BR112021003173A2 - anticorpos anti-gdf15, composições e métodos de uso - Google Patents

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Abstract

ANTICORPOS ANTI-GDF15, COMPOSIÇÕES E MÉTODOS DE USO. A presente invenção refere-se a anticorpos e fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, que especificamente ligam-se a GDF15, bem como métodos e usos para os anticorpos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTI- CORPOS ANTI-GDF15, COMPOSIÇÕES E MÉTODOS DE USO".
CAMPO DE INVENÇÃO
[001] A presente invenção refere-se a anticorpos e fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, que especificamente ligam-se ao fator de diferenciação de crescimento 15 (GDF15), e composições, métodos e usos dos mesmos, incluindo usos da combinação de um anticorpo anti-GDF15 da invenção e um antagonista de ligação de eixo PD-1 e/ou um inibidor de CD40 para tratar câncer.
ANTECEDENTES
[002] GDF15, da mesma forma conhecido como citocina 1 inibi- dora de macrófago (MIC-1), fator derivado da próstata (PDF), proteína morfogenética do osso placentário (PLAB), gene 1 ativado por NSAID (NAG-1) e fator de crescimento de tranformação de placenta β (PTGFB), é uma proteína secretada de 12 kDa que forma um homo- dímero ligado por dissulfeto de 25 kDa que é membro da superfamília do fator de crescimento de transformação beta (TGFβ). Normalmente, GDF15 é fracamente expresso ou não expresso em todos os tecidos e concentrações plasmáticas são baixas. A expressão de GDF15 é su- per regulada durante inflamação e malignidade, limitando a inflamação e o crescimento do tumor. Esta expressão elevada resulta em concen- trações circulantes marcadamente elevadas de GDF15 (>1-100 ng/mL) no câncer (por exemplo, próstata, pâncreas, colorretal e gástri- co), insuficiência cardíaca, doença renal crônica (CKD), sarcopenia e doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD).
[003] A perda de peso relacionada ao GDF15 foi mostrada em modelos pré-clínicos. A administração exógena de GDF15 diminui a ingestão de alimentos e o peso corporal sob condições fisiológicas e fisiopatológicas. O aumento de GDF15 no plasma está associado à perda de peso em pacientes com câncer com caquexia
(WO2005/099746; WO2009/021293, WO2014/100689, WO2016/049470). Embora a evidência seja mais forte em pacientes com câncer, uma associação entre GDF15 e perda de peso em ca- quexia associada a insuficiência cardíaca foi da mesma forma relatada (WO/2015/196142). Consistente com os dados humanos, GDF15 plasmático elevado está associado à caquexia em modelos de tumor de camundongo. Além disso, vários estudos usando análise multivari- ada identificaram GDF15 como um biomarcador prognóstico indepen- dente associado a uma sobrevida pobre em muitos tipos de câncer (por exemplo, NSCLC, pancreático e sarcoma, entre outros) e em in- suficiência cardíaca, CKD e COPD.
[004] Mais recentemente, em outubro de 2017, foi relatado que a atividade de GDF15, por exemplo, seus efeitos metabólicos, é media- da pela ligação de GDF15 ao seu receptor tipo α da família GDNF do receptor cognato (GFRAL), um membro órfão da família GFR-α. Veja, por exemplo, Hsu e outro, 2017, Nature 550: 255-259; Yang e outro, 2017, Nature Med. 23 (10): 1158; e Emmerson e outro, 2017, Nature Med. 23 (10): 1215. Estes estudos demonstraram que GFRAL de liga- ção ao GDF15 ativa uma trilha de sinalização mediada por GFRAL em que um receptor tirosina cinase, RET, é ativado e age como um co- receptor de GFRAL, e RET, por sua vez, media a fosforilação a jusan- te de ERK (pERK), proteína ribossômica S6 (pS6), AKT, MAPK e fos- folipase C gama 1 (PLC-γ1) entre outros. Além disso, esses estudos demonstraram que a ativação de GFRAL por GDF15 ocorre em regi- ões do tronco encefálico, a área postrema e o núcleo do trato solitário, que contêm neurônios quimiossensoriais e receptores para neuropep- tídeos que controlam o apetite e vômito. A área postrema detecta mensageiros químicos no sangue e controla os sistemas fisiológicos autônomos, incluindo sistemas que controlam o metabolismo e o apeti- te. Além disso, essas regiões do tronco encefálico estão fora da barrei-
ra hematoencefálica (BBB), tornando-as acessíveis a, entre outras coi- sas, moléculas grandes, incluindo anticorpos, que podem se ligar a GFRAL ou GDF15 e impedir a interação de GFRAL-GDF15 para mo- dular os efeitos metabólicos de GDF15 relacionado ao apetite, massa corporal, peso, massa gorda e ingestão de alimentos. Desse modo, a trilha de GDF15-GFRAL presente no tronco encefálico é um alvo po- tencial para a modulação de doenças, condições e distúrbios media- dos pela atividade de GDF15.
[005] Permanece uma necessidade significativa de opções tera- pêuticas para perda de peso causada por ou associada à caquexia que é mediada por ou associada a níveis elevados de GDF15. A pre- sente invenção fornece novos anticorpos terapêuticos potenciais que atendem a esta necessidade.
[006] PD-L1 (ligante de morte programada 1; da mesma forma conhecido como CD274 e B7 homólogo 1 [B7-H1]) é superexpresso em muitos cânceres e está frequentemente associado a um mau prog- nóstico (Okazaki T e outro, Intern. Immun. 2007 19 (7): 813) (Thomp- son RH e outro, Cancer Res 2006, 66 (7): 3381). Curiosamente, a maioria dos linfócitos T de infiltração de tumor expressa predominan- temente PD-1, em contraste com os linfócitos T em tecidos normais e sangue periférico. PD-1 (proteína de morte celular programada 1), o receptor cognato de PD-L1 nas células T reativas ao tumor, pode con- tribuir para respostas imunes antitumorais prejudicadas (Ahmadzadeh e outro, Blood 2009 1 14 (8): 1537). Isso pode ser devido à exploração da sinalização de PD-L1 mediada por células tumorais que expressam PD-L1 interagindo com células T que expressam PD-1 para resultar na atenuação da ativação de células T e evasão de vigilância imunológica (Sharpe e outro, Nat Rev 2002) (Keir ME e outro, 2008 Annu. Rev. Immunol. 26: 677). Portanto, a inibição da interação de PD-L1/PD-1 e da trilha de sinalização (da mesma forma referido como "eixo PD-1")
pode realçar a morte mediada por células T CD8+ de tumores.
[007] A inibição da sinalização do eixo PD-1 através de seus li- gantes diretos (por exemplo, PD-L1, PD-L2 [ligante 2 de morte celular programada e B7-DC]) foi proposta para realçar a imunidade das célu- las T para o tratamento do câncer (por exemplo, imunidade tumoral). Além disso, aumentos similares à imunidade das células T foram ob- servados inibindo-se a ligação de PD-L1 a outro parceiro de ligação, isto é, B7-1 (da mesma forma conhecido como CD80).
[008] Existem atualmente pelo menos cinco antagonistas de liga- ção ao eixo PD-1 aprovados pela FDA em mais de 10 indicações de câncer (A Ribas e outro, Science, 359, 1350-1355, 2018), bem como outros conhecidos na técnica. Entre estes, nivolumabe (OPDIVO), pembrolizumabe (KEYTRUDA), espartalizumabe, pidilizumabe, tisleli- zumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe, PF-06801591 (sassanli- mabe, RN888), são cada um anticorpos anti-1-PD, enquanto avelumab (BAVENCIO), atezolizumabe (TECENTRIQ) durvalumabe (IMFINZI), BMS-936559 (MDX-1105), MEDI4736, MPDL3280A (YW243.55.s70) são, cada um, anticorpos anti-PD-L1.
[009] A terapia de combinação de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 com um ou mais agentes anticâncer foi investigada, com o primeiro ensaio clínico iniciado em 2009. Novos ensaios clínicos dire- cionados a tais combinações aumentaram dramaticamente; desde en- tão, 467 novos ensaios foram registrados em 2017 (C. Schmidt, Natu- re, Vol 552, 21/28 de dezembro de 2017). Enquanto a terapia combi- nada de nivolumabe (anti-PD-1) e ipilimumabe (anti-CTLA-4) para tra- tar o melanoma e a terapia combinada de pembrolizumabe (anti-PD-1) com quimioterapia para tratar câncer de pulmão de células não pe- quenas foi aprovado pela FDA em 2015 e 2017, respectivamente, há uma necessidade contínua de encontrar um tratamento terapêutico ideal que combine um antagonista de ligação ao eixo PD-1 com um ou mais outros agentes anticâncer, para tratar, estabilizar, prevenir e/ou atrasar o desenvolvimento de vários tipos de câncer.
[0010] GDF15 mostrou ser induzido por uma série de fatores pró- inflamatórios e lipopolissacarídeos (LPS) e está envolvido no meca- nismo de realimentação que impõe quebras na ativação de macrófa- gos, suprimindo-se a produção do fator de necrose de tumor alfa (TNFα) através da inibição da trilha de sinalização de NF-kB (Bootcov e outro, 1997, PNAS 94 (21): 11514-11519, Ratnam e outro, 2017, J. Clin. Invest. 127 (10): 3796-3809). A expressão diminuída de TNFα está associada a um desvio da população de macrófagos para o fenó- tipo M2 pró-tumorigênico (Kratochvill, 2015, Cell Reports 12 (11): 1902-1914). Alvejar o fenótipo M2 em macrófagos associados a tumor é uma estratégia potencial para aumentar a resposta às terapias con- tra o câncer focadas na ativação da resposta imune do hospedeiro.
[0011] Permanece uma necessidade significante de opções tera- pêuticas para o câncer, particularmente para tumores sólidos. A pre- sente invenção fornece novos anticorpos GDF15 terapêuticos poten- ciais, com ou sem um ou mais outros agentes anticâncer, que aten- dem a essas necessidades. Da mesma forma permanece a necessi- dade de encontrar um tratamento terapêutico ideal que combine um antagonista de ligação ao eixo PD-1 com outro agente terapêutico, tal como um inibidor de GDF15, com ou sem um ou mais outros agentes anticâncer, para tratar, estabilizar, prevenir e/ou atrasar o desenvolvi- mento de vários tipos de câncer. A presente invenção fornece novas combinações terapêuticas potenciais úteis dos anticorpos GDF15 da invenção com um antagonista de ligação ao eixo PD-1 que atendem a essa necessidade.
SUMARIO DA INVENÇÃO
[0012] A invenção fornece anticorpos, e fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, que especificamente ligam-se a GDF15, bem como usos e métodos associados. Aqueles versados na técnica reco- nhecerão ou serão capazes de verificar usando não mais do que expe- rimentação de rotina, muitos equivalentes às modalidades específicas da invenção no presente documento descritas. Tais equivalentes de- vem ser abrangidos pelas seguintes modalidades (E).
[0013] E1. Um anticorpo isolado ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo que especificamente liga-se a GDF15.
[0014] E2. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1, compreendendo as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de um do grupo que consiste em SEQ ID NO:21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 e 166.
[0015] E3. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E2, compreendendo as sequências LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de um do grupo que consiste em SEQ ID NO:11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 e 163.
[0016] E4. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como em qualquer um de E1-E3 compreendendo um ou mais de (a)-(f) a) um LCDR-1LCDR-1 selecionado a partir do grupo que con- siste em SEQ ID NO:7, 27, 36, 46, 55, 62, 82, 88, 95, 101, 129, 138, 150 e 157, b) um LCDR-2 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:8, 28, 37, 47, 70, 108, 114, 122 e 130, c) um LCDR-3 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:9, 29, 38, 48, 63, 76, 89 e 102, d) uma HCDR-1 selecionado a partir de ggrupo que consiste em SEQ ID NO:17, 32, 41, 58, 66, 117, 125, 133 e 153, e) uma HCDR-2 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:18, 33, 42, 51, 59, 67, 85, 92, 98, 105, 118, 126, 134, 141, 146 e 165, f) uma HCDR-3 selecionado a partir do grupo que consiste na SEQ ID NO:1, 19, 43, 52, 79, 111, 119, 135, 147, 154 e 160.
[0017] E5. O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E4 compreendendo: i) uma HCDR-1 com- preendendo a sequência de aminoácidos GYTFX1X2YNID, em que X1 é S ou T e X2 é S ou D; ii) uma HCDR-2 compreendendo a sequência de aminoácidos X3INPX4X5GX6AX7X8X9QKFQG, em que X3 é G ou Q; X4 é I ou N; X5 é F ou N; X6 é T ou L; X7 é F ou N; X8 é Y ou F e X9 é N ou A; e iii) uma HCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos EX10ITTX11GAMDX12, em que X10 é A ou Q; X11 é V ou I; e X12 é H ou Y.
[0018] E6. O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E5 compreendendo: i) um LCDR-1LCDR-1 compreendendo a sequência de aminoácidos RX1SQX2X3X4X5YLA, em que X1 é T ou A, X2 é S ou N, X3 é V ou L, X4 é H ou S, e X5 é N ou S; ii) um LCDR-2 compreendendo a sequência de aminoácidos DAX6X7RAX8, em que X6 é S ou K; X7 é T ou N; e X8 é D ou T; e iii) um LCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos QQFX9X10X11PX12T, em que X9 é W ou S; X10 é S ou N; X11 é W ou D; e X12 é W ou Y.
[0019] E7. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como em qualquer um de E1-E6 compreendendo um ou mais dos seguintes: a) um LCDR-1LCDR-1 compreendendo a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO:174, b) um LCDR-2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:175, c) um LCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:176, d) uma HCDR-1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:171, e) uma HCDR-2 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:172, f) uma HCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:173.
[0020] E8. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E7, compreendendo as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de pelo menos uma sequên- cia selecionada a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:34, 106, 148, 155 e 166.
[0021] E9. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E8, compreendendo as sequências LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de pelo menos uma sequência selecionada do grupo que consiste em SEQ ID NO:30, 103, 144, 151 e 163.
[0022] E10. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como em qualquer um de E1-E9 compreendendo um ou mais de (a) - (f) a) um LCDR-1LCDR-1 selecionado a partir do grupo que con- siste em SEQ ID NO:27, 88, 95, 101 e 150. b) um LCDR-2 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:8, 28 e 108. c) um LCDR-3 selecionado a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NO:9, 29, 38, 48 e 102. d) uma HCDR-1 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:32, 41 e 153. e) uma HCDR-2 selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:33, 105, 146 e 165.
f) uma HCDR-3 selecionado a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NO:19, 52, 147 e 154.
[0023] E11. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E10, compreendendo as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de SEQ ID NO:166.
[0024] E12. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E11, compreendendo as sequências LCDR-1LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de SEQ ID NO:163.
[0025] E13. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como em qualquer um de E1-E12 compreendendo um ou mais dos seguintes: a) um LCDR-1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:95, b) um LCDR-2LCDR-2 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:28, c) um LCDR-3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:9, d) uma HCDR-1 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:32, e) uma HCDR-2 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:165, e f) uma HCDR-3 compreendendo a sequência de SEQ ID NO:52.
[0026] E14. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E13, compreendendo um LCDR-1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:95, um LCDR-2LCDR-2 compreendendo a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NO:28, um LCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9, uma HCDR-1 compreendendo a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO:32, uma HCDR-2 compreen- dendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:165, e uma HCDR-
3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52.
[0027] E15. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E14, compreendendo uma ou mais das seguintes substituições: a) 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições em LCDR-1 para o resíduo correspondente de uma sequência VL de linha germinativa humana, b) 1, 2, 3, 4 ou 5 substituições em LCDR-2 para o resíduo cor- respondente de uma sequência de linha germinativa VL humana, c) 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 substituições em LCDR-3 para o resíduo correspondente de uma sequência VL de linha germinativa humana, d) 1 substituição em HCDR-1 para o resíduo correspondente de uma sequência VH de linha germinativa humana, e) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 substituições em HCDR-2 para o re- síduo correspondente de uma sequência VH de linha germinativa hu- mana,
[0028] em que a sequência VL de linha germinativa humana é se- lecionada a partir do grupo que consiste em IGKV1-12*01, IGKV1- 13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 e IGKV4-1*01 e a linha- gem germinativa humana VH é selecionada a partir do grupo que con- siste em IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3-23*01, IGHV3- 23*04, IGHV3-30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 e IGHV5-51*01.
[0029] E16. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E15, compreendendo uma sequência de estrutura VH derivada de uma sequência VH de linha germinativa humana selecionada a partir do grupo que consiste em IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3-23*01, IGHV3-23*04, IGHV3-
30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 e IGHV5-51*01.
[0030] E17. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E16, compreendendo uma sequência de estrutura VH IGHV1-69*01.
[0031] E18. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E17, compreendendo uma sequência de estrutura VL derivada de uma sequência VL de linha germinativa humana selecionada a partir do grupo que consiste em IGKV1-12*01, IGKV1-13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 e IGKV4- 1*01.
[0032] E19. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E18, compreendendo uma sequência de estrutura VL IGKV3-11*01.
[0033] E20. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E19, compreendendo uma sequência de estrutura VL e uma sequência de estrutura VH, e em que a sequência de estrutura VL é pelo menos 72% idêntica à sequência de linha germinativa humana da qual era derivada.
[0034] E21. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E20, compreendendo uma sequência de estrutura VL e uma sequência de estrutura VH, e em que a sequência de estrutura VL é pelo menos 72%, 74%, 75%, 77%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à se- quência de linha germinativa humana da qual foi derivada.
[0035] E22. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E21, compreendendo uma sequência de estrutura VL e uma sequência de estrutura VH, e em que a sequência de estrutura VH é pelo menos 53% idêntica à sequência de linha germinativa humana a partir da qual era derivada.
[0036] E23. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E22, compreendendo uma sequência de estrutura VL e uma sequência de estrutura VH, e em que a sequência de estrutura VH é pelo menos 53%, 58%, 60%, 63%, 71%, 72%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica à sequência de linha germinativa humana da qual foi derivada.
[0037] E24. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E23, compreendendo um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO:166.
[0038] E25. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E24, compreendendo um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 % ou 99% idêntica à SEQ ID NO:166.
[0039] E26. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E25, compreendendo um VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166.
[0040] E27. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E26, compreendendo um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO:163.
[0041] E28. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E27, compreendendo um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 %, ou 99%, idêntica à SEQ ID NO:163.
[0042] E29. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E28, compreendendo um VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163.
[0043] E30. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E29, compreendendo um VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166 e a sequência de aminoácidos VL de SEQ ID NO:163.
[0044] E31. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E30, compreendendo um domínio Fc.
[0045] E32. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E31, em que o domínio Fc é o domínio Fc de uma IgA (por exemplo IgA1 ou IgA2), IgD, IgE, IgM ou IgG (por exemplo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4).
[0046] E33. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E32, em que o domínio Fc é o domínio Fc de uma IgG.
[0047] E34. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E33, em que a IgG é selecionada a partir do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.
[0048] E35. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E34, em que IgG é IgG1.
[0049] E36. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E35, compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO:164.
[0050] E37. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E36, compreendendo uma cadeia pesada compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, ou 99%, idêntica à SEQ ID NO:164.
[0051] E38. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E37, compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ
ID NO:164.
[0052] E39. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E38, compreendendoum LC compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à SEQ ID NO:162.
[0053] E40. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E39, compreendendo um LC compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98 %, ou 99%, idêntica à SEQ ID NO:162
[0054] E41. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E40, compreendendo um LC compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:162.
[0055] E42. Anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E41, compreendendo uma cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:164 e uma cadeia leve compreendendo a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO:162.
[0056] E43. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E42, compreendendo o CDR1, CDR2 e CDR3 codificados pela inserção do plasmídeo deposi- tado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125038.
[0057] E44. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E43, compreendendo o CDR1, CDR2 e CDR3 codificado pela inserção do plasmídeo deposi- tado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125039.
[0058] E45. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E44, codificado pela inser- ção no plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125038.
[0059] E46. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E45, codificado pela inser- ção no plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125039.
[0060] E47. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E46, compreendendo a sequência de aminoácidos codificada pela inserção no plasmídeo de- positado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125038 e a sequência de aminoácidos codificada pela inserção no plasmídeo de- positado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125039.
[0061] E48. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E47, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno é uma proteína de fusão Fc, um monocorpo, um maxicorpo, um anticorpo bifuncional, um scFab, um scFv, um pepticorpo.
[0062] E49. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E48, em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, liga GDF15 humano com um KD de cerca ou me- nos do que um valor selecionado a partir do grupo que consiste em cerca de 10 nM, 5 nM, 2 nM, 1nM, 900pM, 800pM, 700pM, 600pM, 500pM, 400pM, 300pM, 250pM, 200pM, 150pM, 100pM, 50pM, 40pM, 30pM, 25pM, 20pM, 15pM e 10pM.
[0063] E50. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E49, em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, liga GDF15 de macaco cinomolgo com um KD de cerca ou menos do que um valor selecionado a partir do grupo que consiste em cerca de 10 nM, 5 nM, 2 nM, 1nM, 900pM, 800pM, 700pM, 600pM, 500pM, 400pM, 300pM, 250pM, 200pM, 150pM, 100pM, 50pM, 40pM, 30pM, 25pM, 20pM, 15pM, 13pM, 10pM e 9pM.
[0064] E51. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E50, em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, liga GDF15 de macaco cinomolgo com um KD de cerca de 8pM ou 9pM.
[0065] E52. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E51, em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, liga GDF15 de macaco cinomolgo com um KD de cerca de 8,28 pM.
[0066] E53. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E52, em que a meia-vida terminal em humanos é de pelo menos cerca de 16 dias.
[0067] E54. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E53, em que a meia-vida terminal em humanos é de pelo menos 17 dias.
[0068] E55. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E54, em que o potencial imunogênico previsto do anti- corpo, como indicado pela pontuação ajustada do regítopo t (tReg), é inferior a cerca de -24.
[0069] E56. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E55, em que o potencial imunogênico previsto do anti- corpo, como indicado pela pontuação ajustada de tReg, é menor do que a pontuação ajustada de tReg selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de -24, -26, -27, -30, -32, -33, -34, -35, -36, -37, -38, -39, -40, -41, -42, -43, -50 e -51.
[0070] E57. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E56, em que o potencial imunogênico previsto do anti- corpo, como indicado pela pontuação ajustada de tReg, é selecionado a partir do grupo que consiste em cerca de -26, -34, -36, -41 e -42.
[0071] E58. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E57, em que o potencial imunogênico previsto do anti- corpo, como indicado pela pontuação ajustada de tReg, é de cerca de
-41 ou -42.
[0072] E59. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E58, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno tem uma viscosidade selecionada a partir do gru- po que consiste em pelo menos cerca de 10 centipoise (cP), pelo me- nos cerca de 15 cP, pelo menos cerca de 20 cP, pelo menos cerca de 40 cP e pelo menos cerca de 70 cP, quando medido a 25°C.
[0073] E60. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E59, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno tem uma viscosidade de cerca de 20 cP quando medido a 25°C.
[0074] E61. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E60, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno tem uma viscosidade de 20 cP quando medido a 25°C.
[0075] E62. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E61, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao GDF15 humano em comparação com a ligação ao GDF15 de murino está entre cerca de 0,05 e cerca de 0,10.
[0076] E63. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E62, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno a GDF15 humano em comparação com a ligação a GDF15 de murino é de cerca de 0,07.
[0077] E64. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E63, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao GDF15 humano em comparação com a ligação ao GDF15 de murino é de 0,07.
[0078] E65. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E64, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao GDF15 humano em comparação com a ligação a GDF15 de cinomolgos está entre cerca de 1,0 e cerca de 1,5.
[0079] E66. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E65, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao GDF15 humano em comparação com a ligação a GDF15 de cinomolgos é de cerca de 1,2.
[0080] E67. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E66, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno ao GDF15 humano em comparação com a ligação a GDF15 de cinomolgos é 1,21.
[0081] E68. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E67, em que a relação de de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno a GDF15 de cinomol- gos em comparação com a ligação ao GDF15 de murino está entre cerca de 0,03 e cerca de 0,09.
[0082] E69. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E68, em que a relação de de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno a GDF15 de cinomol- gos em comparação com a ligação ao GDF15 de murino está entre cerca de 0,04 e 0,08.
[0083] E70. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E69, em que a relação de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno a GDF15 de cinomol- gos em comparação com a ligação ao GDF15 de murino está entre 0,05 e 0,06.
[0084] E71. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E70, em que a relação de de ligação KD do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno a GDF15 de cinomol- gos em comparação com a ligação ao GDF15 de murino é 0,05.
[0085] E72. O anticorpo, de acordo com E1-E71, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm1), ou a temperatura na qual o CH2 do anticorpo está 50% desdo- brado, de cerca de 71°C ou mais, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0086] E73. O anticorpo, de acordo com E1-E72, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm1), ou a temperatura na qual o CH2 do anticorpo está 50% desdo- brado, entre 71°C e 72°C, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0087] E74. O anticorpo, de acordo com E1-E73, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm1), ou a temperatura na qual o CH2 do anticorpo está 50% desdo- brado, entre 71°C e 72°C, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0088] E75. O anticorpo, de acordo com E1-E74, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm2), ou a temperatura na qual o Fab do anticorpo está 50% desdo- brado, de cerca de 80°C ou mais, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0089] E76. O anticorpo, de acordo com E1-E75, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm2), ou a temperatura na qual o Fab do anticorpo está 50% desdo- brado, entre 80°C e 86°C, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0090] E77. O anticorpo, de acordo com E1-E76, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm2), ou a temperatura na qual o Fab do anticorpo é 50% desdobra- do, entre 84°C e 85°C, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0091] E78. O anticorpo, de acordo com E1-E77, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm3), ou a temperatura na qual o CH3 do anticorpo está 50% desdo- brado, de cerca de 82°C ou mais, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0092] E79. O anticorpo, de acordo com E1-E78, em que o anti- corpo tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (Tm3), ou a temperatura na qual o CH3 do anticorpo está 50% desdo- brado, entre 83°C e 91°C, como medido por Calorimetria de Varredura Diferencial.
[0093] E80. O anticorpo, de acordo com E1-79, em que o anticor- po tem uma estabilidade térmica com uma temperatura de fusão (T m3), ou a temperatura na qual o CH3 do anticorpo está 50% desdobrado, entre 87°C e 89°C, como medido por Calorimetria de Varredura Dife- rencial.
[0094] E81. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo uma sequência de ácido nucleico que codifica o anticorpo, ou fragmen- to de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80.
[0095] E82. Uma molécula de ácido nucleico isolada compreen- dendo pelo menos uma sequência de ácido nucleico que codifica o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E81.
[0096] E83. Uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica o VL, VH, ou ambos, de um anticorpo, ou uma porção de ligação de an- tígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15 humano, em que a referida molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:167, a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:168, ou ambos.
[0097] E84. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:167, a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:168 ou ambas.
[0098] E85. Molécula de ácido nucleico isolada que codifica a ca- deia leve, cadeia pesada ou ambas de um anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15 humano, em que a referida molécula de ácido nucleico com- preende a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:169, a sequên- cia de ácido nucleico de SEQ ID NO:170 ou ambas.
[0099] E86. Molécula de ácido nucleico isolada, especificada pelo fato de que compreende a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:169, a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:170 ou ambas.
[00100] E87. Molécula de ácido nucleico isolada, especificada pelo fato de que compreende pelo menos uma sequência de ácido nucleico selecionada a partir do grupo que consiste na sequência mencionada como SEQ ID NO:167, 168, 169 ou 170.
[00101] E88. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:167.
[00102] E89. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:168.
[00103] E90. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:169.
[00104] E91. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:170.
[00105] E92. Uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15 humano, em que a referida molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico da inser- ção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA- 125038.
[00106] E93. Uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica um anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15 humano, em que a referida molécula de ácido nucleico compreende a sequência de ácido nucleico da inser- ção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA- 125039.
[00107] E94. Molécula de ácido nucleico isolada que codifica um anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, que es- pecificamente liga-se a GDF15 humano, em que o referido ácido nu- cleico compreende a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA- 125038 e a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo de- positado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA-125039.
[00108] E95. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o número de acesso PTA-125038.
[00109] E96. Uma molécula de ácido nucleico isolada compreen- dendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depo- sitado com o ATCC e tendo o número de acesso PTA-125039.
[00110] E97. Molécula de ácido nucleico isolada compreendendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA-125038 e a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Número de Acesso PTA -125039.
[00111] E98. Um vetor que compreende a molécula de ácido nu- cleico de acordo com qualquer um de E81-E97.
[00112] E99. Uma célula hospedeira compreendendo a molécula de ácido nucleico de acordo com qualquer um de E81-E98 ou o vetor de E98.
[00113] E100. A célula hospedeira de acordo com E99, em que a referida célula é uma célula de mamífero.
[00114] E101. A célula hospedeira de acordo com E100, em que a referida célula hospedeira é uma célula de CHO, uma célula HEK-293, uma célula NS0, uma célula PER.C6® ou uma célula Sp2.0.
[00115] E102. Método para fazer um anticorpo ou fragmento de li- gação de antígeno do mesmo compreendendo a cultura da célula hos- pedeira de acordo com qualquer um de E99-E101, sob uma condição em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno é ex- presso pela referida célula hospedeira.
[00116] E103. O método de E102, também compreendendo isolar o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo.
[00117] E104. Uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo de acordo com qualquer um de E1-E103 e um transportador ou excipiente farma- ceuticamente aceitável.
[00118] E105. A composição de E104, compreendendo tiotepa, ci- clofosfamida (CITOXANO), bussulfano, improssulfano, pipossulfano, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietileno- melamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolomo- lamina; bulatacina, bulatacinaona), delta-9-tetraidrocanabinol (dronabi- nol, MARINOL), beta-lapachona, lapachol, colchicinas, ácido betulíni- co, topotecano (HYCAMTIN), CPT-11 (irinotecano, CAMPTOSAR), acetilcamptotecina, 9-aminocamptotecina, briostatina, pemetrexedo, calistatina, CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e bizelesina), podofilotoxina, ácido podofilínico, teniposí- deo, criptoficinas, dolastatina, duocarmicina (incluindo os análogos sin- téticos, KW-2189 e CB1-TM1), panuterobina, TLK-286, CDP323, um inibidor oral de integrina alfa-4, uma sarcodictina, espongistatina, clo- rambucila, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, me- cloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, mefalan, novembi- cina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila,
carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimus- tina, antibióticos de enediina (incluindo caliqueamicina, caliqueamicina gama e caliqueamicina Omega, dinemicina, dinemicina A, uma espe- ramicina, cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antibióticos de enediina cromoterapia relacionada a enedina, aclacinomisinas, acti- nomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, carabi- cina, carminomicina, carzinofilina, cromomicina, dactinomicina, daunor- rubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (in- cluindo ADRIAMYCIN, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino- doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorubicina, injeção de lipossoma de doxor- rubicina HC1 (DOXIL) e desoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubici- na, idarrubicina, marcelomicina, mitomicina C, ácido micofenólico, no- galamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, que- lamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorrubicina, metotrexato, gencitabina (GEMZAR), tegafur (UFTORAL), capecitabina, (XELODA), uma epoti- lona, 5-fluoroacila (5-FU), denopterina, metotrexato, pteropterina, tri- metrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, anci- tabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, imatinibe, aminoglutetimida, mito- tano, trilostano, ácido frolínico, aceglatona, glicosídeo de aldofosfami- da, ácido aminolevulínico, eniluracila, ansacrina, bestrabucila, bisan- treno, elatraxato, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquona, elfornitina, acetato de eliptínio, etoglucida, nitrato de gálio, hidroxiureia, lentinano, lonidainina, maitansina, ansamitocinas, mitoguazona, mito- xantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pirarrubicina, losoxantrona, 2-etil-hidrazida, procarbazina, complexo de polissacarí- deo PSK, razoxano, rizoxina, sizofirana, espirogermânio, ácido tenu- azônico, triaziquona, 2,2',2"-triclorotilamina, toxina T-2, verracurina A, roridina A, anguidina, uretano, vindesina (ELDISINA, FILDESINA), da-
carbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobromano, gacito- sina, arabinosídeo ("Ara-C"), tiotepa, paclitaxel (TAXOL), formulação de nanopartícula modificada com albumina de paclitaxel (ABRAXANE), doxetaxel (TAOTERE), clorambucila, 6-tioguanina, mercaptopurina, metotrexato, cisplatina, carboplatina, vimblastina (VELBAN), platina, etoposídeo (VP-16), ifosfamida, mitoxantrona, vincristina (ONCOVIN), oxaliplatina, leucovina, leucovina, vinorelbina (NAVELBINA), novantro- na, edatraxato, daunomicina, aminopterina, ibandronato, inibidor de topoisomerase RFS 2000, difluorometililomitina (DMFO), anti- estrogênios e moduladores de receptor de estrogênio seletivos (SERMs) (incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX tamoxifeno), raloxifeno (EVISTA), droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY 1 1 7018, onapristona e toremifeno (FARES- TON), anti-progesteronas, sub-reguladores de receptor de estrogênio (ERDs), fulvestrante (FASLODEX), agonistas de hormônio de libera- ção de leutinização LHRFl) (incluindo acetato de leuprolide (LUPRON e ELIGARD), acetato de goserelina, acetato de buserelina e triptereli- na), anti-andógenos (incluindo fiutamida, nilutamida e bicalutamida); inibidores de aromatase (incluindo 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGASE), exemestano (AROMASIN), formes- tanie, fadrozol, vorozol (RJVISOR), letrozol (FEMARA) e anastrozol (ARIMIDEX), bisfosfonatos (incluindo clodronato (BONEFOS) ou OS- TAC), etidronato (DIDROCAL), NE-58095, ácido zoledrôni- co/zoledronato (ZOMETA), alendronato (FOSAMAX), pamidronato (AREDIA), tiludronato (SKELID) e risedronato (ACTONEL), troxacitabi- na, oligonucleotídeos antissentido (incluindo PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF-R)), vacina THE- RATOPE, vacinas de terapia genética (incluindo vacina de ALOVEC- TINA, vacina de LEUVECTINA e vacina VAXID®; inibidor de topoiso- merase 1 (por exemplo, LURTOTECAN)) , fulvestrante; imatinibe,
EXEL-0862, erlotinibe, cetuximabe, bevacizumabe, arinotecano, rmRH (por exemplo, ABARELIX), lapatinibe, ditosilato de lapatinibe (da mesma forma conhecido como GW572016), 17AAG, inotuzmabe ozo- gamicina (BESPONSA), bosutinibe (BOSULIF), palbociclibe (IBRAN- CE), axitinibe (INLYTA), malato de sunitinibe (SUTENT), crizotinibe (XALKORI), enzalutamida (XTANDI) e combinações de dois ou mais de, sais farmaceuticamente aceitáveis de, e/ou ácidos ou derivados de, qualquer um dos mencionados acima.
[00119] E106. Método para reduzir a atividade de GDF15, compre- endendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das modalidades E1-E80 ou da composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105, e comparar a atividade de GDF15 antes da administra- ção com o nível de atividade de GDF15 após a administraçãon do an- ticorpo, desse modo reduzindo a atividade de GDF15.
[00120] E107. O método de acordo com E106, em que a atividade de GDF15 é selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) ligação de GFRAL; (b) diminuir a ingestão de alimentos; (c) diminuição da massa corporal; (d) diminuição da massa muscular; (e) diminuição da massa gorda; (f) ativar RET; (g) aumento da fosforilação de ERK (pERK); e (h) aumento da fosforilação da proteína ribossômica S6 (S6) (i) aumentar a fosforilação de AKT; (j) aumento da fosforilação de MAPK; e (k) aumentar a fosforilação de PLC-γ1.
[00121] E108. Método para reduzir o nível de GDF15 livre em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quanti- dade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das modalidades E1-E80, ou a composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105.
[00122] E109. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 1 ng/ml.
[00123] E110. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,9 ng/ml.
[00124] E111. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,8 ng/ml.
[00125] E112. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,7 ng/ml.
[00126] E113. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,6 ng/ml.
[00127] E114. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,5 ng/ml.
[00128] E115. O método de E108, em que o nível de GDF15 livre antes da administração é comparado com o nível de GDF15 livre após a administração e a dose e o regime de dosagem são ajustados para reduzir ao nível de GDF15 livre abaixo de 0,4 ng/ml.
[00129] E116. Método de tratamento de caquexia, compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quan- tidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80, ou da composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105.
[00130] E117. O método de E116, em que caquexia está associada a câncer, quimioterapia, quimioterapia em combinação com uma tera- pia imuno-oncológica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença re- nal crônica, insuficiência cardíaca crônica, insuficiência cardíaca con- gestiva ou sarcopenia.
[00131] E118. O método de E117, em que o câncer é um câncer de tumor sólido, câncer pancreático, câncer de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer colorretal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer cervical ou câncer testicular.
[00132] E119. O método E117 ou E118, onde na quimioterapia é tiotepa, ciclofosfamida (CITOXAN), bussulfano, improssulfano, pipos- sulfano, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trime- tilolomelanina, bulatacina, bulatacinaona), delta-9-tetraidrocanabinol (dronabinol, MARINOL), beta-lapachone, lapachol, colchicinas, ácido betulínico, topotecano (HYCAMTIN), CPT-11 (irinotecano, CAMPTO- SAR), acetilcamptotecina, scopolectina, 9-aminocamptotecina, briosta- tina, pemetrexed, calistatina, CC-1065 (incluindo seus análogos de sin- téticos adozelesina, carzelesina e bizelesina), podofilotoxina, ácido podofilínico, teniposídeo, criptoficinas, dolastatina, duocarmicina (inclu- indo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1), eleuterrobina, pan- cratistatina, TLK-286, CDP323, um inibidor de integrina alfa-4 oral,
uma sarcodictina, espongistatina, clorambucila, clornafazina, colofos- famida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalan, novembicina, fenesterina, prednimustati- na, trofosfamida, mostarda de uracila, carmustina, clorozotocina, fote- mustina, lomustina, nimustina, ranimnustina, antibióticos de enedina (incluindo caliqueamicina, caliqueamicina gama e caliqueamicina ômega, dinemicina, dinemicina A, uma esperamicina, cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antibióticos de enedina relacionados a cromoproteína, aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5- oxo-L-norleucina, doxorrubicina (incluindo ADRIAMICINA, morfolino- doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, injecção de lipossoma de doxorubicina HC1 (DOXIL) e desoxidoxorru- bicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomi- cina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina, meto- trexato, gencitabina (GEMZAR), tegafur (UFTORAL), capecitabina (XELODA), uma epotilona, 5-fluorouracila (5-FU), denopterina, meto- trexato, pteropterina, trimetrexato, fludarrabina, 6-mercaptopurina, ti- amiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, imati- nibe, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolínico, aceglatona, glicosídeo de aldofosfamida, ácido aminolevulínico, eniluracila, ansa- crina, bestrabucila, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diaziquone, elfornitina, acetato de eliptínio, etoglucida, nitrato de gálio, hidroxiureia, lentinano, lonidainina, maitansina, ansamitocinas, mito- guazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fename- ta, pirarrubicina, losoxantrona, 2-etil-hidrazida, procarbazina, complexo de polissacarídeo PSK, razoxano, rizoxina, sizofirana, espirogerma- nio,ácido tenuazônico, triaziquona, 2,2’,2’’-triclorotrietilamina, toxina T- 2, verracurina A, roridina A, anguidina, uretano, vindesina (ELDISINA, FILDESINA), dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipo- bromano, gacitosina, arabinosídeo ("Ara-C"), tiotepa, paclitaxel (TA- XOL), formulação de nanopartículas de albumina modificada de pacli- taxel (ABRAXANE), doxetaxel (TAXOTERE), clorambucila, 6- tioguanina, mercaptopurina, metotrexato, cisplatina, carboplatina, vin- blastina (VELBAN), platina, etoposídeo (VP-16), ifosfamida, mitoxan- trona, vincristina (ONCOVIN), oxaliplatina, leucovovina, vinorelbina (NAVELBINE), novantrona, edatraxato, daunomicina, aminopterina, ibandronato, inibidor de topoisomerase RFS 2000, difluorometlilomitina (DMFO), anti-estrgênios e moduladores de receptor de estrogênio se- letivos (SERMs) (incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOL- VADEX tamoxifeno), raloxifeno (EVISTA), droloxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queroxifeno, LY 1 1 7018, onapristona e toremifeno (FARESTON), anti-progesterona, sub-reguladores de re- ceptor de estrogênio (ERDs), fulvestrant (FASLODEX), agonistas de hormônio de liberação de hormônio leutinizante (LHRFl) (incluindo acetato de leuprolida (LUPRON e ELIGARD), acetato de goserelina, acetato de buserelina e tripterelina), anti-andrógenos (incluindo fiuta- mida, nilutamida e bicalutamida); inibidores de aromatase (incluindo 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGASE), exemestano (AROMASIN), formestanie, fadrozol, vorozol (RJVISOR), letrozol (FEMARA) e anastrozol (ARIMIDEX), bisfosfonatos (incluindo clodronato (BONEFOS) ou OSTAC), etidronato (DIDROCAL), NE- 58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA), alendronato (FOS- AMAX), pamidronato (AREDIA), tiludronato (SKELID) e risedronato (ACTONEL), troxacitabina, oligonucleotídeos antissentido (incluindo PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico
(EGF-R)), vacina THERATOPE, vacinas de terapia genética (incluindo vacina de ALOVECTINA, vacina de LEUVECTINA e vacina VAXID®; inibidor de topoisomerase 1 (por exemplo, LURTOTECAN)) , fulves- trante; imatinibe, EXEL-0862, erlotinibe, cetuximabe, bevacizumabe, arinotecano, rmRH (por exemplo, ABARELIX), lapatinibe, ditosilato de lapatinibe (da mesma forma conhecido como GW572016), 17AAG, inotuzumabe ozogamicina (BESPONSA), bosutinibe (BOSULIF), pal- bociclibe (IBRANCE) axitinibe (INLYTA), malato de sunitinibe (SU- TENT), crizotinibe (XALKORI), enzalutamida (XTANDI) e combinações de dois ou mais de, sais farmaceuticamente aceitáveis de, e/ou ácidos ou derivados de, qualquer um dos mencionados acima.
[00133] E120. O método de E119, em que a quimioterapia é a qui- mioterapia à base de platina.
[00134] E121. O método de acordo com qualquer um de E106- E120, em que o referido indivíduo é um humano.
[00135] E122. O método de acordo com qualquer um de E106- E121, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, subcutaneamente.
[00136] E123. O método de acordo com qualquer um de E106- E122, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, intravenosamente.
[00137] E124. O método de acordo com qualquer um de E106- E123, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado cerca de duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro se- manas, uma vez a cada cinco semanas, uma vez a cada seis sema- nas, uma vez a cada sete semanas, uma vez a cada oito semanas,
uma vez a cada nove semanas, uma vez a cada dez semanas, duas vezes por mês, uma vez por mês, uma vez a cada dois meses, uma vez a cada três meses, ou uma vez a cada quatro meses, uma vez a cada cinco meses, uma vez a cada seis meses, uma vez a cada sete meses, uma vez a cada oito meses, uma vez a cada nove meses, uma vez a cada dez meses, uma vez a cada onze meses ou uma vez a ca- da doze meses.
[00138] E125. O método de acordo com qualquer um de E106- E124, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrada uma vez por semana em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 60 mg.
[00139] E126. O método de acordo com qualquer um de E106- E125, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose entre cerca de 2 mg e cerca de 50 mg.
[00140] E127. O método de acordo com qualquer um de E106- E126, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 2 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 40 mg e cerca de 50 mg.
[00141] E128. O método de acordo com qualquer um de E106- E124, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 130 mg.
[00142] E129. O método de acordo com qualquer um de E106-E124 ou E128, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 5 mg e cerca de 125 mg.
[00143] E130. O método de acordo com qualquer um de E106-E124 ou E128-E129, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 5 mg, cerca de 12 mg, cerca de 20 mg, cer- ca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 90 mg e cerca de 125 mg.
[00144] E131. O método de acordo com qualquer um de E106- E124, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 400 mg.
[00145] E132. O método de acordo com qualquer um de E106-E124 ou E131, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 15 mg e cer- ca de 385 mg.
[00146] E133. O método de acordo com qualquer um de E106-E124 ou E131-E132, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose selecionada a partir do gru- po que consiste em cerca de 15 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg e cerca de 385 mg.
[00147] E134. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80, ou a composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105, para uso como um medi- camento.
[00148] E135. O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-80, ou a composição far- macêutica de acordo com E104 ou E105, para uso na redução da ati- vidade de GDF15 em um indivíduo.
[00149] E136. Método para reduzir a atividade de GDF15, compre- endendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo, ou fragmen- to de ligação de antígeno do mesmo compreendendo a) as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de SEQ ID NO:177 e as sequências LCDR-1, LCDR-2LCDR-2 e LCDR-3 de SEQ ID NO:178, ou b) o VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:177 e o VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178 e comparar a atividade de GDF15 antes da administração com o nível de atividade de GDF15 após a administração do anticorpo, desse mo- do reduzindo a atividade de GDF15.
[00150] E137. Método para reduzir a atividade de GDF15, compre- endendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo, ou fragmen- to de ligação de antígeno do mesmo compreendendo a) uma composição farmacêutica compreendendo um anticor- po, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreendendo as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de SEQ ID NO:177; as sequências LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de SEQ ID NO:178; e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, ou b) uma composição farmacêutica compreendendo um anticor- po, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreendendo o VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:177; o VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178;
e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, desse modo reduzindo a atividade de GDF15.
[00151] E138. O método de E137, em que a atividade de GDF15 é selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) ligação de GFRAL; (b) diminuir a ingestão de alimentos; (c) diminuição da massa corporal; (d) diminuição da massa muscular; (e) diminuição da massa gorda; (f) ativar RET; (g) aumento da fosforilação de ERK (pERK); e (h) aumento da fosforilação da proteína ribossômica S6 (S6) (i) aumentar a fosforilação de AKT; (j) aumento da fosforilação de MAPK; e (k) aumentar a fosforilação de PLC- 1.
[00152] E139. Método de tratamento de caquexia, compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quan- tidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo ou fragmento de liga- ção de antígeno do mesmo compreendendo a) as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de SEQ ID NO:177 e as sequências LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de SEQ ID NO:178, ou b) o VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:177 e o VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178.
[00153] E140. Método de tratamento de caquexia, compreendendo a administração a um indivíduo em necessidade de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreendendo a) uma composição farmacêutica compreendendo um anticor-
po, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreendendo as sequências HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 de SEQ ID NO:177; as sequências LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 de SEQ ID NO:178; e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, ou b) uma composição farmacêutica compreendendo um anticor- po, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreendendo o VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:177; o VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:178; e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00154] E141. O método de E139 ou E140, em que a caquexia está associada a câncer, quimioterapia, quimioterapia em combinação com uma terapia imuno-oncológica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença renal crônica, insuficiência cardíaca crônica, insuficiência car- díaca congestiva ou sarcopenia.
[00155] E142. O método de E141, em que o câncer é um câncer de tumor sólido, câncer pancreático, câncer de pulmão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer colorretal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer cervical ou câncer testicular.
[00156] E143. O método E141 ou E142, onde na quimioterapia é tiotepa, ciclofosfamida (CITOXANO), bussulfano, improssulfano, pi- possulfano, benzodopa, carboquona, meturedopa, uredopa, altretami- na, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenofosforamida, trie- tilenofosforamida, trietiofosforamida; bulatacina, bulatacinaona), delta- 9-tetraidrocanabinol (dronabinol, MARINOL), beta-lapachone, lapachol, colchicinas, ácido betulínico, topotecano (HYCAMTIN), CPT-11 (irino- tecano, CAMPTOSAR), acetilcamptotecina, scopolectina, 9- aminocamptotecina, briostatina, pemetrexed, calistatina, CC-1065 (in- cluindo seus análogos de sintéticos adozelesina, carzelesina e bizele- sina), podofilotoxina, ácido podofilínico, teniposídeo, criptoficinas, do- lastatina, duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e
CB1-TM1), eleuterrobina, pancratistatina, TLK-286, CDP323, um inibi- dor de integrina alfa-4 oral, uma sarcodictina, espongistatina, cloram- bucila, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, meclore- tamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalan, novembicina, fenesterina, prednimustatina, trofosfamida, mostarda de uracila, car- mustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimnusti- na, antibióticos de enedina (incluindo caliqueamicina, caliqueamicina gama e caliqueamicina ômega, dinemicina, dinemicina A, uma espe- ramicina, cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos antibióticos de enedina relacionados a cromoproteína, aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, car- minomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubici- na, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (incluindo ADRIAMYCIN, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, injeção de lipossoma de doxorrubicina HC1 (DOXIL) e deoxidoxorubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelorrubicina, mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, oli- vomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodor- rubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinos- tatina, zorubicina, metotrexato, gencitabina (GEMZAR), tegafur (UFTORAL), capecitabina (XELODA), uma epotilona, 5-fluorouracila (5-FU), denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato, fludarabi- na, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6- azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocita- bina, floxuridina, imatinibe, aminoglutetimida, mitotano, trilostano, áci- do frolínico, aceglatona, glicosídeo de aldofosfamida, ácido aminolevu- línico, eniluracila, ansacrina, bestrabucila, bisantreno, edatraxato, defo- famina, demecolcina , diaziquona, elfornitina, acetato de eliptínio, eto- glucida, nitrato de gálio, hidroxiureia, lentinano, lonidainina, maitansi- na, ansamitocinas, mitoguazona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraeri-
na, pentostatina, fenamet, pirarubicina, losoxantrona, 2-etil-hidrazida, procarbazina, complexo de polissacarídeo PSK, razoxano, rizoxina, sizofirana, espirogermânio, ácido tenuazônico, triaziquona, 2,2',2"- triclorotrietilamina, toxina T-2, verracurina A, roridina A, anguidina, ure- tano, vindesina (ELDISINA, FILDESIN), dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobroman, gacitosina, arabinosídeo ("Ara- C"), tiotepa, paclitaxel (TAXOL), formulação de nanopartículas modifi- cadas por albumina de paclitaxel (ABRAXANE), doxetaxel (TAXOTE- RE), clorambucila, 6-tioguanina, mercaptopurina, metotrexato, cisplati- na, carboplatina, vinblastina (VELBAN), platina, etoposídeo (VP-16), ifosfamida, mitoxantrona, vincristina (ONCOVIN), oxaliplatina, leucovo- rina, vinorelbina (NAVELBINE), novantrona, edatraxato, daunomicina, aminopterina, ibandronato, inibidor da topoisomerase RFS 2000, diflu- orometililomitina (DMFO), anti-estrogênios e moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs) (incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX) tamoxifeno), raloxifeno (EVISTA), droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, ceoxifeno, LY 1 1 1 7018, onapristona e toremifeno (FARESTON), anti-progesteronas, sub-reguladores de re- ceptor de estrogênio (ERDs), fulvestrante (FASLODEX), agonistas de hormônio de liberação de leutinização (LHRFl) (incluindo acetato de leuprolide (LUPRON e ELIGARD), acetato de goserelina, acetato de buserelina e tripterelina), anti-andógenos (incluindo fiutamida, niluta- mida e bicalutamida); inibidores de aromatase (incluindo 4(5)- imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGASE), exe- mestano (AROMASIN), formestanie, fadrozol, vorozol (RJVISOR), le- trozol (FEMARA) e anastrozol (ARIMIDEX), bisfosfonatos (incluindo clodronato (BONEFOS) ou OSTAC), etidronato (DIDROCAL), NE- 58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA), alendronato (FOS- AMAX), pamidronato (AREDIA), tiludronato (SKELID) e risedronato (ACTONEL), troxacitabina, oligonucleotídeos antissentido (incluindo
PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF-R)), vacina THERATOPE, vacinas de terapia genética (incluindo vacina de ALOVECTINA, vacina de LEUVECTINA e vacina VAXID®; inibidor de topoisomerase 1 (por exemplo, LURTOTECAN)) , fulves- trante; imatinibe, EXEL-0862, erlotinibe, cetuximabe, bevacizumabe, arinotecano, rmRH (por exemplo, ABARELIX), lapatinibe, ditosilato de lapatinibe (da mesma forma conhecido como GW572016), 17AAG, inotuzumabe ozogamicina (BESPONSA), bosutinibe (BOSULIF), pal- bociclibe (IBRANCE) axitinibe (INLYTA), malato de sunitinibe (SU- TENT), crizotinibe (XALKORI), enzalutamida (XTANDI) e combinações de dois ou mais de, sais farmaceuticamente aceitáveis de, e/ou ácidos ou derivados de, qualquer um dos mencionados acima.
[00157] E144. O método de E141, em que a quimioterapia é a qui- mioterapia à base de platina.
[00158] E145. O método de acordo com qualquer um de E136- E144, em que o referido indivíduo é um humano.
[00159] E146. O método de acordo com qualquer um de E136- E145, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, subcutaneamente.
[00160] E147. O método de acordo com qualquer um de E136- E146, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, intravenosamente.
[00161] E148. O método de acordo com qualquer um de E136- E147, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado cerca de duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro se- manas, uma vez a cada cinco semanas, uma vez a cada seis sema-
nas, uma vez a cada sete semanas, uma vez a cada oito semanas, uma vez a cada nove semanas, uma vez a cada dez semanas, duas vezes por mês, uma vez por mês, uma vez a cada dois meses, uma vez a cada três meses, ou uma vez a cada quatro meses.
[00162] E149. O método de acordo com qualquer um de E136- E148, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 60 mg.
[00163] E150. O método de acordo com qualquer um de E136- E149, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose entre cerca de 2 mg e cerca de 50 mg.
[00164] E151. O método de acordo com qualquer um de E136- E150, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 2 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 40 mg e cerca de 50 mg.
[00165] E152. O método de acordo com qualquer um de E136- E148, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 130 mg.
[00166] E153. O método de acordo com qualquer um de E136-E148 ou E152, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 5 mg e cerca de 125 mg.
[00167] E154. O método de acordo com qualquer um de E136-E148 ou E152-E153, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 5 mg, cerca de 12 mg, cerca de 20 mg, cer- ca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 90 mg e cerca de 125 mg.
[00168] E155. O método de acordo com qualquer um de E136- E148, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 400 mg.
[00169] E156. O método de acordo com qualquer um de E136-E148 ou E155, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 15 mg e cer- ca de 385 mg.
[00170] E157. O método de acordo com qualquer um de E136-E148 ou E155-E156, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose selecionada a partir do gru- po que consiste em cerca de 15 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg e cerca de 385 mg.
[00171] E158. Um método para reduzir o nível de GDF15 livre no plasma de um indivíduo em necessidade do mesmo, o referido método compreendendo a administração do anticorpo de acordo com qualquer um de E1-E80 ou a composição de acordo com qualquer um de E104- E105.
[00172] E159. O método de acordo com qualquer um de E106-E108 ou E116-E158, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido para cerca de 0,05 ng/mL a cerca de 3 ng/mL.
[00173] E160. O método de acordo com qualquer um de E106-E108 ou E116-E159, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido para cerca de 0,1 ng/mL a cerca de 1 ng/mL.
[00174] E161. O método de acordo com qualquer um de E106-E108 ou E116-E160, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido para cerca de 0,4 ng/mL a cerca de 0,8 ng/mL.
[00175] E162. O método de acordo com qualquer um de E106-E114 ou E116-E158, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido para menos de 0,5 ng/ml.
[00176] E163. O método de acordo com qualquer um de E106-E158 ou E162, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é re- duzido para menos de 0,4 ng/ml.
[00177] E164. O método de acordo com qualquer um de E106-E108 ou E116-E158, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido em uma faixa cujo valor inferior é selecionado a partir do grupo que consiste em 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09 , 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5 , 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 ng/mL e cujo valor superior é selecionado a partir do grupo que consiste em 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 e 3,0 ng/mL.
[00178] E165. O método de E106-E114 ou E116-E158, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzido para menos do que cerca de 0,5 ng/mL.
[00179] E166. O método de acordo com qualquer um de E106- E165, em que o nível de GDF15 livre no plasma do indivíduo é reduzi- do além do nível mais baixo de detecção usando um ensaio conhecido na técnica para detectar GDF15 livre no plasma.
[00180] E167. Uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E80, um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e um transpor- tador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00181] E168. Composição farmacêutica, especificada pelo fato de que compreende um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E80, um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável, com a condição de que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 não seja avelumabe.
[00182] E169. Método para o tratamento de câncer, compreenden- do a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e uma quanti- dade de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno deste, de acordo com qualquer um de E1-E80, ou uma quantidade de composi- ção farmacêutica de acordo com E167-E168, em que as quantidades juntas são eficazes no tratamento do câncer.
[00183] E170. Método de tratamento de câncer, compreendendo administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e uma quantidade de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80, ou uma quantidade de composição far- macêutica de acordo com E167-169, em que as quantidades juntas são eficazes no tratamento do câncer e em que o antagonista de liga- ção ao eixo PD-1 não é avelumabe.
[00184] E171. O método de E169-E170, em que as quantidades juntas fornecem um efeito terapêutico sinergístico no tratamento do câncer.
[00185] E172. O método de E169, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-L1.
[00186] E173. O método de E169, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti PD-L1, com a condição de que o an- ticorpo anti PD-L1 não seja avelumabe.
[00187] E174. O método de E172, em que o anticorpo PD-L1 é se- lecionado a partir do grupo que consiste em avelumabe, atezolizuma- be ou durvalumabe.
[00188] E175. O método de E172, em que o anticorpo PD-L1 é ate- zolizumabe ou durvalumabe.
[00189] E176. O método de E172, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é avelumabe e é administrado intravenosamente na quantidade de cerca de 10 mg/kg Q2W ou cerca de 800 mg Q2W.
[00190] E177. Método, de acordo com a reivindicação E168, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-1.
[00191] E178. Método, de acordo com a reivindicação E177, em que o anticorpo anti-PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em nivolumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, tislelizumabe, pidi- lizumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe e sassanlimabe (PF- 06801591, RN888, mAb7).
[00192] E179. Método, de acordo com a reivindicação E178, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é sassanlimabe e é admi- nistrado subcutaneamente na quantidade de cerca de 300 mg Q4W ou cerca de 600 mg Q6W.
[00193] E180. O método de acordo com qualquer um de E170- E180, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células renais, carcinoma de células Merkel, câncer de ovário, cân- cer de mama, câncer pancreático, câncer urotelial e câncer de próstata resistente a castração.
[00194] E181. O método de E180, em que o câncer é carcinoma de células renais.
[00195] E182. O método de E1181, em que o câncer é câncer pan-
creático.
[00196] E183. Método de detecção de GDF15 em uma amostra, tecido ou célula usando o anticorpo ou porção de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80, compreendendo o contato da amostra, tecido ou célula com o anticorpo e a detecção do anticorpo.
[00197] E184. Método para o tratamento de câncer em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao paci- ente de uma terapia de combinação compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um inibidor de GDF15, em que as quantidades juntas fornecem um efeito terapêutico sinergístico, desse modo tratando o câncer.
[00198] E185. Método de tratamento de câncer em um paciente em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao paciente de uma terapia de combinação compreendendo uma quantidade tera- peuticamente eficaz sinergística de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um inibidor de GDF15, em que as quantidades juntas fornecem um efeito terapêutico sinergístico, desse modo, tratando o câncer, e em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 não é avelumabe.
[00199] E186. O método de E184-E185, em que o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti-GDF15, ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80.
[00200] E187. O método de E186, em que o anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno no presente documento, compre- ende: a) um LCDR-1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:95; b) um LCDR-2 compreendendo a sequência aa de SEQ ID
NO:28; c) um LCDR-3 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:9; d) uma HCDR-1 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:32; e) uma HCDR-2 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:165; e f) uma HCDR-3 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:52.
[00201] E188. O método de E187, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo que especificamente liga-se a PD-1 e compreende: a) um LCDR-1 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:216; b) um LCDR-2 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:217; c) um LCDR-3 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:218; d) uma HCDR-1 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:210; e) uma HCDR-2 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:213; e f) uma HCDR-3 compreendendo a sequência aa de SEQ ID NO:215.
[00202] E189. O método de E186, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 selecionado a partir do grupo que consiste em nivolumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, pidili- zumabe, tislelizumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe e sassanli- mabe (PF-06801591).
[00203] E190. O método, de acordo com a reivindicação E188-
E189, em que o anticorpo anti-PD-1 é sassanlimabe (PF-06801591).
[00204] E191. O método, de acordo com a reivindicação 186, em que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-L1.
[00205] E192. O método, de acordo com a reivindicação 190, em que o sassanlimabe é administrado subcutaneamente na quantidade de cerca de 300 mg Q4W ou cerca de 600 mg Q6W.
[00206] E.193. O método, de acordo com a reivindicação 191, em que o anticorpo PD-L1 é selecionado a partir do grupo que consiste em atezolizumabe, durvalumabe, BMS-936559, MEDI4736 e MPDL3280A.
[00207] E194. O método, de acordo com a reivindicação 187, em que o anticorpo anti-GDF15, ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreende um VH que compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO:166 e um VL que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163.
[00208] E195. O método de E194, em que o anticorpo anti-GDF15 compreende um HC compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:164 e um LC compreendendo a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO:162.
[00209] E196. O método de E195, em que o anticorpo anti-PD-1 compreende um HC que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:197 e um LC que compreende a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO:199.
[00210] E197. O método, de acordo com a reivindicação 31, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células re- nais, carcinoma de células Merkel, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer urotelial e câncer de próstata resistente à castração.
[00211] E198. O método de E184-E197, em que o câncer é carci-
noma de células renais ou câncer pancreático.
[00212] E199. Um kit para o tratamento de câncer, em que compre- ende uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anti- corpo anti-PD-1 e uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo anti-GDF15.
[00213] E200. Método de tratamento de câncer, em que compreen- de a administração a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de li- gação de antígeno do mesmo, de acordo com qualquer um de E1-E80, ou a composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105.
[00214] E201. O método de E200, em que o câncer é, por exemplo, sem limitação, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cervical, coriocarcinoma, câncer de cólon, câncer de esôfago, câncer gástrico, glioblastoma, glioma, tumor cerebral, câncer de cabeça e pescoço, câncer renal, câncer de pulmão, câncer oral, câncer de ovário, câncer de pâncreas, câncer de próstata, câncer de fígado, câncer uterino, câncer ósseo, leucemia, linfoma, sarcoma, câncer de sangue, câncer da tireoide, câncer do timo, câncer de olho e câncer de pele.
[00215] E202. O método de E200 ou E201, em que o método com- preende ainda a administração de um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[00216] E203. O método de E202, em que o(s) agente(s) terapêuti- co(s) adicional(is) é(são) selecionado(s) de uma quimioterapia, uma vacina, uma terapia à base de célula CAR-T, radioterapia, uma terapia com citocinas, uma vacina, um anticorpo biespecífico, um inibidor de outras trilhas imunossupressoras, um inibidor de angiogênese, um ati- vador de célula T, um inibidor de uma trilha metabólica, um inibidor de mTOR, um inibidor de uma trilha de adenosina, um inibidor de tirosina cinase incluindo, porém, não limitado a INLYTA, inibidores de ALK e sunitinibe, um inibidor de BRAF, um modificador epigenético, um inibi-
dor ou depletor de células Treg e/ou de células supressoras derivadas mieloides, um inibidor de JAK, um inibidor de STAT, inibidor de cinase dependente de ciclina, um agente bioterapêutico (incluindo, porém, não limitado a anticorpos para VEGF, VEGFR, EGFR, Her2/neu, ou- tros receptores de fator de crescimento, CD20, CD40, CD-40L, CTLA- 4, OX-40, 4- 1BB e ICOS), um agente imunogênico (por exemplo, célu- las cancerosas atenuadas, antígenos tumorais, células de apresenta- ção de antígeno, tal como células dendríticas pulsadas com antígeno derivado de tumor ou ácidos nucleicos, citocinas estimulantes da imu- nidade (por exemplo, IL-2, IFNα2, GM -CSF), células transfectadas com genes que codificam citocinas de estimulação imunológica, tais como, porém, não limitado a GM-CSF), um agonista de STING e um agonista de receptor toll-like (por exemplo, TLR3, TLR7, TLR8, TLR9).
[00217] E204. O método de E202, em que o agente terapêutico adi- cional é um anticorpo anti-CD40.
[00218] E205. O método de E203, onde na quimioterapia é tiotepa, ciclofosfamida (CITOXAN), bussulfano, improssulfano, pipossulfano, benzodopa, carboquone, meturedopa, uredopa, altretamina, trietileno- melamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida, trimetilolome- lanina; bulatacina, bulatacinaona), delta-9-tetraidrocanabinol (dronabi- nol, MARINOL), beta-lapachone, lapachol, colchicinas, ácido betulíni- co, topotecano (HYCAMTIN), CPT-11 (irinotecano, CAMPTOSAR), acetilcamptotecina, scopolectina, 9-aminocamptotecina, briostatina, pemetrexed, calistatina, CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos de adozelesina, carzelesina e bizelesina), podofilotoxina, ácido podofi- línico, teniposídeo, criptoficinas, dolastatina, duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1), eleuterrobina, pancra- tistatina, TLK-286, CDP323, um inibidor de integrina alfa-4 oral, uma sarcodictina, espongistatina, clorambucila, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de meclo-
retamina, melfalan, novembicina, fenesterina, prednimustatina, trofos- famida, mostarda de uracila, carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimnustina, antibióticos de enedina (incluindo caliqueamicina, caliqueamicina gama e caliqueamicina ômega, dine- micina, dinemicina A, uma esperamicina, cromóforo de neocarzinosta- tina e cromóforos antibióticos de enedina relacionados a cromoproteí- na, aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomici- nas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomi- cinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L- norleucina, doxorrubicina (incluindo ADRIAMYCIN, morfolino- doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina, injeção de lipossoma de doxorrubicina HC1 (DOXIL) e deoxidoxorubi- cina), epirubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomici- na C, ácido nicofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, pot- firomicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, es- treptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina, metotrexa- to, gencitabina (GEMZAR), tegafur (UFTORAL), capecitabina (XELO- DA), uma epotilona, 5-fluorouracila (5-FU), denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato, fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina, ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina, imatinibe, ami- noglutetimida, mitotano, trilostano, ácido frolínico, aceglatona, glicosí- deo de aldofosfamida, ácido aminolevulínico, eniluracila, ansacrina, bestrabucila, bisantreno, edatraxato, defofamina, demecolcina, diazi- quona, elfornitina, acetato de eliptínio, etoglucida, nitrato de gálio, hi- droxiureia, lentinano, lonidainina, maitansina, ansamitocinas, mitogua- zona, mitoxantrona, mopidanmol, nitraerina, pentostatina, fenamet, pi- rarubicina, losoxantrona, 2-etil-hidrazida, procarbazina, complexo de polissacarídeo PSK, razoxano, rizoxina, espirogermânio, ácido tenu- azônico, triaziquona, 2,2',2"-triclorotrietilamina, toxina T-2, verracurina
A, roridina A, anguidina, uretano, vindesina (ELDISINA, FILDESIN), dacarbazina, manomustina, mitobronitol, mitolactol, pipobroman, gaci- tosina, arabinosídeo ("Ara-C"), tiotepa, paclitaxel (TAXOL), formulação de nanopartículas modificadas por albumina de paclitaxel (ABRAXA- NE), doxetaxel (TAXOTERE), clorambucila, 6-tioguanina, mercaptopu- rina, metotrexato, cisplatina, carboplatina, vinblastina (VELBAN), plati- na, etoposídeo (VP-16), ifosfamida, mitoxantrona, vincristina (ONCO- VIN), oxaliplatina, leucovorina, vinorelbina (NAVELBINE), novantrona, edatraxato, daunomicina, aminopterina, ibandronato, inibidor da to- poisomerase RFS 2000, difluorometililomitina (DMFO), anti- estrogênios e moduladores de receptor anti-estrogênios e estrogênios seletivos (SERMs) (incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX tamoxifeno), raloxifeno (EVISTA), droloxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queroxifeno, LY 1 1 7018, onapristona e toremifeno (FARESTON), anti-progesteronas, sub-reguladores de re- ceptor de estrogênio (ERDs), fulvestrant (FASLODEX), agonistas de hormônio de liberação de hormônio leutinizante (LHRFl) (incluindo acetato de leuprolida (LUPRON e ELIGARD), acetato de goserelina, acetato de buserelina e tripterelina), anti-andrógenos (incluindo fiuta- mida, nilutamida e bicalutamida); inibidores de aromatase (incluindo 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGASE), exemestano (AROMASIN), formestanie, fadrozol, vorozol (RJVISOR), letrozol (FEMARA) e anastrozol (ARIMIDEX), bisfosfonatos (incluindo clodronato (BONEFOS ou OSTAC), etidronato (DIDROCAL), NE- 58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA), alendronato (FOS- AMAX), pamidronato (AREDIA), tiludronato (SKELID), e risedronato (ACTONEL) troxacitabina, oligonucleotídeos antissentido (incluindo PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF-R)), vacina THERATOPE, vacinas de terapia genética (incluindo vacina ALOVECTINA, vacina LEUVECTINA e vacina VAXID®; inibidor de topoisomerase 1 (por exemplo, LURTOTECAN)), fulvestrant; imati- nibe, EXEL-0862, erlotinibe, cetuximabe, bevacizumabe, arinotecana, rmRH (por exemplo, ABARELIX), lapatinibe, ditosilato de lapatinibe (da mesma forma conhecido como GW572016), 17AAG, inotuzumab ozo- gamicina (BESPONSA), bosutibinibe (BOSULIF), palbociclib (IBRAN- CE), axitinibe (INLYTA), malato de sunitinibe (SUTENT), crizotinibe (XALKORI), enzalutamida (XTANDI) e combinações de dois ou mais de, sais farmaceuticamente aceitáveis de, e/ou ácidos ou derivados de, qualquer um dos mencionados acima.
[00219] E206. O método E203, em que a quimioterapia é a quimio- terapia à base de platina.
[00220] E207. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido indivíduo é um humano.
[00221] E208. O método de acordo com qualquer um de E200- E207, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, subcutaneamente.
[00222] E209. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, compreendendo a administração do referido anticorpo ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, intravenosamente.
[00223] E210. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado cerca de duas vezes por semana, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro se- manas, uma vez a cada cinco semanas, uma vez a cada seis sema- nas, uma vez a cada sete semanas, uma vez a cada oito semanas, uma vez a cada nove semanas, uma vez a cada dez semanas, duas vezes por mês, uma vez por mês, uma vez a cada dois meses, uma vez a cada três meses, ou uma vez a cada quatro meses.
[00224] E211. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 60 mg.
[00225] E212. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose entre cerca de 2 mg e cerca de 50 mg.
[00226] E213. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez por semana em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 2 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 40 mg e cerca de 50 mg.
[00227] E214. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 130 mg.
[00228] E215. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose entre cerca de 5 mg e cerca de 125 mg.
[00229] E216. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada duas semanas em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 5 mg, cerca de 12 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 90 mg e cerca de 125 mg.
[00230] E217. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 0,1 mg e cerca de 400 mg.
[00231] E218. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose entre cerca de 15 mg e cerca de 385 mg.
[00232] E219. O método de acordo com qualquer um de E200- E206, em que o referido anticorpo ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado uma vez a cada quatro semanas em uma dose selecionada a partir do grupo que consiste em cerca de 15 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg e cerca de 385 mg.
[00233] E220. Um método de tratar câncer em um indivíduo em ne- cessidade do mesmo, o método compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1-E80, ou a composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105.
[00234] E221. O método de E220, em que o método compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais agentes terapêuticos adicionais.
[00235] E222. O método de E221, em que o agente terapêutico adi- cional é um anticorpo anti-CD40 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo.
[00236] E223. O método de acordo com qualquer um de E220- E222, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer gástrico, sarcoma, linfoma, linfoma de Hodgkin, leucemia, câncer de cabeça e pescoço, câncer de cabeça e pescoço de células escamosas, câncer tímico, câncer epitelial, câncer salivar, câncer de fígado, câncer de estômago, câncer da tireóide, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de esô- fago, câncer de pâncreas, glioma, leucemia, mieloma múltiplo, carci- noma de células renais, câncer de bexiga, câncer cervical, coriocarci- noma, câncer de cólon, câncer oral, câncer de pele e melanoma.
[00237] E224. O método de acordo com qualquer um de E220-223, em que o indivíduo é um humano.
[00238] E225. O método para realçar o efeito terapêutico de um modulador imunológico administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer, o método compreendendo a administração ao indivíduo re- cebendo o modulador imunológico de uma quantidade eficaz do anti- corpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de acordo com E1 -E80, ou a composição farmacêutica de acordo com E104 ou E105.
[00239] E226. O método de E225, em que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer de mama, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer de pân- creas, câncer de próstata, glioma, glioblastoma, câncer renal, câncer endometrial e câncer colorretal.
[00240] E227. O método para tratar ou prevenir a síndrome de libe- ração de citocina (CRS) em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método compreendendo a administração ao indivíduo de uma quan- tidade eficaz do anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de an- tígeno do mesmo, de E1-E80 ou a composição farmacêutica de E104 ou E105, desse modo tratando ou prevenindo CRS no indivíduo.
[00241] E228. Método para diminuir ou inibir a toxicidade em um indivíduo que experimenta a síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou tempestade de citocinas ou vulnerável à síndrome de liberação de citocinas ou tempestade de citocinas, compreendendo a etapa de ad- ministração de uma composição que compreende administrar ao indi- víduo uma quantidade eficaz do anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E80, ou a composição far- macêutica de E104 ou E105.
[00242] E229. Método, de acordo com a reivindicação E227 ou E228, em que a produção de pelo menos uma citocina pró-inflamatória é diminuída ou inibida no referido indivíduo em comparação com um indivíduo experimentando síndrome de liberação de citocina ou tem- pestade de citocinas ou vulnerável à síndrome de liberação de citocina ou tempestade de citocinas e não administrado o anticorpo anti- GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, de E1-E80, ou a composição farmacêutica de E104 ou E105.
[00243] E230. O método de acordo com qualquer um de E227- E229, em que o indivíduo está sendo submetido a terapia contra cân- cer e o referido método não reduz a eficácia da terapia contra câncer.
[00244] E231. O método de E230, em que a terapia de câncer compreende um modulador imunológico.
[00245] E232. O método de E230 ou E231, em que a administração do anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ocorre antes, simultaneamente ou após a terapia do câncer.
[00246] E233. O método de acordo com qualquer um de E231- E232, em que o modulador imunológico é: um anticorpo anti-CD40, um anticorpo anti-CD47, um anticorpo anti-CTLA4, um anticorpo anti-4- 1BB/CD137, interleucina 12 (IL-12 ) ou IL-15.
[00247] E234. O método de acordo com qualquer um de E228-
E233, em que a causa da CRS ou tempestade de citocinas compreen- de um estímulo, condição ou síndrome infecciosa, ou em que a causa da referida síndrome de liberação de citocina ou tempestade de citoci- nas compreende um estímulo não infeccioso, condição ou síndrome, ou qualquer combinação dos mesmos.
[00248] E235. O método de E234, em que o referido estímulo infec- cioso, condição ou síndrome compreende gripe, gripe aviária, síndro- me respiratória aguda grave (SARS), linfo-histiocitose hemofagocítica associada ao vírus Epstein-Barr (HLH), sepse, sepse gram-negativa, malária, um Vírus Ebola, um vírus da varíola, uma infecção bacteriana Gram-negativa sistêmica ou síndrome de Jarisch-Herxheimer, ou em que o referido estímulonão infeccioso, condição ou síndrome compre- ende é linfo-histiocitose hemofagocítica (HLH), HLH esporádico, sín- drome de ativação de macrófago (MAS), artrite crônica, artrite idiopáti- ca juvenil sistêmica (sJIA), doença de Still, uma síndrome periódica associada à criopirina (CAPS), síndrome autoinflamatória do frio fami- liar (FCAS), urticária familiar ao frio (FCU), síndrome de Muckle-Well (MWS), Síndrome Cutânea e Articular Neurológica Infantil Crônica (CINCA), uma criopirinopatia que compreende mutações de ganho de função herdadas ou de novo no gene NLRP3, um distúrbio autoinfla- matório hereditário, pancreatite aguda, queimaduras severas, um trauma, uma síndrome da angústia respiratória aguda, uma imunote- rapia, uma terapia com anticorpos monoclonais, secundária ao uso de fármacos, é secundária à inalação de toxinas, um lipopolissacarídeo (LPS), uma toxina Gram-positiva, toxinas fúngicas, glicosilfosfatidilino- sitol (GPI), ou modulação de expressão de gene RIG-1.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[00249] FIG. 1A mostra um gráfico que representa as temperaturas de transição (Tm1) para os anticorpos anti-GDF15 da invenção, como determinado por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC). O Tm1 representa a temperatura na qual o CH2 do anticorpo está 50% desdo- brado.
[00250] FIG. 1B mostra um gráfico que representa as temperaturas de transição (Tm2) para os anticorpos anti-GDF15 da invenção, como determinado por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC). O Tm2 representa a temperatura na qual o Fab do anticorpo está 50% desdo- brado.
[00251] FIG. 1C mostra um gráfico que representa as temperaturas de transição (Tm3) para os anticorpos anti-GDF15 da invenção, como determinado por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC). O Tm3 representa a temperatura na qual o CH3 do anticorpo está 50% desdo- brado.
[00252] FIG. 2 mostra a viscosidade de GDF15_001 como analisa- do por um instrumento Anton Parr. O limite de viscosidade aceitável (20cP) é obtido em cerca de 140 mg/ml.
[00253] FIG. 3 mostra a concentração de GDF15 de plasma huma- no após a injeção de vírus adeno-associado (AAV)-GDF15 humano em camundongos C57Bl6N machos saudáveis. O plasma GDF15 foi medido em 13 e 14 dias após a injeção de AAV (corresponde aos dias -2 e -1 na Figura 3) por meio de ELISA (R&D Systems DGD150). As linhas horizontais representam médias. n = 9 por grupo.
[00254] FIG. 4 representa um gráfico que mostra a capacidade de GDF15_001 de reverter a perda de peso induzida por GDF15 em ca- mundongos saudáveis. As setas apontam para os tempos da injeção de AAV-GDF15 humano (dia -15) e a primeira dose de anticorpo mo- noclonal (mAb) (dia 0). Camundongos C57Bl6N machos saudáveis foram tratados com GDF15_001 (30 mg/kg, subcutaneamente (SC) a cada três dias (Q3D)) ou controle de imunoglobulina G (IgG). Os valo- res são médias ± SEM. n = 8 por grupo. ANOVA de medidas repetidas com uma estrutura de covariância autorregressiva (1) foi usada para comparar a alteração percentual dos pesos corporais da linha de refe- rência entre os grupos de tratamento ao longo dos dias 4-6 do período de dosagem. O ajuste de comparação múltipla de Tukey-Kramer foi usado para controlar a taxa de erro da experiência para comparações de grupos de tratamento na análise de medidas repetidas de variância (ANOVA). * é p<0,0001 versus Controle + IgG (dias 4-6); † é p<0,0001 versus GDF15 + GDF15_001 (dias 4-6).
[00255] FIG. 5 representa um gráfico que mostra a capacidade de GDF15_001 de reverter a perda de massa de tecido adiposo induzida por GDF15. Camundongos C57Bl6N machos saudáveis foram injeta- dos com AAV-GDF15 humano no dia -15 seguido pela primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (30 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado por 6 dias. A composição corporal foi medida no dia 6 por meio de imagem de res- sonância magnética (MRI). Os valores são médias ± SEM. n = 8 por grupo. Análise estatística realizada com ANOVA. * é p <0,0001 versus Controle + IgG, † é p <0,01 versus GDF15 + GDF15_001.
[00256] FIG. 6 representa um gráfico que mostra a capacidade de GDF15_001 de reverter a perda de massa de tecido magro induzida por GDF15. Camundongos C57BL6N machos saudáveis foram injeta- dos com AAV-GDF15 humano no dia -15 seguido pela primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (30 mg/kg, subcutaneamente no terceiro dia) ou controle de IgG foi continuado por 6 dias. A composição corporal foi medida no dia 6 por meio de MRI. Os valores são médias ± SEM. n = 8 por grupo. Análise estatística realizada com ANOVA. * é p<0,01 versus Controle + IgG; † é p<0,01 versus GDF15 + GDF15_001.
[00257] FIG. 7 representa um gráfico que mostra a concentração de GDF15 no plasma de murino após a injeção de AAV-GDF15 de murino em camundongos C57Bl6N machos saudáveis. O GDF15 no plasma foi medido em 9 dias após a injeção de AAV (corresponde ao dia 9 na Figura 5) por meio de ELISA (R&D Systems MGD150). As linhas hori- zontais representam médias. n = 6 por grupo. Os níveis de GDF15 no plasma médios foram comparados entre os tratamentos com um teste t usando o ajuste de Satterthwaite para variâncias desiguais. * é p <0,001 versus controle.
[00258] FIG. 8 mostra um gráfico que descreve a capacidade de GDF15_001 de reverter a perda de peso induzida por GDF15 em ca- mundongos saudáveis. As setas apontam para os tempos da injeção de AAV-GDF15 de murino (dia 0) e a primeira dose de mAb (dia 11). Camundongos C57Bl6N machos saudáveis foram tratados com GDF15_001 (30 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 10 por grupo. Uma ANOVA repetida com uma es- trutura de covariância não estruturada foi usada para comparar a por- centagem dos pesos corporais da linha de referência entre os grupos de tratamento ao longo dos dias 12-16 do período de dosagem. Na presença de um tratamento estatisticamente significativo por interação de tempo, as comparações entre os grupos de tratamento foram feitas no dia 16 para a porcentagem dos pesos corporais da linha de refe- rência usando uma ANOVA adequada para o projeto completamente aleatorizado. * é p <0,0001 versus Controle + IgG no dia 16, † é p <0,0001 versus hGDF15 + PF-06946860 no dia 16.
[00259] FIG. 9 mostra um gráfico que descreve a capacidade de GDF15_001 para aumentar a ingestão de alimentos após o tratamento com GDF15 em camundongos saudáveis. Camundongos C57Bl6N machos saudáveis foram tratados com GDF15_001 (30 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. A ingestão alimentar foi medida diariamente, e uma ingestão alimentar cumulativa foi calculada. Os valores são mé- dias ± SEM. n = 8-10 por grupo. ANOVA foi usada para comparações de grupos de tratamento da ingestão alimentar cumulativa ao longo dos dias 11 a 16 usando o ajuste de comparação múltipla de Bonfer- roni. * é p <0,001 versus Controle + IgG, † é p <0,001 versus Controle + GDF15_001, p = 0,0505 GDF15 + GDF15_001 versus GDF15 + IgG.
[00260] FIG. 10 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para reverter a perda de peso em camundongos portado- res de tumor HT-1080 (linhagem celular de fibrossarcoma humano). As setas apontam para os tempos do implante subcutâneo de células HT- 1080 (dia -13) e a primeira dose de mAb (dia 0). Camundongos imu- nodeficientes combinados severos fêmeas foram tratados com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 9-10 por grupo. ANOVA de medidas repetidas com uma estrutura de covariância autorregressiva (1) foi usada para com- parar a alteração percentual dos pesos da linha de referência entre os grupos de tratamento ao longo dos dias 9-11 do período de dosagem (onde a doença se estabilizou e os animais não começaram a desistir devido à perda de peso). * = p <0,0001 HT-1080 + IgG versus NTB + PBS e HT-1080 + GDF15_001 (dias 9-11).
[00261] FIG. 11 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 de reverter a perda de massa gorda em camundongos portadores de tumor HT-1080 (linhagem celular de fibrossarcoma hu- mano). Camundongos fêmeas imunodeficientes combinados graves foram implantados (subcutâneo) com células HT-1080 no dia -13 se- guido pela primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado por 18 dias. A composição corporal foi medida no dia 18 por meio de MRI echo. Os valores são médias ± SEM. n = 9-10 por grupo. Análise estatística realizada com ANOVA. * = p <0,0001 HT- 1080 + IgG versus NTB + PBS e HT-1080 + GDF15_001.
[00262] FIG. 12 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para reverter a perda de massa de tecido magro livre de tumor em camundongos portadores de tumor HT-1080 (linhagem celu- lar de fibrossarcoma humano). Camundongos fêmeas imunodeficien- tes combinados graves foram implantados (subcutâneo) com células HT-1080 no dia -13 seguido pela primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado por 18 dias. A composição corporal foi medida no dia 18 por meio de MRI. Os valores são médias ± SEM. n = 9-10 por grupo. Análise estatística realizada com ANOVA. * = p <0,001 HT-1080 + IgG versus NTB + PBS, † = p <0,0001 HT-1080 + IgG ver- sus HT-1080 + GDF15_001.
[00263] FIG. 13 mostra um gráfico que descreve a capacidade de GDF15_001 para prolongar a sobrevivência em camundongos porta- dores de tumor HT-1080 (linhagem celular de fibrossarcoma humano). Camundongos fêmeas imunodeficientes combinados graves foram im- plantados (subcutâneo) com células HT-1080 no dia -13, seguido pela primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado até morte ou eutanásia (determinada por problemas de saúde e/ou> 30% de perda de peso de acordo com as diretrizes do Institutional Animal Care e Use Committee). n = 9-10 por grupo. As curvas de so- brevivência de Kaplan-Meier foram ajustadas aos dados de tempo de falha usando uma estatística de classificação de log para comparar os grupos de tratamento.* é p <0,0001 versus grupo HT-1080 + GDF15_001.
[00264] FIG. 14 mostra um gráfico que representa a concentração de GDF15 de plasma humano em camundongos portadores de tumor HT-1080 (linha de células de fibrossarcoma humano) alojados em ter- moneutralidade (86◦F). Camundongos fêmeas imunodeficientes com- binados graves foram implantados (subcutâneo) com células HT-1080 no dia -13 seguido pela primeira dose de mAb (controle de IgG, 10 mg/kg, SC, Q3D) começando no dia 0. Plasma GDF15 foi medido no dia 18 via ELISA (R&D Systems DGD150). A linha horizontal represen- ta a média. n = 7.
[00265] FIG. 15 mostra um gráfico que descreve a capacidade de GDF15_001 para reverter a perda de peso em camundongos portado- res de tumor HT-1080 (linhagem celular de fibrossarcoma humano) alojados em termoneutralidade (86◦F). As setas apontam para os tem- pos do implante subcutâneo de células HT-1080 (dia -13) e a primeira dose de mAb (dia 0). Camundongos fêmeas imunodeficientes combi- nados graves foram tratados com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 10 por grupo. ANOVA de medidas repetidas com uma estrutura de covariância não estruturada foi usada para comparar a porcentagem dos pesos corpo- rais da linha de referência entre os grupos de tratamento ao longo dos dias 1-13 do período de dosagem seguido por uma comparação entre os grupos de tratamento no dia 7 e dia 13 usando uma ANOVA. As comparações de interesse entre os grupos de tratamento foram então testadas com testes t usando uma estimativa combinada de variância da ANOVA. O ajuste de comparação múltipla de Bonferroni foi usado para controlar a taxa de erro experimental para comparações de grupo de tratamento. * = p <0,0001 versus NTB + IgG e HT-1080 + GDF15_001 (dias 7 e 13).
[00266] FIG. 16 mostra um gráfico que representa a concentração de GDF15 de plasma humano em camundongos portadores de tumor PA-1065 (derivado de metástase hepática de tumor pancreático). Ca- mundongos fêmeas imunodeficientes combinados graves foram im- plantados (subcutâneo) com tecido tumoral PA-0165 no dia -18 segui- do pela primeira dose de mAb (controle de IgG, 10 mg/kg, SC, Q3D) começando no dia 0. O GDF15 de plasma foi medido no dia 27 via ELISA (R&D Systems DGD150). A linha horizontal representa a média.
n = 14.
[00267] FIG. 17 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para prevenir a perda de peso em camundongos portado- res de tumor PA-0165 (derivado de metástase hepática de tumor pan- creático humano). As setas apontam para os tempos do implante sub- cutâneo de tecido tumoral PA-0165 (dia -18) e a primeira dose de mAb (dia 0). Camundongos fêmeas imunodeficientes combinados graves foram tratados com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 10-17 por grupo. Uma análise de medidas repetidas de variância, com uma estrutura de covariância não estruturada, foi usada para comparar a porcentagem dos pesos corporais da linha de referência entre os grupos de tratamento ao lon- go dos dias 10-16 do período de dosagem. Na presença de um trata- mento estatisticamente significante por interação de tempo, as compa- rações entre os grupos de tratamento foram feitas no dia 16 com tes- tes t usando uma estimativa combinada de variância da ANOVA de medidas repetidas. O ajuste de comparação múltipla de Bonferroni foi usado para controlar a taxa de erro experimental para comparações de grupo de tratamento. * = p <0,0001 versus NTB + PBS e PA-0165 + GDF15_001.
[00268] FIG. 18 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para prolongar a sobrevivência em camundongos porta- dores de tumor PA-1065 (derivado de metástase hepática de tumor pancreático humano). Camundongos fêmeas imunodeficientes combi- nados graves foram implantados (subcutâneo) com tecido tumoral PA- 0165 18 dias antes da primeira dose de mAb começando no dia 0. O tratamento de mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado até a morte ou eutanásia (determinada por pro- blemas de saúde e/ou> 30% de perda de peso de acordo com as dire- trizes de Cuidado Institucional Animal e de Comitê de Uso). n = 17 por grupo. As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier foram ajustadas aos dados do tempo de falha usando uma estatística de classificação de log para comparar as taxas de sobrevida entre os grupos de trata- mento.* é p <0,01 versus PA-0165 + GDF15_001.
[00269] FIG. 19 mostra um gráfico que representa a concentração de GDF15 de plasma de murino em camundongos portadores de tu- mor RENCA (linha celular de adenocarcinoma renal de murino) em termoneutralidade (86◦F). Camundongos Balb/c fêmeas foram implan- tados (subcutâneos) com células RENCA e o GDF15 de plasma foi medido no final do estudo (corresponde à Figura 17) via ELISA (R&D Systems MGD150). Valores são médias. n = 10-12 por grupo. ANOVA com o ajuste de Kenward-Roger para variâncias heterogêneas foi usa- do para comparação de ingestão alimentar cumulativa e GDF15 de plasma transformado de log natural entre grupos de tratamento usan- do o ajuste de comparação múltipla de Tukey-Kramer para controlar a taxa de erro da experiência. Médias geométricas foram produzidas pa- ra médias de GDF15 transformadas de log natural e estimativas de intervalos de confiança de 95%. Todas as variáveis de resposta foram avaliadas para atender à suposição de normalidade com o teste de Shapiro-Wilks e gráficos Q-Q. * é p <0,0001 diferente de NTB + Veícu- lo, ‡ é p <0,0001 diferente de NTB + Sorafenibe, † é p <0,01 versus RENCA + Sorafenibe + IgG.
[00270] FIG. 20 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para reverter a perda de peso em camundongos portado- res de tumor RENCA (linha celular de adenocarcinoma renal de muri- no) tratados com agente anticâncer e alojados em termoneutralidade (86◦F). As setas apontam para os tempos do implante subcutâneo de células RENCA (dia -12), primeira dose de sorafenibe (dia -2) e a pri- meira dose de mAb (dia 0). Camundongos Balb/c fêmeas foram trata- dos com Sorafenibe (15 mg/kg, PO, QD) e GDF15_001 (10 mg/kg, SC,
Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 10-12 por grupo. ANOVA de medidas repetidas com uma estrutura de covariân- cia heterogênea autorregressiva (1) foi usada para comparar a mu- dança percentual dos pesos da linha de referência entre os grupos de tratamento ao longo dos dias 3-7 e 13-17 do período de dosagem. O ajuste de comparação múltipla de Tukey-Kramer foi usado para contro- lar a taxa de erro da experiência para comparações de grupo de tra- tamento na ANOVA de medidas repetidas. ** é p <0,0001 diferente de NTB + Veículo (dias 3-7), * é p <0,0001 diferente de NTB + Sorafenibe (dias 13-17), † é p <0,0001 versus RENCA + Sorafenibe + GDF15_001 (dias 13- 17).
[00271] FIG. 21 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para prolongar a sobrevivência em camundongos porta- dores de tumor RENCA (linha celular de adenocarcinoma renal de mu- rino) tratados com agente anticâncer e alojados em termoneutralidade (86°F). Camundongos Balb/c fêmeas foram implantados (subcutâneo) com células RENCA 10 dias antes da primeira dose de sorafenibe se- guida pela primeira dose de mAb 2 dias depois (corresponde ao dia 0). Sorafenibe (15 mg/kg, PO, QD) e tratamento com mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado até a morte ou eutanásia (determinado por problemas de saúde e/ou perda de peso >30% de acordo com Diretrizes de Institutional Animal Care e Use Committee). n = 10-12 por grupo. As curvas de sobrevi- vência de Kaplan-Meier foram ajustadas aos dados do tempo de falha usando uma estatística de classificação de log para comparar as taxas de sobrevida entre os grupos de tratamento. * é p <0,01 versus REN- CA + Sorafenibe + GDF15_001.
[00272] FIG. 22 mostra um gráfico que representa a concentração de GDF15 de plasma humano em camundongos portadores de tumor NSX-26115 (derivado de adenocarcinoma de carcinoma de pulmão de células não pequenas humano). Camundongos fêmeas imunodeficien- tes combinados graves foram implantados (subcutâneo) com tecido tumoral NSX-26115 e o GDF15 de plasma foi medido no final do estu- do (corresponde à Figura 20) via ELISA (R&D Systems DGD150). n = 10-12 por grupo. Uma ANOVA com o ajuste de Kenward-Roger para variâncias heterogêneas foi usada para comparar os níveis de GDF15 no plasma entre os diferentes grupos de tratamento. A normalidade foi avaliada usando histogramas e o teste de Shapiro-Wilk e a homoge- neidade de variância foi avaliada usando teste de Levene. As compa- rações pareadas do grupo de tratamento foram ajustadas para compa- rações múltiplas usando o método de Tukey-Kramer. * é p <0,01 ver- sus todos os outros grupos.
[00273] FIG. 23 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para reverter a perda de peso em NSX-26115 (derivado de adenocarcinoma de carcinoma de pulmão de células não pequenas humano) camundongos portadores de tumor tratados com ou sem agente anticâncer. As setas apontam para os tempos do implante sub- cutâneo de tecido tumoral NSX-26115 (dia -30), primeira dose de cis- platina (dia 0) e a primeira dose de mAb (dia 0). Camundongos fêmeas imunodeficientes combinados graves foram tratados com Cisplatina (5 mg/kg, IP, Q7D) e/ou GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG. Os valores são médias ± SEM. n = 10-12 por grupo. Uma ANOVA repetida com uma estrutura de covariância autorregressiva de primeira ordem foi usada para comparar a mudança percentual no peso corpo- ral ao longo do tempo entre os grupos de tratamento usando dados dos dias 17-19. Neste momento, a doença estava em um estado esta- bilizado, sem interação significativa entre o tratamento e dia. A norma- lidade multivariada foi avaliada usando os testes de Mardia para assi- metria e curtose. Uma ANOVA de único sentido por tratamento foi conduzida no dia 10 para avaliar as diferenças entre os grupos de tra-
tamento no dia do efeito de cisplatina máximo, como informado pelo cronograma de dosagem. Todas as comparações de pares de grupos de tratamento foram ajustadas para comparações múltiplas usando o método de Tukey-Kramer. * é p <0,0001 versus NTB + veículo (dias 17-19), ‡ é p <0,0001 versus NSX-26115 + GDF15_001 (dias 17-19), † é p <0,001 versus NTB + Cisplatina (dias 17-19), § é p <0,0001 versus NSX-26115 + Cisplatina + GDF15_001 (dias 17-19), ‡‡ é p <0,01 ver- sus NTB + Veículo (dia 10), ** é p <0,0001 versus NSX-26115 + IgG (dia 10)
[00274] FIG. 24 mostra um gráfico que representa a capacidade de GDF15_001 para prolongar a sobrevivência em camundongos porta- dores de tumor NSX-26115 (derivado de adenocarcinoma de carcino- ma pulmonar de células não pequenas humano) tratados com agente anticâncer. Camundongos fêmeas imunodeficientes combinados gra- ves foram implantados (subcutâneo) com tecido tumoral NSX-26115 30 dias antes da primeira dose de cisplatina e mAb (corresponde ao dia 0). O tratamento com cisplatina (5 mg/kg, IP, Q7D) e mAb com GDF15_001 (10 mg/kg, SC, Q3D) ou controle de IgG foi continuado até a morte ou eutanásia (determinado por problemas de saúde e/ou perda de peso> 30% de acordo com Diretrizes de Institutional Animal Care e Use Committee). n = 10-12 por grupo. Curvas de sobrevida de Kaplan-Meier com teste de classificação de log foram utilizadas para comparar a sobrevida à eutanásia prematura entre os grupos. * é p <0,0001 versus NSX-26115 + Cisplatina + GDF15_001.
[00275] FIG. 25 mostra um gráfico que sugere uma dose subcutâ- nea semanal capaz de reduzir o nível de GDF15 livre para menos de 0,5 ng/mL em um indivíduo, ao longo do intervalo de dosagem, para GDF15_001, em função do nível de GDF15 livre inicial em um indiví- duo.
[00276] FIG. 26 mostra um gráfico que sugere uma dose subcutâ-
nea semanal capaz de reduzir o nível de GDF15 livre para menos de 0,5 ng/mL em um indivíduo, ao longo do intervalo de dosagem, para GDF15_001, em função do nível de GDF15 livre inicial em um indiví- duo.
[00277] FIG. 27 mostra um gráfico sugerindo uma dose subcutânea semanal capaz de reduzir o nível de GDF15 livre para menos de 0,5 ng/mL em um indivíduo, ao longo do intervalo de dosagem, para GDF15_001, em função do nível de GDF15 livre inicial em um indiví- duo.
[00278] FIG. 28 fornece uma tabela que mostra as SEQ ID NOs correspondentes aos anticorpos GDF15 da invenção.
[00279] FIG. 29 representa um gráfico que sumariza os resultados do tratamento anti-GDF15 (triângulos sólidos), tratamento com anti- corpo anti-CD40 (círculos abertos) e tratamento de combinação (triân- gulos abertos de cabeça para baixo). Os níveis de expressão de MHCII são apresentados como intensidade fluorescente média (MFI) em uma população de macrófagos infiltrantes de tumor.
[00280] FIG. 30 representa um gráfico que sumariza os resultados do tratamento anti-GDF15 (triângulos sólidos), tratamento com anti- corpo anti-CD40 (círculos abertos) e tratamento de combinação (triân- gulos abertos).
[00281] FIG. 31 representa um gráfico que sumariza os resultados do tratamento anti-GDF15 (triângulos sólidos de cabeça para baixo), tratamento com anticorpo anti-CD40 (triângulos abertos) e tratamento de combinação (quadrados sólidos).
[00282] FIG. 32 representa um gráfico que sumariza os resultados do tratamento com anticorpo anti-GD15_297 (círculos abertos) e tra- tamento com anticorpo anti-GD15_001 (triângulos abertos).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00283] A presente invenção fornece anticorpos, e fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, que especificamente ligam-se a GDF15 e reduzem ou inibem a atividade de GDF15, incluindo, porém, não limitado a capacidade de GDF15 de interagir com a proteína se- melhante ao receptor α da família GDNF (GFRAL). A invenção da mesma forma fornece processos para fazer, preparar ou produzir os anticorpos GDF15. Os anticorpos da invenção são úteis no diagnósti- co, profilaxia e/ou tratamento de distúrbios ou condições mediadas por ou associadas à atividade de GDF15, incluindo, porém, não limitado a distúrbios hiperproliferativos especificados por GDF15, perda de mas- sa muscular, perda de peso corporal, perda de peso de gordura, dimi- nuição da ingestão de alimentos e similar. A invenção da mesma for- ma abrange a expressão dos anticorpos e a preparação e fabricação de composições compreendendo os anticorpos da invenção, ou frag- mentos de ligação de antígeno dos mesmos, tais como medicamentos para o uso dos anticorpos.
[00284] Polinucleotídeos que codificam anticorpos que se ligam a GDF15, ou porções de ligação de antígeno do mesmo, são fornecidos. Polinucleotídeos que codificam cadeias pesadas ou cadeias leves de anticorpos, ou ambas, são da mesma forma fornecidos. Células hos- pedeiras que expressam anticorpos anti-GDF15 são fornecidas. Méto- dos de tratamento usando anticorpos para GDF15 são fornecidos. Tais métodos incluem, porém, não são limitados a métodos de tratamento de doenças associadas ou mediadas pela expressão de GDF15 e/ou ligação de GDF15 a GFRAL, incluindo, porém, não limitado a doenças inflamatórias e imunes e distúrbios hiperproliferativos.
[00285] Os títulos das seções usados no presente documento são apenas para propósitos organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito.
[00286] Todas as referências citadas no presente documento, inclu- indo pedidos de patentes, publicações de patentes e números de acesso de Genbank estão incorporados no presente documento por referência, como se cada referência individual fosse específica e indi- vidualmente indicada para ser incorporada por referência em sua tota- lidade.
[00287] As técnicas e procedimentos descritos ou referenciados no presente documento são geralmente bem entendidos e comumente usados usando metodologia convencional por aqueles versados na técnica, tais como, por exemplo, as metodologias amplamente utiliza- das descritas em Sambrook e outro, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIO- LOGY (F. M. Ausubel, e outro. eds., (2003)); the series METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL AP- PROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATO- RY MANUAL e ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987)); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R. I. Fresh- ney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture La- boratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths e D. G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds); Gene Transfer Vectors for Mamma- lian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987); PCR: The Poly- merase Chain Reaction, (Mullis e outro, eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan e outro, eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibod- ies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Mon-
oclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)); The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Ac- ademic Publishers, 1995); and Cancer: Principles and Practice of On- cology (V. T. DeVita e outro., eds., J.B. Lippincott Company, 1993); e versões atualizadas dos mesmos. Anticorpos
[00288] Um “anticorpo” ou “Ab” é uma molécula de imunoglobulina capaz de reconhecer e se ligar a um alvo específico ou antígeno (Ag), tal como um carboidrato, polinucleotídeo, lipídeo, polipeptídeo, etc., através de pelo menos um local de reconhecimento de antígeno, loca- lizado na região variável da molécula de imunoglobulina. Quando no presente documento utilizado, o termo "anticorpo" pode abranger qualquer tipo de anticorpo, incluindo, porém, não limitado a anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, fragmentos de ligação de antíge- no (ou porção), de anticorpos intactos que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um determinado antígeno (por exemplo, GDF15).
[00289] O termo "antígeno" refere-se à entidade molecular usada para imunização de um vertebrado imunocompetente para produzir o anticorpo que reconhece o Ag ou para avaliar uma biblioteca de ex- pressão (por exemplo, biblioteca de exibição de fago, levedura ou ri- bossomo, entre outros). No presente documento, Ag é denominado mais amplamente e geralmente se destina a incluir moléculas alvo que são especificamente reconhecidas pelo Ab, desse modo incluindo fra- gmentos ou mímicos da molécula usada em um processo de imuniza- ção para aumentar o Ab ou na avaliação da biblioteca para selecionar o Ab. Desse modo, para anticorpos da invenção que se ligam a GDF15, GDF15 de tamanho natural de espécies de mamíferos (por exemplo, GDF15 humano, de macaco, de camundongo e de rato), in- cluindo monômeros e multímeros, tais como dímeros, trímeros, etc. dos mesmos, bem como truncados e outras variantes de GDF15, são referidas como um antígeno.
[00290] Um "fragmento de ligação de antígeno" de um anticorpo refere-se a um fragmento de um anticorpo de tamanho natural que re- tém a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno (de prefe- rência com substancialmente a mesma afinidade de ligação). Exem- plos de um fragmento de ligação de antígeno incluem (i) um fragmento de Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios de VL, VH, CL e CH1; (ii) um fragmento de F(ab’)2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos de Fab ligados por uma ponte dissul- feto na região de articulação; (iii) um fragmento de Fd que consiste nos domínios de VH e CH1; (iv) um fragmento de Fv que consiste nos do- mínios de VL e VH de um único braço de um anticorpo, (v) um frag- mento de dAb (Ward e outro, 1989 Nature 341: 544-546), que consiste em um domínio de VH; e (vi) uma região de determinação de comple- mentaridade isolada (CDR), Fvs ligados por dissulfeto (dsFv) e anti- corpos e intracorpos anti-idiotípicos (anti-Id). Além disso, embora os dois domínios do fragmento de Fv, VL e VH, sejam codificados por ge- nes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinan- tes, por um ligante sintético que permite que sejam feitos como uma única cadeia de proteína em que as regiões de VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia simples (scFv)); ver, por exemplo, Bird e outro Science 242: 423-426 (1988) e Huston e outro, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-
5883. Outras formas de anticorpos de cadeia simples, tal como diacor- pos, estão da mesma forma abrangidas. Diacorpos são anticorpos bi- valentes biespecíficos em que os domínios de VH e VL são expressos em uma única cadeia polipeptídica, porém usando um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento entre os dois domínios na mesma cadeia, forçando desse modo forçando os domínios empare- lhar com os domínios complementares de outra cadeia e criando dois locais de ligação de antígeno (veja por exemplo, Holliger e outro, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448; Poljak e outro, 1994, Struc- ture 2: 1121-1123).
[00291] Um "domínio variável" de anticorpo refere-se à região vari- ável de cadeia leve de anticorpo (VL) ou à região variável da cadeia pesada de anticorpo (VH), sozinha ou em combinação. Como conhe- cido na técnica, as regiões variáveis das cadeias pesadas e leves con- sistem cada uma em quatro regiões de estrutura (FR) conectadas por três regiões de determinação de complementaridade (CDRs) e contri- buem para a formação do sítio de ligação de antígeno de anticorpos.
[00292] "Regiões de Determinação de Complementaridade" (CDRs) podem ser identificadas de acordo com as definições de Kabat, Chothia, o acúmulo de Kabat e Chothia, AbM, contato, Norte e/ou defi- nições conformacionais ou qualquer método de determinação de CDR bem conhecido na técnica. Veja, por exemplo, Kabat e outro, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª ed. (regiões hiper- variáveis); Chothia e outro, 1989, Nature 342: 877-883 (estruturas em alça estruturais). A identidade dos resíduos de aminoácidos em um anticorpo particular que constitui uma CDR pode ser determinada usando métodos bem conhecidos na técnica. A definição de AbM de CDRs é um compromisso entre Kabat e Chothia e usa o software de modelagem de anticorpos de AbM de Oxford Molecular (Accelrys®). A definição de “contato” de CDRs é baseada em contatos de antígenos observados, mencionados em MacCallum e outro, 1996, J. Mol. Biol., 262: 732-745. A definição "conformacional" de CDRs é baseada em resíduos que fazem contribuições entálpicas para a ligação de antíge- no (veja, por exemplo, Makabe e outro, 2008, J. Biol. Chem., 283:
1156-1166). North identificou conformações de CDR canônicas usan- do um conjunto preferido diferente de definições de CDR (North e ou- tro, 2011, J. Mol. Biol. 406: 228-256). Em outra abordagem, referida no presente documento como a "definição conformacional" de CDRs, as posições das CDRs podem ser identificadas como os resíduos que fazem contribuições entálpicas para a ligação de antígeno (Makabe e outro, 2008, J Biol. Chem. 283: 1156 -1166). Ainda outras definições de limite de CDR podem não seguir estritamente uma das abordagens acima, porém, no entanto, se sobreporão a pelo menos uma porção das CDRs de Kabat, embora possam ser encurtados ou alongados à luz da previsão ou descobertas experimentais que resíduos ou grupos de resíduos particulares ou mesmo CDRs inteiras não afetam significa- tivamente a ligação de antígeno. Quando no presente documento utili- zado, um CDR pode se referir a CDRs definidas por qualquer aborda- gem conhecida na técnica, incluindo combinações de abordagens. Os métodos utilizados no presente documento podem utilizar CDRs defi- nidas de acordo com qualquer uma dessas abordagens. Para qualquer modalidade contendo mais do que uma CDR, as CDRs (ou outro resí- duo do anticorpo) podem ser definidos de acordo com qualquer uma das definições de Kabat, Chothia, North, estendidas, AbM, contato e/ou conformacionais.
[00293] Resíduo de "estrutura" (FR) são resíduos de domínio variá- vel de anticorpo diferentes dos resíduos de CDR. Uma estrutura de domínio de VH ou VL compreende quatro sub-regiões de estrutura, FR1, FR2, FR3 e FR4, intercaladas com CDRs na seguinte estrutura: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4.
[00294] Como conhecido na técnica, uma "região constante" de um anticorpo refere-se à região constante de cadeia leve de anticorpo ou à região constante da cadeia pesada de anticorpo, sozinha ou em combinação.
[00295] Os termos "região de Fc", "domínio de Fc" e "Fc", como al- ternadamente utilizados no presente documento, referem-se à porção de uma molécula de imunoglobulina (Ig) que se correlaciona com um fragmento cristalizável obtido por digestão com papaína de uma molé- cula de Ig. Quando no presente documento utilizado, os termos refe- rem-se à região constante de um anticorpo excluindo o primeiro domí- nio de imunoglobulina de região constante e referem-se ainda a por- ções dessa região. Desse modo, Fc refere-se aos dois últimos domí- nios de imunoglobulina de região constante de IgA, IgD e IgG, e os últimos três domínios de imunoglobulina de região constante de IgE e IgM, e o terminal N de articulação flexível para esses domínios, ou porções dos mesmos. Para IgA e IgM, Fc pode incluir a cadeia J.
[00296] Para IgG, Fc compreende domínios de imunoglobulina Cγ2 e Cγ3 (C gamma 2 e C gamma 3) e a articulação entre Cγ1 (C gamma 1) e Cγ2 (C gamma 2). Embora os limites da região de Fc possam va- riar, a região de Fc de cadeia pesada de IgG humano é geralmente definida por compreender os resíduos C226 ou P230 em seu terminal carboxila, em que a numeração está de acordo com o índice de EU de Edelman e outro, 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63 (1): 78-85 como descrito em Kabat e outro, 1991. Normalmente, o domínio de Fc com- preende de cerca de 236 a cerca de 447 resíduos de aminoácido do domínio constante de IgG1 humano. Uma sequência de aminoácidos de domínio de Fc de IgG1 tipo silvestre humano exemplar é mencio- nada em SEQ ID NO:31. O polipeptídeo de Fc pode se referir a esta região isoladamente, ou esta região no contexto de um anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, ou proteína de fusão Fc.
[00297] O domínio constante de cadeia pesada compreende a regi- ão de Fc e compreende ainda o domínio de CH1 e a articulação, bem como os domínios de CH2 e CH3 (e, opcionalmente, CH4 de IgA e
IgE) de cadeia pesada de IgG.
[00298] Em certas modalidades, o anticorpo, ou fragmento de liga- ção de antígeno do mesmo, descrito no presente documento compre- ende um domínio de Fc. O domínio de Fc pode ser derivado de IgA (por exemplo, IgA1 ou IgA2), IgD, IgE, IgM ou IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4).
[00299] Uma proteína de "fusão Fc" é uma proteína em que um ou mais polipeptídeos estão operacionalmente ligados a um polipeptídeo de Fc. Uma fusão de Fc combina a região de Fc de uma imunoglobuli- na com um parceiro de fusão.
[00300] Um "epítopo" refere-se à área ou região de um antígeno ao qual um anticorpo se liga especificamente, por exemplo, uma área ou região compreendendo resíduos que interagem com o anticorpo. Os epítopos podem ser lineares ou conformacionais.
[00301] Em seu nível mais detalhado, o epítopo para a interação entre o Ag e o Ab pode ser definido pelas coordenadas espaciais que definem os contatos atômicos presentes na interação Ag-Ab, bem co- mo informações sobre suas contribuições relativas para a termodinâ- mica de ligação. Em um nível menos detalhado, o epítopo pode ser especificado pelas coordenadas espaciais que definem os contatos atômicos entre o Ag e Ab. Em um nível ainda menos detalhado, o epí- topo pode ser especificado pelos resíduos de aminoácidos que ele compreende como definido por um critério específico, por exemplo, pela distância entre os átomos (por exemplo, átomos pesados, ou se- ja, átomos de não hidrogênio) no Ab e Ag. Em um nível ainda menos detalhado, o epítopo pode ser especificado através da função, por exemplo, por ligação de competição com outros Abs. O epítopo pode da mesma forma ser definido mais genericamente como compreen- dendo resíduos de aminoácidos para os quais a substituição por outro aminoácido irá alterar as características da interação entre o Ab e Ag
(por exemplo, usando varredura de alanina).
[00302] A partir do fato de que as descrições e definições de epíto- pos, dependendo do método de mapeamento de epítopos usados, são obtidas em diferentes níveis de detalhe, segue-se que a comparação de epítopos para diferentes Abs no mesmo Ag pode dimilarmente ser conduzida de em diferentes níveis de detalhe.
[00303] Os epítopos descritos ao nível dos aminoácidos, por exem- plo, determinados a partir de uma estrutura de raios X, são considera- dos idênticos se contiverem o mesmo conjunto de resíduos de amino- ácidos. Epítopos são referidos se sobrepor se pelo menos um aminoá- cido for compartilhado pelos epítopos. Os epítopos são referidos ser separados (únicos) se nenhum resíduo de aminoácido for compartilha- do pelos epítopos.
[00304] Os epítopos especificados pela ligação de competição são referidos se sobrepor se a ligação dos anticorpos correspondentes for mutuamente exclusiva, isto é, a ligação de um anticorpo exclui ligação simultânea ou consecutiva do outro anticorpo. Os epítopos são referi- dos ser separados (únicos) se o antígeno for capaz de acomodar a ligação de ambos os anticorpos correspondentes simultaneamente.
[00305] Um anticorpo que "preferencialmente liga-se" ou "especifi- camente liga-se" (usado alternadamente no presente documento) a um epítopo é um termo bem conhecido na técnica, e métodos para deter- minar tal ligação específica ou preferencial são da mesma forma bem conhecidos na técnica. Uma molécula é referida exibir "ligação especí- fica" ou "ligação preferencial" se ela reage ou se associa mais frequen- temente, mais rapidamente, com maior duração e/ou com maior afini- dade com uma célula ou substância particular do que com células ou substâncias alternativas. Um anticorpo “especificamente liga-se” ou “preferencialmente liga-se” a um alvo se ele liga-se com maior afinida- de, avidez, mais facilmente e/ou com maior duração do que liga-se a outras substâncias. Por exemplo, um anticorpo que especificamente ou preferencialmente liga-se a um epítopo de GDF15, PD-1 ou PD-L1 é um anticorpo que liga-se a este epítopo com maior afinidade, avidez, mais facilmente e/ou com maior duração do que liga-se a outro epíto- pos de GDF15, PD-1 ou PD-L1 ou epítopos de não GDF15, PD-1, PD- L1. Geralmente, porém não necessariamente, a referência à ligação significa ligação preferencial. "Ligação específica" ou "ligação prefe- rencial" inclui um composto, por exemplo, uma proteína, um ácido nu- cleico, um anticorpo e similar, que reconhece e liga-se a uma molécula específica em uma amostra, porém não substancialmente reconhece ou liga outras moléculas na amostra. Por exemplo, um anticorpo ou receptor de peptídeo que reconhece e liga-se a um ligante cognato ou parceiro de ligação (por exemplo, um anticorpo de antígeno de tumor anti-humano que liga-se a um antígeno de tumor, uma molécula de PD-1 que liga-se a PD-L1 ou PD-L2, etc.) em uma amostra, porém não substancialmente reconhece reconhece ou liga-se a outras moléculas na amostra, especificamente liga-se a esse ligante cognato ou parceiro de ligação. Desse modo, sob condições de ensaio designadas, a fra- ção de ligação especificada (por exemplo, um anticorpo ou uma por- ção de ligação de antígeno ou um receptor ou uma porção de ligação do mesmo) liga-se preferencialmente a uma molécula alvo particular e não liga-se em uma quantidade significante a outros componentes presentes em uma amostra de teste.
[00306] Uma variedade de formatos de ensaio pode ser usada para selecionar um anticorpo ou peptídeo que especificamente liga-se a uma molécula de interesse. Por exemplo, imunoensaio de ELISA de fase sólida, imunoprecipitação, BIAcore™ (GE Healthcare, Piscata- way, NJ), classificação de células ativadas por fluorescência (FACS), Octet™ (FortéBio, Inc., Menlo Park, CA) e análise de mancha do Oes- te estão entre muitos ensaios que podem ser usados para identificar um anticorpo que reage especificamente com um antígeno ou um re- ceptor, ou porção de ligação de ligante do mesmo, que especificamen- te liga-se a um ligante cognato ou parceiro de ligação. Tipicamente, uma reação específica ou seletiva será pelo menos duas vezes o sinal antecedente ou ruído e mais tipicamente mais do que 10 vezes o an- tecedente, ainda mais especificamente, um anticorpo é referido "espe- cificamente ligar" a um antígeno quando a constante de dissociação de equilíbrio (KD) é ≤ 1 µM, preferencialmente ≤ 100 nM, mais prefe- rencialmente ≤ 10 nM, ainda mais preferencialmente, ≤ 100 pM, ainda mais preferencialmente, ≤ 10 pM, e ainda mais preferencialmente, ≤ 1 pM.
[00307] O termo "competir", quando no presente documento utiliza- do em relação a um anticorpo, significa que a ligação de um primeiro anticorpo, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, a um an- tígeno reduz a ligação subsequente do mesmo antígeno por um se- gundo anticorpo ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo. Em geral, a ligação a um primeiro anticorpo cria impedimento estérico, mudança conformacional ou ligação a um epítopo comum (ou porção do mesmo), de modo que a ligação do segundo anticorpo ao mesmo antígeno seja reduzida. Os ensaios de competição padrões podem ser usados para determinar se dois anticorpos competem entre si. Um en- saio adequado para competição de anticorpos envolve o uso da tecno- logia Biacore, que pode medir a extensão das interações usando a tecnologia de ressonância de plásmon superficial (SPR), normalmente usando um sistema de biossensor (tal como um sistema BIACORE). Por exemplo, SPR pode ser usado em um ensaio de inibição de liga- ção competitiva in vitro para determinar a capacidade de um anticorpo inibir a ligação de um segundo anticorpo. Outro ensaio para medir a competição de anticorpos usa uma abordagem com base em ELISA.
[00308] Além disso, um processo de alto rendimento para anticor-
pos "binning" com base em sua competição é descrito no Pedido de Patente Internacional No. WO2003/48731. A competição está presente se um anticorpo (ou fragmento) reduz a ligação de outro anticorpo (ou fragmento) ao GDF15. Por exemplo, um ensaio de competição de liga- ção sequencial pode ser usado, com diferentes anticorpos sendo adi- cionados sequencialmente. O primeiro anticorpo pode ser adicionado para alcançar a ligação que está perto da saturação. Em seguida, o segundo anticorpo é adicionado. Se a ligação do segundo anticorpo a GDF15 não for detectada ou for significativamente reduzida (por exemplo, pelo menos cerca de 10%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 50%, em pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 80% ou pelo menos cerca de 90% de redução) em comparação com um ensaio paralelo na ausência do primeiro anticor- po (cujo valor pode ser definido como 100%), o dois anticorpos são referidos como competindo um com o outro.
[00309] Um anticorpo variante pode compreender 1, 2, 3, 4, 5, até 10, até 20, até 30 ou mais substituições e/ou deleções e/ou inserções de aminoácidos das sequências e fragmentos específicos discutidos acima. Variantes de "deleção" podem compreender a deleção de ami- noácidos individuais, deleção de pequenos grupos de aminoácidos, tal como 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, ou deleção de regiões de aminoácidos maiores, tal como a deleção de domínios de aminoácidos específicos ou outras características. Variantes de "inserção" podem compreender a inserção de aminoácidos individuais, inserção de pequenos grupos de aminoácidos, tal como 2, 3, 4 ou 5 aminoácidos, ou inserção de re- giões de aminoácidos maiores, tal como a inserção de domínios de aminoácidos específicos ou outras características. As variantes de "substituição" envolvem de preferência a substituição de um ou mais aminoácidos com o mesmo número de aminoácidos e a realização de substituições de aminoácidos conservadoras. Por exemplo, um amino- ácido pode ser substituído por um aminoácido alternativo tendo propri- edades similares, por exemplo, outro aminoácido básico, outro amino- ácido ácido, outro aminoácido neutro, outro aminoácido carregado, ou- tro aminoácido hidrofílico, outro aminoácido hidrofóbico, outro aminoá- cido polar, outro aminoácido aromático ou outro aminoácido alifático. Algumas propriedades dos 20 aminoácidos principais que podem ser usados para selecionar substituintes adequados são como segue
[00310] As variantes de substituição têm pelo menos um resíduo de aminoácido na molécula de anticorpo removida e um resíduo diferente inserido em seu lugar. Os sítios de maior interesse para mutagênese substitucional incluem as regiões hipervariáveis, porém alterações de estrutura são da mesma forma contempladas. As substituições con- servadoras são mostradas na Tabela 1 sob o título de "substituições conservadoras". Se tais substituições resultarem em uma mudança na atividade biológica, em seguida mudanças mais substanciais, denomi- nadas "substituições exemplares" mostradas abaixo, ou como também descrito abaixo em referência às classes de aminoácidos, podem ser introduzidas e os produtos avaliados. TABELA 1 Aminoácidos e Substituições Substituições Con- Substituições Exem- Resíduo Original servadoras plares alanina Ala (A) Val Val; Leu; Ile arginina Arg (R) Lys Lys; Gln; Asn asparagina Asn (N) Gln Gln; His; Asp, Lys; Arg aspartático Asp (D) Glu Glu; Asn cisteína Cys (C) Ser Ser; Ala glutamina Gln (Q) Asn Asn; Glu glutâmico Glu (E) Asp Asp; Gln
Substituições Con- Substituições Exem- Resíduo Original servadoras plares glicina Gly (G) Ala Ala histidina His (H) Arg Asn; Gln; Lys; Arg Leu; Val; Met; Ala; isoleucina Ile (I) Leu Phe; Norleucine Norleucina; Ile; Val; leucina Leu (L) Ile Met; Ala; Phe lisina Lys (K) Arg Arg; Gln; Asn metionina Met (M) Leu Leu; Phe; Ile fenilalanina Phe (F) Tyr Leu; Val; Ile; Ala; Tyr prolina Pro (P) Ala Ala serina Ser (S) Thr Thr treonina Thr (T) Ser Ser triptofano Trp (W) Tyr Tyr; Phe tirosina Tyr (Y) Phe Trp; Phe; Thr; Ser Ile; Leu; Met; Phe; Ala; valina Val (V) Leu Norleucina
[00311] Modificações substanciais nas propriedades biológicas do anticorpo são realizadas selecionando-se substituições que diferem significativamente em seus efeitos na manutenção (a) a estrutura da cadeia principal de polipeptídico na área da substituição, por exemplo, como uma folha beta ou conformação helicoidal, (b) a carga ou hidro- fobicidade da molécula no sítio alvo, ou (c) o volume da cadeia lateral. Os resíduos de ocorrência natural são divididos em grupos com base nas propriedades de cadeia lateral comuns: I. Não polar: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; ii. Polar sem carga: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; iii. Ácidos (carga negativa): Asp, Glu; iv. Básico (positivamente carregado): Lys, Arg;
v. Resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; e vi. Aromático: Trp, Tyr, Phe, His.
[00312] As substituições não conservadoras são feitas trocando-se um membro de uma dessas classes por outra classe.
[00313] Um tipo de substituição, por exemplo, que pode ser feita é a alteração de uma ou mais cisteínas no anticorpo, que podem ser qui- micamente reativas, para outro resíduo, tal como, sem limitação, ala- nina ou serina. Por exemplo, pode haver uma substituição de uma cis- teína não canônica. A substituição pode ser feita em uma CDR ou re- gião de estrutura de um domínio variável ou na região constante de um anticorpo. Em algumas modalidades, a cisteína é canônica. Qual- quer resíduo de cisteína não envolvido na manutenção da conforma- ção adequada do anticorpo pode da mesma forma ser substituído, ge- ralmente por serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécu- la e prevenir a reticulação aberrante. Por outro lado, ligação(ões) de cisteína podem ser adicionadas ao anticorpo para melhorar sua estabi- lidade, particularmente quando o anticorpo é um fragmento de anticor- po, tal como um fragmento de Fv.
[00314] Em um processo conhecido como "linhagem germinativa", certos aminoácidos nas sequências de VH e VL podem ser mutados para combinar com aqueles encontrados naturalmente nas sequências de VH e VL de linha germinativa. Em particular, as sequências de ami- noácidos das regiões de estrutura nas sequências de VH e VL podem ser mutadas para corresponder às sequências de linha germinativa para reduzir o risco de imunogenicidade quando o anticorpo é adminis- trado. Quando no presente documento utilizado, o termo "linha germi- nativa" refere-se às sequências de nucleotídeos e sequências de ami- noácidos dos genes de anticorpos e segmentos de genes à medida que são passados de pais para filhos por meio das células germinati-
vas. Esta sequência de linha germinativa é distinta das sequências de nucleotídeos codificando anticorpos em células B maduras que foram alteradas por eventos de recombinação e hipermutação durante o cur- so da maturação de células B. Um anticorpo que "utiliza" uma linha germinativa particular tem um nucleotídeo ou sequência de aminoáci- dos que mais intimamente se alinha com a sequência de nucleotídeos de linha germinativa ou com a sequência de aminoácidos que especifi- ca. Tais anticorpos frequentemente são mutados comparados com a sequência de linha germinativa. As sequências de DNA de linha ger- minativa para os genes de VH e VL humanos são conhecidas na téc- nica (veja, por exemplo, o banco de dados de sequência de linha ger- minativa humana "Vbase"; veja da mesma forma Kabat, EA, e outro, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson e outro, J. Mol. Biol. 227: 776-798, 1992; e Cox e outro, Eur. J. Immunol. 24: 827- 836, 1994.) Afinidade de Ligação
[00315] A afinidade de ligação de um anticorpo pode ser expressa como valor KD, que refere-se à taxa de dissociação de uma interação particular antígeno-anticorpo. KD é a relação entre a taxa de dissocia- ção, da mesma forma chamada de "taxa-off (koff)", e a taxa de associ- ação, ou "taxa-on (kon)". Desse modo, KD é igual a koff/kon e é expresso como uma concentração molar (M), e quanto menor o KD, mais forte é a afinidade de ligação. Os valores de KD para anticorpos podem ser determinados usando métodos bem estabelecidos na técnica. Um mé- todo exemplar para medir KD é a ressonância de plásmon superficial (SPR), normalmente usando um sistema biossensor, tal como um sis- tema BIACORE®. A análise cinética BIAcore compreende a análise da ligação e dissociação de um antígeno de lascas com moléculas imobi- lizadas (por exemplo, moléculas compreendendo domínios de ligação de epítopo), em sua superfície. Outro método para determinar o KD de um anticorpo é usando interferometria de bio-camada, tipicamente usando tecnologia de OCTET (sistema Octet QKe, ForteBio). Alternati- vamente, ou adicionalmente, um ensaio de KinExA (Kinetic Exclusion Assay), disponível em Sapidyne Instruments (Boise, Id.) pode da mesma forma ser usado. Anticorpos para GDF15
[00316] A invenção fornece anticorpos anti-GDF15. Um anticorpo anti-GDF15, de preferência, um anticorpo de alta afinidade, pode ser eficaz no plasma e em múltiplos compartimentos de tecido, onde GDF15 acredita-se atuar em suas células alvo. Os anticorpos da in- venção têm o potencial de modificar uma trilha que leva ao desenvol- vimento e progressão da caquexia associada a câncer, insuficiência cardíaca ou COPD, entre outros.
[00317] Um anticorpo neutralizante ou "bloqueador" refere-se a um anticorpo cuja ligação a GDF15 interfere, limita ou inibe a interação entre GDF15 ou um fragmento de GDF15 e um receptor de GDF15, tal como GFRAL, ou componente do receptor de GDF15; e/ou (ii) resulta na inibição de pelo menos uma função biológica de GDF15. Ensaios para determinar a neutralização por um anticorpo da invenção são descritos em outro lugar no presente documento e são bem conheci- dos na técnica.
[00318] Quando no presente documento usado, o termo "GDF15" inclui variantes, isoformas, homólogos, ortólogos e parálogos de GDF15 humano. Em alguns aspectos da invenção, os anticorpos apresentam reação cruzada com GDF15 de espécies diferentes da humana, tal como GDF15 de camundongo, rato ou primata não huma- no, bem como diferentes formas de GDF15. Em outros aspectos, os anticorpos podem ser completamente específicos para GDF15 huma- no e podem não exibir espécies ou outros tipos de reatividade cruza-
da. Quando no presente documento utilizado, o termo GDF15 refere- se a GDF15 humano de ocorrência natural, a menos que contextual- mente determinado de outra maneira. Portanto, um "anticorpo GDF15", "anticorpo anti-GDF15" ou outra designação similar significa qualquer anticorpo (como definido no presente documento) que espe- cificamente se associa, liga-se ou reage com o ligante ou isoforma do tipo GDF15, ou fragmento ou derivado do mesmo. A forma madura de tamanho natural do GDF15 humano, como representado pelo número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot Q99988.1, é no presente documento fornecida como SEQ ID NO:1.
[00319] Sem desejar ser limitado por qualquer teoria em particular, após a interação com GDF15, GFRAL interage com o receptor de pro- to-oncogene tirosina-proteína cinase Ret (RET) e induz a sinalização celular através da ativação das trilhas de sinalização de MAPK e AKT. A sinalização de RET em seguida induz ou media a fosforilação de, por exemplo, ERK, S6, entre outros. Quando no presente documento utilizado, o termo "GFRAL" inclui variantes, isoformas, homólogos, or- tólogos e parálogos de GFRAL humano. A forma madura de tamanho natural de GFRAL humano, é representado pelo número de acesso UniProtKB/Swiss-Prot Q6UXV0. Quando no presente documento utili- zado, o termo "RET" inclui variantes, isoformas, homólogos, ortólogos e parálogos de RET humano. A forma madura de tamanho natural do RET humano, é representado pelo número de acesso UniPro- tKB/Swiss-Prot P07949.
[00320] "Função biológica" ou "atividade biológica" de GDF15 se destina a incluir a regulação de trilhas inflamatórias e apoptóticas em tecidos e o programa de resposta ao estresse de células após lesão celular. “Função biológica” ou “atividade biológica" de GDF15 inclui o aumento da mediação: caquexia, ingestão de alimentos diminuída, di- minuição do apetite, diminuição do peso corporal, perda de peso, di-
minuição da massa gorda, diminuição da massa magra, ligação de GFRAL, ativação de RET, fosforilação de ERK e fosforilação de S6, entre outros agora conhecidos na técnica ou identificados posterior- mente. A função biológica ou atividade biológica de GDF15 pode, po- rém não necessita ser, mediada pela interação entre GDF15 e seu re- ceptor cognato GFRAL.
[00321] A invenção inclui um anticorpo, ou porção de ligação de an- tígeno do mesmo, que pode modular uma atividade biológica de GDF15. Ou seja, a invenção inclui um anticorpo isolado, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15 e modula pelo menos uma atividade GDF15 detectável de modo que o anticorpo: (a) aumente a ingestão de alimentos; (b) aumente o apetite; (c) aumente o peso corporal; (d) diminui a perda de peso; (e) aumenta a massa gorda; (f) aumenta a massa magra; (g) diminui a perda de massa gorda, (h) diminui a perda de massa muscular magra, (i) dimi- nui a ligação de GDF15 a GFRAL; (j) diminui a sinalização a jusante mediada por RET; (k) diminui ou inibe a fosforilação de ERK; (l) dimi- nui ou inibe a fosforilação de S6; (m) diminui a ativação de RET da tri- lha de sinalização de MAPK; (n) diminui a ativação de RET da trilha de sinalização de AKT; e/ou (o) diminui a ativação da trilha de sinalização de PLC- 1.
[00322] A atividade biológica de GDF15 e atividade de sinalização dependente de GDF15 pode ser avaliada in vitro usando células HEK293 ou CHO que coexpressam GFRAL e RET, entre muitos en- saios reconhecidos na técnica. A ativação da trilha de MAPK após o estímulo com GDF15 pode ser medida usando, entre outros, um sis- tema repórter de gene com base em em luciferase (por exemplo, PathDetect, Agilent Technologies). Os ensaios de fosfo-proteína com base na tecnologia de fluorescência resolvida de tempo homogêneo (Cisbio Inc.) podem da mesma forma ser usados como abordagens ortogonais para medir a ativação das trilhas MAPK e AKT (por exem- plo, fosfo-ERK1/2) em resposta a GDF15 ligando-se ao receptor. A capacidade de anticorpos neutralizantes prevenir a sinalização depen- dente de GDF15 pode da mesma forma ser avaliada incubando-se cé- lulas com uma concentração fixa de GDF15 na ausência ou presença de concentrações crescentes do anticorpo anti-GDF15.
[00323] Em um aspecto da invenção, um anticorpo GDF15 da in- venção abrange um anticorpo que compete pela ligação ao GDF15 humano com e/ou liga-se ao mesmo epítopo como, um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, tendo a sequência de aminoácidos de uma região variável de cadeia pesada mencionada como SEQ ID NO:166 e a sequência de aminoácidos de uma região variável de cadeia leve mencionada como SEQ ID NO:163.
[00324] Em um aspecto da invenção, um anticorpo GDF15 da in- venção abrange um anticorpo que inibe ou reduz a ligação de GDF15 com GFRAL.
[00325] Em um aspecto, a invenção abrange um anticorpo que compete com um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, tendo a sequência de aminoácidos de uma região variável de cadeia pesada mencionada como SEQ ID NO:166 e a sequência de aminoácidos de uma região variável de cadeia leve mencionada como SEQ ID NO:163, na inibição da ligação de GDF15 com GFRAL.
[00326] Em alguns aspectos da invenção, o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, inclui uma região constante de ca- deia pesada de IgG1, por exemplo, uma cadeia pesada GDF15 men- cionada como SEQ ID NO:164. Em outros aspectos, o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, inclui uma região cons- tante de cadeia leve kappa, por exemplo, uma cadeia leve GDF15 mencionada como SEQ ID NO:162.
[00327] A Tabela 2 fornece as sequências de aminoácidos (proteí-
nas) e sequências de ácido nucleico associadas (DNA) dos anticorpos anti-GDF15 da presente invenção. Os CDRs dos VHs anti-GDF15 e VLs anti-GDF15, como definido por Kabat e por Chothia, são apresen- tados como sequências separadas.
[00328] Em alguns aspectos, as CDRs compreendem SEQ ID NOs: 171, 172, 173, 174, 175 e 176. Estas sequências de CDR incorporam o consenso com base na análise de sequência favorável e dados de perfil biofísico apresentados nos Exemplos 1 a 10 abaixo. Essas se- quências de CDR possuem vantagens com base em sua sequência, ligação, estabilidade térmica, estabilidade em pH baixo e perfis de vis- cosidade. Tabela 2. Sequências de peptídeos de GDF15 e anticorpos anti- GDF15. SEQ ID Descrição Sequência
NO 1 GDF15 humano, forma madura ARNGDHCPLG PGRCCRLHTV RASLEDLGWA DWVLSPREVQ VTMCIGACPS QFRAAN-
MHAQ IKTSLHRLKP DTVPAPCCVP ASYNPMVLIQ KTDTGVSLQT YDDLLAKDCH CI 2 IgG1 dimérico de murino GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVVVD ISKDDPEVQF SWFVDDVEVH GDF-15 Fc-humano com TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKT ISKTKGRPKA sítio de clivagem FXa PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP GKIEGRMDGG GGSAR-
NGDHC PLGPGRCCRL HTVRASLEDL GWADWVLSPR EVQVTMCIGA CPSQFRAANM
HAQIKTSLHR LKPDTVPAPC CVPASYNPMV LIQKTDTGVS LQTYDDLLAK DCHCI 3 CH23 Humano GDF15 Fc-humano com GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ sítio de clivagem TEV YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR
EEMTKNQVNL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LNSTLTVDKS RWQQGNVFSC SVLHEALHSH YTQKSLSLSP KGSENLYFQG ARNGDHCPLG PGRCCR- LHTV RASLEDLGWA DWVLSPREVQ VTMCIGACPS QFRAANMHAQ IKTSLHRLKP DTV-
PAPCCVP ASYNPMVLIQ KTDTGVSLQT YDDLLAKDCH CI 4 IgG1 dimérico de murino GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVVVD ISKDDPEVQF SWFVDDVEVH GDF-15 Fc-cino com TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKT ISKTKGRPKA sítio de clivagem FXa PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP GKIEGRMDGG GGSAR-
NGDRC PLGPGRCCRL HTVHASLEDL GWADWVLSPR EVQVTMCIGA CPSQFREANM
HAQIKMNLHR LKPDTVPAPC CVPASYNPMV LIQKTDTGVS LQTYDDLLAK DCHCV 5 IgG1 dimérico de murino GCKPCICTVP EVSSVFIFPP KPKDVLTITL TPKVTCVVVD ISKDDPEVQF SWFVDDVEVH GDF-15 de Fc-murino com TAQTQPREEQ FNSTFRSVSE LPIMHQDWLN GKEFKCRVNS AAFPAPIEKT ISKTKGRPKA sítio de clivagem FXa PQVYTIPPPK EQMAKDKVSL TCMITDFFPE DITVEWQWNG QPAENYKNTQ PIMDTDGSYF VYSKLNVQKS NWEAGNTFTC SVLHEGLHNH HTEKSLSHSP GKIEGRMDGG GGSAR-
NGDHC PLGPGRCCRL HTVRASLEDL GWADWVLSPR EVQVTMCIGA CPSQFRAANM
HAQIKTSLHR LKPDTVPAPC CVPASYNPMV LIQKTDTGVS LQTYDDLLAK DCHCI 6 GDF15_200 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 7 GDF15_200 LCDR-1LCDR-1 RASQSVHSYL A 8 GDF15_010 LCDR-2 DASNRAT GDF15_013 LCDR-2 GDF15_014 LCDR-2 GDF15_200 LCDR-2
9 GDF15_001 LCDR-3 QQFWSWPWT GDF15_002 LCDR-3 GDF15_005 LCDR-3 GDF15_007 LCDR-3 GDF15_009 LCDR-3 GDF15_200 LCDR-3 10 LC CL RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQES-
VTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC 11 GDF15_200 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK 12 JK de Cadeia Leve de IgG1 FGQGTKVEIK R 13 Articulação de Cadeia Pesada de IgG1 EPKSCDKTHT CPPCP 14 CH2 de Cadeia Pesada de IgG1 APEAAGAPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK 15 CH3 de Cadeia Pesada GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN
YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG 16 GDF15_200 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 17 GDF15_200 HCDR-1 GYTFSSYNIS 18 GDF15_200 HCDR-2 GINPINGLAF YNQKFQG 19 GDF15_007 HCDR-3 EAITTVGAMD Y GDF15_010 HCDR-3 GDF15_013 HCDR-3 GDF15_014 HCDR-3 GDF15_017 HCDR-3 GDF15_018 HCDR-3 GDF15_020 HCDR-3 GDF15_100 HCDR-3 GDF15_200 HCDR-3 20 CH1 de Cadeia Pesada ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS
GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKK 21 GDF15_200 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPINGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS 22 Estrutura H1 QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS 23 Estrutura H2 WVRQAPGQGL EWMG 24 Estrutura H3 RVTITADEST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR 25 JH WGQGTLVTVS S 26 GDF15_100 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 27 GDF15_008 LCDR-1LCDR-1 RTSQNVHSYL A GDF15_009 LCDR-1 GDF15_100 LCDR-1 28 GDF15_001 LCDR-2 DASTRAD GDF15_004 LCDR-2 GDF15_012 LCDR-2 GDF15_018 LCDR-2 GDF15_020 LCDR-2 GDF15_100 LCDR-2 29 GDF15_100 LCDR-3 QQFWSDPWT 30 GDF15_100 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPWTFGQ GTKVEIK 31 GDF15_100 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 32 GDF15_001 HCDR-1 GYTFSSYNID GDF15_002 HCDR-1 GDF15_004 HCDR-1 GDF15_021 HCDR-1 GDF15_100 HCDR-1 33 GDF15_003 HCDR-2 QINPNNGLAF YNQKFQG GDF15_009 HCDR-2 GDF15_015 HCDR-2 GDF15_017 HCDR-2 GDF15_100 HCDR-2 34 GDF15_100 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 35 GDF15_022 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 36 GDF15_022 LCDR-1 RTSQSVHSYL A 37 GDF15_005 LCDR-2 DAKTRAD GDF15_022 LCDR-2 38 GDF15_003 LCDR-3 QQFSSDPYT GDF15_012 LCDR-3 GDF15_017 LCDR-3 GDF15_022 LCDR-3 39 GDF15_022 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK 40 GDF15_022 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 41 GDF15_010 HCDR-1 GYTFSDYNID GDF15_022 HCDR-1 42 GDF15_022 HCDR-2 QINPNNGLIF FNQKFQG 43 GDF15_012 HCDR-3 EVITTVGAMD Y GDF15_022 HCDR-3 44 GDF15_022 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS 45 GDF15_021 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 46 GDF15_007 LCDR-1 RTSENVHSYL A GDF15_021 LCDR-1 47 GDF15_021 LCDR-2 DASNLAD 48 GDF15_004 LCDR-3 QQFWSDPYT GDF15_009 LCDR-3 GDF15_014 LCDR-3 GDF15_020 LCDR-3 GDF15_021 LCDR-3 49 GDF15_021 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK 50 GDF15_021 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIN- GLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 51 GDF15_021 HCDR-2 GINPINGLIF FNQKFQG 52 GDF15_001 HCDR-3 EAITTVGAMD H GDF15_021 HCDR-3 53 GDF15_021 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIN- GLIFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQG-
TLVTVSS 54 GDF15_020 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 55 GDF15_020 LCDR-1 RASQNLHSYL A 56 GDF15_020 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK 57 GDF15_020 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLANY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 58 GDF15_005 HCDR-1 GYTFSDYNMD GDF15_012 HCDR-1 GDF15_013 HCDR-1 GDF15_015 HCDR-1 GDF15_020 HCDR-1 59 GDF15_020 HCDR-2 QINPNNGLAN YNQKFQG 60 GDF15_020 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLANY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 61 GDF15_018 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 62 GDF15_018 LCDR-1 RASQNVHSYL A 63 GDF15_008 LCDR-3 QQFWNDPYT GDF15_018 LCDR-3 64 GDF15_018 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIK 65 GDF15_018 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLI- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 66 GDF15_017 HCDR-1 GYTFTDYNID GDF15_018 HCDR-1 67 GDF15_018 HCDR-2 QINPNNGLIF YNQKFQG 68 GDF15_018 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNNGLI- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS 69 GDF15_017 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 70 GDF15_017 LCDR-2 DAKTRAT 71 GDF15_017 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK 72 GDF15_017 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED NAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 73 GDF15_017 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED NAVYYCAREA ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 74 GDF15_017 FW_H3 RVTITADEST STAYMELSSL RSEDNAVYYC AR 75 GDF15_015 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 76 GDF15_015 LCDR-3 QQFSNDPWT 77 GDF15_015 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNLADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSNDPWTFGQ GTKVEIK 78 GDF15_015 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGATDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 79 GDF15_015 HCDR-3 EAITTVGATD Y 80 GDF15_015 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGATDYW GQG-
TLVTVSS 81 GDF15_014 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 82 GDF15_014 LCDR-1 RTSQNVHNYL A 83 GDF15_014 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK 84 GDF15_014 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPINGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 85 GDF15_014 HCDR-2 QINPINGLAF YNQKFQG 86 GDF15_014 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPINGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS 87 GDF15_013 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 88 GDF15_004 LCDR-1 RTSESVHSYL A GDF15_013 LCDR-1 89 GDF15_013 LCDR-3 QQFWNWPWT 90 GDF15_013 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNWPWTFGQ GTKVEIK 91 GDF15_013 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 92 GDF15_013 HCDR-2 GINPNNGLAF YNQKFQG
93 GDF15_013 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 94 GDF15_012 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 95 GDF15_001 LCDR-1 RTSQSVHNYL A GDF15_012 LCDR-1 96 GDF15_012 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK 97 GDF15_012 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPIF-
GLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 98 GDF15_012 HCDR-2 QINPIFGLAF YAQKFQG 99 GDF15_012 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGQ INPIF-
GLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREV ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 100 GDF15_010 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 101 GDF15_010 LCDR-1 RTSQSLHSYL A 102 GDF15_006 LCDR-3 QQFWNDPWT GDF15_010 LCDR-3 103 GDF15_010 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSLH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIK 104 GDF15_010 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPNN-
GLAFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 105 GDF15_010 HCDR-2 GINPNNGLAF FNQKFQG 106 GDF15_010 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPNN-
GLAFF NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 107 GDF15_009 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 108 GDF15_003 LCDR-2 DAKNRAD GDF15_009 LCDR-2 109 GDF15_009 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK 110 GDF15_009 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMEYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 111 GDF15_009 HCDR-3 EAITTVGAME Y 112 GDF15_009 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMEYW
GQGTLVTVSS 113 GDF15_008 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 114 GDF15_002 LCDR-2 DASNRAD GDF15_008 LCDR-2 115 GDF15_008 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQNVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPYTFGQ GTKVEIK 116 GDF15_008 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLIFF AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 117 GDF15_008 HCDR-1 GYTFTSYNIS 118 GDF15_008 HCDR-2 QINPNNGLIF FAQKFQG 119 GDF15_005 HCDR-3 EAITTVGAMD Q GDF15_008 HCDR-3 120 GDF15_008 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLIFF AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQG-
TLVTVSS 121 GDF15_007 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTLATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 122 GDF15_007 LCDR-2 DASTLAT 123 GDF15_007 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSENVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTLATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK 124 GDF15_007 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 125 GDF15_007 HCDR-1 GYTFSDYNIS 126 GDF15_002 HCDR-2 GINPIFGLAF YNQKFQG GDF15_007 HCDR-2 127 GDF15_007 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNISWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDYW GQG-
TLVTVSS 128 GDF15_006 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVS NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 129 GDF15_006 LCDR-1 RTSQSVSNYL A 130 GDF15_006 LCDR-2 DAKNRAT 131 GDF15_006 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVS NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRATGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWNDPWTFGQ GTKVEIK 132 GDF15_006 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREF ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 133 GDF15_006 HCDR-1 GYTFTDYNIS 134 GDF15_006 HCDR-2 QINPNNGLAF YAQKFQG 135 GDF15_006 HCDR-3 EFITTVGAMD Y 136 GDF15_006 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNISWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREF ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS
137 GDF15_005 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 138 GDF15_005 LCDR-1 RTSESVSSYL A 139 GDF15_005 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK 140 GDF15_005 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNG- TAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 141 GDF15_005 HCDR-2 GINPNNGTAF YAQKFQG 142 GDF15_005 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DYNMDWVRQA PGQGLEWMGG INPNNG- TAFY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDQW GQG-
TLVTVSS 143 GDF15_004 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 144 GDF15_004 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSESVH SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSDPYTFGQ GTKVEIK 145 GDF15_004 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLANY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTIGAMDYW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 146 GDF15_004 HCDR-2 QINPNNGLAN YAQKFQG 147 GDF15_004 HCDR-3 EAITTIGAMD Y 148 GDF15_004 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN- GLANY AQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTIGAMDYW GQG-
TLVTVSS 149 GDF15_003 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSLS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 150 GDF15_003 LCDR-1 RASQSLSSYL A 151 GDF15_003 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSLS SYLAWYQQKP GQAPRLLIYD AKNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FSSDPYTFGQ GTKVEIK 152 GDF15_003 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREQ ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGAL- TSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCD- KTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP
ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 153 GDF15_003 HCDR-1 GYTFTSYNID 154 GDF15_003 HCDR-3 EQITTVGAMD Y 155 GDF15_003 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT SYNIDWVRQA PGQGLEWMGQ INPNN-
GLAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREQ ITTVGAMDYW
GQGTLVTVSS 156 GDF15_002 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 157 GDF15_002 LCDR-1 RASQNVHNYL A 158 GDF15_002 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQNVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASNRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK
159 GDF15_002 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDPW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 160 GDF15_002 HCDR-3 EAITTVGAMD P 161 GDF15_002 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFGLA- FY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDPW GQG-
TLVTVSS 162 GDF15_001 LC EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYS-
LSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC 163 GDF15_001 VL EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRTSQSVH NYLAWYQQKP GQAPRLLIYD ASTRADGIPA
RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ FWSWPWTFGQ GTKVEIK 95 GDF15_001 LCDR-1 RTSQSVHNYL A 28 GDF15_001 LCDR-2 DASTRAD 9 GDF15_001 LCDR-3 QQFWSWPWT 164 GDF15_001 HC QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFG- TAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQG-
TLVTVSS ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPEAAGA PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSREE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY
SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPG 32 GDF15_001 HCDR-1 GYTFSSYNID 165 GDF15_001 HCDR-2 GINPIFGTAF YNQKFQG 52 GDF15_001 HCDR-3 EAITTVGAMD H 166 GDF15_001 VH QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS SYNIDWVRQA PGQGLEWMGG INPIFG- TAFY NQKFQGRVTI TADESTSTAY MELSSLRSED TAVYYCAREA ITTVGAMDHW GQG-
TLVTVSS 167 GDF15_001 VL DNA GAAATTGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC CTGAGCCTGA GCCCGGGCGA ACGCG-
CGACC CTGAGCTGCC GCACCAGCCA GAGCGTTCAT AACTATCTGG CGTGGTATCA GCAGAAACCG GGCCAGGCGC CGCGCCTGCT GATTTATGAT GCGAGCACCC GTGCG- GATGG CATTCCGGCA CGCTTTAGCG GCAGCGGCAG CGGCACCGAT TTTACCCTGA CCATTAGCAG CCTGGAACCG GAAGATTTTG CGGTGTATTA TTGCCAGCAG TTTTGGA-
GCT GGCCGTGGAC CTTTGGCCAG GGCACCAAAG TGGAAATTAAA 168 GDF15_001 VH DNA CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG
CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CGAGCGGCTA TACCTTTAGC AGCTATAACA TTGATTGGGT GCGCCAGGCG CCGGGCCAGG GCCTGGAATG GATGGGCGGT AT- TAACCCGA TTTTTGGCAC CGCATTTTAT AACCAGAAAT TTCAGGGCCG CGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA GCAGCCTGCG CAG- CGAAGAT ACCGCGGTGT ATTATTGCGC ACGCGAAGCG ATTACCACCG TGGGCGCGAT
GGATCATTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC CGTGAGCAGC 169 GDF15_001 LC DNA GAAATTGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC CTGAGCCTGA GCCCGGGCGA ACGCG-
CGACC CTGAGCTGCC GCACCAGCCA GAGCGTTCAT AACTATCTGG CGTGGTATCA GCAGAAACCG GGCCAGGCGC CGCGCCTGCT GATTTATGAT GCGAGCACCC GTGCG- GATGG CATTCCGGCA CGCTTTAGCG GCAGCGGCAG CGGCACCGAT TTTACCCTGA CCATTAGCAG CCTGGAACCG GAAGATTTTG CGGTGTATTA TTGCCAGCAG TTTTGGA- GCT GGCCGTGGAC CTTTGGCCAG GGCACCAAAG TGGAAATTAA ACGTACGGTG GCTGCACCAT CTGTCTTCAT CTTCCCGCCA TCTGATGAGC AGTTGAAATC TGGAAC- TGCC TCTGTTGTGT GCCTGCTGAA TAACTTCTAT CCCAGAGAGG CCAAAGTACA GTGGAAGGTG GATAACGCCC TCCAATCGGG TAACTCCCAG GAGAGTGTCA CAGAG- CAGGA CAGCAAGGAC AGCACCTACA GCCTCAGCAG CACCCTGACG CTGAGCAAAG CAGACTACGA GAAACACAAA GTCTACGCCT GCGAAGTCAC CCATCAGGGC CTGAG-
CTCGC CCGTCACAAA GAGCTTCAAC AGGGGAGAGT GT 170 GDF15_001 HC DNA CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG
CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CGAGCGGCTA TACCTTTAGC AGCTATAACA TTGATTGGGT GCGCCAGGCG CCGGGCCAGG GCCTGGAATG GATGGGCGGT AT- TAACCCGA TTTTTGGCAC CGCATTTTAT AACCAGAAAT TTCAGGGCCG CGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA GCAGCCTGCG CAG- CGAAGAT ACCGCGGTGT ATTATTGCGC ACGCGAAGCG ATTACCACCG TGGGCGCGAT GGATCATTGG GGCCAGGGCA CCCTGGTGAC CGTGAGCAGC GCGTCGACCA AGGG- CCCATC GGTCTTCCCC CTGGCACCCT CCTCCAAGAG CACCTCTGGG GGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGA- ACTCAG GCGCCCTGAC CAGCGGCGTG CACACCTTCC CGGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAGCTTGGG CAC- CCAGACC TACATCTGCA ACGTGAATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAA AGTTGAGCCC AAATCTTGTG ACAAAACTCA CACATGCCCA CCGTGCCCAG CAC- CTGAAGC CGCTGGGGCA CCGTCAGTCT TCCTCTTCCC CCCAAAACCC AAGGACACCC TCATGATCTC CCGGACCCCT GAGGTCACAT GCGTGGTGGT GGACGTGAGC CACGAAGACC CTGAGGTCAA GTTCAACTGG TACGTGGACG GCGTGGAGGT GCATAA- TGCC AAGACAAAGC CGCGGGAGGA GCAGTACAAC AGCACGTACC GTGTGGTCAG CGTCCTCACC GTCCTGCACC AGGACTGGCT GAATGGCAAG GAGTACAAGT GCAAGG- TCTC CAACAAAGCC CTCCCAGCCC CCATCGAGAA AACCATCTCC AAAGCCAAAG GGCAGCCCCG AGAACCACAG GTGTACACCC TGCCCCCATC CCGGGAGGAG ATGAC- CAAGA ACCAGGTCAG CCTGACCTGC CTGGTCAAAG GCTTCTATCC CAGCGACATC GCCGTGGAGT GGGAGAGCAA TGGGCAGCCG GAGAACAACT ACAAGACCAC GCCTCCCGTG CTGGACTCCG ACGGCTCCTT CTTCCTCTAT AGCAAGCTCA CCGTG- GACAA GAGCAGGTGG CAGCAGGGGA ACGTCTTCTC ATGCTCCGTG ATGCATGAGG
CTCTGCACAA CCACTACACG CAGAAGAGCC TCTCCCTGTC CCCCGGA 171 GDF15 HCDR-1 Sequência de Consenso GYTFX1X2YNID em que X1 é S ou T and X2 é S ou D 172 GDF15 HCDR-2 Sequência de Consenso X3INPX4X5GX6AX7X8X9QKFQG, em que X3 é G ou Q; X4 é I ou N; X5 é F ou N; X6 é T ou L; X7 é F ou N; X8 é Y ou F and X9 é N ou A 173 GDF15 HCDR-3 Sequência de Consenso EX10ITTX11GAMDX12, em que X10 é A ou Q; X11 é V ou I; and X12 é H ou Y 174 GDF15 LCDR-1 Sequência de Consenso RX1SQX2X3X4X5YLA, em que X1 é T ou A, X2 é S ou N, X3 é V ou L, X4 é H ou S, and X5 é N ou S 175 GDF15 LCDR-2 Sequência de Consenso DAX6X7RAX8, em que X6 é S ou K; X7 é T ou N; and X8 é D ou T 176 GDF15 LCDR-3 Sequência de Consenso QQFX9X10X11PX12T, em que X9 é W ou S; X10 é S ou N; X11 é W ou D; and X12 é W ou Y 177 hu01G06 VH QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT DYNMDWVRQA PGQSLEWMGQ
INPNNGLIFF NQKFQGRVTL TTDTSTSTAY MELRSLRSDD TAVYYCAREA
ITTVGAMDYW GQGTLVTVSS 178 hu01G06 VL DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRTSENLH NYLAWYQQKP GKSPKLLIYD
AKTLADGVPS RFSGSGSGTD YTLTISSLQP EDFATYYCQH FWSDPYTFGQ
GTKLEIK 179 GDF15_0297 HCDR-1 GYPFEGWYIH GDF15_0301 HCDR-1 GDF15 0470 HCDR-1 180 GDF15_0297 HCDR-2 WNNPRTGLTNHAQKFQG GDF15_0301 HCDR-2 GDF15 0470 HCDR-2 181 GDF15_0297 HCDR-3 GVGADAAFDI GDF15_0301 HCDR-3 GDF15 0470 HCDR-3 182 GDF15 0297 VH QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKVTM TRDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTTLTVSS 183 GDF15 0297 HC QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKVTM TRDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTTLTVSSA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV AISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY
FIYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS PGK 184 GDF15_0297 LCDR-1 RSSQSLLWKHGYNYLD GDF15_0301 LCDR-1 GDF15 0470 LCDR-1 185 GDF15_0297 LCDR-2 LDRNRAH GDF15_0301 LCDR-2 GDF15 0470 LCDR-2
186 GDF15_0297 LCDR-3 MQSFETPIT GDF15_0301 LCDR-3 GDF15 0470 LCDR-3 187 GDF15_0297 VL DIVMTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRN-
RA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IK 188 GDF15_0297 LC DIVMTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRN- RA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IKRA-
DAAPTV SIFPPSSEQL TSGGASVVCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD
QDSKDSTYSM SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPI VKSFNRNEC 189 GDF15 0301 VH QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTTLTVSS 190 GDF15 0301 HC QVQLQQPGAE LVKPGASVKM SCKASGYPFE GWYIHWVKQR PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGKATL TVDTSSSTAY MQLSSLTSED SAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTTLTVSSA KTTPPSVYPL APGSAAQTNS MVTLGCLVKG YFPEPVTVTW NSGSLSSGVH TFPAVLQSDL YTLSSSVTVP SSTWPSETVT CNVAHPASST KVDKKIVPRD CGCKPCICTV PEVSSVFIFP PKPKDVLTIT LTPKVTCVVV AISKDDPEVQ FSWFVDDVEV HTAQTQPREE QFNSTFRSVS ELPIMHQDWL NGKEFKCRVN SAAFPAPIEK TISKTKGRPK APQVYTIPPP KEQMAKDKVS LTCMITDFFP EDITVEWQWN GQPAENYKNT QPIMDTDGSY
FIYSKLNVQK SNWEAGNTFT CSVLHEGLHN HHTEKSLSHS PGK 191 GDF15_0301 VL DIVLTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRN-
RA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IK 192 GDF15_0301 LC DIVLTQSPSS LSVSAGEKVT MSCRSSQSLL WKHGYNYLDW YQQKPGQPPK LLIYLDRN- RA HGVPDRFTGS GSGTDFTLTI SSVQAEDLAV YYCMQSFETP ITFGGGTKLE IKRA-
DAAPTV SIFPPSSEQL TSGGASVVCF LNNFYPKDIN VKWKIDGSER QNGVLNSWTD
QDSKDSTYSM SSTLTLTKDE YERHNSYTCE ATHKTSTSPI VKSFNRNEC 193 GDF15 0470 VH QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYPFE GWYIHWVRQA PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTMVTVSS 194 GDF15 0470 HC QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYPFE GWYIHWVRQA PGQGLEWMGW NNPRTGLTNH AQKFQGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARGV GA-
DAAFDIWG QGTMVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPEAAGAP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSREEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE
NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG 195 GDF15_0470 VL EIVLTQSPA TLSLSPGER ATLSCRSSQ SLLWKHGYN YLDWYQQKP GQAPRLLIY LDRN-
RAHGI PARFSGSGS GTDFTLTIS SLEPEDFAV YYCMQSFET PITFGQGTK VEIK 196 GDF15_0470 LC EIVLTQSPA TLSLSPGER ATLSCRSSQ SLLWKHGYN YLDWYQQKP GQAPRLLIY LDRN-
RAHGI PARFSGSGS GTDFTLTIS SLEPEDFAV YYCMQSFET PITFGQGTK VEIKRTVAA PSVFIFPPS DEQLKSGTA SVVCLLNNF YPREAKVQW KVDNALQSG NSQESVTEQ DSK- DSTYSL SSTLTLSKA DYEKHKVYA CEVTHQGLS SPVTKSFNR GEC
[00329] Em certas modalidades, a substituição é a substituição de linha germinativa humana em que um resíduo de CDR (doador) é substituído pelo resíduo de linha germinativa humana (aceptor) cor- respondente, para aumentar o teor de aminoácidos humanos e poten- cialmente reduzir a imunogenicidade do anticorpo, como descrito, por exemplo, na Publicação do Pedido de Patente US 2017/0073395 e Townsend e outro, 2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112 (50): 15354- 15359). Por exemplo, se a estrutura de linha germinativa humana IGHV1-69*01 for usada e o anticorpo exemplar, GDF15_001 VH (SEQ ID NO:166) for comparado, em seguida o alinhamento do HCDR-1 do anticorpo GDF15_001 (SEQ ID NO:32) e a linha germinativa humana IGHV1-69*01 é como segue: Posição 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 Linha Germinal Humana IGHV1-69*01 GGTFSSYAIS GDF15_001 VH (SEQ ID NO:166) GYTFSSYNID
[00330] Para as posições de aminoácidos números 26, 28, 29, 30, 31, 32 e 34 (itálico), o resíduo de linha germinativa humana (aceptor) e os resíduos de GDF15_001 correspondentes (doador) são os mes- mos, e uma substituição de linha germinativa não é possível. Para as posições 27, 33 e 35 (negrito e sublinhado), o resíduo de linha germi- nativa humana (aceptor) e o resíduo GDF15_001 (doador) correspon- dente são diferentes. Os resíduos de GDF15_001 nessas posições podem ser substituídos pelo resíduo IGHV1-69*01 de linha germinativa humana correspondente para também aumentar o teor de resíduo hu- mano. O mesmo processo pode ser seguido para cada CDR de cadeia pesada e leve aumentar o teor de resíduos de aminoácidos humanos enquanto conserva as características de ligação, por exemplo, ligação de epítopo, afinidade e similar, enquanto minimiza o teor de resíduos de camundongo, desse modo diminuindo qualquer imunogenicidade potencial, por exemplo, resposta imune de anticorpo anti-camundongo humano (HAMA), ao anticorpo em um ser humano.
[00331] Métodos e bibliotecas para a introdução de resíduos de li- nha germinativa humana em CDRs de anticorpos são descritos em detalhes na Publicação do Pedido de Patente US Nº 2017/0073395 e Townsend e outro, 2015, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA. 112 (50): 15354- 15359, e ambos estão no presente documento incorporados por refe- rência em sua totalidade.
[00332] Os anticorpos anti-GDF15, ou fragmentos de ligação de an- tígeno dos mesmos, podem compreender uma estrutura VH compre-
endendo uma sequência de estrutura VH de linha germinativa huma- na. Em alguns aspectos, estruturas VH das seguintes linhas germinati- vas podem ser usadas: IGHV1-2*02, IGHV1-3*01, IGHV1-46*01, IGHV1-69*01, IGHV1-69*02, IGHV1-8*01, IGHV3-13*01, IGHV3- 23*01, IGHV3-23*04, IGHV3-30*01, IGHV3-30*18, IGHV5-10-1*01, IGHV5-10-1*04 ou IGHV5-51*01 (nomes de linha germinativa são ba- seados na definição de linha germinativa IMGT). Em alguns aspectos, estruturas VL das seguintes linhas germinativas podem ser usadas: IGKV1-12*01, IGKV1-13*02, IGKV1-33*01, IGKV1-39*01, IGKV1-5*01, IGKV3-11*01, IGKV3-15*01, IGKV3-20*01, IGKV3D-20*02 e IGKV4- 1*01 (nomes de linha germinativa são baseados na definição de linha germinativa IMGT. Sequências de estruturas de linha germinativa hu- mana estão disponíveis em vários bancos de dados públicos, tal como V-base, IMGT, NCBI ou Abysis.
[00333] Os anticorpos anti-GDF15, ou fragmentos de ligação de an- tígeno dos mesmos, podem compreender uma estrutura VL compre- endendo uma sequência de estrutura VL de linha germinativa humana. A estrutura VL pode compreender uma ou mais substituições, adições ou deleções de aminoácidos, embora ainda retenha similaridade funci- onal e estrutural com a linha germinativa da qual foi derivada. Em al- guns aspectos, a estrutura VL é de pelo menos 53%, 58%, 60%, 63%, 71%, 72%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97 %, 98% ou 99% idêntica à sequência de linha germinativa humana da qual foi derivada. Em alguns aspectos, o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreende uma estrutura VL compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 substituições, adições ou deleções de aminoácidos em relação à linha germinativa humana VL sequência da estrutura. Em alguns aspectos, as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições, adições ou deleções de aminoácidos são apenas nas regiões de estrutura. Em alguns aspectos, a identidade percentual (%) é baseada em similari-
dade com VL, excluindo aquelas porções no presente documento defi- nidas como CDRs.
[00334] Os anticorpos anti-GDF15, ou fragmentos de ligação de an- tígeno dos mesmos, podem compreender uma estrutura VH compre- endendo uma sequência de estrutura VH de linha germinativa huma- na. A estrutura VH pode compreender uma ou mais substituições, adi- ções ou deleções de aminoácidos, embora ainda retenha a similarida- de funcional e estrutural com a linha germinativa da qual foi derivada. Em alguns aspectos, a estrutura VH é de pelo menos 72%, 74%, 75%, 77%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idên- tica à sequência de linha germinativa humana da qual foi derivada. Em alguns aspectos, o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, compreende uma estrutura VH compreendendo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 substituições, adições ou deleções de aminoácidos em relação à linha germinativa humana VH sequência da estrutura. Em alguns aspectos, as 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 substituições, adições ou deleções de aminoácidos são apenas nas regiões de estrutura. Em alguns aspectos, a identidade % é baseada na similaridade com VH, excluindo aquelas porções no presente documento definidas como CDRs.
[00335] Os anticorpos anti-GDF15, ou fragmentos de ligação de an- tígeno dos mesmos, podem compreender um VH compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácido de SEQ ID NO:6. O VH pode compreender uma sequência de aminoácidos pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 e 166. O VH pode compreender a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 e 166.
[00336] O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno pode compreender um VL compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:1. O VL pode compreender uma sequência de aminoácidos pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idêntica à sequência de aminoácidos SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 e 163. O VL pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 e 163.
[00337] Em alguns aspectos, o anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, compreende um LCDR-1, um LCDR-2 e um LCDR-3 como mencionado na sequência de aminoácidos de pelo me- nos uma de SEQ ID NOs: 11, 30, 39, 49, 56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123, 131, 139, 144, 151, 158 e 163.
[00338] Em alguns aspectos, o anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, compreende ainda uma HCDR-1, uma HCDR-2 e uma HCDR-3 como mencionado na sequência de aminoácidos de pelo menos uma de SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161 e 166.
[00339] Em alguns aspectos, o anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, compreende um LCDR-1, um LCDR-2, um LCDR-3 como mencionado na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163 e uma HCDR-1, uma HCDR-2 e uma HCDR-3 como mencio- nado na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166.
[00340] O anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, pode compreender um VL compreendendo uma sequência de aminoá- cidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163. O VL pode compreender uma sequência de aminoácidos pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%,
idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163. O VL pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163.
[00341] O anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, pode compreender um VH compreendendo uma sequência de amino- ácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166. O VH pode compreender uma sequência de aminoácidos pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166. O VH pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166.
[00342] O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno pode compreender um HC compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:164. O HC pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:164.
[00343] O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno pode compreender um LC compreendendo uma sequência de aminoácidos de pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%, idêntica a SEQ ID NO:162. O LC pode compreender a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:162. Antagonistas de Ligação ao Eixo PD-1
[00344] O termo "antagonista de ligação ao eixo PD-1", quando no presente documento utilizado, refere-se a uma molécula que inibe a interação de um parceiro de ligação ao eixo PD-1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, para remover a disfunção de células T re- sultando em sinalização no eixo de sinalização PD-1 (da mesma forma referido como "trilha de sinalização PD-1/PD-L" ou "trilha de sinaliza- ção PD-1/PD-L"), com um resultado sendo restaurar ou melhorar a função das células T. Quando no presente documento utilizado, um antagonista de ligação ao eixo PD-1 inclui um antagonista de ligação ao PD-1, um antagonista de ligação ao PD-L1 e um antagonista de ligação ao PD-L2. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti PD-1. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti PD-L1. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um an- ticorpo anti-PD-L2.
[00345] Em alguns aspectos, um antagonista do eixo PD-1, um an- tagonista de ligação ao eixo PD-1, um antagonista de ligação ao PD-1 e um anticorpo anti-PD-L1 não inclui avelumabe. Isto é, opcionalmen- te, o avelumabe é excluído do agente que inibe o eixo de sinalização do eixo PD-1.
[00346] Antagonistas de ligação ao eixo PD-1 exemplares para uso no método de tratamento, medicamentos e usos da presente invenção incluem, sem limitação, nivolumabe, pembrolizumabe, AMP-224 com ou sem a sequência de sinal, como descrito na Publicação de Patente Internacional No. WO2010/027827 e WO2011/066342, mAb7 e mAb15 como descrito na Publicação de Patente Internacional No. WO2016/092419, e avelumab como descrito em WO2013/079174. As descrições de WO2010/027827, WO2011/066342, WO2016/092419 e WO2013/079174 estão incorporadas no presente documento por refe- rência em sua totalidade. A Tabela 3 lista as várias sequências de al- guns dos antagonistas de ligação ao eixo PD-1 exemplificados. Tabela 3 SEQ ID Descrição Sequência
NO 197 mAb7 (RN888) ou mAb15 QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKF- de cadeia pesada de KNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP tamanho natural (HC) com CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGT- CDRs sublinhados, incluin- KTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV do lisina terminal (K). VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV
SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES
NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLGK (SEQ ID NO:1 IN US 62/750579)(SEQ ID NO:29 em WO 16/092419) 198 mAb7 (RN888) ou mAb15 QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKF- de cadeia pesada de KNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSSAST KGPSVFPLAP tamanho natural sem a CSRSTSESTA ALGCLVKDYF PEPVTVSWNS GALTSGVHTF PAVLQSSGLY SLSSVVTVPS SSLGT- lisina C-terminal, com CDRs KTYTC NVDHKPSNTK VDKRVESKYG PPCPPCPAPE FLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV sublinhados. VDVSQEDPEV QFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQFNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV
SNKGLPSSIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SQEEMTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES
NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSRLTVD KSRWQEGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SLG (SEQ ID NO:2 IN US 62/750579)(SEQ ID NO:38 em WO 16/092419)
199 mAb7 (RN888) de cadeia DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLW DSGNQKNFLT WYQQKPGQPP KLLIYWTSYR ESGVP- leve de tamanho natural, DRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYFY PHTFGGGTKV EIKRGTVAAP SVFIFPPSDE com CDRs sublinhados. QLKSGTASVV CLLNNFYPRE AKVQWKVDNA LQSGNSQESV TEQDSKDSTY SLSSTLTLSK ADYEKHKVYA CEVTHQGLSS PVTKSFNRGE C (SEQ ID NO:3 IN US 62/750579)(SEQ ID NO:39 em WO 16/092419) 200 mAb7 (RN888) de região QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IYPGSSLTNY NEKF- variável de cadeia leve, com KNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS TGTFAYWGQG TLVTVSS (SEQ ID NO:4 IN US CDRs sublinhados. 62/750579) (SEQ ID NO:8 em WO 16/092419) 201 mAb7 (RN888) e mAb15 de QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN IWPGSSLTNY NEKF- região variável de cadeia KNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLL TGTFAYWGQG TLVTVSS (SEQ ID NO:5 IN US pesada, com CDRs subli- 62/750579) (SEQ ID NO:4 em WO 16/092419) nhados. 202 mAb15 de região variável DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLWD SGNQKNFLT WYQQKPGQPP KLLIYWTSYR ESGVP- de cadeia leve, com CDRs DRFSG SGSGTDFTLTI SSLQAEDVA VYYCQNDYFY PHTFGGGTKV EIK (SEQ ID NO:6 IN US sublinhados. 62/750579) 203 nivolumab, MDX1106, de QVQLVESGGG WQPGRSLRLD CKASGITFSN SGMHWVRQAP GKGLEWVAVR WYDGSKRYYA cadeia pesada de tamanho DSVKGRFTIS RDNSKNTLFL QMNSLRAEDT AVYYCATNDD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV natural FPLAPCSRST SESTAALGCL VDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSL- De WO2006/121168 GTT YTCNVDHKPS NTKVDRVESY GPPCPPCPAP EFLGGPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCW VDVSQEDPEV QFNWYYDGVE VHNATKPREE QFNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKGL-
PSSIEK TISKAGQPRE PQVYTLPPSQ EEMTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPEKNYKTTP
PVLDSDGSFF LYSRLTVDKS RWQEGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSL GK 204 nivolumab, MDX1106, de EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQPG QAPRLLIYDA SNRATGIPAR FSGSGSG- cadeia leve de tamanho TDF TLTISSLEPE DFAVYYCQQS SNWPRTFGQG TKVEIRTVAA PSVFIFPPSD EQLSGTASVV natural CLLNNFYPRE AVQWKVDNAL QSGNSQESVT EQDSDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE De WO2006/121168 VTHQGLSSPV TSFNRGEC 205 pembrolizumab, MK3475, QVQLVQSGVE VKKPGASVK VSCKASGYTF TNYYMYWVRQA PGQGLEWMGG INPSNGGTNF de cadeia pesada de NEKFKNRVT LTTDSSTTTA YMELKSLQFDD TAVYYCARRD YRFDMGFDYW GQGTTVTVS SASTKG- tamanho natural PSVF PLAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVVT De WO2009/114335 VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMIS-
RTPEVT CVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESN-
GQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQKS LSLSLGK 206 pembrolizumab, MK3475, EIVLTQSPAT LSLSPGERA TLSCRASKGV STSGYSYLHWY QQKPGQAPRL LIYLASYLES de cadeia leve de tamanho GVPARFSGS GSGTDFTLTI SSLEPEDFAVY YCQHSRDLPL TFGGGTKVEI KRTVAAPSV natural FIFPPSDEQL KSGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTE QDSK D STYSL De WO2009/114335 SSTLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC 207 AMP-224, sem sequência LFTVTVPKEL YIIEHGSNVT LECNFDTGSH VNLGAITASL QKVENDTSPH RERATLLEEQ LPLGKASFHI de sinal PQVQVRDEGQ YQCIIIYGVA WDYKYLTLKV KASYRKINTH ILKVPETDEV ELTCQATGYP LAEVSW- De WO2010/027827 e PNVS VPANTSHSRT PEGLYQVTSV LRLKPPPGRN FSCVFWNTHV RELTLASIDL QSQMEPRTHP WO2011/066342 TWEPKSCDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCWV DVSHEDPEVK FNWYVD-
GVEV HNAKTKPREE QYNSTYRWSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF LYSKLTV-
DKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK 208 YW243.55.S70, EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS DSWIHWVRQA PGKGLEWVAW ISPYGGSTYY MPDL3280A) ADSVKGRFTI SADTSKNTAY LQMNSLRAED TAVYYCARRH WPGGFDYWGQ GTLVTVSA de região variável de cadeia pesada De WO2010/077634 209 YW243.55.S70, DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDVS TAVAWYQQKP GKAPKLLIYS ASFLYSGVPS MPDL3280A, RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YLYHPATFGQ GTKVEIKR de região variável de cadeia leve De WO2010/077634
[00347] O termo "antagonista de ligação a PD-1", quando no pre- sente documento utilizado, refere-se a uma molécula que especifica- mente liga-se a PD-1 e diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere na transdução de sinal resultante da interação de PD-1 com uma ou mais de suas ligações parceiros, tal como PD-L1, PD-L2. Em algumas mo-
dalidades, o antagonista de ligação ao PD-1 é uma molécula que inibe a ligação do PD-1 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto es- pecífico, o antagonista de ligação a PD-1 liga-se especificamente a PD-1 e, desse modo, inibe a ligação de PD-1 a PD-L1 e/ou PD-L2. Por exemplo, os antagonistas de ligação a PD-1 incluem anticorpos anti- PD-1, fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, imunoadesi- nas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que dimi- nuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem na transdução de sinal resultante da interação de PD-1 com PD-L1 e/ou PD-L2. Em uma mo- dalidade, um antagonista de ligação a PD-1 liga-se especificamente a PD-1 e, desse modo, reduz o sinal coestimulador negativo mediado por ou através de proteínas de superfície celular expressas em linfóci- tos T mediados por meio de sinalização através de PD-1, de modo a tornar uma célula T disfuncional menos não disfuncional. Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao PD-1 é um anticorpo anti- PD-1 incluindo, porém, não limitado a nivolumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, tislelizumabe, pidilizumabe, AMP-224, AMP-554, cemiplimabe e PF-06801591.
[00348] PF-06801951 é da mesma forma referido como sassanli- mabe (Registro CAS No. 2206792-50-7), RN888, e é descrito na Pu- blicação de Patente Internacional No. WO 2016/092419, que é incor- porada por referência como mencionado em sua totalidade no presen- te documento. Sassanlimabe é um anticorpo monoclonal IgG4-kappa (κ) estabilizado por região de articluação, humanizado. As sequências de aminoácidos de sassanlimabe (PF-06801951; RN888) são apresen- tadas na Tabela 4 abaixo.
[00349] Em um aspecto específico, um antagonista de ligação ao PD-1 é nivolumabe. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação a PD-1 é pembrolizumabe. Em outro aspecto específico, um antagonista de ligação a PD-1 é pidilizumabe.
[00350] O termo "antagonista de ligação ao PD-L1", quando no pre- sente documento utilizado, refere-se a uma molécula que especifica- mente liga-se ao PD-L1 e diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere na transdução de sinal resultante da interação de PD-L1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD-1, B7-1. Em algumas moda- lidades, um antagonista de ligação ao PD-L1 é uma molécula que inibe a ligação de PD-L1 aos seus parceiros de ligação. Em alguns aspec- tos, o antagonista de ligação ao PD-L1 não inclui avelumabe. Em um aspecto específico, o antagonista de ligação a PD-L1 inibe a ligação de PD-L1 a PD-1 e/ou B7-1. Em algumas modalidades, os antagonis- tas de ligação ao PD-L1 incluem anticorpos anti-PD-L1, fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras moléculas que diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem na transdução de sinal resultante da interação de PD-L1 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD- 1, B7-1. Em uma modalidade, um antagonista de ligação a PD-L1 re- duz o sinal coestimulatório negativo mediado por ou através de proteí- nas de superfície celular expressas em linfócitos T mediados por sina- lização através de PD-L1 de modo a tornar uma célula T disfuncional menos não disfuncional. Em algumas modalidades, um antagonista de ligação ao PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1. Em um aspecto específi- co, um anticorpo anti-PD-L1 é avelumabe (descrito como A09-246-2, na Publicação de Patente Internacional No. WO2013/079174). Em al- guns aspectos, avelumab não está incluído como um antagonista do eixo PD-1.
[00351] Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é o atezolizumabe. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é durvalumabe. Em outro aspecto específico, um anticorpo anti-PD-L1 é BMS-936559 (MDX-1105).
[00352] Quando no presente documento utilizado, um anticorpo an-
ti-PD-L1 humano refere-se a um anticorpo que especificamente liga-se a PD-L1 humano maduro, ou porção do mesmo, em que a molécula PD-L1 humana madura consiste nos aminoácidos 19-290 da seguinte sequência: MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNM- TIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYR- QRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGA- DYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIW- TSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLD- PEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRL- RKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (SEQ ID NO:221). Tabela 4. SEQUÊNCIAS DE SASANLIMAB DE ANTICORPO MO- NOCLONAL PD-L1 ANTI-HUMANO (PF-06801951, RN888, mAb7) SEQ ID NO Descrição Sequência de Aminoácido 210 HCDR-1 (Chothia) (SEQ ID NO:14 GYTFTSY EM WO 2016/092419) 211 HCDR-1 (estendido) (SEQ ID GYTFTSYWIN NO:13 EM WO 2016/092419) 212 HCDR-1 (Kabat) SYWIN (SEQ ID NO:15 EM WO 2016/092419) 213 HCDR-2 (Chothia) (SEQ ID NO:16 NIYPGSSL EM WO 2016/092419) 214 HCDR-2 (estendido) (SEQ ID NIYPGSSLTNYNEKFK NO:17 EM WO 2016/092419) 215 HCDR-3 LSTGTFAY (SEQ ID NO:23 EM WO 2016/092419) 216 LCDR-1 KSSQSLWDSGNQKNFLT SEQ ID NO:10 EM WO 2016/092419) 217 LCDR-2 WTSYRES (SEQ ID NO:20 EM WO 2016/092419) 218 LCDR-3 QNDYFYPHT (SEQ ID NO:21 EM WO 2016/092419) 219 VH QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT SYWINWVRQA PGQGLEWMGN (SEQ ID NO:4 EM WO IYPGSSLTNY NEKFKNRVTM TRDTSTSTVY MELSSLRSED TAVYYCARLS 2016/092419) TGTFAYWGQG TLVTVSS Chothia (negrito), Kabat (sublinha- dos), e estendido (ambos), CDRs são indicados; 220 VL DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCKSSQSLW DSGNQKNFLT WYQQKPGQPP (SEQ ID NO:8 EM WO KLLIYWTSYR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYFY 2016/092419) PHTFGGGTKV EIK CDRs são indicados em letras em negrito e sublinhadas 197 Cadeia pesada QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWINWVRQAPGQGLEWM- (HC) GNIYPGSSLTNYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR- (SEQ ID NO:29 EM WO 16/092419) LSTGTFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK- Terminal lisina (K) é opcional; DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCN-
Chothia CDRs são indicados em VDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMIS- letras em negrito; RTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS- Kabat CDRs são sublinhados; TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTL- estendido CDRs (ambos) PPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGS- FFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG(K) 199 Cadeia leve (LC) DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLWDSGNQKNFLTWYQQK- (SEQ ID NO:39 EM WO PGQPPKLLIYWTSYRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAED- 2016/092419) VAVYYCQNDYFYPHTFGGGTKVEIKRGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTAS- CDRs são indicados em letras em VVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS- negrito e sublinhadas LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 221 MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL protein de PD-L1 humano; PD-L1
AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ humano maduro consiste em 29-
ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE 290 resíduos de aminoácido; os
HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN resíduos não incluídos na proteína TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERTH LVILGAILLC LGVAL- madura são sublinhados
TFIFR LRKGRMMDVK KCGIQDTNSK KQSDTHLEET
[00353] O termo "antagonistas de ligação a PD-L2", quando no pre- sente documento utilizado, refere-se a uma molécula que especifica- mente liga-se a PD-L2 e diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere na transdução de sinal resultante da interação de PD-L2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal como PD-1. Em algumas modalida- des, um antagonista de ligação ao PD-L2 é uma molécula que inibe a ligação do PD-L2 aos seus parceiros de ligação. Em um aspecto es- pecífico, o antagonista de ligação a PD-L2 inibe a ligação de PD-L2 a PD-1. Em algumas modalidades, os antagonistas de PD-L2 incluem anticorpos anti-PD-L2, fragmentos de ligação de antígeno dos mes- mos, imunoadesinas, proteínas de fusão, oligopeptídeos e outras mo- léculas que especificamente ligam-se a PD-L2 e diminuem, bloqueiam, inibem, anulam ou interferem na transdução de sinal resultante da inte- ração de PD-L2 com um ou mais de seus parceiros de ligação, tal co- mo PD-1. Em uma modalidade, um antagonista de ligação a PD-L2 reduz o sinal coestimulador negativo mediado por ou através de prote- ínas de superfície celular expressas em linfócitos T mediados por meio de sinalização por PD-L2 de modo a tornar uma célula T disfuncional menos não disfuncional. Em algumas modalidades, um antagonista de ligação ao PD-L2 é uma imunoadesina de PD-L2. Ácidos Nucleicos
[00354] A invenção da mesma forma fornece polinucleotídeos que codificam qualquer um dos anticorpos da invenção, incluindo porções de anticorpo e anticorpos modificados descritos no presente documen- to. A invenção da mesma forma fornece um método de preparação de qualquer um dos polinucleotídeos descritos no presente documento. Os polinucleotídeos podem ser produzidos e expressos por procedi- mentos conhecidos na técnica.
[00355] A sequência de um anticorpo desejado, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, e ácido nucleico que codifica tal anti- corpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, podem ser de- terminados usando técnicas de sequenciamento padrão. Uma sequên- cia de ácido nucleico que codifica um anticorpo desejado, ou fragmen- to de ligação de antígeno do mesmo, pode ser inserida em vários veto- res (tais como vetores de clonagem e expressão) para produção e ca- racterização recombinante. Um ácido nucleico que codifica a cadeia pesada, ou um fragmento de ligação de antígeno de cadeia pesada e um ácido nucleico que codifica a cadeia leve, ou um fragmento de li- gação de antígeno de cadeia leve, pode ser clonado no mesmo vetor, ou vetores diferentes.
[00356] Em um aspecto, a invenção fornece polinucleótidos que co- dificam as sequências de aminoácidos de qualquer um dos seguintes anticorpos GDF15 e porções de ligação de antígeno do mesmo: GDF15_001, GDF15_002, GDF15_003, GDF15_004, GDF15_005, GDF15_006, GDF15_007, GDF15_008, GDF15_009, GDF15_010, GDF15_011, GDF15_012, GDF15_013, GDF15_014, GDF15_015, GDF15_017, GDF15_018, GDF15_020, GDF15_021, GDF15_022, GDF15_100, GDF15_200, GDF15_297, GDF15_301, GDF15-470.
[00357] A invenção fornece polinucleotídeos que codificam uma ou mais proteínas compreendendo a sequência de aminoácidos selecio- nada a partir do grupo que consiste em: (i) SEQ ID NOs: 21, 34, 44, 53, 60, 68, 73, 80, 86, 93, 99, 106, 112, 120, 127, 136, 142, 148, 155, 161, 166, 11, 30, 39, 49,56, 64, 71, 77, 83, 90, 96, 103, 109, 115, 123,
131, 139, 144, 151, 158, 163, 166, 183, 187, 189, 191, 193 e 195.
[00358] A invenção fornece polinucleotídeos compreendendo a se- quência de ácido nucleico como mencionado como uma ou mais de SEQ ID NOs: 167, 168, 169 e 170. A invenção fornece um polinucleo- tídeo compreendendo a sequência de ácido nucleico como menciona- do como SEQ ID NO:167. A invenção fornece um polinucleotídeo compreendendo a sequência de ácido nucleico como mencionado co- mo SEQ ID NO:168. A invenção fornece um polinucleotídeo compre- endendo a sequência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:169. A invenção fornece um polinucleotídeo compreendendo a se- quência de ácido nucleico mencionada como SEQ ID NO:170. Devido à degeneração do código genético, a invenção fornece ainda uma se- quência de ácido nucleico em que o nucleotídeo na posição número 1344 de SEQ ID NO:170 pode ser A, C, G, T, e/ou o nucleotídeo na posição número 1347 pode ser A, C, G, T. Os dois últimos códons for- necidos em SEQ ID NO:170 ainda codificam prolina e glicina, respecti- vamente.
[00359] A invenção fornece um polinucleotídeo compreendendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado em ATCC e tendo o Nº de Acesso PTA-125038 que codifica o domínio de VH de GDF15_001. A invenção da mesma forma fornece um polinu- cleotídeo compreendendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado em ATCC e tendo o Nº de Acesso PTA- 125039 que codifica o domínio de VL de GDF15_001. Além disso, a invenção fornece um polipeptídeo compreendendo a sequência de aminoácidos codificada pela inserção de DNA do plasmídeo deposita- do com o ATCC e tendo o Nº de Acesso PTA-125038, que codifica o domínio de VH de GDF15_001. A invenção fornece ainda um polipep- tídeo compreendendo a sequência de aminoácidos codificada pela in- serção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso
PTA-125039 que codifica o domínio de VL de GDF15_001.
[00360] A invenção da mesma forma fornece um polinucleotídeo compreendendo a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmí- deo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso PTA-125038, codificando o domínio de VH de GDF15_001 e a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso PTA-125039, codificando o domínio de VL de GDF15_001.
[00361] Em outro aspecto, a invenção fornece polinucleotídeos e variantes dos mesmos que codificam um anticorpo anti-GDF15, em que tais polinucleotídeos variantes compartilham pelo menos 70%, pe- lo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 87%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo me- nos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, ou pelo menos pelo me- nos 99% de identidade de sequência de ácido nucleico com qualquer uma das sequências de ácido nucleico descritas ou referidas no pre- sente documento. Essas quantidades não são pretendidas ser limitan- tes e os incrementos entre as porcentagens citadas são especifica- mente previstas como parte da descrição.
[00362] A invenção fornece polipeptídeos codificados pelas molécu- las de ácido nucleico no presente documento descritas.
[00363] Em uma modalidade, os domínios de VH e VL, ou porção de ligação de antígeno dos mesmos, ou HC ou LC de tamanho natural, são codificados por polinucleotídeos separados. Alternativamente, tan- to VH quanto VL, ou porção de ligação de antígeno dos mesmos, ou HC e LC, são codificados por um único polinucleotídeo.
[00364] Polinucleotídeos complementares a qualquer uma dessas sequências são da mesma forma abrangidos pela presente descrição. Os polinucleotídeos podem ser de filamento único (codificação ou an-
tissentido) ou de filamento duplo e podem ser moléculas de DNA (ge- nômico, cDNA ou sintético) ou RNA. As moléculas de RNA incluem moléculas de HnRNA, que contêm íntrons e correspondem a uma mo- lécula de DNA de maneira um-para-um, e moléculas de mRNA, que não contêm íntrons. Sequências codificantes ou não codificantes adi- cionais podem, porém não necessitam, estar presentes dentro de um polinucleotídeo da presente descrição, e um polinucleotídeo pode, po- rém não necessita, ser ligado a outras moléculas e/ou materiais de su- porte.
[00365] Os polinucleotídeos podem compreender uma sequência de ácido nucleico que codifica um anticorpo ou uma porção do mesmo ou podem compreender uma variante de tal sequência. As variantes de polinucleotídeo contêm uma ou mais substituições, adições, dele- ções e/ou inserções de modo que as características de ligação do po- lipeptídeo codificado não sejam diminuídas em relação a uma molécu- la de anticorpo nativa. O efeito sobre as características de ligação do polipeptídeo codificado pela sequência de ácido nucleico variante pode geralmente ser avaliado como no presente documento descrito. Em algumas modalidades, as variantes de polinucleotídeo exibem pelo menos cerca de 70% de identidade, em algumas modalidades, pelo menos cerca de 80% de identidade, em algumas modalidades, pelo menos cerca de 90% de identidade e, em algumas modalidades, pelo menos cerca de 95% de identidade com um polinucleotídeo sequência que codifica o anticorpo original (parental) não compreendendo qual- quer substituição, adição, deleção e/ou inserção, ou uma porção do mesmo. Essas identidades percentuais não são pretendidas ser limi- tantes e incrementos entre as porcentagens citadas são especifica- mente previstos como parte da descrição.
[00366] Duas sequências polinucleotídicas ou polipeptídicas são referidas ser "idênticas" se a sequência de nucleotídeos ou aminoáci-
dos nas duas sequências for a mesma quando alinhada para corres- pondência máxima, como descrito abaixo. As comparações entre duas sequências são normalmente realizadas comparando-se as sequên- cias em uma janela de comparação para identificar e comparar regiões locais de similaridade de sequência. Uma "janela de comparação", quando no presente documento utilizada, refere-se a um segmento de pelo menos cerca de 20 posições contíguas, geralmente 30 a cerca de 75, ou 40 a cerca de 50, em que uma sequência pode ser comparada a uma sequência de referência do mesmo número de posições após as duas sequências estarem idealmente alinhadas.
[00367] O alinhamento ideal de sequências para comparação pode ser conduzido usando o programa MegAlign® no software Lasergene® suíte of bioinformatics (DNASTAR®, Inc., Madison, WI), usando parâ- metros padrões. Este programa incorpora vários esquemas de alinha- mento descritos nas seguintes referências: Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting dis- tant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequência e Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment e Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA; Higgins, D.G. e Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers, E.W. e Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. e Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles e Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA; Wilbur, W.J. e Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730.
[00368] Em algumas modalidades, a "porcentagem de identidade de sequência" é determinada pela comparação de duas sequências idealmente alinhadas sobre uma janela de comparação de pelo menos
20 posições, em que a porção do polinucleotídeo ou sequência poli- peptídica na janela de comparação pode compreender adições ou de- leções (ou seja, lacunas) de 20 por cento ou menos, normalmente 5 a 15 por cento, ou 10 a 12 por cento, em comparação com as sequên- cias de referência (que não compreende adições ou deleções) para o alinhamento ideal das duas sequências. A porcentagem é calculada determinando o número de posições em que as bases de ácido nuclei- co idênticas ou resíduos de aminoácidos ocorrem em ambas as se- quências para produzir o número de posições correspondentes, divi- dindo o número de posições correspondentes pelo número total de po- sições na sequência de referência (ou seja, o tamanho da janela) e multiplicando os resultados por 100 para produzir a porcentagem de identidade de sequência.
[00369] As variantes de polinucleotídeo podem da mesma forma, ou alternativamente, ser substancialmente homólogas a um gene, ou uma porção ou complemento do mesmo. Essas variantes de polinucleotí- deo são capazes de hibridizar sob condições moderadamente rigoro- sas com uma sequência de DNA de ocorrência natural que codifica um anticorpo (ou uma sequência complementar).
[00370] “Condições moderadamente rigorosas” adequadas incluem pré-lavagem em uma solução de 5X SSC, 0,5% de SDS, 1,0 mM de EDTA (pH 8,0); hibridização a cerca de 50°C a 65°C, 5X SSC (NaCl 0,75 M, citrato de sódio 0,075 M), durante a noite; seguido por lava- gem duas vezes a 65°C durante 20 minutos com cada um de 2X, 0,5X e 0,2X SSC contendo SDS a 0,1%.
[00371] Quando no presente documento utilizado, "condições alta- mente rigorosas" ou "condições de alto rigor" são aquelas que: (1) usam baixa resistência iônica e alta temperatura para lavagem, por exemplo 0,015 M de cloreto de sódio/0,0015 M de citrato de só- dio/0,1% de dodecil sulfato de sódio em 50°C; (2) usar durante a hibri-
dização um agente desnaturante, tal como formamida, por exemplo, 50% (v/v) formamida com 0,1% de albumina de soro bovino/0,1% de Ficoll/0,1% de polivinilpirrolidona/tampão de fosfato de sódio 50 mM em pH 6,5 com cloreto de sódio 750 mM, citrato de sódio 75 mM a 42°C; ou (3) usar 50% de formamida, 5X SSC, fosfato de sódio 50 mM (pH 6,8), 0,1% de pirofosfato de sódio, solução de 5X Denhardt, DNA de esperma de salmão sonicado (50 µg/mL), 0,1% de SDS e 10% de sulfato de dextrano a 42°C, com lavagens a 42°C em 0,2X SSC (clore- to de sódio/citrato de sódio) e 50% de formamida a 55°C, seguido por uma lavagem de alto rigor consistindo em 0,1X SSC contendo EDTA a 55°C. Alguém versado na técnica reconhecerá como ajustar a tempe- ratura, resistência iônica, etc. como necessário para acomodar fatores tal como o comprimento da sonda e similar.
[00372] Será apreciado por aqueles versados na técnica que, como resultado da degeneração do código genético, existem muitas sequên- cias de nucleotídeos que codificam um polipeptídeo como no presente documento descrito. Alguns desses polinucleotídeos possuem homo- logia mínima com a sequência de nucleotídeos de qualquer gene nati- vo. No entanto, polinucleotídeos que variam devido a diferenças no uso de códons são especificamente contemplados pela presente des- crição. Além disso, os alelos dos genes que compreendem as sequên- cias polinucleotídicas fornecidas no presente documento estão dentro do escopo da presente descrição. Alelos são genes endógenos que são alterados como um resultado de uma ou mais mutações, tal como como deleções, adições e/ou substituições de nucleotídeos. O mRNA e a proteína resultantes podem, porém não necessitam, ter uma estru- tura ou função alterada. Os alelos podem ser identificados usando téc- nicas padrões (tal como hibridização, amplificação e/ou comparação de sequência de banco de dados).
[00373] Os polinucleotídeos desta descrição podem ser obtidos usando síntese química, métodos recombinantes ou PCR. Os métodos de síntese química de polinucleotídeos são bem conhecidos na técnica e não necessitam ser descritos em detalhes no presente documento. Alguém de experiência na técnica pode usar as sequências fornecidas no presente documento e um sintetizador de DNA comercial para pro- duzir uma sequência de DNA desejada.
[00374] Para preparar polinucleotídeos usando métodos recombi- nantes, um polinucleotídeo compreendendo uma sequência desejada pode ser inserido em um vetor adequado, e o vetor por sua vez pode ser introduzido em uma célula hospedeira adequada para replicação e amplificação, como discutido adicionalmente no presente documento. Os polinucleotídeos podem ser inseridos em células hospedeiras por qualquer meio conhecido na técnica. As células são transformadas pe- la introdução de um polinucleotídeo exógeno por absorção direta, en- docitose, transfecção, união com F ou eletroporação. Uma vez intro- duzido, o polinucleotídeo exógeno pode ser mantido dentro da célula como um vetor não integrado (tal como um plasmídeo) ou integrado no genoma da célula hospedeira. O polinucleotídeo desse modo amplifi- cado pode ser isolado da célula hospedeira por métodos bem conhe- cidos na técnica. Veja, por exemplo, Sambrook e outro, 1989.
[00375] Alternativamente, a PCR permite a reprodução de sequên- cias de DNA. A tecnologia de PCR é bem conhecida na técnica e está descrita nas Patentes U.S. Nos. 4.683.195, 4.800.159, 4.754.065 e
4.683.202, bem como PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis e outro eds., Birkauswer Press, Boston, 1994.
[00376] O RNA pode ser obtido usando o DNA isolado em um vetor apropriado e inserindo-o em uma célula hospedeira adequada. Quan- do a célula se replica e o DNA é transcrito em RNA, o RNA pode em seguida ser isolado usando métodos bem conhecidos por aqueles ver- sados na técnica, como mencionado em Sambrook e outro, 1989, por exemplo.
[00377] Quando no presente documento utilizado, "vetor" significa uma construção, que é capaz de liberar, e, de preferência, expressar, um ou mais genes ou sequência(s) de interesse em uma célula hos- pedeira. Exemplos de vetores incluem, porém, não são limitados a ve- tores virais, vetores de expressão de DNA ou RNA nus, vetores de ex- pressão de plasmídeo, cosmídeo ou fago, vetores de expressão de DNA ou RNA associados a agentes de condensação catiônicos, veto- res de expressão de DNA ou RNA encapsulados em lipossomas, e certas células eucarióticas, tais como células produtoras.
[00378] Os vetores de clonagem e expressão adequados podem incluir uma variedade de componentes, tais como promotor, intensifi- cador e outras sequências reguladoras da transcrição. O vetor pode da mesma forma ser construído para permitir a clonagem subsequente de um domínio variável de anticorpo em diferentes vetores. Os vetores de clonagem adequados podem ser construídos de acordo com técnicas padrões ou podem ser selecionados a partir de um grande número de vetores de clonagem disponíveis na técnica. Embora o vetor de clona- gem selecionado possa variar de acordo com a célula hospedeira pre- tendida ser usada, os vetores de clonagem úteis geralmente terão a capacidade de se auto-replicar, podem possuir um único alvo para uma endonuclease de restrição particular e/ou podem transportar ge- nes para um marcador que pode ser usado na seleção de clones con- tendo o vetor. Exemplos adequados incluem plasmídeos e vírus bacte- rianos, por exemplo, pUC18, pUC19, Bluescript (por exemplo, pBS SK+) e seus derivados, mp18, mp19, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, DNAs de fago e vetores de transporte, tal como pSA3 e pAT28. Estes e muitos outros vetores de clonagem estão disponíveis em for- necedores comerciais tal como BioRad, Strategene e Invitrogen. Os vetores de expressão são também fornecidos. Os vetores de expres-
são geralmente são construtores polinucleotídicos replicáveis que con- têm um polinucleotídeo de acordo com a descrição. Está implícito que um vetor de expressão deve ser replicável nas células hospedeiras como epissomas ou como parte integrante do DNA cromossômico. Os vetores de expressão adequados incluem, porém, não são limitados a plasmídeos, vetores virais, incluindo adenovírus, vírus adeno- associados, retrovírus, cosmídeos e vetor(es) de expressão descritos em Publicação PCT Nº WO 87/04462. Os componentes do vetor po- dem geralmente incluir, porém não são limitados a um ou mais dos seguintes: uma sequência de sinal; uma origem de replicação; um ou mais genes marcadores; elementos de controle da transcrição ade- quados (tais como promotores, realçadores e terminadores). Para a expressão (ou seja, translação), um ou mais elementos de controle translacionais são da mesma forma geralmente necessários, tal como locais de ligação ao ribossomo, locais de iniciação da tradução e có- dons de parada.
[00379] Os vetores contendo os polinucleotídeos de interesse e/ou os próprios polinucleotídeos podem ser introduzidos em uma célula hospedeira por qualquer um de uma série de meios apropriados, inclu- indo eletroporação, transfecção usando cloreto de cálcio, cloreto de rubídio, fosfato de cálcio, DEAE-dextrano ou outras substâncias; bom- bardeio de microprojéteis; lipofecção; e infecção (por exemplo, onde o vetor é um agente infeccioso, tal como o vírus de vacinia). A escolha de introduzir vetores ou polinucleotídeos dependerá frequentemente das características da célula hospedeira.
[00380] Desse modo, uma "célula hospedeira" inclui uma célula in- dividual ou cultura de células que pode ser ou foi um receptor para po- linucleotídeos e/ou vetor (es) compreendendo polinucleotídeos para incorporação dos polinucleotídeos e/ou vetores. As células hospedei- ras incluem a progênie de uma única célula hospedeira, e a progênie pode não ser necessariamente completamente idêntica (em morfologia ou em complemento de DNA genômico) à célula parental original devi- do a mutação natural, acidental ou deliberada. Uma célula hospedeira inclui células transfectadas e/ou transformadas in vivo com um polinu- cleótido desta invenção.
[00381] O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, pode ser feito recombinantemente usando uma célula hospedeira adequada. Um ácido nucleico que codifica o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo pode ser clonado em um vetor de ex- pressão, que pode em seguida ser introduzido em uma célula hospe- deira, tal como célula de E. coli, uma célula de levedura, uma célula de inseto, uma célula COS de símio, uma célula de ovário de hamster chinês (CHO), ou uma célula de mieloma onde a célula não produz de outra forma uma proteína de imunoglobulina, para obter a síntese de um anticorpo na célula hospedeira recombinante. As células hospedei- ras preferidas incluem uma célula de CHO, uma célula 293 de rim em- brionário humano (HEK), uma célula de NS0 ou uma célula de Sp2.0, entre muitas células bem conhecidas na técnica. Um fragmento de an- ticorpo pode ser produzido por degradação proteolítica ou outra de um anticorpo de tamanho natural, por métodos recombinantes ou por sín- tese química. Um fragmento de polipeptídeo de um anticorpo, especi- almente polipeptídeos mais curtos até cerca de 50 aminoácidos, pode ser convenientemente feito por síntese química. Métodos de síntese química para proteínas e peptídeos são conhecidos na técnica e estão comercialmente disponíveis.
[00382] O anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, da invenção pode ser amadurecido por afinidade. Por exemplo, um anticorpo amadurecido por afinidade pode ser produzido por pro- cedimentos conhecidos na técnica (Marks e outro, 1992, Bio/Technology, 10: 779-783; Barbas e outro, 1994, Proc Nat. Acad.
Sci, USA 91: 3809-3813; Schier e outro, 1995, Gene, 169: 147-155; Yelton e outro, 1995, J. Immunol., 155: 1994-2004; Jackson e outro, 1995, J. Immunol., 154 (7): 3310-9; Hawkins e outro, 1992, J. Mol. Bi- ol., 226: 889-896; e WO2004/058184). Imunogenicidade
[00383] A imunogenicidade é a principal barreira para o desenvol- vimento e utilização de proteínas terapêuticas, incluindo anticorpos e proteínas de fusão de Fc. Vários fatores podem contribuir para a imu- nogenicidade da proteína, incluindo, porém não são limitados à se- quência de proteína, a rotina e frequência de administração e a popu- lação de pacientes. Embora as respostas imunes sejam tipicamente mais graves para proteínas não humanas, tal como anticorpos de mu- rino, mesmo terapêuticas com teor de sequência principalmente ou inteiramente humana podem ser imunogênicas. A imunogenicidade é uma série complexa de respostas a uma substância que é percebida como estranha e pode incluir a produção de anticorpos neutralizantes e não neutralizantes, formação de complexos imunes, ativação do complemento, ativação de mastócitos, inflamação e anafilaxia. As res- postas imunes indesejadas podem reduzir a eficácia de terapêuticos de anticorpo e da proteína de fusão de Fc, interferindo diretamente no reconhecimento do antígeno, alterando as interações com moléculas efetoras ou perturbando a meia-vida de soro ou distribuição nos teci- dos do terapêutico.
[00384] Terapêuticos de proteína podem ser analisados para prever a presença de epítopos imunogênicos potenciais usando serviços co- mercialmente disponíveis, tais como fornecidos por Epivax, Inc. de Providence, R.I. Em algumas modalidades, algoritmos em sílico po- dem prever epítopos que se ligam-se a moléculas de MHC de Classe II. A análise de um conjunto de dados do polipeptídeo com tais algo- ritmos fornece epítopos previstos. Os epítopos previstos são usados para preparar peptídeos preparados por métodos padrões de síntese de péptidos automática ou técnicas de DNA recombinantes. A infor- mação de pontuação fornecida pelo Epivax pode fornecer uma indica- ção de quão difundido um epítopo previsto reconhecido na população.
[00385] Conforme descrito no Exemplo 10 abaixo, os anticorpos da presente invenção foram avaliados quanto à presença de epítopos re- conhecidos por células T, da mesma forma referidos no presente do- cumento como epítopos de células T, "regítopos T" ou "tReg", usando o algoritmo EpiMatrix desenvolvido por EpiVax. As sequências de anti- corpos são analisadas em estruturas de 9-mer sobrepostas, em que cada estrutura se sobrepõe à última em 8 aminoácidos. Cada uma das estruturas resultantes é, em seguida, pontuada para afinidade de liga- ção prevista em relação a um painel de oito alelos de HLA MHC Clas- se II comuns (DRB1*0101, DRB1*0301, DRB1*0401, DRB1*0701, DRB1*0801, DRB1*1101, DRB1*1301 e DRB1*1501). Pontuações bru- tas são normalizadas contra às pontuações de uma grande amostra de peptídeos gerados aleatoriamente e uma pontuação "Z" resultante é relatada.
[00386] Uma pontuação geral da sequência, uma pontuação ajus- tada tReg, pode ser calculada, usando a pontuação Z de EpiMatrix, para prever a imunogenicidade de um anticorpo. Como descrito no Exemplo 10, a pontuação ajustada tReg é calculada somando as pon- tuações Z de EpiMatrix dos quadros de 9 mer (o total em execução) e anotando o número de observações do tipo HLA. Todas as combina- ções individuais de 9-mer e tipo HLA ("observações") são examinadas, independentementese se o 9-mer é um epítopo. Se uma observação particular indicar que o peptídeo está entre os 5% principais de agluti- nantes para um determinado tipo de HLA, a pontuação Z do EpiMatrix para esta observação é adicionada a um total em execução associado com a sequência de proteína inteira. O número total de observações examinadas é da mesma forma registrado. A única exceção é que to- das as observações em 9-mers identificadas pelo pacote de software ISPRI desenvolvido por EpiVax como "T-regítopos" são assumidos como tendo pontuações EpiMatrix de zero. Quando no presente do- cumento usado, "T-regítopos" são sequências de aminoácidos dentro da região de estrutura de anticorpo monoclonal que pode potencial- mente ativar células T reguladoras naturais e reduzir respostas imunes indesejadas. A pontuação ajustada de tReg é calculada como segue: Pontuação ajustada de tReg = (total em execução)*1000/(número de observações). No total em execução, a pontuação de linha de referên- cia de 0,05 * 2,2248 é subtraída de cada observação (incluindo T- regítopos.) Uma pontuação ajustada de tReg mais baixa prevê um po- tencial menor para risco de imunogenicidade. Usos Métodos para tratar a caquexia
[00387] Em alguns aspectos, a invenção fornece métodos terapêu- ticos para reduzir ou inibir a atividade de GDF15 usando um anticorpo anti-GDF15 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, em que os métodos terapêuticos compreendem a administração de uma quan- tidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica com- preendendo um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. O distúrbio tratado é qualquer doença ou condição que é aperfeiçoada, melhorada, inibida ou evitada pela remoção, inibição ou redução da atividade ou sinalização de GDF15.
[00388] A invenção abrange um método para reduzir o nível de GDF15 livre em um indivíduo em necessidade. O método compreende determinar o nível de GDF15 livre em um indivíduo, administrando uma quantidade terapêutica do anticorpo da invenção, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, e comparando o nível de GDF15 antes da administração ao nível de GDF15 livre após a administração do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, desse modo reduzindo o nível de GDF15 livre no indivíduo.
[00389] Em uma modalidade, a redução do nível de GDF15 livre reduz uma atividade biológica indesejável, deletéria ou indesejada de GDF15. Tal atividade de GDF15 inclui, porém não é limitada a, (a) di- minuição da ingestão de alimentos; (b) diminuição do apetite; (c) dimi- nuição do peso corporal; (d) aumentar a perda de peso; (e) diminuição da massa gorda; (f) diminuição da massa magra; (g) aumento da per- da de massa gorda, (h) aumento da perda de massa muscular magra, (i) ligação ao GFRAL; (j) aumentar a sinalização a jusante mediada por RET; (k) aumento da fosforilação de ERK; (l) aumentar a fosforilação de S6; (m) aumento da ativação mediada por RET da trilha de sinali- zação de MAPK; (n) aumentar a ativação de RET da trilha de sinaliza- ção de AKT; e (o) aumentar a ativação da trilha de sinalização de PLC- γ1.
[00390] Em uma modalidade, a invenção inclui um método para re- duzir uma atividade biológica de GDF15 em um indivíduo em necessi- dade do mesmo. O método compreende a administração de uma quantidade terapêutica do anticorpo da invenção, ou fragmento de li- gação de antígeno do mesmo, desse modo reduzindo a atividade bio- lógica de GDF15.
[00391] Em um aspecto, a atividade biológica de GDF15 inclui, po- rém não é limitada a, (a) diminuir a ingestão de alimentos; (b) diminui- ção do apetite; (c) diminuição do peso corporal; (d) aumentar a perda de peso; (e) diminuição da massa gorda; (f) diminuição da massa ma- gra; (g) aumento da perda de massa gorda, (h) aumento da perda de massa muscular magra, (i) ligação ao GFRAL; (j) aumentar a sinaliza- ção a jusante mediada por RET; (k) aumento da fosforilação de ERK; (l) aumentar a fosforilação de S6; (m) aumento da ativação mediada por RET da trilha de sinalização de MAPK; (n) aumentar a ativação de
RET da trilha de sinalização de AKT; e (o) aumentar a ativação da tri- lha de sinalização de PLC-γ1.
[00392] Os termos "tratamento" ou "tratado" incluem tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos. Se for administrado antes da manifesta- ção clínica de uma condição, o tratamento é considerado profilático. O tratamento terapêutico inclui, por exemplo, melhorar ou reduzir a gra- vidade de uma doença ou encurtar a duração da doença.
[00393] Quando no presente documento utilizado, o termo "caque- xia" inclui um distúrbio metabólico e comorbidade que ocorre com vá- rias doenças crônicas, incluindo câncer, quimioterapia, quimioterapia em combinação com terapia imuno-oncológica, insuficiência cardíaca crônica, insuficiência cardíaca congestiva, sarcopenia, doença pulmo- nar obstrutiva crônica (COPD), sarcopenia e doença renal crônica (CKD).
[00394] A invenção abrange métodos de tratamento de uma doen- ça, distúrbio ou condição mediada por ou associada a GDF-15. Em um aspecto, o distúrbio é caquexia. Em outros aspectos, o distúrbio é ca- quexia associada a câncer, quimioterapia, quimioterapia em combina- ção com uma terapia imuno-oncológica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença renal crônica, insuficiência cardíaca crônica, insufici- ência cardíaca congestiva ou sarcopenia. Em alguns aspectos, o cân- cer é um câncer de tumor sólido, câncer pancreático, câncer de pul- mão, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer colorretal, câncer de próstata, câncer de ovário, câncer cervical ou câncer testi- cular. Em alguns aspectos, a quimioterapia é a quimioterapia à base de platina. A doença ou distúrbio ou sintoma pode ser aliviado ou re- duzido em gravidade, duração ou frequência de ocorrência.
[00395] A invenção da mesma forma abrange um anticorpo, ou fra- gmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, como definido no presente documento, para uso nos métodos de tratamento definidos. Em modalidades que se referem a um método de tratamento como descrito no presente documento, tais modalidades são da mesma forma outras modalidades relativas a um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farma- cêutica, para uso naquele tratamento, ou alternativamente para a fa- bricação de um medicamento para uso nesse tratamento.
[00396] Os anticorpos e fragmentos de anticorpos dos mesmos po- dem ser administrados em combinação com um ou mais compostos terapeuticamente ativos adicionais. Os compostos terapeuticamente ativos adicionais incluem agentes usados para o tratamento de distúr- bios crônicos associados à caquexia, agentes anticâncer (por exem- plo, terapia imunológica e quimioterapia), agentes anticâncer que in- duzem estresse celular (por exemplo, agentes de quimioterapia à base de platina, tal como cisplatina), agentes anabólicos musculares (por exemplo, moduladores do receptor de androgênio seletivos (SARMs), inibidores de miostatina e inibidor do receptor de Activina A), agentes anti-inflamatórios (por exemplo, inibidores de JAK, inibidores de IL-6, inibidores de IL-8), estimulantes de apetite (por exemplo, miméticos de grelina , inibidores do receptor de melanocortina 4) e agentes que me- lhoram o metabolismo (por exemplo, metformina). Os agentes profiláti- cos ou terapêuticos das terapias de combinação, incluindo os anticor- pos, ou fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos, podem ser administrados a um indivíduo na mesma composição farmacêutica. Alternativamente, os agentes profiláticos ou terapêuticos das terapias de combinação podem ser administrados simultaneamente a um indi- víduo em composições farmacêuticas separadas. Os agentes profiláti- cos ou terapêuticos podem ser administrados a um indivíduo pelas mesmas ou diferentes rotinas de administração.
[00397] Um "agente quimioterapêutico" é um composto químico útil no tratamento do câncer. Exemplos de agentes quimioterapêuticos in-
cluem agentes alquilantes, tais como tiotepa e ciclofosfamida (CITO- XANO); sulfonatos de alquila, tais como bussulfano, improssulfano e pipossulfano; aziridinas tal como benzodopa, carboquone, meturedopa e uredopa; etileniminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trieti- lenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimeti- lolomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacina- ona); delta-9-tetra-hidrocanabinol (dronabinol, MARINOL); beta- lapachona; lapachol; colchicina; ácido betulínico; uma camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano (HYCAMTIN), CPT-11 (irino- tecano, CAMPTOSAR), acetilcamptotecina, escopolectina e 9- aminocamptotecina); briostatina; pemetrexed; calistatina; CC-1065 (in- cluindo seus análogos de sintéticos adozelesina, carzelesina e bizele- sina); podofilotoxina; ácido podofilínico; teniposide; criptoficinas (parti- cularmente criptoficina 1 e criptoficina 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; TLK-286; CDP323, um inibidor de integrina alfa-4 oral; uma sarcodictina; espongistatina; mostardas de nitrogênio, tais como clorambucila, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, no- vembiquina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosureias, tais como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina e ranimnustina; antibióticos, tais como os antibió- ticos de enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente calique- amicina gama I e caliqueamicina omegal l (veja, por exemplo, Nicolaou e outro, Angew.
Chem Intl.
Ed.
Engl., 33: 183-186 (1994)); dinemicina, incluindo dinemicina A; uma esperamicina; bem como cromóforo de neocarzinostatina e cromóforos de antibióticos de enedina relaciona- dos a cromoproteína), aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubi-
cina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina (incluindo ADRI- AMYCIN, morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2- pirrolino-doxorrubicina, injeção de lipossoma de doxorrubicina HC1 (DOXIL) e deoxidoxorrubicina, epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas tais como mitomicina C, ácido micofenóli- co, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidi- na, ubenimex, zinostatina, zorurrubicina; anti-metabólitos, tais como metotrexato, gencitabina (GEMZAR), tegafur (UFTORAL), capecitabi- na (XELODA), uma epotilona e 5-fluorouracila (5-FU); análogos de ácido fólico, tais como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetre- xato; análogos de purina, tais como fludarabina, 6-mercaptopurina, ti- amiprina, tioguanina; análogos de pirimidina, tais como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, didesoxiuridina, doxiflu- ridina, enocitabina, floxuridina e imatinibe (um derivado de 2- fenilaminopirimidina), bem como outros inibidores de c-it; anti- adrenais, tais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reforçador de ácido fólico, tal como ácido frolínico; aceglatona; glicosídeo de aldo- fosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracila; ansacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elforniti- na; acetato de eliptínio; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lenti- nano; lonidainina; maitansinóides, tais como maitansina e ansamitoci- nas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidanmol; nitraerina; pentostatina; fenamet; pirarrubicina; losoxantrona; 2-etil-hidrazida; procarbazina; Complexo de polissacarídeo PSK (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoxano; rizoxina; sizofirano; espirogermânio; ácido tenuazôni- co; triaziquona; 2,2',2"-triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente toxina T-2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina (ELDIS1NE, FILDESIN); dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mi- tolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosídeo ("Ara-C"); tiotepa; taxó-
ides, por exemplo, paclitaxel (TAXOL), formulação de nanopartículas de albumina modificada por paclitaxel (ABRAXANE) e doxetaxel (TA- XOTERE); clorambucila; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato, análogos de platina tal comocisplatina e carboplatina; vimblastina (VELBAN); platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vin- cristina (ONCOVIN); oxaliplatina; leucovovina; vinorelbina (NAVELBI- NE); novantrona; edatrexato; daunomicina; aminopterina; ibandronato; inibidores de topoisomerase RFS 2000; difluorometililomitina (DMFO); retinoides, tais como ácido retinóico; inotuzumabe ozogamicina (BES- PONSA), bosutinibe (BOSULIF), palbociclibe (IBRANCE), axitinibe (INLYTA), malato de sunitinibe (SUTENT), crizotinibe (XALKORI), en- zalutinibe (XTANDI); sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos anteriores; bem como combinações de dois ou mais dos anteriores, tal como CHOP, uma abreviação para uma terapia combinada de ciclofosfamida, doxorrubicina, vincristina e prednisolona e FOLFOX, uma abreviação para um regime de trata- mento com oxaliplatina (ELOXATIN) combinada com 5-FU e leucovo- vina.
[00398] Exemplos adicionais de agentes quimioterapêuticos inclu- em agentes anti-hormonais que agem para regular, reduzir, bloquear ou inibir os efeitos dos hormônios que podem promover o crescimento do câncer e estão frequentemente na forma de tratamento sistêmico ou de corpo inteiro. Eles podem ser hormônios. Os exemplos incluem anti-estrogênios e moduladores seletivos do receptor de estrogênio (SERMs), incluindo, por exemplo, tamoxifeno (incluindo NOLVADEX tamoxifeno), raloxifeno (EVISTA), droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queroxifeno, LY 11 7018, onapristona, e torifeno FARES- TON®); anti-progesteronas; sub-reguladores de receptor de estrogênio (ERDs); antagonistas do receptor de estrogênio, tais como fulvestrant (FASLODEX); agentes que funcionam para suprimir ou desligar os ovários, por exemplo, agonistas de hormônio de liberação de hormônio leutinizante (LHRFl), tais como acetato de leuprolida (LUPRON e ELI- GARD), acetato de goserelina, acetato de buserelina e tripterelina; an- ti-andrógenos, tais como fiutamida, nilutamida e bicalutamida; e inibi- dores de aromatase que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogênio nas glândulas adrenais, tais como, por exem- plo, 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, acetato de megestrol (MEGA- SE), exemestano (AROMASIN), formestanie, fadrozol, vorozol (RJVI- SOR), letrozol (FEMARA) e anastrozol (ARIMIDEX). Além disso, essa definição de agentes quimioterapêuticos inclui bifosfonatos, tais como clodronato (por exemplo, BONEFOS ou OSTAC), etidronato (DIDRO- CAL), NE-58095, ácido zoledrônico/zoledronato (ZOMETA), alendro- nato (FOSAMAX), pamidronato (AREDIA), tiludronato, (SKELID), ou risedronato (ACTONEL); bem como troxacitabina (um análogo de cito- sina de nucleosídeo 1,3-dioxolano); oligonucleotídeos antissentido, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes em trilhas de sinalização implicadas na proliferação celular aberrante, tais como, por exemplo, PKC-alfa, Raf, H-Ras e receptor de fator de crescimento epidérmico (EGF-R); vacinas, tais como a vacina THERATOPE e vaci- nas de terapia genética, por exemplo, vacina ALOVECTINA, vacina LEUVECTINA e vacina VAXID; inibidor da topoisomerase 1 (por exemplo, LURTOTECAN); um antiestrogênio, tal como fulvestrant; um inibidor de kit, tal como imatinibe ou EXEL-0862 (um inibidor de tirosi- na cinase); Inibidor de EGFR, tal como erlotinibe ou cetuximabe; um inibidor anti-VEGF, tal como bevacizumabe; arinotecano; rmRH (por exemplo, ABARELIX); lapatinibe e ditosilato de lapatinibe (um inibidor de molécula pequena de tirosina cinase dupla ErbB-2 e EGFR da mesma forma conhecido como GW572016); 17AAG (derivado de gel- danamicina que é uma proteína de choque térmico (Hsp) 90 veneno) e sais, ácidos ou derivados farmaceuticamente aceitáveis de qualquer um dos anteriores.
[00399] Uma "quimioterapia", quando no presente documento utili- zada, refere-se a um agente quimioterapêutico, como definido acima, ou uma combinação de dois, três ou quatro agentes quimioterapêuti- cos, para o tratamento de câncer. Quando uma quimioterapia consiste em mais de um agente quimioterapêutico, os agentes quimioterapêuti- cos podem ser administrados ao paciente no mesmo dia ou em dias diferentes no mesmo ciclo de tratamento.
[00400] Uma "quimioterapia à base de platina", quando no presente documento utilizada, refere-se a uma quimioterapia em que pelo me- nos um agente quimioterapêutico é um complexo de coordenação de platina. A quimioterapia à base de platina exemplar inclui, sem limita- ção, cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, nedaplatina, gencitabina em combinação com cisplatina, carboplatina em combinação com peme- tremed.
[00401] Um "dupleto à base de platina", quando no presente docu- mento utilizado, refere-se a uma quimioterapia que compreende dois e não mais do que dois agentes quimioterapêuticos e em que pelo me- nos um agente quimioterapêutico é um complexo de coordenação de platina. O dupleto à base de platina exemplar inclui, sem limitação, gencitabina em combinação com cisplatina, carboplatina em combina- ção com pemetrexedo.
[00402] Quando no presente documento utilizado, o termo "terapia anticâncer sistêmica" refere-se à administração sistêmica de agente(s) farmacêutico(s) aprovado(s) pelas agências reguladoras de quaisquer países do mundo, ou em ensaios clínicos em humanos conduzidos pelas agências reguladoras de quaisquer países do mundo, com a in- tenção geral de mudar o resultado do câncer. A terapia anticâncer sis- têmica inclui, porém não é limitada a quimioterapia, terapia hormonal, terapia anticâncer alvejada, vacinas contra o câncer, vacinas oncolíti-
cas e terapia com células T adotivas. Método de tratamento do câncer
[00403] A invenção abrange um método de tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de anticorpo GDF15. Em algumas modalidades, o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer gástrico, sarcoma, linfoma, leucemia, câncer de cabeça e pescoço, câncer tímico, câncer epitelial, câncer salivar, câncer de fí- gado, câncer de estômago, câncer da tireoide, câncer de pulmão, cân- cer de ovário , câncer de mama, câncer de próstata, câncer de esôfa- go, câncer pancreático, glioma, leucemia, mieloma múltiplo, carcinoma de células renais, câncer de bexiga, câncer cervical, coriocarcinoma, câncer de cólon, câncer oral, câncer de pele e melanoma. Em algumas modalidades, o indivíduo é um paciente adulto tratado anteriormente com melanoma localmente avançado ou metastático, câncer de cabe- ça e pescoço de células escamosas (SCHNC), carcinoma de ovário, sarcoma ou Linfoma de Hodgkin clássico (cHL) reincidente ou refratá- rio. Em algumas modalidades, o câncer pode ser um câncer resistente à platina e/ou refratário à platina, tal como, por exemplo, câncer de ovário resistente à platina e/ou refratário, câncer de mama resistente à platina e/ou/refratário, ou câncer de pulmão resistente à platina e/ou refratário.
[00404] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para ini- bir o crescimento ou progressão do tumor em um indivíduo que tem um tumor, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quan- tidade eficaz da composição farmacêutica como descrito no presente documento.
[00405] Em outro aspecto, a invenção fornece um método de inibir ou prevenir a metástase de células cancerosas em um indivíduo, com- preendendo a administração ao indivíduo em necessidade de uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como descrito no pre- sente documento.
[00406] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para in- duzir a regressão do tumor em um indivíduo que tem um tumor, com- preendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade eficaz da composição farmacêutica como descrito no presente documento.
[00407] Em algumas modalidades, o método pode compreender ainda a administração de uma quantidade eficaz de um segundo agen- te terapêutico. Em algumas modalidades, o segundo agente terapêuti- co é, por exemplo, um modulador imunológico. O termo "modulador imunológico" refere-se a uma substância capaz de alterar (por exem- plo, inibir, diminuir, aumentar, aumentar ou estimular) a resposta imu- ne (como definido no presente documento) ou o funcionamento de qualquer componente do sistema imune inato, humoral ou celular de um mamífero hospedeiro. Desse modo, o termo "modulador imunoló- gico" abrange o "intensificador de células imuno-efetoras" como defini- do no presente documento e o "inibidor de células imunossupressoras" como definido no presente documento, bem como a substância que afeta outros componentes do sistema imunológico de um mamífero. Em algumas modalidades, o modulador imunológico pode ser um anti- corpo agonista anti-CD40.
[00408] A invenção da mesma forma abrange um anticorpo, ou fra- gmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, como definido no presente documento, para uso nos métodos de tratamento definidos. Em modalidades que se referem a um método de tratamento como descrito no presente documento, tais modalidades são da mesma forma outras modalidades relativas a um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farma- cêutica, para uso naquele tratamento, ou alternativamente para a fa- bricação de um medicamento para uso nesse tratamento.
[00409] Desse modo, é da mesma forma fornecido um anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou com- posição farmacêutica, fornecida no presente documento para uso no tratamento de câncer ou para inibir o crescimento ou progressão do tumor em um indivíduo em necessidade do mesmo.
[00410] É da mesma forma fornecido o uso de qualquer um dos an- ticorpos anti-GDF15 fornecidos no presente documento na fabricação de um medicamento para o tratamento de câncer ou para inibir o cres- cimento ou progressão do tumor em um indivíduo em necessidade do mesmo.
[00411] Os anticorpos e fragmentos de anticorpos dos mesmos po- dem ser administrados em combinação com um ou mais compostos terapeuticamente ativos adicionais. Os compostos terapeuticamente ativos adicionais incluem agentes usados para o tratamento de distúr- bios crônicos associados à caquexia, agentes anticâncer (por exem- plo, terapia imunológica e quimioterapia), agentes anticâncer que in- duzem estresse celular (por exemplo, agentes de quimioterapia à base de platina, tal como cisplatina), agentes anabólicos musculares (por exemplo, moduladores seletivos do receptor de androgênio (SARMs), inibidores de miostatina e inibidor do receptor de Activina A), agentes anti-inflamatórios (por exemplo, inibidores de JAK, inibidores de IL-6, inibidores de IL-8), estimulantes de apetite (por exemplo, miméticos de grelina , inibidores do receptor de melanocortina 4) e agentes que me- lhoram o metabolismo (por exemplo, metformina).
[00412] Os agentes profiláticos ou terapêuticos das terapias de combinação, incluindo os anticorpos, ou fragmentos de ligação de an- tígeno dos mesmos, podem ser administrados a um indivíduo na mesma composição farmacêutica. Alternativamente, os agentes profi- láticos ou terapêuticos das terapias de combinação podem ser admi- nistrados simultaneamente a um indivíduo em composições farmacêu-
ticas separadas. Os agentes profiláticos ou terapêuticos podem ser administrados a um indivíduo pelas mesmas ou diferentes rotinas de administração.
[00413] O termo "resposta imune" refere-se a qualquer resposta detectável a uma substância particular (tal como um antígeno ou imunógeno) pelo sistema imunológico de um mamífero hospedeiro, tal como respostas imunes inatas (por exemplo, ativação da cascata de sinalização do receptor Toll), respostas imunes mediadas por células (por exemplo, respostas mediadas por células T, tal como células T específicas de antígeno e células não específicas do sistema imunoló- gico) e respostas imunes humorais (por exemplo, respostas mediadas por células B, tal como geração e secreção de anticorpos no plasma, linfa e/ou fluidos de tecidos).
[00414] O termo "imunogênico" refere-se à capacidade de uma substância causar, extrair, estimular ou induzir uma resposta imune, ou para melhorar, realçar, aumentar ou prolongar uma resposta imune pré-existente, contra um antígeno particular, sozinho ou quando ligado a um transportador, na presença ou ausência de um adjuvante.
[00415] As composições e métodos para o tratamento do câncer fornecidos no presente documento podem também compreender um ou mais outros moduladores imunológicos
[00416] Em algumas modalidades, o modulador imunológico pode ser um anticorpo agonista anti-CD40. O anticorpo pode ser, por exem- plo, um anticorpo anti-CD40 quimérico humano, humanizado ou parci- almente humano. Exemplos de anticorpos monoclonais anti-CD40 es- pecíficos incluem o anticorpo monoclonal G28-5, mAb89, EA-5 ou S2C6, CP870893 ou APX005M. Em uma modalidade particular, o anti- corpo agonista anti-CD40 é CP870893 ou dacetuzumabe (SGN-40).
[00417] CP-870.893 é um anticorpo monoclonal anti-CD40 agonísti- co totalmente humano que foi investigado clinicamente como uma te-
rapia antitumoral. A estrutura e preparação de CP870.893 são descri- tas em WO2003040170, em que o anticorpo CP870.893 é identificado como o anticorpo “21.4.1”. As sequências de aminoácidos de cadeia pesada e de cadeia leve de CP-870.893 são apresentadas em SEQ ID NO:46 e SEQ ID NO:48, respectivamente, bem como na Tabela 7, em WO2003040170. Em ensaios clínicos, CP870.893 foi administrado por perfusão intravenosa em doses geralmente na faixa de 0,05 - 0,25 mg/kg por perfusão. Nos métodos de tratamento de câncer fornecidos no presente documento, CP-870.893 pode ser administrado por intra- dermicamente, subcutaneamente ou topicamente.
[00418] Dacetuzumabe (da mesma forma conhecido como SGN-40 ou huS2C6; número CAS 88-486-59-9) é outro anticorpo agonista anti- CD40 exemplar que foi investigado em ensaios clínicos para linfomas indolentes, linfomas de células B grandes difusos e mieloma múltiplo. Nos métodos de tratamento do câncer no presente documento forne- cidos, dacetuzumabe pode ser administrado intradermicamente, sub- cutaneamente ou topicamente. Síndrome de Liberação de Citocinas (CRS)
[00419] A invenção abrange um método para o tratamento de CRS, compreendendo a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de anticorpo GDF15. CRS é uma resposta inflamatória sistêmica vista após a administração de anticor- pos monoclonais e agentes imunoterapêuticos de células T. (Shima- bukuro-Vornhagen e outro, Journal for ImmunoTherapy of Cancer 6, 56 (2018). Pouco se sabe sobre a fisiopatologia de CRS e os eventos iniciais que desencadeiam a liberação maciça de uma variedade de citocinas que perpetuam a resposta inflamatória sistêmica da CRS.
[00420] Em algumas modalidades, a invenção fornece um método de tratamento de CRS em um indivíduo em necessidade do mesmo, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade efi-
caz da composição farmacêutica, como descrito no presente docu- mento.
[00421] Em outras modalidades, o método pode compreender ainda a administração de uma quantidade eficaz de um segundo agente te- rapêutico. Os segundos agentes terapeuticamente incluem agentes anti-inflamatórios, por exemplo, inibidores de IL-6, inibidores do fator de necrose de tumor alfa (TNF-α), inibidores de interferon gama (IFN- γ), corticosteroides, anti-histamínicos), antipiréticos e/ou antibióticos. Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é um anti- corpo, por exemplo, tocilizumabe e/ou siltuximabe.
[00422] A invenção da mesma forma fornece um anticorpo GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou uma composição farmacêutica, como definido no presente documento, para uso em um método para o tratamento de CRS. A invenção da mesma forma for- nece o uso de um anticorpo GDF15, ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou uma composição farmacêutica, como definido no presente documento, na fabricação de um medicamento para o trata- mento de CRS. Em modalidades que se referem a um método de tra- tamento como descrito no presente documento, tais modalidades são da mesma forma outras modalidades relativas a um anticorpo, ou fra- gmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêuti- ca, para uso naquele tratamento, ou alternativamente para a fabrica- ção de um medicamento para uso nesse tratamento. Terapia de combinação de anticorpo GDF15 e antagonista de ligação ao eixo PD-1
[00423] A invenção abrange um método para o tratamento do cân- cer, compreendendo administrar a um paciente em necessidade do mesmo um anticorpo GDF15 em combinação com um antagonista de ligação ao eixo PD-1, cuja combinação é eficaz no tratamento do cân- cer. Ou seja, os dados descritos no presente documento demonstram que a combinação de um anticorpo anti-GDF15 e um antagonista do eixo PD-1 fornece um efeito terapêutico no tratamento do câncer. Os dados demonstram ainda que a combinação do anti-GDF-15 e do an- tagonista do eixo PD-1 fornece um efeito terapêutico sinergístico que é um efeito terapêutico maior do que o efeito aditivo previsto de cada terapia administrada sozinha.
[00424] A invenção abrange um método para o tratamento do cân- cer, compreendendo a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade de um inibidor de GDF15 em combina- ção com uma quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 que é eficaz no tratamento do câncer. A invenção da mesma forma abrange um método para o tratamento de câncer, compreendendo a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade de um inibidor de GDF15 e uma quantidade de um anta- gonista de ligação ao eixo PD-1, em que as quantidades juntas são eficazes no tratamento do câncer. Em outra modalidade, a invenção está relacionada a um método para o tratamento de câncer que com- preende a administração a um paciente em necessidade do mesmo de uma quantidade de um inibidor de GDF15 e uma quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1, em que as quantidades juntas alcançam efeitos sinergísticos no tratamento de câncer, ou seja, a combinação é "sinergística". Em um aspecto, o inibidor de GDF15 é o anticorpo anti GDF15 GDF15_001 e o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em avelumabe, PF- 06801591 (sassanlimabe, RN-888), nivolumabe, pembrolizumabe, ate- zolizumabe e durvalumabe. A invenção abrange uma composição far- macêutica compreendendo um inibidor de GDF15 e um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e um transportador farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de câncer. A invenção abrange uma composi- ção farmacêutica que compreende uma quantidade sinergicamente eficaz de um inibidor de GDF15, uma quantidade sinergística terapeu- ticamente eficaz de um antagonista de ligação ao eixo PD-1 e um transportador farmaceuticamente aceitável para uso no tratamento de câncer. A composição pode ainda compreender um agente terapêutico adicional, tal como, porém, não limitado a, pelo menos, um agente quimioterapêutico.
[00425] Alguém versado na técnica entenderia, com base na des- crição fornecida no presente documento, que o método de tratamento do câncer da invenção abrange a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo anti-GDF15 e uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um antagonis- ta de ligação ao eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-PD-L1, etc.) para um paciente previamente tratado com, ou atualmente recebendo, pelo menos um agente terapêutico adicional para tratar o câncer. Esse agente terapêutico adicional abrange um agente que é padrão de cuidado para tratar o câncer. Ou seja, a tera- pia de combinação da invenção pode ser adicionada ao regime tera- pêutico de um paciente com câncer que já está recebendo uma terapia diferente, incluindo, porém, não limitado a cirurgia, radiação, quimiote- rapia e qualquer outra terapia conhecida na técnica.
[00426] Os versados na técnica serão capazes de determinar, de acordo com métodos conhecidos, a quantidade, dose ou dosagem apropriada de cada composto, como usado na combinação da presen- te invenção, para administrar a um paciente, levando em consideração fatores tal como idade, peso, saúde geral, o composto administrado, a rotina de administração, a natureza e evolução do câncer que requer tratamento e a presença de outros medicamentos.
[00427] Em uma modalidade, o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti GDF15, ou uma porção de ligação de antígeno do mesmo, e é administrado intravenosamente (IV) ou subcutaneamente (SC) em uma dose inicial de cerca de 0,025 mg/kg a cerca de 20 mg/kg. A dose inicial pode ser seguida por uma ou mais doses subsequentes. Em al- gumas modalidades, uma ou mais doses subsequentes podem ser administradas pelo menos semanalmente, a cada duas semanas, a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a ca- da nove semanas, a cada dez semanas, a cada onze semanas ou a cada doze semanas.
[00428] Em algumas modalidades, o inibidor de GDF15 é um anti- corpo anti GDF15 e é administrado intravenosamente (IV) ou subcuta- neamente (SC) como uma dose fixa de cerca de 0,25 mg a cerca de 2000 mg. Em algumas modalidades, o anticorpo é administrado sema- nalmente, a cada duas semanas, a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a cada nove semanas, a cada dez semanas, a cada onze semanas, ou a cada doze semanas.
[00429] Em algumas modalidades, o inibidor de GDF15 é um anti- corpo anti GDF15, em que o anticorpo anti GDF15 é administrado in- travenosamente (IV) ou subcutaneamente (SC) como uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 60 mg a cada semana. Em algumas moda- lidades, o anticorpo anti GDF15 é administrado como uma dose fixa de cerca de 2 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 40 mg e cerca de 50 mg semanalmente.
[00430] Em algumas modalidades, o inibidor de GDF15 é um anti- corpo anti GDF15, em que o anticorpo anti GDF15 é administrado in- travenosamente (IV) ou subcutaneamente (SC) como uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 130 mg a cada duas semanas. Em algu- mas modalidades, o anticorpo anti GDF15 é administrado como uma dose fixa de cerca de 5 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de
15 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 35 mg, cerca de 40 mg, cerca de 50 mg, cerca de 60 mg, cerca de 70 mg, cerca de 75 mg, cerca de 80 mg, cerca de 90 mg, cerca de 100 mg, cerca de 110 mg, cerca de 120 mg e cerca de 125 mg duas vezes por semana.
[00431] Em algumas modalidades, o inibidor de GDF15 é um anti- corpo anti GDF15, em que o anticorpo anti GDF15 é administrado in- travenosamente (IV) ou subcutaneamente (SC) como uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 400 mg a cada 21 dias (± 2 dias). Em al- gumas modalidades, o anticorpo anti GDF15 é administrado como uma dose fixa em cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 50 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 125 mg, cerca de 150 mg, cerca de 175 mg, cerca de 200 mg, cerca de 225 mg, cerca de 250 mg, cerca de 275 mg, cerca de 300 mg, cerca de 325 mg, cerca de 350 mg, cerca de 375 mg e cerca de 385 mg administrados a cada 21 dias (± 2 dias).
[00432] Em algumas modalidades, o inibidor de GDF15 é um anti- corpo anti GDF15, em que o anticorpo anti GDF15 é administrado in- travenosamente (IV) ou subcutaneamente (SC) como uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 400 mg a cada 28 dias (± 2 dias). Em al- gumas modalidades, o anticorpo anti GDF15 é administrado como uma dose fixa em cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 50 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 125 mg, cerca de 150 mg, cerca de 175 mg, cerca de 200 mg, cerca de 225 mg, cerca de 250 mg, cerca de 275 mg, cerca de 300 mg, cerca de 325 mg, cerca de 350 mg, cerca de 375 mg e cerca de 385 mg administrados a cada 28 dias (± 2 dias).
[00433] A prática do método desta invenção pode ser realizada através de vários regimes de administração ou dosagem. Os compos- tos da combinação da presente invenção podem ser administrados intermitentemente, simultaneamente ou sequencialmente. Em uma modalidade, os compostos da combinação da presente invenção po- dem ser administrados em um regime de dosagem simultânea.
[00434] A repetição da administração ou dos regimes de dosagem pode ser realizada quando necessário para atingir a redução ou dimi- nuição desejada das células cancerosas. Um "cronograma de dosa- gem contínua", quando no presente documento utilizado, é uma admi- nistração ou regime de dosagem sem interrupções de dose, por exemplo, sem dias sem tratamento. A repetição de ciclos de tratamen- to de 21 ou 28 dias sem interrupções de dose entre os ciclos de trata- mento é um exemplo de cronograma de dosagem contínua. Em uma modalidade, os compostos da combinação da presente invenção po- dem ser administrados em um cronograma de dosagem contínua. Em uma modalidade, os compostos da combinação da presente invenção podem ser administrados simultaneamente em um cronograma de do- sagem contínua.
[00435] Em uma modalidade, o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti GDF15. Em algumas modalidades, o anticorpo anti GDF15 é GDF-001.
[00436] Em algumas modalidades, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um antagonista de ligação ao PD-L1. Em algumas modalida- des, o antagonista de ligação ao PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1, tal como, porém, não limitado a, MEDI4736, MPDL3280A (YW243.55.s70), BMS-936559 (MDX-1105), avelumabe, atezolizuma- be e durvalumabe. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é avelumabe e pode ser administrado intravenosamente em uma dose de cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20 mg/kg em intervalos de cerca de 14 dias (± 2 dias) ou cerca de 21 dias (± 2 dias) ou cerca de 30 dias (± 2 dias) ao longo do curso do tratamento. Em algumas modalidades, o avelumabe é administrado como uma dose fixa de cerca de 80, 150, 160, 200, 240, 250, 300, 320, 350, 400, 450, 480, 500, 550, 560, 600, 640, 650, 700, 720, 750, 800, 850, 880, 900, 950, 960, 1000, 1040, 1050, 1100, 1120, 1150, 1200, 1250, 1280, 1300, 1350, 1360, 1400, 1440, 1500, 1520, 1550 ou 1600 mg, de preferência 800 mg, 1200 mg ou 1600 mg em intervalos de cerca de 14 dias (± 2 dias) ou cerca de 21 dias (± 2 dias) ou cerca de 30 dias (± 2 dias) ao longo do curso do tratamento. Em certas mo- dalidades, um indivíduo receberá uma infusão intravenosa (IV) de um medicamento compreendendo qualquer um dos antagonistas de liga- ção ao eixo PD-1 descritos no presente documento. Em certa modali- dade, o indivíduo receberá uma infusão subcutânea (SC) de um medi- camento compreendendo qualquer um dos antagonistas de ligação ao eixo PD-1 descritos no presente documento.
[00437] Em algumas modalidades, o antagonista do eixo PD-1 é um antagonista de ligação ao eixo PD-1. Em algumas modalidades, o an- tagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-1, por exemplo, PF-06801591 (sassanlimabe, RN888), nivolumabe, pembro- lizumabe, pidilizumabe, tislelizumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplima- be, e o anticorpo anti-GDF15 será administrado intravenosamente ou subcutaneamente, porém, de preferência subcutaneamente, em uma dose de cerca de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 mg/kg em intervalos de cerca de 14 dias (± 2 dias) ou cerca de 21 dias (± 2 dias) ou cerca de 30 dias (± 2 dias) ao longo do curso do tratamento. Em algumas modalidades, PF-06801591 (sassanlimabe, RN-888), como descrito em US 2016/159905, é administrado como uma dose plana de cerca de 80, 150, 160, 200, 240, 250, 300, 320, 350, 400, 450, 500, 550 ou 600 mg, de preferência 300 mg, em intervalos de cerca de 14 dias (± 2 dias) ou cerca de 21 dias (± 2 dias) ou cerca de 30 dias (± 2 dias) ou cerca de
35 dias (± 2 dias), ou cerca de 42 dias (± 2 dias). Em algumas modali- dades, PF-06801591 (sassanlimabe, RN888) é administrado subcuta- neamente em uma quantidade de 300 mg Q4W. Em algumas modali- dades, PF-06801591 (sassanlimabe, RN888, mAb7) é administrado subcutaneamente em uma quantidade de 600 mg Q6W.
[00438] Além disso, a invenção está relacionada a um método para o tratamento de câncer, que compreende a administração a um paci- ente em necessidade do mesmo de uma quantidade de um anticorpo GDF15 e uma quantidade de um antagonista de ligação ao eixo PD-1, em que as quantidades juntas alcançam efeitos sinergísticos no trata- mento de câncer que são maiores que o efeito terapêutico do anticor- po anti-GDF15 e o efeito terapêutico do inibidor de ligação ao eixo PD- 1, onde os efeitos separados são adicionados juntos. O método ou uso da invenção está relacionado a uma combinação sinergística de agen- tes terapêuticos alvejados, especificamente um anticorpo GDF15 e um antagonista de ligação ao eixo PD-1. Em um aspecto das modalida- des, o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti GDF15 e o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em nivolumabe, pembrolizumabe, tislelizumabe, pidilizumabe, AMP- 224, AMP-514, cemiplimabe, PF-06801591 (sassanlimabe, RN888, mAb7), avelumabe, atezolizumabe e durvalumabe. Em um aspecto das modalidades, o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti GDF15 e o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em nivolumabe, pembrolizumabe, tislelizumabe, pidilizu- mabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe, PF-06801591 (sassanlima- be, RN888, mAb7), atezolizumabe, durvalumabe e não é avelumabe.
[00439] De acordo com a presente invenção, uma quantidade de um primeiro composto ou componente, por exemplo, um inibidor de GDF15, é administrada com uma quantidade de um segundo compos- to ou componente, por exemplo, um antagonista de ligação ao eixo
PD-1 (que não inclui avelumabe), e as quantidades juntas são eficazes no tratamento do câncer. As quantidades, que juntas são eficazes, irão aliviar até certo ponto um ou mais dos sintomas da doença a ser trata- da. Em referência ao tratamento do câncer, uma quantidade eficaz re- fere-se àquela quantidade que tem o efeito de (1) reduzir o tamanho do tumor, (2) inibir (isto é, desacelerar até certo ponto, de preferência parar) o surgimento de metástases, (3) inibir até certo ponto (isto é, retardar até certo ponto, de preferência parar) o crescimento do tumor ou invasividade do tumor e/ou (4) aliviar até certo ponto (ou, de prefe- rência, eliminar) um ou mais sinais ou sintomas associados com o cancer. A eficácia terapêutica ou farmacológica das doses e regimes de administração pode da mesma forma ser especificada como a ca- pacidade de induzir, aumentar, manter ou prolongar o controle da do- ença e/ou sobrevida geral em pacientes com esses tumores específi- cos, que pode ser medida como o prolongamento do tempo antes da progressão da doença.
[00440] A invenção fornece métodos para a administração de um anticorpo anti-GDF15, ou porções de ligação de antígeno dos mes- mos, da descrição sozinhos ou em combinação com outras terapias a um indivíduo em necessidade do mesmo. As terapias de combinação (por exemplo, anti-GDF15 e antagonistas do eixo PD-1) da presente descrição podem ser administradas concomitantemente ou sequenci- almente a um indivíduo. A terapia de combinação do antagonista anti- GDF15 e do eixo PD-1 da presente descrição pode da mesma forma ser administrada ciclicamente. A terapia de ciclagem envolve a admi- nistração de uma primeira terapia (por exemplo, um primeiro agente profilático ou terapêutico) por um período de tempo, seguido pela ad- ministração de uma segunda terapia (por exemplo, um segundo agen- te profilático ou terapêutico) por um período de tempo e repetir esta administração sequencial, ou seja, o ciclo, a fim de reduzir o desenvol-
vimento de resistência a uma das terapias (por exemplo, agentes) para evitar ou reduzir os efeitos colaterais de uma das terapias (por exem- plo, agentes) e/ou para melhorar a eficácia das terapias.
[00441] A invenção da mesma forma abrange um anticorpo anti- GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composi- ção farmacêutica, como definido no presente documento para uso nos métodos de tratamento definidos em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, é admi- nistrado em combinação com um antagonista de ligação ao eixo PD-1 como definido no presente documento. Em modalidades que se refe- rem a um método de tratamento como descrito no presente documen- to, tais modalidades são da mesma forma outras modalidades relativas a um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou composição farmacêutica, para uso naquele tratamento, ou alternati- vamente para a fabricação de um medicamento para uso nesse trata- mento.
[00442] As terapias (por exemplo, agentes profiláticos ou terapêuti- cos) das terapias de combinação da descrição podem ser administra- das a um indivíduo simultaneamente. O termo "simultaneamente" não está limitado à administração de terapias (por exemplo, agentes profi- láticos ou terapêuticos) exatamente ao mesmo tempo, porém significa que uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpo GDF15, ou porção de ligação de antígeno do mesmo da descrição é administrada a um indivíduo em uma sequência e dentro de um inter- valo de tempo de modo que o anticorpo possa atuar junto com a(s) outra(s) terapia(s) (por exemplo, um antagonista do eixo PD-1 que po- de não incluir avelumabe) para fornecer um benefício aumentado mai- or do que se eles foram administrados de outra forma, mais preferen- cialmente, a terapia de combinação fornece um "efeito terapêutico si- nergístico" em que o efeito terapêutico é maior do que o efeito aditivo das duas terapias administradas separadamente. Por exemplo, cada terapia pode ser administrada a um indivíduo ao mesmo tempo ou se- quencialmente em qualquer ordem em diferentes pontos no tempo; no entanto, se não forem administrados ao mesmo tempo, devem ser administrados suficientemente próximos no tempo de modo a fornecer o efeito terapêutico ou profilático desejado. Cada terapia pode ser ad- ministrada a um indivíduo separadamente, em qualquer forma apropri- ada e por qualquer rotina adequada. O anticorpo anti-GDF15, ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, pode ser qualquer anticorpo da invenção, de preferência, GDF-15_001. O antagonista do eixo PD-1 inclui, porém não está limitado a um antagonista de ligação ao PD-1, um antagonista de ligação ao PD-L1 e um antagonista de ligação ao PD-L2. Em outros aspectos, o antagonista de ligação ao PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. Em outros aspectos, o anticorpo anti-PD-1 inclui, porém não está limi- tado a nivolumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, tislelizumabe, pidilizumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe e PF-06801591 (sas- sanlimabe, RN888). Em outros aspectos, o antagonista de ligação ao PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. Em outros aspectos, o anticorpo anti-PD-L1 é BMS-936559 (MDX-1105), avelumabe, atezolizumabe, durvalumabe. Em outros as- pectos, o antagonista de ligação ao PD-L1 é um anticorpo anti-PD-L1, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, porém não é avelu- mabe.
[00443] Em várias modalidades, o anticorpo anti-GDF15, ou frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, é administrado a um indiví- duo com menos do que 15 minutos, menos do que 30 minutos, menos do que 1 hora de intervalo, em cerca de 1 hora de intervalo, em cerca de 1 hora a cerca de 2 horas de intervalo, em cerca de 2 horas a cerca de 3 horas de intervalo, em cerca de 3 horas a cerca de 4 horas de intervalo, em cerca de 4 horas a cerca de 5 horas de intervalo, em cer- ca de 5 horas a cerca de 6 horas de intervalo, em cerca de 6 horas a cerca de 7 horas de intervalo, em cerca de 7 horas a cerca de 8 horas de intervalo, em cerca de 8 horas a cerca de 9 horas de intervalo, em cerca de 9 horas a cerca de 10 horas de intervalo, em cerca de 10 ho- ras a cerca de 11 horas de intervalo, em cerca de 11 horas a cerca de 12 horas de intervalo, 24 horas de intervalo, 48 horas de intervalo, 72 horas de intervalo ou 1 semana de intervalo da administração de um antagonista do eixo PD-1 (por exemplo, um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-PD-L1, que pode não incluir avelumabe ou um anticorpo anti-PD-L2, entre outros). Em outras modalidades, duas ou mais tera- pias (por exemplo, um anticorpo anti-GDF15, um anticorpo anti-PD-L1, que pode não incluir avelumabe e um agente quimioterapêutico) são administradas a um paciente na mesma visita do paciente.
[00444] Os agentes profiláticos ou terapêuticos das terapias de combinação podem ser administrados a um indivíduo na mesma com- posição farmacêutica. Alternativamente, os agentes profiláticos ou te- rapêuticos das terapias de combinação podem ser administrados si- multaneamente a um indivíduo em composições farmacêuticas sepa- radas. Os agentes profiláticos ou terapêuticos podem ser administra- dos a um indivíduo pelas mesmas ou diferentes rotinas de administra- ção. Métodos de Diagnóstico
[00445] Os anticorpos anti-GDF15, composições de anticorpos e métodos da presente invenção têm utilidades in vitro e in vivo, incluin- do imunoensaios e uso para o diagnóstico e avaliação do tratamento de distúrbios mediados por GDF15. Os métodos são particularmente adequados para diagnosticar, avaliar e tratar pacientes humanos com um distúrbio associado à existência de GDF15 e, mais preferencial- mente, com um nível aumentado de GDF15, onde nível aumentado de
GDF15 abrange um nível aumentado acima das concentrações plas- máticas de GDF-15 em voluntários humanos saudáveis. Este distúrbio associado à existência de GDF15 inclui, porém não está limitado a ca- quexia associada ao câncer, quimioterapia, quimioterapia em combi- nação com uma terapia imuno-oncológica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença renal crônica, insuficiência cardíaca crônica, insufici- ência cardíaca congestiva, ou sarcopenia.
[00446] A invenção fornece um método para detectar a presença de GDF15 em uma amostra, o método compreendendo contar uma amos- tra suspeita de compreender GDF15 com um anticorpo específico para GDF15 e a detecção da presença de GDF15 ligado ao anticorpo, des- se modo detectando GDF15 na amostra. Métodos para detectar GDF15 ligado ao anticorpo são bem conhecidos na técnica, incluindo, porém, não limitado a um ensaio em que GDF15 é ligado a um suporte sólido e uma amostra é adicionada ao mesmo, permitindo que o anti- corpo se ligue a GDF15 na amostra. Um segundo anticorpo GDF15 que é o mesmo ou diferente do anticorpo ligado ao suporte sólido é adicionado e pode ser detectado por rotulagem direta (ou seja, o se- gundo anticorpo é conjugado em um rótulo detectável) ou pela adição de um terceiro anticorpo, por exemplo, de outra espécie que reage com o domínio constante do segundo anticorpo e que compreende um marcador detectável. Desse modo, o ensaio pode ser usado para de- tectar a presença ou ausência de GDF15 em uma amostra.
[00447] Em outra modalidade, a invenção inclui um kit para detectar a presença de GDF15 em uma amostra, o kit compreendendo um anti- corpo específico para GDF15, um aplicador e um material de instrução para o uso do mesmo.
[00448] A invenção da mesma forma fornece um método para de- terminar a concentração de GDF15 em uma amostra, o referido méto- do compreendendo o fornecimento de um competidor rotulado com-
preendendo GDF15 acoplado a um rótulo detectável; fornecendo um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que espe- cificamente liga GDF15; combinando a amostra, o anticorpo e o com- petidor rotulado, em que o GDF15 na amostra compete com o compe- tidor rotulado pela ligação ao anticorpo; e determinando a concentra- ção de GDF15 na referida amostra medindo a quantidade de competi- dor rotulado não ligado ao anticorpo pela detecção do marcador. A quantidade de competidor rotulado ligado ao anticorpo na ausência da amostra é comparada com a quantidade de competidor rotulado ligado ao anticorpo quando a amostra é adicionada. A quantidade de diminui- ção do competidor rotulado ligado na presença da amostra é um indi- cador da quantidade de GDF15 não rotulado presente na amostra, de modo que o ensaio possa ser usado para avaliar a presença e o nível de GDF15 em uma amostra.
[00449] Em uma modalidade, a invenção fornece um método para avaliar a eficácia de um tratamento para uma doença ou distúrbio as- sociado a um nível elevado de GDF15 em um indivíduo, o método compreendendo a administração de um tratamento ao indivíduo e a comparação do nível de GDF15 em uma amostra obtida do indivíduo antes do tratamento com o nível de GDF15 em uma amostra idêntica obtida do indivíduo após o tratamento, em que o nível de GDF15 em uma amostra é avaliado usando um anticorpo específico de GDF15, e ainda em que um nível inferior de GDF15 na amostra coletada do indi- víduo após o tratamento em comparação com o nível de GDF15 em uma amostra coletada do indivíduo antes do tratamento é uma indica- ção da eficácia do curso de tratamento.
[00450] O termo "rotulado", em relação ao anticorpo específico GDF15 ou competidor rotulado, inclui rotulagem direta por acoplamen- to (isto é, ligação física) de uma substância detectável ao anticorpo ou competidor rotulado, bem como rotulagem indireta do anticorpo ou competidor rotulado por acoplamento com outro reagente que é dire- tamente rotulado. Um exemplo de rotulagem indireta inclui a detecção de um anticorpo primário usando um anticorpo secundário rotulado com fluorescência. As técnicas in vitro para a detecção de polipeptí- deos da invenção incluem ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISAs), manchas do Oeste, imunoprecipitação e imunofluorescên- cia.
[00451] O termo "amostra biológica" pretende incluir tecidos, células e fluidos biológicos isolados de um indivíduo, bem como tecidos, célu- las e fluidos presentes dentro de um indivíduo.
[00452] Os anticorpos, competidores rotulados e compostos tera- pêuticos potenciais descritos no presente documento são da mesma forma adequados para uso com qualquer um de uma série de outros imunoensaios homogêneos e heterogêneos com uma variedade de sistemas de detecção. Composições
[00453] Os anticorpos GDF15 da invenção podem ser formulados como uma composição farmacêutica. A composição farmacêutica po- de compreender ainda um transportador, excipiente e/ou estabilizador farmaceuticamente aceitável (Remington: The Science and Practice of Pharmacy 21st Ed., 2005, Lippincott Williams e Wilkins, Ed. KE Hoover), na forma de formulação liofilizada ou solução aquosa. Os transportadores, excipientes ou estabilizadores aceitáveis não são tó- xicos em recipientes nas dosagens e concentrações e podem compre- ender tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametô- nio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquilparabenos tais como metil ou propil parabeno; cate- col; resorcinol; cicloexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos do que cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina de soro, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dex- tranos; agentes quelantes tal como EDTA; açúcares tal como sacaro- se, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons de formação de sal, tais como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos Zn- proteína); e/ou tensoativos não iônicos, tais como TWEEN™, PLU- RONICS™ ou polietilenoglicol (PEG). Excipientes farmaceuticamente aceitáveis são também descritos no presente documento.
[00454] A composição farmacêutica da descrição pode compreen- der ainda um antagonista do eixo PD-1 como descrito no presente do- cumento e um inibidor de GDF15, como descrito no presente docu- mento. Em uma modalidade, o inibidor de GDF15 é um anticorpo anti GDF15 GDF15_001 ou GDF15_297 e o antagonista do eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste, opcionalmente, em avelu- mabe, PF-06801591 (da mesma forma referido como "sassanlimabe" e "RN- 888 ”e mAb7, todos como descrito em WO 2016/092419), nivo- lumabe, pembrolizumabe, atezolizumabe e durvalumabe. Em uma modalidade, o antagonista do eixo PD-1 não inclui avelumabe.
[00455] Os compostos farmacêuticos da descrição podem incluir um ou mais sais farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de tais sais incluem sais de adição de ácido e sais de adição de base. Os sais de adição de ácido incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos não tóxicos, tais como clorídrico, nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico, fósforo e similar, bem como de ácidos orgânicos não tóxicos, tais como ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos substituídos por fenila, ácidos hidroxialcanóicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfônicos alifáticos e aromáticos e similar. Sais de adição de base incluem aqueles derivados de metais alcalinos terrosos, tais co- mo sódio, potássio, magnésio, cálcio e similar, bem como de aminas orgânicas não tóxicas, tais como N,N'-dibenziletilenodiamina, N- metilglucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina , etilenodiamina, procaína e similar.
[00456] Uma composição farmacêutica da descrição pode da mes- ma forma incluir um antioxidante farmaceuticamente aceitável. Exem- plos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antio- xidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similar; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de as- corbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), le- citina, galato de propila, alfa-tocoferol e similar; e (3) agentes quelan- tes de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico e similar.
[00457] Exemplos de transportadores aquosos e não aquosos ade- quados que podem ser usados nas composições farmacêuticas da descrição incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno- glicol, polietilenoglicol e similar) e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tais como azeite e ésteres orgânicos injetáveis, tais como oleato de etila. A fluidez adequada pode ser mantida, por exem- plo, pelo uso de materiais de revestimento, tal como a lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso de disper- sões e pelo uso de tensoativos.
[00458] Estas composições podem da mesma forma conter adju- vantes, tais como conservantes, agentes umectantes, agentes emulsi- ficantes e agentes dispersantes. A prevenção da presença de micror- ganismos pode ser assegurada tanto por procedimentos de esteriliza- ção como pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngi- cos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e simi-
lar. Pode da mesma forma ser desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e similar nas composições. Além dis- so, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser provocada pela inclusão de agentes que retardam a absorção, tais como monoestearato de alumínio e gelatina.
[00459] As composições farmacêuticas normalmente devem ser estéreis e estáveis nas condições de fabricação e armazenamento. A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, lipossoma ou outra estrutura ordenada adequada para alta concentra- ção de fármaco. O veículo pode ser um solvente ou meio de dispersão contendo, por exemplo, água, etanol, poliol (por exemplo, glicerol, pro- pilenoglicol e polietilenoglicol líquido e similar) e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez adequada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento tal como a lecitina, pela manutenção do ta- manho de partícula necessário no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. Em muitos casos, será adequado incluir agentes isotôni- cos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio na composição. A absorção prolongada das composi- ções injetáveis pode ser conseguida incluindo na composição um agente que retarda a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.
[00460] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas in- corporando o composto ativo na quantidade necessária em um solven- te apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumera- dos acima, quando requerido, seguido por microfiltração de esteriliza- ção.
[00461] Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando o composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de disper- são básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetá-
veis estéreis, os métodos preferidos de preparação são secagem a vácuo e secagem por congelamento (liofilização) que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução filtrada previamente esterilizada.
[00462] Uma composição farmacêutica da presente descrição pode ser preparada, empacotada ou vendida em uma formulação adequada para administração oftálmica. Tais formulações podem, por exemplo, estar na forma de colírios incluindo, por exemplo, uma solução ou sus- pensão de 0,1% - 1,0% (p/p) do ingrediente ativo em um veículo líqui- do aquoso ou oleoso. Essas gotas podem compreender ainda agentes de tamponamento, sais ou um ou mais dos outros ingredientes adicio- nais descritos no presente documento. Outras formulações oftalmica- mente administráveis que são úteis incluem aquelas que compreen- dem o ingrediente ativo na forma microcristalina ou em uma prepara- ção lipossômica.
[00463] Quando no presente documento utilizado, "ingredientes adicionais" incluem, porém, não são limitados a um ou mais dos se- guintes: excipientes; agentes tensoativos; agentes dispersantes; dilu- entes inertes; agentes de granulação e desintegração; agentes de li- gação; agentes lubrificantes; agentes adoçantes; agentes aromatizan- tes; agentes colorantes; conservantes; composições fisiologicamente degradáveis, tais como gelatina; veículos aquosos e solventes; veícu- los oleosos e solventes; agentes de suspensão; agentes dispersantes ou umectantes; agentes emulsificantes, demulcentes; tampões; sais; agentes espessantes; cargas; agentes emulsificantes; antioxidantes; antibióticos; agentes antifúngicos; agentes estabilizadores; e materiais poliméricos ou hidrofóbicos farmaceuticamente aceitáveis. Outros "in- gredientes adicionais" que podem ser incluídos nas composições far- macêuticas da descrição são conhecidos na técnica e descritos, por exemplo, em Remington's Pharmaceutical Sciences, Genaro, ed.,
Mack Publishing Co., Easton, PA (1985), que está incorporado no pre- sente documento por referência.
[00464] Em uma modalidade, o anticorpo GDF15, ou porção de li- gação de antígeno do mesmo, é administrado em uma formulação in- travenosa como uma solução aquosa estéril contendo 5 mg/mL, ou em algumas modalidades, cerca de 10 mg/mL, ou em algumas modalida- des, cerca de 15 mg/mL, ou em algumas modalidades, cerca de 20 mg/mL de anticorpo, ou em algumas modalidades, cerca de 25 mg/mL, ou em algumas modalidades, cerca de 50 mg/mL, com acetato de só- dio, polissorbato 80 e cloreto de sódio em um pH variando de cerca de 5 a 6. Em algumas modalidades, a formulação intravenosa é uma so- lução aquosa estéril contendo 5 ou 10 mg/mL de anticorpo, com aceta- to de sódio 20 mM, polissorbato 80 0,2 mg/mL e cloreto de sódio 140 mM em pH 5,5. Além disso, uma solução compreendendo um anticor- po, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, pode compreender, entre muitos outros compostos, histidina, manitol, sacarose, trealose, glicina, poli(etileno) glicol, EDTA, metionina e qualquer combinação dos mesmos, e muitos outros compostos conhecidos na técnica rele- vante.
[00465] Em uma modalidade, uma composição farmacêutica da presente descrição compreende os seguintes componentes: 50 mg/mL de anticorpo GDF15 ou porção de ligação de antígeno da presente descrição, 20 mM de histidina, 8,5% de sacarose e 0,02% de polissor- bato 80, 0,005% de EDTA em pH 5,8; em outra modalidade, uma composição farmacêutica da presente invenção compreende os se- guintes componentes: 100 mg/mL de anticorpo GDF15 ou porção de ligação de antígeno da presente descrição, 10 mM de histidina, 5% de sacarose e 0,01% de polissorbato 80 em pH 5,8. Esta composição po- de ser fornecida como uma formulação líquida ou como um pó liofiliza- do. Quando o pó é reconstituído no volume total, a composição retém a mesma fórmulação. Alternativamente, o pó pode ser reconstituído na metade do volume, caso em que a composição compreende 100 mg de anticorpo GDF15 ou porção de ligação de antígeno do mesmo da presente descrição, 20 mM de histidina, 10% de sacarose e 0,02% de polissorbato 80 em pH 5,8.
[00466] Em uma modalidade, parte da dose é administrada por um bolo intravenoso e o resto por infusão da formulação de anticorpo. Por exemplo, uma injeção intravenosa de 0,01 mg/kg do anticorpo GDF15, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, pode ser dada como um bolo, e o resto da dose de anticorpo pode ser administrada por injeção intravenosa. Uma dose predeterminada do anticorpo GDF15, ou por- ção de ligação de antígeno do mesmo, pode ser administrada, por exemplo, durante um período de uma hora e meia a duas horas a cin- co horas.
[00467] No que diz respeito a um agente terapêutico, onde o agente é, por exemplo, uma pequena molécula, pode estar presente em uma composição farmacêutica na forma de um éster ou sal fisiologicamente aceitável, tal como em combinação com um cátion ou ânion fisiologi- camente aceitável, como é bem conhecido na técnica.
[00468] As formulações das composições farmacêuticas descritas no presente documento podem ser preparadas por qualquer método conhecido ou a seguir desenvolvido na técnica de farmacologia. Em geral, tais métodos preparatórios incluem a etapa de trazer o ingredi- ente ativo em associação com um transportador ou um ou mais outros ingredientes acessórios e em seguida, se necessário ou desejável, moldar ou empacotar o produto em uma unidade de dose única ou múltipla desejada.
[00469] Em uma modalidade, as composições da descrição são formulações apirogênicas que são substancialmente livres de endoto- xinas e/ou substâncias pirogênicas relacionadas. As endotoxinas in-
cluem toxinas que são confinadas dentro de um microrganismo e são liberadas quando os microrganismos são decompostos ou morrem. As substâncias pirogênicas da mesma forma incluem substâncias ter- moestáveis de indução de febre (glicoproteínas) da membrana externa de bactérias e outros microrganismos. Ambas as substâncias podem causar febre, hipotensão e choque se administradas a humanos. Devi- do aos efeitos nocivos potenciais, é vantajoso remover até mesmo pe- quenas quantidades de endotoxinas de soluções farmacêuticas admi- nistradas intravenosamente. A Food and Drug Administration ("FDA") estabeleceu um limite superior de 5 unidades de endotoxina (UE) por dose por quilograma de peso corporal em um único período de uma hora para aplicações de fármacos intravenosas (The United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26 (1): 223 (2000)). Quando as proteínas terapêuticas são administradas em quantidades de várias centenas ou milhares de miligramas por quilograma de peso corporal, é vantajoso remover até mesmo vestígios de endotoxina. Em uma modalidade, os níveis de endotoxina e pirogênio na composição são menores do que 10 EU/mg, ou menores do que 5 EU/mg, ou me- nores do que 1 EU/mg, ou menores do que 0,1 EU/mg, ou menores do que 0,01 EU/mg , ou menos do que 0,001 EU/mg. Em outra modalida- de, os níveis de endotoxina e pirogênio na composição são menores do que cerca de 10 EU/mg, ou menores do que cerca de 5 EU/mg, ou menores do que cerca de 1 EU/mg, ou menores do que cerca de 0,1 EU/mg, ou menores do que cerca de 0,01 EU/mg, ou menos do que cerca de 0,001 EU/mg.
[00470] Em uma modalidade, a descrição compreende a adminis- tração de uma composição em que a referida administração é oral, pa- renteral, intramuscular, intranasal, vaginal, retal, lingual, sublingual, bucal, intrabucal, intravenosa, cutânea, subcutânea ou transdérmica.
[00471] Em outra modalidade, a descrição compreende ainda a administração de uma composição em combinação com outras terapi- as, como cirurgia, quimioterapia, terapia hormonal, terapia biológica, imunoterapia ou radioterapia. Dosagem
[00472] Para preparar composições farmacêuticas ou estéreis inclu- indo um anticorpo GDF15, ou porção de ligação de antígeno do mes- mo da descrição, o anticorpo é misturado com um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável. As formulações de agentes terapêuticos e de diagnóstico podem ser preparadas por mistura com transportadores, excipientes ou estabilizadores fisiologicamente acei- táveis na forma de, por exemplo, pós liofilizados, pastas, soluções aquosas, loções ou suspensões (veja, por exemplo, Hardman, e outro ( 2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Thera- peutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams e Wilkins, New York, NY; Avis, e outro (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, e outro (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, e outro (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Dis- perse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner e Kotkoskie (2000) Excipi- ent Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).
[00473] A seleção de um regime de administração para um terapêu- tico depende de vários fatores, incluindo a taxa de renovação do soro ou do tecido da entidade, o nível de sintomas, a imunogenicidade da entidade e a acessibilidade das células alvo na matriz biológica. Em certas modalidades, um regime de administração maximiza a quanti- dade de terapêutico liberado ao paciente de acordo com um nível acei- tável de efeitos colaterais. Desta maneira, a quantidade de produtos biológicos administrados depende em parte da entidade específica e da gravidade da condição a ser tratada. Orientação na seleção de do-
ses adequadas de anticorpos, citocinas e moléculas pequenas estão disponíveis (veja, por exemplo, Wawrzynczak, 1996, Antibody The- rapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.), 1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Ther- apy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert, e outro, 2003, New Engl. J. Med. Chem. 348: 601-608; Milgrom, e outro, 1999, New Engl. J. Med. 341: 1966-1973; Slamon, e outro, 2001, New Engl. J. Med. 344: 783-792; Beniaminovitz, e outro, 2000, New Engl. J. Med. 342: 613-619; Ghosh, e outro, 2003, New Engl. J. Med. 348: 24- 32; Lipsky, e outro, 2000, New Engl.. J. Med. 343: 1594-1602).
[00474] A determinação da dose apropriada é feita pelo clínico, por exemplo, usando parâmetros ou fatores conhecidos ou suspeitos na técnica para afetar o tratamento ou previsto para afetar o tratamento. Geralmente, a dose começa com uma quantidade um pouco menor do que a dose ideal e é aumentada em pequenos incrementos depois disso até que o efeito desejado ou ideal seja alcançado em relação a quaisquer efeitos colaterais negativos.
[00475] “Reduzir o nível de GDF15” ou “reduzir o nível de GDF15”, como os termos são usados no presente documento, significa diminuir o nível de GDF15 livre em comparação com o nível de GDF15 livre antes de qualquer intervenção terapêutica. Quando no presente do- cumento utilizado, "GDF15 livre" significa GDF15 que não está ligado ou de outra forma em um complexo com outra molécula (por exemplo, um anticorpo ou moléculas de ligação presentes, por exemplo, no plasma).
[00476] O nível de GDF15 inclui o nível de GDF15 livre em um indi- víduo onde o nível é avaliado usando os métodos descritos no presen- te documento ou qualquer outro método para avaliar o nível de GDF15 livre conhecido na técnica.
[00477] Em uma modalidade, o nível de GDF15 livre é reduzido em comparação com o nível de GDF15 no indivíduo antes da administra- ção de um anticorpo da invenção. Em uma modalidade, o nível de GDF15 livre é reduzido em comparação com um nível padrão de GDF15 livre que está associado ou indica que o indivíduo não sofre de uma doença, distúrbio ou condição associada ou mediada por um nível elevado de GDF15 livre. Em uma modalidade, o nível padrão ou de referência de GDF15 livre é de cerca de 0,05 ng/mL a cerca de 3 ng/mL no plasma. Em outra modalidade, o nível padrão ou de referên- cia de GDF15 livre está dentro de uma faixa cujo valor inferior é sele- cionado a partir do grupo que consiste em 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7,1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 ng/mL e cujo valor superior é selecionado a partir do grupo que consiste em 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7 , 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9 e 3,0 ng/mL. Em uma outra modalidade, o nível padrão ou de refe- rência de GDF15 livre é inferior a 1 ng/mL, preferencialmente, inferior a 0,9 ng/mL, ainda mais preferencialmente, inferior a 0,8 ng/mL, ainda mais preferencialmente, inferior a 0,7 ng/mL, ainda mais preferencial- mente, menos do que 0,6 ng/mL, ainda mais preferencialmente, me- nos do que 0,5 ng/mL, e ainda mais preferencialmente, menos do que 0,4 ng/mL. Em uma modalidade, o nível de GDF15 livre é o nível no plasma.
[00478] A invenção não está limitada ao nível de GDF15 livre sendo inferior a 0,5 ng/mL; em vez disso, seria entendido por alguém versado na técnica que um nível terapêutico pode ser inferior ou superior a 0,5 ng/mL para um determinado indivíduo. Portanto, a invenção abrange a redução do nível de GDF15 livre em um nível onde há uma diminuição ou ausência completa de efeito(s) deletério(s) detectável(is) media-
do(s) por ou associado em um nível aumentado de GDF15 livre. Tais efeitos incluem, porém, não são limitados a caquexia, diminuição da ingestão de alimentos, diminuição do apetite, diminuição do peso cor- poral, perda de peso, diminuição da massa gorda, diminuição da mas- sa magra e similar.
[00479] Quando no presente documento utilizado, uma "dosagem eficaz", "dose eficaz", "quantidade eficaz" ou "quantidade terapeutica- mente eficaz" de um medicamento, composto ou composição farma- cêutica é uma quantidade suficiente para efetuar qualquer um ou mais resultados benéficos ou desejados. Para uso profilático, os resultados benéficos ou desejados incluem eliminar ou reduzir o risco, diminuir a gravidade ou retardar o início da doença, incluindo sintomas bioquími- cos, histológicos e/ou comportamentais da doença, suas complicações e fenótipos patológicos intermediários que se apresentam durante o desenvolvimento da doença. Para uso terapêutico, os resultados bené- ficos ou desejados incluem resultados clínicos detectáveis, tal como redução ou diminuição da taxa de perda de peso ou redução de um ou mais sintomas resultantes da alta expressão de GDF15 ativo (por exemplo, ingestão de alimentos diminuída, diminuição do apetite, di- minuição do peso corporal, perda de peso, diminuição da massa gorda e diminuição da massa magra) diminuindo a dose de outros medica- mentos necessários para tratar a doença, aumentando o efeito de ou- tro medicamento e/ou atrasando a progressão do doença dos pacien- tes. Uma dosagem eficaz pode ser administrada em uma ou mais ad- ministrações. Para propósitos desta invenção, uma dosagem eficaz de fármaco, composto ou composição farmacêutica é uma quantidade suficiente para realizar o tratamento profilático ou terapêutico, direta ou indiretamente. Como é entendido no contexto clínico, uma dosagem eficaz de um medicamento, composto ou composição farmacêutica pode ou não ser alcançada em conjunto com outro medicamento,
composto ou composição farmacêutica. Desse modo, uma "dosagem eficaz" pode ser considerada no contexto da administração de um ou mais agentes terapêuticos, e um único agente pode ser considerado ser dado em uma quantidade eficaz se, em conjunto com um ou mais outros agentes, um resultado desejável pode ser ou é obtido.
[00480] Em algumas modalidades, a dosagem eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção é basea- da na concentração plasmática de GDF-15 livre em voluntários huma- nos saudáveis e em pacientes afetados. A dose total eficaz depende da concentração plasmática inicial de GDF-15 livre no paciente afeta- do. Em uma modalidade, uma dosagem eficaz pode ser uma dosagem com a capacidade de diminuir ou reduzir os níveis de GDF15 livre em um indivíduo para o mesmo ou menor nível médio medido em voluntá- rios humanos saudáveis para um intervalo de dosagem inteiro no es- tado estacionário. Em outra modalidade, uma dosagem eficaz pode ser uma dosagem com a capacidade de diminuir ou reduzir os níveis de GDF15 livre em um paciente para menos do que 0,5 ng/mL por um intervalo de dosagem inteiro em estado estacionário. Em ainda outra modalidade, uma dosagem eficaz pode ser a dosagem administrada a um indivíduo de 70 kg que pode diminuir ou reduzir o nível de GDF15 livre no indivíduo para menos do que 0,5 ng/mL ao longo do intervalo de dosagem no estado estacionário.
[00481] Um "indivíduo", "paciente" ou "indivíduo" é um mamífero, mais preferencialmente, um ser humano. Os mamíferos da mesma forma incluem, porém, não são limitados a animais de fazenda, ani- mais de esporte, animais de estimação, primatas, cavalos, cães, ga- tos, camundongos e ratos. Em algumas modalidades, o indivíduo é considerado estar em risco de uma doença, distúrbio ou condição me- diada por ou associada à ligação de GDF15 ao seu receptor e sinali- zação mediada por ele. Em certas modalidades, o indivíduo tem ca-
quexia associada a câncer, quimioterapia, quimioterapia em combina- ção com terapia imuno-oncológica, insuficiência cardíaca crônica, insu- ficiência cardíaca congestiva, sarcopenia, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), sarcopenia e doença renal crônica (CKD).
[00482] Em algumas modalidades, o método ou uso compreende a administração de uma dose inicial de cerca de 0,025 mg/kg a cerca de 20 mg/kg de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou uma composição farmacêutica da invenção. A dose inicial pode ser seguida por uma ou mais doses subsequentes. Em algumas modalidades, uma ou mais doses subsequentes podem ser adminis- tradas pelo menos semanalmente, a cada duas semanas, a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a cada nove semanas, a cada dez semanas, a cada onze semanas ou a cada doze semanas.
[00483] Em algumas modalidades, o método ou uso compreende a administração de uma dose fixa de cerca de 0,25 mg a cerca de 2000 mg de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção. Em algumas modalidades, o anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, é administrado semanalmente, a cada duas semanas, a cada três semanas, a cada quatro semanas, a cada cinco semanas, a cada seis semanas, a cada sete semanas, a cada oito semanas, a cada nove semanas, a cada dez semanas, a cada on- ze semanas ou a cada doze semanas.
[00484] Em outras modalidades, o método ou uso compreende a administração de uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 60 mg de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da in- venção a cada semana. Em algumas modalidades, a dose fixa de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da inven- ção é de cerca de 2 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7 mg, cerca de 10 mg, cerca de 12 mg, cerca de 15 mg, cerca de 25 mg, cerca de 40 mg e cerca de 50 mg administrados semanalmente.
[00485] Em algumas modalidades, o método ou uso compreende a administração de uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 130 mg de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da in- venção a cada duas semanas. Em algumas modalidades, a dose fixa de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção é de cerca de 5 mg, cerca de 12 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 90 mg e cerca de 125 mg administrados duas vezes por semana.
[00486] Em algumas modalidades, o método ou uso compreende a administração de uma dose fixa de cerca de 0,1 a cerca de 400 mg de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da in- venção a cada quatro semanas. Em algumas modalidades, a dose fixa de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção é de cerca de 15 mg, cerca de 40 mg, cerca de 60 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 115 mg, cerca de 200 mg, cerca de 300 mg e cerca de 385 mg administrados a cada quatro semanas. Kits
[00487] A invenção da mesma forma fornece kits ou um artigo de fabricação compreendendo um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção e instruções de uso. Desta maneira, em algumas modalidades, é fornecido um kit ou um artigo de fabrica- ção, compreendendo um recipiente, uma composição dentro do recipi- ente que compreende um anticorpo anti-GDF15 e uma bula contendo instruções para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo anti-GDF15 para o tratamento de um paciente em neces- sidade do mesmo.
[00488] Em certas modalidades, o kit pode conter um primeiro reci- piente com uma proteína seca e um segundo recipiente com uma for-
mulação aquosa. Em certas modalidades, kits contendo seringas pré- carregadas de uma ou várias câmaras (por exemplo, seringas líquidas e liosseringas) estão incluídos.
[00489] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit para de- terminar a concentração de GDF15 em uma amostra, o kit compreen- dendo um competidor rotulado compreendendo GDF15 acoplado a um rótulo detectável; um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15; um aplicador; e um material de instrução para o uso do mesmo.
[00490] A invenção fornece ainda um kit de imunoensaio competiti- vo para determinar a quantidade de GDF15 em uma amostra de teste, o imunoensaio competitivo compreendendo um anticorpo, ou um frag- mento de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15; um competidor rotulado compreendendo GDF15 conjugado a um rótulo detectável; em que o competidor rotulado compete com o GDF15 na amostra de teste pela ligação com o anticorpo, e ainda em que o rótulo fornece um sinal indicativo da quantidade de GDF15 na amostra de teste. Em uma modalidade exemplar, a diminuição no marcador ligado pelo anticorpo na amostra de teste em comparação com o marcador ligado pelo anticorpo em uma amostra idêntica que não contém GDF15 é uma indicação da quantidade de GDF15 na amostra de teste.
[00491] Em uma modalidade, a invenção fornece um kit para de- terminar a concentração de GDF15 em uma amostra, o kit compreen- dendo um competidor rotulado compreendendo GDF15 acoplado a um rótulo detectável; um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que especificamente liga-se a GDF15; um aplicador; e um material de instrução para uso do mesmo.
[00492] Em uma modalidade alternativa, a invenção fornece um kit para identificar um paciente humano em risco de caquexia compreen-
dendo um anticorpo específico GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, um aplicador e um material de instrução para o uso do mesmo.
[00493] Em algumas modalidades, é fornecido um kit ou um artigo de fabricação, compreendendo um primeiro recipiente, uma composi- ção dentro do recipiente que compreende um anticorpo anti-GDF15, um segundo recipiente, uma composição dentro do segundo recipiente que compreende um antagonista de ligação ao eixo PD-1, e uma bula contendo instruções para administrar uma quantidade terapeuticamen- te eficaz do anticorpo anti-GDF15 e o antagonista de ligação ao eixo PD-1 para o tratamento de um paciente em necessidade do mesmo.
[00494] A invenção abrange um kit ou um artigo de fabricação, compreendendo um primeiro recipiente, uma composição dentro do recipiente compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo anti-GDF15, um segundo recipiente, uma composição dentro do segundo recipiente compreendendo uma quan- tidade terapêutica terapeuticamente eficaz de um antagonista de liga- ção ao eixo PD-1 e uma bula contendo instruções para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística do anticorpo anti- GDF15 e o antagonista de ligação ao eixo PD-1 para o tratamento de combinação de um paciente em necessidade do mesmo.
[00495] Em alguns aspectos, o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consiste em um anticorpo PD-1, ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, um anticorpo PD- L1 ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo e um anticorpo PD-L2, ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo. Em alguns aspectos, o anticorpo PD-1 é selecionado a partir do grupo que consis- te em nivolumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, tislelizumabe, pidilizumabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe e PF-06801591 (sas- sanlimabe, RN888). Em outros aspectos, o anticorpo PD-L1 é selecio-
nado a partir do grupo que consiste em, opcionalmente, avelumabe, atezolizumabe, durvalumabe. Em outros aspectos, o anticorpo PD-L1 não é avelumabe.
[00496] Em outras modalidades, é fornecido um kit ou um artigo de fabricação, compreendendo um primeiro recipiente, uma composição dentro do recipiente que compreende um anticorpo anti-GDF15, um segundo recipiente, uma composição dentro do segundo recipiente que compreende um agente terapêutico anticâncer, e uma bula con- tendo instruções para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo anti-GDF15 e o agente terapêutico anticâncer para o tratamento de um paciente em necessidade do mesmo. Em alguns aspectos, o agente terapêutico anticâncer é um anticorpo anti-CD40.
[00497] A invenção abrange um kit ou um artigo de fabricação com- preendendo um primeiro recipiente, uma composição dentro do recipi- ente compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz siner- gística de um anticorpo anti-GDF15, um segundo recipiente, uma composição dentro do segundo recipiente compreendendo uma quan- tidade terapêutica terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico anticâncer e uma bula contendo instruções para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística do anticorpo anti- GDF15 e o agente terapêutico anticâncer para o tratamento de combi- nação de um paciente em necessidade do mesmo. Em algumas moda- lidades, o agente terapêutico anticâncer é um anticorpo anti-CD40.
[00498] As instruções relacionadas ao uso de um anticorpo, ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, da invenção geralmente incluem informações quanto à dosagem, cronograma de dosagem e rotina de administração para o tratamento pretendido. Os recipientes podem ser doses unitárias, pacotes em volume (por exemplo, pacotes de multidose) ou doses de subunidades. As instruções fornecidas nos kits da invenção são tipicamente instruções escritas em um rótulo ou bula (por exemplo, uma folha de papel incluída no kit), porém as ins- truções legíveis por máquina (por exemplo, instruções transportadas em um disco de armazenamento magnético ou óptico) são da mesma forma aceitável.
[00499] Os kits desta invenção estão em embalagens adequadas. A embalagem adequada inclui, porém não é limitada a frasconetes, gar- rafas, jarros, embalagens flexíveis (por exemplo, Mylar selado ou sa- cos plásticos) e similar. Da mesma forma contempladas são embala- gens para uso em combinação com um dispositivo específico, tal como um inalador, dispositivo de administração nasal (por exemplo, um ato- mizador) ou um dispositivo de infusão, tal como uma minibomba. Um kit pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente po- de ser um saco de solução intravenosa ou um frasconete tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). O recipiente pode da mesma forma ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser um saco de solução intravenosa ou um frasconete tendo uma rolha perfurável por uma agulha de injeção hipodérmica). O recipiente pode ainda compreender um segundo agente farmaceuti- camente ativo.
[00500] Os kits podem opcionalmente fornecer componentes adici- onais, tal como tampões e informações interpretativas. Normalmente, o kit compreende um recipiente e um rótulo ou bula(s) em ou associa- do ao recipiente. Definições
[00501] "Cerca de" ou "aproximadamente", a menos que de outra maneira definido no presente documento, quando usado em conexão com uma variável numérica mensurável, refere-se ao valor indicado da variável e a todos os valores da variável que estão dentro do erro ex- perimental do valor indicado (por exemplo dentro do intervalo de confi- ança de 95% para a média) ou dentro de 10 por cento do valor indica-
do, o que for maior. Faixas numéricas incluem os números que defi- nem a faixa.
[00502] O termo "identidade", como conhecido na técnica, refere-se a uma relação entre as sequências de duas ou mais moléculas de po- lipeptídeo ou duas ou mais moléculas de ácido nucleico, como deter- minado pela comparação das sequências. Na técnica, "identidade" da mesma forma significa o grau de relação de sequência entre as se- quências de polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico, como o caso, como determinado pela correspondência entre as sequências de nu- cleotídeo ou aminoácidos. "Identidade" mede a porcentagem de cor- respondências idênticas entre duas ou mais sequências com alinha- mentos de lacunas endereçados por um modelo matemático específi- co de programas de computador (isto é, "algoritmos").
[00503] O termo "similaridade" é um conceito relacionado, porém em contraste com "identidade", refere-se a uma medida de similarida- de que inclui correspondências idênticas e correspondências de subs- tituição conservadoras. Uma vez que as substituições conservadoras se aplicam a polipeptídeos e não a moléculas de ácido nucleico, a si- milaridade trata apenas de comparações de sequências polipeptídicas. Se duas sequências polipeptídicas têm, por exemplo, 10 de 20 amino- ácidos idênticos, e o restante são todas substituições não conservado- ras, em seguida a identidade percentual e similaridade seriam ambas de 50%. Se, no mesmo exemplo, houver mais 5 posições em que há substituições conservadoras, a identidade percentual permanece 50%, porém a similaridade percentual seria 75% (15 de 20). Portanto, nos casos em que há substituições conservadoras, o grau de similaridade entre duas sequências polipeptídicas será maior do que a identidade percentual entre essas duas sequências.
[00504] O uso do termo "ou" nas reivindicações é usado para signi- ficar "e/ou", a menos que explicitamente indicado para se referir a al-
ternativas apenas ou as alternativas são mutuamente exclusivas, em- bora a descrição suporte uma definição que se refere apenas a alter- nativas e "e/ou." Quando no presente documento usado a especifica- ção, "um" ou "uma" pode significar um ou mais, a menos que seja cla- ramente indicado de outra maneira. Quando no presente documento usado na(s) reivindicação(ões), quando usado em conjunto com a pa- lavra "compreendendo", as palavras "um" ou "uma" podem significar um ou mais do que um. Quando no presente documento utilizado, "ou- tro" pode significar pelo menos um segundo ou mais. A menos que de outra maneira definido no presente documento, os termos científicos e técnicos usados em conexão com a presente invenção devem ter os significados que são comumente entendidos por aqueles versados na técnica. Além disso, a menos que exigido de outra maneira requerido pelo contexto, termos singulares devem incluir pluralidades e termos plurais devem incluir o singular. As palavras "compreende/compreen- dendo" e as palavras "tendo/incluindo" quando usadas no presente documento com referência à presente invenção são usadas para es- pecificar a presença de características, números inteiros, etapas ou componentes declarados, porém não excluem a presença ou adição de uma ou mais outras características, números inteiros, etapas, com- ponentes ou grupos dos mesmos.
[00505] Quando no presente documento utilizado, ao descrever a quantidade de carboplatina administrada ao paciente, o termo "dose calculada de AUC 3", "dose calculada de AUC 4", "dose calculada de AUC 5", "dose calculada de AUC 6", etc., refere-se à quantidade de carboplatina calculada de acordo com a Equação de Calvert com base na área alvejada sob a curva (AUC) sendo 3, 4, 5 e 6 mg.min/mL, res- pectivamente, e a taxa de filtração glomerular do paciente (TFG, mL/min): dose de carboplatina (mg) = AUC alvo (mg.min/mL) x (GFR +25), como descrito em National Comprehensive Cancer Network®
(NCCN) Chemotherapy Order Templates Appendix B as updated Fe- bruary 2018.
[00506] Quando no presente documento utilizado, o termo "citocina" refere-se genericamente a proteínas liberadas por uma população de células que agem em outra célula como mediadores intercelulares ou têm um efeito autócrino nas células que produzem as proteínas. Exemplos de tais citocinas incluem linfocinas, monocinas; interleucinas ("ILs"), tais como IL-1, IL-la, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL10, IL-1 1, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17A-F, IL-18 a IL-29 (tal como IL- 23), IL-31, incluindo PROLEUKIN® rIL-2; um fator de necrose de tu- mor, como TNF-a ou TNF-β, TGF-l -3; e outros fatores polipeptídicos incluindo fator inibidor de leucemia ("LIF"), fator neurotrófico ciliar ("CNTF"), citocina tipo CNTF ("CLC"), cardiotrofina ("CT") e ligante de kit ("L").
[00507] Quando no presente documento utilizado, o termo "quimio- cina" refere-se a fatores solúveis (por exemplo, citocinas) que têm a capacidade de induzir seletivamente a quimiotaxia e a ativação de leu- cócitos. Eles da mesma forma ativam processos de angiogênese, in- flamação, cicatrização de feridas e tumorigênese. As quimiocinas de exemplo incluem IL-8, um homólogo humano do quimioatrator de que- ratinócitos de murino (KC).
[00508] Os termos "câncer", "canceroso" ou "maligno" referem-se ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente especificada por crescimento celular desregulado. Exemplos de câncer incluem, porém, não são limitados a carcinoma, linfoma, leucemia, blastoma e sarcoma. Exemplos mais particulares de tais cânceres in- cluem carcinoma de células escamosas, mieloma, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas, gli- oma, linfoma de Hodgkin, linfoma não-Hodgkin, leucemia mieloide aguda (AML), mieloma múltiplo, câncer gastrointestinal (trato), câncer renal, câncer de ovário, câncer de fígado, leucemia linfoblástica, leu- cemia linfocítica, câncer colorretal, câncer endometrial, câncer de rim, câncer de próstata, câncer da tireoide, melanoma, condrossarcoma, neuroblastoma, câncer pancreático, glioblastoma multiforme, câncer cervical, câncer cerebral, câncer de estômago, câncer de bexiga, he- patoma, câncer de mama, carcinoma de cólon e câncer de cabeça e pescoço. Outro exemplo particular de câncer inclui carcinoma de célu- las renais.
[00509] O termo "tratar", quando no presente documento utilizado, a menos que de outra maneira indicado, significa reverter, aliviar, inibir o progresso ou prevenir o distúrbio ou condição a que tal termo se apli- ca, ou um ou mais sintomas de tal distúrbio ou condição.
[00510] Um "paciente" a ser tratado de acordo com esta invenção inclui qualquer animal de sangue quente, tal como, porém, não limita- do a humano, macaco ou outro primata de ordem inferior, cavalo, ca- chorro, coelho, porquinho da índia ou camundongo. Por exemplo, o paciente é humano. Aqueles versados na técnica médica são facilmen- te capazes de identificar pacientes individuais que sofrem de câncer de pulmão de células não pequenas e que necessitam de tratamento.
[00511] Os termos "regime de tratamento", "protocolo de dosagem" e regime de dosagem são usados indistintamente para se referir à do- se e ao tempo de administração de cada agente terapêutico em uma combinação da invenção.
[00512] "Melhorar" significa uma diminuição ou melhora de um ou mais sintomas em comparação com a não administração de um trata- mento. “Melhorar” da mesma forma inclui encurtamento ou redução na duração de um sintoma.
[00513] "Tumor", como se aplica a um indivíduo diagnosticado com, ou suspeito de ter, um câncer refere-se a uma neoplasia maligna ou potencialmente maligna ou massa de tecido de qualquer tamanho e inclui tumores primários e neoplasias secundárias. Um tumor sólido é um crescimento anormal ou massa de tecido que geralmente não con- tém cistos ou áreas líquidas. Diferentes tipos de tumores sólidos são nomeados de acordo com o tipo de células que os formam. Exemplos de tumores sólidos são sarcomas, carcinomas e linfomas. As leucemi- as (cânceres do sangue) geralmente não formam tumores sólidos (Na- tional Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms).
[00514] "Carga de tumor", da mesma forma referida como "carga de tumor", refere-se à quantidade total de material de tumor distribuído ao longo de tele corpo. A carga de tumor se refere ao número total de cé- lulas cancerosas ou ao tamanho total do(s) tumor(es), em todo o cor- po, incluindo linfonodos e medula óssea. A carga de tumor pode ser determinada por uma variedade de métodos conhecidos na técnica, tais como, por exemplo medindo-se as dimensões do(s) tumor(es) sob a remoção do indivíduo, por exemplo, usando calibradores, ou en- quanto no corpo usando técnicas de imagem, por exemplo, ultrassom, cintilografia óssea, tomografia computadorizada (CT) ou imagem de ressonância magnética (MRI).
[00515] O termo "tamanho do tumor" refere-se ao tamanho total do tumor que pode ser medido como o comprimento e a largura de um tumor. O tamanho do tumor pode ser determinado por uma variedade de métodos conhecidos na técnica, tais como, por exemplo medindo- se as dimensões do(s) tumor(es) após a remoção do indivíduo, por exemplo, usando calibradores, ou enquanto no corpo usando técnicas de imagem, por exemplo, cintilografia óssea, ultrassom, TC ou MRI.
[00516] "Resposta individual" ou "resposta" pode ser avaliada usando qualquer ponto final que indique um benefício para o indivíduo, incluindo, sem limitação, (1) inibição, até certo ponto, da progressão da doença (por exemplo, progressão do câncer), incluindo desacele- rando ou parando completamente; (2) uma redução no tamanho do tumor; (3) inibição (isto é, redução, desaceleração ou parada comple- ta) da infiltração de células cancerosas em órgãos periféricos e/ou te- cidos adjacentes; (4) inibição (isto é, redução, desaceleração ou para- da completa) de metástases; (5) alívio, até certo ponto, de um ou mais sintomas associados à doença ou distúrbio (por exemplo, câncer); (6) aumento ou extensão do tempo de sobrevida, incluindo sobrevida total e sobrevida livre de progressão; e/ou (7) diminuição da mortalidade em um determinado ponto do tempo após o tratamento.
[00517] Uma "resposta eficaz" de um paciente ou "capacidade de resposta" de um paciente ao tratamento com um medicamento e for- mulações similares refere-se ao benefício clínico ou terapêutico confe- rido a um paciente em risco de, ou sofrendo de uma doença ou distúr- bio, tal como o câncer. Em uma modalidade, tal benefício inclui qual- quer um ou mais de: estender a sobrevida (incluindo sobrevida total e/ou sobrevida livre de progressão); resultando em uma resposta obje- tiva (incluindo uma resposta completa ou uma resposta parcial); ou melhorar os sinais ou sintomas do câncer.
[00518] Uma "resposta objetiva" refere-se a uma resposta mensu- rável, incluindo resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR). Em algumas modalidades, a "taxa de resposta objetiva (ORR)" refere-se à soma da taxa de resposta completa (CR) e taxa de resposta parcial (PR).
[00519] "Resposta completa" ou "CR", quando no presente docu- mento utilizado, significa o desaparecimento de todos os sinais de câncer (por exemplo, desaparecimento de todas as lesões alvo) em resposta ao tratamento. Isso nem sempre significa que o câncer foi curado.
[00520] Quando no presente documento utilizado, "resposta parcial" ou "PR" refere-se a uma diminuição no tamanho de um ou mais tumo- res ou lesões, ou na extensão do câncer no corpo, em resposta ao tra-
tamento. Por exemplo, em algumas modalidades, PR refere-se a pelo menos uma diminuição de 30% na soma dos diâmetros mais longos (SLD) de lesões alvo, tomando como referência o SLD de linha de re- ferência.
[00521] "Resposta prolongada" refere-se ao efeito prolongado na redução do crescimento do tumor após a cessação de um tratamento. Por exemplo, o tamanho do tumor pode ser do mesmo tamanho ou menor em comparação com o tamanho no início da fase de adminis- tração do medicamento. Em algumas modalidades, a resposta prolon- gada tem uma duração de pelo menos a mesma que a duração do tra- tamento, pelo menos 1,5x, 2x, 2,5x ou 3x a duração do tratamento ou mais.
[00522] Quando no presente documento utilizado, "sobrevivência livre de progressão" (PFS) refere-se ao período de tempo durante e após o tratamento durante o qual a doença a ser tratada (por exemplo, câncer) não piora. A sobrevida livre de progressão pode incluir a quan- tidade de tempo que os pacientes experimentaram uma resposta com- pleta ou uma resposta parcial, bem como a quantidade de tempo que os pacientes experimentaram a doença estável.
[00523] Em algumas modalidades, o efeito anticâncer do método de tratamento do câncer, incluindo "resposta objetiva", "resposta comple- ta", "resposta parcial", "doença progressiva", "doença estável", "sobre- vida livre de progressão", "duração de resposta", quando no presente documento utilizado, são como definidos e avaliados pelos investiga- dores usando RECIST v1.1 (Eisenhauer e outro, Eur J of Cancer 2009; 45 (2): 228-47) em pacientes com tumores sólidos localmente avança- dos ou metastáticos diferentes de CRPC metastático e RECIST v1.1 e PCWG3 (Scher e outro, J Clin Oncol 20 de abril de 2016; 34 (12):1402-18) em pacientes com CRPC metastático. As descrições de Eisenhauer e outro, Eur J of Cancer 2009; 45 (2): 228-47 e Scher e outro, J Clin Oncol 20 de abril de 2016; 34 (12): 1402-18 estão no pre- sente documento incorporados por referências em sua totalidade.
[00524] Em algumas modalidades, o efeito anticâncer do tratamen- to, incluindo "resposta objetiva relacionada ao sistema imunológico" (irOR), "resposta completa relacionada ao sistema imunológico" (irCR), "resposta parcial relacionada ao sistema imunológico" (irCR), "doença progressiva relacionada a imunidade "(irPD)," doença estável relacio- nada ao sistema imunológico "(irSD)," sobrevivência livre de progres- são relacionada ao sistema imunológico "(irPFS)," duração relacionada ao sistema imunológico de resposta ”(irDR), quando no presente do- cumento utilizado, são como definidos e avaliados pelos critérios de resposta relacionados ao sistema imunológico (irRECIST, Nishino e outro J Immunother Cancer 2014; 2:17) para pacientes com tumores sólidos localmente avançados ou metastáticos diferentes dos pacien- tes com CRPC metastático. A descrição de Nishino e outro J Immu- nother Cancer 2014; 2:17 está no presente documento incorporado por referência em sua totalidade.
[00525] Quando no presente documento utilizado, "sobrevivência total" (OS) se refere à porcentagem de indivíduos em um grupo que provavelmente estarão vivos após um determinado período de tempo.
[00526] Por "prolongamento da sobrevida" entende-se o aumento da sobrevida total ou livre de progressão em um paciente tratado em relação a um paciente não tratado (isto é, em relação a um paciente não tratado com o medicamento).
[00527] Quando no presente documento utilizado, "toxicidade rela- cionada ao fármaco", "reações relacionadas à infusão" e "eventos ad- versos relacionados ao sistema imunológico" ("irAE"), e a gravidade ou graus dos mesmos são exemplificados e definidos em National Cancer Institute’s Common Terminology Criteria for Adverse Events v 4.0 (NCI CTCAE v 4.0).
[00528] Quando no presente documento utilizado, "em combinação com" ou "em conjunto com" refere-se à administração de uma modali- dade de tratamento além de outra modalidade de tratamento. Como tal, "em combinação com" ou "em conjunto com" refere-se à adminis- tração de uma modalidade de tratamento antes, durante ou após a administração da outra modalidade de tratamento ao indivíduo.
[00529] Uma "quantidade de dose baixa", quando no presente do- cumento utilizada, refere-se a uma quantidade ou dose de uma subs- tância, agente, composto ou composição, que é inferior à quantidade ou dose normalmente usada em um ambiente clínico.
[00530] O termo "avançado", quando no presente documento utili- zado, no que se refere a tumores sólidos, inclui doença localmente avançada (não metastática) e doença metastática. Tumores sólidos localmente avançados, que podem ou não podem ser tratados com intenção curativa, e doença metastática, que não pode ser tratada com intenção curativa, estão incluídos dentro do escopo de "tumores sóli- dos avançados, quando usado na presente invenção. Aqueles versa- dos na técnica serão capazes de reconhecer e diagnosticar tumores sólidos avançados em um paciente.
[00531] "Duração da resposta" para os propósitos da presente in- venção significa o tempo desde a documentação da inibição do cres- cimento do modelo de tumor devido ao tratamento com fármaco até o tempo de aquisição de uma taxa de crescimento restaurada similar à taxa de crescimento de pré-tratamento
[00532] O termo "aditivo" é usado para significar que o resultado da combinação de dois compostos, componentes ou agentes alvejados não é maior do que a soma de cada composto, componente ou agente alvejado individualmente. O termo "aditivo" significa que não há melho- ra na condição de doença ou distúrbio sendo tratado em relação ao uso de cada composto, componente ou agente alvejado individualmen-
te.
[00533] Os termos "sinergia" ou "sinergístico" são usados para sig- nificar que o efeito da combinação de dois compostos, componentes ou agentes alvejados é maior do que a soma do efeito que cada agen- te fornece sozinho. Os termos "sinergia" ou "sinergística" significam que há uma melhora na condição de doença ou distúrbio sendo trata- do, em relação ao uso separado de cada composto, componente ou agente alvejado individualmente. Esta melhora na condição da doença ou distúrbio a ser tratado é um "efeito sinergístico" ou "efeito terapêuti- co sinergístico". Uma "quantidade sinergística", "quantidade sinergísti- ca eficaz" ou "quantidade sinergística terapeuticamente eficaz" é uma quantidade de um composto, componente ou agente alvejado quando administrado em combinação que resulta em um efeito sinergístico, como "sinergístico" é definido no presente documento. Determinando uma interação sinergística entre dois ou mais componentes, a faixa ideal para o efeito e faixas de dose absoluta de cada componente para o efeito podem ser medidos definitivamente pela administração dos componentes ao longo de diferentes faixas de relação p/p (peso por peso) e doses para pacientes com necessidade de tratamento. No en- tanto, a observação de sinergia em modelos in vitro ou modelos in vivo pode ser preditiva do efeito em humanos e outras espécies e modelos in vitro ou modelos in vivo existem, como descrito no presente docu- mento, para medir um efeito sinergístico e os resultados de tais estu- dos pode da mesma forma ser usado para prever a dose eficaz e fai- xas de concentração plasmática e as doses absolutas e as concentra- ções plasmáticas necessárias em humanos e outras espécies pela aplicação de métodos farmacocinéticos/farmacodinâmicos. Equivalentes
[00534] A descrição anterior e os seguintes Exemplos detalham cer- tas modalidades específicas da descrição e descrevem o melhor modo contemplado pelos inventores. Será apreciado, no entanto, que não importa o quão detalhado o anterior possa aparecer no texto, a descri- ção pode ser praticada de muitas maneiras e a descrição deve ser in- terpretada de acordo com as reivindicações anexas e quaisquer equi- valentes das mesmas.
[00535] Embora os ensinamentos descritos tenham sido descritos com referência a várias aplicações, métodos, kits e composições, será apreciado que várias mudanças e modificações podem ser feitas sem se afastar dos ensinamentos no presente documento e da descrição reivindicada abaixo. Os exemplos a seguir são fornecidos para ilustrar melhor os ensinamentos descritos e não se destinam a limitar o esco- po dos ensinamentos apresentados no presente documento. Embora os presentes ensinamentos tenham sido descritos em termos dessas modalidades exemplares, o técnico versado facilmente compreenderá que numerosas variações e modificações dessas modalidades exem- plares são possíveis sem experimentação indevida. Todas essas vari- ações e modificações estão dentro do escopo dos ensinamentos atu- ais.
[00536] Todas as referências citadas no presente documento, inclu- indo patentes, pedidos de patentes, artigos, livros de texto e similar, e as referências citadas no presente documento, na medida em que ain- da não estejam, estão no presente documento incorporadas por refe- rência em sua totalidade. No caso de um ou mais da literatura incorpo- rada e materiais similares diferirem ou contradizerem este pedido, in- cluindo, porém, não limitado a termos definidos, uso de termos, técni- cas descritas ou semelhantes, este pedido controla. Técnicas Gerais
[00537] Deve ser entendido que esta invenção não está limitada a métodos sintéticos específicos de fabricação que podem, obviamente, variar. A menos que de outra maneira definido no presente documen-
to, os termos científicos e técnicos usados em conexão com a presen- te invenção devem ter os significados que são comumente entendidos por aqueles versados na técnica. Além disso, a menos que de outra maneira requerido pelo contexto, os termos singulares devem incluir pluralidades e os termos plurais devem incluir o singular. Geralmente, as nomenclaturas usadas em conexão com, e técnicas de cultura de células e tecidos, biologia molecular, imunologia, microbiologia, gené- ticas e proteína e química de ácido nucleico e hibridização descritas no presente documento são aquelas bem conhecidas e comumente usa- das na técnica.
[00538] A prática da presente invenção irá usar, a menos que de outra maneira indicado, técnicas convencionais de biologia molecular (incluindo técnicas recombinantes), microbiologia, biologia celular, bio- química e imunologia, que estão dentro da experiência na técnica. Tais técnicas são totalmente explicadas na literatura, tais como Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook e outro., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell e Tissue Culture (J.P. Mather e P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell e Tis- sue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, e D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley e Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir e C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller e M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Mo- lecular Biology (F.M. Ausubel e outro., eds., 1987); PCR: The Poly- merase Chain Reaction, (Mullis e outro., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan e outro., eds., 1991); Sambrook e Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Ausubel e outro., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002); Harlow e Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Coligan e outro., Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley e Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway e P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd e C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using anti- bodies: a laboratory manual (E. Harlow e D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti e J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).
[00539] As reações enzimáticas e técnicas de purificação são reali- zadas de acordo com as especificações do fabricante, como comu- mente realizado na técnica ou como descrito no presente documento. As nomenclaturas usadas em conexão com, e os procedimentos de laboratório e técnicas de, química analítica, bioquímica, imunologia, biologia molecular, química orgânica sintética e química medicinal e farmacêutica descritos no presente documento são aqueles bem co- nhecidos e comumente usados na técnica. As técnicas padrões são usadas para sínteses químicas, análises químicas, preparação farma- cêutica, formulação e distribuição e tratamento de pacientes. Depósitos Biológicos
[00540] Os materiais representativos da presente invenção foram depositados na American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, EUA, em 4 de abril de 2018. O vetor GDF15_001-VH tendo o Nº de Acesso ATCC PTA-125038 com- preende um plasmídeo compreendendo uma inserção de DNA que codifica a região variável de cadeia pesada de anticorpo GDF15_001 e o vetor GDF15_001-VL com o Nº de Acesso ATCC PTA-125039 com- preende um plasmídeo compreendendo uma inserção de DNA que codifica a região variável de cadeia leve de anticorpo GDF15_001. Os depósitos foram feitos de acordo com as disposições do Tratado de Budapeste sobre o International Recognition of the Deposit of Microor- ganisms for the Purpose of Patent Procedure and Regulations (Tratado de Budapeste). Isso garante a manutenção de uma cultura viável do depósito por 30 anos a partir da data do depósito. O depósito será dis- ponibilizado por ATCC sob os termos do Tratado de Budapeste e su- jeito a um acordo entre a Pfizer Inc. e a ATCC, que garante a disponi- bilidade permanente e irrestrita do produto da cultura do depósito ao público sob emissão da Patente U.S. pertinente ou aberta ao público de qualquer pedido de patente U.S. ou estrangeira, o que ocorrer pri- meiro, e garante a disponibilidade do produto para um determinado pelo U.S. Commissioner of Patents and Trademarks intitulado no pre- sente documento de acordo com 35 U.S.C. Seção 122 e as regras de Commissioner em conformidade com a mesma (incluindo 37 C.F.R. Seção 1.14 com referência particular a 886 OG 638).
[00541] O cessionário do presente pedido concordou que se uma cultura dos materiais depositados morrer ou ser perdida ou destruída quando cultivada sob condições adequadas, os materiais serão facil- mente substituídos mediante notificação por outro igual. A disponibili- dade do material depositado não deve ser interpretada como uma li- cença para praticar a invenção em violação dos direitos concedidos sob a autoridade de qualquer governo de acordo com suas leis de pa- tentes. Exemplos Exemplo 1: Anticorpos Anti-GDF15
[00542] Um painel de anticorpos (Veja Tabelas 2 e 5 e Figura 29) foi gerado e comparado através de uma faixa de ensaios de ligação e biofísicos.
[00543] Os anticorpos anti-GDF15 da presente invenção foram ana- lisados com base em suas sequências de aminoácidos e na presença de "pontos quentes" nas regiões de CDR (por exemplo, glicosilação potencial, oxidação e sítios de degradação química). A análise da se- quência de ponto quente dos anticorpos anti-GDF15 é representada na Tabela 5 abaixo. GDF15_005, GDF15_006, GDF15_007, GDF15_008, GDF15_009 e GDF15_200 demonstraram a presença de sítios de glicosilação ligados a N na região de CDR e não foram sele- cionados para outros estudos. Tabela 5. Análise de sequência de anticorpos anti-GDF15 Anticorpo HCDR1 HCDR2 HCDR3 LCDR1 LCDR2 LCDR3 GDF15_0 GYTFSSYNID GINPIFGTAFYNQKFQG EAITTVGAMDH RTSQSVHNYLA DASTRAD QQFWSWPWT 01 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:165) (SEQ ID NO:52) (SEQ ID NO:95) (SEQ ID (SEQ ID NO:9) NO:28) GDF15- GYTFSSYNID GINPIFGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDP RASQNVHNYLA DASNRAD QQFWSWPWT 002 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:126) (SEQ ID NO:160) (SEQ ID NO:157) (SEQ ID (SEQ ID NO:9) NO:114) GDF15- GYTFTSYNID QINPNNGLAFYNQKFQG EQITTVGAMDY RASQSLSSYLA DAKNRAD QQFSSDPYT 003 (SEQ ID NO:153) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:154) (SEQ ID NO:150) (SEQ ID (SEQ ID NO:38) NO:108) GDF15- GYTFSSYNID QINPNNGLANYAQKFQG EAITTIGAMDY RTSESVHSYLA DASTRAD QQFWSDPYT 004 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:146) (SEQ ID NO:147) (SEQ ID NO:88) (SEQ ID (SEQ ID NO:48) NO:28) GDF15- GYTFSDYNMD GINPNNGTAFYAQKFQG EAITTVGAMDQ RTSESVSSYLA DAKTRAD QQFWSWPWT 005 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:141) (SEQ ID NO:119) (SEQ ID NO:138) (SEQ ID (SEQ ID NO:9) NO:37) GDF15- GYTFTDYNIS QINPNNGLAFYAQKFQG EFITTVGAMDY RTSQSVSNYLA DAKNRAT QQFWNDPWT 006 (SEQ ID NO:133) (SEQ ID NO:134) (SEQ ID NO:135) (SEQ ID NO:129) (SEQ ID (SEQ ID NO:102) NO:130) GDF15- GYTFSDYNIS GINPIFGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RTSENVHSYLA DASTLAT QQFWSWPWT 007 (SEQ ID NO:125) (SEQ ID NO:126) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:46) (SEQ ID (SEQ ID NO:9) NO:122) GDF15- GYTFTSYNIS QINPNNGLIFFAQKFQG EAITTVGAMDQ RTSQNVHSYLA DASNRAD QQFWNDPYT 008 (SEQ ID NO:117) (SEQ ID NO:118) (SEQ ID NO:119) (SEQ ID NO:27) (SEQ ID (SEQ ID NO:63) NO:114) GDF15- GYTFSSYNIS QINPNNGLAFYNQKFQG EAITTVGAMEY RTSQNVHSYLA DAKNRAD QQFWSDPYT 009 (SEQ ID NO:17) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:111) (SEQ ID NO:27) (SEQ ID (SEQ ID NO:48) NO:108) GDF15- GYTFSDYNID GINPNNGLAFFNQKFQG EAITTVGAMDY RTSQSLHSYLA DASNRAT QQFWNDPWT 010 (SEQ ID NO:41) (SEQ ID NO:105) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:101) (SEQ ID (SEQ ID NO:102) NO:8) GDF15- GYTFSDYNMD QINPIFGLAFYAQKFQG EVITTVGAMDY RTSQSVHNYLA DASTRAD QQFSSDPYT 012 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:98) (SEQ ID NO:43) (SEQ ID NO:95) (SEQ ID (SEQ ID NO:38) NO:28) GDF15- GYTFSDYNMD GINPNNGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RTSESVHSYLA DASNRAT QQFWNWPWT 013 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:92) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:88) (SEQ ID (SEQ ID NO:89) NO:8) GDF15- GYTFSSYNID QINPINGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RTSQNVHNYLA DASNRAT QQFWSDPYT 014 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:85) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:82) (SEQ ID (SEQ ID NO:48) NO:8) GDF15- GYTFSDYNMD QINPNNGLAFYNQKFQG EAITTVGATDY RTSQNVHSYLA DASNLAD QQFSNDPWT
015 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:79) (SEQ ID NO:27) (SEQ ID (SEQ ID NO:76) NO:47) GDF15- GYTFTDYNID QINPNNGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RTSQSVHSYLA DAKTRAT QQFSSDPYT 017 (SEQ ID NO:66) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:36) (SEQ ID (SEQ ID NO:38) NO:70) GDF15- GYTFTDYNID QINPNNGLIFYNQKFQG EAITTVGAMDY RASQNVHSYLA DASTRAD QQFWNDPYT 018 (SEQ ID NO:66) (SEQ ID NO:67) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:62) (SEQ ID (SEQ ID NO:63) NO:28) GDF15- GYTFSDYNMD QINPNNGLANYNQKFQG EAITTVGAMDY RASQNLHSYLA DASTRAD QQFWSDPYT 020 (SEQ ID NO:58) (SEQ ID NO:59) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:55) (SEQ ID (SEQ ID NO:48) NO:28) GDF15- GYTFSSYNID GINPINGLIFFNQKFQG EAITTVGAMDH RTSENVHSYLA DASNLAD QQFWSDPYT 021 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:51) (SEQ ID NO:52) (SEQ ID NO:46) (SEQ ID (SEQ ID NO:48) NO:47) GDF15- GYTFSDYNID QINPNNGLIFFNQKFQG EVITTVGAMDY RTSQSVHSYLA DAKTRAD QQFSSDPYT 022 (SEQ ID NO:41) (SEQ ID NO:42) (SEQ ID NO:43) (SEQ ID NO:36) (SEQ ID (SEQ ID NO:38) NO:37) GDF15- GYTFSSYNID QINPNNGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RTSQNVHSYLA DASTRAD QQFWSDPWT 100 (SEQ ID NO:32) (SEQ ID NO:33) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:27) (SEQ ID (SEQ ID NO:29) NO:28) GDF15- GYTFSSYNIS GINPINGLAFYNQKFQG EAITTVGAMDY RASQSVHSYLA DASNRAT QQFWSWPWT 200 (SEQ ID NO:17) (SEQ ID NO:18) (SEQ ID NO:19) (SEQ ID NO:7) (SEQ ID (SEQ ID NO:9) NO:8) Sítios de responsabilidade de sequência potencial (por exemplo, de- samidação: NG, isomerização: DG, clivagem: DP) estão sublinhados também. Exemplo 2: Propriedades de Ligação dos Anticorpos Anti-GDF15: Atividade de Ligação a GDF15 Humano, de Macacos Cinomolgos e de Murino por SPR
[00544] A afinidade de ligação do anticorpo GDF15_001 (compre- endendo um VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166 e um VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163) para GDF15 humano, de cino e murino foi determi- nada usando um instrumento BIAcore T200 (GE Healthcare) a 37°C com uma taxa de coleta de 10 Hz. Fc de camundongo-GDF15 humano (Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15; SEQ ID NO:2), Fc de camundongo- GDF15 de camundongo (Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15; SEQ ID NO:5) e Fc de camundongo-GDF15 de macacos cinomolgos (MuG1Fc_Fc_Fxa ID NO 4 SEQ GDF15: SEQxa 4 SEQ15 GDF15;) foram capturados em três células de fluxo diferentes de uma superfície chip sensor CM4 (número de catálogo BR100534, GE Healthcare) usando o Kit de captura de anticorpo de camundongo (BR100838, GE Healthcare) de acordo com o protocolo do fabricante. O tampão fluente e de amostra foi HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, 0,05% P-20 (HBS-EP+). Os níveis de captura finais de Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 e Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 foram 40 unidades de ressonância (RU), 32 RU e 25 RU, respectivamente. A célula de fluxo 1 foi usada como uma célula de fluxo de referência. Uma série de diluição dupla de GDF15_001 com concentrações variando de 10nM a 0,625nM foi inje- tada sobre a superfície do sensor por 120 segundos. A dissociação foi monitorada por 2,8 horas e a superfície foi regenerada com 10 mM de glicina pH 1,7. As afinidades de ligação e as constantes de taxa foram determinadas para GDF15 de murino e macaco cinomolgo ajustando os dados de sensorgrama resultantes a um modelo 1:1 Langmuir no software de avaliação BIAcore T200 versão 2.0 (GE Healthcare). Os valores de afinidade foram determinados como mostrado na Tabela 6 abaixo.
[00545] As afinidades de ligação de vários clones de anticorpos de ligação de GDF15 a Fc de camundongo-GDF15 humano foram da mesma forma determinadas usando a metodologia descrita no presen- te documento no Exemplo 2 e são mostradas na Tabela 6 abaixo. To- dos os clones testados em formato bivalente demonstraram valor de KD aparente abaixo de 150 pM, sugerindo que eles são ligantes fortes para GDF15 humano. Além disso, a ligação do clone GDF15_001 ao macaco cinomolgo e GDF15 de camundongo foi medida usando o en- saio BIAcore mencionado acima (Tabela 7). O clone GDF15_001 exibe forte ligação a GDF-15 de macaco cinomolgo (KD aparente 8,28 pM) e mantém a ligação a GDF15 de camundongo (KD aparente 142,3 pM), tornando o clone GDF15_001 adequado para estudos pré-clínicos em ambas as espécies.
Tabela 6. Dados cinéticos BIAcore de ligação de clones de anticorpo a GDF15 humano Ligante Analisado Ka (1/Ms) KD (1/s) T1/2 min Rmax %Chi2/Rma KD Aparente (RU) x (pM) GDF15_001 1,69E+06 9,22E-06 1252,8 23,2 1,2 <10 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_001 2,03E+06 6,25E-06 1848 70,6 1 <10 GDF15 GDF15_001 2,18E+06 4,78E-06 2417,3 64,8 0,05 <10 Avg 1,97E+06 6,75E-06 <10 GDF15_003 2,64E+06 7,22E-05 160,04 23,91 0,133 27,4 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_003 3,43E+06 9,19E-05 125,73 17,73 2,51 26,8 GDF15 Avg 3,03E+06 8,20E-05 27,1 ± 0,3 GDF15_004 2,22E+06 7,14E-05 161,86 45,77 0,291 32,2 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu 1,96E+06 8,20E-05 140,85 37,03 0,51 41,9 GDF15 Avg 2,09E+06 7,67E-05 37 ± 4,8 GDF15_010 1,31E+06 1,47E-05 783,58 34,1 1,302 11,3 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_010 8,85E+05 1,78E-05 649,24 33,33 1,287 20,1 GDF15 Avg 1,10E+06 1,63E-05 15,7 ± 4,4 GDF15_013 2,42E+06 6,66E-05 173,35 33,56 1,54 27,5 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_013 7,30E+06 7,51E-05 153,88 25,04 0,57 10,3 GDF15 Avg 4,86E+06 7,08E-05 18,0 ± 8,6 GDF15_014 1,88E+06 1,79E-05 644,89 29,2 0,13 <10 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_014 1,90E+06 1,48E-05 779,88 23,53 0,13 <10 GDF15 Avg 1,89E+06 1,64E-05 <10 GDF15_015 1,67E+06 9,93E-05 116,28 23,28 0,42 59,4 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_015 1,81E+06 1,04E-04 111,59 17,68 0,49 57,3 GDF15 Avg 1,74E+06 1,01E-04 58,4 ± 1,1 GDF15_017 3,24E+06 8,66E-05 133,39 26,35 0,12 26,7 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_017 1,90E+06 8,18E-015 141,22 23,1 0,16 43 GDF15 Avg 2,57E+06 8,42E-05 34,9 ± 8,2 GDF15_020 9,72E+05 9,46E-05 122,08 22,23 0,1 97,4 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_020 6,86E+05 1,13E-04 102,3 21,57 0,17 165 GDF15 Avg 8,29E+05 1,04E-04 131,2 ± 33,8 GDF15_021 2,05E+06 2,91E-04 39,64 28,58 0,36 142 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_021 2,14E+06 3,52E-04 32,84 22,75 0,27 165 GDF15 Avg 2,09E+06 3,22E-04 153,5 ± 11,5 GDF15_022 1,34E+06 1,77E-05 654,39 30,58 0,26 13,2 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_022 8,13E+05 1,45E-05 795,45 38,96 0,33 17,9 GDF15 Avg 1,08E+06 1,61E-05 15,6 ± 2,4 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_0297 5,54E+06 1,09E-05 1060,61 52,25 0,36 <10 GDF15 GDF15_0297 5,50E+06 1,29E-05 894,66 53,67 0,39 <10 Avg 5,52E+06 1,19E-05 <10 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_0301 3,36E+06 1,04E-06 11105,77 58,42 1,16 <10 GDF15 GDF15_0301 5,58E+06 7,08E-06 1632,05 46,84 0,29 <10 GDF15_0301 5,22E+06 1,28E-05 903,76 46,75 0,30 <10 Avg 4,72E+06 6,97E-06 <10 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_0470 1,20E+07 5,21E-05 221,86 43,46 0,17 <10 GDF15 GDF15_0470 1,30E+07 4,30E-05 268,36 39,94 0,22 <10 Avg 1,25E+07 4,76E-05 <10
Tabela 7. Dados cinéticos BIAcore de GDF15_001 para GDF15 hu- mano, de murino e cino Ligante Analisado Ka (1/Ms) KD (1/s) T1/2 min Rmax %Chi2/Rma KD Aparente (RU) x (pM) GDF15_001 1,69E+06 9,22E-06 1252,8 23,2 1,2 <10 Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15_001 2,03E+06 6,25E-06 1848 70,6 1 <10 GDF15 GDF15_001 2,18E+06 4,78E-06 2417,3 64,8 0,05 <10 Avg 1,97E+06 6,75E-06 <10
GDF15_001 2,55E+06 2,92E-04 39,6 86,7 1,5 114,0 Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15_001 2,46E+06 4,31E-04 26,8 58,9 1,1 175,0 GDF15 GDF15_001 2,51E+06 3,47E-04 33,3 54,0 1,5 138,0 Avg 2,51E+06 3,56E-04 142,3 ± 30,7 GDF15_001 1,47E+06 1,30E-05 886,4 96,0 0,89 8,86 Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15_001 1,85E+06 1,24E-05 928,5 49,6 0,28 6,71 GDF15 GDF15_001 1,12E+06 1,03E-05 1119,2 76,50 0,07 9,26 Avg 1,48E+06 1,19E-05 8,28 ± 1,37 Exemplo 3: Propriedades de Ligação dos Anticorpos Anti-GDF15: Atividade de Ligação do Anticorpo anti-GDF15 Monomérico para GDF15 Humano, de Macaco Cinomolgo e Murino por SPR
[00546] Para entender o valor de KD, sem o efeito de avidez, da ligação de GDF15_001 a GDF15, o Fc-Fab monomérico foi produzido e testado no mesmo ensaio usado no Exemplo 2. A afinidade de liga- ção de GDF15_001 monomérico a GDF15 humano, de cino e murino foi determinada usando um instrumento BIAcore T200 (GE Healthcare) a 37°C com uma taxa de coleta de 10 Hz. Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 e Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 foram capturados em três células de fluxo diferentes de uma superfície de chip sensor CM4 (número de catálogo BR100534, GE Healthcare) usando o Kit de captura de anticorpo de camundongo (BR100838, GE Healthcare) de acordo com o protocolo do fabricante. O tampão fluente e de amostra foi HEPES 10 mM pH 7,4, NaCl 0,15 M, EDTA 3 mM, 0,05% P-20 (HBS-EP+). Os níveis de captura finais de Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15, Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15 e Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15 foram 19 unidades de ressonância (RU), 22 RU e 19 RU, respectivamente. A célula de fluxo 1 foi usada como uma célula de fluxo de referência. Uma série de diluição dupla de GDF15_001 monomérico com concentrações variando de 10nM a 1,25nM foi injetada sobre a superfície do sensor por 120 segundos. A dissociação foi monitorada por 1200 segundos e a superfície foi rege- nerada com 10 mM de glicina pH 1,7. As afinidades de ligação e as constantes de taxa foram determinadas ajustando os dados do sen- sorgrama resultantes a um modelo Langmuir 1:1 no software de avali- ação BIAcore T200 versão 2,0 (GE Healthcare). O clone monomérico
GDF15_001 demonstrou forte ligação ao GDF15 humano (KD 21,3 pM) e de macaco cinomolgo (KD 62,0 pM) com ligação mais fraca ao GDF15 de murino (KD 1965,0 pM), como mostrado na Tabela 8 abai- xo. Tabela 8. Ligante Analisado Ka (1/Ms) KD (1/s) T1/2 min Rmax %Chi2/Rm KD Aparente (RU) ax (pM) CH23LS- 1,52E+06 2,25E-05 512,65 29,94 0,655 14,9 Mu GDF15_001 IgG1Fc_Fxa_ CH23LS- 1,66E+06 4,58E-05 252,24 24,61 1,601 27,6 Hu GDF15 GDF15_001 Avg 1,59E+06 3,42E-05 21,3 ± 6,4 CH23LS- 1,62E+06 3,41E-03 3,39 32,44 0,364 2110 GDF15_001 Mu CH23LS- 1,70E+06 3,10E-03 3,73 26,86 0,521 1820 IgG1Fc_Fxa_ GDF15_001 Mu GDF15 Avg 1,66E+06 3,26E-03 1965,0 ± 145,0 Mu GDF15_001 1,63E+06 7,48E-05 154,33 29,65 0,661 45,8 IgG1Fc_Fxa_ GDF15_001 1,20E+06 9,39E-05 123,07 30,11 0,661 78,2 Cyno GDF15 Avg 1,42E+06 8,43E-05 62,0 ± 16,2 Exemplo 4: Propriedades de ligação dos anticorpos anti-GDF15: especificidade de ligação de GDF15_001 para GDF15 humano
[00547] Para avaliar a especificidade de ligação de GDF15_001 ao GDF15 humano, a ligação de GDF15_001 a membros adicionais da família TGFβ foi testada. A análise foi realizada em um instrumen- to°Ctet Red.
[00548] Um OctetRED 384 (ForteBio, Menlo Park, CA) foi usado para avaliar a ligação fora do alvo de GDF15_001 monomérico (CH23LS- GBT-GDF15_001) a dez membros da família TGFβ incluin- do GDNF humano (R&D, 212-GD/CF), Inibina A humana (R&D, 8506- AB/CF), Activina B humana (R&D, 659-AB/CF) TGFβ-1 humano (R&D, 240-B/CF) BMP2 humano (R&D, 355-BM/CF), BMP3b humano (R&D, 1543-BP/CF), BMP6 humano (R&D, 507-BP/CF), BMP9 humano (R&D, 3209-BP/CF), BMP11 humano (R&D, 1958-CD/CF), GDF8 hu- mano (Pfizer, 41075-201) e controlar GDF15 humano (Mu
IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15). Os membros da família TGFβ foram diluídos para 10ug/ml em acetato de sódio 10 mM pH 4,5 e amina acoplada a biossensores AR2G (catálogo # 18-5092, ForteBio) de acordo com as instruções do fabricante. O GDF15_001 monomérico foi diluído para 200 nM em tampão cinético (catálogo # 18-5032 ForteBio). Os ensaios de octeto foram conduzidos em temperatura ambiente com um tempo de associação de 300 segundos e um tempo de dissociação de 180 segundos. Os dados foram duplamente referenciados (Myszka, D., J. Mol. Recognit 1999; 279-284) e analisados com o software Octet Data Analysis versão 8,1 (ForteBio).
[00549] GDF15_001 ligado a GDF15 humano como esperado. Ne- nhuma ligação a outros membros da família TGFβ (GDF-11, BMP-9, GDF-8, BMP-2, BMP-6, TGFß-1, ativina-B, inibina-A) foi detectada a 200 nM do clone monomérico GDF15_001, demonstrando a alta espe- cificidade de GDF15_001, que não liga-se a esses outros membros da família relacionados. A alta especificidade de GDF15_001 minimiza o risco de ligação fora do alvo e indica que GDF15_001 é um potencial novo e útil terapêutico humano. Exemplo 5: Anticorpos anti-GDF15 Impedem a Ligação de GDF15 a GFRAL
[00550] A capacidade de GDF15_001 para evitar a ligação de GDF15 humano ao domínio extracelular de GFRAL foi avaliada em um ensaio de competição. A análise foi realizada usando um instrumento BIAcore T200 (GE Healthcare, Chicago, IL).
[00551] GDF15_001 foi titulado em 10 nM de GDF-15 humano em concentrações que variam de 10 nM a 2,5 nM. As misturas GDF-15, GDF15_001 e controles foram injetadas sobre o domínio extracelular de GFRAL humano que foi imobilizado diretamente em um chip sensor CM4. Inibição dependente da concentração da ligação de GDF15 hu- mano a GFRAL. A ligação de GDF15 humano ao GFRAL ECD huma-
no foi completamente bloqueada por GDF15_001 7,5 nM.
[00552] Estes dados demonstram que GDF15_001 bloqueia a inte- ração entre GDF15 humano e seu receptor cognato, GFRAL, e pode, desse modo, interferir na sinalização de GFRAL. Isso demonstra ainda que GDF15_001 pode ser novo terapêutico potencialmente útil para diminuir uma atividade mediada pela ligação de GDF15 a GFRAL. Exemplo 6: Propriedades Biofísicas dos Anticorpos Anti-GDF15: Estabilidade Térmica
[00553] A estabilidade térmica dos anticorpos anti-GDF15 foi avali- ada por Calorimetria de Varredura Diferencial (DSC). As proteínas fo- ram diluídas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para 0,3 mg/ml em um volume de 400 µl. PBS foi usado como um tampão em branco na célula de referência. PBS continha NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 8,1 mM e KH2PO4 1,47 mM, pH 7,2. As amostras foram dispensadas na bandeija de amostras de um MicroCal VP-Capillary DSC com Autosampler (Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK). As amostras foram equilibradas durante 5 minutos a 10°C e em seguida escaneadas até 110°C em uma taxa de 100°C por hora. Um período de filtragem de 16 segundos foi selecionado. Os dados brutos foram corrigidos na linha de referência e a concentração de proteína foi nor- malizada. Origin Software 7,0 (OriginLab Corporation, Northampton, MA) foi usado para ajustar os dados em um modelo MN2-State com um número apropriado de transições.
[00554] As temperaturas de transição são mostradas nas Figuras 1A, 1B e 1C e estão listadas na Tabela 9. O T m1 representa a tempe- ratura na qual o CH2 do anticorpo está 50% desdobrado. O Tm2 repre- senta a temperatura na qual o Fab do anticorpo está 50% desdobrado. O Tm3 representa a temperatura na qual o CH3 do anticorpo está 50% desdobrado. Todos os clones com temperatura de fusão (T m1) acima de 65°C são designados como clones estáveis, que serão estáveis durante a fabricação e armazenamento. Tabela 9. Temperaturas de transição de anticorpos anti-GDF15. Clone Tm1 (°C) Tm2 (°C) Tm3 (°C) GDF15_001 71,67 ± 0,08 84,30 ± 0,25 88,00 ± 0,04 GDF15_002 71,81 ± 0,06 80,51 ± 1,10 82,51 ± 0,21 GDF15_003 71,67 ± 0,10 83,69 ± 0,37 86,66 ± 0,12 GDF15_004 71,57 ± 0,11 84,94 ± 0,29 88,50 ± 0,07 GDF15_005 71,37 ± 0,14 83,30 ± 0,67 85,79 ± 0,18 GDF15_006 71,40 ± 0,09 84,45 ± 0,26 87,92 ± 0,11 GDF15_007 71,41 ± 0,11 85,14 ± 0,23 89,72 ± 0,07 GDF15_008 71,70 ± 0,14 83,05 ± 0,76 85,33 ± 0,24 GDF15_009 71,35 ± 0,15 85,42 ± 0,31 89,88 ± 0,09 GDF15_010 72,14 ± 0,20 81,18 ± 0,64 84,13 ± 0,19 GDF15_100 71,33 ± 0,17 85,45 ± 0,28 90,02 ± 0,07 GDF15_0297 73,01±0,20 74,45±0,07 80,80±0,07 GDF15_0301 76,14±0,06 77,20±0,04 78,82±0,05 Exemplo 7: Propriedades Biofísicas dos Anticorpos Anti-GDF15: Cromatografia de Exclusão de Tamanho
[00555] Os clones de anticorpos foram analisados por cromatogra- fia de exclusão de tamanho analítica (aSEC). As proteínas foram diluí- das em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para 1,0 mg/ml e analisadas por aSEC em uma coluna YMC-Pack Diol-200, 300 x 8 mm com tampão fluente isocrático contendo fosfato de sódio 20 mM pH 7,2, 400 mM de NaCl. SEC nativo foi usado para determinar as quanti- dades relativas de massa molecular alta (agregado) e anticorpo mo- nomérico intacto. A percentagem do agregado foi calculada como a área do pico da massa molecular elevada dividida pela área do pico total (agregado e monômero) multiplicado por 100. O tempo de reten- ção em minutos foi registado e comparado com um controlo de ensaio. Os clones de anticorpos com tempo de retenção normal e formato de pico de análise de aSEC podem sugerir interações mínimas com resi- na de fase estacionária e hidrofobicidade ideal, estas são característi- cas úteis e indicam que o anticorpo pode ser um terapêutico útil poten- cial.
[00556] O tempo de retenção para cada clone de anticorpo testado é mostrado na Tabela 10. GDF15_002 mostrou tempo de retenção atrasado e formato de pico largo e, portanto, não foi estudado também. Tabela 10. Tempo de retenção aSEC para anticorpos anti-GDF15 Anticorpo Tempo de Retenção aSEC (min) controle mAb 10,40 GDF15_001 10,79 GDF15_002 11,69 GDF15_003 10,22 GDF15_004 10,24 GDF15_005 9,74 GDF15_100 10,30 GDF15_0297 9,96 GDF15_0301 9,91 Exemplo 8: Propriedades Biofísicas dos Anticorpos Anti-GDF15: Estabilidade em pH Baixo
[00557] Uma vez que os anticorpos são purificados por captura de Proteína A e a eluição está em condições de pH baixo, os clones de anticorpo anti-GDF15 foram testados para estabilidade de retenção de pH baixo. O anticorpo a 1,0 mg/ml em PBS, pH 7,2 foi acidificado com glicina pH 3,4 e incubado a 25°C por 5 horas, depois neutralizado com Tris Base e conduzido em aSEC para determinar a quantidade de es- pécies de massa molecular alta (HMMS) e espécies de massa molecu- lar baixa (LMMS), Tabela 11. Todos os clones testados mostram uma quantidade aceitável de aumentos de HMMS (<5%) após desafio de pH baixo. Isso indica que os anticorpos anti-GDF15 permanecerão es- táveis durante os processos de purificação e podem ser terapêuticos potencialmente úteis. Tabela 11. Quantidade de HMMS e LMMS após desafio de pH baixo. GDF15 % de controle % de aumento de HMMS % de controle % de aumento de LMMS % de diminuição de área neutro de acidificado em seguida neutron de acidificado em seguida de pico de monômero HMMS neutralizado LMMS neutralizado acidificado em seguida neutralizado GDF15_001 2,9 -1,5 0 0 -0,4 GDF15_002 3,0 -0,7 0 0 -0,6 GDF15_003 2,0 -0,3 0 0 1,5 GDF15_004 1,9 -0,3 0 0 1,4 GDF15_005 6,4 -0,6 0 0 1,3 GDF15_100 5,5 -0,3 0 0 3,0
Exemplo 9: Propriedades Biofísicas dos Anticorpos Anti-GDF15: Viscosidade
[00558] A viscosidade do GDF15_001 foi analisada pelo instrumen- to Anton Paar. GDF15_001 foi concentrado em 215 mg/mL usando unidades de filtro centrífugo Amicon de corte de peso molecular de 30 KDa (EMD Millipore, Billerica, MA). Uma série de diluições variando de 46-178 mg/mL foi preparada com 20 mM de Histidina, 85 g/L de saca- rose, 0,05 mg/mL de EDTA pH 5,8 tampão como diluente. As concen- trações de proteína foram determinadas por análise de 280 nm no So- loVPE Variable Pathlength System (C Technologies, Inc, Bridgewater, NJ). As medições de viscosidade foram realizadas usando o cone e a placa CP25-1 no reômetro MCR-302 (Anton Paar USA Inc., Ashland, VA) em uma velocidade de rotação constante de 150 rpm a 25°C. Um total de 10 medidas de 10 segundos cada qual foram coletadas por amostra e os dados foram analisados no software Rheoplus (Anton Paar USA Inc.) V 3,62. A viscosidade é expressa em unidades centi- poise (cP).
[00559] A viscosidade de GDF15_001 é mostrada na Figura 2. Os dados mostram que o limite de viscosidade aceitável (20 cP) é obtido em cerca de 140 mg/ml, tornando a injeção subcutânea de GDF15_001 viável, indicando ainda que este anticorpo é um terapêuti- co potencial útil. Exemplo 10: Imunogenicidade de anticorpos anti-GDF15
[00560] Com base na detecção de epítopos de células T não ger- minativas e em uma pontuação ajustada por tReg calculada, a imuno- genicidade dos anticorpos anti-GDF15 da presente invenção e outro anticorpo anti-GDF15 conhecido na técnica como hu01G06 (as se- quências de VH e VL de hu01G06 são fornecidas no presente docu- mento como SEQ ID NO:177 e SEQ ID NO:178, respectivamente (VH, SEQ ID NO:248 de WO2014/100689 e VL, SEQ ID NO:254 de
WO2014/100689)). Uma pontuação ajustada por tReg inferior prediz um potencial baixo para risco de imunogenicidade.
[00561] As sequências foram analisadas usando dois protocolos (Protocolos 1 e 2 abaixo) para identificar os epítopos. Qualquer se- quência identificada pelas regras descritas no presente documento pa- ra qualquer protocolo foi considerada um epítopo. As sequências fo- ram examinadas ao nível dos aminoácidos 9-mer.
[00562] Protocolo 1 - ISPRI/EpiMatrix: Sequências foram submeti- das para análise de EpiMatrix no pacote de software ISPRI (ISPRI v 1,8,0, EpiVax Inc., Providence, RI (2017); Schafer e outro Vaccine 16 (19), 1880-84 ( 1998)). Os resultados brutos fornecem classificações da probabilidade de ligação de cada fragmento de aminoácido 9-mer contra 8 tipos de HLA diferentes. Desse modo, existem 8 previsões ("observações") para cada 9 mer. Os 9-mers são gerados começando em cada posição de numeração linear individual da sequência. É pos- sível que o mesmo 9-mer ocorrer mais do que uma vez na mesma se- quência. Se quaisquer 4 observações indicarem que o 9-mer está en- tre os 5% principais de aglutinantes, o que significa que está previsto estar entre os 5% principais dos ligantes para pelo menos 4 tipos de HLA, o 9-mer é considerado um epítopo previsto. Alternativamente, se qualquer 1 das 8 previsões indicar que o 9-mer está no 1% principal dos aglutinantes, o 9-mer é da mesma forma considerado um epítopo previsto.
[00563] Protocolo 2- Método de Consenso IEDB: Sequências foram submetidas para análise usando o Método de Consenso de ligação de MHC-II (Wang e outro BMC Bioinformatics 11, 568 (2010); Wang e ou- tro PLoS ComputBiol. 4 (4), e1000048 (2008)) no banco de dados de epítopos imunológicos (IEDB) (IEDB MHC-II Binding Predictions, http://www.iedb.org; Vita e outro, Nucleic Acids Res. 28 de janeiro (43), D405-12 (2015). A saída do software organiza os resultados por 15-
mer. Uma pontuação de consenso e uma classificação percentil são fornecidas para cada combinação de 15-mers e tipo HLA. No entanto, as pontuações individuais de cada 15-mers o consenso é derivado são classificações de certos 9-mers encontrados no 15-mer: cada método usado para o consenso relata uma classificação percentil para um 9- mer dentro do 15-mer, e o consenso usado como o valor para o 15- mer total é a previsão para o 9 mer tendo a pontuação mediana. Um 9 mer é classificado como um epítopo se (a) for escolhido como o repre- sentante de consenso para o 15 mer e (b) tiver uma classificação per- centil nos 10% principais dos aglutinantes para o tipo de HLA sendo considerado e se os critérios (a) e (b) ocorrerem para três ou mais ti- pos de HLA distintos para o mesmo 9-mer (ou seja, três observações). Os tipos de HLA considerados foram DRB1*01, 1*03, 1*04, 1*07, 1*08, 1*11, 1*13 e 1*15, que são os mesmos tipos de HLA em um relatório ISPRI/EpiMatrix padrão. Para facilidade de comparação com o Proto- colo 1, os dados são reinterpretados para obter uma lista de epítopos de 9-mer previstos, embora a saída principal do Método de Consenso seja uma classificação de 15-mers.
[00564] Cada epítopo é classificado como um epítopo de linha ger- minativa ou linha não germinativa. Para os anticorpos, cada epítopo é também classificado com base na sua localização dentro do anticorpo (por exemplo, CDR ou não CDR). Sequências de domínios V humanos obtidos de IMGT (www.imgt.org) são filtrados para remover linhas germinativas anotadas como pseudogenes ou estruturas de leitura abertas. Qualquer epítopo 9-mer previsto encontrado nas sequências restantes é considerado um epítopo de linha germinativa. Os epítopos encontrados nas regiões J ou C (incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) ou as junções entre essas regiões foram da mesma forma classificados como epítopos de linha germinativa. De outra maneira, um epítopo foi classificado como um epítopo não de linha germinativa.
[00565] As definições de CDR foram baseadas no método de Ka- bat, onde as CDRs são definidas para incluir os seguintes resíduos: HCDR-1 (H26-H35 incluindo inserções tal como H35A, até porém não incluindo H36), HCDR-2 (H50-H65 inclusive), HCDR-3 (H95-H102 in- clusive) LCDR-1 (L24-L34 inclusive), LCDR-2 (L54-L56 inclusive), LCDR-3 (L89-L97, inclusive). Um epítopo 9-mer previsto é definido como um epítopo de CDR se qualquer um dos seus aminoácidos fizer parte de uma região de CDR.
[00566] Pontuação de Sequência Geral (pontuação ajustada tReg): Para uma cadeia individual ou para um emparelhamento de um domí- nio de VH e VL de anticorpo, uma pontuação geral pode ser calculada somando cada um dos 9-mers constituintes, como descrito abaixo.
[00567] Todas as combinações individuais de 9-mer e tipo de HLA ("observações") são examinadas, independentemente do 9-mer ser um epítopo. Se uma observação particular indicar que o peptídeo está entre os 5% principais de aglutinantes para um determinado tipo de HLA, o escore Z de EpiMatrix para esta observação é adicionado a um ciclo total associado com a sequência de proteína inteira. O número total de observações examinadas é da mesma forma registrado. A úni- ca exceção é que todas as observações em 9-mers identificados por ISPRI como "T-regitopes" (sequências de aminoácidos dentro da regi- ão estrutural do anticorpo monoclonal que podem potencialmente ati- var células T regulatórias naturais e reduzir respostas imunes indese- jadas), são assumidas como tendo pontuações de EpiMatrix de zero.
[00568] No ciclo total, uma pontuação de linha de referência de 0,05 * 2,2248 é subtraída de cada observação (incluindo T-regítopos). A pontuação final é calculada como segue: Pontuação ajustada tReg = (Ciclo total)*1000/(Número de observações)
[00569] As pontuações calculadas são listadas na Tabela 12. Como declarado acima, uma pontuação mais baixa indica potencial imuno-
gênico previsto menor. Os anticorpos anti-GDF15 da presente inven- ção tiveram pontuações mais baixas do que hu01G06. Os clones GDF15_001, GDF15_004, GDF15_005 e GDF15_013 tiveram as pon- tuações mais baixas, portanto, tiveram o menor risco potencial previsto de desencadear respostas imunogênicas. Isto também indica que os anticorpos da invenção são terapêuticos úteis potenciais. Tabela 12. Previsão de risco de imunogenicidade para mAbs de GDF15, pontuação ajustada tReg Clone # Pontuação (tReg-Ajustado) GDF15_001 -41,58 GDF15_002 -39,34 GDF15_003 -26,99 GDF15_004 -42,06 GDF15_005 -50,36 GDF15_006 -34,21 GDF15_007 -39,6 GDF15_008 -24,95 GDF15_009 -29,30 GDF15_010 -34,08 GDF15_012 -38,79 GDF15_013 -42,09 GDF15_014 -34,36 GDF15_015 -34,18 GDF15_017 -38,82 GDF15_018 -33,79 GDF15_020 -33,64 GDF15_021 -31,56 GDF15_022 -33,16 GDF15_100 -36,41 GDF15_200 -26,01 hu01G06 -20,36
[00570] Os epítopos de células T previstos de GDF15_001 e hu01G06 foram da mesma forma comparados, com base nos métodos in silico descritos acima. Como mostrado na Tabela 13 abaixo, hu01G06 tem dois epítopos de células T previstos na cadeia pesada e um epítopo de células T previsto na cadeia leve, enquanto GDF15_001 não tem nenhum epítopo de células T previsto. Isso indica que GDF15_001 da mesma forma tem um risco potencial menor de desencadear respostas imunogênicas em comparação com hu01G06. Isto também que GDF15_001 é um novo terapêutico útil em potencial com características melhoradas.
Tabela 13. Epítopos de células T previstos de GDF15_001 e hu01G06 Nome Cadeia Pesada Cadeia Leve Hu01G06 2 1 GDF15_001 0 0 Exemplo 11: Inibição de GDF15 humano e murino em camundon- gos saudáveis
[00571] A capacidade de GDF15_001 inibir a atividade de GDF15 humano foi avaliada em camundongos C57Bl6N saudáveis tratados com vírus adeno-associado (AAV)-GDF15 humano. Duas semanas após o tratamento com AAV-GDF15 humano, os níveis circulantes de GDF15 humano aumentaram para aproximadamente 17 ng/mL (Figura 3) e o peso corporal diminuiu 15% (Figura 4). A administração de GDF15_001 reverteu rapidamente o peso corporal (Figura 4), gordura (Figura 5) e perda de massa magra (Figura 6) em camundongos trata- dos com AAV-GDF15 humano versus controle de IgG. GDF15_001 não teve efeito em camundongos tratados com vetor de controle de AAV.
[00572] A capacidade de GDF15_001 inibir a atividade de GDF15 de murino foi da mesma forma avaliada em camundongos C57Bl6N saudáveis tratados com AAV-GDF15 de murino. Onze dias após a administração de AAV-GDF15 de murino, os níveis circulantes de GDF15 de murino aumentaram para aproximadamente 3 ng/mL (Figu- ra 7) e o peso corporal diminuiu em aproximadamente 10% (Figura 8). A administração de GDF15_001 rapidamente reverteu a perda de peso (Figura 8) e aumentou a ingestão de alimentos (Figura 9) em camun- dongos tratados com AAV-GDF15 humano versus controle de IgG. GDF15_001 não teve efeito em camundongos tratados com vetor de controle de AAV.
[00573] Esses dados demonstram que GDF15_001 reverte a perda de peso, devido à perda de massa magra e gorda, e aumenta a inges- tão de alimentos em camundongos saudáveis, mesmo na presença de níveis aumentados de GDF15.
Exemplo 12: Inibição de GDF15 humano em camundongos porta- dores de tumor de fibrossarcoma (HT-1080)
[00574] Para determinar se GDF15_001 poderia reverter a caquexia e aumentar a vida útil em camundongos portadores de tumor, camun- dongos imunocomprometidos graves (SCID) foram implantados subcu- taneamente com células de fibrossarcoma humano HT-1080. Duas semanas após a implantação do tumor, o peso corporal diminuiu em aproximadamente 10% (Figura 10). A administração de GDF15_001 reverteu rapidamente a perda de massa corporal (Figura 10), perda de massa gorda (Figura 11) e perda de massa magra (Figura 12) versus controle de IgG. Além da melhora da composição corporal, GDF15_001 aumentou a sobrevida (Figura 13) em comparação com o controle de IgG.
[00575] Para confirmar o benefício metabólico de GDF15_001 em camundongos portadores de tumor HT-1080 sob condições termoneu- tras, onde a elevação do estresse pelo frio da taxa metabólica basal é eliminada, o estudo foi repetido quando os camundongos foram aloja- dos a 86°F. O GDF15 humano circulante foi elevado para ~5 ng/mL (Figura 14). A administração de GDF15_001 manteve a reversão rápi- da da perda de peso (Figura 15) versus controle de IgG. GDF15_001 não teve efeito sobre qualquer um desses parâmetros em camundon- gos não portadores de tumor de outra maneira idênticos.
[00576] Estes dados demonstram que GDF15_001 aumenta a so- brevida e reverte a caquexia em camundongos portadores de tumor. Desse modo, esses resultados também indicam que GDF15_001 é um novo terapêutico humano potencial. Exemplo 13: Inibição de GDF15 humano em camundongos porta- dores de tumor pancreático
[00577] Para também avaliar se GDF15_001 poderia reverter a ca- quexia e aumentar a vida útil em camundongos portadores de tumor,
camundongos SCID foram implantados subcutaneamente com PA- 0165, derivado de metástase hepática de tumor pancreático, fragmen- tos de tecido tumoral. O GDF15 humano circulante foi elevado a ~2 ng/mL (Figura 16). Quatro semanas após a implantação do tumor, o peso corporal diminuiu em aproximadamente 10% (Figura 17). A ad- ministração de GDF15_001 evitou completamente a perda de peso (Figura 17) versus controle de IgG. Além da melhora do peso corporal, GDF15_001 aumentou a sobrevida (Figura 18) em comparação com o controle de IgG.
[00578] Esses dados da mesma forma demonstram que GDF15_001 aumenta a sobrevida e reverte a caquexia em camundon- gos portadores de tumor. Desse modo, esses resultados indicam ainda que GDF15_001 é um novo terapêutico humano potencial. Exemplo 14: Inibição de GDF15 Humano em Camundongos Por- tadores de Tumor Tratados com Agentes Anticâncer
[00579] Para determinar se GDF15_001 poderia reverter a caquexia e aumentar a sobrevida em camundongos portadores de tumor trata- dos com agentes anticâncer, camundongos BALB/c foram implantados subcutaneamente com células RENCA (adenocarcinoma renal de mu- rino). O GDF15 de murino circulante foi elevado para ~ 8 ng/mL (Figu- ra 19). Quando o tamanho do tumor atingiu 100 mg, o tratamento com o agente anticâncer sorafenibe foi iniciado seguido pela adição de GDF15_001 ou controle de IgG quando a perda de peso de 10% foi alcançada (Figura 20). A administração de GDF15_001 aos camun- dongos tratados com sorafenibe reverteu completamente a perda de peso (Figura 20). Junto com a melhora do peso corporal, a combina- ção de sorafenibe + GDF15_001 aumentou a sobrevida em compara- ção ao controle de sorafenibe + IgG (Figura 21).
[00580] A capacidade de GDF15_001 para melhorar o peso corpo- ral foi da mesma forma examinada em camundongos portadores de tumor tratados com o agente anticâncer cisplatina. Camundongos SCID foram implantados subcutaneamente com fragmentos de tecido tumoral NSX-26115 (derivado de adenocarcinoma de carcinoma de pulmão de células não pequenas humano). O GDF15 humano circu- lante foi elevado para ~ 4,5 ng/mL (Figura 22). Quando o tamanho do tumor atingiu 100 mg, uma perda de peso de 10% foi alcançada e o tratamento com o agente anticâncer cisplatina foi iniciado junto com GDF15_001 ou controle de IgG (Figura 23). GDF15_001 ou controle de IgG foram da mesma forma dados sem cisplatina. A administração de GDF15_001 reverteu a perda de peso quando administrado com ou sem cisplatina versus controle de IgG (Figura 23). Junto com a melho- ra do peso corporal, a combinação de cisplatina + GDF15_001 aumen- tou a sobrevida (Figura 24) em comparação com o controle de cisplati- na + IgG.
[00581] Esses dados da mesma forma demonstram que GDF15_001 aumenta a sobrevida e reverte a caquexia em camundon- gos portadores de tumor tratados com agentes anticâncer. Desse mo- do, esses resultados indicam ainda que GDF15_001 é um novo tera- pêutico humano potencial. Exemplo 15: Dosagem de Anticorpos Anti-GDF15
[00582] Existem desafios associados à identificação de doses efi- cazes e regimes de dosagem para anticorpos anti-GDF15 para o tra- tamento de caquexia. A dose eficaz total depende da concentração inicial de GDF15 em circulação em um paciente, que é conhecida por ser variável. Além disso, os níveis de GDF15 livre em pacientes com caquexia são reduzidos em taxas diferentes em resposta à terapia. Desse modo, a dose eficaz pode ser definida para um determinado intervalo de dosagem como a quantidade dada a um paciente de 70 kg que reduz o nível de GDF15 livre para menos do que 0,5 ng/mL ao longo do intervalo de dosagem no estado estacionário (ou seja, após uma série de doses de modo que a concentração máxima após uma dose é substancialmente a mesma que a concentração máxima após a dose anterior). Este nível de GDF15 livre é selecionado com base em dados relatados a indivíduos saudáveis (Wollert e outro, 2017, J Appl Lab Med 1 (5): 510-521). Desse modo, as dosagens eficazes descritas no presente documento são descritas como uma função do nível inicial de GDF15 livre em um indivíduo afetado e a redução desse nível para menos do que 0,5 ng/mL. O nível de GDF livre em uma amostra pode ser medido, por exemplo, usando um imunoensaio de eletroquimiolu- minescência, tal como o ensaio de ELECSYS GDF15 (Roche Diagnos- tics). O ensaio de ELECSYS GDF15, usa tecnologia de biotina- estreptavidina e é baseado no princípio do imunoensaio sanduíche (veja Wollert e outro, 2017). Outros ensaios que podem medir a quan- tidade de GDF15 livre em uma amostra, que são conhecidos na técni- ca, podem da mesma forma ser usados para determinar o nível de GDF15 livre em um paciente.
[00583] A fim de superar os desafios de prever doses eficazes e regimes de dosagem para os anticorpos descritos no presente docu- mento, um modelo farmacocinético de dois compartimentos foi desen- volvido. A dosagem subcutânea de um anticorpo anti-GDF15 foi simu- lada por meio da dosagem de uma quantidade especificada em um depósito, que é em seguida absorvido no compartimento central com a taxa especificada ka. O anticorpo se distribui em um compartimento periférico e, em seguida, é eliminado do compartimento central. Quan- do no presente documento utilizado, o termo "depósito" se refere ao sítio no qual um fármaco é depositado (por exemplo, o espaço subcu- tâneo), o termo "compartimento central" se refere ao espaço vascular e órgãos altamente perfundidos (por exemplo, fígado, rim e pulmões), e o termo “compartimento periférico” refere-se a tecido menos perfun- dido (por exemplo, gordura e músculo).
[00584] Os parâmetros para GDF15_001 foram determinados por escala de parâmetros em um estudo farmacocinético de GDF15_001 em camundongos que expressam FcRn humano.
Resumidamente, 6 camundongos foram dosados com 1 mg/kg de GDF15_001 intraveno- samente e foram monitorados por 1000 horas; farmacocinéticos do anticorpo resultante foram ajustados ao modelo farmacocinético de dois compartimentos.
Os parâmetros para outros anticorpos descritos no presente documento podem ser determinados de uma maneira si- milar.
GDF15_001 é produzido no compartimento central, distribuído para o compartimento periférico e é liberado de ambos os espaços.
Os volumes e a taxa de distribuição foram assumidos como os mesmos determinados para GDF15_001 no estudo farmacocinético descrito acima.
A renovação foi selecionada para produzir uma meia-vida de 16,6 horas para GDF15_001, com base em uma experiência quantifi- cando a incorporação de aminoácidos rotulados por isótopos estáveis em GDF15 circulantes em dois voluntários saudáveis (metodologia ex- perimental essencialmente como fornecido em Lassman e outro, 2014, Clin Chem 60 (9): 1217-1224). A taxa de síntese GDF15 foi seleciona- da para produzir um nível de circulação especificado de GDF15. Este nível circulante pode representar o nível mais alto relatado para uma determinada doença (para tratar todos os pacientes com uma condi- ção correspondente), um limite inferior, porém ainda acima dos valores para uma fração especificada de indivíduos (para controlar a dose má- xima enquanto permite o tratamento da maioria dos pacientes), ou o nível específico determinado para um indivíduo específico para permi- tir uma dose individualizada mais precisa.
Para as faixas de níveis de GDF15 associados a doenças humanas, veja, por exemplo, Mutlu e outro, 2015, Inflammation 38 (5): 1805-1813; Montero e outro, 2016, PLoS One 11 (2): e0148709; Kempf e Wollert, 2009, Heart Fail Clin 5 (4): 537-547; e Lerner e outro, 2016, Oncol Lett 12 (5): 4219–4223.
[00585] Em ambos os compartimentos central e periférico, o GDF15 pode se ligar reversivelmente ao anticorpo anti-GDF15, com base nas constantes de taxa de associação e dissociação para o anticorpo. Para GDF15_001, estes parâmetros foram determinados como sendo 1,59 x 106 M-1 s-1 (ka) e 3,42 x 10-5 s-1 (KD), respectivamente (igualando a uma constante de dissociação de equilíbrio de 21,3 pM), com base nas medições de Biacore (veja Tabela 8 acima). Ensaios similares podem ser realizados para os outros anticorpos descritos no presente docu- mento, ou os parâmetros podem ser usados como parâmetros de en- trada para explorar o efeito da alteração da afinidade na dose. Sem desejar ser ligado por qualquer teoria particular, o complexo de anti- corpo/GDF15 se distribui entre os dois compartimentos e é eliminado do compartimento central usando os mesmos parâmetros farmacoci- néticos determinados para o próprio anticorpo. Os parâmetros para o modelo de dosagem de dois compartimentos são mostrados na Tabela
14. Tabela 14. Parâmetros do modelo de dosagem de dois compartimen- tos GDF15_001 Parâmetro Valor Unidades Fonte V1 49 mL/kg Escalado a partir de parâmetros farmacocinéticos determinados em V2 46 mL/kg camundongos expressando hFcRn usando metodologia de melhor Q 0,42 mL/hr/kg prática atual CL 0,24 mL/hr/kg Peso corporal 70 kg Humano típico t1/2,GDF15 16,6 hr Determinado a partir de incorporação de isótopo estável em GDF15 humano em indivíduos saudáveis KDeg 0,0418 Rotatividade, ln(2)/t1,2,GDF15 kon 1,59 x 106 M-1 s-1 Medido por SPR koff 3,42 x 10-5 s-1 Medido por SPR KD 21,3 pM koff/kon [GDF15]linha de referência 0,5 ng/mL Inserção do ensaio ELECSYS GDF15 (Roche Diagnostics) Dose Varia mg Especificação de entrada OR determinada para produzir nível alvo de redução de GDF15 livre ka 0,0108 hr-1 Típico MW GDF15 25 KDa Derivado da entrada do gene em Uniprot http://www.uniprot.org/uniprot/Q99988 Anticorpo MW 150 KDa Típico Biodisponibilidade 0,5 Adimencional Assumido
[00586] As doses subcutâneas terapeuticamente eficazes previstas para GDF15_001 em função do nível inicial de GDF15 livre em um in- divíduo são mostradas nas Tabelas 15, 16 e 17 e nas Figuras 25, 26 e
27. As doses terapeuticamente eficazes previstas para dosagem se- manal, quinzenal e aproximadamente mensal são mostradas.
[00587] Os dados de dosagem fornecidos no presente documento sugerem que GDF15_001 pode ser administrado em tais quantidades e intervalos de dosagem que pode atingir uma redução de desligamen- to de nível potencialmente terapêutico do nível de GDF15 livre. Esses resultados demonstram que a dosagem de GDF15_001 pode ser al- cançada e mantida em um regime de dosagem que é viável e garantirá a adesão do paciente. Tabela 15. Potencial de dosagem semanal para administração subcu- tânea de GDF15_001 para diminuir o nível de GDF15 Iniciando GDF15 livre (ng/mL) Dose subcutânea semanal (mg) 5 2 10 5 15 7 20 10 25 12 30 15 50 25 75 40 100 50 Tabela 16. Potencial de dosagem para administração subcutânea quinzenal de GDF15_001 para diminuir o nível de GDF15 Iniciando GDF15 livre (ng/mL) Dose subcutânea quinzenal (mg) 5 5 10 12 15 20 20 25 25 30 30 40
Tabela 17. Potencial de dosagem para administração subcutânea aproximadamente mensal de GDF15_001 para diminuir o nível de GDF15 Iniciando GDF15 livre (ng/mL) Dose subcutânea a cada quatro semanas (mg) 5 15 10 40 15 60 20 75 25 100 30 115 50 200 75 300 100 385 Exemplo 16: Tratamento de Combinação com Anticorpo Anti-PD-1 (F2) e Anti-GDF15 (GDF15-297) em modelo subcutâneo de RCC
[00588] Os dados descritos no presente documento demonstram o efeito terapêutico sinergístico do anticorpo anti-GDF15 e terapia de combinação de anticorpo anti-PD1 em modelo de carcinoma de célu- las renais metastático (RCC) de murino RENCA.
[00589] Os animais portadores de tumor foram gerados como se segue: Camundongos BALB/c fêmeas com seis (6) a 8 semanas de idade foram comprados de Jackson Laboratories. Todos os animais foram alojados em uma instalação de viveiro livre de patógenos em CID e experiências foram conduzidos de acordo com os protocolos de acordo com as diretrizes do Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC). A linhagem celular RENCA foi adquirida na American Type Culture Collection (ATCC). As células foram cultivadas em Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS), 2 mM de L-glutamina a 37°C em 5% de dióxi- do de carbono (CO2), e IMPACT-testado para patógenos em Research
Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Células livres de patógenos crescendo em uma fase de crescimento exponencial fo- ram colhidas e usadas para inoculação do tumor. Camundongos BALB/c foram inoculados subcutaneamente no flanco direito com RENCA 0,2 × 106 em 0,1 mL de DMEM livre de soro.
[00590] A análise do volume do tumor foi realizada como segue: quando os tumores atingiram o tamanho alvo, os camundongos foram aleatorizados em grupos de tratamento. O tratamento foi iniciado no mesmo dia da aleatorização, ou seja, dia 0. O tamanho do tumor foi medido duas vezes por semana em 2 dimensões usando um paquíme- tro, e o volume foi expresso em milímetros cúbicos usando a fórmula: V = 0,5 L × W 2 onde L é o diâmetro mais longo do tumor e W é o diâ- metro perpendicular a L. O peso corporal foi registrado duas vezes por semana.
[00591] Os anticorpos terapêuticos usados neste estudo foram: PD1 F2 anti-camundongo de camundongo (imunoglobulina G1 de ca- mundongo [mIgG1]) e GDF15_0297 anti-camundongo de camundongo compreendendo uma função efetora de IgG1 de camundongo nula D265A, ou seja, aspártico (Asp, D) a alanina (Ala, A) no resíduo de aminoácido número 265), mutação no Fc. Anticorpo GDF15_0297 é essencialmente um anticorpo substituto de camundongo de GDF15_001 que liga-se similarmente a esse anticorpo. Da mesma forma, F2 é um anticorpo substituto de camundongo que liga-se simi- larmente ao sassanlimabe (RN888). O anticorpo anti-PD1 e o anticor- po anti-GDF15 foram cada um diluído em uma concentração de 2 mg/mL em solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Life Techno- logies) e dosado a 10 mg/kg por camundongo intraperitonealmente (ip) no “dia de tratamento 0” (d0). ANOVA de sentido único ou dois senti- dos foi aplicado para comparar as diferenças estatísticas entre vários grupos em relação ao controle de isótipo (IgG1 de camundongo de controle negativo) ou outros grupos de tratamento. O teste t não pare- ado foi aplicado para comparar a diferença estatística entre dois gru- pos. P <0,05 foi considerado como diferença significante.
[00592] O modelo RENCA foi usado para avaliar a eficácia terapêu- tica do anti-GDF15 em combinação com anti-PD1 no modelo de rRCC, o tamanho médio do tumor inicial de 25 a 38 mm3 (n = 10 animais por grupo). Os animais foram monitorados durante duas semanas após o início do tratamento. O tratamento, isto é, administração i.p. de anti- GDF15 e anti-PD1, foi iniciada 11 dias após o transplante. O tratamen- to combinatório com anticorpo anti-GDF15 e anticorpo anti-PD1 inibiu significativamente a progressão do tumor subcutâneo RENCA rRCC quando comparado com o grupo tratado com isótipo de controle. Mo- noterapia anti-GDF15 e monoterapia anti-PD1 não foram eficazes na inibição da progressão do tumor neste cenário (Tabela 18 e Tabela 19). Tabela 18: Medições de tumor (M± SEM) de Carcinoma Renal RENCA subcutâneo ao longo do tempo Grupo 1. Controle de isótipo Dia de tratamento Tamanho de Tumor Médio SEM N (mm3) 0 24,8179 18,48923 10 3 41,10472 16,01365 10 7 118,3017 38,05085 10 11 316,4947 87,86244 10 14 458,5579 180,3841 10 Grupo 2. Anticorpo Anti-GDF15 (10 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tamanho de Tumor Médio SEM N Tumor (mm3) 0 38,6903 23,46297 10 3 74,46177 55,75148 10 7 118,0962 76,10373 10 11 242,452 131,6799 10 14 421,239 250,0879 10 Grupo 3. Anticorpo Anti-PD1 (10 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tamanho de Tumor Médio SEM N Tumor (mm3) 0 30,47708 19,57651 10 3 46,06364 33,32501 10 7 81,07916 48,32548 10 11 188,6607 104,1654 10
14 279,6987 159,2461 10 Grupo 4. Anticorpo Anti-PD1 e Anti-GDF15 (10 mg/kg cada) Dias Pós-Inoculação do Tamanho de Tumor Médio SEM N Tumor (mm3) 0 31,10019 20,06108 10 3 58,65684 27,55265 10 7 100,9666 49,4239 10 11 179,1596 73,56688 10 14 367,1608 165,8177 10 3 O volume do tumor é expresso em mm . N = número de animais den- tro de cada grupo; SEM = erro padrão da média. Tabela 19: Comparação estatística entre as medições do tumor de Carcinoma Renal RENCA subcutâneo ao longo do tempo em compa- ração com o Controle de Isótipo Dia Anti-GDF15 Anti-PD1 Anti-GDF15 (10 mg/kg) + Anti-PD1 (10 (10 mg/kg) (10 mg/kg) mg/kg) 0 0,9995 >0,9999 >0,9999 3 0,9721 0,9986 >0,9999 7 >0,9999 0,9987 0,9554 11 0,5250 0,0205 0,0394 14 0,9549 0,2835 0,0007
[00593] Os resultados da análise estatística mostrados na Tabela 19 demonstram que o tratamento com anticorpo anti-GDF15 em com- binação com anti-PD1 tem um efeito sinergístico nos estágios iniciais da progressão do tumor no modelo de câncer RCC. Exemplo 17: Tratamento de Câncer de Pâncreas com Combinação de Anticorpo anti-PD1 e Anticorpo anti-GDF15
[00594] Este exemplo ilustra o efeito terapêutico sinergístico do an- ticorpo anti-GDF15 e terapia de combinação de anticorpo anti-PD1 em um modelo de adenocarcinoma pancreático metastático de murino, ou seja, modelo Pan02. Para facilitar a identificação do crescimento do tumor no modelo ortotópico, as células de Pan02 (NHI/NCI) foram in- fectadas com a construção de luciferase de vagalume, gerando células de Pan02-luciferase.
[00595] Seis camundongos fêmeas B6 (Cg)-Tyrc-2J/J (B6 albino) com 8 semanas de idade foram comprados em Jackson Laboratories. Todos os animais foram alojados em uma instalação de viveiro livre de patógenos em CID e as experiências foram conduzidas de acordo com os protocolos de acordo com as diretrizes do Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC).
[00596] A linhagem de células de Pan02 foi obtida de NHI/NCI. As células foram cultivadas em Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS), 2 mM de L-glutamina a 37°C em 5% de dióxido de carbono (CO2), e IMPACT- testado para patógenos em Research Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Células livres de patógenos crescendo em uma fase de crescimento exponencial foram colhidas e usadas para transplante de tumor. Camundongos albino B6 foram injetados no pâncreas com 20 µL de células tumorais: mistura de matrigel contendo 0,2 x 106 mL de DMEM livre de soro de Pan02-luciferase e matrigel (Corning, ref 356237). Quatro dias após o transplante, a carga de tu- mor foi avaliada pelo nível de luminescência. Os animais foram estrati- ficados em grupos e o ensaio foi iniciado. Para detectar a emissão de luciferase, os animais foram injetados com 0,1 mL de 30 mg/mL de sal monossódico de D-luciferina em solução salina (Pierce, # 88292). Os níveis de luminescência foram detectados no IVIS Spectrum CT (Cali- per Life Science) após exposição de 1-15 segundos em binning médio, 1 F/stop. As imagens foram analisadas pelo Software LivingImage 4,5,1. A carga do tumor foi calculada como fóton/segundo em ROI (re- gião de interesse) após subtrair os valores antecedentes. Em um exemplo, a emissão média no momento da inscrição era 4,8*108 fó- tons/segundo. Em outro exemplo, a emissão média no momento da inscrição foi de 1,8*108 fótons/segundo.
[00597] O anticorpo PD1 F2 anti-camundongo de camundongo (imunoglobulina G1 de camundongo [mIgG1]) e o anticorpo GDF15_0297 anti-camundongo de camundongo foram como descrito no Exemplo 16. O anticorpo anti-PD1 e o anticorpo anti-GDF15 foram cada um diluídos em uma concentração de 2 mg/mL solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Life Technologies) e dosados em 10 mg/kg por camundongo intraperitonealmente (ip). Em outro exemplo, o anticorpo anti-PD1 foi diluído em uma concentração de 1 mg/mL e do- sado em 5 mg/kg por camundongo. Em cada caso, o anticorpo PD-1 e o anticorpo GDF15 foram administrados no mesmo dia (dia do trata- mento 0).
[00598] A progressão do tumor foi monitorada semanalmente com base no nível de luminescência nos animais tratados. Os níveis de lu- minescência foram determinados como descrito acima. O peso corpo- ral foi registrado semanalmente.
[00599] No dia 35 após o transplante, as mudanças na carga de tumor entre os animais de anticorpo de isótipo, anticorpo anti-GDF15, anticorpo anti-PD1 e combinação de anticorpo anti-GDF15 + anti-PD1 foram determinadas seguindo a fórmula: mudanças na carga de tumor = (fluxo de fótons em d35 - fluxo de fótons em d4)/fluxo de fótons no dia 4. O tratamento com anticorpo anti-GDF15 + anticorpo anti-PD1 reduziu significativamente a carga de tumor de animais transplantados com tumores Pan02, resultando em 8 de 12 animais mostrando sinais de regressão do tumor, em comparação com grupos anti-PD1, anti- GDF15 e isótipo (4/12; 1/12 e 0/12, respectivamente). Os resultados são resumidos abaixo na Tabela 20. Na Tabela 20, os resultados indi- viduais de cada um dos doze animais por grupos são mencionados. Tabela 20. Mudanças na carga de tumor em animais transplantados com Pan02 35 dias após o transplante. Isótipo (10 mg/kg) Anti-GDF15 (10 mg/kg) Anti-PD1 (10 mg/kg) Anti-GDF15 (10 mg/kg) + anti- (n=12) (n=12) (n=12) PD1 (10 mg/kg) (n=12) 388650,8 238089,09 51810,29 121462,31 202783,4 42471,88 5095,89 729,61 146446 40946,73 1997,97 509,41 20687,27 35690,5 1435,5 117,08 19259,32 17367,64 390,93 -35,58 11767,25 12343,34 192,99 -53,22 11056,08 4468,03 145,6 -79,94 4223,002 1331,72 48,91 -82,36
1969,562 127,73 -5,73 -98,16 1357,696 70,79 -81,18 -99,36 561,6385 38,24 -94,2 -99,63 477,8538 -64,21 -99,55 -99,67
[00600] Essas mudanças na carga de tumor corresponderam ao aumento da sobrevida de animais tratados com anticorpo anti-GDF15 + anticorpo anti-PD1 com sobrevida média aumentando para 90 dias em comparação com a sobrevida de 66 dias (anti-PD1), 52,5 dias (an- ti-GDF15) e 45 dias (Controle de isotipo). Quando comparado ao valor de p do grupo de isótipo de controle no final da experiência (dia 145), os valores de p foram p <0,0001 (anti-GDF15 + anti-PD1), p = 0,0010 (anti-PD1) e não estatisticamente significativo (ns) (anti-GDF15). No dia 79, houve uma diferença estatisticamente significativa entre a so- brevida dos animais tratados com anti-GDF15 + anti-PD1 em combi- nação e monoterapia anti-PD1 refletida em p = 0,05 estabelecido pelo teste de Matel-Cox, ep = 0,042 por Gehan-Breslow -Teste de Wilco- xon.
[00601] Em outro exemplo, no modelo Pan02 pancreático com a carga de tumor média estimada por emissão luminescente no momen- to da inscrição 1,8*108 fótons/segundo. (n = 13 animais por grupo), a eficácia terapêutica de 10 mg/kg de anticorpo anti-GDF15 em combi- nação com 5 mg/kg de anticorpo anti-PD1 foi avaliada. O tratamento foi iniciado quatro dias após o transplante. No dia 39, o volume do tu- mor do grupo tratado com anti-GDF15 + anti-PD1 caiu abaixo do limite de detecção em 38% dos animais. A monoterapia PD1 resultou na re- dução do tumor em apenas 15% dos animais, enquanto tanto o contro- le de isótipo quanto a monoterapia anti-GDF15 não exibiram nenhum benefício terapêutico neste cenário.
[00602] Estes resultados demonstram que o tratamento com anti- corpo anti-GDF15 em combinação com anti-PD1 fornece um efeito an- titumor sinergístico maior do que os efeitos aditivos de cada tratamen- to fornecido separadamente na progressão em um modelo de câncer pancreático ortotópico.
[00603] Desse modo, esses dados demonstram que a terapia de combinação de anti-GDF15 e um antagonista do eixo PD-1 seria uma nova terapia sinergística útil para o tratamento do câncer. Exemplo 18. Seleção de modelos singênicos de camundongo pa- ra testar a eficácia na imunoterapia de câncer
[00604] Para a seleção do modelo apropriado para determinar a eficácia terapêutica da terapia anti-GDF15, as seguintes linhagens ce- lulares singênicas de camundongo foram testadas: MC38 (gentilmente cedido pelo Dr. Antoni Ribas at University of California, Los Angeles, CA), Pan02 (NHI/NCI), 4T1 (ATCC), RENCA (ATCC), CT26 (ATCC), ID8 (University of Kansas e University of Kansas Medical Center), LL2 (ATCC), B16F10 (ATCC) e GL261 (NHI/NCI). Os níveis de GDF15 no meio condicionado foram analisados pelo kit de ELISA GDF15 de ca- mundongo (R&D Systems, MGD 150). As células foram semeadas em triplicata de 0,3 × 106 células/cavidade em placa de cultura de células de 6 cavidades (353224, Corning) e cultivadas por quarenta e oito ho- ras. Os sobrenadantes foram coletados, centrifugados por 5-10 min a 2,000 rpm, transferidos em tubos novos e armazenados a +4°C. A quantidade de células vivas/mortas foi estimada por métodos de ex- clusão de azul tripano por contador de células BioRad TC 20. Volume e número de células para cada amostra foram registrados. Os resulta- dos são apresentados na Tabela 21. Tabela 21. Linhagem Celular pg/ml SD Replicação 4T1 0 0,33 3 B16-F10 12,8 0,71 3 CT26 0 0,25 3 GL261 14,72744 2,38 3 ID8 6,375451 0,47 3 LL2 4,20784 1,35 3 MC38 55,65824 3,56 3 PAN02 38,44435 16,32 3 RENCA 342,397 8,08 3
[00605] Para a seleção de um modelo in vivo apropriado, o sangue de animais portadores de tumor foi coletado pelo método retro-orbital e transferido para tubos de coleta de sangue microtainer (365967, BD). O volume do tumor foi registrado e ajustado para 200 mm3 quando aplicável. O soro de animais com tumores ortotópicos Pan02 foi cole- tado de animais em estágio final (35-40 dias após o transplante). O soro para animais com histórico genético livre de tumor foi coletado como controle. Os níveis de GDF15 de camundongo foram determina- dos pelo kit ELISA de GDF15 de camundongo e apresentados na Ta- bela 22. Tabela 22. Cepa/Modelo pg/ml SD Replicação BalbC 31,10779804 6,632974 3 C57Bl6 74,55406 2,443727 2 FVB/N 38,96494373 13,71892286 3 RENCA 3460,438 1398,909 3 4T1 32,45177948 8,056048 3 Pan02 1880,244884 1095,055333 3 MC-38 44,13618956 21,41318 3 PyMT 146,4433483 27,91198329 3 B16_F10 136,8055 193,4721 3
[00606] O modelo de camundongo RCC renal metastático (RENCA) e o modelo de câncer pancreático (Pan02) foram identificados como os maiores produtores de GDF15 in vivo e foram ainda usados em es- tudos in vivo para determinar o potencial terapêutico de terapias anti- GDF15 em combinação com terapias com base em imuno-oncologia. Exemplo 19. Tratamento de combinação com anticorpo anti-CD40 e anticorpo anti-GDF15
[00607] Este exemplo ilustra a atividade terapêutica do anticorpo anti-GDF15 e terapia de combinação de anticorpos anti-CD40 em um modelo de RCC metastático RENCA de murino.
[00608] Camundongos BalbC fêmeas de seis (6) a 8 semanas de idade foram comprados de Jackson Laboratories. Todos os animais foram alojados em uma instalação de viveiro livre de patógenos em
CID e as experiências foram conduzidas de acordo com os protocolos de acordo com as diretrizes do Institutional Animal Care e Use Committee (IACUC).
[00609] A linhagem celular RENCA foi adquirida na American Type Culture Collection (ATCC). As células foram cultivadas em Meio de Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro bovino fetal (FBS), 2 mM de L-glutamina a 37°C em 5% de dióxi- do de carbono (CO2), e IMPACT-testado para patógenos em Rese- arch Animal Diagnostic Laboratory (RADIL) (Columbia, MO). Células livres de patógenos crescendo em uma fase de crescimento exponen- cial foram colhidas e usadas para inoculação do tumor. Camundongos BalbC foram inoculados subcutaneamente no flanco direito com 0,2 × 106 RENCA em 0,1 mL de DMEM livre de soro.
[00610] O anticorpo CD40 anti-camundongo FGK45 (IgG1 de ca- mundongo) e o anticorpo GDF15 anti-camundongo GDF_0297 (com- preendendo uma função efetora de camundongo IgG1 Fc nulo com- preendendo uma substituição no resíduo de aminoácido número 265 de ácido aspártico para alanina (D265A)) foram diluídos para concen- trações de 2 mg/mL em solução salina tamponada com fosfato (PBS) (Life Technologies), e dosados em 10 mg/kg por camundongo intrape- ritonealmente (ip). Em outro exemplo, o anti-CD40 foi diluído para a concentração de 1 mg/mL e dosado em 5 mg/kg por camundongo.
[00611] Quando os tumores atingiram o tamanho desejado, os ca- mundongos foram distribuídos aleatoriamente em grupos de tratamen- to. O tratamento foi iniciado no mesmo dia da aleatorização. O tama- nho do tumor foi medido duas vezes por semana em duas dimensões usando um paquímetro e o volume foi expresso em milímetros cúbicos usando a fórmula: V = 0,5 L × W 2 onde L é o diâmetro mais longo do tumor e W é o diâmetro perpendicular a L. Peso corporal foi registrado duas vezes por semana.
[00612] Para analisar o resultado do tratamento combinatório no estado de infiltração de tumor e leucócitos esplênicos, a seguinte aná- lise foi realizada. Os tumores foram disseminados em uma suspensão de célula única usando MACS™ suave e Kit de dissociação de ca- mundongo Miltenyi (Miltenyi Biotec) de acordo com o protocolo do fa- bricante com modificação. Tampão de lise de cloreto de amônio- potássio (ACK) (Life Technologies) foi usado para hemácias. As célu- las foram lavadas duas vezes com tampão de manchamento de FACS (PBS suplementado com FBS a 10%) e finalmente ressuspensas em tampão de manchamento de FACS. Para leucócitos esplênicos, os ba- ços excisados foram perfundidos com 3 mL de solução de digestão contendo 0,2 mg/mL de Liberase TL (5401020001, Roche) e 20 u/mL de DNase I Roche 4716728001, Roche). Os baços foram incubados durante 15 min a 37°C com agitação suave. No final da incubação, a atividade enzimática foi extinta pela adição de 1mL de FBS, os baços foram cortados em pequenos pedaços e coados em um tubo cônico de 50 mL, as células foram lavadas em PBS, centrifugadas a 1500 fpm por 5 minutos e o sedimento resultante foi ressuspenso em tampão de MACS frio. Tampão de lise de ACK foi usado para remover as hemá- cias.
[00613] Uma alíquota de células foi pré-incubada com 0,5 µg/106 células de Bloco BD Fc de camundongo (Biolegend, 101310) em soro de rato a 10% em PBS por 10 minutos antes de mAbs de fenotipagem serem adicionados para especificamente manchar células imunes. An- tígenos de superfície celular foram rotulados incubando as células a 4°C durante 30 minutos. Após a remoção dos mAbs não ligados, as células foram lavadas duas vezes com tampão de manchamento de FACS, fixadas em tampão fixador (PBS + 1% paraformaldeído) e ar- mazenadas a 4°C no escuro até serem analisadas por citometria de fluxo. A coloração intracelular foi realizada usando o conjunto de Tam-
pão de Manchamento de Fator Foxp3/Transcrição (eBioscience) de acordo com o protocolo do fabricante. Os dados de citometria de fluxo foram adquiridos usando Fortessa™ SORP (BD Biosciences) e anali- sados usando FlowJo™ (TreeStar Inc.).
[00614] Os anticorpos usados para a coloração da superfície celular ou intracelular foram adquiridos em BD Biosciences, eBioscience, Invi- trogen ou Biolegend. Eles foram anti-camundongo de rato CD45- PerCP-Cy5,5 (clone 30-F11, BD Biosciences), anti-camundongo de rato CD11b Texas Red (M1/70, BD Biosciences), anti-camundongo de rato CD25-BUV395 (PC61, BD Biociências), anti-camundongo de rato Ly6G-FITC (1A8, BD Biosciences), anti-camundongo de rato CD90,2- BV786 (53-2,1, BD Biosciences), anti-camundongo de rato CD8- BV650 (53-6,7, BD Biosciences), anti-camundongo de rato Ly6C- BV421 (AL-21, BD Biosciences), anti-camundongo de rato F4/80- PECy7 (BM8, Invitrogen™), anti-camundongo de rato CD86-BV605 (GL1, BD Biosciences), anti-amundongo de hamster armênio CD49a- APC (HMA1, BioLegend) anti-camundongo de rato MHCII (IA-IE)- Alexa Fluor 700 (M5/114,15,2, BioLegend), anti-camundongo de rato CD4-V450 (RM4-5, BD Biosciences), anti-camundongo de rato Foxp3- PE (FJK-16s, eBioscience). Para evitar artefatos de manchamento, as amostras foram mantidas em tampão de coloração brilhante (BD Bios- ciences). As células vivas foram separadas das células mortas usando o kit LIVE/DEAD Fixable eFluor™ 780 Dead Cell Stain (Invitrogen).
[00615] Os resultados foram expressos como média ± SEM. As análises estatísticas foram realizadas usando GraphPad Prism 6,0. ANOVA de único sentido ou de duas sentidos foi aplicado para compa- rar as diferenças estatísticas entre vários grupos em relação ao contro- le de isótipo ou outros grupos de tratamento. O teste t não pareado foi aplicado para comparar a diferença estatística entre dois grupos. P <0,05 foi considerado como diferença significante.
[00616] O modelo RENCA foi usado para avaliar a eficácia terapêu- tica de anti-GDF15 em combinação com anti-CD40 no modelo rRCC, o tamanho do tumor inicial médio de 25 a 38 mm3 (n = 10 animais por grupo). Os animais foram sacrificados quando o volume do tumor atin- giu 2,000 mm3 ou perda de peso corporal de 20%. A sobrevida média do animal com os tumores para isótipo, anticorpo anti-GDF15 sozinho e anticorpo anti-CD40 sozinho e combinação de anticorpo anti-GDF15 + anticorpo anti-CD40 foi de 26, 25,5, 32,5 e 34 dias, respectivamente. O grupo anticorpo anti-CD40 + anticorpo anti-GDF15 da mesma forma resultou em 30% de respondedores completos quando comparado a 0% no isótipo, grupos de anticorpo anti-GDF15 sozinho e anticorpo anti-CD40 sozinho.
[00617] Em um estudo separado, a eficácia terapêutica do anticorpo anti-GDF15 em combinação com duas dosagens diferentes de anti- corpo anti-CD40 (10 mg/kg e 5 mg/kg) foi avaliada no modelo de car- cinoma de células renais recorrente RENCA (rRCC), com o tamanho do tumor inicial médio de 47 a 54 mm3 (n = 10 animais por grupo). Os resultados são resumidos na Tabela 23 e Tabela 24. Tabela 23. Medições de tumor (Média  SEM) de carcinoma renal subcutâneo de Renca ao longo do tempo Grupo 1. Controle de isótipo Dias Pós-Inoculação do Tumor Tamanho de Tumor Médio (mm3) SEM N 10 53,90874 14,3443 10 13 130,8436 28,27738 10 17 353,1065 85,68442 10 20 552,0961 137,3508 10 25 858,6344 162,7132 10 27 1195,16 292,976 10 Grupo 2. Anticorpo Anti-GDF15 (10 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tumor Tamanho de Tumor Médio (mm3) SEM N 10 53,24435 13,3418 10 13 118,301 31,60418 10 17 347,7124 117,5708 10 20 602,2936 247,2447 10 25 1207,494 545,9653 9 27 1455,983 309,5726 8 Grupo 3. Anticorpo Anti-CD40 (10 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tumor Tamanho de Tumor Médio (mm3) SEM N 10 53,44178 13,94953 10 13 110,619 34,34105 10 17 224,5232 70,38568 10
20 338,2354 74,07587 10 25 532,1088 155,9947 10 27 715,2596 193,4371 10 Grupo 4. Anticorpo Anti-CD40 (5 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tumor Tamanho de Tumor Médio (mm3) SEM N 10 53,09616 13,09756 10 13 96,98625 33,47341 10 17 254,366 86,80886 10 20 376,4508 110,6125 10 25 648,832 170,2004 10 27 795,9384 357,4954 10 Grupo 5. Anticorpo Anti-GDF15 + Anticorpo Anti-CD40 (10 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tumor 10 46,99903 11,86423 10 13 106,4694 43,02584 10 17 186,6874 88,81804 10 20 233,0179 132,9253 10 25 349,6296 234,2788 10 27 458,9107 371,8595 10 Grupo 5. Anticorpo Anti-GDF15 + Anticorpo Anti-CD40 (5 mg/kg) Dias Pós-Inoculação do Tumor Tamanho de Tumor Médio (mm3) SEM N 10 53,78749 14,79445 10 13 97,36322 37,22007 10 17 232,1165 95,47443 10 20 315,4536 157,8604 10 25 565,9923 322,4584 9 27 584,3638 417,7759 9 3 O volume do tumor é expresso em mm . N = número de animais den- tro de cada grupo; SEM = erro padrão da média. Tabela 24: Comparação estatística entre as medições do tumor de carcinoma renal RENCA subcutâneo ao longo do tempo em compara- ção com o controle de isótipo Dia Anticorpo Anti-CD40 Anticorpo Anti-CD40 (5 Anticorpo Anti-GDF15 Anticorpo Anti-GDF15 Anticorpo Anti-GDF15 (10 mg) mg) + anticorpo anti-CD40 + anticorpo anti-CD40 (10 mg) (10 mg) 10 >0,9999 >0,9999 >0,9999 >0,9999 >0,9999 13 0,9997 0,9983 0,9999 0,9997 0,9983 17 0,6932 0,8611 >0,9999 0,4581 0,7398 20 0,2271 0,4057 0,9911 0,0256 0,152 25 0,0213 0,243 0,0152 <0,0001 0,0571 27 0,0002 0,0028 0,1278 <0,0001 <0,0001
[00618] A sobrevida média do animal com os tumores para isótipo, anticorpo anti-GDF15 sozinho, anticorpo anti-CD40 (5 mg/kg), anticor- po anti-CD40 (10 mg/kg) e anticorpo anti-GDF15 (10mg/kg) + A com- binação de anticorpo anti-CD40 (5 mg/kg) e anticorpo anti-GDF15 (10mg/kg) + anticorpo anti-CD40 (10 mg/kg) foi de 29,5, 29,5, 36, 36, 38 e 44,5 dias, respectivamente.
[00619] Para determinar a contribuição de linfócitos infiltrantes de tumor (TILs) na resposta antitumoral mediada por anti-GDF15, os TILs foram isolados de tumores RENCA vinte e quatro horas após o último tratamento e analisados quanto a marcadores associados à resposta imune antitumoral. Os resultados são resumidos na FIG. 29 (valor de p determinado pelo teste t não pareado; p = 0,0026).
[00620] O tratamento de combinação [anticorpo anti-GDF15 (10mg/kg) + anticorpo anti-CD40 (10 mg/kg)] aumentou o estado de ativação (MHCII MFI) de macrófagos fechados como CD11b+; F4/80+; células Ly6C- em tumores, em média, 187% em comparação com o grupo tratado com isótipo (FIG. 29). Em contraste, a monoterapia com anti-CD40 aumentou MHCII MFI em 67% (FIG. 29). A monoterapia an- ti-GDF15 não aumentou o estado de ativação de macrófagos (FIG. 29).
[00621] A relação de células T CD8+/células T reguladoras (Treg) nos grupos isótipo e anti-GDF15 foi de 2,4 e 2,1, respectivamente (FIG. 30, círculos sólidos e triângulos sólidos). A relação células T CD8+/Treg aumentou para 17 no tratamento com anticorpo anti-CD40 sozinho (FIG. 30, círculos abertos). Em contraste, o tratamento de combinação com anticorpo anti-GDF15 mais anticorpo anti-CD40 re- sultou em uma relação células T CD8+/Treg de 84 (FIG. 30, triângulos abertos).
[00622] Estes resultados demonstram que a terapia baseada em anti-CDF15 é eficaz no aumento da eficácia antitumor da terapia anti- CD40.
[00623] Além de aumentar a eficácia antitumor da terapia anti-CD40 no modelo RRC, a terapia baseada em anti-GDF15 mitigou a toxicida- de induzida por anti-CD40 manifestada na perda de peso corporal dos animais tratados. Enquanto a terapia baseada em anti-CD40 resultou em 4,43% de perda de peso corporal em animais tratados, o grupo de combinação de anticorpo anti-GDF15 + anticorpo anti-CD40 demons- trou 1,5% de ganho de peso corporal, em comparação com 1,2% de ganho de peso corporal no grupo tratado com controle de isótipo (n = 20 animais em cada grupo, anticorpo anti-CD40 vs anticorpo anti- CD40 + anticorpo anti-GDF15, p = 0,0006 por teste t não pareado). A restauração do peso corporal no grupo anticorpo anti-CD40 + anticor- po anti-GDF15 foi acompanhada pela redução da expressão de citoci- nas geralmente associada à toxicidade mediada por citocinas no soro de animais tratados.
[00624] Amostras de soro foram coletadas de animais tratados co- mo descrito no Exemplo 1. Os níveis de citocinas foram analisados pelo kit V-PLEX® Proinflammatory Panel 1 (camundongo) da Meso Scale Discover® (Mescoscale® K15048D). Cada amostra foi diluída de 1 a 4 com Diluente 41 (Mescoscale® R50AH-1) e testada em tripli- cata de acordo com o protocolo do fabricante. Os resultados foram analisados pela máquina Meso Scale Discovery® Quickplex® SQ 120 e pelo software Discovery workbench. A expressão das seguintes cito- cinas foi analisada: IFN, IL10, IL12p70, IL1 beta, IL2, IL4, IL5, IL6, KC/GRO, TNFα. Como mostrado na FIG. 31, os níveis de expressão de uma série de citocinas pró-inflamatórias (IFN (IFNg), TNFα (TNFa), IL6, IL10, KC/GRO) foram significativamente reduzidos no grupo tratado com anti-CD40 após a exposição ao tratamento anti- GDF15 (n = 5, anti-CD40 vs anti-CD40 + anti-GDF15, p = 0,0044 pelo teste ANOVA de dois sentidos).
[00625] Estes resultados demonstram que o tratamento com anti- corpo anti-GDF15 em combinação com anti-CD40 tem um efeito anti- tumor sinergístico acompanhado por níveis aumentados de ativação de CD11b +; células F4/80+ e relação de célula T CD8+/célula T regu- ladora (Treg) aumentada no local do tumor. Além disso, a terapia anti- GDF15 mitiga os sinais clínicos de toxicidades da terapia anti-CD40 associadas ao aumento da produção de citocinas. Exemplo 20. Tratamento de câncer de pâncreas com anticorpo anti-CD40 e anticorpo anti-GDF15
[00626] Este exemplo ilustra a atividade terapêutica do anticorpo anti-GDF15 e terapia de combinação de anticorpos anti-CD40 em um modelo de adenocarcinoma pancreático de murino (Pan02). Os ani- mais portadores de tumor foram gerados como descrito no Exemplo
19. A carga de tumor foi calculada como fótons/segundo em ROI (regi- ão de interesse) após subtrair os valores antecedentes. A emissão média no momento da inscrição foi 4,8*108 fótons/segundo.
[00627] Para este estudo, os anticorpos usados foram: anticorpo de CD40 anti-camundongo de camundongo FGK45 (imunoglobulina de camundongo G1 [mIgG1]) (10mg/kg) e GDF15_0297 anti-camundongo de camundongo (função efetora de IgG1 de camundongo mutação D265A nula) (10mg/kg).
[00628] A sobrevida média dos animais tratados com anticorpo anti- GDF15 + anticorpo anti-CD40 foi de 126,5 dias, em comparação com 106 dias no grupo tratado com anticorpo anti-CD40 sozinho, 52,5 dias no grupo tratado com anticorpo anti-GDF15 sozinho e 45 dias no gru- po de controle de isótipo.
[00629] Estes resultados demonstram que o tratamento com anti- corpo anti-GDF15 em combinação com anti-CD40 tem um efeito anti- tumor sinergístico na progressão do câncer pancreático. Exemplo 21. Anticorpos neutralizantes de GDF15 revertem a inibi- ção mediada por GDF15 da morte de tumor mediada por macrófa- gos
[00630] Este exemplo ilustra a função GDF15 na modulação da ati- vidade de morte de tumor de macrófagos.
[00631] Os macrófagos peritoneais foram isolados de camundongos C57Bl6 cinco dias após a injeção ip com 1 mL de meio de tioglicolato de Brewer a 3% (B2551, Sigma). Os macrófagos foram semeados a 0,35 × 106 células/cavidade em concentração de placa de cultura de células de 24 cavidades em meio de macrófago completo (RPMI 1640 suplementado com 10% de FBS inativado pelo calor, 2 mM de L- glutamina, 100 u/ml de penicilina, 0,1 mg/ml de estreptomicina, Piruva- to de sódio 10 µM, aminoácidos não essenciais 100 µM, HEPES 25 mM [pH 7,4], -mercaptoetanol 50 µM) sozinho ou na presença de ci- tocinas e anticorpos testados. As seguintes citocinas e anticorpos fo- ram usados no estudo: GDF15 de camundongo recombinante (purifi- cado por E. coli, sistemas RD 8944-GD), anticorpo GDF15_0297 anti- camundongo "297" e anti-GDF15_001. Após três horas de incubação com GDF15 de camundongo recombinante (10 nM) e anticorpos (100 nM cada), as células foram submetidas a LPS (10 ng/ml, L2654, Sig- ma) e IFN (100 u/ml, 485M100/CF, R&D Systems) tratamento para atingir a ativação de macrófagos. No dia seguinte, as células Pan02 foram rotuladas por CSFE (C34554, Invitrogen) de acordo com as ins- truções do fabricante e co-semeadas com macrófagos ativados na proporção de 1:4. Vinte e quatro horas mais tarde, macrófagos e célu- las tumorais foram coletadas após incubação com TrypLE Express™ e analisadas por FACS como descrito no Exemplo 17. Células mieloides foram identificadas por CD11b BUV395 anti-camundongo de rato (M1/70, BD Biosciences), células tumorais foram identificadas como população CSFE-positiva/CD11b-negativa, as células vivas foram se- paradas das células mortas por DAPI (4',6-diamidino-2-fenilindol) (62247, Thermo Scientific).
[00632] Como mostrado na FIG. 32, GDF15 recombinante inibiu a morte de células tumorais mediada por macrófagos (triângulos fecha- dos). Esta inibição mediada por GDF15 foi revertida por tratamento com anticorpos anti-GDF15 (círculos abertos e triângulos abertos).
[00633] Estes resultados demonstram que o tratamento com anti- corpos anti-GDF15 é eficaz na promoção da atividade antitumorigênica de células imunes.
[00634] Embora os ensinamentos descritos tenham sido descritos com referência a várias aplicações, métodos, kits e composições, será apreciado que várias mudanças e modificações podem ser feitas sem se afastar dos ensinamentos no presente documento e da invenção reivindicada abaixo. Os exemplos anteriores são fornecidos para ilus- trar melhor os ensinamentos descritos e não são pretendidos limitar o escopo dos ensinamentos apresentados no presente documento. Em- bora os presentes ensinamentos tenham sido descritos em termos dessas modalidades exemplares, o versado na técnica facilmente compreenderá que numerosas variações e modificações dessas mo- dalidades exemplares são possíveis sem experimentação indevida. Todas essas variações e modificações estão dentro do escopo dos ensinamentos atuais.
[00635] Todas as referências citadas no presente documento, inclu- indo patentes, pedidos de patentes, artigos, livros de texto e similar, e as referências citadas nos mesmos, na medida em que ainda não es- tejam, estão no presente documento incorporadas por referência em sua totalidade para todos os propósitos. No caso de um ou mais da literatura incorporada e materiais similares diferirem ou contradizerem este pedido, incluindo, porém, não limitado a termos definidos, uso de termos, técnicas descritas ou similar, este pedido controla.
[00636] Será evidente para aqueles versados na técnica que várias modificações e variações podem ser feitas na presente invenção sem se afastar do escopo ou do espírito da invenção. Outras modalidades da invenção serão evidentes para aqueles versados na técnica a partir da consideração do relatório descritivo e da prática da invenção no presente documento descrita. Pretende-se que a especificação e os exemplos sejam considerados apenas exemplares, com um verdadeiro escopo e espírito da invenção sendo indicado pelas seguintes reivindi- cações.

Claims (38)

REIVINDICAÇÕES
1. Anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, caracterizado pelo fato de que especificamente liga-se ao fator de diferenciação de crescimento humano 15 (GDF15), compreendendo pelo menos um dos seguintes: a) uma região de determinação de complementaridade de cadeia leve 1 (LCDR-1) compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:95, um LCDR-2 compreendendo a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO:28, um LCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:9, uma região de determinação de complementaridade de cadeia pesada 1 (HCDR-1) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:32, uma HCDR-2 que com- preende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:165 e uma HCDR-3 compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; b) sequência de aminoácidos LCDR-1 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:7, 27, 36, 46, 55, 62, 82, 88, 95, 101, 129, 138, 150, 157, 174, e 184; c) uma sequência de aminoácidos LCDR-2 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:8, 28, 37, 47, 70, 108, 114, 122, 130, 175 e 185; d) uma sequência de aminoácidos LCDR-3 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:9, 29, 38, 48, 63, 76, 89, 102, 176 e 186; e) uma sequência de aminoácidos de HCDR-1 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:17, 32,41, 58, 66, 117, 125, 133, 153, 171 e 179; f) uma sequência de aminoácidos HCDR-2 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:18, 33, 42, 51, 59, 67, 85, 92, 98, 105, 118, 126, 134, 141, 146, 165, 172 e 180;
g) uma sequência de aminoácidos HCDR-3 selecionada a partir do grupo que consiste na sequência de SEQ ID NO:1, 19, 43, 52, 79, 111, 119, 135, 147, 154, 160, 173 e 181; h) as sequências de aminoácidos HCDR-1, HCDR-2 e HCDR-3 como mencionado na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166, e as sequências de aminoácidos LCDR-1, LCDR-2 e LCDR-3 como mencionado na sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163; i) a sequência de aminoácidos codificada pela inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e possuindo o Nº de Acesso ATCC PTA-125038 e a sequência de aminoácidos codificada pela in- serção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o Nº de Acesso ATCC PTA -125039; j) um domínio variável de cadeia pesada (VH) compreen- dendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à se- quência de SEQ ID NO:166, e um domínio variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de SEQ ID NO:163; k) um VH compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:166 e um VL compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:163; e l) um anticorpo que compete pela ligação a GDF15 com pe- lo menos um anticorpo de (a) - (k) acima.
2. Anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de Fc humano selecionado a partir do grupo que consiste em um domínio de Fc de IgA1 IgA2, IgD, IgE, IgM, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4.
3. Anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracteri- zado pelo fato de que compreende:
a) uma cadeia pesada (HC) compreendendo uma sequên- cia de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de SEQ ID NO:164, e uma cadeia leve (LC) compreendendo uma sequência de aminoácidos pelo menos 90% idêntica à sequência de SEQ ID NO:162; b) um HC compreendendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:164, e um LC compreendendo a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO:162.
4. Anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mes- mo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracteri- zado pelo fato de que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antíge- no do mesmo, liga GDF15 humano ou de macaco cinomolgo com um KD de cerca de ou menos do que um valor selecionado a partir do gru- po que consiste de cerca de 10nM, 5nM, 2nM, 1nM, 900pM, 800pM, 700pM, 600pM, 500pM, 400pM, 300pM, 250pM, 200pM, 150pM, 100pM, 50pM, 40pM, 30pM, 25pM, 20pM, 15pM e 10pM.
5. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que codifica o anticorpo, ou porção de ligação de antígeno do mesmo, co- mo definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4.
6. Ácido nucleico isolado, caracterizado pelo fato de que compreende: a) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:167, a se- quência de ácido nucleico de SEQ ID NO:168 ou ambas, b) a sequência de ácido nucleico de SEQ ID NO:169, a se- quência de ácido nucleico de SEQ ID NO:170 ou ambas, e c) a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositado com o ATCC e tendo o número de acesso PTA-125038, a sequência de ácido nucleico da inserção do plasmídeo depositada na ATCC e tendo o número de acesso PTA-125039, ou ambos.
7. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o áci-
do nucleico, como definido na reivindicação 5 ou 6.
8. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que com- preende o vetor, como definido na reivindicação 7.
9. Célula hospedeira, de acordo com a reivindicação 8, ca- racterizada pelo fato de que a referida célula hospedeira é uma célula de mamífero selecionada a partir do grupo que consiste em uma célula de CHO, uma célula de COS, uma célula de HEK-293, uma célula de NS0, uma célula de PER.C6® ou um Célula de Sp2.0.
10. Método de produção de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que com- preende a cultura da célula hospedeira, como definida na reivindicação 8, sob uma condição em que o referido anticorpo, ou fragmento de li- gação de antígeno do mesmo, é expresso pela referida célula hospe- deira.
11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um transportador ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
12. Método de tratamento de uma condição médica, doença ou distúrbio mediado por ou associado à expressão de GDF15, em um indivíduo em necessidade do mesmo, o referido método caracterizado pelo fato de que compreende a administração de uma quantidade te- rapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 11.
13. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracteriza- do pelo fato de que a condição é caquexia associada a câncer, quimio- terapia, quimioterapia em combinação com uma terapia imuno- oncológica, doença pulmonar obstrutiva crônica, doença renal crônica, insuficiência cardíaca crônica, insuficiência cardíaca congestiva ou sarcopenia.
14. Método para diminuir o nível de GDF15 livre em um in- divíduo em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que o referido método compreende a administração de uma quantidade tera- peuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 11, em que o nível de GDF15 livre é reduzido.
15. Método para redução da atividade de GDF15 em um indivíduo em necessidade do mesmo, o método caracterizado pelo fa- to de que compreende a administração de uma quantidade terapeuti- camente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 11.
16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracteriza- do pelo fato de que a atividade de GDF15 é pelo menos uma atividade selecionada a partir do grupo que consiste em: (a) diminuir a ingestão de alimentos; (b) diminuição do apetite; (c) diminuição do peso corpo- ral; (d) aumentar a perda de peso; (e) diminuição da massa gorda; (f) diminuição da massa magra; (g) aumento da perda de massa gorda, (h) aumento da perda de massa muscular magra, (i) ligação ao GFRAL; (j) aumentar a sinalização a jusante mediada por RET; (k) aumento da fosforilação de ERK; (l) aumento da fosforilação da proteí- na ribossômica S6; (m) aumento da ativação mediada por RET da tri- lha de sinalização de MAPK; (n) aumentar a ativação de RET da trilha de sinalização de AKT; e (o) aumentar a ativação da trilha de sinaliza- ção de PLC- 1.
17. Método para tratar câncer em um paciente em necessi- dade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende a admi- nistração ao paciente de uma terapia de combinação que proporciona um efeito terapêutico sinergístico, o método compreendendo a admi- nistração de uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como defi- nido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou a composição far- macêutica como definida na reivindicação 11, e a) uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo antagonista anti-CD40; ou b) uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um antagonista de ligação ao eixo PD-1, em que o antagonista de li- gação ao eixo PD-1 não é avelumabe.
18. Método, de acordo com a reivindicação 17 (b), caracte- rizado pelo fato de que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-1 selecionado a partir do grupo que consiste em ni- volumabe, pembrolizumabe, espartalizumabe, pidilizumabe, tislelizu- mabe, AMP-224, AMP-514, cemiplimabe e sassanlimabe (PF- 06801591).
19. Método, de acordo com a reivindicação 17 (b), caracte- rizado pelo fato de que o antagonista de ligação ao eixo PD-1 é um anticorpo anti-PD-L1 selecionado a partir do grupo que consiste em atezolizumabe, durvalumabe, BMS-936559, MEDI4736 e MPDL3280A, e em que o anticorpo anti-PD-L1 não é avelumabe.
20. Método, de acordo com a reivindicação 18 ou 19, carac- terizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, carcinoma de células renais, carcinoma de células de Merkel, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de pâncreas, urotelial câncer e câncer de próstata resistente à castração.
21. Método, de acordo com a reivindicação 17 (a), caracte- rizado pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em câncer gástrico, sarcoma, linfoma, linfoma de Hodgkin,
leucemia, câncer de cabeça e pescoço, câncer de cabeça e pescoço de células escamosas, câncer tímico, câncer epitelial , câncer salivar, câncer de fígado, câncer de estômago, câncer da tireóide, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer de mama, câncer de próstata, cân- cer de esôfago, câncer de pâncreas, glioma, leucemia, mieloma múlti- plo, carcinoma de células renais, câncer de bexiga, câncer cervical, coriocarcinoma, câncer de cólon, câncer oral, câncer de pele e mela- noma.
22. Kit para o tratamento do câncer, caracterizado pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergís- tica de um anticorpo anti-GDF15 e uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo anti-PD-1.
23. Kit para o tratamento de câncer, caracterizado pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-GDF15 e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-CD40.
24. Método para aumentar o efeito terapêutico de um mo- dulador imunológico administrado a um indivíduo para o tratamento de câncer, caracterizado pelo fato de que o método compreende a admi- nistração ao indivíduo recebendo o modulador imunológico de uma quantidade eficaz do anticorpo anti-GDF15, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindi- cações 1 a 4, ou a composição farmacêutica como definida na reivin- dicação 11.
25. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracteriza- do pelo fato de que o câncer é selecionado a partir do grupo que con- siste em câncer de mama, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer de pulmão, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, glioma, glioblastoma, câncer renal, câncer endometrial e câncer color- retal.
26. Método para diminuir ou inibir a toxicidade em um indi- víduo que experimenta a síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou tempestade de citocinas ou vulnerável a CRS ou tempestade de cito- cinas, o método caracterizado pelo fato de que compreende a adminis- tração ao indivíduo de uma quantidade eficaz do anticorpo anti-GDF15 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, ou a composição farmacêutica como definida na reivindicação 11.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracteriza- do pelo fato de que o indivíduo está passando por uma terapia contra o câncer e o referido método não reduz a eficácia da terapia contra o câncer.
28. Método, de acordo com a reivindicação 27, caracteriza- do pelo fato de que a terapia do câncer compreende um modulador imunológico, tal como um anticorpo anti-CD40, um anticorpo anti- CD47, um anticorpo anti-CTLA4, um anticorpo anti-4-1BB, IL-12 ou IL-
15.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 26 a 28, caracterizado pelo fato de que a causa da CRS ou tem- pestade de citocinas compreende um estímulo infeccioso, condição ou síndrome, ou em que a causa da referida síndrome de liberação de citocina ou tempestade de citocinas compreende um estímulo não in- feccioso, condição, ou síndrome, ou qualquer combinação dos mes- mos.
30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracteriza- do pelo fato de que o estímulo, condição ou síndrome infecciosa com- preende gripe, gripe aviária, síndrome respiratória aguda grave (SARS), linfo-histiocitose hemofagocítica associada ao vírus Epstein- Barr (HLH), sepse, sepse gram-negativa, malária, um vírus Ebola, um vírus da varíola, uma infecção bacteriana Gram-negativa sistêmica ou síndrome de Jarisch-Herxheimer, ou em que o referido estímulo não infeccioso, condição ou síndrome compreende linfo-histiocitose hemo- fagocítica (HLH), HLH esporádico, síndrome de ativação de macrófago (MAS), artrite crônica, artrite idiopática juvenil sistêmica (sJIA), doença de Still, uma síndrome periódica associada à criopirina (CAPS), sín- drome autoinflamatória familiar pelo frio (FCAS), urticária familiar ao frio (FCU), síndrome de Muckle-Well ( MWS), síndrome neurológica cutânea infantil crônica e articular (CINCA), uma criopirinopatia que compreende mutações de função herdadas ou de novo no gene NLRP3, um distúrbio autoinflamatório hereditário, pancreatite aguda, queimaduras graves, trauma, síndrome da angústia respiratória aguda, imunoterapia, terapia com anticorpos monoclonais, secundária ao uso de fármacos, é secundária à inalação de toxinas, um lipopolissacarí- deo (LPS), toxinas Gram-positivas, toxinas fúngicas, glicosilfosfatidili- nositol (GPI) ou modulação da expressão do gene RIG-1.
31. Quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica, como definida na reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de tratamento de uma condição médica, doença ou distúrbio mediado por ou associado à expressão de GDF15, em um indivíduo com necessidade do mesmo.
32. Quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica, como definida na reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de redução do nível de GDF15 livre em um indivíduo em necessidade do mesmo.
33. Quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qual-
quer uma das reivindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica como definida na reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para reduzir a atividade de GDF15 em um indivíduo em necessidade do mesmo.
34. Quantidade terapeuticamente eficaz do anticorpo, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica, como definida na reivindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método de tratamento de câncer em um paciente em necessi- dade do mesmo, em que o anticorpo, ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, ou composição farmacêutica, é administrado em combinação com: a) uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um anticorpo antagonista anti-CD40; ou b) uma quantidade terapeuticamente eficaz sinergística de um antagonista de ligação ao eixo PD-1, em que o antagonista de li- gação ao eixo PD-1 não é avelumabe.
35. Quantidade eficaz do anticorpo, ou fragmento de liga- ção de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica, como definida na rei- vindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para aumentar o efeito terapêutico de um modulador imunológico ad- ministrado a um indivíduo para o tratamento do câncer.
36. Quantidade eficaz do anticorpo, ou fragmento de liga- ção de antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das rei- vindicações 1 a 4, ou composição farmacêutica, como definida na rei- vindicação 11, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para diminuir ou inibir a toxicidade em um indivíduo que experimenta a síndrome de liberação de citocina (CRS) ou tempestade de citocinas ou vulnerável a CRS ou tempestade de citocinas.
37. Uso de um anticorpo, ou fragmento de ligação de antí- geno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de uma com- posição farmacêutica, medicamento ou produto para tratar uma condi- ção médica, doença ou distúrbio mediado por ou associado à expres- são de GDF15; para diminuir o nível de GDF15; para reduzir a ativida- de de GDF15; para aumentar o efeito terapêutico de um modulador imunológico; para diminuir ou inibir a toxicidade em um indivíduo que experimenta a síndrome de liberação de citocinas (CRS) ou tempesta- de de citocinas ou vulnerável a CRS ou tempestade de citocinas e/ou para tratar câncer.
38. Invenção, caracterizada em quaisquer formas de suas modalidades ou em qualquer categoria aplicável de reivindicação, por exemplo, de produto ou de processo ou uso ou qualquer outro tipo de reivindicação englobada pela matéria inicialmente descrita, divulgada ou ilustrada no pedido de patente.
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