JP2022188191A - 抗ｇｄｆ１５抗体、組成物および使用の方法 - Google Patents

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Abstract

【課題】ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、ならびにこれらの抗体のための方法および使用を提供する。【解決手段】ヒト増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、特定の配列番号の配列からなるＬＣＤＲならびにＨＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。【選択図】図５

Description

本発明の分野
本発明は、増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、ならびにがんを処置するための本発明の抗ＧＤＦ１５抗体ならびにＰＤ－１軸結合性アンタゴニストおよび／またはＣＤ４０阻害剤の組み合わせの使用を含む、その組成物、方法および使用に関する。
背景
ＧＤＦ１５は、マクロファージ阻害性サイトカイン１（ＭＩＣ－１）、前立腺由来因子（ＰＤＦ）、胎盤骨形成タンパク質（ＰＬＡＢ）、ＮＳＡＩＤ活性化遺伝子１（ＮＡＧ－１）および胎盤トランスフォーミング増殖因子β（ＰＴＧＦＢ）としても公知であり、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦβ）スーパーファミリーのメンバーである２５ｋＤａのジスルフィド連結されたホモダイマーを形成する１２ｋＤａの分泌型タンパク質である。正常では、ＧＤＦ１５は、組織中では弱く発現されるか全く発現されず、血漿濃度は低い。ＧＤＦ１５発現は、炎症および悪性腫瘍の間に上方調節され、炎症および腫瘍成長を制限する。この上昇した発現は、がん（例えば、前立腺、膵臓、結腸直腸および胃（gastric））、心不全、慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）、サルコペニアおよび慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において、著しく上昇したＧＤＦ１５の循環濃度（＞１～１００ｎｇ／ｍＬ）を生じる。
ＧＤＦ１５関連の体重減少が、前臨床モデルにおいて示されている。外因性ＧＤＦ１５投与は、生理学的および病態生理学的条件下で、食物摂取および体重を減少させる。増加した血漿ＧＤＦ１５は、悪液質を有するがん患者における体重減少と関連する（ＷＯ２００５／０９９７４６；ＷＯ２００９／０２１２９３、ＷＯ２０１４／１００６８９、ＷＯ２０１６／０４９４７０）。証拠は、がん患者において最も強いが、心不全と関連する悪液質におけるＧＤＦ１５と体重減少との間の関連もまた報告されている（ＷＯ／２０１５／１９６１４２）。ヒトデータと一致して、上昇した血漿ＧＤＦ１５は、マウス腫瘍モデルにおいて、悪液質と関連する。さらに、多変量分析を使用した複数の研究が、多くのがん型（例えば、とりわけ、ＮＳＣＬＣ、膵および肉腫）ならびに心不全、ＣＫＤおよびＣＯＰＤにおける低い生存と関連する独立した予後バイオマーカーとして、ＧＤＦ１５を同定している。
より最近、２０１７年の１０月に、ＧＤＦ１５活性、例えば、その代謝効果は、ＧＦＲ－αファミリーのオーファンメンバーであるその同族受容体ＧＤＮＦファミリー受容体α様（ＧＦＲＡＬ）へのＧＤＦ１５結合によって媒介されることが報告された。例えば、Ｈｓｕら、２０１７、Ｎａｔｕｒｅ ５５０：２５５～２５９；Ｙａｎｇら、２０１７、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２３（１０）：１１５８；およびＥｍｍｅｒｓｏｎら、２０１７、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２３（１０）：１２１５を参照のこと。これらの研究は、ＧＦＲＡＬに結合するＧＤＦ１５が、ＧＦＲＡＬ媒介性のシグナル伝達経路を活性化し、それによって、受容体チロシンキナーゼＲＥＴが活性化され、ＧＦＲＡＬの共受容体として作用し、次に、ＲＥＴが、とりわけ、ＥＲＫ（ｐＥＲＫ）、リボソームタンパク質Ｓ６（ｐＳ６）、ＡＫＴ、ＭＡＰＫおよびホスホリパーゼＣガンマ１（ＰＬＣ－γ１）の下流リン酸化を媒介することを実証した。さらに、これらの研究は、ＧＤＦ１５によるＧＦＲＡＬの活性化が、食欲および嘔吐を制御する神経ペプチドに対する化学感覚ニューロンおよび受容体を含む脳幹の領域である最後野および孤束核において生じることを実証した。最後野は、血液中の化学的メッセンジャーを感知し、代謝および食欲を制御する系を含む自律神経性の生理学的系を制御する。さらに、脳幹のこれらの領域は、血液脳関門（ＢＢＢ）の外側にあり、これにより、これらの領域は、とりわけ、ＧＦＲＡＬまたはＧＤＦ１５に結合し、ＧＦＲＡＬ－ＧＤＦ１５相互作用を防止して、食欲、ボディマス、体重、体脂肪量および食物摂取と関連するＧＤＦ１５の代謝効果をモジュレートすることができる抗体を含む大分子にアクセス可能になる。したがって、脳幹中に存在するＧＤＦ１５－ＧＦＲＡＬ経路は、ＧＤＦ１５活性によって媒介される疾患、状態および障害をモジュレートするための潜在的な標的である。
上昇したＧＤＦ１５レベルによって媒介されるもしくはそれと関連する悪液質によって引き起こされるまたはそれと関連する体重減少のための治療選択肢の著しい必要が存在したままである。本発明は、この必要を満たす新規の潜在的な治療的抗体を提供する。
ＰＤ－Ｌ１（プログラム死－リガンド１；ＣＤ２７４およびＢ７ホモログ１［Ｂ７－Ｈ１］としても公知）は、多くのがんにおいて過剰発現され、予後不良としばしば関連する（Ｏｋａｚａｋｉ Ｔら、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｉｍｍｕｎ．２００７ １９（７）：８１３）（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＲＨら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２００６、６６（７）：３３８１）。興味深いことに、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球の大部分は、正常な組織および末梢血中のＴリンパ球とは対照的に、ＰＤ－１を優勢に発現する。腫瘍反応性Ｔ細胞上のＰＤ－Ｌ１の同族受容体であるＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質１）は、損なわれた抗腫瘍免疫応答に寄与し得る（Ａｈｍａｄｚａｄｅｈら、Ｂｌｏｏｄ ２００９ １ １４（８）：１５３７）。これは、Ｔ細胞活性化の減弱および免疫監視の逃避を生じる、ＰＤ－１発現Ｔ細胞と相互作用するＰＤ－Ｌ１発現腫瘍細胞によって媒介されるＰＤ－Ｌ１シグナル伝達の利用に起因し得る（Ｓｈａｒｐｅら、Ｎａｔ Ｒｅｖ ２００２）（Ｋｅｉｒ ＭＥら、２００８ Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６：６７７）。したがって、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１相互作用およびシグナル伝達経路（「ＰＤ－１軸」とも呼ばれる）の阻害は、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性の死滅を増強し得る。
ＰＤ－１軸シグナル伝達の直接的リガンド（例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２［プログラム細胞死１リガンド２およびＢ７－ＤＣ］）を介したＰＤ－１軸シグナル伝達の阻害は、がんの処置のためのＴ細胞免疫（例えば、腫瘍免疫）を増強することが提唱されている。さらに、Ｔ細胞免疫と類似の増強が、別の結合パートナー、即ち、Ｂ７－１（ＣＤ８０としても公知）へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害することによって観察されている。
現在、１０よりも多くのがん適応症（Ａ Ｒｉｂａｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３５９、１３５０～１３５５、２０１８）ならびに当該分野で公知の他の適応症において、ＦＤＡによって承認された少なくとも５つのＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが存在する。これらのうち、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ）、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ）、スパルタリズマブ、ピディリズマブ、チスレチズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ（sasanlimab）、ＲＮ８８８）は、各々抗ＰＤ－１抗体であるが、アベルマブ（ＢＡＶＥＮＣＩＯ）、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ）、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＹＷ２４３．５５．ｓ７０）は、各々抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストと１つ以上の抗がん剤との組み合わせ治療は、調査されており、最初の臨床試験は、２００９年に開始した。かかる組み合わせに関する新たな臨床試験は、劇的に増加した；それ以来、４６７の新たな試験が、２０１７年に登録された（Ｃ．Ｓｃｈｍｉｄｔ、Ｎａｔｕｒｅ、第５５２巻、２１／２８ ２０１７年１２月）。黒色腫を処置するためのニボルマブ（抗ＰＤ－１）およびイピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４）の組み合わせ治療、ならびに非小細胞肺がんを処置するためのペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１）と化学療法との組み合わせ治療は、それぞれ、２０１５年および２０１７年にＦＤＡによって承認されたが、種々のがんを処置し、安定化し、予防し、および／またはその発達を遅延させるための、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを１つ以上の他の抗がん剤と組み合わせる最適な治療的処置を見出す必要が継続している。
ＧＤＦ１５は、いくつかの炎症促進因子およびリポ多糖（ＬＰＳ）によって誘導されることが示され、ＮＦ－ｋＢシグナル伝達経路の阻害を介して腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）産生を抑制することによってマクロファージ活性化に中断を課すフィードバック機構に関与している（Ｂｏｏｔｃｏｖら、１９９７、ＰＮＡＳ ９４（２１）：１１５１４～１１５１９、Ｒａｔｎａｍら、２０１７、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２７（１０）：３７９６～３８０９）。ＴＮＦαの減少した発現は、腫瘍化促進性（pro-tumorigenic）のＭ２表現型に向かうマクロファージ集団の傾向と関連する（Ｋｒａｔｏｃｈｖｉｌｌ、２０１５、Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２（１１）：１９０２～１９１４）。腫瘍関連マクロファージにおけるＭ２表現型を標的化することは、宿主免疫応答の活性化に焦点を当てたがん治療に対する応答を増強するための潜在的な戦略である。
がんのため、特に、固形腫瘍のための治療選択肢の著しい必要が存在したままである。本発明は、これらの必要を満たす、１つ以上の他の抗がん剤を伴うまたは伴わない、新規の潜在的な治療的ＧＤＦ１５抗体を提供する。種々のがんを処置し、安定化し、予防し、および／またはその発達を遅延させるための、１つ以上の他の抗がん剤を伴いまたは伴わずに、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを別の治療剤、例えば、ＧＤＦ１５阻害剤と組み合わせる最適な治療的処置を見出す必要も存在したままである。本発明は、この必要を満たす、本発明のＧＤＦ１５抗体とＰＤ－１軸結合性アンタゴニストとの新規の潜在的な有用な治療的組み合わせを提供する。
発明の概要
本発明は、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片、ならびに使用、および関連の方法を提供する。当業者は、慣用的に過ぎない実験を使用して、本明細書に記載される発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識する、またはそれを確認することができる。かかる等価物は、以下の実施形態（Ｅ）によって包含される意図である。
Ｅ１．ＧＤＦ１５に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２．配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６からなる群のうち１つのＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３．配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３からなる群のうち１つのＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４．（ａ）～（ｆ）：
ａ）配列番号７、２７、３６、４６、５５、６２、８２、８８、９５、１０１、１２９、１３８、１５０および１５７からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１、
ｂ）配列番号８、２８、３７、４７、７０、１０８、１１４、１２２および１３０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２、
ｃ）配列番号９、２９、３８、４８、６３、７６、８９および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３、
ｄ）配列番号１７、３２、４１、５８、６６、１１７、１２５、１３３および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１、
ｅ）配列番号１８、３３、４２、５１、５９、６７、８５、９２、９８、１０５、１１８、１２６、１３４、１４１、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２、
ｆ）配列番号１、１９、４３、５２、７９、１１１、１１９、１３５、１４７、１５４および１６０からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５．ｉ）アミノ酸配列ＧＹＴＦＸ１Ｘ２ＹＮＩＤを含むＨＣＤＲ－１であって、式中、Ｘ１がＳまたはＴであり、Ｘ２がＳまたはＤである、ＨＣＤＲ－１；ｉｉ）アミノ酸配列Ｘ３ＩＮＰＸ４Ｘ５ＧＸ６ＡＸ７Ｘ８Ｘ９ＱＫＦＱＧを含むＨＣＤＲ－２であって、式中、Ｘ３がＧまたはＱであり；Ｘ４がＩまたはＮであり；Ｘ５がＦまたはＮであり；Ｘ６がＴまたはＬであり；Ｘ７がＦまたはＮであり；Ｘ８がＹまたはＦであり、Ｘ９がＮまたはＡである、ＨＣＤＲ－２；およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＥＸ１０ＩＴＴＸ１１ＧＡＭＤＸ１２を含むＨＣＤＲ－３であって、式中、Ｘ１０がＡまたはＱであり；Ｘ１１がＶまたはＩであり；Ｘ１２がＨまたはＹである、ＨＣＤＲ－３、を含む、Ｅ１からＥ４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６．ｉ）アミノ酸配列ＲＸ１ＳＱＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＬＡを含むＬＣＤＲ－１であって、式中、Ｘ１がＴまたはＡであり、Ｘ２がＳまたはＮであり、Ｘ３がＶまたはＬであり、Ｘ４がＨまたはＳであり、Ｘ５がＮまたはＳである、ＬＣＤＲ－１；ｉｉ）アミノ酸配列ＤＡＸ６Ｘ７ＲＡＸ８を含むＬＣＤＲ－２であって、式中、Ｘ６がＳまたはＫであり；Ｘ７がＴまたはＮであり；Ｘ８がＤまたはＴである、ＬＣＤＲ－２；およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＦＸ９Ｘ１０Ｘ１１ＰＸ１２Ｔを含むＬＣＤＲ－３であって、式中、Ｘ９がＷまたはＳであり；Ｘ１０がＳまたはＮであり；Ｘ１１がＷまたはＤであり；Ｘ１２がＷまたはＹである、ＬＣＤＲ－３、を含む、Ｅ１からＥ５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７．以下のうち１つ以上
ａ）配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、
ｂ）配列番号１７５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、
ｃ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、
ｄ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、
ｅ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２、
ｆ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む、Ｅ１からＥ６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ８．配列番号３４、１０６、１４８、１５５および１６６からなる群から選択される少なくとも１つの配列のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ９．配列番号３０、１０３、１４４、１５１および１６３からなる群から選択される少なくとも１つの配列のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１０．（ａ）～（ｆ）：
ａ）配列番号２７、８８、９５、１０１および１５０からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１
ｂ）配列番号８、２８および１０８からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２
ｃ）配列番号９、２９、３８、４８および１０２からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３
ｄ）配列番号３２、４１および１５３からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１
ｅ）配列番号３３、１０５、１４６および１６５からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２
ｆ）配列番号１９、５２、１４７および１５４からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１１．配列番号１６６のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ１０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１２．配列番号１６３のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む、Ｅ１からＥ１１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１３．以下：
ａ）配列番号９５の配列を含むＬＣＤＲ－１、
ｂ）配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ－２、
ｃ）配列番号９の配列を含むＬＣＤＲ－３、
ｄ）配列番号３２の配列を含むＨＣＤＲ－１、
ｅ）配列番号１６５の配列を含むＨＣＤＲ－２、および
ｆ）配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ－３
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１４．配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－２、配列番号９のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－３、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－２、および配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ－３、を含む、Ｅ１からＥ１３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１５．以下の置換：
ａ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－１中の１、２、３、４、５または６個の置換、
ｂ）ヒトＶＬ生殖系列配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－２中の１、２、３、４または５個の置換、
ｃ）ヒト生殖系列ＶＬ配列の対応する残基への、ＬＣＤＲ－３中の１、２、３、４、５または６個の置換、
ｄ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－１中の１個の置換、
ｅ）ヒト生殖系列ＶＨ配列の対応する残基への、ＨＣＤＲ－２中の１、２、３、４、５、６、７または８個の置換
のうち１つ以上を含む、Ｅ１からＥ１４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、ヒト生殖系列ＶＬ配列が、ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択され、ヒト生殖系列ＶＨが、ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択される、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１６．ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４およびＩＧＨＶ５－５１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＨ配列に由来するＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１７．ＩＧＨＶ１－６９＊０１ ＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１８．ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１からなる群から選択されるヒト生殖系列ＶＬ配列に由来するＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ１９．ＩＧＫＶ３－１１＊０１ ＶＬフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２０．ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ１９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＬフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％同一である、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２１．ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＬフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％、７４％、７５％、７７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２２．ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＨフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％同一である、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２３．ＶＬフレームワーク配列およびＶＨフレームワーク配列を含む、Ｅ１からＥ２２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片であって、ＶＨフレームワーク配列が、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％、５８％、６０％、６３％、７１％、７２％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である、抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２４．配列番号１６６に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ２３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２５．配列番号１６６に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ２４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２６．配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨを含む、Ｅ１からＥ２５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２７．配列番号１６３に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ２６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２８．配列番号１６３に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ２７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ２９．配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１からＥ２８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３０．配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のＶＬアミノ酸配列を含む、Ｅ１からＥ２９のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３１．Ｆｃドメインを含む、Ｅ１からＥ３０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３２．Ｆｃドメインが、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃドメインである、Ｅ３１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３３．Ｆｃドメインが、ＩｇＧのＦｃドメインである、Ｅ３２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３４．ＩｇＧが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４からなる群から選択される、Ｅ３３に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３５．ＩｇＧがＩｇＧ１である、Ｅ３４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３６．配列番号１６４に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１からＥ３５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３７．配列番号１６４に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１からＥ３６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３８．配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、Ｅ１からＥ３７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ３９．配列番号１６２に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１からＥ３８のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４０．配列番号１６２に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１からＥ３９のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４１．配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１からＥ４０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４２．配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１６２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、Ｅ１からＥ４１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４３．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物によってコードされるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、Ｅ１からＥ４２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４４．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物によってコードされるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む、Ｅ１からＥ４３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４５．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされる、Ｅ１からＥ４４のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４６．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされる、Ｅ１からＥ４５のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４７．ＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミド中の挿入物によってコードされるアミノ酸配列、を含む、Ｅ１からＥ４６のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４８．Ｆｃ融合タンパク質、モノボディ（monobody）、マキシボディ（maxibody）、二機能性抗体、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦｖ、ペプチボディである、Ｅ１からＥ４７のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ４９．約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、ヒトＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ４８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５０．約１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１３ｐＭ、１０ｐＭおよび９ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、カニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ４９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５１．約８ｐＭまたは９ｐＭのＫＤでカニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ５０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５２．約８．２８ｐＭのＫＤでカニクイザルＧＤＦ１５に結合する、Ｅ１からＥ５１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５３．ヒトにおける終末相半減期が、少なくとも約１６日間である、Ｅ１からＥ５２のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５４．ヒトにおける終末相半減期が、少なくとも１７日間である、Ｅ１からＥ５３のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５５．ｔ－レジトープ（t-regitope）（ｔＲｅｇ）調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－２４未満である、Ｅ１からＥ５４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５６．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－２４、－２６、－２７、－３０、－３２、－３３、－３４、－３５、－３６、－３７、－３８、－３９、－４０、－４１、－４２、－４３、－５０および－５１からなる群から選択されるｔＲｅｇ調整済スコア未満である、Ｅ１からＥ５５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５７．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－２６、－３４、－３６、－４１および－４２からなる群から選択される、Ｅ１からＥ５６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５８．ｔＲｅｇ調整済スコアによって示される、抗体の予測される免疫原性潜在力が、約－４１または－４２である、Ｅ１からＥ５７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ５９．２５℃で測定した場合に、少なくとも約１０センチポアズ（ｃＰ）、少なくとも約１５ｃＰ、少なくとも約２０ｃＰ、少なくとも約４０ｃＰおよび少なくとも約７０ｃＰからなる群から選択される粘度を有する、Ｅ１からＥ５８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６０．２５℃で測定した場合に、約２０ｃＰの粘度を有する、Ｅ１からＥ５９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６１．２５℃で測定した場合に、２０ｃＰの粘度を有する、Ｅ１からＥ６０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６２．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約０．０５と約０．１０との間である、Ｅ１からＥ６１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６３．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約０．０７である、Ｅ１からＥ６２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６４．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、０．０７である、Ｅ１からＥ６３に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６５．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約１．０と約１．５との間である、Ｅ１からＥ６４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６６．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約１．２である、Ｅ１からＥ６５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６７．カニクイザルＧＤＦ１５への結合と比較した、ヒトＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、１．２１である、Ｅ１からＥ６６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６８．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約０．０３と約０．０９との間である、Ｅ１からＥ６７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ６９．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、約０．０４と０．０８との間である、Ｅ１からＥ６８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７０．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、０．０５と０．０６との間である、Ｅ１からＥ６９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７１．マウスＧＤＦ１５への結合と比較した、カニクイザルＧＤＦ１５への抗体または抗原結合性断片の結合ＫＤの比が、０．０５である、Ｅ１からＥ７０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
Ｅ７２．示差走査熱量測定によって測定した場合に、約７１℃以上の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７１に記載の抗体。
Ｅ７３．示差走査熱量測定によって測定した場合に、７１℃と７２℃との間の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７２に記載の抗体。
Ｅ７４．示差走査熱量測定によって測定した場合に、７１℃と７２℃との間の、融解温度（Ｔｍ１）または抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７３に記載の抗体。
Ｅ７５．示差走査熱量測定によって測定した場合に、約８０℃以上の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７４に記載の抗体。
Ｅ７６．示差走査熱量測定によって測定した場合に、８０℃と８６℃との間の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７５に記載の抗体。
Ｅ７７．示差走査熱量測定によって測定した場合に、８４℃と８５℃との間の、融解温度（Ｔｍ２）または抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７６に記載の抗体。
Ｅ７８．示差走査熱量測定によって測定した場合に、約８２℃以上の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７７に記載の抗体。
Ｅ７９．示差走査熱量測定によって測定した場合に、８３℃と９１℃との間の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７８に記載の抗体。
Ｅ８０．示差走査熱量測定によって測定した場合に、８７℃と８９℃との間の、融解温度（Ｔｍ３）または抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度で、熱安定性を有する、Ｅ１からＥ７９に記載の抗体。
Ｅ８１．Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８２．Ｅ１からＥ８１のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする少なくとも１つの核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８３．ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分の、ＶＬ、ＶＨ、またはそれら両方をコードする単離された核酸分子であって、配列番号１６７の核酸配列、配列番号１６８の核酸配列、またはそれら両方を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８４．配列番号１６７の核酸配列、配列番号１６８の核酸配列、またはそれら両方を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８５．ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分の、軽鎖、重鎖、またはそれら両方をコードする単離された核酸分子であって、配列番号１６９の核酸配列、配列番号１７０の核酸配列、またはそれら両方を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８６．配列番号１６９の核酸配列、配列番号１７０の核酸配列、またはそれら両方を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８７．配列番号１６７、１６８、１６９または１７０として示される配列からなる群から選択される少なくとも１つの核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８８．配列番号１６７として示される核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ８９．配列番号１６８として示される核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９０．配列番号１６９として示される核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９１．配列番号１７０として示される核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９２．ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９３．ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９４．ヒトＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性部分をコードする単離された核酸分子であって、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９５．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９６．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９７．ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含む、単離された核酸分子。
Ｅ９８．Ｅ８１からＥ９７のいずれか１つに記載の核酸分子を含む、ベクター。
Ｅ９９．Ｅ８１からＥ９７のいずれか１つに記載の核酸分子またはＥ９８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
Ｅ１００．哺乳動物細胞である、Ｅ９９に記載の宿主細胞。
Ｅ１０１．ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞またはＳｐ２．０細胞である、Ｅ１００に記載の宿主細胞。
Ｅ１０２．抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、Ｅ９９からＥ１０１のいずれか１つに記載の宿主細胞を、前記抗体または抗原結合性断片が前記宿主細胞によって発現される条件下で培養するステップを含む、方法。
Ｅ１０３．抗体またはその抗原結合性断片を単離するステップをさらに含む、Ｅ１０２に記載の方法。
Ｅ１０４．Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性断片、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
Ｅ１０５．チオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン（piposulfan）、ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、ウレドパ（uredopa）、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホラミド（triethiylenethiophosphoramide）、トリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）；ブラタシン、ブラタシノン（bullatacinone））、デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）、ベータ－ラパコン、ラパコール、コルヒチン、ベツリン酸、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（scopolectin）、９－アミノカンプトテシン、ブリオスタチン、ペメトレキセド、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）およびビゼレシン（bizelesin）合成アナログを含む）、ポドフィロトキシン、ポドフィリン酸（podophyllinic acid）、テニポシド、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、ＴＬＫ－２８６、ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤、サルコジクチイン（sarcodictyin）、スポンギスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン（ranimnustine）、エンジイン抗生物質（カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマおよびカリケアマイシンオメガｌを含む）、ダイネミシン（dynemicin）、ダイネミシンＡ、エスペラミシン、ネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（cactinomycin）、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣ１リポソーム注射（ＤＯＸＩＬ）およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン（denopterin）、メトトレキサート、プテロプテリン（pteropterin）、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、イマチニブ、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フォリン酸（frolinic acid）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（bestrabucil）、ビサントレン（bisantrene）、エダトレキセート（edatraxate）、デフォファミン（defofamine）、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン（elfornithine）、酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダイニン（lonidainine）、メイタンシン、アンサミトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（mopidanmol）、ニトラエリン（nitraerine）、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、Ｔ－２毒素、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（gacytosine）、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、チオテパ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ドセタキセル（doxetaxel）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、クロラムブシル、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）、オキサリプラチン、ロイコボリン（leucovovin）、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）、ノバントロン、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（difluorometlhylomithine）（ＤＭＦＯ）、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １ １ ７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む）、抗プロゲステロン剤、エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（leutinizing hormone-releasing hormone）（ＬＨＲＨ）アゴニスト（酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン（tripterelin）を含む）、抗アンドロゲン剤（フルタミド（fiutamide）、ニルタミドおよびビカルタミドを含む）；アロマターゼ阻害剤（４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、フォルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＪＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）を含む）、ビスホスホネート（クロドロネート（ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）およびリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）を含む）、トロキサシタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）を含む）、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチン、遺伝子治療ワクチン（ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンを含む）；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）、フルベストラント；イマチニブ、ＥＸＥＬ－０８６２、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、イリノテカン（arinotecan）、ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ）、ラパチニブ、二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知）、１７ＡＡＧ、イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ）、パルボシクリブ（ＩＢＲＡＮＣＥ）、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ）、リンゴ酸スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、クリゾチニブ（ＸＡＬＫＯＲＩ）、エンザルタミド（ＸＴＡＮＤＩ）ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩および／または酸もしくは誘導体のうち２つ以上の組み合わせ、を含む、Ｅ１０４に記載の組成物。
Ｅ１０６．ＧＤＦ１５の活性を低減させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップ、および抗体の投与前のＧＤＦ１５の活性を、投与後のＧＤＦ１５活性のレベルと比較するステップ、を含み、それによって、ＧＤＦ１５の活性を低減させる、方法。
Ｅ１０７．ＧＤＦ１５の活性が、
（ａ）ＧＦＲＡＬの結合；
（ｂ）食物摂取を減少させること；
（ｃ）ボディマスを減少させること；
（ｄ）筋肉量を減少させること；
（ｅ）体脂肪量を減少させること；
（ｆ）ＲＥＴを活性化すること；
（ｇ）ＥＲＫのリン酸化（ｐＥＲＫ）を増加させること；および
（ｈ）リボソームタンパク質Ｓ６（Ｓ６）のリン酸化を増加させること
（ｉ）ＡＫＴのリン酸化を増加させること；
（ｊ）ＭＡＰＫのリン酸化を増加させること；および
（ｋ）ＰＬＣ－γ１のリン酸化を増加させること
からなる群から選択される、Ｅ１０６に記載の方法。
Ｅ１０８．遊離ＧＤＦ１５のレベルの低減を必要とする対象において、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の実施形態Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１０９．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、１ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１０．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．９ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１１．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．８ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１２．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．７ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１３．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．６ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１４．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．５ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１５．投与前の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較され、用量および投薬レジメンが、０．４ｎｇ／ｍｌを下回る遊離ＧＤＦ１５のレベルまで低減するように調整される、Ｅ１０８に記載の方法。
Ｅ１１６．悪液質を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１１７．悪液質が、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓疾患、慢性心不全、うっ血性心不全またはサルコペニアと関連する、Ｅ１１６に記載の方法。
Ｅ１１８．がんが、固形腫瘍がん、膵がん、肺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がんまたは精巣がんである、Ｅ１１７に記載の方法。
Ｅ１１９．化学療法が、チオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン（piposulfan）、ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、ウレドパ（uredopa）、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホラミド（triethiylenethiophosphoramide）、トリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）；ブラタシン、ブラタシノン（bullatacinone））、デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）、ベータ－ラパコン、ラパコール、コルヒチン、ベツリン酸、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（scopolectin）、９－アミノカンプトテシン、ブリオスタチン、ペメトレキセド、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）およびビゼレシン（bizelesin）合成アナログを含む）、ポドフィロトキシン、ポドフィリン酸（podophyllinic acid）、テニポシド、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、ＴＬＫ－２８６、ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤、サルコジクチイン（sarcodictyin）、スポンギスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン（ranimnustine）、エンジイン抗生物質（カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマおよびカリケアマイシンオメガｌを含む）、ダイネミシン（dynemicin）、ダイネミシンＡ、エスペラミシン、ネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（cactinomycin）、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣ１リポソーム注射（ＤＯＸＩＬ）およびデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン（denopterin）、メトトレキサート、プテロプテリン（pteropterin）、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、イマチニブ、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フォリン酸（frolinic acid）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（bestrabucil）、ビサントレン（bisantrene）、エダトレキセート（edatraxate）、デフォファミン（defofamine）、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン（elfornithine）、酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダイニン（lonidainine）、メイタンシン、アンサミトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（mopidanmol）、ニトラエリン（nitraerine）、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、Ｔ－２毒素、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（gacytosine）、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、チオテパ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ドセタキセル（doxetaxel）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、クロラムブシル、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）、オキサリプラチン、ロイコボリン（leucovovin）、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）、ノバントロン、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（difluorometlhylomithine）（ＤＭＦＯ）、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １ １ ７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む）、抗プロゲステロン剤、エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（leutinizing hormone-releasing hormone）（ＬＨＲＨ）アゴニスト（酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン（tripterelin）を含む）、抗アンドロゲン剤（フルタミド（fiutamide）、ニルタミドおよびビカルタミドを含む）；アロマターゼ阻害剤（４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、フォルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＪＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）を含む）、ビスホスホネート（クロドロネート（ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）およびリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）を含む）、トロキサシタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）を含む）、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチン、遺伝子治療ワクチン（ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンを含む）；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）、フルベストラント；イマチニブ、ＥＸＥＬ－０８６２、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、イリノテカン（arinotecan）、ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ）、ラパチニブ、二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知）、１７ＡＡＧ、イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ）、パルボシクリブ（ＩＢＲＡＮＣＥ）、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ）、リンゴ酸スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、クリゾチニブ（ＸＡＬＫＯＲＩ）、エンザルタミド（ＸＴＡＮＤＩ）ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩および／または酸もしくは誘導体のうち２つ以上の組み合わせ、である、Ｅ１１７またはＥ１１８に記載の方法。
Ｅ１２０．化学療法が白金ベースの化学療法である、Ｅ１１９に記載の方法。
Ｅ１２１．対象がヒトである、Ｅ１０６からＥ１２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２２．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を皮下投与するステップを含む、Ｅ１０６からＥ１２１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２３．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を静脈内投与するステップを含む、Ｅ１０６からＥ１２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２４．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、または４ヶ月毎に１回、５ヶ月毎に１回、６ヶ月毎に１回、７ヶ月毎に１回、８ヶ月毎に１回、９ヶ月毎に１回、１０ヶ月毎に１回、１１ヶ月毎に１回または１２ヶ月毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２５．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約６０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２６．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇと約５０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２７．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇからなる群から選択される用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２８．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約１３０ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２９．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇと約１２５ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４またはＥ１２８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３０．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇおよび約１２５ｍｇからなる群から選択される用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４またはＥ１２８からＥ１２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３１．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約４００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３２．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇと約３８５ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４またはＥ１３１のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３３．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇおよび約３８５ｍｇからなる群から選択される用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１０６からＥ１２４またはＥ１３１からＥ１３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１３４．医薬としての使用のための、Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物。
Ｅ１３５．対象においてＧＤＦ１５の活性を低減させる際の使用のための、Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物。
Ｅ１３６．ＧＤＦ１５の活性を低減させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列ならびに配列番号１７８のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列、もしくは
ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む抗体またはその抗原結合性断片
を投与するステップ、ならびに
抗体の投与前のＧＤＦ１５の活性を、投与後のＧＤＦ１５活性のレベルと比較するステップ
を含み、それによって、ＧＤＦ１５の活性を低減させる、方法。
Ｅ１３７．ＧＤＦ１５の活性を低減させる方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列；配列番号１７８のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む抗体もしくはその抗原結合性断片；ならびに薬学的に許容できる担体もしくは賦形剤を含む、医薬組成物、または
ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片；および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物
を構成する抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、それによって、ＧＤＦ１５の活性を低減させる、方法。
Ｅ１３８．ＧＤＦ１５の活性が、
（ａ）ＧＦＲＡＬの結合；
（ｂ）食物摂取を減少させること；
（ｃ）ボディマスを減少させること；
（ｄ）筋肉量を減少させること；
（ｅ）体脂肪量を減少させること；
（ｆ）ＲＥＴを活性化すること；
（ｇ）ＥＲＫのリン酸化（ｐＥＲＫ）を増加させること；および
（ｈ）リボソームタンパク質Ｓ６（Ｓ６）のリン酸化を増加させること
（ｉ）ＡＫＴのリン酸化を増加させること；
（ｊ）ＭＡＰＫのリン酸化を増加させること；および
（ｋ）ＰＬＣ－γ１のリン酸化を増加させること
からなる群から選択される、Ｅ１３７に記載の方法。
Ｅ１３９．悪液質を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列ならびに配列番号１７８のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列、もしくは
ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＶＬ
を含む抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４０．悪液質を処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、
ａ）配列番号１７７のＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３配列；配列番号１７８のＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３配列を含む抗体もしくはその抗原結合性断片；ならびに薬学的に許容できる担体もしくは賦形剤を含む、医薬組成物、または
ｂ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＶＨ；配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片；および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物
を構成する抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１４１．悪液質が、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓疾患、慢性心不全、うっ血性心不全またはサルコペニアと関連する、Ｅ１３９またはＥ１４０に記載の方法。
Ｅ１４２．がんが、固形腫瘍がん、膵がん、肺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がんまたは精巣がんである、Ｅ１４１に記載の方法。
Ｅ１４３．化学療法が、チオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン（piposulfan）、ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、ウレドパ（uredopa）、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホラミド（triethiylenethiophosphoramide）、トリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）；ブラタシン、ブラタシノン（bullatacinone））、デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）、ベータ－ラパコン、ラパコール、コルヒチン、ベツリン酸、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（scopolectin）、９－アミノカンプトテシン、ブリオスタチン、ペメトレキセド、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）およびビゼレシン（bizelesin）合成アナログを含む）、ポドフィロトキシン、ポドフィリン酸（podophyllinic acid）、テニポシド、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、ＴＬＫ－２８６、ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤、サルコジクチイン（sarcodictyin）、スポンギスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン（ranimnustine）、エンジイン抗生物質（カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマおよびカリケアマイシンオメガｌを含む）、ダイネミシン（dynemicin）、ダイネミシンＡ、エスペラミシン、ネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（cactinomycin）、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣ１リポソーム注射（ＤＯＸＩＬ）およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン（denopterin）、メトトレキサート、プテロプテリン（pteropterin）、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、イマチニブ、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フォリン酸（frolinic acid）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（bestrabucil）、ビサントレン（bisantrene）、エダトレキセート（edatraxate）、デフォファミン（defofamine）、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン（elfornithine）、酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダイニン（lonidainine）、メイタンシン、アンサミトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（mopidanmol）、ニトラエリン（nitraerine）、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、Ｔ－２毒素、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（gacytosine）、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、チオテパ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ドセタキセル（doxetaxel）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、クロラムブシル、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）、オキサリプラチン、ロイコボリン（leucovovin）、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）、ノバントロン、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（difluorometlhylomithine）（ＤＭＦＯ）、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １ １ ７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む）、抗プロゲステロン剤、エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（leutinizing hormone-releasing hormone）（ＬＨＲＨ）アゴニスト（酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン（tripterelin）を含む）、抗アンドロゲン剤（フルタミド（fiutamide）、ニルタミドおよびビカルタミドを含む）；アロマターゼ阻害剤（４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、フォルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＪＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）を含む）、ビスホスホネート（クロドロネート（ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）およびリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）を含む）、トロキサシタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）を含む）、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチン、遺伝子治療ワクチン（ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンを含む）；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）、フルベストラント；イマチニブ、ＥＸＥＬ－０８６２、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、イリノテカン（arinotecan）、ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ）、ラパチニブ、二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知）、１７ＡＡＧ、イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ）、パルボシクリブ（ＩＢＲＡＮＣＥ）、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ）、リンゴ酸スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、クリゾチニブ（ＸＡＬＫＯＲＩ）、エンザルタミド（ＸＴＡＮＤＩ）ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩および／または酸もしくは誘導体のうち２つ以上の組み合わせ、である、Ｅ１４１またはＥ１４２に記載の方法。
Ｅ１４４．化学療法が白金ベースの化学療法である、Ｅ１４１に記載の方法。
Ｅ１４５．対象がヒトである、Ｅ１３６からＥ１４４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４６．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を皮下投与するステップを含む、Ｅ１３６からＥ１４５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４７．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を静脈内投与するステップを含む、Ｅ１３６からＥ１４６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４８．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、または４ヶ月毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１４９．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約６０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５０．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇと約５０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５１．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇからなる群から選択される用量で、１週間に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１５０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５２．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約１３０ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５３．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇと約１２５ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８またはＥ１５２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５４．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇおよび約１２５ｍｇからなる群から選択される用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８またはＥ１５２からＥ１５３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５５．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約４００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５６．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇと約３８５ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８またはＥ１５５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５７．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇおよび約３８５ｍｇからなる群から選択される用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ１３６からＥ１４８またはＥ１５５からＥ１５６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１５８．血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルの低減を必要とする対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させる方法であって、Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体またはＥ１０４からＥ１０５のいずれか１つに記載の組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ１５９．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬ内に低減される、Ｅ１０６からＥ１０８またはＥ１１６からＥ１５８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６０．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約１ｎｇ／ｍＬ内に低減される、Ｅ１０６からＥ１０８またはＥ１１６からＥ１５９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６１．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、約０．４ｎｇ／ｍＬ～約０．８ｎｇ／ｍＬ内に低減される、Ｅ１０６からＥ１０８またはＥ１１６からＥ１６０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６２．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、０．５ｎｇ／ｍｌを下回るまで低減される、Ｅ１０６からＥ１１４またはＥ１１６からＥ１５８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６３．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、０．４ｎｇ／ｍｌを下回るまで低減される、Ｅ１０６からＥ１５８またはＥ１６２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６４．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、その下限値が、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９ｎｇ／ｍＬからなる群から選択され、その上限値が、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９および３．０ｎｇ／ｍＬからなる群から選択される範囲まで低減される、Ｅ１０６からＥ１０８またはＥ１１６からＥ１５８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６５．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、約０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低減される、Ｅ１０６からＥ１１４またはＥ１１６からＥ１５８に記載の方法。
Ｅ１６６．対象の血漿中の遊離ＧＤＦ１５のレベルが、血漿中の遊離ＧＤＦ１５を検出するための当該分野で公知のアッセイを使用した検出の最も低いレベルを超えて低減される、Ｅ１０６からＥ１６５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１６７．Ｅ１からＥ８０に記載の抗体またはその抗原結合性断片、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
Ｅ１６８．Ｅ１からＥ８０に記載の抗体またはその抗原結合性断片、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物であって、ただし、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストがアベルマブではない、医薬組成物。
Ｅ１６９．がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、および一定量のＥ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または一定量のＥ１６７からＥ１６８に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、がんを処置する際に有効である、方法。
Ｅ１７０．がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に、一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、および一定量のＥ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、または一定量のＥ１６７から１６９に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、がんを処置する際に有効であり、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストがアベルマブではない、方法。
Ｅ１７１．それらの量が一緒になって、がんを処置する際に相乗的治療効果を提供する、Ｅ１６９からＥ１７０に記載の方法。
Ｅ１７２．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、Ｅ１６９に記載の方法。
Ｅ１７３．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、ただし、抗ＰＤ－Ｌ１抗体がアベルマブではない、Ｅ１６９に記載の方法。
Ｅ１７４．ＰＤ－Ｌ１抗体が、アベルマブ、アテゾリズマブまたはデュルバルマブからなる群から選択される、Ｅ１７２に記載の方法。
Ｅ１７５．ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブまたはデュルバルマブである、Ｅ１７２に記載の方法。
Ｅ１７６．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、アベルマブであり、約１０ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗまたは約８００ｍｇ Ｑ２Ｗの量で静脈内投与される、Ｅ１７２に記載の方法。
Ｅ１７７．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、抗ＰＤ－１抗体である、Ｅ１６８に記載の方法。
Ｅ１７８．抗ＰＤ－１抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレチズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびササンリマブ（ＰＦ－０６８０１５９１、ＲＮ８８８、ｍＡｂ７）からなる群から選択される、Ｅ１７７に記載の方法。
Ｅ１７９．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、ササンリマブであり、約３００ｍｇ Ｑ４Ｗまたは約６００ｍｇ Ｑ６Ｗの量で皮下投与される、Ｅ１７８に記載の方法。
Ｅ１８０．がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞癌、メルケル細胞癌、卵巣がん、乳がん、膵がん、尿路上皮がんおよび去勢抵抗性前立腺がんからなる群から選択される、Ｅ１７０からＥ１８０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１８１．がんが腎細胞癌である、Ｅ１８０に記載の方法。
Ｅ１８２．がんが膵がんである、Ｅ１８１に記載の方法。
Ｅ１８３．Ｅ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体またはその抗原結合性部分を使用して、サンプル、組織または細胞中のＧＤＦ１５を検出する方法であって、サンプル、組織または細胞を抗体と接触させるステップおよび抗体を検出するステップを含む、方法。
Ｅ１８４．がんの処置を必要とする患者において、がんを処置するための方法であって、患者に、相乗的治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストおよび相乗的治療有効量のＧＤＦ１５阻害剤を含む組み合わせ治療を投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、相乗的治療効果を提供し、それによって、がんを処置する、方法。
Ｅ１８５．がんの処置を必要とする患者において、がんを処置する方法であって、患者に、相乗的治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストおよび相乗的治療有効量のＧＤＦ１５阻害剤を含む組み合わせ治療を投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、相乗的治療効果を提供し、それによって、がんを処置し、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストがアベルマブではない、方法。
Ｅ１８６．ＧＤＦ１５阻害剤が、Ｅ１からＥ８０のいずれかに記載の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片である、Ｅ１８４からＥ１８５に記載の方法。
Ｅ１８７．抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片が、
ａ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
ｂ）配列番号２８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
ｃ）配列番号９のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
ｄ）配列番号３２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
ｅ）配列番号１６５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
ｆ）配列番号５２のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１８８．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、ＰＤ－１に特異的に結合する抗体であって、
ａ）配列番号２１６アミノ酸配列を含むＬＣＤＲ－１；
ｂ）配列番号２１７のａａ配列を含むＬＣＤＲ－２；
ｃ）配列番号２１８のａａ配列を含むＬＣＤＲ－３；
ｄ）配列番号２１０のａａ配列を含むＨＣＤＲ－１；
ｅ）配列番号２１３のａａ配列を含むＨＣＤＲ－２；および
ｆ）配列番号２１５のａａ配列を含むＨＣＤＲ－３
を含む抗体である、Ｅ１８７に記載の方法。
Ｅ１８９．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、ピディリズマブ、チスレチズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびササンリマブ（ＰＦ－０６８０１５９１）からなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１９０．抗ＰＤ－１抗体が、ササンリマブ（ＰＦ－０６８０１５９１）である、Ｅ１８８からＥ１８９に記載の方法。
Ｅ１９１．ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、Ｅ１８６に記載の方法。
Ｅ１９２．ササンリマブが、約３００ｍｇ Ｑ４Ｗまたは約６００ｍｇ Ｑ６Ｗの量で皮下投与される、Ｅ１９０に記載の方法。
Ｅ．１９３．ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択される、Ｅ１９１に記載の方法。
Ｅ１９４．抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、Ｅ１８７に記載の方法。
Ｅ１９５．抗ＧＤＦ１５抗体が、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１９４に記載の方法。
Ｅ１９６．抗ＰＤ－１抗体が、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＣおよび配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＬＣを含む、Ｅ１９５に記載の方法。
Ｅ１９７．がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞癌、メルケル細胞癌、卵巣がん、乳がん、膵がん、尿路上皮がんおよび去勢抵抗性前立腺がんからなる群から選択される、Ｅ１８４－Ｅ１９６に記載の方法。
Ｅ１９８．がんが、腎細胞癌または膵がんである、Ｅ１８４からＥ１９７に記載の方法。
Ｅ１９９．相乗的治療有効量の抗ＰＤ－１抗体および相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を含む、がんの処置のためのキット。
Ｅ２００．がんを処置する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量のＥ１からＥ８０のいずれか１つに記載の抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ２０１．がんが、例えば、限定なしに、膀胱がん、乳がん、子宮頸がん、絨毛癌、結腸がん、食道がん、胃がん（gastric cancer）、神経膠芽腫、神経膠腫、脳腫瘍、頭頸部がん、腎臓がん、肺がん、口腔がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、肝臓がん、子宮がん、骨がん、白血病、リンパ腫、肉腫、血液がん、甲状腺がん、胸腺がん、眼がんおよび皮膚がんである、Ｅ２００に記載の方法。
Ｅ２０２．１つ以上のさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、Ｅ２００またはＥ２０１に記載の方法。
Ｅ２０３．さらなる治療剤が、化学療法、ワクチン、ＣＡＲ－Ｔ細胞ベースの治療、放射線療法、サイトカイン治療、ワクチン、二重特異性抗体、他の免疫抑制経路の阻害剤、血管新生の阻害剤、Ｔ細胞活性化因子、代謝経路の阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、アデノシン経路の阻害剤、ＩＮＬＹＴＡ、ＡＬＫ阻害剤およびスニチニブが含まれるがこれらに限定されないチロシンキナーゼ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、エピジェネティック修飾因子、Ｔｒｅｇ細胞および／または骨髄系由来サプレッサー細胞の阻害剤または枯渇因子、ＪＡＫ阻害剤、ＳＴＡＴ阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、生物治療剤（ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ－４０Ｌ、ＣＴＬＡ－４、ＯＸ－４０、４－１ＢＢおよびＩＣＯＳに対する抗体が含まれるがこれらに限定されない）、免疫原性剤（例えば、減弱されたがん性細胞、腫瘍抗原、抗原提示細胞、例えば、腫瘍由来の抗原または核酸でパルスした樹状細胞、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＦＮα２、ＧＭ－ＣＳＦ）、例えばＧＭ－ＣＳＦであるがこれに限定されない免疫刺激性サイトカインをコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞）、ＳＴＩＮＧアゴニストならびにｔｏｌｌ様受容体（例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９）アゴニストから選択される、Ｅ２０２に記載の方法。
Ｅ２０４．さらなる治療剤が、抗ＣＤ４０抗体である、Ｅ２０２に記載の方法。
Ｅ２０５．化学療法が、チオテパ、シクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン（piposulfan）、ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、ウレドパ（uredopa）、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド（trietylenephosphoramide）、トリエチレンチオホスホラミド（triethiylenethiophosphoramide）、トリメチロールメラミン（trimethylolomelamine）；ブラタシン、ブラタシノン（bullatacinone））、デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）、ベータ－ラパコン、ラパコール、コルヒチン、ベツリン酸、トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（scopolectin）、９－アミノカンプトテシン、ブリオスタチン、ペメトレキセド、カリスタチン、ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（carzelesin）およびビゼレシン（bizelesin）合成アナログを含む）、ポドフィロトキシン、ポドフィリン酸（podophyllinic acid）、テニポシド、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）、エリュテロビン、パンクラチスタチン、ＴＬＫ－２８６、ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤、サルコジクチイン（sarcodictyin）、スポンギスタチン、クロラムブシル、クロルナファジン（chlornaphazine）、コロホスファミド（cholophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン（novembichin）、フェネステリン（phenesterine）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン（ranimnustine）、エンジイン抗生物質（カリケアマイシン、カリケアマイシンガンマおよびカリケアマイシンオメガｌを含む）、ダイネミシン（dynemicin）、ダイネミシンＡ、エスペラミシン、ネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、オースラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（cactinomycin）、カラビシン（carabicin）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣ１リポソーム注射（ＤＯＸＩＬ）およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（esorubicin）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（potfiromycin）、ピューロマイシン、ケラマイシン（quelamycin）、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、デノプテリン（denopterin）、メトトレキサート、プテロプテリン（pteropterin）、トリメトレキサート、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、イマチニブ、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フォリン酸（frolinic acid）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル（bestrabucil）、ビサントレン（bisantrene）、エダトレキセート（edatraxate）、デフォファミン（defofamine）、デメコルチン、ジアジコン、エフロルニチン（elfornithine）、酢酸エリプチニウム（elliptinium acetate）、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、レンチナン、ロニダイニン（lonidainine）、メイタンシン、アンサミトシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（mopidanmol）、ニトラエリン（nitraerine）、ペントスタチン、フェナメット、ピラルビシン、ロソキサントロン、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ＰＳＫ多糖複合体、ラゾキサン、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン、Ｔ－２毒素、ベラクリン（verracurin）Ａ、ロリジンＡ、アングイジン、ウレタン、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、ガシトシン（gacytosine）、アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）、チオテパ、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）、ドセタキセル（doxetaxel）（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）、クロラムブシル、６－チオグアニン、メルカプトプリン、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）、白金、エトポシド（ＶＰ－１６）、イホスファミド、ミトキサントロン、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）、オキサリプラチン、ロイコボリン（leucovovin）、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）、ノバントロン、エダトレキセート、ダウノマイシン、アミノプテリン、イバンドロネート、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００、ジフルオロメチルオルニチン（difluorometlhylomithine）（ＤＭＦＯ）、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）（例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １ １ ７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ）を含む）、抗プロゲステロン剤、エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（leutinizing hormone-releasing hormone）（ＬＨＲＨ）アゴニスト（酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン（tripterelin）を含む）、抗アンドロゲン剤（フルタミド（fiutamide）、ニルタミドおよびビカルタミドを含む）；アロマターゼ阻害剤（４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、フォルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＪＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）を含む）、ビスホスホネート（クロドロネート（ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）およびリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）を含む）、トロキサシタビン、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）を含む）、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチン、遺伝子治療ワクチン（ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンを含む）；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）、フルベストラント；イマチニブ、ＥＸＥＬ－０８６２、エルロチニブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、イリノテカン（arinotecan）、ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ）、ラパチニブ、二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知）、１７ＡＡＧ、イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ）、パルボシクリブ（ＩＢＲＡＮＣＥ）、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ）、リンゴ酸スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、クリゾチニブ（ＸＡＬＫＯＲＩ）、エンザルタミド（ＸＴＡＮＤＩ）ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩および／または酸もしくは誘導体のうち２つ以上の組み合わせ、である、Ｅ２０３に記載の方法。
Ｅ２０６．化学療法が白金ベースの化学療法である、Ｅ２０３に記載の方法。
Ｅ２０７．対象がヒトである、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０８．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を皮下投与するステップを含む、Ｅ２００からＥ２０７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２０９．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物を静脈内投与するステップを含む、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１０．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、７週間毎に１回、８週間毎に１回、９週間毎に１回、１０週間毎に１回、１ヶ月に２回、１ヶ月に１回、２ヶ月毎に１回、３ヶ月毎に１回、または４ヶ月毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１１．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約６０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１２．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇと約５０ｍｇとの間の用量で、１週間に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１３．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇからなる群から選択される用量で、１週間に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１４．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約１３０ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１５．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇと約１２５ｍｇとの間の用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１６．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇおよび約１２５ｍｇからなる群から選択される用量で、２週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１７．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約０．１ｍｇと約４００ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１８．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇと約３８５ｍｇとの間の用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２１９．抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物が、約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇおよび約３８５ｍｇからなる群から選択される用量で、４週間毎に１回投与される、Ｅ２００からＥ２０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２０．がんの処置を必要とする対象において、がんを処置する方法であって、治療有効量のＥ１からＥ８０に記載の抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ２２１．対象に、有効量の１つ以上のさらなる治療剤を投与するステップをさらに含む、Ｅ２２０に記載の方法。
Ｅ２２２．さらなる治療剤が、抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合性断片である、Ｅ２２１に記載の方法。
Ｅ２２３．がんが、胃がん（gastric cancer）、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胃がん（stomach cancer）、甲状腺がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱がん、子宮頸がん、絨毛癌、結腸がん、口腔がん、皮膚がんおよび黒色腫からなる群から選択される、Ｅ２２０からＥ２２２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２４．対象がヒトである、Ｅ２２０から２２３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２２５．がんの処置のために対象に投与される免疫モジュレーターの治療効果を増強するための方法であって、免疫モジュレーターを受けている対象に、有効量のＥ１からＥ８０に記載の抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ２２６．がんが、乳がん、胃がん（gastric cancer）、肝臓がん、肺がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、神経膠腫、神経膠芽腫、腎がん、子宮内膜がんおよび結腸直腸がんからなる群から選択される、Ｅ２２５に記載の方法。
Ｅ２２７．サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）の処置または予防を必要とする対象において、ＣＲＳを処置または予防するための方法であって、対象に、有効量のＥ１からＥ８０に記載の抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、それによって、対象においてＣＲＳを処置または予防する、方法。
Ｅ２２８．サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）もしくはサイトカインストームを経験しているまたはサイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームに対して脆弱な対象において、毒性を減少させるまたは阻害する方法であって、対象に、有効量のＥ１からＥ８０に記載の抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片またはＥ１０４もしくはＥ１０５に記載の医薬組成物を投与することを含む、組成物を投与するステップを含む、方法。
Ｅ２２９．少なくとも１つの炎症促進性サイトカインの産生が、サイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームを経験しているまたはサイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームに対して脆弱であり、Ｅ１からＥ８０に記載の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片もＥ１０４またはＥ１０５に記載の医薬組成物も投与されていない対象と比較して、上記対象において減少または阻害される、Ｅ２２７またはＥ２２８に記載の方法。
Ｅ２３０．対象が、がん治療を受けており、上記方法が、がん治療の効力を低減させない、Ｅ２２７からＥ２２９のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３１．がん治療が、免疫モジュレーターを含む、Ｅ２３０に記載の方法。
Ｅ２３２．抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片の投与が、がん治療の前に、それと同時発生的に、またはその後に行われる、Ｅ２３０またはＥ２３１に記載の方法。
Ｅ２３３．免疫モジュレーターが、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４－１ＢＢ／ＣＤ１３７抗体、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）またはＩＬ－１５である、Ｅ２３１からＥ２３２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３４．ＣＲＳまたはサイトカインストームの原因が、感染性刺激、状態もしくは症候群を含み、またはサイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームの原因が、非感染性刺激、状態もしくは症候群、またはそれらの任意の組み合わせを含む、Ｅ２２８からＥ２３３のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ２３５．感染性刺激、状態または症候群が、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バーウイルス関連血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、敗血症、グラム陰性敗血症、マラリア、エボラウイルス、痘瘡ウイルス、全身性グラム陰性細菌感染症もしくはヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群を含み、または非感染性刺激、状態もしくは症候群が、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、孤発性ＨＬＨ、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、慢性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スチル病、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル・ウェルズ症候群（Muckle-Well Syndrome）（ＭＷＳ）、慢性乳児神経皮膚関節（Chronic
Infantile Neurological Cutaneous and, Articular）（ＣＩＮＣＡ）症候群、ＮＬＲＰ３遺伝子における遺伝性もしくはｄｅ ｎｏｖｏ機能獲得型変異を含むクリオピリノパチー（cryopyrinopathy）、遺伝性自己炎症性障害、急性膵炎、重症熱傷、外傷、急性呼吸窮迫症候群、免疫療法、モノクローナル抗体治療、薬物使用に対して二次的、毒素の吸入に対して二次的、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陽性毒素、真菌毒素、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、またはＲＩＧ－１遺伝子発現のモジュレーションを含む、Ｅ２３４に記載の方法。
図１Ａは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定した、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体についての遷移温度（Ｔｍ１）を示すグラフを示す。Ｔｍ１は、抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度を示す。 図１Ｂは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定した、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体についての遷移温度（Ｔｍ２）を示すグラフを示す。Ｔｍ２は、抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度を示す。 図１Ｃは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって決定した、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体についての遷移温度（Ｔｍ３）を示すグラフを示す。Ｔｍ３は、抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度を示す。 図２は、Ａｎｔｏｎ Ｐａｒｒ機器によって分析した、ＧＤＦ１５＿００１の粘度を示す。許容できる粘度限界（２０ｃＰ）には、約１４０ｍｇ／ｍｌにおいて到達する。 図３は、健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおけるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）－ヒトＧＤＦ１５注射後のヒト血漿ＧＤＦ１５濃度を示す。血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＧＤ１５０）を介して、ＡＡＶ注射の１３日後および１４日後（図３の－２日目および－１日目に対応する）に測定した。水平線は、平均を示す。１群当たりｎ＝９。 図４は、健康なマウスにおいてＧＤＦ１５誘導性の体重減少を逆転するＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５注射のタイミング（－１５日目）および最初のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）用量のタイミング（０日目）を指す。健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６Ｎマウスを、ＧＤＦ１５＿００１（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下（ＳＣ）、３日毎（Ｑ３Ｄ））または免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝８。自己回帰（１）共分散構造を用いた反復測定ＡＮＯＶＡを使用して、投薬期間の４～６日目にわたる処置群間のベースライン体重からのパーセント変化を比較した。Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ多重比較調整を使用して、反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）における処置群比較のために実験ワイズ（experiment-wise）エラー率を制御した。＊は、対照＋ＩｇＧ（４～６日目）に対してｐ＜０．０００１であり；†は、ＧＤＦ１５＋ＧＤＦ１５＿００１（４～６日目）に対してｐ＜０．０００１である。 図５は、ＧＤＦ１５誘導性の脂肪組織量喪失を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６Ｎマウスに、－１５日目にＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５を注射し、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量が続いた。ＧＤＦ１５＿００１（３０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、６日間継続した。身体組成を、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）を介して、６日目に測定した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝８。ＡＮＯＶＡを用いて実施した統計分析。＊は、対照＋ＩｇＧに対してｐ＜０．０００１であり、†は、ＧＤＦ１５＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０１である。 図６は、ＧＤＦ１５誘導性の除脂肪組織量喪失を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。健康な雄性Ｃ５７ＢＬ６Ｎマウスに、－１５日目にＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５を注射し、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量が続いた。ＧＤＦ１５＿００１（３０ｍｇ／ｋｇ、皮下、３日毎）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、６日間継続した。身体組成を、ＭＲＩを介して６日目に測定した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝８。ＡＮＯＶＡを用いて実施した統計分析。＊は、対照＋ＩｇＧに対してｐ＜０．０１であり；†は、ＧＤＦ１５＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０１である。 図７は、健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６ＮマウスにおけるＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５注射後のマウス血漿ＧＤＦ１５濃度を示すグラフを示す。血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＭＧＤ１５０）を介して、ＡＡＶ注射の９日後（図５の９日目に対応する）に測定した。水平線は、平均を示す。１群当たりｎ＝６。平均血漿ＧＤＦ１５レベルを、不等分散についてＳａｔｔｅｒｔｈｗａｉｔｅ調整を使用するｔ検定を用いて、処置間で比較した。＊は、対照に対してｐ＜０．００１である。 図８は、健康なマウスにおいてＧＤＦ１５誘導性の体重減少を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５注射のタイミング（０日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（１１日目）を指す。健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６Ｎマウスを、ＧＤＦ１５＿００１（３０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝１０。無構造の共分散構造を用いた反復ＡＮＯＶＡを使用して、投薬期間の１２～１６日目にわたる処置群間のベースライン体重のパーセントを比較した。統計的に有意な処置×時間相互作用の存在下で、処置群間の比較を、完全無作為化設計に適切なＡＮＯＶＡを使用して、ベースライン体重のパーセントについて１６日目に実施した。＊は、１６日目の対照＋ＩｇＧに対してｐ＜０．０００１であり、†は、１６日目のｈＧＤＦ１５＋ＰＦ－０６９４６８６０に対してｐ＜０．０００１である。 図９は、健康なマウスにおいてＧＤＦ１５処置後に食物摂取を増加させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。健康な雄性Ｃ５７Ｂｌ６Ｎマウスを、ＧＤＦ１５＿００１（３０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。食物摂取を毎日測定し、累積食物摂取を計算した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝８～１０。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重比較調整を使用するＡＮＯＶＡを、１１～１６日目にわたる累積食物摂取の処置群比較のために使用した。＊は、対照＋ＩｇＧに対してｐ＜０．００１であり、†は、対照＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．００１であり、ＧＤＦ１５＋ＧＤＦ１５＿００１ 対 ＧＤＦ１５＋ＩｇＧでｐ＝０．０５０５である。 図１０は、ＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおいて体重減少を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＨＴ－１０８０細胞皮下埋め込みのタイミング（－１３日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（０日目）を指す。雌性重症複合免疫不全マウスを、ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝９～１０。自己回帰（１）共分散構造を用いた反復測定ＡＮＯＶＡを使用して、投薬期間の９～１１日目（このとき、疾患は安定化されており、動物は、体重減少に起因して脱落し始めてはいなかった）にわたる処置群間のベースライン体重からのパーセント変化を比較した。＊＝ＨＴ－１０８０＋ＩｇＧ 対 ＮＴＢ＋ＰＢＳおよびＨＴ－１０８０＋ＧＤＦ１５＿００１（９～１１日目）でｐ＜０．０００１。 図１１は、ＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおいて体脂肪量喪失を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、－１３日目にＨＴ－１０８０細胞を（皮下で）埋め込み、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量が続いた。ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、１８日間継続した。身体組成を、ｅｃｈｏ ＭＲＩを介して１８日目に測定した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝９～１０。ＡＮＯＶＡを用いて実施した統計分析。＊＝ＨＴ－１０８０＋ＩｇＧ 対 ＮＴＢ＋ＰＢＳおよびＨＴ－１０８０＋ＧＤＦ１５＿００１でｐ＜０．０００１。 図１２は、ＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおいて無腫瘍除脂肪組織量喪失を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、－１３日目にＨＴ－１０８０細胞を（皮下で）埋め込み、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量が続いた。ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、１８日間継続した。身体組成を、ｅｃｈｏ ＭＲＩを介して１８日目に測定した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝９～１０。ＡＮＯＶＡを用いて実施した統計分析。＊＝ＨＴ－１０８０＋ＩｇＧ 対 ＮＴＢ＋ＰＢＳでｐ＜０．００１、†＝ＨＴ－１０８０＋ＩｇＧ 対 ＨＴ－１０８０＋ＧＤＦ１５＿００１でｐ＜０．０００１。 図１３は、ＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおいて生存を延長させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、－１３日目にＨＴ－１０８０細胞を（皮下で）埋め込み、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量が続いた。ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、死亡または安楽死（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインに従う不健康および／または＞３０％の体重減少によって決定される）まで継続した。１群当たりｎ＝９～１０。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を、ログランク統計量を使用して生存時間（failure-time）データにフィットさせて、処置群を比較した。＊は、ＨＴ－１０８０＋ＧＤＦ１５＿００１群に対してｐ＜０．０００１である。 図１４は、中立温度環境（thermoneutrality）（８６°Ｆ）で収容したＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおけるヒト血漿ＧＤＦ１５濃度を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、－１３日目にＨＴ－１０８０細胞を（皮下で）埋め込み、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ（ＩｇＧ対照、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）用量が続いた。血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＧＤ１５０）を介して１８日目に測定した。水平線は、平均を示す。ｎ＝７。 図１５は、中立温度環境（８６°Ｆ）で収容したＨＴ－１０８０（ヒト線維肉腫細胞株）腫瘍保有マウスにおいて体重減少を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＨＴ－１０８０細胞皮下埋め込みのタイミング（－１３日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（０日目）を指す。雌性重症複合免疫不全マウスを、ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝１０。無構造の共分散構造を用いた反復測定ＡＮＯＶＡを使用して、投薬期間の１～１３日目にわたる処置群間のベースライン体重のパーセントを比較し、その後、ＡＮＯＶＡを使用する７日目および１３日目における処置群間の比較が続いた。次いで、処置群間の目的の比較を、ＡＮＯＶＡからのプールした分散推定値を使用するｔ検定を用いて試験した。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重比較調整を使用して、処置群比較についての実験ワイズエラー率を制御した。＊＝ＮＴＢ＋ＩｇＧおよびＨＴ－１０８０＋ＧＤＦ１５＿００１（７日目および１３日目）に対してｐ＜０．０００１。 図１６は、ＰＡ－０１６５（ヒト膵腫瘍肝臓転移に由来する）腫瘍保有マウスにおけるヒト血漿ＧＤＦ１５濃度を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、－１８日目にＰＡ－０１６５腫瘍組織を（皮下で）埋め込み、その後、０日目に開始する最初のｍＡｂ（ＩｇＧ対照、１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）用量が続いた。血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＧＤ１５０）を介して、２７日目に測定した。水平線は、平均を示す。ｎ＝１４。 図１７は、ＰＡ－０１６５（ヒト膵腫瘍肝臓転移に由来する）腫瘍保有マウスにおいて体重減少を予防するＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＰＡ－０１６５腫瘍組織皮下埋め込みのタイミング（－１８日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（０日目）を指す。雌性重症複合免疫不全マウスを、ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝１０～１７。無構造の共分散構造を用いた反復測定分散分析を使用して、投薬期間の１０～１６日目にわたる処置群間のベースライン体重のパーセントを比較した。統計的に有意な処置×時間相互作用の存在下で、処置群間の比較を、反復測定ＡＮＯＶＡからのプールした分散推定値を使用するｔ検定を用いて１６日目に実施した。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重比較調整を使用して、処置群比較についての実験ワイズエラー率を制御した。＊＝ＮＴＢ＋ＰＢＳおよびＰＡ－０１６５＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０００１。 図１８は、ＰＡ－０１６５（ヒト膵腫瘍肝臓転移に由来する）腫瘍保有マウスにおいて生存を延長させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、０日目に開始する最初のｍＡｂ用量の１８日前に、ＰＡ－０１６５腫瘍組織を（皮下で）埋め込んだ。ＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、死亡または安楽死（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインに従う不健康および／または＞３０％の体重減少によって決定される）まで継続した。１群当たりｎ＝１７。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を、ログランク統計量を使用して生存時間データにフィットさせて、処置群間の生存率を比較した。＊は、ＰＡ－０１６５＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０１である。 図１９は、中立温度環境（８６°Ｆ）におけるＲＥＮＣＡ（マウス腎腺癌細胞株）腫瘍保有マウスにおけるマウス血漿ＧＤＦ１５濃度を示すグラフを示す。雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに、ＲＥＮＣＡ細胞を（皮下で）埋め込み、血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＭＧＤ１５０）を介して、研究の終了時（図１７に対応する）に測定した。値は、平均である。１群当たりｎ＝１０～１２。異質分散についてＫｅｎｗａｒｄ－Ｒｏｇｅｒ調整を用いたＡＮＯＶＡを、Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ多重比較調整を使用して、処置群間の累積食物摂取および自然対数変換した血漿ＧＤＦ１５比較のために使用して、実験ワイズエラー率を制御した。幾何平均を、自然対数変換したＧＤＦ１５平均および９５％信頼区間推定値について生成した。全ての応答変数を、Ｓｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋｓ ＴｅｓｔおよびＱ－Ｑ Ｐｌｏｔｓを用いて、正規性の仮定を満たすかどうかについて評価した。＊は、ＮＴＢ＋ビヒクルとはｐ＜０．０００１異なり、‡は、ＮＴＢ＋ソラフェニブとはｐ＜０．０００１異なり、†は、ＲＥＮＣＡ＋ソラフェニブ＋ＩｇＧに対してｐ＜０．０１である。 図２０は、抗がん剤で処置し、中立温度環境（８６°Ｆ）で収容したＲＥＮＣＡ（マウス腎腺癌細胞株）腫瘍保有マウスにおいて体重減少を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＲＥＮＣＡ細胞皮下埋め込みのタイミング（－１２日目）、最初のソラフェニブ用量のタイミング（－２日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（０日目）を指す。雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ソラフェニブ（１５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）およびＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝１０～１２。異質自己回帰（１）共分散構造を用いた反復測定ＡＮＯＶＡを使用して、投薬期間の３～７日目および１３～１７日目にわたる処置群間のベースライン体重からのパーセント変化を比較した。Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ多重比較調整を使用して、反復測定ＡＮＯＶＡにおける処置群比較のために、実験ワイズエラー率を制御した。＊＊は、ＮＴＢ＋ビヒクル（３～７日目）とはｐ＜０．０００１異なり、＊は、ＮＴＢ＋ソラフェニブ（１３～１７日目）とはｐ＜０．０００１異なり、†は、ＲＥＮＣＡ＋ソラフェニブ＋ＧＤＦ１５＿００１（１３～１７日目）に対してｐ＜０．０００１である。 図２１は、抗がん剤で処置し、中立温度環境（８６°Ｆ）で収容したＲＥＮＣＡ（マウス腎腺癌細胞株）腫瘍保有マウスにおいて生存を延長させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスに、最初のソラフェニブ用量の１０日前に、ＲＥＮＣＡ細胞を（皮下で）埋め込み、その後、２日後（０日目に対応する）に、最初のｍＡｂ用量が続いた。ソラフェニブ（１５ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）、およびＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、死亡または安楽死（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインに従う不健康および／または＞３０％の体重減少によって決定される）まで継続した。１群当たりｎ＝１０～１２。Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を、ログランク統計量を使用して生存時間データにフィットさせて、処置群間の生存率を比較した。＊は、ＲＥＮＣＡ＋ソラフェニブ＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０１である。 図２２は、ＮＳＸ－２６１１５（ヒト非小細胞肺癌腺癌に由来する）腫瘍保有マウスにおけるヒト血漿ＧＤＦ１５濃度を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、ＮＳＸ－２６１１５腫瘍組織を（皮下で）埋め込み、血漿ＧＤＦ１５を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＤＧＤ１５０）を介して、研究の終了時（図２０に対応する）に測定した。１群当たりｎ＝１０～１２。異質分散についてＫｅｎｗａｒｄ－Ｒｏｇｅｒ調整を用いたＡＮＯＶＡを使用して、異なる処置群間での血漿中のＧＤＦ１５レベルを比較した。正規性を、ヒストグラムおよびＳｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ検定を使用して評価し、等分散性を、Ｌｅｖｅｎｅ検定を使用して評価した。処置群の一対比較を、Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法を使用して、多重比較のために調整した。＊は、全ての他の群に対してｐ＜０．０１である。 図２３は、抗がん剤で処置したまたは処置しなかったＮＳＸ－２６１１５（ヒト非小細胞肺癌腺癌に由来する）腫瘍保有マウスにおいて体重減少を逆転させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。矢印は、ＮＳＸ－２６１１５腫瘍組織皮下埋め込みのタイミング（－３０日目）、最初のシスプラチン用量のタイミング（０日目）および最初のｍＡｂ用量のタイミング（０日目）を指す。雌性重症複合免疫不全マウスを、シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、Ｑ７Ｄ）および／またはＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）もしくはＩｇＧ対照で処置した。値は、平均±ＳＥＭである。１群当たりｎ＝１０～１２。一次自己回帰共分散構造を用いた反復ＡＮＯＶＡを使用して、１７～１９日目からのデータを使用して、処置群間の経時的な体重におけるパーセント変化を比較した。この時点で、疾患は、安定状態であり、処置と日数との間に有意な相互作用は存在しなかった。多変量正規性を、歪度および尖度について、Ｍａｒｄｉａ検定を使用して評価した。処置による一元配置ＡＮＯＶＡを１０日目に実施して、投薬スケジュールによって知らされる最大シスプラチン効果の日における処置群間の差異を評価した。処置群の全ての一対比較を、Ｔｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ法を使用して、多重比較のために調整した。＊は、ＮＴＢ＋ビヒクル（１７～１９日目）に対してｐ＜０．０００１であり、‡は、ＮＳＸ－２６１１５＋ＧＤＦ１５＿００１（１７～１９日目）に対してｐ＜０．０００１であり、†は、ＮＴＢ＋シスプラチン（１７～１９日目）に対してｐ＜０．００１であり、§は、ＮＳＸ－２６１１５＋シスプラチン＋ＧＤＦ１５＿００１（１７～１９日目）に対してｐ＜０．０００１であり、‡‡は、ＮＴＢ＋ビヒクル（１０日目）に対してｐ＜０．０１であり、＊＊は、ＮＳＸ－２６１１５＋ＩｇＧ（１０日目）に対してｐ＜０．０００１である。 図２４は、抗がん剤で処置したＮＳＸ－２６１１５（ヒト非小細胞肺癌腺癌に由来する）腫瘍保有マウスにおいて生存を延長させるＧＤＦ１５＿００１の能力を示すグラフを示す。雌性重症複合免疫不全マウスに、最初のシスプラチンおよびｍＡｂ用量（０日目に対応する）の３０日前に、ＮＳＸ－２６１１５腫瘍組織を（皮下で）埋め込んだ。シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、Ｑ７Ｄ）、およびＧＤＦ１５＿００１（１０ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、Ｑ３Ｄ）またはＩｇＧ対照によるｍＡｂ処置を、死亡または安楽死（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインに従う不健康および／または＞３０％の体重減少によって決定される）まで継続した。１群当たりｎ＝１０～１２。ログランク検定を用いたＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存曲線を使用して、早期安楽死まで、群間の生存を比較した。＊は、ＮＳＸ－２６１１５＋シスプラチン＋ＧＤＦ１５＿００１に対してｐ＜０．０００１である。 図２５は、対象における出発遊離ＧＤＦ１５レベルの関数として、ＧＤＦ１５＿００１について、投薬間隔を通じて、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低減させることが可能である毎週皮下用量を示唆するグラフを示す。 図２６は、対象における出発遊離ＧＤＦ１５レベルの関数として、ＧＤＦ１５＿００１について、投薬間隔を通じて、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低減させることが可能である隔週皮下用量を示唆するグラフを示す。 図２７は、対象における出発遊離ＧＤＦ１５レベルの関数として、ＧＤＦ１５＿００１について、投薬間隔を通じて、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低減させることが可能である毎月皮下用量を示唆するグラフを示す。 図２８は、本発明のＧＤＦ１５抗体に対応する配列番号を示す表を提供する。 図２９は、抗ＧＤＦ１５処置（黒三角）、抗ＣＤ４０抗体処置（白抜きの丸）および組み合わせ処置（逆さまの白抜きの三角）の結果をまとめるグラフを示す。ＭＨＣＩＩ発現レベルは、腫瘍浸潤性マクロファージ集団における平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示される。 図３０は、抗ＧＤＦ１５処置（黒三角）、抗ＣＤ４０抗体処置（白抜きの丸）および組み合わせ処置（白抜きの三角）の結果をまとめるグラフを示す。 図３１は、抗ＧＤＦ１５処置（逆さまの黒三角）、抗ＣＤ４０抗体処置（白抜きの三角）および組み合わせ処置（黒四角）の結果をまとめるグラフを示す。 図３２は、抗ＧＤ１５＿２９７抗体処置（白抜きの丸）および抗ＧＤ１５＿００１抗体処置（白抜きの三角）の結果をまとめるグラフを示す。
発明の詳細な説明
本発明は、ＧＤＦ１５に特異的に結合し、ＧＤＮＦファミリー受容体α様タンパク質（ＧＦＲＡＬ）と相互作用するＧＤＦ１５の能力が含まれるがこれに限定されないＧＤＦ１５活性を低減させるまたは阻害する、抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本発明は、ＧＤＦ１５抗体を作製、調製または産生するためのプロセスもまた提供する。本発明の抗体は、ＧＤＦ１５、筋肉量の喪失、体重の喪失、脂肪重量の喪失、減少した食物摂取などによって特徴付けられる過剰増殖障害が含まれるがこれらに限定されないＧＤＦ１５活性によって媒介されるまたはそれと関連する障害または状態の診断、予防および／または処置において有用である。本発明は、抗体の発現、ならびに本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物、例えば、抗体の使用のための医薬の調製および製造をさらに包含する。
ＧＤＦ１５に結合する抗体またはその抗原結合性部分をコードするポリヌクレオチドが提供される。抗体重鎖もしくは軽鎖、またはそれら両方をコードするポリヌクレオチドもまた提供される。抗ＧＤＦ１５抗体を発現する宿主細胞が提供される。ＧＤＦ１５に対する抗体を使用する処置の方法が提供される。かかる方法には、炎症性および免疫疾患ならびに過剰増殖障害が含まれるがこれらに限定されない、ＧＤＦ１５発現および／またはＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合と関連するまたはそれによって媒介される疾患を処置する方法が含まれるがこれらに限定されない。
本明細書で使用されるセクション見出しは、構成のみを目的としており、記載される主題を限定すると解釈すべきではない。
特許出願、特許公開およびＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号を含む、本明細書で引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献がその全体が参照によって組み込まれると具体的かつ個々に示されるかのように、本明細書で参照によって組み込まれる。
本明細書に記載されるまたは本明細書で言及される技術および手順は、一般に、十分に理解され、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第３版（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ． ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００３））；シリーズＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ ２：Ａ ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ ＡＰＰＲＯＡＣＨ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．ＨａｍｅｓおよびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，ａｎｄ ＡＮＩＭＡＬ ＣＥＬＬ ＣＵＬＴＵＲＥ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９））；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）；およびＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａら編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３）；ならびにそれらの最新版に記載される広く利用される方法論などの、当業者による従来の方法論を使用して、一般に使用される。
抗体
「抗体」または「Ａｂ」は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、特異的標的または抗原（Ａｇ）、例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどを認識しそれに結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、所与の抗原（例えば、ＧＤＦ１５）に特異的に結合する能力を保持する、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、インタクトな抗体の抗原結合性断片（または部分）が含まれるがこれらに限定されない、任意の型の抗体を包含し得る。
用語「抗原」は、Ａｇを認識する抗体を産生するため、または発現ライブラリー（例えば、とりわけ、ファージ、酵母またはリボソームディスプレイライブラリー）をスクリーニングするために、免疫適格性脊椎動物の免疫化のために使用される分子実体を指す。本明細書で、Ａｇは、より広い用語であり、Ａｂによって特異的に認識される標的分子を含むこと、したがって、Ａｂを生じさせるための免疫化プロセスにおいて、またはＡｂを選択するためのライブラリースクリーニングにおいて使用される分子の断片または模倣物を含むことを一般に意図する。したがって、ＧＤＦ１５に結合する本発明の抗体について、そのモノマーおよびマルチマー、例えば、ダイマー、トリマーなどを含む、哺乳動物種由来の全長ＧＤＦ１５（例えば、ヒト、サル、マウスおよびラットＧＤＦ１５）、ならびにＧＤＦ１５の短縮型および他のバリアントが、抗原と呼ばれる。
抗体の「抗原結合性断片」は、抗原に（好ましくは、実質的に同じ結合親和性で）特異的に結合する能力を保持する、全長抗体の断片を指す。抗原結合性断片の例には、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）１つのＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、１９８９ Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４～５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）、ならびに抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体および細胞内抗体、が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）としても公知）を形成している単一のタンパク質鎖としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、接合され得る；例えば、Ｂｉｒｄら Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３～４２６（１９８８）およびＨｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９～５８８３を参照のこと。他の形態の単鎖抗体、例えば、ダイアボディ（diabody）もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上で発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それによって、これらのドメインをもう一方の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を創出する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、１９９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４～６４４８；Ｐｏｌｊａｋら、１９９４、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１～１１２３を参照のこと）。
抗体「可変ドメイン」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の可変領域（ＶＬ）または抗体重鎖の可変領域（ＶＨ）を指す。当該分野で公知のように、重鎖および軽鎖の可変領域は各々、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。
「相補性決定領域」（ＣＤＲ）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方の集積、ＡｂＭ、接触、Ｎｏｒｔｈおよび／もしくはコンフォメーション定義または当該分野で周知のＣＤＲ決定の任意の方法の定義に従って同定され得る。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版（超可変領域）；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７～８８３（構造的ループ構造）を参照のこと。特定の抗体中のＣＤＲを構成するアミノ酸残基の同一性は、当該分野で周知の方法を使用して決定され得る。ＣＤＲのＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ａｃｃｅｌｒｙｓ（登録商標））を使用する。ＣＤＲの「接触」定義は、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２～７４５に示される、観察された抗原接触に基づく。ＣＤＲの「コンフォメーション」定義は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基に基づく（例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８３：１１５６～１１６６を参照のこと）。Ｎｏｒｔｈは、異なる好ましいセットのＣＤＲ定義を使用して、カノニカルなＣＤＲコンフォメーションを同定している（Ｎｏｒｔｈら、２０１１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０６：２２８～２５６）。ＣＤＲの「コンフォメーション定義」と本明細書で呼ばれる別のアプローチでは、ＣＤＲの位置は、抗原結合にエンタルピー的に寄与する残基として同定され得る（Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８３：１１５６～１１６６）。なお他のＣＤＲ境界定義は、上記アプローチのうちの１つに厳密に従わなくてもよいが、それにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲの少なくとも一部分と重複するが、これらは、特定の残基もしくは残基の群またはさらにはＣＤＲ全体であっても抗原結合に顕著には影響しないという予測または実験的知見に照らして、短縮または延長され得る。本明細書で使用する場合、ＣＤＲは、アプローチの組み合わせを含む、当該分野で公知の任意のアプローチによって定義されるＣＤＲを指し得る。本明細書で使用される方法は、これらのアプローチのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用し得る。１つよりも多くのＣＤＲを含む任意の所与の実施形態について、ＣＤＲ（または抗体の他の残基）は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｎｏｒｔｈ、拡張型（extended）、ＡｂＭ、接触および／またはコンフォメーション定義のいずれかに従って定義され得る。
「フレームワーク」（ＦＲ）残基は、ＣＤＲ残基以外の抗体可変ドメイン残基である。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４でＣＤＲが散在する４つのフレームワークサブ領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む。
当該分野で公知のように、抗体の「定常領域」は、単独のまたは組み合わせた、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を指す。
用語「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」および「Ｆｃ」は、本明細書で相互交換可能に使用される場合、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子のパパイン消化によって得られる結晶化可能な断片と相関する、Ｉｇ分子の部分を指す。本明細書で使用する場合、これらの用語は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除外する抗体の定常領域に関し、その領域の部分にさらに関する。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにこれらのドメインに対してＮ末端側の可動性ヒンジ、またはそれらの部分を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。
ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣγ２およびＣγ３（Ｃガンマ２およびＣガンマ３）ならびにＣγ１（Ｃガンマ１）とＣγ２（Ｃガンマ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端までを含むと定義され、この番号付けは、Ｋａｂａｔら、１９９１に記載されるように、Ｅｄｅｌｍａｎら、１９６９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６３（１）：７８～８５のＥＵインデックスに従う。典型的には、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１定常ドメインのアミノ酸残基約２３６～約４４７を含む。例示的なヒト野生型ＩｇＧ１ Ｆｃドメインアミノ酸配列は、配列番号３１に示される。Ｆｃポリペプチドは、単離状態にあるこの領域、または抗体もしくはその抗原結合性部分、またはＦｃ融合タンパク質と関連したこの領域を指し得る。
重鎖定常ドメインは、Ｆｃ領域を含み、ＩｇＧ重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジならびにＣＨ２およびＣＨ３（ならびに、任意選択により、ＩｇＡおよびＩｇＥのＣＨ４）ドメインをさらに含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃドメインを含む。Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）に由来し得る。
「Ｆｃ融合」タンパク質は、１つ以上のポリペプチドがＦｃポリペプチドに作動可能に連結されたタンパク質である。Ｆｃ融合は、免疫グロブリンのＦｃ領域を融合パートナーと組み合わせる。
「エピトープ」は、抗体が特異的に結合する抗原のエリアまたは領域、例えば、抗体と相互作用する残基を含むエリアまたは領域を指す。エピトープは、線状またはコンフォメーションであり得る。
その最も詳細なレベルでは、ＡｇとＡｂとの間の相互作用のためのエピトープは、Ａｇ－Ａｂ相互作用中に存在する原子接触を定義する空間座標、ならびに結合熱力学へのそれらの相対的寄与についての情報によって、定義され得る。あまり詳細でないレベルでは、エピトープは、ＡｇとＡｂとの間の原子接触を定義する空間座標によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、具体的な基準によって、例えば、ＡｂおよびＡｇ中の原子（例えば、重原子、即ち、非水素原子）間の距離によって定義される、それが含むアミノ酸残基によって特徴付けられ得る。さらにあまり詳細でないレベルでは、エピトープは、機能を介して、例えば、他のＡｂとの競合結合によって、特徴付けられ得る。エピトープはまた、別のアミノ酸による置換（例えば、アラニンスキャニングを使用する）がＡｂとＡｇとの間の相互作用の特徴を変更するアミノ酸残基を含むものとして、より一般に定義され得る。
使用されるエピトープマッピング法に依存するエピトープの説明および定義が、異なるレベルの詳細さで得られるという事実から、同じＡｇ上の、異なるＡｂに対するエピトープの比較は、異なるレベルの詳細さで同様に実施することができるということになる。
例えばＸ線構造から決定される、アミノ酸レベルで記載されるエピトープは、それらが同じセットのアミノ酸残基を含む場合、同一であると言われる。エピトープは、少なくとも１つのアミノ酸がそれらのエピトープによって共有される場合、重複すると言われる。エピトープは、アミノ酸残基がそれらのエピトープによって共有されない場合、別々（独自）であると言われる。
競合結合によって特徴付けられるエピトープは、対応する抗体の結合が相互に排他的である場合、即ち、１つの抗体の結合が、他の抗体の同時のまたは連続的な結合を排除する場合、重複していると言われる。エピトープは、抗原が、両方の対応する抗体の結合を同時に受け入れることが可能である場合、別々（独自）であると言われる。
エピトープに「優先的に結合する」または「特異的に結合する」（本明細書で相互交換可能に使用される）抗体は、当該分野で十分に理解された用語であり、かかる特異的または優先的結合を決定するための方法もまた、当該分野で周知である。分子は、それが代替的な細胞または物質と反応または会合する場合よりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより高い親和性で反応または会合する場合、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が他の物質に結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、ＧＤＦ１５、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、それが他のＧＤＦ１５、ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１エピトープまたは非ＧＤＦ１５、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１エピトープに結合する場合よりも、より高い親和性、結合力で、より容易に、および／またはより長い持続時間でこのエピトープに結合する抗体である。一般に、必ずではないが、結合に対する言及は、優先的結合を意味する。「特異的結合」または「優先的結合」は、サンプル中の特定の分子を認識しそれに結合するが、サンプル中の他の分子は実質的に認識も結合もしない、化合物、例えば、タンパク質、核酸、抗体などを含む。例えば、サンプル中の同族リガンドまたは結合パートナー（例えば、腫瘍抗原に結合する抗ヒト腫瘍抗原抗体、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に結合するＰＤ－１分子など）を認識しそれに結合するが、サンプル中の他の分子は実質的に認識も結合もしない抗体またはペプチド受容体は、その同族リガンドまたは結合パートナーに特異的に結合する。したがって、指定されたアッセイ条件下で、特定された結合部分（例えば、抗体もしくはその抗原結合性部分または受容体もしくはそのリガンド結合性部分）は、特定の標的分子に優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の構成要素には、顕著な量では結合しない。
種々のアッセイフォーマットが、目的の分子に特異的に結合する抗体またはペプチドを選択するために使用され得る。抗原と特異的に反応する抗体、または同族リガンドもしくは結合パートナーに特異的に結合する受容体もしくはそのリガンド結合性部分を同定するために使用され得る多くのアッセイの中では、例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）およびウエスタンブロット分析である。典型的には、特異的または選択的反応は、背景シグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、より典型的には、背景の１０倍を超え、さらにより具体的には、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ）が、≦１μＭ、好ましくは≦１００ｎＭ、より好ましくは≦１０ｎＭ、さらにより好ましくは≦１００ｐＭ、なおより好ましくは≦１０ｐＭ、さらにより好ましくは≦１ｐＭである場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。
用語「競合する」は、抗体に関して本明細書で使用する場合、抗原への第１の抗体またはその抗原結合性部分の結合が、第２の抗体またはその抗原結合性部分による同じ抗原の引き続く結合を低減させることを意味する。一般に、第１の抗体の結合は、同じ抗原への第２の抗体の結合が低減されるような、立体障害、コンフォメーション変化、または共通のエピトープ（もしくはその部分）への結合を創出する。標準的な競合アッセイが、２つの抗体が互いに競合するかどうかを決定するために使用され得る。抗体競合についての１つの適切なアッセイには、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジーを使用して、典型的には、バイオセンサーシステム（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥシステム）を使用して相互作用の程度を測定することができる、Ｂｉａｃｏｒｅテクノロジーの使用が関与する。例えば、ＳＰＲは、第２の抗体の結合を阻害する１つの抗体の能力を決定するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ競合的結合阻害アッセイにおいて使用され得る。抗体競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。
さらに、それらの競合に基づいて抗体を「ビニング」（ｂｉｎｎｉｎｇ）するためのハイスループットプロセスが、国際特許出願公開ＷＯ２００３／４８７３１に記載されている。競合は、１つの抗体（または断片）がＧＤＦ１５への別の抗体（または断片）の結合を低減させる場合に存在する。例えば、逐次的な結合競合アッセイが使用され得、異なる抗体は逐次的に添加される。第１の抗体は、飽和に近い結合に到達するまで添加され得る。次いで、第２の抗体が添加される。ＧＤＦ１５への第２の抗体の結合が検出されない場合、または第１の抗体の非存在下での並行アッセイ（その値が１００％と設定され得る）と比較して、顕著に低減される（例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％または少なくとも約９０％の低減）場合、これら２つの抗体は、互いに競合するとみなされる。
バリアント抗体は、上で議論した特定の配列および断片からの、１、２、３、４、５、最大で１０、最大で２０、最大で３０、またはそれよりも多くのアミノ酸置換および／または欠失および／または挿入を含み得る。「欠失」バリアントは、個々のアミノ酸の欠失、アミノ酸の小さい群、例えば、２、３、４もしくは５アミノ酸の欠失、またはより大きいアミノ酸領域の欠失、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の欠失を含み得る。「挿入」バリアントは、個々のアミノ酸の挿入、アミノ酸の小さい群、例えば、２、３、４もしくは５アミノ酸の挿入、またはより大きいアミノ酸領域の挿入、例えば、特定のアミノ酸ドメインもしくは他の特色の挿入を含み得る。「置換」バリアントには、好ましくは、１つ以上のアミノ酸の、同じ数のアミノ酸による置き換え、および保存的アミノ酸置換を行うことが関与する。例えば、アミノ酸は、類似の特性を有する代替的アミノ酸、例えば、別の塩基性アミノ酸、別の酸性アミノ酸、別の中性アミノ酸、別の荷電アミノ酸、別の親水性アミノ酸、別の疎水性アミノ酸、別の極性アミノ酸、別の芳香族アミノ酸または別の脂肪族アミノ酸で置換され得る。適切な置換基を選択するために使用され得る２０種の主要アミノ酸の一部の特性は、以下の通りである：
置換バリアントは、抗体分子中の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その場所に異なる残基が挿入されている。置換変異誘発のために最も目的とされる部位には、超可変領域が含まれるが、フレームワーク変更もまた企図される。保存的置換は、「保存的置換」の見出しの下で、表１中に示される。かかる置換が生物学的活性における変化を生じる場合、以下に示される「例示的な置換」と称される、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載される、より実質的な変化が導入され得、産物がスクリーニングされ得る。
Figure 2022188191000002
抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）例えば、ベータ－シートもしくはらせんコンフォメーションとしての、置換のエリアにおけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の嵩、を維持することに対するそれらの効果が顕著に異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、以下の群へと分けられる：
ｉ．非極性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｉｉ．電荷なし極性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｉｉｉ．酸性（負に荷電）：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｉｖ．塩基性（正に荷電）：Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｖ．鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
ｖｉ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ。
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを、別のクラスと交換することによって行われる。
例えば、行われ得る１つの型の置換は、抗体中の化学的に反応性であり得る１つ以上のシステインを、別の残基、例えば、限定なしに、アラニンまたはセリンに変化させることである。例えば、非カノニカルなシステインの置換が存在し得る。置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域中、または定常領域中で行われ得る。一部の実施形態では、システインは、カノニカルである。抗体の適切なコンフォメーションを維持することに関与しない任意のシステイン残基もまた、分子の酸化安定性を改善するためおよび異常な架橋結合を防止するために、一般にはセリンで置換され得る。逆に、システイン結合は、特に、抗体がＦｖ断片などの抗体断片である場合、その安定性を改善するために抗体に付加され得る。
「生殖系列化（germlining）」として公知のプロセスでは、ＶＨおよびＶＬ配列中の特定のアミノ酸が、生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列中に天然に見出されるアミノ酸と一致するように変異され得る。特に、ＶＨおよびＶＬ配列中のフレームワーク領域のアミノ酸配列は、抗体が投与された場合の免疫原性のリスクを低減させるために、生殖系列配列と一致するように変異され得る。本明細書で使用する場合、用語「生殖系列」は、それらが生殖細胞を介して親から子孫に受け継がれるときの、抗体遺伝子および遺伝子セグメントのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。この生殖系列配列は、Ｂ細胞成熟化の過程の間の組換えおよび超変異事象によって変更された、成熟Ｂ細胞中の抗体をコードするヌクレオチド配列から識別される。特定の生殖系列を「利用する」抗体は、その生殖系列ヌクレオチド配列またはそれが特定するアミノ酸配列と最も密接にアラインするヌクレオチドまたはアミノ酸配列を有する。かかる抗体は、生殖系列配列と比較して、頻繁に変異される。ヒトＶＨおよびＶＬ遺伝子についての生殖系列ＤＮＡ配列は、当該分野で公知である（例えば、「Ｖｂａｓｅ」ヒト生殖系列配列データベースを参照のこと；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら、１９９１、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６～７９８、１９９２；およびＣｏｘら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７～８３６、１９９４もまた参照のこと）。
結合親和性
抗体の結合親和性は、特定の抗原－抗体相互作用の解離速度を指すＫＤ値として表され得る。ＫＤは、「オフレート（off-rate）（ｋｏｆｆ）」とも呼ばれる解離の速度の、会合速度、即ち「オンレート（on-rate）（ｋｏｎ）」に対する比である。したがって、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎと等しく、モル濃度（Ｍ）として表され、ＫＤが小さいほど、結合の親和性はより強い。抗体についてのＫＤ値は、当該分野で十分に確立された方法を使用して決定され得る。Ｋｄを測定するための１つの例示的な方法は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを典型的には使用する、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。ＢＩＡｃｏｒｅ動態分析は、それらの表面上に固定化された分子（例えば、エピトープ結合ドメインを含む分子）を有するチップからの、抗原の結合および解離を分析することを含む。抗体のＫｄを決定するための別の方法は、Ｂｉｏ－Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙを使用すること、典型的には、ＯＣＴＥＴテクノロジー（Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ ｓｙｓｔｅｍ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用することによる。あるいは、またはさらに、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ、Ｉｄ．）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイもまた使用され得る。
ＧＤＦ１５に対する抗体
本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体を提供する。抗ＧＤＦ１５抗体、好ましくは、高親和性抗体は、ＧＤＦ１５がその標的細胞に対して作用すると考えられる血漿および複数の組織区画において有効であり得る。本発明の抗体は、とりわけ、がん、心不全またはＣＯＰＤと関連する悪液質の発達および進行を駆動する経路を改変する潜在力を有する。
中和または「遮断」抗体は、ＧＤＦ１５へのその結合が、ＧＤＦ１５もしくはＧＤＦ１５断片とＧＤＦ１５受容体、例えば、ＧＦＲＡＬもしくはＧＤＦ１５受容体構成要素との間の相互作用を妨害、制限もしくは阻害する；および／または（ｉｉ）ＧＤＦ１５の少なくとも１つの生物学的機能の阻害を生じる、抗体を指す。本発明の抗体による中和を決定するためのアッセイは、本明細書の他の場所に記載されており、当該分野で周知である。
本明細書で使用する場合、用語「ＧＤＦ１５」には、ヒトＧＤＦ１５のバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。本発明の一部の態様では、抗体は、ヒト以外の種からのＧＤＦ１５、例えば、マウス、ラットまたは非ヒト霊長類のＧＤＦ１５、ならびに異なる形態のＧＤＦ１５と交差反応する。他の態様では、抗体は、ヒトＧＤＦ１５に対して完全に特異的であり得、種または他の型の交差反応性を示さなくてもよい。本明細書で使用する場合、ＧＤＦ１５という用語は、文脈上他のように定められない限り、天然に存在するヒトＧＤＦ１５を指す。したがって、「ＧＤＦ１５抗体」、「抗ＧＤＦ１５抗体」または他の類似の指定は、ＧＤＦ１５型のリガンドもしくはアイソフォームと特異的に会合、結合もしくは反応する任意の抗体（本明細書で定義される）、またはその断片もしくは誘導体を意味する。ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ９９９８８．１によって示される全長成熟形態のヒトＧＤＦ１５は、本明細書で配列番号１として提供される。
いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、ＧＤＦ１５との相互作用の際に、ＧＦＲＡＬは、原癌遺伝子チロシンタンパク質キナーゼ受容体Ｒｅｔ（ＲＥＴ）と相互作用し、ＭＡＰＫシグナル伝達経路およびＡＫＴシグナル伝達経路の活性化を介して細胞シグナル伝達を誘導する。次いで、ＲＥＴシグナル伝達は、例えば、とりわけ、ＥＲＫ、Ｓ６のリン酸化を誘導または媒介する。本明細書で使用する場合、用語「ＧＦＲＡＬ」には、ヒトＧＦＲＡＬのバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。全長成熟形態のヒトＧＦＲＡＬは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ６ＵＸＶ０によって示される。本明細書で使用する場合、用語「ＲＥＴ」には、ヒトＲＥＴのバリアント、アイソフォーム、ホモログ、オルソログおよびパラログが含まれる。全長成熟形態のヒトＲＥＴは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０７９４９によって示される。
ＧＤＦ１５の「生物学的機能」または「生物学的活性」は、組織における炎症およびアポトーシス経路、ならびに細胞傷害後の細胞のストレス応答プログラムを調節することを含む意味である。ＧＤＦ１５の「生物学的機能」または「生物学的活性」には、とりわけ、当該分野で現在公知のまたは後に同定される、悪液質を増加させること、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量、減少した除脂肪量、ＧＦＲＡＬの結合、ＲＥＴの活性化、ＥＲＫのリン酸化、およびＳ６のリン酸化を媒介することが含まれる。ＧＤＦ１５の生物学的機能または生物学的活性は、ＧＤＦ１５とその同族受容体ＧＦＲＡＬとの間の相互作用によって媒介され得るが、その必要はない。
本発明は、ＧＤＦ１５の生物学的活性をモジュレートし得る抗体またはその抗原結合性部分を含む。即ち、本発明は、その抗体が、（ａ）食物摂取を増加させる；（ｂ）食欲を増加させる；（ｃ）体重を増加させる；（ｄ）体重減少を減少させる；（ｅ）体脂肪量を増加させる；（ｆ）除脂肪量を増加させる；（ｇ）体脂肪量の喪失を減少させる、（ｈ）除脂肪筋肉量の喪失を減少させる、（ｉ）ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合を減少させる；（ｊ）ＲＥＴによって媒介される下流シグナル伝達を減少させる；（ｋ）ＥＲＫのリン酸化を減少させるもしくは阻害する；（ｌ）Ｓ６のリン酸化を減少させるもしくは阻害する；（ｍ）ＭＡＰＫシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を減少させる；（ｎ）ＡＫＴシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を減少させる；および／または（ｏ）ＰＬＣ－γ１シグナル伝達経路の活性化を減少させるような、ＧＤＦ１５に特異的に結合し、少なくとも１つの検出可能なＧＤＦ１５活性をモジュレートする、単離された抗体またはその抗原結合性部分を含む。
ＧＤＦ１５の生物学的活性およびＧＤＦ１５依存的シグナル伝達活性は、多くの当該分野で認識されたアッセイの中でも、ＧＦＲＡＬおよびＲＥＴを共発現するＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価され得る。ＧＤＦ１５による刺激後のＭＡＰＫ経路の活性化は、とりわけ、ルシフェラーゼベースの遺伝子レポーターシステム（例えば、ＰａｔｈＤｅｔｅｃｔ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して測定され得る。均一時間分解蛍光テクノロジー（Ｃｉｓｂｉｏ Ｉｎｃ．）に基づくリン酸化タンパク質アッセイもまた、その受容体に結合するＧＤＦ１５に応答したＭＡＰＫおよびＡＫＴ経路の活性化（例えば、リン酸化ＥＲＫ１／２）を測定するための直交アプローチとして使用され得る。ＧＤＦ１５依存的シグナル伝達を防止する中和抗体の能力は、漸増濃度の抗ＧＤＦ１５抗体の非存在下または存在下で、細胞を固定濃度のＧＤＦ１５と共にインキュベートすることによっても評価され得る。
本発明の一態様では、本発明のＧＤＦ１５抗体は、配列番号１６６として示される重鎖可変領域のアミノ酸配列および配列番号１６３として示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と、ヒトＧＤＦ１５への結合について競合する、および／またはそれと同じエピトープに結合する、抗体を包含する。
本発明の一態様では、本発明のＧＤＦ１５抗体は、ＧＦＲＡＬとのＧＤＦ１５の結合を阻害するまたは低減させる抗体を包含する。
一態様では、本発明は、ＧＦＲＡＬとのＧＤＦ１５の結合を阻害するにあたり、配列番号１６６として示される重鎖可変領域のアミノ酸配列および配列番号１６３として示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗体を包含する。
本発明の一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、例えば、配列番号１６４として示されるＧＤＦ１５重鎖を含む。他の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、カッパ軽鎖定常領域、例えば、配列番号１６２として示されるＧＤＦ１５軽鎖を含む。
表２は、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体のアミノ酸（タンパク質）配列および関連の核酸（ＤＮＡ）配列を提供する。Ｋａｂａｔによって、およびＣｈｏｔｈｉａによって定義される抗ＧＤＦ１５ ＶＨおよび抗ＧＤＦ１５ ＶＬのＣＤＲは、別々の配列として示される。
一部の態様では、ＣＤＲは、配列番号１７１、１７２、１７３、１７４、１７５および１７６を含む。これらのＣＤＲ配列は、以下の実施例１～１０に示される好ましい配列分析および生物物理学的プロファイルデータに基づくコンセンサスを取り込む。これらのＣＤＲ配列は、それらの配列、結合、熱安定性、低いｐＨにおける安定性、および粘度プロファイルに基づく利点を保有する。
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ある特定の実施形態では、置換は、（ドナー）ＣＤＲ残基が、例えば、米国特許出願公開第２０１７／００７３３９５号およびＴｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １１２（５０）：１５３５４～１５３５９に記載されるように、ヒトアミノ酸含量を増加させ、抗体の免疫原性を潜在的に低減させるように、対応するヒト生殖系列（アクセプター）残基で置き換えられる、ヒト生殖系列置換である。例えば、ヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１フレームワークが使用され、例示的な抗体、ＧＤＦ１５＿００１ＶＨ（配列番号１６６）が比較される場合、ＧＤＦ１５＿００１抗体（配列番号３２）およびヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１のＨＣＤＲ－１のアラインメントは、以下の通りである：
Figure 2022188191000020
アミノ酸位置番号２６、２８、２９、３０、３１、３２および３４について、ヒト生殖系列残基（アクセプター）と対応するＧＤＦ１５＿００１残基（ドナー）とは同じであり、生殖系列置換は不可能である。位置２７、３３および３５（太字かつ下線付き）について、ヒト生殖系列（アクセプター）残基と対応するＧＤＦ１５＿００１（ドナー）残基とは異なる。これらの位置におけるＧＤＦ１５＿００１の残基は、ヒト残基含量をさらに増加させるために、対応するヒト生殖系列ＩＧＨＶ１－６９＊０１残基で置き換えられ得る。ヒトアミノ酸残基の含量を増加させる一方で、マウス残基の含量を最小化し、それによって、ヒトにおける抗体に対する任意の潜在的な免疫原性、例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）免疫応答を減少させつつ、結合特徴、例えば、エピトープ結合、親和性などを保存するために、同じプロセスが、各重鎖および軽鎖ＣＤＲについて踏襲され得る。
抗体ＣＤＲ中にヒト生殖系列残基を導入するための方法およびライブラリーは、米国特許出願公開第２０１７／００７３３９５号およびＴｏｗｎｓｅｎｄら、２０１５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１１２（５０）：１５３５４～１５３５９に詳細に記載されており、これらは共に、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＨフレームワークが使用され得る：ＩＧＨＶ１－２＊０２、ＩＧＨＶ１－３＊０１、ＩＧＨＶ１－４６＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０１、ＩＧＨＶ１－６９＊０２、ＩＧＨＶ１－８＊０１、ＩＧＨＶ３－１３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０１、ＩＧＨＶ３－２３＊０４、ＩＧＨＶ３－３０＊０１、ＩＧＨＶ３－３０＊１８、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０１、ＩＧＨＶ５－１０－１＊０４またはＩＧＨＶ５－５１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。一部の態様では、以下の生殖系列からのＶＬフレームワークが使用され得る：ＩＧＫＶ１－１２＊０１、ＩＧＫＶ１－１３＊０２、ＩＧＫＶ１－３３＊０１、ＩＧＫＶ１－３９＊０１、ＩＧＫＶ１－５＊０１、ＩＧＫＶ３－１１＊０１、ＩＧＫＶ３－１５＊０１、ＩＧＫＶ３－２０＊０１、ＩＧＫＶ３Ｄ－２０＊０２およびＩＧＫＶ４－１＊０１（生殖系列の名称は、ＩＭＧＴ生殖系列定義に基づく）。ヒト生殖系列フレームワークの配列は、種々の公的データベース、例えば、Ｖ－ｂａｓｅ、ＩＭＧＴ、ＮＣＢＩまたはＡｂｙｓｉｓから入手可能である。
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列を含むＶＬフレームワークを含み得る。ＶＬフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＬフレームワークは、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも５３％、５８％、６０％、６３％、７１％、７２％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＬフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＬフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の態様では、パーセント（％）同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＬとの類似性に基づく。
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列を含むＶＨフレームワークを含み得る。ＶＨフレームワークは、それが由来した生殖系列との機能的および構造的類似性をなおも保持しつつ、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失を含み得る。一部の態様では、ＶＨフレームワークは、それが由来したヒト生殖系列配列に対して少なくとも７２％、７４％、７５％、７７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である。一部の態様では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト生殖系列ＶＨフレームワーク配列と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個のアミノ酸置換、付加または欠失を含むＶＨフレームワークを含む。一部の態様では、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加または欠失は、フレームワーク領域中のみにある。一部の態様では、％同一性は、本明細書でＣＤＲと定義される部分を除いたＶＨとの類似性に基づく。
抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含み得る。ＶＨは、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＨは、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のアミノ酸配列を含み得る。
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含み得る。ＶＬは、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＬは、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のアミノ酸配列を含み得る。
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８および１６３のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に示されるＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２およびＬＣＤＲ－３を含む。
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１および１６６のうち少なくとも１つのアミノ酸配列に示されるＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３をさらに含む。
一部の態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６３のアミノ酸配列に示されるＬＣＤＲ－１、ＬＣＤＲ－２、ＬＣＤＲ－３、ならびに配列番号１６６のアミノ酸配列に示されるＨＣＤＲ－１、ＨＣＤＲ－２およびＨＣＤＲ－３を含む。
抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＬを含み得る。ＶＬは、配列番号１６３のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＬは、配列番号１６３のアミノ酸配列を含み得る。
抗体またはその抗原結合性部分は、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むＶＨを含み得る。ＶＨは、配列番号１６６のアミノ酸配列に対して少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含み得る。ＶＨは、配列番号１６６のアミノ酸配列を含み得る。
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１６４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＨＣを含み得る。ＨＣは、配列番号１６４のアミノ酸配列を含み得る。
抗体または抗原結合性断片は、配列番号１６２に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一なアミノ酸配列を含むＬＣを含み得る。ＬＣは、配列番号１６２のアミノ酸配列を含み得る。
ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト
用語「ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－１シグナル伝達軸（「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ経路」または「ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌシグナル伝達経路」とも呼ばれる）上でのシグナル伝達から生じるＴ細胞機能障害を除去して、結果が、Ｔ細胞機能の回復または増強であるような、その結合パートナーのいずれか１つ以上との、ＰＤ－１軸結合性パートナーの相互作用を阻害する分子を指す。本明細書で使用する場合、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストには、ＰＤ－１結合性アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストおよびＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストが含まれる。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。
一部の態様では、ＰＤ－１軸アンタゴニスト、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト、ＰＤ－１結合性アンタゴニストおよび抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、アベルマブが含まれない。即ち、任意選択により、アベルマブは、ＰＤ－１軸シグナル伝達軸を阻害する薬剤から排除される。
本発明の処置方法、医薬および使用における使用のための例示的なＰＤ－１軸結合性アンタゴニストには、限定なしに、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０２７８２７およびＷＯ２０１１／０６６３４２に記載される、シグナル配列ありまたはなしのＡＭＰ－２２４、国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されるｍＡｂ７およびｍＡｂ１５、ならびにＷＯ２０１３／０７９１７４に記載されるアベルマブが含まれる。ＷＯ２０１０／０２７８２７、ＷＯ２０１１／０６６３４２、ＷＯ２０１６／０９２４１９およびＷＯ２０１３／０７９１７４の開示は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。表３は、例示されたＰＤ－１軸結合性アンタゴニストの一部の種々の配列を列挙する。
Figure 2022188191000021
Figure 2022188191000022
用語「ＰＤ－１結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－１に特異的に結合し、ＰＤ－１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２のうち１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－１の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合し、それによって、ＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２へのＰＤ－１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ－１結合性アンタゴニストには、ＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１および／またはＰＤ－Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１に特異的に結合し、それによって、機能障害性Ｔ細胞をあまり機能障害性でなくするように、ＰＤ－１を介したシグナル伝達を介して媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレチズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５５４、セミプリマブおよびＰＦ－０６８０１５９１が含まれるがこれらに限定されない抗ＰＤ－１抗体である。
ＰＦ－０６８０１９５１は、ササンリマブ（ＣＡＳ登録番号２２０６７９２－５０－７）、ＲＮ８８８とも呼ばれ、それらの全体が本明細書に示されるかのように参照によって組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されている。ササンリマブは、ヒト化されたヒンジ領域安定化ＩｇＧ４－カッパ（κ）モノクローナル抗体である。ササンリマブ（ＰＦ－０６８０１９５１；ＲＮ８８８）のアミノ酸配列は、以下の表４に示される。
具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ニボルマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ペムブロリズマブである。別の具体的な態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、ピディリズマブである。
用語「ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－Ｌ１に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する分子である。一部の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストには、アベルマブは含まれない。具体的な態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１へのＰＤ－Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストには、ＰＤ－Ｌ１と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１、Ｂ７－１のうち１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞をあまり機能障害性でなくするように、ＰＤ－Ｌ１を介したシグナル伝達によって媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０７９１７４において、Ａ０９－２４６－２として開示される）である。一部の態様では、アベルマブは、ＰＤ－１軸アンタゴニストとしては含まれない。
別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブである。別の具体的な態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）である。
本明細書で使用する場合、抗ヒトＰＤ－Ｌ１抗体は、成熟ヒトＰＤ－Ｌ１に特異的に結合する抗体またはその部分を指し、成熟ヒトＰＤ－Ｌ１分子は、以下の配列のアミノ酸１９～２９０からなる：
ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号２２１）
Figure 2022188191000023
Figure 2022188191000024
用語「ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニスト」は、本明細書で使用する場合、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ２と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する分子を指す。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１へのＰＤ－Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２アンタゴニストには、ＰＤ－Ｌ２に特異的に結合し、ＰＤ－Ｌ２と、その結合パートナー、例えば、ＰＤ－１のいずれか１つ以上との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、遮断、阻害、無効化または妨害する、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、その抗原結合性断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチドおよび他の分子が含まれる。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、機能障害性Ｔ細胞をあまり機能障害性でなくするように、ＰＤ－Ｌ２を介したシグナル伝達を介して媒介される、Ｔリンパ球上に発現される細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減させる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ２イムノアドヘシンである。
核酸
本発明は、本明細書に記載される抗体部分および改変抗体を含む本発明の抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドもまた提供する。本発明は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかを作製する方法もまた提供する。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の手順によって作製および発現され得る。
所望の抗体またはその抗原結合性断片およびかかる抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸の配列は、標準的な配列決定技術を使用して決定され得る。所望の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸配列は、組換え産生および特徴付けのために、種々のベクター（例えば、クローニングおよび発現ベクター）中に挿入され得る。重鎖または重鎖の抗原結合性断片をコードする核酸、および軽鎖または軽鎖の抗原結合性断片をコードする核酸は、同じベクターまたは異なるベクター中にクローニングされ得る。
一態様では、本発明は、以下のＧＤＦ１５抗体およびその抗原結合性部分のいずれかのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを提供する：
ＧＤＦ１５＿００１、ＧＤＦ１５＿００２、ＧＤＦ１５＿００３、ＧＤＦ１５＿００４、ＧＤＦ１５＿００５、ＧＤＦ１５＿００６、ＧＤＦ１５＿００７、ＧＤＦ１５＿００８、ＧＤＦ１５＿００９、ＧＤＦ１５＿０１０、ＧＤＦ１５＿０１１、ＧＤＦ１５＿０１２、ＧＤＦ１５＿０１３、ＧＤＦ１５＿０１４、ＧＤＦ１５＿０１５、ＧＤＦ１５＿０１７、ＧＤＦ１５＿０１８、ＧＤＦ１５＿０２０、ＧＤＦ１５＿０２１、ＧＤＦ１５＿０２２、ＧＤＦ１５＿１００、ＧＤＦ１５＿２００、ＧＤＦ１５＿２９７、ＧＤＦ１５＿３０１、ＧＤＦ１５－４７０
本発明は、（ｉ）配列番号２１、３４、４４、５３、６０、６８、７３、８０、８６、９３、９９、１０６、１１２、１２０、１２７、１３６、１４２、１４８、１５５、１６１、１６６、１１、３０、３９、４９、５６、６４、７１、７７、８３、９０、９６、１０３、１０９、１１５、１２３、１３１、１３９、１４４、１５１、１５８、１６３、１６６、１８３、１８７、１８９、１９１、１９３および１９５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む１つ以上のタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。
本発明は、配列番号１６７、１６８、１６９および１７０のうち１つ以上として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６７として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６８として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１６９として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、配列番号１７０として示される核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。遺伝コードの縮重に起因して、本発明は、配列番号１７０の位置番号１３４４におけるヌクレオチドがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔであり得、および／または位置番号１３４７におけるヌクレオチドがＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔであり得る、核酸配列をさらに提供する。配列番号１７０中に提供される最後の２つのコドンは、それぞれ、プロリンおよびグリシンをなおもコードする。
本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列を含むポリヌクレオチドもまた提供する。さらに、本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドのＤＮＡ挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに提供する。
本発明は、ＧＤＦ１５＿００１のＶＨドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、およびＧＤＦ１５＿００１のＶＬドメインをコードする、ＡＴＣＣに寄託され、アクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するプラスミドの挿入物の核酸配列、を含むポリヌクレオチドもまた提供する。
別の態様では、本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体をコードするポリヌクレオチドおよびそのバリアントを提供し、かかるバリアントポリヌクレオチドは、本明細書で開示または言及される核酸配列のいずれかに対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８７％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の核酸配列同一性を共有する。これらの量は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
本発明は、本明細書に記載される核酸分子によってコードされるポリペプチドを提供する。
一実施形態では、ＶＨおよびＶＬドメインもしくはその抗原結合性部分、または全長ＨＣもしくはＬＣは、別々のポリヌクレオチドによってコードされる。あるいは、ＶＨおよびＶＬもしくはその抗原結合性部分、またはＨＣおよびＬＣは共に、単一のポリヌクレオチドによってコードされる。
任意のかかる配列に対して相補的なポリヌクレオチドもまた、本開示によって包含される。ポリヌクレオチドは、一本鎖（コーディングまたはアンチセンス）または二本鎖であり得、ＤＮＡ（ゲノム、ｃＤＮＡまたは合成）またはＲＮＡ分子であり得る。ＲＮＡ分子には、イントロンを含み、一対一の様式でＤＮＡ分子に対応するＨｎＲＮＡ分子、およびイントロンを含まないｍＲＮＡ分子が含まれる。さらなるコードまたは非コード配列が、本開示のポリヌクレオチド内に存在してもよいがその必要はなく、ポリヌクレオチドは、他の分子および／または支持体材料に連結されてもよいがその必要はない。
ポリヌクレオチドは、抗体もしくはその一部分をコードする核酸配列を含み得、またはかかる配列のバリアントを含み得る。ポリヌクレオチドバリアントは、コードされたポリペプチドの結合特徴がネイティブ抗体分子と比較して減弱されるような、１つ以上の置換、付加、欠失および／または挿入を含む。バリアント核酸配列によってコードされるポリペプチドの結合特徴に対する影響は、一般に、本明細書に記載されるように評価され得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドバリアントは、いずれの置換、付加、欠失および／もしくは挿入も含まない元の（親）抗体またはその一部分をコードするポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも約７０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約８０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約９０％の同一性、一部の実施形態では、少なくとも約９５％の同一性を示す。これらのパーセント同一性は限定を意味せず、列挙されたパーセンテージ間の増分は、本開示の一部として具体的に想定される。
２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、２つの配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸の配列が、以下に記載されるように、最大の対応を求めてアラインした場合に同じである場合、「同一」であると言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するために、比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」は、本明細書で使用する場合、少なくとも約２０、通常は３０～約７５または４０～約５０連続する位置のセグメントを指し、ここで、配列は、２つの配列を最適にアラインした後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る。
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを使用して、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ（登録商標）スイートのバイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ（登録商標），Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中のＭｅｇＡｌｉｇｎ（登録商標）プログラムを使用して実施され得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載されるいくつかのアラインメントスキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．、１９７８、Ａ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｃｈａｎｇｅ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ－Ｍａｔｒｉｃｅｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ、第５巻、補遺３、３４５～３５８頁；Ｈｅｉｎ Ｊ．、１９９０、Ｕｎｉｆｉｅｄ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６～６４５頁、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，Ｐ．Ｍ．、１９８９、ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１～１５３；Ｍｙｅｒｓ，Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ Ｗ．、１９８８、ＣＡＢＩＯＳ ４：１１～１７；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｅ．Ｄ．、１９７１、Ｃｏｍｂ．Ｔｈｅｏｒ．１１：１０５；Ｓａｎｔｏｕ，Ｎ．、Ｎｅｓ，Ｍ．、１９８７、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｅｖｏｌ．４：４０６～４２５；Ｓｎｅａｔｈ，Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，Ｒ．Ｒ．、１９７３、Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８０：７２６～７３０。
一部の実施形態では、「配列同一性のパーセンテージ」は、少なくとも２０個の位置の比較のウインドウにわたって、２つの最適にアラインされた配列を比較することによって決定され、ここで、比較ウインドウ中のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために、参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセント以下、通常は５～１５パーセントまたは１０～１２パーセントの付加または欠失（即ち、ギャップ）を含み得る。パーセンテージは、同一な核酸塩基またはアミノ酸残基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、一致した位置の数を得、一致した位置の数を参照配列中の位置の総数（即ち、ウインドウサイズ）によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを得ることによって、計算される。
ポリヌクレオチドバリアントはまた、またはあるいは、遺伝子、またはその一部分もしくは相補体に対して実質的に相同であり得る。かかるポリヌクレオチドバリアントは、抗体をコードする天然に存在するＤＮＡ配列（または相補的配列）に、中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることが可能である。
適切な「中程度にストリンジェントな条件」は、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）の溶液中で事前洗浄すること；約５０℃～６５℃、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）で一晩ハイブリダイズさせること；その後、０．１％ＳＤＳを含む２×、０．５×および０．２×ＳＳＣの各々で、６５℃で２０分間２回洗浄すること、を含む。
本明細書で使用する場合、「高度にストリンジェントな条件」または「高ストリンジェンシー条件」は、以下の条件である：（１）洗浄のために、低いイオン強度および高い温度、例えば、５０℃で、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用する；（２）ハイブリダイゼーションの間に、変性剤、例えば、ホルムアミド、例えば、５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを含む０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％Ｆｉｃｏｌｌ／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ６．５と共に、４２℃で使用する；または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％硫酸デキストランを４２℃で使用し、０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中で４２℃および５０％ホルムアミド中で５５℃での洗浄、その後の、ＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる５５℃での高ストリンジェンシー洗浄を使用する。当業者は、例えば、プローブ長さなどの因子に適応するために、必要に応じて、温度、イオン強度などを調整する方法を認識する。
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されるポリペプチドをコードする多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者によって理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意のネイティブ遺伝子のヌクレオチド配列に対する最小限の相同性を保有する。それにもかかわらず、コドン使用における差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本開示によって具体的に企図される。さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子の対立遺伝子は、本開示の範囲内である。対立遺伝子は、ヌクレオチドの１つ以上の変異、例えば、欠失、付加および／または置換の結果として変更された内因性遺伝子である。得られたｍＲＮＡおよびタンパク質は、変更された構造または機能を有し得るが、その必要はない。対立遺伝子は、標準的な技術（例えば、ハイブリダイゼーション、増幅および／またはデータベース配列比較）を使用して同定され得る。
本開示のポリヌクレオチドは、化学的合成、組換え法またはＰＣＲを使用して得ることができる。化学的ポリヌクレオチド合成の方法は、当該分野で周知であり、本明細書で詳細に記載する必要はない。当業者は、所望のＤＮＡ配列を産生するために、本明細書で提供される配列および市販のＤＮＡ合成機を使用することができる。
組換え法を使用してポリヌクレオチドを調製するために、所望の配列を含むポリヌクレオチドが、適切なベクター中に挿入され得、このベクターは、次に、本明細書でさらに議論されるように、複製および増幅に適切な宿主細胞中に導入され得る。ポリヌクレオチドは、当該分野で公知の任意の手段によって、宿主細胞中に挿入され得る。細胞は、直接的取り込み、エンドサイトーシス、トランスフェクション、Ｆ交配（F-mating）またはエレクトロポレーションによって外因性ポリヌクレオチドを導入することによって形質転換される。いったん導入されると、外因性ポリヌクレオチドは、非組み込みベクター（例えば、プラスミド）として細胞内で維持され得、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。そうして増幅されたポリヌクレオチドは、当該分野で周知の方法によって、宿主細胞から単離され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９を参照のこと。
あるいは、ＰＣＲは、ＤＮＡ配列の再生産を可能にする。ＰＣＲテクノロジーは、当該分野で周知であり、米国特許第４，６８３，１９５号、同第４，８００，１５９号、同第４，７５４，０６５号および同第４，６８３，２０２号、ならびにＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ、Ｍｕｌｌｉｓら編、Ｂｉｒｋａｕｓｗｅｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｓｔｏｎ、１９９４に記載されている。
ＲＮＡは、適切なベクター中の単離されたＤＮＡを使用し、それを適切な宿主細胞中に挿入することによって得ることができる。細胞が複製し、ＤＮＡがＲＮＡへと転写される場合、ＲＮＡは、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９に示される、当業者に周知の方法を使用して単離され得る。
本明細書で使用する場合、「ベクター」は、目的の１つ以上の遺伝子または配列を宿主細胞中に送達すること、好ましくは、それを宿主細胞において発現させることが可能な、構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、ネイキッドＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドもしくはファージベクター、カチオン性縮合剤と関連したＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されたＤＮＡもしくはＲＮＡ発現ベクター、および特定の真核生物細胞、例えば、産生細胞が含まれるがこれらに限定されない。
適切なクローニングおよび発現ベクターは、種々の構成要素、例えば、プロモーター、エンハンサーおよび他の転写調節配列を含み得る。ベクターはまた、異なるベクター中への抗体可変ドメインの引き続くクローニングを可能にするように構築され得る。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築され得、または当該分野で入手可能な多数のクローニングベクターから選択され得る。選択されるクローニングベクターは、使用が意図される宿主細胞に従って変動し得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を保有し得、および／またはベクターを含むクローンを選択する際に使用され得るマーカーの遺伝子を保有し得る。適切な例には、プラスミドおよび細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳ ＳＫ＋）およびその誘導体、ｍｐ１８、ｍｐ１９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３およびｐＡＴ２８が含まれる。これらおよび多くの他のクローニングベクターが、供給業者、例えば、ＢｉｏＲａｄ、ＳｔｒａｔｅｇｅｎｅおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手可能である。発現ベクターがさらに提供される。発現ベクターは、一般に、本開示に従うポリヌクレオチドを含む複製可能なポリヌクレオチド構築物である。発現ベクターは、エピソームとして、または染色体ＤＮＡの不可欠な一部として、宿主細胞中で複製可能でなければならないことが暗示される。適切な発現ベクターには、プラスミド、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスが含まれるウイルスベクター、コスミド、およびＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示される発現ベクターが含まれるがこれらに限定されない。ベクター構成要素には、一般に、以下のうち１つ以上が含まれ得るがこれらに限定されない：シグナル配列；複製起点；１つ以上のマーカー遺伝子；適切な転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサーおよびターミネーター）。発現（即ち、翻訳）のために、リボソーム結合部位、翻訳開始部位および停止コドンなどの、１つ以上の翻訳制御エレメントもまた通常は必要とされる。
目的のポリヌクレオチドを含むベクターおよび／またはポリヌクレオチド自体は、エレクトロポレーション、塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ－デキストラン、または他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；および感染（例えば、ベクターが、ワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）が含まれるいくつかの適切な手段のいずれかによって、宿主細胞中に導入され得る。ベクターまたはポリヌクレオチドを導入する選択は、宿主細胞の特色に依存する場合が多い。
したがって、「宿主細胞」には、ポリヌクレオチドおよび／またはベクターの取り込みのための、ポリヌクレオチドおよび／またはポリヌクレオチドを含むベクターのレシピエントであり得るまたはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、この子孫は、天然の、偶然のまたは意図的な変異に起因して、（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ相補性において）元の親細胞とは必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドでｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトおよび／または形質転換された細胞が含まれる。
抗体またはその抗原結合性断片は、適切な宿主細胞を使用して、組換え作製され得る。抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸は、発現ベクター中にクローニングされ得、これは次いで、組換え宿主細胞における抗体の合成を得るために、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、酵母細胞、昆虫細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞中に導入され得る。好ましい宿主細胞には、当該分野で周知の多くの細胞の中で、ＣＨＯ細胞、ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）２９３細胞、ＮＳ０細胞またはＳｐ２．０細胞が含まれる。抗体断片は、全長抗体のタンパク質分解性もしくは他の分解によって、組換え法によって、または化学的合成によって産生され得る。抗体のポリペプチド断片、特に、最大で約５０アミノ酸のより短いポリペプチドは、化学的合成によって簡便に作製され得る。タンパク質およびペプチドのための化学的合成の方法は、当該分野で公知であり、市販されている。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片は、親和性成熟され得る。例えば、親和性成熟された抗体は、当該分野で公知の手順によって産生され得る（Ｍａｒｋｓら、１９９２、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９～７８３；Ｂａｒｂａｓら、１９９４、Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ ９１：３８０９～３８１３；Ｓｃｈｉｅｒら、１９９５、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７～１５５；Ｙｅｌｔｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４～２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら、１９９５、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０～９；Ｈａｗｋｉｎｓら、１９９２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９～８９６；およびＷＯ２００４／０５８１８４）。
免疫原性
免疫原性は、抗体およびＦｃ融合タンパク質が含まれるタンパク質治療薬の開発および利用に対する主な障壁である。タンパク質配列、投与の経路および頻度、ならびに患者集団が含まれるがこれらに限定されないいくつかの因子が、タンパク質免疫原性に寄与し得る。免疫応答は、典型的には、マウス抗体などの非ヒトタンパク質に対して最も激しいが、主にまたは完全にヒト配列内容を有する治療薬であっても、免疫原性であり得る。免疫原性は、外来として把握される物質に対する複雑な一連の応答であり、これには、中和および非中和抗体の産生、免疫複合体の形成、補体活性化、肥満細胞活性化、炎症ならびにアナフィラキシーが含まれ得る。望まれない免疫応答は、抗原認識を直接妨害すること、エフェクター分子との相互作用を変更すること、または治療薬の血清半減期もしくは組織分布を乱すことによって、抗体およびＦｃ融合タンパク質治療薬の効力を低減させ得る。
タンパク質治療薬は、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、Ｒ．Ｉ．のＥｐｉｖａｘ，Ｉｎｃ．によって提供されるような市販のサービスを使用して、潜在的な免疫原性エピトープの存在を予測するために分析され得る。一部の実施形態では、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏアルゴリズムが、クラスＩＩ ＭＨＣ分子に結合するエピトープを予測できる。かかるアルゴリズムを用いたポリペプチドのデータセットの分析は、予測されたエピトープを提供する。予測されたエピトープは、自動ペプチド合成または組換えＤＮＡ技術の標準的な方法によって調製されるペプチドを作製するために使用される。Ｅｐｉｖａｘから提供されたスコアリング情報は、集団中に認識された予測されたエピトープがどのように広がっているかの指標を提供し得る。
以下の実施例１０に記載されるように、本発明の抗体を、ＥｐｉＶａｘによって開発されたＥｐｉＭａｔｒｉｘアルゴリズムを使用して、本明細書でＴ細胞エピトープ、「Ｔ－レジトープ」または「ｔＲｅｇ」とも呼ばれる、Ｔ細胞によって認識されるエピトープの存在についてスクリーニングした。抗体配列は、重複する９マーフレームへと分類解析され、各フレームは、最後が８アミノ酸重複する。次いで、得られたフレームの各々は、８つの一般的なＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子（ＤＲＢ１＊０１０１、ＤＲＢ１＊０３０１、ＤＲＢ１＊０４０１、ＤＲＢ１＊０７０１、ＤＲＢ１＊０８０１、ＤＲＢ１＊１１０１、ＤＲＢ１＊１３０１およびＤＲＢ１＊１５０１）のパネルに関して、予測される結合親和性についてスコアリングされる。生スコアは、無作為に生成されたペプチドの大きいサンプルのスコアに対して標準化され、得られた「Ｚ」スコアが報告される。
全体的配列スコアであるｔＲｅｇ調整済スコアは、抗体の免疫原性を予測するために、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアを使用して計算され得る。実施例１０に記載されるように、ｔＲｅｇ調整済スコアは、９マーフレームのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアを合計し（中間合計）、ＨＬＡ型観測の数を指摘することによって計算される。９マーおよびＨＬＡ型の全ての個々の組み合わせ（「観測」）が、その９マーがエピトープであるかどうかにかかわらず、試験される。特定の観測が、そのペプチドが所与のＨＬＡ型に対する結合子の上位５％にあることを示す場合、この観測についてのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアが、タンパク質配列全体と関連する中間合計に加算される。試験した観測の総数もまた記録される。唯一の例外は、ＥｐｉＶａｘによって開発されたＩＳＰＲＩソフトウェアパッケージによって「Ｔ－レジトープ」として同定された９マーについての全ての観測が、ゼロのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを有すると仮定されることである。本明細書で使用する場合、「Ｔ－レジトープ」は、天然の調節性Ｔ細胞を活性化し、望まれない免疫応答を低減させることが潜在的にできる、モノクローナル抗体フレームワーク領域内のアミノ酸配列である。ｔＲｅｇ調整済スコアは以下のように計算される：ｔＲｅｇ調整済スコア＝（中間合計）＊１０００／（観測の数）。中間合計では、０．０５＊２．２２４８のベースラインスコアが、各観測（Ｔ－レジトープを含む）から減算される。より低いｔＲｅｇ調整済スコアは、免疫原性リスクのより低い潜在力を予測する。
使用
悪液質を処置するための方法
一部の態様では、本発明は、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片を使用して、ＧＤＦ１５活性を低減させるまたは阻害するための治療方法であって、治療有効量の、抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物を投与するステップを含む、方法を提供する。処置される障害は、ＧＤＦ１５活性またはシグナル伝達の除去、阻害または低減によって改善、寛解、阻害または予防される任意の疾患または状態である。
本発明は、遊離ＧＤＦ１５のレベルの低減を必要とする対象において、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させる方法を包含する。この方法は、対象における遊離ＧＤＦ１５のレベルを決定するステップ、治療的量の本発明の抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップ、および抗体またはその抗原結合性断片の投与前のＧＤＦ１５のレベルを、投与後の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較するステップ、を含み、それによって、対象において遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させる。
一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルの低減は、ＧＤＦ１５の望ましくない、有害なまたは望まれない生物学的活性を低減させる。ＧＤＦ１５のかかる活性には、（ａ）食物摂取を減少させること；（ｂ）食欲を減少させること；（ｃ）体重を減少させること；（ｄ）体重減少を増加させること；（ｅ）体脂肪量を減少させること；（ｆ）除脂肪量を減少させること；（ｇ）体脂肪量の喪失を増加させること、ｈ）除脂肪筋肉量の喪失を増加させること、ｉ）ＧＦＲＡＬに結合すること；（ｊ）ＲＥＴによって媒介される下流シグナル伝達を増加させること；（ｋ）ＥＲＫのリン酸化を増加させること；（ｌ）Ｓ６のリン酸化を増加させること；（ｍ）ＭＡＰＫシグナル伝達経路のＲＥＴ媒介性の活性化を増加させること；（ｎ）ＡＫＴシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を増加させること；および（ｏ）ＰＬＣ－γ１シグナル伝達経路の活性化を増加させること、が含まれるがこれらに限定されない。
一実施形態では、本発明は、ＧＤＦ１５の生物学的活性の低減を必要とする対象において、ＧＤＦ１５の生物学的活性を低減させる方法を含む。この方法は、治療的量の本発明の抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、それによって、ＧＤＦ１５の生物学的活性を低減させる。
一態様では、ＧＤＦ１５の生物学的活性には、（ａ）食物摂取を減少させること；（ｂ）食欲を減少させること；（ｃ）体重を減少させること；（ｄ）体重減少を増加させること；（ｅ）体脂肪量を減少させること；（ｆ）除脂肪量を減少させること；（ｇ）体脂肪量の喪失を増加させること、ｈ）除脂肪筋肉量の喪失を増加させること、ｉ）ＧＦＲＡＬに結合すること；（ｊ）ＲＥＴによって媒介される下流シグナル伝達を増加させること；（ｋ）ＥＲＫのリン酸化を増加させること；（ｌ）Ｓ６のリン酸化を増加させること；（ｍ）ＭＡＰＫシグナル伝達経路のＲＥＴ媒介性の活性化を増加させること；（ｎ）ＡＫＴシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を増加させること；および（ｏ）ＰＬＣ－γ１シグナル伝達経路の活性化を増加させること、が含まれるがこれらに限定されない。
用語「処置」または「処置された」には、予防的および／または治療的処置が含まれる。状態の臨床所見の前に投与される場合、処置は、予防的とみなされる。治療的処置には、例えば、疾患の重症度を寛解もしくは低減させる、または疾患の長さを短縮することが含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「悪液質」には、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性心不全、うっ血性心不全、サルコペニア、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サルコペニアおよび慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）を含むいくつかの慢性疾患と共に生じる代謝障害および併存症が含まれる。
本発明は、ＧＤＦ－１５によって媒介されるまたはそれと関連する疾患、障害または状態を処置する方法を包含する。一態様では、障害は、悪液質である。他の態様では、障害は、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓疾患、慢性心不全、うっ血性心不全またはサルコペニアと関連する悪液質である。一部の態様では、がんは、固形腫瘍がん、膵がん、肺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がんまたは精巣がんである。一部の態様では、化学療法は、白金ベースの化学療法である。疾患または障害または症状は、軽減され得る、または重症度、持続時間、もしくは発生の頻度が低減され得る。
本発明は、処置の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物をさらに包含する。本明細書に記載される処置の方法に言及する実施形態では、かかる実施形態もまた、その処置における使用のための、またはあるいは、その処置における使用のための医薬の製造のための、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物に関するさらなる実施形態である。
抗体およびその抗体断片は、１つ以上のさらなる治療的に活性な化合物と組み合わせて投与され得る。さらなる治療的に活性な化合物には、悪液質と関連する慢性障害の処置のために使用される薬剤、抗がん剤（例えば、免疫療法および化学療法）、細胞ストレスを誘導する抗がん剤（例えば、白金ベースの化学療法剤、例えば、シスプラチン）、筋肉同化剤（例えば、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）、ミオスタチン阻害剤およびアクチビンＡ受容体阻害剤）、抗炎症剤（例えば、ＪＡＫ阻害剤、ＩＬ－６阻害剤、ＩＬ－８阻害剤）、食欲刺激薬（例えば、グレリン模倣物、メラノコルチン４受容体阻害剤）および代謝を改善する薬剤（例えば、メトホルミン）が含まれる。抗体またはその抗原結合性断片が含まれる、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、別々の医薬組成物で、対象に同時発生的に投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる経路の投与によって、対象に投与され得る。
「化学療法剤」は、がんの処置において有用な化学化合物である。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ）；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパおよびウレドパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミンが含まれる、エチレンイミンおよびメチロールメラミン（methylamelamine）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ）；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）、アセチルカンプトテシン、スコポレチンおよび９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；ＴＬＫ－２８６；ＣＤＰ３２３、経口アルファ－４インテグリン阻害剤；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビシン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（nitrosurea）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマＩおよびカリケアマイシンオメガｌｌ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３～１８６（１９９４）を参照のこと）；ダイネミシンＡを含むダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣ１リポソーム注射（ＤＯＸＩＬ）およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ）、エポチロンおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンおよびイマチニブ（２－フェニルアミノピリミジン誘導体）、ならびに他のｃ－ｉｔ阻害剤；抗副腎薬、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補給剤、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジコン；エフロルニチン；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳ１ＮＥ、ＦＩＬＤＥＳＩＮ）；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ）およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）；クロラムブシル；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ）；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ）；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ）；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；イノツズマブオゾガマイシン（ＢＥＳＰＯＮＳＡ）、ボスチニブ（ＢＯＳＵＬＩＦ）、パルボシクリブ（ＩＢＲＡＮＣＥ）、アキシチニブ（ＩＮＬＹＴＡ）、リンゴ酸スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ）、クリゾチニブ（ＸＡＬＫＯＲＩ）、エンザルタミド（ＸＴＡＮＤＩ）；上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸もしくは誘導体；ならびに上記のうち２つ以上の組み合わせ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの組み合わせ治療の略称であるＣＨＯＰ、ならびに５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ）による処置レジメンの略称であるＦＯＬＦＯＸ、が含まれる。
化学療法剤のさらなる例には、がんの成長を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断または阻害するように作用し、全身性または全身処置の形態である場合が多い、抗ホルモン剤が含まれる。これらは、ホルモン自体であり得る。例には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸタモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ）、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ １１ ７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））が含まれる、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；抗プロゲステロン剤；エストロゲン受容体下方調節因子（ＥＲＤ）；エストロゲン受容体アンタゴニスト、例えば、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ）；卵巣を抑制またはシャットダウンするように機能する薬剤、例えば、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、例えば、酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮおよびＥＬＩＧＡＲＤ）、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリン；抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミド；ならびに副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ）、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ）、フォルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＪＶＩＳＯＲ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ）およびアナストロゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ）などが含まれる。さらに、化学療法剤のかかる定義には、ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳまたはＯＳＴＡＣ）、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ）、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ）、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ）、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ）またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ）；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路中の遺伝子、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓおよび上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）などの発現を阻害するもの；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥワクチンならびに遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮワクチンおよびＶＡＸＩＤワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ）；抗エストロゲン剤、例えば、フルベストラント；Ｋｉｔ阻害剤、例えば、イマチニブまたはＥＸＥＬ－０８６２（チロシンキナーゼ阻害剤）；ＥＧＦＲ阻害剤、例えば、エルロチニブまたはセツキシマブ；抗ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ベバシズマブ；イリノテカン；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ）；ラパチニブおよび二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知のＥｒｂＢ－２およびＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）；１７ＡＡＧ（ヒートショックタンパク質（Ｈｓｐ）９０毒であるゲルダナマイシン誘導体）、ならびに上記のいずれかの薬学的に許容できる塩、酸または誘導体が含まれる。
「化学療法」は、本明細書で使用する場合、がんの処置のための、上で定義した化学療法剤、または２、３もしくは４つの化学療法剤の組み合わせを指す。化学療法が１つよりも多くの化学療法剤からなる場合、それらの化学療法剤は、同じ日、または同じ処置サイクル中の異なる日に、患者に投与され得る。
「白金ベースの化学療法」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの化学療法剤が白金の配位錯体である化学療法を指す。例示的な白金ベースの化学療法には、限定なしに、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、シスプラチンと組み合わせたゲムシタビン、ペメトレキセド（pemetremed）と組み合わせたカルボプラチンが含まれる。
「白金ベースのダブレット」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの化学療法剤が白金の配位錯体である、２つおよび２つ以下の化学療法剤を含む化学療法を指す。例示的な白金ベースのダブレットには、限定なしに、シスプラチンと組み合わせたゲムシタビン、ペメトレキセドと組み合わせたカルボプラチンが含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「全身性抗がん治療」は、がんの転帰を変化させることを一般的に意図した、世界の任意の国の規制機関によって承認された、または世界の任意の国の規制機関の監督下で実施されたヒト臨床試験における、医薬品の全身性投与を指す。全身性抗がん治療には、化学療法、ホルモン療法、標的化抗がん治療、がんワクチン、腫瘍溶解性ワクチンおよび養子Ｔ細胞治療が含まれるがこれらに限定されない。
がんを処置する方法
本発明は、がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に、有効量のＧＤＦ１５抗体を投与するステップを含む方法を包含する。一部の実施形態では、がんは、胃がん（gastric cancer）、肉腫、リンパ腫、白血病、頭頸部がん、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胃がん（stomach cancer）、甲状腺がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱がん、子宮頸がん、絨毛癌、結腸がん、口腔がん、皮膚がんおよび黒色腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、対象は、局所進行性もしくは転移性黒色腫、頭頸部扁平上皮がん（ＳＣＨＮＣ）、卵巣癌、肉腫、または再燃性もしくは難治性古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）を有する、以前に処置された成人患者である。一部の実施形態では、がんは、白金抵抗性および／もしくは白金難治性がん、例えば、白金抵抗性および／もしくは難治性卵巣がん、白金抵抗性および／もしくは難治性乳がんまたは白金抵抗性および／もしくは難治性肺がんなどであり得る。
別の態様では、本発明は、腫瘍を有する対象において、腫瘍の成長または進行を阻害する方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、対象において、がん細胞の転移を阻害または予防する方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
別の態様では、本発明は、腫瘍を有する対象において、腫瘍退縮を誘導する方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
一部の実施形態では、この方法は、有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含み得る。一部の実施形態では、第２の治療剤は、例えば、免疫モジュレーターである。用語「免疫モジュレーター」は、免疫応答（本明細書で定義される）を変更（例えば、阻害、減少、増加、増強または刺激）することが可能な物質、または宿主哺乳動物の自然、体液性もしくは細胞性免疫系の任意の構成要素の働きを指す。したがって、用語「免疫モジュレーター」は、本明細書で定義される「免疫エフェクター細胞エンハンサー」および本明細書で定義される「免疫抑制性細胞阻害剤」、ならびに哺乳動物の免疫系の他の構成要素に影響を与える物質を包含する。一部の実施形態では、免疫モジュレーターは、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体であり得る。
本発明は、処置の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物をさらに包含する。本明細書に記載される処置の方法に言及する実施形態では、かかる実施形態もまた、その処置における使用のための、またはあるいは、その処置における使用のための医薬の製造のための、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物に関するさらなる実施形態である。
したがって、がんの処置における使用のための、または腫瘍の成長もしくは進行の阻害を必要とする対象において腫瘍の成長もしくは進行を阻害するための、本明細書で提供される抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物もまた提供される。
がんの処置のための医薬の製造における、または腫瘍の成長もしくは進行の阻害を必要とする対象において腫瘍の成長もしくは進行を阻害するための、本明細書で提供される抗ＧＤＦ１５抗体のいずれかの使用もまた提供される。
抗体およびその抗体断片は、１つ以上のさらなる治療的に活性な化合物と組み合わせて投与され得る。さらなる治療的に活性な化合物には、悪液質と関連する慢性障害の処置のために使用される薬剤、抗がん剤（例えば、免疫療法および化学療法）、細胞ストレスを誘導する抗がん剤（例えば、白金ベースの化学療法剤、例えば、シスプラチン）、筋肉同化剤（例えば、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）、ミオスタチン阻害剤およびアクチビンＡ受容体阻害剤）、抗炎症剤（例えば、ＪＡＫ阻害剤、ＩＬ－６阻害剤、ＩＬ－８阻害剤）、食欲刺激薬（例えば、グレリン模倣物、メラノコルチン４受容体阻害剤）および代謝を改善する薬剤（例えば、メトホルミン）が含まれる。
抗体またはその抗原結合性断片が含まれる、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、別々の医薬組成物で、対象に同時発生的に投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる経路の投与によって、対象に投与され得る。
用語「免疫応答」は、宿主哺乳動物の免疫系による、特定の物質（例えば、抗原または免疫原）に対する任意の検出可能な応答、例えば、自然免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体シグナル伝達カスケードの活性化）、細胞媒介性の免疫応答（例えば、Ｔ細胞、例えば、抗原特異的Ｔ細胞、および免疫系の非特異的細胞によって媒介される応答）、および体液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって媒介される応答、例えば、抗体の産生、ならびに血漿、リンパ液および／または組織液中への抗体の分泌）を指す。
用語「免疫原性」は、アジュバントの存在下または非存在下で、単独であっても担体と連結された場合であっても、免疫応答を引き起こす、惹起する、刺激するもしくは誘導する、または特定の抗原に対する既存の免疫応答を改善する、増強する、増加させるもしくは延長させる、物質の能力を指す。
本明細書で提供されるがんを処置するための組成物および方法は、１つ以上の他の免疫モジュレーターをさらに含み得る。
一部の実施形態では、免疫モジュレーターは、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体であり得る。抗体は、例えば、ヒト、ヒト化または一部ヒトキメラ抗ＣＤ４０抗体であり得る。特異的抗ＣＤ４０モノクローナル抗体の例には、Ｇ２８－５、ｍＡｂ８９、ＥＡ－５もしくはＳ２Ｃ６モノクローナル抗体、ＣＰ８７０８９３、またはＡＰＸ００５Ｍが含まれる。特定の実施形態では、抗ＣＤ４０アゴニスト抗体は、ＣＰ８７０８９３またはダセツズマブ（ＳＧＮ－４０）である。
ＣＰ－８７０，８９３は、抗腫瘍治療として臨床的に調査された完全ヒトアゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。ＣＰ８７０，８９３の構造および調製は、ＷＯ２００３０４０１７０に開示されており、そこで、抗体ＣＰ８７０，８９３は、抗体「２１．４．１」として同定されている。ＣＰ－８７０，８９３の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４６および配列番号４８に示され、ＷＯ２００３０４０１７０の表７中にも示される。臨床試験では、ＣＰ８７０，８９３は、一般には注入１回当たり０．０５～０．２５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、静脈内注入によって投与された。本明細書で提供されるがんを処置するための方法では、ＣＰ－８７０，８９３は、皮内、皮下または外用投与され得る。
ダセツズマブ（ＳＧＮ－４０またはｈｕＳ２Ｃ６としても公知；ＣＡＳ番号８８－４８６－５９－９）は、インドレントリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫および多発性骨髄腫に対する臨床試験において調査された別の例示的な抗ＣＤ４０アゴニスト抗体である。本明細書で提供されるがんを処置するための方法では、ダセツズマブは、皮内、皮下または外用投与され得る。
サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）
本発明は、ＣＲＳを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、有効量のＧＤＦ１５抗体を投与するステップを含む方法を包含する。ＣＲＳは、モノクローナル抗体およびＴ細胞免疫療法剤の投与後に時折見られる全身性炎症応答である（Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ－Ｖｏｒｎｈａｇｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｆｏｒ ＩｍｍｕｎｏＴｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ６、５６（２０１８））。ＣＲＳの病態生理学、およびＣＲＳの全身性炎症応答を永続させる種々のサイトカインの大量放出を誘発する起因事象については、ほとんど知られていない。
一部の実施形態では、本発明は、ＣＲＳの処置を必要とする対象において、ＣＲＳを処置する方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
他の実施形態では、この方法は、有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含み得る。第２の治療剤には、抗炎症剤、例えば、ＩＬ－６阻害剤、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）阻害剤、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）阻害剤、コルチコステロイド、抗ヒスタミン薬、解熱薬および／または抗生物質が含まれる。一部の実施形態では、第２の治療剤は、抗体、例えば、トシリズマブおよび／またはシルツキシマブである。
本発明は、ＣＲＳを処置するための方法における使用のための、本明細書で定義されるＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物もまた提供する。本発明は、ＣＲＳを処置するための医薬の製造における、本明細書で定義されるＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物の使用もまた提供する。本明細書に記載される処置の方法に言及する実施形態では、かかる実施形態もまた、その処置における使用のための、またはあるいは、その処置における使用のための医薬の製造のための、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物に関するさらなる実施形態である。
ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストの組み合わせ治療
本発明は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストと組み合わせたＧＤＦ１５抗体を投与するステップを含み、この組み合わせが、がんを処置する際に有効である、方法を包含する。即ち、本明細書で開示されるデータは、抗ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸アンタゴニストの組み合わせが、がんの処置において治療効果を提供することを実証している。このデータは、抗ＧＤＦ－１５およびＰＤ－１軸アンタゴニストの組み合わせが、単独で投与される各治療の予測される相加的効果よりも高い治療効果である相乗的治療効果を提供することをさらに実証している。
本発明は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、がんを処置する際に有効である、一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストと組み合わせた一定量のＧＤＦ１５阻害剤を投与するステップを含む、方法を包含する。本発明は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、一定量のＧＤＦ１５阻害剤および一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、がんを処置する際に有効である、方法もまた包含する。別の実施形態では、本発明は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、一定量のＧＤＦ１５阻害剤および一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、がんの処置において相乗的効果を達成する、即ち、組み合わせが「相乗的」である、方法に関する。一態様では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体ＧＤＦ１５＿００１であり、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、アベルマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ－８８８）、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。本発明は、がんの処置における使用のための、ＧＤＦ１５阻害剤およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストならびに薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を包含する。本発明は、がんの処置における使用のための、相乗的有効量のＧＤＦ１５阻害剤、相乗的治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストおよび薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を包含する。この組成物は、例えば、少なくとも１つの化学療法剤であるがこれに限定されないさらなる治療剤をさらに含み得る。
当業者は、本明細書で提供される開示に基づいて、本発明のがんを処置する方法が、がんを処置するために、少なくとも１つのさらなる治療剤で以前に処置されたまたはそれを現在受けている患者に、相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体および相乗的治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体など）を投与するステップを包含することを理解する。かかるさらなる治療剤は、がんを処置するための標準治療である薬剤を包含する。即ち、本発明の組み合わせ治療は、手術、放射線、化学療法、および当該分野で公知の任意の他の治療が含まれるがこれらに限定されない異なる治療をすでに受けているがん患者の治療レジメンに追加され得る。
当業者は、公知の方法に従って、患者に投与するために本発明の組み合わせにおいて使用される、各化合物の適切な量、用量または投薬量を、年齢、体重、総体的な健康、投与される化合物、投与の経路、処置を必要とするがんの性質および進行、他の薬物療法の存在などの因子を考慮に入れて、決定することができる。
ある実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分であり、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの初期用量で、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。初期用量の後には、１つ以上の引き続く用量が続き得る。一部の実施形態では、１つ以上の引き続く用量は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎の少なくともいずれかで投与され得る。
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、約０．２５ｍｇ～約２０００ｍｇの固定用量として、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗体は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎に投与される。
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、抗ＧＤＦ１５抗体は、毎週約０．１～約６０ｍｇの固定用量として、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、毎週約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇの固定用量として投与される。
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、抗ＧＤＦ１５抗体は、１週間おきに約０．１～約１３０ｍｇの固定用量として、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、隔週で約５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇおよび約１２５ｍｇの固定用量として投与される。
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、抗ＧＤＦ１５抗体は、２１日（±２日）毎に約０．１～約４００ｍｇの固定用量として、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、２１日（±２日）毎に投与される約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇおよび約３８５ｍｇの固定用量として投与される。
一部の実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、抗ＧＤＦ１５抗体は、２８日（±２日）毎に約０．１～約４００ｍｇの固定用量として、静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）投与される。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、２８日（±２日）毎に投与される約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１７５ｍｇ、約２００ｍｇ、約２２５ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２７５ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２５ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３７５ｍｇおよび約３８５ｍｇの固定用量として投与される。
本発明の方法の実施は、種々の投与または投薬レジメンを介して達成され得る。本発明の組み合わせの化合物は、間欠的に、同時発生的にまたは逐次的に投与され得る。ある実施形態では、本発明の組み合わせの化合物は、同時発生的な投薬レジメンで投与され得る。
投与または投薬レジメンの反復は、がん細胞の所望の低減または減弱を達成するために、必要に応じて実施され得る。「持続的投薬スケジュール」は、本明細書で使用する場合、用量中断なしの、例えば、処置なしの日なしの、投与または投薬レジメンである。処置サイクル間の用量中断なしの２１日または２８日の処置サイクルの反復は、持続的投薬スケジュールの一例である。ある実施形態では、本発明の組み合わせの化合物は、持続的投薬スケジュールで投与され得る。ある実施形態では、本発明の組み合わせの化合物は、持続的投薬スケジュールで、同時発生的に投与され得る。
ある実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体である。一部の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＤＦ１５＿００１である。
一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストである。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、例えば、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＹＷ２４３．５５．ｓ７０）、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ、アテゾリズマブおよびデュルバルマブであるがこれらに限定されない抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブであり、処置の過程を通じて、約１４日間（±２日間）または約２１日間（±２日間）または約３０日間（±２日間）の間隔で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内投与され得る。一部の実施形態では、アベルマブは、処置の過程を通じて、約１４日間（±２日間）または約２１日間（±２日間）または約３０日間（±２日間）の間隔で、約８０、１５０、１６０、２００、２４０、２５０、３００、３２０、３５０、４００、４５０、４８０、５００、５５０、５６０、６００、６４０、６５０、７００、７２０、７５０、８００、８５０、８８０、９００、９５０、９６０、１０００、１０４０、１０５０、１１００、１１２０、１１５０、１２００、１２５０、１２８０、１３００、１３５０、１３６０、１４００、１４４０、１５００、１５２０、１５５０または１６００ｍｇ、好ましくは８００ｍｇ、１２００ｍｇまたは１６００ｍｇの一律用量として投与される。ある特定の実施形態では、対象には、本明細書に記載されるＰＤ－１軸結合性アンタゴニストのいずれかを含む医薬の静脈内（ＩＶ）注入が投与される。ある特定の実施形態では、対象には、本明細書に記載されるＰＤ－１軸結合性アンタゴニストのいずれかを含む医薬の皮下（ＳＣ）注入が投与される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１軸アンタゴニストは、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストである。一部の実施形態では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８）、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、チスレリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブであり、抗ＧＤＦ１５抗体は、処置の過程を通じて、約１４日間（±２日間）または約２１日間（±２日間）または約３０日間（±２日間）の間隔で、約１、２、３、４、５、６、７または８ｍｇ／ｋｇの用量で、静脈内または皮下投与されるが、好ましくは皮下投与される。一部の実施形態では、ＵＳ２０１６／１５９９０５に開示されるＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ－８８８）は、約１４日間（±２日間）または約２１日間（±２日間）または約３０日間（±２日間）または約３５日間（±２日間）または約４２日間（±２日間）の間隔で、約８０、１５０、１６０、２００、２４０、２５０、３００、３２０、３５０、４００、４５０、５００、５５０または６００ｍｇ、好ましくは３００ｍｇの一律用量として投与される。一部の実施形態では、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８）は、３００ｍｇ Ｑ４Ｗの量で皮下投与される。一部の実施形態では、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８、ｍＡｂ７）は、６００ｍｇ Ｑ６Ｗの量で皮下投与される。
さらに、本発明は、がんを処置するための方法であって、それを必要とする患者に、一定量のＧＤＦ１５抗体および一定量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するステップを含み、これらの量が一緒になって、別々の効果が一緒に加算された抗ＧＤＦ１５抗体の治療効果およびＰＤ－１軸結合性阻害剤の治療効果よりも大きい、がんの処置における相乗的効果を達成する、方法に関する。本発明の方法または使用は、標的化された治療剤、特に、ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストの相乗的組み合わせに関する。実施形態の一態様では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、チスレリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８、ｍＡｂ７）、アベルマブ、アテゾリズマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。実施形態の一態様では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体であり、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、チスレリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８、ｍＡｂ７）、アテゾリズマブ、デュルバルマブからなる群から選択され、アベルマブではない。
本発明によれば、一定量の第１の化合物または構成要素、例えば、ＧＤＦ１５阻害剤が、一定量の第２の化合物または構成要素、例えば、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニスト（これにはアベルマブは含まれない）と共に投与され、これらの量が一緒になって、がんの処置において有効である。一緒になって有効であるこれらの量は、処置されている障害の症状のうち１つ以上を、ある程度まで緩和する。がんの処置に関して、有効量は、（１）腫瘍のサイズを低減させる効果、（２）腫瘍転移発生を阻害する（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）効果、（３）腫瘍成長もしくは腫瘍侵襲性をある程度まで阻害する（即ち、ある程度まで減速させる、好ましくは停止させる）効果、および／または（４）がんと関連する１つ以上の徴候もしくは症状をある程度まで緩和する（または、好ましくは、排除する）効果、を有する量を指す。用量および投与レジメンの治療的または薬理学的有効性は、疾患進行前の時間の延長として測定され得る、これらの特定の腫瘍を有する患者における疾患制御および／または全生存を誘導、増強、維持または延長させる能力としても特徴付けられ得る。
本発明は、単独での、または他の治療と組み合わせた、本開示の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分を必要とする対象への、単独での、または他の治療と組み合わせた、本開示の抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分の投与のための方法を提供する。本開示の組み合わせ治療（例えば、抗ＧＤＦ１５およびＰＤ－１軸アンタゴニスト）は、対象に、付随的または逐次的に投与され得る。本開示の抗ＧＤＦ１５およびＰＤ－１軸アンタゴニスト組み合わせ治療は、周期的にも投与され得る。周期的治療には、治療（例えば、薬剤）のうち１つの副作用を回避もしくは低減させるために治療（例えば、薬剤）のうち１つに対する抵抗性の発達を低減させるため、および／または治療の効力を改善するために、一定期間にわたる第１の治療（例えば、第１の予防剤または治療剤）の投与、その後の、一定期間にわたる第２の治療（例えば、第２の予防剤または治療剤）の投与、およびこの逐次的な投与、を反復すること、即ち、サイクルが関与する。
本発明は、処置の定義された方法における使用のための、本明細書で定義される抗ＧＤＦ１５抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物をさらに包含し、この抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物は、本明細書で定義されるように、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストと組み合わせて投与される。本明細書に記載される処置の方法に言及する実施形態では、かかる実施形態もまた、その処置における使用のための、またはあるいは、その処置における使用のための医薬の製造のための、抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物に関するさらなる実施形態である。
本開示の組み合わせ治療の治療（例えば、予防剤または治療剤）は、対象に同時発生的に投与され得る。用語「同時発生的に」は、治療（例えば、予防剤または治療剤）の投与が正確に同時であることに限定されないが、むしろ、それらが他の方法で投与された場合よりも大きい増加した利益を提供するように他の治療（例えば、アベルマブが含まれない場合があるＰＤ－１軸アンタゴニスト）と一緒に抗体が作用できるような、より好ましくは、別々に投与された２つの治療の相加的効果よりも大きい治療効果である「相乗的治療効果」を組み合わせ治療が提供するような順番で、かつそのような時間間隔内に、本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分を含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各治療は、対象に、同時に、または異なる時点において任意の順序で逐次的に投与され得る；しかし、同時に投与されない場合、これらは、所望の治療効果または予防効果を提供するために、時間的に十分に接近して投与すべきである。各治療は、任意の適切な形態で、任意の適切な経路によって、対象に別々に投与され得る。抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、任意の本発明の抗体、好ましくは、ＧＤＦ－１５＿００１であり得る。ＰＤ－１軸アンタゴニストには、ＰＤ－１結合性アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストおよびＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニストが含まれるがこれらに限定されない。他の態様では、ＰＤ－１結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片である。さらなる態様では、抗ＰＤ－１抗体には、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８）が含まれるがこれらに限定されない。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片である。他の態様では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９（ＭＤＸ－１１０５）、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブである。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１結合性アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片であるが、アベルマブではない。
種々の実施形態では、抗ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＤ－１軸アンタゴニスト（例えば、とりわけ、抗ＰＤ－１抗体、アベルマブが含まれない場合がある抗ＰＤ－Ｌ１抗体、または抗ＰＤ－Ｌ２抗体）の投与から、１５分未満、３０分未満、１時間未満離れて、約１時間離れて、約１時間～約２時間離れて、約２時間～約３時間離れて、約３時間～約４時間離れて、約４時間～約５時間離れて、約５時間～約６時間離れて、約６時間～約７時間離れて、約７時間～約８時間離れて、約８時間～約９時間離れて、約９時間～約１０時間離れて、約１０時間～約１１時間離れて、約１１時間～約１２時間離れて、２４時間離れて、４８時間離れて、７２時間離れて、または１週間離れて、対象に投与される。他の実施形態では、２つ以上の治療（例えば、抗ＧＤＦ１５抗体、アベルマブが含まれない場合がある抗ＰＤ－Ｌ１抗体、および化学療法剤）は、同じ患者来院内に、患者に投与される。
組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る。あるいは、組み合わせ治療の予防剤または治療剤は、別々の医薬組成物で、対象に同時発生的に投与され得る。予防剤または治療剤は、同じまたは異なる経路の投与によって、対象に投与され得る。
診断方法
本発明の抗ＧＤＦ１５抗体、抗体組成物および方法は、イムノアッセイ、ならびにＧＤＦ１５媒介性障害の診断、および処置の評価のための使用を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏの有用性を有する。これらの方法は、ＧＤＦ１５の存在、より好ましくは、増加したレベルのＧＤＦ１５と関連する障害を有するヒト患者を診断、評価および処置するために特に適切であり、ここで、増加したレベルのＧＤＦ１５は、健康なヒトボランティアにおける遊離ＧＤＦ－１５の血漿濃度を上回る増加したレベルを包含する。ＧＤＦ１５の存在と関連するこの障害には、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓疾患、慢性心不全、うっ血性心不全またはサルコペニアと関連する悪液質が含まれるがこれらに限定されない。
本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の存在を検出するための方法であって、ＧＤＦ１５を含むと疑われるサンプルを、ＧＤＦ１５に対して特異的な抗体と接触させるステップ、および抗体と結合したＧＤＦ１５の存在を検出するステップを含み、それによって、サンプル中のＧＤＦ１５を検出する、方法を提供する。ＧＤＦ１５が固体支持体に結合され、サンプルがそれに添加されて、サンプル中のＧＤＦ１５に抗体を結合させるアッセイが含まれるがこれに限定されない、抗体と結合したＧＤＦ１５を検出するための方法が、当該分野で周知である。固体支持体に結合した抗体と同じまたはそれとは異なる第２のＧＤＦ１５抗体が添加され、直接的標識化（即ち、第２の抗体は、検出可能な標識にコンジュゲートされる）によって、または例えば、第２の抗体の定常ドメインと反応し、検出可能な標識を含む、別の種由来の第３の抗体を添加することによって、検出され得る。したがって、このアッセイは、サンプル中のＧＤＦ１５の存在または非存在を検出するために使用され得る。
別の実施形態では、本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の存在を検出するためのキットであって、ＧＤＦ１５に対して特異的な抗体、アプリケーター、およびそれらの使用のための指導用材料を含む、キットを含む。
本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するための方法であって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手を提供するステップ；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を提供するステップ；サンプル、抗体および標識された競合相手を組み合わせるステップであって、サンプル中のＧＤＦ１５が、抗体への結合について、標識された競合相手と競合する、ステップ；ならびに標識の検出によって、抗体に結合していない標識された競合相手の量を測定することによって、このサンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するステップ、を含む方法もまた提供する。サンプルの非存在下で抗体に結合した標識された競合相手の量が、サンプルが添加された場合の抗体に結合した標識された競合相手の量と比較される。サンプルの存在下での結合した標識された競合相手の減少の量は、サンプル中に存在する標識されていないＧＤＦ１５の量の指標であり、その結果、このアッセイは、サンプル中のＧＤＦ１５の存在およびレベルを評価するために使用され得る。
一実施形態では、本発明は、対象において、増加したレベルのＧＤＦ１５と関連する疾患または障害に対する処置の有効性を評価するための方法であって、対象に処置を投与するステップ、および処置の前に対象から得られたサンプル中のＧＤＦ１５のレベルを、処置の後に対象から得られた他の点では同一のサンプル中のＧＤＦ１５のレベルと比較するステップ、を含み、サンプル中のＧＤＦ１５のレベルが、ＧＤＦ１５特異的抗体を使用して評価され、さらに、処置の前に対象から収集されたサンプル中のＧＤＦ１５のレベルと比較した、処置の後に対象から収集されたサンプル中のＧＤＦ１５のより低いレベルが、処置の過程の有効性の指標である、方法を提供する。
ＧＤＦ１５特異的抗体または標識された競合相手に関して、「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体または標識された競合相手にカップリングする（即ち、物理的に連結する）ことによる直接的標識化、ならびにそれを直接標識される別の試薬にカップリングすることによる、抗体または標識された競合相手の間接的標識化を含む。間接的標識化の一例には、蛍光標識した二次抗体を使用した一次抗体の検出が含まれる。本発明のポリペプチドの検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技術には、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。
用語「生物学的サンプル」は、対象から単離された組織、細胞および生物学的流体、ならびに対象内に存在する組織、細胞および流体を含む意図である。
本明細書に記載される抗体、標識された競合相手、および潜在的な治療的化合物は、様々な検出システムを用いたいくつかの他の均一および不均一イムノアッセイのいずれかとの使用のためにも適切である。
組成物
本発明のＧＤＦ１５抗体は、医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物は、凍結乾燥された製剤または水溶液の形態の、薬学的に許容できる担体、賦形剤および／または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、２００５、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）をさらに含み得る。許容できる担体、賦形剤または安定剤は、投薬量および濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンが含まれる抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム（octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride）；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；グルコース、マンノースもしくはデキストランが含まれる、単糖、二糖および他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み得る。薬学的に許容できる賦形剤は、本明細書にさらに記載される。
本開示の医薬組成物は、本明細書に記載されるＰＤ－１軸アンタゴニストおよび本明細書に記載されるＧＤＦ１５阻害剤をさらに含み得る。一実施形態では、ＧＤＦ１５阻害剤は、抗ＧＤＦ１５抗体ＧＤＦ１５＿００１またはＧＤＦ１５＿２９７であり、ＰＤ－１軸アンタゴニストは、任意選択により、アベルマブ、ＰＦ－０６８０１５９１（「ササンリマブ」および「ＲＮ－８８８」およびｍＡｂ７とも呼ばれ、全てＷＯ２０１６／０９２４１９に開示されている）、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。一実施形態では、ＰＤ－１軸アンタゴニストには、アベルマブは含まれない。
本開示の医薬化合物には、１つ以上の薬学的に許容できる塩が含まれ得る。かかる塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、非毒性無機酸、例えば、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などに由来するもの、ならびに非毒性有機酸、例えば、脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族ならびに芳香族スルホン酸などに由来するものが含まれる。塩基付加塩には、アルカリ土類金属、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどに由来するもの、ならびに非毒性有機アミン、例えば、Ｎ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどに由来するものが含まれる。
本開示の医薬組成物は、薬学的に許容できる抗酸化剤もまた含み得る。薬学的に許容できる抗酸化剤の例には、以下が含まれる：（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ－トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など。
本開示の医薬組成物において使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物、植物油、例えば、オリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えば、オレイン酸エチルが含まれる。適切な流動性は、例えば、コーティング材料、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
これらの組成物は、アジュバント、例えば、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤もまた含み得る。微生物の存在の防止は、無菌化手順、ならびに種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めること、の両方によって確実にされ得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなどを組成物中に含めることが望ましい場合もある。さらに、注射可能な医薬形態の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
医薬組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。組成物は、高い薬物濃度に適切な、溶液、マイクロエマルジョン、リポソームまたは他の秩序立った構造として製剤化され得る。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には要求される粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが適切である。注射可能な組成物の延長された吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
無菌の注射可能な溶液は、上に列挙した成分のうち１つまたはその組み合わせと共に、適切な溶媒中に活性化合物を要求される量で取り込み、その後、必要に応じて、無菌化精密濾過することによって、調製され得る。
一般に、分散物は、基本分散媒および上に列挙したものからの要求される他の成分を含む無菌のビヒクル中に活性化合物を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製の好ましい方法は、その以前に無菌濾過された溶液から、活性成分プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
本開示の医薬組成物は、点眼投与に適切な製剤で、調製、包装または販売され得る。かかる製剤は、例えば、水性または油性液体担体中の活性成分の０．１％～１．０％（ｗ／ｗ）溶液または懸濁物を例えば含む点眼薬の形態であり得る。かかる点眼薬は、緩衝剤、塩、または本明細書に記載されるさらなる成分のうち１つ以上の他のものをさらに含み得る。有用な他の点眼投与可能な製剤には、微結晶形態で、またはリポソーム調製物中に、活性成分を含むものが含まれる。
本明細書で使用する場合、「さらなる成分」には、以下のうち１つ以上が含まれるがこれらに限定されない：賦形剤；表面活性剤；分散剤；不活性希釈剤；造粒および崩壊剤；結合剤；滑沢剤；甘味剤；香味剤；着色剤；防腐剤；生理学的に分解可能な組成物、例えば、ゼラチン；水性ビヒクルおよび溶媒；油性ビヒクルおよび溶媒；懸濁化剤；分散剤または湿潤剤；乳化剤、乳化破壊剤（demulcent）；緩衝液；塩；増粘剤；フィラー；乳化剤；抗酸化剤；抗生物質；抗真菌剤；安定化剤；および薬学的に許容できるポリマー性または疎水性材料。本開示の医薬組成物中に含められ得る他の「さらなる成分」は、当該分野で公知であり、例えば、本明細書で参照によって組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９８５）に記載されている。
一実施形態では、ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分は、約５～６の範囲のｐＨで、酢酸ナトリウム、ポリソルベート８０および塩化ナトリウムと共に、５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約１０ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約１５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約２０ｍｇ／ｍＬの抗体、または一部の実施形態では、約２５ｍｇ／ｍＬ、または一部の実施形態では、約５０ｍｇ／ｍＬを含む無菌の水溶液として、静脈内製剤で投与される。一部の実施形態では、静脈内製剤は、ｐＨ５．５で、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、０．２ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０および１４０ｍＭ塩化ナトリウムと共に、５または１０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、無菌の水溶液である。さらに、抗体またはその抗原結合性部分を含む溶液は、多くの他の化合物の中でも、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、トレハロース、グリシン、ポリ（エチレン）グリコール、ＥＤＴＡ、メチオニンおよびそれらの任意の組み合わせ、ならびに当該分野で公知の多くの他の化合物を含み得る。
一実施形態では、本開示の医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、５０ｍｇ／ｍＬの本開示のＧＤＦ１５抗体または抗原結合性部分、２０ｍＭヒスチジン、８．５％スクロースおよび０．０２％ポリソルベート８０、０．００５％ＥＤＴＡ；別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、以下の構成要素を含む：ｐＨ５．８で、１００ｍｇ／ｍＬの本開示のＧＤＦ１５抗体または抗原結合性部分、１０ｍＭヒスチジン、５％スクロースおよび０．０１％ポリソルベート８０。この組成物は、液体製剤として、または凍結乾燥された粉末として、提供され得る。粉末が最大体積で再構成される場合、組成物は、同じ製剤を保持する。あるいは、粉末は、半分体積で再構成され得、その場合、組成物は、ｐＨ５．８で、１００ｍｇの本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分、２０ｍＭヒスチジン、１０％スクロースおよび０．０２％ポリソルベート８０を含む。
一実施形態では、用量の一部は、静脈内ボーラスによって投与され、残りは、抗体製剤の注入によって投与される。例えば、ＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分の０．０１ｍｇ／ｋｇ静脈内注射は、ボーラスとして与えられ得、抗体用量の残りは、静脈内注射によって投与され得る。所定の用量のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分は、例えば、１時間半～２時間～５時間の期間にわたって、投与され得る。
治療剤に関して、この薬剤が例えば小分子である場合、これは、当該分野で周知のように、例えば、生理学的に許容できるカチオンまたはアニオンと組み合わせた、生理学的に許容できるエステルまたは塩の形態で、医薬組成物中に存在し得る。
本明細書に記載される医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、かかる調製方法は、活性成分を、担体または１つ以上の他の補助成分と関連させるステップ、および次いで、必要な場合または望ましい場合、産物を所望の単回用量単位または複数用量単位へと成形または包装するステップを含む。
一実施形態では、本開示の組成物は、エンドトキシンおよび／または関連の発熱性物質を実質的に含まない、発熱物質を含まない製剤である。エンドトキシンには、微生物の内側に制限される毒素が含まれ、これは、微生物が破壊または死亡した場合に放出される。発熱性物質には、細菌および他の微生物の外膜からの、発熱誘導性の熱安定性物質（糖タンパク質）もまた含まれる。これらの物質は共に、ヒトに投与されると、発熱、低血圧およびショックを引き起こし得る。潜在的な有害作用に起因して、静脈内投与される医薬薬物溶液から、低い量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物適用のための、単一の１時間の期間における、体重１キログラム当たり１用量当たり、５エンドトキシン単位（ＥＵ）の上限を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。治療的タンパク質が、体重１キログラム当たり数百または数千ミリグラムの量で投与される場合、微量のエンドトキシンでさえも除去することが有利である。一実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態では、組成物中のエンドトキシンおよび発熱物質のレベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、または約５ＥＵ／ｍｇ未満、または約１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
一実施形態では、本開示は、組成物を投与することを含み、この投与は、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、腟、直腸、舌、舌下、頬、頬内、静脈内、皮膚、皮下または経皮である。
別の実施形態では、本開示は、他の治療、例えば、手術、化学療法、ホルモン療法、生物学的治療、免疫療法または放射線治療と組み合わせて、組成物を投与することをさらに含む。
投薬量
本開示のＧＤＦ１５抗体またはその抗原結合性部分を含む医薬組成物または無菌の組成物を調製するために、抗体は、薬学的に許容できる担体または賦形剤と混合される。治療剤および診断剤の製剤は、例えば、凍結乾燥された粉末、スラリー、水溶液、ローションまたは懸濁物の形態の、生理学的に許容できる担体、賦形剤または安定剤と混合することによって調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
治療薬のために投与レジメンを選択することは、実体の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックス中の標的細胞のアクセス可能性が含まれるいくつかの因子に依存する。ある特定の実施形態では、投与レジメンは、許容できるレベルの副作用と合致した、患者に送達される治療薬の量を最大化する。したがって、送達される生物製剤の量は、特定の実体、および処置されている状態の重症度に一部依存する。抗体、サイトカインおよび小分子の適切な用量を選択する際のガイダンスは、入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ、１９９６、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ、ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）、１９９１、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｃｈ（編）、１９９３、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．；Ｂａｅｒｔら、２００３、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１～６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら、１９９９、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６～１９７３；Ｓｌａｍｏｎら、２００１、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３～７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら、２０００、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３～６１９；Ｇｈｏｓｈら、２００３、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４～３２；Ｌｉｐｓｋｙら、２０００、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４～１６０２を参照のこと）。
適切な用量の決定は、例えば、当該分野で公知の、または処置に影響を与えると疑われるもしくは処置に影響を与えると予測される、パラメーターまたは因子を使用して、臨床医によってなされる。一般に、用量は、最適な用量よりもいくらか少ない量で開始し、任意の負の副作用と比較して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、その後小さい増分ずつ増加される。
「ＧＤＦ１５のレベルを低減させる」または「ＧＤＦ１５のレベルを低下させる」は、これらの用語が本明細書で使用される場合、任意の治療的介入の前の遊離ＧＤＦ１５のレベルと比較して、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低下させることを意味する。本明細書で使用する場合、「遊離ＧＤＦ１５」は、結合していない、またはさもなくば別の分子（例えば、血漿中などに存在する抗体または結合分子）との複合体中に存在しないＧＤＦ１５を意味する。
ＧＤＦ１５のレベルには、対象における遊離ＧＤＦ１５のレベルが含まれ、このレベルは、本明細書で開示される方法または当該分野で公知の遊離ＧＤＦ１５のレベルを評価するための任意の他の方法を使用して、評価される。
一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、本発明の抗体の投与前の対象におけるＧＤＦ１５のレベルと比較して低減される。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、増加したレベルの遊離ＧＤＦ１５と関連するまたはそれによって媒介される疾患、障害または状態に対象が罹患していないことと関連するまたはそれを示す標準的なレベルの遊離ＧＤＦ１５と比較して低減される。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、血漿中で約０．０５ｎｇ／ｍＬ～約３ｎｇ／ｍＬである。別の実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、その下限値が、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９ｎｇ／ｍＬからなる群から選択され、その上限値が、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９および３．０ｎｇ／ｍＬからなる群から選択される範囲内である。さらなる実施形態では、遊離ＧＤＦ１５の標準的なまたは参照のレベルは、１ｎｇ／ｍＬ未満、好ましくは０．９ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．８ｎｇ／ｍＬ未満、なおより好ましくは０．７ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．６ｎｇ／ｍＬ未満、なおより好ましくは０．５ｎｇ／ｍＬ未満、さらにより好ましくは０．４ｎｇ／ｍｌ未満である。一実施形態では、遊離ＧＤＦ１５のレベルは、血漿中のレベルである。
本発明は、０．５ｎｇ／ｍＬ未満の遊離ＧＤＦ１５レベルに限定されない；そのかわり、治療レベルは、特定の対象について、０．５ｎｇ／ｍＬよりも低くても高くてもよいことが、当業者によって理解される。したがって、本発明は、増加したレベルの遊離ＧＤＦ１５によって媒介されるまたはそれと関連する検出可能な有害作用の減少またはその完全な欠如が存在するレベルまで、遊離ＧＤＦ１５のレベルを低減させることを包含する。かかる効果には、悪液質、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量、減少した除脂肪量などが含まれるがこれらに限定されない。
本明細書で使用する場合、薬物、化合物または医薬組成物の「有効投薬量」、「有効用量」、「有効量」または「治療有効量」は、任意の１つ以上の有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。予防的使用について、有益なまたは所望の結果には、リスクを排除もしくは低減させること、重症度を低下させること、または疾患、その合併症、および疾患の発達の間に存在する中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的および／もしくは行動学的症状を含む、疾患の開始を遅延させること、が含まれる。治療的使用について、有益なまたは所望の結果には、検出可能な臨床結果、例えば、体重減少の速度を低減もしくは減少させること、または活性ＧＤＦ１５の高い発現から生じる１つ以上の症状（例えば、減少した食物摂取、減少した食欲、減少した体重、体重減少、減少した体脂肪量および減少した除脂肪量）を低減させること、疾患を処置するために要求される他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を増強すること、および／もしくは患者の疾患の進行を遅延させること、が含まれる。有効投薬量は、１つ以上の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、予防的処置または治療的処置を直接的または間接的に達成するのに十分な量である。臨床状況において理解されるように、薬物、化合物または医薬組成物の有効投薬量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効投薬量」は、１つ以上の治療剤を投与する観点から検討され得、単一の薬剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合に、有効量で与えられたとみなされ得る。
一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の有効投薬量は、健康なヒトボランティアおよび罹患患者における遊離ＧＤＦ－１５の血漿濃度に基づく。全体の有効な用量は、罹患患者における遊離ＧＤＦ－１５の初期血漿濃度に基づく。一実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔全体にわたって、定常状態で、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを、健康なヒトボランティアにおいて測定された同じまたはより低い平均レベルまで低下または低減させる能力を有する投薬量であり得る。別の実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔全体にわたって、定常状態で、患者における遊離ＧＤＦ１５レベルを、０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低下または低減させる能力を有する投薬量であり得る。なお別の実施形態では、有効投薬量は、投薬間隔を通じて、定常状態で、対象における遊離ＧＤＦ１５レベルを、０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低下または低減させることができる、７０ｋｇの対象に与えられる投薬量であり得る。
「個体」、「患者」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物には、家畜、スポーツ動物（sport animal）、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットもまた含まれるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、個体は、その受容体へのＧＤＦ１５結合およびそれによって媒介されるシグナル伝達によって媒介されるまたはそれと関連する疾患、障害または状態のリスクがあるとみなされる。ある特定の実施形態では、対象は、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性心不全、うっ血性心不全、サルコペニア、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サルコペニアおよび慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）と関連する悪液質を有する。
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物の約０．０２５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの初期用量を投与することを含む。初期用量には、１つ以上の引き続く用量が後に続き得る。一部の実施形態では、１つ以上の引き続く用量は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎の少なくともいずれかで投与され得る。
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．２５ｍｇ～約２０００ｍｇの固定用量を投与することを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、毎週、１週間おき、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎または１２週間毎に投与される。
他の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約６０ｍｇの固定用量を毎週投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、毎週投与される約２ｍｇ、約５ｍｇ、約７ｍｇ、約１０ｍｇ、約１２ｍｇ、約１５ｍｇ、約２５ｍｇ、約４０ｍｇおよび約５０ｍｇである。
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約１３０ｍｇの固定用量を１週間おきに投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、隔週で投与される約５ｍｇ、約１２ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約９０ｍｇおよび約１２５ｍｇである。
一部の実施形態では、方法または使用は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の約０．１～約４００ｍｇの固定用量を４週間毎に投与することを含む。一部の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合性断片の固定用量は、４週間毎に投与される約１５ｍｇ、約４０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１５ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇおよび約３８５ｍｇである。
キット
本発明は、本発明の抗体またはその抗原結合性断片を含むキットまたは製造品、および使用のための指示もまた提供する。したがって、一部の実施形態では、コンテナ、コンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、およびそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。
ある特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１のコンテナおよび水性製剤を有する第２のコンテナの両方を含み得る。ある特定の実施形態では、単一および複数チャンバーの事前充填シリンジ（例えば、液体シリンジおよびリオシリンジ（lyosyringe））を含むキットが含まれる。
一実施形態では、本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するためのキットであって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；アプリケーター；およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
本発明は、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量を決定するための競合的イムノアッセイキットであって、ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；検出可能な標識にコンジュゲートされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手を含み；標識された競合相手が、抗体との結合について、試験サンプル中のＧＤＦ１５と競合し、さらに、標識が、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量を示すシグナルを提供する、競合的イムノアッセイキットをさらに提供する。例示的な実施形態では、ＧＤＦ１５を含まない他の点では同一のサンプル中の抗体によって結合された標識と比較した、試験サンプル中の抗体によって結合された標識における減少は、試験サンプル中のＧＤＦ１５の量の指標である。
一実施形態では、本発明は、サンプル中のＧＤＦ１５の濃度を決定するためのキットであって、検出可能な標識にカップリングされたＧＤＦ１５を含む標識された競合相手；ＧＤＦ１５に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片；アプリケーター；およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
代替的な実施形態では、本発明は、悪液質のリスクがあるヒト患者を同定するためのキットであって、ＧＤＦ１５特異的抗体またはその抗原結合性断片、アプリケーター、およびそれらの使用のための指導用材料、を含むキットを提供する。
一部の実施形態では、第１のコンテナ、このコンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。
本発明は、第１のコンテナ、このコンテナ内の相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の治療有効量のＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の組み合わせ処置のために相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体およびＰＤ－１軸結合性アンタゴニストを投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品を包含する。
一部の態様では、ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストは、ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片、ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片、およびＰＤ－Ｌ２抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される。一部の態様では、ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、チスレリズマブ、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびＰＦ－０６８０１５９１（ササンリマブ、ＲＮ８８８）からなる群から選択される。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、任意選択により、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブからなる群から選択される。他の態様では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブではない。
他の実施形態では、第１のコンテナ、このコンテナ内の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の抗がん治療剤を含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の処置のために治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体および抗がん治療剤を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品が提供される。一部の態様では、抗がん治療剤は、抗ＣＤ４０抗体である。
本発明は、第１のコンテナ、このコンテナ内の相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体を含む組成物、第２のコンテナ、第２のコンテナ内の治療有効量の抗がん治療剤を含む組成物、ならびにそれを必要とする患者の組み合わせ処置のために相乗的治療有効量の抗ＧＤＦ１５抗体および抗がん治療剤を投与するための指示を含む添付文書、を含むキットまたは製造品を包含する。一部の実施形態では、抗がん治療剤は、抗ＣＤ４０抗体である。
本発明の抗体またはその抗原結合性断片の使用に関する指示は、一般に、意図した処置のための投薬量、投薬スケジュール、および投与の経路に関する情報を含む。コンテナは、単位用量、バルク包装（例えば、多用量包装）またはサブ単位用量であり得る。本発明のキット中に供給される指示は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による指示であるが、機械可読指示（例えば、磁気または光学保存ディスク上で運搬される指示）もまた許容できる。
本発明のキットは、適切な包装中にある。適切な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封Ｍｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などが含まれるがこれらに限定されない。特定のデバイス、例えば、インヘラー、経鼻投与デバイス（例えば、アトマイザー）または注入デバイス、例えば、ミニポンプと組み合わせた使用のための包装もまた企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。コンテナもまた、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、コンテナは、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。コンテナは、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含み得る。
キットは、任意選択により、さらなる構成要素、例えば、緩衝液および説明情報を提供し得る。通常、キットは、コンテナ、およびコンテナ上にあるまたはそれと関連したラベルまたは添付文書を含む。
定義
「約」または「およそ」は、本明細書で他に定義されない限り、測定可能な数値変数と併せて使用される場合、変数の示された値、および示された値の実験誤差（例えば、平均についての９５％信頼区間）または示された値の１０パーセントのいずれか大きい方以内の、変数の全ての値を指す。数値範囲は、範囲を規定する数字を含む。
用語「同一性」は、当該分野で公知のように、配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関連性を指す。当該分野では、「同一性」は、場合によっては、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列のストリング間の一致によって決定され得る、ポリペプチドまたは核酸分子配列間の配列関連の程度もまた意味する。「同一性」は、特定の数理モデルのコンピュータープログラム（即ち、「アルゴリズム」）によって扱われるギャップアラインメントを用いて、２つ以上の配列間の同一の一致のパーセントを測定する。
用語「類似性」は、関連する概念であるが、「同一性」とは対照的に、同一の一致および保存的置換一致の両方を含む類似性の尺度を指す。保存的置換は、ポリペプチドには当てはまり、核酸分子には当てはまらないので、類似性は、ポリペプチド配列比較のみを扱う。２つのポリペプチド配列が、例えば、２０個のうち１０個の同一なアミノ酸を有し、残りが全て非保存的置換である場合、パーセント同一性および類似性は、共に５０％である。同じ例において、保存的置換が存在する５つのさらなる位置が存在する場合、パーセント同一性は、５０％のままであるが、パーセント類似性は、７５％（２０個のうち１５個）である。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド配列間の類似性の程度は、その２つの配列間のパーセント同一性よりも高い。
特許請求の範囲における用語「または」の使用は、選択肢のみを指すこと、または選択肢が相互に排他的であることを指すことが明確に示されない限り、「および／または」を意味するために使用されるが、本開示は、選択肢および「および／または」のみを指す定義を支持する。本明細書で使用する場合、「１つの（a）」または「１つの（an）」は、明確に他が示されない限り、１つ以上を意味し得る。特許請求の範囲において本明細書で使用する場合、単語「含む（comprising）」と併せて使用される場合、単語「１つの（a）」または「１つの（an）」は、１つまたは１つよりも多くを意味し得る。本明細書で使用する場合、「別の」は、少なくとも第２のものまたはそれ以上を意味し得る。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。単語「含む（comprises／comprising）」および単語「有する（having）／含む（including）」は、本発明に関して本明細書で使用される場合、述べられた特色、整数、ステップまたは構成要素の存在を特定するために使用されるが、１つ以上の他の特色、整数、ステップ、構成要素またはそれらの群の存在または追加を除外しない。
本明細書で使用する場合、患者に投与されるカルボプラチンの量を記述する場合、用語「計算されたＡＵＣ ３用量」、「計算されたＡＵＣ ４用量」、「計算されたＡＵＣ ５用量」、「計算されたＡＵＣ ６用量」などは、それぞれ３、４、５および６ｍｇ・分／ｍＬである標的化された曲線下面積（ＡＵＣ）ならびに患者の糸球体濾過率（ＧＦＲ、ｍＬ／分）に基づいて、以下のＣａｌｖｅｒｔ式に従って計算されたカルボプラチンの量を指す：２０１８年２月に改訂されたＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ（登録商標）（ＮＣＣＮ）Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｏｒｄｅｒ Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ Ａｐｐｅｎｄｉｘ Ｂに記載される、カルボプラチン用量（ｍｇ）＝標的ＡＵＣ（ｍｇ・分／ｍＬ）×（ＧＦＲ＋２５）。
本明細書で使用する場合、用語「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞に対して作用し、またはそのタンパク質を産生する細胞に対して自己分泌効果を有する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を一般に指す。かかるサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン；インターロイキン（「ＩＬ」）、例えば、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ－２が含まれる、ＩＬ－１、ＩＬ－ｌａ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７Ａ－Ｆ、ＩＬ－１８～ＩＬ－２９（例えば、ＩＬ－２３）、ＩＬ－３１；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ－ａまたはＴＮＦ－β、ＴＧＦ－ｌ－３；ならびに白血病阻害因子（「ＬＩＦ」）、毛様体神経栄養因子（「ＣＮＴＦ」）、ＣＮＴＦ様サイトカイン（「ＣＬＣ」）、カルジオトロフィン（「ＣＴ」）およびｋｉｔリガンド（「Ｌ」）が含まれる他のポリペプチド因子が含まれる。
本明細書で使用する場合、用語「ケモカイン」は、白血球の走化性および活性化を選択的に誘導する能力を有する可溶性因子（例えば、サイトカイン）を指す。これらはまた、血管新生、炎症、創傷治癒および腫瘍形成のプロセスを誘発する。ケモカインの例には、マウスケラチノサイト化学誘引物質（ＫＣ）のヒトホモログであるＩＬ－８が含まれる。
用語「がん」、「がん性」または「悪性」は、調節されない細胞成長によって典型的には特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すまたは記述する。がんの例には、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が含まれるがこれらに限定されない。かかるがんのより特定の例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫、胃腸（管）がん、腎がん、卵巣がん、肝臓がん、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、黒色腫、軟骨肉腫、神経芽腫、膵がん、多形神経膠芽腫、子宮頸がん、脳腫瘍、胃がん（stomach cancer）、膀胱がん、ヘパトーマ、乳がん、結腸癌および頭頸部がんが含まれる。がんの別の特定の例には、腎細胞癌が含まれる。
用語「処置する」は、本明細書で使用する場合、他に示されない限り、かかる用語が適用される障害もしくは状態、またはかかる障害もしくは状態の１つ以上の症状を逆転させること、軽減すること、その進行を阻害すること、またはそれを予防することを意味する。
本発明に従って処置される「患者」には、例えば、ヒト、サルまたは他の下位霊長類、ウマ、イヌ、ウサギ、モルモットまたはマウスであるがこれらに限定されない、任意の温血動物が含まれる。例えば、患者は、ヒトである。医学分野の当業者は、非小細胞肺がんに罹患しており処置を必要としている個々の患者を容易に同定することができる。
用語「処置レジメン」、「投薬プロトコール」および投薬レジメンは、本発明の組み合わせ中の各治療剤の用量および投与のタイミングを指すために、相互交換可能に使用される。
「寛解させる」は、処置を投与しない場合と比較した、１つ以上の症状の低下または改善を意味する。「寛解させる」は、症状の持続時間における短縮または低減もまた含む。
「腫瘍」は、がんと診断されたまたはがんを有すると疑われる対象に適用される場合、任意のサイズの悪性または潜在的に悪性の新生物または組織塊を指し、これには、原発性腫瘍および二次新生物が含まれる。固形腫瘍は、通常は嚢胞も液体エリアも含まない、組織の異常な成長または塊である。異なる型の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の型に由来して名付けられている。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫およびリンパ腫である。白血病（血液のがん）は、一般に、固形腫瘍を形成しない（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｅｒｍｓ）。
「腫瘍負荷」は、「腫瘍量」とも呼ばれ、身体中に分布した腫瘍材料の総量を指す。腫瘍負荷は、リンパ節および骨髄を含む身体中のがん細胞の総数または腫瘍の全体サイズを指す。腫瘍負荷は、例えば、例えばキャリパーを使用して対象からの除去の際の腫瘍の寸法を測定すること、または身体中にありながら、画像化技術、例えば、超音波、骨スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）もしくは磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）スキャンを使用して腫瘍の寸法を測定することなどの、当該分野で公知の種々の方法によって決定され得る。
用語「腫瘍サイズ」は、腫瘍の長さおよび幅として測定され得る、腫瘍の全体サイズを指す。腫瘍サイズは、例えば、例えばキャリパーを使用して対象からの除去の際の腫瘍の寸法を測定すること、または身体中にありながら、画像化技術、例えば、骨スキャン、超音波、ＣＴもしくはＭＲＩスキャンを使用して腫瘍の寸法を測定することなどの、当該分野で公知の種々の方法によって決定され得る。
「個々の応答」または「応答」は、限定なしに、（１）減速もしくは完全な抑止を含む、疾患進行（例えば、がん進行）の、ある程度までの阻害；（２）腫瘍サイズにおける低減；（３）隣接末梢臓器および／もしくは組織中へのがん細胞浸潤の阻害（即ち、低減、減速または完全な停止）；（４）転移の阻害（即ち、低減、減速または完全な停止）；（５）疾患もしくは障害（例えば、がん）と関連する１つ以上の症状の、ある程度までの緩和；（６）全生存および無増悪生存を含む生存の長さにおける増加もしくは延長；ならびに／または（７）処置後の所与の時点における減少した死亡率、が含まれる、個体にとっての利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価され得る。
医薬による処置に対する患者の「有効な応答」または患者の「応答性」および類似の言い回しは、疾患または障害、例えばがんのリスクがある、またはそれを患っている患者に付与される、臨床的または治療的利益を指す。一実施形態では、かかる利益には、以下のうちいずれか１つ以上が含まれる：生存（全生存および／または無増悪生存を含む）を延長させること；客観的応答（完全奏功または部分奏功を含む）を生じさせること；またはがんの徴候もしくは症状を改善すること。
「客観的応答」は、完全奏功（ＣＲ）または部分奏功（ＰＲ）を含む、測定可能な応答を指す。一部の実施形態では、「客観的応答率（ＯＲＲ）」は、完全奏功（ＣＲ）率および部分奏功（ＰＲ）率の合計を指す。
「完全奏功」または「ＣＲ」は、本明細書で使用する場合、処置に応答した、がんの全ての徴候の消失（例えば、全ての標的病変の消失）を意味する。これは、がんが治癒したことを必ずしも意味しない。
本明細書で使用する場合、「部分奏功」または「ＰＲ」は、処置に応答した、１つ以上の腫瘍もしくは病変のサイズにおける、または身体中のがんの程度における減少を指す。例えば、一部の実施形態では、ＰＲは、ベースライン最長直径（ＳＬＤ）を参照とした、標的病変のＳＬＤの合計における、少なくとも３０％の減少を指す。
「持続的応答」は、処置の休止後の、腫瘍成長を低減させることに対する、持続的な効果を指す。例えば、腫瘍サイズは、医薬投与期の開始時のサイズと比較して、同じサイズまたはより小さいサイズであり得る。一部の実施形態では、持続的応答は、処置持続時間と少なくとも同じ、処置持続時間の長さの少なくとも１．５×、２×、２．５×もしくは３×の長さの、またはそれよりも長い、持続時間を有する。
本明細書で使用する場合、「無増悪生存」（ＰＦＳ）は、処置されている疾患（例えば、がん）が悪化しない、処置の間およびその後の時間の長さを指す。無増悪生存には、患者が完全奏功または部分奏功を経験した時間の量、ならびに患者が安定疾患（stable disease）を経験した時間の量が含まれ得る。
一部の実施形態では、「客観的応答」、「完全奏功」、「部分奏功」、「進行性疾患」、「安定疾患」、「無増悪生存」、「応答の持続時間」が含まれる、がんを処置する方法の抗がん効果は、本明細書で使用する場合、転移性ＣＲＰＣ以外の局所進行性または転移性固形腫瘍を有する患者においては、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒら、Ｅｕｒ Ｊ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２００９；４５（２）：２２８～４７）を使用し、転移性ＣＲＰＣを有する患者においては、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１およびＰＣＷＧ３（Ｓｃｈｅｒら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１６ Ａｐｒ ２０；３４（１２）：１４０２～１８）を使用して、治験責任医師によって定義および評価されるとおりである。Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒら、Ｅｕｒ Ｊ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ２００９；４５（２）：２２８～４７およびＳｃｈｅｒら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０１６ Ａｐｒ ２０；３４（１２）：１４０２～１８の開示は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。
一部の実施形態では、「免疫関連客観的応答」（ｉｒＯＲ）、「免疫関連完全奏功」（ｉｒＣＲ）、「免疫関連部分奏功」（ｉｒＣＲ）、「免疫関連進行性疾患」（ｉｒＰＤ）、「免疫関連安定疾患」（ｉｒＳＤ）、「免疫関連無増悪生存」（ｉｒＰＦＳ）、「免疫関連の応答の持続時間」（ｉｒＤＲ）が含まれる、処置の抗がん効果は、本明細書で使用する場合、転移性ＣＲＰＣを有する患者以外の、局所進行性または転移性固形腫瘍を有する患者について、免疫関連応答基準（ｉｒＲＥＣＩＳＴ、Ｎｉｓｈｉｎｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１４；２：１７）によって定義および評価されるとおりである。Ｎｉｓｈｉｎｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ ２０１４；２：１７の開示は、その全体が本明細書で参照によって組み込まれる。
本明細書で使用する場合、「全生存」（ＯＳ）は、特定の持続時間の後に生存している可能性が高い、群中の個体のパーセンテージを指す。
「生存を延長させる」は、未処置の患者と比較して（即ち、医薬で処置されていない患者と比較して）、処置された患者において全生存または無増悪生存を増加させることを意味する。
本明細書で使用する場合、「薬物関連毒性」、「注入関連反応」および「免疫関連有害事象」（「ｉｒＡＥ」）、およびそれらの重症度またはグレードは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ ｖ ４．０（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ ４．０）に例示および定義されるとおりである。
本明細書で使用する場合、「～と組み合わせた」または「～と併せた」は、別の処置モダリティに加えた、１つの処置モダリティの投与を指す。このように、「～と組み合わせた」または「～と併せた」は、個体への他の処置モダリティの投与の前、その間またはその後の、１つの処置モダリティの投与を指す。
「低用量」は、本明細書で使用する場合、臨床設定において典型的に使用される量または用量よりも低い、物質、薬剤、化合物または組成物の量または用量を指す。
用語「進行性」には、本明細書で使用する場合、固形腫瘍と関連する場合、局所進行性（非転移性）疾患および転移性疾患が含まれる。治癒を意図して処置されてもされなくてもよい局所進行性固形腫瘍、および治癒を意図して処置することができない転移性疾患は、本発明において使用される「進行性固形腫瘍」の範囲内に含まれる。当業者は、患者における進行性固形腫瘍を認識および診断することができる。
「応答の持続時間」は、本発明の目的のために、薬物処置に起因する腫瘍モデル成長阻害の報告の時間から、処置前成長速度と類似の回復された成長速度の獲得の時間までを意味する。
用語「相加的」は、２つの化合物、構成要素または標的化された薬剤の組み合わせの結果が、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の合計以下であることを意味するために使用される。用語「相加的」は、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の使用を超える、処置されている疾患状態または障害における改善が存在しないことを意味する。
用語「シナジー」または「相乗的」は、２つの化合物、構成要素または標的化された薬剤の組み合わせの効果が、各薬剤が単独で提供する効果の合計よりも大きいことを意味するために使用される。用語「シナジー」または「相乗的」は、各個々の化合物、構成要素または標的化された薬剤の別々の使用を超える、処置されている疾患状態または障害における改善が存在することを意味する。処置されている疾患状態または障害におけるこの改善は、「相乗的効果」または「相乗的治療効果」である。「相乗的量」、「相乗的有効量」または「相乗的治療有効量」は、組み合わせて投与された場合に相乗的効果を生じる化合物、構成要素または標的化された薬剤の量であり、「相乗的」は、本明細書で定義される。２つ以上の構成要素間の相乗的相互作用を決定すると、効果のための最適な範囲および効果のための各構成要素の絶対的用量範囲が、処置を必要とする患者への、異なるｗ／ｗ（重量／重量）比範囲および用量にわたる構成要素の投与によって断定的に測定され得る。しかし、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルまたはｉｎ ｖｉｖｏモデルにおけるシナジーの観察は、ヒトおよび他の種における効果を予測し得、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルまたはｉｎ ｖｉｖｏモデルは、本明細書に記載されるように、相乗的効果を測定するために存在し、かかる研究の結果は、ヒトおよび他の種において要求される有効用量および血漿濃度比範囲ならびに絶対的用量および血漿濃度を、薬物動態学的／薬力学的方法の適用によって予測するためにも使用され得る。
等価物
上述の説明および以下の実施例は、本開示のある特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らによって企図される最良の形態を記載する。しかし、上述がテキスト中に出現し得ることがどんなに詳述されても、本開示が多くの方法で実施され得、本開示が添付の特許請求の範囲およびその任意の等価物に従って実施されるべきであることが、理解される。
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変化および改変が、本明細書の教示および以下の特許請求される開示から逸脱することなしになされ得ることが理解される。以下の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定することを意図しない。本明細書の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーションおよび改変が過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのかかるバリエーションおよび改変は、本明細書の教示の範囲内である。
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、ならびにまだ引用されていない範囲までその中で引用される参考文献は、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。
一般技術
本発明は、当然変動し得る、それを作製する特定の合成方法に限定されないことを理解すべきである。本明細書で他に定義されない限り、本発明と併せて使用される科学用語および技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有するものとする。さらに、文脈が他を要求しない限り、単数形の用語は、複数を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書に記載される細胞および組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学ならびにタンパク質および核酸化学、ならびにハイブリダイゼーションと併せて使用される術語体系、ならびにそれらの技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。
本発明の実施は、他に示されない限り、当業者の技術範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術を使用する。かかる技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３～１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００２）；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９９８）；Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、ＮＹ（２００３）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８８～１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献中で完全に説明されている。
酵素反応および精製技術は、当該分野で一般に達成されるように、または本明細書に記載されるように、製造業者の仕様書に従って実施される。本明細書に記載される分析化学、生化学、免疫学、分子生物学、合成有機化学ならびに医薬品化学および薬化学と併せて使用される術語体系、ならびにそれらの実験室手順ならびに技術は、当該分野で周知かつ一般に使用されるものである。標準的な技術が、化学的合成、化学的分析、医薬の調製、製剤および送達、ならびに患者の処置のために使用される。
生物学的寄託
本発明の代表的な材料は、２０１８年４月４日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ．２０１１０－２２０９、ＵＳＡに寄託された。ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３８を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＨは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の重鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含み、ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ－１２５０３９を有するベクターＧＤＦ１５＿００１－ＶＬは、抗体ＧＤＦ１５＿００１の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ挿入物を含むプラスミドを含む。これらの寄託は、特許手続き上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条項およびその規則（ブダペスト条約）の規定の下で行われた。これは、寄託の日から３０年間にわたって寄託物の生存可能な培養物の維持を保証する。寄託物は、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間での同意を条件として、ブダペスト条約の条項の下でＡＴＣＣによって入手可能にされ、これは、関連する米国特許の発行の際、または任意の米国もしくは外国の特許出願の公衆への公開の際のいずれか早い方の時点における、公衆への寄託物の培養物の子孫の恒久的かつ無制限の入手可能性を保証し、米国特許商標庁長官が米国特許法１２２条およびそれに従う長官規則（特に８８６ ＯＧ ６３８に関連した米国特許規則１．１４を含む）に従って資格ありと決定した者への子孫の入手可能性を保証する。
本出願の譲受人は、寄託にかかる材料の培養物が、適切な条件下で培養した場合に万一死んだり失われたり破壊されたりしたときには、通知があり次第それらの材料が同一物の別のもので速やかに置き換えられることに同意している。寄託された材料の入手可能性は、その特許法に従って任意の政府の権限の下で与えられた権利に違反して本発明を実施することの許諾として解釈すべきではない。
（実施例１）
抗ＧＤＦ１５抗体
抗体のパネル（表２および５ならびに図２９を参照のこと）を生成し、様々な結合および生物物理学的アッセイを横断して比較した。
本発明の抗ＧＤＦ１５抗体を、それらのアミノ酸配列、およびＣＤＲ領域中の「ホットスポット」（例えば、潜在的なグリコシル化、酸化および化学的分解の部位）の存在に基づいて分析した。抗ＧＤＦ１５抗体のホットスポット配列分析は、以下の表５に示される。ＧＤＦ１５＿００５、ＧＤＦ１５＿００６、ＧＤＦ１５＿００７、ＧＤＦ１５＿００８、ＧＤＦ１５＿００９およびＧＤＦ１５＿２００は、ＣＤＲ領域中のＮ結合型グリコシル化部位の存在を実証し、さらなる研究のためには選択しなかった。
Figure 2022188191000025
Figure 2022188191000026
（実施例２）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５への結合活性
ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対する抗体ＧＤＦ１５＿００１（配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＶＨおよび配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＶＬを含む）の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。マウスＦｃ－ヒトＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５；配列番号２）、マウスＦｃ－マウスＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５；配列番号５）およびマウスＦｃ－カニクイザルＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５；配列番号４）を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、４０レゾナンスユニット（ＲＵ）、３２ＲＵおよび２５ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから０．６２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するＧＤＦ１５＿００１の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を２．８時間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって、マウスおよびカニクイザルＧＤＦ１５について決定した。親和性値を、以下の表６に示すように決定した。
マウスＦｃ－ヒトＧＤＦ１５に対するＧＤＦ１５結合性抗体のいくつかのクローンの結合親和性もまた、実施例２で本明細書に記載される方法論を使用して決定し、以下の表６に示す。二価フォーマットで試験した全てのクローンは、１５０ｐＭを下回る見かけのＫＤ値を実証し、これは、これらが、ヒトＧＤＦ１５に対する強い結合子であることを示唆している。さらに、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５へのクローンＧＤＦ１５＿００１の結合を、上で言及したＢＩＡｃｏｒｅアッセイを使用して測定した（表７）。クローンＧＤＦ１５＿００１は、カニクイザルＧＤＦ－１５への強い結合を示し（見かけのＫＤ ８．２８ｐＭ）、マウスＧＤＦ１５への結合を維持し（見かけのＫＤ １４２．３ｐＭ）、このことが、クローンＧＤＦ１５＿００１を、両方の種における前臨床研究にとって適切なものにしている。
Figure 2022188191000027
Figure 2022188191000028
Figure 2022188191000029
（実施例３）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ＳＰＲによる、ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５へのモノマー性抗ＧＤＦ１５抗体の結合活性
ＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１結合の、結合力効果（avidity effect）なしのＫＤ値を理解するために、モノマー性Ｆｃ－Ｆａｂを産生し、実施例２で使用したのと同じアッセイにおいて試験した。ヒト、カニクイザルおよびマウスＧＤＦ１５に対するモノマー性ＧＤＦ１５＿００１の結合親和性を、１０Ｈｚの収集速度で３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して決定した。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５を、製造業者のプロトコールに従ってＭｏｕｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（ＢＲ１００８３８、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＣＭ４センサーチップ（カタログ番号ＢＲ１００５３４、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）表面の３つの異なるフローセル上に捕捉した。ランニングおよびサンプル緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ－２０（ＨＢＳ－ＥＰ＋）であった。Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５、Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｍｕ ＧＤＦ１５およびＭｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｃｙｎｏ ＧＤＦ１５の最終捕捉レベルは、それぞれ、１９レゾナンスユニット（ＲＵ）、２２ＲＵおよび１９ＲＵであった。フローセル１を、参照フローセルとして使用した。１０ｎＭから１．２５ｎＭまでの範囲の濃度を有するモノマー性ＧＤＦ１５＿００の２倍希釈シリーズを、１２０秒間にわたってセンサー表面上に注入した。解離を１２００秒間にわたってモニタリングし、表面を、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７で再生させた。結合親和性および速度定数を、得られたセンサーグラムデータを、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン２．０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒモデルにフィットさせることによって決定した。モノマー性クローンＧＤＦ１５＿００１は、以下の表８に示すように、マウスＧＤＦ１５へのより弱い結合（ＫＤ １９６５．０ｐＭ）と共に、ヒト（ＫＤ ２１．３ｐＭ）およびカニクイザルＧＤＦ１５（ＫＤ ６２．０ｐＭ）への強い結合を実証した。
Figure 2022188191000030
（実施例４）
抗ＧＤＦ１５抗体の結合特性：ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性
ヒトＧＤＦ１５へのＧＤＦ１５＿００１の結合特異性を評価するために、さらなるＴＧＦβファミリーメンバーへのＧＤＦ１５＿００１結合を試験した。分析を、Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ機器で実施した。
ＯｃｔｅｔＲＥＤ ３８４（ＦｏｒｔｅＢｉｏ、Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ、ＣＡ）を使用して、ヒトＧＤＮＦ（Ｒ＆Ｄ、２１２－ＧＤ／ＣＦ）、ヒトインヒビンＡ（Ｒ＆Ｄ、８５０６－ＡＢ／ＣＦ）、ヒトアクチビンＢ（Ｒ＆Ｄ、６５９－ＡＢ／ＣＦ）、ヒトＴＧＦβ－１（Ｒ＆Ｄ、２４０－Ｂ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ２（Ｒ＆Ｄ、３５５－ＢＭ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ３ｂ（Ｒ＆Ｄ、１５４３－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ６（Ｒ＆Ｄ、５０７－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ９（Ｒ＆Ｄ、３２０９－ＢＰ／ＣＦ）、ヒトＢＭＰ１１（Ｒ＆Ｄ、１９５８－ＣＤ／ＣＦ）、ヒトＧＤＦ８（Ｐｆｉｚｅｒ、４１０７５－２０１）および対照ヒトＧＤＦ１５（Ｍｕ ＩｇＧ１Ｆｃ＿Ｆｘａ＿Ｈｕ ＧＤＦ１５）を含む１０種のＴＧＦβファミリーメンバーへの、モノマー性ＧＤＦ１５＿００１（ＣＨ２３ＬＳ－ＧＢＴ－ＧＤＦ１５＿００１）のオフターゲット結合を評価した。ＴＧＦβファミリーメンバーを、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５中で１０ｕｇ／ｍｌになるように希釈し、製造業者の指示に従って、ＡＲ２Ｇバイオセンサー（カタログ番号１８－５０９２、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上にアミンカップリングした。モノマー性ＧＤＦ１５＿００１を、キネティクス（kinetics）緩衝液（カタログ番号１８－５０３２ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）中で２００ｎＭになるように希釈した。Ｏｃｔｅｔアッセイを、３００秒の会合時間および１８０秒の解離時間で室温で実施した。データを二重参照し（Ｍｙｓｚｋａ，Ｄ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ １９９９；２７９～２８４）、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウェアバージョン８．１（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で分析した。
ＧＤＦ１５＿００１は、期待通り、ヒトＧＤＦ１５に結合した。他のＴＧＦβファミリーメンバー（ＧＤＦ－１１、ＢＭＰ－９、ＧＤＦ－８、ＢＭＰ－２、ＢＭＰ－６、ＴＧＦβ－１、アクチビン－Ｂ、インヒビン－Ａ）への結合は、２００ｎＭのモノマー性クローンＧＤＦ１５＿００１では検出されず、これは、これらの他の関連のファミリーメンバーには結合しない、ＧＤＦ１５＿００１の高い特異性を実証している。ＧＤＦ１５＿００１の高い特異性は、オフターゲット結合のリスクを最小化し、ＧＤＦ１５＿００１が、潜在的な新規の有用なヒト治療薬であることを示している。
（実施例５）
抗ＧＤＦ１５抗体は、ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合を防止する
ＧＦＲＡＬの細胞外ドメインへのヒトＧＤＦ１５結合を防止するＧＤＦ１５＿００１の能力を、競合アッセイによって評価した。分析を、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）を使用して実施した。
ＧＤＦ１５＿００１を、１０ｎＭから２．５ｎＭまでの範囲の濃度で、１０ｎＭヒトＧＤＦ－１５中に滴定した。混合物ＧＤＦ－１５、ＧＤＦ１５＿００１および対照を、ＣＭ４センサーチップ上に直接固定化したヒトＧＦＲＡＬの細胞外ドメイン上に注入した。ＧＦＲＡＬへのヒトＧＤＦ１５結合の濃度依存的阻害が観察された。ヒトＧＦＲＡＬ ＥＣＤへのヒトＧＤＦ１５の結合は、７．５ｎＭ ＧＤＦ１５＿００１によって完全に遮断された。
これらのデータは、ＧＤＦ１５＿００１が、ヒトＧＤＦ１５とその同族受容体ＧＦＲＡＬとの間の相互作用を遮断し、それによって、ＧＦＲＡＬシグナル伝達を妨害できることを実証している。これは、ＧＤＦ１５＿００１が、ＧＦＲＡＬへのＧＤＦ１５結合によって媒介される活性を減少させるための新規の潜在的に有用な治療薬であり得ることをさらに実証している。
（実施例６）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：熱安定性
抗ＧＤＦ１５抗体の熱安定性を、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）によって評価した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に、４００μｌの体積中０．３ｍｇ／ｍｌになるように希釈した。ＰＢＳを、参照セルにおいて緩衝液ブランクとして使用した。ＰＢＳは、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、８．１ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４および１．４７ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．２を含んだ。サンプルを、Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を用いて、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ＤＳＣのサンプルトレイ中に分配した。サンプルを、１０℃で５分間平衡化し、次いで、１時間当たり１００℃の速度で、１１０℃までスキャンした。１６秒間のフィルタリング期間を選択した。生データをベースライン補正し、タンパク質濃度を標準化した。Ｏｒｉｇｉｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０（ＯｒｉｇｉｎＬａｂ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、データを、適切な数の遷移を有するＭＮ２－Ｓｔａｔｅ Ｍｏｄｅｌにフィットさせた。
遷移温度は、図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示され、表９に列挙される。Ｔｍ１は、抗体のＣＨ２が５０％折り畳まれていない温度を示す。Ｔｍ２は、抗体のＦａｂが５０％折り畳まれていない温度を示す。Ｔｍ３は、抗体のＣＨ３が５０％折り畳まれていない温度を示す。６５℃を超える融解温度（Ｔｍ１）を有する全てのクローンは、安定なクローンとして設計され、これは、製造および貯蔵の間、安定である。
Figure 2022188191000031
（実施例７）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：サイズ排除クロマトグラフィー
抗体クローンを、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）によって分析した。タンパク質を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に１．０ｍｇ／ｍｌになるように希釈し、２０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．２、４００ｍＭ ＮａＣｌを含むアイソクラチックランニング緩衝液を用いたＹＭＣ－Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ－２００、３００×８ｍｍカラム上でのａＳＥＣによって分析した。ネイティブＳＥＣを使用して、高分子量（凝集体）およびモノマー性のインタクトな抗体の相対的な量を決定した。パーセント凝集体を、総（凝集体およびモノマー）ピーク面積によって除算し、１００を乗算した、高分子量のピーク面積として計算した。分での保持時間を記録し、アッセイ対照と比較した。ａＳＥＣ分析からの、標準の保持時間およびピーク形状を有する抗体クローンは、固定相樹脂との最小の相互作用および最適な疎水性を示唆し得、これらは、有用な特徴であり、抗体が、潜在的な有用な治療薬であり得ることを示している。
試験した各抗体クローンについての保持時間を、表１０に示す。ＧＤＦ１５＿００２は、遅延された保持時間および広いピーク形状を示し、したがって、さらには研究しなかった。
Figure 2022188191000032
（実施例８）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：低ｐＨにおける安定性
抗体はプロテインＡ捕捉によって精製され、溶出は低ｐＨ条件であるので、抗ＧＤＦ１５抗体クローンを、低ｐＨ維持安定性について試験した。ＰＢＳ、ｐＨ７．２中１．０ｍｇ／ｍｌの抗体を、グリシンｐＨ３．４で酸性化し、２５℃で５時間インキュベートし、次いで、Ｔｒｉｓ塩基で中和し、ａＳＥＣ上に流して、高分子量種（ＨＭＭＳ）および低分子量種（ＬＭＭＳ）の量を決定した、表１１。試験した全てのクローンは、低ｐＨチャレンジ後に、ＨＭＭＳの許容できる量の増加（＜５％）を示す。これは、抗ＧＤＦ１５抗体が、精製プロセスの間安定のままであり、潜在的に有用な治療薬であり得ることを示している。
Figure 2022188191000033
（実施例９）
抗ＧＤＦ１５抗体の生物物理学的特性：粘度
ＧＤＦ１５＿００１の粘度を、Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ機器によって分析した。ＧＤＦ１５＿００１を、３０ｋＤａ分子量カットオフＡｍｉｃｏｎ遠心濾過ユニット（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して、２１５ｍｇ／ｍＬに濃縮した。４６～１７８ｍｇ／ｍＬの範囲の一連の希釈を、２０ｍＭヒスチジン、８５ｇ／Ｌスクロース、０．０５ｍｇ／ｍｌ ＥＤＴＡ ｐＨ５．８緩衝液を希釈剤として用いて調製した。タンパク質濃度を、ＳｏｌｏＶＰＥ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｐａｔｈｌｅｎｇｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ、ＮＪ）での２８０ｎｍ分析によって決定した。粘度測定を、２５℃で１５０ｒｐｍの一定の回転速度で、ＭＣＲ－３０２血流計（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．、Ａｓｈｌａｎｄ、ＶＡ）上でＣＰ２５－１円錐およびプレートを使用して実施した。各々１０秒間の合計１０個の測定値を、サンプル１つ当たり収集し、データを、Ｒｈｅｏｐｌｕｓ（Ａｎｔｏｎ Ｐａａｒ ＵＳＡ Ｉｎｃ．）Ｖ ３．６２ソフトウェアを使用して分析した。粘度は、センチポアズ（ｃＰ）単位で報告する。
ＧＤＦ１５＿００１の粘度を、図２に示す。このデータは、許容できる粘度限界（２０ｃＰ）には、約１４０ｍｇ／ｍｌにおいて到達することを示しており、これが、ＧＤＦ１５＿００１の皮下注射を実現可能なものにしており、この抗体が有用な潜在的な治療薬であることをさらに示している。
（実施例１０）
抗ＧＤＦ１５抗体の免疫原性
非生殖系列Ｔ細胞エピトープの検出、および計算されたｔＲｅｇ調整済スコアに基づいて、本発明の抗ＧＤＦ１５抗体および当該分野で公知の別の抗ＧＤＦ１５抗体、例えば、ｈｕ０１Ｇ０６（ｈｕ０１Ｇ０６のＶＨおよびＶＬ配列は、それぞれ配列番号１７７および配列番号１７８として本明細書で提供される（ＶＨ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２４８、およびＶＬ、ＷＯ２０１４／１００６８９の配列番号２５４））の免疫原性を予測した。より低いｔＲｅｇ調整済スコアは、免疫原性リスクのより低い潜在力を予測する。
配列を、２つのプロトコール（以下のプロトコール１および２）を使用して分析して、エピトープを同定した。いずれかのプロトコールについて本明細書に記載される規則によって同定された任意の配列を、エピトープとみなした。配列を、アミノ酸９マーのレベルで試験した。
プロトコール１ － ＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ：配列を、ＩＳＰＲＩソフトウェアパッケージ（ＩＳＰＲＩ ｖ １．８．０、ＥｐｉＶａｘ Ｉｎｃ．、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ、ＲＩ（２０１７）；Ｓｃｈａｆｅｒら Ｖａｃｃｉｎｅ １６（１９）、１８８０～８４（１９９８））でのＥｐｉＭａｔｒｉｘ分析に供した。生結果は、８つの異なるＨＬＡ型に対する各９マーアミノ酸断片の結合の可能性のランキングを提供する。したがって、各９マーについて、８つの予測（「観測」）が存在する。これらの９マーを、配列の各個々の直線的な番号付け位置で開始して生成する。同じ９マーが同じ配列中に１回よりも多く存在することが可能である。任意の４つの観測が、９マーが結合子の上位５％にあることを示す場合、これは、少なくとも４つのＨＬＡ型について、それが結合子の上位５％にあることを意味し、９マーは、予測されたエピトープとみなされる。あるいは、８つの予測のうちいずれか１つが、９マーが結合子の上位１％にあることを示す場合、この９マーも、予測されたエピトープとみなされる。
プロトコール２ －ＩＥＤＢコンセンサス法：配列を、免疫エピトープデータベース（ＩＥＤＢ）（ＩＥＤＢ ＭＨＣ－ＩＩ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｓ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｅｄｂ．ｏｒｇ；Ｖｉｔａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊａｎ ２８（４３）、Ｄ４０５～１２（２０１５））においてＭＨＣ－ＩＩ ｂｉｎｄｉｎｇ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｍｅｔｈｏｄ（Ｗａｎｇら、ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １１、５６８（２０１０）；Ｗａｎｇら、ＰＬｏＳ Ｃｏｍｐｕｔ Ｂｉｏｌ．４（４）、ｅ１００００４８（２００８））を使用する分析に供した。ソフトウェアのアウトプットは、結果を１５マーずつ配置する。コンセンサススコアおよびパーセンタイルランキングが、１５マーおよびＨＬＡ型の各組み合わせについて提供される。しかし、各１５マーのコンセンサスが由来する個々のスコアは、１５マー中に見出される特定の９マーのランキングである：コンセンサスのために使用される各方法は、１５マー内の９マーについてのパーセンタイルランクを報告し、１５マー全体についての値として取られたコンセンサスは、中央値スコアを有する９マーについての予測である。９マーは、（ａ）それが１５マーを代表するコンセンサスとして選択される場合、および（ｂ）検討されているＨＬＡ型に対する結合子の上位１０％中にパーセンタイルランキングを有する場合、ならびに基準（ａ）および（ｂ）が、同じ９マーについて３つ以上の別個のＨＬＡ型（即ち、３つの観測）について生じる場合、エピトープとして分類される。検討したＨＬＡ型は、ＤＲＢ１＊０１、１＊０３、１＊０４、１＊０７、１＊０８、１＊１１、１＊１３および１＊１５であり、これらは、標準的なＩＳＰＲＩ／ＥｐｉＭａｔｒｉｘ報告では、同じＨＬＡ型である。プロトコール１との比較の容易さのために、データは、予測された９マーエピトープのリストを得るために再解釈されるが、コンセンサス法の一次アウトプットは、１５マーのランキングである。
各エピトープは、生殖系列または非生殖系列エピトープとして分類される。抗体について、各エピトープは、抗体内でのその位置（例えば、ＣＤＲまたは非ＣＤＲ）に基づいて、さらに分類される。ＩＭＧＴ（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）から得られたヒトＶドメインの配列をフィルタリングして、偽遺伝子またはオープンリーディングフレームとしてアノテーションされる生殖系列を除去する。残りの配列中に見出される任意の予測された９マーエピトープは、生殖系列エピトープとみなされる。ＪもしくはＣ領域（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む）またはこれらの領域間の接合部中に見出されるエピトープもまた、生殖系列エピトープとして分類した。さもなければ、エピトープは、非生殖系列エピトープとして分類した。
ＣＤＲ定義は、Ｋａｂａｔの方法に基づき、ここで、ＣＤＲは、以下の残基を含むと定義される：ＨＣＤＲ－１（例えばＨ３５Ａであるが、Ｈ３６未満の挿入を含むＨ２６～Ｈ３５）、ＨＣＤＲ－２（Ｈ５０～Ｈ６５包含的）、ＨＣＤＲ－３（Ｈ９５～Ｈ１０２包含的）、ＬＣＤＲ－１（Ｌ２４～Ｌ３４包含的）、ＬＣＤＲ－２（Ｌ５４～Ｌ５６包含的）、ＬＣＤＲ－３（Ｌ８９～Ｌ９７、包含的）。予測された９マーエピトープは、そのアミノ酸のうちいずれか１つがＣＤＲ領域の一部である場合、ＣＤＲエピトープとして定義される。
全体的配列スコア（ｔＲｅｇ調整済スコア）：個々の鎖について、または抗体ＶＨおよびＶＬドメインの対形成について、全体的スコアは、以下に記載されるように、構成成分９マーの各々を合計することによって計算され得る。
９マーおよびＨＬＡ型の全ての個々の組み合わせ（「観測」）を、９マーがエピトープであるかどうかにかかわりなく試験した。特定の観測が、そのペプチドが所与のＨＬＡ型に対する結合子の上位５％にあることを示す場合、この観測についてのＥｐｉＭａｔｒｉｘ Ｚスコアが、タンパク質配列全体と関連する中間合計に加算される。試験した観測の総数もまた記録される。唯一の例外は、ＩＳＰＲＩによって「Ｔ－レジトープ」（天然の調節性Ｔ細胞を活性化し、望まれない免疫応答を低減させることが潜在的にできる、モノクローナル抗体フレームワーク領域内のアミノ酸配列）として同定された９マーについての全ての観測が、ゼロのＥｐｉＭａｔｒｉｘスコアを有すると仮定されることである。
中間合計では、０．０５＊２．２２４８のベースラインスコアが、各観測（Ｔ－レジトープを含む）から減算される。最終スコアは、以下のように計算される：ｔＲｅｇ調整済スコア＝（中間合計）＊１０００／（観測の数）。
計算されたスコアを、表１２に列挙する。上述のように、より低いスコアは、より低い予測される免疫原性潜在力を示す。本発明の抗ＧＤＦ１５抗体は、ｈｕ０１Ｇ０６よりも低いスコアを有した。クローンＧＤＦ１５＿００１、ＧＤＦ１５＿００４、ＧＤＦ１５＿００５およびＧＤＦ１５＿０１３は、最も低いスコアを有し、したがって、免疫原性応答を惹起する、最も低い潜在的な予測されたリスクを有した。これは、本発明の抗体が潜在的な有用な治療薬であることをさらに示している。
Figure 2022188191000034
ＧＤＦ１５＿００１およびｈｕ０１Ｇ０６の予測されたＴ細胞エピトープもまた、上記ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ方法に基づいて比較した。以下の表１３に示すように、ｈｕ０１Ｇ０６は、重鎖中に２つの予測されたＴ細胞エピトープを有し、軽鎖中に１つの予測されたＴ細胞エピトープを有するが、ＧＤＦ１５＿００１は、いずれの予測されたＴ細胞エピトープも有さない。これは、ＧＤＦ１５＿００１がまた、ｈｕ０１Ｇ０６と比較した場合に、免疫原性応答を惹起するより低い潜在的なリスクを有することを示している。これは、ＧＤＦ１５＿００１が、改善された特徴を有する潜在的な有用な新規の治療薬であることをさらに示している。
Figure 2022188191000035
（実施例１１）
健康なマウスにおけるヒトおよびマウスＧＤＦ１５の阻害
ヒトＧＤＦ１５活性を阻害するＧＤＦ１５＿００１の能力を、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）－ヒトＧＤＦ１５で処置した健康なＣ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおいて評価した。ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置の２週間後、循環ヒトＧＤＦ１５レベルは、およそ１７ｎｇ／ｍＬまで増加し（図３）、体重は１５％減少した（図４）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置マウスにおいて、体重（図４）、脂肪（図５）および除脂肪量喪失（図６）を迅速に逆転させた。ＧＤＦ１５＿００１は、ＡＡＶ対照ベクター処置マウスでは効果を有さなかった。
マウスＧＤＦ１５活性を阻害するＧＤＦ１５＿００１の能力もまた、ＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５で処置した健康なＣ５７Ｂｌ６Ｎマウスにおいて評価した。ＡＡＶ－マウスＧＤＦ１５投与の１１日後、循環マウスＧＤＦ１５レベルは、およそ３ｎｇ／ｍＬまで増加し（図７）、体重は、およそ１０％減少した（図８）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、ＡＡＶ－ヒトＧＤＦ１５処置マウスにおいて、体重減少を迅速に逆転させ（図８）、食物摂取を増加させた（図９）。ＧＤＦ１５＿００１は、ＡＡＶ対照ベクター処置マウスでは効果を有さなかった。
これらのデータは、ＧＤＦ１５＿００１が、増加したレベルのＧＤＦ１５の存在下であってさえも、健康なマウスにおいて、除脂肪量および体脂肪量喪失の両方に起因する体重減少を逆転させ、食物摂取を増加させることを実証している。
（実施例１２）
線維肉腫腫瘍（ＨＴ－１０８０）保有マウスにおけるヒトＧＤＦ１５の阻害
ＧＤＦ１５＿００１が腫瘍保有マウスにおいて悪液質を逆転させ得、寿命を増加させ得るかどうかを決定するために、重症免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスに、ＨＴ－１０８０ヒト線維肉腫細胞を皮下で埋め込んだ。腫瘍埋め込みの２週間後、体重は、およそ１０％減少した（図１０）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、体重質量喪失（図１０）、体脂肪量喪失（図１１）および除脂肪量喪失（図１２）を迅速に逆転させた。身体組成改善に加えて、ＧＤＦ１５＿００１は、ＩｇＧ対照と比較して、生存を増加させた（図１３）。
基礎代謝速度の低温ストレス上昇が排除される中立温度条件下でのＨＴ－１０８０腫瘍保有マウスにおけるＧＤＦ１５＿００１の代謝利益を確認するために、研究を、マウスを８６°Ｆで収容して反復した。循環ヒトＧＤＦ１５は、約５ｎｇ／ｍＬまで上昇した（図１４）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、体重減少の迅速な逆転を維持した（図１５）。ＧＤＦ１５＿００１は、他の点では同一の非腫瘍保有マウスでは、これらのパラメーターのいずれに対しても効果を有さなかった。
これらのデータは、ＧＤＦ１５＿００１が、腫瘍保有マウスにおいて生存を増加させ、悪液質を逆転させることを実証している。したがって、これらの結果は、ＧＤＦ１５＿００１が、潜在的な新規のヒト治療薬であることをさらに示している。
（実施例１３）
膵腫瘍保有マウスにおけるヒトＧＤＦ１５の阻害
ＧＤＦ１５＿００１が腫瘍保有マウスにおいて悪液質を逆転させ得、寿命を増加させ得るかどうかをさらに評価するために、ＳＣＩＤマウスに、膵腫瘍肝臓転移に由来するＰＡ－０１６５腫瘍組織断片を、皮下で埋め込んだ。循環ヒトＧＤＦ１５は、約２ｎｇ／ｍＬまで上昇した（図１６）。腫瘍埋め込みの４週間後、体重は、およそ１０％減少した（図１７）。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、体重減少を完全に防止した（図１７）。体重改善に加えて、ＧＤＦ１５＿００１は、ＩｇＧ対照と比較して、生存を増加させた（図１８）。
これらのデータもまた、ＧＤＦ１５＿００１が、腫瘍保有マウスにおいて生存を増加させ、悪液質を逆転させることを実証している。したがって、これらの結果は、ＧＤＦ１５＿００１が、潜在的な新規のヒト治療薬であることをさらに示している。
（実施例１４）
抗がん剤で処置した腫瘍保有マウスにおけるヒトＧＤＦ１５の阻害
ＧＤＦ１５＿００１が抗がん剤で処置した腫瘍保有マウスにおいて悪液質を逆転させ得、生存を増加させ得るかどうかを決定するために、ＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＲＥＮＣＡ（マウス腎腺癌）細胞を皮下で埋め込んだ。循環マウスＧＤＦ１５は、約８ｎｇ／ｍＬまで上昇した（図１９）。腫瘍サイズが１００ｍｇに達した時点で、抗がん剤ソラフェニブによる処置を開始し、その後、１０％体重減少が達成された時点で、ＧＤＦ１５＿００１またはＩｇＧ対照を添加した（図２０）。ソラフェニブ処置マウスへのＧＤＦ１５＿００１の投与は、体重減少を完全に逆転させた（図２０）。体重改善と共に、ソラフェニブ＋ＧＤＦ１５＿００１の組み合わせは、ソラフェニブ＋ＩｇＧ対照と比較して、生存を増加させた（図２１）。
体重を改善するＧＤＦ１５＿００１の能力を、抗がん剤シスプラチンで処置した腫瘍保有マウスにおいても試験した。ＳＣＩＤマウスに、ＮＳＸ－２６１１５（ヒト非小細胞肺癌腺癌に由来する）腫瘍組織断片を、皮下で埋め込んだ。循環ヒトＧＤＦ１５は、約４．５ｎｇ／ｍＬまで上昇した（図２２）。腫瘍サイズが１００ｍｇに達した時点で、１０％体重減少が達成され、抗がん剤シスプラチンによる処置を、ＧＤＦ１５＿００１またはＩｇＧ対照と共に開始した（図２３）。ＧＤＦ１５＿００１またはＩｇＧ対照を、シスプラチンなしでも与えた。ＧＤＦ１５＿００１の投与は、ＩｇＧ対照と比較して、シスプラチンを与えた場合または与えなかった場合に、体重減少を逆転させた（図２３）。体重改善と共に、シスプラチン＋ＧＤＦ１５＿００１の組み合わせは、シスプラチン＋ＩｇＧ対照と比較して、生存を増加させた（図２４）。
これらのデータもまた、ＧＤＦ１５＿００１が、抗がん剤で処置した腫瘍保有マウスにおいて生存を増加させ、悪液質を逆転させることを実証している。したがって、これらの結果は、ＧＤＦ１５＿００１が、新規の潜在的なヒト治療薬であることをさらに示している。
（実施例１５）
抗ＧＤＦ１５抗体の投薬
悪液質の処置のための抗ＧＤＦ１５抗体についての有効な用量および投薬レジメンを同定することに関連する課題が存在する。全体の有効な用量は、可変であることが公知の、患者における初期循環ＧＤＦ１５濃度に依存する。さらに、悪液質患者における遊離ＧＤＦ１５レベルは、治療に応答して異なる速度で低減される。したがって、有効な用量は、投薬間隔を通じて、定常状態で（即ち、用量後の最大濃度が、以前の用量後の最大濃度と実質的に同じになるような、いくつかの用量の後に）、遊離ＧＤＦ１５レベルを、０．５ｎｇ／ｍＬ未満まで低減させる、７０ｋｇの患者に与えられる量として、所与の投薬間隔について定義され得る。この遊離ＧＤＦ１５レベルは、健康な対象について報告されたデータに基づいて選択する（Ｗｏｌｌｅｒｔら、２０１７、Ｊ Ａｐｐｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ １（５）：５１０～５２１）。したがって、本明細書で開示される有効な投薬量は、罹患対象における出発遊離ＧＤＦ１５レベルの関数、および０．５ｎｇ／ｍＬ未満までのそのレベルの低減として記述される。サンプル中の遊離ＧＤＦレベルは、例えば、電気化学発光イムノアッセイ、例えば、ＥＬＥＣＳＹＳ ＧＤＦ１５アッセイ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して測定され得る。ＥＬＥＣＳＹＳ ＧＤＦ１５アッセイは、ビオチン－ストレプトアビジンテクノロジーを使用し、サンドイッチイムノアッセイ原理に基づく（Ｗｏｌｌｅｒｔら、２０１７を参照のこと）。当該分野で公知の、サンプル中の遊離ＧＤＦ１５の量を測定できる他のアッセイもまた、患者における遊離ＧＤＦ１５レベルを決定するために使用され得る。
本明細書で開示される抗体について有効な用量および用量レジメンを予測するための課題を克服するために、２コンパートメント薬物動態学的モデルを開発した。抗ＧＤＦ１５抗体の皮下投薬を、デポ中に特定された量を投薬することによってシミュレートしたが、これは次いで、特定された速度ｋａで中央コンパートメント中に吸収される。抗体は、末梢コンパートメント中に分布し、次いで、中央コンパートメントから除去される。本明細書で使用する場合、用語「デポ」は、薬物が蓄積する部位（例えば、皮下空間）を指し、用語「中央コンパートメント」は、脈管空間および高度に灌流される臓器（例えば、肝臓、腎臓および肺）を指し、用語「末梢コンパートメント」は、あまり灌流されない組織（例えば、脂肪および筋肉）を指す。
ＧＤＦ１５＿００１についてのパラメーターを、ヒトＦｃＲｎ発現マウスにおけるＧＤＦ１５＿００１の薬物動態学的研究におけるパラメーターから拡大することによって決定した。簡潔に述べると、６匹のマウスに、１ｍｇ／ｋｇのＧＤＦ１５＿００１を静脈内投薬し、１０００時間にわたってモニタリングした；得られた抗体薬物動態学的を、２コンパートメント薬物動態モデルにフィットさせた。本明細書で開示される他の抗体についてのパラメーターを、類似の様式で決定することができた。ＧＤＦ１５＿００１は、中央コンパートメントにおいて産生され、末梢コンパートメントに分布し、両方の空間から除去される。体積および分布速度は、上記薬物動態学的研究においてＧＤＦ１５＿００１について決定したものと同じになると仮定された。ターンオーバーを、２人の健康なボランティアにおける循環ＧＤＦ１５中への安定なアイソトープ標識されたアミノ酸の取り込みを定量化する実験に基づいて、ＧＤＦ１５＿００１について１６．６時間の半減期を与えるように選択した（実験方法論は、本質的に、Ｌａｓｓｍａｎら、２０１４、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ６０（９）：１２１７～１２２４に提供されるとおり）。ＧＤＦ１５合成速度を、特定された循環レベルのＧＤＦ１５を与えるように選択した。この循環レベルは、所与の疾患について報告された最も高いレベル（対応する状態を有する全ての患者を処置するため）、より低いが、対象の特定されたごく一部についての値をなおも上回る閾値（ほとんどの患者の処置を可能にしつつ最大用量を制御するため）、またはより正確な個別化された用量を可能にするために特定の対象について決定された特定のレベル、を示し得る。ヒト疾患と関連するＧＤＦ１５レベルの範囲については、例えば、Ｍｕｔｌｕら、２０１５、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ３８（５）：１８０５～１８１３；Ｍｏｎｔｅｒｏら、２０１６、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ １１（２）：ｅ０１４８７０９；ＫｅｍｐｆおよびＷｏｌｌｅｒｔ、２００９、Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌ Ｃｌｉｎ ５（４）：５３７～５４７；ならびにＬｅｒｎｅｒら、２０１６、Ｏｎｃｏｌ Ｌｅｔｔ １２（５）：４２１９～４２２３を参照のこと。
中央および末梢コンパートメントの両方において、ＧＤＦ１５は、抗体についての会合および解離速度定数に基づいて、抗ＧＤＦ１５抗体に可逆的に結合できる。ＧＤＦ１５＿００１について、これらのパラメーターは、Ｂｉａｃｏｒｅ測定に基づいて、それぞれ、１．５９×１０６Ｍ－１ｓ－１（ｋａ）および３．４２×１０－５ｓ－１（ｋｄ）（２１．３ｐＭの平衡解離定数と等しい）と決定された（上記表８を参照のこと）。類似のアッセイが、本明細書で開示された他の抗体について実施され得る、またはパラメーターが、用量に対する親和性変化の影響を調査するためのインプットパラメーターとして使用され得る。いずれの特定の理論に束縛されることも望まないが、抗体／ＧＤＦ１５複合体は、２つのコンパートメント間に分布し、抗体自体について決定されたのと同じ薬物動態学的パラメーターを使用して、中央コンパートメントから除去される。２コンパートメント投薬モデルについてのパラメーターを、表１４に示す。
Figure 2022188191000036
対象における出発遊離ＧＤＦ１５レベルの関数としての、ＧＤＦ１５＿００１についての予測された治療有効皮下用量を、表１５、１６および１７ならびに図２５、２６および２７に示す。毎週、隔週およびおよそ毎月の投薬についての予測された治療有効用量が示される。
本明細書で提供される投薬データは、ＧＤＦ１５＿００１が、遊離ＧＤＦ１５のレベルの、潜在的に治療的なレベルターンオフ低減を達成できるような量および投薬間隔で投与され得ることを示唆している。これらの結果は、ＧＤＦ１５＿００１の投薬が、実現可能でありかつ患者の服薬遵守を保証する投薬レジメンで達成および維持され得ることを実証している。
Figure 2022188191000037
Figure 2022188191000038
Figure 2022188191000039
（実施例１６）
ＲＣＣの皮下モデルにおける抗ＰＤ－１（Ｆ２）抗体および抗ＧＤＦ１５（ＧＤＦ１５－２９７）による組み合わせ処置
本明細書で開示されるデータは、マウスＲＥＮＣＡ転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）モデルにおける抗ＧＤＦ１５抗体および抗ＰＤ１抗体組み合わせ治療の相乗的治療効果を実証している。
腫瘍保有動物を、以下のように生成した：６～８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。全ての動物を、ＣＩＤにおいて病原体なしの生態動物園設備中に収容し、実験を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに従うプロトコールに従って実施した。ＲＥＮＣＡ細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞を、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％二酸化炭素（ＣＯ２）中３７℃で培養し、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＲＡＤＩＬ）（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＯ）において、病原体についてＩＭＰＡＣＴ試験した。対数成長期にある成長中の病原体なしの細胞を回収し、腫瘍接種に使用した。ＢＡＬＢ／ｃマウスの右脇腹に、０．１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ中０．２×１０６のＲＥＮＣＡを皮下接種した。
腫瘍体積分析を、以下のように実施した：腫瘍が標的サイズに達した時点で、マウスを処置群へと無作為化した。処置を、無作為化と同日、即ち、０日目に開始した。腫瘍サイズを、キャリパーを使用して２つの次元で毎週２回測定し、体積を、以下の式を使用して、立法ミリメートルで表した：Ｖ＝０．５Ｌ×Ｗ２、式中、Ｌは、腫瘍の最長直径であり、Ｗは、Ｌと直交する直径である。体重を、毎週２回記録した。
この研究で使用した治療的抗体は、以下であった：マウス抗マウスＰＤ１ Ｆ２（マウス免疫グロブリンＧ１［ｍＩｇＧ１］）、およびＦｃ中にマウスＩｇＧ１エフェクター機能ヌルＤ２６５Ａ、即ち、アミノ酸残基番号２６５におけるアスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）からアラニン（Ａｌａ、Ａ）への変異を含むマウス抗マウスＧＤＦ１５＿０２９７。抗体ＧＤＦ１５＿０２９７は、本質的に、その抗体に同様に結合する、ＧＤＦ１５＿００１のマウス代理抗体である。同様に、Ｆ２は、ササンリマブ（ＲＮ８８８）に同様に結合するマウス代理抗体である。抗ＰＤ１抗体および抗ＧＤＦ１５抗体を各々、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に２ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、「処置０日目」（ｄ０）にマウス１匹当たり１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内（ｉｐ）投薬した。一元配置または二元配置ＡＮＯＶＡを適用して、アイソタイプ対照（陰性対照マウスＩｇＧ１）または他の処置群と比較した、複数の群間の統計的差異を比較した。独立ｔ検定を適用して、２つの群間の統計的差異を比較した。Ｐ＜０．０５を、有意な差異とみなした。
ＲＥＮＣＡモデルを使用して、平均出発腫瘍サイズ２５～３８ｍｍ３のｒＲＣＣモデル（１群当たりｎ＝１０匹の動物）における、抗ＰＤ１と組み合わせた抗ＧＤＦ１５の治療効力を評価した。動物を、処置の開始後２週間にわたってモニタリングした。処置、即ち、抗ＧＤＦ１５および抗ＰＤ１のｉ．ｐ．投与を、移植の１１日後に開始した。抗ＧＤＦ１５抗体および抗ＰＤ１抗体の組み合わせ処置は、対照アイソタイプ処置群と比較した場合、ＲＥＮＣＡ ｒＲＣＣ皮下腫瘍の進行を有意に阻害した。抗ＧＤＦ１５単剤療法および抗ＰＤ１単剤療法は、この設定では、腫瘍進行を阻害するのに有効ではなかった（表１８および表１９）。
Figure 2022188191000040
Figure 2022188191000041
表１９に示される統計分析結果は、抗ＰＤ１と組み合わせた抗ＧＤＦ１５抗体による処置が、ＲＣＣがんモデルにおいて、初期段階の腫瘍進行において相乗的効果を有することを実証している。
（実施例１７）
抗ＰＤ１抗体および抗ＧＤＦ１５抗体の組み合わせによる膵がんの処置
この実施例は、マウス転移性膵腺癌モデル、即ち、Ｐａｎ０２モデルにおける、抗ＧＤＦ１５抗体および抗ＰＤ１抗体組み合わせ治療の相乗的治療効果を示す。同所性モデルにおける腫瘍成長の同定を促進するために、Ｐａｎ０２（ＮＨＩ／ＮＣＩ）細胞に、ホタルルシフェラーゼ構築物を感染させて、Ｐａｎ０２－ルシフェラーゼ細胞を生成した。
６～８週齢の雌性Ｂ６（Ｃｇ）－Ｔｙｒｃ－２Ｊ／Ｊ（Ｂ６アルビノ）マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。全ての動物を、ＣＩＤにおいて病原体なしの生態動物園設備中に収容し、実験を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに従うプロトコールに従って実施した。
Ｐａｎ０２細胞株は、ＮＨＩ／ＮＣＩから得た。細胞を、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ Ｌグルタミンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％二酸化炭素（ＣＯ２）中３７℃で培養し、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＲＡＤＩＬ）（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＯ）において、病原体についてＩＭＰＡＣＴ試験した。対数成長期にある成長中の病原体なしの細胞を回収し、腫瘍移植に使用した。アルビノＢ６マウスの膵臓に、０．２×１０６ｍＬのＰａｎ０２－ルシフェラーゼ無血清ＤＭＥＭおよびマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ、参照３５６２３７）を含む腫瘍細胞：マトリゲル混合物２０μＬを注射した。移植の４日後、腫瘍負荷を、冷光のレベルによって評価した。動物を群に階層化し、試験を開始した。ルシフェラーゼ発光を検出するために、動物に、食塩水中３０ｍｇ／ｍＬのＤ－ルシフェリン一ナトリウム塩（Ｐｉｅｒｃｅ、番号８８２９２）０．１ｍＬを注射した。冷光のレベルを、中間ビニング、１Ｆ／ストップでの１～１５秒露光後に、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＣＴ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）で検出した。画像を、ＬｉｖｉｎｇＩｍａｇｅ ４．５．１ Ｓｏｆｔｗａｒｅによって分析した。腫瘍負荷を、背景値を減算した後の、ＲＯＩ（関心領域）における光子／秒として計算した。一例では、登録の時点における平均発光は、４．８＊１０８光子／秒であった。別の例では、登録の時点における平均発光は、１．８＊１０８光子／秒であった。
マウス抗マウスＰＤ１Ｆ２抗体（マウス免疫グロブリンＧ１［ｍＩｇＧ１］）およびマウス抗マウスＧＤＦ１５＿０２９７抗体は、実施例１６に記載されるとおりであった。抗ＰＤ１抗体および抗ＧＤＦ１５抗体を各々、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に２ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、マウス１匹当たり１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内（ｉｐ）投薬した。別の例では、抗ＰＤ１抗体を、１ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、マウス１匹当たり５ｍｇ／ｋｇで投薬した。各場合において、ＰＤ－１抗体およびＧＤＦ１５抗体を、同日（処置０日目）に投与した。
腫瘍進行を、処置動物における冷光のレベルに基づいて毎週モニタリングした。冷光のレベルを、上記のように決定した。体重を毎週記録した。
移植後３５日目に、アイソタイプ抗体、抗ＧＤＦ１５抗体、抗ＰＤ１抗体および抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＰＤ１組み合わせからの、動物間での腫瘍負荷における変化を、以下の式に従って決定した：腫瘍負荷における変化＝（ｄ３５における光子束－ｄ４における光子束）／４日目における光子束。抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＰＤ１抗体処置は、Ｐａｎ０２腫瘍を移植した動物の腫瘍負荷を有意に低減させ、抗ＰＤ１、抗ＧＤＦ１５およびアイソタイプ群（それぞれ、４／１２；１／１２および０／１２）と比較して、１２匹の動物のうち８匹が、腫瘍退縮の徴候を示すという結果を生じた。結果を、以下の表２０にまとめる。表２０では、１群当たり１２匹の動物の各々からの個々の結果が示される。
Figure 2022188191000042
腫瘍負荷におけるこれらの変化は、抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＰＤ１抗体処置動物の増加した生存に対応し、平均生存は、６６日間（抗ＰＤ１）、５２．５日間（抗ＧＤＦ１５）および４５日間（アイソタイプ対照）にわたる生存と比較して、９０日間まで増加した。実験の終了時（１４５日目）の対照アイソタイプ群のｐ値と比較した場合、ｐ値は、ｐ＜０．０００１（抗ＧＤＦ１５＋抗ＰＤ１）、ｐ＝０．００１０（抗ＰＤ１）であり、統計的に有意でなかった（ｎｓ）（抗ＧＤＦ１５）。７９日目には、組み合わせた抗ＧＤＦ１５＋抗ＰＤ１および抗ＰＤ１単剤療法で処置した動物の生存間に、Ｍａｔｅｌ－Ｃｏｘ検定によって確立されたｐ＝０．０５およびＧｅｈａｎ－Ｂｒｅｓｌｏｗ－Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定によって確立されたｐ＝０．０４２に反映される、統計的に有意な差異が存在した。
別の例では、登録の時点における冷光発光１．８＊１０８光子／秒によって推定された平均腫瘍負荷を有するＰａｎ０２膵モデル（１群当たりｎ＝１３匹の動物）において、５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１抗体と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇの抗ＧＤＦ１５抗体の治療効力を評価した。処置を、移植の４日日後に開始した。３９日目に、抗ＧＤＦ１５＋抗ＰＤ１処置群の腫瘍体積は、動物の３８％において、検出限界を下回るまで低下した。ＰＤ１単剤療法は、動物の１５％のみにおいて腫瘍低減を生じたが、アイソタイプ対照および抗ＧＤＦ１５単剤療法は共に、この設定では治療利益を示さなかった。
これらの結果は、抗ＰＤ１と組み合わせた抗ＧＤＦ１５抗体による処置が、同所性膵がんモデルにおける進行に対して、別々に提供された各処置の相加的効果よりも高い相乗的抗腫瘍効果を提供することを実証している。
したがって、これらのデータは、抗ＧＤＦ１５およびＰＤ－１軸アンタゴニストの組み合わせ治療が、がんの処置のための新規の有用な相乗的治療であることを実証している。
（実施例１８）
がん免疫療法における効力を試験するためのマウス同系モデルの選択
抗ＧＤＦ１５治療の治療効力を決定するための適切なモデルの選択のために、以下のマウス同系細胞株を試験した：ＭＣ３８（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡのＡｎｔｏｎｉ Ｒｉｂａｓ博士の厚意による提供）、Ｐａｎ０２（ＮＨＩ／ＮＣＩ）、４Ｔ１（ＡＴＣＣ）、ＲＥＮＣＡ（ＡＴＣＣ）、ＣＴ２６（ＡＴＣＣ）、ＩＤ８（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ＫａｎｓａｓおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｋａｎｓａｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＬＬ２（ＡＴＣＣ）、Ｂ１６Ｆ１０（ＡＴＣＣ）およびＧＬ２６１（ＮＨＩ／ＮＣＩ）。順化培地中のＧＤＦ１５レベルを、マウスＧＤＦ１５ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＧＤ １５０）によって分析した。細胞を、６ウェル細胞培養ディッシュ（３５３２２４、Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に３連の０．３×１０６細胞／ウェルでプレートし、４８時間培養した。上清を収集し、２．０００ｒｐｍで５～１０分間遠心分離し、新たなチューブに移し、＋４℃で貯蔵した。生／死細胞の量を、ＢｉｏＲａｄ ＴＣ ２０細胞カウンターによって、トリパンブルー排除法によって推定した。各サンプルについての体積および細胞数を記録した。結果を表２１に示す。
Figure 2022188191000043
適切なｉｎ ｖｉｖｏモデルの選択のために、腫瘍保有動物からの血液を、後眼窩法によって収集し、ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ血液収集チューブ（３６５９６７、ＢＤ）に移した。腫瘍体積を記録し、適用できる場合、２００ｍｍ３に調整した。Ｐａｎ０２同所性腫瘍を保有する動物からの血清を、後期段階の動物（移植の３５～４０日後）から収集した。無腫瘍の遺伝的背景が一致した動物の血清を、対照として収集した。マウスＧＤＦ１５レベルを、マウスＧＤＦ１５ ＥＬＩＳＡキットによって決定し、表２２に示す。
Figure 2022188191000044
転移性腎ＲＣＣマウスモデル（ＲＥＮＣＡ）および膵がんモデル（Ｐａｎ０２）を、ｉｎ ｖｉｖｏでのＧＤＦ１５の最も高い産生体として同定し、ｉｎ ｖｉｖｏ研究においてさらに使用して、がん免疫学ベースの治療と組み合わせた抗ＧＤＦ１５治療の治療的潜在力を決定した。
（実施例１９）
抗ＣＤ４０抗体および抗ＧＤＦ１５抗体による組み合わせ処置
この実施例は、マウスＲＥＮＣＡ転移性ＲＣＣモデルにおける抗ＧＤＦ１５抗体および抗ＣＤ４０抗体組み合わせ治療の治療活性を示す。
６～８週齢の雌性ＢａｌｂＣマウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。全ての動物を、ＣＩＤにおいて病原体なしの生態動物園設備中に収容し、実験を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）ガイドラインに従うプロトコールに従って実施した。
ＲＥＮＣＡ細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。細胞を、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％二酸化炭素（ＣＯ２）中３７℃で培養し、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｉｍａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＲＡＤＩＬ）（Ｃｏｌｕｍｂｉａ、ＭＯ）において、病原体についてＩＭＰＡＣＴ試験した。対数成長期にある成長中の病原体なしの細胞を回収し、腫瘍接種に使用した。ＢａｌｂＣマウスの右脇腹に、０．１ｍＬの無血清ＤＭＥＭ中０．２×１０６のＲＥＮＣＡを皮下接種した。
抗マウスＣＤ４０抗体ＦＧＫ４５（マウスＩｇＧ１）および抗マウスＧＤＦ１５抗体ＧＤＦ＿０２９７（アミノ酸残基番号２６５においてアスパラギン酸からアラニンへの置換（Ｄ２６５Ａ）を含むマウスエフェクター機能ヌルＩｇＧ１ Ｆｃを含む）を、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に２ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、マウス１匹当たり１０ｍｇ／ｋｇで腹腔内（ｉｐ）投薬した。別の例では、抗ＣＤ４０を、１ｍｇ／ｍＬの濃度になるように希釈し、マウス１匹当たり５ｍｇ／ｋｇで投薬した。
腫瘍が標的サイズに達した時点で、マウスを処置群へと無作為化した。処置を、無作為化と同日に開始した。腫瘍サイズを、キャリパーを使用して２つの次元で毎週２回測定し、体積を、以下の式を使用して、立法ミリメートルで表した：Ｖ＝０．５Ｌ×Ｗ２、式中、Ｌは、腫瘍の最長直径であり、Ｗは、Ｌと直交する直径である。体重を、毎週２回記録した。
腫瘍浸潤性および脾臓白血球の状態に対する組み合わせ処置の転帰を分析するために、以下の分析を実施した。腫瘍を、改変を伴った製造業者のプロトコールに従って、穏やかなＭＡＣＳ（商標）およびＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｍｏｕｓｅ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、単一細胞懸濁物へと散在させた。Ａｍｍｏｎｉｕｍ－Ｃｈｌｏｒｉｄｅ－Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ（ＡＣＫ）Ｌｙｓｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、赤血球を除去した。細胞を、ＦＡＣＳ染色緩衝液（１０％ＦＢＳを補充したＰＢＳ）で２回洗浄し、最後に、ＦＡＣＳ染色緩衝液中に再懸濁した。脾臓白血球のために、摘出した脾臓を、０．２ｍｇ／ｍＬのＬｉｂｅｒａｓｅ ＴＬ（５４０１０２０００１、Ｒｏｃｈｅ）および２０ｕ／ｍＬのＤＮａｓｅ Ｉ（Ｒｏｃｈｅ ４７１６７２８００１、Ｒｏｃｈｅ）を含む、３ｍＬのＤｉｇｅｓｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎで灌流した。脾臓を、穏やかに揺らしながら、３７℃で１５分間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、酵素活性を、１ｍＬのＦＢＳを添加することによってクエンチし、脾臓を、小片へとスライスし、５０ｍＬのコニカルチューブに裏ごしし、細胞を、ＰＢＳ中で洗浄し、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、得られたペレットを、冷ＭＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。ＡＣＫ Ｌｙｓｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒを使用して、赤血球を除去した。
細胞の一部を、ＰＢＳ中１０％のラット血清中、０．５μｇ／１０６細胞のマウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、１０１３１０）と共に１０分間事前インキュベートし、その後、表現型決定ｍＡｂを添加して、免疫細胞を特異的に染色した。細胞表面抗原を、細胞を４℃で３０分間インキュベートすることによって標識した。未結合のｍＡｂを除去した後、細胞を、ＦＡＣＳ染色緩衝液で２回洗浄し、固定緩衝液（ＰＢＳ＋１％パラホルムアルデヒド）中で固定し、フローサイトメトリーによって分析するまで、暗中で４℃で貯蔵した。細胞内染色を、製造業者のプロトコールに従ってＦｏｘｐ３／Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒセット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して実施した。フローサイトメトリーデータを、Ｆｏｒｔｅｓｓａ（商標）ＳＯＲＰ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して獲得し、ＦｌｏｗＪｏ（商標）（ＴｒｅｅＳｔａｒ Ｉｎｃ．）を使用して分析した。
細胞表面または細胞内染色のために使用した抗体は、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。これらは、ラット抗マウスＣＤ４５－ＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５（クローン３０－Ｆ１１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ（Ｍ１／７０、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＣＤ２５－ＢＵＶ３９５（ＰＣ６１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＬｙ６Ｇ－ＦＩＴＣ（１Ａ８、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＣＤ９０．２－ＢＶ７８６（５３－２．１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＣＤ８－ＢＶ６５０（５３－６．７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＬｙ６Ｃ－ＢＶ４２１（ＡＬ－２１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＦ４／８０－ＰＥＣｙ７（ＢＭ８、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））、ラット抗マウスＣＤ８６－ＢＶ６０５（ＧＬ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、アルメニアンハムスター抗マウスＣＤ４９ａ－ＡＰＣ（ＨＭＡ１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ラット抗マウスＭＨＣＩＩ（ＩＡ－ＩＥ）－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００（Ｍ５／１１４．１５．２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ラット抗マウスＣＤ４－Ｖ４５０（ＲＭ４－５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ラット抗マウスＦｏｘｐ３－ＰＥ（ＦＪＫ－１６ｓ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）であった。染色アーチファクトを回避するために、サンプルを、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で維持した。生細胞を、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ ｅＦｌｕｏｒ（商標）７８０ Ｄｅａｄ Ｃｅｌｌ Ｓｔａｉｎ Ｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、死細胞から分離した。
結果を、平均±ＳＥＭとして表した。統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用して実施した。一元配置または二元配置ＡＮＯＶＡを適用して、アイソタイプ対照または他の処置群と比較した、複数の群間の統計的差異を比較した。独立ｔ検定を適用して、２つの群間の統計的差異を比較した。Ｐ＜０．０５を、有意な差異とみなした。
ＲＥＮＣＡモデルを使用して、平均出発腫瘍サイズ２５～３８ｍｍ３のｒＲＣＣモデル（１群当たりｎ＝１０匹の動物）における、抗ＣＤ４０と組み合わせた抗ＧＤＦ１５の治療効力を評価した。動物を、腫瘍体積が２０００ｍｍ３に達した時点、または２０％体重減少の時点で、屠殺した。アイソタイプ、抗ＧＤＦ１５抗体単独、および抗ＣＤ４０抗体単独、および抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＣＤ４０抗体組み合わせについての、腫瘍を有する動物の中央値生存は、それぞれ、２６、２５．５、３２．５および３４日間であった。抗ＣＤ４０抗体＋抗ＧＤＦ１５抗体群はまた、アイソタイプ、抗ＧＤＦ１５抗体単独および抗ＣＤ４０抗体単独群における０％と比較して、３０％の完全奏功者を生じた。
別々の研究では、抗ＣＤ４０抗体の２つの異なる投薬量（１０ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせた抗ＧＤＦ１５抗体の治療効力を、平均出発腫瘍サイズ４７～５４ｍｍ３のＲＥＮＣＡ再発性腎細胞癌（ｒＲＣＣ）モデル（１群当たりｎ＝１０匹の動物）において評価した。結果を、表２３および表２４にまとめる。
Figure 2022188191000045
Figure 2022188191000046
Figure 2022188191000047
アイソタイプ、抗ＧＤＦ１５抗体単独、抗ＣＤ４０抗体（５ｍｇ／ｋｇ）、抗ＣＤ４０抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）、および抗ＧＤＦ１５抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ４０抗体（５ｍｇ／ｋｇ）組み合わせ、および抗ＧＤＦ１５抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ４０抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）組み合わせについての、腫瘍を有する動物の中央値生存は、それぞれ、２９．５、２９．５、３６、３６、３８および４４．５日間であった。
抗ＧＤＦ１５媒介性の抗腫瘍応答における腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の寄与を決定するために、ＴＩＬを、最後の処置の２４時間後に、ＲＥＮＣＡ腫瘍から単離し、抗腫瘍免疫応答と関連するマーカーについて分析した。結果を図２９にまとめる（独立ｔ検定によって決定したｐ値；ｐ＝０．００２６）。
組み合わせ処置［抗ＧＤＦ１５抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）＋抗ＣＤ４０抗体（１０ｍｇ／ｋｇ）］は、アイソタイプ処置群と比較して、腫瘍中のＣＤ１１ｂ＋；Ｆ４／８０＋；Ｌｙ６Ｃ－細胞としてゲートされる活性化状態（ＭＨＣＩＩ ＭＦＩ）のマクロファージを、平均して１８７％増加させた（図２９）。対照的に、抗ＣＤ４０単剤療法は、ＭＨＣＩＩ ＭＦＩを６７％増加させた（図２９）。抗ＧＤＦ１５単剤療法は、マクロファージの活性化状態を増加させなかった（図２９）。
アイソタイプおよび抗ＧＤＦ１５群におけるＣＤ８＋Ｔ細胞／調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の比は、それぞれ、２．４および２．１であった（図３０、黒丸および黒三角）。ＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比は、抗ＣＤ４０抗体処置単独では、１７まで増加した（図３０、白抜きの丸）。対照的に、抗ＧＤＦ１５抗体プラス抗ＣＤ４０抗体による組み合わせ処置は、８４のＣＤ８＋Ｔ細胞／Ｔｒｅｇ比を生じた（図３０、白抜きの三角）。
これらの結果は、抗ＣＤＦ１５ベースの治療が、抗ＣＤ４０治療の抗腫瘍効力を増強する際に有効であることを実証している。
ＲＲＣモデルにおいて抗ＣＤ４０治療の抗腫瘍効力を増強することに加えて、抗ＧＤＦ１５ベースの治療は、処置動物の体重減少として現れる抗ＣＤ４０誘導性の毒性を和らげた。抗ＣＤ４０ベースの治療は、処置動物において４．４３％の体重減少を生じたが、抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＣＤ４０抗体組み合わせ群は、アイソタイプ対照処置群における１．２％の体重増加と比較して、１．５％の体重増加を実証した（各群中ｎ＝２０匹の動物、抗ＣＤ４０抗体 対 抗ＣＤ４０抗体＋抗ＧＤＦ１５抗体、独立ｔ検定によってｐ＝０．０００６）。抗ＣＤ４０抗体＋抗ＧＤＦ１５抗体群における体重の回復には、処置動物の血清中の、サイトカイン媒介性の毒性と一般に関連するサイトカイン発現の低減が伴った。
血清サンプルを、実施例１に記載されるように、処置動物から収集した。サイトカインレベルを、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ（登録商標）のＶ－ＰＬＥＸ（登録商標）Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｐａｎｅｌ １（マウス）Ｋｉｔ（Ｍｅｓｃｏｓｃａｌｅ（登録商標）Ｋ１５０４８Ｄ）によって分析した。各サンプルを、Ｄｉｌｕｅｎｔ ４１（Ｍｅｓｃｏｓｃａｌｅ（登録商標）Ｒ５０ＡＨ－１）で１対４希釈し、製造業者のプロトコールに従って、３連でアッセイした。結果を、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（登録商標）Ｑｕｉｃｋｐｌｅｘ（登録商標）ＳＱ １２０機械およびＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ｗｏｒｋｂｅｎｃｈソフトウェアによって分析した。以下のサイトカインの発現を分析した：ＩＦＮγ、ＩＬ１０、ＩＬ１２ｐ７０、ＩＬ１ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦα。図３１に示されるように、いくつかの炎症促進性サイトカイン（ＩＦＮγ（ＩＦＮｇ）、ＴＮＦα（ＴＮＦａ）、ＩＬ６、ＩＬ１０、ＫＣ／ＧＲＯ）の発現レベルは、抗ＧＤＦ１５処置への曝露後に、抗ＣＤ４０処置群において有意に低減された（ｎ＝５、抗ＣＤ４０ 対 抗ＣＤ４０＋抗ＧＤＦ１５、二元配置ＡＮＯＶＡ検定によってｐ＝０．００４４）。
これらの結果は、抗ＣＤ４０と組み合わせた抗ＧＤＦ１５抗体による処置が、腫瘍部位におけるＣＤ１１ｂ＋；Ｆ４／８０＋細胞の増加したレベルの活性化および増加したＣＤ８＋Ｔ細胞／調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）比が伴う、相乗的抗腫瘍効果を有することを実証している。さらに、抗ＧＤＦ１５治療は、増加したサイトカイン産生と関連する抗ＣＤ４０治療毒性の臨床徴候を和らげる。
（実施例２０）
抗ＣＤ４０抗体および抗ＧＤＦ１５抗体による膵がんの処置
この実施例は、マウス膵腺癌モデル（Ｐａｎ０２）における抗ＧＤＦ１５抗体および抗ＣＤ４０抗体組み合わせ治療の治療活性を示す。腫瘍保有動物を、実施例１９に記載されるように生成した。腫瘍負荷を、背景値を減算した後の、ＲＯＩ（関心領域）における光子／秒として計算した。登録の時点における平均発光は、４．８＊１０８光子／秒であった。
この研究のために、使用した抗体は以下であった：マウス抗マウスＣＤ４０抗体ＦＧＫ４５（マウス免疫グロブリンＧ１［ｍＩｇＧ１］）（１０ｍｇ／ｋｇ）およびマウス抗マウスＧＤＦ１５＿０２９７（マウスＩｇＧ１エフェクター機能ヌルＤ２６５Ａ変異）（１０ｍｇ／ｋｇ）。
抗ＧＤＦ１５抗体＋抗ＣＤ４０抗体処置動物の中央値生存は、抗ＣＤ４０抗体単独処置群における１０６日間、抗ＧＤＦ１５抗体単独処置群における５２．５日間、およびアイソタイプ対照群における４５日間と比較して、１２６．５日間であった。
これらの結果は、抗ＣＤ４０と組み合わせた抗ＧＤＦ１５抗体による処置が、膵がんの進行に対して相乗的抗腫瘍効果を有することを実証している。
（実施例２１）
ＧＤＦ１５中和抗体は、マクロファージ媒介性の腫瘍死滅のＧＤＦ１５媒介性の阻害を逆転させる
この実施例は、マクロファージの腫瘍死滅活性をモジュレートすることにおけるＧＤＦ１５機能を示す。
腹腔マクロファージを、３％のＢｒｅｗｅｒ Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ培地（Ｂ２５５１、Ｓｉｇｍａ）１ｍＬによるｉｐ注射の５日後に、Ｃ５７Ｂｌ６マウスから単離した。マクロファージを、完全マクロファージ培地（１０％熱不活性化ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１００ｕ／ｍｌペニシリン、０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、１０μＭピルビン酸ナトリウム、１００μＭ非必須アミノ酸、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ［ｐＨ７．４］、５０μＭ β－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ １６４０）単独中で、または試験したサイトカインおよび抗体の存在下で、２４ウェル細胞培養プレート中０．３５×１０６細胞／ウェルの濃度で蒔いた。以下のサイトカインおよび抗体を研究において使用した：組換えマウスＧＤＦ１５（大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）精製、ＲＤ ｓｙｓｔｅｍｓ ８９４４－ＧＤ）、抗マウスＧＤＦ１５＿０２９７抗体「２９７」および抗ＧＤＦ１５＿００１。組換えマウスＧＤＦ１５（１０ｎＭ）および抗体（各々１００ｎＭ）との３時間のインキュベーション後に、細胞を、ＬＰＳ（１０ｎｇ／ｍｌ、Ｌ２６５４、Ｓｉｇｍａ）およびＩＦＮγ（１００ｕ／ｍｌ、４８５Ｍ１００／ＣＦ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）処置に供して、マクロファージの活性化を達成した。次の日、Ｐａｎ０２細胞を、製造業者の指示に従ってＣＳＦＥ（Ｃ３４５５４、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて標識し、活性化されたマクロファージと共に１：４の比で共に蒔いた。２４時間後、マクロファージおよび腫瘍細胞を、ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ（商標）とのインキュベーション後に収集し、実施例１７に記載されるように、ＦＡＣＳによって分析した。骨髄系細胞を、ラット抗マウスＣＤ１１ｂ ＢＵＶ３９５（Ｍ１／７０、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって同定し、腫瘍細胞を、ＣＳＦＥ陽性／ＣＤ１１ｂ陰性集団として同定し、生細胞を、ＤＡＰＩ（４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール）（６２２４７、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって、死細胞から分離した。
図３２に示されるように、組換えＧＤＦ１５は、マクロファージ媒介性の腫瘍細胞死滅を阻害した（黒三角）。このＧＤＦ１５媒介性の阻害は、抗ＧＤＦ１５抗体による処置によって逆転された（白抜きの丸および白抜きの三角）。
これらの結果は、抗ＧＤＦ１５抗体による処置が、免疫細胞の抗腫瘍原性活性を促進する際に有効であることを実証している。
開示された教示は、種々の適用、方法、キットおよび組成物に関して記載されてきたが、種々の変化および改変が、本明細書の教示および以下の特許請求される発明から逸脱することなしになされ得ることが理解される。上述の実施例は、開示された教示をよりよく説明するために提供されるのであって、本明細書に提示された教示の範囲を限定することを意図しない。本明細書の教示は、これらの例示的な実施形態に関して記載されてきたが、当業者は、これらの例示的な実施形態の多数のバリエーションおよび改変が過度の実験なしに可能であることを容易に理解する。全てのかかるバリエーションおよび改変は、本明細書の教示の範囲内である。
特許、特許出願、論文、教科書などを含む、本明細書で引用される全ての参考文献、ならびにまだ引用されていない範囲までその中で引用される参考文献は、全ての目的のために、それらの全体が本明細書で参照によって組み込まれる。組み込まれた文献および類似の資料のうち１つ以上が、定義された用語、用語の用法、記載された技術などが含まれるがこれらに限定されない本出願とは異なるまたはそれと矛盾する場合、本出願が支配する。
種々の改変およびバリエーションが、本発明の範囲または精神から逸脱することなしに本発明においてなされ得ることが、当業者に明らかである。本発明の他の実施形態は、本明細書で開示される発明の仕様および実施を考慮して、当業者に明らかである。仕様および例は、例示にすぎないとみなされる意図であり、本発明の真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示される。

Claims (28)

  1. ヒト増殖分化因子１５（ＧＤＦ１５）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、以下のうち少なくとも１つ：
    ａ）配列番号７、２７、３６、４６、５５、６２、８２、８８、９５、１０１、１２９、１３８、１５０、１５７、１７４および１８４の配列からなる群から選択されるＬＣＤＲ－１アミノ酸配列；
    ｂ）配列番号８、２８、３７、４７、７０、１０８、１１４、１２２、１３０、１７５および１８５の配列からなる群から選択されるＬＣＤＲ－２アミノ酸配列；
    ｃ）配列番号９、２９、３８、４８、６３、７６、８９、１０２、１７６および１８６の配列からなる群から選択されるＬＣＤＲ－３アミノ酸配列；
    ｄ）配列番号１７、３２、４１、５８、６６、１１７、１２５、１３３、１５３、１７１および１７９の配列からなる群から選択されるＨＣＤＲ－１アミノ酸配列；
    ｅ）配列番号１８、３３、４２、５１、５９、６７、８５、９２、９８、１０５、１１８、１２６、１３４、１４１、１４６、１６５、１７２および１８０の配列からなる群から選択されるＨＣＤＲ－２アミノ酸配列；
    ｆ）配列番号１、１９、４３、５２、７９、１１１、１１９、１３５、１４７、１５４、１６０、１７３および１８１の配列からなる群から選択されるＨＣＤＲ－３アミノ酸配列；ならびに
    ｇ）上記（ａ）～（ｆ）からの少なくとも１つの抗体と、ＧＤＦ１５への結合について競合する抗体
    を含む、抗体またはその抗原結合性断片。
  2. ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃドメインからなる群から選択されるヒトＦｃドメインを含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  3. １０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、９００ｐＭ、８００ｐＭ、７００ｐＭ、６００ｐＭ、５００ｐＭ、４００ｐＭ、３００ｐＭ、２５０ｐＭ、２００ｐＭ、１５０ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭおよび１０ｐＭからなる群から選択されるおよその値のＫＤまたはその値未満のＫＤで、ヒトまたはカニクイザルＧＤＦ１５に結合する、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  4. 請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性部分をコードする、単離された核酸。
  5. 請求項４に記載の核酸を含む、ベクター。
  6. 請求項５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  7. ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ－２９３細胞、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞またはＳｐ２．０細胞からなる群から選択される哺乳動物細胞である、請求項６に記載の宿主細胞。
  8. 抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、請求項６に記載の宿主細胞を、前記抗体またはその抗原結合性断片が前記宿主細胞によって発現される条件下で培養するステップを含む、方法。
  9. 請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
  10. ＧＤＦ１５の発現によって媒介されるまたはそれと関連する医学的状態、疾患または障害の処置をするための、請求項９に記載の医薬組成物。
  11. 前記状態が、がん、化学療法、がん免疫学治療と組み合わせた化学療法、慢性閉塞性肺疾患、慢性腎臓疾患、慢性心不全、うっ血性心不全またはサルコペニアと関連する悪液質である、請求項１０に記載の医薬組成物。
  12. 遊離ＧＤＦ１５のレベルを減少させるための、請求項９に記載の医薬組成物。
  13. ＧＤＦ１５の活性を低減させるための請求項９に記載の医薬組成物。
  14. ＧＤＦ１５の前記活性が、（ａ）食物摂取を減少させること；（ｂ）食欲を減少させること；（ｃ）体重を減少させること；（ｄ）体重減少を増加させること；（ｅ）体脂肪量を減少させること；（ｆ）除脂肪量を減少させること；（ｇ）体脂肪量の喪失を増加させること、ｈ）除脂肪筋肉量の喪失を増加させること、ｉ）ＧＦＲＡＬに結合すること；（ｊ）ＲＥＴによって媒介される下流シグナル伝達を増加させること；（ｋ）ＥＲＫのリン酸化を増加させること；（ｌ）リボソームタンパク質Ｓ６のリン酸化を増加させること；（ｍ）ＭＡＰＫシグナル伝達経路のＲＥＴ媒介性の活性化を増加させること；（ｎ）ＡＫＴシグナル伝達経路のＲＥＴ活性化を増加させること；および（ｏ）ＰＬＣ－γ１シグナル伝達経路の活性化を増加させること、からなる群から選択される少なくとも１つの活性である、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 相乗的治療効果を提供する組成物と組み合わせて使用するための、がんを処置するための請求項９に記載の医薬組成物であって、ここで相乗的治療効果を提供する組成物が、
    ａ）相乗的治療有効量の抗ＣＤ４０アンタゴニスト抗体；または
    ｂ）相乗的治療有効量の、アベルマブではないＰＤ－１軸結合性アンタゴニストである、医薬組成物。
  16. 前記ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、スパルタリズマブ、ピディリズマブ、チスレチズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４、セミプリマブおよびササンリマブ（ＰＦ－０６８０１５９１）からなる群から選択される抗ＰＤ－１抗体である、請求項１５の（ｂ）に記載の医薬組成物。
  17. 前記ＰＤ－１軸結合性アンタゴニストが、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＭＥＤＩ４７３６およびＭＰＤＬ３２８０Ａからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アベルマブではない、請求項１５の（ｂ）に記載の医薬組成物。
  18. 前記がんが、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞癌、メルケル細胞癌、卵巣がん、乳がん膵がん、尿路上皮がんおよび去勢抵抗性前立腺がんからなる群から選択される、請求項１６または１７に記載の医薬組成物。
  19. 前記がんが、胃がん（gastric cancer）、肉腫、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、白血病、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、胸腺がん、上皮がん、唾液腺がん、肝臓がん、胃がん（stomach cancer）、甲状腺がん、肺がん、卵巣がん、乳がん、前立腺がん、食道がん、膵がん、神経膠腫、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、膀胱がん、子宮頸がん、絨毛癌、結腸がん、口腔がん、皮膚がんおよび黒色腫からなる群から選択される、請求項１５の（ａ）に記載の医薬組成物。
  20. 相乗的治療有効量の、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗ＧＤＦ１５抗体および相乗的治療有効量の抗ＰＤ－１抗体を含む、がんの処置のためのキット。
  21. 治療有効量の、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗ＧＤＦ１５抗体および治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含む、がんの処置のためのキット。
  22. がんの処置のために対象に投与される免疫モジュレーターの治療効果を増強するための、請求項９に記載の医薬組成物。
  23. 前記がんが、乳がん、胃がん（gastric cancer）、肝臓がん、肺がん、卵巣がん、膵がん、前立腺がん、神経膠腫、神経膠芽腫、腎がん、子宮内膜がんおよび結腸直腸がんからなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）もしくはサイトカインストームを経験しているまたはＣＲＳもしくはサイトカインストームに対して脆弱な対象において、毒性を減少させるまたは阻害するための、請求項９に記載の医薬組成物。
  25. 前記対象が、がん治療を受けており、前記方法が、前記がん治療の効力を低減させない、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 前記がん治療が、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗４－１ＢＢ抗体、ＩＬ－１２またはＩＬ－１５などの免疫モジュレーターを含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 前記ＣＲＳまたはサイトカインストームの原因が、感染性刺激、状態もしくは症候群を含み、または前記サイトカイン放出症候群もしくはサイトカインストームの原因が、非感染性刺激、状態もしくは症候群、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  28. 前記感染性刺激、状態または症候群が、インフルエンザ、鳥インフルエンザ、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、エプスタイン・バーウイルス関連血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、敗血症、グラム陰性敗血症、マラリア、エボラウイルス、痘瘡ウイルス、全身性グラム陰性細菌感染症もしくはヤーリッシュ・ヘルクスハイマー症候群を含み、または前記非感染性刺激、状態もしくは症候群が、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、孤発性ＨＬＨ、マクロファージ活性化症候群（ＭＡＳ）、慢性関節炎、全身型若年性特発性関節炎（ｓＪＩＡ）、スチル病、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、家族性寒冷自己炎症性症候群（ＦＣＡＳ）、家族性寒冷蕁麻疹（ＦＣＵ）、マックル・ウェルズ症候群（Muckle-Well Syndrome）（ＭＷＳ）、慢性乳児神経皮膚関節（Chronic
    Infantile Neurological Cutaneous and, Articular）（ＣＩＮＣＡ）症候群、ＮＬＲＰ３遺伝子における遺伝性もしくはｄｅ ｎｏｖｏ機能獲得型変異を含むクリオピリノパチー（cryopyrinopathy）、遺伝性自己炎症性障害、急性膵炎、重症熱傷、外傷、急性呼吸窮迫症候群、免疫療法、モノクローナル抗体治療、薬物使用に対して二次的、毒素の吸入に対して二次的、リポ多糖（ＬＰＳ）、グラム陽性毒素、真菌毒素、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）、またはＲＩＧ－１遺伝子発現のモジュレーションを含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
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