TW202021619A - 抗－ｇｄｆ１５抗體、組成物及使用方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供特異性結合GDF15之抗體、及其抗原結合片段，以及抗體之方法與用途。

Description

抗－ＧＤＦ１５抗體、組成物及使用方法
本發明關於特異性結合生長分化因子15(GDF15)之抗體及其抗原結合片段、及其組成物、方法與用途，其包括組合本發明抗-GDF15抗體與PD-1軸結合拮抗劑及/或CD40抑制劑以治療癌症之用途。
GDF15，亦已知為巨噬細胞抑制細胞激素1(MIC-1)、前列腺衍生因子(PDF)、胎盤骨形態演發蛋白質(PLAB)、NSAID-活化之基因1(NAG-1)、及胎盤轉形生長因子β(PTGFB)，為12-kDa分泌蛋白質，其形成25 kDa的二硫化物連接的同源二聚體(為轉形生長因子β(TGFβ)超家族之成員)。正常地，GDF15是弱表現或在組織完全不表現且血漿濃度低。GDF15表現在炎症和惡性腫瘤中經上調節，限制炎症和腫瘤生長。這種升高的表現導致在癌症(例如前列腺癌、胰臟癌、結腸直腸癌和胃癌)、心臟衰竭、慢性腎臟疾病(CKD)、肌少症(sarcopenia)、及慢性阻塞性肺臟疾病(COPD)中GDF15的循環濃度顯著升高(＞1-100 ng/mL)。
在臨床前模式中已顯示GDF15相關的體重損失。外源性GDF15投予在生理和病理生理條件下減少食物攝入和體重。增加的血漿GDF15與患有惡病質的癌症患者的體重損失相關(WO2005/099746；WO2009/021293、WO2014/100689、WO2016/049470)。儘管在癌症患者中證據最為強烈，但也報導GDF15與心臟衰竭相關的惡病質中體重損失之間的相關性(WO/2015/196142)。與人類數據一致，在小鼠腫瘤模式中，升高的血漿GDF15與惡病質相關。再者，使用多變異分析的多重研究已經辨識出GDF15為在許多癌症類型(例如NSCLC、胰臟癌、及肉瘤等等)、及在心臟衰竭、CKD、與COPD中與不良存活率相關的獨立預後生物標記。
最近，在2017年10月，報導GDF15活性，例如，其代謝效果，由結合到其同源受體GDNF-家族受體α樣(GFRAL)(GFR-α 家族的孤成員)之GDF15媒介。見，例如，Hsu等人，2017, Nature 550:255-259；Yang等人，2017, Nature Med. 23(10): 1158；及Emmerson等人，2017, Nature Med. 23(10):1215。這些研究證實GDF15結合GFRAL活化GFRAL-媒介的訊號傳遞路徑，藉此受體酪胺酸激酶RET被活化並作為GFRAL的共受體，而接著RET媒介ERK(pERK)、核糖體蛋白質S6(pS6)、AKT、MAPK、及和磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)等等的下游磷酸化。此外，這些研究證實GDF15對GFRAL的活化發生在腦幹區域、最後區和孤束核(nucleus tractus solitaries)，其包含化學感官神經元和控制食慾和嘔吐的神經肽的受體。最後區感知血液中的化學傳訊並控制自主生理系統，包括控制代謝和食慾的系統。此外，腦幹的這些區域是在血腦屏障外(BBB)，使其可接近，除其他事項外，大的分子，包括可結合GFRAL或GDF15和防止GFRAL-GDF15相互作用以調節GDF15與食慾、身體質量、重量、脂肪量和食物攝入相關的代謝效果之抗體。因此，腦幹中存在的GDF15-GFRAL路徑是調節由GDF15活性媒介的疾病、病症和失調的潛在標靶。
仍然存在顯著需要對由升高的GDF15量所媒介的或相關的惡病質所造成的或相關的重量損失之治療選項。本發明提供符合此需要的新穎潛在治療抗體。
PD-L1(計畫性死亡配體1；也稱為CD274和B7同源物1[B7-H1])在許多癌症中過度表現，並且通常與不良預後有關(Okazaki T等人，Intern. Immun. 2007 19 (7):813)(Thompson RH等人，Cancer Res 2006, 66(7): 3381)。有趣的是，與正常組織和周邊血中的T淋巴細胞相比，大多數腫瘤浸潤性T淋巴細胞主要表現PD-1。PD-1(計畫性細胞死亡蛋白1)，是腫瘤反應性T細胞上PD-L1的同源受體，可導致抗腫瘤免疫反應受損(Ahmadzadeh等人，Blood 2009 1 14(8): 1537)。這可是由於利用PD-L1表現的腫瘤細胞與PD-1表現的T細胞相互作用所媒介的PD-L1訊號傳遞，導致T細胞活化的減弱和免疫監視的逃避(Sharpe等人，Nat Rev 2002)(Keir ME等人，2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677)。因此，抑制PD-L1/PD-1相互作用和訊號傳遞路徑(也稱為「PD-1軸」)可以增強CD8+T細胞媒介的腫瘤毒殺。
已經提出通過其直接配體(例如，PD-L1，PD-L2[計畫性細胞死亡1配體2和B7-DC])抑制PD-1軸訊號傳遞以增強用於治療癌症的T細胞免疫性(例如，腫瘤免疫性)。此外，藉由抑制PD-L1與另一種結合配偶體(即B7-1)(也稱為CD80)的結合，已經觀察到對T細胞免疫性的類似增強。
目前，至少有五種PD-1軸結合拮抗劑被FDA批准用於超過10種癌症適應症(A Ribas等人，Science, 359, 1350-1355, 2018)以及本領域已知的其他癌症。其中，納武單抗(nivolumab)(OPDIVO)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888)各為抗PD-1抗體，而阿維單抗(avelumab)(BAVENCIO)、阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ)度伐魯單抗(durvalumab) (IMFINZI)、BMS-936559(MDX-1105)、MEDI4736、MPDL3280A (YW243.55.s70)各為抗PD-L1抗體。
已經研究PD-1軸結合拮抗劑與一種或多種抗癌劑的組合療法，第一次臨床試驗於2009年開始。從那時起針對這種組合的新臨床試驗顯著增加，2017年有467項新試驗登記(C. Schmidt, Nature, Vol 552, 2017年12月21/28日)。儘管納武單抗(nivolumab)(抗-PD-1)和伊匹單抗(ipilimumab)(抗-CTLA-4)之組合療法治療黑色素瘤，以及派姆單抗(pembrolizumab)(抗-PD-1)與化學療法之組合療法治療非小細胞肺癌分別在2015年和2017由FDA批准，但仍持續需要尋找結合PD-1軸結合拮抗劑與一種或多種其它抗癌劑用於治療、穩定、預防及/或延遲各種癌症的發展的最佳治療性處理。
GDF15被顯示受一些促發炎因子和脂多醣(LPS)誘導且參與在巨噬細胞活化上給予破壞的反饋機制，其藉由通過抑制NF-kB訊號傳遞路徑而抑制腫瘤壞死因子α(TNFα)產生(Bootcov等人，1997, PNAS 94(21): 11514-11519, Ratnam等人，2017, J. Clin. Invest. 127(10): 3796-3809)。TNFα的降低表現與巨噬細胞群朝前致瘤性(pro-tumorigenic)M2表現型的漂移相關聯(Kratochvill, 2015, Cell Reports 12(11): 1902-1914)。靶向腫瘤相關巨噬細胞中的M2表現型是增強對癌症療法反應的潛在策略，其集中於宿主免疫反應的活化。
對於癌症的治療選項仍存在顯著需求，特別是對於實體瘤。本發明提供與或不與一種或多種其他抗癌劑的新穎潛在治療GDF15抗體，滿足這些需要。也存在需要尋找最佳治療性處理，其結合PD-1軸結合拮抗劑與另一種治療劑，諸如GDF15抑制劑，與或不與一種或多種其它抗癌劑，用於治療、穩定、預防及/或延遲各種癌症的發展。本發明提供本發明的GDF15抗體與PD-1軸結合拮抗劑的新穎潛在有用治療組合，滿足此需要。
本發明提供特異性結合GDF15之抗體、及其抗原結合片段，以及用途，與相關方法。發明所屬技術領域中具有通常知識者將認知或能夠確認使用不超過常規的實驗，許多等同於本文所述的本發明具體的具體實施例。這些均等物亦於被涵蓋在下述具體實施例(E)中。
E1. 特異性結合GDF15的單離之抗體或其抗原結合片段。
E2. E1之抗體、或其抗原結合片段，包含下列所組成群組之一的HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列：SEQ ID NO：21、34、44、53、60、68、73、80、86、93、99、106、112、120、127、136、142、148、155、161及166。
E3. E1至E2中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含下列所組成群組之一的LCDR-1LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列：SEQ ID NO：11、30、39、49、56、64、71、77、83、90、96、103、109、115、123、131、139、144、151、158及163。
E4. E1至E3中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含(a)至(f)之一或多者 a) 選自下列所組成之群組之LCDR-1LCDR-1：SEQ ID NO：7、27、36、46、55、62、82、88、95、101、129、138、150及157， b) 選自下列所組成之群組之LCDR-2：SEQ ID NO：8、28、37、47、70、108、114、122、及130， c) 選自下列所組成之群組之LCDR-3：SEQ ID NO：9、29、38、48、63、76、89、及102， d) 選自下列所組成之群組之HCDR-1：SEQ ID NO：17、32、41、58、66、117、125、133、及153， e) 選自下列所組成之群組之HCDR-2：SEQ ID NO：18、33、42、51、59、67、85、92、98、105、118、126、134、141、146及165， f) 選自下列所組成之群組之HCDR-3：SEQ ID NO：1、19、43、52、79、111、119、135、147、154、及160。
E5. 根據E1-E4之抗體或其抗原結合片段，包含：i)HCDR-1，包含胺基酸序列GYTFX1 X2 YNID，其中，X1 為S或T且X2 為S或D；ii)HCDR-2，包含胺基酸序列X3 INPX4 X5 GX6 AX7 X8 X9 QKFQG，其中，X3 為G或Q；X4 為I或N；X5 為F或N；X6 為T或L；X7 為F或N；X8 為Y或F且X9 為N或A；以及iii)HCDR-3，包含胺基酸序列EX10 ITTX11 GAMDX12 ，其中，X10 為A或Q；X11 為V或I；且X12 為H或Y。
E6. 根據E1至E5之抗體或其抗原結合片段，包含：i)LCDR-1LCDR-1，包含胺基酸序列 RX1 SQX2 X3 X4 X5 YLA，其中，X1 為T或A、X2 為S或N、X3 為V或L、X4 為H或S、且X5 為N或S；ii)LCDR-2，包含胺基酸序列DAX6 X7 RAX8 ，其中，X6 為S或K；X7 為T或N；且X8 為D或T；以及iii)LCDR-3，包含胺基酸序列QQFX9 X10 X11 PX12 T，其中，X9 為W或S；X10 為S或N；X11 為W或D；且 X12 為W或Y。
E7. E1至E6中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含下述之一或多者： a) LCDR-1LCDR-1，包含SEQ ID NO：174之胺基酸序列， b) LCDR-2，包含SEQ ID NO：175之胺基酸序列， c) LCDR-3，包含SEQ ID NO：176之胺基酸序列， d) HCDR-1，包含SEQ ID NO：171之胺基酸序列， e) HCDR-2，包含SEQ ID NO：172之胺基酸序列， f) HCDR-3，包含SEQ ID NO：173之胺基酸序列。
E8. E1至E7中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含選自下列所組成之群組一至少一序列的HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列：SEQ ID NO：34、106、148、155、及166。
E9. E1至E8中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含選自下列所組成之群組至少一序列的LCDR-1LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列：SEQ ID NO：30、103、144、151、及163。
E10. E1至E9中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含(a)至(f)之一或多者 a) LCDR-1LCDR-1，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：27、88、95、101及150。 b) LCDR-2，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：8、28及108。 c) LCDR-3，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：9、29、38、48及102。 d) HCDR-1，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：32、41、及153。 e) HCDR-2，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：33、105、146及165。 f) HCDR-3，選自下列所組成之群組：SEQ ID NO：19、52、147、及154。
E11. E1至E10中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含SEQ ID NO：166之HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列。
E12. E1至E11中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含SEQ ID NO：163 之LCDR-1LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列。
E13. E1至E12中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含下述之一或多者： a) LCDR-1，包含SEQ ID NO：95之序列， b) LCDR-2LCDR-2，包含SEQ ID NO：28之序列， c) LCDR-3，包含SEQ ID NO：9之序列， d) HCDR-1，包含SEQ ID NO：32之序列， e) HCDR-2，包含SEQ ID NO：165之序列，及 f) HCDR-3，包含SEQ ID NO：52之序列。
E14. E1至E13中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含：包含SEQ ID NO：95之胺基酸序列的LCDR-1，包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的LCDR-2LCDR-2，包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的LCDR-3，包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的HCDR-1，包含SEQ ID NO：165之胺基酸序列的HCDR-2，及包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HCDR-3。
E15. E1至E14中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含下述取代之一或多者： a) 在LCDR-1的1、2、3、4、5、或6個取代為人類種系VL序列之對應殘基， b) 在LCDR-2的1、2、3、4、或5個取代為人類VL種系序列之對應殘基， c) 在LCDR-3的1、2、3、4、5、或6個取代為人類種系VL序列之對應殘基， d) 在HCDR-1的1個取代為人類種系VH序列之對應殘基， e) 在HCDR-2的1、2、3、4、5、6、7、或8個取代為人類種系VH序列之對應殘基， 其中，人類種系VL序列係選自下列所組成之群組：IGKV1-12*01、IGKV1-13*02、IGKV1-33*01、IGKV1-39*01、IGKV1-5*01、IGKV3-11*01、IGKV3-15*01、IGKV3-20*01、IGKV3D-20*02、及IGKV4-1*01，且人類種系VH係選自下列所組成之群組：IGHV1-2*02、IGHV1-3*01、IGHV1-46*01、IGHV1-69*01、IGHV1-69*02、IGHV1-8*01、IGHV3-13*01、IGHV3-23*01、IGHV3-23*04、IGHV3-30*01、IGHV3-30*18、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、及IGHV5-51*01。
E16. E1至E15中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含衍生自選自下列所組成之群組的人類種系VH序列的VH框架序列：IGHV1-2*02、IGHV1-3*01、IGHV1-46*01、IGHV1-69*01、IGHV1-69*02、IGHV1-8*01、IGHV3-13*01、IGHV3-23*01、IGHV3-23*04、IGHV3-30*01、IGHV3-30*18、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、及IGHV5-51*01。
E17. E1至E16中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含IGHV1-69*01 VH框架序列。
E18. E1至E17中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含衍生自選自下列所組成之群組的人類種系VL序列的VL框架序列：IGKV1-12*01、IGKV1-13*02、IGKV1-33*01、IGKV1-39*01、IGKV1-5*01、IGKV3-11*01、IGKV3-15*01、IGKV3-20*01、IGKV3D-20*02、及IGKV4-1*01。
E19. E1至E18中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含IGKV3-11*01 VL框架序列。
E20. E1至E19中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL框架序列及VH框架序列，且其中，VL框架序列為與其衍生自的人類種系序列至少72%同一性。
E21. E1至E20中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL框架序列及VH框架序列，且其中，VL框架序列為與其衍生自的人類種系序列至少72%、74%、75%、77%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
E22. E1至E21中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL框架序列及VH框架序列，且其中，VH框架序列為與其衍生自的人類種系序列至少53%同一性。
E23. E1至E22中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL框架序列及VH框架序列，且其中，VH框架序列為與其衍生自的人類種系序列至少53%、58%、60%、63%、71%、72%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。
E24. E1至E23中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VH，其包含與SEQ ID NO：166至少90%同一性的胺基酸序列。
E25. E1至E24中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VH，其包含與SEQ ID NO：166至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。
E26. E1至E25中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VH，其包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列。
E27. E1至E26中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL，其包含與SEQ ID NO：163至少90%同一性的胺基酸序列。
E28. E1至E27中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL，其包含與SEQ ID NO：163至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之胺基酸序列。
E29. E1至E28中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含VL，其包含SEQ ID NO：163之胺基酸序列。
E30. E1至E29中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含：包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列的VH及SEQ ID NO：163之VL胺基酸序列。
E31. E1至E30中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含Fc結構域。
E32. E31之抗體、或其抗原結合片段，其中，Fc結構域為IgA(例如，IgA1 或IgA2 )、IgD、IgE、IgM、或IgG(例如，IgG1 、IgG2 、IgG3 、或IgG4 )之Fc結構域。
E33. E32之抗體、或其抗原結合片段其中，Fc結構域為IgG之Fc結構域。
E34. E33之抗體、或其抗原結合片段，其中，IgG係選自下列所組成之群組：IgG1 、IgG2 、IgG3 、或IgG4 。
E35. E34之抗體、或其抗原結合片段，其中，IgG為IgG1 。
E36. E1至E35中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含重鏈，其包含與SEQ ID NO：164至少90%同一性的胺基酸序列。
E37. E1至E36中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含重鏈，其包含與SEQ ID NO：164至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。
E38. E1至E37中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含重鏈，其包含SEQ ID NO：164之胺基酸序列。
E39. E1至E38中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含LC，其包含與SEQ ID NO：162至少90%同一性的胺基酸序列。
E40. E1至E39中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含LC，其包含與SEQ ID NO：162至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。
E41. E1至E40中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含LC，其包含SEQ ID NO：162之胺基酸序列。
E42. E1至E41中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含：包含SEQ ID NO：164之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO：162之胺基酸序列的輕鏈。
E43. E1至E42中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125038的質體之插入編碼的CDR1、CDR2及CDR3。
E44. E1至E43中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125039的質體之插入編碼的CDR1、CDR2及CDR3。
E45. E1至E44中任一之抗體、或其抗原結合片段，其藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125038的質體中之插入編碼。
E46. E1至E45中任一之抗體、或其抗原結合片段，其藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125039的質體中之插入編碼。
E47. E1至E46中任一之抗體、或其抗原結合片段，包含藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125038的質體中之插入所編碼的胺基酸序列及藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125039的質體之插入所編碼的胺基酸序列。
E48. E1至E47中任一之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體或抗原結合片段為Fc融合蛋白質、單抗體(monobody)、大抗體(maxibody)、雙官能抗體、scFab、scFv、肽體(peptibody)。
E49. E1至E48之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體、或其抗原結合片段以約或少於選自下列所組成之群組的值之KD 結合人類GDF15：約10nM、5nM、2nM、1nM、900pM、800pM、700pM、600pM、500pM、400pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、50pM、40pM、30pM、25pM、20pM、15pM、及10pM。
E50. E1至E49之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體、或其抗原結合片段以約或少於選自下列所組成之群組的值之KD 結合石蟹獼猴GDF15：約10nM、5nM、2nM、1nM、900pM、800pM、700pM、600pM、500pM、400pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、50pM、40pM、30pM、25pM、20pM、15pM、13pM、10pM、及9pM。
E51. E1至E50之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體、或其抗原結合片段以KD 為約8pM或9pM結合石蟹獼猴GDF15。
E52. E1至E51之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體、或其抗原結合片段以KD 為約8.28pM結合石蟹獼猴GDF15。
E53. E1至E52中任一之抗體、或其抗原結合片段，其中，人類中末端半衰期為至少約16天。
E54. E1至E53中任一之抗體、或其抗原結合片段，其中，人類中末端半衰期為至少17天。
E55. E1至E54之抗體、或其抗原結合片段，其中，如t-regitope(tReg)調整之評分指示的抗體的預測免疫原性潛力為少於約-24。
E56. E1至E55之抗體、或其抗原結合片段，其中，如tReg調整之評分指示的抗體的預測免疫原性潛力為少於選自下列所組成之群組的tReg調整之評分：約-24、-26、-27、-30、-32、-33、-34、-35、-36、-37、-38、 -39、-40、-41、-42、-43、-50及-51。
E57. E1至E56之抗體、或其抗原結合片段，其中，如tReg調整之評分指示的抗體的預測免疫原性潛力係選自下列所組成之群組：約-26、-34、-36、-41、及   -42。
E58. E1至E57之抗體、或其抗原結合片段，其中，如tReg調整之評分指示的抗體的預測免疫原性潛力為約-41或-42。
E59. 根據E1至E58之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體或抗原結合片段當在25℃測量時，具有選自下列所組成之群組的黏度：至少約10厘泊(cP)、至少約15 cP、至少約20 cP、至少約40 cP、及至少約70 cP。
E60. 根據E1至E59之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體或抗原結合片段當在25℃測量時，具有黏度為約20 cP。
E61. 根據E1至E60之抗體、或其抗原結合片段，其中，抗體或抗原結合片段當在25℃測量時，具有黏度為20 cP。
E62. E1至E61之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為介於約0.05至約0.10。
E63. E1至E62之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為約0.07。
E64. E1至E63之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為0.07。
E65. E1至E64之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到石蟹獼猴GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為介於約1.0至約1.5。
E66. E1至E65之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到石蟹獼猴GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為約1.2。
E67. E1至E66之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到石蟹獼猴GDF15，抗體或抗原結合片段到人類GDF15的結合KD 比為1.21。
E68. E1至E67之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到石蟹獼猴GDF15的結合KD 比為介於約0.03至約0.09。
E69. E1至E68之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到石蟹獼猴GDF15的結合KD 比為介於約0.04至0.08。
E70. E1至E69之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到石蟹獼猴GDF15的結合KD 比為介於0.05至0.06。
E71. E1至E70之抗體、或其抗原結合片段，其中，相較於結合到鼠類GDF15，抗體或抗原結合片段到石蟹獼猴GDF15的結合KD 比為0.05。
E72. 根據E1至E71之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有為約71℃或更高之解構溫度(melting temperature)(Tm 1)、或其中抗體的CH 2為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E73. 根據E1至E72之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於71℃至72℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 1)、或其中抗體的CH 2為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E74. 根據E1至E73之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於71℃至72℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 1)、或其中抗體的CH 2為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E75. 根據E1至E74之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有為約80℃或更高的解構溫度(melting temperature)(Tm 2)、或其中抗體的Fab為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E76. 根據E1至E75之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於80℃至86℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 2)、或其中抗體的Fab為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E77. 根據E1至E76之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於84℃至85℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 2)、或其中抗體的Fab為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E78. 根據E1至E77之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有為約82℃或更高的解構溫度(melting temperature)(Tm 3)、或其中抗體的CH 3為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E79. 根據E1至E78之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於83℃至91℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 3)、或其中抗體的CH 3為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E80. 根據E1-79之抗體，其中，如差示掃描量熱法所測量，抗體具有介於87℃至89℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 3)、或其中抗體的CH 3為50%未摺疊時的溫度之熱穩定性。
E81. 經單離之核酸分子，包含編碼E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段的核酸序列。
E82. 經單離之核酸分子，包含編碼E1至E81中任一之抗體、或其抗原結合片段的至少一核酸序列。
E83. 經單離之核酸分子，編碼特異性結合人類GDF15之抗體、或其抗原結合部分的VL、VH、或二者，其中，該核酸分子包含SEQ ID NO：167之核酸序列、SEQ ID NO：168之核酸序列、或二者。
E84. 經單離之核酸分子，包含SEQ ID NO：167之核酸序列、SEQ ID NO：168之核酸序列、或二者。
E85. 經單離之核酸分子，編碼特異性結合人類GDF15之抗體、或其抗原結合部分的輕鏈、重鏈、或二者，其中，該核酸分子包含SEQ ID NO：169之核酸序列、SEQ ID NO：170之核酸序列、或二者。
E86. 經單離之核酸分子，包含SEQ ID NO：169之核酸序列、SEQ ID NO：170之核酸序列、或二者。
E87. 經單離之核酸分子，包含選自下列所組成之群組的至少一核酸序列：如SEQ ID NO：167、168、169、或170所列之序列。
E88. 經單離之核酸分子，包含如SEQ ID NO：167所列之核酸序列。
E89. 經單離之核酸分子，包含如SEQ ID NO：168所列之核酸序列。
E90. 經單離之核酸分子，包含如SEQ ID NO：169所列之核酸序列。
E91. 經單離之核酸分子，包含如SEQ ID NO：170所列之核酸序列。
E92. 經單離之核酸分子，編碼特異性結合人類GDF15之抗體、或其抗原結合部分，其中，該核酸分子包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125038之質體的插入之核酸序列。
E93. 經單離之核酸分子，編碼特異性結合人類GDF15之抗體、或其抗原結合部分，其中，該核酸分子包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125039之質體的插入之核酸序列。
E94. 經單離之核酸分子，編碼特異性結合人類GDF15之抗體、或其抗原結合部分，其中，該核酸包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125038之質體的插入之核酸序列及在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125039之質體的插入之核酸序列。
E95. 經單離之核酸分子，包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125038之質體的插入之核酸序列。
E96. 經單離之核酸分子，包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125039之質體的插入之核酸序列。
E97. 經單離之核酸分子，包含在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125038之質體的插入之核酸序列、及在ATCC寄存且具有登錄號PTA-125039之質體的插入之核酸序列。
E98. 載體，包含E81至E97中任一之核酸分子。
E99. 宿主細胞，包含E81至E98中任一之核酸分子、或E98之載體。
E100. E99之宿主細胞，其中，該細胞為哺乳動物細胞。
E101. E100之宿主細胞，其中，該宿主細胞為CHO細胞、HEK-293細胞、NS0細胞、PER.C6®細胞、或Sp2.0細胞。
E102. 製造抗體或其抗原結合片段之方法，包含在其中，該抗體或抗原結合片段由該宿主細胞表現的條件下培養E99至E101中任一之宿主細胞。
E103. E102之方法，進一步包含單離該抗體或其抗原結合片段。
E104. 醫藥組成物，包含E1至E103中任一之抗體或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
E105. E104之組成物，包含塞替派(thiotepa)、環磷醯胺(CYTOXAN)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)、烏得哌(uredopa)、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone))、δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、MARINOL)、β-拉帕醌(lapachone)、拉帕醇(lapachol)、秋水仙鹼(colchicine)、樺木酸、托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)、CAMPTOSAR)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪亭(scopolectin)、9-胺基喜樹鹼、苔蘚抑素(bryostatin)、培美曲塞(pemetrexed)、卡利司他汀(callystatin)、CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、鬼臼酸(podophyllinic acid)、替尼泊苷(teniposide)、念珠藻素(cryptophycin)、多拉司他汀(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物、KW-2189及CB1-TM1)、艾榴素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、TLK-286、CDP323、口服α-4整合素抑制劑、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海綿抑制素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥(mechlorethamine)氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、烯二炔(enediyne)抗生素(包括卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素(calicheamicin)γ及卡奇黴素(calicheamicin)ωl、達內黴素(dynemicin)、達內黴素(dynemicin)A、埃斯波黴素(esperamicin)、新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白質烯二炔(enediyne)抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、氰基N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、2-吡咯啉并-多柔比星(doxorubicin)、多柔比星(doxorubicin)HC1脂質體注射液(DOXIL)及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine) (GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA)、埃坡黴素(epothilone)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)、伊馬替尼(imatinib)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、夫羅林酸(frolinic acid)、醋葡內酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸、伊利盧拉(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、倍思塔布(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依達曲沙(edatraxate)、地磷醯胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鳥胺酸(elfornithine)、依利乙銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵、羥基脲、蘑菇多糖、洛達尼(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocin)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫丹莫耳(mopidanmol)、尼特林(nitraerine)、噴司他汀(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼、丙卡巴肼(procarbazine)、PSK多醣複合物、雷佐生(razoxane)、根黴素(rhizoxin)、西佐喃(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2"-三氯三乙基胺、T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、桿孢菌素(roridin)A、蛇形菌索(anguidine)、烏拉坦(urethan)、長春地辛(vindesine) (ELDISINE、FILDESIN)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加賽特辛(gacytosine)、阿醣胞苷(arabinoside)("Ara-C")、塞替派(thiotepa)、紫杉醇(TAXOL)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(ABRAXANE)、多西紫杉醇(doxetaxel) (TAXOTERE)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、6-硫鳥嘌呤(thioguanine)、巰基嘌呤、胺甲蝶呤(methotrexate)、順鉑、卡鉑、長春鹼(VELBAN)、鉑、依託泊苷(etoposide) (VP-16)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲醯四氫葉酸(leucovovin)、長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE)、諾凡特龍(novantrone)、依達曲沙(edatraxate)、柔紅黴素(daunomycin)、胺基喋呤(aminopterin)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylomithine) (DMFO)、抗-雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)(包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬(tamoxifen))、雷諾昔芬(raloxifene)(EVISTA)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 1 1 7018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene)(FARESTON)、抗-助孕素、雌激素受體下調控劑(ERD)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX)、黃體激素(leutinizing hormone)-釋放激素(LHRFl)促效劑(包括乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON及ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin))、抗-雄性素(包括氟他胺(fiutamide)、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide))；芳香酶抑制劑(包括4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate) (MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、服美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)(RJVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)、及安那唑(anastrozole)(ARIMIDEX)、雙膦酸鹽類(bisphosphonate)(包括氯屈膦酸鹽(clodronate)(BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate)(ZOMETA)、阿侖膦酸鹽(alendronate) (FOSAMAX)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID)、及利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL)、曲沙他濱(troxacitabine)、反義寡核苷酸(包括PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體(EGF-R))、THERATOPE疫苗、基因療法疫苗(包括ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗、及VAXID®疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如、LURTOTECAN))、氟維司群(fulvestrant)；伊馬替尼(imatinib)、EXEL-0862、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、瑞諾替康(arinotecan)、rmRH(例如，ABARELIX)、拉帕替尼(lapatinib)、拉帕替尼(lapatinib)對甲苯磺酸鹽(亦已知為GW572016)、17AAG、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)(BESPONSA)、伯舒替尼(bosutinib)(BOSULIF)、帕泊西力(palbociclib)(IBRANCE)、阿西替尼(axitinib) (INLYTA)、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)(SUTENT)、克卓替尼(crizotinib) (XALKORI)、恩雜魯它脈 (enzalutamide)(XTANDI)及上述任一之二或更多之組合、上述任一之醫藥上可接受之鹽、及/或酸或衍生物。
E106. 減少GDF15活性之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之 具體實施例E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物，且比較投予之前GDF15活性與投予抗體之後GDF15活性量，從而減少GDF15活性。
E107. E106之方法，其中，GDF15活性係選自下列所組成之群組： (a) GFRAL之結合； (b) 降低食物攝入； (c) 降低身體質量； (d) 降低肌肉質量； (e) 降低脂肪量； (f) 活化RET； (g) 增加ERK之磷酸化(pERK)；及 (h) 增加核糖體蛋白質S6(S6)之磷酸化 (i) 增加AKT之磷酸化； (j) 增加MAPK之磷酸化；及 (k) 增加PLC-γ1之磷酸化。
E108. 在有其需要之個體中減少游離GDF15量之方法，方法包含投予到有其需要之個體治療有效量之具體實施例E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E109. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於1 ng/ml。
E110. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.9 ng/ml。
E111. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.8 ng/ml。
E112. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.7 ng/ml。
E113. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.6 ng/ml。
E114. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.5 ng/ml。
E115. E108之方法，其中，比較投予之前的游離GDF15量與投予之後的游離GDF15量，且調整劑量與給藥方案以減少到游離GDF15量低於0.4 ng/ml。
E116. 治療惡病質之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E117. E116之方法，其中，惡病質與癌症、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性腎臟疾病、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、或肌少症(sarcopenia)相關。
E118. E117之方法，其中，癌症為固態腫瘤癌症、胰臟癌、肺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、或睪丸癌。
E119. E117或E118之方法，其中，化學療法為塞替派(thiotepa)、環磷醯胺(CYTOXAN)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)、烏得哌(uredopa)、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone))、δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、MARINOL)、β-拉帕醌(lapachone)、拉帕醇(lapachol)、秋水仙鹼(colchicine)、樺木酸、托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)、CAMPTOSAR)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪亭(scopolectin)、9-胺基喜樹鹼、苔蘚抑素(bryostatin)、培美曲塞(pemetrexed)、卡利司他汀(callystatin)、CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、鬼臼酸(podophyllinic acid)、替尼泊苷(teniposide)、念珠藻素(cryptophycin)、多拉司他汀(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物、KW-2189與CB1-TM1)、艾榴素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、TLK-286、CDP323、口服α-4整合素抑制劑、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海綿抑制素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、烯二炔(enediyne)抗生素(包括卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素(calicheamicin)γ及卡奇黴素(calicheamicin)ωl、達內黴素(dynemicin)、達內黴素(dynemicin)A、埃斯波黴素(esperamicin)、新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白質烯二炔(enediyne)抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、氰基N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、2-吡咯啉并-多柔比星(doxorubicin)、多柔比星(doxorubicin)HC1脂質體注射液(DOXIL)及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine) (GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA)、埃坡黴素(epothilone)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)、伊馬替尼(imatinib)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、夫羅林酸(frolinic acid)、醋葡內酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸、伊利盧拉(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、倍思塔布(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依達曲沙(edatraxate)、地磷醯胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鳥胺酸(elfornithine)、依利乙銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵、羥基脲、蘑菇多糖、洛達尼(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocin)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫丹莫耳(mopidanmol)、尼特林(nitraerine)、噴司他汀(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼、丙卡巴肼(procarbazine)、PSK多醣複合物、雷佐生(razoxane)、根黴素(rhizoxin)、西佐喃(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2"-三氯三乙基胺、T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、桿孢菌素(roridin)A、蛇形菌索(anguidine)、烏拉坦(urethan)、長春地辛(vindesine) (ELDISINE、FILDESIN)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加賽特辛(gacytosine)、阿醣胞苷(arabinoside)("Ara-C")、塞替派(thiotepa)、紫杉醇(TAXOL)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(ABRAXANE)、多西紫杉醇(doxetaxel) (TAXOTERE)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、6-硫鳥嘌呤(thioguanine)、巰基嘌呤、胺甲蝶呤(methotrexate)、順鉑、卡鉑、長春鹼(VELBAN)、鉑、依託泊苷(etoposide) (VP-16)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲醯四氫葉酸(leucovovin)、長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE)、諾凡特龍(novantrone)、依達曲沙(edatraxate)、柔紅黴素(daunomycin)、胺基喋呤(aminopterin)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylomithine) (DMFO)、抗-雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)(包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬(tamoxifen))、雷諾昔芬(raloxifene)(EVISTA)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 1 1 7018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene)(FARESTON)、抗-助孕素、雌激素受體下調控劑(ERD)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX)、黃體激素(leutinizing hormone)-釋放激素(LHRFl)促效劑(包括乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON及ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin))、抗-雄性素(包括氟他胺(fiutamide)、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide))；芳香酶抑制劑(包括4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate) (MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、服美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole) (RJVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)、及安那唑(anastrozole)(ARIMIDEX)、雙膦酸鹽類(bisphosphonate)(包括氯屈膦酸鹽(clodronate)(BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸鹽 (etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑來膦酸 (zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate)(ZOMETA)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX)、帕米膦酸鹽 (pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID)、及利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL)、曲沙他濱(troxacitabine)、反義寡核苷酸(包括PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體(EGF-R))、THERATOPE疫苗、基因療法疫苗(包括ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗、及VAXID®疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如、LURTOTECAN))、氟維司群(fulvestrant)；伊馬替尼(imatinib)、EXEL-0862、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、瑞諾替康(arinotecan)、rmRH(例如，ABARELIX)、拉帕替尼(lapatinib)、拉帕替尼(lapatinib)對甲苯磺酸鹽(亦已知為GW572016)、17AAG、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)(BESPONSA)、伯舒替尼(bosutinib)(BOSULIF)、帕泊西力(palbociclib)(IBRANCE)、阿西替尼(axitinib) (INLYTA)、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate) (SUTENT)、克卓替尼(crizotinib)(XALKORI)、恩雜魯它脈 (enzalutamide)(XTANDI)及上述任一之二或更多之組合、上述任一之醫藥上可接受之鹽、及/或酸或衍生物。
E120. E119之方法，其中，化學療法為基於鉑之化學療法。
E121. E106至E120中任一之方法，其中，該個體為人類。
E122. E106至E121中任一之方法，包含皮下投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E123. E106至E122中任一之方法，包含靜脈內投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E124. E106至E123中任一之方法，其中，約一週二次、一週一次、每二週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一個月二次、一個月一次、每二個月一次、每三個月一次、或每四個月一次 每五個月一次、每六個月一次、每七個月一次、每八個月一次、每九個月一次、每十個月一次、每十一個月一次或每十二個月一次投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E125. E106至E124中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約0.1 mg至約60 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E126. E106至E125中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約2 mg至約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E127. E106至E126中任一之方法，其中，一週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約2 mg、約5 mg、約7 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約25 mg、約40 mg、及約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E128. E106至E124中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約0.1 mg至約130 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E129. E106至E124或E128中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約5 mg至約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E130. E106至E124或E128至E129中任一之方法，其中，每二週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約5 mg、約12 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約60 mg、約90 mg、及約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E131. E106至E124中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約0.1 mg至約400 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E132. E106至E124或E131中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約15 mg至約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E133. E106至E124或E131至E132中任一之方法，其中，每四週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約15 mg、約40 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約200 mg、約300 mg、及約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E134. E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物，用作為藥劑。
E135. E1至80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物，用於減少個體中GDF15活性。
E136. 減少GDF15活性之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之抗體、或其抗原結合片段，包含 a) SEQ ID NO：177之HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列與SEQ ID NO：178之LCDR-1、LCDR-2LCDR-2、及LCDR-3序列，或 b) 包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列的VH與包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列的VL 及比較投予之前GDF15活性與投予抗體之後GDF15活性量，從而減少GDF15活性。
E137. 減少GDF15活性之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之抗體、或其抗原結合片段，包含 a) 醫藥組成物包含抗體、或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO：177之HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列；SEQ ID NO：178的LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列；及醫藥上可接受之載劑或賦形劑，或 b) 醫藥組成物包含抗體、或其抗原結合片段，包含包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列的VH；包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列的VL；及醫藥上可接受之載劑或賦形劑，從而減少GDF15活性。
E138. E137之方法，其中，GDF15活性係選自下列所組成之群組： (a) GFRAL之結合； (b) 降低食物攝入； (c) 降低身體質量； (d) 降低肌肉質量； (e) 降低脂肪量； (f) 活化RET； (g) 增加ERK之磷酸化(pERK)；及 (h) 增加核糖體蛋白質S6(S6)之磷酸化 (i) 增加AKT之磷酸化； (j) 增加MAPK之磷酸化；及 (k) 增加PLC-1之磷酸化。
E139. 治療惡病質之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之抗體、或其抗原結合片段，包含 a) SEQ ID NO：177之HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列及SEQ ID NO：178的LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列，或 b) 包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列的VL。
E140. 治療惡病質之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之抗體、或其抗原結合片段，包含 a) 醫藥組成物包含抗體、或其抗原結合片段，其包含SEQ ID NO：177之HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3序列；SEQ ID NO：178的LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3序列；及醫藥上可接受之載劑或賦形劑，或 b) 醫藥組成物包含抗體、或其抗原結合片段，包含包含SEQ ID NO：177之胺基酸序列的VH；包含SEQ ID NO：178之胺基酸序列的VL；及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
E141. E139或E140之方法，其中，惡病質與癌症、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性腎臟疾病、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭，或肌少症(sarcopenia)相關。
E142. E141之方法，其中，癌症為固態腫瘤癌症、胰臟癌、肺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、或睪丸癌。
E143. E141或E142之方法，其中，化學療法為塞替派(thiotepa)、環磷醯胺(CYTOXAN)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)、烏得哌(uredopa)、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone))、δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、MARINOL)、β-拉帕醌(lapachone)、拉帕醇(lapachol)、秋水仙鹼(colchicine)、樺木酸、托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)、CAMPTOSAR)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪亭(scopolectin)、9-胺基喜樹鹼、苔蘚抑素(bryostatin)、培美曲塞(pemetrexed)、卡利司他汀(callystatin)、CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、鬼臼酸(podophyllinic acid)、替尼泊苷(teniposide)、念珠藻素(cryptophycin)、多拉司他汀(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物、KW-2189與CB1-TM1)、艾榴素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、TLK-286、CDP323、口服α-4整合素抑制劑、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海綿抑制素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、烯二炔(enediyne)抗生素(包括卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素(calicheamicin)γ及卡奇黴素(calicheamicin)ωl、達內黴素(dynemicin)、達內黴素(dynemicin)A、埃斯波黴素(esperamicin)、新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白質烯二炔(enediyne)抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、氰基N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、2-吡咯啉并-多柔比星(doxorubicin)、多柔比星(doxorubicin)HC1脂質體注射液(DOXIL)及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine) (XELODA)、埃坡黴素(epothilone)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)、伊馬替尼(imatinib)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、夫羅林酸(frolinic acid)、醋葡內酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸、伊利盧拉(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、倍思塔布(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依達曲沙(edatraxate)、地磷醯胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鳥胺酸(elfornithine)、依利乙銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵、羥基脲、蘑菇多糖、洛達尼(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocin)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫丹莫耳(mopidanmol)、尼特林(nitraerine)、噴司他汀(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼、丙卡巴肼(procarbazine)、PSK多醣複合物、雷佐生(razoxane)、根黴素(rhizoxin)、西佐喃(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2"-三氯三乙基胺、T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、桿孢菌素(roridin)A、蛇形菌索(anguidine)、烏拉坦(urethan)、長春地辛(vindesine) (ELDISINE、FILDESIN)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加賽特辛(gacytosine)、阿醣胞苷(arabinoside)("Ara-C")、塞替派(thiotepa)、紫杉醇(TAXOL)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(ABRAXANE)、多西紫杉醇(doxetaxel) (TAXOTERE)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、6-硫鳥嘌呤(thioguanine)、巰基嘌呤、胺甲蝶呤(methotrexate)、順鉑、卡鉑、長春鹼(VELBAN)、鉑、依託泊苷(etoposide) (VP-16)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲醯四氫葉酸(leucovovin)、長春瑞濱(vinorelbine) (NAVELBINE)、諾凡特龍(novantrone)、依達曲沙(edatraxate)、柔紅黴素(daunomycin)、胺基喋呤(aminopterin)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylomithine) (DMFO)、抗-雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)(包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX 他莫昔芬(tamoxifen))、雷諾昔芬(raloxifene) (EVISTA)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 1 1 7018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene) (FARESTON)、抗-助孕素、雌激素受體下調控劑(ERD)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX)、黃體激素(leutinizing hormone)-釋放激素(LHRFl)促效劑(包括乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON及ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin))、抗-雄性素(包括氟他胺(fiutamide)、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide))；芳香酶抑制劑(包括4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、服美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)(RJVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)、及安那唑(anastrozole) (ARIMIDEX)、雙膦酸鹽類(bisphosphonate)(包括氯屈膦酸鹽(clodronate)(BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑來膦酸 (zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate)(ZOMETA)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID)、及利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL)、曲沙他濱(troxacitabine)、反義寡核苷酸(包括PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體(EGF-R))、THERATOPE疫苗、基因療法疫苗(包括ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗、及VAXID®疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如、LURTOTECAN))、氟維司群(fulvestrant)；伊馬替尼(imatinib)、EXEL-0862、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、瑞諾替康(arinotecan)、rmRH(例如，ABARELIX)、拉帕替尼(lapatinib)、拉帕替尼(lapatinib)對甲苯磺酸鹽(亦已知為GW572016)、17AAG、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)(BESPONSA)、伯舒替尼(bosutinib) (BOSULIF)、帕泊西力(palbociclib)(IBRANCE)、阿西替尼(axitinib)(INLYTA)、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)(SUTENT)、克卓替尼(crizotinib)(XALKORI)、恩雜魯它脈(enzalutamide)(XTANDI)及上述任一之二或更多之組合、上述任一之醫藥上可接受之鹽、及/或酸或衍生物。
E144. E141之方法，其中，化學療法為基於鉑之化學療法。
E145. E136至E144中任一之方法，其中，該個體為人類。
E146. E136至E145中任一之方法，包含皮下投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E147. E136至E146中任一之方法，包含靜脈內投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E148. E136至E147中任一之方法，其中，約一週二次、一週一次、每二週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一個月二次、一個月一次、每二個月一次、每三個月一次、或每四個月一次投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E149. E136至E148中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約0.1 mg至約60 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E150. E136至E149中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約2 mg至約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E151. E136至E150中任一之方法，其中，一週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約2 mg、約5 mg、約7 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約25 mg、約40 mg、及約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E152. E136至E148中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約0.1 mg至約130 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E153. E136至E148或E152中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約5 mg至約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E154. E136至E148或E152至E153中任一之方法，其中，每二週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約5 mg、約12 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約60 mg、約90 mg、及約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E155. E136至E148中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約0.1 mg至約400 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E156. E136至E148或E155中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約15 mg至約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E157. E136至E148或E155至E156中任一之方法，其中，每四週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約15 mg、約40 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約200 mg、約300 mg、及約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E158. 減少有其需要之個體血漿中的游離GDF15量之方法，該方法包含投予E1至E80中任一之抗體或E104至E105中任一之組成物。
E159. E106至E108或E116至E158中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到於約0.05 ng/mL至約3 ng/mL中。
E160. E106至E108或E116至E159中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到於約0.1 ng/mL至約1 ng/mL中。
E161. E106至E108或E116至E160中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到於約0.4 ng/mL至約0.8 ng/mL中。
E162. E106至E114或E116至E158中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到低於0.5 ng/ml。
E163. E106至E158或E162中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到低於0.4 ng/ml。
E164. E106至E108或E116至E158中任一之方法，其中，個體血漿中的游離GDF15量減少到其最低值係選自下列所組成之群組：0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9 ng/mL而其最高值係選自下列所組成之群組：0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、及3.0 ng/mL的範圍。
E165. E106至E114或E116至E158之方法，其中個體血漿中的游離GDF15量減少到低於約0.5 ng/mL。
E166. E106至E165中任一之方法，其中，使用本領域已知分析檢測血漿中游離GDF15，個體血漿中的游離GDF15量減少到超出最低檢測量。
E167. 醫藥組成物，包含E1至E80之抗體、或其抗原結合片段、PD-1軸結合拮抗劑、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
E168. 醫藥組成物，包含E1至E80之抗體、或其抗原結合片段、PD-1軸結合拮抗劑、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑，惟PD-1軸結合拮抗劑不為阿維單抗(avelumab)。
E169. 治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者PD-1軸結合拮抗劑之量、及E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段之量、或E167至E168之醫藥組成物之量，其中，一起的量有效於治療癌症。
E170. 治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者PD-1軸結合拮抗劑之量、及E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段之量、或E167-169之醫藥組成物之量，其中，一起的量有效於治療癌症，及其中，PD-1軸結合拮抗劑不為阿維單抗(avelumab)。
E171. E169至E170之方法，其中，一起的量提供治療癌症的協同治療效果。
E172. E169之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為抗PD-L1抗體。
E173. E169之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為抗PD-L1抗體，惟抗PD-L1抗體不為阿維單抗(avelumab)。
E174. E172之方法，其中，PD-L1抗體係選自下列所組成之群組：阿維單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)或度伐魯單抗(durvalumab)。
E175. E172之方法，其中，PD-L1抗體為阿特珠單抗(atezolizumab)或度伐魯單抗(durvalumab)。
E176. E172之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為阿維單抗(avelumab)並以量為約10 mg/kg Q2W或約800 mg Q2W靜脈內投予。
E177. 請求項E168之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為抗PD-1抗體。
E178. 請求項E177之方法，其中，抗PD-1抗體係選自下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)及沙珊單抗(sasanlimab)(PF-06801591、RN888、mAb7)。
E179. 請求項E178之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為沙珊單抗(sasanlimab)且以量為約300 mg Q4W或約600 mg Q6W皮下投予。
E180. E170至E180中任一之方法，其中，癌症係選自下列所組成之群組：黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞惡性腫瘤、Merkel細胞惡性腫瘤、卵巢癌、乳癌、胰臟癌、尿路上皮癌及去勢抵抗性前列腺癌。
E181. E180之方法，其中，癌症為腎細胞惡性腫瘤。
E182. E1181之方法，其中，癌症為胰臟癌。
E183. 使用E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合部分檢測樣本、組織、或細胞中之GDF15之方法，包含將樣本、組織或細胞與抗體接觸並檢測抗體。
E184. 在有其需要之患者中治療癌症之方法，包含投予到患者組合療法，其包含協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑、及協同治療有效量之GDF15抑制劑，其中，一起的量提供協同治療效果，從而治療癌症。
E185. 在有其需要之患者中治療癌症之方法，包含投予到患者組合療法，其包含協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑、及協同治療有效量之GDF15抑制劑，其中，一起的量提供協同治療效果，從而治療癌症，且其中，PD-1軸結合拮抗劑不為阿維單抗(avelumab)。
E186. E184至E185之方法，其中，GDF15抑制劑為E1至E80中任一之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段。
E187. E186之方法，其中，本文之抗-GDF15抗體、或抗原結合片段包含： a) LCDR-1，包含SEQ ID NO：95之胺基酸序列； b) LCDR-2，包含SEQ ID NO：28之aa序列； c) LCDR-3，包含SEQ ID NO：9之aa序列； d) HCDR-1，包含SEQ ID NO：32之aa序列； e) HCDR-2，包含SEQ ID NO：165之aa序列；以及 f) HCDR-3，包含SEQ ID NO：52之aa序列。
E188. E187之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為特異性結合PD-1之抗體且包含： a) LCDR-1，包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列； b) LCDR-2，包含SEQ ID NO：217之aa序列； c) LCDR-3，包含SEQ ID NO：218之aa序列； d) HCDR-1，包含SEQ ID NO：210之aa序列； e) HCDR-2，包含SEQ ID NO：213之aa序列；以及 f) HCDR-3，包含SEQ ID NO：215之aa序列。
E189. E186之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑係選自下列所組成之群組的抗-PD-1抗體：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、及沙珊單抗(sasanlimab)(PF-06801591)。
E190. 請求項E188至E189之方法，其中，抗-PD-1抗體為沙珊單抗(sasanlimab)(PF-06801591)。
E191. 請求項186之方法，其中，PD-1軸結合拮抗劑為抗-PD-L1抗體。
E192. 請求項190之方法，其中，沙珊單抗(sasanlimab)以量為約300 mg Q4W或約600 mg Q6W皮下投予。
E.193. 請求項191之方法，其中，PD-L1抗體係選自下列所組成之群組：阿特珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、BMS-936559、MEDI4736、及MPDL3280A。
E194. 請求項187之方法，其中，抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段包含VH(包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列)及VL(包含SEQ ID NO：163之胺基酸序列)。
E195. E194之方法，其中，抗-GDF15抗體包含HC(包含SEQ ID NO：164之胺基酸序列)、及LC(包含SEQ ID NO：162之胺基酸序列)。
E196. E195之方法，其中，抗-PD-1抗體包含HC(包含SEQ ID NO：197之胺基酸序列)、及LC(包含SEQ ID NO：199之胺基酸序列)。
E197. 請求項31之方法，其中，癌症係選自下列所組成之群組：黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞惡性腫瘤、Merkel細胞惡性腫瘤、卵巢癌、乳癌、胰臟癌、尿路上皮癌及去勢抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer)。
E198. E184至E197之方法，其中，癌症為腎細胞惡性腫瘤或胰臟癌。
E199. 治療癌症之套組，包含協同治療有效量之抗-PD-1抗體、及協同治療有效量之抗-GDF15抗體。
E200. 治療癌症之方法，包含投予到有其需要之個體治療有效量之E1至E80中任一之抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E201. E200之方法，其中，癌症為例如，而非限制，膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌、食道癌、胃癌(gastric cancer)、神經膠質母細胞瘤、神經膠質瘤、腦腫瘤、頭頸癌、腎癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、肝癌、子宮癌、骨癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、血癌、甲狀腺癌、胸腺癌、眼癌、及皮膚癌。
E202. E200或E201之方法，其中，方法進一步包含投予一或多種額外治療劑。
E203. E202之方法，其中，額外治療劑係選自：化學療法、疫苗、CAR-T細胞為主之療法、放射線療法、細胞激素療法、疫苗、雙特異性抗體、其他免疫抑制路徑之抑制劑、血管生成之抑制劑、T細胞活化劑、代謝路徑之抑制劑、mTOR抑制劑、腺苷酸路徑之抑制劑、酪胺酸激酶抑制劑，包括但不限於INLYTA、ALK抑制劑與舒尼替尼(sunitinib)、BRAF抑制劑、表觀遺傳調節劑、Treg細胞及/或骨髓衍生之抑制因子細胞之抑制劑或耗盡劑、JAK抑制劑、STAT抑制劑、周期蛋白依賴型激酶抑制劑、生物治療劑(包括但不限於針對VEGF、VEGFR、EGFR、Her2/neu、其他生長因子受體、CD20、CD40、CD-40L、CTLA-4、OX-40、4-1BB、及ICOS之抗體)、免疫原性劑(例如，減弱之癌細胞、腫瘤抗原、以腫瘤衍生之抗原或核酸脈衝之抗原呈現細胞諸如樹狀細胞、免疫刺激細胞激素(例如，IL-2、IFNα2、GM-CSF)、以編碼免疫刺激細胞激素(諸如但不限於GM-CSF)之基因轉染的細胞)、STING促效劑、及類鐸受體(例如，TLR3、TLR7、TLR8、TLR9)促效劑。
E204. E202之方法，其中，額外治療劑為抗-CD40抗體。
E205. E203之方法，其中，化學療法為塞替派(thiotepa)、環磷醯胺(CYTOXAN)、白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、哌泊舒凡(piposulfan)、苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)、烏得哌(uredopa)、六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺、三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；布拉他辛(bullatacin)、布拉他辛酮(bullatacinone))、δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、MARINOL)、β-拉帕醌(lapachone)、拉帕醇(lapachol)、秋水仙鹼(colchicine)、樺木酸、托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)、CAMPTOSAR)、乙醯基喜樹鹼(acetylcamptothecin)、莨菪亭(scopolectin)、9-胺基喜樹鹼、苔蘚抑素(bryostatin)、培美曲塞(pemetrexed)、卡利司他汀(callystatin)、CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、鬼臼酸(podophyllinic acid)、替尼泊苷(teniposide)、念珠藻素(cryptophycin)、多拉司他汀(dolastatin)、多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物、KW-2189與CB1-TM1)、艾榴素(eleutherobin)、水鬼蕉鹼(pancratistatin)、TLK-286、CDP323、口服α-4整合素抑制劑、匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)、海綿抑制素(spongistatin)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子、卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)、烯二炔(enediyne)抗生素(包括卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素(calicheamicin)γ及卡奇黴素(calicheamicin)ωl、達內黴素(dynemicin)、達內黴素(dynemicin)A、埃斯波黴素(esperamicin)、新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白質烯二炔(enediyne)抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、氰基N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、2-吡咯啉并-多柔比星(doxorubicin)、多柔比星(doxorubicin)HC1脂質體注射液(DOXIL)及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine)　(GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA)、埃坡黴素(epothilone)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)、氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)、伊馬替尼(imatinib)、胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)、夫羅林酸(frolinic acid)、醋葡內酯(aceglatone)、醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)、胺基乙醯丙酸、伊利盧拉(eniluracil)、安吖啶(amsacrine)、倍思塔布(bestrabucil)、比生群(bisantrene)、依達曲沙(edatraxate)、地磷醯胺(defofamine)、秋水仙胺(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、依氟鳥胺酸(elfornithine)、依利乙銨(elliptinium acetate)、依託格魯(etoglucid)、硝酸鎵、羥基脲、蘑菇多糖、洛達尼(lonidainine)、美登素(maytansine)、安絲菌素(ansamitocin)、米托胍腙(mitoguazone)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫丹莫耳(mopidanmol)、尼特林(nitraerine)、噴司他汀(pentostatin)、蛋胺氮芥(phenamet)、吡柔比星(pirarubicin)、洛索蒽醌(losoxantrone)、2-乙基醯肼、丙卡巴肼(procarbazine)、PSK多醣複合物、雷佐生(razoxane)、根黴素(rhizoxin)、西佐喃(sizofiran)、螺旋鍺(spirogermanium)、細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)、三亞胺醌(triaziquone)、2,2',2"-三氯三乙基胺、T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、桿孢菌素(roridin)A、蛇形菌索(anguidine)、烏拉坦(urethan)、長春地辛(vindesine)(ELDISINE、FILDESIN)、達卡巴嗪(dacarbazine)、甘露氮芥(mannomustine)、二溴甘露醇(mitobronitol)、二溴衛矛醇(mitolactol)、哌泊溴烷(pipobroman)、加賽特辛(gacytosine)、阿醣胞苷(arabinoside)("Ara-C")、塞替派(thiotepa)、紫杉醇(TAXOL)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(ABRAXANE)、多西紫杉醇(doxetaxel)(TAXOTERE)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、6-硫鳥嘌呤(thioguanine)、巰基嘌呤、胺甲蝶呤(methotrexate)、順鉑、卡鉑、長春鹼(VELBAN)、鉑、依託泊苷(etoposide)(VP-16)、異環磷醯胺(ifosfamide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲醯四氫葉酸(leucovovin)、長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE)、諾凡特龍(novantrone)、依達曲沙(edatraxate)、柔紅黴素(daunomycin)、胺基喋呤(aminopterin)、伊班膦酸鹽(ibandronate)、拓樸異構酶抑制劑RFS 2000、二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylomithine)(DMFO)、抗-雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)(包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX 他莫昔芬(tamoxifen))、雷諾昔芬(raloxifene)(EVISTA)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 1 1 7018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene)(FARESTON)、抗-助孕素、雌激素受體下調控劑(ERD)、氟維司群(fulvestrant)(FASLODEX)、黃體激素(leutinizing hormone)-釋放激素(LHRFl)促效劑(包括乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON及ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin))、抗-雄性素(包括氟他胺(fiutamide)、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide))；芳香酶抑制劑(包括4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、服美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)(RJVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)、及安那唑(anastrozole)(ARIMIDEX)、雙膦酸鹽類(bisphosphonate)(包括氯屈膦酸鹽(clodronate)(BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate )(ZOMETA)、阿侖膦酸鹽(alendronate) (FOSAMAX)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID)、及利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL)、曲沙他濱(troxacitabine)、反義寡核苷酸(包括PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體(EGF-R))、THERATOPE疫苗、基因療法疫苗(包括ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗、及VAXID®疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如、LURTOTECAN))、氟維司群(fulvestrant)；伊馬替尼(imatinib)、EXEL-0862、埃羅替尼(erlotinib)、西妥昔單抗(cetuximab)、貝伐珠單抗(bevacizumab)、瑞諾替康(arinotecan)、rmRH(例如，ABARELIX)、拉帕替尼(lapatinib)、拉帕替尼(lapatinib)對甲苯磺酸鹽(亦已知為GW572016)、17AAG、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)(BESPONSA)、伯舒替尼(bosutinib)(BOSULIF)、帕泊西力(palbociclib)(IBRANCE)、阿西替尼(axitinib) (INLYTA)、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)(SUTENT)、克卓替尼(crizotinib)(XALKORI)、恩雜魯它脈(enzalutamide)(XTANDI)及上述任一之二或更多之組合、上述任一之醫藥上可接受之鹽、及/或酸或衍生物。
E206. E203之方法，其中，化學療法為基於鉑之化學療法。
E207. E200至E206中任一之方法，其中，該個體為人類。
E208. E200至E207中任一之方法，包含皮下投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E209. E200至E206中任一之方法，包含靜脈內投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E210. E200至E206中任一之方法，其中，約一週二次、一週一次、每二週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一個月二次、一個月一次、每二個月一次、每三個月一次、或每四個月一次投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E211. E200至E206中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約0.1 mg至約60 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E212. E200至E206中任一之方法，其中，一週一次以劑量介於約2 mg至約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E213. E200至E206中任一之方法，其中，一週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約2 mg、約5 mg、約7 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約25 mg、約40 mg、及約50 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E214. E200至E206中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約0.1 mg至約130 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E215. E200至E206中任一之方法，其中，每二週一次以劑量介於約5 mg至約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E216. E200至E206中任一之方法，其中，每二週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約5 mg、約12 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約60 mg、約90 mg、及約125 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E217. E200至E206中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約0.1 mg至約400 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E218. E200至E206中任一之方法，其中，每四週一次以劑量介於約15 mg至約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E219. E200至E206中任一之方法，其中，每四週一次以選自下列所組成之群組的劑量：約15 mg、約40 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約200 mg、約300 mg、及約385 mg投予該抗體或其抗原結合片段、或醫藥組成物。
E220. 在有其需要之個體中治療癌症之方法 ，方法包含投予治療有效量之E1至E80之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E221. E220之方法，其中，方法 進一步包含投予到個體有效量之一或多種額外治療劑。
E222. E221之方法，其中，額外治療劑為抗-CD40抗體、或其抗原結合片段。
E223. E220至E222中任一之方法，其中，癌症係選自下列所組成之群組：胃癌(gastric cancer)、肉瘤、淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、白血病、頭頸癌、鱗狀細胞頭頸癌、胸腺癌、上皮癌、唾腺癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、食道癌、胰臟癌、神經膠質瘤、白血病、多發性骨髓瘤、腎細胞惡性腫瘤、膀胱癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、及黑色素瘤。
E224. E220-223中任一之方法，其中，個體為人類。
E225. 增強投予到個體治療癌症的免疫調節劑之治療效果之方法，方法包含投予到接受免疫調節劑的個體有效量之E1至E80之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E226. E225之方法，其中，癌症係選自下列所組成之群組：乳癌、胃癌(gastric cancer)、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、神經膠質瘤、神經膠質母細胞瘤、腎癌、子宮內膜癌、及結腸直腸癌。
E227. 在有其需要之個體中治療或預防細胞激素釋放症候群(CRS)之方法，方法包含投予到個體有效量之E1至E80之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物，從而治療或預防個體中之CRS。
E228. 在經歷細胞激素釋放症候群(CRS)或細胞激素風暴或易受細胞激素釋放症候群或細胞激素風暴的個體中降低或抑制毒性之方法，包含投予組成物之步驟，包含投予到個體有效量之E1至E80之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物。
E229. 請求項E227或E228之方法，其中，相較於經歷細胞激素釋放症候群或細胞激素風暴或易受細胞激素釋放症候群或細胞激素風暴且未投予E1至E80之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或E104或E105之醫藥組成物的個體，該個體中至少一促炎性細胞激素的產生經降低或抑制。
E230. E227至E229中任一之方法，其中，個體正經歷癌症療法且該方法未減少癌症療法效力。
E231. E230之方法，其中，癌症療法包含免疫調節劑。
E232. E230或E231之方法，其中，投予抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段在癌症療法之前、同時或之後發生。
E233. E231至E232中任一之方法，其中，免疫調節劑為：抗-CD40抗體、抗-CD47抗體、抗-CTLA4抗體、抗-4-1BB/CD137抗體、介白素12(IL-12)、或IL-15。
E234. E228至E233中任一之方法，其中，CRS或細胞激素風暴的原因包含感染性刺激、病症、或症候群，或其中，該細胞激素釋放症候群或細胞激素風暴的原因包含非感染性刺激、病症、或症候群、或其任何組合。
E235. E234之方法，其中，該感染性刺激、病症、或症候群包含流行性感冒、禽流感、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、Epstein-Barr二氏病毒-相關之噬血球性淋巴組織球增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis) (HLH)、敗血症、革蘭氏陰性敗血症、瘧疾、Ebola病毒、天花病毒、系統性革蘭氏陰性細菌感染、或Jarisch-Herxheimer 症候群，或其中，該非感染性刺激、病症、或症候群包含為噬血球性淋巴組織球增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis)(HLH)、突發性HLH、巨噬細胞活化症候群(MAS)、慢性關節炎、系統性幼年特發性關節炎(Juvenile idiopathic Arthritis)(sJIA)、Still氏疾病、隱熱蛋白相關週期性症候群(Cryopyrin-Associated Periodic Syndrome，CAPS)、家族性冷因性自體發炎症候群(FCAS)、家族性冷因性蕁麻疹(FCU)、Muckle-Well症候群(MWS)、慢性嬰兒神經性皮膚病(Chronic Infantile Neurological Cutaneous)及、關節病(CINCA)症候群、包含遺傳或在NLRP3基因中重新獲得功能突變之隱熱蛋白病(cryopyrinopathy)、遺傳性自體發炎失調、急性胰臟炎、嚴重燒傷、創傷、急性呼吸窘迫症候群、免疫療法、單株抗體療法、繼發於藥物使用、繼發於吸毒、脂多醣(LPS)、革蘭氏陽性毒素、真菌毒素、多醣磷脂肌醇(GPI)、或RIG-1基因表現之調節。
本發明提供特異性結合GDF15且減少或抑制GDF15活性之抗體、及其抗原結合片段，包括但不限於GDF15與GDNF家族受體α樣蛋白質(GFRAL)交互作用之能力。本發明亦提供製造、製備或生產GDF15抗體之方法。本發明的抗體有用於診斷、預防及/或治療GDF15活性媒介或相關的失調或病症，包括，但不限於，GDF15特徵之過度增殖性失調、肌肉質量的損失、體重的損失、脂肪重量損失、食物攝入減少等。本發明進一步涵蓋抗體的表現，以及包含本發明的抗體或其抗原結合片段的組成物的製備和製造，諸如使用抗體的藥劑。
提供編碼結合GDF15或其抗原結合部分的抗體的多核苷酸。亦提供編碼抗體重鏈或輕鏈或二者的多核苷酸。提供表現抗-GDF15抗體的宿主細胞。提供使用針對GDF15的抗體的治療方法。此等方法包括，但不限於，治療與GDF15表現及/或GDF15結合到GFRAL相關或媒介的疾病之方法，包括但不限於炎性和免疫疾病與過度增殖性失調。
本文所用之章節標題僅用於組織目的，且不應解釋為限制所描述的標的。
本文引用的所有參考文獻，包括專利申請案、專利揭露案、和Genbank登錄號均通過引用方式併入本文，如同每個單獨的參考文獻被具體且單獨地指出整體通過引用方式併入。
本文所述或參考的技術和程序為發明所屬技術領域中具有通常知識者使用習知方法很好地理解和常用，諸如，例如，在Sambrook等人，Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F. M. Ausubel, 等人，eds.,(2003))；METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds.(1995)), Harlow and Lane, eds.(1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed.(1987))系列；Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook(J. E. Cellis, ed., 1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R. I. Freshney), ed., 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures(A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell, eds., 1993-8)J. Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等人，eds., 1994)；Current Protocols in Immunology(J. E. Coligan等人，eds., 1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology(C. A. Janeway and P. Travers, 1997)；Antibodies(P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach(D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach(P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual(E. Harlow and D. Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999))；The Antibodies(M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)；及Cancer: Principles and Practice of Oncology(V. T. DeVita等人, eds., J.B. Lippincott Company, 1993)；及其更新版本中描述的廣泛使用的方法。抗體
「抗體」或「Ab」是能夠通過位於免疫球蛋白分子之可變區的至少一抗原辨識位點辨識和結合到特定標靶或抗原(Ag)(諸如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽等)的免疫球蛋白分子。如本文所用，術語「抗體」可涵蓋任何類型的抗體，包括但不限於單株抗體、多株抗體、保留特異性結合給定抗原(例如GDF15)的能力之完整抗體的抗原結合片段(或部分)。
術語「抗原」是指用於使免疫活性脊椎動物免疫以產生辨識Ag的抗體或篩選表現庫(例如，噬菌體、酵母或核醣體展示庫等)的分子實體。本文中，Ag被更廣泛地稱呼並且通常意於包括被Ab特異性辨識的標靶分子，因此包括在用於產生Ab的免疫過程中或者在用於選擇Ab的庫篩選中使用的分子的片段或模擬物。因此，對於結合到GDF15之本發明抗體，來自哺乳動物物種(例如人、猴、小鼠和大鼠GDF15)的全長GDF15，包括單體和集合體，諸如其二聚體、三聚體等，以及GDF15的截斷的和其他變體均被稱為抗原。
抗體的「抗原結合片段」是指全長抗體的片段，其保留特異性結合抗原的能力(較佳具有實質上相同的結合親和性)。抗原結合片段的例子包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，包含在鉸鏈區通過雙硫鍵連接的二個Fab片段的二價片段；(iii)由VH和CH1結構域所組成的Fd片段；(iv)由抗體單臂的VL和VH結構域所組成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward等人，1989 Nature 341:544-546)，其由VH結構域所組成；及(vi)單離之互補決定區(CDR)、二硫化物連接的Fv(dsFv)和抗-遺傳型(抗-Id)抗體和胞內抗體(intrabody)。再者，儘管Fv片段的二個結構域VL和VH由不同的基因編碼，但它們可以使用重組方法藉由合成連接子結合，使得它們能夠作為單個蛋白質鏈製造，其中VL和VH區配對以形成單價分子(已知為單鏈Fv(scFv))；見例如，Bird 等人，Science 242:423-426(1988)及Huston等人，1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883。亦涵蓋其他形式的單鏈抗體，例如雙抗體。雙抗體是二價、雙特異性抗體，其中VH和VL結構域在單個多肽鏈上表現，但使用的連接子太短而不允許在同一鏈上的二個結構域之間配對，從而迫使結構域與另一鏈的互補結構域配對並產生二個抗原結合位點(見例如，Holliger等人，1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448；Poljak等人，1994, Structure 2:1121-1123)。
抗體「可變結構域」是指抗體輕鏈(VL)的可變區或抗體重鏈(VH)的可變區，單獨或組合。如本領域已知的，重鏈和輕鏈的可變區各自由三個互補決定區(CDR)連接的四個框架區(FR)所組成，並有助於抗體的抗原結合位點的形成。
「互補決定區」(CDR)可根據下述辨識：Kabat、Chothia的定義、Kabat和Chothia二者的累積、AbM、接觸、North及/或構形定義或任何本領域廣知的CDR測定方法。見，例如，Kabat 等人，1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed.(hypervariable regions)；Chothia 等人，1989, Nature 342:877-883 (structural loop structures)。可以使用本領域廣知的方法確定構成CDR的特定抗體中胺基酸殘基的身份。CDR的AbM定義是Kabat和Chothia之間的折衷，並使用Oxford Molecular的AbM抗體模型化軟體(Accelrys®)。CDR的「接觸」定義係基於所觀察的抗原接觸，如MacCallum等人，1996, J. Mol. Biol., 262:732-745中所列。CDR的「構形」定義係基於對抗原結合產生焓貢獻的殘基(見，例如，例如，Makabe等人，2008, J. Biol. Chem., 283:1156-1166)。North使用不同的較佳CDR定義組辨識典範CDR構形(North等人，2011, J. Mol. Biol. 406: 228-256)。在另一種方法中，在本文中稱為CDR的「構形定義」，CDR的位置可以被辨識為對抗原結合產生焓貢獻的殘基(Makabe等人，2008, J Biol. Chem. 283:1156-1166)。又其他CDR邊界定義可能不嚴苛遵循上述方法之一，但仍然會與Kabat CDR的至少部分重疊，儘管根據特定殘基或殘基組或甚至整個CDR不會顯著影響抗原結合的預測或實驗結果而可能會縮短或延長它們。如本文所用，CDR可以指藉由本領域已知的任何方法定義的CDR，包括方法的組合。本文使用的方法可以利用根據任何這些方法定義的CDR。對於包含多於一個CDR的任何給定具體實施例，CDR(或抗體的其他殘基)可以根據Kabat、Chothia、North、延伸、AbM、接觸及/或構形定義中的任一種來定義。
「框架」(FR)殘基是除CDR殘基之外的抗體可變結構域殘基。VH或VL結構域框架包含4個框架子區域FR1、FR2、FR3及FR4，其中散佈有以下結構的CDR：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。
如本領域已知的，抗體的「恆定區」是指抗體輕鏈的恆定區或抗體重鏈的恆定區，單獨或組合。
本文可互換使用的術語「Fc區」、「Fc結構域」及「Fc」是指免疫球蛋白(Ig)分子的一部分，其與藉由木瓜蛋白酶消化Ig分子獲得的可結晶片段相關。如本文所用，該術語係關於排除第一恆定區免疫球蛋白結構域之抗體的恆定區，並且進一步關於該區的部分。因此，Fc是指IgA、IgD、及IgG的最後二個恆定區免疫球蛋白結構域，以及IgE和IgM的最後三個恆定區免疫球蛋白結構域，以及這些結構域的可撓性鉸鍊N-末端、或其部分。對於IgA和IgM，Fc可包括J鏈。
對於IgG，Fc包含免疫球蛋白結構域Cγ2和Cγ3(Cγ2和Cγ3)及Cγ1(Cγ1)和Cγ2(Cγ2)之間的鉸鏈。儘管Fc區的邊界可以變化，但人IgG重鏈Fc區通常被定義為包含其羧基末端的殘基C226或P230，其中編號是根據Edelman等人，1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85的EU索引，如Kabat等人，1991中所述。典型地，Fc結構域包含人類IgG1恆定結構域的約胺基酸殘基236至約447。例示性的人類野生型IgG1 Fc結構域胺基酸序列如SEQ ID NO：31所列。Fc多肽可以指單離這區，或在抗體或其抗原結合部分或Fc融合蛋白質的背景下指此區。
重鏈恆定結構域包含Fc區，並且進一步包含IgG重鏈的CH1結構域和鉸鏈以及CH2和CH3(以及視需要地，IgA和IgE的CH4)結構域。
在某些具體實施例中，本文所述之抗體、或其抗原結合片段包含Fc結構域。Fc結構域可衍生自IgA(例如，IgA1 或IgA2 )、IgD、IgE、IgM、或IgG(例如，IgG1 、IgG2 、IgG3 、或IgG4 )。
「Fc融合」蛋白質是一種蛋白質，其中一種或多種多肽與Fc多肽可操作地連接。Fc融合體將免疫球蛋白的Fc區與融合配偶體組合。
「表位」是指抗體特異性結合的抗原的區域或區，例如包含與抗體相互作用的殘基的區域或區。表位可以是線性或構形。
在其最詳細的程度上，Ag和Ab之間相互作用的表位可以藉由定義Ag-Ab相互作用中存在的原子接觸的空間坐標來定義，以及關於它們對結合熱力學的相對貢獻的資訊。在較不詳細的程度上，表位可以藉由定義Ag和Ab之間的原子接觸的空間坐標來特徵化。在更不詳細的程度上，表位可以藉由其包含的胺基酸殘基來特徵化，如特定標準所定義，例如，藉由Ab和Ag中原子(例如，重，即非氫原子)之間的距離。在進一步的較不詳細的程度，表位可以藉由功能，例如，藉由與其它Ab競爭結合來特徵化。表位也可以更一般地定義為包含胺基酸殘基，其中被另一個胺基酸取代將改變Ab和Ag之間相互作用的特徵(例如使用丙胺酸掃描)。
根據表位的描述和定義之事實，取決於所使用的表位作圖方法，在不同的細節程度上獲得，可在不同的細節程度上類似地進行相同Ag上不同Ab的表位的比較。
在胺基酸程度描述的表位，例如，由X射線結構測定的表位，如果它們包含相同的胺基酸殘基組，則稱它們是相同的。如果至少一個胺基酸表位共有，則稱表位重疊。如果表位沒有共有胺基酸殘基，則稱表位是分開的(獨特的)。
如果相應抗體的結合是相互排斥的，則稱競爭結合所特徵化的表位是重疊的，即一抗體的結合排除了另一抗體的同時或連續結合。如果抗原能夠同時適應二種相應抗體的結合，則稱表位是分開的(獨特的)。
「優先結合」或「特異性結合」(在本文中可互換使用)到表位的抗體是本領域熟知的術語，且測定此種特異性或優先結合的方法也是本領域熟知的方法。如果分子與特定細胞或物質比替代細胞或物質更頻繁、更快速地與更長的持續時間及/或更強親和性地反應或結合，則稱其呈現「特異性結合」或「優先結合」。如果抗體以比其與其他物質結合更高親和性、結合性、更容易及/或更長的持續時間結合，則抗體「特異性結合」或「優先結合」標靶。例如，特異性或優先結合GDF15、PD-1或PD-L1表位的抗體是比與其他GDF15、PD-1或PD-L1表位或非-GDF15、PD-1、PD-L1表位結合更高親和性、結合性、更容易及/或更長的持續時間與此表位結合的抗體。一般但不是必須地，提及結合意味著優先結合。「特異性結合」或「優先結合」包括化合物，例如蛋白質、核酸、抗體等，其辨識並結合樣本中的特定分子，但不實質上辨識或結合樣本中其他分子。例如，辨識並結合樣本中同源配體或結合配偶體(例如，結合腫瘤抗原的抗-人類腫瘤抗原抗體，結合PD-L1或PD-L2等的PD-1分子等)，但不實質上辨識或結合樣本中的其它分子的抗體或肽受體，特異性地結合同源配體或結合配偶體。因此，在指定的分析條件下，指定的結合部分(例如，抗體或其抗原結合部分或受體或其配體結合部分)優先結合特定的標靶分子，並且不以顯著量與測試樣本中存在的其他成分結合。
可以使用多種分析形式來選擇特異性結合有興趣分子的抗體或肽。例如，固相ELISA免疫分析、免疫沉澱、BIAcore™(GE Healthcare, Piscataway, NJ)、螢光活化細胞分選(FACS)、Octet™(FortéBio, Inc., Menlo Park, CA)和西方墨點轉漬法分析為在可用於辨識特異性與抗原或受體、或其配體結合部分(其與同源配體或結合配偶體特異性結合)交互作用的抗體的許多分析中。典型地，特異性或選擇性反應將是背景訊號或雜訊的至少二倍，更典型地是背景的10倍以上，甚至更具體地，當平衡解離常數(KD )為≤1 µM，較佳地≤100 nM，更佳地≤10 nM，甚更佳地≤100 pM，又更佳地≤10 pM，且甚更佳地≤1 pM時，抗體被稱為「特異性結合」抗原。
如本文關於抗體所用之術語「競爭」是指第一抗體或其抗原結合部分與抗原的結合減少隨後第二抗體或其抗原結合部分對同一抗原的結合。一般而言，第一抗體的結合產生空間位阻，構形變化或與共有表位(或其部分)的結合，使得第二抗體與相同抗原的結合減少。可使用標準競爭分析來測定二種抗體是否彼此競爭。用於抗體競爭的一種合適的分析涉及使用Biacore技術，其可以使用表面電漿子共振(SPR)技術測量相互作用的程度，典型使用生物感測器系統(諸如BIACORE系統)。例如，SPR可用於活體外競爭性結合抑制分析以測定一種抗體抑制第二抗體結合的能力。用於測量抗體競爭的另一分析使用基於ELISA的方法。
此外，在國際專利申請案第WO2003/48731號描述基於其競爭「抗合(binning)」抗體的高通量方法。如果一種抗體(或片段)減少另一種抗體(或片段)與GDF15的結合，則存在競爭。例如，可以使用順序結合競爭分析，依序添加不同抗體。可以添加第一抗體以達到接近飽和的結合。然後，添加第二抗體。如果未檢測到第二抗體與GDF15的結合，或者與不存在第一抗體(其值可設為100%)的平行分析相比，顯著減少(例如，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、或至少約90%減少)，則二抗體被認為是相互競爭。
變體抗體可包含上述討論的特定序列和片段的1、2、3、4、5、至多10、至多20、至多30或更多胺基酸取代及/或缺失及/或插入。「缺失」變體可包括個別胺基酸缺失、小群胺基酸，諸如2、3、4或5個胺基酸缺失、或較大的胺基酸區缺失，諸如特定胺基酸結構域或其他特徵缺失。「插入」變體可以包括個別胺基酸插入、小群胺基酸，諸如2、3、4或5個胺基酸插入、或較大的胺基酸區插入，諸如特定胺基酸結構域或其他特徵插入。「取代」變體較佳地涉及用相同數量的胺基酸替換一個或多個胺基酸並進行保守胺基酸取代。例如，胺基酸可以被具有相似性質的替代胺基酸取代，例如，另一種鹼性胺基酸、另一種酸性胺基酸、另一種中性胺基酸、另一種帶電荷的胺基酸、另一種親水性胺基酸、另一種疏水性胺基酸、另一種極性胺基酸、另一種芳香族胺基酸或另一種脂肪族胺基酸。可用於選擇合適取代基的20種主要胺基酸的一些性質如下。
取代變體在抗體分子中具有至少一個胺基酸殘基經移除，並在其位置插入不同的殘基。對於置換誘變最感興趣的位點包括高度變異區，但也考慮框架改變。表1中「保守取代」的標題下顯示保守取代。如果這種取代導致生物活性變化，則可導入更多實質性變化，稱為如下所示「例示性取代」，或如下文關於胺基酸類別進一步描述，並篩選產品。
Figure 02_image001
藉由選擇在維持下述的效果顯著不同的取代來實現對抗體的生物性質的實質性修飾：(a)取代區域中多肽骨架的結構(例如，為β-褶板或螺旋構形)，(b)分子在標靶位點的電荷或疏水性，或(c)側鏈的主體。天然存在的殘基根據共同的側鏈特性分組： i. 非極性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； ii. 極性而無電荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； iii. 酸性(帶負電)：Asp、Glu； iv. 鹼性(帶正電)：Lys、Arg； v. 影響鏈定向的殘留物：Gly、Pro；及 vi. 芳香族：Trp、Tyr、Phe、His。
藉由將這些類別中的一員交換為另一個類別來進行非保守取代。
例如，可以進行的一種取代是將抗體中的一或多個半胱胺酸(其可以是化學反應性)改變為另一個殘基，諸如，而非限制，丙胺酸或絲胺酸。例如，可有非典型的半胱胺酸取代。可以在可變結構域的CDR或框架區中或在抗體的恆定區中進行取代。在一些具體實施例中，半胱胺酸是典型的。任何不參與維持抗體適當構形的半胱胺酸殘基也可以被取代，一般用絲胺酸取代，以改善分子的氧化穩定性並防止異常交聯。相反，可以將半胱胺酸鍵添加到抗體中以改善其穩定性，特別是當抗體是抗體片段如Fv片段時。
在稱為「種系化」的過程中，VH和VL序列中的某些胺基酸可以突變以匹配在種系VH和VL序列中天然發現的胺基酸。特別地，可以突變VH和VL序列中框架區的胺基酸序列以匹配種系序列，以減少投予抗體時免疫原性的風險。如本文所用，術語「種系」是指抗體基因和基因區段的核苷酸序列和胺基酸序列，因為它們經由生殖細胞從父母傳遞給後代。此種系序列與成熟B細胞中編碼抗體的核苷酸序列不同，後者在B細胞成熟過程中藉由重組和超突變事件而被改變。「利用」特定種系的抗體具有與其指定的種系核苷酸序列或胺基酸序列最緊密對齊的核苷酸或胺基酸序列。與種系序列相比，此類抗體經常發生突變。人類VH和VL基因的種系DNA序列是本領域已知(見 例如，"Vbase" 人類種系序列資料庫；亦見Kabat, E. A.,等人，1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242；Tomlinson等人，J. Mol. Biol. 227:776-798, 1992；以及Cox等人，Eur. J. Immunol. 24:827-836, 1994)。結合親和性
抗體的結合親和性可以表示為KD 值，其是指特定抗原-抗體相互作用的解離速率。KD 是解離速率(也稱為「解離速率(off-rate)(koff )」)與締合速率或「締合速率(on-rate)(kon )」的比率。因此，KD 等於koff /kon 並且表示為莫耳濃度(M)，並且KD 越小，結合的親和性越強。可以使用本領域中充分建立的方法測定抗體的KD 值。用於測量Kd的一種例示性方法是表面電漿子共振(SPR)，典型使用生物感測器系統，諸如BIACORE®系統。BIAcore動力學分析包括在其表面上分析來自具有固定化分子(例如包含表位結合結構域的分子)的晶片的抗原的結合和解離。測定抗體Kd的另一種方法是使用生物層干涉法，典型使用OCTET技術(Octet QKe系統，ForteBio)。或者，或此外，也可使用購自Sapidyne Instruments(Boise, Id.)的KinExA (Kinetic Exclusion Assay)分析。對 GDF15 之抗體
本發明提供抗-GDF15抗體。抗-GDF15抗體，較佳地，高親和性抗體，可有效於血漿及多個組織區室，其中GDF15認為作用於其標靶細胞。本發明抗體具有潛力修飾驅動與相關癌症之惡病質、心臟衰竭、或COPD等之發展與進展的路徑。
中和或「阻斷」抗體是指與GDF15結合干擾、限制或抑制GDF15或GDF15片段與GDF15受體諸如GFRAL或GDF15受體組分之間的相互作用的抗體；及/或(ii)導致GDF15的至少一生物功能的抑制。用於測定本發明抗體的中和作用的分析在本文別處描述，並且是本領域廣知。
如本文所用，術語「GDF15」包括人類GDF15的變體、同功型、同源物，異種同源物與同種同源物。在本發明的一些態樣中，抗體與來自除人類以外的物種之GDF15交叉反應，諸如小鼠、大鼠、或非人類靈長類動物的GDF15，以及不同形式的GDF15。在其他態樣中，抗體可以對人類GDF15完全特異，並且可以不呈現出物種或其他類型的交叉反應性。如本文所用，術語GDF15是指天然存在的人類GDF15，除非上下文另有要求。因此，「GDF15抗體」、「抗-GDF15抗體」或其他類似命名是指與GDF15型配體或同功型或其片段或衍生物特異性締合、結合或反應的任何抗體(如本文所定義)。由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q99988.1表示的全長，成熟形式的人類GDF15在本文中提供為SEQ ID NO：1。
不希望受任何特定理論限制，與GDF15相互作用時，GFRAL與原致癌基因酪胺酸-蛋白質激酶受體Ret(RET)相互作用並通過MAPK-和AKT-訊號傳遞路徑活化誘導細胞訊號傳遞。然後，RET訊號傳遞誘導或媒介例如ERK、S6等的磷酸化。如本文所用，術語「GFRAL」包括人類GFRAL的變體、同功型、同源物、異種同源物及同種同源物。人類GFRAL的全長，成熟形式由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q6UXV0表示。如本文所用，術語「RET」包括人類RET的變體、同功型、同源物、異種同源物與同種同源物。人類RET的全長，成熟形式由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號P07949表示。
GDF15的「生物功能」或「生物活性」意指包括調節組織中的炎症和細胞凋亡路徑以及細胞損傷後細胞的壓力反應程序。GDF15的「生物功能」或「生物活性」包括媒介增加：惡病質、減少食物攝入、減少食慾、降低體重、重量損失、降低脂肪量、減少瘦肉量、GFRAL之結合、RET的活化、ERK之磷酸化和S6之磷酸化、本領域已知的或以後辨識的其他。GDF15的生物功能或生物活性可以，但不必要，由GDF15與其同源受體GFRAL之間的相互作用媒介。
本發明包括抗體、或其抗原結合部分，其能夠調節GDF15的生物活性。即，本發明包括單離之抗體、或其抗原結合部分，其特異性結合GDF15並調節至少一種可檢測的GDF15活性，使得抗體：(a)增加食物攝入；(b)增加食慾；(c)增加體重；(d)減少重量損失；(e)增加脂肪量；(f)增加瘦肉量；(g)減少脂肪量損失，(h)減少瘦肌肉量損失，(i)降低GDF15與GFRAL的結合；(j)減少RET媒介的下游訊號傳遞；(k)降低或抑制ERK之磷酸化；(l)減少或抑制S6之磷酸化；(m)減少MAPK訊號傳遞路徑的RET活化；(n)減少AKT-訊號傳遞路徑的RET活化；及/或(o)減少PLC-1訊號傳遞路徑的活化。
GDF15和GDF15依賴性訊號傳遞活性的生物活性可以使用共表現GFRAL和RET的HEK293或CHO細胞等許多本領域公認的分析中活體外估算。以GDF15刺激之後MAPK路徑的活化可以使用，除其他外，基於螢光素酶報告子系統(例如，PathDetect, Agilent Technologies)測量。基於同源時間解析螢光技術(Cisbio Inc.)的磷-蛋白質分析也可以用作正交方法，以測量回應GDF15結合其受體之MAPK和AKT路徑的活化(例如，磷-ERK1/2)。還可以藉由在不存在或存在遞增濃度的抗-GDF15抗體的情況下將細胞與固定濃度的GDF15一起培養來估算中和抗體預防GDF15-依賴性訊號傳遞的能力。
在本發明的一個態樣中，本發明的GDF15抗體涵蓋與具有下述的抗體、或其抗原結合片段競爭結合到人類GDF15，及/或結合相同表位的抗體：如SEQ ID NO：166所列之重鏈可變區之胺基酸序列及如SEQ ID NO：163所列之輕鏈可變區之胺基酸序列。
在本發明的一個態樣中，本發明的GDF15抗體涵蓋抑制或減少GDF15與GFRAL結合的抗體。
在一態樣中，本發明涵蓋與具有下述之抗體、或其抗原結合片段在抑制GDF15與GFRAL結合上競爭的抗體：如SEQ ID NO：166所列之重鏈可變區之胺基酸序列及如SEQ ID NO：163所列之輕鏈可變區之胺基酸序列。
在本發明的一些態樣中，抗體或其抗原結合片段，包括IgG1重鏈恆定區，例如，如SEQ ID NO：164所列之GDF15重鏈。在其他態樣中，抗體或其抗原結合片段包括κ輕鏈恆定區，例如如SEQ ID NO：162所列之GDF15輕鏈。
表2提供本發明的抗-GDF15抗體的胺基酸(蛋白質)序列和相關核酸(DNA)序列。由Kabat和Chothia定義的抗-GDF15 VH和抗-GDF15 VL的CDR作為單獨的序列列出。
在一些態樣中，CDR包含SEQ ID NO：171、172、173、174、175、及176。這些CDR序列基於下文實施例1至10中呈現的有利序列分析和生物物理概況數據併入一致性。這些CDR序列基於它們的序列、結合、熱穩定性、低pH下的穩定性和黏度概況而具有優勢。
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在某些具體實施例中，取代是人類種系取代，其中(供體)CDR殘基被相應的人類種系(接受體)殘基取代，以增加人類胺基酸含量並潛在地減少抗體的免疫原性，如下列所述，例如，US專利申請揭露案第2017/0073395號及Townsend等人，2015, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 112(50):15354-15359)。例如，如果人類種系IGHV1-69*01框架用於與例示性抗體，GDF15_001 VH(SEQ ID NO：166)進行比較，然後將GDF15_001抗體的HCDR-1(SEQ ID NO：32)和人類種系 IGHV1-69*01對準如下：
Figure 108129121-A0304-0001
對於胺基酸位置編號26、28、29、30、31、32與34(斜體)，人類種系殘基(接受體)和對應的GDF15_001殘基(供體)是相同的，並且種系替換是不可能的。對於位置27、33與35(粗體和下劃線)，人類種系(接受體)殘基和對應的GDF15_001(供體)殘基是不同的。在這些位置的GDF15_001殘基可以經對應的人類種系IGHV1-69*01殘基替換，以進一步增加人的殘基含量。對於每個重鏈和輕鏈CDR可以遵循相同的程序以增加人類胺基酸殘基的含量，同時保留結合特徵，例如表位結合、親和性等，同時最小化小鼠殘基含量，從而降低任何潛在免疫原性，例如對人體內的抗體之人類抗小鼠抗體(HAMA)免疫反應。
用於在抗體CDR中導入人類種系殘基的方法和庫詳細描述於US專利申請揭露案第2017/0073395號、及Townsend等人，2015, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 112(50):15354-15359，二者整體以引用方式併入本文。
抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段可包含VH框架，其包含人類種系VH框架序列。在一些態樣中，可使用來自下述種系之VH框架：IGHV1-2*02、IGHV1-3*01、IGHV1-46*01、IGHV1-69*01、IGHV1-69*02、IGHV1-8*01、IGHV3-13*01、IGHV3-23*01、IGHV3-23*04、IGHV3-30*01、IGHV3-30*18、IGHV5-10-1*01、IGHV5-10-1*04、或IGHV5-51*01(種系名稱依據IMGT種系定義)。在一些態樣中，可使用來自下述種系之VL框架：IGKV1-12*01、IGKV1-13*02、IGKV1-33*01、IGKV1-39*01、IGKV1-5*01、IGKV3-11*01、IGKV3-15*01、IGKV3-20*01、IGKV3D-20*02、及IGKV4-1*01(種系名稱依據IMGT 種系定義。人類種系框架序列可從各種揭露資料庫獲得，諸如 V-base、IMGT、NCBI、或Abysis。
抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段可包含VL框架，其包含人類種系VL框架序列。VL框架可包含一或多種胺基酸取代、加入、或缺失，同時仍然保持與其衍生的種系的功能和結構相似性。在一些態樣中，VL框架為與其衍生自的人類種系序列至少53%、58%、60%、63%、71%、72%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。在一些態樣中，抗體、或其抗原結合片段包含VL框架，其相對於人類種系VL框架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、加入或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個胺基酸取代、加入或缺失僅在框架區。在一些態樣中，百分比(%)同一性是基於與VL的相似性，排除本文定義為CDR的那些部分。
抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段可包含VH框架，其包含人類種系VH框架序列。VH框架可包含 一或多種胺基酸取代、加入、或缺失，同時仍然保持與其衍生的種系的功能和結構相似性。在一些態樣中，VH框架為與其衍生自的人類種系序列至少72%、74%、75%、77%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性。在一些態樣中，抗體、或其抗原結合片段包含VH框架，其相對於人類種系VH框架序列，包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、加入或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個胺基酸取代、加入或缺失僅在框架區。在一些態樣中，%同一性是基於與VH的相似性，排除本文定義為CDR的那些部分。
抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段可包含VH，其包含與SEQ ID NO：6之胺基酸序列至少90%同一性的胺基酸序列。VH可包含與SEQ ID NO：21、34、44、53、60、68、73、80、86、93、99、106、112、120、127、136、142、148、155、161及166之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性之胺基酸序列。VH可包含SEQ ID NO：21、34、44、53、60、68、73、80、86、93、99、106、112、120、127、136、142、148、155、161及166之胺基酸序列。
抗體或抗原結合片段可包含VL，其包含與SEQ ID NO：1之胺基酸序列至少90%同一性的胺基酸序列。VL可包含與胺基酸序列SEQ ID NO：11、30、39、49、56、64、71、77、83、90、96、103、109、115、123、131、139、144、151、158及163至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。VL可包含SEQ ID NO：11、30、39、49、56、64、71、77、83、90、96、103、109、115、123、131、139、144、151、158及163之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體、或其抗原結合部分包含LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3，如列於SEQ ID NO：11、30、39、49、56、64、71、77、83、90、96、103、109、115、123、131、139、144、151、158、及163之至少一者之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體、或其抗原結合部分、進一步包含HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3，如列於SEQ ID NO：21、34、44、53、60、68、73、80、86、93、99、106、112、120、127、136、142、148、155、161、及166之至少一者之胺基酸序列。
在一些態樣中，抗體、或其抗原結合部分包含如列於SEQ ID NO：163之胺基酸序列的LCDR-1、LCDR-2、LCDR-3、及如列於SEQ ID NO：166之胺基酸序列的HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3。
抗體、或其抗原結合部分可包含VL，其包含與SEQ ID NO：163之胺基酸序列至少90%同一性的胺基酸序列。VL可包含與SEQ ID NO：163之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。VL可包含SEQ ID NO：163之胺基酸序列。
抗體、或其抗原結合部分可包含VH，其包含與SEQ ID NO：166之胺基酸序列至少90%同一性的胺基酸序列。VH可包含與SEQ ID NO：166之胺基酸序列至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。VH可包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列。
抗體或抗原結合片段可包含HC，其包含與SEQ ID NO：164之胺基酸序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。HC可包含SEQ ID NO：164之胺基酸序列。
抗體或抗原結合片段可包含LC，其包含與SEQ ID NO：162至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%同一性的胺基酸序列。LC可包含SEQ ID NO：162之胺基酸序列。PD-1 軸結合拮抗劑
用於本文之術語「PD-1軸結合拮抗劑」係指抑制PD-1軸結合配偶體與一或多個其結合配偶體的的相互作用，以去除因為PD-1訊號傳遞軸上的訊號傳遞(亦稱為「PD-1/PD-L路徑」或「PD-1/PD-L訊號傳遞路徑」)造成的T細胞功能不全，其結果是恢復或增強T細胞功能。如本文所用，PD-1軸結合拮抗劑包括PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑和PD-L2結合拮抗劑。在一些具體實施例中，PD-1軸結合拮抗劑是抗PD-1抗體。在一些具體實施例中，PD-1軸結合拮抗劑是抗PD-L1抗體。在一些具體實施例中，PD-1軸結合拮抗劑是抗-PD-L2抗體。
在一些態樣中，PD-1軸拮抗劑、PD-1軸結合拮抗劑、PD-1結合拮抗劑、和抗PD-L1抗體不包括阿維單抗(avelumab)。即，視需要地，從抑制PD-1軸訊號傳遞軸之劑中排除阿維單抗(avelumab)。
用於本發明的治療方法、藥劑和用途的例示性PD-1軸結合拮抗劑包括但不限於納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、具有或不具有如國際專利揭露案第WO2010/027827及WO2011/066342號中所述的訊號序列的AMP-224、如國際專利揭露案第WO2016/092419號中所揭露的mAb7與mAb15、及如第WO2013/079174號中所述的阿維單抗(avelumab)。WO2010/027827、WO2011/ 066342、WO2016/092419及WO2013/079174之揭露整體以引用方式併入本文。表3列出了一些例示性PD-1軸結合拮抗劑的各種序列。
Figure 02_image039
Figure 02_image041
Figure 02_image043
如本文所用的術語「PD-1結合拮抗劑」是指特異性結合PD-1並減少、阻斷、抑制、消除或干擾因PD-1與其結合配偶體之一或多者(諸如PD-L1、PD-L2)相互作用導致的訊號傳導的分子。在一些具體實施例中，PD-1結合拮抗劑是抑制PD-1與其結合配偶體結合的分子。在一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑特異性結合PD-1，並從而抑制PD-1與PD-L1及/或PD-L2的結合。例如，PD-1結合拮抗劑包括抗PD-1抗體、其抗原結合片段，免疫黏附素、融合蛋白質、寡肽和減少、阻斷、抑制、消除或干擾由PD-1與PD-L1及/或PD-L2相互作用導致的訊號傳導的其他分子。在一個具體實施例中，PD-1結合拮抗劑特異性結合PD-1，並從而減少負共刺激訊號(由通過PD-1藉由訊號傳遞媒介的T淋巴細胞上表現的細胞表面蛋白質所媒介或通過細胞表面蛋白質)，從而使功能不全T細胞比較少非功能不全。在一些具體實施例中，PD-1結合拮抗劑為抗-PD-1抗體包括，但不限於納武單抗(nivolumab)、派姆單抗 (pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-554、測米匹單抗(cemiplimab)、及PF-06801591。
PF-06801951亦稱為沙珊單抗(sasanlimab) (CAS註冊編號2206792-50-7)，RN888，並且在國際專利揭露案第WO 2016/092419號揭露，其彷彿完整地闡述以引用方式併入本文。沙珊單抗(sasanlimab)為人源化、絞鏈區穩定的IgG4-卡帕(κ)單株抗體。沙珊單抗(sasanlimab)(PF-06801951；RN888)之胺基酸序列列於下表4中。
在一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑是納武單抗(nivolumab)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑是派姆單抗(pembrolizumab)。在另一特定態樣中，PD-1結合拮抗劑是匹迪立珠單抗(pidilizumab)。
如本文所用的術語「PD-L1結合拮抗劑」是指特異性結合PD-L1並減少、阻斷、抑制、消除或干擾因PD-L1與其結合配偶體之一或多者，諸如PD-1、B7-1相互作用導致的訊號傳導的分子。在一些具體實施例中，PD-L1結合拮抗劑是抑制PD-L1與其結合配偶體結合的分子。在一些態樣中，PD-L1結合拮抗劑不包括阿維單抗(avelumab)。在一特定態樣中，PD-L1結合拮抗劑抑制PD-L1與PD-1及/或B7-1的結合。在一些具體實施例中，PD-L1結合拮抗劑包括抗PD-L1抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白質、寡肽和減少、阻斷、抑制、消除或干擾因PD-L1與其結合配偶體之一或多者，例如PD-1、B7-1相互作用導致的訊號傳導的其他分子。在一具體實施例中，PD-L1結合拮抗劑減少負共刺激訊號(由通過PD-L1訊號傳遞媒介的T淋巴細胞上表現的細胞表面蛋白質所媒介或通過細胞表面蛋白質)，從而使功能不全T細胞較少非功能不全。在一些具體實施例中，PD-L1結合拮抗劑是抗PD-L1抗體。在一特定態樣中，抗-PD-L1抗體是阿維單抗(avelumab)(揭露為A09-246-2，在國際專利揭露案第WO2013/079174號)。在一些態樣中，不包括阿維單抗(avelumab)作為PD-1軸拮抗劑。
在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體是阿特珠單抗(atezolizumab)。在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體是度伐魯單抗(durvalumab)。在另一特定態樣中，抗-PD-L1抗體是BMS-936559(MDX-1105)。
如本文所用，抗-人類PD-L1抗體是指特異性結合成熟人類PD-L1或其部分的抗體，其中，成熟人類PD-L1分子由以下序列的胺基酸19至290所組成：
Figure 02_image045
Figure 02_image047
Figure 02_image049
如本文所用的術語「PD-L2結合拮抗劑」是指特異性結合PD-L2並減少、阻斷、抑制、消除或干擾因PD-L2與其結合配偶體之一或多者，諸如PD-1相互作用導致的訊號傳導的分子。在一些具體實施例中，PD-L2結合拮抗劑是抑制PD-L2與其結合配偶體結合的分子。在一特定態樣中，PD-L2結合拮抗劑抑制PD-L2與PD-1的結合。在一些具體實施例中，PD-L2拮抗劑包括抗-PD-L2抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白質、寡肽和特異性結合PD-L2並減少、阻斷、抑制、消除或干擾因PD-L2與其結合配偶體之一或多者，諸如PD-1相互作用導致的訊號傳導的其他分子。在一個具體實施例中，PD-L2結合拮抗劑減少負共刺激訊號(由通過PD-L2經由訊號傳遞媒介的T淋巴細胞上表現的細胞表面蛋白質所媒介或通過細胞表面蛋白質)，從而使功能不全T細胞較少非功能不全。在一些具體實施例中，PD-L2結合拮抗劑是PD-L2免疫黏附素。核酸
本發明還提供編碼本發明抗體任一的多核苷酸，包括本文所述的抗體部分和修飾的抗體。本發明亦提供製造本文所述的多核苷酸任一之方法。可以藉由本領域已知的程序製造和表現多核苷酸。
可以使用標準定序技術測定所欲之抗體、或其抗原結合片段的序列、以及編碼這種抗體或其抗原結合片段的核酸。可以將編碼所欲之抗體、或其抗原結合片段的核酸序列插入各種載體(例如選殖和表現載體)中用於重組生產和特徵化。編碼重鏈、或重鏈的抗原結合片段的核酸，和編碼輕鏈、或輕鏈的抗原結合片段的核酸可以選殖到相同載體或不同載體。
在一態樣中，本發明提供編碼下述GDF15抗體及其抗原結合部分任一之胺基酸序列的多核苷酸：GDF15_001、GDF15_002、GDF15_003、GDF15_004、GDF15_005、GDF15_006、GDF15_007、GDF15_008、GDF15_009、GDF15_010、GDF15_011、GDF15_012、GDF15_013、GDF15_014、GDF15_015、GDF15_017、GDF15_018、GDF15_020、GDF15_021、GDF15_022、GDF15_100、GDF15_200、GDF15_297、GDF15_301、GDF15-470。
本發明提供編碼包含選自下列所組成之群組的胺基酸序列之一或多種蛋白質的多核苷酸：(i)SEQ ID NO：21、34、44、53、60、68、73、80、86、93、99、106、112、120、127、136、142、148、155、161、166、11、30、39、49、56、64、71、77、83、90、96、103、109、115、123、131、139、144、151、158、163、166、183、187、189、191、193、及195。
本發明提供包含如SEQ ID NO：167、168、169、及170之一或多者所列之核酸序列的多核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO：167所列之核酸序列的多核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO：168所列之核酸序列的多核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO：169所列之核酸序列的多核苷酸。本發明提供包含如SEQ ID NO：170所列之核酸序列的多核苷酸。由於遺傳密碼的退化性，本發明進一步提供核酸序列，其中，在SEQ ID NO：170的位置編號1344之核苷酸可為A、C、G、T，及/或在位置編號1347的核苷酸可為A、C、G、T。提供在SEQ ID NO：170的最後二個密碼子仍分別編碼脯胺酸及甘胺酸。
本發明提供包含寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125038的質體之插入編碼GDF15_001的VH結構域之核酸序列的多核苷酸。本發明亦提供包含寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125039的質體之插入編碼GDF15_001的VL結構域之核酸序列的多核苷酸。此外，本發明提供包含由寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125038的質體之DNA插入(編碼GDF15_001的VH結構域)所編碼的胺基酸序列的多肽。本發明進一步提供包含由寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125039的質體之插入(編碼GDF15_001的VL結構域)所編碼的胺基酸序列之多肽。
本發明亦提供包含寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125038的質體之插入之核酸序列的多核苷酸，編碼GDF15_001的VH結構域及寄存在ATCC且具有登錄號PTA-125039的質體之插入之核酸序列，編碼GDF15_001的VL結構域。
在另一態樣中，本發明提供編碼抗-GDF15抗體之多核苷酸及其變體，其中，此變體多核苷酸與本文揭露或所指之核酸序列任一共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%核酸序列同一性。這些量並不意味著限制，並且所主張的百分比之間的增量被具體設想為本揭露的一部分。
本發明提供由本文所述的核酸分子編碼的多肽。
在一具體實施例中，VH和VL結構域、或其抗原結合部分、或全長HC或LC由分開的多核苷酸編碼。或者，VH和VL二者、或其抗原結合部分、或HC和LC由單一多核苷酸編碼。
與任何此序列互補的多核苷酸也涵蓋在本揭露中。多核苷酸可以是單股(編碼或反義)或雙股，並且可以是DNA(基因組、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子包括含有內含子並且以一對一的方式對應於DNA分子之HnRNA分子、和不含有內含子之mRNA分子。另外的編碼或非編碼序列可以但不必存在於本揭露的多核苷酸內，並且多核苷酸可以但不必與其他分子及/或支持材料連接。
多核苷酸可包含編碼抗體或其部分的核酸序列，或可包含此類序列的變體。多核苷酸變體包含一或多種取代、加入、缺失及/或插入，使得編碼的多肽的結合特徵相對於天然抗體分子不會減少。通常可以如本文所述估算對變體核酸序列編碼的多肽的結合特徵的影響。在一些具體實施例中，多核苷酸變體呈現與編碼原始(親本)抗體(其不包含任何取代、加入、缺失及/或插入)、或其部分之多核苷酸至少約70%同一性，在一些具體實施例中，至少約80%同一性，在一些具體實施例中，至少約90%同一性，並且在一些具體實施例中，至少約95%同一性。這些百分比同一性並不意味著限制，並且所主張的百分比之間的增量被具體設想為本揭露的一部分。
如果二個序列中的核苷酸或胺基酸序列在如下所述進行最大對應性對準時是相同的，則稱二個多核苷酸或多肽序列是「同一性」。典型藉由在比較窗口比較序列來辨識和比較序列相似性的局部區域來進行二個序列之間的比較。如本文所用的「比較窗口」是指至少約20，通常為30至約75，或40至約50，個連續位置的區段，其中二個序列最佳對準之後，序列可與相同數目的連續位置之參考序列比較。
用於比較的序列的最佳對準可使用MegAlign®程式於生物資訊軟體的Lasergene®套裝(DNASTAR®, Inc., Madison, WI)，使用系統內定參數進行。此程式體現以下參考文獻中描述的幾種對準方案：Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins-Matrices for detecting distant relationships。在Dayhoff, M.O.(ed.)Atlas of Protein Sequence and Structure, National Biomedical Research Foundation, Washington DC Vol. 5, Suppl. 3, pp. 345-358；Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, Academic Press, Inc., San Diego, CA；Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153；Myers, E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17；Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105；Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425；Sneath, P.H.A. and Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical Taxonomy, Freeman Press, San Francisco, CA；Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730。
在一些具體實施例中，「序列同一性之百分比」藉由在至少20個位置的比較窗口比較二個最佳對準序列來測定，其中與參考序列(不包括加入或缺失)比較對於二個序列的最佳對準，比較窗口中的多核苷酸或多肽序列的部分可以包含20%或更少，通常為5%至15%，或10%至12%的加入或缺失(即，間隙)。藉由確定其中二個序列中相同核酸鹼基或胺基酸殘基出現的位置數目來產生匹配位置的數目，將匹配位置的數量除以參考序列中的位置總數(即，窗口大小)並將結果乘以100以產生序列同一性的百分比。
多核苷酸變體也可以，或者與基因或其部分或互補實質上同源。此多核苷酸變體能夠在中等嚴苛條件下與編碼抗體(或互補序列)的天然存在的DNA序列雜交。
合適的「中等嚴苛條件」包括在5X SSC、0.5% SDS、1.0 mM EDTA(pH 8.0)的溶液中預洗滌；在約50℃至65℃，5X SSC(0.75M NaCl，0.075 M檸檬酸鈉)雜交過夜；接著在65℃下用含有0.1% SDS的2X、0.5X和0.2X SSC各洗滌20分鐘。
如本文所用，「高度嚴苛條件」或「高嚴苛性條件」是下述者：(1)使用低離子強度和高溫洗滌，例如，在50℃之0.015 M氯化鈉/0.0015 M檸檬酸鈉/0.1%十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交過程中使用變性劑，例如甲醯胺，例如，50%(v/v)甲醯胺與0.1%牛血清白蛋白/0.1% Ficoll /0.1%聚乙烯基吡咯啶酮/50mM磷酸鈉緩衝液，在pH 6.5，與750 mM氯化鈉，75 mM檸檬酸鈉，在42℃下；或(3)使用50%甲醯胺、5X SSC、50 mM磷酸鈉(pH 6.8)、0.1%焦磷酸鈉、5X Denhardt氏溶液、聲波處理之鮭魚精子DNA(50 μg/mL)、0.1% SDS和10%硫酸聚葡糖，在42℃下，於42℃下在0.2X SSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)和於55℃下在50%甲醯胺中洗滌，接著於55℃下在包含EDTA的0.1X SSC所組成的高嚴苛性洗滌。發明所屬技術領域中具有通常知識者將認知如何根據需要調節溫度、離子強度等以適應諸如探針長度等因素。
發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，由於遺傳密碼的退化性，存在許多編碼如本文所述的多肽的核苷酸序列。這些多核苷酸中的一些與任何天然基因的核苷酸序列具有最小的同源性。儘管如此，本揭露特別考慮由於密碼子使用的差異而變化的多核苷酸。此外，包含本文提供的多核苷酸序列的基因的對偶基因在本揭露的範圍內。對偶基因是內源基因，其由於一或多個突變而改變，例如核苷酸的缺失、加入及/或取代。所得的mRNA和蛋白質可以但不必具有改變的結構或功能。可以使用標準技術(例如雜交、擴增及/或數據庫序列比較)辨識對偶基因。
可以使用化學合成、重組方法或PCR獲得本揭露的多核苷酸。化學多核苷酸合成的方法是本領域熟知，而不需要在本文詳細描述。發明所屬技術領域中具有通常知識者可以使用本文提供的序列和商業DNA合成儀來產生所欲DNA序列。
為了使用重組方法製備多核苷酸，可以將包含所欲序列的多核苷酸插入合適的載體中，然後可以將載體導入合適的宿主細胞中用於複製和擴增，如本文進一步討論的。可以藉由本領域已知的任何方法將多核苷酸插入宿主細胞中。藉由直接攝取、胞飲作用、轉染、F-交配或電穿孔導入外源性多核苷酸來轉形細胞。一旦導入，外源性多核苷酸可以作為非整合載體(例如質體)保持在細胞內或整合到宿主細胞基因組中。如此擴增的多核苷酸可以藉由本領域廣知的方法從宿主細胞中單離。見，例如，Sambrook等人，1989。
或者，PCR允許DNA序列增殖。PCR技術是本領域廣知，並且描述於美國專利案第4,683,195、4,800,159、4,754,065與4,683,202號，以及PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis等人eds., Birkauswer Press, Boston, 1994。
藉由在合適的載體中使用單離的DNA並將其插入合適的宿主細胞中，可以獲得RNA。當細胞複製並且DNA被轉錄成RNA時，然後可以使用發明所屬技術領域中具有通常知識者廣知的方法單離RNA，例如，如列於Sambrook等人，1989中。
如本文所用，「載體」意指構築體，其能夠在宿主細胞中遞送，且較佳地表現一或多種有興趣的基因(群)或序列(群)。載體的例子包括但不限於病毒載體、裸DNA或RNA表現載體、質體、黏接質體或噬菌體載體、與陽離子縮合劑相關的DNA或RNA表現載體、包封在脂質體中的DNA或RNA表現載體、以及某些真核細胞，如生產者細胞。
合適的選殖和表現載體可包括多種組分，例如啟動子、增強子和其他轉錄調節序列。還可以建構載體以允許隨後將抗體可變結構域選殖到不同的載體中。合適的選殖載體可以根據標準技術建構，或者可以選自本領域可獲得的大量選殖載體。雖然所選的選殖載體可根據欲使用的宿主細胞而變化，但有用的選殖載體通常具有自我複製的能力，可具有針對特定限制核酸內切酶的單個標靶，及/或可攜帶用於標記的基因，其可用於選擇包含載體的選殖株。合適的例子包括質體和細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)及其衍生物，mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA和穿梭載體，例如pSA3和pAT28。這些和許多其他選殖載體可從商業供應商獲得，例如BioRad、Strategene、和Invitrogen。進一步提供表現載體。表現載體通常是可複製的多核苷酸構築體，其包含根據本揭露的多核苷酸。暗示表現載體必須作為游離基因體或作為染色體DNA的整合部分在宿主細胞中複製。合適的表現載體包括但不限於質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒)、黏接質體和PCT揭露案第WO 87/04462號中揭露的表現載體。載體組分通常可以包括但不限於下述中的一或多者：訊號序列；複製起始序列；一個或多種標記基因；合適的轉錄控制元件(諸如啟動子、增強子和終止子)。為了表現(即，轉譯)，通常還需要一或多種轉譯控制元件，諸如核醣體結合位點、轉譯起始位點和終止密碼子。
包含有興趣之多核苷酸及/或多核苷酸本身的載體可以藉由許多適當的方法導入宿主細胞，包括電穿孔、使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-聚葡糖或其他物質的轉染；微彈轟擊(microprojectile bombardment)；脂質體轉染(lipofection)；和感染(例如，其中載體是感染劑，諸如牛痘病毒)。導入載體或多核苷酸的選擇通常取決於宿主細胞的特徵。
因此，「宿主細胞」包括可以是或已經是多核苷酸及/或載體的接受體之個別細胞或細胞培養物，該多核苷酸及/或載體包含用於併入多核苷酸及/或載體的多核苷酸。宿主細胞包括單個宿主細胞的後代，並且由於天然、偶然或故意的突變，後代可能不一定與原始親本細胞完全相同(在形態學或基因組DNA互補中)。宿主細胞包括用本發明的多核苷酸在活體內轉染及/或轉形的細胞。
可以使用合適的宿主細胞重組製造抗體、或其抗原結合片段。可以將編碼抗體或其抗原結合片段的核酸選殖到表現載體中、然後將其導入宿主細胞、諸如大腸桿菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、或細胞不產生免疫球蛋白蛋白質的骨髓瘤細胞，以獲得重組宿主細胞中抗體的合成。較佳的宿主細胞包括本領域廣知的許多細胞中的CHO細胞、人類胚胎腎(HEK)293細胞、NS0細胞、或Sp2.0細胞。抗體片段可以藉由全長抗體的蛋白水解或其他降解、藉由重組方法、或藉由化學合成來產生。抗體的多肽片段，尤其是多達約50個胺基酸的較短多肽，可以藉由化學合成方便地製造。蛋白質和肽的化學合成方法是本領域已知並且是可商業上獲得。
本發明的抗體、或其抗原結合片段可以是親和性成熟。例如，親和性成熟的抗體可以藉由本領域已知的程序產生(Marks等人，1992, Bio/Technology, 10:779-783；Barbas等人，1994, Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813；Schier等人，1995, Gene, 169:147-155；Yelton等人，1995, J. Immunol., 155:1994-2004；Jackson等人，1995, J. Immunol., 154(7):3310-9；Hawkins等人，1992, J. Mol. Biol., 226:889-896；及WO2004/058184)。免疫原性
免疫原性是蛋白質治療(包括抗體和Fc融合蛋白質)的開發和利用的主要障礙。幾種因素可以促成蛋白質免疫原性，包括但不限於蛋白質序列、投予途徑和頻率以及患者群體。儘管對於非人類蛋白質(例如鼠類抗體)，免疫反應典型最嚴重，但即使具有大部分或完全人類序列含量的治療也可能為免疫原性。免疫原性是對被認為是外來物質的一系列複雜反應，且可能包括中和和非中和抗體的產生，免疫複合物的形成，補體活化，肥胖細胞活化，炎症和過敏反應。不需要的免疫反應可藉由直接干擾抗原辨識、改變與效應分子的相互作用或混亂治療的血清半衰期或組織分佈來減少抗體和Fc融合蛋白質治療的效力。
可以使用商業上可獲得的服務(諸如由Providence，R.I.的Epivax，Inc.提供)分析蛋白質治療以預測潛在免疫原性表位的存在。在一些具體實施例中，電腦模擬演算法可以預測與第II類MHC分子結合的表位。用此種演算法分析多肽的數據組提供預測的表位。預測的表位用於製造藉由自動肽合成或重組DNA技術的標準方法所製備的肽。從Epivax提供的評分資訊可提供在群體中所辨識的預測表位有多廣泛的指示。
如下文實施例10中所述，使用由EpiVax開發的EpiMatrix演算法篩選本發明抗體中由T細胞辨識的表位的存在，在本文中也稱為T細胞表位、「T-tregitope」或「tReg」。將抗體序列解析為重疊的9-單體單元(mer)框架，其中每個框架與最後一個重疊8個胺基酸。然後針對關於一組八個常見第II類MHC HLA對偶基因(DRB1*0101、DRB1*0301、DRB1*0401、DRB1*0701、DRB1*0801、DRB1*1101、DRB1*1301、及DRB1*1501)的預測結合親和性，評分所得的框架各者。將原始評分相對於大樣本的隨機生成肽的評分標準化，並報告所得的「Z」評分。
使用EpiMatrix Z-評分可以計算整體序列評分，tReg調整之評分，以預測抗體的免疫原性。如實施例10所述，藉由總和9-mer框架(運行總量)並注意到HLA型觀察數目來計算tReg調整之評分。無論9-mer是否是表位，都檢查9-mer和HLA型(「觀察」)的所有個別組合。如果特定觀察表明肽在給定HLA型的結合者的前5%中，則將此觀察的EpiMatrix Z-評分加入與整個蛋白質序列相關的運行總量中。還記錄所檢查的觀察總數。唯一的例外是，藉由EpiVax開發的ISPRI軟體套裝所辨識為「T-regitope」之在9-mer的所有觀察被假定為具有0的EpiMatrix評分。如本文所用，「T-regitope」是單株抗體框架區中的胺基酸序列，其可以潛在活化天然調節T細胞和減少不希望的免疫反應。tReg調整之評分計算如下：tReg調整之評分=(運行總量)* 1000 /(觀察數)。在運行總量中，從每次觀察(包括T-regitope)中減去0.05 * 2.2248的基線評分。較低的tReg調整之評分預測免疫原性風險的可能性較低。用途 治療惡病質之方法
在一些態樣，本發明提供使用抗-GDF15抗體或其抗原結合片段減少或抑制GDF15活性的治療方法，其中治療方法包括投予治療有效量之包含抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物。所治療的失調是任何疾病或病症，其藉由去除、抑制或降低GDF15活性或訊號傳遞而改良、改善、抑制或預防。
本發明涵蓋在有其需要之個體中減少游離GDF15量之方法。方法包含測定個體中游離GDF15量，投予治療量的本發明抗體或其抗原結合片段，且將投予前GDF15量與投予抗體、或其抗原結合片段後的游離GDF15量進行比較，從而減少個體中游離GDF15量。
在一具體實施例中，游離GDF15量的減少減少GDF15的非所欲、有害或不需要的生物活性。GDF15的此等活性包括但不限於(a)降低食物攝入；(b)降低食慾；(c)降低體重；(d)增加體重損失；(e)降低脂肪量；(f)降低瘦肉量；(g)增加脂肪量損失，(h)增加瘦肌肉量的損失，(i)結合到GFRAL；(j)增加RET媒介之下游訊號傳遞；(k)增加ERK之磷酸化；(l)增加S6磷酸化；(m)增加MAPK訊號傳遞路徑的RET-媒介之活化；(n)增加AKT-訊號傳遞路徑的RET活化；及(o)PLC-γ1訊號傳遞路徑的增加活化。
在一具體實施例中，本發明包括在有其需要之個體中減少GDF15的生物活性之方法。方法包含投予治療量的本發明的抗體、或其抗原結合片段，從而減少GDF15的生物活性。
在一態樣中，GDF15的生物活性包括，但不限於，(a)降低食物攝入；(b)降低食慾；(c)降低體重；(d)增加體重損失；(e)降低脂肪量；(f)降低瘦肉量；(g)增加脂肪量損失，(h)增加瘦肌肉量的損失，(i)結合到GFRAL；(j)增加RET媒介之下游訊號傳遞；(k)增加ERK之磷酸化；(l)增加S6磷酸化；(m)增加MAPK訊號傳遞路徑的RET-媒介之活化；(n)增加AKT-訊號傳遞路徑的RET活化；以及(o)PLC-γ1訊號傳遞路徑的增加活化。
術語「治療(treatment)或(treated)」包括預防性及/或治療性治療。如果在病症臨床表現之前投予，則治療被認為是預防性。治療性治療包括，例如，改善或減少疾病的嚴重程度，或縮短疾病的持續時間。
如本文所用、術語「惡病質」包括與幾種慢性疾病(包括癌症)、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、肌少症(sarcopenia)、慢性阻塞性肺臟疾病(COPD)、肌少症(sarcopenia)、及慢性腎臟疾病(CKD)一起發生的代謝失調和合併症。
本發明涵蓋治療由GDF-15所媒介或與GDF-15相關之疾病、失調或病症之方法。在一態樣中，失調為惡病質。在其他態樣中，失調為與癌症、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性腎臟疾病、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、或肌少症(sarcopenia)相關之惡病質。在一些態樣中，癌症為固態腫瘤癌症、胰臟癌、肺癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮頸癌、或睪丸癌。在一些態樣中，化學療法為基於鉑之化學療法。疾病或失調或症狀在嚴重度、持續時間或發生頻率方面可經改善、或減少。
本發明進一步涵蓋用於經定義的治療方法的如本文所定義的抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物。在涉及如本文所述的治療方法的具體實施例中，此具體實施例亦為關於用於該治療的抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物，或者用於製造用於該治療之藥劑的進一步具體實施例。
抗體和其抗體片段可以與一或多種額外的治療活性化合物組合投予。額外的治療活性化合物包括用於治療與惡病質相關的慢性失調之劑、抗癌劑(例如，免疫療法和化學療法)、誘導細胞壓力的抗癌劑(例如，基於鉑的化學療法劑，諸如順鉑)、肌肉合成代謝劑(例如選擇性雄性素受體調節劑(SARM)、肌生成抑制素(myostatin)抑制劑、和活化素A受體抑制劑)、抗炎劑(如JAK抑制劑、IL-6抑制劑、IL-8抑制劑)、食慾興奮劑(如飢餓肽模擬物、黑皮質素4受體抑制劑)、和改良代謝之劑(例如二甲雙胍)。組合療法的預防或治療劑，包括抗體、或其抗原結合片段，可以在同一醫藥組成物中投予到個體。或者，組合療法的預防或治療劑可以在分開的醫藥組成物中同時投予到個體。預防劑或治療劑可以藉由相同或不同的投予途徑投予到個體。
「化學治療劑」是可用於治療癌症的化學化合物。化學治療劑的例子包括烷化劑，諸如塞替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN)；磺酸烷酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)、及哌泊舒凡(piposulfan)；氮環丙烷，諸如苯得哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米得哌(meturedopa)、及烏得哌(uredopa)；伸乙亞胺及甲基阿美胺(methylamelamine)包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基三聚氰胺(trimethylolomelamine)；乙醯精寧(acetogenin)(特別是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)、MARINOL)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙鹼(colchicine)；樺木酸；喜樹鹼(包括合成類似物托泊替康(topotecan) (HYCAMTIN)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)、CAMPTOSAR)、乙醯基喜樹鹼、莨菪亭(scopolectin)、及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚抑素(bryostatin)；培美曲塞(pemetrexed)；卡利司他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻素(cryptophycin)(特別是念珠藻素1及念珠藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物、KW-2189與CB1-TM1 )；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；TLK-286；CDP323、口服α-4整合素抑制劑；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥子氣，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯乙酸氮芥膽甾醇酯(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子；亞硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔(enediyne)抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)、特別是卡奇黴素(calicheamicin)γ I及卡奇黴素(calicheamicin)ωl l(見，例如，Nicolaou等人Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33 : 183-186(1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素(dynemicin)A；埃斯波黴素(esperamicin)；以及新製癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色素蛋白質烯二炔(enediyne)抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮絲胺酸、博來黴素(bleomycin)、放線菌素、卡拉比星(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN、N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、氰基N-嗎啉基-多柔比星(doxorubicin)、2-吡咯啉并-多柔比星(doxorubicin)、多柔比星(doxorubicin)HC1脂質體注射液(DOXIL)及去氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素，諸如絲裂黴素C、黴酚酸、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、波弗黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他汀(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗-代謝物，諸如胺甲蝶呤(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR)、替加氟(tegafur)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine) (XELODA)、埃坡黴素(epothilone)、及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、胺甲蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如環胞苷(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮雜尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿核苷(floxuridine)、及伊馬替尼(imatinib)(2-苯基胺基嘧啶衍生物)、以及其他c-it抑制劑；抗-腎上腺，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如夫羅林酸(frolinic acid)；醋葡內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸；伊利盧拉(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；倍思塔布(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利乙銨(elliptinium acetate)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多糖；洛達尼(lonidainine)；類美登素(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫丹莫耳(mopidanmol)；尼特林(nitraerine)；噴司他汀(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多醣複合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙基胺；新月毒素(trichothecenes)(特別是T-2毒素、疣孢菌素(verracurin)A、桿孢菌素(roridin)A及蛇形菌索(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長春地辛(vindesine)(ELDIS1NE、FILDESIN)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加賽特辛(gacytosine)；阿醣胞苷(arabinoside)("Ara-C")；塞替派(thiotepa)；紫杉毒素(taxoids)，例如，紫杉醇(TAXOL)、紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(ABRAXANE)、及多西紫杉醇(doxetaxel)(TAXOTERE)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；6-硫鳥嘌呤(thioguanine)；巰基嘌呤；胺甲蝶呤(methotrexate)；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼(VELBAN)；鉑；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)(ONCOVIN)；奧沙利鉑(oxaliplatin)；甲醯四氫葉酸(leucovovin)；長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE)；諾凡特龍(novantrone)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(difluorometlhylomithine)(DMFO)；類視色素，諸如視黃酸；奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin) (BESPONSA)、伯舒替尼(bosutinib)(BOSULIF)、帕泊西力(palbociclib)(IBRANCE)、阿西替尼(axitinib)(INLYTA)、蘋果酸舒尼替尼(sunitinib malate)(SUTENT)、克卓替尼(crizotinib)(XALKORI)、恩雜魯它脈(enzalutamide) (XTANDI)；上述任一之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述二或更多者之組合，諸如CHOP，針對環磷醯胺、多柔比星(doxorubicin)、長春新鹼(vincristine)、及氫化潑尼松(prednisolone)之組合療法之縮寫、及FOLFOX，針對以奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN)組合5-FU及甲醯四氫葉酸(leucovovin)之治療方案的縮寫。
化學治療劑的額外例子包括抗激素劑，其用於調節、減少、阻斷或抑制可促進癌症生長的激素的作用，並且通常呈系統性或全身治療的形式。它們本身可能是激素。例子包括抗-雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬(tamoxifen))、雷諾昔芬(raloxifene) (EVISTA)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY 11 7018、奧那司酮(onapristone)、及托瑞米芬(toremifene) (FARESTON®)；抗-助孕素；雌激素受體下調控劑(ERD)；雌激素受體拮抗劑，諸如氟維司群(fulvestrant) (FASLODEX)；作用於抑制或關閉卵巢的劑，例如，黃體激素(leutinizing hormone)-釋放激素(LHRFl)促效劑，諸如乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(LUPRON及ELIGARD)、乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、乙酸布舍瑞林(buserelin acetate)及曲特瑞林(tripterelin)；抗-雄性素，諸如氟他胺(氟他胺(fiutamide))、尼魯胺(nilutamide)及比卡魯胺(bicalutamide)；以及抑制酶芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中雌激素生成，諸如，例如，4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)(MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、服美斯坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)(RJVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)、及安那唑(anastrozole)(ARIMIDEX)。此外，化學治療劑的此定義包括雙膦酸鹽類(bisphosphonate)，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)(例如，BONEFOS或OSTAC)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate)(ZOMETA)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate) (SKELID)、或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL)；以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧雜環戊烷核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是那些抑制牽連異常細胞增殖之訊號傳遞路徑中的基因表現者，諸如，例如，PKC-α、Raf、H-Ras、及表皮生長因子受體(EGF-R)；疫苗，諸如THERATOPE疫苗及基因療法疫苗，例如，ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗、及VAXID疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如、LURTOTECAN)；抗-雌激素，諸如氟維司群(fulvestrant)；Kit抑制劑，諸如伊馬替尼(imatinib)或EXEL-0862(酪胺酸激酶抑制劑)；EGFR抑制劑，諸如埃羅替尼(erlotinib)或西妥昔單抗(cetuximab)；抗-VEGF抑制劑，諸如貝伐珠單抗(bevacizumab)；瑞諾替康(arinotecan)；rmRH(例如，ABARELIX)；拉帕替尼(lapatinib)及拉帕替尼(lapatinib)對甲苯磺酸鹽(ErbB-2與EGFR雙酪胺酸激酶小分子抑制劑，亦已知為GW572016)；17AAG(格爾德黴素(geldanamycin)衍生物，其為熱休克蛋白質(Hsp)90毒素)、及上述任一之醫藥上可接受之鹽、酸或衍生物。
如本文所用的「化學療法」是指用於治療癌症的如上定義的化學治療劑，或二、三或四種化學治療劑的組合。當化學療法由超過一種的化學治療劑所組成時，化學治療劑可以在同一天或同一治療週期的不同日子投予到患者。
如本文所用的「基於鉑的化學療法」是指化學療法，其中至少一種化學治療劑是鉑的配位複合物。例示性的基於鉑的化學療法包括但不限於，與順鉑組合的順鉑、卡鉑、奧沙利鉑(oxaliplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、吉西他濱(gemcitabine)、與培美曲塞(pemetremed)組合的卡鉑。
如本文所用的「基於鉑的雙聯體」是指包含二種且不超過二種化學治療劑的化學療法，並且其中至少一種化學治療劑是鉑的配位複合物。例示性的基於鉑的雙聯體包括但不限於，與順鉑組合之吉西他濱(gemcitabine)、與培美曲塞(pemetrexed)組合的卡鉑。
如本文所用，術語「系統性抗癌療法」是指由世界上任何國家的管理機構批准的醫藥劑的系統性投予，或在世界上任何國家的管理機構下進行的人體臨床試驗中醫藥劑的系統性投予，一般意圖改變癌症的結果。系統性抗癌療法包括但不限於，化學療法、激素療法、標靶抗癌 療法、癌症疫苗、溶瘤疫苗和過繼性T細胞療法。 治療癌症之方法
本發明涵蓋治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者有效量之GDF15抗體。在一些具體實施例中，癌症係選自下列所組成之群組：胃癌(gastric cancer)、肉瘤、淋巴瘤、白血病、頭頸癌、胸腺癌、上皮癌、唾腺癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、食道癌、胰臟癌、神經膠質瘤、白血病、多發性骨髓瘤、腎細胞惡性腫瘤、膀胱癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、及黑色素瘤。在一些具體實施例中，個體為先前經治療的成人患者，患有局部進展或轉移之黑色素瘤、鱗狀細胞頭頸癌(SCHNC)、卵巢惡性腫瘤、肉瘤、或復發或不反應典型霍奇金氏淋巴瘤(cHL)。在一些具體實施例中，癌症可為鉑抗性及/或鉑不反應癌症，諸如，例如，鉑抗性及/或不反應卵巢癌、鉑抗性及/或/不反應乳癌、或鉑抗性及/或不反應肺癌。
在另一態樣中，本發明提供抑制患有腫瘤的個體中的腫瘤生長或進展之方法，包含投予到個體有效量之如本文所述的醫藥組成物。
在另一態樣中，本發明提供抑制或預防個體中癌症細胞轉移之方法，包含投予到有其需要之個體有效量有效量之如本文所述的醫藥組成物。
在另一態樣中，本發明提供了在患有腫瘤的個體中誘導腫瘤退化之方法，包含投予到個體有效量之如本文所述的醫藥組成物。
在一些具體實施例中，方法可以進一步包含投予有效量之第二治療劑。在一些具體實施例中，第二治療劑為，例如免疫調節劑。術語「免疫調節劑」是指能夠改變(例如，抑制、降低、增加、增強或刺激)免疫反應(如本文所定義)或宿主哺乳動物之先天性、體液或細胞免疫系統的任何組分的工作之物質。因此，術語「免疫調節劑」涵蓋如本文所定義的「免疫-效應-細胞增強劑」和如本文所定義的「免疫-抑制-細胞抑制劑」，以及影響哺乳動物免疫系統的其他組分之物質。在一些具體實施例中，免疫調節劑可為抗CD40促效劑抗體。
本發明進一步涵蓋如本文所定義之抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物，其用於所定義的治療方法。在關於如本文所述的治療方法的具體實施例中，此具體實施例亦為涉及用於該治療，或者於製造用於該治療之藥劑的抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物的進一步具體實施例。
因此，亦提供的是抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物，其提供於本文用於治療癌症或用於抑制在有其需要之個體中的腫瘤生長或進展。
亦提供的是本文提供的任何抗-GDF15抗體在製造用於治療癌症或用於在有其需要之個體中抑制腫瘤生長或進展的藥劑之用途。
抗體和其抗體片段可以與一或多種額外的治療活性化合物組合投予。額外的治療活性化合物包括用於治療與惡病質相關的慢性失調之劑、抗癌劑(例如，免疫療法和化學療法)、誘導細胞壓力的抗癌劑(例如基於鉑的化學療法劑，諸如順鉑)、肌肉合成代謝劑(如選擇性雄性素受體調節劑(SARM)、肌生成抑制素(myostatin)抑制劑和活化素A受體抑制劑)、抗炎劑(例如JAK抑制劑、IL-6抑制劑、IL-8抑制劑)、食慾興奮劑(如飢餓肽模擬物、黑皮素4受體抑制劑)、及改良代謝之劑(例如二甲雙胍)。
組合療法的預防或治療劑，包括抗體、或其抗原結合片段，可以在同一醫藥組成物中投予到個體。或者，組合療法的預防劑或治療劑可以在個別的醫藥組成物中同時投予到個體。預防劑或治療劑可以藉由相同或不同的投予途徑投予到個體。
術語「免疫反應」指的是藉由宿主哺乳動物的免疫系統，諸先天免疫反應(例如，Toll受體訊號傳遞級聯的活化)、細胞媒介的免疫反應(例如，由T細胞，例如抗原特異性T細胞和免疫系統的非特異性細胞所媒介的反應)、以及體液免疫反應(例如，B細胞媒介的反應，諸如產生和分泌抗體進入血漿、淋巴及/或組織液)對特定物質(諸如抗原或免疫原)的任何可檢測的反應。
術語「免疫原性」是指物質引起、引發、刺激或誘導免疫反應、或改良、增強、增加或延長針對特定抗原的預先存在的免疫反應之能力，無論是單獨或當存在或不存在佐劑的情況下與載劑連接。
本文提供的用於治療癌症的組成物和方法可進一步包含一或多種其他免疫調節劑。
在一些具體實施例中，免疫調節劑可以是抗-CD40促效劑抗體。抗體可以是，例如，人、人源化或部分人類嵌合抗-CD40抗體。特異性抗-CD40單株抗體的例子包括G28-5、mAb89、EA-5或S2C6單株抗體、CP870893、或APX005M。在一特定具體實施例中，抗-CD40促效劑抗體是CP870893或達西珠單抗(dacetuzumab) (SGN-40)。
CP-870,893是全人類促效性抗-CD40單株抗體，其已在臨床上作為抗腫瘤療法進行研究。CP870,893的結構和製備揭露在WO2003040170中，其中抗體CP870,893被辨識為抗體「21.4.1」。CP-870,893的重鏈和輕鏈的胺基酸序列分別在SEQ ID NO：46和SEQ ID NO：48以及在WO2003040170的表7中列出。在臨床試驗中，CP870,893藉由靜脈內輸注投予，劑量通常為每次輸注0.05至0.25 mg/kg的範圍。在本文提供的治療癌症的方法中，CP-870,893可以皮內、皮下或局部投予。
達西珠單抗(dacetuzumab)(亦已知為SGN-40或huS2C6；CAS號88-486-59-9)是另一例示性抗-CD40促效劑抗體，其已在無痛淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤和多發性骨髓瘤的臨床試驗中進行研究。在本文提供的治療癌症之方法中，可以皮內、皮下或局部投予達西珠單抗(dacetuzumab)。 細胞激素釋放症候群(CRS)
本發明涵蓋治療CRS之方法，包含投予到有其需要之患者有效量之GDF15抗體。CRS是在投予單株抗體和T細胞免疫治療劑後有時看到的系統性炎症反應。(Shimabukuro-Vornhagen等人，Journal for ImmunoTherapy of Cancer 6, 56(2018)。關於CRS的病理生理學和引發大量釋放各種細胞激素的起始事件所知甚少，細胞激素使CRS的系統性炎症反應長期存在。
在一些具體實施例中，本發明提供在有其需要之個體中治療CRS之方法，包括投予到個體有效量之如本文所述的醫藥組成物。
在其他具體實施例中，方法可進一步包含投予有效量之第二治療劑。第二治療劑包括抗炎劑，例如，IL-6抑制劑、腫瘤壞死因子α(TNF-α)抑制劑、干擾素γ(IFN-γ)抑制劑、皮質類固醇、抗組織胺劑)、退熱劑、及/或抗生素。在一些具體實施例中，第二治療劑是抗體，例如，托珠單抗(tocilizumab)及/或西圖昔單抗(siltuximab)。
本發明亦提供如本文所定義的GDF15抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物，其用於治療CRS之方法中。本發明亦提供如本文所定義的GDF15抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物在製造用於治療CRS之藥劑之用途。在涉及如本文所述的治療方法的具體實施例中，此具體實施例亦為用於該治療，或者於製造用於該治療之藥劑的抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物的進一步具體實施例。 GDF15抗體及PD-1軸結合拮抗劑之組合療法
本發明涵蓋治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者與PD-1軸結合拮抗劑組合的GDF15抗體，該組合有效治療癌症。也就是說，本文揭露的數據證實抗-GDF15抗體和PD-1軸拮抗劑的組合在治療癌症中提供治療效果。數據進一步證實抗GDF-15和PD-1軸拮抗劑的組合提供協同治療效果，其治療效果比單獨投予的各療法的預測加成效果還更高。
本發明涵蓋治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者一定量的GDF15抑制劑與一定量的有效治療癌症的PD-1軸結合拮抗劑。本發明亦涵蓋治療癌症之方法，包含投予到有其需要之患者一定量的GDF15抑制劑和一定量的PD-1軸結合拮抗劑，其中一起的量有效於治療癌症。在另一具體實施例中，本發明係關於治療癌症之方法，包括包含投予到有其需要之患者一定量的GDF15抑制劑和一定量的PD-1軸結合拮抗劑，其中一起的量在治療癌症中達到協同效果，即，組合是「協同性」。在一態樣中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體GDF15_001且選自PD-1軸結合拮抗劑係選自下列所組成之群組：阿維單抗(avelumab)、PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)、RN-888)、納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)及度伐魯單抗(durvalumab)。本發明涵蓋用於治療癌症的包含GDF15抑制劑和PD-1軸結合拮抗劑之醫藥組成物，以及醫藥上可接受之載劑。本發明涵蓋用於治療癌症的醫藥組成物，其包含協同有效量之GDF15抑制劑、協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑、及醫藥上可接受之載劑。組成物可進一步包含額外治療劑，諸如但不限於至少一種化學治療劑。
基於本文提供的揭露，發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，本發明治療癌症之方法涵蓋投予協同治療有效量之抗-GDF15抗體與協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑(例如，抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體等)到先前經至少一額外治療劑治療、或同時接受至少一額外治療劑治療癌症的患者。此額外治療劑涵蓋為治療癌症標準照護的治療劑。即，本發明的組合療法可以添加到已經接受不同療法的癌症患者的治療方案中，包括但不限於，手術、放射、化學療法和本領域已知的任何其他療法。
發明所屬技術領域中具有通常知識者將能夠根據已知方法確定本發明組合中使用的各化合物的適當量、劑量或用量，以投予到患者，考慮到的因素諸如年齡、重量、一般健康、投予的化合物、投予途徑、需要治療的癌症的性質和進展、以及其他藥物劑存在。
在一具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體、或其抗原結合部分，並且以初始劑量為約0.025 mg/kg至約20 mg/kg靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。初始劑量之後可以是一或多種後續劑量。在一些具體實施例中，可以每週、每隔一週、每三週、每四周、每五週、每六週、每七週、每八週、每九周、每十週、每十一周或每十二週中的至少任一個投予一或多種後續劑量。
在一些具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體且以約0.25 mg至約2000 mg的固定劑量靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。在一些具體實施例中，抗體每週、每隔一週、每三週、每四周、每五週、每六週、每七週、每八週、每九週、每十週、每十一周、或每十二週投予。
在一些具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體，其中，抗GDF15抗體以每週約0.1至約60 mg的固定劑量靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。在一些具體實施例中，抗GDF15抗體以每週約2 mg、約5 mg、約7 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約25 mg、約40 mg、及約50 mg的固定劑量投予。
在一些具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體，其中，抗GDF15抗體每隔一週以約0.1至約130 mg的固定劑量靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。在一些具體實施例中，抗GDF15抗體每二週以約5 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約50 mg、約60 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約90 mg、約100 mg、約110 mg、約120 mg至約125 mg的固定劑量投予。
在一些具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體，其中，抗GDF15抗體每21天(±2天)以約0.1至約400 mg的固定劑量靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。在一些具體實施例中，抗GDF15抗體每21天(±2天)投予以約15 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約50 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約125 mg、約150 mg、約175 mg、約200 mg、約225 mg、約250 mg、約275 mg、約300 mg、約325 mg、約350 mg、約375 mg至約385 mg的固定劑量投予。
在一些具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體，其中，抗GDF15抗體每28天(±2天)以約0.1至約400 mg的固定劑量靜脈內(IV)或皮下(SC)投予。在一些具體實施例中，抗GDF15抗體每28天(±2天)投予以約15 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約50 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約125 mg、約150 mg、約175 mg、約200 mg、約225 mg、約250 mg、約275 mg、約300 mg、約325 mg、約350 mg、約375 mg至約385 mg的固定劑量投予。
本發明方法的實施可以通過各種投予或給藥方案來實現。本發明組合的化合物可間歇、同時或依次投予。在一具體實施例中，本發明組合的化合物可以以同時給藥方案投予。
可以根據需要進行重複投予或給藥方案以達到癌症細胞所需減少或縮小。如本文所用，「連續給藥排程」是沒有劑量中斷的投予或給藥方案，例如，沒有治療休息日。治療週期之間沒有劑量中斷在21或28天治療週期重複是連續給藥排程的例子。在具體實施例中，本發明組合的化合物可以在連續給藥排程中投予。在具體實施例中，本發明組合的化合物可以在連續給藥排程中同時投予。
在一具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體。在一些具體實施例中，抗GDF15抗體是GDF-001。
在一些具體實施例中，PD-1軸結合拮抗劑是PD-L1結合拮抗劑。在一些具體實施例中，PD-L1結合拮抗劑是抗-PD-L1抗體，諸但不限於，MEDI4736、MPDL3280A(YW243.55.s70)、BMS-936559(MDX-1105)、阿維單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、及度伐魯單抗(durvalumab)。在一些具體實施例中，抗-PD-L1抗體是阿維單抗(avelumab)並且在整個治療過程中可以以劑量為約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20 mg/kg，間隔為約14天(±2天)或約21天(±2天)或約30天(±2天)靜脈內投予。在一些具體實施例中，阿維單抗(avelumab)在整個治療過程中以均一劑量(flat dose)為約80、150、160、200、240、250、300、320、350、400、450、480、500、550、560、600、640、650、700、720、750、800、850、880、900、950、960、1000、1040、1050、1100、1120、1150、1200、1250、1280、1300、1350、1360、1400、1440、1500、1520、1550 或1600 mg，較佳地800 mg、1200 mg或1600 mg，間隔為約14天(±2天)或約21天(±2天)或約30天(±2天)投予。在某些具體實施例中，個體將經包含本文所述的任何PD-1軸結合拮抗劑的藥劑靜脈內(IV)輸注投予。在某些具體實施例中，個體將經包含本文所述的任何PD-1軸結合拮抗劑的藥劑皮下(SC)輸注投予。
在一些具體實施例中，PD-1軸拮抗劑為PD-1軸結合拮抗劑。在一些具體實施例中，PD-1軸結合拮抗劑為抗-PD-1抗體，例如，PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)、RN888)、納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)，且抗-GDF15抗體在整個治療過程中將以劑量為約1、2、3、4、5、6、7或8 mg/kg ，間隔為約14天(±2天)或約21天(±2天)或約30天(±2天)靜脈內或皮下投予，但較佳皮下投予。在一些具體實施例中，投予如US 2016/159905中揭露的PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN-888)為均一劑量約80、150、160、200、240、250、300、320、350、400、450、500、550或600 mg，較佳地300 mg，間隔為約14天(±2天)或約21天(±2天)或約30天(±2天)或約35天(±2天)、或約42天(±2天)。在一些具體實施例中，以300 mg Q4W的量皮下投予PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888)。在一些具體實施例中，以600 mg Q6W的量皮下投予PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888，mAb7)。
此外，本發明係關於治療癌症之方法，其包含投予到有其需要之患者一定量的GDF15抗體和一定量的PD-1軸結合拮抗劑，其中，一起的量在癌症的治療中達到協同效果，其比抗-GDF15抗體的治療效果和PD-1軸結合抑制劑的治療效果其中分開的效果加在一起更高。本發明的方法或用途係關於標靶治療劑的協同組合，特別是GDF15抗體和PD-1軸結合拮抗劑。在具體實施例的一個態樣中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體而PD-1軸結合拮抗劑係選自下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)、RN888、mAb7)、阿維單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)及度伐魯單抗(durvalumab)。在具體實施例的一個態中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體，而PD-1軸結合拮抗劑係選自下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888，mAb7)、阿特珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)，且其不為阿維單抗(avelumab)。
依據本發明，第一種化合物或成分的量，例如，GDF15抑制劑，是與第二種化合物或成分的量，例如，PD-1軸結合拮抗劑(其不包括阿維單抗(avelumab))投予，並且一起的量有效治療癌症。一起有效的量將在一定程度上緩解所治療的失調的一或多種症狀。關於癌症的治療，有效量是指具有下述的效果之量(1)減小腫瘤大小、(2)抑制(即，在某種程度上減緩，較佳停止)腫瘤轉移出現、(3)在一定程度上抑制(即，在某種程度上減緩，較佳停止)腫瘤生長或腫瘤侵襲、及/或(4)在一定程度上緩解(或較佳地，消除)與癌症相關的一種或多種徵象或症狀。劑量和投予方案的治療或藥理學有效性還可以特徵化為誘導、增強、維持或延長患有這些特定腫瘤的患者的疾病控制及/或整體存活的能力，其可以測量為疾病進展之前時間的延長。
本發明提供單獨或組合其他療法向有其需要之個體投予本揭露之抗-GDF15抗體、或其抗原結合部分之方法。本揭露之組合療法(例如，抗-GDF15和PD-1軸拮抗劑)可相伴或依序地投予到個體。本揭露的抗-GDF15和PD-1軸拮抗劑組合療法亦可循環投予。循環療法涉及投予第一療法(例如，第一預防或治療劑)一段時間期間，然後投予第二療法(例如，第二預防或治療劑)一段時間期間並重複這順序投予，即，循環，以減少對療法(例如，劑)之一的抗性發展，以避免或減少療法(例如，劑之一)的副作用，及/或改良療法的效力。
本發明進一步涵蓋如本文所定義的抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物，用於所定義的治療方法，其中抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物與本文所定義的PD-1軸結合拮抗劑組合投予。在涉及如本文所述的治療方法的具體實施例中，此具體實施例亦為用於該治療，或者於製造用於該治療之藥劑的抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物的進一步具體實施例。
本揭露的組合療法的療法(例如，預防劑或治療劑)可以同時投予到個體。術語「同時」並不限於在完全相同的時間投予療法(例如，預防或治療劑)，而是意指包含本揭露之GDF15抗體、或其抗原結合部分的醫藥組成物以一種順序並在時間間隔中投予到個體，使得抗體可以與其他療法一起作用(例如，PD-1軸拮抗劑，其可以不包括阿維單抗(avelumab))以提供比如果它們用別的方法投予更高的增加益處，更佳地，組合治療提供「協同治療效果」，其中治療效果比分別投予二種治療的加成效果更高。例如，各療法可以同時投予到個體，或者在不同的時間點以任何順序依次投予；然而，如果不同時投予，它們應該以足夠接近的時間投予，以提供所欲治療或預防效果。各療法可以以任何適當的形式和藉由任何合適的途徑分別投予到個體。抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段可以是本發明的任何抗體，較佳地GDF-15_001。PD-1軸拮抗劑包括，但不限於，PD-1結合拮抗劑、PD-L1結合拮抗劑及PD-L2結合拮抗劑。在其他態樣中，PD-1結合拮抗劑為抗-PD-1抗體、或其抗原結合片段。在進一步態樣中，抗-PD-1抗體包括，但不限於，納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、及PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888)。在其他態樣中，PD-L1結合拮抗劑為抗-PD-L1抗體、或其抗原結合片段。在其他態樣中，抗-PD-L1抗體為BMS-936559(MDX-1105)、阿維單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)。在其他態樣中，PD-L1結合拮抗劑為抗-PD-L1抗體、或其抗原結合片段，但其不為阿維單抗(avelumab)。
在各種具體實施例中，抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段與PD-1軸拮抗劑(例如，其中抗-PD-1抗體、抗-PD-L1抗體，其可不包括阿維單抗(avelumab)、或抗-PD-L2抗體)之投予低於15分鐘、低於30分鐘、相隔低於1小時、相隔約1小時、相隔約1小時至約2小時、相隔約2小時至約3小時、相隔約3小時至約4小時、相隔約4小時至約5小時、相隔約5小時至約6小時、相隔約6小時至約7小時、相隔約7小時至約8小時、相隔約8小時至約9小時、相隔約9小時至約10小時、相隔約10小時至約11小時、相隔約11小時至約12小時、相隔24小時、相隔48小時、相隔72小時、或相隔1週投予到個體。在其他具體實施例中，在同一患者訪視中向患者投予二或更多種療法(例如，抗-GDF15抗體、抗-PD-L1抗體，其可不包括阿維單抗(avelumab)、及化學治療劑)。
組合療法的預防劑或治療劑可以在相同的醫藥組成物中投予於個體。或者，組合療法的預防劑或治療劑可以在分開的醫藥組成物中同時投予到個體。預防劑或治療劑可以藉由相同或不同的投予途徑投予到個體。診斷方法
本發明的抗-GDF15抗體、抗體組成物和方法具有活體外和活體內運用，包括免疫檢定法和用於診斷和評估GDF15媒介的失調的治療之用途。方法特別適合用於診斷、評估、和治療患有與GDF15的存在相關，並且更佳地與GDF15的增加量相關之失調的人類患者，其中GDF15的增加量涵蓋高於人類健康志願者中游離GDF-15之血漿濃度的增加量。與GDF15的存在相關的此失調包括，但不限於，與癌症相關的惡病質、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性腎臟疾病、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、或肌少症(sarcopenia)。
本發明提供檢測樣本中GDF15存在之方法，方法包括使懷疑包含GDF15的樣本與對GDF15特異性之抗體接觸，並檢測與抗體結合的GDF15的存在，從而檢測樣本中的GDF15。檢測與抗體結合的GDF15的方法是本領域廣知，包括，但不限於，其中GDF15與固體支撐物結合並向其中加入樣本，使得樣本中抗體結合GDF15的檢定法。加入與結合於固體支撐物的抗體相同或不同的第二種GDF15抗體，並且可以藉由直接標記(即，第二抗體與可檢測標記共軛)或藉由添加第三抗體(例如，來自另一物種，其與第二抗體的恆定結構域反應並且包含可檢測的標記)來檢測。因此，檢定法可用於檢測樣本中GDF15的存在或不存在。
在另一具體實施例中，本發明包括用於檢測樣本中GDF15的存在的套組，套組包含對GDF15特異性之抗體、施用器和其使用的用法說明材料。
本發明亦提供了測定樣本中GDF15濃度的方法，該方法包含提供包含與可檢測標記偶合的GDF15之經標記之競爭物；提供特異性結合GDF15之抗體、或其抗原結合片段；合併樣本、抗體、以及經標記之競爭物，其中樣本中的GDF15與經標記之競爭物競爭結合到抗體；且藉由檢測標記而測量未與抗體結合的經標記之競爭物的量，來確定該樣本中GDF15的濃度。將不存在樣本時與抗體結合的經標記之競爭物的量與當加入樣本時與抗體結合的經標記之競爭物的量比較。在樣本的存在下結合的經標記之競爭物的減少量是樣本中未經標記的GDF15之量的指標，使得檢定法可以用於估算於樣本中GDF15的存在和量。
在一具體實施例中，本發明提供估算對個體中與GDF15增加量相關的疾病或失調的治療有效性之方法，方法包含向個體投予治療並比較自治療前之個體獲得的樣本中GDF15量與自治療後之個體獲得的相同樣本中GDF15量，其中使用GDF15特異性抗體估算樣本中GDF15的量，且進一步其中，與自治療前的個體收集的樣本中之GDF15量相比，自治療後的個體收集樣本中較低的GDF15量是治療過程有效性的指示。
關於GDF15特異性抗體或經標記之競爭物，術語「經標記的」包括藉由將可檢測物質與抗體或經標記之競爭物偶合(即，物理性連接)直接標記，以及藉由以下方式間接標記抗體或經標記之競爭物：將其與另一種直接標記的試劑偶合。間接標記的例子包括使用螢光標記的第二抗體檢測第一抗體。用於檢測本發明多肽的活體外技術包括酶聯免疫吸附檢定法(ELISA)、西方墨點轉漬法、免疫沉澱和免疫螢光。
術語「生物樣本」旨在包括從個體單離的組織、細胞和生物流體，以及個體體內存在的組織、細胞和流體。
本文所述的抗體、經標記之競爭物和潛在的治療化合物亦適合與具有一系列檢測系統的許多其他均質和異質免疫檢定法中的任何一種使用。組成物
本發明的GDF15抗體可以調配成醫藥組成物。醫藥組成物可以進一步包含醫藥上可接受之載劑、賦形劑及/或穩定劑(Remington: The Science and practice of Pharmacy 21st Ed., 2005, Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover)，以凍乾調配物或水溶液的形式。可接受之載體、賦形劑或穩定劑在劑量和濃度下對接受者無毒，並且可包含緩衝劑、諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑(如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六羥季銨；羥基氯苯胺、氯化苯索寧；酚、丁基或苄基醇；對羥苯甲酸烷酯、如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸、或離胺酸；單醣、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或聚葡糖；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；鹽形成相對離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子性界面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。本文進一步描述了醫藥上可接受之賦形劑。
如本文所述，本揭露的醫藥組成物可進一步包含如本文所述的PD-1軸拮抗劑和如本文所述的GDF15抑制劑。在一具體實施例中，GDF15抑制劑是抗GDF15抗體GDF15_001或GDF15_297，並且PD-1軸拮抗劑選自下列所組成之群組：視需要地，阿維單抗(avelumab)、PF-06801591(亦稱為「沙珊單抗(sasanlimab)」、及「RN-888」與mAb7，皆揭露於WO 2016/092419)、納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)及度伐魯單抗(durvalumab)。在一具體實施例中，PD-1軸拮抗劑不包括阿維單抗(avelumab)。
本揭露的醫藥化合物可包括一種或多種醫藥上可接受之鹽。此等鹽的例子包括酸加成鹽和鹼加成鹽。酸加成鹽包括衍生自無毒無機酸者，諸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、磷等，以及來自無毒有機酸，諸如脂肪族單羧酸和二羧酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等。鹼加成鹽包括衍生自鹼土金屬者，諸如鈉、鉀、鎂、鈣等，以及來自無毒有機胺，諸如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因(procaine)等。
本揭露的醫藥組成物亦可包括醫藥上可接受之抗氧化劑。醫藥上可接受之抗氧化劑的例子包括：(1)水溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸、半胱胺酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，諸如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯、α-生育酚等；(3)金屬螯合劑，諸如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
可以在本揭露的醫藥組成物中運用的合適的水性和非水性載體的例子包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其合適的混合物、植物油，諸如橄欖油，及可注射的有機酯，諸如油酸乙酯。可例如，藉由使用塗佈材料，諸如卵磷脂，藉由在分散體的情況下保持所需的粒度，以及藉由使用界面活性劑，來保持適當的流動性。
這些組成物亦可包含佐劑，諸如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。藉由滅菌程序和藉由包含各種抗細菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、酚山梨酸等二者，可以確保防止微生物的存在。可能亦需要在組成物中包括等張劑，諸如糖、氯化鈉等。此外，可以藉由包含延遲吸收的劑，諸如單硬脂酸鋁和明膠來實現可注射醫藥形式的延長吸收。
醫藥組成物典型在製造和儲存條件下必須是無菌和穩定。組成物可以調配成溶液，微乳液，脂質體或適於高藥物濃度的其他有序結構。載體可以是溶劑或分散介質，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇等)、及其合適的混合物。可例如，藉由使用諸如卵磷脂的塗層，藉由在分散的情況下保持所需的粒度和藉由使用界面活性劑，保持適當的流動性。在許多情況下，在組成物中包括等張劑，例如糖、多元醇，諸如甘露醇、山梨糖醇、或氯化鈉是合適。藉由在組成物中包括延遲吸收的劑，例如單硬脂酸鹽和明膠，可以實現可注射組成物的延長吸收。
無菌可注射溶液可以藉由將適當的溶劑中所需量的活性化合物與上面列舉的成分(如果需要)中的一種或組合一起併入，接著滅菌微過濾來製備。
一般而言，藉由將活性化合物併入無菌媒劑(包含有基礎分散介質和來自上面列舉的那些的所需其他成分)來製備分散體。在用於製備無菌可注射溶液的無菌粉末的情況下，較佳的製備方法是真空乾燥和冷凍乾燥(凍乾)，其產生活性成分的粉末加上來自其先前無菌過濾的溶液的任何額外所欲成分。
本揭露的醫藥組成物可以以適於眼部投予的調配物製備、包裝或銷售。此類調配物可以是例如眼滴劑的形式，包括例如在水性或油性液體載體中活性成分的0.1%至1.0%(w/w)的溶液或懸浮液。此類滴劑可進一步包含緩衝劑、鹽或本文所述的一或多種其他額外成分。其它有用可用於眼部投予的調配物包括包含呈微晶形式或於脂質體製劑中的活性成分者。
如本文所用，「額外成分」包括，但不限於，下述之一或多者：賦形劑；界面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；製粒和崩解劑；結合物；潤滑劑；甜味劑；調味劑；著色劑；防腐劑；生理可降解的組成物，諸如明膠；水性媒劑和溶劑；油性媒劑和溶劑；懸浮劑；分散劑或潤濕劑；乳化劑，緩和劑；緩衝劑；鹽；增稠劑；填料；乳化劑；抗氧化劑；抗生素；抗真菌劑；穩定劑；和醫藥上可接受之聚合性或疏水性材料。可以包括在本揭露的醫藥組成物中的其他「額外成分」是本領域已知並且描述於，例如Remington's Pharmaceutical Sciences, Genaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA(1985)，其以引用方式併入本文。
在一具體實施例中，GDF15抗體、或其抗原結合部分以靜脈內調配物投予，為含有5 mg/mL的無菌水溶液，或在一些具體實施例中，約10 mg/mL，或在一些具體實施例中，約15 mg/mL，或在一些具體實施例中，約20 mg/mL的抗體，或在一些具體實施例中，約25 mg/mL，或在一些具體實施例中，約50 mg/mL，與乙酸鈉、聚山梨醇酯80和氯化鈉，pH範圍為約5至6。在一些具體實施例中，靜脈內調配物為包含5或10 mg/mL之抗體、20 mM乙酸鈉、0.2 mg/mL聚山梨醇酯80、和140 mM氯化鈉的無菌水溶液，pH為5.5。此外，包含抗體、或其抗原結合部分的溶液可包含許多其他化合物中的組胺酸、甘露醇、蔗糖、海藻糖、甘胺酸、聚(乙)二醇、EDTA、甲硫胺酸及其任何組合，以及許多相關領域中已知的其他化合物。
在一具體實施例中，本揭露的醫藥組成物包含以下組分：50 mg/mL本揭露的GDF15抗體或抗原結合部分、20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、和0.02%聚山梨醇酯80、0.005%EDTA，pH為5.8；在另一具體實施例中，本發明的醫藥組成物包含以下組分：100 mg/mL本揭露的GDF15抗體或抗原結合部分、10 mM組胺酸、5%蔗糖、和0.01%聚山梨醇酯80，pH為5.8。此組成物可以作為液體調配物或凍乾粉末提供。當粉末以全體積重構時，組成物保留相同配方。或者，粉末可以半體積重構，在這種情況下，組成物包含100 mg本發明的GDF15抗體或其抗原結合部分、20 mM組胺酸、10%蔗糖、和0.02%聚山梨醇酯80，pH為5.8。
在一具體實施例中，部分劑量藉由靜脈推注投予，而其餘部分藉由輸注抗體調配物投予。例如，GDF15抗體、或其抗原結合部分的0.01 mg/kg靜脈內注射液可以推注給予，而其餘的抗體劑量可以藉由靜脈內注射液投予。預定劑量的GDF15抗體、或其抗原結合部分可以例如在一小時半至二小時至五小時的期間內投予。
關於治療劑，其中劑是例如小分子，其可以以生理學上可接受之酯或鹽的形式存在於醫藥組成物中，諸如與生理學上可接受之陽離子或陰離子組合，如在本領域中廣知的。
本文所述醫藥組成物的調配物可藉由藥理學領域已知或以後開發的任何方法製備。一般而言，此製備方法包括將活性成分與載體或一或多種其它輔助成分締合的步驟，然後，如果必要或需要，將產品成型或包裝成所欲的單劑量或多劑量單位。
在一具體實施例中，本揭露的組成物是無熱原的調配物，其實質上不含內毒素及/或相關的熱原物質。內毒素包括限制在微生物內的毒素，並在微生物分解或死亡時釋放。熱原物質亦包括來自細菌和其他微生物外膜的熱誘導的熱穩定物質(糖蛋白)。如果投予到人類，這些物質二種都可引起發燒、低血壓和休克。由於潛在有害效果，從靜脈內投予的醫藥藥物溶液中除去甚至少量的內毒素是有利的。食品和藥物管理局(「FDA」)在靜脈注射藥物應用的單一一小時期間內設定每劑量每公斤體重5個內毒素單位(EU)的上限值(United States Pharmacopeial Convention, Pharmacopeial Forum 26(1):223(2000))。當治療性蛋白質以每公斤體重數百或數千毫克的量投予時，甚至除去痕量的內毒素也是有利的。在一具體實施例中，組成物中的內毒素和熱原量低於10 EU/mg、或低於5 EU/mg、或低於1 EU/mg、或低於0.1 EU/mg、或低於0.01 EU/mg、或低於0.001 EU/mg。在另一具體實施例中，組成物中的內毒素和熱原量低於約10 EU/mg、或低於約5 EU/mg、或低於約1 EU/mg、或低於約0.1 EU/mg、或低於約0.01 EU/mg、或低於約0.001 EU/mg。
在一具體實施例中，本揭露包括投予組成物，其中該投予是口服、腸胃外、肌肉內、鼻內、陰道、直腸、舌、舌下、頰、頰內、靜脈內、皮膚、皮下或經皮。
在另一具體實施例中，本揭露進一步包含與其他療法組合投予組成物，例如手術、化學療法、激素療法、生物療法、免疫療法或放射療法。劑量
為了製備包括本揭露的GDF15抗體、或其抗原結合部分的醫藥或無菌組成物，將抗體與醫藥上可接受之載劑或賦形劑混合。治療和診斷劑的調配物可以藉由與生理學上可接受之載體、賦形劑或穩定劑以例如凍乾粉末、漿液、水溶液、洗劑或懸浮液的形式混合來製備(見，例如，Hardman,等人(2001)Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.；Gennaro(2000)Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N. Y.；Avis,等人(eds.) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY；Lieberman,等人(eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY；Lieberman,等人(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY；Weiner and Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.)。
選擇治療的投予方案取決於若干因素，包括實體的血清或組織更新率、症狀水平、實體的免疫原性、以及標靶細胞在生物基質中的可近性。在某些具體實施例中，投予方案使遞送至患者的治療量最大化，與可接受的副作用水平一致。因此，遞送的生物量部分取決於特定實體和所治療病症的嚴重度。可以獲得選擇合適劑量的抗體、細胞激素、和小分子的指導(見，例如，Wawrzynczak, 1996, Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK；Kresina(ed.), 1991, Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, N.Y.；Bach(ed.),1993, Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, N. Y.；Baert，等人，2003, New Engl. J. Med. 348:601-608；Milgrom，等人，1999, New Engl. J. Med. 341:1966-1973；Slamon，等人，2001, New Engl. J. Med. 344:783-792；Beniaminovitz，等人，2000, New Engl. J. Med. 342:613-619；Ghosh，等人，2003, New Engl. J. Med. 348:24-32；Lipsky，等人，2000, New Engl. J. Med. 343:1594-1602)。
臨床醫生做出確定合適的劑量，例如，使用本領域已知或懷疑的參數或因素來影響治療或預測影響治療。一般而言，劑量開始時的量略低於最佳劑量，並且此後以小的增量增加，直到相對於任何負面副作用達到所欲或最佳效果。
本文使用的術語「GDF15之降低量」或「降低GDF15之量」意指在任何治療干預之前與游離GDF15量相比，降低游離GDF15的量。如本文所用，「游離GDF15」意指在具有另一分子的複合物(例如，存在於例如血漿中的抗體或結合分子)中未結合或未以其他方式結合的GDF15。
GDF15量包括個體中游離GDF15量，其中量係使用本文揭露的方法或本領域已知的估算游離GDF15量的任何其它方法估算。
在一具體實施例中，相較於投予本發明抗體之前個體中GDF15的量，游離GDF15量減少。在一具體實施例中，相較於游離GDF15之標準量(與下述相關或顯示個體未患有與游離GDF15之增加量相關或媒介之疾病、失調或病症)，游離GDF15量減少。在一具體實施例中，血漿中標準、或參考游離GDF15量為約0.05 ng/mL至約3 ng/mL。在另一具體實施例中，標準、或參考游離GDF15量係在一範圍，其最低值係選自下列所組成之群組：0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9 ng/mL，而其最高值係選自下列所組成之群組：0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、及3.0 ng/mL。在進一步具體實施例中，標準、或參考游離GDF15量為少於1 ng/mL，較佳地，低於0.9 ng/mL，甚更佳地，低於0.8 ng/mL，又更佳地，低於0.7 ng/mL，甚更佳地，低於0.6 ng/mL，又更佳地，低於0.5 ng/mL，且甚更佳地，低於0.4 ng/ml。在一具體實施例中，游離GDF15量為在血漿中的量。
本發明不限於游離GDF15量低於0.5 ng/mL；相反，發明所屬技術領域中具有通常知識者將理解，對於特定個體，治療量可以低於或高於0.5 ng/mL。因此，本發明涵蓋將游離GDF15量減少至其中將由游離GDF15之增加量媒介或與之相關的可檢測的有害效果減少或完全缺乏之量。這些效果包括但不限於，惡病質、食物攝入降低、食慾降低、體重降低、體重損失、脂肪量降低、瘦肉量降低等。
如本文中所使用的，藥物、化合物或醫藥組成物的「有效劑量(dosage)」、「有效劑量(dose)」、「有效量」、或「治療有效量」是足以影響任何一或多種有益或所欲結果的量。對於預防性使用，有益或所欲的結果包括消除或減少風險，減輕嚴重度，或延遲疾病的開始，包括疾病的生化、組織學及/或行為症狀、其併發症和在疾病發展期間中出現的中間病理表型。對於治療性使用，有益或所欲的結果包括可檢測的臨床結果，諸如減少、或降低體重減輕速率或減少因高活性GDF15的表現所致的一或多種症狀(例如，食物攝入降低、食慾降低、體重降低、重量損失、脂肪量降低和瘦肉量降低)，降低治療疾病所需的其他藥劑的劑量，增強另一種藥劑的效果，及/或延遲患者疾病的進展。有效劑量可以在一或多次投予中投予。出於本發明的目的，藥物、化合物、或醫藥組成物的有效劑量是足以直接或間接完成預防性或治療性治療的量。如在臨床背景中所理解的，藥物、化合物、或醫藥組成物的有效劑量可以或可以不與另一種藥物、化合物或醫藥組成物一起達到。因此，在投予一或多種治療劑的情況下可以考慮「有效劑量」，並且如果與一或多種其他劑一起，可達到或達到所欲結果時，可以考慮以有效量給予單一劑。
在一些具體實施例中，本發明的抗體、或其抗原結合片段的有效劑量係基於人類健康志願者和受影響患者中游離GDF-15的血漿濃度。總體有效劑量取決於在受影響的患者中之游離GDF-15的初始血漿濃度。在一具體實施例中，有效劑量可以是有能力將個體中的游離GDF15量降低或減少至在穩定態下的人類健康志願者中測量相同或較低平均量的劑量達整個給藥間隔。在另一具體實施例中，有效劑量可以是在穩定態下有能力降低或減少患者游離GDF15量至低於0.5 ng/mL的劑量達整個給藥間隔。在又另一具體實施例中，有效劑量可以是給予70 kg個體的劑量，其可以在穩定態下整個給藥間隔中將個體中的游離GDF15量降低或減少至低於0.5 ng/mL。
「個體(individual)」、「患者」或「個體(subject)」是哺乳動物，更佳地人類。哺乳動物亦包括，但不限於，農場動物、運動動物、寵物、靈長類動物、馬、狗、貓、小鼠和大鼠。在一些具體實施例中，個體被認為處於與其受體結合及由其媒介訊號傳遞之GDF15所媒介或相關之疾病、失調或病症的風險。在某些具體實施例中，個體具有與癌症相關之惡病質、化學療法、組合免疫腫瘤療法之化學療法、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、肌少症(sarcopenia)、慢性阻塞性肺臟疾病(COPD)、肌少症(sarcopenia)、及慢性腎臟疾病(CKD)。
在一些具體實施例中，方法或用途包含投予約0.025 mg/kg至約20 mg/kg的本發明抗體、或其抗原結合片段、或醫藥之組成物之初始劑量。初始劑量之後可以是一或多個後續劑量。在一些具體實施例中，可以每週、每隔一週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週、每八週、每九週、每十週、每十一週或每十二週至少任一投予一或多個後續劑量。
在一些具體實施例中，方法或用途包含投予固定劑量為約0.25 mg至約2000 mg的本發明抗體、或其抗原結合片段。在一些具體實施例中，每週、每隔一週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週、每八週、每九週、每十週、每十一週、或每十二週投予抗體、或其抗原結合片段。
在其它具體實施例中，方法或用途包含每週投予固定劑量為約0.1至約60 mg的本發明抗體、或其抗原結合片段。在一些具體實施例中，本發明的抗體、或其抗原結合片段的固定劑量為每週投予約2 mg、約5 mg、約7 mg、約10 mg、約12 mg、約15 mg、約25 mg、約40 mg、及約50 mg。
在一些具體實施例中，方法或用途包含每隔一週投予固定劑量為約0.1至約130 mg的本發明抗體、或其抗原結合片段。在一些具體實施例中，本發明的抗體、或其抗原結合片段的固定劑量為雙週投予約5 mg、約12 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約40 mg、約60 mg、約90 mg、及約125 mg。
在一些具體實施例中，方法或用途包含每四週投予固定劑量為約0.1至約400 mg的本發明抗體、或其抗原結合片段。在一些具體實施例中，本發明的抗體、或其抗原結合片段的固定劑量為每四週投予約15 mg、約40 mg、約60 mg、約75 mg、約100 mg、約115 mg、約200 mg、約300 mg、及約385 mg。套組
本發明亦提供套組或製造物件，其包含本發明的抗體、或其抗原結合片段、以及使用用法說明。因此，在一些具體實施例中，提供套組或製造物件，其包含容器、容器內包含抗-GDF15抗體的組成物、及包含投予治療有效量之抗-GDF15抗體用於治療有其需要之患者的用法說明之藥品仿單。
在某些具體實施例中，套組可包含具有乾燥蛋白質的第一容器和具有水性調配物的第二容器二者。在某些具體實施例中，包括包含單室和多室預填充注射器(例如，液體注射器和冷凍注射器(lyosyringe))的套組。
在一具體實施例中，本發明提供用於測定樣本中GDF15濃度的套組，套組包含經標記之競爭物，其包含與可檢測標記偶合的GDF15；特異性結合GDF15的抗體、或其抗原結合片段；施用器；以及其使用的用法說明材料。
本發明進一步提供用於測定測試樣本中GDF15的量的競爭性免疫檢定法套組，競爭性免疫檢定法包含特異性結合GDF15的抗體、或其抗原結合片段；經標記之競爭物，其包含與可檢測標記共軛的GDF15；其中，經標記之競爭物與測試樣本中的GDF15競爭與抗體結合，並且進一步其中，標記提供測試樣本中GDF15的量的訊號指示。在一例示性具體實施例中，與不含GDF15的其他相同樣本中的抗體結合的標記相比，測試樣本中抗體結合的標記的減少是測試樣本中GDF15的量的指示。
在一具體實施例中，本發明提供用於測定樣本中GDF15濃度的套組，套組包含經標記之競爭物，其包含與可檢測標記偶合的GDF15；特異性結合GDF15的抗體、或其抗原結合片段；施用器；以及其使用的用法說明材料。
在替代具體實施例中，本發明提供用於辨識具有惡病質風險的人類患者的套組，其包含GDF15特異性抗體、或其抗原結合片段、施用器和其使用的用法說明材料。
在一些具體實施例中，提供套組或製造物件，其包含第一容器、容器內包含抗-GDF15抗體的組成物、第二容器、第二容器內包含PD-1軸結合拮抗劑的組成物、以及包含投予治療有效量之抗-GDF15抗體和PD-1軸結合拮抗劑治療有其需要之患者的用法說明之藥品仿單。
本發明包括套組或製造物件，其包含第一容器、容器內包含協同治療有效量之抗-GDF15抗體的組成物、第二容器、第二容器內包含治療有效治療量之PD-1軸結合拮抗劑的組成物、及包含投予協同治療有效量之抗-GDF15抗體和PD-1軸結合拮抗劑用於組合治療有其需要之患者的用法說明之藥品仿單。
在一些態樣中，PD-1軸結合拮抗劑係選自下列所組成之群組：PD-1抗體、或其抗原結合片段、PD-L1抗體、或其抗原結合片段、及PD-L2抗體、或其抗原結合片段。在一些態樣中，PD-1抗體係選自下列所組成之群組：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、及PF-06801591(沙珊單抗(sasanlimab)，RN888)。在其他態樣中，PD-L1抗體係選自下列所組成之群組：視需要地，阿維單抗(avelumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)。在其他態樣中，PD-L1抗體不為阿維單抗(avelumab)。
在其他具體實施例中，提供套組或製造物件，其包含第一容器、容器內包含抗-GDF15抗體的組成物、第二容器、第二容器內包含抗癌治療劑的組成物、及包含投予治療有效量之抗-GDF15抗體及抗癌治療劑用於治療有其需要之患者的用法說明之藥品仿單。在一些態樣，抗癌治療劑是抗-CD40抗體。
本發明涵蓋套組或製造物件，其包含第一容器、容器內包含協同治療有效量之抗-GDF15抗體的組成物、第二容器、第二容器內包含治療有效治療量之抗癌治療劑的組成物、及包含投予協同治療有效量之抗-GDF15抗體及抗癌治療劑用於組合治療有其需要之患者的用法說明之藥品仿單。在一些具體實施例中，抗癌治療劑是抗-CD40抗體。
關於使用本發明抗體、或其抗原結合片段的用法說明一般包括對所欲治療之劑量的資訊、給藥排程和投予途徑。容器可以是單位劑量、散裝包裝(bulk package)(例如，多劑量包裝)或次單位劑量。本發明的套組中提供的用法說明典型是在標籤或藥品仿單(例如，包括在套組中的紙張)上的書面用法說明，但為機器可讀之用法說明(例如，磁性或光學儲存盤上攜帶的用法說明)也是可以接受。
本發明的套組於合適的包裝中。合適的包裝包括但不限於，小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝(例如，密封的Mylar或塑膠袋)等。還考慮與特定裝置組合使用的包裝、例如吸入器、鼻腔投予裝置(例如，霧化器)或輸液裝置，諸如微型泵。套組可具有無菌出入口(例如，容器可以是靜脈內溶液袋或具有由皮下注射針刺穿的塞子的小瓶)。容器亦可具有無菌出入口(例如，容器可以是靜脈內溶液袋或具有由皮下注射針刺穿的塞子的小瓶)。容器可進一步包含第二醫藥活性劑。
套組可視需要地提供額外的組件，諸如，緩衝液和解釋資訊。通常，套組包括容器和在容器上或與容器相關的標籤或藥品仿單。定義
「約」或「近似」，除非本文另有定義，否則當與可測量的數值變量結合使用時，指的是變量的指示值以及變量的所有值，其在指示值的實驗誤差內(例如，在平均值的95%信賴區間內)或在指示值的10%內，以較高者為準。數字範圍包括定義範圍的數字。
如本領域已知的，術語「同一性」是指二或更多多肽分子或二或更多核酸分子的序列之間藉由比較序列所測定的關係。在本領域中，「同一性」亦指多肽或核酸分子序列之間的序列相關度的程度，視情況而定，可如藉由核苷酸或胺基酸序列串之間的匹配所測定。「同一性」測量二或更多序列之間相同匹配的百分比，其中間隙對準由電腦程式的特定數學模型(即「演算法」)解決。
術語「相似性」是相對概念，但與「同一性」相反，是指包括相同匹配和保守取代匹配的相似性測量。由於保守取代適用於多肽而非核酸分子，因此相似性僅涉及多肽序列比較。如果二個多肽序列具有，例如，20個相同胺基酸中的10個，並且其餘的都是非保守取代，則百分比同一性和相似性均為50%。如果在同一個例子中，還有5個位置其中存在保守取代，則百分比同一性保持50%，但百分比相似性為75%(20個中的15個)。因此，在存在保守取代的情況下，二個多肽序列之間的相似性程度將高於這二個序列之間的百分比同一性。
請求項中術語「或」的使用用於指「及/或」，除非明確指出，儘管本揭露支持僅涉及替代方案的定義與「及/或」，僅指替代方案或替代方案是相互排斥的。除非另有明確指出，否則本說明書中使用的「一(a)或(an)」可指一或多個。如本文在請求項中所使用的，當與詞「包含」結合使用時，詞「一(a)或(an)」可指一或多於一。如本文所用，「另一」可指至少第二或更多。除非本文另有定義，否則結合本發明使用的科學和技術術語應具有發明所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的意義。此外，除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數，且複數術語應包括單數。當在本文中參考本發明使用時，詞「包含(comprises/comprising)」和詞「具有/包括」用於指定所述特徵、整數、步驟或組件的存在，但不排除存在或加入一或多種其他特徵、整數、步驟、組件或其群組。
如本文所用，如描述投予至患者的卡鉑量，術語「計算的AUC 3劑量」、「計算的AUC 4劑量」、「計算的AUC 5劑量」、「計算的AUC 6劑量」等是指根據Calvert Equation，基於曲線下的目標面積(AUC)分別為3、4、5、與6 mg– min/mL及患者的腎小球濾過率(GFR，mL/min)：卡鉑劑量(mg)=目標AUC(mg– min/mL)x(GFR+25)所計算的卡鉑量，如在2018年2月更新之National Comprehensive Cancer Network® (NCCN)Chemotherapy Order Templates Appendix B所述。
如本文所用，術語「細胞激素」一般是指由一種細胞群釋放的蛋白質，其作用於另一種細胞作為細胞間媒介物或對產生蛋白質的細胞具有自分泌作用。此細胞激素的例子包括淋巴激素，單核激素(monokine)；介白素(「IL」)，諸如IL-1、IL-la、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A-F、IL-18至IL-29(諸如IL-23)、IL-31、包括PROLEUKIN® rIL-2；腫瘤壞死因子，諸如TNF-a或TNF-β、TGF-l-3；和其他多肽因子，包括白血病抑制因子(「LIF」)、睫狀神經營養因子(「CNTF」)、CNTF樣細胞激素(「CLC」)、心營養素(「CT」)、及kit配體(「L」)。
如本文所用，術語「趨化介素」是指具有選擇性誘導白血球趨化性和活化能力的可溶性因子(例如，細胞激素)。它們亦引發血管生成、炎症、傷口癒合和腫瘤形成的過程。例子趨化介素包括IL-8，一種鼠類角質細胞化學化學吸引因子(KC)的人類同源物。
術語「癌症」、「癌性」或「惡性」是指或描述哺乳動物中通常由不受調控的細胞生長為特徵的生理病症。癌症的例子包括，但不限於，惡性腫瘤、淋巴瘤、白血病、胚細胞瘤、及肉瘤。此癌症之更特定例子包括鱗狀細胞惡性腫瘤、骨髓瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病(AML)、多發性骨髓瘤、胃腸(道)癌症、腎癌、卵巢癌、肝癌、淋巴胚細胞白血病、淋巴球性白血病、結腸直腸癌、子宮內膜癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、軟骨肉瘤、神經胚細胞瘤、胰臟癌、多形性神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、腦癌、胃癌(stomach cancer)、膀胱癌、肝腫瘤、乳癌、結腸惡性腫瘤、及頭頸癌。癌症另一特定例子包括腎細胞惡性腫瘤。
除非另有指明，否則本文所用的術語「治療」是指逆轉、改善、抑制或預防此術語所適用的失調或病症的進展，或此失調或病症的一或多種症狀。
根據本發明欲治療的「患者」包括任何溫血動物，諸如，但不限於，人類、猴或其他低級靈長類動物、馬、狗、兔、天竺鼠或小鼠。例如，患者是人類。醫學領域中具有通常知識者能夠容易地辨識患有非小細胞肺癌並且需要治療的個體患者。
術語「治療方案」，「給藥程序」和給藥方案可互換使用，指的是本發明組合中各治療劑的投予劑量和時間點。
「改善」意指相較於不投予治療，減輕或改良一或多種症狀。「改善」亦包括縮短或減少症狀的持續時間。
應用於被診斷患有或懷疑患有癌症的個體的「腫瘤」是指任何尺寸的惡性或潛在惡性贅生物或組織塊，並且包括原發性腫瘤和繼發性贅生物。固態腫瘤是組織異常生長或組織塊，通常不包含囊腫或液體區域。不同類型的固態腫瘤以形成它們的細胞類型命名。固態腫瘤的例子為肉瘤、惡性腫瘤和淋巴瘤。白血病(血液癌症)通常不形成固態腫瘤(National Cancer Institute, Dictionary of Cancer Terms)。
「腫瘤負荷」亦稱為「腫瘤負載」，是指分佈在全身的腫瘤物質的總量。腫瘤負荷是指全身中癌症細胞的總數或腫瘤的總尺寸，包括淋巴結和骨窄道。腫瘤負荷可以藉由本領域已知的多種方法測定，諸如，例如藉由測量從個體移除時腫瘤的尺寸，例如使用卡尺，或者在體內使用成像技術測定，例如，超音波、骨掃描、電腦斷層攝影(CT)或核磁共振造影(MRI)掃描。
術語「腫瘤尺寸」是指腫瘤的總尺寸，其可以測量為腫瘤的長度和寬度。腫瘤尺寸可藉由本領域已知的多種方法測定，諸如，例如藉由從個體移除時腫瘤的尺寸，例如使用卡尺，或者在體內使用成像技術測定，例如，骨掃描、超音波、CT或MRI掃描。
可以使用指示對個體有益的任何終點來估算「個體反應」或「反應」，包括，但不限於：(1)在一定程度上抑制疾病進展(例如，癌症進展)，包括減慢或完成遏止；(2)腫瘤尺寸減少；(3)抑制(即，減少、減慢或完全停止)癌症細胞浸潤到鄰近的周邊器官及/或組織；(4)轉移的抑制(即，減少、減慢或完全停止)；(5)在某種程度上緩解與疾病或失調(例如，癌症)相關的一或多種症狀；(6)增加或延長生存長度，包括總生存和無進展生存；及/或(7)治療後在給定時間點的死亡率降低。
以藥劑治療的患者的「有效反應」或患者的「反應性」和類似措辭是指賦予有風險、或患有疾病或失調(諸如癌症)的患者臨床上或治療益處。在一具體實施例中，此類益處包括以下任何一或多種：延長存活(包括總存活及/或無進展存活)；導致客觀反應(包括完整反應或部分反應)；或改良癌症的徵象或症狀。
「客觀反應」是指可測量的反應，包括完全反應(CR)或部分反應(PR)。在一些實施例中，「客觀反應率(ORR)」是指完全反應(CR)率和部分反應(PR)率之和。
如本文所用的「完全反應」或「CR」意指對治療反應的所有癌症徵象消失(例如，所有標靶病變消失)。這並不總是意味著癌症已經治癒。
如本文所用，「部分反應」或「PR」是指對治療反應，一或多種腫瘤或病變的尺寸或體內癌症的程度的降低。例如，在一些具體實施例中，PR是指以基線SLD為參考，標靶病變的最長直徑(SLD)之和至少30%減少。
「持續反應」是指在停止治療後，對減少腫瘤生長的持續作用。例如，相較於藥劑投予階段開始時的尺寸，腫瘤尺寸可以是相同尺寸或更小。在一些具體實施例中，持續反應具有至少與治療持續時間相同的持續時間，治療持續時間的至少1.5x、2x、2.5x、或3x長度、或更長。
如本文所用，「無進展存活」(PFS)是指治療期間和之後的時間長度，在此期間所治療的疾病(例如，癌症)不會變得更糟。無進展存活可包括患者經歷完全反應或部分反應的時間量，以及患者經歷穩定疾病的時間量。
在一些具體實施例中，如本文所用，治療癌症之方法的抗癌效果，包括「客觀反應」、「完全反應」、「部分反應」、「進行性疾病」、「穩定疾病」、「無進展存活」、「反應的持續時間」由使用RECIST v1.1(Eisenhauer等人，Eur J of Cancer 2009; 45(2):228-47)在除了轉移之CRPC之外的患有局部晚期或轉移之固態腫瘤之患者中，以及RECIST v1.1與PCWG3(Scher等人，J Clin Oncol 2016 Apr 20; 34(12):1402-18)在患有轉移之CRPC之患者中經研究者定義與估算。Eisenhauer等人，Eur J of Cancer 2009; 45(2):228-47與Scher等人，J Clin Oncol 2016 Apr 20; 34(12):1402-18的揭露整體以引用方式併入本文。
在一些具體實施例中，如本文所用，治療的抗癌效果，包括「免疫相關的客觀反應」(irOR)、「免疫相關的完全反應」(irCR)、「免疫相關的部分反應」(irCR)、「免疫-相關的進行性疾病」(irPD)、「免疫相關的穩定疾病」(irSD)、「免疫相關的無進展存活」(irPFS)、「免疫相關的反應持續時間」(irDR)，藉由免疫相關反應標準(irRECIST, Nishino等人，J Immunother Cancer 2014; 2:17)針對除了患有轉移之CRPC之患者以外的患有局部晚期或轉移之固態腫瘤之患者所定義並且估算。Nishino等人J Immunother Cancer 2014; 2:17的揭露整體以引用方式併入本文。
如本文所用，「總體存活」(OS)是指在特定持續時間後可能存活的群組中個體的百分比。
「延長存活」是指相對於未治療的患者(即，相對於未以藥劑治療的患者)，在治療的患者中增加總體或無進展存活。
如本文所用，「藥物相關毒性」、「輸注相關反應」和「免疫相關不良事件」(「irAE」)、及其嚴重度或等級係在National Cancer Institute’s Common Terminology Criteria for Adverse Events v 4.0(NCI CTCAE v 4.0)中舉例說明並定義。
如本文所用，「與…組合」或「與...結合」是指除了另一種治療形態之外還投予一種治療形態。因此，「與…組合」或「與...結合」是指在個體投予其他治療形態之前、期間或之後投予一種治療形態。
如本文所用，「低劑量量」是指物質、劑、化合物、或組成物的量或劑量低於臨床設定中典型使用的量或劑量。
如本文所用，術語「晚期」當關於固態腫瘤，包括局部晚期(非轉移性)疾病和轉移性疾病。局部晚期固態腫瘤(可以或不可以用治療意圖治療)，和轉移性疾病(不能用治療意圖治療)均包括在如本發明中所使用的「晚期固態腫瘤」的範圍內。發明所屬技術領域中具有通常知識者將能夠辨識和診斷患者的晚期固態腫瘤。
出於本發明的目的，「反應持續時間」是指從藥物治療引起的腫瘤模式生長抑制的記錄到獲得與治療前生長速率相似的恢復生長速率的時間。
術語「添加劑」用於表示二種化合物、組分或標靶劑的組合的結果不高於各化合物、組分或標靶劑個別的總和。術語「添加劑」是指關於個別使用各化合物、組分或標靶劑治療的疾病病症或失調沒有改良。
術語「協同作用」或「協同」用於表示二種化合物、組分或標靶劑的組合效果大於每試劑單獨提供的效果總和。術語「協同作用」或「協同」是指關於單獨使用個別各化合物、組分或標靶劑，所治療的疾病病症或失調得到改良。所治療的疾病病症或失調的這種改良是「協同效果」或「協同治療效果」。「協同量」、「協同有效量」或「協同治療有效量」是當組合投予時產生協同效果(如同本文定義之「協同」)的化合物、組分或標靶劑的量。確定二或更多種組分之間的協同相互作用，效果的最佳範圍和效果的各組分絕對劑量範圍可以藉由在不同w/w(重量/重量)比例範圍和劑量下投予組分到需要治療的患者中來確定測量。然而，活體外模式或活體內模式中的協同作用觀察可為人類和其他物種中效果的預測，並且如本文所述存在活體外模式或活體內模式以測量協同效果且這些研究的結果藉由應用藥物動力學/藥效學方法，還可以用於預測有效劑量和血漿濃度比範圍以及人類和其他物種中所需的絕對劑量和血漿濃度。均等物
前面的描述和以下實施例詳述本揭露的某些特定具體實施例，並描述本發明人設想的最佳模式。然而，應當理解，無論前述內容在文本中的詳細程度如何，本揭露可以多種方式實施，並且本揭露應當根據所附請求項及其任何均等物來解釋。
儘管已經參考各種應用、方法、套組、和組成物描述所揭露的教示，但是應當理解，在不脫離本文的教示和下面要求保護的揭露內容下，可以進行各種改變和修飾。提供以下實施例是為更好地說明所揭露的教示，而不是為限制本文呈現教示的範圍。雖然已經根據這些例示性實施例描述本教示，但是發明所屬技術領域中具有通常知識者將容易理解，這些例示性具體實施例的許多變化和修飾是可能，而無需過度實驗。所有這些變化和修飾在目前教示的範圍內。
本文引用的所有參考文獻，包括專利案、專利申請案、論文、案教科書等、以及其中引用的參考文獻，在它們尚未及的範圍，整體以引用方式併入本文。於所併入的文獻和類似材料中的一或多者與本申請不同或相矛盾之事件中，包括，但不限於定義的術語、術語用法、所描述的技術等，則本申請控制。一般技術
應理解本發明不限於當然可以改變的特定製造合成方法。除非本文另有定義，否則結合本發明使用的科學和技術術語應具有發明所屬技術領域中具有通常知識者通常理解的意義。再者，除非上下文另有要求，否則單數術語應包括複數，而複數術語應包括單數。通常，與本文所述的細胞和組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學和蛋白質與核酸化學與雜交相關使用的命名法和技術是本領域廣知和常用的那些。
除非另有指明，本發明的實踐將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的習知技術，這些技術在本領域的技術範圍內。這些技術在文獻中有充分解釋，諸如，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition(Sambrook等人，1989)Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis(M.J. Gait, ed., 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook(J.E. Cellis, ed., 1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I. Freshney, ed., 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures(A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998)J. Wiley and Sons；Methods in Enzymology(Academic Press, Inc.)；Handbook of Experimental Immunology(D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987)；Current Protocols in Molecular Biology(F.M. Ausubel等人，eds., 1987)；PCR:  The Polymerase Chain Reaction,(Mullis等人，eds., 1994)；Current Protocols in Immunology(J.E. Coligan等人，eds., 1991)；Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(2001)；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY(2002)；Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(1998)；Coligan等人，Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY(2003)； Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology(C.A. Janeway and P. Travers, 1997)；Antibodies(P. Finch, 1997)；Antibodies:  a practical approach(D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal antibodies:  a practical approach(P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)；Using antibodies:  a laboratory manual(E. Harlow and D. Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)；The Antibodies(M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)。
酵素性反應和純化技術根據製造商的說明書進行，如本領域通常實現的或如本文所述。與本文所述的分析化學、生物化學、免疫學、分子生物學、合成有機化學、以及藥物和醫藥化學相關使用的命名法、和實驗室程序和技術是本領域廣知和常用的那些。標準技術用於化學合成、化學分析、醫藥製備、調配和遞送以及患者的治療。生物寄存
本發明的代表性材料於2018年4月4日寄存於American Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, USA。具有ATCC登錄號PTA-125038的載體GDF15_001-VH包含質體，其包含編碼抗體GDF15_001的重鏈可變區的DNA插入物，而具有ATCC登錄號PTA-125039的載體GDF15_001-VL包括質體，其包含編碼抗體GDF15_001的輕鏈可變區的DNA插入物。寄存是根據Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure and Regulations thereunder (Budapest Treaty)的規定進行的。這確保維持從寄存之日起寄存存活培養物30年。在Budapest Treaty條款下藉由ATCC將可獲得寄存物，且並受輝瑞公司與ATCC之間的協議約束，其確保在授予相關的美國專利案，或者向公眾公開任何美國或外國專利申請案時(以先到者為準)公眾對寄存的培養物後代永久和不受限制的可獲得性，並確保根據35 U.S.C. 122章節及其依據的Commissioner’s法規(包括37 C.F.R. 1.14章節，特別參考886 OG 638)授予之U.S. Commissioner of Patents and Trademarks所確定的後代的可獲得性。
本申請案的受讓人同意，如果在適當的條件下培養，寄存材料的培養物死亡或丟失或銷毀時，則材料將在通知時立即替換為另一種相同材料。寄存材料的可獲得性不應被解釋為違反任何政府根據其專利法授予的權利來實施本發明的許可。 實施例 實施例 1 ：抗 -GDF15 抗體
產生一組抗體(見表2和5以及圖29)，並在一系列結合和生物物理測定中進行比較。
根據其胺基酸序列和CDR區存在「熱點」(例如，潛在糖基化、氧化、和化學降解位點)分析本發明抗-GDF15抗體。抗-GDF15抗體的熱點序列分析是在下表5代表。GDF15_005、GDF15_006、GDF15_007、GDF15_008、GDF15_009、及GDF15_200證實在CDR區存在N-連接的糖基化位點且未被選擇於進一步研究。
Figure 02_image051
Figure 02_image053
實施例 2 ：抗 -GDF15 抗體之結合特性：藉由 SPR 對人類、石蟹獼猴、與鼠類 GDF15 之結合活性
對人類、石蟹獼猴和鼠類GDF15的抗體GDF15_001(包含VH，其包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列與VL，其包含SEQ ID NO：163之胺基酸序列)結合親和性使用BIAcore T200儀器(GE Healthcare)在37℃，收集率為10 Hz測定。使用小鼠抗體捕獲套組(BR100838, GE Healthcare)，根據製造商的程序，小鼠Fc-人類GDF15(Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15；SEQ ID NO：2)、小鼠Fc-小鼠GDF15(Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15；SEQ ID NO：5)和小鼠Fc-石蟹獼猴GDF15(Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15；SEQ ID NO：4)被捕獲到CM4感測器晶片(目錄編號BR100534, GE Healthcare)表面的三種不同流動細胞。運行和樣本緩衝液是10 mM HEPES pH 7.4，0.15 M NaCl，3 mM EDTA，0.05% P-20(HBS-EP+)。Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15、Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15與Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15的最終捕獲量分別為40共振單元(RU)、32 RU和25 RU。流動細胞1用作為參考流動細胞。將二倍稀釋系列的GDF15_001(濃度範圍從10 nM至0.625 nM)注射到感測器表面120秒。監測解離2.8小時，並用10 mM 甘胺酸 pH 1.7再生表面。藉由將得到的傳感圖數據擬合至BIAcore T200評估軟體2.0版(GE Healthcare)中的1：1 Langmuir模型，測定鼠類與石蟹獼猴GDF15的結合親和性和速率常數。測定的親和性值如下表6所示。
亦使用本文實施例2中描述的方法測定針對小鼠Fc-人類GDF15之GDF15結合之抗體的數個選殖株之結合親和性，並顯示在下表6中。以二價形式測試的所有選殖株證實表觀KD值低於150 pM，表示其是人類GDF15的強結合物。此外，使用上述BIAcore檢定法測量選殖株GDF15_001與石蟹獼猴和小鼠GDF15的結合(表7)。選殖株GDF15_001呈現與石蟹獼猴GDF-15的強結合(表觀KD 8.28 pM)並保持與小鼠GDF15的結合(表觀KD 142.3 pM)，使得選殖株GDF15_001適合於二物種的臨床前研究。
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Figure 02_image059
實施例 3 ：抗 -GDF15 抗體之結合特性：藉由 SPR 對人類、石蟹獼猴、及鼠類 GDF15 之單體抗 -GDF15 抗體的結合活性
為了理解結合到GDF15的GDF15_001之KD值，沒有結合性效果，產生單體Fc-Fab並以實施例2中使用的相同的檢定法測試。使用BIAcore T200儀器(GE Healthcare)在37℃以收集率為10 Hz，測定對人類、石蟹獼猴及鼠類GDF15之單體GDF15_001的結合親和性。使用小鼠抗體捕獲套組(BR100838，GE Healthcare)，根據製造商的程序，Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15、Mu IgG1Fc_ Fxa_Mu GDF15與Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15被捕獲到CM4感測器晶片(目錄編號BR100534，GE Healthcare)表面的三種不同流動細胞。運行和樣本緩衝液為10 mM HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、3 mM EDTA、0.05% P-20(HBS-EP+)。Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15、Mu IgG1Fc_Fxa_Mu GDF15與Mu IgG1Fc_Fxa_Cyno GDF15的最終捕獲量分別為19共振單元(RU)，22 RU和19 RU。流動細胞1用作為參考流動細胞。將二倍稀釋系列的單體GDF15_001(濃度範圍從10 nM至1.25 nM)注射到感測器表面120秒。監測解離1200秒，並用10 mM 甘胺酸pH 1.7再生表面。藉由將得到的傳感圖數據擬合至BIAcore T200評估軟體2.0版(GE Healthcare)中的1：1 Langmuir模型，測定結合親和性和速率常數。單體選殖株GDF15_001證實與人類(KD 21.3 pM)和石蟹獼猴GDF15(KD 62.0 pM)的強結合，與鼠類GDF15的結合較弱(KD 1965.0 pM)，如下表8所示。
Figure 02_image061
實施例 4 ：抗 -GDF15 抗體之結合特性： GDF15_001 對人類 GDF15 之結合特異性
為了估算GDF15_001對人類GDF15之結合特異性，測試GDF15_001結合到額外TGFβ家族成員。分析是在Octet Red儀器上進行。
使用OctetRED 384(ForteBio, Menlo Park, CA)評估單體GDF15_001(CH23LS-GBT-GDF15_001)對10個TGFβ家族成員，包括人類GDNF(R&D，212-GD/CF)、人類抑制素A(R&D，8506-AB/CF)、人類活化素B(R&D，659-AB/CF)、人類TGFβ-1(R&D，240-B/CF)、人類BMP2(R&D，355-BM/CF)、人類BMP3b(R&D，1543-BP/CF)、人類BMP6(R&D，507-BP/CF)、人類BMP9(R&D，3209-BP/CF)、人類BMP11(R&D，1958-CD/CF)、人類GDF8(Pfizer、41075-201)與控制組人類GDF15(Mu IgG1Fc_Fxa_Hu GDF15)的脫靶結合。將TGFβ家族成員稀釋至10 ug/ml(在10 mM乙酸鈉pH 4.5)且根據製造商的指示胺偶合到AR2G生物感測器(目錄＃18-5092，ForteBio)。在動力學緩衝液(目錄#18-5032 ForteBio)中將單體GDF15_001稀釋至200 nM。Octet測定在室溫下進行，締合時間為300秒，解離時間為180秒。數據被雙重參考(Myszka, D., J. Mol. Recognit 1999；279-284)並用Octet數據分析軟體8.1版(ForteBio)分析。
如預期，GDF15_001結合到人類GDF15。在200 nM的單體選殖株GDF15_001未檢測到與其他TGFβ家族成員(GDF-11、BMP-9、GDF-8、BMP-2、BMP-6、TGFß-1、活化素-B、抑制素-A)的結合，證實GDF15_001的高特異性，其不與這些其他相關家族成員結合。GDF15_001的高特異性最小化脫靶結合的風險，並且指出GDF15_001是潛在新穎、有用的人類治療。實施例 5 ：抗 -GDF15 抗體防止 GDF15 結合到 GFRAL
藉由競爭檢定法估算GDF15_001防止人類GDF15結合到GFRAL之細胞外結構域的能力。使用BIAcore T200儀器(GE Healthcare，Chicago，IL)進行分析。
將GDF15_001滴定至10 nM人類GDF15中，濃度範圍為10 nM至2.5 nM。將混合物GDF-15、GDF15_001和控制組注射到人類GFRAL的細胞外結構域上，其直接固定在CM4感測器晶片上。觀察到人類GDF15與GFRAL結合的濃度依賴性抑制。人類GDF15與人類GFRAL ECD的結合被7.5 nM GDF15_001完全阻斷。
這些數據證實GDF15_001阻斷人類GDF15與其同源受體GFRAL之間的相互作用，且從而可干擾GFRAL訊號傳遞。這進一步證實GDF15_001可能是新穎的潛在有用治療，以降低GDF15與GFRAL結合所媒介的活性。實施例 6 ：抗 -GDF15 抗體之生物物理特性：熱穩定性
藉由差示掃描量熱法(DSC)估算抗-GDF15抗體的熱穩定性。將蛋白質在磷酸鹽緩衝之鹽水(PBS)溶液中稀釋至0.3 mg/ml，於400 μl體積。PBS用作參考細胞中的緩衝液空白組。PBS含有137 mM NaCl、2.7 mM KCl、8.1 mM Na2 HPO4 、及1.47 mM KH2 PO4 ，pH 7.2。用Autosampler(Malvern Instruments Ltd, Malvern, UK)將樣本分配到MicroCal VP-Capillary DSC的樣本盤中。將樣本在10℃下平衡5分鐘，然後以100℃/小時的速率掃描至110℃。選擇16秒的過濾時間。對原始數據基線校正，並將蛋白質濃度標準化。Origin Software 7.0(OriginLab Corporation, Northampton, MA)用於將數據擬合到具有適當轉換量的MN2狀態模型。
轉移溫度顯示在圖1A、1B、和1C中，並列於表9中。Tm 1表示抗體CH 2為50%未折疊時的溫度。Tm 2表示抗體的Fab為50%未折疊時的溫度。Tm 3表示抗體的CH 3為50%未折疊時的溫度。所有具有超過65℃的解構溫度(melting temperature)(Tm 1)的選殖株都被設計為穩定的選殖株，其將在製造和儲存期間穩定。
Figure 02_image063
實施例 7 ：抗 -GDF15 抗體之生物物理特性：粒徑篩析層析法
藉由分析粒徑篩析層析法(aSEC)來分析抗體選殖株。蛋白質在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)溶液在稀釋到1.0 mg/ml，並藉由aSEC在YMC-Pack Diol-200, 300 x 8 mm管柱與包含20 mM磷酸鈉pH 7.2，400 mM NaCl之等度運行緩衝液分析。天然SEC用於測定高分子量(聚集體)和單體完整抗體的相對量。計算百分比聚集體為高分子量的峰面積除以總(聚集體和單體)峰面積乘以100。記錄滯留時間(分鐘)並與檢定法控制組比較。具有來自aSEC分析的正常滯留時間和峰形的抗體選殖株可表示與固定相樹脂的最小相互作用和最佳疏水性，這些是有用的特徵並且指出抗體可為潛在有用的治療。
所測試的各抗體選殖株的滯留時間顯示在表10中。GDF15_002顯示延遲滯留時間及寬峰形且因此不進一步研究。
Figure 02_image065
實施例 8 ：抗 -GDF15 抗體之生物物理特性：在低 pH 之穩定性
由於抗體藉由蛋白質A捕獲純化且洗提是在低pH條件下，故測試抗-GDF15抗體選殖株對低pH保持穩定性。在1.0 mg/ml於PBS，pH 7.2之抗體用甘胺酸pH 3.4酸化，並在25℃下培育5小時，然後用Tris鹼中和並在aSEC上運行以測定高分子量物種(HMMS)和低分子量物種(LMMS)的量，表11。所測試的所有選殖株在低pH挑戰後顯示出可接受的HMMS增加量(＜5%)。這指出抗-GDF15抗體將在純化過程保持穩定，並且可為潛在有用的治療。
Figure 02_image067
實施例 9 ：抗 -GDF15 抗體之生物物理特性：黏度
由Anton Paar儀器分析GDF15_001的黏度。使用30 kDa分子量截止Amicon離心過濾器單元(EMD Millipore, Billerica, MA)將GDF15_001濃縮至215 mg/mL。一系列稀釋範圍為46至178 mg/mL是以20 mM 組胺酸、85 g/L蔗糖、0.05 mg/ml EDTA pH 5.8緩衝液作為稀釋劑製備。藉由SoloVPE Variable Pathlength System(C Technologies, Inc, Bridgewater, NJ)上的280 nm分析測定蛋白質濃度。使用CP25-1錐和板在MCR-302流變儀(Anton Paar USA Inc., Ashland, VA)上以150 rpm的恆定旋轉速度在25℃下進行黏度測量。每個樣本收集總共10次測量，每次10秒，並使用Rheoplus(Anton Paar USA Inc.)V 3.62軟體分析數據。黏度以厘泊(cP)單位報告。
GDF15_001的黏度如圖2所示。數據顯示達到約140 mg/ml的可接受之黏度限值(20 cP)，使皮下注射GDF15_001可行，進一步指出此抗體為有用的潛在治療。實施例 10 ：抗 -GDF15 抗體之免疫原性
基於檢測的非種系T細胞表位，和經計算的tReg-調整評分，預測本發明抗-GDF15抗體和本領域中已知為hu01G06的另一抗-GDF15抗體(hu01G06之VH與VL序列本文分別提供為SEQ ID NO：177與SEQ ID NO：178(VH，WO2014/100689之SEQ ID NO：248及VL，WO2014/100689之SEQ ID NO：254))的免疫原性。較低的tReg-調整評分預測較低的免疫原性風險可能性。
使用二個程序(下述程序1和2)分析序列，以辨識表位。對任一程序由本文描述的規則所辨識的任何序列被認為是表位。在胺基酸9-mer的量檢查序列。
程序 1-ISPRI/EpiMatrix ：在ISPRI套裝軟體(ISPRI v 1.8.0, EpiVax Inc., Providence, RI(2017); Schafer 等人, Vaccine 16(19), 1880-84(1998))中提交序列用於EpiMatrix分析。原始結果提供各9-mer胺基酸片段對8種不同HLA類型結合的可能性的排序。因此，對各9-mer有8個預測(「觀察」)。9-mer的產生起於序列的各個別線性編碼位置。在相同序列可能發生超過一次的相同9-mer。如果任何4個觀察指出9-mer在結合物的前5%中，則意味著預測在至少4種HLA類型的結合物的前5%中，9-mer被認為是預測的表位。或者，如果8個預測中的任何一個指出9-mer在結合物的前1%中，則9-mer也被認為是預測的表位。
程序 2-IEDB 一致方法 ：使用MHC-II一致方法提交序列用於分析(Wang等人，BMC Bioinformatics 11, 568(2010)；Wang等人，PLoS Comput Biol. 4(4),　e1000048(2008))在免疫表位資料庫(IEDB)(IEDB MHC-II Binding Predictions, http://www.iedb.org；Vita等人，Nucleic Acids Res. Jan 28(43), D405-12(2015)。軟體輸出排列由15-mer的結果。對15-mer和HLA類型的各組合提供一致評分和百分位排序。但是，各15-mer一致衍生的個別評分為15-mer中發現的某些9-mer的評分排序：用於一致的各方法報告在15-mer內9-mer的百分位排序，並且作為整體15-mer的值的一致是對具有中位數評分的9-mer之預測。如果(a)選擇它作為15-mer的一致代表並且(b)考慮的HLA類型具有結合物前10%的百分位排序，及如果對相同的9-mer標準(a)和(b)發生三或更多不同HLA類型(即，三觀察)，則將9-mer分類為表位。考慮的HLA類型是DRB1*01、1*03、1*04、1*07、1*08、1*11、1*13、及1*15，其為標準ISPRI/EpiMatrix報告中的相同HLA類型。為了便於與程序1比較，重新解釋數據以獲得預測的9-mer表位列表，儘管一致方法的主要輸出是15-mer的排序。
各表位分類為種系或非種系表位。對於抗體，各表位基於其在抗體內的位置(例如CDR或非CDR)進一步分類。過濾從IMGT(www.imgt.org)獲得的人類V結構域的序列以除去註釋為假基因或開放閱讀框之種系。在剩餘序列中發現的任何預測的9-mer表位被認為是種系表位。在J或C區域(包括IgG1、IgG2、IgG3、及IgG4)中發現的表位或這些區域之間的連接也被分類為種系表位。否則，表位被分類為非種系表位。
CDR定義基於Kabat之方法，其中CDR定義為包括以下殘基：HCDR-1(H26-H35包括插入諸如H35A，直至但不包括H36)、HCDR-2(包括H50-H65)、HCDR-3(包括H95-H102)、LCDR-1(包括L24-L34)、LCDR-2(包括L54-L56)、LCDR-3(包括L89-L97)。如果其胺基酸中任一是CDR區的一部分，則預測的9-mer表位定義為CDR的表位。總體序列評分 (tReg 調整之評分 ) ：對於個別鏈，或對於抗體VH和VL結構域的配對，可以藉由如下所述對成分9-mer各個求和來計算總評分。
檢查9-mer和HLA類型的所有個別組合(「觀察」)，而不管9-mer是否是表位。如果特定觀察指出肽是針對給定的HLA類型之前5%結合物，對這個觀察的EpiMatrix Z評分被加到與整個蛋白質序列相關聯的運行總計。還記錄了所檢查的觀察總數。唯一的例外是被ISPRI辨識為「T-regitope」(單株抗體框架區內的胺基酸序列，其可潛在地活化天然調節性T細胞並減少不需要的免疫反應)的9-mer上的所有觀察被假定為具有EpiMatrix評分為零。
在運行總數中，從各觀察(包括T-regitope)中減去0.05 * 2.2248的基線評分。最終評分計算如下：tReg調整之評分=(運行總數)* 1000 /(觀察數)。
計算得分列於表12中。如上所述，較低評分指出較低預測免疫原性潛力。本發明抗-GDF15抗體具有比hu01G06較低的評分。選殖株GDF15_001、GDF15_004、GDF15_005及GDF15_013具有最低得分，因此具有最低的潛在預測引發免疫原性反應的風險。這進一步指出本發明抗體是潛在有用的治療。
Figure 02_image069
基於上述電腦模擬方法，亦比較GDF15_001和hu01G06之預測T細胞表位。如下表13中所示，hu01G06在重鏈中具有二個預測的T細胞表位，而在輕鏈中具有一個預測的T細胞表位，而GDF15_001不具有任何預測的T細胞表位。這指出相較於hu01G06時，GDF15_001亦具有引發免疫原性反應的較低潛在風險。這進一步指出GDF15_001是具有改良特徵的潛在有用的新穎治療。
Figure 02_image071
實施例 11 ：在健康小鼠中抑制人類與鼠類 GDF15
GDF15_001抑制人類GDF15活性之能力在以腺相關的病毒(AAV)-人類GDF15處理的健康C57Bl6N小鼠中估算。在AAV-人類GDF15處理後二週，循環的人類GDF15量增加至約17 ng/ mL(圖3 )，並且體重降低15%(圖4)。相對於IgG控制組，在AAV-人類GDF15-處理之小鼠中，GDF15_001的投予迅速扭轉體重(圖4)、脂肪(圖5)、和瘦肉量損失(圖6)。GDF15_001在AAV控制組載體處理之小鼠中沒有影響。
在以AAV-鼠類GDF15處理的健康C57Bl6N小鼠中亦估算GDF15_001抑制鼠類GDF15活性之能力。AAV-鼠類GDF15投予後11天，循環鼠類GDF15量增加至約3 ng/ mL(圖7)，且體重降低約10%(圖8)。相對於IgG控制組，在AAV-人類GDF15-處理之小鼠中，GDF15_001的投予迅速扭轉重量損失(圖8)和增加食物攝入(圖9)。GDF15_001在AAV控制組載體處理之小鼠中沒有影響。
這些數據證實GDF15_001由於瘦肉和脂肪量損失而逆轉重量損失，並且即使在GDF15增加量存在下也能增加健康小鼠的食物攝入。實施例 12 ：在荷纖維肉瘤腫瘤 (HT-1080) 之小鼠中抑制人類 GDF15
為了測定GDF15_001是否能夠逆轉惡病質並增加荷瘤小鼠的壽命，將重度免疫受損(SCID)小鼠皮下植入HT-1080人類纖維肉瘤細胞。腫瘤植入後二週，體重降低約10%(圖10)。相對於IgG控制組，GDF15_001的投予迅速扭轉體重質量損失(圖10)、脂肪量損失(圖11)、和瘦肉量損失(圖12)。除了體組成的改良，GDF15_001相較於IgG控制組增加存活(圖13)。
為了確認在熱中性條件(其中消除基礎代謝率的冷壓力升高)下荷HT-1080腫瘤小鼠中GDF15_001的代謝益處，當小鼠在86°F飼養時，重複研究。循環人類GDF15升高至~5 ng/mL(圖14)。相對於IgG控制組，GDF15_001的投予維持重量損失的快速逆轉(圖15)。GDF15_001在相同的非荷瘤小鼠中對這些參數任一沒有影響。
這些數據證實GDF15_001增加存活並逆轉荷瘤小鼠的惡病質。因此，這些結果進一步指出GDF15_001是潛在新穎人類治療。實施例 13 ：在荷胰臟腫瘤小鼠中抑制人類 GDF15
為了進一步評估GDF15_001是否能夠逆轉惡病質並增加荷瘤小鼠的壽命，SCID小鼠皮下植入PA-0165(衍生自胰臟腫瘤肝轉移)腫瘤組織片段。循環的人類GDF15升高至~2 ng/ mL(圖16)。腫瘤植入後4週，體重降低約10%(圖17)。相對於IgG控制組，GDF15_001的投予完全防止重量損失(圖17)。除了體重改良之外，GDF15_001相較於IgG控制組增加存活(圖18)。
這些數據亦證實GDF15_001增加存活和在荷瘤小鼠逆轉惡病質。因此，這些結果進一步指出GDF15_001是潛在新穎人類治療。實施例 14 ：在以抗癌劑治療的荷瘤小鼠中抑制人類 GDF15
為了測定GDF15_001是否能夠逆轉惡病質並增加以抗癌劑治療的荷瘤小鼠的存活，將BALB/c小鼠皮下植入RENCA(鼠類腎腺癌)細胞。循環鼠類GDF15升高至~8 ng/ mL(圖19)。當腫瘤尺寸達到100 mg時，開始以抗癌劑索拉非尼(Sorafenib)治療，接著當達到10%重量損失時加入GDF15_001或IgG控制組(圖20)。GDF15_001投予到經索拉非尼(Sorafenib)治療之小鼠完全逆轉重量損失(圖20)。連同體重的改良，相較於索拉非尼(Sorafenib)+IgG控制組，索拉非尼(Sorafenib)+GDF15_001的組合增加存活(圖21)。
GDF15_001改良體重之能力亦在以抗癌劑順鉑治療的荷瘤小鼠中檢查。SCID小鼠皮下植入NSX-26115(衍生自人類非小細胞肺惡性腫瘤腺癌)腫瘤組織片段。循環人類GDF15升高到~4.5 ng/ mL(圖22)。當腫瘤尺寸達到100 mg時，達到10%重量損失並開始以抗癌劑順鉑治療連同GDF15_001或IgG控制組(圖23)。亦給予GDF15_001或IgG控制組而無順鉑。相對於IgG控制組，當與或不與順鉑一起給予時，GDF15_001的投予逆轉重量損失(圖23)。連同體重的改良，相較於順鉑+IgG控制組，順鉑+GDF15_001的組合增加存活(圖24)。
這些數據亦證實GDF15_001增加存活並逆轉以抗癌劑治療的荷瘤小鼠中的惡病質。因此，這些結果進一步指出GDF15_001是潛在新穎人類治療。實施例 15 ：抗 -GDF15 抗體之給藥
存在與辨識用於治療惡病質的抗-GDF15抗體的有效劑量和給藥方案相關的挑戰。總體有效劑量依賴於，患者初始循環GDF15濃度，這已知是可變的。此外，惡病質患者中游離GDF15量在回應療法時以不同速率減少。因此，對於給定的給藥間隔，可以定義有效劑量為給予70 kg患者在穩定狀態下整個給藥間隔期間減少游離GDF15量到低於0.5 ng/mL的量(即，在一些劑量之後使得劑量之後的最大濃度實質上與前一次劑量之後的最大濃度一樣)。基於針對健康個體報告的數據，選擇此游離GDF15量(Wollert等人，2017, J Appl Lab Med 1(5)：510-521)。因此，本文揭露的有效劑量被描述為受影響的個體中起始游離GDF15量的函數，並且該量減少至低於0.5 ng/mL。可測量樣本中游離GDF量，例如，使用電致化學發光免疫檢定法，諸如ELECSYS GDF15檢定法(Roche Diagnostics)。ELECSYS GDF15檢定法使用生物素-鏈黴親和素技術，並基於三明治免疫檢定法原理(見Wollert等人，2017)。本領域中已知可以測量樣本中游離GDF15量的其他檢定法亦可用以測定患者中的游離GDF15量。
為了克服預測本文揭露的抗體的有效劑量和劑量方案的挑戰，開發了二區室藥物動力學模式。藉由將給藥特定量到貯庫中來模擬-抗GDF15抗體的皮下給藥，其然後以特定的速率ka 吸收到中央區室中。抗體分佈到周邊區室中，然後從中央區室清除。如本文所用，術語「貯庫」是指藥物儲存的位點(例如，皮下空間)，術語「中央區室」是指血管空間和高度灌注的器官(例如，肝、腎和肺)，及術語「周邊區室」是指灌注較少的組織(例如脂肪和肌肉)。
GDF15_001的參數藉由在表現人類FcRn的小鼠中GDF15_001的藥物動力學研究中的參數進行縮放來測定。簡言之，給6隻小鼠靜脈內給藥1 mg/kg之GDF15_001，並監測1000小時；所得的抗體藥物動力學符合二區室藥物動力學模式。本文揭露的其他抗體的參數可以以類似的方式確定。GDF15_001產生於中央區室，分佈到周邊區室，並從二個空間清除。體積和分配率被假設是與在上述的藥物動力學研究中對GDF15_001測定的相同。基於定量穩定同位素標記的胺基酸併入到在二個健康的志願者中循環GDF15的實驗(實驗方法基本上提供在Lassman等人，2014, Clin Chem 60(9)：1217-1224)選擇轉換以提出GDF15_001之16.6小時半衰期。選擇GDF15合成率以提出GDF15的特定循環量。此循環量可能代表針對給定疾病所報告的最高量(用於治療具有相應病症的所有患者)，閾值較低但仍高於對個體特定部分的值(控制最大劑量，同時允許治療大多數患者)，或對特定個體決定的特定量，以允許更精確的個體化劑量。對於與人類疾病相關的GDF15量的範圍，見，例如，Mutlu等人，2015, Inflammation 38(5):1805-1813；Montero等人，2016, PLoS One 11(2):e0148709；Kempf  and Wollert, 2009, Heart Fail Clin 5(4):537-547；及Lerner等人，2016, Oncol Lett 12(5): 4219-4223。
在中央和周邊區室二者中，基於抗體的締合和解離速率常數，GDF15可以可逆地結合到抗-GDF15抗體。基於Biacore測量，對於GDF15_001，確定這些參數分別為1.59 × 106 M-1 s-1 (ka )與3.42 × 10-5 s-1 (kd )，分別(等同於21.3 pM的平衡解離常數)(見上面的表8)。可以對本文揭露的其他抗體進行類似的檢定法，或者參數可以用作輸入參數以探索改變親和性對劑量的影響。不希望受任何特定理論的限制，抗體/GDF15複合物分佈在二個區室之間，並使用對抗體本身測定的相同藥物動力學參數從中央區室清除。二區室給藥模式的參數顯示在表14中。
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GDF15_001之預測治療有效皮下劑量作為在個體中的起始游離GDF15量的函數顯示於表15、16、和17與圖25、26、和27。顯示每週、每雙週和大約每月給藥的預測治療有效劑量。
本文提供的給藥數據建議GDF15_001可以以這樣的量和給藥間隔投予，使得其可以達到游離GDF15量的可能治療量的關閉減少。這些結果證實GDF15_001的給藥可以在給藥方案中達到和維持，該方案既可行且將確保患者順應性。
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實施例 16 ：在 RCC 皮下模式中以抗 -PD-1(F2) 抗體與抗 -GDF15(GDF15-297) 之組合治療
本文所揭露的數據證實在鼠類RENCA轉移之腎細胞惡性腫瘤(RCC)模式中抗GDF15抗體與抗-PD1抗體組合療法之協同治療效果。
如下產生荷瘤動物：從Jackson Laboratories購買六(6)至8週齡雌性BALB/c小鼠。將所有動物飼養在CID的無病原體的動物飼養所設施中，並根據Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)指南的程序進行實驗。從American Type Culture Collection(ATCC)購買RENCA細胞株。細胞培養在補充有10%胎牛血清(FBS)、2 mM的L-麩醯胺酸的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM)中在37℃下5%二氧化碳(CO2 )中，且在Research Animal Diagnostic Laboratory(RADIL)(Columbia, MO)對病原體IMPACT-測試。收穫在指數生長期生長的無病原體細胞並用於腫瘤接種。將BALB/c小鼠在右側皮下接種在0.1 mL的無血清DMEM中之0.2 × 106 RENCA。
如下進行腫瘤體積分析：當腫瘤達到目標尺寸時，將小鼠隨機分入治療組。治療在隨機化的同一天開始，即，第0天。使用卡尺在2維中每週二次測量腫瘤尺寸，並使用以下公式以立方毫米表示體積：V=0.5 L × W2 ，其中L是腫瘤的最長直徑，而W是垂直於L的直徑。每週記錄體重二次。
在這項研究中使用的治療抗體為：小鼠抗-小鼠PD1 F2(小鼠免疫球蛋白G1[mIgG1])，和小鼠抗-小鼠GDF15_0297(包含小鼠IgG1效應功能無D265A，即，在胺基酸殘基編號265處天門冬胺酸(Asp，D)為丙胺酸(Ala，A)，Fc中的突變。抗體GDF15_0297基本上是GDF15_001的小鼠替代抗體，其與該抗體類似地結合。同樣地，F2是小鼠替代抗體，其與沙珊單抗(sasanlimab)(RN888)類似地結合。在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(Life Technologies)中將抗-PD1抗體與抗-GDF15抗體各稀釋到濃度為2 mg/mL並在「處理0的天數」(d0)對每隻小鼠腹膜內(ip)給藥10 mg/kg。應用單向或2-向ANOVA來比較多組相對於同型控制組(陰性控制組小鼠IgG1)或其他處理組的統計學差異。應用非配對t檢驗來比較二組之間的統計學差異。P ＜0.05被認為是顯著差異。
RENCA模式用於評估組合抗-PD1之抗-GDF15在rRCC模式的治療效力，平均起始腫瘤尺寸25至38 mm3 (每組n=10隻動物)。在開始治療後監測動物二週。在移植後11天開始治療，即，i.p.投予抗-GDF15和抗-PD1。當相較於控制組同型處理組，抗-GDF15抗體與抗-PD1抗體組合治療顯著抑制RENCA rRCC皮下腫瘤的進展。在此設定下，抗-GDF15單一療法和抗-PD1單一療法在抑制腫瘤進展上無效(表18與表19)。
Figure 02_image081
Figure 02_image083
腫瘤體積以mm3 表示。N=每組內的動物數量；SEM=平均值的標準誤差。
Figure 02_image085
表19中顯示的統計分析結果證實以抗-GDF15抗體組合抗-PD1治療在RCC癌症模式中在腫瘤進展的早期階段具有協同效果。實施例 17 ：以抗 -PD1 抗體與抗 -GDF15 抗體之組合治療胰臟癌
此實施例說明抗-GDF15抗體和抗-PD1抗體組合療法在鼠轉移性胰臟腺癌模式，即，Pan02模式中的協同治療效果。為了協助在同位模式中腫瘤生長的辨識，Pan02(NHI/NCI)細胞用產生Pan02-螢光素酶細胞之螢火蟲螢光素酶構築體感染。
從Jackson Laboratories購買6隻8週齡雌性雌性B6(Cg)-Tyrc-2J /J(B6白化)小鼠。將所有動物飼養在CID的無病原體的動物飼養所設施中，並根據Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)指南的程序進行實驗。
Pan02細胞株獲自NHI/NCI。細胞培養在補充有10%胎牛血清(FBS)、2 mM L麩醯胺酸的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM)中在37℃下5%二氧化碳(CO2 )中，並且在Research Animal Diagnostic Laboratory (RADIL)(Columbia, MO)對病原體IMPACT-測試。收穫在指數生長期生長的無病原體細胞並用於腫瘤移植。白化B6小鼠中以20 µL之腫瘤細胞(包含0.2 × 106 mL Pan02-螢光素酶無血清DMEM與matrigel(Corning，ref 356237)之matrigel混合物)注射在胰臟。移植後4天，藉由發光量估算腫瘤負荷。將動物分級成組並開始試驗。為了檢測螢光素酶發射，動物經注射0.1 mL之30 mg/mL D-螢光素單鈉鹽 的鹽水(Pierce, # 88292)。在中等分箱，1 F/stop，暴露1至15秒後，在IVIS Spectrum CT(Caliper Life Science)上檢測發光量。藉由LivingImage 4.5.1軟體分析圖像。在減去背景值後，將ROI(感興趣區)中的腫瘤負荷計算為光子/秒。在一個例子中，招募時的平均發射為4.8*108 光子/秒。在另一個例子中，招募時的平均發射為1.8*108 光子/秒。
小鼠抗-小鼠PD1 F2抗體(小鼠免疫球蛋白G1[mIgG1])與小鼠抗-小鼠GDF15_0297抗體描述於實施例16。在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(Life Technologies)中將抗-PD1抗體與抗-GDF15抗體各稀釋到濃度為2 mg/mL並對每隻小鼠腹膜內(ip)給藥10 mg/kg。在另一例子中，抗-PD1抗體被稀釋至濃度為1 mg/mL並對每隻小鼠給藥5 mg/kg。在各情況下，PD-1抗體和GDF15抗體在同一天(處理0之天數)投予。
基於治療動物中的發光量每週監測腫瘤進展。如上所述測定發光量。每週記錄體重。
在移植後第35天，來自同型抗體、抗-GDF15抗體、抗-PD1抗體與抗-GDF15抗體+抗-PD1組合的動物之間腫瘤負荷的變化根據下式測定：腫瘤負荷的變化=(在d35的光子通量-在d4的光子通量)/第4天的光子通量。相較於抗-PD1、抗-GDF15與同型組(分別為4/12；1/12與0/12)，抗-GDF15抗體+抗-PD1抗體治療顯著降低了以Pan02腫瘤移植的動物之腫瘤負荷，導致12隻動物中的8隻顯示腫瘤消退的徵象。結果總結於下表20中。在表20中，列出每組12隻動物中各隻的個別結果。
Figure 02_image087
相較於存活66天(抗-PD1)、52.5天(抗-GDF15)與45天(同型控制組)，腫瘤負荷的這些變化對應於抗-GDF15抗體+抗-PD1抗體治療的動物增加之存活，平均存活增加至90天。當相較於實驗結束時(第145天)的控制組同型組p值時，p值為p＜0.0001(抗-GDF15+抗-PD1)，p=0.0010(抗-PD1)及無統計學顯著性(ns)(抗-GDF15)。在79天，在以抗-GDF15+抗-PD1組合與抗-PD1單療法治療的動物存活之間有統計學顯著，反映在Matel-Cox檢驗建立的p=0.05，以及Gehan-Breslow-Wilcoxon檢驗建立的p=0.042。
在另一個例子中，在具有在招募時發光發射估計的平均腫瘤負荷1.8*108 光子/秒之Pan02胰臟模式中(每組n=13隻動物)，評估10 mg/kg之抗-GDF15抗體組合5 mg/kg之抗-PD1抗體的治療效力。移植後4天開始治療。在39天，抗-GDF15+抗-PD1-治療組的腫瘤體積下降至低於在38%的動物的檢測限值。PD1單療法僅在15%的動物中導致腫瘤減少，而同型控制組和抗-GDF15-單療法在此設定下均未呈現治療益處。
這些結果證實在同位胰臟癌模式中對進展以抗-GDF15抗體組合抗-PD1治療提供協同抗腫瘤效果，大於分開提供各治療的加成效果。
因此，這些數據證實抗-GDF15和PD-1軸拮抗劑的組合治療是治療癌症的新穎有用協同療法。實施例 18. 用於測試癌症免疫療法之效力的小鼠同源模式選擇
為了選擇合適的模式以測定抗-GDF15療法的治療效力，測試以下小鼠同源細胞株：MC38(由University of California，Los Angeles，CA的Dr. Antoni Ribas友情提供)、Pan02(NHI/NCI)、4T1(ATCC)、RENCA(ATCC)、CT26(ATCC)、ID8(University of Kansas與University of Kansas Medical Center)、LL2(ATCC)、B16F10(ATCC)及GL261(NHI/NCI)。藉由小鼠GDF15 ELISA套組(R&D Systems, MGD 150)分析條件培養基中的GDF15量。細胞一式三份接種0.3 × 106 個細胞/孔在6孔細胞培養皿(353224，Corning)中，並培養48小時。收集上清液，以2.000 rpm離心5至10分鐘，轉移到新管中並在+4℃下儲存。藉由BioRad TC 20細胞計數器的台酚藍排除法估計活/死細胞的量。記錄各樣本的體積和細胞數。結果呈現於表21中。
Figure 02_image089
為了選擇合適的活體內模式，藉由眼眶後方法收集來自荷瘤動物的血液並轉移至微型血液採集管(365967，BD)。記錄腫瘤體積並在適用時調節至200 mm3 。從末期動物(移植後35至40天)收集來自攜帶Pan02同位腫瘤的動物的血清。收集無腫瘤遺傳背景匹配動物的血清作為控制組。藉由小鼠GDF15 ELISA套組測定小鼠GDF15量，並呈現於表22中。
Figure 02_image091
在轉移性腎RCC小鼠模式(RENCA)和胰臟癌模式(Pan02)被辨識為活體內GDF15最高的生產者且進一步使用在活體內研究，以測定在與免疫腫瘤為主之療法組合之抗-GDF15療法的治療潛力。實施例 19. 以抗 -CD40 抗體與抗 -GDF15 抗體組合治療
此實施例說明抗-GDF15抗體與抗-CD40抗體組合療法在鼠類RENCA轉移性RCC模式的治療活性。
從Jackson Laboratories購買六(6)至8週齡雌性BalbC小鼠。將所有動物飼養在CID的無病原體的動物飼養所設施中，並Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC)指南的程序進行實驗。
RENCA細胞株從American Type Culture Collection(ATCC)購買。細胞培養在補充有10%胎牛血清(FBS)、2 mM L-麩醯胺酸的Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM)中在37℃下5%二氧化碳(CO2 )中，並在Research Animal Diagnostic Laboratory(RADIL)(Columbia, MO)對病原體IMPACT-測試。收穫在指數生長期生長的無病原體細胞並用於腫瘤接種。將BalbC小鼠在右側皮下接種在0.1 mL之無血清DMEM的0.2 × 106 RENCA。
將抗-小鼠CD40抗體FGK45(小鼠IgG1)和抗-小鼠GDF15抗體GDF_0297(包括小鼠效應功能無IgG1 Fc，其包含在胺基酸殘基編號265從天門冬胺酸取代為丙胺酸(D265A))稀釋至濃度在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(Life Technologies)中為2 mg/mL，並腹膜內(ip)每隻小鼠給藥10 mg/kg。在另一例子中，將抗-CD40稀釋至1 mg/mL的濃度，並每隻小鼠給藥5 mg/kg。
當腫瘤達到目標尺寸時，將小鼠隨機分入治療組。治療在隨機化的同一天開始。使用卡尺在二維上每週二次測量腫瘤尺寸，並且使用以下公式以立方毫米表示體積：V=0.5 L × W2 ，其中L是腫瘤的最長直徑，W是垂直於L的直徑。每週二次記錄體重。
為了分析組合治療對腫瘤浸潤性和脾臟白血球狀態的結果，進行以下分析。使用MACS™與Miltenyi Mouse Dissociation Kit(Miltenyi Biotec)根據製造商程序加修飾，將腫瘤散佈成單細胞懸浮液。使用氯化銨-鉀(ACK)裂解緩衝液(Life Technologies)去除紅血球。用FACS染色緩衝液(補充有10%FBS的PBS)洗滌細胞二次，最後再懸浮於FACS染色緩衝液中。對於脾臟白血球，用3 mL含有0.2 mg/mL之Liberase TL(5401020001, Roche)和20 u/mL DNase I Roche 4716728001, Roche)的分解溶液灌注切下的脾臟。將脾臟在37℃培養15分鐘並輕輕搖動。在培養尾聲時，藉由加入1 mL之FBS淬滅酵素活性，將脾臟切成小塊並過濾至50 mL錐形管，在PBS中洗滌細胞，以1500 fpm離心5分鐘，及將所得之團塊再懸浮於冷MACS緩衝液。ACK裂解緩衝液用於去除紅血球。
在加入表現型mAb到特異性染色免疫細胞之前，將等分試樣的細胞與0.5 µg/106 細胞的小鼠BD Fc Block(Biolegend, 101310)在PBS中的10%大鼠血清中預培養10分鐘。藉由在4℃下培養細胞30分鐘來標記細胞表面抗原。除去未結合的mAb後，用FACS染色緩衝液洗滌細胞二次，在固定緩衝液(PBS+1%多聚甲醛)中固定，並在4℃黑暗下儲存直至藉由流式細胞術分析。根據製造商的程序，使用Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer組(eBioscience)進行細胞內染色。使用Fortessa™ SORP(BD Biosciences)獲取流式細胞術數據，並使用FlowJo™(TreeStar Inc.)分析。
用於細胞表面或細胞內染色的抗體購自BD Biosciences、eBioscience、Invitrogen、或Biolegend。其為大鼠抗-小鼠CD45-PerCP-Cy5.5(選殖株30-F11、BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠CD11b Texas Red(M1/70，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠CD25-BUV395(PC61，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠Ly6G-FITC(1A8，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠CD90.2-BV786(53-2.1，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠CD8-BV650(53-6.7，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠Ly6C-BV421(AL-21，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠F4/80-PECy7(BM8，Invitrogen™)、大鼠抗-小鼠CD86-BV605(GL1，BD Biosciences)、Armenian-倉鼠抗-小鼠CD49a-APC(HMA1，BioLegend)、大鼠抗-小鼠MHCII(IA-IE)-Alexa Fluor 700(M5/114.15.2，BioLegend)、大鼠抗-小鼠CD4-V450(RM4-5，BD Biosciences)、大鼠抗-小鼠Foxp3-PE(FJK-16s，eBioscience)。為了避免染色假影，將樣本保持在Brilliant Stain Buffer(BD Biosciences)中。使用LIVE/DEAD Fixable eFluor™ 780 Dead Cell Stain Kit(Invitrogen)將活細胞與死細胞分離。
結果表示為平均值±SEM。使用GraphPad Prism 6.0進行統計學分析。應用單向或2-向ANOVA來比較多個組相對於同型控制組或其他治療組之間的統計學差異。應用非配對t檢驗來比較二組之間的統計學差異。P ＜0.05被認為是顯著差異。
RENCA模式用於在rRCC模式中評估組合抗-CD40的抗-GDF15的治療效力，平均起始腫瘤尺寸25至38 mm3 (每組n=10隻動物)。當腫瘤體積達到2000 mm3 或20%體重損失時，犧牲動物。對於同型、單獨抗-GDF15抗體、及單獨抗-CD40抗體與抗-GDF15抗體+抗-CD40抗體組合，帶腫瘤之動物的中位數生存分別為26、25.5、32.5及34天。當相較於同型、單獨抗-GDF15抗體及單獨抗-CD40抗體組中的0%，抗-CD40抗體+抗-GDF15抗體組亦產生30%完全反應者。
在分開的研究中，在RENCA復發腎細胞惡性腫瘤(rRCC)模式中評估抗組合二種不同劑量的抗-CD40抗體(10 mg/kg與5 mg/kg)之抗-GDF15抗體的治療效力，平均起始腫瘤尺寸為47至54 mm3 (每組n=10隻動物)。結果總結在表23和表24。
Figure 02_image093
Figure 02_image095
腫瘤體積以mm3 表示。N=各組內的動物數量；SEM=平均值的標準誤差。
Figure 02_image097
對同型、單獨抗-GDF15抗體、抗-CD40抗體(5 mg/kg)、抗-CD40抗體(10 mg/kg)、及抗-GDF15抗體(10mg/kg)+抗-CD40抗體(5 mg/kg)組合與抗-GDF15抗體(10mg/kg)+抗-CD40抗體(10 mg/kg)組合，帶腫瘤的動物的中位數存活分別為29.5、29.5、36、36、38及44.5天。
為了測定腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)在抗-GDF15媒介的抗腫瘤反應中的貢獻，在最後一次治療後24小時RENCA腫瘤中單離TIL並分析與抗-腫瘤免疫反應相關的標誌物。結果總結在圖29(藉由非配對t檢驗測定p值；p=0.0026)。
相較於同型治療組，組合治療[抗-GDF15抗體(10 mg/kg)+抗-CD40抗體(10 mg/kg)]增加作為腫瘤中的CD11b+；F4/80+；Ly6C-細胞門控的巨噬細胞的活化狀態(MHCII MFI)，平均為187%(圖29)。相較之下，抗-CD40單療法增加MHCII MFI 67%(圖29)。抗-GDF15單療法沒有增加巨噬細胞的活化狀態(圖29)。
同型和抗-GDF15組中CD8+T細胞/調節性T細胞(Treg)的比分別為2.4和2.1(圖30，實心圓形和實心三角形)。單獨的抗-CD40抗體治療中CD8+T細胞/Treg比增加至17(圖30，空心圓圈)。相較之下，以抗-GDF15抗體加抗-CD40抗體的組合治療導致CD8+T細胞/Treg比為84(圖30，空心三角形)。
這些結果證實，基於抗-CDF15的療法有效增強抗-CD40-療法的抗腫瘤效力。
除了在RRC模式中增強抗-CD40-療法的抗腫瘤效力之外，基於抗-GDF15的療法緩和抗-CD40-誘導的毒性(體現在所治療動物之體重損失)。基於抗-CD40的療法導致所治療之動物體重損失4.43%，但相較於在同型控制組治療組中之體重增加1.2%，抗-GDF15抗體+抗-CD40抗體組合組證實體重增加1.5%(各組n=20隻動物，抗-CD40抗體對抗-CD40抗體+抗-GDF15抗體，藉由非配對t檢驗p=0.0006)。抗-CD40抗體+抗-GDF15抗體組中體重的恢復伴隨著細胞激素表現的減少，細胞激素表現一般與治療動物血清中與細胞激素媒介的毒性相關。
如實施例1所述從治療的動物收集血清樣本。藉由從Meso Scale Discover® 之V-PLEX® Proinflammatory Panel 1(小鼠)Kit(Mescoscale® K15048D)分析細胞激素量。以稀釋劑41(Mescoscale® R50AH-1)將各樣本稀釋1至4，並根據製造商的程序一式三份檢定。藉由Meso Scale Discovery® Quickplex® SQ 120機器與Discovery工作台軟體分析結果。分析以下細胞激素的表現：IFNγ、IL10、IL12p70、IL1β、IL2、IL4、IL5、IL6、KC/GRO、TNFα。如圖31所示，許多促炎性細胞激素(IFNγ(IFNg)、TNFα (TNFa)、IL6、IL10、KC/GRO)的表現量在暴露於抗-GDF15治療後在抗-CD40-治療組顯著減少(n=5，抗-CD40對抗-CD40+抗-GDF15，藉由2向ANOVA檢驗，p=0.0044)。
這些結果證實以抗-GDF15抗體組合抗-CD40治療具有協同抗腫瘤效果，伴隨在腫瘤位置CD11b+；F4/80+細胞活化增加量及增加CD8+ T細胞/調節性T細胞(Treg)的比。此外，抗-GDF15療法緩和與增加細胞激素產生相關的抗-CD40-療法毒性的臨床徵象。實施例 20. 以抗 -CD40 抗體與抗 -GDF15 抗體治療胰臟癌
此實施例說明抗-GDF15抗體與抗-CD40抗體組合療法在鼠類胰臟腺癌模式(Pan02)中的治療活性。如實施例19中所述產生荷瘤動物。在減去背景值後，在ROI(感興趣區)中計算腫瘤負荷為光子/秒。招募時的平均發射為4.8*108 光子/秒。
在此研究中，所用的抗體為：小鼠抗-小鼠CD40抗體FGK45(小鼠免疫球蛋白G1 [mIgG1])(10 mg/kg)與小鼠抗-小鼠GDF15_0297(小鼠IgG1效應功能無D265A突變)(10 mg/kg)。
相較於單獨抗-CD40抗體治療組為106天，單獨抗-GDF15抗體治療組為52.5天，及同型控制組為45天，抗-GDF15抗體+抗-CD40抗體所治療動物的中位數存活為126.5天。
這些結果證實以抗-GDF15抗體組合抗-CD40治療對胰臟癌的進展具有協同抗腫瘤效果。實施例 21. GDF15 中和抗體逆轉巨噬細胞所媒介之腫瘤毒殺的 GDF15 所媒介之抑制
此實施例說明GDF15在調節巨噬細胞的腫瘤毒殺活性的功能。
ip注射1 mL 3% Brewer Thioglycollate培養基(B2551，Sigma)後5天，從C57Bl6小鼠中單離腹膜巨噬細胞。將巨噬細胞以0.35 × 106 細胞/孔接種於單獨完全巨噬細胞培養基中的24孔細胞培養板濃度中(RPMI 1640補充有10%熱失活之FBS、2 mM L-麩醯胺酸、100 u/ml青黴素、0.1 mg/ml鏈黴素、10 µM丙酮酸鈉、100 µM非必需胺基酸、25 mM HEPES [pH 7.4]、50 µM β-巰基乙醇)或在測試的細胞激素和抗體存在下。研究中使用以下細胞激素和抗體：重組小鼠GDF15(大腸桿菌純化，RD系統8944-GD)、抗-小鼠GDF15_0297抗體「297」、及抗-GDF15_001。與重組小鼠GDF15(10 nM)及抗體(各100 nM)培養3小時之後，細胞經LPS(10 ng/ml，L2654，Sigma)和IFNγ(100 u/ml，485M100/CF，R&D Systems)處理，以達到活化巨噬細胞。第二天，根據製造商的指示以CSFE(C34554，Invitrogen)標記Pan02細胞，並以1：4的比與活化之巨噬細胞共同接種。24小時後，與TrypLE Express™培養後收集巨噬細胞和腫瘤細胞，並如實施例17所述藉由FACS分析。藉由大鼠抗-小鼠CD11b BUV395(M1/70, BD Biosciences)辨識骨髓細胞，腫瘤細胞辨識為CSFE-陽性/CD11b-陰性群體，藉由DAPI(4′,6-二甲脒基-2-苯基吲哚)(62247，Thermo Scientific)將活細胞與死細胞分離。
如圖32所示，重組GDF15抑制巨噬細胞所媒介的腫瘤細胞毒殺(閉合三角形)。藉由以抗-GDF15抗體(空心圓圈和空心三角形)治療來逆轉此GDF15所媒介的抑制。
這些結果證實以抗-GDF15抗體治療在促進免疫細胞的抗致腫瘤性活性為有效。
儘管已經參考各種應用、方法、套組和組成物描述所揭露的教示，但是應當理解，在不脫離本文的教示和下面主張的發明下，可以進行各種改變和修飾。提供前述實施例是為了更好地說明所揭露的教示，並且不意在限制本文呈現的教示的範疇。雖然已經根據這些例示性具體實施例描述本教示，但是發明所屬技術領域中具有通常知識者將容易理解，這些例示性具體實施例的許多變化和修飾是可能的，而無需過度實驗。所有此等變化和修改都在當前教示的範疇內。
本文引用的所有參考文獻，包括專利案、專利申請案、論文、教科書等、以及其中引用的參考文獻，在它們尚未及的範圍，出於所有目的整體以引用方式併入本文。於所併入的文獻和類似材料中的一或多者與本申請不同或相矛盾之事件中，包括，但不限於定義的術語、術語用法、所描述的技術等，則本申請控制。
對於發明所屬技術領域中具有通常知識者顯而易見的是，在不脫離本發明的範疇或精神的情況下，可以在本發明中進行各種修飾和變化。考慮到本文揭露的本發明的說明書和實施例，本發明的其他具體實施例對於發明所屬技術領域中具有通常知識者而言是顯而易見。所欲為說明書和實施例僅被認為是例示性，本發明的真實範疇和精神由所附請求項指出。
[圖1A]顯示描述如差示掃描量熱法(DSC)所測定之本發明抗-GDF15抗體的轉移溫度(Tm 1)的圖。Tm 1表示抗體的CH 2為50%未折疊時的溫度。
[圖1B]顯示描述如差示掃描量熱法(DSC)所測定之本發明抗-GDF15抗體的轉移溫度(Tm 2)的圖。Tm 2表示抗體的Fab為50%未折疊時的溫度。
[圖1C]顯示描述如差示掃描量熱法(DSC)所測定之本發明抗-GDF15抗體的轉移溫度(Tm 3)的圖。Tm 3表示抗體的CH 3為50%未折疊時的溫度。
[圖2]顯示如Anton Parr儀器所分析的GDF15_001之黏度。在約140 mg/ml達到可接受之黏度限值(20cP)。
[圖3]顯示在健康雄性C57Bl6N小鼠中腺相關的病毒(AAV)-人類GDF15注射液之後的人類血漿GDF15濃度。AAV注射液之後在13及14天(對應於圖3上第-2天及第 -1天)經由ELISA(R&D Systems DGD150)測量血漿GDF15。水平線代表平均值。每組n=9。
[圖4]描述顯示GDF15_001逆轉健康小鼠中GDF15誘導之重量損失之能力的圖。箭頭指出AAV-人類GDF15注射(第-15天)及第一單株抗體(mAb)劑量(第0天)之時間點。以GDF15_001(30 mg/kg，每第3天(Q3D)皮下(SC))或免疫球蛋白G(IgG)控制組處理健康雄性C57Bl6N小鼠。值為平均值±SEM。每組n=8。使用以自我迴歸(1)共變異數結構的重複測量ANOVA比較給藥期間的第4至6天處理組之間自基線體重的百分比改變。使用Tukey-Kramer多重比較調整控制在變異數的重複測量分析(ANOVA)處理組比較的實驗誤差率。＊為p＜0.0001，相對於控制組+IgG(第4至6天)；†為p＜0.0001，相對於GDF15 +GDF15_001(第4至6天)。
[圖5]描述顯示GDF15_001逆轉GDF15誘導之脂肪組織質量損失之能力的圖。健康雄性C57Bl6N小鼠在第-15天經注射AAV-人類GDF15，接著在第0天開始第一mAb劑量。以GDF15_001(30 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之mAb處理繼續6天。在第6天經由核磁共振造影(MRI)測量身體組成。值為平均值±SEM。每組n=8。以ANOVA進行統計分析。＊為p＜0.0001，相對於控制組+IgG，†為p＜0.01，相對於GDF15+GDF15_001。
[圖6]描述顯示GDF15_001逆轉GDF15誘導之瘦肉組織質量損失之能力的圖。健康雄性C57BL6N小鼠在第-15天經注射AAV-人類GDF15，接著在第0天開始第一mAb劑量。以GDF15_001(30 mg/kg，皮下每第三天)或IgG控制組之mAb處理繼續6天。第6天經由MRI測量身體組成。值為平均值±SEM。每組n=8。以ANOVA進行統計分析。＊為p＜0.01，相對於控制組+IgG；†為p＜0.01，相對於GDF15+GDF15_001。
[圖7]描述顯示AAV-鼠類GDF15注射於健康雄性C57Bl6N小鼠之後鼠類血漿GDF15濃度的圖。AAV注射之後第9天(對應到圖5第9天)經由ELISA(R&D Systems MGD150)測量血漿GDF15。水平線代表平均值。每組n=6。處理之間以t-測試使用Satterthwaite調整不等變異比較平均血漿GDF15量。＊為p＜0.001，相對於控制組。
[圖8]顯示描述GDF15_001逆轉健康小鼠中GDF15誘導之重量損失之能力的圖。箭頭指出AAV-鼠類 GDF15注射(第0天)及第一mAb劑量(第11天)的時間點。以GDF15_001(30 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理健康雄性C57Bl6N小鼠。值為平均值±SEM。每組n=10。使用具未結構化共變異數結構之重複ANOVA比較給藥期間的第12至16天處理組之間基線體重之百分比。在藉由時間相互作用的統計學上顯著的處理存在下，使用適合於完全隨機化設計的ANOVA，在第16天對基線體重的百分比進行處理組之間的比較。＊為p＜0.0001，相對於第16天控制組+IgG，†為p＜0.0001，相對於第16天hGDF15+PF-06946860。
[圖9]顯示描述在健康小鼠中GDF15處理之後GDF15_001增加食物攝入之能力的圖。以GDF15_001(30 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理健康雄性C57Bl6N小鼠。每天測量食物攝入，並計算累積食物攝入。值為平均值±SEM。每組n=8至10。使用ANOVA對於使用Bonferroni多重比較調整在第11至16天期間累積食物攝入之處理組比較。＊為p＜0.001，相對於控制組+IgG，†為p＜0.001，相對於控制組+GDF15_001，p=0.0505 GDF15+GDF15_001，相對於GDF15+IgG。
[圖10]顯示描述GDF15_001在HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中逆轉重量損失之能力的圖。箭頭指出HT-1080細胞皮下植入物(第-13天)及第一mAb劑量(第0天)之時間點。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠。值為平均值±SEM。每組n=9至10。使用具自我迴歸(1)共變異數結構之重複測量ANOVA比較給藥期間的第9至11天處理組之間自基線重量的百分比改變(其中疾病已經穩定，且動物尚未開始因為體重損失而退出)。＊=p＜0.0001 HT-1080+IgG，相對於NTB+PBS及HT-1080+GDF15_001(第9至11天)。
[圖11]顯示描述GDF15_001逆轉在HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中脂肪量損失之能力的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第-13天經植入(皮下)HT-1080細胞，接著在第0天開始第一mAb劑量。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之mAb處理繼續18天。在第18天經由迴聲MRI測量身體組成。值為平均值±SEM。每組n=9至10。以ANOVA進行統計分析。＊=p＜0.0001 HT-1080+IgG，相對於NTB+PBS及HT-1080+GDF15_001。
[圖12]顯示描述GDF15_001逆轉在HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中無腫瘤瘦肉組織質量損失之能力的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第-13天經植入(皮下)HT-1080細胞，接著在第0天開始第一mAb劑量。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之mAb處理繼續18天。在第18天經由迴聲MRI測量身體組成。值為平均值±SEM。每組n=9至10。以ANOVA進行統計分析。＊=p＜0.001 HT-1080+IgG，相對於NTB+PBS，†=p＜0.0001 HT-1080+IgG，相對於HT-1080+GDF15_001。
[圖13]顯示描述GDF15_001在HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中延長存活之能力的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第-13天經植入(皮下)HT-1080細胞，接著在第0天開始第一mAb劑量。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之mAb處理繼續直到死亡或安樂死(根據Institutional Animal Care and Use Committee指南，由不良健康及/或＞30%重量損失決定)。每組n=9至10。使用對數秩統計將Kaplan-Meier存活曲線擬合到失敗時間數據以比較處理組。＊為p＜ 0.0001，相對於HT-1080+GDF15_001組。
[圖14]顯示描述在安置於熱中性(86℉)之HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中人類血漿GDF15濃度的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第-13天經植入(皮下)HT-1080細胞，接著第0天開始第一mAb(IgG控制組，10 mg/kg，SC，Q3D)劑量。在第18天經由ELISA(R&D Systems DGD150)測量血漿GDF15。水平線代表平均值。n=7。
[圖15]顯示描述GDF15_001在安置於熱中性(86℉)之HT-1080(人類纖維肉瘤細胞株)荷瘤小鼠中逆轉重量損失之能力的圖。箭頭指出HT-1080細胞皮下植入物(第-13天)與第一mAb劑量(第0天)之時間點。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠。值為平均值±SEM。每組n=10。使用具未結構化共變異數結構之重複測量ANOVA比較給藥期間的第1至13天處理組之間的基線體重百分比，接著使用ANOVA比較在第7天及第13天處理組之間。然後使用來自ANOVA的合併變異數估計，以t-測試來測試處理組之間感興趣的比較。使用Bonferroni多重比較調整控制處理組比較的實驗誤差率。＊=p＜0.0001，相對於NTB+IgG及HT-1080+GDF15_001(第7及13天)。
[圖16]顯示描述在PA-1065(衍生自胰臟腫瘤肝轉移)荷瘤小鼠中人類血漿GDF15濃度的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第-18天經植入(皮下)PA-0165腫瘤組織，接著劑量第0天開始第一mAb(IgG控制組，10 mg/kg，SC，Q3D)。在第27天經由ELISA(R&D Systems DGD150)測量血漿GDF15。水平線代表平均值。n=14。
[圖17]顯示描述GDF15_001避免在PA-0165(衍生自人類胰臟腫瘤肝轉移)荷瘤小鼠中重量損失之能力的圖。箭頭指出PA-0165腫瘤組織皮下植入物(第-18天)及第一mAb劑量(第0天)之時間點。以處GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠。值為平均值±SEM。每組n=10至17。使用具未結構化共變異數結構之變異數的重複測量分析比較給藥期間的第10至16天處理組之間的基線體重百分比。在藉由時間相互作用的統計學上顯著的處理存在下，在第16天使用來自重複測量ANOVA之合併的變異數估計，以t測試進行處理組之間的比較。使用Bonferroni多重比較調整控制處理組比較的實驗誤差率。＊=p＜0.0001，相對於NTB+PBS及PA-0165+GDF15_001。
[圖18]顯示描述GDF15_001在PA-1065(衍生自人類胰臟腫瘤肝轉移)荷瘤小鼠延長存活之能力的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第0天開始的第一mAb劑量之前18天經植入(皮下)PA-0165腫瘤組織。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理mAb繼續直到死亡或安樂死(根據Institutional Animal Care and Use Committee指南，由不良健康及/或＞30%重量損失決定)。每組n=17。使用對數秩統計將Kaplan-Meier存活曲線擬合到失敗時間數據以比較處理組之間的存活率。＊為p＜0.01，相對於PA-0165+GDF15_001。
[圖19]顯示描述在於熱中性(86℉)之RENCA(鼠類腎腺癌細胞株)荷瘤小鼠中鼠類血漿GDF15濃度的圖。雌性Balb/c小鼠經植入(皮下)RENCA細胞且在研究尾聲(對應圖17)經由ELISA(R&D Systems MGD150)測量血漿GDF15。值為平均值。每組n=10至12。使用具有對異質變異數Kenward-Roger調整之ANOVA於累積食物攝入且使用Tukey-Kramer多重比較調整於處理組之間自然對數轉換的血漿GDF15以控制實驗誤差率。對自然對數轉換的GDF15平均值和95%信賴區間估計值產生幾何平均值。使用Shapiro-Wilks Test和Q-Q Plot評估所有反應變量是否符合常態性假設。＊為p＜0.0001，不同於NTB+媒劑，‡為p＜0.0001，不同於NTB+索拉非尼(Sorafenib)，†為p＜0.01，相對於RENCA+索拉非尼(Sorafenib)+IgG。
[圖20]顯示描述GDF15_001逆轉在以抗癌劑治療且安置於熱中性(86℉)之RENCA(鼠類腎腺癌細胞株)荷瘤小鼠中重量損失之能力的圖。箭頭指出RENCA細胞皮下植入物(第-12天)、第一索拉非尼(Sorafenib)劑量(第-2天)及第一mAb劑量(第0天)之時間點。以索拉非尼(Sorafenib)(15 mg/kg，PO，QD)及GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理雌性Balb/c小鼠。值為平均值±SEM。每組n=10至12。使用具異質自我迴歸(1)共變異數結構之重複測量ANOVA比較給藥期間的第3至7與13與17天處理組之間自基線重量的百分比改變。使用Tukey-Kramer多重比較調整以控制重複測量ANOVA中處理組比較的實驗誤差率。＊＊為p＜0.0001，不同於NTB+媒劑(第3至7天)，＊為p＜0.0001，不同於NTB+索拉非尼(Sorafenib)(第13至17天)，†為p＜0.0001，相對於RENCA+索拉非尼(Sorafenib)+GDF15_001(第13至17天)。
[圖21]顯示描述GDF15_001在以抗癌劑治療且安置於熱中性(86℉)之RENCA(鼠類腎腺癌細胞株)荷瘤小鼠中延長存活之能力的圖。雌性Balb/c小鼠在第一索拉非尼(Sorafenib)劑量之前10天經植入(皮下)RENCA細胞，接著第一mAb劑量2天之後(對應第0天)。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之索拉非尼(Sorafenib)(15 mg/kg，PO，QD)及mAb處理繼續直到死亡或安樂死(根據Institutional Animal Care and Use Committee指南，由不良健康及/或＞30%重量損失決定)。每組n=10至12。使用對數秩統計將Kaplan-Meier存活曲線擬合到失敗時間數據以比較處理組之間存活率。＊為p＜0.01，相對於RENCA+索拉非尼(Sorafenib)+GDF15_001。
[圖22]顯示描述在NSX-26115(衍生自人類非小細胞肺惡性腫瘤腺癌)荷瘤小鼠中人類血漿GDF15濃度的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠經植入(皮下)NSX-26115腫瘤組織且在研究尾聲(對應圖20)經由ELISA(R&D Systems DGD150)測量血漿GDF15。每組n=10至12。使用具有對異質變異數Kenward-Roger調整之ANOVA以比較不同處理組之間血漿中的GDF15量。使用直方圖與Shapiro-Wilk測試估算常態性且使用Levene’s測試估算變異數的均齊性。使用Tukey-Kramer方法調整處理組的成對比較以進行多重比較。＊為p＜0.01，相對於所有其他組。
[圖23]顯示描述GDF15_001逆轉在以或無抗癌劑治療的NSX-26115(衍生自人類非小細胞肺惡性腫瘤腺癌)荷瘤小鼠中重量損失之能力的圖。箭頭指出NSX-26115腫瘤組織皮下植入物(第-30天)、第一順鉑劑量(第0天)及第一mAb劑量(第0天)之時間點。以順鉑(5 mg/kg，IP，Q7D)及/或GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組處理雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠。值為平均值±SEM。每組n=10至12。使用具有第一階自我迴歸共變異數結構的重複ANOVA，使用第17至19天的數據，比較處理組之間體重隨時間的百分比改變。此時疾病處於穩定狀態，治療與白天之間沒有顯著的相互作用。使用Mardia’s測試對偏態及峰度估算Multivariate常態性。在第10天進行藉由處理的單向ANOVA以估算在最大順鉑影響的當天處理組之間的差異，如給藥排程所示。使用Tukey-Kramer方法調整處理組的所有成對比較以進行多重比較。＊為p＜0.0001，相對於NTB+媒劑(第17至19天)，‡為p＜0.0001，相對於NSX-26115+GDF15_001(第17至19天)，†為p＜0.001，相對於NTB+順鉑(第17至19天)，§為p＜0.0001，相對於NSX-26115+順鉑+GDF15_001(第17至19天)，‡‡為p＜0.01，相對於NTB+媒劑(第10天)，＊＊為p＜0.0001，相對於NSX-26115+IgG(第10天)。
[圖24]顯示描述GDF15_001在以抗癌劑治療之NSX-26115(衍生自人類非小細胞肺惡性腫瘤腺癌)荷瘤小鼠中延長存活之能力的圖。雌性嚴重合併免疫缺陷小鼠在第一順鉑與mAb劑量(對應第0天)之前30天經植入(皮下)NSX-26115腫瘤組織。以GDF15_001(10 mg/kg，SC，Q3D)或IgG控制組之順鉑(5 mg/kg，IP，Q7D)與mAb處理繼續直到死亡或安樂死(根據Institutional Animal Care and Use Committee指南，由不良健康及/或＞30%重量損失決定)。每組n=10至12。使用對數秩測試的Kaplan-Meier存活曲線來比較組之間的存活對過早的安樂死。＊為p＜0.0001，相對於NSX-26115+順鉑+GDF15_001。
[圖25]顯示建議整個給藥間隔，對於GDF15_001能夠減少個體中游離GDF15量到低於0.5 ng/mL之每週皮下劑量的圖，作為個體中開始游離GDF15量的函數。
[圖26]顯示建議整個給藥間隔，對於GDF15_001能夠減少個體中游離GDF15量到低於0.5 ng/mL之每週皮下劑量的圖，作為個體中開始游離GDF15量的函數。
[圖27]顯示建議整個給藥間隔，對於GDF15_001能夠減少個體中游離GDF15量到低於0.5 ng/mL之每週皮下劑量的圖，作為個體中開始游離GDF15量的函數。
[圖28]提供顯示對應本發明GDF15抗體的SEQ ID NO之表格。
[圖29]描述總結抗-GDF15處理(實心三角形)、抗-CD40抗體處理(空心圓圈)、及組合處理(倒置空心三角形)之結果的圖。呈現MHCII表現量為在腫瘤浸潤性巨噬細胞群中之平均螢光強度(MFI)。
[圖30]描述總結抗-GDF15處理(實心三角形)、抗-CD40抗體處理(空心圓圈)、及組合處理(空心三角形)之結果的圖。
[圖31]描述總結抗-GDF15處理(倒置實心三角形)、抗-CD40抗體處理(空心三角形)、及組合處理(實心方塊)之結果的圖。
[圖32]描述總結抗-GD15_297抗體處理(空心圓圈)及抗-GD15_001抗體處理(空心三角形)之結果的圖。
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Claims (36)

  1. 一種特異性結合人類生長分化因子15(GDF15)之抗體、或其抗原結合片段，包含下述之至少一者： a) 包含SEQ ID NO：95之胺基酸序列的輕鏈互補決定區1(LCDR-1)、包含SEQ ID NO：28之胺基酸序列的LCDR-2、包含SEQ ID NO：9之胺基酸序列的LCDR-3、包含SEQ ID NO：32之胺基酸序列的重鏈互補決定區1(HCDR-1)、包含SEQ ID NO：165之胺基酸序列的HCDR-2、及包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列的HCDR-3； b) 選自下列所組成之群組的LCDR-1胺基酸序列：SEQ ID NO：7、27、36、46、55、62、82、88、95、101、129、138、150、157、174、及184之序列； c) 選自下列所組成之群組的LCDR-2胺基酸序列：SEQ ID NO：8、28、37、47、70、108、114、122、130、175、及185之序列； d) 選自下列所組成之群組的LCDR-3胺基酸序列：SEQ ID NO：9、29、38、48、63、76、89、102、176、及186之序列； e) 選自下列所組成之群組的HCDR-1胺基酸序列：SEQ ID NO：17、32、41、58、66、117、125、133、153、171、及179之序列； f) 選自下列所組成之群組的HCDR-2胺基酸序列：SEQ ID NO：18、33、42、51、59、67、85、92、98、105、118、126、134、141、146、165、172、及180之序列； g) 選自下列所組成之群組的HCDR-3胺基酸序列：SEQ ID NO：1、19、43、52、79、111、119、135、147、154、160、173、及181之序列； h) 如在SEQ ID NO：166之胺基酸序列所列之該HCDR-1、HCDR-2、及HCDR-3胺基酸序列、及如在SEQ ID NO：163之胺基酸序列所列之該LCDR-1、LCDR-2、及LCDR-3胺基酸序列； i) 藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125038的質體之插入所編碼的胺基酸序列、及藉由在ATCC寄存且具有ATCC登錄號PTA-125039的質體之插入所編碼的胺基酸序列； j) 包含與SEQ ID NO：166之序列至少90%同一性的胺基酸序列之重鏈可變結構域(VH)、及包含與SEQ ID NO：163之序列至少90%同一性的胺基酸序列之輕鏈可變結構域(VL)； k) 包含SEQ ID NO：166之胺基酸序列的VH及包含SEQ ID NO：163之胺基酸序列的VL；以及 l) 與來自上述(a)至(k)的至少一抗體競爭結合GDF15之抗體。
  2. 如請求項1之抗體、或其抗原結合片段，包含選自下列所組成之群組的人類Fc結構域：IgA1 、IgA2 、IgD、IgE、IgM、IgG1 、IgG2 、IgG3 、或IgG4 的Fc結構域。
  3. 如請求項1至2中任一項之抗體、或其抗原結合片段，包含： a) 包含與SEQ ID NO：164之序列至少90%同一性的胺基酸序列之重鏈(HC)、及包含與SEQ ID NO：162之序列至少90%同一性的胺基酸序列之輕鏈(LC)； b) 包含SEQ ID NO：164之胺基酸序列的HC、及包含SEQ ID NO：162之胺基酸序列的LC。
  4. 如請求項1至3中任一項之抗體、或其抗原結合片段，其中，該抗體、或其抗原結合片段以約或少於選自下列所組成之群組的值之KD 結合人類或石蟹獼猴GDF15：約10nM、5nM、2nM、1nM、900pM、800pM、700pM、600pM、500pM、400pM、300pM、250pM、200pM、150pM、100pM、50pM、40pM、30pM、25pM、20pM、15pM、及10pM。
  5. 一種經單離之核酸，編碼如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合部分。
  6. 一種經單離之核酸，包含： a) SEQ ID NO：167之核酸序列、SEQ ID NO：168之核酸序列、或二者， b) SEQ ID NO：169之核酸序列、SEQ ID NO：170之核酸序列、或二者，以及 c) 寄存於ATCC且具有登錄號PTA-125038之質體插入之核酸序列、寄存於ATCC且具有登錄號PTA-125039之質體插入之核酸序列、或二者。
  7. 一種載體，包含如請求項5或6之核酸。
  8. 一種宿主細胞，包含如請求項7之載體。
  9. 如請求項8之宿主細胞，其中，該宿主細胞為選自下列所組成之群組的哺乳動物細胞：CHO細胞、COS細胞、HEK-293細胞、NS0細胞、PER.C6®細胞、或Sp2.0細胞。
  10. 一種製造抗體、或其抗原結合片段之方法，包含於其中該抗體、或其抗原結合片段由如請求項8之宿主細胞表現之條件下培養該宿主細胞。
  11. 一種醫藥組成物，包含如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、及醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
  12. 一種在有其需要之個體中治療由GDF15之表現媒介或與GDF15之表現相關之醫學病症、疾病或失調之方法，該方法包含投予治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物。
  13. 如請求項12之方法，其中，該病症係與癌症、化學療法、化學療法組合免疫腫瘤療法相關之惡病質、慢性阻塞性肺臟疾病、慢性腎臟疾病、慢性心臟衰竭、鬱血性心衰竭、或肌少症(sarcopenia)。
  14. 一種在有其需要之個體中降低游離GDF15量之方法，該方法包含投予治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，藉此減少游離GDF15量。
  15. 一種在有其需要之個體中減少GDF15活性之方法，該方法包含投予治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物。
  16. 如請求項15之方法，其中，GDF15活性為選自下列所組成之群組的至少一活性：(a)降低食物攝入；(b)降低食慾；(c)降低體重；(d)增加體重損失；(e)降低脂肪量；(f)降低瘦肉量；(g)增加脂肪量損失；(h)增加瘦肌肉量損失；(i)結合到GFRAL；(j)增加RET媒介之下游訊號傳遞；(k)增加ERK之磷酸化；(l)增加核糖體蛋白質S6之磷酸化；(m)增加MAPK訊號傳遞路徑RET-媒介之活化；(n)增加AKT-訊號傳遞路徑RET活化；及(o)增加PLC-1訊號傳遞路徑活化。
  17. 一種在有其需要之患者中治療癌症之方法，其包含投予到該患者提供協同治療效果之組合療法，該方法包含投予協同治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，以及 a) 協同治療有效量之抗-CD40拮抗劑抗體；或 b) 協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑，其中，該PD-1軸結合拮抗劑不為阿維單抗(avelumab)。
  18. 如請求項17(b)之方法，其中，該PD-1軸結合拮抗劑為選自下列所組成之群組的抗-PD-1抗體：納武單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、斯帕利珠單抗(spartalizumab)、匹迪立珠單抗(pidilizumab)、替雷利珠單抗(tislelizumab)、AMP-224、AMP-514、測米匹單抗(cemiplimab)、及沙珊單抗(sasanlimab)(PF-06801591)。
  19. 如請求項17(b)之方法，其中，該PD-1軸結合拮抗劑為選自下列所組成之群組的抗-PD-L1抗體：阿特珠單抗(atezolizumab)、度伐魯單抗(durvalumab)、BMS-936559、MEDI4736、及MPDL3280A，且其中該抗-PD-L1抗體不為阿維單抗(avelumab)。
  20. 如請求項18至19中任一項之方法，其中，該癌症係選自下列所組成之群組：黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎細胞惡性腫瘤、Merkel細胞惡性腫瘤、卵巢癌、乳癌、胰臟癌、尿路上皮癌(urothelial cancer)及去勢抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer)。
  21. 如請求項17(a)之方法，其中，該癌症係選自下列所組成之群組：胃癌(gastric cancer)、肉瘤、淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、白血病、頭頸癌、鱗狀細胞頭頸癌、胸腺癌、上皮癌、唾腺癌、肝癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、肺癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、食道癌、胰臟癌、神經膠質瘤、白血病、多發性骨髓瘤、腎細胞惡性腫瘤、膀胱癌、子宮頸癌、絨毛膜癌、結腸癌、口腔癌、皮膚癌、及黑色素瘤。
  22. 一種治療癌症之套組，包含協同治療有效量之抗-GDF15抗體、及協同治療有效量之抗-PD-1抗體。
  23. 一種治療癌症之套組，包含治療有效量之抗-GDF15抗體、及治療有效量之抗-CD40抗體。
  24. 一種增強投予到個體治療癌症的免疫調節劑之治療效果之方法，該方法包含投予到接受該免疫調節劑之該個體有效量之如請求項1至4中任一項之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物。
  25. 如請求項24之方法，其中，該癌症係選自下列所組成之群組：乳癌、胃癌(gastric cancer)、肝癌、肺癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、神經膠質瘤、神經膠質母細胞瘤、腎癌、子宮內膜癌、及結腸直腸癌。
  26. 一種在經歷細胞激素釋放症候群(CRS)或細胞激素風暴或易受CRS或細胞激素風暴的個體中降低或抑制毒性之方法，該方法包含投予到該個體有效量之如請求項1至4中任一項之抗-GDF15抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物。
  27. 如請求項26之方法，其中，該個體正經歷癌症療法且該方法不會減少該癌症療法之效力。
  28. 如請求項27之方法，其中，該癌症療法包含免疫調節劑，諸如抗-CD40抗體、抗-CD47抗體、抗-CTLA4抗體、抗-4-1BB抗體、IL-12、或IL-15。
  29. 如請求項26至28中任一項之方法，其中，該CRS或細胞激素風暴的原因包含感染性刺激、病症、或症候群，或其中，該細胞激素釋放症候群或細胞激素風暴的原因包含非感染性刺激、病症、或症候群、或其任何組合。
  30. 如請求項29之方法，其中，該感染性刺激、病症、或症候群包含流行性感冒、禽流感、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)、Epstein-Barr二氏病毒相關之噬血球性淋巴組織球增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis)(HLH)、敗血症、革蘭氏陰性敗血症、瘧疾、Ebola病毒、天花病毒、系統性革蘭氏陰性細菌感染、或Jarisch-Herxheimer症候群，或其中，該非感染性刺激、病症、或症候群包含為噬血球性淋巴組織球增生症(hemophagocytic lymphohistiocytosis)(HLH)、突發性HLH、巨噬細胞活化症候群(MAS)、慢性關節炎、系統性幼年特發性關節炎(Juvenile idiopathic Arthritis)(sJIA)、Still氏疾病、Cryopyrin相關週期性症候群(CAPS)、家族性冷因性自體發炎症候群(FCAS)、家族性冷因性蕁麻疹(FCU)、Muckle-Well症候群(MWS)、慢性嬰兒神經性皮膚病及關節病(Chronic Infantile Neurological Cutaneous and Articular)(CINCA)症候群、包含遺傳或NLRP3基因中重新獲得功能突變之隱熱蛋白病(cryopyrinopathy)、遺傳性自體發炎失調、急性胰臟炎、嚴重燒傷、創傷、急性呼吸窘迫症候群、免疫療法、單株抗體療法、繼發於藥物使用、繼發於吸毒、脂多醣(LPS)、革蘭氏陽性毒素、真菌毒素、多醣磷脂肌醇(GPI)、或RIG-1基因表現之調節。
  31. 一種治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在有其需要之個體中治療由GDF15之表現媒介或與GDF15之表現相關之醫學病症、疾病或失調之方法。
  32. 一種治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在有其需要之個體中降低游離GDF15量之方法。
  33. 一種治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在有其需要之個體中減少GDF15活性之方法。
  34. 一種治療有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在有其需要之患者中治療癌症之方法，其中，該抗體、或其抗原結合片段、或醫藥組成物與下述組合投予： a) 協同治療有效量之抗-CD40拮抗劑抗體；或 b) 協同治療有效量之PD-1軸結合拮抗劑，其中，該PD-1軸結合拮抗劑不為阿維單抗(avelumab)。
  35. 一種有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在增強投予到個體治療癌症的免疫調節劑之治療效果之方法。
  36. 一種有效量之如請求項1至4中任一項之抗體、或其抗原結合片段、或如請求項11之醫藥組成物，其係用於在經歷細胞激素釋放症候群(CRS)或細胞激素風暴或易受CRS或細胞激素風暴的個體中降低或抑制毒性之方法。
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