KR20210025071A

KR20210025071A - Cd226 효능제 항체

Info

Publication number: KR20210025071A
Application number: KR1020217002259A
Authority: KR
Inventors: 나레쉬 쿠마르
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2018-07-26
Filing date: 2019-07-19
Publication date: 2021-03-08
Also published as: CN112513086A; JP7144595B2; MX2021000797A; IL280367A; US20210363241A1; TW202017943A; EP3827018A1; US11440959B2; CA3107773A1; TWI728400B; JP2021531766A; AU2019309786A1; WO2020023312A1; BR112020027087A2

Abstract

본 발명은 고형 종양 암을 치료하는데 유용할 수 있는 항-인간 CD226 효능제 항체에 관한 것이다.

Description

CD226 효능제 항체

본 발명은 의학 분야에 속한다. 보다 특히, 본 발명은 인간 CD226 (hCD226)에 대해 지시된 효능제 항체, 이러한 효능제 항-인간 CD226 항체를 포함하는 조성물, 및 암의 치료를 위해 이러한 효능제 항-인간 CD226 항체를 사용하는 방법에 관한 것이다.

면역 체크포인트 경로는 면역 반응의 억제 또는 활성화에 수반된다 (Isakov N, J. Autoimmune Disorders 2016; 2(2): 17). 자가면역 질환 요법에서는, 면역 반응이 억제되도록 면역-억제 경로의 효과를 촉진하는, 즉 효능작용하는 것이 바람직할 수 있다. 반대로, 암 요법에서는, 면역 반응이 활성화되거나 자극되도록 면역-자극 경로의 효과를 촉진하는, 즉 효능작용하는 것이 바람직할 수 있다.

CD226은 면역 공동-자극 수용체로서 기능한다 (Dougall WC, et al., Immunol. Rev. 2017; 276: 112-120 (2017)). 따라서, CD226 경로는 면역-자극 경로이며, 즉 이는 면역 반응을 활성화/자극한다 (Manaka, I, A, J. Exp. Med.; 2008; 205(13): 2959-2964; Van Vo, A, Molecular Immunology; 2016; 69: 70-76; Shengke, H, J Biol Chem.; 2014; 289(10): 6969-6977). CD226 경로의 면역-자극 효과의 촉진 (효능작용)은, 예를 들어 암을 치료하는데 유익할 수 있고, CD226 경로의 면역-자극 효과를 촉진하는 치료 분자는 CD226 경로 효능제이다.

CD226은 자연 킬러 (NK) 세포, 혈소판, 단핵구, CD8+ T 세포 및 활성화된 CD4+ T 세포의 표면 상에서 발현되고 (Van Vo, A, Molecular Immunology; 2016; 69: 70-76), 갑상선암, 폐암, 위암, 결장직장암, 두경부암, 요로상피암, 전립선암, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암 및 흑색종에서 발현된다 (Protein Atlas, proteinatlas.org/ENSG00000150637-CD226/pathology).

CD226은 인간 및 마우스의 많은 조직 내 조혈, 상피 및 내피 세포 상에서 광범위하게 발현되는 CD112 (PVRL2) 및 CD155 (PVR)와 상호작용한다 (Van Vo, A, Molecular Immunology; 2016; 69: 70-76; Shengke, H, The J. of Biol. Chem., 2014; 289(10): 6969-6977). CD112 (PVLR2)는 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암 및 요로상피암에서 발현된다 (Human Protein Atlas proteinatlas.org/ ENSG00000130202-NECTIN2/pathology). CD155 (PVR)는 폐암, 간암, 췌장암, 카르시노이드, 결장직장암, 두경부암, 위암, 신암, 요로상피암, 고환암, 전립선암, 피부암 및 흑색종에서 발현된다 (Human Protein Atlas, proteinatlas.org/ENSG00000073008-PVR/pathology). CD155는 또한 연부 조직 육종에서 발현된다 (Atsumi S, et al., Oncol. Lett. 2013; 5: 1771-1776).

NK 세포 및 T 세포 상의 CD226과 종양 세포 및 항원 제시 세포 상의 CD112 및 CD155 사이의 상호작용은 세포-매개 세포독성 및 시토카인 생산을 증대시킨다 (Iguchi-Manaka, A, J. Exp. Med. 2008; 205(13): 2959-2964 및 그 안의 참고문헌). CD226은 CD226/TIGIT 경로의 일부이며, 여기서 CD226은 면역-자극 수용체로서 작동하고, TIGIT는 면역-억제 수용체로서 작동하고, CD226은 CD155 및 CD112에의 결합에 대해 TIGIT와 경쟁한다 (Dougall WC, et al., Immunol. Rev. 2017; 276: 112-120 (2017); Blake, S, Clin Cancer Res; 2016; 22(21): 5182-5188). TIGIT는 또한 CD226/CD155 상호작용에 필요한 CD226 동종이량체화를 억제한다 (Dougall WC, et al., Immunol. Rev. 2017; 276: 112-120 (2017)).

CD226의 면역-자극 효과에 효능작용하는 것이 암을 치료하는데 유익할 수 있는 것으로 시사되었다 (Pauken, KE and EJ Wherry, Cancer Cell 2014: 26: 785-787). 따라서, 항종양 면역 반응의 증대는 암 요법의 효과적인 수단일 수 있다. CD226은 NK 세포 및 T 세포 기능을 제어하는데 유용할 수 있으며, 이는 NK 세포의 부착 보조수용체 자극 및 종양 세포에 대한 CD8⁺ T 세포-매개 세포독성, 면역학적 시냅스 형성, T 세포 증식 및 분화, 및 시토카인 분비에 연루되었다 (Guillerey, C, J. Clin. Invest. 2015; 125(5): 2077-2089).

CD226이 결여된 마우스에서, CD8⁺ T 세포는 비전문 항원-제시 세포에 의해 제시된 항원을 인식하는 경우에 공동-자극을 위해 CD226을 요구하고, NK 세포는 다른 NK 세포-활성화 리간드의 부족에 의해 유발된 NK 세포-매개 세포독성에 대해 비교적 저항성인 종양 세포의 제거를 위해 CD226을 요구하는 것으로 제시되었다 (Gilfillan, S, J. Exp. Med.; 2008; 205(13): 2965-2973). 따라서, CD226은 CD8⁺ T 세포 및 NK 세포를 활성화시킬 수 있는 표적 세포의 범위를 확장시키고, 이에 따라, 다른 활성화 또는 보조 분자에 의한 인식을 피하는 종양 및/또는 바이러스에 대한 면역감시에 중요할 수 있다 (Gilfillan, S, J. Exp. Med.; 2008; 205(13): 2965-2973).

특정 항-CD226 항체, 예컨대 마우스 IgG1 KRA236 (Bottino, C, Front Immunol. 2014; 5: 56), 래트 IgG2a TX25 (Van Vo, A, Molecular Immunology; 2016; 69: 70-76); 래트 IgG2b 10e5 (Dardalhon, V. J Immunol 2005; 175:1558-1565); 마우스 TX94, TX95, TX96, TX107 및 TX108 (Okumura, G, Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy, 2017; 36(3): 135-139), 2E6 및 3B9 (Hou, S, The J. Biol. Chemistry; 2014; 289(10): 6969-6977), NewE1 (Gaud, G, et al., Sci. Signal. 2018; 11: eaar3083; doi: 10.1126/scisignal.aar3083), DX11 (Bio-Rad MCA2257), 11A8 (바이오레전드(BioLegend) 338311), 및 LeoA1 (밀리포어 시그마(Millipore Sigma) MABT398)이 보고되었다.

그러나, 인간 항-인간 CD226 효능제 항체는 보고되지 않았고, 암의 치료를 위해 임상 개발 중인 항-CD226 항체는 존재하지 않는다. 따라서, 인간 CD226에 결합하고, 면역 반응을 증진시키고, 암의 치료에 유용한 효능제 항체에 대한 필요가 존재한다.

본원에 기재된 항-인간 CD226 효능제 항체는 인간 CD226에 결합하고, T 세포 유래된 IFNγ 생산을 자극하고, 단독요법으로서 뮤린 종양 모델에서 종양 성장을 억제한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 생체내 안정성, 열 안정성, 용해도, 낮은 자기-회합 및 약동학적 특징을 포함하나 이에 제한되지는 않는 목적하는 물리적 및 화학적 안정성을 입증하고, 따라서 암을 치료하는데 잠재적으로 유용하다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-인간 CD226 효능제 항체는 완전 인간 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항-인간 CD226 효능제 항체는 인간화 항체이다.

본 개시내용은 또한 인간 CD226 (서열식별번호(SEQ ID NO): 13) 또는 그의 세포외 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 14)에 결합하고 단독요법으로서 암의 뮤린 종양 모델에서 종양 성장을 억제하는 인간 항-인간 CD226 IgG1-이펙터 널 (IgG1-EN) 항체를 제공하며, 이러한 항-인간 CD226 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 (LCVR)을 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 (HC) 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 (LC)를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다.

본 개시내용은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 항-인간 CD226 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다.

본 개시내용은 또한 항-인간 CD226 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하며, 여기서 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 것인, 항-인간 CD226 항체를 생산하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다. 본 개시내용은 또한 상기 방법에 의해 생산된 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 본 개시내용은 또한 상기 방법에 의해 생산된 항-인간 CD226 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 개시내용은 또한 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 또는 서열식별번호: 11 및 12의 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자를 제공한다. 본 개시내용은 또한 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 또는 서열식별번호: 11 및 12의 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다.

본 개시내용은 또한 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 항-인간 CD226 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 항-인간 CD226 항체는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-인간 CD226 항체는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진다.

본 개시내용은 치료 방법 및 사용 방법을 제공한다. 면역계에서 공동-자극 수용체로서의 CD226의 역할이 연구되어 왔다. 예를 들어, CD226이 결핍된 마우스는 야생형 (WT) 세포보다 시험관내에서 CD226 리간드-발현 종양에 대해 유의하게 더 적은 세포독성 활성을 나타냈다 (Iguchi-Manaka, A, J. Exp. Med. 2008; 205(13): 2959-2964). 따라서, CD226 경로가 활성화될 때, 면역계 활성이 증가하며, 이는 CD226 경로를 자극 (효능작용)함으로써 암을 치료하는데 이용될 수 있고, 효능제 항-인간 CD226 항체는 NK 세포 및/또는 T 세포 활성을 활성화시킴으로써 암에 대한 치료 효과를 제공할 수 있다.

CD112 및/또는 CD155 발현은 결장직장 암종 (Masson, D., Gut, 2001; 49: 236-240; Tahara-Hanaoka, S. Blood, 2006; 107: 1491-1496); 위암 (Tahara-Hanaoka, S., Blood, 2006; 107: 1491-1496); 난소암 (Carlsten, M., Cancer Res., 2007: 67: 1317-1325); 췌장 암종 (Nishiwada, Anticancer Research; 2015; 35: 2287-2298); 및 전립선, 신세포, 췌장, 결장, 비소세포 폐, 난소 및 유방 암종 (Sloan, K., BMC Cancer 2004; 4: 73)을 포함한 다양한 인간 고형암에 연루되었다.

폐 선암종에서 CD155의 과다발현은 림프절 전이, 종양의 세기관지폐포 암종 비와 유의하게 연관되었고, 양성 CD155 과다발현을 갖는 환자에서의 무질환 생존율은 음성 CD155 과다발현을 갖는 환자에서의 것보다 유의하게 더 낮았다 (Nakai, R, Cancer Sci.; 2010; 101(5): 1326-1330). 다변량 생존 분석은 CD155 발현이 불리한 결과에 대한 독립적인 위험 인자인 것으로 밝혀냈다 (Nakai, R, Cancer Sci.; 2010; 101(5): 1326-1330).

본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 항-인간 CD226 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다.

일부 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 암이 고형 종양 암인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

본 개시내용은 요법에 사용하기 위한, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, 인간 CD226 (서열식별번호: 13) 또는 그의 세포외 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 14)에 결합하는 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다.

한 실시양태에서, 본 개시내용은 요법이 암의 치료인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 암이 고형 종양 암인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

본 개시내용은 또한 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한, 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는, 인간 CD226 (서열식별번호: 13) 또는 그의 세포외 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 14)에 결합하는 항-인간 CD226 항체의 용도를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진 항체를 제공한다.

한 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 암이 고형 종양 암인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

본 개시내용은 또한 인간 항-인간 CD226 효능제 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 인간 항-인간 항체는 생체내 투여되는 경우에 항종양 효과를 갖는다. 본 개시내용은 인간 항-인간 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포를 제공한다. 본 개시내용은 또한 인간 항-인간 CD226 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 인간 항-인간 CD226 항체를 생산하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 또한 요법에 사용하기 위한 인간 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 인간 항-인간 CD226 항체는 효능제 항체이다. 또 다른 실시양태에서, 인간 항-인간 CD226 항체는 면역 반응을 자극한다. 또 다른 실시양태에서, 인간 항-인간 CD226 항체는 생체내 투여되는 경우에 항종양 활성을 갖는다.

본 개시내용은 또한 암의 치료에 사용하기 위한 인간 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 고형 종양 암의 치료에 사용하기 위한 인간 항-인간 CD226 효능제 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 면역 반응을 자극한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 생체내 투여되는 경우에 항종양 활성을 갖는다.

한 실시양태에서, 본 개시내용은 고형 종양 암의 치료에 사용하기 위한 인간 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

본 개시내용은 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 인간 항-인간 CD226 효능제 항체의 용도를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 암이 고형 종양 암인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, 위암 (위의 암), 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

한 실시양태에서, 본 발명은 유효량의 본원에 개시된 항체를 1종 이상의 항종양제와 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 항종양제의 비제한적 예는 라무시루맙, 네시투무맙, 올라라투맙, 겜시타빈, 페메트렉세드, 갈루니세르팁, 아베마시클립, 시스플라틴, 카르보플라틴, 다카르바진, 리포솜 독소루비신, 도세탁셀, 시클로포스파미드 및 독소루비신, 나벨빈, 에리불린, 파클리탁셀, 주사가능한 현탁액을 위한 파클리탁셀 단백질-결합 입자, 익사베필론, 카페시타빈, 폴폭스 (류코보린, 플루오로우라실 및 옥살리플라틴), 폴피리 (류코보린, 플루오로우라실 및 이리노테칸), 세툭시맙, EGFR 억제제, Raf 억제제, B-Raf 억제제, CDK4/6 억제제, CDK7 억제제, 인돌아민 2,3-디옥시게나제 억제제, TGFβ 억제제, TGFβ 수용체 억제제, IL-10, 및 PEG화 IL-10 (예를 들어, 페길로데카킨)을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 본 발명은 유효량의 본원에 개시된 항체의 화합물을 1종 이상의 면역-종양학 작용제와 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다. 면역-종양학 작용제의 비제한적 예는 니볼루맙, 이필리무맙, 피딜리주맙, 펨브롤리주맙, 트레멜리무맙, 우렐루맙, 리릴루맙, 아테졸리주맙, 두르발루맙, 항-Tim3 항체, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 및 항-PD-L1 항체 LY3300054 (이의 중쇄 및 경쇄 서열은 각각 서열식별번호: 10 및 11로서 WO 2017/034916 및 US 2017/0058033에 제시됨)를 포함한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 면역-종양학 작용제는 항-PD-1 항체이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다.

또 다른 실시양태에서, CD226 항체는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포; 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항체를 생산하는 방법; 이러한 방법에 의해 생산된 항체; 및 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, CD226 항체는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포; 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항체를 생산하는 방법; 이러한 방법에 의해 생산된 항체; 및 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

또 다른 실시양태에서, CD226 항체는 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포; 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항체를 생산하는 방법; 이러한 방법에 의해 생산된 항체; 및 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 개시내용은 또한 서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 또는 서열식별번호: 11 및 12의 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자; 이러한 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포를 제공한다.

본 개시내용은 또한 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본 발명의 항체를 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시내용은 또한 요법에 사용하기 위한 본 발명의 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 용도가 암의 치료인 것을 제공한다.

본 개시내용은 또한 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 본 발명의 항체를 제공한다.

한 실시양태에서, 본 개시내용은 또한 암이 고형 종양 암인 것을 제공한다. 또 다른 실시양태에서, 고형 종양 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, (위의) 암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암이다. 바람직한 실시양태에서, 폐암은 비소세포 폐암이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 유방암은 삼중-음성 유방암이다.

하나의 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 인간 CD226에 결합하고, CD226이 CD112에 결합하는 것을 차단하지만, CD155에 결합하는 것은 차단하지 않는 항-인간 CD226 항체를 제공한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 또한 효능제 기능을 나타내는, 즉 시험관내에서 항-인간 CD226 항체에 노출된 CD226⁺ T 세포에서의 T 세포 활성을 자극하는, 예를 들어 항-인간 CD226 항체에 노출되지 않은 CD226⁺ T 세포에 의한 시험관내 인터페론-감마 분비의 수준에 비해 시험관내 인터페론-감마 분비를 증가시키는 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 인터페론-감마 분비는 본원에 개시된 방법을 사용하여 검정될 수 있다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 또한 효능제 기능을 나타내는, 즉, 예를 들어 본원에 개시된 바와 같은 시험관내 항-인간 CD226 항체에 노출되지 않은 인간 배아 신장 (HEK) 세포에 비해 본원에 개시된 바와 같은 HEK 세포에서 NF-KB 활성화 리포터 유전자를 유도하는 항-인간 CD226 항체를 제공한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 혈소판을 활성화시키지 않는 항-인간 CD226 항체를 제공한다. 한 실시양태에서, 검정은 유동 세포측정법을 사용하여 수행되어 혈소판 표면 상의 p-선택 (CD62P)의 발현을 결정함으로써 혈소판의 활성화 상태를 결정한다.

본원에 사용된 용어 "항체"는 중쇄 및 경쇄가 디술피드 결합에 의해 상호연결되도록 하는 2개의 중쇄 (HC) 및 2개의 경쇄 (LC)를 갖는 폴리펩티드 복합체를 지칭하며; 여기서 항체는 IgG 하위부류 항체이다. 각각의 HC는 N-말단 HCVR 및 중쇄 불변 영역 ("HCCR")으로 구성된다. 각각의 LC는 N-말단 LCVR 및 경쇄 불변 영역 ("LCCR")으로 구성된다. 특정 생물학적 시스템에서 발현되는 경우에, 천연 인간 Fc 서열을 갖는 항체는 Fc 영역에서 글리코실화된다. 전형적으로, 글리코실화는 항체의 Fc 영역 내 고도로 보존된 N-글리코실화 부위에서 발생한다. N-글리칸은 전형적으로 아스파라긴에 부착된다. 항체는 또한 다른 위치에서도 글리코실화될 수 있다.

본 발명의 항체는 비-자연 발생 폴리펩티드 복합체이다. 본 발명의 DNA 분자는 본 발명의 항체 내의 폴리펩티드 중 적어도 1개의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 비-자연 발생 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자이다.

HCVR 및 LCVR 영역은 프레임워크 영역 ("FR")으로 불리는 보다 더 보존되어 있는 영역이 산재된, 상보성 결정 영역 ("CDR")으로 불리는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 HCVR 및 LCVR은 아미노 말단에서 카르복시 말단으로 하기의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본원에서, HC의 3개의 CDR은 "HCDR1, HCDR2 및 HCDR3"으로 지칭되고, LC의 3개의 CDR은 "LCDR1, LCDR2 및 LCDR3"으로 지칭된다. CDR은 항원과의 특이적 상호작용을 형성하는 잔기의 대부분을 함유한다.

HCVR 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 HCVR-코딩 DNA를 HCCR을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 HC 유전자로 전환될 수 있다. 인간뿐만 아니라 다른 포유동물 HCCR 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은, 예를 들어 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다.

LCVR 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 LCVR-코딩 DNA를 LC 불변 영역을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동가능하게 연결시킴으로써 전장 LC 유전자로 전환될 수 있다. 인간뿐만 아니라 다른 포유동물 LCCR 유전자의 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이들 영역을 포괄하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. LCCR은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 항체의 경우, LCCR은 카파 불변 영역이다.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 서열이 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된 후에 숙주 세포에서 발현될 수 있다. 발현 벡터는 전형적으로는 숙주 유기체에서 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 필수 부분으로서 복제가능하다. 통상적으로, 발현 벡터는 목적하는 DNA 서열로 형질전환된 세포의 검출을 허용하기 위한 선택 마커, 예를 들어 테트라시클린, 네오마이신 및 디히드로폴레이트 리덕타제를 함유할 것이다.

본 발명의 항체는 포유동물 세포에서 용이하게 생산될 수 있으며, 이의 비제한적 예는 CHO, NS0, HEK 293 또는 COS 세포를 포함한다. 숙주 세포는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술을 사용하여 배양된다.

관심 폴리뉴클레오티드 서열 (예를 들어, 항체의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 발현 제어 서열)을 함유하는 벡터는 세포 숙주의 유형에 따라 달라지는 널리 공지된 방법에 의해 숙주 세포 내로 전달될 수 있다.

다양한 단백질 정제 방법이 이용될 수 있으며, 이러한 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Deutscher, Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990) 및 Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd Edition, Springer, NY (1994)]에 기재되어 있다.

본 발명의 다른 실시양태에서, 항체 (또는 이를 코딩하는 핵산)는 단리된 형태로 제공된다. 본원에 사용된 용어 "단리된"은 세포 환경에서 발견되는 임의의 다른 거대분자 종이 없거나 실질적으로 없는 단백질, 펩티드 또는 핵산을 지칭한다. 본원에 사용된 "실질적으로 없는"은 관심 단백질, 펩티드 또는 핵산이 존재하는 거대분자 종의 80% 초과 (몰 기준), 바람직하게는 90% 초과, 보다 바람직하게는 95% 초과를 차지한다는 것을 의미한다.

본 발명의 항체 또는 그를 포함하는 제약 조성물은 비경구 경로에 의해 투여될 수 있으며, 이의 비제한적 예는 피하 투여 및 정맥내 투여이다. 본 발명의 항체는 단일 또는 다중 용량으로 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 관련 기술분야에 널리 공지된 방법 (예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22^nd ed. (2012), A. Loyd et al., Pharmaceutical Press])에 의해 제조될 수 있고, 본원에 개시된 바와 같은 항체 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함한다.

본원에 사용된 "CD226"은 서열식별번호: 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 수용체를 지칭한다 (uniprot.org/uniprot/Q15762). CD226 세포외 도메인-His 태그 구축물의 예는 rndsystems.com, 제품 번호 Q154762에서 발견된다.

"CD226"에 대한 동의어는 DNAX 보조 분자-1, DNAM-1, DNAM1, PTA1 및 TLiSA1이다.

본원에 사용된 "항-인간 CD226 효능제 항체"는 (a) 인간 CD226 (서열식별번호: 13) 또는 그의 세포외 단편 (예를 들어, 서열식별번호: 14)에 결합하고, (b) 시험관내에서, 예를 들어 본원에 개시된 바와 같은 T 세포 시토카인 (예를 들어, IFN-감마) 방출 검정에서, 또는 생체내에서, 예를 들어 대상체의 혈액 또는 혈청 중 T 세포 시토카인 (예를 들어, IFN-감마) 방출에 의해 검정된 바와 같이, 면역 반응을 자극하고, (c) 대상체에게 생체내 투여된 경우에, 항종양 활성을 유발하는 항체를 지칭한다.

모노클로날 치료 항체와 관련하여, 용어 "인간", "인간화" 및 "완전 인간"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (Weiner LJ, J. Immunother. 2006; 29: 1-9; Mallbris L, et al., J. Clin. Aesthet. Dermatol. 2016; 9: 13-15).

"CD155"에 대한 동의어는 폴리오바이러스 수용체, PVR, Necl-5, NECL5, Tage4, HVED 및 PVS이다.

"CD112"에 대한 동의어는 넥틴 세포 부착 분자 2, 넥틴-2, 넥틴2, PRR-2, PVRL2, PVRR2 및 HVEB이다.

CD226 경로의 면역-자극 효과는 예를 들어, 활성화 신호를 강화시키는 세포 표면 상의 LFA-1과의 회합에 의해 매개될 수 있다. LFA-1 결속은 CD226R 세포질 도메인의 Fyn 키나제-매개 인산화를 유발한다 (Marcus, A, Adv Immunol. 2014; 122: 91-128). 또 다른 예에서, CD226은 또한 NK 세포 세포독성 및 시토카인 생산을 증진시키는 그의 능력에 필수적인 활성 생화학적 신호를 매개할 수 있으며; 이들 신호는 보존된 ITT 또는 ITT-유사 모티프 (pYxNx)에 의해 개시되고, 이는 Src 패밀리 키나제에 의한 인산화를 겪고 어댑터 Grb2를 동원한다. 차례로, Grb2는 Vav-1, PI3'K 및 PLC-γ1을 활성화시키고, 이는 Erk, Akt 및 칼슘 유동의 활성화를 유도한다. 이러한 경로는 액틴 중합 및 과립 분극을 촉진함으로써, 세포독성을 증진시킨다. CD226이 CD8⁺ T 세포를 포함한 다른 면역 세포에서 발현되기 때문에, CD226은 이들 세포에서 유사한 신호 및 효과를 매개한다고 추측하는 것이 합리적이다 (Zhang, Z, JEM, 2015; 212(12): 2165).

시험관내 CD226 활성을 검정하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게, 예를 들어 문헌 [Gaud, G, et al., Sci. Signal. 2018; 11: eaar3083; doi: 10.1126/scisignal.aar3083]에 공지되어 있다.

고형 종양의 생체내 뮤린 모델은 본원에 제시된 바와 같이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게, 및 예를 들어 문헌 [Sanmamed MF, et al., Ann. Oncol. 2016; 27: 1190-1198; Manning HC, et al., J. Nucl. Med 2016; 57(Suppl. 1): 60S-68S; Teich BA. Cancer Ther. 2006; 5: 2435; Rongvaux A, et al., Ann. Rev. Immunol. 2013; 31: 635-74; Stylli SS, et al., J. Clin. Neurosci 2015; 619-26; Oh T, et al., J. Transl. Med. 2014; 12: 107-117; Newcomb, EW, et al., Radiation Res. 2010; 173: 426-432; Song Y, et al., Proc Natl. Acad. Sci. USA 2013; 110: 17933-8; 및 Rutter EM, et al., Scientific Reports 2017; 7: DOI:10.1038/s41598-017-02462-0]에 개시된 바와 같이 널리 공지되어 있다.

고형 종양과 관련하여 본원에 사용된 용어 "항암 활성"은 종양 크기의 수축; 항-CD226 효능제 항체로 치료되지 않은 환자에 비해 항-CD226 효능제 항체로 치료된 환자에서 한 병기로부터 또 다른 병기로의 환자 암 진행의 감소; 또는 항-CD226 효능제 항체로 치료되지 않은 환자에 비해 항-CD226 효능제 항체로 치료된 환자에서 전이성 암 발생의 감소를 지칭한다.

임상 고형 종양 암 치료와 관련하여, CD226 경로의 면역-자극 효과의 활성화 (효능작용)는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 기술을 사용하여, 예를 들어 X선 영상화, 자기 공명 영상화 (MRI), 양전자-방출 단층촬영, 초음파 영상화, 조직 생검, 종양 생검, 외과적 접근 및 시각적 검토, 병리상태 분석, 면역조직화학, 체액 또는 조직 바이오마커 분석, 신체 검사 및 촉진 중 1종 이상을 사용하여 종양 퇴행을 검사함으로써 평가될 수 있다.

투여 요법은 최적의 목적하는 반응 (예를 들어, 치료 효과)을 제공하도록 조정될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능을 최적화하도록 적정될 수 있다. 정맥내 (i.v.) 또는 비-정맥내 투여, 국부 또는 전신, 또는 그의 조합은, 전형적으로 단일 볼루스 투여 또는 연속 주입으로부터 1일에 다회 투여 (예를 들어, 4-6시간마다)의 범위에 이르거나, 또는 치료하는 의사 및 환자의 상태에 의해 나타내어지는 바에 따를 것이다. 투여량 및 빈도는 환자를 치료하는 의사에 의해 결정될 수 있다.

용어 "치료하는" (또는 "치료하다" 또는 "치료")은 기존 증상, 장애, 상태 또는 질환의 진행 또는 중증도를 둔화, 중단, 저지, 완화, 정지, 감소 또는 반전시키는 것을 지칭한다.

"유효량"은 연구원, 의사 또는 다른 임상의가 추구하는 조직, 시스템, 동물, 포유동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응 또는 그들 조직, 시스템, 동물, 포유동물 또는 인간에 대한 목적하는 치료 효과를 도출하게 될 본 발명의 항체 또는 본 발명의 항체를 포함하는 제약 조성물의 양을 의미한다. 항체의 유효량은 인자, 예컨대 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 도출하는 항체의 능력에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 또한 치료상 유익한 효과가 항체의 임의의 독성 또는 유해한 효과를 능가하는 것이다.

유효량은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해, 공지된 기술을 사용하는 것에 의해, 및 유사한 상황 하에서 수득된 결과를 관찰하는 것에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 환자에 대한 유효량을 결정하는데 있어서, 환자의 크기, 연령 및 전반적 건강; 침범된 구체적 질환 또는 장애; 질환 또는 장애의 정도 또는 침범정도 또는 중증도; 개별 환자의 반응; 투여되는 특정한 화합물; 투여 방식; 투여되는 제제의 생체이용률 특징; 선택된 용량 요법; 병용 의약의 사용; 및 다른 관련 상황을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 인자가 담당 진단자에 의해 고려된다.

본원에 사용된 용어 치료에 대한 환자의 "유효 반응" 또는 환자의 "반응성"은 본 개시내용의 항체의 투여시 환자에게 부여되는 임상 이익 또는 치료 이익을 지칭한다. 이러한 이익은 생존 (전체 생존 및 무진행 생존 포함)의 연장; 객관적 반응 (완전 반응 또는 부분 반응 포함)의 유발; 안정화된 질환; 또는 암의 징후 또는 증상의 개선 등 중 어느 하나 이상을 포함한다.

본원에 개시된 방법의 잠재적 이점은 허용되는 내약성, 독성 및/또는 유해 사건을 포함한 허용되는 안전성 프로파일로 환자에서 현저하고/거나 연장된 항종양 활성을 생성하여, 환자가 전체적으로 치료 방법으로부터 이익을 얻게 하도록 하는 것이 가능하다는 것이다. 본 개시내용의 치료의 효능은 종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 수축, 진행까지의 시간, 전체 생존, 무진행 생존, 전체 반응률, 반응 지속기간 및 삶의 질을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 암 치료의 평가에 통상적으로 사용되는 다양한 종점에 의해 측정될 수 있다.

본원에 사용된 용어 "고형 종양"은 혈액, 림프 또는 골수가 아닌 조직에서의 종양을 지칭한다.

본원에 사용된 용어 "완전 반응 (CR)"은 모든 표적 병변의 소멸을 지칭한다. 임의의 병리학적 림프절 (표적이든 비-표적이든)은 짧은 축에서 <10 mm로의 감소를 가져야 한다. 종양 마커 결과는 정규화되어야 한다.

본원에 사용된 용어 "부분 반응 (PR)"은 기준선 합계 직경을 참조로 하여, 표적 병변의 직경의 합계의 적어도 30% 감소를 의미한다.

본원에 사용된 용어 "진행성 질환 (PD)"은 연구시 최소 합계 (기준선 합계가 최소인 경우 기준선 합계)를 참조로 하여, 표적 병변의 직경의 합계의 적어도 20% 증가를 의미한다. 20%의 상대 증가에 추가로, 합계는 또한 적어도 5 mm의 절대 증가를 나타내야 한다. 1개 이상의 새로운 병변의 출현이 또한 진행으로 간주된다. 모호한 진행 소견 (예를 들어, 매우 작고 불확실한 새로운 병변; 기존 병변에서의 낭성 변화 또는 괴사)의 경우, 치료는 다음 스케줄링된 평가까지 계속될 수 있다. 다음 스케줄링된 평가에서, 진행이 확인되면, 진행 날짜는 진행이 의심된 날보다 더 이른 날짜이어야 한다.

본원에 사용된 용어 "무진행 생존 (PFS)"은 임의의 연구 약물의 제1 용량의 날짜로부터 방사선촬영으로 기록된 PD 또는 임의의 원인으로 인한 사망 중 더 이른 날짜까지의 시간으로 정의된다.

본원에 사용된 용어 "전체 생존 (OS)"은 임의의 연구 약물의 제1 용량의 연구 날짜로부터 임의의 원인으로 인한 사망 날짜까지의 시간으로 정의된다.

본원에 사용된 "항체 1"은 서열식별번호: 1의 HCDR1 아미노산 서열, 서열식별번호: 2의 HCDR2 아미노산 서열, 서열식별번호: 3의 HCDR3 아미노산 서열, 서열식별번호: 4의 LCDR1 아미노산 서열, 서열식별번호: 5의 LCDR2 아미노산 서열, 서열식별번호: 6의 LCDR3 아미노산 서열, 서열식별번호: 7의 HCVR 아미노산 서열, 서열식별번호: 8의 LCVR 아미노산 서열, 서열식별번호: 9의 HC 아미노산 서열, 서열식별번호: 10의 LC 아미노산 서열, 서열식별번호: 11의 HC DNA 서열 및 서열식별번호: 12의 LC DNA 서열을 갖는 항체를 지칭한다.

서열이 본원에 제시되어 있는 각각의 항체 내의 프레임워크 및 CDR 서열은 문헌 [North, et al. J. Mol. Biol. 2011: 406: 228-256]의 방법과 일치하는 주석달기 규칙을 사용하여 주석이 달린다.

본원에 사용된 서열 식별자는 표 1에 열거된다.

표 1

항체 특징화, 생성, 발현 및 정제

포유동물 세포에서 서열식별번호: 11에 제시된 HC 폴리뉴클레오티드 서열 및 서열식별번호: 12에 제시된 LC 폴리뉴클레오티드 서열을 사용하는 항체 생산은 서열식별번호: 9에 제시된 HC 아미노산 서열 및 서열식별번호: 10의 LC 아미노산 서열을 갖는 전장 항체 (이하에서 "항체 1"로 지칭됨)의 생산을 가져온다.

본 발명의 항체는 파지 디스플레이를 포함하나 이에 제한되지는 않는 공지된 방법을 사용함으로써 생성될 수 있다. 추가적으로, 상기 기재된 바와 같이 유래된 항체는 본원에 기재된 검정을 사용하여 추가로 스크리닝될 수 있다.

항체 1의 HC 및 LC의 가변 영역의 폴리펩티드 및 완전 HC 및 LC 아미노산 서열 및 이를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 "아미노산 및 뉴클레오티드 서열"이라는 표제의 섹션에 열거된다.

인간 CD226에 대한 서열은 서열식별번호: 13에 제시되고, 인간 CD226 세포외 도메인 (ECD)-Fc 융합체에 대한 서열은 서열식별번호: 14에 제시된다.

항체 1을 포함하나 이에 제한되지는 않는 본 발명의 항체는, 예를 들어 본질적으로 하기와 같이 제조 및 정제될 수 있다. 적절한 숙주 세포, 예를 들어 HEK 293 또는 CHO를, 최적의 미리 결정된 HC:LC 벡터 비를 사용하여 항체를 분비하기 위한 발현 시스템, 또는 HC 및 LC 둘 다를 코딩하는 단일 벡터 시스템으로 일시적으로 또는 안정하게 형질감염시킬 수 있다. 항체가 분비된 정화된 배지를 임의의 많은 통상적으로 사용되는 기술을 사용하여 정제할 수 있다. 예를 들어, 배지를 상용 완충제, 예컨대 포스페이트 완충 염수 (pH 7.4)로 평형화된 맙셀렉트 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare)) 또는 카파셀렉트 칼럼 (지이 헬스케어)에 편리하게 적용할 수 있다. 칼럼을 세척하여 비특이적 결합 성분을 제거할 수 있다. 결합된 항체를, 예를 들어 pH 구배 (예컨대 20 mM 트리스 완충제 pH 7 내지 10 mM 시트르산나트륨 완충제 pH 3.0, 또는 포스페이트 완충 염수 pH 7.4 내지 100 mM 글리신 완충제 pH 3.0)에 의해 용리할 수 있다. 항체 분획을, 예컨대 UV 흡광도 또는 SDS-PAGE에 의해 검출할 수 있고, 이어서 풀링할 수 있다. 추가 정제는 의도되는 용도에 따라 임의적이다. 통상적인 기술을 사용하여 항체를 농축 및/또는 멸균 여과할 수 있다. 가용성 응집체 및 다량체를 크기 배제, 소수성 상호작용, 이온 교환, 다중모드 또는 히드록시아파타이트 크로마토그래피를 포함한 통상적인 기술에 의해 효과적으로 제거할 수 있다. 생성물을 즉시 -70℃에서 동결시킬 수 있거나 또는 동결건조시킬 수 있다.

항체 1은 인간 CD226에 결합한다

인간 CD226에 결합하는 본원에 개시된 항체의 능력은 ELISA에 의해 측정할 수 있다. 인간 CD226에 대한 결합을 측정하기 위해, 96-웰 플레이트 (이뮬론(Immulon) 2HB)를 4℃에서 밤새 인간 CD226-Fc (알앤디 시스템즈(R&D Systems))로 코팅한다. 웰을 2시간 동안 차단 완충제 (1% 소 혈청 알부민을 함유하는 PBS)로 차단한다. 웰을 0.1% 트윈-20을 함유하는 PBS로 3회 세척한다. 이어서 항체 1 또는 대조군 IgG (100 μL)를 상이한 농도로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다. 세척 후, 플레이트를 100 μL의 염소 항-인간 IgG F(ab')2-HRP 접합체 (잭슨 이뮤노 리서치 래보러토리즈(Jackson Immuno Research Laboratories))와 함께 실온에서 45분 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 세척한 다음, 100 μL의 3,3',5,5'-테트라-메틸벤지딘과 함께 인큐베이션한다. 스펙트라맥스(SpectraMax)® 마이크로플레이트 판독기 상에서 450 nm에서의 흡광도를 판독한다. 그래프패드 프리즘 7 소프트웨어를 사용하여 반수 최대 유효 농도 (EC50)를 계산한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 항체 1은 인간 CD226에 0.1 nM의 EC50으로 결합한다.

항체 1은 시노몰구스 원숭이 CD226에 결합한다

세포 표면 시노몰구스 원숭이 CD226에 결합하는 본원에 개시된 항체의 능력은 유동 세포측정 검정을 사용하여 측정할 수 있다. 시노몰구스 원숭이 CD226을 발현하는 안정한 세포는 퓨진-6 시약 (프로메가(Promega))을 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 시노-CD226 플라스미드 DNA를 인간 HEK 293 세포 (ATCC) 내로 형질감염시킴으로써 생성한다. 10% 태아 소 혈청 및 1% 글루타맥스(GlutaMAX)™를 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 0.5 μg/mL 퓨로마이신을 사용하여 안정한 세포를 선택한다. 유동 세포측정법을 위해, 전면생장 부착 세포를 깁코(Gibco)® 세포 해리 완충제 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies))를 사용하여 탈착시키고, 완전 배지로 세척한 다음, FACS 완충제 (2.5% 태아 소 혈청 + 1mM EDTA를 함유하는 포스페이트 완충 염수) 중에 재현탁시킨 다음, 96 웰 V 바닥 플레이트 내로 5x10⁴개 세포/웰의 밀도로 옮긴다. 세포를 항체 1 또는 대조군 인간 IgG1 (FACS 완충제 중 100 μg/mL에서 시작하여 제조하고, 총 7가지 농도를 위해 FACS 완충제로 1:3 연속 희석함)로 실온에서 30분 동안 염색한다.

FACS 완충제 중에서 세척한 후, 2차 항체 알로피코시아닌 (APC) 접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab')2 단편 특이적 항체 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈)를 1:200 희석물로 첨가하고, 세포를 실온에서 30분 동안 인큐베이션한다. 세포를 세척하고, FACS 완충제 중에 재현탁시킨다. 7-아미노-악티노마이신 D (7-AAD) 생존력 염색 용액 (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))을 각각의 샘플에 첨가한 직후에 비디 LSR포르테사(BD LSRFortessa) X-20 세포 분석기 상에서 샘플을 프로세싱한다. 유동 세포측정법 데이터를 플로우조(FlowJo)® 소프트웨어를 사용하여 분석한다. 중앙 형광 강도 (MFI) 비를 (실험 항체의 MFI)/(대조군 IgG의 MFI)로서 계산한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 0.14 μg/mL 농도의 항체 1은 2917.5 (11495/3.94)의 보다 높은 MFI 비를 나타낸다.

항체 1은 세포 표면 상의 인간 CD226에 결합한다

세포 표면 인간 CD226에 결합하는 본원에 개시된 항체의 능력은 유동 세포측정 검정을 사용하여 측정할 수 있다. 인간 CD226을 발현하는 안정한 세포는 퓨진-6 시약 (프로메가)을 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 인간-CD226 플라스미드 DNA를 인간 HEK 293 세포 (ATCC) 내로 형질감염시킴으로써 생성한다. 10% 태아 소 혈청 및 1% 글루타맥스™를 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 0.5 μg/mL 퓨로마이신을 사용하여 안정한 세포를 선택한다. 유동 세포측정법을 위해, 전면생장 부착 세포를 깁코® 세포 해리 완충제 (라이프 테크놀로지스)를 사용하여 탈착시키고, 완전 배지로 세척한 다음, FACS 완충제 (2.5% 태아 소 혈청 + 1mM EDTA를 함유하는 포스페이트 완충 염수) 중에 재현탁시킨 다음, 96 웰 V 바닥 플레이트 내로 5x10⁴개 세포/웰의 밀도로 옮긴다. 세포를 항체 1 또는 대조군 인간 IgG1 (FACS 완충제 중 100 μg/mL에서 시작하여 제조하고, 총 10가지 농도를 위해 FACS 완충제로 1:3 연속 희석함)로 실온에서 30분 동안 염색한다.

FACS 완충제 중에서 세척한 후, 2차 항체 알로피코시아닌 (APC) 접합된 염소 항-인간 IgG, F(ab')2 단편 특이적 항체 (잭슨 이뮤노리서치 래보러토리즈)를 1:200 희석물로 첨가하고, 세포를 실온에서 30분 동안 인큐베이션한다. 세포를 세척하고, FACS 완충제 중에 재현탁시킨다. 7-아미노-악티노마이신 D (7-AAD) 생존력 염색 용액 (비디 바이오사이언시스)을 각각의 샘플에 첨가한 직후에 비디 LSR포르테사 X-20 세포 분석기 상에서 샘플을 프로세싱한다. 유동 세포측정법 데이터를 플로우조® 소프트웨어를 사용하여 분석한다. 중앙 형광 강도 (MFI) 비를 (실험 항체의 MFI)/(대조군 IgG의 MFI)로서 계산한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 0.14 μg/mL 농도의 항체 1은 850.78 (7640/8.98)의 보다 높은 MFI 비를 나타낸다.

항체 1에 대한 동역학/친화도 결과

비아코어 T200 기기를 사용하여 항체 1에 대한 고정화된 인간 CD226-Fc 결합의 동역학을 측정할 수 있다. 재조합 인간 CD226-Fc 융합 단백질 (알앤디 시스템즈)을 아민 커플링 (지이 헬스케어)을 통해 CM5 센서 칩에 공유결합으로 고정화시킨다. HBS-EP+ 완충제 중에서 100 μL/분의 유량으로 CD226 항체 시험을 수행한다. 샘플을 다양한 농도로 주입하고, 측정값을 25℃에서 수득한다. 각각의 샘플 주입 후에 30초 동안 10 μL/분의 유량의 10 mM 글리신-HCl pH 2.1을 사용하여 표면을 재생시킨 다음, 10초 동안 완충제로 안정화시킨다. 비아코어 T200 소프트웨어를 사용하여 1.95 nM 내지 1000 nM 범위의 농도의 센소그램을 평가한다. 정상 상태 피트로부터 평형 해리 상수 (KD) 또는 결합 친화도 상수를 계산한다. 본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 항체 1은 표 2에 예시된 친화도 상수로 인간 CD226에 결합한다.

표 2

항체 1의 NF-카파B 루시페라제 리포터 검정 활성

NF-카파B를 활성화시키는 본원에 개시된 항체의 능력은 하기와 같이 측정할 수 있다. 10% 태아 소 혈청 및 1% 글루타맥스™를 함유하는 둘베코 변형 이글 배지에서 리포펙타민(Lipofectamine)™ 2000 시약 (라이프 테크놀로지스)을 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 플라스미드 DNA에 의해 NF-카파B 루시페라제 리포터 및 pGL4.32[luc2P/NF-kappaB-RE/Hygro] 플라스미드의 HEK 293 세포 내로의 이중 일시적 형질감염을 수행한다. 세포를 37℃에서 밤새 배양하고, 다음 날 세포를 96 웰 플레이트로 분할한다. 항체 1 또는 대조군 인간 IgG1을 배지 중에 10-포인트 3배 희석으로 희석하고, 200 nM에서 시작하여 플레이트에 첨가한다. 이어서, 세포를 항체와 함께 5% CO₂ 하에 37℃에서 18시간 동안 인큐베이션한 다음, 원-글로(ONE-Glo)™ 루시페라제 검정 시스템 (프로메가™)을 사용하여 프로세싱한다. 스펙트라맥스® 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 발광을 측정한다. 그래프패드 프리즘 7 소프트웨어를 사용하여 반수 최대 유효 농도 (EC50)를 계산한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 항체 1은 4.11 nM의 EC50으로 인간 CD226 매개된 NF-kB 리포터를 유도한다.

항체 1은 T 세포-유래된 인터페론-감마 생산을 촉진한다

T 세포-유래된 인터페론-감마 (IFN-감마) 생산을 촉진하는 본원에 개시된 항체의 능력은 하기와 같이 측정할 수 있다. 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 피콜 밀도 구배 원심분리 (피콜® 파크 플러스(Ficoll® Paque PLUS); 지이 헬스케어)에 의해 전혈 또는 류코팩으로부터 단리한다. CD8 T 세포 단리 키트 (밀테니(Miltenyi))를 제조업체의 지침서에 따라 사용하여 CD8 T 세포를 PBMC로부터 단리하고, 엑스 비보(X Vivo)-15 배지 (론자(Lonza)) 중에 mL당 75만개의 농도로 재현탁시킨다. 항체 1 또는 대조군 인간 IgG1을 엑스 비보-15 배지 (론자) 중에 200 ug/mL로 희석하여 제조한다. 항-인간 CD3 항체 클론 Hit3A (비디 바이오사이언시스) 및 항-인간 CD28 항체 클론 CD28.2 (바이오레전드)를 CD8 T 세포 현탁액에 각각 10 μg/mL 및 2 μg/mL의 농도로 첨가한다. 세포를 96 웰 u-바닥 플레이트에 웰당 100 μL로 플레이팅한 후, 동일 부피의 항체를 플레이팅하고, 가습 5% CO2 인큐베이터 내 37℃에서 96시간 동안 인큐베이션한다. 상청액을 수집하고, 알앤디 시스템즈® 인간 IFN-감마 퀀티킨(Quantikine)® ELISA 키트를 사용하여 인간 IFN-감마 수준을 측정한다. 간략하게, 샘플 상청액 및 IFN-감마 표준물을 검정 완충제 중에 희석하고, IFN-감마 포획 항체로 사전-코팅된 플레이트에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 세척 후, 200 μL의 IFN-감마 검출 항체를 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 인큐베이션한다. 세척 후, 200 μL 기질 용액을 10분 동안 첨가하고, 이어서 50 μL 정지 용액을 첨가함으로써 플레이트를 발색시키고, 스펙트라맥스® 마이크로플레이트 판독기로 450 nM에서 신호를 측정한다. 소프트맥스 프로 소프트웨어 및 그래프패드 프리즘 (그래프패드 소프트웨어)을 사용하여 데이터 분석을 수행한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 항체 1은 IFN-감마 시토카인 생산에 의해 측정시 CD3/CD28 공동-자극에 의한 인간 PBMC의 준-최적 활성화를 증진시킨다. 이와 관련하여, 100 μg/mL의 항체 1로의 처리는 대조군 IgG 처리에 비해 IFN-감마의 생산의 1.6배 증가를 유발한다.

확립된 종양 모델에서의 항체 1의 항종양 효능

HCC827 인간 비소세포 폐암 (ATCC) 종양 세포주를 그의 각각의 배지에서 유지하고, 이식을 위해 수거한다. 종양 세포 (마우스당 1 x 10⁷개 세포)를 7주령의 암컷 NOD/SCID 감마 (NSG) 마우스 (잭슨 래보러토리즈)의 우측 옆구리 내로 피하로 주사한다. 종양이 대략 250 mm³ 내지 350 mm³ 크기에 도달할 때, 마우스를 5 내지 8마리의 군으로 무작위화한다. 나이브 인간 PBMC를 디나비즈(Dynabeads)® 인간 T-확장자 CD3/CD28 비드 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific))로 9 내지 10일 동안 자극함으로써 인간의 확장된 T 세포를 생성하고, 보관한다. 셉메이트 튜브 (스템셀 테크놀로지스(STEMCELL Technologies)) 내 피콜® 파크 플러스 상에서 원심분리하여 인간 PBMC (뉴욕 혈액 센터)를 제조하고, 보관한다. 확장된 T 세포를 해동시키고, 2.5 x 10⁶개 세포를 마우스 내로 주사한다. 대조군으로서, 종양 세포 단독을 T 세포 없이 일부 마우스에 이식한다. 처리는 제0일 또는 제1일에 시작한다. 처리군은 대조군 IgG 및 항체 1을 포함한다. 동물에게 10 mg/kg의 항체를 4주 동안 매주 1회 복강내 주사를 통해 투여한다. 체중 (BW)을 1주 2회 기록하고, 하기 식을 사용하여 BW의 퍼센트 변화를 계산한다: (관찰 일에서의 BW - 초기 일에서의 BW) / 초기 일 BW x 100%. 전자 캘리퍼를 사용하여 1주에 2회 종양 부피를 측정한다. 하기 식을 사용하여 종양 부피를 계산한다: 종양 부피 (mm³) = π/6 * 길이 * 폭². ΔT > 0의 기하 평균 값인 경우 식 100 x ΔT / ΔC를 사용하여 %T/C를 계산한다. ΔT = 연구 관찰 일에서의 약물-처리군의 평균 종양 부피 - 투여 초기 일에서의 약물-처리군의 평균 종양 부피; ΔC = 연구 관찰 일에서의 대조군의 평균 종양 부피 - 투여 초기 일에서의 대조군의 평균 종양 부피. SAS 소프트웨어 (버전 9.2)에서 MIXED 절차를 사용하여 시간 및 처리별로 이원 반복 측정 분산 분석에 의해 종양 부피 데이터의 통계적 분석을 수행한다.

본질적으로 상기 기재된 바와 같이 수행된 실험에서, 항체 1로 처리된 마우스는 유의한 종양 성장 억제를 나타냈다 (T/C% = 56.7; P < .01).

아미노산 및 뉴클레오티드 서열

SEQUENCE LISTING <110> Eli LIlly and Company <120> CD226 Agonist Antibodies <130> X21853 <150> 62/703,522 <151> 2018-07-26 <150> 62/795,744 <151> 2019-01-23 <160> 14 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Ala Arg Asp Arg Trp Glu Leu His Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asp Thr 1 5 <210> 7 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Trp Glu Leu His Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 8 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Val Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Asp Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 9 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Trp Glu Leu His Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 10 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Structure <400> 10 Val Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Asp Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Asp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 11 <211> 1350 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gagagatcgg 300 tgggagcttc atgatgcttt tgatatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360 gctagcacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420 ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 480 tggaactcag gcgcactgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540 ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600 tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagag agttgagccc 660 aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca 720 ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780 gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840 tatgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aagactggct gaatggcaag 960 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc 1020 aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 1080 atgaccaaga accaagtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200 ctggactccg acggctcctt cttcctctat tccaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260 cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320 cagaagagcc tctccctgtc tccgggcaaa 1350 <210> 12 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 gtcatctgga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaggctcct gatctaccgt gcatccactt tacaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcgatggatc tggaacacat ttcactctca ccatcagcag cctccagcct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccccgacac ttttggccag 300 gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 13 <211> 336 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Met Asp Tyr Pro Thr Leu Leu Leu Ala Leu Leu His Val Tyr Arg Ala 1 5 10 15 Leu Cys Glu Glu Val Leu Trp His Thr Ser Val Pro Phe Ala Glu Asn 20 25 30 Met Ser Leu Glu Cys Val Tyr Pro Ser Met Gly Ile Leu Thr Gln Val 35 40 45 Glu Trp Phe Lys Ile Gly Thr Gln Gln Asp Ser Ile Ala Ile Phe Ser 50 55 60 Pro Thr His Gly Met Val Ile Arg Lys Pro Tyr Ala Glu Arg Val Tyr 65 70 75 80 Phe Leu Asn Ser Thr Met Ala Ser Asn Asn Met Thr Leu Phe Phe Arg 85 90 95 Asn Ala Ser Glu Asp Asp Val Gly Tyr Tyr Ser Cys Ser Leu Tyr Thr 100 105 110 Tyr Pro Gln Gly Thr Trp Gln Lys Val Ile Gln Val Val Gln Ser Asp 115 120 125 Ser Phe Glu Ala Ala Val Pro Ser Asn Ser His Ile Val Ser Glu Pro 130 135 140 Gly Lys Asn Val Thr Leu Thr Cys Gln Pro Gln Met Thr Trp Pro Val 145 150 155 160 Gln Ala Val Arg Trp Glu Lys Ile Gln Pro Arg Gln Ile Asp Leu Leu 165 170 175 Thr Tyr Cys Asn Leu Val His Gly Arg Asn Phe Thr Ser Lys Phe Pro 180 185 190 Arg Gln Ile Val Ser Asn Cys Ser His Gly Arg Trp Ser Val Ile Val 195 200 205 Ile Pro Asp Val Thr Val Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Arg Cys Tyr Leu 210 215 220 Gln Ala Ser Ala Gly Glu Asn Glu Thr Phe Val Met Arg Leu Thr Val 225 230 235 240 Ala Glu Gly Lys Thr Asp Asn Gln Tyr Thr Leu Phe Val Ala Gly Gly 245 250 255 Thr Val Leu Leu Leu Leu Phe Val Ile Ser Ile Thr Thr Ile Ile Val 260 265 270 Ile Phe Leu Asn Arg Arg Arg Arg Arg Glu Arg Arg Asp Leu Phe Thr 275 280 285 Glu Ser Trp Asp Thr Gln Lys Ala Pro Asn Asn Tyr Arg Ser Pro Ile 290 295 300 Ser Thr Ser Gln Pro Thr Asn Gln Ser Met Asp Asp Thr Arg Glu Asp 305 310 315 320 Ile Tyr Val Asn Tyr Pro Thr Phe Ser Arg Arg Pro Lys Thr Arg Val 325 330 335 <210> 14 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic construct <400> 14 Glu Glu Val Leu Trp His Thr Ser Val Pro Phe Ala Glu Asn Met Ser 1 5 10 15 Leu Glu Cys Val Tyr Pro Ser Met Gly Ile Leu Thr Gln Val Glu Trp 20 25 30 Phe Lys Ile Gly Thr Gln Gln Asp Ser Ile Ala Ile Phe Ser Pro Thr 35 40 45 His Gly Met Val Ile Arg Lys Pro Tyr Ala Glu Arg Val Tyr Phe Leu 50 55 60 Asn Ser Thr Met Ala Ser Asn Asn Met Thr Leu Phe Phe Arg Asn Ala 65 70 75 80 Ser Glu Asp Asp Val Gly Tyr Tyr Ser Cys Ser Leu Tyr Thr Tyr Pro 85 90 95 Gln Gly Thr Trp Gln Lys Val Ile Gln Val Val Gln Ser Asp Ser Phe 100 105 110 Glu Ala Ala Val Pro Ser Asn Ser His Ile Val Ser Glu Pro Gly Lys 115 120 125 Asn Val Thr Leu Thr Cys Gln Pro Gln Met Thr Trp Pro Val Gln Ala 130 135 140 Val Arg Trp Glu Lys Ile Gln Pro Arg Gln Ile Asp Leu Leu Thr Tyr 145 150 155 160 Cys Asn Leu Val His Gly Arg Asn Phe Thr Ser Lys Phe Pro Arg Gln 165 170 175 Ile Val Ser Asn Cys Ser His Gly Arg Trp Ser Val Ile Val Ile Pro 180 185 190 Asp Val Thr Val Ser Asp Ser Gly Leu Tyr Arg Cys Tyr Leu Gln Ala 195 200 205 Ser Ala Gly Glu Asn Glu Thr Phe Val Met Arg Leu Thr Val Ala Glu 210 215 220 Gly Lys Thr Asp Asn His Ile Glu Gly Arg Met Asp Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly Lys 465

Claims

서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 항-인간 CD226 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는 항-인간 CD226 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 LC를 포함하는 항-인간 CD226 항체.
제1항에 있어서, 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는 2개의 HC 및 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는 2개의 LC로 이루어진 항-인간 CD226 항체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 효능제 항체인 항-인간 CD226 항체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 항-인간 CD226 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포.
제6항의 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-인간 CD226 항체를 생산하는 방법.
제7항의 방법에 의해 생산된 항-인간 CD226 항체.
서열식별번호: 11, 서열식별번호: 12, 또는 서열식별번호: 11 및 12의 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 DNA 분자.
제9항의 DNA 분자를 포함하는 포유동물 세포.
제10항의 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-인간 CD226 항체를 생산하는 방법.
제11항의 방법에 의해 생산된 항-인간 CD226 항체.
제1항 내지 제5항, 제8항 및 제12항 중 어느 한 항의 항-인간 CD226 항체 및 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
고형 종양 암의 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제1항 내지 제5항, 제8항 및 제12항 중 어느 한 항의 항-인간 CD226 항체를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 고형 종양 암은 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 연부 조직 육종, 위암, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인, 고형 종양 암을 치료하는 방법.
제1항 내지 제5항, 제8항 및 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암, 연부 조직 육종, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 고형 종양 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-인간 CD226 항체.
방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암, 연부 조직 육종, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 고형 종양 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제5항, 제8항 및 제12항 중 어느 한 항의 항-인간 CD226 항체의 용도.
항-인간 CD226 효능제 항체.
제17항의 항-인간 CD226 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포.
제17항의 항체를 발현할 수 있는 포유동물 세포를 배양하고, 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-인간 CD226 항체를 생산하는 방법.
제17항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 항-인간 CD226 효능제 항체.
제20항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 항-인간 CD226 효능제 항체.
제21항에 있어서, 암이 고형 종양 암인 항-인간 CD226 효능제 항체.
제22항에 있어서, 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암, 연부 조직 육종, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 항-인간 CD226 효능제 항체.
암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제17항의 항-인간 CD226 효능제 항체의 용도.
제24항에 있어서, 암이 고형 종양 암인 용도.
제25항에 있어서, 고형 종양 암이 방광암, 유방암, 자궁경부암, 결장직장암, 자궁내막암, 두경부암, 간암, 폐암, 흑색종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 신암, 위암, 연부 조직 육종, 고환암, 갑상선암, 자궁암 또는 요로상피암인 용도.