CN110662552A - 包含tigit结合剂的癌症治疗方法 - Google Patents

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Abstract

公开了用于增强免疫应答和/或治疗诸如癌症之类的疾病的方法，其包括特异性结合TIGIT的剂。TIGIT结合剂可包括多肽、抗体和/或双特异性试剂。

Description

包含TIGIT结合剂的癌症治疗方法
技术领域
本发明总体上涉及使用结合人类TIGIT的剂，特别为特异性结合TIGIT的细胞外结构域的抗体治疗癌症的方法。
背景技术
免疫疗法的基础在于操控及/或调节免疫系统，包括先天免疫反应及后天免疫反应二者。免疫疗法的概括目标为通过控制对“外来剂”(例如病原体或肿瘤细胞)的免疫反应来治疗疾病。然而，在一些示例中，免疫疗法是用于治疗可自对抗正常存在于体内的蛋白、分子及/或组织的异常免疫反应引起的自体免疫疾病。免疫疗法可包括诱发或增强特异性免疫反应或抑制或降低特异性免疫反应的剂及方法。
免疫系统是由众多细胞类型所组成的高度复杂系统，这些细胞包括但不限于T细胞、B细胞、自然杀手细胞、抗原呈现细胞、树突细胞、单核球和巨噬细胞。这些细胞具有控制那些交互作用及反应的复杂且细微的系统。细胞是利用活化和抑制机制及回馈环路二者来维持查核反应且不容许不受控制的免疫反应的负面结果(例如自体免疫疾病)。
癌免疫监测的概念是基于免疫系统可辨识肿瘤细胞、启动免疫反应及抑制肿瘤发展及/或进展的理论。然而，明确的是许多癌细胞/肿瘤细胞已发展出逃避免疫系统的机制，其使得这些细胞能不受抑制地生长。癌/肿瘤免疫疗法着重于发展可活化及/或激励免疫系统的新型且新颖的剂，以达成更有效的抗肿瘤细胞攻击，导致增加杀死肿瘤细胞及/或抑制肿瘤生长。
发明内容
本发明提供了使用结合具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)的剂治疗癌症(即抑制肿瘤生长)的方法，所述剂包括但不限于特异性结合TIGIT的细胞外结构域的抗体。在特定的实施方案中，所述剂是TIGIT拮抗剂。在一些实施方案中，方法包括使用TIGIT结合剂以诱导、活化、促进、增加、增强或延长对癌症和/或肿瘤的免疫应答。在一些实施方案中，方法包括使用TIGIT结合剂来抑制肿瘤生长。在一些实施方案中，方法包括使用TIGIT结合剂治疗癌症。在一些实施方案中，方法包括使用TIGIT结合剂与至少一种另外的治疗剂的组合。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤是结肠直肠癌(CRC)，例如微卫星不稳定性-高结肠直肠癌(MSI CRC)或微卫星稳定结肠直肠癌(MSS CRC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ IDNO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤是具有高微卫星不稳定性(MSI)的实体瘤。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有高MSI的实体瘤选自MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌、MSI脑癌或MSI皮肤癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌或微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中，所述肿瘤是结肠直肠癌(CRC)，例如微卫星不稳定性-高结肠直肠癌或微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-1抗体。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-L1抗体。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤是具有高微卫星不稳定性的实体瘤，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ IDNO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-1抗体。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，具有高MSI的实体瘤选自MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌、MSI脑癌或MSI皮肤癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性。如本文所使用的，所述肿瘤对用剂治疗具有抗性或难治性，其中在用剂治疗期间或之后存在肿瘤生长进展。在一些实施方案中，所述肿瘤对用作为单一剂施用的剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，肿瘤对用作一线治疗或二线治疗施用的剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，肿瘤对用抗PD-1抗体(例如，作为单一剂)的治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，肿瘤对用抗PD-L1抗体(例如，作为单一剂)治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性的肿瘤选自黑素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或DNA错配修复缺陷(dMMR)转移性CRC)和肝细胞癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤对用作为单一剂的PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤对用作为单一剂的PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，肿瘤对用作一线治疗或二线治疗施用的剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，肿瘤对用PD-1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性，但对用该剂与TIGIT结合剂组合治疗有反应。在一些实施方案中，肿瘤对用PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性，但对用该药剂与TIGIT结合剂组合治疗有反应。在一些实施方案中，所述肿瘤对用抗PD-1抗体(例如，作为单一剂)的治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，肿瘤对用抗PD-L1抗体(例如，作为单一剂)治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-1抗体。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性的肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述受试者先前已用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂进行了治疗。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述受试者先前已用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂进行了治疗，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗，其中在治疗时或之后存在疾病进展。在一些实施方案中，在用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗后存在肿瘤生长复发。如本文所使用的，肿瘤生长复发被定义为治疗后并且在未检测到癌症的一段时间后癌症的复发。癌症可能会回到最初被发现的部位，也可能在身体其他部位被发现。在一些实施方案中，复发是局部复发、区域复发或远处复发。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体治疗。在一些实施方案中，肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述受试者先前已用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂进行了治疗。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中述受试者先前已用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂进行了治疗，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗，其中在治疗时或之后存在疾病进展。在一些实施方案中，在用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗后存在肿瘤生长复发。在一些实施方案中，复发是局部复发、区域复发或远处复发。在一些实施方案中，组合疗法将肿瘤“重新敏感”至用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体治疗。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-1抗体。在一些实施方案中，组合疗法包含抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中肿瘤表达脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和/或脊髓灰质炎病毒受体-相关2(PVRL2)。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR)转移性CRC和肝细胞癌。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤包含肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤包含肿瘤浸润淋巴细胞；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤包含肿瘤浸润性淋巴细胞。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤包含肿瘤浸润淋巴细胞；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤包含调节性T细胞(Tregs)。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤包含Tregs；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明的一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤包含Tregs。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤包含Tregs；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本文所述方法的一些实施方案中，肿瘤选自：肺肿瘤、肝肿瘤、乳腺肿瘤、肾细胞癌/肾肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠/胃肿瘤、黑素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、胶质母细胞瘤、头颈肿瘤、胰腺肿瘤、卵巢肿瘤、结肠直肠肿瘤、子宫内膜肿瘤、肛门肿瘤和食道肿瘤。
在一些实施方案中，肺肿瘤包含NSCLC，例如NSCLC鳞状细胞或NSCLC腺癌。
在一些实施方案中，乳腺肿瘤包含三阴性乳腺癌(TNBC)。
在一些实施方案中，肿瘤是具有高MSI的实体瘤。在一些实施方案中，具有高微卫星不稳定性的实体瘤是MSI结肠直肠癌(MSI CRC)、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌，MSI脑癌或MSI皮肤癌。在一些实施方案中，具有高MSI的实体瘤是MSI CRC。
在一些实施方案中，所述肿瘤是微卫星稳定(MSS)肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤是微卫星稳定的结肠直肠癌(MSS CRC)。
在一些实施方案中，肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，所述剂是特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、和含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、和/或含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，该剂为特异性结合TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中抗体包含与SEQ ID NO：10具有至少90％的序列一致性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO：11具有至少90％的序列一致性的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：10具有至少95％的序列一致性的重链可变区；和/或与SEQ ID NO：11具有至少95％的序列一致性的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含：包含SEQ ID NO：10的重链可变区及包含SEQ ID NO：11的轻链可变区。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，该结合TIGIT剂为抗体，其为单克隆抗体、人源化抗体、人类抗体、重组抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、包含抗原结合部位的抗体片段、IgG抗体、IgG1抗体、IgG2抗体或IgG4抗体。在一些实施方案中，抗体为单价。在一些实施方案中，抗体为双价。在一些实施方案中，抗体为单特异性。在一些实施方案中，抗体为双特异性。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体包含SEQID NO：13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：15的轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体包含SEQ ID NO：17的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：15的轻链氨基酸序列。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合小鼠TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合大鼠TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合兔子TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合狨猴TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合狗TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合猪TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合食蟹猕猴TIGIT。在一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体不结合恒河猴TIGIT。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，特异性结合人类TIGIT的抗体包含来自抗体OMP-313M32的重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含由2015年8月11日依照布达佩斯特条约的条款保藏于美国菌种保藏中心(ATCC)，10801UniversityBoulevard,Manassas,VA,USA的编号为PTA-122346的质粒编码的重链可变区。在一些实施方案中，抗体包含多肽，其包含由保藏于ATCC的编号为PTA-122346的质粒编码的重链可变区。在一些实施方案中，抗体包含由2015年8月11日依照布达佩斯特条约的条款保藏于ATCC，10801University Boulevard,Manassas,VA,USA的编号为PTA-122347的质粒编码的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含由保藏于ATCC的编号为PTA-122347的质粒编码的轻链。在一些实施方案中，抗体包含由保藏于ATCC的编号为PTA-122346的质粒编码的重链可变区及由保藏于ATCC的编号为PTA-122347的质粒编码的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含由保藏于ATCC的编号为PTA-122346的质粒编码的多肽及由保藏于ATCC的编号为PTA-122347的质粒编码的多肽。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂是单价的。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是二价的。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是单特异性的。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是双特异性的。在一些实施方案中，双特异性剂是异二聚体试剂或异二聚体分子。在一些实施方案中，异二聚体剂包含特异性结合TIGIT的抗体。在一些实施方案中，双特异性试剂是同型二聚体剂或同型二聚体分子。在一些实施方案中，同型二聚体剂包含特异性结合TIGIT的抗体。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂是抗体，其与本文所述的抗体竞争与人类TIGIT特异性结合。在一些实施方案中，TIGIT结合剂与本文所述的抗体结合人类TIGIT的相同的抗原决定区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合人类TIGIT的抗原决定区，该抗原决定区与以本文所述的抗体结合的TIGIT的抗原决定区重叠。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含在SEQ ID NO：27内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含在SEQ ID NO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含在SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQID NO：1的氨基酸Q64、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其包含至少一种选自由下列所组成的群组：SEQ ID NO：1的氨基酸N58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120和R121。在一些实施方案中，抗原决定区为构象抗原决定区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合抗原决定区，其不包含SEQ ID NO：1的氨基酸V100。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，特异性结合TIGIT的剂为抗体，其中抗体为双特异性剂的一部分。在一些实施方案中，双特异性剂包含结合TIGIT的第一臂及结合第二标靶的第二臂(second arm)。在一些实施方案中，双特异性剂包含特异性结合TIGIT的第一臂及第二臂，其中第一臂包含抗TIGIT抗体。在一些实施方案中，双特异性剂包含结合TIGIT的第一臂及包含来自抗体的抗原结合部位的第二臂。在一些实施方案中，双特异性剂包含结合TIGIT的第一臂及特异性结合PD-1、PD-L1、CTLA4、TIM-3、LAG-3、OX-40或GITR的第二臂。在一些实施方案中，双特异性剂包含结合TIGIT的第一臂及特异性结合肿瘤抗原的第二臂。在一些实施方案中，双特异性剂包含结合TIGIT的第一臂及包含免疫反应刺激剂的第二臂。在一些实施方案中，免疫反应刺激剂是选自由下列所组成的群组：颗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白介素2(IL-2)、白介素3(IL-3)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BB配体、GITRL、OX-40L、抗CD3抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体。
在一些实施方案中，双特异性剂为异质二聚体剂或异质二聚体分子。在一些实施方案中，双特异性剂为同质二聚体剂或同质二聚体分子。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含结合人类TIGIT的第一臂及结合第二标靶的第二臂。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含特异性结合人类TIGIT的第一臂及第二臂，其中第一臂包含抗TIGIT抗体。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含结合人类TIGIT的第一臂及特异性结合第二标靶的第二臂，该第二臂包含来自抗体的抗原结合部位。在一些实施方案中，异质二聚体分子为双特异性抗体。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含结合人类TIGIT的第一臂及特异性结合肿瘤抗原的第二臂。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含结合人类TIGIT的第一臂及特异性结合PD-1、PD-L1、CTLA-4、TIM-3、LAG-3、OX-40、4-1BB或GITR的第二臂。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含结合TIGIT的第一臂及第二臂，该第二臂包含免疫治疗剂。在一些实施方案中，免疫治疗剂是选自由下列所组成的群组：颗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、白介素2(IL-2)、白介素3(IL-3)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BB配体、GITRL、OX-40L、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗4-1BB抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT与PVR结合。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制或阻断TIGIT与PVR之间的交互作用。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT与PVRL2结合。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制或阻断TIGIT与PVRL2之间的交互作用。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT与PVRL3结合。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制或阻断TIGIT与PVRL3之间的交互作用。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT传导信号。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且为经TIGIT介导的传导信号的拮抗剂。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT活化。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且抑制TIGIT磷酸化。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且降低TIGIT的细胞表面表达。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，剂特异性结合TIGIT且诱发、活化、促进、增强、提高和/或延长免疫反应。在一些实施方案中，免疫反应是针对(例如，杀死)肿瘤或肿瘤细胞。在一些实施方案中，免疫反应是针对病毒或病毒感染细胞。在一些实施方案中，该剂增加细胞介导的免疫力。在一些实施方案中，该剂增加T细胞活性。在一些实施方案中，该剂增加溶胞性T细胞(CTL)活性。在一些实施方案中，该剂增加自然杀手(NK)细胞活性。在一些实施方案中，该剂增加IL-2生产和/或IL-2生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂增加IFN-γ生产和/或IFN-γ生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂增强Th1型免疫反应。在一些实施方案中，该剂降低IL-4生产和/或IL-4生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂降低IL-10和/或IL-10生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂降低IL-6生产和/或IL-6生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂降低IL-5生产和/或IL-5生产细胞的数目。在一些实施方案中，该剂降低Th2型免疫反应。在一些实施方案中，该剂降低Treg细胞的数目。在一些实施方案中，该剂降低Treg活性。在一些实施方案中，该剂抑制和/或降低Treg的抑制活性。在一些实施方案中，该剂降低骨髓衍生性抑制细胞(MDSC)的数目。在一些实施方案中，该剂抑制和/或降低MDSC的抑制活性。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，剂特异性结合TIGIT且抑制肿瘤生长。在一些实施方案中，该剂降低肿瘤生长。在一些实施方案中，该剂降低肿瘤生长至不可检测的大小。在一些实施方案中，该剂诱发长期抗肿瘤免疫性。
在另一方面，本发明提供了包含TIGIT结合剂的组合物，其用于本文所述的方法中。在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含用于本文所述方法的TIGIT结合剂和药学上可接受的载体。
在本文所述方法的某些实施方案中，分离TIGIT结合剂。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂基本上是纯的。
本发明还提供了多核苷酸，其包含编码TIGIT结合剂的多核苷酸。在一些实施方案中，分离多核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供了包含多核苷酸的载体，以及包含载体和/或多核苷酸的细胞。在一些实施方案中，本发明还提供了包含或生产TIGIT结合剂的细胞。在一些实施方案中，细胞为单克隆细胞系。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，方法进一步包含施用至少一种额外治疗剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为化疗剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗LAG-3抗体或抗TIM-3抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为Notch途径、Wnt途径或RSPO/LGR途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为免疫治疗剂。如本文所使用的词句“免疫治疗剂”是以最广义使用且是指直接或间接影响或调节免疫系统的物质。在一些实施方案中，免疫治疗剂为通过诱发免疫系统组分中的任一者活化或增加免疫系统组分中的任一者的活性而直接或间接刺激免疫系统的剂。当考虑TIGIT结合剂为免疫治疗剂时，则可将此额外的免疫治疗剂视为〝第二”免疫治疗剂。在一些实施方案中，第二免疫治疗剂是选自由下列所组成的群组：GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BB配体、GITRL、OX-40配体、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗CD28抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗4-1BB抗体、抗GITR抗体、抗OX-40抗体、抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体。在一些实施方案中，第二免疫治疗剂为包含下列的融合蛋白：GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BB配体、GITRL、OX-40配体或其片段。在一些实施方案中，第二免疫治疗剂为包含GITRL、OX40配体或4-1BB配体的至少一种复制的细胞外结构域的融合蛋白。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，受试者为人类。在一些实施方案中，受试者曾患有至少已部分移除的肿瘤或癌。
在本文所描述的方法的一些实施方案中，肿瘤或癌表达PD-L1。在一些实施方案中，方法另外包含测定肿瘤或癌中的PD-L1表达量的步骤。在一些实施方案中，测定PD-L1表达量是在以TIGIT结合剂治疗或接触之前进行。在一些实施方案中，若肿瘤或癌具有上升的PD-L1表达量，则将TIGIT结合剂施用给受试者。
在一些实施方案中，本发明包括一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是头颈癌、食道/胃食管癌、胃癌、结肠直肠癌、肛门癌、肝细胞癌/肝癌、宫颈癌、肺癌(例如，NSCLC)、黑色素瘤、Merkel细胞癌、肾细胞癌/肾癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫内膜癌和三阴性乳腺癌、已知的MSI高实体瘤(包括MSI CRC)或MSS结肠直肠癌；其中所述肿瘤对用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗具有抗性或难治性；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本文所述方法的一些实施方案中，所述受试者先前已经用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗。在一些实施方案中，所述特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约7.5kg/kg、或约10mg/kg的剂量施用于受试者。在一些实施方案中，所述特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体约每周施用一次、约每两周施用一次、约每三周施用一次或约每四周施用一次。在一些实施方案中，所述受试者具有组织学证实的晚期复发或难治性实体瘤。
在此本发明的方面或实施方案是按照马库什(Markush)群组或其他替代群组说明，本发明不仅包含以全体列举的整个群组，而且单独包含群组的每一成员及主要群组中所有可能的亚群组，且还包含群组成员中的一或多者不存在的主要群组。本发明还展望明确排除于所主张的本发明以外的任何群组成员中的一或多者。
附图说明
图1.在人源化小鼠模式中以抗TIGIT抗体OMP-313M32的肿瘤生长抑制。将人源化小鼠以源自患者的黑色素瘤肿瘤细胞经皮下注射(OMP-M9，75,000个细胞/小鼠)。容许肿瘤生长19天，直到其达到约50立方毫米的平均体积。将携肿瘤的小鼠随机分组(每组n＝8)。将携肿瘤的小鼠以对照抗体或抗TIGIT抗体OMP-313M32治疗。将小鼠每5天以1mg/kg或5mg/kg给药。监测肿瘤生长且以电子式卡尺在指示的时间点测量肿瘤体积。
图2.显示使用抗TIGIT抗体313M32的临床试验的初始阶段的剂量递增和扩增的示意图。
具体实施方式
本发明提供了使用新颖剂的方法，其中所述剂包括但不限于多肽、抗体和异质二聚体分子和同质二聚体分子，其特异性结合人类TIGIT。提供了使用新颖剂以抑制肿瘤生长和/或治疗癌症的方法。进一步提供了使用新颖剂的方法，诸如活化免疫反应的方法、刺激免疫反应的方法、促进免疫反应的方法、增强免疫反应的方法、活化自然杀手(NK)细胞和/或T细胞的方法、增加NK细胞和/或T细胞活性的方法、促进NK细胞和/或T细胞活性的方法、降低和/或抑制T细胞(即调节性T细胞)抑制因子的方法、和/或降低和/或抑制骨髓衍生性抑制细胞的方法。
I.定义
为了有助于对本发明的了解，将许多术语及词句定义于下。
如本文所使用的术语“促效剂”和“促效性”是指或说明能够直接或间接地、实质地诱发、活化、促进、增加或增强标靶和/或途径的生物活性的剂。本文所使用的术语“促效剂”包括部分或完全诱发、活化、促进、增加或增强蛋白活性的任何剂。
如本文所使用的术语“拮抗剂”和“拮抗性”是指或说明能够直接或间接地、部分或完全地阻断、抑制、降低或中和标靶和/或途径的生物活性的剂。本文所使用的术语“拮抗剂”包括部分或完全地阻断、抑制、降低或中和蛋白活性的任何剂。
如本文所使用的术语“调节(modulation)”和“调节(modulate)”是指生物活性的改变或变化。调节包括但不限于刺激活性或抑制活性。调节可为增加或降低活性、改变结合特征或与蛋白、途径、系统或其他关注的生物标靶的活性相关联的生物、功能或免疫性质的任何其他改变。
如本文所使用的术语“抗体”是指辨识及透过至少一个抗原结合部位特异性结合标靶的免疫球蛋白分子。标靶可为蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷酸、脂质或前述中任一者的组合。如本文所使用的术语包含完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、抗体片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、单链Fv(scFv)抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人类抗体、包含抗体的抗原结合部位的融合蛋白及任何其他包含抗原结合部位的经修饰的免疫球蛋白分子，只要抗体展现所期望的生物活性。抗体可为五种基于其分别称为α、δ、ε、γ及μ的重链恒定结构域的一致性的主要类别的免疫球蛋白中的任一者：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其子类别(同型)(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。不同类别的免疫球蛋白具有不同且熟知的子单位结构及三维构型。抗体可为未经修饰(naked)的或与其他分子共轭，这些其他分子包括但不限于毒素及放射性同位素。
术语“抗体片段”是指完整抗体的一部分且通常是指完整抗体的抗原性决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段、线性抗体、单链抗体及自抗体片段所形成的多特异性抗体。如本文所使用的“抗体片段”包含抗原结合部位或抗原决定区结合部位。
术语抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。重链可变区或轻链可变区通常是由以三个互补决定区(CDR)连接的四个架构区(FR)所组成，亦称为“超级可变区”。在各链中的CDR是由架构区以紧密邻接的方式固定在一起且与来自其他链的CDR一起促成抗体的抗原结合部位的形成。有至少两种用于测定CDR的技术：(1)基于跨物种序列变异性的方法(亦即Kabat等人的1991,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Edition,National Institutes of Health,BethesdaMD.)，及(2)基于抗原-抗体复合物的结晶学研究的方法(Al Lazikani等人的1997,J.Mol.Biol.,273：927-948)。另外，在本技术领域中有时使用该两种方法的组合来测定CDR。
如本文所使用的术语“单克隆抗体”是指涉及其高度特异性辨识及结合单一抗原决定子或抗原决定区的同源性抗体群。这与多克隆抗体相反，多克隆抗体通常包括辨识不同的抗原决定子的不同的抗体的混合物。术语“单克隆抗体”包含完整及全长单克隆抗体二者，以及抗体片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)抗体、包含抗体片段的融合蛋白及任何其他包含抗原结合部位的经修饰的免疫球蛋白分子。此外，“单克隆抗体”是指由任何多种技术所制成的这样的抗体，包括但不限于融合瘤生产、噬菌体选择、重组表达和基因转殖动物。
如本文所使用的术语“人源化抗体”是指含有最少的非人类序列的特异性免疫球蛋白链、嵌合性免疫球蛋白或其片段的抗体。人源化抗体通常为其中CDR的氨基酸残基以来自具有所期望的特异性、亲和性和/或结合能力的非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔子或仓鼠)的CDR的氨基酸残基取代的人类免疫球蛋白。在一些情况中，人类免疫球蛋白的架构可变区氨基酸残基可以用来自非人类物种的抗体中的对应氨基酸残基取代。人源化抗体可通过取代在架构可变区和/或经取代的非人类氨基酸残基内的额外氨基酸残基而进一步修饰，以进一步改进及最优化抗体特异性、亲和性和/或结合能力。人源化抗体可包含可变结构域，其含有所有或实质上所有对应于非人类免疫球蛋白的CDR，而所有或实质上所有的架构可变区为那些人类免疫球蛋白序列的架构可变区。在一些实施方案中，可变结构域包含人类免疫球蛋白序列的架构区。在一些实施方案中，可变结构域包含人类免疫球蛋白共有序列的架构区。人源化抗体还可包含至少一部分的免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，通常为至少一部分的人类免疫球蛋白。
如本文所使用的术语“人类抗体”是指由人类所生产的抗体或使用本技术中已知的技术中的任一者所制得的具有对应于由人类所生产的抗体的氨基酸序列的抗体。
如本文所使用的术语“嵌合抗体”是指其中免疫球蛋白分子的氨基酸序列是衍生自二或更多物种的抗体。轻链可变区和重链可变区通常对应于自一种哺乳动物物种(例如小鼠、大鼠、兔子等等)所衍生的具有所期望的特异性、亲和性和/或结合能力的抗体的可变区，而恒定区是与自另一物种所衍生的抗体的序列为同源的。
术语“抗原决定区”与“抗原决定子”在本文可交换使用，且是指能够以特别的抗体辨识且特异性结合的抗原或标靶部分。当抗原或标靶为多肽时，则抗原决定区可自连续氨基酸和自以蛋白三级折叠并列的非连续氨基酸二者形成。自连续氨基酸所形成的抗原决定区(亦称线性抗原决定区)通常在蛋白变性时仍被保留，而三级折叠所形成的抗原决定区(亦称为构象抗原决定区)通常在蛋白变性时失去。抗原决定区通常包括至少3个氨基酸，且更常为至少5、6、7或8-10个氨基酸于独特的空间构象中。
术语“选择性结合”或“特异性结合”意指剂对抗原决定区、蛋白或标靶分子比与替代物质(包括相关和不相关蛋白)更频繁、更快速、具有更长持续期间、具有更高亲和性或与以上的某些组合交互作用。在特定的实施方案中，“特异性结合”意指例如该剂以约0.1mM或更小，但是更经常以小于约1μM的KD与蛋白或标靶结合。在特定的实施方案中，“特异性结合”意指该剂以至少约0.1μM或更小，至少约0.01μM或更小，或至少约1nM或更小的KD与标靶结合。因为在不同物种中的同源性蛋白之间的序列一致性，所以特异性结合可包括辨识在超过一种以上的物种中的蛋白或标靶的剂(例如小鼠TIGIT和人类TIGIT)。同样地，因为在不同的蛋白的多肽序列的特定区域内的同源性，所以特异性结合可包括辨识超过一种以上的蛋白或标靶的剂。应了解在特定的实施方案中，特异性结合第一标靶的剂可以或不可以特异性结合第二标靶。确切而言，“特异性结合”不一定需要(虽然可包括)排他性结合，亦即与单一标靶结合。因此，在特定的实施方案中，该剂特异性结合超过一种以上的标靶。在特定的实施方案中，多重标靶可以相同的抗原结合部位与剂结合。例如，抗体可在特定的情况下包含两个相同的抗原结合部位，每一个特异性结合二或更多个蛋白的相同的抗原决定区。在特定的可替代实施方案中，抗体可为双特异性且包含至少两个具有不同的特异性的抗原结合部位。述及的结合通常(但不必然)意指特异性结合。
如本文所使用的，关于患者的“选择”和“选择的”用于表示特定患者基于(由于)特定患者具有预定标准(例如，患者患有PVR和/或PVRL2表达水平升高的肿瘤)而从较大的患者组中特别选择。类似地，“选择性地治疗患有肿瘤的患者”是指向基于(由于)特定患者具有预定标准(例如，患者患有PVR和/或PVRL2表达水平升高的肿瘤)而特别选自较大患者组的癌症患者提供治疗。类似地，“选择性施用”是指向基于(由于)特定患者具有预定标准(例如，患者具有PVR和/或PVRL2表达水平升高的肿瘤)而特别选自较大的患者组的癌症患者施用药物。通过选择、选择性治疗和选择性施用，意味着基于患者的癌症生物学特性向患者提供针对癌症的个性化治疗，而不是仅基于患有癌症的患者(例如CRC或NSCLC)提供标准治疗方案。
术语“多肽”和“肽”和“蛋白”可于本文交换使用且是指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可为线性或分支，其可包含经修饰的氨基酸，且其可经非氨基酸中断。这些术语亦包含经天然或干预修饰的氨基酸聚合物；例如双硫键形成、糖化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操控或修饰，诸如与标记的成分共轭。该定义亦包括例如含有一或多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸)以及本技术中已知的其他修饰物的多肽。应了解因为本发明的多肽可基于抗体或免疫球蛋白超级家族的其他成员，所以在特定的实施方案中，“多肽”可以单链或二或更多个缔合链出现。
术语“多核苷酸”和“核酸”和“核酸分子”可于本文交换使用且是指任何长度的核苷酸的聚合物，且包括DNA和RNA。核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱和/或其类似物，或任何可通过DNA或RNA聚合酶并入聚合物中的任何底物。
在述及的二或更多个核酸或多肽中，术语“一致”或“一致性”百分比是指当比较及比对(若必要时导入间隔)二或更多个序列或子序列以达最高对应性，不考虑任何保守性氨基酸取代为序列一致性的一部分时，该二或更多个序列或子序列为相同的或具有相同的特定百分比的核苷酸或氨基酸残基。一致性百分比可使用序列比较软件或算法测量，或以目视检查测量。可用于获得氨基酸或核苷酸序列比对的各算法及软件为本技术中所公知。这些包括但不限于BLAST、ALIGN、Megalign、BestFit、GCG Wisconsin软件包及其变化产品。在一些实施方案中，本发明的两个核酸或多肽实质上一致，当比较及比对以达最高对应性时，如使用序列比较算法或目视检查所测量，那些具有至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，且在一些实施方案中至少95％，96％，97％，98％，99％的核苷酸或氨基酸残基一致性。在一些实施方案中，一致性存在于至少约10，至少约20，至少约40-60个核苷酸或氨基酸残基，至少约60-80个核苷酸或氨基酸残基长度或介于之间的任何整数值的序列区域内。在一些实施方案中，一致性存在于比60-80个核苷酸或氨基酸残基更长的区域内，诸如至少约80-100个核苷酸或氨基酸残基，且在一些实施方案中，序列实质上与比较的全长序列一致，诸如核苷酸序列的编码区域。
“保守性氨基酸取代”为其中一个氨基酸残基经具有类似侧链的另一氨基酸残基取代的取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族已于本技术中概括定义，包括碱性侧链(例如离氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、白氨酸、异白氨酸、脯氨酸、苯基丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异白氨酸)及芳族侧链(例如酪氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。例如，以苯基丙氨酸取代酪氨酸被视为保守性取代。在本发明的多肽和/或抗体的序列中的保守性取代通常不废除含有氨基酸序列的多肽或抗体结合至标靶结合部位。鉴别不消除结合的核苷酸及氨基酸保守性取代的方法为本技术领域中所公知。
如本文所使用的术语“载体”意指建构体，其能够在宿主细胞中递送及经常表达一或多个关注的基因或序列。载体的实例包括但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒载体、黏粒载体、噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体，及包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体。
经“分离”的多肽、可溶性蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物为呈现未在自然中发现的形式的多肽、可溶性蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物。经分离的多肽、可溶性蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物包括那些经纯化至使那些不再呈现在自然中发现的形式的程度者。在一些实施方案中，经分离的多肽、可溶性蛋白、抗体、多核苷酸、载体、细胞或组合物是实质上纯的。
如本文所使用的术语“实质上纯的”是指为至少50％纯的(即不含污染物)，至少90％纯的，至少95％纯的，至少98％纯的或至少99％纯的材料。
如本文所使用的术语“免疫反应”包括来自先天免疫系统及后天免疫系统二者的反应。其包括细胞介导和/或体液的免疫反应二者。其包括但不限于T细胞及B细胞反应，以及来自免疫系统的其他细胞的反应，诸如自然杀手(NK)细胞、单核球、巨噬细胞等等。
如本文所使用的术语“癌”和“癌性”是指或说明哺乳动物的生理病况，其中细胞群是以不受调节的细胞生长为特征。癌的实例包括但不限于癌(carcinoma)、胚细胞瘤、肉瘤和血液性癌症，诸如淋巴瘤和白血病。
如本文所使用的术语“肿瘤”和“赘瘤”是指任何由过度的细胞生长或增生所导致的任何组织团块，其为包括癌前病灶的良性(非癌性)或恶性(癌性)。
如本文所使用的术语“转移”是指使癌症自起源位置扩散或转变至身体的其他区域，在新部位发展类似的癌性病灶的过程。通常，“转移的(metastatic)或转移(metastasizing)”细胞是与邻接的细胞丧失黏着接触且自疾病的原发部位经由血流或淋巴移动至全身的继发部位的细胞。
术语“癌细胞”和“肿瘤细胞”是指源自癌或肿瘤或癌前病灶的整体细胞族群，包括非致瘤细胞(其包含大部分的癌细胞群)及致瘤干细胞(癌干细胞)二者。如本文所使用的术语“癌细胞”或“肿瘤细胞”在仅用于指称这些缺乏更新及分化能力的细胞时以术语“非致瘤”修饰，以区别这些肿瘤细胞与癌干细胞。
术语“受试者”是指成为特定治疗的接受者的任何动物(例如哺乳动物)，包括但不限于人类、非人灵长类动物、犬、猫、兔子、啮齿动物及类似者。关于人类受试者的术语“受试者”及〝患者”通常在本文可交换使用。
术语“医药上可接受的”是指经联邦或州政府的管理局核准或可核准或经美国药典或其他普遍公认的药典中用于动物(包括人类)而列示的材料。
术语“医药上可接受的赋形剂、载剂或佐剂”或“可接受的医药载剂”是指可与本发明的至少一种剂一起施用给受试者的赋形剂、载剂或佐剂，且其不破坏本发明的剂的药理活性及在以足以递送治疗效应的剂量施用时没有毒性。本领域技术人员以及美国FDA通常认为医药上可接受的赋形剂、载剂或佐剂为任何制剂的无活性成分。
术语“有效量”或“治疗有效量”或“治疗效应”是指剂、抗体、多肽、多核苷酸、小有机分子或有效“治疗”受试者(诸如哺乳动物)中的疾病或病症的其他药物的量。在癌或肿瘤的示例中，剂(例如多肽或抗体)的治疗有效量具有治疗效应且因此可增强或激励免疫反应、增强或激励抗肿瘤反应、增强免疫细胞的溶胞活性、增强杀死肿瘤细胞、增加以免疫细胞杀死肿瘤细胞、减少肿瘤细胞数目、降低致瘤性、降低致瘤频率或降低肿瘤发生能力、减少癌干细胞数目或频率、减少肿瘤大小、减少癌细胞群、抑制或停止癌细胞浸润至外围器官中，包括例如癌扩散至软组织和骨中、抑制且停止肿瘤或癌细胞转移、抑制且停止肿瘤或癌细胞生长、缓解一或多种与癌相关的症状至某种程度、降低发病率和死亡率、改进生活质量、或此等效应的组合。
术语“治疗(treating或treatment或to treat)”或“缓和(alleviating或toalleviate)”是指下列二者：(1)治疗性措施，其治愈、减缓、减轻经诊断的病理状况或病症症状，和/或终止经诊断的病理状况或病症的进展，及(2)预防性(prophylactic或preventative)措施，其预防或减缓靶定的病理状况或病症的发展。因此，那些需要治疗者包括那些已患有病症者、那些易患有病症者及那些期望预防其病症者。在癌或肿瘤的示例中，若患者显示下列中的一或多者，则根据本发明的方法成功地“治疗”受试者：增加免疫反应、增加抗肿瘤反应、增加免疫细胞的溶胞活性、增加杀死肿瘤细胞、增加以免疫细胞杀死肿瘤细胞、减少或完全没有癌细胞数目、减少肿瘤大小、抑制或没有癌细胞浸润至外围器官中，包括癌扩散至软组织和骨中、抑制或没有肿瘤或癌细胞转移、抑制或没有癌生长、缓解一或多种与特定的癌相关的症状、降低发病率和死亡率、改进生活质量、降低致瘤性、减少癌干细胞数目或频率、或此等效应的组合。
如本发明及申请专利范围中所使用的单数形式一(“a”、“an”)和该(“the”)包括复数形式，除非上下文另外清楚地说明。
应了解无论何时以文字“包含”说明实施方案时，亦提供以“由...组成”和/或“实质上由...组成”的术语所说明的其他方面类似的实施方案。还应了解无论何时以文字“实质上由...组成”说明实施方案时，也提供以“由...组成”的术语所说明的其他方面类似的实施方案。
如本文所使用提及的“约(about或approximately)”某数值或参数包括(且说明)针对该数值或参数的实施方案。例如，述及“约X”的说明包括“X”的说明。
如本文于词句中所使用的术语“和/或”(诸如“A和/或B”)意欲包括A和B二者；A或B；A(单独)；及B(单独)。同样地，如词句中所使用的术语“和/或”(诸如“A、B和/或C”)意指包含下列实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；及C(单独)。
II.使用方法及医药组合物
本发明的TIGIT结合剂有用于各种应用，包括但不限于治疗性治疗方法，诸如癌症治疗。在一些实施方案中，治疗性治疗方法包含癌症的免疫治疗。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂有用于活化、促进、增强和/或提高免疫反应、抑制肿瘤生长、减少肿瘤体积、增加肿瘤细胞凋亡和/或降低致瘤性。
本发明提供了使用TIGIT结合剂抑制肿瘤生长的方法。在特定的实施方案中，抑制肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体。在特定的实施方案中，受试者是人。在特定的实施方案中，受试者患有肿瘤或受试者患有至少部分除去的肿瘤。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌(MSI CRC)、微卫星稳定结肠直肠癌(MSS CRC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌(MSI CRC)、微卫星稳定结肠直肠癌(MSS CRC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，肿瘤是食道癌。在一些实施方案中，肿瘤是食道癌，其已经在至少一种先前的全身治疗或治疗线上发展为不可切除和/或转移性疾病。在一些实施方案中，肿瘤是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，肿瘤是三阴性乳腺癌，其已经在组织学上被证实为乳房的无法治愈的、晚期的雌激素受体-阴性、孕酮受体-阴性和人表皮生长因子受体2-阴性腺癌。
在一些实施方案中，组织学确认由技术人员(例如训练有素的临床医师)使用本领域已知的任何方法(例如免疫组织化学)进行。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中肿瘤是具有高MSI的实体瘤。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤具有高MSI的实体瘤；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有高MSI的实体瘤可包括MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌、MSI脑癌或MSI皮肤癌。
通常，肿瘤可根据其微卫星稳定性(MSI)进行分类。例如，实体瘤可以分类为MSI高，MSI低或MSI稳定的肿瘤。MSI高肿瘤可包括但不限于结肠癌、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肝胆管癌、泌尿道癌、脑癌和皮肤癌。MSI可以使用本领域已知的任何方法确定，例如使用聚合酶链反应(PCR)或免疫组织化学(IHC)确定。在一些实施方案中，在从癌症患者获得的样品中确定MSI。在一些实施方案中，样品是活组织检查样品(例如，针吸活组织检查)。在一些实施方案中，MSI在基于聚合酶链反应(PCR)的方法中确定，例如但不限于在基于逆转录PCR(RT-PCR)、定量RT-PCR(qPCR)、TaqManTM或TaqManTM低密度阵列(TLDA)的方法中确定。在一些实施方案中，使用微阵列确定MSI。在一些实施方案中，MSI通过DNA测序确定，例如通过下一代测序确定。在一些实施方案中，MSI在免疫组织化学(IHC)测定中测定。在一些实施方案中，将肿瘤MSI与预定的MSI进行比较。在一些实施方案中，如果肿瘤中的MSI高于预定的MSI，则肿瘤被分类为MSI高肿瘤。在一些实施方案中，预定的MSI是参考肿瘤样品、参考正常组织样品、一系列参考肿瘤样品或一系列参考正常组织样品中的MSI。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂的组合，其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，肿瘤是食道癌。在一些实施方案中，肿瘤是食道癌，其已经在至少一种先前的全身治疗或治疗线上发展为不可切除和/或转移性疾病。在一些实施方案中，肿瘤是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，肿瘤是三阴性乳腺癌，其已经在组织学上被证实为乳房的无法治愈的、晚期的雌激素受体-阴性、孕酮受体-阴性和人表皮生长因子受体2-阴性腺癌。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤是具有高MSI的实体瘤。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中，所述肿瘤是是具有高MSI的实体瘤，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂的组合，其中，所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有高微卫星不稳定性的实体瘤可包括MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌、MSI脑癌或MSI皮肤癌。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述肿瘤对用抗PD-1抗体治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤对用PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，其中所述肿瘤对用抗PD-L1抗体治疗具有抗性或难治性。
在一些实施方案中，对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性的肿瘤选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂作为单一剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤对用PD-1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是派姆单抗(KEYTRUDA)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是纳武单抗(OPDIVO)。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂的组合，其中所述肿瘤对用PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是阿特朱单抗(TECENTRIQ)。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是巴文西亚(MSB0010718C)。
在一些实施方案中，对用PD-1拮抗剂作为单一剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性的肿瘤可以包括黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂治疗，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中所述受试者先前已经用PD-L1拮抗剂治疗，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗，其中在治疗时或之后存在疾病进展。在特定治疗时或之后具有疾病进展的受试者在本文中可称为“进展者”。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体进行治疗作为一线治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体进行治疗作为二线或三线治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用派姆单抗(KEYTRUDA)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用纳武单抗(OPDIVO)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体进行治疗作为一线治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体进行治疗作为二线或三线治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用阿特朱单抗(TECENTRIQ)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用巴文西亚(MSB0010718C)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂进行治疗作为组合疗法的一部分。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体和第二检查点抑制剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用纳武单抗(OPDIVO)和伊匹单抗(YERVOY)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体和化学治疗剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体和第二检查点抑制剂治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体和伊匹单抗(YERVOY)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体和化学治疗剂治疗。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂的组合，其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂治疗，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述受试者先前已经用抗PD-1抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用派姆单抗(KEYTRUDA)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用纳武单抗(OPDIVO)治疗。在一些实施方案中，在用抗PD-1抗体治疗期间肿瘤生长进展。在一些实施方案中，在用抗PD-1抗体治疗后肿瘤生长复发。在一些实施方案中，肿瘤对抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合疗法有应答。在一些实施方案中，肿瘤对抗TIGIT抗体和抗PD-1抗体的组合疗法有应答，其中该应答优于单独施用抗TIGIT抗体获得的应答。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂的组合，其中所述受试者先前已经用PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述受试者先前已经用抗PD-L1抗体治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用阿特朱单抗(TECENTRIQ)治疗。在一些实施方案中，受试者先前已经用巴文西亚(MSB0010718C)治疗。在一些实施方案中，在用抗PD-L1抗体治疗期间肿瘤生长进展。在一些实施方案中，在用抗PD-L1抗体治疗后肿瘤生长复发。在一些实施方案中，肿瘤对抗TIGIT抗体和抗PD-L1抗体的组合疗法有应答。在一些实施方案中，肿瘤对抗TIGIT抗体和抗PD-L1抗体的组合疗法有应答，其中该应答优于单独施用抗TIGIT抗体获得的应答。
在一些实施方案中，在受试者中先前已用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗的肿瘤可以具有诸如黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)或肝细胞癌之类的肿瘤。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ IDNO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，从受试者获得肿瘤样品并测定PVR和/或PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，PVR的表达水平用于选择受试者以进行治疗。在一些实施方案中，PVRL2的表达水平用于选择受试者以进行治疗。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2选择性地向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2选择性地给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，表达PVR和/或PVRL2的肿瘤/癌症包括NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)或肝细胞癌之类的肿瘤。
在一些实施方案中，表达PVR和/或PVRL2的肿瘤/癌症包括CRC、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肝胆管癌、泌尿道癌、脑癌或皮肤癌。
在一些实施方案中，表达PVR和/或PVRL2的肿瘤/癌症包括MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI卵巢癌、MSI肝胆管癌、MSI泌尿道癌、MSI脑癌、或MSI皮肤癌。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ IDNO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ IDNO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤表达PVR和/或PVRL2；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与派姆单抗(KEYTRUDA)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与纳武单抗(OPDIVO)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与阿特朱单抗(TECENTRIQ)组合施用。
在一些实施方案中，确定肿瘤样品中PVR和/或PVRL2的表达水平处于高水平。在一些实施方案中，将样品中PVR的表达水平与PVR的预定表达水平进行比较。在一些实施方案中，将样品中PVRL2的表达水平与PVRL2的预定表达水平进行比较。在一些实施方案中，PVR表达的预定表达水平是参考肿瘤样品、参考正常组织样品、一系列参考肿瘤样品或一系列参考正常组织样品中的PVR的表达水平。在一些实施方案中，PVRL2表达的预定表达水平是参考肿瘤样品、参考正常组织样品、一系列参考肿瘤样品或一系列参考正常组织样品中的PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，使用免疫组织化学(IHC)测定法测定PVR或PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，使用包含H评分评估的测定法测定PVR和/或PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，使用特异性结合PVR的抗体测定PVR的表达水平。在一些实施方案中，使用特异性结合PVRL2的抗体测定PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，检测在肿瘤细胞上的PVR。在一些实施方案中，检测在肿瘤细胞上的PVRL2。在一些实施方案中，检测在肿瘤浸润性免疫细胞上和/或在肿瘤微环境中的PVR。在一些实施方案中，检测在肿瘤浸润性免疫细胞上和/或在肿瘤微环境中的PVRL2。
在特定的实施方案中，PVR和/或PVRL2的表达水平使用基于PCR的方法确定，例如但不限于使用逆转录PCR(RT-PCR)、定量RT-PCR(qPCR)、TaqManTM或TaqManTM低密度阵列(TLDA)确定。在一些实施方案中，使用微阵列确定生物标志物的表达水平。
在特定的实施方案中，使用基于蛋白的方法测定PVR和/或PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，通过多分析物谱测试、放射免疫测定法(RIA)、Western印迹测定法、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫沉淀测定法、化学发光测定法、免疫组化(IHC)测定法、斑点印迹测定法或狭缝印迹测定法来测量或测定生物标志物的表达水平。在一些实施方案中，使用IHC测定法测定PVR和/或PVRL2的表达水平。在一些实施方案中，该测定使用抗体(例如，作为抗PVR或PVRL2抗体)。在其中测定使用抗体的一些实施方案中，抗体是可检测标记的。在一些实施方案中，标志物选自免疫荧光标志物、化学发光标志物、磷光标志物、酶标志物、放射性标志物、抗生物素蛋白/生物素标志物、胶体金颗粒、有色颗粒和磁性颗粒。
在一些实施方案中，在用TIGIT结合剂治疗之前完成PVR和/或PVRL2的表达水平的确定。在一些实施方案中，如果肿瘤或癌症具有PVR和/或PVRL2的升高的表达水平，则向受试者施用TIGIT结合剂。在一些实施方案中，方法包括(i)从受试者获得肿瘤样品；(ii)测量样品中PVR和/或PVRL2的表达水平；(iii)如果肿瘤或癌症具有PVR和/或PVRL2的升高或高的表达水平，则向受试者施用有效量的TIGIT结合剂。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括基于肿瘤具有PVR和/或PVRL2的升高的表达水平选择性地向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂组合。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂的组合，其中肿瘤具有PVR和/或PVRL2的升高的表达水平；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ IDNO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括基于肿瘤具有PVR和/或PVRL2的升高的表达水平选择性地给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-L1拮抗剂组合；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ IDNO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与派姆单抗(KEYTRUDA)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与纳武单抗(OPDIVO)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与阿特朱单抗(TECENTRIQ)组合施用。
在一些实施方案中，样品是活组织检查样品。在一些实施方案中，样品包含肿瘤细胞、肿瘤浸润性免疫细胞、基质细胞及其任何组合。在一些实施方案中，样品是福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)样品。在一些实施方案中，样品是档案(archival)、新鲜或冷冻组织。
一些患者具有带有活性免疫微环境的肿瘤。这些肿瘤被称为“发炎的”或“热的”肿瘤，其特征在于存在例如肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、产生IFN-γ的CD8+T细胞和PD-L1的表达。在一些研究中，发炎或热的肿瘤与免疫疗法的临床应答有关。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中肿瘤包含TIL。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中肿瘤包含TIL；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，与预定水平相比，肿瘤包含高水平的TIL。在一些实施方案中，TIL的水平是TIL的绝对数量。在一些实施方案中，TIL水平是占总细胞数的百分比。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤包含TIL。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤包含TIL；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，与预定水平相比，肿瘤包含高水平的TIL。在一些实施方案中，TIL的水平是TIL的绝对数量。在一些实施方案中，TIL水平是占总细胞数的百分比。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与派姆单抗(KEYTRUDA)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与纳武单抗(OPDIVO)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与阿特朱单抗(TECENTRIQ)组合施用。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂，其中所述肿瘤包含高水平的调节性T细胞(Treg)。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，其中肿瘤包含高水平的Treg；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ IDNO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:7)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:8)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的TIGIT结合剂与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤包含高水平的Treg。在一些实施方案中，一种抑制受试者的肿瘤生长(例如，治疗癌症)的方法包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，其中肿瘤包含高水平的Treg；并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与派姆单抗(KEYTRUDA)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与纳武单抗(OPDIVO)组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与抗PD-L1抗体组合施用。在一些实施方案中，抗TIGIT抗体与阿特朱单抗(TECENTRIQ)组合施用。
在一些实施方案中，通过评估特定蛋白在细胞上或细胞内的表达来分析肿瘤中或肿瘤微环境内免疫细胞(例如，TIL、Treg、Teff)的存在。通常所使用的用于分析蛋白表达的方法包括但不限于基于免疫组织化学(IHC)、基于抗体和基于质谱的方法。在一些实施方案中，免疫细胞上或免疫细胞内的蛋白表达通过本领域技术人员已知的测定法来确定，包括但不限于多分析物谱测试、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法、Western印迹测定法、免疫荧光测定法、酶免疫测定法、免疫沉淀测定法、化学发光测定法、免疫组化(IHC)测定法、斑点印迹测定法或狭缝印迹测定法。抗体(通常是单克隆抗体)可用于检测基因产物(例如蛋白)的表达。在一些实施方案中，可以通过直接标记抗体本身来检测抗体。在其他实施方案中，未标记的第一抗体与标记的第二抗体结合使用。
在一些实施方案中，使用特异性结合该蛋白的剂测定特定蛋白的表达。显示与蛋白特异性结合的任何分子实体可用于评估样品中蛋白的表达。特异性结合剂包括但不限于抗体、抗体模拟物和多核苷酸(例如适体)。技术人员理解所需的特异性程度由用于检测蛋白的特定测定法确定。
CD45(白细胞共同抗原，LCA；包括CD45家族中的所有蛋白)用作免疫细胞的标志物，其包括淋巴细胞、NK细胞、巨噬细胞、单核细胞等。T细胞可以分成不同的亚组，其包括但不限于CD4+T细胞或CD8+T细胞。在一些实施方案中，CD45用作肿瘤样品中TIL的标记。在一些实施方案中，使用抗CD45抗体检测和/或评估TIL。在一些实施方案中，使用单克隆抗CD45抗体的混合物，其中每一种识别不同的CD45同种型和/或不同的抗原决定区。在一些实施方案中，使用抗CD4抗体检测和/或评估TIL。在一些实施方案中，使用抗CD8抗体检测和/或评估TIL。
本领域技术人员已知FOXP3是调节性T细胞(Treg)标志物，并且可用于检测和/或鉴定肿瘤样品中的Treg。研究表明，Treg细胞包括许多具有不同功能的亚群，并且已经鉴定出一个亚群是FOXP3+和TIGIT+。在一些实施方案中，通过FOXP3表达检测和/或评估Treg。在一些实施方案中，使用抗FOXP3抗体检测和/或评估FOXP3表达。在一些实施方案中，使用单克隆抗FOXP3抗体的混合物，其各自识别不同的同种型和/或不同的抗原决定区。在一些实施方案中，通过FOXP3和TIGIT表达检测和/或评估Treg。在一些实施方案中，使用抗TIGIT抗体检测和/或评估TIGIT表达。
在一些实施方案中，其中在测定中使用抗体，可检测地标记抗体。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光材料、磷光材料、发光材料、生物发光材料、化学发光材料、放射性材料、抗生物素蛋白/生物素、胶体金颗粒、有色颗粒和磁性颗粒。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的修复基团复合物的实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素，丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的实例包括鲁米诺；生物发光材料的实例包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白；合适的放射性物质的实例包括125I、131I、35S或3H。
在一些实施方案中，使用IHC测定法测定CD45、CD4、CD8、FOXP3和/或TIGIT的表达。例如，从肿瘤样品切下FFPE切片并将其安装在涂覆的载玻片上。通过将组织在二甲苯、100％乙醇、95％乙醇、70％乙醇和蒸馏水中连续温育使组织脱蜡并再水合以进行抗原修复。将载玻片置于回收溶液中并置于Decloaker中用于抗原修复。为了阻断内源性过氧化物酶活性，将载玻片在过氧化氢中温育并在PBS中洗涤。为了阻断非特异性背景染色，将载玻片在阻断剂中温育。将载玻片与抗PD-L1抗体一起温育。使用包括二氨基联苯胺(DAB)的试剂盒检测特异性结合。切片用苏木精复染。在一些实施方案中，将FFPE切片安装在涂覆的载玻片上并使用自动系统染色，例如使用Ventana试剂在Ventana BenchMark ULTRA仪器上染色。
在一些实施方案中，抗体是多克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体是结合人生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)的小鼠抗体。在一些实施方案中，抗体是结合人生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)的兔抗体。在一些实施方案中，抗体是结合人生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、FOXP3、TIGIT)的山羊抗体。
可以使用自动化仪器分析IHC载玻片或通过显微镜手动评估IHC载玻片。测量每个细胞的染色强度(0：无表达，1：弱表达，2：中度表达，3：强表达)，并计数每个染色水平的细胞并计算每种类型的百分比。将数据组合成每个组织切片的加权H评分：H评分＝[3×(％3+细胞)]+[2×(％2+细胞)]+[1×(％1+细胞)]。使用这些参数，可用的最高分数是H分数＝300。在一些实施方案中，H分数为1或更小被认为是阴性的。在一些实施方案中，IHC测定具有截止值。在一些实施方案中，IHC测定具有特异性的截止值。在一些实施方案中，IHC测定具有功效的截止值。在一些实施方案中，IHC测定具有通过筛选阳性和阴性肿瘤组织确定的截止值。在一些实施方案中，IHC测定具有约25的截止值。在一些实施方案中，IHC测定具有约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90、约100、或约110、或约120的截止值。
用于分析生物标志物的表达水平的其他合适方法包括基于蛋白组学的方法。蛋白组学尤其包括研究样品中蛋白表达的全局变化。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括以下步骤：(1)通过2-D电泳(2-D PAGE)分离样品中的单个蛋白，(2)鉴定从凝胶中回收的单个蛋白(例如，通过质量光谱测定法或N-末端测序进行)，和(3)使用生物信息学分析数据。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括使用组织微阵列(TMA)。可以根据本领域技术人员已知的各种技术构建组织阵列。在特定的实施方案中，使用手动组织阵列从由组织样品制备的石蜡块中除去“核心”。然后将核心插入网格上指定位置的单独的石蜡块中。可以将多达约400个样本的核心插入单个接收块中。可以将得到的组织阵列加工成薄切片用于分析。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括抗体微阵列。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括使用质谱法，其包括但不限于SELDI、MALDI、电喷雾和表面等离子体共振方法。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括基于珠子的技术，其包括但不限于阵列形式的珠子上的抗体。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括反相蛋白微阵列(RPPM)。在一些实施方案中，蛋白组学方法包括多重蛋白谱，包其括但不限于全球蛋白组调查(GPS)方法。
用于分析生物标志物的表达水平的其他合适方法包括但不限于基于多核苷酸表达分析、多核苷酸测序和/或蛋白表达分析的方法。例如，可以通过检测从目标基因表达的mRNA的表达，和/或通过检测由基因编码的多肽的表达来进行生物标志物表达水平的确定。
通常所使用的用于分析多核苷酸的方法包括Southern印迹分析，Northern印迹分析，和原位杂交，RNA酶保护测定法和基于聚合酶链反应(PCR)的方法，例如逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，定量PCR(qPCR)，如被称为实时PCR，TaqManTM，TaqManTM低密度阵列(TLDA)，锚定PCR，竞争性PCR，cDNA末端快速扩增(RACE)和微阵列分析。RT-PCR是一种定量方法，其可用于比较不同样品中的mRNA水平以检查基因表达谱。RT-PCR的变体是实时定量PCR，其通过双标记的荧光探针(例如，TaqManTM探针)测量PCR产物积累。本领域技术人员已知许多其他基于PCR的技术，其包括但不限于差异显示、扩增片段长度多态性、BeadArrayTM技术、高覆盖表达谱(HiCEP)和数字PCR。基于测序的基因表达分析的代表性方法包括基因表达的系列分析(SAGE)、大规模平行标签测序(MPSS)和NexGen测序分析，其包括mRNA测序。
在特定的实施方案中，使用qPCR测定法测定生物标志物表达。例如，从新鲜冷冻(FF)组织样品中提取总RNA，或者从宏观解剖的福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品中提取总RNA。通过标准分光光度法和/或任何其他适当的方法(例如，AgilentBioanalyzer)评估总RNA的数量和质量。在RNA提取后，使用标准方法和/或市售cDNA合成试剂盒(例如，Roche Transcriptor First Strand cDNA合成试剂盒)逆转录RNA样品。使用例如ABI预扩增试剂盒预扩增得到的cDNA。使用ABI TaqMan Gene Expression Mastermix在例如Roche Lightcycler 480系统(Roche Diagnostics)上评估生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT、其他免疫应答基因)的表达。qPCR反应一式三份进行。对于每个测定，样品的子集在没有逆转录的情况下运行(RT-neg对照)，以及对照样品在没有模板的情况下运行。每个平板上包含通用人参考RNA样品以充当阳性对照。从标准的参照基因组中鉴定合适的参考基因。选择具有不同细胞功能的候选参考基因以消除共调节的风险。使用特定的软件和算法(例如，Genex软件；GeNorm和Normfinder算法)评估和选择最合适的参考基因。使用所选择的最佳参考基因归一化每种生物标志物的表达水平。在一些实施方案中，每种生物标志物的这些归一化(或标准化)表达值用于计算样品的决定值。在一些实施方案中，每种生物标志物的这些归一化(或标准化)表达值用于计算表达水平。
在一些实施方案中，使用基于PCR的测定法测定生物标志物表达，所述测定法包含用于人生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT)的特异性引物和/或探针。如本文所使用的，术语“探针”是指能够选择性结合特定目标靶生物分子的任何分子。探针可以由本领域技术人员使用已知技术合成，或衍生自生物制剂。探针可包括但不限于RNA、DNA、蛋白、肽、适体、抗体和有机分子。术语“引物”或“探针”包括具有特定SEQ ID NO的序列的寡核苷酸或具有与特定SEQ ID NO的序列互补的序列的寡核苷酸。在一些实施方案中，修饰探针。在一些实施方案中，用猝灭剂修饰探针。在一些实施方案中，标记探针。标记可包括但不限于比色、荧光、化学发光或生物发光标记。
替代地，生物标志物表达水平可以通过扩增由mRNA产生的互补DNA(cDNA)或互补RNA(cRNA)并使用微阵列对其进行分析来确定。微阵列技术允许同时分析数千个基因的表达。许多不同的阵列配置和它们的生产方法是本领域技术人员已知的。另外，微阵列是可商购的(例如，Affymetrix GeneChips)或可以定制。目前广泛使用的微阵列包括cDNA阵列和寡核苷酸阵列。通常，将目标多核苷酸(例如，探针或探针组)铺板或排列在微芯片基底上。在一些实施方案中，将至少10、25、50、100、500、1000、5000、10000、20000或25000或更多基因的探针固定在阵列基底上。基底可以是多孔或无孔支撑物，例如玻璃、塑料或凝胶表面。探针可包括DNA、RNA、DNA和RNA的共聚物序列、DNA和/或RNA类似物、或其组合。在一些实施方案中，微阵列包括具有针对每个单独基因的有序阵列结合位点的支撑物。微阵列可以是可寻址阵列或位置可寻址阵列，例如，阵列的每个探针位于固体支撑物上的已知预定位置，使得每个探针的身份可以从其阵列的位置确定。
微阵列上的每个探针的长度可以在10-50000个核苷酸之间。在一些实施方案中，微阵列的探针可以由长度小于约1000个核苷酸、小于约750个核苷酸、小于约500个核苷酸、小于约250个核苷酸、小于约100个核苷酸或小于50个核苷酸的核苷酸序列组成。通常，阵列包括阳性对照探针和阴性对照探针。
在特定的实施方案中，使用微阵列测定生物标志物表达。例如，从新鲜冷冻(FF)组织样品中提取总RNA，或者从宏观解剖的福尔马林固定的石蜡包埋(FFPE)组织样品中提取总RNA。通过标准分光光度法和/或任何其他适当的技术(例如，Agilent Bioanalyzer)评估总RNA的数量和质量。在RNA提取后，使用标准方法和/或市售扩增系统(例如，NuGENOvation RNA Amplification System V2)扩增RNA样品。将扩增的cDNA片段化、标记并按照标准方法与微阵列杂交(例如，使用NuGEN Encore Biotin Module和Affymetrix GeneChip阵列)。根据用于微阵列的说明清洗、染色和扫描阵列。预处理微阵列数据，将探针水平强度测量结果进行背景校正、归一化、并且使用鲁棒多芯片算法(RMA)总结为表达测量结果。总结探针水平数据以获得每种生物标志物(例如，CD45、CD4、CD8、Foxp3、TIGIT)的表达水平。将质量参数阈值和数据减少技术(例如，主成分分析)的组合应用于数据集以建立分布(profile)质量并识别潜在的外围样本。每个生物标志物的这些归一化(或标准化)表达值用于计算样品的决定值。
在本文所述任何方法的一些实施方案中，肿瘤/癌症选自：肺肿瘤/癌、肝肿瘤/癌、乳腺肿瘤/癌、肾细胞癌/肾肿瘤/癌、前列腺肿瘤/癌、胃肠/胃肿瘤/癌、黑素瘤肿瘤/癌、宫颈肿瘤/癌、膀胱肿瘤/癌、胶质母细胞瘤肿瘤/癌、头部和颈部肿瘤/癌、胰腺肿瘤/癌、卵巢肿瘤/癌、结肠直肠肿瘤/癌、子宫内膜和食道肿瘤/癌。在一些实施方案中，结肠直肠癌是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌。在一些实施方案中，结肠直肠癌是微卫星稳定的结肠直肠癌。在一些实施方案中，食道肿瘤是组织学证实的不可切除的、晚期的或复发的食道癌或胃食管交界癌。在一些实施方案中，食道肿瘤是在用于不可切除或转移性疾病的至少一种先前的全身治疗或治疗线上发展的肿瘤。在一些实施方案中，结肠直肠肿瘤是组织学证实的结肠或直肠的不可治愈的晚期腺癌。在一些实施方案中，结肠直肠肿瘤是已用至少一种用于结肠直肠癌或转移性结肠直肠癌的先前的标准化学治疗线治疗的并且对这些疗法是难治性的或正在进展的肿瘤。在一些实施方案中，结肠直肠肿瘤是已经用至少两种用于结肠直肠癌或转移性结肠直肠癌的先前的标准化学治疗线治疗的并且对这些疗法是难治性的或正在进展的肿瘤。在一些实施方案中，肝肿瘤或肝细胞肿瘤是组织学证实的晚期肝细胞癌，其不适合进行手术和/或局部区域治疗。在一些实施方案中，肝肿瘤或肝细胞肿瘤在外科手术和/或局部区域治疗后正在进展或已经进展。在一些实施方案中，宫颈肿瘤是组织学证实的复发性或转移性宫颈癌。在一些实施方案中，宫颈肿瘤是在宫颈癌的至少一个先前化学治疗线上进展的肿瘤。在一些实施方案中，乳腺肿瘤是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺肿瘤已经在组织学上被证实为乳房的不可治愈的、晚期的雌激素受体-阴性、孕酮受体-阴性和人表皮生长因子受体2-阴性腺癌。在一些实施方案中，头颈肿瘤是组织学证实的头颈部的复发性或转移性鳞状细胞癌(SCCHN)，其不适合标准治愈性或姑息性治疗。在一些实施方案中，头颈肿瘤包括但不限于口腔、鼻腔、鼻旁窦、鼻咽、口咽、下咽或喉的鳞状细胞癌。在一些实施方案中，头颈肿瘤包括原发性或复发性癌症，其中没有治愈性或建立的姑息性治疗是适合的。
在本文所述方法的一些实施方案中，本发明提供了TIGIT结合剂在制造或制备用于抑制肿瘤或肿瘤细胞生长的药物中的用途。在本文所述方法的一些实施方案中，本发明提供了TIGIT结合剂在制造或制备用于治疗癌症的药物中的用途。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合人类TIGIT并抑制或减少癌症的生长。在特定的实施方案中，肿瘤/癌症包括癌症干细胞。在特定的实施方案中，肿瘤/癌症中癌症干细胞的频率降低。在特定的实施方案中，受试者是人。在特定的实施方案中，受试者患有至少部分除去的肿瘤。
以二或更多种治疗剂的组合疗法常使用以不同作用机制运作的剂，但这并非必要的。使用具有不同的作用机制的剂的组合疗法可能导致加成或协同效应。组合疗法可容许每一剂的剂量比单一疗法使用的剂量更低，由此降低该剂的毒性副作用和/或增加该剂的治疗指数。组合疗法可降低抗药性癌细胞发生的可能性。在一些实施方案中，组合疗法包含影响免疫反应(例如增强或活化反应)的治疗剂及影响(例如抑制或杀死)肿瘤/癌细胞的治疗剂。
在本文所述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂与至少一种额外治疗剂的组合导致加成或协同效应。在一些实施方案中，组合疗法导致TIGIT结合剂的治疗指数增加。在一些实施方案中，组合疗法导致额外治疗剂的治疗指数增加。在一些实施方案中，组合疗法导致TIGIT结合剂的毒性和/或副作用降低。在一些实施方案中，组合疗法导致额外治疗剂的毒性和/或副作用降低。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，除了施用TIGIT结合剂以外，该方法或治疗另外包含施用至少一种额外治疗剂。额外治疗剂可在施用TIGIT结合剂之前、同时和/或之后施用。在一些实施方案中，至少一种额外治疗剂包含1、2、3或更多个额外治疗剂。
可与TIGIT结合剂组合施用的治疗剂包括化疗剂。因此，在一些实施方案中，该方法或治疗包含TIGIT结合剂与化疗剂组合或与化疗剂混合液组合施用。以TIGIT结合剂治疗可发生在施用化疗剂之前、同时或之后。组合施用可包括以单一医药制剂或使用分开的制剂共同施用，或以任何顺序连续施用，但是通常在一段期间内，使得所有的活性剂可同时发挥其生物活性。这些化疗剂的准备及施用时程可根据制造商的指示使用或由熟练的医师凭经验决定。这些化疗剂的准备及给药方案也说明于The Chemotherapy Source Book,4thEdition,2008,M.C.Perry,Editor,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA中。
有用的治疗剂类别包括例如抗微管蛋白剂、奥立他汀(auristatin)、DNA小沟结合剂(minor groove binder)、DNA复制抑制剂、烷化剂(例如铂复合物，诸如顺铂(cisplatin)、单(铂)、二(铂)和三核铂复合物，及卡铂(carboplatin))、蒽环类(anthracycline)、抗生素、抗叶酸剂、抗代谢物、化疗致敏剂、倍癌霉素(duocarmycin)、依托泊苷(etoposide)、氟化嘧啶、离子载体、莱克西托素(lexitropsin)、亚硝基尿素、普拉汀诺(platinol)、嘌呤抗代谢物、嘌呤霉素(puromycin)、放射致敏剂、类固醇、紫杉烷、拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱或类似物。在特定的实施方案中，第二治疗剂为烷化剂、抗代谢物、抗有丝分裂剂、拓扑异构酶抑制剂或血管生成抑制剂。
在本发明中有用的化疗剂包括但不限于烷化剂，诸如噻替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclosphosphamide)(CYTOXAN)；烷基磺酸盐，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，诸如苯多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)、乌瑞替派(uredopa)；亚乙基亚胺(ethylenimines)及甲基三聚氰胺(methylamelamines)，包括阿草特胺(altretamine)、三亚乙基三聚氰胺(triethylenemelamine)、三乙烯磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙烯硫磷酰胺(triethylenethiophosphaoramide)和三羟甲基三聚氰胺(trimethylolomelamime)；氮芥子气，诸如氯芥苯丁酸(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌二醇氮芥(estramustine)、异环磷酸胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、氧氮芥(mechlorethamine oxide)盐酸盐、霉法兰(melphalan)、新氮芥(novembichin)、胆甾醇苯乙酸氮芥(phenesterine)、松龙苯芥(prednimustine)、氯乙环磷酰胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥(uracil mustard)；亚硝基脲(nitrosureas)，诸如卡氮芥(carmustine)、吡葡亚硝脲(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、罗氮芥(lomustine)、尼氮芥(nimustine)、雷诺氮芥(ranimustine)；抗生素，诸如阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、放线菌素(cactinomycin)、卡利奇霉素(calicheamicin)、卡拉比辛(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代基-L-正白氨酸、多柔比星(doxorubicin)、表阿霉素(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素(mitomycins)、霉酚酸、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链霉黑素(streptonigrin)、链脲佐菌素(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、鸟苯美司(ubenimex)、新制癌菌素(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物，诸如氨甲喋呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、氨甲喋呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲氧蝶呤(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-硫唑脲嘧啶(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-FU；雄性素，诸如卡鲁睪酮(calusterone)、屈他雄酮(dromostanolone)丙酸盐、硫雄甾醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪内酮(testolactone)；抗肾上腺剂，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；安吖啶(amsacrine)；贝斯特氮芥(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；磷胺氮芥(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾氟米辛(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲；香菇糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺(2,2',2"-trichlorotriethylamine)；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(Ara-C)；类紫杉醇(taxoids)，例如太平洋紫杉醇(TAXOL)和多西紫杉醇(TAXOTERE)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤(mercaptopurine)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂(platinum)；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；丝裂霉素C；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；长春瑞滨(vinorelbine)；温诺平(navelbine)；米托蒽醌(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；道诺霉素(daunomycin)；氨喋呤(aminopterin)；伊班膦酸盐(ibandronate)；CPT11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟胺酸(DMFO)；视黄酸；埃斯培拉霉素(esperamicins)；卡培他滨(capecitabine)(XELODA)及上述任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。化疗剂还包括调节或抑制荷尔蒙对肿瘤作用的抗荷尔蒙剂，诸如抗雌激素剂，包括例如它莫西芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羟基它莫西芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)(FARESTON)；及抗雄性素剂，诸如氟他胺(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、柳普林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；以及上述任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。在特定的实施方案中，额外治疗剂为顺铂。在特定的实施方案中，额外治疗剂为卡铂。
在特定的实施方案中，化疗剂为拓扑异构酶抑制剂。地托比星拓扑异构酶抑制剂为干扰拓扑异构酶(例如拓扑异构酶I或II)作用的化疗剂。拓扑异构酶抑制剂包括但不限于多柔比星(doxorubicin)HCl、柔红霉素柠檬酸盐(daunorubicin citrate)、米托蒽醌(mitoxantrone)HCl、放线菌素D、依托泊苷(etoposide)、拓扑替康(topotecan)HCl、替尼泊苷(teniposide)(VM-26)及伊立替康(irinotecan)，以及这些中任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，额外治疗剂为伊立替康。
在特定的实施方案中，化疗剂为抗代谢物。抗代谢物为化学物质，其结构类似正常生化反应所需的代谢物，但仍有足以干扰一或多种细胞正常功能的差别，诸如细胞分裂。抗代谢物包括但不限于吉西他滨(gemcitabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、卡培他滨(capecitabine)、甲氨喋呤钠、雷替曲塞(ralitrexed)、培美曲塞(pemetrexed)、替加氟(tegafur)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、硫鸟嘌呤、5-氮杂胞苷、6-巯基嘌呤、硫唑嘌呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁(pentostatin)、氟达拉滨(fludarabine)盐酸盐和克拉屈滨(cladribine)，以及这些中任一剂的医药上可接受的盐、酸或衍生物。在特定的实施方案中，额外治疗剂为吉西他滨。
在特定的实施方案中，化疗剂为抗有丝分裂剂，包括但不限于结合微管蛋白的剂。在一些实施方案中，该剂为紫杉烷。在特定的实施方案中，该剂为太平洋紫杉醇(paclitaxel)或多西紫杉醇(docetaxel)，或太平洋紫杉醇或多西紫杉醇的医药上可接受的盐、酸或衍生物。在特定的实施方案中，该剂为太平洋紫杉醇(TAXOL)、多西紫杉醇(TAXOTERE)、白蛋白结合的太平洋紫杉醇
Figure GDA0002272835790000531
DHA-太平洋紫杉醇或PG-太平洋紫杉醇。在特定的可替代实施方案中，抗有丝分裂剂包含长春花生物碱，诸如长春新碱(vincristine)、长春碱(binblastine)、长春瑞滨(vinorelbine)或长春地辛(vindesine)或其医药上可接受的盐、酸或衍生物。在一些实施方案中，抗有丝分裂剂为驱动蛋白(kinesin)Eg5的抑制剂或有丝分裂激酶(诸如AuroraA或Plk1)的抑制剂。在特定的实施方案中，额外治疗剂为太平洋紫杉醇。在特定的实施方案中，额外治疗剂为白蛋白结合的太平洋紫杉醇
Figure GDA0002272835790000532
在一些实施方案中，额外治疗剂包含诸如小分子的剂。例如，治疗可包含本发明的剂与作为抗肿瘤相关性抗原(包括但不限于EGFR、HER2(ErbB2)和/或VEGF)的抑制剂作用的小分子的组合施用。在一些实施方案中，本发明的剂是与选自由下列所组成的群组的蛋白激酶抑制剂组合施用：吉非替尼(gefitinib)(IRESSA)、埃罗替尼(erlotinib)(TARCEVA)、舒尼替尼(sunitinib)(SUTENT)、拉帕替尼(lapatanib)、凡德他尼(vandetanib)(ZACTIMA)、AEE788、CI-1033、西地尼布(cediranib)(RECENTIN)、索拉非尼(sorafenib)(NEXAVAR)和帕唑帕尼(pazopanib)(GW786034B)。在一些实施方案中，额外治疗剂包含mTOR抑制剂。
在特定的实施方案中，额外治疗剂为抑制癌干细胞途径的剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为Notch途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为Wnt途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为BMP途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为Hippo途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为RSPO/LGR途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为mTOR/AKR途径的抑制剂。
在本文所述的方法的一些实施方案中，额外治疗剂包含生物分子，诸如抗体。例如，治疗可包含TIGIT结合剂与抗肿瘤相关性抗原的抗体(包括但不限于结合EGFR、HER2/ErbB2和/或VEGF的抗体)的组合施用。在特定的实施方案中，额外治疗剂为对癌干细胞标记特异性的抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为结合Notch途径的组分的抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为结合Wnt途径的组分的抗体。在特定的实施方案中，额外治疗剂为抑制癌干细胞途径的抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为Notch途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为Wnt途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为BMP途径的抑制剂。在一些实施方案中，额外治疗剂为抑制β-连环蛋白传导信号的抗体。在特定的实施方案中，额外治疗剂为血管生成抑制剂的抗体(例如抗VEGF或VEGF受体抗体)。在特定的实施方案中，额外治疗剂为贝伐珠单抗(bevacizumab)(AVASTIN)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)(HERCEPTIN)、帕妥珠单抗(pertuzumab)(OMNITARG)、帕尼单抗(panitumumab)(VECTIBIX)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、扎鲁木单抗(zalutumumab)或西妥昔单抗(cetuximab)(ERBITUX)。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，除了施用TIGIT结合剂以外，该方法或治疗另外包含施用至少一种额外的免疫治疗剂。在一些实施方案中，额外的免疫治疗剂为免疫反应刺激剂。在一些实施方案中，免疫治疗剂(例如免疫反应刺激剂)包括但不限于集落刺激因子(例如颗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、颗粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、干细胞因子(SCF))、白介素(例如IL-1、IL2、IL-3、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18)、阻断免疫抑制功能的抗体(例如抗CTLA4抗体、抗CD28抗体、抗CD3抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体)、增强免疫细胞功能的抗体(例如抗GITR抗体或抗OX-40抗体)、Toll样受体(例如TLR4、TLR7、TLR9)、可溶性配体(例如GITRL或OX-40L)或B7家族成员(例如CD80、CD86)。额外的免疫治疗剂(例如免疫反应刺激剂)可在施用TIGIT结合剂之前、同步和/或之后施用。亦提供包含TIGIT结合剂及额外的免疫治疗剂(例如免疫反应刺激剂)的医药组合物。在一些实施方案中，免疫治疗剂包含1、2、3或更多种免疫治疗剂。在一些实施方案中，免疫反应刺激剂包含1、2、3或更多种免疫反应刺激剂。
在本文所述的方法的一些实施方案中，额外治疗剂为免疫检查点抑制剂的抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂为抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗CD28抗体、抗LAG3抗体、抗TIM3抗体、抗GITR抗体或抗OX-40抗体。在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂为抗4-1BB抗体。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗PD-1抗体：尼沃单抗(nivolumab)(OPDIVO)、派姆单抗(pembrolizumab)(KEYTRUDA)或皮狄单抗(pidilzumab)。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗PD-1抗体：MEDI0680、REGN2810、BGB-A317和PDR001。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗PD-L1抗体：BMS935559(MDX-1105),阿替索单抗(atexolizumab)(TECENTRIQ)、德瓦鲁单抗(durvalumab)(MEDI4736)或阿维单抗(avelumab)(MSB0010718C)。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗CTLA-4抗体：伊匹单抗(ipilimumab)(YERVOY)或曲美木单抗(tremelimumab)。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗LAG-3抗体：BMS-986016和LAG525。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗OX-40抗体：MEDI6469、MEDI0562和MOXR0916。在一些实施方案中，额外治疗剂为选自由下列所组成的群组的抗4-1BB抗体：PF-05082566。
此外，以TIGIT结合剂治疗可包括与其他的生物分子的组合治疗，诸如一或多种细胞激素(例如淋巴激素、白介素、干扰素、肿瘤坏死因子和/或生长因子)，或可伴随手术移除肿瘤、移除癌细胞或由治疗医师认为必要的任何其他疗法。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂可与选自由下列所组成的群组的生物分子组合施用：肾上腺髓质素(AM)、血管生成素(Ang)、BMPs、BDNF、EGF、红血球生成素(EPO)、FGF、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GDF9、HGF、HDGF、IGF、移动刺激因子、肌肉抑制素(GDF-8)、NGF、神经生长激素、PDGF、血小板生成素、TGF-α、TGF-β、TNF-α、VEGF、PIGF、γ-IFN、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15和IL-18。在一些实施方案中，TIGIT结合剂可与选自由下列所组成的群组的生物分子组合施用：巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和干细胞因子(SCF)。
在本文所述的方法的一些实施方案中，以TIGIT结合剂治疗可伴随手术移除肿瘤、移除癌细胞或由治疗医师认为必要的任何其他手术疗法。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，治疗包含施用TIGIT结合剂与放射疗法的组合。以TIGIT结合剂治疗可发生在施用放射疗法之前、同时或之后。此放射治疗的给量时程可由熟习的医师决定。
组合施用可包括以单一医药制剂或使用分开的制剂共同施用，或以任何顺序连续施用，但是通常在一段期间内，使得所有的活性剂可同时发挥那些生物活性。
应理解TIGIT结合剂与至少一种额外治疗剂的组合可以任何顺序施用或同步施用。在一些实施方案中，将TIGIT结合剂施用给先前已接受第二/不同的治疗剂治疗的患者。在特定的其他实施方案中，TIGIT结合剂与第二额外的治疗剂实质上同时或同步施用。例如，受试者可在接受额外的治疗剂(例如化疗法)期间同时施用TIGIT结合剂。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是在以第二治疗剂治疗的1年内施用。在特定的可替代实施方案中，TIGIT结合剂是在以第二治疗剂的任何治疗的10、8、6、4或2个月内施用。在特定的其他实施方案中，TIGIT结合剂是在以第二治疗剂的任何治疗的4、3、2或1周内施用。在一些实施方案中，结合剂是在以第二治疗剂的任何治疗的5、4、3、2或1天内施用。应进一步理解两种(或更多种)剂或治疗可在数小时或数分钟内(亦即实质上同时)施用给受试者。
用于疾病治疗的TIGIT结合剂的适当剂量是取决于所期望的治疗的疾病类型、疾病的严重性和病程、疾病的反应性、结合剂是否以治疗或预防目的施用、先前治疗、患者的临床病史等等而定，所有都由主治医师斟酌。TIGIT结合剂可施用一次或从数天持续至数月的治疗系列施用，或直到完成疗效或达到疾病状态的缩减(例如减少肿瘤大小)。在一些实施方案中，TIGIT结合剂在一系列治疗中施用，直至存在疾病进展。在一些实施方案中，最优化给药方案可自药物累积于患者体内的测量值计算，且取决于个别剂的相对效力而改变。投药医师可决定最优化剂量、给药方法及重复频率。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为0.01μg至100mg/kg体重、从0.1μg至100mg/kg体重、从1μg至100mg/kg体重、从1mg至100mg/kg体重、1mg至80mg/kg体重、从10mg至100mg/kg体重、从10mg至75mg/kg体重、或从10mg至50mg/kg体重。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂的剂量以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约7.5kg/kg、约10mg/kg、约12mg/kg、约12.5mg/kg、约15mg/kg、约17.5mg/kg、约20mg/kg或约25mg/kg的剂量施用于受试者。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约0.1mg至约20mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约0.3mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约1mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约1.5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约2mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约2.5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约3mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约7.5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约10mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约12.5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约15mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约17.5mg/kg。在一些实施方案中，TIGIT结合剂的剂量为约20mg/kg。在特定的实施方案中，剂量可以每天、每周、每月或每年施用一或多次。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂可以每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次或每四周施用一次。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂可以最初较高的“加载(loading)”剂量施用，随后以一或多个较低剂量施用。在一些实施方案中，亦可改变施用频率。在一些实施方案中，给药方案可包含以初始剂量施用，随后以每周一次、每二周一次、每三周一次或每月一次额外剂量(或“维持”剂量)施用。例如，给药方案可包含以初始加载剂量施用，随后以例如一半初始剂量的每周维持剂量施用。或者，给药方案可包含以初始加载剂量施用，随后每隔一周以例如一半的初始剂量的维持剂量施用。或者，给药方案可包含经3周施用三次初始剂量，随后每隔一周以例如相同量的维持剂量施用。
如本领域技术人员已知的，施用任何治疗剂会引起副作用和/或毒性。在一些示例中，副作用和/或毒性非常严重以至于无法施用治疗有效剂量的特定剂。在一些示例中，药物疗法必须中断，且可尝试其他剂。然而，许多相同治疗类别的剂时常展现类似的副作用和/或毒性，意指患者必须停止治疗，或若可能，则忍受与治疗剂相关联的不适副作用。
在一些实施方案中，给药方案可限制成特定次数的施用或“周期”。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是经3、4、5、6、7、8或更多个周期施用。例如，TIGIT结合剂是以每2周经6个周期施用，TIGIT结合剂是以每3周经6个周期施用，TIGIT结合剂是以每2周经4个周期施用，TIGIT结合剂是以每3周经4个周期施用等等。给药方案可考虑后决定且随后由本领域技术人员修改。
在实施方案中，TIGIT结合剂按约每周一次、约每两周一次、约每三周一次、约每四周一次、约每五周一次、约每六周一次、约每八周一次、约每十二周一次、约每个月一次、约每两个月一次、约每三个月或更长一次施用。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约7.5kg/kg、约10mg/kg、约12mg/kg、约12.5mg/kg、约15mg/kg、约17.5mg/kg、约20mg/kg或约25mg/kg剂量按约每两周一次施用于受试者。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂以约0.3mg/kg的剂量每两周一次施用于受试者。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂以约1mg/kg的剂量每两周一次施用于受试者。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂以约3mg/kg的剂量每两周一次施用于受试者。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂以约10mg/kg的剂量每两周一次施用于受试者。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂以约15mg/kg的剂量每两周一次施用于受试者。
在特定的实施方案中，受试者已经接受过PD-1拮抗剂或和/或PD-L1拮抗剂的预先治疗。在特定的实施方案中，受试者具有组织学证实的晚期复发或难治性实体瘤。
在特定的实施方案中，所述受试者患有头颈癌、食道/胃食管癌、胃癌、结肠直肠癌、肛门癌、肝细胞癌/肝癌、宫颈癌、肺癌、黑色素瘤、Merkel细胞癌、肾细胞癌/肾癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫内膜癌、肛门癌、三阴性乳腺癌、已知的MSI高实体瘤(包括MSICRC)或MSS结肠直肠癌。
本发明提供对受试者施用TIGIT结合剂的方法，其包含使用间歇性给药策略施用一或多种剂，这可降低与施用结合剂、化疗剂等等相关联的副作用和/或毒性。在一些实施方案中，抑制人类受试者的肿瘤生长和/或治疗人类受试者的癌症的方法包含对受试者施用治疗有效剂量的TIGIT结合剂与治疗有效剂量的化疗剂的组合，其中这些剂中的一或二者是根据间歇性给药策略施用。在一些实施方案中，间歇性给药策略包含对受试者施用初始剂量的TIGIT结合剂且约每2周施用一次TIGIT结合剂的后续剂量。在一些实施方案中，间歇性给药策略包含对受试者施用初始剂量的TIGIT结合剂且约每3周施用一次TIGIT结合剂的后续剂量。在一些实施方案中，间歇性给药策略包含对受试者施用初始剂量的TIGIT结合剂且约每4周施用一次结合剂的后续剂量。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是使用间歇性给药策略施用以及第二剂是每周施用。
本发明提供使用包含TIGIT结合剂的组合物的方法。本发明还提供本文所述的使用包含TIGIT结合剂及医药上可接受的载体的医药组合物的方法。在一些实施方案中，发现医药组合物在免疫治疗中的用途。在一些实施方案中，发现组合物在抑制肿瘤生长中的用途。在一些实施方案中，发现医药组合物在抑制受试者(例如人类患者)的肿瘤生长中的用途。在一些实施方案中，发现组合物在治疗癌症中的用途。在一些实施方案中，发现医药组合物在治疗受试者(例如人类患者)的癌症中的用途。
制备用于贮存及通过组合纯化的TIGIT结合剂与医药上可接受的载体(例如载剂或赋形剂)而使用的制剂。本领域技术人员通常考虑成为制剂或医药组合物的无活性成分的医药上可接受的载剂、赋形剂和/或稳定剂。
合适的医药上可接受的载体包括但不限于无毒性缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐及其他的有机酸；盐，诸如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸及甲硫胺酸；保存剂，诸如氯化十八烷基二甲基苯甲铵、氯化六烃季铵、氯化苯甲烃铵、氯化苯甲乙氧铵、酚、丁醇或苯甲醇、对羟苯甲酸烷酯(诸如对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚；低分子量多肽(例如少于约10个氨基酸残基)；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；碳水化合物，诸如单醣、双醣、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；盐形成的相对离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白复合物)；及非离子性表面活性剂，诸如TWEEN或聚乙二醇(PEG)。(Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22st Edition,2012,Pharmaceutical Press,London)。
本发明的医药组合物可以任何数种方式经局部或全身性治疗施用。在一些实施方案中，施用为(i)通过表皮或透皮贴片、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷剂、液体及粉剂的局部施用；(ii)通过吸入或喷入粉剂或气雾剂的经肺施用，包括通过喷雾器、气管内或鼻内施用；(iii)经口施用；或(iv)非经肠施用，包括静脉内、动脉内、肿瘤内、皮下、腹膜内、肌肉内(例如注射或输注)或颅内(例如脊椎鞘内或心室内)施用。
治疗制剂可呈单位剂量形式。这样的制剂包括锭剂、丸剂、胶囊、粉剂、颗粒、在水或非水性介质中的溶液或悬浮液、或栓剂。在固态组合物中，诸如锭剂，主要活性成分与医药载剂混合。公知的制锭成分包括玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸二钙或胶和稀释剂(例如水)。这些可用于形成含有本发明化合物或其无毒性的医药上可接受的盐的均匀混合物的固体预调配组合物。固体预调配组合物接着细分成上述类型的单位剂量形式。可将制剂或组合物的锭剂、丸剂等等可包膜或以其他方式化合，以提供给予延长作用的优点的剂型。例如，锭剂或丸剂可包含以外部组分包覆的内部组合物。此外，两种组分可以肠溶层分开，肠溶层适合于抵抗崩解且允许内部组分完整通过胃或延迟释放。可以使用各种材料用于此等肠溶层或包膜，这样的材料包括多种聚合酸及聚合酸与诸如虫胶、鲸腊醇和乙酸纤维素的材料的混合物。
TIGIT结合剂亦可包封于微胶囊中。这样的微胶囊是通过例如凝聚技术或通过界面聚合反应来制备，例如分别于胶体药物递送系统(例如脂质粒、白蛋白微球、微乳液、纳米粒子和纳米微囊)或于巨乳液中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,22st Edition,2012,Pharmaceutical Press,London中所述的。
在特定的实施方案中，医药制剂包括与脂质粒复合的TIGIT结合剂。生产脂质粒的方法为本领域技术人员已知的。例如，一些脂质粒可藉包含磷脂酰胆碱、胆固醇及PEG-衍生性磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂质组合物的反相蒸发而产生。脂质粒可经挤压通过限定孔径的过滤器，得到具有所期望的直径的脂质粒。
在特定的实施方案中，生产包含TIGIT结合剂的缓释制剂。缓释制剂的适合的实例包括含有TIGIT结合剂的固相疏水性聚合物的半透性基质，其中基质是呈成形物品(例如膜或微胶囊)形式。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(诸如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚乙烯醇)、聚交酯、L-谷氨酸与7乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物，诸如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及柳菩林(leuprolide acetate)所组成的注射微球)、蔗糖乙酸异丁酸酯和聚-D-(-)-3-羟丁酸。
II.TIGIT结合剂
具有Ig及ITIM结构域(TIGIT)的T细胞免疫受体为含有免疫球蛋白可变(IgV)结构域的第I型跨膜糖蛋白。TIGIT属于脊髓灰白质病毒受体(PVR)家族且与脊髓灰白质病毒受体(PVR；CD155)以高亲和性结合及与PVRL-2(CD112)和PVRL-3(CD113)以较低亲和性结合。TIGIT表达在T细胞上，包括调节性T细胞(Treg)和记忆性T细胞，以及表达在NK细胞上且在原生CD4+T细胞活化之后向上调节。人类TIGIT(UniProtKB No.Q495A1)的全长氨基酸(aa)序列为本技术中已知且在本文以SEQ ID NO：1提供。如本文所使用的述及的氨基酸位置是指全长氨基酸序列(包括信号序列)的编号。
本发明提供了使用特异性结合TIGIT的剂的方法。该剂在本文称为〝TIGIT结合剂”。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为抗体。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为多肽。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂结合小鼠TIGIT。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂结合人类TIGIT。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂结合小鼠TIGIT及人类TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂结合人类TIGIT及不结合小鼠TIGIT。TIGIT结合剂的非限制性实例已描述于例如国际专利申请No.PCT/US2016/034549；国际专利公布No.WO 2016/106302和WO2016/028656；和美国专利申请No.2013/0251720中。
在一些实施方案中，该剂结合TIGIT且干扰TIGIT与第二蛋白的交互作用。在一些实施方案中，该剂结合TIGIT且干扰TIGIT与PVR的交互作用。在一些实施方案中，该剂结合TIGIT且干扰TIGIT与PVRL2的交互作用。在一些实施方案中，该剂结合TIGIT且干扰TIGIT与PVRL3的交互作用。在一些实施方案中，该剂特异性结合TIGIT且该剂阻扰TIGIT与PVR结合和/或阻扰TIGIT传导信号的PVR活化。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合TIGIT的细胞外结构域的抗体或其片段。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合小鼠TIGIT的细胞外结构域的抗体或其片段。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体或其片段。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合小鼠TIGIT及人类TIGIT的细胞外结构域的抗体或其片段。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合TIGIT的似Ig结构域的抗体。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为特异性结合TIGIT的IgV结构域的抗体。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为在人类TIGIT的氨基酸22-141内结合的抗体。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为在SEQ ID NO：1的氨基酸22-141内结合的抗体。在一些实施方案中，该剂为在人类TIGIT的氨基酸22-124内结合。在一些实施方案中，该剂是在SEQ IDNO：1的氨基酸22-124内结合。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是在SEQ ID NO：3或其片段内结合。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为在人类TIGIT的氨基酸50-124内结合的抗体。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为在SEQ ID NO：1的氨基酸50-124内结合的抗体。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是在SEQ ID NO：3或其片段内结合。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：27内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64和I109。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64、I109和T119。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区包含至少一种选自由下列所组成的群组：SEQ ID NO：1的氨基酸N58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120和R121。在一些实施方案中，抗原决定区为构象抗原决定区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为结合抗原决定区的抗体，该抗原决定区不包含SEQ ID NO：1的氨基酸V100。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)是以约1μM或更小，约100nM或更小，约40nM或更小，约20nM或更小，约10nM或更小，约1nM或更小，约0.1nM或更小，50pM或更小，10pM或更小或1pM或更小的离解常数(KD)结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约20nM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约10nM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约1nM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约0.5nM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约0.1nM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约50pM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约25pM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约10pM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约1pM或更小的KD结合TIGIT。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约10nM或更小的KD结合人类TIGIT及小鼠TIGIT二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约1nM或更小的KD结合人类TIGIT及小鼠TIGIT二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约0.1nM或更小的KD结合人类TIGIT及小鼠TIGIT二者。在一些实施方案中，结合剂(例如抗体)对TIGIT的离解常数是使用固定在Biacore芯片上的包含TIGIT蛋白的至少一部分的细胞外结构域的TIGIT融合蛋白测定的离解常数。在一些实施方案中，结合剂(例如抗体)对TIGIT的离解常数是使用在Biacore芯片上以抗人类IgG抗体及可溶性TIGIT蛋白所捕获的结合剂测定的离解常数。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含特异性结合TIGIT的第一抗原结合部位及特异性结合第二标靶的第二抗原结合部位。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为包含特异性结合TIGIT的第一抗原结合部位及特异性结合第二标靶的第二抗原结合部位的双特异性剂。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约100nM或更小的KD结合TIGIT及第二标靶二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约50nM或更小的KD结合TIGIT及第二标靶二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约20nM或更小的KD结合TIGIT及第二标靶二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约10nM或更小的KD结合TIGIT及第二标靶二者。在一些实施方案中，TIGIT结合剂是以约1nM或更小的KD结合TIGIT及第二标靶二者。在一些实施方案中，抗原结合部位中的一者的亲和性比其他的抗原结合部位的亲和性更弱。例如，一个抗原结合部位的KD可为约1nM及第二抗原结合部位的KD可为约10nM。在一些实施方案中，在两个抗原结合部位之间的亲和性差别可为约2倍或更大，约3倍或更大，约5倍或更大，约8倍或更大，约10倍或更大，约15倍或更大，约20倍或更大，约30倍或更大，约50倍或更大或约100倍或更大。两个抗原结合部位的亲和性调节可影响双特异性抗体的生物活性。例如，降低对TIGIT或第二标靶的抗原结合部位的亲和性可具有所期望的效应，例如降低结合剂毒性和/或增加治疗指数。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)是以约1μM或更低，约100nM或更低，约40nM或更低，约20nM或更低，约10nM或更低，约1nM或更低或约0.1nM或更低的一半最大有效浓度(EC50)结合TIGIT。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是以约1μM或更低，约100nM或更低，约40nM或更低，约20nM或更低，约10nM或更低，约1nM或更低或约0.1nM或更低的一半最大有效浓度(EC50)结合人类TIGIT。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是以约40nM或更低，约20nM或更低，约10nM或更低，约1nM或更低或约0.1nM或更低的EC50结合小鼠TIGIT和/或人类TIGIT。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为抗体。在一些实施方案中，抗体为重组抗体。在一些实施方案中，抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，抗体为人类抗体。在一些实施方案中，抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM抗体。在特定的实施方案中，抗体为IgG1抗体。在特定的实施方案中，抗体为IgG2抗体。在一些实施方案中，抗体为IgG4抗体。在特定的实施方案中，抗体为包含抗原结合部位的抗体片段。在一些实施方案中，抗体为双特异性抗体或多特异性抗体。在一些实施方案中，抗体为单价抗体。在一些实施方案中，抗体为单特异性抗体。在一些实施方案中，抗体为双价抗体。在一些实施方案中，抗体是与细胞毒性部分共轭。在一些实施方案中，将抗体分离。在一些实施方案中，抗体为实质上纯的。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂为多克隆抗体。多克隆抗体可以任何已知的方法制备。在一些实施方案中，多克隆抗体是通过以关注的抗原(例如纯化的肽片段、全长重组蛋白或融合蛋白)使用多次皮下或腹膜内注射使动物(例如兔、大鼠、小鼠、山羊、驴)免疫而制得。抗原可随意地与载剂共轭，诸如钥孔状帽贝血蓝素(KLH)或血清白蛋白。抗原(具有或不具有载剂蛋白)是在无菌盐水中稀释且通常与佐剂(例如完全或不完全弗氏(Freund’s)佐剂)组合以形成稳定的乳液。在充足的时期之后，自经免疫的动物(通常自血液或腹水)回收多克隆抗体。多克隆抗体可根据本技术中的标准方法自血清或腹水纯化，这些方法包括但不限于亲和性层析术、离子交换层析术、胶体电泳和透析。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂为单克隆抗体。单克隆抗体可使用本技术中已知的融合瘤方法制备。在一些实施方案中，将小鼠、大鼠、兔子、仓鼠或其他适当的宿主动物使用融合瘤方法如上述免疫，以引诱生产特异性结合免疫抗原的抗体。在一些实施方案中，可将淋巴细胞于试管内免疫。在一些实施方案中，免疫抗原可为人类蛋白或其片段。在一些实施方案中，免疫抗原可为小鼠蛋白或其片段。
在免疫之后，将淋巴细胞分离且使用例如聚乙二醇与适合的骨髓瘤细胞系融合。融合瘤细胞系使用本技术中已知的专用培养基挑选且未融合的淋巴细胞及骨髓瘤细胞在挑选过程不会存活。生产尤其针对挑选的抗原的单克隆抗体的融合瘤可以多种方法鉴别，包括但不限于免疫沉淀、免疫转渍和试管内结合测定法(例如流动式细胞测量术、FACS、ELISA和放射性免疫测定法)。融合瘤可使用标准方法于试管内培养而繁殖或于动物活体内繁殖成腹水肿瘤。单克隆抗体可根据本技术中的标准方法自培养基或腹水液体纯化，这些方法包括但不限于亲和性层析术、离子交换层析术、胶体电泳和透析。
在特定的实施方案中，单克隆抗体可使用本领域技术人员已知的重组DNA技术制得。编码单克隆抗体的多核苷酸是自成熟B细胞或融合瘤细胞分离，诸如通过使用特异性扩增编码抗体重链及轻链的基因的寡核苷酸引子的RT-PCR，且多核苷酸序列是使用标准技术测定。接着将经分离的编码重链及轻链的多核苷酸克隆至适合的表达载体中，其在转染至不以另外方式生产免疫球蛋白的宿主细胞时(诸如大肠杆菌、类人猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)生产单克隆抗体。
在特定的其他实施方案中，重组单克隆抗体或其片段可自表达所期望的物种的可变结构域或CDR的噬菌体展示库分离。
编码单克隆抗体的多核苷酸可通过例如使用重组DNA技术来修饰，以产生替代抗体。在一些实施方案中，例如小鼠单克隆抗体的轻链及重链恒定结构域可经例如人类抗体的恒定区取代以产生嵌合抗体，或经非免疫球蛋白多肽取代以产生融合抗体。在一些实施方案中，将恒定区截短或移除以产生所期望的单克隆抗体的抗体片段。可变区的部位引导的突变形成或高密度突变形成可用于使单克隆抗体的特异性、亲和性等等最优化。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂为人源化抗体。人源化抗体通常为人类免疫球蛋白，其中CDR的氨基酸残基是使用本领域技术人员已知的方法以来自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔子、仓鼠等等)的具有所期望的特异性、亲和性和/或结合能力的CDR的氨基酸残基取代。在一些实施方案中，人类免疫球蛋白的一些架构可变区氨基酸残基是以非人类物种的抗体中的对应氨基酸残基取代。在一些实施方案中，人源化抗体可通过取代架构可变区和/或经取代的非人类残基内的额外残基而进一步修饰，以进一步改进及最优化抗体特异性、亲和性和/或能力。人源化抗体通常包含可变结构域，其含有所有或实质上所有对应于非人类免疫球蛋白的CDR，而所有或实质上所有的架构可变区为那些人类免疫球蛋白序列的架构区。在一些实施方案中，架构区为人类免疫球蛋白共有序列的架构区。在一些实施方案中，人源化抗体亦可包含至少一部分的免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)，通常为至少一部分的人类免疫球蛋白。在特定的实施方案中，此等人源化抗体是用于治疗，因为那些在施用人类受试者时可降低抗原性及HAMA(人类抗小鼠抗体)反应。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为人类抗体。人类抗体可使用本技术中已知的各种技术直接制备。在一些实施方案中，人类抗体可自试管内免疫的不朽人类B淋巴细胞或自免疫受试者分离的淋巴细胞产生。在任一示例中，可产生且分离用于生产针对标靶抗原的抗体的细胞。在一些实施方案中，人类抗体可选自噬菌体库，其中噬菌体库表达人类抗体。另一选择地，噬菌体展示技术可用于自未免疫的给予体的免疫球蛋白可变结构域基因谱系(gene repertoire)于试管内生产人类抗体及抗体片段。用于产生及使用抗体噬菌体库的技术为本技术中所熟知。一经鉴别出抗体，则可使用本技术中已知的亲和性成熟策略来产生较高的亲和性人类抗体，包括但不限于链替换(chain shuffling)及部位引导的突变形成。
在一些实施方案中，人类抗体可于含有人类免疫球蛋白基因座的基因转殖小鼠中制得。一经免疫时，这些小鼠能够生产人类抗体的全谱系，而不生产内源性免疫球蛋白。
在一些实施方案中，TIGIT结合剂为双特异性抗体。因此，本发明包含特异性辨识TIGIT及至少一种额外标靶的双特异性抗体。双特异性抗体能够特异性辨识及结合至少两种不同的抗原或抗原决定区。不同的抗原决定区可在相同的分子内(例如两个抗原决定区在TIGIT上)或在不同的分子上(例如一个抗原决定区在TIGIT上及一个抗原决定区在不同的蛋白上)。在一些实施方案中，与个别抗体或一种以上的抗体的组合相比，双特异性抗体具有增强的效力。在一些实施方案中，与个别抗体或一种以上的抗体的组合相比，双特异性抗体具有降低的毒性。本领域技术人员已知任何治疗剂可具有独特的药物动力学(PK)(例如循环半衰期)。在一些实施方案中，双特异性抗体具有使两种活性结合剂的PK同步的能力，其中两种个别的结合剂具有不同的PK分布。在一些实施方案中，双特异性抗体具有使两种剂的作用集中在相同区域中(例如肿瘤和/或肿瘤微环境)的能力。在一些实施方案中，双特异性抗体具有使两种剂的作用集中在相同标靶(例如肿瘤或肿瘤细胞)的能力。在一些实施方案中，双特异性抗体具有使两种剂的作用靶定至一种以上的生物途径或功能的能力。在一些实施方案中，双特异性抗体具有靶定两种不同的细胞且使那些更紧密在一起(例如免疫细胞及肿瘤细胞)的能力。
在一些实施方案中，双特异性抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体为人类抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体为IgG1抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体为IgG2抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体为IgG4抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体具有降低的毒性和/或副作用。在一些实施方案中，与两种个别抗体的混合物或成为单一剂的抗体相比，双特异性抗体具有降低的毒性和/或副作用。在一些实施方案中，双特异性抗体具有增加的治疗指数。在一些实施方案中，与两种个别抗体的混合物或成为单一剂的抗体相比，双特异性抗体具有增加的治疗指数。
在一些实施方案中，抗体可特异性辨识及结合TIGIT以及第二抗原标靶，诸如在免疫细胞上的效应子分子(例如CD2、CD3、CD28、CTLA4、PD-1、PD-L1、CD80或CD86)或Fc受体(例如CD64、CD32或CD16)。在一些实施方案中，抗体可用于引导胞毒剂至表达特别的标靶抗原的细胞。这些抗体具有抗原结合臂及结合胞毒剂或放射性核素螯合剂(诸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。
用于制备双特异性抗体的技术为本领域技术人员已知。在一些实施方案中，双特异性抗体包含具有氨基酸修饰的重链恒定区，该氨基酸为两个重链之间的接口的一部分。在一些实施方案中，双特异性抗体可使用“突起进入孔中”策略产生。在一些示例中，将术语“突起”和“孔”以术语“隆凸”和“腔室”取代。在一些实施方案中，双特异性抗体可包含不能够在重链之间形成双硫键联的可变绞链区。在一些实施方案中，修饰可包含导致静电交互作用改变的氨基酸变化。在一些实施方案中，修饰可包含导致疏水性/亲水性交互作用改变的氨基酸变化。
双特异性抗体可为包含抗原结合部位的完整抗体或抗体片段。亦预期具有超过两价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。因此，在特定的实施方案中，对TIGIT的抗体具有多特异性。
在特定的实施方案中，本文所述的抗体(或其他的多肽)可为单特异性。在特定的实施方案中，抗体含有的一或多个抗原结合部位中的每一个能够结合(binding)(或结合(bind))TIGIT的同源性抗原决定区。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为抗体片段。抗体片段可具有与完整抗体不同的功能或能力；例如抗体片段可具有增加的肿瘤穿透。已知用于生产抗体片段的各种技术，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化。在一些实施方案中，抗体片段包括由胃蛋白酶消化抗体分子所生产的F(ab')2片段。在一些实施方案中，抗体片段包括通过还原F(ab')2片段的双硫桥所产生的Fab片段。在其他的实施方案中，抗体片段包括通过以木瓜酶及还原剂处理抗体分子所产生的Fab片段。在特定的实施方案中，抗体片段是以重组方法生产。在一些实施方案中，抗体片段包括Fv或单链Fv(scFv)片段。Fab、Fv及scFv抗体片段可表达在大肠杆菌或其他的宿主细胞中且自大肠杆菌或其他的宿主细胞分泌，容许大量生产这些片段。在一些实施方案中，抗体片段是自抗体噬菌体库分离，如本文所讨论。例如，可使用方法建构Fab表达库，容许快速且有效的鉴别对TIGIT或其衍生物、片段、类似物或同源物具有所期望的特异性的单克隆Fab片段。在一些实施方案中，抗体片段为线性抗体片段。在特定的实施方案中，抗体片段为单特异性或双特异性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为scFv。可使用各种技术来生产对TIGIT具有特异性的单链抗体。
在一些实施方案中，尤其在抗体片段的示例中，抗体经修饰以改变(例如增加或降低)其血清半衰期。这可通过例如使抗体片段中的适当区域突变而使救援受体结合抗原决定区并入抗体片段中来达成，或通过将抗原决定区并入肽标签中，接着与抗体片段在末端或中间融合(例如通过DNA或肽合成)来达成。
异质共轭抗体亦属于本发明的范围内。异质共轭抗体是由二个共价连接的抗体所组成。经提出的此等抗体用于例如使免疫细胞靶定不希望的细胞。亦可预期以合成蛋白化学中已知的方法于试管内制备异质共轭抗体，包括那些涉及交联剂的方法。例如，免疫毒素可使用双硫交换反应或通过形成硫醚键来建构。适合于此目的的试剂的实例包括亚氨基硫醇盐及甲基-4-巯基丁亚酰胺酸酯。
就本发明的目的而言，应理解经修饰的抗体可包含提供抗体与标靶(亦即TIGIT)缔合的任何类型的可变区。关于此点，可变区可包含或源自可经诱发以启动体液反应及产生对抗所期望的抗原的免疫球蛋白的任何类型的哺乳动物。确切而言，经修饰的抗体的可变区可源自例如人类、小鼠类、大鼠类、兔子、非人类灵长类动物(例如食蟹猕猴、猕猴等等)或兔子。在一些实施方案中，经修饰的免疫球蛋白的可变区及恒定区二者为人类。在其他的实施方案中，可兼容抗体的可变区(通常源自非人类来源)可经工程化或经特定设计以改进分子的结合特性或降低免疫原性。关于此点，可将本发明中有用的可变区人源化或透过输入的氨基酸序列的加入而以另外的方式改变。
在特定的实施方案中，在重链及轻链二者中的可变结构域是通过至少部分取代一或多个CDR及若必要时通过部分的架构区取代及序列修饰和/或变异而改变。虽然CDR可能源自与架构区起源的抗体相同类型或甚至相同亚型的抗体，但是设想CDR可能源自不同类型的抗体且常常源自不同物种的抗体。可能没必要将所有的CDR以供体可变区的所有CDR取代以转移一个可变结构域的抗原结合能力至另一可变结构域。反而可能只需要转移那些维持抗原结合部位活性所需的残基。
尽管改变可变区，本领域技术人员应理解本发明的经修饰的抗体还是包含其中恒定结构域中的一或多者的至少一部分已删除或以其他方式改变的抗体(例如全长抗体或其免疫反应性片段)，以提供所期望的生化特征，诸如与包含原生或未改变的恒定区约相同的免疫原性的抗体相比时具有增加的肿瘤定位或增加的血清半衰期。在一些实施方案中，经修饰的抗体的恒定区包含人类恒定区。与本发明可相容的恒定区修饰包含添加、删除或取代在一或多个结构域中的一或多个氨基酸。本文所揭示的经修饰的抗体可包含对三个重链恒定结构域中的一或多者(CH1、CH2或CH3)和/或对轻链恒定结构域(CL)的改变或修饰。在一些实施方案中，一或多个结构域是自经修饰的抗体的恒定区部分或全部删除。在一些实施方案中，经修饰的抗体包含其中整个CH2结构域经移除的结构域删除的建构体或变体(△CH2建构体)。在一些实施方案中，将删去的恒定区结构域以短氨基酸间隔子(例如10个氨基酸残基)取代，以提供通常由缺少的恒定区所赋予的某些分子柔韧性。
在一些实施方案中，经修饰的抗体经工程化以直接融合CH3结构域与抗体的绞链区。在其他的实施方案中，将肽间隔子插入绞链区与经修饰的CH2和/或CH3结构域之间。例如，可表达其中CH2结构域经删除且剩余的CH3结构域(经修饰或未经修饰)以5至20个氨基酸间隔子与绞链区连结的建构体。可添加此间隔子以确保恒定区的调节组件维持自由且易利用，或绞链区维持柔韧。然而，应注意氨基酸间隔子可在一些情况中证实具有免疫原性且引诱对抗建构体的不希望的免疫反应。因此，在特定的实施方案中，添加至建构体的任何间隔子为相对非免疫原性，以维持经修饰的抗体的所期望的生物质量。
在一些实施方案中，经修饰的抗体可能仅具有部分删除的恒定结构域或少数或甚至单一氨基酸的取代。例如，在CH2结构域的选择区域中的单一氨基酸突变可能足以实质地降低Fc结合。在一些实施方案中，在CH2结构域的选择区域中的单一氨基酸突变可能足以实质地降低Fc结合且增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。同样地，可能希望单纯地删除一或多个控制欲调节的特异性效应子功能(例如补体C1q结合)的恒定区结构域的部分。恒定区的此等部分删除可改进经选择的抗体特征(血清半衰期)，同时保留与目标恒定区结构域完整性相关联的其他所期望的功能。而且，如上所提及，所揭示的抗体的恒定区可透过一或多个氨基酸的突变或取代而修饰，以增强所得建构物的分布。关于此点，有可能阻扰由保守的结合部位所提供的活性(例如Fc结合)，且实质地维持经修饰的抗体的构型及免疫原性分布。在特定的实施方案中，经修饰的抗体包含添加一或多个氨基酸至恒定区以增强所期望的特征，诸如降低或增加效应子功能或提供更多的细胞毒素或碳水化合物连接部位。
在本技术中已知恒定区介导数种效应子功能。例如，以补体的C1组分与IgG或IgM抗体(与抗原结合)的Fc区结合使补体系统活化。补体活化在细胞病原体的调理及溶解中具有重要性。补体活化亦刺激发炎反应，且亦可涉入自体免疫超敏反应。另外，抗体的Fc区可结合表达Fc受体(FcR)的细胞。有一些Fc受体对不同类别的抗体具有特异性，包括IgG(γ受体)、IgE(ε受体)、IgA(α受体)及IgM(μ受体)。抗体与细胞表面上的Fc受体结合触发许多重要且多变的生物反应，包括吞噬且破坏抗体包覆粒子、清除免疫复合物、以杀手细胞溶解经抗体包覆的标靶细胞(称为抗体依赖性细胞毒性或ADCC)、释放发炎媒介物、胚胎转移及控制免疫球蛋白生产。
在特定的实施方案中，经修饰的抗体提供经改变的效应子功能，该功能转而影响所施用的抗体的生物分布。例如，在一些实施方案中，恒定区结构域的删除或不活化(透过点突变或其他手段)可降低循环修饰的抗体的Fc受体结合。在一些实施方案中，恒定区结构域的删除或不活化(透过点突变或其他手段)可降低循环修饰的抗体的Fc受体结合，由此增加癌细胞定位和/或肿瘤穿透。在其他的实施方案中，恒定区修饰增加抗体的血清半衰期。在其他的实施方案中，恒定区修饰降低抗体的血清半衰期。在一些实施方案中，恒定区经修饰以消除双硫键联或寡糖部分。依照本发明的恒定区修饰可使用公知的生化或分子工程技术轻易进行。
在特定的实施方案中，TIGIT结合剂(其为抗体)不具有一或多个效应子功能。例如，在一些实施方案中，抗体不具有ADCC活性和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性。在特定的实施方案中，抗体不结合Fc受体和/或补体因子。在特定的实施方案中，抗体不具有效应子功能。
本发明另外包含实质上与本文所述的重组、单克隆、嵌合、人源化和人类抗体或其抗体片段同源的变体及相等物。这些变体可含有例如保守性取代突变，亦即以类似的氨基酸取代一或多个氨基酸。
在特定的实施方案中，将本文所述的抗体分离。在特定的实施方案中，本文所述的抗体为实质上纯的。
本发明的TIGIT结合剂(例如抗体)可以本技术中已知的任何方法检定特异性结合。可使用的免疫测定法包括但不限于使用下列技术的竞争性及非竞争性检定系统：诸如Biacore分析、FACS分析、免疫荧光、免疫细胞化学、西方墨点分析、放射性免疫检定、ELISA、“三明治”式免疫检定、免疫沉淀检定、沉淀反应、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散检定、凝集检定、补体固定检定、免疫放射检定、荧光免疫检定和蛋白A免疫检定。此等检定为惯例程序且为本技术中所熟知(参见例如Ausubel等人的Editors,1994-present,Current Protocolsin Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,New York,NY)。
在非限制性实例中，用于抗体与人类TIGIT的特异性结合的筛选可使用ELISA测定。ELISA包含制备抗原(例如TIGIT或其片段)，以抗原包覆96槽孔微量滴定盘的槽孔，添加与可检测的化合物(诸如酵素底物，例如辣根过氧化酶或碱性磷酸酶)共轭的试验抗体至槽孔中，培育一段时期且检测与抗原结合的抗体的存在。在一些实施方案中，试验抗体不与可检测的化合物共轭，反而将辨识抗体(例如抗Fc抗体)且与可检测的化合物共轭的二级抗体添加至槽孔中。在一些实施方案中，不以抗原包覆槽孔，反而以试验抗体包覆槽孔，添加抗原(例如TIGIT)至槽孔，接着添加与可检测的化合物共轭的二级抗体。本领域技术人员能具有关于可修改以增加检测信号的参数以及本技术中已知的ELISA的其他变量的知识。
在另一非限制性实例中，用于抗体与TIGIT的特异性结合可使用FACS测定。FACS筛选测定法可包含产生表达成为全长蛋白(TIGIT)或融合蛋白(例如TIGIT-CD4TM)的抗原的cDNA建构体，将建构体转染至细胞中，使抗原表达在细胞表面上，将试验抗体与经转染的细胞混合且培育一段时期。以试验抗体结合的细胞可使用与可检测的化合物共轭的二级抗体(例如经PE共轭的抗Fc抗体)及流动式细胞测量计鉴别。本领域技术人员能具有关于可修改而使检测信号最优化的参数以及可增强筛选(例如阻断抗体的筛选)的FACS的其他变量的知识。
抗体或其他结合剂对抗原(例如TIGIT)的结合亲和性及抗体-抗原交互作用的解离速率(off-rate)可通过竞争性结合测定法测定。竞争性结合测定法的一个实例为放射性免疫测定法，其包含将经标记的抗原(例如3H或125I-TIGIT)或其片段或变体与关注的抗体在增量的未标记的抗原存在下培育，接着检测与经标记的抗原结合的抗体。抗体对抗原的亲和性及结合解离速率可自斯卡查德(Scatchard)图分析的数据测定。在一些实施方案中，Biacore动力学分析是用于测定结合抗原(例如TIGIT)的抗体或剂的结合及解离速率。在一些实施方案中，Biacore动力学分析包含分析抗体与芯片表面上固定的抗原(例如TIGIT)的结合及自芯片的解离。在一些实施方案中，Biacore动力学分析包含分析抗原(例如TIGIT)与芯片表面上固定的抗体(例如抗TIGIT抗体)的结合及自芯片的解离。
在本文所述方法的某些实施方案中，本发明提供了特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如，抗体)，其中TIGIT结合剂包含抗体OMP-313M32的CDR中的1、2、3、4、5和/或6个(参见表1)。抗TIGIT抗体OMP-313M32在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32的CDR中的1个或多个；OMP-313M32的CDR中的2个或更多个；OMP-313M32的CDR中的3个或更多个；OMP-313M32的CDR中的4个或更多个；OMP-313M32的CDR中的5个或更多个；或OMP-313M32的CDR中的所有6个。
表1
OMP-313M32
HC CDR1 TSDYAWN(SEQ ID NO:4)
HC CDR2 YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)
HC CDR3 ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)
LC CDR1 KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)
LC CDR2 SASYRYT(SEQ ID NO:8)
LC CDR3 QQHYSTP(SEQ ID NO:9)
在本文所述方法的某些实施方案中，本发明提供了特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如，抗体)，其中TIGIT结合剂包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、以及含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3。在一些实施方案中，TIGIT结合剂还包含含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含：(a)含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、和含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3；以及(b)含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本发明所述的方法的特定的实施方案中，本发明提供了特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如抗体)，其中TIGIT结合剂包含：(a)包含TSDYAWN(SEQ ID NO:4)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的重链CDR1；(b)包含YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的重链CDR2；(c)包含ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的重链CDR3；(d)包含KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的轻链CDR1；(e)包含SASYRYT(SEQ ID NO:8)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的轻链CDR2；及(f)包含QQHYSTP(SEQ ID NO:9)或包含1、2、3或4个氨基酸取代的其变体的轻链CDR3。在特定的实施方案中，氨基酸取代为保守性取代。在一些实施方案中，取代构成人源化过程的一部分。在一些实施方案中，取代构成种系人源化过程的一部分。在一些实施方案中，取代作为结合优化过程的一部分。
在本发明所述的方法的特定的实施方案中，本发明提供了特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如抗体)，其中TIGIT结合剂包含与SEQ ID NO：10具有至少约80％的序列一致性的重链可变区和/或与SEQ ID NO：11具有至少约80％的序列一致性的轻链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含与SEQ ID NO：10具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％的序列一致性的重链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含与SEQ ID NO：11具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％的序列一致性的轻链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含与SEQID NO：10具有至少约95％的序列一致性的重链可变区和/或与SEQ ID NO：11具有至少约95％的序列一致性的轻链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含含有SEQ ID NO：10的重链可变区和/或含有SEQ ID NO：11的轻链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含含有SEQ ID NO：10的重链可变区和含有SEQ ID NO：11的轻链可变区。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区基本上由SEQ ID NO：10所组成且该轻链可变区基本上由SEQ ID NO：11所组成。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区是由SEQ ID NO：10所组成且该轻链可变区是由SEQ ID NO：11所组成。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQ ID NO：10且该轻链可变区包含SEQ ID NO：11。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区基本上由SEQ ID NO：10所组成且该轻链可变区基本上由SEQ ID NO：11所组成。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含重链可变区和轻链可变区，该重链可变区是由SEQ ID NO：10所组成且该轻链可变区是由SEQ ID NO：11所组成。
在本文所述方法的某些实施方案中，本发明提供特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如，抗体)，其中TIGIT结合剂包含：与SEQ ID NO：13具有至少90％的序列一致性的重链和/或与SEQ ID NO：15具有至少90％的序列一致性的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含：与SEQ ID NO：13具有至少95％的序列一致性的重链和/或与SEQ ID NO：15具有至少95％的序列一致性的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含含有SEQ ID NO：13的重链和/或含有SEQ ID NO：15的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含基本上由SEQID NO：13组成的重链和基本上由SEQ ID NO：15组成的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含由SEQ ID NO：13组成的重链和由SEQ ID NO：15组成的轻链。
在本文所述方法的某些实施方案中，本发明提供特异性结合人类TIGIT的TIGIT结合剂(例如，抗体)，其中TIGIT结合剂包含：与SEQ ID NO：17具有至少90％的序列一致性的重链和/或与SEQ ID NO：15具有至少90％的序列一致性的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含：与SEQ ID NO：17具有至少95％的序列一致性的重链和/或与SEQ ID NO：15具有至少95％的序列一致性的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含含有SEQ ID NO：17的重链和/或含有SEQ ID NO：15的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含基本上由SEQID NO：17组成的重链和基本上由SEQ ID NO：15组成的轻链。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含由SEQ ID NO：17组成的重链和由SEQ ID NO：15组成的轻链。
在本文所述方法的某些实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的可变区，其中来自OMP-313M32抗体的重链可变区和/或轻链可变区已经是亲和力成熟的。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链和轻链(具有或不具有前导序列)。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂是OMP-313M32抗体。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链可变区作为IgG1、IgG2或IgG4重链的一部分。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链可变区作为人类IgG1重链的一部分。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链可变区作为人类IgG2重链的一部分。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含OMP-313M32抗体的重链可变区作为人类IgG4重链的一部分。在特定的实施方案中，将包含OMP-313M32抗体的重链可变区作为人类IgG4重链的一部分的TIGIT结合剂称为OMP-313M33抗体。
在本文所述方法的某些实施方案中，TIGIT结合剂包含抗体OMP-313M32，基本上由其组成或由其组成。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂包含抗体OMP-313M32的变体，基本上由该变体组成或由该变体组成。
在本文所述方法的某些实施方案中，TIGIT结合剂包含在2015年8月11日依照布达佩斯特条约(Budapest Treaty)的条款保藏于美国菌种保藏中心(ATCC)，10801UniversityBoulevard,Manassas,VA,USA且以PTA-122346编号的质粒所编码的重链可变区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含在2015年8月11日依照布达佩斯特条约的条款保藏于ATCC，10801University Boulevard,Manassas,VA,USA且以PTA-122347编号的质粒所编码的轻链可变区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含由保藏于ATCC且以PTA-122346编号的质粒所编码的重链可变区和由保藏于ATCC且以PTA-122347编号的质粒所编码的轻链可变区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含重链，该重链包含由保藏于ATCC且以PTA-122346编号的质粒所编码的重链可变区。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含轻链，该轻链包含由保藏于ATCC且以PTA-122347编号的质粒所编码。在一些实施方案中，TIGIT结合剂包含重链和轻链，该重链包含由保藏于ATCC且以PTA-122346编号的质粒所编码的可变区且该轻链由保藏于ATCC且以PTA-122347编号的质粒所编码。
在本文所述方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂是同质二聚体剂/分子及异质二聚体剂/分子。在一些实施方案中，同质二聚体剂为多肽。在一些实施方案中，异质二聚体分子为多肽。同质二聚体分子通常包含两个相同的多肽。异质二聚体分子通常包含至少两个不同的多肽。在一些实施方案中，异质二聚体分子能够结合至少两个标靶，例如双特异性剂。标靶可为例如在单一细胞上的两个不同的蛋白或在两个单独的细胞上的两个不同的蛋白。术语“臂”可于本文用于说明同质二聚体剂、异质二聚体剂和/或双特异性剂的结构。在一些实施方案中，各臂包含至少一个多肽。异质二聚体分子的各臂通常具有不同的功能，例如结合两个不同的标靶。在一些实施方案中，一个臂可包含来自抗体的抗原结合部位。在一些实施方案中，一个臂可包含受体的结合部分。在一些实施方案中，一个臂可包含配体。在一些实施方案中，一个臂可包含配体的结合部分。在一些实施方案中，同质二聚体剂包含两个相同的臂。在一些实施方案中，异质二聚体剂包含两个不同的臂。在一些实施方案中，双特异性剂包含两个不同的臂。
在本文所述方法的一些实施方案中，本发明提供TIGIT结合剂，其为同质二聚体分子。在一些实施方案中，同质二聚体分子包含两个相同的多肽。在一些实施方案中，本发明提供TIGIT结合剂，其为异质二聚体分子。在一些实施方案中，异质二聚体分子包含至少两个不同的多肽。在一些实施方案中，本发明提供TIGIT结合剂，其为异质二聚体剂。在一些实施方案中，本发明提供TIGIT结合剂，其为双特异性剂。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为双特异性抗体。
在本文所述方法的一些实施方案中，本发明提供特异性结合TIGIT的多肽，其包括但不限于抗体。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合小鼠TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合小鼠TIGIT及人类TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合小鼠TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合大鼠TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合兔子TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合狨猴TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合狗TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合猪TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合食蟹猕猴TIGIT。在一些实施方案中，多肽结合人类TIGIT及不结合恒河猴TIGIT。
在本文所述方法的一些实施方案中，多肽包含抗体OMP-313M32的CDR中的一、二、三、四、五和/或六个(参见本文表1)。在一些实施方案中，多肽包含每一CDR具有至多4个(亦即0、1、2、3或4)氨基酸取代的CDR。在特定的实施方案中，重链CDR容纳在重链可变区内。在特定的实施方案中，轻链CDR容纳在轻链可变区内。
在本文所述方法的一些实施方案中，本发明提供特异性结合人类TIGIT的多肽，其中多肽包含与SEQ ID NO：10具有至少约80％的序列一致性的氨基酸序列和/或与SEQ IDNO：11具有至少约80％的序列一致性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含与SEQID NO：10具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％的序列一致性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO：11具有至少约85％，至少约90％，至少约95％，至少约97％或至少约99％的序列一致性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含与SEQ ID NO：10具有至少约95％的序列一致性的氨基酸序列和/或与SEQID NO：11具有至少约95％的序列一致性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含：包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列和/或包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列。
在本文所述方法的一些实施方案中，多肽包含选自下列组成的组中的一个或多个氨基酸序列：SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17。如本文所定义，多肽可以作为单链或作为两个或更多个缔合的链出现。在特定的实施方案中，多肽包含含有SEQ ID NO：10的氨基酸序列和含有SEQ ID NO：11的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含含有SEQ ID NO：12的氨基酸序列和含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含含有SEQID NO：13的氨基酸序列和含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含含有SEQ ID NO：16的氨基酸序列和含有SEQ ID NO：14的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含含有SEQ ID NO：17的氨基酸序列和含有SEQ ID NO：15的氨基酸序列。
在本文所述方法的一些实施方案中，多肽包含由SEQ ID NO：10所组成的氨基酸序列及由SEQ ID NO：11所组成的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含由SEQ ID NO：12所组成的氨基酸序列及由SEQ ID NO：14所组成的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含由SEQ ID NO：13所组成的氨基酸序列及由SEQ ID NO：15所组成的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含由SEQ ID NO：16所组成的氨基酸序列及由SEQ ID NO：14所组成的氨基酸序列。在特定的实施方案中，多肽包含由SEQ ID NO：17所组成的氨基酸序列及由SEQ ID NO：15所组成的氨基酸序列。
许多蛋白(包括抗体)含有引导蛋白运送至不同地区的信号序列。信号序列(又称信号肽或前导序列)通常位于新生多肽的N端。这些信号序列靶定多肽至内质网且将蛋白分类至它们的目的地，例如至胞器的内部空间、至细胞内膜、至细胞外膜或经由分泌至细胞外部。在蛋白运送至内质网之后，大部分的信号序列是通过信号肽酶与蛋白切割。自多肽切割信号序列通常发生在氨基酸序列的特定部位，且取决于信号序列内的氨基酸残基而定。虽然通常有一个特定的切割部位，但是可通过信号肽酶辨识和/或使用一个以上的切割部位，导致多肽的不均匀N端。例如，使用在信号序列内不同的切割部位可导致以不同的N端氨基酸表达的多肽。因此，在一些实施方案中，如本文所述的多肽可包含具有不同的N端的多肽的混合物。在一些实施方案中，N端的长度相差1、2、3、4或5个氨基酸。在一些实施方案中，多肽为实质上均匀的，亦即多肽具有相同的N端。在一些实施方案中，与“原生”或“亲代”信号序列相比，多肽的信号序列包含一或多个(例如一、二、三、四、五、六、七、八、九、十等等)氨基酸取代和/或删除。在一些实施方案中，多肽的信号序列包含容许一个切割部位占优势的氨基酸取代和/或删除，由此导致具有一个N端的实质上均匀的多肽。在一些实施方案中，多肽的信号序列影响多肽的表达程度，例如增加表达或降低表达。
在本文所述方法的某些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与人类TIGIT的特异性结合。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与TIGIT结合剂竞争特异性结合TIGIT，所述TIGIT结合剂包含：(a)含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、以及含有ARRQVGLGFAY(SEQ IDNO:6)的重链CDR3，和(b)含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在本文所述方法的某些实施方案中，抗体或其他结合剂与包含含有SEQ ID NO：10的重链可变区和含有SEQ ID NO：11的轻链可变区的TIGIT结合剂竞争与人类TIGIT的特异性结合。在特定的实施方案中，抗体或其他结合剂与包含含有SEQ ID NO：13的重链和含有SEQ ID NO：15的轻链的TIGIT结合剂竞争与人类TIGIT的特异性结合。在特定的实施方案中，抗体或其他结合剂与包含含有SEQ ID NO：17的重链和含有SEQ ID NO：15的轻链的TIGIT结合剂竞争与人类TIGIT的特异性结合。
在本文所述方法的某些实施方案中，抗体或其他结合剂与抗体OMP-313M32竞争与人类TIGIT的特异性结合。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与参考抗体竞争与人类TIGIT的特异性结合，其中参考抗体是抗体OMP-313M32。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与参考抗体竞争与人类TIGIT的特异性结合，其中参照抗体是抗体313M33。
在本文所述方法的某些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂结合TIGIT上的相同的抗原决定区或基本上相同的抗原决定区。在特定的实施方案中，抗体或其他结合剂与抗体OMP-313M32结合人类TIGIT上的相同的抗原决定区或基本上相同的抗原决定区。在特定的实施方案中，抗体或其他结合剂与抗体313M33结合人类TIGIT上的相同的抗原决定区或基本上相同的抗原决定区。
在本文所述方法的另一个实施方案中，抗体或其他结合剂结合TIGIT上的抗原决定区，该抗原决定区与由本文所述的TIGIT结合剂结合的TIGIT上的抗原决定区重叠。在另一个实施方案中，抗体或其他结合剂结合TIGIT上的抗原决定区，其与抗体OMP-313M32结合的人类TIGIT上的抗原决定区重叠。在另一个实施方案中，抗体或其他结合剂结合TIGIT上的抗原决定区，其与抗体313M33结合的人类TIGIT上的抗原决定区重叠。
在本文所述方法的另一个实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：27内的氨基酸。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含在SEQ ID NO：27及SEQ IDNO：28内的氨基酸。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和I109。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和I109。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQID NO：1的氨基酸Q62、Q64和I109。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、I109和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q64、I109和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含SEQ ID NO：1的氨基酸Q62、Q64、I109和T119。在一些实施方案中，抗体或其他结合剂与本文所述的TIGIT结合剂竞争与抗原决定区的结合，该抗原决定区包含至少一种选自由下列所组成的群组：SEQ ID NO：1的氨基酸N58、E60、Q62、Q64、L65、F107、I109、H111、T117、T119、G120和R121。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)结合TIGIT及调节TIGIT活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为TIGIT拮抗剂且降低TIGIT活性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的TIGIT活性。在特定的实施方案中，抑制TIGIT活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制TIGIT活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制TIGIT活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂结合TIGIT及抑制或降低TIGIT传导信号。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的TIGIT传导信号。在一些实施方案中，TIGIT结合剂抑制小鼠TIGIT传导信号。在一些实施方案中，TIGIT结合剂抑制人类TIGIT传导信号。在特定的实施方案中，抑制TIGIT传导信号的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制TIGIT传导信号的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
TIGIT是在与其反受体(counter-receptor)PVR交互作用之后在其胞质尾区磷酸化。TIGIT的磷酸化为级联的开始，该级联包括影响其他已知的传导信号途径的下游事件。因此，评估TIGIT磷酸化可给出关于TIGIT活性及TIGIT传导信号的信息。
磷酸化测定法为本领域技术人员已知且常被用于监测蛋白活化和/或途径活化。测定法可用于监测各种治疗对标靶蛋白和/或标靶途径的活化的效应。例如，试管内磷酸化测定法可用于评估TIGIT拮抗剂对PVR诱发的TIGIT活化的效应。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)抑制TIGIT与受体结合。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制TIGIT与PVR结合。在一些实施方案中，TIGIT结合剂抑制TIGIT与PVR-L2、PVR-L3和/或PVR-L4结合。在特定的实施方案中，抑制TIGIT结合剂与PVR的结合为至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在特定的实施方案中，抑制TIGIT结合剂与PVR-L2、PVR-L3和/或PVR-L4的结合为至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在特定的实施方案中，抑制TIGIT与PVR结合的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制TIGIT与PVR结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M33。在特定的实施方案中，抑制TIGIT与PVR-L2、PVR-L3和/或PVR-L4结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制TIGIT与PVR-L2、PVR-L3和/或PVR-L4结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M33。
在本文所述方法的某些实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)阻断TIGIT与受体结合。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂阻断TIGIT与PVR结合。在特定的实施方案中，阻断TIGIT结合剂与PVR的结合为至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在一些实施方案中，TIGIT结合剂阻断TIGIT与PVRL2、PVRL3和/或PVRL4结合。在特定的实施方案中，阻断TIGIT结合剂与PVRL2、PVRL3和/或PVRL4的结合为至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％。在特定的实施方案中，阻断TIGIT与PVR结合的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，阻断TIGIT与PVR结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M33。在特定的实施方案中，阻断TIGIT与PVRL2、PVRL3和/或PVRL4结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，阻断TIGIT与PVRL2、PVRL3和/或PVRL4结合的TIGIT结合剂是抗体OMP-313M33。
结合测定法为本领域技术人员已知且于本文说明。结合测定法可用于监测试验剂对标靶蛋白与蛋白结合伙伴(例如受体或配体)之间的交互作用的效应。例如，试管内(invitro)结合测定法可用评估TIGIT拮抗剂是否阻断TIGIT对PVR的交互作用。
在特定的实施方案中，本文所述的TIGIT结合剂具有下列效应中的一或多者：抑制肿瘤细胞增生、抑制肿瘤生长、降低肿瘤的致瘤性、通过减少肿瘤中的癌干细胞频率而降低肿瘤的致瘤性、触发肿瘤细胞的细胞死亡、增强或激励免疫反应、增强或激励抗肿瘤反应、增加免疫细胞的溶胞活性、增加杀死肿瘤细胞、通过免疫细胞增加杀死肿瘤细胞、诱发肿瘤的细胞分化、分化致瘤细胞至非致瘤状态、诱发肿瘤细胞中的分化标记表达、预防肿瘤细胞转移、降低肿瘤细胞存活、增加细胞接触依赖性生长抑制、增加肿瘤细胞凋亡、降低上皮间质转变(EMT)或降低肿瘤细胞存活。在一些实施方案中，该剂具有下列效应中的一或多者：抑制病毒感染、抑制慢性病毒感染、减少病毒载量、触发经病毒感染的细胞的细胞死亡或减少经病毒感染的细胞的数目或百分比。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制肿瘤生长。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制活体内肿瘤生长(例如在小鼠模式中和/或在患有癌症的人类中)。在特定的实施方案中，与未经处理的肿瘤相比，使肿瘤生长抑制至少约2倍，约3倍，约5倍，约10倍，约50倍，约100倍或约1000倍。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，剂(例如多肽和/或抗体)结合TIGIT及调节免疫反应。在一些实施方案中，TIGIT结合剂活化和/或增加免疫反应。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强细胞介导的免疫力。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强先天细胞介导的免疫力。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强后天细胞介导的免疫力。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强T细胞活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强溶胞性T细胞(CTL)活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强NK细胞活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强淋巴激素活化的杀手细胞(LAK)活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂抑制或降低Treg细胞活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂抑制或降低MDSC活性。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强杀死肿瘤细胞。在一些实施方案中，TIGIT结合剂增加、促进或增强肿瘤生长抑制。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂为人类TIGIT拮抗剂。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂且活化和/或增加免疫反应。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂且活化和/或增加NK细胞活性。在特定的实施方案中，该剂增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的活性。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂且活化和/或增加T细胞活性(例如T细胞溶胞活性)。在特定的实施方案中，该剂增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的活性。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂且诱发和/或增强Th1型免疫反应。Th1型免疫反应通常包括生产干扰素-γ(IFN-γ)、IL-2和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)。比较的Th2型免疫反应通常包括生产IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10和IL-13。在一些实施方案中，该剂为TIGIT拮抗剂且诱发和/或增加细胞激素或淋巴激素生产。在一些实施方案中，诱发和/或增加细胞激素或淋巴激素生产可为间接效应。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂增加NK细胞活化。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂增加T细胞活化。在特定的实施方案中，以TIGIT结合剂活化NK细胞和/或T细胞导致增加至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或至少约95％的NK细胞和/或T细胞活化程度。在特定的实施方案中，增加NK细胞活化的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，增加NK细胞活化的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)为调节性T细胞(Treg)活性的拮抗剂。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制或降低Treg活性。在特定的实施方案中，以TIGIT结合剂抑制Treg活性导致抑制至少约10％，至少约25％，至少约50％，至少约75％，至少约90％，至少约95％或约100％的Treg细胞抑制活性。在特定的实施方案中，抑制Treg活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制Treg活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)为骨髓衍生性抑制细胞(MDSC)的拮抗剂。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制MDSC活性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂抑制至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的MDSC活性。在特定的实施方案中，抑制MDSC活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，抑制MDSC活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)增加自然杀手(NK)细胞活性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的NK细胞活性。在特定的实施方案中，增加NK细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，增加NK细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)增加肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)活性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的TIL活性。在特定的实施方案中，增加TIL细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，增加TIL细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂(例如抗体)增加或增强淋巴激素活化的杀手细胞(LAK)活性。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂增加至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约50％，至少约75％，至少约90％或约100％的LAK活性。在特定的实施方案中，增加LAK细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M32。在特定的实施方案中，增加LAK细胞活性的TIGIT结合剂为抗体OMP-313M33。
用于测定TIGIT结合剂(或候选结合剂)是否调节免疫反应的活体内及试管内测定法为本技术中已知或正在发展中。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测T细胞活化。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测T细胞增生。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测NK活性。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测CTL活性。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测Treg活性。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测MDSC活性。在一些实施方案中，可使用功能测定法检测细胞激素或淋巴激素的生产或细胞生产的细胞激素或淋巴激素。在一些实施方案中，ELISpot测定法是用于测量抗原特异性T细胞频率。在一些实施方案中，ELISpot测定法是用于测量细胞激素释放/生产和/或用于测量细胞激素生产的细胞数目。在一些实施方案中，细胞激素测定法是用于鉴别Th1型反应。在一些实施方案中，细胞激素测定法是用于鉴别Th2型反应。在一些实施方案中，细胞激素测定法是用于鉴别Th17-型反应。在一些实施方案中，FACS分析是用于测量在免疫细胞上的活化标记，该免疫细胞包括但不限于T细胞、B-细胞、NK细胞、巨噬细胞和/或骨髓细胞。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂在小鼠、大鼠、食蟹猕猴或人类中具有至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约3天、至少约1周或至少约2周的循环半衰期。在特定的实施方案中，TIGIT结合剂为IgG(例如IgG1、IgG2或IgG4)抗体，其在小鼠、食蟹猕猴或人类中具有至少约2小时、至少约5小时、至少约10小时、至少约24小时、至少约3天、至少约1周或至少约2周的循环半衰期。增加(或降低)该剂(诸如多肽和抗体)的半衰期的方法为本技术中已知。例如，增加IgG抗体的循环半衰期的方法包括引入突变至Fc区中，其在pH 6.0增加抗体与新生Fc受体(FcRn)的pH依赖性结合。增加缺乏Fc区的抗体片段的循环半衰期的已知方法包括诸如聚乙二醇化(PEGylation)的技术。
在本文所述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂为多肽。在一些实施方案中，多肽为包含抗体或其片段的重组多肽、天然多肽或合成多肽，其结合TIGIT。在本技术中承认可改变本发明的一些氨基酸序列而不实质地影响蛋白的结构或功能。因此，本发明另外包括结合TIGIT的多肽的变异，其显示实质的活性或包括抗体或其片段区域。在一些实施方案中，TIGIT结合多肽的氨基酸序列变异包括删除、插入、反转、重复和/或其他的取代类型。
多肽、类似物及其变体可经另外修饰而含有不是多肽的正常部分的额外的化学部分。经衍生的部分可改进或在其他方面调节多肽的溶解性、生物半衰期和/或吸收。该部分亦可降低或消除多肽及变体的非所期望的副作用。化学部分的评论可见于Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,22st Edition,2012,Pharmaceutical Press,London中。
在本文所述的方法的特定的实施方案中，TIGIT结合剂用于数种共轭形式(即免疫共轭物或放射共轭物)或非共轭形式中的任一种中。在特定的实施方案中，该剂可以非共轭形式使用以驾驭受试者的天然防御机制，包括补体依赖性细胞毒性(CDC)及抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，以消除恶性或癌细胞。
在本文所述的方法的一些实施方案中，TIGIT结合剂与胞毒剂共轭。在一些实施方案中，TIGIT结合剂为与胞毒剂共轭成ADC(抗体-药物共轭物)的抗体。在一些实施方案中，胞毒剂为化学治疗剂，包括但不限于甲胺喋呤(methotrexate)、甲烯土霉素(adriamicin)/多柔比星(doxorubicin)、霉法兰(melphalan)、丝裂霉素C(mitomycin C)、氯芥苯丁酸(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)、吡咯并苯并二氮杂(PBD)或其他嵌入剂。在一些实施方案中，胞毒剂为细菌、真菌、植物或动物来源的酵素活性毒素及其片段，包括但不限于白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素(abrin)A链、莫迪素(modeccin)A链、α-次黄嘌呤(sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素(dianthin)蛋白、美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、泻果素(curcin)、巴豆素(crotin)、肥皂草(sapaonariaofficinalis)抑制剂、白树毒素(gelonin)、丝裂胶素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)和新月毒素(tricothecene)。在一些实施方案中，胞毒剂为放射性同位素以生产放射共轭物或经放射共轭的抗体。各种放射性核种可用于生产经放射共轭的抗体，包括但不限于90Y、125I、131I、123I、111In、131In、105Rh、153Sm、67Cu、67Ga、166Ho、177Lu、186Re、188Re和212Bi。亦可使用抗体与一或多种小分子毒素的共轭物，诸如卡利奇霉素(calicheamicin)、类美坦素(maytansinoids)、新月毒素(trichothene)、CC1065及这些毒素的具有毒素活性的衍生物。抗体与胞毒剂的共轭物可使用各种双官能性蛋白偶合剂制得，诸如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫醇)丙酸酯(SPDP)、二亚氨环硫丁烷(IT)、酰亚胺酯的双官能性衍生物(诸如己二亚胺酸二甲酯HCl)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如2,6-二异氰酸甲苯酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝苯)。
IV.多核苷酸
本发明提供了多核苷酸，其包含编码TIGIT结合剂的多核苷酸。术语“编码多肽的多核苷酸”包含仅包括多肽的编码序列的多核苷酸，以及包括额外的编码和/或未编码序列的多核苷酸。本发明的多核苷酸可呈RNA形式或呈DNA形式。DNA包括cDNA、基因组DNA和合成性DNA；且如果单股可为编码股或非编码(反义)股，则该多核苷酸可为双股或单股。
在特定的实施方案中，多核苷酸包含编码多肽的多核苷酸(例如核苷酸序列)，该多肽包含选自由下列所组成的群组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17。
在特定的实施方案中，多核苷酸包含与编码选自由下列所组成的群组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17的多核苷酸具有至少约80％的一致性，至少约85％的一致性，至少约90％的一致性，至少约95％的一致性，且在一些实施方案中，至少约96％，97％，98％或99％的一致性的核苷酸序列的多核苷酸。还提供了多核苷酸，其包含与编码选自由下列所组成的群组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16和SEQ ID NO：17的多核苷酸杂交的多核苷酸。在特定的实施方案中，杂交是在高严格条件下。高严格条件为本领域技术人员已知且可包括但不限于：(1)使用低离子强度及高温清洗，例如在50℃下以具有0.1％十二烷基硫酸钠的15mM氯化钠/1.5mM柠檬酸钠(1x SSC)；(2)在杂交期间使用变性剂，诸如甲酰胺，例如在42℃下使用于5x SSC(0.75M NaCl，75mM柠檬酸钠)中具有0.1％牛血清白蛋白/0.1％Ficoll/0.1％聚乙烯基吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液，pH 6.5的50％(体积/体积)甲酰胺；或(3)在42℃下使用50％甲酰胺、5x SSC、50mM磷酸钠(pH 6.8)、0.1％焦磷酸钠、5x丹哈德(Denhardt’s)溶液、经音波化的鲑鱼精子DNA(50μg/毫升)、0.1％SDS及10％硫酸葡聚糖，在55℃下以含有50％甲酰胺的0.2x SSC清洗，接着在55℃下以含有EDTA的0.1x SSC高严格清洗。
在一些实施方案中，多核苷酸包含多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：SEQ IDNO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22。在一些实施方案中，多核苷酸包含与选自由：SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21和SEQID NO：22所组成的群组的核苷酸序列具有至少约80％的一致性，至少约85％的一致性，至少约90％的一致性，至少约95％的一致性，且在一些实施方案中，至少约96％，97％，98％或99％的一致性的核苷酸序列的多核苷酸。还提供了多核苷酸，其包含与选自由下列所组成的群组的多核苷酸序列杂交的多核苷酸：SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQID NO：21和SEQ ID NO：22。在特定的实施方案中，杂交技术是在如上述的高严格条件下进行。
在特定的实施方案中，多核苷酸包含在相同的阅读框架中与多核苷酸融合的成熟多肽的编码序列，该多核苷酸协助例如来自宿主细胞的多肽的表达及分泌(例如作为控制来自细胞的多肽运送的分泌序列功能的前导序列)。具有前导序列的多肽为前蛋白且可具有以宿主细胞切割的前导序列，以形成多肽的成熟形式。多核苷酸还可编码原蛋白，其为成熟蛋白加上额外的5'氨基酸残基。具有原序列(pro-sequence)的成熟蛋白为原蛋白且为蛋白的不活化形式。原序列一经切割，则剩下活性成熟蛋白。
在特定的实施方案中，多核苷酸包含在相同的阅读框架中与标记序列融合的成熟多肽的编码序列，该标记序列容许例如纯化编码的多肽。例如，标记序列可为由pQE-9载体供给的六组氨酸标签，以提供在细菌宿主的示例中用于纯化与标记融合的成熟多肽，或当使用哺乳动物宿主(例如COS-7细胞)时，标记序列可为源自流感血球凝集素蛋白的血球凝集素(HA)标签。在一些实施方案中，标记序列为FLAG-卷标，序列DYKDDDDK的肽(SEQ ID NO：29)，其可与其他的亲和性标签联合使用。
本发明另外涉及本文所述的多核苷酸的变体，其中变体编码例如片段、类似物和/或衍生物。
在特定的实施方案中，本发明提供多核苷酸，其包含与编码包含TIGIT结合剂的多肽的多核苷酸具有至少约80％的一致性，至少约85％的一致性，至少约90％的一致性，至少约95％的一致性，且在一些实施方案中，至少约96％，97％，98％或99％的一致性的核苷酸序列的多核苷酸。
如本文所使用的具有与参考核苷酸序列有至少例如95％的“一致性”的核苷酸序列的短语多核苷酸用于意指多核苷酸的核苷酸序列与参考序列相同，除了多核苷酸序列会包括以参考核苷酸序列的每100个核苷酸计多达5点突变。换言之，为了获得具有核苷酸序列与参考核苷酸序列至少95％的一致性的多核苷酸，可将参考序列中最多5％的核苷酸删除或以另一核苷酸取代，或可将参考序列中的总核苷酸的最多5％的核苷酸数目插入参考序列。参考序列的这些突变可发生在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置上或那些末端位置之间的任何位置，这些任何位置个别地散置在参考序列中的核苷酸之间或参考序列内的一或多相邻群组中。
多核苷酸变体可含有在编码区、非编码区或两者中的变化。在一些实施方案中，多核苷酸变体含有产生静默取代、添加或删除的变化，但不改变经编码的多肽的性质或活性。在一些实施方案中，多核苷酸变体包含不导致多肽的氨基酸序列改变的静默取代(由于基因密码的简并性)。多核苷酸变体可就各种原因而生产，例如使特定的宿主的密码子表达最优化(例如将人类mRNA中的密码子改变成细菌宿主(诸如大肠杆菌)偏好的密码子)。在一些实施方案中，多核苷酸变体包含至少一个在序列的非编码或编码区中的静默突变。
在一些实施方案中，生产多核苷酸变体以调节或改变经编码的多肽的表达(或表达量)。在一些实施方案中，生产多核苷酸变体以增加经编码的多肽的表达。在一些实施方案中，生产多核苷酸变体以降低经编码的多肽的表达。在一些实施方案中，与亲代多核苷酸序列相比，多核苷酸变体增加经编码的多肽的表达。在一些实施方案中，与亲代多核苷酸序列相比，多核苷酸变体降低经编码的多肽的表达。
在一些实施方案中，生产至少一种多核苷酸变体(不改变经编码的多肽的氨基酸序列)以增加异质二聚体分子的生产。在一些实施方案中，生产至少一种多核苷酸变体(不改变经编码的多肽的氨基酸序列)以增加双特异性抗体的生产。
在特定的实施方案中，多核苷酸经分离。在特定的实施方案中，多核苷酸为实质上纯的。
还提供了包含本文所述的多核苷酸的载体及细胞。在一些实施方案中，表达载体包含多核苷酸分子。在一些实施方案中，宿主细胞包含表达载体，其包含多核苷酸分子。在一些实施方案中，宿主细胞包含多核苷酸分子。
VII.包含本文所述的剂的试剂盒
本发明提供包含本文所述的TIGIT结合剂的试剂盒，其可用于进行本文所述的方法。在特定的实施方案中，试剂盒包含至少一种经纯化的TIGIT结合剂于一或多个容器中。在一些实施方案中，试剂盒含有所有必要和/或足以进行检测测定法的组分，包括所有的对照物、用于进行测定的说明及用于分析和呈现结果的任何必要的软件。本领域技术人员可轻易地辨识本发明所公开的TIGIT结合剂可轻易地并入本技术中公知的经确立的试剂盒形式的一者中。
另外提供了包含TIGIT结合剂以及至少一种额外治疗剂的试剂盒。在特定的实施方案中，第二(或更多)治疗剂为化疗剂。在特定的实施方案中，第二(或更多)治疗剂为抗体。
VI.其他示例性实施方案
在一些实施方案中，在整个本申请中提供的抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有高MSI的肿瘤选自CRC、胃癌、子宫内膜癌、肝胆管癌、泌尿道癌、脑癌和皮肤癌。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤，其选自由MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI肝胆管癌、MSI尿路癌、MSI脑癌和MSI皮肤癌组成的组，其中抗体每两周以约3mg/kg的剂量施用，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤，其选自由MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI肝胆管癌、MSI尿路癌、MSI脑癌和MSI皮肤癌组成的组，其中抗体每两周以约10mg/kg的剂量施用，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是具有高MSI的实体瘤，其选自由MSI CRC、MSI胃癌、MSI子宫内膜癌、MSI肝胆管癌、MSI尿路癌、MSI脑癌和MSI皮肤癌组成的组，其中抗体每两周以约15mg/kg的剂量施用，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是对于用抗-PD1抗体治疗具有难治性的肿瘤，其选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是对于用抗-PD-L1抗体治疗具有难治性的肿瘤，其选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是对于用抗-PD1抗体治疗具有抗性的肿瘤，其选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD1抗体治疗。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括向受试者施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述肿瘤是对于用抗-PD-L1抗体治疗具有抗性的肿瘤，其选自黑素瘤、NSCLC、肾细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、尿路上皮癌、结肠直肠癌(例如MSI或dMMR转移性CRC)和肝细胞癌，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，受试者先前已经用抗PD-L1抗体治疗。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2向受试者选择性地施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。在一些实施方案中，肿瘤选自头颈癌、食道癌、胃癌、宫颈癌、TNBR、肛门癌、肝细胞癌、具有高MSI的实体瘤(例如MSI CRC)、NSCLC和结肠直肠癌。在一些实施方案中，每两周以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2向受试者选择性地施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤/癌症选自头颈癌、食道癌、胃癌、宫颈癌、TNBR、肛门癌、肝细胞癌、具有高MSI的实体瘤(例如MSI CRC)、NSCLC和结肠直肠癌，其中，每两周以约3mg/kg的剂量施用所述抗体，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2向受试者选择性地施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤/癌症选自头颈癌、食道癌、胃癌、宫颈癌、TNBR、肛门癌、肝细胞癌、具有高MSI的实体瘤(例如MSI CRC)、NSCLC和结肠直肠癌，其中，每两周以约10mg/kg的剂量施用所述抗体，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抑制受试者中肿瘤生长的方法包括基于肿瘤/癌症表达PVR和/或PVRL2向受试者选择性地施用治疗有效量的特异性结合TIGIT细胞外结构域的抗体，其中，所述肿瘤/癌症选自头颈癌、食道癌、胃癌、宫颈癌、TNBR、肛门癌、肝细胞癌、具有高MSI的实体瘤(例如MSI CRC)、NSCLC和结肠直肠癌，其中，每两周以约15mg/kg的剂量施用所述抗体，并且其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
本发明的实施方案可参考下列的非限制性实施例而进一步定义，其详细说明本发明的特定抗体的制备及使用本发明的抗体的方法。本领域技术人员应明白可对材料及方法二者实施许多修改而不脱离本发明的范围。
实施例
实施例1
在人源化小鼠中以抗TIGIT抗体于活体内肿瘤生长抑制
使用人源化小鼠模式研究抗-hTIGIT抗体对人类肿瘤的治疗效能。人源化小鼠是自Jackson Laboratories获得。这些小鼠是通过以人类造血干细胞(CD34+细胞)注射至经照射的NSG小鼠中而产生。在15周之后，以流动式细胞测量术确认存在的成熟人类淋巴细胞。将各小鼠经皮下注射源自患者的黑色素瘤肿瘤细胞(OMP-M9；75,000个细胞/小鼠)。容许肿瘤生长19天，直到其达到约50立方毫米平均体积。将携肿瘤的小鼠随机分组(每组n＝8)。将携肿瘤的小鼠以对照抗体或抗-hTIGIT抗体OMP-313M32治疗。小鼠是以每5天1mg/kg或5mg/kg给药。监测肿瘤生长且以电子式卡尺在指示的时间点测量肿瘤体积。
如图1中所示，与对照组相比，在以抗体OMP-313M32治疗的小鼠中的肿瘤生长受到抑制。这些结果显示靶定的TIGIT有效于提高人类淋巴细胞的抗肿瘤免疫反应且促成于活体内抑制人类肿瘤生长。此外，这些结果证明可以携源自患者的异种移植物的人源化小鼠模式用于研究抗-hTIGIT抗体OMP-313M32(其仅结合人类TIGIT)，同时用于以抗TIGIT抗体313R12及313R19和鼠类肿瘤模式进行的临床前研究。
实施例2
1期研究
设计了OMP-313M32在患有某些局部晚期或转移性肿瘤的患者中的开放标记的1期剂量递增和扩增研究。患者的肿瘤在标准治疗后已经进展，或者患有其中治疗被证明是不可容忍的或被认为是不合适的肿瘤。在登记之前，患者将接受筛查以确定研究资格。研究目的是评估OMP-313M32在患者中的安全性和耐受性；估计OMP-313M32的最大耐受剂量(MTD)；表征OMP-313M32的剂量限制毒性(DLT)；确定推荐的2期OMP-313M32剂量；表征OMP-313M32的药代动力学；表征OMP-313M32的免疫原性潜力；初步评估OMP-313M32的抗肿瘤活性；并对药效学(PD)标志物进行初步评估。
如图2所示，进行剂量递增以确定研究初始期的最大耐受剂量(MTD)或最大给药剂量(MAD)。将OMP-313M32通过静脉输注以0.3、1.0、3、10和15mg/kg的剂量水平每2周施用一次。剂量组内不允许剂量递增或减少。如果没有观察到DLT，则以每个剂量水平治疗3名患者。如果3名患者中有1名患有DLT，则该剂量水平扩大至6名患者。如果2名或更多患者经历DLT，则其他患者不在该水平给药，并且另外3名患者被添加到先前剂量组中，除非6名患者在该剂量水平下进行治疗。评估患者的DLT持续28天(第1天至第29天)。
在该研究的剂量扩展期，患者将以等于OMP-313M32的MTD或MAD的剂量水平登记。扩增期旨在更好地表征OMP-313M32在患有特定肿瘤类型或亚型的患者中的安全性和耐受性，并初步评估OMP-313M32在患有特定肿瘤类型或亚型的患者中的抗肿瘤活性。在剂量扩展期考虑用于评估的肿瘤类型包括但不限于头颈癌、食道/胃食管癌、胃癌、结肠直肠癌，肝细胞癌/肝癌、宫颈癌、肺癌、黑素瘤、Merkel细胞癌、肾细胞癌/肾癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫内膜癌和三阴性乳腺癌。如本文所用，“肺癌”包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌。NSCLC可包括NSCLC鳞状细胞和NSCLC腺癌。结肠直肠癌(CRC)可以包括微卫星不稳定性-高CRC和微卫星稳定CRC。剂量扩展期的患者可能具有对用PD-1拮抗剂(例如，抗PD-1抗体)或PD-L1拮抗剂(例如，抗PD-L1抗体)治疗具有抗性或难治性的肿瘤。剂量扩展期的患者可以是先前已经用PD-1拮抗剂(例如，抗PD-1抗体)或PD-L1拮抗剂(例如，抗PD-L1抗体)治疗的受试者，其中肿瘤生长在治疗期间或之后已经进展(可称为抗PD-1/PD-L1进展者)。
除非存在医学禁忌症，否则在剂量递增和扩增组群登记的所有患者将在治疗之前进行活组织检查，并且在治疗开始后进行至少一次肿瘤活组织检查。将在基线并且在第一次施用OMP-313M32后约2-3周进行活组织检查。可以由研究人员自行决定收集额外的活组织检查。活组织检查方法可包括芯针、穿孔、镊子或切除/切口活组织检查。将在FFPE肿瘤样本中评估TIGIT、PVR、PVRL2、FOXP3和其他免疫标志物的表达。可以评估额外蛋白和基因(例如免疫基因标记)的表达水平并将其与临床益处相关联。
实施例3
通过IHC评估TIGIT蛋白表达
为了研究TIGIT蛋白表达，使用专有的小鼠抗hTIGIT单克隆抗体开发并优化TIGIT免疫组织化学(IHC)测定。切割4微米FFPE切片并将其安装在带正电荷的毛细管间隙载玻片上。将组织脱蜡：通过四次，5分钟更换二甲苯，然后用分级的醇系列至蒸馏水。蒸汽热诱导抗原决定区恢复(SHIER)用SHIER 2溶液(基于柠檬酸盐的缓冲液pH 6.0-6.2)在百得蒸笼(Black and Decker Steamer)的上室中进行20分钟。将载玻片用蛋白酶K酶(1:40稀释)预处理10分钟，并在封闭溶液中温育15分钟以减少非特异性背景染色。将载玻片与抗hTIGIT抗体以1μg/ml温育过夜。为了阻断内源性过氧化物酶活性，将载玻片在过氧化氢中孵育3次，持续2.5分钟，并在PBS中洗涤。使用针对小鼠抗体设计的Polink-2 Plus检测试剂盒并使用DAB和苏木精检测特异性结合。通过辣根过氧化物酶和DAB底物的棕色色原反应产物的存在表明阳性染色。苏木精复染剂提供蓝色核染色以评估细胞和组织形态。
对于在IHC测定(表2)中评估覆盖17种不同癌症类型的一组样品中，TIGIT在肿瘤细胞、肿瘤相关免疫细胞和非肿瘤/基质免疫细胞中的染色。
表2
Figure GDA0002272835790001011
Figure GDA0002272835790001021
对于肿瘤细胞，使用在不同强度下观察到的百分比，评估质膜上的反应性。强度评分包括：0＝无效，1+＝低或弱，2+＝中等，3+＝高或强。在每个强度水平记录的百分比报告为0至100％，以在10％以上增量10，在10％以下增量1计。使用标准H评分方法和百分比评分方法评估肿瘤细胞中TIGIT表达的评分数据。使用细胞的百分比与三点半定量标度(0、1+、2+或3+)的表达强度来计算H评分。因此，得分范围从0到300。H得分＝[(％在1+)×1]+[(％在2+)×2]+[(％在3+)×3]。百分比得分通过将≥1+、≥2+和≥3+的强度百分比求和计算得出。因此得分范围从0到100。百分比得分≥1+＝(％在1+)+(％在2+)+(％在3+)；百分比得分≥2+＝(％在2+)+(％在3+)；百分比得分≥3+＝(％在3+)。
还分析了每个样品在(1)基质/非肿瘤区域和(2)肿瘤内区域或与肿瘤紧密相关区域中的免疫细胞中的TIGIT反应性。使用0-3的丰度标度对免疫细胞反应性进行评分，其中0＝无免疫细胞染色；1＝少量的免疫细胞染色；2＝中等量的免疫细胞染色；3＝大量的免疫细胞染色。
表3中总结了肿瘤相关免疫细胞上TIGIT表达的IHC测定结果。
表3.肿瘤相关免疫细胞上的TIGIT染色
Figure GDA0002272835790001031
总的来说，三阴性乳腺癌、T细胞淋巴瘤、头颈癌和宫颈癌在基质和肿瘤相关免疫细胞中具有最高的染色。与该IHC数据一致，通过RNA-Seq对癌症基因组图谱(TGCA)中的33种肿瘤类型的分析显示TIGIT和T细胞标志物的表达水平的良好相关性。肿瘤细胞质膜上TIGIT染色的总体发生率很低且强度低。这些结果有力地表明TIGIT主要在肿瘤和肿瘤微环境中的免疫细胞上表达。
实施例4
药效学(PD)生物标志物
采用多平台方法研究肿瘤和来自用替代抗TIGIT抗体313R12处理的荷瘤小鼠的匹配全血样品中的抗TIGIT治疗药效学(PD)生物标志物。通过微阵列、免疫化学(IHC)和流式细胞术分析肿瘤组织和匹配的全血样品的免疫细胞流行和功能。
将抗体313R12施用于携带CT26.WT结肠、4T1乳腺或B16F10黑素瘤肿瘤的免疫活性小鼠。这些肿瘤被认为具有不同程度的免疫原性-CT26.WT肿瘤具有高度免疫原性和富含细胞毒性的T细胞；4T1肿瘤具有高免疫原性和免疫抑制作用；而B16F10肿瘤免疫原性差并且免疫沉默。在每个模型中按每周一次处理小鼠。
为了鉴定与功效相关的潜在基因表达PD生物标志物，从3个模型中的每一个的研究终止时收集的肿瘤组织和外周血样品中分离RNA。使用来自以下组的3只动物的样品进行微阵列分析：(1)用0.1mg/kg和12.5mg/kg313R12处理的4T1荷瘤小鼠，(2)用0.1mg/kg和12.5mg/kg 313R12处理的B16F10荷瘤小鼠，(3)用0.1、0.5、2.5和12.5mg/kg 313R12处理的CT26.WT荷瘤小鼠，和(4)对照小鼠。通过微阵列对经处理和对照组织分析全局基因表达水平。检查了免疫细胞相关的基因变化，重点是T细胞、NK细胞和B细胞标志物。通过流式细胞术、Luminex和IHC监测免疫细胞群和细胞因子分泌的变化。
在肿瘤样品中，抗TIGIT处理促进与T细胞、CD8 T细胞、细胞毒性细胞、Th1细胞、NK细胞、Teff细胞和T细胞活化标志物相关的基因的表达增加。通过定量实时PCR(即CD3e、CD8a、Ncr1、Ifn-γ、Gzma和CD266)验证这些基因表达变化。在血液样品中的基因表达变化中观察到类似的结果。这些结果表明PD生物标志物可用于临床以研究抗TIGIT抗体OMP-313M32的靶向活性。
应理解本文所述的实施例及实施方案仅以例证为目的，且根据这些进行的各种修改或变化将提示本领域技术人员且包括在本申请的精神及权限内。
本文所引用的所有公开数据、专利、专利申请、网站及编号/数据库序列(包括多核苷酸和多肽序列)全部都以相同程度的目的以其完整内容通过引用并入本文以供参考，如同每一单个的公开数据、专利、专利申请、网站及编号/数据库序列是经具体且单独地指示而因此通过引用并入。
下面为本申请所公开的序列：
人类TIGIT氨基酸序列(SEQ ID NO:1)
MRWCLLLIWAQGLRQAPLASGMMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPLLGAMAATLVVICTAVIVVVALTRKKKALRIHSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQRGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFTETG
不具有预测信号序列的人类TIGIT氨基酸序列(SEQ ID NO:2)
MMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPLLGAMAATLVVICTAVIVVVALTRKKKALRIHSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQRGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFTETG
人类TIGIT的细胞外结构域氨基酸序列(SEQ ID NO:3)
MMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIP
OMP-313M32/313M33重链CDR1(SEQ ID NO:4)
TSDYAWN
OMP-313M32/313M33重链CDR2(SEQ ID NO:5)
YISYSGSTSYNPSLRS
OMP-313M32/313M33重链CDR3(SEQ ID NO:6)
ARRQVGLGFAY
OMP-313M32/313M33轻链CDR1(SEQ ID NO:7)
KASQDVSTAVA
OMP-313M32/313M33轻链CDR2(SEQ ID NO:8)
SASYRYT
OMP-313M32/313M33轻链CDR3(SEQ ID NO:9)
QQHYSTP
OMP-313M32/313M33重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:10)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCARRQVGLGFAYWGQGTLVTVSS
OMP-313M32/313M33轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO:11)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPWTFG
具有下划线的预测信号序列的OMP-313M32重链(IgG1)氨基酸序列(SEQ ID NO:12)
MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCARRQVGLGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
无信号序列的OMP-313M32重链(IgG1)氨基酸序列(SEQ ID NO:13)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCARRQVGLGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
具有带下划线的预测信号序列的OMP-313M32/313M33轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:14)
MVLQTQVFISLLLWISGAYGDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSNTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
无信号序列的OMP-313M32/313M33轻链氨基酸序列(SEQ ID NO:15)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQHYSTPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSNTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
具有带下划线的预测信号序列的313M33重链(IgG4)氨基酸序列(SEQ ID NO:16)
MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCARRQVGLGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
无信号序列的313M33重链(IgG4)氨基酸序列(SEQ ID NO:17)
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSITSDYAWNWIRQPPGKGLEWIGYISYSGSTSYNPSLRSRVTISRDTSKNQFFLKLSSVTAADTAVYYCARRQVGLGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
OMP-313M32/313M33重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:18)
CAGGTCCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCTCCGATTATGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGTACATAAGCTACTCTGGTAGCACTAGCTACAACCCATCTCTCCGGTCACGGGTCACAATATCACGGGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCTGACACCGCCGTGTATTACTGTGCAAGGAGACAGGTCGGGCTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCAGCTCA
OMP-313M32/313M33轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO:19)
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGGCTTCTCAGGATGTGTCTACTGCTGTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACTCTGCATCCTATCGGTACACTGGGGTCCCATCAAGGTTCTCCGGATCTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAACATTATTCTACTCCTTGGACATTCGGC
OMP-313M32重链(IgG1)核苷酸序列(SEQ ID NO:20)
ATGGACTGGACCTGGAGGATACTCTTTCTCGTGGCTGCAGCCACAGGAGCCCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCTCCGATTATGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGTACATAAGCTACTCTGGTAGCACTAGCTACAACCCATCTCTCCGGTCACGGGTCACAATATCACGGGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCTGACACCGCCGTGTATTACTGTGCAAGGAGACAGGTCGGGCTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCAGCTCAGCCAGCACAAAGGGCCCCTCCGTGTTCCCTCTGGCCCCTTCCTCCAAGTCCACCTCCGGCGGCACCGCCGCTCTGGGCTGCCTGGTGAAGGACTACTTCCCTGAGCCTGTGACCGTGTCCTGGAACTCTGGCGCCCTGACCTCTGGCGTGCACACCTTCCCAGCCGTGCTGCAGTCCTCCGGCCTGTACTCCCTGTCCTCCGTGGTGACCGTGCCTTCCTCCTCCCTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAACCACAAGCCTTCCAACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAGCCTAAGTCCTGCGACAAGACCCACACCTGCCCTCCCTGCCCTGCCCCTGAGCTGCTGGGCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTCCCTCCTAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTGACCTGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCACGAGGATCCTGAGGTGAAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCACAACGCTAAGACCAAGCCAAGGGAGGAGCAGTACAACTCCACCTACCGGGTGGTGTCTGTGCTGACCGTGCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAATACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAGGCCCTGCCCGCTCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCTCGCGAGCCTCAGGTGTACACCCTGCCACCCAGCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGTGGAGTGGGAGTCTAACGGCCAGCCCGAGAACAACTACAAGACCACCCCTCCTGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTGTACTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCCGGTGGCAGCAGGGCAACGTGTTCTCCTGCTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGAGCCTGTCTCTGTCTCCTGGCAAGTGA
OMP-313M32/313M33轻链核苷酸序列(SEQ ID NO:21)
ATGGTGCTCCAGACCCAGGTCTTCATTTCCCTGCTGCTCTGGATCAGCGGAGCCTACGGGGACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTTGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAGGCTTCTCAGGATGTGTCTACTGCTGTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACTCTGCATCCTATCGGTACACTGGGGTCCCATCAAGGTTCTCCGGATCTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAACATTATTCTACTCCTTGGACATTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCTCCATCTGATGAGCAGCTCAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTCCAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCCGGCAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAACACCCTGACACTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTATGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGTCTTCCCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGCTAA
313M33重链(IgG4)核苷酸序列(SEQ ID NO:22)
ATGGACTGGACCTGGAGGATACTCTTTCTCGTGGCTGCAGCCACAGGAGCCCACTCCCAGGTCCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCTGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTCTGGTTACTCCATCACCTCCGATTATGCCTGGAACTGGATTCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGTACATAAGCTACTCTGGTAGCACTAGCTACAACCCATCTCTCCGGTCACGGGTCACAATATCACGGGACACATCCAAGAACCAGTTCTTCCTGAAGCTGTCCTCTGTGACCGCCGCTGACACCGCCGTGTATTACTGTGCAAGGAGACAGGTCGGGCTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCAGCTCAGCCAGCACAAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCACCCTGCTCCCGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCCGTTACCGTGTCTTGGAACTCCGGCGCACTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCTGCTGTCCTCCAATCCTCTGGACTCTACTCCCTCTCCTCCGTGGTGACAGTGCCCTCCAGCAGCCTGGGCACTAAGACCTACACCTGCAACGTCGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGACCCCCATGCCCACCTTGCCCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACTTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTATGTGGATGGCGTGGAGGTTCATAATGCCAAGACAAAGCCTCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACCTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGGCTCCCATCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGGGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAAGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACTCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACTCCCGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGGAGGGCAATGTCTTCTCCTGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGCAAATGA
人类IgG1重链恒定区(SEQ ID NO:23)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人类IgG2重链恒定区(SEQ ID NO:24)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
人类IgG3重链恒定区(SEQ ID NO:25)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
人类IgG4重链恒定区(SEQ ID NO:26)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
人类TIGIT氨基酸55-70(SEQ ID NO:27)
TQVNWEQQDQLLAICN
人类TIGIT氨基酸105-122(SEQ ID NO:28)
EYFCIYHTYPDGTYTGRI
FLAG标签(SEQ ID NO:29)
DYKDDDDK
序列表
<110> 昂科梅德制药有限公司
<120> 包含TIGIT结合剂的癌症治疗方法
<130> 2293.164PC02/PAC/E-H/M-S
<150> US 62/479,609
<151> 2017-03-31
<150> US 62/427,903
<151> 2016-11-30
<160> 29
<170> PatentIn版本3.5(PatentIn version 3.5)
<210> 1
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人TIGIT氨基酸序列(Human TIGIT amino acid sequence)
<400> 1
Met Arg Trp Cys Leu Leu Leu Ile Trp Ala Gln Gly Leu Arg Gln Ala
1 5 10 15
Pro Leu Ala Ser Gly Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn
20 25 30
Ile Ser Ala Glu Lys Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser
35 40 45
Ser Thr Thr Ala Gln Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln
50 55 60
Leu Leu Ala Ile Cys Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser
65 70 75 80
Phe Lys Asp Arg Val Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln
85 90 95
Ser Leu Thr Val Asn Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr
100 105 110
Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu
115 120 125
Ser Ser Val Ala Glu His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly
130 135 140
Ala Met Ala Ala Thr Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val
145 150 155 160
Val Ala Leu Thr Arg Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu
165 170 175
Gly Asp Leu Arg Arg Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser
180 185 190
Ala Pro Ser Pro Pro Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala
195 200 205
Gly Leu Cys Gly Glu Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp
210 215 220
Tyr Phe Asn Val Leu Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe
225 230 235 240
Thr Glu Thr Gly
<210> 2
<211> 223
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 不具有预测信号序列的人类TIGIT氨基酸序列(Human TIGIT amino acidsequence without predicted signal sequence)
<400> 2
Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Glu Lys
1 5 10 15
Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln
20 25 30
Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys
35 40 45
Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys Asp Arg Val
50 55 60
Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val Asn
65 70 75 80
Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr
85 90 95
Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu
100 105 110
His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro Leu Leu Gly Ala Met Ala Ala Thr
115 120 125
Leu Val Val Ile Cys Thr Ala Val Ile Val Val Val Ala Leu Thr Arg
130 135 140
Lys Lys Lys Ala Leu Arg Ile His Ser Val Glu Gly Asp Leu Arg Arg
145 150 155 160
Lys Ser Ala Gly Gln Glu Glu Trp Ser Pro Ser Ala Pro Ser Pro Pro
165 170 175
Gly Ser Cys Val Gln Ala Glu Ala Ala Pro Ala Gly Leu Cys Gly Glu
180 185 190
Gln Arg Gly Glu Asp Cys Ala Glu Leu His Asp Tyr Phe Asn Val Leu
195 200 205
Ser Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Cys Ser Phe Phe Thr Glu Thr Gly
210 215 220
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类TIGIT的细胞外结构域氨基酸序列(Human TIGIT extracellular domainamino acid sequence)
<400> 3
Met Met Thr Gly Thr Ile Glu Thr Thr Gly Asn Ile Ser Ala Glu Lys
1 5 10 15
Gly Gly Ser Ile Ile Leu Gln Cys His Leu Ser Ser Thr Thr Ala Gln
20 25 30
Val Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys
35 40 45
Asn Ala Asp Leu Gly Trp His Ile Ser Pro Ser Phe Lys Asp Arg Val
50 55 60
Ala Pro Gly Pro Gly Leu Gly Leu Thr Leu Gln Ser Leu Thr Val Asn
65 70 75 80
Asp Thr Gly Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr
85 90 95
Tyr Thr Gly Arg Ile Phe Leu Glu Val Leu Glu Ser Ser Val Ala Glu
100 105 110
His Gly Ala Arg Phe Gln Ile Pro
115 120
<210> 4
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33 重链 CDR1(OMP-313M32/313M33 Heavy chain CDR1)
<400> 4
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 5
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33 重链 CDR2 (OMP-313M32/313M33 Heavy chain CDR2)
<400> 5
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser
1 5 10 15
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33 重链 CDR3(OMP-313M32/313M33 Heavy chain CDR3)
<400> 6
Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33轻链CDR1(OMP-313M32/313M33 Light chain CDR1)
<400> 7
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33 轻链 CDR2(OMP-313M32/313M33 Light chain CDR2)
<400> 8
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
1 5
<210> 9
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33 轻链 CDR3(OMP-313M32/313M33 Light chain CDR3)
<400> 9
Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro
1 5
<210> 10
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33重链可变区氨基酸序列(OMP-313M32/313M33 Heavy chainvariable region amino acid sequence)
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 99
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33轻链可变区氨基酸序列(OMP-313M32/313M33 Light chainvariable region amino acid sequence)
<400> 11
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly
<210> 12
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有预测信号序列的OMP-313M32重链(IgG1)氨基酸序列(OMP-313M32 Heavychain (IgG1) amino acid sequence with predicted
signal sequence)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(19)
<223> 预测信号序列(predicted signal sequence)
<400> 12
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys
465
<210> 13
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无信号序列的OMP-313M32重链(IgG1)氨基酸序列(OMP-313M32 Heavy chain(IgG1) amino acid sequence without signal
sequence)
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 14
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有预测信号序列的OMP-313M32/313M33轻链氨基酸序列 (OMP-313M32/313M33 Light chain amino acid sequence with predicted
signal sequence)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(20)
<223> 预测信号序列(predicted signal sequence)
<400> 14
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
100 105 110
Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 15
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无信号序列的OMP-313M32/313M33轻链氨基酸序列(OMP-313M32/313M33 Lightchain amino acid sequence without signal
sequence)
<400> 15
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Asn Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 16
<211> 464
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 具有预测信号序列的313M33重链(IgG4)氨基酸序列(313M33 Heavy chain(IgG4) amino acid sequence with predicted
signal sequence)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(19)
<223> 预测信号序列(predicted signal sequence)
<400> 16
Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys
20 25 30
Pro Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile
35 40 45
Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn
65 70 75 80
Pro Ser Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn
85 90 95
Gln Phe Phe Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
180 185 190
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
245 250 255
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
260 265 270
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
275 280 285
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
340 345 350
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
355 360 365
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
385 390 395 400
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
420 425 430
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
450 455 460
<210> 17
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 无信号序列的313M33重链(IgG4)氨基酸序列(313M33 Heavy chain (IgG4)amino acid sequence without signal
sequence)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gln Val Gly Leu Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
210 215 220
Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 18
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33重链可变区核苷酸序列(OMP-313M32/313M33 Heavy chainvariable region nucleotide sequence)
<400> 18
caggtccagc tgcaggagtc tggcccagga ctggtgaagc cttctgagac cctgtccctc 60
acctgcgctg tctctggtta ctccatcacc tccgattatg cctggaactg gattcggcag 120
cccccaggga aggggctgga gtggattggg tacataagct actctggtag cactagctac 180
aacccatctc tccggtcacg ggtcacaata tcacgggaca catccaagaa ccagttcttc 240
ctgaagctgt cctctgtgac cgccgctgac accgccgtgt attactgtgc aaggagacag 300
gtcgggctgg ggtttgctta ctggggccaa ggaaccctgg tcaccgtcag ctca 354
<210> 19
<211> 297
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33轻链可变区核苷酸序列(OMP-313M32/313M33 Light chainvariable region nucleotide sequence)
<400> 19
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aggcttctca ggatgtgtct actgctgttg cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctactct gcatcctatc ggtacactgg ggtcccatca 180
aggttctccg gatctggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatattg caacatatta ctgtcagcaa cattattcta ctccttggac attcggc 297
<210> 20
<211> 1404
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32重链(IgG1)核苷酸序列(OMP-313M32 Heavy chain (IgG1)nucleotide sequence)
<400> 20
atggactgga cctggaggat actctttctc gtggctgcag ccacaggagc ccactcccag 60
gtccagctgc aggagtctgg cccaggactg gtgaagcctt ctgagaccct gtccctcacc 120
tgcgctgtct ctggttactc catcacctcc gattatgcct ggaactggat tcggcagccc 180
ccagggaagg ggctggagtg gattgggtac ataagctact ctggtagcac tagctacaac 240
ccatctctcc ggtcacgggt cacaatatca cgggacacat ccaagaacca gttcttcctg 300
aagctgtcct ctgtgaccgc cgctgacacc gccgtgtatt actgtgcaag gagacaggtc 360
gggctggggt ttgcttactg gggccaagga accctggtca ccgtcagctc agccagcaca 420
aagggcccct ccgtgttccc tctggcccct tcctccaagt ccacctccgg cggcaccgcc 480
gctctgggct gcctggtgaa ggactacttc cctgagcctg tgaccgtgtc ctggaactct 540
ggcgccctga cctctggcgt gcacaccttc ccagccgtgc tgcagtcctc cggcctgtac 600
tccctgtcct ccgtggtgac cgtgccttcc tcctccctgg gcacccagac ctacatctgc 660
aacgtgaacc acaagccttc caacaccaag gtggacaagc gggtggagcc taagtcctgc 720
gacaagaccc acacctgccc tccctgccct gcccctgagc tgctgggcgg accttccgtg 780
ttcctgttcc ctcctaagcc taaggacacc ctgatgatct cccggacccc tgaggtgacc 840
tgcgtggtgg tggacgtgtc ccacgaggat cctgaggtga agttcaattg gtacgtggac 900
ggcgtggagg tgcacaacgc taagaccaag ccaagggagg agcagtacaa ctccacctac 960
cgggtggtgt ctgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa agaatacaag 1020
tgcaaggtct ccaacaaggc cctgcccgct cccatcgaga aaaccatctc caaggccaag 1080
ggccagcctc gcgagcctca ggtgtacacc ctgccaccca gccgggagga gatgaccaag 1140
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtgaag ggcttctacc cttccgatat cgccgtggag 1200
tgggagtcta acggccagcc cgagaacaac tacaagacca cccctcctgt gctggactcc 1260
gacggctcct tcttcctgta ctccaagctg accgtggaca agtcccggtg gcagcagggc 1320
aacgtgttct cctgctccgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagagc 1380
ctgtctctgt ctcctggcaa gtga 1404
<210> 21
<211> 705
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> OMP-313M32/313M33轻链核苷酸序列(OMP-313M32/313M33 Light chainnucleotide sequence)
<400> 21
atggtgctcc agacccaggt cttcatttcc ctgctgctct ggatcagcgg agcctacggg 60
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 120
atcacttgca aggcttctca ggatgtgtct actgctgttg cctggtatca gcagaaacca 180
gggaaagccc ctaagctcct gatctactct gcatcctatc ggtacactgg ggtcccatca 240
aggttctccg gatctggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 300
gaagatattg caacatatta ctgtcagcaa cattattcta ctccttggac attcggccaa 360
gggaccaagg tggaaatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttccctcca 420
tctgatgagc agctcaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 480
cccagagagg ccaaagtcca gtggaaggtg gataacgccc tccaatccgg caactcccag 540
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcaa caccctgaca 600
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctatgcct gcgaagtcac ccatcagggc 660
ctgtcttccc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gctaa 705
<210> 22
<211> 1395
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 313M33重链(IgG4)核苷酸序列(313M33 Heavy chain (IgG4) nucleotidesequence)
<400> 22
atggactgga cctggaggat actctttctc gtggctgcag ccacaggagc ccactcccag 60
gtccagctgc aggagtctgg cccaggactg gtgaagcctt ctgagaccct gtccctcacc 120
tgcgctgtct ctggttactc catcacctcc gattatgcct ggaactggat tcggcagccc 180
ccagggaagg ggctggagtg gattgggtac ataagctact ctggtagcac tagctacaac 240
ccatctctcc ggtcacgggt cacaatatca cgggacacat ccaagaacca gttcttcctg 300
aagctgtcct ctgtgaccgc cgctgacacc gccgtgtatt actgtgcaag gagacaggtc 360
gggctggggt ttgcttactg gggccaagga accctggtca ccgtcagctc agccagcaca 420
aagggcccat ccgtcttccc cctggcaccc tgctcccgga gcacctccga gagcacagcc 480
gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaacccg ttaccgtgtc ttggaactcc 540
ggcgcactga ccagcggcgt gcacaccttc cctgctgtcc tccaatcctc tggactctac 600
tccctctcct ccgtggtgac agtgccctcc agcagcctgg gcactaagac ctacacctgc 660
aacgtcgatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagttgagtc caaatatgga 720
cccccatgcc caccttgccc agcacctgag ttcctggggg gaccatcagt cttcctgttc 780
cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac ttgcgtggtg 840
gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtatgtgga tggcgtggag 900
gttcataatg ccaagacaaa gcctcgggag gagcagttca acagcaccta ccgggtggtc 960
agcgtcctca ccgtcctgca ccaagactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 1020
tccaacaaag ggctcccatc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc 1080
cgggagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaagagg agatgaccaa gaaccaagtg 1140
tccctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1200
aatgggcagc ctgagaacaa ctacaagacc actcctcccg tgctggactc cgacggctcc 1260
ttcttcctct actcccggct caccgtggac aagagcaggt ggcaggaggg caatgtcttc 1320
tcctgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cacagaagag cctctccctg 1380
tctctgggca aatga 1395
<210> 23
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类IgG1重链恒定区(Human IgG1 Heavy chain constant region)
<400> 23
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 24
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类IgG2重链恒定区(Human IgG2 Heavy chain constant region)
<400> 24
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 25
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类IgG3重链恒定区(Human IgG3 Heavy chain constant region)
<400> 25
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 26
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类IgG4重链恒定区(Human IgG4 Heavy chain constant region)
<400> 26
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 27
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类TIGIT氨基酸55-70(Human TIGIT amino acids 55-70)
<400> 27
Thr Gln Val Asn Trp Glu Gln Gln Asp Gln Leu Leu Ala Ile Cys Asn
1 5 10 15
<210> 28
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人类TIGIT氨基酸105-122(Human TIGIT amino acids 105-122)
<400> 28
Glu Tyr Phe Cys Ile Tyr His Thr Tyr Pro Asp Gly Thr Tyr Thr Gly
1 5 10 15
Arg Ile
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FLAG标签(FLAG Tag)
<400> 29
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
1 5

Claims (51)

1.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
2.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中，所述肿瘤是微卫星不稳定性-高结肠直肠癌、微卫星稳定结肠直肠癌、三阴性乳腺癌、Merkel细胞癌、子宫内膜癌或食道癌；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
3.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中，所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗具有抗性或难治性；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
4.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中，所述肿瘤对用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗具有抗性或难治性；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
5.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
6.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中所述受试者先前已经用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂作为单一剂治疗；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
7.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中，所述肿瘤表达脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和/或脊髓灰质炎病毒受体相关2(PVRL2)；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
8.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中，所述肿瘤表达脊髓灰质炎病毒受体(PVR)和/或脊髓灰质炎病毒受体相关2(PVRL2)；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
9.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中，所述肿瘤包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
10.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中，所述肿瘤包括肿瘤浸润淋巴细胞；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
11.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中，所述肿瘤包括调节性T细胞；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
12.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体与PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂的组合，
其中，所述肿瘤包括调节性T细胞；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
13.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其中在用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗期间或之后存在肿瘤生长进展。
14.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其中在用PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂治疗后存在肿瘤生长复发。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述肿瘤复发是局部复发、区域复发或远处复发。
16.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述肿瘤对用抗PD-1抗体治疗具有抗性或难治性。
17.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中所述肿瘤对用抗PD-L1抗体治疗具有抗性或难治性。
18.根据权利要求5或权利要求6所述的方法，其中所述受试者先前已经用抗PD-1抗体治疗。
19.根据权利要求5或权利要求6所述的方法，其中所述受试者先前已经用抗PD-L1抗体治疗。
20.根据权利要求2、4、6、8、10或12中任一项所述的方法，其中所述组合疗法包含抗PD-1抗体。
21.根据权利要求2、4、6、8、10或12中任一项所述的方法，其中所述组合疗法包含抗PD-L1抗体。
22.根据权利要求3-21中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自：肺肿瘤、肝肿瘤、乳腺肿瘤、肾细胞癌/肾肿瘤、前列腺肿瘤、胃肠/胃肿瘤、黑素瘤、宫颈肿瘤、膀胱肿瘤、胶质母细胞瘤、头颈肿瘤、胰腺肿瘤、卵巢肿瘤、结肠直肠肿瘤、子宫内膜肿瘤和食道肿瘤。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有SEQ ID NO：10的重链可变区和含有SEQ ID NO：11的轻链可变区。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体是单克隆抗体。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体是双特异性抗体。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体是包含抗原结合位点的抗体片段。
27.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体是IgG1抗体。
28.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体是IgG4抗体。
29.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体包含SEQID NO：13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：15的轻链氨基酸序列。
30.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体包含SEQID NO：17的重链氨基酸序列和SEQ ID NO：15的轻链氨基酸序列。
31.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体包含由保藏于ATCC的编号为PTA-122346的质粒编码的重链可变区的质粒编码的重链可变区和保藏于ATCC的编号为PTA-122347的质粒编码的轻链可变区。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其增加所述肿瘤和/或所述肿瘤微环境内的T效应细胞。
33.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其增加所述肿瘤和/或所述肿瘤微环境中的T效应细胞活性。
34.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其消耗所述肿瘤和/或所述肿瘤微环境中的调节性T细胞。
35.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，其抑制和/或降低所述肿瘤和/或所述肿瘤微环境中的Treg的抑制活性。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次或每四周施用一次。
37.根据权利要求36的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体约每两周施用一次或每三周施用一次。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体以约0.1mg/kg至约25mg/kg的剂量施用。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述结合人类TIGIT的抗体以约0.3mg/kg、约1mg/kg、约3mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其进一步包括施用至少一种另外的治疗剂。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述另外的治疗剂是化学治疗剂。
42.根据权利要求40所述的方法，其中所述另外的治疗剂是抗体。
43.根据权利要求40所述的方法，其中所述另外的治疗剂是免疫治疗剂。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述免疫治疗剂选自：GM-CSF、M-CSF、G-CSF、IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、4-1BB配体、GITRL、OX40L、CD40L、抗CD3抗体、抗CTLA-4抗体、抗GITR抗体、抗OX40抗体、抗4-1BB抗体、抗LAG-3抗体和抗TIM-3抗体。
45.根据权利要求40所述的方法，其中所述另外的治疗剂是Notch途径、Wnt途径或RSPO/LGR途径的抑制剂。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的方法，其中所述受试者患有至少部分被除去的肿瘤或癌症。
47.一种抑制受试者的肿瘤生长的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体，
其中所述肿瘤是头颈癌、食道/胃食管癌、胃癌、结肠直肠癌、肛门癌、肝细胞癌/肝癌、宫颈癌、肺癌、黑色素瘤、Merkel细胞癌、肾细胞癌/肾癌、膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫内膜癌和三阴性乳腺癌、已知的MSI高实体瘤(包括MSI CRC)或MSS结肠直肠癌；
其中所述肿瘤对用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗具有抗性或难治性；并且
其中所述结合人类TIGIT的抗体包含含有TSDYAWN(SEQ ID NO:4)的重链CDR1、含有YISYSGSTSYNPSLRS(SEQ ID NO:5)的重链CDR2、含有ARRQVGLGFAY(SEQ ID NO:6)的重链CDR3、含有KASQDVSTAVA(SEQ ID NO:7)的轻链CDR1、含有SASYRYT(SEQ ID NO:8)的轻链CDR2和含有QQHYSTP(SEQ ID NO:9)的轻链CDR3。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述受试者先前已经用抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体治疗。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的方法，其中所述特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体以约0.1mg/kg、约0.3mg/kg、约1mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约5mg/kg、约7.5kg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用于受试者。
50.根据权利要求1-49中任一项所述的方法，其中所述特异性结合人类TIGIT的细胞外结构域的抗体每周施用一次、每两周施用一次、每三周施用一次或每四周施用一次。
51.根据权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述受试者具有组织学证实的晚期复发或难治性实体瘤。
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