CZ2003353A3

CZ2003353A3 - Estery steroidních thiokyselin

Info

Publication number: CZ2003353A3
Application number: CZ2003353A
Authority: CZ
Inventors: Keith Biggadike; Paul Jones; Jeremy John Payne
Original assignee: Glaxo Group Limited
Priority date: 2000-08-05
Filing date: 2001-08-03
Publication date: 2003-05-14
Also published as: PT2348032E; FR08C0014I2; KR20030071751A; HUS1600012I1; EP1305330A1; BR0113042A; DK1305329T4; EP1775305A2; NO20030549L; WO2002012266A1; ES2292604T3; EP1305330B1; EP2067784A3; PL213373B1; AR032471A1; SI2348032T1; AR063555A1; LU91429I9; WO2002012265A1; EP1775305B1

Description

Estery steroidních thiokyselin

Oblast techniky

Vynález se týká skupiny nových protizánětlivých a antialergických sloučenin androstanové řady a způsobu těchto látek. Vynález se rovněž týká farmaceutických prostředků, které takové látky obsahují a jejich léčebného použití, zvláště při léčení zánětů a alergických stavů.

Dosavadní stav techniky t‘K i

(. t

Glukokortikoidy s protizánětlivými účinky jsou známé a jsou široce využívány pro léčení zánětlivých poruch nebo onemocnění, jako jsou asthma a rýma. Například v dokumentu US 4335121 se popisuje 6a,9a-difluor-17a-(1-oxopropoxy)-llp-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-dien-17p-karbothiokyselina ve formě S-fluormethylesteru, tato látka je známa pod názvem fluticasonpropionát, popsány jsou také deriváty této látky. Použití glukokortikoidů je obecně a zvláště u dětí omezeno vzhledem k potenciální možnosti vzniku vedlejších příznaků. Těmito vedlejšími příznaky mohou být například potlačení osy hypothalamus-hypofýza-nadledvinky (ΗΡΑ), nepříznivé účinky na růst kostí u dětí a na hustotu kostní tkáně u starších lidí, oční komplikace, jako tvorba šedého zákalu nebo vznik glaukomu a atrofie pokožky. Některé glukokortikoidní sloučeniny mají také složitý metabolismus, při němž může dojít ke tvorbě účinných metabolitů a farmakodynamika a farmakokinetika těchto látek je příliš složitá na možnost předpovědi vedlejších příznaků. I když v poslední době jsou nové i-

steroidní látky daleko bezpečnější než látky, které byly používány na začátku, bylo by stále zapotřebí mít k dispozici nové látky s dobrými protizánětlivými účinky a s předpovídatelnými farmakokinetickými a farmakodynamickými vlastnostmi a s malým množstvím vedlejších účinků tak, aby umožňovaly snadné použití.

Podstata vynálezu

Nyní byla identifikována skupina nových glukokortikoidních sloučenin, které v podstatě splňují svrchu uvedené požadavky.

Podstatu vynálezu tvoří estery steroidních thiokyselin obecného vzorce I

c.

kde

Ri' znamená Cl-C6alkyl nebo Cl-C6halogenalkyl,

R₂ znamená -C(=O)-aryl nebo -C(=0)-heteroaryl,

R₃ znamená atom vodíku, methyl, (v konfiguraci a nebo β) nebo methylenovou skupinu,

R₄ a R₅, stejné nebo odlišné znamenají atom vodíku nebo atom halogenu a přerušovaná čára označuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu, jakož i soli a solváty těchto látek.

i

(* f

ϊ

í

Pod pojmem „aryl se rozumí fenyl, popřípadě substituovaný jedním nebo větším počtem substituentů.

Heteroarylová skupina zahrnuje 5- nebo 6-členné heterocyklické aromatické kruhy, obsahující 1 až 3 heteroatomy ze skupiny N, 0 a S, jde tedy například o pyridinyl, pyrimidinyl, thienyl, jako thien-2-yl nebo thien-3-yl, furanyl, jako furan-2-yl nebo furan-3-yl, pyrrolyl, jako lH-pyrrol-2-yl, oxazolyl, thiadiazolyl, jako 1,2,3-thiadiazol-5-yl, 1,2,5-thiadiazol-3-yl nebo

1.2.3- thiadiazol-4-yl. V jednom z možných provedení je heterocyklickou skupinou s výhodou thiofenyl, pyrrolyl nebo furanyl a zvláště thiofenyl nebo furanyl. Dalšími příklady vhodných skupin mohou být thiazolyl, jako

1.3- thiazolyl-5-yl nebo 1,3-thiazolyl-4-yl, isoxazolyl, jako isoxazol-5-yl nebo isoxazol-4-yl, isothiazolyl, jako isothiazol-3-yl nebo isothiazol-5-yl, pyrazolyl, jako lH-pyrazol-5-yl a imidazolyl, jako lH-imidazol-5-yl.

Všechny uvedené heterocyklické skupiny mohou být substituovány jedním nebo větším počtem, například jedním nebo dvěma substituenty.

Jako příklad substituentů pro arylové a heteroarylové skupiny je možno uvést Cl-C6alkyl, například methyl nebo atom halogenu, jako chloru nebo bromu. Další příklady možných substituentů zahrnují Cl-C6alkoxyskupiny, například methoxyskupinu nebo ethoxyskupinu.

Příkladem substituované furanylové skupiny může být

3-methylfuran-2-yl, 5-bromfuran-2-yl, 2-methylfuran-3-yl fe· t·

a 2,5-dimethylfuran-3-yl. Jako příklady substituované thienylové skupiny je možno uvést 3-methylthien-2-yl,

5-methylthien-2-yl, 5-chlorthien-2-yl, 3-chlorthien-2-yl,

3- bromthien-2-yl, 3-ethoxythien-2-yl, 4-methoxythien-3-yl, 2,5-dichlorthien-3-yl a 4-methoxy-5-chlorthien-3-yl. Jako příklad substituované pyrrolylové skupiny je možno uvést 1-methyl-IH-pyrrol-2-yl. Jako příklady substituované thiazolylové skupiny je možno uvést

4- methyl-l,3-thiazol-5-yl, 2,4-dimethyl-1,3-thiazol-5-yl a 2-methyl-l,3-thiazol-4-yl. Příkladem substituované thiadiazolylové skupiny může být 4-methyl-l,2,3-thiadiazol-5-yl. Příklad substituované oxazolylové skupiny může být 3-methylisoxazol-5-yl, 5-methylisoxazol-3-yl, 5-methylisoxazol-4-yl a 3,5-dimethylisoxazol-4-yl. Příkladem substituované pyrazolylové skupiny může být

1,3-dimethyl-ΙΗ-pyrazol-5-yl a 1-ethyl-3-methyl-1H-pyrazol-5-yl. Jako příklad substituované imidazolylové skupiny lze uvést 1-methyl-1H-imidazol-5-yl.

Příkladem solvátů sloučeniny podle vynálezu mohou být hydráty.

Příkladem solí sloučenin obecného vzorce I mohou být fyziologicky přijatelné soli, které je možno vytvářet s bazickými sloučeninami, například v příkladě, že heteroarylová skupina má bazickou povahu. Může jít například o acetáty, benzoáty, citráty, jantarany, mléčnany, vinany, fumaráty a maleáty.

V případě, že se uvádí sloučenina podle vynálezu, zahrnuje tento pojem jak sloučeniny obecného vzorce I, tak jejich soli a solváty, zvláště farmaceuticky přijatelné soli a solváty.

• ·· ·

Je zřejmé, že do rozsahu vynálezu spadají také všechny stereoisomery sloučenin obecného vzorce I a jejich směsi.

Absolutní stereochemie s výhodou odpovídá obecnému vzorci I.

Příkladem Cl-C6halogenalkylové skupiny ve významu Ri může být Cl-C6alkyl, substituovaný 1 až 3 atomy halogenu, s výhodou jedním atomem halogenu. Výhodným atomem halogenu je atom bromu, chloru a fluoru. Příkladem Cl-C6alkylové skupiny ve významu R_x může být methyl.

Ve výhodném provedení vynálezu R_x znamená fluormethyl, chlormethyl, brommethyl nebo 2'-fluorethyl, zvláště fluormethyl.

Ve výhodném provedení R₂ znamená -C(=0)-heteroaryl. Heteroarylovou skupinou je -s výhodou 5-členný heterocyklický aromatický kruh, obsahující 1 až 3 heteroatomy ze skupiny 0, N a S, popřípadě substituovaný. Ve výhodném provedení znamená heteroaryl furanyolovou, pyrrolylovou nebo thiofenylovou skupinu, zvláště výhodně jde o furanyl nebo thiofenyl, například 2-furanyl, 3-furanyl, 2-thiofenyl nebo 3-thiofenyl, nejvýhodnější je furanyl, zvláště 2-furanyl. Heteroarylová skupina však může v dalším výhodném provedení znamenat také pyrrolyl nebo thiofenyl, zvláště thiofenyl, jako 2-thiofenyl nebo 3-thiofenyl, přičemž uvedené zbytky jsou popřípadě substituovány.

Velmi zajímavé jsou sloučeniny, v nichž heteroarylovou skupinou je 5-členný heterocyklický aromatický kruh, obsahující 2 heteroatomy ze skupiny 0, N a S. Jde o skupinu výhodných sloučenin, v nichž podskupinu tvoří látky, v nichž R₂ znamená thiazolyl, , popřípadě substituovaný. V další výhodné skupině sloučenin R₂ znamená isothiazolyl, popřípadě _f<( substituovaný. Další skupinu výhodných sloučenin tvoří látky, v nichž R₂ znamená pyrazolyl, popřípadě substituovaný. Ještě další skupinu výhodných látek tvoří sloučeniny, v nichž R₂ znamená isoxazolyl, popřípadě V « substituovaný. V další skupině výhodných látek R₂ znamená isothiazolyl, popřípadě substituovaný. Ještě další « výhodnou skupinu tvoří sloučeniny, v nichž R₂ znamená imidazolyl, popřípadě substituovaný.

Zvláštní význam mají sloučeniny, v nichž heteroaryl znamená 5-členný heterocyklický aromatický kruh, obsahující 3 heteroatomy ze skupiny 0, N a S. V další skupině výhodných látek tedy R₂ znamená thiadiazolyl, popřípadě substituovaný.

Sloučeniny, v nichž R₂ znamená -C(=0)-aryl, kde 7 arylovou skupinou je s výhodou fenyl, jsou rovněž velmi cennými látkami.

„ _f Výhodným významem pro R₃ je methyl, zvláště v

J konfiguraci a. Sloučeniny, v nichž R₃ znamená methyl v konfiguraci β, jsou však rovněž velmi zajímavé látky.

Sloučeniny obecného vzorce I, v němž R₄ a R₅, stejné nebo odlišné, znamenají atom vodíku, fluoru nebo chloru, zvláště atom vodíku nebo fluoru jsou výhodnými látkami

- A

podle vynálezu. Zvláště výhodné jsou ty látky, v nichž R₄ i R₅ znamená atom fluoru.

Přerušovaná čára s výhodou znamená dvojnou vazbu..

, Sloučeniny, v nichž přerušovaná čára označuje jednoduchou vazbu, jsou však také velmi zajímavé.

Zvláště výhodnou skupinu sloučenin podle vynálezu tvoří ty látky obecného vzorce I, v nichž Rx znamená fluormethyl, R₂ znamená -C(=0)-2-furanyl, R3 znamená í, methyl, R₄ a R₅ stejné nebo odlišné znamenají atom vodíku nebo fluoru, zvláště atom fluoru a přerušovaná čára & znamená jednoduchou nebo dvojnou vazbu.

Je zřejmé, že vynález zahrnuje všechny sloučeniny s uvedenými výhodnými kombinacemi jednotlivých substituentů.

Z výhodných sloučenin obecného vzorce I je možno uvést zejména následující látky:

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy]-11β-hydroxy-16a-methyl-3 ť

-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-17a- [ (3 <

_} -furanylkarbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3_a* -oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny, * S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(2-thienylkarbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (3-thienylkarbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 17α- (benzoyl) oxy-6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l, 4-άίεη-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 9a-fluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy]- 11β-hydroxy-16β-methyl-3-oxoandrost a-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny a

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl) oxy] -llp-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrost-4-en-17p-karbothiokyseliny, nebo soli a solváty těchto látek.

Zvláště výhodnými sloučeninami obecného vzorce I jsou následující látky:.

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy] -lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p~karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(3-furanylkarbonyl) oxy] -lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(2-thienylkarbonyl)oxy] -androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(3-thienylkarbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny a

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl) oxy] -lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrost-4-en-17p-karbothiokyseliny,

nebo soli a solváty těchto látek.

Sloučeniny, které budou dále uvedeny v příkladech 8 až 43, zvláště v příkladech 8 až 22 a 24 až 43 jsou velmi významnými látkami. Nej výhodněj ší látky budou popsány v příkladech 8, 9, 11 až 13, 15 až 22 a 24 až 43.

Sloučeniny obecného vzorce I mají příznivé protizánětlivé nebo antialergické účinky, zvláště při místním podání. Uvedené látky mají schopnost vázat se na receptory glukokortikoidů a vyvolávat odpověď organismu přes tyto receptory. Je tedy možno je použít k léčení zánětlivých a/nebo alergických poruch.

Sloučeniny obecného vzorce I podléhají účinnému metabolismu v játrech za vzniku odpovídající 17β-karboxylové kyseliny obecného vzorce X, v němž R₂ a R₄ a přerušovaná čára mají svrchu uvedený význam.

Kyselina obecného vzorce X je jediným hlavním metabolitem sloučenin vzorce I· in vitro u krysy i u člověka. Byl syntetizován metabolit -vzorce X pro sloučeninu z příkladu 1 a bylo prokázáno, že jeho účinnost je více než lOOOkrát nižší než účinnost původní látky při zkouškách in vitro na funkční agonistické působení. Analogy sloučeniny vzorce X, v nichž R₂ znamená skupinu, odlišnou od 2-furanylkarbonylové skupiny, mají s největší nízkou účinnost θ'Χ,ΟΗ pravděpodobností také velmi

(X)

Tento metabolismus v jaterní tkáni se odráží v údajích in vivo u krys, u nichž bylo možno prokázat clearánce v plasmě rychlostí, která odpovídá rychlosti průtoku krve játry a také perorální biologickou dostupností nižší než 1 %, což prokazuje vysoký metabolismus při prvním průchodu játry.

Při studiích na lidských jaterních buňkách in vitro bylo prokázáno, že ester vzorce I je metabolizován stejným způsobem jako fluticasonpropionát, avšak přeměna esteru vzorce I na neúčinnou kyseliny jako metabolit probíhá přibližně 5krát rychleji než v případě fluticasonpropionátu. Tato velmi účinná inaktivace v játrech by měla snížit na nejmenší míru systemické účinky u člověka a měla by zvýšit bezpečnost použití esteru.

Vdechnuté steroidy jsou také vstřebávány plicni tkání a rychlost vstřebávání přitom podstatně přispívá ke vzniku systemických účinků. To znamená, že snížení vstřebávání v plicích by mohlo zlepšit bezpečnost použití zkoumaných látek. Sledování esteru vzorce I v tomto směru prokázalo podstatně nižší vstřebávání esteru vzorce I než fluticasonpropionátu po aplikaci suché práškové látky do plic anestetizovaných vepřů.

« , Vzhledem k větší bezpečnosti esterů vzorce I je ·> možno dosáhnout požadovaných protizánětlivých účinků při aplikaci jednou denně. Aplikace jednou denně je pro nemocné mnohem pohodlnější než aplikace dvakrát za den, jak se běžně užívá v případě fluticasonpropionátu.

• fcfc fcfcfcfc • · · · β e e fc e e e <

Příklady onemocnění, při nichž je možno využít ester podle vynálezu, mohou být například kožní onemocnění, jako jsou ekzém, lupénka, alergická dermatitis, neurodermatitis, svědivé afekce a přecitlivělost, dále _e zánětlivé stavy sliznice nosní, nosohltanu nebo plic, jako asthma včetně asthmatických reakcí, vyvolaných

.. alergenem, rýma včetně senné rýmy, polypy na nosní sliznici, chronické obstruktivní plicní onemocnění, intersticiální plicní onemocnění a fibróza a dále zánětlivé stavy tlustého střeva, jako vředový zánět *fc· tlustého střeva a Crohnova nemoc a také autoimunitni choroby, například reumatoidní arthritis.

Sloučeniny podle vynálezu mají své použití také při léčení zánětů spojivek.

Je zřejmé, že v případě léčení je možno účinnou látku stejně dobře použít jak k léčení již vzniklých patologických stavů, tak k prevenci takových onemocnění.

Jak již bylo uvedeno svrchu, ester vzorce I je použitelný v lidském nebo veterinárním lékařství, zvláště £ jako protizánětlivá nebo antialergická látka.

Součást podstaty vynálezu tedy tvoří také ester «

vzorce I nebo jeho fyziologicky přijatelný solvát pro použití v lidském nebo veterinárním lékařství, zvláště , při léčení nemocných se zánětlivými a/nebo alergickými stavy a zvláště v případě podávání účinné látky jednou denně.

Podle dalšího provedení vynálezu se vynález týká použití esteru vzorce I nebo jeho fyziologicky

• A			····	A A	• A A
• ·	•	•	•	A	A
• e«ee	e 9	β	β A	A	A
• · A A ·	• ··	•	• · A A	A • ·	A · A A

přijatelného solvátu pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nemocných se zánětlivými a/nebo alergickými stavy, zvláště v případě podávání účinných látek jednou denně.

Podle dalšího možného provedení vynálezu se vynález týká způsobu léčení živočichů nebo člověka v případě zánětlivých a/nebo alergických stavů, postup spočívá v tom, že se podává účinné množství esteru obecného vzorce I nebo jeho fyziologicky přijatelného solvátu, zvláště v případě podání jednou denně.

Ester podle vynálezu je možno zpracovat pro podání jakýmkoliv vhodným způsobem a součást podstaty vynálezu proto tvoří také farmaceutický prostředek, který jako svou účinnou složku obsahuje ester vzorce I nebo jeho fyziologicky přijatelný solvát, popřípadě ve směsi s jedním nebo větším počtem fyziologicky přijatelných ředidel nebo nosičů.

Mimoto tvoří součást podstaty vynálezu také způsob výroby takového farmaceutického prostředku, při němž se mísí složky tohoto prostředku..

Ester podle vynálezu a jeho solváty je možno zpracovat například na lékové formy, určené pro orální podání, podání na ústní sliznici, pod jazyk, parenterální podání, místní nebo rektální podání, specificky pro místní podání.

Místní podání zahrnuje v průběhu přihlášky podání insuflací a inhalací. Jako příklad různých typů farmaceutického prostředku pro místní podání je možno »φ ΦΦΦ· φφ φφφφ

uvést mazání, emulze, krémy, gely, pěny, prostředky pro aplikaci pomocí transdermálních náplastí, prášky, spreye, aerosoly, kapsle nebo jiné zásobní jednotky pro použití v inhalačních nebo insuflačních přístrojích nebo také kapky, například oční nebo nosní kapky, roztoky nebo suspenze, určené k rozprašování, čípky, pesary, nálevy a žvýkatelné tablety nebo pelety, například pro léčení aftů nebo může jít o prostředky, obsahující liposomy nebo zapouzdřené mikročástice.

S výhodou jsou farmaceutickým prostředkem pro místní podání plicní tkání suché prášky a spreye.

Farmaceutický prostředek ve formě suchého prášku, určený pro místní podání do plic může být například v kapslích nebo jiných zásobních jednotkách pro použití v inhalačním nebo insuflačním přístroji, může například jít o želatinové kapsle. Prostředek tohoto typu obecně obsahuje práškovou směs pro inhalaci esteru podle vynálezu ve vhodném práškovém základu, jako je například laktóza nebo škrob. Každá kapsle nebo jiná zásobní jednotka může obecně obsahovat množství 2 0 μ9 až 10 mg esterů vzorce I. Je také možno použít účinnou látku podle vynálezu bez pomocných látek. Prostředek může být balen po jednotlivých dávkách nebo může obsahovat větší počet dávek. V případě balení po větším počtu dávek mohou být jednotlivé dávky předem odměřeny (například v případě prostředku Diskus podle GB 2242134 nebo Diskhaler podle GB*2178965, GB 2129691 a GB 2169265), nebo je možno použít odměrné zařízení, jako je tomu v případě prostředku Turbuhaler podle EP 69715. Příkladem přístroje s obsahem jednotlivé dávky může být prostředek Rotahaler podle GB 2064336. Inhalační přístroj Diskus obsahuje ♦ · 9999 • · · 9 9 β 99999« • · ♦ ·* 9 • 9

• 9 ·« ···· proužek, který je tvořen základním proužkem, obsahujícím po své délce řadu vyhloubení a krycím proužkem, který těsně lne k základnímu proužku tak, že je možno jej sejmout, čímž je definována řada malých zásobníků, z nichž každý obsahuje inhalovatelný prostředek, obsahující ester vzorce I, s výhodou ve směsi s laktózou. S výhodou je svrchu uvedený proužek dostatečně ohebný k tomu, aby bylo možno jej navinout na váleček. Krycí proužek a základní proužek budou mít s výhodou koncové části, které nejsou spolu pevně spojeny a je možno je navíjet. Jinak je s výhodou hermetické spojení mezi základním proužkem a krycím proužkem použito v celé šířce těchto proužků.

Krycí proužek se s výhodou odlupuje od základního proužku v podélném směru od počátečního konce popsaného základního proužku.

Zvláštní pozornost se soustřeďuje na farmaceutické prostředky, které nejsou pod tlakem a jsou upraveny pro podávání ve formě suchého prášku místně do plicní tkáně přes dutinu ústní, zvláště jde o prostředky, které jsou prosté pomocných látek nebo obsahují ředidlo nebo nosič, například laktózu nebo škrob, zvláště výhodně laktózu.

Prostředky ve formě spreye mohou být například zpracovány jako vodné roztoky nebo suspenze nebo jako aerosoly, které se podávají z tlakových balení, například z inhalačních přístrojů, opatřených odměrným ventilem při použití vhodného zkapalněného hnacího prostředku. Aerosolovým prostředkem, vhodným pro inhalaci může být suspenze nebo roztok, obvykle obsahují takové prostředky eter vzorce I a vhodný hnací prostředek, například fluorovaný uhlovodík nebo chlorovaný a fluorovaný ·· ···· •o ···· • » eeee » · · 4 ·· ·· uhlovodík s obsahem vodíku nebo směsi těchto látek, zvláště jde o hydrogenfluoralkany, zvláště o 1,1,1,2-tetrafluorethan, 1,1,1,2,3,3,3-heptaf luor-n-propan nebo směsi těchto látek. Aerosolové prostředky mohou popřípadě obsahovat další pomocné látky, které jsou v oboru dobře známé, například smáčedla, jako je kyselina olejová nebo lecithin nebo pomocná rozpouštědla, například ethanol. Příkladem prostředku podle vynálezu může být prostředek, prostý pomocných látek, který je tvořen v podstatě esterem vzorce I, s výhodou v nesolvatované formě, například jako forma 1, popřípadě v kombinaci s další účinnou látkou a s hnacím prostředkem, který se volí ze skupiny 1,1,1,2-tetrafluorethan, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluor-n-propan nebo směsi těchto látek. Dalším příkladem prostředku může být prostředek, obsahující práškovou sloučeninu vzorce I, hnací prostředek ze skupiny 1,1,1,2-tetrafluorethan, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluor-n-propan nebo směsi těchto látek a suspenzní činidlo, které je rozpustné v hnacím prostředku, jako je kyselina oligomléčná nebo její deriváty, tak jak jsou popsány v dokumentu WO 94/21229. Výhodným hnacím prostředkem je 1,1,1,2-tetraf luorethan. Jak již bylo uvedeno svrchu, ester vzorce I nevytváří s touto látkou solvát. Prostředky, které jsou podávány pod tlakem, budou obvykle uloženy do pevné nádobky, například hliníkového zásobníku, který je uzavřen ventilem, například odměrným ventilem a mimoto opatřen náústkem pro vložení do úst.

* Farmaceutický prostředek pro podávání inhalací má obvykle řízenou velikost částic. Optimální velikost částic pro inhalaci v průduškovém systému se obvykle pohybuje v rozmezí 1 až 10, s výhodou 2 až 5 μπι. Částice, jejich velikost je větší než 20 μπι, je obvykle příliš

velká pro inhalaci do hlubších částí dýchacích cest. Aby bylo možno dosáhnout popsané velikosti části, je nutno zpracovat ester vzorce I na jemný prášek běžným způsobem, například mikronizací. Požadovanou frakci je pak možno oddělit proséváním nebo pomocí proudu vzduchu. S výhodou jsou částice krystalické, a připravují se například tak, že se v průtokové komůrce v přítomnosti ultrazvuku nechá procházet roztok esteru vzorce I jako účinné látky v kapalném rozpouštědle spolu s proudem kapalného rozpouštědla, v němž není účinná látka rozpustná, tak jak je popsáno v mezinárodní patentové přihlášce PCT/GB 99/04368 nebo je možno použít podobných postupů, při nichž se vždy užívá účinná látka, rozpuštěná v kapalném rozpouštědle a proud rozpouštědla, v němž je účinná látka nerozpustná tak, aby se oba proudy homogenně promísily a došlo k vysrážení krystalických částic účinné látky, například způsobem podle mezinárodní patentové přihlášky PCT/GB 00/04327. V případě, že se užije pomocný prostředek, například laktóza, budou velikosti částic tohoto pomocného prostředku větší než částice účinné látky podle vynálezu. V případě, že se jako pomocný prostředek užije laktóza, půjde v typických případech o mletou laktózu, takže nejvýš 85 % částic laktózy bude mít střední průměr 60 až 90 μιη a alespoň 15 % částic bude mít střední průměr částic nižší než 15 μιη.

Prostředky, určené pro místní podání na nosní sliznici, například při léčení rýmy, zahrnují aerosolové prostředky pod tlakem a vodné prostředky, které jsou podávány na nosní sliznici tlakovým čerpadlem.

Vodné prostředky pro podání do plic nebo na nosní sliznici mohou obsahovat běžné pomocné prostředky,

například pufry, látky pro úpravu osmotického tlaku a podobně. Vodné prostředky mohou být aplikovány na nosní sliznici také rozprašováním.

Dalšími použitelnými lékovými formami s obsahem esterů podle vynálezu mohou být mazání, krémy a gely, například zpracované s vodným nebo olejovým základem za přidání vhodných zahušúovadel a/nebo činidel pro tvorbu gelu a/nebo rozpouštědel. Tyto základy mohou obsahovat například vodu a/nebo olej, například kapalný parafin nebo rostlinný olej, jako arašídový olej nebo ricinový olej a rozpouštědlo, například polyethylenglykol. Zahušúovadla a činidla pro tvorbu gelu, které je možno v takových základech použít, zahrnují měkký parafin, stearan hlinitý, cetostearylalkohol, polyethylenglykoly , lanolin, včelí vosk, karboxypolymethylen a deriváty celulózy a/nebo glycerylmonostearát a/nebo neiontové emulgační prostředky.

Emulze je možno zpracovat s vodným nebo olejovým základem a je obecně možno použít jednu nebo větší počet emulgačních činidel, stabilizačních činidel, dispergačních činidel, suspenzních činidel nebo zahušúovadel.

Prášky pro zevní podání mohou být vytvořeny při použití jakéhokoliv vhodného práškového základu, například při použití mastku, laktózy nebo škrobu. Kapky je-možno připravit při použití vodného nebo nevodného základu, obsahujícího jedno nebo větší počet dispergačních činidel, solubilizačních činidel, suspenzních činidel nebo konzervačních činidel.

V případě potřeby je možno do farmaceutického prostředku podle vynálezu přidávat vhodný pufr.

Podíl účinné látky vzorce I v prostředku podle vynálezu pro místní podání závisí na typu připravovaného prostředku, avšak obecně se bude pohybovat v rozmezí 0,001 až 10 % hmotnostních. Obecně však pro většinu prostředků bude výhodné rozmezí 0,005 až 1 % a s výhodou 0,01 až 0,5 % hmotnostních. Avšak v případě prášků, určených pro inhalaci nebo insuflaci, bude podíl účinné látky obvykle v rozmezí 0,1 až 5 % hmotnostních.

Aerosolové prostředky jsou s výhodou upraveny tak, že každá odměřená dávka aerosolu bude obsahovat 1 až 2000 gg, například 20 až 2000 gg, s výhodou 20 až 500 gg esteru vzorce I. Prostředek je možno podávat jednou denně nebo několikrát denně, například 2, 3, 4 nebo 8krát denně, přičemž pokaždé je možno uvolnit například 1, 2 nebo 3 dávky. S výhodou se však sloučenina vzorce 1 podává jednou nebo dvakrát denně a zvláště výhodně 1 denně. Celková denní dávka aerosolu bude typicky v rozmezí 10 μg až 10 mg, například 100 μg až 10 mg, s výhodou 200 μg až 2000 μg.

Prostředky pro místní podání je možno nanášet na postiženou oblast jednou denně nebo vícekrát. V případě nanášení na pokožku je možno s výhodou použít oklusivní obvaz. Kontinuální nebo prodloužené podání je možno zajistit při použití adhesivního systému jako zásobníku účinné látky.

Pro vnitřní podání může být účinná látka podle vynálezu zpracována například běžným způsobem pro perorální, parenterální nebo rektální podání. Jako příklad prostředku pro perorální podání je možno uvést sirupy, elixíry, prášky, granuláty, tablety nebo kapsle, které v typických případech obsahují běžné pomocné prostředky, jako jsou pojivá, plniva, kluzné látky, desintegrační činidla, smáčedla, suspenzní činidla, emulgační prostředky, konzervační prostředky, pufry, látky pro úpravu chuti, barviva a/nebo sladidla podle potřeby. Jak již bylo svrchu uvedeno, zvláště výhodné jsou lékové formy, které obsahují dávku, určenou pro jednotlivé podání.

Výhodnými lékovými formami pro vnitřní podání jsou běžné lékové formy s obsahem jednotlivé dávky, to znamená,, tablety a kapsle. Tyto lékové formy obsahují 0,1 až 20 mg, s výhodou 2,5 až 10 mg esteru podle vynálezu.

Ester podle vynálezu nebo jeho farmaceuticky přijatelné solváty je obecně možno podávat vnitřně v případech, kde je zapotřebí použít systemické léčení hormony kůry nadledvinek.

Obecně mohou prostředky, určené pro vnitřní podání obsahovat 0,05 až 10 % účinné složky v závislosti na zvoleném typu prostředku. Denní dávka účinné látky se může pohybovat v rozmezí 0,1 až 60 mg, například 5 až 3 0 mg v závislosti na léčeném onemocnění a na předpokládané době léčení.

V některých případech je s výhodou možno použít prostředky se zpomaleným uvolňováním účinné látky nebo enterosolventní prostředky, zvláště při léčení zánětlivých chorob tračníku.

• · · ·

Farmaceutický prostředek podle vynálezu je také možno použít v kombinaci s dalšími účinnými látkami, například sagonisty β₂ adrenoreceptorů, s antihistaminovými látkami nebo s antialergickými látkami. Vynález se tedy rovněž týká kombinace, která obsahuje ester vzorce I nebo jeho fyziologicky přijatelný solvát spolu s další účinnou látkou, například agonistou β₂adrenoreceptorů, antihistaminovou látkou nebo antialergickou látkou.

Jako příklady agonistů β₂ adrenoreceptorů je možno uvést salmeterol, například jako racemát nebo jako izolovaný enanciomer, například R-enanciomer, dále salbutamol, formoterol, salmefamol, fenoterol nebo terbutalin a soli těchto sloučenin, například salmeterolxinafolát, sulfát salbutamblu nebo volný salbutamol nebo fumarát formoterolu. Jako příklad antihistaminových látek je možno uvést methapyrilen nebo loratadin.

Další vhodné kombinace zahrnují například kombinaci s protizánětlivými látkami, například typu NSAID, jako jsou cromoglykát sodný, sodná sůl nedocromilu, inhibitory PDE4, látky, antagonizující leukotrien, inhibitory iNOS, inhibitory tryptázy a elastázy, látky, antagonizující β₂-integrin a látky, antagonizující adenosin 2a, možná je také kombinace s protiinfekčními látkami, jako antibiotiky nebo protivirovými látkami.

Zvláštní význam má použití esterů vzorce I v kombinaci s inhibitorem fosfodiesterázy 4, PDE4 .

• · · · • ·

Specifický inhibitor PDE4, použitelný pro účely vynálezu může být jakákoliv sloučenina, o níž je známo, že· vyvolává inhibici PDE4, měla by však vyvolávat inhibici pouze tohoto enzymu a nikoliv také inhibici jiných enzymů ze skupiny PDE. Obecně je výhodné použít inhibitor PDE4 s hodnotou ICE₅₀ 0,1 nebo vyšší vzhledem ke katalytické formě PDE4, která váže rolipram s vyšší afinitou než běžná forma. Pro účely vynálezu bude katalytické místo cAMP, které váže rolipram R a S s nižší afinitou označováno jako „místo s nižší afinitou, LPDE 4 a další forma katalytického místa, které váže rolipram s vyšší afinitou, bude označována jako „místo s vyšší afinitou, HPDE4. Tento pojem „HPDE4 by neměl být zaměňován s pojmem „hPDE4, který je užíván k označení lidského PDE4. Byly provedeny počáteční pokusy prokázat a vyhodnotit vazbu [³H] rolipramu. Podrobnosti jsou uvedeny dále v odstavci, týkajícím se vazných zkoušek.

Výhodnými inhibitory PDE4 pro použití podle vynálezu budou takové látky, které mají výhodný therapeutický poměr, to znamená látky, které přednostně vyvolávajíinhibici katalytické účinnosti cAMP tam, kde je enzym ve formě, schopné vázat rolipram s nižší afinitou, s čímž se snižují vedlejší účinky, které jsou zjevně spojeny s inhibici formy, která váže rolipram s vyšší afinitou. Dalším způsobem pro stanovení těchto hodnot je skutečnost, že výhodné sloučeniny budou mít poměr IC₅₀přibližně 0,1 nebo vyšší, pokud jde o katalytickou formu PDE4, která váže rolipram s vyšší afinitou, děleno hodnotou IC₅₀ pro formu, která váže rolipram s nižší afinitou.

V případě, že inhibitor PDE4 má hodnotu IC₅₀ 0,1 nebo vyšší, je tento poměr poměrem hodnoty IC₅₀ pro kompetici o vazbu 1 nM [³H] R-rolipramu na formu PDE4, která váže rolipram s vyšší afinitou proti hodnotě IC₅₀pro inhibici katalytické účinnosti PDE4 ve formě, která váže rolipram s nižší afinitou při použití 1 μΜ [³H] -cAMP jako substrátu.

Jako příklady použitelných inhibitorů PDE4 je možno uvést následující látky:

(R) -( + )-1-(4-brombenzyl)-4- [ (3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl]-2-pyrrolidon, (R) -( + ) -1-(4-brombenzyl)-4- [ (3-cyklopentyloxy)-4-methoxyfenyl]-2-pyrrolidon,

3- (cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl) -1- (4-N' - [N2-kyano-S-methylisothioureido]benzyl)-2-pyrrolidon, kyselina cis-4-kyano-4- (3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)-cyklohexan-1-karboxylová, cis- [4-kyano-4- (3-cyklopropylmethoxy-4-difluormethoxyfenyl)-cyklohexan-l-ol] , (R) -( + )-ethyl[4-(3-cyklopentyloxy-4 -methoxyfenyl) pyrrolidin-2-yliden] acetát a (S) -(-)-ethyl[4-(3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)pyrrolidin-2-yliden]acetát.

Nejvýhodnější jsou ty inhibitory PDE4, jejichž hodnota nebo poměr IC₅₀ je vyšší než 0,5 a zvláště vyšší než 1,0. Výhodnými sloučeninami jsou kyselina cis-4-kyano-4-(3-cyklopentyloxy-4-methoxyfenyl)-cyklohexan-1-karboxylová, 2-karbomethoxy-4-kyano-4-(3- cykl opropy 1 me t hoxy - 4 - di f luorme t hoxy f eny 1) cykl ohexan -1 - on a cis - [4-kyano-4- (3-cyklopropylmethoxy-4• · · · • · · ·

-difluormethoxyfenyl) -cyklohexan-l-ol] , jde o sloučeniny, které se přednostně váží s nízkou afinitou a jejich hodnota IC₅₀ je 0,1 nebo vyšší.

Použít je možno také další sloučeniny, například sloučeniny z .dokumentu US 5552438 z 3. září 1996. Sloučeninami se zvláštním významem, uvedenými v tomto patentovém spisu jsou kyselina cis-4-kyano-4-(3- [cyklopentyloxy] -4-methoxyfenyl) -cyklohexan-1-karboxylová, označovaná také jako cilomalast a její soli, estery, prekursory nebo fyzikální formy, dále je možno použít sloučeninu AWD-12-281 od Astra, popsanou v Hofgen N. a další, 15th EFMC Int Symp Med Chem, 6. - 10. září, Edinburgh 1998, Abst P.98, 9-benzyladeninový derivát, označovaný NCS-613 (INSERM), D-4418 od Chiroscience and'Schering-Plough a inhibitor benzodiazepin PDE4, identifikovaný jako Cl-1018 (PD-168787, Parke-Davis/Warner-Lambert) , Benzodioxolový derivát Kyowa Hakko popsaný v dokumentu WO 99/16766, V-11294A pd Napp podle Landells, L. J. a další, Eur Resp J, Annu Cong Eur Resp Soc, 19. - 23. září, Ženeva 1998, (Suppl. 28), Abst P2393, roflumilast (CAS odkaz č. 162401-32-3) a ftalazinon podle WO 99/47505 od BykGulden, použít je možno také sloučeninu, označovanou jako T-440 podle Tanabe Seiyaku, Fuji, K. a další, J Pharmacol Exp Ther, 1998, 284(1), 162.

Zkouška na vazbu fosfodiesterázy a na vazbu rolipramu Postup 1A

PDE4 a hrPDE (lidská rekombinantní PDE4) z lidských izolovaných monocytů existuje primárně ve formě s nízkou afinitou. Z tohoto důvodu je možno stanovit účinnost zkoumaných látek proti této formě PDE4 s nízkou afinitou při použití standardních zkoušek na katalytickou účinnost PDE4 při použití 1 μΜ [³H] cAMP jako substrátu podle publikace Torphy a další, J. of Biol. Chem., sv. 267, č.

3, s. 1798-1804, 1992.

Supernatanty krysího mozku po odstředění vysokou ryhlostí byly použity jako zdroj proteinů, oba enanciomery [³H]-rolipramu byly připraveny se specifickou aktivitou 25,6 Ci/mmol. Podmínky pokusu byly modifikovány ve srovnání se zveřejněným postupem tak, aby byly totožné s podmínkami pro zkoušku PDE s výjimkou cAMP: 50 mM tris HCl, pH 7,5, 5 mM.MgClz, 50 m M 5'-AMP a 1 nM [³H]-rolipramu podle publikace Torphy a další, J. of Biol. Chem., sv. 267, č. 3, s. 1798-1804, 1992. Zkouška probíhala 1 hodinu při teplotě 30 °C. Po ukončení reakce byl vázaný ligand oddělen od volného ligandu v příslušném zařízení. Kompetice pro vazné místo s vysokou afinitou byla stanovena za podmínek, které byly totožné jako pro měření účinnosti PDE s nízkou afinitou s tím rozdílem, že zkouška byla prováděna bez přítomnosti [³H]-cAMP.

Postup 1B

Měření účinnosti fosfodiesterázy

Účinnost PDE byla stanovena enzymatickou zkouškou při použití [³H] cAMP SPA nebo [³H] cGMP SPA podle doporučení výsobce (Amersham Life Sciences) . Reakce byly prováděny na plotnách s 96 vyhloubeními při teplotě místnosti v 0,1 ml reakčního pufru, který obsahoval následující konečné koncentrace látek: 50 mM tris-HCl, pH 7,5, 8,3 mM MgCl₂, 1,7 mM EGTA, [³H] cAMP nebo [³H] cGMP (přibližně 2000 ·· ···· ·· ····

dpm/pmol), enzym a různé koncentrace inhibitorů. Zkoušky probíhaly 1 hodinu a byly ukončeny přidáním 50 μΐ kuliček SPA s yttriumsilikátem v přítomnosti síranu zinečnatého. Plotny byly protřepány a pak ponechány 20 minut při teplotě místnosti. Tvorba radioaktivně značeného produktu byla prokazována scintilační spektrometrií.

Zkouška na vazbu [³H]R-rolipramu

Zkouška na vazbu [³H]R-rolipramu byla provedena jako modifikace způsobu podle publikace Nicholson a další, Trends Pharmacol, Sci., sv. 12, s. 19-27, 1991 a McHale a další, Mol. Pharmacol., sv. 39, 109-113, 1991. R-rolipram se váže na katalytické místo PDE4 podle publikace Torphy a další, Mol., Pharmacol., sv. 39, s. 376-384, 1991. Z tohoto důvodu kompetice o vazbu [³H] R-rolipramu je nezávislým potvrzením inhibiční schopnosti .PDE4 v případě neznačených kompetičních látek. Zkouška byla prováděna při teplotě 30 °C po dobu jedné hodiny v 0,5 μΐ pufru, obsahujícího v konečné koncentraci 50 mM tris-HCl, pH 7,5, 5 mM MgCl₂, 0,05 % sérového albuminu skotu, 2 nM [³H] R-rolipramu (5,7 x 104 dpm/pmol) a různé koncentrace radioaktivně neznačených inhibitorů. Reakce byla zastavena přidáním 2,5 ml ledově chladného reakčního pufru bez [³H]R-rolipramu a rychlou filtrací ve vakuu v Brandelově zařízení při použití filtru Whatman GF/B, nasyceného 0,3% polyethyleniminem. Filtry byly promyty dalším podílem 7,5 ml chladného pufru, usušeny a radioaktivita byla stanovena kapalinovou scintilační spektrometrií.

Součást podstaty vynálezu tedy tvoří podle dalšího provedení kombinace, která obsahuje sloučeninu vzorce I

Μ ····

nebo její fyziologicky přijatelný solvát spolu s inhibitorem PDE4.

Svrchu uvedená kombinace může být zpracována pro konečné použití ve formě farmaceutického prostředku. To znamená, žo součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, obsahující svrchu uvedenou kombinaci spolu s fyziologicky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Jednotlivé složky popsané kombinace je možno podávat následně nebo současně v oddělených prostředcích nebo ve společném farmaceutickém prostředku. Příslušné dávky jednotlivých účinných látek snadno určí každý odborník.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli a solváty je možno připravit dále popsanými postupy, které rovněž tvoří součást podstaty vynálezu.

Způsob výroby esterů obecného vzorce I nebo jejich solí nebo solvátů spočívá v tom, že se alkyluje thiokyselina obecného vzorce II

Ř₅ kde jednotlivé obecné symboly mají svrchu uvedený význam, nebo její sůl.

• v *··· ·· ··««

Při provádění tohoto postupu je možno postupovat tak, že se sloučenina obecného vzorce II nechá reagovat se sloučeninou Ri~L, kde L znamená odštěpítelnou skupinu, jako atom halogenu, tosylovou nebo mesylovou skupinu a ____Ί _ 1 Y -J _1 _ _____X/1.1 .· J — - 1 1 1 1— — 1 — J J — _Λ ......

pkJkJ.kJUi.LC , j uc iiapiij\iau kj a. j-Λ,γ xiicx j-uy cmu. íicuu halogenalkylhalogenid, postup se provádí za standardních podmínek.

Sloučeniny obecného vzorce II je možno použít v krystalické formě v případě, že je tuto krystalickou formu možno připravit.

V případě, že R_x znamená fluormethyl, je výhodným halogenalkylhalogenidem bromfluormethan.

Ve výhodném provedení způsobu výroby esterů obecného vzorce I se postupuje tak, že se na sloučeninu obecného vzorce II nebo její sůl působí bromfluormethanem, popřípadě v přítomnosti katalyzátoru pro přenos fáze a popřípadě v přítomnosti přidané baze. Výhodným rozpouštědlem je methylacetát nebo s výhodou ethylacetát, popřípadě v přítomnosti vody. Přítomnost vody zlepšuje rozpustnost obou výchozích látek i výsledného produktu a při použití katalyzátoru pro přenos fáze je možno dosáhnout zvýšení reakční rychlosti. Použitelným katalyzátorem pro přenos fáze je například tetrabutylamoniumbromid, tetrabutylamoniumchlorid, beijztributylamoniumbromid, benztributylamoniumchlorid, benztriethylamoniumbromid, methyltributylamoniumchlorid a methyltrioktylamoniumchlorid. Jako rozpouštědlo je v případě použití katalyzátoru pro přenos fáze výhodný tetrahydrofuran.

** 9999

9« 9 999 • 9

9 9 • 9 9 9 9 *

9

9 9

Sloučeniny obecného vzorce II je možno připravit z odpovídajícího 17a-hydroxylového derivátu obecného vzorce III °v^SH

kde obecné symboly mají svrchu uvedený význam, například při použití způsobu podle publikace G. H. Phillipps a další, 1984, Journal of Medicinal Chemistry, 37, 3717-3729. Tato reakce typicky zahrnuje přidání reakčního činidla, vhodného pro provedení esterifikace, může jít například o derivát 2-furoové kyseliny, například o aktivovaný ester nebo s výhodou

2-furoylhalogenid, například 2-furóylchlorid, tato látka se užije v alespoň dvojnásobném molárním přebytku vzhledem ke sloučenině vzorce III, postup se provádí v přítomnosti organické baze, například triethyaminu. Druhý mol 2-furoylchloridu reaguje s thiokyselinou ve sloučenině vzorce III, tuto skupinu je pak zapotřebí odstranit například reakcí s aminem, například s diethylaminem.

Sloučeniny obecného vzorce III je možno připravit způsobem podle GB 2088877B.

fcfc fcfcfcfc e

e · •

··

Sloučeniny obecného vzorce III, v němž R₃ znamená methyl v konfiguraci alfa, přerušovaná čára znamená dvojnou vazbu a R₄ a R₅ znamenají atomy fluoru, je možno také připravit podle následujícího reakčního schématu:

• · «· · ··· e «fcfcfc • · ··· fc fc· · • fcfc ee # • ·· · ·« ·· fcfc fcfcfcfc « · • · • · • · · ··

Ve stupni a) se oxiduje roztok, obsahující sloučeniny vzorce V. Stupeň a) se s výhodou provádí v přítomnosti rozpouštědla ze skupiny methanol, voda, tetrahydrofuran, dioxan nebo diethylenglykoldimethylether. Aby bylo možno zvýšit výtěžky a urychlit reakci, jsou výhodnými rozpouštědly methanol, voda nebo tetrahydrofuran a zvláště voda nebo tetrahydrofuran nebo voda ve směsi s tetrahydrofuranem. Dioxan a diethylenglykoldimethylether jsou také výhodnými rozpouštědly, která je ve výhodném provedení možno použít spolu s vodou. Rozpouštědlo bude s výhodou přítomno v množství 3 až 10 objemů na 1 hmotnostní díl výchozího materiálu, s výhodou půjde o 4 až 6 objemů a zvláště o 5 objemů. Oxidační činidlo bude přítomno v množství 1 až 9 molárních ekvivalentů, vztaženo na množství výchozího materiálu. Například v případě, že se použije vodný roztok kyseliny jodisté s koncentrací 50 % hmotnostních, • · může být oxidační činidlo přítomno v množství 1,1 až 10 hmotnostních dílů,, vztaženo na 1 hmotnostní díl výchozí látky, výhodné je množství 1,1 až 3 a zvláště 1,3 hmotnostního dílu. Oxidační stupeň s výhodou zahrnuje použití chemického oxidačního činidla. Oxidačním činidlem —i <-i τ x-s ί Ί i v> \ -n ζ·5 -ί 4— -ν-ι λ l·-» λ 2 x. -! xíi λ Ί—x-» —! λ —! 4* .x·» Λ Τ

J ΧΡ V 2 Ai<''X'X VA JVJ XI XVA J V_A _U kC3 X. XA X XXiJV J X>XA _U OilCl X J C J X □ UX .

Nejvýhodnějším oxidačním činidlem je kyselina jodistá nebo jodistan sodný, nejvýhodnější je kyselina jodistá. Mimo to může oxidační stupeň také zahrnovat jakoukoliv oxidační reakci, například takovou, při níž se využívávzduch a/nebo kyslík. V případě, že se při oxidační reakci užívá vzduch a/nebo kyslík, bude rozpouštědlem, použitím pro tuto reakci s výhodou methanol. Stupeň a) bude s výhodou spočívat v inkubaci reakčních složek při teplotě místnosti nebo o něco vyšší teplotě přibližně 25 °C například po dobu 2 hodin. Sloučeniny vzorce IV je možno izolovat krystalizaci z reakční směsi přidáním rozpouštědla, v němž tyto látky nejsou rozpustné. Vhodným rozpouštědlem tohoto typu pro sloučeniny vzorce IV je voda. Bylo neočekávaně zjištěno, že je vysoce žádoucí řídit podmínky, při nichž dochází k vysrážení sloučeniny vzorce IV přidáním rozpouštědla, v němž tato látka není rozpustná, například vody. V případě, že se provádí překrystalování, je možno užít chladnou vodu, například směs vody a ledu s teplotou 0 až 5 °C. I když bylo možno očekávat lepší výsledek, bylo zjištěno, že získaný krystalický produkt je velmi objemný, připomíná měkký gel a velmi nesnadno se filtruje. Aniž by bylo zapotřebí se omezit na teoretické vysvětlení, je pravděpodobné, že tento produkt obsahuje ve své krystalové mřížce velké množství solvatovaného rozpouštědla. Naopak v případě, že se užije vyšší teplota 10 °C nebo přibližně teplota místnosti, získá se granulovaný produkt, svou konzistencí • · • · • · · • · · · podobný písku, který se velmi snadno filtruje. Za těchto podmínek dochází ke krystalizací typicky po přibližně 1 hodině, krystalizace je ukončena v průběhu několika hodin, například v průběhu 2 hodin. Je pravděpodobné, že tento granulární produkt obsahuje jen malé množství σηΊ ΊΓ2 t r a rs 1~ι \ -vrs ιύγίλμ s m +- 1 o ir r +t Ί o·» τΧ mv· ί λ 1— _Λ ..

—- — — » V A i. kAM Iw V J^X JT h=> <_X -i- V lUX X X neobsahuje žádné takové rozpouštědlo.

Ve stupni b) se v typických případech přidává reakční složka, schopná převést karboxylovou kyselinu na karbothiokyselinu, může jít například o plynný sirovodík spolu s vhodným vazným činidlem, například karbonyldiimidazolem v přítomnosti vhodného rozpouštědla, například dimethylformamidu.

Celý postup je možno upravit pro výrobu dalších sloučenin obecného vzorce III.

Alternativní postup pro výrobu sloučeniny vzorce II spočívá v tom, že se na sloučeninu vzorce X působí reakčním činidlem, schopným převést karboxylovou kyselinu na karbothiokyselinu, použít je možno například plynný sirovodík spolu s vhodným vazným činidlem, například CDI v přítomnosti vhodného rozpouštědla, jako dimethylformamidu. Sloučeniny vzorce X je možno připravit analogickým způsobem. Další sloučeniny obecného vzorce II je možno připravit obdobným způsobem.

Alternativní postup pro výrobu sloučeniny vzorce I, kde R₄ znamená atom fluoru, nebo jejího solvátu spočívá v tom, že se nechá reagovat sloučenina vzorce VI

se zdrojem fluoru.

Jako příklad zdrojů fluoru je možno uvést fluoridy, například fluorid sodný a s výhodou fluorovodík. Výhodným reakčním činidlem je vodný fluorovodík. Postup je možno provádět v rozpouštědle, například v THF nebo DMF.

Sloučeninu vzorce VI je možno připravit

a) alkylací sloučeniny vzorce VII

nebo její soli,

b) reakcí sloučeniny vzorce VIII

O

• · s reakčním činidlem, tvořícím epoxid nebo

c) esterifikací sloučeniny vzorce IX

Při provádění způsobu a) je možno použít podobné podmínky jako při přeměně sloučeniny II na sloučeninu vzorce I. Typicky se postupuje tak, že se sloučenina vzorce VII nechá reagovat se sloučeninou vzorce RiL, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu a podobně), například s příslušným fluormethylhalogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan.

Postup b) se s výhodou provádí ve dvou stupních: i) vytvoří se halogenhydrin, zvláště bromhydrin, například reakcí bromodanu nebo ekvivalentního reakčního činidla a pak se ii) působí baží, například hydroxidem sodným, čímž dojde k uzávěru kruhu. Produktem ze stupně i) je sloučenina vzorce IXA, která je novým meziproduktem a v případě potřeby je možno ji izolovat.

• · ·· ···· ·· ···· • · · · · · · · · ······· · · · · · · • · · · · · ·β·« • · · · ·· · · ·· ·· kde X znamená atom halogenu, s výhodou bromu.

Při provádění postupu c) může být vhodným reakčním činidlem aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, například aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu. Tuto reakci je možno uskutečnit při vyšší teplotě, například přibližně 60 TC nebo také při teplotě místnosti v přítomnosti katalyzátoru acylace, například dimethylaminopyridinu DMAP.

Sloučeniny vzorce VII je možno připravit způsobem, který spočívá v esterifíkací sloučeniny vzorce XI

Při provádění tohoto postupu je možno použít podobné podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce III. na sloučeninu vzorce II. Vhodným reakčním činidlem může být například aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, například aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu. Některé

sloučeniny vzorce XI jsou známy z publikace J Labelled Compd Radiopharm, 1997, 39(7), 567-584.

Sloučeninu vzorce VIII je možno připravit a) alkylací sloučeniny vzorce XII

nebo její soli nebo

b) esterifikací sloučeniny vzorce XIII

Při provádění postupu a) je možno použít podobné podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce II na sloučeninu vzorce I. V typických případech se sloučenina vzorce XII nechá reagovat se sloučeninou vzorce RiL, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně), například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan.

Při postupu b) je možno použít podobné podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce IX na sloučeninu vzorce VI. Vhodným reakčním činidlem je například aktivovaný derivát kyseliny a ryl karboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeniny vzorce IX a XIII je možno připravit alkylaci odpovídajících thiokyselin vzorce XI a XIV při použití již popsaných podmínek, například reakcí se sloučeninou vzorce FCH₂L, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně) , například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan. Sloučenina vzorce XI je známa z publikace J Labelled Compd Radiopharm, 1997, 39(7), 567-584 nebo je možno tyto thiokyseliny připravit analogickými postupy.

Sloučeninu vzorce XII je možno připravit postupem, který spočívá v esterifikací sloučeniny vzorce XIV

nebo její soli.

Tento postup je možno uskutečnit svrchu popsaným způsobem. Vhodným reakčním činidlem je například

aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeniny vzorce XIV je možno připravit z odpovídající karboxylové kyseliny například obdobným způsobem jako při přeměně sloučeniny vzorce IV na sloučeninu vzorce III. Odpovídající karboxylová kyselina je známá látka (Upjohn, WO 90/15816) nebo je možno ji připravit analogickými postupy..

Další alternativní způsob výroby sloučeniny vzorce I nebo jejího solvátu spočívá v tom, že se odštěpí ochranná skupina ve sloučenině vzorce I, v níž je hydroxyskupina v poloze Ιΐβ chráněna nebo maskována. Při prvním takovém postupu se odštěpí ochranná skupina ze sloučeniny vzorce XV

kde P znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině.

Jako příklad ochranné skupiny na hydroxyskupině je možno uvést skupiny, popsané v souhrnné publikaci Protective Groups in Organic Chemistry Ed JFW McOmie

(Plenům Press 1973) nebo Protective Groups in Organic

Synthesis, Theodora W Green (John Wiley and Sons, 1991).

Příkladem vhodných ochranných skupin na hydroxyskupina ve významu P jsou například skupiny, jako karbonáty, alkylové skupiny, například terč.butyl nebo methoxymethyl, aralkylové skupiny, jako benzyl, p-nitrobenzyl, difenylmethyl nebo trifenylmethyl, heterocyklické skupiny, jako tetrahydropyranyl, acylové skupiny, jako acetyl nebo benzyl a také silylové skupiny, jako trialkylsilyl, například terč.butyldimethylsilyl. Ochranné skupiny na hydroxyskupině je možno odstranit pomocí běžných postupů. Karbonátový zbytek je například •možno odstranit působením baze. Alkylové, silylové, acylové a heterocyklické skupiny je možno odstranit solvolýzou, například hydrolýzou v kyselém nebo alkalickém prostředí. Arylkylové skupiny, například trifenylmethyl je možno odstranit obdobným způsobem, například hydrolýzou v kyselém prostředí. Aralkylové skupiny, například benzyl nebo p-nitrobenzyl je možno odštěpit hydrogenolýzou v přítomnosti katalyzátoru na bázi ušlechtilého kovu, například paladia na aktivním uhlí. Některé skupiny, například p-nitrobenzyl je také možno odštěpit působením světla.

Hydroxyskupina v poloze 11β může být maskována jako karbonylové skupina. To znamená, že druhý postup spočívá v redukci sloučeniny vzorce XVI • · 0 0 0 0 0 · · 0 • 00 0 00 00 00 00

Redukci na sloučeninu vzorce I je možno uskutečnit například působením redukčního činidla typu hydridu, například hydroborátu, j-ako hydroborátu sodného.

Ketanová skupina v poloze 11 ve sloučenině vzorce XVI může rovněž být maskována. Jako příklady maskovaných' derivátů sloučeniny vzorce XVI je možno .uvést například i) ketalové deriváty, například ketaly, vytvořené působením alkoholu, například methanolu, ethanolu nebo ethan-1,2-diolu na sloučeninu vzorce XVI, dále ii) dithioketalové deriváty, například dithioketaly, vytvořené působením thiolu, například methanthiolu, ethanthiolu nebo ethan-1,2-dithiolu na sloučeninu vzorce XVI, iii) monothiketalové deriváty, například monothioketaly, vytvořené tak, že se na sloučeninu vzorce XVI působí například l-hydroxyethan-2-thiolem, iv) deriváty, vytvořené působením alkoholaminu, například efedrinu na sloučeninu vzorce XVI, v) iminy, vytvořené působením aminů na sloučeninu vzorce XVI, vi) oximy, vytvořené působením hydroxylaminů na sloučeniny vzorce XVI„ Vynález zahrnuje všechny takové deriváty sloučeniny vzorce XVI.

Tyto maskované deriváty je možno převést zpět na keton běžnými způsoby. Například ketaly, iminy a oximy je možno převést na karbonylovou skupinu působením zředěné kyseliny, dithioketaly je možno převést na keton celou řadou postupů, popsaných v publikaci P. C. Bulman Page a další, 1989, Tetrahedron, 45, 7643-7677.

Sloučeniny vzorce XV je možno připravit a) alkylací sloučeniny vzorce XVII

nebo její soli, kde P znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině nebo

b) esterifikací sloučeniny vzorce XVIII

Ve stupni a) je možno použít analogické podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce II na sloučeninu vzorce I. Typicky se postupuje tak, že se sloučenina vzorce XVII nechá reagovat se sloučeninou vzorce RiL, kde

L znamená odštěpitelnou skupinu, (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně), například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan.

Ve stupni b) je možno použít analogické podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce IX na sloučeninu vzorce VI. Vhodným reakčním činidlem je například ' aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s ’ výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeninu vzorce XVIII je možno připravit alkylaci odpovídající thiokyseliny při použití již svrchu popsaného postupu, například reakcí se sloučeninou vzorce RiL, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně), například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. V případě, že R_x znamená skupinu -CH₂F, užije se jako fluormethylhalogenid s výhodou bromfluormethan. Odpovídající thiokyseliny jsou známé látky nebo je možno' č· je připravit známými postupy. Sloučeninu, vzorce XVIII je také možno připravit zavedením ochranné skupiny do odpovídajícího hydroxyderivátu.

Sloučeninu vzorce XVII je možno připravit . esterifikací sloučeniny vzorce XIX

• fc fcfcfcfc

nebo její soli, kde P znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině.

Tento postup je možno uskutečnit způsobem, který byl popsán svrchu. Vhodným reakčním činidlem, je například aktivovaný derivát kyseliny aryl karboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeniny vzorce XIX je možno připravit ochranou odpovídajícího hydroxyderivátu, přičemž se nejprve chrání thiokyselina, z níž se pak odštěpí ochranná skupina. Odpovídající hydroxyderiváty jsou známé látky nebo je možno je připravit známým způsobem.

Sloučeniny vzorce XVI je možno připravit a) alkylací sloučeniny vzorce XX

nebo soli této sloučeniny nebo jejího derivátu, v němž je 11-karbonylová skupina maskována nebo b) esterifikací sloučeniny vzorce XXI

nebo jejího derivátu, přičemž 11-karbonylová skupina je maskována.

Ve stupni a) je možno užít analogické podmínky jako při přeměně sloučeniny vzorce III na sloučeninu vzorce II. Typicky se sloučenina vzorce XX nechá reagovat se sloučeninou vzorce RiL, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně), například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan.

Ve stupni b) je možno použít obdobné podmínky jako při přeměně sloučeniny IX na sloučeninu vzorce VI.

Vhodným reakčním činidlem je například aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeniny vzorce XXI nebo jejich deriváty, v nichž 11-ketonová skupina je maskována je možno připravit alkylací odpovídající thiokyseliny svrchu popsaným způsobem, například reakcí se sloučeninou vzorce RiL, kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například atom halogenu, mesylovou nebo tosylovou skupinu nebo podobně), například s příslušným halogenidem za standardních podmínek. Jako fluormethylhalogenid se s výhodou užije bromfluormethan. Odpovídající thiokyseliny jsou známé látky.

Sloučeniny vzorce XX je možno připravit esterifikací sloučeniny vzorce XXII

nebo derivátu této látky, v němž 11-ketonová skupina je maskována.

Postup je možno uskutečnit svrchu popsaným způsobem. Vhodným reakčním činidlem je například aktivovaný derivát kyseliny arylkarboxylové nebo heteroarylkarboxylové, jako aktivovaný ester nebo s výhodou halogenid, jako chlorid v přítomnosti organické baze, například triethylaminu.

Sloučeniny vzorce XXII a jejich deriváty, v nichž 11-ketonová skupina je maskována, je možno připravit oxidací odpovídajícího hydroxyderivátu vzorce VI s následným maskováním ketonové skupiny a následnou f! přeměnou karboxylové skupiny na thiokyselinu, jak je popsáno při přeměně sloučeniny vzorce IV na sloučeninu ' vzorce III.

Další možný postup pro výrobu sloučeniny obecného vzorce I, kde R_x znamená -CH₂F, nebo jejího solvátu spočívá v tom, že se nechá reagovat sloučenina vzorce XXIII • · ·Φ Φ··Φ ·· φφφφ • φ e φ · φ φ · φ

kde L znamená odštěpitelnou skupinu (například halogenid, odlišný od fluoridu, jako chlorid nebo jodid nebo zbytek sulfonátového esteru, jako mesylátu, tosylátu nebo triflátu), se zdrojem fluoru.

Zdrojem fluoru je s výhodou fluoridový ion, například fluorid draselný. Další podrobnosti, týkající se této přeměny, je možno nalézt v publikacích G. H. Phillipps a další, 1994, Journal of Medicinal Chemistry, 37, 3717-3729 nebo J. Labelled Compd Radiopharm, 1997, (7) , 567-584 .

Některé ze sloučenin obecného vzorce XXIII jsou sloučeninami obecného vzorce I. Sloučeniny vzorce XXIII je možno připravit analogickými způsoby, jaké byly popsány svrchu. Do rozsahu vynálezu spadají také nové meziprodukty vzorce VI, VIII, IX, IXA, XV a XVI, v nichž je skupina -CH₂F nahrazena skupinou -CH₂L, kde L znamená odštěpitelnou skupinu, odlišnou od atomu fluoru.

Další možný způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I nebo solvátů této látky spočívá v odštěpení ochranné skupiny nebo maskující skupiny z derivátu '· ti · · ti ti obecného vzorce I, v němž je 3-karbonylová skupina chráněna nebo maskována.

3-karbonylová skupina může být maskována způsobem, který je analogický svrchu popsanému způsobu pro maskování 11-karbonylová skupiny. To znamená, že i 3-karbonylová skupina může být maskována například jako ketal, monothioketal, dithioketal, derivát s alkoholaminem, oximem nebo iminem. Karbonylovou skupinu je možno obnovit obvyklými postupy, například ketaly je možno převést na karbonylová sloučeniny působením zředěné kyseliny, dithioketaly je možno převést na ketony řadou postupů, popsaných v publikaci P. C. Bulman Page a další, 1989, Tetrahedron, 45, 7643-7677.

Některé meziprodukty jsou nové a tvoří tedy včetně solí a solvátů součást podstaty vynálezu.

Výhody použití sloučenin obecného vzorce I a/nebo jejich solí a solvátů spočívají převážně v tom, že uvedené látky mají velmi dobré protizánětlivé vlastnosti při předpovídatelných farmakokinetických a farmakodynamických vlastnostech a nemají téměř žádné nežádoucí vedlejší účinky, jak je možno prokázat například zvýšenou selektivitou pro receptor glukokortikoidu ve srovnání s receptorem pro progesteron, mimoto dovolují tyto látky velmi pohodlný systém podávání u nemocných. Dále mají tyto sloučeniny žádoucí fyzikální i chemické vlastnosti, které dovolují jejich snadné zpracování a skladování.

·· ····

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu ¹H NMR spektra byla zaznamenávána při 4 00 MHz, chemické posuny jsou vyjádřeny v ppm vzhledem k tetramethylsilanu. Při popisu signálu jsou užity následující zkratky: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, dd = dublet dubletů, ddd = dublet dubletů dubletů, dt = dublet tripletů a b = široký. Při chromatografii bylo použito předem připravených sloupců silikagelu s obsahem KP-Sil při rychlé chromatografii na modulu 12i. Kapalinová chromatografie byla prováděna na sloupci Supelcosil LCABZ+PLUS s rozměry 3,3 cm x 4,6 mm vnitřní průměr, k eluci byla použita směs 0,1% HCO₂H a 0,01 M octanu amonného ve vodě (rozpouštědlo A) a 0,05% HCO₂H v 5% roztoku vody v acetonitrilu (rozpouštědlo B) při použití následujícího elučního gradientu: 0 až 0,7 minut 0 % B, 0,7 až 4,2 minut 100 % B, 4,2 až 5,3 minut 0 % B, 5,3 až 5,5 minut 0 % B, rychlost průtoku 3 ml/min. Hmotové spektrum bylo zaznamenáváno na spektrometru Fisons VG Platform (ES+ve a ES-ve).

Meziprodukty

Meziprotukt 1

6a, 9a-difluor-17a-[(2-furanyl-karbonyl)oxy]-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl- 3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina • φ φφ ·

Φ· φφφφ »φ φφφφ • φφφφ φφφ φ φ « · φ φ φ φ Φ β Φ φ Φ φ φ φφφ φ φφ φφ φφ φφ

Roztok 18 g, 43,64 mmol 6a,9a-difluor-lip,17a-dihydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-dien-17P~ -karbothiokyseliny, připravené způsobem podle GB 2088877 ve 200 ml bezvodého dichlormethanu a 15,94 ml, 114 mmol triethylaminu se při teplotě nižší než 5 °C smísí v průběhu 40 minut s roztokem 11,24 ml, 114 mmol 2-furoylchloridu ve 100 ml bezvodého dichlormethanu. Roztok se míchá při téže teplotě ještě 30 minut. Výsledný pevný podíl se odfiltruje, postupně se promyje 3,5% vodným roztokem hydrogenuhličitanů sodného, vodou, IM kyselinou chlorovodíkovou, znovu vodou a pak se suší ve vakuu při teplotě 60 °C, čímž se získá krémově zbarvená pevná látka. Dichlormethanový filtrát se postupně promyje 3,5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného vodou, IM kyselinou chlorovodíkovou, znovu vodou, vysuší se síranem sodným a odpaří, čímž se získá další podíl krémově zbarvené pevné látky, která se spojí se svrchu získaným podílem. Celkem se získá 26,9 g pevné látky, která se uvede do suspenze ve 450 ml acetonu. Za míchání se přidá 16,8 ml, 162 mmol diethylaminu a směs se míchá 4,5 hodin při teplotě místnosti. Pak se směs odpaří sraženina se odfiltruje a promyje se malým množstvím acetonu.

Promývací kapalina a filtrát se spojí, odpaří a materiál se nanese na sloupec silikagelu, který se vymývá směsí chloroformu a methanolu v poměru 24:1. Frakce, obsahující polárnější složku se spojí a odpaří, čímž se získá krémově zbarvená pevná látka. Tato látka se spojí se svrchu získanou pevnou látkou a suší ve vakuu, čímž se získá 19,7 g světle béžové pevné látky. Tento produkt se rozpustí v teplé vodě, pH se upraví na 2 přidáním koncentrované kyseliny chlorovodíkové a směs se extrahuje ethylacetátem. Organický extrakt se vysuší síranem sodným • 9 ·» *·9· ·· ···· ··· β · · · · · • ·«·« ··· 9 · · · · β β β « β e e © a 9

9«· 9 «9 ·· »· ·· a odpaří, čímž se po sušení při teplotě 50 °C ve výtěžku 82 % získá 18,081 g krémově zbarvené pevné látky. Doba retence 3,88 minut, m/z 507 MH⁺, NMR δ (CDC1₃) : 7,61 (1H,

m) , 7,18 - 7,12 (2H, m) , 6,52 (1H, dd, J4, 2 Hz), 6,46 (1H, s) , 6,41, 1H, dd, J10, 2Hz), 5,47 a 6,36 (1H, 2 m) , 4,47 (1H, bd, J 9 Hz) , 3,37 (1H, m) , 1,55 (3H, s) , 1,21 (3H s) , 1,06 (3H, d. J 7 Hz) .

f * Analogickým způsobem jako meziprodukt 1 je možno připravit také následující meziprodukty:

Meziprodukt 2

6a, 9a-dif luor- 17a- [ (3-f uranyl karbonyl) oxy] -Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3 - oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina Kapalinová chromatografíe a hmotové spektrum:

doba retence 3,75 minut, m/z 507 MH⁺.

Meziprodukt 3

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (2. -thienylkarbonyl) oxy] -androsta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová.chromatografíe a hmotové spektrum:

£ doba retence 3,93 minut, m/z 523 MH⁺.

*

Meziprodukt 4 'Γ

6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (3’ -thienylkarbonyl) oxy] -androsta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografíe a hmotové spektrum: doba retence 3,95 minut, m/z 523 MH⁺.

Meziprodukt 5

• · • fc ·	•	fc· •	···· •	··	···· •
•	•
• · · ··	• ·	fc	•	fc fc	•	fc
• ·	•	•	• ·	•	•	• ·
··		fcfc	fcfc		• fc	• fc

17α-(benzoyl)oxy-6α,9α-di f luor-Ιΐβ-hydroxy- 16a-me thyl -3 -oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,02 minut, m/z 517 MH⁺.

Meziprodukt 6

9a-fluor-17a- [ (3-furanylkarbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16p-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Meziprodukt 6 byl připraven z 11β,17a-dihydroxy-9a-fluor-16β-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyseliny, připravené způsobem podle publikace Phillips a další, 1994, J. Med. Chem. 37, 3717-3729. Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,61 minut, m/z 48 9 MH⁺.

Meziprodukt 7

6a,9a-difluor-llp-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylthiofen-2-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,01 minut, m/z 537 MH⁺.

Meziprodukt 8

6a,9a-difluor-lip~hydroxy-17a-[(isoxazole-5-karbonyl)oxy]-Ιβα-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,69 minut, m/z 508 MH⁺.

Meziprodukt 9 • · · · ·«

17α- [ (5-chlorthiofen-2-karbonyl) oxy] -6α, 9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l, 4-άίθη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,36 minut, m/z 557/559 MH⁺.

Meziprodukt 10

6a, 9a-dif luor-17a- [ (3,5-dimethylisoxazol-4-karbonyl) oxy] - 11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,71 minut, m/z 536 MH⁺.

Meziprodukt 11

17a-[(5-chlor-4-methoxy-thiofen-3-karbonyl)oxy]-6a,9a-difluor- Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3 - oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 4,18 minut', m/z 587/589 MH⁺.

Meziprodukt 12

6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a- [ (4-methyl-1,2,3 -thiadiazol-5-karbonyl) oxy] -3 - oxoandrosta-1,4 -dien♦

-17β-karbothiokyselina .

Ϊ Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:doba retence 4,06 minut, m/z 539 MH⁺.

s

Meziprodukt 13

17a- [ (3-bromthiofen-2-karbonyl)oxy] -6a, 9a-difluor-ΙΙβ- hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina • · • · · · • ·

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,31 minut, m/z 601/603 MH⁺.

Meziprodukt 14

17a-[(2,5-dichlorthiofen-3-karbonyl) oxy] -6a,9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,59 minut, m/z 591/593/595 MH⁺.

Meziprodukt 15

17a- [ (5-bromfuran-2-karbonyl) oxy] -6a, 9a-difluor-ΙΙβ-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,14 minut, m/z 585/587 MH⁺.

Meziprodukt 16

6a,9a-difluor-17a- [ (2,5-dimethylfuran-3-karbonyl)oxy]-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,02 minut, m/z 535 MH⁺.

Meziprodukt 17

17a-[(3-chlorthiofen-2-karbonyl)oxy] -6a,9a-difluor-ΙΙβ- hydroxy- 16a-methyl- 3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-kárbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,27 minut, m/z 557/559 MH⁺.

Meziprodukt 18

6α, 9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a- [ (2-methylfuran

-3 - karbonyl) oxy] -3 - oxoandrosta-1,4-dien-173-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,92 minut, m/z 521 MH⁺.

Meziprodukt 19

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(3-methylfuran -2-karbonyl) oxy] -3- oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,85 minut, m/z 521 MH⁺.

Meziprodukt 20

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylisoxazol-4-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,74 minut, m/z 522 MH⁺.

Meziprodukt 21

6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(1-methyl-lH-pyrrol-2-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 520 MH⁺.

Meziprodukt 22

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,3-thiazol-4-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p~

-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,48 minut, m/z 524 MH⁺.

Meziprodukt 23

6α,9a-difluor-17a- [ (2,4-dimethyl-l,3-thiazol-5-karbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,72 minut, m/z 552 MH⁺.

Meziprodukt 24

6a,9a-difluor-llp-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylisoxazol-3-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,72 minut,, m/z 522 MH⁺.

Meziprodukt 25

6a, 9a-dif luor- 11β- hydroxy- 16a-methyl- 17a- [ (3-methylisoxazol-5-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,84 minut, m/z 522 MH⁺.

Meziprodukt 26

6a,9a-difluor-17a- [ (1,3-dimethyl-lH-pyrazol-5-kárbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,72 minut, m/z 535 MH⁺.

• ·

Meziprodukt 27

6α,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,2,3-thiadiazol-5-karbony1) oxy] -androsta-1,4-dien-17p~ -karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,89 minut, m/z 525 MH⁺.

Meziprodukt 28

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-17a- [ (isoxazol-3-karbonyl) oxy] -16a-methyl-3-oxóandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 508 MH⁺.

Meziprodukt 29

6a,9a-difluor-lip-hydroxy-17a-[(4-methoxythiofen-3-karbony1)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,74 minut, m/z 553 MH⁺.

Meziprodukt 30

6a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-17a-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-karbony!)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,70 minut, m/z 538 MH⁺.

Meziprodukt 31

6a,9a-difluor-17a- [ (3-ethoxythiofen-2-karbonyl)oxy]-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άϊεη-17β56

-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,85 minut, m/z 567 MH⁺.

Meziprodukt 32

6a, 9a-difluor-liP-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(1,2,3-thiadiazol-4-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,70 minut, m/z 526 MH⁺.

Meziprodukt 33

6a, 9a-difluor-liP-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (1H-pyrrol-2-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,75 minut, m/z 506 MH⁺.

Meziprodukt 34

6a, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,3-thiazol-5-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-άίβη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,29 minut, m/z 524 MH⁺.

Meziprodukt 35

6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(1,2,5-thiadiazol-3-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,65 minut, m/z 525 MH⁺.

·· «··· ·· · ·· ·

Meziprodukt 36

6α, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-17α-[(isothiazol-3-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

, doba retence 4,44 minut, m/z 524 MH⁺.

Meziprodukt 37

6a, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-17a-[(isothiazol-5-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-άίεη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 4,60 minut, m/z 524 MH⁺.

Meziprodukt 38

6a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(3 -methylthiofen-2-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-άίβη-17β-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 4,31 minut, m/z 537 MH⁺.

í·

Meziprodukt 39 ’’ 6a, 9a-dif luor-Ιΐβ- hydroxy-16a-me t hyl -17a- [ (4-methyl-l, 3í -thiazol-5-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-l,4-άίβη-17β-karbothiokyselina * Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,19 minut, m/z 538 MH⁺.

Meziprodukt 40

17a-[(l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5-karbonyl)oxy]-6a,9a58

-dif luor- 11β-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17β-]<3Γΐ>θΐ3ΐ!.ίθ}ζγ3θ1ίη3

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 4,33 minut, m/z 549 MH⁺.

Meziprodukt 41 , 6a, 9a-difluor-17a- [ (1-methyl-1H-imidazol-5-karbonyl) oxy] -11β-hydroxy- 16a-methyl-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17βS·

-karbothiokyselina

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,91 minut, m/z 521 MH⁺.

Příklad 1

S-fluormethylester 6a,9cc-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl) oxy] -Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny

Suspenze 2,5 g, 4,94 mmol meziproduktu 1 se rozpustí ve 25 ml bezvodého N,N-dimethylformamidu a přidá se 465 mg, 5,53 mmol hydrogenuhličitanu sodného. Směs se míchá při teplotě -20 °C, přidá se 0,77 ml, 6,37 mmol (- bromfluormethanu a směs se míchá 2 hodiny při -2 0 °C. Pak se přidá 2,57 ml, 24,7 mmol diethylaminu a směs se míchá ⁱ 30 minut při -20 °C. Pak se směs přidá k 93 ml 2M kyseliny chlorovodíkové a výsledná směs se míchá ještě 30 minut. Pak se přidá 300 ml vody a vzniklá sraženina se ς odfiltruje, promyje se vodou a suší ve vakuu při 50 °C, čímž se získá bílá pevná látka, která se nechá . překrystalovat ze směsi acetonu a vody, produkt se suší ve vakuu při teplotě 50 °C, čímž se ve výtěžku 88 % získá 2,351 g produktu. Doba retence 3,66 minut, m/z 539 MH⁺, NMR δ (CDC1₃) : 7,60 (1H, m) , 7,18-7,11 (2H, m) , 6,52 (1H, < · · ·· ·

dd, J 4,2 Hz), 6,46 (1H, s), 6,41 (1H, dd, J 10, 2 Hz),

5,95 a 5,82 (2H, dd, J 51, 9 Hz), 5,48 a 5,35 (ÍH, 2m),

4,48 (1H, m) , 3,48 (ÍH, m) , 1,55 (3H, s) , 1,16 (3H, s),

1,06 (3H, d, J 7 Hz).

Příklad 2

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(3-furanylkarbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 2 byla připravena z meziproduktu 2 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v přikladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,72 minut, m/z 539 MH⁺.

Příklad 3

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(2-thienylkarbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

I

Sloučenina z příkladu 3 byla připravena z meziproduktu 3 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v přikladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,81 minut, m/z 555 MH⁺.

Příklad 4

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-llp-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(3-thienylkarbonyl)oxy]-androsta-l,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 4 byla připravena z meziproduktu 4 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

• · ·· ti	•	titi •	• tititi •	titi	···· ti
ti	ti
• titititi	ti ti	•	•	ti ti	•	•
• · • titi ti	•	• • ti	• ti • ti	• • ti	•	• ti • ti

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,82 minut, m/z 555 MH⁺.

Příklad 5

S-fluormethylester 17a- (benzoyl)oxy-6a,9a-difluor-ΙΙβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l, 4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 5 byla připravena z meziproduktu 5 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,73 minut, m/z 549 MH⁺.

Příklad 6

S-fluormethylester 9a-fluor-17a-[(3-furanylkarbonyl)oxy]-Ιΐβ-hydroxy-16β-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 6 byla připravena z meziproduktu 6 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,61 minut, m/z 521 MH⁺.

Příklad 7

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2- f urany Ikarbonyl) oxy] -11β - hydroxy-16a-me thyl - 3 -oxoandrosta-1,4-dien- 17β-karbothίokyseliny

5Ό0 mg, 0,93 mmol sloučeniny z příkladu 1 a 15 0 mg Wilkinsonova katalyzátoru v roztoku ve směsi 14 ml toluenu a 7 ml ethanolu se míchá ve vodíkové atmosféře

hodin. Roztok se odpaří do sucha a odparek se čistí chromatografii (Biotage) při použití směsi ethylacetátu a petroletheru 1:2 jako elučního činidla, čímž se získá 435 mg žluté pevné látky, která se nechá překrystalovat ze směsi ethylacetátu a petroletheru, čímž se ve výtěžku 72 % získá 364 mg výsledného produktu.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,57 minut, m/z 541 MH⁺.

Příklad 8

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-liP-hydroxy-17a-[(isoxazole-5-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P~karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 8 byla připravena z meziproduktu 8 při použití postupu, analogického, postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,47 minut, m/z 540 MH⁺.

Příklad 9

S-fluormethylester 17a- [ (5-chlorthiofen-2-karbonyl)oxy]-6 a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta-T,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 9 byla připravena z meziproduktu 9 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,89 minut, m/z 589/591 MH⁺.

Příklad 10

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(3,562

- dimethyl i soxazol -4 -karbonyl) oxy] -1ΐβ-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta -1,4-dien-17β-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 10 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v přikladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,70 minut, m/z 568 MH⁺.

Příklad 11

S-fluormethylester 17a- [ (5-chlor-4-methoxy-thiofen-3-karbonyl) oxy] -6a, 9a-dif luor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien- 17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 11 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,99 minut, m/z 619/621 MH⁺.

Příklad 12

S-fluormethylester 6a, 9a-dif luor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(4-methyl-l,2,3-thiadiazol-5-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 12 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,74 minut, m/z 571 MH⁺.

*

Příklad 13

S-fluormethylester 17a- [ (3-bromthiofen-2-karbonyl)oxy]-6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4• ·

-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 13 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,92 minut, m/z 633/635 MH⁺.

Příklad 14

S-fluormethylester 17a- [ (2,5-dichlorthiofen-3-karbonyl) oxy] -6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 14 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 4,17 minut, m/z 623/625/627 MH⁺.

*

Příklad 15

S-fluormethylester 17a-[ (5-bromfuran-2-karbonyl)oxy]- 6a,9a-di fluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny £ Sloučenina z příkladu 15 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl ^? použit v příkladu 1.

, Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 615/617 MH⁺.

«

Příklad 16

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a-[(2,5-dimethylfuran-3-karbonyl)oxy]-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny • · · ·

Sloučenina z příkladu 16 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,85 minut, m/z 576 MH⁺.

Příklad 17

S-fluormethylester 17a- [ (3-chlorthiofen-2-karbonyl)oxy]- 6a, 9a-dif luor- Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl -3 - oxoandrosta -1,4 -dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 17 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,88 minut, m/z 589/591 MH⁺.

Příklad 18

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl -17a-[(2-methylfuran-3-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 18 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,74 minut, m/z 553 MH⁺.

Příklad 19

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(3-methylfuran-2-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z přikladu 19 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,66 minut, m/z 553 MH⁺.

Příklad 20 i« S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy- 16a-methyl' -17a- [(5-methylisoxazol-4-karbonyl)oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 20 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl '' použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,60 minut, m/z 554 MH⁺.

Příklad 21

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(l-methyl-lH-pyrrol-2-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien’-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 21 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

• Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,72 minut, m/z 552 MH⁺.

'•9

Příklad 22

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (1,3-thiazol-4-karbonyl)oxy] -androsta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny • · • · · ·

Sloučenina z příkladu 22 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,47 minut, m/z 552 MH⁺.

%

Příklad 23

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a-[(2,4-dimethyl-1,3-thiazol-5-karbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P~karbothiokyseliny * Sloučenina z příkladu 23 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl ' použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum: doba retence 3,51 minut, m/z 584 MH⁺.

Příklad 24

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylisoxazol-3-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 24 byla připravena z meziproduktu _b 24 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

·· Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,65 minut, m/z 554 MH⁺.

. Příklad 25

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(3-methylisoxazol-5-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z přikladu 25 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,52 minut, m/z 554 MH⁺.

Příklad 26

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(1,3-dimethyl-1H-pyrazol - 5 - karbonyl) oxy] -1 ΐβ-hydroxy- 16a-methyl -3 -oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 26 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,52 minut, m/z 567 MH⁺.

Příklad 27

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,2,3-thiadiazol-5-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 27 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,47 minut, m/z 557 MH⁺.

Příklad 28

S-4: luormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-17a- [ (isoxazol-3-karbonyl) oxy] -16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny

9 · · ·· · ·· 9

Sloučenina z příkladu 28 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografíe a hmotové spektrum:

doba retence 3,4 8 minut, m/z 54 0 MH⁺.

Příklad 29

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-17a- [ (4-methoxythiofen-3-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 29 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografíe a hmotové spektrum:

doba retence 3,69 minut, m/z. 585 MH⁺.

Příklad 30

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(2-methyl-l,3-thiazol-4-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 30 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografíe a hmotové spektrum:

doba retence 3,47 minut, m/z 570 MH⁺.

Příklad 31 s'-fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a- [ (3-ethoxythiofen-2-karbonyl)oxy]-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-dien-17p~karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 31 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,68 minut, m/z 599 MH⁺.

Příklad 32

S-fluormethylester 6a, 9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-3- oxo-17a- [ (1,2,3-thiadiazol-4-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 32 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,3 0 minut, m/z 557 MH⁺.

Příklad 33

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (lH-pyrrol-2-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17p~karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 33 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,42 minut, m/z 528 MH⁺.

Příklad 34

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (1,3-thiazol-5-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny • · · · ♦ · • to ··«· • to ··· ·« · · · « • · to · to « toto# to to to to to to e to eee e e • · ···· ···· ··· to ·· ·· <· ·«

Sloučenina z příkladu 34 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,44 minut, m/z 556 MH⁺.

Příklad 35

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,2,5-thiadiazol-3-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-173-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 35 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,53 minut, m/z 557 MH⁺.

Příklad 36

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-17a-[(isothiazol-3-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 36 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,51 minut, m/z 556 MH⁺.

Příklad 37

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-17a-[(ísothiazol-5-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny

• · « 9 ·	•	<· •	9999 •	<·	9	····
* ····	• ·	•	• 9	•	9	r
• · ··· ·	•	• ··	9 9 99	•	9 99	• · 99

Sloučenina z příkladu 37 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,59 minut, m/z 556 MH⁺.

Příklad 38

6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylthiofen-2-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 38 byla připravena z meziproduktu 7 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 569 MH⁺.

Příklad 39

S-methylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy]-liP-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Suspenze 507 mg, 1 mmol. meziproduktu 1 se rozpustí v 5 ml bezvodého dimethylformamidu a přidá se 92 mg, 1,1 mmol hydrogenuhličitanu sodného. Směs se míchá při teplotě 0 °C, přidá se 0,125 ml, 2 mmol jodmethanu a směs se míchá 2,5 hodiny při teplotě 0 až 5 °C. Pak se přidá 0,41 ml, 4 mmol diethylaminu a směs se míchá ještě 30 minut při teplotě 5 °C. Pak se ke směsi přidá 25 ml 2M kyseliny chlorovodíkové, čímž vznikne bílá sraženina. Přidá se ještě 75 ml vody a sraženina se odfiltruje, čímž se ve výtěžku 88 % získá 456 mg výsledného produktu ve formě bílé pevné látky.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 569 MH⁺.

Příklad 40

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-llp-hydroxy-16a-methyl -3-oxo-17a- [ (3-methylthiofen-2-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 40 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,78 minut, m/z 569 MH⁺.

Příklad 41

S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl -17a- [ (4-methyl-l, 3-thiazol-5-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4 -dien- 17β-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 41 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,51 minut, m/z 570 MH⁺.

Příklad 42

S-fluormethylester 17a- [ (l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5- karbonyl) oxy] -6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien- 17β-karbothiokyseliny

Sloučenina z příkladu 42 byla připravena z meziproduktu při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

······· · ·· · · · • · ···· ···· ··· · ·· ·· ·· · · doba retence 3,64 minut, m/z 581 MH⁺.

Příklad 43

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(1-methyl-lH-imidazol-5-karbonyl)oxy]-11β-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny Sloučenina z příkladu 43 byla připravena z meziproduktu 41 při použití postupu, analogického postupu, který byl použit v příkladu 1.

Kapalinová chromatografie a hmotové spektrum:

doba retence 3,14 minut, m/z 553 MH⁺.

Farmakologická účinnost

Farmakologická účinnost in vitro

Farmakologická účinnost byla sledována in vitro zkouškou na agonistickou účinnost na glukokortikoidy, podle jejíhož výsledku je možno předpovídat protizánětlivou a antialergickou účinnost in vivo.

Funkční zkouška byla provedena způsobem podle publikace K. P. Ray a další, Biochem J., 1997, 328, 707715. Buňky A549 po transfekci reportérovým genem, obsahujícím prvky NF-κΒ z promotoru genu ELÁM, vázané na sPAP (secernovaná alkalická fosfatáza) se zpracovávají působením zkoumané látky v příslušné dávce 1 hodinu při teplotě 37 °C. Pak se buňky stimulují faktorem nekrózy nádorů TNF v dávce 10 ng/ml celkem 16 hodin. V průběhu této doby se měří množství vytvořené alkalické fosfatázy běžnou kolorimetrií. Pak byly připraveny křivky závislosti účinku na dávce a z těchto křivek byla stanovena hodnota EC₅₀.

Při této zkoušce byla pro sloučeniny z příkladů 1 až 9, 11 až 13, 15 až 22 a 24 až 42 hodnota EC₅₀ menší než 1 nM. Pro sloučeniny příkladů 10, 14 a 23 byla hodnota EC50 1, 2 a 17 nM.

Receptor glukokortikoidů, GR může vykonávat svou funkci alespoň dvěma odlišnými mechanismy, a to řízením exprese genu přímou vazbou GR na specifické sekvence v promotoru genu a regulací exprese genu přes jiné faktory, ovlivňující transkripci, například NFkB nebo AP-1 přímou interakcí s GR.

Ve variantě svrchu uvedeného postupu byly ke sledování těchto funkcí vytvořeny dva reportérové plasmidy a tyto plasmidy byly odděleně uloženy pomocí transfekce do lidských epitheliálních buněk plic A549. První buněčná linie obsahuje reporterový gen luciferázy ze světlušek. Pod řízením syntetického promotoru, který specificky odpovídá na aktivaci transkripčního faktoru NFkB při stimulaci TNFa. Druhá buněčná linie obsahuje reporterový gen luciferázy z renilly pod řízením syntetického promotoru, který je tvořen třemi kopiemi prvku pro odpověď na glukokortikoid a který odpovídá na přímou simulaci glukokortikoidy. Současné měření transaktivace a transreprese bylo prováděno tak, že obě *

buněčné linie byly smíseny v poměru 1:1 na plotně s 96 vyhloubeními při použití 40 000 buněk v jednom vyhloubení, buňky byly pěstovány přes noc při 37 °C. Zkoumané látky byly rozpuštěny v DMSO a přidány k buňkám při konečné koncentraci DMSO 0,7 %. Po inkubaci, trvající

hodinu, bylo přidáno 0,5 ng/ml TNFa (R&D Systems) a po dalších 15 hodinách při teplotě 37 °C byly měřeny koncentrace obou luciferáz při použití zkušebního balíčku Packard Firelite podle návodu výrobce. Pak byly zkonstruovány křivky závislosti odpovědi na dávce a z nich byly určeny hodnoty EC₅₀.

	Transaktivace GR	Transreprese
	ED_SO (nM)	EDso (nM)
Příklad 1	0,06	0,20
Metabolit vzorce X	>250	>1000
Fluticasonpropionát	0,07	0,16

Stanovení účinnosti na receptorů progesteronu

V publikaci Di Lorenzo a další, Cancer Research,

1991, 51, 4470-4475 se prokazuje, že buněčná linie zhoubného nádoru mléčné žlázy T47D upravuje koncentraci endogenní alkalické fosfatázy vlivem progestinů. Pokus byl proveden tak, že buňky T47D byly naočkovány na plotny s 96 vyhloubeními při hustotě 1 x 10⁵ buněk v jednom vyhloubení a byly pěstovány přes noc při teplotě 37 °C. Steroidy byly rozpuštěny v DMSO a byly přidány k buněčnému materiálu při konečné koncentraci DMSO 0,7 %, pak byly buňky inkubovány 24 hodin při teplotě 37 °C. Pak byly buňky promyty PBS a rozrušeny pufrem RIPA, který obsahuje 1 % prostředku IGEPAL, 0,5 % deoxycholátu sodného a 0,1 % SDS ve fyziologickém roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem. Aktivita alkalické fosfatázy ·* byla měřena spektrofotometricky při 405 nm při použití 1,5 mg/ml p-nitrofenylfosfátu jako substrátu v 1M diethanolaminu s 0,28M chloridu sodného a 0,5 mM chloridu hořečnatého. Byly zkonstruovány křivky závislosti seee e e • · · odpovědi na dávce a z těchto křivek byly stanoveny hodnoty EC₅₀.

Sloučenina z příkladu 12 byla zkoumána na svou účinnost na progesteron svrchu uvedeným způsobem a selektivnost jejího účinku byla stanovena vydělením hodnoty ED₅₀ na receptoru pro progesteron hodnotou ED₅₀ na receptoru pro glukokortikoid.

Selektivita sloučeniny z příkladu 12 byla 364, pro srovnání je možno uvést selektivitu fluticasonpropionátu, která je 23.

Farmakologická účinnost in vivo

Farmakologická účinnost in vivo byla sledována na modelu eosinofilie u krys kmene Brown Norway, sensitizovaných vaječným albuminem. Tento model napodobuje eosinofilii, vyvolanou v plicích alergenem, která je hlavní složkou plicního zánětu u asthmatu.

Sloučenina z příkladu 1 vyvolávala v závislosti na použité dávce v tomto modelu inhibici eosinofilie v plicích po intratracheálním IT podání suspenze ve fyziologickém roztoku chloridu sodného 30 minut před podáním vaječného albuminu. Statisticky významnou inhibici je možno pozorovat po jediné dávce 30 gg sloučeniny z příkladu 1, přičemž reakce byla statisticky významně (p=0,016) vyšší než reakce na ekvivalentní dávku fluticasonpropionátu při provádění téže zkoušky (69% inhibice pro sloučeninu z příkladu 1, 41% inhibice při podání fluticasonpropionátu) .

• · 4 ·

Na krysím modelu pro involuci brzlíku bylo možno pozorovat, že po podání IT dávky 100 μ9 sloučeniny z příkladu 1 po dobu 3 dnů pomalejším snižování hmotnosti brzlíku (p=0,004) ve srovnání s podáním ekvivalentní dávky fluticason propionátu při stejném pokusu (67 % snížení hmotnosti brzlíku v případě sloučeniny z příkladu 1, 78 % snížení hmotnosti brzlíku po podání fluticasonpropionátu).

Uvedené výsledky prokazují lepší therapeutický index sloučeniny z příkladu 1 ve srovnání s fluticasonpropionátem.

Metabolismus v jaterních buňkách krysy a člověka in vitro

Inkubace sloučeniny z příkladu 1 s jaterními buňkami krysy nebo člověka prokazuje, že uvedená látka je metabolizována stejným způsobem na tentýž významný metabolit, kterým je 17β-karboxylová kyselina vzorce X. Byla sledována rychlost vzniku tohoto metabolitu při inkubaci sloučeniny z příkladu 1 s lidskými jaterními buňkami (37 °C, koncentrace účinné látky 10 μΜ, jaterní buňky ze 3 dobrovolníků, 0,2 a 0,7 milionů buněk/ml) .

Bylo prokázáno, že v přítomnosti sloučeniny z příkladu 1 dochází přibližně k 5krát rychlejšímu metabolismu uvedené látky než v přítomnosti fluticasonpropionátu.

Osoba	Hustota buněk (miliony/ml)	Produkce metabolitu (pmol/h)
		Sloučenina z příkladu 1	Fluticason- propionát
1	0,2	48,9	18,8
1	0,7	73,3	35,4
2	0,2 .	118	9,7
2	0,7	903	23,7
3	0,2	102	6,6
3	0,7	580	23,9

Medián produkce metabolitu je 102 až 118 pmol/h pro sloučeninu z příkladu 1 a 18,8 až 23,0 pmol/h pro fluticasonpropionát.

Farmakokinetika po nitrožilním (IV) a perorálním podání u krys

Sloučenina z příkladu 1 byla podána perorálně v dávce 0,1 mg/kg a IV rovněž v dávce 0,1 mg/kg krysím samcům kmene Wistar Han a byly stanoveny farmakokinetické parametry. Sloučenina z příkladu 1 měla zanedbatelnou biologickou dostupnost při perorálním podání 0,9 % a clearance z plasmy 47,3 ml/min/kg, což se blíží průtoku krve játry. Clearance pro fluticasonpropionát je 45,2 ml/min/kg.

*

Krysím samcům kmene Wistar Han byly podány také nitrožilně sloučeniny z příkladů 4, 19, 24, 25 a 28. Odpovídající hodnoty clearance v krevní plasmě byly 49, 48, 47, 46 a 51 ml/min/kg.

• · _ jp · · ·

Farmakokinetika po intratracheálním podání suché práškové látky u vepřů

Dvěma anestetizovaným vepřům byla intratracheálně podána homogenní směs 1 mg sloučeniny z příkladu 1 a 1 mg fluticasonpropionátu, šlo o suchou směs v 10 % hmotnostních v laktóze. Pak byly odebírány sériově vzorky krve až do doby 8 hodin po podání. Byly stanoveny koncentrace sloučeniny z příkladu 1 a koncentrace fluticasonpropionátu v krevní plasmě a byla provedena analýza pomocí kapalinové chromatografie a hmotového spektra, spodní hranice kvantitativního stanovení při použití tohoto postupu byla 10 pg/ml pro sloučeninu z příkladu 1 a 20 pg/ml pro fluticasonpropionát. Při použití těchto postupů bylo možno stanovit sloučeninu z příkladu 1 kvantitativně až do 2 hodin po podání, kdežto fluticasonpropionát bylo možno prokázat až do 8 hodin po podání. Maximální koncentrace v plasmě byla u obou sloučenin pozorována přibližně 15 minut po podání.

Poločas v krevní plasmě po podání 0,1 mg/kg těchto látek nitrožilně byl použit ke stanovení plochy pod křivkou AUC pro sloučeninu z příkladu 1. Hodnota AUC (0-inf) kompenzuje nedostatek údajů mezi sloučeninou z příkladu 1 a fluticasonpropionátem, který je možno prokázat v průběhu dalšího časového období.

Hodnoty C_max a AUC (0-inf) prokazují podstatně sníženou systemickou expozici sloučenině z příkladu 1 ve srovnání s fluticasonpropionátem.

Cf ··«e · · ·

	Cmax (pg/ml)	AUC (0-inf)(h.pg/ml)
vepř 1	vepř 2	vepř 1	vepř 2
Sloučenina
z příkladu 1	117	81	254	221
Fluticasonpropionát	277	218	455	4 95

Farmakokinetické parametry pro obě látky jsou u anestetizovaných vepřů totožné i po nitrožilním podání uvedené směsi obou látek v dávce 0,1 mg/kg. Také clearance obou látek je při tomto pokusu podobná.

Vynález byl popsán v souvislosti s některými výhodnými provedeními. Je však zřejmé, že by bylo možno navrhnout ještě řadu běžných změn a modifikací, rovněž spadajících do rozsahu vynálezu. Vynález proto nemůže být omezen na provedení, která byla popsána v příkladové části přihlášky vynálezu.

Zastupuj e:

ť

Φ ·» φφφφ φφ φ φφ φ φ φ φ φφφ φ φφφφ φφφ φφφφ φ φφφφ φφφ • · φφ φφ φφ

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Estery steroidních thiokyselin obecného vzorce I

R_s kde

Ri znamená Cl-C6alkyl nebo Cl-C6halogenalkyl,

R₂ znamená -C(=O)-aryl nebo -C(=0)-heteroaryl,

R₃ znamená atom vodíku, methyl, (v konfiguraci α nebo β) nebo methylenovou skupinu,

R₄ a R₅, stejné nebo odlišné znamenají atom vodíku nebo atom halogenu a přerušovaná čára označuje jednoduchou nebo dvojnou vazbu, jakož i soli a solváty těchto látek.
2. Estery podle nároku 1, v nichž Ri znamená fluormethyl, chlormethyl, brommethyl nebo 2'-fluorethyl.
3. Estery podle nároku 2, v nichž Ri znamená fluormethyl.
4. Estery podle nároku 1 až 3, v nichž R₂ znamená C(=0)-heteroaryl.

fc · fc · « ·

82·’·
5. Estery podle nároku 4, v nichž heteroaryl znamená

5-členný heterocyklický aromatický kruh, obsahující 1 až 3 heteroatomy ze skupiny 0, N a S, popřípadě substituovaný.
6. Estery podle nároku 5, v nichž heterocyklický kruh je substituován jedním nebo větším počtem substituentů ze skupiny Cl-C6alkyl, Cl-C6alkoxyskupina a atom halogenu.
7. Estery podle nároku 5 nebo 6, v nichž je heterocyklickým kruhem furanyl, pyrrolyl nebo thiofenyl.
8. Estery podle nároku 7, v nichž je heterocyklickým kruhem furanyl nebo thiofenyl.
9. Estery podle nároku 5 nebo 6, v nichž 5-členný heterocyklický kruh obsahuje 2 heteroatomy ze skupiny 0,

N a S.
10. Estery podle nároku 9, v nichž se heterocyklický kruh volí ze skupiny thiazolyl, isothiazolyl, pyrazolyl a imidazolyl.
11. Estery podle nároku 5 nebo 6, v nichž 5-členný heterocyklický kruh obsahuje 3 heteroatomy ze skupiny 0,

N a S.
12. Estery podle nároku 11, v nichž heterocyklickým kruhem je thiadiazolyl.
13. Estery podle některého z nároků 5 až 12, v nichž je heterocyklický kruh substiuován jedním nebo větším počtem substituentů ze skupiny Cl-C6alkyl a atom halogenu.

oo

• 9 • 9 9 99 9 99·· • 99 9999 9 9 9 • 9999 9 9 9 9 9 · 9 9 • 9 «9 · 9 9 99 9 9 99 9 9 99 9 9 99
14. Estery podle některého z nároků 1 až 13, v nichž R₃znamená methyl.
15. Estery podle některého z nároků 1 až 14, v nichž R₄a R₅, stejné nebo odlišné, znamenají atom vodíku, fluoru nebo chloru.

’
16. Estery podle některého z nároků 1 až 15, v nichž R₄ a R₅, stejné nebo odlišné, znamenají atom vodíku nebo fluoru.
17. Estery podle některého z nároků 1 až 16, v nichž R₄a R₅ znamenají atom fluoru.
18. Estery podle nároku 1, v nichž R₃ znamená fluormethyl, R2 znamená -C(=0)-2-furanyl, R₃ znamená methyl, R₄ a R₅, stejné nebo odlišné, znamenají atom vodíku nebo fluoru a přerušovaná čára znamená jednoduchou nebo dvojnou vazbu.
19. Estery podle nároku 18, v nichž R₄ a R₅ znamenají ť atomy fluoru.
20. Estery podle některého z nároků 1 až 19, v nichž ₄ přerušovaná čára znamená dvojnou vazbu.

,
21. Esetry podle nároku 1 ze skupiny:

S^fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a-[(3-furanylkarbonyl)oxy]-liP-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-llp-hydroxy-16a-methyl84

-3-οχο-17α- [ (2-thienylkarbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3 - oxo-17a- [ (3 - thienylkarbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 17a- (benzoyl)oxy-6a,9a-difluor-11β- hydroxy- 16a-methyl- 3 - oxoandrosta-1,4-dien-17P~

-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 9a-fluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy] -11β-hydroxy-16β-methyl-3-oxoandrosta-1,4-άίεη-17β-karbothiokyseliny a

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-17a- [ (2-furanylkarbonyl) oxy] -l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrost-4 -εη-17β-karbothiokysel iny, nebo soli a solváty těchto látek.
22. Estery obecného vzorce I podle nároku 1 ze skupiny: S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-17a- [ (isoxazole-5-karbonyl) oxy] -16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokysel iny,

S-fluormethylester 17a- [ (5-chlorthiofen-2-karbonyl)oxy]-6a, 9a-dif luor-11β-hydroxy-16a-methyl-3 - oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a-[(3,5-dimethylisoxazol-4-karbonyl) oxy ] -11 β - hydroxy -16a -methyl -3 - oxoandrosta-1,4 - dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 17a- [ (5-chlor-4-methoxy-thiofen-3-karbonyl) oxy] -6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6α,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(4-methyl-1,2,3-thiadiazol-5-karbonyl)oxy]-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17P~karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 17a-[(3-bromthiofen-2-karbonyl)oxy]-6a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l,4-dien-17P~karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 17a- [ (2,5-dichlorthiofen-3-karbonyl)oxy]-6a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 17a-[(5-bromfuran-2-karbonyl)oxy]-6a,9a-difluor-1ΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-17a-[(2,5-dimethylfuran-3 -karbonyl)oxy]-11β-hydroxy-16a-methy1-3-oxoandrosta-1,'4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 17a- [ (,3-chlorthiofen-2-karbonyl) oxy] -6a,9a-difluor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(2-methylfuran-3-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(3-methylfuran-2-karbonyl)oxy]- 3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylisoxazol-4-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl• · · ·

-17α- [ (1-methyl-IH-pyrrol-2-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17^-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (1,3-thiazol-4-karbonyl)oxy] -androsta-1,4-dien-173~karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-17a- [ (2,4-dimethyl-l, 3- thiazol - 5 - karbonyl) oxy] - 11β-hydroxy- 16a-methyl -3 -oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a- [(5-methylisoxazol-3-karbonyl)oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a- [ (3-methylisoxazol-5-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-17a- [(1,3-dimethyl-lH-pyrazol-5-karbonyl) oxy] -l^-hydroxy-16a-methyl-3 -oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-ΐΐβ-hydroxy- 17a- [ (isoxazol-3-karbonyl) oxy] - 16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4 -dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-difluor-l^-hydroxy-17a- [ (4- me thoxy thiof en- 3 - karbonyl) oxy] -16a-methyl - 3 - oxoandrosta -1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a- [ (2-methyl-l, 3-thiazol-4-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a, 9a-difluor-17a-[(3-ethoxythiofen-2

-karbonyl) oxy] -l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-l, 4• ·

-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-dif luor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(1,2,3-thiadiazol-4-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (IH-pyrrol-2-karbonyl)oxy] -androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [ (1,3-thiazol-5-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,2,5-thiadiazol-3-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-Ιΐβ-hydroxy-17a-[(isothiazol-3-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-lip-hydroxy-17a-[(isothiazol-5-karbonyl)oxy]-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

6a,9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-17a-[(5-methylthiofen-2-karbonyl)oxy]-3-oxoandrosta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny,

S-methylester 6a,9a-difluor-17a-[(2-furanylkarbonyl)oxy]-llp-hydroxy-16a-methyl-3-oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-fluormethylester 6a,9a-difluor-l^-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a-[(3-methylthiofen-2-karbonyl)oxy]-androsta-1,4-dien-17P-karbothiokyseliny, • ·

S-f luormethylester 6α, Sa-difluor-lip-hydroxy-iea-methyl-17a- [ (4-methyl-l, 3-thiazol-5-karbonyl) oxy] -3-oxoandrosta -1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 17a- [ (l-ethyl-3-methyl-lH-pyrazol-5-karbonyl) oxy] -6a, 9a-difluor-lip-hydroxy-16a-methyl-3* -oxoandrosta-1,4-dien-17p-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-17a- [ (1-methyl-lH-imidazol-5-karbonyl) oxy] - llp-hydroxy-16a-methyl-3 i -oxoandrosta -1,4 - dien - 17P-karbothiokyseliny,

S-f luormethylester 6a, 9a-dif luor-11β-hydroxy-16a-methyl-3-oxo-17a- [(1,2,3-thiadiazol-5-karbonyl) oxy] -androsta-1,4-dien-17β-karbothiokyseliny, nebo soli nebo solváty těchto látek.
23. Estery obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo jejich fyziologicky přijatelné soli nebo solváty pro použití ve veterinárním nebo lidském lékařství.
24. Použití esterů obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo jejich fyziologicky přijatelných solí nebo solvátů pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení zánětlivých a/nebo alergických stavů.
25. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící , s e t i m, že jako svou účinnou složku obsahuje estery obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo jejich fyziologicky přijatelné soli nebo solváty, popřípadě ve směsi s jedním nebo větším počtem fyziologicky přijatelných ředidel nebo nosičů.

• · · · · ·
26. Farmaceutický aerosolový prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje estery obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo fyziologicky přijatelné soli nebo solváty těchto látek a jako hnací prostředek fluorovaný uhlovodík nebo chlorovaný a fluorovaný uhlovodík s obsahem vodíku, _s popřípadě ve směsi se smáčedlem nebo s pomocným rozpouštědlem.
27. Farmaceutický prostředek podle nároku 25, vyznačující se tím, že obsahuje ještě další účinnou látku.
28. Farmaceutický prostředek podle nároku 27, vyznačující se tím, že další účinnou . látkou je agonista p₂-adrenoreceptorů.
29. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m, že obsahuje kombinaci esteru obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo jeho fyziologicky přijatelnou sůl nebo solvát s inhibitorem PDE4 .
30. Způsob léčení člověka nebo jiného živočicha, trpícího zánětlivým nebo alergickým stavem, vyznačující se tím, že se podává účinné . množství esteru obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 22 nebo jeho fyziologicky přijatelné soli * nebo solvátu.
31. Způsob výroby esterů obecného vzorce I podle nároku 1,vyznačující se tím, že se podrobí alkylaci sloučenina obecného vzorce II 'b

Ř_s kde obecné symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
32. Způsob podle nároku 31, vyznačující se tím, že se alkylace provádí reakcí sloučeniny obecného vzorce II s příslušným alkylhalogenidem nebo halogenalkylhalogenidem.
33. Sloučenina obecného vzorce II

I kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
34. Způsob výroby esterů obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že v případě, že R₄ znamená atom fluoru, nechá se reagovat sloučenina obecného vzorce VI • « β β β • · kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1, se zdrojem fluoru.
35. Způsob výroby esterů obecného vzorce I podle nároku 1, nebo jejich solí nebo solvátů, vyznačující se t i m, že se odstraní ochranná skupina nebo maskovací skupina ze sloučeniny obecného vzorce I, v níž je Ιΐβ-hydroxyskupina chráněna nebo maskována.
36. Způsob podle nároku 35, vyznačující se tím, že v případě, že 11β-hydroxyskupina je chráněna, odstraní se ochranná skupina ze sloučeniny obecného vzorce XV

O (XV) • to to to to to kde P znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině a ostatní symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
37. Způsob podle nároku 35,vyznačuj ící se tím, že v případě, že Ιΐβ-hydroxyskupina je maskována jako karbonylová skupina, redukuje se sloučenina obecného vzorce XVI kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
38. Sloučenina obecného vzorce VI «* kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
39. Sloučenina obecného vzorce XV ·· ··· · kde P znamená ochrannou skupinu na hydroxyskupině a kde ostatní symboly maj í význam, uvedený v nároku 1
40. Sloučenina obecného vzorce XVI nebo její derivát, kde ketonová skupina v poloze 11 je maskována a kde ostatní symboly maj í význam, uvedený v nároku 1.
41. Sloučenina obecného vzorce VII ⁰ - ΈΗ

O (VII)

I • »· ©· · · · * ··«« • ······ /Λ Λ • · · · * · · ··· · · • · · · · · · a a • · ·· ·· ·« ·« nebo její sůl, kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
42. Sloučenina obecného vzorce X nebo j e j í. sůl, kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku 1.
43. Sloučenina obecného vzorce VIII kde jednotlivé symboly mají význam, uvedený v nároku