TWI679279B - 檢測成人發作型史笛兒氏症之罹病風險及預後之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係揭露一種新穎生物標幟物：miR-134、miR-223、IL-18，由於該生物標誌物係與成人發作型史笛兒氏症及其活動度具有正相關，因此，藉由檢測至少一生物標幟物於樣本中之表現量，係能夠達到檢測樣本提供者之罹病風險及預後之功效。

Description

檢測成人發作型史笛兒氏症之罹病風險及預後之方法
本發明係有關於一種生物標幟物及其檢測用途，特別係指一種檢測成人發作型史笛兒氏症之罹病風險及預後之方法。
按，成人發作型史笛兒氏症（Adult-onset Still’s disease，簡稱AOSD）是一種侵犯多處器官之免疫疾病，其臨床特徵係為持續性高燒、易於消褪之皮膚紅疹、關節炎、喉嚨痛、淋巴結與肝脾腫大、嗜中性白血球為主之白血球過多症或侵犯其他內臟器官。
然由於成人發作型史笛兒氏症之臨床特徵皆不獨特，患者發病時常會因為持續發燒之病徵而被投予不需要之抗生素，或是進行不必要之侵入性檢查，卻仍無法查出病因。目前對於成人發作型史笛兒氏症之診斷係多仰賴醫生綜合判斷患者之臨床症狀、實驗室檢查數據、治療狀態等，因而大多數患者無法被快速且準確地確診，而造成疾病治療延誤之情形發生。
由上可知，目前臨床上係缺少一種能夠用於診斷成人發作型史笛兒氏症之工具及方法。
本發明之主要目的係在於提供一種微型核糖核酸，能夠用於檢測成人發作型史笛兒氏症之發生、預後及活動度。
本發明之另一目的係在於提供一種檢測罹患成人發作型史笛兒氏症風險之方法，其係透過檢測樣本中miR-134、miR-223、IL-18或上述至少二生物標幟物之表現量，達到判斷樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症患者之可能性。
本發明之次一目的係在於提供一種評估成人發作型史笛兒氏症患者之疾病活動度，其係透過檢測樣本中miR-134或/及IL-18之表現量，評估成人發作型史笛兒氏症患者之疾病活動度。
本發明之又一目的係在於提供一種評估成人發作型史笛兒氏症預後之方法，其係能夠係透過檢測樣本中miR-134、miR-223、IL-18或上述至少二生物標幟物之表現量，評估成人發作型史笛兒氏症患者之預後狀態。
本發明之次一目的係在於提供一種醫藥組合物，其係針對miR-134或miR-223之作用靶點設計，而能夠達到改善或減緩成人發作型史笛兒氏症之功效。
緣是，為能達成上述目的，本發明係揭露一種新穎生物標幟物：miR-134、miR-223、IL-18，由於該生物標誌物係與成人發作型史笛兒氏症及其活動度具有正相關，因此，藉由檢測至少一生物標幟物於樣本中之表現量，係能夠達到檢測樣本提供者之罹病風險及預後之功效。
於本發明之一實施例中係揭露一種檢測罹患成人發作型史笛兒氏症風險之方法，其係檢測一樣本中至少一生物標誌物之表現量，其中，該生物標幟物係為miR-134、miR-223或IL-18；當樣本中該生物標幟物之表現量係高於一健康樣本中該生物標幟物之表現量時，該樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症風險為高，而當樣本中該生物標幟物之表現量係低於一健康樣本中該生物標幟物之表現量時，該樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症風險為低。。
於本發明之另一實施例中係揭露一種評估成人型史迪兒氏症預後之方法，其係於接受一治療方法前後分別檢測一樣本中至少一生物標誌物之表現量，其中，該生物標幟物係為miR-134、miR-223或IL-18；當該生物標幟物於接受該治療方法後之該樣本內之表現量高於接受該治療方法前之該樣本內之表現量時，顯示該樣本提供者對於該治療方法之反應為差，而當該生物標幟物於接受該治療方法後之該樣本內之表現量低於接受該治療方法前之該樣本內之表現量時，顯示該樣本提供者對於該治療方法之反應為良好。
於本發明之實施例中，該樣本係以血液為佳，而檢測樣本中miR-134、miR-223 或IL-18表現之方法係得為本發明所屬技術領域周知之技術進行，例如QRT-PCR、ELISA等
更進一步地，本發明之實施例中係揭露一種用於治療或減緩成人發作型史笛兒氏症之醫藥組合物，其包含有一有效量之miR-134抑制劑或/及TLR3受體抑制劑，及至少一藥學上接受之載體。
本發明係揭露以至少一微型核糖核酸及/或一蛋白質作為發作型史笛兒氏症之生物標幟物，而能用於檢測成人發作型史笛兒氏症之疾病活動度、罹病風險及預後狀態，其中，該微型核糖核酸係為miR-134或miR-223，該蛋白質係為IL-18。
更進一步來說，由於miR-134、miR-223及IL-18之表現量與成人發作型史笛兒氏症之疾病活動度及關節炎等病徵有正相關，因此，藉由檢測如血液等樣本中miR-134、miR-223及IL-18之表現量，係能用於評估分析該樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症之風險，或用於評估成人發作型史笛兒氏症患者揭露一預定治療方法後之預後情形，或得評估成人發作型史笛兒氏症患者之疾病活動度。
本發明所揭疾病活動度或活動度係指臨床上經醫生判斷一疾病之活躍程度，以本發明之成人發作型史笛兒氏症來說，若經醫生判斷患者之疾病活動指數為高，則會稱為活動型（active）成人發作型史笛兒氏症，反之，若經醫生判斷患者之疾病活動指數為低，則稱為非活動型（inactive）成人發作型史笛兒氏症。
為能更進一步證實本發明之功效，以下將茲舉若干實例並搭配圖式說明如后。
以下臨床實驗係經由臺中榮民總醫院臨床試驗倫理委員會批准進行（CF11224），並且有依照相關規範獲得所有受試者之書面同意。
以下實例中所述樣本，若未另外加以說明，係為各組別中之受試者所提供之血漿樣本。
實例一：臨床試驗
實驗組：符合山口氏標準（Yamaguchi criteria）且未接收治療之罹患成人發作型史笛兒氏症連續患者（下稱AOSD患者），共12位。該些AOSD患者皆未罹患感染、惡性腫瘤或其他風濕性疾病。每一位AOSD患者之疾病活動度係以改良Pouchot分數計算。
該些AOSD患者常見表現之分析，包含9位表現弛張熱（Spiking fever）（75.0％）、8位表現逐漸消失皮疹（evanescent rash）（66.7%）、7位表現喉嚨痛（58.3％）、5位表現關節炎（41.7％）、4位表現淋巴結腫大（33.3％）及3位表現肝脾腫大（25.0％）。
健康控制組：招募年齡相符且未罹患任何風濕性疾病之健康成人。
驗證組：招募18位AOSD患者進行即時QRT-PCR驗證來自微陣列分析之miRNA差異性表現。
疾病控制組：招募符合美國風濕病學會（American College of Rheumatology）所訂定之標準的22位全身性紅斑狼瘡患者，該些患者係與AOSD患者有部份相同之臨床表現。
其中，實驗組與健康控制組之患者年齡及女性比例間係無顯著差異。
所有組別中之AOSD患者於進行miRNA檢測後，皆會接受皮質類固醇及/無非甾體抗炎藥（NSAIDs）之藥物，其中，10位AOSD患者使用甲氨蝶呤，8位AOSD患者使用羥氯喹，5位AOSD患者使用柳氮磺胺吡啶。後續兩年之追蹤期，3名患者接受了IL-6受體抑製劑（托珠單抗）之治療。
實例二：微陣列分析
使用miRNA微陣列（Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA）進行分析實驗組、健康控制組、疾病控制組，其中，miRNA微陣列具有887個miRNA。
分析步驟如下：以TRIzol 試劑（Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, USA）進行萃取及以RNeasy MinElute Cleanup套組（QIAGEN, Germany）進行純化，以自樣本中獲得總RNA。
將100納克總RNA脫水後，並以Agilent miRNA Complete Labeling及Hyb套組（Agilent Technologies, USA）進行pCp-Cy3之標定；加入2倍雜交緩衝液（Agilent Technologies, USA）至標定混合物至最終體積45μl。將掃描後之影像以軟體分析（Feature Extraction software version 10.7.3.1, Agilent Technologies, USA），並以GeneSpring 7.3.1（Agilent Technologies, USA）分析數據。
每個點之信號強度係藉由總強度減去局部背景而得到。每個miRNA是由每四個點之中位數產生。以每一晶片第75百分位方法進行歸一化，使每一晶片歸一於其中位數，以比較晶片。並且，為能夠突顯每個組miRNA之特徵，使每個基因進行中位數歸一化。
透過微陣列分析方法分析實驗組之AOSD患者及健康控制組，結果如下表一及第一圖A所示，其中，當表一之倍數變化之數值大於3.00或是小於0.330時，實驗組與健康控制組間之差異被認為是顯著的，而倍數變化是指實驗組相較於健康控制組所得到之結果。
表一：以miRNA微陣列分析實驗組相較於健康控制組之血漿中miRNA差異表現。
正調控（up-regulated）miRNAs 倍數變化（中位數值） 負調控（down-regulated）miRNAs 倍數變化（中位數值）
hsa-miR-575 18.099 hsa-miR-940 0.169
hsa-miR-4299 14.766 hsa-miR-4313 0.177
hsa-miR-15b 11.140 hsa-miR-1280 0.189
hsa-miR-223 10.089 hsa-miR-1281 0.206
hsa-miR-142-3p 5.860 hsa-miR-486-5p 0.220
hsa-miR-451 5.501 Hsa-let-7f-1 0.228
hsa-miR-134 4.660 hsa-miR-191 0.232
hsa-miR-187 4.323 hsa-miR-1234 0.243
hsa-miR-19a 3.509 hsa-miR-1825 0.267
hsa-miR-30b 3.507 hsa-miR-129-3p 0.269
hsa-miR-3196 3.491 hsa-miR-1238 0.276
hsa-miR-425 3.322 hsa-miR-1539 0.281
hsa-miR-149 0.287
hsa-miR-425 0.294
hsa-miR-1225-3p 0.295
hsa-miR-21 0.313
由表一及第一圖A之結果可知，AOSD患者血漿中有28個miRNA顯著表現，其中，相較於健康控制組，有12個miRNA為正調控，有16個miRNA為負調控。
實例三：反轉錄定量聚合酶鏈鎖反應（QRT-PCR）
以TaqMan MicroRNA檢測套組（Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, USA）測量出樣本中miRNA表現，並以StepOnePlus即時PCR系統進行QRT-PCR，將小核RNA（small nuclear RNA，下稱RUN6）及合成cel-miR-39（下稱cel-miR-39）分別作為細胞及血漿之內控基因。目標基因之倍數表現係以比較閥值循還（Ct）法計算目標基因相對於樣本中內控基因之平均表現而得者，並由2 −ΔΔCt進行評估，其中，ΔΔCt 為病人（Ct miRNAsgene–Ct Rnu6/cel-miR-39）扣除內控基因平均（Ct miRNAs gene–Ct Rnu6/cel-miR-39）。
為檢測mRNA，總RNA係以寡脫氧胸苷酸（oligo(dT)20）作為引子進行反轉錄為目標mRNA（SuperScript First-Strand Synthesis System, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, USA）。單股cDNA再藉由TaqMan 基因表現檢測套組（Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific, USA）進行QRT-PCR得到，GAPDH基因作為內控基因。
實例四：細胞培養
將分離自受試者之周邊血液單核細胞（peripheral blood mononuclear cells）、人類單核細胞株U937（ATCC CRL1593，下稱U937細胞）及THP-1細胞（ATCC TIB-202）分別以加入10％胎牛血清、1x 非必須胺基酸、100unit/ml盤尼西林及 100unit/ml鏈黴素之RPMI培養基1640（Gibco, Thermo Fisher Scientific, USA），於5％二氧化碳、37℃之環境下培養。
而為能誘導分化巨噬細胞，U937細胞及THP-1細胞（1× 106 cells/mL）分別於培養基上培養，並且以10ng/ml PMA（phorbol myristate acetate）處理過夜。
實例五：驗證微陣列分析之結果
以QRT-PCR分析健康控制組及實驗組內各受試者血漿樣本之miRNA表現，並將QRT-PCR分析結果與實例二微陣列分析之結果相比對，可知QRT-PCR分析結果與微陣列分析結果一致。舉例來說，請參第一圖B，將miR-134分別以QRT-PCR與微陣列進行分析後之結果相比對，發現結果相符。
實例六：miR-134及miR-223係為AOSD之生物標誌物
以QRT-PCR分析不同疾病活動度之AOSD患者與疾病控制組、健康控制組受試者之血漿內miR-134、miR-223及周邊血液單核細胞內miR-134、miR-223之表現，結果係如第二圖A至第二圖D所示，其中，周邊血液單核細胞係以Ficoll-Paque TMPLUS套組（GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden）自靜脈血分離。
請參第二圖A，於活動型AOSD患者血漿內所測得之miR-134表現量為128.60±47.72倍，非活動型AOSD患者血漿內所測得之miR-134表現量為10.00±4.55倍，疾病控制組血漿內所測得之miR-134表現量為2.86±0.53倍，健康控制組血漿內所測得之miR-134表現量為5.25±2.26倍；而由第二圖B之結果顯示，於活動型AOSD患者周邊血液單核細胞內所測得之miR-134表現量為147.70±28.25倍，非活動型AOSD患者周邊血液單核細胞內所測得之miR-134表現量為1.91±0.44倍，疾病控制組周邊血液單核細胞內所測得之miR-134表現量為0.16±0.04倍，健康控制組周邊血液單核細胞內所測得之miR-134表現量為0.53±0.13倍。
請參第二圖C，於活動型AOSD患者血漿內所測得之miR-223表現量為5.41±1.44倍，健康控制組血漿內所測得之miR-223表現量為1.00±2.58倍；而由第二圖D之結果顯示，於活動型AOSD患者周邊血液單核細胞內所測得之miR-223表現量為2.88±0.46倍，健康控制組周邊血液單核細胞內所測得之miR-223表現量為1.00±0.15倍。
由第二圖A及第二圖B之結果可知，AOSD患者血漿及周邊血液單核細胞內miR-134之表現係明顯高於全身性紅斑狼瘡患者及健康受試者，並且，於周邊血液單核細胞中之分析結果可知miR-134之表現係與AOSD活動度間有正關聯性。基此，miR-134係為可作為辨識AOSD之生物標幟物。
相同地，分別以QRT-PCR分析miR-223於AOSD患者與健康控制組受試者之血漿及周邊血液單核細胞內之表現，結果如第二圖C及第二圖D所示，顯示miR-223不論來自血漿及周邊血液單核細胞，其於AOSD患者之表現量係明顯高於健康控制組之受試者，亦即miR-223之表現量確實與AOSD之活動度呈現正相關，能夠作為辨識AOSD之生物標幟物。
實例七：miR-134及miR-223表現與AOSD活動度間呈正相關
請參第三圖，由QRT-PCR分析結果可知，於差異表現之miRNA 中，miR-134及miR-223之表現量確實與AOSD之活動度呈現正相關。請再參第四圖，於AOSD患者接受治療6個月後，miR-134之表現係顯著減少（mean ± SEM, 5.30 ± 2.19 vs. 0.84 ± 0.56, P ＜ 0.05），並且，其平行於臨床緩解（clinical remission）（活動指數 5.7 ± 0.5 vs. 2.0 ± 0.4, P ＜ 0.05）。
由此可知，miR-134及miR-223係能夠作為檢測或評估AOSD患者疾病活動度之生物標幟物。
實例八：TLR3受體抑制劑能夠改善或降低AOSD之活動度
取受試者之周邊血液單核細胞（5 x 105個細胞）以不同TLR配體進行刺激，最後以TaqMan MicroRNA檢測套組測量細胞內miR-134之表現量。結果如第五圖所示。
由第五圖A之結果可知AOSD患者之周邊血液單核細胞以TLR3 配體 poly (I:C) (polyriboinosinic: polyribocytidylic acid，50 μg/ml）處理後，細胞中的miR-134表現量（3.81 ± 0.09倍）係明顯增加，
更進一步地，將THP-1細胞以TLR3配體 poly (I:C)進行處理，由第五圖B結果顯示，THP-1細胞內miR-134之表現量亦明顯增加，並且， miR-134之表現於poly (I:C)刺激24小時到達最高值（1.92 ± 0.11倍）。
由本實例之結果可知，於TLR配體刺激下，確實會誘導miR-134之表現量增加，意即投予TLR3受體抑制劑係能達到治療或減緩AOSD之活動度。
實例九：製備IL-18BP及其突變物
藉由擴增人類IL-18BP mRNA 3’UTR（AF110801.1）並將之克隆至帶有螢光酶之pMIR-REPORT載體（Ambion, Thermo Fisher Scientific, USA），得到野生人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體。將假定結合位點之AGTCAC構築為TGACTC突變，得到突變人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體，如第六圖所示。
實例十：miR-134係會促進發炎相關因子IL-18過度表現
取miR-134模擬物及控制模擬物（Thermo Fisher Scientific, USA）。分別以Neon ®轉染系統 （Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, USA）將miR-134模擬物及控制模擬物（50nM）至U937細胞，以得到miR-134模擬物組及控制模擬物組，並以未進行轉染之U937細胞作為空白組。而後，將經不同處理之細胞於37℃環境下培養過夜，再以ELISA套組檢測經不同處理之細胞上清液中IL-1β （RayBiotech Inc., Norcross, GA, USA）、IL-6（PeproTech Inc., Rocky Hill, NJ, USA）、IL-17A（RayBiotech Inc., Norcross, GA, USA）、IL-18（Medical & Biology Laboratories Co, Ltd., Naka-ku, Nagoya, Japan）及TNF-α（R&D Systems, USA）之表現，結果如第七圖所示。
由第七圖A之結果可知，miR-134模擬物確實有轉染至U937細胞內。再者，由第七圖B之結果顯示，IL-18係於miR-134模擬物組之細胞內過度表現，平均表現量39.7 pg/ml，其係明顯高於控制模擬物組之細胞（平均表現量為22.7 pg/ml）及空白組細胞（平均表現量為22.5 pg/ml）；並由第七圖C至第七圖F之結果可知，其他促發炎相關因子：IL-6、IL-1β、 IL-17A TNF-α於miR-134模擬物組之表現，相較於控制模擬物組及空白組並無顯著差異。因此，由第七圖之結果可知miR-134之過量表現確實會專一地造成IL-18過度分泌。
由此結果顯示，當藉由一樣本中之miR-134過度表現時，該樣本提供者罹患如AOSD之先天免疫性疾病之風險為高，並且，該患者係具有關節炎等病徵；而若投予患者miR-134抑制物，係能有效地抑制或降低細胞內促發炎因子IL-18表現，而能夠達到減緩或改善AOSD患者發炎及其相關疾病之功效。
實例十：IL-18BP 係為miR-134之靶點
取293T細胞及THP-1細胞，分別同時轉染80ng螢光酶報導質體、40ng胸腺嘧啶激酶啟動子- Renilla螢光酶報導質體，以及miR-134模擬物（30nM）、控制模擬物（30nM）、miR-134抑制劑（50nM）、控制抑制劑（50nM），而分別作為miR-134模擬組、控制模擬物組、miR-134抑制劑組、控制抑制劑組，其中，螢光酶報導質體係為空的pMIR-REPORT載體、野生人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體或突變人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體。
於各組培養36小時後，以Dual-Glo螢光酶檢測系統（Promega）分析其內螢光酶活性，結果如第八圖所示。由第八圖之結果可知，相較於細胞轉染突變人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體，當細胞轉染野生人類IL-18BP 3’UTR 螢光酶報導質體時，miR-134模擬物會使螢光活性減少，並且miR-134抑制劑會使螢光活性增加。由此顯示，IL-18BP係為miR-134之目標物，並且，受miR-134之負向調控。
另外，以ELISA套組（R&D Systems, USA）檢測轉染miR-134模擬物、控制模擬物、miR-134抑制劑、控制抑制劑及未轉染（空白組）之各組THP-1細胞內IL-18BP及IL-18之表現量，結果如第九圖所示。由第九圖A及第九圖B之結果可知，轉染miR-134模擬組之細胞係會過度表現miR-134， IL-18BP之平均表現量為38.6pg/ml，IL-18之平均表現量為121.3pg/ml。相較於miR-134模擬組，miR-134抑制劑組、控制模擬物組及空白組之控制抑制劑組IL-18BP之平均表現量係分別為67.2pg/ml、52.7pg/ml及50.4pg/ml，並且，IL-18之平均表現量係分別為57.3pg/ml、72.0pg/ml及62.5pg/ml。
由上述結果顯示，過度表現miR-134係會明顯降低細胞表現IL-18BP，而導致IL-18上升。
實例十一：miR-134與IL-18BP及IL-18間之關聯性
參考實例八之流程，檢測AOSD患者與健康者之周邊血液單核細胞以TLR3配體刺激後，細胞內miR-134及IL-18BP mRNA之表現。並進一步分析IL-18BP及IL-18之表現分別與miR-134表現之關聯性，結果如第十圖所示。
由第十圖A及第十圖B可知，AOSD患者體內受到TLR3配體刺激，使miR-134表現量增加時，會使IL-18BP mRNA之表現量降低，並且，由第十圖C及第十圖D之結果可知，於AOSD患者體內，miR-134表現與IL-18BP mRNA量間呈負相關，並miR-134表現與血漿內IL-18呈正相關。而由第十圖E係更能證實，於活動型AOSD患者之IL-18BP表現量為5572.5 pg/ml、IL-18表現量為3844.0 pg/ml及miR-134表現量為6.4倍；非活動型AOSD患者之IL-18BP表現量為4441.6 pg/ml、IL-18表現量為1863.6 pg/ml及miR-134表現量為2.4倍；健康控制組之IL-18表現量為112 pg/ml及miR-134表現量為0.3倍。
無
第一圖A係為以miRNA微陣列分析實驗組與健康控制組之血漿中差異表現miRNA之結果，並以不同顏色表現miRNA相對表現量，其中，紅色代表相對表現量高於所有樣本之中位數，綠色則代表相對表現量低於所有樣本之中位數。 第一圖B係以QRT-PCR分析法驗證AOSD患者血漿中miR-134之微陣列分析結果。 第二圖A係以QRT-PCR分析不同疾病活動度之AOSD患者與疾病控制組、健康控制組受試者之血漿內miR-134之表現。 第二圖B係以QRT-PCR分析不同疾病活動度之AOSD患者與疾病控制組、健康控制組受試者之周邊血液單核細胞內miR-134之表現。 第二圖C係以QRT-PCR分析AOSD患者與健康控制組受試者之血漿內miR-223之表現。 第二圖D係以QRT-PCR分析AOSD患者與健康控制組受試者之周邊血液單核細胞內miR-223之表現，其中，AOSD患者之表現量為2.88±0.46倍，健康控制組之表現量為1.00±0.15倍。 第三圖A係以QRT-PCR分析法驗證miR-134之表現與AOSD活動度間之關聯性。 第三圖B係以QRT-PCR分析法驗證miR-223之表現與AOSD活動度間之關聯性。 第四圖係顯示於AOSD患者接受治療6個月後，其miR-134之表現係顯著減少，並與AOSD患者之臨床緩解平行。 第五圖A係顯示AOSD患者之周邊血液單核細胞以TLR配體刺激後，細胞內miR-134之表現量明顯增加。 第五圖B係顯示THP-1細胞以poly (I:C)刺激後，細胞內miR-134之表現量亦明顯增加，且在處理24小時到達最高值。 第六圖係顯示與miR-134反向互補之IL-18BP之序列與miR-134之結果。 第七圖A係為檢測miR-134於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第七圖B係為檢測IL-18於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第七圖C係為檢測IL-6於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第七圖D係為檢測IL-1β於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第七圖E係為檢測IL-17A於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第七圖F係為檢測TNF-α於miR-134模擬物組、模擬物控制組及空白組細胞之表現結果。 第八圖係為293T細胞經不同轉染處理後，檢測其內螢光酶素活性之結果。 第九圖A係為THP-1細胞經不同轉染處理後，檢測其IL-18BP表現之結果。 第九圖B係為THP-1細胞經不同轉染處理後，檢測其IL-18表現之結果。 第十圖A係顯示健康控制組之受試者與AOSD患者之周邊血液單核細胞受到TLR3配體刺激後，檢測其細胞內miR-134表現之結果。 第十圖B係顯示健康控制組之受試者與AOSD患者之周邊血液單核細胞受到TLR3配體刺激後，檢測其細胞內IL-18BP mRNA表現之結果。 第十圖C係顯示miR-134表現與IL-18BP mRNA間之關聯性。 第十圖D係顯示miR-134表現與IL-18間之關聯性。 第十圖E係顯示於活動型AOSD患者、非活動型AOSD患者與健康控制組之體內miR-134、IL-18BP、IL-18之表現。

Claims (6)

  1. 一種檢測罹患成人發作型史笛兒氏症風險之方法，其係檢測一樣本中至少一生物標誌物之表現量，其中，該生物標幟物係為miR-134或miR-223；當樣本中該生物標幟物之表現量係高於一健康樣本中該生物標幟物之表現量時，該樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症風險為高，而當樣本中該生物標幟物之表現量係低於一健康樣本中該生物標幟物之表現量時，該樣本提供者罹患成人發作型史笛兒氏症風險為低。
  2. 依據申請專利範圍第1項所述檢測罹患成人發作型史笛兒氏症風險之方法，其中，該樣本為血液。
  3. 依據申請專利範圍第1項所述檢測罹患成人發作型史笛兒氏症風險之方法，其中，檢測該樣本中生物標幟物之技術係為ELISA或是PCR。
  4. 一種評估成人發作型史笛兒氏症預後之方法，其係於接受一治療方法前後分別檢測一樣本中至少一生物標誌物之表現量，其中，該生物標幟物係為miR-134或miR-223；當該生物標幟物於接受該治療方法後之該樣本內之表現量高於接受該治療方法前之該樣本內之表現量時，顯示該樣本提供者對於該治療方法之反應為差，而當該生物標幟物於接受該治療方法後之該樣本內之表現量低於接受該治療方法前之該樣本內之表現量時，顯示該樣本提供者對於該治療方法之反應為良好。
  5. 依據申請專利範圍第4項所述評估成人發作型史笛兒氏症預後之方法，其中，該樣本為血液。
  6. 依據申請專利範圍第4項所述評估成人發作型史笛兒氏症預後之方法，其中，檢測該樣本中生物標幟物之技術係為ELISA或是PCR。
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