RU2766715C2 - Новый штамм бифидобактерии, характеризующийся различными функциями, и его применение - Google Patents
Новый штамм бифидобактерии, характеризующийся различными функциями, и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2766715C2 RU2766715C2 RU2020132171A RU2020132171A RU2766715C2 RU 2766715 C2 RU2766715 C2 RU 2766715C2 RU 2020132171 A RU2020132171 A RU 2020132171A RU 2020132171 A RU2020132171 A RU 2020132171A RU 2766715 C2 RU2766715 C2 RU 2766715C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bifidobacterium longum
- lactobacillus
- strain
- lactic acid
- acid bacteria
- Prior art date
Links
- 230000006870 function Effects 0.000 title description 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 title description 3
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims abstract description 329
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims abstract description 313
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 152
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 139
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 100
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 98
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 37
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 25
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims abstract 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 530
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 268
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 265
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 265
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 224
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 219
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 219
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 118
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 claims description 112
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 claims description 108
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 101
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 101
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 47
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 37
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 12
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 7
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010019728 Hepatitis alcoholic Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002353 alcoholic hepatitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026594 alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009208 Cirrhosis alcoholic Diseases 0.000 claims 2
- 208000010002 alcoholic liver cirrhosis Diseases 0.000 claims 2
- 208000007082 Alcoholic Fatty Liver Diseases 0.000 claims 1
- 206010016262 Fatty liver alcoholic Diseases 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 188
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 79
- 101000946040 Homo sapiens Lysosomal-associated transmembrane protein 4B Proteins 0.000 description 68
- 102100034726 Lysosomal-associated transmembrane protein 4B Human genes 0.000 description 68
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 63
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 62
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 61
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 58
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 56
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 51
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 48
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 48
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 48
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 description 46
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 44
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 42
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 40
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 36
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 32
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 31
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 30
- 235000021109 kimchi Nutrition 0.000 description 30
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 30
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 28
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 27
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 27
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 27
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 26
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 25
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 25
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 25
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 24
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 24
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 22
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 19
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 19
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 description 19
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 19
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 18
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 18
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 18
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 18
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 17
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 17
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 17
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 17
- 108030000917 Glutamine-pyruvate transaminases Proteins 0.000 description 16
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 16
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 15
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 13
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 13
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 13
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 13
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 13
- SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N NSC 227190 Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2C(OC3=CC=C(C=C3O2)C2C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 12
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 12
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 12
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 12
- SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N silibinin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2[C@H](OC3=CC=C(C=C3O2)[C@@H]2[C@H](C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)CO)=C1 SEBFKMXJBCUCAI-HKTJVKLFSA-N 0.000 description 12
- 229960004245 silymarin Drugs 0.000 description 12
- 235000017700 silymarin Nutrition 0.000 description 12
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 12
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 11
- UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N Jacareubin Natural products CC1(C)OC2=CC3Oc4c(O)c(O)ccc4C(=O)C3C(=C2C=C1)O UETNIIAIRMUTSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 101000629036 Lumbricus terrestris Myosin regulatory light chain, striated muscle, 25 kDa isoform Proteins 0.000 description 11
- 102100031829 Myosin light polypeptide 6 Human genes 0.000 description 11
- 101710101143 Myosin light polypeptide 6 Proteins 0.000 description 11
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 11
- 208000037817 intestinal injury Diseases 0.000 description 11
- 230000003870 intestinal permeability Effects 0.000 description 11
- NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N sulfasalazine Chemical compound C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(\N=N\C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-QZQOTICOSA-N 0.000 description 11
- 229960001940 sulfasalazine Drugs 0.000 description 11
- NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N sulfasalazine Natural products C1=C(O)C(C(=O)O)=CC(N=NC=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)NC=2N=CC=CC=2)=C1 NCEXYHBECQHGNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 10
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- VLARUOGDXDTHEH-UHFFFAOYSA-L disodium cromoglycate Chemical compound [Na+].[Na+].O1C(C([O-])=O)=CC(=O)C2=C1C=CC=C2OCC(O)COC1=CC=CC2=C1C(=O)C=C(C([O-])=O)O2 VLARUOGDXDTHEH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 10
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 9
- 241001134772 Bifidobacterium pseudocatenulatum Species 0.000 description 9
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 9
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 9
- 241001134659 Lactobacillus curvatus Species 0.000 description 9
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 9
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 9
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 9
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 9
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 9
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 9
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 8
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 8
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 8
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl peroxide Chemical compound CC(C)(C)OOC(C)(C)C LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 8
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 8
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 8
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 8
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 8
- 238000011623 obesity animal model Methods 0.000 description 8
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 8
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 8
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 8
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 7
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 7
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 7
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 7
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 7
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 7
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 7
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 7
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 7
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 7
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 7
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 7
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 7
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 7
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 6
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 6
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 6
- 241000131482 Bifidobacterium sp. Species 0.000 description 6
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 6
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 6
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 6
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 6
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 6
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 6
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 6
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 5
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 5
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 5
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 5
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 5
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 5
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000582950 Homo sapiens Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 5
- 241000186610 Lactobacillus sp. Species 0.000 description 5
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 5
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 5
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 5
- 102100030304 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 5
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 5
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 101710124574 Synaptotagmin-1 Proteins 0.000 description 5
- 102100035100 Transcription factor p65 Human genes 0.000 description 5
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 5
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 5
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 229930195726 aldehydo-L-xylose Natural products 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 229960000265 cromoglicic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 5
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 5
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 5
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 5
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 5
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 5
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 5
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 5
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 5
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 4
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 241001134770 Bifidobacterium animalis Species 0.000 description 4
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 4
- 241000186011 Bifidobacterium catenulatum Species 0.000 description 4
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 4
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 4
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 4
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 4
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 description 4
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 4
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 4
- 241000186684 Lactobacillus pentosus Species 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 4
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 4
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 4
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N aldehydo-L-xylose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 4
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 4
- 229940118852 bifidobacterium animalis Drugs 0.000 description 4
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 4
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 4
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 4
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 4
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 4
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 3
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 3
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 3
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- ZBDGHWFPLXXWRD-JGWLITMVSA-N methyl beta-D-xylopyranoside Chemical compound CO[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZBDGHWFPLXXWRD-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 3
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 3
- VMXUWOKSQNHOCA-LCYFTJDESA-N ranitidine Chemical compound [O-][N+](=O)/C=C(/NC)NCCSCC1=CC=C(CN(C)C)O1 VMXUWOKSQNHOCA-LCYFTJDESA-N 0.000 description 3
- 229960000620 ranitidine Drugs 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 2-dehydro-D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)C(O)=O VBUYCZFBVCCYFD-JJYYJPOSSA-N 0.000 description 2
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSUILVWOWLUOEU-GOVZDWNOSA-N 4-nitrophenyl beta-D-glucuronide Chemical compound O1[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 QSUILVWOWLUOEU-GOVZDWNOSA-N 0.000 description 2
- IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 5-dehydro-D-gluconate Chemical compound OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O IZSRJDGCGRAUAR-MROZADKFSA-M 0.000 description 2
- 101100327840 Arabidopsis thaliana CHLI1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- MBUVEWMHONZEQD-UHFFFAOYSA-N Azeptin Chemical compound C1CN(C)CCCC1N1C(=O)C2=CC=CC=C2C(CC=2C=CC(Cl)=CC=2)=N1 MBUVEWMHONZEQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186020 Bifidobacterium dentium Species 0.000 description 2
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 2
- IWQUODCHSDELBL-ZGYNEYMNSA-N C[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO IWQUODCHSDELBL-ZGYNEYMNSA-N 0.000 description 2
- 241000252983 Caecum Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 2
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010058838 Enterocolitis infectious Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 2
- 238000011050 LAL assay Methods 0.000 description 2
- BFVQTKQTUCQRPI-YYEZTRBPSA-N LPS with O-antigen Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O5)O)O4)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O3)NC(C)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)NC(C)=O)O2)NC(C)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)OC([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H]([C@@H](O)COC2[C@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]([C@@H](O)CO)O2)O)OC([C@H]1O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCCN)[C@@H]([C@@H](O)CO)OC([C@H]1O)O[C@H]1[C@H](O[C@]2(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@]3(O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](OP(O)(=O)OCCN)C3)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C2)[C@@H](O)CO)C(O)=O)C[C@](O[C@@H]1[C@@H](O)CO)(OC[C@H]1O[C@@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O2)O)[C@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@H]([C@@H]1OP(O)(O)=O)OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O BFVQTKQTUCQRPI-YYEZTRBPSA-N 0.000 description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 2
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 2
- 241000186868 Lactobacillus sanfranciscensis Species 0.000 description 2
- 235000013864 Lactobacillus sanfrancisco Nutrition 0.000 description 2
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 2
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100031787 Myosin regulatory light polypeptide 9 Human genes 0.000 description 2
- 101710107065 Myosin regulatory light polypeptide 9 Proteins 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- 101100495835 Oryza sativa subsp. japonica Cht1 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 2
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N aldehydo-L-fucose Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 2
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 2
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 2
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 2
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 2
- 229960004574 azelastine Drugs 0.000 description 2
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035425 carbon utilization Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000003693 cell processing method Methods 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920002055 compound 48/80 Polymers 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 108010067755 dinitrophenyl-bovine serum albumin Proteins 0.000 description 2
- -1 e.g. Substances 0.000 description 2
- 235000005686 eating Nutrition 0.000 description 2
- 230000000062 effect on obesity Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 235000013410 fast food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 2
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000027139 infectious colitis Diseases 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 2
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 2
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N methyl alpha-D-mannoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 2
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 2
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- KVJHGPAAOUGYJX-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetraethoxypropane Chemical compound CCOC(OCC)CC(OCC)OCC KVJHGPAAOUGYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUVALWUPUHHNQV-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-propylbenzoic acid Chemical compound CCCC1=CC=CC(C(O)=O)=C1O AUVALWUPUHHNQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 9-cis,11-trans-octadecadienoic acid Chemical compound CCCCCC\C=C\C=C/CCCCCCCC(O)=O JBYXPOFIGCOSSB-GOJKSUSPSA-N 0.000 description 1
- 206010000087 Abdominal pain upper Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 201000010000 Agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 1
- 241001675349 Artemisia dubia var. asiatica Species 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 108010011485 Aspartame Proteins 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O Chemical compound CC1=C(C=CC(=C1)C1=CC(C)=C(C=C1)\N=N\C1=C(O)C2=C(N)C(=CC(=C2C=C1)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O)\N=N\C1=CC=C2C(=CC(=C(N)C2=C1O)S(O)(=O)=O)S(O)(=O)=O COXVTLYNGOIATD-HVMBLDELSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010008874 Chronic Fatigue Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 206010013654 Drug abuse Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 1
- 206010017982 Gastrointestinal necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010018366 Glomerulonephritis acute Diseases 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 206010018687 Granulocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010019133 Hangover Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000031773 Insulin resistance syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 241001406038 Lactobacillus johnsonii NCC 533 Species 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 241001468192 Leuconostoc citreum Species 0.000 description 1
- 241001468195 Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides Species 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940121948 Muscarinic receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- HAUHVTUBJKXLLM-SZPZTJOGSA-N OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]1CO Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]1CO HAUHVTUBJKXLLM-SZPZTJOGSA-N 0.000 description 1
- 208000035467 Pancreatic insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 229920002230 Pectic acid Polymers 0.000 description 1
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 1
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040799 Skin atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 206010041969 Steatorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 244000228451 Stevia rebaudiana Species 0.000 description 1
- 206010061372 Streptococcal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 206010043561 Thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 231100000851 acute glomerulonephritis Toxicity 0.000 description 1
- 231100000354 acute hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-VAYJURFESA-N aldehydo-L-arabinose Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-VAYJURFESA-N 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 229940035674 anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001315 anti-hyperlipaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002921 anti-spasmodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000605 aspartame Substances 0.000 description 1
- 235000010357 aspartame Nutrition 0.000 description 1
- IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N aspartame Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 IAOZJIPTCAWIRG-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 229960003438 aspartame Drugs 0.000 description 1
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 238000003287 bathing Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000004856 capillary permeability Effects 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000010000 carbonizing Methods 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000812 cholinergic antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940108924 conjugated linoleic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 229960003699 evans blue Drugs 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 230000005176 gastrointestinal motility Effects 0.000 description 1
- 239000003193 general anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 1
- 208000007475 hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 108010084652 homeobox protein PITX1 Proteins 0.000 description 1
- 230000007366 host health Effects 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002766 immunoenhancing effect Effects 0.000 description 1
- 208000016245 inborn errors of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000954 inflammatory inducer Substances 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 1
- 235000015141 kefir Nutrition 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000019860 lauric fat Nutrition 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037345 metabolism of vitamins Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 208000013465 muscle pain Diseases 0.000 description 1
- 208000029766 myalgic encephalomeyelitis/chronic fatigue syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 229940124706 obesity therapeutics Drugs 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229940127234 oral contraceptive Drugs 0.000 description 1
- 239000003539 oral contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N orlistat Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](OC(=O)[C@H](CC(C)C)NC=O)C[C@@H]1OC(=O)[C@H]1CCCCCC AHLBNYSZXLDEJQ-FWEHEUNISA-N 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N pectic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)O[C@H](C(O)=O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)C(O)=O)O)[C@@H](C(O)=O)O1 LCLHHZYHLXDRQG-ZNKJPWOQSA-N 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- ZPLUZNXSYCCJOE-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.OP(O)(O)=O ZPLUZNXSYCCJOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013550 pizza Nutrition 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010318 polygalacturonic acid Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 235000020192 probiotic milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N rebaudioside A Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@]12C(=C)C[C@@]3(C1)CC[C@@H]1[C@@](C)(CCC[C@]1([C@@H]3CC2)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HELXLJCILKEWJH-NCGAPWICSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 description 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 description 1
- 239000008147 saline laxative Substances 0.000 description 1
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- UNAANXDKBXWMLN-UHFFFAOYSA-N sibutramine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1C1(C(N(C)C)CC(C)C)CCC1 UNAANXDKBXWMLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000016160 smooth muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 208000001162 steatorrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000892 thaumatin Substances 0.000 description 1
- 235000010436 thaumatin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005382 thermal cycling Methods 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 208000025883 type III hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
- 229940002552 xenical Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/745—Bifidobacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/304—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having a modulation effect on allergy and risk of allergy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/322—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the nervous system or on mental function
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/332—Promoters of weight control and weight loss
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/121—Brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/151—Johnsonii
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/51—Bifidobacterium
- A23V2400/533—Longum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K2035/11—Medicinal preparations comprising living procariotic cells
- A61K2035/115—Probiotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/24—Lactobacillus brevis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к штамму Bifidobacterium longum, его культуре, композициям, способам. Предложен штамм Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р для использования в разработке функциональной пищевой и фармацевтической композиции. При этом штамм обладает антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей бета-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов, и активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта. Предложена также культура штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р для использования в разработке функциональной пищевой и фармацевтической композиции. Указанный штамм или его культура используются в составе фармацевтической композиции для предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом или алкоголем. Указанные композиции применяются для изготовления лекарственного препарата. Также предложены способы предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом или алкоголем. Изобретения эффективны в отношении предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом или алкоголем. 8 н. и 5 з.п. ф-лы, 31 ил., 25 табл.
Description
Область техники изобретения
Настоящее изобретение относится к новым штаммам молочнокислых бактерий и т. п., а более конкретно, к новым штаммам молочнокислых бактерий или новым смесям штаммов молочнокислых бактерий, которые выделены из кимчи или человеческих экскрементов и характеризуются различными физиологическими активностями, такими как антиоксидантная активность, активность, подавляющая β-глюкуронидазу, активность, подавляющая продуцирование липополисахаридов (LPS), или активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта. Более того, настоящее изобретение относится к различным пищевым и лекарственным применениям новых штаммов молочнокислых бактерий или новых смесей штаммов молочнокислых бактерий.
Уровень техники изобретения
По мере того, как человечество развивалось в процветающее общество, еда быстрого приготовления быстро стала популярной, и картина заболеваний также резко изменилась. В частности, у современных людей частота появления нарушения кишечной флоры, синдрома кишечной проницаемости, колита, заболеваний печени, аллергических заболеваний, ожирения и т. п. возрастает из-за привычек употребления еды быстрого приготовления на основе мяса и жира, нерегулярного питания, чрезмерного употребления алкоголя, отсутствия физической нагрузки, чрезмерного напряжения, воздействия вредных сред и т. п.
Нарушение кишечной флоры
В желудочно-кишечном тракте организма человека существует много бактерий. В организме человека присутствует приблизительно 10 триллионов нормальных клеток, однако присутствует приблизительно 100 триллионов бактерий, которые приблизительно в 10 раз больше, чем нормальные клетки. Эти бактерии можно разделить на полезные бактерии, которые способствуют здоровью кишечника человека, и вредные бактерии, которые вредны для здоровья человека. Здоровье организма человека может поддерживаться тогда, когда полезные бактерии, такие как Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Sporolactobacillius и т. п., являются более преобладающими в желудочно-кишечном тракте, чем вредные бактерии. В противном случае могут быть вызваны заболевания, такие как ожирение, синдром кишечной проницаемости, заболевания печени, ускоренное старение, энтерит и т. п.
Синдром кишечной проницаемости
Желудочно-кишечный тракт организма человека состоит из слизи и ворсинок, которые эффективно поглощают питательные компоненты, однако предотвращают поглощение патогенных микроорганизмов с высокой молекулярной массой или токсинов, продуцируемых этими микроорганизмами. В дополнение к этому организм человека обладает иммунной системой, способной защищать организм от проникновения внешних антигенов с высокой молекулярной массой. Однако из-за заражения многими патогенными микроорганизмами или токсинами, чрезмерного напряжения, потребления продуктов, как например рационы с высоким содержанием жиров, способные пролиферировать вредные бактерии, живущие в желудочно-кишечном тракте, чрезмерного употребления алкоголя, злоупотребления лекарственными средствами (например, антибиотиками) и т. п., кишечная флора нарушается, возникают аномалии в иммунной системе желудочно-кишечного тракта, и экспрессия белков плотного контакта ингибируется. Если экспрессия белков плотного контакта ингибируется, то плотный контакт слизистой оболочки кишечника становится ослабленным, и увеличивается проникновение в организм больших молекул из-за ослабленной щели и аномалий в иммунной системе. Синдром кишечной проницаемости также известен как синдром негерметичности кишечника и относится к состоянию, при котором внешние, такие как менее переваренные пищевые продукты, патогенные микроорганизмы, токсины или т. п., непрерывно вводятся в кровь, поскольку барьерная система плотного контакта эпителиальных клеток, образующих желудочно-кишечный тракт, не работает как следует. В случае если возникает синдром кишечной проницаемости, внешние антигены, которые обычно не всасываются в организм, проникают в организм, вызывая таким образом язвенный колит, заболевание Крона, повреждение печени, нарушение функции печени, аллергические заболевания (в том числе астму), атопию, аутоиммунные заболевания, стеаторею, нарушение всасывания в пищеварительном тракте, угри, ускоренное старение, эндотоксемию, кишечную инфекцию, экзему, синдром раздраженного кишечника, синдром хронической усталости, псориаз, ревматоидный артрит, недостаточность поджелудочной железы, воспалительные заболевания суставов или т. п.
Колит
Хотя ранее было известно, что частота возникновения язвенного колита и заболевания Крона высока у европейцев, количество пациентов с язвенным колитом и заболеванием Крона в восточных странах, включая Корею, в последнее время быстро растет из-за изменений в образе жизни, таких как пищевые привычки. Однако причина неясна, и таким образом фундаментальный способ лечения этих заболеваний еще не установлен. По этой причине применяются лекарственные средства, которые не направлены на полное лечение, а направлены на облегчение симптомов и поддержание этого облегченного состояния в течение максимально возможного периода времени. В качестве лекарственных средств для этой симптоматической терапии в основном применяются средства на основе аминосалициловой кислоты, средства на основе адренокортикостероидов, иммунодепрессанты и т. п.; однако, как сообщалось, они вызывают различные побочные эффекты. Например, сообщалось, что сульфасалазин, который часто используется в качестве средства на основе аминосалициловой кислоты вызывает побочные эффекты, в том числе тошноту, рвоту, анорексию, сыпь, головную боль, повреждение печени, лейкоцитопению, аномальные эритроциты, протеинурию, диарею и т. п. В дополнение к этому, средства на основе адренокортикостероидов, обычно применяются с помощью перорального введения преднизолона, инфузии, суппозитория, внутривенной инъекции или т. п., однако при длительном применении вызывают сильные побочные эффекты, такие как язва желудка или некроз бедра. Однако прекращение приема лекарственных средств может вызвать возвращение симптомов, и поэтому эти лекарственные средства необходимо применять постоянно. Соответственно, существует потребность в разработке средств для лечения заболеваний кишечника, таких как язвенный колит, заболевания Крона и т. п., которые обладают превосходными эффектами, являются безопасными и не вызывают побочных эффектов. Синдром раздраженного кишечника (IBS) также является хроническим заболеванием брюшной полости, причина которого неясна. В настоящее время нет основного терапевтического средства для IBS, и симптоматическая терапия проводится с целью облегчения симптомов каждого типа IBS. Например, для IBS-диареи применяют антихолинергическое средство, обладающее спазмолитическим действием, которое подавляет сокращение гладких мышц, а для IBS-констипации применяют солевые слабительные. Для IBS-чередования, которое трудно контролировать с помощью лекарственных средств, в основном применяют средство для улучшения двигательной функции желудочно-кишечного тракта.
Заболевания печени
Печень в организме человека выполняет такие роли, как энергетический метаболизм (обработка питательных веществ, а также хранение и удаление отходов), детоксикация токсинов, синтез сывороточных белков и беспрепятственное поглощение жира в кишечнике с помощью секреции желчных соков, а также имеет важное значение в иммунитете (защите организма) и метаболизме витаминов. Однако заражение вирусами гепатита, или чрезмерное употребление алкоголя, или питание с высоким содержанием жиров могут вызывать заболевания печени, такие как гепатит, ожирение печени или цирроз печени. В дополнение к этому, заболевания печени также могут вызываться лекарственными средствами (лекарственными средствами для лечения туберкулеза, аспирином, антибиотиками, анестетиками, антигипертензивными лекарственными средствами, оральными контрацептивами и т. д.), врожденными нарушениями обмена веществ, сердечной недостаточностью, шоком или т. п. При возникновении заболевания печени оно может развиться в хронический гепатит, начинаясь с острого гепатита с усталостью, рвотой, диареей, анорексией, желтухой, болями в правом верхнем квадранте, лихорадкой или мышечной болью.
Аллергические заболевания
По мере усложнения общества и развития промышленности и цивилизации, увеличивались загрязнение окружающей среды и напряжение, а по мере того, как изменялись пищевые привычки, количество пациентов с аллергическими заболеваниями увеличивалось с каждым годом. Количество пациентов с аллергическими заболеваниями, такими как атопия, анаксилоз, астма и т. п., составляло менее 1% в 1980 году, однако быстро увеличивалось до 5% или больше в 2000-х годах и оценивалось как составляющее более 10%, включая потенциальных пациентов. Аллергические заболевания вызваны чрезмерными иммунными реакциями организма, которые являются результатом реакций антиген-антитело, и при этом аллергические заболевания классифицируются на типы 1-4 реакций гиперчувствительности на основании времени ответа и того, включают ли они комплементы. Реакции гиперчувствительности 1-го типа включают атопию, анафилактический шок, бронхиальную астму, крапивницу, поллиноз и т. п.; реакции гиперчувствительности 2-го типа включают ненадлежащее переливание крови, аутоиммунную гемолитическую анемию, гемолитическую анемию, вызванную лекарственными средствами, гранулоцитопению, тромбоцитопеническую пурпуру и т. п.; реакции гиперчувствительности 3-го типа включают эритему, лимфатическую опухоль, артралгию, артрит, нефрит, острый гломерулонефрит после стрептококковой инфекции и т. п.; и реакции гиперчувствительности 4-го типа включают хроническое воспаление и т. п. Чтобы улучшить аллергические заболевания, предпочтительно удалить аллергены (домашняя пыль, клещи и т. д.) с кожи с помощью душа или купания и избежать приема аллергена. Однако, в случае если аллергические заболевания не улучшаются, применяют такие лекарственные средства, как стероиды, антигистамины, иммунодепрессанты или т. п., которые легко вызывают побочные эффекты, такие как атрофия кожи, вазодилатация, обесцвечивание, пурпура (стероиды), сонливость (антигистамины), почечная недостаточность (иммунодепрессанты) и т. п. Среди лекарственных средств, разработанных до настоящего времени, нет лекарственных средств, которые способны полностью излечить виды аллергии, и ожидается, что эти лекарственные средства улучшат симптомы, однако будут иметь проблемы с возникновением значительных побочных эффектов.
Ожирение
Ожирение представляет собой метаболическое расстройство, вызванное дисбалансом потребления омкалорий и расходом энергии, и вызвано увеличением размера (гипертрофией) или увеличением числа (гиперплазией) in vivo адипоцитов в морфологическом плане. Ожирение является не только самым распространенным нарушением, связанным с недостаточным питанием, в западном обществе, но и распространенность ожирения в Корее также быстро возрастает из-за улучшения пищевых привычек и вестернизации образа жизни. Следовательно, большое значение приобретают лечение и предупреждение ожирения. Ожирение является важным фактором, который беспокоит человека в психологическом плане, а также повышает риск развития различных заболеваний взрослых людей в социальном плане. Известно, что ожирение непосредственно связано с увеличением распространенности различных заболеваний взрослых людей, таких как диабет 2 типа, гипертония, гиперлипидемия, сердечные заболевания и т. п. (Cell 87:377, 1999), а также заболевания, связанные с ожирением, в совокупности называются метаболическим синдромом или синдромом инсулинорезистентности и, как сообщается, эти заболевания вызывают артериосклероз и сердечно-сосудистые заболевания. Терапевтические средства от ожирения, известные на данный момент, Xenical (Roche Pharmaceuticals, Швейцария), Reductil (Abbott, США), Exolise (Arkopharma, Франция) и т. п., и в значительной степени классифицируются на средства для подавления аппетита, промоторы расхода энергии и ингибиторы абсорбции жира. Большинство терапевтических средств от ожирения представляют собой средства для подавления аппетита, которые подавляют аппетит посредством контроля нейротрансмиттеров, связанных с гипоталамусом. Однако общепринятые терапевтические средства вызывают побочные эффекты, такие как сердечные заболевания, респираторные заболевания, неврологические заболевания и т. п., и при этом стойкость их эффектов также низка. Таким образом, необходима разработка улучшенных терапевтических средств от ожирения. В дополнение к этому, среди разрабатываемых в настоящее время продуктов мало или совсем нет терапевтических средств, которые обладают удовлетворительным терапевтическим эффектом, не вызывая побочных эффектов, и следовательно необходима разработка нового терапевтического средства от ожирения.
Пробиотики в совокупности относятся к живым микроорганизмам, которые улучшают микробную среду хозяина в желудочно-кишечном тракте животных, в том числе людей, и оказывают благоприятные эффекты в отношении здоровья хозяина. Чтобы быть эффективными в качестве пробиотиков, необходимо обладать превосходной устойчивостью к кислотам, устойчивостью к желчи и способностью прилипания к эпителиальным клеткам, поскольку большинство этих пробиотиков должны проникать в тонкую кишку при пероральном введении и должны быть прикреплены к кишечной поверхности. Молочнокислые бактерии применяют в качестве пробиотиков, потому что они играют роль в разложении волокнистых и сложных белков, чтобы получать важные питательные вещества, при этом живя в пищеварительной системе организма человека. Сообщалось, что молочнокислые бактерии проявляют такие эффекты, как поддержание нормальной кишечной флоры, восстановление кишечной флоры, антидиабетические и антигиперлипидемические эффекты, подавление канцерогенеза, подавление колита и неспецифическая активность иммунной системы хозяина. Среди этих молочнокислых бактерий штаммы Lactobacillus sp. являются основными членами нормальных микробных сообществ, обитающих в кишечнике организма человека и давно известны как важные для поддержания здорового состояния пищеварительного тракта и вагинальной среды. В настоящее время согласно рекомендациям Министерства здравоохранения США все штаммы Lactobacillus, депонированные в Американской коллекции типовых культур (ATCC), классифицируются как «уровень биологической безопасности 1», который признан как не имеющий потенциального риска вызывать заболевания у людей или животных. При этом сообщалось, что молочнокислые бактерии кимчи, которые участвуют в ферментации кимчи, обладают иммуноусиливающими эффектами, антимикробными эффектами, антиоксидантными эффектами, противораковыми эффектами, эффектами в отношении ожирения, эффектами, предупреждающими гипертонию, или эффектами, предупреждающими констипацию [Hivak P, Odrska J, Ferencik M, Ebringer L, Jahnova E, Mikes Z. One-year application of Probiotic strain Enterococcus facium M-74 decreases Serum cholesterol levels. : Bratisl lek Listy 2005; 106(2); 67-72; Agerholm-Larsen L. Bell ML. Grunwald GK. Astrup A.: The effect of a probiotic milk product on plasma cholesterol: a metaanalysis of short-term intervention studies; Eur J Clin Nutr. 2000; 54(11) 856-860; Renato Sousa, Jaroslava Helper, Jian Zhang, Strephen J Lewis and Wani O Li; Effect of Lactobacillus acidophilus supernants on body weight and leptin expression in rats; BMC complementary and alternative medicine. 2008; 8(5)1-8].
Поскольку были известны различные биологически активные активности молочнокислых бактерий, то недавно были проведены исследования для разработки молочнокислых бактериальных штаммов, которые обладают превосходными функциями, при этом являясь безопасными для человека, и применения эти штаммов по отношению к препаратам или функциональным продуктам питания. Например, в публикации заявки на патент Кореи № 10-2009-0116051 раскрыта Lactobacillus brevis HY7401, которая проявляет эффекты лечения и предупреждения колита. Кроме того, в публикации заявки на патент Кореи № 10-2006-0119045 раскрыты молочнокислые бактерии для предупреждения или лечения атопического дерматита, которые выбраны из группы, состоящей из Leuconostoc citreum KACC 91035, Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides KCTC 3100 и Lactobacillus brevis KCTC 3498. Кроме того, в публикации заявки на патент Кореи № 10-2013-0092182 раскрыта функциональная здоровая пища для предупреждения алкогольного заболевания печени или облегчения похмелья, которая содержит Lactobacillus brevis HD-01 (номер доступа: KACC91701P), обладающую превосходной способностью расщеплять спирт. В дополнение к этому, в публикации заявки на патент Кореи № 10-2010-0010015 раскрыт штамм Lactobacillus johnsonii HFI 108 (KCTC 11356BP), обладающий активностью, снижающей уровень холестерина в крови, и активностью в отношении ожирения. В дополнение к этому, в публикации заявки на патент Кореи № 10-2014-0006509 раскрыта композиция для предупреждения или лечения ожирения, содержащая штамм Bifidobacterium longum CGB-C11 (номер доступа: KCTC 11979BP), который продуцирует конъюгированную линолевую кислоту в качестве активного ингредиента.
Однако не было сообщений о технологии, связанной с молочнокислыми бактериями, способной уменьшать тяжесть или лечить все нарушения в кишечной флоре, синдром кишечной проницаемости, колит, заболевания печени, аллергические заболевания, ожирение и т. п., количество которых возрастает у современных людей. Следовательно, существует потребность в проведении скрининга нового штамма, характеризующегося различными функциональными возможностями, и разработке препаратов, функциональных продуктов питания и т. п. с использованием этого штамма.
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Настоящее изобретение было выполнено в соответствии с уровнем техники, описанным выше, и целью настоящего изобретения является обеспечение новых молочнокислых бактерий, обладающих различными физиологическими активностями или функциональными возможностями, необходимыми для пробиотиков, а также их пищевые и лекарственные применения.
Другой целью настоящего изобретения является создание новой смеси молочнокислых бактерий, способной проявлять различные максимизированные физиологические активности или функциональные возможности, а также пути ее пищевого и лекарственного применения.
Решение технической задачи
Авторы настоящего изобретения провели скрининг многочисленных молочнокислых бактерий из кимчи или человеческих экскрементов и обнаружили, что среди этих подвергнутых скринингу молочнокислых бактерий определенный штамм Lactobacillus sp., определенный штамм Bifidobacterium sp. или их смесь проявляют превосходный эффект в отношении восстановления повреждения кишечника, такого как синдром кишечной проницаемости, повреждения печени, такого как ожирение печени, аллергических заболеваний, таких как атопический дерматит, воспалительных заболеваний, таких как колит, или ожирения, за счет чего завершая настоящее изобретение.
Для достижения вышеуказанных целей вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает молочнокислые бактерии, выбранные из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, или Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7. Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum или Bifidobacterium longum характеризуются антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей β-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS), или активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую молочнокислые бактерии, выбранные из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, или Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, культуру молочнокислых бактерий, лизат молочнокислых бактерий или экстракт молочнокислых бактерий в качестве активного ингредиента. Еще один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает пищевую композицию для предупреждения или уменьшения тяжести повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую Lactobacillus brevis, содержащую нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащую нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащую нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащую нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, или Bifidobacterium longum, содержащую нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, культуру молочнокислых бактерий, лизат молочнокислых бактерий или экстракт молочнокислых бактерий в качестве активного ингредиента.
Для достижения других целей настоящего изобретения один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает смесь двух или более молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7. Смесь молочнокислых бактерий обладает антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей β-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS), или активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта. Другой вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает композицию для предупреждения или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую смесь двух или более молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, культуру смеси молочнокислых бактерий, лизат смеси молочнокислых бактерий или экстракт смеси молочнокислых бактерий в качестве активного ингредиента. Еще один вариант осуществления настоящего изобретения предусматривает пищевую композицию для предупреждения или уменьшения тяжести повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую смесь двух или более молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, культуру смеси молочнокислых бактерий, лизат смеси молочнокислых бактерий или экстракт смеси молочнокислых бактерий в качестве активного ингредиента.
Положительные эффекты
Определенный штамм Lactobacillus sp. или определенный штамм Bifidobacterium sp. в соответствии с настоящим изобретением выделены из кимчи или человеческих экскрементов и, таким образом, являются очень безопасными и характеризуются различными физиологическими активностями, такими как антиоксидантная активность, активность, подавляющая β-глюкуронидазу, активность, подавляющая продуцирование липополисахаридов (LPS), или активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта. Соответственно, определенный штамм Lactobacillus или определенный штамм Bifidobacterium sp., или их смесь в соответствии с настоящим изобретением можно применять в качестве функционального пищевого продукта или лекарственного материала, пригодных для предупреждения, уменьшения тяжести или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения.
Описание графических материалов
На ФИГ. 1 представлен график, демонстрирующий изменение значения GOT, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 2 представлен график, демонстрирующий изменение значения GPT, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 3 представлен график, демонстрирующий изменение значения MDA, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 4 представлен график, демонстрирующий эффект молочнокислых бактерий, подвергнутых скринингу в первом эксперименте по настоящему изобретению, в отношении воспалительной реакции дендритных клеток, индуцированной липополисахаридом (LPS). Левый график на ФИГ. 4 демонстрирует эффект молочнокислых бактерий в отношении клеток, не обработанных LPS (липополисахаридом), а на правом графике показан эффект молочнокислых бактерий в отношении клеток, обработанных LPS (липополисахаридом).
На ФИГ. 5 представлен график, демонстрирующий эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении воспалительной реакции макрофагов, индуцированной LPS (липополисахаридом), в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 6 показаны результаты анализа эффекта Lactobacillus brevis CH23 в отношении дифференциации Т-клеток (выделенных из селезенки) в клетки Th17 или клетки Treg с помощью системы сортировки клеток с активированной флуоресценцией, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 7 показаны результаты анализа эффекта Lactobacillus brevis CH23, Bifidobacterium longum CH57 или их смеси в отношении экспрессии белка ZO-1 в клетках СаСО2 в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 8 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 9 изображены гистологические снимки, демонстрирующие эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 10 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 11 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 12 изображены гистологические снимки толстой кишки, которые демонстрируют эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 13 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток, показывающие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 14 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 15 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 16 изображены гистологические снимки, демонстрирующие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 17 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 18 показаны изменения веса, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 19 показаны физические свойства толстой кишки, активность миелопероксидазы (MPO), гистологические снимки толстой кишки и т. п., показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 20 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 21 показаны маркеры воспалительной реакции, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением в первом эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 22 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток в клетки Th17, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 23 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток в клетки Treg, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 24 показаны маркеры воспалительной реакции, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 25 изображены снимки, демонстрирующие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 26 показан общий показатель поражения желудка, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 27 показан индекс язвы, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 28 показан индекс гистологической активности, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 29 показана активность миелопероксидазы (MPO), показывающая эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 30 показаны уровни экспрессии CXCL4, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
На ФИГ. 31 показаны уровни экспрессии TNF-α, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению.
Принцип изобретения
Как используется в данном документе, будут определены термины, используемые в настоящем изобретении.
Как используется в данном документе, термин «культура» означает продукт, полученный с помощью культивирования микроорганизма в известной жидкой среде или твердой среде, и таким образом предназначен для включения микроорганизма.
Как используется в данном документе, термины «фармацевтически приемлемый» и «ситологически приемлемый» не означают какого-либо существенного стимулирования организма, какого-либо подавления биологической активности и характеристик вводимого активного вещества.
Как используется в данном документе, термин «предупреждение» относится ко всем действиям, которые подавляют симптомы или замедляют прогрессирование конкретного заболевания с помощью введения композиции по настоящему изобретению.
Как используется в данном документе, термин «лечение» относится ко всем действиям, которые уменьшают тяжесть или благоприятно изменяют симптомы конкретного заболевания с помощью введения композиции по настоящему изобретению.
Как используется в данном документе термин «уменьшение тяжести» относится ко всем действиям, которые по меньшей мере снижают значение параметра, относящегося к состоянию, подлежащему лечению, например степени проявления симптома.
Как используется в данном документе, термин «введение» означает предоставление композиции по настоящему изобретению субъекту любым подходящим способом. Как используется в данном документе, термин «субъект» означает всех животных, в том числе людей, обезьян, собак, коз, свиней или крыс, у которых имеется конкретное заболевание, симптомы которого могут быть ослаблены с помощью введения композиции по настоящему изобретению.
Как используется в данном документе, термин «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для лечения заболеваний при приемлемом соотношении польза/риск, применимом к любому терапевтическому лечению. Фармацевтически эффективное количество может быть определено в зависимости от факторов, в том числе типа заболевания субъекта, тяжести заболевания, активности лекарственного средства, чувствительности к лекарственному средству, времени введения, способа введения, скорости экскреции, продолжительности лечения и лекарственных средств, применяемых в комбинации с композицией, и других факторов, известных в области медицины.
Далее в данном документе настоящее изобретение будет описано подробно.
Один аспект настоящего изобретения относится к новым молочнокислым бактериям, обладающим различными физиологическими активностями, или к новой смеси молочнокислых бактерий, которые могут характеризоваться повышенными физиологическими активностями.
Новые молочнокислые бактерии в соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения выбраны из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, или Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, и обладает антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей β-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS), или активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта.
Lactobacillus brevis, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, представляет собой анаэробную бациллу, выделенную из кимчи, положительную к окрашиванию по Граму, способную выжить в широком диапазоне температур, с низкими значениями pH и высокими концентрациями солей и продуцирующую глюкозидазу. Кроме того, Lactobacillus brevis, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, использует D-рибозу, D-ксилозу, D-глюкозу, D-фруктозу, эскулин, салицин, мальтозу, мелибиозу, 5-кетоглюконат и т. п. в качестве источников углерода. В дополнение к этому, Lactobacillus brevis, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, предпочтительно представляет собой Lactobacillus brevis CH23 (номер доступа: KCCM 11762P). Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, представляет собой анаэробную бациллу, выделенную из человеческих экскрементов, положительную к окрашиванию по Граму и продуцирующую глюкозидазу. Кроме того, Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, использует D-галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу и т. п. в качестве источников углерода. В дополнение к этому, Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, предпочтительно представляет собой Bifidobacterium longum CH57 (номер доступа: KCCM 11764P). Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, представляет собой анаэробную бациллу, выделенную из кимчи и положительную к окрашиванию по Граму. Кроме того, Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, использует D-рибозу, D-галактозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, маннит, сорбит, N-ацетилглюкозамин, амигдалин, арбутин, эскулин, салицин, целлобиозу, мальтозу, мелибиозу, сахарозу, трегалозу, мелецитозу и т. п. в качестве источников углерода. В дополнение к этому, Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, предпочтительно представляет собой Lactobacillus plantarum LC5 (номер доступа: KCCM 11800P). Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, представляет собой анаэробную бациллу, выделенную из кимчи и положительную к окрашиванию по Граму. Кроме того, Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, использует L-арабинозу, D-рибозу, D-глюкозу, D-фруктозу, D-маннозу, маннит, сорбит, N-ацетилглюкозамин, амигдалин, арбутин, эскулин, салицин, целлобиозу, мальтозу, лактозу, мелибиозу, сахарозу, трегалозу, мелецитозу и т. п. в качестве источников углерода. В дополнение к этому, Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, предпочтительно представляет собой Lactobacillus plantarum LC27 (номер доступа: KCCM 11801P). Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, представляет собой анаэробную бациллу, выделенную из человеческих экскрементов и положительную к окрашиванию по Граму. Кроме того, Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, использует L-арабинозу, D-рибозу, D-ксилозу, D-глюкозу, D-фруктозу, эскулин, мальтозу, лактозу, мелибиозу, сахарозу и т. п. в качестве источников углерода. В дополнение к этому, Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, предпочтительно представляет собой Bifidobacterium longum LC67 (номер доступа: KCCM 11802P).
Смесь молочнокислых бактерий в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения представляет собой смесь двух или более молочнокислых бактерий, выбранных из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7. Ввиду синергического эффекта молочнокислых бактерий, смесь молочнокислых бактерий в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения предпочтительно представляет собой комбинацию Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3. В дополнение к этому, ввиду синергического эффекта молочнокислых бактерий, смесь молочнокислых бактерий в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения предпочтительно представляет собой комбинацию одной или более Lactobacillus sp., выбранных из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, или Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5; и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7. Смесь молочнокислых бактерий характеризуется более высокой антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей β-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS), или активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта, чем один вид молочнокислых бактерий, из-за синергического эффекта специфического штамма Lactobacillus sp. и специфического штамма Bifidobacterium sp., и является более выгодной с точки зрения функциональных пищевых продуктов и лекарственных материалов. В смеси молочнокислых бактерий в соответствии с вариантом осуществления настоящего изобретения Lactobacillus brevis, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, предпочтительно представляет собой Lactobacillus brevis CH23 (номер доступа: KCCM 11762P); Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, предпочтительно представляет собой Bifidobacterium longum CH57 (номер доступа: KCCM 11764P); Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, предпочтительно представляет собой Lactobacillus plantarum LC5 (номер доступа: KCCM 11800P); Lactobacillus plantarum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, предпочтительно представляет собой Lactobacillus plantarum LC27 (номер доступа: KCCM 11801P); и Bifidobacterium longum, содержащая нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, предпочтительно представляет собой Bifidobacterium longum LC67 (номер доступа: KCCM 11802P).
Другой аспект настоящего изобретения связан с различными применениями новых молочнокислых бактерий или новой смеси молочнокислых бактерий. В качестве применения новых молочнокислых бактерий настоящее изобретение предусматривает композицию для предупреждения, уменьшения тяжести или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую молочнокислые бактерии из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, или Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, их культуру, их лизат или их экстракт в качестве активного ингредиента. Кроме того, в качестве применения новой смеси молочнокислых бактерий настоящее изобретение предусматривает композицию для предупреждения, уменьшения тяжести или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения, содержащую смесь двух или более молочнокислых бактерий, выбранных из Lactobacillus brevis, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 1, Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 3, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 4, Lactobacillus plantarum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 5, и Bifidobacterium longum, содержащей нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7, их культуру, их лизат или их экстракт в качестве активного ингредиента. В композиции по настоящему изобретению технические характеристики Lactobacillus brevis, Lactobacillus plantarum и Bifidobacterium longum являются такими, как описано выше, и поэтому их описание пропущено. Повреждение кишечника относится к состоянию, при котором функция кишечника (особенно тонкой кишки или толстой кишки) является аномальной из-за нарушения кишечной флоры или т. п. Предпочтительно, повреждение кишечника представляет собой синдром кишечной проницаемости. Кроме того, повреждение печени относится к состоянию, при котором функция печени является аномальной вследствие внешних факторов или внутренних факторов. Предпочтительно, повреждение печени выбрано из гепатита, ожирения печени или цирроза печени. Кроме того, гепатит включает все формы неалкогольного гепатита и алкогольного гепатита. Более того, ожирение печени включает все формы неалкогольного ожирения печени и алкогольного ожирения печени. Кроме того, аллергическое заболевание не ограничено в своем роде, если оно вызвано чрезмерными иммунными реакциями живого организма, и предпочтительно выбрано из атопического дерматита, астмы, фарингита или хронического дерматита. Кроме того, воспалительное заболевание не ограничено в своем роде, если оно вызвано воспалительными реакциями, и предпочтительно выбрано из гастрита, язвы желудка, артрита или колита. Более того, артрит включает ревматоидный артрит. Колит относится к состоянию, при котором воспаление возникает в толстой кишке из-за бактериальной инфекции или патологической ферментации содержимого кишечника. Формы колита включают инфекционный колит и неинфекционный колит. Конкретные примеры колита включают воспалительные заболевания кишечника, синдром раздраженного кишечника и т. п. Кроме того, воспалительные заболевания кишечника включают ульцеративный колит, заболевание Крона и т. п.
В настоящем изобретении культуру молочнокислых бактерий или культуру смеси молочнокислых бактерий получают с помощью культивирования определенного штамма или смеси штаммов в среде. Среда может быть выбрана из известных жидких сред или твердых сред, и может представлять собой, например, жидкую среду MRS, агаровую среду MRS или агаровую среду BL.
В настоящем изобретении композиция может быть осуществлена в виде фармацевтической композиции, пищевой добавки, пищевой композиции (в частности, функциональной пищевой композиции), кормовой добавки или т. п. в зависимости от предполагаемого применения или аспекта. В дополнение к этому, содержание молочнокислых бактерий или смеси молочнокислых бактерий в качестве активного ингредиента также можно регулировать в широком диапазоне в зависимости от конкретного типа, предполагаемого применения или аспекта композиции.
Содержание новых молочнокислых бактерий, новой смеси молочнокислых бактерий, их культуры, их лизата или их экстракта в качестве активного ингредиента в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением конкретно не ограничено. Например, содержание может составлять от 0,01 до 99 вес. %, предпочтительно от 0,5 до 50 вес. %, более предпочтительно от 1 до 30 вес. % исходя из общего веса композиции. В дополнение к этому фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может дополнительно содержать, в дополнение к активному ингредиенту, добавки, такие как фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или разбавители. Носители, вспомогательные вещества и разбавители, которые могут содержаться в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксилбензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло. В дополнение к этому фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может дополнительно содержать, помимо новых молочнокислых бактерий, новую смесь молочнокислых бактерий, их культуру, их лизат или их экстракт, один или более активных ингредиентов, обладающих эффектом предупреждения или лечения повреждения кишечника, повреждения печени, аллергического заболевания, воспалительного заболевания или ожирения. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть получена в виде составов для перорального введения или составов для парентерального введения, и при этом составы могут быть получены с использованием разбавителей или вспомогательных веществ, таких как наполнители, сухие разбавители, связующие, смачивающие средства, разрыхлители, поверхностно-активные вещества и т. п., которые обычно применяются. Твердые составы для перорального введения включают таблетки, пеллеты, порошки, гранулы, капсулы и т. п., и эти твердые композиции могут быть получены с помощью смешивания активного ингредиента по меньшей мере с одним вспомогательным веществом, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой, лактозой или желатином. В дополнение к простым наполнителям могут также применяться смазывающие вещества, такие как стеарат магния или тальк. Жидкие составы для перорального введения включают суспензии, растворы, эмульсии и сироп и могут содержать различные вспомогательные вещества, например, смачивающие средства, ароматизаторы, ароматические вещества, консерванты и т. п. в дополнение к воде и жидкому парафину, которые часто применяются как простые разбавители. Составы для парентерального введения включают стерилизованные водные растворы, неводные растворы, суспензии, эмульсии, лиофилизированные препараты и суппозитории. Пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, инъекционные сложные эфиры, такие как этилолеат и т. п., могут применяться в качестве неводных растворителей или суспендирующих средств. В качестве основы суппозиториев можно применять витепсол, макрогол, Tween 61, масло какао, лауриновый жир, глицерожелатин и т. п. Кроме того, композиция может быть предпочтительно составлена в зависимости от каждого заболевания или компонента с помощью подходящего способа, известного из уровня техники, или способа, раскрытого в Remington's Pharmaceutical Science (последнее издание), Mack Publishing Company, Истон, Пенсильвания. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить перорально или парентерально млекопитающим, в том числе людям, в соответствии с требуемым способом. Пути для парентерального введения включают внешнее нанесение на кожу, внутрибрюшинную инъекцию, интраректальную инъекцию, подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию, интраторакальную инъекцию или т. п. Доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению конкретно не ограничена, до тех пор пока она представляет собой фармацевтически эффективное количество. Доза может варьироваться в зависимости от веса пациента, возраста, пола, состояния здоровья, рациона, времени введения, способа введения, скорости экскреции и тяжести заболевания. Суточная доза фармацевтической композиции по настоящему изобретению конкретно не ограничена, однако предпочтительно составляет от 0,1 до 3000 мг/кг исходя из активного ингредиента, более предпочтительно от 1 до 2000 мг/кг исходя из активного ингредиента и может вводиться один или несколько раз в сутки.
Кроме того, содержание новых молочнокислых бактерий, новой смеси молочнокислых бактерий, их культуры, их лизата или их экстракта в качестве активного ингредиента в пищевой композиции в соответствии с настоящим изобретением составляет от 0,01 до 99 вес. %, предпочтительно от 0,1 до 50 вес. %, более предпочтительно от 0,5 до 25 вес. % исходя из общего веса композиции, но не ограничивается ими. Пищевая композиция по настоящему изобретению может находиться в форме пеллет, порошков, гранул, инфузий, таблеток, капсул, жидкости или т. п., и конкретные примеры пищи могут включать мясные продукты, колбасы, хлебобулочные изделия, виды шоколада, конфеты, закуски, кондитерские изделия, виды пиццы, виды рамена, другие виды лапши, жевательные резинки, молочные продукты, в том числе виды мороженого, различные виды супов, напитки, виды чая, функциональную воду, напитки, алкогольные напитки, витаминные комплексы и т. п. и могут включать все продукты здорового питания в общем смысле. Пищевая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать в качестве дополнительных ингредиентов ситологически приемлемые носители, различные ароматизаторы или природные углеводы, в дополнение к активному ингредиенту. Кроме того, пищевая композиция по настоящему изобретению может содержать различные питательные вещества, витамины, электролиты, ароматизаторы, красители, пектиновую кислоту и ее соль, альгиновую кислоту и ее соль, органическую кислоту, защитный коллоидный загуститель, средство, регулирующее значение рН, стабилизатор, консервант, глицерин, спирт, карбонизирующее средство, используемое для газированных напитков, и т. п. Кроме того, пищевая композиция по настоящему изобретению может содержать плодово-ягодную мякоть для получения натуральных плодово-ягодных соков, напитков на основе плодово-ягодных соков и овощных напитков. Эти ингредиенты могут применяться раздельно или в виде смеси. Вышеописанные природные углеводы могут включать моносахариды, такие как глюкоза и фруктоза, дисахариды, такие как мальтоза и сахароза, полисахариды, такие как декстрин и циклодекстрин, и сахарные спирты, такие как ксилит, сорбит и эритрит. В качестве ароматизатора может использоваться натуральный ароматизатор, такой как тауматин или экстракт стевии, или синтетический ароматизатор, такой как сахарин или аспартам.
Далее в данном документе настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры. Однако следует понимать, что эти примеры предназначены только для иллюстрирования технических характеристик настоящего изобретения для большей ясности и не ограничивают объем настоящего изобретения.
I. Первый эксперимент по скринингу молочнокислых бактерий и оценки их эффектов
1. Выделение и идентификация молочнокислых бактерий
(1) Выделение молочнокислых бактерий из кимчи
Каждый из кимчи с китайской капустой, кимчи с редиской и кимчи с зеленым луком измельчали, и измельченную жидкость суспендировали в жидкой среде MRS (бульон MRS, Difco, США). Затем супернатант собирали, переносили в агаровую среду MRS (Difco, США) и культивировали анаэробно при 37°С в течение приблизительно 48 часов, а затем выделяли штаммы, которые образовывали колонии.
(2) Выделение молочнокислых бактерий из человеческих экскрементов
Человеческие экскременты суспендировали в жидкой среде GAM (бульон GAM; Nissui Pharmaceutical, Япония). Затем супернатант собирали, переносили в агаровую среду BL (Nissui Pharmaceutical, Япония) и культивировали анаэробно при 37°С в течение приблизительно 48 часов, а затем выделяли штаммы Bifidobacterium sp., которые образовывали колонии.
(3) Идентификация подвергнутых скринингу молочнокислых бактерий
Анализировали физиологические характеристики и последовательности 16S rDNA штаммов, выделенных из кимчи или человеческих фекалий, с целью идентификации видов штаммов, и штаммам присваивали названия. В таблице 1 ниже приведены контрольные номера и названия штаммов молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи с китайской капустой, кимчи с редиской, кимчи с зеленым луком, а также из человеческих фекалий.
Таблица 1
Контрольный № | Название штамма | Контрольный № | Название штамма |
1 | Lactobacillus acidophilus CH1 | 31 | Lactobacillus sakei CH31 |
2 | Lactobacillus acidophilus CH2 | 32 | Lactobacillus johnsonii CH32 |
3 | Lactobacillus acidophilus CH3 | 33 | Lactobacillus sakei CH33 |
4 | Lactobacillus brevis CH4 | 34 | Lactobacillus sakei CH34 |
5 | Lactobacillus curvatus CH5 | 35 | Lactobacillus plantarum CH35 |
6 | Lactobacillus brevis CH6 | 36 | Lactobacillus sanfranciscensis CH36 |
7 | Lactobacillus casei CH7 | 37 | Bifidobacterium pseudocatenulatum CH37 |
8 | Lactobacillus planantrum CH8 | 38 | Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38 |
9 | Lactobacillus sakei CH9 | 39 | Bifidobacterium adolescentis CH39 |
10 | Lactobacillus curvatus CH10 | 40 | Bifidobacterium adolescentis CH40 |
11 | Lactobacillus sakei CH11 | 41 | Bifidobacterium adolescentis CH41 |
12 | Lactobacillus curvatus CH12 | 42 | Bifidobacterium animalis CH42 |
13 | Lactobacillus plantarum CH13 | 43 | Bifidobacterium animalis CH43 |
14 | Lactobacillus fermentum CH14 | 44 | Bifidobacterium bifidum CH44 |
15 | Lactobacillus fermentum CH15 | 45 | Bifidobacterium bifidum CH45 |
16 | Lactobacillus gasseri CH16 | 46 | Bifidobacterium breve CH46 |
17 | Lactobacillus paracasei CH17 | 47 | Bifidobacterium breve CH47 |
18 | Lactobacillus helveticus CH18 | 48 | Bifidobacterium breve CH48 |
19 | Lactobacillus helveticus CH19 | 49 | Bifidobacterium catenulatum CH49 |
20 | Lactobacillus johnsonii CH20 | 50 | Bifidobacterium catenulatum CH50 |
21 | Lactobacillus johnsonii CH21 | 51 | Bifidobacterium dentium CH51 |
22 | Lactobacillus johnsonii CH22 | 52 | Bifidobacterium infantis CH52 |
23 | Lactobacillus brevis CH23 | 53 | Bifidobacterium infantis CH53 |
24 | Lactobacillus paracasei CH24 | 54 | Bifidobacterium infantis CH54 |
25 | Lactobacillus кимчи CH25 | 55 | Bifidobacterium longum CH55 |
26 | Lactobacillus gasseri CH26 | 56 | Bifidobacterium longum CH56 |
27 | Lactobacillus paracasei CH27 | 57 | Bifidobacterium longum CH57 |
28 | Lactobacillus pentosus CH28 | 58 | Bifidobacterium longum CH58 |
29 | Lactobacillus pentosus CH29 | 59 | Bifidobacterium longum CH59 |
30 | Lactobacillus reuteri CH30 | 60 | Bifidobacterium longum CH60 |
Среди штаммов, показанных в таблице 1 выше, Lactobacillus brevis CH23 представлял собой грамположительную анаэробную бациллу, не образовывавшую спор и способную выживать даже в аэробных условиях. Кроме того, Lactobacillus brevis CH23 выживал при температуре от 10 до 42°C и представляла собой кислотоустойчивый штамм, стабильный при рН 2 в течение 2 часов. Кроме того, Lactobacillus brevis CH23 выживал даже в 2% растворе хлорида натрия и активно продуцировал глюкозидазу. В дополнение к этому, для химической классификации Lactobacillus brevis CH23 анализировали его 16S rDNA, и в результате было показано, что Lactobacillus brevis CH23 имеет нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 1. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Lactobacillus brevis CH23 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Lactobacillus brevis, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, что и Lactobacillus brevis CH23, обнаружен не был, и Lactobacillus brevis CH23 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Lactobacillus brevis FJ004.
Среди штаммов, показанных в таблице 1 выше, Lactobacillus johnsonii CH32 представлял собой грамположительную анаэробную бациллу, не образовывавшую спор и способную выживать даже в аэробных условиях. Кроме того, Lactobacillus johnsonii CH32 стабильно выживал при температуре до 45°C и был кислотоустойчивым штаммом, стабильным при рН 2 в течение 2 часов. Более того, Lactobacillus johnsonii CH32 активно продуцировал β-глюкозидазу, но не продуцировал β-глюкуронидазу. В дополнение к этому, для химической классификации Lactobacillus johnsonii CH32 анализировали его 16S rDNA, и в результате было показано, что Lactobacillus johnsonii CH32 имеет нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 2. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Lactobacillus johnsonii CH32 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Lactobacillus johnsonii, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, что и Lactobacillus johnsonii CH32, обнаружен не был, и Lactobacillus johnsonii CH32 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Lactobacillus johnsonii JCM 2012.
Среди штаммов, показанных в таблице 1 выше, Bifidobacterium longum CH57 представлял собой грамположительную анаэробную бациллу, не образовывавшую спор и проявлявшую очень низкую жизнеспособность в аэробных условиях. Кроме того, Bifidobacterium longum CH57 был термически неустойчивым. Кроме того, Bifidobacterium longum CH57 активно продуцировал глюкозидазу, но не продуцировал β-глюкуронидазу. В дополнение к этому, для химической классификации Bifidobacterium longum CH57 анализировали его 16S rDNA, и в результате было показано, что Bifidobacterium longum CH57 имеет нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 3. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Bifidobacterium longum CH57 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Bifidobacterium longum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, что и Bifidobacterium longum CH57, обнаружен не был, и Bifidobacterium longum CH57 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Bifidobacterium longum CBT-6.
В дополнение к этому, среди физиологических характеристик Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32 и Bifidobacterium longum CH57 анализировали коэффициент использования источника углерода с использованием ферментации сахара с помощью набора API (модель API 50 CHL, производства BioMerieux, США). В таблице 2 ниже показаны результаты анализа коэффициента использования Lactobacillus brevis CH23 источника углерода; в таблице 3 ниже показаны результаты анализа коэффициента использования Lactobacillus johnsonii CH32 источника углерода; и в таблице 4 ниже показаны результаты анализа коэффициента использования Bifidobacterium longum CH57 источника углерода. В таблицах 2, 3 и 4 «+» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода являлся положительным; «-» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода являлся отрицательным; и «±» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода допускал двоякое толкование. Как показано в таблицах 2, 3 и 4 ниже, Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32 и Bifidobacterium longum CH57 продемонстрировали, что коэффициент использования источника углерода отличался от коэффициента использования других штаммов того же вида по отношению к некоторым источникам углерода.
Таблица 2
Источник углерода | Название штамма | Источник углерода | Название штамма | ||
L. brevis 1) | L. brevis CH23 | L. brevis 1) | L. brevis CH23 | ||
Глицерин | - | - | Салицин | + | + |
Эритрит | - | - | Целлобиоза | + | - |
D-Арабиноза | - | - | Мальтоза | + | + |
L-Арабиноза | + | - | Лактоза | + | - |
D-Рибоза | + | + | Мелибиоза | - | + |
D-Ксилоза | + | + | Сахароза | + | - |
L-Ксилоза | - | - | Трегалоза | + | - |
D-Адонит | - | - | Инулин | + | - |
Метил-β-D-ксилопиранозид | - | - | Мелецитоза | + | - |
D-Галактоза | + | - | Рафиноза | - | - |
D-Глюкоза | + | + | Крахмал | - | - |
D-Фруктоза | + | + | Гликоген | - | - |
D-Манноза | + | - | Ксилит | - | - |
L-Сорбоза | - | - | Гентиобиоза | + | - |
L-Рамноза | - | - | D-Тураноза | + | - |
Дульцит | + | - | D-Ликсоза | - | - |
Инозит | - | - | D-Тагатоза | + | - |
Маннит | + | - | D-Фукоза | - | - |
Сорбит | + | - | L-Фукоза | - | - |
α-Метил-D-маннозид | - | - | D-Арабит | - | - |
α-Метил-D-глюкозид | - | - | L-Арабит | - | - |
N-Ацетилглюкозамин | + | ± | Гюконат | + | ± |
Амигдалин | + | - | 2-Кетоглюконат | - | - |
Арбутин | + | - | 5-Кетоглюконат | - | + |
Эскулин | + | + |
1) Suriasih K., Aryanta WR, MahardikaG, Astawa NM. Microbiological and Chemical Properties of Kefir Made of Bali Cattle Milk. Food Science and Quality Management 2012; 6:112-22.
Таблица 3
Источник углерода | Название штамма | Источник углерода | Название штамма | ||
L. johnsonii 2) | L. johnsonii CH32 | L. johnsonii 2) | L. johnsonii CH32 | ||
Глицерин | - | - | Салицин | - | - |
Эритрит | - | - | Целлобиоза | + | - |
D-Арабиноза | - | - | Мальтоза | - | + |
L-Арабиноза | - | - | Лактоза | - | + |
D-Рибоза | - | - | Мелибиоза | + | - |
D-Ксилоза | - | - | Сахароза | + | + |
L-Ксилоза | - | - | Трегалоза | + | - |
D-Адонит | - | - | Инулин | - | - |
Метил-β-D-ксилопиранозид | - | - | Мелецитоза | - | - |
D-Галактоза | - | - | Рафиноза | + | - |
D-Глюкоза | - | + | Крахмал | - | - |
D-Фруктоза | - | + | Гликоген | - | - |
D-Манноза | + | + | Ксилит | - | - |
L-Сорбоза | - | - | Гентиобиоза | - | + |
L-Рамноза | - | - | D-Тураноза | - | - |
Дульцит | - | - | D-Ликсоза | - | - |
Инозит | - | - | D-Тагатоза | - | - |
Маннит | - | - | D-Фукоза | - | - |
Сорбит | - | - | L-Фукоза | - | - |
α-Метил-D-маннозид | - | - | D-Арабит | - | - |
α-Метил-D-глюкозид | - | - | L-Арабит | - | - |
N-Ацетилглюкозамин | + | + | Гюконат | - | - |
Амигдалин | - | - | 2-Кетоглюконат | - | - |
Арбутин | - | - | 5-Кетоглюконат | - | - |
Эскулин | - | - |
2) Pridmore RD, Berger B, Desiere F, Vilanova D, Barretto C, Pittet AC, Zwahlen MC, Rouvet M, Altermann E, Barrangou R, Mollet B, Mercenier A, Klaenhammer T, Arigoni F, Schell MA. The genome sequence of the probiotic intestinal bacterium Lactobacillus johnsonii NCC 533. Proc Natl Acad Sci U S A. 2004 Feb 24; 101(8):2512-7.
Таблица 4
Источник углерода | Название штамма | Источник углерода | Название штамма | ||
B. longum 3) | B. longum CH57 | B. longum 3) | B. longum CH57 | ||
Глицерин | ± | - | Салицин | ± | - |
Эритрит | - | - | Целлобиоза | ± | ± |
D-Арабиноза | - | - | Мальтоза | - | - |
L-Арабиноза | - | - | Лактоза | - | - |
D-Рибоза | ± | - | Мелибиоза | - | - |
D-Ксилоза | - | - | Сахароза | + | ± |
L-Ксилоза | - | - | Трегалоза | ± | - |
D-Адонит | - | - | Инулин | - | - |
Метил-β-D-ксилопиранозид | - | - | Мелецитоза | - | - |
D-Галактоза | + | + | Рафиноза | - | - |
D-Глюкоза | + | + | Крахмал | - | - |
D-Фруктоза | + | + | Гликоген | - | - |
D-Манноза | - | - | Ксилит | - | - |
L-Сорбоза | - | - | Гентиобиоза | - | - |
L-Рамноза | - | - | D-Тураноза | - | - |
Дульцит | - | - | D-Ликсоза | - | - |
Инозит | - | - | D-Тагатоза | - | - |
Маннит | + | - | D-Фукоза | - | - |
Сорбит | - | - | L-Фукоза | - | - |
α-Метил-D-маннозид | - | - | D-Арабит | - | - |
α-Метил-D-глюкозид | - | - | L-Арабит | - | - |
N-Ацетилглюкозамин | ± | - | Гюконат | ± | - |
Амигдалин | - | - | 2-Кетоглюконат | - | - |
Арбутин | ± | - | 5-Кетоглюконат | - | - |
Эскулин | - | - |
3) Lukacova D, Karovucova J, Greifova M, Greif G, Sovcikova A, Kohhajdova Z. In vitro testing of selected probiotic characteristics of Lactobacillus plantarum and Bifidobacterium longum. Journal of Food and Nutrition Research 2006; 45: 77-83.
(4) Информация о депонировании молочнокислых бактерий
Авторы настоящего изобретения депонировали Lactobacillus brevis CH23 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес: Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 1 сентября 2015 г. под номером доступа KCCM 11762P. Кроме того, авторы настоящего изобретения депонировали Lactobacillus johnsonii CH32 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес: Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 1 сентября 2015 г. под номером доступа KCCM 11763P. Кроме того, авторы настоящего изобретения депонировали Bifidobacterium longum CH57 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес: Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 1 сентября 2015 г. под номером доступа KCCM 11764P.
2. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или кишечной проницаемости
Чтобы оценить эффект молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи или человеческих экскрементов, в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или кишечной проницаемости, у молочнокислых бактерий измеряли антиоксидантную активность, активность, подавляющую продуцирование липополисахаридов (LPS), активность, подавляющую β-глюкуронидазу (вредный кишечный фермент), и активность, индуцирующую экспрессию белка плотного контакта.
(1) Экспериментальные способы
* Антиоксидантная активность
Для получения раствора DPPH растворяли в этаноле DPPH (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил) до концентрации 0,2 мМ. Суспензию молочнокислых бактерий (1 × 108 КОЕ/мл) или раствор витамина С (1 г/мл) добавляли к 0,1 мл раствора DPPH и культивировали при 37°С в течение 20 минут. Культуру центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 5 минут, и супернатант собирали. Затем измеряли поглощение супернатанта при 517 нм, и рассчитывали антиоксидантную активность молочнокислых бактерий.
* Активность, подавляющая продуцирование липополисахаридов (LPS)
В 0,9 мл стерильного физиологического солевого раствора суспендировали 0,1 г свежих экскрементов человека и разбавляли в 100 раз общей анаэробной средой для получения фекальной суспензии. К 9,8 мл стерильной анаэробной среды (Nissui Pharmaceuticals, Япония) добавляли 0,1 мл фекальной суспензии и 0,1 мл молочнокислых бактерий (1 × 104 или 1 × 105 КОЕ) и культивировали анаэробно в течение 24 часов. Затем культуру обрабатывали ультразвуком в течение приблизительно 1 часа для разрушения наружной клеточной мембраны бактерий, и центрифугировали при 5000×g, и собирали супернатант. Затем с помощью набора LAL для анализа (Limulus Amoebocyte Lysate) (производства Cape Cod Inc., США) измеряли содержание LPS (липополисахарида) (который является типичным эндотоксином) в супернатанте. В дополнение к этому, чтобы оценить активность подавления пролиферации E. coli молочнокислых бактерий, культуру, полученную в том же эксперименте, как описано выше, разбавляли в 1000 раз и в 100000 раз и культивировали в среде DHL, а затем подсчитывали количество клеток E.coli.
*Активность, подавляющая β-глюкуронидазу
В реактор помещали 0,1 мл 0,1 мМ раствора п-нитрофенил-β-D-глюкуронида, 0,2 мл 50 мМ фосфатно-солевого буферного раствора, и 0,1 мл суспензии молочнокислых бактерий (полученной суспендированием культуры молочнокислых бактерий в 5 мл физиологического солевого раствора), и подвергали ферментативной реакции β-глюкуронидазы, и для прекращения реакции добавляли 0,5 мл 0,1 мМ раствора NaOH. Затем реакционный раствор центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 5 минут, и супернатант собирали. Затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм.
* Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта
Клетки СаСО2, полученные из Корейского банка клеточных линий, культивировали в среде RPMI 1640 в течение 48 часов, а затем культивированные клетки CaCO2 распределяли в каждую лунку 12-луночного планшета с плотностью, составлявшей 2 × 106 клеток/лунка. Затем каждую лунку обрабатывали 1 мкг LPS (липополисахарида) или комбинацией 1 мкг LPS (липополисахарида) и 1 × 103 КОЕ молочнокислых бактерий и инкубировали в течение 24 часов. Затем культивируемые клетки собирали из каждой лунки, и уровень экспрессии белка плотного контакта ZO-1 в клетках измеряли с помощью способа иммуноблоттинга.
(2) Экспериментальные результаты
Измеряли антиоксидантную активность, активность, подавляющую продуцирование липополисахаридов (LPS), активность, подавляющую β-глюкуронидазу, и активность, индуцирующую экспрессию белка плотного контакта у молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи или человеческих экскрементов, и результаты измерения показаны в таблицах 5 и 6 ниже. Как представлено в таблицах 5 и 6 ниже, Lactobacillus curvatus CH5, Lactobacillus sakei CH11, Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32, Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38 и Bifidobacterium longum CH57 обладали превосходной антиоксидантной активностью, активностью, сильно подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS) и β-глюкуронидазы, и сильно индуцирующей экспрессию белка плотного контакта. Эти молочнокислые бактерии характеризуются превосходным антиоксидантным эффектом, характеризуются превосходным эффектом подавления ферментативной активности вредных бактерий кишечной флоры, связанных с воспалением и канцерогенезом, подавляют продуцирование эндотоксина LPS (липополисахарида), продуцируемого вредными бактериями кишечной флоры, и индуцируют экспрессию белка плотного контакта. Таким образом, эти молочнокислые бактерии способны облегчить синдром кишечной проницаемости.
Таблица 5
Контрольный № | Название штамма | Антиоксидантная активность | Активность, подавляющая бета-глюкуронидазу | Активность, подавляющая продуцирование LPS | Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта |
1 | Lactobacillus acidophilus CH1 | + | + | - | - |
2 | Lactobacillus acidophilus CH2 | + | + | + | - |
3 | Lactobacillus acidophilus CH3 | + | + | + | - |
4 | Lactobacillus brevis CH4 | + | + | - | - |
5 | Lactobacillus curvatus CH5 | +++ | + | +++ | ++ |
6 | Lactobacillus brevis CH6 | + | + | - | - |
7 | Lactobacillus casei CH7 | + | + | - | - |
8 | Lactobacillus planantrum CH8 | + | + | - | - |
9 | Lactobacillus sakei CH9 | - | + | - | - |
10 | Lactobacillus curvatus CH10 | - | + | - | - |
11 | Lactobacillus sakei CH11 | +++ | + | +++ | ++ |
12 | Lactobacillus curvatus CH12 | - | + | - | + |
13 | Lactobacillus plantarum CH13 | - | + | - | - |
14 | Lactobacillus fermentum CH14 | - | + | - | - |
15 | Lactobacillus fermentum CH15 | +++ | + | ++ | - |
16 | Lactobacillus gasseri CH16 | + | + | - | - |
17 | Lactobacillus paracasei CH17 | + | + | - | - |
18 | Lactobacillus helveticus CH18 | + | + | - | - |
19 | Lactobacillus helveticus CH19 | + | + | - | - |
20 | Lactobacillus johnsonii CH20 | + | + | - | + |
21 | Lactobacillus johnsonii CH21 | + | + | - | + |
22 | Lactobacillus johnsonii CH22 | + | + | - | + |
23 | Lactobacillus brevis CH23 | +++ | + | ++ | ++ |
24 | Lactobacillus paracasei CH24 | + | + | - | - |
25 | Lactobacillus кимчи CH25 | + | + | - | - |
26 | Lactobacillus gasseri CH26 | + | + | - | - |
27 | Lactobacillus paracasei CH27 | + | + | - | + |
28 | Lactobacillus pentosus CH28 | + | + | - | - |
29 | Lactobacillus pentosus CH29 | + | + | - | - |
30 | Lactobacillus reuteri CH30 | + | - | - | - |
Таблица 6
Контрольный № | Название штамма | Антиоксидантная активность | Активность, подавляющая бета-глюкуронидазу | Активность, подавляющая продуцирование LPS | Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта |
31 | Lactobacillus sakei CH31 | - | + | - | + |
32 | Lactobacillus johnsonii CH32 | +++ | + | ++ | ++ |
33 | Lactobacillus sakei CH33 | + | + | - | + |
34 | Lactobacillus sakei CH34 | + | + | - | + |
35 | Lactobacillus plantarum CH35 | + | + | + | + |
36 | Lactobacillus sanfranciscensis CH36 | + | + | + | + |
37 | Bifidobacterium pseudocatenulatum CH37 | - | + | - | + |
38 | Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38 | +++ | + | ++ | ++ |
39 | Bifidobacterium adolescentis CH39 | - | + | - | + |
40 | Bifidobacterium adolescentis CH40 | - | + | +++ | + |
41 | Bifidobacterium adolescentis CH41 | + | + | - | + |
42 | Bifidobacterium animalis CH42 | + | + | - | - |
43 | Bifidobacterium animalis CH43 | + | + | - | - |
44 | Bifidobacterium bifidum CH44 | + | + | - | - |
45 | Bifidobacterium bifidum CH45 | + | + | - | - |
46 | Bifidobacterium breve CH46 | + | - | - | - |
47 | Bifidobacterium breve CH47 | + | + | - | + |
48 | Bifidobacterium breve CH48 | + | + | - | + |
49 | Bifidobacterium catenulatum CH49 | + | + | - | ++ |
50 | Bifidobacterium catenulatum CH50 | - | + | - | - |
51 | Bifidobacterium dentium CH51 | + | - | - | - |
52 | Bifidobacterium infantis CH52 | - | + | - | - |
53 | Bifidobacterium infantis CH53 | - | + | - | - |
54 | Bifidobacterium infantis CH54 | + | + | - | - |
55 | Bifidobacterium longum CH55 | + | + | - | + |
56 | Bifidobacterium longum CH56 | +++ | + | ++ | + |
57 | Bifidobacterium longum CH57 | +++ | + | +++ | ++ |
58 | Bifidobacterium longum CH58 | + | + | + | + |
59 | Bifidobacterium longum CH59 | + | + | + | + |
60 | Bifidobacterium longum CH60 | + | - | + | + |
* Конечная концентрация молочнокислых бактерий при измерении антиоксидантной активности: 1 × 104 КОЕ/мл; концентрация молочнокислых бактерий, добавленных для измерения активности, подавляющей бета-глюкуронидазу, и активности, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS): 1 × 104 КОЕ/мл; концентрация молочнокислых бактерий при измерении активности, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта: 1 × 104 КОЕ/мл.
* Критерии для измерения различных активностей молочнокислых бактерий: очень сильно (+++; >90%); сильно (++; >60-90%); слабо (+; >20-60%); не менее или менее 20% (-; <20%).
3. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения печени
Исходя из оценки эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или синдрома кишечной проницаемости, были выбраны следующие семь штаммов: Lactobacillus curvatus CH5, Lactobacillus sakei CH11, Lactobacillus fermentum CH15, Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32, Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38 и Bifidobacterium longum CH57. Эффект каждого из этих выбранных штаммов или смеси этих штаммов в отношении уменьшения тяжести повреждения печени оценивали с использованием различных животных моделей с повреждением печени.
(1) Измерение эффекта молочнокислых бактерий, уменьшающего тяжесть повреждения печени, с помощью эксперимента с использованием животных моделей с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином
1) Экспериментальный способ
Мышей (C57BL/6, самцы) разделяли на несколько групп, каждая из которых состояла из 6 животных. D-галактозамин вводили внутрибрюшинно тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы, в дозе, составлявшей 800 мг/кг, для индуцирования повреждения печени. Через 2 часа после внутрибрюшинного введения D-галактозамина 1 × 109 КОЕ молочнокислых бактерий вводили перорально тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы и группы отрицательного контроля, один раз в сутки в течение 3 суток. В дополнение к этому, вместо молочнокислых бактерий тестируемым животным группы положительного контроля перорально вводили силимарин в дозе, составлявшей 100 мг/кг, один раз в сутки в течение 3 суток. Через 6 часов после последнего введения лекарственного средства отбирали кровь из сердца. Отобранный образец крови оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 60 минут и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут для отделения сыворотки. Уровни GPT (глутаминпируваттрансаминазы) и GOT (глутаматоксалацетаттрансаминазы) в отделенной сыворотке измеряли с использованием набора для анализа крови (набор для измерения ALT & AST, Asan Pharm. Co., Корея).
В дополнение к этому у тестируемых животных иссекали образец ткани печени, и измеряли количество малонового диальдегида (MDA), присутствующего в ткани печени. Малоновый диальдегид является маркером перекисного окисления липидов. В частности, 0,5 г иссеченной ткани печени добавляли к 16-кратному объему раствора RIPA (0,21 М маннит, 0,1 М EDTA-2Na, 0,07 М сахарозы, 0,01 М основания Trizma), а затем гомогенизировали с использованием гомогенизатора. Гомогенизированный раствор центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 10 минут, и собирали гомогенат печени. К 0,4 мл 10% SDS добавляли 0,5 мл гомогената печени, инкубировали при 37°C в течение 30 минут и охлаждали, а затем к ним добавляли 3 мл 1% фосфатного буфера и 1 мл 0,6% TBA, и нагревали на водной бане при 100°C в течение 45 минут для получения раствора образца. Добавляли полученный раствор образца и смешивали с 4 мл н-бутанола, а затем центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 10 минут, и супернатант собирали. Для количественной оценки MDA измеряли поглощение собранного супернатанта при 535 нм. В дополнение к этому была построена калибровочная кривая для измерения MDA с использованием 1,1,3,3-тетраэтоксипропана.
2) Экспериментальные результаты
На ФИГ. 1 представлен график, демонстрирующий изменение значения GOT, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином; на ФИГ. 2 представлен график, демонстрирующий изменение значения GPT, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином; и на ФИГ. 3 представлен график, демонстрирующий изменение значения MDA, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином.
На оси х на ФИГ. 1-3 «Nor» означает нормальную группу; «Con» означает группу отрицательного контроля, в которой какие-либо лекарственные средства не вводились животным моделям с повреждением печени, индуцированным D-галактозамином; «ch11» означает группу, которой вводили Lactobacillus sakei CH11; «ch15» означает группу, которой вводили Lactobacillus fermentum CH15; «ch23» означает группу, которой вводили Lactobacillus brevis CH23; «ch32» означает группу, которой вводили Lactobacillus johnsonii CH32; «ch38» означает группу, которой вводили Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38; «ch57» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum CH57; «ch57+ch11» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus sakei CH11 в одинаковых количествах; «ch57+ch23» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах; «ch57+ch32» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 в одинаковых количествах; и «SM» означает группу положительного контроля, которой вводили силимарин вместо молочнокислых бактерий.
Как показано на ФИГ. 1-3, в случае если каждый из Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32 и Bifidobacterium longum CH57 вводили животным моделям, в которых значения GOT, GPT и MAD увеличивались из-за повреждения печени, тяжесть повреждения печени уменьшалась. В частности, в случае если вводили смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 или смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32, тяжесть повреждения печени значительно уменьшалась. В дополнение к этому, специфические молочнокислые бактерии или смесь молочнокислых бактерий, выбранных из них, продемонстрировали улучшенный эффект в отношении уменьшения тяжести повреждения печени по сравнению с силимарином, который применяется в качестве лекарственного средства для лечения повреждения печени. Эти результаты показывают, что специфические молочнокислые бактерии или смесь молочнокислых бактерий, выбранных из них, эффективны для уменьшения тяжести ожирения печени, вызванного алкоголем и рационами с высоким содержанием жиров, или для уменьшения тяжести заболеваний печени, вызванных окислительным стрессом.
(2) Измерение эффекта молочнокислых бактерий, уменьшающего тяжесть повреждения печени, с помощью эксперимента с использованием животных моделей с повреждением печени, индуцированным трет-бутилпероксидом
1) Экспериментальный способ
Мышей (C57BL/6, самцы) разделяли на несколько групп, каждая из которых состояла из 6 животных. Трет-бутилпероксид вводили внутрибрюшинно тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы, в количестве, составлявшем 2,5 ммоль/кг, для индуцирования повреждения печени. Через 2 часа после внутрибрюшинного введения трет-бутилпероксида 2 × 109 КОЕ молочнокислых бактерий вводили перорально тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы и группы отрицательного контроля, один раз в сутки в течение 3 суток. В дополнение к этому, вместо молочнокислых бактерий тестируемым животным группы положительного контроля перорально вводили силимарин в дозе, составлявшей 100 мг/кг, один раз в сутки в течение 3 суток. Через 6 часов после последнего введения лекарственного средства отбирали кровь из сердца. Отобранный образец крови оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 60 минут и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут для отделения сыворотки. Уровни GPT (глутаминпируваттрансаминазы) и GOT (глутаматоксалацетаттрансаминазы) в отделенной сыворотке измеряли с использованием набора для анализа крови (набор для измерения ALT & AST, Asan Pharm. Co., Корея).
2) Экспериментальные результаты
В таблице 7 ниже представлены изменения значений GOT и GPT в случае если молочнокислые бактерии вводились животным моделям с повреждением печени, индуцированным трет-бутилпероксидом. Как представлено в таблице 7 ниже, Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32 и Bifidobacterium longum CH57 продемонстрировали превосходные эффекты в отношении уменьшения тяжести повреждения печени по сравнению с силимарином, и смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 или смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 продемонстрировали улучшенный эффект в отношении уменьшения тяжести повреждения печени.
Таблица 7
Тестируемые группы | GOT (МЕ/л) | GPT (МЕ/л) |
Нормальная группа | 36,1 | 26,3 |
Группа отрицательного контроля | 84,1 | 96,1 |
Группа, которой вводили CH23 | 58,0 | 74,2 |
Группа, которой вводили CH32 | 53,0 | 70,5 |
Группа, которой вводили CH57 | 57,6 | 71,2 |
Группа, которой вводили CH57 + CH23 | 48,6 | 64,3 |
Группа, которой вводили CH57 + CH32 | 51,2 | 68,4 |
Группа, которой вводили силимарин | 61,7 | 69,1 |
В таблице 7 выше «CH23» означает Lactobacillus brevis CH23; «CH32» означает Lactobacillus johnsonii CH32; «CH57» означает Bifidobacterium longum CH57; «CH57+CH23» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах; и «CH57+CH32» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 в одинаковых количествах.
4. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести аллергии
(1) Измерение подавления дегрануляции с помощью молочнокислых бактерий
Клеточную линию RBL-2H3 (клеточная линия тучных клеток крысы, Корейский банк клеточных линий, № по кат. 22256) культивировали с DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, Sigma, 22256), содержащей 10% FBS (фетальная бычья сыворотка) и L-глютамин в увлажненном 5% CO2-инкубаторе при 37°С. Клетки, содержащиеся в культуральной среде, флотировали с использованием раствора трипсина-EDTA, и всплывающие клетки выделяли, собирали и использовали в эксперименте. Собранные клетки RBL-2H3 распределяли в 24-луночный планшет с плотностью 5 × 105 клеток/лунка и сенсибилизировали с помощью инкубирования с 0,5 мкг/мл моноклонального IgE мыши в течение 12 часов. Сенсибилизированные клетки промывали 0,5 мл сираганового буфера (119 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 0,4 мМ MgCl2, 25 мМ PIPES, 40 мМ NaOH, pH 7,2), а затем инкубировали с 0,16 мл сираганового буфера (дополненного 5,6 мМ глюкозы, 1 мМ CaCl2, 0,1% BSA) при 37°С в течение 10 минут. Затем к клеточной культуре в качестве тестируемого лекарственного средства добавляли молочнокислые бактерии до концентрации, составлявшей 1 × 104 КОЕ/мл, или к клеточной культуре в качестве контрольного лекарственного средства добавляли 0,04 мл DSCG (динатрия кромогликат), и через 20 минут клетки активировали с помощью 0,02 мл антигена (1 мкг/мл DNP-BSA) при 37°С в течение 10 минут. Затем клеточную культуру центрифугировали при 2000 об./мин. в течение 10 минут, и супернатант собирали. Переносили в 96-луночный планшет 0,025 мл собранного супернатанта и затем 0,025 мл 1 мМ п-NAG (раствор п-нитрофенил-N-ацетил-β-D-глюкозамида в 0,1 М цитратном буфере, рН 4,5), а затем обеспечивали реакцию смеси при 37°С в течение 60 минут. Затем реакцию останавливали с помощью добавления 0,2 мл 0,1 М Na2CO3/NaHCO3, и показатель поглощения при 405 нм измеряли с помощью анализатора ELISA.
(2) Измерение подавления зуда с помощью молочнокислых бактерий
Мышей BALB/c разделяли на несколько групп, каждая из которых состояла из 5 животных. Вводили перорально в качестве тестируемого лекарственного средства один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ молочнокислых бактерий тестируемым группам, отличным от нормальной группы и контрольной группы, или вводили перорально в качестве контрольного лекарственного средства DSCG (динатрия кромогликат) или азеластин в количестве, составлявшем 0,2 мг/мышь, один раз в сутки в течение 3 суток. Через 1 час после последнего введения лекарственного средства мышей оставляли в клетке для наблюдения (24 см × 22 см × 24 см) в течение 10 минут, чтобы акклиматизироваться к окружающей среде, а затем брили заднюю часть головы. Затем мышам из нормальной группы вводили физиологический солевой раствор, а мышам других тестируемых групп вводили индуктор зуда (50 мкг соединения 48/80, Sigma, США) с помощью иглы 29 калибра. Затем каждую мышь сразу же помещали в клетку для наблюдения, и поведение вследствие зуда наблюдали в условиях без присмотра с помощью записи на 8-миллиметровую видеокамеру (SV-K80, Samsung) в течение 1 часа. Царапание задней ногой области инъекции рассматривалось как поведение вследствие зуда, а царапание других частей не рассматривалось как таковое.
(3) Измерение подавления проницаемости сосудов с помощью молочнокислых бактерий
Известно, что в областях с индуцированным зудом проницаемость сосудов увеличена. Этот эксперимент был проведен для того, чтобы проверить, могли ли молочнокислые бактерии эффективно подавлять проницаемость сосудов, вызванную различными соединениями. В соответствии с тем же способом, как и описанный выше эксперимент для измерения подавляющей зуд активности, лекарственное средство вводили тем же мышам. Затем физиологический солевой раствор инъецировали подкожно в заднюю часть головы мышей из нормальной группы, а индуктор зуда (50 мкг соединения 48/80, Sigma, США) вводили подкожно в заднюю часть головы мышей другой тестируемой группы. Затем в хвостовую вену вводили 0,2 мл 1% раствора синего Эванса (Sigma, США), и через 1 час мышей подвергали эвтаназии. Кожу подкожно инъецированной области иссекали и инкубировали в 1 мл 1 н. КОН при 37°С в течение ночи. На следующий день инкубированную ткань кожи смешивали с 4 мл 0,6 н. смеси фосфорная кислота-ацетон (5:13) и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут, и супернатант собирали и измеряли поглощение при 620 нм. Подавление (%) проницаемости сосудов рассчитывали с использованием следующего уравнения:
Подавление (%) = {1 - [показатель поглощения области, обработанной лекарственным средством и индуктором зуда, – показатель поглощения области, не обработанной индуктором зуда] / [показатель поглощения области, обработанной индуктором зуда, – показатель поглощения области, не обработанной индуктором зуда]} x 100.
(4) Экспериментальные результаты
В таблице 8 ниже показаны результаты измерения скорости подавления дегрануляции, скорости подавления зуда и скорости подавления капиллярной проницаемости молочнокислыми бактериями. В таблице 8 ниже «CH5» означает Lactobacillus curvatus CH5; «CH11» означает Lactobacillus sakei CH11; «CH15» означает Lactobacillus fermentum CH15; «CH23» означает Lactobacillus brevis CH23; «CH32» означает Lactobacillus johnsonii CH32; «CH38» означает Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38; «CH57» означает Bifidobacterium longum CH57; ch57+ch11» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus sakei CH11 в одинаковых количествах; «CH57+CH23» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах; и «CH57+CH32» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 в одинаковых количествах.
Как представлено в таблице 8 ниже, Lactobacillus curvatus CH5, Lactobacillus brevis CH23, Lactobacillus johnsonii CH32 и Bifidobacterium longum CH57 эффективно подавляли дегрануляцию базофилов, а Bifidobacterium longum CH57 очень сильно подавлял зуд и проницаемость сосудов. В дополнение к этому, по сравнению с этими только молочнокислыми бактериями смесь этих молочнокислых бактерий, в частности смесь Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23, или смесь Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 демонстрировали более высокие скорости подавления дегрануляции, скорости подавления зуда и скорости подавления проницаемости сосудов. Таким образом, видно, что эти молочнокислые бактерии или их смеси могут очень эффективно уменьшать тяжесть аллергической атопии, астмы, фарингита, хронического дерматита или т. п.
Таблица 8
Лекарственное средство | Подавление (%) | ||
Дегрануляция | Зуд | Проницаемость сосудов | |
Отсутствует | 0 | 2 | 1 |
CH5 | 53 | 46 | 45 |
CH11 | 47 | 46 | 45 |
CH15 | 48 | 42 | 42 |
CH23 | 54 | 47 | 47 |
CH32 | 52 | 45 | 46 |
CH38 | 44 | 45 | 42 |
CH57 | 55 | 55 | 52 |
CH57+CH11 | 59 | 56 | 54 |
CH57+CH23 | 63 | 62 | 61 |
CH57+CH32 | 61 | 58 | 56 |
DSCG (динатрия кромогликат) | 62 | 25 | 37 |
Азеластин | - | 65 | 68 |
5.
In vitro
оценка противовоспалительного эффекта и эффекта подавления кишечной проницаемости молочнокислых бактерий
(1) Выделение дендритных клеток и измерение маркера воспаления
Иммунные клетки выделяли из костного мозга мышей C57BL/6 (самцы, 20-23 г) с использованием RPMI 1640 (содержащего 10% FBS, 1% антибиотиков, 1% глутамакса, 0,1% меркаптоэтанола). Выделенные клетки обрабатывали буфером для лизиса RBC, промывали, распределяли в каждую лунку 24-луночного планшета, обрабатывали GM-CSF и IL-4 при соотношении 1:1000 и культивировали. Через 5 дней культивирования среду заменяли свежей средой, и через 8 дней клетки собирали и использовали в качестве дендритных клеток. Затем дендритные клетки высевали в 24-луночный планшет с плотностью, составлявшей 0,5 × 106 клеток/лунка, и обрабатывали молочнокислыми бактериями (тестируемое вещество) и индуктором воспаления LPS (липополисахаридом) в течение 2 часов или 24 часов, а затем собирали супернатант и клетки. Используя собранный супернатант, посредством способа иммуноблоттинга измеряли уровни экспрессии IL-10 и IL-12.
На ФИГ. 4 представлен график, демонстрирующий эффект молочнокислых бактерий, подвергнутых скринингу согласно настоящему изобретению, в отношении воспалительной реакции дендритных клеток, индуцированной липополисахаридом (LPS). Левый график на ФИГ. 4 демонстрирует эффект молочнокислых бактерий в отношении клеток, не обработанных LPS (липополисахаридом), а на правом графике показан эффект молочнокислых бактерий в отношении клеток, обработанных LPS (липополисахаридом). В дополнение к этому, на оси х на ФИГ. 4 «Nor» означает группу, не обработанную тестируемыми молочнокислым бактериями и индуктором воспаления LPS (липополисахаридом); «LPS» означает группу, обработанную индуктором воспаления LPS (липополисахаридом); «ch11» означает группу, обработанную Lactobacillus sakei CH11; «ch15» означает группу, обработанную Lactobacillus fermentum CH15; «ch23» означает группу, обработанную Lactobacillus brevis CH23; «ch32» означает группу, обработанную Lactobacillus johnsonii CH32; «ch38» означает группу, обработанную Bifidobacterium pseudocatenulatum CH38; «ch57» означает группу, обработанную Bifidobacterium longum CH57; «ch57+ch11» означает группу, обработанную смесью молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus sakei CH11 в одинаковых количествах; «CH57+CH23» означает группу, обработанную смесью молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах; и «CH57+CH32» означает группу, обработанную смесью молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 в одинаковых количествах.
Как показано на ФИГ. 4, Lactobacillus sakei CH11, Lactobacillus brevis CH23 и Lactobacillus johnsonii CH32 индуцировали продуцирование IL-10 дендритных клеток, полученных с помощью дифференциации после выделения из костного мозга, эффективно подавляли продуцирование IL-12, индуцированное LPS (липополисахаридом), а также эффекты увеличивались в случае применения в комбинации с Bifidobacterium longum CH57. В частности, смесь Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 проявляла наилучший эффект в отношении подавления воспаления. В случае если дендритные клетки являются контролируемыми, клетки Treg (регуляторные Т-клетки) могут эффективно контролироваться. По данной причине молочнокислые бактерии, подвергнутые скринингу в настоящем изобретении, способны эффективно уменьшать тяжесть хронических воспалительных заболеваний, таких как колит, аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и т. п.
(2) Выделение макрофагов и измерение маркера воспаления
Мышей C57BL/6J (20-23 г) возрастом 6 недель приобретали у RaonBio Co., Ltd. В брюшную полость каждой мыши вводили 2 мл 4% стерильного тиогликолята, и через 96 часов мышей анестезировали, и 8 мл среды RPMI 1640 вводили в брюшную полость каждой мыши. Через 5-10 минут среду RPMI (в том числе макрофаги) в брюшной полости мышей извлекали, центрифугировали при 1000 об./мин. в течение 10 минут, а затем дважды промывали средой RPMI 1640. Макрофаги высевали в 24-луночный планшет с плотностью, составлявшей 0,5 × 106 клеток/лунка, и обрабатывали тестируемым веществом на основе молочнокислых бактерий и индуктором воспаления LPS (липополисахаридом) в течение 2 часов или 24 часов, а затем собирали супернатант и клетки. Собранные клетки гомогенизировали в буфере (Gibco). Используя собранный супернатант, уровни экспрессии цитокинов, таких как TNF-α и IL-1β, измеряли с помощью набора ELISA. В дополнение к этому, используя собранные клетки, уровни экспрессии p65 (NF-каппа B), p-p65 (фосфор-NF-каппа B) и β-актина измеряли с помощью способа иммуноблоттинга. В частности, отбирали 50 мкг супернатанта и подвергали электрофорезу на 10% (вес/об.) полиакриламидном геле SDS в течение 1 часа и 30 минут. Подвергнутый электрофорезу образец переносили на нитроцеллюлозную мембрану в условиях 100 В и 400 мА в течение 1 часа и 10 минут. Нитроцеллюлозную мембрану с перенесенным образцом блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 30 минут, а затем три раза промывали PBS-Tween в течение 5 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением 1:100 первичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение ночи. Затем мембрану промывали три раза в течение 10 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением вторичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) 1:1000 в течение 1 часа и 20 минут. Затем мембрану промывали три раза в течение 15 минут каждый раз, и ее проявляли с помощью флуоресценции и визуализировали.
На ФИГ. 5 представлен график, демонстрирующий эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении воспалительной реакции макрофагов, индуцированной LPS (липополисахаридом). Как показано на ФИГ. 5, Bifidobacterium longum CH57 эффективно подавлял воспалительную реакцию, индуцированную LPS (липополисахаридом).
(3) Выделение Т-клеток из селезенки и измерение дифференциации в клетки Th17 или клетки Treg
У мышей C56BL/6J отделяли селезенку, соответствующим образом измельчали и суспендировали в 10% FCS-содержащей среде RPMI 1640, и из нее выделяли CD4 Т-клетки с использованием набора для выделения CD4 T-клеток (MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Выделенные CD4 Т-клетки высевали в 12-луночный планшет с плотностью, составлявшей 5 × 105/лунка, и к ним добавляли антитело к CD3 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) и антитело к CD28 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) или антитело к CD3 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия), антитело к CD28 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия), рекомбинантный IL-6 (20 нг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) и рекомбинантный трансформирующий фактор роста бета (1 нг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Во время культивирования клеток к ним добавляли 1 x 103 или 1 × 105 КОЕ молочнокислых бактерий, и клетки культивировали в течение 4 суток. Затем клетки культуры окрашивали антителом к FoxP3 или антителом к IL-17A, и распределение клеток Th17 и Treg анализировали с использованием системы FACS (сортировка клеток с активированной флуоресценцией) (система C6 Flow Cytometer®, Сан-Хосе, Калифорния, США).
На ФИГ. 6 показаны результаты анализа эффекта Lactobacillus brevis CH23 в отношении дифференциации Т-клеток (выделенных из селезенки) в клетки Th17 или клетки Treg с помощью системы сортировки клеток с активированной флуоресценцией. Как показано на ФИГ. 6, Lactobacillus brevis CH23 подавлял дифференциацию Т-клеток в клетки Th17 (клетки Т-хелперы 17) и стимулировал дифференциацию Т-клеток в клетки Treg. Эти результаты свидетельствуют о том, что Lactobacillus brevis CH23 способен эффективно уменьшать тяжесть воспалительных заболеваний, таких как колит и артрит.
(4) Измерение эффекта молочнокислых бактерий в отношении экспрессии белка ZO-1 клеток CaCO
2
Клетки СаСО2, полученные из Корейского банка клеточных линий, культивировали в среде RPMI 1640 в течение 48 часов, а затем культивированные клетки CaCO2 распределяли в 12-луночный планшет с плотностью, составлявшей 2 × 106 клеток/лунка. Затем каждую лунку обрабатывали 1 мкг LPS (липополисахарида) отдельно или комбинацией 1 мкг LPS (липополисахарида) и 1 × 103 КОЕ или 1 × 105 КОЕ молочнокислых бактерий, а затем инкубировали в течение 24 часов. Затем культивируемые клетки собирали из каждой лунки, и уровень экспрессии белка плотного контакта ZO-1 измеряли с помощью способа иммуноблоттинга.
На ФИГ. 7 показаны результаты анализа эффекта Lactobacillus brevis CH23, Bifidobacterium longum CH57 или их смеси в отношении экспрессии белка ZO-1 клеток СаСО2. На ФИГ. 7 «CH23» означает Lactobacillus brevis CH23; «CH57» означает Bifidobacterium longum CH57; «mix» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 в одинаковых количествах. Как показано на ФИГ. 7, обработка с помощью Lactobacillus brevis CH23 и Bifidobacterium longum CH57 увеличивала экспрессию белка плотного контакта ZO-1, а обработка смесью Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus johnsonii CH32 синергетически увеличивала экспрессию белка плотного контакта ZO-1. В случае если экспрессия белка плотного контакта увеличивается, in vivo проникновение токсичных веществ может быть заблокировано, за счет чего предотвращается прогрессирование колита, артрита и повреждения печени.
6.
In vivo
оценка противовоспалительного эффекта и эффекта, уменьшающего тяжесть колита, молочнокислых бактерий
(1) Тестируемые животные
Мышей C57BL/6 (24-27 г) возрастом 5 недель приобретали у OrientBio и размещали в контролируемых условиях окружающей среды (влажность: 50±10%, температура: 25±2°C, цикл 12 ч. свет/12 ч. темнота), а затем использовали в эксперименте. В качестве корма использовали стандартный экспериментальный корм (Samyang, Корея), и при этом животные имели доступ к питьевой воде ad libitum. Во всех экспериментах одна группа состояла из 6 животных.
(2) Индуцирование колита с помощью TNBS и введение образца
Одну группу тестируемых животных использовали в качестве нормальной группы, а тестируемых животных других групп обрабатывали 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS) для индуцирования острого колита. В частности, тестируемых животных слегка анестезировали эфиром, а затем в толстую кишку через анальное отверстие вводили раствор в виде смеси 2,5 г TNBS (2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты) и 100 мл 50% этанола в количестве по 0,1 мл каждый раз с применением шприца с круглым наконечником объемом 1 мл, поднимали вертикально и выдерживали в течение 30 секунд, за счет чего вызывая воспаление. С другой стороны, нормальной группе вводили перорально 0,1 мл солевого раствора. На следующий день молочнокислые бактерии или смесь молочнокислых бактерий в качестве тестируемого образца суспендировали в солевом растворе и вводили перорально каждой мыши в количестве, составлявшем 2,0 × 109 КОЕ, один раз в сутки в течение трех суток. На следующий день, после окончания введения образца, животных умерщвляли диоксидом углерода, часть толстой кишки в пределах от слепой кишки до участка сразу перед анальным отверстием иссекали и использовали. При этом тестируемым животным нормальной группы перорально вводили только солевой раствор вместо молочнокислых бактерий. Кроме того, тестируемым животным группы отрицательного контроля, после индукции колита с помощью TNBS, перорально вводили только солевой раствор вместо молочнокислых бактерий. Кроме того, тестируемым животным группы положительного контроля перорально вводили вместо молочнокислых бактерий 50 мг/кг сульфасалазина, который представляет собой лекарственное средство для лечения колита.
(3) Макроскопический анализ толстой кишки
Определяли длину и внешний вид иссеченной толстой кишки, и внешний вид анализировали с помощью оценки в соответствии с критериями (Hollenbach et al., 2005, Criteria of Degit of Colitis), показанными в таблице 9 ниже. После полного удаления содержимого толстой кишки ткань толстой кишки промывали солевым раствором. Часть промытой ткани толстой кишки фиксировали 4% раствором формальдегида, чтобы использовать ее в качестве образца патологической ткани, а остаток хранили при замораживании при -80°С для молекулярно-биологического анализа.
Таблица 9
Макроскопическая оценка | Критерии |
0 | Не обнаружены какие-либо язва и воспаление. |
1 | Обнаружен отек без кровотечения. |
2 | Обнаружена язва с отеком. |
3 | Язва и воспаление обнаружены только в одном участке. |
4 | Язва и воспаление обнаружены в двух или более участках. |
5 | Язва имеет увеличенный размер, составлявший 2 см или больше. |
(4) Измерение активности миелопероксидазы (MPO)
Гомогенизировали 100 мг ткани толстой кишки в 200 мкл 10 мМ калий-фосфатного буфера (рН 7,0), содержащего 0,5% гексадецилтриметиламмонийбромида. Гомогенизированную ткань центрифугировали при 10000×g и 4°C в течение 10 минут, и супернатант собирали. Добавляли 50 мкл супернатанта к 0,95 мл реакционного раствора (содержащего 1,6 мМ тетраметилбензидина и 0,1 мМ H2O2), и обеспечивали реакцию при 37°С, и в различные моменты времени во время реакции измеряли оптическую плотность при 650 нм. Для расчета активности миелопероксидазы (MPO) 1 мкмоль/мл пероксида, полученного с помощью реакции, использовали в качестве 1 единицы.
(5) Измерение маркера воспаления
С помощью способа вестерн-блоттинга измеряли маркеры воспаления, такие как p-p65, p65, iNOS, COX-2 и β-актин. В частности, в соответствии с тем же способом, как и при эксперименте для измерения активности миелопероксидазы (MPO), получали супернатант. Отбирали 50 мкг супернатанта и подвергали электрофорезу на 10% (вес/об.) полиакриламидном геле SDS в течение 1 часа и 30 минут. Подвергнутый электрофорезу образец переносили на нитроцеллюлозную мембрану в условиях 100 В и 400 мА в течение 1 часа и 10 минут. Нитроцеллюлозную мембрану с перенесенным образцом блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 30 минут, а затем три раза промывали PBS-Tween в течение 5 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением 1:100 первичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение ночи. Затем мембрану промывали три раза в течение 10 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением вторичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) 1:1000 в течение 1 часа и 20 минут. Затем мембрану промывали три раза в течение 15 минут каждый раз, и ее проявляли с помощью флуоресценции и визуализировали.
Кроме того, связанные с воспалением цитокины, такие как TNF-α, IL- 1β и т. п., измеряли с использованием набора ELISA.
(6) Экспериментальные результаты
На ФИГ. 8 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; на ФИГ. 9 изображены гистологические снимки толстой кишки, которые демонстрируют эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; и на ФИГ. 10 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект Bifidobacterium longum CH57 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS. На ФИГ. 8-10 «NOR» означает нормальную группу; «TNBS» означает группу отрицательного контроля; «CH57» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum CH57; и «SS50» означает группу, которой вводили сульфасалазин. Как показано на ФИГ. 8-10, Bifidobacterium longum CH57 эффективно уменьшал тяжесть колита с учетом веса животных моделей с TNBS-индуцированным острым колитом, маркеров колита, длины толстой кишки, активности миелопероксидазы (MPO) и т. п., и продемонстрировал улучшенный эффект в отношении уменьшения тяжести колита по сравнению с сульфасалазином. В дополнение к этому Bifidobacterium longum CH57 подавлял продуцирование воспалительного цитокина и увеличивал продуцирование противовоспалительного цитокина IL-10 у животных моделей с TNBS-индуцированным острым колитом.
На ФИГ. 11 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; на ФИГ. 12 изображены гистологические снимки толстой кишки, которые демонстрируют эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; на ФИГ. 13 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток, демонстрирующие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; и на ФИГ. 14 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS. На ФИГ. 11-14 «N» означает нормальную группу; «TNBS» означает группу отрицательного контроля; «CH23» означает группу, которой вводили Lactobacillus brevis CH23; и «SS» означает группу, которой вводили сульфасалазин. Как показано на ФИГ. 11-14, Lactobacillus brevis CH23 эффективно уменьшал тяжесть колита с учетом веса животных моделей с TNBS-индуцированным острым колит, маркеров колита, длины толстой кишки, активности миелопероксидазы (MPO) и т. п., и продемонстрировал улучшенный эффект в отношении уменьшения тяжести колита по сравнению с сульфасалазином. В дополнение к этому, Lactobacillus brevis CH23 подавлял дифференциации Т-клеток в клетки Th17 и индуцировал дифференциации Т-клеток в клетки Treg у животных моделей с TNBS-индуцированным острым колитом. Кроме того, Lactobacillus brevis CH23 подавлял продуцирование воспалительного цитокина и увеличивал продуцирование противовоспалительного цитокина IL-10 у животных моделей с TNBS-индуцированным острым колитом.
На ФИГ. 15 показаны физические свойства толстой кишки или активность миелопероксидазы (MPO), показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; на ФИГ. 16 изображены гистологические снимки, демонстрирующие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS; и на ФИГ. 17 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS. На ФИГ. 15-17 «NOR» означает нормальную группу; «TNBS» означает группу отрицательного контроля; «BL» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах; и «SS50» означает группу, которой вводили сульфасалазин. Как показано на ФИГ. 15-17, смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 значительно улучшала эффекты в отношении уменьшенного веса модельных животных с TNBS-индуцированным острым колитом, увеличенных уровней маркера колита, сокращения длины толстой кишки и увеличения активности миелопероксидазы (MPO), и ее эффект в отношении уменьшения тяжести колита был значительно лучше, чем у сульфасалазина. В дополнение к этому, смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 значительно подавляла продуцирование воспалительного цитокина и резко увеличивала продуцирование противовоспалительного цитокина IL-10 у животных моделей с TNBS-индуцированным острым колитом.
7.
In vivo
оценка эффекта, снижающего ожирение, и противовоспалительного эффекта молочнокислых бактерий
(1) Экспериментальный способ
В общей сложности 24 мыши C57BL6/J приобретали у RaonBio Co., Ltd. и адаптировали к кормовому рациону (Purina) в условиях температуры 20±2°C, влажности 50±10% и цикла 12 ч. свет/12 ч. темнота в течение 1 недели. Затем тестируемых животных разделяли на три группы (LFD, HFD и HFD+BL), каждая из которых состояла из 8 животных, при этом группу LFD кормили нормальным рационом (LFD, 10% калорий, полученных из жиров, Research, Нью-Джерси, США) в течение 4 недель, а группу HFD и группу HFD+BL кормили рационом с высоким содержанием жиров (HFD, 60% калорий, полученных из жиров, Research, Нью-Джерси, США) в течение 4 недель. Затем группе LFD вводили перорально PBS, и кормили обычным рационом в течение 4 недель. Кроме того, группе HFD вводили перорально PBS, и кормили рационом с высоким содержанием жиров в течение 4 недель. В дополнение к этому группе HFD+BL вводили перорально суспензию PBS из 2 × 109 КОЕ смеси молочнокислых бактерий, пока кормили рационом с высоким содержанием жиров в течение 4 недель. Смесь молочнокислых бактерий получали смешиванием Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в одинаковых количествах.
(2) Анализ эффекта в отношении ожирения и противовоспалительного эффекта смеси молочнокислых бактерий
Эффект в отношении ожирения смеси молочнокислых бактерий анализировали с помощью изменения веса. В дополнение к этому, противовоспалительный эффект смеси молочнокислых бактерий анализировали с использованием того же способа, что и в эксперименте на животных моделях с TNBS-индуцированным острым колитом.
(3) Экспериментальные результаты
На ФИГ. 18 показаны изменения веса, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением; на ФИГ. 19 показаны физические свойства толстой кишки, активность миелопероксидазы (MPO), гистологические снимки толстой кишки и т. п., которые показывают эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением; на ФИГ. 20 показаны уровни цитокинов, связанных с воспалением, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением; и на ФИГ. 21 показаны маркеры воспалительной реакции, показывающие эффект смеси Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 в отношении животных моделей с индуцированным ожирением. Как показано на ФИГ. 18-21, смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 значительно уменьшала увеличенный вес, повышала уровни маркера колита и увеличивала активность миелопероксидазы (MPO) у животных моделей с ожирением, индуцированным рационом с высоким содержанием жиров, а также подавляла развитие колита. В дополнение к этому, смесь молочнокислых бактерий Bifidobacterium longum CH57 и Lactobacillus brevis CH23 значительно подавляла продуцирование воспалительного цитокина и увеличивала продуцирование противовоспалительного цитокина IL-10 у животных моделей с ожирением, индуцированным рационом с высоким содержанием жиров.
II. I. Второй эксперимент по скринингу молочнокислых бактерий и оценки их эффектов
1. Выделение и идентификация молочнокислых бактерий
(1) Выделение молочнокислых бактерий из кимчи
Каждый из кимчи с китайской капустой, кимчи с редиской и кимчи с зеленым луком измельчали, и измельченную жидкость суспендировали в жидкой среде MRS (бульон MRS, Difco, США). Затем супернатант собирали, переносили в агаровую среду MRS (Difco, США) и культивировали анаэробно при 37°С в течение приблизительно 48 часов, а затем штаммы Bifidobacterium longum, которые образовывали колонии, разделяли в соответствии с формой.
(2) Выделение молочнокислых бактерий из человеческих экскрементов
Человеческие экскременты суспендировали в жидкой среде GAM (бульон GAM; Nissui Pharmaceutical, Япония). Затем супернатант собирали, переносили в агаровую среду BL (Nissui Pharmaceutical, Япония) и культивировали анаэробно при 37°С в течение приблизительно 48 часов, а затем выделяли штаммы Bifidobacterium sp., которые образовывали колонии.
(3) Идентификация подвергнутых скринингу молочнокислых бактерий
Анализировали характеристики окрашивания по Грамму, физиологические характеристики и последовательности 16S rDNA штаммов, выделенных из кимчи или человеческих фекалий, с целью идентификации видов штаммов, и штаммам присваивали названия. В таблице 10 ниже приведены контрольные номера и названия штаммов молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи с китайской капустой, кимчи с редиской и кимчи с зеленым луком, а в таблице 11 ниже приведены контрольные номера и названия штаммов молочнокислых бактерий, выделенных из человеческих экскрементов.
Таблица 10
Контрольный № | Название штамма | Контрольный № | Название штамма |
1 | Lactobacillus plantarum LC1 | 26 | Lactobacillus plantarum LC26 |
2 | Lactobacillus plantarum LC2 | 27 | Lactobacillus plantarum LC27 |
3 | Lactobacillus plantarum LC3 | 28 | Lactobacillus plantarum LC28 |
4 | Lactobacillus plantarum LC4 | 29 | Lactobacillus plantarum LC29 |
5 | Lactobacillus plantarum LC5 | 30 | Lactobacillus plantarum LC30 |
6 | Lactobacillus plantarum LC6 | 31 | Lactobacillus plantarum LC31 |
7 | Lactobacillus plantarum LC7 | 32 | Lactobacillus plantarum LC32 |
8 | Lactobacillus plantarum LC8 | 33 | Lactobacillus plantarum LC33 |
9 | Lactobacillus plantarum LC9 | 34 | Lactobacillus plantarum LC34 |
10 | Lactobacillus plantarum LC10 | 35 | Lactobacillus plantarum LC35 |
11 | Lactobacillus plantarum LC11 | 36 | Lactobacillus plantarum LC36 |
12 | Lactobacillus plantarum LC12 | 37 | Lactobacillus plantarum LC37 |
13 | Lactobacillus plantarum LC13 | 38 | Lactobacillus plantarum LC38 |
14 | Lactobacillus plantarum LC14 | 39 | Lactobacillus plantarum LC39 |
15 | Lactobacillus plantarum LC15 | 40 | Lactobacillus plantarum LC40 |
16 | Lactobacillus plantarum LC16 | 41 | Lactobacillus plantarum LC41 |
17 | Lactobacillus plantarum LC17 | 42 | Lactobacillus plantarum LC42 |
18 | Lactobacillus plantarum LC18 | 43 | Lactobacillus plantarum LC43 |
19 | Lactobacillus plantarum LC19 | 44 | Lactobacillus plantarum LC44 |
20 | Lactobacillus plantarum LC20 | 45 | Lactobacillus plantarum LC45 |
21 | Lactobacillus plantarum LC21 | 46 | Lactobacillus plantarum LC46 |
22 | Lactobacillus plantarum LC22 | 47 | Lactobacillus plantarum LC47 |
23 | Lactobacillus plantarum LC23 | 48 | Lactobacillus plantarum LC48 |
24 | Lactobacillus plantarum LC24 | 49 | Lactobacillus plantarum LC49 |
25 | Lactobacillus plantarum LC25 | 50 | Lactobacillus plantarum LC50 |
Таблица 11
Контрольный № | Название штамма | Контрольный № | Название штамма |
51 | Bifidobacterium longum LC51 | 76 | Bifidobacterium longum LC76 |
52 | Bifidobacterium longum LC52 | 77 | Bifidobacterium longum LC77 |
53 | Bifidobacterium longum LC53 | 78 | Bifidobacterium longum LC78 |
54 | Bifidobacterium longum LC54 | 79 | Bifidobacterium longum LC79 |
55 | Bifidobacterium longum LC55 | 80 | Bifidobacterium longum LC80 |
56 | Bifidobacterium longum LC56 | 81 | Bifidobacterium longum LC81 |
57 | Bifidobacterium longum LC57 | 82 | Bifidobacterium longum LC82 |
58 | Bifidobacterium longum LC58 | 83 | Bifidobacterium longum LC83 |
59 | Bifidobacterium longum LC59 | 84 | Bifidobacterium longum LC84 |
60 | Bifidobacterium longum LC60 | 85 | Bifidobacterium longum LC85 |
61 | Bifidobacterium longum LC61 | 86 | Bifidobacterium longum LC86 |
62 | Bifidobacterium longum LC62 | 87 | Bifidobacterium longum LC87 |
63 | Bifidobacterium longum LC63 | 88 | Bifidobacterium longum LC88 |
64 | Bifidobacterium longum LC64 | 89 | Bifidobacterium longum LC89 |
65 | Bifidobacterium longum LC65 | 90 | Bifidobacterium longum LC90 |
66 | Bifidobacterium longum LC66 | 91 | Bifidobacterium longum LC91 |
67 | Bifidobacterium longum LC67 | 92 | Bifidobacterium longum LC92 |
68 | Bifidobacterium longum LC68 | 93 | Bifidobacterium longum LC93 |
69 | Bifidobacterium longum LC69 | 94 | Bifidobacterium longum LC94 |
70 | Bifidobacterium longum LC70 | 95 | Bifidobacterium longum LC95 |
71 | Bifidobacterium longum LC71 | 96 | Bifidobacterium longum LC96 |
72 | Bifidobacterium longum LC72 | 97 | Bifidobacterium longum LC97 |
73 | Bifidobacterium longum LC73 | 98 | Bifidobacterium longum LC98 |
74 | Bifidobacterium longum LC74 | 99 | Bifidobacterium longum LC99 |
75 | Bifidobacterium longum LC75 | 100 | Bifidobacterium longum LC100 |
Было показано, что Lactobacillus plantarum LC5, представленная в таблице 10 выше, представляла собой грамположительную анаэробную бациллу, и ее 16S rDNA имела нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 4. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Lactobacillus plantarum LC5 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Lactobacillus plantarum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, как и у Lactobacillus plantarum LC5, обнаружен не был, и Lactobacillus plantarum LC5 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Lactobacillus plantarum KF9. Кроме того, было показано, что Lactobacillus plantarum LC27, представленная в таблице 10 выше, представляла собой грамположительную анаэробную бациллу, и ее 16S rDNA имела нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 5. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Lactobacillus plantarum LC27 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Lactobacillus plantarum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, как и у Lactobacillus plantarum LC27, обнаружен не был, и Lactobacillus plantarum LC27 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Lactobacillus plantarum JL18. В дополнение к этому было показано, что Lactobacillus plantarum LC28, представленная в таблице 10 выше, представляла собой грамположительную анаэробную бациллу, и ее 16S rDNA имела нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 6. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Lactobacillus plantarum LC28 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Lactobacillus plantarum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, как и у Lactobacillus plantarum LC28, обнаружен не был, и Lactobacillus plantarum LC28 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Lactobacillus plantarum USIM01.
Было показано, что Bifidobacterium longum LC67, представленная в таблице 11 выше, представляла собой грамположительную анаэробную бациллу, и ее 16S rDNA имела нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 7. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Bifidobacterium longum LC67 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Bifidobacterium longum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, как и у Bifidobacterium longum LC67, обнаружен не был, и Bifidobacterium longum LC67 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Bifidobacterium longum CBT-6. Кроме того, было показано, что Bifidobacterium longum LC68, представленная в таблице 11 выше, представляла собой грамположительную анаэробную бациллу, и ее 16S rDNA имела нуклеотидную последовательность под SEQ ID NO: 8. Нуклеотидную последовательность 16S rDNA Bifidobacterium longum LC68 идентифицировали с помощью BLAST в Gene Bank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), и в результате штамм Bifidobacterium longum, имеющий такую же нуклеотидную последовательность 16S rDNA, как и у Bifidobacterium longum LC68, обнаружен не был, и Bifidobacterium longum LC68 продемонстрировал 99% гомологию с последовательностью 16S rDNA штамма Bifidobacterium longum IMAUFB067.
В дополнение к этому, среди физиологических характеристик Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68 анализировали коэффициент использования источника углерода с использованием ферментации сахара с помощью набора API (модель API 50 CHL, производства BioMerieux, США). В таблице 12 ниже приведены результаты анализа коэффициента использования источника углерода Lactobacillus plantarum Lactobacillus plantarum LC5 и Lactobacillus plantarum LC27, а в таблице 13 приведены результаты анализа коэффициента использования источника углерода Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68. В таблицах 12 и 13 ниже «+» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода являлся положительным; «-» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода являлся отрицательным; и «±» означает случай, когда коэффициент использования источника углерода допускал двоякое толкование. Как приведено в таблицах 12 и 13 ниже, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27, Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68 продемонстрировали, что коэффициент использования источника углерода отличался от коэффициента использования известных штаммов того же вида по отношению к некоторым источникам углерода.
Таблица 12
Источник углерода | Название штамма | Источник углерода | Название штамма | ||
L. plantarum LC5 | L. plantarum LC27 | L. plantarum LC5 | L. plantarum LC27 | ||
Глицерин | - | - | Салицин | + | + |
Эритрит | - | - | Целлобиоза | + | + |
D-Арабиноза | - | - | Мальтоза | + | + |
L-Арабиноза | - | + | Лактоза | - | + |
D-Рибоза | + | + | Мелибиоза | + | + |
D-Ксилоза | - | - | Сахароза | + | + |
L-Ксилоза | - | - | Трегалоза | + | + |
D-Адонит | - | - | Инулин | - | - |
Метил-β-D-ксилопиранозид | - | - | Мелецитоза | + | + |
D-Галактоза | + | ± | Рафиноза | ± | - |
D-Глюкоза | + | + | Крахмал | - | - |
D-Фруктоза | + | + | Гликоген | - | - |
D-Манноза | + | + | Ксилит | - | - |
L-Сорбоза | - | - | Гентиобиоза | + | + |
L-Рамноза | - | ± | D-Тураноза | - | + |
Дульцит | - | - | D-Ликсоза | - | - |
Инозит | - | - | D-Тагатоза | - | - |
Маннит | + | + | D-Фукоза | - | - |
Сорбит | + | + | L-Фукоза | - | - |
α-Метил-D-маннозид | - | ± | D-Арабит | - | - |
α-Метил-D-глюкозид | - | - | L-Арабит | - | - |
N-Ацетилглюкозамин | + | + | Гюконат | - | - |
Амигдалин | + | + | 2-Кетоглюконат | - | - |
Арбутин | + | + | 5-Кетоглюконат | - | - |
Эскулин | + | + |
Таблица 13
Источник углерода | Название штамма | Источник углерода | Название штамма | ||
B. longum LC67 | B. longum LC68 | B. longum LC67 | B. longum LC68 | ||
Глицерин | - | - | Салицин | - | - |
Эритрит | - | - | Целлобиоза | - | - |
D-Арабиноза | - | - | Мальтоза | + | + |
L-Арабиноза | + | + | Лактоза | + | + |
D-Рибоза | - | - | Мелибиоза | + | + |
D-Ксилоза | + | ± | Сахароза | + | ± |
L-Ксилоза | - | - | Трегалоза | - | ± |
D-Адонит | - | - | Инулин | - | - |
Метил-β-D-ксилопиранозид | - | - | Мелецитоза | - | + |
D-Галактоза | ± | + | Рафиноза | + | + |
D-Глюкоза | + | + | Крахмал | - | - |
D-Фруктоза | + | + | Гликоген | - | - |
D-Манноза | - | - | Ксилит | - | - |
L-Сорбоза | - | - | Гентиобиоза | + | ± |
L-Рамноза | - | - | D-Тураноза | ± | ± |
Дульцит | - | - | D-Ликсоза | - | - |
Инозит | - | - | D-Тагатоза | - | - |
Маннит | ± | + | D-Фукоза | - | - |
Сорбит | ± | + | L-Фукоза | - | - |
α-Метил-D-маннозид | - | - | D-Арабит | - | - |
α-Метил-D-глюкозид | ± | ± | L-Арабит | - | - |
N-Ацетилглюкозамин | - | - | Гюконат | - | - |
Амигдалин | - | ± | 2-Кетоглюконат | - | - |
Арбутин | - | - | 5-Кетоглюконат | - | - |
Эскулин | + | + |
(4) Информация о депонировании молочнокислых бактерий
Авторы настоящего изобретения депонировали Lactobacillus plantarum LC5 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 11 января 2016 г. под номером доступа KCCM 11800P. Кроме того, авторы настоящего изобретения депонировали Lactobacillus plantarum LC27 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 11 января 2016 г. под номером доступа KCCM 11801P. Кроме того, авторы настоящего изобретения депонировали Bifidobacterium longum LC67 в Корейском центре культур микроорганизмов (адрес Yurim Building, 45, Hongjenae 2ga-gil, Seodaemun-gu, Сеул, Корея), Международном органе по депонированию, 11 января 2016 г. под номером доступа KCCM 11802P.
2. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или кишечной проницаемости
Чтобы оценить эффект молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи или человеческих экскрементов, в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или кишечной проницаемости, у молочнокислых бактерий измеряли антиоксидантную активность, активность, подавляющую продуцирование липополисахаридов (LPS), активность, подавляющую β-глюкуронидазу (вредный кишечный фермент), и активность, индуцирующую экспрессию белка плотного контакта.
(1) Экспериментальные способы
* Антиоксидантная активность
Для получения раствора DPPH растворяли в этаноле DPPH (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил) до концентрации 0,2 мМ. Суспензию молочнокислых бактерий (1 × 108 КОЕ/мл) или раствор витамина С (1 г/мл) добавляли к 0,1 мл раствора DPPH и культивировали при 37°С в течение 20 минут. Культуру центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 5 минут, и супернатант собирали. Затем измеряли поглощение супернатанта при 517 нм, и рассчитывали антиоксидантную активность молочнокислых бактерий.
* Активность, подавляющая продуцирование липополисахаридов (LPS)
В 0,9 мл стерильного физиологического солевого раствора суспендировали 0,1 г свежих экскрементов человека и разбавляли в 100 раз общей анаэробной средой для получения фекальной суспензии. К 9,8 мл стерильной анаэробной среды (Nissui Pharmaceuticals, Япония) добавляли 0,1 мл фекальной суспензии и 0,1 мл молочнокислых бактерий (1 × 104 или 1 × 105 КОЕ) и культивировали анаэробно в течение 24 часов. Затем культуру обрабатывали ультразвуком в течение приблизительно 1 часа для разрушения наружной клеточной мембраны бактерий, и центрифугировали при 5000×g, и собирали супернатант. Затем с помощью набора LAL для анализа (Limulus Amoebocyte Lysate) (производства Cape Cod Inc., США) измеряли содержание LPS (липополисахарида) (который является типичным эндотоксином) в супернатанте. В дополнение к этому, чтобы оценить активность подавления пролиферации E. coli молочнокислых бактерий, культуру, полученную в том же эксперименте, как описано выше, разбавляли в 1000 раз и в 100000 раз и культивировали в среде DHL, а затем подсчитывали количество клеток E.coli.
*Активность, подавляющая β-глюкуронидазу
В реактор помещали 0,1 мл 0,1 мМ раствора п-нитрофенил-β-D-глюкуронида, 0,2 мл 50 мМ фосфатно-солевого буферного раствора, и 0,1 мл суспензии молочнокислых бактерий (полученной суспендированием культуры молочнокислых бактерий в 5 мл физиологического солевого раствора), и подвергали ферментативной реакции β-глюкуронидазы, и для прекращения реакции добавляли 0,5 мл 0,1 мМ раствора NaOH. Затем реакционный раствор центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 5 минут, и супернатант собирали. Затем измеряли поглощение супернатанта при 405 нм.
* Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта
Клетки СаСО2, полученные из Корейского банка клеточных линий, культивировали в среде RPMI 1640 в течение 48 часов, а затем культивированные клетки CaCO2 распределяли в каждую лунку 12-луночного планшета с плотностью, составлявшей 2 × 106 клеток/лунка. Затем каждую лунку обрабатывали 1 мкг LPS (липополисахарида) или комбинацией 1 мкг LPS (липополисахарида) и 1 × 103 КОЕ молочнокислых бактерий и инкубировали в течение 24 часов. Затем культивируемые клетки собирали из каждой лунки, и уровень экспрессии белка плотного контакта ZO-1 в клетках измеряли с помощью способа иммуноблоттинга.
(2) Экспериментальные результаты
Измеряли антиоксидантную активность, активность, подавляющую продуцирование липополисахаридов (LPS), активность, подавляющую β-глюкуронидазу, и активность, индуцирующую экспрессию белка плотного контакта у молочнокислых бактерий, выделенных из кимчи или человеческих экскрементов, и результаты измерения показаны в таблицах 14-16 ниже. Как представлено в таблицах 14-16 ниже, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC15, Lactobacillus plantarum LC17, Lactobacillus plantarum LC25, Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC55, Bifidobacterium longum LC65, Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68 характеризовались превосходной антиоксидантной активностью, сильно подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS) и β-глюкуронидазы, и сильно индуцирующей экспрессию белка плотного контакта. В частности, Bifidobacterium longum LC67 продемонстрировали самую лучшую активность, индуцирующую экспрессию белка плотного контакта. Эти молочнокислые бактерии характеризуются превосходным антиоксидантным эффектом, характеризуются превосходным эффектом подавления ферментативной активности вредных бактерий кишечной флоры, связанных с воспалением и канцерогенезом, подавляют продуцирование эндотоксина LPS (липополисахарида), продуцируемого вредными бактериями кишечной флоры, и индуцируют экспрессию белка плотного контакта. Таким образом, эти молочнокислые бактерии способны облегчить синдром кишечной проницаемости.
Таблица 14
Контрольный № | Название штамма | Антиоксидантная активность | Активность, подавляющая бета-глюкуронидазу | Активность, подавляющая продуцирование LPS | Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта |
1 | Lactobacillus plantarum LC1 | ++ | + | + | - |
2 | Lactobacillus plantarum LC2 | ++ | ++ | + | - |
3 | Lactobacillus plantarum LC3 | +++ | ++ | + | - |
4 | Lactobacillus plantarum LC4 | +++ | ++ | + | + |
5 | Lactobacillus plantarum LC5 | +++ | +++ | ++ | ++ |
6 | Lactobacillus plantarum LC6 | ++ | +++ | + | - |
7 | Lactobacillus plantarum LC7 | +++ | ++ | + | - |
8 | Lactobacillus plantarum LC8 | ++ | +++ | + | - |
9 | Lactobacillus plantarum LC9 | ++ | ++ | + | + |
10 | Lactobacillus plantarum LC10 | ++ | +++ | + | + |
11 | Lactobacillus plantarum LC11 | ++ | ++ | + | - |
12 | Lactobacillus plantarum LC12 | ++ | +++ | + | + |
13 | Lactobacillus plantarum LC13 | ++ | ++ | + | + |
14 | Lactobacillus plantarum LC14 | ++ | ++ | + | - |
15 | Lactobacillus plantarum LC15 | +++ | +++ | ++ | ++ |
16 | Lactobacillus plantarum LC16 | + | +++ | + | - |
17 | Lactobacillus plantarum LC17 | +++ | +++ | ++ | ++ |
18 | Lactobacillus plantarum LC18 | ++ | ++ | + | + |
19 | Lactobacillus plantarum LC19 | ++ | +++ | + | + |
20 | Lactobacillus plantarum LC20 | ++ | ++ | + | - |
21 | Lactobacillus plantarum LC21 | ++ | ++ | + | - |
22 | Lactobacillus plantarum LC22 | ++ | +++ | - | - |
23 | Lactobacillus plantarum LC23 | +++ | ++ | - | - |
24 | Lactobacillus plantarum LC24 | +++ | + | - | - |
25 | Lactobacillus plantarum LC25 | +++ | +++ | ++ | ++ |
26 | Lactobacillus plantarum LC26 | ++ | + | + | + |
27 | Lactobacillus plantarum LC27 | +++ | +++ | ++ | ++ |
28 | Lactobacillus plantarum LC28 | +++ | +++ | ++ | ++ |
29 | Lactobacillus plantarum LC29 | ++ | + | - | - |
30 | Lactobacillus plantarum LC30 | ++ | + | + | - |
31 | Lactobacillus plantarum LC31 | +++ | ++ | + | - |
32 | Lactobacillus plantarum LC32 | +++ | ++ | + | - |
33 | Lactobacillus plantarum LC33 | +++ | ++ | + | - |
34 | Lactobacillus plantarum LC34 | ++ | ++ | + | + |
35 | Lactobacillus plantarum LC35 | ++ | ++ | + | + |
Таблица 15
Контрольный № | Название штамма | Антиоксидантная активность | Активность, подавляющая бета-глюкуронидазу | Активность, подавляющая продуцирование LPS | Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта |
36 | Lactobacillus plantarum LC36 | ++ | ++ | ++ | - |
37 | Lactobacillus plantarum LC37 | +++ | ++ | + | + |
38 | Lactobacillus plantarum LC38 | ++ | ++ | + | - |
39 | Lactobacillus plantarum LC39 | ++ | + | + | - |
40 | Lactobacillus plantarum LC40 | +++ | + | - | - |
41 | Lactobacillus plantarum LC41 | ++ | ++ | - | + |
42 | Lactobacillus plantarum LC42 | +++ | + | - | + |
43 | Lactobacillus plantarum LC43 | ++ | + | - | + |
44 | Lactobacillus plantarum LC44 | ++ | + | - | + |
45 | Lactobacillus plantarum LC45 | ++ | ++ | - | + |
46 | Lactobacillus plantarum LC46 | ++ | + | - | + |
47 | Lactobacillus plantarum LC47 | +++ | + | - | + |
48 | Lactobacillus plantarum LC48 | ++ | ++ | - | + |
49 | Lactobacillus plantarum LC49 | ++ | +++ | + | + |
50 | Lactobacillus plantarum LC50 | +++ | ++ | + | - |
51 | Bifidobacterium longum LC51 | ++ | ++ | + | - |
52 | Bifidobacterium longum LC52 | +++ | +++ | + | - |
53 | Bifidobacterium longum LC53 | ++ | +++ | - | + |
54 | Bifidobacterium longum LC54 | +++ | ++ | + | + |
55 | Bifidobacterium longum LC55 | +++ | +++ | ++ | ++ |
56 | Bifidobacterium longum LC56 | +++ | ++ | + | + |
57 | Bifidobacterium longum LC57 | ++ | + | - | + |
58 | Bifidobacterium longum LC58 | +++ | + | - | + |
59 | Bifidobacterium longum LC59 | ++ | + | - | - |
60 | Bifidobacterium longum LC60 | +++ | + | - | - |
61 | Bifidobacterium longum LC61 | ++ | + | + | - |
62 | Bifidobacterium longum LC62 | +++ | + | + | - |
63 | Bifidobacterium longum LC63 | ++ | ++ | ++ | - |
64 | Bifidobacterium longum LC64 | +++ | + | - | - |
65 | Bifidobacterium longum LC65 | +++ | +++ | ++ | ++ |
66 | Bifidobacterium longum LC66 | ++ | + | + | + |
67 | Bifidobacterium longum LC67 | +++ | +++ | ++ | +++ |
68 | Bifidobacterium longum LC68 | +++ | +++ | ++ | ++ |
69 | Bifidobacterium longum LC69 | +++ | + | - | - |
70 | Bifidobacterium longum LC70 | ++ | + | - | + |
Таблица 16
Контрольный № | Название штамма | Антиоксидантная активность | Активность, подавляющая бета-глюкуронидазу | Активность, подавляющая продуцирование LPS | Активность, индуцирующая экспрессию белка плотного контакта |
71 | Bifidobacterium longum LC71 | ++ | + | - | + |
72 | Bifidobacterium longum LC72 | +++ | ++ | - | + |
73 | Bifidobacterium longum LC73 | ++ | ++ | + | - |
74 | Bifidobacterium longum LC74 | ++ | +++ | + | - |
75 | Bifidobacterium longum LC75 | +++ | + | - | + |
76 | Bifidobacterium longum LC76 | ++ | + | - | + |
77 | Bifidobacterium longum LC77 | ++ | ++ | + | + |
78 | Bifidobacterium longum LC78 | ++ | + | + | + |
79 | Bifidobacterium longum LC79 | +++ | + | + | + |
80 | Bifidobacterium longum LC80 | ++ | + | + | + |
81 | Bifidobacterium longum LC81 | ++ | + | + | + |
82 | Bifidobacterium longum LC82 | ++ | ++ | - | + |
83 | Bifidobacterium longum LC83 | +++ | + | - | + |
84 | Bifidobacterium longum LC84 | ++ | ++ | - | - |
85 | Bifidobacterium longum LC85 | +++ | ++ | - | + |
86 | Bifidobacterium longum LC86 | ++ | + | + | - |
87 | Bifidobacterium longum LC87 | ++ | ++ | + | - |
88 | Bifidobacterium longum LC88 | ++ | +++ | + | + |
89 | Bifidobacterium longum LC89 | ++ | ++ | + | + |
90 | Bifidobacterium longum LC90 | ++ | ++ | + | + |
91 | Bifidobacterium longum LC91 | +++ | +++ | + | + |
92 | Bifidobacterium longum LC92 | +++ | ++ | + | + |
93 | Bifidobacterium longum LC93 | ++ | ++ | + | + |
94 | Bifidobacterium longum LC94 | ++ | ++ | - | + |
95 | Bifidobacterium longum LC95 | ++ | +++ | - | - |
96 | Bifidobacterium longum LC96 | ++ | + | - | - |
97 | Bifidobacterium longum LC97 | ++ | + | - | - |
98 | Bifidobacterium longum LC98 | ++ | ++ | - | - |
99 | Bifidobacterium longum LC99 | ++ | ++ | - | - |
100 | Bifidobacterium longum LC100 | ++ | ++ | - | + |
* Конечная концентрация молочнокислых бактерий при измерении антиоксидантной активности: 1 × 104 КОЕ/мл; концентрация молочнокислых бактерий, добавленных для измерения активности, подавляющей бета-глюкуронидазу, и активности, подавляющей продуцирование липополисахаридов (LPS): 1 × 104 КОЕ/мл; концентрация молочнокислых бактерий при измерении активности, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта: 1 × 104 КОЕ/мл.
* Критерии для измерения различных активностей молочнокислых бактерий: очень сильно (+++; >90%); сильно (++; >60-90%); слабо (+; >20-60%); не менее или менее 20% (-; <20%).
3. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения печени
Исходя из оценки эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести повреждения кишечника или синдрома кишечной проницаемости, были выбраны следующие десять штаммов: Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC15, Lactobacillus plantarum LC17, Lactobacillus plantarum LC25 Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC55, Bifidobacterium longum LC65, Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68. Эффект каждого из этих выбранных штаммов молочнокислых бактерий или смеси этих штаммов в отношении уменьшения тяжести повреждения печени оценивали с использованием животных моделей с повреждением печени, индуцированным трет-бутилпероксидом.
1) Экспериментальный способ
Мышей (C57BL/6, самцы) разделяли на несколько групп, каждая из которых состояла из 6 животных. Трет-бутилпероксид вводили внутрибрюшинно тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы, в дозе, составлявшей 2,5 ммоль/кг, для индуцирования повреждения печени. Через 2 часа после введения трет-бутилпероксида вводили перорально 2 × 109 КОЕ молочнокислых бактерий тестируемым животным из групп, отличных от нормальной группы и группы отрицательного контроля, один раз в сутки в течение 3 суток. В дополнение к этому, вместо молочнокислых бактерий тестируемым животным группы положительного контроля перорально вводили силимарин в дозе, составлявшей 100 мг/кг, один раз в сутки в течение 3 суток. Через 6 часов после последнего введения лекарственного средства отбирали кровь из сердца. Отобранный образец крови оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 60 минут и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут для отделения сыворотки. Уровни GPT (глутаминпируваттрансаминазы) и GOT (глутаматоксалацетаттрансаминазы) в отделенной сыворотке измеряли с использованием набора для анализа крови (набор для измерения ALT & AST, Asan Pharm. Co., Корея). В дополнение к этому, 1 г ткани печени иссекали из каждого испытуемого животного, добавляли к солевому раствору и гомогенизировали с использованием гомогенизатора, и супернатант анализировали с помощью набора ELISA для измерения уровня TNF-α.
(2) Экспериментальные результаты
В таблице 17 ниже представлены изменения значений GOT, GPT и TNF-α, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с повреждением печени, индуцированным трет-бутилпероксидом. Как представлено в таблице 17 ниже, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC67 и Bifidobacterium longum LC68 продемонстрировали превосходные эффекты в отношении уменьшения тяжести повреждения печени по сравнению с силимарином, и смеси этих молочнокислых бактерий продемонстрировали лучшие эффекты в отношении уменьшения тяжести повреждения печени.
Таблица 17
Тестируемые группы | GOT (МЕ/л) | GPT (МЕ/л) | TNF-α (пг/г) |
Нормальная группа | 42,4 | 6,2 | 140,4 |
Группа отрицательного контроля | 103,1 | 28,0 | 298,0 |
Группа, которой вводили LC5 | 36,9 | 5,4 | 115,7 |
Группа, которой вводили LC15 | 60,3 | 6,2 | 154,3 |
Группа, которой вводили LC17 | 65,8 | 6,8 | 136,7 |
Группа, которой вводили LC25 | 64,6 | 11,3 | 132,4 |
Группа, которой вводили LC27 | 35,3 | 3,3 | 157,1 |
Группа, которой вводили LC28 | 42,0 | 1,0 | 185,7 |
Группа, которой вводили LC55 | 55,6 | 17,6 | 251,4 |
Группа, которой вводили LC65 | 61,4 | 17,3 | 127,6 |
Группа, которой вводили LC67 | 50,8 | 3,8 | 150,5 |
Группа, которой вводили LC68 | 40,8 | 5,7 | 82,4 |
Группа, которой вводили LC5+LC67 | 32,7 | 3,1 | 115,9 |
Группа, которой вводили LC5+LC68 | 36,8 | 5,6 | 105,4 |
Группа, которой вводили LC27+LC67 | 30,5 | 2,3 | 121,2 |
Группа, которой вводили LC27+LC68 | 35,4 | 3,2 | 112,8 |
Группа, которой вводили LC28+LC67 | 32,5 | 2,8 | 128,2 |
Группа, которой вводили силимарин | 52,9 | 5,9 | 93,8 |
В таблице 17 выше «LC5» означает Lactobacillus plantarum LC5; «LC15» означает Lactobacillus plantarum LC15; «LC17» означает Lactobacillus plantarum LC17; «LC25» означает Lactobacillus plantarum LC25; «LC27» означает Lactobacillus plantarum LC27; «LC28» означает Lactobacillus plantarum LC28; «LC55» означает Bifidobacterium longum LC55; «LC65» означает Bifidobacterium longum LC65; «LC67» означает Bifidobacterium longum LC67; «LC68» означает Bifidobacterium longum LC68; «LC5+LC67» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC5 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах; «LC5+LC68» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC5 и Bifidobacterium longum LC68 в одинаковых количествах; «LC27+LC67» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах; «LC27+LC68» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC68 в одинаковых количествах; и «LC28+LC67» означает смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC28 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах. В следующих таблицах, представляющих экспериментальные результаты, одни и те же символы используются для одиночных молочнокислых бактерий или смесей молочнокислых бактерий.
4. Оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести аллергии
(1) Измерение подавления дегрануляции с помощью молочнокислых бактерий
Клеточную линию RBL-2H3 (клеточная линия тучных клеток крысы, Корейский банк клеточных линий, № по кат. 22256) культивировали с DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла, Sigma, 22256), содержащей 10% FBS (фетальная бычья сыворотка) и L-глютамин в увлажненном 5% CO2-инкубаторе при 37°С. Клетки, содержащиеся в культуральной среде, флотировали с использованием раствора трипсина-EDTA, и всплывающие клетки выделяли, собирали и использовали в эксперименте. Собранные клетки RBL-2H3 распределяли в 24-луночный планшет с плотностью 5 × 105 клеток/лунка и сенсибилизировали с помощью инкубирования с 0,5 мкг/мл моноклонального IgE мыши в течение 12 часов. Сенсибилизированные клетки промывали 0,5 мл сираганового буфера (119 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 0,4 мМ MgCl2, 25 мМ PIPES, 40 мМ NaOH, pH 7,2), а затем инкубировали с 0,16 мл сираганового буфера (дополненного 5,6 мМ глюкозы, 1 мМ CaCl2, 0,1% BSA) при 37°С в течение 10 минут. Затем к клеточной культуре в качестве тестируемого лекарственного средства добавляли молочнокислые бактерии до концентрации, составлявшей 1 × 104 КОЕ/мл, или к клеточной культуре в качестве контрольного лекарственного средства добавляли 0,04 мл DSCG (динатрия кромогликат), и через 20 минут клетки активировали с помощью 0,02 мл антигена (1 мкг/мл DNP-BSA) при 37°С в течение 10 минут. Затем клеточную культуру центрифугировали при 2000 об./мин. в течение 10 минут, и супернатант собирали. Переносили в 96-луночный планшет 0,025 мл собранного супернатанта и затем 0,025 мл 1 мМ п-NAG (раствор п-нитрофенил-N-ацетил-β-D-глюкозамида в 0,1 М цитратном буфере, рН 4,5), а затем обеспечивали реакцию смеси при 37°С в течение 60 минут. Затем реакцию останавливали с помощью добавления 0,2 мл 0,1 М Na2CO3/NaHCO3, и показатель поглощения при 405 нм измеряли с помощью анализатора ELISA.
(2) Экспериментальные результаты
В таблице 18 ниже представлены результаты измерения подавления (%) дегрануляции молочнокислыми бактериями. Как представлено в таблице 18, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC67, Bifidobacterium longum LC68 и их смеси эффективно подавляют дегрануляцию базофилов. Таким образом, эти молочнокислые бактерии или их смеси могут очень эффективно уменьшать тяжесть аллергической атопии, астмы, фарингита, хронического дерматита или т. п.
Таблица 18
Лекарственное средство | Подавление дегрануляции (%) |
Отсутствует | 0 |
LC5 | 65 |
LC15 | 45 |
LC17 | 43 |
LC25 | 48 |
LC27 | 52 |
LC28 | 54 |
LC55 | 38 |
LC65 | 42 |
LC67 | 65 |
LC68 | 61 |
LC5+LC67 | 65 |
LC5+LC68 | 60 |
LC27+LC67 | 65 |
LC27+LC68 | 59 |
LC28+LC67 | 62 |
DSCG (динатрия кромогликат) | 62 |
5.
In vivo
оценка противовоспалительного и иммунорегулирующего эффектов молочнокислых бактерий
(1) Выделение макрофагов и измерение маркера воспаления
Мышей C57BL/6J (20-23 г) возрастом 6 недель приобретали у RaonBio Co., Ltd. В брюшную полость каждой мыши вводили 2 мл 4% стерильного тиогликолята, через 96 часов мышей анестезировали, и 8 мл среды RPMI 1640 вводили в брюшную полость каждой мыши. Через 5-10 минут среду RPMI (в том числе макрофаги) в брюшной полости мышей извлекали, центрифугировали при 1000 об./мин. в течение 10 минут, а затем дважды промывали средой RPMI 1640. Макрофаги высевали в 24-луночный планшет с плотностью, составлявшей 0,5 × 106 клеток/лунка, и обрабатывали тестируемым веществом на основе молочнокислых бактерий и индуктором воспаления LPS (липополисахаридом) в течение 2 часов или 24 часов, а затем собирали супернатант и клетки. В данном случае молочнокислые бактерии использовали при концентрации, составляющей 1 × 104 КОЕ/мл, для обработки клеток. Собранные клетки гомогенизировали в буфере (Gibco). Используя собранный супернатант, уровни экспрессии цитокинов, таких как TNF-α, измеряли с помощью набора ELISA. В дополнение к этому, используя собранные клетки, уровни экспрессии p65 (NF-каппа B), p-p65 (фосфор-NF-каппа B) и β-актина измеряли с помощью способа иммуноблоттинга. В частности, отбирали 50 мкг супернатанта и подвергали электрофорезу на 10% (вес/об.) полиакриламидном геле SDS в течение 1 часа и 30 минут. Подвергнутый электрофорезу образец переносили на нитроцеллюлозную мембрану в условиях 100 В и 400 мА в течение 1 часа и 10 минут. Нитроцеллюлозную мембрану с перенесенным образцом блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 30 минут, а затем три раза промывали PBS-Tween в течение 5 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением 1:100 первичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение ночи. Затем мембрану промывали три раза в течение 10 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением вторичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) 1:1000 в течение 1 часа и 20 минут. Затем мембрану промывали три раза в течение 15 минут каждый раз, и ее проявляли с помощью флуоресценции и визуализировали. Измеряли интенсивность проявленной полосы, а затем ингибирование (%) рассчитывали с использованием следующего уравнения. В следующем уравнении нормальная группа означает группу, в которой макрофаги обрабатывали только солевым раствором; группа, обработанная LPS, означает группу, в которой макрофаги обрабатывали с помощью только LPS; и группа, обработанная молочнокислыми бактериями, означает группу, в которой макрофаги обрабатывали как молочнокислыми бактериями, так и LPS.
Ингибирование (%) = (уровень экспрессии в группе, обработанной LPS, – уровень экспрессии в группе, обработанной молочнокислыми бактериями) / (уровень экспрессии в группе, обработанной LPS, – уровень экспрессии в нормальной группе) x 100
В таблице 19 ниже представлено ингибирование активации NF-каппа В и ингибирование экспрессии TNF-α в случае если макрофагов с воспалением, индуцированным LPS (липополисахаридом), обрабатывали молочнокислыми бактериями. Как представлено в таблице 19 ниже, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC67, Bifidobacterium longum LC68 и их смеси эффективно подавляют воспаление, индуцированное LPS (липополисахаридом).
Таблица 19
молочнокислые бактерии, используемые для обработки | Ингибирование (%) экспрессии TNF-α | Ингибирование (%) активации p-p65/p65 |
LC5 | 71 | 73 |
LC15 | 54 | 55 |
LC17 | 61 | 55 |
LC25 | 52 | 65 |
LC27 | 70 | 72 |
LC28 | 74 | 71 |
LC55 | 63 | 62 |
LC65 | 65 | 68 |
LC67 | 76 | 77 |
LC68 | 75 | 71 |
LC5+LC67 | 78 | 72 |
LC5+LC68 | 76 | 72 |
LC27+LC67 | 81 | 75 |
LC27+LC68 | 77 | 73 |
LC28+LC67 | 77 | 73 |
(2) Выделение Т-клеток из селезенки и измерение дифференциации в клетки Th17 или клетки Treg
У мышей C56BL/6J отделяли селезенку, соответствующим образом измельчали и суспендировали в 10% FCS-содержащей среде RPMI 1640, и из нее выделяли CD4 Т-клетки с использованием набора для выделения CD4 Т-клеток (MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Выделенные CD4 Т-клетки высевали в 12-луночный планшет с плотностью, составлявшей 5 × 105/лунка, и к ним добавляли антитело к CD3 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) и антитело к CD28 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) или антитело к CD3 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия), антитело к CD28 (1 мкг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия), рекомбинантный IL-6 (20 нг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия) и рекомбинантный трансформирующий фактор роста бета (1 нг/мл, MiltenyiBiotec, Бергиш-Гладбах, Германия). Во время культивирования клеток к ним добавляли 1 x 103 или 1 × 105 КОЕ молочнокислых бактерий, и клетки культивировали в течение 4 суток. Затем клетки культуры окрашивали антителом к FoxP3 или антителом к IL-17A, и распределение клеток Th17 и клеток Treg анализировали с использованием системы FACS (сортировка клеток с активированной флуоресценцией) (система C6 Flow Cytometer®, Сан-Хосе, Калифорния, США).
В таблице 20 ниже представлен уровень дифференциации Т-клеток (выделенных из селезенки) в клетки Th17 в случае если Т-клетки были обработаны антителом к CD3, антителом к CD28, IL-6 и TGF-β, а в таблице 21 ниже представлен уровень дифференциации Т-клеток (выделенных из селезенки) в клетки Treg в случае если Т-клетки обрабатывали антителом к CD3 и антителом к CD28. Как представлено в таблицах 20 и 21 ниже, Lactobacillus plantarum LC5, Lactobacillus plantarum LC27, Lactobacillus plantarum LC28, Bifidobacterium longum LC67, Bifidobacterium longum LC68 и их смеси подавляли дифференциацию Т-клеток в клетки Th17 (клетки Т-хелперы 17) и стимулировали дифференциацию Т-клеток в клетки Treg. Эти результаты свидетельствуют о том, что молочнокислые бактерии или их смеси способны эффективно уменьшать тяжесть воспалительных заболеваний, таких как колит или артрит.
Таблица 20
Способ обработки T-клеток | Дифференциация (%) в клетки Th17 | |
Обработка антителом к CD3, антителом к CD28, IL-6 и TGF-β | Обработка молочнокислыми бактериями | |
Не обработанные | Не обработанные | 12,2 |
Обработанные | Не обработанные | 25,6 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5 | 14,2 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC15 | 19,6 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC17 | 17,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC25 | 18,2 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27 | 15,1 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC28 | 14,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC55 | 18,8 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC65 | 17,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC67 | 15,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC68 | 15,7 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5+LC67 | 14,2 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5+LC68 | 14,5 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27+LC67 | 13,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27+LC68 | 14,4 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC28+LC67 | 14,1 |
Таблица 21
Способ обработки T-клеток | Дифференциация (%) в клетки Treg | |
Обработка с помощью антитела к CD3 и антитела к CD28 | Обработка молочнокислыми бактериями | |
Не обработанные | Не обработанные | 9,1 |
Обработанные | Не обработанные | 11,4 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5 | 22,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC15 | 15,8 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC17 | 16,9 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC25 | 18,4 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27 | 21,8 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC28 | 21,4 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC55 | 19,5 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC65 | 19,2 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC67 | 21,6 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC68 | 20,5 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5+LC67 | 21,8 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC5+LC68 | 21,8 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27+LC67 | 22,0 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC27+LC68 | 21,5 |
Обработанные | Обработанные с помощью LC28+LC67 | 21,9 |
6.
In vivo
оценка противовоспалительного эффекта и эффекта, уменьшающего тяжесть колита, молочнокислых бактерий
(1) Тестируемые животные
Мышей C57BL/6 (24-27 г) возрастом 5 недель приобретали у OrientBio и размещали в контролируемых условиях окружающей среды (влажность: 50±10%, температура: 25±2°C, цикл 12 ч. свет/12 ч. темнота), а затем использовали в эксперименте. В качестве корма использовали стандартный экспериментальный корм (Samyang, Корея), и при этом животные имели доступ к питьевой воде ad libitum. Во всех экспериментах одна группа состояла из 6 животных.
(2) Индуцирование колита с помощью TNBS и введение образца
Одну группу тестируемых животных использовали в качестве нормальной группы, а тестируемых животных других групп обрабатывали 2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислотой (TNBS) для индуцирования острого колита. В частности, тестируемых животных слегка анестезировали эфиром, а затем в толстую кишку через анальное отверстие вводили раствор в виде смеси 2,5 г TNBS (2,4,6-тринитробензолсульфоновой кислоты) и 100 мл 50% этанола в количестве по 0,1 мл каждый раз с применением шприца с круглым наконечником объемом 1 мл, поднимали вертикально и выдерживали в течение 30 секунд, за счет чего вызывая воспаление. С другой стороны, нормальной группе вводили перорально 0,1 мл солевого раствора. На следующий день молочнокислые бактерии или смесь молочнокислых бактерий в качестве тестируемого образца суспендировали в солевом растворе и вводили перорально каждой мыши в количестве, составлявшем 2,0 × 109 КОЕ, один раз в сутки в течение трех суток. На следующий день, после окончания введения образца, животных умерщвляли диоксидом углерода, часть толстой кишки в пределах от слепой кишки до участка сразу перед анальным отверстием иссекали и использовали. При этом тестируемым животным нормальной группы перорально вводили только солевой раствор вместо молочнокислых бактерий. Кроме того, тестируемым животным группы отрицательного контроля, после индукции колита с помощью TNBS, перорально вводили только солевой раствор вместо молочнокислых бактерий. Кроме того, тестируемым животным группы положительного контроля перорально вводили вместо молочнокислых бактерий 50 мг/кг сульфасалазина, который представляет собой лекарственное средство для лечения колита.
(3) Макроскопический анализ толстой кишки
Определяли длину и внешний вид иссеченной толстой кишки, и внешний вид анализировали с помощью оценки в соответствии с критериями (Hollenbach et al., 2005, Criteria of Degit of Colitis), показанными в таблице 22 ниже. После полного удаления содержимого толстой кишки ткань толстой кишки промывали солевым раствором. Часть промытой ткани толстой кишки фиксировали 4% раствором формальдегида, чтобы использовать ее в качестве образца патологической ткани, а остаток хранили при замораживании при -80°С для молекулярно-биологического анализа.
Таблица 22
Макроскопическая оценка | Критерии |
0 | Не обнаружены какие-либо язва и воспаление. |
1 | Обнаружен отек без кровотечения. |
2 | Обнаружена язва с отеком. |
3 | Язва и воспаление обнаружены только в одном участке. |
4 | Язва и воспаление обнаружены в двух или более участках. |
5 | Язва имеет увеличенный размер, составлявший 2 см или больше. |
(4) Измерение активности миелопероксидазы (MPO)
Гомогенизировали 100 мг ткани толстой кишки в 200 мкл 10 мМ калий-фосфатного буфера (рН 7,0), содержащего 0,5% гексадецилтриметиламмонийбромида. Гомогенизированную ткань центрифугировали при 10000×g и 4°C в течение 10 минут, и супернатант собирали. Добавляли 50 мкл супернатанта к 0,95 мл реакционного раствора (содержащего 1,6 мМ тетраметилбензидина и 0,1 мМ H2O2), и обеспечивали реакцию при 37°С, и в различные моменты времени во время реакции измеряли оптическую плотность при 650 нм. Для расчета активности миелопероксидазы (MPO) 1 мкмоль/мл пероксида, полученного с помощью реакции, использовали в качестве 1 единицы.
(5) Измерение маркера воспаления
С помощью способа вестерн-блоттинга измеряли маркеры воспаления, такие как p-p65, p65, iNOS, COX-2 и β-актин. В частности, в соответствии с тем же способом, как и при эксперименте для измерения активности миелопероксидазы (MPO), получали супернатант. Отбирали 50 мкг супернатанта и подвергали электрофорезу на 10% (вес/об.) полиакриламидном геле SDS в течение 1 часа и 30 минут. Подвергнутый электрофорезу образец переносили на нитроцеллюлозную мембрану в условиях 100 В и 400 мА в течение 1 часа и 10 минут. Нитроцеллюлозную мембрану с перенесенным образцом блокировали 5% обезжиренным молоком в течение 30 минут, а затем три раза промывали PBS-Tween в течение 5 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением 1:100 первичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) в течение ночи. Затем мембрану промывали три раза в течение 10 минут каждый раз и инкубировали с разбавлением вторичного антитела (Santa Cruz Biotechnology, США) 1:1000 в течение 1 часа и 20 минут. Затем мембрану промывали три раза в течение 15 минут каждый раз, и ее проявляли с помощью флуоресценции и визуализировали.
Кроме того, связанные с воспалением цитокины, такие как TNF-α, IL-17, IL-10 и т. п., измеряли с использованием набора ELISA.
(6) Анализ иммунорегулирующих маркеров
Иссеченную толстую кишку дважды промывали 2,5 мМ раствором EDTA. Промытую толстую кишку перемешивали в среде RPMI, содержащей 1 мг/мл коллагеназы типа VIII (Sigma), при 30°С в течение 20 минут и фильтровали для отделения собственного слоя слизистой оболочки. Затем собственный слой слизистой оболочки обрабатывали 30-100% раствором перколла и центрифугировали для отделения Т-клеток. Отделенные Т-клетки окрашивали антителом к FoxP3 или антителом к IL-17A, и распределение клеток Th17 и Treg анализировали с использованием системы FACS (сортировка клеток с активированной флуоресценцией) (система C6 Flow Cytometer®, Сан-Хосе, Калифорния, США).
(7) Экспериментальные результаты
В таблице 23 ниже представлены эффекты молочнокислых бактерий в отношении веса толстой кишки, физических свойств толстой кишки, активности миелопероксидазы (MPO) и содержания цитокинов, связанных с воспалением, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с TNBS-индуцированным острым колитом. Как представлено в таблице 23 ниже, животные модели с острым колитом, индуцированным с помощью TNBS, продемонстрировали снижение веса, снижение макроскопического показателя толстой кишки, уменьшение длины толстой кишки и увеличенную активность MPO. Однако, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с острым колитом, индуцированным TNBS, все эти маркеры улучшались. В частности, введение только Bifidobacterium longum LC67 или введение смеси Bifidobacterium longum LC67 и Lactobacillus plantarum LC5 продемонстрировало весьма превосходный эффект в отношении уменьшения тяжести колита. В дополнение к этому животные модели с острым колитом, индуцированным TNBS, продемонстрировали увеличенные уровни TNF-α и IL-17 и увеличенные уровни IL-10. Однако, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным моделям с острым колитом, индуцированным TNBS, все эти маркеры улучшались. В частности, в случае если вводили только Bifidobacterium longum LC67, или вводили смесь Bifidobacterium longum LC67 и Lactobacillus plantarum LC5, то уровни TNF-α и IL-17 значительно снижались, а уровни IL-10 значительно увеличивались.
Таблица 23
Тестируемые группы | Увеличение веса (г) | Макроскопическая оценка | Длина толстой кишки (см) | Активность MPO (мкЕ/мг) | TNF-α (пг/мг) | IL-17 (пг/мг) | IL-10 (пг/мг) |
Нормальная группа | 0,64 | 5,9 | 0,14 | 0,42 | 35,1 | 18,4 | 61,2 |
Группа отрицательного контроля | -2,46 | 4,2 | 2,32 | 1,54 | 95,5 | 65,2 | 30,7 |
Группа, которой вводили LC5 | -1,90 | 4,65 | 1,30 | 0,91 | 75,5 | 52,8 | 43,9 |
Группа, которой вводили LC27 | -1,0 | 4,56 | 1,08 | 0,82 | 67,2 | 50,4 | 44,0 |
Группа, которой вводили LC67 | -0,28 | 4,92 | 0,50 | 0,43 | 48,5 | 38,5 | 54,6 |
Группу, которой вводили LC 68 | -1,02 | 4,5 | 1,34 | 1,04 | 54,4 | 50,5 | 48,1 |
Группа, которой вводили LC5+LC67 | -0,3 | 5,08 | 0,84 | 0,42 | 45,1 | 37,3 | 55,3 |
Группа, которой вводили LC27+LC68 | -1,15 | 4,8 | 1,17 | 0,78 | 59,8 | 45,0 | 50,0 |
Группа положительного контроля | -0,91 | 4,58 | 1,43 | 0,95 | 58,2 | 48,5 | 45,5 |
На ФИГ. 22 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток в клетки Th17, которые показывают эффект молочно-кислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS, и на ФИГ. 23 показаны диаграммы дифференциации Т-клеток в клетки Treg, которые показывают эффект молочно-кислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS. На ФИГ. 22 и 23 «NOR» означает нормальную группу; «TNBS» означает группу отрицательного контроля; «LC5» означает группу, которой вводили Lactobacillus plantarum LC5; «LC27» означает группу, которой вводили Lactobacillus plantarum LC27, «LC67» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum LC67; «LC68» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum LC68; «LC5+LC67» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC5 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах; «LC27+LC68» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC68 в одинаковых количествах; и «SS» означает группу, которой вводили сульфасалазин. Как показано на ФИГ. 22 и 23, в случае животных с острым колитом, индуцированным TNBS, дифференциация Т-клеток в клетки Th17 стимулировалась, а дифференциация Т-клеток в клетки Treg подавлялась. Однако, в случае если молочнокислые бактерии вводили животным с острым колитом, индуцированным TNBS, то дифференциация Т-клеток в клетки Th17 подавлялась, а дифференциация T-клеток в клетки Treg стимулировалась. В частности, в случае если вводили только Bifidobacterium longum LC67 или смесь Bifidobacterium longum LC67 и Lactobacillus plantarum LC5, то дифференциация Т-клеток в клетки Th17 значительно подавлялась, а дифференциация Т-клеток в клетки Treg значительно стимулировалась.
На ФИГ. 24 показаны маркеры воспалительной реакции, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении животных моделей с острым колитом, индуцированным TNBS. На ФИГ. 24 «Nor» означает нормальную группу; «T» означает группу отрицательного контроля; «LC5» означает группу, которой вводили Lactobacillus plantarum LC5; «LC27» означает группу, которой вводили Lactobacillus plantarum LC27; «LC67» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum LC67; «LC68» означает группу, которой вводили Bifidobacterium longum LC68; «LC5+LC67» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC5 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах; «LC27+LC68» означает группу, которой вводили смесь молочнокислых бактерий, полученную с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC68 в одинаковых количествах, и «SS» означает группу, которой вводили сульфасалазин. Как показано на ФИГ. 24, в случае модельных животных с острым колитом, индуцированным TNBS, NF-κB (p-p65) активировался, и уровни экспрессии COX-2 и iNOS увеличивались. Однако, в случае если вводили молочнокислые бактерии, то активация NF-κB (p-p65) ингибировалась, и уровни экспрессии COX-2 и iNOS также уменьшались. В частности, введение только Bifidobacterium longum LC67 или введение смеси Bifidobacterium longum LC67 и Lactobacillus plantarum LC5 проявило превосходные эффекты в отношении ингибирования активации NF-κB (p-p65) и ингибирования экспрессии COX-2 и iNOS.
7.
In vivo
оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести алкоголь-индуцированной язвы желудка
(1) Тестируемые животные
Мышей C57BL/6 (24-27 г) возрастом 5 недель приобретали у OrientBio и размещали в контролируемых условиях окружающей среды (влажность: 50±10%, температура: 25±2°C, цикл 12 ч. свет/12 ч. темнота), а затем использовали в эксперименте. В качестве корма использовали стандартный экспериментальный корм (Samyang, Корея), и при этом животные имели доступ к питьевой воде ad libitum. Во всех экспериментах одна группа состояла из 6 животных.
(2) Индукция язвы желудка алкоголем и введение образца
Одной тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ Lactobacillus plantarum LC27, суспендированной в солевом растворе. Другой тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ Bifidobacterium longum LC67, суспендированной в солевом растворе. Еще одной тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ смеси молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах после ее суспендирования в солевом растворе. В дополнение к этому, группе положительного контроля вводили перорально ранитидин, коммерческое средство для лечения язвы желудка, один раз в сутки в течение 3 суток в количестве, составлявшем 50 мг/кг. В дополнение к этому, нормальной группе и группе отрицательного контроля вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 0,2 мл солевого раствора. После того как образец вводили перорально в течение 3 дней, тестируемым мышам не давали еды и воды в течение 18 часов. На 4-й день эксперимента через 1 час после введения солевого раствора мышам всех тестируемых групп, отличных от нормальной группы, вводили перорально 0,2 мл 99% чистого этанола для индукции язвы желудка. В дополнение к этому нормальной группе вместо этанола вводили 0,2 мл солевого раствора.
(3) Измерение макроскопического маркера, связанного с повреждением желудка
Через 3 часа после введения этанола тестируемых мышей умерщвляли, и ткань желудка рассекали в продольном направлении и промывали раствором фосфатно-солевого буферного раствора PBS, а затем степень повреждения желудка исследовали визуально или микроскопически и оценивали (см. Park, S.W., Oh, T.Y., Kim,Y.S., Sim, H., et al., Artemisia asiatica extracts protect against ethanol-induced injury in gastric mucosa of rats. J. Gastroenterol. Hepatol. 2008, 23, 976-984).
(4) Измерение активности миелопероксидазы (MPO)
Гомогенизировали 100 мг ткани желудка в 200 мкл 10 мМ калий-фосфатного буфера (рН 7,0), содержащего 0,5% гексадецилтриметиламмонийбромида. Затем раствор ткани центрифугировали при 10000×g и 4°C в течение 10 минут, и супернатант собирали. Добавляли 50 мкл супернатанта к 0,95 мл реакционного раствора (содержащего 1,6 мМ тетраметилбензидина и 0,1 мМ H2O2), и обеспечивали реакцию при 37°С, и в различные моменты времени во время реакции измеряли оптическую плотность при 650 нм. Для расчета активности миелопероксидазы (MPO) 1 мкмоль/мл пероксида, полученного с помощью реакции, использовали в качестве 1 единицы.
(5) Измерение маркеров воспаления
Выделяли 2 мкг mRNA из ткани желудка с помощью набора Qiagen RNeasy Mini и синтезировали в cDNA с использованием Takara Prime Script Rtase. Затем измеряли уровни экспрессии лиганда CXCL4 [хемокин (CXC-мотив) 4] и TNF-α (фактор некроза опухоли-альфа) с использованием количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (термоциклер Qiagen, предварительно смешанное средство Takara SYBER, условия термического циклирования: активация ДНК-полимеразы в течение 5 мин. при 95°С, затем 40 циклов амплификации в течение 10 с при 95°С и в течение 45 с при 60°С). В таблице 24 ниже представлены последовательности праймеров, используемые для анализа каждого цитокина в количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Таблица 24
Цитокин, подлежащий анализу | Тип праймера | Нуклеотидная последовательность праймера |
TNF-α | Прямой | 5'-CTGTAGCCCACGTCGTAGC-3' |
Обратный | 5'-TTGAGATCCATGCCGTTG-3' | |
CXCL4 | Прямой | 5'-AGTCCTGAGCTGCTGCTTCT-3' |
Обратный | 5'-GATCTCCATCGCTTTCTTCG-3' |
(6) Экспериментальные результаты
На ФИГ. 25 изображены снимки, демонстрирующие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению; на ФИГ. 26 показан общий показатель поражения желудка, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению; на ФИГ. 27 показан индекс язвы, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению; и на ФИГ. 28 показан индекс гистологической активности, показывающий эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению. Кроме того, на ФИГ. 29 показана активность миелопероксидазы (MPO), показывающая эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению. В дополнение к этому на ФИГ. 30 показаны уровни экспрессии CXCL4, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению; и на ФИГ. 31 показаны уровни экспрессии TNF-α, показывающие эффект молочнокислых бактерий в отношении слизистой оболочки желудка мышей с язвой желудка, индуцированной этанолом, во втором эксперименте по настоящему изобретению. На ФИГ. 30 и 31 уровни экспрессии CXCL4 и уровни экспрессии TNF-α в тестируемых группах, отличных от нормальной группы, выражены с кратным изменением относительно уровней экспрессии в нормальной группе. На ФИГ. 25-31, «Nor» означает нормальную группу; «этанол» означает группу отрицательного контроля с этанол-индуцированной язвой желудка и введенным физиологическим раствором в виде образца; «этанол+ранитидин» означает тестируемую группу с этанол-индуцированной язвой желудка и введенным ранитидином в виде образца; «этанол+LC27» означает тестируемую группу с этанол-индуцированной язвой желудка и введенным Lactobacillus plantarum LC27 в виде образца; «этанол+LC67» означает тестируемую группу с этанол-индуцированной язвой желудка и введенным Bifidobacterium longum LC67 в виде образца; и «этанол+LC27/LC67» означает тестируемую группу с этанол-индуцированной язвой желудка и введенной смесью молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 в равных количествах, в виде образца. Как показано на ФИГ. 25-29, Bifidobacterium longum LC67, Lactobacillus plantarum LC27 или их смесь эффективно уменьшали тяжесть повреждения желудка или язвы желудка, индуцированных этанолом. Кроме того, как показано на ФИГ. 30 и 31, Bifidobacterium longum LC67, Lactobacillus plantarum LC27 или их смесь значительно снижали уровни маркеров воспаления у мышей с этанол-индуцированными повреждением желудка или язвой желудка.
8.
In vivo
оценка эффекта молочнокислых бактерий в отношении уменьшения тяжести алкоголь-индуцированного повреждения печени
(1) Тестируемые животные
Мышей C57BL/6 (24-27 г) возрастом 5 недель приобретали у OrientBio и размещали в контролируемых условиях окружающей среды (влажность: 50±10%, температура: 25±2°C, цикл 12 ч. свет/12 ч. темнота), а затем использовали в эксперименте. В качестве корма использовали стандартный экспериментальный корм (Samyang, Корея), и при этом животные имели доступ к питьевой воде ad libitum. Во всех экспериментах одна группа состояла из 6 животных.
(2) Индукция повреждения печени алкоголем и введение образца
Одной тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ Lactobacillus plantarum LC27, суспендированной в солевом растворе. Другой тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ Bifidobacterium longum LC67, суспендированной в солевом растворе. Еще одной тестируемой группе вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 1 × 109 КОЕ смеси молочнокислых бактерий, полученной с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах после ее суспендирования в солевом растворе. Группе положительного контроля вводили перорально силимарин, коммерческое средство для лечения повреждения печени, один раз в сутки в течение 3 суток в количестве, составлявшем 50 мг/кг. В дополнение к этому нормальной группе и группе отрицательного контроля вводили перорально один раз в сутки в течение 3 суток 0,1 мл солевого раствора. Через 3 часа после 3 суток перорального введения образца или солевого раствора вводили внутрибрюшинно этанол мышам всех тестируемых групп, отличных от нормальной группы, в количестве, составлявшем 6 мл/кг, чтобы индуцировать повреждение печени. В дополнение к этому нормальной группе вместо этанола вводили внутрибрюшинно солевой раствор в количестве, составлявшем 6 мл/кг. Затем тестируемым мышам не давали еды и воды в течение 12 часов, а затем умерщвляли, и отбирали кровь из сердца.
(3) Измерение маркеров функции печени и результаты
Отобранный образец крови оставляли отстаиваться при комнатной температуре в течение 60 минут и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут для отделения сыворотки. Уровни GPT (глутаминпируваттрансаминазы) и GOT (глутаматоксалацетаттрансаминазы) в отделенной сыворотке измеряли с использованием набора для анализа крови (набор для измерения ALT & AST, Asan Pharm. Co., Корея), и результаты измерения представлены в таблице 25 ниже. Как показано в таблице 25 ниже, Bifidobacterium longum LC67, Lactobacillus plantarum LC27 или их смесь эффективно уменьшают тяжесть этанол-индуцированного повреждения печени. В частности, Bifidobacterium longum LC67 продемонстрировал улучшенный эффект по сравнению с силимарином, который представляет собой коммерческое средство для лечения повреждения печени.
Таблица 25
Тестируемые группы | GOT (МЕ/л) | GPT (МЕ/л) |
Нормальная группа | 52,1 | 42,2 |
Группа отрицательного контроля | 107,7 | 156,3 |
Группа, которой вводили этанол и LC27 | 82,3 | 95,4 |
Группа, которой вводили этанол и LC67 | 62,5 | 65,8 |
Группа, которой вводили этанол и LC27/LC67 | 71,4 | 78,3 |
Группа, которой вводили этанол и силимарин | 79,5 | 87,5 |
* LC27: Lactobacillus plantarum LC27
* LC67: Bifidobacterium longum LC67
* LC27/LC67: смесь молочнокислых бактерий, полученная с помощью смешивания Lactobacillus plantarum LC27 и Bifidobacterium longum LC67 в одинаковых количествах.
Хотя настоящее изобретение было описано выше со ссылкой на примеры, объем настоящего изобретения не ограничивается этими примерами, и при этом возможны различные модификации без отхода от объема и идеи настоящего изобретения. Следовательно, объем защиты настоящего изобретения должен интерпретироваться как включающий все варианты осуществления, входящие в прилагаемую формулу изобретения.
--->
Перечень последовательностей
<110> ЮНИВЕРСИТИ-ИНДАСТРИ КООПЕРЕЙШН ГРУП ОФ КЮН ХЕЕ ЮНИВЕРСИТИ
<120> НОВАЯ БИФИДОБАКТЕРИЯ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩАЯСЯ РАЗЛИЧНЫМИ ФУНКЦИЯМИ,
И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> PCT-16-130
<150> KR 10-2015-0130124
<151> 2015-09-15
<150> KR 10-2016-0005018
<151> 15.01.2016
<160> 8
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 1132
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Lactobacillus brevis CH23
<400> 1
agggataaca cttggaaaca ggtgctaata ccgtataaca acaaaatccg catggatttt 60
gtttgaaagg tggcttcggc tatcacttct ggatgatccc gcggcgtatt agttagttgg 120
tgaggtaaag gcccaccaag acgatgatac gtagccgacc tgagagggta atcggccaca 180
ttgggactga gacacggccc aaactcctac gggaggcagc agtagggaat cttccacaat 240
ggacgaaagt ctgatggagc aatgccgcgt gagtgaagaa gggtttcggc tcgtaaaact 300
ctgttgttaa agaagaacac ctttgagagt aactgttcaa gggttgacgg tatttaacca 360
gaaagccacg gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtaggtggc aagcgttgtc 420
cggatttatt gggcgtaaag cgagcgcagg cggtttttta agtctgatgt gaaagccttc 480
ggcttaaccg gagaagtgca tcggaaactg ggagacttga gtgcagaaga ggacagtgga 540
actccatgtg tagcggtgga atgcgtagat atatggaaga acaccagtgg cgaaggcggc 600
tgtctagtct gtaactgacg ctgaggctcg aaagcatggg tagcgaacag gattagatac 660
cctgstagtc catgccgtaa acgatgagtg ctaagtgttg gagggtttcc gcccttcagt 720
gctgcagcta acgcattaag cactccgcct ggggagtacg accgcaaggt tgaaactcaa 780
aggaattgac gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agctacgcga 840
agaaccttac caggtcttga catcttctgc caatcttaga gataagacgt tcccttcggg 900
gacagaatga caggtggtgc atggttgtcg tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag 960
tcccgcaacg agcgcaaccc ttattatcag ttgccagcat tcagttgggc actctggtga 1020
gactgccggt gacaaaccgg aggaaggtgg ggatgacgtc aaatcatcat gccccttatg 1080
acctgggcta cacacgtgct acaatggacg gtacaacgag tcgcgaagtc gt 1132
<210> 2
<211> 1258
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Lactobacillus brevis CH32
<400> 2
gtaacttgcc caagagactg ggataacacc tggaaacaga tgctaatacc ggataacaac 60
actagacgca tgtctagagt ttgaaagatg gttctgctat cactcttgga tggacctgcg 120
gtgcattagc tagttggtaa ggtaacggct taccaaggca atgatgcata gccgagttga 180
gagactgatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt 240
agggaatctt ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag tgaagaaggg 300
tttcggctcg taaagctctg ttggtagtga agaaagatag aggtagtaac tggccttgat 360
ttgacggtaa ttccccagaa agtcacggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt 420
aggtggcaag cgttgtccgg atttattggg cgtaaagcga gtgcaggcgg ttcaataagt 480
ctgatgtgaa agccttcggc tcaaccggag aattgcatca gaaactgttg aacttgagtg 540
cagaagagga gagtggaact ccatgtgtag cggtggaatg cgtagatata tggaagaaca 600
ccagtggcga aggcggctct ctggtctgca actgacgctg aggctcgaaa gcatgggtag 660
cgaacaggat tagataccct ggtagtccat gccgtaaacg atgagtgcta agtgttggga 720
ggtttccgcc tctcagtgct gcagctaacg cattaagcac tccgcctggg gagtacgacc 780
gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt 840
aattcgaagc aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat ccagtgcaaa cctaagagat 900
taggtgttcc cttcggggac gctgagacag gtggtgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg 960
tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg tcattagttg ccatcattaa 1020
gttgggcact ctaatgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaag 1080
tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggacggta caacgagaag 1140
cgaacctgcg aaggcaagcg gatctcttaa agccgttctc agttcggact gtaggctgca 1200
actcgcctac acgaagctgg aatcgctagt aatcgcggaa cagtacgccg cggtgaat 1258
<210> 3
<211> 1348
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Bifidobacterium longum CH57
<400> 3
cgggctttgc ttggtggtga gagtggcgaa cgggtgagta atgcgtgacc gacctgcccc 60
atacaccgga atagctcctg gaaacgggtg gtaatgccgg atgctccagt tgatcgcatg 120
gtcttctggg aaagctttcg cggtatggga tggggtcgcg tcctatcagc ttgacggcgg 180
ggtaacggcc caccgtggct tcgacgggta gccggcctga gagggcgacc ggccacattg 240
ggactgagat acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt ggggaatatt gcacaatggg 300
cgcaagcctg atgcagcgac gccgcgtgag ggatggaggc cttcgggttg taaacctctt 360
ttatcgggga gcaagcgaga gtgagtttac ccgttgaata agcaccggct aactacgtgc 420
cagcagccgc ggtaatacgt agggtgcaag cgttatccgg aattattggg cgtaaagggc 480
tcgtaggcgg ttcgtcgcgt ccggtgtgaa agtccatcgc ttaacggtgg atccgcgccg 540
ggtacgggcg ggcttgagtg cggtagggga gactggaatt cccggtgtaa cggtggaatg 600
tgtagatatc gggaagaaca ccaatggcga aggcaggtct ctgggccgtt actgacgctg 660
aggagcgaaa gcgtggggag cgaacaggat tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg 720
gtggatgctg gatgtggggc ccgttccacg ggttccgtgt cggagctaac gcgttaagca 780
tcccgcctgg gggagtacgg ccgcaaggct aaaactcaaa gaaattgacg ggggcccgca 840
caagcggcgg agcatgcgga ttaattcgat gcaacgcgaa gaaccttacc tgggcttcac 900
atgttcccga cggtcgtaga gatacggctt cccttcgggg cgggttcaca ggtggtgcat 960
ggtcgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctc 1020
gccccgtgtt gccagcggat tatgccggga actcacgggg gaccgccggg gttaactcgg 1080
aggaaggtgg ggatgacgtc agatcatcat gccccttacg tccagggctt cacgcatgct 1140
acaatggccg gtacaacggg atgcgacgcg gcgacgcgga gcggatccct gaaaaccggt 1200
ctcagttcgg atcgcagtct gcaactcgac tgcgtgaagg cggagtcgct agtaatcgcg 1260
aatcagcaac gtcgcggtga atgcgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcaagtcat 1320
gaaagtgggc agcacccgaa gccggtgg 1348
<210> 4
<211> 1421
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Lactobacillus brevis LC5
<400> 4
ctggtattga ttggtgcttg catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt 60
aacacgtggg aaacctgccc agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg 120
cataacaact tggaccgcat ggtccgagct tgaaagatgg cttcggctat cacttttgga 180
tggtcccgcg gcgtattagc tagatggtgg ggtaacggct caccatggca atgatacgta 240
gccgacctga gagggtaatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg 300
aggcagcagt agggaatctt ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag 360
tgaagaaggg tttcggctcg taaaactctg ttgttaaaga agaacatatc tgagagtaac 420
tgttcaggta ttgacggtat ttaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc 480
ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg 540
gttttttaag tctgatgtga aagccttcgg ctcaaccgaa gaagtgcatc ggaaactggg 600
aaacttgagt gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagatat 660
atggaagaac accagtggcg aaggcggctg tctggtctgt aactgacgct gaggctcgaa 720
agtatgggta gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca taccgtaaac gatgaatgct 780
aagtgttgga gggtttccgc ccttcagtgc tgcagctaac gcattaagca ttccgcctgg 840
ggagtacggc cgcaaggctg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 900
gcatgtggtt taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tactatgcaa 960
atctaagaga ttagacgttc ccttcgggga catggataca ggtggtgcat ggttgtcgtc 1020
agctcgtgtc gtgagatgtt gggttaagtc ccgcaacgag cgcaaccctt attatcagtt 1080
gccagcatta agttgggcac tctggtgaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg 1140
atgacgtcaa atcatcatgc cccttatgac ctgggctaca cacgtgctac aatggatggt 1200
acaacgagtt gcgaactcgc gagagtaagc taatctctta aagccattct cagttcggat 1260
tgtaggctgc aactcgccta catgaagtcg gaatcgctag taatcgcgga tcagcatgcc 1320
gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatgag agtttgtaac 1380
acccaaagtc ggtggggtaa ccttttagga accagccgcc t 1421
<210> 5
<211> 1356
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Lactobacillus brevis LC27
<400> 5
tttacatttg attgagtggc gaactggtga gtaacacgtg ggaaacctgc ccagaagcgg 60
gggataacac ctggaaacag atgctaatac cgcataacaa cttggaccgc atggtccgag 120
tttgaaagat ggcttcggct atcacttttg gatggtcccg cggcgtatta gctagatggt 180
ggggtaacgg ctcaccatgg caatgatacg tagccgacct gagagggtaa tcggccacat 240
tgggactgag acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg 300
gacgaaagtc tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag ggtttcggct cgtaaaactc 360
tgttgttaaa gaagaacata tctgagagta actgttcagg tattgacggt atttaaccag 420
aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc 480
ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa gtctgatgtg aaagccttcg 540
gctcaaccga agaagtgcat cggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag gacagtggaa 600
ctccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct 660
gtctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagtatgggt agcaaacagg attagatacc 720
ctggtagtcc ataccgtaaa cgatgaatgc taagtgttgg agggtttccg cccttcagtg 780
ctgcagctaa cgcattaagc attccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct gaaactcaaa 840
ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gctacgcgaa 900
gaaccttacc aggtcttgac atactatgca aatctaagag attagacgtt cccttcgggg 960
acatggatac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1020
cccgcaacga gcgcaaccct tattatcagt tgccagcatt aagttgggca ctctggtgag 1080
actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga 1140
cctgggctac acacgtgcta caatggatgg tacaacgagt tgcgaactcg cgagagtaag 1200
ctaatctctt aaagccattc tcagttcgga ttgtaggctg caactcgcct acatgaagtc 1260
ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca 1320
caccgcccgt cacaccatga gagtttgtaa caccca 1356
<210> 6
<211> 1325
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Lactobacillus brevis LC28
<400> 6
catcatgatt tacatttgag tgagtggcga actggtgagt aacacgtggg aaacctgccc 60
agaagcgggg gataacacct ggaaacagat gctaataccg cataacaact tggaccgcat 120
ggtccgagtt tgaaagatgg cttcggctat cacttttgga tggtcccgcg gcgtattagc 180
tagatggtgg ggtaacggct caccatggca atgatacgta gccgacctga gagggtaatc 240
ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 300
ccacaatgga cgaaagtctg atggagcaac gccgcgtgag tgaagaaggg tttcggctcg 360
taaaactctg ttgttaaaga agaacatatc tgagagtaac tgttcaggta ttgacggtat 420
ttaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag 480
cgttgtccgg atttattggg cgtaaagcga gcgcaggcgg ttttttaagt ctgatgtgaa 540
agccttcggc tcaaccgaag aagtgcatcg gaaactggga aacttgagtg cagaagagga 600
cagtggaact ccatgtgtag cggtgaaatg cgtagatata tggaagaaca ccagtggcga 660
aggcggctgt ctggtctgta actgacgctg aggctcgaaa gtatgggtag caaacaggat 720
tagataccct ggtagtccat accgtaaacg atgaatgcta agtgttggag ggtttccgcc 780
cttcagtgct gcagctaacg cattaagcat tccgcctggg gagtacggcc gcaaggctga 840
aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc 900
tacgcgaaga accttaccag gtcttgacat actatgcaaa tctaagagat tagacgttcc 960
cttcggggac atggatacag gtggtgcatg gttgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg 1020
ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta ttatcagttg ccagcattaa gttgggcact 1080
ctggtgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc 1140
ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggatggta caacgagttg cgaactcgcg 1200
agagtaagct aatctcttaa agccattctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac 1260
atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcattccg cggtgaatac gttcccgggc 1320
cttgt 1325
<210> 7
<211> 1342
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Bifidobacterium longum LC67
<400> 7
ggctttgctt ggtggtgaga gtggcgaacg ggtgagtaat gcgtgaccga cctgccccat 60
acaccggaat agctcctgga aacgggtggt aatgccggat gctccagttg atcgcatggt 120
cttctgggaa agctttcgcg gtatgggatg gggtcgcgtc ctatcagctt gacggcgggg 180
taacggccca ccgtggcttc gacgggtagc cggcctgaga gggcgaccgg ccacattggg 240
actgagatac ggcccagact cctacgggag gcagcagtgg ggaatattgc acaatgggcg 300
caagcctgat gcagcgacgc cgcgtgaggg atggaggcct tcgggttgta aacctctttt 360
atcggggagc aagcgagagt gagtttaccc gttgaataag caccggctaa ctacgtgcca 420
gcagccgcgg taatacgtag ggtgcaagcg ttatcccgga attattgggc gtaaagggct 480
cgtaggcggt tcgtcgcgtc cggtgtgaaa gtccatcgct taacggtgga tccgcgccgg 540
gtacgggcgg gcttgagtgc ggtaggggag actggaattc ccggtgtaac ggtggaatgt 600
gtagatatcg ggaagaacac caatggcgaa ggcaggtctc tgggccgtta ctgacgctga 660
ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt agataccctg gtagtccacg ccgtaaacgg 720
tggatgctgg atgtggggcc cgttccacgg gttccgtgtc ggagctaacg cgttaagcat 780
cccgcctggg ggagtacggc cgcaaggcta aaactcaaag aaattgacgg gggcccgcac 840
aagcggcgga gcatgcggat taattcgatg caacgcgaag aaccttacct gggcttgaca 900
tgttcccgac ggtcgtagag atacggcttc ccttcggggc gggttcacag gtggtgcatg 960
gtcgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctcg 1020
ccccgtgttg ccagcggatt atgccgggaa ctcacggggg accgccgggg ttaactcgga 1080
ggaaggtggg gatgacgtca gatcatcatg ccccttacgt ccagggcttc acgcatgcta 1140
caatggccgg tacaacggga tgcgacgcgg cgacgcggag cggatccctg aaaaccggtc 1200
tcagttcgga tcgcagtctg caactcgact gcgtgaaggc ggagtcgcta gtaatcgcga 1260
atcagcaacg tcgcggtgaa tgcgttcccg ggccttgtac acaccgcccg tcaagtcatg 1320
aaagtgggca gcacccgaag cg 1342
<210> 8
<211> 1343
<212> ДНК
<213> Неизвестно
<220>
<223> 16S rDNA Bifidobacterium longum LC68
<400> 8
cggcttcggg tgctgcccac tttcatgact tgacgggcgg tgtgtacaag gcccgggaac 60
gcattcaccg cgacgttgct gattcgcgat tactagcgac tccgccttca cgcagtcgag 120
ttgcagactg cgatccgaac tgagaccggt tttcagggat ccgctccgcg tcgccgcgtc 180
gcatcccgtt gtaccggcca ttgtagcatg cgtgaagccc tggacgtaag gggcatgatg 240
atctgacgtc atccccacct tcctccgagt taaccccggc ggtcccccgt gagttcccgg 300
cataatccgc tggcaacacg gggcgagggt tgcgctcgtt gcgggactta acccaacatc 360
tcacgacacg agctgacgac gaccatgcac cacctgtgaa cccgccccga agggaagccg 420
catctctacg accgtcggga acatgtcaag cccaggtaag gttcttcgcg ttgcatcgaa 480
ttaatccgca tgctccgccg cttgtgcggg cccccgtcaa tttctttgag ttttagcctt 540
gcggccgtac tccccaggcg ggatgcttaa cgcgttagct ccgacacgga acccgtggaa 600
cgggccccac atccagcatc caccgtttac ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt 660
tcgctcccca cgctttcgct cctcagcgtc agtaacggcc cagagacctg ccttcgccat 720
tggtgttctt cccgatatct acacattcca ccgttacacc gggaattcca gtctccccta 780
ccgcactcaa gcccgcccgt acccggcgcg gatccaccgt taagcgatgg actttcacac 840
cggacgcgac gaaccgccta cgagcccttt acgcccaata attccggata acgcttgcac 900
cctacgtatt accgcggctg ctggcacgta gttagccggt gcttattcaa cgggtaaact 960
cactctcgct tgctccccga taaaagaggt ttacaacccg aaggcctcca tccctcacgc 1020
ggcgtcgctg catcaggctt gcgcccattg tgcaatattc cccactgctg cctcccgtag 1080
gagtctgggc cgtatctcag tcccaatgtg gccggtcgcc ctctcaggcc ggctacccgt 1140
cgaagccacg gtgggccgtt accccgccgt caagctgata ggacgcgacc ccatcccata 1200
ccgcgaaagc tttcccagaa gaccatgcga tcaactggag catccggcat taccacccgt 1260
ttccaggagc tattccggtg tatggggcag gtcggtcacg cattactcac ccgttcgcca 1320
ctctcaccac caagcaaagt ctc 1343
<---
Claims (13)
1. Штамм Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р для использования в разработке функциональной пищевой и фармацевтической композиции, обладающий антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей бета-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов, и активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта.
2. Культура штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р для использования в разработке функциональной пищевой и фармацевтической композиции, обладающего антиоксидантной активностью, активностью, подавляющей бета-глюкуронидазу, активностью, подавляющей продуцирование липополисахаридов, и активностью, индуцирующей экспрессию белка плотного контакта.
3. Штамм Bifidobacterium longum LC67 по п. 1, где штамм Bifidobacterium longum LC67 содержит нуклеотидную последовательность 16S rDNA, представленную под SEQ ID NO: 7.
4. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом, содержащая фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р или культуры штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р.
5. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного алкоголем, содержащая фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р.
6. Способ предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р или культуры штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р, субъекту.
7. Способ предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного алкоголем, включающий введение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р.
8. Применение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа КССМ 11802Р или культуры штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р, для изготовления лекарственного препарата, предназначенного для предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного окислительным стрессом.
9. Применение фармацевтической композиции по п. 8, где композиция дополнительно содержит фармацевтически эффективное количество одной или более молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из штамма Lactobacillus brevis СН23 с номером доступа KCCM 11762Р, штамма Bifidobacterium longum СН57 с номером доступа KCCM 11764Р, штамма Lactobacillus plantarum LC5 с номером доступа KCCM 11800Р.
10. Применение фармацевтической композиции по п. 8, где заболевание печени выбрано из группы, состоящей из неалкогольного гепатита, неалкогольного ожирения печени и неалкогольного цирроза печени.
11. Применение фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически эффективное количество штамма Bifidobacterium longum LC67 с номером доступа KCCM 11802Р, для изготовления лекарственного препарата, предназначенного для предупреждения или лечения заболевания печени, вызванного алкоголем.
12. Применение фармацевтической композиции по п. 11, где композиция дополнительно содержит фармацевтически эффективное количество одной или более молочнокислых бактерий, выбранных из группы, состоящей из штамма Lactobacillus brevis СН23 с номером доступа KCCM 11762Р, штамма Bifidobacterium longum CH57 с номером доступа KCCM 11764Р и штамма Lactobacillus plantarum LC5 с номером доступа KCCM 11800Р.
13. Применение фармацевтической композиции по п. 11, где заболевание печени выбрано из группы, состоящей из алкогольного гепатита, алкогольного ожирения печени и алкогольного цирроза печени.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20150130124 | 2015-09-15 | ||
KR10-2015-0130124 | 2015-09-15 | ||
KR10-2016-0005018 | 2016-01-15 | ||
KR1020160005018A KR20170032816A (ko) | 2015-09-15 | 2016-01-15 | 다양한 기능성을 가진 신규 유산균 및 이의 용도 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018113245A Division RU2734031C2 (ru) | 2015-09-15 | 2016-09-07 | Новая лактобактерия, характеризующаяся различными функциями, и ее применение |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2020132171A RU2020132171A (ru) | 2020-10-19 |
RU2020132171A3 RU2020132171A3 (ru) | 2021-03-24 |
RU2766715C2 true RU2766715C2 (ru) | 2022-03-15 |
Family
ID=58496099
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018113245A RU2734031C2 (ru) | 2015-09-15 | 2016-09-07 | Новая лактобактерия, характеризующаяся различными функциями, и ее применение |
RU2020132171A RU2766715C2 (ru) | 2015-09-15 | 2020-09-30 | Новый штамм бифидобактерии, характеризующийся различными функциями, и его применение |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018113245A RU2734031C2 (ru) | 2015-09-15 | 2016-09-07 | Новая лактобактерия, характеризующаяся различными функциями, и ее применение |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10471111B2 (ru) |
EP (2) | EP3351616A4 (ru) |
JP (2) | JP6626569B2 (ru) |
KR (5) | KR20170032815A (ru) |
CN (3) | CN108603162B (ru) |
AU (3) | AU2016324846B2 (ru) |
BR (1) | BR112018005195A2 (ru) |
CA (3) | CA2998877C (ru) |
HK (1) | HK1254665A1 (ru) |
MX (2) | MX2018003230A (ru) |
NZ (1) | NZ741028A (ru) |
PH (1) | PH12018500566A1 (ru) |
RU (2) | RU2734031C2 (ru) |
SG (4) | SG11201802145SA (ru) |
Families Citing this family (67)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20170032815A (ko) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | 경희대학교 산학협력단 | 신규 유산균 및 퇴행성 뇌질환 또는 인지기능의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
AU2018216532B2 (en) * | 2017-01-31 | 2021-06-03 | Navipharm Co, Ltd | Novel lactic acid bacteria and use thereof |
EP3690026A4 (en) | 2017-09-28 | 2021-06-23 | Kobiolabs, Inc. | COMPOSITION FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF ALCOHOLIC LIVER DISEASE USING A MODIFICATION IN THE SHORT CHAIN FATTY ACID-PRODUCING INTESTINAL COMMUNITY |
AU2018341753B2 (en) * | 2017-09-29 | 2021-11-18 | Navipharm Co,Ltd | Novel lactic acid bacteria and use thereof |
KR101993270B1 (ko) * | 2017-10-31 | 2019-06-26 | (주)아모레퍼시픽 | 녹차 유래 유산균을 포함하는 미세먼지에 의한 피부 세포 손상 케어용 조성물 |
JP6964191B2 (ja) * | 2017-11-02 | 2021-11-10 | ユニバーシティ−インダストリー コーオペレイション グループ オブ キョンヒ ユニバーシティUniversity−Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University | 新規な乳酸菌およびその使用 |
KR101972236B1 (ko) * | 2017-11-02 | 2019-04-24 | 서원대학교산학협력단 | 김치에서 분리한 락토바실러스 플란타룸 및 이의 용도 |
KR101991276B1 (ko) * | 2018-01-19 | 2019-06-21 | 전남대학교산학협력단 | 신규 균주 페니실리움 아쿠아티쿰 및 이를 이용한 퇴행성 뇌질환 치료제 |
CN108410763B (zh) * | 2018-03-14 | 2020-10-09 | 绍兴同创生物科技有限公司 | 长双歧杆菌tc01及其应用和应用其的产品 |
WO2019227414A1 (zh) * | 2018-05-31 | 2019-12-05 | 深圳华大生命科学研究院 | 一种组合物及其应用 |
KR101951919B1 (ko) * | 2018-12-07 | 2019-02-25 | (주)에이투젠 | 도파민 분비 증진 기능이 있는 신규한 락토바실러스 루테리 atg-f4 균주, 이를 함유하는 정신질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
KR20200076001A (ko) * | 2018-12-18 | 2020-06-29 | 동화약품주식회사 | 체중 및 체지방 감소 효능을 갖는 신규 유산균 및 이의 용도 |
KR102223635B1 (ko) * | 2019-04-26 | 2021-03-05 | 한국식품연구원 | 무청 추출물을 포함하는 장내 염증 또는 장누수증후군 개선, 예방 또는 치료용 조성물 |
WO2020130296A1 (ko) * | 2018-12-18 | 2020-06-25 | 한국식품연구원 | 무청 추출물을 포함하는 장내 균총 개선용 조성물, 또는 장내 염증, 장누수증후군, 비만 또는 대사성 장질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 |
CN109593676B (zh) * | 2018-12-21 | 2023-04-07 | 江苏大学 | 一种用于酸菜发酵液中微生物分离的培养基及其制备方法 |
KR102047459B1 (ko) * | 2018-12-24 | 2019-11-21 | 한국식품연구원 | 락토바실러스 플랜타룸 WiKim0088 |
KR102651296B1 (ko) * | 2018-12-28 | 2024-03-26 | 씨제이제일제당 (주) | 헬리코박터 파일로리 감염에 의해 발생한 위암의 예방 또는 개선용 김치를 포함하는 식품 조성물 |
CN109652334A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-04-19 | 谭瑛 | 一种微生物复合菌剂及其制备方法和应用 |
KR102162143B1 (ko) * | 2019-01-15 | 2020-10-07 | 한국식품연구원 | 페디오코쿠스 이노피나투스 wikim27을 포함하는 퇴행성 뇌질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
CN109758484B (zh) * | 2019-02-18 | 2020-12-25 | 上海交通大学医学院 | 微生物在治疗和/或预防免疫介导的肠道疾病中的应用 |
KR102148707B1 (ko) * | 2019-02-22 | 2020-08-31 | 한국식품연구원 | 우울증 및 불안장애의 예방, 개선 또는 치료 효능을 갖는 김치 유산균 락토바실러스 사케아이 |
CN109652349B (zh) * | 2019-02-25 | 2021-03-02 | 江南大学 | 一株能够缓解特应性皮炎的长双歧杆菌及其应用 |
KR102032982B1 (ko) | 2019-02-28 | 2019-10-16 | 한국식품연구원 | 류코노스톡 시트래움 WiKim0104를 포함하는 비만 또는 지방간 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
KR102072059B1 (ko) | 2019-02-28 | 2020-01-31 | 한국식품연구원 | 와이셀라 헬레니카 WiKim0103를 포함하는 비만 또는 지방간 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
CN110241046B (zh) * | 2019-06-26 | 2021-05-18 | 河北一然生物科技有限公司 | 一种能够缓解酒精性肝损伤的瑞士乳杆菌及应用 |
JP6739602B1 (ja) * | 2019-07-24 | 2020-08-12 | 雪印メグミルク株式会社 | 記憶・学習能維持および/または向上用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料 |
JP7503899B2 (ja) * | 2019-07-24 | 2024-06-21 | 雪印メグミルク株式会社 | 記憶・学習能維持および/または向上用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料 |
JP6739603B1 (ja) * | 2019-07-24 | 2020-08-12 | 雪印メグミルク株式会社 | 記憶・学習能維持および/または向上用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料 |
KR102229090B1 (ko) * | 2019-07-26 | 2021-03-19 | (주)성운파마코피아 | 락토바실러스 가세리 swpm102를 포함하는 허혈성 뇌질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
JP6664637B1 (ja) * | 2019-08-08 | 2020-03-13 | 株式会社 レオロジー機能食品研究所 | ストレス低下用及び/又は体重回復用経口組成物、並びにプラズマローゲン含有組成物の製造方法 |
KR102224072B1 (ko) * | 2019-08-19 | 2021-03-10 | 주식회사 빙그레 | 면역 조절능력과 혈중콜레스테롤 감소 능력이 모두 뛰어난 비피도박테리엄 롱검 아종 균주 및 이의 용도 |
US20220369684A1 (en) * | 2019-10-08 | 2022-11-24 | Korea Food Research Institute | Composition for improving respiratory diseases using lactobacillus plantarum strain |
KR102140405B1 (ko) * | 2019-10-25 | 2020-08-03 | 재단법인 농축산용미생물산업육성지원센터 | 신균주 비피도박테리움 롱검 cacc 517 및 이를 유효성분으로 함유하는 반려동물용 사료 조성물 |
WO2021162419A1 (ko) * | 2020-02-11 | 2021-08-19 | 주식회사 리스큐어바이오사이언시스 | 미성숙 수지상 세포의 성숙화 유도를 이용한 암의 예방 또는 치료용 조성물 |
KR102404011B1 (ko) * | 2020-02-24 | 2022-05-31 | (주)지에이치바이오 | 신규 류코노스톡 메센테로이데스 균주 및 이의 용도 |
JP2021020885A (ja) * | 2020-03-09 | 2021-02-18 | 雪印メグミルク株式会社 | 記憶・学習能維持および/または向上用組成物及び組成物を含む食品、医薬品、飼料 |
KR102136335B1 (ko) | 2020-03-24 | 2020-07-22 | (주)메디톡스 | 간기능 개선 또는 지방축적 억제 미생물 및 그의 용도 |
EP3957316B1 (en) * | 2020-06-16 | 2024-02-07 | MD Healthcare Inc. | Composition for preventing or treating neurological or mental disorders comprising vesicles derived from lactobacillus paracasei |
EP3932415A1 (en) * | 2020-07-01 | 2022-01-05 | Fundació Institut d'Investigació Biomèdica de Girona Dr. Josep Trueta (IDIBGI) | Gut microbiota composition and uses thereof |
US20230338439A1 (en) * | 2020-07-14 | 2023-10-26 | Liscure Biosciences Co., Ltd | Composition for treating brain disease comprising pediococcus inopinatus or extracellular vesicles isolated therefrom as active ingredient |
CN111925961B (zh) * | 2020-08-13 | 2022-07-22 | 吉林农业大学 | 一株植物乳杆菌Lp2及其应用 |
WO2022039514A1 (ko) * | 2020-08-20 | 2022-02-24 | 주식회사 리스큐어바이오사이언시스 | 락토바실러스 사케이 또는 이로부터 유래된 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 뇌질환의 치료용 조성물 |
TWI770595B (zh) * | 2020-08-27 | 2022-07-11 | 臺灣菸酒股份有限公司 | 乳酸菌用於治療或預防肝臟損傷相關疾病之用途 |
KR20220040410A (ko) * | 2020-09-23 | 2022-03-30 | 피비엘바이오랩 주식회사 | 신규 유산균 및 이의 용도 |
WO2022092919A1 (ko) * | 2020-10-29 | 2022-05-05 | 엠테라파마 주식회사 | 신규한 비피도박테리움 롱검 z1 균주 및 이의 용도 |
CN112401094A (zh) * | 2020-11-03 | 2021-02-26 | 四川省农业科学院农产品加工研究所 | 一种乳酸菌发酵猕猴桃果汁饮品及其制备方法 |
KR102397589B1 (ko) * | 2020-11-11 | 2022-05-12 | 고려대학교 산학협력단 | 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 msk408 균주 및 이를 포함하는 뇌전증의 예방 또는 치료용 조성물 |
KR102480136B1 (ko) * | 2020-12-14 | 2022-12-23 | 서울대학교산학협력단 | 인지능력 개선 기능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 |
KR102480146B1 (ko) | 2020-12-14 | 2022-12-23 | 서울대학교산학협력단 | 인지능력 개선 기능을 가지는 락토바실러스 아시도필루스 |
KR102480148B1 (ko) * | 2020-12-14 | 2022-12-23 | 서울대학교산학협력단 | 인지능력 개선 기능을 가지는 스트렙토코커스 써모필러스 |
KR102480131B1 (ko) * | 2020-12-14 | 2022-12-23 | 서울대학교산학협력단 | 인지능력 개선 기능을 가지는 락토바실러스 람노수스 |
CN112915108B (zh) * | 2021-01-21 | 2022-08-02 | 吉林省农业科学院 | 凝结芽孢杆菌ja845在制备预防和/或治疗阿尔茨海默病药物中的应用 |
CN113018320A (zh) * | 2021-02-04 | 2021-06-25 | 四川农业大学 | 约氏乳杆菌bs15在制备预防和/或治疗慢性氟中毒导致的肠道损伤药物中的应用 |
WO2022169337A1 (ko) * | 2021-02-08 | 2022-08-11 | 주식회사 리스큐어바이오사이언시스 | 류코노스톡 시트래움 균주를 유효성분으로 포함하는 장 손상의 예방 또는 치료용 약학 조성물 |
WO2022171654A1 (en) * | 2021-02-09 | 2022-08-18 | Lactobio A/S | Method for treating atopic disorders |
KR102310898B1 (ko) * | 2021-02-16 | 2021-10-08 | 주식회사 메디오젠 | 락토바실러스 애시도필러스 배양 건조물을 포함하는 항산화용 조성물 |
CN113122473B (zh) * | 2021-04-10 | 2022-08-02 | 江南大学 | 增强记忆能力的乳酸杆菌bb1及其应用 |
CN114098084A (zh) * | 2021-04-13 | 2022-03-01 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种缓解长期低剂量辐射暴露所致认知损伤的益生菌组合物及其应用 |
KR102548802B1 (ko) * | 2021-04-30 | 2023-06-29 | 주식회사 레인보우바이오테크 | 김치유래 유산균을 포함하는 프로바이오틱스 조성물 및 이의 용도 |
CN113288920B (zh) * | 2021-06-10 | 2023-03-28 | 吉林省农业科学院 | 大麻二酚单体与植物乳杆菌dp189联合在制备预防和/或治疗帕金森病药物中的应用 |
KR102633113B1 (ko) * | 2021-12-28 | 2024-02-05 | 롯데칠성음료주식회사 | 기능성 발효음료에 적합한 락토바실러스 브레비스 lrcc5229 균주 및 이의 용도 |
CN115181695B (zh) * | 2022-06-27 | 2023-08-29 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种植物乳杆菌5b4m2及其应用 |
CN115181698B (zh) * | 2022-06-28 | 2023-09-08 | 广东粤港澳大湾区国家纳米科技创新研究院 | 一种益生菌组合物及应用 |
CN115044518B (zh) * | 2022-08-10 | 2022-11-15 | 广东益可维生物技术有限公司 | 一种护肝益生菌及其应用 |
CN115300532B (zh) * | 2022-09-20 | 2023-10-20 | 中加健康工程研究院(合肥)有限公司 | 具改善阿尔兹海默病认知能力的益生菌剂及其制备方法 |
WO2024095199A1 (en) * | 2022-11-02 | 2024-05-10 | Probionova Sa | Bacterial strains to support the mood and cognitive functionality, compositions and uses thereof |
CN115886162A (zh) * | 2022-12-07 | 2023-04-04 | 四川轻化工大学 | 以丢糟为主要原料制备药食两用昆虫饲养土的配方及方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7544356B2 (en) * | 2005-04-19 | 2009-06-09 | Korea Yakult Co., Ltd. | Composition for the improvement of liver function, the reduction of serum ethanol level and antioxidant activity enhancement |
WO2013109635A1 (en) * | 2012-01-16 | 2013-07-25 | Elizabeth Mckenna | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
RU2546251C2 (ru) * | 2009-11-11 | 2015-04-10 | Алиментари Хелс Лимитед | Пробиотический штамм бифидобактерий |
Family Cites Families (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1002898A (en) | 1910-09-23 | 1911-09-12 | Edmund B Calkins | Safety cranking device. |
IT1306716B1 (it) * | 1999-06-21 | 2001-10-02 | Mendes S U R L | Associazione di batteri lattici e suo uso per la prevenzione e/o iltrattamento terapeutico di infezioni e di stati infiammatori. |
DK1485463T3 (da) | 2002-03-21 | 2008-11-10 | Bifodan As | Lactobacillus stamme |
AU2003303894A1 (en) * | 2003-01-30 | 2004-08-30 | The Regents Of The University Of California | Inactivated probiotic bacteria and methods of use thereof |
US20040208863A1 (en) * | 2003-01-30 | 2004-10-21 | James Versalovic | Anti-inflammatory activity from lactic acid bacteria |
JP2007502858A (ja) | 2003-05-22 | 2007-02-15 | シンバイオティクス アクティエボラーグ | ヒト及び動物の胃腸管にコロニーを形成することができ、併せて、腸内生存性、腸内結合性、感染保護性及び繊維発酵性から選ばれる少なくとも2種の利点を有する少なくとも2種の乳酸菌株を含むプロバイオティック組成物 |
KR101094194B1 (ko) | 2005-05-18 | 2011-12-14 | (주)콤비메드 | 아토피성 피부염 치료 및/또는 예방용 유산균 및 이를함유하는 조성물 |
KR100759751B1 (ko) | 2006-05-08 | 2007-10-04 | 주식회사 에코프로 | 하이드로 싸이클론을 이용한 리튬 이차전지 양극 활물질의제조방법 및 그 제조장치 |
KR20080075971A (ko) * | 2007-02-14 | 2008-08-20 | (주)네오팜 | 프로바이오틱스 복합 제제 |
KR100818360B1 (ko) | 2007-03-16 | 2008-04-02 | 건국대학교 산학협력단 | 신규 락토바실러스 플란타룸, 이의 생산을 위한 배지조성물및 이를 포함하는 조성물 |
MY146590A (en) * | 2007-03-28 | 2012-08-30 | Alimentary Health Ltd | Probiotic bifidobacterium strains |
CN101314763B (zh) * | 2007-06-01 | 2011-06-08 | 统一企业(中国)投资有限公司 | 具有抗胃肠道致病菌、抗氧化和降血压作用的短双歧杆菌及其用途 |
WO2008157728A1 (en) | 2007-06-19 | 2008-12-24 | The University Of Chicago | An anti-inflammatory, cytoprotective factor derivable from a probiotic organism |
KR20110008200A (ko) | 2008-04-30 | 2011-01-26 | 네스텍 소시에테아노님 | 커피의 클로로겐산에서 유래한 탈카르복실화 페놀산의 용도, 및 이를 포함하는 생성물 |
KR100996056B1 (ko) | 2008-05-06 | 2010-11-22 | 주식회사한국야쿠르트 | 대장염 발생 예방 효능을 가진 락토바실러스 브레비스에이치와이7401 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품 |
CN102115721B (zh) * | 2008-05-08 | 2012-09-26 | 景岳生物科技股份有限公司 | 具有抗炎活性的乳杆菌分离株及其用途 |
CN101575582B (zh) * | 2008-05-08 | 2011-10-12 | 景岳生物科技股份有限公司 | 具有抗炎活性的乳杆菌分离株及其用途 |
CN105920216A (zh) * | 2008-05-09 | 2016-09-07 | 西奈山医学院 | 用于预防和治疗神经退行性疾病的方法 |
KR101114498B1 (ko) | 2008-07-21 | 2012-02-24 | 신현길 | 혈중 콜레스테롤 저하와 항비만 활성을 동시에 갖는 락토바실러스 존소니 hfi 108 균주 |
EP2210504A1 (en) * | 2009-01-27 | 2010-07-28 | Nestec S.A. | Composition comprising chicoric acid and/or derivatives thereof |
EP2210505A1 (en) * | 2009-01-27 | 2010-07-28 | Nestec S.A. | Composition comprising caftaric acid and/or derivatives thereof |
JP2012136436A (ja) * | 2009-03-31 | 2012-07-19 | Taiyo Corp | ポリフェノール成分を利用した乳酸菌発酵物及びその製造方法 |
ES2559008T3 (es) * | 2009-05-11 | 2016-02-10 | Nestec S.A. | Bifidobacterium longum NCC2705 no replicante y trastornos inmunitarios |
US8658236B2 (en) | 2009-08-21 | 2014-02-25 | Deuteria Beverages, Llc | Alcoholic compositions having a lowered risk of acetaldehydemia |
KR101087972B1 (ko) | 2009-11-24 | 2011-12-01 | 일동제약주식회사 | 치매, 치매관련 질환의 예방/치료 및 인지기능장애 개선에 효과가 있는 유산균 발효 산물, 이의 제조방법 및 용도 |
KR101292139B1 (ko) | 2011-06-22 | 2013-08-09 | 강원대학교산학협력단 | 유산균과 누룩을 사용한 발효 선식 및 그 제조방법 |
KR101424547B1 (ko) | 2011-06-29 | 2014-08-01 | 한국 한의학 연구원 | 뇌 신경 세포 보호 활성을 갖는 십전대보탕의 유산균 발효물 및 이의 용도 |
US9165124B1 (en) | 2012-02-01 | 2015-10-20 | Convertro, Inc. | Systems and methods for identifying a returning web client |
KR101371648B1 (ko) | 2012-02-10 | 2014-03-07 | 매일유업주식회사 | 알코올 분해능이 우수한 락토바실러스 브레비스 및 그를 함유하는 조성물 |
CN104427989B (zh) | 2012-06-22 | 2019-10-15 | 雀巢产品有限公司 | 抗神经变性的益生菌和多酚 |
KR101401530B1 (ko) | 2012-07-06 | 2014-06-11 | (주)케비젠 | 공액리놀레산을 생산하는 비피도박테리움 롱검 균주 및 그 용도 |
KR101476236B1 (ko) | 2012-08-16 | 2014-12-24 | 경희대학교 산학협력단 | 노화 및 치매의 예방 및/또는 치료 활성을 갖는 유산균 |
KR101470347B1 (ko) | 2012-12-31 | 2014-12-10 | 재단법인 전남생물산업진흥원 | 황금엑스 발효물을 함유한 간손상 보호용 조성물 |
EP2958575B1 (en) * | 2013-02-22 | 2019-04-03 | The Regents of The University of California | Composition comprising lactobaccilus johnsonii 456 and its use in treating or preventing diseases |
KR101406168B1 (ko) | 2013-05-03 | 2014-06-13 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 락토바실러스 플란타룸 및 이를 포함하는 조성물 |
KR101594219B1 (ko) | 2013-10-24 | 2016-02-16 | (주)옴니허브 | 발효 식물추출물을 유효성분으로 함유하는 기억력 개선 및 증진용 조성물 |
WO2015122717A1 (ko) | 2014-02-17 | 2015-08-20 | 경희대학교 산학협력단 | 비만 억제 효능을 갖는 신규 유산균 및 이의 용도 |
US9399048B2 (en) | 2014-03-05 | 2016-07-26 | Asian Probiotics And Prebiotics Ltd | Lactic acid bacteria and its applications in immunomodulation and anti-inflammation |
KR20150142527A (ko) | 2014-06-12 | 2015-12-22 | 부산대학교 산학협력단 | 유산균이 코팅된 견과류 |
MA41020A (fr) * | 2014-11-25 | 2017-10-03 | Evelo Biosciences Inc | Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome |
KR101764887B1 (ko) * | 2015-02-17 | 2017-08-04 | 서울대학교산학협력단 | 발효 팥 요거트 및 이의 제조 방법 |
WO2017047968A1 (ko) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | 경희대학교 산학협력단 | 다양한 기능성을 가진 신규 유산균 및 이의 용도 |
KR20170032815A (ko) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | 경희대학교 산학협력단 | 신규 유산균 및 퇴행성 뇌질환 또는 인지기능의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
WO2017047962A1 (ko) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | 경희대학교 산학협력단 | 신규 유산균 및 퇴행성 뇌질환 또는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |
-
2016
- 2016-01-06 KR KR1020160001312A patent/KR20170032815A/ko active Search and Examination
- 2016-01-15 KR KR1020160005018A patent/KR20170032816A/ko active Search and Examination
- 2016-09-06 NZ NZ741028A patent/NZ741028A/en unknown
- 2016-09-06 AU AU2016324846A patent/AU2016324846B2/en active Active
- 2016-09-06 CN CN201680066260.6A patent/CN108603162B/zh active Active
- 2016-09-06 CA CA2998877A patent/CA2998877C/en active Active
- 2016-09-06 KR KR1020160114319A patent/KR101851196B1/ko active IP Right Grant
- 2016-09-06 SG SG11201802145SA patent/SG11201802145SA/en unknown
- 2016-09-06 JP JP2018513764A patent/JP6626569B2/ja active Active
- 2016-09-06 EP EP16846783.5A patent/EP3351616A4/en active Pending
- 2016-09-06 US US15/759,928 patent/US10471111B2/en active Active
- 2016-09-07 SG SG11201802144TA patent/SG11201802144TA/en unknown
- 2016-09-07 BR BR112018005195-0A patent/BR112018005195A2/pt active Search and Examination
- 2016-09-07 JP JP2018513778A patent/JP6608047B2/ja active Active
- 2016-09-07 CN CN202210200178.5A patent/CN114410548B/zh active Active
- 2016-09-07 MX MX2018003230A patent/MX2018003230A/es unknown
- 2016-09-07 US US15/759,915 patent/US11202811B2/en active Active
- 2016-09-07 CA CA3161585A patent/CA3161585A1/en active Pending
- 2016-09-07 KR KR1020160114842A patent/KR101889281B1/ko active Application Filing
- 2016-09-07 SG SG10201913054TA patent/SG10201913054TA/en unknown
- 2016-09-07 CN CN201680066778.XA patent/CN108473944B/zh active Active
- 2016-09-07 AU AU2016322617A patent/AU2016322617B2/en active Active
- 2016-09-07 SG SG10202109688X patent/SG10202109688XA/en unknown
- 2016-09-07 RU RU2018113245A patent/RU2734031C2/ru active
- 2016-09-07 CA CA2998841A patent/CA2998841C/en active Active
- 2016-09-07 EP EP16846789.2A patent/EP3351617A4/en active Pending
-
2018
- 2018-03-15 MX MX2022005323A patent/MX2022005323A/es unknown
- 2018-03-15 PH PH12018500566A patent/PH12018500566A1/en unknown
- 2018-08-08 KR KR1020180092699A patent/KR101937365B1/ko active IP Right Grant
- 2018-10-24 HK HK18113645.2A patent/HK1254665A1/zh unknown
-
2020
- 2020-03-26 AU AU2020202144A patent/AU2020202144B2/en active Active
- 2020-09-30 RU RU2020132171A patent/RU2766715C2/ru active
-
2021
- 2021-11-17 US US17/455,328 patent/US11771725B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7544356B2 (en) * | 2005-04-19 | 2009-06-09 | Korea Yakult Co., Ltd. | Composition for the improvement of liver function, the reduction of serum ethanol level and antioxidant activity enhancement |
RU2546251C2 (ru) * | 2009-11-11 | 2015-04-10 | Алиментари Хелс Лимитед | Пробиотический штамм бифидобактерий |
WO2013109635A1 (en) * | 2012-01-16 | 2013-07-25 | Elizabeth Mckenna | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
HAN S.Y. ET AL. Hepatoprotective effect of lactic acid bacteria, inhibitors of beta-glucuronidase production against intestinal microflora. Arch Pharm Res. 2005 Mar; 28(3):325-9. doi: 10.1007/BF02977800. PMID: 15832821. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2766715C2 (ru) | Новый штамм бифидобактерии, характеризующийся различными функциями, и его применение | |
KR102265538B1 (ko) | 락토바실러스 플란타럼 kbl396 균주 및 그 용도 | |
KR101937364B1 (ko) | 면역조절 작용을 가는 사람 소화관 유래 신규 유산균 및 이의 용도 | |
KR102146429B1 (ko) | 비피도박테리움 아니말리스 아종 아니말리스 균주 | |
KR101862051B1 (ko) | 면역조절 작용을 가는 사람 소화관 유래 신규 유산균 및 이의 용도 | |
KR101679045B1 (ko) | 개체의 지방 함량을 감소시키는 미생물 및 그의 용도 | |
JP6901092B2 (ja) | 多様な機能性を有する新規乳酸菌およびその用途 | |
KR102668292B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 퍼멘텀 atg-v5 균주 또는 이를 포함하는 면역증강용 조성물 | |
KR102578408B1 (ko) | 지방간 개선 효능을 갖는 신규 락토바실러스 사케이 균주 및 이의 용도 | |
KR102578389B1 (ko) | 지방간 개선 효능을 갖는 신규 락토바실러스 루테리 균주 및 이의 용도 | |
KR102244008B1 (ko) | 글루텐 분해능을 가지는 락토바실러스 파라카제이 glu70 균주의 사균체를 유효성분으로 함유하는 글리아딘으로 야기된 염증성 장 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물 |