RU2716991C2 - Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона - Google Patents

Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона Download PDF

Info

Publication number
RU2716991C2
RU2716991C2 RU2017115477A RU2017115477A RU2716991C2 RU 2716991 C2 RU2716991 C2 RU 2716991C2 RU 2017115477 A RU2017115477 A RU 2017115477A RU 2017115477 A RU2017115477 A RU 2017115477A RU 2716991 C2 RU2716991 C2 RU 2716991C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
nucleotides
aadc
accordance
aav
sequence
Prior art date
Application number
RU2017115477A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017115477A3 (ru
RU2017115477A (ru
Inventor
Роберт КОТИН
Эдриан Филип КЕЛЛС
Бернард РАВИНА
Original Assignee
Вояджер Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Вояджер Терапьютикс, Инк. filed Critical Вояджер Терапьютикс, Инк.
Publication of RU2017115477A publication Critical patent/RU2017115477A/ru
Publication of RU2017115477A3 publication Critical patent/RU2017115477A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2716991C2 publication Critical patent/RU2716991C2/ru

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/51Lyases (4)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86Viral vectors
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88Lyases (4.)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y401/00Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01028Aromatic-L-amino-acid decarboxylase (4.1.1.28), i.e. tryptophane-decarboxylase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011Details
    • C12N2750/14011Parvoviridae
    • C12N2750/14111Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011Details
    • C12N2750/14011Parvoviridae
    • C12N2750/14111Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/42Vector systems having a special element relevant for transcription being an intron or intervening sequence for splicing and/or stability of RNA
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной биологии. Предложен векторный геном на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC). Изобретение может быть использовано для лечения болезни Паркинсона. 4 н. и 20 з.п. ф-лы, 10 табл., 9 пр.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на выдачу патента США № 62/075298, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 5 ноября 2014 года, предварительной заявке на патент США № 62/155692, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 1 мая 2015 года, предварительной заявке на патент США № 62/199578, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 31 июля 2015 года, и предварительной заявке на патент США № 62/243537, озаглавленной «Полинуклеотиды AADC для лечения болезни Паркинсона», поданной 19 октября 2015 года; причем содержание каждой из них включено в данный документ во всей их полноте посредством ссылки.
ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[0002] Данная заявка подана вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Файл с перечнем последовательностей с названием 1010PCTSEQLST.txt был создан 5 ноября 2015 года и его размер составляет 178144 байта. Информация из перечня последовательностей в электронном формате включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0003] Настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут кодироваться рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или быть закодированными в них.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0004] Декарбоксилаза ароматических L-аминокислот (AADC) представляет собой гомодимерный пиридоксальфосфат-зависимый фермент, ответственный за синтез дофамина и серотонина. Кодируемый белок катализирует декарбоксилирование L-3,4-дигидроксифенилаланина (L-DOPA или леводопы) в дофамин; L-5-гидрокситриптофана в серотонин; и L-триптофана в триптамин. Дефекты в этом гене являются причиной дефицита декарбоксилазы ароматических L-аминокислот (AADCD), который является врожденным нарушением метаболизма нейромедиаторов, которое приводит к совместному дефициту серотонина и катехоламинов, что в результате приводит к серьезным нарушениям двигательных и вегетативных функций.
[0005] Болезнь Паркинсона (PD) представляет собой прогрессирующее нейродегенеративное заболевание центральной нервной системы (ЦНС), вызывающее сенсорные и двигательные симптомы. Дофаминовое замещение (т. е. леводопа) является стандартной фармакотерапией для лечения нарушения двигательных функций при БП. Однако, польза от дофаминовой терапии с течением времени становится менее заметной отчасти в связи с прогрессирующей гибелью вырабатывающих дофамин клеток и соответствующей утратой AADC-активности. Кроме того, системное введение высоких доз дофамина осложняется побочными эффектами, такими как флуктуации в двигательной активности, дискинезии и галлюцинации, возникающие в результате дофаминергической стимуляции мезолимбической системы. Одной стратегией восстановления дофаминергической функции и сведения к минимуму побочных эффектов является применение генной терапии для доставки AADC непосредственно в целевой участок ЦНС.
[0006] Аденоассоциированный вирус (AAV) проявил себя как перспективный вектор для генной терапии в связи с его длительной экспрессией генов, неспособностью к автономной репликации без вируса-помощника, способностью к трансфекции делящихся и неделящихся клеток, а также отсутствием патогенности, в отличие от инфекций дикого типа (см., например, Hadaczek et al. Mol. Ther. 18(8), 1458-1461, Aug. 2010). AAV является зависимым от помощника ДНК-парвовирусом, который принадлежит к роду Dependovirus.
[0007] Настоящее изобретение относится к таким усовершенствованным конструкциям нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, для применения с помощью полученных из AAV векторов, содержащих последовательность гена дофа-декарбоксилазы («DDC»), которая кодирует полноразмерный белок AADC, для генной терапии при лечении болезни Паркинсона.
[0008] Описанные в настоящем документе конструкции нуклеиновых кислот содержат по меньшей мере 5'-ITR и 3'-ITR, каждый или оба из которых могут быть полученными из AAV, расположены около последовательности гена DDC, а также дополнительные компоненты, необходимые для экспрессии гена и отбора клонов.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0009] Настоящее изобретение относится к описываемым в настоящем документе композициям, способам, процессам, наборам и устройствам для разработки, получения, производства и/или составления полинуклеотидов AADC.
[00010] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие полинуклеотиды AADC могут быть закодированы плазмидами, или векторами, или рекомбинантными аденоассоциированными вирусами (AAV) или содержаться в них.
[00011] Подробности различных вариантов осуществления настоящего изобретения изложены в описании ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут понятны из описания и формулы изобретения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Композиции согласно настоящему изобретению
[00012] В соответствии с настоящим изобретением предлагаются полинуклеотиды AADC, которые функционируют сами по себе или в комбинации с дополнительной последовательностью(-ями) нуклеиновой кислоты, кодируя белок AADC. В контексте настоящего описания «полинуклеотид AADC» представляет собой любой полимер нуклеиновой кислоты, который кодирует белок AADC и при наличии в векторе, плазмиде или транслируемой конструкции экспрессирует такой белок​AADC в клетке, ткани, органе или организме.
[00013] Полинуклеотиды AADC включают в себя молекулы-предшественники, которые процессируются внутри клетки. Полинуклеотиды AADC или их процессированные формы могут быть закодированы в плазмиде, векторе, геноме или другом векторе экспрессии нуклеиновой кислоты для доставки в клетку.
[00014] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC разработаны в качестве компонентов вирусных геномов AAV и упакованы в вирусных частицах AAV, которые процессируются в клетке с образованием белка AADC дикого типа.
[00015] В контексте настоящего описания белок AADC дикий тип может представлять собой любую или любой из встречающихся в природе изоформ или вариантов, полученных от гена DDC. Было идентифицировано несколько получаемых путем альтернативного сплайсинга вариантов транскриптов, кодирующих различные изоформы AADC. В частности, ген DDC дает семь вариантов транскриптов, которые кодируют шесть различных изоформ. Варианты 1 и 2 транскрипта DDC кодируют изоформу 1 AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC кодируют вариант 2 транскрипта DDC, таким образом кодируя нативную изоформу 1 AADC (эталонная последовательность в NCBI: NP_000781.1). Данная последовательность имеет вид: MNASEFRRRGKEMVDYVANYMEGIEGRQVYPDVEPGYLRPLIPAAAPQEPDTFEDIINDVEKIIMPGVTHWHSPYFFAYFPTASSYPAMLADMLCGAIGCIGFSWAASPACTELETVMMDWLGKMLELPKAFLNEKAGEGGGVIQGSASEATLVALLAARTKVIHRLQAASPELTQAAIMEKLVAYSSDQAHSSVERAGLIGGVKLKAIPSDGNFAMRASALQEALERDKAAGLIPFFMVATLGTTTCCSFDNLLEVGPICNKEDIWLHVDAAYAGSAFICPEFRHLLNGVEFADSFNFNPHKWLLVNFDCSAMWVKKRTDLTGAFRLDPTYLKHSHQDSGLITDYRHWQIPLGRRFRSLKMWFVFRMYGVKGLQAYIRKHVQLSHEFESLVRQDPRFEICVEVILGLVCFRLKGSNKVNEALLQRINSAKKIHLVPCHLRDKFVLRFAICSRTVESAHVQRAWEHIKELAADVLRAERE (SEQ ID NO:1)
[00016] Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению могут быть сконструированы так, чтобы они содержали модульные элементы и/или мотивы последовательности, которые в сборке создают конструкции на основе полинуклеотида AADC.
Конструкции на основе полинуклеотида AADC
[00017] В соответствии с настоящим изобретением представлены полинуклеотиды AADC. Такие полинуклеотиды содержат полимеры нуклеиновых кислот, которые содержат участок связанных нуклеозидов, кодирующих одну или более изоформ или вариантов белка AADC.
[00018] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит кодон-оптимизированный транскрипт, кодирующий белок AADC.
[00019] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит участок последовательности, кодирующий одну или более изоформ или вариантов белка AADC дикого типа. Такие полинуклеотиды также могут содержать участок последовательности, кодирующей любую одну или более из следующих: 5'-ITR, энхансер цитомегаловируса (CMV), промотор CMV, ie1 экзон 1, ie1 интрон 1, hbBglobin интрон 2, hBglobin экзон 3, 5'-UTR, 3'-UTR, сигнал поли(A) hGH и/или 3'-ITR. Такие участки последовательности раскрыты в настоящем описании или могут представлять собой любые, которые известны из уровня техники.
[00020] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность любой из SEQ ID NO. 2-23.
[00021] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая имеет некоторых процент идентичности с любой из SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% идентичности с SEQ ID NO: 2-23. Полинуклеотид AADC может иметь 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% с любой из SEQ ID NO: 2-23. В качестве неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 80% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 85% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 90% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 95% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23. В качестве другого неограничивающего примера полинуклеотид AADC содержит последовательность, которая на 99% идентична любой из SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23.
[00022] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1440 нуклеотидов. Такой полинуклеотид AADC может быть кодон-оптимизированным по всему или части полинуклеотида.
[00023] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1443 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида может присутствовать дополнительный кодон.
[00024] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участок, кодирующий AADC, имеет длину 1449 нуклеотидов. В таком случае на 3'-конце полинуклеотида могут присутствовать дополнительные кодоны.
[00025] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотид AADC содержит любую из SEQ ID NO: 6-9, 17-23, но без 5'- и/или 3'-ITR. Такой полинуклеотид может быть встроен в плазмиду или вектор и использован для экспрессии кодируемого белка AADC.
[00026] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены в клетках насекомых (например, клетках Sf9).
[00027] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC могут быть получены при помощи тройной трансфекции.
[00028] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC может содержать кодон-оптимизированную открытую рамку считывания мРНК AADC, по меньшей мере один 5'-ITR и по меньшей мере один 3'-UTR, где один или более из 5'-ITR могут быть расположены на 5'-конце промоторного участка, а один или более 3'-ITR могут быть расположены на 3'-конце сигнала поли(A). мРНК AADC может содержать промоторный участок, 5'-нетранслируемый участок (UTR), 3'-UTR и сигнал поли(A). Промоторный участок может включать в себя без ограничения энхансерный элемент, промоторный элемент, первый экзонный участок, первый интронный участок, второй интронный участок и второй экзонный участок. В качестве неограничивающего примера энхансерный элемент и промоторный элемент получены из CMV. В качестве другого неограничивающего примера первым экзонным участком является ie1 экзон 1 или его фрагменты, первым интронным участком является ie1 интрон 1 или его фрагменты, вторым интронным участком является hbBglobin интрон 2 или его фрагменты, а вторым экзонным участком является hbBglobin экзон 3 или его фрагменты. В качестве еще одного неограничивающего примера сигнал поли(A) получен из гормона роста человека.
[00029] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотид AADC кодируется в плазмиде или векторе, которые могут быть полученными из аденоассоциированного вируса (AAV). ААВ может представлять собой рекомбинантный AAV-вирус и может содержать капсид такого серотипа, как без ограничения AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV2. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAVrh10. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9(hu14). В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV9.47. В качестве неограничивающего примера капсид рекомбинантного вируса AAV является AAV-DJ8.
Промоторы
[00030] Специалист в данной области техники может понять, что целевая клетка может требовать специфического промотора, включающего, без ограничения, промотор, который является видоспецифическим, индуцируемым, тканеспецифическим или специфическим в отношении фазы клеточного цикла; Parr et al., Nat. Med.3:1145-9 (1997); содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00031] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, который считается эффективным для полинуклеотида AADC.
[00032] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой промотор, эффективный для клетки, подвергающейся целенаправленному воздействию.
[00033] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор представляет собой слабый промотор, который обеспечивает экспрессию полезного груза в течение периода времени в целевых тканях, таких как без ограничения тканях нервной системы. Экспрессия может осуществляться в течение периода длительностью 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часа, 1 сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 1 неделя, 8 суток, 9 суток, 10 суток, 11 суток, 12 суток, 13 суток, 2 недели, 15 суток, 16 суток, 17 суток, 18 суток, 19 суток, 20 суток, 3 недели, 22 суток, 23 суток, 24 суток, 25 суток, 26 суток, 27 суток, 28 суток, 29 суток, 30 суток, 31 суток, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 19 месяцев, 20 месяцев, 21 месяц, 22 месяца, 23 месяца, 2 года, 3 года, 4 года, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет или более 10 лет. Экспрессия может может осуществляться в течение 1-5 часов, 1-12 часов, 1-2 суток, 1-5 суток, 1-2 недель, 1-3 недель, 1-4 недель, 1-2 месяцев, 1-4 месяцев, 1-6 месяцев, 2-6 месяцев, 3-6 месяцев, 3-9 месяцев, 4-8 месяцев, 6-12 месяцев, 1-2 лет, 1-5 лет, 2-5 лет, 3-6 лет, 3-8 лет, 4-8 лет или 5-10 лет. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой слабый промотор для устойчивой экспрессии полезного груза в нервных тканях. В качестве еще одного неограничивающего примера промотор является слабым промотором для непрерывной экспрессии фратаксина в ткани нервной системы, такой как без ограничения нейронная ткань и глиальная ткань.
[00034] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC применяют промотор FRDA.
[00035] В соответствии с одним вариантом осуществления имеет место участок, расположенный примерно на ~5 т. о. выше первого экзона полезного груза. В качестве неограничивающего примера имеет место участок из 17 т. о., расположенный примерно на 4,9 т. о. выше первого экзона гена фратаксина, для обеспечения экспрессии с промотором FRDA (см., например, Puspasari et al. Long Range Regulation of Human FXN Gene Expression, PLOS ONE, 2011; содержание которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00036] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой промотор, который имеет длину менее 1 т. о. Промотор может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или боле 800. Промотор может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800.
[00037] В соответствии с одним вариантом осуществления промотор может представлять собой комбинацию двух или более компонентов, таких как, без ограничения, CMV и CBA. Каждый компонент может иметь длину 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 или более 800. Каждый компонент может иметь длину 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 или 700-800. В качестве неограничивающего примера, промотор представляет собой комбинацию 382-нуклеотидной энхансерной последовательности CMV и 260-нуклеотидной промоторной последовательности CBA.
[00038] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Неограничивающие примеры элементов для повышения специфичности трансгена в отношении мишени и усиления экспрессии включают промоторы, эндогенные miRNA, посттранскрипционные регуляторные элементы (PRE), последовательности сигнала полиаденилирования (полиA) и вышележащие энхансеры (USE), энхансеры CMV и интроны.
[00039] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как промоторы. Промоторы, которые стимулируют экспрессию в большинстве тканей, включают в себя без ограничения промотор 1α-субъединицы фактора элонгации (EF1α) человека, предранний промотор цитомегаловируса (CMV), промотора β-актина курицы (CBA) и его производного CAG, β-глюкуронидазы (GUSB) или убиквитина C (UBC). Для ограничения экспрессии определенными типами клеток можно применять тканеспецифические экспрессионные элементы, такие как, без ограничения, промоторы, специфические в отношении нервной системы, которые можно применять для ограничения экспрессии нейронами, астроцитами или олигодендроцитами. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для нейронов включает промоторы нейрон-специфической енолазы (NSE), фактора роста тромобоцитов (PDGF), B-цепи фактора роста тромбоцитов (PDGF-β), синапсина (Syn), метил-CpG связывающего белка 2 (MeCP2), CaMKII, mGluR2, NFL, NFH, nβ2, PPE, Enk и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифических экспрессионных элементов для астроцитов включает промоторы глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) и EAAT2. Неограничивающий пример тканеспецифического экспрессионного элемента для олигодендроцитов включает промотор основного белка миелина (MBP).
[00040] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять убиквитарный промотор. Неограничивающие примеры убиквитарных промоторов включают CMV, CBA (в том числе производные CAG, CBh и т.д.), EF-1α, PGK, UBC, GUSB (hGBp) и UCOE (промотор HNRPA2B1-CBX3). Yu et al. (Molecular Pain 2011, 7:63; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали экспрессию eGFP под контролем промоторов CAG, EFIα, PGK и UBC в крысиных DRG клетках и первичных DRG клетках с использованием векторов на основе лентивируса, и обнаружили, что UBC показывал более слабую экспрессию, чем 3 другие промотора, и для всех промоторов наблюдали экспрессию только в 10-12% глии. Soderblom et al. (E. Neuro 2015; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) исследовали экспрессию eGFP в AAV8 с промоторами CMV и UBC и AAV2 с промотором CMV после инъекции в двигательную кору. Интраназальное введение плазмиды, содержащей промотор UBC или EFIα, показывало устойчивую экспрессию в дыхательных путях, большую, чем экспрессия с промотором CMV (см., например, Gene Therapy 2001, Vol. 8, 1539-1546; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки). Husain et al. (Gene Therapy 2009; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали конструкцию HβH с промотором hGUSB, промотором HSV-1LAT и промотором NSE и выяснили, что конструкция HβH показывала более слабую экспрессию в головном мозге мышей, чем NSE. Passini и Wolfe (J. Virol. 2001, 12382-12392, содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) оценивали долговременные эффекты вектора HβH после внутрижелудочковой инъекции у новорожденных мышей и выяснили, что присутствует устойчивая экспрессия в течение по меньшей мере 1 года. Низкая экспрессия во всех областях головного мозга была обнаружена Xu et al. (Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; содержание которой включено в данный документ в своей полноте посредством ссылки) в случае, когда использовали промоторы NF-L и NF-H в сравнении с CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE+wpre, NSE (0,3 т. о.), NSE (1,8 т. о.) и NSE (1,8 т. о.+wpre). Xu et al. выяснили, что активность промоторов убывала в следующем порядке: NSE (1,8 т. о.), EF, NSE (0,3 т. о.), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL и NFH. NFL представляет собой 650-нуклеотидный промотор, и NFH представляет собой 920-нуклеотидный промотор, причем оба из них отсутствуют в печени, но NFH является распространенным в проприоцептивных сенсорных нейронах, головном и спинном мозге, а NFH присутствует в сердце. Scn8a представляет собой 470-нуклеотидный промотор, который экспрессируется везде в DRG, спинном мозге и головном мозге, причем особенно высокая экспрессия наблюдается в нейронах гиппокампа и мозжечковых клетках Пуркинье, коре головного мозга, таламусе и гипоталамусе (см., например, Drews et al. 2007; и Raymond et al. 2004; причем содержание каждой из которых включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки).
[00041] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор UBC. Промотор UBC может иметь размер 300-350 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор UBC имеет размер 332 нуклеотида.
[00042] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор GUSB. Промотор GUSB может иметь размер 350-400 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор GUSB имеет размер 378 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00043] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFL. Промотор NFL может иметь размер 600-700 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFL имеет размер 650 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00044] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор NFH. Промотор NFH может иметь размер 900-950 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор NFH имеет размер 920 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарным, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00045] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор scn8a. Промотор scn8a может иметь размер 450-500 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, промотор scn8a имеет размер 470 нуклеотидов. В качестве неограничивающего примера, конструкция может представлять собой AAV-промотор-интрон CMV/глобина-hFXN-RBG, где AAV может быть самокомплементарныим, и AAV может представлять собой серотип DJ.
[00046] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор FXN.
[00047] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор PGK.
[00048] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CBA.
[00049] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор CMV.
[00050] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять промотор печени или скелетных мышц. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении печени, включают hAAT и TBG. Неограничивающие примеры промоторов, специфичных в отношении скелетных мышц, включают десминовый промотор, MCK и C5-12.
[00051] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять энхансерный элемент, промотор и/или 5'-UTR интрон. Энхансер может представлять собой, без ограничения, энхансер CMV, промотор может представлять собой, без ограничения, промотор CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, синапсина, MeCP2 и GFAP, и 5'UTR/интрон может представлять собой, без ограничения, SV40 и CBA-MVM. В качестве неограничивающего примера, энхансер, промотор и/или интрон, применяемые в комбинации, могут представлять собой: (1) энхансер CMV, промотор CMV, интрон 5'UTR SV40; (2) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR SV 40; (3) энхансер CMV, промотор CBA, интрон 5'UTR CBA-MVM; (4) промотор UBC; (5) промотор GUSB; (6) промотор NSE; (7) промотор синапсина; (8) промотор MeCP2 и (9) промотор GFAP.
[00052] В соответствии с одним вариантом осуществления с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC можно применять сконструированный промотор.
Интроны
[00053] В соответствии с одним вариантом осуществления по меньшей мере один элемент можно применять с описанными в настоящем документе полинуклеотидами AADC для усиления целевой специфичности и экспрессии трансгена (см., например, Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; содержание которой включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки), такой как интрон. Неограничивающие примеры интронов включают MVM (67-97 п.о.), F.IX усеченный интрон 1 (300 п.о.), SD β-глобина /акцепторный сайт сплайсинга тяжелой цепи иммуноглобулина (250 п.о.), донорный сайт сплайсинга аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга иммуноглобулина (500 п.о.), донорный сайт сплайсинга/акцепторный сайт сплайсинга поздних генов SV40 (19S/16S) (180 п.о.) и донорный сайт сплайсинга гибридного аденовируса/акцепторный сайт сплайсинга IgG (230 п.о.).
[00054] В соответствии с одним вариантом осуществления интрон может иметь длину 100-500 нуклеотидов. Интрон может иметь длину 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 или 500. Интрон может иметь длину в диапазоне 80-100, 80-120, 80-140, 80-160, 80-180, 80-200, 80-250, 80-300, 80-350, 80-400, 80-450, 80-500, 200-300, 200-400, 200-500, 300-400, 300-500 или 400-500.
Введение в клетки
[00055] Полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно встраивать в клетки-хозяева с помощью любого из множества подходов. Можно осуществить заражение вирусным вектором, содержащим полинуклеотид AADC. Примеры подходящих вирусных векторов включают векторы на основе ретровируса с дефектной репликацией, векторы на основе аденовируса, векторы на основе аденоассоциированного вируса и векторы на основе лентивируса.
[00056] В соответствии с настоящим изобретением вирусные векторы для применения при лечении и/или диагностике представляют собой вирус, который был очищен или сокращен до минимальных компонентов, необходимых для трансдукции переносимого или полезного груза представляющей интерес нуклеиновой кислоты.
[00057] Таким образом, вирусные векторы конструируют в качестве средств для специфической доставки при отсутствии вредных признаков репликации и/или интеграции, обнаруживаемых у вируса дикого типа.
[00058] В контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы, такой как полинуклеотиды согласно настоящему изобретению. «Вирусный вектор» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих представляющую интерес молекулу полезного груза, например, трансген, полинуклеотид, кодирующий полипептид или несколько полипептидов. Вирусные векторы согласно настоящему изобретению могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Серотипы, которые могут быть пригодны согласно настоящему изобретению, включают любые из берущих начало от AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8.
[00059] В соответствии с одним вариантом осуществления серотип, который может быть пригодным в настоящем изобретении, может представлять собой AAV-DJ8. Аминокислотная последовательность AAV-DJ8 может содержать две или более мутации с целью удаления гепарин-связывающего домена (HBD). В качестве неограничивающего примера последовательность AAV-DJ, описанная как SEQ ID NO: 1 в патенте США № 7588772, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки, могут содержать две мутации: (1) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (2) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr). В качестве другого неограничивающего примера может содержать три мутации: (1) K406R, где лизин (K; lys) в положении аминокислоты 406 заменен на аргинин (R; arg), (2) R587Q, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 587 заменен на глутамин (Q; gln), и (3) R590T, где аргинин (R; arg) в положении аминокислоты 590 заменен на треонин (T; thr).
[00060] AAV-векторы также могут содержать векторы на основе самокомплементарного AAV (scAAV). Векторы на основе scAAV содержат обе цепи ДНК, которые комплементарно соединены вместе с образованием двухцепочечной ДНК. За счет пропуска синтеза второй цепи scAAV обеспечивают возможность быстрой экспрессии в клетке.
Фармацевтические композиции
[00061] Несмотря на то, что описания фармацевтических композиций, например, таких полинуклеотидов (включая кодирующие плазмиды или векторы экспрессии, такие как вирусы, например, AAV), которые содержат подлежащий доставке полезный груз, например, последовательности, кодирующие AADC, преимущественно направлены на фармацевтические композиции, которые являются подходящими для введения людям, причем специалисту в данной области техники будет понятно, что такие композиции обычно являются подходящими для введения любому другому животному, например, животным, отличным от человека, например, млекопитающим, отличным от человека. Модификация фармацевтических композиций, подходящих для введения людям, для того, чтобы сделать композиции подходящими для введения различным животным, является хорошо понятной, и средний специалист в области ветеринарной фармакологии может разработать и/или выполнить такую модификацию с использованием только стандартного экспериментирования, если оно вообще будет необходимо. Субъекты, для которых предполагается введение фармацевтических композиций, включают, без ограничения, людей и/или других приматов; млекопитающих, в том числе коммерчески значимых млекопитающих, таких как крупный рогатый скот, свиньи, лошади, овцы, кошки, собаки, мыши и/или крысы; и/или птиц, в том числе коммерчески значимых птиц, таких как домашняя птица, куры, утки, гуси и/или индейки.
[00062] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления композиции вводят людям, пациентам-людям или субъектам-людям. В контексте настоящего раскрытия фраза «активный ингредиент» обычно относится либо к вирусному вектору, несущему полезный груз, либо к полинуклеотидной молекуле полезного груза, доставляемой вирусным вектором, который описан в настоящем документе.
[00063] Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию обеспечения объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами, а затем, если необходимо и/или желательно, разделение, придание формы и/или упаковку продукта в предпочтительную единицу с однократной дозой или единицу с несколькими дозами.
[00064] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением будут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию.
[00065] В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическая композиция содержит вектор на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащего капсид AAV и AAV-векторный геном. AAV-векторный геном может содержать по меньшей мере один описанный в настоящем документе полинуклеотид AADC, такой как без ограничения SEQ ID NO 6, 7, 8, 9, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23, или варианты, обладающие по меньшей мере 95% идентичности с ним. В число векторов на основе рекомбинантного AAV в фармацевтической композиции могут входить по меньшей мере 70%, которые содержат AAV-векторный геном.
Состав
[00066] Полинуклеотиды AADC или кодирующие их вирусные векторы можно составить с применением одного или более вспомогательных веществ для (1) повышения стабильности; (2) повышения уровня трансфекции или трансдукции клеток; (3) обеспечения возможности длительного или замедленного высвобождения или (4) изменения биораспределения (например, целенаправленного воздействия вирусного вектора на конкретные ткани или типы клеток).
[00067] Составы согласно настоящему изобретению могут включать, без ограничения, солевой раствор, липидоиды, липосомы, липидные наночастицы, полимеры, липоплексы, наночастицы по типу ядро-оболочка, пептиды, белки, клетки, трансфицированные вирусными векторами (например, для трансплантации субъекту), средства, имитирующие наночастицы, и их комбинации. Кроме того, вирусные векторы согласно настоящему изобретению можно составить с применением самособирающихся наночастиц нуклеиновой кислоты.
[00068] Составы фармацевтических композиций, описанных в данном документе, можно получить с помощью любого способа, известного или который будет разработан в будущем в области фармакологии. В целом, такие способы получения включают стадию объединения активного ингредиента со вспомогательным веществом и/или одним или более другими дополнительными ингредиентами.
[00069] Фармацевтическую композицию в соответствии с настоящим раскрытием можно получить, упаковать и/или реализовать нерасфасованной, в виде единичной стандартной дозы и/или в виде нескольких единичных стандартных доз. В контексте настоящего описания «стандартная доза» относится к дискретному количеству, фармацевтической композиции, содержащей заранее определенное количество активного ингредиента. Количество активного ингредиента обычно равно дозе активного ингредиента, которую можно вводить субъекту, и/или подходящей части такой дозы, такой как, например, половина или треть такой дозы.
[00070] Относительные количества активного ингредиента, фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества и/или любых дополнительных ингредиентов в фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием могут варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей, размера и/или состояния субъекта, получающего лечение, а также в зависимости от пути, которым следует вводить композицию. Например, композиция может содержать от 0,1% до 99% (вес/вес) активного ингредиента. В качестве примера, композиция может содержать от 0,1% до 100%, например, от 0,5 до 50%, 1-30%, 5-80%, по меньшей мере 80% (вес/вес) активного ингредиента.
[00071] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления описанные в настоящем документе составы могут содержать по меньшей мере одну молекулу полезного груза, например, полинуклеотид AADC. В качестве неограничивающего примера составы могут содержать 1, 2, 3, 4 или 5 молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC.
[00072] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество может иметь чистоту по меньшей мере 95%, по меньшей мере 96%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или 100%. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество одобрено для применения у людей и для применения в ветеринарии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может быть одобрено Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может иметь фармацевтическую степень чистоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вспомогательное вещество может отвечать стандартам Фармакопеи США (USP), Европейской фармакопеи (EP), Британской фармакопеи и/или Международной фармакопеи.
[00073] Вспомогательные вещества, которые в контексте данного описания включают, без ограничения, любые и все растворители, дисперсионные среды, разбавители или другие жидкие среды, вспомогательные средства для диспергирования или суспендирования, поверхностно-активные средства, средства для обеспечения изотоничности, загущающие или эмульгирующие средства, консерванты и т.п., которые подходят для конкретной необходимой лекарственной формы. Различные вспомогательные вещества для составления фармацевтических композиций и методики получения композиции известны из уровня техники (см. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; включенную в данный документ в своей полноте посредством ссылки). Применение традиционной среды для лекарственного средства может предполагаться в объеме настоящего раскрытия, за исключением того случая, когда какая-либо традиционная среда для лекарственного средства может быть несовместима с веществом или его производными, как например, являясь причиной какого-либо нежелательного биологического эффекта или иным образом пагубно взаимодействуя с любым другим компонентом(компонентами) фармацевтической композиции.
[00074] Иллюстративные разбавители включают, без ограничения, карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат кальция, фосфат дикальция, сульфат кальция, гидрофосфат кальция, фосфат натрия, лактозу, сахарозу, целлюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, каолин, маннит, сорбит, инозит, хлорид натрия, сухой крахмал, кукурузный крахмал, сахарную пудру и т.д. и/или их комбинации.
[00075] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC перед введением можно составить в гидрогеле. Гидрогели имеют степень пластичности, которая схожа с пластичностью естественной ткани по причине значительного содержания в них воды.
[00076] В соответствии с другим вариантом осуществления гидрогель можно вводить субъекту до введения состава с полинуклеотидом AADC. В качестве неограничивающего примера место введения гидрогеля может находиться в пределах 3 дюймов (например, в пределах 2,9, 2,8, 2,7, 2,6, 2,5, 2,4, 2,3, 2,2, 2,1, 2,0, 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1,0, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 или менее 0,1 дюйма) от места введения состава с полинуклеотидом AADC.
[00077] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC можно вводить в физиологическом растворе. В качестве неограничивающего примера состав может представлять собой фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) с 0,001% плюрониловой кислоты (F-68). Кроме того, состав может быть стерилизованным.
Неактивные компоненты
[00078] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления составы с полинуклеотидом AADC могут содержать по меньшей мере одно вспомогательное вещество, которое является неактивным ингредиентом. В контексте настоящего описания термин «неактивный ингредиент» относится к одному или более неактивным средствам, включенным в составы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления все, ни один или некоторые из неактивных ингредиентов, которые можно применять в составах согласно настоящему изобретению, могут быть одобрены Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).
[00079] Составы с вирусными векторами, несущими раскрытые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, могут включать в себя катионы или анионы. В соответствии с одним вариантом осуществления составы включают катионы металлов, такие как, без ограничения, Zn2+, Ca2+, Cu2+, Mg+ и их комбинации. В качестве неограничивающего примера составы могут включать в себя полимеры и полинуклеотиды AADC в комплексе с катионом металла (см., например, патент США № 6265389 и № 6555525, каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки).
Введение
[00080] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить любым путем, который приведет к терапевтически эффективному результату. Они включают без ограничения эпидуральный (в твердую мозговую оболочку), пероральный (через ротовую полость), трансдермальный, перидуральный, внутримозговой (в головной мозг), интрацеребровентрикулярный (в желудочки мозга), подкожный (под кожу), назальное введение (через нос), внутривенный (в вену), внутривенное струйное введение, внутривенное капельное введение, внутриартериальный (в артерию), интратекальный (в спинномозговой канал), эндоцервикальный, интракаудальный (в область конского хвоста спинного мозга), интрацистернальный (в мостомозжечковую цистерну), внутридисковый (в диск), интрадуральный (внутрь или под твердую мозговую оболочку), межоболочечный (в мозговые оболочки), внутриплевральный (в плевру), интраспинальный (в позвоночный столб), интратекальный (в спинномозговую жидкость на любом уровне цереброспинальной оси), внутригрудной (в грудную клетку), интрастриарный (в стриатум, хвостатое ядро и/или скорлупу), спинномозговую блокаду, блокаду нервов или спинальный. В соответствии с конкретными вариантами осуществления композиции можно вводить таким образом, который позволяет им преодолевать гематоэнцефалический барьер, сосудистый барьер или другой эпителиальный барьер. В соответствии с одним вариантом осуществления состав для некоторого пути введения может включать по меньшей мере один неактивный компонент.
[00081] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, можно вводить в скорлупу правого полушария и/или скорлупу левого полушария. Введение можно осуществлять в одном или более местах скорлупы, как например, без ограничения в 2 местах, 3 местах, 4 местах или более чем в 4 местах. В качестве неограничивающего примера вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, доставляют в 2 места скорлупы левого полушария и 2 места скорлупы правого полушария.
[00082] В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват скорлупы субъекта (например, скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 8%, 9%, 10%, 13%, 14%, 15%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-40%, 20-30%, 20-35%, 20-50%, 30-40%, 35-40%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади поверхности скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.
[00083] В соответствии с одним вариантом осуществления введение субъекту состава с вирусными векторами, содержащими полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, обеспечивает охват задней части скорлупы субъекта (например, задней части скорлупы левого и/или правого полушария). В соответствии с одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охвата задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с другим аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать по меньшей мере 10%, 15%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более 95% охват площади поверхности задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 20%. В качестве неограничивающего примера общий охват составляет по меньшей мере 40%. В соответствии с еще одним аспектом введение вирусных векторов, содержащих полинуклеотиды AADC, может обеспечивать 10-40%, 20-50%, 30-60%, 40-70%, 50-80% или 60-90% охват задней части скорлупы левого и/или правого полушария субъекта или общей площади скорлупы левого и/или правого полушария субъекта.
[00084] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, безопасно доставляемые в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий, или, в качестве альтернативы, интрастриарно (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро​(STN).
[00085] В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить путем остроконечного двустороннего размещения катетеров в каждой скорлупе. При размещении можно применять известные из уровня техники или описанные в настоящем документе стереотаксические нейрохирургические методики с контролем по магнитно-резонансной томограмме (MRI). Кроме того, в составе можно применять контраст, такой как без ограничения гадолиниевый контраст (например, PROHANCE®), для отслеживания и подтверждения распространения состава.
[00086] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекту можно вводить вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, в двусторонней стереотаксической пошаговой CED-инфузии в скорлупу (например, посткомиссуральную часть скорлупы).
[00087] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) предусматривает скорость доставки, определяемую выражением [вг/час=мл/ч * вг/мл], где вг представляет собой количество вирусных геномов, вг/мл представляет собой концентрацию композиции, и мл/час представляет собой скорость пролонгированной инфузии.
[00088] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию до 1 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,001, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,010, 0,015, 0,020, 0,025, 0,030, 0,040, 0,050, 0,060, 0,070, 0,080, 0,090, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или 0,9 мл.
[00089] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию, составляющую от приблизительно 1 мл до приблизительно 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может включать инфузию 0,1, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 или 120 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 3 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) включает инфузию по меньшей мере 10 мл. В соответствии с одним вариантом осуществления доставка частиц AAV в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) заключается в инфузии 10 мл.
[00090] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл.
[00091] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в участок обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в участок обоих полушарий, составляет 1800 мкл.
[00092] В соответствии с одним вариантом осуществления объем фармацевтической композиции c вирусными векторами, доставляемой в скорлупу обоих полушарий головного мозга субъекта, составляет 50 мкл, 100 мкл, 200 мкл, 300 мкл, 400 мкл, 450 мкл, 500 мкл, 600 мкл, 700 мкл, 800 мкл, 900 мкл, 1000 мкл, 1100 мкл, 1200 мкл, 1300 мкл, 1400 мкл, 1500 мкл, 1600 мкл, 1700 мкл, 1800 мкл, 1900 мкл, 2000 мкл или более 2000 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 100 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 200 мкл. В качестве неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 300 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 450 мкл. В качестве другого неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 900 мкл. В качестве еще одного неограничивающего примера объем, доставляемый в скорлупу обоих полушарий, составляет 1800 мкл.
[00093] В соответствии с одним вариантом осуществления общий объем, доставляемый субъекту, можно разделить между одним или более местами введения, например, 1, 2, 3, 4, 5 или более 5 местами. В качестве неограничивающего примера общий объем разделяют между введением в скорлупу левого и правого полушария. В качестве еще одного неограничивающего примера общий объем разделяют между двумя местами введения в скорлупу каждого из левого и правого полушария.
[00094] В соответствии с одним вариантом осуществления фармацевтическую композицию с вирусным вектором вводят с помощью иглы с несколькими отверстиями. Неограничивающие примеры игл с несколькими отверстиями описаны в патентах США №№ 8333734, 7135010, 7575572, 7699852, 4411657, 6890319, 6613026, 6726659, 6565572, 6520949, 6382212, 5848996, 5759179, 5 674267, 5588960, 5484401, 5199441, 5012818, 4474569, 3766907, 3552394, причем содержание каждого из них включено в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
[00095] В соответствии с одним вариантом осуществления композиция содержит описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, и полинуклеотиды AADC являются компонентами AAV-вирусного генома, упакованного в вирусную частицу AAV. Процентное (%) соотношение вирусных частиц AAV, содержащих полинуклеотид AADC (также называемых в настоящем документе AADC-частицами) к вирусным частицам AAV без полинуклеотида AADC (также называемым в настоящем документе пустыми капсидами) в композиции может составлять 0:100, 1:99, 0:90, 15:85, 25:75, 30:70, 50:50, 70:30, 85:15, 90:10, 99:1 или 100:0. В качестве неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 50:50. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 70:30. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 85:15. В качестве другого неограничивающего примера процентное соотношение AADC-частиц к пустым капсидам составляет 100:0.
[00096] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит по меньшей мере 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более 99% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 50% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 52% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 58% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 70% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 83% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 85% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит по меньшей мере 99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера композиция содержит 100% AADC-частиц.
[00097] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50 -100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80 -85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-100% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 50-60% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-99% AADC-частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-90% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-95% AADC-частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 80-85% AADC-частиц.
[00098] В соответствии с одним вариантом осуществления описанная в настоящем документе композиция содержит менее 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 50% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 45% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 40% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 35% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 30% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 25% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 20% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 15% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 10% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 5% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера композиция содержит менее 1% пустых частиц.
[00099] Описанная в настоящем документе композиция содержит 1-10%, 10-20%, 30-40%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-99%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-99%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-99%, 70-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-100%, 90-95%, 90-99% или 90-100% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-40% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-50% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-60% пустых частиц. В качестве другого неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-70% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-80% пустых частиц. В качестве неограничивающего примера описанная в настоящем документе композиция содержит 30-90% пустых частиц.
[000100] В соответствии с одним вариантом осуществления описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно вводить субъекту, который также проходит терапию леводопой. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть положительная реакция на терапию леводопой, и уменьшается по меньшей мере один симптом PD. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD остаются стабильными. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может быть отрицательная реакция на терапию леводопой, при которой испытываемые субъектом симптомы PD усиливаются.
[000101] В соответствии с одним вариантом осуществления доза леводопы, вводимая субъекту до введения полинуклеотидов AADC, составляет 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 или более 25 мг/кг. В качестве неограничивающего примера доза составляет 3 мг/кг. В качестве другого неограничивающего примера доза составляет 10 мг/кг. В качестве еще одного неограничивающего примера доза составляет 20 мг/кг. Реакцию субъекта (например, поведенческую реакцию) на леводопу можно оценить до введения полинуклеотидов AADC. Кроме того, субъекту можно снова вводить леводопу после введения полинуклеотидов AADC (например, через 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца, 4 месяца, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 1 год или более 1 года после введения полинуклеотидов AADC). Для определения влияний полинуклеотидов AADC, можно повторно оценить поведенческую реакцию и сравнить ее с первоначальной реакцией. Субъект может иметь 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или 100% улучшение поведенческой реакции.
[000102] В соответствии с одним вариантом осуществления леводопу можно вводить многократно после введения полинуклеотидов AADC. Леводопу можно вводить по повторяющейся схеме (например, каждые 5 дней, еженедельно, каждые 10 дней, каждые 15 дней, каждые 30 дней, ежемесячно, раз в два месяца, каждые 3 месяца, каждые 4 месяца, каждые 5 месяцев, каждые 6 месяцев, каждые 7 месяцев, каждые 8 месяцев, каждые 9 месяцев, каждые 10 месяцев, каждые 11 месяцев или раз в год) или по мере возникновения симптомов. В качестве неограничивающего примера через 3 года после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 6 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC. В качестве неограничивающего примера через 9 лет после введения полинуклеотидов AADC субъект может иметь 1-10%, 5-15%, 10-20%, 15-30%, 20-40%, 25-50%, 30-50%, 40-50%, 40-60%, 50-70%, 50-80%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-90%, 70-80%, 70-90%, 75-90%, 80-90%, 90-100% стриарных нейронов в участке введения инфузией в скорлупу, который должен быть иммунореактивным к AADC.
[000103] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить описанные в настоящем документе полинуклеотиды AADC, имеет задокументированную реакцию на терапию леводопой, но имеет рефракторные с медицинской точки зрения флуктуации и считается потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство. Решение, является ли субъект потенциальным кандидатом на хирургическое вмешательство, может принимать врач, осуществляющий лечение субъекта от PD, или врач, назначающий введение полинуклеотидов AADC, который принимает во внимание соотношения общий риск к пользе для пациента в отношении хирургического вмешательства, необходимого для доставки полинуклеотидов AADC.
[000104] В соответствии с одним вариантом осуществления соотношение объема распределения в паренхиме поля у субъекта к инфузионному объему поля у субъекта может составлять 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0 или более 6,0. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 1,6 в хвостатом ядре. В качестве неограничивающего примера соотношение объема распределения в паренхиме к инфузионному объему составляло 3,1 в скорлупе. В качестве неограничивающего примера распределение полинуклеотидов AADC в скорлупе может в 2-3 раза превышать вводимый инфузией объем.
Дозировка
[000105] Настоящее изобретение относится к способам, предусматривающим введение вирусных векторов и их полезного груза в виде полинуклеотидов AADC или комплексов в соответствии с настоящим изобретением нуждающемуся в том субъекту. Фармацевтические, визуализирующие, диагностические или профилактические композиции с вирусными векторами могут быть введены субъекту в любом количестве и любым путем введения, эффективным для предупреждения, лечения, диагностики или визуализации заболевания, нарушения и/или состояния (например, заболевания, нарушения и/или состояния, связанного с нарушением кратковременной памяти). Точное необходимое количество будет варьировать от субъекта к субъекту в зависимости от вида, возраста и общего состояния субъекта, тяжести заболевания, конкретной композиции, способа ее введения, механизма ее действия и т.п. Композиции согласно настоящему изобретению, как правило, составляют в единичной лекарственной форме для облегчения введения и равномерности дозировки. Тем не менее, будет понятно, что общее суточное потребление композиций согласно настоящему изобретению может определяться лечащим врачом по результатам тщательной клинической оценки. Конкретный терапевтически эффективный, профилактически эффективный или соответствующий для визуализации уровень дозы для каждого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе от нарушения, подлежащего лечению, и тяжести нарушения; активности конкретного используемого соединения; конкретной используемой композиции; возраста, массы тела, общего состояния здоровья, пола и рациона пациента; времени введения, пути введения, а также скорости выведения из организма используемого полезного груза в виде конкретных полинуклеотидов; длительности лечения; лекарственных средств, применяемых в комбинации или совместно с конкретным используемым соединением; и подобных факторов, хорошо известных в области медицины.
[000106] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтические композиции c вирусными векторами согласно настоящему изобретению можно вводить с уровнями дозировки полинуклеотида AADC, достаточными для доставки от приблизительно 0,0001 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,005 до приблизительно 0,05 мг/кг, от приблизительно 0,001 мг/кг до приблизительно 0,005 мг/кг, от приблизительно 0,05 мг/кг до приблизительно 0,5 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 50 мг/кг, от приблизительно 0,1 до приблизительно 40 мг/кг, от приблизительно 0,5 мг/кг до приблизительно 30 мг/кг, от приблизительно 0,01 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг или от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта в день, один или более раз в день, для получения желаемого терапевтического, диагностического, профилактического или визуального эффекта. Необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставлять три раза в день, два раза в день, один раз в день или в за период 24 часа дозировку можно доставлять один, два, три или более трех раз. В соответствии с определенными вариантами осуществления необходимую дозировку полинуклеотида AADC можно доставить с помощью нескольких введений (например, двух, трех, четырех, пяти, шести, семи, восьми, девяти, десяти, одиннадцати, двенадцати, тринадцати, четырнадцати или большего числа введений). Если используют несколько введений, можно применять режимы дозирования с разделением дозы, такие как описанные в данном документе. В контексте настоящего описания «раздельная доза» относится к разделению единичной стандартной дозы или общей дозы на две или более доз, например, два или более введений единичной стандартной дозы. В контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства на основе полинуклеотида, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы. В соответствии с одним вариантом осуществления вирусные векторы, содержащие полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению, вводят субъекту раздельными дозами. Их можно составить только в буфере или в составе, описанном в данном документе.
[000107] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию от приблизительно 1×106 вг/мл до приблизительно 1×1016 вг/мл. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×106, 2×106, 3×106, 4×106, 5×106, 6×106, 7×106, 8×106, 9×106, 1×107, 2×107, 3×107, 4×107, 5×107, 6×107, 7×107, 8×107, 9×107, 1×108, 2×108, 3×108, 4×108, 5×108, 6×108, 7×108, 8×108, 9×108, 1×109, 2×109, 3×109, 4×109, 5×109, 6×109, 7×109, 8×109, 9×109, 1×1010, 2×1010, 3×1010, 4×1010, 5×1010, 6×1010, 7×1010, 8×1010, 9×1010, 1×1011, 1.8×1011, 2×1011, 3×1011, 4×1011, 5×1011, 5.5×1011, 6×1011, 7×1011, 8×1011, 9×1011, 0.8×1012, 0.83×1012, 1×1012, 1,1×1012, 1,2×1012, 1,3×1012, 1,4×1012, 1,5×1012, 1,6×1012, 1,7×1012, 1,8×1012, 1,9×1012, 2×1012, 2,1×1012, 2,2×1012, 2,3×1012, 2,4×1012, 2,5×1012, 2,6×1012, 2,7×1012, 2,8×1012, 2,9×1012, 3×1012, 3,1×1012, 3,2×1012, 3,3×1012, 3,4×1012, 3,5×1012, 3,6×1012, 3,7×1012, 3,8×1012, 3,9×1012, 4×1012, 4,1×1012, 4,2×1012, 4,3×1012, 4,4×1012, 4,5×1012, 4,6×1012, 4,7×1012, 4,8×1012, 4,9×1012, 5×1012, 6×1012, 7×1012, 8×1012, 9×1012, 1×1013, 2×1013, 3×1013, 4×1013, 5×1013, 6×1013, 7×1013, 8×1013, 9×1013, 1×1014, 2×1014, 3×1014, 4×1014, 5×1014, 6×1014, 7×1014, 8×1014, 9×1014, 1×1015, 2×1015, 3×1015, 4×1015, 5×1015, 6×1015, 7×1015, 8×1015, 9×1015 или 1×1016 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×1013 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,1×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3,7×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8×1011 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,6×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,9×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,8×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 0,83×1012 вг/мл. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет максимальную итоговую дозу, которая может содержаться в ампуле.
[000108] В соответствии с одним вариантом осуществления доставка фармацевтических композиций с вирусными векторами в соответствии с настоящим изобретением в клетки центральной нервной системы (например, паренхимы) может предусматривать общую концентрацию на субъекта от приблизительно 1×106 VG до приблизительно 1×1016 вг. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления доставка может предусматривать концентрацию композиции, составляющую приблизительно 1×106, 2×106, 3×106, 4×106, 5×106, 6×106, 7×106, 8×106, 9×106, 1×107, 2×107, 3×107, 4×107, 5×107, 6×107, 7×107, 8×107, 9×107, 1×108, 2×108, 3×108, 4×108, 5×108, 6×108, 7×108, 8×108, 9×108, 1×109, 2×109, 3×109, 4×109, 5×109, 6×109, 7×109, 8×109, 9×109, 1×1010, 1.5×1010, 2×1010, 3×1010, 4×1010, 5×1010, 6×1010, 7×1010, 8×1010, 9×1010, 1×1011, 1,3×1011, 2×1011, 2,1×1011, 2,2×1011, 2,3×1011, 2,4×1011, 2,5×1011, 2,6×1011, 2,7×1011, 2,8×1011, 2,9×1011, 3×1011, 4×1011, 5×1011, 5,4×1011, 6×1011, 7×1011, 7,1×1011, 7,2×1011, 7,3×1011, 7,4×1011, 7,5×1011, 7,6×1011, 7,7×1011, 7,8×1011, 7,9×1011, 8×1011, 9×1011, 9,4×1011, 1×1012, 1,1 x1012, 1,2×1012, 1,3×1012, 1,4×1012, 1,5×1012, 1,6×1012, 1,7×1012, 1,8×1012, 1,9×1012, 2×1012, 2,3×1012, 2,4×1012, 3×1012, 4×1012, 4,1×1012, 4,2×1012, 4,3×1012, 4,4×1012, 4,5×1012,4,6×1012, 4,7×1012, 4,8×1012, 4,9×1012, 5×1012, 6×1012, 7×1012, 8×1012, 8,1×1012, 8,2×1012, 8,3×1012, 8,4×1012, 8,5×1012, 8,6×1012, 8,7×1012, 8,8 x1012, 8,9×1012, 9×1012, 1×1013, 2×1013, 3×1013, 4×1013, 5×1013, 6×1013, 7×1013, 8×1013, 9×1013, 1×1014, 2×1014, 3×1014, 4×1014, 5×1014, 6×1014, 7×1014, 8×1014, 9×1014, 1×1015, 2×1015, 3×1015, 4×1015, 5×1015, 6×1015, 7×1015, 8×1015, 9×1015 или 1×1016 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1×1013 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 3×1012 вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 3×1011 вг/субъект. В качестве неограничивающего примера вводимая субъекту композиция имеет концентрацию, составляющую приблизительно 9×1011 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×1011 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,2×1011 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 7,5×1011 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 1,4×1012 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 4,8×1012 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 8,8×1012 вг/субъект. В соответствии с одним вариантом осуществления концентрация вирусного вектора в композиции составляет 2,3×1012 вг/субъект.
[000109] В соответствии с одним вариантом осуществления эффективность дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью различных способов, описываемых в настоящем документе, таких как без ограничения PET-визуализация, тест с нагрузкой L-DOPA (например, см. Forsayeth et al. 2006, Mol. Ther. 14(4): 571-577), оценки по шкале UPDRS и журналы пациентов. В качестве неограничивающего примера у субъекта после введения композиции с полинуклеотидом AADC может быть сниженная дискинезия или периоды сниженной дискинезии. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть снижение симптомов, связанных с болезнью Паркинсона, в том числе ограниченной подвижности и дискинезии. В качестве еще одного неограничивающего примера у субъекта может наблюдаться улучшению показателей периода «выключения» и двигательных флуктуаций. Улучшение может составлять по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% или более 90%. Улучшение может продолжаться в течение нескольких минут (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или более 55), часов (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 или более 24), дней (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6 или более 7), недель (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или более 7), месяцев (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или более 11) или лет (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более 9).
[000110] В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с помощью визуализации периваскулярных пространств (PVS), которые также известны как пространства Вирхова-Робина. PVS окружают артериолы и венулы, по мере их проникновения в паренхиму мозга, и они заполнены спинномозговой жидкостью (CSF)/интерстициальной жидкостью. PVS распространены в среднем мозге, BG и полуовальном центре. Без привязки к теории, PVS могут играть некоторую роль в нормальном выведении метаболитов, и была установлена их ассоциация с ухудшением когнитивных функций и некоторыми болезненными состояниями, в том числе с болезнью Паркинсона. Обычно PVS имеют нормальный размер, но они могут увеличиваться в размере при ряде болезненных состояний. Potter et al. (Cerebrovasc Dis. 2015 Jan; 39(4): 224-231; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) разработали способ ранжирования, при этом они исследовали весь спектр PVS и ранжировали PVS базальных ганглиев, полуовального центра и среднего мозга. Они использовали частоту и диапазон PVS, которые были использованы в работе Mac и Lullich et al. (J Neurol Neurosurg Psychiatry. 2004 Nov;75(11):1519-23; содержание которой включено в данный документ в его полноте посредством ссылки) и Potter et al. разделили PVS базальных ганглиев и полуовального центра на 5 рангов: 0 (отсутствуют), 1 (1-10), 2 (11-20), 3 (21-40) и 4 (>40); и PVS среднего мозга на 2 ранга: 0 (не видимы) или 1 (видимы). Руководство пользователя для системы ранжирования по Potter et al. можно найти по следующей ссылке: www.sbirc.ed.ac.uk/documents/epvs-rating-scale-user-guide.pdf.
[000111] В соответствии с одним вариантом осуществления выбор субъектов для введения описываемых в настоящем документе вирусных векторов и/или эффективности дозы, пути введения и/или объема введения можно оценить с путем измерения с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PET) нейровизуализационных биомаркеров, таких как без ограничения [18F]FDOPA. Нейровизуализационные биомаркеры, такие как [18F]FDOPA, можно применять для идентификации пораженных индивидуумов и/или можно применять для выявления нигростриального поражения до начала клинических проявлений. Кроме того, PET-критерии можно применять для категоризации субъектов по функциональности их нигростриальных нейронов (например, аномальной, нормальной или неопределенной функциональности нигростриальных нейронов) (Rachette et al. Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet. 2006 Apr 5; 141B(3): 245-249; содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки).
[000112] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, может иметь прогрессирующую PD и все еще отвечать на терапию леводопой, но субъект также испытывает рефрактерные с медицинской точки зрения двигательные осложнения (например, серьезные двигательные флуктуации и/или дискинезии, возникающие во время терапии леводопой и другой дофаминергической терапии, несмотря на корректировки и оптимизацию лечения лекарственными препаратами). Субъект может быть достаточно здоров для прохождения нейрохирургической процедуры, которая может быть определена способами, известными из уровня техники. В качестве неограничивающего примера субъект может соответствовать критериям отбора для глубокой стимуляции головного мозга (DBS). Субъект может иметь идиопатическую PD, быть в возрасте моложе 69 лет, иметь выраженные реакции на леводопу, иметь рефракторные к лечению лекарственными препаратами симптомы (например, двигательную флуктуацию и/или дискинезию) и/или иметь незначительную когнитивную дисфункцию или вообще ее не иметь.
[000113] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, также может страдать от деменции или когнитивного нарушения.
[000114] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог быть ранее подвергнут лечению с помощью такого же или схожего терапевтического средства. В соответствии с другим вариантом осуществления субъект мог быть подвергнут лечению с помощью терапевтического средства, для которого было показано уменьшение симптомов болезни Паркинсона.
[000115] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, мог не получить надлежащий полезный эффект от стандартной лекарственной терапии. В качестве неограничивающего примера субъект мог не отвечать на лечение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть остаточное нарушение функций, несмотря на лечение.
[000116] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC, можно подвергать тестированию для оценки уровней нейромедиаторных аналитов для определения эффективности дозы. В качестве неограничивающего примера можно проанализировать нейромедиаторы CSF, активность AADC в плазме и/или VLA в моче.
[000117] В соответствии с одним вариантом осуществления субъекта, которому можно вводить дозу описываемого в настоящем документе полинуклеотида AADC, можно записывать на видео или аудио для отслеживания прогресса у субъекта в ходе курса лечения.
Комбинации
[000118] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC, можно применять в комбинации с одним или более другими терапевтическими, профилактическими, диагностическими или визуализирующими средствами. Под выражением «в сочетании с» не подразумевается, что средства нужно вводить одновременно и/или составлять для совместной доставки, хотя эти способы доставки находятся в пределах объема настоящего раскрытия. Композиции можно вводить одновременно с одним или более другими необходимыми терапевтическими средствами или медицинскими процедурами, до или после них. В целом, каждое средство будут вводить в дозе и/или по временному графику, определенным для каждого средства. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящее раскрытие охватывает доставку фармацевтических, профилактических, диагностических или визуализирующих композиций в комбинации со средствами, которые могут повысить их биодоступность, снизить и/или модифицировать их метаболизм, подавить их выведение из организма и/или модифицировать их распределение в организме.
Доставка
[000119] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP1857552, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000120] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки белков с использованием векторов на основе AAV, описанных в Европейской патентной заявке № EP2678433, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000121] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки молекул ДНК с использованием векторов на основе AAV, описанных в патенте США № US 5858351, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000122] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки ДНК в кровоток, описанных в патенте США № US 6211163, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000123] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки вирионов AAV, описанных в патенте США № US 6325998, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000124] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в центральную нервную систему, описанных в патенте США № US 7588757, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000125] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза, описанных в патенте США № US 8283151, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки.
[000126] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза с использованием вектора для доставки глутаматдекарбоксилазы (GAD), описанных в Международной патентной публикации № WO2001089583, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000127] В соответствии с одним вариантом осуществления вирусный вектор, содержащий полинуклеотид AADC, можно вводить или доставлять с помощью способов доставки полезного груза в нервные клетки, описанных в международной патентной публикации № WO2012057363, содержание которой включено в настоящее описание с помощью ссылки в полном ее объеме.
[000128] Фармацевтические композиции с описанными в данном документе вирусными векторами могут быть охарактеризованы с помощью одного или более из биодоступности, терапевтического окна и/или объема распределения.
Биодоступность
[000129] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении в композиции со средствами для доставки/составления или средами, которые описаны в настоящем документе, могут иметь повышенную биодоступность по сравнению с композициями без средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «биодоступность» относится к системной доступности заданного количества определенного средства, вводимого субъекту. Биодоступность может быть оценена путем измерения площади под кривой (AUC) или максимальной концентрации в сыворотке или плазме (Cmax) неизмененной формы соединения после введения соединения млекопитающему. AUC представляет собой определение площади под кривой, графически представляющей концентрацию соединения в сыворотке или плазме по оси ординат (оси Y) в зависимости от времени по оси абсцисс (оси X). Как правило, AUC для определенного соединения может быть рассчитана при помощи способов, известных специалистам в данной области техники и описанных в G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996, содержание которой включено в данный документ при помощи ссылке во всей своей полноте.
[000130] Значения Cmax представляют собой максимальные концентрации соединений, достигаемые в сыворотке или плазме субъекта после введения соединений субъекту. Значения Cmax определенных соединений могут быть измерены при помощи способов, известных специалистам в данной области техники. В контексте настоящего описания выражения «повышение биодоступности» или «улучшение фармакокинетики» относятся к действиям, которые могут повышать системную доступность вирусного вектора согласно настоящему изобретению (по результатам измерения по AUC, Cmax или Cmin) у субъекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления такие действия могут предусматривать совместное введение с одним или более средствами для доставки, которые описаны в данном документе. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биодоступность вирусных векторов может повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.
Терапевтическое окно
[000131] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться увеличением терапевтического окна введения соединения и/или композиции по сравнению с терапевтическим окном вирусных векторов, вводимых без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «терапевтическое окно» относится к диапазону концентраций в плазме или диапазону уровней терапевтически активного вещества в месте действия с высокой вероятностью получения терапевтического эффекта. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтические окна вирусных векторов при введении в составе могут повышаться по меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%, по меньшей мере приблизительно на 75%, по меньшей мере приблизительно на 80%, по меньшей мере приблизительно на 85%, по меньшей мере приблизительно на 90%, по меньшей мере приблизительно на 95% или приблизительно на 100%.
Объем распределения
[000132] Вирусные векторы, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, при составлении с одним или более средствами для доставки, которые описаны в настоящем документе, могут характеризоваться улучшенным объемом распределения (Vраспр.), например, сниженным или направленным, относительно составов без одного или более средств для доставки, которые описаны в настоящем документе. Vраспр. относится к количеству средства в организме по отношению к концентрации того же самого средства в крови или плазме. В контексте настоящего описания термин «объем распределения» относится к объему жидкости, которое потребовалось бы для содержания всего количества средства в организме в такой же концентрации, что и в крови и в плазме: Vраспр. равняется количеству средства в организме/концентрации средства в крови или плазме. Например, для дозы 10 мг заданного средства и концентрации в плазме 10 мг/л объем распределения составил бы 1 литр. Объем распределения отражает степень, в которой средство присутствует во внесосудистой ткани. Большие объемы распределения отражают тенденцию средств связываться с тканевыми компонентами, а не с белками плазмы. В клинических условиях Vраспр. может быть использован для определения нагрузочных доз для достижения концентраций в равновесном состоянии. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления объемы распределения композиций с вирусными векторами по настоящему изобретению при совместном введении с одним или более средствами доставки, которые описаны в данном документе, могут снижатьсяпо меньшей мере приблизительно на 2%, по меньшей мере приблизительно на 5%, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 15%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 25%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 35%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 45%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 55%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70%.
Наборы и устройства
[000133] Настоящее изобретение предлагает ряд наборов для удобного и/или эффективного осуществления способов по настоящему изобретению. Как правило, наборы будут содержать достаточные количества и/или числа компонентов, с тем чтобы позволить пользователю осуществить несколько процедур обработки субъекта(субъектов) и/или провести несколько экспериментов.
[000134] В состав набора можно включить любой из векторов AADC, конструкций AADC, полинуклеотидов AADC или полипептидов AADC согласно настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут дополнительно включать реагенты и/или инструкции для получения и/или синтеза соединений и/или композиций по настоящему изобретению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут включать один или более буферов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы по настоящему изобретению могут включать компоненты для получения массивов или библиотек белков или нуклеиновых кислот и, таким образом, могут включать, например, твердые подложки.
[000135] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть упакованы либо в водных средах, либо в лиофилизированной форме. Емкость в наборе обычно будет включать по меньшей мере одну ампулу, пробирку, колбу, бутылку, шприц или другую емкость, в которую можно поместить компонент и предпочтительно в виде соответствующей аликвоты. В случае, если в наборе присутствует более одного компонента (метящий реагент и метка могут быть упакованы вместе), наборы, как правило, также могут содержать вторые, третьи или другие дополнительные емкости, в которые могут быть отдельно помещены дополнительные компоненты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы также могут содержать вторую емкость для хранения стерильных фармацевтически приемлемых буферов и/или других разбавителей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления в одной или более ампулах могут содержаться различные комбинации компонентов. Наборы по настоящему изобретению также обычно могут включать средства хранения соединений и/или композиций по настоящему изобретению, например, емкости для белков, нуклеиновых кислот и любых других реагентов исключительно для коммерческой продажи. Такие емкости могут включать емкости для инъекций или пластиковые емкости, полученные методом выдувания, в которых хранятся необходимые ампулы.
[000136] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов представлены в одном и/или более жидких растворах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления жидкими растворами являются водные растворы, при этом стерильные водные растворы являются особенно предпочтительными. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления компоненты наборов могут быть представлены в виде сухого(сухих) порошка(порошков). Если реагенты и/или компоненты представлены в виде сухих порошков, то такие сухие порошки могут быть разведены при добавлении подходящих объемов растворителя. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что растворители также могут быть представлены в другой емкости. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления метящие красители представлены в виде сухих порошков. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предполагается, что 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 микрограмм или по меньшей мере или по большей мере эти количества сухого красителя представлены в наборах по настоящему изобретению. В соответствии с такими вариантами осуществления краситель может также быть ресуспендирован в любом подходящем растворителе, таком как DMSO.
[000137] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления наборы могут включать инструкции для использования компонентов наборов, а также применения любого другого реагента, не включенного в набор. Инструкции могут включать вариации, которые могут быть осуществляться.
Устройства
[000138] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения AADC и/или композиции AADC согласно настоящему изобретению можно объединять в комбинации с устройством, нанести на него или поместить в него. Устройства могут включать без ограничения стенты, помпы и/или другое имплантируемое терапевтическое устройство. Кроме того, соединения AADC и/или композиции AADC можно доставлять субъекту при использовании субъектом компрессионного устройства, такое как без ограничения компрессионное устройство для уменьшения вероятности тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта.
[000139] Настоящее изобретение относится к устройствам, которые могут содержать вирусные векторы, которые кодируют одну или более молекул полезного груза, представляющих собой полинуклеотид AADC. Эти изделия содержат в стабильном составе вирусные векторы, которые могут быть незамедлительно доставлены нуждающемуся в том субъекту, такому как пациент-человек.
[000140] Устройства для введения можно использовать для доставки вирусных векторов, содержащих полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, согласно режиму однократного, множественного или разделенного дозирования, который раскрыт в настоящем документе.
[000141] Предусмотрены способы и устройства, известные в данной области техники для многократного введения в клетки, органы и ткани для применения в сочетании со способами и композициями, раскрытыми в данном документе в виде вариантов осуществления настоящего изобретения. В их число входят, например, такие способы и устройства, в которых предусмотрено использование нескольких игл, гибридные устройства с использованием, например, полостей или катетеров, а также устройства с использованием механизмов, работающих от источников тепла, электрического тока или излучения.
[000142] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение АADC и/или композицию AADC согласно настоящему изобретению можно доставить с помощью устройства, такого как без ограничения стент, пробирка, катетер, трубка, трубочка, игла и/или капилляр. Способы применения таких устройств описаны в настоящем документе и известны из уровня техники.
[000143] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью систем доставки, которые объединяют терапию и визуализацию с контролем по изображениям, такие как без ограничения лазерные, MRgFUS, эндоскопические устройства и устройства для роботизированной хирургии.
[000144] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы для нейровмешательства CLEARPOINT® от MRI Interventions, Inc. Систему для нейровмешательства CLEARPOINT® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов или устройств для введения. Система для нейровмешательства CLEARPOINT® помогает обеспечивать стереотаксический контроль при размещении приборов или устройств и манипуляции с ними в ходе планирования и осуществления неврологических процедур.
[000145] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной системы NEUROMATE® для стереотаксиса от Renishaw PLC. Систему NEUROMATE® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера систему NEUROMATE® можно применять с держателями головы, локализаторами изображения CT, каркасными креплениями, устройствами дистанционного управления и программным обеспечением.
[000146] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью устройства Elekta MICRODRIVE™ от Elekta AB. Устройство MICRODRIVE™ можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера устройство MICRODRIVE™ можно применять для размещения электродов (например, при имплантации электродов для микроэлектродной записи (MER), макростимуляции и глубокой стимуляции мозга (DBS)), имплантации катетеров, трубок или электродов для DBS с использованием крестообразных и A-P фиксаторов для проверки положения, биопсий, инъекций и аспираций, воздействия на очаги поражения головного мозга, контроля эндоскопа и радиохирургии GAMMA KNIFE®.
[000147] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью амагнитной рамки для стереотаксиса AXIIIS® от MONTERIS® Medical, Inc. Амагнитную рамку для стереотаксиса AXIIIS® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Амагнитная рамка для стереотаксиса AXIIIS® является устройством для выравнивая траектории, которое можно применять для лазерной коагуляции, биопсий, размещения катетера, имплантации электрода, эндоскопии и удаления тромбов. Амагнитная рамка обеспечивает 360-градусную область взаимодействия и с помощью простой регулировки обеспечивает доступ к множеству внутричерепным целевым точкам. Кроме того, амагнитная рамка совместима с MRI.
[000148] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы INTEGRA™ CRW® от Integra LifeSciences Corporation. Систему INTEGRA™ CRW® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. Систему CRW® можно использовать для различных целей, таких как без ограничения стереотаксическая хирургия, микрохирургия, катетеризация и биопсия. Система CRW® выполнена так, чтобы для использующих такую систему обеспечивалась точность (например, крыльчатые затворные винты, наличие шкалы верньера, двойная фиксация болта и жесткая рамка).
[000149] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью системы-решения EPOCH® от Stereotaxis, Inc., которая может включать магнитную навигационную систему NIOBE® ES, роботизированную навигационную систему VDRIVE® и/или информационное решение ODYSSEY® (все от Stereotaxis, Inc.). Систему-решение EPOCH® можно применять отдельно или в комбинации с любым из других описываемых в настоящем документе способов и устройств для введения. В качестве неограничивающего примера магнитную навигационную систему NIOBE® ES можно применять для проведения взаимодействия с субъектом с высокой степенью точности. В качестве другого неограничивающего примера магнитную систему NIOBE® ES можно применять с роботизированной системой навигации VDRIVE® для обеспечения точного движения и стабильности.
[000150] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью рабочей станции NeuroStation, в работе которой применяются бескаркасные стереотаксические способы, обеспечивающие визуальный контроль для таких целей, как без ограничения планирование хирургической операции, биопсии, краниотомии, эндоскопия, ультразвуковая и лучевая терапия во время хирургической операции.
[000151] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью роботизированной стереотаксической системы, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5078140, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. Для точного ориентирования хирургических инструментов или другого оборудования, используемого для осуществления процедуры, можно применять манипулятор устройства.
[000152] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту с помощью автоматической системы доставки, такой как без ограничения устройство, описанное в патенте США № 5865744, содержание которого включено в данный документ в его полноте посредством ссылки. На основе изображений, собранных с помощью системы доставки, компьютер корректирует введение иглы на соответствующую глубину для конкретного субъекта.
[000153] В соответствии с одним вариантом осуществления полинуклеотиды AADC согласно настоящему изобретению можно вводить субъекту, который одновременно применяет в ходе введения и/или применяет в течение периода времени до и/или после введения компрессионное устройство, такое как без ограничения компрессионное устройство, которое уменьшает вероятность тромбоза глубоких вен (DVT) у субъекта. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере за 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов или более 8 часов до введения субъекту полинуклеотидов AADC. Компрессионное устройство можно применять по меньшей мере через 5 минут, 15 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов, 9 часов, 10 часов, 11 часов, 12 часов, 13 часов, 14 часов, 15 часов, 16 часов, 17 часов, 18 часов, 19 часов, 20 часов, 21 час, 22 часа, 23 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 1 неделю, 2 недели, 3 недели или через месяц после введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера компрессионное устройство применяют одновременно с процедурой доставки полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют до введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют после введения полинуклеотидов AADC. В качестве другого неограничивающего примера компрессионное устройство применяют в ходе или до введения полинуклеотидов AADC.
[000154] В число неограничивающих примеров компрессионных устройств входят компрессионное устройство периодического действия ActiveCare+SFT, пневматическое компрессионное устройство ActiveCare+SFT, DVTlite's Venowave, KCl системный компрессор, система Aircast VenaFlow, пневматическое оборудование для компрессионной терапии от SCD Compression System Express или Bio Compression Systems, Inc. (например, помпу можно выбрать из модели модели SC-2004, модели SC-2004-FC, модели SC-3004, модели SC-3004-FC, модели SC-2008, модели SC-2008-DL, модели SC-3008-T, системы BioCryo, модели IC-ВАР-DL или multi-flo DVT combo IC_1545-DL, а используемое с помпой надеваемое на тело изделие может быть 4-камерным, 8-камерным, надеваемым на тело изделием BioCryo, Multi-Flo или BioArterial).
Заболевания ЦНС
[000155] Полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности. В соответствии с одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к композициям, в частности, к молекулам нуклеиновых кислот, например, полинуклеотидам, кодирующим AADC, для применения при лечении болезни Паркинсона.
[000156] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полинуклеотиды согласно настоящему изобретению можно применять для лечения, профилактики или облегчения любого заболевания или нарушения, характеризующегося аберрантной или нежелательной экспрессией целевой последовательности, при этом полезный груз, т. е. AADC, замещается альтернативным полезным грузом.
[000157] Настоящее раскрытие относится к способу лечения заболевания, нарушения и/или состояния у субъекта-млекопитающего, в том числе человека-субъекта, предусматривающему введение субъекту любой из вирусных частиц, например, описываемых в настоящем документе AAV, полинуклеотидов AAV или геномов AAV (т. е. вирусных геномов или «вг»), или введение субъекту частицы, содержащей указанный полинуклеотид AAV или геном AAV, или введение субъекту любой из описанных композиций, в том числе фармацевтических композиций.
[000158] В соответствии с одним вариантом осуществления заболевание, нарушение и/или состояние представляет собой неврологическое заболевание, нарушение и/или состояние. Заболевания ЦНС могут быть заболеваниями, которые затрагивают любой компонент головного мозга (в том числе полушария головного мозга, таламус, ствол головного мозга и мозжечок) или спинного мозга.
[000159] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению, посредством доставки функционального полезного груза, который является терапевтическим продуктом, который может модулировать уровень или функцию генного продукта в ЦНС, можно применять для лечения нейродегенеративных заболеваний и/или заболеваний или нарушений, которые характеризуются нейродегенерацией, нервно-мышечных заболеваний, лизосомных заболеваний, травмы, травм костного мозга, боли (включая невропатическую боль), злокачественных опухолей нервной системы, демиелинизирующих заболеваний, аутоиммунных заболеваний нервной системы, нейротоксических синдромов, нарушений сна, генетических нарушений головного мозга и нарушений развития ЦНС. Функциональный полезный груз может облегчить или уменьшить симптомы, которые являются результатом аномального уровня и/или функции генного продукта (например, отсутствие или дефект белка) у нуждающегося в том субъекта или, в противном случае, обеспечивает полезный эффект в отношении нарушения ЦНС у нуждающегося в том субъекта.
[000160] В качестве неограничивающих примеров терапевтические продукты, доставляемые с помощью вирусных частиц согласно настоящему изобретению, могут включать без ограничения факторы роста и трофические факторы, цитокины, гормоны, нейромедиаторы, ферменты, антиапоптические факторы, ангиогенные факторы, а также любой белок, мутантная форма которого известна при патологических нарушениях, такой как белок «выживания двигательных нейронов» (SMN); антисмысловую РНК или средства для RNAi информационных РНК, кодирующих белки, представляющие терапевтический интерес при любом из рассматриваемых в настоящем документе заболеваний ЦНС; или микроРНК, которые функционируют при сайленсинге генов и посттранскрипционной регуляции экспрессии генов в ЦНС (например, специфическая для головного мозга Mir-128a, см., Adlakha and Saini, Molecular cancer, 2014, 13:33). Например, средство для RNAi, целью которого является фермент супероксиддисмутаза, может быть упаковано в вирусные частицы согласно настоящему изобретению для лечения ALS.
[000161] Факторы роста и трофические факторы могут включать без ограничения мозговой фактор роста (BDNF), эпидермальный фактора роста (EGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF), цилиарный нейротрофический фактор (CNTF), кортикотропин-рилизинг-фактор (CRF), глиальный фактор роста (GDNF), инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1), фактор роста нервов (NGF), нейротрофин-3 (NT-3), нейротрофин-4 (NT-4) и фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Цитокины могут включать интерлейкин-10 (IL-10), интерлейкин-6, интерлейкин-8, хемокин CXCL12 (SDF-1), TGF-бета и фактор роста и дифференцировки (GDF-1/10).
[000162] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть нейродегенеративными нарушениями, включая без ограничения болезни Альцгеймера (AD); боковой амиотрофический склероз (ALS); болезнь Крейтцфельда-Якоба (CJD); болезнь Хантингтона (HD); атаксия Фридрейха (FA); болезнь Паркинсона (PD); множественную системную атрофию (MSA); спинальную мышечную атрофию (SMA), рассеянный склероз (MS); первичную прогрессирующую афазию; прогрессирующий надъядерный паралич (PSP); деменцию; злокачественную опухоль головного мозга, нейродегенеративные заболевания, энцефалит, эпилепсию, генетические нарушения головного мозга, которые вызывают нейродегенерацию, пигментный ретинит (RP), мальформации головы и головного мозга, гидроцефалию, инсульт, прионную болезнь, детский нейрональный цероид-липофусциноз (INCL) (нейродегенеративное заболевание детей, вызванное дефицитом лизосомального фермента пальмитоил-протеинтиоэстеразы-1 (PPT1)) и другие.
[000163] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения заболеваний, которые ассоциированы с нарушениями роста и развития ЦНС, т. е. нарушений неврологического развития. В соответствии с некоторыми аспектами такие нарушения неврологического развития могут быть вызванными генетическими мутациями, включая без ограничения синдром ломкой Х-хромосомы (вызываемый мутациями в гене FMR1), синдром Дауна (вызываемый трисомией 21-й хромосомы), синдром Ретта, синдром Уильямса, синдром Эйнджелмена, синдром Смита-Магениса, синдром ATR-Х, синдром Барта, иммунную дисфункцию и/или инфекционные заболевания в раннем детстве, такие как хорея Сиденгама, шизофрения, спровоцированная врожденным токсоплазмозом, синдром врожденной краснухи, нарушения обмена веществ, такие как сахарный диабет и фенилкетонурия; нарушения питания и/или травма головного мозга, аутизм и его разнообразные формы.
[000164] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления вирусные частицы согласно настоящему изобретению можно применять для лечения опухоли в ЦНС, включая без ограничения невриному слухового нерва, астроцитому (I, II, III и IV класса), хордому, лимфому ЦНС, краниофарингиому, глиомы (например, глиому ствола головного мозга, эпендимому, глиому зрительного нерва, субэпендимому), медуллобластому, менингиому, метастатические опухоли головного мозга, олигодендроглиому, опухоли гипофиза, примитивную нейроэктодермальную опухоль (PNET) и шванному.
[000165] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут быть функциональными неврологическими нарушениями с двигательными и/или сенсорными симптомами, которые имеют неврологическое происхождение в ЦНС. В качестве неограничивающих примеров функциональные неврологические нарушения могут представлять собой хроническую боль, судороги, нарушения речи, непроизвольные движения и нарушения сна.
[000166] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой нарушения белого вещества (группа заболеваний, которая затрагивает нервные волокна в ЦНС), включая без ограничения болезнь Пелицеуса-Мерцбахер, гипомиелинизацию с атрофией базальных ганглиев и мозжечка, синдром Айкарди-Гутьереса, мегалэнцефалическую лейкоэнцефалопатию с подкорковыми кистами, врожденную мышечную дистрофию, миотоническую дистрофию, болезнь Вильсона, синдром Лоу, синдром Шегрена-Ларссона, PIBD или синдром Тэй, болезнь Коккейна, церебротендинальный ксантоматоз, синдром Зельвегера, неонатальную адренолейкодистрофию, детскую болезнь Рефсума, синдром, подобный синдрому Зеллвегера, псевдо-синдром Зельвегера, псевдо-неонатальную адренолейкодистрофию, бифункциональный дефицит белка, адренолейкодистрофию, сцепленную с Х-хромосомой, и адреномиелоневропатию и болезнь Рефсума.
[000167] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления неврологические нарушения могут представлять собой лизосомальные болезни накопления (LSD), вызванные неспособностью клеток в ЦНС разрушать конечные продукты метаболизма, включая без ограничения болезнь Ниманна-Пика (LSD, развивающуюся в результате наследственного дефицита кислой сфингомиелиназы (АНМ); метахроматическую лейкодистрофию (MLD) (LSD, которая характеризуется накоплением сульфатидов в глиальных клетках и нейронах, в результате наследственного дефицита арилсульфатазы А (ARSA)); глобоидную-клеточную лейкодистрофию (GLD) (LSD, вызываемую мутациями в галактозилцерамидазы); болезнь Фабри (LSD, вызываемую мутациями в гене альфа-галактозидазы А (GLA)); болезнь Гоше (вызываемую мутациями в гене бета-глюкоцереброзидазы (GBA)); ганглиозидоз GM1/GM2; мукополисахаридоз; болезнь Помпе и неврональный цероид-липофусциноз.
[000168] В соответствии с одним вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Паркинсона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Паркинсона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на AADC или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Паркинсона. В качестве неограничивающего примера состоянием является ранняя стадия болезни Паркинсона. В качестве другого неограничивающего примера состоянием является поздняя стадия болезни Паркинсона.
[000169] В соответствии с одним вариантом осуществления субъектом является пациент-человек, который имеет минимальный показатель двигательной активности от приблизительно 30 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 10 до максимального показателя приблизительно 100, от приблизительно 20 до максимального показателя приблизительно 100 в унифицированной оценочной шкале болезни Паркинсона.
[000170] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона в пределах последних 5 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона в пределах недели, 2 недель, 3 недель, 4 недель, 5 недель, 6 недель, 7 недель, 8 недель, 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 1 года, 2 лет, 3 лет, 4 лет или менее 5 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000171] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за 5-10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5 или 10 лет до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000172] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта была диагностирована болезнь Паркинсона за более чем 10 лет до начала лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций. В качестве неограничивающего примера у субъекта могла быть диагностирована болезнь Паркинсона за 10,5, 11, 11,5, 12, 12,5, 13, 13,5, 14, 14,5, 15, 15,5, 16, 16,5, 17, 17,5, 18, 18,5, 19, 19,5, 20, 20,5, 21, 21,5, 22, 22,5, 23, 23,5, 24 или более чем 24 года до лечения с помощью описываемых в настоящем документе композиций.
[000173] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение двигательных симптомов, таких как формы тремора и движений. Неограничивающие примеры форм тремора включают односторонние или двусторонние легкие формы тремора, двусторонние или средне-умеренные формы тремора или тяжелые формы тремора. Неограничивающие примеры движений включают мягкую брадикинезию, умеренную брадикинезию, тяжелую брадикинезию и утреннюю акинезию.
[000174] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть изменения равновесия, такие как без ограничения нарушение равновесия, нарушение установочных рефлексов, существенное нарушение или отсутствие равновесия.
[000175] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта может быть ухудшенное качество жизни. В качестве неограничивающего примера у субъекта может умеренно затрагиваться качество его жизни, например, он может испытывать некоторые ограничения в повседневной деятельности. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть качество жизни, которое ухудшилось по причине болезни.
[000176] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до ведения описываемой в настоящем документе композиции наблюдали изменение недвигательных симптомов. В качестве неограничивающего примера у субъекта до введения описываемой в настоящем документе композиции может быть легкое-умеренное когнитивное нарушение. В качестве другого неограничивающего примера у субъекта может быть значительное когнитивное нарушение, такое как деменция, которая также может включать поведенческие нарушения психического равновесия, такие как галлюцинации.
[000177] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций может быть удовлетворительная реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.
[000178] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть двигательные флуктуации, обуславливающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов.
[000179] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта до введения описанных в данном документе композиций могут быть рефракторные с медицинской точки двигательные флуктуации, состоящие из «истощения» и/или индуцированных леводопой дискинезий, обуславливающих значительное ограничение жизнедеятельности.
[000180] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения отсутствие диагностированного за последние 5 лет когнитивного нарушения, приемлемая реакция с ограниченными флуктуациями на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, односторонние или двусторонние легкие формы тремора, незначительное или полное отсутствие влияния на качество жизни и/или отсутствие нарушения равновесия.
[000181] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть умеренные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения легкое-умеренное когнитивное нарушение, первые признаки нарушения равновесия и установочных рефлексов, двигательные флуктуации, вызывающие легкое-умеренное ограничение жизнедеятельности, на один или более дофаминергических лекарственных препаратов, диагностированные за последние 5-10 лет двусторонние или средне-умеренные формы тремора, умеренная брадикинезия, и/или субъект испытывает некоторые ограничения в повседневной деятельности.
[000182] В соответствии с одним вариантом осуществления у субъекта могут быть дополнительные симптомы, ассоциированные с болезнью Паркинсона, такие как без ограничения, если болезнь Паркинсона была диагностирована более чем 10 лет до того, средние рефракторные двигательные флуктуации, истощение и/или индуцированная леводопой дискинезия, вызывающая значительное ограничение жизнедеятельности, тяжелые формы тремора, значительное нарушение равновесия и/или отсутствие равновесия, значительное нарушение когнитивных функций (например, деменция с нарушениями поведения или без них), тяжелая брадикинезия, качество жизни, которое заметно ухудшилось с болезнью и/или утренней акинезией.
[000183] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект был направлен к специалисту по двигательным расстройствам (MDS), но не подвергался глубокой стимуляции головного мозга.
[000184] В соответствии с одним вариантом осуществления субъект применяет DUOPA™ в комбинации с описанными в настоящем документе композициями. В качестве неограничивающего примера у субъекта может быть успешным лечение с помощью только DUOPA™. В качестве неограничивающего примера у субъекта может не быть успешным или может быть лишь частично успешным лечение с помощью только DUOPA™.
[000185] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является атаксия Фридрейха. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения атаксии Фридрейха полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на фратаксин или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения атаксии Фридрейха.
[000186] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является боковой амиотрофический склероз (ALS). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения ALS полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для SOD1 или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения ALS.
[000187] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением и/или состоянием является болезнь Хантингтона. В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения болезни Хантингтона полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на hRNA, miRNA, siRNA, RNAi для Htt или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения болезни Хантингтона.
[000188] В соответствии с другим вариантом осуществления неврологическим заболеванием, нарушением или состоянием является спинальная мышечная атрофия (SMA). В соответствии с одним вариантом осуществления применяемый для лечения SMA полинуклеотид содержит любую из SEQ ID NO: 2-23, таких как без ограничения SEQ ID NO: 6-9 и 17-23, в которых полезный груз заменен на SMN или любой другой полезный груз, который известен из уровня техники как применяемый для лечения SMA.
Циркадный ритм и циклы сон-бодрствование
[000189] Циркадный ритм представляет собой физические, психические и поведенческие изменения, которые имеют склонность соответствовать 24-часовому циклу. Циркадные ритмы могут влиять на циклы сон-бодрствование, секрецию гормонов, температуру тела и другие функции организма. Изменения циркадного ритма могут вызывать состояния и/или нарушения, такие как без ограничения нарушения сна (например, инсомнию), депрессию, биполярное расстройство, сезонное аффективное расстройство, ожирение и диабет.
[000190] В соответствии с одним вариантом осуществления описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC можно применять для лечения инсомнии.
[000191] Цикл сон-бодрствование включает периоды сна и периоды бодрствования. Как правило, в 24-часовом периоде общее количество часов сна меньше, чем общее количество часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 7-9 часов сна и 15-17 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8 часов сна и 16 часов бодрствования. В качестве неограничивающего примера цикл сон-бодрствование включает 8-10 часов сна и 14-16 часов бодрствования.
[000192] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта улучшают путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC.
[000193] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта регулируют путем введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера регуляция может представлять собой коррекцию большего количества периодов сна, имеющих место за ночь, и меньшего количества имеющих место периодов сна.
[000194] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, улучшается по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера субъект имеет увеличенный период сна и уменьшенный период бодрствования. В качестве неограничивающего примера субъект имеет уменьшенный период сна и увеличенный период бодрствования.
[000195] В соответствии с одним вариантом осуществления цикл сон-бодрствование у субъекта, которому вводят описываемые в настоящем документе полинуклеотиды AADC, регулируется по сравнению с циклом сон-бодрствование у субъекта до введения полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования может быть приблизительно одинаковой (например, +/- 1 час) на протяжении по меньшей мере 2 дней. В качестве еще одного неограничивающего примера длительность периодов сна и периодов бодрствования, в случае 24 часового периода, может варьировать в пределах 10 минут, 15 минут, 20 минут, 25 минут, 30 минут, 35 минут, 40 минут, 45 минут, 50 минут, 55 минут, 1 часа, 1,5 часа или 2 часов от предыдущего 24-часового периода.
[000196] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал сна с быстрым движением глаз (REM), который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. REM-сон, как правило, рассматривают как активный период сна, характеризуемый интенсивной активностью головного мозга, при котором мозговые волны являются динамичными и десинхронизированными. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 20-25% своего общего суточного периода сна в REM-сне. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал REM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000197] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал не-REM (NREM) сна, который субъект переживает в 24-часовом периоде, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. NREM-сон, как правило, характеризуется снижением физиологической активности, поскольку мозговые волны, измеренные с помощью EEG, становятся медленнее и имеют большую амплитуду. NREM содержит четыре стадии: стадия 1 представляет собой время сомнолентности или перехода от бодрствования к засыпанию, при котором мозговые волны и мышечная активность начинают замедляться; стадия 2 представляет собой период легкого сна, в течение которого останавливается движение глаз, а мозговые волны замедляются со случайными вспышками быстрых волн (иногда называемых сонными веретенами); стадия 3 и стадия 4 (совместно называемые медленноволновым сном) характеризуются наличием медленных мозговых волн (дельта-волн), чередующихся с меньшими, более быстрыми волнами, при этом движения глаз отсутствуют. Взрослый человек в среднем проводит приблизительно 75-80% своего общего суточного периода сна в NREM-сне и приблизительно половину своего общего суточного времени сна в стадии 2 NREM-сна.
[000198] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000199] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 1 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 1 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000200] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 2 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 2 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000201] В соответствии с одним вариантом осуществления интервал стадии 3 и 4 NREM-сна, который переживает субъект, изменяется после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна уменьшается на 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65% или более чем на 65%. В качестве неограничивающего примера интервал стадии 3 и 4 NREM-сна увеличивается на 1-5%, 1-10%, 5-10%, 5-15%, 10-15%, 15-20%, 15-25%, 20-25%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 40-50% или 40-60%.
[000202] В соответствии с одним вариантом осуществления периоды циклов NREM и REM более согласованы у субъекта после введения субъекту описываемых в настоящем документе полинуклеотидов AADC. Обычно циклы NREM и REM чередуются каждые 90-110 минут четыре-шесть раз за ночь.
ОПРЕДЕЛЕНИЯ
[000203] В различных местах настоящего описания заменители соединений по настоящему раскрытию раскрыты в группах или в диапазонах. В частности предполагается, что настоящее раскрытие включает в себя все без исключения отдельные подкомбинации членов таких групп и диапазонов.
[000204] Приблизительно: в контексте настоящего описания термин «приблизительно» означает +/- 10% от указанного значения.
[000205] Активность: в контексте настоящего описания термин «активность» относится к состоянию, при котором нечто происходит и осуществляется. Описываемые в настоящем документе композиции могут обладать активностью, и эта активность может участвовать в одном или более биологических событий.
[000206] Аденоассоциированный вирус: термин «аденоассоциированный вирус» или «AAV» в контексте настоящего описания относится к представителям рода Dependovirus, в том числе к любой частице, последовательности, гену, белку или их производному компоненту. В контексте настоящего описания термин «частица AAV» содержит капсид и полинуклеотид. Частица AAV может быть получена из любого описываемого в настоящем документе или известного из уровня техники серотипа, в том числе из комбинаций серотипов (т. е. «псевдотипированный» AAV), или из различных геномов (например, одноцепочечный или самокомплементарный). Кроме того, частица AAV может быть дефектной по репликации и/или подвергшейся целенаправленному воздействию.
[000207] Вводимый в комбинации: в контексте настоящего описания термин «вводимый в комбинации» или «комбинированное введение» означает, что два или более средства (например, AAV) вводят субъекту в одно и то же время или в пределах такого интервала, чтобы могло иметь место перекрытие эффекта от каждого средства на пациента, и/или чтобы субъект в некоторый момент времени одновременно подвергался воздействию обоих средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления их вводят в пределах приблизительно 60, 30, 15, 10, 5 или 1 минуты друг от друга или в пределах приблизительно 24 часов, 12 часов, 6 часов, 3 часов от по меньшей мере одной дозы одного или более других средств. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение происходит согласно перекрывающимся режимам дозирования. В контексте настоящего описания термин «режим дозирования» относится к множеству разделенных по времени доз. Такие дозы могут вводиться через равные промежутки времени или могут включать один или более перерывов при введении. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления интервал между введением средств очень незначителен, поэтому достигается комбинаторный (например, синергический) эффект.
[000208] Ослабление: в контексте настоящего описания термины «ослабление» или «ослабляющий» относятся к снижению тяжести по меньшей мере одного показателя состояния или заболевания. Например, в контексте нейрогенеративного заболевания, ослабление включает уменьшение потери нейронов.
[000209] Животное: в контексте настоящего описания термин «животное» относится к любому представителю царства Животные. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к людям на любой стадии развития. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «животное» относится к отличным от человека животным на любой стадии развития. В соответствии с определенными вариантами осуществления отличным от человека животным человека является млекопитающее (например, грызун, мышь, крыса, кролик, обезьяна, собака, кошка, овца, крупный рогатый скот, примат или свинья). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животные включают без ограничения млекопитающих, птиц, рептилий, амфибий, рыб и червей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления животным является трансгенное животное, животное, полученное методами генной инженерии, или клон.
[000210] Антисмысловая цепь: в контексте настоящего описания термины «антисмысловая цепь», или «первая цепь», или «направляющая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая практически комплементарна участку из приблизительно 10-50 нуклеотидов, например, из приблизительно 15-30, 16-25, 18-23 или 19-22 нуклеотидов, в мРНК гена, подвергающемуся целенаправленному воздействию с целью сайленсинга. Антисмысловая цепь или первая цепь имеет последовательность, в достаточной степени комплементарную последовательности необходимой целевой мРНК для непосредственного мишень-специфического сайленсинга, например, комплементарную в достаточной степени для запуска разрушения необходимой целевой мРНК с помощью аппарата или процесса RNAi.
[000211] Примерно: в контексте настоящего описания термин «примерно» или «приблизительно», применительно к одному или более представляющим интерес значениям, относится к значению, которое является схожим с приведенным эталонным значением. В соответствии с определенными вариантами осуществления термин «примерно» или «приблизительно» относится к диапазону значений, которые находятся в пределах 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% или менее в любом направлении (больше или меньше) от указанного референтного значения, если только не указано иное или не очевидно иное из контекста (кроме случаев, когда такое число превышало бы 100% от возможного значения).
[000212] Ассоциированный с: в контексте настоящего описания термины «ассоциированный с», «конъюгированный», «соединенный», «прикрепленный» и «связанный», при использовании в отношении двух или более фрагментов, означают, что фрагменты физически ассоциированы или соединены друг с другом, либо непосредственно, либо посредством одного или более дополнительных фрагментов, которые служат связывающим средством, с образованием структуры, которая является достаточно стабильной, чтобы фрагменты оставались физически ассоциированными в условиях использования структуры, например, физиологических условиях. «Ассоциация» не обязательно должна осуществляться при помощи прямой ковалентной химической связи. Она может также предполагать ионную или водородную связь или гибридизацию на основе связности, достаточно стабильной для того, чтобы «ассоциированные» молекулярные частицы оставались физически ассоциированными.
[000213] Бифункциональный: в контексте настоящего описания термин «бифункциональный» относится к любому веществу, молекуле или фрагменту, который способен к поддержанию или поддерживает по меньшей мере две функции. Функции могут затрагивать один и тот же результат или различный результат. Структура, которая выполняет такую функцию, может быть одной и той же или различной.
[000214] Биологически активный: в контексте настоящего описания фраза «биологически активный» относится к характеристике любой материи (например, AAV), которая обладает активностью в биологической системе и/или организме. Например, вещество, которое при введении в организм обладает биологическим эффектом на этот организм, считают биологически активным. В соответствии с конкретными вариантами осуществления полинуклеотид согласно настоящему изобретению можно считать биологически активным, если хотя бы часть полинуклеотидов является биологически активными или имитируют активность, которая считается биологически релевантной.
[000215] Биологическая система: в контексте настоящего описания термин «биологическая система» относится к группе органов, тканей, клеток, внутриклеточных компонентов, белков, нуклеиновых кислот, молекул (включая без ограничения биомолекулы), которые совместно функционируют, выполняя определенную биологическую задачу в клеточных мембранах, клеточных компартментах, клетках, тканях, органах, системах органов, многоклеточных организмах или любых биологических организмах. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы представляют собой клеточные сигнальные пути, содержащие межклеточные и/или внеклеточные сигнальные биомолекулы клетки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления биологические системы включают сигнальные события фактора роста во внеклеточном/клеточном матриксе и/или клеточных нишах.
[000216] Биомолекула: в контексте настоящего описания термин «биомолекула» представляет собой любую природную молекулу, в основе которой лежат аминокислоты, нуклеиновые кислоты, углеводы или липиды и т. п.
[000217] Комплементарный и практически комплементарный: в контексте настоящего описания термин «комплементарный» относится к способности полинуклеотидов к образованию пар оснований друг с другом. Пары оснований, как правило, образуются с помощью водородных связей между нуклеотидными звеньями в антипараллельных полинуклеотидных цепях. Комплементарные полинуклеотидные цепи могут образовывать пары оснований посредством образования уотсон-криковских пар (например, A с T, A с U, C с G) или любым другим способом, который обеспечивает возможность образования дуплексов. Поскольку специалисты в данной области техники осведомлены, что при использовании РНК в отличие от ДНК урацил, а не тимин является основанием, которое считается комплементарным аденозину. Тем не менее, если U обозначен в контексте настоящего изобретения, предполагается возможность замены T, если не указано иное. Полная комплементарность или 100% комплементарность относится к ситуации, в которой каждое нуклеотидное звено в одной полинуклеотидной цепи может образовать водородную связь с нуклеотидным звеном во второй полинуклеотидной цепи. Менее чем полная комплементарность относится ситуации, в которой некоторые, но не все нуклеотидные звенья в двух цепях могут образовывать водородные связи друг с другом. Например, в случае двух последовательностей из 20 мономерных звеньев, если только две пары оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 10% комплементарность. В том же примере, если 18 пар оснований на каждой цепи могут образовывать водородные связи друг с другом, полинуклеотидные цепи проявляют 90% комплементарность. В контексте настоящего описания термин «практически комплементарный» означает, что siRNA имеет последовательность (например, в антисмысловой цепи), которая является достаточной для связывания необходимой целевой мРНК и для запуска РНК-сайленсинга целевой мРНК.
[000218] Соединение: в контексте настоящего описания термин «соединение» относится к индивидуальной химической структурной единице. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления конкретное соединение может существовать в одной или более изомерных или изотопных формах (включая без ограничения стереоизомеры, геометрические изомеры и изотопы). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется только в одной такой форме. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединение представлено или используется в виде смеси из двух или более таких форм (включая без ограничения рацемическую смесь стереоизомеров). Специалисты в данной области техники знают, что некоторые соединения существуют в различных таких формах и характеризуются различными свойствами и/или активностями (включая без ограничения биологические активности). В таких случаях рядовой специалист в данной области техники без труда подберет или исключит определенные формы соединения для применения в соответствии с настоящим изобретением. Например, соединения, которые содержат асимметрично замещенные атомы углерода, можно выделить в оптически активной или рацемической форме. Из уровня техники известны способы получения оптически активных форм из оптически активных исходных материалов, такие как разделение рацемических смесей или стереоселективный синтез. Многие геометрические изомеры олефинов, C=N двойных связей и подобного также могут присутствовать в описанных в данном документе соединениях, и в настоящем раскрытии предусматриваются все такие стабильные изомеры. Цис- и транс-геометрические изомеры соединений по настоящему раскрытию описаны и могут быть выделены в виде смеси изомеров или в виде разделенных изомерных форм.
[000219] Соединения по настоящему раскрытию также включают таутомерные формы. Таутомерные формы образуются в результате обмена одинарной связи на соседнюю двойную связь и сопутствующей миграции протона. Таутомерные формы включают прототропные таутомеры, которые представляют собой изомерные протонированные состояния с той же эмпирической формулой и суммарным зарядом.
[000220] Соединения по настоящему раскрытию также включают все изотопы атомов, встречающихся в промежуточных или конечных соединениях. Выражение «изотопы» относится к атомам с одним атомным числом, но другими массовыми числами, образующимся из различного числа нейтронов в ядрах. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий.
[000221] Соединения и соли по настоящему раскрытию могут быть получены при помощи стандартных способов в комбинации с молекулами растворителей или воды с образованием сольватов и гидратов.
[000222] Консервативный: в контексте настоящего описания термин «консервативный» относится к нуклеотидам или аминокислотным остаткам соответственно полинуклеотидной последовательности или полипептидной последовательности, которые встречаются неизмененными в одном и том же положении у двух или более сравниваемых последовательностей. Нуклеотиды или аминокислоты, которые являются сравнительно консервативными, представляют собой такие, которые консервативны в более родственных последовательностях по сравнению с нуклеотидами или аминокислотами, встречающимися в других местах в последовательностях.
[000223] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «полностью консервативными», если они на 100% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «высококонсервативными», если они приблизительно на 70% идентичны, приблизительно на 80% идентичны, приблизительно на 90% идентичны, приблизительно на 95% идентичны, приблизительно на 98% идентичны или приблизительно на 99% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательностей являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны друг другу. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления две или более последовательности являются «консервативными», если они по меньшей мере на 30% идентичны, по меньшей мере на 40% идентичны, по меньшей мере на 50% идентичны, по меньшей мере на 60% идентичны, по меньшей мере на 70% идентичны, по меньшей мере на 80% идентичны, по меньшей мере на 90% идентичны или по меньшей мере на 95% идентичны, по меньшей мере на 98% идентичны или по меньшей мере на 99% идентичны друг другу. Консервативность последовательности может быть применима ко всей длине олигонуклеотида, полинуклеотида или полипептида или может быть применима к его части, участку или элементу.
[000224] В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.
[000225] В соответствии с одним вариантом осуществления консервативные последовательности не являются непрерывными. Специалист в настоящей области техники может понять как осуществить выравнивание при наличии в последовательностях при непрерывном выравнивании гэпов и выровнять соответствующие остатки, несмотря на присутствующие вставки или делеции.
[000226] Доставка: в контексте настоящего описания термин «доставка» относится к процессу или способу доставки соединения, такого как парвовирус, например, AAV и/или соединение, вещество, молекулярная частица, фрагмент, груз или полезный груз на основе AAV, к цели. Такой целью может быть клетка, ткань, орган, организм или система (как биологическая, так и произведенная).
[000227] Средство доставки: в контексте настоящего описания «средство доставки» относится к любому средству или веществу, которое облегчает, по меньшей мере частично, in vivo и/или in vitro доставку полинуклеотида и/или одного или более веществ (включая без ограничения соединения и/или композиции согласно настоящему изобретению, например, вирусные частицы или векторы экспрессии) к целевым клеткам.
[000228] Дестабилизированный: в контексте настоящего описания термин «дестабилизированный», «дестабилизировать» или «дестабилизирующий участок» означает участок или молекулу, которая является менее стабильной, чем исходная, эталонная, дикого типа или нативная форма того же участка или молекулы.
[000229] Детектируемая метка: в контексте настоящего описания термин «детектируемая метка» относится к одному или более маркерам, сигналам или фрагментам, которые присоединены, включены или ассоциированы с другой молекулярной частицей, которая легко детектируется известными в настоящей области техники способами, включая радиографию, флуоресценцию, хемилюминесценцию, ферментативную активность, абсорбционную иммунологическую детекцию и т. п. Детектируемые метки могут включать радиоизотопы, флуорофоры, хромофоры, ферменты, красители, ионы металла, лиганды, такие как биотин, авидин, стрептавидин и гаптены, квантовые точки и т. п. Детектируемые метки могут быть иметь любое расположение в молекулярной частице, к которой они присоединены, в которую включены или с которой ассоциированы. Например, при присоединении, включении в или ассоциировании с пептидом или белком, они могут находиться среди аминокислот, пептидов или белков или быть расположенными на N- или С-конце.
[000230] Режим дозирования: в контексте настоящего описания «режим дозирования» представляет собой график введения или определенный врачом режим лечения, профилактики или паллиативной терапии.
[000231] Эффективное количество: в контексте настоящего описания термин «эффективное количество» средства, представляет собой такое количество, которое достаточно для обеспечения полезных или желаемых результатов, например, при введении однократной дозы или множества доз в подвергаемую воздействию клетку, при излечении, снижении, облегчении или уменьшении одного или более симптомов нарушения, клинических результатов, и само по себе «эффективное количество» зависит от контекста, в котором это выражение употребляется. Например, в контексте введения средства, которое обеспечивает лечение болезни Паркинсона, эффективное количество средства представляет собой, например, количество, достаточное для осуществления лечения болезни Паркинсона, которое определено в данном документе, по сравнению с ответом, полученным без введения средства.
[000232] Инкапсулировать: в контексте настоящего описания термин «инкапсулировать» означает включать, окружать или заключать.
[000233] Сконструированный: в контексте настоящего описания варианты осуществления характеризуют как «сконструированные», если они разработаны такими, чтобы имели признак и свойство, либо структурное, либо химическое, которое отличается от такового у первоначальной, дикого типа или нативной молекулы. Таким образом, сконструированные средства или молекулярные частицы являются такими, чья разработка и/или получение включают действие при участии человека.
[000234] Эпитоп: в контексте настоящего описания «эпитоп» относится к поверхности или участку на молекуле, которые могут взаимодействовать с биомолекулой. Например, белок может содержать одну или более аминокислот, например, эпитоп, который взаимодействует с антителом, например, с биомолекулой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, эпитоп может представлять собой линейный отрезок аминокислот или трехмерную структуру, образованную уложенными аминокислотными цепями.
[000235] Экспрессия: в контексте настоящего описания «экспрессия» последовательности нуклеиновой кислоты относится к одному или более из следующих событий: (1) производству матрицы РНК с последовательности ДНК (например, путем транскрипции); (2) процессингу РНК-транскрипта (например, путем сплайсинга, редактирования, образование 5′-кэпа и/или процессинга 3′-конца); (3) трансляции РНК в полипептид или белок; (4) укладке полипептида или белка; и (5) посттрансляционной модификации полипептида или белка.
[000236] Признак: в контексте настоящего описания «признак» относится к характеристике, свойству или отличительному элементу.
[000237] Состав: в контексте настоящего описания термин «состав» включает по меньшей мере один полинуклеотид, и/или соединение, и/или композицию согласно настоящему раскрытию (например, вектор, частицу AAV и т. д.) и средство доставки.
[000238] Фрагмент: «фрагмент», в контексте настоящего описания, относится к непрерывной части целого. Например, фрагменты белков могут представлять собой полипептиды, полученные при расщеплении полноразмерного белка, выделенного из культивируемых клеток. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагмент белка включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250 или более аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фрагменты антитела включают части антитела, подвергаемые ферментативному расщеплению или синтезированные таким образом.
[000239] Функциональный: в контексте настоящего описания «функциональная» биологическая молекула представляет собой биологическую молекулу и/или молекулярную частицу со структурой и в форме, в которой она проявляет свойство и/или активность, которыми она характеризуется.
[000240] Экспрессия гена: термин «экспрессия гена» относится к процессу, при котором последовательность нуклеиновой кислоты подвергается успешной транскрипции и, в большинстве случаев, трансляции с образованием белка или пептида. Для ясности, в случае, когда упоминается измерение «экспрессии гена», это следует понимать как означающее, что измерения могут относиться к продукту транскрипции нуклеиновой кислоты, например, РНК или мРНК, или к состоящему из аминокислот продукту трансляции, например, полипептидам или пептидам. Способы измерения количества или уровней РНК, мРНК, полипептидов и пептидов хорошо известны в уровне техники.
[000241] Гомология: в контексте настоящего описания термин «гомология» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между молекулами нуклеиновых кислот (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления полимерные молекулы считаются «гомологичными» друг другу, если их последовательности являются по меньшей мере на 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 99% идентичными или схожими. Выражение «гомологичный» обязательно относится к сравнению между по меньшей мере двумя последовательностями (полинуклеотидными или полипептидными последовательностями). В соответствии с настоящим изобретением две полинуклеотидные последовательности считаются гомологичными, если полипептиды, которые они кодируют, по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% или даже 99% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления гомологичные полинуклеотидные последовательности характеризуются способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. Для полинуклеотидных последовательностей длиной менее 60 нуклеотидов гомология обычно определяется способностью кодировать отрезок, содержащий по меньшей мере 4-5 однозначно указанных аминокислот. В соответствии с настоящим изобретением две белковые последовательности считаются гомологичными, если белки по меньшей мере на 50%, 60%, 70%, 80% или 90% идентичны по меньшей мере на одном отрезке по меньшей мере из приблизительно 20 аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичный белок может характеризоваться большой общей степенью гомологии и высокой степенью гомологии на протяжении по меньшей мере одного короткого отрезка по меньшей мере из 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 или более аминокислот. В множестве вариантов осуществления гомологичные белки имеют один или более характерных элементов последовательности. В контексте настоящего описания термин «характерный элемент последовательности» относится к мотиву, присутствующему в родственных белках. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления присутствие таких мотивов коррелирует с конкретной активностью (такой как биологическая активность).
[000242] Идентичность: в контексте настоящего описания термин «идентичность» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между олигонуклеотидными и/или полинуклеотидными молекулами (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента идентичности двух полинуклеотидных последовательностей, например, можно осуществить путем выравнивания двух последовательностей в контексте оптимального сравнения (например, можно внести гэпы в одну или обе из первой и второй последовательности нуклеиновых кислот для оптимального выравнивания, а неидентичные последовательности в контексте сравнения можно не учитывать). В соответствии с определенными вариантами осуществления длина выравниваемой последовательности для сравнения составляет по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% или по меньшей мере 100% от длины эталонной последовательности. Затем сравнивают нуклеотиды в соответствующих нуклеотидных положениях. Если положение в первой последовательности занято тем же самым нуклеотидом, что и соответствующее положение во второй последовательности, то молекулы являются идентичными по этому положению. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой зависимость числа идентичных положений, общих для последовательностей, с учетом числа гэпов и длины каждого гэпа, который необходим для введения с целью оптимального выравнивания двух последовательностей. Сравнение последовательностей и определение процента идентичности между двумя последовательностями может быть выполнено при помощи математического алгоритма. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить с помощью способов, таких как описанные в работах Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; и Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; каждая из которых включена в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Например, процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями можно определить, например, с помощью алгоритма Майера и Миллера (CABIOS, 1989, 4: 11-17), который был включен в программу ALIGN (версия 2.0) с использованием матрицы вероятности мутаций PAM120, штрафа за удлинение гэпа 12 и штрафа за открытие гэпа 4. Процент идентичности между двумя нуклеотидными последовательностями альтернативно можно определить с помощью программы GAP в пакете компьютерной программы GCG с использованием матрицы NWSgapdna.CMP. Способы, обычно используемые для определения процента идентичности между последовательностями, включают без ограничения способы, раскрытые в работе Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48: 1073 (1988); включенной в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки. Методики определения идентичности закодированы в общедоступных компьютерных программах. Иллюстративные компьютерные программы для определения гомологии между двумя последовательностями включают без ограничения программный пакет GCG, Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984)), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215, 403 (1990)).
[000243] Ингибировать экспрессию гена: в контексте настоящего описания фраза «ингибировать экспрессию гена» означает, что это приводит к снижению количества продукта экспрессии гена. Продукт экспрессии может представлять собой РНК, транскрибируемую с гена (например, мРНК), или полипептид, транслируемый с мРНК, которая транскрибируется с гена. Как правило, снижение уровня мРНК приводит в результате к снижению уровня полипептида, транслируемого с нее. Уровень экспрессии можно определить с применением стандартных методик для измерения уровня мРНК или белка.
[000244] In vitro: в контексте настоящего описания «in vitro» относится к событиям, которые происходят в искусственной среде, например, в пробирке или реакционном сосуде, в клеточной культуре, в чашке Петри и т. д., а не внутри организма (например, животного, растения или микроба).
[000245] In vivo: в контексте настоящего описания термин «in vivo» относится к событиям, которые происходят внутри организма (например, животного, растения или микроба или в их клетке или ткани).
[000246] Выделенный: в контексте настоящего описания термин «выделенный» является синонимом «отделенный», но охватывает вместе с тем базирующееся на умозаключении отделение, осуществляемое при участии человека. В соответствии с одним вариантом осуществления выделенное вещество или молекулярная частица представляет собой вещество или молекулярную частицу, которые были отделены по меньшей мере от некоторых компонентов, с которыми они ранее были ассоциированы (либо в природе, либо в экспериментальных условиях). Выделенные вещества могут иметь различные уровни чистоты по отношению к веществам, с которыми они были ассоциированы. Выделенные вещества и/или молекулярные частицы могут быть отделены по меньшей мере приблизительно от 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90% или более других компонентов, с которыми они были изначально ассоциированы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделенные средства имеют степень чистоты более чем приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 91%, приблизительно 92%, приблизительно 93%, приблизительно 94%, приблизительно 95%, приблизительно 96%, приблизительно 97%, приблизительно 98%, приблизительно 99% или более приблизительно 99%. В контексте настоящего описания вещество является «чистым», если оно практически не содержит других компонентов.
[000247] Практически выделенный: «практически выделенный» означает, что соединение практически отделено от среды, в которой оно было образовано или обнаружено. Частичное отделение может включать, например, композицию с высоким содержанием соединения по настоящему раскрытию. Практическое отделение может включать композиции, содержащие по меньшей мере приблизительно 50%, по меньшей мере приблизительно 60%, по меньшей мере приблизительно 70%, по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95%, по меньшей мере приблизительно 97% или по меньшей мере приблизительно 99% по массе соединения по настоящему раскрытию или его соли. Способы выделения соединений и их солей общеизвестны в данной области техники. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение вещества или молекулярной частицы включает разрушение химических ассоциаций и/или связей. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления выделение включает только отделение от компонентов, с которыми выделенное вещество или молекулярная частица ранее были объединены, и не предусматривает такое разрушение.
[000248] Модифицированный: в контексте настоящего описания термин «модифицированный» относится к измененному состоянию или структуре молекулы или молекулярной частицы согласно настоящему изобретению по сравнению с исходной или эталонной молекулой или частицей. Молекулы можно модифицировать разнообразными путями, в том числе химически, структурно и функционально. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления соединения и/или композиции согласно настоящему раскрытию модифицированы путем внесения не встречающихся в природе аминокислот или не встречающихся в природе нуклеотидов.
[000249] Мутация: в контексте настоящего описания термин «мутация» относится к модификации и/или изменению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации могут представлять собой модификации и/или изменения в белках (включая пептиды и полипептиды) и/или нуклеиновых кислотах (включая полинуклеиновые кислоты). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления мутации включают модификации и/или изменения в последовательности белка и/или нуклеиновой кислоты. Такие модификации и/или изменения могут включать добавление, замену и/или делецию одной или более аминокислот (в случае белков и/или пептидов) и/или нуклеотидов (в случае нуклеиновых кислот и/или полинуклеиновых кислот). В соответствии с вариантами осуществления, где мутации включают добавление и/или замену аминокислот и/или нуклеотидов, такие добавления и/или замены могут включать 1 или более аминокислотных и/или нуклеотидных остатков и могут включать модифицированные аминокислоты и/или нуклеотиды.
[000250] Встречающийся в природе: в контексте настоящего описания термин «встречающийся в природе» означает существующие в природе без искусственной помощи или участия человека
[000251] Отличное от человека позвоночное: в контексте настоящего описания термин «отличное от человека позвоночное» включает всех позвоночных, за исключением Homo sapiens, включая дикие и одомашненные виды животных. Примеры отличных от человека позвоночных включают без ограничения таких млекопитающих, как альпака, бантенг, бизон, верблюд, кошка, крупный рогатый скот, олень, собака, осел, гаял, коза, морская свинка, лошадь, лама, мул, свинья, кролик, северный олень, овца, буйвол и як.
[000252] Нуклеиновая кислота: в контексте настоящего описания термины «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид» относятся к любым полимерам нуклеиновой кислоты, состоящим или из полидезоксирибонуклеотидов (содержащих 2-дезокси-D-рибозу), или из полирибонуклеотидов (содержащих D-рибозу), или из полинуклеотида любого другого типа, который представляет собой N-гликозид пуринового или пиримидинового основания или модифицированных пуриновых или пиримидиновых оснований. Не предполагаются различия по длине между терминами «нуклеиновая кислота», «полинуклеотид» и «олигонуклеотид», и эти термины используются взаимозаменяемо. Эти термины относятся только к первичной структуре молекулы. Таким образом, эти термины включают двух- и одноцепочечную ДНК, а также двух- и одноцепочечную РНК.
[000253] Нецелевой: в контексте настоящего описания «нецелевой» относится к любому непредусмотренному эффекту в отношении любой одной или более мишени, гена и/или клеточного транскрипта.
[000254] Открытая рамка считывания: в контексте настоящего описания «открытая рамка считывания» или «ORF» относится к последовательности, которая не содержит стоп-кодона в указанной рамке считывания.
[000255] Функционально связанный: в контексте настоящего описания термин «функционально связанный» относится к функциональному соединению между двумя или более молекулами, конструкциями, транскриптами, молекулярными частицами, фрагментами и т. п.
[000256] Частица: в контексте настоящего описания термин «частица» представляет собой вирус, содержащий в своем составе по меньшей мере два компонента: белковый капсид и полинуклеотидную последовательность, заключенную внутри капсида.
[000257] Пациент: в контексте настоящего описания «пациент» относится к субъекту, который может обратиться за помощью или нуждаться в лечении, требовать лечения, проходить лечение, будет проходить лечение, или к субъекту, который находится под наблюдением обученного специалиста по конкретному заболеванию или состоянию, такому как, например, болезнь Паркинсона.
[000258] Полезный груз: в контексте настоящего описания «полезный груз» относится к одному или более полинуклеотидам или полинуклеотидным участкам, закодированным посредством вирусного генома или в вирусном геноме, или продукту экспрессии такого полинуклеотида или полинуклеотидного участка, например, трансгена, полинуклеотида, кодирующего полипептид или несколько полипептидов, или модулирующей нуклеиновой кислоты или регуляторной нуклеиновой кислоты.
[000259] Конструкция полезного груза: в контексте настоящего описания «конструкция полезного груза» представляет собой один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих полезный груз, который фланкирован на одной или обеих сторонах последовательностью инвертированных концевых повторов (ITR). Конструкция полезного груза представляет собой матрицу, которая реплицируется в клетке для вирусного производства с образованием вирусного генома.
[000260] Вектор с конструкцией полезного груза: в контексте настоящего описания «вектор с конструкцией полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и регуляторные участки для репликации и экспрессии в бактериальных клетках.
[000261] Вектор экспрессии конструкции полезного груза: в контексте настоящего описания, «вектор экспрессии конструкции полезного груза» представляет собой вектор, кодирующий или содержащий конструкцию полезного груза и дополнительно содержащий один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.
[000262] Пептид: в контексте настоящего описания «пептид» имеет длину менее 50 аминокислот или равную 50 аминокислотам, например, приблизительно 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 или 50 аминокислотам.
[000263] Фармацевтически приемлемый: фраза «фармацевтически приемлемый» используется в данном документе для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, по результатам тщательной клинической оценки, являются подходящими для применения в контакте с тканями человеческих организмов и животных без чрезмерной токсичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, соизмеримых с разумным соотношением выгоды и риска.
[000264] Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества: фраза «фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества» в контексте настоящего описания относится к любому ингредиенту, отличному от соединений и/или активных средств (например, которые описаны в настоящем документе), присутствующих в фармацевтических композициях и обладающих свойствами, практически не вызывающими токсичность и воспаление у субъекта, такого как пациент. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества представляют собой среды, способные суспендировать и/или растворять активные средства. Вспомогательные вещества могут включать, например, антиадгезивы, антиоксиданты, связующие вещества, покрытия, средства для спрессовывания, разрыхлители, красители (пигменты), смягчающие вещества, эмульгаторы, наполнители (разбавители), пленкообразователи или покрытия, ароматизаторы, отдушки, скользящие вещества (усилители текучести), смазывающие вещества, консерванты, краски для печати, сорбенты, суспензионные или диспергирующие средства, подсластители и гидратационную воду. Иллюстративные вспомогательные вещества включают без ограничения: бутилированный гидрокситолуол (BHT), карбонат кальция, фосфат кальция (двухосновный), стеарат кальция, кроскармеллозу, перекрестно сшитый поливинилпирролидон, лимонную кислоту, кросповидон, цистеин, этиленцеллюлозу, желатин, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, лактозу, стеарат магния, мальтит, маннит, метионин, метилцеллюлозу, метилпарабен, микрокристаллическую целлюлозу, полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, повидон, прежелатинизированный крахмал, пропилпарабен, ретинилпальмиат, шеллак, диоксид кремния, карбоксиметилцеллюлозу натрия, цитрат натрия, натрия крахмала гликолят, сорбит, крахмал (кукурузный), стеариновую кислоту, сахарозу, тальк, диоксид титана, витамин A, витамин E, витамин C и ксилит.
[000265] Фармацевтически приемлемые соли: фармацевтически приемлемые соли соединений, которые описаны в настоящем документе. В контексте настоящего описания термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к производным или формах раскрытых соединений, где исходное соединение модифицировано посредством превращения существующего кислотного или основного фрагмента в его солевую форму (например, которые получены путем осуществления реакции группы свободного основания с подходящей органической кислотой). Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, без ограничения, соли основных остатков, таких как амины, с минеральными или органическими кислотами; соли кислотных остатков, таких как карбоновые кислоты, с щелочами или органическими основаниями и т.п. Типичные соли присоединения кислоты включают ацетат, соли уксусной кислоты, адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, соли бензолсульфоновой кислоты, бензоат, бисульфат, борат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, 2-гидрокси-этансульфонат, лактобионат, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, стеарат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, толуолсульфонат, ундеканоат, валерат и т.п. Типичные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают катионы натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п., а также нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, в том числе, без ограничения, катионы аммония, тетраметиламмония, тетраэтиламмония, метиламина, диметиламина, триметиламина, триэтиламина, этиламина и т.п. Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему раскрытию включают традиционные нетоксичные соли, образованные исходным соединением, например, с нетоксичными неорганическими или органическими кислотами. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему раскрытию может быть синтезированной солью, полученной из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, посредством традиционных химических способов. Обычно такие соли можно получить посредством проведения реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или же в их смеси; обычно предпочтительными являются неводные среды, подобные эфиру, этилацетату, этанолу, изопропанолу или ацетонитрилу. Перечень подходящих солей можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, и Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977); каждый из которых включен в данный документ во всей своей полноте посредством ссылки.
[000266] Фармацевтически приемлемый сольват: термин «фармацевтически приемлемый сольват» в контексте настоящего описания относится к кристаллической форме соединения согласно настоящему изобретению, где молекулы подходящего растворителя включены в кристаллическую решетку. Подходящий растворитель является физиологически переносимым во вводимой дозе. Например, сольваты можно получить посредством кристаллизации, перекристаллизации или осаждения из раствора, который включает органические растворители, воду или их смесь. Примерами подходящих растворителей являются этанол, вода (например, моно-, ди- и тригидраты), N-метилпирролидинон (NMP), диметилсульфоксид (DMSO), N,N'-диметилформамид (DMF), N,N'-диметилацетамид (DMAC), 1,3-диметил-2-имидазолидинон (DMEU), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2-(1H)-пиримидинон (DMPU), ацетонитрил (ACN), пропиленгликоль, этилацетат, бензиловый спирт, 2-пирролидон, бензилбензоат и т. п. Если растворителем является вода, сольват называется «гидратом». В соответствии с некоторыми вариантами осуществления включенный в сольват растворитель относится к типу или находится на уровне, который является физиологически переносимым для организма, в который вводят такой сольват (например, в единичной лекарственной форме из фармацевтической композиции).
[000267] Фармакокинетический: в контексте настоящего описания «фармакокинетический» относится к любому одному или более свойствам молекулы или соединения, когда оно относится к определению поведения веществ, вводимых в живой организм. Фармакокинетика разделена на несколько областей, в том числе степень и скорость всасывания, распределение, метаболизм и выведение из организма. В целом это обозначается как ADME, где: (A) всасывание представляет собой процесс проникновения вещества в кровоток; (D) распределение представляет собой распространение или рассредоточение веществ в жидкостях и тканях организма; (M) метаболизм (или биотрансформация) представляет собой необратимое превращение исходных соединений в дочерние метаболиты; и (E) выведение из организма (или элиминация) относится к удалению веществ из организма. В редких случаях некоторые лекарственные препараты необратимо накапливаются в ткани организма.
[000268] Физико-химический: в контексте настоящего описания «физико-химический» означает физическое и/или химическое свойство или относится к физическому и/или химическому свойству.
[000269] Предупреждение: в контексте настоящего описания термин «предупреждение» относится к частичной или полной задержке проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или клинических проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке проявления одного или более симптомов, признаков или проявлений конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния; частичной или полной задержке прогрессирования инфекции, конкретного заболевания, нарушения и/или состояния; и/или снижению риска развития патологии, ассоциированной с инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.
[000270] Пролекарство: настоящее раскрытие также включает пролекарства соединений, которые описаны в данном документе. В контексте настоящего описания «пролекарства» относятся к любому веществу, молекуле или молекулярной частице, которые находятся в форме, предшествующей для такого вещества, молекулы или молекулярной частицы, начиная действовать в качестве лекарства при химическом или физическом изменении. Пролекарства могут быть ковалентно связаны или секвестированы некоторым образом и высвобождают или превращаются в активный лекарственный фрагмент до введения, при введении или после введения субъекту-млекопитающему. Получение и применение пролекарств рассмотрено в работе T. Higuchi and V. Stella, ʺPro-drugs as Novel Delivery Systems,ʺ Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, и в работе Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, обе из которых включены в данный документ во всей своей полноте при помощи ссылки.
[000271] Пролиферировать: в контексте настоящего описания термин «пролиферировать» означает расти, размножаться, реплицироваться или увеличиваться в количестве или вызывать рост, размножение, репликацию или увеличение в количестве. «Пролиферативный» означает наличие способности к пролиферации. «Антипролиферативный» означает наличие свойств, которые противоположны или противодействуют пролиферативным свойствам.
[000272] Профилактический: в контексте настоящего описания «профилактический» относится к лекарству или способу воздействия, используемому для предупреждения распространения заболевания.
[000273] Профилактика: в контексте настоящего описания «профилактика» относится к мере, предпринимаемой для поддержания здоровья и предупреждения распространения заболевания.
[000274] Представляющий интерес белок: в контексте настоящего описания термины «представляющие интерес белки» или «необходимые белки» включают предлагаемые в данном документе белки, а также их фрагменты, мутанты, варианты и измененнные формы.
[000275] Очищенный: в контексте настоящего описания «очищать», «очищенный», «очистка» означает делать практически чистым или очищенным от нежелательных компонентов, загрязнителя, примеси или дефекта. «Очищенный» относится к состоянию чистоты. «Очистка» относится к способу получения чистого продукта.
[000276] Участок: в контексте настоящего описания термин «участок» относится к зоне или общей площади. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о белке или белковом модуле, участок может содержать линейную последовательность аминокислот вдоль белка или белкового модуля или может содержать трехмерную область, эпитоп и/или кластер из эпитопов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о белках, концевые участки могут включать в себя N- и/или C-концы. N-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной аминогруппой. С-концы относятся к краю белка, содержащему аминокислоту со свободной карбоксильной группой. Таким образом, N- и/или С-концевые участки могут включать в себя N- и/или С-концы, а также окружающие аминокислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N- и/или С-концевые участки содержат от приблизительно 3 аминокислот до приблизительно 30 аминокислот, от приблизительно 5 аминокислот до приблизительно 40 аминокислот, от приблизительно 10 аминокислот до приблизительно 50 аминокислот, от приблизительно 20 аминокислот до приблизительно 100 аминокислот и/или по меньшей мере 100 аминокислот. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления N-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя N-конец, но не включает С-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления С-концевые участки могут содержать любую протяженность аминокислот, которая включает в себя С-конец, но не включает N-конец.
[000277] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, если речь идет о полинуклеотиде, участок может содержать линейную последовательность из нуклеотидов вдоль полинуклеотида или может характеризоваться трехмерной областью, вторичной структурой или третичной структурой. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления участки включают в себя концевые участки. В контексте настоящего описания термин «концевой участок» относится к участкам, расположенным на краях или концах данного средства. Если речь идет о полинуклеотидах, концевые участки могут включать в себя 5' и 3'-концы. 5'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной фосфатной группой. 3'-концы относятся к краю полинуклеотида, содержащему нуклеотид со свободной гидроксильной группой. Таким образом, 5'- и 3'-участки могут включать в себя 5'- и 3'-концы, а также окружающие нуклеотиды. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'- и 3'-концевые участки содержат от приблизительно 9 нуклеотидов до приблизительно 90 нуклеотидов, от приблизительно 15 нуклеотидов до приблизительно 120 нуклеотидов, от приблизительно 30 нуклеотидов до приблизительно 150 нуклеотидов, от приблизительно 60 нуклеотидов до приблизительно 300 нуклеотидов и/или по меньшей мере 300 нуклеотидов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 5'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 5'-конец, но не включает 3'-конец. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления 3'-концевые участки могут содержать любую протяженность нуклеотидов, которая включает в себя 3'-конец, но не включает 5'-конец.
[000278] РНК или молекула РНК: в контексте настоящего описания термин «РНК», или «молекула РНК», или «молекула рибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из рибонуклеотидов; термин «ДНК», или «молекула ДНК», или «молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты» относится к полимеру из дезоксирибонуклеотидов. ДНК и РНК могут синтезироваться в естественных условиях, например, при репликации ДНК и транскрипции ДНК, соответственно; или их можно химически синтезировать. ДНК и РНК могут быть одноцепочечными (т.е. ssRNA или ssDNA, соответственно) или многоцепочечными (например, двухцепочечными, т.е. dsRNA и dsDNA, соответственно). Термины «мРНК» или «информационная РНК», которые используются в данном документе, относятся к одноцепочечной РНК, которая кодирует аминокислотную последовательность одной или более полипептидных цепей.
[000279] РНК-интерференция: в контексте настоящего описания термин «РНК-интерференция» или «RNAi» относится к специфичному в отношении последовательности регуляторному механизму, опосредованному молекулами РНК, который приводит в результате к ингибированию, или препятствованию, или «сайленсингу» экспрессии соответствующего гена, кодирующего белок.
[000280] Образец: в контексте настоящего описания термин «образец» относится к аликвоте, подмножеству или части, взятой из источника и/или предоставленной для анализа или обработки. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец получен из биологического источника, например, ткань, клетка или составная часть (например, жидкость организма, в том числе без ограничения кровь, слизь, лимфатическая жидкость, синовиальная жидкость, спинномозговая жидкость, слюна, амниотическая жидкость, амниотическая пуповинная кровь, моча, влагалищные выделения и сперма). В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец может представлять собой или содержать гомогенат, лизат или экстракт, полученный из целого организма или подмножества его тканей, клеток или составных частей, или их фракции или доли, в том числе без ограничения, например, плазмы, сыворотки, цереброспинальной жидкости, лимфы, внешних участков кожи, дыхательных, кишечных и мочеполового трактов, слез, слюны, молока, клеток крови, опухолей или органов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления образец представляет собой или содержит среду, такую как питательный бульон или гель, которая может содержать клеточные компоненты, такие как белки или молекулы нуклеиновой кислоты. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления «первичный» образец представляет собой аликвоту источника. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления первичный образец подвергают одной или более стадиям обработки (например, разделению, очистке и т.д.) для подготовки образца для анализа или другого применения.
[000281] Самокомплементарная вирусная частица: в контексте настоящего описания «самокомплементарная вирусная частица» представляет собой частицу, состоящую по меньшей мере из двух компонентов: белкового капсида и полинуклеотидной последовательности, кодирующей самокомплементарный геном, заключенный внутри капсида.
[000282] Смысловая цепь: в контексте настоящего описания термин «смысловая цепь», или «вторая цепь», или «сопровождающая цепь» молекулы siRNA относится к цепи, которая комплементарна антисмысловой цепи или первой цепи. Антисмысловая и смысловая цепи молекулы siRNA гибридизируются с образованием дуплексной структуры. В контексте настоящего описания «дуплекс siRNA» включает в себя цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью с участком приблизительно из 10-50 нуклеотидов в мРНК гена, подвергающегося целенаправленному воздействию с целью сайленсинга, и цепь siRNA, характеризующуюся достаточной комплементарностью для образования дуплекса с цепью siRNA.
[000283] Сигнальные последовательности: в контексте настоящего описания фраза «сигнальные последовательности» относится к последовательности, которая может управлять транспортом или локализацией.
[000284] Единичная стандартная доза: в контексте настоящего описания «единичная стандартная доза» относится к дозе любого терапевтического средства, вводимого в одной дозе/в одно время/одним путем/через одну точку контакта, т. е. при одном событии введения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления единичная стандартная доза представлена в виде дискретной лекарственной формы (например, таблетки, капсулы, пластыря, заряженного шприца, ампулы и т. д.).
[000285] Схожесть: в контексте настоящего описания термин «схожесть» относится к общему родству между полимерными молекулами, например, между полинуклеотидными молекулами (например, молекулами ДНК и/или молекулами РНК) и/или между полипептидными молекулами. Расчет процента схожести полимерных молекул друг с другом может быть выполнен таким же образом, как и расчет процента идентичности, за исключением того, что при расчете процента схожести учитываются консервативные замены, как понимается в данной области техники.
[000286] Малая/короткая интерферирующая РНК: в контексте настоящего описания термин «малая/короткая интерферирующая РНК» или «siRNA» относится к молекуле РНК (или аналога РНК), содержащей приблизительно 5-60 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), которая способна управлять или опосредовать RNAi. Предпочтительно молекула siRNA содержит приблизительно 15-30 нуклеотидов или нуклеотидных аналогов, более предпочтительно приблизительно 16-25 нуклеотидов (или нуклеотидных аналогов), еще более предпочтительно приблизительно 18-23 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) и еще более предпочтительно приблизительно 19-22 нуклеотида (или нуклеотидных аналога) (например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида или нуклеотидного аналога). Термин «короткая» siRNA относится к siRNA, содержащей 5-23 нуклеотида, предпочтительно 21 нуклеотид (или нуклеотидный аналог), например, 19, 20, 21 или 22 нуклеотида. Термин «длинная» siRNA относится к siRNA, содержащей 24-60 нуклеотидов, предпочтительно приблизительно 24-25 нуклеотидов, например, 23, 24, 25 или 26 нуклеотидов. Короткие siRNA в некоторых случаях могут включать в себя менее 19 нуклеотидов, например, 16, 17 или 18 нуклеотидов, или всего лишь 5 нуклеотидов при условии, что более короткая siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi. Аналогичным образом, длинные siRNA в некоторых случаях могут включать в себя более 26 нуклеотидов, например, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55 или даже 60 нуклеотидов, при условии, что более длинная siRNA сохраняет способность опосредовать RNAi или трансляционную репрессию при отсутствии дополнительного процессинга, например, ферментативного процессинга, в короткие siRNA. siRNA могут представлять собой молекулы одноцепочечной РНК (ss-siRNA) или молекулы двухцепочечной РНК (ds-siRNA), содержащие смысловую цепь и антисмысловую цепь, которые гибридизируются с образованием дуплексной структуры, называемой дуплексом siRNA.
[000287] Раздельная доза: в контексте настоящего описания «раздельная доза» представляет собой разделение единичной стандартной дозы или общей суточной дозы на две или более доз.
[000288] Стабильный: в контексте настоящего описания термин «стабильный» относится к соединению или молекулярной частице, которые достаточно устойчивы, чтобы выдержать выделение до пригодной степени чистоты из реакционной смеси, и предпочтительно могут быть составлены в эффективное терапевтическое средство.
[000289] Стабилизированный: в контексте настоящего описания термин «стабилизировать», «стабилизированный», «стабилизированный участок» означает делать или становиться стабильным. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к абсолютному значению. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стабильность измеряют по отношению к эталонному соединению или молекулярной частице.
[000290] Субъект: в контексте настоящего описания термин «субъект» или «пациент» относятся к любому организму, которому можно вводить композицию в соответствии с настоящим изобретением, например, для экспериментальных, диагностических, профилактических и/или терапевтических целей. Типичные субъекты включают в себя животных (например, млекопитающих, таких как мыши, крысы, кролики, отличные от человека приматы и люди), и/или растения. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъектом может быть младенец, новорожденный или ребенок в возрасте до 12 лет. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления субъект может находиться в утробе матери.
[000291] Практически: в контексте настоящего описания термин «практически» относится к качественному состоянию проявления полной или почти полной степени или порядка представляющей интерес характеристики или свойства. Специалисту в биологии в данной области техники будет понятно, что биологические и химические явления редко, если вообще, доходят до завершения и/или продолжаются до завершенности или приводят к достижению или избежанию абсолютного результата. Таким образом, выражение «практически» используют в данном документе для отражения потенциального отсутствия завершенности, свойственного многим биологическим и химическим явлениям.
[000292] Практически равный: в контексте настоящего описания это относится к временным различиям между дозами, при этом выражение означает плюс/минус 2%.
[000293] Практически одновременно: в контексте настоящего описания, и поскольку он относится к нескольким дозам, этот термин обычно означает в течение приблизительно 2 секунд.
[000294] Страдающий от: у индивидуума, который «страдает от» заболевания, нарушения и/или состояния, было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние, такое как, например, болезнь Паркинсона, или проявляется один или более его симптомов.
[000295] Подвержен развитию: у индивидуума, который «подвержен развитию» заболевания, нарушения и/или состояния, не было диагностировано заболевание, нарушение и/или состояние или не могут проявляться его симптомы, но он имеет предрасположенность к развитию заболевания или его симптомов. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления индивид, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния (например, злокачественной опухоли), может быть охарактеризован одним или более из следующего: (1) генетической мутацией, ассоциированной с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (2) генетическим полиморфизом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (3) повышенной и/или сниженной экспрессией и/или активностью белка и/или нуклеиновой кислоты, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием; (4) привычками и/или образом жизни, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния; (5) семейным анамнезом заболевания, нарушения и/или состояния; и (6) воздействием микроорганизма и/или заражением микроорганизмом, ассоциированным с развитием заболевания, нарушения и/или состояния. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, разовьется заболевание, нарушение и/или состояние. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления у индивида, который подвержен развитию заболевания, нарушения и/или состояния, не разовьется заболевание, нарушение и/или состояние.
[000296] Замедленное высвобождение: в контексте настоящего описания термин «замедленное высвобождение» относится к профилю высвобождения фармацевтической композиции или соединения, который соответствует скорости высвобождения в течение определенного периода времени.
[000297] Синтетический: термин «синтетический» означает полученный, приготовленный и/или произведенный руками человека. Синтез полинуклеотидов, или полипептидов, или других молекул согласно настоящему изобретению может быть химическим или ферментативным.
[000298] Нацеливание: в контексте настоящего описания термин «нацеливание» означает процесс разработки и подбора последовательности нуклеиновой кислоты, которая будет гибридизироваться с целевой нуклеиновой кислотой и индуцировать желаемый эффект.
[000299] Целевые клетки: в контексте настоящего описания термин «целевые клетки» относится к любой одной или более представляющим интерес клеткам. Клетки могут находиться in vitro, in vivo, in situ или в ткани или органе организма. Организмом может быть животное, предпочтительно млекопитающее, более предпочтительно человек и наиболее предпочтительно пациент.
[000300] Терапевтическое средство: термин «терапевтическое средство» относится к любому средству, которое при введении субъекту оказывает терапевтический, диагностический и/или профилактический эффект и/или вызывает необходимый биологический и/или фармакологический эффект.
[000301] Терапевтически эффективное количество: в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективное количество» означает количество средства, подлежащего доставке (например, нуклеиновой кислоты, лекарственного средства, терапевтического средства, диагностического средства, профилактического средства и т. д.), которое является достаточным, при введении субъекту, страдающему от или подверженному развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, уменьшения симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, такого как, например, болезнь Паркинсона. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество представлено в виде единичной дозы. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления терапевтически эффективное количество вводят согласно режиму дозирования, предусматривающему введение множества доз. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что, в соответствии с некоторыми вариантами осуществления, единичную лекарственную форму можно рассматривать как содержащую терапевтически эффективное количество конкретного средства или молекулярной частицы, если она содержит количество, которое является эффективным при введении в качестве части такого режима дозирования.
[000302] Терапевтически эффективный результат: в контексте настоящего описания термин «терапевтически эффективный результат» означает результат, который является достаточным у субъекта, который страдает инфекцией, заболеванием, нарушением и/или состоянием или подвержен развитию инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния, для лечения, нормализации симптомов, диагностики, предупреждения и/или задержки проявления инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния.
[000303] Общая суточная доза: в контексте настоящего описания «общая суточная доза» относится к количеству, которое дают или прописывают на 24 часовой период. Его можно вводить в виде единичной стандартной дозы.
[000304] Трансфекция: в контексте настоящего описания термин «трансфекция» относится к способам введения в клетку экзогенных нуклеиновых кислот. Способы трансфекции включают, без ограничения, химические способы, физическую обработку и обработку катионными липидами или смесями.
[000305] Лечение: в контексте настоящего описания термин «лечение» относится к частичному или полному снижению, ослаблению, уменьшению, облегчению, задержке проявления, ингибированию прогрессирования, уменьшению тяжести и/или снижению частоты возникновения одного или более симптомов или признаков конкретной инфекции, заболевания, нарушения и/или состояния. Например, «лечение злокачественной опухоли» может относиться к ингибированию выживаемости, роста и/или распространения опухоли. Лечение можно назначать субъекту, у которого не наблюдаются признаки заболевания, нарушения и/или состояния, и/или субъекту, у которого наблюдаются только ранние признаки заболевания, нарушения и/или состояния, с целью снижения риска развития патологии, ассоциированной с заболеванием, нарушением и/или состоянием, таким как, например, болезнь Паркинсона.
[000306] Немодифицированный: в контексте настоящего описания термин «немодифицированный» относится к любому веществу, соединению или молекуле до ее изменения каким-либо образом. Немодифицированный может, но не всегда, относиться к форме дикого типа или нативной форме биомолекулы или молекулярной частицы. Молекулы или молекулярные частицы могут быть подвергнуты ряду модификаций, в силу чего каждое модифицированное вещество, соединение, молекула или молекулярная частица может служить в качестве «немодифицированной» исходной молекулы для последующей модификации.
[000307] Вектор: в контексте настоящего описания термин «вектор» означает любую молекулу или фрагмент, который транспортирует, трансдуцирует или иным образом действует как носитель гетерологичной молекулы. Векторы по настоящему раскрытию могут быть получены рекомбинантными способами и могут иметь в своей основе и/или могут содержать исходную или эталонную последовательность аденоассоциированного вируса (AAV). Такие исходные или эталонные последовательности AAV могут служить в качестве изначальной, второй, третьей или последующей последовательности для конструирования векторов. В неограничивающих примерах такие исходные или эталонные последовательности AAV могут включать в себя любую одну или более из следующих последовательностей: полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид или несколько полипептидов, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа и последовательность которой может кодировать полноразмерную или частичную последовательность белка, белкового домена или одной или более субъединиц белка; причем полинуклеотид содержит модулирующую или регуляторную нуклеиновую кислоту, последовательность которой может быть дикого типа или модифицированной от дикого типа; и трансген, который может быть или не быть последовательностью, модифицированной от дикого типа. Эти последовательности AAV могут служить либо «донорной» последовательностью одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида), либо «акцепторными» последовательностями одного или более кодонов (на уровне нуклеиновой кислоты) или аминокислот (на уровне полипептида).
[000308] Вектор на основе вирусной конструкции: в контексте настоящего описания «вектор на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих белок Rep и или Cap.
[000309] Вектор экспрессии на основе вирусной конструкции: в контексте настоящего описания «вектор экспрессии на основе вирусной конструкции» представляет собой вектор, который содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих Rep и или Cap, который дополнительно содержит один или более полинуклеотидных участков, кодирующих или содержащих компоненты для вирусной экспрессии в клетке вирусной репликации.
[000310] Вирусный геном: в контексте настоящего описания «вирусный геном» представляет собой полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR), по меньшей мере одну регуляторную последовательность и по меньшей мере один полезный груз. Вирусный геном получен путем репликации конструкции полезного груза из вектора экспрессии конструкции полезного груза. Вирусный геном кодирует по меньшей мере одну копию конструкции полезного груза.
ЭКВИВАЛЕНТЫ И ОБЪЕМ
[000311] Специалисты в данной области техники поймут или будут способны установить с использованием не более чем стандартного экспериментирования многие эквиваленты конкретным вариантам осуществления в соответствии с настоящим изобретением, описанным в данном документе. Не предполагается, чтобы объем настоящего изобретения ограничивался вышеизложенным описанием, вместо этого он изложен в прилагаемой формуле изобретения.
[000312] В пунктах формулы изобретения формы единственного числа, такие как «некоторый», «некий» и «данный», могут означать один или более чем один, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Пункты формулы изобретения или описания, которые включают «или» между одним или более членами группы, считаются удовлетворительными, если один, более чем один или все из членов группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу, если не указано обратное, или это иным образом очевидно из контекста. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых именно один член группы присутствует в, используется в или иным образом относится к заданному продукту или процессу. Настоящее изобретение включает варианты осуществления, в которых более одного или все члены группы присутствуют в, используются в или иным образом относятся к заданному продукту или процессу.
[000313] Также отмечается, что термин «содержащий» предполагается открытым и позволяет, но не требует включения дополнительных элементов или стадий. Если термин «содержащий» используется в данном документе, термин «состоящий из», следовательно, также охватывается и раскрывается.
[000314] Если не определено иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно понятно среднему специалисту в области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Способы и материалы описаны в данном документе для применения в настоящем раскрытии; также могут быть использованы другие подходящие способы и материалы, известные в данной области техники.
[000315] В случае, если приведены диапазоны, конечные значения включены. Более того, следует понимать, что если не указано иное, или это в иных условиях не является очевидным из контекста и понимания специалиста в данной области техники, величины, которые выражены в виде диапазонов, могут предполагать любое конкретное значение или поддиапазон в приведенных диапазонах в разных вариантах осуществления настоящего изобретения, до десятой части единицы измерения на нижней границе диапазона, если контекст явно не предписывает иное.
[000316] Кроме того, следует понимать, что любой конкретный вариант осуществления настоящего изобретения, который попадает в уровень техники, может быть явно исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения. Поскольку такие варианты осуществления считаются известными специалисту в данной области техники, их можно исключить, даже если исключение явно не изложено в данном документе. Любой определенный вариант осуществления композиций по настоящему изобретению (например, любая нуклеиновая кислота или кодируемый ею белок; любой способ получения; любой способ применения; и т. д.) может быть исключен из любого одного или более пунктов формулы изобретения по любой причине, связанной или не связанной с его присутствием в уровне техники.
[000317] Все упоминаемые источники, например, ссылки, публикации, базы данных, записи в базах данных и источники из уровня техники, цитируемые в данном документе, включены в настоящую заявку при помощи ссылки, даже если явным образом не указываются при цитировании. В случае противоречивых утверждений из цитируемого источника и настоящей заявки, утверждение в настоящей заявке должно иметь преимущественную силу.
[000318] Названия разделов и таблиц не подразумеваются как ограничивающие.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Разработка полинуклеотидов AADC
[000319] Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.
[000320] После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.
[000321] Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.
[000322] Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.
[000323] В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 1. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).
Таблица 1. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.
Конструкция SEQ ID NO
pFB CMV hAADC-1 2
pFB CMV hAADC-2 3
pFB CMV hAADC-3 4
pFB CMV hAADC-4 5
Пример 2. Полинуклеотиды AADC: ITR к ITR
[000324] Полинуклеотиды AADC, пригодные для применения в вирусном векторе на основе AAV, включают приведенные в таблице 2.
[000325] В таблице 2 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 1.
Таблица 2. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR
Конструкция SEQ ID NO
pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR) 6
pFB CMV hAADC-2 (ITR к ITR) 7
pFB CMV hAADC-3 (ITR к ITR) 8
pFB CMV hAADC-4 (ITR к ITR) 9
Пример 3. По отношению к исходной последовательности ITR к ITR,
[000326] полинуклеотиды AADC разработаны согласно таблице 3 и таблице 4. Положения старт- и стоп-кодонов даны по отношению полинуклеотидам AADC ITR к ITR, описанным в таблице 2.
Таблица 3. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
pFB CMV hAADC-1 (ITR к ITR) pFB CMV hAADC-2
(ITR к ITR)
pFB CMV hAADC-3
(ITR к ITR)
pFB CMV hAADC-4
(ITR к ITR)
Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон
5'-ITR 1 130 1 130 1 130 1 130
Энхансер CMV 263 566 263 566 263 566 296 599
Промотор CMV 567 769 567 769 567 769 600 802
ie1 экзон 1 784 917 784 917 784 917 817 950
ie1 интрон 1 918 949 918 949 918 949 951 982
hbBglobin, интрон 2 950 1296 950 1296 950 1296 983 1329
hBglobin, экзон 3 1297 1349 1297 1349 1297 1349 1330 1382
5'-UTR -- -- -- -- -- -- 1398 1468
hAADC 1374 2822 -- -- 1374 2822 1473 2921
кодоп hAADC -- -- 1374 2816 -- -- -- --
3'-UTR -- -- -- -- 2823 3221 2922 3361
сигнал поли(A) hGH 2841 3317 2835 3311 3240 3716 3380 3856
3'-ITR 3417 3535 3416 3534 3822 3940 3961 4079
Таблица 4. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
hAADC_1k hAADC_2k hAADC_3k hAADC_4
Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон
5'-ITR 1 141 1 141 1 141 1 141
Энхансер CMV 245 548 245 548 245 548 245 548
Промотор CMV 549 751 549 751 549 751 549 751
ie1 экзон 1 766 899 766 899 766 899 766 899
ie1 интрон 1 900 931 900 931 900 931 900 931
hbBglobin, интрон 2 932 1278 932 1278 932 1278 932 1278
hBglobin, экзон 3 1279 1331 1279 1331 1279 1331 1279 1331
5'-UTR -- -- -- -- -- -- 1347 3310
hAADC 1356 2804 1356 2804 -- -- 1422 2864
кодоп hAADC -- -- -- -- 1356 2798 -- --
3'-UTR -- -- -- -- -- -- 2865 3310
сигнал поли(A) hGH 2823 3299 2823 3299 2817 3293 3329 3805
3'-ITR 3357 3497 3357 3497 3351 3491 3863 4003
Таблица 5. Составляющие модули или участки последовательности полинуклеотидов AADC
hAADC_5k hAADC_6k hAADC_9k
Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон Старт Стоп-кодон
5'-ITR 1 145 1 141 1 130
Энхансер CMV 249 552 245 548 234 537
Промотор CMV 553 755 549 751 538 740
ie1 экзон 1 770 903 766 899 755 888
ie1 интрон 1 904 935 900 931 889 920
hbBglobin, интрон 2 936 1282 932 1278 921 1267
hBglobin, экзон 3 1283 1335 1279 1331 1268 1320
5'-UTR -- -- -- -- -- --
hAADC 1356 2798 1345 2793
кодоп hAADC 1360 2802 -- -- -- --
3'-UTR -- -- 2799 3203 -- --
сигнал поли(A) hGH 2821 3297 3222 3698 2812 3288
3'-ITR 3355 3499 3756 3896 3346 3475
Пример 4. Разработка полинуклеотидов AADC
[000327] Полинуклеотиды AADC были разработаны с включением как минимум последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок AADC.
[000328] После разработки последовательность конструировали, или синтезировали, или вставляли в вектор и вводили в клетку или организм. Подходящими плазмидами или векторами являлись любые, которые трансдуцируют или трансфицируют целевую клетку.
[000329] Можно было использовать векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV), вирусные частицы или целые вирусы.
[000330] Введение приводит к процессированию полинуклеотида AADC с образованием белка AADC, который изменяет этиологию заболевания, в данном случае болезни Паркинсона.
[000331] В соответствии с одним неограничивающим примером плазмиды, содержащие полинуклеотид AADC согласно настоящему изобретению, приведены в таблице 6. Эти полинуклеотиды AADC из таблицы содержатся в плазмиде Fastback, и имеют промотор CMV, и кодируют AADC. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления открытая рамка считывания мРНК белка AADC является кодон-оптимизированной (например, кодоп).
Таблица 6. Содержащие полинуклеотид AADC плазмиды/векторы.
Конструкция SEQ ID NO
phAADC_1k 10
phAADC_2k 11
phAADC_3k 12
phAADC_4 13
phAADC_5k 14
phAADC_6k 15
phAADC_9k 16
[000332] В таблице 7 приведены последовательности ITR к ITR из таблицы 6.
Таблица 7. Полинуклеотиды AADC ITR к ITR
Конструкция SEQ ID NO
phAADC_1k (ITR к ITR) 17
phAADC_2k (ITR к ITR) 18
phAADC_3k (ITR к ITR) 19
phAADC_4 (ITR к ITR) 20
phAADC_5k (ITR к ITR) 21
phAADC_6k (ITR к ITR) 22
phAADC_9k (ITR к ITR) 23
Пример 5. Введение композиций с полинуклеотидами AADC пациентам для генной терапии
[000333] Композиции с векторами на основе рекомбинантных AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводили инфузией в черную субстанцию и, в частности, Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) пациентов, у которых есть болезнь Паркинсона и которые идентифицированы как подходящие для лечения в соответствии с известными в настоящей области техники способами.
[000334] Одним способом введения, рассматриваемым для применения в описываемых в настоящем документе способах, является конвективная доставка в режиме реального времени (RCD) композиций с векторами на основе AAV, содержащими полинуклеотид AADC, путем совместной инфузии гадотеридола (контраста, используемого для магнитного резонанса (MR)) и магнитно-резонансной томографии T1 или Т2 (MRT), с помощью которой можно прогнозировать области последующей экспрессии гена AADC. Как описано в Richardson, et al., 2011, точность размещения канюли и начального распределение инфузата можно безопасно определять путем инфузии солевого раствора без существенного изменения последующего распределения радиоактивного индикатора (Richardson, et al., 2011, Neurosurgery, 69(1):154-163). RCD Т2 позволяет производить детекцию интрапаренхиматозной конвективной доставки в неповрежденном головном мозге, и с помощью нее можно прогнозировать последующее распределение трансгена после инфузии вирусного вектора. Субъектам вводили инфузию солевого раствора/получали T2-изображения, сразу же с последующей инфузией гадотериола/получением T1-изображений в скорлупе и стволе головного мозга. Анализировали объемы распределения и пространственные паттерны. Гадотеридол и AVV-кодируемые AADC совместно вводили инфузией при переменном получении T2/T1-изображений в таламусе, а гиперинтенсивные области сравнивали с областями последующей экспрессии трансгена. Ожидалось, что соотношения объема распределения к объему инфузии должны были быть схожими для RCD солевого раствора и гадотеридола. Пространственное перекрытие должно было хорошо коррелировать между T2- и T1-изображениями. Второй инфузат должен был повторять пространственно-временной паттерн, аналогичный первому, заполняя целевую область до появления дополнительного целераспределения. Области экспрессии AADC должны были хорошо коррелировать с областями гиперинтенсивности как на Т1-, так и на Т2-изображениях, наблюдаемой в ходе RCD (Richardson, et al., 2011, Neurosurgery, 69(1):154-163).
[000335] Конвективная доставка (CED) макромолекул непосредственно в паренхиму головного мозга известна на протяжении более двух десятилетий. CED - это термин, который обозначает использование градиента давления для создания объемного потока внутри паренхимы головного мозга, т. е. конвекции макромолекул внутри интерстициальной жидкости, управляемой путем инфузии раствора через канюлю, размещенную непосредственно в целевой структуре. Этот способ делает возможным равномерное распределение терапевтических средств по большим объемам ткани головного мозга, минуя гематоэнцефалический барьер и превосходя простую диффузию (Richardson,et al., 2011, Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151).
[000336] Salegioet al. недавно продемонстрировали распределение наночастиц различных размеров, в том числе мицелл (~15 нм по размеру), ААV (~20-25 нм) и липосом (~65 нм), в ЦНС грызунов и NHP (Salegio et al., 2014, Frontiers in Neuroanatomy, vol. 8, article 9: pp. 1-8). Простые инъекции не могут задействовать периваскулярную систему, и необходимы специализированные инфузионные канюли, позволяющие поддерживать постоянное давление на кончике канюли, благодаря чему превышается интерстициальное гидростатическое давление, а инфузат может вытекать в ткань. Простые иглы создают значительный противоток; поэтому для противодействия такой тенденции были разработаны устойчивые к противотоку канюли. Появление платформ для конвективных инфузий с контролем по MRI дополнительно усовершенствовало понимание механики периваскулярного потока, и было продемонстрировано, что периваскулярное распределение липосом было линейным относительно времени, наклон кривой возрастал в миелинизированных участках, а прекращение инфузии предотвращало дальнейшее увеличение объема распределения. (Richardson,et al., 2011, Stereotact. Funct. Neurosurg. 89:141-151;Salegio et al., 2014, Frontiers in Neuroanatomy, vol. 8, article 9: pp. 1-8).
[000337] Известно, что интрапаренхимальные инъекции rAAV приводят к устойчивой, но относительно локальной трансдукции. Такие способы локальной доставки являются преимущественными при проведении генной терапии неврологических нарушений, которые обусловлены невропатологией, которая локализована в конкретном анатомическом участке или анатомической цепи, например, как в случае болезни Паркинсона. Тем не менее, в способах лечения, предусматривающих трансдукцию более широких областей ЦНС, интрапаренхимальные инъекции являются практически нецелесообразными. Лечение неврологических нарушений, относящихся к врожденным аномалиям обмена веществ и/или моногенным нарушениям, или таким, которые затрагивают двигательные нейроны спинного мозга, может предусматривать трансдукцию больших частей соответственно головного мозга или спинного мозга. Разработка малоинвазивных способов доставки через гематоэнцефалический барьер для векторов является чрезвычайно важной задачей. Сообщалось о многочисленных попытках с различными результатами применять молекулы, о которых известно, что они взаимодействуют с различными механизмами активного транспорта (вероятно, рецептор-опосредованного) для переноса белков через гематоэнцефалический барьер. Учитывая большое количество доступных серотипов AAV, один или более серотипов могут связываться с рецептором входа в клетку, способным транспортировать капсид AAV через гематоэнцефалический барьер (Manfredsson, et al., 2009, ʺAAV9: a potential blood brain barrier buster.ʺ Molecular Therapy 17(3):403-405).
Вектор и стереотаксическая инфузия
[000338] Стереотаксической подход можно применять для хирургической доставки полинуклеотидов AADC. Хотя у индивидуумов с дефицитом AADC присутствует недостаток адреналина и норадреналина, у этих пациенты должны сохраняться стабильное кровяное давление и частота сердечных сокращений во время хирургической операции. Не должно быть никаких заметных внутримозговых кровоизлияний на послеоперационных сканах компьютерной томографии (СТ) или MRI. Следы от укола иглы, которые видны на MRI, должны свидетельствовать о точной инъекции в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA). Пациенты должны быть выписаны из больницы приблизительно через одну неделю после хирургической операции (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61).
[000339] Назначенные на лечение субъекты получают вектор в композиции с AAV-вектором, безопасно доставляемый в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральную область покрышки (VTA) с помощью двусторонних инфузий или, в качестве альтернативы, в полосатое тело (в хвостатые ядра и скорлупу) или в гипоталамическое ядро​(STN), например, необязательно с использованием FDA-утвержденных нейровентрикулярных канюль SMARTFLOW® (SurgiVision, Inc), специально разработанных для клинического применения, с или без помощи системы CLEARPOINT®, для того, чтобы помочь лечащему нейрохирургу(-ам) направлять и отслеживать доставку терапевтического средства в головной мозг (см., например, San Sebastian, et al., 2014, Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 3: 14049; см., например, Feng and Maguire-Zeiss, 2010, CNS Drugs 24(3):177-192).
[000340] Так, например, во время хирургической операции определяют две целевые точки в Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (ВТА), которые достаточно отделены друг от друга в дорсолатеральных направлениях и идентифицировали на магнитно-резонансной томограмме. Пробуривают одно трепанационное отверстие на каждой стороне кости черепа, через которое вектор вводят инъекцией в две целевые точки по двойному пути введения. Содержащий AAV-вектор раствор готовят в концентрации 1,5 × 1012 векторного генома/мл, и 50 мкл на каждую точку раствора вводят инъекцией в количестве 1 мкл/мин.; каждый пациент получает 3 × 1011 векторного генома AAV-векторной конструкции.
[000341] Титры нейтрализующих антител к AAV2 определяют путем измерения β-галактозидазных активностей в клетках НЕК293, трансдуцированных 5 × 103 векторного генома/клетка векторов AAV2, экспрессирующих β-галактозидазу, в различных разведениях сыворотки.
PET
[000342] Уровень экспрессии AADC в черной субстанции оценивают на PET с визуализацией FMT за шесть дней до хирургической операции и через один и шесть месяцев после переноса гена. Все пациенты прекращают принимать дофаминергические лекарственные препараты за 18 часов до PET и принимали 2,5 мг/кг карбидопы перорально за один час до FMT-инъекции. Затем 0,12 мКи/кг средства для FMT в солевом растворе вводят инфузией в локтевую вену и получают 90-минутную динамическую последовательность изображений. Данные PET и магнитно-резонансной томографии совместно регистрируют с помощью программы обработки наложения (Syntegra; Philips, Амстердам, Нидерланды) для получения наложенных изображений. Значения радиоактивности в пределах представляющих интерес объемов, задействованных в нигростриарном пути, рассчитывают между 80 и 90 минутами после инъекции индикатора. Изменение поглощения в FMT нигростриатного пути от исходной точки до 24 недель оценивают с использованием соотношения значений радиоактивности черной субстанции к полосатому телу.
Статистический анализ
[000343] Значения в исходной точке и через 6 месяцев после переноса гена сравнивают с помощью t-критерия Стьюдента (спаренные анализы). Двустороннее Р-значение <0,05 берут для обозначения значимых различий. Двусторонний дисперсионный анализ с поправкой по методу Бонферрони P-значений используют для оценки кратковременного ответа к леводопе. (См., например, Muramatsu, et al., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ Mol. Ther. 18:1731-1735).
[000344] Безопасность и переносимость двустороннего введения композиций с вектором на основе AAV с использованием инфузии в режиме реального времени с контролем по изображениям в головной мозг субъектов с болезнью Паркинсона можно отслеживать сроком до 9 месяцев после операции или дольше. Широкий охват целевых областей (Pars compacta черной субстанции (SNpc) и вентральной области покрышки (VTA)) и широкое распределение белка AADC в стриатуме должны достигаться без каких-либо побочных эффектов.
[000345] Изменения роста и двигательных навыков: пациенты должны набирать массу и характеризоваться улучшением их двигательных показателей после переноса гена в течение года после лечения. Массу измеряют через 3-6 месяцев после переноса гена. Все пациенты изначально должны иметь предварительные показатели, равные нулю, по Шкале развития моторики младенцев Альберта (AIMS) и очень низкие предварительные показатели по Шкале развития моторики Пибоди, второй редакции (PDMS-II). После переноса гена у всех пациентов должны наблюдаться непрерывные увеличения их предварительных показателей по этим двум шкалам, что свидетельствует о том, что их двигательные функции улучшились. Анкета сравнительной оценки развития для младенцев и детей (CDIIT) охватывает развитие как когнитивных так и двигательных функций. У всех пациентов должны наблюдаться низкие предварительные показатели CDIIT перед переносом гена, а последующее увеличение показателей свидетельствует об улучшении как двигательных, так и когнитивных функций.
Субъективные улучшения после переноса гена
[000346] Для документирования симптомов, которые труднее поддаются количественной оценке, супругов, опекунов или попечителей пациентов в конце исследования просят заполнить анкету. Симптомы окулогирных кризов должны уменьшаться, а некоторыми умеренными симптомами при окулогирных кризах, которые могли оставаться после генной терапии являются, например, девиации глаза и нарушения сна. Субъекты могут испытывать повышенную эмоциональную стабильность, и/или некоторые улучшения в потоотделения и гипертермии (общее проявление нестабильности температуры тела в жаркую погоду). Не должно быть никаких детектируемых аномалий в колебательности сердечного ритма, оцениваемых по 24-часовому холтеровскому мониторированию ЭКГ, либо до, либо после переноса гена. У пациентов, которые до генной терапии были прикованы к постели и у которых наблюдали небольшое спонтанное движение, может наблюдаться менее серьезный птоз (опущение верхнего века) через одну-две недели после переноса гена. В соответствии с предыдущими исследованиями, через один месяц после переноса гена может появляться дискинезия, но в случае, если наблюдалось уменьшение дискинезии, должно начинаться развитие двигательных функций (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61). У субъектов можно наблюдать, например, улучшенное удержание головы спустя три месяца, способность сидеть с поддержкой спустя шесть - девять месяцев, способность садиться из лежачего положения спустя тринадцать месяцев и способность удерживать игрушки и стоять с поддержкой спустя шестнадцать месяцев после переноса гена. Антитело к AAV2 должно быть отрицательным у пациентов до генной терапии, и титры могут слегка возрастать после переноса гена.
PET-сканирование и CSF-анализ
[000347] Для подвергаемых лечению пациентов проводят PET-сканирование и CSF-анализ. Через шесть месяцев после переноса гена на PET-сканах должно быть видно, что поглощение 6-[18F]-фтордопы (FDOPA) увеличивается от исходного уровня в объединенных (справа и слева) участках обработки. CSF-анализ должен выявить увеличение уровней гомованилиновой кислоты (HVA, метаболита дофамина) и 5-оксииндолуксусной кислоты (HIAA, метаболита серотонина). Однако уровни L-DOPA и 3-О-метилдопы могут оставаться повышенными (Hwu, W.L., et al., 2012. Gene therapy for aromatic L-amino acid decarboxylase deficiency. Sci. Transl. Med. Vol. 4, 134ra61).
Пример 6. Введение полинуклеотидов AADC
[000348] Композицию с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC, вводят инфузией в скорлупу пациентов с болезнью Паркинсона с помощью способов введения, описанных в Примере 5. Доза, число пациентов и объем приведены в таблице 8.
Таблица 8. Схема исследования
Исследование № Количество пациентов Доза Объем
1 6 3×1011 вг 100 мкл на скорлупу
2 6 9×1011 вг 300 мкл на скорлупу
3 10 2,3×1011 вг 100 мкл на скорлупу
4 10 7,5×1011 вг 100 мкл на скорлупу
5 5 7,5×1011 вг 450 мкл на скорлупу
6 До 20 1,4×1012 вг До 900 мкл на скорлупу
7 До 20 4,8×1012 вг До 900 мкл на скорлупу
8 До 20 8,8×1012 вг До 900 мкл на скорлупу
[000349] В ходе исследования оценивали безопасность и переносимость инфузии композиций с векторами на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (AAV), содержащим полинуклеотид AADC, у пациентов-людей с диагностированной болезнью Паркинсона. Пациентов оценивали до операции и ежемесячно в послеоперационном периоде в течение шести месяцев с использованием нескольких показателей, в том числе шкалы общей оценки дистонии (GDS) (см. Comella, et al., 2003, Movement Disorders, 18(3):303-312), теста с нагрузкой L-DOPA, оценок по шкале UPDRS, журналов статуса двигательных функций и результатов лабораторных тестов. С помощью журналов, в которых день разделен на получасовые сегменты, опекуны пациентов регистрировали их подвижность в течение четырех дней до поступления и в течение еще четырех дней через шесть месяцев после поступления в исследовательский центр. Опекунов пациента обучали оценивать состояние субъекта как спящего, неподвижного, подвижного без вызывающей беспокойство дискинезии или подвижного с вызывающей беспокойство дискинезией. Подсчитывали общее количество часов, проведенных в каждой из этих категорий, и различие между исходной оценкой и шестимесячными оценками сравнивали между группами. Кратковременный ответ на леводопу оценивали на исходном уровне и через 6 месяцев после переноса гена; субъекты принимали 100 мг леводопы перорально с 25 мг бенсеразида спустя 20 часов без дофаминергического лекарственного препарата. Двигательные симптомы, на основе GDS и концентрации леводопы в плазме, оценивали на исходном уровне и через 30 мин, 1, 2, 3 и 4 часа после приема леводопы (см., например, Muramatsu, et al., 2010, ʺA phase I study of aromatic L-amino acid decarboxylase gene therapy for Parkinson's disease.ʺ Mol. Ther. 18:1731-1735).
Пример 7. In vivo введение полинуклеотидов AADC
[000350] Две композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмиду, SEQ ID NO: 10 и 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 17 и 19), контроль и стандарт вводили крысам (n=5) с помощью двустороннего интрастриарного введения (10 мкл/сторона) с уровнем дозы 2×1012 вг/мл. Экспрессию AADC в стриатуме крыс определяли с помощью ELISA через 4 и 8 недель. Наблюдали разброс среди животных и полушарий из-за отличающейся доставки среди участков инфузий. Обе конструкции экспрессировали AADC, но для конструкции phAADC_3k (плазмида SEQ ID NO: 12; ITR к ITR SEQ ID NO: 19) наблюдали до 200% увеличения экспрессии по сравнению со стандартной конструкцией.
Пример 8. Дозозависимое исследование полинуклеотидов AADC
[000351] Крысам с поражениями, вызванными 6-OHDA, вводили композиции с векторами на основе рекомбинантного AAV, содержащими полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17) с пятью различными уровнями доз в диапазоне от 1×1011 вг/мл до 1×1013 вг/мл и контроль. Поведенческий ответ на введение низкой дозы леводопы количественно оценивали до и после (на 3-ю и 4-ю неделю) доставки композиции. Спустя 5 недель после введения дозы проводили аутопсию и измеряли ферментативную активность AADC в ex vivo анализе ткани стриатума и с помощью иммуногистохимического (IHC) окрашивания определяли распределение AADC в головном мозге.
Пример 9. Влияние пустых частиц на интрастриарную трансдукцию
[000352] Взрослым крысам (п=6) вводили различные соотношения заполненных:пустых векторных частиц, 0% заполненных, 50% заполненных, 85% заполненных или 99% заполненных. В постоянной дозе и объеме (5 мкл и 1×10 вг) интрастриарно вводили вектор на основе рекомбинантного AAV, содержащий полинуклеотид AADC (плазмида SEQ ID NO: 10; ITR к ITR SEQ ID NO: 17). Крыс оценивали через 4 недели после введения. Низкая доза вектора доза приводила к ограниченной экспрессии вектора AADC. Объем распределения для частиц показан в таблице 9 (ELISA), а стриарные уровни экспрессии AADC показаны в таблице 10 (гистология).
Таблица 9. Объем распределения
% отношения заполненной AAV2-AADC-частицы к пустым капсидам Примерный объем распределения (мм 3 )
50:50 2
70:30 2.4
85:15 2.5
100:0 3
Таблица 10. Стриарные уровни
% заполненных AAV2-AADC-частиц пг AADC/мкг белка
0 0.4
52 1.1
58 1.7
83 2
>99 2.1
[000353] Распределение было сравнимым для всех групп. Относительно низкая доза вектора приводила к ограниченной экспрессии AADC. Также имела место тенденция к снижению уровней экспрессии AADC при >30% пустых частиц.
[000354] Хотя настоящее изобретение было описано в некотором объеме и с некоторыми подробностями в отношении нескольких описанных вариантов осуществления, не предполагается, что оно должно ограничиваться любыми такими подробностями или вариантами осуществления или любым конкретным вариантом осуществления, а его следует толковать с учетом прилагаемой формулы изобретения для того, чтобы обеспечить наиболее широкую возможную интерпретацию таких пунктов формулы изобретения в связи с уровнем техники и, следовательно, чтобы эффективно охватить предусмотренный объем настоящего изобретения.
Все публикации, патентные заявки, патенты и другие источники, упомянутые в данном документе, включены во всей своей полноте посредством ссылки. В случае конфликта настоящее описание, в том числе определения, будет иметь преимущество. Кроме того, заголовки разделов, материалы, способы и примеры являются лишь иллюстративными и не предназначены для ограничения.
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC.
<120> ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ AADC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЕЗНИ ПАРКИНСОНА
<130> 2057.1010PCT
<140> PCT/US2015/XXXXXX
<141> 2015-11-05
<150> 62/243,537
<151> 2015-10-19
<150> 62/199,578
<151> 2015-07-31
<150> 62/155,692
<151> 2015-05-01
<150> 62/075,298
<151> 2014-11-05
<160> 23
<170> PatentIn, версия 3.5
<210> 1
<211> 480
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Asn Ala Ser Glu Phe Arg Arg Arg Gly Lys Glu Met Val Asp Tyr
1 5 10 15
Val Ala Asn Tyr Met Glu Gly Ile Glu Gly Arg Gln Val Tyr Pro Asp
20 25 30
Val Glu Pro Gly Tyr Leu Arg Pro Leu Ile Pro Ala Ala Ala Pro Gln
35 40 45
Glu Pro Asp Thr Phe Glu Asp Ile Ile Asn Asp Val Glu Lys Ile Ile
50 55 60
Met Pro Gly Val Thr His Trp His Ser Pro Tyr Phe Phe Ala Tyr Phe
65 70 75 80
Pro Thr Ala Ser Ser Tyr Pro Ala Met Leu Ala Asp Met Leu Cys Gly
85 90 95
Ala Ile Gly Cys Ile Gly Phe Ser Trp Ala Ala Ser Pro Ala Cys Thr
100 105 110
Glu Leu Glu Thr Val Met Met Asp Trp Leu Gly Lys Met Leu Glu Leu
115 120 125
Pro Lys Ala Phe Leu Asn Glu Lys Ala Gly Glu Gly Gly Gly Val Ile
130 135 140
Gln Gly Ser Ala Ser Glu Ala Thr Leu Val Ala Leu Leu Ala Ala Arg
145 150 155 160
Thr Lys Val Ile His Arg Leu Gln Ala Ala Ser Pro Glu Leu Thr Gln
165 170 175
Ala Ala Ile Met Glu Lys Leu Val Ala Tyr Ser Ser Asp Gln Ala His
180 185 190
Ser Ser Val Glu Arg Ala Gly Leu Ile Gly Gly Val Lys Leu Lys Ala
195 200 205
Ile Pro Ser Asp Gly Asn Phe Ala Met Arg Ala Ser Ala Leu Gln Glu
210 215 220
Ala Leu Glu Arg Asp Lys Ala Ala Gly Leu Ile Pro Phe Phe Met Val
225 230 235 240
Ala Thr Leu Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ser Phe Asp Asn Leu Leu Glu
245 250 255
Val Gly Pro Ile Cys Asn Lys Glu Asp Ile Trp Leu His Val Asp Ala
260 265 270
Ala Tyr Ala Gly Ser Ala Phe Ile Cys Pro Glu Phe Arg His Leu Leu
275 280 285
Asn Gly Val Glu Phe Ala Asp Ser Phe Asn Phe Asn Pro His Lys Trp
290 295 300
Leu Leu Val Asn Phe Asp Cys Ser Ala Met Trp Val Lys Lys Arg Thr
305 310 315 320
Asp Leu Thr Gly Ala Phe Arg Leu Asp Pro Thr Tyr Leu Lys His Ser
325 330 335
His Gln Asp Ser Gly Leu Ile Thr Asp Tyr Arg His Trp Gln Ile Pro
340 345 350
Leu Gly Arg Arg Phe Arg Ser Leu Lys Met Trp Phe Val Phe Arg Met
355 360 365
Tyr Gly Val Lys Gly Leu Gln Ala Tyr Ile Arg Lys His Val Gln Leu
370 375 380
Ser His Glu Phe Glu Ser Leu Val Arg Gln Asp Pro Arg Phe Glu Ile
385 390 395 400
Cys Val Glu Val Ile Leu Gly Leu Val Cys Phe Arg Leu Lys Gly Ser
405 410 415
Asn Lys Val Asn Glu Ala Leu Leu Gln Arg Ile Asn Ser Ala Lys Lys
420 425 430
Ile His Leu Val Pro Cys His Leu Arg Asp Lys Phe Val Leu Arg Phe
435 440 445
Ala Ile Cys Ser Arg Thr Val Glu Ser Ala His Val Gln Arg Ala Trp
450 455 460
Glu His Ile Lys Glu Leu Ala Ala Asp Val Leu Arg Ala Glu Arg Glu
465 470 475 480
<210> 2
<211> 8150
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 2
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg 2100
tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg 2160
agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg 2220
aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc 2280
cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc 2340
tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc 2400
tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga 2460
atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg 2520
tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc 2580
tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct 2640
cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca 2700
acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc 2760
tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc 2820
tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct 2880
acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg 2940
cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca 3000
tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga 3060
agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg 3120
gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac 3180
tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc 3240
aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa 3300
agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc 3360
acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca 3420
cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg 3480
tgctgcgagc agagagggag taggagtgag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct 3540
gtgacccctc cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc 3600
ttgtcctaat aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta 3660
tggggtggag gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct 3720
gcggggtcta ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct 3780
ccgcctcctg ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg 3840
catgcatgac caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat 3900
tggccaggct ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat 3960
tgctgggatt acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa 4020
ccccggacca cgtgcggacc gagcggccgc tctagagcat ggctacgtag ataagtagca 4080
tggcgggtta atcattaact acaaggaacc cctagtgatg gagttggcca ctccctctct 4140
gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgggcg accaaaggtc gcccgacgcc cgggcggcct 4200
cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc aggtctgaga caataaccct gataaatgct 4260
tcaataatgt agccaaccac tagaactata gctagagtcc tgggcgaaca aacgatgctc 4320
gccttccaga aaaccgagga tgcgaaccac ttcatccggg gtcagcacca ccggcaagcg 4380
ccgcgacggc cgaggtcttc cgatctcctg aagccagggc agatccgtgc acagcacctt 4440
gccgtagaag aacagcaagg ccgccaatgc ctgacgatgc gtggagaccg aaaccttgcg 4500
ctcgttcgcc agccaggaca gaaatgcctc gacttcgctg ctgcccaagg ttgccgggtg 4560
acgcacaccg tggaaacgga tgaaggcacg aacccagttg acataagcct gttcggttcg 4620
taaactgtaa tgcaagtagc gtatgcgctc acgcaactgg tccagaacct tgaccgaacg 4680
cagcggtggt aacggcgcag tggcggtttt catggcttgt tatgactgtt tttttgtaca 4740
gtctatgcct cgggcatcca agcagcaagc gcgttacgcc gtgggtcgat gtttgatgtt 4800
atggagcagc aacgatgtta cgcagcagca acgatgttac gcagcagggc agtcgcccta 4860
aaacaaagtt aggtggctca agtatgggca tcattcgcac atgtaggctc ggccctgacc 4920
aagtcaaatc catgcgggct gctcttgatc ttttcggtcg tgagttcgga gacgtagcca 4980
cctactccca acatcagccg gactccgatt acctcgggaa cttgctccgt agtaagacat 5040
tcatcgcgct tgctgccttc gaccaagaag cggttgttgg cgctctcgcg gcttacgttc 5100
tgcccaagtt tgagcagccg cgtagtgaga tctatatcta tgatctcgca gtctccggcg 5160
agcaccggag gcagggcatt gccaccgcgc tcatcaatct cctcaagcat gaggccaacg 5220
cgcttggtgc ttatgtgatc tacgtgcaag cagattacgg tgacgatccc gcagtggctc 5280
tctatacaaa gttgggcata cgggaagaag tgatgcactt tgatatcgac ccaagtaccg 5340
ccacctaaca attcgttcaa gccgagatcg gcttcccggc cgcggagttg ttcggtaaat 5400
tgtcacaacg ccgcgaatat agtctttacc atgcccttgg ccacgcccct ctttaatacg 5460
acgggcaatt tgcacttcag aaaatgaaga gtttgcttta gccataacaa aagtccagta 5520
tgctttttca cagcataact ggactgattt cagtttacaa ctattctgtc tagtttaaga 5580
ctttattgtc atagtttaga tctattttgt tcagtttaag actttattgt ccgcccacac 5640
ccgcttacgc agggcatcca tttattactc aaccgtaacc gattttgcca ggttacgcgg 5700
ctggtctatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg 5760
ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc ggcgagcggt 5820
atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa 5880
gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg cgttgctggc 5940
gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct caagtcagag 6000
gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa gctccctcgt 6060
gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc tcccttcggg 6120
aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt aggtcgttcg 6180
ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg ccttatccgg 6240
taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg cagcagccac 6300
tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct tgaagtggtg 6360
gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc tgaagccagt 6420
taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg ctggtagcgg 6480
tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 6540
tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 6600
ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt 6660
taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag 6720
tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt 6780
cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc 6840
gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc 6900
cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg 6960
ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac 7020
aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg 7080
atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc 7140
tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact 7200
gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc 7260
aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat 7320
acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc 7380
ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac 7440
tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa 7500
aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact 7560
catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg 7620
atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg 7680
aaaagtgcca cctaaattgt aagcgttaat attttgttaa aattcgcgtt aaatttttgt 7740
taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca aaatccctta taaatcaaaa 7800
gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga acaagagtcc actattaaag 7860
aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc agggcgatgg cccactacgt 7920
gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc gtaaagcact aaatcggaac 7980
cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc cggcgaacgt ggcgagaaag 8040
gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg caagtgtagc ggtcacgctg 8100
cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac agggcgcgtc 8150
<210> 3
<211> 8149
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 3
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcca gcgagttcag gaggaggggc aaggagatgg 2100
tggactacgt ggccaactac atggagggca tcgagggcag gcaggtgtac cccgacgtgg 2160
agcccggcta cctgaggccc ctgatccccg ccgccgcccc ccaggagccc gacaccttcg 2220
aggacatcat caacgacgtg gagaagatca tcatgcccgg cgtgacccac tggcacagcc 2280
cctacttctt cgcctacttc cccaccgcca gcagctaccc cgccatgctg gccgacatgc 2340
tgtgcggcgc catcggctgc atcggcttca gctgggccgc cagccccgcc tgcaccgagc 2400
tggagaccgt gatgatggac tggctgggca agatgctgga gctgcccaag gccttcctga 2460
acgagaaggc cggcgagggc ggcggcgtga tccagggcag cgccagcgag gccaccctgg 2520
tggccctgct ggccgccagg accaaggtga tccacaggct gcaggccgcc agccccgagc 2580
tgacccaggc cgccatcatg gagaagctgg tggcctacag cagcgaccag gcccacagca 2640
gcgtggagag ggccggcctg atcggcggcg tgaagctgaa ggccatcccc agcgacggca 2700
acttcgccat gagggccagc gccctgcagg aggccctgga gagggacaag gccgccggcc 2760
tgatcccctt cttcatggtg gccaccctgg gcaccaccac ctgctgcagc ttcgacaacc 2820
tgctggaggt gggccccatc tgcaacaagg aggacatctg gctgcacgtg gacgccgcct 2880
acgccggcag cgccttcatc tgccccgagt tcaggcacct gctgaacggc gtggagttcg 2940
ccgacagctt caacttcaac ccccacaagt ggctgctggt gaacttcgac tgcagcgcca 3000
tgtgggtgaa gaagaggacc gacctgaccg gcgccttcag gctggacccc acctacctga 3060
agcacagcca ccaggacagc ggcctgatca ccgactacag gcactggcag atccccctgg 3120
gcaggaggtt caggagcctg aagatgtggt tcgtgttcag gatgtacggc gtgaagggcc 3180
tgcaggccta catcaggaag cacgtgcagc tgagccacga gttcgagagc ctggtgaggc 3240
aggaccccag gttcgagatc tgcgtggagg tgatcctggg cctggtgtgc ttcaggctga 3300
agggcagcaa caaggtgaac gaggccctgc tgcagaggat caacagcgcc aagaagatcc 3360
acctggtgcc ctgccacctg agggacaagt tcgtgctgag gttcgccatc tgcagcagga 3420
ccgtggagag cgcccacgtg cagagggcct gggagcacat caaggagctg gccgccgacg 3480
tgctgagggc cgagagggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc 3540
cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc 3600
taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt 3660
ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg 3720
tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct 3780
cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca 3840
tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca 3900
ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg 3960
gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaacgtaac 4020
cccggaccac gtgcggaccg agcggccgct ctagagcatg gctacgtaga taagtagcat 4080
ggcgggttaa tcattaacta caaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg 4140
cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggcggcctc 4200
agtgagcgag cgagcgcgca gctgcctgca ggtctgagac aataaccctg ataaatgctt 4260
caataatgta gccaaccact agaactatag ctagagtcct gggcgaacaa acgatgctcg 4320
ccttccagaa aaccgaggat gcgaaccact tcatccgggg tcagcaccac cggcaagcgc 4380
cgcgacggcc gaggtcttcc gatctcctga agccagggca gatccgtgca cagcaccttg 4440
ccgtagaaga acagcaaggc cgccaatgcc tgacgatgcg tggagaccga aaccttgcgc 4500
tcgttcgcca gccaggacag aaatgcctcg acttcgctgc tgcccaaggt tgccgggtga 4560
cgcacaccgt ggaaacggat gaaggcacga acccagttga cataagcctg ttcggttcgt 4620
aaactgtaat gcaagtagcg tatgcgctca cgcaactggt ccagaacctt gaccgaacgc 4680
agcggtggta acggcgcagt ggcggttttc atggcttgtt atgactgttt ttttgtacag 4740
tctatgcctc gggcatccaa gcagcaagcg cgttacgccg tgggtcgatg tttgatgtta 4800
tggagcagca acgatgttac gcagcagcaa cgatgttacg cagcagggca gtcgccctaa 4860
aacaaagtta ggtggctcaa gtatgggcat cattcgcaca tgtaggctcg gccctgacca 4920
agtcaaatcc atgcgggctg ctcttgatct tttcggtcgt gagttcggag acgtagccac 4980
ctactcccaa catcagccgg actccgatta cctcgggaac ttgctccgta gtaagacatt 5040
catcgcgctt gctgccttcg accaagaagc ggttgttggc gctctcgcgg cttacgttct 5100
gcccaagttt gagcagccgc gtagtgagat ctatatctat gatctcgcag tctccggcga 5160
gcaccggagg cagggcattg ccaccgcgct catcaatctc ctcaagcatg aggccaacgc 5220
gcttggtgct tatgtgatct acgtgcaagc agattacggt gacgatcccg cagtggctct 5280
ctatacaaag ttgggcatac gggaagaagt gatgcacttt gatatcgacc caagtaccgc 5340
cacctaacaa ttcgttcaag ccgagatcgg cttcccggcc gcggagttgt tcggtaaatt 5400
gtcacaacgc cgcgaatata gtctttacca tgcccttggc cacgcccctc tttaatacga 5460
cgggcaattt gcacttcaga aaatgaagag tttgctttag ccataacaaa agtccagtat 5520
gctttttcac agcataactg gactgatttc agtttacaac tattctgtct agtttaagac 5580
tttattgtca tagtttagat ctattttgtt cagtttaaga ctttattgtc cgcccacacc 5640
cgcttacgca gggcatccat ttattactca accgtaaccg attttgccag gttacgcggc 5700
tggtctatgc ggtgtgaaat accgcacaga tgcgtaagga gaaaataccg catcaggcgc 5760
tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta 5820
tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 5880
aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 5940
tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 6000
tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 6060
cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 6120
agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 6180
tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 6240
aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 6300
ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 6360
cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 6420
accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 6480
ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 6540
ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 6600
gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa atgaagtttt 6660
aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg cttaatcagt 6720
gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg actccccgtc 6780
gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc aatgataccg 6840
cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc cggaagggcc 6900
gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa ttgttgccgg 6960
gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc cattgctaca 7020
ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg ttcccaacga 7080
tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc cttcggtcct 7140
ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat ggcagcactg 7200
cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg tgagtactca 7260
accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc ggcgtcaata 7320
cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg aaaacgttct 7380
tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat gtaacccact 7440
cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg gtgagcaaaa 7500
acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg ttgaatactc 7560
atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga 7620
tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga 7680
aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt 7740
aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag 7800
aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga 7860
acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg 7920
aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc 7980
ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg 8040
aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc 8100
gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtc 8149
<210> 4
<211> 8555
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 4
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcac gcgtggagct agttattaat 900
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 960
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 1020
tgacgtatgt tcccatagta acgtcaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 1080
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 1140
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 1200
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc 1260
ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc 1320
tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttgcaccaa aatcaacggg actttccaaa 1380
atgtcgtaac aactccgccc cattgacgca aatgggcggt aggcgtgtac ggtgggaggt 1440
ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg tcagatcgcc tggagacgcc atccacgctg 1500
ttttgacctc catagaagac accgggaccg atccagcctc cgcggattcg aatcccggcc 1560
gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag tgacgtaagt accgcctata 1620
gagtctatag gcccacaaaa aatgctttct tcttttaata tacttttttg tttatcttat 1680
ttctaatact ttccctaatc tctttctttc agggcaataa tgatacaatg tatcatgcct 1740
ctttgcacca ttctaaagaa taacagtgat aatttctggg ttaaggcaat agcaatattt 1800
ctgcatataa atatttctgc atataaattg taactgatgt aagaggtttc atattgctaa 1860
tagcagctac aatccagcta ccattctgct tttattttat ggttgggata aggctggatt 1920
attctgagtc caagctaggc ccttttgcta atcatgttca tacctcttat cttcctccca 1980
cagctcctgg gcaacgtgct ggtctgtgtg ctggcccatc actttggcaa agaattggga 2040
ttcgaacatc ggccgccacc atgaacgcaa gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg 2100
tggattacgt ggccaactac atggaaggca ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg 2160
agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg 2220
aggacatcat caacgacgtt gagaagataa tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc 2280
cctacttctt cgcctacttc cccactgcca gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc 2340
tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc 2400
tggagactgt gatgatggac tggctcggga agatgctgga actaccaaag gcatttttga 2460
atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg 2520
tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc 2580
tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg tggcttactc atccgatcag gcacactcct 2640
cagtggaaag agctgggtta attggtggag tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca 2700
acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc 2760
tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc 2820
tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct 2880
acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg 2940
cagattcatt caactttaat ccccacaaat ggctattggt gaattttgac tgttctgcca 3000
tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg gagcctttag actggacccc acttacctga 3060
agcacagcca tcaggattca gggcttatca ctgactaccg gcattggcag ataccactgg 3120
gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac 3180
tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc 3240
aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa 3300
agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc 3360
acttggttcc atgtcacctc agggacaagt ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca 3420
cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct gggaacacat caaagagctg gcggccgacg 3480
tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga 3540
gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa ataaatatca tcctgccttc atggaactca 3600
gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca aagttatcca gagggttgtg attttgtctg 3660
cttagtatct catcaacaaa gaaatattat ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc 3720
atagctttta ttcattagct gtgatttttg ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc 3780
ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct cactgatata ttttccaggg caatcaatgt 3840
tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg 3900
cctaataagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc 3960
tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt 4020
gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat 4080
ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa 4140
gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga 4200
ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc atgcatgacc aggctcagct 4260
aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact 4320
cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa 4380
ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac cgtaaccccg gaccacgtgc 4440
ggaccgagcg gccgctctag agcatggcta cgtagataag tagcatggcg ggttaatcat 4500
taactacaag gaacccctag tgatggagtt ggccactccc tctctgcgcg ctcgctcgct 4560
cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag 4620
cgcgcagctg cctgcaggtc tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatgtagcca 4680
accactagaa ctatagctag agtcctgggc gaacaaacga tgctcgcctt ccagaaaacc 4740
gaggatgcga accacttcat ccggggtcag caccaccggc aagcgccgcg acggccgagg 4800
tcttccgatc tcctgaagcc agggcagatc cgtgcacagc accttgccgt agaagaacag 4860
caaggccgcc aatgcctgac gatgcgtgga gaccgaaacc ttgcgctcgt tcgccagcca 4920
ggacagaaat gcctcgactt cgctgctgcc caaggttgcc gggtgacgca caccgtggaa 4980
acggatgaag gcacgaaccc agttgacata agcctgttcg gttcgtaaac tgtaatgcaa 5040
gtagcgtatg cgctcacgca actggtccag aaccttgacc gaacgcagcg gtggtaacgg 5100
cgcagtggcg gttttcatgg cttgttatga ctgttttttt gtacagtcta tgcctcgggc 5160
atccaagcag caagcgcgtt acgccgtggg tcgatgtttg atgttatgga gcagcaacga 5220
tgttacgcag cagcaacgat gttacgcagc agggcagtcg ccctaaaaca aagttaggtg 5280
gctcaagtat gggcatcatt cgcacatgta ggctcggccc tgaccaagtc aaatccatgc 5340
gggctgctct tgatcttttc ggtcgtgagt tcggagacgt agccacctac tcccaacatc 5400
agccggactc cgattacctc gggaacttgc tccgtagtaa gacattcatc gcgcttgctg 5460
ccttcgacca agaagcggtt gttggcgctc tcgcggctta cgttctgccc aagtttgagc 5520
agccgcgtag tgagatctat atctatgatc tcgcagtctc cggcgagcac cggaggcagg 5580
gcattgccac cgcgctcatc aatctcctca agcatgaggc caacgcgctt ggtgcttatg 5640
tgatctacgt gcaagcagat tacggtgacg atcccgcagt ggctctctat acaaagttgg 5700
gcatacggga agaagtgatg cactttgata tcgacccaag taccgccacc taacaattcg 5760
ttcaagccga gatcggcttc ccggccgcgg agttgttcgg taaattgtca caacgccgcg 5820
aatatagtct ttaccatgcc cttggccacg cccctcttta atacgacggg caatttgcac 5880
ttcagaaaat gaagagtttg ctttagccat aacaaaagtc cagtatgctt tttcacagca 5940
taactggact gatttcagtt tacaactatt ctgtctagtt taagacttta ttgtcatagt 6000
ttagatctat tttgttcagt ttaagacttt attgtccgcc cacacccgct tacgcagggc 6060
atccatttat tactcaaccg taaccgattt tgccaggtta cgcggctggt ctatgcggtg 6120
tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc 6180
gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa 6240
ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa 6300
aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct 6360
ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac 6420
aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc 6480
gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc 6540
tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg 6600
tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga 6660
gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag 6720
cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta 6780
cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag 6840
agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg 6900
caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac 6960
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 7020
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag 7080
tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc 7140
agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac 7200
gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc 7260
accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg 7320
tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag 7380
tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc 7440
acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac 7500
atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag 7560
aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac 7620
tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg 7680
agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc 7740
gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact 7800
ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg 7860
atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa 7920
tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt 7980
tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg 8040
tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctaa 8100
attgtaagcg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat cagctcattt 8160
tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata gaccgagata 8220
gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt ggactccaac 8280
gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc atcaccctaa 8340
tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa agggagcccc 8400
cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg gaagaaagcg 8460
aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt aaccaccaca 8520
cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtc 8555
<210> 5
<211> 8694
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 5
cattcgccat tcaggctgca aataagcgtt gatattcagt caattacaaa cattaataac 60
gaagagatga cagaaaaatt ttcattctgt gacagagaaa aagtagccga agatgacggt 120
ttgtcacatg gagttggcag gatgtttgat taaaaacata acaggaagaa aaatgccccg 180
ctgtgggcgg acaaaatagt tgggaactgg gaggggtgga aatggagttt ttaaggatta 240
tttagggaag agtgacaaaa tagatgggaa ctgggtgtag cgtcgtaagc taatacgaaa 300
attaaaaatg acaaaatagt ttggaactag atttcactta tctggttcgg atctcctagg 360
cgatatcagt gatcagatcc agacatgata agatacattg atgagtttgg acaaaccaca 420
actagaatgc agtgaaaaaa atgctttatt tgtgaaattt gtgatgctat tgctttattt 480
gtaaccatta taagctgcaa taaacaagtt aacaacaaca attgcattca ttttatgttt 540
caggttcagg gggaggtgtg ggaggttttt taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt 600
atggctgatt atgatcctct agtacttctc gacaagctta cattattgaa gcatttatca 660
gggttattgt ctcagacctg caggcagctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg 720
gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc 780
agagagggag tggccaactc catcactagg ggttccttgt agttaatgat taacccgcca 840
tgctacttat ctacgtagcc atgctctaga gcggccgcaa cgcgtaaact tcgtcgacga 900
tctgcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 960
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 1020
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 1080
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 1140
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 1200
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 1260
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 1320
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 1380
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 1440
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 1500
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 1560
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 1620
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 1680
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1740
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1800
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1860
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1920
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1980
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 2040
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcgaattcg ggcacgaggg 2100
aggacagaga gcaagtcact cccggctgcc tttttcacct ctgacagagc ccagacacca 2160
tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca 2220
tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc 2280
tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg 2340
agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 2400
ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca 2460
tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact 2520
ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg 2580
gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga 2640
ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg 2700
agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa 2760
ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg 2820
ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg 2880
ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct 2940
gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct 3000
gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc 3060
cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag 3120
acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag 3180
ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga 3240
aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc 3300
atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct 3360
gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg 3420
aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca 3480
gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc 3540
agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt 3600
aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat 3660
aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt 3720
ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag 3780
aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg 3840
tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta 3900
ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat 3960
ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataaaca attcaagtga 4020
aatactaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagc tgctcgagag atctacgggt ggcatccctg 4080
tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc ccaccagcct 4140
tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct ataatattat 4200
ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct gtagggcctg 4260
cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca ctgcaatctc 4320
cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg gattccaggc 4380
atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt tcaccatatt 4440
ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc ctcccaaatt 4500
gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt tgtaggtaac 4560
gtaaccccgg accacgtgcg gaccgagcgg ccgctctaga gcatggctac gtagataagt 4620
agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg aacccctagt gatggagttg gccactccct 4680
ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggcg 4740
gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagctgc ctgcaggtct gagacaataa ccctgataaa 4800
tgcttcaata atgtagccaa ccactagaac tatagctaga gtcctgggcg aacaaacgat 4860
gctcgccttc cagaaaaccg aggatgcgaa ccacttcatc cggggtcagc accaccggca 4920
agcgccgcga cggccgaggt cttccgatct cctgaagcca gggcagatcc gtgcacagca 4980
ccttgccgta gaagaacagc aaggccgcca atgcctgacg atgcgtggag accgaaacct 5040
tgcgctcgtt cgccagccag gacagaaatg cctcgacttc gctgctgccc aaggttgccg 5100
ggtgacgcac accgtggaaa cggatgaagg cacgaaccca gttgacataa gcctgttcgg 5160
ttcgtaaact gtaatgcaag tagcgtatgc gctcacgcaa ctggtccaga accttgaccg 5220
aacgcagcgg tggtaacggc gcagtggcgg ttttcatggc ttgttatgac tgtttttttg 5280
tacagtctat gcctcgggca tccaagcagc aagcgcgtta cgccgtgggt cgatgtttga 5340
tgttatggag cagcaacgat gttacgcagc agcaacgatg ttacgcagca gggcagtcgc 5400
cctaaaacaa agttaggtgg ctcaagtatg ggcatcattc gcacatgtag gctcggccct 5460
gaccaagtca aatccatgcg ggctgctctt gatcttttcg gtcgtgagtt cggagacgta 5520
gccacctact cccaacatca gccggactcc gattacctcg ggaacttgct ccgtagtaag 5580
acattcatcg cgcttgctgc cttcgaccaa gaagcggttg ttggcgctct cgcggcttac 5640
gttctgccca agtttgagca gccgcgtagt gagatctata tctatgatct cgcagtctcc 5700
ggcgagcacc ggaggcaggg cattgccacc gcgctcatca atctcctcaa gcatgaggcc 5760
aacgcgcttg gtgcttatgt gatctacgtg caagcagatt acggtgacga tcccgcagtg 5820
gctctctata caaagttggg catacgggaa gaagtgatgc actttgatat cgacccaagt 5880
accgccacct aacaattcgt tcaagccgag atcggcttcc cggccgcgga gttgttcggt 5940
aaattgtcac aacgccgcga atatagtctt taccatgccc ttggccacgc ccctctttaa 6000
tacgacgggc aatttgcact tcagaaaatg aagagtttgc tttagccata acaaaagtcc 6060
agtatgcttt ttcacagcat aactggactg atttcagttt acaactattc tgtctagttt 6120
aagactttat tgtcatagtt tagatctatt ttgttcagtt taagacttta ttgtccgccc 6180
acacccgctt acgcagggca tccatttatt actcaaccgt aaccgatttt gccaggttac 6240
gcggctggtc tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca 6300
ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag 6360
cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag 6420
gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 6480
tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 6540
agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 6600
tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 6660
cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 6720
ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 6780
ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 6840
ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 6900
ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 6960
cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 7020
gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 7080
atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 7140
ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 7200
gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 7260
tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 7320
ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 7380
taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 7440
gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 7500
gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 7560
ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 7620
aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 7680
gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 7740
cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt 7800
actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt 7860
caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac 7920
gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac 7980
ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag 8040
caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa 8100
tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga 8160
gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc 8220
cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg cgttaaattt 8280
ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc cttataaatc 8340
aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga gtccactatt 8400
aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg atggcccact 8460
acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag cactaaatcg 8520
gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga acgtggcgag 8580
aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg tagcggtcac 8640
gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg cgtc 8694
<210> 6
<211> 3535
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 6
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380
caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag 1440
gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc 1500
ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga 1560
taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg 1620
ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct 1680
tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg 1740
ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag 1800
tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag 1860
tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc 1920
tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg 1980
gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc 2040
aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc 2100
tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca 2160
aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg 2220
agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca 2280
aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa 2340
cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta 2400
tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt 2460
ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc 2520
agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg 2580
aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc 2640
ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca 2700
agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg 2760
cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt 2820
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 2880
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 2940
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3000
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3060
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3120
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3180
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3240
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3300
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccccgga ccacgtgcgg accgagcggc 3360
cgctctagag catggctacg tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga 3420
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3480
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcag 3535
<210> 7
<211> 3534
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 7
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380
ccagcgagtt caggaggagg ggcaaggaga tggtggacta cgtggccaac tacatggagg 1440
gcatcgaggg caggcaggtg taccccgacg tggagcccgg ctacctgagg cccctgatcc 1500
ccgccgccgc cccccaggag cccgacacct tcgaggacat catcaacgac gtggagaaga 1560
tcatcatgcc cggcgtgacc cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccaccg 1620
ccagcagcta ccccgccatg ctggccgaca tgctgtgcgg cgccatcggc tgcatcggct 1680
tcagctgggc cgccagcccc gcctgcaccg agctggagac cgtgatgatg gactggctgg 1740
gcaagatgct ggagctgccc aaggccttcc tgaacgagaa ggccggcgag ggcggcggcg 1800
tgatccaggg cagcgccagc gaggccaccc tggtggccct gctggccgcc aggaccaagg 1860
tgatccacag gctgcaggcc gccagccccg agctgaccca ggccgccatc atggagaagc 1920
tggtggccta cagcagcgac caggcccaca gcagcgtgga gagggccggc ctgatcggcg 1980
gcgtgaagct gaaggccatc cccagcgacg gcaacttcgc catgagggcc agcgccctgc 2040
aggaggccct ggagagggac aaggccgccg gcctgatccc cttcttcatg gtggccaccc 2100
tgggcaccac cacctgctgc agcttcgaca acctgctgga ggtgggcccc atctgcaaca 2160
aggaggacat ctggctgcac gtggacgccg cctacgccgg cagcgccttc atctgccccg 2220
agttcaggca cctgctgaac ggcgtggagt tcgccgacag cttcaacttc aacccccaca 2280
agtggctgct ggtgaacttc gactgcagcg ccatgtgggt gaagaagagg accgacctga 2340
ccggcgcctt caggctggac cccacctacc tgaagcacag ccaccaggac agcggcctga 2400
tcaccgacta caggcactgg cagatccccc tgggcaggag gttcaggagc ctgaagatgt 2460
ggttcgtgtt caggatgtac ggcgtgaagg gcctgcaggc ctacatcagg aagcacgtgc 2520
agctgagcca cgagttcgag agcctggtga ggcaggaccc caggttcgag atctgcgtgg 2580
aggtgatcct gggcctggtg tgcttcaggc tgaagggcag caacaaggtg aacgaggccc 2640
tgctgcagag gatcaacagc gccaagaaga tccacctggt gccctgccac ctgagggaca 2700
agttcgtgct gaggttcgcc atctgcagca ggaccgtgga gagcgcccac gtgcagaggg 2760
cctgggagca catcaaggag ctggccgccg acgtgctgag ggccgagagg gagtgagctg 2820
ctcgagagat ctacgggtgg catccctgtg acccctcccc agtgcctctc ctggccctgg 2880
aagttgccac tccagtgccc accagccttg tcctaataaa attaagttgc atcattttgt 2940
ctgactaggt gtccttctat aatattatgg ggtggagggg ggtggtatgg agcaaggggc 3000
aagttgggaa gacaacctgt agggcctgcg gggtctattg ggaaccaagc tggagtgcag 3060
tggcacaatc ttggctcact gcaatctccg cctcctgggt tcaagcgatt ctcctgcctc 3120
agcctcccga gttgttggga ttccaggcat gcatgaccag gctcagctaa tttttgtttt 3180
tttggtagag acggggtttc accatattgg ccaggctggt ctccaactcc taatctcagg 3240
tgatctaccc accttggcct cccaaattgc tgggattaca ggcgtgaacc actgctccct 3300
tccctgtcct tctgattttg taggtaacgt aaccccggac cacgtgcgga ccgagcggcc 3360
gctctagagc atggctacgt agataagtag catggcgggt taatcattaa ctacaaggaa 3420
cccctagtga tggagttggc cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg 3480
cgaccaaagg tcgcccgacg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcag 3534
<210> 8
<211> 3940
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 8
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180
agagcggccg cacgcgtgga gctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 240
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 300
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgtcaa 360
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 420
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 480
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 540
acgtattagt catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg 600
gatagcggtt tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt 660
tgttttgcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 720
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 780
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 840
ccgatccagc ctccgcggat tcgaatcccg gccgggaacg gtgcattgga acgcggattc 900
cccgtgccaa gagtgacgta agtaccgcct atagagtcta taggcccaca aaaaatgctt 960
tcttctttta atatactttt ttgtttatct tatttctaat actttcccta atctctttct 1020
ttcagggcaa taatgataca atgtatcatg cctctttgca ccattctaaa gaataacagt 1080
gataatttct gggttaaggc aatagcaata tttctgcata taaatatttc tgcatataaa 1140
ttgtaactga tgtaagaggt ttcatattgc taatagcagc tacaatccag ctaccattct 1200
gcttttattt tatggttggg ataaggctgg attattctga gtccaagcta ggcccttttg 1260
ctaatcatgt tcatacctct tatcttcctc ccacagctcc tgggcaacgt gctggtctgt 1320
gtgctggccc atcactttgg caaagaattg ggattcgaac atcggccgcc accatgaacg 1380
caagtgaatt ccgaaggaga gggaaggaga tggtggatta cgtggccaac tacatggaag 1440
gcattgaggg acgccaggtc taccctgacg tggagcccgg gtacctgcgg ccgctgatcc 1500
ctgccgctgc ccctcaggag ccagacacgt ttgaggacat catcaacgac gttgagaaga 1560
taatcatgcc tggggtgacg cactggcaca gcccctactt cttcgcctac ttccccactg 1620
ccagctcgta cccggccatg cttgcggaca tgctgtgcgg ggccattggc tgcatcggct 1680
tctcctgggc ggcaagccca gcatgcacag agctggagac tgtgatgatg gactggctcg 1740
ggaagatgct ggaactacca aaggcatttt tgaatgagaa agctggagaa gggggaggag 1800
tgatccaggg aagtgccagt gaagccaccc tggtggccct gctggccgct cggaccaaag 1860
tgatccatcg gctgcaggca gcgtccccag agctcacaca ggccgctatc atggagaagc 1920
tggtggctta ctcatccgat caggcacact cctcagtgga aagagctggg ttaattggtg 1980
gagtgaaatt aaaagccatc ccctcagatg gcaacttcgc catgcgtgcg tctgccctgc 2040
aggaagccct ggagagagac aaagcggctg gcctgattcc tttctttatg gttgccaccc 2100
tggggaccac aacatgctgc tcctttgaca atctcttaga agtcggtcct atctgcaaca 2160
aggaagacat atggctgcac gttgatgcag cctacgcagg cagtgcattc atctgccctg 2220
agttccggca ccttctgaat ggagtggagt ttgcagattc attcaacttt aatccccaca 2280
aatggctatt ggtgaatttt gactgttctg ccatgtgggt gaaaaagaga acagacttaa 2340
cgggagcctt tagactggac cccacttacc tgaagcacag ccatcaggat tcagggctta 2400
tcactgacta ccggcattgg cagataccac tgggcagaag atttcgctct ttgaaaatgt 2460
ggtttgtatt taggatgtat ggagtcaaag gactgcaggc ttatatccgc aagcatgtcc 2520
agctgtccca tgagtttgag tcactggtgc gccaggatcc ccgctttgaa atctgtgtgg 2580
aagtcattct ggggcttgtc tgctttcggc taaagggttc caacaaagtg aatgaagctc 2640
ttctgcaaag aataaacagt gccaaaaaaa tccacttggt tccatgtcac ctcagggaca 2700
agtttgtcct gcgctttgcc atctgttctc gcacggtgga atctgcccat gtgcagcggg 2760
cctgggaaca catcaaagag ctggcggccg acgtgctgcg agcagagagg gagtaggagt 2820
gaagccagct gcaggaatca aaaattgaag agagatatat ctgaaaactg gaataagaag 2880
caaataaata tcatcctgcc ttcatggaac tcagctgtct gtggcttccc atgtctttct 2940
ccaaagttat ccagagggtt gtgattttgt ctgcttagta tctcatcaac aaagaaatat 3000
tatttgctaa ttaaaaagtt aatcttcatg gccatagctt ttattcatta gctgtgattt 3060
ttgttgatta aaacattata gattttcatg ttcttgcagt catcagaagt ggtaggaaag 3120
cctcactgat atattttcca gggcaatcaa tgttcacgca acttgaaatt atatctgtgg 3180
tcttcaaatt gtcttttgtc atgtggctaa atgcctaata agctgctcga gagatctacg 3240
ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc cctggaagtt gccactccag 3300
tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat tttgtctgac taggtgtcct 3360
tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa ggggcaagtt gggaagacaa 3420
cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag tgcagtggca caatcttggc 3480
tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct gcctcagcct cccgagttgt 3540
tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt gtttttttgg tagagacggg 3600
gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc tcaggtgatc tacccacctt 3660
ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc tcccttccct gtccttctga 3720
ttttgtaggt aaccgtaacc ccggaccacg tgcggaccga gcggccgctc tagagcatgg 3780
ctacgtagat aagtagcatg gcgggttaat cattaactac aaggaacccc tagtgatgga 3840
gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgggcgac caaaggtcgc 3900
ccgacgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag 3940
<210> 9
<211> 4079
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 9
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctacgta gccatgctct 180
agagcggccg caacgcgtaa acttcgtcga cgatctgcgg ccgcacgcgt ggagctagtt 240
attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta 300
cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt 360
caataatgac gtatgttccc atagtaacgt caatagggac tttccattga cgtcaatggg 420
tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat atgccaagta 480
cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga 540
ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg 600
tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca cggggatttc 660
caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg caccaaaatc aacgggactt 720
tccaaaatgt cgtaacaact ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg 780
ggaggtctat ataagcagag ctcgtttagt gaaccgtcag atcgcctgga gacgccatcc 840
acgctgtttt gacctccata gaagacaccg ggaccgatcc agcctccgcg gattcgaatc 900
ccggccggga acggtgcatt ggaacgcgga ttccccgtgc caagagtgac gtaagtaccg 960
cctatagagt ctataggccc acaaaaaatg ctttcttctt ttaatatact tttttgttta 1020
tcttatttct aatactttcc ctaatctctt tctttcaggg caataatgat acaatgtatc 1080
atgcctcttt gcaccattct aaagaataac agtgataatt tctgggttaa ggcaatagca 1140
atatttctgc atataaatat ttctgcatat aaattgtaac tgatgtaaga ggtttcatat 1200
tgctaatagc agctacaatc cagctaccat tctgctttta ttttatggtt gggataaggc 1260
tggattattc tgagtccaag ctaggccctt ttgctaatca tgttcatacc tcttatcttc 1320
ctcccacagc tcctgggcaa cgtgctggtc tgtgtgctgg cccatcactt tggcaaagaa 1380
ttgggattcg aacatcgaat tcgggcacga gggaggacag agagcaagtc actcccggct 1440
gcctttttca cctctgacag agcccagaca ccatgaacgc aagtgaattc cgaaggagag 1500
ggaaggagat ggtggattac gtggccaact acatggaagg cattgaggga cgccaggtct 1560
accctgacgt ggagcccggg tacctgcggc cgctgatccc tgccgctgcc cctcaggagc 1620
cagacacgtt tgaggacatc atcaacgacg ttgagaagat aatcatgcct ggggtgacgc 1680
actggcacag cccctacttc ttcgcctact tccccactgc cagctcgtac ccggccatgc 1740
ttgcggacat gctgtgcggg gccattggct gcatcggctt ctcctgggcg gcaagcccag 1800
catgcacaga gctggagact gtgatgatgg actggctcgg gaagatgctg gaactaccaa 1860
aggcattttt gaatgagaaa gctggagaag ggggaggagt gatccaggga agtgccagtg 1920
aagccaccct ggtggccctg ctggccgctc ggaccaaagt gatccatcgg ctgcaggcag 1980
cgtccccaga gctcacacag gccgctatca tggagaagct ggtggcttac tcatccgatc 2040
aggcacactc ctcagtggaa agagctgggt taattggtgg agtgaaatta aaagccatcc 2100
cctcagatgg caacttcgcc atgcgtgcgt ctgccctgca ggaagccctg gagagagaca 2160
aagcggctgg cctgattcct ttctttatgg ttgccaccct ggggaccaca acatgctgct 2220
cctttgacaa tctcttagaa gtcggtccta tctgcaacaa ggaagacata tggctgcacg 2280
ttgatgcagc ctacgcaggc agtgcattca tctgccctga gttccggcac cttctgaatg 2340
gagtggagtt tgcagattca ttcaacttta atccccacaa atggctattg gtgaattttg 2400
actgttctgc catgtgggtg aaaaagagaa cagacttaac gggagccttt agactggacc 2460
ccacttacct gaagcacagc catcaggatt cagggcttat cactgactac cggcattggc 2520
agataccact gggcagaaga tttcgctctt tgaaaatgtg gtttgtattt aggatgtatg 2580
gagtcaaagg actgcaggct tatatccgca agcatgtcca gctgtcccat gagtttgagt 2640
cactggtgcg ccaggatccc cgctttgaaa tctgtgtgga agtcattctg gggcttgtct 2700
gctttcggct aaagggttcc aacaaagtga atgaagctct tctgcaaaga ataaacagtg 2760
ccaaaaaaat ccacttggtt ccatgtcacc tcagggacaa gtttgtcctg cgctttgcca 2820
tctgttctcg cacggtggaa tctgcccatg tgcagcgggc ctgggaacac atcaaagagc 2880
tggcggccga cgtgctgcga gcagagaggg agtaggagtg aagccagctg caggaatcaa 2940
aaattgaaga gagatatatc tgaaaactgg aataagaagc aaataaatat catcctgcct 3000
tcatggaact cagctgtctg tggcttccca tgtctttctc caaagttatc cagagggttg 3060
tgattttgtc tgcttagtat ctcatcaaca aagaaatatt atttgctaat taaaaagtta 3120
atcttcatgg ccatagcttt tattcattag ctgtgatttt tgttgattaa aacattatag 3180
attttcatgt tcttgcagtc atcagaagtg gtaggaaagc ctcactgata tattttccag 3240
ggcaatcaat gttcacgcaa cttgaaatta tatctgtggt cttcaaattg tcttttgtca 3300
tgtggctaaa tgcctaataa acaattcaag tgaaatacta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3360
agctgctcga gagatctacg ggtggcatcc ctgtgacccc tccccagtgc ctctcctggc 3420
cctggaagtt gccactccag tgcccaccag ccttgtccta ataaaattaa gttgcatcat 3480
tttgtctgac taggtgtcct tctataatat tatggggtgg aggggggtgg tatggagcaa 3540
ggggcaagtt gggaagacaa cctgtagggc ctgcggggtc tattgggaac caagctggag 3600
tgcagtggca caatcttggc tcactgcaat ctccgcctcc tgggttcaag cgattctcct 3660
gcctcagcct cccgagttgt tgggattcca ggcatgcatg accaggctca gctaattttt 3720
gtttttttgg tagagacggg gtttcaccat attggccagg ctggtctcca actcctaatc 3780
tcaggtgatc tacccacctt ggcctcccaa attgctggga ttacaggcgt gaaccactgc 3840
tcccttccct gtccttctga ttttgtaggt aacgtaaccc cggaccacgt gcggaccgag 3900
cggccgctct agagcatggc tacgtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca 3960
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 4020
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcag 4079
<210> 10
<211> 9266
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 10
gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc 60
ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac 120
agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 180
ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg 240
cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc 300
aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct 360
agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc 420
tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt 480
ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg 540
cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct 600
atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag 660
ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag 720
tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg 780
gcggagccta tggaaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 840
cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 900
ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aagcccaatc tgaataatgt tacaaccaat 960
taaccaattc tgaaaacgcg cgatgcagct ctggcccgtg tctcaaaatc tctgatgtta 1020
cattgcacaa gataaaaata tatcatcatg aacaataaaa ctgtctgctt acataaacag 1080
taatacaagg ggtgttatga gccatattca acgggaaacg tcgaggccgc gattaaattc 1140
caacatggat gctgatttat atgggtataa atgggctcgc gataatgtcg ggcaatcagg 1200
tgcgacaatc tatcgcttgt atgggaagcc cgatgcgcca gagttgtttc tgaaacatgg 1260
caaaggtagc gttgccaatg atgttacaga tgagatggtc agactaaact ggctgacgga 1320
atttatgcct cttccgacca tcaagcattt tatccgtact cctgatgatg catggttact 1380
caccactgcg atccccggaa aaacagcatt ccaggtatta gaagaatatc ctgattcagg 1440
tgaaaatatt gttgatgcgc tggcagtgtt cctgcgccgg ttgcattcga ttcctgtttg 1500
taattgtcct tttaacagcg atcgcgtatt tcgtctcgct caggcgcaat cacgaatgaa 1560
taacggtttg gttgatgcga gtgattttga tgacgagcgt aatggctggc ctgttgaaca 1620
agtctggaaa gaaatgcata aacttttgcc attctcaccg gattcagtcg tcactcatgg 1680
tgatttctca cttgataacc ttatttttga cgaggggaaa ttaataggtt gtattgatgt 1740
tggacgagtc ggaatcgcag accgatacca ggatcttgcc atcctatgga actgcctcgg 1800
tgagttttct ccttcattac agaaacggct ttttcaaaaa tatggtattg ataatcctga 1860
tatgaataaa ttgcagtttc atttgatgct cgatgagttt ttctaatcag aattggttaa 1920
ttggttgtaa cattattcag attgggcttg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga 1980
tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt 2040
tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcaacaccc cttgtattac 2100
tgtttatgta agcagacagt tttattgttc atgatgatat atttttatct tgtgcaatgt 2160
aacatcagag attttgagac acgggccaga gctgcatcgc gcgtttcggt gatgacggtg 2220
aaaacctctg acacatgcag ctcccgtatc tggaggctat aaatgattac gatacttcga 2280
aaacatcctt atcctggaaa actccccgtt catttcccac tctcctgcca ttcgacactc 2340
gtgcgtccat tcaagtctgt gctaatttct acgcatttcc ctctgccatt gactttgctt 2400
gcgtgggata ataactatta agccaacttg attcaactca ggcattcaaa aggcattttg 2460
attagtcgaa aagtggcacg gctgacgagt ggagctgcca tttcacgttt atttcgaact 2520
tttgattaca tggtatattt agtaatacac atatttttta gccagcaggt taatacttca 2580
aagttgtttc gattttcaac gaataaaagg aatttggcat ggtgtttttt ctggtctttg 2640
gtattgacaa atcagggata tacaatatgt attaacaaaa ttggattgct acatatattt 2700
aatgattttc attattagaa tgggtggaat aaagttttaa attacattat taatttcatt 2760
agggttggct gattgattac tatttcctca ttgaattgca ttcgatatta gcagtattta 2820
tctggcccat tttggaagtt acttaaattt cgaaccttaa gtcattatta gagctaatat 2880
acaacagagt tgtcaacttg gtttgatcag cattgaaatt aaactgattt cttgttcgtt 2940
cttatttcgt ttggttttgt atctcgtatt ttatatgcag gagggcatat attggcacaa 3000
gacaaataat cacagcaccc attctcaact ttgtcctgtt tctcagttta gtgtaaatag 3060
aatgttgcaa aaaattgaat ataagcatta tcatagtgtc aaattcgaga ggatgagttt 3120
gctgtgggtc ttcgaggttc tttccctgtg tttgccacgg ttcgttgcac gttgccactg 3180
attggacaca tgtccgcagt gaaaaatcta cggtcaggta ccacccaact aaaccggaag 3240
gcggcacgtg tgtgggcgtt gagcggtgtg ggcgtggcag ccatataatg agacatttat 3300
ttaaaaagaa cattcgaaca tttttgatgg gccatatctt ggcttgtcaa gctccagggc 3360
agacattttc ctcgactcca ccgccttttt catttgaatg gaggaggtgt agggcacaaa 3420
aaacgtttcc tgccttttta agcagcacaa aggatatgag ccattaaatt agttaatttc 3480
gagtgcattt cattttaaat aagtgttgga aagggaataa aaaagcgact gatagaaaag 3540
ttgcagacac caagagaatg ttaaatattt taataatagc tacatttttc tatctctgtg 3600
acaaggcctg tgtactttaa tgttatatta cttctttgtg tttgatttct gttaaaagtt 3660
tatgattttg gcatgtacaa atcttacaac ccttttttgt catcatgaca aaatcaaaat 3720
cgtgcaatat ttccattctc atcttttagc cgattcataa cattcgtaga aattaatatg 3780
aaatcaatca tgtataattt tcatgcacgt tatgccgatt tggtatcgtc gatttgccgg 3840
ctcatcgtcg ccattgtgtt aatggaaaag ttatgctttt cgcaggaaaa aagagttgaa 3900
aattccaatt tttgtcatgc tcatcaaaat gttatacatt cggtaatttg agctggccaa 3960
acgttaaccc cttatcgccc cgcgcaagca ttcattaact gcccccagag cgtaattaat 4020
ctctttctcg cagaatttcc ttcacagcca cgtcttgggt aaaagtcacc cctcaaagtg 4080
gcagttgcat gttgtaaatt agattttcgt ccgtcatgac aaccctcgtg cgagggttgc 4140
tgcagcattt gaatgcaaaa ctgcttttgg tcattaacct gtctgaggca ctttgctgca 4200
aaacttctat tagaattcgg tttggactcg aattcggatt tcttccccca aaatgcgatg 4260
gctacagcaa aatgctttca gcttccgaag ttttgcaacc ccaaagtcca gagtttccac 4320
gctgtcacga ttccaaagcg gcgccatttt tggctcacgc aaaacttatt aatgaacttt 4380
aagcagacta cgaggaaagg gctataatgg ccacacaaaa gggttaagca agtgttaagg 4440
gctggtggga gggaaaaatc atcaatcata ttttctgcat agctgaatca tttgcgccga 4500
tcagttgggg ttacttaatg ggtttatttc aagaagaaaa ctgtgggaaa ctaactgact 4560
ctaaacttaa tcagattaaa tgtaacctgg agatgatttt caaaatatta aaagagtttt 4620
atggaggtaa ttttaaagaa aactgaaaaa ctttgaagaa gtctataata gatccagtct 4680
taatcgtagc actgattatt tgtttttaaa ttggaaaaaa ttaaatgata catcatgctt 4740
aaatgcgatg tccaacaaat cccaagacgg taatttccgt gcgttccaaa ctcatctgaa 4800
gaatcttaca aatacatttc gtgtatcccc aggctcagcg tgcaaataaa tcttttggat 4860
ctttgcaaat gcgaaatgct tatttttatg cgttttcaat gccaattcga tggcaaaacc 4920
aacaaaatca catggaaata atggaaaagc aatttccatt tctacaaggg aggcagtgag 4980
acacaagagc agcgtataca attccccagc agcgatttga ccattaaaat tatacccaca 5040
ggacgagcag gcataaaaag cagaggatgc gaggtgttca ggggactgtc tatatctcca 5100
acttgaatat atgaaatcgt ttggaaatag ccaagcgacc aaattggcat ttggaaaatt 5160
gcacaacgac agaagaagat gtttgaaaag agaaattgaa ataataaacc aagatatatg 5220
taaacggttg gtcacatttg ggttctgaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg 5280
ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggctggctta 5340
actatgcggc atcagagcag attgtactga gagtgcacca tatgcggtgt gaaataccgc 5400
acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact 5460
gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat 5520
gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa 5580
cgacggccag tgaattcgag ctcggtacca tttaaatcgt cttggccact ccctctctgc 5640
gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg gcgtcgggcg acctttggtc 5700
gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt ggccaactcc atcactaggg 5760
gttccttcgc gagcttaatt aactgcggcc gctcggtccg cacgtggtta cctacaaaat 5820
cagaaggaca gggaagggag cagtggttca cgcctgtaat cccagcaatt tgggaggcca 5880
aggtgggtag atcacctgag attaggagtt ggagaccagc ctggccaata tggtgaaacc 5940
ccgtctctac caaaaaaaca aaaattagct gagcctggtc atgcatgcct ggaatcccaa 6000
caactcggga ggctgaggca ggagaatcgc ttgaacccag gaggcggaga ttgcagtgag 6060
ccaagattgt gccactgcac tccagcttgg ttcccaatag accccgcagg ccctacaggt 6120
tgtcttccca acttgcccct tgctccatac cacccccctc caccccataa tattatagaa 6180
ggacacctag tcagacaaaa tgatgcaact taattttatt aggacaaggc tggtgggcac 6240
tggagtggca acttccaggg ccaggagagg cactggggag gggtcacagg gatgccaccc 6300
gtagatctct cgagcagctc actcctactc cctctctgct cgcagcacgt cggccgccag 6360
ctctttgatg tgttcccagg cccgctgcac atgggcagat tccaccgtgc gagaacagat 6420
ggcaaagcgc aggacaaact tgtccctgag gtgacatgga accaagtgga tttttttggc 6480
actgtttatt ctttgcagaa gagcttcatt cactttgttg gaacccttta gccgaaagca 6540
gacaagcccc agaatgactt ccacacagat ttcaaagcgg ggatcctggc gcaccagtga 6600
ctcaaactca tgggacagct ggacatgctt gcggatataa gcctgcagtc ctttgactcc 6660
atacatccta aatacaaacc acattttcaa agagcgaaat cttctgccca gtggtatctg 6720
ccaatgccgg tagtcagtga taagccctga atcctgatgg ctgtgcttca ggtaagtggg 6780
gtccagtcta aaggctcccg ttaagtctgt tctctttttc acccacatgg cagaacagtc 6840
aaaattcacc aatagccatt tgtggggatt aaagttgaat gaatctgcaa actccactcc 6900
attcagaagg tgccggaact cagggcagat gaatgcactg cctgcgtagg ctgcatcaac 6960
gtgcagccat atgtcttcct tgttgcagat aggaccgact tctaagagat tgtcaaagga 7020
gcagcatgtt gtggtcccca gggtggcaac cataaagaaa ggaatcaggc cagccgcttt 7080
gtctctctcc agggcttcct gcagggcaga cgcacgcatg gcgaagttgc catctgaggg 7140
gatggctttt aatttcactc caccaattaa cccagctctt tccactgagg agtgtgcctg 7200
atcggatgag taagccacca gcttctccat gatagcggcc tgtgtgagct ctggggacgc 7260
tgcctgcagc cgatggatca ctttggtccg agcggccagc agggccacca gggtggcttc 7320
actggcactt ccctggatca ctcctccccc ttctccagct ttctcattca aaaatgcctt 7380
tggtagttcc agcatcttcc cgagccagtc catcatcaca gtctccagct ctgtgcatgc 7440
tgggcttgcc gcccaggaga agccgatgca gccaatggcc ccgcacagca tgtccgcaag 7500
catggccggg tacgagctgg cagtggggaa gtaggcgaag aagtaggggc tgtgccagtg 7560
cgtcacccca ggcatgatta tcttctcaac gtcgttgatg atgtcctcaa acgtgtctgg 7620
ctcctgaggg gcagcggcag ggatcagcgg ccgcaggtac ccgggctcca cgtcagggta 7680
gacctggcgt ccctcaatgc cttccatgta gttggccacg taatccacca tctccttccc 7740
tctccttcgg aattcacttg cgttcatggt ggcggccgat gttcgaatcc caattctttg 7800
ccaaagtgat gggccagcac acagaccagc acgttgccca ggagctgtgg gaggaagata 7860
agaggtatga acatgattag caaaagggcc tagcttggac tcagaataat ccagccttat 7920
cccaaccata aaataaaagc agaatggtag ctggattgta gctgctatta gcaatatgaa 7980
acctcttaca tcagttacaa tttatatgca gaaatattta tatgcagaaa tattgctatt 8040
gccttaaccc agaaattatc actgttattc tttagaatgg tgcaaagagg catgatacat 8100
tgtatcatta ttgccctgaa agaaagagat tagggaaagt attagaaata agataaacaa 8160
aaaagtatat taaaagaaga aagcattttt tgtgggccta tagactctat aggcggtact 8220
tacgtcactc ttggcacggg gaatccgcgt tccaatgcac cgttcccggc cgggattcga 8280
atccgcggag gctggatcgg tcccggtgtc ttctatggag gtcaaaacag cgtggatggc 8340
gtctccaggc gatctgacgg ttcactaaac gagctctgct tatatagacc tcccaccgta 8400
cacgcctacc gcccatttgc gtcaatgggg cggagttgtt acgacatttt ggaaagtccc 8460
gttgattttg gtgcaaaaca aactcccatt gacgtcaatg gggtggagac ttggaaatcc 8520
ccgtgagtca aaccgctatc cacgcccatt gatgtactgc caaaaccgca tcaccatggt 8580
aatagcgatg actaatacgt agatgtactg ccaagtagga aagtcccata aggtcatgta 8640
ctgggcataa tgccaggcgg gccatttacc gtcattgacg tcaatagggg gcgtacttgg 8700
catatgatac acttgatgta ctgccaagtg ggcagtttac cgtaaatact ccacccattg 8760
acgtcaatgg aaagtcccta ttgacgttac tatgggaaca tacgtcatta ttgacgtcaa 8820
tgggcggggg tcgttgggcg gtcagccagg cgggccattt accgtaagtt atgtaacgcg 8880
gaactccata tatgggctat gaactaatga ccccgtaatt gattactatt aataactagc 8940
tccacgcgtg cggccgcaga tcgtcgacga agtttaaact caggaacccc tagtgatgga 9000
gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg 9060
gcgtcgggcg acctttggtc gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt 9120
ggccaacgtc atttaaatgc atgcaagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt 9180
gtgaaaattg cgttgcgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg 9240
cattaatgaa tcggccaacg cgcggg 9266
<210> 11
<211> 9236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 11
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat 1500
tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg 1560
gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg 1620
cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc 1680
ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt 1740
acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg 1800
cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc 1860
tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg 1920
gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc 1980
ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt 2040
actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat 2100
taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc 2160
tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca 2220
caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca 2280
tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc 2340
accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat 2400
tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct 2460
ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact 2520
accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat 2580
ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc 2640
atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc 2700
tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa 2760
gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc 2820
tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac 2880
acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc 2940
gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag 3000
ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg 3060
actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag 3120
ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg 3180
cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc 3240
ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt 3300
ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga 3360
tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc 3420
ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct 3480
cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga 3540
ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga 3600
gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt 3660
acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc 3720
ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt 3780
gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg 3840
tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag 3900
ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc 3960
atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc agaacccaaa tgtgaccaac cgtttacata 4020
tatcttggtt tattatttca atttctcttt tcaaacatct tcttctgtcg ttgtgcaatt 4080
ttccaaatgc caatttggtc gcttggctat ttccaaacga tttcatatat tcaagttgga 4140
gatatagaca gtcccctgaa cacctcgcat cctctgcttt ttatgcctgc tcgtcctgtg 4200
ggtataattt taatggtcaa atcgctgctg gggaattgta tacgctgctc ttgtgtctca 4260
ctgcctccct tgtagaaatg gaaattgctt ttccattatt tccatgtgat tttgttggtt 4320
ttgccatcga attggcattg aaaacgcata aaaataagca tttcgcattt gcaaagatcc 4380
aaaagattta tttgcacgct gagcctgggg atacacgaaa tgtatttgta agattcttca 4440
gatgagtttg gaacgcacgg aaattaccgt cttgggattt gttggacatc gcatttaagc 4500
atgatgtatc atttaatttt ttccaattta aaaacaaata atcagtgcta cgattaagac 4560
tggatctatt atagacttct tcaaagtttt tcagttttct ttaaaattac ctccataaaa 4620
ctcttttaat attttgaaaa tcatctccag gttacattta atctgattaa gtttagagtc 4680
agttagtttc ccacagtttt cttcttgaaa taaacccatt aagtaacccc aactgatcgg 4740
cgcaaatgat tcagctatgc agaaaatatg attgatgatt tttccctccc accagccctt 4800
aacacttgct taaccctttt gtgtggccat tatagccctt tcctcgtagt ctgcttaaag 4860
ttcattaata agttttgcgt gagccaaaaa tggcgccgct ttggaatcgt gacagcgtgg 4920
aaactctgga ctttggggtt gcaaaacttc ggaagctgaa agcattttgc tgtagccatc 4980
gcattttggg ggaagaaatc cgaattcgag tccaaaccga attctaatag aagttttgca 5040
gcaaagtgcc tcagacaggt taatgaccaa aagcagtttt gcattcaaat gctgcagcaa 5100
ccctcgcacg agggttgtca tgacggacga aaatctaatt tacaacatgc aactgccact 5160
ttgaggggtg acttttaccc aagacgtggc tgtgaaggaa attctgcgag aaagagatta 5220
attacgctct gggggcagtt aatgaatgct tgcgcggggc gataaggggt taacgtttgg 5280
ccagctcaaa ttaccgaatg tataacattt tgatgagcat gacaaaaatt ggaattttca 5340
actctttttt cctgcgaaaa gcataacttt tccattaaca caatggcgac gatgagccgg 5400
caaatcgacg ataccaaatc ggcataacgt gcatgaaaat tatacatgat tgatttcata 5460
ttaatttcta cgaatgttat gaatcggcta aaagatgaga atggaaatat tgcacgattt 5520
tgattttgtc atgatgacaa aaaagggttg taagatttgt acatgccaaa atcataaact 5580
tttaacagaa atcaaacaca aagaagtaat ataacattaa agtacacagg ccttgtcaca 5640
gagatagaaa aatgtagcta ttattaaaat atttaacatt ctcttggtgt ctgcaacttt 5700
tctatcagtc gcttttttat tccctttcca acacttattt aaaatgaaat gcactcgaaa 5760
ttaactaatt taatggctca tatcctttgt gctgcttaaa aaggcaggaa acgttttttg 5820
tgccctacac ctcctccatt caaatgaaaa aggcggtgga gtcgaggaaa atgtctgccc 5880
tggagcttga caagccaaga tatggcccat caaaaatgtt cgaatgttct ttttaaataa 5940
atgtctcatt atatggctgc cacgcccaca ccgctcaacg cccacacacg tgccgccttc 6000
cggtttagtt gggtggtacc tgaccgtaga tttttcactg cggacatgtg tccaatcagt 6060
ggcaacgtgc aacgaaccgt ggcaaacaca gggaaagaac ctcgaagacc cacagcaaac 6120
tcatcctctc gaatttgaca ctatgataat gcttatattc aattttttgc aacattctat 6180
ttacactaaa ctgagaaaca ggacaaagtt gagaatgggt gctgtgatta tttgtcttgt 6240
gccaatatat gccctcctgc atataaaata cgagatacaa aaccaaacga aataagaacg 6300
aacaagaaat cagtttaatt tcaatgctga tcaaaccaag ttgacaactc tgttgtatat 6360
tagctctaat aatgacttaa ggttcgaaat ttaagtaact tccaaaatgg gccagataaa 6420
tactgctaat atcgaatgca attcaatgag gaaatagtaa tcaatcagcc aaccctaatg 6480
aaattaataa tgtaatttaa aactttattc cacccattct aataatgaaa atcattaaat 6540
atatgtagca atccaatttt gttaatacat attgtatatc cctgatttgt caataccaaa 6600
gaccagaaaa aacaccatgc caaattcctt ttattcgttg aaaatcgaaa caactttgaa 6660
gtattaacct gctggctaaa aaatatgtgt attactaaat ataccatgta atcaaaagtt 6720
cgaaataaac gtgaaatggc agctccactc gtcagccgtg ccacttttcg actaatcaaa 6780
atgccttttg aatgcctgag ttgaatcaag ttggcttaat agttattatc ccacgcaagc 6840
aaagtcaatg gcagagggaa atgcgtagaa attagcacag acttgaatgg acgcacgagt 6900
gtcgaatggc aggagagtgg gaaatgaacg gggagttttc caggataagg atgttttcga 6960
agtatcgtaa tcatttatag cctccagata cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc 7020
gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat 7080
tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa 7140
tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 7200
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 7260
tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa 7320
ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag 7380
gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga 7440
ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat 7500
caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat 7560
gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt 7620
caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca 7680
ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa 7740
caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg 7800
aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta 7860
accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg 7920
tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat 7980
gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg 8040
attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat 8100
ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt 8160
ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac 8220
atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg 8280
gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct 8340
aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 8400
actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc 8460
ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 8520
aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 8580
cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 8640
cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 8700
aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 8760
cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 8820
ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 8880
gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta 8940
gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc 9000
agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 9060
tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 9120
ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 9180
gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc 9236
<210> 12
<211> 6260
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 12
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500
tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca 1560
tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc 1620
tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg 1680
agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740
ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca 1800
tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact 1860
ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg 1920
gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga 1980
ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg 2040
agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga 2100
tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg 2160
ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg 2220
ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct 2280
gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct 2340
gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc 2400
cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg 2460
acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg 2520
gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga 2580
agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc 2640
acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct 2700
gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg 2760
aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga 2820
gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc 2880
agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt 2940
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 3000
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 3060
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3120
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3180
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3240
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3300
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3360
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3420
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt 3480
aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg 3540
ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc 3600
ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag 3660
ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 3720
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 3780
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta 3840
ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat 3900
ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc 3960
ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctccgggag 4020
ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt 4080
gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa 4140
actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac 4200
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 4260
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat 4320
ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat 4380
gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct 4440
gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt 4500
ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa 4560
ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt 4620
tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac 4680
tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat 4740
cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca 4800
gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt 4860
ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga 4920
tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat 4980
cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat 5040
acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat 5100
ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc 5160
tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata 5220
tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg 5280
cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac 5340
ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa 5400
tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat 5460
cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 5520
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 5580
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 5640
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 5700
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 5760
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 5820
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 5880
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 5940
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 6000
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca 6060
gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc 6120
ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg 6180
ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc 6240
caatacgcaa accgcctctc 6260
<210> 13
<211> 6442
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 13
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcgaattc gggcacgagg gaggacagag 1500
agcaagtcac tcccggctgc ctttttcacc tctgacagag cccagacacc atgaacgcaa 1560
gtgaattccg aaggagaggg aaggagatgg tggattacgt ggccaactac atggaaggca 1620
ttgagggacg ccaggtctac cctgacgtgg agcccgggta cctgcggccg ctgatccctg 1680
ccgctgcccc tcaggagcca gacacgtttg aggacatcat caacgacgtt gagaagataa 1740
tcatgcctgg ggtgacgcac tggcacagcc cctacttctt cgcctacttc cccactgcca 1800
gctcgtaccc ggccatgctt gcggacatgc tgtgcggggc cattggctgc atcggcttct 1860
cctgggcggc aagcccagca tgcacagagc tggagactgt gatgatggac tggctcggga 1920
agatgctgga actaccaaag gcatttttga atgagaaagc tggagaaggg ggaggagtga 1980
tccagggaag tgccagtgaa gccaccctgg tggccctgct ggccgctcgg accaaagtga 2040
tccatcggct gcaggcagcg tccccagagc tcacacaggc cgctatcatg gagaagctgg 2100
tggcttactc atccgatcag gcacactcct cagtggaaag agctgggtta attggtggag 2160
tgaaattaaa agccatcccc tcagatggca acttcgccat gcgtgcgtct gccctgcagg 2220
aagccctgga gagagacaaa gcggctggcc tgattccttt ctttatggtt gccaccctgg 2280
ggaccacaac atgctgctcc tttgacaatc tcttagaagt cggtcctatc tgcaacaagg 2340
aagacatatg gctgcacgtt gatgcagcct acgcaggcag tgcattcatc tgccctgagt 2400
tccggcacct tctgaatgga gtggagtttg cagattcatt caactttaat ccccacaaat 2460
ggctattggt gaattttgac tgttctgcca tgtgggtgaa aaagagaaca gacttaacgg 2520
gagcctttag actggacccc acttacctga agcacagcca tcaggattca gggcttatca 2580
ctgactaccg gcattggcag ataccactgg gcagaagatt tcgctctttg aaaatgtggt 2640
ttgtatttag gatgtatgga gtcaaaggac tgcaggctta tatccgcaag catgtccagc 2700
tgtcccatga gtttgagtca ctggtgcgcc aggatccccg ctttgaaatc tgtgtggaag 2760
tcattctggg gcttgtctgc tttcggctaa agggttccaa caaagtgaat gaagctcttc 2820
tgcaaagaat aaacagtgcc aaaaaaatcc acttggttcc atgtcacctc agggacaagt 2880
ttgtcctgcg ctttgccatc tgttctcgca cggtggaatc tgcccatgtg cagcgggcct 2940
gggaacacat caaagagctg gcggccgacg tgctgcgagc agagagggag taggagtgaa 3000
gccagctgca ggaatcaaaa attgaagaga gatatatctg aaaactggaa taagaagcaa 3060
ataaatatca tcctgccttc atggaactca gctgtctgtg gcttcccatg tctttctcca 3120
aagttatcca gagggttgtg attttgtctg cttagtatct catcaacaaa gaaatattat 3180
ttgctaatta aaaagttaat cttcatggcc atagctttta ttcattagct gtgatttttg 3240
ttgattaaaa cattatagat tttcatgttc ttgcagtcat cagaagtggt aggaaagcct 3300
cactgatata ttttccaggg caatcaatgt tcacgcaact tgaaattata tctgtggtct 3360
tcaaattgtc ttttgtcatg tggctaaatg cctaataaac aattcaagtg aaatactaaa 3420
aaaaaaaaaa aaaaaaaaag ctgctcgaga gatctacggg tggcatccct gtgacccctc 3480
cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc ttgtcctaat 3540
aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta tggggtggag 3600
gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct gcggggtcta 3660
ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct ccgcctcctg 3720
ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg catgcatgac 3780
caggctcagc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat tggccaggct 3840
ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat tgctgggatt 3900
acaggcgtga accactgctc ccttccctgt ccttctgatt ttgtaggtaa ccacgtgcgg 3960
accgagcggc cgcagttaat taagctcgcg aaacccctag tgatggagtt ggccactccc 4020
tctctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gggcgaccaa aggtcgcccg acgcccgggc 4080
tttgcccggg cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagct ggacgattta aatggtaccg 4140
agctcgaatt cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc tggcgttacc 4200
caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag cgaagaggcc 4260
cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatggcg cctgatgcgg 4320
tattttctcc ttacgcatct gtgcggtatt tcacaccgca tatggtgcac tctcagtaca 4380
atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg 4440
ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg 4500
agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgatgca gctctggccc 4560
gtgtctcaaa atctctgatg ttacattgca caagataaaa atatatcatc atgaacaata 4620
aaactgtctg cttacataaa cagtaataca aggggtgtta tgagccatat tcaacgggaa 4680
acgtcgaggc cgcgattaaa ttccaacatg gatgctgatt tatatgggta taaatgggct 4740
cgcgataatg tcgggcaatc aggtgcgaca atctatcgct tgtatgggaa gcccgatgcg 4800
ccagagttgt ttctgaaaca tggcaaaggt agcgttgcca atgatgttac agatgagatg 4860
gtcagactaa actggctgac ggaatttatg cctcttccga ccatcaagca ttttatccgt 4920
actcctgatg atgcatggtt actcaccact gcgatccccg gaaaaacagc attccaggta 4980
ttagaagaat atcctgattc aggtgaaaat attgttgatg cgctggcagt gttcctgcgc 5040
cggttgcatt cgattcctgt ttgtaattgt ccttttaaca gcgatcgcgt atttcgtctc 5100
gctcaggcgc aatcacgaat gaataacggt ttggttgatg cgagtgattt tgatgacgag 5160
cgtaatggct ggcctgttga acaagtctgg aaagaaatgc ataaactttt gccattctca 5220
ccggattcag tcgtcactca tggtgatttc tcacttgata accttatttt tgacgagggg 5280
aaattaatag gttgtattga tgttggacga gtcggaatcg cagaccgata ccaggatctt 5340
gccatcctat ggaactgcct cggtgagttt tctccttcat tacagaaacg gctttttcaa 5400
aaatatggta ttgataatcc tgatatgaat aaattgcagt ttcatttgat gctcgatgag 5460
tttttctaat cagaattggt taattggttg taacattatt cagattgggc ttgatttaaa 5520
acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa 5580
aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 5640
atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 5700
gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 5760
tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca 5820
ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 5880
ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 5940
ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 6000
aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 6060
cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 6120
gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 6180
ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 6240
cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 6300
tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac 6360
cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg 6420
cccaatacgc aaaccgcctc tc 6442
<210> 14
<211> 9260
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 14
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500
tgaacgccag cgagttcagg aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca 1560
tggagggcat cgagggcagg caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc 1620
tgatccccgc cgccgccccc caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg 1680
agaagatcat catgcccggc gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740
ccaccgccag cagctacccc gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca 1800
tcggcttcag ctgggccgcc agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact 1860
ggctgggcaa gatgctggag ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg 1920
gcggcgtgat ccagggcagc gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga 1980
ccaaggtgat ccacaggctg caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg 2040
agaagctggt ggcctacagc agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga 2100
tcggcggcgt gaagctgaag gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg 2160
ccctgcagga ggccctggag agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg 2220
ccaccctggg caccaccacc tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct 2280
gcaacaagga ggacatctgg ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct 2340
gccccgagtt caggcacctg ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc 2400
cccacaagtg gctgctggtg aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg 2460
acctgaccgg cgccttcagg ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg 2520
gcctgatcac cgactacagg cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga 2580
agatgtggtt cgtgttcagg atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc 2640
acgtgcagct gagccacgag ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct 2700
gcgtggaggt gatcctgggc ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg 2760
aggccctgct gcagaggatc aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga 2820
gggacaagtt cgtgctgagg ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc 2880
agagggcctg ggagcacatc aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt 2940
gagctgctcg agagatctac gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg 3000
ccctggaagt tgccactcca gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca 3060
ttttgtctga ctaggtgtcc ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca 3120
aggggcaagt tgggaagaca acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga 3180
gtgcagtggc acaatcttgg ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc 3240
tgcctcagcc tcccgagttg ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt 3300
tgtttttttg gtagagacgg ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat 3360
ctcaggtgat ctacccacct tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg 3420
ctcccttccc tgtccttctg attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt 3480
aattaagctc gcgaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg 3540
ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc 3600
ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggccaag acgatttaaa tggtaccgag 3660
ctcgaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 3720
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 3780
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggcgcc tgatgcggta 3840
ttttctcctt acgcatctgt gcggtatttc acaccgcata tggtgcactc tcagtacaat 3900
ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg ctgacgcgcc 3960
ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg tctcagaacc 4020
caaatgtgac caaccgttta catatatctt ggtttattat ttcaatttct cttttcaaac 4080
atcttcttct gtcgttgtgc aattttccaa atgccaattt ggtcgcttgg ctatttccaa 4140
acgatttcat atattcaagt tggagatata gacagtcccc tgaacacctc gcatcctctg 4200
ctttttatgc ctgctcgtcc tgtgggtata attttaatgg tcaaatcgct gctggggaat 4260
tgtatacgct gctcttgtgt ctcactgcct cccttgtaga aatggaaatt gcttttccat 4320
tatttccatg tgattttgtt ggttttgcca tcgaattggc attgaaaacg cataaaaata 4380
agcatttcgc atttgcaaag atccaaaaga tttatttgca cgctgagcct ggggatacac 4440
gaaatgtatt tgtaagattc ttcagatgag tttggaacgc acggaaatta ccgtcttggg 4500
atttgttgga catcgcattt aagcatgatg tatcatttaa ttttttccaa tttaaaaaca 4560
aataatcagt gctacgatta agactggatc tattatagac ttcttcaaag tttttcagtt 4620
ttctttaaaa ttacctccat aaaactcttt taatattttg aaaatcatct ccaggttaca 4680
tttaatctga ttaagtttag agtcagttag tttcccacag ttttcttctt gaaataaacc 4740
cattaagtaa ccccaactga tcggcgcaaa tgattcagct atgcagaaaa tatgattgat 4800
gatttttccc tcccaccagc ccttaacact tgcttaaccc ttttgtgtgg ccattatagc 4860
cctttcctcg tagtctgctt aaagttcatt aataagtttt gcgtgagcca aaaatggcgc 4920
cgctttggaa tcgtgacagc gtggaaactc tggactttgg ggttgcaaaa cttcggaagc 4980
tgaaagcatt ttgctgtagc catcgcattt tgggggaaga aatccgaatt cgagtccaaa 5040
ccgaattcta atagaagttt tgcagcaaag tgcctcagac aggttaatga ccaaaagcag 5100
ttttgcattc aaatgctgca gcaaccctcg cacgagggtt gtcatgacgg acgaaaatct 5160
aatttacaac atgcaactgc cactttgagg ggtgactttt acccaagacg tggctgtgaa 5220
ggaaattctg cgagaaagag attaattacg ctctgggggc agttaatgaa tgcttgcgcg 5280
gggcgataag gggttaacgt ttggccagct caaattaccg aatgtataac attttgatga 5340
gcatgacaaa aattggaatt ttcaactctt ttttcctgcg aaaagcataa cttttccatt 5400
aacacaatgg cgacgatgag ccggcaaatc gacgatacca aatcggcata acgtgcatga 5460
aaattataca tgattgattt catattaatt tctacgaatg ttatgaatcg gctaaaagat 5520
gagaatggaa atattgcacg attttgattt tgtcatgatg acaaaaaagg gttgtaagat 5580
ttgtacatgc caaaatcata aacttttaac agaaatcaaa cacaaagaag taatataaca 5640
ttaaagtaca caggccttgt cacagagata gaaaaatgta gctattatta aaatatttaa 5700
cattctcttg gtgtctgcaa cttttctatc agtcgctttt ttattccctt tccaacactt 5760
atttaaaatg aaatgcactc gaaattaact aatttaatgg ctcatatcct ttgtgctgct 5820
taaaaaggca ggaaacgttt tttgtgccct acacctcctc cattcaaatg aaaaaggcgg 5880
tggagtcgag gaaaatgtct gccctggagc ttgacaagcc aagatatggc ccatcaaaaa 5940
tgttcgaatg ttctttttaa ataaatgtct cattatatgg ctgccacgcc cacaccgctc 6000
aacgcccaca cacgtgccgc cttccggttt agttgggtgg tacctgaccg tagatttttc 6060
actgcggaca tgtgtccaat cagtggcaac gtgcaacgaa ccgtggcaaa cacagggaaa 6120
gaacctcgaa gacccacagc aaactcatcc tctcgaattt gacactatga taatgcttat 6180
attcaatttt ttgcaacatt ctatttacac taaactgaga aacaggacaa agttgagaat 6240
gggtgctgtg attatttgtc ttgtgccaat atatgccctc ctgcatataa aatacgagat 6300
acaaaaccaa acgaaataag aacgaacaag aaatcagttt aatttcaatg ctgatcaaac 6360
caagttgaca actctgttgt atattagctc taataatgac ttaaggttcg aaatttaagt 6420
aacttccaaa atgggccaga taaatactgc taatatcgaa tgcaattcaa tgaggaaata 6480
gtaatcaatc agccaaccct aatgaaatta ataatgtaat ttaaaacttt attccaccca 6540
ttctaataat gaaaatcatt aaatatatgt agcaatccaa ttttgttaat acatattgta 6600
tatccctgat ttgtcaatac caaagaccag aaaaaacacc atgccaaatt ccttttattc 6660
gttgaaaatc gaaacaactt tgaagtatta acctgctggc taaaaaatat gtgtattact 6720
aaatatacca tgtaatcaaa agttcgaaat aaacgtgaaa tggcagctcc actcgtcagc 6780
cgtgccactt ttcgactaat caaaatgcct tttgaatgcc tgagttgaat caagttggct 6840
taatagttat tatcccacgc aagcaaagtc aatggcagag ggaaatgcgt agaaattagc 6900
acagacttga atggacgcac gagtgtcgaa tggcaggaga gtgggaaatg aacggggagt 6960
tttccaggat aaggatgttt tcgaagtatc gtaatcattt atagcctcca gatacgggag 7020
ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgatgcagc tctggcccgt 7080
gtctcaaaat ctctgatgtt acattgcaca agataaaaat atatcatcat gaacaataaa 7140
actgtctgct tacataaaca gtaatacaag gggtgttgaa gatcctttga tcttttctac 7200
ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc 7260
aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caagcccaat 7320
ctgaataatg ttacaaccaa ttaaccaatt ctgattagaa aaactcatcg agcatcaaat 7380
gaaactgcaa tttattcata tcaggattat caataccata tttttgaaaa agccgtttct 7440
gtaatgaagg agaaaactca ccgaggcagt tccataggat ggcaagatcc tggtatcggt 7500
ctgcgattcc gactcgtcca acatcaatac aacctattaa tttcccctcg tcaaaaataa 7560
ggttatcaag tgagaaatca ccatgagtga cgactgaatc cggtgagaat ggcaaaagtt 7620
tatgcatttc tttccagact tgttcaacag gccagccatt acgctcgtca tcaaaatcac 7680
tcgcatcaac caaaccgtta ttcattcgtg attgcgcctg agcgagacga aatacgcgat 7740
cgctgttaaa aggacaatta caaacaggaa tcgaatgcaa ccggcgcagg aacactgcca 7800
gcgcatcaac aatattttca cctgaatcag gatattcttc taatacctgg aatgctgttt 7860
ttccggggat cgcagtggtg agtaaccatg catcatcagg agtacggata aaatgcttga 7920
tggtcggaag aggcataaat tccgtcagcc agtttagtct gaccatctca tctgtaacat 7980
cattggcaac gctacctttg ccatgtttca gaaacaactc tggcgcatcg ggcttcccat 8040
acaagcgata gattgtcgca cctgattgcc cgacattatc gcgagcccat ttatacccat 8100
ataaatcagc atccatgttg gaatttaatc gcggcctcga cgtttcccgt tgaatatggc 8160
tcataacacc ccttgtatta ctgtttatgt aagcagacag ttttattgtt catgatgata 8220
tatttttatc ttgtgcaatg taacatcaga gattttgaga cacgggccag agctgcatcg 8280
cgcgttttca gaattggtta attggttgta acattattca gattgggctt gatttaaaac 8340
ttcattttta atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa 8400
tcccttaacg tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat 8460
cttctttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga 8520
ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg 8580
tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg 8640
gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc 8700
gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg 8760
gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca 8820
ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt 8880
ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag 8940
ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg 9000
gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caaaacgcca 9060
gcaacgcggc ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc 9120
ctgcgttatc ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg 9180
ctcgccgcag ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc 9240
caatacgcaa accgcctctc 9260
<210> 15
<211> 9665
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 15
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 180
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 240
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt 300
cgacgatctg cggccgcacg cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat 360
tagttcatag cccatatatg gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg 420
gctgaccgcc caacgacccc cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa 480
cgtcaatagg gactttccat tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact 540
tggcagtaca tcaagtgtat catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta 600
aatggcccgc ctggcattat gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt 660
acatctacgt attagtcatc gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg 720
ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg 780
ggagtttgtt ttgcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc 840
attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt 900
agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca 960
ccgggaccga tccagcctcc gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc 1020
ggattccccg tgccaagagt gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa 1080
atgctttctt cttttaatat acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct 1140
ctttctttca gggcaataat gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat 1200
aacagtgata atttctgggt taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca 1260
tataaattgt aactgatgta agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac 1320
cattctgctt ttattttatg gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc 1380
cttttgctaa tcatgttcat acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg 1440
gtctgtgtgc tggcccatca ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca 1500
tgaacgcaag tgaattccga aggagaggga aggagatggt ggattacgtg gccaactaca 1560
tggaaggcat tgagggacgc caggtctacc ctgacgtgga gcccgggtac ctgcggccgc 1620
tgatccctgc cgctgcccct caggagccag acacgtttga ggacatcatc aacgacgttg 1680
agaagataat catgcctggg gtgacgcact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc 1740
ccactgccag ctcgtacccg gccatgcttg cggacatgct gtgcggggcc attggctgca 1800
tcggcttctc ctgggcggca agcccagcat gcacagagct ggagactgtg atgatggact 1860
ggctcgggaa gatgctggaa ctaccaaagg catttttgaa tgagaaagct ggagaagggg 1920
gaggagtgat ccagggaagt gccagtgaag ccaccctggt ggccctgctg gccgctcgga 1980
ccaaagtgat ccatcggctg caggcagcgt ccccagagct cacacaggcc gctatcatgg 2040
agaagctggt ggcttactca tccgatcagg cacactcctc agtggaaaga gctgggttaa 2100
ttggtggagt gaaattaaaa gccatcccct cagatggcaa cttcgccatg cgtgcgtctg 2160
ccctgcagga agccctggag agagacaaag cggctggcct gattcctttc tttatggttg 2220
ccaccctggg gaccacaaca tgctgctcct ttgacaatct cttagaagtc ggtcctatct 2280
gcaacaagga agacatatgg ctgcacgttg atgcagccta cgcaggcagt gcattcatct 2340
gccctgagtt ccggcacctt ctgaatggag tggagtttgc agattcattc aactttaatc 2400
cccacaaatg gctattggtg aattttgact gttctgccat gtgggtgaaa aagagaacag 2460
acttaacggg agcctttaga ctggacccca cttacctgaa gcacagccat caggattcag 2520
ggcttatcac tgactaccgg cattggcaga taccactggg cagaagattt cgctctttga 2580
aaatgtggtt tgtatttagg atgtatggag tcaaaggact gcaggcttat atccgcaagc 2640
atgtccagct gtcccatgag tttgagtcac tggtgcgcca ggatccccgc tttgaaatct 2700
gtgtggaagt cattctgggg cttgtctgct ttcggctaaa gggttccaac aaagtgaatg 2760
aagctcttct gcaaagaata aacagtgcca aaaaaatcca cttggttcca tgtcacctca 2820
gggacaagtt tgtcctgcgc tttgccatct gttctcgcac ggtggaatct gcccatgtgc 2880
agcgggcctg ggaacacatc aaagagctgg cggccgacgt gctgcgagca gagagggagt 2940
aggagtgaag ccagctgcag gaatcaaaaa ttgaagagag atatatctga aaactggaat 3000
aagaagcaaa taaatatcat cctgccttca tggaactcag ctgtctgtgg cttcccatgt 3060
ctttctccaa agttatccag agggttgtga ttttgtctgc ttagtatctc atcaacaaag 3120
aaatattatt tgctaattaa aaagttaatc ttcatggcca tagcttttat tcattagctg 3180
tgatttttgt tgattaaaac attatagatt ttcatgttct tgcagtcatc agaagtggta 3240
ggaaagcctc actgatatat tttccagggc aatcaatgtt cacgcaactt gaaattatat 3300
ctgtggtctt caaattgtct tttgtcatgt ggctaaatgc ctaataagct gctcgagaga 3360
tctacgggtg gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca 3420
ctccagtgcc caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg 3480
tgtccttcta taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg caagttggga 3540
agacaacctg tagggcctgc ggggtctatt gggaaccaag ctggagtgca gtggcacaat 3600
cttggctcac tgcaatctcc gcctcctggg ttcaagcgat tctcctgcct cagcctcccg 3660
agttgttggg attccaggca tgcatgacca ggctcagcta atttttgttt ttttggtaga 3720
gacggggttt caccatattg gccaggctgg tctccaactc ctaatctcag gtgatctacc 3780
caccttggcc tcccaaattg ctgggattac aggcgtgaac cactgctccc ttccctgtcc 3840
ttctgatttt gtaggtaacc acgtgcggac cgagcggccg cagttaatta agctcgcgaa 3900
ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc 3960
cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg 4020
agcgcgcaga gagggagtgg ccaagacgat ttaaatggta ccgagctcga attcactggc 4080
cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc 4140
agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc 4200
ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca 4260
tctgtgcggt atttcacacc gcatatggtg cactctcagt acaatctgct ctgatgccgc 4320
atagttaagc cagccccgac acccgccaac acccgctgac gcgccctgac gggcttgtct 4380
gctcccggca tccgcttaca gacaagctgt gaccgtctca gaacccaaat gtgaccaacc 4440
gtttacatat atcttggttt attatttcaa tttctctttt caaacatctt cttctgtcgt 4500
tgtgcaattt tccaaatgcc aatttggtcg cttggctatt tccaaacgat ttcatatatt 4560
caagttggag atatagacag tcccctgaac acctcgcatc ctctgctttt tatgcctgct 4620
cgtcctgtgg gtataatttt aatggtcaaa tcgctgctgg ggaattgtat acgctgctct 4680
tgtgtctcac tgcctccctt gtagaaatgg aaattgcttt tccattattt ccatgtgatt 4740
ttgttggttt tgccatcgaa ttggcattga aaacgcataa aaataagcat ttcgcatttg 4800
caaagatcca aaagatttat ttgcacgctg agcctgggga tacacgaaat gtatttgtaa 4860
gattcttcag atgagtttgg aacgcacgga aattaccgtc ttgggatttg ttggacatcg 4920
catttaagca tgatgtatca tttaattttt tccaatttaa aaacaaataa tcagtgctac 4980
gattaagact ggatctatta tagacttctt caaagttttt cagttttctt taaaattacc 5040
tccataaaac tcttttaata ttttgaaaat catctccagg ttacatttaa tctgattaag 5100
tttagagtca gttagtttcc cacagttttc ttcttgaaat aaacccatta agtaacccca 5160
actgatcggc gcaaatgatt cagctatgca gaaaatatga ttgatgattt ttccctccca 5220
ccagccctta acacttgctt aacccttttg tgtggccatt atagcccttt cctcgtagtc 5280
tgcttaaagt tcattaataa gttttgcgtg agccaaaaat ggcgccgctt tggaatcgtg 5340
acagcgtgga aactctggac tttggggttg caaaacttcg gaagctgaaa gcattttgct 5400
gtagccatcg cattttgggg gaagaaatcc gaattcgagt ccaaaccgaa ttctaataga 5460
agttttgcag caaagtgcct cagacaggtt aatgaccaaa agcagttttg cattcaaatg 5520
ctgcagcaac cctcgcacga gggttgtcat gacggacgaa aatctaattt acaacatgca 5580
actgccactt tgaggggtga cttttaccca agacgtggct gtgaaggaaa ttctgcgaga 5640
aagagattaa ttacgctctg ggggcagtta atgaatgctt gcgcggggcg ataaggggtt 5700
aacgtttggc cagctcaaat taccgaatgt ataacatttt gatgagcatg acaaaaattg 5760
gaattttcaa ctcttttttc ctgcgaaaag cataactttt ccattaacac aatggcgacg 5820
atgagccggc aaatcgacga taccaaatcg gcataacgtg catgaaaatt atacatgatt 5880
gatttcatat taatttctac gaatgttatg aatcggctaa aagatgagaa tggaaatatt 5940
gcacgatttt gattttgtca tgatgacaaa aaagggttgt aagatttgta catgccaaaa 6000
tcataaactt ttaacagaaa tcaaacacaa agaagtaata taacattaaa gtacacaggc 6060
cttgtcacag agatagaaaa atgtagctat tattaaaata tttaacattc tcttggtgtc 6120
tgcaactttt ctatcagtcg cttttttatt ccctttccaa cacttattta aaatgaaatg 6180
cactcgaaat taactaattt aatggctcat atcctttgtg ctgcttaaaa aggcaggaaa 6240
cgttttttgt gccctacacc tcctccattc aaatgaaaaa ggcggtggag tcgaggaaaa 6300
tgtctgccct ggagcttgac aagccaagat atggcccatc aaaaatgttc gaatgttctt 6360
tttaaataaa tgtctcatta tatggctgcc acgcccacac cgctcaacgc ccacacacgt 6420
gccgccttcc ggtttagttg ggtggtacct gaccgtagat ttttcactgc ggacatgtgt 6480
ccaatcagtg gcaacgtgca acgaaccgtg gcaaacacag ggaaagaacc tcgaagaccc 6540
acagcaaact catcctctcg aatttgacac tatgataatg cttatattca attttttgca 6600
acattctatt tacactaaac tgagaaacag gacaaagttg agaatgggtg ctgtgattat 6660
ttgtcttgtg ccaatatatg ccctcctgca tataaaatac gagatacaaa accaaacgaa 6720
ataagaacga acaagaaatc agtttaattt caatgctgat caaaccaagt tgacaactct 6780
gttgtatatt agctctaata atgacttaag gttcgaaatt taagtaactt ccaaaatggg 6840
ccagataaat actgctaata tcgaatgcaa ttcaatgagg aaatagtaat caatcagcca 6900
accctaatga aattaataat gtaatttaaa actttattcc acccattcta ataatgaaaa 6960
tcattaaata tatgtagcaa tccaattttg ttaatacata ttgtatatcc ctgatttgtc 7020
aataccaaag accagaaaaa acaccatgcc aaattccttt tattcgttga aaatcgaaac 7080
aactttgaag tattaacctg ctggctaaaa aatatgtgta ttactaaata taccatgtaa 7140
tcaaaagttc gaaataaacg tgaaatggca gctccactcg tcagccgtgc cacttttcga 7200
ctaatcaaaa tgccttttga atgcctgagt tgaatcaagt tggcttaata gttattatcc 7260
cacgcaagca aagtcaatgg cagagggaaa tgcgtagaaa ttagcacaga cttgaatgga 7320
cgcacgagtg tcgaatggca ggagagtggg aaatgaacgg ggagttttcc aggataagga 7380
tgttttcgaa gtatcgtaat catttatagc ctccagatac gggagctgca tgtgtcagag 7440
gttttcaccg tcatcaccga aacgcgcgat gcagctctgg cccgtgtctc aaaatctctg 7500
atgttacatt gcacaagata aaaatatatc atcatgaaca ataaaactgt ctgcttacat 7560
aaacagtaat acaaggggtg ttgaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca 7620
gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac 7680
ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaagc ccaatctgaa taatgttaca 7740
accaattaac caattctgat tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat 7800
tcatatcagg attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa 7860
actcaccgag gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc 7920
gtccaacatc aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga 7980
aatcaccatg agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagtttatgc atttctttcc 8040
agacttgttc aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac 8100
cgttattcat tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac 8160
aattacaaac aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat 8220
tttcacctga atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgtttttccg gggatcgcag 8280
tggtgagtaa ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca 8340
taaattccgt cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac 8400
ctttgccatg tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaag cgatagattg 8460
tcgcacctga ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca 8520
tgttggaatt taatcgcggc ctcgacgttt cccgttgaat atggctcata acaccccttg 8580
tattactgtt tatgtaagca gacagtttta ttgttcatga tgatatattt ttatcttgtg 8640
caatgtaaca tcagagattt tgagacacgg gccagagctg catcgcgcgt tttcagaatt 8700
ggttaattgg ttgtaacatt attcagattg ggcttgattt aaaacttcat ttttaattta 8760
aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt 8820
tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct ttccataggc 8880
tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga 8940
caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc 9000
cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt 9060
ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct 9120
gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg 9180
agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta 9240
gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct 9300
acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa 9360
gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt 9420
gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaaa cgccagcaac gcggcctttt 9480
tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg 9540
attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 9600
cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 9660
ctctc 9665
<210> 16
<211> 6236
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 16
cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg 60
ggcagtgagc gcaacgcaat tttcacacag gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc 120
ttgcatgcat ttaaatgacg cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa 180
agcccgggcg tcgggcgacc tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag 240
agggagtggc caactccatc actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc 300
gcacgcgtgg agctagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat 360
atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg 420
acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt 480
tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag 540
tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc 600
attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag 660
tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt 720
ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca 780
ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 840
cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 900
cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 960
cctccgcgga ttcgaatccc ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca 1020
agagtgacgt aagtaccgcc tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt 1080
aatatacttt tttgtttatc ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca 1140
ataatgatac aatgtatcat gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc 1200
tgggttaagg caatagcaat atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg 1260
atgtaagagg tttcatattg ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt 1320
ttatggttgg gataaggctg gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg 1380
ttcatacctc ttatcttcct cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc 1440
catcactttg gcaaagaatt gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat 1500
tccgaaggag agggaaggag atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg 1560
gacgccaggt ctaccctgac gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg 1620
cccctcagga gccagacacg tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc 1680
ctggggtgac gcactggcac agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt 1740
acccggccat gcttgcggac atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg 1800
cggcaagccc agcatgcaca gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc 1860
tggaactacc aaaggcattt ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg 1920
gaagtgccag tgaagccacc ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc 1980
ggctgcaggc agcgtcccca gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt 2040
actcatccga tcaggcacac tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat 2100
taaaagccat cccctcagat ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc 2160
tggagagaga caaagcggct ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca 2220
caacatgctg ctcctttgac aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca 2280
tatggctgca cgttgatgca gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc 2340
accttctgaa tggagtggag tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat 2400
tggtgaattt tgactgttct gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct 2460
ttagactgga ccccacttac ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact 2520
accggcattg gcagatacca ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat 2580
ttaggatgta tggagtcaaa ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc 2640
atgagtttga gtcactggtg cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc 2700
tggggcttgt ctgctttcgg ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa 2760
gaataaacag tgccaaaaaa atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc 2820
tgcgctttgc catctgttct cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac 2880
acatcaaaga gctggcggcc gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc 2940
gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag 3000
ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg 3060
actaggtgtc cttctataat attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag 3120
ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg 3180
cacaatcttg gctcactgca atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc 3240
ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt 3300
ggtagagacg gggtttcacc atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga 3360
tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc 3420
ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct 3480
cgcgaaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga 3540
ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga 3600
gcgagcgcgc agctggacga tttaaatggt accgagctcg aattcactgg ccgtcgtttt 3660
acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc 3720
ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt 3780
gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg 3840
tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag 3900
ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc 3960
atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc 4020
gtcatcaccg aaacgcgcga tgcagctctg gcccgtgtct caaaatctct gatgttacat 4080
tgcacaagat aaaaatatat catcatgaac aataaaactg tctgcttaca taaacagtaa 4140
tacaaggggt gttgaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 4200
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 4260
tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaag cccaatctga ataatgttac aaccaattaa 4320
ccaattctga ttagaaaaac tcatcgagca tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag 4380
gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga 4440
ggcagttcca taggatggca agatcctggt atcggtctgc gattccgact cgtccaacat 4500
caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat 4560
gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca aaagtttatg catttctttc cagacttgtt 4620
caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca 4680
ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa 4740
caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg 4800
aatcaggata ttcttctaat acctggaatg ctgtttttcc ggggatcgca gtggtgagta 4860
accatgcatc atcaggagta cggataaaat gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg 4920
tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat 4980
gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct tcccatacaa gcgatagatt gtcgcacctg 5040
attgcccgac attatcgcga gcccatttat acccatataa atcagcatcc atgttggaat 5100
ttaatcgcgg cctcgacgtt tcccgttgaa tatggctcat aacacccctt gtattactgt 5160
ttatgtaagc agacagtttt attgttcatg atgatatatt tttatcttgt gcaatgtaac 5220
atcagagatt ttgagacacg ggccagagct gcatcgcgcg ttttcagaat tggttaattg 5280
gttgtaacat tattcagatt gggcttgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct 5340
aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc 5400
actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc tttccatagg ctccgccccc 5460
ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat 5520
aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc 5580
cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct 5640
cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg 5700
aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc 5760
cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga 5820
ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa 5880
gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta 5940
gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc 6000
agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc 6060
tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg 6120
ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc 6180
gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctc 6236
<210> 17
<211> 3497
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 17
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct 2820
acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc 2880
cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt 2940
ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga 3000
caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt 3060
ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt 3120
tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac 3180
ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac 3240
cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc 3300
tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga 3360
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3420
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 3480
gcgcagctgc ctgcagg 3497
<210> 18
<211> 3497
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 18
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgagctgct cgagagatct 2820
acgggtggca tccctgtgac ccctccccag tgcctctcct ggccctggaa gttgccactc 2880
cagtgcccac cagccttgtc ctaataaaat taagttgcat cattttgtct gactaggtgt 2940
ccttctataa tattatgggg tggagggggg tggtatggag caaggggcaa gttgggaaga 3000
caacctgtag ggcctgcggg gtctattggg aaccaagctg gagtgcagtg gcacaatctt 3060
ggctcactgc aatctccgcc tcctgggttc aagcgattct cctgcctcag cctcccgagt 3120
tgttgggatt ccaggcatgc atgaccaggc tcagctaatt tttgtttttt tggtagagac 3180
ggggtttcac catattggcc aggctggtct ccaactccta atctcaggtg atctacccac 3240
cttggcctcc caaattgctg ggattacagg cgtgaaccac tgctcccttc cctgtccttc 3300
tgattttgta ggtaaccacg tgcggaccga gcggccgcag ttaattaagc tcgcgaagga 3360
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 3420
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 3480
gcgcagctgc ctgcagg 3497
<210> 19
<211> 3491
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 19
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgccagcgag ttcaggagga 1380
ggggcaagga gatggtggac tacgtggcca actacatgga gggcatcgag ggcaggcagg 1440
tgtaccccga cgtggagccc ggctacctga ggcccctgat ccccgccgcc gccccccagg 1500
agcccgacac cttcgaggac atcatcaacg acgtggagaa gatcatcatg cccggcgtga 1560
cccactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac cgccagcagc taccccgcca 1620
tgctggccga catgctgtgc ggcgccatcg gctgcatcgg cttcagctgg gccgccagcc 1680
ccgcctgcac cgagctggag accgtgatga tggactggct gggcaagatg ctggagctgc 1740
ccaaggcctt cctgaacgag aaggccggcg agggcggcgg cgtgatccag ggcagcgcca 1800
gcgaggccac cctggtggcc ctgctggccg ccaggaccaa ggtgatccac aggctgcagg 1860
ccgccagccc cgagctgacc caggccgcca tcatggagaa gctggtggcc tacagcagcg 1920
accaggccca cagcagcgtg gagagggccg gcctgatcgg cggcgtgaag ctgaaggcca 1980
tccccagcga cggcaacttc gccatgaggg ccagcgccct gcaggaggcc ctggagaggg 2040
acaaggccgc cggcctgatc cccttcttca tggtggccac cctgggcacc accacctgct 2100
gcagcttcga caacctgctg gaggtgggcc ccatctgcaa caaggaggac atctggctgc 2160
acgtggacgc cgcctacgcc ggcagcgcct tcatctgccc cgagttcagg cacctgctga 2220
acggcgtgga gttcgccgac agcttcaact tcaaccccca caagtggctg ctggtgaact 2280
tcgactgcag cgccatgtgg gtgaagaaga ggaccgacct gaccggcgcc ttcaggctgg 2340
accccaccta cctgaagcac agccaccagg acagcggcct gatcaccgac tacaggcact 2400
ggcagatccc cctgggcagg aggttcagga gcctgaagat gtggttcgtg ttcaggatgt 2460
acggcgtgaa gggcctgcag gcctacatca ggaagcacgt gcagctgagc cacgagttcg 2520
agagcctggt gaggcaggac cccaggttcg agatctgcgt ggaggtgatc ctgggcctgg 2580
tgtgcttcag gctgaagggc agcaacaagg tgaacgaggc cctgctgcag aggatcaaca 2640
gcgccaagaa gatccacctg gtgccctgcc acctgaggga caagttcgtg ctgaggttcg 2700
ccatctgcag caggaccgtg gagagcgccc acgtgcagag ggcctgggag cacatcaagg 2760
agctggccgc cgacgtgctg agggccgaga gggagtgagc tgctcgagag atctacgggt 2820
ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc actccagtgc 2880
ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag gtgtccttct 2940
ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcaagttggg aagacaacct 3000
gtagggcctg cggggtctat tgggaaccaa gctggagtgc agtggcacaa tcttggctca 3060
ctgcaatctc cgcctcctgg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc gagttgttgg 3120
gattccaggc atgcatgacc aggctcagct aatttttgtt tttttggtag agacggggtt 3180
tcaccatatt ggccaggctg gtctccaact cctaatctca ggtgatctac ccaccttggc 3240
ctcccaaatt gctgggatta caggcgtgaa ccactgctcc cttccctgtc cttctgattt 3300
tgtaggtaac cacgtgcgga ccgagcggcc gcagttaatt aagctcgcga aggaacccct 3360
agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc 3420
aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag 3480
ctgcctgcag g 3491
<210> 20
<211> 4003
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 20
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcgaatt cgggcacgag ggaggacaga gagcaagtca 1380
ctcccggctg cctttttcac ctctgacaga gcccagacac catgaacgca agtgaattcc 1440
gaaggagagg gaaggagatg gtggattacg tggccaacta catggaaggc attgagggac 1500
gccaggtcta ccctgacgtg gagcccgggt acctgcggcc gctgatccct gccgctgccc 1560
ctcaggagcc agacacgttt gaggacatca tcaacgacgt tgagaagata atcatgcctg 1620
gggtgacgca ctggcacagc ccctacttct tcgcctactt ccccactgcc agctcgtacc 1680
cggccatgct tgcggacatg ctgtgcgggg ccattggctg catcggcttc tcctgggcgg 1740
caagcccagc atgcacagag ctggagactg tgatgatgga ctggctcggg aagatgctgg 1800
aactaccaaa ggcatttttg aatgagaaag ctggagaagg gggaggagtg atccagggaa 1860
gtgccagtga agccaccctg gtggccctgc tggccgctcg gaccaaagtg atccatcggc 1920
tgcaggcagc gtccccagag ctcacacagg ccgctatcat ggagaagctg gtggcttact 1980
catccgatca ggcacactcc tcagtggaaa gagctgggtt aattggtgga gtgaaattaa 2040
aagccatccc ctcagatggc aacttcgcca tgcgtgcgtc tgccctgcag gaagccctgg 2100
agagagacaa agcggctggc ctgattcctt tctttatggt tgccaccctg gggaccacaa 2160
catgctgctc ctttgacaat ctcttagaag tcggtcctat ctgcaacaag gaagacatat 2220
ggctgcacgt tgatgcagcc tacgcaggca gtgcattcat ctgccctgag ttccggcacc 2280
ttctgaatgg agtggagttt gcagattcat tcaactttaa tccccacaaa tggctattgg 2340
tgaattttga ctgttctgcc atgtgggtga aaaagagaac agacttaacg ggagccttta 2400
gactggaccc cacttacctg aagcacagcc atcaggattc agggcttatc actgactacc 2460
ggcattggca gataccactg ggcagaagat ttcgctcttt gaaaatgtgg tttgtattta 2520
ggatgtatgg agtcaaagga ctgcaggctt atatccgcaa gcatgtccag ctgtcccatg 2580
agtttgagtc actggtgcgc caggatcccc gctttgaaat ctgtgtggaa gtcattctgg 2640
ggcttgtctg ctttcggcta aagggttcca acaaagtgaa tgaagctctt ctgcaaagaa 2700
taaacagtgc caaaaaaatc cacttggttc catgtcacct cagggacaag tttgtcctgc 2760
gctttgccat ctgttctcgc acggtggaat ctgcccatgt gcagcgggcc tgggaacaca 2820
tcaaagagct ggcggccgac gtgctgcgag cagagaggga gtaggagtga agccagctgc 2880
aggaatcaaa aattgaagag agatatatct gaaaactgga ataagaagca aataaatatc 2940
atcctgcctt catggaactc agctgtctgt ggcttcccat gtctttctcc aaagttatcc 3000
agagggttgt gattttgtct gcttagtatc tcatcaacaa agaaatatta tttgctaatt 3060
aaaaagttaa tcttcatggc catagctttt attcattagc tgtgattttt gttgattaaa 3120
acattataga ttttcatgtt cttgcagtca tcagaagtgg taggaaagcc tcactgatat 3180
attttccagg gcaatcaatg ttcacgcaac ttgaaattat atctgtggtc ttcaaattgt 3240
cttttgtcat gtggctaaat gcctaataaa caattcaagt gaaatactaa aaaaaaaaaa 3300
aaaaaaaaaa gctgctcgag agatctacgg gtggcatccc tgtgacccct ccccagtgcc 3360
tctcctggcc ctggaagttg ccactccagt gcccaccagc cttgtcctaa taaaattaag 3420
ttgcatcatt ttgtctgact aggtgtcctt ctataatatt atggggtgga ggggggtggt 3480
atggagcaag gggcaagttg ggaagacaac ctgtagggcc tgcggggtct attgggaacc 3540
aagctggagt gcagtggcac aatcttggct cactgcaatc tccgcctcct gggttcaagc 3600
gattctcctg cctcagcctc ccgagttgtt gggattccag gcatgcatga ccaggctcag 3660
ctaatttttg tttttttggt agagacgggg tttcaccata ttggccaggc tggtctccaa 3720
ctcctaatct caggtgatct acccaccttg gcctcccaaa ttgctgggat tacaggcgtg 3780
aaccactgct cccttccctg tccttctgat tttgtaggta accacgtgcg gaccgagcgg 3840
ccgcagttaa ttaagctcgc gaaggaaccc ctagtgatgg agttggccac tccctctctg 3900
cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg cccgacgccc gggctttgcc 3960
cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctgcctgc agg 4003
<210> 21
<211> 3499
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 21
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctgagtt taaacttcgt cgacgatctg cggccgcacg 180
cgtggagcta gttattaata gtaatcaatt acggggtcat tagttcatag cccatatatg 240
gagttccgcg ttacataact tacggtaaat ggcccgcctg gctgaccgcc caacgacccc 300
cgcccattga cgtcaataat gacgtatgtt cccatagtaa cgtcaatagg gactttccat 360
tgacgtcaat gggtggagta tttacggtaa actgcccact tggcagtaca tcaagtgtat 420
catatgccaa gtacgccccc tattgacgtc aatgacggta aatggcccgc ctggcattat 480
gcccagtaca tgaccttatg ggactttcct acttggcagt acatctacgt attagtcatc 540
gctattacca tggtgatgcg gttttggcag tacatcaatg ggcgtggata gcggtttgac 600
tcacggggat ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttgcaccaaa 660
atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta 720
ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct 780
ggagacgcca tccacgctgt tttgacctcc atagaagaca ccgggaccga tccagcctcc 840
gcggattcga atcccggccg ggaacggtgc attggaacgc ggattccccg tgccaagagt 900
gacgtaagta ccgcctatag agtctatagg cccacaaaaa atgctttctt cttttaatat 960
acttttttgt ttatcttatt tctaatactt tccctaatct ctttctttca gggcaataat 1020
gatacaatgt atcatgcctc tttgcaccat tctaaagaat aacagtgata atttctgggt 1080
taaggcaata gcaatatttc tgcatataaa tatttctgca tataaattgt aactgatgta 1140
agaggtttca tattgctaat agcagctaca atccagctac cattctgctt ttattttatg 1200
gttgggataa ggctggatta ttctgagtcc aagctaggcc cttttgctaa tcatgttcat 1260
acctcttatc ttcctcccac agctcctggg caacgtgctg gtctgtgtgc tggcccatca 1320
ctttggcaaa gaattgggat tcgaacatcg gccgccacca tgaacgccag cgagttcagg 1380
aggaggggca aggagatggt ggactacgtg gccaactaca tggagggcat cgagggcagg 1440
caggtgtacc ccgacgtgga gcccggctac ctgaggcccc tgatccccgc cgccgccccc 1500
caggagcccg acaccttcga ggacatcatc aacgacgtgg agaagatcat catgcccggc 1560
gtgacccact ggcacagccc ctacttcttc gcctacttcc ccaccgccag cagctacccc 1620
gccatgctgg ccgacatgct gtgcggcgcc atcggctgca tcggcttcag ctgggccgcc 1680
agccccgcct gcaccgagct ggagaccgtg atgatggact ggctgggcaa gatgctggag 1740
ctgcccaagg ccttcctgaa cgagaaggcc ggcgagggcg gcggcgtgat ccagggcagc 1800
gccagcgagg ccaccctggt ggccctgctg gccgccagga ccaaggtgat ccacaggctg 1860
caggccgcca gccccgagct gacccaggcc gccatcatgg agaagctggt ggcctacagc 1920
agcgaccagg cccacagcag cgtggagagg gccggcctga tcggcggcgt gaagctgaag 1980
gccatcccca gcgacggcaa cttcgccatg agggccagcg ccctgcagga ggccctggag 2040
agggacaagg ccgccggcct gatccccttc ttcatggtgg ccaccctggg caccaccacc 2100
tgctgcagct tcgacaacct gctggaggtg ggccccatct gcaacaagga ggacatctgg 2160
ctgcacgtgg acgccgccta cgccggcagc gccttcatct gccccgagtt caggcacctg 2220
ctgaacggcg tggagttcgc cgacagcttc aacttcaacc cccacaagtg gctgctggtg 2280
aacttcgact gcagcgccat gtgggtgaag aagaggaccg acctgaccgg cgccttcagg 2340
ctggacccca cctacctgaa gcacagccac caggacagcg gcctgatcac cgactacagg 2400
cactggcaga tccccctggg caggaggttc aggagcctga agatgtggtt cgtgttcagg 2460
atgtacggcg tgaagggcct gcaggcctac atcaggaagc acgtgcagct gagccacgag 2520
ttcgagagcc tggtgaggca ggaccccagg ttcgagatct gcgtggaggt gatcctgggc 2580
ctggtgtgct tcaggctgaa gggcagcaac aaggtgaacg aggccctgct gcagaggatc 2640
aacagcgcca agaagatcca cctggtgccc tgccacctga gggacaagtt cgtgctgagg 2700
ttcgccatct gcagcaggac cgtggagagc gcccacgtgc agagggcctg ggagcacatc 2760
aaggagctgg ccgccgacgt gctgagggcc gagagggagt gagctgctcg agagatctac 2820
gggtggcatc cctgtgaccc ctccccagtg cctctcctgg ccctggaagt tgccactcca 2880
gtgcccacca gccttgtcct aataaaatta agttgcatca ttttgtctga ctaggtgtcc 2940
ttctataata ttatggggtg gaggggggtg gtatggagca aggggcaagt tgggaagaca 3000
acctgtaggg cctgcggggt ctattgggaa ccaagctgga gtgcagtggc acaatcttgg 3060
ctcactgcaa tctccgcctc ctgggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccgagttg 3120
ttgggattcc aggcatgcat gaccaggctc agctaatttt tgtttttttg gtagagacgg 3180
ggtttcacca tattggccag gctggtctcc aactcctaat ctcaggtgat ctacccacct 3240
tggcctccca aattgctggg attacaggcg tgaaccactg ctcccttccc tgtccttctg 3300
attttgtagg taaccacgtg cggaccgagc ggccgcagtt aattaagctc gcgaaggaac 3360
ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc 3420
gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc 3480
gcagagaggg agtggccaa 3499
<210> 22
<211> 3896
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 22
cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcaaag cccgggcgtc 60
gggcgacctt tggtcgcccg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagagag ggagtggcca 120
actccatcac taggggttcc tgagtttaaa cttcgtcgac gatctgcggc cgcacgcgtg 180
gagctagtta ttaatagtaa tcaattacgg ggtcattagt tcatagccca tatatggagt 240
tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc 300
cattgacgtc aataatgacg tatgttccca tagtaacgtc aatagggact ttccattgac 360
gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata 420
tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc 480
agtacatgac cttatgggac tttcctactt ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta 540
ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac 600
ggggatttcc aagtctccac cccattgacg tcaatgggag tttgttttgc accaaaatca 660
acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg 720
tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag 780
acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcgg 840
attcgaatcc cggccgggaa cggtgcattg gaacgcggat tccccgtgcc aagagtgacg 900
taagtaccgc ctatagagtc tataggccca caaaaaatgc tttcttcttt taatatactt 960
ttttgtttat cttatttcta atactttccc taatctcttt ctttcagggc aataatgata 1020
caatgtatca tgcctctttg caccattcta aagaataaca gtgataattt ctgggttaag 1080
gcaatagcaa tatttctgca tataaatatt tctgcatata aattgtaact gatgtaagag 1140
gtttcatatt gctaatagca gctacaatcc agctaccatt ctgcttttat tttatggttg 1200
ggataaggct ggattattct gagtccaagc taggcccttt tgctaatcat gttcatacct 1260
cttatcttcc tcccacagct cctgggcaac gtgctggtct gtgtgctggc ccatcacttt 1320
ggcaaagaat tgggattcga acatcggccg ccaccatgaa cgcaagtgaa ttccgaagga 1380
gagggaagga gatggtggat tacgtggcca actacatgga aggcattgag ggacgccagg 1440
tctaccctga cgtggagccc gggtacctgc ggccgctgat ccctgccgct gcccctcagg 1500
agccagacac gtttgaggac atcatcaacg acgttgagaa gataatcatg cctggggtga 1560
cgcactggca cagcccctac ttcttcgcct acttccccac tgccagctcg tacccggcca 1620
tgcttgcgga catgctgtgc ggggccattg gctgcatcgg cttctcctgg gcggcaagcc 1680
cagcatgcac agagctggag actgtgatga tggactggct cgggaagatg ctggaactac 1740
caaaggcatt tttgaatgag aaagctggag aagggggagg agtgatccag ggaagtgcca 1800
gtgaagccac cctggtggcc ctgctggccg ctcggaccaa agtgatccat cggctgcagg 1860
cagcgtcccc agagctcaca caggccgcta tcatggagaa gctggtggct tactcatccg 1920
atcaggcaca ctcctcagtg gaaagagctg ggttaattgg tggagtgaaa ttaaaagcca 1980
tcccctcaga tggcaacttc gccatgcgtg cgtctgccct gcaggaagcc ctggagagag 2040
acaaagcggc tggcctgatt cctttcttta tggttgccac cctggggacc acaacatgct 2100
gctcctttga caatctctta gaagtcggtc ctatctgcaa caaggaagac atatggctgc 2160
acgttgatgc agcctacgca ggcagtgcat tcatctgccc tgagttccgg caccttctga 2220
atggagtgga gtttgcagat tcattcaact ttaatcccca caaatggcta ttggtgaatt 2280
ttgactgttc tgccatgtgg gtgaaaaaga gaacagactt aacgggagcc tttagactgg 2340
accccactta cctgaagcac agccatcagg attcagggct tatcactgac taccggcatt 2400
ggcagatacc actgggcaga agatttcgct ctttgaaaat gtggtttgta tttaggatgt 2460
atggagtcaa aggactgcag gcttatatcc gcaagcatgt ccagctgtcc catgagtttg 2520
agtcactggt gcgccaggat ccccgctttg aaatctgtgt ggaagtcatt ctggggcttg 2580
tctgctttcg gctaaagggt tccaacaaag tgaatgaagc tcttctgcaa agaataaaca 2640
gtgccaaaaa aatccacttg gttccatgtc acctcaggga caagtttgtc ctgcgctttg 2700
ccatctgttc tcgcacggtg gaatctgccc atgtgcagcg ggcctgggaa cacatcaaag 2760
agctggcggc cgacgtgctg cgagcagaga gggagtagga gtgaagccag ctgcaggaat 2820
caaaaattga agagagatat atctgaaaac tggaataaga agcaaataaa tatcatcctg 2880
ccttcatgga actcagctgt ctgtggcttc ccatgtcttt ctccaaagtt atccagaggg 2940
ttgtgatttt gtctgcttag tatctcatca acaaagaaat attatttgct aattaaaaag 3000
ttaatcttca tggccatagc ttttattcat tagctgtgat ttttgttgat taaaacatta 3060
tagattttca tgttcttgca gtcatcagaa gtggtaggaa agcctcactg atatattttc 3120
cagggcaatc aatgttcacg caacttgaaa ttatatctgt ggtcttcaaa ttgtcttttg 3180
tcatgtggct aaatgcctaa taagctgctc gagagatcta cgggtggcat ccctgtgacc 3240
cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc agccttgtcc 3300
taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat attatggggt 3360
ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg gcctgcgggg 3420
tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca atctccgcct 3480
cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc caggcatgca 3540
tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc atattggcca 3600
ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc aaattgctgg 3660
gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag gtaaccacgt 3720
gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaggaa cccctagtga tggagttggc 3780
cactccctct ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccggg cgaccaaagg tcgcccgacg 3840
cccgggcttt gcccgggcgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagctgcc tgcagg 3896
<210> 23
<211> 3475
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 23
cagctgcgcg ctcgctcgct cactgaggcc gcccgggcaa agcccgggcg tcgggcgacc 60
tttggtcgcc cggcctcagt gagcgagcga gcgcgcagag agggagtggc caactccatc 120
actaggggtt gagtttaaac ttcgtcgacg atctgcggcc gcacgcgtgg agctagttat 180
taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca 240
taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca 300
ataatgacgt atgttcccat agtaacgtca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg 360
gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg 420
ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc 480
ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg 540
atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca 600
agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttgca ccaaaatcaa cgggactttc 660
caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt gtacggtggg 720
aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga cgccatccac 780
gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag cctccgcgga ttcgaatccc 840
ggccgggaac ggtgcattgg aacgcggatt ccccgtgcca agagtgacgt aagtaccgcc 900
tatagagtct ataggcccac aaaaaatgct ttcttctttt aatatacttt tttgtttatc 960
ttatttctaa tactttccct aatctctttc tttcagggca ataatgatac aatgtatcat 1020
gcctctttgc accattctaa agaataacag tgataatttc tgggttaagg caatagcaat 1080
atttctgcat ataaatattt ctgcatataa attgtaactg atgtaagagg tttcatattg 1140
ctaatagcag ctacaatcca gctaccattc tgcttttatt ttatggttgg gataaggctg 1200
gattattctg agtccaagct aggccctttt gctaatcatg ttcatacctc ttatcttcct 1260
cccacagctc ctgggcaacg tgctggtctg tgtgctggcc catcactttg gcaaagaatt 1320
gggattcgaa catcggccgc caccatgaac gcaagtgaat tccgaaggag agggaaggag 1380
atggtggatt acgtggccaa ctacatggaa ggcattgagg gacgccaggt ctaccctgac 1440
gtggagcccg ggtacctgcg gccgctgatc cctgccgctg cccctcagga gccagacacg 1500
tttgaggaca tcatcaacga cgttgagaag ataatcatgc ctggggtgac gcactggcac 1560
agcccctact tcttcgccta cttccccact gccagctcgt acccggccat gcttgcggac 1620
atgctgtgcg gggccattgg ctgcatcggc ttctcctggg cggcaagccc agcatgcaca 1680
gagctggaga ctgtgatgat ggactggctc gggaagatgc tggaactacc aaaggcattt 1740
ttgaatgaga aagctggaga agggggagga gtgatccagg gaagtgccag tgaagccacc 1800
ctggtggccc tgctggccgc tcggaccaaa gtgatccatc ggctgcaggc agcgtcccca 1860
gagctcacac aggccgctat catggagaag ctggtggctt actcatccga tcaggcacac 1920
tcctcagtgg aaagagctgg gttaattggt ggagtgaaat taaaagccat cccctcagat 1980
ggcaacttcg ccatgcgtgc gtctgccctg caggaagccc tggagagaga caaagcggct 2040
ggcctgattc ctttctttat ggttgccacc ctggggacca caacatgctg ctcctttgac 2100
aatctcttag aagtcggtcc tatctgcaac aaggaagaca tatggctgca cgttgatgca 2160
gcctacgcag gcagtgcatt catctgccct gagttccggc accttctgaa tggagtggag 2220
tttgcagatt cattcaactt taatccccac aaatggctat tggtgaattt tgactgttct 2280
gccatgtggg tgaaaaagag aacagactta acgggagcct ttagactgga ccccacttac 2340
ctgaagcaca gccatcagga ttcagggctt atcactgact accggcattg gcagatacca 2400
ctgggcagaa gatttcgctc tttgaaaatg tggtttgtat ttaggatgta tggagtcaaa 2460
ggactgcagg cttatatccg caagcatgtc cagctgtccc atgagtttga gtcactggtg 2520
cgccaggatc cccgctttga aatctgtgtg gaagtcattc tggggcttgt ctgctttcgg 2580
ctaaagggtt ccaacaaagt gaatgaagct cttctgcaaa gaataaacag tgccaaaaaa 2640
atccacttgg ttccatgtca cctcagggac aagtttgtcc tgcgctttgc catctgttct 2700
cgcacggtgg aatctgccca tgtgcagcgg gcctgggaac acatcaaaga gctggcggcc 2760
gacgtgctgc gagcagagag ggagtaggag tgagctgctc gagagatcta cgggtggcat 2820
ccctgtgacc cctccccagt gcctctcctg gccctggaag ttgccactcc agtgcccacc 2880
agccttgtcc taataaaatt aagttgcatc attttgtctg actaggtgtc cttctataat 2940
attatggggt ggaggggggt ggtatggagc aaggggcaag ttgggaagac aacctgtagg 3000
gcctgcgggg tctattggga accaagctgg agtgcagtgg cacaatcttg gctcactgca 3060
atctccgcct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc ctcccgagtt gttgggattc 3120
caggcatgca tgaccaggct cagctaattt ttgttttttt ggtagagacg gggtttcacc 3180
atattggcca ggctggtctc caactcctaa tctcaggtga tctacccacc ttggcctccc 3240
aaattgctgg gattacaggc gtgaaccact gctcccttcc ctgtccttct gattttgtag 3300
gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagt taattaagct cgcgaaaccc ctagtgatgg 3360
agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg 3420
cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agctg 3475
<---

Claims (37)

1. Векторный геном на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC), который содержит в следующем порядке:
а) 5'-инвертированный концевой повтор (ITR) длиной 141 нуклеотид,
b) участок последовательности цитомегаловируса (CMV) длиной по меньшей мере 500 нуклеотидов, содержащий в направлении от 5'- к 3'-концу:
энхансер CMV или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 250 нуклеотидов, и
промотор CMV или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 150 нуклеотидов,
c) участок последовательности непосредственно раннего 1 гена (IE1), содержащий:
экзон 1 IE1 или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 50 нуклеотидов, и
интрон 1 IE1 или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 20 нуклеотидов,
d) участок последовательности бета глобина (HB) человека, содержащий
интрон 2 НВ или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 250 нуклеотидов, и
экзон 3 НВ или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 40 нуклеотидов,
e) участок последовательности AADC, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:1 или его изоформу,
f) участок сигнальной последовательности поли(A), содержащий сигнальную последовательность поли(А) гена гормона роста человека (hGH) или его функциональный фрагмент длиной по меньшей мере 200 нуклеотидов, и
g) 3'-ITR длиной 141 нуклеотид.
2. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR и 3'-ITR получены из AAV2.
3. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности CMV имеет длину 507 нуклеотидов.
4. AAV-векторный геном по п.2, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 1332-1355 последовательности SEQ ID NO:17.
5. AAV-векторный геном по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 2796-2822 последовательности SEQ ID NO:17.
6. AAV-векторный геном по п.1, содержащий нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 1332-1355 последовательности SEQ ID NO:17, и нуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 50% идентична нуклеотидам 2796-2822 последовательности SEQ ID NO:17.
7. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности IE1 имеет длину 166 нуклеотидов.
8. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности HB имеет длину 400 нуклеотидов.
9. AAV-векторный геном по п.1, где участок сигнальной последовательности поли(A) имеет длину 477 нуклеотидов.
10. AAV-векторный геном по п.1, где участок последовательности CMV имеет длину 507 нуклеотидов, участок последовательности IE1 имеет длину 166 нуклеотидов, участок последовательности HB имеет длину 400 нуклеотидов и участок сигнальной последовательности поли(A) имеет длину 477 нуклеотидов.
11. AAV-векторный геном по п.1, содержащий последовательность, выбранную из SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.
12. AAV-векторный геном по п.2, содержащий кодон-оптимизированную нуклеотидную последовательность, кодирующую SEQ ID NO:1.
13. AAV-векторный геном по п.12, содержащий нуклеотидную последовательность, выбранную из SEQ ID NO:19 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.
14. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR состоит из нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидов 1-141 SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.
15. AAV-векторный геном по п.1 или 14, где 3'-ITR состоит из нуклеотидной последовательности, выбранной из группы, состоящей из нуклеотидов 3357-3497 SEQ ID NO:17 или вариантов, которые по меньшей мере на 95% идентичны ей.
16. AAV-векторный геном по п.1, где 5'-ITR состоит из нуклеотидов 1-141 SEQ ID NO:17.
17. AAV-векторный геном по п.1 или 16, где 3'-ITR состоит из нуклеотидов 3357-3497 SEQ ID NO:17.
18. Рекомбинантный AAV (rAAV) для доставки в клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей декарбоксилазу ароматических L-аминокислот (AADC), содержащий AVV-векторный геном по любому из пп.1-17.
19. rAAV по п.18, где капсид AAV выбран из: AAV2, AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ и AAV-DJ8.
20. rAAV по п.18, где капсид AAV представляет собой капсид AAV2.
21. Фармацевтическая композиция для повышения уровня белка AADC у индивида, содержащая эффективное количество rAAV по любому из пп.18-20.
22. Фармацевтическая композиция для лечения неврологического заболевания, расстройства или состояния у пациента, содержащая эффективное количество rAAV по любому из пп.18-20.
23. Фармацевтическая композиция по п.22, где неврологическое заболевание, расстройство или состояние представляет собой болезнь Паркинсона.
24. Фармацевтическая композиция по любому из пп.21-23, в которой по меньшей мере 70% rAAV содержат AAV-векторный геном.
RU2017115477A 2014-11-05 2015-11-05 Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона RU2716991C2 (ru)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462075298P 2014-11-05 2014-11-05
US62/075,298 2014-11-05
US201562155692P 2015-05-01 2015-05-01
US62/155,692 2015-05-01
US201562199578P 2015-07-31 2015-07-31
US62/199,578 2015-07-31
US201562243537P 2015-10-19 2015-10-19
US62/243,537 2015-10-19
PCT/US2015/059201 WO2016073693A2 (en) 2014-11-05 2015-11-05 Aadc polynucleotides for the treatment of parkinson's disease

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020109343A Division RU2020109343A (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017115477A RU2017115477A (ru) 2018-11-09
RU2017115477A3 RU2017115477A3 (ru) 2019-03-26
RU2716991C2 true RU2716991C2 (ru) 2020-03-17

Family

ID=55910029

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017115477A RU2716991C2 (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона
RU2020109343A RU2020109343A (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020109343A RU2020109343A (ru) 2014-11-05 2015-11-05 Полинуклеотиды aadc для лечения болезни паркинсона

Country Status (14)

Country Link
US (6) US10335466B2 (ru)
EP (1) EP3215191A4 (ru)
JP (4) JP6401871B2 (ru)
KR (1) KR20170096998A (ru)
CN (2) CN112553229A (ru)
AU (2) AU2015343037B2 (ru)
BR (1) BR112017009497A2 (ru)
CA (1) CA2966620A1 (ru)
HK (1) HK1243922A1 (ru)
IL (2) IL251787B (ru)
MX (1) MX2017005834A (ru)
RU (2) RU2716991C2 (ru)
SG (2) SG10202007103TA (ru)
WO (1) WO2016073693A2 (ru)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2966620A1 (en) * 2014-11-05 2016-05-12 Voyager Therapeutics, Inc. Aadc polynucleotides for the treatment of parkinson's disease
SG11201703419UA (en) 2014-11-14 2017-05-30 Voyager Therapeutics Inc Modulatory polynucleotides
MX2017009336A (es) * 2015-01-16 2017-11-15 Voyager Therapeutics Inc Polinucleótidos dirigidos al sistema nervioso central.
WO2017096162A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Voyager Therapeutics, Inc. Assays for the detection of aav neutralizing antibodies
SG11201809643UA (en) 2016-05-18 2018-12-28 Voyager Therapeutics Inc Compositions and methods of treating huntington's disease
US11298041B2 (en) 2016-08-30 2022-04-12 The Regents Of The University Of California Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same
TW201819398A (zh) 2016-09-28 2018-06-01 美商寇峇有限公司 治療性肽
WO2018156892A1 (en) 2017-02-23 2018-08-30 Adrx, Inc. Peptide inhibitors of transcription factor aggregation
WO2018170473A1 (en) * 2017-03-17 2018-09-20 Adverum Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for enhanced gene expression
US10898585B2 (en) 2017-04-14 2021-01-26 Ptc Therapeutics .Inc. Gene therapy for AADC deficiency
WO2018204803A1 (en) 2017-05-05 2018-11-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating huntington's disease
EP3634978A1 (en) 2017-06-07 2020-04-15 Adrx, Inc. Tau aggregation inhibitors
JOP20190269A1 (ar) * 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
WO2019018342A1 (en) 2017-07-17 2019-01-24 Voyager Therapeutics, Inc. NETWORK EQUIPMENT TRACK GUIDE SYSTEM
AU2018346102B2 (en) * 2017-10-03 2023-05-11 Prevail Therapeutics, Inc. Gene therapies for lysosomal disorders
WO2019210137A1 (en) * 2018-04-27 2019-10-31 Voyager Therapeutics, Inc. Methods for measuring the potency of aadc viral vectors
WO2019222328A1 (en) * 2018-05-15 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of parkinson's disease
WO2019222441A1 (en) * 2018-05-16 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Aav serotypes for brain specific payload delivery
EP3807404A1 (en) 2018-06-13 2021-04-21 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered 5' untranslated regions (5' utr) for aav production
CN108795946B (zh) * 2018-06-28 2022-03-04 北京锦篮基因科技有限公司 携带设计smn1基因表达框的重组腺相关病毒及应用
CN112770812A (zh) 2018-07-24 2021-05-07 沃雅戈治疗公司 产生基因治疗制剂的系统和方法
TW202035689A (zh) 2018-10-04 2020-10-01 美商航海家醫療公司 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法
CN113166731A (zh) 2018-10-05 2021-07-23 沃雅戈治疗公司 编码aav生产蛋白的工程化核酸构建体
EP3867389A1 (en) 2018-10-15 2021-08-25 Voyager Therapeutics, Inc. Expression vectors for large-scale production of raav in the baculovirus/sf9 system
EP3911410A1 (en) 2019-01-18 2021-11-24 Voyager Therapeutics, Inc. Methods and systems for producing aav particles
AU2020216135A1 (en) 2019-01-28 2021-08-05 Cohbar, Inc. Therapeutic peptides
CN113924115A (zh) 2019-01-31 2022-01-11 俄勒冈健康与科学大学 用于aav衣壳的使用转录依赖性定向进化的方法
EP3962536A1 (en) 2019-04-29 2022-03-09 Voyager Therapeutics, Inc. Systems and methods for producing baculoviral infected insect cells (biics) in bioreactors
EP4010465A1 (en) 2019-08-09 2022-06-15 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
US20220364114A1 (en) 2019-08-26 2022-11-17 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN115135347A (zh) * 2019-12-12 2022-09-30 梅里特斯英国第二有限公司 治疗帕金森病的方法
WO2022032153A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
EP3982378A1 (en) 2020-10-09 2022-04-13 Koninklijke Philips N.V. Cryogen-free superconducting magnet system
TW202246516A (zh) 2021-03-03 2022-12-01 美商航海家醫療公司 病毒蛋白之控制表現
WO2022187548A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN116981474A (zh) * 2021-03-12 2023-10-31 可隆生命科学株式会社 用于预防或治疗退行性脑疾病的组合物
WO2022212273A1 (en) * 2021-03-29 2022-10-06 Sanford Health Methods and compositions for treating lysosomal storage disorders
WO2023279078A1 (en) * 2021-07-01 2023-01-05 Northwestern University Enhanced expression of an aromatic amino acid decarboxylase (aadc) in the substantia nigra for the treatment of parkinson's disease
TW202325845A (zh) 2021-10-02 2023-07-01 賓州大學委員會 新穎aav衣殼及含其之組成物
WO2023093905A1 (zh) * 2021-11-29 2023-06-01 上海瑞宏迪医药有限公司 Aadc、gdnf多核苷酸及其用于治疗帕金森病
WO2023202637A1 (en) * 2022-04-19 2023-10-26 Shanghai Vitalgen Biopharma Co., Ltd. Recombinant aav vectors for treating neurodegenerative disorders
WO2024054983A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins

Family Cites Families (457)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2640638B1 (fr) 1988-12-20 1991-02-15 Commissariat Energie Atomique Bioreacteur et dispositif pour la culture de cellules animales
AU7906691A (en) 1990-05-23 1991-12-10 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors
US5173414A (en) 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
GB9027917D0 (en) * 1990-12-21 1991-02-13 Ici Plc Expression systems
US5252479A (en) 1991-11-08 1993-10-12 Research Corporation Technologies, Inc. Safe vector for gene therapy
US5587308A (en) 1992-06-02 1996-12-24 The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter
US6268213B1 (en) 1992-06-03 2001-07-31 Richard Jude Samulski Adeno-associated virus vector and cis-acting regulatory and promoter elements capable of expressing at least one gene and method of using same for gene therapy
US5693531A (en) 1993-11-24 1997-12-02 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Vector systems for the generation of adeno-associated virus particles
EP0755454B1 (en) 1994-04-13 2008-02-13 The Rockefeller University Aav-mediated delivery of dna to cells of the nervous system
US5658785A (en) 1994-06-06 1997-08-19 Children's Hospital, Inc. Adeno-associated virus materials and methods
US20020159979A1 (en) 1994-06-06 2002-10-31 Children's Hospital, Inc. Adeno-associated virus materials and methods
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US5856152A (en) 1994-10-28 1999-01-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor
US5625048A (en) 1994-11-10 1997-04-29 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
US5652224A (en) 1995-02-24 1997-07-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for gene therapy for the treatment of defects in lipoprotein metabolism
US5741657A (en) 1995-03-20 1998-04-21 The Regents Of The University Of California Fluorogenic substrates for β-lactamase and methods of use
US6281010B1 (en) 1995-06-05 2001-08-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adenovirus gene therapy vehicle and cell line
US5756283A (en) 1995-06-05 1998-05-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy
US5688676A (en) 1995-06-07 1997-11-18 Research Foundation Of State University Of New York In vitro packaging of adeno-associated virus DNA
US5741683A (en) 1995-06-07 1998-04-21 The Research Foundation Of State University Of New York In vitro packaging of adeno-associated virus DNA
US6197293B1 (en) 1997-03-03 2001-03-06 Calydon, Inc. Adenovirus vectors specific for cells expressing androgen receptor and methods of use thereof
US6676935B2 (en) 1995-06-27 2004-01-13 Cell Genesys, Inc. Tissue specific adenoviral vectors
US6143548A (en) 1995-08-30 2000-11-07 Genzyme Corporation Chromatographic purification of adeno-associated virus (AAV)
US6265389B1 (en) 1995-08-31 2001-07-24 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides
US5846528A (en) 1996-01-18 1998-12-08 Avigen, Inc. Treating anemia using recombinant adeno-associated virus virions comprising an EPO DNA sequence
US5858351A (en) 1996-01-18 1999-01-12 Avigen, Inc. Methods for delivering DNA to muscle cells using recombinant adeno-associated virus vectors
US5962313A (en) 1996-01-18 1999-10-05 Avigen, Inc. Adeno-associated virus vectors comprising a gene encoding a lyosomal enzyme
US5952221A (en) 1996-03-06 1999-09-14 Avigen, Inc. Adeno-associated virus vectors comprising a first and second nucleic acid sequence
US7026468B2 (en) 1996-07-19 2006-04-11 Valentis, Inc. Process and equipment for plasmid purification
AU723497C (en) 1996-09-06 2001-10-11 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy
IL128736A0 (en) 1996-09-06 2000-01-31 Univ Pennsylvania Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses
WO1998010088A1 (en) 1996-09-06 1998-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
US20020037867A1 (en) 1999-02-26 2002-03-28 James M. Wilson Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy
AU4255397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Chimpanzee adenovirus vectors
US5866552A (en) 1996-09-06 1999-02-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for expressing a gene in the absence of an immune response
US20030215422A1 (en) 1996-09-11 2003-11-20 John A. Chiorini Aav4 vector and uses thereof
ATE550429T1 (de) 1996-11-20 2012-04-15 Crucell Holland Bv Adenovirus-zusammensetzungen erhältlich durch ein verbessertes produktions- und reinigungsverfahren
US7732129B1 (en) 1998-12-01 2010-06-08 Crucell Holland B.V. Method for the production and purification of adenoviral vectors
EP0950091A2 (en) 1996-12-18 1999-10-20 Targeted Genetics Corporation Aav split-packaging genes and cell lines comprising such genes for use in the production of recombinant aav vectors
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
US6710036B2 (en) 1997-07-25 2004-03-23 Avigen, Inc. Induction of immune response to antigens expressed by recombinant adeno-associated virus
US6251677B1 (en) 1997-08-25 2001-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
US6989264B2 (en) 1997-09-05 2006-01-24 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
US6566118B1 (en) 1997-09-05 2003-05-20 Targeted Genetics Corporation Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors
EP1015619A1 (en) 1997-09-19 2000-07-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses
AU9774998A (en) 1997-09-19 1999-04-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein
WO1999014354A1 (en) 1997-09-19 1999-03-25 The Trustees Of The University Of The Pennsylvania Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav
US6642051B1 (en) 1997-10-21 2003-11-04 Targeted Genetics Corporation Amplifiable adeno-associated virus(AAV) packaging cassettes for the production of recombinant AAV vectors
IT1297074B1 (it) 1997-11-21 1999-08-03 Angeletti P Ist Richerche Bio Forme ormone-dipendenti delle proteine rep del virus adeno-associato (aav-2), sequenze di dna codificanti per esse, vettori che le
EP1042494A1 (en) 1997-12-23 2000-10-11 Introgene B.V. Adeno-associated virus and adenovirus chimeric recombinant viruses useful for the integration of foreign genetic information into the chromosomal dna of target cells
US6410300B1 (en) 1998-01-12 2002-06-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and formulations for mediating adeno-associated virus (AAV) attachment and infection and methods for purifying AAV
AU2882899A (en) 1998-02-26 1999-09-15 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Stable protection from dystrophic sarcolemmal degeneration and restoration of the sarcoglycan complex
US6953690B1 (en) 1998-03-20 2005-10-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses
US6521426B1 (en) 1998-04-08 2003-02-18 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Preparation of recombinant adenovirus carrying a rep gene of adeno-associated virus
FR2778413B1 (fr) 1998-05-07 2000-08-04 Immunotech Sa Nouveaux reactifs et methode de lyse des erythrocytes
EP1078096A1 (en) 1998-05-11 2001-02-28 Ariad Gene Therapeutics, Inc. Multiviral compositions and uses thereof
EP1849872A1 (en) 1998-05-20 2007-10-31 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors and uses thereof
US6436392B1 (en) 1998-05-20 2002-08-20 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors
EP1080218A1 (en) 1998-05-27 2001-03-07 University of Florida Method of preparing recombinant adeno-associated virus compositions by using an iodixanol gradient
CA2329143A1 (en) 1998-05-27 1999-12-02 Cell Genesys, Inc. Adeno-associated viral vector-mediated expression of factor viii activity
EP1621625B1 (en) 1998-05-27 2009-05-13 Genzyme Corporation AAV vectors for the manufacture of medicaments for convection enhanced delivery
ATE431418T1 (de) 1998-05-27 2009-05-15 Genzyme Corp Aav vektoren zur herstellung der medikamente zur konvektion-erhöhten verabreichung
US6984517B1 (en) 1998-05-28 2006-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services AAV5 vector and uses thereof
ATE402254T1 (de) 1998-05-28 2008-08-15 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
GB2338236B (en) 1998-06-13 2003-04-09 Aea Technology Plc Microbiological cell processing
US6900049B2 (en) 1998-09-10 2005-05-31 Cell Genesys, Inc. Adenovirus vectors containing cell status-specific response elements and methods of use thereof
WO2000022152A1 (en) 1998-10-13 2000-04-20 Avigen, Inc. Compositions and methods for producing recombinant adeno-associated virus
US6200560B1 (en) 1998-10-20 2001-03-13 Avigen, Inc. Adeno-associated virus vectors for expression of factor VIII by target cells
US6221349B1 (en) * 1998-10-20 2001-04-24 Avigen, Inc. Adeno-associated vectors for expression of factor VIII by target cells
MXPA01004169A (es) 1998-10-27 2002-06-04 Crucell Holland Bv Produccion mejorada de vector de virus adenoasociados.
US6759237B1 (en) 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
US6689600B1 (en) 1998-11-16 2004-02-10 Introgen Therapeutics, Inc. Formulation of adenovirus for gene therapy
US6759050B1 (en) 1998-12-03 2004-07-06 Avigen, Inc. Excipients for use in adeno-associated virus pharmaceutical formulations, and pharmaceutical formulations made therewith
US6225113B1 (en) 1998-12-04 2001-05-01 Genvec, Inc. Use of trans-activation and cis-activation to modulate the persistence of expression of a transgene in an at least E4-deficient adenovirus
US6387368B1 (en) 1999-02-08 2002-05-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
DE19905501B4 (de) 1999-02-10 2005-05-19 MediGene AG, Gesellschaft für molekularbiologische Kardiologie und Onkologie Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten Adeno-assoziierten Virus, geeignete Mittel hierzu sowie Verwendung zur Herstellung eines Arzneimittels
US6509150B1 (en) 1999-03-05 2003-01-21 Universite De Nantes Compositions and methods for recombinant Adeno-Associated Virus production
JP4693244B2 (ja) 1999-03-18 2011-06-01 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法
US6258595B1 (en) 1999-03-18 2001-07-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses
JP2002542805A (ja) 1999-04-30 2002-12-17 ユニバーシティ オブ フロリダ アデノ随伴ウイルス送達リボザイム組成物および使用方法
AU2409200A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses
EP1212411A2 (en) 1999-08-20 2002-06-12 The Johns Hopkins University School Of Medicine Methods and compositions for the construction and use of fusion libraries
US6399385B1 (en) 1999-09-29 2002-06-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods for rapid PEG-modification of viral vectors, compositions for enhanced gene transduction, compositions with enhanced physical stability, and uses therefor
US6365394B1 (en) 1999-09-29 2002-04-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus
CA2386546A1 (en) 1999-10-07 2001-04-12 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated viruses and uses thereof
US7241447B1 (en) 1999-10-07 2007-07-10 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors and uses thereof
WO2001032711A2 (en) 1999-10-21 2001-05-10 Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Adeno-associated virus aav rep78 major regulatory protein, mutants thereof and uses thereof
AU3642601A (en) 1999-11-05 2001-05-30 Avigen, Inc. Ecdysone-inducible adeno-associated virus expression vectors
WO2001036603A2 (en) 1999-11-17 2001-05-25 Avigen, Inc. Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders
EP1240345A2 (en) 1999-12-10 2002-09-18 Ariad Gene Therapeutics, Inc. Methods for expression of genes in primates
US20020045264A1 (en) 2000-03-14 2002-04-18 During Matthew J. Production of chimeric capsid vectors
US7638120B2 (en) 2000-03-14 2009-12-29 Thomas Jefferson University High transgene expression of a pseudotyped adeno-associated virus type
US6468524B1 (en) 2000-03-22 2002-10-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services AAV4 vector and uses thereof
US6855314B1 (en) 2000-03-22 2005-02-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells
US7048920B2 (en) 2000-03-24 2006-05-23 Cell Genesys, Inc. Recombinant oncolytic adenovirus for human melanoma
GB0009887D0 (en) 2000-04-20 2000-06-07 Btg Int Ltd Cytotoxic agents
US20030013189A1 (en) 2000-04-28 2003-01-16 Wilson James M. Compositions and methods useful for non-invasive delivery of therapeutic molecules to the bloodstream
WO2001083692A2 (en) 2000-04-28 2001-11-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav vectors with aav5 capsids and aav5 vectors pseudotyped in heterologous capsids
US7125705B2 (en) 2000-04-28 2006-10-24 Genzyme Corporation Polynucleotides for use in recombinant adeno-associated virus virion production
WO2001089583A2 (en) 2000-05-23 2001-11-29 Neurologix, Inc. Glutamic acid decarboxylase (gad)_delivery system for treating neurodegenerative diseases
US20020106381A1 (en) 2000-06-13 2002-08-08 High Katherine A. Methods for administering recombinant adeno-associated virus virions to humans previously exposed to adeno-associated virus
EP1302542B1 (en) 2000-07-18 2007-06-13 Takeda Pharmaceutical Company Limited Novel physiologically active peptide and use thereof
US6593123B1 (en) 2000-08-07 2003-07-15 Avigen, Inc. Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification
US6329181B1 (en) 2000-08-07 2001-12-11 Neurologix, Inc. Helper functions for recombinant vector production
AU2001294096A1 (en) 2000-08-17 2002-02-25 Uichi Ikeda Adeno-associated virus-mediated delivery of angiogenic factors
DE10066104A1 (de) 2000-09-08 2003-01-09 Medigene Ag Wirtszellen zur Verpackung von rekombinantem Adeno-assoziiertem Virus (rAAV), Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung
FR2813891B1 (fr) 2000-09-14 2005-01-14 Immunotech Sa Reactif multifonctionnel pour erythrocytes mettant en jeu des carbamates et applications
GB0024550D0 (ru) * 2000-10-06 2000-11-22 Oxford Biomedica Ltd
JP2002153278A (ja) 2000-11-22 2002-05-28 Hisamitsu Pharmaceut Co Inc ウイルスベクターの製造に用いられる細胞、その製法およびその細胞を用いたウイルスベクターの製造方法
WO2002070719A2 (en) 2001-01-19 2002-09-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania Regulatable gene expression system
JP2004532822A (ja) 2001-03-14 2004-10-28 アビジェン, インコーポレイテッド ビリオンの管逆行感染による組換えアデノ随伴ウイルス媒介遺伝子移入
US7588757B2 (en) 2001-03-14 2009-09-15 Genzyme Corporation Methods of treating Parkinson's disease using recombinant adeno-associated virus virions
US6841357B1 (en) 2001-03-30 2005-01-11 Stratagene California Method and kits for titering adeno-associated virus vectors
US7182944B2 (en) 2001-04-25 2007-02-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Methods of increasing distribution of nucleic acids
US20030096264A1 (en) * 2001-06-18 2003-05-22 Psychiatric Genomics, Inc. Multi-parameter high throughput screening assays (MPHTS)
US20040136963A1 (en) 2001-06-22 2004-07-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Simian adenovirus vectors and methods of use
US7344872B2 (en) 2001-06-22 2008-03-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for rapid screening of bacterial transformants and novel simian adenovirus proteins
US8241622B2 (en) 2001-07-13 2012-08-14 University Of Iowa Research Foundation Adeno-associated virus vectors with intravector heterologous terminal palindromic sequences
EP1279740A1 (en) 2001-07-26 2003-01-29 Vrije Universiteit Brussel Recombinant vector derived from adeno-associated virus for gene therapy
JP2004538005A (ja) 2001-08-08 2004-12-24 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア シアル酸に結合するタンパク質を有するウイルスベクターの精製法
US20030092161A1 (en) 2001-09-19 2003-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for production of recombinant viruses, and uses therefor
US6723551B2 (en) 2001-11-09 2004-04-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Production of adeno-associated virus in insect cells
WO2003042361A2 (en) 2001-11-09 2003-05-22 Government Of The United States Of America, Department Of Health And Human Services Production of adeno-associated virus in insect cells
NZ600121A (en) 2001-11-13 2013-12-20 Univ Pennsylvania A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
EP1944043A1 (en) 2001-11-21 2008-07-16 The Trustees of the University of Pennsylvania Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use
NZ550416A (en) 2001-11-21 2008-06-30 Univ Pennsylvania Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use
CA2469623C (en) 2001-12-12 2012-05-29 F H Faulding & Co Limited Composition for the preservation of viruses
AU2002359284A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor
AU2002360291A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
AU2002359786A1 (en) 2001-12-19 2003-07-09 Hiroaki Mizukami Adeno-associated virus-mediated delivery of gdnf to skeletal muscles
CN1617938A (zh) 2002-01-16 2005-05-18 戴诺生物技术有限公司 从单个样品中分离核酸和蛋白质的方法
EP1504108B1 (en) 2002-02-01 2013-04-17 Oxford Biomedica (UK) Limited Lentiviral vector
GB0208390D0 (en) 2002-04-11 2002-05-22 Univ London Adeno-associated virus producer system
US20030198620A1 (en) 2002-04-16 2003-10-23 Keiya Ozawa Method of treating amino acid metabolic disorders using recombinant adeno-associated virus virions
DE60310297T2 (de) 2002-04-29 2007-06-06 Trustees Of The University Of Pennsylvania Methode für die direkte Gewinnung und Amplifikation von integrierten Viren aus zellulärer Gewebe-DNA
MXPA04010603A (es) 2002-04-30 2004-12-13 Oncolytics Biotech Inc Metodos mejorados de purificacion viral.
NZ561656A (en) 2002-05-01 2009-03-31 Univ Florida Improved rAAV expression systems for genetic modification of specific capsid proteins
US20050196854A1 (en) 2002-05-14 2005-09-08 Konz John O.Jr. Methods of adenovirus purification
US7419817B2 (en) 2002-05-17 2008-09-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography
WO2003104413A2 (en) 2002-06-05 2003-12-18 University Of Florida Production of pseudotyped recombinant aav virions
JP2006515162A (ja) 2002-08-29 2006-05-25 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ 環状核酸ベクター、ならびに同ベクターの作製法および使用法
TW200509968A (en) 2002-11-01 2005-03-16 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic disease
EP1418185A1 (en) 2002-11-11 2004-05-12 Aventis Pharma Deutschland GmbH Use of EDG2 receptor in an animal model of heart failure
US7169612B2 (en) 2002-11-11 2007-01-30 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Use of EDG2 receptor in an animal model of heart failure
WO2004075861A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus production
WO2004083441A2 (en) 2003-03-19 2004-09-30 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Random peptide library displayed on aav vectors
WO2004108922A2 (en) 2003-04-25 2004-12-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of aav comprising a capsid protein from aav7 or aav8 for the delivery of genes encoding apoprotein a or e genes to the liver
US8927269B2 (en) 2003-05-19 2015-01-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Avian adenoassociated virus and uses thereof
ES2521682T3 (es) 2003-05-21 2014-11-13 Genzyme Corporation Procedimientos para producir preparaciones de viriones de AAV recombinantes sustancialmente exentas de cápsidas vacías
EP1486567A1 (en) 2003-06-11 2004-12-15 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy
JP4888876B2 (ja) 2003-06-13 2012-02-29 田平 武 アルツハイマー病の治療のための組換えアデノ随伴ウィルスベクター
PL1633772T3 (pl) 2003-06-19 2016-10-31 Wiriony AAV o zmniejszonej immunoreaktywności i ich zastosowanie
US7491508B2 (en) 2003-06-20 2009-02-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses
US7291498B2 (en) 2003-06-20 2007-11-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses
US9441244B2 (en) 2003-06-30 2016-09-13 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
ES2391975T3 (es) 2003-07-25 2012-12-03 Genvec, Inc. Vacunas a base de vector adenovírico
US7683036B2 (en) 2003-07-31 2010-03-23 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs
US20070073264A1 (en) 2003-09-26 2007-03-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods, compositions and apparatus for delivering heterologous molecules to cells
JP5054975B2 (ja) 2003-09-30 2012-10-24 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア アデノ随伴ウイルス(aav)の同源系統群、配列、それらを含有するベクターおよびそれらの用途
CN1897977A (zh) * 2003-10-20 2007-01-17 Ns基因公司 帕金森氏病的体内基因治疗
EP1742668B1 (en) 2004-04-28 2011-02-09 The Trustees of The University of Pennsylvania Sequential delivery of immunogenic molecules via adenovirus and adeno-associated virus-mediated administrations
WO2005116224A2 (en) * 2004-05-18 2005-12-08 Children's Memorial Hospital Tetracycline-regulated adeno-associated viral (aav) vectors for gene delivery to the nervous system
ES2647477T3 (es) 2004-06-01 2017-12-21 Genzyme Corporation Composiciones y métodos para prevenir la agregación del vector AAV
US7815623B2 (en) 2004-10-05 2010-10-19 Genzyme Corporation Stepped cannula
US7901921B2 (en) 2004-10-22 2011-03-08 Oncolytics Biotech Inc. Viral purification methods
CN1286981C (zh) 2004-11-30 2006-11-29 华中科技大学同济医学院附属同济医院 表达人类cyp2j2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法
EP1833975A2 (en) 2004-12-09 2007-09-19 Genzyme Corporation Regulated expression of transgenes in the central nervous system of mammals
US8614101B2 (en) 2008-05-20 2013-12-24 Rapid Pathogen Screening, Inc. In situ lysis of cells in lateral flow immunoassays
US7625570B1 (en) 2005-03-10 2009-12-01 The Regents Of The University Of California Methods for purifying adeno-associated virus
WO2006102072A2 (en) 2005-03-23 2006-09-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Use of a pa131 polypeptide in treatment of atherosclerosis
JP5702519B2 (ja) 2005-04-07 2015-04-15 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Aavベクターの機能を上げる方法
WO2006119432A2 (en) 2005-04-29 2006-11-09 The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes
CN107007842A (zh) 2005-05-02 2017-08-04 建新公司 神经代谢疾病的基因治疗
US9089667B2 (en) 2005-08-23 2015-07-28 The Regents Of The University Of California Reflux resistant cannula and system for chronic delivery of therapeutic agents using convection-enhanced delivery
LT2578685T (lt) 2005-08-23 2019-06-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rnr, apimančios modifikuotus nukleozidus ir jų panaudojimo būdai
EP1857552A1 (en) 2006-05-20 2007-11-21 Cargill Incorporated Thermostable xylose isomerase enzyme
EP2311967B1 (en) 2005-10-20 2017-09-20 UniQure IP B.V. Improved AAV vectors produced in insect cells
EP1979485A2 (en) 2006-01-31 2008-10-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Self-complementary parvoviral vectors, and methods for making and using the same
WO2007120542A2 (en) 2006-03-30 2007-10-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Aav capsid library and aav capsid proteins
BRPI0710800A2 (pt) 2006-04-25 2012-01-17 Univ California administração de fatores de crescimento para o tratamento de distúrbios de snc
US20090317417A1 (en) 2006-04-28 2009-12-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified AAV Vectors Having Reduced Capsid Immunogenicity and Use Thereof
ES2400235T3 (es) 2006-04-28 2013-04-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Método de producción escalable de AAV
DE602007004470D1 (de) 2006-04-28 2010-03-11 Univ Pennsylvania Modifiziertes adenovirus-hexon-protein und anwendungen davon
US20080003565A1 (en) 2006-05-02 2008-01-03 Government Of The Us, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Viral nucleic acid microarray and method of use
ES2378333T3 (es) 2006-05-25 2012-04-11 Sangamo Biosciences, Inc. Métodos y composiciones para la inactivación de genes
JP5123936B2 (ja) 2006-05-30 2013-01-23 メイヨ・ファウンデーション・フォー・メディカル・エデュケーション・アンド・リサーチ 認知症の検出および治療
CA2654292C (en) 2006-06-07 2022-01-11 Genzyme Corporation Gene therapy for motor neuron disorders
CN104087591A (zh) 2006-06-19 2014-10-08 阿斯克肋匹奥生物制药公司 用于基因治疗的修饰的因子viii和因子ix基因和载体
RU2457252C2 (ru) 2006-06-21 2012-07-27 Амстердам Молекьюла Терапьютикс (Амт) Ип Б.В. AAV ВЕКТОРЫ С УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫМИ Rep-КОДИРУЮЩИМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМИ В СИСТЕМАХ ПРОДУКЦИИ НА ОСНОВЕ КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ
WO2008011636A2 (en) 2006-07-21 2008-01-24 California Institute Of Technology Targeted gene delivery for dendritic cell vaccination
US8945918B2 (en) 2006-08-24 2015-02-03 Virovek, Inc. Expression in insect cells of genes with overlapping open reading frames, methods and compositions therefor
WO2008067480A2 (en) 2006-11-29 2008-06-05 Nationwide Children's Hospital Myostatin inhibition for enhancing muscle and/or improving muscle function
WO2008097503A2 (en) 2007-02-02 2008-08-14 Biogen Idec Ma Inc. Use of semaphorin 6a for promoting myelination and oligodendrocyte differentiation
US20120322861A1 (en) 2007-02-23 2012-12-20 Barry John Byrne Compositions and Methods for Treating Diseases
US9725485B2 (en) 2012-05-15 2017-08-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy
US9611302B2 (en) 2007-04-09 2017-04-04 University Of Florida Research Foundation, Inc. High-transduction-efficiency RAAV vectors, compositions, and methods of use
EP3492596A1 (en) 2007-04-09 2019-06-05 University of Florida Research Foundation, Inc. Raav vector compositions having tyrosine-modified capsid proteins and methods for use
WO2008128251A1 (en) 2007-04-17 2008-10-23 The Children's Hospital Of Philadelphia Humanized viral vectors and methods of use thereof
EP2158211B1 (en) 2007-05-31 2016-08-10 Medigene AG Mutated structural protein of a parvovirus
EP2012122A1 (en) 2007-07-06 2009-01-07 Medigene AG Mutated parvovirus structural proteins as vaccines
SI2158322T1 (sl) 2007-06-06 2017-10-30 Genzyme Corporation Genska terapija za bolezni lizosomskega shranjevanja
KR101183764B1 (ko) 2007-06-29 2012-09-17 에프. 호프만-라 로슈 아게 프로모터
EP3121190A1 (en) 2007-07-14 2017-01-25 University of Iowa Research Foundation Methods and compositions for treating brain diseases
WO2009014445A2 (en) 2007-07-26 2009-01-29 Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. Baculoviral vectors comprising repeated coding sequences with differential codon biases
EP2198016B1 (en) 2007-09-04 2015-05-27 Her Majesty The Queen In Right of Canada as represented by The Minister of Health Porcine adeno-associated viruses
WO2009038462A1 (en) 2007-09-19 2009-03-26 Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. Use of aav replication machinery for improved protein production
WO2009051421A2 (en) 2007-10-18 2009-04-23 Lg Electronics Inc. Method and system for transmitting and receiving signals
US8642341B2 (en) 2007-11-02 2014-02-04 Cornell University Materials and methods for gene mediated therapy of psychiatric disorders
BRPI0822651A2 (pt) 2007-11-28 2014-10-14 Univ Pennsylvania Subfamília b de adenovírus sadv-28, -27, 29, -32, -33 e -35 de símio e seus usos
MX2010005860A (es) 2007-11-28 2010-06-22 Univ Pennsylvania Adenovirus simianos de la subfamilia c sadv-40, sadv-31 y sadv-34 y usos de los mismos.
CN101883858B (zh) 2007-11-28 2015-07-22 宾夕法尼亚大学托管会 猿猴亚家族E腺病毒SAdV-39、-25.2、-26、-30、-37和-38及其应用
EP2247617B1 (en) 2008-01-18 2013-02-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for targeting polyubiquitin
CA2713338C (en) 2008-01-29 2021-10-26 Applied Genetic Technologies Corporation Recombinant virus production using mammalian cells in suspension
WO2009104964A1 (en) 2008-02-19 2009-08-27 Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. Optimisation of expression of parvoviral rep and cap proteins in insect cells
CN102016011B (zh) 2008-03-04 2013-12-11 宾夕法尼亚大学托管会 猿猴腺病毒sadv-36、-42.1、-42.2和-44及其应用
US9265843B2 (en) 2008-03-27 2016-02-23 The Ohio State University Treatment of metabolic-related disorders using hypothalamic gene transfer of BDNF and compositions therefor
WO2009134681A2 (en) 2008-04-30 2009-11-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Aav7 viral vectors for targeted delivery of rpe cells
US8632764B2 (en) 2008-04-30 2014-01-21 University Of North Carolina At Chapel Hill Directed evolution and in vivo panning of virus vectors
CN102159713A (zh) 2008-05-20 2011-08-17 Eos神经科学公司 用于递送光敏蛋白的载体和使用方法
US9217155B2 (en) 2008-05-28 2015-12-22 University Of Massachusetts Isolation of novel AAV'S and uses thereof
US20110171262A1 (en) 2008-06-17 2011-07-14 Andrew Christian Bakker Parvoviral capsid with incorporated gly-ala repeat region
US8945885B2 (en) 2008-07-03 2015-02-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Minicircle DNA vector preparations and methods of making and using the same
WO2010036118A1 (en) 2008-09-29 2010-04-01 Amsterdam Molecular Therapeutics (Amt) B.V. Porphobilinogen deaminase gene therapy
US8940290B2 (en) 2008-10-31 2015-01-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Simian adenoviruses SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49, and -50 and uses thereof
JP2012508591A (ja) 2008-11-14 2012-04-12 ライフ テクノロジーズ コーポレーション 細胞を操作するための組成物および方法
US9415121B2 (en) 2008-12-19 2016-08-16 Nationwide Children's Hospital Delivery of MECP2 polynucleotide using recombinant AAV9
WO2010093784A2 (en) 2009-02-11 2010-08-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Modified virus vectors and methods of making and using the same
PT2403867T (pt) 2009-03-04 2019-08-29 Deutsches Krebsforsch Proteína de ativação de montagem (aap) e a sua utilização para o fabrico de partículas de parvovírus essenciais consistindo de vp3
CN102448501A (zh) 2009-03-27 2012-05-09 西马生物医学计划公司 治疗肝硬化和肝纤维化的方法和组合物
CN102439157B (zh) 2009-04-30 2015-09-16 宾夕法尼亚大学托管会 包含腺伴随病毒构建体的靶向传导气道细胞组合物
CN102414313B (zh) 2009-05-01 2014-04-02 雷德生物科技股份公司 多基因载体编码的重组病毒样颗粒
HUE057606T2 (hu) 2009-05-02 2022-05-28 Genzyme Corp Génterápia neurodegeneratív rendellenességekre
EP2435575A2 (en) 2009-05-28 2012-04-04 Deutsches Krebsforschungszentrum Modified aav capsid polypeptides
WO2010138263A2 (en) 2009-05-28 2010-12-02 University Of Massachusetts Novel aav 's and uses thereof
EP2435559A1 (en) 2009-05-29 2012-04-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Simian adenovirus 41 and uses thereof
CA3077531C (en) 2009-06-16 2022-09-20 Genzyme Corporation Improved methods for purification of recombinant aav vectors
WO2011005786A2 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhancing production of a biological product
EP2292781A1 (en) 2009-08-17 2011-03-09 Genethon Baculovirus-based production of biopharmaceuticals free of contaminating baculoviral virions
WO2011038187A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Controlled adeno-associated virus (aav) diversification and libraries prepared therefrom
BR112012010866A2 (pt) 2009-11-09 2016-11-29 Genepod Therapeutics Ab "nova construção de vetor viral para síntese específica otimizada contínua de dopa por neurônios in vivo".
WO2011069529A1 (en) 2009-12-09 2011-06-16 Curevac Gmbh Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids
WO2011088081A1 (en) 2010-01-12 2011-07-21 The University Of North Carolina At Chapel Hill Restrictive inverted terminal repeats for viral vectors
WO2011091419A2 (en) 2010-01-25 2011-07-28 New York Universiy Recombinant derivatives of botulinum neurotoxins engineered for trafficking studies and neuronal delivery
WO2011097456A2 (en) 2010-02-05 2011-08-11 The University Of North Carolina At Chapel Hill Compositions and methods for enhanced parvovirus transduction
US9228174B2 (en) 2010-03-11 2016-01-05 Uniqure Ip B.V. Mutated rep encoding sequences for use in AAV production
EP2550021A2 (en) 2010-03-22 2013-01-30 Association Institut de Myologie Methods of increasing efficiency of vector penetration of target tissue
US9315825B2 (en) 2010-03-29 2016-04-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
US20130023033A1 (en) 2010-03-29 2013-01-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
WO2011122950A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Amsterdam Molecular Therapeutics (Amt) Ip B.V. Monomeric duplex aav vectors
US9546369B2 (en) 2010-04-23 2017-01-17 University Of Massachusetts Multicistronic expression constructs
EP2826860B1 (en) 2010-04-23 2018-08-22 University of Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods of use thereof
EP3444346B1 (en) 2010-04-23 2022-07-27 University of Massachusetts Aav-based treatment of cholesterol-related disorders
US8927514B2 (en) 2010-04-30 2015-01-06 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
US9839696B2 (en) 2010-04-30 2017-12-12 City Of Hope Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment
EP2605798A1 (en) * 2010-07-12 2013-06-26 Universidad Autònoma de Barcelona Gene therapy composition for use in diabetes treatment
US8808684B2 (en) 2010-09-10 2014-08-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Epidermal growth factor receptor (EGFR) and methods of use in adenoviral-associated virus type 6 (AAV6) transduction
EP2612909B1 (en) 2010-10-05 2015-02-25 Takara Bio, Inc. Method for producing virus vector
US8663624B2 (en) 2010-10-06 2014-03-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
JP6018069B2 (ja) 2010-10-12 2016-11-02 ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィアThe Children’S Hospital Of Philadelphia 血友病bを治療する方法及び組成物
WO2012057363A1 (ja) 2010-10-27 2012-05-03 学校法人自治医科大学 神経系細胞への遺伝子導入のためのアデノ随伴ウイルスビリオン
EP2635906A4 (en) 2010-11-05 2014-04-02 Univ Brandeis ICE INHIBITING COMPOUNDS AND USES THEREOF
WO2012064920A1 (en) 2010-11-11 2012-05-18 University Of Miami Methods, compositions, cells, and kits for treating ischemic injury
AU2011332025B2 (en) 2010-11-23 2015-06-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Subfamily E simian adenoviruses A1321, A1325, A1295, A1309 and A1322 and uses thereof
CA2826273C (en) 2011-02-10 2021-11-02 The University Of North Carolina At Chapel Hill Viral vectors with modified transduction profiles and methods of making and using the same
ES2724800T3 (es) 2011-02-17 2019-09-16 Univ Pennsylvania Composiciones y métodos para alterar la especificidad de tejido y mejorar la transferencia génica mediada por AAV9
EP2678433B1 (en) * 2011-02-22 2017-05-03 California Institute of Technology Delivery of proteins using adeno-associated virus (aav) vectors
GB201103062D0 (en) 2011-02-22 2011-04-06 Isis Innovation Method
US20120220648A1 (en) * 2011-02-24 2012-08-30 National Taiwan University Hospital Method of Treating Aromatic L-Amino Acid Decarboxylase (AADC) Deficiency Using Adeno-Associated Virus (AAV)-AADC Vector
EP2500434A1 (en) 2011-03-12 2012-09-19 Association Institut de Myologie Capsid-free AAV vectors, compositions, and methods for vector production and gene delivery
EP2700399B1 (en) 2011-04-18 2017-05-31 National Center of Neurology and Psychiatry Drug delivery particles and method for producing same
EP2699688A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
US9226976B2 (en) 2011-04-21 2016-01-05 University Of Massachusetts RAAV-based compositions and methods for treating alpha-1 anti-trypsin deficiencies
RS60207B1 (sr) 2011-04-22 2020-06-30 Univ California Adeno-povezani virioni virusa sa varijantama kapsida i postupci za njihovu primenu
US9249425B2 (en) 2011-05-16 2016-02-02 The Trustees Of The University Of Pennslyvania Proviral plasmids and production of recombinant adeno-associated virus
WO2012159006A2 (en) 2011-05-18 2012-11-22 University Of Florida Research Foundation, Inc. Polypeptides and vectors for targeting her2/neu expressing cells and uses thereof
US20120295960A1 (en) * 2011-05-20 2012-11-22 Oxford Biomedica (Uk) Ltd. Treatment regimen for parkinson's disease
AU2012266754B2 (en) 2011-06-06 2016-04-21 Biocartis Nv Selective lysis of cells by ionic surfactants
IN2014CN00688A (ru) 2011-07-27 2015-04-03 Genethon
ES2558168T3 (es) 2011-09-08 2016-02-02 Uniqure Ip B.V. Eliminación de virus contaminantes en preparaciones AVV
US9056892B2 (en) 2011-09-09 2015-06-16 University Of Washington Retrograde transport peptide and use of same for delivery to central nervous system
GB201118636D0 (en) 2011-10-28 2011-12-07 Oxford Biomedica Ltd Nucleotide sequence
US9441206B2 (en) 2011-10-28 2016-09-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Cell line for production of adeno-associated virus
EP3539568A1 (en) 2011-11-22 2019-09-18 The Children's Hospital of Philadelphia Virus vectors for highly efficient transgene delivery
WO2013078199A2 (en) 2011-11-23 2013-05-30 Children's Medical Center Corporation Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas
US9434928B2 (en) 2011-11-23 2016-09-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides
WO2013103896A1 (en) 2012-01-06 2013-07-11 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating cardiovascular or renal diseases
HUE036640T2 (hu) 2012-02-14 2018-07-30 Univ California Parakrin gének szisztémás bejuttatása és szabályozott expressziója szív és érrendszeri betegségekre és egyéb állapotokra
ES2752191T3 (es) 2012-02-17 2020-04-03 Childrens Hospital Philadelphia Composiciones y métodos con vectores de AAV para la transferencia de genes a células, órganos y tejidos
IN2014DN08812A (ru) 2012-04-18 2015-05-22 Philadelphia Children Hospital
EP2660325A3 (en) 2012-05-02 2014-02-12 Christian Medical College AAV vectors and corresponding nucleotide sequences and methods
US9163259B2 (en) 2012-05-04 2015-10-20 Novartis Ag Viral vectors for the treatment of retinal dystrophy
WO2013169576A1 (en) 2012-05-08 2013-11-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Permeable glycosidase inhibitors and uses thereof
US9677088B2 (en) 2012-05-09 2017-06-13 Oregon Health & Science University Adeno associated virus plasmids and vectors
TWI775096B (zh) 2012-05-15 2022-08-21 澳大利亞商艾佛蘭屈澳洲私營有限公司 使用腺相關病毒(aav)sflt-1治療老年性黃斑部退化(amd)
US10294281B2 (en) 2012-05-15 2019-05-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use
AU2013262626B2 (en) 2012-05-18 2018-11-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Subfamily E simian adenoviruses A1302, A1320, A1331 and A1337 and uses thereof
AU2013287261B2 (en) 2012-07-06 2019-03-07 University Of Iowa Research Foundation Modified adeno-associated virus vector compositions
CN104603272B (zh) 2012-07-06 2017-11-07 宝生物工程株式会社 能够产生腺伴随病毒载体的细胞
ES2684222T3 (es) 2012-08-01 2018-10-01 Nationwide Children's Hospital Administración intratecal de virus adenoasociado 9 recombinante
AU2013308470B2 (en) 2012-08-31 2017-04-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services AAV mediated aquaporin gene transfer to treat Sjogren's syndrome
WO2014052789A1 (en) 2012-09-28 2014-04-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Aav vectors targeted to oligodendrocytes
WO2014071042A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying candidates for the treatment of neurodegenerative diseases
EP2931897B1 (en) 2012-12-12 2017-11-01 The Broad Institute, Inc. Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications
US9938541B2 (en) 2012-12-25 2018-04-10 Takara Bio Inc. AAV variant
CA2897444A1 (en) 2013-01-08 2014-07-17 Genzyme Corporation Use of inos inhibitors to increase viral yield in culture
US9066966B2 (en) 2013-02-01 2015-06-30 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of cardiomyopathy due to friedreich ataxia
EP2954051B1 (en) 2013-02-08 2019-03-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modified aav8 capsid for gene transfer for retinal therapies
WO2014160092A1 (en) 2013-03-13 2014-10-02 The Children's Hospital Of Philadelphia Adeno-associated virus vectors and methods of use thereof
WO2014143932A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 The University Of North Carolina At Chapel Hill Synthetic adeno-associated virus inverted terminal repeats
CN105612253A (zh) 2013-03-15 2016-05-25 费城儿童医院 含有填充者/填充物多核苷酸序列的载体及其制备方法
JP6516725B2 (ja) 2013-04-08 2019-05-22 ユニバーシテイ・オブ・アイオワ・リサーチ・フアウンデーシヨン キメラアデノ随伴ウイルス/ボカウイルスパルボウイルスベクター
EP2792742A1 (en) 2013-04-17 2014-10-22 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf (UKE) Gene-therapy vectors for treating cardiomyopathy
AU2014255665B2 (en) 2013-04-18 2018-08-02 Fondazione Telethon Effective delivery of large genes by dual AAV vectors
AU2014253730B2 (en) 2013-04-20 2018-09-13 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Recombinant adeno-associated virus delivery of exon 2-targeted U7snRNA polynucleotide constructs
US9719106B2 (en) 2013-04-29 2017-08-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and uses thereof
KR20220119187A (ko) 2013-05-15 2022-08-26 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타 중추 신경계로의 아데노-연관 바이러스 매개 유전자 전달
US10006049B2 (en) 2013-05-16 2018-06-26 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Hairpin mRNA elements and methods for the regulation of protein translation
US11136557B2 (en) 2013-05-31 2021-10-05 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
WO2014201308A1 (en) 2013-06-12 2014-12-18 Washington University Endothelial-targeted adenoviral vectors, methods and uses therefor
EP3567112A1 (en) 2013-06-13 2019-11-13 Translate Bio, Inc. Messenger rna based viral production
KR102380265B1 (ko) 2013-07-22 2022-03-29 더 칠드런스 호스피탈 오브 필라델피아 변종 aav 및 조성물, 세포, 기관 및 조직으로의 유전자 전이를 위한 방법 및 용도
RU2018128780A (ru) 2013-07-26 2018-12-05 Юниверсити Оф Айова Рисерч Фаундейшн Способы и композиции для лечения болезней мозга
ITTO20130669A1 (it) 2013-08-05 2015-02-06 Consiglio Nazionale Ricerche Vettore adeno-associato ricombinante muscolo-specifico e suo impiego nel trattamento di patologie muscolari
WO2015031686A1 (en) 2013-08-30 2015-03-05 Amgen Inc. High titer recombinant aav vector production in adherent and suspension cells
HUE050484T2 (hu) 2013-09-12 2020-12-28 Biomarin Pharm Inc VIII. faktort kódoló gént tartalmazó AAV vektorok
EP3561062A1 (en) 2013-09-13 2019-10-30 California Institute of Technology Selective recovery
EP3633041A3 (en) 2013-09-26 2020-07-29 University of Florida Research Foundation, Inc. Synthetic combinatorial aav capsid library for targeted gene therapy
EP3068889B1 (en) 2013-09-26 2019-04-17 Universitat Autònoma De Barcelona Gene therapy compositions for use in the prevention and/or treatment of non-alcoholic fatty liver disease
CN106232618A (zh) 2013-10-11 2016-12-14 马萨诸塞眼科耳科诊所 预测祖先病毒序列的方法及其用途
WO2015060722A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Uniqure Ip B.V. Aav-5 pseudotyped vector for gene therapy for neurological diseases
WO2015108610A1 (en) 2013-11-08 2015-07-23 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Adeno-associated virus "x" oncogene
CN105934515B (zh) 2013-11-26 2020-08-04 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) 用于治疗糖原贮积病的腺相关病毒载体
KR102245861B1 (ko) 2013-11-29 2021-04-28 다카라 바이오 가부시키가이샤 아데노 수반 바이러스의 정량 방법
US9732345B2 (en) 2013-12-09 2017-08-15 Baylor College Of Medicine Hippo and dystrophin complex signaling in cardiomyocyte renewal
MX2016007325A (es) 2013-12-12 2017-07-19 Broad Inst Inc Composiciones y metodos de uso de sistemas crispr-cas en desordenes debidos a repeticion de nucleotidos.
GB201322798D0 (en) 2013-12-20 2014-02-05 Oxford Biomedica Ltd Production system
EP3092493B1 (en) 2014-01-09 2019-04-17 Genethon Methods for diagnosing or monitoring muscular dystrophies
US20150197809A1 (en) 2014-01-13 2015-07-16 Trustees Of Boston University Methods and assays relating to huntingtons disease and parkinson's disease
GB201401707D0 (en) 2014-01-31 2014-03-19 Sec Dep For Health The Adeno-associated viral vectors
GB201403684D0 (en) 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
US10072251B2 (en) 2014-02-19 2018-09-11 University Of Massachusetts Recombinant AAVS having useful transcytosis properties
EP3107928B1 (en) 2014-02-19 2019-09-04 F. Hoffmann-La Roche AG Blood brain barrier shuttle
WO2015124546A1 (en) 2014-02-19 2015-08-27 Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii- Cnic Aav vectors for the treatment of ischemic and non-ischemic heart disease
US20170007720A1 (en) 2014-02-21 2017-01-12 University Of Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions for gene delivery to on bipolar cells
EP3110974A4 (en) 2014-02-24 2018-01-24 Celgene Corporation Methods of using an activator of cereblon for neural cell expansion and the treatment of central nervous system disorders
WO2015131076A1 (en) 2014-02-27 2015-09-03 Yale University Nlrp6 inflammasome intestinal epithelium mucus secretion
CA2941640A1 (en) 2014-03-04 2015-09-11 University Of Florida Research Foundation, Inc. Improved raav vectors and methods for transduction of photoreceptors and rpe cells
EP3119415A4 (en) 2014-03-07 2017-11-29 The Arizona Board of Regents on behalf of the University of Arizona Non-narcotic crmp2 peptides targeting sodium channels for chronic pain
PT3116900T (pt) 2014-03-09 2020-10-08 Univ Pennsylvania Composições úteis no tratamento da deficiência de ornitina transcarbamilase (otc)
US10837027B2 (en) 2014-03-10 2020-11-17 Uniqure Ip B.V. Further improved AAV vectors produced in insect cells
WO2015152813A1 (en) 2014-04-03 2015-10-08 Deniz Kirik Gene expression system and regulation thereof
EP3556858A3 (en) 2014-04-09 2020-01-22 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating cystic fibrosis
EP2933335A1 (en) 2014-04-18 2015-10-21 Genethon A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases
WO2015164786A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 University Of Massachusetts Recombinant aav vectors useful for reducing immunity against transgene products
EP3919508A1 (en) 2014-04-25 2021-12-08 The Trustees of The University of Pennsylvania Ldlr variants and their use in compositions for reducing cholesterol levels
WO2015173436A1 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Vrije Universiteit Brussel Genetic correction of myotonic dystrophy type 1
US10577627B2 (en) 2014-06-09 2020-03-03 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
US11207424B2 (en) 2014-06-13 2021-12-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for increasing viral vector infectivity
US10781459B2 (en) 2014-06-20 2020-09-22 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Methods of packaging multiple adeno-associated virus vectors
EP2960336A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Genethon Efficient systemic treatment of dystrophic muscle pathologies
US10526583B2 (en) 2014-07-02 2020-01-07 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Compositions and methods for purifying recombinant adeno-associated virus
WO2016006658A1 (ja) 2014-07-10 2016-01-14 タカラバイオ株式会社 非エンベロープウイルス粒子の製造方法
US9616090B2 (en) 2014-07-30 2017-04-11 Sangamo Biosciences, Inc. Gene correction of SCID-related genes in hematopoietic stem and progenitor cells
WO2016019364A1 (en) 2014-08-01 2016-02-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for self-regulated inducible gene expression
US10711270B2 (en) 2014-10-03 2020-07-14 University Of Massachusetts High efficiency library-identified AAV vectors
US10370432B2 (en) 2014-10-03 2019-08-06 University Of Massachusetts Heterologous targeting peptide grafted AAVS
WO2016057975A2 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Guided injections for aav gene transfer to muscle
RU2020140209A (ru) 2014-10-21 2021-01-25 Юниверсити Оф Массачусетс Варианты рекомбинантных aav и их применения
CA2966620A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Voyager Therapeutics, Inc. Aadc polynucleotides for the treatment of parkinson's disease
US10907130B2 (en) 2014-11-05 2021-02-02 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Methods and materials for producing recombinant viruses in eukaryotic microalgae
CA2966964A1 (en) 2014-11-19 2016-05-26 Michal Novak Humanized tau antibodies in alzheimer's disease
EP3221456B1 (en) 2014-11-21 2021-09-22 University of Florida Research Foundation, Inc. Genome-modified recombinant adeno-associated virus vectors
KR20240063169A (ko) 2014-11-21 2024-05-10 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 중추 신경계에 표적화된 aav 벡터
FI3224376T4 (fi) 2014-11-28 2023-08-31 Dna-epäpuhtaudet koostumuksessa, joka käsittää parvovirusvirionin
US11697825B2 (en) 2014-12-12 2023-07-11 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scAAV
CA2972807C (en) 2015-01-14 2024-01-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for targeted gene transfer
US20180008727A1 (en) 2015-01-30 2018-01-11 The Regents Of The University Of California Spinal subpial gene delivery system
US20180030096A1 (en) 2015-02-03 2018-02-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof
PL3256594T3 (pl) 2015-02-10 2022-02-14 Genzyme Corporation Ulepszone dostarczanie cząstek wirusa do prążkowia i kory
WO2016137949A1 (en) 2015-02-23 2016-09-01 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
CN107635575A (zh) 2015-03-10 2018-01-26 纽约市哥伦比亚大学理事会 重组glut1腺相关病毒载体构建体以及用于恢复glut1表达的相关方法
US20180094280A1 (en) 2015-03-20 2018-04-05 Bluebird Bio, Inc. Vector formulations
ES2860712T3 (es) 2015-03-24 2021-10-05 Univ California Variantes de virus adenoasociados y métodos de uso de las mismas
JP6892433B2 (ja) 2015-04-03 2021-06-23 ユニバーシティ・オブ・マサチューセッツUniversity Of Massachusetts 十分に安定化された非対称sirna
US10081659B2 (en) 2015-04-06 2018-09-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Adeno-associated vectors for enhanced transduction and reduced immunogenicity
TWI707951B (zh) 2015-04-08 2020-10-21 美商健臻公司 過大腺相關載體之製造
ES2763551T3 (es) 2015-04-16 2020-05-29 Univ Emory Promotores y vectores recombinantes para la expresión de proteínas en el hígado y uso de los mismos
WO2016172155A1 (en) 2015-04-23 2016-10-27 University Of Massachusetts Modulation of aav vector transgene expression
WO2016172008A1 (en) 2015-04-24 2016-10-27 University Of Massachusetts Modified aav constructions and uses thereof
US20160346359A1 (en) 2015-05-01 2016-12-01 Spark Therapeutics, Inc. Adeno-associated Virus-Mediated CRISPR-Cas9 Treatment of Ocular Disease
CA2985223A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Methods of delivering an agent to the eye
AU2016262467B2 (en) 2015-05-11 2020-09-10 Alcyone Therapeutics, Inc. Drug delivery systems and methods
JP6805174B2 (ja) 2015-05-12 2020-12-23 アメリカ合衆国 神経成長因子シグナルペプチド及び副甲状腺ホルモンを含むaav分離株及び融合タンパク質
US20170067028A1 (en) 2015-05-15 2017-03-09 Douglas J. Ballon Radiolabeling of adeno associated virus
WO2016191418A1 (en) 2015-05-26 2016-12-01 Salk Institute For Biological Studies Motor neuron-specific expression vectors
MX2017014966A (es) 2015-05-28 2018-08-15 Univ Cornell Liberación de c1ei mediada por virus adenoasociado como terapia para el angioedema.
US11027024B2 (en) 2015-05-29 2021-06-08 University Of Iowa Research Foundation Methods of delivery of transgenes for treating brain diseases
RU2761564C9 (ru) 2015-05-29 2022-03-17 Дзе Трастиз Оф Дзе Юнивёрсити Оф Пенсильвания Композиции и способы деградации неправильно упакованных белков
CN108138159A (zh) 2015-06-23 2018-06-08 费城儿童医院 经修饰的因子ix、以及用于基因转移到细胞、器官和组织的组合物、方法和用途
WO2017004514A1 (en) 2015-07-02 2017-01-05 University Of Florida Research Foundation, Inc. Recombinant adeno-associated virus vectors to target medullary thyroid carcinoma
US20170007669A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 Mayo Foundation For Medical Education And Research Peptide-mediated delivery of active agents across the blood-brain barrier
WO2017005806A1 (en) 2015-07-07 2017-01-12 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for expressing a polynucleotide of interest in the peripheral nervous system of a subject
WO2017015102A1 (en) 2015-07-17 2017-01-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for achieving high levels of transduction in human liver cells
WO2017019876A1 (en) 2015-07-28 2017-02-02 University Of Massachusetts Transgenic expression of dnase i in vivo delivered by an adeno-associated virus vector
US10738087B2 (en) 2015-07-30 2020-08-11 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Ancestral virus sequences and uses thereof
WO2017023724A1 (en) 2015-07-31 2017-02-09 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of aadc deficiency
JP6978407B2 (ja) 2015-08-06 2021-12-08 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Glp−1及び代謝性疾患を治療するための組成物におけるその使用
TWI756185B (zh) 2015-09-24 2022-03-01 美商拜奧馬林製藥公司 腺相關病毒因子viii載體、相關病毒粒子及包含其之治療調配物
PT3356390T (pt) 2015-09-28 2021-04-21 Univ Florida Métodos e composições para vetores virais que se evadem a anticorpos
EP3359665A2 (en) 2015-10-09 2018-08-15 Genzyme Corporation Improved flare (flow cytometry attenuated reporter expression) technology for rapid bulk sorting
US10123969B2 (en) 2015-10-15 2018-11-13 Wisconsin Alumni Research Foundation Osmotic enhancement of drug/therapeutic delivery to the brain following infusion or injection into the cerebrospinal fluid
US20200181644A1 (en) 2015-10-22 2020-06-11 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Synthetic combinatorial aav3 capsid library
CA3002980A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 University Of Massachusetts Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors
CA3002982A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease
US20180236105A1 (en) 2015-10-23 2018-08-23 University Of Iowa Research Foundation Methods for treating neurodegenerative diseases using gene therapy to delay disease onset and progression while providing cognitive protection
WO2017075335A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
KR20180100304A (ko) 2015-10-28 2018-09-10 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 유전자 요법을 위한 아데노-관련-바이러스 벡터의 척추강 내 투여
WO2017079768A1 (en) 2015-11-08 2017-05-11 Genentech, Inc. Methods of screening for multispecific antibodies
US10633662B2 (en) 2015-11-10 2020-04-28 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for modulating AAV infection
US20170151416A1 (en) 2015-12-01 2017-06-01 Invivo Therapeutics Corporation Methods and Systems for Delivery of a Trail of a Therapeutic Substance into an Anatomical Space
CN108603174A (zh) 2015-12-01 2018-09-28 星火治疗有限公司 在适用于临床应用的无血清悬浮细胞培养体系中产生重组腺相关病毒(aav)载体的可扩展方法
WO2017096164A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Novel recombinant adeno-associated virus capsids with enhanced human skeletal muscle tropism
US10406244B2 (en) 2015-12-02 2019-09-10 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University AAV vectors with expanded packaging capacity
EP3383896A1 (en) 2015-12-03 2018-10-10 Genethon Compositions and methods for improving viral vector efficiency
US11028372B2 (en) 2015-12-11 2021-06-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAVRH10
ES2934848T3 (es) 2015-12-11 2023-02-27 Univ Pennsylvania Método de purificación escalable para AAV8
US11098286B2 (en) 2015-12-11 2021-08-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV9
WO2017100674A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aav1
CN108699565B (zh) 2015-12-11 2023-08-08 加州理工学院 用于定向腺相关病毒(aav)的靶向肽
JP7406783B2 (ja) 2015-12-14 2023-12-28 ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル パルボウイルスベクターの高められた送達のための改変キャプシドタンパク質
WO2017112948A1 (en) 2015-12-24 2017-06-29 University Of Florida Research Foundation, Inc. Improved aav production using suspension adapted cells
CN118048321A (zh) 2016-01-13 2024-05-17 建新公司 用于治疗哺乳动物内骨关节炎和相关关节病症的表达骨保护性基因、包括has2和润滑素的重组aav载体
US20190022251A1 (en) 2016-01-15 2019-01-24 Jichi Medical University Adeno-Associated Virus Virions for Treatment of Epilepsy
US11826433B2 (en) 2016-02-02 2023-11-28 University Of Massachusetts Method to enhance the efficiency of systemic AAV gene delivery to the central nervous system
CA3012653A1 (en) 2016-02-05 2017-08-10 Emory University Injection of single-stranded or self-complementary adeno-associated virus 9 into the cerebrospinal fluid
US11702672B2 (en) 2016-02-08 2023-07-18 University Of Iowa Research Foundation Methods to produce chimeric adeno-associated virus/bocavirus parvovirus
CA3014637A1 (en) 2016-02-16 2017-08-24 Mark A. Kay Novel recombinant adeno-associated virus capsids resistant to pre-existing human neutralizing antibodies
US20190071681A1 (en) 2016-02-26 2019-03-07 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav heparin mutants that display significantly improved eye and brain transduction
WO2017151884A1 (en) 2016-03-02 2017-09-08 The Children's Hospital Of Philadelphia Therapy for frontotemporal dementia
DK3423110T3 (da) 2016-03-03 2021-11-15 Univ Massachusetts Lineært duplex-dna med lukket ende til ikke-viral genoverførsel
MX2018010842A (es) 2016-03-07 2019-07-04 Univ Iowa Res Found Expresion mediada por el virus adeno-asociado (aav) usando un promotor y pontenciador sintetico.
CN109476716A (zh) 2016-03-23 2019-03-15 加利福尼亚大学董事会 治疗线粒体障碍的方法
WO2017165859A1 (en) 2016-03-24 2017-09-28 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Modified viral capsid proteins
EP3436476A4 (en) 2016-03-28 2020-04-29 The Regents of The University of California ANTI-RYK ANTIBODIES AND METHOD FOR USE THEREOF
DK3436593T3 (da) 2016-03-28 2023-02-20 Ultragenyx Pharmaceutical Inc Fremgangsmåder til varmeinaktivering af adenovirus
CN109563496B (zh) 2016-03-30 2023-08-29 星火治疗有限公司 用于重组蛋白和/或病毒载体生产的细胞系
SG11201808354PA (en) 2016-03-31 2018-10-30 Spark Therapeutics Inc Column-based fully scalable raav manufacturing process
CN109661470A (zh) 2016-04-15 2019-04-19 宾夕法尼亚州大学信托人 新型aav8突变衣壳和含有其的组合物
WO2017181162A1 (en) 2016-04-16 2017-10-19 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Methods of enhancing biological potency of baculovirus system-produced recombinant adeno-associated virus
EP3445381A4 (en) 2016-04-21 2019-10-02 Virovek, Inc. AAV PREPARATION IN INSECT CELLS, METHOD AND COMPOSITIONS THEREFOR
EP3235516B1 (en) 2016-04-22 2019-06-26 Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin Regulatable adeno-associated virus (aav) vector
EP3449250B1 (en) 2016-04-28 2020-11-04 Indiana University Research & Technology Corporation Methods and compositions for resolving components of a virus preparation
WO2017192699A1 (en) 2016-05-03 2017-11-09 Children's Medical Research Institute Adeno-associated virus polynucleotides, polypeptides and virions
WO2017192750A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Oregon Health & Science University Recombinant adeno-associated viral vectors
US10898585B2 (en) 2017-04-14 2021-01-26 Ptc Therapeutics .Inc. Gene therapy for AADC deficiency
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
WO2019222328A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of parkinson's disease

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Li Rebekah Feng et al. "Gene Therapy in Parkinson’s Disease: Rationale and CurrentStatus", CNS Drugs, 2010 March 1; 24(3): 177-192. *
Li Rebekah Feng et al. "Gene Therapy in Parkinson’s Disease: Rationale and CurrentStatus", CNS Drugs, 2010 March 1; 24(3): 177-192. Угрюмов М.В. и др. Генная и генно-клеточная терапия и нейродегенеративные заболевания", Вопросы медицинской химии, 2000, том 46, N3, с.311-323. *
Угрюмов М.В. и др. Генная и генно-клеточная терапия и нейродегенеративные заболевания", Вопросы медицинской химии, 2000, том 46, N3, с.311-323. *

Also Published As

Publication number Publication date
US20190008931A1 (en) 2019-01-10
IL251787A0 (en) 2017-06-29
US11975056B2 (en) 2024-05-07
US10335466B2 (en) 2019-07-02
JP2021106619A (ja) 2021-07-29
AU2019202498A1 (en) 2019-05-02
US20190358306A1 (en) 2019-11-28
AU2019202498B2 (en) 2021-04-01
JP6401871B2 (ja) 2018-10-10
US20210338786A1 (en) 2021-11-04
RU2017115477A3 (ru) 2019-03-26
JP2017535291A (ja) 2017-11-30
CN112553229A (zh) 2021-03-26
IL280530A (en) 2021-03-01
US20190008932A1 (en) 2019-01-10
SG10202007103TA (en) 2020-09-29
KR20170096998A (ko) 2017-08-25
AU2015343037A1 (en) 2017-05-11
WO2016073693A2 (en) 2016-05-12
US20170333538A1 (en) 2017-11-23
EP3215191A4 (en) 2018-08-01
AU2015343037B2 (en) 2019-01-17
BR112017009497A2 (pt) 2018-02-06
JP6878370B2 (ja) 2021-05-26
RU2020109343A (ru) 2020-03-17
SG11201703148TA (en) 2017-05-30
MX2017005834A (es) 2017-11-17
RU2017115477A (ru) 2018-11-09
US11027000B2 (en) 2021-06-08
EP3215191A2 (en) 2017-09-13
JP2018198622A (ja) 2018-12-20
JP2019010110A (ja) 2019-01-24
WO2016073693A3 (en) 2016-06-30
CA2966620A1 (en) 2016-05-12
US20190008933A1 (en) 2019-01-10
CN107106689A (zh) 2017-08-29
IL251787B (en) 2021-02-28
HK1243922A1 (zh) 2018-07-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019202498B2 (en) AADC polynucleotides for the treatment of Parkinson&#39;s Disease
AU2020260491B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
AU2020260476B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
CN107002095B (zh) 用于治疗溶酶体贮积症的腺伴随病毒载体
AU2020205228B2 (en) Gene therapies for lysosomal disorders
AU2021204620A1 (en) Central nervous system targeting polynucleotides
AU2016343979A1 (en) Delivery of central nervous system targeting polynucleotides
KR102494564B1 (ko) 말라리아 백신
CN114026115A (zh) 用于溶酶体病症的基因疗法
CN108495685B (zh) 针对艰难梭菌感染的基于酵母的免疫疗法
KR20230066360A (ko) 신경퇴행성 장애를 위한 유전자 요법
CN114174324A (zh) 用于溶酶体病症的基因疗法
KR20220112283A (ko) Hunter 질환 치료용 아데노-연합된 바이러스 벡터
KR20230051529A (ko) 리소좀 장애에 대한 유전자 요법
AU2016252887B2 (en) Smad7 gene delivery as a therapeutic
CN115516100A (zh) 靶向肌肉疾病中肌肉的优化基因疗法
KR20230117327A (ko) 가용성 알칼리성 포스파타제 작제물 및 가용성 알칼리성 포스파타제 작제물을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터
RU2812852C2 (ru) Невирусные днк-векторы и варианты их применения для экспрессии терапевтического средства на основе фактора viii (fviii)
KR20210150487A (ko) 리소좀 장애를 위한 유전자 요법