BRPI0710800A2

BRPI0710800A2 - administração de fatores de crescimento para o tratamento de distúrbios de snc

Info

Publication number: BRPI0710800A2
Application number: BRPI0710800-1A
Authority: BR
Inventors: Krystof Bankiewicz
Original assignee: Univ California
Priority date: 2006-04-25
Filing date: 2007-04-25
Publication date: 2012-01-17
Also published as: ES2618787T3; JP6190336B2; JP2014224140A; US20140017297A1; US20070254842A1; US9050299B2; PT2019683T; AU2007244826A1; ES2618787T5; DK2019683T3; EP2019683A4; WO2007127803A3; US9724387B2; SI2019683T1; US20150313962A1; EP2019683A2; DK2019683T4; US20120009245A1; EP2019683B1; WO2007127803A2

Abstract

ADMINISTRAçãO DE FATORES DE CRESCIMENTO PARA O TRATAMENTO DE DISTúRBIOS DE SNC. A presente invenção refere-se a um processo e sistema que sao direcionados para a liberação local de fatores de crescimento para o SNC de mamífero para tratamento de distúrbios de SNC associados com morte e/ou disfunção neuronal são descritos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ADMINISTRAÇÃO DE FATORES DE CRESCIMENTO PARA O TRATAMENTO DE DISTÚRBIOS DE SNC".

Referência Cruzada a Pedidos de Patente Relacionados

Este pedido de patente reivindica prioridade para pedido de pa- tente provisório U.S. número de série 60/795.012, depositado em 25 de abril de 2006, que é aqui incorporado por referência em sua totalidade.

Declaração Com Relação a Pesquisa ou Desenvolvimento Com Verba Federal

Esta invenção foi obtida com suporte do Governo sob No. de Concessão NINDS U54 NS045309, concedida pelo National Institutes of Neuorological Disorders and Stroke. O Governo dos U.S. tem certos direitos nesta invenção.

Incorporação Por Referência de Material Submetido Em Um Disco Rígido

Não Aplicável

Notícia de Material Sujeito A Proteção de Direito Autoral

Uma porção do material neste documento de patente é sujeito a proteção de direito autoral sob as leis de direitos autorais dos Estados Uni- dos e de outros países. O proprietário dos direitos autorais não tem objeção à reprodução de facsimile através de qualquer um dos documentos de pa- tente ou a descrição de patente, como aparecem nos arquivos ou gravações publicamente disponíveis de United States Patent and Trademark Office, mas de outro modo reserva em absoluto todos os direitos autorais. O propri- etário dos direitos autorais pelo que não abre mão de quaisquer de seus direitos para ter este documento de patente em sigilo, incluindo sem limita- ção seus direitos de acordo com 37 C.F.R. §1.14.

Antecedentes da Invenção

1. Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a doenças neurodegenerativas e outras condições caracterizadas por morte e/ou disfunção neuronal no sis- tema nervoso central. A invenção também refere-se a fatores de crescimento que são capazes de promoverem a sobrevivência de neurônios no sistema nervoso central. A invenção refere-se especificamente a processos de tra- tamento de doenças e condições neurodegenerativas caracterizadas por morte e/ou disfunção neuronal no sistema nervoso central com a adminis- tração local de fatores de crescimento.

2. Descrição de Técnica Relacionada

Fatores de crescimento são proteínas naturais que desempe- nham importantes papéis no sistema nervoso. Eles são encontrados dentro de tecido nervoso assim como em muitos tecidos alvos inervados. Fatores de crescimento promovem o crescimento, sobrevivência, e diferenciação fenotípica de neurônios e/ou células gliais. Fatores de crescimento também desempenham um papel na remodelagem de conexões sinápticas no siste- ma nervoso maduro, um processo referido genericamente como plasticidade neuronal. Devido a estes papéis fisiológicos, fatores de crescimento são Ci- teis para tratamento de distúrbios de sistema nervoso central (SNC) onde a sobrevivência e/ou função própria de neurônios é comprometida. Tais dis- túrbios de SNC podem surgir através de muitos meios diferentes, incluindo: (1) dano físico, que causa a degeneração dos processos axonais e/ou cor- pos de célula de nervo perto do sítio de dano, (2) cessação temporária ou permanente de fluxo de sangue (isquemia) para partes do sistema nervoso, como em acidente vascular cerebral, (3) descrição intencional ou acidental a neurotoxinas, tais como os agentes de quimioterapia de câncer e AIDS cis- platinum e dideoxicitidina (ddC), respectivamente, (4) doenças metabólicas crônicas, tais como diabetes ou disfunção renal, ou (5) doenças neurodege- nerativas como mal de Parkinson, mal de Alzheimer, e esclerose lateral a - miotrófica (ALS), que resulta da degeneração de específicas populações neuronais.

O efeito terapêutico de um fator de crescimento liberado para o SNC pode derivar de múltiplos mecanismos de ação. Fatores de crescimen- to podem contribuir para eficácia terapêutica através de promoção de sobre- vivência e/ou manutenção de diferenciação fenotípica de uma população neuronal que está comprometida em um distúrbio de SNC. Adicionalmente, fatores podem atuar sobre populações neuronais secundárias que não estão comprometidas em um particular distúrbio de SNC mas são capazes de efe- tuarem benéficas mudanças compensatórias no SNC em resposta a fator de crescimento, por exemplo, através de plasticidade neuronal. De modo que um particular fator de crescimento seja potencialmente útil em tratamento de um distúrbio de SNC, a população neuronal comprometida no distúrbio SNC ou uma população neuronal secundária de compensação tem de ser res- ponsiva ao particular fator. Capacidade de resposta a um particular fator de crescimento é conferida por seu receptor de fator de crescimento cognato, a vasta maioria dos quais pertence à família de receptor de tirosina cinase.

Fator de crescimento de nervo (NGF) é o membro fundador de uma definida família de fatores de crescimento, chamados neurotrofinas, que inclui fator neurotrófico derivado de cérebro (BDNF), neurotrofina-3 (NT- 3), NT-4/5, e NT-6. Estas neurotrofinas são conhecidas atuarem via a família de receptores de tirosina cinase trk, isto é, trkA, trkB, trkC, e o receptor de p75 de baixa afinidade.

Fator neurotrófico derivado de linha de célula glial (GDNF) é um homodímero ligado - dissulfeto glicosilado que tem sua homologia estrutural mais próxima da superfamília de fator de crescimento transformante (TGF) de proteínas. GDNF foi identificado e purificado usando ensaios baseados em sua eficácia em promoção de sobrevivência e estimulação de fenótipo transmissor de neurônios dopaminérgicos mesencefálicos in vitro. In vivo, tratamento com GDNF exógeno estimula o fenótipo dopaminérigico de neu- rônios de substância negra, e restaura déficits funcionais induzidos por axo- tomia ou neurotoxinas dopaminérgicas em modelos animais de mal de Par- kinson. Embora originalmente pensado ser relativamente específico para neurônios dopaminérgicos, subseqüentes experimentos mostraram que GDNF tem eficácia neurotrófica sobre tronco cerebral e neurônios colinérgi- cos de cordão espinhal, ambos in vitro e in vivo.

GDNF, e os Iigantes relacionados neurturina, artemina e perse- fina, mantêm várias populações neuronais no SNC, incluindo neurônios de dopamina de cérebro médio e motoneurônios. A família GDNF de Iigantes se liga a específicas proteínas alfa receptoras de família GDNF, que formam complexos com receptor e sinaliza através de receptor de tirosina cinase RET. GDNF também é capaz de sinalizar diretamente através de receptor alfa, assim como através de molécula de adesão de célula neural (NCAM) via ativação de Fyn e FAK.

No SNC, a expressão de trkA, o receptor para NGF1 é quase exclusivamente limitada aos neurônios colinérgicos no cérebro anterior ba- sal. Estes neurônios colinérgicos são de particular interesse neurológico, porque degeneração e/ou distrofia neuronal colinérgica é um fundamento de mal de Alzheimer. Os neurônios colinérgicos de cérebro anterior basais po- dem ser facilmente identificados em preparações morfológicas usando his- toquímica de acetil colinesterase ou com imunohistoquímica usando anticor- po para colina acetil transferase (ChAT), a enzima sintética para acetil coli- na, ou para p75.

Mal de Alzheimer é uma demência progressiva caracterizada por falha de memória recente, amnésia, distúrbios em comportamento emocio- nal, e dificuldade de gerenciar relações espaciais ou habilidades motoras. A doença ocorre por todo mundo e totaliza por metade a dois terços de todos os casos de insuficiência intelectual em vida posterior em muitos países de- senvolvidos tendo populações com altas expectativas de vida.

Mal de Alzheimer é diagnosticado principalmente através de sin- tomas clínicos, após outras causas de demência terem sido excluídas. Após morte, o diagnóstico pode ser conclusivamente estabelecido através de ob- servação de numerosos emaranhados neurofibrilares característicos e pla- cas senis no cérebro que acompanham a degeneração vista em mal de Alzheimer.

Progressivas perda e degeneração específicas de região de se- lecionadas células em áreas de associação e memória do córtex cerebral é vista em mal de Alzheimer, junto com anormalidades em certos núcleos subcorticais. Perda neuronal afeta especialmente as células piramidais grandes das áreas de associação parietal e frontal, o hipocampo e amígda- la. Entradas de hipocampo fortemente afetadas são aquelas a partir do cór- tex entorrinal, neurônios colinérgicos do cérebro anterior basal, e neurônios noradrenérgicos do lócus coeruíeus. O núcleo de cérebro anterior basal de Meynert1 do qual a principal projeção colinérgica para o córtex surge, tam- bém sofre severa degeneração.

Evidência substancial aponta para um papel significante para neurônios colinérgicos de cérebro anterior basais nas alterações comporta- mentais vistas em pacientes de Alzheimer. A perda de função colinérgica é uma das mudanças iniciais na doença. A extensão do déficit colinérgico cor- relaciona-se com o grau de prejuízo de memória, e aperfeiçoamento de fun- ção colinérgica por inibidores de acetil colinesterase produz modesta mas significante melhora de sintomas. Em animais, lesões dos neurônios coli- nérgicos inervando o hipocampo e córtex resultam em pronunciados déficits de memória e cognitivos que são revertidos por fármacos que aperfeiçoam função colinérgica.

Neurônios de projeção produzindo outros transmissores mono- amina (norepinefrina, serotonina, e dopamina) e neurônios corticais produ- zindo glutamato, ácido gama amino butírico (GABA), somatostatina, neuro- peptídeo Y, fator de liberação de corticotropina, substância P e outros neu- romoduladores também são afetados em mal de Alzheimer.

Embora pesquisa inicial tenha apontado para promessa de NGF como um composto terapêutico para mal de Alzheimer e outras neuropato- logias, insustentáveis efeitos colaterais foram observados em experimentos clínicos humanos usando NGF. Administração sistêmica de NGF em baixas doses para o tratamento de neuropatia periférica causou severa dor muscu- lar em alguns pacientes, enquanto pacientes de Alzheimer tratados com in- fusões intracerebroventricular de NGF experimentaram dor de músculo ros- tral periférico similar àquela reportada com administração de NGF periférica, e significante perda de peso.

Experimentos clínicos usando GDNF para o tratamento de mal de Parkinson também foram reportados e mostraram alguns resultados mis- tos. Mal de Parkinson é um distúrbio no qual lenta degeneração de neurô- nios produzindo dopamina, principalmente no caminho nigrostriatal, resulta em efeito neurológico. Administração intraventricular de GDNF não conduz a benefício clínico determinável, e múltiplos efeitos colaterais adversos foram reportados. Liberação local de GDNF para o striatum também foi usada para tratar mal de Parkinson. Dois experimentos clínicos envolvendo a contínua infusão e difusão de GDNF no putâmen dorsal reportaram diferentes resul- tados, potencialmente devido a pelo menos em parte a diferenças em dosa- gem e liberação.

Importantemente, anticorpos anti-GDNF neutralizantes foram detectados em soros de vários pacientes humanos, e em um estudo de toxi- cologia, dano cerebelar segmentai caracterizado por Purkinje e perda de célula granulosas foi observado em macacos recebendo infusão de GDNF.

Estudos clínicos envolvendo infusão de neurotrofina no parên- quima de cérebro de pacientes com doença neurodegenerativa usaram infu- são contínua e baseada em difusão para infundido atingir tecidos alvos. E- xiste um número de dificuldades associadas com liberação baseada em di- fusão, a mais crítica sendo baixo volume de distribuição em tecido. Sem meios para monitorar a distribuição de neurotrofina infundida, é difícil deter- minar a eficácia terapêutica. Por exemplo, Gill et al. reportaram em Nat. Med. 9:5899-595, 2003 que, quando fator neurotrófico derivado de linha de célula glial (GDNF) foi usado em estudos clínicos como um tratamento para mal de Parkinson, não foi claro quanto longe GDNF pode se difundir a partir da ponta do cateter e que é possível mais porções rostrais do putâmen po- derem continuar a degenerar se não atingidas por difusão. Eles também verificaram que, quando a dose de GDNF foi aumentada, uma alta intensi- dade de sinal T2 MRI foi observada ao redor da ponta do cateter, possivel- mente devido a edema vasogênico ou desenvolvimento de proteína, que requer redução de dosagem e potencialmente ainda porções rostrais com- prometidas do putâmen.

Continua a existir uma necessidade de processos e composi- ções terapêuticas úteis para o tratamento de distúrbios de SNC, incluindo doenças neurodegenerativas como mal de Alzheimer e mal de Parkinson. Sumário da Invenção

A invenção deriva em parte da descoberta de que a taxa de de- puração de tecido de fatores de crescimento em tecido de SNC mamífero é menor do que previamente acreditado. Em particular, a presente descrição estabelece que fatores de crescimento infundidos no parênquima de cérebro em um típico regime de tratamento são detectáveis por até cerca de 2-6 semanas após liberação.

Experimentos prévios envolvendo infusão de fator de crescimen- to no parênquima de cérebro para o tratamento de doença neurodegenerati- va empregaram infusão contínua. Entretanto, como uma conseqüência de taxas de depuração de tecido acentuadamente baixas, infusão contínua de fator de crescimento é desnecessária para obtenção de um nível terapeuti- camente efetivo de fator de crescimento em tecido de cérebro feito alvo, e a acumulação que resulta de administração contínua pode ter efeitos adver- sos. Por exemplo, acumulação de fator de crescimento em parênquima de cérebro pode conduzir a desenvolvimento de dose e vazamento para sítios secundários e CSF, o que tem o potencial de causar indesejáveis efeitos secundários assim como respostas imunes e concomitante produção de an- ticorpos neutralizantes de fator de crescimento. Tais anticorpos anti-GDNF neutralizantes foram observados nos soros de pacientes recebendo infusão contínua de GDNF no striatum. Adicionalmente, toxidez celular foi observa- da em sítios secundários em um estudo de toxidez animal de GDNF, e fluxo de infundido a partir do putâmen para sítios secundários via o espaço peri- vascular foi observado em primatas.

A presente invenção é direcionada à obtenção e manutenção de uma efetiva dose terapêutica de fator de crescimento em tecido SNC alvo enquanto evitando desenvolvimento de dose conduzindo a overdose para reduzir o risco de eventos adversos, incluindo a produção de anticorpos neu- tralizantes e o início de uma resposta imune. A invenção obtém estes objeti- vos com regimes de administração de fator de crescimento que contraba- lançam taxas de depuração de tecido previamente não-reconhecidas de modo a prover uma dose terapêutica efetiva sustentada de fator de cresci- mento em tecido de SNC comprometido. Em contraste, esforços anteriores para regular a dosagem terapêutica de fatores de crescimento empregaram sensores capazes de detectarem atividade elétrica indicativa de degenera- ção ou disfunção neuronal, Elsberry et al., U.S. 6.042.579; um parâmetro de retroalimentação inadequado que falha para endereçar-se a eventos adver- sos tais como os processos mediados - imunes notados acima.

Em uma modalidade preferida, o regime de administração en- volve liberação intermitente, onde a liberação contrabalança depuração de tecido.

Em uma modalidade preferida, a invenção envolve o processo de liberação aperfeiçoada de convecção ("CED"), preferivelmente em con- junção com uma cânula isenta de refluxo de desenho de etapa para a libe- ração de fator de crescimento para populações de células comprometidas no SNC. Em uma modalidade preferida,a invenção ainda envolve a libera- ção de um agente traçador com o fator de crescimento, e o agente traçador atua como um substituto para monitoração de distribuição de fator de cres- cimento infundido. Em uma modalidade preferida, a invenção ainda envolve o uso de um agente de facilitação, que provê aumentada mobilidade de fator de crescimento no parênquima de cérebro. Assim, em adição ao endereça- mento aos problemas associados com acumulação de fator de crescimento, a presente invenção supera as limitações inerentes em liberação baseada em difusão com típicos cateteres, particularmente baixo volume de distribui- ção em tecido, acumulação em ponta de cateter, refluxo, e vazamento para sítios secundários e CSF, e provê monitoração em tempo real e otimização de administração neuropática.

De acordo com os objetivos estabelecidos acima, em um aspec- to, a invenção provê processos para promoção de sobrevivência de uma população de neurônios responsiva a fator de crescimento no SNC de ma- mífero. Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios responsiva a fator de crescimento, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que opõe-se substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quantidade terapeutica- mente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo. Um tal regime de administração é desenhado para evitar substancial acumula- ção de fator de crescimento.

Em uma modalidade, o processo compreende a etapa de de- terminação de taxa de depuração do fator de crescimento que é para ser liberado localmente para uma população de neurônios responsiva a fator de crescimento no SNC. Em uma modalidade preferida, a etapa de determina- ção de taxa de depuração é feita pré-clinicamente, preferivelmente em um primata. Em uma outra modalidade preferida, a etapa de determinação de taxa de depuração é feita através de medição de um indicador de taxa de depuração em um sujeito humano.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica é liberável por liberação aperfeiçoada de convecção (CED).

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica é liberada localmente por CED.

Em uma modalidade preferida, CED compreende uma taxa de infusão de entre cerca de 0,5 μL / minuto e cerca de 10 μL / minuto.

Em uma modalidade preferida, CED compreende uma taxa de infusão maior que cerca de 0,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 0,7 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 1 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 1,2 μL / minuto, mais pre- ferivelmente maior que cerca de 1,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que 1,7 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2,2 μL / minuto, mais preferivel- mente maior que cerca de 2,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2,7 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 3 μL / minuto, assim como preferivelmente menos que cerca de 25 μL / minuto, mais preferivelmente menos que 20 μL / minuto, mais preferivelmente me- nos que cerca de 15 μL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 12 μL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 10 μL / minuto.

Em uma modalidade preferida, CED compreende aumentos in- crementais em taxa de fluxo, referidos como "etapas", durante liberação. Preferivelmente, formação de etapas compreende taxas de infusão de entre cerca de 0,5 μL/ minuto e cerca de 10 μL / minuto. Em uma modalidade preferida, formação de etapas compreende taxas de infusão maiores que cerca de 0,5 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 0,7 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 1 μL/ minuto, mais pre- ferivelmente maiores que cerca de 1,2 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 1,5 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 1,7 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,2 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,5 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,7 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 3 μL/ minuto, assim como preferivelmente de menos que cerca de 25 μL/ minuto, mais preferivelmente menos que 20 μL / minuto, mais prefe- rivelmente menos que cerca de 15 μL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 12 μL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 10 μL/ minuto.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica é liberada com o uso de uma cânula de desenho de etapa isenta de refluxo compatível com CED.

Em uma modalidade, a cânula de desenho em etapa é compatí- vel com administração crônica. Tais cânulas são preferidas para uso no tra- tamento de distúrbios crônicos de SNC, como aqui descritos.

Em uma outra modalidade, a cânula de desenho de etapa é compatível com administração aguda. Tais cânulas são preferidas para uso no tratamento de distúrbios agudos de SNC, como aqui descritos.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende um agente traçador que provê liberação guiada de fator de crescimento. Preferivelmente, o agente traçador é um agente de contraste MRI1 algumas vezes aqui referido como um "magneto MRI". Em uma moda- lidade preferida, o agente traçador compreende uma lipossoma. Em uma modalidade especialmente preferida, o agente traçador compreende uma lipossoma contendo quelato de gadolínio.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende um agente de facilitação, que facilita liberação de fator de cres- cimento para tecido alvo. Em uma modalidade preferida, o agente de facili- tação é heparina de baixo peso molecular.

Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende um neuroterapêutico de alto peso molecular compreendendo um fator de crescimento e um carreador. Em uma modalidade, o carreador é um carrea- dor sintético. Uma ampla variedade de carreadores sintéticos são disponí- veis para uso nos neuroterapêuticos de alto peso molecular da invenção.

Em uma modalidade preferida, o carreador é uma lipossoma. Em uma outra modalidade preferida, o carreador é uma partícula de metal, tal como uma partícula de ouro, ou um polímero. Em uma outra modalidade, o carreador é uma composição ocorrendo naturalmente ou sua variante. Exemplos de tais carreadores naturais incluem partículas de vírus, incluindo partículas de ví- rus modificado (por exemplo, aqueles tendo um perfil de proteína de super- fície modificado).

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende um fator de crescimento que é selecionado do grupo consistin- do em NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, NT-6, GDNF, CNTF, LIF, IGF-1, b-FGF, neurturina, persefina, artemina, TGFp, TGFp, IGF-2, PDGF, EGF, cardiotro- pina, EGF, IGF, VEGF1 Sonic hedgehog (SHH), BMP, FGF20, VIP, PDGF, pleiotrofina (PTN), e HGF.

Em uma modalidade, a composição farmacêutica compreende um ácido nucléico codificando um fator de crescimento. Em uma modalida- de preferida, o fator de crescimento é selecionado do grupo consistindo em NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, NT-6, GDNF, CNTF, LIF, IGF-1, b-FGF, neurtu- rina, persefina, artemina, TGFp, Τ6Ρβ, IGF-2, PDGF, EGF, cardiotropina, EGF, IGF, VEGF, Sonic hedgehog (SHH), BMP, FGF20, VIP, PDGF, pleio- trofina (PTN), e HGF. Em uma modalidade preferida, a composição farma- cêutica compreende um vetor, cujo vetor compreende um tal ácido nucléico codificando um fator de crescimento sob o controle de um promotor regulá- vel.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende NGF, ou um seu fragmento ativo ou variante, e ao população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende neurônios coli- nérgicos do cérebro anterior.

Em uma modalidade preferida, em adição a NGF, a composição farmacêutica adicionalmente compreende um agente bioativo selecionado do grupo consistindo em agonistas colinérgicos, inibidor de colinesterase tal como cloridrato de tacrina, neurotrofinas, indutores de síntese ou produção de fator neurotrófico endógeno, inibidores de formação de placa amilóide senil, e inibidores de formação de PHF.

Em uma outra modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende GDNF, ou um seu fragmento ou variante ativo, e a população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende neurônios coli- nérgicos do cérebro anterior basal.

Em uma outra modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende GDNF, ou um seu fragmento ou variante ativa, e a população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende neurônios do- paminérgicos tendo corpos de células ou processos no estriado e/ou cére- bro médio.

Em uma outra modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende VIP, ou um seu fragmento ou variante ativa, e a população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende neurônios dopa- minérgicos tendo corpos de célula ou processos no estriado e/ou cérebro médio.

Em uma outra modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende PTN, ou um seu fragmento ou variante ativa, e a população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende neurônios dopa- minérgicos tendo corpos de células ou processos no estriado e/ou cérebro médio.

Será apreciado que em algumas modalidades, fatores de cres- cimento podem ser liberados para terminais neuronais em uma distância de corpos de células.

Em uma outra modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende BMP, ou um seu fragmento ou variante ativa, e a população de neurônios responsiva a fator de crescimento compreende células de um ló- cus de SNC impactado por acidente vascular cerebral.

Em uma modalidade preferida, o processo compreende Iibera- ção local intermitente da composição farmacêutica.

Em uma modalidade preferida, administração do fator de cres- cimento compreende um intervalo de cerca de 7 dias a cerca de 45 dias, mais preferivelmente de cerca de 14 dias a cerca de 45 dias, mais preferi- velmente de cerca de 17 dias a cerca de 35 dias, mais preferivelmente de cerca de 20 dias a cerca de 35 dias seguindo liberação do fator de cresci- mento, cujo intervalo é seguido por uma outra liberação do fator de cresci- mento. Em uma modalidade preferida, administração do fator de crescimen- to compreende dois ou mais tais intervalos.

Em uma outra modalidade, administração do fator de crescimen- to compreende intervalos de menos que 7 dias, preferivelmente entre cerca de 2 dias e cerca de 6 dias, ou mais que 45 dias.

Em uma modalidade preferida, a duração de dois ou mais inter- valos é diferente em um regime de administração intermitente compreen- dendo três ou mais etapas de liberação. Em uma modalidade preferida, a duração de um intervalo entre etapas de liberação no início de um regime de administração intermitente é substancialmente mais curta que um intervalo entre etapas de liberação subseqüentes.

Em uma modalidade, a dose de fator de crescimento liberada difere entre etapas de liberação. Em uma modalidade preferida, a dose de fator de crescimento liberada em uma etapa de liberação inicial é maior que a dose de fator de crescimento liberada em uma etapa de liberação posteri- or em um regime de administração intermitente compreendendo duas ou mais etapas de liberação.

Em uma modalidade preferida, a duração de CED é de cerca de 30 minutos a cerca de 12 horas, mais preferivelmente de cerca de 30 minu- tos a cerca de 6 horas.

Em uma outra modalidade, duração de CED é menos que cerca de 30 minutos ou mais que cerca de 12 horas.

Em uma modalidade preferida, a duração de liberação é infor- mada através do uso de um agente traçador e monitoração de distribuição de infundido.

Em um aspecto, a invenção provê processos para redução de morte de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífe- ro. Os processos compreendem liberação local de uma composição farma- cêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento que está em risco de sofrer morte de célula na ausência de intervenção, onde o fator de cresci- mento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente a taxa de de- puração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quantidade tera- peuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC al- vo.

Em um aspecto, a invenção provê processos para modulação de formação de sinapse por neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC mamífero. Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substanci- almente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo, e onde o fator de crescimento modula formação de sinapse pela população neuronal responsiva a fator de crescimento.

Em um aspecto, a invenção provê processos para modulação de crescimento de neurito através de neurônios responsivos a fator de cresci- mento do SNC mamífero. Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimen- to, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmen- te se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido SNC alvo, e onde o fator de crescimento modula desenvolvimento de neurito pela população de neurôniois responsiva a fator de crescimento.

Em um aspecto, a invenção provê processos para aumento de quantidade processada de neurotransmissor em neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC mamífero. Os processos compreendem libera- ção local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de cresci- mento, pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de cres- cimento é obtida no tecido SNC alvo, e onde o fator de crescimento aumen- ta a quantidade processada de neurotransmissor na população de neurônios responsiva a fator de crescimento.

Em um aspecto, a invenção provê processos para modulação de diferenciação fenotípica de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC mamífero. Os processos compreendem liberação local de uma compo- sição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma po- pulação de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quan- tidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo, e onde o fator de crescimento modula diferenciação fenotípica da população de neurônios responsiva a fator de crescimento.

Em um aspecto, a invenção provê processos para tratamento de um paciente tendo uma desordem de SNC caracterizada por morte e/ou dis- função de neurônios. Em uma modalidade, o distúrbio de SNC é um distúr- bio crônico. Em uma outra modalidade, o distúrbio de SNC é um distúrbio agudo. Em uma modalidade preferida, o distúrbio de SNC é selecionado do grupo consistindo em mal de Huntington, mal de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), mal de Parkinson, acidente vascular cerebral, trauma de cabeça, dano de cordão espinhal, esclerose múltipla, demência com Corpos Lewy, degeneração de retina, epilepsia, distúrbios psiquiátricos, distúrbios de balanço hormonal, e degeneração coclear. São ainda contemplados pro- cessos para redução de inflamação que é associada com um distúrbio de SNC caracterizado por morte e/ou disfunção de neurônios.

Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento no paciente, onde tal administração do fator de crescimento é terapeuticamente efetiva no tra- tamento do paciente. O fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de cresci- mento, pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de cres- cimento é obtida no tecido SNC alvo.

Em modalidades onde um distúrbio de SNC agudo é tratado, há preferivelmente um ponto final no qual administração é interrompida.

Em um aspecto, a invenção provê processos para tratamento de um paciente diagnosticado como tendo um distúrbio de SNC em seus está- gios iniciais, preferivelmente antes de apresentação clínica. Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreen- dendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento no paciente, onde tal administração do fator de crescimento previne, retarda, ou reduz a severidade de manifesta- ções clínicas associadas com a desordem de SNC. O fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quantidade terapeutica- mente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido SNC alvo.

Em um aspecto, a invenção provê processos profiláticos para tratamento de um paciente em risco de um distúrbio de SNC. Os processos compreendem liberação local de uma composição farmacêutica compreen- dendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento no paciente, onde tal administração do fator de crescimento previne ou retarda início de um distúrbio de SNC, ou reduz a severidade do distúrbio de SNC uma vez ele se manifeste. O fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, pelo que uma quanti- dade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo.

Processos de tratamento aqui incluindo processos profiláticos preferivelmente envolvem diagnóstico pré-operativo.

Em uma modalidade preferida, diagnóstico pré-operativo envol- ve seleção genética. Em uma outra modalidade preferida, diagnóstico pré- operativo envolve formação de imagem de neurônios. Em uma modalidade, a formação de imagem de neurônios realizada compreende formação de imagem de neurônios funcional. Em uma outra modalidade, a formação de imagem de neurônios realizada envolve formação de imagem não-funcional. Preferivelmente, a formação de imagem de neurônios feita envolve PET, MRI e/ou CT.

Processos de tratamento aqui também preferivelmente compre- endem formação de imagem de neurônios, preferivelmente MRI, para locali- zação de alvo e/ou colocação de cânula guiada. Preferivelmente um fixador estereotático é usado em conjunção com formação de imagem de neurônios para provimento de colocação guiada de cânula na ou próxima de uma po- pulação alvo de neurônios.

Os presentes processos de tratamento também compreendem preferivelmente formação de imagem de neurônios, preferivelmente MRI em conjunção com um magneto MRI administrado para monitoração de distribu- ição de infundido.

Em um aspecto, a invenção provê composições farmacêuticas úteis para tratamento de uma desordem de SNC caracterizada pela morte e/ou disfunção de uma população de neurônios de SNC.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica é liberável por CED.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende um agente traçador.

Em uma modalidade preferida, o agente traçador é um magneto MRI. Em uma modalidade preferida, o agente traçador compreende uma lipossoma. Em uma modalidade especialmente preferida, o agente tra- çador compreende uma lipossoma contendo um magneto MRI, preferivel- mente quelato de gadolínio. Em uma modalidade altamente preferida, o a- gente traçador consiste essencialmente em uma lipossoma contendo um magneto MRI, preferivelmente quelato de gadolínio.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica compreende um agente de facilitação.

Em uma modalidade preferida, o agente de facilitação é hepari- na de baixo peso molecular.

Em uma modalidade preferida, fator de crescimento é selecio- nado do grupo consistindo em NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, NT-6, GDNF, CNTF, LIF, IGF-1, b-FGF, neurturina, persefina, artemina, TGFp, TGFp, IGF-2, PDGF, EGF, cardiotropina, EGF1 IGF, VEGF, Sonic hedgehog (SHH), BMP, FGF20, VIP, PDGF, pleiotrofina (PTN), e HGF.

Processos de produção de uma composição farmacêutica da invenção também são providos.

Em um aspecto, a invenção provê um dispositivo de liberação compreendendo uma composição farmacêutica da invenção.

Em um aspecto, a invenção provê um cateter ou Cânula com- preendendo uma composição farmacêutica da invenção.

Em um aspecto, a invenção provê um dispositivo de liberação compreendendo uma bomba que é capaz de efetuar liberação de uma com- posição farmacêutica da invenção através de CED. Em uma modalidade preferida, a invenção provê um dispositivo de liberação compreendendo uma bomba que é capaz de efetuar liberação intermitente de uma composi- ção farmacêutica da invenção através de CED. Em uma modalidade preferi- da, o dispositivo ainda compreende uma composição farmacêutica da in- venção. Em uma modalidade preferida, o dispositivo ainda compreende uma cânula de desenho de etapa livre de refluxo, compatível com CED, cuja câ- nula é compatível com administração crônica ou aguda.

Em um aspecto, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produção de um medicamento útil para o tratamento de um paciente tendo um distúrbio de SNC caracterizado por morte e/ou disfunção de neurônios, onde o medi- camento é liberável para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codifi- cando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quando o medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medica- mento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medi- camento pode ser liberado intermitentemente.

Em uma realização, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produzir um medicamento útil para redução de morte de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífero, onde o medicamento é liberável para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que subs- tancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimen- to, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeutica- mente efetiva quando o medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medicamento é liberável atra- vés de CED. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser Iibe- rado intermitentemente.

Em um aspecto, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produção de um medicamento útil para modulação de desenvolvimento de neurito por neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífero, onde o medicamento é liberável para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codi- ficando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quando o medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medica- mento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medi- camento pode ser liberado intermitentemente.

Em uma modalidade, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produzir um medicamento útil para aumento de quantidade metabolizada de neuro- transmissor em neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífero, onde o medicamento pode ser liberado para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de cres- cimento ou ácido nucléico codificando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quan- do o medicamento é liberado para o CNS do paciente sem produzir subs- tancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado intermitentemente.

Em um aspecto, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produzir um medicamento útil para modulação de diferenciação fenotípica de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC mamífero, onde o medicamento pode ser liberado para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codifi- cando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quando medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medica- mento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medi- camento pode ser liberado intermitentemente. Em um aspecto, a invenção prove processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produzir um medicamento útil para tratamento de um paciente diagnosticado como tendo um distúrbio de SNC em seus estágios iniciais, onde o medicamento pode ser liberado para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quando o medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado intermitentemente.

Em um aspecto, a invenção provê processos de uso de um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo para produção de um medicamento útil para tratamento profilático de um paciente em risco de um distúrbio de SNC, onde o medicamento pode ser liberado para o SNC do paciente tendo um distúrbio de SNC em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento, onde o fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo está presente em uma quantidade suficiente para prover uma dose terapeuticamente efetiva quan- do o medicamento é liberado para o SNC do paciente sem produção de substancial acumulação do fator de crescimento no SNC do paciente. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado por CED. Em uma modalidade preferida, o medicamento pode ser liberado intermitente- mente.

Em uma modalidade, um medicamento ainda compreende um agente traçador.

Em uma modalidade, um medicamento ainda compreende um agente de facilitação.

Em uma modalidade, processos de produção de um medica- mento envolvem o uso de um neuroterapêutico de alto peso molecular da invenção compreendendo (i) um carreador, e (ii) um fator de crescimento ou ácido nucléico codificando o mesmo.

Em um aspecto, a invenção provê kits para o tratamento de dis- túrbios de SNC, cujos kits compreendem uma ou mais composições farma- cêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção prove kits úteis para redução de morte de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamí- feros, cujos kits compreendem uma ou mais composições farmacêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção provê kits úteis para modula- ção de desenvolvimento de neurito por neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífero, cujos kits compreendem uma ou mais composições farmacêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção provê kits úteis para aumento de quantidade metabolizada de neurotransmissor em neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC mamífero, cujos kits compreendem uma ou mais composições farmacêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção provê kits úteis para modula- ção de diferenciação fenotípica de neurônios responsivos a fator de cresci- mento do SNC mamífero, cujos kits compreendem uma ou mais composi- ções farmacêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção provê kits úteis para tratamen- to de um paciente diagnosticado como tendo um distúrbio de SNC em seus estágios iniciais, cujos kits compreendem uma ou mais composições farma- cêuticas da invenção.

Em um outro aspecto a invenção provê kits úteis para tratamen- to profilático de um paciente em risco de um distúrbio de SNC, cujos kits compreendem uma ou mais composições farmacêuticas da invenção.

Em uma modalidade, um kit da invenção ainda compreende um dispositivo de liberação útil para CED, preferivelmente uma cânula, e mais preferivelmente uma cânula livre de refluxo de desenho de etapa. Em uma modalidade, um kit da invenção ainda compreende uma bomba útil para CED.

Um outro aspecto da invenção é um processo de tratamento de um mamífero tendo um distúrbio de sistema nervoso central (SNC). Em uma modalidade, o processo envolve administração a um mamífero tendo um distúrbio de SNC, de uma composição farmacêutica tal como um fator de crescimento, através de correlação de liberação da dita composição farma- cêutica com correspondente depuração de tecido da composição farmacêu- tica. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é administrada usan- do liberação aperfeiçoada de convecção (CED). Em uma modalidade, a composição farmacêutica inclui um agente traçador. Em uma outra modali- dade, a composição farmacêutica ainda compreende um agente de facilita- ção. Em uma modalidade, a composição farmacêutica é liberada intermiten- temente. Em um modo, a liberação intermitente equilibra o processo de de- puração de tecido.

Um outro aspecto da invenção é um processo para promoção de sobrevivência de uma população de neurônios responsiva a fator de cresci- mento no SNC de mamífero. Em uma modalidade, o processo envolve libe- ração local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para a população de neurônios responsiva a fator de cresci- mento onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento de modo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo. Em um modo, a liberação não produz subs- tancial acumulação de fator de crescimento. Em uma modalidade, o proces- so envolve determinação de taxa de depuração de tecido do fator de cres- cimento que é para ser liberado localmente para uma população de neurô- nios responsiva a fator de crescimento no SNC. Em uma modalidade, de- terminação de taxa de depuração de tecido é realizada pré-clinicamente em um primata. Em uma outra modalidade, determinação de taxa de depuração de tecido é realizada através de medição de um indicador de taxa de depu- ração em um sujeito humano.

Um outro aspecto da invenção é um processo para redução a morte de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífe- ro. Em uma modalidade, o processo envolve liberação local de uma compo- sição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma po- pulação de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento que está em risco de sofrer morte de célula na ausência de intervenção, onde o fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento e pelo que uma quanti- dade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo.

Um outro aspecto da invenção é um processo de tratamento de um distúrbio de SNC. Em uma modalidade, o processo envolve administra- ção local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento para uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento no paciente, onde tal administração do fator de crescimento é terapeuticamente efetiva no tratamento do paciente. Em uma modalidade, o fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se o- põe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido SNC alvo. Em uma modalidade, o distúrbio de SNC compreende um distúrbio de SNC agudo e administração é interrompida em um ponto final.

Um outro aspecto da invenção é um processo para tratamento de um paciente diagnosticado como tendo um distúrbio de SNC em seus estágios iniciais. Em uma modalidade, o processo envolve administração local de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de cresci- mento a uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de cresci- mento no paciente onde tal administração do fator de crescimento previne, retarda, ou reduz a severidade de manifestações clínicas associadas com o distúrbio de SNC em estágios posteriores na ausência de fator de cresci- mento administrado. Em uma modalidade, o fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo. Um outro aspecto da invenção é um processo profilático para tratamento de um paciente em risco de um distúrbio de SNC. Em uma mo- dalidade, o processo envolve administração local de uma composição far- macêutica compreendendo um fator de crescimento a uma população de neurônios de SNC responsiva a fator de crescimento no paciente onde tal administração do fator de crescimento previne ou retarda início de um dis- túrbio de SNC, ou reduz a severidade do distúrbio de SNC uma vez ele se manifeste. Em uma modalidade, o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido alvo de SNC.

Ainda aspectos da invenção serão mostrados nas seguintes porções do relatório descritivo, onde a descrição detalhada é para o propósi- to de mostrar inteiramente modalidades preferidas da invenção sem coloca- ção de limitações sobre a mesma.

Breve Descrição dos Desenhos

A invenção será mais inteiramente entendida através de refe- rência aos seguintes desenhos que são somente para propósitos ilustrativos:

A figura 1 e figura 2 são imagens de cérebro de rato. LMW Hep (1 micrograma / microlitro) com GDNF é infundido em cérebro de rato. (he- misfério esquerdo infundido com GDNF + LMW Hep; o hemisfério direito recebeu somente GDNF com PBS como um controle.

A figura 3 é um gráfico ilustrando expressão de GDNF em dife- rentes pontos de tempo após transdução com AAV2-GDNF. AAV2-GDNF foi infundida no estriado em diferentes doses e ratos sofreram eutanásia em diferentes pontos de tempo para análise de correlação com o nível de ex- pressão de GDNF. Os resultados mostram gradual acumulação de GDNF com o tempo.

A figura 4 é uma imagem de um cérebro de macaco tratado de acordo com um processo da invenção GDNF (30 μg / sítio) foi administrada através de CED sobre um lado do cérebro de macaco normal. Um sítio foi feito alvo no caudado e 2 sítios no putâmen. O macaco sofreu eutanásia 3 semanas depois. Significante proteína GDNF residual presente. Mancha- mento TH revelou forte regulação ascendente de fibras DA sobre somente o sítio tratado com GDNF.

A figura 5 é um gráfico ilustrando efeitos de administração de 5 μg de neutirina (NTN) em ratos normais em 4 dias. Um significante aumento em quantidade metabolizada de DA foi visto após administração simples. Uma aparente sinergia entre NTN e heparina também foi observada.

A figura 6 é um gráfico ilustrando depuração de tecido de GDNF após administração simples.

A figura 7 é um gráfico ilustrando regulação de níveis de DA a- pós uma administração simples.

A figura 8 ilustra AAV2-GDNF infundida (CED) no estriado de rato em diferentes doses.

A figura 9 é um gráfico ilustrando expressão de GDNF no cére- bro de rato em diferentes pontos de tempo após transdução com AASV2- GDNF. Os valores médios em cada ponto de tempo foram calculados de 3 hemisférios.

A figura 10 ilustra parâmetros experimentais para determinação de depuração de NF do cérebro de rato.

A figura 11 é um gráfico ilustrando depuração de proteína GDNF no cérebro de rato após sua infusão semanal através de CED. Os valores médios em cada semana foram calculados de 3 ratos (6 hemisférios).

A figura 12 é um gráfico ilustrando depuração de GDNF após sua infusão intra-estriado no cérebro de rato.

Descrição Detalhada da Invenção

A invenção é direcionada a processos e composições para a liberação local de fatores de crescimento para populações de neurônios res- ponsivas a fator de crescimento do SNC de mamífero. A invenção deriva em parte da verificação de que depuração de tecido de fatores de crescimento no SNC é lenta em relação a taxas nas quais fatores de crescimento exóge- nos têm sido tipicamente administrados anteriormente. Infusão de um fator de crescimento em uma taxa maior que depuração de tecido resulta em uma acumulação desnecessária e potencialmente tóxica de fator de crescimento. Na presente invenção, liberação de fator de crescimento em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido é feita para evitar acumulação tóxica de fator de crescimento e obter níveis em tecido alvo que são mantidos dentro de uma janela terapeuticamente efetiva com o tempo. Em uma modalidade preferida, é feita liberação intermitente de fator de crescimento.

O fenômeno de lenta depuração de tecido não é limitado a um particular fator de crescimento ou região de cérebro. Conseqüentemente, o benefício associado com os presentes processos de administração não é limitado a um particular fator de crescimento, uma particular população de neurônios no SNC, ou uma particular indicação. Em princípio, dada a habili- dade para liberar uma ampla variedade de fatores de crescimento para uma ampla variedade de populações de neurônios no SNC, qualquer indicação caracterizada pela morte e/ou disfunção de uma população de neurônios que é responsiva a fator de crescimento, ou pode ser funcionalmente com- pensada por uma população de neurônios responsiva a fator de crescimen- to, pode ser tratada.

Administração de Fator de Crescimento

Um número de fatores de crescimento foram liberados através de várias maneiras em tentativas para tratar uma variedade de doenças neurodegenerativas. Para revisão, vide, por exemplo, Dawbarn et al., Neu- ropathol and App. Neurobiol, 29:211-230, 2003 aqui incorporado por refe- rência em sua totalidade. A presente invenção provê novos meios de libera- ção de fatores de crescimento para populações de neurônios responsivas a fator de crescimento nestas doenças com aperfeiçoada eficácia. Em particu- lar, a invenção provê processos e composições para liberação de fatores de crescimento para populações de neurônios alvos em uma taxa que contra- balança taxas de depuração de tecido para obtenção de uma dose terapêu- tica efetiva sustentada sem indesejados efeitos adversos.

Nos processos da invenção, fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento. Por "taxa que substancialmente se opõe à taxa de de- puração de tecido" é pretendida uma taxa de liberação que é aproximada- mente contra à taxa de depuração de tecido. Taxa refere-se à quantidade de fator de crescimento sobre tempo. A taxa de liberação não precisa exata- mente contrabalançar a taxa de depuração de tecido, e a quantidade de fa- tor de crescimento em tecido alvo não precisa permanecer constante. Por exemplo, em uma modalidade preferida da invenção, administração envolve liberação intermitente de fator de crescimento. Será apreciado que tais pro- tocolos de administração resultarão em variadas quantidades de fator de crescimento em tecido alvo, com um máximo aproximadamente no início de um intervalo e um mínimo aproximadamente no fim de um intervalo. O que é buscado nos presentes processos é uma taxa de liberação que proporcione manutenção de uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de cres- cimento (dentro de uma janela terapêutica) em tecido alvo sobre tempo. A- través de consideração de taxa de depuração determinada empiricamente de um determinado fator de crescimento em tecido alvo, aqueles versados na técnica podem facilmente determinar uma apropriada taxa de liberação sem indevida experimentação.

A taxa de liberação de fator de crescimento nos presentes pro- cessos é informada pela taxa de depuração de tecido do fator de crescimen- to e substancialmente se opõe à taxa de depuração de tecido. A desejada taxa de liberação de fator de crescimento pode ser obtida com liberação contínua ou intermitente e apropriadas concentrações de fator de cresci- mento. CED é um meio preferido de liberação na presente invenção, e libe- ração intermitente de uma composição farmacêutica tendo uma apropriada concentração de fator de crescimento é preferida. Entretanto, em modalida- des alternativas, liberação em uma taxa de infusão de menos que 0,5 μL pode ser feita, e um regime de administração compreendendo liberação in- termitente com intervalos muito curtos (dias, horas, minutos), e mesmo libe- ração contínua pode ser feita com apropriadas concentrações de fator de crescimento de modo que a taxa de liberação substancialmente se oponha à taxa de depuração de tecido.

Por "substancial acumulação" ou "acumulação prejudicial" de fator de crescimento é pretendido obtenção de uma quantidade de fator de crescimento que é maior que a quantidade mínima terapeuticamente efetiva de fator de crescimento e capaz de produzir indesejáveis efeitos prejudiciais, que está tipicamente bem acima da quantidade terapêutica maximamente efetiva de fator de crescimento (isto é, maior que a quantidade teto efetiva de fator de crescimento) por um período de tempo. Por "liberação intermiten- te" é pretendida liberada descontínua. De acordo com a invenção, em uma modalidade preferida, um particular fator de crescimento é administrado quando seu nível em tecido alvo está declinando de modo a manter uma quantidade terapeuticamente efetiva do fator no tecido alvo. O fator de cres- cimento é infundido na população alvo por um período de tempo, tipicamen- te de cerca de 30 minutos a cerca de 12 horas, mais preferivelmente de cer- ca de 30 minutos a cerca de 6 horas, em cujo ponto liberação cessa. A du- ração de liberação será informada por um agente traçador em modalidades preferidas. Durante liberação, o nível de fator de crescimento no tecido alvo aumenta. Preferivelmente, cessação de liberação ocorre quando a dose te- rapêutica efetiva máxima (teto de dosagem terapêutica) é obtida em tecido alvo. Embora menos preferido, cessação de liberação pode ocorrer quando a dose terapêutica efetiva máxima foi ultrapassada. Preferivelmente, cessa- ção de liberação ocorre quando infundido é distribuído por todo o tecido al- vo, como pode ser monitorado com um agente traçante como aqui mostra- do. Preferivelmente, cessação de liberação ocorre enquanto o infundido permanece substancialmente confinado em tecido alvo. Seguindo cessação, mecanismos de depuração de tecido atuam para lentamente diminuir o nível de fator de crescimento no tecido alvo. Liberação é repetida quando o fator de crescimento em tecido alvo está declinando, preferivelmente enquanto uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento permane- ce em tecido alvo, mais preferivelmente quando o fator de crescimento está acima ou levemente acima de quantidade terapêutica efetiva mínima de fa- tor de crescimento. Embora menos preferido, liberação pode ser repetida quando o fator de crescimento está abaixo de quantidade efetiva terapêutica mínima de fator de crescimento. Em uma modalidade, uma dose terapeuti- camente efetiva não é mantida continuamente sem interrupção.

Em uma modalidade preferida, administração do fator de cres- cimento compreende um intervalo de cerca de 7 dias a cerca de 45 dias, mais preferivelmente de cerca de 14 dias a cerca de 45 dias, mais preferi- velmente de cerca de 17 dias a cerca de 35 dias, mais preferivelmente de cerca de 20 dias a cerca de 35 dias seguindo liberação do fator de cresci- mento, cujo intervalo é seguido por uma outra liberação do fator de cresci- mento. Em uma modalidade preferida, administração do fator de crescimen- to compreende dois ou mais intervalos.

Em uma outra modalidade, administração do fator de crescimen- to compreende intervalos de menos que cerca de 7 dias ou mais que cerca de 45 dias.

Nos presentes processos, fatores de crescimento são liberados localmente para uma população alvo de neurônios responsivos a fator de crescimento no SNC de mamífero através de infusão. Especialmente prefe- rido é o processo de CED. Por "CED" é pretendido infusão em uma taxa maior que cerca de 0,5 pL/minuto. Em uma modalidade preferida. Fator de crescimento é liberado por CED através de um cateter ou cânula apropriado, preferivelmente uma cânula isenta de refluxo de desenho de etapa. Em uma modalidade preferida, o processo de CED é realizado com uma cânula de desenho de etapa isenta de refluxo compatível com CED. Vide Krauze et al., J. Neurosurg., 103:923-929, 2005, aqui incorporado por referência em sua totali- dade. Vide também, publicação de pedido de patente U.S. 2007/0088295 A1 e 2006/0135945 A1, ambas as quais são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. O processo envolve posicionamento de ponta da cânula pelo menos bem próxima do tecido alvo. Após a cânula ser posicionada, ela é conectada a uma bomba que libera o fator de crescimento através da ponta de cânula para o tecido alvo. Um gradiente de pressão a partir da ponta da cânula é mantido durante infusão.

Por "próxima a" uma população alvo é pretendido dentro de uma distância efetiva da população alvo. Em particular, com relação ao posicio- namento de uma cânula em relação a tecido alvo, proximidade refere-se a uma distância tal que o infundido atingirá o tecido alvo. Na medida em que o meio altamente preferido de liberação de uma composição farmacêutica é CED, proximidade aqui na maioria dos exemplos refere-se a estando dentro de uma distância do tecido alvo que é atingida por CED de composição far- macêutica.

Em uma modalidade preferida, uma cânula isenta de refluxo de desenho de etapa é ligada com uma bomba que retira o fator de crescimen- to de um recipiente e produz suficiente pressão para fazer com que o fator de crescimento flua através de cateter para o tecido alvo em taxas controla- das. Qualquer taxa de fluxo apropriada pode ser usada de modo que a pressão intracranial seja mantida em apropriados níveis apropriados de mo- do a não danificar o tecido de cérebro. Mais de uma cânula simples podem ser usadas.

Penetração do fator de crescimento em tecido alvo é grande- mente facilitada por infusão de pressão positiva sobre um período de horas. Penetração é ainda aumentada através de uso de um agente de facilitação, tal como heparina de baixo peso molecular. Adicionalmente, a inclusão de um agente traçante, preferivelmente um magneto MRI, provê monitoração de tempo real de penetração em tecido por infundido, e informa a cessação de liberação.

Qualquer quantidade apropriada de fator de crescimento pode ser administrada desta maneira. Quantidades apropriadas são quantidades que são terapeuticamente efetivas, e assim capazes de provocarem uma resposta dos neurônios responsivos a fator de crescimento em um tecido alvo, sem causar uma superabundância de efeitos colaterais indesejáveis. Tipicamente, a quantidade de fator de crescimento estará entre cerca de 1 pg e cerca de 1000 pg, mais preferivelmente entre cerca de 1 pg e cerca de 500 pg, mais preferivelmente entre cerca de 1 pg e cerca de 250 pg, mais preferivelmente entre cerca de 1 pg e cerca de 100 pg. Em uma modalidade especialmente preferida, a quantidade de fator de crescimento está entre cerca de 10 pg e cerca de 100 pg. Em uma modalidade preferida, CED compreende uma taxa de infusão de entre cerca de 0,5 MLVminuto e cerca de 10 μL/minuto.

Em uma modalidade preferida, CED compreende uma taxa de infusão maior que cerca de 0,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 0,7 μL/ minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 1 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 1,2 μL / minuto, mais pre- ferivelmente maior que cerca de 1,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 1,7 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2 μΙ_ / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2,2 μL / minuto, mais pre- ferivelmente maior que cerca de 2,5 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 2,7 μL / minuto, mais preferivelmente maior que cerca de 3 pL / minuto, assim como preferivelmente menos que cerca de 25 μL / minuto, mais preferivelmente menos que 20 μL / minuto, mais preferivelmente me· nos que cerca de 15 μL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 12 μL/ minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 10 μL/ minuto.

Em uma modalidade preferida, CED compreende aumentos in- crementais em taxa de fluxo, referidos como "escalonado", durante libera- ção. Preferivelmente, o escalonamento compreende taxas de infusão de entre cerca de 0,5 μL / minuto e cerca de 10 uL/minuto.

Em uma modalidade preferida, escalonamento compreende ta- xas de infusão maiores que cerca de 0,5 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 0,7 μL / minuto, mas preferivelmente maiores que cer- ca de 1 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 1,2 μL / mi- nuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 1,5 μL / minuto, mais pre- ferivelmente maiores que cerca de 1,7 μL/ minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2 μL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,2 uL / minuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,5 μL / mi- nuto, mais preferivelmente maiores que cerca de 2,7 μL / minuto, mais pre- ferivelmente maiores que cerca de 3 pL / minuto, asssim como preferivel- mente menos que cerca de 25 pL / minuto, mais preferivelmente menos que 20 uL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 15 uL / minuto, mais preferivelmente menos que cerca de 12 μL / minuto, mais preferivel- mente menos que cerca de 10 uL/ minuto.

Para ainda ensinamento sobre o processo de CED, vide por e- xemplo, Saito et al., Exp. Neurol., 196:3891-389, 2005; Krauze et al., Exp. Neurol., 196:104-111, 2005; Krauze et al., Brain Res. Brain Res. Protocol., 16:20-26, 2005; Publicação de Pedido de Patente U.S. N2 2006/0073101; U.S. Patente N2 5.720.720, cada uma das quais é aqui incorporada por refe- rência em sua totalidade.

Os presentes processos de tratamento preferivelmente envol- vem uma ou mais determinações diagnosticas pré-operação para a presen- ça ou risco de um distúrbio de SNC. "Distúrbio de SNC" como aqui usado refere-se a distúrbios do SNC mamífero caracterizados pela morte e/ou dis- função de uma ou mais populações de neurônicos. Distúrbios de SNC incluem distúrbios crônicos, tais como doenças neurodegenerativas, por exemplo, mal de Alzheimer, assim como distúrbios agudos, como acidente vascular cerebral. Muitos biomarcadores associados com vários distúrbios de SNC são conhe- cidos. Por exemplo, vide Henley et al., Curr. Opin. Neurol., 18:698-705, 2005, aqui incorporado por referência em sua totalidade. A determinação diagnostica feita preferivelmente inclui neuroformação de imagem. Por e- xemplo, vide Mathis et al., Arch. Neurol., 62: 196-200, 2005, aqui incorpora- do por referência em sua totalidade. Em uma modalidade preferida, a de- terminação diagnostica envolve um teste genético.

Os processos preferivelmente também envolvem formação de imagem pré-operativa para definir estereotaticamente a localização da popu- lação de neurônios que será feita alvo.

Em uma modalidade altamente preferida, os processos adicio- nalmente compreendem formação de imagem durante administração de modo a monitorar-se posicionamento de cânula. Em uma modalidade, o processo compreende uso de um sistema de neuro - navegação, por exem- plo, vide publicação de pedido de patente U.S. 2002/0095081, aqui incorpo- rado por referência em sua totalidade. Em uma modalidade preferida, os processos adicionalmente compreendem neuro - formação de imagem para monitoração de distribuição de infundido.

Em um aspecto, a invenção provê processos para o tratamento de um distúrbio de SNC.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de mal de Alzheimer. Os processos compreendem administra- ção de NGF1 ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferi- velmente intermitentemente, a neurônios colinérgicos do cérebro anterior basal.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de mal de Alzheimer. Os processos compreendem administra- ção de GDNF, ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferi- velmente intermitentemente, a neurônios colinérgicos do cérebro anterior basal.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de mal de Parkinson. Os processos compreendem administra- ção de GDNF, ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferi- velmente intermitentemente, ao estriado e/ou cérebro médio.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de mal de Parkinson. Os processos compreendem administra- ção de VIP, ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferi- velmente intermitentemente, ao estriado e/ou cérebro médio.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de mal de Parkinson. Os processos compreendem administra- ção de PTN, ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferi- velmente intermitentemente, ao estriado e/ou cérebro médio.

Em uma modalidade preferida, a invenção provê processos para o tratamento de acidente vascular cerebral. Os processos compreendem administração de BMP, ou um seu fragmento ou variante ativo, localmente, e preferivelmente intermitentemente, ao lócus de SNC impactado pelo aci- dente vascular cerebral.

A Tabela 1 provê uma lista de fatores de crescimento que po- dem ser usados na presente invenção para produzirem os desejados efeitos em uma variedade de populações de neurônios alvos. Esta descrição é e- xemplar, e não é pretendida ser limitante.

Mais genericamente, a Tabela 2 provê uma lista de fatores de crescimento que são genericamente capazes de produzirem efeitos benéfi- cos, como sobrevivência, desenvolvimento de neurito e manutenção fenotí- pica, em particulares tipos de neurônios listados. Esta descrição é exemplar, e não pretendida ser limitante.

A dose de fator de crescimento liberada é determinada pelo par- ticular fator de crescimento, a densidade de tecido alvo, o volume de tecido alvo, e a taxa de depuração de tecido. Tipicamente, a quantidade de fator de crescimento estará entre cerca de 1 ug e cerca de 500 ug, mais preferi- velmente entre cerca de 1 ug e cerca de 250 ug, mais preferivelmente entre cerca de 1 ug e cerca de 100 ug. Em uma modalidade particularmente pre- ferida, a quantidade de fator de crescimento está entre cerca de 10 ug e cerca de 100 ug. Em uma modalidade preferida, seguindo um intervalo de cerca de 7 dias a cerca de 45 dias, mais preferivelmente de cerca de 14 dias a cerca de 45 dias, mais preferivelmente de cerca de 17 dias a cerca de 35 dias, mais preferivelmente de cerca de 20 dias a cerca de 35 dias, liberação, se requerido, é repetida em uma dose novamente pretendida manter uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento em tecido sem produção de acumulação nociva.

Em uma modalidade preferida, administração do fator de cres- cimento compreende dois ou mais tais intervalos.

Em uma modalidade preferida, a duração de um intervalo ocor- rendo posterior é mais longa que a duração de um intervalo ocorrendo inici- almente em um regime de administração compreendendo três ou mais eta- pas de liberação.

Em uma modalidade preferida, a dose de fator de crescimento dada em uma liberação inicial é maior que a dose de fator de crescimento dada em uma liberação posterior em um regime de administração compre- endendo duas ou mais etapas de liberação.

É ainda contemplado que o fator de crescimento seja adminis- trado com uma quantidade efetiva de um segundo agente terapêutico. Por exemplo, no tratamento de mal de Alzheimer, tais segundos agentes tera- pêuticos podem incluir: agonistas colinérgicos, particularmente aqueles es- pecíficos para o SNC e não para músculos periféricos, inibidores de colines- terase como cloridrato de tacrina, neurotrofinas como NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF), fator neurotrófico ciliar (CTNF), inibidores de formação de placa amilóide senil, inibidores de formação de PHF1 e indutores de síntese ou produção de fator neurotrófico endógeno.

A proteína fator de crescimento de acordo com esta invenção pode ser isolada ou gerada através de quaisquer meios conhecidos por a- queles versados na técnica.

Produtos de proteína de fator de crescimento ocorrendo natu- ralmente podem ser isolados a partir de preparações de célula neuronal mamífera, ou a partir de uma linha de célula mamífera secretando ou ex- pressando fator de crescimento. Por exemplo, publicação internacional PCT W093/06116, aqui incorporada por referência em sua totalidade, descreve o isolamento de GDNF a partir de células glioblastoma B49 de meio condicio- nado livre de soro. Produtos de proteína GDNF também podem ser quimi- camente sintetizados por meios conhecidos por aqueles versados na técni- ca. Produtos de proteína GDNF são preferivelmente produzidos via técnicas recombinantes porque elas são capazes de obterem quantidades de proteí- na comparativamente maiores em maior pureza. Produto de proteína GDNF recombinante inclui formas glicosiladas e não-glicosiladas da proteína, e proteína expressa em sistemas de células de bactérias, mamíferos ou inse- tos.

Em geral, técnicas recombinantes envolvem isolamento de ge- nes responsáveis pela codificação de fator de crescimento, clonagem de gene em apropriados vetores e tipos de células, modificação de gene se necessário para codificar uma desejada variante, e expressão de gene de modo a produzir o produto proteína fator de crescimento. Alternativamente, uma seqüência de nucleotídeos codificando o desejado produto proteína fator de crescimento pode ser sintetizado quimicamente. É contemplado que produto proteína fator de crescimento pode ser expresso usando seqüências de nucleotídeos que diferem em utilização de códon devido às degeneres- cências do código genético ou variações alélicas.

Em algumas modalidades aqui, fator de crescimento é adminis- trado na forma de um ácido nucléico codificante que pode ser expresso em uma célula transduzida. Em uma modalidade, um neuroterapêutico de alto peso molecular é administrado a um paciente, onde o neuroterapêutico de alto peso molecular compreende um ácido nucléico codificando um fator de crescimento, onde o ácido nucléico é expresso em uma célula de SNC transduzida do paciente e o fator de crescimento codificado é produzido. Assim, o fator de crescimento é produzido in situ. Ácidos nucléicos codifi- cando proteínas de fator de crescimento da invenção são bem-conhecidos na técnica.

Em uma modalidade preferida, o ácido nucléico codificando um fator de crescimento é regulado in situ. Em uma modalidade, uma composi- ção farmacêutica compreendendo um vetor compreendendo um ácido nu- cléico codificando um fator de crescimento sob o controle de um promotor regulável é administrada. Será apreciado que expressão regulável de um ácido nucléico codificando um fator de crescimento provê liberação intermi- tente de fator de crescimento.

Uma composição infusata terapêutica é um volume de composi- ção farmacêutica a ser liberado por CED em uma administração simples. O volume de infusato será grandemente determinado pelo tecido alvo e seu volume. Volumes típicos estarão entre cerca de 10μΙ_ e cerca de 10 cm3, embora volumes maiores e menores possam ser usados.

O termo "tecido alvo" refere-se a um alvo físico (usualmente a- natômico) no SNC compreendendo uma população de neurônios de interes-se.

Um agente traçante é preferivelmente detectável por formação de imagem de ressonância magnética (MRI) ou tomografia computadorizada de raios χ. A distribuição de agente traçante é monitorada e usada como uma medida indireta da distribuição de fator de crescimento ou neurotera- pêutico de alto peso molecular. Esta monitoração é feita para verificar que o fator de crescimento está atingindo tecido alvo e obtendo ali uma concentra- ção efetiva para detectar indesejada liberação de infusato para tecido não- alvo.

Em uma modalidade preferida, um agente traçante é separado do fator de crescimento. O agente traçante é distribuído em uma maneira que correlaciona-se com aquela do fator de crescimento e assim é um indi- cador indireto de distribuição de fator de crescimento.

Em uma modalidade preferida, o agente traçante e o fator de crescimento estão, cada um, na forma de composições carreadoras, o que confere características de distribuição altamente similares.

Em uma modalidade altamente preferida, o agente traçante e o fator de crescimento estão na forma de composições lipossomais. Agentes traçantes baseados em Iipossomas são indicadores indiretos altamente pre- cisos da distribuição de neuroterapêuticos de alto peso molecular baseados em lipossomas.

O ato de "monitoração" refere-se a obtenção de imagens seriais do agente traçante sobre o tempo. Através de monitoração de distribuição do agente traçante, a localização e volume de distribuição do neuroterapêu- tico de alto peso molecular dentro de tecido pode ser determinada em qual- quer momento durante o processo de infusão. Imagens seriais podem ser obtidas em qualquer taxa até a taxa máxima que o instrumento de formação de imagem pode obter imagens. Por exemplo, imagens seriais podem ser obtidas em intervalos variando de uns poucos milissegundos a horas, mas tipicamente em intervalos de minutos, como intervalos de 1, 2, 5, 10, 15, 20 ou 30 minutos. O intervalo entre imagens seriais pode ser variado durante infusão. Em alguns exemplos, pode ser desejável obter imagens em interva- los curtos (por exemplo, cada 5, 10, ou 15 segundos) no início do processo de infusão para detectar contra fluxo ao longo da cânula, ou para verificar que o infusato está entrando no desejado tecido alvo. Uma vez a liberação para o sítio adequado seja confirmada, o intervalo entre imagens pode ser aumentado, e as imagens usadas para seguir o processo de infusão.

Em um aspecto, a invenção provê processos de tratamento que compreendem liberação de uma composição farmacêutica da invenção a- través de CED, onde a composição farmacêutica compreende um agente traçante, monitoração de distribuição do agente traçante na medida em que ele se move-se através de SNC, e cessando liberação da composição far- macêutica quando o neuroterapêutico de alto peso molecular está distribuí- do em um volume predeterminado dentro do SNC. O movimento do agente traçante através de tecido sólido pode ser monitorado através da técnica de formação de imagem tal como formação de imagem de ressonância magné- tica (MRI) ou tomografia computadorizada de rios-x (CT). O agente traçante tem uma mobilidade em tecido de SNC que é substancialmente similar ao agente terapêutico, e liberação é cessada quando o agente traçante é ob- servado atingir uma desejada região ou obter um desejado volume de distri- buição, ou atingir ou aproximadamente atingir ou exceder os limites do teci- do alvo.

O volume predeterminado pode corresponder a uma particular região do cérebro. O volume predeterminado de distribuição é "substancial- mente similar" ao volume de distribuição observado para um agente traçante que está sendo monitorado para seguir a infusão. "Substancialmente similar" refere-se a uma diferença em volume de menos que 20%. Mais preferivel- mente, a diferença em volume é menos que 15%, mais preferivelmente me- nos que 10%, mais preferivelmente menos que 5%. Através de monitoração de distribuição de agente traçador, infusão pode ser cessada quando o pre- determinado volume de distribuição seja atingido.

Volume de distribuição pode ser determinado, por exemplo, a- través do uso de software de formação de imagem que é padrão na técnica, por exemplo, iFLOW. Vide também, por exemplo, Krautze et al., Brain Res. Protocols, 16:20-26, 2005; e Saito et al., Exp. Neurol., 196:3891-389, 2005, aqui incorporados por referência em sua totalidade. Variantes de Fator de Crescimento

O termo "variante de fator de crescimento" como aqui usado in- clui polipeptídeos nos quais aminoácidos foram suprimidos de ("variantes de supressão"), inseridos em ("variantes de adição"), ou substituídos por ("vari- antes de substituição"), resíduos dentro de seqüência de aminoácidos de fator de crescimento ocorrendo naturalmente. Tais variantes são preparadas através de introdução de apropriadas alterações de nucleotídeos no ADN codificando o polipeptídeo ou através de síntese química in vitro do deseja- do polipeptídeo. Será apreciado por aqueles versados na técnica que muitas combinações de supressões, inserções, e substituições podem ser feitas contanto que a molécula final seja biologicamente ativa.

O termo "biologicamente ativa" como aqui usado significa que o fragmento ou variante demonstra propriedades similares, mas não necessa- riamente todas as mesmas propriedades, e não necessariamente no mesmo grau, como o fator de crescimento sobre o qual ele é baseado.

Técnicas de mutagênese para a substituição, inserção ou su- pressão de um ou mais selecionados resíduos de aminoácidos são bem co- nhecidas por aqueles versados na técnica (por exemplo, patente U.S. 4.518.584, a descrição da qual é aqui incorporada por referência em sua totalidade). Existem duas principais variáveis na construção de variantes: a localização do sítio de mutação e a natureza da mutação. No desenho de variantes de fator de crescimento, a seleção do sítio de mutação e natureza da mutação dependerão da característica(s) de fator de crescimento a ser modificada. Os sítios para mutação podem ser individualmente modificados ou em séries, por exemplo, através de (1) substituição primeiro com esco- lhas conservativas de aminoácidos e então com seleções mais radicais de- pendendo dos resultados obtidos (2) supressão de resíduo de aminoácido alvo, ou (3) inserção de resíduos de aminoácidos adjacentes ao sítio locali- zado. Mudanças conservativas em 1 a 20 aminoácidos são preferidas. Uma vez a seqüência de aminoácidos do desejado produto proteína fator de crescimento seja determinada, a seqüência de ácidos nucléicos a ser usada na expressão da proteína é facilmente determinada. Variantes de supressão terminal-N e terminal-C também podem ser geradas por enzimas proteolíticas. Para variantes de supressão de fator de crescimento, supres- sões genericamente variam de cerca de 1 a 30 resíduos, mais usualmente de cerca de 1 a 10 resíduos, e tipicamente de cerca de 1 a 5 resíduos contí- guos. Supressões terminal-N, terminal-C e intra-seqüência interna são con- templadas. Supressões podem ser introduzidas em regiões de baixa homo- Iogia com outros membros de família para modificar a atividade de um parti- cular fator de crescimento. Supressões em áreas de substancial homologia com outras seqüências de família serão mais prováveis de modificarem ati- vidade biológica do particular fator de crescimento mais significantemente. O número de supressões consecutivas será selecionado de modo a preservar a estrutura terciária do produto proteína fator de crescimento no domínio afetacío.

Exemplos de variantes incluem aquelas mostradas nas patentes U.S. 6.723.701; 6.468.970; 6.440.702; 5.741.778; 5.731.284; 5.830.857; 5.733.875, cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

Para variantes de adição de fator de crescimento, adições de seqüência de aminoácidos tipicamente incluem fusões terminais N e/ou C variando em comprimento de um resíduo para polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, assim como adições de intra- seqüência interna de resí- duos de aminoácidos simples ou múltiplos. Adições internas podem variar genericamente de cerca de 1 a 10 resíduos, mais tipicamente de cerca de 1 a 5 resíduos, e usualmente de cerca de 1 a 3 resíduos de aminoácidos. E- xemplos de variantes de adição terminal-N incluem fator de crescimento com um resíduo metionila terminal-N (um artefato da expressão direta de GDNF em cultura de célula recombinante bacteriana) e fusão de uma se- qüência sinal terminal-N heteróloga para o terminus-N de fator de cresci- mento para facilitar a secreção de fator de crescimento maduro a partir de células hospedeiras recombinantes. Tais seqüências sinais genericamente serão obtidas de, e assim serão homólogas às, espécies de células hospe- deiras pretendidas. Adições também podem incluir seqüências de aminoáci- dos derivadas da seqüência de outros fatores de crescimento. Variantes de substituição de fator de crescimento têm pelo me- nos um resíduo de aminoácido da seqüência de aminoácidos de fator de crescimento removido e um diferente resíduo inserido em seu lugar. Tais variantes de substituição incluem variantes alélicas, que são caracterizadas por mudanças de seqüência de nucleotídeos ocorrendo naturalmente na população de espécies que podem ou não resultar em uma mudança de aminoácidos.

Mutações específicas da seqüência de aminoácidos de fator de crescimento podem envolver modificações para um sítio de glicosilação (por exemplo, serina, treonina, ou asparagina). A ausência de glicosilação ou glicosilação somente parcial resulta de substituição ou supressão de amino- ácido em qualquer sítio de reconhecimento de glicosilação ligado a aspara- gina ou em qualquer sítio da molécula que seja modificado por adição de um carboidrato ligado-O. Um sítio de reconhecimento de glicosilação ligado a asparagina compreende uma seqüência de tripeptídeo que é especificamen- te reconhecida por apropriadas enzimas de glicosilação celular. Estas se- qüências de tripeptídeos são tanto Asn-Xaa-Thr como Asn-Xaa-Ser, onde Xaa pode ser qualquer aminoácido que não Pro. Uma variedade de substitu- ições ou supressões de aminoácidos em uma ou ambas da primeira ou ter- ceira posições de aminoácidos de um sítio de reconhecimento de glicosila- ção (e/ou supressão de aminoácido na segunda posição) resultam em não- glicosilação na seqüência de tripeptídeo modificada. Assim, a expressão de apropriadas seqüências de nucleotídeos alteradas produz variantes que não são glicosiladas naquele sítio. Alternativamente, a seqüência de aminoáci- dos de fator de crescimento pode ser modificada para adicionar sítios de glicosilação.

Um processo para identificação de resíduos ou regiões de ami- noácidos de fator de crescimento para mutagênese é chamado "mutagêne- se de exploração de alanina" como descrito por Cunningham and Wells (Science, 244:1081-1085, 1989), aqui incorporado por referência em sua totalidade. Neste processo, um resíduo ou grupo de aminoácido de resíduos alvos são identificados (por exemplo, resíduos carregados como Arg, Asp, His, Lys e Glu) e substituídos por um aminoácido neutro ou carregado nega- tivamente (mais preferível alanina ou polialanina) para afetar a interação dos aminoácidos com o ambiente aquoso circundante na ou fora da célula. A- queles domínios demonstrando sensitividade funcional para as substituições então são refinados através de introdução de resíduos adicionais ou alter- nados nos sítios de substituição. Assim, o sítio alvo para introdução de uma variação de seqüência de aminoácido é determinado, mutagênese randômi- ca ou de exploração de alanina é conduzida sobre o correspondente códon alvo ou região da seqüência de ADN, e as variantes de fator de crescimento expressas são selecionadas para a ótima combinação otimizada de deseja- da atividade e grau de atividade.

Os sítios de maior interesse para mutagênese de substituição incluem sítios onde os aminoácidos encontrados em um particular fator de crescimento de várias espécies são substancialmente diferentes em termos de volume de cadeia lateral, carga, e/ou hidrofobicidade. Outros sítios de interesse são aqueles nos quais particulares resíduos de proteínas relacio- nadas a fator de crescimento, obtidos de várias espécies, são idênticos. Tais posições são genericamente importantes para a atividade biológica de uma proteína. Inicialmente, estes sítios são substituídos em uma maneira relati- vãmente conservativa. Tais substituições conservativas são mostradas na Tabela 3 sob o título de substituições exemplares. Se tais substituições re- sultam em uma mudança em atividade biológica, então mudanças mais substanciais (substituições exemplares) são introduzidas, e/ou outras adi- ções ou supressões podem ser feitas, e os resultantes produtos seleciona- dos para atividade.

Modificações conservativas para a seqüência de aminoácidos (e correspondentes modificações para as seqüências de ácidos nucléicos codi- ficantes) são esperadas produzirem produtos proteína fator de crescimento tendo características funcionais e químicas similares àquelas de fator de crescimento natural correlato. Em contraste, substanciais modificações nas características funcionais e/ou químicas de produtos proteína de fator de crescimento podem ser realizadas através de seleção de substituições que diferem significantemente em seu efeito sobre manutenção de (a) a estrutu- ra da cadeia principal de polipeptídeo na área da substituição, por exemplo, como uma conformação de folha ou helicoidal, (b) a carga ou hidrofobicida- de da molécula no sítio alvo, ou (c) o volume da cadeia lateral. Resíduos ocorrendo naturalmente são divididos em grupos baseados em propriedades comuns de cadeia lateral:

(1) hidrofóbicos: norleucina, Met, Ala, Vai, Leu, lie;

(2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr;

(3) ácidos: Asp, Glu;

(4) básicos: Asn1GIn1 His, Lys, Arg;

(5) resíduos que influenciam orientação de cadeia: Gly, Pro; e

(6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.

Substituições não-conservativas podem envolver a troca de um membro de uma destas classes por outro. Tais resíduos substituídos podem ser introduzidos em regiões da proteína de fator de crescimento que são homólogas com outras proteínas de fator de crescimento, ou nas regiões não-homólogas da molécula.

Derivados de Fator de Crescimento

Derivados modificados quimicamente de fator de crescimento ou variantes de fator de crescimento podem ser preparados por aqueles versa- dos na técnica dadas as presentes descrições. As metades químicas mais apropriadas para derivação incluem polímeros solúveis em água. Um polí- mero solúvel em água é desejável porque a proteína à qual ele está ligado não precipita em um ambiente aquoso, tal como um ambiente fisiológico. Preferivelmente, o polímero será farmaceuticamente aceitável para a prepa- ração de um produto ou composição terapêutica. Aqueles versados na téc- nica serão capazes de selecionar o desejado polímero baseado em conside- rações tais como se o conjugado polímero / proteína será usado terapeuti- camente, e se assim, a desejada dosagem, tempo de circulação, resistência a proteólise, e outras considerações. A eficácia da derivação pode ser de- terminada através de administração do derivado, na forma desejada (isto é, através de bomba osmótica, ou, mais preferivelmente, através de injeção ou infusão, ou, ainda formulado para oral, pulmonar ou outras rotas de libera- ção), e determinando sua eficácia.

Apropriados polímeros solúveis em água incluem, mas não são limitados a, polietileno glicol, coipolímeros de etileno glicol / propileno glicol, carboxi metil celulose, dextran, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona, poli- 1,3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno / anidrido maléico, poliaminoácidos (tanto homopolímeros como copolímeros randômicos), e dextran ou poli(n-vinil pirrolidona) polietileno glicol, homopolímeros de propi- leno glicol, copolímeros de oxido de polipropileno / óxido de etileno, polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico, e suas misturas. Polietileno glicol propionaldeído pode ter vantagens em fabricação devido sua estabilidade em água.

O polímero pode ser de qualquer peso molecular, e pode ser ramificado ou não. Para polietileno glicol, o peso molecular preferido está entre cerca de 2 kDa e cerca de 100 kDa para facilidade de manuseio e fa- bricação (o termo "cerca" indicando que em preparações de polietileno gli- col, algumas moléculas pesarão mais, algumas menos, que o peso molecu- lar estabelecido). Outros tamanhos podem ser usados, dependendo do de- sejado perfil terapêutico (por exemplo, a duração de liberação sustentada desejada, os efeitos, se qualquer sobre atividade biológica, a facilidade em manuseio, o grau ou falta de antigenicidade e outros efeitos conhecidos de polietileno glicol sobre uma proteína terapêutica ou variante).

O número de moléculas de polímero assim ligadas pode variar, e aqueles versados na técnica serão capazes de verificar o efeito sobre fun- ção. Pode-se monoderivar, ou se pode prover uma di-, tri-, tetra- ou alguma combinação de derivação, com as mesmas ou diferentes metades químicas (por exemplo, polímeros, tais como diferentes pesos de polietileno glicóis). A proporção de moléculas de polímero para moléculas de proteína (ou peptí- deo) irá variar, assim como suas concentrações na mistura de reação. Em geral, a razão otimizada (em termos de eficiência de reação em que não há excesso de proteína não-reagido ou polímero) será determinada por fatores tais como o desejado grau de derivação (por exemplo, mono-, di-, tri-, etc.), o peso molecular do polímero selecionado, se o polímero é ramificado ou não-ramificado, e as condições de reação.

As moléculas de polietileno glicol (ou outras metades químicas) devem ser ligadas à proteína com consideração de efeitos sobre domínios funcionais ou antigênicos da proteína. Existe um número de processos de ligação disponíveis para aqueles versados na técnica. Vide, por exemplo, EP 0 401 384, a descrição da qual é aqui incorporada por referência (aco- plamento PEG a G-CSF), vide também Malik et al., Exp. Hematol. 20:1028- 1035 (1992) (reportando pegilação de GM-CSF usando cloreto de tresila).

Por exemplo, polietileno glicol pode ser ligado covalentemente através de resíduos de aminoácidos via um grupo reativo, tal como, um grupo amino ou carboxila livre. Grupos reativos são aqueles aos quais uma molécula de po- lietileno glicol ativada pode ser ligada. Os resíduos de aminoácidos tendo um grupo amino livre podem incluir resíduos Iisina e o resíduo aminoácido terminal-N. Aqueles tendo um grupo carboxila livre podem incluir resíduos de ácido aspártico, resíduos de ácido glutâmico, e o resíduo de aminoácido terminal-C. Grupos sulfidrila também podem ser usados como um grupo rea- tivo para ligação de molécula(s) de polietileno glicol. Para propósitos tera- pêuticos, ligação em grupo amino, tal como ligação no terminus-N ou grupo lisina é preferida. Ligação em resíduos importantes para ligação de receptor deve ser evitada se ligação de receptor é desejada.

Pode-se desejar especificamente uma proteína modificada qui- micamente em terminal-N. Usando polietileno glicol como uma ilustração das presentes composições, se pode selecionar a partir de uma variedade de moléculas de polietileno glicol (através de peso molecular, ramificação, etc.), a proporção de moléculas de polietileno glicol para moléculas de prote- ína (ou peptídeo) na mistura de reação, o tipo de reação de pegilação a ser formada, e o processo de obtenção de proteína pegilada em terminal-N se- lecionada. O processo de obtenção de preparação pegilada em terminal-N (isto é, separação desta metade de outras metades monopegiladas se ne- cessário) pode ser através de purificação do material pegilado em terminal-N a partir de uma população de moléculas de proteína pegiladas. Modificação química em terminal-N pode ser realizada através de alquilação redutiva com explora reatividade diferencial de diferentes tipos de grupos amino pri- mários (lisina versus o terminal-N) disponível para derivação em uma parti- cular proteína. Sob as apropriadas condições de reação, derivação substan- cialmente seletiva da proteína no terminus-N com um polímero contendo grupo carboxila é obtida. Por exemplo, pode-se pegilar seletivamente o ter- minal-N de proteína através de modalidade de reação em um pH que permi- ta tirar-se vantagem das diferenças de pKa entre o grupo e-amino dos resí- duos de lisina e aquele do grupo a-amino do resíduo terminal-N da proteína. Através de derivação seletiva, ligação de um polímero solúvel em água a uma proteína é controlada: a conjugação com o polímero ocorre predomi- nantemente no terminus-N da proteína e nenhuma modificação significante de outros grupos reativos, tais como os grupos amino de cadeia lateral de lisina, ocorre. Usando alquilação redutiva, o polímero solúvel em água pode ser do tipo descrito acima, e deve ter um aldeído reativo simples para aco- plamento à proteína. Polietileno glicol propionaldeído, contendo um aldeído reativo simples, pode ser usado.

A presente invenção contempla uso de derivados que são fator de crescimento expresso em procariote, ou suas variantes, ligados a uma molécula de polietileno glicol, assim como uso de fator de crescimento, ou suas variantes, ligado a uma ou mais moléculas de polietileno glicol via uma ligação acila ou alquila.

Pegilação pode ser realizada através de qualquer uma das rea- ções de pegilação conhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Focus on Growth Factors, 3(2):4-10 (1992); EP 0 154 316, a descrição da qual é aqui incorporada por referência em sua totalidade; EP 0 401 384, a descrição da qual é aqui incorporada por referência em sua totalidade; e as outras publi- cações aqui citadas que se relacionam a pegilação, as descrições das quais são aqui incorporadas por referência em suas totalidades. A pegilação pode ser realizada via uma reação de acilação ou uma reação de alquilação com uma molécula de polietileno glicol reativa (ou um polímero solúvel em água reativo análogo). Pegilação por acilação genericamente envolve reação de um derivado de éster ativo de polietileno glicol (PEG) com o fator de crescimen- to ou variante. Qualquer molécula de PEG reativa conhecida ou subseqüen- temente descoberta pode ser usada para realizar a pegilação de proteína de fator de crescimento ou variante. Um éster de PEG ativado preferido é PEG esterificado a N-hidroxi succinimida ("NITS"). Como aqui usado, "acilação" é contemplada incluir sem limitação os seguintes tipos de ligações entre a pro- teína terapêutica e um polímero solúvel em água tal como PEG: amida, car- bamato, uretano, e similares. Vide Bioconjugate Chem., 5:133-140 (1994), aqui incorporado por referência em sua totalidade. Condições de reação po- dem ser selecionadas a partir de qualquer uma daquelas conhecidas na técnica de pegilação ou aquelas subseqüentemente desenvolvidas, mas devem evitar condições tais como temperatura, solvente, e pH que possam inativar o fator de crescimento ou variante a ser modificada.

Pegilação através de acilação genericamente resultará em uma proteína de fator de crescimento polipegilada ou variante. Preferivelmente, a ligação conectando será uma amida. Também preferivelmente, o resultante produto será substancialmente somente (por exemplo, > 95%) mono-, di- ou tripegilado. Entretanto, algumas espécies com maiores graus de pegilação podem ser formadas em quantidades dependendo das específicas condi- ções de reação usadas. Se desejado, espécies pegiladas mais purificadas podem ser separadas da mistura, particularmente espécies não-reagidas, através de técnicas de purificação padrões, incluindo, entre outras, diálise, crescimento de cristais, ultrafiltração, cromatografia de troca de íons, croma- tografia de filtração com gel e eletroforese.

Pegilação por alquilação genericamente envolve reação de um derivado aldeído terminal de PEG com a proteína de fator de crescimento ou variante na presença de um agente redutor. Pegilação por alquilação tam- bém pode resultar em proteína ou variante de fator de crescimento polipegi- lado. Em adição, pode-se manipular as condições de reação para favorecer pegilação substancialmente somente no grupo a-amino do terminus-N da proteína ou variante de fator de crescimento (isto é, uma proteína monopegi- lada). Em qualquer caso de monopegilação ou polipegilação, os grupos PEG são preferivelmente ligados à proteína via um grupo --CH2--NH--. Com parti- cular referência ao grupo --CH2--, este tipo de ligação é aqui referida como uma ligação "alquila".

Derivação via alquilação redutiva para produzir um produto mo· nopegilado explora reatividade diferencial de diferentes tipos de grupos ami- no primários (lisina versus o terminal-N) disponíveis para derivação. A rea- ção é realizada em um pH que permite tirar-se vantagem das diferenças de pKa entre os grupos e-amino dos resíduos lisina e aquele do grupo a-amino do resíduo terminal-N da proteína. Através de tal derivação seletiva, ligação de um polímero solúvel em água que contém um grupo reativo tal como um aldeído, a uma proteína é controlada: a conjugação com o polímero ocorre predominantemente no terminus-N da proteína e nenhuma modificação sig- nificante dos grupos reativos, tais como os grupos amino de cadeia lateral de lisina, ocorre. Em um aspecto importante, a presente invenção contempla uso de uma preparação substancialmente homogênea de moléculas de con- jugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento (significando proteína ou variante de fator de crescimento à qual uma molé- cula de polímero foi ligada substancialmente somente (isto é, >95%) em uma localização única). Mais especificamente, se polietileno glicol é usado, a presente invenção também abrange o uso de proteína ou variante de fator de crescimento pegilada carecendo possivelmente de grupos de ligação an- tigênicos, e tendo a molécula de polietileno glicol diretamente acoplada à proteína ou variante de fator de crescimento.

Assim, produtos proteína de fator de crescimento presentemen- te preferidos de acordo com a presente invenção são proteínas ou variantes de fator de crescimento pegiladas, onde o grupo(s) PEG é (são) ligado via grupos acila ou alquila. Como discutido acima, tais produtos podem ser mo- nopegilados ou polipegilados (por exemplo, contendo 2-6, e preferivelmente 2-5, grupos PEG). Os grupos PEG são genericamente ligados à proteína nos grupos a- ou e-amino de aminoácidos, mas também é contemplado que os grupos PEG podem ser ligados a qualquer grupo amino ligado à proteína, que seja suficientemente reativo para tornar-se ligado ao grupo PEG sob apropriadas condições de reação.

As moléculas de polímero usadas em ambas abordagens de acilação e alquilação podem ser selecionadas de entre polímeros solúveis em água como descrito acima. O polímero selecionado deve ser modificado para ter um único grupo reativo, tal como um éster ativo para acilação ou um aldeído para alquilação, preferivelmente, de modo que o grau de polimeriza- ção pode ser controlado como provido nos presentes processos. Um aldeído PEG reativo exemplar é um polietileno glicol propionaldeído, que é estável em água, ou seus derivados mono C1-C10 alcóxi ou arilóxi (vide, patente U.S. 5.252.714, aqui incorporada por referência em sua totalidade). O polí- mero pode ser ramificado ou não. Para as reações de acilação, o políme- ro(s) selecionado deve ter um único grupo éster reativo. Para a presente alquilação redutiva, o polímero(s) selecionado deve ter um único grupo alde- ido reativo. Genericamente, o polímero solúvel em água não será seleciona- do de resíduos glicosila ocorrendo naturalmente uma vez que estes são u- sualmente fabricados mais convenientemente por sistemas de expressão recombinante mamíferos. O polímero pode ser de qualquer peso molecular, e pode ser ramificado ou não.

Um polímero solúvel em água particularmente preferido para uso aqui é polietileno glicol. Como aqui usado, polietileno glicol é pretendido abranger qualquer uma das formas de PEG que foram usadas para derivar outras proteínas, tal como mono-(C1-C10) alcóxi- ou arilóxi-polietileno glicol.

Em geral, derivação química pode ser realizada sob qualquer condição apropriada para reagir uma substância biologicamente ativa com uma molécula de polímero ativado. Processos para preparação de proteína ou variante de fator de crescimento pegilada genericamente compreenderão as etapas de (a) reação de uma proteína ou variante de fator de crescimento com polietileno glicol (tal como um éster reativo ou derivado de aldeído de PEG) sob condições pelo que a proteína se torna ligada a um ou mais gru- pos PEG, e (b) obtenção de produto(s) de reação. Em geral, as condições de reação otimizadas para as reações de acilação serão determinadas ca- so-a-caso baseado em parâmetros conhecidos e o desejado resultado. Por exemplo, quanto maior a razão de PEG : proteína, maior a porcentagem de produto polipegilado.

Alquilação redutiva para produzir uma população substancial- mente homogênea de moléculas de conjugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento genericamente compreenderá as eta- pas de: (a) reação de uma proteína ou variante de fator de crescimento com uma molécula de PEG reativa sob condições de alquilação redutiva, em um pH apropriado para permitir seletiva modificação do grupo a-amino no termi- nus amino da dita proteína ou variante de fator de crescimento; e (b) obten- ção de produto(s) de reação.

Para uma população substancialmente homogênea de molécu- las de conjugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de cres- cimento, as condições de reação de alquilação redutiva são aquelas que permitem a ligação seletiva da metade polímero solúvel em água ao termi- nus-N de proteína ou variante de fator de crescimento. Tais condições de reação são genericamente providas por diferenças de pKa entre os grupos amino de Iisina e o grupo a-amino no terminus-N (o pKa sendo o pH no qual 50% dos grupos amino são protonados e 50% não). O pH também afeta a razão de polímero para proteína a ser usada. Em geral, se o pH é menor, um maior excesso de polímero para proteína será desejado (isto é, quanto menos reativo o grupo a-amino de terminal-N, mais polímero necessário pa- ra obtenção de condições otimizadas). Se o pH é muito alto, a razão de po- límero : proteína não precisa ser tão grande (isto é, grupos mais reativos são disponíveis, assim menos moléculas são necessárias). Para os propósitos da presente invenção, o pH genericamente cairá dentro de faixa de 3-9, pre- ferivelmente 3-6.

Uma outra consideração importante é o peso molecular do polí- mero. Em geral, quanto maior o peso molecular do polímero, menos molécu- las de polímero podem ser ligadas à proteína. Similarmente, ramificação do polímero deve ser levada em conta quando otimizando estes parâmetros. Genericamente, quanto maior o peso molecular (ou mais ramificações) mai- or a razão de polímero : proteína. Em geral, para as reações de pegilação aqui contempladas, o peso molecular médio preferido é de cerca de 2 kDa a cerca de 100 kDa. O peso molecular médio preferido é cerca de 5 kDa a cerca de 50 kDa, particularmente preferivelmente cerca de 12 kDa a cerca de 25 kDa. A razão de polímero solúvel em água para proteína ou variante GDNF genericamente variará de 1:1 a 100:1, preferivelmente (para polipegi- lação) 1:1 a 20:1 e (para monopegilação) 1:1 a 5:1.

Usando as condições indicadas acima, alquilação redutiva pro- verá ligação seletiva do polímero a qualquer proteína ou variante de fator de crescimento tendo um grupo a-amino no terminus amino, e provê uma pre- paração substancialmente homogênea de conjugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento. O termo "conjugado de mo- nopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento é aqui usado para significar uma composição compreendida por uma molécula de políme- ro simples ligada a uma molécula de proteína de fator de crescimento ou proteína variante de fator de crescimento. O conjugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento preferivelmente terá uma mo- lécula de polímero localizada no terminus-N, mas não sobre grupos laterais amino de lisina. A preparação preferivelmente será maior que 90% conjuga- do de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento, e mais preferivelmente maior que 95% de conjugado de monopolímero / proteína (ou variante) de fator de crescimento, com o restante de moléculas observá- veis sendo não-reagidas (isto é, proteína carecendo de metade polímero).

Para a presente alquilação redutiva, o agente redutor deve ser estável em solução aquosa e preferivelmente ser capaz de reduzir somente a base de Schiff formada no processo inicial de alquilação redutiva. Preferi- dos agentes redutores podem ser selecionados de boroidreto de sódio, da- no boroidreto de sódio, dimetil amina borano, trimetil amina borano e piridino borano. Um agente redutor particularmente preferido é ciano boroidreto de sódio. Outros parâmetros de reação, como solvente, tempos de reação, temperaturas, etc., e meios de purificação de produtos, podem ser determi- nados caso-a-caso baseado na informação publicada com relação à deriva- ção de proteínas com polímeros solúveis em água (vide as publicações aqui citadas).

Composições Farmacêuticas de Fator de Crescimento

Composições farmacêuticas de fator de crescimento tipicamente incluem uma quantidade terapeuticamente efetiva de um produto proteína de fator de crescimento em mistura com um ou mais materiais de formula- ção farmacêutica e fisiologicamente aceitáveis. Apropriados materiais de formulação incluem, mas não são limitados a, antioxidantes, conservantes, corantes, agentes de diluição, agentes emulsificantes, agentes de suspen- são, solventes, materiais de enchimento, agente de volume, tampão, veícu- los de liberação, diluentes, e excipientes. Por exemplo, um veículo apropria- do pode incluir água, solução salina fisiológica, ou CSF artificial, possivel- mente suplementado com outros materiais. Solução salina tamponada neu- tra ou solução salina misturada com albumina de soro ainda são veículos exemplares.

Uma vez a composição terapêutica tenha sido formulada, ela pode ser estocada em frascos estéreis como uma solução, suspensão, gel, emulsão, sólido, ou pulverizado desidratado ou liofilizado. Tais formulações podem ser estocadas em uma forma pronta para uso ou em uma forma, por exemplo, liofilizada, requerendo reconstituição antes de administração.

A formulação farmacêutica otimizada será determinada por a- queles versados na técnica. Vide, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) páginas 1435-1712, a descrição do qual é aqui incorporada por referência. O regime de dosagem final envolvido em um processo para tratamento de condições descritas acima será determinado pelo médico atendente, considerando vá- rios fatores que modificam a ação de fármacos, por exemplo, a idade, con- dição, peso de corpo, sexo e dieta do paciente, a severidade de qualquer infecção, tempo de administração e outros fatores clínicos. Quando estudos são conduzidos, ainda informação surgirá com relação a apropriados níveis de dosagem para o tratamento de várias doenças e condições.

A composição farmacêutica tipicamente pode incluir uma quan- tidade efetiva do respectivo fator de crescimento em combinação com um carreador farmaceuticamente aceitável e, em adição, pode incluir outros a- gentes medicinais, agentes farmacêuticos, carreadores, diluentes, etc. Por "farmaceuticamente aceitável" é pretendido um material que não é biologi- camente ou de outro modo indesejável, isto é, o material pode ser adminis- trado a um indivíduo junto com o agente selecionado sem causar quaisquer efeitos biológicos indesejáveis ou interação em uma maneira nociva com qualquer um dos outros componentes da composição farmacêutica na qual está contido.

Em uma modalidade preferida, fator de crescimento é selecio- nado do grupo consistindo em NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, NT-6, GDNF, CNTF, LIF, IGF-1, b-FGF, neurturina, persefina, artemina, TGFa, TGFb, IGF-2, PDGF, EGF, cardiotropina, EGF, IGF, VEGF, Sonic hedgehog (SHH), BMPs, FGF20, VIP, PDGF, pleiotrofina (PTN), e HGF.

Em uma modalidade preferida, uma composição farmacêutica da invenção é localmente liberável no SNC de mamífero através de CED.

Um agente traçador preferivelmente compreende um íon para- magnético para uso com MRI. Apropriados íons de metais incluem aqueles tendo números atômicos de 22-29 (inclusive), 42, 44 e 58-70 (inclusive) e têm estados de oxidação de +2 ou +3. Exemplos de tais íons de metais são cromo (III), manganês (II), ferro (II), ferro (III), cobalto (II), níquel (II), cobre (II), praseodímio (III), neodímio (III), samário (III), gadolínio (III), térbio (III), disprósio (III), hólmio (III), érbio (III) e itérbio (III).

Em uma modalidade preferida, o agente traçador compreende um magneto MRI que pode ser usado em conjunção com MRI para monito- rar distribuição de composição farmacêutica infundida.

Em uma modalidade preferida, o magneto de MRI é quelato de gadolínio.

Em uma modalidade preferida, o agente traçante compreende uma lipossoma, que compreende um magneto MRI. Em uma modalidade preferida, o magneto MRI é quelato de gadolínio.

Em modalidades onde formação de imagem de raio χ (tal como CT) é usada para monitorar CED, o traçador pode compreender um material rádio - opaco. Apropriados materiais rádio - opacos são bem-conhecidos e incluem compostos de iodo, compostos de bário, compostos de gálio, com- postos de tálio, e similares. Específicos exemplos de materiais rádio - opa- cos incluem bário, diatrizoato, óleo etiodizado, citrato de gálio, ácido iocár- mico, ácido iocetâmico, iodamida, iodipamida, ácido iodoxâmico, iogulamida, iohexol, iopamidol, ácido iopanóico, ácido ioprocêmico, ácido iosefâmico, ácido iosérico, iosulamida meglumina, ácido iosumético, iotasul, ácido ioté- trico, ácido iotalâmico, ácido iotróxico, ácido ioxáglico, ácido ioxotriróico, i- podato, meglumina, metrizamida, metrizoato, propiliodona e cloreto taloso.

Em uma modalidade preferida, a composição farmacêutica com- preende um agente de facilitação. Um agente de facilitação é capaz de faci- litar a liberação de fator de crescimento para tecido alvo, preferivelmente quando ambos, agente de facilitação e fator de crescimento são liberados por CED. Em uma modalidade preferida, um agente de facilitação é uma biomolécula que é eficientemente depurada de tecido. Em uma modalidade preferida, um agente de facilitação tem uma curta meia vida em relação a fator de crescimento. Em uma modalidade preferida, um agentes de facilita- ção é capaz de competir com fator de crescimento por ligação a sítios de ligação de fator de crescimento em parênquima de cérebro, cujos sítios de ligação são outros que não receptores de fator de crescimento cognatos. Para adicional descrição de agentes de facilitação, vide U.S. 2002/0114780.

Um agente de facilitação especialmente preferido para uso na presente invenção é heparina de baixo peso molecular. Heparina de baixo peso molecular (Hep LMW) aperfeiçoa eficientemente o volume de distribui- ção de GDNF infundida, tem uma ampla janela terapêutica, e é mais segura que heparina de alto peso molecular (que pode causar hemorragia na mes- ma dose). Quando Hep LMW (1 micrograma / microlitro) com GDNF é infun- dida um grande aperfeiçoamento da distribuição de GDNF é visto (Figs. 1 e 2). Heparina de alto peso molecular é uma forma não-fracionada com uma faixa de peso molecular de 5000 - 35 000 dáltons. Neuroterapêuticos de Alto Peso Molecular

Em uma modalidade, fatores de crescimento são providos como neuroterapêuticos de alto peso molecular. Composições neuroterapêuticas de alto peso molecular da invenção compreendem um fator de crescimento e um carreador. Em um aspecto, a invenção provê composições farmacêuti- cas compreendendo neuroterapêuticos de alto peso molecular. Ainda com relação a neuroterapêuticos de alto peso molecular, vide pedido de patente provisório U.S. 60/795.371, depositado em 26 de abril de 2006, aqui incor- porado por referência em sua totalidade, e pedido de patente provisório U.S. 60/900.492 depositado em 9 de fevereiro de 2007, aqui incorporado por re- ferência em sua totalidade.

Neuroterapêuticos de alto peso molecular da invenção têm um peso molecular maior que cerca de 200 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 500 kDa , mais preferivelmente maior que cerca de 1000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 1500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 2000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 2500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 3000 kDa, mais preferi- velmente maior que cerca de 3500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 4000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 4500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 5000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 5500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 6000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 6500 kDa, mais preferi- velmente maior que cerca de 7000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 7500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 8000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 8500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 9000 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 9500 kDa, mais preferivelmente maior que cerca de 10000 kDa.

Em uma modalidade, um neuroterapêutico de alto peso molecu- lar da invenção tem um diâmetro ou comprimento maior que cerca de 10 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 20 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 30 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 40 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 50 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 60 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 70 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 80 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 90 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 100 nm, mais pre- ferivelmente maior que cerca de 110 nm, mais preferivelmente maior que cerca de 120 nm. Em algumas modalidades, um neuroterapêutico de alto peso molecular da invenção tem um diâmetro ou comprimento maior que cerca de 130 nm, ou maior que cerca de 140 nm, ou maior que cerca de 150 nm, ou maior que cerca de 160 nm, ou maior que que cerca de 170 nm, ou maior que cerca de 180 nm, ou maior que cerca de 190 nm, ou maior que cerca de 200 nm.

Em uma modalidade, o carreador é um carreador sintético.

Uma ampla variedade de carreadores sintéticos são disponíveis para uso nos neuroterapêuticos de alto peso molecular da invenção. Em uma modalidade preferida, o carreador é uma lipossoma. Em uma outra modalidade preferida, o carreador é uma partícula de metal, tal como uma partícula de ouro, ou um polímero. Com relação a carreadores, vide, por e- xemplo, Felgner et al., Ann N Y Acad Sei. 1995 Nov 27; 772:126-39; Ram- say et al., Curr Drug Deliv. 2005 Oct; 2(4):341-51; Allen et al., Anticancer Agents Méd Chem. 2006 Nov; 6(6):513-23; Mitra et al., Curr Pharm Des. 2006; 12(36):4729-49, cada uma das quais é aqui incorporada por referên- cia em sua totalidade.

Em uma modalidade, o carreador é uma composição ocorrendo naturalmente ou sua variante. Exemplos de tais carreadores incluem partícu- las de vírus, incluindo partículas de vírus modificado (por exemplo, aquelas tendo um perfil de proteína de superfície modificada). Por exemplo, vide de Jonge, et al., Gene Therapy (2006) 13, 400-411, expressamente aqui incor- porada em sua totalidade por referência.

Em uma modalidade, o neuroterapêutico de alto peso molecular é maior que um vírus AAV.

Em uma modalidade, o neuroterapêutico de alto peso molecular tem um peso molecular maior que um vírus AAV. Em uma modalidade, o neuroterapêutico de alto peso molecular compreende um carreador outro que não AAV.

Kits

Em um aspecto, a invenção provê kits que compreendem uma ou mais composições farmacêuticas da invenção. Em uma modalidade, um kit da invenção ainda compreende um dispositivo de liberação útil para CED, preferivelmente uma cânula, e mais preferivelmente uma cânula isenta de refluxo de desenho de etapa . Em uma modalidade, um kit da invenção ain- da compreende uma bomba útil para CED. Kits adicionalmente podem com- preender partes de conexão, tubos, material de embalagem, panfletos de instruções, e outros materiais úteis para prática de tratamento de um distúr- bio de SNC.

Compilação de Dados

Em um aspecto, a invenção provê processos de compilação de dados obtidos de monitoração baseada em imagem de distribuição de infu- sato quando liberado para pacientes tendo um distúrbio de SNC. Os dados podem incluir mas não limitado a volume de infusato, volume de distribuição, distribuição neuroanatômica, localização neuroanatômica de população al- vo, dados genéticos, parâmetros de infusão, parâmetros de cânula, e dados de colocação de cânula. Em uma modalidade, a base de dados é útil para derivação de algoritmos descrevendo a distribuição de infusato no SNC de um paciente tendo um distúrbio de SNC e pode ser usada para modelar libe- ração terapêutica.

Dispositivos de Liberação

Em um aspecto, a invenção provê um dispositivo de liberação compreendendo uma bomba que é capaz de liberar uma composição far- macêutica da invenção, preferivelmente através de CED, preferivelmente através de CED intermitente. O dispositivo compreende, ou é usado em con- junção com um cateter ou cânula que facilita liberação localizada para uma população de neurônios de SNC. Preferivelmente uma cânula de desenho de etapa isenta de refluxo, compatível com CED que é compatível com ad- ministração crônica ou aguda é usada. Em uma modalidade preferida, o dis- positivo ainda compreende uma composição farmacêutica da invenção.

Qualquer dispositivo de liberação aperfeiçoada por convecção pode ser apropriado para uso. Em uma modalidade preferida, o dispositivo é uma bomba osmótica ou uma bomba de infusão. Ambas bombas, osmótica e de infusão, são comercialmente disponíveis a partir de uma variedade de fornecedores, por exemplo, Alzet Corporation, Hamilton Corporation, Alza Inc., Palo Alto, Calif.).

O cateter ou cânula é inserido em tecido de SNC no sujeito es- colhido. Aqueles versados na técnica podem facilmente determinar que área genérica do SNC é um alvo apropriado. Por exemplo, quando tratando mal de Parkinson, o estriado é uma área apropriada do cérebro para alvo. Ma- pas estéreo-táticos e dispositivos de posicionamento são disponíveis, por exemplo, de ASI Instruments, Warren, Mich. Posicionamento também pode ser conduzido através de uso de mapas anatômicos obtidos por formação de imagem CT e/ou MRI do cérebro de sujeito para auxiliar a guiar o disposi- tivo de injeção para o alvo escolhido.

Em uma modalidade altamente preferida, o processo de CED é realizado com uma cânula de desenho de etapa isenta de refluxo compatível com CED. Tais cânulas altamente preferidas são mostradas em Krauze et al., J Neurosurg. 2005 Nov; 103(5):923-9. Treatment of SNC Disorders, aqui incorporado por referência em sua totalidade.

Tratamento genericamente resulta em redução ou prevenção de severidade ou sintomas do distúrbio de SNC no sujeito, isto é, um aperfei- çoamento na condição de sujeito ou um "efeito terapêutico". Por isso, trata- mento, pode reduzir a severidade ou prevenir um ou mais sintomas do dis- túrbio de SNC, inibir progressão ou piora do distúrbio de SNC, e em alguns exemplos, reverter o distúrbio de SNC.

Como aqui usado, o termo "melhora" significa um aperfeiçoa- mento na condição do sujeito, uma redução na severidade da condição, ou uma inibição de progressão ou piora da condição.

No caso de um distúrbio agudo de SNC, tratamento aperfeiçoará a condição de sujeito para um ponto final clínico, que pode ser melhora do distúrbio, recuperação completa ou parcial a partir do distúrbio, em cujo pon- to administração de fator de crescimento é preferivelmente interrompida.

Um distúrbio agudo de SNC é um que pode ser efetivamente tratado com administração de fator de crescimento de modo que a condição de sujeito aperfeiçoa para um ponto clínico onde administração pode ser interrompida. Exemplos de distúrbios agudos de SNC podem incluir acidente vascular cerebral e trauma de SNC, embora dependendo da severidade, acidente vascular cerebral e trauma possam ser considerados distúrbios crônicos de SNC em necessidade de tratamento crônico (administração crô- nica de fator de crescimento).

Os processos da invenção para tratamento de um sujeito são aplicáveis para profilaxia para prevenir um distúrbio de SNC em um sujeito em risco de um distúrbio de SNC, ou para prevenção de uma apresentação clínica em um sujeito diagnosticado com um distúrbio de SNC em um está- gio inicial.

Os processos da invenção para tratamento de um sujeito tam- bém podem ser suplementados com outras formas de terapia. Terapias su- plementares incluem tratamento com fármaco, uma mudança em dieta, etc.

Terapias suplementares podem ser administradas antes de, contemporane- amente com ou seguindo os processos de tratamento da invenção. O técni- co versado pode facilmente determinar terapias que podem ser usadas em um regime em combinação com os processos de tratamento da invenção.

Deve ser notado que as composições farmacêuticas aqui descri- tas podem ser usadas para aplicações veterinárias assim como humanas e que o termo "paciente" não deve ser construído em uma maneira limitante.

Todas as citações são expressamente aqui incorporadas em sua totalidade por referência.

Exemplos

Exemplo 1: Expressão de GDNF No Estriado de Rato Após CED de AAV2- GDNF

AAV2-GDNF foi infundida no estriado em diferentes doses e ra- tos sofreram eutanásia em diferentes pontos de tempo para análise de a- cumulação de expressão de GDNF. GDNF foi medida por ELISA.

AAV2-GDNF (de Avigen) = 1.1e13 vg/mL (PBS + pluronic F68 0,001%)

3 doses diferentes foram escolhidas:

15 ml # max = 1,65 e11vg [1,1e13 vg/ml]

15 ml # 1/2 Iog = 9,07e10vg [6,05e12 vg/ml]

15 ml # Iog -1 = 1,65e10 vg [1,1e12 vg/ml]

7 ratos por ponto de tempo:

grupo A: 4 ratos Lhemisf: max / Rhemisf: Iog [3 para ELISA, 1 para IHC] grupo B: 3 ratos Lhemisf: log 1 / Rhemisf: AAV2-LacZ (controle) [3 para ELISA] CED - taxa de infusão: 0,2 μΙ/minuto = 11 minutos

0,5 μl/minuto = 8 minutos

0,8 μl/minuto = 11 minutos

15 μl 30 minutos

Resultados são providos na Tabela 4 e na figura 3, que demons- tram uma gradual acumulação de GDNF sobre tempo.

Exemplo 2: Avaliação de liberação de Proteína GDNF Em Tratamento de Mal de Parkinson

Administração de dose simples de GDNF em putâmen de maca- co resulta em prolongados níveis de GDNF em tecido que podem durar por mais que várias semanas (figura 4).

De modo a entender freqüência e nível de dose de administra- ção local de GDNF com liberação aperfeiçoada de convecção (CED), a rela- ção entre administração de uma dose simples e meia-vida de tecido e efei- tos biológicos (figura 4) é estabelecida. Ainda estudos em macacos MPTP com avaliação funcional e formação de imagem PET são opcionalmente também realizados para ainda caracterizar as fármaco - cinéticas de GDNF administrada localmente em macacos PD.

Um estudo de verificação de dose em macacos Rhesus para estabelecer a magnitude e duração de resposta em maneira dependente de dose é realizado. Trinta e nove (39) animais são usados e divididos em coor- tes de 3 animais. Cada coorte recebe unilateralmente uma dose de 10, 50 ou 100 pg de GDNF em 2 sítios no putâmen.

O lado contra-lateral é infundido com PBS ou excipiente (vide Tabela 5 e figura 5). Heparina de baixo peso molecular é incluída na formu- lação. Heparina de baixo peso molecular aumenta significantemente distri- buição de GDNF no cérebro após CED, estabiliza proteína GDNF na solu- ção, e aumenta efeitos de GDNF sobre quantidade metabolizada de DA que pode aumentar efeitos funcionais de GDNF. (Hamilton J.F., Morrison P.F., Chen M.Y., Harvey-White J, Pernaute R.S., Phillips H.S., Oldfield E.H., e Bankiewicz K.S. Heparin Co-infusion during Convection-Enhanced Delivery (CED) increases the distribution of the glial derived neurotrophic factor (GDNF) Iigand family in rat striatum and enhances the pharmacological acti- vity of neurturin. (2001) Experimental Neurology 168, 155-161), aqui incorpo- rados por referência em suas totalidades.

Cada animal recebe administração unilateral de GDNF em 2 sí- tios no putâmen. PBS é liberada no lado contra-lateral. CED será usada pa- ra administração de fármaco. Três macacos normais sofrem eutanásia em 6 semanas para determinação de níveis normais de GDNF e razão DO- PAC/DA uma vez que ali pode haver efeito contralateral de administração de GDNF.

Processos Abreviados

Cirurgia

Cada animal recebe GDNF ou PBS / excipiente em 2 sítios (50 pL por sítio) no putâmen com CED. Coordenadas estéreo-táticas são esta- belecidas baseado em MRI e cânulas de sílica fundida resistentes a refluxo são colocadas nos sítios alvos. CED é controlada através de bomba externa. Após administração de GDNF, CSF é coletado via perfuração cisterna, e animais são retornados para suas jaulas. CSF é coletado em linha base e cada 2 semanas de todos os macacos (CSF de animais de 6 semanas cole- tado em linha base, e em 0, 2, 4, 6 semanas; animais 4-semanas em linha base, 0, 2 e 4 semanas; animais 2-semanas em linha base, 0, 2 semanas; 0-semana e linha base e em 0 semana. Amostras de sangue são coletadas junto com amostras de CSF. Imediatamente após administração de GDNF (O semana) ou em 2, 4 ou 6 semanas depois, animais sofrem eutanásia e seus cérebros são removidos (frescos). Cérebros são feitos blocos em lâmi- nas de 3 mm e imediatamente congeladas. Órgãos vitais são coletados para futuras avaliações patológicas.

Processamento de Cérebro:

Cérebros são processados para: 1 - níveis de GDNF por Elisa; 2 - níveis de DOPAC/DA através de HPLC; 3 - GDNF, TH. CD68, GFAP imu- nomanchamento; 4 - H & E.

Blocos de cérebro congelados são montados no cryostat e 6 seções coronais (20 μηι) são coletadas de cada bloco que contem putâmen. Seções são pós-fixadas e manchadas para imuno-química de GDNF para determinar extensão de liberação de GDNF. Putâmen sobre ambos os lados do cérebro é dissecado e pesado para obtenção de peso úmido. Tecido é homogeneizado, e processado para teor de GDNF por ELISA, e DA e meta- bólitos por HPLC. Teor de proteína das amostras é também medido.

Resultados

Imunomanchamento de GDNF detecta proteína GDNF no putâ- men em todos os pontos de tempo. Volume de distribuição (Vd) de GDNF é reduzido como uma função de tempo. Confirmação de manchamento de GDNF é usada para validar - cruzado dados de ELISA e HPLC.

1. Depuração de tecido de GDNF após administração simples

Referindo-se à figura 6, seguindo uma administração simples de 3 doses de GDNF em putâmen, níveis em tecido de GDNF declinam como uma função de dose e tempo.

2. Regulação ascendente de níveis de DA após administração simples de GDNF

A figura 7 descreve um possível resultado de uma administração de dose simples no putâmen. Vários cenários são possíveis, (i) o padrão de regulação ascendente de DA seguirá de perto aquele de níveis em tecido de GDNF, em cujo caso o efeito biológico de GDNF é dependente de presença de proteína GDNF. (ii) GDNF dispara efeitos biológicos, e eles persistem além de níveis de GDNF detectáveis em tecido. 3. Níveis de GDNF em CSF

Pode haver um pequeno aumento em GDNF em 0 semana com níveis indetectáveis em todos os outros tempos.

4. Anticorpos GDNF

Nenhum Ab GDNF é detectado em qualquer ponto de tempo no CSF ou soro5.

Verificações Neuropatológicas

Embora animais não sofram perfusão com formalina, cerebelo pode ser examinado para qualquer patologia. Nenhuma patologia é obser- vada.

Usando os processos acima, a relação entre uma dose simples de GDNF, sua meia - vida em tecido, e seus efeitos biológicos sobre o sis- tema DA em macacos são determinados. Sujeitos:

Espécie: Macaca (cinomolgo ou rhesus)

Gênero: macho ou fêmea Idade: adulto jovem a adulto

Número: 39 Peso: 3-8 kg

Agente Experimental:

Fator neurotrófico derivado glial (GDNF)

Grupos de tratamento são mostrados na Tabela 6 e parâmetros são mostrados na Tabela 7.

Esquema de Avaliação:

Formação de Imagem de Ressonância Magnética (MRI)

Administração de PBS/GDNF intracranial (via CED) Coleta de CSF e sangue: Sobrevivência semana-0: linha base e pós-CED Sobrevivência semana-2: linha base, pós-CED e em 2 semanas após cirurgia

Sobrevivência semana-4: linha base, pós-CED e em 2 e 4 se- manas pós-cirurgia Sobrevivência semana-6: linha base, pós-CED e em 2, 4 e 6 semanas pós-cirurgia

Eutanásia:

Nove (9) animais sofreram eutanásia após procedimentos CED

Nove (9) animais sofreram eutanásia em 2 semanas após cirurgia

Nove (9) animais sofreram eutanásia em 4 semanas após cirurgia

Nove (9) animais sofreram eutanásia em 6 semanas após cirurgia.

Três (3) animais (PBS) sofreram eutanásia em 6 semanas após cirurgia

Necropsia e Processamento de Tecido:

Após eutanásia, uma perfusão cardíaca é realizada para intro- duzir sistemicamente 1 L de solução salina tamponada com fosfato. O cére- bro é colhido, feito bloco em lâminas de 3 mm e congelado fresco em iso- pentano resfriado com gelo seco. Amostras representativas dos órgãos vi- tais são colhidas e processadas para exame histológico.

Processamento de Tecido de Cérebro:

Blocos de cérebro congelados são montados em um criostato e seis (6) seções coronais (espessura de 20 Mm) são coletadas de cada bloco- que contem o putâmen. As seções são pós-fixadas e manchadas para imu- nohistoquímica de GDNF para avaliar distribuição de GDNF.

Dissecações são realizadas sobre o tecido de cérebro congela- do restante para colher o núcleo de putâmen de cada bloco. O tecido de putâmen é pesado, homogeneizado, e processado para teor de GDNF por ELISA. Níveis de DA e metabólito serão medidos por HPLC.

Duração de Estudo:

Duração em-vida: 0 a 6 semanas após infusão de CEDE

Parâmetros de Avaliação Em-Vida:

MRI

Administração de PBS/GDNF Intracranial

Observações clínicas após cirurgia

Observações semanais de saúde

Coleta de sangue ( 5 ml_, soro): pré-cirurgia, após CED e em 2, 4, e 6 semanas após CED

Coleta de CSF (1 mL): pré-cirurgia, pós-CED e em 2, 4, e 6 se- manas após CED

Neuropatologia e Parâmetros Bioquímicos:

Ensaio de anticorpo GDNF é realizado sobre amostras de soro e CSF coletadas em pré-cirurgia, pós-CED, e em 2, 4, e 6 semanas após CED Ensaio de GDNF é realizado sobre amostras de CSF coletadas em pré-cirurgia, após CED, e em 2, 4, e 6 semanas após CED

Análises de tecido de cérebro

Nível de GDNF determinado por ELISA (ponto final primário) Razão de DOPAC/DA determinada por HPLC (ponto final primário) Imunomanchamento de GDNF (ponto final primário) Imunomanchamento GFAP, TH, CD68 (ponto final secundário) Manchamento H&E (ponto final primário)

Vide também Hadaczek et al., Human Gene Therapy, 17:1-12, 2006, aqui incorporado por referência em sua totalidade. Exemplo 3: Avaliação de Expressão de GDNF em Estriado de Rato

AAV2-GDNF foi infundida (CED) no estriado de rato em diferen- tes doses e ratos sofreram eutanásia em diferentes pontos de tempo para análise de correlação com o nível de expressão de GDNF sobre o tempo. Ambos hemisférios foram infundidos com uma própria quantidade de AAV2- GDNF em um volume total de 15 μL. Os grupos de testes são ilustrados na figura 8.

Procedimentos cirúrgicos padrões para CED intra-estriado foram realizados com as seguintes taxas de infusão: 0,2 μL / minuto por 11 minu- tos, 0,5 μL / minuto por 8 minuto, e 0,8 μL / minuto por 11 minutos. Concen- tração de proteína GDNF em tecido de estriado foi determinada por ELISA. Seguindo eutanásia, os cérebros foram rapidamente removidos e o estriado foi dissecado bilateralmente e imediatamente congelado. As amostras foram homogeneizadas e expostas a tratamento de acidulação. Nível de GDNF em tecido foi determinado por GDNF Emax ImmunoAssay System (Promega). Para confirmar expressão de GDNF, um rato de grupo A foi usado para ava- liação imunohistoquímica (manchamento DAB padrão com anticorpo poli- clonal GDNF anti-humano foi usado; R&D Systems, 1:50).

Resultados: Transdução do estriado de rato comAAV2-GDNF resultou em expressão de proteína GDNF em tecido de cérebro em uma maneira dependente de dose (figura 9). O nível de expressão de GDNF foi aumentando até 1 mês quando ela atingiu sua concentração estável dentro de tecido de estriado. Desde este ponto de tempo, para a dose máxima do vírus infundido (1,6511 vg), a quantidade máxima de GDNF detectada por ELISA foi —11 ng/mg de proteína em tecido. Menores doses do vetor, 9,0710 vg e 1,6510 vg, resultaram em menores concentrações em tecido de GDNF: -6-7 ng/mg de proteína em tecido e -2-3 ng/mg proteína tecido, respectiva- mente.

Exemplo 4: Avaliação de Depuração de GDNF a Partir de Cérebro de Rato

Processos: Para examinar a depuração de GDNF a partir de cérebro de rato nós desenhamos o experimento no qual nós liberamos pro- teína GDNF no estriado por meio de CED. Ambos hemisférios foram infun- didos com 1 pg de GDNF em um volume total de 15 μΙ_. Nós reaalizamos 4 infusões semanais para vide se há qualquer efeito acumulativo. Cada se- mana 3 animais sofreram eutanásia para coleta de tecido de cérebro. Vide figura 10.

Procedimentos cirúrgicos padrões para CED em estriado foram realizados com as seguintes taxas de infusão: 0,2 pL/minuto por 11 minutos, 0,5 pL/minuto por 8 minutos, e 0,8 pL/minuto por 11 minutos. Concentração de proteína GDNF em tecido estriado foi determinada por ELISA. Seguindo eutanásia, os cérebros foram rapidamente removidos e o estriado foi disse- cado bilateralmente e imediatamente congelado. As amostras foram homo- geneizadas e expostas a tratamento de acidulação. O nível de GDNF em tecido foi determinado em homogeneizados através de GDNF Emax Immu- noAssay System (Promega).

Resultados: Liberação semanal de proteína GDNF no estriado de rato resultou em seu nível estável no tecido de cérebro. As concentra- ções médias foram 32,9; 26,6; 29,0; e 28,8 pg/mg de proteína em semana 1, 2, 3, e 4, respectivamente . (figura 11).

Exemplo 5: Curso de Tempo de Depuração de GDNF de Cérebro de Rato

Proteína GDNF foi infundida no estriado e ratos sofreram euta- násia em diferentes pontos de tempo para análise de curso de tempo de depuração de GDNF a partir do cérebro.

A quantidade de GDNF foi medida por ELISA. GDNF (de NIH; 10 pg / 30 μL): 0,33 μg / uL

Uma dose foi escolhida:

O estoque original foi diluído 1:2 com PBS

40 μL + 80 μL PBS = 120 μL por linha (0,11 ug / μL)

15 μL serão infundidos em cada hemisfério (quantidade total: 1,65 μg de GDNF por hemisfério)

2 ratos por ponto de tempo (4 hemisférios)

Taxa de infusão CED: 0,2 μL / minuto = 11 minutos; 0,5 μL / mi- nuto = 8 minutos; 0,8 μL / minuto = 11 minutos; 15 μL, 30 minutos total, (fi- gura 12).

As seguintes publicações são aqui incorporadas por referência em suas totalidades. Varon et al., Ann. Rev. Neuroscience, 1:327, 1979; Thoenen et al., Science, 229:238, 1985); Thoenen, Trends. Neurosci. 14:165-170, 1991; Lapchak et at., Rev. Neurosci., 3:1-10, 1993; Bothwell, Ann. Rev. Neurosci., 18:223-253, 1995; Lapchak et al., Rev. Neurosci. 3:1- 10, 1993; Bothwell, Ann. Rev. Neurosci., 18:223-253, 1995; Chao et al., TINS 18:321-326, 1995; Lin etal., Science 260:1130-1132, 1993; Krieglstein et al., EMBO J. 14:736-742, 1995; Poulsen et al., Neuron 13:1245-1252, 1994; Lin et al., Science 260:1130-1132, 1993; Hudson et al., Brain Res. Buli. 36:425-432; 1995; Beck et al., Nature 373:339-341, 1995; Tomac et al., Nature 373:335-339, 1995; Hoffer et al., Neurosci. Lett. 182:107-111, 1994; Oppenheim et al., Nature 373:344-346, 1995; Zurn et al., Neuroreport 6:113- 118, 1994; Yan et al., Nature 373:341-344, 1995; Henderson et al., Science 266:1062-1064, 1994; Sariola et al., J. Cell Sci., 2003 Oct 1;116(Pt 19):3855-62; Venero et al., Neuroreport 4:959-962, 1993; Hefti, J. Neurobiol. 25:1418-1435, 1994; Olson, Neurochem. Jul. 15:1-3, 1994; Batchelor et al., J. Comp. Neurol. 284:187-204, 1989; Kiss et al., Neurosci. 27:731-748, 1988; Woolf et al., Neurosci. 30:143-152, 1989; Selkoe, Neuron, 6:487-498, 1991; Hefti, J. Neurobiol. 25:1418-1435, 1994; Petty et al., Ann. Aug. 36:244-246, 1994; Eslamboli, Rev. Neurosci., 2005;16(4):303-10; Kordower et al., Ann. Neurol., 46:419-424, 1999; Gill et al., Nat. Med. 9:5899-595, 2003; Patel et al., Ann. Neurol., 57:298-302, 2005; Lang et al., Ann. Neurol., 59:459-466, 2006; Eslamboli, Rev. Neurosci., 2005;16(4):303-10; Krauze et al., Exp Neurol. 2005 Nov;196(1 ):104-11; Gill et al., Nat. Med. 9:5899-595, 2003.

Embora a descrição acima contenha muitos detalhes, estes não devem ser construídos como limitando o escopo da invenção mas como me- ramente provendo ilustrações de algumas modalidades desta invenção pre- sentemente preferidas. Por isso, será apreciado que o escopo da presente invenção abrange inteiramente outras modalidades que podem se tornar óbvias para aqueles versados na técnica. Nas reivindicações apostas, refe- rência a um elemento no singular não é pretendida significar "um e somente um" a menos que explicitamente assim estabelecido, mas antes "um ou mais". Todos os equivalentes químicos, estruturais e funcionais para os e- lementos das modalidades referidas acima que são conhecidos por aqueles versados na técnica são expressamente aqui incorporados por referência e não são pretendidos serem abrangidos pela presente descrição e reivindica- ções. Além disso, não é necessário para um dispositivo ou processo para endereçar cada um e todo problema procurado ser resolvido pela presente invenção, para o mesmo ser abrangido pela presente descrição e reivindica- ções. Além disso, nenhum elemento, componente, ou etapa de processo na presente descrição é pretendido ser dedicado ao público independente de se o elemento, componente, ou etapa de processo é explicitamente recitado nas reivindicações. Nenhum elemento de reivindicação aqui é para ser cons- truído sob as provisões de 35 U.S.C. 112, sexto parágrafo, a menos que o elemento seja expressamente recitado usando a frase "meios para" Tabela 1

<table>table see original document page 71</column></row><table> Tabela 2

<table>table see original document page 72</column></row><table>

Tabela 3

<table>table see original document page 72</column></row><table> Tabela 4

<table>table see original document page 73</column></row><table>

Tabela 5

Estudo de Dose - Variação Em Macacos Normais

<table>table see original document page 73</column></row><table>

Tabela 6

Grupos de Tratamento

<table>table see original document page 73</column></row><table> Tabela 6 -continuação-

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Tabela 7

Parâmetros de Infusão

<table>table see original document page 74</column></row><table>

Claims

1. Processo de tratamento de um mamífero tendo um distúrbio de sistema nervoso central (SNC)1 compreendendo: administração a um mamífero tendo um distúrbio de SNC de uma quantidade de uma composição farmacêutica compreendendo um fator de crescimento; em que a dita administração compreende liberação da dita com- posição farmacêutica sem substancial acumulação do dito fator de cresci- mento no SNC do dito mamífero.

2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita libe- ração compreende liberação aperfeiçoada de convecção (CED).

3. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita composição farmacêutica ainda compreende um agente traçante.

4. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita composição farmacêutica ainda compreende um agente de facilitação.

5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita ad- ministração compreende liberação intermitente.

6. Processo de acordo com a reivindicação 9, ainda compreen- dendo determinação de taxa de depuração de tecido do dito fator de cres- cimento.

7. Processo de acordo com a reivindicação 6, em que a dita de- terminação de taxa de depuração de tecido é feita pré-clinicamente em um primata.

8. Processo de acordo com a reivindicação 9, em que a dita de- terminação de taxa de depuração de tecido compreende medição de um indicador de taxa de depuração em um sujeito humano.

9. Processo de acordo com a reivindicação 2, em que a dita CED compreende aumentos incrementais em taxa de fluxo.

10. Processo de acordo com a reivindicação 2, onde a composi- ção farmacêutica é liberada com o uso de uma cânula de desenho de etapa livre de refluxo compatível com CED.

11. Processo de acordo com a reivindicação 7, em que a dita com- posição farmacêutica ainda compreende um agente traçante.

12. Processo de acordo com a reivindicação 11, onde o agente traçante compreende um magneto MRI ou um agente detectável - CT.

13. Processo de acordo com a reivindicação 12, onde o dito a- gente traçante compreende uma lipossoma.

14. Processo de acordo com a reivindicação 13, onde o dito a- gente traçante é um quelato de gadolínio.

15. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita composição farmacêutica compreende um neuroterapêutico de alto peso molecular compreendendo o dito fator de crescimento.

16. Processo de acordo com a reivindicação 15, onde o dito neuropático de alto peso molecular compreende uma lipossoma.

17. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita composição farmacêutica ainda compreende um agente de facilitação.

18. Processo de acordo com a reivindicação 17, onde o dito a- gente de facilitação compreende heparina de baixo peso molecular.

19. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o dito fator de crescimento é selecionado do grupo consistindo em NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5, NT-6, GDNF, CNTF, LIF1 IGF-1, b-FGF, neurturina, persefina, arte- mina, TGFp, TGFp, IGF-2, PDGF, EGF, cardiotropina, EGF, IGF, VEGF, Sonic hedgehog (SHH), BMP, FGF20, VIP, PDGF, pleiotrofina (PTN), e HGF.

20. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que a dita administração compreende uma intermissão de cerca de 7 dias a cerca de -45 dias seguindo liberação da dita composição farmacêutica, cuja intermis- são é seguida por uma outra liberação do fator de crescimento.

21. Processo de acordo com a reivindicação 1, onde o dito dis- túrbio de SNC é selecionado do grupo consistindo em mal de Huntington, mal de Azheimer, esclerose lateral amiotrófica (ALS), mal de Parkinson, aci- dente vascular cerebral, trauma de cabeça, dano de cordão espinhal, escle- rose múltipla, demência com Corpos Lewy, degeneração retinal, epilepsia, distúrbios psiquiátricos, distúrbios de balanço hormonal, e degeneração co- clear.

22. Processo para promoção de sobrevivência de uma popula- ção neuronal responsiva a fator de crescimento no SNC de mamífero, com- preendendo: liberação local de uma composição farmacêutica compreenden- do um fator de crescimento para uma população neuronal responsiva a fator de crescimento em tecido de SNC alvo; em que o dito fator de crescimento é liberado em uma taxa que substancialmente opõe-se à taxa de depuração de tecido do dito fator de crescimento, pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva do dito fator de crescimento é obtida no tecido SNC alvo.

23. Processo para redução de morte de neurônios responsivos a fator de crescimento do SNC de mamífero, compreendendo: liberação local de uma composição farmacêutica compreenden- do um fator de crescimento para uma população neuronal responsiva a fator de crescimento em tecido de SNC, cuja população neuronal está em risco de sofrer morte de célula na ausência de intervenção; em que o fator de crescimento é liberado em uma taxa que se opõe substancialmente à taxa de depuração de tecido do fator de crescimento; e pelo que uma quantidade terapeuticamente efetiva de fator de crescimento é obtida no tecido de SNC alvo.

24. Processo para tratamento de um paciente diagnosticado como tendo um distúrbio de SNC em seus estágios iniciais, compreendendo: liberação local de uma composição farmacêutica compreenden- do um fator de crescimento para uma população neuronal de SNC responsi- va a fator de crescimento no paciente; em que tal administração do fator de crescimento previne, retar- da, ou reduz a severidade de manifestações clínicas associadas com a de- sordem de SNC em estágios posteriores na ausência de fator de crescimen- to administrado.

25. Processo profilático para tratamento de um paciente em ris- co de um distúrbio de SNC, compreendendo: liberação local de uma composição farmacêutica compreenden- do um fator de crescimento para uma população neuronal de SNC responsi- va a fator de crescimento no paciente; em que tal administração do fator de crescimento previne ou retarda o início de um distúrbio de SNC, ou reduz a severidade do distúrbio de SNC uma vez ele se manifeste.