CN107635575A - 重组glut1腺相关病毒载体构建体以及用于恢复glut1表达的相关方法 - Google Patents

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G·高
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Abstract

本发明涉及重组Glut1腺相关病毒载体(rAAV)构建体和用于恢复Glut1缺陷型哺乳动物中的Glut1表达的相关方法。在某些实施方案中，所述rAAV还包含鸡β‑肌动蛋白启动子，其中所述rAAV能够穿过血脑屏障(BBB)。在某些实施方案中，本发明涉及一种组合物，所述组合物包含本文所述的任何重组AAV。在某些实施方案中，本发明涉及一种包括容器壳体的试剂盒，所述容器壳体包含本文所述的组合物。在某些实施方案中，本发明涉及恢复受试者的BBB中的Glut1转运的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何重组AAV载体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗有需要的受试者中的Glut1缺陷综合征的方法。

Description

重组GLUT1腺相关病毒载体构建体以及用于恢复GLUT1表达的 相关方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2015年3月10日提交的美国临时专利申请序列号62/130,899的优先权，其通过引用整体并入本文。
政府支持的声明
本发明是在美国国家卫生研究院授予的拨款号R01 NS057482下借助政府资助进行的。政府可以具有本发明的某些权利。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交，并且据此通过引用整体并入本文。所述ASCII副本于2016年3月4日创建，名称为01001～003887～WO0_SL.txt，并且大小为189,953字节。
发明领域
本发明涉及重组Glut1腺相关病毒载体(AAV)构建体和用于恢复Glut1缺陷型哺乳动物中的Glut1表达的相关方法。
背景
葡萄糖是哺乳动物脑的主要能量来源。葡萄糖转运蛋白1(Glut1)，也称为溶质载体家族2，是血脑屏障(BBB)中表达的主要葡萄糖转运蛋白，负责葡萄糖进入脑，并且是促进葡萄糖转运蛋白家族的第一个鉴定成员(SLC2A)。编码Glut1蛋白的人基因SLC2A1已定位于染色体1的短臂(1p34.2)并且长度为35kb，含有编码492个氨基酸(SEQ ID NO:79)的蛋白质的10个外显子。该蛋白质在包括人、大鼠、小鼠和猪在内的不同物种之间是高度保守的。编码mGlut1蛋白的小鼠Slc2a1基因定位于染色体4，并且与人SLC2A1具有非常相似的基因结构(小鼠基因组信息学(Mouse Genome Informatics))(492个氨基酸的mGlut1序列是SEQID NO:78)。小鼠Slc2a1cDNA(NM 011400)与人SLC2A1cDNA是>97％相同的。(参见，MuecklerM等人,1985；Veggiotti,P等人,2013；Seidner等人,1998)。
Glut1缺陷综合征(Glut1 DS，OMIM 606777)是由SLC2A1基因的单倍体不足(haplo-insufficiency)引起的罕见但令人虚弱的儿童神经病症。Glut1缺陷综合征是常染色体显性病症。最突出的患者表型包括婴儿癫痫发作、获得性小头、发育迟缓和脑脊液糖分过少(De Vivo D.C.等人1991)。
疾病的当前治疗包括使用生酮饮食，因为酮体形成脑中神经元的替代能量来源。然而，饮食涉及摄取大量的油，并且据报道对神经行为症状只有适度的影响。持续需要更好的治疗，特别是用于基因疗法以恢复患者中的Glut1表达。
发明概述
在某些实施方案中，本发明涉及重组腺相关载体(rAAV)，所述重组腺相关载体包含核酸序列，所述核酸序列包含编码Glut1的转基因。在某些实施方案中，Glut1包含SEQ IDNO:78或79。在某些实施方案中，rAAV还包含鸡β-肌动蛋白启动子，其中所述rAAV能够穿过血脑屏障(BBB)。在某些实施方案中，转基因能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。在某些实施方案中，鸡β-肌动蛋白启动子选自由SEQ ID NO:31、38、45、54、62和70组成的组。在某些实施方案中，rAAV是AAV8或AAV9。在某些实施方案中，rAAV还包含选自由SEQID NO:48、56、59、64和73组成的组的miRNA元件。在某些实施方案中，rAAV还包含在所述miRNA元件侧翼的反向末端重复(ITR)。
在某些实施方案中，本发明涉及组合物，其包含本文所述的任何重组AAV。在某些实施方案中，组合物还包含药用载体。
在某些实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包括容器壳体，所述容器壳体包含本文所述的组合物。在某些实施方案中，容器是注射器。
在某些实施方案中，本发明涉及恢复受试者的血脑屏障(BBB)中的Glut1转运的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何重组AAV载体，其能够穿过BBB并且还能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。
在某些实施方案中，本发明涉及治疗有需要的受试者中的Glut1缺陷综合征的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何重组AAV载体，其能够穿过BBB并且还能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。
在某些实施方案中，本发明涉及在受试者中缓解至少一种与Glut1缺陷综合征相关的症状的方法，所述症状选自由脑脊液糖分过少、获得性小头、共济失调性和张力障碍性运动功能障碍组成的组，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的任何重组AAV载体，其能够穿过BBB并且还能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。
在某些方面，本发明的实施方案涉及用于治疗以SLC2A1基因缺陷或单倍体不足为特征的受试者中的Glut1 DS的方法。该方法可以包括向受试者施用有效量的重组腺相关病毒，所述病毒携带在启动子序列的控制下编码正常/野生型Glut1蛋白的核酸序列(即转基因)，所述启动子序列在期望的细胞中表达Glut1产物。在某些实施方案中，启动子序列提供了BBB细胞中Glut1产物的表达。在某些实施方案中，表达是在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中。在某些实施方案中，转基因基因的表达对细胞提供了在受试者中恢复或维持期望的Glut1水平所必需的产物。在另一个实施方案中，本发明提供了用于治疗Glut1 DS的组合物。此类组合物可以用载体和适于注射的其它组分配制。
本发明的其它方面和优点在对其优选实施方案的以下详细描述中进一步描述。
附图简述
图1A-D是(10种)Glut1编码构建体的质粒图。图1A显示携带Glut1和EGFP报道基因以及2A编码序列的两种EGFP-2A-Glut1构建体。图1B显示了两种Glut1-2A-EGFP构建体。图1C显示两种天然Glut1构建体。图1D显示了携带miRNA-122结合位点(Mir-122BS)的四种构建体，所述miRNA-122结合位点用来选择性地关闭肝组织中Glut1的表达。
图2A-C是显示在体外CHO细胞测定中AAV9-hGlut1-eGFP(SEQ ID NO:80)构建体的表达和Glut1功能的印迹和图。图2A显示了证明AAV9-hGlut1-eGFP构建体的表达的蛋白质印迹。图2B是显示用AAV9-hGlut1-eGFP构建体转染的CHO细胞对葡萄糖的摄取增强的图；证明其在功能测定中的能力。图2C显示转染入CHO细胞中后构建体的GFP荧光。
图3A-B是显示在将鼠slc2a1基因重新导入Glut1 DS小鼠后增强的运动表现的图。图3A是显示在AAV9-mGlut1(SEQ ID NO:35)处理的突变体小鼠中改善的转杆(rotarod)表现的图。图3B是显示在处理的突变体小鼠中恢复mGlut1后改善的垂直杆爬行的图。
图4A-B是显示AAV9-mGlut1(SEQ ID NO:35)处理的小鼠中Glut1的组织特异性表达增强的图。图4A是显示经处理的突变体和相关对照中相对的slc2a1基因表达的图。图4B是显示在野生型Glut1+/+小鼠中作为表达百分比的Glut1表达的图。
图5A-D是显示AAV9-mGlut1处理的突变体小鼠中Glut1蛋白和CSF葡萄糖水平升高的印迹和图；证明了恢复Glut1减轻Glut1 DS模型小鼠的脑脊液糖分过少。图5A是处理的Glut1 DS突变体小鼠和相关对照的脑组织中Glut1蛋白的蛋白质印迹。图5B是显示经处理的Glut1 DS突变体小鼠和对照中蛋白质水平的定量的图。图5C是显示AAV9-mGlut1(SEQ IDNO:35)处理的小鼠和对照中的血液和CSF葡萄糖浓度的图。图5D是显示各只小鼠中CSF:血糖浓度的比率的箱须图。注意：N.S.-不显著，*，P<0.05，**，P<0.01，***，P<0.001，单因素ANOVA，N≥8。
详述
SLC2A1(也称为Glut1)基因中的突变导致Glut1缺陷综合征(Glut1 DS)，一种罕见的但具有破坏性的神经发育病症(De Vivo D.C.等人，1991)。野生型Glut1蛋白被广泛表达。然而，其主要的细胞活动部位似乎是脑微血管的内皮细胞，在那里其在促进葡萄糖转运穿过血脑屏障中发挥功能。蛋白质的降低水平或损失导致复杂表型，其标签特征包括脑脊液糖分过少、发育延迟和获得性小头。患者还表现出共济失调性以及张力障碍性的运动表型。对于slc2a1基因而言单倍体不足的小鼠表现出人疾病的许多特征。鼠Slc2a1基因的纯合敲除是胚胎致死的。单倍体不足动物模型表现出人疾病的许多方面。本发明涉及使用AAV9-Glut1构建体来恢复脑中的Glut1蛋白表达。预期此类方法和AAV9-Glut1构建体可以是人疾病的有效治疗方法。为了便于参考，本文所述的载体构建体称为各种AAV9-Glut1构建体，其指示包含编码小鼠或人Glut1蛋白的核酸序列的AAV9构建体等等。如本文所用，SLC2A1是指人基因，而slc2a1是指编码相应Glut1蛋白的小鼠基因。
定义
下面具体定义某些技术和科学术语，使得可以更容易地理解本发明。除非在本文件的其它地方特别定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
如本文(包括所附权利要求书)中所用，词语的单数形式诸如“一个”、“一种”和“所述/该”包括它们相应的复数指代物，除非上下文另有明确规定。
“激活”、“刺激”和“处理”当它适用于细胞或受体时，可能具有相同的含义，例如用配体活化、刺激或处理细胞或受体，除非上下文或明确另有说明。“配体”包括天然的和合成的配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和源自抗体的结合化合物。“配体”还包括小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“活化”可以指如由内部机制以及外部或环境因素调节的细胞活化。例如，细胞、组织、器官或生物体的“应答”包括生物化学或生理行为的变化，例如生物区室内的浓度、密度、粘附或迁移、基因表达速率或分化状态，其中变化与激活、刺激或处理相关，或与内部机制如遗传编程相关。
分子的“活性”可以描述或指分子与配体或受体的结合，催化活性；刺激基因表达或细胞信号传导、分化或成熟的能力；抗原活性，调节其它分子的活性等。分子的“活性”还可以指在调节或维持细胞与细胞相互作用(例如粘附)的活性或维持细胞结构，例如细胞膜或细胞骨架的活性。“活性”还可以意指比活性，例如[催化活性]/[mg蛋白]或[免疫活性]/[mg蛋白]、生物区室内的浓度等。“活性”可以指先天或适应性免疫系统的组分的调节。
术语“施用”和“治疗/处理”当它适用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，是指外源药物、治疗剂、诊断剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。“施用”和“治疗/处理”可以指例如治疗、药代动力学、诊断、研究和实验方法。细胞的处理包括试剂与细胞的接触以及试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。“施用”和“治疗/处理”也意味着通过试剂、诊断剂、结合化合物或通过另一细胞对例如细胞的体外和离体处理。术语“受试者”包括任何生物体，优选动物，更优选哺乳动物(例如大鼠、小鼠、狗、猫、兔)，最优选包括人患者的人。
“治疗”或“处理”意指向具有一种或多种疾病症状或怀疑具有疾病或有升高的获得疾病的风险的受试者或患者内部或外部施用治疗剂，如含有本发明的任何rAAV构建体的组合物，对于所述疾病，所述药剂具有治疗活性。通常，药剂以有效缓解受治疗的受试者或群体中的一种或多种疾病症状的量施用，无论是通过诱导此类症状的消退还是抑制此类症状的进展达到任何临床可测量的程度。有效缓解任何特定疾病症状的治疗剂的量(也称为“治疗有效量”)可以根据如患者的疾病状态、年龄和体重，和药物在受试者中引发期望应答的能力的因素而变化。可以通过内科医生或其它熟练医疗保健提供者通常用于评价该症状的严重性或进展状态的任何临床测量来评价疾病症状是否得到缓解。虽然本发明的一个实施方案(例如，治疗方法或制品)不能有效缓解每个受试者中的目标疾病症状，但是它应该在统计学显著的数目的受试者中缓解目标疾病症状，如通过本领域已知的任何统计学检验确定，如学生t检验、卡方检验、根据Mann和Whitney的U检验、Kruskal-Wallis检验(H检验)、Jonckheere-Terpstra检验和Wilcoxon检验。
“治疗/处理”当它适用于人、兽医或研究受试者时，是指治疗性处理、防范或预防措施，指研究和诊断应用。“治疗/处理”当它适用于人、兽医或研究受试者、或细胞、组织、或器官时，包括转染本发明的任何rAAV构建体或相关方法，如应用于人或动物受试者、细胞、组织、生理区室或生理液体。
“分离的核酸分子”意指基因组、mRNA、cDNA或合成来源或其某种组合的DNA或RNA，其与分离的多核苷酸被天然发现的多核苷酸的全部或部分不缔合，或者与它天然不连接的多核苷酸连接。为了本公开的目的，应当理解，“包含特定核苷酸序列的核酸分子”不包括完整的染色体。“包含”规定核酸序列的分离的核酸分子除了规定的序列之外还可以包含多达10个或甚至多达20个或更多其它蛋白质或其部分或片段的编码序列，或可以包括可操作地连接的调节序列，其控制所述核酸序列的编码区的表达，和/或可以包括载体序列。
短语“控制序列”是指在特定宿主生物体中可操作连接的编码序列表达所必需的DNA序列。适用于原核生物的控制序列例如包括启动子，任选地操纵子序列和核糖体结合位点。已知真核细胞使用启动子、多腺苷酸化信号和增强子。
当核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“可操作地连接的”。例如，如果前序列或分泌前导序列的DNA被表达为参与多肽分泌的前蛋白，则其与多肽的DNA可操作连接；如果启动子或增强子影响序列的转录，则其与编码序列可操作地连接；或者如果核糖体结合位点被定位以便于翻译，则它与编码序列可操作地连接。通常，“可操作地连接”意指被连接的DNA序列是连续的，并且在分泌型前导序列的情况下是连续的且在读取相中。然而，增强子不一定是连续的。通过在方便的限制位点处连接来实现连接。如果这些位点不存在，则按照常规实践使用合成的寡核苷酸衔接头或接头。
如本文中所用，表述“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用，并且所有这些名称包括后代。因此，词语“转化体”和“转化细胞”包括原代受试细胞和自其衍生的培养物，而不考虑转移次数。还应当理解，由于故意或无意的突变，并非所有后代将具有精确相同的DNA含量。包括具有与原始转化细胞中筛选的相同功能或生物活性的突变体后代。在意图独特名称的情况下，它从上下文将会清楚。
重组AAV
在一些方面，本发明提供了分离的AAV。如本文关于AAV所用，术语“分离的”是指已经从其天然环境(例如从宿主细胞、组织或受试者)分离的AAV或人工产生的AAV。可以使用重组方法产生分离的AAV。这种AAV在本文中称为“重组AAV”。重组AAV(rAAV)优选具有组织特异性靶向能力，使得rAAV的转基因将被特异性递送至一个或多个预定组织。AAV衣壳是决定这些组织特异性靶向能力的重要因素。因此，可以选择具有适合于靶向组织的衣壳的rAAV。在一些实施方案中，rAAV包含编码具有如SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列的AAV9衣壳的序列(如SEQ ID NO:96)或与其具有实质性同源性的蛋白质。
为了在治疗Glut1 DS的上下文中靶向期望的组织，优选的rAAV是AAV9衣壳和AAV2主链的组合，导致本文所述的各种rAAV(参见表1和序列表)。
已经描述了用于获得具有期望的衣壳蛋白的重组AAV的方法(参见例如US 2003/0138772，其内容通过引用整体并入本文)。已经描述了许多不同的AAV衣壳蛋白，例如G.Gao等人,J.Virol,78(12):6381-6388(2004年6月)；G.Gao,等人,Proc Natl Acad Sci USA,100(10):6081-6086(2003年5月13日)；US 2003-0138772、US 2007/0036760、US 2009/0197338中公开的AAV衣壳蛋白，其涉及AAV衣壳蛋白及相关核苷酸和氨基酸序列的内容通过引用并入本文。对于目前描述的构建体和方法的期望包装，优选AAV9载体和衣壳。然而，应注意的是，其它合适的AAV，如rAAVrh.8和rAAVrh.10，或其它类似的载体可以适用于本发明。通常，该方法包括培养含有编码AAV衣壳蛋白或其片段的核酸序列的宿主细胞；功能性rep基因；由AAV反向末端重复(ITR)和转基因组成的重组AAV载体；和足够的辅助功能，以允许将重组AAV载体包装到AAV衣壳蛋白中。
要在宿主细胞中培养以在AAV衣壳中包装rAAV载体的组分可以以反式提供给宿主细胞。或者，任何一种或多种需要的组分(例如，重组AAV载体、rep序列、cap序列和/或辅助功能)可由稳定的宿主细胞提供，所述稳定的宿主细胞已经使用本领域技术人员已知的方法来工程化而含有一种或多种需要的组分。最适当地，此类稳定的宿主细胞将含有在诱导型启动子控制下的需要组分。然而，需要的组分可以在组成型启动子的控制下。在另一替代方案中，选择的稳定宿主细胞可以含有在组成型启动子的控制下的选择组分和在一种或多种诱导型启动子控制下的其它选择组分。例如，可以产生稳定的宿主细胞，其源自293细胞(其包含在组成型启动子控制下的E1辅助功能)，但含有在诱导型启动子控制下的rep和/或cap蛋白。
用于产生rAAV的重组AAV载体、rep序列、cap序列和辅助功能可以使用任何合适的遗传元件(载体)递送至包装宿主细胞。所选择的遗传元件可以通过任何合适的方法递送，包括本文所述的那些。参见例如K.Fisher等人,J.Virol.,70:520-532(1993)和美国专利号5,478,745。
在一些实施方案中，可以使用三重转染方法(例如，如美国专利号6,001,650中详细描述，其涉及三重转染方法的内容通过引用并入本文)来产生重组AAV。通常，重组AAV通过用包装到AAV颗粒中的重组AAV载体(包含转基因)、AAV辅助功能载体和辅助功能载体转染宿主细胞来产生。AAV辅助功能载体编码“AAV辅助功能”序列(即rep和cap)，其以反式发挥功能用于生产AAV复制和衣壳化。优选地，AAV辅助功能载体支持有效的AAV载体产生而不产生任何可检测的野生型AAV病毒体(即，含有功能性rep和cap基因的AAV病毒体)。适合用于本发明的载体的非限制性实例包括美国专利号6,001,650中描述的pHLP19和美国专利号6,156,303中描述的pRep6cap6载体，这两者的全部内容通过引用并入本文。辅助功能载体编码非AAV衍生的病毒的核苷酸序列和/或AAV复制依赖的细胞功能(即“辅助功能”)。辅助功能包括AAV复制所需的那些功能，包括但不限于参与AAV基因转录激活、阶段特异性AAVmRNA剪接、AAV DNA复制、cap表达产物的合成以及AAV衣壳组装的部分。基于病毒的辅助功能可以源自任何已知的辅助病毒如腺病毒、疱疹病毒(除了单纯疱疹病毒1型外)和痘苗病毒。
关于转染的宿主细胞，术语“转染”用于指细胞吸收外来DNA，并且当外源DNA被引入细胞膜内时，细胞已被“转染”。许多转染技术是本领域公知的。参见例如Graham等人(1973)Virology,52:456,Sambrook等人(1989)Molecular Cloning,a laboratorymanual,Cold Spring Harbor Laboratories,New York,Davis等人(1986)Basic Methodsin Molecular Biology,Elsevier，和Chu等人(1981)Gene 13:197。此类技术可用于将一种或多种外源核酸，如核苷酸整合载体和其它核酸分子引入合适的宿主细胞中。
“宿主细胞”是指任何含有或能够含有感兴趣物质的细胞。宿主细胞通常是哺乳动物细胞。宿主细胞可以用作AAV辅助构建体、AAV微型基因质粒、辅助功能载体或与重组AAV的产生相关的其它转移DNA的接受者。该术语包括已经转染的原始细胞的后代。因此，如本文所用，“宿主细胞”可以指已经用外源DNA序列转染的细胞。应当理解，由于自然、意外或故意的突变，单亲本细胞的后代可能不一定与原始亲本在形态或在基因组或总DNA互补物中完全相同。
关于细胞，术语“分离的”是指已经从其天然环境(例如，从组织或受试者)分离的细胞。术语“细胞系”是指能够在体外连续或延长生长和分裂的细胞群。通常，细胞系是源自单个祖细胞的克隆群体。在本领域中进一步已知的是，在这种克隆群体的储存或转移期间，自发或诱导的变化可以发生在核型中。因此，源自提及的细胞系的细胞可以与祖先细胞或培养物不完全相同，并且提及的细胞系包括此类变体。如本文所用，术语“重组细胞”是指已引入外源DNA片段(如导致生物活性多肽转录或生物活性核酸如RNA产生的DNA片段)的细胞。
术语“载体”包括任何遗传元件，如质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、人工染色体、病毒、病毒体等，其在与适当的控制元件结合时能够复制并且可以在细胞之间转移基因序列。因此，该术语包括克隆和表达载体以及病毒载体。在一些实施方案中，有用的载体被认为是其中待转录的核酸片段位于启动子的转录控制下的那些载体。“启动子”是指引发基因的特异性转录需要的通过细胞的合成机器或引入的合成机器识别的DNA序列。术语“可操作定位”、“可操作连接”、“在控制下”或“在转录控制下”是指启动子相对于核酸处于正确位置和取向以控制RNA聚合酶引发和表达基因。术语“表达载体或构建体”意指含有其中部分或全部核酸编码序列能够被转录的核酸的任何类型的遗传构建体。在一些实施方案中，表达包括核酸的转录，例如从转录基因产生生物活性多肽产物或抑制性RNA(例如shRNA，miRNA)。
重组AAV载体
本文所述的“重组AAV(rAAV)载体”通常至少由转基因(例如编码Glut1)及其调节序列以及5’和3’AAV反向末端重复(ITR)组成。将这种重组AAV载体包装成衣壳蛋白并递送至选定的靶细胞。在一些实施方案中，转基因是编码多肽、蛋白质、功能性RNA分子(例如miRNA，miRNA抑制剂)或感兴趣的其它基因产物(例如Glut1)的与载体序列异源的核酸序列。核酸编码序列以允许靶组织的细胞中转基因转录、翻译和/或表达的方式与调节组分可操作连接。
载体的AAV序列可以包含顺式作用的5’和3’反向末端重复序列(参见例如B.J.Carter,于“Handbook of Parvoviruses”，P.Tijsser编,CRC Press,第155 168页(1990))。ITR序列的长度通常约为145bp。优选地，在分子中使用基本上编码ITR的整个序列，尽管这些序列的一些程度的微小修改是允许的。(参见例如教科书，如Sambrook等人,“Molecular Cloning.A Laboratory Manual”,第2版,Cold Spring harbor Laboratory,New York(1989)；以及K.Fisher等人,J.Virol.,70:520 532(1996))。这种分子的实例是含有转基因的“顺式作用”质粒，其中选择的转基因序列和相关的调节元件侧翼有5’和3’AAVITR序列。AAV ITR序列可以从任何已知的AAV获得，包括目前鉴定的哺乳动物AAV类型。
除了上文针对重组AAV载体鉴定的元件之外，载体还可以包括常规控制元件，其以下述方式与转基因可操作连接，所述方式允许其在用质粒载体转染或用由本发明产生的病毒感染的细胞中转录、翻译和/或表达。如本文所用，“可操作地连接”的序列包括与感兴趣的基因连续的表达控制序列和以反式或一定距离作用以控制感兴趣的基因的表达控制序列。表达控制序列包括适当的转录起始、终止、启动子和增强子序列；高效的RNA处理信号，如剪接和多腺苷酸(polyA)信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列(即Kozak共有序列)；增强蛋白质稳定性的序列；并且当需要时，增强编码产物分泌的序列。包括天然、组成型、诱导型和/或组织特异性的启动子的许多表达控制序列是本领域已知的并且可以被利用。
如本文所用，当核酸序列(例如编码序列)和调节序列以下述方式共价连接，以使核酸序列的表达或转录置于调节序列的影响或控制下时，它们被称为可操作地连接的。如果期望将核酸序列翻译成功能性蛋白质，则在下述情况下两个DNA序列称为可操作连接的：诱导5’调节序列中的启动子导致编码序列的转录，并且两个DNA序列之间的连接的性质不(1)导致移码突变的引入，(2)干扰启动子区域指导编码序列转录的能力，或(3)干扰相应的RNA转录物翻译成蛋白质的能力。因此，如果启动子区域能够实现该DNA序列的转录，使得所得到的转录物可以翻译成期望的蛋白质或多肽，则启动子区域将可操作地连接到核酸序列。类似地，当两个或更多个编码区以下述方式连接，使得它们从共同启动子的转录导致两个或更多个已经以符合读码框的方式翻译的蛋白质的表达时，它们是可操作地连接的。在一些实施方案中，可操作连接的编码序列产生融合蛋白。在一些实施方案中，可操作地连接的编码序列产生功能性RNA(例如shRNA，miRNA)。
对于编码蛋白质的核酸，通常在转基因序列之后和3’AAV ITR序列之前插入多腺苷酸序列。可用于本发明的rAAV构建体还可含有内含子，期望位于启动子/增强子序列和转基因之间。一个可能的内含子序列源自SV-40，并且称为SV-40T内含子序列。可以使用的另一个载体元件是内部核糖体进入位点(IRES)。使用IRES序列从单个基因转录物中产生多于一种的多肽。IRES序列将用于产生含有多于一条多肽链的蛋白质。这些和其它常见载体元件的选择是常规的，并且许多此类序列是可用的[参见例如Sambrook等人以及其中例如于第3.18 3.26和16.17 16.27页引用的参考文献和Ausubel等人,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,New York,1989]。在某些情况下，口蹄疫病毒2A序列可以包含在多蛋白中；这是一种已经显示介导多蛋白切割的小肽(长度约为18个氨基酸)(Ryan,M D等人,EMBO,1994；4:928-933；Mattion,N M等人,J Virology,1996年11月；第8124-8127页；Furler,S等人,Gene Therapy,2001；8:864-873；以及Halpin,C等人,ThePlant Journal,1999；4:453-459)。以前已经在包括质粒和基因疗法载体(AAV和逆转录病毒)的人工系统中证明了2A序列的切割活性(Ryan,M D等人,EMBO,1994；4:928-933；Mattion,N M等人,J Virology,1996年11月；第8124-8127页；Furler,S等人,GeneTherapy,2001；8:864-873；和Halpin,C等人,The Plant Journal,1999；4:453-459；deFelipe,P等人,Gene Therapy,1999；6:198-208；de Felipe,P等人,Human Gene Therapy,2000；11:1921-1931.；和Klump,H等人,Gene Therapy,2001；8:811-817)。
在宿主细胞中基因表达所需要的调控序列的确切性质可以在物种、组织或细胞类型之间变化，但通常应当根据必要包括分别牵涉启动转录和翻译的5’非转录和5’非翻译序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列、增强子元件等。特别地，此类5’非转录的调节序列将包括启动子区，其包括用于可操作地连接的基因的转录控制的启动子序列。调节序列还可以根据需要包括增强子序列或上游激活子序列。载体可以任选地包括5’前导或信号序列。
组成型启动子的实例包括但不限于逆转录病毒劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR启动子(任选与RSV增强子一起)、巨细胞病毒(CMV)启动子(任选与CMV增强子一起)[参见例如Boshart等人,Cell,41:521-530(1985)]、SV40启动子、二氢叶酸还原酶启动子、13-肌动蛋白启动子、磷酸甘油激酶(PGK)启动子和EFla启动子[Invitrogen]。
诱导型启动子允许调节基因表达并且可以通过外源供应的化合物、环境因素如温度或特定生理状态(例如急性期)的存在、细胞的特定分化状态或仅在复制细胞中调节。诱导型启动子和诱导型系统可从各种商业来源购得，包括但不限于Invitrogen、Clontech和Ariad。由外源供应的启动子调节的诱导型启动子的实例包括锌诱导性绵羊金属硫蛋白(MT)启动子、地塞米松(Dex)诱导型小鼠乳腺肿瘤病毒(MMTV)启动子、T7聚合酶启动子系统(WO 98/10088)；蜕皮激素昆虫启动子(No等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:3346-3351(1996))、四环素抑制型系统(Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992))、四环素诱导型系统(Gossen等人,Science,268:1766-1769(1995)，也参见Harvey等人,Curr.Opin.Chem.Biol.,2:512-518(1998))、RU486诱导型系统(Wang等人,Nat.Biotech.,15:239-243(1997)和Wang等人,Gene Ther.,4:432-441(1997))和雷帕霉素诱导型系统(Magari等人,J.Clin.Invest.,100:2865-2872(1997))。可以用于本上下文的其它类型的诱导型启动子是由特定生理状态(如温度)、急性期、细胞的特定分化状态或仅在复制细胞中调节的启动子。
在另一个实施方案中，将使用转基因的天然启动子或其片段。当期望转基因的表达应该模拟天然表达时，天然启动子可以是优选的。当转基因的表达必须在时间上或发育上，或以组织特异性方式，或者响应特定的转录刺激物调节时，可使用天然启动子。在另一个实施方案中，也可以使用其它天然表达控制元件，如增强子元件、聚腺苷酸化位点或Kozak共有序列来模拟天然表达。
在一些实施方案中，调节序列赋予组织特异性基因表达能力。在一些情况下，组织特异性调节序列结合以组织特异性方式诱导转录的组织特异性转录因子。此类组织特异性调节序列(例如启动子、增强子等)是本领域公知的。示例性组织特异性调节序列包括但不限于以下组织特异性启动子：神经元如神经元特异性烯醇化酶(NSE)启动子(Andersen等人,Cell.Mol.Neurobiol.,13:503-15(1993))、神经丝轻链基因启动子(Piccioli等人,Proc.Natl.Acad.Sci.IDSA,88:5611-5(1991))和神经元特异性vgf基因启动子(Piccioli等人,Neuron,15:373-84(1995))。在一些实施方案中，组织特异性启动子是选自以下的基因的启动子：神经元核(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、腺瘤结肠息肉(APC)和离子化的钙结合衔接分子1(Iba-1)。在一些实施方案中，启动子是鸡β-肌动蛋白启动子。
在一些实施方案中，将一种或多种miRNA的一个或多个结合位点掺入rAAV载体的转基因中，以抑制转基因在含有转基因的受试者的一个或多个组织(例如非CNS组织)中的表达。熟练技术人员将理解，可以选择结合位点，从而以组织特异性方式控制转基因的表达。例如，可以通过掺入miR-122的结合位点，使得从转基因表达的mRNA与肝脏中的miR-122结合并且受肝脏中的miR-122抑制，来抑制肝脏中转基因的表达。可以通过掺入miR-133a或miR-1的结合位点，使得从转基因表达的mRNA与心脏中的miR-133a或miR-1结合并被心脏中的miR-133a或miR-1抑制，来抑制转基因在心脏中的表达。mRNA中的miRNA靶位点可以在5’UTR、3’UTR中或者在编码区中。通常，靶位点在mRNA的3’UTR中。此外，转基因可以设计成使得多个miRNA通过识别相同或多个位点来调节mRNA。多个miRNA结合位点的存在可以导致多个RISC的协同作用，并且提供对表达的高效抑制。靶位点序列可以包含总共5-100、10-60个或更多个核苷酸。靶位点序列可以包含靶基因结合位点序列的至少5个核苷酸。
转基因编码序列
rAAV载体的转基因序列的组成将取决于所得载体将被放置的用途。例如，一种类型的转基因序列包括报告序列，其在表达时产生可检测的信号。在另一个实例中，转基因编码治疗性Glut1蛋白或治疗功能性RNA。在另一个实例中，转基因编码旨在用于研究目的的蛋白质或功能性RNA，例如创建含有转基因的体细胞转基因动物模型，例如以研究转基因产物的功能。在另一个实例中，转基因编码旨在用于创建疾病动物模型的蛋白质或功能性RNA。合适的转基因编码序列对于本领域技术人员是显而易见的。
在一些方面，本发明提供了rAAV载体，用于预防或治疗哺乳动物中的SLC2A1基因缺陷(例如，遗传性基因缺陷、体细胞基因改变)(如例如导致受试者中Glut1多肽缺陷的基因缺陷)和特别是用于治疗或降低表现Glut1缺陷的受试者中的缺陷严重性或程度的方法。在一些实施方案中，方法包括以下述的量将药物可接受载体中编码一种或多种治疗性肽、多肽、shRNA、微小RNA、反义核苷酸等的rAAV载体向受试者施用下述的时间段，所述量和时间段足以治疗患有或怀疑患有此类病症的受试者中的Glut1病症。
重组AAV施用
以足以转染期望组织的细胞以及提供足够水平的基因转移和表达而没有不适当的副作用的量施用rAAVS。常规和药学上可接受的施用途径包括但不限于直接递送至所选择的组织(例如，脑内施用、鞘内施用)、静脉内、口服、吸入(包括鼻内和气管内递送)、眼内、静脉内、肌肉内、皮下、皮内、肿瘤内和其它胃肠外施用途径。如果期望的话，可以组合施用途径。
将某些rAAV递送到受试者可以是例如通过施用到受试者的血液中。可以通过注射到静脉、动脉或任何其它血管导管中施用入血流中。此外，在某些情况下，可以期望将rAAV递送至脑组织、脑膜、神经元细胞、神经胶质细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞、脑脊液(CSF)、间质间隙等。在一些实施方案中，可以使用本领域已知的神经外科技术，如通过立体定向注射(参见例如Stein等人,J Virol 73:3424-3429,1999；Davidson等人,PNAS 97:3428-3432,2000；Davidson等人,Nat.Genet.3:219-223,1993；以及Alisky和Davidson,Hum.Gene Ther.11:2315-2329,2000)，通过用针、导管或相关装置注射到心室区域中，以及到纹状体(例如，纹状体的尾状核或壳)和神经肌肉接头或小脑小叶将重组AAV直接递送至脊髓或脑。在某些情况下，期望皮下、胰腺内、鼻内、胃肠外、静脉内、肌内、脑内、鞘内、脑内、口服、腹膜内或通过吸入递送本文所公开的合适配制的药物组合物中的基于rAAV的治疗构建体。在一些实施方案中，如美国专利号5,543,158；5,641,515和5,399,363(各自通过引用整体并入本文)描述的施用模式可用于递送rAAV。
重组AAV组合物
可以根据本领域已知的任何适当方法将在组合物中的rAAV递送至受试者。可以将优选悬浮在生理相容的载体中(例如在组合物中)的rAAV施用于受试者，例如人、小鼠、大鼠、猫、狗、绵羊、兔、马、牛、山羊、猪、豚鼠、仓鼠、鸡、火鸡或非人灵长类(例如短尾猴)。在某些实施方案中，组合物可以包含单独的或与一种或多种其它病毒(例如，编码具有一种或多种不同转基因的第二rAAV)组合的rAAV。
考虑到rAAV所针对的适应症，本领域技术人员可以容易地选择合适的载体。例如，一种合适的载体包括盐水，其可以用多种缓冲溶液(例如磷酸盐缓冲盐水)配制。其它示例性载体包括无菌盐水、乳糖、蔗糖、磷酸钙、明胶、葡聚糖、琼脂、果胶、花生油、芝麻油和水。载体的选择不是本发明的限制。
任选地，本发明的组合物除rAAV和载体之外还可含有其它常规药物成分，如防腐剂或化学稳定剂。合适的示例性防腐剂包括氯丁醇、山梨酸钾、山梨酸、二氧化硫、没食子酸丙酯、对羟基苯甲酸酯、乙基香草醛、甘油、酚和对氯酚。合适的化学稳定剂包括明胶和白蛋白
实现期望效果或“治疗效果”所需要的rAAV病毒体的剂量，例如，载体基因组/每千克体重(vg/kg)中的剂量单位将随若干因素而变化，包括但不限于：rAAV施用途径、达到治疗效果所需要的基因或RNA表达水平、待治疗的特定疾病或病症、以及基因或RNA产物的稳定性。基于前述因素以及本领域熟知的其它因素，本领域技术人员可以容易地确定rAAV病毒体剂量范围以治疗具有特定疾病或病症的受试者。rAAV的有效量通常在约10μl至约100ml的含有每个受试者约109至1016个基因组拷贝的溶液的范围内。可以使用其它体积的溶液。所使用的体积通常特别取决于受试者的体格、rAAV的剂量和施用途径。例如，对于鞘内注射或脑内施用，可以使用1μl至10μl或10μl至100μl范围内的体积。对于静脉内施用，可以使用10μl至100μl、100μl至1ml、1ml至10ml或更大范围内的体积。在一些情况下，每个受试者的约1010至1012个之间的rAAV基因组拷贝的剂量是合适的。在某些实施方案中，每个受试者的1012个rAAV基因组拷贝有效靶向CNS组织。在一些实施方案中，rAAV以每个受试者的1010、1011、1012、1013、1014或1015个基因组拷贝的剂量施用。在一些实施方案中，rAAV以每kg的1010、1011、1012、1013或1014个基因组拷贝的剂量施用。
在一些实施方案中，配制rAAV组合物以减少组合物中AAV颗粒的聚集，特别是在存在高rAAV浓度(例如约1013GC/ml或更高)的情况下。用于减少rAAV聚集的方法是本领域公知的，并且包括例如表面活性剂的添加、pII调节、盐浓度调节等(参见例如Wright F R等人,Molecular Therapy(2005)12,171-178，其内容通过引用并入本文。)
药学上可接受的赋形剂和载体溶液的配制是本领域技术人员公知的，在多种治疗方案中使用本文所述的特定组合物的合适的给药和治疗方案的开发亦然。通常，这些配制剂可以含有至少约0.1％的活性成分或更多，尽管活性成分的百分比当然可以改变，并且可以方便地在总配制剂的重量或体积的约1％或2％和约70％或80％或更多之间。自然地，可以以下述方式制备每种治疗有用的组合物中的活性成分的量，使得在任何给定单位剂量的化合物中获得合适的剂量。制备此类药物配制剂的本领域技术人员将考虑诸如溶解度、生物利用度、生物半衰期、施用途径、产品货架期以及其它药理学考虑等因素，并且因此，多种剂量和治疗方案可以是期望的。
适用于可注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中和在油中制备。在通常的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂以防止微生物的生长。在许多情况下，形式是无菌的并且在存在容易的注射性的程度上是流体的。在制造和储存的条件下它必须是稳定的，并且必须保藏以防微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)、其合适的混合物和/或植物油的溶剂或分散介质。可以例如通过使用包衣如卵磷脂，通过在分散体的情况下维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、酚、山梨酸、硫柳汞等来预防微生物的作用。在许多情况下，优选包括等张剂，例如糖或氯化钠。可以通过在组合物中使用延迟吸收剂，例如单硬脂酸铝和明胶来延长可注射组合物的吸收。
对于可注射水溶液的施用，例如，如果必要的话，溶液可以适当地缓冲，并且首先用足够的盐水或葡萄糖使液体稀释剂变得等张。这些特定的水溶液特别适用于静脉内、肌肉内、皮下和腹膜内施用。在这一点上，可以使用的无菌水性介质将是本领域技术人员已知的。例如，一剂可以溶解在1ml等张NaCl溶液中，并添加到1000ml的皮下灌注流体中或者在提出的输注部位处注射(参见例如“Remington’s Pharmaceutical Sciences”第15版，第1035-1038和1570-1580页)。剂量的一些变化必然会根据宿主的情况而发生。无论如何，负责施用的人员将确定个体宿主的适当剂量。
通过将需要量的活性rAAV掺入根据需要具有本文列举的各种其它成分的适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将各种灭菌的活性成分掺入无菌媒介物中制备分散体，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自上述列举的成分所需的其它成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，其从其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分及任何另外的期望成分的粉末。
本文公开的rAAV组合物也可以以中性或盐形式配制。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与蛋白质的游离氨基形成)，并且与无机酸，如例如盐酸或磷酸，或有机酸如乙酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等形成。由游离羧基形成的盐也可以源自无机碱，如例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁，和有机碱诸如异丙胺、三甲胺、组氨酸、普鲁卡因等。配制后，溶液将以与剂量配制剂相容的方式并且以治疗有效的量施用。配制剂容易以多种剂型施用，如可注射溶液、药物释放胶囊等。
如本文所用，“载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、媒介物、涂层、稀释剂、抗菌和抗真菌剂、等张和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液、胶体等。此类介质和药剂用于药物活性物质的用途是本领域公知的。补充的活性成分也可以掺入组合物中。短语“药学上可接受的”是指当施用于宿主时不产生变应性或相似的不利反应的分子实体和组合物。
递送媒介物如脂质体、纳米胶囊、微粒、微球、脂质颗粒、囊泡等可用于将本发明的组合物引入合适的宿主细胞中。特别地，可以配制rAAV载体递送的转基因用于递送，其包封在脂质颗粒、脂质体、囊泡、纳米球或纳米颗粒等中。
此类配制剂对于引入本文公开的核酸或rAAV构建体的药学上可接受的配制剂可以是优选的。脂质体的形成和使用通常是本领域技术人员已知的。最近，开发出具有改善的血清稳定性和循环半衰期的脂质体(美国专利号5,741,516)。此外，已经描述了作为潜在药物载体的脂质体和脂质体样制剂的各种方法(美国专利号5,567,434；5,552,157；5,565,213；5,738,868和5,795,587)。
脂质体已成功应用于许多细胞类型，所述细胞类型通常对通过其它方法的转染具有抗性。此外，脂质体没有基于病毒的递送系统典型的DNA长度限制。脂质体已经有效地用于将基因、药物、放射治疗剂、病毒、转录因子和变构效应器引入多种培养的细胞系和动物中。此外，已经完成了几项检查脂质体介导的药物递送有效性的成功的临床试验。
脂质体由分散在水性介质中的磷脂形成，自发形成多层同心双层囊泡(也称为多层囊泡(MLV))，MLV通常具有25nm至4μm的直径。MLV的超声波导致形成直径在200至范围内的核心中含有水溶液的小单层囊泡(SUV)。
或者，可以使用rAAV的纳米胶囊配制剂。纳米胶囊通常可以以稳定和可再现的方式捕获物质。为了避免由于细胞内聚合物过载引起的副作用，应当使用能够在体内降解的聚合物来设计此类超细颗粒(大小约0.1μm)。可以考虑使用满足这些要求的可生物降解的聚烷基-氰基丙烯酸酯纳米颗粒。
除了上述递送方法之外，还考虑以下技术作为将rAAV组合物递送至宿主的替代方法。超声促渗(即超声波)已经在美国专利号5,656,016中使用并且描述为用于增强药物渗入和通过循环系统的速率和功效的装置。考虑的其它药物递送替代物是骨内注射(美国专利号5,779,708)、微芯片装置(美国专利号5,797,898)、眼用配制剂(Bourlais等人，1998)、透皮基质(美国专利号5,770,219和5,783,208)和反馈控制递送(美国专利号5,697,899)。
关于rAAV组合物递送的一般方法
本发明提供了包含rAAV病毒体的稳定药物组合物。组合物即使当经受冷冻/解冻循环时并且当储存在由包括玻璃在内的各种材料制成的容器中时仍保持稳定和活性。
含有感兴趣的异源核苷酸序列的重组AAV病毒体可用于基因递送，如在基因疗法应用中，用于生产转基因动物，在核酸疫苗接种、核酶和反义疗法中，以及用于体外递送基因至多种细胞类型。
通常，使用体内或体外转导技术将rAAV病毒体引入受试者的细胞中。如果在体外转导，则将期望的受体细胞从受试者中取出，用rAAV病毒体转导并重新引入受试者中。或者，可以使用同基因或异基因细胞，其中那些细胞不会在受试者中产生不适当的免疫应答。
已经描述了将转导的细胞递送和引入受试者中的合适方法。例如，可以通过例如在合适的培养基中组合重组AAV病毒体与细胞，并且使用常规技术如Southern印迹和/或PCR，或通过使用可选择的标志物筛选含有感兴趣DNA的那些细胞来体外转导细胞。然后，可以将转导的细胞配制成下文更全面地描述的药物组合物，并且通过各种途径，诸如通过肌肉内、静脉内、动脉内、皮下和腹膜内注射，或通过使用例如导管注射到平滑肌中，或直接进入器官中将组合物引入受试者中。
对于体内递送，将rAAV病毒体配制成药物组合物，并且通常将肠胃外施用，例如通过直接对骨骼肌的肌内注射、关节内、静脉内或直接进入器官。
合适的剂量将取决于治疗的受试者(例如，人或非人灵长类或其它哺乳动物)、待治疗的受试者的年龄和一般状况、治疗的病状的严重程度、rAAV病毒体的施用方式等因素。本领域技术人员可以容易地确定适当的有效量。
因此，“治疗有效量”将落入可以通过临床试验确定的相对宽的范围内。例如，对于体内注射，即直接注射到受试者中，治疗有效剂量将为rAAV病毒体的约105至1016，更优选为108至1014个rAAV病毒体的量级。对于体外转导，待递送至细胞的rAAV病毒体的有效量将为rAAV病毒体的105至1013个，优选108至1013个的量级。如果组合物包含待递送回到受试者的转导细胞，则药物组合物中的转导细胞的量将为约104至1010个细胞，更优选为105至108个细胞。剂量当然取决于转导的效率、启动子强度、信息的稳定性和由此编码的蛋白质等。本领域普通技术人员可以通过建立剂量响应曲线的常规试验容易地确定有效剂量。
剂量治疗可以是单剂方案或多剂方案以最终递送上文规定的量。此外，受试者可以酌情施用多剂。因此，可以单剂或两剂、四剂、五剂、六剂或更多剂对受试者给予例如105至1016个rAAV病毒体，所述剂量共同导致递送例如105至1016个rAAV病毒体。本领域技术人员可以容易地确定适当数量的施用剂量。
因此，药物组合物将包含足够的遗传物质以产生治疗有效量的感兴趣的蛋白质，即足以减少或改善所讨论的疾病状态症状的量或足以赋予期望益处的量。因此，rAAV病毒体将以当以一剂或多剂给予时足以提供治疗效果的量存在于主题组合物中。rAAV病毒体可作为冻干制剂提供，并在病毒体稳定组合物中稀释，以立即或将来使用。或者，rAAV病毒体可以在生产后立即提供并存储以供将来使用。
药物组合物还将含有药学上可接受的赋形剂。此类赋形剂包括本身不诱导产生对接受组合物的个体有害的抗体，并且可以在没有不适当的毒性的情况下施用的任何药剂。药学上可接受的赋形剂包括但不限于液体如水、盐水、甘油和乙醇。可以在其中包括药学上可接受的盐，例如无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；和有机酸的盐，如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。此外，这些媒介物中可以存在辅助物质，如润湿剂或乳化剂，pH缓冲物质等。关于药学上可接受的赋形剂的详细讨论可以在REMINGTON'SPHARMACEUTICAL SCIENCES(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中获得。
如本文所用，“聚合酶链式反应”或“PCR”是指扩增特定的核酸序列、RNA和/或DNA的方法或技术，如例如美国专利号4,683,195中描述。通常，使用来自感兴趣区域末端或超出的序列信息来设计寡核苷酸引物。这些引物将与待扩增的模板的相反链序列相同或相似。两个引物的5’末端核苷酸可以与扩增的材料的末端重合。PCR可用于扩增特定的RNA序列、来自总基因组DNA的特定DNA序列、以及从总细胞RNA、噬菌体或质粒序列转录的cDNA等。一般参见Mullis等人(1987)Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51:263；Erlich编,(1989)PCR Technology(Stockton Press,N.Y.)。如本文所用，认为PCR是一种但不是唯一的用于扩增核酸测试样品的核酸聚合酶反应方法的实例，PCR包括使用已知核酸作为引物和核酸聚合酶，以扩增或产生特定的核酸片段。
核酸
本发明还包括编码本文所述的Glut1蛋白的某些构建体和核酸。某些构建体和序列，包括在表1中列出的所选序列，包括SEQ ID NO:28-75和80-97，和在某些方面，SEQ IDNO:2-5、7-9、11-14、16-18、20-23、25-27和80-95中一项或多项可用于本发明的实施方案。出人意料地，如本文所述，已经发现包括编码2A肽的核酸序列不表达期望水平的Glut1。因此，优选的rAAV构建体将缺少全部对应于2A编码序列的核酸SEQ ID NO:6、15和/或24。
优选地，核酸在低、中等或高的严格性条件下杂交，并且编码维持生物功能的Glut1蛋白。当第一核酸分子的单链形式可以在适当的温度和溶液离子强度条件下与第二核酸分子退火时，第一核酸分子与第二核酸分子“可杂交”(参见Sambrook等人，同上)。温度和离子强度的条件决定了杂交的“严格性”。典型的低严格性杂交条件包括55℃、5X SSC、0.1％SDS以及无甲酰胺；或30％甲酰胺、5X SSC、0.5％SDS，于42℃。典型的中度严格性杂交条件为40％甲酰胺，在42℃下用5X或6X SSC和0.1％SDS。高严格性杂交条件是在42℃或任选地在更高温度(例如57℃、59℃、60℃、62℃、63℃、65℃或68℃)下的50％甲酰胺、5X或6XSSC。一般地，SSC为0.15M NaCl和0.015M柠檬酸钠。杂交需要两种核酸含有互补序列，尽管取决于杂交的严格性，碱基之间的错配是可能的。用于杂交核酸的适当的严格性取决于本领域公知的变量核酸的长度和互补程度。两个核苷酸序列之间的相似性或同源性程度越大，核酸可以杂交的严格性越高。对于长度大于100个核苷酸的杂交体，已经得出了用于计算熔解温度的方程式(参见Sambrook等人，同上，9.50-9.51)。为了与较短的核酸例如寡核苷酸杂交，错配的位置变得更重要，并且寡核苷酸的长度决定其特异性(参见Sambrook等人，同上，11.7-11.8)。
当通过BLAST算法进行比较时，就恢复Glut1功能而言考虑下述Glut1多肽，所述多肽包含与本文提供的mGlut1或hGlut1氨基酸序列(例如SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79)至少约70％同一，优选至少约80％同一，更优选至少约90％同一，最优选至少约95％同一(例如，95％、96％、97％、98％、99％、100％)的氨基酸序列，其中选择算法的参数以在相应的参考序列的整个长度上给出相应序列之间的最大匹配。下述多肽也包括在本发明的构建体和方法中，在用BLAST算法进行比较时，所述多肽包含与任何参考Glut1氨基酸序列至少约70％相似，优选至少约80％相似，更优选至少约90％相似，最优选至少约95％相似(例如95％、96％、97％、98％、99％、100％)的氨基酸序列，其中选择算法的参数以在相应参考序列的整个长度上在相应的序列间给出最大匹配。
序列同一性是指当两个序列最佳比对时，两个多肽的氨基酸在等同位置上相同的程度。序列相似性包括相同的残基和不相同的生化相关的氨基酸。共享相似性质并且可以互换的生化相关的氨基酸在上文中讨论。
“同源性”是指两个多核苷酸序列之间或两个多肽序列之间在它们最佳比对时的序列相似性。当两个比较序列中的两个序列的位置被相同的碱基或氨基酸单体亚基占据时，例如，如果两个DNA分子中的每个中的位置被腺嘌呤占据，那么该分子在该位置是同源的。同源性的百分比是两个序列共享的同源位置数除以比较的总位置数x100。例如，当序列最佳比对时，如果两个序列中的10个位置中的6个匹配或同源，则两个序列是60％同源的。通常，当两个序列比对以给出最大百分比同源性时进行比较。
以下参考文献涉及通常用于序列分析的BLAST算法：BLAST ALGORITHMS:Altschul,S.F.等人,(1990)J.Mol.Biol.215:403-410；Gish,W.等人,(1993)NatureGenet.3:266-272；Madden,T.L.等人,(1996)Meth.Enzymol.266:131-141；Altschul,S.F.等人,(1997)Nucleic Acids Res.25:3389-3402；Zhang,J.等人,(1997)Genome Res.7:649-656；Wootton,J.C.等人,(1993)Comput.Chem.17:149-163；Hancock,J.M.等人,(1994)Comput.Appl.Biosci.10:67-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMS:Dayhoff,M.O.等人,"Amodel of evolutionary change in proteins."于Atlas of Protein Sequence andStructure,(1978)第5卷,增刊3.M.O.Dayhoff(编),第345-352页,Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,DC；Schwartz,R.M.等人,"Matrices fordetecting distant relationships."于Atlas of Protein Sequence and Structure,(1978)第5卷,增刊3."M.O.Dayhoff(编),第353-358页,Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,DC；Altschul,S.F.,(1991)J.Mol.Biol.219:555-565；States,D.J.等人,(1991)Methods 3:66-70；Henikoff,S.等人,(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915-10919；Altschul,S.F.等人,(1993)J.Mol.Evol.36:290-300；ALIGNMENT STATISTICS:Karlin,S.等人,(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-2268；Karlin,S.等人,(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877；Dembo,A.等人,(1994)Ann.Prob.22:2022-2039；和Altschul,S.F."Evaluating the statistical significance of multiple distinctlocal alignments."于Theoretical and Computational Methods in Genome Research(S.Suhai编),(1997)第1-14页,Plenum,New York。
本发明还提供了包含各种核酸的表达载体，其中当宿主细胞用载体转染时，核酸与宿主细胞识别的对照序列可操作地连接。还提供了病毒体，其包含重组AAV 9和某些AAV2序列，以及用于在鸡-β-肌动蛋白启动子和CMV增强子的指导下表达Glut-1的核酸序列。在这些构建体内，rAAV2序列对应于5’和3’ITR序列，例如SEQ ID NO:2、9、29、34、36、41等，如表1所述)。这些序列与AAV9衣壳一起包装以形成在本发明中治疗Glut-1缺陷的病毒体。
药物组合物和施用
为了制备本发明组合物的药物或无菌组合物，可将AAV9载体或相关组合物与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences和U.S.Pharmacopeia:National Formulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)。
治疗剂和诊断剂的制剂可以通过与例如冻干粉末、浆液、水溶液或悬浮液形式的可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备(参见例如Hardman等人(2001)Goodman andGilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics,McGraw-Hill,New York,NY；Gennaro(2000)Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott,Williams和Wilkins,New York,NY；Avis等人(编)(1993)Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications,Marcel Dekker,NY；Lieberman等人(编)(1990)PharmaceuticalDosage Forms:Tablets,Marcel Dekker,NY；Lieberman等人(编)(1990)PharmaceuticalDosage Forms:Disperse Systems,Marcel Dekker,NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety,Marcel Dekker,Inc.,New York,NY)。
可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序确定单独施用或与另一种试剂组合施用的治疗组合物的毒性和治疗功效，例如用于测定LD50(对群体的50％致死的剂量)和ED50(在50％的群体中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果之间的剂量比率是治疗指数(LD50/ED50)。在具体方面中，期望表现出高治疗指数的治疗性组合物。从这些细胞培养测定和动物研究获得的数据可用于制定用于人体的剂量范围。此类化合物的剂量优选在包括ED50的循环浓度的范围内，具有很少的毒性或没有毒性。剂量可以在该范围内变化，这取决于所用的剂型和施用途径。
在本发明的一个实施方案中，根据Physicians’Desk Reference 2003(ThomsonHealthcare；第57版(2002年11月1日))向受试者施用本发明的组合物。
施用模式可以有所变化。合适的施用途径包括口服、直肠、经粘膜、肠、肠胃外；肌内、皮下、皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、透皮或动脉内。
在具体实施方案中，组合物或治疗剂可以通过侵入途径，如通过注射施用(参见上文)。在本发明的其它实施方案中，静脉内、皮下、肌内、动脉内、关节内(例如关节炎关节)、瘤内或通过吸入、气雾剂递送施用组合物、治疗剂或其药物组合物。通过非侵入性途径(例如，口服，例如为丸剂、胶囊或片剂)施用也在本发明的范围内。
组合物可以与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，本发明的药物组合物可以通过用皮下针注射施用，包括例如预充式注射器或自动注射器。
本发明的药物组合物还可以用无针皮下注射装置施用；如美国专利号6,620,135；6,096,002；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中公开的装置。
或者，可以以局部而非系统方式施用AAV9载体或相关化合物，例如通过直接注射到期望的靶位点，通常在储库或持续释放配制剂中。此外，可以在靶向药物递送系统中施用组合物，例如在包被有靶向例如脑的组织特异性抗体的脂质体中。将脂质体靶向到期望的组织并且由期望的组织选择性吸收。
施用方案取决于几个因素，包括治疗组合物的血清或组织周转速率、症状水平和靶细胞在生物基质中的可及性。优选地，施用方案递送足够的治疗组合物以实现目标疾病状态的改善，同时最小化不期望的副作用。因此，递送的生物制剂的量部分地取决于特定的治疗组合物和所治疗病状的严重性。
适当剂量的确定由临床医生进行，例如使用本领域中已知或怀疑的参数或因素来影响治疗。通常，剂量以稍微小于最佳剂量的量开始，并且此后它以小增量增加，直到相对于任何负面副作用达到期望或最佳效果。重要的诊断测量包括例如所产生的炎症或炎性细胞因子水平的症状的测量。通常，期望将使用的生物制剂源自与靶向治疗的动物相同的物种，从而使对试剂的任何免疫应答最小化。
如本文所用，“抑制”或“治疗”或“处理”包括延缓与病症相关的症状的发展和/或此类病症的症状的严重性降低。术语进一步包括改善现有的不受控制或不需要的症状，预防其它症状，和改善或预防此类症状的根本原因。因此，术语表示已经对具有病症、疾病或症状或具有发展这种病症、疾病或症状的潜力的脊椎动物受试者赋予有益结果。
如本文所用，术语“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的基于rAAV9-Glut1的化合物的量，其当单独或与另外的治疗剂组合向细胞、组织或受试者施用时有效引起疾病或病状的一种或多种症状或此类疾病或病状进展的可测量的改善。治疗有效剂量还指足以导致至少部分改善症状，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病状，或治疗速率增加、治愈、预防或改善此类病状的化合物的量。当应用于单独施用的单独的活性成分时，治疗有效剂量是指单独的成分。当应用于组合时，治疗有效剂量是指导致治疗效果的活性成分的组合量，无论是连续还是同时组合施用。有效量的治疗剂将导致诊断测量或参数的改善至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％，最优选至少50％。在采用主观测量评估疾病严重性的情况下，有效量也可导致主观测量的改善。
试剂盒
本发明还提供了试剂盒，其以试剂盒形式包含本发明的组合的组分。本发明的试剂盒包含一种或多种组分，包括但不限于如本文讨论的基于rAAV9-Glut1的化合物，与一种或多种另外的组分(包括但不限于如本文所讨论的药学上可接受的载体和/或化疗剂)组合。基于rAAV9-Glut1的化合物或组合物和/或治疗剂可以在药物组合物中配制为纯组合物或与药学上可接受的载体组合。
在一个实施方案中，试剂盒包含一个容器中(例如，在无菌玻璃或塑料小瓶中)的本发明的基于rAAV9-Glut1的化合物/组合物或其药物组合物和/或在另一个容器中(例如，在无菌玻璃或塑料小瓶中)的化疗剂。
在本发明的另一个实施方案中，试剂盒在单一的普通容器中包括本发明的组合，包括基于rAAV9-Glut1的化合物以及药学上可接受的载体，任选地与一起配制的一种或多种化疗剂组分组合，任选地在药物组合物中。
如果试剂盒包括用于对受试者肠胃外施用的药物组合物，则该试剂盒可以包括用于进行此类施用的装置。例如，试剂盒可以包括如上所讨论的一种或多种皮下注射针或其它注射装置。
该试剂盒可以包括包含有关试剂盒中的药物组合物和剂型的信息的包装插页。通常，此类信息有助于患者和内科医生有效和安全地使用封闭的药物组合物和剂型。例如，关于本发明的组合的以下信息可以在插页中提供：药代动力学、药效学、临床研究、功效参数、适应症和用法、禁忌症、警告、预防措施、不良反应、过量用药、适当的剂量和施用、如何提供、适当的储存条件、参考文献、制造商/分销商信息和专利信息。
通用方法
分子生物学中的标准方法记载于Sambrook,Fritsch和Maniatis(1982&1989第2版,2001年第3版)Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning,第3版,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Wu(1993)Recombinant DNA,第217卷,Academic Press,San Diego,CA)。标准方法也出现于Ausbel等人(2001)Current Protocols in Molecular Biology,第1-4卷,John Wiley andSons,Inc.New York,NY，其描述细菌细胞中的克隆和DNA诱变(第1卷)、在哺乳动物细胞和酵母中克隆(第2卷)、糖缀合物和蛋白质表达(第3卷)和生物信息学(第4卷)。
描述了用于蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀、层析、电泳、离心和结晶(Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science,第1卷,John Wiley and Sons,Inc.,New York)。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生、蛋白质的糖基化(参见例如Coligan等人(2000)Current Protocols in Protein Science,第2卷,JohnWiley and Sons,Inc.,New York；Ausubel等人(2001)Current Protocols in MolecularBiology,第3卷,John Wiley and Sons,Inc.,NY,NY,第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich,Co.(2001)Products for Life Science Research,St.Louis,MO；第45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001)BioDirectory,Piscataway,N.J.,第384-391页)。描述了多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化(Coligan等人(2001)Current Protcolsin Immunology,第1卷,John Wiley and Sons,Inc.,New York；Harlow和Lane(1999)UsingAntibodies,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Harlow和Lane,同上)。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可用的(参见例如Coligan等人(2001)Current Protocols in Immunology,第4卷,John Wiley,Inc.,New York)。
缩写
AAV：腺相关病毒
rAAV重组腺相关病毒或病毒载体
BBB：血脑屏障
FMDV：口蹄疫病毒
GFP：绿色荧光蛋白
Glut1：葡萄糖转运蛋白1，也被称为溶质载体家族2，促进葡萄糖转运蛋白成员1(SLC2A1)，是人中的单向转运体蛋白，由SLC2A1基因编码。Glut1有助于葡萄糖转运通过哺乳动物细胞的质膜。Glut1是第一种待表征的葡萄糖转运蛋白。Glut1 1与人Glut1蛋白(hGlut1)(登录号：NP_006507.2；SEQ ID NO:79)和小鼠Glut1蛋白(mGlut1)(登录号：NP_035530.2；SEQ ID NO:78)是高度保守的，共有98％同源性。Glut1与其它Glut表现出40％的同源性。
SLC2A1：编码人葡萄糖转运蛋白1(hGlut1)的基因。人SLC2A1(登录号：NG_008232.1；基因ID-6513)。
Slc2a1：编码小鼠Glut1(mGlut1)的基因(登录号：基因组编号：NC_000070.6；基因ID-20525)。
GLUT1DS：Glut1缺陷综合征
PND：出生后天数
PND3：出生后第3天
实施例
表1：重组Glut1质粒
重组AAV构建体形成
产生四种DNA构建体，其携带与编码绿色荧光蛋白(GFP)报告子的核苷酸盒连接的鼠或人SLC2A1基因，如图1A-B中所示。这四种构建体还含有掺入Glut1和GFP开放阅读框之间的编码口蹄疫病毒(FMDV)的16个氨基酸长的2A肽的核酸序列。该构建体中包含2A肽以避免Glut1-GFP融合蛋白可能改变Glut1蛋白的结构或活性的可能性。2A肽在最终产生成熟FMDV蛋白的加工事件的级联中介导FMDV多蛋白的主要顺式-“切割”(Donnelly，M.L.等人(2001))。预期这种策略可创建构建体，其中Glut1蛋白以其天然状态产生。然而，如下所述，这些构建体无一以令人满意的水平表达Glut1。
还开发了六种另外的没有编码2A肽的核酸的DNA构建体(图1C-D)，其中几种包括提供在肝脏中选择性关闭SLC2A1基因的表达的元件(图1D)。开发这些构建体以解决以下可能性：在将来的基因疗法实验中全身性增加SLC2A1基因可以导致高水平的蛋白质在肝脏中表达，这可以增加糖原发生的过程并因此诱导低血糖状态。最后，为了对照目的，也产生了仅含有天然小鼠或人SLC2A1基因的构建体(图1C)。pAAV9 CB6 PI hGlut1、pAAV9 CB6 PIhGlut1 out3xmiR122BS和pAAV9 CB6 PI hGlut1 in3xmiR122BS将用于验证实验。这些构建体的序列和关键特征列于表1和相应的序列表SEQ ID NO:1-97中。
转染到CHO细胞中的rAAV质粒的初步表达分析
使用两种细胞系来评价细胞培养中的各种重组质粒。一种细胞系是中国仓鼠卵巢(CHO)系，另一种是源自Glut1患者的成纤维细胞系(Yang等人，2011)。细胞培养实验和随后的蛋白质印迹表明，含有2A肽的质粒构建体不以满意的水平表达Glut1和GFP。尽管意想不到，有可能在SLC2A1/slc2A1基因的上下文中，2A肽不利地影响蛋白质的表达。相反，发现仅含有小鼠或人SLC2A1基因的对照构建体表达强健水平的蛋白质。含有2A的Glut1构建体(图1A-B)无一进一步追求在突变体模型系统中恢复Glut1表达。
为了规避在前四种构建体中存在2A肽引入的表达困难(图1A-B)，测试了hGlut1-eGFP融合蛋白(称为phGlut1::eGFP)。细胞培养实验表明融合蛋白不仅表达，而且在葡萄糖摄取测定中也有功能。考虑该构建体(phGlut1::eGFP)以及仅含有小鼠slc2a1或人SLC2A1基因的构建体用于涉及Glut1模型小鼠的基因疗法的体内实验。
AAV9质粒克隆和随后的病毒载体包装
将hGlut1-eGFP融合蛋白构建体(phGlut1::eGFP)重新克隆到AAV9质粒中，用于随后包装入病毒载体。为了确保重新克隆的构建体继续表达蛋白质，将其瞬时转染入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中，并且通过蛋白质印迹分析检测蛋白质水平(图2A)。对CHO细胞中蛋白质表达的分析表明，相对于仅表达由不同启动子元件驱动的hGlut1编码cDNA或hGlut-eGFP融合物的构建体，AAV9-hGlut1-eGFP质粒表达较低水平的Glut1(图2A)。然而，修饰的(AAV9-hGlut1-eGFP)融合构建体以有效和令人满意的量继续表达Glut1蛋白。此外，融合蛋白似乎显著大于天然hGlut1蛋白，如由于Glut1cDNA 3’末端的GFP标签所预期(图2A)。这些结果与葡萄糖摄取测定法一致，其中发现hGlut-eGFP蛋白增加摄取葡萄糖到CHO细胞中(图2B)。图2C显示转染到CHO细胞后该构建体的GFP荧光。平行地，也将人SLC2A1和小鼠slc2a1基因克隆到AAV9质粒中，并且转染到患者成纤维细胞中后，发现驱动Glut1表达并增加葡萄糖摄取。因此，将每种包装在AAV9衣壳中，并将约1013个基因组拷贝制备用于施用到Glut1DS模型小鼠中。(根据如美国专利号8,734,809，以及Grieger和Samulski 2005以及Grieger和Samulski 2012中所述的方法)。
包装条件/分布
为了优化用于施用包装在AAV9载体中的Glut1表达构建体的条件，分析野生型小鼠中AAV9-GFP(Foust，K.D.等人2009)载体的分布。(根据Gao,G.P.和Sena-Esteves,M.(2012),于Molecular Cloning,第2卷:A Laboratory Manual(M.R.Green和J.Sambrook编)中描述的方法)。
在野生型成年或新生小鼠的不同组织中评价AAV9-GFP构建体的分布。在经AAV9-GFP注射的小鼠的测试组织中，但不在经PBS/对照注射的小鼠中发现明亮的绿色荧光。基本上，通过眶后窦和颞静脉，在约40μl的体积中将约4x1012个载体的基因组拷贝全身性施用到小鼠中。这些实验的结果表明AAV9病毒分布到多种神经和非神经组织。特别地，发现高水平靶向骨骼肌、心脏和肝脏。然而，在脑组织中观察到大量的GFP荧光，包括作为脑微血管系统衬里的Glut1阳性内皮细胞。重要的是，这些细胞是Glut1 DS靶向疗法的推定部位。
对照AAV9-mGlut1构建体
表2—
mGlut1＝pAAV9 CB6PI mGlut1(SEQ ID NO:35-41).
表2-Glut1或媒介物注射的小鼠的概述
将表达期望量的mGlut1蛋白的构建体之一包装到AAV9病毒载体中。即使此构建体没有标记的标签(例如GFP)，可以通过蛋白质印迹分析和免疫组织化学实验来评估总的mGlut1蛋白来追踪模型小鼠中来自此构建体的Glut1表达。
通过框后窦将构建体pAAV9 CB6 PI mGlut1(SEQ ID NO:35)引入出生后(PND)第2天的突变体Glut1小鼠幼仔中。用该构建体注射的小鼠充当AAV9-hGlut1-eGFP注射的突变体(SEQ ID NO:80；参见特征SEQ ID NO:81-87)的对照。已经用AAV9-mGlut1构建体pAAV9CB6 PI mGlut1(表2)注射9只突变体小鼠。作为另外的对照，用单独的媒介物(PBS)注射7只突变体。对这些小鼠疾病表型的功能改善进行测试。这将通过确定脑组织中的葡萄糖摄取水平，通过PET扫描和通过根据标准技术(参见Kariya等，2012)测量转杆或垂直杆测试的运动表现来进行。
用Glut1 DS模型小鼠进行基因替换实验中使用的构建体之一是AAV9-hGlut1-eGFP构建体(SEQ ID NO:80)。由该构建体产生的加标签的Glut1蛋白将允许追踪各种器官系统中的蛋白质分布，包括实验小鼠脑的Glut1表达性内皮细胞。这将允许优化用于检测小鼠脑中mGlut1的条件。使用特异性抗体检测脑中mGlut1蛋白的稳健表达。
将Glut1恢复到Glut1 DS突变体小鼠拯救疾病表型，如通过拯救步态功能障碍例 示
利用重组腺相关病毒9(rAAV9)感染多种细胞类型的能力作为将鼠Slc2a1基因重新导入人疾病的小鼠模型中的特征。在缺乏一个野生型Slc2a1等位基因的情况下，Glut1DS小鼠在转杆测定中表现不佳，即认为是模拟人患者中观察到的运动行为缺陷，即运动表型的结果测量。在PND3时给突变体小鼠注射约4x 1011个由构建体pAAV9 CB6 PI mGlut1(SEQ ID NO:35)提供的AAV9-Glut1的基因组拷贝或媒介物(PBS)。使用单因素ANOVA计算P值。在PND3时将Slc2a1基因恢复到突变体小鼠中导致早在6周龄时在转杆(在标准条件下进行--参见Wang等人2006)上表现的显著改善(图3A)。增强的表现持续到20周龄，此时终止实验。
除了在转杆测定上改善的表现(图3A)之外，经处理的小鼠还比其媒介物处理的对应物以更大的敏捷性越过垂直杆(图3B)。当在6周龄至12周龄之间测试分组时，经处理的突变体与野生型对照同窝出生者无差别地表现。这些结果提供了强有力的证据，证明将Glut1恢复到Glut1 DS小鼠减轻了人疾病的运动表型特征，表明将Slc2a1基因恢复到突变体模型小鼠指示治疗价值。
将Glut1恢复到Glut1 DS突变体小鼠导致多个组织中基因的表达增强。
为了探索AAV9-Glut1处理的动物的改善表现的分子基础，评估了动物的脑和肝组织中鼠Slc2a1基因的表达。用pAAV9 CB6 PI mGlut1(SEQ ID NO:35)处理的突变体动物在脑和肝组织中压制较高水平的Slc2a1基因(图4A-B)。从经处理的小鼠和对照小鼠中提取脑组织和肝组织，制备RNA，然后逆转录，之后在Q-PCR测定中扩增Slc2a1转录物。用β-肌动蛋白归一化Slc2a1基因表达。图4A显示了处理的突变体和相关对照中的相对Slc2a1基因表达。图4B显示了作为野生型Glut1+/+小鼠中的表达百分比的Slc2a1表达。在经处理的突变体(Glut1+/-)和相关对照(Glut1+/+和经PBS处理的Glut1+/-突变体)中通过定量PCR，使用跨越内含子1的引物扩增编码Glut1的转录物。将小鼠安乐死，并且在用PBS穿心灌注后提取组织。根据制造商的说明书(Qiagen，Valencia，CA)，使用Qiagen RNAeasy试剂盒制备RNA。根据标准方法逆转录RNA，并使用以下引物扩增编码Glut1的转录物：Glut1QPCR F1:5’CTTGCT TGT AGA GTG ACG ATC 3’(SEQ ID NO:76)和Glut1QPCR R1:5’CAG TGA TCC GAG CACTGC TC 3’(SEQ ID NO:77)。预期的212bp条带在Eppendorf Realplex Cycler(Eppendorf，Germany)中定量。
出乎意料的是，与AAV9-Glut1病毒对肝具有特定向性的以前的报道(Foust等人，2010)一致，处理的突变体肝中的基因的表达超过了Glut1+/+对照的同一组织中的水平。在一小组施用了病毒的WT小鼠中，这也导致低血糖症，这可能是该组织中Slc2a1上调的结果，因此从血液中除去葡萄糖。因此，使用含有miRNA-122结合位点(如图1D所示并由SEQ IDNO:42-75涵盖)的构建体预期抑制Slc2a1的表达。miRNA-122在肝脏中特异性表达并抑制基因(miRNA-122结合该基因的转录物)的表达(Xie等人，2011)。这一发现的生理后果将成为进一步调查的对象。
用AAV9-Glut1处理的突变体小鼠中增强的Glut1脑蛋白和CSF葡萄糖；恢复Glut1 减轻Glut1 DS模型小鼠的脑脊液糖分过少。
Glut1 DS的定义特征是脑脊液糖分过少(低脑脊液葡萄糖)。Glut1 DS模型小鼠表现出这种表型。为了确定将Glut1恢复到模型小鼠是否逆转或减轻脑脊液糖分过少，从动物中提取血液和脑脊髓液(CSF)，并测量葡萄糖水平。所有小鼠在进行测量前禁食过夜。基本上如前所述(Wang等人，2006；Fleming等人，1983)，从小脑延髓池中分离CSF。简言之，从头骨的顶部到背部胸部进行切割，并且除去从头骨的基部到第一椎骨的肌肉组织以暴露覆盖小脑延髓池的脑膜。切除小脑延髓池上方的组织，注意不要穿透半透明的脑膜。一旦对周围区域清除残留的血液/间质液，使用附着于30G针的微量移液管穿刺覆盖小脑延髓池的蛛网膜并抽出5-15μl的CSF。在5分钟内完成整个过程，并用Ascensia Elite XL血糖计(BayerCorp.)测量CSF葡萄糖。在CSF提取之前，通过从尾部的切口中抽取约10μl血液，类似地测定血糖。评估每只小鼠的血液和CSF葡萄糖浓度的各两个读数。将报告平均值。
关于CSF葡萄糖值和疾病阶段，以下范围是典型的：超过90％的Glut1患者具有<40mg/dl(2.2mM)的CSF葡萄糖值，并且剩余患者落入41-52mg/dl的范围内。因此，CSF葡萄糖水平的正常范围≥约53mg/dl。对于Glut1 DS模型小鼠，典型的CSF葡萄糖水平为约23.3±7.17mg/dL(落入<25.0±8.00mg/dl的范围内)；而对于野生型小鼠，水平为约74.6±14.1mg/dL(落入≥约70.0±15.0mg/dL范围内)。
此外，RBC葡萄糖摄取功能测定通常用作Glut1单倍体不足的替代物。在该测定中，表现出Glut1 DS的患者样品围绕50％摄取聚簇，范围为36-73％。估计≥75％的活性与正常范围一致。值得注意的是，<25％是严重的，并且接近于0％的胚胎致死率。
通过用构建体pAAV9 CB6 PI mGlut1(SEQ ID NO:35)转染将slc2a1基因恢复到Glut1 DS突变体小鼠导致Glut1的表达增加(图5A)。另外，经处理的Glut1 DS突变体小鼠在脑组织中表达升高水平的Glut1蛋白(图5B)。在图5C中，经处理的突变体中的CSF葡萄糖浓度显著大于未处理突变体的CSF葡萄糖浓度，但是未达到野生型对照中观察到的水平。恢复的slc2a1突变体小鼠表现出增加水平的CSF/血糖(图5D)。对于未处理的突变体小鼠，样品大小为n＝8，并且对于经处理的突变体小鼠，n＝9。另外，野生型分组是n＝18。这些数据显示，将Glut1恢复到Glut1 DS突变体小鼠提高CSF葡萄糖水平，并且减轻受影响的动物的脑脊液糖分过少。总的来说，这些结果清楚地表明在Glut1缺陷型受试者中恢复Glut1的治疗益处。这些实验的初步结果表明，将Glut1恢复到这些有症状的成年小鼠不能拯救疾病表型，从而论证了对小鼠以及也可能对人的有限的治疗时机窗口。
将Glut1恢复到有症状的小鼠—Glut1施用的时机。
在Glut1 DS小鼠中在疾病过程期间早期，将Glut1表达恢复到模型小鼠(通过PN3注射AAV9-mGlut1构建体例示)具有明显的治疗价值。为了确定有症状的小鼠中Glut1恢复的时间范围，已经启动了涉及将pAAV CB6 PI mGlut1构建体(SEQ ID NO:35)注入8周龄突变体小鼠的实验。在这点时，Glut1 DS小鼠明显是有症状的，在转杆上表现得不如对照野生型同窝出生者那样好。因此，将一组Glut1 DS小鼠全身性注射媒介物或1x 1012个AAV9-mGlut1基因组拷贝。所有的小鼠耐受程序，表明成年啮齿动物中的病毒注射是安全的。正在评价与上述相似的分子、细胞和行为测定法，以确定将允许治疗/缓解Glut1缺乏症状的时间范围，以及逆转疾病表型过程的任何时间限制。
在Glut1 DS模型中细化治疗时机窗口
目前的数据表明，新生(PND3)Glut1 DS小鼠中AAV9介导的Glut1(鼠)蛋白的补充增加了Glut1的表达，减轻了在该疾病中特征性观察到的脑脊液糖分过少，恢复了脑的大小，并导致了运动表现的显著改善。相比之下，8周龄时的Glut1补充未能拯救疾病表型。这些结果表明，在Glut1 DS模型小鼠中存在有限的治疗时机窗口，这一发现可能反映了人的病状。初步数据还表明，早在2周龄时，突变体小鼠中的CSF葡萄糖水平显著降低(突变体：23.25±3.77mg/dL；对照：53.33±5.20mg/dL，P<0.01，t检验)。然而，不清楚的是在可辨别的明显表型前，在此时机时恢复Glut1是否将会提供治疗益处。
为了确定在该疾病早期(类似于治疗在儿童期已经得到诊断、但是不过在婴儿期受到Glut1缺陷的致病作用的患者)恢复Glut1的结果，用pAAV9 CB6 PI mGlut1载体(SEQID NO:35)全身性转导突变体小鼠。简言之，将约50μl体积中约1012个媒介物治疗载体的基因组拷贝注射到2周龄小鼠的颞静脉中。随后，使用分子(蛋白质印迹分析、Q-PCR测定、CSF和血糖水平)、成像(PET扫描)和行为(转杆分析、垂直杆测试)测定的综合组来评估动物，以确定在小鼠中在此“幼态”阶段时恢复功能性蛋白质的结果。这些实验将补充在新生(PND3)(一方面)中以及成年模型(8周)(另一方面)中处理后获得的结果，并细化Glut1 DS的治疗时机窗口。
在Glut1 DS模型小鼠中评估用生酮饮食的早期处理和Glut1蛋白晚期补充的组合 效果
尽管清楚的是将Glut1恢复到成年小鼠(8周)不减轻Glut1 DS表型，但可能的是用高脂肪饮食对这些小鼠的预先处理可能已经产生更有利的结果。进行此类饮食的小鼠更准确地代表老年Glut1 DS患者分组，其可能已经错过治疗的理想治疗窗口，但是不过由于生酮饮食的早期保护作用可以受益于Glut1蛋白的晚期恢复。此类饮食为脑提供酮体，这是一种通过单羧酸转运蛋白穿过血脑屏障的可替代的(尽管不完美)的能量来源。因此，除了我们在两周龄老鼠中的实验之外，我们还将测试将Glut1恢复到成年(6-8周)突变体的效果，所述突变体已经(在PND7开始)接受7C甘油三酯三庚酸甘油酯(triheptanoin)。目前在Glut1 DS的临床试验中，三庚酸甘油酯不仅被代谢为乙酰CoA，用于TCA循环，而且还被认为为该循环提供必需的添补底物，因为营养物最终被分解以提供细胞的能量需求。简言之，本实验将涉及用(82mg/g)或不用三庚酸甘油酯处理突变体，直到对它们施用AAV9-Glut1(pAAV9 CB6 PI mGlut1)构建体。然后，如上所述评估小鼠的不同分组，作为预测进行当前可用(生酮饮食)治疗的老年患者中恢复Glut1表达的治疗结果的手段。
优化Glut1构建体用于临床试验
尽管迄今为止尚未观察到Glut1 DS小鼠中slc2a1表达的不利影响，但是对施用了构建体pAAV9 CB6 PI mGlut1载体(SEQ ID NO:35)的野生型小鼠的小样品的初步研究表明CSF和血糖水平降低。这种意想不到的事件可以源自肝脏(优选的AAV9靶器官)中slc2a1表达增加，从而增强了葡萄糖向该组织中的转运。净结果是以低血糖状态反映的循环葡萄糖的下降。在这种事件的预期中，修饰hGlut1构建体(pAAV CB6 PI hGlut1)以排除其在肝脏(AAV9具有特别高的向性的器官)中的高水平表达(Zincarelli等人，2008；Pacak等人，2006)。为此，向构建体引入miRNA-miR-122(在肝细胞中特异性表达)的结合位点(BS)。该策略先前已经成功实施(参见Xie等人，2011)，并利用miRNA介导的对靶mRNA的内切核溶解切割，从而将转录物的表达限制于目标组织。将图1D和表1中所示的此类构建体(pAAV CB6 PIhGlut1-in3xmiR-122BS、pAAV CB6 PI hGlut1-out3xmiR-122 BS、pAAV CB6 PI mGlut1-in3xmiR-122、pAAV CB6 PI mGlut1-out3xmiR-122)与初始(未修饰的)Glut1表达载体并列在小鼠的亚组中测试，各自检查Glut1表达水平和治疗功效。初始构建体引起低血糖症的增加趋势将表明在随后的实验和试验中使用新的Glut1-miRNA-BS构建体的益处。
为了优化本文所述的测试构建体的表达，不仅仅作为在制造过程期间降低病毒滴度的手段，而且还解决了与病毒的高浓度相关的安全性顾虑，使用免费可获得的软件(https://www.idtdna.com/CodonOpt)，使用密码子优化过程来评价SLC2A1和slc2a1基因。另外，根据需要将共同的Kozak序列引入构建体中。因此，表1中描述的任何构建体或元件可以以此方式进行密码子优化。每个经修饰的构建体将在小鼠中与亲本构建体平行测试。简言之，通过颞静脉将构建体全身性施用到PND3小鼠幼仔中。然后，在两或三周后将动物安乐死，并通过Q-PCR和蛋白质印迹测定每种构建体的蛋白质水平。考虑递送最快速和高水平表达的构建体，用于在非人灵长类研究中以及最终在用于人患者的临床试验中最终使用。
非人灵长类研究
为了确定我们选择的构建体在大型哺乳动物模型中的生物分布、表达和毒性，将一种或多种病毒载体施用于一组食蟹猴。简言之，以5x 1013个基因组拷贝/kg的剂量对PND1、PND90和2年龄的各6只动物全身性施用AAV9载体。为了确定构建体的急性毒性，在载体施用后1天、3天和7天，对动物放血。此外，在载体注射后2、3和4周对动物放血。在每种情况下，评估重要的临床化学和血液学参数。通过基于转导的定量中和抗体测定(Rapti等人，2012)在血清样品中监测针对AAV9的中和抗体的滴度，并使用ELISPOT、细胞内细胞因子染色技术和流式细胞术(Walker等人，2001)测定PBMC中转基因或衣壳特异性T细胞的存在。为了补充上述免疫学研究，在第4周对来自每个分组的三只动物实施安乐死，以在所有主要器官系统中进行组织病理学、载体生物分布研究和转基因表达分析。这些实验还能够在病毒施用后的早期对比晚期时间时检查和比较血清、淋巴细胞和PBMC中对衣壳或转基因的B和T细胞免疫应答。为了进行长期安全性研究，在3个月时段内追踪每组中剩下的3只动物，期间每个月对它们放血，用于临床化学和血液学研究，如上文所述。这些动物最终将在注射后3个月进行安乐死，并且如急性毒性研究中所述进行分析。尽管与食蟹猴Glut1共享约99％的同源性，人Glut1蛋白可能引发攻击性免疫应答。为了排除这点，将miR-142-3p和miR-155的两个miRNA结合位点引入到测试构建体中。来自独立研究的初步结果表明，这些miRNA在抗原呈递细胞中表达，因此抑制转录物含有miRNA结合位点的蛋白质的表达。总而言之，这些研究将有助于本文所述的测试Glut1构建体在人临床试验中的最终使用。
参考文献
1.De Vivo DC，Trifiletti RR，Jacobson RI，Ronen GM，Behmand RA，Harik SI.(1991).Defective glucose transport across the blood-brain barrier as a causeof persistent hypoglycorrhachia，seizures，and developmentaldelay.N.Engl.J.Med.，325，703-709.
2.Donnelly，M.L.et al.(2001)，The‘cleavage’activities of foot-and-mouthdisease virus 2A site directed mutants and naturally occurring‘2A-like’seqaences.J.Gen.Virol.82，1027-1041.
3.Foust，K.D.，Nurre，E.，Montgomery，C.L.，Hernandez，A.，Chan，C.M.andKaspar.B.K.(2009).Intravascular AAV9preferentially targets neonatal neuronsand adult astrocytes.Nat.Biotech.27，59-65.
4.Pearson TS，Akman C，Hinton VJ，Engelstad K，De Vivo DC.(2013)Phenotypic spectrum of glucose transporter type 1 deficiency syndrome(Glut 1DS)，Curr.Neurol.Neurosci.Rep.13，342.
5.De Giorgis V and Veggiotti，P.(2013)Glut 1 deficiency syndrome 2013：Current state of the art.Seizure 22，803-811.
6.Wang D，Pascual JM.Yang H，Engelstad K，Mao X，Cheng J，Yoo J，NoebelsJL，De Vivo DC(2006)A mouse model for Glut-1haploinsufficiency.Hum.Mol.Genel.15，1169-1179.
7.Mueckler M，Caruso C，Baldwin SA，Panico M，Blench I，Morris HR，AllardWJ，Lienhard GE，Lodish HF(1985)Sequence and structure of a humanglucosetransporter.Science 229，941-945.
8.Seidner G，Alvarez MG，Yeh JI，O’Driscoll KR，Klepper J，Stump TS，WangD，Spinner NB，Birnbaum MJ，De Vivo DC(1998)GLUT-1deficiency syndrome caused hyhaploinsufficiency of the blood-brain barrier hexose carrier.Nat Genet.18，188-191.
9.Yang H，Wang D，Engelstad K，Bagay L，Wei Y，Rotstein M，Aggarwal V，LevyB，Ma L，Chung W K，De Vivo DC(2011)Glutl deficiency syndrome and erythrocyteglucose uptake assay，Ann Neurol 70，996-1005.
10.Grieger JC，Samulski RJ(2005)Adeno-associated virus as a genetherapy vector：vector development，production and clinical applications.AdvBiochem Eng Biotechnol.99，119-145.
11.Grieger JC.Samulski RJ(2012)Adeno-associated virus vectorology，manufacturing，and clinical applications.Methods Enzymol.507，229-254.
12.Kariya S，Re DB，Jacquier A，Nelson K，Przedborski S，Monani UR(2012)Mutant superoxide dismutase 1(SOD1)，a cause of amyotrophic lateral sclerosis，disrupts the recruitment of SMN，the spinal muscular atrophy protein tonuclear Cajal bodies.Hum Mol Genet.21，3421-3434.
13.Foust KD，Wang X，McGovern VL，Braun L，Bevan AK，Haidet AM，Le TT，Morales PR，Rich NM，Burghes AH，Kaspar BK(2010)Rescue of the spinal muscularatrophy phenotype in a mouse model by early postnatal delivery ofSMN.Nat.Biotech.28，271-274.
14.Fleming JO，Ting JY，Stohlman SA，Weiner LP(1983)Improvements inobtaining and characterizing mouse cerebrospinal fluid.Application to mousehepatitis virus-induced encephalomyelitis.J Neuroimmunol.4，129-140.
15.Gao，G.P.，and Sena-Esteves，M.(2012).Introducing Genes intoMammalian Cells：Viral Vectors.In Molecular Cloning.Vol 2：ALaboratory Manual(M.R.Green and J.Sambrook eds.)pp.1209-1313.Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York.
16.Rapti K，Louis-Jeune V，Kohlbrenner E，Ishikawa K，Ladage D，ZolotukhinS，Hajjar RJ，Weber(2012)Neutralizing antibodies against AAV serotypes 1，2，6，and 9in sera of commonly used animal models.Mol.Ther.20，73-83.
17.Goulder PJ，AddoMM，Altfeld MA，Rosenberg ES，Tang Y，Govender U，Mngqundaniso N，Annamalai K，Vogel TU，Hammond M，Bunce M，Coovadia HM，Walker BD(2001)Rapid definition of five novel HLA-A*3002-restricted humanimmunodeficiency virus-specific cytotoxic T-lymphocyte epitopes by elispotand intracellular cytokine staining assays.J.Virol.75，1339-1347.
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认为上述书面说明书足以使本领域技术人员能够实施本发明。除了本文所示和所述的内容之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员将从前述描述中变得显而易见，并且落在所附权利要求书的范围内。
序列表
<110> 纽约市哥伦比亚大学理事会
马萨诸塞大学医学院
<120> 重组GLUT1腺相关病毒载体构建体以及用于恢复GLUT1表达的相关方法
<130> 01001/003887-WO0
<140>
<141>
<150> 62/130,899
<151> 2015-03-10
<160> 97
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 7109
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI EGFP-2A-hGlut1
<400> 1
gccttaatta ggctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt 60
cgggcgacct ttggtcgccc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc 120
aactccatca ctaggggttc cttgtagtta atgattaacc cgccatgcta cttatctacc 180
agggtaatgg ggatcctcta gaactatagc tagtcgacat tgattattga ctagttatta 240
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aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 420
gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 480
ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 540
atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatgtcgag 600
gccacgttct gcttcactct ccccatctcc cccccctccc cacccccaat tttgtattta 660
tttatttttt aattattttg tgcagcgatg ggggcggggg gggggggcgc gcgccaggcg 720
gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggag aggtgcggcg gcagccaatc 780
agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg gcggcggcgg cggccctata 840
aaaagcgaag cgcgcggcgg gcgggagcaa gctttattgc ggtagtttat cacagttaaa 900
ttgctaacgc agtcagtgct tctgacacaa cagtctcgaa cttaagctgc agaagttggt 960
cgtgaggcac tgggcaggta agtatcaagg ttacaagaca ggtttaagga gaccaataga 1020
aactgggctt gtcgagacag agaagactct tgcgtttctg ataggcacct attggtctta 1080
ctgacatcca ctttgccttt ctctccacag gtgtccactc ccagttcaat tacagctctt 1140
aaggctagag tacttaatac gactcactat aggctagtaa tacgactcac tatagatggt 1200
gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga 1260
cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa 1320
gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt 1380
gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca 1440
cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa 1500
ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa 1560
ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct 1620
ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat 1680
caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca 1740
ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct 1800
gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct 1860
ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agaattttga 1920
ccttcttaag cttgcgggag acgtcgagtc caaccctggg cccatggagc ccagcagcaa 1980
gaagctgacg ggtcgcctca tgctggccgt gggaggagca gtgcttggct ccctgcagtt 2040
tggctacaac actggagtca tcaatgcccc ccagaaggtg atcgaggagt tctacaacca 2100
gacatgggtc caccgctatg gggagagcat cctgcccacc acgctcacca cgctctggtc 2160
cctctcagtg gccatctttt ctgttggggg catgattggc tccttctctg tgggcctttt 2220
cgttaaccgc tttggccggc ggaattcaat gctgatgatg aacctgctgg ccttcgtgtc 2280
cgccgtgctc atgggcttct cgaaactggg caagtccttt gagatgctga tcctgggccg 2340
cttcatcatc ggtgtgtact gtggcctgac cacaggcttc gtgcccatgt atgtgggtga 2400
agtgtcaccc acagcccttc gtggggccct gggcaccctg caccagctgg gcatcgtcgt 2460
cggcatcctc atcgcccagg tgttcggcct ggactccatc atgggcaaca aggacctgtg 2520
gcccctgctg ctgagcatca tcttcatccc ggccctgctg cagtgcatcg tgctgccctt 2580
ctgccccgag agtccccgct tcctgctcat caaccgcaac gaggagaacc gggccaagag 2640
tgtgctaaag aagctgcgcg ggacagctga cgtgacccat gacctgcagg agatgaagga 2700
agagagtcgg cagatgatgc gggagaagaa ggtcaccatc ctggagctgt tccgctcccc 2760
cgcctaccgc cagcccatcc tcatcgctgt ggtgctgcag ctgtcccagc agctgtctgg 2820
catcaacgct gtcttctatt actccacgag catcttcgag aaggcggggg tgcagcagcc 2880
tgtgtatgcc accattggct ccggtatcgt caacacggcc ttcactgtcg tgtcgctgtt 2940
tgtggtggag cgagcaggcc ggcggaccct gcacctcata ggcctcgctg gcatggcggg 3000
ttgtgccata ctcatgacca tcgcgctagc actgctggag cagctacccc ggatgtccta 3060
tctgagcatc gtggccatct ttggctttgt ggccttcttt gaagtgggtc ctggccccat 3120
cccatggttc atcgtggctg aactcttcag ccagggtcca cgtccagctg ccattgccgt 3180
tgcaggcttc tccaactgga cctcaaattt cattgtgggc atgtgcttcc agtatgtgga 3240
gcaactgtgt ggtccctacg tcttcatcat cttcactgtg ctcctggttc tgttcttcat 3300
cttcacctac ttcaaagttc ctgagactaa aggccggacc ttcgatgaga tcgcttccgg 3360
cttccggcag gggggagcca gccaaagtga caagacaccc gaggagctgt tccatcccct 3420
gggggctgat tcccaagtgt gagtcgcccc agatcaccag cccggcctgc tcccagcagc 3480
cctaaggatc tctcaggagc acaggcagct ggatgagact tccaaacctg acagatgtca 3540
gccgagccgg gcctggggct cctttctcca gccagcaatg atgtccagaa gaatattcag 3600
gacttaacgg ctccaggatt ttaacaaaag caagactgtt gctcaaatct attcagacaa 3660
gcaacaggtt ttataatttt tttattactg attttgttat ttttatatca gcctgagtct 3720
cctgtgccca catcccaggc ttcaccctga atggttccat gcctgagggt ggagactaag 3780
ccctgtcgag acacttgcct tcttcaccca gctaatctgt agggctggac ctatgtccta 3840
aggacacact aatcgaacta tgaactacaa agcttctatc ccaggaggtg gctatggcca 3900
cccgttctgc tggcctggat ctctcgagga cggggtgaac tacgcctgag gatccgatct 3960
ttttccctct gccaaaaatt atggggacat catgaagccc cttgagcatc tgacttctgg 4020
ctaataaagg aaatttattt tcattgcaat agtgtgttgg aattttttgt gtctctcact 4080
cggaagcaat tcgttgatct gaatttcgac cacccataat acccattacc ctggtagata 4140
agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4200
cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4260
gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ccttaattaa cctaattcac 4320
tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc 4380
ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc 4440
cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatgggacgc gccctgtagc ggcgcattaa 4500
gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc 4560
ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag 4620
ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca 4680
aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc 4740
gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa 4800
cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct 4860
attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattttaac aaaatattaa 4920
cgcttacaat ttaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt 4980
tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca 5040
ataatattga aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc ttattccctt 5100
ttttgcggca ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga aagtaaaaga 5160
tgctgaagat cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca acagcggtaa 5220
gatccttgag agttttcgcc ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt ttaaagttct 5280
gctatgtggc gcggtattat cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat 5340
acactattct cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga 5400
tggcatgaca gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc 5460
caacttactt ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat 5520
gggggatcat gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa 5580
cgacgagcgt gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac 5640
tggcgaacta cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa 5700
agttgcagga ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc 5760
tggagccggt gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc 5820
ctcccgtatc gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag 5880
acagatcgct gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag accaagttta 5940
ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa 6000
gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc 6060
gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat 6120
ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga 6180
gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt 6240
tcttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata 6300
cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac 6360
cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg 6420
ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg 6480
tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag 6540
cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct 6600
ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc 6660
aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt tcctggcctt 6720
ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg 6780
tattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga 6840
gtcagtgagc gaggaagcgg aagagcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc ccgcgcgttg 6900
gccgattcat taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg gcagtgagcg 6960
caacgcaatt aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac actttatgct 7020
tccggctcgt atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag gaaacagcta 7080
tgaccatgat tacgccagat ttaattaag 7109
<210> 2
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 2
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 3
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 3
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 4
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 4
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 5
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> eGFP
<400> 5
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaag 717
<210> 6
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
寡核苷酸
<220>
<223> 2A-接头
<400> 6
aattttgacc ttcttaagct tgcgggagac gtcgagtcca accctgggcc c 51
<210> 7
<211> 1959
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA和3'UTR
<400> 7
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtgag tcgccccaga tcaccagccc 1500
ggcctgctcc cagcagccct aaggatctct caggagcaca ggcagctgga tgagacttcc 1560
aaacctgaca gatgtcagcc gagccgggcc tggggctcct ttctccagcc agcaatgatg 1620
tccagaagaa tattcaggac ttaacggctc caggatttta acaaaagcaa gactgttgct 1680
caaatctatt cagacaagca acaggtttta taattttttt attactgatt ttgttatttt 1740
tatatcagcc tgagtctcct gtgcccacat cccaggcttc accctgaatg gttccatgcc 1800
tgagggtgga gactaagccc tgtcgagaca cttgccttct tcacccagct aatctgtagg 1860
gctggaccta tgtcctaagg acacactaat cgaactatga actacaaagc ttctatccca 1920
ggaggtggct atggccaccc gttctgctgg cctggatct 1959
<210> 8
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 8
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 9
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 9
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 10
<211> 7503
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI EGFP-2A-mGlut1
<400> 10
gccttaatta ggctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg cccgggcaaa gcccgggcgt 60
cgggcgacct ttggtcgccc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagaga gggagtggcc 120
aactccatca ctaggggttc cttgtagtta atgattaacc cgccatgcta cttatctacc 180
agggtaatgg ggatcctcta gaactatagc tagtcgacat tgattattga ctagttatta 240
atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 300
acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 360
aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 420
gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 480
ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 540
atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatgtcgag 600
gccacgttct gcttcactct ccccatctcc cccccctccc cacccccaat tttgtattta 660
tttatttttt aattattttg tgcagcgatg ggggcggggg gggggggcgc gcgccaggcg 720
gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggag aggtgcggcg gcagccaatc 780
agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg gcggcggcgg cggccctata 840
aaaagcgaag cgcgcggcgg gcgggagcaa gctttattgc ggtagtttat cacagttaaa 900
ttgctaacgc agtcagtgct tctgacacaa cagtctcgaa cttaagctgc agaagttggt 960
cgtgaggcac tgggcaggta agtatcaagg ttacaagaca ggtttaagga gaccaataga 1020
aactgggctt gtcgagacag agaagactct tgcgtttctg ataggcacct attggtctta 1080
ctgacatcca ctttgccttt ctctccacag gtgtccactc ccagttcaat tacagctctt 1140
aaggctagag tacttaatac gactcactat aggctagtaa tacgactcac tatagatggt 1200
gagcaagggc gaggagctgt tcaccggggt ggtgcccatc ctggtcgagc tggacggcga 1260
cgtaaacggc cacaagttca gcgtgtccgg cgagggcgag ggcgatgcca cctacggcaa 1320
gctgaccctg aagttcatct gcaccaccgg caagctgccc gtgccctggc ccaccctcgt 1380
gaccaccctg acctacggcg tgcagtgctt cagccgctac cccgaccaca tgaagcagca 1440
cgacttcttc aagtccgcca tgcccgaagg ctacgtccag gagcgcacca tcttcttcaa 1500
ggacgacggc aactacaaga cccgcgccga ggtgaagttc gagggcgaca ccctggtgaa 1560
ccgcatcgag ctgaagggca tcgacttcaa ggaggacggc aacatcctgg ggcacaagct 1620
ggagtacaac tacaacagcc acaacgtcta tatcatggcc gacaagcaga agaacggcat 1680
caaggtgaac ttcaagatcc gccacaacat cgaggacggc agcgtgcagc tcgccgacca 1740
ctaccagcag aacaccccca tcggcgacgg ccccgtgctg ctgcccgaca accactacct 1800
gagcacccag tccgccctga gcaaagaccc caacgagaag cgcgatcaca tggtcctgct 1860
ggagttcgtg accgccgccg ggatcactct cggcatggac gagctgtaca agaattttga 1920
ccttcttaag cttgcgggag acgtcgagtc caaccctggg cccatggatc ccagcagcaa 1980
gaaggtgacg ggccgcctca tgttggctgt gggaggagca gtgctcggat cactgcagtt 2040
cggctataac actggtgtca tcaacgcccc ccagaaggtt attgaggagt tctacaatca 2100
aacatggaac caccgctacg gagagcccat cccatccacc acactcacca cgctttggtc 2160
tctctccgtg gccatcttct ctgtcggggg catgattggt tccttctctg tcggcctctt 2220
tgttaatcgc tttggcaggc ggaactccat gctgatgatg aacctgttgg cctttgtggc 2280
tgctgtgctt atgggcttct ccaaactggg caagtccttt gagatgctga tcctgggccg 2340
cttcatcatc ggtgtgtact gcggcctgac tactggcttt gtgcccatgt atgtgggaga 2400
ggtgtcacct acagctctac gtggagccct aggcacactg caccagctgg gaatcgtcgt 2460
tggcatcctt attgcccagg tgtttggctt agactccatc atgggcaatg cagacttgtg 2520
gcctctgctg ctcagtgtca tcttcatccc agccctgcta cagtgtatcc tgttgccctt 2580
ctgccccgag agcccccgct tcctgctcat caatcgtaac gaggagaacc gggccaagag 2640
tgtgctgaag aagcttcgag ggacagccga tgtgacccga gacctgcagg agatgaaaga 2700
agagggtcgg cagatgatgc gggagaagaa ggtcaccatc ttggagctgt tccgctcacc 2760
cgcctaccgc cagcccatcc tcatcgctgt ggtgctgcag ctgtcccagc agctgtcggg 2820
tatcaatgct gtgttctact actcaacgag catcttcgag aaggcaggtg tgcagcagcc 2880
tgtgtacgcc accatcggct ccggtatcgt caacacggcc ttcactgtgg tgtcgctgtt 2940
tgttgtagag cgagctggac gacggaccct gcacctcatt ggcctggctg gcatggcagg 3000
ctgtgctgtg ctcatgacca tcgccctggc cttgctggaa cggctgcctt ggatgtccta 3060
tctgagcatc gtggccatct ttggctttgt ggccttcttt gaagtaggcc ctggtcctat 3120
tccatggttc attgtggccg agctgttcag ccaggggccc cgtcctgctg ctattgctgt 3180
ggctggcttc tccaactgga cctcaaactt cattgtgggc atgtgcttcc agtatgtgga 3240
gcaactgtgc ggcccctacg tcttcatcat cttcacggtg ctcctcgtgc tcttcttcat 3300
cttcacctac ttcaaagtcc ctgagaccaa aggccgaacc ttcgatgaga tcgcttccgg 3360
cttccggcag gggggtgcca gccaaagtga caagacaccc gaggagctct tccaccctct 3420
gggggcggac tcccaagtgt gaggagcccc acacccagcc cggcctgctc cctgcagccc 3480
aaggatctct ctggagcaca ggcagctaga tgagacctct tccgaaccga cagatctcgg 3540
gcaagccggg cctgggcgcc tttcctcagc cagcagtgaa gtccaggagg atattcagga 3600
ctttgatggc tccagaattt ttaatgaaag caagactgct gctcagatct attcagataa 3660
gcagcaggtt ttataatttt tttattactg attttgttat tttttttttt tatcagccac 3720
tctcctatct ccacactgta gtcttcacct tgattggccc agtgcctgag ggtggggacc 3780
acgccctgtc cagacacttg ccttctttgc caagctaatc tgtagggctg gacctatggc 3840
caaggacaca ctaataccga actctgagct aggaggcttt accgctggag gcggtagctg 3900
ccacccactt ccgcaggcct ggacctcggc accatagggg tccggactcc attttaggat 3960
tcgcccattc ctgtctcttc ctacccaacc actcaattaa tctttccttg cctgagacca 4020
gttggaagca ctggagtgca gggaggagag ggaagggcca ggctgggctg ccaggttcta 4080
gtctcctgtg cactgagggc cacacaaaca ccatgagaag gacctcggag gctgagaact 4140
taactgctga agacacggac actcctgccc tgctgtgtat agatggaaga tatttatata 4200
ttttttggtt gtcaatatta aatacagaca ctaagttata gtatatctgg acaaacccac 4260
ttgtaaatac accaacaaac tcctgtaact ttacctaagc agatataaat ggctggctcg 4320
aggacggggt gaactacgcc tgaggatccg atctttttcc ctctgccaaa aattatgggg 4380
acatcatgaa gccccttgag catctgactt ctggctaata aaggaaattt attttcattg 4440
caatagtgtg ttggaatttt ttgtgtctct cactcggaag caattcgttg atctgaattt 4500
cgaccaccca taatacccat taccctggta gataagtagc atggcgggtt aatcattaac 4560
tacaaggaac ccctagtgat ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact 4620
gaggccgggc gaccaaaggt cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc 4680
gagcgagcgc gcagccttaa ttaacctaat tcactggccg tcgttttaca acgtcgtgac 4740
tgggaaaacc ctggcgttac ccaacttaat cgccttgcag cacatccccc tttcgccagc 4800
tggcgtaata gcgaagaggc ccgcaccgat cgcccttccc aacagttgcg cagcctgaat 4860
ggcgaatggg acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc 4920
agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc 4980
tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg 5040
ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca 5100
cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc 5160
tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct 5220
tttgatttat aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa 5280
caaaaattta acgcgaattt taacaaaata ttaacgctta caatttaggt ggcacttttc 5340
ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc 5400
cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga 5460
gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt 5520
ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag 5580
tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag 5640
aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta 5700
ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg 5760
agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca 5820
gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag 5880
gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc 5940
gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg 6000
tagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc 6060
ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg 6120
cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg 6180
gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga 6240
cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac 6300
tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa 6360
aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca 6420
aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag 6480
gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac 6540
cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa 6600
ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc 6660
accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag 6720
tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac 6780
cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc 6840
gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc 6900
ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca 6960
cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc 7020
tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg 7080
ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct 7140
ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata 7200
ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc 7260
gcccaatacg caaaccgcct ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg 7320
acaggtttcc cgactggaaa gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca 7380
ctcattaggc accccaggct ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg 7440
tgagcggata acaatttcac acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc agatttaatt 7500
aag 7503
<210> 11
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 11
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 12
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 12
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 13
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 13
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 14
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> eGFP
<400> 14
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaag 717
<210> 15
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
寡核苷酸
<220>
<223> 2A-接头
<400> 15
aattttgacc ttcttaagct tgcgggagac gtcgagtcca accctgggcc c 51
<210> 16
<211> 2353
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> mGlut1 cDNA和3'UTR
<400> 16
atggatccca gcagcaagaa ggtgacgggc cgcctcatgt tggctgtggg aggagcagtg 60
ctcggatcac tgcagttcgg ctataacact ggtgtcatca acgcccccca gaaggttatt 120
gaggagttct acaatcaaac atggaaccac cgctacggag agcccatccc atccaccaca 180
ctcaccacgc tttggtctct ctccgtggcc atcttctctg tcgggggcat gattggttcc 240
ttctctgtcg gcctctttgt taatcgcttt ggcaggcgga actccatgct gatgatgaac 300
ctgttggcct ttgtggctgc tgtgcttatg ggcttctcca aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgcg gcctgactac tggctttgtg 420
cccatgtatg tgggagaggt gtcacctaca gctctacgtg gagccctagg cacactgcac 480
cagctgggaa tcgtcgttgg catccttatt gcccaggtgt ttggcttaga ctccatcatg 540
ggcaatgcag acttgtggcc tctgctgctc agtgtcatct tcatcccagc cctgctacag 600
tgtatcctgt tgcccttctg ccccgagagc ccccgcttcc tgctcatcaa tcgtaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctgaagaag cttcgaggga cagccgatgt gacccgagac 720
ctgcaggaga tgaaagaaga gggtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcttg 780
gagctgttcc gctcacccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtcgggtat caatgctgtg ttctactact caacgagcat cttcgagaag 900
gcaggtgtgc agcagcctgt gtacgccacc atcggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtggtgt cgctgtttgt tgtagagcga gctggacgac ggaccctgca cctcattggc 1020
ctggctggca tggcaggctg tgctgtgctc atgaccatcg ccctggcctt gctggaacgg 1080
ctgccttgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtaggccctg gtcctattcc atggttcatt gtggccgagc tgttcagcca ggggccccgt 1200
cctgctgcta ttgctgtggc tggcttctcc aactggacct caaacttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgcggc ccctacgtct tcatcatctt cacggtgctc 1320
ctcgtgctct tcttcatctt cacctacttc aaagtccctg agaccaaagg ccgaaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggtgccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctcttcc accctctggg ggcggactcc caagtgtgag gagccccaca cccagcccgg 1500
cctgctccct gcagcccaag gatctctctg gagcacaggc agctagatga gacctcttcc 1560
gaaccgacag atctcgggca agccgggcct gggcgccttt cctcagccag cagtgaagtc 1620
caggaggata ttcaggactt tgatggctcc agaattttta atgaaagcaa gactgctgct 1680
cagatctatt cagataagca gcaggtttta taattttttt attactgatt ttgttatttt 1740
ttttttttat cagccactct cctatctcca cactgtagtc ttcaccttga ttggcccagt 1800
gcctgagggt ggggaccacg ccctgtccag acacttgcct tctttgccaa gctaatctgt 1860
agggctggac ctatggccaa ggacacacta ataccgaact ctgagctagg aggctttacc 1920
gctggaggcg gtagctgcca cccacttccg caggcctgga cctcggcacc ataggggtcc 1980
ggactccatt ttaggattcg cccattcctg tctcttccta cccaaccact caattaatct 2040
ttccttgcct gagaccagtt ggaagcactg gagtgcaggg aggagaggga agggccaggc 2100
tgggctgcca ggttctagtc tcctgtgcac tgagggccac acaaacacca tgagaaggac 2160
ctcggaggct gagaacttaa ctgctgaaga cacggacact cctgccctgc tgtgtataga 2220
tggaagatat ttatatattt tttggttgtc aatattaaat acagacacta agttatagta 2280
tatctggaca aacccacttg taaatacacc aacaaactcc tgtaacttta cctaagcaga 2340
tataaatggc tgg 2353
<210> 17
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 17
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 18
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 18
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 19
<211> 6844
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI hGlut1-2A-EGFP
<400> 19
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattgatc cactagtaac 1200
ggccgccagt gtgctggaag caggagacca aacgacgggg gtcggagtca gagtcgcagt 1260
gggagtcccc ggaccggagc acgagcctga gcgggagagc gccgctcgca cgcccgtcgc 1320
cacccgcgta cccggcgcag ccagagccac cagcgcagcg ctgccatgga gcccagcagc 1380
aagaagctga cgggtcgcct catgctggcc gtgggaggag cagtgcttgg ctccctgcag 1440
tttggctaca acactggagt catcaatgcc ccccagaagg tgatcgagga gttctacaac 1500
cagacatggg tccaccgcta tggggagagc atcctgccca ccacgctcac cacgctctgg 1560
tccctctcag tggccatctt ttctgttggg ggcatgattg gctccttctc tgtgggcctt 1620
ttcgttaacc gctttggccg gcggaattca atgctgatga tgaacctgct ggccttcgtg 1680
tccgccgtgc tcatgggctt ctcgaaactg ggcaagtcct ttgagatgct gatcctgggc 1740
cgcttcatca tcggtgtgta ctgtggcctg accacaggct tcgtgcccat gtatgtgggt 1800
gaagtgtcac ccacagccct tcgtggggcc ctgggcaccc tgcaccagct gggcatcgtc 1860
gtcggcatcc tcatcgccca ggtgttcggc ctggactcca tcatgggcaa caaggacctg 1920
tggcccctgc tgctgagcat catcttcatc ccggccctgc tgcagtgcat cgtgctgccc 1980
ttctgccccg agagtccccg cttcctgctc atcaaccgca acgaggagaa ccgggccaag 2040
agtgtgctaa agaagctgcg cgggacagct gacgtgaccc atgacctgca ggagatgaag 2100
gaagagagtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcctggagct gttccgctcc 2160
cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca gcagctgtct 2220
ggcatcaacg ctgtcttcta ttactccacg agcatcttcg agaaggcggg ggtgcagcag 2280
cctgtgtatg ccaccattgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt cgtgtcgctg 2340
tttgtggtgg agcgagcagg ccggcggacc ctgcacctca taggcctcgc tggcatggcg 2400
ggttgtgcca tactcatgac catcgcgcta gcactgctgg agcagctacc ccggatgtcc 2460
tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtggg tcctggcccc 2520
atcccatggt tcatcgtggc tgaactcttc agccagggtc cacgtccagc tgccattgcc 2580
gttgcaggct tctccaactg gacctcaaat ttcattgtgg gcatgtgctt ccagtatgtg 2640
gagcaactgt gtggtcccta cgtcttcatc atcttcactg tgctcctggt tctgttcttc 2700
atcttcacct acttcaaagt tcctgagact aaaggccgga ccttcgatga gatcgcttcc 2760
ggcttccggc aggggggagc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct gttccatccc 2820
ctgggggctg attcccaagt gaccggtaat tttgaccttc ttaagcttgc gggagacgtc 2880
gagtccaacc ctgggcccgc catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg 2940
cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag 3000
ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag 3060
ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc 3120
cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac 3180
gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg 3240
aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag 3300
gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc 3360
atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag 3420
gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc 3480
gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac 3540
gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc 3600
atggacgagc tgtacaagta aagcggccat caagcttatc ggccgttact agtggatcga 3660
ggacggggtg aactacgcct gaggatccga tctttttccc tctgccaaaa attatgggga 3720
catcatgaag ccccttgagc atctgacttc tggctaataa aggaaattta ttttcattgc 3780
aatagtgtgt tggaattttt tgtgtctctc actcggaagc aattcgttga tctgaatttc 3840
gaccacccat aatacccatt accctggtag ataagtagca tggcgggtta atcattaact 3900
acaaggaacc cctagtgatg gagttggcca ctccctctct gcgcgctcgc tcgctcactg 3960
aggccgggcg accaaaggtc gcccgacgcc cgggctttgc ccgggcggcc tcagtgagcg 4020
agcgagcgcg cagccttaat taacctaatt cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact 4080
gggaaaaccc tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct 4140
ggcgtaatag cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg 4200
gcgaatggga cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca 4260
gcgtgaccgc tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct 4320
ttctcgccac gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt 4380
tccgatttag tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac 4440
gtagtgggcc atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct 4500
ttaatagtgg actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt 4560
ttgatttata agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac 4620
aaaaatttaa cgcgaatttt aacaaaatat taacgcttac aatttaggtg gcacttttcg 4680
gggaaatgtg cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc 4740
gctcatgaga caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag 4800
tattcaacat ttccgtgtcg cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt 4860
tgctcaccca gaaacgctgg tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt 4920
gggttacatc gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga 4980
acgttttcca atgatgagca cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat 5040
tgacgccggg caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga 5100
gtactcacca gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag 5160
tgctgccata accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg 5220
accgaaggag ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg 5280
ttgggaaccg gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt 5340
agcaatggca acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg 5400
gcaacaatta atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc 5460
ccttccggct ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg 5520
tatcattgca gcactggggc cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac 5580
ggggagtcag gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact 5640
gattaagcat tggtaactgt cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa 5700
acttcatttt taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa 5760
aatcccttaa cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg 5820
atcttcttga gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc 5880
gctaccagcg gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac 5940
tggcttcagc agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca 6000
ccacttcaag aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt 6060
ggctgctgcc agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc 6120
ggataaggcg cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg 6180
aacgacctac accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc 6240
cgaagggaga aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac 6300
gagggagctt ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct 6360
ctgacttgag cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc 6420
cagcaacgcg gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt 6480
tcctgcgtta tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac 6540
cgctcgccgc agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg 6600
cccaatacgc aaaccgcctc tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga 6660
caggtttccc gactggaaag cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac 6720
tcattaggca ccccaggctt tacactttat gcttccggct cgtatgttgt gtggaattgt 6780
gagcggataa caatttcaca caggaaacag ctatgaccat gattacgcca gatttaatta 6840
aggc 6844
<210> 20
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 20
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 21
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 21
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 22
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 22
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 23
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA
<400> 23
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtga 1479
<210> 24
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
寡核苷酸
<220>
<223> 2A-接头
<400> 24
aattttgacc ttcttaagct tgcgggagac gtcgagtcca accctgggcc c 51
<210> 25
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> eGFP
<400> 25
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaag 717
<210> 26
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 26
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 27
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 27
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 28
<211> 6568
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI hGlut1
<400> 28
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattggcc gccagtgtga 1200
tggatatctg cagaattcgc ccttagcagg agaccaaacg acgggggtcg gagtcagagt 1260
cgcagtggga gtccccggac cggagcacga gcctgagcgg gagagcgccg ctcgcacgcc 1320
cgtcgccacc cgcgtacccg gcgcagccag agccaccagc gcagcgctgc catggagccc 1380
agcagcaaga agctgacggg tcgcctcatg ctggccgtgg gaggagcagt gcttggctcc 1440
ctgcagtttg gctacaacac tggagtcatc aatgcccccc agaaggtgat cgaggagttc 1500
tacaaccaga catgggtcca ccgctatggg gagagcatcc tgcccaccac gctcaccacg 1560
ctctggtccc tctcagtggc catcttttct gttgggggca tgattggctc cttctctgtg 1620
ggccttttcg ttaaccgctt tggccggcgg aattcaatgc tgatgatgaa cctgctggcc 1680
ttcgtgtccg ccgtgctcat gggcttctcg aaactgggca agtcctttga gatgctgatc 1740
ctgggccgct tcatcatcgg tgtgtactgt ggcctgacca caggcttcgt gcccatgtat 1800
gtgggtgaag tgtcacccac agcccttcgt ggggccctgg gcaccctgca ccagctgggc 1860
atcgtcgtcg gcatcctcat cgcccaggtg ttcggcctgg actccatcat gggcaacaag 1920
gacctgtggc ccctgctgct gagcatcatc ttcatcccgg ccctgctgca gtgcatcgtg 1980
ctgcccttct gccccgagag tccccgcttc ctgctcatca accgcaacga ggagaaccgg 2040
gccaagagtg tgctaaagaa gctgcgcggg acagctgacg tgacccatga cctgcaggag 2100
atgaaggaag agagtcggca gatgatgcgg gagaagaagg tcaccatcct ggagctgttc 2160
cgctcccccg cctaccgcca gcccatcctc atcgctgtgg tgctgcagct gtcccagcag 2220
ctgtctggca tcaacgctgt cttctattac tccacgagca tcttcgagaa ggcgggggtg 2280
cagcagcctg tgtatgccac cattggctcc ggtatcgtca acacggcctt cactgtcgtg 2340
tcgctgtttg tggtggagcg agcaggccgg cggaccctgc acctcatagg cctcgctggc 2400
atggcgggtt gtgccatact catgaccatc gcgctagcac tgctggagca gctaccccgg 2460
atgtcctatc tgagcatcgt ggccatcttt ggctttgtgg ccttctttga agtgggtcct 2520
ggccccatcc catggttcat cgtggctgaa ctcttcagcc agggtccacg tccagctgcc 2580
attgccgttg caggcttctc caactggacc tcaaatttca ttgtgggcat gtgcttccag 2640
tatgtggagc aactgtgtgg tccctacgtc ttcatcatct tcactgtgct cctggttctg 2700
ttcttcatct tcacctactt caaagttcct gagactaaag gccggacctt cgatgagatc 2760
gcttccggct tccggcaggg gggagccagc caaagtgaca agacacccga ggagctgttc 2820
catcccctgg gggctgattc ccaagtgtga gtcgccccag atcaccagcc cggcctgctc 2880
ccagcagccc taaggatctc tcaggagcac aggcagctgg atgagacttc caaacctgac 2940
agatgtcagc cgagccgggc ctggggctcc tttctccagc cagcaatgat gtccagaaga 3000
atattcagga cttaacggct ccaggatttt aacaaaagca agactgttgc tcaaatctat 3060
tcagacaagc aacaggtttt ataatttttt tattactgat tttgttattt ttatatcagc 3120
ctgagtctcc tgtgcccaca tcccaggctt caccctgaat ggttccatgc ctgagggtgg 3180
agactaagcc ctgtcgagac acttgccttc ttcacccagc taatctgtag ggctggacct 3240
atgtcctaag gacacactaa tcgaactatg aactacaaag cttctatccc aggaggtggc 3300
tatggccacc cgttctgctg gcctggatct ccaagaaaca aagggcgaat tccagcacac 3360
tggcggccgt tactagtgga tcgaggacgg ggtgaactac gcctgaggat ccgatctttt 3420
tccctctgcc aaaaattatg gggacatcat gaagcccctt gagcatctga cttctggcta 3480
ataaaggaaa tttattttca ttgcaatagt gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg 3540
aagcaattcg ttgatctgaa tttcgaccac ccataatacc cattaccctg gtagataagt 3600
agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg aacccctagt gatggagttg gccactccct 3660
ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggct 3720
ttgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagcct taattaacct aattcactgg 3780
ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg 3840
cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt 3900
cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg 3960
cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg 4020
ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc 4080
taaatcgggg gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa 4140
aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc 4200
ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac 4260
tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt 4320
ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc 4380
ttacaattta ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt 4440
ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata 4500
atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt 4560
tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc 4620
tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat 4680
ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg agcactttta aagttctgct 4740
atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag caactcggtc gccgcataca 4800
ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg 4860
catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa 4920
cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg 4980
ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca taccaaacga 5040
cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg 5100
cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg cggataaagt 5160
tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg ataaatctgg 5220
agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg gtaagccctc 5280
ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac gaaatagaca 5340
gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc aagtttactc 5400
atatatactt tagattgatt taaaacttca tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat 5460
cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc 5520
agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg 5580
ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct 5640
accaactctt tttccgaagg taactggctt cagcagagcg cagataccaa atactgttct 5700
tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt caagaactct gtagcaccgc ctacatacct 5760
cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg 5820
gttggactca agacgatagt taccggataa ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc 5880
gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga 5940
gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg 6000
cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta 6060
tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg 6120
ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg 6180
ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat 6240
taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc 6300
agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc 6360
gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa 6420
cgcaattaat gtgagttagc tcactcatta ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc 6480
ggctcgtatg ttgtgtggaa ttgtgagcgg ataacaattt cacacaggaa acagctatga 6540
ccatgattac gccagattta attaaggc 6568
<210> 29
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 29
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 30
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 30
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 31
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 31
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 32
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA
<400> 32
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtga 1479
<210> 33
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 33
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 34
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 34
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 35
<211> 7057
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI mGlut1
<400> 35
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
tcccagcagc aagaaggtga cgggccgcct catgttggct gtgggaggag cagtgctcgg 1440
atcactgcag ttcggctata acactggtgt catcaacgcc ccccagaagg ttattgagga 1500
gttctacaat caaacatgga accaccgcta cggagagccc atcccatcca ccacactcac 1560
cacgctttgg tctctctccg tggccatctt ctctgtcggg ggcatgattg gttccttctc 1620
tgtcggcctc tttgttaatc gctttggcag gcggaactcc atgctgatga tgaacctgtt 1680
ggcctttgtg gctgctgtgc ttatgggctt ctccaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgcggcctg actactggct ttgtgcccat 1800
gtatgtggga gaggtgtcac ctacagctct acgtggagcc ctaggcacac tgcaccagct 1860
gggaatcgtc gttggcatcc ttattgccca ggtgtttggc ttagactcca tcatgggcaa 1920
tgcagacttg tggcctctgc tgctcagtgt catcttcatc ccagccctgc tacagtgtat 1980
cctgttgccc ttctgccccg agagcccccg cttcctgctc atcaatcgta acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctga agaagcttcg agggacagcc gatgtgaccc gagacctgca 2100
ggagatgaaa gaagagggtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcttggagct 2160
gttccgctca cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtcg ggtatcaatg ctgtgttcta ctactcaacg agcatcttcg agaaggcagg 2280
tgtgcagcag cctgtgtacg ccaccatcgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
ggtgtcgctg tttgttgtag agcgagctgg acgacggacc ctgcacctca ttggcctggc 2400
tggcatggca ggctgtgctg tgctcatgac catcgccctg gccttgctgg aacggctgcc 2460
ttggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtagg 2520
ccctggtcct attccatggt tcattgtggc cgagctgttc agccaggggc cccgtcctgc 2580
tgctattgct gtggctggct tctccaactg gacctcaaac ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gcggccccta cgtcttcatc atcttcacgg tgctcctcgt 2700
gctcttcttc atcttcacct acttcaaagt ccctgagacc aaaggccgaa ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggtgc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
cttccaccct ctgggggcgg actcccaagt gtgaggagcc ccacacccag cccggcctgc 2880
tccctgcagc ccaaggatct ctctggagca caggcagcta gatgagacct cttccgaacc 2940
gacagatctc gggcaagccg ggcctgggcg cctttcctca gccagcagtg aagtccagga 3000
ggatattcag gactttgatg gctccagaat ttttaatgaa agcaagactg ctgctcagat 3060
ctattcagat aagcagcagg ttttataatt tttttattac tgattttgtt attttttttt 3120
tttatcagcc actctcctat ctccacactg tagtcttcac cttgattggc ccagtgcctg 3180
agggtgggga ccacgccctg tccagacact tgccttcttt gccaagctaa tctgtagggc 3240
tggacctatg gccaaggaca cactaatacc gaactctgag ctaggaggct ttaccgctgg 3300
aggcggtagc tgccacccac ttccgcaggc ctggacctcg gcaccatagg ggtccggact 3360
ccattttagg attcgcccat tcctgtctct tcctacccaa ccactcaatt aatctttcct 3420
tgcctgagac cagttggaag cactggagtg cagggaggag agggaagggc caggctgggc 3480
tgccaggttc tagtctcctg tgcactgagg gccacacaaa caccatgaga aggacctcgg 3540
aggctgagaa cttaactgct gaagacacgg acactcctgc cctgctgtgt atagatggaa 3600
gatatttata tattttttgg ttgtcaatat taaatacaga cactaagtta tagtatatct 3660
ggacaaaccc acttgtaaat acaccaacaa actcctgtaa ctttacctaa gcagatataa 3720
atggctggtt tttagaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa actgtctcgc tgcggccgct ctagagtatc 3840
cctcgactct agagtcgacc cgggcggcct cgaggacggg gtgaactacg cctgaggatc 3900
cgatcttttt ccctctgcca aaaattatgg ggacatcatg aagccccttg agcatctgac 3960
ttctggctaa taaaggaaat ttattttcat tgcaatagtg tgttggaatt ttttgtgtct 4020
ctcactcgga agcaattcgt tgatctgaat ttcgaccacc cataataccc attaccctgg 4080
tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga acccctagtg atggagttgg 4140
ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg gcgaccaaag gtcgcccgac 4200
gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc gcgcagcctt aattaaccta 4260
attcactggc cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa ccctggcgtt acccaactta 4320
atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa tagcgaagag gcccgcaccg 4380
atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg ggacgcgccc tgtagcggcg 4440
cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc 4500
tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc 4560
gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg 4620
accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg 4680
tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg 4740
gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt 4800
cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa 4860
tattaacgct tacaatttag gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg 4920
tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat 4980
gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat 5040
tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt 5100
aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag 5160
cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa 5220
agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg 5280
ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct 5340
tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac 5400
tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca 5460
caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat 5520
accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact 5580
attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc 5640
ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga 5700
taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg 5760
taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg 5820
aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca 5880
agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta 5940
ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca 6000
ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg 6060
cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga 6120
tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa 6180
tactgttctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc 6240
tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg 6300
tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac 6360
ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct 6420
acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc 6480
ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg 6540
gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg 6600
ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct 6660
ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga 6720
taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg 6780
cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc 6840
gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag 6900
tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg ctttacactt 6960
tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc acacaggaaa 7020
cagctatgac catgattacg ccagatttaa ttaaggc 7057
<210> 36
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 36
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 37
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 37
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 38
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 38
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 39
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> mGlut1 cDNA
<400> 39
atggatccca gcagcaagaa ggtgacgggc cgcctcatgt tggctgtggg aggagcagtg 60
ctcggatcac tgcagttcgg ctataacact ggtgtcatca acgcccccca gaaggttatt 120
gaggagttct acaatcaaac atggaaccac cgctacggag agcccatccc atccaccaca 180
ctcaccacgc tttggtctct ctccgtggcc atcttctctg tcgggggcat gattggttcc 240
ttctctgtcg gcctctttgt taatcgcttt ggcaggcgga actccatgct gatgatgaac 300
ctgttggcct ttgtggctgc tgtgcttatg ggcttctcca aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgcg gcctgactac tggctttgtg 420
cccatgtatg tgggagaggt gtcacctaca gctctacgtg gagccctagg cacactgcac 480
cagctgggaa tcgtcgttgg catccttatt gcccaggtgt ttggcttaga ctccatcatg 540
ggcaatgcag acttgtggcc tctgctgctc agtgtcatct tcatcccagc cctgctacag 600
tgtatcctgt tgcccttctg ccccgagagc ccccgcttcc tgctcatcaa tcgtaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctgaagaag cttcgaggga cagccgatgt gacccgagac 720
ctgcaggaga tgaaagaaga gggtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcttg 780
gagctgttcc gctcacccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtcgggtat caatgctgtg ttctactact caacgagcat cttcgagaag 900
gcaggtgtgc agcagcctgt gtacgccacc atcggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtggtgt cgctgtttgt tgtagagcga gctggacgac ggaccctgca cctcattggc 1020
ctggctggca tggcaggctg tgctgtgctc atgaccatcg ccctggcctt gctggaacgg 1080
ctgccttgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtaggccctg gtcctattcc atggttcatt gtggccgagc tgttcagcca ggggccccgt 1200
cctgctgcta ttgctgtggc tggcttctcc aactggacct caaacttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgcggc ccctacgtct tcatcatctt cacggtgctc 1320
ctcgtgctct tcttcatctt cacctacttc aaagtccctg agaccaaagg ccgaaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggtgccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctcttcc accctctggg ggcggactcc caagtgtga 1479
<210> 40
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 40
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 41
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 41
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 42
<211> 6641
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI hGlut1-out3xmiR-122 BS
<400> 42
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcagctc ttaaggctag 1140
agtacttaat acgactcact ataggctagc gcgccgaatt ggccgccagt gtgatggata 1200
tctgcagaat tcgcccttag caggagacca aacgacgggg gtcggagtca gagtcgcagt 1260
gggagtcccc ggaccggagc acgagcctga gcgggagagc gccgctcgca cgcccgtcgc 1320
cacccgcgta cccggcgcag ccagagccac cagcgcagcg ctgccatgga gcccagcagc 1380
aagaagctga cgggtcgcct catgctggcc gtgggaggag cagtgcttgg ctccctgcag 1440
tttggctaca acactggagt catcaatgcc ccccagaagg tgatcgagga gttctacaac 1500
cagacatggg tccaccgcta tggggagagc atcctgccca ccacgctcac cacgctctgg 1560
tccctctcag tggccatctt ttctgttggg ggcatgattg gctccttctc tgtgggcctt 1620
ttcgttaacc gctttggccg gcggaattca atgctgatga tgaacctgct ggccttcgtg 1680
tccgccgtgc tcatgggctt ctcgaaactg ggcaagtcct ttgagatgct gatcctgggc 1740
cgcttcatca tcggtgtgta ctgtggcctg accacaggct tcgtgcccat gtatgtgggt 1800
gaagtgtcac ccacagccct tcgtggggcc ctgggcaccc tgcaccagct gggcatcgtc 1860
gtcggcatcc tcatcgccca ggtgttcggc ctggactcca tcatgggcaa caaggacctg 1920
tggcccctgc tgctgagcat catcttcatc ccggccctgc tgcagtgcat cgtgctgccc 1980
ttctgccccg agagtccccg cttcctgctc atcaaccgca acgaggagaa ccgggccaag 2040
agtgtgctaa agaagctgcg cgggacagct gacgtgaccc atgacctgca ggagatgaag 2100
gaagagagtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcctggagct gttccgctcc 2160
cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca gcagctgtct 2220
ggcatcaacg ctgtcttcta ttactccacg agcatcttcg agaaggcggg ggtgcagcag 2280
cctgtgtatg ccaccattgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt cgtgtcgctg 2340
tttgtggtgg agcgagcagg ccggcggacc ctgcacctca taggcctcgc tggcatggcg 2400
ggttgtgcca tactcatgac catcgcgcta gcactgctgg agcagctacc ccggatgtcc 2460
tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtggg tcctggcccc 2520
atcccatggt tcatcgtggc tgaactcttc agccagggtc cacgtccagc tgccattgcc 2580
gttgcaggct tctccaactg gacctcaaat ttcattgtgg gcatgtgctt ccagtatgtg 2640
gagcaactgt gtggtcccta cgtcttcatc atcttcactg tgctcctggt tctgttcttc 2700
atcttcacct acttcaaagt tcctgagact aaaggccgga ccttcgatga gatcgcttcc 2760
ggcttccggc aggggggagc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct gttccatccc 2820
ctgggggctg attcccaagt gtgagtcgcc ccagatcacc agcccggcct gctcccagca 2880
gccctaagga tctctcagga gcacaggcag ctggatgaga cttccaaacc tgacagatgt 2940
cagccgagcc gggcctgggg ctcctttctc cagccagcaa tgatgtccag aagaatattc 3000
aggacttaac ggctccagga ttttaacaaa agcaagactg ttgctcaaat ctattcagac 3060
aagcaacagg ttttataatt tttttattac tgattttgtt atttttatat cagcctgagt 3120
ctcctgtgcc cacatcccag gcttcaccct gaatggttcc atgcctgagg gtggagacta 3180
agccctgtcg agacacttgc cttcttcacc cagctaatct gtagggctgg acctatgtcc 3240
taaggacaca ctaatcgaac tatgaactac aaagcttcta tcccaggagg tggctatggc 3300
cacccgttct gctggcctgg atctcccaag aaacaaaggg cgaattccag cacactggcg 3360
gcccgaaaca aacaccattg tcacactcca acaaacacca ttgtcacact ccaacaaaca 3420
ccattgtcac actccattcg ggttactagt ggatcgagga cggggtgaac tacgcctgag 3480
gatccgatct ttttccctct gccaaaaatt atggggacat catgaagccc cttgagcatc 3540
tgacttctgg ctaataaagg aaatttattt tcattgcaat agtgtgttgg aattttttgt 3600
gtctctcact cggaagcaat tcgttgatct gaatttcgac cacccataat acccattacc 3660
ctggtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag 3720
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 3780
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ccttaattaa 3840
cctaattcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa 3900
cttaatcgcc ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc 3960
accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatgggacgc gccctgtagc 4020
ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc 4080
gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt 4140
ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac 4200
ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag 4260
acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa 4320
actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg 4380
atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattttaac 4440
aaaatattaa cgcttacaat ttaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta 4500
tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat 4560
aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc 4620
ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga 4680
aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca 4740
acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt 4800
ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg 4860
gtcgccgcat acactattct cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc 4920
atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata 4980
acactgcggc caacttactt ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt 5040
tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag 5100
ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca 5160
aactattaac tggcgaacta cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg 5220
aggcggataa agttgcagga ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg 5280
ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag 5340
atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg 5400
aacgaaatag acagatcgct gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag 5460
accaagttta ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga 5520
tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt 5580
tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc 5640
tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc 5700
cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac 5760
caaatactgt tcttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac 5820
cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt 5880
cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct 5940
gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat 6000
acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt 6060
atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg 6120
cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt 6180
gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt 6240
tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg 6300
tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg 6360
agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg aagagcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc 6420
ccgcgcgttg gccgattcat taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg 6480
gcagtgagcg caacgcaatt aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac 6540
actttatgct tccggctcgt atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag 6600
gaaacagcta tgaccatgat tacgccagat ttaattaagg c 6641
<210> 43
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 43
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 44
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 44
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 45
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 45
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 46
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA
<400> 46
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtga 1479
<210> 47
<211> 482
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3'UTR
<400> 47
gtcgccccag atcaccagcc cggcctgctc ccagcagccc taaggatctc tcaggagcac 60
aggcagctgg atgagacttc caaacctgac agatgtcagc cgagccgggc ctggggctcc 120
tttctccagc cagcaatgat gtccagaaga atattcagga cttaacggct ccaggatttt 180
aacaaaagca agactgttgc tcaaatctat tcagacaagc aacaggtttt ataatttttt 240
tattactgat tttgttattt ttatatcagc ctgagtctcc tgtgcccaca tcccaggctt 300
caccctgaat ggttccatgc ctgagggtgg agactaagcc ctgtcgagac acttgccttc 360
ttcacccagc taatctgtag ggctggacct atgtcctaag gacacactaa tcgaactatg 420
aactacaaag cttctatccc aggaggtggc tatggccacc cgttctgctg gcctggatct 480
cc 482
<210> 48
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
寡核苷酸
<220>
<223> 3xmiR-122 BS
<400> 48
cgaaacaaac accattgtca cactccaaca aacaccattg tcacactcca acaaacacca 60
ttgtcacact ccattcg 77
<210> 49
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 49
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 50
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 50
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 51
<211> 7137
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI hGlut1-in3xmiR-122 BS
<400> 51
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
gcccagcagc aagaagctga cgggtcgcct catgctggcc gtgggaggag cagtgcttgg 1440
ctccctgcag tttggctaca acactggagt catcaatgcc ccccagaagg tgatcgagga 1500
gttctacaac cagacatggg tccaccgcta tggggagagc atcctgccca ccacgctcac 1560
cacgctctgg tccctctcag tggccatctt ttctgttggg ggcatgattg gctccttctc 1620
tgtgggcctt ttcgttaacc gctttggccg gcggaattca atgctgatga tgaacctgct 1680
ggccttcgtg tccgccgtgc tcatgggctt ctcgaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgtggcctg accacaggct tcgtgcccat 1800
gtatgtgggt gaagtgtcac ccacagccct tcgtggggcc ctgggcaccc tgcaccagct 1860
gggcatcgtc gtcggcatcc tcatcgccca ggtgttcggc ctggactcca tcatgggcaa 1920
caaggacctg tggcccctgc tgctgagcat catcttcatc ccggccctgc tgcagtgcat 1980
cgtgctgccc ttctgccccg agagtccccg cttcctgctc atcaaccgca acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctaa agaagctgcg cgggacagct gacgtgaccc atgacctgca 2100
ggagatgaag gaagagagtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcctggagct 2160
gttccgctcc cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtct ggcatcaacg ctgtcttcta ttactccacg agcatcttcg agaaggcggg 2280
ggtgcagcag cctgtgtatg ccaccattgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
cgtgtcgctg tttgtggtgg agcgagcagg ccggcggacc ctgcacctca taggcctcgc 2400
tggcatggcg ggttgtgcca tactcatgac catcgcgcta gcactgctgg agcagctacc 2460
ccggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtggg 2520
tcctggcccc atcccatggt tcatcgtggc tgaactcttc agccagggtc cacgtccagc 2580
tgccattgcc gttgcaggct tctccaactg gacctcaaat ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gtggtcccta cgtcttcatc atcttcactg tgctcctggt 2700
tctgttcttc atcttcacct acttcaaagt tcctgagact aaaggccgga ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggagc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
gttccatccc ctgggggctg attcccaagt gtgaggagcc ccacacccag cccggcctgc 2880
tccctgcagc ccaaggatct ctctggagca caggcagcta gatgagacct cttccgaacc 2940
gacagatctc gggcaagccg ggcctgggcg cctttcctca gccagcagtg aagtccagga 3000
ggatattcag gactttgatg gctccagaat ttttaatgaa agcaagactg ctgctcagat 3060
ctattcagat aagcagcagg ttttataatt tttttattac tgattttgtt attttttttt 3120
tttatcagcc actctcctat ctccacactg tagtcttcac cttgattggc ccagtgcctg 3180
agggtgggga ccacgccctg tccagacact tgccttcttt gccaagctaa tctgtagggc 3240
tggacctatg gccaaggaca cactaatacc gaactctgag ctaggaggct ttaccgctgg 3300
aggcggtagc tgccacccac ttccgcaggc ctggacctcg gcaccatagg ggtccggact 3360
ccattttagg attcgcccat tcctgtctct tcctacccaa ccactcaatt aatctttcct 3420
tgcctgagac cagttggaag cactggagtg cagggaggag agggaagggc caggctgggc 3480
tgccaggttc tagtctcctg tgcactgagg gccacacaaa caccatgaga aggaccgaaa 3540
caaacaccat tgtcacactc caacaaacac cattgtcaca ctccaacaaa caccattgtc 3600
acactccatt cggacctcgg aggctgagaa cttaactgct gaagacacgg acactcctgc 3660
cctgctgtgt atagatggaa gatatttata tattttttgg ttgtcaatat taaatacaga 3720
cactaagtta tagtatatct ggacaaaccc acttgtaaat acaccaacaa actcctgtaa 3780
ctttacctaa gcagatataa atggctggtt tttagaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa actgtctcgc 3900
tgcggccgct ctagagtatc cctcgactct agagtcgacc cgggcggcct cgaggacggg 3960
gtgaactacg cctgaggatc cgatcttttt ccctctgcca aaaattatgg ggacatcatg 4020
aagccccttg agcatctgac ttctggctaa taaaggaaat ttattttcat tgcaatagtg 4080
tgttggaatt ttttgtgtct ctcactcgga agcaattcgt tgatctgaat ttcgaccacc 4140
cataataccc attaccctgg tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga 4200
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 4260
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 4320
gcgcagcctt aattaaccta attcactggc cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa 4380
ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa 4440
tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg 4500
ggacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac 4560
cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc 4620
cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt 4680
tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg 4740
gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag 4800
tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt 4860
ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt 4920
taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttag gtggcacttt tcggggaaat 4980
gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg 5040
agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa 5100
catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac 5160
ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac 5220
atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt 5280
ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc 5340
gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca 5400
ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc 5460
ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag 5520
gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa 5580
ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg 5640
gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa 5700
ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg 5760
gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt 5820
gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt 5880
caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag 5940
cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat 6000
ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct 6060
taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct 6120
tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca 6180
gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc 6240
agcagagcgc agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc 6300
aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct 6360
gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag 6420
gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc 6480
tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg 6540
agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag 6600
cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt 6660
gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac 6720
gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg 6780
ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc 6840
cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata 6900
cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt 6960
cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag 7020
gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga 7080
taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccagatttaa ttaaggc 7137
<210> 52
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 52
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 53
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 53
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 54
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 54
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 55
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA
<400> 55
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtga 1479
<210> 56
<211> 1035
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' UTR和3xmiR-122
<400> 56
ggagccccac acccagcccg gcctgctccc tgcagcccaa ggatctctct ggagcacagg 60
cagctagatg agacctcttc cgaaccgaca gatctcgggc aagccgggcc tgggcgcctt 120
tcctcagcca gcagtgaagt ccaggaggat attcaggact ttgatggctc cagaattttt 180
aatgaaagca agactgctgc tcagatctat tcagataagc agcaggtttt ataatttttt 240
tattactgat tttgttattt ttttttttta tcagccactc tcctatctcc acactgtagt 300
cttcaccttg attggcccag tgcctgaggg tggggaccac gccctgtcca gacacttgcc 360
ttctttgcca agctaatctg tagggctgga cctatggcca aggacacact aataccgaac 420
tctgagctag gaggctttac cgctggaggc ggtagctgcc acccacttcc gcaggcctgg 480
acctcggcac cataggggtc cggactccat tttaggattc gcccattcct gtctcttcct 540
acccaaccac tcaattaatc tttccttgcc tgagaccagt tggaagcact ggagtgcagg 600
gaggagaggg aagggccagg ctgggctgcc aggttctagt ctcctgtgca ctgagggcca 660
cacaaacacc atgagaagga ccgaaacaaa caccattgtc acactccaac aaacaccatt 720
gtcacactcc aacaaacacc attgtcacac tccattcgga cctcggaggc tgagaactta 780
actgctgaag acacggacac tcctgccctg ctgtgtatag atggaagata tttatatatt 840
ttttggttgt caatattaaa tacagacact aagttatagt atatctggac aaacccactt 900
gtaaatacac caacaaactc ctgtaacttt acctaagcag atataaatgg ctggttttta 960
gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020
aaaaaaaaaa aaaaa 1035
<210> 57
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 57
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 58
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 58
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 59
<211> 7137
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI mGlut1-in3xmiR-122 BS
<400> 59
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
tcccagcagc aagaaggtga cgggccgcct catgttggct gtgggaggag cagtgctcgg 1440
atcactgcag ttcggctata acactggtgt catcaacgcc ccccagaagg ttattgagga 1500
gttctacaat caaacatgga accaccgcta cggagagccc atcccatcca ccacactcac 1560
cacgctttgg tctctctccg tggccatctt ctctgtcggg ggcatgattg gttccttctc 1620
tgtcggcctc tttgttaatc gctttggcag gcggaactcc atgctgatga tgaacctgtt 1680
ggcctttgtg gctgctgtgc ttatgggctt ctccaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgcggcctg actactggct ttgtgcccat 1800
gtatgtggga gaggtgtcac ctacagctct acgtggagcc ctaggcacac tgcaccagct 1860
gggaatcgtc gttggcatcc ttattgccca ggtgtttggc ttagactcca tcatgggcaa 1920
tgcagacttg tggcctctgc tgctcagtgt catcttcatc ccagccctgc tacagtgtat 1980
cctgttgccc ttctgccccg agagcccccg cttcctgctc atcaatcgta acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctga agaagcttcg agggacagcc gatgtgaccc gagacctgca 2100
ggagatgaaa gaagagggtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcttggagct 2160
gttccgctca cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtcg ggtatcaatg ctgtgttcta ctactcaacg agcatcttcg agaaggcagg 2280
tgtgcagcag cctgtgtacg ccaccatcgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
ggtgtcgctg tttgttgtag agcgagctgg acgacggacc ctgcacctca ttggcctggc 2400
tggcatggca ggctgtgctg tgctcatgac catcgccctg gccttgctgg aacggctgcc 2460
ttggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtagg 2520
ccctggtcct attccatggt tcattgtggc cgagctgttc agccaggggc cccgtcctgc 2580
tgctattgct gtggctggct tctccaactg gacctcaaac ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gcggccccta cgtcttcatc atcttcacgg tgctcctcgt 2700
gctcttcttc atcttcacct acttcaaagt ccctgagacc aaaggccgaa ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggtgc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
cttccaccct ctgggggcgg actcccaagt gtgaggagcc ccacacccag cccggcctgc 2880
tccctgcagc ccaaggatct ctctggagca caggcagcta gatgagacct cttccgaacc 2940
gacagatctc gggcaagccg ggcctgggcg cctttcctca gccagcagtg aagtccagga 3000
ggatattcag gactttgatg gctccagaat ttttaatgaa agcaagactg ctgctcagat 3060
ctattcagat aagcagcagg ttttataatt tttttattac tgattttgtt attttttttt 3120
tttatcagcc actctcctat ctccacactg tagtcttcac cttgattggc ccagtgcctg 3180
agggtgggga ccacgccctg tccagacact tgccttcttt gccaagctaa tctgtagggc 3240
tggacctatg gccaaggaca cactaatacc gaactctgag ctaggaggct ttaccgctgg 3300
aggcggtagc tgccacccac ttccgcaggc ctggacctcg gcaccatagg ggtccggact 3360
ccattttagg attcgcccat tcctgtctct tcctacccaa ccactcaatt aatctttcct 3420
tgcctgagac cagttggaag cactggagtg cagggaggag agggaagggc caggctgggc 3480
tgccaggttc tagtctcctg tgcactgagg gccacacaaa caccatgaga aggaccgaaa 3540
caaacaccat tgtcacactc caacaaacac cattgtcaca ctccaacaaa caccattgtc 3600
acactccatt cggacctcgg aggctgagaa cttaactgct gaagacacgg acactcctgc 3660
cctgctgtgt atagatggaa gatatttata tattttttgg ttgtcaatat taaatacaga 3720
cactaagtta tagtatatct ggacaaaccc acttgtaaat acaccaacaa actcctgtaa 3780
ctttacctaa gcagatataa atggctggtt tttagaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3840
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa actgtctcgc 3900
tgcggccgct ctagagtatc cctcgactct agagtcgacc cgggcggcct cgaggacggg 3960
gtgaactacg cctgaggatc cgatcttttt ccctctgcca aaaattatgg ggacatcatg 4020
aagccccttg agcatctgac ttctggctaa taaaggaaat ttattttcat tgcaatagtg 4080
tgttggaatt ttttgtgtct ctcactcgga agcaattcgt tgatctgaat ttcgaccacc 4140
cataataccc attaccctgg tagataagta gcatggcggg ttaatcatta actacaagga 4200
acccctagtg atggagttgg ccactccctc tctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgg 4260
gcgaccaaag gtcgcccgac gcccgggctt tgcccgggcg gcctcagtga gcgagcgagc 4320
gcgcagcctt aattaaccta attcactggc cgtcgtttta caacgtcgtg actgggaaaa 4380
ccctggcgtt acccaactta atcgccttgc agcacatccc cctttcgcca gctggcgtaa 4440
tagcgaagag gcccgcaccg atcgcccttc ccaacagttg cgcagcctga atggcgaatg 4500
ggacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac 4560
cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc 4620
cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt 4680
tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg 4740
gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag 4800
tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt 4860
ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt 4920
taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgct tacaatttag gtggcacttt tcggggaaat 4980
gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta tccgctcatg 5040
agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat gagtattcaa 5100
catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt ttttgctcac 5160
ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg agtgggttac 5220
atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga agaacgtttt 5280
ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg tattgacgcc 5340
gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt tgagtactca 5400
ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg cagtgctgcc 5460
ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg aggaccgaag 5520
gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga tcgttgggaa 5580
ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc tgtagcaatg 5640
gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc ccggcaacaa 5700
ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc ggcccttccg 5760
gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg cggtatcatt 5820
gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac gacggggagt 5880
caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc actgattaag 5940
cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt aaaacttcat 6000
ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac caaaatccct 6060
taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa aggatcttct 6120
tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc accgctacca 6180
gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt aactggcttc 6240
agcagagcgc agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc cgtagttagg ccaccacttc 6300
aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc agtggctgct 6360
gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt accggataag 6420
gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga gcgaacgacc 6480
tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct tcccgaaggg 6540
agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg cacgagggag 6600
cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca cctctgactt 6660
gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa cgccagcaac 6720
gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt ctttcctgcg 6780
ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc 6840
cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata 6900
cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt 6960
cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag 7020
gcaccccagg ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga 7080
taacaatttc acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccagatttaa ttaaggc 7137
<210> 60
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 60
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 61
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 61
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 62
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 62
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 63
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> mGlut1 cDNA
<400> 63
atggatccca gcagcaagaa ggtgacgggc cgcctcatgt tggctgtggg aggagcagtg 60
ctcggatcac tgcagttcgg ctataacact ggtgtcatca acgcccccca gaaggttatt 120
gaggagttct acaatcaaac atggaaccac cgctacggag agcccatccc atccaccaca 180
ctcaccacgc tttggtctct ctccgtggcc atcttctctg tcgggggcat gattggttcc 240
ttctctgtcg gcctctttgt taatcgcttt ggcaggcgga actccatgct gatgatgaac 300
ctgttggcct ttgtggctgc tgtgcttatg ggcttctcca aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgcg gcctgactac tggctttgtg 420
cccatgtatg tgggagaggt gtcacctaca gctctacgtg gagccctagg cacactgcac 480
cagctgggaa tcgtcgttgg catccttatt gcccaggtgt ttggcttaga ctccatcatg 540
ggcaatgcag acttgtggcc tctgctgctc agtgtcatct tcatcccagc cctgctacag 600
tgtatcctgt tgcccttctg ccccgagagc ccccgcttcc tgctcatcaa tcgtaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctgaagaag cttcgaggga cagccgatgt gacccgagac 720
ctgcaggaga tgaaagaaga gggtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcttg 780
gagctgttcc gctcacccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtcgggtat caatgctgtg ttctactact caacgagcat cttcgagaag 900
gcaggtgtgc agcagcctgt gtacgccacc atcggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtggtgt cgctgtttgt tgtagagcga gctggacgac ggaccctgca cctcattggc 1020
ctggctggca tggcaggctg tgctgtgctc atgaccatcg ccctggcctt gctggaacgg 1080
ctgccttgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtaggccctg gtcctattcc atggttcatt gtggccgagc tgttcagcca ggggccccgt 1200
cctgctgcta ttgctgtggc tggcttctcc aactggacct caaacttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgcggc ccctacgtct tcatcatctt cacggtgctc 1320
ctcgtgctct tcttcatctt cacctacttc aaagtccctg agaccaaagg ccgaaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggtgccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctcttcc accctctggg ggcggactcc caagtgtga 1479
<210> 64
<211> 1035
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3'UTR和3x-miR122BS
<400> 64
ggagccccac acccagcccg gcctgctccc tgcagcccaa ggatctctct ggagcacagg 60
cagctagatg agacctcttc cgaaccgaca gatctcgggc aagccgggcc tgggcgcctt 120
tcctcagcca gcagtgaagt ccaggaggat attcaggact ttgatggctc cagaattttt 180
aatgaaagca agactgctgc tcagatctat tcagataagc agcaggtttt ataatttttt 240
tattactgat tttgttattt ttttttttta tcagccactc tcctatctcc acactgtagt 300
cttcaccttg attggcccag tgcctgaggg tggggaccac gccctgtcca gacacttgcc 360
ttctttgcca agctaatctg tagggctgga cctatggcca aggacacact aataccgaac 420
tctgagctag gaggctttac cgctggaggc ggtagctgcc acccacttcc gcaggcctgg 480
acctcggcac cataggggtc cggactccat tttaggattc gcccattcct gtctcttcct 540
acccaaccac tcaattaatc tttccttgcc tgagaccagt tggaagcact ggagtgcagg 600
gaggagaggg aagggccagg ctgggctgcc aggttctagt ctcctgtgca ctgagggcca 660
cacaaacacc atgagaagga ccgaaacaaa caccattgtc acactccaac aaacaccatt 720
gtcacactcc aacaaacacc attgtcacac tccattcgga cctcggaggc tgagaactta 780
actgctgaag acacggacac tcctgccctg ctgtgtatag atggaagata tttatatatt 840
ttttggttgt caatattaaa tacagacact aagttatagt atatctggac aaacccactt 900
gtaaatacac caacaaactc ctgtaacttt acctaagcag atataaatgg ctggttttta 960
gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1020
aaaaaaaaaa aaaaa 1035
<210> 65
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 65
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 66
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3'ITR
<400> 66
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 67
<211> 7138
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI mGlut1-out3xmiR-122 BS
<400> 67
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
tcccagcagc aagaaggtga cgggccgcct catgttggct gtgggaggag cagtgctcgg 1440
atcactgcag ttcggctata acactggtgt catcaacgcc ccccagaagg ttattgagga 1500
gttctacaat caaacatgga accaccgcta cggagagccc atcccatcca ccacactcac 1560
cacgctttgg tctctctccg tggccatctt ctctgtcggg ggcatgattg gttccttctc 1620
tgtcggcctc tttgttaatc gctttggcag gcggaactcc atgctgatga tgaacctgtt 1680
ggcctttgtg gctgctgtgc ttatgggctt ctccaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgcggcctg actactggct ttgtgcccat 1800
gtatgtggga gaggtgtcac ctacagctct acgtggagcc ctaggcacac tgcaccagct 1860
gggaatcgtc gttggcatcc ttattgccca ggtgtttggc ttagactcca tcatgggcaa 1920
tgcagacttg tggcctctgc tgctcagtgt catcttcatc ccagccctgc tacagtgtat 1980
cctgttgccc ttctgccccg agagcccccg cttcctgctc atcaatcgta acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctga agaagcttcg agggacagcc gatgtgaccc gagacctgca 2100
ggagatgaaa gaagagggtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcttggagct 2160
gttccgctca cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtcg ggtatcaatg ctgtgttcta ctactcaacg agcatcttcg agaaggcagg 2280
tgtgcagcag cctgtgtacg ccaccatcgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
ggtgtcgctg tttgttgtag agcgagctgg acgacggacc ctgcacctca ttggcctggc 2400
tggcatggca ggctgtgctg tgctcatgac catcgccctg gccttgctgg aacggctgcc 2460
ttggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtagg 2520
ccctggtcct attccatggt tcattgtggc cgagctgttc agccaggggc cccgtcctgc 2580
tgctattgct gtggctggct tctccaactg gacctcaaac ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gcggccccta cgtcttcatc atcttcacgg tgctcctcgt 2700
gctcttcttc atcttcacct acttcaaagt ccctgagacc aaaggccgaa ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggtgc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
cttccaccct ctgggggcgg actcccaagt gtgaggagcc ccacacccag cccggcctgc 2880
tccctgcagc ccaaggatct ctctggagca caggcagcta gatgagacct cttccgaacc 2940
gacagatctc gggcaagccg ggcctgggcg cctttcctca gccagcagtg aagtccagga 3000
ggatattcag gactttgatg gctccagaat ttttaatgaa agcaagactg ctgctcagat 3060
ctattcagat aagcagcagg ttttataatt tttttattac tgattttgtt attttttttt 3120
tttatcagcc actctcctat ctccacactg tagtcttcac cttgattggc ccagtgcctg 3180
agggtgggga ccacgccctg tccagacact tgccttcttt gccaagctaa tctgtagggc 3240
tggacctatg gccaaggaca cactaatacc gaactctgag ctaggaggct ttaccgctgg 3300
aggcggtagc tgccacccac ttccgcaggc ctggacctcg gcaccatagg ggtccggact 3360
ccattttagg attcgcccat tcctgtctct tcctacccaa ccactcaatt aatctttcct 3420
tgcctgagac cagttggaag cactggagtg cagggaggag agggaagggc caggctgggc 3480
tgccaggttc tagtctcctg tgcactgagg gccacacaaa caccatgaga aggacctcgg 3540
aggctgagaa cttaactgct gaagacacgg acactcctgc cctgctgtgt atagatggaa 3600
gatatttata tattttttgg ttgtcaatat taaatacaga cactaagtta tagtatatct 3660
ggacaaaccc acttgtaaat acaccaacaa actcctgtaa ctttacctaa gcagatataa 3720
atggctggtt tttagaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 3780
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa actgtctcgc tgcggcccga aacaaacacc 3840
attgtcacac tccaacaaac accattgtca cactccaaca aacaccattg tcacactcca 3900
ttcgggccgc tctagagtat ccctcgactc tagagtcgac ccgggcggcc tcgaggacgg 3960
ggtgaactac gcctgaggat ccgatctttt tccctctgcc aaaaattatg gggacatcat 4020
gaagcccctt gagcatctga cttctggcta ataaaggaaa tttattttca ttgcaatagt 4080
gtgttggaat tttttgtgtc tctcactcgg aagcaattcg ttgatctgaa tttcgaccac 4140
ccataatacc cattaccctg gtagataagt agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg 4200
aacccctagt gatggagttg gccactccct ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg 4260
ggcgaccaaa ggtcgcccga cgcccgggct ttgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag 4320
cgcgcagcct taattaacct aattcactgg ccgtcgtttt acaacgtcgt gactgggaaa 4380
accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc ccctttcgcc agctggcgta 4440
atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt gcgcagcctg aatggcgaat 4500
gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt ggtggttacg cgcagcgtga 4560
ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc tttcttccct tcctttctcg 4620
ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg gctcccttta gggttccgat 4680
ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta gggtgatggt tcacgtagtg 4740
ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt ggagtccacg ttctttaata 4800
gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat ctcggtctat tcttttgatt 4860
tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa tgagctgatt taacaaaaat 4920
ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta ggtggcactt ttcggggaaa 4980
tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat 5040
gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca 5100
acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca 5160
cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta 5220
catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt 5280
tccaatgatg agcactttta aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtattgacgc 5340
cgggcaagag caactcggtc gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc 5400
accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc 5460
cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa 5520
ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga 5580
accggagctg aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat 5640
ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca 5700
attaatagac tggatggagg cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc 5760
ggctggctgg tttattgctg ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat 5820
tgcagcactg gggccagatg gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag 5880
tcaggcaact atggatgaac gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa 5940
gcattggtaa ctgtcagacc aagtttactc atatatactt tagattgatt taaaacttca 6000
tttttaattt aaaaggatct aggtgaagat cctttttgat aatctcatga ccaaaatccc 6060
ttaacgtgag ttttcgttcc actgagcgtc agaccccgta gaaaagatca aaggatcttc 6120
ttgagatcct ttttttctgc gcgtaatctg ctgcttgcaa acaaaaaaac caccgctacc 6180
agcggtggtt tgtttgccgg atcaagagct accaactctt tttccgaagg taactggctt 6240
cagcagagcg cagataccaa atactgttct tctagtgtag ccgtagttag gccaccactt 6300
caagaactct gtagcaccgc ctacatacct cgctctgcta atcctgttac cagtggctgc 6360
tgccagtggc gataagtcgt gtcttaccgg gttggactca agacgatagt taccggataa 6420
ggcgcagcgg tcgggctgaa cggggggttc gtgcacacag cccagcttgg agcgaacgac 6480
ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gctatgagaa agcgccacgc ttcccgaagg 6540
gagaaaggcg gacaggtatc cggtaagcgg cagggtcgga acaggagagc gcacgaggga 6600
gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact 6660
tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa 6720
cgcggccttt ttacggttcc tggccttttg ctggcctttt gctcacatgt tctttcctgc 6780
gttatcccct gattctgtgg ataaccgtat taccgccttt gagtgagctg ataccgctcg 6840
ccgcagccga acgaccgagc gcagcgagtc agtgagcgag gaagcggaag agcgcccaat 6900
acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc acgacaggtt 6960
tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtgagttagc tcactcatta 7020
ggcaccccag gctttacact ttatgcttcc ggctcgtatg ttgtgtggaa ttgtgagcgg 7080
ataacaattt cacacaggaa acagctatga ccatgattac gccagattta attaaggc 7138
<210> 68
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 68
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 69
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 69
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 70
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 70
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 71
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> mGlut1 cDNA
<400> 71
atggatccca gcagcaagaa ggtgacgggc cgcctcatgt tggctgtggg aggagcagtg 60
ctcggatcac tgcagttcgg ctataacact ggtgtcatca acgcccccca gaaggttatt 120
gaggagttct acaatcaaac atggaaccac cgctacggag agcccatccc atccaccaca 180
ctcaccacgc tttggtctct ctccgtggcc atcttctctg tcgggggcat gattggttcc 240
ttctctgtcg gcctctttgt taatcgcttt ggcaggcgga actccatgct gatgatgaac 300
ctgttggcct ttgtggctgc tgtgcttatg ggcttctcca aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgcg gcctgactac tggctttgtg 420
cccatgtatg tgggagaggt gtcacctaca gctctacgtg gagccctagg cacactgcac 480
cagctgggaa tcgtcgttgg catccttatt gcccaggtgt ttggcttaga ctccatcatg 540
ggcaatgcag acttgtggcc tctgctgctc agtgtcatct tcatcccagc cctgctacag 600
tgtatcctgt tgcccttctg ccccgagagc ccccgcttcc tgctcatcaa tcgtaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctgaagaag cttcgaggga cagccgatgt gacccgagac 720
ctgcaggaga tgaaagaaga gggtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcttg 780
gagctgttcc gctcacccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtcgggtat caatgctgtg ttctactact caacgagcat cttcgagaag 900
gcaggtgtgc agcagcctgt gtacgccacc atcggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtggtgt cgctgtttgt tgtagagcga gctggacgac ggaccctgca cctcattggc 1020
ctggctggca tggcaggctg tgctgtgctc atgaccatcg ccctggcctt gctggaacgg 1080
ctgccttgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtaggccctg gtcctattcc atggttcatt gtggccgagc tgttcagcca ggggccccgt 1200
cctgctgcta ttgctgtggc tggcttctcc aactggacct caaacttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgcggc ccctacgtct tcatcatctt cacggtgctc 1320
ctcgtgctct tcttcatctt cacctacttc aaagtccctg agaccaaagg ccgaaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggtgccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctcttcc accctctggg ggcggactcc caagtgtga 1479
<210> 72
<211> 955
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3'UTR
<400> 72
ggagccccac acccagcccg gcctgctccc tgcagcccaa ggatctctct ggagcacagg 60
cagctagatg agacctcttc cgaaccgaca gatctcgggc aagccgggcc tgggcgcctt 120
tcctcagcca gcagtgaagt ccaggaggat attcaggact ttgatggctc cagaattttt 180
aatgaaagca agactgctgc tcagatctat tcagataagc agcaggtttt ataatttttt 240
tattactgat tttgttattt ttttttttta tcagccactc tcctatctcc acactgtagt 300
cttcaccttg attggcccag tgcctgaggg tggggaccac gccctgtcca gacacttgcc 360
ttctttgcca agctaatctg tagggctgga cctatggcca aggacacact aataccgaac 420
tctgagctag gaggctttac cgctggaggc ggtagctgcc acccacttcc gcaggcctgg 480
acctcggcac cataggggtc cggactccat tttaggattc gcccattcct gtctcttcct 540
acccaaccac tcaattaatc tttccttgcc tgagaccagt tggaagcact ggagtgcagg 600
gaggagaggg aagggccagg ctgggctgcc aggttctagt ctcctgtgca ctgagggcca 660
cacaaacacc atgagaagga cctcggaggc tgagaactta actgctgaag acacggacac 720
tcctgccctg ctgtgtatag atggaagata tttatatatt ttttggttgt caatattaaa 780
tacagacact aagttatagt atatctggac aaacccactt gtaaatacac caacaaactc 840
ctgtaacttt acctaagcag atataaatgg ctggttttta gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 900
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 955
<210> 73
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
寡核苷酸
<220>
<223> 3xmiR-122BS
<400> 73
cgaaacaaac accattgtca cactccaaca aacaccattg tcacactcca acaaacacca 60
ttgtcacact ccattcg 77
<210> 74
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 74
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 75
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3'ITR
<400> 75
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
引物
<220>
<223> Glut1QPCR F1
<400> 76
cttgcttgta gagtgacgat c 21
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
引物
<220>
<223> Glut1QPCR R1
<400> 77
cagtgatccg agcactgctc 20
<210> 78
<211> 492
<212> PRT
<213> 小家鼠
<220>
<223> mGlut1氨基酸序列; 溶质载体家族2,
促进葡萄糖转运蛋白成员1
<400> 78
Met Asp Pro Ser Ser Lys Lys Val Thr Gly Arg Leu Met Leu Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Ala Val Leu Gly Ser Leu Gln Phe Gly Tyr Asn Thr Gly Val
20 25 30
Ile Asn Ala Pro Gln Lys Val Ile Glu Glu Phe Tyr Asn Gln Thr Trp
35 40 45
Asn His Arg Tyr Gly Glu Pro Ile Pro Ser Thr Thr Leu Thr Thr Leu
50 55 60
Trp Ser Leu Ser Val Ala Ile Phe Ser Val Gly Gly Met Ile Gly Ser
65 70 75 80
Phe Ser Val Gly Leu Phe Val Asn Arg Phe Gly Arg Arg Asn Ser Met
85 90 95
Leu Met Met Asn Leu Leu Ala Phe Val Ala Ala Val Leu Met Gly Phe
100 105 110
Ser Lys Leu Gly Lys Ser Phe Glu Met Leu Ile Leu Gly Arg Phe Ile
115 120 125
Ile Gly Val Tyr Cys Gly Leu Thr Thr Gly Phe Val Pro Met Tyr Val
130 135 140
Gly Glu Val Ser Pro Thr Ala Leu Arg Gly Ala Leu Gly Thr Leu His
145 150 155 160
Gln Leu Gly Ile Val Val Gly Ile Leu Ile Ala Gln Val Phe Gly Leu
165 170 175
Asp Ser Ile Met Gly Asn Ala Asp Leu Trp Pro Leu Leu Leu Ser Val
180 185 190
Ile Phe Ile Pro Ala Leu Leu Gln Cys Ile Leu Leu Pro Phe Cys Pro
195 200 205
Glu Ser Pro Arg Phe Leu Leu Ile Asn Arg Asn Glu Glu Asn Arg Ala
210 215 220
Lys Ser Val Leu Lys Lys Leu Arg Gly Thr Ala Asp Val Thr Arg Asp
225 230 235 240
Leu Gln Glu Met Lys Glu Glu Gly Arg Gln Met Met Arg Glu Lys Lys
245 250 255
Val Thr Ile Leu Glu Leu Phe Arg Ser Pro Ala Tyr Arg Gln Pro Ile
260 265 270
Leu Ile Ala Val Val Leu Gln Leu Ser Gln Gln Leu Ser Gly Ile Asn
275 280 285
Ala Val Phe Tyr Tyr Ser Thr Ser Ile Phe Glu Lys Ala Gly Val Gln
290 295 300
Gln Pro Val Tyr Ala Thr Ile Gly Ser Gly Ile Val Asn Thr Ala Phe
305 310 315 320
Thr Val Val Ser Leu Phe Val Val Glu Arg Ala Gly Arg Arg Thr Leu
325 330 335
His Leu Ile Gly Leu Ala Gly Met Ala Gly Cys Ala Val Leu Met Thr
340 345 350
Ile Ala Leu Ala Leu Leu Glu Arg Leu Pro Trp Met Ser Tyr Leu Ser
355 360 365
Ile Val Ala Ile Phe Gly Phe Val Ala Phe Phe Glu Val Gly Pro Gly
370 375 380
Pro Ile Pro Trp Phe Ile Val Ala Glu Leu Phe Ser Gln Gly Pro Arg
385 390 395 400
Pro Ala Ala Ile Ala Val Ala Gly Phe Ser Asn Trp Thr Ser Asn Phe
405 410 415
Ile Val Gly Met Cys Phe Gln Tyr Val Glu Gln Leu Cys Gly Pro Tyr
420 425 430
Val Phe Ile Ile Phe Thr Val Leu Leu Val Leu Phe Phe Ile Phe Thr
435 440 445
Tyr Phe Lys Val Pro Glu Thr Lys Gly Arg Thr Phe Asp Glu Ile Ala
450 455 460
Ser Gly Phe Arg Gln Gly Gly Ala Ser Gln Ser Asp Lys Thr Pro Glu
465 470 475 480
Glu Leu Phe His Pro Leu Gly Ala Asp Ser Gln Val
485 490
<210> 79
<211> 492
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> hGlut1氨基酸序列; 溶质载体家族2,
促进葡萄糖转运蛋白成员1
<400> 79
Met Glu Pro Ser Ser Lys Lys Leu Thr Gly Arg Leu Met Leu Ala Val
1 5 10 15
Gly Gly Ala Val Leu Gly Ser Leu Gln Phe Gly Tyr Asn Thr Gly Val
20 25 30
Ile Asn Ala Pro Gln Lys Val Ile Glu Glu Phe Tyr Asn Gln Thr Trp
35 40 45
Val His Arg Tyr Gly Glu Ser Ile Leu Pro Thr Thr Leu Thr Thr Leu
50 55 60
Trp Ser Leu Ser Val Ala Ile Phe Ser Val Gly Gly Met Ile Gly Ser
65 70 75 80
Phe Ser Val Gly Leu Phe Val Asn Arg Phe Gly Arg Arg Asn Ser Met
85 90 95
Leu Met Met Asn Leu Leu Ala Phe Val Ser Ala Val Leu Met Gly Phe
100 105 110
Ser Lys Leu Gly Lys Ser Phe Glu Met Leu Ile Leu Gly Arg Phe Ile
115 120 125
Ile Gly Val Tyr Cys Gly Leu Thr Thr Gly Phe Val Pro Met Tyr Val
130 135 140
Gly Glu Val Ser Pro Thr Ala Leu Arg Gly Ala Leu Gly Thr Leu His
145 150 155 160
Gln Leu Gly Ile Val Val Gly Ile Leu Ile Ala Gln Val Phe Gly Leu
165 170 175
Asp Ser Ile Met Gly Asn Lys Asp Leu Trp Pro Leu Leu Leu Ser Ile
180 185 190
Ile Phe Ile Pro Ala Leu Leu Gln Cys Ile Val Leu Pro Phe Cys Pro
195 200 205
Glu Ser Pro Arg Phe Leu Leu Ile Asn Arg Asn Glu Glu Asn Arg Ala
210 215 220
Lys Ser Val Leu Lys Lys Leu Arg Gly Thr Ala Asp Val Thr His Asp
225 230 235 240
Leu Gln Glu Met Lys Glu Glu Ser Arg Gln Met Met Arg Glu Lys Lys
245 250 255
Val Thr Ile Leu Glu Leu Phe Arg Ser Pro Ala Tyr Arg Gln Pro Ile
260 265 270
Leu Ile Ala Val Val Leu Gln Leu Ser Gln Gln Leu Ser Gly Ile Asn
275 280 285
Ala Val Phe Tyr Tyr Ser Thr Ser Ile Phe Glu Lys Ala Gly Val Gln
290 295 300
Gln Pro Val Tyr Ala Thr Ile Gly Ser Gly Ile Val Asn Thr Ala Phe
305 310 315 320
Thr Val Val Ser Leu Phe Val Val Glu Arg Ala Gly Arg Arg Thr Leu
325 330 335
His Leu Ile Gly Leu Ala Gly Met Ala Gly Cys Ala Ile Leu Met Thr
340 345 350
Ile Ala Leu Ala Leu Leu Glu Gln Leu Pro Trp Met Ser Tyr Leu Ser
355 360 365
Ile Val Ala Ile Phe Gly Phe Val Ala Phe Phe Glu Val Gly Pro Gly
370 375 380
Pro Ile Pro Trp Phe Ile Val Ala Glu Leu Phe Ser Gln Gly Pro Arg
385 390 395 400
Pro Ala Ala Ile Ala Val Ala Gly Phe Ser Asn Trp Thr Ser Asn Phe
405 410 415
Ile Val Gly Met Cys Phe Gln Tyr Val Glu Gln Leu Cys Gly Pro Tyr
420 425 430
Val Phe Ile Ile Phe Thr Val Leu Leu Val Leu Phe Phe Ile Phe Thr
435 440 445
Tyr Phe Lys Val Pro Glu Thr Lys Gly Arg Thr Phe Asp Glu Ile Ala
450 455 460
Ser Gly Phe Arg Gln Gly Gly Ala Ser Gln Ser Asp Lys Thr Pro Glu
465 470 475 480
Glu Leu Phe His Pro Leu Gly Ala Asp Ser Gln Val
485 490
<210> 80
<211> 6834
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI hGlut1- EGFP
<400> 80
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
tcccagcagc aagaaggtga cgggccgcct catgttggct gtgggaggag cagtgctcgg 1440
atcactgcag ttcggctata acactggtgt catcaacgcc ccccagaagg ttattgagga 1500
gttctacaat caaacatgga accaccgcta cggagagccc atcccatcca ccacactcac 1560
cacgctttgg tctctctccg tggccatctt ctctgtcggg ggcatgattg gttccttctc 1620
tgtcggcctc tttgttaatc gctttggcag gcggaactcc atgctgatga tgaacctgtt 1680
ggcctttgtg gctgctgtgc ttatgggctt ctccaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgcggcctg actactggct ttgtgcccat 1800
gtatgtggga gaggtgtcac ctacagctct acgtggagcc ctaggcacac tgcaccagct 1860
gggaatcgtc gttggcatcc ttattgccca ggtgtttggc ttagactcca tcatgggcaa 1920
tgcagacttg tggcctctgc tgctcagtgt catcttcatc ccagccctgc tacagtgtat 1980
cctgttgccc ttctgccccg agagcccccg cttcctgctc atcaatcgta acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctga agaagcttcg agggacagcc gatgtgaccc gagacctgca 2100
ggagatgaaa gaagagggtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcttggagct 2160
gttccgctca cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtcg ggtatcaatg ctgtgttcta ctactcaacg agcatcttcg agaaggcagg 2280
tgtgcagcag cctgtgtacg ccaccatcgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
ggtgtcgctg tttgttgtag agcgagctgg acgacggacc ctgcacctca ttggcctggc 2400
tggcatggca ggctgtgctg tgctcatgac catcgccctg gccttgctgg aacggctgcc 2460
ttggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtagg 2520
ccctggtcct attccatggt tcattgtggc cgagctgttc agccaggggc cccgtcctgc 2580
tgctattgct gtggctggct tctccaactg gacctcaaac ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gcggccccta cgtcttcatc atcttcacgg tgctcctcgt 2700
gctcttcttc atcttcacct acttcaaagt ccctgagacc aaaggccgaa ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggtgc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
cttccaccct ctgggggcgg actcccaagt gaccggtgcc atggtgagca agggcgagga 2880
gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa acggccacaa 2940
gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga ccctgaagtt 3000
catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca ccctgaccta 3060
cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact tcttcaagtc 3120
cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg acggcaacta 3180
caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca tcgagctgaa 3240
gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt acaactacaa 3300
cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg tgaacttcaa 3360
gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc agcagaacac 3420
ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca cccagtccgc 3480
cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt tcgtgaccgc 3540
cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccatc aagcttatcg 3600
ggccgctcta gagtatccct cgactctaga gtcgacccgg gcggcctcga ggacggggtg 3660
aactacgcct gaggatccga tctttttccc tctgccaaaa attatgggga catcatgaag 3720
ccccttgagc atctgacttc tggctaataa aggaaattta ttttcattgc aatagtgtgt 3780
tggaattttt tgtgtctctc actcggaagc aattcgttga tctgaatttc gaccacccat 3840
aatacccatt accctggtag ataagtagca tggcgggtta atcattaact acaaggaacc 3900
cctagtgatg gagttggcca ctccctctct gcgcgctcgc tcgctcactg aggccgggcg 3960
accaaaggtc gcccgacgcc cgggctttgc ccgggcggcc tcagtgagcg agcgagcgcg 4020
cagccttaat taacctaatt cactggccgt cgttttacaa cgtcgtgact gggaaaaccc 4080
tggcgttacc caacttaatc gccttgcagc acatccccct ttcgccagct ggcgtaatag 4140
cgaagaggcc cgcaccgatc gcccttccca acagttgcgc agcctgaatg gcgaatggga 4200
cgcgccctgt agcggcgcat taagcgcggc gggtgtggtg gttacgcgca gcgtgaccgc 4260
tacacttgcc agcgccctag cgcccgctcc tttcgctttc ttcccttcct ttctcgccac 4320
gttcgccggc tttccccgtc aagctctaaa tcgggggctc cctttagggt tccgatttag 4380
tgctttacgg cacctcgacc ccaaaaaact tgattagggt gatggttcac gtagtgggcc 4440
atcgccctga tagacggttt ttcgcccttt gacgttggag tccacgttct ttaatagtgg 4500
actcttgttc caaactggaa caacactcaa ccctatctcg gtctattctt ttgatttata 4560
agggattttg ccgatttcgg cctattggtt aaaaaatgag ctgatttaac aaaaatttaa 4620
cgcgaatttt aacaaaatat taacgcttac aatttaggtg gcacttttcg gggaaatgtg 4680
cgcggaaccc ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga 4740
caataaccct gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat 4800
ttccgtgtcg cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca 4860
gaaacgctgg tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc 4920
gaactggatc tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca 4980
atgatgagca cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg 5040
caagagcaac tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca 5100
gtcacagaaa agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata 5160
accatgagtg ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag 5220
ctaaccgctt ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg 5280
gagctgaatg aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca 5340
acaacgttgc gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta 5400
atagactgga tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct 5460
ggctggttta ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca 5520
gcactggggc cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag 5580
gcaactatgg atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat 5640
tggtaactgt cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt 5700
taatttaaaa ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa 5760
cgtgagtttt cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga 5820
gatccttttt ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg 5880
gtggtttgtt tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc 5940
agagcgcaga taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag 6000
aactctgtag caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc 6060
agtggcgata agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg 6120
cagcggtcgg gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac 6180
accgaactga gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga 6240
aaggcggaca ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt 6300
ccagggggaa acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag 6360
cgtcgatttt tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg 6420
gcctttttac ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatgttctt tcctgcgtta 6480
tcccctgatt ctgtggataa ccgtattacc gcctttgagt gagctgatac cgctcgccgc 6540
agccgaacga ccgagcgcag cgagtcagtg agcgaggaag cggaagagcg cccaatacgc 6600
aaaccgcctc tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc 6660
gactggaaag cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac tcattaggca 6720
ccccaggctt tacactttat gcttccggct cgtatgttgt gtggaattgt gagcggataa 6780
caatttcaca caggaaacag ctatgaccat gattacgcca gatttaatta aggc 6834
<210> 81
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
<220>
<223> 5'ITR
<400> 81
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 82
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 82
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 83
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 83
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 84
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> eGFP
<400> 84
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaag 717
<210> 85
<211> 1959
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> hGlut1 cDNA和3'UTR
<400> 85
atggagccca gcagcaagaa gctgacgggt cgcctcatgc tggccgtggg aggagcagtg 60
cttggctccc tgcagtttgg ctacaacact ggagtcatca atgcccccca gaaggtgatc 120
gaggagttct acaaccagac atgggtccac cgctatgggg agagcatcct gcccaccacg 180
ctcaccacgc tctggtccct ctcagtggcc atcttttctg ttgggggcat gattggctcc 240
ttctctgtgg gccttttcgt taaccgcttt ggccggcgga attcaatgct gatgatgaac 300
ctgctggcct tcgtgtccgc cgtgctcatg ggcttctcga aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgtg gcctgaccac aggcttcgtg 420
cccatgtatg tgggtgaagt gtcacccaca gcccttcgtg gggccctggg caccctgcac 480
cagctgggca tcgtcgtcgg catcctcatc gcccaggtgt tcggcctgga ctccatcatg 540
ggcaacaagg acctgtggcc cctgctgctg agcatcatct tcatcccggc cctgctgcag 600
tgcatcgtgc tgcccttctg ccccgagagt ccccgcttcc tgctcatcaa ccgcaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctaaagaag ctgcgcggga cagctgacgt gacccatgac 720
ctgcaggaga tgaaggaaga gagtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcctg 780
gagctgttcc gctcccccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtctggcat caacgctgtc ttctattact ccacgagcat cttcgagaag 900
gcgggggtgc agcagcctgt gtatgccacc attggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtcgtgt cgctgtttgt ggtggagcga gcaggccggc ggaccctgca cctcataggc 1020
ctcgctggca tggcgggttg tgccatactc atgaccatcg cgctagcact gctggagcag 1080
ctaccccgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtgggtcctg gccccatccc atggttcatc gtggctgaac tcttcagcca gggtccacgt 1200
ccagctgcca ttgccgttgc aggcttctcc aactggacct caaatttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgtggt ccctacgtct tcatcatctt cactgtgctc 1320
ctggttctgt tcttcatctt cacctacttc aaagttcctg agactaaagg ccggaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggagccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctgttcc atcccctggg ggctgattcc caagtgtgag tcgccccaga tcaccagccc 1500
ggcctgctcc cagcagccct aaggatctct caggagcaca ggcagctgga tgagacttcc 1560
aaacctgaca gatgtcagcc gagccgggcc tggggctcct ttctccagcc agcaatgatg 1620
tccagaagaa tattcaggac ttaacggctc caggatttta acaaaagcaa gactgttgct 1680
caaatctatt cagacaagca acaggtttta taattttttt attactgatt ttgttatttt 1740
tatatcagcc tgagtctcct gtgcccacat cccaggcttc accctgaatg gttccatgcc 1800
tgagggtgga gactaagccc tgtcgagaca cttgccttct tcacccagct aatctgtagg 1860
gctggaccta tgtcctaagg acacactaat cgaactatga actacaaagc ttctatccca 1920
ggaggtggct atggccaccc gttctgctgg cctggatct 1959
<210> 86
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 86
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 87
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 87
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 88
<211> 6885
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> pAAV CB6 PI mGlut1-2A- EGFP
<400> 88
cttaattagg ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg 60
ggcgaccttt ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa 120
ctccatcact aggggttcct tgtagttaat gattaacccg ccatgctact tatctaccag 180
ggtaatgggg atcctctaga actatagcta gtcgacattg attattgact agttattaat 240
agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac 300
ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa 360
tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt 420
atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc 480
ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat 540
gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atgtcgaggc 600
cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca cccccaattt tgtatttatt 660
tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg gggggcgcgc gccaggcggg 720
gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag 780
agcggcgcgc tccgaaagtt tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa 840
aagcgaagcg cgcggcgggc gggagcaagc tttattgcgg tagtttatca cagttaaatt 900
gctaacgcag tcagtgcttc tgacacaaca gtctcgaact taagctgcag aagttggtcg 960
tgaggcactg ggcaggtaag tatcaaggtt acaagacagg tttaaggaga ccaatagaaa 1020
ctgggcttgt cgagacagag aagactcttg cgtttctgat aggcacctat tggtcttact 1080
gacatccact ttgcctttct ctccacaggt gtccactccc agttcaatta cagctcttaa 1140
ggctagagta cttaatacga ctcactatag gctagcgcgc cgaattcggc acgaggaaaa 1200
aggcagctcc gcgcgctctc ccccaagagc agaggcttgc ttgtagagtg acgatctgag 1260
ctacggggtc ttaagtgcgt cagggcgtgg aggtctggcg ggagacgcat agttacagcg 1320
cgtccgttct ccgtctcgca gccggcacag ctagagcttc gagcgcagcg cggccatgga 1380
tcccagcagc aagaaggtga cgggccgcct catgttggct gtgggaggag cagtgctcgg 1440
atcactgcag ttcggctata acactggtgt catcaacgcc ccccagaagg ttattgagga 1500
gttctacaat caaacatgga accaccgcta cggagagccc atcccatcca ccacactcac 1560
cacgctttgg tctctctccg tggccatctt ctctgtcggg ggcatgattg gttccttctc 1620
tgtcggcctc tttgttaatc gctttggcag gcggaactcc atgctgatga tgaacctgtt 1680
ggcctttgtg gctgctgtgc ttatgggctt ctccaaactg ggcaagtcct ttgagatgct 1740
gatcctgggc cgcttcatca tcggtgtgta ctgcggcctg actactggct ttgtgcccat 1800
gtatgtggga gaggtgtcac ctacagctct acgtggagcc ctaggcacac tgcaccagct 1860
gggaatcgtc gttggcatcc ttattgccca ggtgtttggc ttagactcca tcatgggcaa 1920
tgcagacttg tggcctctgc tgctcagtgt catcttcatc ccagccctgc tacagtgtat 1980
cctgttgccc ttctgccccg agagcccccg cttcctgctc atcaatcgta acgaggagaa 2040
ccgggccaag agtgtgctga agaagcttcg agggacagcc gatgtgaccc gagacctgca 2100
ggagatgaaa gaagagggtc ggcagatgat gcgggagaag aaggtcacca tcttggagct 2160
gttccgctca cccgcctacc gccagcccat cctcatcgct gtggtgctgc agctgtccca 2220
gcagctgtcg ggtatcaatg ctgtgttcta ctactcaacg agcatcttcg agaaggcagg 2280
tgtgcagcag cctgtgtacg ccaccatcgg ctccggtatc gtcaacacgg ccttcactgt 2340
ggtgtcgctg tttgttgtag agcgagctgg acgacggacc ctgcacctca ttggcctggc 2400
tggcatggca ggctgtgctg tgctcatgac catcgccctg gccttgctgg aacggctgcc 2460
ttggatgtcc tatctgagca tcgtggccat ctttggcttt gtggccttct ttgaagtagg 2520
ccctggtcct attccatggt tcattgtggc cgagctgttc agccaggggc cccgtcctgc 2580
tgctattgct gtggctggct tctccaactg gacctcaaac ttcattgtgg gcatgtgctt 2640
ccagtatgtg gagcaactgt gcggccccta cgtcttcatc atcttcacgg tgctcctcgt 2700
gctcttcttc atcttcacct acttcaaagt ccctgagacc aaaggccgaa ccttcgatga 2760
gatcgcttcc ggcttccggc aggggggtgc cagccaaagt gacaagacac ccgaggagct 2820
cttccaccct ctgggggcgg actcccaagt gaccggtaat tttgaccttc ttaagcttgc 2880
gggagacgtc gagtccaacc ctgggcccgc catggtgagc aagggcgagg agctgttcac 2940
cggggtggtg cccatcctgg tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt 3000
gtccggcgag ggcgagggcg atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac 3060
caccggcaag ctgcccgtgc cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca 3120
gtgcttcagc cgctaccccg accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc 3180
cgaaggctac gtccaggagc gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg 3240
cgccgaggtg aagttcgagg gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga 3300
cttcaaggag gacggcaaca tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa 3360
cgtctatatc atggccgaca agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca 3420
caacatcgag gacggcagcg tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg 3480
cgacggcccc gtgctgctgc ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa 3540
agaccccaac gagaagcgcg atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat 3600
cactctcggc atggacgagc tgtacaagta aagcggccat caagcttatc gggccgctct 3660
agagtatccc tcgactctag agtcgacccg ggcggcctcg aggacggggt gaactacgcc 3720
tgaggatccg atctttttcc ctctgccaaa aattatgggg acatcatgaa gccccttgag 3780
catctgactt ctggctaata aaggaaattt attttcattg caatagtgtg ttggaatttt 3840
ttgtgtctct cactcggaag caattcgttg atctgaattt cgaccaccca taatacccat 3900
taccctggta gataagtagc atggcgggtt aatcattaac tacaaggaac ccctagtgat 3960
ggagttggcc actccctctc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgggc gaccaaaggt 4020
cgcccgacgc ccgggctttg cccgggcggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcagccttaa 4080
ttaacctaat tcactggccg tcgttttaca acgtcgtgac tgggaaaacc ctggcgttac 4140
ccaacttaat cgccttgcag cacatccccc tttcgccagc tggcgtaata gcgaagaggc 4200
ccgcaccgat cgcccttccc aacagttgcg cagcctgaat ggcgaatggg acgcgccctg 4260
tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc 4320
cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg 4380
ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg 4440
gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg 4500
atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt 4560
ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt 4620
gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt 4680
taacaaaata ttaacgctta caatttaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc 4740
cctatttgtt tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc 4800
tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc 4860
gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg 4920
gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat 4980
ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc 5040
acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgta ttgacgccgg gcaagagcaa 5100
ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa 5160
aagcatctta cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt 5220
gataacactg cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct 5280
tttttgcaca acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat 5340
gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc aacaacgttg 5400
cgcaaactat taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg 5460
atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt 5520
attgctgata aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg 5580
ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg 5640
gatgaacgaa atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg 5700
tcagaccaag tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa 5760
aggatctagg tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt 5820
tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt 5880
tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt 5940
ttgccggatc aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag 6000
ataccaaata ctgttcttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta 6060
gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat 6120
aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg 6180
ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg 6240
agatacctac agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac 6300
aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga 6360
aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt 6420
ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta 6480
cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat 6540
tctgtggata accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg 6600
accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcccaatacg caaaccgcct 6660
ctccccgcgc gttggccgat tcattaatgc agctggcacg acaggtttcc cgactggaaa 6720
gcgggcagtg agcgcaacgc aattaatgtg agttagctca ctcattaggc accccaggct 6780
ttacacttta tgcttccggc tcgtatgttg tgtggaattg tgagcggata acaatttcac 6840
acaggaaaca gctatgacca tgattacgcc agatttaatt aaggc 6885
<210> 89
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 5'ITR
<400> 89
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact 120
aggggttcct 130
<210> 90
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CMV IE增强子
<400> 90
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 91
<211> 382
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> CB启动子
<400> 91
ctagtcgaca ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc 60
atagcccata tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac 120
cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa 180
tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag 240
tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc 300
ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct 360
acgtattagt catcgctatt ac 382
<210> 92
<211> 717
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> eGFP
<400> 92
atggtgagca agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac 60
ggcgacgtaa acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac 120
ggcaagctga ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc 180
ctcgtgacca ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag 240
cagcacgact tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc 300
ttcaaggacg acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg 360
gtgaaccgca tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac 420
aagctggagt acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac 480
ggcatcaagg tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc 540
gaccactacc agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac 600
tacctgagca cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc 660
ctgctggagt tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaag 717
<210> 93
<211> 1476
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> mGlut1 cDNA和3'UTR
<400> 93
atggatccca gcagcaagaa ggtgacgggc cgcctcatgt tggctgtggg aggagcagtg 60
ctcggatcac tgcagttcgg ctataacact ggtgtcatca acgcccccca gaaggttatt 120
gaggagttct acaatcaaac atggaaccac cgctacggag agcccatccc atccaccaca 180
ctcaccacgc tttggtctct ctccgtggcc atcttctctg tcgggggcat gattggttcc 240
ttctctgtcg gcctctttgt taatcgcttt ggcaggcgga actccatgct gatgatgaac 300
ctgttggcct ttgtggctgc tgtgcttatg ggcttctcca aactgggcaa gtcctttgag 360
atgctgatcc tgggccgctt catcatcggt gtgtactgcg gcctgactac tggctttgtg 420
cccatgtatg tgggagaggt gtcacctaca gctctacgtg gagccctagg cacactgcac 480
cagctgggaa tcgtcgttgg catccttatt gcccaggtgt ttggcttaga ctccatcatg 540
ggcaatgcag acttgtggcc tctgctgctc agtgtcatct tcatcccagc cctgctacag 600
tgtatcctgt tgcccttctg ccccgagagc ccccgcttcc tgctcatcaa tcgtaacgag 660
gagaaccggg ccaagagtgt gctgaagaag cttcgaggga cagccgatgt gacccgagac 720
ctgcaggaga tgaaagaaga gggtcggcag atgatgcggg agaagaaggt caccatcttg 780
gagctgttcc gctcacccgc ctaccgccag cccatcctca tcgctgtggt gctgcagctg 840
tcccagcagc tgtcgggtat caatgctgtg ttctactact caacgagcat cttcgagaag 900
gcaggtgtgc agcagcctgt gtacgccacc atcggctccg gtatcgtcaa cacggccttc 960
actgtggtgt cgctgtttgt tgtagagcga gctggacgac ggaccctgca cctcattggc 1020
ctggctggca tggcaggctg tgctgtgctc atgaccatcg ccctggcctt gctggaacgg 1080
ctgccttgga tgtcctatct gagcatcgtg gccatctttg gctttgtggc cttctttgaa 1140
gtaggccctg gtcctattcc atggttcatt gtggccgagc tgttcagcca ggggccccgt 1200
cctgctgcta ttgctgtggc tggcttctcc aactggacct caaacttcat tgtgggcatg 1260
tgcttccagt atgtggagca actgtgcggc ccctacgtct tcatcatctt cacggtgctc 1320
ctcgtgctct tcttcatctt cacctacttc aaagtccctg agaccaaagg ccgaaccttc 1380
gatgagatcg cttccggctt ccggcagggg ggtgccagcc aaagtgacaa gacacccgag 1440
gagctcttcc accctctggg ggcggactcc caagtg 1476
<210> 94
<211> 127
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 多聚腺苷酸信号
<400> 94
gatctttttc cctctgccaa aaattatggg gacatcatga agccccttga gcatctgact 60
tctggctaat aaaggaaatt tattttcatt gcaatagtgt gttggaattt tttgtgtctc 120
tcactcg 127
<210> 95
<211> 130
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> 3' ITR
<400> 95
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag 130
<210> 96
<211> 2208
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多核苷酸
<220>
<223> AAV9 DNA
<400> 96
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca accttagtga aggaattcgc 60
gagtggtggg ctttgaaacc tggagcccct caacccaagg caaatcaaca acatcaagac 120
aacgctcgag gtcttgtgct tccgggttac aaataccttg gacccggcaa cggactcgac 180
aagggggagc cggtcaacgc agcagacgcg gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 240
cagcagctca aggccggaga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgccgagttc 300
caggagcggc tcaaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 360
gccaaaaaga ggcttcttga acctcttggt ctggttgagg aagcggctaa gacggctcct 420
ggaaagaaga ggcctgtaga gcagtctcct caggaaccgg actcctccgc gggtattggc 480
aaatcgggtg cacagcccgc taaaaagaga ctcaatttcg gtcagactgg cgacacagag 540
tcagtcccag accctcaacc aatcggagaa cctcccgcag ccccctcagg tgtgggatct 600
cttacaatgg cttcaggtgg tggcgcacca gtggcagaca ataacgaagg tgccgatgga 660
gtgggtagtt cctcgggaaa ttggcattgc gattcccaat ggctggggga cagagtcatc 720
accaccagca cccgaacctg ggccctgccc acctacaaca atcacctcta caagcaaatc 780
tccaacagca catctggagg atcttcaaat gacaacgcct acttcggcta cagcaccccc 840
tgggggtatt ttgacttcaa cagattccac tgccacttct caccacgtga ctggcagcga 900
ctcatcaaca acaactgggg attccggcct aagcgactca acttcaagct cttcaacatt 960
caggtcaaag aggttacgga caacaatgga gtcaagacca tcgccaataa ccttaccagc 1020
acggtccagg tcttcacgga ctcagactat cagctcccgt acgtgctcgg gtcggctcac 1080
gagggctgcc tcccgccgtt cccagcggac gttttcatga ttcctcagta cgggtatctg 1140
acgcttaatg atggaagcca ggccgtgggt cgttcgtcct tttactgcct ggaatatttc 1200
ccgtcgcaaa tgctaagaac gggtaacaac ttccagttca gctacgagtt tgagaacgta 1260
cctttccata gcagctacgc tcacagccaa agcctggacc gactaatgaa tccactcatc 1320
gaccaatact tgtactatct ctcaaagact attaacggtt ctggacagaa tcaacaaacg 1380
ctaaaattca gtgtggccgg acccagcaac atggctgtcc agggaagaaa ctacatacct 1440
ggacccagct accgacaaca acgtgtctca accactgtga ctcaaaacaa caacagcgaa 1500
tttgcttggc ctggagcttc ttcttgggct ctcaatggac gtaatagctt gatgaatcct 1560
ggacctgcta tggccagcca caaagaagga gaggaccgtt tctttccttt gtctggatct 1620
ttaatttttg gcaaacaagg aactggaaga gacaacgtgg atgcggacaa agtcatgata 1680
accaacgaag aagaaattaa aactactaac ccggtagcaa cggagtccta tggacaagtg 1740
gccacaaacc accagagtgc ccaagcacag gcgcagaccg gctgggttca aaaccaagga 1800
atacttccgg gtatggtttg gcaggacaga gatgtgtacc tgcaaggacc catttgggcc 1860
aaaattcctc acacggacgg caactttcac ccttctccgc tgatgggagg gtttggaatg 1920
aagcacccgc ctcctcagat cctcatcaaa aacacacctg tacctgcgga tcctccaacg 1980
gccttcaaca aggacaagct gaactctttc atcacccagt attctactgg ccaagtcagc 2040
gtggagatcg agtgggagct gcagaaggaa aacagcaagc gctggaaccc ggagatccag 2100
tacacttcca actattacaa gtctaataat gttgaatttg ctgttaatac tgaaggtgta 2160
tatagtgaac cccgccccat tggcaccaga tacctgactc gtaatctg 2208
<210> 97
<211> 736
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成
多肽
<220>
<223> AAV9蛋白
<400> 97
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr
165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro
180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser
210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
245 250 255
Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn
260 265 270
Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn
290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile
305 310 315 320
Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn
325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu
340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro
355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp
370 375 380
Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe
385 390 395 400
Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu
405 410 415
Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu
420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser
435 440 445
Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser
450 455 460
Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro
465 470 475 480
Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn
485 490 495
Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn
500 505 510
Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly
530 535 540
Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile
545 550 555 560
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser
565 570 575
Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln
580 585 590
Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln
595 600 605
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
610 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met
625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
645 650 655
Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr
660 665 670
Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln
675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn
690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val
705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735

Claims (23)

1.一种包含核酸序列的重组腺相关载体(rAAV)，所述核酸序列包含编码Glut1的转基因。
2.如权利要求1所述的重组AAV，其还包含鸡β-肌动蛋白启动子并且其中所述rAAV能够穿过血脑屏障(BBB)。
3.如权利要求2所述的重组AAV，其中所述转基因能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。
4.如权利要求2所述的重组AAV，其中所述鸡β-肌动蛋白启动子选自由SEQ ID NO:31、38、45、54、62和70组成的组。
5.如权利要求1所述的重组AAV，其中所述AAV是AAV8或AAV9。
6.如权利要求1所述的重组AAV，其中所述Glut1包含SEQ IDNO:78或79。
7.如权利要求1所述的重组AAV，其还包含选自由SEQ IDNO:48、56、59、64和73组成的组的miRNA元件。
8.如权利要求1所述的重组AAV，其中所述重组载体还包含在所述miRNA元件侧翼的反向末端重复(ITR)。
9.一种组合物，所述组合物包含如权利要求1所述的重组AAV。
10.如权利要求9所述的组合物，其还包含药用载体。
11.一种包括容器壳体的试剂盒，所述容器壳体包含如权利要求9所述的组合物。
12.如权利要求11所述的试剂盒，其中所述容器是注射器。
13.一种恢复受试者的血脑屏障(BBB)中的Glut1转运的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的重组AAV载体。
14.一种治疗有需要的受试者中的Glut1缺陷综合征的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的重组AAV载体。
15.一种缓解受试者中的至少一种与Glut1缺陷综合征相关的症状的方法，所述症状选自由脑脊液糖分过少、获得性小头、共济失调性和张力障碍性运动功能障碍组成的组，其中所述方法包括向所述受试者施用有效量的如权利要求1所述的重组AAV载体。
16.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述重组AAV还包含鸡β-肌动蛋白启动子并且其中所述rAAV能够穿过血脑屏障(BBB)。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述转基因能够在作为脑微血管系统衬里的内皮细胞中表达。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述鸡β-肌动蛋白启动子选自由SEQ ID NO:31、38、45、54、62和70组成的组。
19.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述AAV是AAV8或AAV9。
20.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述Glut1包含SEQ ID NO:78或79。
21.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述重组AAV还包含选自由SEQ ID NO:48、56、59、64和73组成的组的miRNA元件。
22.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述重组载体还包含在所述miRNA元件侧翼的反向末端重复(ITR)。
23.如权利要求13、14或15所述的方法，其中所述重组AAV包含在组合物内，所述组合物还包含药用载体。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112154209A (zh) * 2018-05-08 2020-12-29 罗特格斯新泽西州立大学 Aav相容的层粘连蛋白—连接子聚合蛋白
CN113383010A (zh) * 2018-09-28 2021-09-10 沃雅戈治疗公司 具有经工程化改造的启动子的共济蛋白表达构建体及其使用方法
CN114555814A (zh) * 2019-09-13 2022-05-27 罗特格斯新泽西州立大学 Aav相容的层粘连蛋白-连接子聚合蛋白
CN116033917A (zh) * 2020-05-01 2023-04-28 阿特拉斯生物技术股份有限公司 与病毒感染相关的疾病或综合征的治疗和/或预防

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107106689A (zh) 2014-11-05 2017-08-29 沃雅戈治疗公司 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸
JP6996728B2 (ja) * 2016-01-07 2022-01-17 学校法人自治医科大学 グルコーストランスポーター１発現用アデノ随伴ウイルスベクター
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
CN114127083A (zh) 2019-05-13 2022-03-01 Dna2.0股份有限公司 使用人工微rna修饰哺乳动物细胞以改变其特性及其产品的组成
US20230248824A1 (en) * 2020-07-09 2023-08-10 The Board of Trutees of the Leland Stanford Junior University Immune cells with increased glycolytic flux
IL300185A (en) * 2020-08-05 2023-03-01 Spacecraft Seven Llc Adeno-associated viral vector for GLUT1 expression and uses thereof
MX2023001615A (es) 2020-08-07 2023-03-08 Spacecraft Seven Llc Genoterapia con placofilina-2 (pkp2) mediante el uso de vector de aav.
US20230313187A1 (en) * 2020-09-04 2023-10-05 Dna Twopointo Inc. Modifications of mammalian cells using artificial micro-rna to alter their properties and the compositions of their products
IL314602A (en) * 2022-02-08 2024-09-01 Spacecraft Seven Llc Adeno-associated viral vector for GLUT1 expression and uses thereof

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011133890A1 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 University Of Massachusetts Cns targeting aav vectors and methods of use thereof
US20120177605A1 (en) * 2008-12-19 2012-07-12 Nationwide Children's Hospital Inc. Delivery of Polynucleotides Across the Blood-Brain-Barrier Using Recombinant AAV9
US20120232130A1 (en) * 2009-04-16 2012-09-13 Cepko Constance L Methods for inhibiting starvation of a cell
CN103037905A (zh) * 2010-06-10 2013-04-10 埃斯特维博士实验室股份有限公司 用于治疗疾病的载体及序列

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5399363A (en) 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
IE80468B1 (en) 1995-04-04 1998-07-29 Elan Corp Plc Controlled release biodegradable nanoparticles containing insulin
US6001650A (en) 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
EP0931158A1 (en) 1996-09-06 1999-07-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
NZ532635A (en) 2001-11-13 2007-05-31 Univ Pennsylvania A method of identifying unknown adeno-associated virus (AAV) sequences and a kit for the method
DK1648926T3 (da) * 2003-05-02 2013-10-14 Centre Nat Rech Scient Glut-1 som en receptor til htlv-kapper og anvendelser heraf
DK2292780T3 (en) 2003-09-30 2017-12-04 Univ Pennsylvania Clades and sequences of adeno-associated virus (AAV), vectors containing them, and uses thereof
WO2006110689A2 (en) 2005-04-07 2006-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an aav vector
US20100199362A1 (en) * 2007-04-26 2010-08-05 President And Fellows Of Harvard College Wnt ligands involved in blood-brain barrier development and uses therefor

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120177605A1 (en) * 2008-12-19 2012-07-12 Nationwide Children's Hospital Inc. Delivery of Polynucleotides Across the Blood-Brain-Barrier Using Recombinant AAV9
US20120232130A1 (en) * 2009-04-16 2012-09-13 Cepko Constance L Methods for inhibiting starvation of a cell
WO2011133890A1 (en) * 2010-04-23 2011-10-27 University Of Massachusetts Cns targeting aav vectors and methods of use thereof
CN103037905A (zh) * 2010-06-10 2013-04-10 埃斯特维博士实验室股份有限公司 用于治疗疾病的载体及序列

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MONANI UR等: "PL1-6. Gene therapy for Glut1 deficiency syndrome", 《ANNALS OF NEUROLOGY》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112154209A (zh) * 2018-05-08 2020-12-29 罗特格斯新泽西州立大学 Aav相容的层粘连蛋白—连接子聚合蛋白
CN113383010A (zh) * 2018-09-28 2021-09-10 沃雅戈治疗公司 具有经工程化改造的启动子的共济蛋白表达构建体及其使用方法
CN114555814A (zh) * 2019-09-13 2022-05-27 罗特格斯新泽西州立大学 Aav相容的层粘连蛋白-连接子聚合蛋白
CN116033917A (zh) * 2020-05-01 2023-04-28 阿特拉斯生物技术股份有限公司 与病毒感染相关的疾病或综合征的治疗和/或预防

Also Published As

Publication number Publication date
MX2023001213A (es) 2023-03-03
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