PT88186B

PT88186B - Processo para a preparacao de derivados 4'-fosfato de glucosidos da epipodofilotoxina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT88186B
Application number: PT88186A
Authority: PT
Inventors: John F Kadow; Mark G Saulnier; Peter D Senter
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1987-08-04
Filing date: 1988-08-03
Publication date: 1995-07-03
Also published as: NO920277D0; CZ286893B6; SK279325B6; PT88186A; FR2622193B1; FR2622193A1; GR880100512A; NZ225615A; BE1002982A4; IT8821535A0; IL87290A; CN1027169C; NO883299L; SG101291G; IT1226825B; CY1625A; HUT47303A; KR900006230B1; GB2207674B; US4904768A

Description

PATENTE DE INVENÇÃO

N9 88.186

NOME: BRISTOL-MYERS COMPANY, norte-americana, com sede em 345 Park Avenue, New York, New York 10154, Estados Unidos da América,

EPÍGRAFE: PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS

4'-FOSFATO DE GLUCOSIDOS DA EPIPODOFILOTOXINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS OUE OS

CONTÊM

INVENTORES· ^G· Saulnier, Peter D. Senter e

John F. Kadow.

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 49 da Convenção da União de Paris de 20 de Março de 1883.

U.S.A., 04.08.87, sob ο Ν2 081,493,

27.05.88, sob ο Ν2 199,731.

BRISTOL-MYERS COMPANY

PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE DERIVADOS 4'-FOSFATO DE GLUCOSIDOS DA EPIPODOFILOTOXINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

MEMÓRIA DESCRITIVA

O presente pedido de patente de invenção é uma continuação, em parte, do pedido de patente de invenção norte -americana série n2 081.493, requerido em 4 de Agosto de 1987 no Departamento de Patentes e Marcas Registadas dos Estados

Unidos.

Antecedentes da invenção

I - Campo da invenção

A presente inovação refere-se a derivados 4'-fosfato de glucosidos de epipodofilotoxina, à sua utilização como agentes anti-tumorais e as composições farmacêuticas que contêm estes novos agentes.

II -Descrição da técnica anterior

O etoposido (VP-16,I) e o teniposido (VM-26,II)

são agentes anti-neoplásicos utilizados em clínica, derivados de linano de ocorrência natural, a podofilotoxina (II); a cias se dos compostos que incluem o etoposido coteniposido é muitas vezes referida como glucosidos de 4 '-desmetilepipodof ilotoxina. 0 etoposido e o teniposido são activos no tratamento de diver sas variedades de cancro que incluem o cancro testicular, do pulmão de pequenas células, do ovário, da mama, da tiróide,da bexiga, do cérebro, a leucemia não-linfocítica e a doença de Hodgkin.

Os compostos de forma geral I e II e o processo para a sua preparação estão descritos nas patentes de invenção norte-americanas n2 3.408.441 por Wartburg et al e n2 3.524.844 por Keller-juslen et al. Os compostos ali descritos em particular o etoposido e o teniposido, utilizam-se como material inicial para a preparação de derivados 4'-fosfato de glucosido da epipodofilotoxina da presente invenção.

R^CH

OH ,0

111

II «'-e-thienyl

-3c

A fosforilação de agentes terapêuticos que contêm grupos hidroxilo, tem sido utilizada como um meio para manter fãrmacos no estado latente; os derivados fosforilados podem então ser clivados in vivo por uma fosfatase, libertando a mo lécula principal activa. Uma breve apreciação dos fosfatos co mo pro-fármacos potenciais está incluída num artigo da revisão intitulado Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives: Prodrugs (Sinkula e Yalkowsky, J. Pharm, Sei, 1975, 64:181-210 at 189-191).

São exemplos de fosfatos com acção anti-tumoral conhecida a camptotecina (Japan Kokai 21-95,394 e 21-95-393 Derwent Abst. N<? 87-281016 e 87-281015, respectivamente) e daurorrubicina (patente de invenção norte-americana n9 4.185.111).

O sal dissõdico do fosfato de podofilotoxina de fórmula geral IV foi preparado por Seligman et al. Contudo, o fosfato não foi hidrolizado por fosfatase ácida prostática e não exibiu uma menor toxicidade em relação a podofilotoxina inicial (Câncer Chemotherapy Reports Part I, 59:1975,

233-242).

IV

-4ι

A presente invenção proporciona ésteres de fosfa to de glucosidos de 4'- desmetilepipodofilotoxina que são agentes anti-tumorais activos. Em particular, o 4' fosfato de gluco sidos da desmetilepipodofilotoxina di-hidrogenado e os seus sais são altamente solúveis proporcionando deste modo uma maior vantagem farmacêutica sobre os agentes terapêuticos correntes desta classe, etoposido e teniposido que têm uma solubilidade mínima na água.

Resumo da invenção

A presente invenção proporciona derivados de 4'-fosfato de glucosidos de 4¹-desmetilepipodofilotoxina de fórmu la geral V e os seus sais aceitáveis sob ponto de vista farmacêu tico,

V na qual

R’ representa um grupo alquilo alcenilo cicloalquilo Cg_g, 2-furilo, 2 tienilo, arilo Cθ_ -| θ, aralquilo C₇_₁₄ ou aralcenilo que cada um dos núcleos aromáticos com-5porta eventualmente um ou mais substituinte (s) escolhido (s) entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo C^_g, alcoxi C^_g, hidroxi, nitro ou amino e

Rg representa um átomo de hidrogénio, ou e

Rg representam cada um, um grupo . alquilo C^_g; ou R.j e Rg representam, considerados conjuntamente com o átomo de carbono a que estão ligados, um grupo cicloalquilo Cg_g;

X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre;

Ry e Rg representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo-C^_g>, cicloalquilo Cg_g, arilo alquil-arilo substituído ou um grupo de fórmula geral A-a.1 quilo C^_g, A-cicloalquilo Cg_g, A-arilò ou A-aralquilo, em que A representa um ou mais ã tomo(s) de halogéneo ou grupo (s) hidroxi, aJL coxi, alcanoiloxi, ciano, amino,alquilamino, dialquil-amino, carboxilo, alquil-tio, mercajo to, mercapto-tio, dissulfureto de nitropiridi lo,alcanoílamino, alcanoílo, carbamoil o ou ni tro.

Os sais dos compostos de fórmula geral V incluem os sais monoaniónicos e dianiónicos. 0 catião pode ser um ião metálico tal como um grupo de metal alcalino ou um grupo de me-6-

tal alcalino-terroso ou outros ioes de metais comuns: ou um grupo contendo azoto orgânico, tal como um grupo amónio, mo no, di ou trialquilamõnio ou piridínio.

O catião escolhe-se de preferência entre um gru po constituído por sódio, potássio, lítio, césio, magnésio, cálcio, alumínio, amónio e mono-di ou trialquilamõnio. Circunstâncias preferenciais proporcionam compostos de fórmula geral V em que R? e Rg representam ambos um átomo de hidrogénio e os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. Num ambiente especialmente preferido obtêm-se fosfato de 4'-di-hidrogeno-etoposido e tiofosfato de 4'-di-hidrogeno-etoposido e os seus respectivos sais de sódio de fórmulas gerais Via e VIb. Ainda em condições particularmente preferidas, obtêm-se compostos de fórmula geral V na qual R_ e R_o, iguais ou diferentes, representam um grupo constituído por um grupo 2,2,2-tri-halogenoetilo , alquilo fenilo ou fenilalquilo em que o núcleo fenílico comporta eventualmente como substituintes um ãtomo de halogéneo ou um grupo alquilo ou nitro.

4( X · 0 bí X · s

Ainda um outro aspecto da vados de fosforoamidato de acção presente invenção proporciona anti-tumora1 de fórmula geral derj.

VII.

VII na qual

RpRg e X têm o significado definido antes, Y representa um átomo de cloro, um grupo hidroxi, ou um grupo de fórmula geral NR^R^,

R_o,R_nR„ e R_c representam, cada um, independentemente, um áto á o 4 o — mo de hidrogénio ou um grupo alquilo C. _c, alcenilo C_ _r, i- o Z-o cicloalquilo Cg g, ou um grupo de fórmula geral A-alquilo C _c, A-alcenilo C _c ou A-cic1oa1qui1 o C. _c, em que A tem o significado definido antes, ou R₄ e Rg representam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto a que estão ligados, um núcleo com 3 a 6 átomos, e

Rg e Rg representam, considerados conjuntamente com o átomo de azoto a que estão ligados, um núcleo comportando 3 a 6

-8átomos, e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Outras circunstâncias da presente invenção proporcionam com postos intermédios de diclorofosfato de fórmula geral VIII.

na qual r , R, e X têm os significados definidos antes; estes agen 16 ~ tes são úteis para a preparação dos compostos de fórmula geral V:

Ainda um outro aspecto da presente invenção proporciona o processo para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R? e Rg representam cada um, um átomo de hidrogénio e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico que consiste nas seguin_ tes fases:

a) Conversão de um composto de fórmula geral IX

ιχ num composto de fórmula geral X na qual R^ , Rg e Y têm os significa, dos definidos antes e G representa um grupo de protecção do grupo fosfato;

b) eliminável do grupo de protecção do grupo fosfato

x e c) conversão eventual do produto obtido na fase b) em um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Os grupos de protecção dos grupos fosfatos abrangem, mas não estão limitados, àqueles em que Ry tem o significado definido antes excepto no que respeita ao

átomo de hidrogénio.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO

Tal como aqui se uti1iza, a menos que especificado de outro nw do, o termo alquilo significa um grupo de hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada; o termo halogéneo significa bromo, cloro,flúor ou iodo; etopofos significa o sal dissódico do 4'-fosfato de etoposido, isto é, o composto de fórmula geral Via.

grupo fenol dos glicosidos de 4¹-desmeti1epipodofi1otoxina pode ser fosforilato com oxicloreto de fósforo e cloreto de tio-fosfo rilo para se obterem os correspondentes dic1orofosfato e diclorotiofosfato respectivamente, (fórmula geral VIII). A reacção de fosforilação realiza-se no seio de um dissolvente orgânico anidro apropriado, p. ex., em acetonitrilo e de preferência na presença de uma base de amina terciária, p. ex., Ν,N-di-isopropi1 eti1amina . 0 decorrer da reacção pode ser controlado por cromatografia em camada fina (CCF)em que o tempo optimo de reacção pode avaliar-se pelo aspecto do produto ou pelo desaparecimento do material inicial ou por ambos. Nas pre sentes experiências, o período reaccional pode estar compreendido en. tre cerca de 4 e cerca de 72 horas, o tempo de reacção requerido parece estar relacionado com a qualidade do reagente fosforoso utiliza, do.

Os 4'-diclorofosfato de fórmula geral VIII são compostos inter médios versáteis que podem reagir subsequentemente com agentes núcleo fílicos para proporcionar uma variedade de derivados de fosfato e /

-11de tiofosfato. Assim, os compostos intermédios podem ser hidrolizados para se obterem os fosfatos e na presença de uma base obtêm-se os sais de fosfato. Por exemplo, o composto de fórmula geral VIII tratado com um excesso de solução aquosa de bicarbonato de sódio pr£ porciona o correspondente sal dissódico de 4’-fosfato e sal dissódj_ co de 4¹-tiofosfatos bicarbonatos de outros catiões, como p. ex.,de potássio e amónio, também podem ser utilizados para se obterem os respectivos sais. 0 dic1orofosfato intermédio de fórmula geral VIII pode reagir com aminas para produzir o fosforodiamidato corresponden. te ou o c1orofosforomonoamidato. Exemplos apropriados de aminas, abrangem mas não estão limitados a amoníaco, aminas primárias tais como etilamina, cloroeti1amina, alilamína, dimetilaminopropilamina, h i drox i et i 1 ami na , cic1o-hexa1amina e aminociclo-hexanol ; e aminas se. cundárias, tais como dietilamina, piperidina, etilmetilamina, metilaminaetanol, eti lbuti lamina e outras. A quantidade de aminas utilizai da relativamente ao dic1orofosfato de epipodofilotoxina pode ser co£ rígido de modo a favorecer um ou outro produto da reacção. Por exemplo, quando se utiliza um grande excesso de amina relativamente à epipodofilotoxina utilizada, obtém-se o fosforodiamidato simétrico, isto é, compostos de fórmula geral VII em que Y representa um grupo de fórmula geral NR^Rg . 0 clorofosforomonoamidato, isto é,os compo_s tos de fórmula geral VII em que Y representa um átomo de cloro,podem ser preparados quando se utiliza uma quantidade de amina mais contr£ lada. 0 clorofosforomonoamidato pode ser hidrolizado para se obterem compostos de fórmula geral VII, na qual Y representa um grupo hidroxilo ou os seus sais ou pode reagir ainda com uma segunda amina para dar origem ao fosforodiamidato assimétrico, isto é, compostos de fójr

-12-f

L mula geral VII, na qual Y representa um grupo de fórmula geral NR^ θ é diferente do grupo de fórmula geral NR₂R₃· processo descrito anteriormente está ilustrado no esque ma reaccional seguinte.

Hidrólise

(

Os triésteres de fosfato são compostos de fórmula geral V na qual R-, e R não representam o átomo de hidrogénio e podem ser preparados mediante o tratamento de um glucosido de 4*-desmetilepipodo filotoxina com um diéster de halogeno-fosfato £ isto é, um composto de fórmula geral Hal-P(X)(OR,)(0R_o) 7. Verificou-se que esta reacção é mais eficaz quando realizada em acetonitrilo na presença de uma base orgânica de trialquilamina; a base preferida é a di-isopro pi leti lamina. Utiliza-se pelo menos um equivalente de halogenof osf a_ to e de base amínica mas ambos os reagentes são empregados de prefe rência em quantidades molares equivalentes com um ligeiro excesso relativo à quantidade do reagente de glucosido de epipodofilotoxina.

A reacção pode realizar-se a qualquer temperatura que conduza à fo£ mação do produto; contudo, temperaturas ligeiramente elevadas, p.ex., entre 30° e 40°C parecem facilitar a reacção que decorre durante vá. rios dias até estar completa. Os diésteres de ha 1ogenofosfato sim£ tricôs (isto é, em que R, é igual a R ), podem ser prepara-dos de um modo convencional a partir do álcool e, p. ex., cloreto de fosforilo e os não simétricos, isto é, em que R? é diferente de Rg podem ser preparados a partir de álcool e de éster de ha 1ogenofosf,ato . Também ê possível preparar triésteres de fosfato por outras vias, p.ex., mediante conversão inicial do fenol em um éster de fosflto, p. ex., mediante reacção com um reagente tal como (PhCH^O)^ PN(i-pr)₂e subsequente oxidação do fosfato a éster de fosfato utilizando-se ácido metacloro perbenzoico.

Os triésteres de fosfato podem além disso, servir como compos. tos intermédios para a preparação de compostos de fórmula geral V e

-14dos seus sais. Assim, p. ex., o fosfato de di-hidroxilato (de fórmula geral V, em que R =R=H ) obtem-se quando o éster difenílico (foVmula geral V, R=R_o=feni1 o) é submetido a hidrogenaçao catalítica. Outros grupos de protecção do grupo fosfato apropriados abraii gem, mas não estão limitados, a 2,2,2-tricloroetilo, benzilo, ciano eti1 o,para-nitro fenilo eventualmente substituído, benzilo, fenetilo e para-bromofenilo. Os fosfatos dihidroxi1ados (de fórmula geral V em que R=R=H) são convertidos em sais alcalinos mediante a reacção com uma base apropriada, p. ex., bicarbonato de sódio, bicarbonato de amónio ou aminas orgânicas. Alternativamente, os sais tam bém se podem preparar por eluição do fosfato di-hidroxi1ado através de uma coluna de resina permutável que contenha o catião desejado.

Ainda que a presente invenção utilize oxicloreto de fósforo e diésteres de ha 1ogenofosfato e os seus respectivos análogos de enxofre, como reagente de fosfori1 ação , entende-se que também se podem utilizar outros reagentes fosforosos capazes de fosfõrilarem os fenóis e podem-se escolher condições de reacção e meio apropriado de acordo com o agente de fosforilação escolhido. Um artigo de revisão intitulado Current Methods of Phosphory1ation of Biological Mo lecu les ( Synthes i s 1 977, p. 737-52 ) contém mais exemplos de ageji tes de fosforilação e por isso aqui se faz referência.

PROPRIEDADES BIOLÓGICAS

Analisaram-se os compostos representat i vos da presente ija venção para determinar a sua actividade anti-tumoral contra a leucemia P388 murina transplantável. Em todas as experiências utilizaram-15- /

-se fêmeas de murganho CDF₁ com uma inoculação tumoral de 10⁶ células de ascite de leucemia murina P388. As experiências em que se utilizou o 4*-fosfato de etoposido e os seus sais dissódicos e o sal dissódico de 4'-tiofosfato de etoposido quer a implantação turno ral, quer o farmáco para tratamento foram administrados por via endovenosa. Em todas as outras experiências o implante do tumor e o tratamento com o fármaco foram feitos por via intraperitoneal.Em to dos os casos, contudo, o controlo positivo, etoposido, foi administrado por via intraperitonea1. As experiências duraram entre 28 e 46 dias , tempo ao fim do qual se determinou os sobre v i ventes. A ac, tividade anti-tumoral foi expressa como uma percentagem da relação T/C que consiste na proporção do tempo de sobrevivência médio (TSM) do grupo tratado com o fármaco e o tempo de sobrevivência médio do grupo que constituí o controlo tratado com uma solução de cloreto de sódio. Os compostos que tinham uma percentagem da relação T/C de 125 ou superior foram considerados, de um modo geral, como,exibindo actividade anti-tumoral significativa no ensaio com P388. 0 quadro I apresenta os resultados das determinações descritas anteriormente e os valores máximos da percentagem de T/C e doses que forneceram aquele efeito, estão referidos.

Quadro I - Actividade anti-tumoral sobre a leucémia P388 murina
Composto de	Dose* (mg/Kg/inj)	V i a	TSM(d)	%T/C
CÉLULAS	DE TUMOR IMPLANTADAS INTRAVENOSAMENTE
Exemplo 1	140	IV	29,0	363
(Etopos i do)	50	IP	20,5	256
Exemplo 4	200	IP	18,0	225
(Etoposido)	100	IP	21 ,5	269
Exemplo 8	125	IV	24,5	306
(Etoposido)	100	IP	29,5	369

CÉLULAS DE TUMOR IMPLANTADAS I NTRAPERITONEALMENTE

Exemplo 2	240	IP	16,5	165
(Etopos i do)	60	IP	25,0	250
Exemplo 3	200	IP	15,5	155
(Etopos ido)	100	IP	27,0	270
Composto	(mg/Kg/inj)	V i a	TSM(d)	Dose* TT7C
Exemplo 7	240	IP	25,0	250
(Etopos ido)	100	IP	26,0	260
Exemplo 9	150	IP	19,5	217
(Etoposido)	100	IP	24,0	267
* Os fármacos	foram administrados	nos 5⁹ e 8	⁵ dias a menos	que se
expresse de	outro modo (o dia 1	cons iderou	-se como sendo	o dia

implantação do tumor).

-17Os compostos com actividade anti-tumoral da presente invenção demonstraram ter actividade contra tumores transplantados em animais de experiência.

E pecificamente , o composto representado pela fórmu1 as'gera 1 Via (etopofos) exibiu uma actividade anti-tumoral significativamente mais elevada do que o etoposido no teste com P388. Este agente selectivo representa um pro-fármaco de etoposido muito solúvel na água que reduziu a actividade anti-tumoral in vitro e que rapidamente foi clivado pela fosfatase alcalina o que resultou na libertação de etoposido. 0 etoposido que se libertou exibiu uma citotoxicidade idêntica à do fármaco inicial.

Deste modo, a presente invenção proporciona um método para a inibição de tumores de mamíferos que consiste na administração de uma dose eficaz inibidora do tumor dum composto de fórmula geral V ou VII com actividade anti-tumoral, em relação a um hospede/ ro atingido por um tumor. Para este efeito, o fármaco pode_ser administrado pelas vias convencionais, abrangendo mas não estando limitado às vias endovenosas, intramuscular, intra-tumora1 , intra-arterial, intra-1infática e oral.

Um outro aspecto da presente invenção proporciona uma comp£ sição farmacêutica que consiste em um composto de fórmula geral V ou VII e um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

A composição anti-tumoral pode ser apresentada sob qualquer forma farmacêutica apropriada à via de administração desejada. Exemplos destas composições incluem as composições sólidas para admi

-18nistração oral, tais como comprimidos, cápsulas, pílulas, pós e grânulos, composições líquidas para administração oral tais como soluções,suspensões, xaropes ou elixires e preparações para administração parentérica, tais como soluções estéreis, suspensões ou emulsões. Também podem ser preparadas sob a forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas em água estéril, solução de cloreto de sódio fisiológico ou qualquer outro meio injectável estéril, imediatamente antes do uso.

As doses óptimas e regimes óptimos para administração a um hospedeiro mamífero, podem ser facilmente determinadas pelos médicos. Evidentemente que será correcto que a dose varie de acordo com a composição em causa, com o composto especialmente utilizado, com a via de aplicação e o sítio a que se destina no hospedeiro e ainda com as condições da doença a ser tratada. Muitos factores que mo dificam a acção dos fármacos, têm que ser tomados em consideração incluindo idade, peso, sexo, dieta, tempo de administração', via de administração velocidade de excreção, condição do doente, associações de fármacos reacções de sensibilidade e gravidade da doença.

Os exemplos que se seguem são apenas para fins ilustrativos e não foram construídos para limitar o âmbito da presente invenção que é definido unicamente pelas reivindicações apensas a este pedido de patente de invenção.

Nos exemplos que se seguem os espectros de ressonância magné tica nuclear do protão (NMR) e do carbono utilizando CDCl^ ou D^O como referência interna e os espectros de ressonância magnético nuclear de fósforo, utilizando uma solução aquosa de H^PO^ como refe_

rência externa, foram registados num espectrómetro de Bruker WM360.

espectro de infravermelho (IV) foi determinado por um espectofotó metro de infra -vermelho de transformada de Fourier da Perkin-Elmer 1800. A cromatografia rápida refere-se ao método descrito por Still (Still, W.C.; Kahn, M.; Mitra, A.; J. Org. Chem 43, 1978,p.2923) e realizou-se com gel de sílica da E. Merck de 230-400 malhas. A cromatografia de fase inversa realizou-se a uma pressão positiva de azoto, utilizando C18 (Octadeci1si1 ano ) ligado ao gel de sílica,(40 )um de diâmetro, fornecido por J.T. Baker).

Exemplo 1

Sal dissõdico de 4¹-fosfato de etoposido(composto de fórmula geral Via

Aqueceu-se uma suspensão agitada magneticamente de 2,30 g (3,91 mmole) de etoposido em 210 ml de acetonitrilo anidro, para se obter uma solução praticamente total. Deixou-se arrefecer a solução à temperatura ambiente e adicionou-se 2,36 ml (13,5 mmole) de N,N-di-isopropileti1amina. A mistura foi em seguida arrefecida até à temperatura de 0°C e adicionou-se 666 mg (4,34 mmole) de POCl^, por meio de uma seringa, durante 30 segundos. Deixou-se a mistura retomar lentamente a temperatura ambiente durante 2-3 horas e agitou-se continuamente a essa temperatura durante 63 horas. No fim deste período, retirou-se 20% em volume e tratou-se com dietilamina, como descrito no exemplo 2. Tratou-se a mistura restante com uma solução de bicarbonato de sódio 6,0 g (71,4 mmole) em 110 ml de água desionizada; tratou-se a mistura à temperatura ambiente durante 80 minutos e em seguida partilhou-se entre 20 ml de uma solução aquosa sa-20turada de bicarbonato de sódio, 125 ml de água desionizada e 350 ml de acetato de etilo. Extraiu-se em seguida a fase orgânica com 50 ml de-.água desionizada e lavaram-se as fases aquosas reunidas com 250 ml de acetato de etilo e em seguida submetiveram-se a um vácuo de 0,5 mm à temperatura ambiente durante uma hora para eliminar os dissolventes. A fracção aquosa foi em seguida aplicada a uma coluna de 4 cm de diâmetro que continha 15 cm de octadeci1si1 ano ligado ao gel de sílica compactada com metanol e equilibrada com água. Após toda a fracção aquosa ter sido aplicada eluíu-se a coluna com 175ml de água, para eliminar os sais inorgânicos e em seguida eluíu-se o produto com uma mistura de água e álcool metílico 4:1. A concentra, ção do dissolvente a 0,5 torr originou 744 mg (rendimento de 36%) do composto em título, sob a forma pura de um sólido incolor. Alternat_i_ vamente a 1 iofi lização proporciona o composto em título sob a forma pura de um sólido muito leve de muito baixa densidade.

IV (KBr) 3426, 1775, 1593, 1505, 1486, 1337, 1239, 1191,1122, 1078, 1034, 983, 927, 888, 876, 851, 840, 697, 684, 664, 547 cm¹.

360 MHz ¹H RMN (D₂0) S 6,93 (s,1H), 6,59 (s,1H), 6,27 (s,2H) 5,93 (d,2H), 5,09 (d,1H, J=2,8Hz), 4,83 (q, 1H, J=5,0Hz), 4,68 (d , 1 Η,J = 7,9Hz), 4,62 (d,1 Η,J = 5,7Ηz) 4,47-4,35 (m,2H), 4,24 (dd,1H,J=4,4 e 10,4Hz), 3,64 (s,6H), 3,68-3,52 (m,3H), 3,44-3,30 (m,3H), 3,17-3,07 (m,1H), 1,31 (d , 3H,J = 5,0Hz).

MHz ¹³C RMN (D₂0) ó 178,5, 151,8, 148,1, 146,1, 135,0, 132,6, 130,9, 127,4, 109,9, 109,5, 107,4, 101,3, 100,4, 99,6, 79,2,

73,7, 72,7, 72,2, 69,1, 67,1, 65,4, 55,6, 42,8, 40,3, 37,5, 18,8.

-21/

146 MHz ³¹P RMN (D₂0) δ 3,79.

Espectro de massa (FAB), m/e, 713 (M⁺ + H). C_2gH₃₁Na₂0₁ ^P requer M⁺, 712.

anal. Calcd. para θ29^Η31^Ν92θ16^Ρ' C,48,89; H,4,39; Na, 6,45

Determ*: 0,48,72; H,4,56; Na,6,56.

♦ Corrigido para 8,16% de água, determinada pelo método de Kar1 Fischer.

Exemplo 2

4* - (Bi s-Γ Ν , N-d i et i 1 J7-f osf onamida de etoposido (fórmula geral VII, X=0, R=metilo, R, = H, Y=N(Et)_, R =R =Et.

-1-b-2-2—3Como indicado no exemplo 1, adicionou-se 20% em volume da mi_s tura do produto reaccional de etoposido e POCl^ a 4 ml de dietilamina e agitou-se à temperatura ambiente durante três horas. Evaporou-se o dissolvente em vácuo e purificou-se o resíduo cor de laranja claro por cromatografia rápida sobre gel de sílica e eluiu-se com me tanol a 4% em cloreto de metileno obtendo-se 271,3 mg do composto em título puro, sob a forma de um sólido amarelo claro; rendimento de 46,9%.

IV (KBr) 3408, 2974, 2936,2877, 1774, 1598, 1508, 1486,1467, 1421, 1383, 1339, 1234, 1191, 1162, 1130, 1098, 1079, 1037, 902,858, 795, 713, 700, 544 cm¹.

360 MHz ¹H RMN (CDC1₃) S 6,79, (s,1H), 6,50 (s,1H), 6,20 (s,2H)

5,96 (ABq,2H), 4,87 (d,1 Η,J=3,2Hz), 4,71 (q , 1Η,J=5,1 Hz), 4,61 (d, 1H,J=7,6Hz), 4,57 (d,1Η,J = 5,2Hz), 4,39 (dd,1H,J = 9,1 e 10,2Hz), 4,22-4,13 (m,2H), 3,74 (m,1H), 3,65 (s,6H), 3,55 (m,1H),3,40 (m,1H), 3,32-3,10 (m,11H), 2,94-2,83 (m,1H), 1,37 (d,3H, J=5,1Hz), 1,10 (m,12H).

146 MHz ³¹P RMN (CDClg) 16,49.

Espectro de massa (FAB), m/e, 779 (M⁺+ H), 573 (M⁺ -açúcar) ^C37^H51^N2°14^{P re}d^{uer M+> 778}·

Exemplo 3

Cloreto de 4¹ - ( N, N-Z7 2-c 1 oroet i lo 7 fosforil de etoposido.

(fórmula geral V11,R„=meti1 o , R_r=H, X=0, Y=C1,R„ = R_n = CH_oCH„C 1)

--¢5---g -j-£— £

Aqueceu-se uma suspensão agitada magneticamente de 2,00 g, (3,40 mmole) de etoposido em 220 ml de acetonitrilo anidro, para se obter a solução praticamente completa. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente, tratou-se com 2,05 ml (11,8 mmole) de N,N,-di-isopropi1 eti1amina e em seguida arrefeceu-se até à temperatura de 0°C numa atmosfera de azoto e adicionou-se por meio de uma seringa 624 mg (4,7 mmoles) de oxidocloreto de fósforo. Agitou-se magnetic_a mente a mistura à temperatura de 0°C durante duas horas e meia eem seguida à temperatura ambiente por mais uma hora e meia. Em seguida, adicionaram-se rapidamente 1,82 g (10,2 mmoles) de cloridrato de bis-(2-c1oroeti1amina) seguindo da adição imediata de 2,10 ml (12,0 ζ

-23mmole) de Ν,N-di-isopropi1 eti1amina. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 85 minutos, concentrou-se em vácuo até se obter um volume de cerca de 5 ml e dissolveu-se em 400 ml de acetato de etilo e 5 ml de metanol. Lavou-se a solução resultante por duas vezes, com 200 ml de cada vez, de uma solução tampão com um pH5 com 150 ml de água e com 150 ml de uma solução concentrada de cloreto de sódio e finalmente secou-se sobre sulfato de sódio/sulfato de magnésio. A evaporação do dissolvente originou um produto sólido la. ranja amarelado que se purificou por cromatografia rápida sobre gel de sílica que se eluiu com 3 a 4% de metanol em cloreto de metileno, obtendo-se 1,25 g do composto em título sob a forma de um sólido incolor puro; rendimento de 45,4%.

360 MHz ¹H RMN (CDCl ) ^6,82 (s,1H), 6,52 (s,1H), 6,27 (s, 2H), 5,99 (d,2H), 4,90 (d , 1H,J = 3,4Hz), 4,73 (q,1Η , J = 5,0Hz), 4,65-4,60 (m,2H), 4,41 (m,1H), 4,25-4,15 (m,2H), 3,75-3,65 (m,5H), 3,72 (s,6H), 3,60-3,23 (m,9H), 2,91-2,80'(m,1H), ,38 (d , 3H , J = 5,0Hz).

(

146 MHz PRMN (CDClg) O 11,16 e 10,96 (dois picos) provenieri tes do fósforo quirálico).

Espectro de massa (FAB), m/e, 812, 810, 808, ^C 3 3 ^H 3 9 ^C13 ^N θ 14 ^{P requer M+} 809.

Exemplo 4

Sal dissódico de 4¹-tiofosfato de etoposido (composto de fórmula geral VIb

Aqueceu-se uma suspensão agitada magneticamente de 2,04 g (3,47 mmole) de etoposido em 175 ml de acetonitrilo anidro para se obter uma solução praticamente total. Deixou-se arrefecer a solução até à temperatura ambiente e em seguida adicionou-se de uma só vez 2,00 ml (11,5 mmole) de N,N-di-isopropi1 eti1amina. Em seguida arrefeceu-se a mistura até àtemperatura de 0°C e adicionou-se por meio de uma seringa durante 30 segundos, 0,720 g (4,17 mmole) de cloreto de tiofosforilo. Deixou-se a mistura aquecer lentamente até à tempe^ ratura ambiente durante duas a três horas, sob agitação contínua e em seguida, ainda sob agitação, durante mais 16 horas. Aqueceu-se então a mistura até 30°-35° C e manteve-se a essa temperatura por mais 4 horas.

A mancha principal do Rf mais alto de etoposido observou-se por cromatografia em camada fina (com álcool metílicó em cloreto de metileno a 5% como eluente). Tratou-se a mistura reaccional com 7,4g de bicarbonato de sódio sólido e em seguida adicionou-se 100 ml de água desionizada. Agitou-se a mistura a uma temperatura entre 28° e 25°C durante uma hora e meia e à temperatura ambiente durante mais uma hora e meia.

Em seguida,dividiu-se entre 200 ml de água desionizada, 30 ml de uma solução aquosa de bicarbonato de sódio e 300 ml de acetato de etilo. 0 tratamento e cromatografia de .fase inversa realizada de acordo com o processo descrito no exemplo 1, originaram 1,03 g do

composto em título puro sob a forma de um sólido incolor, (rendimer^ to de 40,8%).

350 MHz ¹H RMN (DgO) b 6,93 (s,1H), 6,60 (s,1H), 6,27 (s,2H), 5,93 (d,2H), 5,09 (d , 1 Η , J=2,8Hz), 4,83 (q,1Η,J = 5,0Hz), 4,68 (d,1H,

J = 7,8Hz), 4,63 (d , 1 Η,J = 5,7Hz), 4,47-4,35 (m,2H), 4,24 (dd, 1H,J=4,3 e 10,5Hz), 3,64 (s,6H), 3,67-3,52 (m,3H), 3,47-3,29 (m,3H), 3,17-3,07 (m,1H) , 1 ,31 (d,3H,J = 5,0Hz ).

Espectro de massa (FAB), m/e 728 (M⁺), 706 (M⁺ + H - Na), ^C29^H31^Na2°15^{PS re}q^{uer h+}> 728.

Exemplo 5

- ZZ'N,N-bis-(2-cloroetilo)-amino7-/?N-(3-hidroxipropil)-amino 7 7-fosfato de etoposido (de fórmula geral VII, X=0,

R = metilo, R,=H, R =R =2 - cloroetilo, Y=-NH(CH_O)_0H — 1-o-z— o-c 3—

Tratou-se uma solução agitada magneticamente do composto do exemplo 3 (280 mg, 0,346 mmole) em 3 ml de cloreto de metileno, com uma solução de 33,5 mg (0,446 mmole) de 3-amino-1-propanol em 1 ml de cloreto de metileno. Após 5 minutos adicionaram-se mais 31,0 mg (0,413 mmole) de 3-amino-1-propano1 em 0,5 ml de metanol absoluto. Purificou-se a mistura reaccional mediante a aplicação directa a qua tro placas de cromatografia em camada fina preparativa de 1 mm de gel de sílica E. Merck, que se eluiram utilizando álcool metilico em cloreto de metileno a 5-8%. A eluição do produto desejado utilizando-se metanol a 5% em acetato de etilo seguida de evaporação em vácuo e posterior secagem a 0,1 torr originou 185 mg do composto em

-26título, puro sob a forma de um sólido incolor, rendimento de 63% (mistura de diastereoisómeros de fósforo).

360 MHz ¹H RMN (CDClg) £>7,20 (largo,s, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,50 e 6,48 (2s, 1H), 6,26 e 6,25 (2s, 2H), 5,97 (d, 2H), 4,88 (m, 1H), 4,73 (q, 1H), 4,64-4,57 (m, 2H), 4,40 (m,1H), 4,21-4,13 (m, 2H), 3,71, 3,70 (2s, 6H), 3,71-3,06 (m,18H), 2,90-2,80 (m, 1H),

1,37 (d, 3H).

Espectro de massa (FAB), m/e, 849, 851 (M⁺ + H, ³⁵C1,³⁷C1), ^C36^H47^C12^N2°15^{P re(}^^{uer M+ 848} (³⁵C1) e 850 (^3?C1).

Exemplo 6

A* — C C Ν, N-b i s - (2-c 1 oroet i 1 o ) - am i no 7 —Z7 N-/' 2-C (3-nitro-piridi1-2-i1)-dissulfureto J-eti1 7 7-amino J-fosfato de etoposido. (de fórmula geral VII. X=0, R.=metilo, R.=H,R_=

-Ί=_Rg = 2-c 1 oroet i 1 o , Y=NH(CHg ) g -SS-(3-nitropiridil-2-il).

Tratou-se uma mistura de 248 mg (0,306 mmole) do composto o_b tido no exemplo 3 e 105 mg (0,393 mmole) de cloridrato de dissulfureto de 2-(3-nitropiridi1)-1 -(2-aminoeti1 o), com 7 ml de cloreto de metileno e em seguida adicionou-se 100 jjl (0,570 mmole) de di-isopropi leti lamina em 0,5 ml de metanol anidro. Agitou-se a solução r_e sultante à temperatura ambiente durante uma hora e meia e em seguida purificou-se por aplicação directa em quatro placas de 1 mm de gel de sílica E. Merck, para cromatografia em camada fina preparatj_ va e foram desenvolvidas uti1izando-se metanol a 4-5% em acetato de etilo. A eluição da banda do produto desejado utilizando metanol a

5% em acetato de etilo seguida de evaporação em vácuo e posterior secagem a 0,1 torr, proporcionou 231,7 mg do composto em título sob a forma de um sólido castanho amarelado, rendimento 75,3% (mis^ tura de diastereómeros de fósforo)

IV (KBr) 1774, 1598, 1584, 1559, 1509, 1486, 1456, 1421, 1397, 1342, 1236, 1160, 1128, 1096, 1038, 1004, 926, 857, 747,

699 cm 1.

360 MHz ¹H RMN (CDClg) S 8,81 e 8,77 (2m, 1H), 8,48 (m, 1H),

7,33 (m, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,51 e 6,50 (2s, 1H), 6,26 (largo, s,

2H), 5,97 (d, 2H), 4,89 (m, 1H), 4,73 (q, 1H), 4,65-4,52 (m, 3H),

4,41 (m, 1H), 4,24-4,14 (m, 2H), 3,71, 3,70 (2s, 6H), 3,71-2,85 (m, 19H), 2,68 (largo,s,1H, 0H), 2,37 (largo,s, 1H,0H), 1,37 (d,

3H).

Espectro de massa (FAB), m/e, 1005, 1007 (M⁺ + H, ³⁵C1, ³⁷ci). C₄₀H₄₇Cl₂N₄0₁₆PS₂requer M⁺, 1004 (³⁵C1) e 1006 (³⁷Cl).

Exemplo 7

4¹-difeni1-fosfato de etoposido (R^=CH₃ , R^H,_R^-R^^fen i1 o

Tratou-se uma suspensão agitada magneticamente de 10,50 g (17,84 mmole) de etoposido, seca sobre pentóxido de fósforo à temp_e ratura de 80°C e à pressão de 0,5 torr, em 450 ml de acetonitrilo anidro, com 420 ml (24,1 mmole) de di-i sopropi leti lamina e em seguj_ da adicionou-se, por meio de uma seringa, 2,00 ml (9,65 mmole) de clorofosfato de difenilo. Agitou-se a mistura numa atmosfera de azo

-28to durante duas horas, à temperatura de 50°C até ao momento em que todo o etoposido se encontrava dissolvido. Adicionou-se mais 1,80 ml (8,68 mmole) de clorofosfato de difenilo e deixou-se a mistura reaccional à temperatura de 45°C durante 72 horas. Após a adição de mais 0,75 ml (4,3 mmole) da base aminada e de 0,80 ml (3,86 mmole) de clorofosfato de difenilo, agitou-se a mistura a uma temperatura entre 40° e 45°C durante 27 horas e tratou-se com mais 0,40 ml (1,93 mmole) de clorofosfato de difenilo e manteve-se àquela temp£ ratura durante mais vinte e duas horas. Em seguida, adicionaram-se 20ml de isopropanol e evaporou-se o dissolvente em vácuo; dissolveu-se o resíduo em 500 ml de cloreto de metileno e partilhou-se em 400 ml de água. Extraiu-se a fase aquosa com 100 ml de cloreto de metileno e lavaram-se os extractos orgânicos reunidos com 250 ml de uma solução concentrada de cloreto de sódio e secaram-se sobre sulfato de sódio/sulfato de magnésio. A evaporação rotativa seguida de cromatografia rápida sobre gel de sílica utilizando-se como elue£ te metanol a 2-3% em cloreto de metileno, originou 12,50 g do composto em título, puro, sob a forma de um sólido incolor; rendimento de 85%.

FAB EM m/e (intensidade relativa) 820 (M+H)⁺.

IV (KBr) 3460, 2925, 1775, 1601, 1490 cm¹.

¹H RMN (CDC1₃) & 7,28 (m,8H), 7,15 (m,2H), 6,78 (s,1H),

6,47 (s, 1H) , 5,95 (m,2H), 4,85 (d,J = 3,5Hz , 1H ) , 4,71 (m,1H),4,60 (d , J = 7,6Hz.1H) , 4,56 (d,J = 5,1 Hz , 1H), 4,38 (m,1H),4,22-4,13 (m,2H), 3,72-3,60 (m,1H), 3,48 (s,6H), 3,54-3,28 (m,3H), 3,23 (dd,J=14, 2,5, 3Hz, 1H), 2,78 m, 1H), 1,35 (d,J=5,1Hz, 3H).

I *

Anal. Calcd. para ^c 4-j ^H4 ·,⁰-j 5 ^{p :} 6,60,00; H,5,04. Determ:

0,60,20; H,5,16.

Exemplo 8

4¹-fosfato de etoposido (fórmula geral V; R„ =CH„ ; R_r =H ; R., = R_n = H ) ι 3 —0 —/ —o —

Adicionaram-se 0,198 g (0,87 mmole) de óxido de platina duma embalagem recentemente aberta (Aldrich Chemical Co.) a uma solução de 4'-difeni1-fosfato de etoposido, preparado no exemplo 7 (0,79 g, 0,962 mmole) em 95 ml de etanol absoluto. Hidrogenou-se a solução num aparelho de Parr a 40 a 50 PSI durante 4 horas à temperatura ambien te. Filtrou-se a mistura reaccional através de uma almofada de celulite utilizando como eluente etanol. A concentração em vácuo e a S£ cagem sobre pentóxido de fósforo durante 14 horas também no vácuo, originou 0 produto desejado sob a forma de um sólido branco na quantidade de 0,627 g, rendimento de 94%

FAB EM m/e (intensidade relativa) 669 (M + H)'⁺

IV (KBr) 3440, 2930, 1778,1604, 1498 cm^-1.

¹H RMN (DMSO-dg) & 6,93 (s, 1H), 6,46 (s,1H), 6,12 (s,2H),

5,94 (m, 2H), 5,17 (largo, 1H), 4,86 (d,J=3,93Hz, 1H), 4,64 (q,J=7,5, 5,8Hz, 1H), 4,51-4,42 (m,2H), 4,20 (d , J = 10,7Hz , 1 H ) , 4,01 (dd,J = 12,

1,5, 3Hz, 1H), 3,51 (s, 6H), 3,51-2,75 (m, 7H), 2,83 (m,1H), 1,16 (d,J=5,1Hz, 3H).

¹³C RMN (DMSO-dg) S 174,5, 151,2, 151,1, 147,7, 146,2, 126,1, 132,3, 128,8, 109,8, 109,7, 107,9, 101,5, 101,2, 98,5, 80,0, 74,3,

-3072,7, 71,7, 67,6, 67,2, 65,7, 55,8, 43,0,

37,1, 20,2, 18,5.

anal. Calcd. para ^29^33^16?' θ,θ5% H^O: C,50,95; H 5,11

Determ: C,51,42; H,4,97.

Exemplo 9

4^015 (2,2-tr 1 c 1 oroeti 1 o)-fosfato de etoposido (de fórmula geral VIII; R_r=CH_n, R,=H, R,=R_O=CH„CC1_n).

Repetiu-se o processo descrito noexemplo 7 utilizando clorofosfato de bis-(2,2,2-tricloroetilo) para se obter o composto em tí tulo com o rendimento de 100% a seguir a uma cromatografia rápida sobre gel de sílica sob a forma de um composto sólido incolor.

IV (KBr) 1780, 1610, 1490, 1415, 1345, 1240, 1040, 960,

725 cm“¹.

300 MHz ¹H RMN (CDClg) S 6,81 (s,1H), 6,49 (s,1H), 6,27 (s, 2H), 5,98 (dd,2H), 4,88 (d , 1 Η , J = 3,4Hz), 4,82-4,70 (m,5H), 4,64 (d, 1H,J = 7,6Hz), 4,61 (d,1 Η , J = 5 , 3Hz), 4,41 (dd,1H), 4,25-4,13 (m,2H), 3,75 (m, 1H), 3,73 (s,6H), 3,56 (m,1H),3,43 (dd,1H), 3,34-3,24 (m, 3H), 2,91-2,82 (m,1H), 1,38 (d,3H, J=4,9Hz).

Espectro de massa (FAB), m/e = 928.9848 (M⁺+H).

C_OOH 01 0 P requer 928.9872.

36 6 16

-31Exemplo 10

Sal dissódico de 4‘-fosfato de etoposido a partir de 4‘-fosfato de etoposido.

Método A

Tratou-se20g de uma resina de permuta catiónica comercial Dowex 50 x8-100 sob a forma hidrogenada (Aldrich Chemical Co.), com um excesso de hidróxido de sódio 1N. Compactou-se a resina resultante sob a forma Na+ para formar uma coluna de 2 cm e equi1ibrou-se com água. Aplicou-se 1,25 g (1,87 mmole) de 4'-fosfato de etoposido, obtido no exemplo 8, em 25 ml de àgua desionizada no cimo da coluna e eluíu-se com água. As fracções que continham o composto em título foram reun_i_ das, filtradas e liofilizadas para se obter 1,15 g do composto em título sob a forma de um material muito leve branco.

Método B

A 2,90 g (4,34 mmole) de 4⁽-fosfato de etoposido impuro proveniente do exemplo 8, adicionaram-se 50 ml de água desionizada e 3,0 g (35,7 mmole) de bicarbonato de sódio. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante trinta minutos até que cessou a libertação de anidrido carbónico. A mistura foi em seguida submetida a cromatografia como descrito no exemplo 1. A eluição com 300 ml de água desionizada e em seguida com água/CHgOH 4:1 originou 1,90 g (rendimento de 61%) do composto em título sob a forma dum produto sólido branco muito leve após a 1 iofi1ização.

/

-32Exemplo 11

Repetiu-se o proceso geral descrito no exemplo 2 com excepção
do facto de se utilizar, para substituir a dietilamina, as aminas ci
tadas a seguir para tos de etoposido.	se obterem os correspondentes 4¹	-fosforodi amida-
Amina	Composto de fórmula geral VII Rg=H, Y=NR₂R₃)	(X=0, R^metilo,
	R„	R.
	2	3
propilamina	H	^CH2^CH2^CH3
etanolamina	H	CH₂CH₂0H
metoxietilamina	H	CH₂CH₂0CH₃
N-acetiletilenodiamina	H	CH₂CHNC(0)CH₃
2-metilalilamina	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
alilamina	H	ch₂ch=ch₂
dimeti1aminopropilamina	H	(CH₂)N(CH₃)₂
N-metiletilenodiamina	H	CH₂CH₂NCH₃
trifluoroetilamina	H	^CH2^CF3
2-aminoetanotiol	H	CH₂CH₂SH
ciclohexilamina	H	ciclohexi1
2-amino-1-metoxipropano	H	ch(ch₃)ch₂och₃
2-(etiltio)-et ilamina	H	CH₂CH₂SCH₂CH₃
cloroetilamina	H	CH_OCH Cl

4-aminociclohexanol

Η

/ Amina Composto de fórmula geral VII (X=0, f/=metilo, r₅=h, y=nr₂r₃)

etilmetilamina	^CH3	^CH2^CH3
etilbutilamina	CH-CH,	(ch₂)₃ch
meti 1aminoetanol	^CH3	CH₂CH₂0H
bis-(2-cloroetil)-amina	CH-CH,Cl	CH₂CH₂C1
2-propilaminoetanol	ch₂ch CH	CH₂CH₂OH
3-metilaminopropionitrilo	^CH3	CH, CH₂CN
piperidina	^R2^+R3=	-^(CH2^}5-

Exemplo 12

Repetiu-se o processo geral descrito no exemplo 3 com excepção do facto de se utilizarem os compostos listados abaixo, para se obterem os correspondentes c lorofosf oroamidatos de etoposido em sub_s tituição de bis-(2-cloroeti1amina) utilizada antes.

Amina Composto de fórmula geral VII (X=0, Remeti lo,

R=H, Y=C1) b ^R2 ^R3 propilamina H CH₂CH₂CH₃ etanolamina H CH₂CH₂0H

H CH₂CH₂0CH₃ metoxietilamina

-34/ f

Amino Composto de fórmula geral VII (X=0,Remetilo

N-acetiletilenodiamina	H ²	CH₂CHNC(0)CH₃
2-metilalilamina	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
al ilamina	H	CH₂CH=CH₂
dimetilamlnopropilamina	H	(ch₂)n(ch₃)₂
N-metiletilenodiamina	H	CH₂CH₂NCH₃
Trifluoroetilamina	H	CH₂CF₃
2-aminoetanotiol	H	ch₂ch₂sh
ciclohexilamina	H	ciclohexil
2-amino-1-metoxipropano	H	CH(CH₃)CH₂OCH₃
2-(etiltio)-etilamino	H	CH₂CH₂SCH₂CH₃
cloroetilamina	H	CH₂CH₂C1
4-aminociclohexanol	H	4-OH ciclohexi1
etilmetilamina	cn₃	^CH2^CH3
etilbutilamina	CH₂ ^CH3	<^CH2>3^CH3
metilaminoetanol	ch₃	CH CH OH
dietilamina	^CH2^CH3	^CH2^CH3 '
2-propilaminoetanol	CHgCH CH	ch₂ch₂oh
3-metilaminopropionitrilo	^CH3	CH CH CN
piperidina	^r2+ R₃=	-^(CH2>5-

Exemplo 13

Repetiu-se o método geral descrito no exemplo 5 com excepção de se ter substituído o 3-aminopropanol utilizado, pelas aminas a seguir in dicadas, para se obterem os correspondentes fosforodiamidatos de etoposido assimétricos.

-.35-

Amina Composto de fórmula geral VII (X=0,R^=metilo, r₆=h, y=nr₄r₅, r₂=r₃=ch₂ch₂cd

propilamina	H	ch₂ch₂ch₃
etanolamina	H	ch₂ch₂oh
metoxietilamina	H	CH₂CH₂0CH₃
N-acetiIetilenodiamina	H	CH₂CHNC(0)CH₃
2-metilalalamina	H	CH₂CH(CH₃)=CH₂
alilamína	H	ch₂ch=ch₂
dimetilaminopropilamina	H	(ch₂)n(ch₃)₂
N-metiIetilenodiamina	H	CH₂CH₂NCH₃
trifluoroetilamina	H	^CH2^CF3
2-aminoetanctiol	H	CH₂CH₂SH
ciclohexilamina	H	ciclohexi1
2-amino-1-metoxipropano	H	CH(CH₃)CH OCH₃
2-(etiltio)-etilamina	H	CH₂CH₂SCH₂CH₃
cloroetilamina	H	CH₂CH₂C1
4-aminociclohexanol	H	4-OH ciclohexi1
etilmetilamina	ch₃	^CH2^CH3
etilbutilamina	CH₂ ^ch3
metilaminoetanol	^CH3	CH₂CH₂0H
bis(2-cloroeti1)amina	CH₂CH₂C1	CH₂CH₂C1
2-propilaminoetanol	^CH2^CH2^CH3	ch₂ch₂oh
3-metilaminopropionitrilo	^CH3	CH₂CH₂CN
piperidina	^R4^+R5	-(^ch2)₅-

Exemplo 14

Repetiu-se o processo geral descrito no exemplo 7 excepto na utilização de clorofosfato de difenilo, que se substituiu pe.losclor£ fosfatos referidos a seguir para se obterem os correspondentes diés_ teres de 4'-fosfato de etoposido (X = 0, R,= metilo, R_C = H, R =R =R a segui r descrito) c 1 orof osf atos C ( RO) ^P (0) C1 27

R = metilo etilo benzi lo p-n i trobenz i1 o p-n i trofen i1 o p-bromobenz i1 o p-nitrofenetilo c i anoet i1 o o-(t-buti1)fenilo

Exemplo 15

Repetiram-se os métodos gerais descritos nos exemplos 1 a 16 com excepção de que os materiais iniciais de etoposido utilizados fo ram substituídos por os correspondenetes compostos de teniposido para se obterem os correspondenetes produtos de teniposido.

-36Α-

Exemplo 16

Aqueceu-se uma suspensão agitada magneticamente de 4,00 g (6,10 mmoles) de teniposido em 340 ml de acetonitrilo seco atê se obter uma solução completa. Arrefeceu-se depois a solução até à tem peratura de 0°C e adicionaram-se 3,72 ml (21,34 mmoles) de N,N-diisopropiletilamina. Utilizando uma seringa, adicionou-se à mistu ra, durante mais de 1 minuto 1,04 g (6,77 mmoles) de oxicloreto de fósforo. Arrefeceu-se a mistura lentamente durante 2 a 3 horas atê ã temperatura ambiente e cont.inuou-se a agitar durante 24 horas â temperatura ambiente. No final deste período, adicionaram-se 30 ml de ãgua desionizada e reduziu-se o volume total até 50 ml’ sob vàzio. Tratou-se a mistura concentrada com uma solução de 9,36 g (111,38 mmoles) de hidrogeno carbonato de sódio em 200 ml de água desioniza da, agitou-se a mistura resultante durante 2 horas ã temperatura am biente e partilhou-se depois com 3 x 100 ml de acetato de etilo. Submeteu-se depois a camada aquosa a um vazio de 0,5 mm Hg, à tempe ratura ambiente, durante 1 hora para eliminar os dissolventes. Fez-se passar depois a fase aquosa por uma coluna com um diâmetro de 4 cm contendo 15 cm de octadecilsilano ligado a gel de sílica, que se carregou em metanol e equilibrou com ãgua. Após a aplicação de toda a fase aquosa eluiu-se a coluna com 300 ml de ãgua para elimi_ nar os sais inorgânicos e utilizou-se depois como eluente uma mistu ra de ãgua e álcool metílico a 4:1. Concentraram-se sob vazio as fracções que continham o produto pretendido atê ao volume de 300 ml, depois do que se congelaram e liofilizaram obtendo-se 1,09 g (rendi mento de 23 %) do composto em título, puro, sob a forma de um sóli-36Βdo branco penugento.

IV(KBr) 3421, 2981, 2896, 1773, 1593, 1507, 1485, 1466, 1422, 1384, 1335, 1237, 1236, 1101, 1075, 1040, 988, 927, 853, 809, 768, 711, 552 cm'¹

360 MHz ¹H RMN (D₂0) L 7,44(d,IH,J=3,6 Hz), 7,22(d,IH,J=3,6 Hz), 7,03(t,lH, J=3,6 Hz), 6,94(s,lH), 6,58(s,lH), 6,28(s,2H),

5,95(d,2H, J=7, 2Hz), 5,91(s,lH), 5,l(d,lH, J=2, 5Hz), 4,41(m,4H), 3,36(t,lH, J=9,4 Hz), 3,64(s,6H), 3,60-3,36(m,5H), 3,35(t,IH,7,2Hz), 3,13(m,lH).

Espectro de massa (FAB), m/e, 781 (M⁺+H) , C₃₂ ^H3 ]_°i6^SPNa2 ^exil?^eM⁺, 780

Espectro de massa de alta resolução C__H_OηΟ_ηrSPNa„ ' jz jí lo 2 calculado: 781,0944 encontrado: 781,0947

Claims

Reivindicações

1 VII na qual R₂ e Rg relo, R, reoresenta um átomo 4 caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais corres-52 pondentemente substituídos.

27.- Processo para a preparação de compostos intermédios de fórmula geral

VIII na qual

R_fi eX têm o significado definido antes, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral

IX na qual

R^ e Rg têm o significado definido antes, com um corr.DOSto de fórmula ceral

P(X)C1 na qual

X tem o significado definido antes.

28. - Processo de acordo com a reivindicação 27, para a preparação de compostos de fórmula geral VIII na qual Rg representa um átomo de hidrogénio, R^ representa um grupo metilo e X representa um ãtomo de oxigénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

29. - Processo de acordo com a reivindicação 27, para a preparação de compostos de fórmula geral VIII na qual Rg representa um ãtomo de hidrogénio, R^ representa um grupo metilo e X representa um ãtomo de enxofre, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

30.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral na qual

R., R, e X têm o significado definido antes, ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

(a) de se converter um composto de fórmula geral na qual

R e Rg têm o significado definido antes, em um composto de fórmula geral na qual

R^ e Rg têm o significado definido antes, e G representa um grupo protector do radical fosfato;

(b) de se eliminar o grupo protector do radical fosfato; e (c) de se converter, eventualmente, o produto preparado na fase (b), citada antes, em um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

31. - Processo de acordo com a reivindicação 30, para a preparação de compostos de fórmula geral 3, citada antes, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral IX, também citada antes, com um composto de fórmula geral

Hal-P(X)(0-G)₂na qual

Hal representa um átomo de halogéneo, e X e G têm o significado definido antes, no seio de acetonitrilo ou (Cg _ ) CN e na presença de trialquilamina.

32. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas com acção anti-tumcral, caracterizado pelo facto de se misturar, comc ingrediente activo, uma quantidade eficaz de um composto de formula geral V cu VII, precarados peiescrocesscsde acordo com as reivindicações 1 a 18, ccm. um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

33. - Processo de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo facto de se utilizar comc ingrediente activo o sal dis sódico do derivado 4'-fosfato de etoposido

Lisboa, 3 de Agosto de 1988

O ΡΓο,η'-ιγΩΧΓίς InoustrisH

RESUMO

Processo para a preparação de derivados 4'-fosfato de glucosidos da epipodofilotoxina e de composições farmacêuticas que os contêm

Descreve-se um processo para a preparação de compostos de fórmula geral e

que consiste

A) para a preparação de compostos de fórmula geral V

-577

a) em fazer reagir um composto de fórmula geral com um composto de fórmula geral P(X)Clg na presença de um agente de fixação de ãcido para se obter um composto intermédio de fórmula geral se obter um composto de fórmula geral ιι χ

(3) ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico; ou c) em fazer reagir um composto de fórmula geral VIII, citada antes, com pelo menos um equivalente de cada um dos compostos de fórmula geral R^OH ou RgOH, na presença de um agente de fixação de ãcido e em converter, eventualmente, o composto resultante em um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico mediante tratamento com uma base;

e

1 b com cloreto de tiofosforilo no seio de acetonitrilo e na presença de uma base e de se tratar depois o composto resultante com carbo nato de hidrogénio e sódio.

11.- Processo de acordo com a reivindicação 1,-para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R-, representa um grupo alquilo C^_g, cicloalquilo Cg_g, arilo ^cg_j.Q' aralquilo

C. , alcuil-arilo substituído ou alcuil-aralquilo substituído 1-14' ou um grupo de fórmula geral A-alcuilo C^_g, A-cicloalquilo Cg__f;, A-arilo ou A-aralquilo em que A tem o significado definido antes e Rg representa um átomc de hidrogénio ou um dos grupos definidos antes para o símbolo R_, ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto

I de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

12.- Processo de acordo com a reivindicação 11, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual Rg representa um átomo de hidrogénio e R^ representa um grupo metilo ou 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

13.- Processo de acordo com a reivindicação 12, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual Ry e Rg representam, cada um, independentemente, um grupo alquilo C^_g, nalogeno-alquil (C^_)-substituído , ciano-alquil -substituído, arilo ^cg_-j_g ^ou aralquilo Cy_.^, comportando os núcleos dos compostos arílicos ou arilalquílicos citados antes, eventualmente, um substituinte escolhido entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo ou nitro, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

14. - Processo de acordo com a reivindicação 13, para a preparação de compostos ce fórmula geral V na qual R^ representa um grupe metilo, caracterizado pelo factc de se utilizar compostos iniciais ccrrespondentemente substituídos.

15. - Processo de acordo com a reivindicação 14, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual X representa um. átomo de oxigénio, caracrerizado pelo facto de se compostos iniciais correspcndentemente substituídos.

utilizar

-46V

i.

16.- Processo de acordo com a reivindicação 15, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R^ e Rg representam, cada um, um grupo fenilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

17.- Processo de acordo com a reivindicação 15, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R^ e Rg representam, cada um, um grupo 2, 2, 2-tricloroetilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

18.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral na qual

Rl, Ρθ e X têm o significado definido antes,

Y representa um átomo de cloro, um grupo hidroxi ou um oruco de fórmula geral -XR.R,, na cual R. e

-4Ί

Rg representam, cada um, independentemente, um ãtomo de hidrogénio, um grupo alquilo Cg_g, alcenilo C₂_g, cicloalquilo C^_g ou um grupo de fõrmula geral A-alquilo ^C2.-5' ^A-al^cenil° ^C2-5 ^{ou A-}cicloalquilo Cg_g, em que A tem o significado definido antes, ou R^ e Rg representam, considerados conjuntamente com o ãtomo de azoto a que estão ligados, um núcleo tri- a hexagonal, e

R₂ e Rg têm o significado definido antes para os símbolos R^ e Rg ou Rg e Rg representam, considerados conjuntamente com o ãtomo de azoto a que estão ligados, um núcleo tri- a hexagonal;

e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um composto de fõrmula geral na qual ^R1' ^R6 ^e X ^ta“‘ ° definido antes, com uma amina de fõrmula geral

-48HNRgRg na qual

Rg e Rg têm o significado definido antes, ou com um seu sal de adição de ácido, para se obter um composto de fórmula geral na qual

Rg, Rg, X, Rg e Rg têm o significado definido antes, e

(b) de se fazer reagir, eventualmente, um composto de fórmula geral 4, citada antes, com uma segunda amina de fórmula geral

HNR.R4 5 na cual

R, e R_ têm o sicniíicadc definido antes, ou com um seu sal de adição de ácido, para se obrer um composto de fórmula ceral cs) na qual

R^, Rg, R^, Rg, R^, Rg e X têm o significado definido antes, ou (c) de se hidrolisar um composto de fórmula geral 4, citada antes, eventualmente na presença de uma base, para se obter um composto de fórmula geral (4) na cual

R., R, , R_, R, e X têm o significado definido antes, 1 O 2 J ou um seu sal aceitável sob o conto de vista farmacêutico.

19.- Propesso de acordo com a reivindicação 18, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual Rg represent;

um ãtomo de hidrogénio; representa um grupo metilo ou 2-tienilo; Y representa um ãtomo de cloro ou um grupo de fórmula geral -NR^Rg, na qual R^ e Rg representam, cada um, ir.cependentemente, um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo- 0^,-, halogeno-alquilo (C₁_-)-substituído, hidroxi-alquilo (C^_g)-substituído ou dissulfureto de nitropiridil-alquilo (C^_g)-substituído; X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre e Rg e Rg têm o significado definido antes para os símbolos R₄ e Rg, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

20.- Processo de acordo com a reivindicação 19, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual X representa um ãtomo de oxigénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

21. - Processo de acordo com a reivindicação 20, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual R^ representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais-correspondentemente substituídos.

22. - Processe de acordo com a reivindicação 21, para a preparação de compostos de fórmula geral presentam, cada um um grupo 2-cloroetilo de cloro, caracterizado pelo facto de se ciais correspondentemente substituídos.

VII na qual Rg e Rg ree Y representa um ãtomo utilizar compostos inirbad original

23. - Processo de acordo com a reivindicação 21, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual Y representa um grupo de fórmula geral -NR^R_, na qual R^ e Rg têm o significado definido antes, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

24. - Processo de acordo com a reivindicação 23, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual R₂, Rg, R^ e Rg representam, cada um, um grupo etilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

25.- Processo de acordo com a reivindicação 23, para a preparação de compostos de fórmula geral VII na qual R₂ e Rg representam, cada um, um grupo 2-cloroetilo, R^ representa um átomo de hidrogénio e Rg representa um grupo 3-hidroxipropilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

26.Processo de acordo com a reivindicação 23, cara a preparaçao presenta.?., de hidrogê.

de compostos ds fórmula ger cada um, um grupe 2-cloroet io e R. reoresenta um gruoc

-CH₂CH₂-S-S-

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral v

na qual representa um grupo alquilo ^cj_-10' ^aí^cen^-l° ^C2-10' cicloalquilo Cg_g, 2-furilo, 2-tienilo, arilo ^cg_i_₀aralquilo ^ou aralcenilo Cg_^^,em que cada um dos núcleos aromáticos comporta, eventualmente, um

..ζou mais substituinte(s) escolhido(s) entre ãtomos de halogéneo ou grupos -alquilo Cq__q, alcoxi C^_g, hidroxi, nitro ou amino, e

Rg representa um átomo de hidrogénio, ou R^ e Rg representam, cada um, um grupo alquilo ϋ^_θ; ^ou θ Rg representam, considerados conjuntamente com o átomo de carbono a que estão ligados um grupo cicloalquilo

C ^U5-6'

X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre;

R_, e Rg representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo-C₃_g, cicloalquilo Cg_g, arilo ^cg_pQ/ alquil-arilo substituído, aralquilo ou alquil-aralquilo substituído ou um grupo de fórmula geral A-alquilo C^_g A-cicloalquilo Cg_g, A-arilo ou A-aralquilo, em que A representa um ou mais átomo(s) de halogéneo ou grupo(s) hidroxi, alcoxi, alcanoiloxi, ciano, amino, alquilamino, dialquil-amino, carboxilo, alquil-tio, mercapto, mercapto-tio, dissulfureto nitropiridilo, alcanoílamino, alcanoilo, carbamoílo ou nitro, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

IX na qual

R^ e Rg têm o significado definido antes, com um composto de fórmula geral

P(X)ci₃na qual

X tem o significado definido antes, na presença de um agente de fixação de ãcido, para se obter um composto intermédio de fórmula geral

VI 11 na qual

R., R, e X têm o significado definido antes, 1 D e (b) de se hidrolisar o composto resultante de fórmula geral

VIII, citada antes, eventualmente, na presença de uma base para se obter um composto de fórmula geral na qual

R^, Rg e X têm o significado definido antes ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico;

ou (c) de se fazer reagir um composto de fórmula gerai VIII, citada antes, com pelo menos um equivalente de cada um dos compcs tos de fórmula geral R^OH ou RgOH, em que R^ e Rg têm o signifi cado definido antes com a condição de R-, e Rg não representarem simultaneamente átomos de hidrogénio, e na presença de um agente de fixação de ácidos; e se um dos símbolos R^ ou Rg representar um átomo de hidrogénio, de se converter, eventualmente, o composto resultante em um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico mediante tratamento com uma base.

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre paração de coiwostos de fórmula geral V na qual R, , R, e X têm o «LO

41•significado definido antes e R? e Rg representam, cada um, indepen dentemente, um átomo de hidrogénio, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual Rg representa um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo metilo ou 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual Rg representa um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo metilo ou 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5. - Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual Rg representa um ãtomo de hidrogénio e representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondente mente substituídos.

6. - Processo de acordo com a reivindicação 5, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual X representa um r

i i

-42átomo de oxigénio, caracterizado pelo facto de se utilizar compos tos iniciais correspondentemente substituídos.

7. - Processo de acordo com a reivindicação 5, para a preparação de compostos de fõrmula geral V na qual X representa um ãtomo de enxofre, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

8. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se preparar como um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico o sal de sódio.

9. - Processo para a preparação de compostos de fõrmula caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fõrmula geral na qual

R^ e Rg têm o significado definido antes, com cloreto de fosforilo no seio de acetonitrilo e na presença de uma base e de se tratar depois o composto resultante com carbonato de hidrogénio e sódio.

caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral

L na qual

R. e R, têm o significado definido antes,

3) para a preparação de compostos de fórmula geral VII

a) em fazer reagir um composto de fórmula geral com uma amina de fórmula geral HNR₂Rg ou com um seu sal de adiçao de ãcido, para se obter um composto de fórmula geral e

b) em fazer reagir, eventualmente, um composto de fórmula geral 4, citada antes, com uma segunda amina de fórmula geral HNR^Rg ou com um seu sal de adição de ãcido, para se obter um composto de fórmula geral ou

c) em hicrclisar um composto de fórmula geral 4, citada antes,

-60ί )

ou um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Estes compostos utilizam-se como agentes anti-tumorais.

Lisboa, 3 de Agosto de 1988 O A»env· '.V-H '*=> Prenri-dari* Industrial