KR900006230B1

KR900006230B1 - 에피포도필로톡신 배당체의 4'-포스페이트 유도체

Info

Publication number: KR900006230B1
Application number: KR1019880009910A
Authority: KR
Inventors: 지.솔니에르 마아크; 디. 센터 피터; 에프. 캐도우 존
Original assignee: 브리스톨-마이어즈 스퀴브 컴페니; 아이삭 자아코브스키
Priority date: 1987-08-04
Filing date: 1988-08-03
Publication date: 1990-08-27
Also published as: ES2010775A6; SE502214C2; CN1027169C; YU10490A; GB8818462D0; MX9202851A; CZ541288A3; NL970042I1; NO172440B; DE3826562A1; SE8802815D0; CN1061225A; NL192683B; NO172440C; US5041424A; NO920277L; FI87790C; NO1998002I1; NZ225615A; YU143688A

Abstract

내용 없음.

Description

에피포도필로톡신 배당체의 4'-포스페이트 유도체

본 발명은 에피포도필로톡신 배당체의 4'-포스페이트 유도체류, 그의 항종양제로서의 용도 및 이 신규의 약제들을 함유하는 약리적 조성물에 관한 것이다.

다음의 구조식의 에토포시드(VP-16(I)) 및 테니포시드(VM-26,(II))는 천연산 리그난인 포도필로폭신(III)으로부터 유도된 임상적으로 유효한 항암제로서, 에토포시드와 테니포시드를 포함하는 화합물류는 종종 4'-데메틸에피포도필로톡신 배당체로 칭해진다. 에토포시드와 데니포시드는 고환암, 소형세포폐암, 난소암,유방암, 갑상선암, 방광암, 뇌암, 비임파성 백혈병 및 호지킨병을 포함한 여러암의 치료에 있어 활성적이다.

상기 화합물(I)과 (II) 및 이들의 제조방법이 와트버그외 공동 발명자의 미국특허 제3,408,441호 및 켈러-쥬슬렌외 공동 발명자의 미국특허 제3,524,844호에 기재되어 있다. 기재된 화합물들중 특히 에토포시드와 테니포시드는 본 발명의 에피포도필로톡신 배당체의 4'-포스페이트 유도체의 제조시 출발 물질 역할을한다.

( I ) R¹=CH₃

(II) R¹=2-thieny¹

히드록실기를 함유하는 치료제의 인산화는 약물 잠재능력화 수단으로 사용되어 왔으며 이 인산화 유도체는 다음 생체내에서 포스파타제에 의해 분해되어 활성 모분자로 방출된다. 잠재적인 전구 약물로서의 포스페이트에 대한 간단한 논의가 "Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives : Prodrugs''(싱클라 및 알콥스키, J.Pharm Sci., 1975, 64 : 181-210, 189-191)라는 제목의 리뷰기사에 실려있다. 공지의 포스페이트 항종양제의 예로는 캄프로테신(일본 공개 제21-95,394 및 제21-95,393흐, 더웬트 초록 제87-281016호 및 87-281015호)과 다우노루비신(미국특허 제4,185,111호)을 들 수 있다.

다음 구조식의 포도필로톡시 포스페이트 디나트륨염(IV)은 셀리그만등에 의해 제조되었다. 그러나, 포스페이트는 프로스테틱산 포스파타제에 의해 가수분해 되지 않으며 독성은 모 프도필로톡신에 비해 감소되지 않았다.(암 화학요법 보고서 제1부, 1975, 59 : 233-242)

본 발명은 항종양제로 활성적인 4'-데메틸에피포도필로폭신 배당체의 포스페이트 에스테르를 제공한다. 특히 4'-데메틸에피포도필로톡신의 디히드로겐 인삼염과 그의 염은 고도로 수용성이므로 최저 수용성을 갖는 에토포시드와 테니포시드와 같은 요즘의 치료제에 비해 약리적으로 더 우수하다.

본 발명은 다음의 일반식(V)의 4'-데메틸에피포도필로톡신 배당체의 4'-포스페이트 유도체 및 약리적으로 허용되는 그의 염을 제공한다.

상기 일반식중 R⁶은 H이고 R¹은 및 (C_1-10)알킬 ; (C_2-10)알케닐 ; (C_5-6)시클로알킬 ; 2-퓨릴 ; 2-티에닐 ; (C_6-10) 아릴; (C_7-14)아르알킬; 및 (C_8-14)아르알케닐중에서 선택한 기이고 여기서 각 방향족 고리는 할로, (C_1-8)알킬, (C_1-8)알콕시, 히드록시, 니트로, 및 아미노중에서 선택된 1개 이상의 기토 치환되거나 치환되지 않을 수 있으며, 또는 R¹과 R⁶이 각각 (C_1-8)알킬이거나 또는 R¹과 R⁶은 이들이 결합되어 있는 탄소와 함께(C_5-6) 시클로알킬기를 형성하며 ; X는 산소 또는 황이고 R⁷및 R⁸은 H,(C_1-5)알킬, A-치환(C_l-5)알킬, (C_3-6)시클로알킬, A-치환 (C_3-6)시클로알킬, (C_6-10)아릴, A-치환 아릴, 알킬-치환아킬, (C_7-14)아르알킬, A-치환 아르알킬 및 알킬치환 아르알킬 중에서 각각 선택한 기이고, 여기서 상기 A-치환체는 히드록시, 알콕시, 알카도일옥시, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아이노, 카르복시, 알킬티오, 메르캅토, 메르캅토티오, 니트로피리딜 디설파이드, 알카노일아미노, 알카노일, 카르바모일, 니트로, 및 할로중에서 선택된 1개이상의 기이다.

화합물(V)의 염들은 모노아니온산과 디아니온산 모두를 포함한다. 양이온으로는 알칼리금속 또는 알칼리토금속이나 기타 흔한 금속이온과 같은 금속이온, 또는 암모늄, 모노-, 디-, 또는 트리알킬암모늄 또는 피리디늄과 같은 유기질소 함유기를 들 수 있다. 양이온은 나트륨, 칼륨, 리튬, 세슘, 마그네슘, 칼슘, 알루미늄, 암모늄 및 모노-, 디-, 및 트리알킬암모늄 중에서 선택하는 것이 바람직하다. 바람직한 구체예에서는 R⁷과 R⁸모두 H인 일반식(V)의 화합물과 약리적으로 허용되는 그의 염이 제공된다. 가장 바람직한 구체적인 예로는 에토포시드 4′-디히드로겐 인산염 및 티오포스페이트, 그리고 그의 상응하는 디나트륨염(VIa) 및 (VIb)를 제공한다.

더욱 바람직한 실시예에서는 R⁷및 R⁸은 2,2,2-트리할로에틸, 2-시아노에틸, (C_1-5)알킬, 페닐 및 페닐알킬중에서 선택된 동일한 기이고 이때 페닐고리는 임의로 알킬, 할로겐, 또는 니트로로 치환되는 일반식(V)의 화합물이 제공된다.

본 발명의 추가적인 면은 다음의 일반식(Ⅶ)을 갖는 항종양성 포스포로아미네이트 유도체와 약리적으로 허용되는 그의 염을 제공한다.

상기 일반식중 R^l, R⁶및 X는 앞서 정의한 바와 같고 : Y는 Cl,OH 또는 NR⁴R⁵이고 R², R³, R⁴및 R⁵는 각각 H, (C_l-5)알킬, (C_2-5) 알케닐, (C_3-6) 시클로알킬, A-치환 (C_l-5) 알킬, A-치환(C_2-5) 알케닐, A-치환 (C_3-6)시클로알킬중에서 각각 선택한 기이고; 또는 R², R³는 이들이 결합해있는 질소원자와 함께 3-내지 6-원환을 나타내며; 또는 R⁴, R⁵는 이들의 결합해있는 질소원자와 함께 3-내지 6-원환을 나타내고; 이때 상기 A-치환체는 전술한 바와같다.

본 발명의 다른 면은 일반식(Ⅷ)(여기서 R^l, R⁶및 X는 전술한 바와같음)의 디클로로포스페이트 중간체들을 제공하는데 이 제제들은 일반식(V)의 화합물의 제조시 유용하다.

본 발명의 또다른 면은 R⁷및 R⁸이 모두 H인 일반식(V)의 화합물과 약리적으로 허용되는 그의 염의 제조방법을 제공하며 이 제조방법은 다음의 공정들로 구성되어 있다. (a) 다음의 일반식(IX)을 가진 화합물

을 다음의 일반식(X)을 가진 화합물

(상기 일반식들중 R^l, R⁶및 X는 앞서 정의한 바와 같고 G는 포스페이트 보호기임)로 전환시키고 ; (b)포스페이트 보호기를 제거하며 ; (c)(b) 공정에서의 생성물을 임의로 약리적으로 허용되는 염으로 전환시킨다. 포스페이트 보호기에는 R⁷의 정의가 H인 경우를 제외하고는 상기와 같은 기들을 들 수 있으나 이에 한정시키는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용되듯이, 특별히 다르게 명시된 경우를 제외하고는 "알킬"은 직쇄 또는 가지달린 탄소사슬을 의미하고 "할로"에는 브로모, 클로로, 플루오로 및 요오드가 있으며 "etopofos"는 에토포시드 4'-포스페이트디나트륨염이다.[즉, 화합물(VIa) ].

4'-데메틸에피포도필로톡신 배당체의 페놀기를 옥시염화인과 염화 티오포스포릴로 인산화시켜 각각 상응하는 디클로로포스페이트 및 디클로로티오포스페이트를 얻을 수 있다(일반식 Ⅷ). 인산화 반응은 예컨대 아세토니트릴과 같은 적절한 무수 유기 용매중에서, 바람직하게는 N,N-디이소프로필에틸아민과 같은 3차아민 염기의 존재하에서 수행한다.

반응 과정은 박충 크로마토그래피(TLC)에 의해 모니터할 수 있으며 이로써 출발 물질의 소실이나 생성물의 출현, 또는 양쪽모두에 의해 최적 반응 기간을 판단할 수 있다. 본 발명자들의 경험상 반응에는 약4-72시간이 소용되었다. 요구반응 기간은 사용된 포스포러스시약의 품질과 관계있는 것으로 나타났다.

일반식(Ⅷ)의 4'-디클로로포스페이트류는 후속적으로 친핵체와 반응하여 여러가지 포스페이트와 티오포스페이트 유도체를 제공하는 다능의 중간체이다. 따라서 이 중간체들은 가수분해되어 포스페이트를 제공할수 있고, 염기가 존재하면 포스페이트 염을 얻을 수 있다. 예컨대, 과량의 중탄산나트륨 수용액으로 일반식(Ⅷ)의 화합물을 처리하면 상응하는 4'-포스페이트 디나트륨염과 4'-티오포스페이트 디나트륨염을 얻게되며 : 칼륨 및 암모니아와 같은 기타의 양이온의 중탄산염 또는 상응하는 염을 얻는데 쓰일 수 있다. 디클로로포스페이트 중간체(Ⅷ)는 아민과 반응하여 상응하는 포스포로디아미네이트나 클로로포스포로모노아미데이트를 제공할 수 있다. 적당한 아민에는 에틸아민, 클로로에틸아민, 알릴아민, 디메틸아미노프로필아민, 히드록시에틸아민, 시클로헥실아민 및 아미노시클로헥산올과 같은 1차아민, 디에틸아민, 피페리딘, 에틸메틸아민, 에틸 아미노에탄올, 에틸부틸아민과 같은 2차아민, 암모니아 등이 있다. 에피포도필로톡신 디클로로포스페이트등의 양에 대한 아민의 사용량은반응 생성물중 하나 또는 다른 하나에 유리하게 조절할 수 있다. 예컨대 에피포도필로톡신에 대해 아민을 훨씬 과량으로 사용하면, 대칭 포스포로디아미데이트, 즉 Y가 NR²R³와 동일한 일반식(VII)의 화합물을 얻게되며 : 아민의 양을 좀더 조절하여 사용하면 클로로포스포로 모노아미데이트, 즉 Y가 Cl인 일반식(VII)의 화합물을 얻는다. 클로로포스포로모노아미데이트는 가수분해되어 Y가 OH인 일반식(VII)의 화합물 또는 그의 염을 제공하고, 또한 2차아민과 추가로 반응하여 비대칭 포스포로디아미데이트, 즉 Y가 NR⁴R⁵이며 NR²R³과는 다른 일반식(VII)의 화합물을 제공한다.

상술한 공정을 다음의 반응식에 도시하였다.

포스페이트 트리에스테르류는 일반식(V)의 화합물(R⁷및 R⁸은 H가 아님)이며, 이들은 4'-데메틸에피포도필로톡신 배당체를 할로포스페이트 디에스테르[즉, Hal-P(X)(OR⁷)(OR⁸)]로 처리하여 제조할 수 있다.이 반응은 유기 트리알킬아민 염기의 존재하에서 아세토니트릴중에서 수행하는 것이 가장 효과적인 것으로 밝혀졌으며 이때 바람직한 염기는 디이소프로필에틸아민이다. 적어도 1당량의 할로포스페이트와 아민 염기를 사용하여 두시약 모두 에피포도필로톡신 배당체 시약의 몰당량보다 약간 많은 몰 당량으로 사용하는 것이 바람직하다. 반응은 생성물의 생성에 도움이 되는 어떤 온도에서는 진행될 수 있으나, 예컨대 30-40℃의 약간 높은 온도가 반응 종결까지 수일이 걸리는 반응을 용이하게 해주는 것으로 나타났다. 대칭 할로포스페이트 디에스테르[즉, R⁷=R⁸]는 알코올과 예컨대 염화 포스포릴로부터 간단히 제조할 수 있으며 비대칭 할로포스페이트 디에스테르[즉, R⁷≠R⁸]는 알코올과 디할로포스페이트 에스테르로부터 제조할 수 있다. 또한, 예컨대 (PhCH₂O)₂PN(i-pr)₂와 같은 시약과 반응시킴으로써 우선 페놀을 포스파이트 에스테르로 전환시키고, 이어서 예컨대 m-클로로 과벤조산을 사용하여 포스페이트를 포스페이트 에스테르로 산화시키는 것과 같이 다른 경로에 의해서도 포스페이트 트리에스테르류를 제조할 수 있다.

포스페이트 트리에스테르류는 일반식(V)의 화합물과 그의 염의 제조시 중간체 역할을 추가로 할 수 있다. 이리하여, 디페닐 에스테르((V), R⁷=R⁸=페닐)를 촉매적으로 수소첨가시키면 예컨대, 디히드록시 포스페이트(V), R⁷=R⁸=H)를 얻을 수 있다. 기타 적합한 포스페이트 보호기에는 2,2,2,-트리클로로에틸,벤질, 시아노에틸, p-니트로 치환 페닐, 페네틸 및 p-브로모페닐을 들 수 있으나 이들로 한정시키는 것은 아니다. 예컨대 중탄산나트륨, 중탄산 암모늄 또는 유기 아민과 같은 적절한 염기와의 반응에 의해 디히드록시 포스페이트(V), R⁷=R⁸=H)는 염기성 염으로 전환된다. 다른 한편, 이염들은 요구되는 양이온을 함유하는 교환 수지만을 통해 디히드록시 포스페이트를 용리시킴으로써 생산될 수도 있다.

비록 본 발명에서는 인산화 시약으로서 옥시 염화인, 할로 포스페이트 디에스테르류 및 그들의 상응하는 황 동족체들을 사용하고 있으나 페놀류를 인산화시킬 수 있는 기타의 인 시약도 사용될 수 있음과 적절한 반응조건 및 매질은 선택한 인산화 시약에 따라 선별해야 함을 이해하여야 한다. ''Current Methods of Phosphorylation of Biological Molecules"(Synthesis, 1977, 737-52)이라는 제목의 리뷰기사에는 인산화시약의 다른 예를 기재하였으며 본 발명에 참고로 인용하였다.

[생물학적 특성]

본 발명의 대표적인 화합물들을 이식가능한 쥐의 P388 백혈병에 대한 항종양 활성으로 평가하였다. 모든실험에서 쥐의 P388 백혈병의 10⁶개의 복수 세포 종양 접종물로 내이식시킨 암컷 CDF₁새앙쥐를 사용하였다. 에토포시드 4'-포스페이트, 그의 디나트륨염 및 에토포시드 4'-티오포스페이트 디나트륨염을 사용한 실험에서 종양 내이식과 약물 처리는 정맥 경로를 따라 수행하였다 다른 모든 실험에서는 종양 내이식과 약물 처리는 복강 경로로 수행하였다. 그러나 모든 경우에 있어서, 양성 대조, 에토포시드는 복강내로 투여하였다. 28-46일동안 지속된 실험 마지막날 생존 마릿수를 기록하였다. 항종양 활성은 식염수 처리군의 평균 생존기간(median survial time : MST)대 약물 처리군의 MST의 비율인 %T/C로 나타내었다. %T/C값이 125를 초과한 화합물은 일반적으로 P388 테스트에서 우수한 항종양 활성을 갖는 것으로 사료된다. 표(I)은 상술한 평가 결과를 나타내며 최대 %T/C값과 그만한 효과를 주는 투여량을 기록하였다.

[표 1]

쥐의 P388 백혈병에 대한 항종양 활성

* 약물은 별다른 언급이 없는한 제 5 일과 제 8 일에 투여하였다. (제1일은 종양을 내이식시킨 날임)

본 발명의 항종양 화합물은 실험 동물에 있어서 이식시킨 종양에 대해 활성적인 것으로 입증되었다. 특히, 일반식(VIa)("에토포포스 : etopofos")로 나타내는 화합물은 P388 테스트에 있어 에토포시드보다 훨씬높은 항종양 활성을 나타낸다. 이 선택적인 제제는 생체외에서는 감소된 항종양 활성을 갖는 에토포시드의 고수용성 전구 약물을 나타내며 알칼린 포스파타제에 의해 신속히 분해되어 에토포시드를 방출시킨다. 방출된 에토포시드는 모약물과 동일한 세포독성을 나타낸다.

이리하여, 본 발명은 종양을 가진 숙주에서 일반식(V) 또는 (VII)의 항종양 화합물을 유효 종양 억제량만큼 투여하는 것으로 이루어진 포유류의 종양 억제 방법을 제공한다. 이 목적을 위해, 약물은 정맥, 근육, 종양, 동맥, 임파구 및 경구를 포함하는 동상적인 경로에 의해 투여할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 또다른 면은 일반식(V) 또는 (VII)의 화합물과 약리적으로 허용되는 담체로 이루어진 약리적 조성물을 제공한다. 항종양 조성물은 요구되는 투여경로에 적합한 약제 형태로 제조될 수 있다. 이러한 조성물의 예로는 정제, 캡슐제, 알약, 분말제 및 과립제와 같은 경구투여를 위한 고상 조성물, 용액제, 현탁제, 시럽 또는 엘릭시르제와 같은 경구용 액상 조성물 및 멸균 용액, 현탁제 또는 유제와 같은 비경구 투여용 제제를 들 수 있다. 이들은 사용직전 멸균수, 생리식염수 또는 기타 멸균시킨 주사매질중에 용해시킬 수 있는 멸균 고상 조성물 형태로 제조될 수도 있다.

주어진 포유류 숙주에 있어서의 최적 투여량과 섭생은 이 분야의 기술에 숙련된 자들에게는 쉽게 결정될수 있다.

물론 사용되는 실제 투여량이 특정 조성물, 사용된 특정 화합물, 투여 형태 및 특정부위, 처리 받는 숙주및 질병에 따라 변할 수 있음을 이해하여야 한다. 약물의 작용을 변형시키는 많은 인자가 있으며 그 예로 연령, 체중, 성별, 식이법, 투여시기, 투여경로, 배설속도, 환자의 상태, 약물 배합, 반응 민감도 및 병의 위중도를 들 수 있다.

다음의 실시예들은 오직 설명 목적을 위한 것으로서 결코 본 출원에 첨부된 청구범위에 의해서만 한정된 본 발명의 범위를 제한 하는 것이 아니다.

다음의 실시예들중,양자 및 탄소 핵 자기공명(NMR)스팩트럼(CDC1₃또는 D₂O를 내부 기준으로 사용)은 브루커 WM360스펙트로포토미터 상에서 기록하였다. 적외선 스펙트럼(IR)은 퍼킨-엘머 1800푸리에 전환적외선 스펙트로포토미터로 측정하였다. "플래쉬 크로마토그래피"는 스틸(스틸, 더블유, 시. ; 칸, 엠. : 미트라, 에이 , ; J Org,Chem,1978,43,2923) 및 이 머크 시리카겔(230-400메쉬)에 의해 측정하였다.

역상 크로마토그래피는 실리카겔(40-μm직경, 제이. 티. 베이거 배급자)에 결합된 C18(옥타 메실실란)을 사용하여 포지티브 질소 압력하에서 수행하였다.

[실시예 1]

에토포시드 4'-포스페이트 디나트륨염(화합물(VIa)자력 교반시킨 건조 아세토니트릴(210ml)중의 에토포시드(2.30g, 3.91mmo1)현탁액을 데워 거의 완전한 용액으로 만들었다.

용액을 실온으로 냉각시키고 N,N-디이소프로필에틸아민(2,36ml,13.5mmol)을 첨가하였다. 다음 혼합물을 0℃까지 냉각시키고 POCl₃(666mg, 4.34mmol)을 시린지를 통해 30초동안 첨가하였다. 혼합물을 서서히 2-3시간에 걸쳐 실온에 이르게 하고 실온에서 63시간 동안 교반시켰다. 이 기간의 말기에 20체적%를 제거하고 실시예 2에 기재된 바와 같이 디에틸아민 처리를 하였다. 잔사를 탈이온화시키 H₂O(110ml)중의 중탄산 나트륨(6.0g, 71.4mmol)용액으로 처리하고, 혼합물을 실온에서 80분간 교반시킨 다음, 중탄산나트륨 포화수용액(20ml), 탈이온시킨 H₂O(125ml) 및 에틸 아세테이트(350ml)로 분별시켰다. 유기층은 탈이온화시킨 H₂O(1×50ml)로 세척한 다음 실온에서 1시간동안 0.5mm로 진공처리하여 용해된 용매를 제거하였다. 다음 수성부분을 메탄올중에 충진된 실리카 겔에 접착되어 있는 옥타데실실란 15cm을 함유하는 직경4cm의 관에 얹고 H₂O로 평형 시켰다. 수성부분 모두를 이렇게 처리하고, 관을 H₂O(175ml)로 용리시켜 무기염을 제거한 다음 4 1의 H₂O , CH₃OH로 생성물을 용리하였다. 0.5토르에서 용매를 농축시켜 순수한표제의 화합물 744mg(36%)을 무색의 고체로 얻었다. 다른 한편 동결건조시켜서 매우 복슬복슬한 저밀도의 고체로서 순수한 표제의 화합물을 얻었다.

IR(KBr) 3426, 1775, 1593, 1505, 1486, 1337, 1239, 1191, 1122, 1078, 1034, 983, 927, 888, 876, 851, 840, 697, 684, 547cm^-1

360MHz 1H NMR(D₂O) δ 6.93(s 1H), 6.59(s,1H), 6.27(s,2H), 5,93(d,2H), 5.09(d,1H,J=2.8Hz), 4,83(q.1H,J=5.0Hz), 4,68(d,1H,J=7.9Hz), 4.62(d,1H,J=5.7Hz), 4.47-4.35(m,2H), 4.24(d,d,1H,J=4.4 and 10.4Hz), 3,64(s.6H), 3,68-3.52(m,3H), 3.44-3.30(m,3H), 3.17-3.07(m,1H), 1.31(d,3H,J=5,OHz).

90MHz¹³NME(D₂O) δ 178.5, l51.8, 148.1, 146.1, 135.0, 132.6, 130.9, 127.4, 109.9, 109.5, 107.4, 101.3, 100.4, 99.6, 79.2, 73.7, 72.7, 72 2, 69. 1, 67.1, 65.4, 55.6, 42.8, 40.3, 37.5, 18.8,

l46MHz³¹P NMR(D₂O) δ 3.7g

질량 스팩트럼 (FAB), m/e, 713(M⁺＋H) C₂₉H₃₁Na₂O₁₆P는 M⁺요구, 712

분석C₂₉H₃₁Na₂O₁₆P:

계산치 : C,48,89, H ; 4.39, Na ; 6.45

실측치^*: C ; 48.72, H ; 4.56, Na ; 6.56

* 칼 피셔 분석에 의해 측정한 8.16% H₂O로 조정

[실시예 2]

에토포시드 4'-(비스-[N,N-디에틸]포스폰아미드)((VII), X=O, R¹=메틸, R⁶=H, Y=N(Et)₂, R²= R³= Et)

실시예 1에서 지시된바와 같이 에토포시드와 POCl₃의 반응 생성물 혼합물 20체적%를 디에틸아민(4ml)에 첨가하고 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 진공에서 증발시키고 밝은 오렌지색 잔사를 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. 염화메틸렌중의 4%메탄올로 용리시켜 순수한 표제의 화합물 271. 3mg(46.9%)을 연황색 고체로서 얻었다.

IR (KBr) 3048, 2974, 2936, 2877, 1774, 1598, 1508, 1486, 1467, 1421, 1383, 1339, 1234, 1191, 1162, 1130, 1098, 1079, 1037, 902, 858, 795, 713, 700, 544cm^-1.

360 MHz^lH NMR(CDCl₃) δ 6.79, (s.1H), 6.50(s,1H), 6,20(s,2H), 5 96(ABq,2H), 4,87(d,1H,J=3.2Hz), 4.71(q,1H,J=5.1Hz), 4.61(d,1H,J=7.6Hz), 4.57(d,1H,J=5.2Hz), 4.39(dd,1H,J=9.1 and 10.2Hz), 4.22-4.13(m,2H), 3.74(m,1H), 2.94-2.83(m,1H), 1.37(d,3H,J=5.1Hz), 1.10(m,12H), 146MHz 31P NMR(CDCl₃) δ 16.49.

질량 스팩트럼(FAB), m/e,779(M++H),573(M+-당)

C₃₇H₅₁N O₂P₁₄는 M+요구, 778

[실시예 3]

에토포시드 4'(N,N-[2-클로로에틸]포스포릴 클로라이드((VII), R¹=메틸, R⁶=H, X=O, Y=Cl, R²=R³=CH₂CH₂Cl)

자력교반시킨 건조 아세토니트릴(220ml)중의 에토포시드(2.00g, 3.40mmol)현탁액을 데워 거의 완전한용액으로 만들었다.

혼합물을 실온으로 냉각시키고 N,N-디이소프로필에틸아민(2.05ml, 11.8mmol)으로 처리하였다. 다음 N₂하에서 혼합물을 0℃까지 냉각하고 시린지를 통해 30초동안 옥시염화인(624mg, 4.07mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2.5시간동안, 다음 실온에서 추가로 1.5시간동안 자력에 의해 교반시켰다. 다음 비스-(2-클로르에틸아민)히드로크로라이드(1.82g, 10.2mmol)을 신속히 첨가하고 그 직후 N,N-디이소프로필에틸아민(2.10ml, 12.0mmol)을 추가로 첨가하였다. 이 혼합물을 실온에서 85분간 교반시키고 진공하에서 5ml체적으로 농축시킨 다음 에틸아세테이트(400ml)와 메탄올(5ml)중에 용해시켰다. 결과적인용액을 pH5완충액(2×200ml), 물(l50ml) 및 브린(150ml)으로 세척하고 Na₂SO₄/MgSO₄로 건조시켰다. 용매를 증발시켜 황색의 고체를 얻고 이를 실리카 겔 상에서 염화메틸렌중의 3-4% 메탄올로 플래쉬크로마토그래피 처리하여 순수한 표제의 화합물 1.25g(45.4%)을 무색의 고체로서 얻었다.

360 MHz^lH NMR(CDCl₃) δ 6.82(s,1H), 6.52(s,1H), 6.27(s,2H), 5.99(d,2H), 4.90(d,1H,J=3,4Hz), 4.73(q,1H,J=5.0Hz), 4.65-4.60(m,2H), 4.41(m,1H), 4.25-4.15(m,2H), 3.75-3.65(m,5H), 3.72(s,6H), 3.60-3. 23(m,9H), 2.91-2.80(m,1H), 1.38(d,3H,J=5.0Hz).

146MHz^3lP NMR(CDC1₃) δ 11.16 and 10.96(비대칭 인에 의해 피그 2개)

질량 스팩트럼(FAB), m/e, 812, 810, 808.

C₃₃H₃₉Cl₃NO_l4P은 M⁺(³⁵Cl) 809요구

[실시예 4]

에토포시드 4'-티오포스페이트 디나트륨 염(화합물(VIb))

자력 교반시킨 건조 아세토니트릴(175ml)중의 에토포시드(2.04g, 43.47mmol)현탁액을 데워 거의 완전한용액으로 만들었다.

용액을 실온으로 냉각시키고 N,N-디이소프로필에틸아민(2.00ml, 11.5mmol)을 이에 첨가하였다. 다음 혼합물을 0℃로 냉각시키고 시린지를 통해 30초동안 염화 티오포스포릴(0.72g, 4.17mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 2-3시간에 걸쳐 서서히 실온에 이르게 하고 실온에서 16시간동안 교반시켰다. 다음 혼합물을 30-35℃까지 데우고 그 온도에서 추가로 4시간 동안 유지시켰다. 그러자 에토포시드보다 Rf가 높은 주요한 새로운 점(spot)이 TLC(CH₂C₁₂중의 5%CH₃OH)에 의해 관찰되었다. 반응 혼합물을 고체 중탄산나트륨(7.4g)으로 처리한다음 탈이온화시킨 H₂O(100ml)을 첨가하였다. 혼합물을 28-25℃에서 1.5시간, 실온에서 1.5시간 교반시켰다. 혼합물을 탈이온화시킨 H₂O(200ml), 중탄산 나트륨 포화 수용액(30ml) 및 에틸아세테이트(300ml)로 분별시켰다. 실시예 1에 따라 더욱 워크엎시키고 역상 크로마토 그래피로 처리하여 순수한 표제의 화합물 1.03g(40.8%)을 무색의 고체로 얻었다.

360 MHz^lH NMR(D₂O) δ 6,93(s.1H), 6.60(s,1H), 6.27(s,2H), 5.93(d,2H), 5.09(d,1H,J=2.8Hz), 4.83(q,1H,J=5,0Ohz), 4.68(d,lH,J=7.8Hz), 4. 63(d,1H,J=5.7Hz), 4.47-4.35(m,2H), 4.24(dd,1H,J=r,3 and 10 5Hz), 3.64(m,1H), 1.31(d,3H,J=5.0Hz)

질량스펙트럼 (FAB), m/e 728(M⁺), 706(M⁺+H -Na)

C₂₉H₃₁Na₂O₁₅PS는 M⁺요구, 728

[실시예 5]

에토포시드 4'-[[N,N-비스(2-클로로에틸)아미노-[N-(3-히드록시프로필)아미노]포스페이트((VII), X = O, R¹= 메 틸, R⁶= H, R²= R³-2 -클로로에틸, Y = -NH (CH₂)₃OH)

자력으로 교반시킨 CH₂Cl₂(3ml)중의 실시예 3의 화합물(280mg, 0.346mmol)용액을 CH₂Cl₂(1ml)중의 3-아미노-1-프로판올(33.5mg, 0.446mmol)용액으로 처리하였다. 5분후 순수 메탄올(0.5ml)중의 3-아미노-1-프로판올(31.0mg, 0.413mmol)을 추가로 첨가 하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂중의 5-8% CH₃OH를 사용하여 전개시키는 4개의 예비 TLC판(1mm, 이, 머크 시리카겔)에 직접 적용시켰다. 에틸 아세테이트중의 5%CH₃OH를 사용하여 목적하는 생성물 밴드를 용리시킨다음 진공 증발 시키고 추가로 0.1토르에서 건조시켜 순수한 표제의 화합물 185mg(63%)을 무색의 고체(인의 다이아스테레오머의 혼합물)를 얻었다.

360 MHz¹H NMR(CDCl₃) δ 7.20(br s.1HD, 6.80(s,1H), 6.50 and 6.48(2s,1H), 6.26 and 6.25(2s,2H), 5.97(d,2H), 4,88(m,1H), 4.73(q,1H), 4.64-4.57(m,2H), 4.40(m,1H), 4.21-4.13(m,2H), 3.71-3.70(2s,6H), 3.71-3.06(m,18H), 2.90-2.80(m,1H), 1.37(d,3H).

질량 스팩트럼 (FAB), m/e, 849, 851(M⁺+H,³⁵Cl, 37Cl) ·C₃₆H₄₇Cl₂N₂O₁₅P는 M⁺848(³⁵Cl) 과 850(³⁷Cl)요구.

[실시예 6]

에토포시드 4′-[[N,N-비스 (2-클로로에틸)아미노-IN-[2-[(3-니트로-피리딜-2-일)디설파이드]에틸]] 아미노]포스페이트((VII), X =O, R¹= 메틸, R⁶= H, R²= R³= 2 -클로로에틸, Y=NH(CH₂)₂-SS - (3 - 니트로피리딘-2-일 ) )

실시예 3의 화합물(248mg, 0.306mmol) 및 2-(3-니트로피리딜) -1-(2-아미노에틸)디설파이드 히로클로라이드(105mg, 0.393mmol)의 혼합물을 CH₂Cl₂(7ml)로 처리하고 디이소프로필에틸아민(100μl, 0.570mmol)과건조 메탄올(0.5ml)을 첨가하였다. 결과적인 용액을 실온에서 1.5시간동안 교반시킨다음 4개의 예비 TLC판(1mm, E 머크 실리카겔)에 직접 적용시켜 정제시키고 에틸 아세테이트 중의 4-5% CH₃OH로 전개시켰다. 에틸 아세테이트중의 5% CH₃OH를 사용하여 목적하는 생성물 밴드를 용리시킨다음 진공 증발시키고 0.1토르에서 추가로 건조시켜 순수한 표제의 화합물 231.7mg(75.3%)을 황갈색의 고체(인의 다이아스테레오머 혼합물)로 되었다.

IR(KBr) 1774, 1598, 1584, 1559, 1509, 1486, 1456, 1421, 1397, 1342, 1236, 1160, 1128, 1096, 1038, 1004, 936, 857, 747, 699cm^-1

360 MHz^lH NMR(CDCl₃) δ 8.81 and 8.77(2m,1H), 8.48(m,1H), 7 33(m,1H), 6.81(s,1H), 6.51 and 6,50(2s,1H), 6.26(br s,2H), 5.97(d,2H), sa 4.89(m,1H), 4.73(q,1H), 4.65-4.52(m,3H), 4.41(m,1H), 4.24-4.14(m,2H), 3m71, 3.70(2s,6H), 3.71-2.85(m,19H), 2.68(brs,1H,OH), 2.37(brs,1H,OH), 1.37(d. 3H).

질량스팩트럼(FAB), m/e,1005, 1007(M⁺+H,³⁵Cl,³⁷Cl) C₄₀H₄₇Cl₂N₄O_l6PS₂은 M⁺요구 1004(³⁵Cl) 및 1006(³⁷Cl)

[실시예 7]

에토포시드4'-디페닐 포스페이트(R¹=CH₃, R⁶=H, R⁷=R⁸=페닐)

자력으로 교반시킨 건조아세트니트릴(450ml)중의 에토포시드(10.50g, 17, 84mmol, 80℃/0.5토르에서 P₂O₅로 건조)

현탁액을 디이소프로필에틸아민(4.20ml, 24.1mmol)으로 처리하고 디페닐클로로포스페이트(2.00ml, 9.65mmol)를 시린지를 통해 순수하게 첨가하였다. 혼합물을 N₂하에서 2시간동안 50℃에서 교반시키고 이온도에서 에토포시드가 모두 용해되었다.

디페닐 클로로포스페이트(1.80ml,8,68mmol)를 추가로 첨가하고 반응 혼합물을 45℃에서 72시간동안 방치하였다. 아민 염기(0.75ml,4.3mmol)와 디페닐 클로로포스페이트(0.80ml,3,86mmol)를 더 첨가한후, 혼합물을 40-45℃에서 27시간동안 교반시키고, 디페닐 클로로포스페이트(0.40ml,1.93mmol)로 더 처리하고 40-45℃에서 22사간동안 유지시켰다. 다음 이소프로판올(20ml)을 첨가하고, 용매를 진공으로 증발시키고 고체 잔사를 CH₂Cl₂(500ml)중에 용해시켜 H₂O(400ml)로 분별하였다. 수층은 CH₂Cl₂(100ml)로 더 추출하고 결합 유기층은 브린(250ml)으로 세척하고(Na₂SO/MgSO₄)로 건조시켰다.

회전 증발시킨후 CH₂Cl₂중의 2-3% CH₃OH를 사용하여 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피로 처리하여 순수한 표제의 화합물 12.50g(85%)을 무색의 고체로 얻었다.

FAB MS m/e(상대 강도) 820(M+H)⁺

IR(KBr) 3460, 2925, 1775, 1601, 1490cm^-1

¹H NMR(CDCl³) δ 7.28(m,8H), 7.15(m,2H), 6.78(s,1H), 6.47(s,1H), 5. 95(m,2H), 4.85(d,J=3.5Hz,1H), 4.71(m,1H), 4.60(d,J=7.6Hz,1H), 4.56(d,J=5.1Hz,1H), 4.38(m,1H), 4.22-4.13(m,2H), 3.72-3.60(m,1H), 3 48(s,6H), 3.54-3,28(m,3H), 3.23(dd,J=14.2,5.3Hz,1H), 2.78m,1H), 1.35 (d, J=5.1Hz,3H)

분석C₄₁H₄₁O₁₆P :

계산치 : C ; 60.00, H ; 5.04

실측치 : C ; 60.20, H ; 5.16

[실시예 8]

에토포시드 4'-포스페이트((V) ; R^l=CH₃; R⁶=H, R⁷=R⁸=H)

새로 마개를 연 병(알드리치 화학사)으로부터의 산파 백금(0.198g, 0.87mmol)을 순수 에탄올 95ml중의 에토포시드 4'一디페닐 포스페이트(실시예 7의 생성물 : 0.79g, 0.962mmol)용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 4시간동안 45-50Psi하에서 parr장치로 수소 첨가시켰다. 반응 혼합물을 용리액으로서 에탄올을 사용하여 셀라이트패드를 통과시켰다. 진공 농축시키고 진공에서 14시간동안 P₂O₅로 건조시켜 목적하는 생성물은 백색고체로 얻었다.(0.627,94%)

FAB MSm/e(상대 강도)669(M+H)⁺

IR(KBr) 3440, 2930, 1778, 1604, 1498cm^-1

¹H NMR(DMSO-d₆) δ 6.93(s,1H), 6.46(s,1H), 6.12(s,2H), 5.94(m,2H), 5. 17(bs,1H), 4.86(d,J=3.93Hz,1H), 4.64(q,J=7.5,5.8Hz,1H), 54.5l-4.42(m,2H), 4.20(d,J=10.7Hz,1H), 4.01(dd,J=12.1,5.3Hz,1H), 3.51(s.6H), 3.51-2.75(m,7H), 2.83(m,1H), 1.16(d,J=5.1Hz,3H)¹⁷

C NMR(DMSO-d₆) δ 174.5, 151.2, 151.1, 147.7, 146.2, 126.1, 132.3, 128.8, 109.8, 109.7, 107.9, 101.5, 101.2, 98.5, 80.0, 74.3, 72.7, 71.7, 67.6, 67.2, 65.7, 55.8, 43.0, 37.1, 20.2, 18.5.

분석C₂₉H₃₃O₁₆P. 0.85% H₂O :

계산치 : C ; 50.95, H ; 5.11

실측치 : C ; 51.42, H ; 4.97

[실시예 9]

에토프시드4'-비스(2,2,2-트리클로로에틸)포스페이트((VIII) ; R⁶=CH₃, R¹=H, R⁷=R⁸CH₂CCl₃)

비스(2.2.2-트리클로로에틸)클로로포스페이트를 사용하여 실시예 7에 기재된 공정을 수행하여 표제의 화합물을 수율 100%로 무색의 고체로 얻은 다음 실리카 겔 상에서 크로마토그래피 처리하였다.

IR(KBr) l780, 1610, 1490, 1415, 1345, 1240, 1040, 960, 725cm^-1.

300MHz^lH NMR(CDCl₃) δ 6.81(s,1H), 6.49(s,1H), 6.27(s,2H), 5.98(dd,2H), 4.88(d,1H,J=3.4Hz), 4.82-4.70(m,5H), 4.64(d,1H,J=7 6Hz), 4.61(d,1H,J=5.3Hz), 4.41(dd,1H), 4.25-4.13(m,2H), 3.75(m,1H), 3.73(s.6H), 3.56(m,1H), 3.43(dd,1H), 3.34-3.24(m,3H), 2.91-2.82(m,1H), 1.38(d,3H,J=4.9Hz)

질량 스팩트럼(FAB), m/e=928 9848(M⁺+H).

C₃₃H₃₆C1₁₆O₁₆P는 928.9872요구.

[실시예 10]

에토포시드 4′-포스페이트로부터의 에토포시드 4'-포스페이트 디나트륨염

[방법A]

수소형태(20g, 알드리치 화학사)의 시판하는 다우엑스 50×8-100양이온 교환수지를 과량의 1N NaOH로 처리하였다. 이렇게 얻은 Na⁺형태의 수지를 2cm관에 충진시키고 물로 평형시켰다.

탈이온수 25ml중에 용해된 에토포시드 4'-포스페이트(실시예 8의 생성물, 1 25g,1.87mmol)를 충진관꼭대기에 얹고 물로 관을 용리하였다. 표제의 화합물이 함유된 분획을 모아, 여과하고, 동결 건조시켜 표제의 화합물 1.159을 백색의 복슬복슬한 물질로 얻었다.

[방법B]

조 에토포시드 4'-포스페이트(실시예 8의 생성물)2.90g(4.34mmol)에 탈이온수(50ml)와 중탄산나트륨(3.00g,35.7mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분동안 교반하고 이동안 CO₂발생을 중지시켰다. 다음 혼합물을 실시예 1에 기재된 것처럼 크로마토그래피 처리하였다. 탈이온수(300ml)로 용리시키고 4 : 1 H₂O/CH₃OH로 용리시키고 동결건조시켜 표제의 화합물 1.90g(61%)을 백색의 복슬복슬한 고체로 얻었다.

[실시예 11]

디에틸아민을 다음에 기재된 아민류로 대치한 것을 제외하고는 실시예 2에 기재된 일반공정을 반복 수행하여 상응하는 에토포시드 4'-포스포로디아미네이트를 얻었다.

[실시예 12]

비스(2-클로로에틸)아민 재신 다음에 기재된 아민류를 사용한 것을 제외하고는 실시예 3의 일반공정을 반복수행하여 상응하는 에토포시드 클로로포토아미데이트류를 얻었다.

[실시예 13]

3-아미노프로판올대신 다음에 기재된 아민류를 사용한 것을 제외하고는 실시예 5의 일반공정을 반복 수행하여 상응하는 비대칭 에토포시드 포스포로디아미데이트류를 얻었다.

[실시예 14]

디페닐 클로로포스페이트 대신 다음에 기재된 클로로포스페이트류를 사용한 것을 제외하고는 실시예 7의 일반공정을 반복 수행하며 상응하는 에토포시드 4'-포스페이트디에스테르류(X-O, R¹=메틸, R⁶=H, R⁷=R⁸=R 다음에 기재)를 얻었다.

클로로포스페이트류 [(RO)₂P(O)Cl]

R=메틸

에틸

벤질

P-니트로벤질

P-니트로페닐

P-브로모벤질

P-니트로페네틸 시아노에틸

o-(t-부틸)페닐

[실시예 15]

에토포시드 출발물질을 상응하는 테니포시드 화합물을 대치한 것을 제외하고는 실시예 1-14의 일반공정을 수행하여 상응하는 테니포시드 생성물을 얻었다.

Claims

다음의 일반식(Ⅴ)을 갖는 화합물 또는 약리적으로 허용되는 그의 염

상기 일반식중, R⁶은 H이고 R¹은(C_1-10)알킬 ; (C_2-10)알케닐 ; (C_5-6)시클로알킬 ; 2-퓨릴 ; 2-티에닐 ; (C_6-10)아릴 ; (C_7-14)아르알킬 ; 및 (C_8-l4)아르알케닐 중에서 선택되는 기이고, 여기서 방향족 고리는 할로, (C_1-8)알킬, (C_1-8)알콕시, 히드록시, 니트로, 및 아미노 중에서 선택한 하나 이상의 기로 치환되거나 치환되지 않을 수 있고; 또는 R¹과 R⁶이 각각(C_1-8)알킬이거나, 또는 R¹과 R⁶은 이들이 결합해 있는 탄소원자와 함께(C_5-6)시클로 알킬기를 형성하며, X는 산소 또는 황이고 ;

R⁷및 R⁸은 H, (C_1-5) 알킬, A-치환 (C_1-5)알킬, (C_3-6)시클로알킬, A- 치 환(C_3-6) 시클로알킬, (C_6-10)아릴, A-치환아릴, 알킬-치환아릴, (C_7-14) 아르알킬, A-치환아르알킬 및 알킬치환 아르알킬 중에서 각각 선택되는 기이고 ; 상기 A-치환체는 히드록시, 알콕시, 알카노일옥시, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 카르복시, 알킬티오, 메르캅토, 메르캅토티오, 니트로피리딜 디설파이드, 알카노일아미노, 알카노일, 카르바모일, 니트로 및 할로 중에서 선택한 1개 이상의 기이다.
다음의 일반식을 갖는 화합물 또는 약리학적으로 허용되는 그의 염

상기 일반식중, R^l, R⁶및 X는 앞서 정의한 바와같고, Y는 Cl,OH, 또는 NR⁴R⁵이고, R², R³, R⁴및 R⁵는 각각 H, (C_1-5) 알킬, (C_2-5) 알케닐, (C_3-6) 시클로알킬, A-치환(C_1-5)알킬, A-치환(C_2-5) 알케닐, A-치환(C_3-6)시클로알킬 중에서 각각, 선택한 기이고; 또는 R², R³가 이들이 결합해 있는 질소원자와 함께 3 내지 6원환을 형성하거나; 또는 R⁴, R⁵가 이들이 결합해 있는 질소원자와 함께 3 내지 6원환을 형성하고, 여기서 상기 A-치환체는 앞서 정의한 바와같다.
다음의 일반식을 갖는 중간체

상기 일반식중, R^l, R⁶및 X는 앞서 정의한 바와같다.