RO106742B1 - Derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxin-gIucozide si procedeu de obținere a acestora - Google Patents

Abstract

Invenția se refera la derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxin-glucozide, care au formula structurala V: De asemenea, invenția se mai refera si la un procedeu de obținere a derivărilor cu formula (V) prin a) protejarea grupei 4’fenolice, a compusului cu formula I a: unde R, si R, sunt definiți in revendicarea 1; b) reacția produsului 4’-fenol protejat, din etapa (a), cu un compus selectat din grupul constând din SOj, R^SOjCI si (R7O) P(X) CI, unde R«, R7 si X sunt definiți in revendicarea 1; c) îndepărtarea opționala a grupei R7 - protectoare a fosfatului; d) îndepărtarea opționala a grupei protectoare a 4’-fenolului; e) separarea izomerilor. Acești compuși sunt utilizări ca medicamente antitumorale.

Description

Invenția de față se referă la derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxin glucozide și la un procedeu de obținere a acestora, precum și la utilizarea lor ca agenți antitumorali sub formă de compoziții farmace- 5 utice.

4’-dimetilpipodofilotoxin glucozidele de formula (I) sunt agenți antitumorali derivați prin formare naturală din lignan, podofilotoxin având formula (II):

a: R¹ = H; R² = CH₃ b: R¹ = H; R² = 2 -tienil Metoda pentru sintetizarea lor este descrisă în: Brevet U.S. nr.3524844.

Dintre compușii de formula (I), etoposida I-a și teniposida I-b au fost stabilite pentru folosirea clinică împotriva unei varietăți de tumori incluzând celula mică a plămânului, ovariană, testiculară, a sânului, vezicii, creierului, leucemiei nelimfocitice și bolii lui Hodgkîn.

Brevetele U.S. nr.4547567 și 4716221, descriu compușii cu formula (III):

unde unul din X¹ și X² este OH, și celălalt este o graupă amino, monoalchilamino sau dialchilamino. Se menționează că acești derivați prezintă o solubilitate ridicată în apă.

Seligman și alții (Cancer Chemotherapy

Reports Part I, 1975, 591 233-242) au prezentat prepararea sării disodice a podofilotoxin fosfatului cu formula (IV). în orice caz, fosfatul nu a fost hidrolizat de acidul prostatic la fosfatază și nu a prezentat o toxicitate redusă față de podofilotoxina inițială.

O

Prezenta invenție furnizează compuși antitumorali cu formula (V):

unde R² este H și R¹ este selecționat dintr-un grup constând din (Cl.₁₀) alchil; (C₂._l0) alchenil; (C₅.₆) cicloalchil; 2-fenil 2-tienil;, (C₆.₁₀) - arii; (C₇.₁₄) - aralchil; (C₈._u) aralchenil, unde fiecare din inelele aromatice pot fi nesubstituite sau substituite cu una sau mai multe grupe selectate dintre halogeni, (C,.₈) alchil, (Ci.₈) alcoxi, hidroxi, nitro și amino; sau R^l și R² sunt fiecare (Ομ8) alchil; sau R¹ și R² și atomul de carbon la care sunt legați, formează o grupă (C5.₆) cicloalchil; R³ și R⁴ sunt selectați dintr-un grup constând din OH, - OSO2R⁶ - OSO3H și săruri acceptate farmaceutic ale acestora; - OP(X)(OH)₂ și săruri acceptate farmaceutic ale acestuia și - OP(X) (OR⁷)* unde R⁶ este hidrogen, (C_b5) alchil, fenil, (C^j) alchil substituit cu fenil, sau fenil (C_t.₅) alchil; R⁷ este o grupă de protecție a fosfatului; X este oxigen sau sulf cu condiția ca R³ și R⁴ să nu fie amândoi OH; și R⁵ este H sau o grupă protectoare a fenolului.

Se preferă compușii cu formula V unde R⁴ este OH și R³ este definit mai sus.

De asemenea, conform invenției, se obțin compuși cu formula (VI) și sărurile acceptabile farmaceutic.

unde R¹, R² și R³ sunt definite mai sus, iar R⁸ este H sau o sare din aceasta sau R⁷.

în această descriere, fosfat, fosforilare și termenii înrudiți includ: tiofosfat, tiofosforilare etc., hal, halogenură și halogen se referă la clor, brom și iod; alchil se referă la lanțuri de carbon liniare și ramificate; și notația ”L semnifică gruparea care pleacă, cum ar fi clorul care este de obicei întâlnit în reacțiile de esterificare.

Materiile prime, 4’-dimetiIpipodofilotoxin glucozide (I) pot fi preparate prin procedeele descrise în Brevet U.S. nr.3524844 care este inclus ca referință. Pentru a evidenția eficient grupele hidroxil ale părții de zahăr, este necesar de a bloca întâi grupa fenolică reactivă. Protecția grupei 4’-fenol a compușilor cu formula (I) poate fi realizată prin utilizarea procedeelor cunoscute care includ, de exemplu, formarea eterilor, acetalilor sau esterilor. Selecția grupei protectoare a fenolului nu este restrictivă specific și poate fi oricare dintre grupale protectoare convenționale cunoscute în tehnică. Alegerea grupei protectoare și metodele pentru blocarea și deblocarea grupei fenol sunt prezentate în tratate ca, de exemplu: Proiective Groups în Organic Chemistry, J.F.W. Mc. Omie, Ed. Plenum Press, 1973. Exemple de grupe corespunzătoare pentru protejarea fenolului includ, dar nu sunt limitate la r-butil, benzii, 2-te-trahidro-piranil, 2, 2, 2, - tricloroetoxicarbonil și benziloxicarbonil, ultimul fiind cel preferat.

Grupele hidroxil ale zahărului din 4’-dimetilpipodofilotoxin glucosidă cu formula (I) protejată, pot fi apoi trecute în fosfați, sulfați sau sulfonați, conform prezentei invenții, prin metode convenționale cunoscute în literatură. Reacțiile sunt de obicei nereglospecifice și rezultă un amestec de 2, 3- și 2, 3- bis produse derivate și, de asemenea, în cazul fosforilării și dimerul fosfat cu formula (VI). Amestecul de produse poate fi separat în componenți individuali prin utilizarea tehnicilor cunoscute cum ar fi cromatografia pe coloană. Nu prezintă importanță deosebită la ce punct, în secvența de reacție, este separat amestecul produșilor de reacție.

Fosforilarea poate fi realizată prin reacția 4’-fenol-protejat (I) cu halogenură de fosforil, P(X) (hal)j, într-un solvent organic inert, de exemplu, clorură de metilen sau acetonitril, și în prezența unui acceptator de acid preferabil o bază amină terțiară cum ar fi piridina sau diizopropiletilamină. Amestecul rezultat al diclorfosfaților intermediari poate fi hidrolizat in situ pentru a da monoesteri fosfați, iar dacă hidroliză este condusă în prezența unei baze cum ar fi bicarbonatul de sodiu și altele similare, se obține sarea corespunzătoare a monoester fosfatului. Grupa protectoare a 4’-fenolului este îndepărtată ulterior pentru a se obține fosfații prezentei invenții.

Diclorofosfații intermediarii pot fi, de asemenea, transformați în triesteri - fosfați prin tratament cu un alcool având formula R⁷OH; unde R⁷ este o grupă fosfat protectoare. Grupele fosfat protectoare includ, dar nu sunt limitate la, (Cj.s) alchil substituit opțional cu unul sau mai mulți atomi de halogen; fenil substituit opțional cu una sau mai multe grupe selecționate dintre (C,.5) alchil, halogen și nitro; și fenil (Cj.5) alchil unde inelul fenil este substituit opțional ca mai sus. Triesterfosfatul poate fi de asemenea obținut prin tratarea derivatului 4’-fenol protejat cu formula (I) cu un compus cu formula (R⁷O)2 P(X) - L într-un solvent organic inert în prezența unui receptor de acid. Grupa R⁷ de la triester fosfat poate fi opțional îndepărtată pentru a da un monoesterfosfat care poate fi imediat transformat într-o sare acceptabilă farmaceutic prin tratarea ei cu o bază cum ar fi bicarbonatul de sodiu. Astfel, grupa R⁷ de la triester fosfat poate fi aleasă astfel încât poate fi îndepărtată simultan cu grupa protectoare a fenolului sau una poate fi îndepărtată selectiv fără a afecta pe cealaltă.

Sulfații pot fi preparați prin tratarea compusului 4’- fenol protejat cu formula (I) cu trioxid de sulf sau cu un complex al acestuia cum ar fi complexul trioxid de sulf - piridina într-un solvent organic inert la temperatura ambiantă. Grupa fenol este îndepărtată utilizând metodele convenționale binecunoscute în tehnică pentru a da produsul. Derivatul sulfat poate fi imediat transformat în sărurile sale acceptabil farmaceutic prin contactul acestuia cu o sursă de cationi doriți.

Sulfonații prezentei invenții pot fi obținuți similar prin reacția compusului 4’- fenol protejat (I) cu un compus cu formula R⁶SO₂ - L. Reacția este condusă într-un solvent organic inert și în prezența unui acceptor de acid la o temperatură cuprinsă între temperatura camerei și aproximativ —20°C. îndepărtarea grupei fenol protectoare dă produsul final.

Este de înțeles că sinteza compușilor prezentei invenții nu este limitată la procedeele și reactivii schițați mai sus, putând include și alte metode capabile să introducă grupa fosfat sau sulfonat la grupa de zahăr a 4’- dimetilpipodofilotoxin glucozidelor. Condițiile de reacție vor fi bineînțeles variate în funcție de alegerea materialelor inițiale, dar pot fi stabilite de către un cadru calificat fără experimentări excesive.

Compușii din prezenta invenție pot fi utilizați la inhibarea creșterii tumorilor maligne în cazul mamiferelor incluzând omul. Unii compuși, în particular fosfații și sulfonații, pot fi considerați ca promedicamente ale 4’-dimetilpipodofilotoxin glucozidelor și care astfel sunt transformate în medicamentul activ inițial in vivo prin factori fie endogeni sau exogeni. Aceste promedicamente pot fi administrate singure sau în combinații cu un agent capabil să elibereze forma activă in vivo, de exemplu, enzime capabile să desfacă grupele fosfat sau sulfat. Exemple ale enzimelor corespunzătoare includ fosfataze cum ar fi fosfataza - alcalină și sulfataze cum ar fi arii - sulfataza. Enzima poate fi legată la anticorpul specific tumorii pentru a forma conjugatul enzimă - anticorp care poate ti apoi administrat organismului purtător al tumorii înainte de, în același timp cu, sau după administrarea promedicamentului. Promedicamentul plus conjugatul anticorp - enzimă este modul preferat în administrarea promedicamentului sulfat al prezentei invenții. Conjugații anticorp enzimă, metodele pentru prepararea lor și metodele pentru utilizarea lor sunt cunoscute.

Compușii reprezentativi ai prezentei invenții au fost evaluați pentru activitatea antitumorală contra murinei leucemici P 388 transplantabilă. Femele de șoareci CDF_X în vârstă de 5 săptămâni au fost inoculate intraperitoneal cu 0,4 ml de fluid ascitic diluat conținând 10⁶ celule de leucemnie limfocitică P 388. Compușii de testare au fost administrați intraperitoneal ca o doză unică în ziua 1 și animalele au fost observate timp de 45 zile. Creșterea procentului timpului mediu de supraviețuire (MST) ai animalelor tratate față de cel al animalelor netratate a fost determinată și reportată ca % T/C. Compușii care prezin10 tă valori % T/C de 125 sau mai mari sunt considerați a avea o activitate antitumorală semnificativă. Tabelul 1 prezintă rezultatele evaluării in vivo-, s-au prezentat numai maximum % T/C și dozele care dau efectul maxim.

Tabelul 1.

Activitatea antitumorală contra leucemiei P 388

Compus	Doză (mg/kg/zi)	% T/C a MST
Etoposide	120	250
XI	120	185
XII	30	120
XIII	30	125
XIV	60	195
XVIII	30	115
XIX	30	100
XXIII	120	175
XXIV	60	130
XXVI	30	130
XXVII	120	105
XXVIII	10	105

Citotoxicitatea compușilor din prezenta invenție a fost studiată utilizând celule de melanoma B16. Celulele de melanoma B16 au fost crescute la stadiu logaritmic 20 în mediu esențial Eagle minimum îmbogățit, suplimentat cu ser fetal de vițel (10%) și kanamicinâ (60 mcg/ml). Celulele tumorii au fost recoltate și implantate în cavitățile celor 96 plăci de microtitra- 25 re, cu materiale de testare la o mărime de inoculare d< 3,0 x IO⁴ celule/ml. Acestea au fost trecute în incubație la 37°C în atmosferă umidificată, cu 5% CO₂ și 95% aer pentru 72 h. Activitatea citotoxică față de linia de celule de mai sus a fost determinată colorimertric la 540 nm după colorarea celulelor viabile cu roșu neutral și este redată în termenii de concentrație care inhibă 50% din celulele tumorale (ICso). Valorile IC_W mai mari de 100țig/ml sunt considerate în general ca indicând o lipsă de activitate citotoxică.

Tabelul 2.

Citotoxicitatea in vitro fa^ă de B 16 melanoma

Compus	IC^pg/ml)
Etoposide	0,21
XI	2,2
XII	20
XIII	37
XVII	0,07
XVIII	5,4
XIX	30
XXIII	0,32
XXIV	29
XXVI	8,0

„ Invenția prezintă o metodă pentru inhibarea tumorilor mamiferelor, care cuprinde administrarea unei doze eficiente tumor -inhibitoare a unui compus antitumoial cu formula (V) sau (VI) unui orga- 5 nism - gazdă care are o tumoare. In acest scop medicamentul poate fi administrat pe căi convenționale incluzând, dar nu limitate la cele intravenoase, intramusculare, intratum orale, intraarteriale, intralimfatice 10 Și OFale. In anumite cazuri, medicamentul poate fi administrat în combinație cu un anticorp enzimă conjugat care poate activa mediacamentul in vivo.

Un alt aspect al prezentei invenții este 15 o compoziție farmaceutică care cuprinde un compus de formula V sau VI și un suport acceptabil din punct de vedere farmaceutic. Compoziția antitumorală poate fi realizată sub orice formă farma- 20 ceutică potrivită pentru calea de administrare dorită. Exemplele unor astfel de compoziții includ compoziții solide pentru administrarea orală cum ar· fi tabletele, capsulele, pastilele, pulberi și granule, 25 compoziții lichide pentru administrarea orală cum ar fi soluții, suspensii, siropuri sau elixirurile și preparatele pentru administrația parenterală cum ar fi soluțiile sterile, suspensiile sau emulsiile. Ele pot 30 fi de asemenea realizate în forma unor compoziții solide sterile care pot fi dizolvate în apă sterilă, soluție salină fiziologică sau alte medii injectabile imediat înainte de utilizare.

Dozajele și regtimurile optime, pentru un mamifer gazdă dat, pot fi repede stabilite de cei calificați în această tehnică. Se va aprecia, bineînțeles, că doza efectivă utilizată va diferi după compozița specifică formulată, compusul specific utilizat, modul administrării și locul particular, gazda și afecțiunea ce urmează a fi tratată. Muiți factori care modifică acțiunea medicamentului vor fi luați în considerare inclusiv vârsta, greutatea, sexul, dieta, timpul de administrare, calea de administrare, viteza de execuție, condiția pacientului, combinațiile de medicament, sezitivitățile reacției și severitatea bolii.

Invenția de față prezintă avantajul obținerii unor agenți cu activitate antitumorală.

Se dau în continuare exemple de realizare a invenției:

Exemplul 1. a) Prepararea a 4’-0-benziloxicarbonil etoposidă (VII)

Benzilcloroformiatul (1,98 ml, 15 mmol) s-a adăugat timp de 30 min într-un amestec de etoposidă (5,88 g, 10 mmol) și piridină (10 ml) în clorură de metilen (100 ml) ținută la -15°C.

Amestecul a fost agitat la -15°C timp de o oră, spălat succesiv cu 5% HC1, soluție bicarbonat de sodiu și apă și apoi uscat pe sulfat de sodiu anhidru. Solventul a fost evaporat rezultând 8,05 g produs brut care a fost purificat pe coloană cu silicagel (5% metanol - clorură de metilen) obținându-se 6,93 g (96%) de 4’- 0 benziloxicarbonil etoposidă sub formă de semisolid necolorat, punct de topire = 152 ... 155°C.

IRv_m„ (Nujol) cm'¹: 3200 - 3600 (OH, 1760 (lactonă 4’ - 0 - benziloxicarbonil), 1600 (aromatic)

1_H rmn (60 MHz, CDClj) δ 7,36 (5 H, s, OCO₂ CH₂Ph), 6, 81 (1 H, s, 5 - H), 6,50 (1 H, s, 8 H), 6,25 (2H, s, 2’ și 6’ - H), 5,94(2H, br.s, O-CH₂-O), 5,23 (2H,s, -OCO₂CH₂Ph), 4,89(14,d, J= 4 Hz, 4-H), 3,66 (6H, s,3’, 5’-OCHj) 2,8-3,0 (2H, m,2, 3-OH, D₂O înlocuit); 1,38 (3H, d, J = 5 Hz, 7” - CH₃)

b) fosfor ilare a a 4’-0-benziloxicarbonil etoposidă

Oxiclorură de fosfor (280 μΐ, 3 mmol), a fost încet adăugată într-o soluție rece (0°C) de 4’-0-benziloxicarbonil etoposidă (1,511 g, 2,1 mmol) în clorură de metilen uscată (10 ml) și piridinâ (10 ml), iar amestecul a fost agitat la 0°C timp de 45, min. Apoi s-a adăugat alcool benzilic (620 μΐ, 6 mmol) și s-a încălzit amestecul de reacție la temperatura camerei, iar după ce a fost agitat timp de două ore, s-a diluat cu clorură de metilen (50 ml), s-a spălat cu apă și s-a uscat pe sulfat de sodiu. Solventul a fost evaporat în vid pentru a da 2,40 g de produs semi-solid brut conținând trei componenți (cromatografie pe strat subțire de silicagel: R₇ 0,66, 0,54 și 0,46) care au fost separați prin cromatografie pe silicagel (1% metanol - clorură de metilen). Fracțiunile prezentând un spot cu R_t—0,66 au fost combinate și evaporate în vid pentru a da

435 g (21%) de 4’-benziloxicarbonil etoposidă 3 - dibenzil fosfat ester (VIII). Similar, fracțiunile cu Rf 0,54 și 0,46 au dat 352 mg (21%) de bis (4’-benziloxicarboniletoposid 3-0-) benzii fosfat ester (IX) §i respectiv 262 mg (13%) de 4'-benziloxicarbonil etoposidă 2-dibenzil fosfat ester (X).

IR v max (Nujol) cm¹

VIII 3300 (br), 1760, 1600

IX 3300 (br), 1760, 1600

X 3350, 1760, 1600

c) Prepararea sării disodice a 3 -și 2etoposidă fosfaților și a sării sodice a bis (etoposidil -3-) fosfatului

O soluție de 4’-benziloxicarbonil etoposid 3-dibenzil fosfat ester (270 mg) în metanol (20 ml) și acetat de etil (20 ml) conținând paladiu 10% pe cărbune (50 mg) a fost hidrogenată la 1 at timp de o oră. Catalizatorul a fost îndepărtat prin filtrare și filtratul a fost concentrat în vid pentru a da 188 mg de produs semisolid, care a fost triturat cu acetat de etil pentru a da 145 mg (79%) de etoposidă 3-dihidro fosfat sub forma unei pulberi brun deschis. O probă de 135 mg din produsul de mai sus a fost dizolvat în-tr-o soluție apoasă de bicarbonat de sodiu (33,6 mg în 2 ml apă) și liofilizată pentru a da 140 mg de sare disodică de etaposidă 3-fosfat (compusul XI) sub forma unei pulberi gri; puritatea estimată: 95% determinată prin HPLC (Lichrosorb RP-18, 70% MeOH-H₂O), punct de topire = 262 ... 263°C (dese.).

IR v max (Nujol) cm'¹: 3377 (br), 1762, 1615

UV λ max (MeOH) nm (ε): 238 (sh, 13000), 285 (4010)

SIMS m/z: 713 (M + Hf

Conform procedeului de mai sus, 97 mg 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2-dibenzil fosfat ester a fost hidrogenat obținându-se 70 mg (cca. 100%) sare disodică de etoposidă 2-fosfat (compusul XII) sub formă de pulbere gri.

Puritate estimată: 95% prin HPLC

Punct de topire 255 ... 257°C (dese.)

IR v ^(KBr) cm¹: 3460, 1772, 1615

UV λ nm (ε): 240 (sh, 12600), 284 (3740)

SIMS m/z 713 (Μ + H)*, 735 (M + +Na)⁺

Similar, 135 mg de bis (4’-benziloxicarbonil etoposidă-3-) benzii fosfat ester a fost hidrogenat pentru a da 60 mg (58%) de sare sodică de bis (etoposidă3-) fosfat (compusul XIII) sub forma unei pulberi gri deschis. Puritatea estimată: 95% prin HPLC.

Punct de topire 265 ... 266°C (dese.)

IR v (KBr) cm¹: 3460, 1772, 1620

UV λ (MeOH) nm (ε): 240 (sh, 24600), 285 (7730)

SIMS m/z: 1262 (Μ + H)\ 1285 (M + +Na + 1)*

Exemplul 2. a) Tosilarea 4’-benziloxicarbonil etoposidei

4- dimetilamino piridină (200 mg) și clorură de tosil (870 mg, 4,6 mmol) au fost adăugați la o soluție de 4’-benziloxicar'oonil etoposidă (produs, conform exemplului 1, etapa a, 2,2 g, 3 mmol) în piridină uscată (50 ml) la 0°C, iar amestecul a fost agitat timp de 3 zile la temperatura camerei.

5- au adăugat amestecului site moleculare (4 Â) și clorură de tosil suplimentară (870 mg, 4,6 mmol) și s-a continuat agitarea pentru o săptămână la temperatura camerei. La sfârșitul perioadei precipitatul a fost filtrat, s-a diluat cu CH2CI2, s-a spălat cu apă, HC1 5%, soluție apoasă NaHCOj și apă, s-a uscat pc sulfat de sodiu anhidru și apoi s-a concentrat în vid pentru a da un produs solid (2,35 g) conținând trei cornponenți (cromatografie pe strat subțire de silicagel: Rf = 0,8; 0,6 și 0,4) care a fost separat prin cromatografie pe coloană de silicagel (2% MeOH-CH₂ CI2).

Fracțiunile care prezintă un spot cu Rf = 0,8 au fost combinate și evaporate în vid pentru a da 602 mg (19%) de 4’-ben14 ziloxicarbonil etoposidă 2, 3-ditosilat (XIV), sub formă de pulbere necolorată. Similar, fracțiunile cu Rf = 0,6 și Rf = 0,4 au dat 690 mg (26%) 4’-benziloxicarbonil etoposidă 3-tosilat (XV) și respectiv 156 mg (6%) 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2tosilat (XVI) sub forma unei higroscopice fără culoare.

4’-benziloxicarbon.il etoposidă 3 - tosilat (XV)

Punct de topire 145 ... 148°C

Analiza elementară pentru: C^H^OpS· •3H₂O

- calculat: C=56,77; H=5,41; S=3,44

- găsit: C=56,84; H=4,9l; S=3,90 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2-tosilat (XVI)

Punct de topire 135 ... 139°C

Analiza elementară pentru C^H^OpS· •3H₂O

- calculat: C=56,77; H=5,41; S=3,44

- găsit: C=56,61; H=4,89; S=3,70 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2, 3ditosilat (XIV)

Punct de topire 149 ... 152°C b) Prepararea etoposidei 3 -și 2 tos ilarilor și a 2, 3 - ditosilatului

O soluție de 4’-benziIoxicarbonil etoposidă 3 - tosilat (47 mg. 0,05 mmol) în ' etanol - acetonă (4: 1, 2, 5 ml) sub agitare, a fost hidrogenată la 1 at timp de o oră în prezență de paladiu 10% pe carbon (40 mg). Catalizatorul a fost filtrat, iar Filtratul a fost concentrat în vid pentru a da etoposidă 3 - tosilat (compusul XVII) (42 mg, cca 100%) sub forma unei pulberi fără culoare care a fost apoi recristalizată din metanol pentru a da produsul sub formă de cristale necolorate.

Puritatea estimată 90% prin HPLC

Punct de topire 175... 178°C

IR v (KBr) cm'¹ 3500 (br), 1780,

1600

UV λ (MeOH) cm (ε) 245 (sh,

10260), 284 (3900)

Analiza elementară pentru C_% H_w O15S:

- calculat: C=58,21; H=5,16; S=4,32

- găsit: C=57,80; H=5,14; S=4,43 Conform cu procedeul de mai sus, 100 mg (0,09 mmol) 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2 - tosilat a fost hidrogenat pentru a da 114 mg (100% etoposidă 2 tosilat (compusul XVIII) pulbere fără culoare care a fost recristalizată din metanol pentru a da produsul sub forma unor cristale higroscopice.

Puritatea estimată 90% prin HPLC

Punct de topire 210 ... 212°C

IR v (KBr) cm¹ 3500 (br), 1780, 1600

UV λ (MeOH) nm (ε) 243 (sh, 4560), 282 (1450)

Analiza elementară pentru:

H₂O

- calculat: C=56,83; H=5,30; S=4,21

- găsit: C=56,87; H=5,37; S=4,19

Similar, 80 mg (0,08 mmol) 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2, 3 - ditosilat a fost hidrogenat pentru a da 72 mg (100%) etoposidă 2, 3 - . ditosilat (compusul XIX) siib forma unei pulberi fără culoare care a fost recristalizată din metanol pentru a da produsul sub, formă de cristale fără culoare.

Puritatea estimată 90% prin HPLC

Punct de topire 169 ... 171^UC

IR v _max (KBr) cm¹ 3400 (br.), 1770, 1600

UV λ (MeOH) nm (ε) 245 (sh, 11750), 284(3840)

Exemplul 3. a. Mesilarea 4’-benziloxicarbonil etoposidei

S-a adăugat clorură de mesil (270 μΐ, 2,8'mmol) unei soluții de 4’-benziloxicarbonil etoposidă (1,00 g, 1,4 mmol) în piridină uscată (50 ml) și amestecul a fost agitat peste noapte la temperatura camerei. Amestecul de reacție a fost diluat cu acetat de etil; spălat cu apă, 5% HC1, soluție apoasă de bicarbonat de sodiu și apă, uscat pe sulfat de sodiu și apoi filtrat. Filtratul a fost concentrat în vacuum rezultând un solid brut (1,4 g) conținând 3 componenți (silicagel TLC: Rf 0,51, 0,44 și 0,40) care au fost separați pe coloană cromatografică cu silicagel (1% metanol clorură de metilen). Fracțiunile arătând un spot cu Rf = 0,51 au fost combinate și evaporate în vacuum pentru a da 440 mg (36%) de 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2, 3 dimesilat (XX). In mod similar, fracțiunile cu Rf = 0,44 și 0,40 au furnizat 314 mg (32%) de 4’-benziloxicârbonil etoposidă 3mesilat (XXI) și 248 mg (26%) de 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2-mesilat (XXII), sub forma unor pulberi tară culoare.

4'-benziloxicarbonil etoposidă 3 - mesilat (XXI)

Punct de topire 167 ... 170°C

Analiza elementară pentru: C^H^O^S. 1/2 H₂O

- calculat: C=56,36; H=4,98; S=3,96

- găsit: C=56,23; H=5,06; S=4,14

4'- benziloxicarbonil etoposidă 2 mesilat (XXII)

Punct de topire 159 ... 161°C; higroscopică Analiza elementară pentru: C^H^OpS. 3H₂O

- calculat: C=55,13; H=5,ll; S=3,87

- găsit: C=55, 29; H=5,00; S=4,00

4' - benziloxicarbonil etoposidă 2, 3 dimesilat

Punct de topire 226 ... 228°C

Analiza elementară pentru C3qH₄₂O_1qS₂. 1/2 H₂O

- calculat: C=52,76; H=4,77; S=7,22

- găsit: C=52,78; H=4,77; S=7,3l

b. prepararea etoposidei 3 - și 2 mesilați

O soluție de 4’-benziloxicarbonil etoposidă 3-mesilat (60 mg, 0,07 mmol) în etanol -acetonă (4:1,2,5 ml)agitată, a fost hidrogenată la 1 at timp de o oră în prezență de paladiu 10% pe carbon (30 mg). După ce catalizatorul a fost filtrat, filtratul a fost concentrat în vacuum pentru a furniza etoposidă 3 - mesilat (compusul XXIII) sub forma unei pulberi fără culoare

Puritate estimată: 90% prin HPLC.

Punct de topire 226 ... 229°C

IR v (KBr) cm¹ 3500 (br), 1770, 1610

UV λ _max (MeOH) nm (ε) 740 (sh, 12.900), 286 (3,950) în mod similar, 30 mg (0,04 mmol) de 4’-benziloxicarbonil etoposidă 2 - mesilat a fost hidrogenată pentru a da 23 mg (94%) de etoposidă 2 - mesilat (compusul XXIV) sub formă de pulbere fără culoare.

Puritate estimată 95% prin HPLC.

Punct de topire 179 ... 181°C

IR v (KBr) cm⁴ 3500 (br), 1770, 1620

UV λ (MeOH) nm (ε) 240 (sh, 12.200), 285 (3,950)

Exemplul 4. Ln amestec de 4’-benziloxicarbonil etoposidă (350 mg, 0,5 mmol) și clorură de difenilfosfonil (322 mg, 1,2 mmol) a fost agitat la temperatura camerei 2 zile; diluat cu clorură de metilen (50 ml); spălat cu apă, 10% HC1 și soluție apoasă de bicarbonat de sodiu; și apoi uscat pe sulfat de sodiu anhidru. Solventul a fost evaporat în vacuum rezultând 4’benziloxicarbonil etoposidă 3-difenil fosfat (XXV) sub forma unui semi-solid brut (290 mg). O soluție a acestui semisolid (190g) agitată, a fost hidrogenată la 1 at cu paladiu 10% pe carbon drept catalizator. După ce catalizatorul a fost filtrat, filtratul a fost concentrat în vacuum rezultând 131 mg semi-solid brut care a fost apoi cromatografiat pe o coloană cu silicagel (1% metanol - clorură de metilen) pentru a furniza 59 mg(20%) de etoposidă 3-difenil fosfat (compusul XXVI).

Puritate estimată: 80% prin HPLC.

Punct de topire =126 ... 130°C

IR v _max (Nujol) cm⁴ 3350, 1770, 1600

FAB MS m/z 820 (M')

Exemplul 5. Prepararea sulfaților de sodiu ai 3 - și 2”-etoposidei

Unei soluții de 4’-benziloxicarbonil etoposidă (500 mg, 0,69 mmol) în piridină uscată (20 ml), sub atmosferă de argon, i s-a adăugat un complex trioxid de sulf - piridină (330 mg, 2,07 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 3 h, s-a adăugat suplimentar complexul trioxid de sulf - piridină (250 mg, 1,59 mmol) și s-a agitat la temperatura camerei timp de 15 h. Amestecul a fost concentrat în vacuum sub 40°C, rezultând un ulei brut (1,2 g) care a fost cromatografiat pe o coloană cu silicagel (2% MeOH - CH₂Cl2) obținându-se un amestec de 2- și 3 - sulfați (411 mg). O soluție a acestui amestec (400 mg, 0,49 mmol) în C₂H₅OH - acetonă (4:1, 15), agitată, a fost hidrogenată cu paladiu 10% pe carbon (400 mg) la 1 at. Catalizatorul a fost îndepărtat prin filtrare și filtratul s-a concentrat în vacuum rezultând 370 mg de amestec de regioizomeri, care s-au separat prin cromatografie pe coloană cu fază inversă C₁₈, pentru a da 52 mg (16%) 3sulfat (XXVII), 107 tng(32%) 2 - sulfat (XXVIII) și 138 mg de aceste amestecuri. 3-sulfat a fost trecut printr-o coloană cu rășină Dowex 5ON (Na⁺) cu apă. Fracțiunile solubile în apă au fost liofilizate pentru a da sarea de sodiu corespunzătoare compusului XXVII sub formă de pulbere fără culoare. în mod similar, sarea de sodiu a compusului XXVIII a fost obținută sub forma unei pulberi fără culoare.

XXVII: pt. 223 - 225°C. Puritate estimată: 90% prin HPLC

IR v (KBr) cm⁴ 3440, 1770, 1620

UV λ (MeOH) nm (ε) 240 (sh, 11.600), 284 (3,670)

SIMS m/z 691 (M + Hf, 713 (M + + Na)'

XXVIII p.t. 246-247°C Puritate estimată: 95% prin HPLC

I.R. v (KBr) cm⁴ 3450, 1770, 1620

UV λ (MeOH) nm (ε) 240 (sh, 11, 200), 285 (3,650) SIMS m/z 691 (M + H)\ 713 (Μ + Na/ piele 1 ... 5 sunt arătate mai jos:

Structurile compușilor preparați fnexem-

Ex.	Compus	R1	R5	R8
lb	IX	ch3	CBZ	Bz
lc	XIII	ch3	H	Na'

(V)

Ex.	Compus	R1	R3	R4	R5
1 a	VII	ch3	- OH	- OH	CBZ*
1 b	VIII	ch3	(BzO)2P02-	- OH	CBZ
1 b	X	ch3	OH	(BzO)2PO2-	CBZ
1 c	XI	ch3	(NaO)2PO2-	- OH	Η
1 c	XII	CHj	- OH	(NaO)2PO2-	H
2 a	XIV	ch3	pCH3-C6H4-SOj	pCH3-C6H4-SO3	CBZ
2 a	XV	ch3	pCH3-C6H4-SOj	OH	CBZ
2 a	XVI	ch3	- OH	pCHj-C6H4-SO3-	CBZ
2 b	XVII	CHj	pCH3-C6H4-SOj	OH	H
2b	XVIII	CHj	OH	pCHj-C6H4-SO3-	H
2 b	XIX	CHj	pCHj-C6H4-SO3	pCH3-C6H4-SOj-	H
3 a	XX	CHj	CHjSOj-	CHjSOj-	CBZ

continuare tabel

Ex.	Compus	R1	R3	R4	R5
3 a	XXI	CH,	CH3SOj-	OH	CBZ
3 a	XXV	CH3	OH	CH3SO3-	CBZ
3 b	XXIII	CHj	CH3SO3-	OH	H
3 b	XXIV	ch3	OH	CH3SO3-	H
4	XXV	ch3	(PhO)2PO2	OH	CBZ
4	XXVI	CHj	(PhO)2PO2	OH	H
5	XXVII	CH,	BaSO4-	OH	H
5	XXVIII	CHj	OH	NaSO4-	H

CBZ = benziloxicarbonil; Bz - benzii

Exemplul 6. Procedeele generale descrise în exemplele 1 la 5 sunt repetate cu teniposidă în loc de etoposidă pentru a furniza analogi de teniposidă ai compușilor VII - XXVIII (de pildă R¹ este 2 tienil).

Revendicări

Claims (31)

1. Derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxin-glucozide, caracterizați prin aceea că, au formula structurală:

în care R² este H iar R¹ este selectat dintrun grup constând Jin (C_biu) alchil; (C₂.₁₀) alchenil; (C₅.₆) cicloalchil; 2-furil; 2tienil; (C₆.₁₀) arii; (C₇.₁₄) aralchil; și (C₈._I4) ar-alchenil, unde fiecare din inelele aromatice poate fi nesubstituit sau substituit cu una sau mai multe grupe selectate dintre halogen (C_b8) alchil, (C_b8) alcoxi, hidroxi, nitro și amino; sau R¹ și R² suni fiecare (C_b8) alchil; sau R¹ și R² și carbonul la care sunt atașați pentru a forma o grupă (C,^) cicloalchil; R³ și R⁴ sunt selectați din grupul constând din -OH, - OSO2R⁶, 5 OSOjH și sărurile acestora acceptibile farmaceutic și -OP(X) (OR⁷)2, unde R⁶ este hidrogen, (C_b5) alchil, fenil, (C_b5) alchil fenil substituit sau fenil (C,._s) alchil; R⁷ este o grupă protectoare a fosfatului; X este

10 oxigen, sau sulf cu condiția câ R³ și R⁴ să nu fie amândoi OH; și R' este H sau o grupă protectoare pentm fenol.

2. Derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxinglucozide, conform revendicării 1, caracte15 rizați prin aceea că, au formula generală I:

în care:

R² este H și R¹ este selectat din grupul constând din (C_bl0) alchil; (C₂.₁₀) alchenil; (C₅.₆) cicloalchil; 2-furil; 2-tienil; (C₆.₁₀) arii; (C₇.₁₄) ar-alchil; și (C₈.₁₄) ar-alchenil unde fiecare din inelele aromatice poate fi nesubstituit sau substituit cu una sau mai multe grupe selectate dintre halogen, (C_{b 8}) alchil, (C^s) alcoxi, hidroxi, nitro, și amino; sau R¹ și R² sunt fiecare (Ct.8) alchil; sau R¹ și R² și carbonul la care ei sunt atașați pot forma o grupă (C5.₆) cicloalchil, R³ și R⁴ sunt selectați din grupul constând din OH-OSO2R⁶, - OP(X) (OH)2 și sărurile lor acceptabile farmaceutic, și -OP(X) (OR⁷)2, unde R⁶ este hidrogen, (C[.5) alchil, fenil, (C_b5) alchil fenil substituit sau fenil (Q.s) alchil; R⁷ este o grupă protectoare a fosfatului; X este oxigen sau sulf; cu condiția ca R³ și R⁴ să nu fie amândoi OH; și R⁵ este H sau o grupă protectoare a fenolului.

3. Compus, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R² este H și R¹ este 2-tienil.

4. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R² este H iar R¹ este 2-tienil.

5. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R² este H iar R¹ este metil.

6. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R³ și R⁴ sunt selețtate independent din grupul constând din OH,-OSO2R⁶, și -OP (X) (OR⁷)2 unde R⁶, R⁷ și X sunt definite anterior cu condiția ca R³ și R⁴ să nu fie amândouă OH.

7. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R³ și R⁴ sunt independent OH sau -OP(X) (OH)₂ unde X este definit mai sus cu condiția ca R³ și R⁴ să nu fie amândoi OH, sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic.

8. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R³ este OH, R⁵ este H, iar R⁴ este -OP(O) (OH)₂; sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic.

9. Compus, conform revendicării 2, caracterizat prin aceea că, R⁴ este OH, R⁵ este H, și R³ este -OPfO) (OH)₂; sau o sare a acestuia acceptabilă farmaceutic.

10. Derivat, conform revendicării 8, caracterizat prin aceea că, compusul poate fi sub formă de sare disodică.

11. Derivat, conform revendicării 9, caracterizat prin aceea că, compusul poate fi sub forma de sare disodică.

12. Compus, conform revendicării 6, caracterizat prin aceea că, R⁷ este selecționat din grupul constând din (C^j) alchil ’ substituit, opțional cu unul sau mai mulți atomi de halogen; fenil substituit opțional cu una sau mai multe grupe selectate dintre (Cj.j) alchil, halogen și nitro; iar fenil (Q.j) alchil unde ciclul fenil este substituit opțional cu una sau mai multe grupe selecționate dintre (Ο_μ5) alchil, halogen și nitro.

13. Compus, conform revendicării 12, caracterizat prin aceea că, R⁵ este benziloxicarbonil.

14. Compus, conform revendicării 12, caracterizat prin aceea că, R^? este H.

15. Compus, conform revendicării 14, caracterizat prin aceea că, R⁴ este OH.

16. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R³ este -OSO₂

- (p-tolil).

17. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R³ este -OSO₂-ch₃.

18. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R³ este -OP(O) (O-C₆H₅)₂.

19. Compus, conform revendicării 14, caracterizat prin aceea că, R³ este OH.

20. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R⁴ este -OSO₂- (p-tolil).

21. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R⁴ este -OSO₂- CH₃.

22. Compus, conform revendicării 15, caracterizat prin aceea că, R⁴ este -OP(O) (O-QsHsh.

23. Compus, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R² și R' sunt fiecare H, R^J este metil, R³ este -OSO₃H, iar R⁴ este OH; sau o sare a acestuia accep106742 tibilă farmaceutic.

24. Compus, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, R² și R⁵ sunt fiecare H, R¹ este metil, R⁴ este-OSOjH și R³ este OH; sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia.

25. Compus, conform revendicării 3, caracterizat prin aceea că, R² și R⁵ sunt fiecare H, R¹ este 2-tienil, R³ este -OSO₃H, și R⁴ este OH; sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia.

26. Compus, conform revendicării 3, caracterizat prin aceea că, R² și R^? reprezintă fiecare H, R¹ este 2-tienil, R⁴ este -OSO₃H și R₃ este OH; sau o sare farmaceutică acceptabilă a acestuia.

27. Derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxin-glucozide, caracterizați prin aceea că, se utilizează la inhibarea tumorilor la mamifere prin administrarea compusului sub forma unei compoziții având un suport farmaceutic convențional și în anumite cazuri putând fi administrat în combinație cu un anticorp enzimă conjugat.

28. Procedeu pentru prepararea compusului, conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, cuprinde etapele::

a) protejarea grupei 4’ - fenolice a compusului cu formula I a:

unde R¹ și R² sunt definiți în revendicarea 1; apoi

b) reacția produsului 4’-fenol protejat din etapa (a) cu un compus selectat din grupul

5 constând din SO₃, R⁶SO₂C1 și (R⁷ O)P(X) CI unde R⁶, R⁷ și X sunt definiți în revendicarea 1;

c) îndepărtarea opțională a grupei R⁷ protectoare a fosfatului;

10 d) îndepărtarea opțională a grupei protectoare a 4’-fenolului; și

e) separarea izomerilor.

29. Derivați de 4’-dimetilpipodofilotoxinglucozide, conform revendicării 1, carac15 terizați prin aceea că, au formula structurală VI:

o sare farmaceutic acceptabilă, sau R⁷, R¹,

30 R², R⁵ și R⁷ au semnificațiile de mai sus.

30. Compus, conform cu revendicarea

27, caracterizat prin aceea că, R¹ este metil, R², R^s și R⁸ \reprezintă H; sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia.

35 31. Compus, conform revendicării 28, caracterizat prin aceea că, este sarea de sodiu a compusului 1.