PT1607399E

PT1607399E - Bis-(n,n'-bis-(2-haloetil)amino)fosforamidatos como agentes antitumorais

Info

Publication number: PT1607399E
Application number: PT05020467T
Authority: PT
Inventors: Robert T Lum; Steven R Schow; Jason R Herr; Michael R Kozlowski; Pavel Zhichkin; Fanying Meng
Original assignee: Telik Inc
Priority date: 2000-05-02
Filing date: 2001-05-02
Publication date: 2010-02-02
Also published as: ES2253380T3; CN1182143C; NO20025240L; EP1278759A1; NO20025240D0; CN1427844A; ES2337154T3; EA006852B1; KR100729980B1; NO328854B1; DE60116081D1; AU2001261153B2; CA2407606C; WO2001083496A1; EP1607399A2; MXPA02010813A; NO331833B1; ATE313549T1; PL207005B1; DK1607399T3

Description

ΡΕ1607399 ι DESCRIÇÃO "BIS-(N,N'-BIS-(2-HALOETIL)AMINO)FOSFORAMIDATOS COMO AGENTES ANTITOMORAIS" O presente invento relaciona-se com compostos químicos, composições farmacêuticas, e processos para a sua preparação. Mais especificamente, os compostos possuem actividades anti-tumorais ou são capazes de serem modificados para que apresentem actividades anti-tumorais. Assim, este invento relaciona-se particularmente com a utilização dos compostos para o tratamento de tumores e, especialmente, para o tratamento do cancro, assim como com os processos para preparação dos compostos.

Os protocolos comuns de quimioterapia do cancro envolvem a administraçãop a pacientes de fármacos anti-mitóticos tais como adriamicina, vincristina, cisplatina, doxorubicina, daunomicina e metotrexato, toxinas tais como toxina da difteria, toxina de pseudomonas e rícino, e fármacos anti-tumorais tais como ciclofosfamida e isofosfamida. A ciclofosfamida é um dos agentes contra o cancro mais amplamente usado em todo o mundo e é administrado em combinação com um certo número de outros fármacos para o tratamento de uma ampla variedade de tumores hematológicos e sólidos. Contudo, vários aspectos da ciclofosfamida depreciam a sua eficácia clínica. Por 2 ΡΕ1607399 exemplo, o fármaco requere activação metabólica no fígado para produzir metabolitos que sejam tóxicos para as células do cancro. O fármaco é especificamente tóxico para a bexiga, e também apresenta toxicidade em relação à medula óssea típica da classe do agente de alquilação dos fármacos utilizados contra o cancro. A ciclofosfamida é um potente supressor do sistema imunitário nas doses utilizadas para tratar o cancro, diminuindo desse modo a capacidade para combater a infecção de pacientes já debilitados pela sua doença. Finalmente, a utilização repetida de ciclofosfamida dá origem frequentemente ao desenvolvimento de resistência ao fármaco nas células cancerosas do paciente, tornando assim o fármaco ineficaz.

Os derivados da fosforamida são há muito conhecidos na literatura e encontram-se bem documentados como reagentes de alquilação. Verificou-se que alguns deles são úteis no tratamento do cancro; ver, por exemplo, H. Kroger et al., Arzneimittel Forschung. Drug Research, vol. 9, no. 10, 1959, páginas 598-600; e H. Arnold et al., th

Arzneimittel Forschung Drug Research, vol. 11, no. 2a, 1961, páginas 143-158. Para uma revisão ver, De Vita, "Principies of Câncer Therapy", páginas 765-788 em Petersdorf et al., Principies of Internai Medicine, 10 ed. McGraw-Hill, N.Y., 1983.

Análogos da ciclofosfamida são também conhecidos na literatura e foram extensivamente derivatizados (Ciclofosfamida, Merck Index, 11a Edição páginas 429-430, 3 ΡΕ1607399 US5190929) . Contudo, tem havido relativamente poucas referências a bis-(N,N'-(2-cloroetil)amino)fosforamidatos (DE195245515, US5306727, WO9306120, DE3835772, GB2207674, DE3239858, EP072531). US5556942 apresenta o composto j

O em que Z é bromo, e R é hidrogénio, ou R é cloro como um intermediário de reacção sintética.

Sumário do Invento

Um aspecto do invento relaciona-se com uma nova classe de compostos fosforamidato os quais são representados pela Fórmula I:

X

R-Q | \ s.

X (I) onde: X é halogéneo; Q é NH; e 4 ΡΕ1607399 R é R'CO-, R'NHCO-, R'S02-, OU R'NHS02-, onde R' é hidrogénio, Ci-6 alquilo, Ci-6 alquilo substituído, C6-14 arilo, Cê-14 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Outro aspecto da invenção diz respeito a novos compostos fosforamidato de Fórmula I onde: X é halogéneo; Q é S; e R é hidrogénio, C1-6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído, C6-i4 arilo, C6-14 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído, ou é R'CO-, R'NHCO-, R'S02-, ou R'NHS02-, onde R' é hidrogénio, Ci-6 alquilo, C1-6 alquilo substituído, C6-14 arilo, Cê-i4 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído; em que o referido Ci_6 alquilo substituído é mono-, di-, ou tri-substituído with C6-14 arilo, C6-14 arilo substituído com R1, C5-14 heteroarilo, nitro, ciano, halogéneo, -OR1, -SR1, -C(0)r\ -0C(0)r\ -CÍOJOR1, -NR22, -so2or\ -OSO^1, -SO^R^, -NR^O^1, -CONR^, ou -NRXC (O) R1, em que cada R1 é, independentemente, hidrogénio, Ci_6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído com R2, Cê-i4 arilo, C6-i4 arilo substituído com R2, C5_i4 independentemente, hidroxi, heteroarilo, C5-14 heteroaril-Ci-6 alquilo, C6-i4 aril-Ci_6 alquilo substituído com R2, ou C6-i4 aril-Ci^6 alquilo e cada R2 é, 5 ΡΕ1607399 halogéneo, Ci-6 alquiloxi, ciano, tio, nitro, Ci_6 alquilo, halo-Ci-6 alquilo ou amino; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

Ainda outro aspecto do invento relaciona-se com uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula I em mistura com pelo menos um veiculo farmaceuticamente aceitável. De um modo especifico, a composição tem como finalidade o tratamento do cancro ou de outras doenças que possam beneficiar de um agente anti-mitótico.

Um outro aspecto do invento relaciona-se com a utilização de um composto da fórmula I no tratamento do cancro e de outras doenças que possam beneficiar de um agente anti-mitótico num mamifero.

Ainda um outro aspecto do invento relaciona-se com um processo para a preparação de um composto da Fórmula I.

Descrição Detalhada Do Invento

Definições:

Os termos aqui usados baseiam-se nos seus significados reconhecidos e deverão ser claramente compreendidos pelos especialistas nesta técnica. 6 ΡΕ1607399 O termo "halogénio" ou "halo" significa bromo, iodo, fluoro, ou cloro. O termo "alquilo", tal como em "alquilo" ou "alquiloxi", significa uma porção hidrocarbilo Ci-Cê monovalente a qual pode ser linear, ramificada, ou ciclica. Este termo é exemplificado por radicais tais como, metilo, etilo, isopropilo, propilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, tert-butilo, pentilo, hexilo, ciclopentilo, ciclopropil-metilo ou ciclo-hexilo. 0 termo "alquilo substituído" é um alquilo que é tipicamente mono-, di-, ou tri-substituido com arilo, arilo substituído com R1, heteroarilo, nitro, ciano, halogéneo, -OR1, -SR1, -C(0)R\ -(X(O)R1, -C(0)0R1, -NR'2, -SO2OR1, -OSO2R1, -S02NR12, -NRSO2R1, -CONR12, ou -NRC(0)R\ em que cada R1 é, independentemente, hidrogénio, alquilo, alquilo substituído com R2, arilo, arilo substituído com R2, heteroarilo, heteroarilalquilo, arilalquilosubstituído com R2, ou arilalquilo e cada R2 é, independentemente, hidroxi, halogéneo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloal-quilo ou amino. São particularmente preferidos alquilos substituídos que são substituídos com um a três dos substituintes seleccionados a partir do grupo constituído por ciano, halo, alquiloxi inferior, tio, nitro, amino, e hidroxi. O termo "haloalquilo" significa um alquilo substituído com um a três grupos halo, e é ainda exemplificado por radicais tais como -CF3, -CH2CF3 e -CH2CC13. 7 ΡΕ1607399 O termo "arilalquilo" significa um radical alquilo inferior que é substituído com um arilo. Um "arilalquilo substituído" significa um radical arilalquilo tendo um a três substituintes na porção arilo ou na porção alquilo do radical, ou em ambas. O termo "heteroarilalquilo" significa um radical alquilo que é substituído com a heteroarilo. A "heteroarilarilo substituído" significa um radical heteroarilalquilo tendo um a três substituintes na porção heteroarilo ou na porção alquilo do radical, ou em ambas. O termo " alquiloxi" significa um radical -OR3, onde R3 é alquilo. O termo "arilo", tal como em "arilo", "ariloxi", e "arilalquilo", significa um radical derivado de um hidrocarboneto aromático contendo 6 a 14 átomos de carbono no anel, tendo um anel simples (por exemplo, fenilo), ou dois ou mais anéis condensados, de preferência 2 a 3 anéis condensados (por exemplo, naftilo), ou dois ou mais anéis aromáticos, de preferência 2 a 3 anéis aromáticos, os quais estão ligados por uma simples ligação (por exemplo, bifenilo). O radical arilo pode ele mesmo ser substituído, várias vezes ou uma só vez, com uma porção tal como um alquilo, um alquilo substituído, halogéneo, ciano, nitro, -SR1, -OR1, -C(0)R\ -0C(0)R\ -SO2OR1, -OSO2R1, -S02NR12, -NRSO2R1, -CÍOJOR1, -NRx2, -CONR^, ou -NRC (O)R1, em que cada ΡΕ1607399 R1 é, independentemente, hidrogénio, alquilo, alquilo substituído com R2, arilo, arilo substituído com R2, heteroarilo, heteroarilalquilo, arilalquilo, ou arilalquilo substituído com R2 e cada R2 é, independentemente hidroxi, halo, alquiloxi inferior, ciano, tio, nitro, alquilo inferior, haloalquilo ou amino. O termo "arilo substituído" significa um arilo substituído com um a três substituintes seleccionados a partir de alquilo, alquilo substituído, halogéneo, ciano, nitro, -SR1, -OR1, -C{0)R\ -(X(O)R1, -SO2OR1, -0S02r\ -S02NR12, -NRSChR1, -C (0) OR1, -NR12, -CONR^ ou -NRCÍOJR1, onde cada R1 é, independentemente, hidrogénio, alquilo, alquilo substituído com R2, arilo, arilo substituído com R2, heteroarilo, heteroarilalquilo, arilalquilo, ou arilalquilo substituído com R2 e cada R2 é, independentemente hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloalquilo ou amino. Para além disso, quaisquer dois substituintes adjacentes no arilo podem, facultativamente, formar em conjunto um alquilenodioxi. Substituintes particularmente preferidos no arilo substituído incluem hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, halo-alquilo, ou amino. 0 termo "heteroarilo", tal como em heteroarilo e heteroarilalquilo, significa um radical derivado de um hidrocarboneto aromático contendo 5 a 14 átomos no anel, 1 a 5 dos quais são heteroátomos escolhidos, de um modo independente, de entre N, O, ou S, e inclui anéis 9 ΡΕ1607399 aromáticos monocíclicos, heterocíclicos condensados, e carbocíclicos e heterocíclicos condensados (por exemplo, tienilo, furilo, pirrolilo, pirimidinilo, isoxazolilo, oxazolilo, indolilo, isobenzofuranilo, purinilo, isoquinolilo, pteridinilo, imidazolilo, piridilo, pira-zolilo, pirazinilo, quinolilo, etc.). O termo "heteroarilo substituído" significa um heteroarilo que pode ter desde um a três substituintes tais como um alquilo, alquilo substituído com R1, halo, ciano, nitro, -SR1, -OR1, -CÍOJR1, -(X(O)R1, -SO2OR1, -OSO2R1, -S02NR12, -NRSO2R1, -C (O) OR1, -NR12, -CONR^, OU -NRC (O) R1, onde cada R1 é independentemente hidrogénio, alquilo, alquilo substituído com R2, arilo, arilo substituído com R2, heteroarilo, heteroarilalquilo, arilalquilo, ou arilalquilo substituído com R2 e cada R2 é, independentemente, hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloalquilo, ou amino. Para além disso, quaisquer dois substituintes adjacentes no heteroarilo podem, facultativamente, formar em conjunto um alquilenodioxi. Substituintes particularmente preferidos no heteroarilo substituído incluem hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloalquilo, ou amino. O termo "heterociclo", significa um radical derivado de um hidrocarboneto aromático contendo 5 a 14 átomos de anel, 1 a 5 dos quais são heteroátomos escolhidos, independentemente, a partir de N, O, ou S, e incluem anéis aromáticos monocíclicos, heterocíclicos 10 ΡΕ1607399 condensados, e carbocíclicos condensados e heterocíclicos (por exemplo, tienilo, furilo, pirrolilo, pirimidinilo, isoxazolilo, oxazolilo, indolilo, isobenzofuranilo, purinilo, isoquinolilo, pteridinilo, imidazolilo, piridilo, pirazolilo, pirazinilo, quinolilo, etc.). Heterociclos podem ter desde um a três substituintes tais como um alquilo, alquilo substituído com R1, halo, ciano, nitro, -SR1, -OR1, -C(0)R‘, -(X(O)R1, -SO2OR1, -OSO2R1, -S02NR12, -NRSO2R1, -C(0)0R\ -NRx2, -CONR^, ou -NRC (O) R1, em que cada R1 é independentemente hidrogénio, alquilo, alquilo substituído com R2, arilo, arilo substituído com R2, heteroarilo, heteroarilalquilo, arilalquilo, ou arilalquilo substituído com R2 e cada R2 é, independentemente, hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloalquilo, ou amino. Para além disso, quaisquer dois substituintes adjacentes no heteroarilo podem, facultativamente, formar em conjunto um alquilenodioxi. Substituintes particularmente preferidos no heteroarilo substituído incluem hidroxi, halo, alquiloxi, ciano, tio, nitro, alquilo, haloalquilo, ou amino. O termo "grupo éster" significa R'C(O)-O,R3CO-S-, sulfonato, ou carbamato, em que R' é hidrogénio, alquilo, arilo, ou heterociclo. O termo "doença", no contexto do presente invento, pretende incluir tumores, em particular o cancro, e outras doenças que possam beneficiar de um agente anti-mitótico incluindo mas não se limitando a hiperplasia 11 ΡΕ1607399 benigna e infecções por agentes patogénicos tais como infecções por fungos ou por parasitas. O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" significa sais que podem ser formados quando grupos acídicos, mais especificamente, protões acídicos presentes são capazes de reagir com bases inorgânicas ou orgânicas. Protões acídicos estão, por exemplo, presentes nos grupos -OR1, -SO2OR1, ou -CÍOJOR1. Tipicamente o composto afim é tratado com um excesso de um reagente alcalino, tal como hidróxido, carbonato ou alcóxido, contendo um catião apropriado. Catiões tais como Na+, K+, Ca2+ e NH4+ são exemplos de catiões presentes em sais farmaceuticamente aceitáveis. Os sais de Na+ são especialmente úteis. Bases inorgânicas aceitáveis, incluem assim hidróxido de alumínio, hidróxido de cálcio, hidróxido de potássio, carbonato de sódio e hidróxido de sódio. Sais podem também ser preparados usando bases orgânicas, tais como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, N-metilglu-camina, etanolamina, e trometamina. Se os compostos do invento contiverem um grupo básico, poderá ser preparado um sal de adição de ácido. Exemplos de grupos básicos são grupos -NR12. Sais de adição de ácido dos compostos são preparados de um modo padronizado num solvente apropriado a partir de composto afim e de um excesso de ácido, tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico (dando origem a sais sulfato e bisulfato), ácido azótico, ácido fosfórico, etc., e ácidos orgânicos tais como ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, 12 ΡΕ1607399 ácido oxálico, ácido málico, ácido malónico, ácido succinico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido salicílico, ácido p-toluenossulfónico, ácido hexa-nóico, ácido heptanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido láctico, ácido p-(4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido 1,2-etanodisulfónico, ácido 2-hidroxietanossulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido p-clorobenzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido canforossulfónico, ácido 4-metil-biciclo[2.2.2]oct-2-eno-l-carboxílico, ácido gluco-heptónico, ácido glucónico, ácido 4,4'-metilenobis(3-hi-droxi-2-naftoico), ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetil-acético, ácido t-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucurónico, ácido glutâmico, ácido 3-hidroxi-2-naftoico, ácido esteárico, ácido mucónico, etc. 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" também incluem sais internos ou Zwitteriões. Zwitteriões serão formados se um composto da Fórmula I contiver protões acídicos e grupos básicos. "Sais internos" ou "Zwitteriões" podem ser formados transferindo um protão de um grupo carboxilo para o par solitário de electrões do átomo de azoto no grupo amino. 0 termo "estereoisómeros" significa compostos que têm a mesma sequência de ligações covalentes e que diferem na disposição relativa dos seus átomos no espaço. 0 termo "quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade que, quando administrada a um animal 13 ΡΕ1607399 para o tratamento de uma doença, é suficiente para efectuar esse tratamento para a doença. O termo "anti-mitótico" refere-se a um fármaco ou agente que vá interferir com a divisão do núcleo de uma célula eucarionte.

Os termos "tratando" ou "tratamento" de uma doença num mamifero pretendem incluir: (1) prevenção para que a doença ocorra num mamifero que possa estar predisposto à doença mas que ainda não sinta ou apresente sintomas da doença, (2) inibição da doença, isto é, travar o seu desenvolvimento, ou (3) alivio dos sintomas da doença, isto é, causar a regressão da doença.

Certos compostos do invento podem conter um ou mais centros quirais. Nesses casos, todos os esteroisómeros situam-se no âmbito deste invento. Os compostos no âmbito do invento são assim considerados como incluindo os estereoisómeros isolados individualmente assim como misturas desses esteroisómeros.

Apresentações Preferidas

De entre os compostos do primeiro aspecto do invento, são preferidos certos compostos (incluindo como farmaceuticamente aceitáveis sais dos compostos). 14 ΡΕ1607399

Estas preferências incluem compostos que são objecto das reivindicações de composto dependentes.

Farmacologia e Utilidade

Os compostos da Fórmula I possuem actividades anti-tumorais ou são capazes de ser modificados de modo a apresentarem actividades anti-tumorais. 0 2-haloetilo, mais especificamente, a porção 2-cloroetilo da molécula nestes compostos pode actuar directamente como um alquilador de AND ou pode ser transformado num aziridinilo. A forma aziridinilo é uma forma altamente activa da molécula e constitui o mecanismo proposto para a classe de mostarda de azoto de compostos. Assim, os compostos são eficazes no tratamento de tumores e de outras doenças que possam beneficiar de um agente anti-mitótico, tal como hiperplasia benigna e infecções por agentes patogénicos. Estes compostos não têm que ser activados metabolicamente no fígado para adquirirem actividade anti-tumoral e, desse modo, não têm o mesmo perfil de toxicidade que as ciclofosfamidas.

Administração e Composições Farmacêuticas

Os compostos do invento podem ser administrados ao paciente a ser tratado numa quantidade terapeuticamente eficaz por quaisquer vias aceitáveis. Vias de administração incluem, mas não se limitam a, administração por injecção, 15 ΡΕ1607399 incluindo injecção intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, e subcutânea, por administração transmucosa ou transdérmica, através de aplicação tópica, pulverização nasal, supositórios, etc., ou podem ser administrados por via oral. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar amplamente dependendo da gravidade da doença, da idade e da saúde relativa do paciente, da potência do composto usado e de outros factores. Ela varia usualmente entre 1 miligrama por kg (mg/kg) do peso corporal por dia e 1.000 mg/kg do peso corporal por dia, de preferência na gama de aproxima-damente 1 a 100 mg/kg/dia.

Em geral, compostos do invento serão administrados sob a forma de composições farmacêuticas que podem tomar a forma de comprimidos, pilulas, cápsulas, semí-sóli-dos, pós, formulações de libertação sustentada, soluções, suspensões, elixires, ou qualquer outra composição apropriada e são compreendidos por, em geral, um composto da fórmula I em combinação com pelo menos um veículo farma-ceuticamente aceitável. Veículos aceitáveis são não tóxicos, auxiliam a administração, e não afectam de um modo adverso o beneficio terapêutico do composto da Fórmula I. Esse excipiente pode ser qualquer sólido, liquido ou semí-sólido.

Excipientes farmacêuticos sólidos incluem amidos, celulose, talco, glucose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz , farinha, giz, gel de sílica, estearato de 16 ΡΕ1607399 magnésio, estearato de sódio, monostearato de glicerol, cloreto de sódio, leite magro seco, etc. Excipientes líquidos e sólidos podem ser seleccionados de entre água, etanol, glicerol, propilenoglicol e vários óleos, incluindo os de petróleo, animais, vegetais ou de origem sintética (por exemplo, óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo, etc.). Veículos líquidos preferidos, particularmente apropriados para soluções para injecção, incluem água, solução salina, dextrose aquosa e glicois. A quantidade de um composto da Fórmula I na composição pode variar amplamente dependendo do tipo de composição, tamanho de uma unidade de dosagem, tipo de excipientes e outros factores conhecidos dos especialistas na técnica das ciências farmacêuticas. Em geral, a composição final irá compreender entre 1% p/p e 99% p/p, com maior preferência, entre 10% p/p e 90% p/p do composto, com a maior preferência entre 25% p/p e 75% p/p com a porção restante sendo constituída por excipiente ou excipientes.

As composições farmacêuticas são preparadas seguindo as técnicas convencionais da farmácia. O presente invento contempla ainda a administração de uma composição farmacêutica de um ou mais compostos da Fórmula I a serem usados isoladamente ou em combinação com outros agentes farmacológicos. Uma apresentação preferida do presente invento inclui terapêutica de 17 ΡΕ1607399 combinação em que uma composição farmacêutica de um ou mais compostos da Fórmula I são usados em combinação com outros agentes farmacologicamente activos seleccionados de entre o grupo consistindo em antibióticos, agentes antineoplásicos, agentes tumoricidas, agentes tumorostáticos, etc. Essa utilização de terapêutica de combinação pode ser rapidamente praticada pelos especialistas nesta técnica ao seguirem padrões geralmente aceites de cuidados médicos e tendo como base princípios clinicos geralmente aceites.

Síntese de Compostos da Fórmula I

m

Os compostos da Fórmula I podem ser preparados de acordo com o esquema de reacção acima descrito e descrito mais abaixo: 18 ΡΕ1607399 O composto Β pode ser preparado fazendo reagir oxicloreto de fósforo com composto A, haleto de bis (2-haloetil)amina. A mistura da reacção é feita reagir num solvente inerte. Solventes inertes podem ser hidrocarbo-netos aromáticos. É adicionada uma base à mistura da reacção, com maior preferência, uma base orgânica tal como amina orgânica, com a maior preferência, trietilamina é adicionada à mistura da reacção, e a mistura da reacção é então agitada durante um período de tempo prolongado a 0-50° C. A mistura, freguentemente uma suspensão, é aguecida até 0-100° C e é agitada durante um período de tempo prolongado. A mistura é então arrefecida, é tratada com um adsorvente, por exemplo, carvão, sendo agitada à temperatura ambiente e filtrada. O solvente é então removido para produzir um composto B. O composto B é subsequentemente feito reagir com um composto C. A reacção é realizada num solvente polar. A mistura da reacção é batida/agitada sendo em seguida arrefecida. Alcóxido de elemento alcalino é adicionado à mistura, a qual é então aquecida lentamente até 0-50° C e agitada durante um período de tempo prolongado. Uma solução de haleto de hidrogénio, por exemplo HC1, em água é introduzida na mistura da reacção. A fracção orgânica é recolhida, e a fracção aquosa é extraída com um solvente polar aprótico não miscível com água (2 x 4 L) . Solventes polares apróticos não miscíveis com água incluem diclorometano, clorofórmio, etc. As fracções orgânicas 19 ΡΕ1607399 combinadas são lavadas, e os solventes são removidos sob pressão reduzida. O produto crú resultante da reacção, um composto da Fórmula (I), é então lavado e purificado por meios convencionais.

Mais especificamente, o composto 2 (ver esquema sintético, mais abaixo) pode ser preparado fazendo reagir oxicloreto fosforoso com 1 nomeadamente, hidrocloreto de bis(2-haloetil)amina. A mistura da reacção num solvente tal como tolueno, benzeno, xileno, etc., é batida/misturada a uma taxa moderada (para proporcionar uma solução transparente) e é adicionada trietilamina à mistura da reacção durante um período de 5-30 minutos. A mistura da reacção é então agitada durante um período de tempo prolongado à temperatura ambiente. A esta mistura é adicionada uma quantidade adicional de hidrocloreto de bis(2-haloetil)amina e trietilamina. A suspensão resultante é aquecida até à temperatura de refluxo do solvente e é agitada durante 16-24 horas. A mistura é então arrefecida até à temperatura ambiente e é tratada com carvão, sendo agitada à temperatura ambiente durante 2 horas e em seguida filtrada sob vácuo através de uma camada de Celite. O solvente é então removido sob pressão reduzida (30 mmHg, temperatura do banho final a 50° C) num evaporador rotativo para produzir um composto 2. O composto 2 assim preparado é então feito reagir com um composto 3. A reacção é realizada num solvente tal 20 ΡΕ1607399 como tetra-hidrofurano, dioxano, éter t-butilmetílico, etc. A mistura da reacção é batida/agitada a uma taxa moderada (para proporcionar uma solução vermelha transparente) e a mistura é arrefecida até 0o C usando um banho de gelo/água. A esta solução fria é adicionado tert-butóxido de potássio (362 g, 3,22 moles) durante 20 minutos. A mistura da reacção é então aquecida lentamente até à temperatura ambiente e é agitada durante um periodo de tempo prolongado (16-24 horas). Uma solução de cloreto de hidrogénio em água é introduzida na mistura da reacção neste estádio. A fracção orgânica é recolhida e a fracção aquosa é extraída com acetato de etilo (2 x 4 L) . As fracções orgânicas combinadas são lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (1 x 4 L) e os solventes são removidos sob pressão reduzida (30 mm Hg de vácuo, temperatura final do banho a 50° C) num evaporador rotativo. O produto cru resultante da reacção, um composto da Fórmula /1), é então lavado e purificado por meios convencionais.

Nesta síntese, reagentes tais como oxicloreto de fósforo, compostos 1 e 3 encontram-se todos eles comercialmente disponíveis a partir de fontes tais como Aldrich, Fluka a Alfa.

Na síntese de certos compostos da Fórmula I, grupos protectores podem ser introduzidos e finalmente removidos. Grupos protectores apropriados para grupos amino, hidroxilo, carboxilo, são descritos em Greene, et al. 21 ΡΕ1607399 "Protective Groups in Organic Xynthesis," Second Edition, John Wiley and Sons, New York, 1991. Alguns derivados requerem esterificação de álcoois, a qual pode ser relizada por métodos bem conhecidos nesta técnica (ver, por exemplo, Larock, "Comprehensive Organic Transformations", VCH Publishers, New York, 1989).

Consequentemente, o processo para a preparação de um composto da Fórmula I compreende um ou mais dos passos que se seguem: (a) reacção de um composto da Fórmula (2)

com um composto da Fórmula (3) ou (b) elaboração de substituintes de um composto da Fórmula I de um modo conhecido per se; ou (c) conversão de um composto da Fórmula I em que R é hidrogénio e Q é oxigénio num composto da Fórmula I em que R-Q em conjunto é um grupo éster; ou ΡΕ1607399 - 22 - (d) reacção da base livre de um composto da Fórmula I com um ácido para dar origem a um sal de adição farmaceuticamente aceitável; ou (e) reacção de um sal de adição de ácido de um composto da Fórmula I com uma base para formar a base livre correspondente; ou (f) conversão de um sal de um composto da Fórmula I num outro sal farmaceuticamente aceitável de um composto da Fórmula I; ou (g) resolução de uma mistura racémica de quaisquer proporções de um composto da Fórmula I para proporcionar um seu estereoisómero.

Exemplos

Os exemplos que se seguem são apresentados para permitir que os especialistas nesta técnica percebam e pratiquem de um modo mais claro o presente invento. Esses exemplos não deverão ser limitativos do âmbito do invento, mas deverão ser meramente ilustrativos e representativos.

Nos exemplos sintéticos, foi realizada cromato-grafia de placa delgada usando placas de gel de silica 1" x 3" Analtech GF 350 com indicador fluorescente. A visualização de placas de cromatografia de placa delgada foi realizada por observação em vapores de iodo. Os 23 ΡΕ1607399 espectros de ressonância magnética de protões e de carbono foram obtidos num espectrómetro Bruker AC 300 MHz Nuclear Magnetic Resonance, usando tetrametilsilano como uma referência interna. Pontos de fusão foram obtidos usando um aparelho de ponto de fusão electrotérmico os quais são não corrigidos. Os espectros infravermelhos foram obtidos sob a forma de pílulas de KBr e obtidos num espectrofotómetro Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT-Infrared. Análises espectros-cópicas de massa foram realizadas num Shimadzu QP-5000 GC/Mass Spectrometer (Cl, metano) por injecção directa. Análises térmicas foram realizadas num Mettler Toledo DSC821e Differential Scanning Calorimeter.

Síntese de Compostos da Fórmula I

Esquema 2

Cl

3 24 ΡΕ1607399

Exemplo 1

Preparação de Cloreto de Ν,Ν,Ν' ,N '-Tetraquis(2-cloro-etil)fosforodiamídico (2)

Um balão de fundo redondo, de três tubuladuras, de 12 L, numa capa de aquecimento eléctrico foi equipado com um aqitador mecânico superior, um condensador de refluxo e um funil de adição de pressão iqualizada revestido com um aparelho de formação de bolhas de entrada/saida de azoto. O balão foi carreqado com oxicloreto de fósforo (258 ml, 2,77 moles), hidrocloreto de bis (2-cloroetil)amina (495 q, 2,77 moles), 1, e tolueno (5 L) . 0 agitador foi ligado para agitar a uma taxa moderada (para proporcionar uma solução transparente) e trietilamina (812 ml, 5,82 moles) foi adicionada à mistura da reacção durante 10 minutos. A mistura da reacção foi então agitada durante 26 horas à temperatura ambiente. A esta mistura foi carregado hidrocloreto de bis(2-cloroetil)aminna (505 g, 2,83 moles) e trietilamina (830 ml, 6,11 moles) durante 10 minutos. A suspensão escura foi aquecida até refluxo de tolueno (110° C) e foi agitada durante 22 horas. A mistura foi então arrefecida até à temperatura ambiente e foi tratada com carvão (500 g), agitada à tenmperatura ambiente durante 2 horas sendo em seguida filtrada sob vácuo através de uma camada de Celite (1 kg). O solvente foi removido sob pressão reduzida (30 mm Hg, temperatura final do banho a 50° C) num evaporador rotativo para produzir N,N,Ν',Ν'-tetraquis {2-cloroetil) forforodiamídico, 2, sob a forma de 25 ΡΕ1607399

um óleo castanho-avermelhado (979 g, rendimento de 97%). Análise por cromatografia de placa delgada revelou uma mancha (Rf = 0,71; acetato de etilo:hexanos 1:1). O espectro de RMN de protões foi consistente com material comercialmente disponível.

Exemplo 2

Preparação de N,N, Ν',Ν'-Tetraquis(2-Cloroetil)-fosforo-diamidato de 2-hidroxietilo, 3 (não é um composto da invenção)

Um balão de fundo redondo, com três tubuladuras, de 12 L, foi equipado com um agitador mecânico superior, um termómetro e um aparelho para fazer borbulhar de entrada/saida de azoto. O balão foi carregado com cloreto de Ν,Ν,Ν' ,N'~tetraquis(2-cloroetil)fosforodiamídico (2) (979 g, 2,68 moles), etilenoglicol (1,5 L, 26,8 moles), 4 e tetra-hidrofurano (3 L) . O agitador foi ligado para agitação a uma taxa moderada (para proporcionar um solução vermelha transparente) e a mistura foi arrefecida até 0o C usando um banho de gelo/água. A esta solução arrefecida foi adicionado tert-butóxido de potássio (362 g, 3,22 moles) durante 20 minutos. A mistura da reacção foi então aquecida lentamente até à temperatura ambiente e foi agitada durante um total de 19 horas. Uma solução de cloreto de hidrogénio em água (8 L, 1M) foi introduzida no balão durante 10 minutos. A fracção orgânica foi recolhida e a fracção aquosa foi extraida com acetato de etilo (2 x 4 L) . As fracções orgânicas combinadas foram lavadas com solução 26 ΡΕ1607399 aquosa saturada de cloreto de sódio (1 x 4 L) e os solventes foram removidos sob pressão reduzida (vácuo de 30 mm Hg, temperatura final de banho a 50° C) num evaporador rotativo para proporcionar um óleo castanho avermelhado escuro. Este produto orgânico cru foi então dissolvido com éter metil-tert-butilico (2 L) quente (40° C) e foi deixado arrefecer até à temperatura ambiente, agitando durante um periodo de tempo total de 14 horas. A pasta resultante foi agitada durante 30 minutos a 0o C e em seguida o precipitado foi recolhido por filtração sob vácuo e foi lavado com éter metil-tert-butilico frio (1 L) . Os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida (vácuo de 30 mm de Hg, temperatura final do banho a 50° C) num evaporador rotativo até se obter um volume de 500 ml e foram agitados durante 30 minutos a 0 o C. O precipitado resultante foi recolhido por filtração sob vácuo e foi lavado com éter metil tert-butílico frio (200 ml). Duas colheitas de produto sólido foram então combinadas e secas durante a noite (30 mm Hg, 40° C) para produzir Ν,Ν,Ν' ,N'~tetraquis(2-cloroetil)fosforodiamidato de 2-hidroxietilo, 3, sob a forma de um pó escuro (526 g, 50% de rendimento) . Análise por cromatografia de placa delgada revelou uma mancha (Rj 0,62; metanol:clorofórmio 1:9). Ponto de fusão76-78° C; IV (KBr) 3372, 2957, 1459, 1344, 1206, 1098, 1053, 929 cm-1; MS (Cl, metano) m/z 391 (MH+), 353, 339, 248, 106. Uma análise térmica (DSC) revelou duas gamas de decomposição exotérmica de 164-179 e 222-231 C. 27 ΡΕ1607399

Quadro 1, mais abaixo, apresenta compostos da invenção obtidos por um método semelhante f X X 0 ? * i. 1 v \ Composto R-Q X PM 6 nh2 Cl 389 7 SH Cl 406

Exemplo 3

Preparação de Composto 11 (Esquema 3)(não é um composto da invenção)

TiQ

A uma solução de composto 3 (0,780 g, 2 mmol) em THF/H20 (1:1) e NaOH IN (2 ml), foi adicionada uma solução de sulfonilcloreto de p-tolueno (TsCl, 0,40 g, 2,1 mmol) em THF. A mistura da reacção foi deixada a agitar durante 24 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com cloreto de metileno, e foi lavada com HC1 IN. A camada orgânica foi lavada com solução salina, foi seca sobre K2CO3 e concentrada até se obter um óleo viscoso, composto 11 (1,04 g, 96%) 28 ΡΕ1607399

Quadro 2, mais abaixo, apresenta compostos da invenção que foram preparados de um modo semelhante

A * f J- X. r' ·χ

Composto R Q X 21 AC NH Cl 22 PhCO NH Cl 23 p-MePhS02 NH Cl

Exemplo 4 Viabilidade Celular Células de melanoma humano RPMI 8322 (ATCC) foram feitas crescer a 37° C em MEM suplementado com soro bovino fetal a 10%, L-glutamato a 1%, e gentamicina 0,1%. As células foram colocadas em placa a uma densidade de 2 x 106 por cavidade em placas de microtitulação com 96 cavidades. Vinte e quatro horas mais tarde, o meio foi substituído com o mesmo meio ao qual compostos do teste em concentrações finais de 1 μΜ a 10 mM, e 1% DMSO tinham sido adicionados. As células foram feitas crescer na presença do composto durante 4 dias adicionais. Cada concentração do composto foi testada em triplicado. A viabilidade das células foi medida usando um ensaio padrão que monitorizou a conversão metabólica de um corante (Cell Titer 96™, Promega). 29 ΡΕ1607399

Composto μΜ para 50% viabilidade celular 6 >500 23 >500

Exemplo 5 Efeitos Anti-tumorais em Ratinhos

Ratinhos fêmeas rapados, atímicos NCr-nu com 7 semanas de idade foram comprados a Charles River Laboratories (Raliegh, NC) e aclimatados nos laboratórios uma semana antes da experimentação. Os animais foram alojados em gaiolas com microisolador, aos cinco por gaiola, num ciclo de luz/escuridão de 12 horas. Os animais receberam água esterilizada filtrada e alimento estéril para roedores ad libitum. Os animais foram observados diariamente, e foram anotados sinais clínicos tais como encolhimento tumoral.

Modelo de Tumor. Fragmentos de trinta a quarenta mg de tumor mamário humano MX-1 foram implantados subcutâneamente em ratinhos próximo da área axilar, usando uma agulha trocarte de calibre 12 e foram deixados crescer. Permitiu-se que os tumores atingissem 75-196 mg de peso (75-196 mm3 de tamanho) antes de se iniciar o tratamento.

Tratamento com Fármaco O composto 3 foi administrado por via intraperitoneal durante cinco dias consecutivos em doses de 55, 75, e 100 mg/kg/dose. O composto 3 foi formulado fresco diariamente numa concentração de 10 mg/Ml em 5% de EtOH/45% de propilenoglicol/50% PBS. Soluções de dosagem foram administradas a ratinhos após 4 horas de 30 ΡΕ1607399 formulação. Os compostos foram administrados de acordo com o peso corporal exacto, sendo o volume da injecção de 0,1 ml/10 g de peso corporal.

Medições do Tumor. Os tumores foram medidos, e os animais foram pesados duas vezes por semana, começando com o primeiro dia de tratamento. O volume do tumor foi determinado por medições calibradas (mm) e usando a fórmula para uma esfera elipsoide L x W2/2=mm3, onde L e W se referem às dimensões maiores e menores recolhidas em cada medição. Esta fórmula foi também usada para calcular o peso do tumor, assumindo uma densidade unitária (1 mm3 = 1 mg). A duração do estudo foi de 28 dias após a implantação do tumor. Qualquer um dos animais cujo tumor tivesse atingido 4 g de peso foi sacrificado antes do fim do estudo.

Dose (mg/kg) Mortes Não Específicas Regressão do Tumor Sem Tumor Dias para Duplicar Regressão Parcial Regressão Completa 100 0/8 0 0 0/8 7,7 75 0/8 0 0 0/8 8,1 55 0/8 0 0 0/8 7,2 Controlo PBS 0/8 6,6

Lisboa, 26 de Janeiro de 2010 1 ΡΕ1607399

REFERENCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e ο IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito.

Documentos de patentes citadas na Descrição

♦ <33 £207874 A « BE 3233858 « EP 072531 A « US 5551842 A

* USS1A0S£8A » DE1S524S1S

* US 5308727 A * WO &30612S k * DE. 3835772

Literatura que não é de patentes citada na Descrição *: KrSger , sssííít/ 1SE3. ¥<& S4^.::538^80S' ' M.H. 37,..: ÍSOMSO? * De Vfts P;r:s,o;és ot Ctccs? rM^.£g^, ,7SS:-?Sg Pétereduíf «í si PMgeeià ífífe^áí Mesfesàs. Gfsw-Hsfi, 1883

Cyc&u4K>sp8&"ikte. yaick Sades. 42S-43S GfSffne sí as, Prstecâve Gfsypsfe Bígstíía Syslfe-•Sis.-Jota Wifej· sTid Ssrs, 1881 Lsfoefc. CoEyíprshéilavs OfçaAfc Tf^sfcí^afiSíiS:. VCH FlÉtehSIS, 188&

Claims

ΡΕ1607399 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto da Fórmula I: X O 1-“'" ! I 8-0 (I) onde: X é halogéneo; Q é NH; e R é R'C0-, R'NHCO-, R'S02-, OU R'NHS02-, onde R' é hidrogénio, Ci_6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído, C6-i4 arilo, C 6—14 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-i4 heteroarilo substituído; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. O composto da reivindicação 1, onde X é cloro ou bromo.
3. O composto da reivindicação 2, onde X é cloro. 2 ΡΕ1607399
4. O composto da reivindicação 3, onde R é R'S02-.
5. O composto da reivindicação 4, onde R é metanossulfonilo, para-nitrobenzenossulfonilo, para- bromobenzenossulfonilo, ou para-toluenossulfonilo.
6. O composto da reivindicação 3, onde R é acetilo.
7. O composto da reivindicação 3, onde R é benzoílo.
8. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das reivindicações 1-7.
9. A composição farmacêutica da reivindicação 8 para o tratamento de tumores, em particular cancro, num mamífero.
10. Um composto de qualquer uma das reivindicações 1-7 para utilização no tratamento de tumores, em particular cancro, num mamífero.
11. Um processo para a preparação de um composto da fórmula (I) de acordo com a reivindicação 1, compreendendo o processo (a) reacção de um composto da Fórmula (2) ΡΕ1607399 3 χ J Jl χ'" ^ ÍSí com um composto da Fórmula (3) «/Voh ou, (b) elaboração de substituintes de um composto da Fórmula I de um modo conhecido per se; ou (c) reacção da base livre de um composto da Fórmula I com um ácido para dar origem a um sal de adição farmaceuti-camente aceitável; ou (d) reacção de um sal de adição de ácido de um composto da Fórmula I com uma base para formar a base livre correspondente; ou (e) conversão de um sal de um composto da Fórmula I num outro sal farmaceuticamente aceitável de um composto da Fórmula I; ou (f) resolução de uma mistura racémica de quaisquer proporções de um composto da Fórmula I para proporcionar um seu estereoisómero. ΡΕ1607399 4
12. Um composto da Fórmula I: X Ή 0lí Q~~rfX-tf, 1 s. V 'V X X 'X (I) X é halogéneo; Q é S; e R é hidrogénio, Ci_6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído, C6-i4 arilo, C6-i4 arilo substituído, C5_i4 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído, ou é R'CO-, R'NHCO-, R'S02-, ou R'NHS02-, onde R' é hidrogénio, C1-6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído, C6-i4 arilo, C6-14 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído; em que o referido Ci_6 alquilo substituído é mono-, di-, ou tri-substituído with C6-i4 arilo, C6-i4 arilo substituído com R1, C5-14 heteroarilo, nitro, ciano, halogéneo, -OR1, -SR1, -C(0)R1, -0C(0)R1, -C(0)0R\ -NR12, -SO2OR1, -OSO2R1, -so2nr12, -nr1so2r1, -CONrS, ou -NR1C (0) R1, em que cada R1 é, independentemente, hidrogénio, Ci_6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído com R2, C6-i4 arilo, C6-i4 arilo substituído com R2, C5_i4 heteroarilo, C5-14 heteroaril-Ci-6 alquilo, C6-14 aril- 5 ΡΕ1607399 Ci_6 alquilo substituído com R2, ou C6-14 aril-Ci-6 alquilo e cada R2 é, independentemente, hidroxi, halogéneo, Ci_6 alquiloxi, ciano, tio, nitro, Ci_6 alquilo, halo-Ci_6 alquilo ou amino; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
13. O composto da reivindicação 12, onde X é cloro ou bromo.
14. O composto da reivindicação 13, onde X é cloro.
15. O composto de qualquer uma das reivindicações 12-14, onde R é hidrogénio, Ci_6 alquilo, Ci_6 alquilo substituído, C6-14 arilo, C6-14 arilo substituído, C5-14 heteroarilo, ou C5-14 heteroarilo substituído.
16. O composto da reivindicação 14, onde R é H.
17. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de qualquer uma das reivindicações 12-16.
18. A composição farmacêutica da reivindicação 17 para 0 tratamento de tumores, em particular cancro, num mamífero.
19. Um composto de qualquer uma das reivindicações 12-16 para utilização no tratamento de tumores, em particular cancro, num mamífero. 6 ΡΕ1607399
20. Um processo para a preparação de um composto da fórmula (I) de acordo com a reivindicação 12, compreendendo o processo (a) reacção de um composto da Fórmula (2) com um composto da Fórmula R-O·'· (3) \/OH ou, (b) elaboração de substituintes de um composto da Fórmula I de um modo conhecido per se; ou (c) reacção da base livre de um composto da Fórmula I com um ácido para dar origem a um sal de adição farmaceuti-camente aceitável; ou (d) reacção de um sal de adição de ácido de um composto da Fórmula I com uma base para formar a base livre correspondente; ou 7 ΡΕ1607399 (e) conversão de um sal de um composto da Fórmula I num outro sal farmaceuticamente aceitável de um composto da Fórmula I; ou (f) resolução de uma mistura racémica de quaisquer proporções de um composto da Fórmula I para proporcionar um seu estereoisómero. Lisboa, 26 de Janeiro de 2010