SE502214C2 - Epipodofyllotoxin-glukosid-4'-fosfat-derivat samt förfarande för deras framställning - Google Patents

Description

502 214 5 ut/1:g:ššš:::””fl on 10 15 20 25 30 35 ( ° ( u,c .. ocn, ca, oca, I R1=cH3 III 11 R1=2-tienyl Fosforylering av terapeutiska medel, som innehåller en hydroxylgrupp, har använts som ett medel för läkemedelslaten- tiering; de fosforylerade derivaten kan därefter spjälkas in giyg medelst ett fosfatas för frigöring av den aktiva moder- molekylen. En kort diskussion av fosfater som potentiella proläkemedel ingår i en översiktsartikel med titeln 'Rational for Design of Biologically Reversible Drug Derivatives: Pro- drugs” (Sinkula och Yalkowsky, J. Pharm. Sci., 1975, 64:181- 210, sid. 189-191). Exempel på fosfater av kända antitumör- medel innefattar kamptotecin (Japan Kokai 21-95, 394 och 21-95, 393, Derwent Abst. nr 87-281016 resp. 87-281015) och daurorubicin (US 4 185 111).

Podofyllotoxinfosfat-dinatriumsalt 11 har framställts avi Seligman gt gl. Fosfater hydrolyserades emellertid ej av prostatinsyrafosfatas och uppvisade ej heller minskad toxi- sitet jämfört med moder-podofyllotoxinet (Cancer Chemotherapy Reports Part I, 1975, 59:233-242). 10 15 20 25 30 35 502 214 0 U 0P0¿Na¿ en, ocu, IV Föreliggande uppfinning tillhandahåller fosfatestrar av 4'- demetylepipodofyllotoxin-glukosider, som är aktiva antitumör- medel. I synnerhet är divätefosfatet av 4'-demetylepipodofyl- lotoxin-glukosider och salter därav synnerligen vattenlös- liga, vilket således tillhandahåller en överlägsen farmaceu- tisk fördel jämfört med de nuvarande terapeutiska medlen tillhörande denna klass, etoposid och teniposid, som har minimal vattenlöslighet.

SAQAÄFATTNING AV UPPEINNIEGEN Föreliggande uppfinning tillhandahåller 4'-fosfatderivat av 4'-demetylepipodofyllotoxin-glukosíder med den allmänna formeln V och farmaceutiskt godtagbara salter därav 10 15 20 25 30 35 502 214 4 vari R5 är H och R1 är (C1_10)alkyl; (C2_1°)alkenyl; (C5_5)- cykloalkyl; 2-furyl; 2-tienyl; (C5_10)aryl; (C7_14)aralkyl eller (C3_14)aralkenyl, vari var och en av de aromatiska ringarna kan vara osubstituerad eller substituerad med en eller flera grupper, som utgöres av halo, (C1_3)alkyl, (C1_8)alkoxi, hydroxi, nitro och/eller amino; eller R1 och R5 vardera är (C1_3)alkyl; eller R1 och R6 och den kolatom till vilken de är bundna tillsammans bildar en (C5_5)cykloalkyl- grupp; X är syre eller svavel; R7 och R8 oberoende är H, (C1_5)alkyl, A-substituerad (C1_5)alkyl, (C3_5)cykloalkyl, A-substituerad (C3_5)cykloalkyl, (C5_10)aryl, A-substituerad aryl, alkyl-substituerad aryl, (C7_14)aralkyl, A-substituerad aralkyl eller alkyl-substituerad aralkyl; varvid nämnda A- substituenter är en eller flera grupper, som utgöres av hydroxi, alkoxi, alkanoyloxi, cyano, amino, alkylamino, dialkylamino, karboxi, alkyltio, merkapto, merkaptotio, nítropyridyl-disulfid, alkanoylamino, alkanoyl, karbamoyl, nitro eller halo. l Salterna av föreningen y innefattar både de monoanjoniska och de dianjoniska salterna. Katjonen kan vara en metalljon såsom en metalljon från alkalimetall- eller jordalkalimetallgruppen eller någon annan vanlig metalljon eller en organisk kväve- haltig grupp såsom ammonium, mono-, di- eller trialkylammo- nium eller pyridinium. Katjonen är företrädesvis natrium, kalium, litium, cesium, magnesium, kalcium, aluminium, ammo- nium eller mono-, di- eller trialkylammonium.

En föredragen utföringsform tillhandahåller föreningen med formeln 1, vari R7 och R8 båda är väte, och farmaceutiskt godtagbara salter därav. En synnerligen föredragen utförings- form tillhandahåller etoposid-4'-divätefosfat och -tiofosfat och deras respektive dinatriumsalter ylg och 113. 10 15 20 25 30 35 502 214 OH H,C Cu, P<0Na>, H X VI X = O X S a: b: = En ytterligare föredragen utföringsform tillhandahåller före- ningar med formeln y, vari R7 och R8 är lika och utgöres av 2,2,2-trihaloetyl, 2-cyanoetyl, (C1_5)alkyl, fenyl eller fenylalkyl, där fenylringen eventuellt är substítuerad med alkyl, halogen eller nítro.

En ytterligare aspekt av denna uppfinning tillhandahåller fosforoamidat-antitumörderivat med formeln yli och farma- ceutiskt godtagbara salter därav RÖ R1-*L§: 0 H OH ( o MW ß *É u,c ocu, -P=x V' \*~n2n= V11 10 15 20 25 30 35 502 214 6 vari R1, R5 och X har ovan angivna betydelser; Y är Cl, OH eller NR4R5; R2, R3, R4, och R5 vardera oberoende utgöres av H, (C1_5)alkyl, (C2_5)alkenyl, (C3_5)cykloalkyl, A-substitue- rad (C1_5)alkyl, A-substituerad (C2_5)alkenyl eller A-substi- tuerad (C3_5)cykloalkyl; eller R2, R3 och den kväveatom till vilken de är bundna tillsammans är en 3- till 6-ledad ring; eller R4, R5 och den kväveatom till vilken de är bundna till- sammans är en 3- till 6-ledad ring; varvid nämnda A-substitu- enter har ovan angivna betydelser.

En annan aspekt av föreliggande uppfinning tillhandahåller diklorfosfat-mellanprodukter med formeln yL;_, vari R1, R5 och X har ovan angivna betydelser; dessa medel är användbara vid framställningen av föreningarna med formeln 2. “Ö »a ca, ca, fen, VIII Ytterligare en aspekt av föreliggande uppfinning tillhanda- håller ett förfarande för framställning av föreningar med formeln 2, vari R7 och R8 båda är väte, och deras farmaceu- tiskt godtagbara salter, varvid man (a) omvandlar en förening med formeln 13 10 15 20 25 30 35 502 214 IX till en förening med formeln X vari R1, R6 och X har ovan angivna betydelser och G är en fosfatskyddande grupp; (b) avlägsnar den fosfatskyddande gruppen; och (c) eventuellt omvandlar produkten från steg (b) till ett farmaceutiskt godtagbart salt. Fosfatskyddande grupper innefattar, men är ej begränsade till sådana som faller inom definitionen för R7 ovan med undantag av väte. 10 15 20 25 30 35 502 214 DETALJEBA BESKRIVNING AV U22ElflflIfl§Efl Om ej annat anges avser i föreliggande sammanhang ”alkyl" raka eller grenade kolkedjor; ”halo” innefattar brom, klor, fluor och jod; "etopofos” är föreningen etoposid-4'-fosfat- dinatriumsalt (dvs föreningen ylg).

Fenolgruppen i 4'-demetylepipodofyllotoxin-glukosider kan fosforyleras med fosforoxiklorid och tiofosforylklorid för erhållande av motsvarande diklorfosfat resp. diklortiofosfat (formel ylll). Fosforyleringsreaktionen utföres i ett lämp- ligt vattenfritt organiskt lösningsmedel, exempelvis aceto- nitril, och företrädesvis i närvaro av en tertiär aminbas, exempelvis N,N-diisopropyletylamin. Reaktionsförloppet kan övervakas medelst tunnskiktskromatografi (TLC), medelst vilken den optimala reaktionstiden kan fastställas genom upp- trädandet av produkt eller försvinnandet av utgångsmaterial eller bådadera. Vid våra försök har reaktionsperioden varit från ca 4 timmar till ca 72 timmar. Reaktionstidens längd synes vara relaterad till kvaliteten hos det använda fosfor- haltiga reagenset. 4'-diklorfosfaterna med formeln y1L; är användbara mellan- produkter, som kan bringas att reagera med nukleofiler för tillhandahållande av en mångfald fosfat- och tiofosfatderi- vat. Således kan mellanprodukterna hydrolyseras för tillhan- dahållande av fosfaterna och i närvaro av en bas erhålles fosfatsalterna. Så exempelvis ger behandling av 1111 med ett överskott av en vattenlösning av natriumbikarbonat motsva- rande 4'-fosfat-dinatrium- och 4'-tiofosfat-dinatriumsalter; bikarbonater av andra katjoner såsom kalium och ammonium kan även användas för att tillhandahålla respektive salter. Di- klorfosfat-mellanprodukten 2111 kan omsättas med aminer för tillhandahållande av antingen motsvarande fosforodiamidat eller klorfosforomonoamidat. Exempel på lämpliga aminer inne- fattar, men är ej begränsade till ammonía, primära aminer såsom etylamin, kloretylamin, allylamin, dimetylaminopropyl- 10 15 20 25 30 35 502 214 9 amin, hydroxietylamin, cyklohexylamin och aminocyklohexanol; och sekundära aminer såsom dietylamin, piperidin, etylmetyl- amin, metylaminoetanol, etylbutylamin och liknande. Den mängd amin som användes i förhållande till mängden epipodofyllo- toxin-diklorfosfat kan regleras för att gynna den ena eller den andra reaktionsprodukten. När exempelvis ett stort över- skott av aminen i förhållande till epipodofyllotoxin använ- des, erhálles det symmetriska fosforodiamidatet, dvs före- ningar med formeln 111, vari Y är densamma som NRZR3; klor- fosforomonoamidatet, dvs föreningar med formeln 211, vari Y är Cl, kan framställas när en mera kontrollerad mängd av aminen användes. Klorfosforomonoamidatet kan hydrolyseras för tillhandahållande av föreningar med formeln VI , vari Y är OH eller dess salter, eller kan omsättas vidare med en andra amin för tillhandahållande av det osymmetriska fosforodiami- datet, dvs föreningar med formeln y_1, vari Y är NR4R5 och skiljer sig från NRZR3.

Ovan beskrivna förfarande àskâdliggöres i följande reak- tionsschema. 502 214 lo RÖ R* 0 0 H OH ( o un - ~s cm, ocn, H *väv överskott ”ä” ^š^^ lleRaNH Hydrolys o-í __:-> H,c ocn, +13: ocH, H,c ocu, P01) P(X)Cl¿ P(X_)(0H)¿ nfnfiu' Nnfnï* 'fiflflfi R5R.NH Hydrolys 4---_- '_:_"_' H C OCH H C OCH "flc om? 3 P 3 3 von a N” u' Män* Ho' Mafa* Masu' “nnfrü 10 15 20 25 30 35 502 214 ll Fosfattriestrar är föreningar med formeln y, vari R7 och R3 ej är väte, och de kan framställas genom att man behandlar en 4'-demetylepipodofyllotoxin-glukosid med en halofosfatdi- ester, [dvs Hal-P(X)(0R7)(OR8)]. Det har visat sig att denna reaktion utföres synnerligen effektivt i acetonitril i när- varo av en organisk trialkylaminbas; den föredragna basen är diisopropyletylamin. Minst en ekvivalent av halofosfatet och aminbasen användes men båda reagensen användes företrädesvis i molära ekvivalenter i ringa överskott i förhållande till mängden epipodofyllotoxin-glukosid-reaktant. Reaktionen kan utföras vid vilken som helst temperatur som leder till pro- duktbildning; emellertid synes något förhöjda temperaturer, exempelvis 30-40°C, underlätta reaktionen, vilken ta upp till flera dagar för att gå till fullbordan. Symmetriska halofos- fatdiestrar (dvs R7=R8) kan konventionellt framställas utgå- ende från alkoholen och exempelvis fosforylklorid och osym- metriska sådana (dvs R7#R8) kan framställas utgående från alkoholen och dihalofosfatester. Det är även möjligt att framställa fosfattriestrar på annat sätt, exempelvis genom att man först omvandlar fenolen till en fosfitester, exempel- vis genom omsättning med ett sådant reagens som (PhCH20)2PN- (i-pr)2, och därefter oxidation av fosfatet till fosfatestern under användning av exempelvis m-klorperbensoesyra.

Fosfattriestrar kan vidare tjäna som mellanprodukter vid framställning av föreningar med formeln 2 och salter därav.

Så exempelvis erhålles dihydroxifosfatet ( y, R7=R3=H) när difenylestern ( y, R7=R5=fenyl) underkastas katalytisk hydre- ring. Andra lämpliga fosfatskyddande grupper innefattar, men är ej begränsade till 2,2,2-trikloretyl, bensyl, cyanoetyl, p-nitrosubstituerad fenyl, bensyl, fenetyl och p-bromfenyl.

Dihydroxifosfatet ( y, R7=R8=H) omvandlas till bassalter genom omsättning med den lämpliga basen ifråga, exempelvis natriumbikarbonat, ammoniumbikarbonat eller organiska aminer.

Alternativt kan salterna även alstras genom eluering av dihydroxifosfatet genom en kolonn av ett jonbytarharts, som innehåller den önskade katjonen. 502 214 10 15 20 25 30 35 12 Ehuru föreliggande uppfinning utnyttjar fosforoxiklorid, halofosfatdiestrar och deras respektive svavelanaloger som fosforyleringsreagens, torde inses att andra fosforhaltiga reagens med förmåga att fosforylera fenoler även kan användas och lämpliga reaktionsbetingelser och reaktionsmedium kan väljas alltefter det valda fosforyleringsmedlet. En över- siktsartikel med rubriken “Current Methods of Phosphorylation of Biological Molecules” (Synthesis, 1977, 737-52) innehåller ytterligare exempel på fosforyleringsmedel och införlivas med denna beskrivning genom hänvisning därtill.

EIOLOGISKA EGENSKAPER Representativa föreningar enligt föreliggande uppfinning ut- värderades med avseende pà antitumöraktivitet mot transplant- erbar P388-leukemi på ráttdjur. I samtliga försök användes honmöss CDF1, på vilka hade inplanterats ett tumörinokulat om 105 askitesceller av ráttdjursleukemi P388. Vid försöken under användning av etoposid-4'-fosfat, dess dinatriumsalt och etoposid-4'-tiofosfat-dinatriumsalt skedde tumörinplanta- tion och läkemedelsbehandling båda via intravenös (IV) admi- nistrering. I alla övriga försök skedde tumörinplantation och läkemedelsbehandling via intraperitonal (IP) administre- ring. I samtliga fall administrerades emellertid den positiva kontrollen, etoposid, intraperitonalt. Försöken varade 28-46 dagar, efter vilken tid antalet överlevande noterades. Anti- tumöraktiviteten uttryckes som % T/C, som är förhållandet mellan medelöverlevnadstiden (MST) för den läkemedelsbehand- lade gruppen och MST för den saltlösningsbehandlade kontroll- gruppen. En förening med ett % T/C-värde av 125 eller däröver anses allmänt ha signifikant antitumöraktivitet vid P388- testet. Tabell 1 nedan återger resultaten av ovan beskrivna testförfarande; de maximala % T/C-värdena och de doser som ger denna effekt anges. 502 214 13 t' ö akt'v' t ' eu em' Förening Dos* Admin. §nliQL__ Lmglhgtinil §§§L__ Målldl SILQ TUMÖRCELLER IMPLANTERADE INTRAVENÖST Exempel 1 140 IV 29,0 363 (Etoposid) 50 IP 20,5 256 Exempel 4 200 IP 18,0 225 (Etoposid) 100 IP 21,5 269 Exempel 8 125 IV 24,5 306 (Etoposíd) 100 IP 29,5 369 Q TUMÖRCELLER IMPLANTERADE INTRAPERITONEALT Exempel 2 240 IP 16,5 165 (Etoposid) 60 IP 25,0 250 Exempel 3 200 IP 15,5 ' 155 (Etoposid) 100 IP 27,0 270 Exempel 7 240 IP 25,0 250 (Etoposid) 100 IP 26,0 260 Exempel 9 150 IP 19,5 217 (Etoposid) 100 IP 24,0 267 * Läkemedlet administrerades på dag 5 och 8, om ej annat anges (dag 1 utgjorde dagen för tumörinplantation).

Antitumörföreningarna enligt föreliggande uppfinning har visat sig vara aktiva mot transplanterade tumörer hos försöksdjur. Speciellt uppvisar den förening som represen- teras av formel ylg ("etopofos") signifikant högre antitumör- 10 15 20 25 30 35 502 214 14 aktivitet än etoposid vid P388-testet. Detta selektiva medel representerar ett kraftigt vattenlösligt proläkemedel av etoposid, som har reducerad antitumöraktivitet ig_git;g och snabbt spjälkas av alkaliskt fosfatas, vilket resulterar i frigöringen av etoposid. Den etoposid som frigöres uppvisar en cytotoxisitet som är identisk med cytotoxisiteten hos moderläkemedlet.

Följaktligen innebär ett sätt att inhibera däggdjurstumörer att man administrerar en effektiv tumörinhiberande dos av en antitumörförening med formeln 1 eller y;; till ett tumörbä- rande värddjur. För detta ändamål kan läkemedlet administre- ras pâ konventionellt sätt, vilket innefattar, men ej är be- gränsat till intravenös, intramuskulär, intratumoral, intra- arteriell, intralymfatisk och oral administrering.

En ytterligare aspekt av föreliggande uppfinning tillhanda- häller en farmaceutisk beredning, som innefattar en förening med formeln y eller yli och en farmaceutisk godtagbar bärare.

Antitumörberedningen kan föreligga i vilken som helst farma- ceutisk form som är lämplig för det avsedda administrerings- sättet. Exempel på dylika beredningar innefattar fasta bered- ningar för oral administrering såsom tabletter, kapslar, piller, pulver och granulat, flytande beredningar för oral administrering såsom lösningar, suspensioner, siraper, tink- turer eller mixturer och preparat för parenteral administre- ring såsom sterila lösningar, suspensioner eller emulsioner.

De kan även framställas i form av sterila fasta beredningar, som kan upplöses i sterilt vatten, fysiologisk saltlösning eller något annat sterilt injicerbart medium omedelbart före användning.

Optimala doseringar och doseringsscheman för en given dägg- djursvärd kan lätt fastställas av fackmannen. Det inses naturligtvis att den dos som i varje enskilt fall användes varierar med den speciella beredningsformen i fråga, den speciella förening i fråga som användes, administrerings- sättet och det speciella sjukdomstället i fråga värddjuret 10 15 20 25 30 35 502 214 15 och den för behandling avsedda sjukdommen. Många faktorer, som modifierat verkan av läkemedlet, måste beaktas inne- fattande ålder, vikt, kön, diet, administreringstid, admini- streringssätt, utsöndringshastighet, patientens tillstånd, läkemedelskombinationer, reaktionskänslighet och sjukdomens svårighetsgrad.

Följande utföringsexempel åskådliggör uppfinningen och är ej avsedda att begränsa denna, eftersom uppfinningen definieras av de bifogade patentkraven.

I utföringsexemplen nedan registrerades proton- och kolkärn- magnetresonans (NMR)-spektra (under användning av CDCI3 eller D20 som inre referens) och fosfor-NMR-spektra (under använd- ning av en 85%-ig vattenlösning av H3PO4 som yttre referens) på en Bruker WM360-spektrometer. Infraröd spektra (IR) be- stämdes på en Perkin-Elmer 1800 Fourier Transform Infrared spektrofotometer. “Snabbkromatografi' hänförs sig till den metod som beskrives av Still (Still, W. C.; Kahn, M.; Mitra, A.; J. Org. Chem., lglg gå, 2923) och utfördes under använd- ning av E. Merck silikagel (230-400 mesh). Omvänd faskromato- grafi utfördes under ett positivt kvâvetryck under användning av C18 (oktadecylsilan) bunden till silikagel (40 - pm diame- ter, tillverkare J. T. Baker). o os' - '- at- ' ' " n'n V En magnetiskt omrörd suspension av 2,30 g (3,91 mmol) etoposíd i 210 ml torr acetonitril värmdes och gav en nära nog fullständig lösning. Lösningen fick svalna till rums- temperatur och 2,36 ml (13,5 mmol) N,N-diisopropyletylamin tillsattes. Blandningen kyldes därefter till 0°C och 666 mg (4,34 mmol) POCI3 tillsattes via injectionsspruta under 30 sekunder. Blandningen fick långsamt anta rumstemperatur under 2-3 timmar och omröringen fortsattes vid rumstemperatur under 63 timmar. Mot slutet av denna period avlägsnades 20 volymt och behandlades med dietylamin såsom beskrives i Exempel 2. 10 15 20 25 30 35 502 214 16 Aterstoden behandlades med en lösning av 6,0 g (71,4 mmol) natriumbikarbonat i 110 ml avjoniserat vatten, blandningen omrördes vid rumstemperatur under 80 minuter och fördelades därefter mellan 20 mml av en mättad vattenlösning av natriumbikarbonat, 125 ml avjoniserat vatten och 350 ml etylacetat. Det organiska skiktet extraherades ytterligare med 1 x 50 ml avjoniserat vatten och de kombinerade vatten- skikten tvättades med 250 ml etylacetat och underkastades därefter ett vakuum av 0,5 mm vid rumstemperatur under en timme för att avlägsna upplösta lösningsmedel. Den vatten- haltiga delen applicerades därefter på en kolonn med dia- metern 4 cm, vilken innehöll 15 cm oktadecylsilan bunden till silikagel, som hade fyllts på kolonnen i metanol och bringats i jämvikt med vatten. Efter det att hela den vatten- haltiga delen hade applicerats eluerades kolonnen med 175 ml vatten för avlägsnande av oorganiska salter och därefter eluerade 4:1 vatten: CH30H produkten. Koncentrering av lös- ningsmedlet vid 0,5 torr gav 744 mg (36%) av den i rubriken angivna föreningen i ren form som ett färglöst fast material.

Alternativt ger lyofilisering den i rubriken angivna före- ningen i ren form som ett mycket luckert fast material med låg densitet. 1R (nar) 3426, 1775, 1593, 1505, 1466, 1337, 1239, 1191, 1122, 1076, 1034, 963, 927, 666, 676, 651, 640, 697, 664, 664, 547 cm-1. 360 Mnz 16 mmm (02o>¿“ 6,93 (s,1u), 6,59 (s,1n), 6,27 (s,2H), 5,93 (a,2n), 5,09 (a,1n,J=2,6nz), 4,63 , 4,66 (a,1H,J=7,9xz), 4,62 (a,1H,J=5,7nz), 4,47-4,35 (m,2n), 4,24 (dd,1n,J=4,4 aan 10,462), 3,64 3,44-3,30 (m,3n), 3,17-3,07 (m,1H), 1,31 (a,3H,J=5,0nz). 90 una 13c nmm (020) 3 176,5, 151,6, 146,1, 146,1, 135,0, 132,6, 130,9, 127,4, 109,9, 109,5, 107,4, 101,3, 100,4, 99,6, 79,2, 73,7, 72,7, 72,2, 69,1, 67,1, 65,4, 55,6, 42,6, 40,3, 37,5, 16,6. 10 15 20 25 30 35 502 214 17 146 m1: 312 man (020) 5 3,79.

Mass-spektrum (FAB), m/e, 713 (M* + H). C29H31Na2015P kräver M*, 712.

Anal. Beräkn. för C29H31Na2O15P: C 48,89; H 4,39; Na 6,45.

Funnet*: C 48,72; H 4,56; Na 6,56.

* Korrigerat för 8,16% H20 bestämt genom Karl Fischer- analys.

Ezsm2:l_2 Etogosig-4'-(bis-[N,fl-dietyl]fos§ogamid) (V11, X=O, ß1=met1l, ß5=fl, I=fl(§t)2, ß2=ß3=E§) Såsom anges i Exempel 1 sattes 20 v0lym% av reaktionsprodukt- blandningen av etoposid och POCl3 till 4 ml díetylamin och omrördes vid rumstemperatur under 3 timmar. Lösningsmedlet avdrevs i vakuum och den ljust orangefärgade återstoden renades genom snabbkromatografi på silikagel. Eluering med 4% metanol i metylenklorid gav 271,3 mg (46,9%) av den i rubriken angivna föreningen i ren form som ett ljusgult fast material.

Ia (xsr) 3406, 2974, 2936, 2677, 1774, 1596, 1506, 1466, 1467, 1421, 1363, 1339, 1234, 1191, 1162, 1130, 1090, 1079, 1037, 902, ass, 795, 713, 700, 544 cm-1. 360 M2 ln nu (c0c13)<§ 6,79, , 4,67 (d,1n,J=3,2Hz), 4,71 1 (q,1H,J=s,1az), 4,61 (d,1H,J=7,6Hz), 4,57 (d,1n,J=s,2Hz), 4,39 (dd,1H,J=9,1 och 1o,2nz), 4,22-4,13 (m,2n), 3,74 (m,1u), 3,65 (s,6H), 3,55 (m,1n), 3,40 (m,1n), 3,32-3,10 (m,11n), 2,94-2,03 (m,1n), 1,37 (a,3n,a=5,1nz>, 1,10 (m,12n). 146 Mmz 31P nns (c0c13) 8 16,49. 10 15 20 25 30 35 502 214 18 Mass-spektrum (FAB), m/e, 779 (M* + H), 573 (M* - socker). c37n51n2o14P kräver M*, 778.

En magnetiskt omrörd suspension av 2,00 g (3,40 mmol) etoposid i 220 ml torr acetonitril uppvärmdes för att ge en nära nog fullständig lösning. Blandingen kyldes till rums- temperatur och behandlades med 2,05 ml (l1,8 mmol) N,N-diiso- propyletylamin. Blandningen kyldes därefter till 0°C under kväve och 624 mg (4,07 mmol) fosforoxiklorid tillsattes medelst injektionsspruta under 30 sekunder. Blandningen om- rördes magnetiskt vid 0°C under 2,5 timmar och därefter vid rumstemperatur under ytterligare 1,5 timmar. 1,82 g (10,2 mmol) bis-(2-kloretylamin) hydroklorid tillsattes därefter snabbt, följt omedelbart av ytterligare 2,10 ml (12,0 mmol) N,N-diisopropyletylamin. Blandningen omrördes vid rumstempe- ratur under 85 minuter, koncentrerades i vakuum till en volym av cirka 5 ml och upplöstes i 400 ml etylacetat och 5 ml metanol. Den erhållna lösningen tvättades med 2 x 200 ml av en buffert pH 5, 150 ml vatten och 150 ml saltlösning och torkades över Na2SO4/MQSO4. Avdrivning av lösningsmedlet gav ett gul-orangefärgat fast material, som renades genom snabb- kromatografi på silikagel på 3-4% metanol i metylenklorid, varvid man erhöll 1,25 g (45,4%) av den i rubriken angivna föreningen som i ren form som ett färglöst fast material. 360 Mnz ln una (cnc13).; 6,82 (s,1n), 6,s2 (s,1n), 6,27 , 4,90 (a,1a,J=3,4nz), 4,73 (q,1H,J=s,onz), 4,65-4,60 (m,2H>, 4,41 (m,1n), 4,25-4,15 (m,2H), 3,75-3,65 (m,sn>, 3,72 (s,6H), 3,60-3,23 (m,9H), 2,91-2,60 (m,1H), 1,38 (a,3H,J=s,onz). 146 Mmz 319 NMR (cnc13) J 11,16 och 10,96 (tva toppar till följd av chiralt fosfor). 10 15 20 25 30 35 502 214 19 Mass-spektrum (FAB), m/e, 812, 810, 808. c33H39c13No14P kräver M* (3501) 809. t ._,_. _.a.8a En magnetiskt omrörd suspension av 2,04 g (3,47 mmol) etoposid i 175 mml torr acetonitril uppvärmdes för att ge nära nog fullständig lösning. Lösningen fick svalna till rumstemperatur och 2,00 ml (l1,5 mmol) N,N-diísopropyletyl- amin tillsattes därefter. Blandningen kyldes till 0°C och 0,720 g (4,17 mmol) tiofosforylklorid tillsattes via injek- tionsspruta under 30 sekunder. Blandningen fick långsamt anta rumstemperatur under 2-3 timmar och omröringen fortsat- tes vid rumstemperatur under 16 timmar. Blandningen uppvärm- des därefter till 30-35°C och hölls vid denna temperatur under ytterligare 4 timmar. En ny huvudfläck med högre Rf- värde än etoposid observerades vid TLC (5% CH30H i CH2Cl2).

Reaktionsblandningen behandlades med 7,4 g fast natriumbi- karbonat och därefter tillsattes 100 ml avjoniserat vatten.

Blandningen omrördes vid 28-25°C under 1,5 timmar och där- efter vid rumstemperatur under 1,5 timmar. Blandningen för- delades mellan 200 ml avjoniserat vatten, 30 ml av en mättad vattenlösning av natriumbikarbonat och 300 ml etylacetat.

Ytterligare upparbetning och omvänd faskromatografi utfördes medelst det förfarande som har angivits i Exempel 1, varvid man erhöll 1,03 g (40,8%) av den i rubriken angivna före- ningen i ren form som ett färglöst fast material. 360 umz ln Nnm (D20) 6'6,93 (s,1H), 6,60 (6,1H>, 6,21 (s,2H), 6,93 (a,2n), s,o9 (a,1a,J=2,enz>, 4,63 (d,1n,J=7,aaz), 4,63 (d,1n,J=s,7nz), 4,47-4,36 (m,2a), 4,24 (dd,1n,J=4,3 och 1o,saz), 3,64 (s,6u), 3,67-3,52 (m,3n), 3,47-3,29 (m,3n), 3,17-3,07 (m,1u>, 1,31 (d,3a,J=s,onz).

Mass-spektrum (FAB), m/e 728 (M+), 706 (M* + H - Na). c29H31Na2o15Ps kräver n+, 726. 10 15 20 25 30 35 502 214 20 5l2E2E!li_ZE:Efll§fl2l3Q§ En magnetiskt omrörd lösning av 280 mg (0,346 mmol) av före- ningen enligt Exempel 3 i 3 ml CH2Cl2 behandlades med en lösning av 33,5 mg (0,446 mmol) 3-amino-1-propanol i 1 ml CHZCI2. Efter 5 minuter tillsattes ytterligare 31,0 mg (0,413 mmol) 3-amino-1-propanol i 0,5 ml absolut metanol. Reaktions- blandningen renades genom direkt applicering på fyra prepara- tiva TLC-plattor (1 mm, E. Merck silikagel), som framkallades under användning av 5-8% CH30H i CH2Cl2. Eluering av det önskade produktbandet under användning av 5% CH30H i etyl- acetat, följt av avdriving i vakuum och därefter ytterligare torkning vid 0,1 torr, gav 185 mg (63%) av den i rubriken an- givna föreningen i ren form som ett färglöst fast material (blandning av diastereomerer vid fosfor). 360 Mhz la NMR (c0c13)¿§ 7,20 (hr s, 1H>, 6,00 (s, ln), 6,50 ooh 6,40 (25, 1n), 6,26 ooh 6,25 (25, zh), s,91 (o, zu) 4,00 (m, 1n), 4,13 (q, 1H), 4,64-4,57 (m, za), 4,40 (m, 1H), 4,21- 4,13 (m, zu), 3,71, 3,70 (26, sh), 3,11-3,06 (m, 1eH), 2,90- 2,ao (m, 1H), 1,31 (d, sn).

Mass-spektrum (FAB), m/e, 849 851 (M+ + H, 3561, 37Cl). c35H47c12N2o15P kräver M* 040 (35c1) ooh aso (37c1). oyridg1-2-11)o1ou1f¿d]oty111om;ho1foofot (V11. x=o, a1=moty1, 35=H, R2=g3=2-k1o;o:y1, 1=gH(çH2¿2-ss-(3-nitrogyr;oy1-2-311_ En blandning av 248 mg (0,306 mol) av föreningen enligt Exempel 3 och 105 mg (0,393 mmol) 2-(3-nitropyridyl)-1-(2- aminoetyl)-disulfid-hydroklorid behandlades med 7 ml CH2Cl2, följt av tillsats av 100 pl (0,570 mmol) diisopropyletylamin 10 15 20 25 30 35 502 214 21 och 0,5 ml torr metanol. Den erhållna lösningen omrördes vid rumstemperatur under 1,5 timmar och renades därefter genom direkt applicering på fyra preparativa TLC-plattor (1 mm, E.

Merck silikagel), som framkallades under användning av 4-5% CH3OH i etylacetat. Eluering av det önskade produktbandet under användning av 5% CH30H i etylacetat, följt av indunst- ning i vakuum och därefter ytterligare torkning vid 0,1 torr, gav 231,7 mg (75,3%) av den i rubriken angivna föreningen i ren form som ett gulbrunt fast material (blandning av diastereomerer vid fosfor).

In (kar) 1774, 1596, 1564, 1559, 1509, 1466, 1456, 1421, 1397, 1342, 1236, 1160, 1126, 1096, 1036, 1004, 926, 657, 747, 699 cm-1. 360 mm: ln nun (cnc13) 5 6,61 och 6,77 (zm, 16), 6,46 (m, 1n), 7,33 (m, 16), 6,61 (6, 16) 6,51 och 6,50 (26, 1u), 6,26 (br 6, 26), 5,97 (a, za), 4,69 (m, 16), 4,73 (q, 1H), 4,65- 4,52 (m, 36), 4,41 (m, 16), 4,24-4,14 (m, za), 3,71, 3,70 (2s, 68), 3,71-2,85 (m, l9H), 2,68 (br s, IH, OH), 2,37 (br S, 16, on), 1,37 (a, 3n).

Mass-spektrum (FAB), m/e, 1005 1007 (m+ + H, 3501, 3701). c40n4,012N4016Ps2 kräver M+, 1004 (3501) øcn 1006 (3701).

EXfimP§l_1 ßtogosig-4'-gifegylfggfgt (ß1=gfi3, ß5=fi, 37=ß8=figgy1) En magnetiskt omrörd suspension av 10,50 g (l7,84 mmol) etoposid (torkad över P205 vid 80°C/0,5 torr) i 450 ml torr acetonitril behandlades med 4,20 ml (24,1 mmol) diisopropyl- etylamin och därefter tillsattes 2,00 ml (9,65 mmol) difenyl- klorfosfat outspätt via injektionsspruta. Blandningen omrör- des under kväve 2 timmar vid 50°C, i vilket skede kall etoposid hade upplösts. Ytterligare 1,80 ml (8,68 mmol) di- fenylklorfosfat tillsattes och reaktionsblandningen hölls 72 timmar vid 45°C. Efter det att ytterligare 0,75 ml (4,3 mmol) aminbas och 0,80 ml (3,86 mmol) difenylklorfosfat hade till- 10 15 20 25 30 35 502 214 22 sats, omrördes blandningen vid 40-45°C under 27 timmar, behandlades med ytterligare 0,40 ml (1,93 mmol) difenylklor- fosfat och hölls vid 40-45°C under 22 timmar. 20 ml isopropa- nol tillsattes därefter, lösningsmedlet avdrevs i vakuum och den fasta återstoden upplöstes i 500 ml CH2Cl2 och extrahera- des med 400 ml vatten. Vattenskiktet extraherades ytterligare med 100 ml CH2Cl2 och de kombinerade organiska extrakten tvättades med 250 ml saltlösning och torkades (Na2S04/MgSO4).

Rotationsindunstning, följt av snabbkromatografi pá silikagel under användning av 2-3% CH30H i CHZCI2, gav 12,50 g (85%) av den i rubriken angivna föreningen i ren form som ett färglöst fast material.

FAB MS m/e (relativ intensitet) 820 (M+H)*.

Ia (xnr) 3460, 2925, 1775, 1601, 1490 cm-1. ln nun (cnc13)<§ 7,28 (m,8H), 7,15 (m,2H), 6,78 (s,1n), 6,47 (s,1n), 5,95 , 4,71 (m,1n), 4,50 (d,J=7,sHz,1a), 4,58 (d,J=s,1Hz,1n), 4,38 (m,1H>, 4,22-4,13 (m,2H), 3,72-3,60 (m,1u>, 3,48 (s,sH), 3,54-3,28 (m,3H), 3,23 (da,J=14,2, s,3nz,1H>, 2,78 (m,1n), 1,35 (a,J=5,1nz,3H).

Anal. Beräknad för C41H41015P:C 60,00; H 5,04.

Funnet: C 60,20; H 5,16.

Ezsm2sl_§ 0,198 g (0,87 mmol) platinaoxid från en nyöppnad flaska (Aldrich Chemical Co.) sattes till en lösning av 0,79 g (0,962 mmol) etoposid-4'-difenylfosfat (produkt enligt Exempel 7) i 95 ml absolut etanol. Lösningen hydrerades i en Parr-apparat under 45-50 PSI (3,lS-3,50 kg/cmz) 4 timar vid rumstemperatur. Reaktionsblandningen filtrerades genom en dyna av celite under användning av etanol som elueringsmedel.

Koncentrering i vakuum och torkning över P205 under 14 timmar i vakuum gav den önskade produkten som ett vitt fast material (0,627 g; 94%). 10 15 20 25 30 35 502 214 23 FAB MS m/e (relativ intensitet) 669 (M+H)+ IR (Kur) 3440, 2930, 1778, 1604, 1498 cm-1. 1H nun (nnso-dfi) ¿"6,93 (s,1H), 6,46 (a,1H), 6,12 (s,2n), 5,94 (m,2n), 5,17 (bs,1H), 4,86 (d,J=3,93Hz,1H>, 4,64 (q,J=7,5, 5,8nz,1fl), 4,51-4,42 (m,2H), 4,20 (d,J=10,7az,1a), 4,01 (dd,J=12,1, 5,3nz,1H), 3,51 (s,6n), 3,51-2,75 (m,7H), 2,83 (m,1n), 1,16 (d,J=5,1nz,3H). 130 NMR (nnso-d5) 132,3, 128,8, 109,8, 109,7, 107,9, 101,5, 101,2, 98,5, 80,0, 74,3, 72,7, 71,7, 67,6, 67,2, 65,7 55,8, 43,0, 37,1, 20,2, 18,5.

Anal. Beräknad för C29H33O16P. C 50,95; H 5,11 Funnet: C 51,42; H 4,97. 0,85% H20: _§§§mR§l_9 to osi - '-bis R7=R8=cH2cc131 - ' lo e 1 os at VI - 5=C 3, §1=H, Det i Exempel 7 beskrivna förfarandet upprepades under användning av bis(2,2,2-tríklcretyl)klorfosfat för erhållande av den i rubriken angivna föreningen i ett utbyte av 100% som ett färglöst fast material, följt av snabbkromatografí på sílikagel.

IR (Kur) 1780, 1610, 1490, 1415, 1345, 1240, 1040, 960, 725 cm'1. 300 Mm: ln um (c0c13),5 6,81 (s,1n), 6,49 (s,1n), 6,27 (s,2n), 5,98 (dd,2n), 4,88 (d,1a,J=3,4nz), 4,82-4,70 (m,sn), 4,64 , 4,61 (d,1u,J=5,3Hz), 4,41 4,25-4,13 (m,2H), 3,75 (m,1H), 3,73 (s,6n), 3,56 (m,1n), 3,43 (dd,1u), 3,34-3,24 (m,3H), 2,91-2,82 (d,3H,J=4,9uz).

Mass-spektrum (FAB), m/e = 928.9848 (M++H).

C33H36C16015P krävêr 928.9872. 10 15 20 25 30 35 502 214 24 Kommersiellt Dowex 50 x 8-100 katjonbytarharts i väteform (20 g, Aldrich Chemical Co.) behandlades med ett överskott av 1N NaOH. Det erhållna hartset i Na*-formen fylldes på en 2 cm kolonn och bringades i jämnvikt med vatten. Etoposid-4'-fos- fat (produkt från Exempel 8, 1,25 g; 1,87 mmol), upplöst i 25 mml avjoniserat vatten, applicerades på toppen av den fyllda kolonnen och kolonnen eluerades med vatten. De fraktioner som innehöll den i rubriken angivna föreningen sammanfördes, filtrerades och lyofiliserades för erhållande av 1,15 g av den i rubriken angivna föreningen som ett vitt och luckert material.

Metod 5 Till 2,90 g (4,34 mmol) av rått etoposid-4'-fosfat (produkt från Exempel 8) sattes 50 mml avjoniserat vatten och 3,00 g (35,7 mol) natriumbikarbonat. Blandningen omrördes 30 minu- ter vid rumstemperatur, under vilken tid C02-utvecklingen upphörde. Blandningen kromatograferades därefter såsom beskrivits i Exempel 1. Eluering med 300 ml avjoniserat vatten och därefter 4:1 vatten/CH3OH gav 1,90 g (61%) av den i rubriken angivna föreningen i ren form som ett luckert, vitt fast material efter lyofilisering. flxempelJl Det allmänna förfarandet enligt Exempel 2 upprepas med den skillnaden att den däri använda dietylaminen ersättes med nedan angivna aminer för tillhandahållande av motsvarande etoposid-4'-fosforodiamidater. 10 15 20 25 30 35 502 214 25 Förening V11 (x=o, n1=mety1, n5=n, Amin Y=NR2n3) 1:2 33 propylamin H CH2CH2CH3 etanolamin H CH2CH20H metoxietylamin H CH2CH20CH3 N-acetyletylendiamin H CH2CHNC(0)CH3 2-metylallylamin H CH2CH(CH3)=CH2 allylamin H CH2CH=CH2 dimetylaminopropylamin H (CH2)N(CH3)2 N-metyletylendiamín H CH2CH2NCH3 trifluoretylamin H CH2CF3 2-amínoetantiol H CH2CH2SH cyklchexylamin H cyklohexyl 2-amino-1-metoxipropan H CH(CH3)CH2OCH3 2-(etyltío)-etylamin H CH2CH2SCH2CH3 kloretylamin H CH2CH2Cl 4-aminocyklohexanol H 4-OH-cyklohexyl etylmetylamin CH3 CHZCH3 etylbutylâmin CHZCH3 (CH2)3CH3 metylaminoetanol CH3 CH2CH2OH bis(2-kloretyl)amin CH2CH2Cl CH2CH2Cl 2-propylamínoetanol CHZCHZCH3 CH2CH20H 3-metylaminopropionitril CH3 CHZCHZCN piperidin R2+R3 = -(cn2)5- Exempel 12 Det allmänna förfarandet enligt Exempel 3 upprepas med den skillnaden att den däri använda bis(2-kloretyl)aminen ersät- tes med nedan angivna aminer för tillhandahållande av mot- svarande etoposid-klorforoamidater. 10 15 20 25 30 35 502 214 propylamin etanolamin metoxietylamin N-acetyletylendiamín 2-metylallylamin allylamin dimetylaminopropylamin N-metyletylendiamin trifluøretylamin 2-aminoetantiol cyklohexylamin 2-amino-1-metoxipropan 2-(etyltio)-etylamin kloretylamin 4-aminocyklohexanol etylmetylamin etylbutylamin metylaminoetanol dietylamin 2-propylaminoetanol 3-metylaminopropionitril piperidin Exempel lå 26 Förening VII (X=0, R1=metyl, R5=H, Y=c1) Bl CIÉIIIIIIIEEEIEIBIIIEIIZIZEIIIZIIZJIZEF-I! CH3 CHZCH3 CH3 CHZCH3 CHZCHZCH3 CH3 R2+R3 = 33 CH2CH2CH3 CHZCHZOH CH2CH2OCH3 CH2CHNC(O)CH3 CH2CH(CH3)=CH2 CH2CH=CH2 (CH2)N(CH3)2 CH2CH2NCH3 CH2CF3 CHZCHZSH cyklohexyl CH(CH3)CH2OCH3 CHZCHZSCHZCH3 CH2CH2Cl 4-OH-cyklohexyl CHZCH3 (CH2)3CH3 CH2CH2OH CH2CH3 CHZCHZOH CH2CH2CN -(CH2)5_ Det allmänna förfarandet enligt Exempel 5 upprepas men med den skillnaden att den däri använda 3-aminopropanolen ersät- tes med följande aminer för tillhandahållande av motsvarande osymmetriska etoposid-fosforodiamidater. 10 15 20 25 30 35 propylamin etanolamin metoxietylamin N-acetyletylendiamin 2-metylallylamin allylamin dimetylaminopropylamin N-metyletylendíamin trifluoretylamin 2-aminoetantiol cyklohexylamin 2-amino-1-metoxipropan 2-(etyltio)-etylamín kloretylamin 4-amínocyklohexanol etylmetylamin etylbutylamin metylaminoetanol bis(2-kloretyl)amin 2-propylaminoetanol 3-metylaminopropionitril píperidin Ezsm2sl_l1 27 502 214 Förening VII (X=0, R1=metyl, R5=H, Y=NR4a5, R2=R3=cH2cn2c1) B4 SISF-Iåï-'Iiälålliflåï-EEIIIIIEII-'ißälißlåïlåflâ CH3 CHZCH3 CH3 CHZCHZCI CH2CH2CH3 CH3 R4+R5 = BS CHZCHZCH3 CH2CH2OH CHZCHZOCH3 CH2CHNC(O)CH3 CH2CH(CH3)=CH2 CH2CH=CH2 (CH2)N(CH3)2 CHZCHZNCH3 CH2CF3 CH2CH2SH cyklohexyl CH(CH3)CH2OCH3 CHZCHZSCHZCH3 CHZCHZCI 4-OH-cyklohexyl CHZCH3 CH2CH2OH CH2CH2Cl CH2CH2OH CH2CH2CN -(Cfi2>s- Det allmänna förfarandet enligt Exempel 7 upprepas men med den skillnaden att det däri använda difenylklorfosfatet ersättes med de nedan använda klorfosfater för tillhandahål- lande av motsvarande etoposid-4'-fosfat-díestrar (X=O, R1=metyl, R5=H, R7=R8=R enligt nedan).

.E 10 15 20 502 214 28 2RIQJLLI R = metyl etyl bensyl p-nitrobensyl p-nitrofenyl p-brombensyl p-nitrofenetyl cyanoetyl o-(t-butyl)fenyl Exempel lå De allmänna förfarandena i Exemplen 1-16 upprepas men med den skillnaden att de däri använda etoposid-utgângsmateríalen ersättes med motsvarande teniposíd-föreningar för tillhanda- hållande av motsvarande teniposid-produkter.

Claims (22)

10 15 20 502 214 «¿9 PATENTKRAV

1. Föreningar med formeln eller < g “KO H,c ocu, \\P4? Y 1' \~~RaRa VII van Rs är H och RI är (C 1_10)alkyl; (C2_10)alkeny1; (C5_6)cykloalkyl; 2-fi1ryl; 2-tienyl; (C6_10)aryl; (C7_14)ara1kyl; eller (C8_14)aralkenyl, där var och en av de aroma- tiska ringarna kan vara osubstituerade eller substituerade med en eller flera grupper, som utgörs av halo, (C1_8)alkyl, (C1_8)alkoxi, hydroxi, nitro och/eller amino; eller RI och RS vardera är (C1_8)alkyl; eller RI och Ra och den kolatom till vilken de är bundna tillsammans bildar en (C5_6)cykloalky1grupp; X är syre eller svavel; R7 och RB oberoende av varandra är H, (C1_5)alkyl, A-substituerad (C 1_5)alky1, (C3_6)cyk1oalkyl, A-substituerad (C3_6)cyk1oalky1, (C6_10)aryl, A-substituerad aryl, alkyl-substituerad aryl, (C7_14)aralkyl, A-substituerad aralkyl eller alkyl- substituerad aralkyl; där nämnda A-substituenter är en eller flera grupper, som utgörs av hydroxi, alkoxi, alkanoyloxi, cyano, amino, alkylamino, dialkylamino, karboxi, alkyltio, merkapto, merkaptotio, nitropyridyldisulfid, alkanoylamino, alkanoyl, karbamoyl, nitro eller halo; Y är Cl, OH eller NR4R5; 10 15 502 214 30 R2, R3, R4 och H5 vardera oberoende är H, (C1_5)a1kyl, (C2_5)alkenyl, (C3_6)cykloa1kyl, A-substituerad (C1_5)alky1, A-substituerad (C2_5)alkenyl eller A-substituerad (C3_6)cykloalkyl; eller R2, H3 och den kväveatom till vilken de är bundna tillsammans är en 3- till 6-ledad ring; eller H4, R5 och den kväveatom till vilken de är bundna tillsammans är en 3- till 6-ledad ring; varvid nämnda A- substitutenter har ovan angivna betydelser; och farmaceutiskt godtagbara salter därav.

2. Föreningar enligt krav 1 med formeln ax,JQç;::šš::::ë¿,,o H ON ( o -"*S u,c ocu, ~\P4$ "°" \“nu vari RI, H6 och X har ovan angivna betydelser; och farmaceutiskt godtagbara salter därav.

3. Föreningar enligt krav 1 eller 2, kännetecknade därav, att RS är H och Rl är metyl eller 2-tienyl.

4. Föreningar enligt krav 1, kännetecknade därav, att det farmaceutiskt godtagbara saltet är natriumsaltet.

5. Föreningen etoposid-4'-fosfat-dinatriumsalt enligt krav 1 med formeln 502 214 P<0Na)a I I O

6. Föreningen etoposid-ff-tiofosfat-dinatriumsalt enligt krav 1 med formeln ca;-/<Éâ:::šš::::ïšx/,0 H ou < IWKU * 0 H,c OCH, P(0Ni)e ll S

7. Föreningar enligt krav 1, kännetecknade därav, att R7 och RB oberoende är (C1_5)a1ky1; ha1o-substitue- rad (C1_5)a1ky1; cyano-substituerad (C1_5)alkyl; (C6_10)aryl; eller (C7_14)aralkyl; varvid ringdelen i nämnda aryl- och arylalkylgrupper eventuellt är substituerad med alkyl, halo eller nitro.

8. Föreningar enligt krav 7, kännetecknade därav, att Rl är metyl. 10 15 20 502 214 3.2

9. Föreningar enligt krav 8, kännetecknade därav, att X är syre.

10. Föreningar enligt krav 9, kännetecknade därav, att R7 och H8 vardera är fenyl eller vardera är 2,2,2- trikloretyl.

11. Föreningar enligt krav 1, kännetecknade därav, att Re är H; RI är metyl eller 2-tienyl; Y är Cl eller NR4R5; X är syre eller svavel; och H2, R3, R4 och R5 vardera oberoende är H, (C1_5)alky1, halo-substituerad (C1_5)alkyl, hydroxi-substituerad (C1_5)alkyl eller nitropyridyldisulfid-substituerad (C1_5)alkyl.

12. Föreningar enligt krav 11, kännetecknade därav, att R2 och RB vardera är 2-kloretyl; och Y är Cl.

13. Föreningar enligt krav 11, kännetecknade därav, att Y är NR4R5.

14. Föreningar enligt krav 13, kännetecknade därav, att R2, R3, R4 och R5 vardera är etyl.

15. Föreningar enligt krav 13, kännetecknade därav, att R2 och R3 vardera är 2-kloretyl; R4 är H; och R5 är B-hydroxipropyl eller man -cH cH -s-s-'l/ \> a a w

16. Mellanprodukter med formeln 502 214 .JJ RÖ “Åïíšíë/fl n ou ( .,,,,«° 3 o u,c ca, 5:1, X vari RI, H6 och X har i kravet 1 angivna betydelser.

17. Föreningar enligt krav 16, kännetecknade därav, att Re är H; RI är metyl; och X är syre eller svavel.

18. Farmaceutisk beredning, kännetecknad därav, att den innehåller en antitumöreffektiv mängd av en förening enligt krav 1 och en farmaceutiskt godtagbar bärare.

19. Beredning enligt krav 18, kännetecknad därav, att föreningen är etoposid-IY-fosfat-dinatriumsalt.

20. Förfarande för framställning av en förening med formeln H,c ocu, oP¿ H X 502 214 J? vari RI, H6 och X har i kravet 1 angivna betydelser, eller ett farmaceutiskt i godtagbart salt därav, kännetecknat därav, att man (a) omvandlar en förening med formeln DC 5 till en förening med formeln X 10 *sa oüoo-ea, X vari RI, RG och X har ovan angivna betydelser och G är en fosfatskyddande grupp; (b) avlägsnar den fosfatskyddande gruppen; och (c) eventuellt omvandlar produkten från steg (b) till ett farmaceutiskt godtag- bart salt. 5 Û 2 21 4 35 "

21. Förfarande enligt krav 20, kännetecknat därav, att man i steg (a) omsätter en förening med formeln IX med en förening med formeln Hal-P(X)(O-G)2, där Hal är en halogen och X och G har ovan angivna betydelser, i acetonitril eller (C2_5)CN och i närvaro av en 5 trialkylarnin.

22. Förfarande för framställning av en förening enligt krav 1, kännetecknat därav, att man A) för framställning av en förening med formeln V (a) omsätter en förening med formeln (1) nå H img OH _ 0 ' ( CH3 CH, H 10 med en förening med formeln P(X)Cl3, vari RI, RS och X har i kravet 1 angivna betydelser, och i närvaro av en väteacceptor för bildning av en mellanprodukt med 1) formeln (2) och R 6 “we/O ca, ocna -Puncla (2) 502 214 _34, (b) hydrolyserar en förening med formeln (2), eventuellt i närvaro av en bas, för bildning av en förening med formeln (3) eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav; eller (3) (c) omsätter en förening med formeln (2) med minst en ekvivalent vardera av 5 R7OH och R8OH, där R7 och RS har i kravet 1 angivna betydelser, med det förbehållet att R7 och Rs ej båda är väte, och i närvaro av en väteacceptor; och att man, då en av R7 eller Rs är väte, eventuellt omvandlar föreningen till ett farmaceutiskt godtagbart salt genom behandling med en bas; och att man B) för framställning av en förening med formeln VII 10 (a) omsätter en mellanprodukt med ovan angivna formel (2) med en amin med formeln HNR2R3, där H2 och H3 har i kravet 1 angivna betydelser, eller ett syraadditionssalt därav för bildning av en förening med formeln (4); och (4) 37 502 214 (b) eventuellt omsätter en förening med formeln (4) med en andra amin med formeln HNR4R5, där H4 och R5 har i kravet 1 angivna betydelser, eller ett syraadditionssalt därav, for bildning av en förening med formeln (5); eller RÖ I! g ca, ca, _p,un'n° (s) 'Å \un'n° (c) hydrolyserar en förening med formeln (4), eventuellt i närvaro av en bas, 5 fór bildning av en förening med formeln (6) eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav (S) ca, _,,ou ca,