PT98539B - Processo de preparacao de oxidos de difenil-(1,8-dissubstituido-octa-2,3,5-tri-en-7-ino)fosfeno de composicoes farmaceuticas e de clivagem de adn - Google Patents

Description

MEMÓRIA.....DESCRITIVA

Campo.....técnico presente invento refere-se ά um processo de preparação de novos compostos antibióticos e antitumor, para clivagem de ADN, particularmente, de moléculas que contêm uma funcionalidade aleno-cis-eno-ino terminada em fosfeno-óxido»

Arte anterior

Desde há muito tempo que os produtos naturais têm captado o interesse e a imaginação dos químicos interessados no isolamento, na síntese e na química medicinai, «devido às suas estruturas fascinantes e actividade biológica» As moléculas concebidas pelo Homem (moléculas de projecto) com propriedades químicas e biológicas pré-definidas poderiam enriquecer e complementar este arsenal de substâncias e aumentar a capacidade da. quimica em proporcionar compostos biologicamente e terapeuticamente úteis.,

No presente invento descrevem-se a concepção, síntese e actividade química e biológica de novas moléculas de projecto com propriedades de clivagem de ADN e antitumor; para alguns exemplos recentes de moléculas de projecto para clivagem de ADN, ver: (a)

Nicolaou et al», Am,......Chem,......Soc»., 110:7247 (1988); (b) Nicolaou et al», Angew., C.hem.,„ Int.» Ed, Eng.1,.., 2.8:1272 (1989); (c) Povsic et al», J. Am» Chem. Soc».., 1.11:3059 (1989); (d) Hertsberg et al», à.,,

Am,........Chem.».........Soc,..» 104:313 (1982); (e) Moser et al», Science, 2.38;

:645 (1987); (f) Co rey et al», J,...........Am. Chem,...........Soc, , 111:8523 (1989); (g) Pyle et al.., J,.......Am,........Chem..,....Soc, 111:4520 (1989); (h)

Sigman, J,........Am,.......Chem,........Soc,., 111:4941 (1989); (i) Ohno et al»,

Am,.........Chem»........Soc,., 1.12.:0000 (1990; (j) Daníshefsky, J,.........Org,.........Chem».

Sqç.,., 54:2781 (1989) »

Adicionalmente, Nagata et al», T.etrahedron.........Lett,., 3.0:4995 (1989), referiram a síntese de uma molécula contendo uma funcionalidade aleno-eno-ino que continha, também, um grupo fosfeno-óxido» Este fosfeno-óxido estava ligada ao grupo aleno proximal da ligação dupla, em comparação com os compostos que aqui depois se descrevem nos quais o grupo fosfeno-óxido está ligado à

945 212.0 (POR)

posição terminal do grupo aleno, distai da ligação dupla» Nagata et al» não referem qualquer estudo biológico»

Além dos compostos concebidos pelo Homem para clivagem de AON, também têm sido referidos e estudados compostos eno~di~ino de ocorrência natural. A caliqueamicina e a esperimicina, que têm porções aglícona substancialmente idênticas e porções açúcar diferentes, [(a) Lee et al», 3.»..........Am._______Chem»...........S.oç..„., 109:3464, 3466 (1987); (b) Nicolaou et al», J-.......Am. Chem.......Soc.,.., 110.:7247 (1988);

(c) Hawley et al», Proc..........Nat'1......Acad..........Sei.».........USA, 86:1105 (1989);

(d) fâolik et al», J» Am»........Chem.,.........Soe»., 109:3461, 3462 (1987))'] e a neocarzinostatina, que também contém cadeias laterais de derivados de açúcar L'(a) i~do et al», 2.6:331 (1984);

(b) Chin et al», Biochemistry, 27:8106 (1988); (c) Lee et al»,

8iochemist ry. 28:1019 (1989)] estão incluídas entre os eno-di-inos de ocorrência natural»

Bteye.....sumário.....do.....invento presente invento refere-se a um processo de preparação de compostos alerio-eno-ino terminados em fosfeno-óxido, que possuem actividades de clivagem de ADN, aritimícrobianas e de inibição do crescimento de tumores» Um composto preparado de acordo com o presente invento é um difenil-(l,8”dissubstituído”octa-2,3,5~trieno-7-íno)fosfeno-óxido com a estrutura geral como se mostra a seguir _Λ

P(Ph)₂

II

R²

na qual Ph é fenilo;

R¹ e R² são hidrogénio (H) ou R¹ e R², conjuntamente com os átomos de carbono não saturados a que estão ligados (o grupo vi72 945

2.12.0 (POR) ~4~ nxlxdeno interveniente ilustrado, formam um anel aromático mono ou bicíclico;

R·² é hidroxilo ou aci10^„₆-οχίlo; e

R^ é hidroximetilo, aciICj^-hidroximetilo ou fenilo.

Quando R¹ e R², conjuntamente com o© átomos de carbono não saturados a que estão ligados, formam um anel aromático mono ou bicíclico este anel é, preferivelmente, um anel benzeno ou naftaleno. Prefere-se também que seja hidroxilo e que R^ seja hidroximetilo ou fenilo.

presente invento também se refere ao processo de preparação de uma composição farmacêutica. Para tal dissolve-se ou dispersa-se um composto, anteriormente descrito, num diluente fisiologicamente tolerável, numa quantidade eficaz para produzir um efeito desejado, como por exemplo a clivagem de ADN, actxvxdade antimicrobiana ou inibição do crescimento de tumores.

presente invento refere-se, também, a um método para a clivagem de ADN, inibição do crescimento de tumores ou para matar micróbxos. Para tal põe-se a composição anteriormente descrita, em contacto com o ADN a ser clivado, com as células de tumor alvo cujo crescimento se pretende inibir ou com as células microbianas alvo que se pretendem matar. Mantém-se este contacto durante um período de tempo suficiente para se obter o resultado desejado. Pode-se administrar uma composição repetxdamente.

Breve.....descrição.....dos.....desenhos

Nos desenhos, que constituem uma porção do presente invento, a Figura 1 mostra um esquema reaccional (Esquema 1) que ilustra um mecanismo racional para a preparação de um composto do presente invento (III) e a sua reacção durante a clivagem de ADN pelos percursos a ou b. Neste esquema, R^ e R₂ são substituintes generalizados que são aqui especificamente descritos como CH₂R³ e R⁴, respectivamente, X é fósforo ou enxofre e n é um para o enxofre ou dois para o fósforo, e Ph é fenilo. As estruturas entre parêntesis rectos são intermediários propostos e as setas curvas indicam as posições de rearranjo de ligações e ataque por ADN.

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-5A Figura 2 mostra um esquema reaccional (Esquema 2) que ilustra as reacções de ciclização de vãrios compostos do presente invento. Neste esquema Ph é fenilo, R-^ e R₂ sâo CH₂R^Ó e R⁴ como se definirá pósteríormente, e Si^BuMe₂ ® t-butíIdimetíIsilílo.

A Figura 3 mostra um esquema reaccional (Esquema 3) para a preparação de compostos do presente invento através de compostos intermediários. As percentagens entre parêntesis sâo os rendimentos de cada passo indicado. Os grupos R sâo como se indica, sendo Ph e Sí^BuMe2 definidos como anteriormente.

A Figura 4, em três painéis (Fig- 4a, 4b e 4c) são fotografias de geles de agarose a 1 por cento, corados com brometo de etidio, que ilustram a clivagem de AON ^X174, da forma I, pelos compostos do presente invento, após 48 horas às temperaturas indicadas. A faixa 1 de cada painel é o AON de partida. As faixas 2-5 de cada painel continham os compostos lb, 2b, 3b e 4b, respectivamente, presentes numa concentração de 1000 μΜ, a um valor de pH de 8,5. Os números I, II e III à esquerda da Fig. 4a indicam as posições de migração do ADN das formas I, II e III, respectivamente«

A Figura 5 é uma fotografia de culturas de células, coradas com violeta de cristal, de carcinoma de pâncreas humano MIA PaCa-2 que ilustra a inibição do crescimento dessas células, «apõs quatro dias, pelo composto 4b nas concentrações indicadas.

A Figura 6 mostra resultados similares aos da Figura 5, usando o composto lb.

A Figura 7 é um gráfico que mostra a percentagem de coloração das células de controlo de células de carcinoma de pâncreas humano MIA PaCa-2, «após quatro dias de crescimento na presença dos compostos lb-4b. Neste gráfico os pontos experimentais estão apresentados como se segue: composto lb ~ quadrados a cheio; composto 2b ~ círculos em branco, composto 3b ~ círculos a cheio; e compostos 4b ~ quadrados em branco.

945 212.0 (POR.)

Descrição.....detalhada.....do.....invento

I ·· Antecedentes

Esquema 1 da Figura 1 ilustra um mecanismo racional para a formação e acção desta nova classe de compostos. Assim pôs-se a hipótese de os compostos propargilicos do tipo I poderem ser Induzidos a rearranjarem-se num sistema alénico conjugado,, 111, sob a Influência de PhSCl ou de PhgPCl,, através dos Intermediários II. Assim, esperava-se que as estruturas III reagissem segundo uma reacção de ciclizaçâo de Meyers C(a) Meyers et al», d..........Am».

Chem........Soc. , 111:8057 (1989); (b) Meyers et al., d.»..........Am...... Chem.,

SLOSasi 11.1.:9130 (1990) 5 (c) Kappen et al», d...........Am...........Chem............Soç...,

112:2797 (1990)] para formar radicais IV (percurso a) ou que sofressem um ataque nucleófilo originado pelo AON para formar a espécie V (percurso b), de acordo com estudos recentes oom sulfonas propargi li cas e alénicas» (' Nicolaou et al., ......í..nt...

E.d„,.......Enql.. 28:1272 (1989)3. Qualquer dos percursos deverá causar a clivagem de AON.

Verifícou-se que os compostos de enxofre do tipo III são bastante lábeis e não adequados para estudos práticos de AON e de actividades antibióticas e aritítumorais. No entanto, verifícou-se que a série de compostos de fósforo era facilmente preparada e manuseada, e exibia propriedades de clivagem de AON e actividade antltumor na gama de temperaturas de 37 a 47^0, conforme depois se descreve.

11» Os compostos

Um composto do presente invento é um difenil~(i,8~dissubsti~ tuído-octa-2,3,5-trIen-7-ino)fosfeno-óxido ou um seu derivado de anel fundido na posição 5(6). Uma estrutura geral para esse composto é ilustrada na fórmula estrutural I que se apresenta seguidamente;

(segue fórmula I) '72 945

212.0 (POR) ~7~

onde Ph é fenilo;

p.l _e p2 _s£_o hidrogénio (H) ou R-*· e R^,, conjuntamente com os átomos de carbono não saturados aos quais estão ligadas (o grupo vinilideno interveniente) formam um anel aromático mono ou bicíclico;

R'³ é hidroxilo ou acilC-^-^^oxilo; e

R⁴ é hidroximetilo, acilC₁„_é,-hidroxímetilo ou fenilo.

Pode-se observar que os grupos alénícos e acetilénícos estão numa posição cis. um relativamente ao outro. Do mesmo modo, pode-se dizer que os grupos R¹ e R² das posições 5 e 6 estão numa posição cis em relação à ligação dupla da posição 5.

De acordo com a fórmula anterior, a ligação dupla da posição 5 também pode ser partilhada com um sistema de anel aromático, que contém um ou dois anéis fundidos. Esses sistemas de anel incluem benzeno, naftaleno, pirideno, quinolina, isoquínolina, pirazina, quinoxaiina, benzofurano, furano, tiofeno, oxazole, pirimídeno, benzotiofeno, ísobenzofurano, isobenzotíofeno, N-alquilíndole, N-alquilC^^^-iso-indole, N-alquilC^^-benzimidazolc e benzoxazole, substituído ou não substituído.

Nas designações anteriores um grupo N-alquiloC^„₆ é um grupo alquiloC^„& ligado a um ãtomo de azoto secundário de um anel aromático apropriado. Exemplos de grupos alquíloCjL„₆ incluem metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, sec-butilo, pentílo, hexilo, 2-metil-hexilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo.

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-80.¾ sistemas de anel aromático anteriores podem, eles próprios, estar também substituídos em uma ou em todas as posições disponíveis, i.e. numa posição que não seja partilhada com a ligação dupla 5(6). Exemplos de grupos substituintes incluem alquiloC-^^, hidroxilo, alcoxi loCacilC_lm6 oxilo, nitro e halogéneo, excluindo o iodo, i.e., o flúor, o cloro ou o bromo.

Um grupo acilC|_₆-oxílo anteriormente referido é um radical formado por esterificação de um grupo hidroxilo, de um derivado (aleno-eno-ino)fosfeno-óxido anteriormente referido, com um ãcido carboxilícoC₁„_é>.. Exemplos de grupos acíIC^-^-oxilo incluem formoxilo, acetoxílo, propionoxilo, hexanoiloxílo e cíclopentariocarboxx lo.

De entre os vários compostos anteriores preferem-se os compostos onde R³· e R^z são hidrogénio ou formam, conjuntamente com a ligação dupla da posição 5 (o grupo vinilideno interveniente), um anel benzeno ou naftaleno. Também se prefere que R^ seja hxdroxiio e que R⁴ seja hidroximetilo ou fenilo.

Os compostos particularmente preferidos incluem:

a) 2-difeniIfosforo-nona-2,3,5-tríen-7-íno~l,9~díol; i.e. um

IO T composto de fórmula I onde R⁴- e R' são hidrogénio, R^u é hidroxilo e R⁴ é hidroximetilo (Composto Ib);

b) 2-dxfenxlfosforo-8-fenilocta-2,3,5~trxen-7-xno”l”Ol; i.e. um composto de fórmula I onde R·*· e R² são hidrogénio, R^ é hidroxilo e R⁴ é fenilo (Composto 4b);

c) 1- (3-di.f eni If osf oro-3-hídroxiprop-l ,2-dienil)-2-(3-hidroxíprop-l”inil)benzeno; i.e. um composto de fórmula I onde R¹ e R'~, conjuntamente com a ligação dupla interveniente, formam um anel benzeno, R^ú é hidroxilo e R⁴ é hidroximetilo (Composto 2b); &

d) 2-(3“dífeniIfosforo~3-hídroxíprop-l,2~diení1)-3-(3-hidroxxprop-l-inil)naftaleno; i.e. um composto de fórmula I onde R·¹ e R², conjuntamente com a ligação dupla interveniente, formam um anel naftaleno, R^ é hidroxilo e R⁴ é hidroximetilo (Composto 3b).

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212.0 (POR)

III. Síntese.....dos.....compostos.

Um composto do presente invento pode ser facilmente preparado. Na Figura 3 apresenta-se urn esquema sintético generalizado (Esquema 3), para a preparação dos compostos lb, 2b, 3b e 4b. É de notar que no Esquema 3 se utilizam os grupos R indexados com subscrito em vez de grupos R indexados com sobrescritos para diferenciar os grupos R do esquema dos grupos R com sobrescritos referidos anteriormente. De qualquer modo os compostos ilustrados são os mesmos.

Faz-se reagir um iodeto de hidroximetilviriilo apropriado, p.e., l-iodo-3-hidroxiprop-l-eno, álcool 2-iodobenzílico ou álcool 3-iodo~2~naftilico (Compostos 5-7), com um ligeiro excesso de um derivado de acetileno apropriado, tal como álcool t-butildimetilsil.il(TBS)-propargiIico ou fenilacetileno, na. presença de trifenilfosfeno, cloreto de paládio (II), iodeto cuproso e dietilamina para formar um eno-inol conjugado (Compostos 8-11).

A porção álcool dessa molécula é oxidada para formar o aldeído correspondente, com dióxido de manganês. Depois, faz-se reagir o aldeído com álcool TBS-propargílico na presença de uma base forte, tal como butil-lítio, para formar urn álcool contendo uma ligação dupla e duas ligações triplas (Compostos 12-15).

A reacção do álcool eno-di-íno com clorodifenilfosfeno forma um derivado (aleno-eno-ino)fosfeno-óxido, bloqueado no 0 (Compostos la, 2a, 3a e 4a). A remoção dos grupos TBS, com ácido fluoridrico por exemplo, em acetonitrilo, forma o composto desejado (Compostos lb, 2b, 3b e 4b).

Um composto aromático de halo-hídroximetilo de partida é, ele próprio, tipicamente, um composto conhecido ou pode ser preparado por processos análogos aos processos referidos na arte. Num exemplo de síntese, um aminoácido aromático vicinal, o ãcido 3-amino-2-naftenoico, é o material de partida para a formação do álcool 3-iodo-2~naftilico.

grupo carboxilo é esterificado com um álcool de alquilo72 945

212.0 (POR)

-10“ ^1-6 conveniente, tal como metanol, e o éster é reduzido para formar o derivado de hidroximetilo. Um agente de redução conveniente e o hidreto de di-isobutilalumíηίo (DIBAL). Por diazotização, seguida de reacção com um sal de iodeto, tal como Kl, forma-se um iodeto hidroximetilo aromático vicinal.

Vários aminoácidos aromáticos vicinais estão disponíveis comercialmente. Por exemplo, a Aldrich Chemical Company de Milwaukee, WI-E.U.A., comercializa o ácido aminonaftõíco anterior, bem como o ácido 2-aminonicotínico, o ácido 3-aminopirazino-2~carboxilico e o ácido antranílico (ácido 2-aminobenzóico)„ A Aldrich Chemical também comercializa o ácido 2-iodobenzóico.

Adicionalmente, vários compostos de hidroximetilo estão disponíveis comercíalmente e necessitam apenas de ser adequadamente halogenados para utilização no âmbito do presente invento. Por exemplo, todas as três das hidroximetilpíridínas, ambos os hidroximetilnaftalenos e o indole-3-carbínol estão também disponíveis na Aldrich, bem como o álcool 2-iodobenzílico.

Os compostos de hidroximetilo aromáticos também podem ser preparados a partir dos ésteres de ácido carboxílico correspondentes, conforme se referiu anteriormente. Continuando com o mesmo fornecedor, a Aldrich Chemical Co. comercializa três ácidos quinolino-carboxílicos, dois ácidos iridole-carboxí licos e um indole-carboxaldeído, bem como o ácido pirazíno-carboxilíco e o cloreto de guinoxalino-carbonilo, podendo todos ser esterificados e reduzidos para formar os compostos de hidroximetilo correspondentes, depois halogenados e usados para formar um composto do invento.

IV- Composições.....farmacêuticas

Um composto cujo processo de preparação se descreve no presente invento, é útil como agente de clivagem de ADN e, também, como agente antimicrobiano (antibiótico) e cítóxico (antitumor), tal como o são a dinamicina A, a caliqueamicína, a esperímicina e a rieocarzinostatina. Um composto do presente invento também pode, deste modo, ser designado por agente activo ou ingrediente ac-

945

212.0 (POR) tivo.

11’

A clivagem de ADN pode ser determinada usando as técnicas que a seguir se descrevem bem como as descritas por Man tio et al., J,.....0 r g -......Chem..., 54:2781 (1989); Nicolaou et a 1., J......Am.,.....Chem..,..

Sp.Ç..,., 11.0:7147 (.1989); Nicolaou et al „ , 3..........Am.........Chem.,........8o.ç.,., 110:

:7247 (1988) ou Zein et al., Science» 240:1198 (.1988) e as citações aí contidas. Os ensaios antimicrobianos e antítumor também podem ser realizados por técnicas descritas na Patente dos E.U.A.. NS. 4 837 206, cuja descrição é aqui incorporada como referência, bem como pelos procedimentos que aqui se descrevem a seguir.

Também se pode mostrar que um composto anteriormente descrito pode reagir segundo uma reacção de cicloaromatização de Bergman na presença de benzilmercaptano, trietilamina e 1,4-ciclo-oxadieno, como se discute em Haseltine et al., ..........Am,...........Chem,

Soc , 111:7638 (1989). Esta reacção forma um produto tetracíclico, tal como o gue se forma na clivagem de AON, e pode ser usada como um co-pesquisa para seleccionar compostos mais activos.

Assim, coritempla~se uma composição farmacêutica que contenha um composto do invento, anteriormente descrito, como agente activo. Prepara-se uma composição farmacêutica por qualquer um dos processos bem conhecidos na arte da. farmácia, e todos estes processos envolvem o contacto do composto activo e do seu transportador. Para uso terapêutico, pode-se administrar um dos compostos do presente invento na forma de uma composição farmacêutica convencional. Estas composições podem ser formuladas de forma a que sejam adequadas para administração oral ou parentérica, ou como supositórios. Nestas composições o agente é tipicamente dissolvido ou disperso num transportador fisíologícamente tolerável.

Um transportador ou diluente é um material útil para a administração do composto activo e deve ser farmaceuticamente aceitável, no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da composição, e não deve ser pernicioso para o seu receptor.

Assim, tal como são aqui usadas, as frases fisíologícamente

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tolerãvel ou farmaceuticamente aceitável são usadas intermutavelmente e referem-se a entidades moleculares e composições que não produzem uma reacção alérgica ou desfavorável, similar, tal como perturbações gástricas, tonturas e similares, quando administrados a um mamífero» Um transportador fisiologicamente tolerável pode tomar uma .larga variedade de formas dependendo da preparação desejada para a administração e do modo de administração pretendido.

Como exemplo de uma composição util pode-se utilizar um composto do presente invento dissolvido ou disperso numa composição líquida, tal como uma suspensão ou solução esterilizada, ou como um preparado ísotónico contendo os conservantes adequados- Os meios injectáveis constituídos por soluções salinas ou de glucose, aquosas, injectáveis, tamponadas ou não tamponadas, ísotónícas e esterilizadas, bem como a água, por si só, ou uma solução aquosa de etanol, são partícularmente adequados para os presentes objectivos» F”ormas líquidas adicionais, onde estes compostos podem ser incorporados para administração, incluem emulsões aromatizadas como óleos alimentares, tais como, óleo de semente de algodão, óleo de sésamo, óleo de coco, óleo de amendoim e similares, bem como elixires e veículos farmacêuticos similares- Exemplos adicionais de diluentes líquidos podem ser encontrados em

Remmington^s Pharmaceutical.........Sciences, Mack Publishing Co», Easton, PA (E-U-A-) (1980),

Um agente activo também pode ser administrado sob a forma de lipossomas» Como é bem conhecido na arte, os lipossomas são, geralmente, derivados de fosfolípídos ou de outras substâncias lípidas» Os lipossomas são formados por cristais líquidos hidratados, mono ou multilamelares, dispersos num meio aquoso» Pode-se· usar qualquer lipído não tóxico, fisiologicamente aceitável e metabolizãvel, capaz de formar lipossomas» As presentes composições sob a forma de lipossoma podem conter estabilizantes, conservantes, excipientes e similares, além do agente» Os 'lipidos preferidos são os fosfolipidos e as fosfatidilcolínas (lecitinas), quer naturais quer sintéticas» ^{72 945} ΖΖ

212.0 (POR) —13™

Os métodos para a formação do lipossomas são conhecidos na arte. Ver, por exemplo, Prescott, Ed., Methods.......in........ce.1'1.........fâiqlqgy.,

Vol. XIV, Academíc press, New York, N.Y., E.U.A. (1976), p. 33 et seq..

Um agente activo também pode ser usado eni composições, tais como comprimidos ou pílulas, contendo, preferivelmente, uma unidade de dosagem do composto. Com este objectivo rnistura-se o agente (ingrediente activo) com ingredientes convencionais para a preparação de comprimidos, tais como amido de milho, lactose, sacarose, sorbitol, talco, ãcido esteárico, estearato de magnésio, fosfato de dicálcio, gomas ou materiais similares, usados como transportadores fisiologicamente toleráveis, não tóxicos. Os comprimidos ou pílulas podem ser laminados ou constituídos de outro modo, para proporcionarem formas de dosagem unitária que permitam uma acção prolongada ou retardada,

Oeve ser entendido que, além dos ingredientes transportadores anteriormente referidos, a formulação farmacêutica aqui descrita pode incluir, conforme apropriado, um ou mais ingredientes transportadores adicionais, tais como diluentes, tampões, agentes aromatizantes, ligantes, agentes activos de superfície, espessantes, lubrificantes, conservantes (incluindo antioxidantes) e similares, e substâncias incluídas com o propósito de tornar a formulação isotónica com o sangue do receptor desejado.

Os comprimidos ou pílulas também podem ser preparados com uma camada entérica, na forma de um envelope que serve para resistir à desintegração no estômago e que permite que o ingrediente activo passe intacto para o duodeno ou que a sua libertação seja retardada. Pode-se usar uma variedade de materiais para formar essa camada ou revestimento entérico, incluindo ácidos poliméricos ou misturas desses ácidos com materiais tais como goma-'iaca, goma-laca e álcool cetilíco, acetato e ftalato de celulose, e similares. Um revestimento entérico particularmente adequado compreende um copolímero de estireno/ácido maleico, conjuntamente com materiais conhecidos que contribuem para as propriedades entéricas do revestimento. Na Patente dos E.U.A. NQ.

945 212»0 (POR)

J$!

Ss~14“

079 125 de Sipos, que é aqui incorporada como referência, descrevem-se métodos para a produção de comprimidos revestidos entericamente.

termo dose unitária, tal como é aqui usado, designa unidades fisicamente discretas adequadas como unidades de dosagem para administração a animais de sangue quente, contendo, cada unidade, uma quantidade predeterminada de agente, calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, conjuntamente com o diluente farmaceuticamente aceitável. Exemplos de formas de dosagem unitária adequadas, de acordo com o presente Invento, Incluem comprimidos, cápsulas, pílulas, pacotes de pó, grânulos, bolachas, hóstias, colheres de chã cheias, conta-gotas, ámpolas, frascos, múltiplos segregados de qualquer uma das anteriores e similares»

Um composto do presente invento está presente, numa tal composição farmacêutica, numa quantidade eficaz para se obter o resultado desejado» Por exemplo, quando se pretende obter a clivagem de AON in.......vitro, pode-se utilizar um composto do presente

Invento numa quantidade suficiente para proporcionar uma concentração de cerca de 1,0 a cerca de 5000 mlcromolar (μΜ), com uma concentração de AON de cerca de 0,02 pg/μΐ» Como agente citóxico (antitumor) uma quantidade eficaz de um composto do presente Invento é de cerca de 0,1 a cerca de 15 mg por quilograma de peso de corpo ou uma quantidade suficiente para proporcionar uma concentração de cerca de 0,01 a cerca de 50 pg/ml na corrente sanguínea» Um composto do presente invento exibe actividade antimicrobiaria numa gama de concentrações de cerca de 0,01 a cerca de 50 pg/ml» As concentrações e dosagens anteriores variam com o composto particular, do presente invento, usado bem como com o alvo, p.e» AON, tumor e micróbio, como é bem conhecido»

V ,· Métodos

Um composto do presente Invento é util na clivagem de AON, como aritimlcroblario e, também, na Inibição do crescimento de células neoplástlcos e é utilizado num método para proporcionar esses resultados» Um composto do presente Invento é, tipicamente.

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utilizado numa composição tal como se descreveu anteriormente.

De acordo com esse método o ADN ou as células alvo que se pretendem matar ou cujo crescimento se pretende inibir, são postas em contacto com uma composição que contém um composto do presente invento (ingrediente activo), presente numa quantidade eficaz ou suficiente para esse efeito, tal como se discutiu anteriormente, dissolvido ou disperso num diluente fisiologicamente tolerável (farmaceuticamente aceitável). Mantém-se o contacto durante um tempo suficiente para se obter o resultado desejado, i.e», a clivagem do ADN, a morte das células ou a inibição do crescimento de células neoplâsticas»

Quando se pretende obter o resultado desejado in..........yitrq o contacto é realizado pela simples mistura do ADN ou das células alvo com a composição e, depois, mantêm-se em contacto sob condições apropriadas de temperatura e para crescimento celular, tal como para as células de controlo não tratadas. Deste modo, uma única mistura e contacto são tipicamente suficientes para os objectivos in.....yitrq» método anterior também é útil in........vivo, tal como quando se trata um mamífero, tal como um roedor, por exemplo uma ratazana, um ratinho ou um coelho, gado, por exemplo um cavalo, uma vaca ou uma cabra, ou um primata, por exemplo um macaco, um chimpanzé ou um humano» Neste caso, o contacto de uma composição e das células que se pretendem rnatar ou cujo crescimento se pretende inibir, é efectuado pela administração de composições ao mamífero, por administração oral, nasal ou anal ou por introdução intravenosa, subcutânea ou intraperitoneal. Oeste modo, o contacto in........vivo e efectuado através do sangue ou dos sistemas linfáticos»

Embora uma única administração (mistura) e o seu contacto sejam, geralmente, suficientes para manter o contacto requerido e obter o resultado desejado in.....yitrq, utilizam-se in.....vivo, tipicamente, administrações múltiplas. Oeste modo, devido à intolerância do organismo e â excreção, o contacto entre o ingrediente activo de uma composição e as células alvo é, tipicamente, mantido

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212.0 (POR)

-16por administração repetida de um composto do presente invento durante um período de tempo, tal como dias, semanas ou meses, ou mais, dependendo das células alvo.

Seguídamente, descrevem-se métodos exemplificativos do presente invento para clivagem de AON e inibição de células alvo de carcinoma pancreático humano MIA PaCa-2 (ATCC CRL 1420).

VI. Resultados

Os compostos la,b~4a,b (Esquema 2 da Figura 2) foram concebidos e sintetizados como se sumariza no Esquema 3 apresentado na Figura 3. As operações principais incluíram: (a) acoplamentos iodeto de vinilo-acetileno através de catalisadores de Pd(Cl)₂-Cu(I) (passo a. Esquema 3);; (b) adição de acetiletos a aldeídos (passo c» Esquema 3); e (c) rearranjos 2,3-sigmatrõpicos (passo d, Esquema 3).

Os compostos la, 2a e 3a eram suficientemente estáveis para serem isolados, mas ciclizaram suavemente formando sistemas aromáticos, presumivelmente por via di-radícalar, quando aquecidos na presença de ciclo-hexadieno (Esquema 2, passo a). Os tempos de mela-vida (tj) destes sistemas a 37c (la: t_i=21 horas, 2a: tj=23 horas; 3a: tj=60 horas) Indicam que os sistemas ou os seus derivados podem ser bons agentes de destruição de ADN ou de células de tumor, com períodos de acção prolongados.

Com efeito, os compostos lb~4b exibiram propriedades de clivagem de ADN a 37^OC, 42°C e 47^0, na ausência de quaisquer aditivos. Deste modo, a incubação dos compostos lb-4b (1000 μΜ) com AON supei—enrolado (forma 1), aerobíamerite, a pH 8,5 e a várias temperaturas, causou a ruptura do ADN resultando, inicialmente, na formação de ADN da forma I.I e, finalmente, na formação de ADN da forma III, como se mostra na Figura 4.

Testou-se a actividade anti-cancerigena destes compostos usando células de tumor humano. Tal como se pode ver nas Figuras

5, 6 e 7, os compostos lb~4b exibem uma potente citotoxicidade, dependente da concentração, em relação às células de carcinoma

945

212.0 (POR)

-17humano indo assim ao encontro cias expectativas iniciais que conduziram à concepção destes sistemas. A potência destes compostos como agentes antitumor pode aumentar com o aumento da temperatura, conforme sugerido pelo maior grau de clivagem de ADN observado (Figura 4) e, assim, a danificação selectiva de tecidos pode-se tornar possível, com estes agentes, através de técnicas diatérmicas.

Melhor forma de......r.e.a.l..i..z.a.r......o......invento

Métodos.....de... ensaio.

F^tudos.....d.e....ç.l.iyagem.....de.....ADN

A um frasco contendo uma solução 50 micromolar, por par de base de ADN de cadeia dupla $X174, forma I, em 2,0 microlitros de tampão fosfato pH 8,5 (50 μΜ), adicionaram-se 6,0 microlitros da mesma solução tampão e 2,0 microlitros de uma solução 5,0 milimolar do composto a ser testado, em etanol.

Colocaram-se os frascos num forno, ás temperaturas indicadas, durante 48 horas. Adicionou-se uma porção de 2,0 microlitros de solução tampão de carga de glicerol a cada frasco. Retirou-se, depois, uma alíquota de 10 microlitros de cada frasco, Efectuou-se uma análise de electroforese em gel a cada alíquota, usando um gel de agarose a 2,0 por cento com brometo de etidío, efectuando o ensaio a 115 volts durante 1 hora. A clivagem de ADN foi indicada pela formação de ADN de forma II ou III, que foi detectada por inspecção visual do gel sob uma luz ultravioleta de 310 nanometros.

Rr.S.ç©d.i.m.en.to.....pa.ra.....um ensaio.....de çitotoxiçidade.....em......6....ça.yi.da.des

Colocaram-se células de carcinoma pancreático humano MIA PaCa-2 em cada uma das cavidades de uma placa de 6 cavidades, com uma densidade de 100 000 células/cavidade em 3 ml de meio de cultura. Incubaram-se durante 4 horas (37^0, 7 por cento de C0₂). Depois, adicionaram-se 6 microlitros da solução de citotoxina aos 3 ml de meio (RPMI-1640, com 5% de soro fetal bovino e 1 por cento de glutarnina) numa diluição de 500X, e a urna cavidade adicionou-se etanol para fazer um controlo de etanol a 0,2 por cento. Depois, incubaram-se as placas durante 4 dias (37Χ, 7 por cento

945

12-0 (POR)

18de C0₂)- Escorreu-se então o meio, adicionou-se corante de violeta de cristal (fórmula de Hucker) para tapar o fundo das cavidades e depois enxaguaram-se com ãgua da torneira até que as águas de enxaguar estivessem limpas» Solubilizaram-se as células coradas para quantificação com solução de Sarkosyl (N-lauril sarcosina, 1 por cento em ãgua) riuma quantidade de 3 ml/cavidade» Depois, efectuou-se a leitura da. absorvância da solução a 590-650 nm»

E xetrip lo ls Compos to ...8 ή uma solução agitada de 1,93 g (10,5 mmole) do iodeto de vinilo, Composto 5, e 1,70 g (10,0 mmole) do alcino terminal (neste caso, o éter TBS do álcool propargílico) em 20 ml de benzeno seco, sob árgon, à temperatura ambiente, adicionaram-se 1,54 ml (15,0 mmole) de dietilamina com uma seringa» Imediatamente depois, introduziram-se 0,28 g (0,40 mmole) de dicloreto de bis-trifenilfosfinapaládío e 0,31 g (1,60 mmole) de iodeto cuproso, sob a forma sólida» Continuou-se a agitação durante 1 hora à temperatura ambiente» Depois, adicionaram-se 30 ml de solução aquosa de cloreto de amónio, saturada, e agitou-se a mistura ao ar durante 1 hora» A esta mistura adicionaram-se 30 ml de éter e secou-se a fase orgânica, superior, sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se» i’urificou-se o residuo por cromatografia flash (sílica), eluindo com 30 por cento de éter em éter de petróleo, obtendo-se 1,95 g do produto, Composto 8, com um rendimento de 86 por cento»

Exemplo 2: Composto,.,.12

A uma solução de 1,00 g (4,42 mmole) do álcool ein-alilico. Composto 8, em 20 ml de benzeno seco, à temperatura ambiente, adicionaram-se 7,00 g (80,5 mmole) de dióxido de manganês activado e agítou-se a mistura à temperatura ambiente durante 24 horas» Filtrou-se a mistura através de celíte e lavou-se o bolo da filtração com 60 ml de tetra-hidrofurano» Concentraram-se os filtrados, obtendo-se 0,84 g do aldeído com um rendimento de 84 por cento»

Adicionaram-se 6,13 mililitros (9,84 mmole) de uma solução

945

212.0 (POR)

1,,6 M de n~butil~lítio em hexanos, através de uma seringa, a uma solução agitada de 1,97 g (11,59 mmole) do éter t-butildimetilsilílico ( TBS ) do álcool propargílico em 40 ml de tetra-hidrofurano, sob atmosfera de árgon, arrefecida a -78'’'C. Continuou-se a agitação durante 30 minutos deixando-se, entretanto, a temperatura aumentar até -lú^C. Arrefeceu-se a mistura reaccional até ™20’C e adicionaram-se, gota a gota, 2,00 g (8,91 mmole) do aldeído em 10 tnl de tetra-hidrofurano, durante um período de 5 minutos, através de uma seringa. Após agitar durante 1 hora, adicionaram-se 100 ml de solução aquosa de cloreto de amónio, saturada, e 50 ml de éter. Secou-se a camada orgânica superior sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia flash (sílica), eluindo com 25 por cento de éter-álcool em éter de petróleo, obtendo-se 3,48 g do produto álcool eno-di-ino. Composto 12, com um rendimento de 99 por cento.

Óleo amarelo claro; R^ = 0,48 (silica, 30 por cento de éter em éter de petróleo); ^XH RMN (500 MHz, COC1₃) õ 5,98 (dd, J~10,6,

8,8 Hz, 1 H, -CH-CHOH), 5,65 (dt, J=10,6, 2,0 Hz, 1 H, C-CH-CH), 5,41 (bd, 0=8,8 Hz, 1 H, CH=CH.OH) , 4,46 (bd, 0=2,0 Hz, 2 H,

CH2O) , 4,35 (d, 0=1,8 Hz, 2 H, CH2O), 0,91 (s, 9 H, Si^BuMe-^) ? 0,90 (s, 9 H SiWeg), 0,13 (s, 6 H, SÍ^tBuMe₂), 0,11 (s, 6 H,

(6 11 500).

Exemplo 3s Composto .la uma solução agitada de 1,00 g (2,53 mmole) do álcool eno-di-ino em 35 ml de cloreto de metileno seco, arrefecida a -78^0, adícionaram-se, através de uma seringa, 0,39 ml (2,79 mmole) de trietilamina e, depois, 0,50 ml (2,79 mmole) de clorodif enilf osf ina. Contínuou-se a agitação durante 1 hora e adicionaram-se 50 ml de solução aquosa de cloreto de amónio, saturada. Secou-se a fase orgânica inferior sobre sulfato de magnésio, filtrou-se e concentrou-se. Purificou-se o resíduo por

945

212.0 (POR)

-20cromatografia flash (sílica), eluindo com 80 por cento de éter em éter de petróleo, obtendo-se 1,23 g do óxido de fosfina. Composto la, com um rendimento de 84 por cento.

óleo amarelo claro, Rf = 0,40 (silica, éter); ¹H RMN (500 MHz, CDC1D3), 5 7,78-7,67 (m, 4 H, aromático), 7,53-7,40 (m, 6 H, aromático), 6,43 (ddtd, 7(-10,7, 10,7, 2,7, 1,0 Hz, 1 H, GH=C=), 6,03 (ddd, 3=10,7, 10,7, 1,8 Hz, 1 H, CH=CH-CH=), 5,35 (dm, 3=10,7 Hz, 1 H, ®C-CH=CH-), 4,50 (m, 2 H, =C(P=0)~CH20), 4,45 (d, 3=2,0, 2 H, 2sC~CH20), 0,90 (s, 9 H, sAuMe^), 0,79 (s, 9 H, Sí'^t:~ BuMe^/j, 0,11 (s, 3 H, Si^BuMe^.) , 0,10 (s, 3 H, Si^BuMeg), ---0,03 (s, 6 H, 8i^tBuM©2); IV (CHCI3) _max 2957, 2931, 2858, 1931, 1603, 1471, 1438, 1.258, 1171, 1119, 1098, 839 cm”¹; ¹³C RMN (.125 MHz, CDC13) δ 212,4 (²3ccp=4,4 Hz, CH=C=C), 132,8-128,1 (treze sinais sobrepostos, aromáticos, ^C-ÇH=), .109,7 (⁴3coccp=4,9 Hz, C-CH-CH-), 101,8 (¹3cp=98,5 Hz, CH-C-C), 95,6 (acetileno), 94,9 (³3cccp=13,0 Hz, CH-C-C), 80,7 (acetileno), 60,3 (²3ccp=10,5 Hz, =C (P=Q)-Ç.H20), 52,1 (saC-CH₂0), 25,7 (Si^tBuMe2), 25,6 (Si^tBuMe2), 18,1 (SÍ^tBuMe2), -5,2 (S͹BuMe2), -5,6 (Sí^tBuMe₂)“, UV (EtOH)

Λ _max 274 (€ 10 500), 267 (e 10 500), 222 nm (e 28 000); HRMS calo. para C33H₄₈0₃PSi₂ (M ⁺ +1): 579,2879, determinado; 579,2877.

Exemplo 4; Compost o...lb

Adicionaram-se 0,10 mililitros de uma solução aquosa de ácido fluoridrico a 48 por cento a uma solução de 34,7 mg (0,0599 mmole) do óxido de fosfina, composto la, em 1,0 ml de acetonitrilo, à temperatura ambiente. Após agitar durante 15 minutos, removeram-se os solventes sob vácuo a 1,3 Pa (0,01 torr). Dissolveu-se o resíduo em 1,0 ml de clorofórmio e, novamente, removeu-se o solvente sob vácuo obtendo-se 20,2 mg do diol, composto lb com um rendimento de 96 por cento.

óleo amarelo claro, Rf = 0,27 (silica, acetato de etilo);

RMN (500 MHz, COCI3) δ 7,77-7,40 (m, 10 H, aromático), 6,08 (dd,

3=10,4, 10,4 Hz, 1 H, CH-C-), 5,77 (dd, 3=10,4, 10,4 Hz, 1 H, =CH.-CH=C=) , 5,52 (dm, 3=10,4 H.Z, 1 H, saC-CH-CH-), 4,44 (Tn, 4 H,

-CH₂0H), 3,4 (bs, 2 H, OH); IV (sem diluição) 7 _max 3318, 2971,

945

212-0 (POR) ~21~

2950, 2871, 1928, 1438, 1169, 1120 cm”¹; UV (EtOH) Á _ma>í. 274 (e 18 500) 222 nm (sh, e 26 500); HRMS calc. para C21H1903PCS (M ⁺ +Cs): 483,0126, determinado; 483,0126»

Exemplo 5: C.o.mp.o.s.t.q......l.6.a.

Agitou-se uma solução de 123 mg (0,212 mmole) do erio-ino-aleno, Composto la, em 5,0 ml de .1,4-ciclo-hexadieno, a 37°C, durante 35 horas e, depois, concentrou-se. Por TLC preparativa (silica, 0,5 mm x 20 x 20 cm), eluindo com 80 por cento de éter em éter de petróleo, obtiveram-se 74 mg do produto ciclízado. Composto 16a, com um rendimento de 60 por cento.

Óleo amarelo claro, R_f - 0,43 (sílica, acetato de etilo); ¹H RMN (500 MHz, CDClg) δ 7,97 (dd, 0--7,7, 1,6 Hz, 1 H, aromático) , 7,94 (dd, 3-7,8, 1,6 Hz, 1 H, aromático), 7,84 (d, 3-7,4 Hz, 1 H, aromático), 7,58-7,50 (m, 5 H, aromático), 7,28 (m, 1 H, aromático), 7,21-7,13 (m, 5 H, aromático), 4,75 (d, 3=12,0 Hz, 1 H, Ar-CH20), 4,57 (d, 3-12,0 Hz, 1 H, Ar~CH20), 4,34 (m, 2 H, Ar-CH(P=O), CH“CH20), 4,14 (m, 1 H, CH-CH.2O), 1,01 (s, 9 H, Si^BuMe-,), 0,69 (S, 9 H, C^BuMe.?) , 0,17, 0,16, -0,20, -0,26 (singuletos, 3 H cada, Si^BuMe^-); IV (CHClg) í^iax 2957, 2930, 2858, 1471, 1438, 1257, 1117, 1101, 838 cm”¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDClg) δ 139,1-126,9 (vários sinais, aromático), 64,7 (CH2O), 64,3 (CH₂0), 43,9 (¹3cp=67,9 Hz, Ar~CH(P=Q), 26,1 (δΛυΜ©2), 25,7 (Si^tBuMe2), 18,6 (Si'^tBuMe2), 18,1 (Sí^tBuMe2), -5,1, -5,2, -5,8, -5,9 (Si^uMeg); UV (EtOH) A _max 266 nm (e 3 500); HRMS calo, para ^c33M₅₀0₃PSí₂ (1*1 ⁺ +1): 581,3036, determinado: 581,3012.

Exemplo 6: Composto... 16b

Adicionaram-se 0,10 mililitros de ácido fluorídrico aquoso a 48 por cento a uma solução de 112 mg (0,193 mmole) do produto ciclizado, Composto 16a, em 1,0 ml de acetonitrilo, à temperatura ambiente. Após agitar durante 15 minutos, removeram-se os solventes sob vácuo a 1,3 Pa (0,01 torr)„ Dissolveu-se o resíduo em 1,0 ml de clorofórmio e removeu-se, novamente, o solvente sob vácuo, obtendo-se 68 mg do diol, Composto 16b, com um rendimento quantitativo72 945

212.0 (POR)

composto 6 foi comprado á Aldrich Chemical Co», Milwaukee, WI, E.U.A.. Os composto 9, 13, 2a, 2b © 17a foram preparados de um modo substancialmente similar aos processos de preparação utilizados na preparação dos Compostos 8, 12, la, lb e 16a. Seguidamente indicam-se os resultados relativos aos Compostos 13, 2a, 2b e 17a.

S.ómppsto....l.3.

Óleo amarelo claro, R_f=0»50 (sílica, 30 por cento de éter em éter de petróleo); ^XH RMN (300 MHz, C0013) õ 7,70 (d, 3=7,7 Hz, 1 H, aromático), 7,45-7,27 (m, 3 H, «aromático), 5,91 (bs, 1 H, CHOH), 4,59 (s, 2 H, Ar~CO~CH20), 4,40 (d, 3=1,6 Hz, 2 H, CHOH-C-C“CH20), 2,58 (bs, 1 H, OH), 0,95 (s, 9 H, Si^tBuMe2)„ 0,90 (s, 9 H, Si^tBuMe2), 0,18 (s, 6 H, Si^tBuMe2) , 0,11 (s, 6 H, Si^t;BuMe₂); XV (CHC1_S) \)_max 3595, 2957, 2931, 2859, 1472, .1365, 1256, 1079, 838 CB͹; -¹¾ RMN (125 MHz, CDClg) õ 142,1 (aromático), .132,5 (aromático), 128,8 (aromático), 128,2 (aromático), 126,7 (aromático), 121,1 (aromático), 93,2 (acetileno), 85,3 (acetileno),

83.8 (acetileno), 82,0 (acetileno), 62,9 (CHOH), 52,2 (CH₂0),

51.8 (CH₂0), 25,8 (SÍ^tBuMe2), .18,3 (Sí^tBuMe2) , .18,2 (Sl^tBuMe2), -5,1 (Sí^tBuMe2), -5,2 (SÍ^tBuMe₂); UV (EtOH) λ _max 244 (e 13 000), 209 nm (€28 000).

Composto 2a óleo amarelo claro, Rf = 0,40 (sílica, éter); ⁱH RMN (300 MHz, COC13) δ 7,97-7,81 (m, 4 H, aromático), 7,66-7,39 (rn, 8 H, aromático), 7,30-7,21 (rn, 2 H, aromático), 6,91 (dt, 3=10,6, 2,9 Hz, 1 H, CH=C=), 4,72 (m, 2 H, =C(P=0)-CH2Q) , 4,66 (s, 2 H, ~CH20), 1,06 (s, 9 H, 8í^tBuMe2), 0,90 (s, 9 H, Si^tBuMe2), 0,27 (s, 6 H, sAuMe2), 0,09 (s, 6 H, 8i^tBuMe2); IV (CHC1₃) P _max 2958, 2931, 2858, 1938, 1487, 1438, 1363, 1256, 1181, 1120, 1098, 838 cm¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDCl^) δ 210,3 (²3ccp=5,3 Hz, '•J

CH=Ç=C), 133,9 (^3ccccp=6,8 Hz, aromático), .132,5-120,7 (dezasseis sinais, aromático), 103,8 (^300=99,2 Hz, CH = C = C.), 96,2 (³3cccp=12,9 Hz, CH=C=C), 92,8 (acetileno), 82,4 (acetileno),

60,5 (²Jccp=10,S Hz, =C(P=0)-C.H20), 52,2 («C~ÇH20), 25,8 (sAuMe2), 25,7 (SÍ^t:BuMe2), .18,3 (sAuMe₂), .18,2 (sAuMe₂), -5,1 (sAuMe₂) , -5,5 (sAuMe₂); UV (EtOH) λ _max 274 (e 23 000), 223

945

212.0 (POR) ~23

nm (6 37 000); HRMS calc. para C₃₇H₅₀0₃PSi₂ (M ⁺ +1): 629,3036, determinado; 629,3081.

C.Q.fHPOS.t.o.....2b.

Óleo amarelo claro, R^ = 0,27 (sílica, acetato de etilo); -¼ RMN (500 MHz, COC1₃) δ 7,82 (m, 2 H, aromático), 7,67 (m, 2 H, aromático), 7,58 (m, 1 H, aromático), 7,52 (m, 2 H, aromático), 7,37 (m, 2 H, aromático), 7,26 (m, 2 H, aromático), 7,14 (m, 2 H, aromático), 6,89 (m, 1 H, aromático), 6,33 (dt, 8=10,8, 2,2 Hz, 1 H, CH=C=), 4,59 (d, 8=16,7 Hz, 1 H, ssC-CH₂0) , 4,50 (d, 8=16,7 Hz, 1 H, ssC-CH₂0), 4,49 (m, 2 H, =C(P=Q)~CH₂0) ; XV (CHC1₃) p_max 3307, 3011, 2929, 2856, 1936, 1438, 1220, 1160, 1120, 1028 cm¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDC13) δ 211,1 (²8ccp=5,9 Hz, CH=C=C), 134,0-127,6 (quinze sinais, aromático), 121,4 (aromático), 101,4 (¹8cp=99,2 Hz, CH=C=Ç.), 96,6 (³8cccp=13,l Hz, CH=C=C), 95,8 (acetileno), 83,5 (acetileno), 61,2 (²8ccp=7,2 Hz, =0(P=0)-CH20H), 51,4 (^-CH₂0H); UV (EtOH) λ _max 267 (sh, e 7 200), 226 nm (e 31 000); HRMS calc. para C₂₅K₂₁0₃PCs (M ⁺ +Cs): 533,0282, determinado: 533,0274.

βΡ.η[!ΡΡ.§.^ο.....17.^.

óleo amarelo claro, R^ = 0,44 (sílica, acetato de etilo); -¼ RMN (500 MHz, COC1₃) δ 8,30 (bs, 1 H, aromático), 7,94 (m, 2 H, aromático), 7,80 (m, 1 H, aromático), 7,72 (m, 1 H, aromático), 7,64 (s, 1 H, aromático), 7,52 (m, 5 H, aromático), 7,40 (m, 2 H, aromático), 7,18 (m, 1 H, aromático), 7,10 (rn, 2 H, aromático).

4,87 (d,	8=12,1 Hz,	1 H, Ar-CH20), 4,72 (d, 8=12,1 Hz, 1 H, Ar-
-ch2o),	*4 ft ·43	(ITi, 2	H, Ar-CH(P=O), C	H-CH20), 4,20 (m, 1 H, CH-
~CH20),	1,00	(s, 9	H, 8ítBuMe2), 0,6	4 (s, 9 H, 8ítBuMe2), 0,18,
0,16, ~	Ό, 25,	-0,32	(singuletos, 3 H	cada, SitBuMe2); IV (CHClg)
Q v rnax	2957,	2930,	2858, 1471, 1438,	1258, 1220, 1097, 839 cm“;1;

¹³C RMN (125 MHZ. CDC1₃) δ 137,2-125,7 (vãrios sinais, aromático), 65,3 (CH₂0), 64,8 (CH₂0), 43,6 (¹8cp=67,9 Hz,

Ar~CH(P=O)), 26,1 (Sí^uMe^) , 25,7 (Si^BuMe^,) , 18,7 (S^BuMe-J ,

18,1 (Si^tBuMe2), -5,1, -5,1, -5,8, -5,9 (Si^tBuMe2); UV /\(EtOH) _max 233 nm (e 50 000); HRMS calc para C₃₇H₅₂0₃PSi₂ (M ¹ +1):631,3192, determinado; 631,3157.

945 212.0 (POR.)

Exemplo 7: Álcool.....3-iodo-2~nafti1.ico......(.Composto.....7.)..

A 500 ml de metanol (MeOH) e 50 ml de cloreto de acetilo, adicionaram-se 11,950 g (63,83 mmole) de ãcido 3-amino-2~naftoico em 100 ml de MeOH. A esta mistura adicionaram-se 50 ml de benzeno e 50 ml de CH₂C1₂, e agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante duas horas e, depois, aqueceu-se ao refluxo durante três horas. Depois adicionou-se MgS0₄ e aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 12 horas. Substituiu-se o MgS0₄ por peneiros moleculares 3$ e aqueceu-se a mistura reaccional ao refluxo durante 48 horas. Diluiu-se então a mistura reaccional com 500 ml de acetato de etilo (EtOAc), lavou-se com 100 ml de NH₄C1 saturado, 100 ml de NaHCQ^ saturado, 100 ml de Na₂CQg a 5 por cento e salmoura, secou-se sobre MgSO^ e concentrou-se. Purificou-se o produto por cromatografia em coluna (10 por cento de éter em éter de petróleo) obtendo-se 7,412 g (36,83 mmole) do éster aminonaftoico (rendimento de 58 por cento).

A 0,500 g (2,500 mmole) do éster anterior em 25 ml de CH₂C1₂ adicionaram-se 10 ml de DIBAL (1M em hexanos) a -78⁰C e aqueceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente. Adicionaram-~se 20 ml de MeOH, 50 ml de EtOAc e 20 ml de sal de Rochelle à mistura reaccional. Lavou-se a fase orgânica com cloreto de amónio saturado, secou-se sobre MgSO^ e concentrou-se. Recristal.izou~se o produto em tolueno, obtendo-se 0,255 g (1,472 mmole) do álcool 3-amino~2-naftilico (rendimento 59 por cento).

Aqueceu-se o álcool aminonaftilico anterior (1,340 g; 7,736 mmole) em 13 ml de ãcido sulfúrico 6 M, para formar uma solução e, depois, arrefeceu-se até zero graus Centígrados. A suspensão resultante adicionaram-se 0,587 g (8,510 mmole) de NaN0₂ em 2 ml de água e agítou-se a mistura reaccional a zero graus C, durante 10 minutos. Depois adicionaram-se 0,200 g de ureia em 2 ml de água, a zero graus C com agitação durante 5 minutos e, seguidamente, 1,926 g (11,604 mmole) de Kl em 2 ml de água, a zero graus C„ com agitação à temperatura ambiente durante 15 minutos. Adieionou-se uma porção de 50 ml de éter:acetato de etilo 1:1, 20 ml de cloreto de amónio saturado e 20 ml de bissulfato de sódio, separou-se a fase orgânica e lavou-se com cloreto de amónio, bicai—

945

212.0 (POR)

-25bonato de sódio e salmoura e, depois, secou-se sobre MgS0₄. Purificou-se o produto por cromatografia em coluna (30 por cento de éter em éter de petróleo) obtendo-se 0,585 g (rendimento de 27 por cento) do álcool 3-iodo-2-naftilico.

Os Compostos 10, 14, 3a, 3b e 18a foram preparados analogamente aos Compostos 8, 12, la, 16 e 16a, usando álcool 3-iodo-2-naftilico, Composto 7, em vez do Composto 5. Seguidamente indicam-se os resultados relativos aos Compcstos 14, 3a, 3b e 18a.

Comppsto„„14.

óleo amarelo claro; R^ - 0,64 (silica, 60 por cento de éter em éter de petróleo); RMN (500 MHz, CDCI3) δ 8,15 (s, 1 H, aromático), 7,99 (s, 1 H, aromático), 7,83 (m, 1 H, aromático),

7,77 (m, 1 H, aromático), 7,50 (m, 2 H, aromático), 6,01 (s, 1 H„ CHOH), 4,63 (s, 2 H, Ar-CsC-CH^O) , 4,44 (Ps, 2 H, CH0H~«-CH₂Q), 2,85 (bs, 1 H, CHOH), 0,97 (s„ 9 H, Si^Bul^) , 0,91 (s, 9 H, Si^BuMe₂), 0,20 (s, 6 H, Si^uMe^,), 0,13 (s, 3 H, 8í^tBuMe2), 0,12 (s, 3 H, Si^tBuMe2); IV (CHC1₃) / _max 3592, 2960, 2931, 2859, 1472, 1368, 1257, 1101, 1078, 838 cm¹; ¹³C RMN (125 MHz, COC1₃) δ 138,3 (aromático), 133,0 (aromático), 132,8 (aromático), 132,6 (aromático), 128,1 (aromático), .127,4 (aromático), 127,1 (aromático), 126,9 (aromático), .126,1 (aromático), 118,7 (aromático),

92,8 (acetileno), 85,6 (acetileno), 83,8 (acetileno), 82,4 (acetileno), 63,2 (CHOH), 52,3 (CH₂0), 51,9 (CH₂0) , 25,8 (Sí^tBuMe₂),

18,3 (3ί^Γ8υΜθ2), 18,3 (SÍ^LBuM©2), -5,1 (SÍ^tBuMe₂), -5,1 (Si^tBuMe₉); UV (EtOH) 278 (e 6 900), 250 (e 54 500), 241 nm max (e 44 000)

Composto 3a óleo amarelo claro; R^ ~ 0,48 (sílica éter); ^H RMN (500 MHz, COC1₃) δ 7,87 (s, 1 H, aromático), 7,86-7,76 (m, 4 H, aromático), 7,71 (d, 3-7,9 Hz, 1 H, aromático), 7,64 (d, ..1-7,6 Hz, 1 H, aromático), 7,52 (m, 2 H, aromático), 7,44 (m, 4 H, aromático), 7,34 (m, 1 H, aromático), 7,28 (m, 2 H, aromático), 6,89 (dt, 3-10,7, 2,9 Hz, 1 H, CH=C=), 4,66 (m, 2 H, -C(P-O)-CH₂0), 4,58 (s, 2 H, ssC-CH₂0), 0,96 (s, 9 H, SÍ^tBuMe2), 0,79 (s, 9 H, Si^tBuMe2), 0,18 (s, 3 H, Si^uMejg), 0,17 (s, 3 H, Si^l~BuMe₂),

945

212.0 (POR)

-0,02 (s, 6 H, Si^tBuMe₂); IV (CHClg) l) rnax ²⁹⁵⁷> 2931, 2858, 1939, 1472, 1438, 1364, 1257, 1181, 1105, 1086, 838 cm¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDClg) d 210,4 (²Jccp=5,l Hz, CH~C~e), 132,8-119,0 (vinte e dois sinais, aromático), 103,6 (¹Jcp=99,3 Hz, CH~C~C), 96,2 (^ώJcccp=13,1 Hz, CH = C = C), 92,4 (acetileno), 82,6 (acetileno), 60,6 (²Jccp~10,6 Hz, =e(P=0)-CH₂Q) , 52,3 (ssC-CH^O),

25,8 (SÍ^tBul*le2) , 25,7 (SÍ^tBuM®2), 18,3 (Si^BuMe;^), 18,2 (Si^BuMe?), -5,0 (Bi^BuMfôo), -5,5 (Si^uMe^) -5,5 (Si^uMe.,); UV (EtOH) \_max 267 (e 57 000), 226 nm (e 38 000); HRMS calc. para ^c41^H52°3^PSi2 ⁺ +D = 679,3192, determinado: 679,3169.

Compo.sto....3b óleo amarelo claro, Rf ~ 0,28 (sílica, acetato de etilo); ¹H RMN (500 MHz, CDClg) δ 7,86 (s, 1 H, aromático), 7,80 (m, 2 H, aromático), 7,66 (m, 3 H, aromático), 7,59-7,47 (m, 4 H, aromático), 7,37 (m, 2 H, aromático), 7,27 (s, 1 H, aromático), 7,25-7,16 (m, 3 H, aromático), 6,42 (fod, :(-10,6 Hz, 1 H, CH-C-), 4,59 (d, J-16,7 Hz, 1 H, sC-CH20H), 4,51 (m, 2 H, -C(P=0)-CH.20H) , 4,49 (d, 3=16,7 HZ, 1 H, sC~CH.20H) ; IV (CHClg) T>max 3349, 3011, 2961, 2930, 2857, 1936, 1438, 1214, 1120, 1099, 1028 cm¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDClg) δ 211,2 (CH=C=C), 134,3-119,0 (quinze sinais, aromático), 101,4 (¹Jcp=97,6 Hz, CH=C=C), 96,9 (³3cccp=12,9 Hz, CHC”C), 94,7 (acetileno), 83,6 (acetileno), 61,1 (²3ccp=7,l HZ, =C(P=G)~CH20H) , 51,4 <^C-CH₂QH); UV (EtOH) _max 266 (€ 46 000), 224 nm (sh, e 22 000); HRMS calc. para C₂₉H₂g0gPCs (M ⁺+ +Cs): 583,0438, determinado: 583,0471»

Composto 18a óleo amarelo claro, Rf = 0,51 (sílica, acetato de etilo); -¼ RMN (500 MHz, CDClg) δ 8,46 (d, 3=1,8 Hz, 1 H, aromático), 8,37 (s, 1 H, aromático), 8,28 (s, 1 H, aromático), 7,94 (m, 4 H, aromático), 7,79 (s, 1 H, aromático), 7,52 (m, 5 H, aromático), 7,41 (m, 2 H, aromático), 7,14 (m, 1 H, aromático), 7,06 (m, 2 H, aromático), 4,89 (d, 3=12,3 Hz, 1 H, Ar-CH₂Q), 4,74 (d, 3=12,3 Hz, 1 H, Ar~CH₂0), 4,44 (m, 2 H, Ar-CH(P=G), CH-CH.₂G) , 4,23 (m, 1 H, CH“CH.₂O), 1,00 (s, 9 H, 8i¹BuMe2), 0,63 (s, 9 H, 8i^tBuMe2), 0,17, 0,16, -0,26, -0,34 (singuletos, 3 H cada, 8i'^fcBuMe2); IV (CHClg) Í)_max 2957, 2929, 2857, 1471, 1438, 1258, 1117, 1097, 839

945

212,0 (POR)

_cm“l» 13q p_MN (125 MHz, CDClg) δ 137,0-125,2 (vários sinais, aromático), 65,4 (CH₂0), 65,0 (CH₂0), 43,6 (¹lcp=67,9 Hz, Ar-CH(P=0)), 26,2 (Si^BuMe^), 25,7 (Si^uM©^), 18,7 (S^BuM©^) ,

18,1 (8i^tBuMe₂), -5,0, -5,1, -5,8, -5,9 (Si^uMeg); UV (EtOH) m_ax 381 (e 8 600), 263 nm (e 81 000); HRMS calc. para ^C41^H54°3^PSi2 681,3349, determinado: 681,3356»

Os Compostos 1.1, .15, 4a e 4b foram preparados de um modo análogo ao processo de preparação dos Compostos 8, 12, la e lb com a excepção de o Composto 5 reagir com fenilacetileno em vez de ãlcool propargilico protegido com TBS, Seguidamente indicam-se os resultados referentes aos Compostos 15, 4a e 4b»

Composto 15

Óleo amarelo claro, R^ = 0,45 (silica, 30 por cento de éter em éter de petróleo); ^;1H RMN (500 MHz, CDClg) δ 7,43 (m, 2 H, aromático), 7,31 (m, 3 H, aromático), 6,03 (dd, 1=10,7, 8,9 Hz, 1 M, -CH-CHOH), 5,83 (d, 1=10,7 Hz, 1 H, ^€-CH.=CH), 5,51 (m, 1 H, =CH-CHOH), 4,35 (d, 1=0,9 Hz, 2 H, CH20), 2,16 (d, 1=4,3 Hz, 1 H, 1 H, CHOH), 0,88 (s, 9 H, Si^BuMe^.) , 0,10 (s, 6 H, Si^tBuMe2); IV (CHClg), 8,27 n_max 3596, 2957, 2931, 2859, 1490, .1472, .1257, 1131, 1077, 838 «.-1, «C RMN (125 MHz, CDClj) δ 140,1 (C=CH-CHOH), 131,6 (aromático), .128,6 (aromático), .128,3 (aromático), 122,7 (aromático), 111,5 (CH=C-CHOH), 96,0 (acetileno), 84,5 (acetileno), 84,2 (acetileno), 83,5 (acetileno), 60,3 (CHOH),

51,8 (CH₂0), 25,8 (Sí^tBuMe2), 18,2 (Si‘^tBuMe2)» “S,l (8i’^fcBuMe₂);

UV (EtOH)	max ^1- C 13	500) ,	275 nrn (€15 000),
Composto 4a
Oleo amarelo claro.	Rf =	0,40 (sílica, éter); -**Η	RMN (500
MHz. CDClj)	δ 7,90 (m,	1 H,	aromático), 7,78-7,68	(m, 4 Η,
aromático),	7,52-7,35	(m, 8	H, aromático), 7,29	(m, 2 Η,

aromático), 6,53 (dddd, 1=10,7, 10,7, 2,7, 2,1 Hz, 1 H, CH=C=), 6,09 (ddd, 1=10,7, 10,7, 1,8 Hz, 1 H, CH=CH~CH=), 5,54 (bdd, 1=10,7, 3,0 Hz, 1 H, -C-CH-CH), 4,49 (m, 2 H, CH₂Q), 0,79 (s, 9 H, 8i^tBuMe2), -0,04 (s, 6 H, 8i^tBuMe2); IV (CHClg) ^_max 2988, 2958, 2931, 2851, .1930, 1592, .1438, .1182, 1120, .1103, 838 cm’¹; ¹³C RMN (.125 MHz, CDClg) δ 212,6 (²Jccp=4,4 Hz, CH=C=C) , 132,672 945

212. Ο (POR )

-28”

-128,3 (vários sinais, aromático, «c-ÇH«), .123,0 (aromático),

110.2 (⁴3ccccp-4,8 Hz, CH=C.H-CH~), 102,0 (^Jcp^B^O Hz, CH~C-C),

97.2 (acetileno), 95,3 (³Jcccp~13,0 Hz, CH=C=C), 85,6 (acetileno), 60,5 (²Jccp=:10,6 Hz, CHoO), 25,7 (Si^BuMSo), 18,2

Xv. X» (Si^tBuMe2), -5,4 (Si^tBuMe2), -5,5 (8i^tBuM©₂); UV (EtOH) X_max 328 (6' 17 000), 309 (e 23 000), 222 nm (sh, 6 17 000); HRMS calo, paria e₃₂H₃₆Q₂PSí (M ⁺ +1); 511,2222, determinado; 511,2230.

Composto„...4b óleo amarelo claro, R_f ~ 0,32 (sílica, acetato de etilo); ¹H RMN (500 MHz, CDClg) 5 7,80-7,68 (m, 4 H, aromático), 7,56-7,43 (m, 6 H, aromático), 7,38 (m, 2 H, aromático), 7,31 (m, 3 H, aromático), 6,52 (bdd, . 3-10,7, 10,7 Hz, 1 H, CH~C=), 6,07 (ddd, 3-10,7, 10,7, 1,8 H.z, 1 H, GH-CH-CH-), 5,59 (dd, 3-10,7, 2,9 Hz, 1 H, sC-CH-CH), 4,50 (m, 2 H, CH₂0); IV (CHClg) 3>_max 3360, 3020, 1929, 1592, 1490, 1439, 1210, 1168, 1121, 1070, 775 cm”'¹; ¹³C RMN (125 MHz, CDClg) δ 213,5 (CH^C-C), 134,1-128,3 (vários sinais sobrepostos, aromático, «C-CH-), 122,7 (aromático), 111,3 (C=CH-CH-), 99,2 (CH~C=C), 97,7 (acetileno), 94,9 (³3cccp=12,6 Hz, CH=C-C), 85,4 (acetileno), 60,7 (CH₂QH); UV (EtOH) λ _max 307 (€ 14 000), 223 nm (sh, 6 18 000); HRMS calc. para C₂₆H₂₂0₂P (M ⁺1): 397,1357, determinado; 397,1376.

Embora o presente invento tenha sido agora descrito em relação a certas concentrações preferidas, e aqui exemplificadas neste sentido, urn perito na arte facilmente se apercebe que se podem fazer várias modificações, alterações, omissões e substituições sem que o seu espírito seja alterado.

Claims (15)

1 - Processo de preparação de um oxido de difenil-(l₉8~dissubstItuído-octa-2,3,5-trien-7~ino)f osf eno caracterizado por compreender a reacção de um l,8~dissubstituído~4-hidroxí~aeta~ -2,7~diin~5~eno com clorodifeniIfosfeno»

2 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por os substituintes nas posições 1 e 8 serem seleccionados do grupo consistindo em hidroxilo, hidroximetilo, fenilo e acíloxi ^cr^c6

3 - Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado por a ligação dupla na posição 5 ser partilhada com um sistema de anel aromático que contém um ou dois anéis fundidos»

4 - Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por o referido sistema de anel aromático ser seleccionado de entre o grupo consistindo de um benzeno, naftaleno, piridina, quinolina, isoquinolina, pirazína, quinoxalina, berizofurano, furano, tiofeno, oxazole, pirimidina, benzotiofeno, isobenzofurano, isobenzotiofeno, N-alquil C^-C^-indole, N-alquil C-^-C^-iso-indole, N-alquil C^-C^-benzimídazole e benzoxazole, substituído ou não substituído.

5 - Processo de acordo com a reivindicação 3, caracterizado por o referido sistema de anel aromático ser o benzeno ou o naftaleno.

6 -Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto preparado ser o 2-difenilfosforoso”nona-2,3,5-tri· en-7-ino-l,9-diol

7 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto preparado ser o 2-difenílfosforoso~8~fenil~octa~ -2,3,5-trien-7-ín-l-ol»

8 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado

72. 945

212«0 (POR)

-30por o composto preparado ser o l-(3-dífenilfosforoso-3-hidroxi-prop~l,2-díení1)-2-(3-hidroxi-prop~l~Iníl)benzeno»

9 - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto preparado ser o 2-(3-difenilfosforoso-3-hídroxi-prop-l,2-dienil)-3-(3-hidroxi-prop-l-inil)naftaleno»

10 - Processo de preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por compreender a dispersão de uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um óxido de difenil-(1,8-dissubstituído-octa-2,3,5-trien-7-ino)fosfeno como agente activo num diluente fisiologicamente tolerável»

11 - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por os substituintes nas posições 1 e 8 do referido agente activo serem seleccionados do grupo consistindo em hidroxilo, hidroximetilo, fenilo e aciloxi C^-C^»

12 - Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado por a ligação dupla na posição 5 do referido agente activo ser partilhada com um sistema de anel aromatíco que contém um ou dois anéis fundidos»

13 - Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por o referido sistema de anel aromático ser seleccionado de entre o grupo consistindo de benzeno, naftaleno, piridina, quinolina, isoquinolina, pirazina, quinoxalina, berizof urano, furano, tiofeno, oxazole, pirimidina, benzotiofeno, isobenzofurano, isobenzotiofeno, N-alquíl C^-C^-índole, N-alquíl Gi”C₆-iso-índole, N-alquil C^-C^-benzimídazole e benzoxazole»

14 - Processo de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por o referido sistema de anel aromático ser o benzeno ou o naftaleno»

15 - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado por o agente activo óxido de fosfeno ser seleccionado de entre o grupo consistindo em 2-difenilfosfo roso-no72 945

212.0 (POR)

31na-2,3,5-trien-7-inol_s9-diol, 2-difenilfosforoso-8-fenil-octa™ “•2,3₉5-trien-7-ín-l-ol, l-(3-difenilfosforoso-3-hidroxíprop-l,2~dienil)-2-(3-hidroxi-prop-l-ínil)benzeno_? e 2-(3-difenilfosforoso-3-hidróxi-prop-l„2-dieni1)-3-(3-hidróxi-prop~l~inil)naftaleno,,