JP4780834B2

JP4780834B2 - 新規なプテリン抗新生物薬

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Publication number: JP4780834B2
Application number: JP2000577174A
Authority: JP
Inventors: フィリップ・ビー・ビー・モヘノ
Original assignee: Phillip BB Moheno
Current assignee: Phillip BB Moheno
Priority date: 1998-10-22
Filing date: 1999-10-21
Publication date: 2011-09-28
Anticipated expiration: 2019-10-21
Also published as: JP2002527518A; AU1223400A; US6358953B1; EP1123294A1; WO2000023448A1

Description

【０００１】
（関連出願）
本出願は、１９９８年１０月２２日に出願された仮出願６０／１０５１７２の一部継続出願である１９９９年５月２４日に出願された仮出願６０／１０５８３４の一部継続出願であり、これらは全体を参考文献として本発明に援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、強力な抗新生物活性を有する新規なプテリンおよびプテリン類縁体金属錯体に関する。さらに本発明は、ガンおよびウイルス感染の治療および予防におけるこれらの錯体の製造および使用に関する。
【０００３】
（背景技術および発明への導入）
毎年１０万人もの人々が癌により死亡し、科学者は何十年もの間、効果的な治療法を捜し求めている。広範囲の有効な抗新生物薬がある。これらの作用薬は、一般にアルキル化薬、ＤＮＡバインダー、抗代謝産物薬および有糸分裂阻害薬に分類される。
食品医薬品局認可制ガン薬になったものはないけれども、幾つかのプテリジン誘導体が、ある程度の抗新生物活性をもつことがわかった。たとえば、米国特許第５５３４５１４号は、キサントプテリン、イソキサントプテリンおよびネオプテリン誘導体が、抗新生物活性を有することを教示している。また、米国特許第４３９３０６４号および第４７５３９３９号には、それぞれ、１０−デアザミノプテリン、１０−エチル−１０−デアザミノプテリンが、白血病の治療に有用であることが開示されている。国立衛生研究所によって、プテリン懸濁物がテストされたが、有意な抗新生物活性は見られなかった。これらの文献には、ガンを治療するためのプテリンおよびプテリン類縁体の金属錯体は開示されていない。
特異的リガンドをもつ金属錯体が、抗腫瘍薬として好結果で用いられている。このような化合物として、シスプラチンおよびカルボプラチンの２つがある。
多くの抗ガン薬が市販されているけれども、耐性をもつガンが常に存在する。したがって、新規な抗新生物薬が必要である。
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、式（Ｉ）：
(ＭＸ_ａ)_ｙ(プテリン類)_ｚ（Ｉ）
[式中、Ｍは、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｖ^２＋、Ｃｒ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｚｎ^２＋、Ｍｏ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｂａ^２＋、Ｒａ^２＋、Ｒｕ^２＋、Ｒｈ^２＋、Ｐｄ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｓｎ^２＋、Ｗ^２＋、Ｒｅ^２＋、Ｏｓ^２ ^＋、Ｉｒ^２＋、Ｐｔ^２＋、Ｓｉ^２＋およびＳｍ^２＋からなるグループから選ばれる二価金属イオン；
Ｘは、酸のアニオンであり、イオン化時に−１または−２の電荷をもつ；
ａは、１〜２の整数；
ｙは、１〜６の整数；および
ｚは、１〜６の整数である]
で示される新規な金属プテリンおよびプテリン類縁体錯体に関する。
プテリン類および金属塩から調製される懸濁物も本発明に含まれる。このような懸濁物は、抗新生物薬および／または抗ウイルス薬である。
【０００５】
（定義）
「プテリン類」は、互変体として存在しうる以下の化合物を意味する。
【化１】

[式中、Ｒ^１およびＲ^２は、水素、アルキル、ペルハロアルキル、カルボキシル、アミド、カルボキサミド、オキソ、カルボキシエステル、アミノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アジド、アシルアルキル、ヒドロキシアルキル、−Ｃ(Ｏ)Ｈ、アリール、脂環式、アラルキル、チオアルキル、スルフヒドリル（−ＳＨ）、スルホニル（ＳＯ^２− _３）、−ＣＮ、ペルハロアルコキシおよびアシルからなるグループから独立して選ばれる；
Ｒ^５およびＲ^６は、水素、アルキル、ペルハロアルキル、カルボキシル、アミド、カルボキサミド、オキソ、カルボキシエステル、アミノ、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アジド、アシルアルキル、ヒドロキシアルキル、−Ｃ(Ｏ)Ｈ、アリール、脂環式、アラルキル、チオアルキル、スルフヒドリル（−ＳＨ）、スルホニル（ＳＯ^２− _３）、−ＣＮ、ペルハロアルコキシ、アシルおよびゼロ（存在せず）からなるグループから独立して選ばれる；
Ｒ^３およびＲ^４は、−Ｈ、アルキル、−Ｃ(Ｏ)Ｈ、アシル、ヒドロキシアルキル、アリール、アルキルアリール、ヒドロキシ、オキソ、アシルアルキル、ハロアルキル、ペルハロアルキル、ハロアリール、カルボキシルおよびゼロからなるグループから独立して選ばれる。]
【０００６】
上記構造式における点線は、任意の結合を表す。Ｂ環における窒素は、中性であるかまたはプラス荷電することができる。したがって、「プテリン類」は、プテリンおよびプテリン類縁体の両方を意味し、キサントプテリンやイソキサントプテリンが包含されるが、これらに限定されるものではない。
「懸濁」は、物質の粒子が流体または固体中に混合されているが、溶解していない状態を意味する。
「ＲＣＯＯＨ」は、カルボン酸を意味し、ここで、Ｒは、アルキル、アリールまたはアラルキルである。適当なカルボン酸アニオンとして、ＣＨ_３ＣＯＯ⁻およびフェニル−ＣＯＯ⁻が挙げられる。
「アルキル」は、直鎖、分枝鎖および環式基を含む飽和または不飽和脂肪族基を意味する。アルキル基は、任意に置換することができる。アルキル基は、二重または三重結合を含むことができる。適当なアルキル基は、メチルである。
【０００７】
「アリール」は、５〜１４個の環原子および少なくとも１個の共役π電子系を含む環を有する芳香族基を意味し、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビアリールが包含され、これらは任意に置換されてよい。適当なアリール基は、フェニルである。
炭素環式アリール基は、芳香環上の環原子が炭素原子である基である。炭素環式アリール基には、単環式かつ炭素環式アリール基、ならびに任意に置換されたナフチル基といったような多環式あるいは縮合化合物が包含される。
複素環式アリールまたはヘテロアリール基は、芳香環上の環原子として１〜４個のヘテロ原子を有し、残りの環原子が炭素原子である基である。適当なヘテロ原子として、酸素、イオウおよび窒素が挙げられる。適当なヘテロアリール基として、フラニル、チエニル、ピリジル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロリル、ピリジル−Ｎ−オキシド、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなどが挙げられ、すべて任意に置換されてよい。
【０００８】
「ビアリール」は、２個以上の芳香環を含むアリール基を表し、縮合環系および他のアリール基で置換されたアリール基の両方が包含される。このような基は、任意に置換されてよい。適当なビアリール基には、ナフチルおよびビフェニルが包含される。
「脂環式」は、脂肪族化合物と環式化合物の特性を併せ持つ化合物を意味する。このような環式化合物には、芳香族、シクロアルキルおよび架橋シクロアルキル化合物が包含されるが、これらに限定されるものではない。シクロヘキセニルエチルおよびシクロヘキシルエチルが、適当な脂環式基である。これらの基は任意に置換されてよい。
「任意に置換された」または「置換された」は、低級アルキル、低級アリール、低級アラルキル、低級脂環式基、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アリールオキシ、ペルハロアルコキシ、アラルコキシ、ハロ、アジド、アミノ、アシル、低級アルキルチオ、オキソ、アシルアルキル、カルボキシエステル、カルボキシル、カルボキシアミド、ニトロ、アシルオキシ、アルキルアリール、アルコキシアリール、ホスホノ、スルホニル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、シアノ、低級アルコキシアルキル、低級ペルハロアルキルおよびアラルキルオキシアルキルから独立して選ばれる１〜４個の置換基によって置換された基である。
【０００９】
「アラルキル」は、アシル基で置換されたアルキル基を意味する。適当なアラルキル基は、ベンジル、ピコリルなどであり、任意に置換されてよい。「−アラルキル−」は、二価の基−アリール−アルキレン−を意味する。
本明細書において、それぞれ有機ラジカルまたは化合物に関して言及される「低級」とは、１０個以下、好ましくは６個以下、さらに好ましくは１〜４個の炭素原子であると定義される。このような基は、直鎖、分枝鎖または環式基であってよい。
【００１０】
「アシル」は、−Ｃ(Ｏ)Ｒを意味し、ここでＲは、Ｈ、アルキルおよびアリールである。
「カルボキシエステル」は、−Ｃ(Ｏ)ＯＲを意味し、ここでＲは、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式基であり、すべて任意に置換されてよい。
「カルボキシ」は、−Ｃ(Ｏ)ＯＨを意味する。
「オキソ」は、アルキル基における＝Ｏを意味する。
「アミノ」は、−ＮＲＲ'を意味し、ここでＲおよびＲ'は、水素、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式基から独立して選ばれる基であり、Ｈ以外は任意に置換されてよい；ならびにＲおよびＲ'は、環系を形成することができる。
「ハロゲン」または「ハロ」は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒおよび−Ｉを意味する。
「環式アルキル」または「シクロアルキル」は、環式のアルキル基を意味する。適当な環式基には、ノルボルニルおよびシクロプロピルが包含される。このような基は、置換されてよい。
【００１１】
「複素環式」および「複素環式アルキル」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含む基を意味する。適当なヘテロ原子は、酸素、イオウおよび窒素である。複素環式基は、環の窒素原子または炭素原子を介して結合することができる。適当な複素環式基には、ピロリジニル、モルホリノ、モルホリノエチルおよびピリジルが包含される。
「ホスホノ」は、−ＰＯ_３Ｒ_２を意味し、ここでＲは、−Ｈ、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式基からなるグループから選ばれる。
「スルホニル」は、−ＳＯ_３Ｒを意味し、ここでＲは、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式基である。
「アルキレン」は、二価の直鎖、分枝鎖または環式飽和脂肪族基を意味する。
【００１２】
「アラルキルオキシアルキル」は、アリール−ａｌｋ−Ｏ−ａｌｋ−を意味し、ここでａｌｋは、アルキレン基である。「低級アラルキルオキシアルキル−」は、アルキレン基が低級アルキレンである基を意味する。
「−アルコキシ−」または「−アルキルオキシ−」は、−ａｌｋ−Ｏ−を意味し、ここでａｌｋは、アルキレン基である。
「アルコキシ−」は、アルキル−Ｏ−を意味する。
「−アルコキシアルキル−」または「−アルキルオキシアルキル−」は、−ａｌｋ−Ｏ−ａｌｋ−を意味し、ここで各ａｌｋは、アルキレン基から独立して選ばれる。「低級−アルコキシアルキル−」において、各アルキレンは、低級アルキレンである。
「アルキルチオ−」または「−アルキルチオ−」は、それぞれアルキル−Ｓ−および−ａｌｋ−Ｓ−を意味し、ここでａｌｋは、アルキレン基である。
「−アルキルチオアルキル−」は、−ａｌｋ−Ｓ−ａｌｋ−を意味し、ここで各ａｌｋは、独立して選ばれるアルキレン基である。「低級−アルキルチオアルキル−」において、各アルキレンは、低級アルキレンである。
【００１３】
「アミド」または「カルボキサミド」は、ＮＲ_２−Ｃ(Ｏ)−およびＲＣ(Ｏ)−ＮＲ^１−を意味し、ここでＲおよびＲ^１は、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキルおよび脂環式基である。
「ペルハロ」は、脂肪族またはアリール基上のすべてのＣ−Ｈ結合がＣ−ハロ結合に置き換わっている基を意味する。適当なペルハロ基には、−ＣＦ_３および−ＣＦＣｌ_２が包含される。
「医薬的に許容しうる塩」には、式（Ｉ）の化合物の塩および本発明化合物と有機酸または塩基との組み合わせから誘導されたそのプロドラッグの塩が包含される。
【００１４】
本明細書で用いる「プロドラッグ」は、生物学的システムに投与された場合に、自発的化学反応または酵素による触媒反応、あるいは代謝反応のいずれかの結果として“薬”物質を生成するどのような化合物をも意味する。プロドラッグは、プテリン類に結合するＨＯ−、ＨＳ−、ＨＯＯＣ−、Ｒ_２Ｎ−といったような官能基に結合してインビボで開裂する基を用いて形成される。プロドラッグとしては、該基がアルキル、アリール、アラルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルであるカルボン酸エステル、ならびに、結合される基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェートまたはスルフェートであるヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらの基は、例示的なものであり、網羅的なものではなく、当業者であれば種々の公知のプロドラッグを製造することができるであろう。このような式（Ｉ）の化合物のプロドラッグは、本発明に含まれる。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
本発明者は、プテリン類および二価カチオンの塩から調製された懸濁物が著しい抗新生物活性をもつことを見出している。一般式(ＭＸ_ａ)_ｙ(プテリン類)_ｚ[式中、Ｍは、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｖ^２＋、Ｃｒ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｚｎ^２＋、Ｍｏ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｂａ^２＋、Ｒａ^２＋、Ｒｕ^２＋、Ｒｈ^２＋、Ｐｄ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｓｎ^２＋、Ｗ^２＋、Ｒｅ^２＋、Ｏｓ^２＋、Ｉｒ^２＋、Ｐｔ^２＋、Ｓｉ^２＋およびＳｍ^２＋からなるグループから選ばれる金属イオン；
Ｘは、酸のアニオンであり、イオン化時に−１または−２の電荷をもつ；ａは、１〜２の整数；ｙおよびｚは、独立して１〜６の整数；ただし、
ａ）ＭがＣｕ^２＋である場合、プテリン類は、プテリンまたは６−カルボキシプテリンではなく；
ｂ）ＭがＣａ^２＋である場合、プテリン類は、キサントプテリン、イソキサントプテリンまたはネオプテリンではなく；および
ｃ）ＭがＺｎ^２＋である場合、プテリン類は、プテリンではない]で示される化合物が、哺乳動物において、大いに重要な抗新生物効力をもつと考えられる。
以下の図式は、水溶液中で、ａ＝２、ｙ＝１およびｚ＝４である、これらの化合物によって形成されると考えられる構造の種類の一例を示す。プテリン類−リガンドおよびもう１つのプテリン類化合物の間に水素結合が存在すると考えられる。このような水素結合を図式２に示す。
図式１
【化２】

(ＭＸ_２)(プテリン)_４、溶液中の金属イオン−プテリン類錯体（例）
【００１６】
図式２および３に示すように、Ｒ^１，Ｒ^２＝Ｈ；Ｒ^５，Ｒ^６＝ゼロ；およびＲ^３，Ｒ^４＝ゼロであるように配置された(ＭＸ_ａ)_ｙ(プテリン類)_ｚ化合物は、腫瘍細胞の細胞性ＤＮＡにインターカレートし、細胞分裂および成長に必要なこのような遺伝子の発現を抑制すると考えられる。このメカニズムと相助作用して作動することによって、(ＭＸ_ａ)_ｙ(プテリン類)_ｚ化合物は、哺乳動物の免疫系の体液性細胞を抑制することができ、またＤＮＡインターカレーティングメカニズムを介することにより、腫瘍細胞に対抗する免疫系のキラー細胞を強化することもできる。体液性系の抑制は、腫瘍細胞の外表面を覆い、腫瘍細胞を破壊しようとするキラー細胞の接近を遮断しうる抗体の産生を阻害する。
【００１７】
図式２
【化３】

図式３
【化４】

本発明の金属プテリン類組成物は、動物の新生物およびウイルス感染の治療および予防に有用であると考えられる。
【００１８】
（好ましい化合物および組成物）
適当なアルキル基として、１〜約２０個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当なアリール基として、１〜約２０個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当なアラルキル基として、２〜約２１個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当なアシルオキシ基として、１〜約２０個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当なアルキレン基として、１〜約２０個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当な脂環式基として、３〜約２０個の炭素原子を含む基が挙げられる。適当なヘテロアリール基として、１〜約２０個の炭素原子および好ましくは窒素、酸素、リンおよびイオウから独立して選ばれる１〜４個のヘテロ原子を含む基が挙げられる。適当なヘテロ脂環式基として、２〜約２０個の炭素原子および好ましくは窒素、酸素およびイオウから独立して選ばれる１〜５個のヘテロ原子を含む基が挙げられる。
【００１９】
好ましいプテリン類として、プテリン、６−ホルミルプテリン、７−ホルミルプテリン、６−ヒドロキシメチルプテリン、７−ヒドロキシメチルプテリン、６−メチルプテリン、７−メチルプテリン、６，７−ジメチルプテリン、プテリン−６−カルボン酸、プテリン−７−カルボン酸、キサントプテリンおよびイソキサントプテリンが挙げられる。プテリン、６−ホルミルプテリン、７−ホルミルプテリン、６−ヒドロキシメチルプテリン、７−ヒドロキシメチルプテリン、６−メチルプテリン、７−メチルプテリン、６，７−ジメチルプテリン、プテリン−６−カルボン酸およびプテリン−７−カルボン酸が、より好ましい。プテリンが、特に好ましい。
【００２０】
好ましい組成物は、約１：１〜約６：１のプテリン類：二価カチオンのモル比を用いて調製される。より好ましくは、約１：１〜約４：１のモル比である。最も好ましくは、約２：１〜約４：１のモル比である。約４：１のモル比が、特に好ましい。
これらの組成物は、プテリン類の溶液または懸濁液を二価のカチオンの塩の溶液または懸濁液と合わせることによって調製することができる。組成物は、プテリン類と二価のカチオンの塩を適当な溶媒に混合し、溶液または懸濁液を形成することによって調製することもできる。
好ましい溶媒は、極性溶媒であり、水、生理的食塩水、水性緩衝液、ＤＭＳＯおよびエタノールならびにイソプロパノールといったような低級アルコールが挙げられるが、これらに限定されるものではない。水が、より好ましい。
好ましい二価のカチオンとして、ＣａＣｌ_２およびＣｕＣｌ_２が挙げられる。これらは、ＣａＣｌ_２などの水和錯体の形態をとることもできる。
【００２１】
好ましい化合物は、Ｒ^１およびＲ^２が、−Ｈ、メチル、−Ｃ(Ｏ)Ｈ、−ＣＨ_２ＯＨ、−ＣＯＯＨ、＝Ｏおよび−Ｃｌからなるグループから独立して選ばれるプテリン類である。−Ｈが、より好ましい。
Ｒ^５およびＲ^６が、ゼロである化合物が好ましい。
好ましいプテリンとして、Ｒ^３およびＲ^４が、独立してＨまたはゼロである化合物が挙げられる。
好ましいＸとして、Ｆ⁻、Ｃｌ⁻、Ｂｒ⁻、Ｉ⁻、ＲＣＯＯ⁻、ＣＯ_３ ^２−、ＨＰＯ_３ ^２−、ＳＯ_４ ^２−およびＳＯ_３ ⁻が挙げられる。Ｆ⁻、Ｃｌ⁻およびＢｒ⁻が、より好ましい。
好ましいＭイオンとして、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｖ^２＋、Ｃｒ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｍｏ^２＋、Ｓｉ^２＋およびＺｎ^２＋が挙げられる。Ｃａ^２＋およびＣｕ^２＋が、より好ましい。Ｃａ^２＋が、特に好ましい。別の態様においては、Ｃａ^２＋、Ｃｕ^２＋およびＺｎ^２＋が好ましい。別の態様においては、好ましいＭイオンとして、Ｓｒ^２＋、Ｂａ^２＋、Ｒａ^２＋、Ｒｕ^２＋、Ｒｈ^２＋、Ｗ^２＋、Ｒｅ^２＋、Ｏｓ^２＋、Ｉｒ^２＋、Ｐｔ^２＋、Ｐｄ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｓｎ^２＋およびＳｍ^２＋が挙げられる。
１つの好ましい態様において、組成物は、プテリン：塩またはプテリン類縁体：塩＝約４：１のモル比にて、プテリン類、ＣａＣｌ_２またはＣｕＣｌ_２、水および任意の賦形剤から作成される。
ａが整数２であるのが好ましい。
ｙが１〜４の整数であるのが好ましい。１または２であるのが、より好ましい。１が最も好ましい。
ｚが１〜４の整数であるのが好ましい。２〜４であるのが、より好ましい。４が最も好ましい。
１つの好ましい態様において、ＭはＣａ^２＋またはＣｕ^２＋、ＸはＦ⁻、Ｃｌ⁻またはＢｒ⁻、ａは２、ｘは１およびｚは２または４である。
【００２２】
以下の化合物が、本発明における好ましいプテリン類である。
【表１】

【００２３】
（プテリン類縁体）
これまでに述べたように、プテリン類縁体もまた、プテリンと同じ有益な特性をもっている。これらの類縁体には、下記の基本プテリン構造において、Ｎ−５およびＮ−８において、任意に、および独立して置換されたもの、ならびにＣ−６およびＣ−７において、任意に、および独立してモノ−またはビ−置換されたものが包含される。このリストは、例示のみを目的とするものであり、限定するものとして解釈されるべきではない。多くの他のプテリン類縁体が公知であるか、あるいは当業者には明らかであるが、このようなプテリン類縁体もまた本発明に包含される。同様に、まだ発見されていないけれども当業者には、本発明において有用であるということが明らかであるプテリン類縁体もまた本発明に包含される。
【化５】

プテリンおよびプテリン類縁体の合成は公知である。以下に挙げるものは、プテリン類を合成するために開発されている手順が記載されている３項文献の部分的概要である。
【表２】

【表３】

【表４】

【表５】

【表６】

【表７】

【表８】

【表９】

【表１０】

【表１１】

【表１２】

【表１３】

【表１４】

【表１５】

【表１６】

【表１７】

【表１８】

【表１９】

【表２０】

【表２１】

【表２２】

【表２３】

【表２４】

【表２５】

【表２６】

【表２７】

【表２８】

【表２９】

【表３０】

多くのプテリン類は、スイス、ジョナ、ＣＨ−８６４５、ブエクスシュトラーセ１０番、シルクス・ラボラトリーズ（Schircks Laboratories）から在庫注文または特別注文によって入手可能である。
【００２４】
（製剤）
本発明化合物は、合計１日用量が約０.５mg/kg/用量〜約７０mg/kg/用量、好ましくは約１.５mg/kg/用量〜約３５mg/kg/用量を経口投与する。有効成分の放出速度をコントロールするために時間−放出性製剤を用いるのが好ましい。都合がよい回数に分割して投与することができる。他の方法（静脈投与など）を用いる場合、化合物は、０.００３〜３０mg/kg/時間、好ましくは０.０３〜３.０mg/kg/時間の速度で冒された組織へ投与する。これらの化合物を下記のように静脈内投与する場合、このような速度は容易に維持される。
本発明の目的のために、化合物は、経口、非経口、吸入スプレー、局所または経直腸といったような種々の手段により、医薬的に許容し得る担体、アジュバントおよびビヒクルを含む製剤にて投与することができる。ここで用いる非経口投与方法として、種々の注入技術をもちいた、皮下、静脈内、筋肉内および動脈内注射が挙げられる。ここで用いる動脈内および静脈内注射には、カテーテルによる投与も含まれる。経口投与が一般に好ましい。
【００２５】
有効成分を含む医薬組成物は、意図する投与方法にとって適当であればいずれの剤形であってもよい。経口用としては、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性または油性懸濁液剤、分散しうる散剤または顆粒剤、乳液剤、硬または軟カプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤などを調製する。経口用に意図される組成物は、医薬組成物製造業界で公知のいずれかの方法にしたがって調製するが、口当たりのよい製剤を提供するために、このような組成物に、甘味剤、香味剤、着色剤および保存剤といったような１種または２種以上の作用剤を含めることもできる。錠剤の製造に適する非毒性の医薬的に許容し得る賦形剤と混合した有効成分を含む錠剤がよい。このような賦形剤は、たとえば、炭酸カルシウムまたはナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはナトリウムといったような不活性希釈剤；コーンスターチまたはアルギン酸といったような顆粒化剤および崩壊剤；スターチ、ゼラチンまたはアラビアゴムといったような結合剤；およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクといったような滑沢剤である。錠剤は、コーティングしなくてもよいし、あるいは崩壊および胃腸管における吸収を遅らせ、それによって長い期間にわたって持続性作用が提供されるように、マイクロカプセル封入などの公知の技術によって、コーティングしてもよい。たとえば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルといったような時間遅延物質を単独で、またはワックスとともに用いることができる。
【００２６】
経口用製剤は、有効成分がリン酸カルシウムまたはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混合される硬ゼラチンカプセル剤または有効成分が水またはピーナツ油、液状パラフィンまたはオリーブ油などの油性媒質と混合される軟ゼラチンカプセル剤として提供されてもよい。
本発明の水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と任意に混合物を形成した有効成分を含む。このような賦形剤として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルコース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴムといったような懸濁剤および天然のホスファチド（レシチンなど）、酸化アルキレンと脂肪酸との縮合生成物（ステアリン酸ポリオキシエチレンなど）、酸化エチレンと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（ヘプタデカエチレンオキシセタノールなど）、酸化エチレンと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）といったような分散剤または湿潤剤が挙げられる。水性懸濁液は、ｐ−ヒドロキシ−安息香酸エチルまたはｎ−プロピルといったような１種または２種以上の保存剤、１種または２種以上の香味剤およびスクロースまたはサッカリンといったような１種または２種以上の甘味剤も含んでもよい。このような懸濁液は、酸、塩基および保存剤を含んでもよい。
【００２７】
油性懸濁液は、落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはココナツ油などの植物油または液状パラフィンなどの鉱物油に有効成分を懸濁することによって製剤することができる。経口懸濁液は、蜜蝋、硬パラフィンまたはセチルアルコールなどの濃化剤を含んでもよい。口当たりのよい経口製剤を提供するために、前述の甘味剤および風味剤を加えてもよい。これらの組成物に、アスコルビン酸などの抗酸化剤を加えることによって保存することができる。
水を加えて製造される水性製剤に適した本発明の分散可能な散剤および顆粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１種または２種以上の保存剤と任意に混合された有効成分を提供する。適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、前述のとおりである。甘味剤、香味剤および着色剤などのさらなる賦形剤を加えてもよい。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、水中油型の乳液剤であってもよい。油相は、オリーブ油または落花生油などの植物油、液状パラフィンなどの鉱物油、あるいはこれらの混合物であってよい。適当な乳化剤として、アラビアゴムおよびトラガカントゴムなどの天然ゴム、大豆レシチンなどの天然ホスファチド、モノオレイン酸ソルビタンなどの脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘導されたエステルまたは部分エステル、およびモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの酸化エチレンとこれらの部分エステルとの縮合生成物が挙げられる。乳化剤は、甘味剤および香味剤も含んでもよい。
シロップ剤およびエリキシル剤は、グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤とともに製剤してもよい。このような製剤は、粘滑剤、保存剤、香味剤または着色剤も含んでもよい。
【００２９】
本発明の医薬組成物は、滅菌した注射用水性または油性懸濁液などの滅菌注射用製剤の剤形をとることもできる。この懸濁液は、適当な分散剤または湿潤剤および前述の懸濁剤を用いて公知の方法にしたがって製剤することができる。滅菌注射用製剤は、１,３−ブタン−ジオールなどの非毒性非経口投与可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液もしくは凍結乾燥散剤であってもよい。使用しうる許容し得るビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、溶媒または懸濁媒質として、滅菌不揮発性油を常套的に用いる。この目的には、どのような刺激性の低い油を用いてもよく、合成モノ−またはジグリセリドが挙げられる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸もまた、注射用製剤に用いることができる。
【００３０】
１回投与剤形を作成するための担体物質と合わせる有効成分の量は、治療される患者および特定の投与モードに応じて変化する。たとえば、ヒト経口投与用に意図された時間放出性製剤は、組成物合計量の約５〜約９５％の好適かつ都合のよい量の担体物質と混合した約６〜６０００mgの有効成分を含むことができる。が好ましい。製造される医薬組成物が、投与のための量を容易に測定し得るように製剤されるのが好ましい。たとえば、静脈内注入用に意図される水性溶液は、約１００ｍｌ／時間の速度で適当な体積が注入されるようにするために、溶液１ｍｌ当たり約２.３〜２３０００μgの有効成分を含むべきである。
【００３１】
前述のように、経口投与に適した本発明の製剤は、それぞれ既定の量の有効成分を含むカプセル剤、カシェ剤または錠剤；散剤または顆粒剤；水性または非水性液体中の溶液剤または懸濁液剤；または水中油型乳液剤または油中水型乳液剤などの別個の単位として存在する。有効成分は、巨丸、舐剤またはペースト剤として投与することもできる。
錠剤は、打錠または型入れによって製造され、任意に付随成分を加えてもよい。打錠錠剤は、任意に結合剤（ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（グリコール酸ナトリウムスターチ、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウムなど）、界面活性剤または分散剤と混合された、散剤または顆粒剤といったような自由に流れる状態の有効成分を適当な機械で打錠することによって製剤される。型入れ錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を適当な機会で型入れすることによって製造される。錠剤は、任意にコーティングするかまたは刻み目を入れ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを種々の比率で用いて、所望の放出プロファイルが得られるように、有効成分が遅延あるいは制御放出されるように製剤する。錠剤は、胃ではなく腸の部分で放出されるように、任意に、腸溶性コーティングしてもよい。このことは、式（Ｉ）の化合物が酸加水分解に影響を受けやすい場合において特に有利である。
【００３２】
マウスに局所投与するのに適した製剤は、通常、スクロースとアラビアゴムまたはトラガカントゴムからなる香味剤基材に有効成分が含まれるロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基材に有効成分が含まれる香錠；および適当な液体担体に有効成分が含まれる口内洗浄剤である。
直腸投与用製剤は、ココアバターまたはサリチル酸などを含む適当な基材でできた座剤である。
膣内投与に適する製剤は、有効成分に加えて、当業界で公知の適当な担体を含むペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡剤またはスプレー製剤である。
【００３３】
非経口投与に適した製剤として、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および製剤を処置される患者の血液と等張にする溶質を含む水性または非水性の等張・滅菌・無発熱物質の注射溶液；懸濁剤および濃化剤を含んでもよい水性または非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。該製剤は、アンプルおよびバイアルといったような１回用量または複数回用量が封入された容器に入れた形で製剤し、注射用水などの滅菌液体担体の使用直前の添加のみを必要とする凍結乾燥状態で貯蔵することができる。注射用溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および前述した種類の錠剤から製造することができる。
【００３４】
好ましい単位用量製剤は、金属プテリン複合体の１日用量または単位、１日サブ用量またはそれらの適当なフラクションを含むものである。
しかし、特定の患者のための特別の用量レベルは、使用した特定の化合物の活性；治療を受ける個人の年齢、体重、全身的治癒力、性別および食事；投与時間および経路；排泄速度；先に投与されている他の薬物；および治療を受けている特定の疾患の重篤度といったような種々の因子に依存することが当業者には理解されよう。
本発明化合物およびその製剤について、これらの化合物が調製される幾つかのプロセスを説明する実施例によってさらに詳しく理解することができる。しかし、これらの実施例は、本発明および本発明のバリエーションに特別な制限を構築するものであると理解すべきではなく、現在公知のものあるいは今後開発されるものも本発明の請求の範囲に属するものとみなすべきである。
【００３５】
実施例１（生物実施例Ａに使用）
ＣａＣｌ _２ ( プテリン ) _４の製剤（Ａ）
プテリン（シルクス・ラボラトリーズ、ジョナ、スイス、純度９９．８％）を２種類の懸濁液ＡおよびＢにする。懸濁液Ａは、５ｍＭプテリンの蒸留水溶液である。懸濁液Ｂは、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏを用いて調製した５ｍＭプテリンと５ｍＭＣａＣｌ_２の蒸留水溶液である。懸濁液Ｂを作成するために、適当な量のＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏをまず蒸留水に溶解し、次いで、プテリン粉末を添加する。次いで、懸濁液ＡをＡ：Ｂ＝３：１の比率で懸濁液Ｂと混合する。得られる懸濁液Ｃは、５ｍＭのプテリンと１.２５ｍＭのＣａＣｌ_２を含んでおり、テスト用マウスの経口胃栄養法に直接用いる。懸濁液Ｃの可溶性部分の質量分析は、ＭＨ^＋１＝２３９である。３０９に小さなピークも存在する[Ｃａ(プテリン)(プテリンフラグメントＣ４Ｎ３Ｈ３)]。渦攪拌した懸濁液は、[Ｃａ(プテリン^＋)(プテリン)]に匹敵する３６５にピークを示す。１３７、１８６、１１９、１６２、２９５および１４７に大きなピークがある。乾燥固体のＣＮＨ元素分析は、Ｃ：１９.９１、Ｎ１８.７１であり、これはプテリン中のＣ_６Ｈ_５のモル比に等しい。
【００３６】
実施例２（生物実施例Ｂに使用）
ＣａＣｌ _２ ( プテリン ) _４の製剤（Ｂ）
本実施例は、金属−プテリン懸濁液を作成する好ましい方法である。プテリン（シルクス・ラボラトリーズ、ジョナ、スイス、純度９９．８％）を２種類の懸濁液ＡおよびＢにする。懸濁液Ａは、５ｍＭプテリンの蒸留水溶液である。懸濁液Ｂは、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏを用いて調製した５ｍＭプテリンと５ｍＭＣａＣｌ_２の蒸留水溶液である。懸濁液Ｂでは、適当な量のＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏとプテリン粉末の両方を同時に蒸留水に添加する。次いで、懸濁液ＡをＡ：Ｂ＝３：１の比率で懸濁液Ｂと混合する。得られる懸濁液Ｃは、５ｍＭのプテリンと１.２５ｍＭのＣａＣｌ_２を含んでおり、テスト用マウスの経口胃栄養法に直接用いる。
適当な塩を用いる他の二価のカチオンとの懸濁液を調製するには、同じ方法を用いることができる。
本発明方法の使用例を以下に記載する。これらの例は例示的なものであり、本発明方法がこれらの例のみに限定されないものであることが理解されよう。
【００３７】
後記の例以外にも、抗腫瘍活性をもつ化合物を同定するのに有用なアッセイとして、以下の動物腫瘍モデルが挙げられる：
ｉ）抗腫瘍活性をスクリーニングするために国立ガン研究所（ＮＣＩ）薬物評価部門の現行スクリーニング法のスクリーニングデータ概要解釈インストラクション１４；“新規抗腫瘍薬物のインビボにおける評価のためのヒト腫瘍異種移植モデルの発達”D.J.Dykesら、Contrib.Oncol.、バーゼル、カージャー、４２：１−２２（１９９２）；“ＮＣＩ薬物部におけるヒト腫瘍異種移植モデル”Anticancer Drug Development Guide、Ch.６、ｐ１０１−１２５（B.Teicher編）（ヒューマナ・プレス・インコーポレイテッド、トトワ、ＮＪ）；“中空繊維における腫瘍細胞のインビボ培養”M.G.Hollingsheadら、Life Sciences、５７(２)：１３１−１４１（１９９５）に記載された国立衛生研究所（ＮＩＨ）が用いる動物モデル。特に有用なモデルは、スイスマウス−肉腫１８０、Ｂ６Ｄ２Ｆ１（ＢＤＦ１）マウス、腺癌７５５移植マウスおよびＬ１２１０白血病移植マウスといったような腫瘍移植モデルである。
ii）Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ−ＭＴＶ＋−乳癌；Ｃ３Ｈ／ＨｅＯｕ−乳癌といったような自発性腫瘍モデル。
【００３８】
インビトロ腫瘍細胞スクリーニングもまた、有効な本発明の抗腫瘍剤をスクリーニングするのに用いることができる。たとえば、ＮＣＩガン薬物発見および開発プログラムによって開発されたインビトロヒトガン細胞パネル。M.R.Boydら、Drug Development Research、３４：９１−１０９（１９９５）；M.R.Greverら、Seminars in Oncology、１９(６)：６２２−６３８（１９９２）。
抗ウイルス活性は、当業界で公知のスクリーンを用いることによって同定することができる。Methods in Virology、K.MaramoroschおよびH.Koprowski編、Vol.III（アカデミック・プレス、１９６７）。
【００３９】
実施例（生物 )
Ａ．ＣａＣｌ _２ ( プテリン ) _４の製剤（Ａ）の抗腫瘍効力
実施例１で調製したＣａＣｌ_２(プテリン)_４の懸濁液を、１．２５ｍＭＣａＣｌ_２中の５ｍＭプテリン３／１６ｍＬという毎日用量にて、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ−ＭＴＶ＋（乳癌ウイルス）マウスに経口投与する。この用量は約７ｍｇ／ｋｇ／日である。
図１は、コントロールマウス（Ｎ＝４）および８日間ＣａＣｌ_２(プテリン)_４を毎日投与されたテストマウス（Ｎ＝５）のメジアン腫瘍体積（ＭＴＶ）を示す。図１からわかるように、ＣａＣｌ_２(プテリン)_４処置は、コントロールと比べて腫瘍の成長を著しく緩解する。
【図１】

【００４０】
本発明者は、腫瘍成長阻害活性，Ｔ／Ｃを決定するためのＮＣＩ標準測定法に基く分析を行うのにこのデータを用いた。LaRusso,P.ら、Cancer Research、５０：４９００−４９０５（１９９０）。Ｔ／Ｃは、腫瘍生成マウスであるテストグループのメジアン腫瘍体積（ＭＴＶ）とコントロールグループのＭＴＶの間の比率である。簡単に述べると、本測定は、キャリパーで定期的に腫瘍を測定することであり、処置グループとコントロールグループの両方において行い、腫瘍が触診できる時点から開始する（図１）。測定日ごとに、各グループのメジアン腫瘍体積を決定するが、これにはゼロ（緩解）も含まれる。パーセンテージで表すＴ／Ｃ値は、抗腫瘍有効性を示す（図２）。Ｔ／Ｃが４２％以下の場合、有意な抗腫瘍活性があるとみなされる。Ｔ／Ｃ値が１０％未満の場合、高度の抗腫瘍活性があることになり、治験新薬申請に先立つ系統的毒素学実験を正当化するために国立ガン研究所（ＮＣＩ）によって使用されるレベルである（ＤＮ−２レベル活性と呼ばれる）。国立ガン研究所によって現在までにテストされた約３９の化合物が、この呼称を得ている。
【図２】

【００４１】
図２は、図１に示される腫瘍サイズデータに対する毎日のＴ／Ｃ比である。４２％を示すＡ線は、ＮＣＩによって創設された“有意な抗腫瘍活性”という活性のレベルを表す。約１０％を示すＢ線は、“高度な抗腫瘍活性”に相当するレベルを表す。実施例１の懸濁液ＣａＣｌ_２(プテリン)_４は、４日後に高度な抗腫瘍活性を示す。現在、高度に有意な抗腫瘍活性に対するＮＣＩ規格に及第している３９の化合物のうち大部分は、種々の発展段階にある。それらの多くが、高いインビボ毒性を伴っている。ところが、ＣａＣｌ_２(プテリン)_４は、治療的用量にて実験マウスに投与しても毒性がみられない。
【００４２】
Ｂ．ヒト乳癌異種移植片に対する新規な抗新生物薬Ｃａプテリンのインビボにおける評価
この実験では、マウスにおけるヒト乳癌異種移植片において、テストする作用剤であるＣａプテリンの活性を評価する。３〜４週齢の無胸腺ヌード（ｎｕ／ｎｕ）雌性マウスをハーラン・スプラーグ・ドーリー・インコーポレイテッド（インディアナポリス、ＩＮ）から購入する。換気されたケージ棚中の上面滅菌フィルターケージおよびMicroisolator（商標）ケージ（ラブプロダクツ、ＤＥ）にてマウスを４匹ずつ飼育する。到着後、使用する前に少なくとも４日間隔離する。実験動物の設備は、ＡＡＡＬＡＣ認可されている。温度は、７２±５Ｆに維持し、相対湿度は、３５〜７０％に維持する；明暗周期は１２時間である。マウスに滅菌したオートクレーブ可能な保証ピュリーナ齧歯動物用食事を任意給餌する。飲料水は、酸性化し、オートクレーブ処理したものを用い、供給源水は、再循環、脱イオン、ＵＶ照射し、５μｍフィルターで濾過したものを用いる。水は金属および痕跡量の汚染物質について３ヶ月ごとに分析する。
【００４３】
ＭＤＡＭＢ２３１乳癌細胞（リン酸緩衝生理的食塩水１００μＬ当たり５,０００,０００個の細胞）を雌性免疫不全無胸腺ヌードマウスの右足に皮下注射する。腫瘍の平均直径が３〜５ｍｍに達したとき、マウスを２つのグループに分割し（処置グループ毎に８匹）、処置を始める。１日１回、３／１６ｍＬのビヒクルコントロール（水）または３／１６ｍＬの実施例２の５ｍＭＣａＣｌ_２・プテリンを１４日間マウスに経口投与する。
処置開始からおよそ３週間の間、週４回腫瘍の寸法と体重を測定する。ノギスを用いて腫瘍を３面測定し、式：Ｖ＝ｐｉ(ｘｘｙｘｚ)／６[式中、ｘ，ｙおよびｚは、腫瘍測定値−皮膚の厚さである]によって腫瘍の体積(Ｖ)を算出する。平均腫瘍体積を各時点で測定する。各グループについて、Ｖ／Ｖ_０比の平均を、処置後の時間の関数としてプロットし、腫瘍成長の遅延を算出する。処置の毒性は、処置後の体重の減少から評価する。腫瘍の体積が１６００ｍｍ^３以上になるかまたは体重の減少が２５％を越えたときに、マウスを屠殺する。
処置の過程を通して、毒性の証拠はどのマウスにも見られなかった。
【００４４】
図３は、Ｃａプテリンで処置したヌードマウスにおけるヒト乳癌異種移植片の相対腫瘍体積としての平均成長応答を示す。腫瘍の直径が３〜５ｍｍに達したとき（０日）、テスト動物にＣａプテリンの毎日経口投与を開始する。図３からわかるように、Ｃａプテリンはコントロールに比べて非常に強く腫瘍の成長を退行させる。
【図３】

図３：記号：上の線□コントロール；下の線◆処置；Ｖ_０：平均初期体積。誤差バーは、各８匹のメンバーからなる動物のグループの平均測定値の標準誤差を表す。
【００４５】
図４は、コントロールマウスに対するテストマウスの毎日の腫瘍体積比（Ｖ／Ｖ_０）を表す。テスト／コントロール比（Ｔ／Ｃ）は、１４日目に４２％以下になる。
【図４】

前記実施例Ａに記載したように、Ｔ／Ｃ比は、抗腫瘍有効度の指針である。有意な抗腫瘍活性に対する国立ガン研究所の基準は、Ｔ／Ｃ＝４２％である。図３および図４は、経口投与されたテスト複合体ＣａプテリンのＴ／Ｃが４２％であり、この基準を越えることを示す。

Claims

式(Ｉ)：

で示されるＣａＣｌ_２(プテリン)_４。
医薬有効量の請求項１に記載の化合物を含む、動物における腫瘍細胞を阻害するための医薬組成物。
医薬有効量の請求項１に記載の化合物を含む、動物の悪性腫瘍を治療するための医薬組成物。
さらに、医薬的に許容し得る酸、塩基、塩または賦形剤を含む請求項２または３に記載の医薬組成物。
懸濁液である請求項２または３に記載の医薬組成物。