PT92152B

PT92152B - Processo para a preparacao de derivados glucosidicos de epipodofilotoxina comportando grupos fosfato ou sulfonato na fraccao acucar e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT92152B
Application number: PT92152A
Authority: PT
Inventors: Hideo Kamei; Takeshi Ohnuma; Takayuki Naito; Tetsuro Yamasaki; Mark Saulnier
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1988-10-31
Filing date: 1989-10-30
Publication date: 1995-07-03
Also published as: NZ231187A; NO894304L; EP0367189A2; CN1042362A; FI895087A0; NO894304D0; IL92149A0; DK540089A; KR900006359A; PL161731B1; FI895087A7; HU895601D0; JPH02178299A; AU624189B2; ZA898224B; NO171728B; BG90160A; PT92152A; JPH0585558B2; HU207734B

Description

“PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE DERIVADOS GLUCOSTDICOS

DE EPIPODOFIIOTQXINA COMPORTANDO GRUPOS FOSFATO OU SULFONATO NA FRACÇÃO AÇÚCAR E DE COMPOSIÇQES

FARMACÊUTICAS QUE OS CONTÊM

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

1. Campo da Invenção

A presente invenção diz respeito a glucosidos derivados de 4'-desmeti1epipodofilo toxina que possuem vários substitutos na fracção açúcar, 3 sua utilização como aqentes anti-tumorais e a composições farmacêuticas que os contêm.

2. Técnica Anterior

Os glucosidos derivados de 4'-desmeti1epipodofi1otoxina de formula geral (Γ) sao agentes anti-tumorais derivados do ligna no ocorrendo natural mente , podofi1otoxina (II). 0 método para a sua síntese estã descrito na patente de invenção norte-americana n9 3 524 844 de Kel1er-Juslen et al.

Entre os compostos de fórmula geral (I), etoposido (Ta) e teniposido (Ib) têm sido considerados como úteis clinicamente contra uma variedade de tumores, incluindo os tumores de pequenas células dos pulmões, tumores dos ovários, dos testículos, da mama, da bexiga, do cérebro, leucemia não-linfocítica e doença de Hodgkin.

As patentes de invenção norte-americanas n<?^s 4 547 567 e 4 716 221 descrevem compostos de fórmula geral

(III) na qual um dos símbolos e representa um grupo OH e o outro representa um grupo amino, monoalqui1amino ou dialquilamino. Citam-se estes derivados por exibirem alta solubilidade na ãgua.

Seligman et al. ÇCancer Chemotherapy Reports Part I, 1975, 59: 233-242) referiram a preparação do sal fosfato dissõdico de podofi 1 otoxina (IV). 0 fosfato, porém, não se hidrolisou por meio da fosfatase do acido prostãtico e não mostrou toxicidade reduzida sobre a podofi1otoxina inicial,

<0 (IV)

-4/

A presente invenção proporciona compostos anti-tumorais de fórmula geral

RESUMO DA INVENÇÃO

(V) na qual o símbolo R£ representa um atomo de hidrogénio e 0 símbolo R.| reoresenta um grupo alquilo alcenilo ^C2-10’ ^C1'^C1 °alqu¹1 ^{0 C}5-6’ ^2-furil°» 2-tienilo, arilo ^C6_iq» aralquilo C₇_₁₄ ou aralcenilo comportando facultativamente, cada um dos núcleos aromáticos, um ou mais substituintes, escolhidos entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo c,.₈, alcoxi ε,.θ, _hidroxi. _nitr0 ou amino; ou

os símbolos e R₂ representam, cada um, um grupo alqui_ lo C-|_₈; ou os símbolos R^ e R₂ representam, conjuntamente com o ãto mo de carbono a que estão ligados, um grupo cicloalquilo C_g__g;

Os símbolos R₃ e representam, cada um, um grupo hidro xi ou um grupo de formula geral -0S0₂R_g, -0S0₃H e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, -0P(X)(0H₂) e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêu tico ou -OP(X)(0R₇)₂, em que o símbolo R_g representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo alquilo C^__g, fenilo, a 1qui1(C__g)-feni1 o , eventua1 mente substituído ;

símbolo Ry representa um grupo protector do radical fo^ fato;

símbolo X representa um ãtomo de oxigénio ou de enxofre com a condição de os símbolos R₃ e R^ não representarem, ambos, um grupo hidroxi; e símbolo R_g representa um atomo de hidrogénio ou um gru po protector do radical fenol.

Uma variante preferida proporciona compostos de formula geral (V), na qual o símbolo R^ reoresenta um gruoo hidroxi e o

-6simbolo R-j tem o significado definido antes.

Outra variante da presente invenção proporciona compostos de formula geral (VI) e os seus sais aceitãveis sob o ponto de vi£ ta farmacêutico, na qual os símbolos R-j , R₂ θ tem o significado definido antes e o símbolo Rg representa um ãtomo de hidrogénio ou

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA rNVENÇÃO

Tal como utilizados aqui, e salvo indicação em contrário, os termos fosfato e fosforilacão incluem tiofosfato e tiofosfori1 ação, etc; os termos halogéneo e halogeneto referem-se a cloro, bromo e iodo; o termo alquilo refere-se a cadeias de carbono lineares e ramificadas; e a notação -L significa um

V grupo removível, tal como cloreto, que se encontra, vu1garmente, nas reacções de esterificação.

Os compostos iniciais, glucósidos de 4'-desmetilepipodofilotoxina (I), podem preoarar-se por processos descritos na patente de invenção norte-americana nQ 3 524 844 que estã incorpora da aqui como referência. No que respeita a derivar, eficazmente, os grupos hidroxilo na fracção açúcar, ê necessário, em primeiro lugar, bloquear o grupo fenol reactivo. A protecção do grupo 4'-fenol do composto (I) pode obter-se por meio da utilização de oro cessos conhecidos que incluem, por exemplo, a formação de éteres, acetais ou esteres. A selecção do grupo protector do radical fenol não é especificamente limitada e pode ser qualquer dos grupos pro tectores convencionais, conhecidos na técnica. A escolha do grupo protector e os métodos para bloquear e desbloquear o qruoo fenol estão documentados em tratados, tais como Protective Groups in Orgânic Chemistry, J.F.W. McOmie, Ed,, Plenum Press, 1973. Exemplos de grupos protectores, apropriados, do radical fenol incluem, mas não são limitados aos grupos t-buti¹ⁿ, benzilo, 2-tetra4ii dropiranilo, 2,2,2-tri cl oroetox i carbon i 1 o e benzi 1oxicarboni1 o , sendo o ultimo o preferido.

Os grupos hidroxilo da fracção açúcar de um glucõsido de 4'-desmeti1epipodofi1otoxina, assim protegido, podem ser convert/ dos, depois, em fosfatos, sulfatos ou sulfonatos da presente invenção por métodos convencionais conhecidos na literatura. As rea£ ções sao habitualmente não-regioesnecTficas e originam uma mistura de compostos 2-, 3- e '2 ,3-bis-derivados e no caso da fosforila ção o fosfato dimero de fórmula geral (VI), também, A mistura dos

ζ w

compostos pode separar-se nos componentes individuais oor meio da utilização de técnicas conhecidas, tais como a cromatografia em coluna . Nãoíe critico o ponto da sequência reaccional em que se verifica a separação dos produtos da reacção.

A fosforilação pode obter-se por meio da reacção de um radical 4'-fenol protegido (I) com um halogeneto fosforilado,

P(X) (halogêneo)₃, no seio de um dissolvente orgânico inerte, por exemplo cloreto de metileno ou acetonitrilo, e na presença de um agente de fixação deãcido, de preferencia uma base amina terciária, tal como piridina ou diisoprooiletilamina. A mistura resultante dos diclorofosfatos intermédios pode ser hidrolisada in si tu para se obterem os monoésteres de fosfato; e se a hidrólise for efectua da, na presença de uma base, tal como hidrogenocarbonato de sódio e similares, obtém-se o sal corresDondente do monoêster do fosfato. 0 grupo protector do radical 4'-fenol é, subsequentemente, el/ minado para se obterem os fosfatos da presente invenção.

Os dic1orofosfatos intermédios podem converter-se, também, em triêsteres de fosfato mediante tratamento com um álcool de fórmula geral RyOH, na qual o símbolo R? representa um gruoo protector do radical fosfato. Os grupos protectores do radical fo£ fato incluem, mas não se limitam a, grupo alquilo C^_₅ eventualmeii te substituído por um ou mais átomos de halogéneo; qrupo fenilo eventualmente substituído por um ou mais grupos escolhidos entre átomos de halogéneo e grupos alquilo C-j.g θ nitro; e fenilalquilo C]_5, ^em que θ núcleo fenilo ê, eventualmente, substituído como se definiu anteriormente. 0 triéster de fosfato pode obter-se tam bêm por tratamento do composto 4'-fenol-protegido (I) com um com-

posto de formula geral (R₇0)₂P(X)-L no seio de um dissolvente orgânico inerte, na presença de um receptor de ãcido. 0 grupo R? no triéster de fosfato pode eliminar-se, opcionalmente para se orepa rar o monoêster de fosfato que pode converter-se, facilmente, em um sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, por tratamento com uma base, tal como o hídrogenocarbonato de sódio. Assim, o grupo R₇ no triéster de fosfato pode ser escolhido de modo a que possa ser removido, simultaneamente, com o grupo protector do radical fenol ou um possa ser removido selectivamente sem afectar o outro.

Os sulfatos podem preparar-se Dor tratamento do composto 4'-fenol-protegido (I) com trióxido de enxofre ou um seu complexo, tal como complexo de piridina-triõxido de enxofre, no seio de um dissolvente orgânico inerte, ã temperatura ambiente. Remove-se o grupo fenol utilizando-se métodos convencionais, bem conhecidos na técnica, para preparar o composto. Um derivado do sulfato pode converter-se, facilmente, nos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, por meio de contacto com uma fonte do catião desejado.

Os sulfonatos da presente invenção podem obter-se, iguaj mente, por meio da reacção de um composto 4'-fenol-protegi do (I) com um composto de fórmula geral RgS02’L. A reacção efectua-se no seio de um dissolvente orgânico inerte, e na presença de um receptor de ãcido, desde a temoeratura ambiente ate cerca de -20°C, A remoção do grupo protector do fenol origina o composto final.

Deve compreender-se que a síntese dos compostos da pre-

sente invenção não se limita a processos e reagentes referidos an tes, mas pode incluir outros métodos capazes de introduzir o gr£ po fosfato ou o grupo sulfonato na parte açúcar dos glucosidos de 4'-desmeti1épipodofi1otoxina . As condições reaccionais deverão va r1ar, naturalmente, com a escolha dos compostos iniciais, mas devem ser confirmadas por um especialista na matéria, sem ensaio in devido.

Os compostos da presente invenção podem utilizar-se para inibir o crescimento de tumores malignos nos hospedeiros mamíferos, incluindo os seres humanos. Alguns dos compostos, particular mente os fosfatos e sulfatos, podem considerar-se como prõ-farmacos derivados dos glucosidos de 4'-desmetilépipodofilotoxina e, como tal, convertem-se no farmaco activo de origem, in vivo, por factores endógenos no hospedeiro ou fornecidos por via exógena. Estes pró-farmacos podem ser administrados, individualmente, ou em associação com um agente capaz de libertar a forma activa in vi vo, por exemplo, enzimas capazes de clivarem o grupo fosfato ou sulfato. Exemplos de enzimas apropriadas incluem as fosfatases, tais como a fosfatase alcalina e sulfatases, tais como a sulfatase arílica. A enzima pode estar ligada a um anticorpo esoecTfico contra um tumor para formar um conjugado anticorpo-enzima que pode administrar-se depois a um hospedeiro que sofre de um tumor, antes, concorrente com, ou apos a administração do prô-fãrmaco. 0 prÕ-fãrmaco mais o conjugado anticorpo-enzima são a via preferida na administração dos pró-farmacos sulfatos da presente invenção. Os conjugados anticorpo-enzima, os métodos para a sua preparação e os métodos para a sua utilização estão descritos em pormenor no nosso pedido, co-pendente, de patente de invenção norte-americana

π com ο níimero de série 211 301, depositado a 29 de Junho de 1988 e nos seus pedidos afins e anteriores nÇ 161 068, depositado a 26 de Fevereiro de 1988 e ηθ 081 382, depositado a 4 de Agosto· de 1987, respectivamente. Estes pedidos de patentes de invenção estão incorporados aqui como referencia,

ACTIVIDADE BIOLÓGICA

Os compostos representativos da presente invenção foram avaliados em relação a actividade anti-tumoral contra a leucemia murina P388 transplantâvel, Inocularam-se, Dor via intraperitoneal, murganhos fêmeas CDF^ de cinco semanas de idade, com 0,4 ml de fluido ascítico diluído contendo 10θ células leucémicas linfocTticas P388, Administraram-se os compostos do teste, por via intraperitoneal , em uma dose única, no primeiro dia, e observaram-se os animais durante 45 dias, 0 aumento da percentagem do tempo médio de sobrevivência (TMS) dos animais tratados em relação aos animais de controlo não tratados foi determinado e referido como % de T/C, Os compostos que apresentam valores de % de T/C de 125 ou mais são considerados como possuindo actividade anti-tumoral significativa. 0 Quadro I apresenta os resultados da avaliação i n vivo; apenas se referem a % de T/C maxima e a dose que provoca os efeitos máximos.

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Quadro I.	Actividade anti-tumoral contra a leucemia P388
Composto	Dose (mg/Kg/dia)	%T/C de TMS
Etoposido	120	250
xr	120	185
xrr	30	120
x r i r	30	125
XVII	60	195
XVIII	30	115
XIX	30	100
XXIII	120	175
XXIV	60	130
XXVI	30	130
XXVII	120	105
XXVIII	10	105

Estudou-se a citotoxicidade dos compostos da presente in venção utilizando-se células B16 de melanoma. As células B16 de melanoma cresceram até à fase logarítmica em meio essencial mínimo de Eagle suplementado com 10% de soro fetal de vitela, e 60 mcg/ml de canamicina. Colheram-se as células tumorais e implantaram-se em cavidades de placas microtituladoras de 96 cavidades com os materiais do teste com a dimensão do inoculado de 3,0 x 10 cêlulas/ml. Incubaram-se à temperatura de 37°C em atmosfera humidificada de 5% de CO2 e 95% de ar, durante 72 horas. Determinou-se a actividade citotoxica contra a série celular anterior, por clorimetria, a 540 nm apos coloração das células viãveis com vermelho neutro e registou-se em termos da concentração que inibe 50% do crescimento celular . Valores superiores a 100 y/g/ml da CIçq consideram-se, geralmente, como indicadores da carência de actividade citotoxica.

/

-13-/

Quadro ΙΓ,_Citotoxicidade in vitro contra 816 de melanoma

Composto	^CI50-ÍBZílU
Etopos i do	0,21
XI	2,2
XII	20
XIII	37
XVII	0,07
xvrn	5,4
xrx	30
xxi i r	0,32
XXIV	29
XXVI	8,0

A presente invenção proporciona um método para inibição dos tumores nos mamíferos que compreende a administração de uma dose inibidora do tumor eficaz, de um comoosto de formula geral (V) ou (VI), anti-tumora1, a um hospedeiro sofrendo de um tumor. Com esta finalidade, o farmaco pode administrar-se por vias convencionais, incluindo, mas não limitado, a via intravenosa, intra muscular, intratumora1, intraarterial, 1ntralinfãtica e oral. Em certos casos, o medicamento pode administrar-se em associação com um conjugado anticorpo-enzima que pode activar o farmaco i n vivo.

Uma variante adicional da presente invenção Droporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula geral (V) ou (VI) e um veículo aceitável sob o ponto de vista far maceutico. A composição anti-tumoral pode preparar-se sob qualquer forma farmacêutica apropriada, segundo a via de administração desejada, Exemplos de tais comnosfçóes incluem composiçoes sólidas para administração oral, tais como comprimidos, cápsulas, pílulas, pos e grânulos: composições líquidas oara administração oral, tais

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como soluções, suspensões, xaropes ou elixires e preparações para administração parentérica, tais como soluções esterilizadas, suspensões ou emulsões. Podem preparar-se, também, sob a forma de composições solidas esterilizadas que se podem dissolver em ãgua esterilizada, soro fisiológico ou algum outro meio esterilizado, injectãvel imediatamente antes da utilização.

As doses Óptimas e regimes para um determinado hospedeiro mamífero podem confirmar-se, facilmente, pelos entendidos na matéria. Deverá considerar-se, naturalmente, que a dose utilizada poderá variar de acordo com a composição particular formulada, com o composto particular utilizado, com o modo de aplicação e com o local particular, com o hospedeiro e com a doença a tratar. Muitos factores que modificam a acção do medicamento deverão ser tidos em consideração, incluindo idade, peso, sexo, dieta, tempo de administração, via de administração, velocidade de excreção, esta^ do do doente, combinações de fármacos, sensibilidades reactivas e gravidade da doença.

Os exemplos seguintes têm apenas finalidades ilustrativas e não devem ser considerados como limitação ao âmbito da invenção que se circunscreve, somente, ãs reivindicações anexas a este pedido de patente de invenção.

Exemplo 1

A, Preparação de 4'-0-benziloxicarbonil-etoposido (VII)

Adicionaram-se 1,98 ml (15 mmoles) de cloroformato de

benzilo, durante um período de 30 minutos, a uma mistura de 5,88 g (1Q mmoles) de etoposido e 10 ml de piridina em 100 ml de clore to de metileno, conservada ã temperatura de -15°C, Agitou-se a mistura a temperatura de -15°C durante mais uma hora, lavou-se S£ cessivamente com HC1 a 5%, bidrogenocarbonato de sódio aquoso e água e, depois, secou-se sobre sulfato de sódio anidro, Evaporou-se o dissolvente para se obterem 8,05 g do composto impuro que se purificou sobre uma coluna de gel de sílica (metanol a 5%/cloreto de metileno) para se obterem 6,93 g (96%) de 4'-O-benzi 1 oxi* carboni1-etoposido, sob a forma de um semi-sólido incolor; o.f,:

152°-155°C .

I.V. %ax (^Νυ^^ο11 ^c,n ^1: 3200-3600 (0H), 1 760 (lactona e 4'-0-benzi loxicarboni!o), 1600 (aromático),

RMN ^]H (60 MHz, CDC/) 5 7,36 (5H, s, 0C02CH2Ph), 6,81 (]H, s, 5-H), 6,50 (IH, s, 8-H), 6,25 (2H, s, 2'- e 6'-H), 5,94 (2H, br.s, 0-Ch^:2-0), 5,23 (2H, s, -0C0₂CH₂Ph), 4,89 (IH, d, J = 4 Hz, 4-H),

3,66 (6H, s, 3', 5'-0CH₃), 2,8-3,0 (2H, m, 2, 3-0H,D₂0 permutado), 1,38 (3H, d, J=5 Hz, 7-CH₃).

B, Fosforilação de 4'-O-benzi1oxicarbonil-etoposido

Adicionaram-se 280 >il (3 mmoles) de oxicloreto de fósforo, lentamente, a uma solução fria (Q°C) de 1,511 g (2,1 mmoles) de 4'-0-benziToxicarbonil-etoposido em 10 ml de cloreto de metile no anidro e 10 ml de piridina e agitou-se a mistura S temperatura de Q°C, durante 45 minutos. Depois, adicionaram-se 620 /tl (6 mmoles) de ãlcool benzilico e aqueceu-se a mistura reaccional à

-16- / ί

zr temperatura ambiente e, apôs agitação durante duas horas, diluíu-se com 50 ml de cloreto de metileno, lavou-se com ãgua e secou-se sobre sulfato de sodio, Evaporou-se o dissolvente in vacuo pa ra se obterem 2,40 g de um semi-sÕlido impuro contendo três compo nentes (CCF sobre gel de sílica: 0,66, 0,54 e 0,46) que foram separados por meio de cromatografta sobre gel de sílica (metanol a 1%/cloreto de metileno), Reuniram-se as fracçoes que mostravam um ponto de R^, 0,66 e evaporaram-se in vacuo Dara se obterem 435 mg (21%) do ester dibenzílico de 4'-benzi 1oxicarboni1-etoposido-3-fosfato, De modo semelhante, as fracçoes de R^. 0,54 e 0,46 ori_ ginaram 352 mg (21%) do éster benzílico de bis(4'-benziloxicarbonil etoposido-3-0.)-fosfato (ΓΧ) e 262 mg (13%) do éster dibenzílico de 4'-benzi 1oxicarboni1etoposido-2-fosfato (X), respectivamente,

I.V, ^max (^NuJ^o1) ^cm'^1;

VIII: 3300 (br), 1760, 1600,

IX: 3300 (br), 1760, 1600,

X; 3350, 1760, 1600,

C. Preparação dos 3- e 2-etoposidofosfatos dissodicos e do bis(etoposidtl-3-)-fosfato de sodio

Hidrogenou-se sob 1 atm, durante 1 hora, uma solução de 270 mg do éster dibenzílico de 4'-benziloxicarboniletonosido-3-fosfato em 20 ml de metanol e 20 ml de acetato de etilo contendo palãdio sobre carvão (50 mo) a 10%, Eliminou-se o cataiisador por meio de filtração e concentrou-se o filtrado i n vacuo para se obterem 188 mg de um semi-sÕlido que foi triturado com acetato de etilo para se obterem 145 mg (79%) do etoposido

-3-di-hidrogenofosfato, sob a forma de um pÓ castanho-claro, Disso! veram-se 135 mg de uma amostra do composto anterior em hidroge nocarbonato de sódio aquoso (33,6 mg em 2 ml de aguai e liofilizou-se para se obterem 140 mg do etooosido 3-fosfato dissõdico (composto XI), sob a forma de um pÓ cinzento; pureza avaliada:

95% por meio de HPLC (Ltchrosorb RP-13,70% MeOH-H^O); p.f.: 262°-263°C (dec.).

I.V. V_ma¥ (Nujól) cm'¹: 3377 (br), 1762, 1615.

III α À

UV >_mav (MeOH) nm (g): 238 (sh, 13,000), 285 (4,010).

Hla X

SIMS m/z: 713 (M+H)⁺.

De acordo com o processo anterior, hidrogenaram-se 97 mg de ester dibenzílico de 4¹-benzi 1oxicarboni1-etoposido-2-fosfato para se obterem 70 mg (ca, 100%) do etoposido-2-fosfato dissõdico (composto XII), sob a forma de um po cinzento. Pureza avaliada:

95%	por meio da HPLC.
P.F.	: 255°-257°C (dec.),
I.V.	^Qmax ^KBr) cm¹: 3460, 1772, 1615.
UV	^{nm 240} (^sh’ 12,600), 284
SIMS	m/z: 713 (M+H)⁺, 735 (M+Na)⁺,

De modo semelhante, hidrogenaram-se 135 mg do éster benzílico de bis (4 ¹-benzi 1oxicarboni1-etoposido-3-)-fosfa to para se obterem 60 mg (58%) de bis(etoposido-3-)-fos fato de sodio (Com posto ΧΙΙΓ), sob a forma de um DÓ cinzento, Pureza avaliada: 95% por meio de HPLC.

,18(

P.F.: 265°-266°C (dec.).

I.V. V' (KBr) cm’¹: 3460, 1772, 162Q, (Πα X ^{UV X}máx ^{fMe0H) nm 240 fsh}’ ²⁴’^6QQb ²⁸⁵ (7,730).

SIMS m/z: 1262 (M+K)⁺, 1285 (M+Na+1)⁺,

Exemplo 2

A, Tosilação do 4'-benziloxícarbonil-etoposido

Adícionaram-se 200 mg de 4'-dimeti1aminopiridina e 870 mg (4,6 mmoles). de cloreto de tosilo a uma solução de 4'-benzi loxicar boni1-etoposido (composto do Exemplo 1, fase A, 2,2 g, 3 mmoles) em 50 ml de piridina anidra, a temperatura de 0°C, e agitou-se a mistura durante 3 dias à temperatura ambiente, Adicionaram-se de peneiros moleculares (4Â) e 870 mg (4,6 mmoles) de cloreto de tosilo adicional ã mistura e agitou-se continuamente, durante uma semana, a temperatura ambiente. No final do perTodo, filtrou-se o precipitado; diluTu-se o filtrado com 0Η2^Ί2» lavou-se com ãgua, HC1 a 5%, NaHC0₃ aquoso e ãgua, secou-se sobre sulfato de sodio anidro e, depois, concentrou-se in vacuo para se obterem 2,35 g do solido impuro contendo três componentes (TLC sobre gel de sT1/ ca: R_f 0,8, 0,6 e 0,4) que se separaram por meio de cromatografia de coluna sobre gel de sílica (MeOH a 2% -CI^C^) . Reuniram-se as fracções que mostraram um ponto de Rf 0,8 e evaporaram-se in vacuo para se obterem 602 mg (19%) do 2,3-ditosi1 ato 4'-benzi 1oxicarboni 1-etopos ido (XIV) sob a forma de um põ incolor, De modo semelhante, as fracções de R_f 0,6 e R_f 0,4 originaram 690 mg (26%) do 3-tosilato de 4'-benzi 1oxicarboni1-etonosido (XV) 156 mg (6%) do 2-tosilato de 4¹-benzi 1oxicarboni1-etoposido (XVI), sob a forma

-19de po incolor, hiqroscopico, respectivamente.

3-tosilato de 4 ¹ -benzi 1oxicarbonil-etooosido (XV)

P.F,: 145°-148°C.

Análise Calculada para C^^H^^O-j y S, 3H₂0: C 56,77 , H 5,41, S 3,44. Encontrado: C 56,84, H 4,91, S 3,90,

2-tosilato de 4 ¹-benzi1oxicarboni1-etopos ido (XVI)

P.F.: 135°-139°C.

Análise Calculada para C^H^OpS, 3Η^0: C 56,77 , H, 5,41, S 3,44. Encontrado: C 56,61, H 4,89, S 3,70, ,3-ditosi1 ato de 4 ¹ -benzi 1oxicarboni1-etoposido (XIV)

P.F.: 149°-152°C.

B. Preparação dos etoposidos 3-e 2-tosilatos e 2 ,3-ditosilatos

Hidrogenou-se sob 1 atm,, durante 1 hora, na presença de paládio a 10% sobre carvão (40 mg), uma solução agitada de 47 mg (0,Q5 mmole) do 3-tosilato do 4'-benzi1oxicarboni1-etoposido em etanol-acetona (4:1, 2,5 ml). Filtrou-se o catalisador e concentrou-se o filtrado in vacuo para se obterem 42 mg (ca 100%) do 3-tosilato de etoposido (Composto XVII), sob a forma de um DÕ incolor, que depois se recristalizou em metanol para se obter o composto, sob a forma de cristais incolores, Pureza avaliada: 90% oor meio de HPLC.

P.F

175°-178°C.

I.V. *_mav (KBr) cm’¹ 3500 Cbr), 1780, 1600.

ΠΙO X

UV x_mav (MeOH) nm (£) 245 (sh, 10,260), 284 (3,900). Πι d X

Análise Calculada para C₃gH₃g0^gS: C 58,21, H 5,16, S 4,32. Encontrado: C 57,80, H 5,14, S 4,43,

De acordo com o processo anterior, hidrogenaram-se 100 mg (0,09 mmoles) do 2-tosilato de 4'-benzi1oxicarboni1-etoposido para se obterem 114 mg (ca 100%) do 2-to$ilato de etoposido (Com posto XVIII), sob a forma de um põ incolor que se recristalizou em metanol para se obter o composto, sob a forma de cristais higroscopicos, Pureza avaliada: 90% oor meio de HPLC.

P.F.: 210°-212°C.

I.V. V_mav (KBr) cm¹ 3500 (br), 1780, 1600, iH α X

UV ^Xmax ^{(Me0H) nm 243 (sh> 4}’⁵⁶°)« ²⁸² d.450),

Analise Calculada para θ₃θΗ₃θΟ·| gS. H^O; C 56,83 , H 5,30, S 4,21. Encontrado: C 56,87, H 5,37, S 4,19.

De modo semelhante, hidrogenaram-se 80 mg (0,08 mmole) do 2 ,3-ditosilato do 4 '-benzi 1oxicarboni1-etoposido para se obterem 72 mg (ca 100%) do 2 ,3-ditosi1 ato de etoposido (Comoosto XIX), sob a forma de um põ incolor que se recri stal izou em meta nol para se obter o composto, sob a forma de cristais incolores. Pureza avaliada: 90% por meio de HPLC,

P.F.: 169°-171°C,

I.V. <_av (KBr) cm¹ 3400 (br), 1770, 1600, in α λ

UV *_max CMeOHJ nm (é) 245 (sh, 11,750), 284 (3,840).

Exemplo 3

A. Mesilação do £'-benzi!oxicarboni!-etoposido

Adieionaram-se 270 )il (2,8 mmoles) de cloreto de mesilo a uma solução de 1,00 g (1,4 mmoles) do 4'-benziloxicarboni!-etoposido em 50 ml de piridina anidra e agitou-se a mistura, durante a noite, a temperatura ambiente, Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo, lavou-se com ãgua, KCl a 5%, hidrogenocarbo nato de sodio aquoso e ãgua; secou-se sobre sulfato de sodio e, depois, filtrou-se. Concentrou-se o filtrado in vacuo para se obterem 1,4 g de um solido impuro contendo três componentes (TLC sobre gel de silica: R_f 0,51, 0,44 e 0,40) que se separaram por meio de cromatografia de coluna sobre gel de sílica (metanol a 1%-cloreto de metileno). Reuniram-se as fracções que mostraram um ponto de R^ 0,51 e evaporaram-se in vacuo para se obterem 440 mg (36%) do 2,3-dimesilato de 4'-benzi 1oxicarboni1-etoposido (XX). De modo s-emelhante, as fracções de R^ 0,44 e 0,40 originaram 314 mg (32%) do 3-mesilato de 4'-benzi 1oxicarboni1-etoposido (XXI) e 248 mg (26%) do 2-mesilato de 4'-benzi 1oxicarboni1-etooosido (XXII), respectivamente, sob a forma de põs incolores.

-223^ll-mesilato de 4 ¹-benzi!oxicarboni1-etoposido (XXII

P.F.: 167°-170°C.

Analise Calculada para ^c3qH₄₀0^₇$,l/2H₂0: C 56,36, H 4,98, S 3,96. Encontrado: C 56,23, H 5,06, S 4,14,

2-mesilato 4¹-benziloxicarboni!-etoposido (XXIII

P.F.: 159°-161°C. Higroscópico.

Analise Calculada para C^H^gO.] ?S . 3H₂0: C 55,13, H 5,11, S 3,87. Encontrado: C 55,29, H 5,00, S 4,00.

2,3-dimesi1 ato de 4¹-benzi 1oxicarboni1-etoposido

P.F.: 226°-228°C.

Análise Calculada para C₃gH^₂0^gS₂.l/2H₂0: C 52,76, H 4,77, S 7,22. Encontrado: C 52,78, H 4,77, S 7,31,

B. Preparação dos 2- e 3-mesi 1 atos do etoposido

Hidrogenou-se sob 1 atm, durante 1 hora, na Dresença de paládio a 10% sobre carvão (30 mg), uma solução agitada de 60 mg (0,07 mmole) do 3-mesilato de 4'-benzi 1oxicarboni1-etoposido em 2,5 ml de etanol-acetona (4:1). Apõs a filtração do catalisador, concentrou-se o filtrado in vacuo Dara se obter o 3-mesilato de etoposido (Composto XXIII), sob a forma de um po incolor, Pureza avaliada: 90% por meio de HPLC,

P.F,: 226°-229°C.

I.V. (KBr) cm’¹ 3500 (br), 1770, 1610,

ΠαΧ

UV X_mav (MeOH) nm (£) 740 (sh, 12,900), 286 (3,950), [Ha X

De modo semelhante, hidrogenaram-se 30 mg (0,04 mmole)

z.

do 2-mesllato de 4'-benzi 1oxicarbonil-etoposido para se obterem mg (94%) do 2-mesilato de etoposido (Comoosto XXIV), sob a forma de um po incolor. Pureza avaliada: 95% por meio de HPLC.

P.F.: 179°-181°C.

I.V. 9_max (KBr) cm’¹ 35Q0 (br), 1770, 1620,

UV (MeOH) nm (6) 240 Csh, 12,200), 285 (3,950), m d λ

Exemplo 4

Agitou-se ã temperatura ambiente durante dois dias uma mistura de 350 mg (0,5 mmole) de 4'-benziloxicarboni1-etoposido e 322 mg (1,2 mmole) de cloreto de difenilfosfoni1 o; dilulu-se com 50 ml de cloreto de metileno; lavou-se com agua, HC1 a 10% e hidrogenocarbonato de sodio aquoso; e depois, secou-se sobre sulfato de sodio anidro. Evaporou-se o dissolvente in vacuo para se obter o fosfato 3-difenilico de 4'-benzi 1oxicarbonil-etoposido (XXV), sob a forma de um semi-solido impuro (290 mg), Hidrogenou-se sob 1 atm, uma solução agitada de 190 mg deste semi-sõlido com paládio a 10% sobre carvão, como catalisador. Após a filtração do catalisador, concentrou-se o filtrado in vacuo para se obterem 131 mg de um semi-sõlido impuro que se cromatografou, depois, sobre uma coluna de gel de silica (metanol a 1%-cloreto de metileno) para se obterem 59 mg (20%) do fosfato 3-difenllico de etopo sido (Composto XXVI), Pureza avaliada: 80% por meio de HPLC.

P.F.} 126°-130°C.

I.V. ν_φήχ (Nujol) cm’¹ 3350, 1770, 1600,

FAB MS m/z 820 (M⁺).

Exemplo 5

Preparação dos 3- e 2-etoposido-su1fato de sódio

A uma solução de 500 mg (Q,69 mmole) de 4'-Benzi!oxicarboni1-etoposido em 20 ml de piridina anidra, sob atmosfera de ãrgon, adicionaram-se 330 mg [2,07 mmoles) do comolexo triõxido de enxofre-piridina. Apôs agitação ã temoeratura ambiente, durante três horas, adicionaram-se 250 mg (1,59 mmole) do complexo tri óxido de enxofre-piridina e agitou-se a temperatura ambiente, durante 15 horas. Concentrou-se a mistura i n vacuo abaixo de 40°C para se obter 1,2 g de um óleo impuro que se cromatografou sobre uma coluna de gel de sTlica [2% de MeOH-CH^Cl^) para se obter uma mistura dos sulfatos 2 e 3 (411 mg). Hidrogenou-se uma solução agitada de 400 mg (0,49 mmoles) desta mistura em 15 ml de EtOH-ace tona (4:1) com 40Q mg de paládio a 10% sobre carvão sob 1 atm. Eliminou-se o catalisador por meio de filtração e concentrou-se o filtrado in vacuo para se obterem 370 mg de uma mistura dos regio isómeros, que se separou por meio de cromatografia de coluna de fase inversa C^g para se obterem 52 mg (16%) do sulfato 3 (XXVII), 1Q7 mg (32%) do sulfato 2 (XXVriI) e 138 mg destas misturas. Pas sou-se o sulfato 3 através de uma coluna de resina Dowex 50W (Na⁺) com água, como eluente, e 1iofi1izaram-se as fraeções solúveis na ãgua para se obter o sal de sodio correspondente do composto (XXVII), sob a forma de um po incolor. De modo semelhante, obteve-se o sal de sódio do composto (XXVIII), sob a forma de um pó i ncolor.

-25XXVII: P.F.: 223°-225°C, Pureza avaliada: 9Q% por meto de HPLC,

I.V. ^Vmax ^{(KBri cm}'^{1 344θ}’ ¹⁷⁷⁰’ ^162θ· ^UV \iax ^(Me0H)nm (£l 240 (sh, 1 1 ,600), 284 (3,670) , SIMS m/z 691 (M+H)⁺, 713 (M+Na)⁺,

XXVIII: P.F.: 246°-247°C, Pureza avaliada: 95% por meio de HPLC.

I.V, V_max (KBr) cm'¹ 3450, 1 770 , 1620, UV X_max (MeOH) nm Ce) ²⁴⁰ (sh, 11,200), 285 (3,650), SIMS m/z 691 (M+H)⁺* 713 (M+Na)⁺.

As estruturas dos compostos preparados nos ExemDlos 1-5 mostram-se a seguir:

Ex.	Composto	—1	—3	*4	—5
la	VII	^CH3	-OH	-OH	CBZ
lb	VIII	ch₃	(BzO)₂PO₂-	-OH	CBZ
lb	X	^CH3	OH	<BzO)₂PO₂-	CBZ
lc	XI	ch₃	(NaO)₂PO₂-	-OH	H
lc	XII	CH₃	-OH	(NaO)₂PO₂-	H
2a	XIV	CH₃	P^CH3-^C6^H4-^so3-	P^CH3-^C6^H4-S°3-	CBZ
2a	XV	ch₃	P^CH3-^C6^H4-^s03-	OH	CBZ
2a	XVI	ch₃	-OH	P^CH3-^C6^H4-^s03-	CBZ
2b	XVII	ch₃	P^CH3-^C6^H4^S°3-	OH	H
2b	XVIII	ch₃	-OH	P^CH3-^C6^H4-^SO3-	H
2b	XIX	CH₃	P^CH3-C₆ ^H4-^SO3-	P^CH3-C₆ ^H4-^SO3-	H
3a	XX	ch₃	ch₃so₃-	CH₃SO₃-	CBZ
3a	XXI	CH₃	CH₃SO₃-	OH	CBZ
3a	XXV	ch₃	OH	ch₃so₃-	CBZ
3b	XXIII	^CH3	ch₃so₃-	OH	H
3b	XXIV	ch₃	OH	ch₃so₃-	H
4	XXV	ch₃	(PhO)₂PO₂	OH	CBZ
4	XXVI	ch₃	(PhO)₂PO₂	OH	H
5	XXVII	^CH3	NaSO 4	OH	H
5	XXVIII	CH,	OH	NaSO-	H

*CBZ

Benziloxicarbonilo; Bz benzilo

Exemplo 6

Os processos gerais descritos nos Exemplos 1 a 5 reoetem-se, utilizando-se teniposido em vez de etoposido para oreoarar os análogos de teniposido dos compostos Vri-XXVIII (isto é, o sim bolo representa o grupo 2-tienilo).

Claims

1.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral na qual

9t <.

R2 representa um átomo de hidrogénio e R^ representa um grupo alquilo alcenilo ^2-10' ^c^^c-'-^oa^^c3^u^l^{o C}5_6' 2-furilo,

2-tienilo, arilo Cg_^_Q, aralquilo ou aralcenilo Cg_₁₄, comportando, facultativamente, cada um dos núcleos aromáticos, um ou mais substituintes escolhidos entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo C^_g, alcoxi ^ci_g» hidroxi, nitro ou amino; ou

R^ e R2 representam, cada um, um grupo alquilo C/_g, ou R^ e R2 representam, conjuntamente com o átomo de carbono a que estão ligados, um grupo cicloalauilo^C5-6'

R^ e R^ representam, cada um, um grupo hidroxi ou um grupo de fórmula geral -OSC^Rgz -OSO^H e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, -OP(X)(OH)2 e os seus sais aceitáveis em farmácia ou -OP(X)(OR₇)2# na qual Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo fenilo, alquil (Ci-g)fenilo, facultativamente substituído, R^ representa um grupo protector do radical fosfato;

X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; com a condição de R^ e R^ não representarem, ambos, um grupo hidroxi; e

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo proc f

tector do radical fenol;

a) de se proteger o grupo 4'-fenol de um composto de fórmula geral na qual e têm os significados definidos antes;

b) de se fazer reagir o composto obtido na fase (a) com um composto escolhido entre SO^, RgSC^Cl e (R^O)P(X)C1 em que R^,R^ e X têm os significados definidos antes;

c) de se eliminar, facultativamente, o grupo protector do radical fosfato representado pelo símbolo R-,;

d) de se eliminar, facultativamente, o grupo protector do radical 4'-fenol; e

e) de se separarem os isómeros.

2.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral I definido na reivindicação 1 ou de fórmula geral

VI em que e representam, cada um, um grupo hidroxi ou um grupo de fórmula geral -OP(X)(OH)₂ e os seus sais aceitáveis em farmácia, ou -OP(X)(OR₇)₂, em que X e R_? têm os significados definidos antes, com a condição de Rg e R₄ náo representarem ambos grupos hidroxi,

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um seu sal aceitável em farmácia, ou um grupo representado pelo símbolo R^;

e Rp R₂, Rg e R_? têm os significados definidos antes, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

a) de se proteger o grupo 4'-fenol de um composto de fórmula geral na qual

R e R₂ têm os significados definidos antes;

b) de se fazer reagir o composto 4'-fenólico protegido obtido na fase a) com tricloreto de fosforilo (POClg) e de se tratar os compostos intermédios formados in situ com um álcool de fórmula geral R^OH;

c) de se eliminar, facultativamente, o grupo protector do radical fosfato presente no grupo representado por R_?;

d) de se eliminar, facultativamente, o grupo protector do radical 4'-fenol; e

e) de se separarem os isómeros.

3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral w

na qual R^ e R₂ têm os significados definidos antes;

R₃ e R^ representam, cada um, um grupo hidroxi, um grupo -OSOgH e os seus sais aceitáveis em farmácia, um grupo de fórmula geral -OSO₂R₆, -OP(X)(OH)₂ e os seus sais aceitáveis em farmácia, e -OP(X)(OR₇)₂, em que Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo fenilo ou alquil (C^-C^)-fenilo facultativamente substituído; R? representa um grupo protector do radical fosfato; X representa um átomo de oxigénio ou de enxofre; com a condição de R^ e R^ não poderem representar simultaneamente um grupo hidroxi; e P-₅ tem o significado definido antes;

caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral V, na qual R₂ representa ( -34.** um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

5. - Processo de acordo com a reivindicação 3, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R₂ representa um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6. - Processo de acordo com a reivindicação 3,para a preparação de compostos de fórmula geral VI', na qual R₂ representa um ãtomo de hidrogénio e R^ representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

7. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R^ e R^ representam, cada um, independentemente, um grupo hidroxi ou um grupo de fórmula geral -OSC^Rg ou -OP(X) (OR.?^' ^em *3^ue · R-y € X têm os significados definidos antes, com a condição de R^ e R^ não representarem ambos um grupo hidroxi, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

8. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a pre- paração de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg e R^ representam, cada um, independentemente, um grupo hidroxi ou um grupo de fórmula geral -OP(X)(OH) ₂ na qual X tem os significados definidos antes, com a condição de Rg e R₄ não representarem ambos um grupo hidroxi, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

9.- Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg representa um grupo hidroxi, Rg representa um átomo de hidrogénio e R^ representa um grupo -0P(0)(0H)₂, ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

10. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R^ representa um grupo hidroxi, Rg representa um átomo de hidrogénio e Rg representa um grupo -OP(O)(OH)₂ ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

11. - Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo facto de se preparar o sal dissódico.

12. - Processo de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo facto de se preparar o sal dissódico.

13. - Processo de acordo com a reivindicação 7, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R? representa um grupo alquilo comportando, facultativamente, como substituinte (s), um ou mais átomos de halogéneo, um grupo fenilo comportando, facultativamente um ou mais substituinte(s) escolhido(s) entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo ou nitro; ou alquil (C^^) fenilo comportando, facultativamente, no núcleo fenilo um ou mais substituinte(s) escolhido(s) entre átomos de halogéneo ou grupos alquilo ou nitro, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .

14.- Processo de acordo com a reivindicação 13, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R^ representa um grupo benziloxicarbonilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

15.- Processo de acordo com a reivindicação 13, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R^ representa um ãtomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

16.-

16. - Processo de acordo com a reivindicação 15, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual representa um grupo hidroxi,caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

17. - Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg representa um grupo -OSOg-(p-tolilo), caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

18. - Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg representa um grupo -OSOg-CHg, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

19. - Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg representa um grupo -0P(O)()₂, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

20. - Processo de acordo com a reivindicação 15, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual Rg representa um grupo hidroxi, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

21.- Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R₄ representa um grupo -OSC^-(p-tolilo), caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .

22. - Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI' na qual R₄ represeri ta um grupo -OSC^-CH^, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

23. - Processo de acordo com a reivindicação 16, para a preparação de compostos de fórmula geral VI¹ na qual R^ representa um grupo -0P(0)(O-C^H^), caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

24. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R2 e R^ repre sentam, cada um, um átomo de hidrogénio, R^ representa um grupo metilo, R^ representa um grupo -OSO^H e R₄ representa um grupo hidroxi, ou de um seu sal aceitável sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

25.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a s

preparação de compostos de fórmula geral V na qual R^ e R^ representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio, R^ representa um grupo metilo, R^ representa um grupo -OSO₃H e R₃ representa um grupo hidroxi, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

26,- Processo de acordo com a reivindicação 4, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R£ e R^ representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio, R^ representa um grupo

2-tienilo, R^ representa um grupo -OSO^H e R^ representa um grupo hidroxi, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

27.- Processo de acordo com a reivindicação 4, para a preparação de compostos de fórmula geral V na qual R2 e R^ representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio, R^ representa um grupo

28.- Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula gera] vi na qual R^ representa

-4 0( um grupo metilo e R₂, R₅ e R_g representam, cada um, um ãtomo de hidrogénio, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.

29. - Processo de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo facto de se preparar o sal de sódio.

30. - Processo para a preparação de composições farmacêuticas apropriadas para inibirem o crescimento de tumores em um hospedeiro mamífero, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade antitumoral eficaz de um composto preparado de acordo com o processo descrito na reivindicação 1, como ingredien te activo, com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

31.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas apropriadas para inibirem o crescimento de tumores em um hospedeiro mamífero, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade antitumoral eficaz de um comoosto de fórmula geral VI, preparado de acordo com o processo descrito na reivindicação 2, como ingrediente activo, com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico,