PT96226B

PT96226B - Processo para a preparacao de derivados morfolinilicos de doxorubicina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT96226B
Application number: PT96226A
Authority: PT
Inventors: Daniela Faiardi; Alberto Bargiotti; Maria Grandi; Antonino Suarato
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Spa
Priority date: 1989-12-19
Filing date: 1990-12-17
Publication date: 1998-06-30
Also published as: NO913176D0; NO175533C; NO176911B; CZ621990A3; HU209433B; CN1039708C; HUT60232A; FI913887A0; ES2094136T3; WO1991009046A1; NO940831L; SI9012379A; DE69028610T2; CN1053238A; IL96643A0; SK621990A3; NO175533B; NZ243695A; DE69028610D1; KR0183033B1

Description

Α presente invenção, portanto, proporciona um processo para a preparação de glicõsidos de antracíclina de formula geral A ou dos seus sais de adição de ãcido aceitáveis em farmácia, que consiste em:

(i) fazer reagir a doxorubicina ou um seu sal de adi ção de ãcido, por exemplo o cloridrato, com um composto diiodado de fórmula geral

-X (C) na qual X tem o significado definido antes; e (ii) se apropriado converter o glicõsido de antraci clina de fórmula geral A obtido deste modo num seu sal de adição de ãcido aceitável em farmácia.

A alquilação do grupo amino. em C-3’ de doxorubicina ou do sal de doxorubicina realiza-se habitualmente no passo (i), num dissolvente ap.rótico polar e na presença de uma base orgânica anidra, nómeadamente a trietilamina. Realiza-se geralmente a reacção â temperatura ambiente durante 8 a 20 horas. 0 ãto mo de carbono C-2 que comporta o grupo de fórmula geral -OX no composto diiodado pode apresentar a configuração (S) ou (R) . Num aspecto preferido, faz-se reagir a doxorubicina ou o seu

cloridrato, no seio de um dissolvente aprótieo polar, â temperatura ambiente e na presença de uma base orgânica anidra, com c composto diiodado de fórmula geral C, para se obter o correspondente derivado morfolinilico de doxorubicina de fôr mula geral A que, após purificação numa coluna de gel de síli_ ca e eluição com um sistema de cloreto de metileno/metanol a 97:5 (v/v), se isola sob a forma de cloridrato,por tratamento com cloreto de hidrogénio anidro metanclico.

A presente invenção também proporciona um processo ' para a preparação dos compostos de fórmula geral C diiodados opticamente puros a partir dos precursores de açúcar, tais co mo os compostos derivados da L-arabinose, de fórmula geral

(S) na qual X tem os significados definidos antes. Este processo consiste em:

(a) submeter um composto de fórmula geral

na qual X tem o significado definido antes, a uma com periodato;

(b) reduzir o derivado dialdeido obtido de fórmula geral na qual X tem o significado definido antes;

(c) sulfonar c derivado di-hidroxilado obtido de fórmula geral

na qual X tem o significado definido antes; e, (d) iodar o derivado sulfonado assim obtido.

Para preparar os compostos diiodados de fórmula geral C, convertem-se primeiro os açucares 1-substituídos de fórmula geral S, preparados de acordo com o processo convencional descrito em Methods on Carbohydrate Chemistry, Acad. ress., 1962, Vol 1, nos derivados dialdeidos de fórmula geral

D. Geralmente, utiliza-se a D- ou a L-arabinose como composto inicial. Faz-se reagir este com um álcool de fórmula geral X-OH para, deste modo, obter um composto de fórmula geral S. Os derivados dialdeidos podem-se obter mediante oxidação com periodato em ãgua, sendo, em seguida, reduzidos para se obterem com postos de fórmula geral E, l,5-di-hidroxi-2-alcoxi ou -benziio xi-3-oxa-pentano, mediante a utilização de agentes redutores, designadamente, boro-hidreto de .sódio ou ciancboro-hidreto de sódio a pH 6,5, numa mistura de ãgua e metanol.

Sulfonam-se os compostos di-hidroxilados resultantes de fórmula geral E nos grupos 1- e 5-hidroxilo, geralmente uti lizando cloreto de' p-toluenossulfonilo em piridina, ã tempera-6-f /

tura de 4°C para se obterem os. ésteres sulfonílicos de fórmula geral F, a partir dos quais se obtêm os drivados diiodados de fórmula geral C apôs tratamento com iodeto de sódio ou com iode to de potássio, num dissolvente aprõtico, tal como a metiletilcetona, à temperatura de 85°C durante um a deis dias. A sequência destas reacções não altera a quiralidade no C-2 dos derivados diiodados C, que ê igual à dos açucares iniciais S.

Um aspecto preferido do processo de acordo com a presente invenção estã representado no Esquema de Reacção seguinte :

Esquema de Reacção

λ' d

Ts=O2S-CgH^p-CH2 f -8A presente invenção também proporciona composições farmacêuticas que contêm um veículo aceitável em farmácia cu um diluente, e, como ingrediente activo, um glicósido de antra ciclina de fórmula geral’ A ou um seu sal de adição de ãcido aceitavel scb o ponto de vista farmacêutico. Podem utilizar-se veículos ou dissolventes convencionais. As composições podem ser formuladas e administradas, por exemplo, per via endovenosa, de um modo habitual,

Os glicósidos de antraciclina de fórmula geral’ A e os seus sais de adição de ãcido aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico são agentes antitumorais. Podem ser utilizados para tratar um doente com um tumor mediante a administração de uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico. Os compostos podem ser utilizados para inibir o desenvolvimento do tumor, não sendo tóxicos nas doses terapêuticas.

Os exemplos que se seguem ilustram a presente invenção

Exemplo 1

Preparação de 1,5-di(p-toluenossulfonil)-oxi-2(S)-benziloxi-3-oxa-pentano (Fl)

Submeteu-se a aquecimento sob agitação na presença de Dowex 50Wx2 na forma ácida (2g), 3 g (0,022 mole) de L-arabinose e 15 ml de álcool benzilico. Após 4 horas, arrefeceu-se a mistura e filtrou-se. Eliminou-se o dissolvente sob pressão reduzida e recolheu-se 1-benzil- -L-arabincpirancsido (Sl, 3,5 g) a partir de acetona, CCF em placa de Kieselgel (Merck) , eluição com o sistema cloreto de metilenc/metanol/ãgua a 120/20/2 em volume; Rur: R^ = 0,47. / / = +215 (c = 1%, agua), .¾

Dissolveram-se 3,48 g (0,0145 mole) de 1-benzil- -L-arabinopiranôsido (SI) em 100 ml de ãgua e trataram-se ccm

5,6 g (0,026 mole) de periodato de sódio, à temperatura de 0°C, durante 2 horas. Em seguida, adicionou-se cloreto de bãrio e levou-se a mistura a pH 7 com carbonato de bãrio, filtrou-se e lavcu-se com ãgua. Concentrou-se a solução aquosa sob pressão reduzida até â formação de um xarope e extraiu-se com 50 ml de acetonitrilo.

Diluiu-se a fase orgânica com uma mistura de 20 ml de metanol e 10 ml de ãgua e tratou-se ccm 0,3 g de cianoboro-hi dretc de sódio dissolvido em 5 ml de ãgua. Apôs 15 minutos, ajustou-se o pH da mistura para 7 por adição de Dowex 50Wx2 e filtrou^se. Eliminaram-se os dissolventes sob pressão reduzida, obtendo-se 2,6 g de 1,5-di-hidroxi-2(S)-benzilcxi-3-oxa-pentano (El, rendimento de 85%). CCF sobre placa Kieselgel F254 (merck), sistema eluente cloreto de metileno/metanol a 10:1 em volume; Rur: Rf = 0,28. Dissolveu-se 2,6 g do composto El cm pi ridina anidra e adicionaram-se 6,67 g de cloreto de p-toluenossulfonilo. Manteve-se a mistura à temperatura de 0°C durante a noite, em seguida verteu-se em ãgua arrefecida com gelo e extraiu-se com cloreto de metileno. Lavou-se a fase orgânica com ãgua, separou-se, secou-se com sulfate de sódio anidro e filtrou -se. Elimincu-se o dissolvente sob pressão reduzida obtendo-se 4,3 g de 1,5-di(p-toluenossulfonil)-oxi-2(S)-benziloxi-3-oxa-pen tano (Fl; rendimento de 68%) . CCF em placa Kieselgel F,._.. (Merck) , eluição com o sistema de cloreto de metileno/acetona a 98:2 em volume; R = 0,55

RMN^H (CDC1₃, 400 MHz)

2,42 (s, 6H, dois ÇH₃Ts); 3,65, 3,69 (dois dt, J=4,7, 11,7Hz, 2H, ,-10/

-Λ

TsOCE₂ÇH₂O); 3,94 (dois, dd, J=5,3, 10,5Hz, 2H, OCH-CH₂-OTS);

4,08 (t, J=4,7Hz, 2H, Ts-Q-C^CH^-Q); 4,46, 4,56 (dois, d, J=ll,7Hz, 2H, OCH₂“Ph); 4,72 (t, J=5,3Hz, 1H- O-CH-CH₂-OTs);

7.2- 7,8 (m, 13H, aromáticos).

Exemplo 2

Preparação de l,5-diiodo-2(S)-benziloxi-3-oxa-pentano (Cl)

Dissolveram-se 4,3 g (8,3 mmoles) do composto Fl, preparado do modo descrito no Exemplo 1, em 50 ml de metiletil cetona e adicionaram-se 7,4 g (49 mmoles) de iodeto de sódio. Manteve-se a mistura â temperatura de 95 C durante 24 horas.

Após isto, eliminou-se o dissolvente sob pressão reduzida e ex traiu-se o resíduo com n-hexano» Concentrou-se a fase orgânica até à obtenção de um xarope que deu 3,5 g do composto em título Cl (rendimento de 90%). CCF sobre placa de Kieselgel F₂₃^ (Merck), eluição no sistema' n-hexano/acetato de etilo a 10:0,5 em volume: = 0,34

RMlAí (CDC1₃, 400 MHz) :

3,27 (t, J=6,8Hz, 2H, J-ÇH₂CH₂-O); 3,30 (d, J=5,5Hz, 2H,

O-CH-CH₂-J); 3,84 (m, 2H, J-CH₂ÇH₂-O); 4,63, 4,74 (dois d, J=ll,7Hz, 2H, )-ÇH₂Ph); 4,81 (t, J=5,5Hz, 1H, O-ÇH-CH₂-J);

7.3- 7,5 (m, 5H, aromáticos).

Exemplo 3

Preparação de 3’-desamino-3’-/ 2(S)-benziloxi-4-morfolinil /^-doxorubicina (Al)

A uma solução de 0,5 g (0,86 mmole) de cloridrato de doxorubicina em 20 ml de dimetilformamida anidra adicionaram-se

-113,5 g (7,54 mmoles) de 1,5-diiodo-2 (S) -benziloxi-3-oxa-pentano (Cl) em 3,6 ml (2,6 mmoles) de trietilamina anidra. Manteve-se a mistura à temperatura ambiente durante 36 horas e, em seguida, verteu-se sobre ãgua e extraiu-se com cloreto de meti leno. Apõs um processamento convencional purificou-se o produto impuro numa coluna de ãcido silícico utilizando como sistema de eluição uma mistura de cloreto de metileno/metanol a 97:5 em volume, para se obter, apõs tratamento com cloreto de hidrogénio anidro metanolico, o composto em título Al (0,3 g) sob a forma de cloridrato (rendimento de 46%) . CCF sobre placa de Kieselgel r eluição com o sistema cloreto de me tileno/metanol a 10:1 em volume: = 0,6

FD-MS: m/e 756 (M+)

RMN¹H da base livre (CDC1₃, 200 MHz) :

1,37 (d, J=6,6Hz, 3H, 5'-ÇH₃); 1,76 (m, 2H, 2'-CH₂); 2,14 (dd, J=3,9, 14,8Hz, IH 8ax-H); 2,2-2,7 (m, 6H, ÇH₂“N-CH₂, 8eq-H, 3'-H); 3,00 (d, J=18,8Hz, IH, lOax-H); 3,55, 4,00 (dois m, 2H, OCH₂ ^CH2N) i 3,68 (s, IH, 4'-H); 3,94 (q, J=6,6Hz, IH, 5'-H); 4,08 (s, 3H, OCH₃); 4,51, 4,77 (dois d, J=12,lHz, 2H, OCH^Ph) ; 4,65 (dd, J=2,6, 4,0Hz, IH, OCH(OCH₂Ph)CH₂N); 4,71 (s, IH, COÇH₂OH); 5,28 (dd, J=2,4, 3,8Hz, IH 7-H); 5,54 (m, IH, l’-H); 7,2-8,1 (m, 8H, Hs aromáticos); 13,22 (s, IH, 11-OH); 13,95 (s, IH, 6-OH).

Exemplo 4

Preparação de l,5-diio.do-2 (S)-etoxi-3-oxa-pentano (C2)

Preparou-se o composto em título C2 a partir de 3 g de l_arabinose por meio da sequência de reacções descrita nos Exemplos 1 e 2.

^1255*“® .<9 .O

1-etil- -L-arabinopirancsido (52) : / / = +233,5 (c=l%. ãgua)

1.5- di-hidroxi-2(S)-etoxi-3-oxa-pentano (E2); CCF em placa de Kieselgel ^254 )Merck)7 eluição ccm cloreto de metileno/metanol (10/1 em volume) R^=0,33,

1.5- di(p-toluenossulfonil)oxi-2(S)-etcxi-3-oxa-pentano (F2):

CCF em placa de Kieselgel (Merck), eluição com cloreto de metileno/acetona (98/2 em volume) R^=0,56

RMN^H (CDC1₃, 200MHz) :

1,11 (t, J=7,)Hz, 3H, OCH₂ÇH ) 7 2,43 (s, 6H, deis CH-^-Ts) 7 3,44, 3,58 (dois dq, J=7,0, 9,4Hz, 2H, OCH₂CH )7 3,68 (m, 2H, O-CH₂-CH₂-OTs)7 3,89 (d, J=5,4, 2H, o-CH-CH₂-OTs); 4,10 (t, J=4,8Hz, 2H, OCH₂-ÇH₂OTs)7 4,61 (t, J=5,4Hz, ÍH, O-CH-CH₂OTs)7

7,3-7,8 (m, 8H, Hs aromáticos),

1.5- diiodo-2(S)-etoxi-3-oxa-pentano (C2):

CCF em placa de Kieselgel F^^(Merck), eluição com n-hexano/ace tato de etilo (10/0 ,'5 em volume) R^=0,37 RMN¹H (CDC1₃, 200MHz) :

1,24 (t, 7,0Hz, 3H, OCH₂ÇH₃); 3,23 (d, J=5,6Hz, 2H J-CH₂CH-Q)7 3,27 (t, J=6,8Hz, 2H J-CH₂CH₂-O)7 3,58, 3,77 (dois dq, J=7,0, 9,3Hz, 2H, OÇH₂CH₃); 3,78, 3,87 (dois dt, J=6,8, 10,6Hz, 2H, J^CH₂ÇH₂-O)7 4,70 (t, J=5,6Hz, ÍH, O-CH-CH₂-J).

Exemplo 5

Preparação de 3 ¹ -desaminc-3 ¹ -/ 2 (S)-etoxi-4-morfolinil /-.doxorubicina (A2)

Fez-se reagir 0,5 g de cloridrato de doxorubicina com 3 g do composto' C2 segundo o mesmo procedimento descrito no Exemplo 3, para se. obter o composto em título A2, (0,28 g) sob a forma de cloridrato, CCF em placa de Kieselgel F₂₃^ (Merck),

eluição com o sistema cloreto de metileno/metanol a 10:1 em volume: R^ = 0,58 FD-MS; m/e 694 (M+)

ΗΜΝ^Η como base livre (CDCl^, 200MHz) :

1,16 (t, J=7,OHz, 3H, OCH₂'CH₃) ; 1,36 (d, J=6,4Hz, 3H, 5’-CH₃);

1,7-1,8 (m, 2H, 2'-ÇH₂); 2,16 (dd, J=4,l, 14,7Hz; 1H, 8ax-H);

2,3-2,6 (m, 6H, CH₂-N-CH₂);, 8eq-H- 3’-H)? 3,02 (d, J=18,8Hz,

ÍH, lOax-H); 3,26 (dd, 1,9, 18,8Hz, ÍH lOeq-H); 3,46, 3,78 (dois dq, J=7,0, 9,8Hz, 2H, OCÍ^CH^ ; 3,53, 3,93 (dois m, 2H, OÇH₂CH₂N),· 3,68 (s, 1H, 4'-H); 3,93 (q, J=6,4Hz, 1H, 5’-H);

4,08 (s, 3H, OCH₃); 4,56 (dd, J=2,3, 4,7Hz, 1H, OCH(OCH₂CH₃CH₂N); 4,72 (s, ÍH, 9-OH); 4,74 (s, 2H, COÇH^OH); 5,30 (m, ÍH, 7-H);

5,55 (m, lH, l’-H); 7,3-8,1 (m, 3H, Hs aromáticos); 13,25 (s, ÍH, 11-OH); 13,97 (s, ÍH, 6-ΌΗ)

Exemplo 6

Preparação de 1,5-diiodo-2(R)-isopropiloxi-3-oxa-pentano (C3)

Preparou-se o composto em titulo C3 a partir de 3 g de L-arabincse seguindo a sequência de reacções descrita nos Exemplos 1 e 2.

1-isopropil- -L-arabinopiranõsido (S3) : / / = +225° (ãgua)

1.5- di-hidroxi-2(R)-isopropiloxi-3-oxa-pentanc (Έ3);

CCF em placa Kieselgel ^254 (^Merck) r eluição com cloreto de me tileno/metanol (10/1 em volume) R^=0,36

1.5- di(p-toluenossulfonil)oxi-2(R)-isopropiloxi-3-oxa-pentano (F3)

CCF em placa Kieselgel ^254 (Merck), eluição com cloreto de me tilenc/acetcna (98/2 em volume) R^=0,55

RmA (CDC1₃, 200MHz) :

1,05, 1,10 (dois d, J=6,2Hz, 6H, CH(CH₃) )? 2,42 dois s, 6H,

CH₃-Ts); 3,64 (dois m, 2H, Ts-O-CH₂ÇH₂-O); 3,76 (m, ÍH,

CH-O-CH^CH^-O); 7,3-7,8 (m, 8H, Hs aromáticos).

l,5-diiodo-2(R)-isopropiloxi-3-oxa-pentano (C3)

CCF em placa .Kieselgel (Merck) , eluição com n-hexano/acetato de etilo (10/0,5 em volume) R_f=0,40 RMN^H (CDC1₃, 200MHz) :

1,20, 1,22 (dois d, J=6,4Hz, 6H, CH(CH₃) ); 3,24 (d, J=5,6Hz,

2H, O-CH-CE₂-J); 3,28 (t, J=6,7Hz, 2H J-ÇÍ^CHj-O); 3,6-3,8 (m, 2H, J-CH₂CH₂-O); 3,94 (m, ÍH, CH(CH₃)₂); 4,76 (t, J=5,6Hz, ÍH, O-CH~CH₂-J).

Exemplo 7

Preparação de 3'-desaminc-3'-/ 2(R)-iscpropiloxi /-4-morfolinil /-doxorubicina (A3)

Fizeram—se reagir 0,5 g de cloridrato de doxorubicina com 3,2 g do composto' C3 seguindo-se o mesmo processo descrito no Exemplo 3 para se obterem 0,21 g do composto em título A3 sob a forma de cloridrato. CCF em placa Kiselgel F^^ (Merck), eluição com cloreto de metileno/metanol a 10:1 em volume:

Rf = 0,55

FD-MS: m/e 708 (M+)

RMN¹E da base livre (CDC1₃, 200MHz) :

1,09, 1,16 (dois d, J=6,0Hz, 6H, CH(CH₃)₂); 1,36 (d, J=6,6Hz,

3H, 5'-ÇH₃); 1,80 (m, 2H, 2’-CH₂),· 2,15 (dd, J=4,0, 14,9Hz, ÍH, 8ax-H); 2,3-2,8 (m, 6H,CH₂NCH₂, 8eq-H, 3’-H); 2,97 (d, J=18,8Hz, ÍH, lOax-H); 3,26 (d, J=18,8Hz, ÍH, lOeq-H); 3,54 (m, ÍH, ff .¾

O-CH(H)CH₂N); 3,74 (s, ÍH, 4’-H); 3,81-4,1 (m, 3H, OCH(H)CH₂N, 5'-H, OCH(CH₃)₂); 4,08 (s, 3H, 0¾) ; 4,66 (s, ÍH, 9-OH); 4,68 (dd, J=2,2, 4,9Hz, ÍH, OCH/ OCH(CH₃)₂ /CH₂N); 4,75 (s, 2H, COCH₂OH); 5,28 (m, 1H, 7-H); 5,55 (m, 1H, l’-H); 7,3-7,8 (m,

3H, Hs aromáticos); 13,24 (s, 1H, 11-OH); 13,97 (s, ÍH, 6-OH).

Exemplo 8 l,5-di-hidroxi-2(S)-metoxi-3-oxa-pentane (E4)

Prepararam-se 1,5 g (11 mmoles) de 1,5-dioxo-2(S)-metoxi -3- oxa-pen tano (D4) pelo método descrito em Methods on Carbohydrate Chemlstry, Acad. Press., 1962, Vol 1, p. 445, que se dissolveram numa mistura de 10 ml de água e 10 ml de metanol e se trataram com 0,1 g de boro-hidreto de sodio dissolvido em 2 ml de água. Após 20 minutos, ajustou-se o pH da solução para 7 com resina ácida Dowex 50Wx2, filtrou-se e eliminou-se o di£3 solvente sob pressão reduzida para se obterem 1,4 g do composto em título (rendimento de 93%). CCF em placa Kieselgel ^F254 (Merck); eluição com cloreto de metilenc/metanol a 1:1 em volume; formou-se uma mancha castanha a R^ = 0,24 apôs aquecimen to da placa de CCF previamente pulverizada com ácido sulfúrico. 1

RMN H (200 MHz, DMSO-dg) :

3,26 (s, 3H, OCH₃); 3,4-3,6 (m, 6H, ÇH -C^-O-CH-CE^-) ;

4,37 (t, J=5,4 Hz, ÍH, O-CH-O); 4,40 (bm, 2H, HO-CH₂CH , CH₂CH₂>OH)

Exemplo 9

1,5-di (p-toluenossulfonil) *-0x1-2 (S) -metoxi-3-oxa-pentano (F4)

Dissolveram-se 1,4 g (10,3 mmoles) de 1,5-di-hidroxi-2(S)-metoxi-3-oxa-pentano (E4) preparado de acordo com o meto-Ϊ6-

do descrito no Exemplo 8, em 10 ml de piridina e trataram-se com 6,4 g (0,034 mole) de cloreto de p-toluencssulfonilo â tem peratura de 0°C. Manteve-se a mistura durante a noite â temperatura de 4°C e, em seguida, verteu-se numa mistura de ãgua e gelo e, finalmente, extraiu-se com cloreto de metileno. Lavou-se a fase orgânica com ãgua, separou-se, secou-se sobre sulfa to de sódio anidro e filtrou-se. Eliminou-se c dissolvente sob pressão reduzida. Cromatografou-se a substância impura sobre uma coluna de ãcido silícico utilizando cloreto de metileno co mo agente eluente obtendo-se 2,8 g do derivado em título puro (rendimento de 62%).

A CCF em placa Kieselgel ^54 (Merck), eluição ccm cloreto de metileno/acetona a 95:5 em volume deu uma mancha cas tanha a R^ = 0,55 após aquecimento da placa de CCF previamente pulverizada com acido sulfúrico.

RMN¹H (200 MHz, CDC1₃) :

2,44 (s, 6H, CH₃-Ph); 3,27 (s, 3H, OCH ); 3,69 (m, 2H,

SO₂OCH₂ÇH₂-O); 3,90 (m, 2H, S0₂OÇH₂-CH-0); 4,11 (m, 2H,

S)„OCH CH„-O); 4,56 (t, J=5,3Hz, IH, -O-CH-CH )7 7,3-7,8 (m, 2

8H, Hs aromáticos).

Exemplo '10

Preparação de l,5-diiodo-2(S)-metoxi-3-cxa-pentano (C4)

Dissolveram-se 1,6 g (3,6 mmoles) de 1,5-di(g-toluenossulfonil)-oxi-2(S)-metoxi-3-oxa-pentano (F4), de acordo com o método descrito no Exemplo 9, em 30 ml de metiletilcetona e trataram-se com 3,04 g (20,2 mmoles) de iodeto de sódio â temperatura de 85°C durante 2 dias. Em seguida, eliminou-se o dissolvente sob vazio e adicionaram-se ao resíduo hexano (50 ml) e

ãgua. Separou—se a fase orgânica, secou-se com sulfato de sódio anidro e filtrou-se. Eliminou-se o dissolvente sob pressão redu zida, cbtendo-se l,5-diicdo-2(S)-metoxi-3-oxa-pentano (C4) (1,2 g; rendimento de 86%), A CCF em placa Kieselgel £^54 (^Merc^)> eluição com cloreto de metileno apresentou uma mancha castanha a Rf = 0,54 após aquecimento da placa de CCF previamente pulverizada ccm ãcido sulfúrico.

Ri4N¹H (200 MHz, CDC1₃) :

3,15 (m, 4H, J-CH₂CH₂-OCH-CH₂-J) ; 3,40 (s, 3H, 0¾) ; 3,80 (m, 2H, J-CH₂ÇH₂-O); 4,62 (t, J=5,6 Hz, ÍH, O-CH-CH₂).

Exemplo 11 ~ I II II

Preparação de 3 -desaminc-/ 2 (S)-metcxi-4 -morfolinil /-dcxorubicina (A4)

A uma solução de 80 mg (0,138 mmole), de cloridrato de doxorubicina dissolvidos em 4 ml de dimetilformamida adicionaram -se 0,8g (2,06 mmoles) de l,5-diiodo-2(S)-metoxi-3-oxa-pentano (C4) e 0,056 ml (0,388 mmole) de trietilamina. Manteve-se a mistura reaccional sob agitação durante 36 horas â temperatura ambiente e, em seguida, verteu-se em ãgua e extraiu-se com cloreto de metileno. Após transformação convencional purificou-se o produto bruto numa coluna de ãcido silícico utilizando uma mistura eluente de cloreto metileno/metanol a 97,5:2,5 em volume, obtendo-se, apcs tratamento com cloreto de hidrogénio metanõlico anidro, 40 mg (rendimento de 45%) do composto em título sob a forma de cloridrato. CCF em placa. Kieselgel F₂₅₄ (Merck), eluição com cloreto de metileno/metanol a 19:1 em volume: R^ = 0,15 Base livre: RMN¹H (400 MHz, CDC1₃),

13,98 (s, 1H, 6-OH); 13,27 (s, 1H, 11-ΌΗ); 8,03 (dd, J=l,l, 7,7Hz,

-18-/

ÍH, l-H); 7,78 (dd, J=7,7, 8,6Hz, ÍH, 2-H); 7,39 (dd, J=l,l,

8,6Hz, ÍH, 3-H); 5,55 (m, ÍH, l'-H); 5,30 (dd, J=2,l, 4,1Hz,

ÍH, 7-H); 4,74 (d, J=4,5Hz, 14-CH₂OH); 4,74 (s, ÍH, 9-OH); 4,49 / dd, J=2,6, 4,1Hz, ÍH, NCH^-CH(OCH )O /, 4,08 (s, 3H, 4-OCH.p ;

3,94 (q, J=6,6Hz, ÍH, 5 -H); 3,93 J m, ÍH, NCH₂ÇH(H)O /; 3,67

I (m, ÍH, 4 -H) ; 3,54 / m, ÍH, NCH₂ÇH(H)O /; 3,38 / s, 3H, NO^CEÍOCH₃ /; 3,27 (dd, J=19, 18,8Hz, ÍH, 10-Heq); 3,04 (d, J=18,8Hz, ÍH, 10-Hax); 3,00 (t, J=4,5Hz, ÍH, CH₂0H); 2,60 / dd, J=4,l, 11,4Hz, 1H, NCH(H)CHOCH₃ /; 2,6-2,5 (m, 3H, NCH(H)CHOCH₃, NCH CH₂0); 2,4-2,3 (m, 2H, 8-Heq, 3'-H); 2,15 (dd, J=4,l, 14,7Hz, 8-Hax); 1,76 (m, 2H, 2'-CH₂); 1,26 (d, J=6,6Hz, 3H, 5*-ΟΗ₃).

Exemplo 12

Preparação de 1,5-dihidroxi-2 (R)-metoxi-3-oxa-pentano (E5)

Preparou-se o composto em título do modo descrito no Exemplo 8, a partir de 1,5-dioxo-2(R)-metoxi-3-oxa-pentano (D5) que, por sua vez, pode preparar-se do modo descrito em Methods on Carbohydrate' Chemistry, Acad. Press., 1962, Vol. 1, p. 445.

A CCF em placa Kieselgel (Merck) e eluição com cloreto de metileno/metanol deu uma mancha castanha a R^ = 0,24 após aquecimento da placa de CCF previamente pulverizada com ãcido sulfúrico.

Exemplo 13

Preparação de 1,5-di(p-toluenossulfonil)-oxi-2(R)-metoxi-3-oxa-pentano (F5)

Preparou-se l,5-dihidroxi-2(R)-metoxi-3-oxa-pentano (E5) do modo descrito no Exemplo 12 e transformou-se no compos/

to em titulo F5 seguindo o procedimento descrito no Exemplo 9.

A cromatografia em camada fina sobre placa Kieselgel F₂54 e a eluição com o sistema de cloreto de metilenc/acetona a 95:5 em volume deu uma mancha castanha a = 0,55, apôs aquecimento da placa de CCF previamente pulverizada com ãcido sulfúrico.

Exemplo' 14

Preparação de l,5-diiodo-2(R)-metoxi-3-oxa-pentano (C5)

Preparou-se 1,5-di (,£-toluenossulfonil) -oxi-2 (R) -metoxi- 3-oxa-pentano (F5) do modo descrito no Exemplo 13 e converteu-se no derivado diiodado C5 seguindo o procedimento descrito no Exemplo 10. A CCF sobre placa Kieselgel F₂,-₄ (Merck) e a elui ção com cloreto de metileno apresentou uma mancha castanha a Rf = 0,54, após aquecimento da placa de CCF previamente pulverizada com ãcido sulfúrico.

Exemplo 15

II II

Preparação de 3 -desamino-/ 2 (R)-metoxi-4 -morfolinil /-doxorubicina (A5)

Preparou-se o composto em título condensando-se o cloridrato de doxorubicina com 1,5-diiodo-2(R)-metoxi-3-oxa-pentano (C5), preparado do modo descrito anteriormente, seguindo o procedimento referido no Exemplo 11. CCF em placa Kieselgel ^234 (Merck) e a eluição com cloreto de metileno/metanol a 19:1 em vo lume: R_f = 0,13.

Base livre: RMN¹!! (400 MHz, CDCl^) :

13,97 (s, IH, 6-ΌΗ); 13,25 (s, IH, 11-OH); 8,03 (dd, J=l,l, 7,7Hz, IH, 1-H); 7,78 (dd, J=7,6, 7,7Hz, IH, 2-H); 7,39 (dd,

I

J=l,l, 7,6Hz, IH, 3-H); 5,53 (d, J=3,4Hz, IH, 1-H); 5,29 (dd,

-20-J=2,5, 4,1Hz, 1H, 7-H) 7 4,75 (s, 2H, 14-CH₂QH); 4,71 (s, ÍH,

9-OH)7 4,46 / dd, J=2,6, 4,7Hz, 1H, NCH^CH (OCH₃) O /,· 4,08 (s, 3H, 4-OÇH₃)? 3,93 (q, J=6,6Hz, 1H, δ'-Η),· 3,92 / m, ÍH,

NCH CH(H)O /; 3,70 (m, ÍH, 4*-Η); 3,56 / τη, ÍH, NCH'₂CH(H)O /?

3,40 / s, 3H, NCH₂CH-OCH₃ /; 3,26 (dd, J=19, 19,9Hz, ÍH, 10-Heq); 3,03 (d, J=19,9Hz, ÍH, 10-Hax); 2,66 J dd, J=2,6, 11,4Hz, ÍH,

NCH(H)CHOCH₃ /; 2,53 (m, ÍH, NCH(H)CH₂O); 2,5-2,3 (m, 4H, NCH(H)

CH₂O, NCH(H)CHOCH₃, 8-Heq, 3 -H); 2,15 (dd, J=4,l, 14,7Hz, 8-Hax)7 1,8-1,7 (m, 2H, 2'-ÇH₂)7 1,36 (d, J=6,6Hz, 3H, δ’-ΟΒ^).

ACTIVIDADE BIOLÓGICA DE 3'-desamino-/ 2(S)-metoxi-4-morfoiiI » II nil /-doxorubicina (A4) e de 3 -desaminc-/ 2 (R)-metoxi-4 -mor folinil /-doxorubicina (A5)

Testaram-se os compostos em vários sistemas experimen tais a fim de determinar a sua citotoxicidade e actividade anti tumoral em animais de experiência, em comparação com a doxorubi cina original. As novas antracíclinas apresentaram maior citoxi cidade de que o fármaco inicial sobre linhas de células LoVc e LoVo resistente â doxorubicina (LoVo/Dx), (Ouadro 1), e são activas in vivo sobre as linhas de células resistentes à doxorubi cina.

A sondagem inicial in vivo realizou-se em murganhos

BDFl portadores de leucemia de Johnson resistente â doxorubici5 na, P388 (P388/Dx) (10 células por murganho). Administraram-se os fármacos por via endovenosa no primeiro dia após a inoculação do tumor. Os resultados estão referidos no Ouadro 2. Ambos os compostos se apresentaram activos e mais potentes do que a doxorubicina.

O composto A4 também foi testado' in vitro sobre Schabel P388 resistente â doxorubicina, Quadro 3, e in vivo em murganhos BDFl (10 células por murganho), com tratamento endovenoso no primeiro dia apôs a inoculação do tumor, Ouadro 4. Finalmente, estudou-se o composto Ia sobre um tumor sólido, designadamente um tumor mamário murino e um carcinoma humano (MX1), com adminis tração oral e endovenosa, Quadros 5 e 6.

ζ

-22Quadro 1

Teste com o ensaio de colónias sobre células LoVo e LoVo/Dx resistentes in vitro (tratamento durante 4 horas),

Composto	LoVo	LoVo/Dx	R.I.^b
	(CI₅₀=ng/ml)^a	(CI₅₀=ng/ml)^a
Doxorubicina	48,8	2553	52,6
A4	8,7	31,7	3,6
A5	6,5	40,1	6,1

a) CIgQ ⁼ Concentração inibidora de 50% do crescimento de coió nias

b) R.I, = índice de resistência = (CI_5Q LoVo/Dx) / (CIj-θ LoVo)

Quadro 2 efeito de A4 e A5 sobre leucemia de Johnson P388 resistente à doxorubicina, in vivo.

Composto D.O. T/C (mg/kg) %

Doxorubicina 13 86

A4 0,09 250

A5 0,13 244

c) D.O, = Dose Óptima: dose mãxima tolerada

d) T/C% = Tempo de sobrevivência médio de murganhos tratados dividido pelo tempo de sovrevivencia médio dos con-23- trolos χ 100

Quadro 3

Efeito de A4 sobre leucemia P388 resistente à doxorubicina (Schalbel) e sensível' in vitro, (tratamento de 1 hora) „

Composto	P388 (CI_5Q ng/ml)®	P388/DX (CI_5Q ng/ml)^e
Doxorubicina	52,7	4000
A4	7,6	24,3
e) CI₅g = Concentração	inibidora de 50%	da sobrevivência celu

lar

Quadro 4

Efeito de A4 sobre leucemia de Schabel P388 resistente â doxorubicina in vivo

Composto

D.0.^C T/C^d (mg/Kg) %

Doxorubicina

100

A4

0,09

153 /

-24Quadro 5

Efeito de A4 sobre carcinoma mamário murino
Composto	Via e esquema de tratamento	D.0.^C (mg/Kg)	Inibição do tumor o. Ό
Doxorubicina	iv q4dx4^	5,85	99
A4	iv q4dx4	0,065	94
	po q4dx4^g	ι—1 O	97
f) iv q4dx4	= Tratamento iv de	quatro em quatro dias, quatro
	vezes ao dia
g) po q4dx4	= Tratamento oral	de quatro em quatro	dias, por

quatro vezes

Quadro 6

Efeito de A4 sobre carcinoma mamário	humano (MXl)
Composto	Via e esquema de tratamento	D.0.^C (mg/Kg)	Inibição do tumor %
Doxorubicina	iv q7dx3^	6	72
A4	iv q7dx3	0,05	98
	po qVdxS¹	0,13	99
\ \ ·

-25h) iv q7dx3 = Tratamento iv de sete em sete dias, por tres vezes

i) po q7dx3 = Tratamento oral de sete em sete dias, por três vezes

Claims

REIVINDICAÇÕES

Processo para a preparação de novos compostos de fórmula geral na qual:

X representa um grupo alquilo C₁__g de cadeia linear ou ramificada ou benzilo, ou dos seus sais de adição de ãcido aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto:

(i) de.se fazer reagir doxorubicina ou um seu sal de adição de ãcido com um composto de fórmula geral (C) na qual:

X tem os significados definidos antes, e (ii) de se converter, eventualmente, o glicosido antraciclínico resultante de fórmula geral A em um seu sal de adição de ácido aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.
2.- Processo.de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 3 ' -desamino-3 ' - [2 (S) -benziloxi-4-morfolinil] -doxorubicina ou do seu cloridrato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 3 '-desamino-3'-[2 (S)-etoxi-4 -morfolinil] -doxorubicina ou do seu cloridrato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substi tuídos.
4.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 3 '-desamino-3 [2 .(R)-isopropiloxi-4-morf olinil],-doxorubicina ou do seu cloridrato, caracterizado pelo fac to de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente subs tituidos.

3.- Processo de acordo com a reivindicação 1,- para a preparação de 3’-desamino-3’-[2(S)-metoxi-4-morfolinil]-doxo rubicina ou do seu cloridrato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 3'-desamino-3'-[2(R)-metoxi-4-morfolinil]-doxo rubicina ou do seu cloridrato, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
7. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se fazer reagir a doxorubicina ou o seu cloridrato, dissolvida no seio de um dissolvente polar aprótico, à temperatura ambiente e na presença de uma base orgânica anidra,, com um diiodo de fórmula geral .C, citada antes, para se obter o correspondente derivado morfolinílico de doxorubicina de. fórmula geral A, e. de se separar, após purificação numa colu na de gel de sílica utilizando como agente de eluição uma mistura de cloreto de metileno e de metanol (97:5 v/v), mediante tratamento com uma solução metanõlica de ãcido clorídrico, sob a forma de cloridrato.
8.« Processo para.a preparação de compostos iniciais de fórmula geral na qual

X representa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada ou benzilo, caracterizado pelo facto (a) de se submeter a uma reacção de oxidação com periodato um composto de fórmula geral

OX (S)

OH na qual.

X tem os significados definidos antes,

-30i7 (b) de. se reduzir o composto resultante de fórmula geral

Οι ' na qual

X tem os significados definidos antes, (c) de se sulfonar o derivado resultante de fórmula geral

Ό

HO—7 OX

HO—<

na qual

X tem os significados definidos antes, e (d) de se iodar o derivado sulfonado resultante.
9.- Processo de acordo com a reivindicação 8, -caracte rizado pelo facto, de se fazer reagir a D- ou L-arabinose com um álcool de fórmula geral

XOH na qual·

X representa um grupo alquilo de cadeia linear ou ramificada ou benzilo, para se obter um composto de fórmula geral /31- £ΐ<

Ο (S) • na qual.

X tem os significados definidos antes.
10.- Processo de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo facto de se fazer reagir o derivado, di-hidroxi de fórmula, geral E com cloreto de p-toluenosulfonilo na fase (c) do processo.
11.- Processo para a preparação de composições farmacêu ticas. com acção anti-tumoral, caracterizado pelo facto de se misturar, uma quantidade eficaz sob o ponto de vista terapêutico de um composto de fórmula geral A,, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, como ingrediente activo, com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico.

Lisboa, 17 de Dezembro de 1990