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ANTHRACYCLINE GLYCOSIDER A ACTIVITE ANTITUMORALE. LEU PREPARATION. LRS COMPOSES IKrTERMRr-lAIRES DE CETTE PREPARATION. RT COMPOHTTTDNS ET UTILISATION DE CES SUBSTANCES
La presente invention se rapporte à de nouvelles
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4nthraeyclines, à un proyédé de präparation de ces anthracyclines. aux compositions pharmaceutiques qui les contiennent et aux nouveaux aminosucres protégés, qui sont utilisés comme composés intermédiaires lors de leur préparation.
La présente invention propose les nouveaux anthracycline glycosides IA-D, et leurs sels d'addition pharmaceutiquement acceptables :
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Les glycosides IA et IC sont prepares par couplage de la daunomycinone, qui est un aglycone connu de
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l'anthracycline daunorubicine ä activit6 antitumorale, avec des dérivés réactifs protegees des nouveaux amlnosucres que sont le tridesoxy-2, 3, 6 aminomethyl-3 L-ribohexopyranose (IIA) et le tridésoxy-2,3,6 aminométhyl-3 L-arabinohexopyranose (IIB), dans les conditions décrites dans le brevet des Etats-Unis d'Amerique US-A-4 098 798.
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Les analogues IB et ID sont obtenus par une bromation des glycosides respectivement IA et IC, suivie par l'hydrolyse des derives bromés en position 14, de préférence selon le procédé décrit dans le brevet des Etats-Unis d'amharique US-A-4 112 076.
En consequence, la presente invention propose un
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procédé de preparation d'un anthracyc1ine glycoslde de formule (D, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de ce composa, ce procédé consistant : (i) à faire reagir la daunomycinone avec un derivé réactif du tridésoxy-2, 3, 6 aminométhyl-3 L-ribohexopyranose ou du tridésoxy-2,3,6 aminométhyl-3 L-arabinohexopyranose, dans lesquels les groupes amino et les groupes hydroxy en position 4 sont protégés, et A bliminer les groupes protecteurs du produit ainsi obtenu, de façon à obtenir un anthracycline glycoside de formule < I) dans lequel R1 représente hydrogène ;
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(ii > si on le desire, a convertir ledit glycoside de formule (I) en l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ; (iii) si on le desire, A bromer ledit glycoside de formule (I), ou son sel pharmaceutlquement acceptable, et à hydrolyser le dérivé bromé en position 14 ainsi obtenu, de façon à former le glycoside
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correspondant de formule < D, dans lequel R represente hydroxy ; et lu) on le desire, à convertir ledit glycoside de formule (I), dans lequel R1 représente hydroxy en l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables.
La préparation des anthracycline glycosides de l'invention et de leurs sels sera maintenant decrite plus en détail, plus spécifiquement en rapport avec la preparation des premiers composés intermediaire 5 et
Deux procédés de synthèse ont ete mis au point pour obtenir et t. La première vole, représentée sur le Schéma I ci-dessous, est basée sur l'addition de nitro-
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méthane au sucre connu L pressentant une fonction cétone en position 3, fournissant le dérivé nitro , à partir duquel, en suivant la séquence réactionne11e indiquée. on obtient un mélange de 5 eut 6, avec la formation prépondérante du Sucre ayant la configuration L-ribo < 5 : 6 = 3 : 1). sol
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de OH ome it He 0 CH) N02 - ;
d 1) AC2'H' HO 0 HO CH NO 2) NaHCO) 01 2 2 Ho 0 4o CH2NO2 3 2 1 2 0 Naome me 0 0 OMe hie AcO 0 NaOMe "NO HO 2 H02 3 4 . H P Me H.
1de v w 1) NiRaney 2) (CF3COaO .. + 3) Separation chromtographicpje Me Me 0 HO NHCOCF3 6
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Plus particulièrement, l'addition de nitrométhane en presence de méthylate de sodium fournit le nitroalcool correspondant 2, avec un rendement de 85% après cristallt-
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sation. Le nitrogène 3., obtenu facilement ä partir de 2., subit le réarrangement indiqué de la double liaison, dans des conditions basiques, pour donner le nitrosucre insaturé 4. Celui-ci, une fols réduit en présence de nickel de Raney, fournit un melange des deux aminasucres 5 et 6, séparés par chromatographie sous forme de dérivés N-trifluoracetyles.
Une autre voie, représentée sur le Schéma II cidessous,. permet d'obtenir les intermédiaires S. ou ss. de façon
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stereoselective, et elle est basee sur l'utilisatlon, comme intermediaire clé, de l'olefine exocyclique connue Z.
(R. M. Gluliano, Carbohydr. Res. 131 (1984) 341-345), qui est facilement préparée ä partir de 1. L'hydroboration de 2. fournit l'alcool correspondant 9 de façon stéréosélective.
Cet intermediaire permet de préparer l'intermédiaire 5, par formation de l'azide correspondant, hydrolyse du groupe protecteur sur 0, réduction et, enfin, N-trifluoracAtylation du nouvel aminosucre.
Selon un autre mode de réalisation, l'Oxydation de 9 en 12, suivie par un traitement alcalin, fournit l'intermédiaire 13 ayant la configuration arabino. L'intermédiaire 13 est réduit en l'alcool JA. En suivant la meine sequence reactionnelle que celle utilisee pour la conversion de 3. en on convertit l'alcool 14 en l'aminosucre 6 protégé sur N, ayant la configuration L-arabino.
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La préparation des analogues de la daunorubicine, IA et IC, est effectuée par réaction de la daunomycinone avec les dérivés chlores en position 1 et N, 0-trifluoracétylés, IIIA ou IIIB,
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obtenus par traitement de 5 ou 6 par l'anhydride trifluor- ascétique, en faisant suivre par une réaction avec du chlorure d'hydrogène sec. Le glycoside protégé obtenu, à la suite de l'élimination du groupe protecteur N-trifluor- acétyle par une hydrolyse alcaline modérée, est converti en la nouvelle anthracycline IA ou IC. Cette anthracycline peut, si on le désire, entre isolée en tant que chlorhydrate.
Ceci est effectué de façon typique par traitement du glycoside par une solution methanolique de chlorure d'hydrogène, et isolement du glycoside sous la forme de son chlorhydrate.
La preparation des analogues de la doxorubicine, IB et ID, est effectuée par bromation de IA ou de IC, par exemple, avec du brome dans le dichlorure de methylene, afin d'obtenir le dérive bromé en position 14, à partir duquel, après une hydrolyse, typiquement avec une solution aqueuse de formiate de sodium, on obtient le nouveau glycoside IB ou ID. Egalement, le nouveau glycoside peut être isolé en tant que chlorhydrate. Ceci est effectué typiquement par traitement du glycoside par une solution méthanollque de
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chlorure d'hydrogène, et isolement du glycoside sous la forme de son chlorhydrate.
La présente invention propose également une composition pharmaceutique comprenant, comme ingrédient actif, un anthracycline glycoside de formule IA-D, ou un de
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ses sels pharmaceutiquement acceptables, conjointement avec un support ou diluant pharmaceutiquement acceptable. Des supports classiques peuvent être utilises et la composition
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peut être formulee d'une maniere classique.
Les composés de l'invention sont utiles dans des méthodes de traitement du corps humain ou animal par thérapie. En particulier, les composes de l'inventlon sont utiles comme agents antitumoraux par administration d'une
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quantité therapeutiquement efficace du compos6 à un patient.
Les Exemples suivants illustrent l'invention.
Exemple 1
Preparation du didésoxy-2, 6 nitrométhyl-3 C α-L-ribohexopyranoside de méthyle (2)
Une solution 1 fois molaire de méthylate de sodium dans le méthanol < 20 ml, 20 mmoles > a été ajoutée goutte à goutte, sous agitation, à une solution de didésoxy-2, 6 α-L- érythro-hexopyranosid-3-ulose de méthyle (1) (1, 60 g, 10 mmoles), dans 70 ml de nitrométhane sec.
Le mélange réactionnel a été agite pendant toute une nuit, à la température ambiante, et, ensuite, il a été désionise par la resine Dawex 50WX8 (H), et le filtrat a été évaporé jusqu'à obtention d'un solide.
La cristallisation fractionnée du produit dans
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l'éther a donné 1, 66 g (75%) de dldésoxy-2, 6 nitromethyl-3 C a-L-rlbo-hexopyranoside de methyle < 2.).
P. f. 115'C, 20 tet] ' =-104, 25 < c = l, CH ci D 2 2 Le spectre de résonance magnétique du proton < 200 MHz, CHC13) a montré une absorption ä : 1, 35 (d, J = 6, 2 Hz, 3H, CH3-5), 2, 01 (dd, J -3,7, 15,0 Hz, 1H, H-2ax, 2,24 (bd, J = 11, 7 Hz, 1H, OH-4), 2, 32 (dd, J = 1, 1,15, 0 Hz, 1H, H-2e),
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3, 06 (dd, J = 9, 3, 11, 7 Hz, 1H, H-4), 3,38 (s, 3H, OCH3),
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3, 70 (qd, J 6, 2, 9, 3 Hz, 1H, ), 4, 26 (d, J = 1, 5 Hz, 1H, OH-3), 4, 34 (dd, J = 1, 5, 11, 1 Hz, 1H, CH < H)-NO)), 4, 74 (d, J = 11, 1 Hz, 1H, CH (H)-NO > ,
4, 84 (dd, J = 1, 1, 3, 7 Hz, 1H, H-1).
Le spectre RMN 13C (50 MHz, CDC13 a montr6 une absorption ä :
17, 8 (CH3-5) ;
36, 7 (C-2)
55,3 (OCH3) ;
65,1 (C-5) ; 71,5 (C-3) ;
73,5 (C-4) 80,8 (CH2NO2) ;
97, 7 (C-1).
Exemple 2
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Prépratlon du nltromthyl-3 tridésoxy-2. 3. 6 hex-éno- 2pyrana5ide de méthyle (4) Le composé (2.) < 1, 1 g, 5 mmoles) a < 6t6 trait6 par 70 ml dfanhydride acatique et 0, 7 g d'ac1de p-toluène sulfonique monohydraté, à la température ambiante, pendant toute une nuit.
Le mélange réactionnel a été vers dans un mélange eau-glace et traité par de l'hydrogénocarbonate de sodium sous agitation.
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Après neutralisation, on a laissé le mélange se rechauffer jusqu'à la température ambiante, sous agitation, et le mélange a été extrait par l'acétate d'éthyle.
L'extrait organique a été lave avec de l'eau, puis il a éte séché sur sulfate de sodium, filtré, et on l'a fait évaporer sous pression réduite, ce qui a donné 1,030 g (84%)
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de (3), sous la forme d'un sirop blanc, qui a été utilisé pour l'étape suivante sans purification supplementaire.
Le composé 3 (0, 98 g, 4 mmoles), dissous dans du methylat de sodium méthanolique 0. 1M (70 ml) a été maintenu ä la température ambiante. Le progrès de la reaction a été suivi en C. C. M. sur gel de silice, ä l'aide du mélange chlorure de méthylène : méthanol (10:1 v/v).
Lorsque la réaction a été achevée, le mélange reactionnel a été neutralisé par de l'acide ascétique dissous dans du méthanol et on l'a fait évaporer, pour donner un sirop qui a été purifié par chromatographie éclair avec un melange chlorure de méthylène : méthanol (19:1 v/v), ce qui a donné 0,675 g (83%) de 4, sous la forme d'un sirop.
Le spectre de résonance magnétique du proton < 200 MHz, CHCl ) a montré une absorption ä 6 : 1,33 (d, J = 6, 2 Hz, 3H, CH3-5),
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2, 38 (bd, J = 7, 0 Hz, 1H, QH-4).
3, 42 (s, 3H, OCS) 3, 76 < dq, J = 9, 1, 6, 2 Hz, 1H, HS.), 3, 99 (ddd, J = 9,1, 7,0, 2,0 Hz, 1H, H-4), 4,86, 5,30 (deux d, J = 13, 3 Hz, 2H, CHNO > , 4,84 (D, J = 3, 0 Hz, 1razz 5, 90 (dd, J =3,0, 2,0 Hz, 1H, H-2).
Exemple 3
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Preparation du trldesoxy-2, 3, 6 trifluoracetamidomethyl-3 of-L-ribo-exopyranoside de methyle ( & et trjdespxy-S. 3, 6 trifluoracetamidométhyl-3 a-L-arabino-hexopyranosi4 de méthyle (6) Le composé (4.) (0, 61 g, 3 moles), dans 50 ml d'eau, a été hydrogéné en présence de 0, 6 g de nickel de Raney neutre, sous une pression de 1, 013 MPa (10 atmosphères).
.. Après elimination du catalyseur par filtration, le pH de la solution a été ajusté ä 6 par du chlorure
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d'hydrogene aqueux et on a fait évaporer la solution resultante. Le residu a été traite par plusieurs fractions de toluène, en faisant suivre par une évaporation, afin de donner un sirop incolore qui a été mis en suspension dans 20 ml de dichlorure de méthylène et traité par 4 ml d'anhydride
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trifluoracötique à O'C.
Au bout de 2 heures, an a fait évaporer le mélange réactionnel à siccité, et on l'a traita par du méthanol (20 ml). Après l'avoir laissé reposer à la température amblante, on a fait evaporer le mélange réactionnel ä . siccité. La CCM du residu avec un mélange dichlorure de méthylène : méthanol 10:1, après développement, a montré la présence de deux produits avec une Rf de 0,45 et une Rf de 0, 40.
Le residu résultant a été urifié par chromatographie eclair, à l'aide d'un melange chlorure de méthylène : méthanol 97 : 3 en tant que système d'élution. On a obtenu 0,55 g (67%) de 5. : le spectre de résonance magnétique du proton a montré une absorption à # :
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1, 24 (d, 3H, -5), 1, 71 < ddd, J = 2, 7, 5, 0, 14, 5 Hz, 1H, H-2ax), 1, 87 (ddd, J = 4, 1, 5. 5, 14, 5 Hz, 1H, H-2e), 2, 21 (m, lH, Hza),
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3, 32 (s, 3H, OCiL,).
3, 53 (dd, J = 4, 7, 8, 1 Hz, 1H, H-4).
3, 60 (m, 2H, QRNH), 3, 80 (qd, J = 6, 4, 8, 1 Hz, 1H, Hl5.).
4, 61 (dd, J = 2, 7, 4, 1 Hz, 1H, H-l) ; FD-SM 271 (M ); et 0,185 g (23%) de 6. : Le spectre de résonance magnétique du proton a montre une absorption à < y : 1, 26 (d, J = 6, 3, 3H, ses-5), 1, 50 (ddd, J = 3, 6, 13, 5, 13, 5 Hz, 1H, Sax), 1, 80 (ddd, J = 1, 3, 4, 1, 13, 5 Hz, 1H, bye), 2, 0-2, 2 (m, 1H, H3.), 2, 29 (d, J = 5, 1 Hz, 1R, Qui-4),
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3,0-3,1 (m, 1H, CH(CH)-NH).
3,06 (ddd, J = 5,1, 9,3, 9, 6 Hz, 1H, H-4), 3,34 < s, 3H, OQRg), 3,64 (dq, J = 6, 3, 9, 3 Hz, 1H, H-S), 3, 76 (ddd, J = 3, 8, 8, 0, 14, 0 Hz, 1H, CH(H)-NH), 4, 67 < dd, J = 1, 3, 3, 6 Hz, 1H, H-l).
FD-SM 271 (M+@).
Exemple 4
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Préparatian du tert. -butyldtméthylsilyl-4 (hydrométhyl) -3 tridésQxy-2. 3. de cc-L-ribo-hexopyranoside de Mäthyle (9) 3, 16 g de trldésoxy-2, 3, 6 methylene-3 C α-L-étythro-hexopyranoside de méthyle (Z > . dissous dans 30 ml de N. N-diméthylformamide, ont été ajoutés ä 3,650 g de chlorure de tert.-butyldiméthylsilyle et 3, 27 g d'imidazole, A 35*C, pendant 10 heures.
Le mélange réactionnel a été versa dans un mélange eau-glace et on l'a extrait par le dichlorométhane.
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L'extrait a été 1avé avec de l'eau, puis 11 a été seche sur sulfate de sodium et on l'a fait évaporer sous pression réduite, ce qui a fourni 4,850 g (89%) de 8., sous forme de sirop.
4,5 g (16, 5 mmoles) de 8, dans 30 ml de tétrahydrofuranne anhydre, sous atmosphere d'azote, ont été traites par 27 ml d'une solution dans le tétrahydrofuranne anhydre du complexe borane-tetrahydrofuranne 1M à 0*C.
La solution a été agitée à la température ambiante pendant 3 heures, refroidie ä nouveau et traitée par 20 ml du mélange tétrahydrofuranne : eau (1:1) et 25,5 ml d'hydroxyde de sodium 2N et, au bout de 10 minutes, 20,5 ml de peroxyde d'hydrogène à 30%.
Le melange a été agite à la temperature ambiante pendant 2 heures, refroidi à nouveau, et traité par 50 ml de thiosulfate de sodium en solution aqueuse saturée, afin de décomposer le peroxyde en exces.
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Du'chlorure de sodium a été ajouté pour saturer la couche aqueuse, laquelle a été séparée et extraite par du dichlorure de méthylène. Les couches organiques ont été séchées et on les a fait évaporer, ce qui a fourni 4, 65 g (97%) de 9.
Le spectre de résonance magnétique du proton a
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montre une absorption a < ? : 0, 08-0, 09 < deux s, 6H, Si (ga3) 2)' 0, 88 (s, 9H, SiC < CH3) ?.
1, 17 (d, J = 6, 4 Hz, 3H, CL-5), 1, 86 (m, 2H, GE2-2), 2, 20 (m, 1H, riz 2, 82 (m, 1H, CH20H), 3, 31 (s, 3H, OCB), 3, 55 (dd, J = 5, 3. 9, 2 Hz, 1H, R-4), 3.76 (ddd, J = 6, 0, 6, 9, 12,0 Hz, 1H, CH (H)-OH), 3, 90 (qd, J = 6,4, 9,2 Hz, 1H, H-5), 4,01 (ddd, J = 4, 0, 7, 0, 12,0 Hz, 1H, CH(H)-OH), 4,58 (t, J = 2,9 1H, H-1).
Exemple 5
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Préparation de l'aziroétby1-3 tert. -butyldlméthyldirnAthylr,-ilyl-4 tride--ijxy-2, 3. 6 a-L-ribohxopyranoside de méthyle (11)
2, 9 g (10 mmoles) de 9, dissous dans 20 ml de . pyridine sèche, ont été traités par du chlorure de méthane sulfonyle < 2 ml), à 0 C, pendant toute une nuit. Le mélange a été verse dans un mélange eau-glace, et le mélange aqueux a été extrait par du chlorure de methylene. Les extraits organiques combinés ont été laves avec du chlorure d'hydrogène aqueux, de l'hydrogénocarbonate de sodium aqueux, de l'eau, et, ensuite, ils ont été séchés sur
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sulfate de sodium. L'évaporation du filtrat a donné 3, 40 g (92%) de m.
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3 g (8,15 immoles) de 10, dissous dans 30 ml de N,N-diméthylformamide sec, ont été traités par un excès d'azide de sodium (3, 2 g). Le mélange a été porté au reflux pendant 30 minutes, et, ensuite, il a été vers dans un mélange eau-glace sous agitation, et le produit a été extrait par du dichlorure de méthylène. Le sirop résultant a été purifié par chromatographie eclair A l'aide de
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chlorure de roéthylène comme Fluant ; rendement : 2, 50 g (80%) de 1L pur.
I. R. = 2110 cm (azide).
Exemple 6
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Präparation du trldésoy-2, 3. 6 trifluaractamidomethyl- ? a-L-ribo-hexopyranoside de méthyle (52 2, 50 g (8 mmoles) de 11 ont été dissous dans 50 ml de tétrahydrofuranne à la température ambiante. A la solution, on a ajouté 5 g de fluorure de tétrabutylammonium. La solution a été agitee pendant 1 heure, puls elle a Ate diluée par du dichlorure de methylene et de l'eau. La couche aqueuse a ete extralte par du chlorure de méthylène, et les solutions organiques combinées ont été
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lavées avec de l'eau, sechees (aSO.) et concentrées A siccite.
Au sirop dissous dans du msethanol sec (75 ml), a été ajoute du palladium ä 20% sur carbone (1 g), et le mélange a été hydrogéné à 1,013 MPa < 10 atmosphères), pendant 3 heures, filtre et concentré à siccité.
Une solution du sirop résultant dans du chlorure de méthylène anhydre (40 ml), à 0 C, a été traitée par de l'anhydride trifluoracétique < 6 ml). Au bout de 2 heures, le mélange a été concentré ä siccite. Le residu a été dissous dans du méthanol anhydre (50 ml) pendant toute une nuit. Le solvant a été élimine et le résidu a été purifie par chromatographie eclair, avec un melange chlorure de methylene : méthanol 97 : 3, en tant que système d'elution.
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On a obtenu 1,540 g (71%) de 5.
Exemple 7
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Prparation du tert.-butyldimethylsilyl-4 formyl-3 tridesoxy-2,3.6 X-L-ribo-hexopyrano-3ide demethyle < 12 >
A 0, 5 ml (5, 5 mmoles) de chlorure d'oxalyle, dissous dans 15 ml de chlorure de methylene à -60 C, on a ajouté sous agitation, 0,85 ml (11 mmoles) de dimethyl- sulfoxyde dissous dans 5 ml de chlorure de méthylène. Le melange reactionnel a été agité pendant 5 minutes et, ensuite, on y a ajoute 1,45 g (5 mmoles) de 2. dissous dans 10 ml de chlorure de methylene. Au bout de 15 minutes, on a ajouté 3,5 ml de triethylamine, et le melange reactionnel a été agit6 pendant 5 minutes', puis on l'a laisse se rechauffer jusqu'à la température ambiante.
De l'eau (25 ml) a été ajoutée, et la couche aqueuse a été réextraite par du chlorure de méthylène. Les couches organiques ont été combinees, lavées avec du chlorure de sodium sature, et séchées sur sulfate de magnesium anhydre, et on les a fait évaporer, ce qui a fourni 1, 34 g (93%) de 12.
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Le spectre de résonance magnetique du proton a montre une absorption ä : 0, 03, 0, 06 (deux s, 6H, Si CC)), 0, 84 (s, 9H, SIC (C"3) 3), dz J = 6, 2 Hz, 3H CE3-5), 1, 97 (ddd, J - 3, 4, 6, 0, 14, 0 Hz), 1H. H-2ax), 2, 09 (ddd, J = 1, 4, 2, 6, 14, 0 Hz, IH, H-2e). 2,54 (dddd, J = 3, 0, 2,6, 5, 6, 6,0 Hz, 1H, H-3), 3,30 (s, 3H, Ocra3), 3,54 (dd, J = 5, 6, 9, 7 Hz, 1H, H-4), 4,03 (qd, J = 6, 2, 9,7 Hz, 1H, H-5),
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4, 56 < dd, J = 1, 4, 3, 4 Hz, 1H,H=L), 10, 02 < d, J = 3, 0 Hz, 1H, CHO).
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Exemple 8 preparation du tert.-butyldiméthylsilyl-4 formyl-3 tridésoxy-2,3,6 α-L-arabing-hexopyranoside de méthyle (13)
1, 30 g (4,5 mmoles) de 12, dissous dans 30 ml de triethylamine seche, ont été agités au reflux.
Le progrès de la réaction a été suivi en C. C. M. sur gel de silice, ä l'aide d'un mélange toluène-acétone 9 : 1 comme agent de développement. Lorsque l'on a fait évaporer le mélange réactionnel et que le résidu résultant a été filtre ä travers une courte colonne de gel de silice à
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l'aide du toluene comme lutant, on a obtenu 1, 25 g (96%) de la.
Le spectre RNN a montra une absorption in 0, 01, 0, 08 (deux s, 6H, Si CtBL)), 0, 86 (s, 9H, SiC < QH), 1, 22 (d, J = 6, 2 Hz, 3H, CIL--5), 1, 6-1, 9 < m, 2H, CH-2), 2,93 (dddd, J = 2,5, 5,0, 9,2, 12,0 Hz, 1H, H-3), 3,33 (s, 3H, OCH3), 3,51 tdd. J = 9,2, 9,2 Hz, 1H, H-4), 3,66 < qd, J = 6,2, 9, 2 Hz, 1H, H-5), 4, 68 < dd, J = 1, 5, 3, 5 Hz, lH, H-1), 9, 77 < d, J = 2, 5 Hz, 1R, CHO).
Exemple 9
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I Préparation du tert.-butyldiméthylsilyl-4 hydroxyméthyl-3 tridésoxy-2, 3, 6 α-L-arabino-hexopyranoside de méthyle (14)
1, 2 g (4,15 mmoles) de 13, dissous dans 50 ml de méthanol, a été réduit par du borohydrure de sodium (0, 1 g), à 0 C, pendant 20 minutes. Le borohydrure de sodium en excès a été consommé par l'addition d'acétone. Après addition de 25 ml d'eau, la solution a été neutralisée par de L'acide acétique et, ensuite, elle a été extraite par du
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chlorure de méthylène. On a fait évaporer les extraits organiques ä siccité, ce qui a fourni 1,2 g (100%) de 1 & .
Le spectre de résonance magnétique du proton a montrè une absorption & 6 :
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0, 08, 0, 09 (deux s, 6H, Si () 2)' 0, 88 {s, 9H, SiC {) 3) t 1,20 (d, J = 6,3 Hz, 3R, CH3-5), 1,66 (ddd, J = 3, 6,13, 0, 1H, H-2ax), 1, 85 (ddd, J = 1, 4, 2, 5, 13, 0 Hz, IN, H-2e),
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1, 9-2, 0 (m, 1H, H. =3.), 3,22 (dd, J = 9, 4, 9, 4 Hz, 1H, H-4), 3, 33 (s, 3H, OCH3), 3, 6-3, 7 (m, 3H, H-5, CH2OH), 4, 68 (dd, J = 1, 4, 3, 6 Hz, 1H, H-1).
Exemple 10
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Préparation du tr1dsoxy-2. 3. 6 triluorac6ta. midojBthyl-3 q-L-arabino-hexopyranas1de de méthyle (5)
On a effectué la synthèse du compose de 1'intitulé ä partir de 14. par l'intermédiaire d'une mésylation suivie d'une azidolyse, en suivant le mode opératoire décrit aux Exemples 5 et 6.
Exemple 11
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Preparation du chlorure da tr1désoxy-2. 3. 6 trifluoractamidom6thyl-3 trifluoracAtyl-4 < x-L-ribo- hexopyranosyle (III-A)
On a fait réagir une solution de 0, 5 g (1,84 mmoles) de S. dans 10 ml d'acide acétique et 40 ml d'eau, a 100*C, pendant 1 heure. On a fait évaporer la solution sous vide. Le résidu a été dissous dans 25 ml de dichlorure de méthylène, et 11 a été traitè à 0 C par 3 ml d'anhydride trifluoracétique. Au bout de 2 heures à 0 C et
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d'l heure & la température ambiante, on a fait évaporer le mélange rêactionne1 pour obtenir un sirop qui a été direc- tement dissous dans 15 ml d'éther diethylique anhydre.
La solution a été saturée ä 0*C par du chlorure d'hydrogène sec.
Après un repos à 0*C pendant toute une nuit, on a fait évaporer le mélange réactionnel sous vide, ce qui a fournit le composé de l'intitulé approprié pour la réaction ultérieure sans purification supplémentaire.
Exemple 12 Préparation de la désamino-3' aminométhyl-3' épi-3',4' daungrubicine (I-A)
A une solution de daunomycinone (0, 400 g, 1 mmole) dans 50 ml de dichlorure de méthylène anhydre, on a ajoute du chlorure de tridésoxy-2,3,6 trifluoracétamidométhyl-3 trifluoracetyl-4 L-ribohexapyranosyle (0,37 g, 1 mmole), prepare comme decrit à l'Exemple 11, dans 15 ml de dichlorure de methylene et 4 g de tamis moléculaire < 0, 4 nm (4Á), Merck). Le mèlange a ensuite été traité par 0, 28 g de trifluorométhanesulfonate d'argent dans 15 ml de d'éther diethyltque anhydre, sous agitation énergique.
Au bout de 15 minutes, le mélange réactionnel a été traité par une solution aqueuse saturée d'hydrogènocarbonate de sodium. La phase organique séparée a été lavée avec de l'eau, puis on l'a fait évaporer à siccité.
Le residu solide a été dissous dans du méthanol sec (25 ml) et gardé pendant toute une nuit. Le produit brut obtenu par evaporation du solvant a été chromatographié sur une colonne de gel de silice, à l'aide d'un mélange dichlorure de methylene : acetone = 19 : 1 comme agent d'elution, ce qui a donné de la désamino-3' trifluoracétamidométhyl-3' épi-3',4' daunorubicine pure (0, 410 g, 63%) ; p. f. : 161-163"C.
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Le spectre de résonance magnétique du proton a monts une absorption ä S: 1, 30 < d, J 6, 1 Hz, 3H, ru-5% 1, 7-2, 5 < m, 5H. CH-8, %-2', CH-3'), 2, 41 (s, 3H, COGR-), 2, 88 (d, J = 16, 9 Hz. 1H, HLJax > , 3, 18 (dd, J = 1, 5, 18, 9 Hz, 1H. H-lOe).
3, 4-3, 8 (m, 3H, -nus 4, 07 (s, 3H, OCRg-4, 4, 53 (s, lH, QH.-9), 5, 23 (m, 1H, H-7), 5, 29 < dd, J = < 1, 5, 0 Hz, 1R, '), 7, 38 (d, J = 8, 3 Hz, li, 7, 76 (dd, J = 8,3, 8,3 Hz, 1H, H-2), 8, 01 (d, J = 8,3 Hz, 1H, H-1), 13, 26 (s, 1H, OH-11),
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13, 97 (s, 1H, OH-6).
Une solution de 0,4 g du composé indiqua cl-dessus . dans 10 ml d'acétone a été traité par 40 ml d'hydroxyde de sodium aqueux 0,1N et agité sous azote ä 15 C. Au bout d'l heure, le mélange reactionnel a été ajusté à pH 3, 5 par du chlorure d'hydrogène aqueux IN et, ensuite, 11 a été extrait par du dichlorure de méthylène, afin d'eliminer les impuretés.
La phase aqueuse, ajustée à pH 8, 0, a été extraite par du dichlorure de méthylène.
Les extraits organiques combinés ont été seches sur sulfate de sodium, concentres jusqu'à un petit volume et acidifiés à pH 4, 5 par du chlorure d'hydrogène méthanolique
0, 25N. L'addition d'éther diéthylique en exces a donné de la désamino-3' aminométhyl-3' épi-3',4' daunorubicine (I-A),
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sous la forme de son chlorhydrate (0, 300 g), p. f. : 151-153*C (avec decomposition).
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Exemple 13 Préparation de la désamino-3' aminométhyl-3' épi-3',4'
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doxorubicine (I-B) Une solution de 0, 200 g de chlorhydrate de desamino-3'aminométhyl-3'epi-3'-4'daunorubicine (I-A), préparée comme décrit à l'Exemple 12, dans un melange de
3 ml de méthanol anhydre, 8 ml de dioxanne et 0,2 ml d'orthoformiate d'éthyle a été traitée par 0, 45 ml d'une solution contenant 0, 95 g de brome dans 10 ml de dichlorure de methylene.
Au bout d'1, 5 heure a 15*C, le mélange réactionnel a été verse dans un melange de 40 ml d'éther diéthylique et de 40 ml d'ether de pétrole.
Le précipité rouge résultant, après avoir été recueilli. par filtration et lave avec de l'éther diéthylique, a ete dissous dans un mélange de 7, 5 ml d'acetone et 7,5 ml de bromure d'hydrogène aqueux 0, 25N. Au bout d'une journée à 30. C, le mélange réactionnel a été traite par 0,35 g de formiate de sodium dans 4 ml d'eau, et agité à 30 C pendant 2 jours.
Le melange réactionnel a été extrait par du dichlorure de methylene de façon Åa éliminer quelques impuretés lipophiles. La phase aqueuse, apres avoir ete aJustée à pH 7,6 par du bicarbonate de sodium aqueux, a ete extraite de façon répétée par du dichlarure de méthylène.
Les extralts organiques combinés ont été séchés sur sulfate
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de sodium, et on les a fait evaporer Jusqu'à obtenir un petit volume sous vide. A la solution rouge résultante, ajustée à pH 3,5 par du chlorure d'hydrogène méthanolique anhydre, on a ajoute de l'éther diéthylique en excès, ce qui a permis d'obtenir de la désamino-3' aminométhyl-3' épi- 3', 4' doxorubicine (I-B, 0, 180 g).
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Exemple 14 Préparation du chlorure de tridésoxy-2, 3, 6 triluoracétamidométhyl- trifluoracétyl-4 L-arabino- hexopyranosyle (III-b)
La synthèse du compose de l'intitulé à partir de d, a été effectuée conformément au mode opératoire durst a exemple 15
Exemple 15
Preparation de la désamino-3' aminométhyl-3' épi-4' daunorubicine (I-C)
La synthese du composé de l'intitulé, à partir de la daunomycinone et du chlorure de trldésoxy-2, 3, 6 trifluorcétamidométhyl-3trifluoracétyl-4L'-arabino- hexopyranosyle (III-B) a été effectuée conformément au mode opératoire décrit à l'Exemple 12.
Le spectre de résonance magnétique du proton de la désamino-3' trifluoracétamidométhyl-3' épi-3',4' daunorubicine a mantra une absorption ion 6: 1,32 (d, J = 6,0 Hz, 3H, CH3-5'), 1,5-1,9 (m, 3H, CH2-2', H-3'), 2, 0-2,4 (m, 2H, CH2-8), 2,42 (s, 3H, COCH3), 2,64 (d, J = 5,3 Hz, 1H, Qu-4), 2, 94 (d,'J = 18,9 Hz, 1H, H-10ax), 3,05 (m, 1H, H-4'), 3,23 (dd, J = 1,5, 18,9 Hz, 1H, H-lOe), 3, 6-3, 8 (m, 2H, CH2-NH), 3,87 (qd, J = 6, 0, 9,2 Hz, 1H, H-5'), 4,08 (s, 3H, OCH3-4), 4, 59 (s, 1H, QR-9),
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5, 30 (dd, J = 1, 9, 3, 7 Hz, 1H, HZ), 5,45 (dd, J < 1 3,5 Hz, 1H, H-1'), 7,25 (m, IH, NH-COCF3),
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7,39 (d, J = 8, 1 Hz, 1H, Ut2),
7, 78 (dd, J = 8, 1,
8, 1 Hz, 1H, H-2),
8,03 < d, J = 8,1 Hz, 1H, H-1), 13,28 (s, 1H, OH-11), 14,00 (s, 1H, OH-6).
La désamino-3' aminométhyl-3' épi-4' daunorubicin < I-C) a ete obtenue en tant que chlorhydrate sous forme de cristaux rouges, p. f. = 164-165 C (avec decomposition).
Exemple 16
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Prparatipn de la damina-3'aminamthyl-3'pi-4' doxorubiciAe. < I-D?
Le compos I-C, prepare comme décrit à l'Exemple 15, a été transforma en le dérivé correspondant hydroxylé en position 14, conformement au mode opératoire décrit à l'Exemple 13.
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La désamino-3* ajninomethyl-3'epi.-4'doxorubicine (I-D) a été obtenue en tant que chlorhydrate sous la forme de cristaux rouges < p. f. : 170-172*C) avec decomposition).
Activité biologique de IB Le compose IB a été testé, en comparaison avec la daunorubicine (DNR), a l'encontre des cellules HeLa et P388 in vitro (Tableau 1).
L'effet in vivo de IB, a l'encontre de la leucémie de Gross disséminée est rapporté dans le Tableau 2. Ici, IB, administre par la vote intraveineuse, etait moins puissant que DNR ; cependant, le nouveau compose, ä la dose maximale tolérée (32, 11 rng/kg) était plus actif que DNR (MxTD = 15 mg/kg).
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Tableau 1 -Activité cytotoxique de IB par comparaison avec la daunorubicine
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<tb> COMPOSE <SEP> DI50 <SEP> (ng/ml)
<tb> Hela+ <SEP> P388++
<tb> DNR <SEP> 10,5 <SEP> 8,4
<tb> IB <SEP> 6,4 <SEP> 10
<tb>
+ = Essai d'inhibition de la colonie au bout de
24 heures d'exposition aux médicaments.
++ = Cytotoxlc1té évaluée au bout de 48 heures d'exposition aux medicaments par la technique de comptage des cellules.
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A) Tableau 2 - Effet à l'encontre de la leucémie de Gross
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<tb>
<tb> COMPOSE <SEP> DOSE <SEP> B) <SEP> MORTS <SEP> PAR
<tb> mg/kg <SEP> T/C% <SEP> C) <SEP> TOXICITE <SEP> D)
<tb> DNR <SEP> 10 <SEP> 150 <SEP> 0/10
<tb> 15 <SEP> 183 <SEP> 0/10
<tb> 22, <SEP> 5 <SEP> 217 <SEP> 2/10
<tb> IB <SEP> 19 <SEP> 167 <SEP> 0/10
<tb> 24,7 <SEP> 183 <SEP> 0/10
<tb> 32,11 <SEP> 200 <SEP> 1/10
<tb>
A) = Les experiences ont été effectuées chez les souris C3H, inoculées par 2 x 10 cellules de leucémie par la vole intraveineuse.
B) = Traitement par la vole intraveineuse au jour 1 après l'inoculation de la tumeur.
C) = Temps de survie moyen des souris traitées/temps de survie moyen des témoins x 100.
D) = Evaluées sur la base des decouvertes de l'autopsie.