PT94281A

PT94281A - Processo para a preparacao de derivados acilados de etoposido e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT94281A
Application number: PT94281A
Authority: PT
Inventors: Hideo Kamei; Takeshi Ohnuma; Takayuki Naito; Rika Obata
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 1989-06-07
Filing date: 1990-06-06
Publication date: 1991-02-08
Also published as: KR910000778A; HU206221B; HUT54174A; NZ233900A; AU5682890A; CA2018067A1; NO902495L; US5036055A; EP0401800A2; JPH0324097A; CN1024197C; ZA904366B; AU637104B2; YU110690A; NO173239C; CZ283890A3; IL94606A0; EP0401800A3; NO173239B; CN1047869A

Description

BRISTOL-I-TTERS SQUIBB CQ^PAÍTT "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS ACILADOS DE ETOPOSIDO E DE CQnPGSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS COH TÊI-f AUTECEDSHTES DA IMVENÇÃO 1- Âmbito da Invenção A presente invenção refere-se a derivados de epipodofilotoxina, à sua utilização corao agentes anti--tumor, e às composiçbes farmacêuticas que os contêm, í-íais particularmente, os novos compostos da presente invenção são os derivados acílicos de 4'-desmetil-epi-podofilotoxina glicosidos. 2. Descrição da Técnica Anterior

Os compostos de etoposido e de teniposido são clinicamente úteis como agentes anti-tumor, sendo derivados de um lignano de ocorrência natural, a podofiloto xina. Correntemente o composto etoposido é comercializa do nos Estados Unidos sob o nome comercial HVepesid*' pa ra ° tratamento de cancro pulmonar de células pequenas e cancro testicular. As propriedades farmacológicas favoráveis do etoposido e do teniposido encorajaram muita

τ actividade de pesquisa de outros compostos análogos acti vos pertencentes à mesma classe.

Os 4'-O-desmetil-epipodofilotoxina glicosidos em que os grupos hidroxilo do radical açúcar são acilados têm sido descritos em diversas obres como intermediários Para a preparação dos correspondentes 4 *-desmetil-epipo-dofilotoxina glicosidos; contudo, o grupo fenol desses compostos também se encontra protegido. A patente de invenção canadiana ne 956 939 descre ve compostos de fórmula geral

O-C-OCHp-Rq ir c J 0 < I) na qual R1 representa um grupo alquilo(Ci“Cg), representa um grupo acetilo ou forrailo; R3 representa um grupo fenilo ou um grupo fenilo substituído; os substituintes -oossíveis para os grupos fenilo referidos mas não exemplificados são os grupos p-nitro-fenilo e p-metoxi--fenilo. A patente de invenção norte-americana ns 4 554 075 descreve compostos de fórmula geral

0 — R ( í I ) na qual

R representa um grupo de fórmula geral >v representa um êtomo de halogéneo.

0 pedido de patente de invenção europeia nQ 162 701 descreve compostos de fórmula geral

3 (III) na qual e , iguais ou diferentes, r epre sentaiçi, cada t um, grupos de fórmula geral -C(0)CHX2 ou -C(0)CX X representa um átomo de halogéneo.

As publicações japonesas 58/225 096 (Resumo da Derwent N° 84-034268/06) e 58/219 196 (resumo da Derwent n& 84-027495/05) descrevem compostos de fórmulas gerais (IV) e (V), respectlvamente.

< V) (IV) em que o radical A representa um grupo de fórmula geral “CO^-CH^-C(H)m(X)n na qual o símbolo X representa um átomo de halo-géneo e m representa um inteiro compreendido entre 0 e 2 n representa um inteiro compreendido en tre 1 e 3, sendo m+n=3, e o radical Ac representa um grupo acilo.

0 pedido de patente europeia ns226 202# descreve ura produto intermediário para a síntese do composto eto-posido de fórmula geral

(VI) na qual o radical A representa ura grupo acetilo.

Os derivados mono-hemi-succinato de etoposido de fórmula geral (VII) encontram-se descritos na publicação "J. Pharm. Biomed. Anal.# 5(1) 1987 p.11-20,

H na qual um dos radicais e R? representa um atomo de hidrogénio e o outro representa o Qru po -C0Çch2)2G02H.

Estes compostos são utilizados como produtos in1 termediários para conjugar o etoposido com albumina de soro de bovino. 0 composto 4'-fosfato de etoposido e o seu sal dissódico encontram-se descritos na publicação japonesa 63/192 793.

fosfatojâe etogosido

SUI-5ÁRI0 DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona compostos de fórmula geral

(VIII) na qual representa um átomo de hidrogénio representa um grupo alquiloC^-C^), alcenilo(C2~C10), ciclo-alquilo(C5-Cg), 2-furilo, 2-tienilo, arilo(Cg-C10) e aralquilo(C7-C14); ou e R representam, cada um, um grupo alquilo (C^-C·^) ou e e o átomo de carbono ao qual estão ligados representam, conjuntamente, um grupo ciclo-alquilo(Cg-Cg); um dos radicais R3 e R4. representam ura átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo alcanoílo(C^-C5) ou benzoílo; ou Rg e R^ representam, cada um, um grupo alcanoíloíC^-C^) ou benzoílo;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo fosfato.

De acordo com outro aspecto da presente invenção, obtêm-se composiçSes farmacêuticas que incorporam uma quantidade eficaz anti-tumor de um composto de fór mula geral (VIII) e um veiculo aceitável, sob o ponto de vista farmacêutico.

Ainda de acordo com outro dos seus aspectos, a presente invenção proporciona um método para inibir o desenvolvimento de tumores num hospedeiro mamífero que tenha um tumor, consistindo esse método em administrar ao referido hospedeiro uma quantidade anti-tumor de um composto de fórmula geral (VIII).

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

De acordo com um dos seus aspectos preferenciais, os compostos de fórmula geral (VIII), englobam compostos em que o radical R2 representa um átomo de hidrogénio e o radical representa um grupo metilo, 2-tienilo ou fe nilo, sendo o grupo metilo o substituinte mais preferen-cxal« a nre

De acordo com um aspecto mais ^referencial, / -10- sente invenção proporciona compostos de fórmula geral (VIII) na qual os símbolos R3 e RA representam, cada um, um grupo alcanoílo(C^-C5); de acordo com um aspecto mais preferencial, a presente invenção proporciona compostos de fórmula geral (VIII) em que os símbolos R3 e representam, cada um, um grupo formilo.

Ainda de acordo com um aspecto preferencial, a presente invenção proporciona compostos de fórmula geral (VIII) em que um dos símbolos R^ ou representa um áto mo de hidrogénio e o outro representa um grupo alcanoí-ΙοίΟχ-Οό) ou benzoilo.

Tal como utilizado na presente memória descritiva, o termo “fosfato" significa o grupo-P03Hp e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Os sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêu tico englobam tanto os sais monobásicos como os sais di-básicos em que o catião engloba, sem que isso constitua uma liraitaçao, os metais alcalinos, por exemplo, o sódio, o potássio ou o lítio; os metais alcalino-terrosos, por exemplo, o magnésio, o cálcio e o bário? os sais de ami-nas organicas, por exemplo, de amónio, É possível preparar os novos compostos da presente invenção fazendo reagir o composto 4'-desmetil-epipodoxi-lotoxina glicosido protegido pelo 4'-feno!, de fórmula ge ral ClXa) cora o desejado ácido carboxílico ou com um seu equivalente de acilaç§o, seguindo-se a eliminação do grupo de orotecção fenol. -11-

T]Ca: Y = grupo de protecção IXb: Y = H 0 grupo de protecção fenol nã.o é particularraente restrito e pode ser qualquer grupo que possa ser introdu sido e eliminado com poucos ou mesmo nenhuns efeitos pre judiciais sobre as outras partes da molécula. liais parti cularmente, o grupo de protecção fenol deverá ser eliminado por métodos que não pertubem as funcionalidades aci loxi do radical açúcar dos produtos finais. Os métodos para a protecção com grupos fenol são bem conhecidos na especialidade e, como exemplos das classes gerais de gru pos de protecção fenol, é possível referir éteres, ace-tais, ésteres e carbonatos. Para os objectivos da presen te invenção, descobriu-se que o radicai benzil-oxi-car-bonilo pode ser utilizado convenientemente. Deste modo, fazendo reagir o composto 4*-desmetil-epipodofilotoxi-na glicosido de fórmula geral (iXb) com cloroformato de benzilo, a uma baixa temperatura# por exemplo -150°C, num dissolvente orgânico inerte tal como o cloreto de metileno e na presença de uma base orgânica terciária tal como a piridina, obtem-se o correspondente composto 4'-0-benzil-oxi-carbonil-4-desmetil-epipodofilotoxina glicosido. Os compostos de fórmula geral (IXb) e a sua síntese encontrara—se descritos na patente de invenção norte-americana ne 3 524 844.

Pode efectuar-se a acilação dos grupos hidroxilo do açúcar dos compostos de fórmula geral (iXa) utilizando o desejado ácido carboxilico ou o seu derivado que se ja agente de acilação, por exemplo, um halogeneto de áci_ do tal como um cloreto de ácido, um éster activo derivado de N-hidroxi-succinimida ou 1-hidroxi-triazol e um anidrido simétrico ou misto. No caso de se utilizar o ácido carboxilico como agente de acilação, utilizar-se-á preferencialraente em conjunto com um agente de condensa-çao, por exemplo, uma carbo—di—imida tal coroo a diciclo— —hexil—carbo-diimida (DCC). Os agentes de acilação s§o Ds ácidos alcanóicos(C^-C^) e o ácido benzóico e os seus equivalentes de acilação conforme descrito antes. Os ácidos alcanórcos englobam, sem que isso constitua qualquer limitaçao, o acido fôrmico, o acido acético, o ácido pro piónico, o ácido butírico, o ácido pentanóico e os ácidos alcanóicos ramificados tais como o ácido 2-metil-propióni

co e o ácido 3-metil-butanôico.

Pode e£ectuar-se a reacção de acilação no seio de um dissolvente orgânico inerte tal como a piridina, incorporando-se preferencialmente na mistura de reacção ura aceitador de ácido no caso de se esperar a formação de ácido como sub-produto; os aceitadores de ácidos adequados são, por exemplo, as bases de amina terciária tais como a piridina, a trietil-amina, a di-isopropil--etil—amina e semelhantes, ou as bases inorgânicas tais como os carbonatos de sódio e de potássio. Pode efectu-ar-se a reacção a temperaturas que conduzam à formação dos produtos desejados, as quais podem variar entre -15° C e cerca de 50°C aproximadamente; a reacção pode decorrer num período de tempo compreendido entre diversos minutos e vários dias antes de estar completa, dependendo da natureza dos reagentes e da escolha das condições de reacção tais como a temperatura. A acilação não é regiosselectiva e pode terminar com a formação de uma mistura de um produto 2"-mono-acila do, de um produto 3"-mono-acilado e de um produto 2",3"--bis-acilado. Todavia, no caso de se utilizar pelo menos dois equivalentes do agente de acilação relativamente ao reagente epipodofilotoxina, produz-se predorainantemente o derivado bis-acilado. a proporção entre o produto mono--acilado e o produto bis-acilado pode ser controlada de alguma forma manipulando os parâmetros de reacção de acor do com princípios vulgarmente praticados na especialidade, por exemplo, variando as quantidades relativas dos reagen ψί tes, ou Variando as condições de reacção tais' como a temperatura e o tempo de duração da reacção. Em geral» no caso de sè utilizar quantidades equimolares dos reagentes, as temperaturas de reacção reduzidas e tem pos de reacção mais curtos tendem a aumentar a quantjL dade de produtos mono-acilados formados. Sm alternati va, é possível obter produtos mono-acilados protegendo primeiro um dos grupos hidroxilo do açúcar do material inicial de epipodofilotoxina glicosido protegido pelo grupo 4*-fenol. 0 grupo de protecção para o grupo hidroxilo do açúcar é preferencialmente um grupo de protecção volumoso, por exemplo, o grupo t-butil-dimetil--sililo, no sentido de minimizar a transformação dos dois grupos hidroxilo. Repetindo, a protecção dos grupos hidroxilodo açúcar não é regiosseiectiva; contudo, se desejado, os compostos protegidos na posição 2" ou protegidos na posição 3n são facilmente separados por méto dos cromatográficos, Foram efectuadas reacções de formi. laçao do etoposido; contudo, não houve qualquer sucesso no isolamento de qualquer dos esperados derivados mono— formilicos do etoposido. A mistura de produtos constituída por derivados acilados protegidos por fenol pode ser separada em componentes individuais utilizando técnicas convencionais de separação tais como a cromatografia em coluna. A des-protecção do grupo hidroxilo fenólico e, se necessário, do grupo hidroxilo do açúcar, proporciona os compostos da presente invenção. Pode efectuar-se a desprotecçgo antes ou depois do isolamento dos componentes individuais; a ordem não é critica. Elimina-se o grupo de protecção utilizando métodos adequados para o grupo de protecção seleccionado, sendo esses métodos geralmente conhecidos na especialidade. Por exemplo, no caso de o grupo de protecção ser o grupo benzil-oxi-carbonilo, é possível eliminá-lo por hidrogenação catalítica à pres_ são atmosférica utilizando como catalisador paládio-em--carvão; é possível eliminar o grupo t-butil-dimetil--sililo por aquecimento em solução aquosa alcoólica ou por tratamento com o anião fluor ou por tratamento com uma solução aquosa de ácido acético.

Depois ,da eliminação do grupo de protecção fenol, o grupo 4 * -fenol ainda pode ser transformado para dar origem ao composto 4'-fosfato de fórmula geral (VIJI). Pode efectuar-se a fosforilação do 4'-fenol utilizando métodos convencionais. Por exemplo, pode fazer-se reagir um composto de fórmula geral (VIII) na qual o símbolo Rc

O representa ura átomo de hidrogénio, com um agente de fosforilação tal como o oxicloreto fosforoso; hidrolisa-se o cloreto de fosforilo intermédio in situ, para se obter o composto de 4'-fosfato, a hidrólise em presença de uma base, por exemplo, o bicarbonato de sódio, proporciona o sal correspondente. Este procedimento e outros potencial mente aplicáveis nos métodos de fosforilação encontram-se descritos no pedido de patente de invenção norte-americana ne GB2 207 674 a qual aqui se indica a titulo de referência. •16- «iy

Deve subentender-se que a síntese dos compostos da presente invenção não fica limitada aos procedimentos e aos reagentes anteriormente referidos, podendo englobar outros métodos susceptiveis de acilau os grupos hidroxi-lo da porção açúcar dos 4*-desmetil-epipodofilotoxina glicosidos« Como é evidente, as condições de reacção va~ riarão de acordo com os materiais iniciais seleccionados mas podem ser confirmados por um especialista com experi ência. ACTIVIDADS biologica

Avaliou-se a actividade anti-tumor dos compostos representativos da presente invenção contra a leucéiaia provocada pelas células F388 transplantadas para murinos.

Inoculou-se intrapsritonealmente murganhos fêmea da estir pe CDIT^ utilizando 0,4 ml de fluído ascítico diluído con— /* tendo 10 células Ρ388 de leucémia linfociticas, Os compostos ensaiados foram administrados intraperitonealmente numa dose única no primeiro dia e fez—se a observação dos animais durante 50 dias. Determinou-se o acréscimo percen tual do tempo médio de sobrevivência (TMS) dos animais tra tados em relação aos animais de controlo não tratados, efec. tuando-se o seu registo sob a forrna % T/C. Os compostos que apresentaram um valor % T/C de 125 ou superior foram considerados como sendo possuidores de uma significativa actividade anti-tumor. No quadro I estão representados os resulta dos da. avaliação in vivo ; apenas se apresenta o registo do valo^ máximo % T/C e da dose que proporciona os efeitos máximos.

Quadro I. Actividade anti-tumor contra a leucémia das células P388 Composto Dose(ma/ka/dia) (%T/C)TMS Exemplo 1 30 165 Exemplo 3 30 240 Exemplo 4 30 210 Etoposido 30 182 Exemplo 6 120 >500 (3/4 }* Exemplo 8 120 145 Exemplo 9 60 420 (1/4) Exemplo 10 120 125 Etoposido 120 >3 90 (6/12) ^Eámero de s obrevive nte s/te s tados no 502 dia

Avaiiou-se a citotoxicidade in vitro dos compostos da presente invenção, contra as linhas celulares do carcinoma do colon humano de Moser e contra o melanoma de murinos B16-PIO. Procedeu-se à recolha das células B16—FIO e de Moser em desenvolvimento exponencial# efec-tuou-se a sua contagem e preparou-se uma suspensão no meio de cultura nas concentrações de 1,5 x 104 e 3 χ 104 células/ml, respectivamente. Decorridas 24 horas após a colocação da suspensão celular (ISO μΐ) nas cavidades de uma placa de microtitulação de 96 cavidades, procedeu—se à adição dos materiais ensaiados (20 jil) a essas cavidades e e£ectuou-se a incubação das placas durante 72 horas# Determinou-se colorimetricaraente a actividade citotóxica contra as células do tumor a 540 nm após coloração das células viáveis com uma solução vermelha neutra# Os resul tados encontram-se resumidos no quadro II.

Quadro II# Citotoxicidade in vitro contra células de tumor humano e de murinos IC50 (mca/ml)

Composto B16-F10 Moser Exemplo 3 1.6 1.1 Exemplo 4 1.4 ND1 Exemplo 1 1.3 < 0.8 Exemplo 8 0.92 ND Exemplo 9 0.17 0.83 Exemplo 10 4.4 ND Exemplo 6 2.0 0.84 Etoposido 0.45 HD 1 ND: não determinado

Em consequência, a presente invenção proporciona um método para inibir tumores dos mamíferos, o qual consiste era administrar a ura hospedeiro que tenha ura tumor uma dose eficaz inibidora de tumor de um composto anti--tumor de fórmula geral VIII. Para satisfazer este objec-tivo, o fármaco pode ser administrado pelas vias convencionais, mas sem qualquer limitação, designadamente por via intravenosa, intramuscular, intratumoral, intra-erte-rial, intralinfética e oral.

De acordo com outro dos seus aspectos, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica constituída por um composto de fórmula geral VIII e por um veiculo farmaceuticamente aceitável, a composição anti-tumor pode ser apresentada segundo qualquer forma farmaceuticamente apropriada Para a via de administração desejada. Os exemplos dessas composições englobam as composições sólidas para administração oral tais como os comprimidos, as cápsulas, as pílulas, os pós e os grânulos, as composições liquidas para administração oral tais como as soluções, as suspensões, os xaropes ou os elixires e as preparações para a administração parentérica tais como as soluções, suspensões ou emulsões esterilizadas. Também podem ser preparadas na forma de composições sólidas esterilizadas as quais podem ser dissolvidas em água esterilizada, em solução salina fisiológica ou noutros meios injectáveis esteri lizados, imediatamente antes da utilização.

Os regimens e dosagens óptimos para um determina do hospedeiro mamífero podem ser determinados facilmente pelos especialistas na matéria. Como é evidente, faz-se observar que a dose real utilizada variará de acordo com a composição particular formulada, com o composto particular utilizado, com o modo de aplicação e com o local específico, com o hospedeiro e com a doença que se preten de tratar. Existem muitos factores que modificam a acção do fãrmaco e os quais devem ser tomados em consideração, incluindo a idade, o peso, o sexo, a dieta alimentar, o tempo de administração, a via de administração, a velocidade de excreção, o estado de saúde do doente as combinações farmacológicas, as sensibilidades ã reacção e a gravidade da doença.

Os exemplos que se seguem têm apenas objectivos ilustrativos e não deverão ser considerados como qualquer limitação do âmbito da presente invenção a qual é definida apenas pelas reivindicações anexas a esta memória descritiva.

Preparação de 4'-O-benzil-oxi-carbonil-etoposido (4'-CBZ--etoposido)

Durante 30 minutos adicionou-se cloroformato de benzilo (1,98 ml; 15 mmol) a uma mistura de etoposido (5,88 g, 10 itmol) e de piridina (10 ml) em cloreto de metileno (100 ml), mantendo-se â temperatura de -15°C. Agitou-se a mistura à temperatura de -15°C durante mais 1 hora, lavou-se sucessivamente com uma solução

de KC1 a 5%, com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio e com água e depois secou-se sobre sulfato de sódio anidro. Evaporou—se o dissolvente para se obter S,5 g de produto impuro o qual se purificou em coluna de gel de sílica (5/° de metanol/cloreto de metileno)

Para se obter 6,93 g (96%) de 4*-O-benzil—oxi-carboni-lo-etoposida, com o aspecto de um semi-sólido incolor;

P.f. 152°-155°C IV ^max ÍNu:ío:L) cm"*1: 3200-3600 (OH), 1760 (lactona <£ 4’-C-benziloxi-carbonilo), 1600 (aromático). (60 I-iHz, CDC13) £ 7,36 (5H, s, OCO^HgPh) , 6,81 (1H, s, 5-H), 6,50 (1H, s, 8-H), 6,25 (2H, s, 2*- e 6f-H), 5,94 (2H, s largo, Q-CH^Q) , 5,23 (2H, s, -CCOpCí^Ph 4,89 (1H, d, Je4 Hz, 4^-i), 3,66 (6H, s, 3*,5*-0CH3), 2,8-~3,0 C2H, m, 2ts,3u-0K,D20 permutado), 1,38 (3H, d, J=5 Hz, 7“ **°Η3 ) ·

Exemplo 1: Preparação de etoposido de 2“ ,3ts-di-0-acetilo (VIII, rl=ch3, r2*h, R3=r4=ch3co-)

Preparação de 2U ,3'* -di-O-acetato de 41 -O-benzil-oxi--carbonil-etoposido

Adicionou-se anidrido acético (1 ml) a uma solução de 4*-CBZ-etoposido (500 mg; 0,69 mmol) em piridina (10 ml)

e agitou-se a mistura durante 4 horas à temperatura ambiente.

Temperou-se a mistura reaccional com metanol (.2 ml), diluiu-se com dicloro-metano e depois lavou-se sucessivamente com água com uma solução de HC1 a 5% e novamente com água. Secou-se a camada orgânica sobre sulfato de sódio, filtrou-se e concentrou-se o filtrado in vacuo para se obter ura sólido incolor (551 mg; 99/0 » A recristalisação do sólido impuro no seio de metanol, proporcionou 2’* ,3" -di-O-acetato de 4 ' -0-bensil-o;ci-car~ bonil-etoposido com o aspecto de cristais incolores (l2, 395 mg, 22, 60 mg); p.f. 236°~233°C. IV CííPr) cm"1 3500(lr), 1770, 1610. UV λ ^ (Me0H) nm (£) 290 (3 950).

Anal. Calcd. para ^-41^43^171 c 61,04, H 5,25.

Encontrado: C 60,64, H 5,36. (b) Preparagão de 2" .318 -di-O-acetil-etoposiâo ,

Preparou-se uma soluçgo agitada do produto da fase fa) (405 mg, 0,5 mmol) em etanol/acetona (4:1; 15 ml) e hidrogenou-se durante 1,5 horas na presença de catalisa dor constituído por Pd/C a 10¾ (400 mg) à pressão de 1 atmosfera e depois filtrou-se o catalisador. Concentrou--se o filtrado in vacuo para se obter um sólido incolor (.360 mg, ca. 100¾), o qual recristalizou no seio de aceta to de etilo/metanol para se obter o composto em epigrafe

—23 -* (204 mg) com o aspecto de cristais incolores. Pureza estimada: 90% (por CLER) (Cromatografia Liquida de Elevad·o Rendimento). p.f. 2S7-289°C. IV v (KBr) cm"1 3500(lr), 1760, 1610 ΓΠ0.Λ UV λ m ,r (KeOH) nm ( £.) 240(3¾. 12780), 285 Ç406G).

Anal. Calcd. para C33H36°15: C 5a'53/ H 5,39.

Encontrado: C 53,56, H,41.

Exemplo 2: Preparação de 2"-0-acetato e 3"-0-acetato de 4*-O-benzil-oxi-carbonil-etoposido

Adicionou-se anidrido acético (20 >il; 0,18 mraol) e 4-dimetil-amino-piridina (3 mg) a uma solução de 4'--CBZ-etoposido (142 mg; 0,2 mmol) em piridina (8 ml), mantendo-se à temperatura de -10°C. Agitou-se a mistura durante 30 minutos à temperatura de -10°C e decorrido esse tempo, adicionou-se mais anidrido acético (20 jal; 0,18 mraol). Agitou-se a mistura reaccional durante mais 30 minutos à temperatura de -10°C e depois diluiu-se com di-cloro-metano e lavou-se sucessivamente cora água, com uma solução de HC1 a 5%, com uma solução aquosa de bicarbonato de sódio e com água. Secou-se a fase orgânica sobre Ng^SO^, filtrou-se e concentrou-se o filtrado in vácuo para se obter um pó incolor (117 mg) contendo quatro componentes (gel de sílica; CCF (Cromatograf ia. de Camada Fina)

Rf = 0,56; 0,46, 0,34 e 0,24; hexa.no/acetona. = 1/1). Separou-se a mistura por cromatografia eia coluna sobre gel de sílica (2,5/ de metanol/dicloro-metano).

As fracçSes que apresentaram uma mancha Para o valor de Rf = 0,56 foram combinadas e res-se a evaporação in vacuo Para proporcionar 1 mg ¢1/) de 2t:,3“-di-0--•acetil-4 '-O-bensil-oxi—carbonil-etoposido(4_). De modo idêntico, as fracçSes com os valores Rf = 0,46; O, 34 e 0,24 proporcionaram 3"-0-acetil-4 *-C-bensil-oxi "•carbonil-etoposidoC^), 2" -0-acetil-4 ’ -O-bensil-oxi-c3 bonii-etoposidoí .2) e 4* -CBZ-etoposido (1; 60 mg; 42/) com o asiaecto de pó incolor, respcccivamente, A parti·1' das fracçóes intermédias obteve-se também misturas &e 3. e 4 (IS mg), 2 e 3 (15 mg), e 1 e 2 (6 mg). 2t: —0—aoetil—4 * -O—bensil-oxi-çgirbonil-etoposido P. f. 224°—227°C. τ'? à (KBr) cm"1 3400( lr), 1740, 1600. UVXraax (lie OH) na (fe.) 291 (4200).

Anal. Calcd. Para C33H40°16* 1/2H20: c 61H 5,27,

Rncontrado: C 60,S4, K 5,25, -25- / pi» -O-a ce ti 1.-4* -O-benzil-oxi-carbonil-etoposido o.f. 139“145°C. * w IV j max (KBr) αΙΐΓΐ 3500(lr), 1770, 1600. UV ^ max (MeOIi) nm (£ ) 291 (3 920).

Anzlo Calcd. para C39H40°16* V2H 0S C 60,54, H 5,

Encontrado: C 60,27, H 5,26, etoposido ^?10 3; Preparaçgo de 2'8 ~0-acetil-< (VIII, R1=ch3, r2=ch3co-, R4=H)

Seguiu-se o procedimento descrito no exemplo 1, fas® (b) utilizando 2"-0-acetil-4· -O-benzil-oxi-carbonil-i-opooido (25 mg; 0,03 ramol) para se obter o composto era (?._ mg, ca, 100%) cora o aspecto de um pó incolor, L ureza estimada de 9Q% (por CL-ER), P.f. 144-147¾. 1V-i">«K (KEr) ora-1 3450(lr), 1770, 1740, 1610. (MeOH) nrn ( £ ) 240(sh I29OO) # 2S4 (4030). àfiâl. Calcd. Para C3ih34014; C 59,04, H 5,43.

Encontrado: c 58/65^ H 5/46# aCetil-etoposido ,4: Preparação de 3,e-0- (Vixx, Ri=CH3> R2=h> R3=h< r =CH,C0)

Seguiu-se o procedimento descrito no exemplo 1, fase (b) utili2ando 3,!-0-acetil-4* -O-bensil-oxi-carbo-nil-etoposido (lo mg, Q,01 mmol) Para se obter o compos to era epígrafe (9 rng, ca» 10G%) com o aspecto de pô incolor. Purez® estimada de 85% (por CLER), p.f. 226-228°C. IV^max ^KBr) cm~1 3450(Ir), 1760, 1610, UV^max ^4e0H) nra (£-) 240(sh, 12610), 285 (3960), Anal. Calca. para c31H34°i4’ C 58,21, H 5,52.

Encontrado: C 58,22, H 5,42

Exemplo 5: Preparação de 2"-O-acetil-etoposido e de 3U--O-acetil-etoposido a Partir de uma mistura de 2 8 3,

Preparou-se uma solução agitada de uma mistura de 2 e 3_ (60 mg; 0,08 mmol) em etanol/acetona (4:1; 5 ml) e hidrogenou-se durante 1,5 horas na presença de catalisador constituido por Pd/C a 10% (30 mg) à pressão de 1 atmosfera e depois filtrou-se o catalisador. Goncentrou--se o filtrado para se obter uma mistura de regioisómeros (50 mg; ca. 100%), a qual foi separada em coluna de gel de sílica para se obter 2”~0-acetil-etoposido (10 mg; 20%); 3»-o-acetil-etoposido (4 mg; 8%) e uma mistura destes com postos (30 mg; 61%), com o aspecto de um pó incolor.

Exemplo 6; Preparação de 2“,3w-di-0-formil-etoposido (VIII; RlSCH3, R2=H# R3=R4=KCO~) a. Preparação de 2" .3"-di-Q-formato de 4»-Q-benzil-oxi--carbonil-etooosido A uma solução de 4r-CBS-etoposido (100 mg; 0,14 mmol) em piridina (0,7 ml) adicionou.-se gota, a gota uma mistura de ácido fórmico a 99% (1,4 ml) e de anidrido acético (0,56 ml) à temperatura de 0°C. Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 4 horas e depois diluíu-se com dicloro-metano e lavou-se com água. Secou-se a fase orgânica sobre Na^O^ e depois filtrou--se e concentrou-se o filtrado in vacuo para se obter um sólido incolor (122 mg) o qual foi purificado em coluna de gel de silica MeOHiCH^C 1- sl: 50) para se obter 2,5,3”--di-O-formato de 4'-O-bensil-oxi-carbonil-etoposido (91 mg; 84%), com o aspecto de um pó amorfo. ΡΗΚ-Ηϊ (CDC13)^ 8,04 & 7,S0 (1H cada, s, CHO), 7,36 (5H, s, PhCH2C0), 6,72 (1H, s, H-5), 6,53 (1H,. s, H-3), 6,23 (2H, s, 21,61~H), 5,97 (2H, s, 0CH20), 5,23 (2H, S, PhCH2c°)., , 5,4-4,0 (9H, m), 3,66 (6H, s, 3*,5,-OCH3), 3,6-2,6 (6H, m), 1,35 (3H, d, J=5 Hz, 8M-CH3). b. Preparação de 2U.S^-di-O-formil-etooosldo

%

Preparou-se uma solução agitada do produto da fase Ça) (71 mg; 0,009 mmol) em etanol/acetona (4:1; 2,5 ml) e hidrogenou-se durante 1,5 horas na presença de catalisador constituído por Pd/C a 10% (50 mg) à pressão de 1 atmosfera. Filtrou-se o catalisador e con centrou-se o filtrado in vacuo para se obter o composto em epígrafe com o aspecto de um pó incolor (59 mg; ca. 100%). Pureza estimada de 80% por CLER, P.f. 278-2SO°C. IV ) (KBr) cm"1 3400, 1760, 1740, 1610 ma UVJL ,r (MeOH) nm (£· ) 236 Çsh, 14100), 285 (4,230) ΓΠ3,.#ν ΚΜΝ^Η (CDC13) £ 8,04 e 7,83 (1H cada, s, CHO) , 6,72 (1H,s,H-5) , 6,53 (1H, s, H-8), 6,23 (2H, s, 2',6r-H), 5,98 (2H, s, 0CH2Q), 5,6-4,1 (9H, m), 3,76 (6H, s, 3',5'--00H3), 3,7-2,6 (6H, m), 1,35 (3H, d, J=5 Hz, 8"-CHg).

Anal Calcd para C31H3?015: C 57,26, H 5,00.

Encontrado: C 57,09, H 5,00

Exemplo 7: Preparação àe 2“-O-benzoato, 3"-benzoato, e 2“,3H-di-O-benzoato ds 4'-benEil-oxi-carbonil--etoposido

Adicionou-se o cloreto de benzoilo (100 pl; 0,86 mmol) a uma solução de 4'-O-CBZ-etoposido (500 mg, 0,7 mmol) em piridina (5ml). Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 3 dias, diluiu-se com di-cloro-metano e depois lavou—se sucessivamente com água. com uma solução de HCl a 5% e novamente com água, Secou- -se a camada orgânica sobre filtrou-se e concen trou-se o filtrado in vacuo para se obter um óleo amarelo cla.ro, o qual continha três novos componentes (gel de sílica, CCL: Rf = 0,50; 0,38 e 0,21; dicloro-metano/meta nol, 100*1), Separou-se a mistura por cromatografia em coluna de gel de sílica (40% de hexano/acetona) para se obter 2“ ,3t6-di-0-benzoato 7_ (Rf = 0,50; 30 mg; 5%), 3'*--0-benzoato (5 (Rf = 0,38; 227 rag; 40%), 2“-O-benzoato 5_ (Rf = 0,21; 70 mg; 12%) e recuperou-se o composto 4*--CBS-etoposido 1 (215 mg; 43%)# 2"-0-benaoato de 41benzil-oxi-carbonil-etoposido (5) IV») w (KBr) cnT1 3400(lr), 1700, 1720, 1600 wax υνλ, „ (í-IeOH) nm {f.) 281 (4,050) Πίδ'ν RIÍM-^H (CDC13) & 7,3-7,9 (10H, m, 2x0^, 5,17 (1H, t, J-8 Hz, 2“-HO, 5,01 (1H, d, J=8 Hz, 1"-H), 4,77 (1H, g, J=5 Hz, 7"-H), 3,2-3,8 (1H, m, 3U-H), 2,75 ÇlH, lr, 3"-OH), 1,31 (3H, d, J=5 Hz, 7S,-CH3) .

Anal Calcd para C44H420i6: C 63*92' H 5,12.

Encontrado: C 63,80, H 5,17, 3,! -0-benzoato de 41-O-bensil-oxi-carbonil-etooosi rin (6_i IV -s) maX (KEr) cm"1 350Q(lr), 1770, 1600

TjV\maX C:'3e0H> nm ( g-) 225 (sh, 30,390), 281 (4,300) ΗΜΗ^Η (CDG13)5 7,4-δ,Ο (10H, m, 2xCgH5, 5,34 (1H, t, j*9 Hz, 3 “ -H, 4,74 (1H, â, J=8 Hz, 1"-K), 4,68 (1H, q, J=5 Hz, 7"-H), 3,60 (1H, m, 2”-H), 1,28 (3H, d, J=5 Hz, 7"-CH3).

Anal Calcd para C44H42°1õ: C 62,55, H 5,25.

Encontrado: C 62,73, H 5,29. 2n13 ~dí—O—benzoato de 4 * —O—benzil—oxi-carbonll—etoposído

iXL IV ^ „ (KBr) cm”1 1770, 1730, 1600 ulcL/v WXmax C^eOH) nm (í) 227 (sh, 40,270), 282 (4,550) Rí'IM-1H (CDC13)^ 7,3-7,9 (10H, m, 2:cCgH5) , 5,55 (1H, t, J=8 Hz, 3"-H), 5,32 (1H, t, J=8 Hz, 2“-H, 4,93 (1H, d, J=8 Hz, Γ*-Η), 4,50 (1H, g, 7t5-H), 1,31 (3H, d, J=5 Hz, 7“ -CHn ) ,

Anal Calcd Para ^53/^46^175 0 65,80, H 4,55,

Encontrado: C 65,28, H 4,98.

Exemplo 8: Preparação de 2"-O-benzoil-etoposido (VIII, R-^CHg, R2=H, R3=PhC0-, R4 =H)

Prepa^ou-se uma solução agitada d.e 2"-O-benzoato cie 4' -benzil-oxi-carbonil-etoposido (54 mg; 0,07 mmol) em etanol/acetona (2:1? 3 ml) e hidrogenou-se durante 2 horas na presença de um catalisador constituído paládio--em-carvao a 10% (50 mg) à pressão de 1 atmosfera. Filtrou--se o catalisador e concentrou-se o filtrado pa.ra se obter o composto em epígrafe (40 mg; 88%, p6 incolor)» Pureza estimada de 95% por CLER. P. ·*· * 289-292°C. IV 0 max (KBr> cm~ 1 3450, 1760, 1730 uv λ m-x (iíeOH) nm ( £ ) 283 (4 #470) RI-IN- 3‘h (CDCl^) s 7,4-7,8 (5H í m, CQCH-i 6 5*' 5,07 (1H, dd, J=7, 7 e 9,2 Hz, 2 ** "H) , 4 ,89 (1H, d, J= 7#7 Hz, Γ’-Η) 9 * co o ÍIH, g, Je5, 1 Hz, 7 " -H) / 4.23 (1H , dd, J =4,8 e 10,3 Hz, 6"-Heq), 3,98 (1H, dt, J =3 e 9,2 Hz , 318 -K)/ 3 ,64 (1H, t, J=10,3 Hz , 6"-Hax), 3 / 47 (ih. t. J=9, 2 Kz , 4 " -H ) 3,40 ClH, dt, J=4 ,8 e 10 Hz, 5 “ —H) 9 '9 9 74 (1H, d, J= ô f D Hz, 3“=0H), 1,41 (3H, d, J=5 ,1 Hs, 7t: -CH3 ). Anal Calcd para C36H36° 14* H 2° * c 60, 84, H 5 ^ XX e

Encontrado: C 61,10, H 5,40.

Exemplo 9: Preparação de 3“-0-benzoil-etor>osido (VIU, r =CH3, R?=H, R3=H, R4=PhC0)

De acordo com o procedimento do exemplo 8, hi-drogenou-se 34 mg (0,04 mmol) de 311 -Q-benzoato de 41 --O-benzil-cxi-carbonil-etoposido para se obter o compojs to em epígrafe (27 mg; 95%) no estado sólido e incolor, ° qual foi purificado por cromatografia em coluna para. obter cristais incolores. Pureza estimada de 95% por P.f. 188-191°C, IV (KBr) cm”1 3400 (lr), 1730. ΙϊΙδΧ HVX (1-ieOH) nm (£) 223 (35,900), 280 (4,030). Ι»3λ (CDC13) 6 7,4-7,8 (5H, m, CQPh), 5,38 (1H, t, J*9,2 Hz, 311 -H), 4,79 (1H, d, J=7,7 Hz, 1“-H), 4,72 rlH, q, J*5,l Hz, 7IE-H), 4,22 (1H, dd, J=5 Ã 10 Hz, 6H-Heq), 3,67 (1H, t lr, J=8 Hz, 2"-H), 3,61 (1K, t, J«10 Hz, 6“-Hax), 3,59 ClH, t, J=9,4 Hz, 4“-H), 3,47 ClH, m, 5“-H), 2,58 (1H, Ir, 2“-0K), 1,31 (3H, d, J=5,l Hz, 7"-CH3).

Anal Calcd para C3gH321*1^0: C 59,31, H 4,98. Encontrado: C 59,14-, H 5,10.

Exemplo 10; Preparação de 2",3"-G-di-benzoil-etoposido (VIII, Rj_=CH3# R2=H, R3=R4=PhCO-)

Preparou-se uma solução agitada de 2“,3"-di-0--benzoato de 41-O-bensil-oxi-carbonil-etoposido (130 mg; 0,14 mmol) em acetato de etilo/etanol/acetona (4:4:1 4,5 ml) e hidrogenou-se de acordo com o procedimento do exemplo 8 para se obter o composto em epígrafe (112 mg; ca, 100%) com o aspecto de um pó incolor. Pureza estimada de 90% por CLER. P,f, >295°C„ IV <0 (KBr) cm"1 1770, 1730.

lUçlX UV* (KeOH) nm ( ^.) 226 (sh, 24,200), 281, (3,470). 31317-½ (CDC13) è 7,3-8,0 (1QH, m, 23cCOC6H5), 5,67 (1H, t, J=9,5 Hz, 3n-H), 5,35 (1H, dd, J=8,l e 9,7 Hz, 2n-H), 498 (1H, d, J=8,1 Hz, Γ'-Η), 4,73 (1H, q, J=4,8 Hz, 7"-H), 4,28 C1H, dd, J=4,4 e 10,3 Hz, 6"-Heq), 3,69 (1H, t, J=9,5 Hz, 4“-H), 3,67 ClH, t, J=10 Hz, 6“-Hax) , 3,56 (1H, dt, J=9,5 e 10 Hz, 5" -H) , 1,33 f3H, cl, J=4,8 Kz, 7“-CH3),

Anal Calcd para C^H^qO^· K^O: C 63,39, H 5,20-

Encontrado: C 62,99, H 4,99

Exemplo XI

Seguiu-se o procedimento geral descrito no Exemplo 1 utilizando o composto 4*-CBZ-teniposido em ve de o composto 4*-CBS-etoposido para se obter o composto 2",3"-di-O-acetil-teniposido.

Exemplo 12

Repetiu-se o procedimento geral descrito nos exemplos 2-4 utilizando o composto 4'-CBS-teniposido em vez do composto 4*-CBZ-etoposido para se obter o composto 2"-O-acetil-teniposido e 3“-O-teniposido.

Exemplo 13

Repetiu-se o procedimento geral descrito no exemplo 6 utilizando o composto 41-CBS-teniposido em vez do composto 4'-CBS-etoposido para se obter o composto 2",3"-di-O-formil-teniposido.

Exemplo 14 ------------ -*»- -·

Repetiu-se o procedimento geral descrito nos exemplos 7-10 utilizando o composto 4 *-CBS-teniposido em vez do composto 4' -GBS-etoposidO/ para se obter 2’1 - -O-benzil-teniposido, 3"-O-bensoil-teniposido e 2,£,3"--di-O-benzoil-teniposido,

Claims

-35- REIVINDIC AÇÕES 1.- Processo para a preparaçao de compostos de fórmula geral

na qual R? representa um átomo de hidrogénio e R·^ represen ta um radical alquilo Cl-C10 , alceni lo C2~C10’ cicloalqui-lo , 2-furilo, 2-tienilo, arilo C^-C^ e aralquilo -36- C7-C14’ ou R1 e ^2 rePresentam» cada um, independentemente, um grupo alquilo C-^-C-^q; ou R^, .R2 e o átomo de carbono ao qual estão ligados representam um grupo ciclo-alquilo C^-Cg; um dos símbolos R^ e R^ representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo alcanoílo C^-Cç; ou benzoílo; ou R^ e R^ são iguais e representam um grupo alcanoílo C-^-C^ ou benzoílo; e R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo fosfato, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um 4'-desmetilepipo-dofilotoxina-glucosido protegido no grupo 4'-fenol de fórmula geral

CH. O

CH- com 0 ácido carboxílico desejado ou um seu equivalente de acilação e de se remover em seguida o grupo protector do radical fenol.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e 0 símbolo R^ representa um grupo metilo 2-tienilo ou fenilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R-, representa um grupo metilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compos tos de fórmula geral I na qual os símbolos R^ e R^ representam, cada um, um grupo alcanoílo Cj-caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual um dos símbolos R^ e R^ representa um ãtomo de hidrogénio e o outro representa um gru po alcanoílo C-^-C^ ou benzoílo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. - Processo de acordo com a reivindicação 4, para a prepa-raçao de compostos de fórmula geral 1 na qual o símbolo R2 representa um átomo de hidrogénio e o símbolo R^ representa um radical metilo ou 2-tienilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentenente substituídos.
7. - Processo de acordo com a reivindicação 6, para a prepa-raçao de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R^ representa um grupo metilo, os símbolos £ representam ambos

um grupo formilo e o símbolo representa um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
8.- Processo de acordo com a reivindicação 6, para a preparação de compostos de formula geral I na qual o símbolo R^ representa um grupo metilo, os símbolos R^ e representam ambos um grupo acetilo e o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a prepara ção de compostos de fórmula geral I na qual os símbolos R^ e R^ representam ambos um grupo benzoílo e o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
10.- Processo de acordo com a reivindicação 3, para a pre-paraçao de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, um dos símbolos R^ e R^ representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo alcanoílo C2-C5, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
11. Processo de acordo com a reivindicação 3, para a pre- ^39-

paraçao de compostos de fórmula geral I na qual o símbolo R^ representa um átomo de hidrogénio, um dos símbolos e R^ representa um átomo de hidrogénio e o outro representa um grupo benzoílo, caracterizado por se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
12.- Processo para a preparação de composiçoes farmacêuticas caracterizado por se incorporar, como ingrediente activo, uma quan tidade eficaz anti-tumor de um composto de fórmula geral I, quando preparado de acordo com as reivindicações anteriores, e um veículo farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 6 de Junho de 1990 O Agente Oficia! da Propriedade industrial