PT95177A - Processo para a preparacao de glicosidos de 4'-desmetil-epipodofilotoxina com actividade antitumoral e de composicoes farmaceuticas que os contem - Google Patents

Description

s % BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPAMY "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE GLICOSIDOS DE 41-DESMETIL--EPIPODOFILOTOXINA COM ACTIVIDADE ANTITUMORAL E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE OS CONTEM" 1. Campo da invengão

J A presente invenção refere-se a glicosidos de 4'-desme-tilepipodofilotoxina e à sua aplicação como agentes antitumo-rais e ainda a composições farmacêuticas que os contêm. 2. Antecedentes da invengão

Os glicosidos de 41-desmetilepipodofilotoxina de fórmula geral I são agentes antitumorais derivados de lenina natural, a podofilotoxina II.

J

2 / // ./ em que a: representa um átomo de hidrogénio e Rj um grupo metilo. b: representa um átomo de hidrogénio e R2 um grupo 2-tienilo. 0 método para a síntese destes compostos está descrito na patente de invenção norte americana 3 524 844 de Keller-Juslen et al. Entre os compostos os de fórmula geral I, o etoposido (Ia) e teniposido (Ib) têm-sido aceites como agentes clínicamente úteis contra uma diversidade de tumores incluindo o tumor do pulmão de células pequenas, tumores do ovário, tumores dos testículos, tumores da mama, tumores da bexiga, tumores do cérebro, leucemia não linfocítica e doença de Hodgkin.

Uns tantos homólogos análogos e derivados do etoposido e teniposido têm sido preparados e estudados devido â sua activida de antitumoral. Com algumas excepções, têm sido caracterizados pela presença de um radical D-glucose.

Três D-galactopiranosidos estão referidos em J. Med. Chem., (10), 936-40, 1971 e diversos L-glucopiranosidos estão descritos em chem. Lett. 799-802, 1987.

Análogos de etoposido em que um dos grupos hidroxilo de açúcar está substituído por um grupo amino ou alquilamino estão descritos nas patentes de invenção norte americana 4 547 567 e 4 716 221. •7 ^ .¾ Ο 4'-fosfato de etoposido, um profármaco solúvel em água, está descrito na patente de invenção japonesa Kokai 63-192793. 0 pedido de patente de invenção copendente e comumente re querido da série no 240 971 descreve e reivindica glucosidos de epipodofilotoxina em que.um ou ambos os grupos hidroxilo de açúcar estão substituídos por átomos de flúor.

Os glucosidos de 4'-desmetilepipodofilotoxina em que os grupos hidroxilo do-radical da glucose estão acilados e em que os grupos fenólicos estão protegidos, foram referidos como compostos intermédios para a preparação das 41-desmetilepipodofilotoxinas correspondentes, como compostos de fórmula geral It.

A patente de invenção canadiana nQ 956 939 descreve compostos de fórmula geral III

III na qual representa um grupo alquil R2 representa um gru po acetilo ou formilo; e R^ representa um grupo fenilo eventualmente substituído e em que os possíveis substituintes fenílicos mencionados não são exemplificados e são p-nitrofenilo e p-meto xifenilo. A patente de invenção norte americana nQ 4 564 675 descreve compostos de fórmula geral (IV)

na qual R representa um grupo de fórmula geral -C(0)CH2X, na qual X representa um átomo de halogéneo. 0 pedido de patente de invenção europeu 162 701 refere compostos de fórmula geral (V)

na qual e R2 , iguais ou diferentes, representam cada um, um grupo de fórmula geral --C(0)CHX2 ou -C(0)CX3 em que X representa um átomo de halogéneo. » A patente de invenção japonesa Kokai 58-225 096 (Derwent Abst. ne 84-0324268/06)e 58-219 196 (Derwent Abst. nõ 84-027495/05) descrevem compostos de fórmulas gerais (VI) e (VII), respectiva-mente.

em que A representa um grupo de fórmula geral -C02-CH2-C (H) mCX)n na qual X representa um átomo de halogéneo e m representa um ãto mo de halogéneo e m representa zero, 1 ou 2 e n representa 1, 2 ou 3, m+n representam 3 e Ac representa um grupo acilo.

0 pedido de patente de invenção europeu nQ 226 202 descreve um intermédio para a síntese de etoposido de fórmula geral (VIII)

J

(VIII) na qual A representa um grupo acetilo.

Os derivados de mono-hemissuccinato de etoposido apresen tam a fórmula geral IX e estão referidos em J. Pharm. Biomed. Anal., 5(1): 11-20, 1987.

OH αχ) ,-7- ,λ?λ$ % na qual um de e R2 representam um átomo âe hidrogénio e o ou tro um grupo -C0(CH2)2C02H. Estes compostos são úteis como um meio para a conjugação de etoposido com albumina de soro bovino.

Resumo da invenção

A presente invenção proporciona compostos com actividade antitumoral de fórmula geral X

na qual representa um grupo alquilo fenilo, furilo ou 2-tienilo; um dos símbolos R^ e R^ representam um gru po alcoxi ou aciloxi e o outro representa um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo alcoxi aciloxi C1-5 ou azido; ou um dos símbolos R4 e R5 representa um átomo de flúor e o outro representa um grupo azido;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo ΡΟ^Η2 Μ í e os seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico.

Breve descrição dos desenhos A síntese dos compostos da presente invenção está ilustrada nas figuras de I. á 6 em que o símbolo R representado na figu ra 2 equivale ao símbolo da fórmula geral X e R' representado na figura 6 equivale ao símbolo Rç. de fórmula geral X.

Descrição detalhada- da presente invenção 0 principal aspecto dos compostos da presente invenção é o radical glucose do etoposido estar substituído por altrose.

Como se pode ver na figura 1 a síntese processa-se por meio do composto 2,3-anidro-4,6-0-etilideno-o^-D-alopiranosido de benzilo que é preparado a partir de c<-D-glucopiranosido de benzilo ou dos correspondentes compostos de alquil , fe nilo, furilo ou 2-tienilo os quais são todos conhecidos ou se .podem preparar por métodos conhecidos, por formação de acetal seguida de tosilação e formação do epóxido 4^ mediante reacção com um alcõxido inferior de metal alcalino ou num dissolvente constituído por um alcanol inferior.

Os compostos de 1 a 7 da figura 1, podem-se considerar materiais iniciais. Os compostos da figura 2 são, ou abrangidos pelo âmbito da presente invenção, ou são novos intermédios para a preparação destes compostos. i 9- .¾ 0 composto inicial da síntese representativa dos compojs tos da presente invenção como se mostra nas figuras é um compos^ to conhecido, o^-D-glucopiranosido de benzilo cuja introdução de um radical etilideno se faz por meio de acetaldeído na presença de um catalisador ácido. A reacção realiza-se num dissoJL vente orgânico inerte, como por exemplo o cloreto de metilo, o cloreto de etileno, o acetonitrilo, o tetra-hidrofurano ou suas misturas. Catalisadores ácidos apropriados são o ácido clorídri co, o ácido sulfúrico, o ácido tolueno-sulfónico ou um ácido de Lewis como por exemplo o cloreto de zinco. A temperatura da reacção pode estar compreendida entre cerca de 10°C e cerca de 50°C, preferindo-se a temperatura ambiente durante um período entre cerca de 1 a 4 dias.

Pode efectuar-se a reacção de tosilação por meio da reacção com cloreto de p-tolueno-sulfonilo, num dissolvente or gânico anidro, na presença de uma base azotada para neutralizar o ácido clorídrico produzido. De preferência, conduz-se a reacção no seio da piridina a uma temperatura compreendida entre cerca de 20° e 40°C, de uma forma adequada à temperatura ambien te durante um período de cerca de 3 a 7 dias. 0 composto tosilado converte-se para o composto 4. por reacção com alcóxido de metal alcalino num alcanol inferior, apropriadamente em metóxido de sódio ou em metóxido de potássio ou etóxido de sódio ou etóxido de potássio em metanol ou em eta nol. Pode-se empregar uma reacção num dissolvente orgânico iner te como por exemplo um éster ou um éter. Alternativamente util_i za-se um excesso de alcanol. O período reaccional estará compre- -ιο

ί endido entre cerca de 16 e 30 horas a uma temperatura entre cer ca de 20° e 40°C. 0 núcleo do epóxido é aberto para formar um composto 2'--hidroxi mediante aquecimento num dissolvente orgânico inerte, apropriadamente num éter como por exemplo em tetra-hidrofurano ou dioxano a uma temperatura entre cerca de 60° e 120°C durante um período de cerca de 1 a 3 dias. A acilação para se formar um composto como o composto 6a efectua-se mediante aplicação de um agente de acilação, de preferência um anidrido acético na presença de uma base azotada. A base preferida é a piridina anidra, que é normalmente utiliza da em excesso de maneira a servir também como dissolvente. A tem peratura reaccional é compreendida entre cerca de 20° e 40°C, adequadamente a temperatura ambiente. O período reaccional situa-se entre cerca de 30 minutos e 3 horas.

Habitualmente, conduz-se a reacção de hidrogenolise com hidrogénio na presença de paládio com catalisador, apropriadamente na presença de paládio sobre carvão ou sulfato de bário. Habitualmente, utiliza-se um dissolvente misto compreendendo um alcanol inferior e um ácido carboxílico inferior. Prefere-se a utilização de metanol ou etanol conjuntamente com ácido acético. Embora se possa realizar a reacção sob pressão, de um modo geral ela realiza-se ã pressão atmosférica e a uma temperatura entre cerca de 20° e 40°C durante um período entre cerca de 1 e 3 dias. Os compostos designados por 7a, b e d na figura 1 foram preparados por este processo. 0 composto fluorado, 5b, preparou-se por tratamento de um intermédio _4 comum com um fluoreto de hidrogénio e metal alcalino, de acordo com o método descrito por Wright et al, J. Org. Chem., _34, 2632 (1969). Pode realizar-se a reacção na presença de um excesso molar de fluoreto de hidrogénio e potássio num dissolvente orgânico inerte com ponto de ebulição alto, ade quadamente num poliol orgânico cano por' exemplo ó etUeiO - glicol. 0 perío do reaccional está compreendido entre cerca de 1,5 e 3 horas a uma temperatura entre cerca de 175° e 300°C, de preferência durante um período entre cerca de 30 minutos a uma hora. 0 composto fluorado 5b é acetilado de acordo com o mét<3 do descrito anteriormente para a formação de 6b que em seguida é desbenzilado para formar a mistura de isómeros 7b, por hidro-genação como, por exemplo hidrogénio na presença de paládio sobre carvão. 0 composto 4_ converte-se na azida 5£ mediante reacção com uma azida de metal alcalino de preferência com uma azida de sódio, no seio de um dissolvente orgânico anidro inerte como, por exemplo a dimetilformamida, o dimetilsulfóxido ou o tetra-hidro-furano a uma temperatura entre cerca de 90° e 125°C durante um período de 1 a 3 dias.

Os compostos podem alterar-se, de acordo com o método descrito anteriormente para se formarem compostos 6c. f -12-

Verificou-se que a desbenzilação de 6c por hidrogenação não fornece um produto puro. Portanto utilizou-se o método de Hashimoto como descrito em Tetrahedron Letters, 28-3505 (1987) para preparar o 3-0-acetil-2-azido-2-desoxi-4,6-0-etilideno e |£-D-altropiranose 7c.

Neste processo, o composto benzilado faz-se reagir primeiramente com o excesso molar de N-homossuccinimida e óxido de propileno no seio de um dissolvente orgânico halogenado como por exemplo o tetracloreto de carbono ou o clorofórmio ou uma mistura destes dois durante um período entre cerca de 1 a 3 horas e uma temperatura entre cerca de 75° e 100°C. O produto resultante faz-se reagir em seguida com um excesso molar de cianeto mercúrico, no seio de um dissolvente orgânico oxigenado inerte, miscível com água, apropriadamente em acetona aquosa a uma temperatura compre endida entre cerca de 20° e 40°C durante um período entre cerca de 30 minutos e 2 horas. O composto 5d pode preparar-se por redução do composto _4, por exemplo com boro-hidreto de sódio ou hidreto de alumínio e lítio no seio de um dissolvente orgânico anidro como por exemplo o éter dietílico, dioxano ou o tetra-hidrofurano a uma temperatu ra entre cerca de 30° e 75°C durante uma a três horas. O produto acetilado, 6d, pode preparar-se por acetilação de 5d com anidrido acético e em seguida hidrogenar-se para formar o composto 7d, mediante a utilização dos processos descritos anteriormente. >13-

I

Todos os derivados de altrose de (2a - 7d), são isolados sob a forma de misturas dos f anómeros.

As epipodofilotoxinas da presente invenção preparam-se por condensação do derivado de altrose escolhido, de 7a a 7d pre parado como descrito anteriormente, com 4,-benziloxicarbonil-4'--desmetilepipodofilotoxina, composto jl· ou com um composto análogo em que o grupo fenol está protegido. A reacção de condensação realiza-se num dissolvente orgâ nico inerte, por exemplo em cloreto de raetileno ou em cloreto de etileno a uma temperatura inferior a 0°C e na presença de um catalisador como o eterato de etilo-trifluoreto de boro. 0 tempo da reacção pode estar compreendido entre cerca de 10 minutos e cerca de 5 horas, de preferência entre cerca de 30 minutos e 1,5 horas. A reacção com o eterato de etilo-trifluoreto de boro pode ser diluída por adição à mistura reaccional, de uma amina terciã ria, como por exemplo a piridina ou a trietilamina. A escolha dos grupos protectores de fenol não é particularmente restrita e pode incluir a formação de derivados de acilo, como por exemplo ésteres, assim como carbonatos, éteres, acetais, etc. Estes grupos protectores podem eliminar-se por meio de aplicação de métodos de desbloqueamento convencionais cuja escolha depende da nature za dos grupos protectores utilizados. Métodos habituais que podem mencionar-se incluem a hidrogenação, a hidrólise catalisada por um ácido ou por uma base e alcoolise na presença de um cata lisador metálico tal como por exemplo o zinco em pó ou o acetato de zinco.

No processo ilustrado na figura 2 o grupo protector fe nol é o grupo carbobenzoxi. Este é eliminado por hidrogenação utilizando-se os processos descritos anteriormente, de preferên cia a hidrogenação com hidrogénio e paládio sobre carvão.

Verificou-se que a glicosidade das misturas anomericas dos derivados de altrose de 7a a 7d fornecem predominantemente anõmeros ||. Esta grande estereosselectividade considera-se es_ tar associada com a interacção estérica 1,3-diaxial entre os grupos 3-acetoxi e 1-hidroxi, que impede a glicosidação com o isómero#, mas não impede com o isómero j£. A desacetilação do composto 10a com acetato de zinco, em etanol quente proporciona uma mistura de compostos iniciais, designadamente derivados 2' '-0-acetilo, 13^, derivados 3*'-0--acetilo, 12 e o composto 11a completamente desacetilado que po de separar-se por cromatografia sobre gel de sílica.

Os compostos 11b e lld têm preparação idêntica, com ace tato de zinco em alcanol, a partir de compostos de 10b a lOd. A redução catalítica dos compostos azido 10c e 11c, du rante um período perlongado e/ou em ácido acético converte o grupo 2'1-azido num grupo amino e proporciona compostos lOe, 4'--desmetil-4-0- (3-0-acetil-2-amino-2-desoxi-4,6-0-etilideno-j|-D--altropiranosil)-epipodofilotoxina e _14, 4 ' -desmetil-4-0-(2-ami no-2-desoxi-4,6-0-etilideno-^-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, respectivamente. Pode efectuar-se a hidrogenação com hidro génio e paládio sobre carvão, como citado anteriormente. -15- Ά

Os compostos 4'-fosforilados da presente invenção formam-se por reacção de um fenol desprotegido com um agente de fosforilação, como por exemplo o oxicloreto fosforoso ou o ácido pirofosfórico, de preferência o primeiro destes. A reacção com oxicloreto é idêntica a reacção de tosilação. Esta tem lugar num dissolvente orgânico inerte na presença de uma base nitrogenada que neutralizará o ácido produzido. Preferem-se as aminas terciárias, incluindo a piridina, aminas dialquil aromáticas e· ^ aminas trialquil aromáticas. A figura 3 ilustra a conversão do composto 11b para o-composto 15, o fosfato dissódico.

Conduz-se a reacção a uma temperatura entre cerca de 0o a 20°C durante um período entre cerca de 5 a 30 minutos. Pode isolar-se o ácido, se apropriado, mas prefere-se converter di-rectamente para o sal in situ mediante adição de uma base metá lica apropriada, um carbonato de metal alcalino, um carbonato de hidrogénio ou um hidróxido. O composto preferido ê o hidroge nocarbonato.

J

Os análogos 2" e/ou 3"-0-alquilo dos etoposidos, por exemplo os análogos metílicos, os compostos 22^, 23 e 24 prepa-ram-se como representado na figura 4.

Na primeira fase de síntese, o composto 5a o 4,6-0-eti^ lideno-0(-D-altropir anos ido de benzilo, i alquilado à temperatu ra ambiente, isto é entre cerca de 25° e 40°C num dissolvente polar como por exemplo o dimetil sulfóxido (DMSO) ou a dimetil-formamida (DMF), utilizando-se uma mistura de um hidróxido de metal alcalino como o hidróxido de sódio e com um iodeto de al-

-16 quilo como por exemplo o iodeto metílico. 0 tempo da reacção está compreendido entre 15 e 60 minutos. Pode utilizar-se um ligeiro excesso molar de hidróxido e iodeto, mas normalmente são suficientes quantidades equimolares.

Resulta, quando se utiliza iodeto de metilo, uma mistura de isõmeros, designadamente 2,3-di-O-metil 4,6-O-etilideno -D-altropiranosido de benzilo, composto 1£, 4,6-O-etilideno-O-me til-p^-D-altropiranosido de benzilo, composto 1_7? e 4,6-O-etili-deno-3-O-metil-^-D-altropiranosido de benzilo, composto ljS. Es^ tes podem separar-se e isolar-se por cromatografia, como descrito nos Exemplos.

Pode converter-se o composto 16_ para o composto 2j2, 4'--desmetil-4-Ο-(2,3-di-0-metil-4,6-O-etilideno-|9-D-altropirano-sil)-epipodofilotoxina mediante redução seguida de condensação com 41-desmetil-41-benziloxicarbonilepipodofilotoxina e uma segunda redução utilizando os processos descritos anteriormente, e ilustrados nos exemplos e representados na figura 4. 0 composto 4,-desmetil-4-0-(4,6-0-etilideno-2-0-metil-p--D-altropiranosil) epipodofilotoxina, composto 23, preparou-se como representado na figura 4, isto é por acetilação, redução, condensação, redução e reacção com acetato de zinco. Todos os processos descritos anteriormente estão ilustrados nos exemplos. O composto 2£ 4'-desmetil-4-O-(2-0-acetil-4,6-O-etilide no- 3-O-metil-^ -D-altropiranosil) -epipodofilotoxina) preparou-se a -17- f partir do composto 1J3, de acordo com uma série de reacções representadas na figura 4. As reacções são descritas anteriormen te e ilustradas nos exemplos. Estas são a acetilação, redução, condensação, redução e como fase última a reacção com acetato de zinco. A figura 5 representa a preparação de mais dois compostos, activos da presente invenção, designadamente 4'-desmetil-4-0-)3--azido-4,6-0-etilideno-2-fluoro-β-D-altropiranosil)-epipodofilo toxina e 4"-desmetil-4-0-(3-amino-4,6-0-etilideno-2-fluoro-β-D--altropiranosil)-epipodofilotOxiáa..

Preparam-se os compostos a partir de composto conhecido, 3-azido-2,3-didesoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro- 0(-D-altropiranose. Ver S. Castillon, et al., J. Org. Chem., 50., 4913 (1985). As reacções representam-se na figura e estão ilustrados nos exemplos. Estas são conduzidas geralmente como descrito anteriormente exce£ to na redução do composto 2Q para formar o composto 30.

Na formação do composto 3£, o catalisador utilizado na hidrogenação é óxido de platina em substituição do paládio sobre carvão. Habitualmente conduz-se a reacção à temperatura ambiente, isto é numa temperatura compreendida entre 20° e 45°C utilizando--se um excesso molar de hidrogénio num dissolvente ácido, como por exemplo o ácido acético com água.

Como se pode observar na figura e entender a partir dos exemplos, a redução do composto 28_ mediante a utilização de óxi do de platina como catalisador não produz apenas a redução do gru po azido mas também a eliminação do grupo carbobenzoxi. A figura 6 é análoga à sequência representada na figura 1 que representa a conversão do composto 4 da figura 1 nos com postos 5(a-d), 6(a-d) e 7(a-d) excepto na figura 6 em que o com posto 4_ é substituído pelo acetal benzílico 2,3-anidro-0(-mano-piranosido-4,6-0-cíclico preparado de acordo com o processo des crito por Robertson, G. J., et al., J. Chem. Soc.f 1193-1201 , 1935. Os compostos correspondentes de alquil(C^_^q), fenilo , furilo e 2-tienilo são conhecidos ou podem preparar-se por méto dos conhecidos.

As reacções da figura 6 realizam-se utilizando processos descritos relativamente às reacções da figura 1 excepto na reac-ção de metilação cujo processo é como descrito para a representa ção da figura 4. As reacções subsequentes, para formarem os pro dutos da presente invenção estão de acordo com os processos representados na figura 2 e descritos anteriormente.

Outros produtos da presente invenção preparam-se a partir dos compostos representados na figura 6 utilizando-se os prc> cessos descritos relativamente às figuras 2,3 e 4. Estes são ilustrados nos exemplos.

Preparam-se os compostos, como descritos anteriormente e isolam-se e purificam-se de acordo com qualquer dos processos conhecidos para esse fim, como por exemplo a extracção, precipi tação, cristalização e cromatografia que estão todos descritos nos exemplos simultaneamente com outros métodos.

Actividade Biológica

Os compostos representativos da presente invenção foram avaliados para determinação da sua actividade antitumoral sobre a leucemia P388 tresplantável murina. Inocularam-se murganhos femeas CDF^ com cinco semanas por via intraperitoneal com 0,4 ml de líquido ascítico diluído contendo 10 células de leucemia P388 linfocítica. Õs compostos de ensaio foram administrados por via intraperitonial em dose única no dia 1 e os animais foram observados durante 45 dias. Determinou-se o aumento em percentagem do tempo médio de sobrevivência (MST) dos animais tratados relativamente aos animais de controlo não tratados e referiu-se como T/C %.

Os compostos que exibiram valores T/C de 125% ou superiores consideraram-se como contendo actividade antitumoral significativa. 0 Quadro I apresenta os resultados da avaliação in vivo relativamente aos valores de T/C % máximos (acompanhados com a dose que produziu os efeitos máximos entre parenteses) e a dose mínima eficaz (MED) que indica a dose mínima cujo valor de T/C % é de 125 ou superior. -20-

Quadro 1: Actividade antitumoral sobre a leucemia P388

Composto %T/C Max. de MST (Dose, mg/Kg/dia) Med (mg/Kg/d: Etoposido 288 (120) 0/3 10a 170 (120) 30 10b 152 (60) 10 10c 150 (120) 30 lOd 135 (120) 120 11a 220 (30) 0,3 11b 181 (60) 3 11c 139 (120) 60 lld 145 (120) 30 12 190 (30) 0/3 13 160 (120) 10 14 176 (10) 0/3 15 185 (120) 30 22 160 (120) 10 23 170 (120) 30 24 180 (60) 1 29 133 (30) 30 30 152 (30) 30

Deste modo, a presente invenção proporciona um método para a inibição de tumores de mamíferos que consiste na adminis^ tração de uma dose inibidora de tumor eficaz de um composto de actividade antitumoral de forma geral XIX, a um hospedeiro portador de um tumor. Para esse fim, pode administrar-se o fãrmaco pelas vias convencionais incluindo, mas não se limitando às vias endovenosas, intramuscular, intratumoral, intraarterial, intra-linfática e oral. -21- .¾

Um outro aspecto da presente invenção proporciona compo sições farmacêuticas que contêm um composto de fórmula geral III e um veículo aceitável em farmácia. A composição antitumoral pode preparar-se e apresentar-se sob qualquer forma farmacêutica apropriada para a via de administração pretendida. Exemplos de£ tas composições incluem formas de administração oral sólidas, por exemplo comprimidos, cápsulas, pílulas, põs e grânulos, com posições líquidas da administração oral como as soluções, suspensões, xaropes ou elixires e preparações para administração parentérica como as -soluções, suspensões ou emulsões estéreis. Podem ainda preparar-se sob a forma de composições estéreis sõ lidas que se podem dissolver em água estéril, em solução de cloreto de sõdio fisiológica ou em algum outro meio injectável estéril imediatamente antes do uso.

Doses e posologias óptimas para um dado hospedeiro mamí fero podem ser facilmente determinadas por um técnico. Deve con siderar-se evidentemente que a dose real utilizada varia de acor do com a composição particular preparada, com o composto utiliza do, modo de aplicação e o sítio particular, o hospedeiro e a doença a tratar. Muitos dos factores que modificam a acção do fármaco e que são todos bem conhecidos pelos técnicos, têm que considerar a idade, o peso, o sexo, a dieta, o tempo de adminiss tração, a via de administração, a velocidade de expressão, a condição do doente, a associação de fãrmacos, as reacções de sensibilidade e a gravidade da doença.

Os exemplos que se seguem têm fins ilustrativos apenas e não devem ser construídos como limitando o âmbito da presente in venção o qual está definido apenas pelas reivindicações apensas a esta memória descritiva.

Preparação de materiais iniciais 4,6-0-etilideno-^-D-glucopiranosido de benzilo (2) A uma suspensão de 22 g (0,0815 mol) de^-D-glucopirano sido de benzilo (1) e (20 ml) de acetaldeído em (250 ml) de cio reto de metileno anidro, adicionaram-se 2 gotas de ácido sulfú-rico concentrado e agitou-se a mistura vigorosamente ã temperatura ambiente durante 3 dias. Lavou-se a mistura reaccional sucessivamente com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, água e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Após eliminação do dissolvente, sub meteu-se o resíduo oleoso a cromatografia sobre uma coluna de gel de sílica (Wako gel C200 - 250 g). Eluiu-se a coluna com clorofórmio e em seguida com clorofórmio-metanol (50:1 - 2:1). Recolheram-se as fracções que continham o produto desejado e evaporou-se à secura para se obter um resíduo oleoso que se tri turou com éter isopropílico para se obterem 19,22 g (80% de ren dimento) do composto em título (2) . P.F. 110°-118°C. (KBr) cm"1 1173, 1160, 1150, 1127. 1H RMN (CDC13)£1,37 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,72 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH-j) , 4,98 (1H, d, J=4,03 Hz, H-l).

Anal Calcd para ci5H20°6: C 60,80, H 6,80 Determinado: C 60,90, H 6,92. ,r23-2,3-bis-(Q-p-toluenosulfonil)-4,6-Q-etilideno-o(-D-qlucopirano-sido de benzilo {3) A uma solução de 29 g (0,1 ml) de 2 e 24,4 g (0,2 mol) de 4-dimetilaminopiridina em (300 ml) de piridina anidra adicionaram -se 76 g (0,4 mol) de cloreto de p-toluenossulfonilo e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 3 dias. Adicionou-se à mistura uma quantidade adicional de 38 g (0,2 mol) de cloreto de p-toluenossulfonilo e agitou-se de novo a mistura durante 4 dias. Eliminou-se a maioria do dissolvente sob pressão reduzida. Verteu-se o resíduo sobre 1 litro de água e extraiu-se a mistura com 1 litro de cloreto de metileno. Lavou-se o extracto sucessivamen te com 500 ml de ácido sulfúrico 2N, água e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou--se o extracto aquoso sob vácuo e triturou-se o resíduo oleoso com 500 ml de éter dietílico para se obterem 11,9 g do composto em título (2) . Concentrou-se o filtrado e submeteu-se o concentrado a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Wako gel D-200, 300 g). Diluiu-se a coluna com clorofórmio e com uma mis tura de clorofórmio-metanol (50:1 - 10:1). Recolheram-se as frac ções que continham 2 e evaporaram-se à secura obtendo-se 7,7 g de 2 numa segunda colheita. O rendimento total de 2 foi de 19,6 g (32,5% rendimento) P.F: 140°-42°C. IV^ Ttiax (KBr) cm-1 1600, 1366, 1347, 1183, 1178. XH RMN (CDC13) S 0,98 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CB3), 2,40 (3H, s, CH3Ph), 2,44 (3H, s, CH3Ph), 4,39 (1H, dd, J=9,52 & 3,66 Hz, H—2), 4,40 (1H, q, J=5,13 Hz, Ch-CH_), 4,98 (1H, dd, J=9,89 & 9,52 Hz, H-3), 5,20 (1H, d, J=3,66 Hz, H-l).

Anal Calcd para C29H32°1qS2: C 57'60'‘ h 5/33/* S 10,60.

Obtido: C 57,52; H 5,31; S 10,60. 2,3-anidro-4,6-0-etilideno-o(-D-altropiranosido de benzilo (4.) A uma solução de 15,3 g de 3 (0,0253 mol) em (300 ml) de acetato de etilo adicionaram-se 20 ml (0,1 ml) de metóxido de só dio em metanol a 28% e agitou-se a mistura à temperatura ambien te durante 24 horas. Lavou-se a mistura reaccional com água e solução saturada de -cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Após evaporação até à secura, triturou-se o resíduo com éter-n-hexano para se obterem 4,31 g do composto em título (_4) . Evaporou-se o filtrado à secura e submeteu-se o resíduo a cromatografia numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 40 g). Eluiu-se a coluna com acetato de etilo-tolueno a (1:10) e as fracções apropriadas recolheram-se e evaporaram-se à secura obtendo-se 1,45 g de 4_. O rendimento total de 4_ foi de 5,76 g, seja (rendimento 82%). P.F. 132°-134°C. IV Vmax (KBr) cm 1 1170, 1153, 1119, 1055, 1034. XH RMN (CDC13) S 1,38 (3H, d, J= =5,13 Hz, CH-CH3), 3,37 (1H, d, J=4,40 Hz, H-3), 3,46 (1H, dd, J=4,40 & 1,10 Hz, H-2), 4,79 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH3), 5,04 (1H, d, J=l,10 Hz, H-l).

Anal Calcd para ci5Hig°5: c 64,74, H 6,52

Obtido: C 64,51, H 6,50.

4,6-0-etilideno-Qf-altropiranosido de benzilo (5a e 32a) A uma solução de 3,06 g de (4J (11 mmoles) em (100 ml) de dioxano adicionaram-se 100 ml (100 mmoles) de hidróxido de sódio IN e submeteu-se a mistura a refluxo sob agitação durante dois dias. Concentrou-se a mistura reaccional para o volume de 100 ml e extraiu-se o concentrado com 300 ml de clorofórmio. Lavou-se o extracto com água e solução saturada de cloreto de sódio e secou -se sobre sulfato de magnésio. Após eliminação do dissolvente, o resíduo oleoso foi submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 50 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-ace-tato de etilo (10:1 - 1:1). As fracções apropriadas eluiram-se com tolueno-acetato de etilo a (1:1) recolheram-se e evaporaram--se ã secura para se obter 2,53 g (rendimento 78%) do composto em título (5a). P.F. 1160-118°C. ItfV a (KBr) cm”1 3450, 3300, 1412, 1132. XH RMN (CDC13) 6 1,38 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,83 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,81 (1H, br.s, H-l).

Anal Calcd para C]_5H20^6! H 6,80.

Obtido: C 60,53, H 6,81.

Este composto ê preparado identicamente ao composto 32a a partir de 2,3-anidro-4,6-0-etilideno-õí-D-manopiranosido de ben zilo (composto 3JL da figura 6) . 2,3-di-Q-acetil-4,6-0-etilideno-0<r-D-altropiranosido de benzilo (6a)

Agitou-se à temperatura ambiente durante 1 hora uma mistura de 2,5 g (8,4 mmoles) de 5a e 250 mg de 4-dimetil-aminopiri. dina em (25 ml) de piridina anidro e (10 ml) de anidrido acético. Adicionaram-se à mistura reaccional 10 ral de metanol e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 30 minutos. Concentrou--se a mistura sob pressão reduzida e diluiu-se o resíduo obtido com 100 ml de acetato de etilo, lavou-se sucessivamente com ácido sulfúrico a 5%, água, solução saturada de carbonato de hidrogénio e sódio aquosa e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco até à secura e submeteu-se o resíduo a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 40 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (10:1) e recolheram-se as fracções apropriadas que se evaporaram até ã secura obtendo-se 2,55 g (rendimento 80%) do composto em título (6a). P.F. 94°-96°C. IVV v (KBr) cm-1 1746, 1733, 1240, 1221, 1136. ΧΗ RMN (CDC1-) $1,34 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CH3), 2,05 (3H, s, OCOCH3) , 2,07 (3H, s, 0C0CH3), 4,78 (1H, d, J=l,10 Hz, H-l), 4,79 (1H, q, J= =5,13 Hz, CH-CH3), 5,09 (1H, dd, J=2,93 & 1,10 Hz, H-2), 5,11 (1H, t, J=2,93 Hz, H-3).

Anal Calcd para C19H240g: C 59,99, H 6,36.

Obtido: C 60,03, H 6,43. 2,3-di-0-acetil-4,6-0-etilideno-altropiranose (7a e 34a)

Hidrogenou-se ã pressão atmosférica durante 2 dias uma mistura de 1/14 g (3 mmoles) de 6a e (1 g) de paládio sobre car vão a 10% em (50 ml) de ácido acético e (5 ml) de etanol. Reti-rou-se o catalisador por filtração e lavou-se com metanol. Lavou-se o filtrado que se evaporou ã secura e submeteu-se o resí^ duo a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60/ 40 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (10:1 --1:1). Recolheram-se as fracções eluídas com tolueno-acetato de etilo a (1:1) apropriadas e evaporaram-se à secura obtendo-se 800 mg (rendimento 92%) de 7a sob a forma de uma mistura de isó meros de oC e ê. P.F. 55°C. IVV (KBr) cm"1 1752, 1374, 1229. r max XH RMN (CDC13)6 5.04 (1H, d, J=6,60 Hz, H-l do isómeroo<), 5,16 (1H, dd, J=8,80 & 1,46 Hz, H-l do isómero j£) .

Anal Calcd para C^H^gOg: C 49,65, H 6,25.

Obtido: C 49,43, H 6,46.

Este composto é idêntico ao composto 34a da figura 6 que foi preparada da mesma maneira. 2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-of-D-altropiranosido de benzilo (5b)

Submeteu-se a aquecimento à temperatura de 200°C durante 45 minutos sob agitação uma mistura de 10 g de £ (0,036 mol) e 25 g (0,32 mol) de hidrogenofluoreto de potássio em (200 ml) de etilenoglicol. Após arrefecimento para a temperatura ambiente, ,^28- j¥· extraiu-se a mistura reaccional com 500 ml de clorofórmio, la-vou-se o extracto com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio e secou-se sobre sulfato de magnésio. Concentrou-se o extracto seco para o volume de 200 ml. Adicionaram-se ao concentrado 19 ml (0,18 mol) de acetaldeído-dimetilacetal e (200 mg) de ácido p-tolueno-sulfónico agitando-se a mistura à temperatura ambiente durante 20 horas. Lavou-se a mistura com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, com água e uma solu ção saturada de cloreto de sódio, sucessivamente e secou-se com sulfato de magnésio.- Após eliminação do dissolvente, submeteu--se o resíduo oleoso a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 130 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (10:1) e as fracções apropriadas foram recolhidas e evaporaram-se até è secura para se obterem 3 g (rendimento 28¾) do composto em título (5b) sob a forma de um óleo. Evaporaram--se as segundas fracções até à secura obtendo-se 1,03 g (rendi mento 9,6%) de 3-desoxi-4,6-O-etilideno-3-fluoro-0(-D-glucopira nosido de benzilo. IVV__„ (liq.) cm 1 3500, 1500, 1460, 1420, 1220, 1160, 1140. 1H RMN (CDC13) $ 1,38 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,22 (1H, dt, J=6,60 & 2,93 Hz, H-3), 4,67 (1H, ddd, J=43,97, 3,30 ® 1,10 Hz, H-2), 4,83 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,95 (1H, d, J=10,26 Hz, H-l).

Preparou-se o composto 32b de um modo idêntico a partir do composto 31. 3- 0-acetil-2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-Q^-D-altropiranosi-do de benzilo (6b) A uma mistura de 2,5 g (8,39 mmoles) de 5b e (250 mg) de 4- dimetilaminopiridina em (25 ml) de piridina anidra, adicionaram-se (10 ml) de anidrido acético e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 30 minutos. Adicionaram-se a esta mis tura 20 ml de metanol, agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos e evaporou-se à secura. Diluiu-se o resíduo com 150 ml de acetato de eti-lo, lavou-se com ácido sulfúrico a 5%, água, solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, água, solução saturada de cloreto de sódio, sucessivamente e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco até ã secura e submeteu-se a cromatografia, o resíduo oleoso, numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 40 g). Eluiu-se a coluna com tolue no-acetato de etilo (20:1) e recolheram-se as fracções apropriadas que se evaporaram à secura, obtendo-se 2,57 g (rendimento 90%) do composto em título 6b sob a forma de um óleo. IVV (liq.) — max cm"1 1750, 1500, 1410, 1380. 2Η RMN (CDC13) è 1,35 (3H, d, J= =5,13 Hz, CH-CHLj) , 2,05 (3H, s, OCOCH3) , 4,75 (1H, ddd, J=43,23, 3,30 & 1,10 Hz, H-2), 4,80 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,94 (1H, d, J=10,99 Hz, H-l), 5,27 (1H, dt, J=6,23 & 3,30 Hz, H-3). 0 composto 3-fluor correspondente preparou-se de um modo idêntico a partir do composto 32b. -30-

3-0-acetil-2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-ofe |?-D-altropiranó-se (7b)

Hidrogenou-se à temperatura ambiente durante 24 horas e à pressão atmosférica uma mistura de 2,5 g de 6b (7,35 mmoles) e (2,5 g) de paládio sobre carvão a 10% em (50 ml) de ácido acético. Retirou-se o catalisador por filtração e lavou-se com álcool metílico e evaporaram-se à secura o filtrado e os líquidos de la vagem. Dissolveu-se o resíduo em 200 ml de clorofórmio e lavou--se a solução com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, água, solução saturada de cloreto de sódio, sucessivamen te e secou-se com sulfato de magnésio. Após eliminação do dissol^ vente, submeteu-se o resíduo oleoso a cromatografia numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 60 g). Eluiu-se a coluna com clorofórmio e mistura de clorofórmio-metanol a (50:1). As primejL ras fracções que eluiram com a mistura de clorofórmio-metanol fo ram recolhidas e evaporadas à secura fornecendo 800 mg (rendimen to 32%) do material inicial recuperado (6b) sob a forma de um óleo. Recolheram-se as segundas fracções e evaporaram-se à secura obtendo-se 910 mg (rendimento 49,5%) do composto em título (7b) sob a forma de um óleo. IVV„_„ (liq.) cm”1 3450, 1750, 1420, 1380. 1H RMN (CDC13) 8 1,33 St 1,34 (cada 3H, d, J=5,13 Hz, CHCH3), 2,15 (6H, s, OCOCH3), 4,75 e 4,79 (cada 1H, q, J= = 5,13 Hz, CH-CH3), 4,69 (1H, ddd, J=43,2, 3,30 & 1,10 Hz, H-2,

0<) , 4,57 (1H, ddd, J=45,43, dd, J=10,63 & 6,23 Hz, H-l,o(), 4,99 (1H, dd, J=20,52 & 11,73 Hz, H-l, ^), 5,38 (lH,dd, J=5,50 & 3,30 Hz, H-3,o(), 5,51 (1H, dd, J=7,33 & 3,30 Hz, H-3, fe). 31 0 composto correspondente, 34b, preparou-se de um modo idêntico a partir do composto 3-flúor da preparação prévia. 2-azido-2-desoxi-4,6-0-etilideno-oé-D-altropiranosido de benzilo (5c) .

Submeteu-se a aquecimento à temperatura de 100°C durante 2 dias sob agitação uma mistura de 11,12 g de 4 (0,04 mol) e 26 g de azida de sódio (0,4 mol) em 200 ml de dimetilformamida anidra. Concentrou-se a mistura reaccional para 50 ml eextraiu--se o concentrado com 800 ml de clorofórmio. Lavou-se o extracto e secou-se com sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto ã secura e o resíduo oleoso obtido deste modo submeteu-se a cromato grafia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 130 g). Eluiu -se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (20:1). Recolheram--se as fracçÕes apropriadas e evaporaram-se à secura obtendo-se 10 g (rendimento 78%) do produto 5c impuro, que se utilizou na fase de acetilação seguinte sem outra purificação. iW (liq.) cm”1 2100.

Preparou-se de um modo similar o composto 32c a partir do composto 31. 3-Q-acetil-2-azidQ-2-desoxi~4-6-0-etilideno-0£-D-altropiranosido de ben-zilo (6c) A uma solução de 10 g (0,03 mol) de í>c impuro em (100 ml) de piridina anidra, contendo (1 g) de 4-dimetilaminopiridina, -32 / >7 X, g? adicionaram-se (50 ml) de anidrido acético e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 30 minutos. Sob arrefecimen to adicionaram-se gota a gota (50 ml) de metanol, agitou-se a mistura ã temperatura ambiente durante 30 minutos, evaporando--se até ã secura. Extraiu-se o resíduo com 500 ml de acetato de etilo e lavou-se o extracto sucessivamente com ácido sulfúrico a 5%, água e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se com sulfato de magnésio. Apôs eliminação do dissolvente subme-teu-se o resíduo oleoso a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 100 g). Eluiu-se a coluna com tolueno--acetato de etilo (50:1 - 10:1). Recolheram-se as fracções que continham 6c e submeteu-se repetidamente a cromatografia (4 vezes) numa coluna de gel de sílica que se eluiu com o mesmo dissolvente. Recolheram-se as primeiras fracções e evaporaram--se à secura para se obterem 2,16 g (rendimento 19%) do deriva do de glucose que se cristalizou por repouso. P.F. 76°-80°C. IVV (KBr) cm"1 2106, 1747. max

Anal Calcd para C^yH^N^Og: C 56,51, H 5,30, N 11,63

Obtido: C 56,21, H 5,83, N 11,65.

Recolheram-se de um modo idêntico as segundas fracções que se evaporaram à secura para se obterem 7,35 g (rendimento 65%) do derivado de altrose 6c que cristalizou de n-hexano. P.F. 56°-57°C. IVVmax (KBr) cm"1 2109, 1736. ΧΗ RMN (CDC13) 6 1,35 (3H, d, J=5,1 Hz, 8-H), 2,03 (3H, s, 0C0CH3), 3,55 (1H, t, J=10,3 Hz, 6-Hax) , 3,77 (1H, dd, J=2,9 &- 9,5 Hz, 4-H) , 4,05 (1H, dd, J=Q, 7 & 2,9 Hz, 2-H) , 4,11 (1H, dd, J=5,l Sc, 10,3 Hz, 6-Heq) , 4,20 (1H, ddd, J=5,5, 9,9 &. 10,3 Hz, 5-H) , 4,46 & 4,74 V,». -33- (2H, cada d, CH_2Ph) , 4,78 (1H, q, J=5,l Hz, 7-H), 4,83 (1H, brs, 1-H), 5,07 (1H, t, J=2,9 Hz, 3-H).

Anal Calcd para C17H19N306: C 56,51, H 5,30, N 11,63. Obtido: C 56,12, H 5,81, N 11,65. O composto 3-azido correspondente preparou-se de um modo idêntico a partir do composto 32c. 3-0-acetil-2-azido-2-desoxi-4,6-0-etilideno-jE» e^?-d-altropira-nose (7c)

Submeteu-se a refluxo durante 1,5 horas uma mistura de 1,27 g de (6c) (3,5 mmoles), 1,88 g (10,6 mmoles) de N-bromossuci nimida e (7 ml) de óxido de propileno em (30 ml) de tetracloreto de carbono e 30 ml de clorofórmio. Evaporou-se a mistura reaccio-nal à secura e dissolveu-se o resíduo em 40 ml de acetona. A esta solução, adicionaram-se uma solução de 1,76 g (7,6 mmoles) de ciane to de mercúrio em (20 ml) de água e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora e concentrou-se para 20 ml. Extraí-se o concentrado com 100 ml de clorofórmio e lavou-se com água e solu ção saturada de cloreto de sódio, secando-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco até à secura e submeteu-se a cromatogra fia, o resíduo oleoso obtido numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 50 g). Eluíu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo (10:1--2:1), sucessivamente. Eluíram-se as fracções apropriadas ccm tolueno--acetato de etilo a (2:1), recolheram-se e evaporaram-se à secu- ra obtendo-se 710 mg (rendimento 67,5%) de 7c sob a forma de um óleo. IV>J (Neat) cm-1 3300-3500, 2110, 1410, 1220 , 1090, 1070. RMN. Não se observou na ressonância magnética nu clear protónica qualquer pico devido aos protões de benzilo. 0 composto 3-azido correspondente, composto 34c, preparou-se de um modo idêntico a partir do composto 3-azido da prepa ração prévia. 2-desoxi-4,6-0-etilideno-of- D-altropiranosido de benzilo (5d) A uma suspensão homogénea de 5 g (0,132 raol) de hidreto de alumínio e lítio em (200 ml) de éter dietílico anidro, adicio naram-se gota à gota ã temperatura de refluxo, uma solução de 3,17 g de £ (11,4 mmoles) em 200 ml de éter dietílico anidro e submeteu-se a mistura a refluxo durante 1,5 horas arrefecendo-se depois para a temperatura de 0°C. Adicionaram-se à mistura reac cional gota a gota, 50 ml de acetato de etilo, água e 150 ml de ácido sulfúrico 2N sucessivamente. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com água, solução saturada de cloreto de sódio e secou--se com sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco até ã secura e o resíduo oleoso submeteu-se a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 80 g). Eluíu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (2:1). As fracções apropriadas contro laram-se por cromatografia em camada fina, recolheram-se e evapo raram-se à secura obtendo-se 3,13 g (rendimento 98%) de 5d. P. F. -35- / >* IV^max (KBr) cm"1 3550, 1165, 1149, 1125, 1100, 1056, 1034 , 1026. 1H RMN (CDC13) è 1,39 (3H, d, J=5,l Hz, H-8) , 4,81 (1H, q, J=5,1 Hz, H-7), 4,95 (1H, d, J=3,8 H, H-l).

Preparou-se de um modo idêntico o composto 32d a partir do composto 31. 3-0-acetil-2-desoxi-4,6-0-etilideno- #-D-al tropir anos ido de ben-zilo (6d)

Agitou-se ã temperatura ambiente durante 1 hora uma solu ção de 3 g (0,0107 mol) de 5d e (0,3 g) de 4-N-N-dimetilaminopi. ridina em (60 ml) de piridina e (30 ml) de anidrido acético. Adi cionaram-se gota a gota, à solução reaccional 60 ml de metanol e evaporou-se a mistura à secura. Extraíu-se o resíduo com 200 ml de acetato de etilo, lavou-se sucessivamente com ácido sulfúrico 2N, água, solução saturada de cloreto de sódio e secou-se com suJL fato de magnésio. Após eliminação do dissolvente, submeteu-se o resíduo oleoso em uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 100 g). Eluíu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo (10:1-5:1). sucessivamente. Recolheram-se as fracções apro priadas e evaporou-se à secura obtendo-se 2,65 g (rendimento 77%) de 6d sob a forma de um óleo. 1H RMN (CDC13) £ 1,35 (3H, d, J=5,1 Hz, 8-H), 1,96 (1H, ddd, J=3,0, 4,3 & 15,4 Hz, 2-Hax) , 2,04 (3H, s, OCOCH3), 2,36 (1H, ddd, J=0,9, 3,0 & 15,4 Hz, 2-Heq), 3,49 (1H, dd, J=3,0 & 9,8 Hz, 4-H), 3,50 (1H, t, J=10,3 Hz, 6-Hax) 4,09 (1H, dd, J=5,1 & 10,3 Hz, 6-Heq), 4,24 (1H, ddd, J-5,1, 9,8 & 10,3 Hz, 5-H), 4,42 & 4,73 (2H, cada, d, CH2Ph), 4,77 (1H, q, 9 -36-/ J=5,l Hz, 7-H), 4,90 (1H, d, J=4,3 Hz, 1-H) . O composto 2-0-acetil-3-desoxi correspondente é preparado de um modo idêntico a partir do composto 32d. 3-0-acetil-2-desoxi-4,6-0-etilideno-^-^-D-altropiranose (7d)

Hidrogenou-se à pressão atmosférica durante 20 horas uma mistura de 2,47 g de 6d (7,67 mmoles) e 1 g de paládio sobre car vão a 10% em (50 ml)- de ácido acético e (10 ml) de etanol. Retirou-se o catalisador por filtração e lavou-se por duas vezes com 50 ml de metanol. O filtrado e os líquidos de lavagem reuniram--se e evaporaram-se ã secura. Submeteu-se o resíduo oleoso a uma cromatografia em uma coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 100 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (2:1). Con-trolaram-se as fracções apropriadas por cromatografia em camada fina, recolheram-se e evaporaram-se à secura, obtendo-se 1,32 g (rendimento 74%) de 7d sob a forma de um óleo que, de acordo com o espectro de RMN pretónica era constituída por uma mistura a 1:2 dos anómeros tC e p.

Preparou-se o composto 2-0-acetil-3-desoxi corresponden te, composto 34d de um modo idêntico, a partir do composto da preparação prévia. '-37- .¾

Exemplo 1 4 *-benziloxicarbonil-41-desmetil-4-0-(2,3-di-0-acetil-4,6-0--etilideno-|H>-altropiranosil) -epipodofilotoxina (9a) A uma solução homogénea arrefecida de 226 mg (0,4 mmol) de 4,-benziloxicarbonil-4,-desmetilepipodofilotoxina, 8 e 232 mg (0,8 mmol), de ]_& em 20 ml de 1,2-dicloroetano anidro, adicio naram-se 0,15 ml (1,2 mmol) de trifluoreto eterato de boro a tem peratura de -18°C e -agitou-se a mistura a essa temperatura duran te 45 minutos. Adicionaram-se à mistura 0,3 ml de piridina anidra e agitou-se à temperatura de -18°C durante 10 minutos. Extraiu-se a mistura com 100 ml de clorofórmio e lavou-se o ex tracto com água, solução saturada aquosa de carbonato de hidro génio e sódio, água e solução saturada de cloreto de sódio, sucessivamente e secou-se com sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco e submeteu-se o resíduo a cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 30 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (2:1), e controlaram-se as fracções pretendidas, por cromatografia em camada fina (tolueno-acetato de etilo a 1:1), recolheram-se e evaporaram-se à secura, tritu rando-se com éter dietílico para se obterem 250 mg (rendimento 75%) do composto em título 9a. P.F. 135°-140°C. IW a (KBr) cm"1 1767, 1600, 1507, 1486, 1234, 1218, 1165, 1132, 1099, 1072, 1038. OV1 (MeOH) nm (£) 292 (3000). 90% de pureza por HPLC;

IUclX

[75% MeOH-tampão (pH 7)].

Anal Calcd para ^ ^0,84, H 5,22

Obtido: C 60,56, H 5,24.

Exemplo 2 4'-desmetil-4-0-(2,3-di-0-acetil-4,6-0-etilideno-jS-D-altropira-nosil)-epipodofilotoxina (10a)

Sob pressão de uma atmosfera e durante 1,5 horas hidroge nou-se uma mistura de 220 mg (0,265 mmol) de j)a e 100 mg de palá dio sobre carvão a 10% em 200 ml de etanol e 20 ml de acetona. Retirou-se o catalisador por filtração e lavou-se com acetona. O filtrado e os líquidos de lavagem reuniram-se e evaporaram-se à secura. Cromatografou-se o resíduo era coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 15 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (1:1) controlando-se as fracções apropriadas por croma-tografia em camada fina que se recolheram e evaporaram à secura. Triturou-se o resíduo com éter dietílico obtendo-se 155 mg (ren dimento 90%) do composto em título 10a. P.F. 205°-210°C (com de composição). IVV „ (KBr) cm"1 3400, 1762, 1610, 1507, 1485,

IIlcl2C 1373, 1230, 1190, 1113, 1098, 1072, 1039. (MeOH) nm (£) 235 (sh) (12,000), 285 (2,900). ΧΗ RMN (CDC13) 8 1,34 (3H, d, J=5,13 Hz, CH-CH3), 2,11 (3H, s, OAc), 2,13 (3H, s, OAc), 4,79 (1H, q, J=5,13 Hz, CH-CH3), 4,97 (1H, d, J=3,30 Hz, AG-H-4), 5,00 (1H, d, J=1,10 Hz, açucar-H-1), 5,02 (1H, dd, J=3,30 & 1,10 Hz, açucar-H-2), 5,29 (1H, t, J=3,30 Hz, açucar-H-3).

Anal Calcd para C33H3g°i5: c 58,93, H 5,40

Obtido: C 58,70, H 5,41. -39-

Desacetilagão de (10a); preparação de 41-desmetil-4-0-(4,6-0--etilideno-jl-D-altropiranosil) -epipodofilotoxina (11a) , 4*-des-metil-4-0-(3-0-acetil-4,6-0-etilideno-ê-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (12) e 41-desmetil-4-0-(2-0-acetil-4,6-0-etili-deno-ft-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (13)

Submeteu-se a refluxo durante 16 horas sob agitação e em seguida evaporou-se ã secura uma mistura de 1,1 g (1,6 mmol) de 10a e de 3,52 g (16 mmoles) de acetato de zinco hidratado em 50 ml de etanol e 50 ml de dioxano. Extraiu-se o resíduo com cio rofôrmio contendo 1 ml de ácido acético e lavou-se o extracto com solução aquosa de carbonato de hidrogénio e sódio, água, so lução saturada de cloreto de sódio e secou-se com sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto ã secura e submeteu-se o resí^ duo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 50 g) e eluiu-se a coluna com mistura de clorofórmio-metanol a (100:1).

Evaporaram-se as primeiras fracções até à secura obten do-se 142 mg (rendimento 9%) do material inicial (10a). Evaporaram-se as segundas fracções à secura obtendo-se 334 mg (rendimento 32%) do derivado 2-0-acetílico (13) . Evaporaram-se as terceiras fracções até à secura, purificaram-se por HPLC prepa rativa obtendo-se 77 mg (rendimento 8%) do derivado 3-0-acetíldL co (12) . As quartas fracções, que se recolheram e evaporaram à secura e depois se trituraram com éter dietílico forneceram 145 mg (rendimento 15%) do composto (11) totalmente desacetilado. -40-

Dados correspondentes a 11a P.F. ca. 280°C (grad. dec.). Pureza >95% por HPLC (55% MeOH-tampão? tempo de retenção: 4,0 min). IVV (KBr) cm-1 ΙΓΙα,Χ 1767, 1730, 1610, 1518, 1507, 1486, 1231, 1164, 1111. UVJmax (MeOH) nm (£) 238 (sh) (12,000), 285 (4,000).

Anal Calcd para ^29^2^3^^2^ C 58,29, H 5,57 Obtido: C 58,50, H 5,57.

Dados correspondentes a 12 P.F. 160-165°C (dec.). Pureza >90% por HPLC (55% MeOH--tampão pH 7; tempo de retenção? 7,7 min). IWmax (KBr) cm 1 3426, 1777, 1754, 1612, 1512, 1505, 1485, 1234, 1117, 1039. UVl v (MeOH) nm (£) 238 (sh) (12,000), 286 (3,900).

ItlâX

Anal Calcd para C31H340141/2H20: C 58,21, H 5,52 Obtido: C 58,13, H 5,76.

Dados correspondentes a 13 P.F. 180-190°C (dec.). Pureza >95% por HPLC (55% MeOH--tampão; tempo de retenção: 6,7 min). VJV (KBr) cm 1 3470,

IuqX 1777, 1754, 1613, 1513, 1505, 1484, 1230, 1160, 1090. UVAmax (MeOH) nm (£) 238 (sh) (12,000), 284 (3,900).

Anal Calcd para C3iH34°i4H20: C 57'40' H 5/59

Obtido: C 57,86, H 5,56 -41-

Exemplo 3 41-benziloxicarbonil-41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-4,6--0-etilideno-2-fluoro-|^-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (9b) A uma solução homogénea arrefecida de 830 mg (1,47 mmol) de 4'-benziloxicarbonil-4'-desmetilepipodofilotoxina (8_) e 550 mg de ]lo (2/2 mmoles) em (50 ml) de 1/2-dicloroetano anidro, adi cionaram-se 0,55 ml de trifluoro eterato de boro (4,4 mmoles) à temperatura de -18°C e agitou-se durante 1 hora a essa temperatu ra. Adicionou-se à mistura 1 ml de piridina e agitou-se esta du-rante 5 minutos, a temperatura de -18 C. Diluiu-se a mistura com 100 ml de clorofórmio, lavou-se com água e solução saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água e solução saturada de cio reto de sódio, sucessivamente, e secou-se com sulfato de magnésio. Concentrou-se o extracto seco até à secura e submeteu-se o resíduo a uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 30 g). Eluiu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (4:1). Recolheram-se as primeiras fracções e evaporaram-se ã se cura para se obterem 27 mg (rendimento 2,4%) do isómero do composto em título cuja estrutura se determinou pelo espectro da ressonância magnética nuclear a (400 MHz) como um produto menor. As segundas fracções recolhidas, evaporaram-se ã secura obtendo -se 959 mg (rendimento 85%) do composto pretendido (9b). P.F. ca. 145°C (grad. dec.). Pureza: 80% HPLC (80% MeOH-pH 7 tampão). IW_ (KBr) cm""1 1772, 1600, 1507, 1486. UVA^ (MeOH) nm (£) 290,5 (3,900).

Anal Calcd para C^H^gO^F: C 61,09, H 5,13. -42- -42- Obtido: C 60,86, H 5,13.

Prepararam-se de um modo idêntico os compostos (9c: e 2^) por glicosidação dos álcoois (7c. e 7d) com 8^ respectivamente. São preparados identicamente todos os compostos 3-fluoro correspondentes. 41-benziloxicarbonil-41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-azido-2-deso-xi-4,6-0-etilideno-p-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (9c) P.F. 120-130°C. Pureza: 85% por HPLC. IVtf (KBr) cm-1 ΠΙαΧ 2109, 1772, 1602, 1507, 1485. UVATnay (MeOH) nm (£) 291 (4100).

Anal Calcd para c39H39N3°i5: c 59,31, H 4,98, N 5,32. Obtido: C 59,28, H 5,02, N 5,33. 41-benziloxicarbonil-41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-^-D--altropiranosil)-epipodofilotoxina (9d) P.F. 150°C. Pureza: 80% por HPLC. v (KBr) cm"1:

lUCiX 1772, 1746, 1600, 1485. UVi (MeOH) nm (£) 291 (2700). ' max

Anal Calcd para c3iH4q°15H20: C H 5,52.

Obtido: C 61,25, H 5,31.

Prepararam-se identicamente os compostos 3-azido e 2-0--acetilo correspondentes a partir dos compostos iniciais apropriados .

Exemplo 4 4'-desmetil-4-0-(3-Q-acetil-2-desoxi-4,6-Q-etilideno-2-fluoro--^-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (10b)

Hidrogenou-se durante 1 hora sob uma pressão atmosférica uma mistura de 825 mg (1,077 mmol) de 9b e (100 mg) de paládio sobre carvão a 10% em (50 ml) de etanol e (50 ml) de acetona. Re tirou-se por filtração o catalisador e lavou-se com metanol. O filtrado e os líquidos de lavagem evaporaram-se à secura e sub-meteu-se o resíduo a uma cromatografia sobre uma coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 60 g) . Eluiu-se a coluna com tolueno--acetato de etilo a (3:1 - 2:1). Controlou-se a fracção pretendida por cromatografia em camada fina, recolheu-se e evaporou--se à secura, obtendo-se 620 mg (rendimento 91%) do composto em título (10b). P.F. 209-212°C. IVy (KBr) cm"1 1762, 1610, 1484.

ItlclX UVA (MeOH) nm (£) 235 (sh) (13,000), 284,5 (4,000).

*IuclX

Anal Calcd para C 58,86, H 5,26.

Obtido: C 58,67, H 5,21. A hidrogenolise similar dos compostos 9c e 9d forneceu os fenóis 4', 10c e lOd respectivamente.

Prepararam-se de um modo idêntico os compostos 3-fluoro correspondentes a partir dos compostos iniciais apropriados. 4’-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-azido-2-desoxi-4,6-0-etilideno--^-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (10c) P.F. 150-160°C. Pureza: 95% por HPLC. IVVmax (KBr) cm_1 3438, 2107, 1615, 1502. UV λ max (MeOH) nm (£) 238 (sh, 12,800), 285 (4,100).

Anal Calcd para tolueno: C 57,96, H 5,20, N 6,19.

Obtido: C 57,67, H 5,21, N 6,08. 41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-4,6-0-etilideno-p-D-altro-piranosil)-epipodofilotoxina (IQd) P.F. 185-188°C. Pureza: 95% por HPLC. IVVmax (KBr) cnf1 1759, 1610, 1484, 1230, 1217. UvAmax (MeOH) nm (£) 237 (sh, 12,000) , 285 (3,900) .

Anal Calcd para C 60,58, H 5,58

Obtido: C 60,58, H 5,60. A partir dos compostos iniciais apropriados preparam-se de um modo idêntico os correspondentes compostos 3-azido e 2-0--acetilo. -45- ,1

Cloridrato de 4,-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-amino-2-desoxi-4,6--O-etilideno-^ -D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (lOe)

Preparou-se este composto por hidrogenação de 9c sob con dições diferentes (solventes, período reaccional, etc.) a partir da redução de 9c e 10c.

Hidrogenou-se à temperatura ambiente durante 4 horas e sob uma pressão atmosférica uma mistura de 900 mg (1,1 mmol) de 9c e 500 mg de paládio sobre carvão a 10% numa mistura de 40 ml de ácido acético e de 8 ml de etanol. Removeu-se o catalisador por filtração, lavou-se duas vezes com 20 ml de metanol. Reuniram- se o filtrado e os líquidos de lavagem e evaporou-se a mistu ra à secura submetendo-se o resíduo sobre uma cromatografia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60. 20 g). Lavou-se a coluna com clorofórmio e em seguida, elulu-se com clorofórmio-metanol (25:1). Controlaram-se as fracções apropriadas por cromatografia em camada fina, recolheram-se e evaporaram-se ã secura e tri turou-se o resíduo obtido com éter dietllico para se recolherem 452 mg (rendimento 63%) dos compostos em título (35.) da amina li vre. P.F. 245°-250°C (dec.); IV^max (KBr) cm"1 1770, 1740, 1600, 1480, 1230, 1110, 1040; UV Λ (MeOH) nm (fc) 285 (4100), 292 max (4000) .

Suspenderam-se 308 mg da amina livre (0,5 mmol) em 5 ml de metanol e adicionou-se ã suspensão 1 ml (2,7 mmol) de clore to de hidrogénio em metanol a 10% de onde resultou uma solução límpida. Diluíu-se a solução com 100 ml de éter dietllico e re colheu-se o sódio resultante por filtração, lavou-se com éter dietllico obtendo-se 300 mg (rendimento 92%) do composto em tí -46 f

V tulo (lOe). P.F. ca 215°C (dec.)? IV* (KBr) cm"1 1750, 1610, max 1480, 1230, 1100, 1030; UV λ (MeOH) nm (£) 285 (3,500): pureza max 95% (por HPLC; 60% MeOH-tampão; 4,7 min); MS FAB(+), m/z 630(M+l)+; 1H RMN (400 MHz, D20) S 5,42 (1H, d, J=l,83 Hz, H-l), 3,66 (1H, m, H-2), 5,50 (1H, t, J^2,93 Hz, H-3), 5,00 (1H, q, J=5,13 Hz, H-7), 1,36 (1H, d, J=5,13 Hz, H-8), 2,20 (3H, s, OAc).

Exemplo 5 41-desmetil-4-0-(2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-p-D-altropi-ranosil)-epipodofilotoxina (11b)

Uma mistura de 520 mg de 10b (0,8 mmol) e de 530 mg (2,4 mmoles) de acetato de zinco desidratado em (100 ml) de metanol foi submetida a refluxo durante 16 horas com agitação depois do que se evaporou a mistura até à secura. Extraiu-se o resíduo com 100 ml de clorofórmio contendo 0,4 ml de ácido acético, lavou-se o extracto com água e solução saturada de cloreto de sódio e se cou-se com sulfato de magnésio. Após eliminação do dissolvente submeteu-se o resíduo a cromatografia numa coluna de gel de síl^ ca. Eluiu-se a coluna com clorofórmio-metanol a (100:1) e contro laram-se as fracções apropriadas por cromatografia em camada fi_ na, recolheram-se e evaporaram-se à secura. Triturou-se o resíduo com éter dietílico obtendo-se 468 mg (rendimento 79%) de 11b. P.F. 277-279°C (dec.). IV* v (KBr) cm"1 1764, 1610, 1484. UVA a (MeOH) nm (£) 235 (sh) (14,000), 284 (4,300).

Anal Calcd para C29H3i°i2F: C 5^,98, H 5,29

Obtido: C 58,98, H 5,30. V,

V -47

Também a desacetilação de 10c e lOd forneceu, respectiva-mente, 11c e lld.

Prepara-se o composto 3-fluoro correspondente, de um modo idêntico, a partir dos compostos iniciais apropriados. ) 41-Desmetil-4-Ο-(2-azido-2-desoxi-4,6-0-etilideno- jí-D-altropira-nosil)epipodofilotoxina (11c) P. F. 283-285°C. Pureza: 95% por HPLC. IVymax (KBr) ..cm' 3438, 2107, 1767, 1615, 1517. UV \ (MeOH) nm (£) 238 (sh,

ItlaX 12,000) , 286 (4,000) .

Anal Calcd para ^29^31^3^12 Obtido:

Et20: C 57,63; H 6,01; N 6,11. C 57,21; H 5,89; M 6,08.

41-Desmetil-4-Ο-(2-desoxi-4,6-O-etilideno-^ -D-altropiranosil)epi-dofilotoxina (lld) P. F. 288°-292°C. Pureza: 95% por HPLC. IVJ (KBr) cm"1: 3300, 1762, 1610, 1484. UVJ (MeOH) nm (£) 237 (sh ,

IuclX 12,000), 286 (4,000), 291 (3,900).

Anal Calcd para ^29^32^121 C H 5,63.

Obtido: C 60,76; H 5,76.

Os compostos 3-azido e o epímero 2-desoxi correspondentes preparam-se de um modo idêntico a partir dos compostos inicias apropriados.

Exemplo 6 41-desmetil-4-0-(2-amino-2-desoxi-4,6-0-etilideno--D-altropira-nosil)-epipodofilotoxina (14)

Uma mistura de 203 mg (0/33 mmol) de 11c e de (200 mg) de paládio sobre carvão a 10% em (15 ml) de ácido acético e (5 ml) de etanol, foi hidrogenada durante 4 horas sob uma pressão de uma atmosfera. Retirou-se o catalisador por filtração e lavou-se com 50 ml de metanol. Reuniram-se o filtrado e os líquidos de lavagem que se evaporaram à secura. Submeteu-se o resíduo a cromato grafia em coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 20 g) e eluíu--se a coluna com clorofórmio-metanol a (50:1-25:1), recolheram-se e evaporaram-se à secura, trituraram-se com éter dietílico para se obterem 98 mg (rendimento 50,5%) de _14 sob a forma de uma ami-na livre. P. P. 285°-288°C (com decomposição).

Pureza: 95% por HPLC. IV max (KBr) cm ^ 3380, 1765, 1610 , 1461, 1230, 1137, 1089, 1034. UV Xmax (MeOH) nm (£.) 238 (sh, 13,000) , 285 (4,200) .

Anal Calcd para C2gH33N012: C 59,28? H 5,66? N 2,38.

Obtido: C 59,10? H 5,87, N 2,24.

Dissolveram-se 60 mg (0,1 mmol) de amina livre em 4 ml de dioxano e adicionou-se à solução 0,1 ml (0,27 mmol) de cloreto de hidrogénio em metanol a 10% e concentrou-se a mistura para o -49- -49- / f volume de 2 ml numa temperatura inferior a 30°C. Liofilizou-se o concentrado para se obterem 62 mg (rendimento 100%) do clori-drato 14. IV max$ (KBr) cm-1 1770# 1610, 1507, 1458. UV max (MeOH) nm (€,) 238 (11,000), 285 (3,700).

Preparou-se o composto 3-amino-3-desoxi correspondente de um modo idêntico.

Exemplo 7 41-desmetil-4-0-(2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-J3-D-altropira-nosil)-epipodofilotoxina-4'-desoxi-4 *-fosfato-di-sódico (15) A uma solução homogénea arrefecida de 118 mg (0,2 mmol) de 11b e 0,52 ml (3 mmoles) de N,N-di-isopropil-etilamina em (10 ml) de acetonitrilo anidro, adicionou-se ã temperatura de 5°C, uma so lução de 122 mg, (0,8 mmol) de oxicloreto, fosforoso em (0,5 ml) de acetonitrilo anidro e agitou-se a mistura a essa temperatura du rante 10 minutos. Adicionou-se à mistura reaccional 1 ml de água e concentrou-se para um volume de 2 ml a uma temperatura inferior a 30°C. Dissolveu-se o concentrado em 10 ml de água contendo 300 mg de carbonato de hidrogénio e sódio e lavou-se a solução com 300 ml de éter dietllico. Introduziu-se a fase aquosa numa coluna preenchida com 50 ml de um cartridge PAK-C^g prep (Waters). Lavou-se a coluna com água e em seguida eluíu-se ccm metanol a 20% e metanol a 30%, sucessivamente. Eluíram-se as fracções pretendidas com metanol a 20%, recolheram-se e concentraram-se para o volume de 5 ml e liofi

lizaram-se para se obterem 50 mg de 15. Eluiram-se as fracções impuras com metanol a 20% e com metanol a 30% recolheram-se e con centraram-se para o volume de 10 ml e liofilizaram-se para se obterem 50 mg do produto impuro que se repurificou por HPLC preparativa obtendo-se 17 mg de 15. 0 rendimento total de 15 foi de 67 mg (rendimento 49%). P. F. 190°-195°C (dec.). Pureza: ^95% por HPLC. IV 0 v (KBr) cm-1 1772, 1600, 1506, 1486, 1235. uv Xmax (MeOH) 11111 (£) 289,5 (3,500).

Prepara-se de um modo idêntico o composto 3-flúor correspondente .

Exemplo 8 O-metilagão de 4,6-0-etilideno-ol-D-altropiranosido de benzilo de (5a); 2,3-di-0-metil-4,6-0-etilideno-2-0-metil-Q^-D-altrapirano-sido de benzilo, (16), 4,6-0-etilideno-2-0-metil-Q^-D-altropira-nosido de benzilo, (17) e 4,6-0-etilideno-3-0-metil- al-D-altropi-ranosido de benzilo, (18).

Adicionaram-se 360 mg (7,5 mmoles) de hidróxido de sódio a 50% em óleo a uma solução de 2,23 g (7,5 mmoles) de 4,6-0-eti-lideno-^-D-altropiranosido de benzilo (5a) em 15 ml de dimetil sulfóxido e agitou-se durante 30 minutos ã temperatura ambiente. Adicionaram-se à mistura 10 ml de iodeto de metilo e agitou-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Extraíu-se a mistura reaccional com 150 ml de clorofórmio, lavou-se com água e solu- ção saturada de cloreto de sódio sucessivamente e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou-se o extracto seco até ã secura e submeteu-se o resíduo oleoso a uma cromatografia numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 50 g). Eluíu-se a coluna com tolue no-acetato de etilo a (5:21-2:1). As primeiras fracções eluíram com tolueno-acetato de etilo a (5:1), depois recolheram-se e eva poraram-se à secura, para se obterem 920 mg (rendimento 38%) de 1£ . 1H RMN (CDCL3) & 3,40 e 3,55 (cada 3H, s, OCH3), 4,79 (1H, br-s, H-l). A segunda fracção eluíu com tolueno-acetato de etilo a (5:1), recolheu-se e evaporou-se ã secura para se obterem 250 mg (rendimento 10%) de 17· 1h RMN (CDCL3) é 3,42 (3H, s, CH3) , 4,89 (1H, br-s, H-l).

As terceiras fracções eluíram-se com tolueno-acetato de etilo a (2:1), recolheram-se e evaporaram-se à secura para se ob terem 780 mg (rendimento 33,5%) de 1£. RMN (CDCL3) & 3,55 (3H, s, OCH3), 4,71 (1H, br-s-H-1).

As fracções últimas eluíram-se com tolueno-acetato de eti lo a (2:1) recolheram-se e evaporaram-se à secura para se obterem 400 mg (rendimento 18%) do material inicial 5a.

Exemplo 9 2,3-di-0-metil-4,6-0-etilideno-D-altropiranose (19)

Submeteu-se a hidrogenação à temperatura ambiente durante “52- ,.Α .¾ 20 horas sob pressão atmosférica uma mistura de 920 mg (2,84 mmo les) de e 500 mg de paládio sobre carvão a 10% em 10 ml de ácido acético e 2 ml de etanol. Removeu-se o catalisador por filtração, lavou-se duas vezes com 20 ml de metanol, reuniram-se o filtrado e os líquidos de lavagem e evaporou-se a mistura à secura. Cromatografou-se o resíduo oleoso sobre uma coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 30 g). Eluíu-se a coluna com tolueno--acetato de etilo a (2:1) Recolheram-se as fracções pretendidas mediante o controlo com CCF e evaporaram-se ã secura para se obterem 650 mg (rendimento 98%) do composto em título 19_ sob a for ma de um óleo, consistindo numa mistura de anómeros oi β β , co mo evidenciados pelos espectros; de RMN respectivos (400 MHZ) , 1H RMN (CDCL3) 3 3,53 6 3,54 (cada 3H, s, 0CH3 do tf-anómero), 3,45 & 3,61 (cada 3H, s, 0CH3 do -=.anómero), 4,99 (1H, br-s, H-ltf') 5,00 (1H, br-s, H-l ^3).

Exemplo 10 3-0-acetil-4,6-0-etilideno-2-0-metil-D-altropiranose (20) A uma solução de 250 mg (0,08 mmol) de Γ7 com 25 mg de Ν,Ν-dimetilaminopiridina em 5 ml de piridina anidra adicionaram--se (2,5 ml) de anidrido acético e agitou-se a mistura à tempera tura ambiente durante 30 minutos. Adicionaram-se a esta mistura 5 ml de metanol e evaporou-se a solução à secura. Extraíu-se o resíduo com 50 ml de acetato de etilo, lavou-se com ácido sul-fúrico 2N, depores com água e soluças saturada de cloreto de sódio -53 * ι. -*jy& sucessivamente e secou-se sobre sulfato de magnésio. Evaporou--se o extracto à secura e cromatografou-se o resíduo oleoso numa coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 15 g). Eluíu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo a (5:1) e recolheram-se as fracções apropriadas, controlando-se por CCF e evaporaram-se à secura para se obterem 290 mg (rendimento >100%) do composto 3--0-acetilado sob a formade um óleo. RMN (CDCL3) & 2,03 (3H, s, OCOCH3), 3,48 (3H, s, OCH3), 4,84 (1H, br-s, H-l).

J

Uma mistura de 280 mg (0,795 rnrnol) do composto 3-0-acetil e 280 mg de paládio sobre carvão a,10% em 5 ml de ácido acético è 1 ml de etanol foi submetida a hidrogenação à temperatura ambiente durante 3 dias sob pressão atmosférica. Removeu-se o catalisador por filtração, lavou-se 2 vezes com 10 ml de metanol. Reuniram-se o filtrado e as soluções de lavagem e evaporaram-se â secura. Cro matografou-se o resíduo oleoso sobre uma coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 20 g). Eluíu-se a coluna com tolueno-acetato de etilo (5:1-2:1). Eluíram-se as fracções apropriadas com tolueno--acetato de etilo (5:1-2:1). Recolheram-se as fracções desejadas eluídas com tolueno-acetato de etiló (2:1) e evaporaram-se à secu ra para se obterem 160 mg (rendimento 77%) do composto em título (20) sob a forma de um óleo. O espectro de ressonância magnética nuclear protõnica (400 MHz) , demonstrou que o produto era conjs tituído por uma mistura dos anómeros o( e Ç> . XH RMN (CDC13) 6 4,95 (1H, d, J=l,3 Hz, H-l-H-leC), 5,09 (1H, br- -s, H-1^3), 5,33 (1H, t, J=3,3 Hz, H-3 ) , 5,47 (1H, t, 3,3 Hz, H-3tf). -54- >

Exemplo 11 2-Q-acetil-4,6-0-etilideno-3-0-metil-D-altropiranose (21)

Preparou-se o derivado 2-0-acetil (21) de um modo idêntico ao do processo descrito na preparação dos derivados 3-0-ace-txlicos (20) . Assim, a 0-acetilação de 1J3, 780 mg (2,5 mmoles) com anidrido acético forneceu 860 mg (rendimento 98%) de um inter médio benzilico, 2-0-acetil-altropiranosido de benzilo sob a forma de um óleo. RMN (CDCl^) & 2,09 (3H, s, OGOCH^)/ 3,57 (3H, s, OCH3), 4,71 (1H, Br-s, H-l), 5,18 (dd, J=3,00 & 0,85 Hz, H-2). 0 composto 2-0-acetílico obtido anteriormente, 850 mg, (2,4 mmoles) foi submetido a hidrogenação na presença de (500 mg) de paládio sobre carvão a 10% em ácido acético e etanol para fornecer 580 mg (rendimento 92%) de 2jL sob a forma de um ôleo, que consistia numa mistura dos anômeros ¢( e ^ de acordo com o espectro de RMN (400 MHz). *Η RMN (CDC13) S 4,92 (1H, br-s, H--1 ) , (1H, dd, J=3,9 & 1,3 Hz, ^2«*), 5,26 (1H, br-s, H-l /5 ) , 5,04 (1H, dd, J=4,7 & 1,7 Hz, H-2 p ).

Exemplo 12 41-desmetil-4-0-(2,3-di-0-metil-4,6-0-etilideno-jB -D-altropira-nosil)-epipodofilotoxina (22) A uma solução homogénea arrefecida constituída por 320 mg (0,6 mmol) de 4'-desmetil-4'-benziloxicarbonilepipodotoxina (8) e de 170 mg (0,726 mmol) de 19^ em 20 ml de 1,2-dicloroetano ani dro adicionaram-se 0,25 ml de trifluoro eterato de boro (2 mmo-les), à temperatura de -18°C e agitou-se a mistura a essa temperatura durante 30 minutos. Adicionaram-se à mistura 0,25 ml de piridina e agitou-se à mesma temperatura durante 5 minutos. Ex-traíu-se a mistura com 100 ml de clorofórmio, lavou-se com carbo nato de hidrogénio e sódio aquoso, água e solução saturada de cio reto de sódio, sucessivamente, sécando-se sobre sulfato de magnésio. Após a remoção do dissolvente, submeteu-se o resíduo a cro-matografia de gel de sílica (Kiesel gel 60, 20 g). Eluíu-se a co luna com tolueno-acetato de etilo a (3:1) e recolheram-se as frac ções pretendidas, de acordo com o controlo por CCF e evaporaram-se à secura , trituraram-se com éter-n-hexano para se obterem 145 mg (rendimento 32%) do derivado de 41-0-benziloxicarbonil de 22. P. F. 125°-132°C (dec.). (KBr) cm-1 1772, 1602, 1484,

1235, 1109, 1044. (MeOH) nm (£ ) 292 (4700). 1H RMN (CDC13) S 3,49 & 3,51 (cada 3H, s, OCH3), 4,94 (1H, d, J=0,36 Hz, H-l").

Submeteu-se a hidrogenação à temperatura ambiente e pressão atmosférica durante 5 minutos uma mistura de 135 mg (0,18 mmol) do derivado de 0-benziloxicarbonil obtido anteriormente com 50 mg de paládio sobre carvão a 10% em 10 ml de etanol e 10 ml de acetona. Retirou-se o catalisador por filtração, lavou-se duas vezes com 10 ml de acetona. Reuniram-se o filtrado e as lavagens e evaporou-se a solução à secura. Cromatografou-se o resíduo sobre uma coluna de gel de sílica (Kiesel gel 60, 15 g). A coluna eluíu com tolueno-acetato de etilo a (2:1). Recolheram-se as frac: .-56- ções apropriadas de acordo com o controlo do CCF (tolueno-aceta-to de etilo a (1:1) e evaporaram-se à secura. Triturou-se o resíduo com éter dietllico para se obterem 76 mg (rendimento 68/5%) do composto em título (22) . P. P. 140°-150°C (dec.), IV^„ (KBr) cm"1 1774, 1751, 1616, 1485, 1230, 1111, 1040 .

UV,A (MeOH) nm (d) 237 (sh, 10,000), 284 (3,300). 1H RMN

J IuaX (CDC13) 6 4,94 (1H, d, J=0,85 Hz, H-l"), 3,37 (1H, dd, J=3,42 & 0,85 Hz, H-2"), 4,71 (1H, q, J=5,13 Hz, H- -7"), 1,37 (3Η, d, J=5,13 Hz, H-8”), 3,49 & 3,50 (cada 3H, s, och3). Anal Calcd para C31H36°13· ·2·5Η2°: C 56,23, H 6,25

Determ.: C 56,39, H 6,61

Exemplo 13 41-desmetil-4-Q-(4,6-0-etilideno-2-0-metil-fi-D-altropiranosil)--epipodofilotoxina (23)

De um modo idêntico ao descrito na preparação 12 procedeu-se ã glicosidação de com 20_ seguida de desbenziloxicarbo nilação. Assim a glicosidação de £ com 20_, 150 mg (0,57 mmol) forneceu 230 mg (rendimento 59%) do produto glicosilado sob a forma de um pó. P. F. 132°-134°C (com decomposição). IV$ m (KBr) max cm"1 1772, 1602, 1485, 1235, 1109, 1040. υν^&χ (MeOH) nm (6.) 291 (4,300). XH RMN (CDC13) 8 4,91 (1H, d, J=0,85 Hz, H-l"), 3,35 (1H, dd, J=3,84 & 1,28 Hz, H-2"), 5,34 (1H, dd, J=3,42 & 2,66 Hz, H-3"), 4,76 (1H, q, J=5,13 Hz, H-7"), 1,34 (3H, d, J= =5,13 Hz, H-8"), 3,51 (3H, s, OCH3), 2,12 (3H, s, OAc). /-57- 0 produto glicosilado obtido anteriormente, 220 mg (0,8 mmol), foi submetido a hidrogenação na presença de paládio sobre carvão a 10% para fornecer 210 mg (rendimento cerca de 100%) do derivado 3"-Q-acetílico de j23. P.F. 140-150°C (com decomposi ção). IVtf v (KBr) cm"1 1779, 1751, 1617, 1486, 1232, 1110, 1037.

IuaX UV1 (MeOH) nm (£) 237 (sh, 13,000), 284 (3,900). lE RMN (CDC1_) & 4,91 (1H, d, J=0,86 Hz, H-l"), 3,35 (1H, dd, J=3,42 & 0,86 Hz, H-2"), 5,34 (1H, t, J=3,42 Hz, H-3"), 4,75 (1H, g, J=5,13 Hz, H-7"), 1,34 (3H, d, J=5,13 Hz, H-8"), 3,51 (3H, s, OMe), 2,12 (3H, s, OAc).

Submeteu-se a refluxo durante 6 horas sob agitação uma mistura de 200 mg (0,3 mmol) do composto de 3"-0-acetilo obtida anteriormente e 660 mg (3 mmoles) de acetato de zinco desidrata do em 30 ml de metanol anidro e evaporou-se à secura. Extraiu--se o resíduo com 100 ml de clorofórmio contendo 0,5 ml de ãci^ do acético, lavou-se com água e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre o sulfato de magnésio. Evaporou-se o ex tracto seco até à secura e cromatografou-se o resíduo numa colu na de gel de sílica (Kiesel gel 60, 20 g). Eluiu-se a coluna com clorofórmio-metanol a (100:1). Recolheram-se as fracções apropriadas, evaporaram-se à secura e trituraram-se com éter dietílico para se obterem 94 mg (rendimento 52%) do composto em título 23^. P.F. 173-180°C (com decomposição). IV^ (KBr) cm”1 3445, 1772, 1615, 1518, 1507, 1485, 1286, 1190, 1116, 1037.

UV\ (MeOH) nm (£) 237 (sh, 12,000), 284 (3,800). XH RMN

'IClclX (CDC13) $ 5,03 (1H, d, J=l,10 Hz, H-l"), 3,89 (1H, dd, J=3,66 & 1,10 Hz, H-2"), 4,16 (1H, t, J=3,30 Hz, H-3"), 4,82 (1H, q, J=5,13 Hz, H-7"), 1,36 (3H, d, J=5,13 Hz, H-8"), 3,50 (3H, s, och3). 303413'

Anal Calcd para C,nH-.0

Determ.: (C2H5)20: C 60,35/ H 6,55 C 60,33, H 6,60 4 *-desmetil-4-0-(4,6-0-etilideno-3-0-metil-p-D-altropiranosil)--epipodofilotoxina (24)

De acordo com os processos anteriormente mencionados realizou-se a glicosidação de 8> com 21_ seguida por hidrogenoli-se e desacetilação para se obter o composto final 24. (1) Na presente glicosidação, os produtos e p-glicosidos estão em condições de se separarem e isolarem. Assim, a gLL cosidação de £ (801 mg, 1,5 mmol) com 21^ (530 mg, 2 mmoles) forneceu uma mistura impura dos anõmeros o( e p, que se sepa raram mediante uma cromatografia sobre coluna de gel de sílica, (tolueno-acetato de etilo a 3:1) para se obterem 400 mg (rendimento 34%) do derivado p-D-altropiranosílico e 570 mg (rendimento 49%) do seu anómero Os dados dos espectros são os seguintes:

Produto de glicosidação (p-Anõmero): P.F. 130-135°C (com decomposição). IVVmax (KBr) cm 1 1772, 1602, 1485, 1235, 1108, 1042. UVAmax (MeOH) nm (£) 291 (4,100). 1H RMN (CDC13) $ 5,03 (1H, d, J=l,28 Hz, H-l"), 5,05 (1H, dd, J=3,42 & 1,28 Hz, H-2").

Produto de glicosidação (j^-anõmero) : P.F. 130-135°C (com decomposição) . iW^y (KBr) cm”1 1772, -¾ 1742, 1602, 1484, 1235, 1106, 1039. (MeOH) nm (£) 291 (4,200). ΧΗ RMN (CDC13) 6 4,80 (1H, br-s, H-l"), 5,07 (1H, d, J=2,56 Hz, H-2"), 3,61 (1H, t, J=2,93 Hz, H-3"). (2) Hidrogenaram-se 345 mg (0,44 mmol) do anómero p obtido ante riormente em acetona-etanol à pressão de uma atmosfera na presença de paládio sobre carvão a 10% para se obterem 280 mg (rendimento 98%) do derivado 2"-0-acetil-41-hidroxi sob a forma de um pó incolor.

Derivado 2"-0-acetil-41-hidroxi: P.F. ca. 150°C (com decomposição). (KBr) cm 1 1779, 1751, 1617, 1486, 1229, 1111, 1039. UVAmav (MeOH) nm (£) 237 (sh, 13,000), 285 (3,900). ΧΗ RMN (CDC13) S 5,03 (1H, ã, J=1,46 Hz, H-l"), 5,05 (1H, dd, J=3,30 & 1,46 Hz, H-2"), 3,64 (1H, t, J=3,66 Hz, h-3"). (3) A desacetilação do derivado 2"-0-acetilo obtido anteriormen-te (270 mg, 0,42 mmol), com acetato de zinco di-hidratado forneceu 163 mg (rendimento 59%) de 24 sob a forma de um pó incolor.

Composto 24: MP 205-210°C (com decomposição). IVtf (KBr) cm 1 3475, 1772, 1751, max 1617, 1485, 1232, 1193, 1162, 1110, 1039. UVAmax (MeOH) nm (£) 240 (11,000), 286 (3,500). 1H RMN (CDCl3) Ò 5,00 (1H, d, J=l,10

Hz, H-l"), 3,86 (1H, dd, J=3,66 & 1,10 Hz, H-2"), 3,74 (1H, t, J=3,30 Hz, H-3"), 4,73 (1H, g, J=4,76 Hz, H-7”), 1,38 (3H, d, J=4,76 Hz, H-8"), 3,53 (3H, s, OMe) .

Anal Calcd para ^-30^34^131 c 59,80, H 5,68 Determ.: C 59,70, H 5,82.

Exemplo 14 3-azido-2,3-didesoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro-flf-D-altropirano-se (27) A uma solução constituída 420 mg (1,09 mmol) de 3-azido--4,6-0-benzilideno-2,3-didesoxi-2-fluoro-fl(-D-altropiranosido de benzilo em 5 ml de uma mistura de etanol-água a (4:1), adiciona ram-se 10 mg (0,05 mmol) de ácido p-toluencssulfõnico e submeteu -se esta mistura a refluxo durante 5 horas. Concentrou-se a ndjs tura reaccional, diluiu-se com diclorometano, lavou-se com água e secou-se sobre sulfato de sódio. Concentrou-se a fase orgânica para se obterem 380 mg de um sólido impuro que se purificou por cromatografia sobre uma coluna em gel de sílica (hexano-ace tato de etilo a 1:1) para se obterem 274 mg (rendimento 85%) de 3-azido-2,3-didesoxi-2-fluoro-0Í-D-altropiranosido de benzilo. Adicionaram-se (0,3 ml) de acetaldeído dimetil acetal e 10 mg de ácido p-toluenosulfónico a uma solução homogénea de 274 mg (0,92 mmol) do diol obtido anteriormente em (4 ml) de diclorometano e agitou-se esta mistura ã temperatura ambiente durante 6 horas. Extinguiu-se a mistura reaccional com carbonato de hi drogénio e sódio aquoso, em seguida lavou-se com água e secou- -61- tí -se sobre sulfato de sódio. Concentrou-se a fase orgânica para se obterem 289 mg de um óleo incolor, que se purificou numa coluna de gel de sílica (hexano-acetato de etilo a 2:1) para se obterem 250 mg (rendimento 84%) do derivado de 4,6-0-etilideno. A uma solução de 250 mg (0,77 mmol) do derivado de 4,6--0-etilideno em 8 ml de tetracloreto de carbono, adicionaram-se (243 mg) de NBS e submeteu-se a mistura a refluxo durante 1 hora e concentrou-se. A este resíduo diluído com 5 ml de acetona--água a (4:1) adicionou-se cianeto mercúrico e agitou-se a mistura a temperatura ambiente durante 4 horas. Após a transformação habitual, obteve-se o produto impuro que se submeteu a croma tografia sobre uma coluna de gel de sílica para se obterem 118 mg do composto em título (27) sob a forma de um óleo puro. RMN (CDC13) S 5,40-4,56 (2H,m), 4,56-3,23 (7H, m), 1,37 (3H, d, J=5 Hz).

Exemplo 15 41-benziloxicarbonil-4'-desmetil-4-0-(3-azido-2,3-didesoxi-4,6--0-etilideno-2-fluoro-jS-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (28) A uma solução de 220 mg (0,41 mmol) de 41-benziloxicarb£ nil-4'-desmetilepipodofilotoxina, 8 e de 118 mg (0,53 mmol) de 27 era (6 ml) de dicloroetano adicionaram-se 104 jil de trifluoro eterato de boro, â temperatura de -10°C e agitou-se a mistura du rante 1 hora a uma temperatura compreendida entre -10° e -5°C du rante 1 hora. Em seguida misturou-se a mistura reaccional com (0,1 ml) de trietilamina e agitou-se durante 1 hora ã temperatu ra ambiente. Após a transformação habitual obteve-se o produto impuro que se cromatografou sobre uma coluna de gel de sílica para se obterem 227 mg (rendimento 75%) de 2j5 sob a forma de um pó incolor. IVV (KBr) cm”1 2114, 1771, 1602. UVJ (MeOH) nm

IuàX fIUclX (£) 292 (3,140).

Anal Calcd para C37H36N3013F.3H20: C 55,29, H 5,27, N 5,23 Determ.: C 55,33, H 4,53, N 5,25.

Exemplo 16 41-desmetil-4-0-(3-azido-2,3-didesoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro--p-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (29)

Uma solução homogénea constituída por 87 mg (0,12 mmol) de 2J3 em 5 ml de etanol-acetato de etilo a (4:1), foi hidrogena da durante 20 minutos na presença de paládio sobre carvão a 10% ã pressão de uma atmosfera e em seguida retirou-se o catalisador por filtração. Concentrou-se o filtrado para se obterem (75 mg) de um sólido impuro que se purificou através de uma coluna de gel de sílica para se obterem 53 mg (rendimento 73%) de 29^ sob a forma de um pó incolor. P.F. 132°-134°C. Pureza calculada em 80% por HPLC (SSC-ODS-262, 65% MeOH-tampão pH 7). IVtf (KBr) *· max cm"1 2120, 1777, 1616. UVA_ (MeOH) nm (£) 240 (sh, 11,960),

luoX 285 (3,850). 1H RMN (CDC13) $ 4,90 (1H, d, J=20,6 Hz, 1"-H), 4,80 (1H, q, J=4,8 Hz, 7"-H), 4,44 (1H, dd, J=4 & 47 Hz, 2"-H), 3,65 (1H, t, J=10 Hz, 6"ax-H), 1,40 (3H, d, J=4,8 Hz, 8"-CH3). -63-

Anal Calcd para C Η N 0 F.1/2H 0: C 55,77, H 5,00, - * 29 30 3 11 2 N 6,73

Determ.: C 55,55, H 5,09, N 6,25.

Exemplo 17 41-desmetil-4-0-(3-amino-2,3-didesoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro--p-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina (30)

Submeteu-se -a hidrogenação durante a noite e na presença de óxido de platina (50 mg) à pressão de 55 psi, uma suspensão homogénea de 100 mg de 25J (0,14 mmol) em 10 ml de uma mistura de ácido acético a (1:1) . Retirou-se o catalisador por filtração e concentrou-se o filtrado para se obterem 120 mg de um óleo ama relo pálido, impuro, que se purificou através de uma coluna de gel de sílica para se obterem 61 mg (rendimento 77%) de 3£ sob a forma de um pó incolor. P.F. 169-172°C. Pureza calculada em 80% por HPLC. IVtJ (KBr) cm"1 1775, 1610. UVAmav (MeOH) nm (é) 237 (sh, 12,050), 285 (3,700). 1H RMN (DMSO-dg) & 5,34 (1H, d, J=22,2 Hz, 1"-H), 4,85 (1H, q, J=5,l Hz, 7"-H), 4,43 (1H, dd, J=3,5 & 47 Hz, 2”-H), 4,10 (1H, dd, J=5,l & 10,3 Hz, 6"eq-H), 3,93 (1H, dt, J=5 & 10 Hz, 5"-H), 3,66 (1H, m, 4"-H), 3,56 (1H, t, J=1Q,3 Hz, 6”ax-H), 3,51 (1H, m, 3"-H), 1,24 (3H, d, J=5,l Hz, 8"-CH3).

Anal Calcd para C29H32N011F*3H20: C 54,12, h 5,95, N 2,18.

Determ.: C 54,32, H 5,21, N 2,24 -6Α- .'θ' · / -- '

Exemplo 18 Cápsulas

Misturaram-se os materiais seguintes sob um estado anidro e em seguida acondicionou-se em cápsulas de gelatina com um enchi, mento de 0,345 g de peso por cápsula. 4'-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-4,6--O-etilideno-2-fluoro-Ô-D-altropiranosil)- -epipodofilotoxina 100 g

Estearato de magnésio 2,0 g

Celulose microcristalina (Avicel PH 102) 30,0 g

Amido 10,5 g O lote é suficiente para 1000 cápsulas apropriadas para administração oral.

Exemplo 19

Supositórios

Preparou-se um lote para 100 supositórios, apropriados pa ra administração rectal com os seguintes componentes:

Bases para supositórios gorda, com baixo índice de hidroxilo friável dura, por 154,8 g exemplo Witepsol H-15 (Dinamite-Nobel) -,/ tf -65- ’ --ver**# 4 * -desmetil-4-0- (4,6-0-etilideno) -jJ-D- -altropiranosil)-epipodofilotoxina 12 g

Fundiu-se a base gorda a uma temperatura entre 50° e 60°C e em seguida arrefeceu-se para uma temperatura exactamente acima do ponto de fusão (35°C) sob uma agitação suave. Em segui^ da espalhou-se o componente activo na superfície da base fundida até se distribuir a quantidade total, durante um intervalo de 15 minutos. Continuou-se a agitação durante 1 hora e em seguida ver teu-se a mistura em-moldes para supositórios prê-aquecidos. Este conjunto arrefeceu-se em seguida para uma temperatura entre 22° e 26°C e retiraram-se os supositórios dos contentores. Cada supositório continha uma dose equivalente a 100 mg do agente anti tumoral.

Exemplo 20

Composição para administração oral

Misturaram-se os componentes seguintes para se obterem composições líquidas para administração oral contendo 100 mg do componente activo por cada 5 ml da composição. 4·-desmetil-4-0-(3-0-acetil-4,6-0-etilideno- -p-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina 100 mg Ãcido cítrico anidro 10 mg Ãlcool benzílico 150 mg

Polissorbato 80 puro 400 mg

Polietilenoglicol 300 3,25 g Ãlcool etílico absoluto 5,12 g

Exemplo 21

Composição para administração parentérica

Diluiu-se a composição descrita no exemplo 18 entre 20 a 50 vezes com cloreto de sódio a 0,9% ou com dextrose a 5% para in jecção seguida de perfusão endovenosa lenta.

Claims (19)

1. Processo para a preparação de compostos de fórmula ge-

   / \ (X) MeO na qual fenilo, furilo ou representa um grupo alquilo ^ , 2-tienilo; um dos símbolos e Rg representa um grupo alcoxi Cl-5 ou ac^oxi ci-5 e ° outro representa um átomo de hidrogénio ou de flúor ou um grupo alcoxi · acilO” xi ou azido; ou um dos símbolos R^ e R^ representa um átomo de flúor e o outro representa um grupo azido; Rg representa um átomo de hidrogénio ou nm grupo

   e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico/ ca racterizado pelo facto: A. de se fazer reagir um composto de fórmula OH

   II O ococ:-:_?h com um composto de fórmula geral 69-

   yv' * na gual R^_, R^ e R^. têm os significados definidos antes, na presença de um eterato de ti-ifiuoreto de boro; B. de se eliminar o arupo pro+-ector do radical fenol_ mediante hidrogenação do produto obtido na fase A; e C. de se fosforilar eventualmente o grupo fenôlico pa ra se obter um composto de fórmula geral X na qual Rç_ representa um grupo PO^H^ ou ns seus sais. 2..,.- _Proc.es·?P para a .preparação de. compo.s.to.s. de .fórmula ge. ral X na anal representa um qruo alcuilo C., _1Q, fenilo, furilo ou 2-tienilo; um dos símbolos R^. e R^ representa um átomo dô hidrogénio e o outro representa um átomo de hidrogénio ou de flúor I J ou um grupo hidroxi, alcoxi C^_5, aciloxi ou azido; Rg re presenta um átomo de hidrogénio ou um grupo PO^í^, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista.farmacêutico, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um composto de fórmula geral X, citada antes, na gual um dos símbolos e Rq representa um arupo aciloxi C2__5 em substituição do grupo hidroxi e o outro tem os significados como definidos antes., com um reagente de zinco.
2. 3.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral X na gual R^ representa um grupo alquilo fenilo, furi lo ou 2-tienilo; um dos símbolos R. e R- representa um grupo ani- • w no e o outro representa um átomo de flúor ou um grupo hidroxi, alcoxi ou aciloxi C1_5; Rg representa um átomo de hidrogé nio ou um grupo PO^í^, e dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto de se hidrogenar um composto de fórmula geral X na qual.um dos símbolos e R5 re-J presenta um grupo azido em substituição do grupo amino e o outro tem os significados como definidos antes, na presença de um catalisador.
3. 4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-4,β-0-etilideno--2-fluoro-Jâ -D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemen te substituídos. J
4. 5. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre- r paraçao de 41-desmetil-4-0-(4,6-0-etilideno-P -D-altropiranosil)--epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
5. 6. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(3-0-acetil-4,β-0-etilideno-jj -D-altro j _ piranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se uti lizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. 7.- Processo de acordo com a reivindicacãç 1, para a preparação de 4,-desmetil-4-0-(2-amino-2-desoxi-4,6-0-etilide-no-j·*-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos. .8,- ..Processo de acordo .com a rejvindicação .1,..para a preparação de 4,-desmetil-4-0-(2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluo- n ro-P-D-altrogiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
6. 9,- Processo de acordo com a reivindicação 1. para a preparação de 4 ,-desmetil-4-0- (2,3-di~0-acetil-4-,6-0-etilideno-(3-D- / -altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos .
7. 10.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(3-Q-acetil-2-azido-2-desoxi-4,6-0--etilideno-ρ-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemen te substituídos.
8. 11.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre- paração de 41-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-desoxi-4, 6-0-etilideno--2-fluoro-p-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado i pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
9. 12.- Processo de acordo com a reivindicação 1/ para a preparação de 4 '-dêsmetil-4-Q-(2-aziào-2-desoxi-4,6-0-etilÍd<?rio-& D--altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos . _ .13..- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a ,pre-__. paração de 4'-desmetil-4-0-(2-desoxi-4,6-0-etilideno-J^-D-altro-piranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se uti_ lizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
10. 14..- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(4,6-0-etilideno-3-0-metil- j^-D-altro i piranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
11. 15.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(3-0-acetil-2-amino-2-desoxi-4,6-0--etilidenc- 'p -D-altropiranosil) -epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais corresponden- -73- / temente substituídos.
12. 16.- Processo de acordo com a reivindicação 1,. para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(2-0-acetil-4,6-0-etilideno-B -D-al-tropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
13. 17,- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4 1 -desmetil-4-0- (4,6-0-etilideno-2-0-metil-£> -D-altro piranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
14. 18.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 41-desmp-H 1-4-D-(2.3-di-0-raetil-4.β-0-etilideno- B-D--altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
15. 19.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(2-desoxi-4,6-0-etilideno-2-fluoro--D-altropiranosil)-epipodofilotoxina-4'-desoxi-4'-fosfato dis sõdico, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
16. 20.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a pre- -74-

    paração de 4'-benziloxicarbonil-41-desmetil-4-0-(3-azido-2-fluo-ro-2,3-didesoxi-4,6-0-etilideno-]t> -D-altropiranosil) -epipodofi-lotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
17. 21.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(3-azido-2,3-didesoxi-4,6-0-etilide-no-2-fluoro- {^-D-altropiranosil)-epipodofilotoxina, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos.
18. 22.- Processo de acordo com a reivindicação 1, .para a preparação de 4'-desmetil-4-0-(3-amino-2,3-didesoxi-4,6-0-etilide-

    caracteriza- do pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondente mente substituídos.
19. 23.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas com actividade antitumoral para o tratamento de tumores malignos, caracterizado pelo facto de se misturar uma quantidade antitumoral eficaz de um composto de fórmula geral X, preparado pelo processo de acordo com a reivindicação 1, com um veículo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Lisboa, 31 de Agosto de 1990