MXPA98000484A

MXPA98000484A - Composicion en gel de polisacarido

Info

Publication number: MXPA98000484A
Application number: MXPA/A/1998/000484A
Authority: MX
Inventors: Agerup Bengt
Original assignee: Q Med Ab
Priority date: 1995-07-17
Filing date: 1998-01-15
Publication date: 1998-04-01

Abstract

La presente invención se refiere a un proceso para la preparación de una composición en gel de polisacárido biocompatible, entrecruzada, el cual proceso comprende:formar una solución acuosa de un polisacárido entrecruzable. soluble en agua;iniciar un enlazamiento cruzado del polisacárido en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo;impedir estéricamente que la reacción de enlazamiento cruzado se termine antes de que se presente gelificación, se obtiene un polisacárido activado;y reintroducir condiciones no impedidas estéricamente para el polisacárido activado para continuar el enlazamiento cruzado del mismo a un gel viscoelástico. También se provee una composición de gel que se puede obtener mediante tal proceso, también como composiciones de gel para usos médicos diferentes.

Description

COMPOSICIÓN EN GEL DE POLISACÁRIDO Campo técnico La presente invención se relaciona al campo de las composiciones en gel de polisacápdo biocompatibles y más específicamente con un nuevo proceso para el enlazamiento cruzado de tales composiciones, mediante el cual se obtiene una nueva estructura de gel. La nueva estructura imparte propiedades mejoradas a la composiciones de gel previamente conocidas así como también permite nuevos usos de las composiciones, como tales y que contienen ingredientes activos.

Antecedentes de la invención Los geles de aglutinación en agua se usan ampliamente en el campo biomédico Se preparan en general mediante el enlazamiento cruzado químico de los polimeros a redes infinitas Cuando se utilizan polímeros biocompatibles. en general se tiene que utilizar un bajo grado de enlazamiento cruzado para mantener la biocompatibilidad Sin embargo, frecuentemente se requiere un gel más denso de tal manera que tenga un efecto apropiado de los ingredientes activos utilizados y en tal caso la biocompatibilidad frecuentemente se pierde Otra propiedad valiosa de los geles aglutinantes en agua o hidrogeles, es que los péptidos y las sustancias biológicamente activas más grandes pueden estar encerradas en los mismos para la formación de una composición de liberación sostenida Sin embargo, problemas prácticos han estado involucrados para llevar a cabo un tiempo de mantenimiento suficiente del ingrediente activo, puesto que en general el ingrediente activo es liberado a REF : 26640 la misma velocidad con la cual fue disuelto o encerrado en la composición a la que se refiere. Además, si tal gel se hiciera más denso en un intento por mantener el ingrediente activo por un tiempo más largo, se dilataría rápidamente en un tejido animal en donde hay libre acceso al agua. Uno de los polímeros biocompatibles más ampliamente utilizado para uso médico es el ácido hialurónico. Ya que está presente en composición idéntica en cada organismo viviente, da un mínimo de reacciones y permite usos médicos avanzados. Como consecuencia de lo mismoj ha sido el tema de muchos intentos de modificación. Así, ha sido entrecruzado con agentes tales como aldehidos, epóxidos, compuestos de poliaziridilo y divinil sulfona (Laurent et al. Acta Chem. Scand 18 (1964), No. 1 , p. 274; EP 0 161 887B1 , EP 0 265 116A2; y la patente norteamericana 4,716,154). En WO 87/07898 se describe una reacción de un polisacárido con un epóxido polifuncional, la separación del exceso del epóxido y finalmente operación de secado para entrecruzar el polisacárido a una película, material pulverizado o producto seco similar Sin embargo, no hay sugerencia en la misma para diluir el polisacárido activado y luego reconcentrar el mismo a la densidad o consistencia deseada la cual es entonces sustancialmente permanente. La patente norteamericana 5, 128,326 describe una diversidad de ácidos hialurónicos modificados para uso como compuestos farmacéuticos de almacén Los métodos descritos de "carga" de las preparaciones de gel están basados todos en una difusión del ingrediente activo al gel y luego liberación del mismo con la misma constante de difusión. Por el contrario, la presente invención involucra la disolución del ingrediente activo, seguida por una densificación o concentración de la composición de gel, hasta que no se lleva a cabo ninguna difusión o solamente una difusión menor del ingrediente activo. La patente norteamericana 5,399,351 describe mezclas de gel y soluciones poliméricas, las soluciones se utilizan para mejorar las propiedades reológicas del gel. Sin embargo, también en este caso se describen geles comprimidos de manera reversible, como se puede ver de por ejemplo la columna 6, líneas 53-58 Breve descripción de la invención De acuerdo a la presente invención se ha encontrado inesperadamente que se pueden obtener composiciones en gel de polisacárido que tienen una nueva estructura y mediante esto nuevas propiedades sobresalientes al utilizar una nueva técnica para el enlazamiento cruzado de los mismas La nueva técnica de enlazamiento cruzado permite un control versátil de la estructura de las propiedades de la composición en gel de polisacárido elaborada, lo cual a su vez hace posible ajustar la composición final para los propósitos planeados Más específicamente, un objeto de la presente invención es proveer un proceso para la preparación de una composición en gel de polisacápdo entrecruzada, la biocompatiblidad de la cual puede ser retenida a pesar de un alto grado de enlazamiento cruzado o polimerización. Otro objeto de la invención es proveer una composición en gel de polisacápdo con propiedades viscoelásticas a pesar de ser entrecruzada a un grado sustancial Todavía otro objeto de la presente invención es proveer una composición en gel de pohsacápdo la cual se vuelve densa o concentrada más o menos irreversiblemente, esto es, la cual no se dilata sustancialmente o se dilata solamente a un grado limitado cuando se pone en contacto con el agua Todavía otro objeto de la invención es proveer una composición en gel de polisacándo que encierra una sustancia biológicamente activa para uso como una composición de liberación sostenida o una composición de almacén Otro objeto de la invención es proveer composiciones en gel de polisacápdo que contienen una variedad de sustancias biológicamente activas para usos como composiciones médicas o profilácticas para propósitos diferentes Todavía otro objeto de la invención es proveer usos de las composiciones referidas para la fabricación de composiciones médicas o profilácticas también como para la administración a mamíferos, especialmente seres humanos l ^ Todavía otro objeto de la invención es proveer una composición en gel de polisacápdo activada, parcialmente entrecruzada, como se obtiene como un intermediario en el proceso mencionado anteriormente de acuerdo a la invención, el cual intermediario puede ser finalmente entrecruzado in situ en cualquier sitio deseado 0 Estos y otros objetos de la invención se harán evidentes mediante la descripción mas detallada de la misma presentada a continuación Descripción detallada de la invención De acuerdo a un aspecto de la presente invención, se provee así ^ un proceso para la preparación de una composición en gel de polisacápdo biocompatible entrecruzada, el cual proceso comprende: formar una solución acuosa de un polisacárido entrecruzable, soluble en agua; iniciar un enlazamiento cruzado del polisacárido en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo; impedir estéricamente que la reacción de enlazamiento cruzado temine antes de que se presente la gelificación, se obtiene mediante esto un polisacárido activado; y reintroducir condiciones no impedidas estéricamente para el polisacárido, para continuar el enlazamiento cruzado del mismo hasta la formación de un gel viscoelástico. En otras palabras, el nuevo proceso de acuerdo a la presente invención, involucra un enlazamiento cruzado de un polisacárido entrecruzable, soluble en agua, en por lo menos dos pasos o etapas, en donde la reacción de enlazamiento cruzado es descontinuada antes de que se inicie la gelificación, la descontinuación se lleva a cabo al impedir estéricamente la reacción de enlazamiento cruzado Luego se continúa ia reacción de enlazamiento cruzado en un segundo paso, mediante la reintroducción de condiciones no impedidas estéricamente Así. en primer lugar, se ha encontrado inesperadamente que mediante el impedimento estérico, se obtiene un polisacárido activado, el enlazamiento cruzado o polimerización del cual se puede continuar con el solo hecho de reintroducir condiciones no impedidas estéricamente para el mismo.

En segundo lugar también se ha encontrado inesperadamente que la composición en gel de po sacárido obtenida mediante el mismo no forma la estructura compacta, densa, la cual se habría obtenido si se llevara a cabo la correspondiente reacción de enlazamiento cruzado en un solo paso a un gel completamente entrecruzado o reticulado sino más bien un gel viscoelástico Además, como se menciona anteriormente, la nueva estructura de gel obtenida 5 mediante la presente invención representa una estructura de gel sustancialmente irreversible, la cual no se dilata a ninguna extensión apreciable en contacto con el agua o cualquier otro medio acuoso En general, esto significa que la redilatación es menor del 10% en volumen, en base al volumen como se obtiene del proceso reivindicado 10 Aunque la invención no está limitada por ninguna teoría, puede ser que la nueva estructura obtenida mediante la presente invención sea una combinación del enlazamiento cruzado entre la cadenas poliméricas existentes y un alargamiento de las cadenas existentes en lugar de una red muy densa que da una estructura muy rígida Lo que puede sugerir tal mecanismo es el hecho i * de que un producto viscoelástico es obtenible mediante la invención Como se usa en la presente el término "impedir estéricamente la reacción de enlazamiento cruzado" se debe interpretar en un sentido amplio, esto es no necesita ser necesariamente un impedimento completo, sino que en muchos casos más bien un impedimento parcial de la reacción a la que se hace 0 referencia Esto es, lo que es importante es que la velocidad de enlazamiento cruzado sea sustancialmente reducida para permitir que la reacción de enlazamiento cruzado final se lleve a cabo con los nuevos sitios de reacción involucrados Similarmente el término ure?ntroduc?r condiciones no impedidas estepcamente" también debe ser interpretado ampliamente, lo cual significa en general que las condiciones no impedidas estéricamente no necesitan ser exactamente las mismas condiciones estéricas como las que fueron utilizadas cuando se inicia la reacción de enlazamiento cruzado. Así, lo que es en general de importancia, es que las condiciones no impedidas estéricamente permitan que se lleven a cabo reacciones más rápidas que las condiciones impedidas estéricamente El impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado debe ser obtenible de diferentes maneras, pero una modalidad preferida de la invención a este respecto se representa mediante el caso en donde el impedimento estérico comprende la dilución del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado, para llevar a cabo una concentración más baja del po sacárido en el medio. La reintroducción de las condiciones no impedidas estéricamente también debe ser posible de diferentes maneras, pero una modalidad preferida a este respecto es el caso el cual comprende la evaporación del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado, para llevar a cabo una concentración más alta del po sacárido en el medio. Otra modalidad preferida a este respecto es representada mediante el caso que comprende la dia zaci?n del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado De acuerdo a una modalidad preferida de la presente invención, el impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado se lleva a cabo antes de que se haya consumido el agente de enlazamiento cruzado. Esto, a su vez. significa en general que la reintroducción de condiciones no impedidas estéricamente es iniciada en presencia del agente de enlazamiento cruzado no consumido. El impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado se puede iniciar en general o llevarse a cabo en el rango del 50 - 90% del tiempo de gelificación total utilizado en el proceso de acuerdo a la invención, también se toma a consideración la elasticidad o consistencia apropiadas para el uso propuesto de la composición. La idea de la invención debe ser aplicable a cualquier polisacárido biocompatible que sea entrecruzable y soluble en un medio acuoso. Así, el termino "soluble en agua" debe ser interpretado en un sentido amplio, no es necesario que se trate de agua Esto es, solución acuosa significa cualquier solución en donde el agua es el componente principal Un subgrupo preferido de polisacápdos en relación con la invención es sin embargo, una glucosa amina glucana de la cual el ácido hialurónico es un ejemplo especialmente interesante. El agente de enlazamiento cruzado, a ser usado en relación con la invención es cualquier agente de enlazamiento cruzado previamente conocido, útil en relación con los polisacápdos. tomando en consideración que se debe asegurar que se satisfagan los prerequisitos de biocompatibilidad. De preferencia, sin embargo el agente de enlazamiento cruzado se selecciona del grupo que consiste de aldehidos epóxidos compuestos de poliaziridilo, glicidil éteres y divinil sulfonas De estos, los g cidil éteres representan un grupo especialmente preferido, de los cuales se puede hacer referencia al diglicidil éter de 1 , 4-butanod?ol como un ejemplo preferido. En relación a esto, también se debe mencionar que "polifuncional" incluye difuncional La reacción de enlazamiento cruzado inicial, en presencia de un agente de enlazamiento cruzado po funcional se puede llevar a cabo a varios Q valores de pH, dependiendo principalmente de si se deben promover o no reacciones de éter o éster. De preferencia, esto significa que la reacción de enlazamiento cruzado se lleva a cabo a un pH alcalino, especialmente mayor de pH 9, por ejemplo en el rango de pH 9 -12, cuando se promueven formaciones de éter. Cuando se promueven formaciones de ester, la reacción de enlazamiento cruzado se lleva a cabo de preferencia a un pH ácido, especialmente a un pH de 2 - 6. Un aspecto interesante de la invención es representado mediante el caso en donde la composición en gel de polisacárido entrecruzada, preparada, es utilizada como, ya tal que la invención permite la elaboración de una composición viscoelástica Tal composición viscoelástica es por ejemplo útil en cirugía de los ojos, como substituto del fluido sinovial, como colirios, etcétera y como se ha referido anteriormente, la presente invención hace posible ajustar las propiedades viscoelásticas para tales usos. Así, al utilizar la tecnología estépca de acuerdo a la presente invención, es posible obtener extensiones de cadena, ramificaciones de cadena enlazamientos cruzados, de una manera más controlada que mediante las técnicas utilizadas previamente con sitios de acoplamiento más o menos desordenados Además, por medio del hecho de que los geles obtenidos de acuerdo con la invención no retienen su volumen original en presencia de un medio acuoso, los nuevos productos no causan ningún efecto de volumen interferente o negativo en estos usos médicos u otros usos. De acuerdo con la presente invención, también es posible incluir dentro de la composición en gel de polisacárido cualquier sustancia biológicamente activa para lo cual se desee o acepte un portador en gel de polisacárido. En este contexto, la técnica de dilución-concentración, usada en el proceso reivindicado, permite el encerramiento de la sustancia biológicamente activa, antes de que se someta el polisacárido a las condiciones no impedidas estéricamente Esto es, en tanto que condiciones no impedidas estéricamente significa en general una operación de concentración, tal operación significa que la sustancia biológicamente activa estará presente en una fase que es más compacta que cuando la sustancia estaba incluida en el portador. En otras palabras, la sustancia biológicamente activa puede ser retenida por mucho más tiempo, en comparación con las reacciones de enlazamiento cruzado de gel conocidas previamente Mediante esto se puede obtener un mejor perfil de liberación sostenida para la sustancia activa. En relación con la incorporación de la sustancia biológicamente activa a la composición, un ajuste de las condiciones al pH fisiológico y las condiciones de sal se lleva a cabo.de preferencia, para tener una preparación lista para uso medico Tal ajuste fisiológico es preferido también, ya que es concerniente con las condiciones de reacción, ya que se ha encontrado que la segunda etapa del proceso procede bien bajo tales condiciones. La invención no debe ser limitada en ningún aspecto a la sustancia biológicamente activa en comparación al uso de la sustancia en los casos de la técnica previa En otras palabras, la condición a ser tratada debe ser decisiva para la sustancia específica a ser seleccionada Sin embargo, las sustancias de interés en relación con la invención se pueden seleccionar del grupo que consiste de hormonas, citocinas, vacunas, sustancias que aumentan las células y que aumentan los tejidos. Así, la combinación única de propiedades de la nueva composición en gel de acuerdo a la presente invención, la hacen extremadamente ventajosa en relación con estas sustancias, esto es principalmente gracias al depósito sobresaliente o las propiedades de liberación sostenida y las propiedades de no dilatación. Así, un grupo interesante de sustancias biológicamente activas son las sustancias que aumentan el tejido, como un gel de polisacárido lo es un portador ventajoso para las mismas. Detalles adicionales concernientes a tales productos se pueden encontrar en WO 94/21299. Más específicamente, una sustancia que aumenta el tejido, preferida, comprende un polímero seleccionado de colágeno, almidón, dextranómero, poliactida y copolímeros de los mismos y poli-ß -hidroxibutirato y copolímeros del mismo. En relación con las hormonas, la eritropoeitina y la calcitonina son especialmente preferidas. El proceso de acuerdo a la presente invención también permite la incorporación de la sustancia biológicamente activa mediante reacción química con la estructura en gel del polisacándo o el agente de enlazamiento cruzado para el mismo, a condición de que la sustancia activa contenga grupos funcionales reactivos con la misma Propiedades únicas o combinaciones de propiedades pueden mediante esto ser obtenidas, tal como en tal caso por ejemplo en donde la velocidad de liberación del ingrediente activo será decidida mediante la degradación o descomposición de la red polimérica, en lugar de mediante la velocidad de disolución o migración para la sustancia referida de la red del gel Una modificación de la última técnica mencionada de acuerdo con la invención significa que los grupos funcionales de la sustancia activa pueden haber pre-reaccionado con un agente de enlazamiento cruzado para el polisacárido. De preferencia el mismo agente de enlazamiento cruzado es utilizado como se utiliza en el enlazamiento cruzado del polisacárido. Puesto que el proceso de la presente invención provee una composición o estructura en gel de polisacárido nueva, otro aspecto de la invención es representado por la nueva composición en gel de polisacárido preparada. A este respecto, el alcance de protección abarca no solamente la composición en gel de polisacárido, siempre que se prepare mediante dicho proceso, sino también cualquier composición en gel de polisacárido la cual sea obtenible mediante una técnica similar. En otras palabras, la presente invención también proporciona una composición en gel de polisacárido biocompatible entrecruzada, la cual es obtenible mediante el enlazamiento cruzado de un polisacárido entrecruzable, con un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo, en dos etapas, la primera etapa de enlazamiento cruzado se termina antes de que se presente la gelificación mediante un impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado y la segunda etapa de enlazamiento cruzado es iniciada mediante la remtroducción de las condiciones no impedidas estéricamente para que la reacción de enlazamiento cruzado continúe de la misma manera hasta un gel viscoelástico. Todas aquellas características las cuales han sido presentadas como preferidas o características interesantes en relación con el proceso reivindicado son aplicables también a la composición en gel de polisacárido per se y no necesitan ser repetidas una vez más Todavia otro aspecto de la invención es representado mediante el caso en donde un producto intermediario es obtenido al posponer la etapa final de la reacción de enlazamiento cruzado con condiciones no impedidas estéricamente a una etapa o sitio posterior, por ejemplo en el uso final de la composición. Así, se ha encontrado que el producto intermediario obtenido después del impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado posee tal estabilidad que la terminación de la reacción de enlazamiento cruzado se puede llevar a cabo en una etapa posterior. La invención también se relaciona con la composición definida anteriormente, para uso como una composición médica o profiláctica. Otro aspecto de la invención es el uso de la composición para la elaboración de una composición médica o profiláctica para cualquiera de los propósitos médicos o profilácticos específicos mencionados anteriormente, aumento de tejido y tratamiento de hormonas para un mamífero, especialmente un ser humano, que son las aplicaciones preferidas. Finalmente, la invención se relaciona con un método de tratamiento médico o profiláctico de un mamífero, especialmente un ser humano, el cual comprende la administración de una composición como se define anteriormente a un mamífero en necesidad de tal tratamiento.

Eiemplos La invención será ahora ilustrada mediante los siguientes ejemplos no limitantes E?emplo 1 Activación del polímero a Bajo condiciones alcalinas El polisacándo, en forma de 10 g de ácido hialurónico, preparado mediante la fermentación de Streptococcus, fue disuelto en 100 ml de NaOH (hidróxido de sodio) al 1 %. pH mayor de 9 El agente de enlazamiento cruzado, en forma de dighcidil éter de 1 ,4-butanod?ol fue agregado a una concentración del 0 2% La solución fue incubada a 40°C durante 4 horas b Bajo condiciones acidas El experimento fue llevado a cabo como en la parte 1a, pero a un pH ácido de aproximadamente 2 - 6, mediante la adición de ácido acético al 1 % 10 a la solución, en lugar de NaOH (hidróxido de sodio) de acuerdo a la parte 1a Eiemplo 2 Preparación de un qel viscoelástico Los incubados de acuerdo a las partes 1a y 1b fueron diluidos a un l<i volumen el cual fue dos veces el volumen finalmente deseado o aproximadamente 0 5 - 1 % y fueron neutralizados Luego el gel se evapora de manera rotativa a un gel viscoelástico Eiemplo 3 0 Preparación de un qel que contiene partículas de dextranómero Los incubados de acuerdo a las partes 1a y 1 b fueron diluidos a una fuerza del 1% y 20 g de partículas de dextranómero secas (Sephadex ® 25, Pharmacia) se mezclaron con la solución las partículas se encierran mediante el enlazamiento cruzado del polímero del ácido hialurónico en pocos minutos, 5 como consecuencia de la concentración del ácido hialurónico, la cual se lleva a cabo mediante una absorción de agua mediante las perlas del dextranómero. Los geles viscoelásticos obtenidos fueron estables; se pudieron someter a autoclave y fueron inyectados por medio de agujas hipodérmicas delgadas. 5 Ejemplo 4 Preparación de un qel para uso como una medicina de almacén que contiene eritropoeitina (EPO) El incubado obtenido en el ejemplo 1a fue diluido a una fuerza del l o 1% y el pH fue ajustado mediante la adición de una solución reguladora del pH de citrato. de acuerdo a las instrucciones del fabricante (Ortho Biotech, Inc., Raritan USA) para una buena estabilidad en solución acuosa. 5x106 IU de EPO fueron agregados bajo agitación Después de evaporación de la solución a % del volumen, el polímero se había entrecruzado a una composición de almacén i * y una cantidad de 20.000 IU de EPO/ml fue recuperada Eiemplo 5 Preparación de un gel para uso como una preparación de depósito que contiene calcitonina 0 La calcitonina de salmón 100 I U/ml (Miacalcic® Sandoz) fue mezclada con 2% de solución polimépca elaborada de acuerdo con el ejemplo 1b y la solución fue concentrada al 5% (250 lU/ml) mediante evaporación rotativa Un caballo con claudicación (cojera) crónica en la pata frontal derecha fue tratado con una inyección de 2 ml s c por semana durante dos semanas. En 5 las seis semanas siguientes después de esto el caballo estaba libre de dolores El calcio del suero fue disminuido con 12% solamente.

Eiemplo 6 Preparación de un qel que contiene heparina a ser liberada de una manera sostenida En un polímero activado diluido, de acuerdo al ejemplo 4, se disuelve heparina en una cantidad de 5% del polímero. La mezcla obtenida fue equilibrada durante 1 hora, después de lo cual fue evaporada a A del volumen. Una liberación que inhibe la coagulación de la misma fue notada durante 16 días de incubación en solución salina fisiológica.

Eiemplo 7 Preparación de un gel con heparina enlazada covalentemente en una posición controlada estéricamente El polímero activado de acuerdo al ejemplo 1 fue precipitado en metanol bajo agitación vigorosa La precipitación fina obtenida fue secada durante la noche. La hepanna fue activada de acuerdo con el ejemplo 1.

Después de la incubación (4 horas a 40°C) la precipitación del polímero fue mezclada con la solución de hepanna activada La mezcla fue incubada durante la noche y al siguiente dia la solución de gel fue neutralizada, se convertió en partículas y se lavó de los residuos de los reactivos. El gel formado fue capaz de adherirse al factor de crecimiento inter alia el factor de crecimiento de fibroblasto básico (bF6F) pero no mostró ninguna inhibición de la coagulación de sangre entera.

Ejemplo 8 Preparación de un qel que contienen grupos cargados positivamente de quitosana La incubación de una mezcla de 7.5 g de polímero de ácido hialurónico y 2.5 g de quitosana (See Cure ® Protan) fue llevada a cabo de acuerdo con el ejemplo 1. Después de la disolución y la neutralización se obtiene una solución viscoelástica copolimerizada. La solución poseía propiedades que promueven la cicatrización después de haber sido aplicada a una llaga lenta para cicatrizar.

Eiemplo 9 Preparación de un gel el cual ha sido acoplado estéricamente 7.5 g de ácido hialurónico fueron activados de acuerdo con el ejemplo 1a De la misma manera. 2.5 g de dextran fueron activados. El ácido hialurónico fue precipitado en metanol, luego la precipitación se mezcla con 500 ml de una solución de dextran al 0.5 %. activada, diluida. Después de la agitación y ajuste del pH y la concentración de la sal, se obtiene una solución viscoelástica 5 ml de dicha solución fueron sometidos a infusión en una vaina para tendón de Aquiles el cual mostraba repetidamente inflamación en forma de llagas y "rechinidos" Después de 4 semanas los problemas del tendón de Aquiles habían desaparecido Eiemplo 10 Preparación de un qel para uso como una medicina de deposito que contiene GMCSF El producto fue preparado de acuerdo con el ejemplo 5 . pero en lugar de calcitonina, se agregó el factor que estimula la colonia - de macrófagos granulocitos, GMCSF (Leucomax®) 1 miligramo/gramo de polímero.

Eiemplo 1 1 Preparación de un qel que contiene virus exterminado tipo influenza A2 La preparación fue llevada a cabo como en el ejemplo 4, pero en lugar de EPO, se agregaron 40 . virus de influenza, de caballo, exterminado 960 HAU, por 100 ml de solución polimérica al 1 %, activa, diluida. Después de la contracción a 4x. la preparación contenía un 600 HAU por ml. Mediante vacunación de más de 100 caballos en relación con una influenza epidémica, se encontró que la preparación era altamente efectiva como protección contra la infección, la cual protección fue mantenida por un tiempo largo (más de 6 meses) Eiemplo 12 Preparación de un gel nuevo que contiene una suspensión de células vivientes Un cultivo de fibroblastos de 5 ml fue mezclado con 100 ml de una solución neutralizada de acuerdo con el ejemplo 1a. La mezcla fue oxigenada y secada a la mitad del volumen Se obtuvo una solución viscoelástica que contenía células vivientes.

Eiemplo 13 Preparación de un qel microscópico denso que contienen péptidos pequeños A un gel neutralizado, activado, de acuerdo al ejemplo 1 a, se 10 agregan 5 mg de un péptido que tiene 12 aminoácidos. El gel fue evaporado durante la agitación, al 10% y fue suspendido en aceite mineral. Después de la adición del metanol, las partículas de gel secas se filtraron y lavaron de los residuos de aceite Ejemplo 14 Preparación de un gel que contiene un qel microscópico denso que contiene péptidos pequeños de acuerdo al eiemplo 13 A una solución al 1 % de polímero neutralizado activado, de acuerdo al ejemplo 1a, se agregan las microesferas del ejemplo 13. Luego el gel se evapora a la mitad de su volumen. Se forma un gel inyectable homogéneo y estable que contiene microesferas finamente dispersadas.

Eiemplo 15 Preparación de un qel que contiene perlas de polimetilmetacrilato (PMMA) esféricas que tienen un tamaño de 40 -120 mieras A 5 g de un polímero diluido al 1% y neutralizado y activado de acuerdo con el ejemplo 1a, se agregan 100 ml de esferas de polimetilmetacrilato (PMMA) La evaporación al 3% del gel polimépco, da un gel viscoelástico estable, inyectable Eiemplo 16 Preparación de un qel que contiene fragmentos de PMMA de 500 nm a los cuales se había agregado antíqeno hidrofóbico Antígeno de hemaglutinina. preparado a partir del virus A2 de acuerdo al ejemplo 11. fue absorbido mediante interacción hidrofóbica sobre partículas de PMMA de 500 nm. Las partículas se agregaron a la solución al 1 % de acuerdo al ejemplo 15 y se llevó a cabo una reducción a la mitad del volumen. Se formó un gel viscoelástico estable, homogéneo, el cual fue útil como una vacuna que tiene un alto efecto adyuvante.

Eiemplo 17 Comparación entre el grado de redilatación, a libre disponibilidad de agua, entre los geles preparados convencionalmente y los geles preparados de acuerdo a la presente invención Geles de ácido hialurónico. preparados de acuerdo a Laurent et al, 1963 y de acuerdo a los ejemplos 1 y 2 anteriores se secaron a la mitad de sus volúmenes de dilatación Luego se volvieron a introducir a sus soluciones originales Los geles previamente conocidos se dilataron a su volumen original, en tanto que las composiciones de gel de acuerdo a los ejemplos presentes 1 y 2 se dilataron solo marginalmente (10%) Eiemplo 18 Comparación entre la actividad biológica de la EPO copolimerizada , con ácido hialurónico a un gel v el gel de acuerdo al eiemplo 1 al cual la EPO había sido encerrada mediante una concentración del gel Cuatro pacientes bajo tratamiento con Eprex® (CILAG) por su anemia, provocada por uremia crónica, fueron tratados durante dos meses, con una dosis cada mes, que contiene el siguiente régimen: Páctente 1 2 3 4 Dosis IU 60 000 70 000 70 000 50 000 es 1 depósito depósito Control Control directamente directamente gelificado gelificado Mes 2 Control Control Concentrado Concentrado Depósito directamente gelificado enlazamiento cruzado de epóxido, bajo condiciones moderadas, de acuerdo al ejemplo 11 , en presencia de EPO.

Control EPO disuelta en ácido hialurónico al 4%, peso molecular de aproximadamente 6x106 de cock's comb, preparado de acuerdo a la patente norteamericana 4.141.973 (Healon® Pharmacia) Concentrado EPO encerrada dentro del gel activado, el cual fue gelificado por medio de concentración La dosis fue seleccionada como la dosis total por mes, la cual fue requerida normalmente por el paciente para mantener el nivel de hemoglobina. El nivel o la concentración de la EPO en el suero, fue analizado a intervalos regulares por medio de un método mmunoquímico Resultados Un método común para expresar el efecto funcional de las preparaciones de depósito es calcular el área de la curva (unidades de EPO x dias) Este estudio también proporciona la biodisponibilidad en forma del nivel de hemoglobina en la sangre como 0 = retenido, + = incrementado y - = reducido Tabla Paciente No /mes 1/1 1/2 2/1 2/2 3/1 3/2 4/1 4/2 Área bajo la curva 41 424 57 534 224 952 567 656 Control de - + - + 0 + + + hemoglobina Conclusión 5 Una envoltura de la EPO en un depósito contraído, proporciona la liberación más alta posible durante el análisis Los intentos para llevar a cabo la reacción de gelificación. en presencia de EPO destruyeron las hormonas, de tal manera que una liberación baja podría ser registrada Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método i o conocido por la solicitante para llevar al práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes

Claims

Reivindicaciones 1. Un proceso para la preparación de una composición en gel de polisacárido biocompatible, de enlazamiento cruzado, caracterizado porque comprende: formar una solución acuosa de un polisacárido entrecruzable, 5 soluble en agua; iniciar un enlazamiento cruzado del polisacárido en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo; impedir estéricamente que la reacción de enlazamiento cruzado se temine antes de que se presente la gelificación, se obtiene mediante esto un l o polisacárido activado, y reiptroducir condiciones no impedidas estéricamente para el polisacárido activado, para terminar el enlazamiento cruzado del mismo a un gel viscoelástico. 1 2 Un proceso de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el polisacárido se selecciona del grupo que consiste de glucosa amina glucana. 3 Un proceso de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la glucosa amina glucana comprende ácido hialurónico. 0 4 Un proceso de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el agente de enlazamiento cruzado se selecciona del grupo que consiste de aldehidos, epóxidos, compuestos de poliazipdilo. glícidil éteres y divmil sulfonas. 5. Un proceso de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque el glicidil éter comprende diglicidil éter de 1 , 4-butanodiol. 6. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 5 precedentes, caracterizado porque el impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado comprende la dilución del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado, para llevar a cabo una concentración más baja del polisacárido en el medio. i o 7. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la reintroducción de las condiciones no impedidas estéricamente comprende la evaporación del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado, para llevar a cabo una concentración más alta del polisacárido en el medio. 1 8 Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, caracterizado porque la reintroducción de las condiciones no impedidas estéricamente comprende la dialización del medio acuoso en el cual se lleva a cabo la reacción de enlazamiento cruzado 0 9 Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la reacción de enlazamiento cruzado inicial en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional se lleva a cabo a un pH alcalino, de preferencia mayor de 9, mediante esto se promueven 5 las reacciones de enlazamiento cruzado de éter 10. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 8, caracterizado porque la reacción de enlazamiento cruzado inicial, en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional, se lleva a cabo a un pH ácido, de preferencia a pH de 2 - 6, mediante esto se promueven las reacciones de enlazamiento cruzado de ester. 11. Un proceso de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el impedimento estérico de la reacción de enlazamiento cruzado se lleva a cabo antes de que se consume el agente de enlazamiento cruzado. 12. Un proceso de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones precedentes, caracterizado porque una sustancia biológicamente activa se encierra dentro de la composición de gel de polisacárido entrecruzado, durante la preparación de la misma, de preferencia a un pH fisiológico y condiciones de concentración de sal 13 Un proceso de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la sustancia activa se encierra dentro de la composición de gel al disolver o dispersar la misma en el polisacápdo activado, antes de someter el polisacárido mencionado a condiciones no impedidas estéricamente. 14 Un proceso de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 12 y 13, caracterizado porque la sustancia biológicamente activa se selecciona del grupo que consiste de hormonas, atocinas, vacunas, sustancias que aumentan las células y el tejido. 15. Un proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la sustancia que aumenta el tejido comprende un polímero seleccionado de colágeno, almidón, dextranómero. polilactida y copolímeros del mismo y poli-ß -hidroxibutirato y copolímeros del mismo. 16. Un proceso de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la hormona se selecciona del grupo que consiste de eritropoeitina y calcitonina. 17. Un proceso de conformidad con cualquiera de la reivindicaciones 12 - 16, caracterizado porque la sustancia biológicamente activa contiene grupos funcionales reactivos con el polisacápdo y está encerrada dentro de la estructura de gel mediante reacción química con la misma. 18 Un proceso de conformidad con la reivindicación 17. caracterizado porque la sustancia biológicamente activa que contiene los grupos funcionales, se ha hecho pre-reaccionar con un agente de enlazamiento cruzado para el polisacápdo, de preferencia el mismo agente de enlazamiento cruzado como se utiliza en el enlazamiento cruzado del polisacándo. 19 Una composición en gel de polisacápdo biocompatible, entrecruzada, caracterizada porque se prepara mediante un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -18 20. Una composición en gel de polisacárido activada, biocompatible, parcialmente entrecruzada, caracterizada porque se obtiene mediante un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 - 18, antes de continuar el enlazamiento cruzado del polisacárido activado, al reintroducir las condiciones no impedidas estéricamente para la reacción de enlazamiento cruzado. 21. Una composición en gel de polisacárido, biocompatible, entrecruzada, caracterizada porque se puede obtener mediante el enlazamiento cruzado de un polísacárido entrecruzable con un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo en dos etapas, la primera etapa de enlazamiento cruzado es terminada antes de que se presente la formación de gel mediante un impedimento estérico de la reacción de enlazamiepto cruzado y la segunda etapa de enlazamiento cruzado es iniciada al reintroducir las condiciones no impedidas estéricamente para que la reacción de enlazamiento cruzado continúe de la misma manera hasta un gel viscoelástico. 22 Una composición en gel de polisacápdo biocompatible, entrecruzada, de conformidad la reivindicación 21 caracterizada porque se define mediante cualquiera de las características resumidas en cualquiera de las reivindicaciones 2 - 11 23 Un polisacándo biocompatible. entrecruzado, de conformidad cualquiera de las reivindicaciones 21 y 22, caracterizado porque comprende una sustancia biológicamente activa encerrada en el mismo 24. Un polisacárido biocompatible, entrecruzado, de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la sustancia biológicamente activa es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 12 - 18. 5 25. Una composición en gel de polisacárido médica o profiláctica, caracterizada porque es como se define en cualquiera de las reivindicaciones 21-24. 26. Una composición de conformidad con la reivindicación 25, caracterizada porque está adaptada como una preparación de almacén. lo 27. Una composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 21 - 24, caracterizada porque se utiliza como una composición médica o profiláctica. 28 El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las 15 reivindicaciones 21 - 24. caracterizado porque se emplea para la elaboración de una composición medica o profiláctica para el aumento del tejido de un mamífero, especialmente un ser humano 29 El uso de una composición de conformidad con cualquiera de las 20 reivindicaciones 21 - 24, caracterizado porque se emplea para la elaboración de una composición de depósito médica o profiláctica, especialmente para el tratamiento mediante hormonas de un mamífero, especialmente un ser humano. ">* Resumen de la invención Se describe un proceso para la preparación de una composición en gel de polisacárido biocompatible, entrecruzada,. el cual proceso comprende: formar una solución acuosa de un polisacárido entrecruzable, soluble en agua; iniciar un enlazamiento cruzado del polisacárido en presencia de un agente de enlazamiento cruzado polifuncional para el mismo; impedir estéricamente que la reacción de enlazamiento cruzado se temine antes de que se presente gelificación, se obtiene un polisacárido activado; y reintroducir condiciones no impedidas estéricamente para el polisacárido activado para continuar el enlazamiento cruzado del mismo a un gel viscoelástico. También se provee una composición de gel que se puede obtener mediante tal proceso, también como composiciones de gel para usos médicos diferentes.