PT839159E

PT839159E - Composicao de gel a base de polissacarido

Info

Publication number: PT839159E
Application number: PT96923119T
Authority: PT
Inventors: Q Med Ab
Original assignee: Q Med Ab
Priority date: 1995-07-17
Filing date: 1996-05-28
Publication date: 2001-11-30
Also published as: PL324608A1; DK0839159T3; JP3094074B2; AU700215B2; CA2226488C; NO315274B1; MX9800484A; JPH11509256A; CZ290755B6; BRPI9609534B8; ATE204000T1; US5827937A; BR9609534A; KR19990029034A; ES2161368T3; KR100314488B1; TR199800072T1; EA001500B1; DE839159T1; DE69614391T2

Description

1 7%

Descrição “Composição de gel à base de polissacárido”

CAMPO TÉCNICO A presente invenção refere-se ao campo das composições de gel à base de polissacárido biocompatível e, mais especificamente, a um novo processo para a reticulação de tais composições, obtendo-se deste modo uma nova estrutura de gel. A nova estrutura confere propriedades melhoradas às composições de gel conhecidas anteriormente bem como permite novas utilizações das referidas composições, como tais e contendo ingredientes activos.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Os geles de ligação com água são amplamente utilizados no campo biomédico. Eles são, de uma maneira geral, preparados mediante reticulação química de polímeros em redes infinitas. Quando se utiliza polímeros biocompatíveis, de uma maneira geral tem de se utilizar um grau reduzido de reticulação para manter a referida biocompatibilidade. Contudo, com frequência, toma-se necessário um gel mais denso para se obter um efeito apropriado dos ingredientes activos utilizados e, em um tal caso, a biocompatibilidade perde-se com frequência.

Uma outra propriedade valiosa dos geles de ligação com água, ou hidrogeles, reside no facto de os péptidos e substâncias biologicamente activas maiores poderem ser encerrados nos mesmos para a formação de uma composição de libertação retardada. Contudo, têm estado envolvidos problemas práticos na obtenção de um tempo de manutenção suficiente do ingrediente activo, visto que, de uma maneira geral, o ingrediente activo é libertado com a mesma velocidade com que foi 2 dissolvido ou encerrado na composição a que se faz referência. Além disso, se um tal gel for densificado numa tentativa para manter o ingrediente activo durante um intervalo de tempo mais longo, ele inchará rapidamente num tecido animal onde há livre acesso à água.

Um dos polímeros biocompatíveis mais largamente utilizado para uso médico é o ácido hialurónico. Tal como se encontra presente numa composição idêntica em cada organismo vivo, ele proporciona um mínimo de reacções e permite usos médicos avançados. Como consequência disso, tem sido objecto de muitas tentativas de modificação. Deste modo, tem sido reticulado com agentes tais como aldeídos, epóxidos, compostos poliaziridílicos e divinilsulfona (Laurent et al, Acta Chem. Scand 18 (1964) N° 1, p. 274; EP 0 161 887B1; EP 0 265 116A2; e US 4 716 154).

Na patente de invenção WO 87/07898 encontra-se descrita uma reacção de um polissacárido com um epóxido polifuncional, a remoção do excesso do referido epóxido e finalmente uma operação de secagem para reticular o referido polissacárido numa película, material em pó ou produto seco similar. Porém, não há qualquer sugestão na mesma quanto à diluição do polissacárido activado e então a reconcentração do mesmo até à densidade ou consistência desejadas que é então substancialmente permanente. A patente de invenção US 5 128 326 descreve um número de ácidos hialurónicos modificados para uso como produtos farmacêuticos depot. Os métodos descritos de “carga” das preparações de gel são todos eles baseados numa difusão do ingrediente activo no gel e em seguida uma libertação do mesmo com a mesma constante de difusão. Contrariamente a isto, a presente invenção envolve a 7% dissolução do ingrediente activo seguida por uma densifícação ou concentração da composição de gel até não ter lugar qualquer difusão ou apenas uma difusão mínima do referido ingrediente activo. A patente de invenção US 5 399 351 descreve misturas de gel e soluções poliméricas, sendo as referidas soluções utilizadas para melhorar as propriedades reológicas do gel. Porém, também neste caso se encontram descritos geles comprimidos reversivelmente, como se pode observar a partir, por exemplo, da coluna 6, linhas 53-58.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

De acordo com a presente invenção descobriu-se inesperadamente que era possível obter composições de gel à base de polissacárido tendo uma estrutura nova e, deste modo, novas, com propriedades salientes, pelo uso de uma nova técnica para sua reticulaçao. A referida nova técnica de reticulação permite um controlo versátil da estrutura e das propriedades da composição de gel à base de polissacárido preparada, que, por sua vez, toma possível ajustar a composição final aos fins em causa.

Mais especificamente, um objecto da presente invenção é proporcionar um processo para a preparação de uma composição de gel à base de polissacárido reticulado, cuja biocompatibilidade pode ser retida a despeito de um grau elevado de reticulação ou polimerização.

Um outro objecto da presente invenção é proporcionar uma composição de gel à base de polissacárido com propriedades viscoelásticas a despeito de ser reticulada até um grau substancial.

Ainda um outro objecto da presente invenção consiste em proporcionar uma 4 composição de gel à base de polissacárido que é mais ou menos densificada ou concentrada irreversivelmente, isto é, que não incha substancialmente ou apenas incha num grau limitado quando em contacto com a água.

Ainda um outro objecto da presente invenção é proporcionar uma composição de gel à base de polissacárido que engloba uma substância biologicamente activa para utilização como composição de libertação retardada ou como uma composição depot.

Um outro objecto da presente invenção é proporcionar composições de gel à base de polissacárido que contêm uma variedade de substâncias biologicamente activas para usos como composições médicas ou profilácticas para diferentes finalidades.

Ainda um outro objecto da presente invenção é proporcionar utilizações das composições referidas anteriormente para a preparação de composições médicas ou profilácticas bem como para a administração a mamíferos, especialmente seres humanos.

Ainda um outro objecto da presente invenção é proporcionar uma composição de gel à base de polissacárido activado e parcialmente reticulado tal como obtido como um intermediário no processo mencionado anteriormente de acordo com a invenção, intermediário esse que pode ser finalmente reticulado in situ em qualquer local desejado.

Estes e outros objectos da presente invenção tomar-se-ão evidentes através da descrição mais pormenorizada da mesma conforme se apresenta mais abaixo.

DESCRICÀQ PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

De acordo com um aspecto da presente invenção, proporciona-se assim um 7% processo para a preparação de uma composição de gel à base de polissacárido biocompatível reticulado, processo esse que compreende: a formação de uma solução aquosa de um polissacárido reticulável, solúvel em água; a iniciação de uma reticulação do referido polissacárido na presença de um agente de reticulação polifúncional para o mesmo; o impedimento estérico da reacção de reticulação terminar antes de ocorrer a gelificação, obtendo-se deste modo um polissacárido activado; e a reintrodução de condições de desimpedimento estérico para o referido polissacárido activado de modo a prosseguir a sua reticulação até à obtenção de um gel viscoelástico.

Por outras palavras, o novo processo de acordo com a presente invenção envolve uma reticulação de um polissacárido reticulável solúvel em água em pelo menos duas fases ou estádios, em que a reacção de reticulação é interrompida antes de se iniciar a gelificação, sendo a interrupção conseguida por impedimento estereoquímico da referida reacção de reticulação. Prossegue-se então a reacção de reticulação em uma segunda fase pela reintrodução de condições de desimpedimento estereoquímico.

Deste modo, em primeiro lugar descobriu-se inesperadamente que pelo referido impedimento estérico se obtinha um polissacárido activado, cuja reticulação ou polimerização pode ser prosseguida apenas pela reintrodução de condições de desimpedimento estérico do mesmo. Em segundo lugar, descobriu-se também inesperadamente que a composição de gel à base de polissacárido assim obtida não formava a estrutura densa e compacta que seria obtida se se realizasse a reacção correspondente de reticulação numa fase única para se obter um gel completamente ?si reticulado mas em vez disso obtém-se um gel viscoelástico. Além disso, tal como foi mencionado anteriormente, a nova estrutura de gel obtida pela presente invenção representa uma estrutura de gel substancialmente irreversível que não incha numa medida apreciável em contacto com a água ou com qualquer outro meio aquoso. De uma maneira geral, isto significa que o referido reinchamento é inferior a 10% em volume com base no volume tal como obtido através do processo reivindicado.

Muito embora a presente invenção não fique ligada à qualquer teoria pode ser que a nova estrutura obtida pela presente invenção seja uma combinação de reticulação entre cadeias poliméricas existentes e um alongamento de cadeias existentes em vez de uma rede muito densa que dá origem a uma estrutura muito rígida. O que pode surgerir um tal mecanismo é o facto de ser possível obter um produto viscoelástico pela presente invenção.

Tal como utilizada na presente memória descritiva, a expressão “impedimento estérico da reacção de reticulação” deve ser interpretada num sentido lato, isto é não há qualquer necessidade de ser necessariamente um impedimento completo mas em muitos casos, pelo contrário, um impedimento parcial da reacção referida. Ou seja, o que é importante é que a velocidade de reticulação seja substancialmente reduzida para permitir que a reacção de reticulação final tenha lugar com os novos sítios da reacção envolvidos.

De maneira análoga, a expressão “reintrodução de condições de desimpedimento estérico” deve também ser interpretada de maneira lata, o que geralmente significa que as referidas condições de desimpedimento estérico não têm de ser necessariamente exactamente as mesmas condições histéricas que foram utilizadas quando do início da reacção de reticulação. Deste modo, o que é 7% geralmente de importância é que as referidas condições de desimpedimento estérico permitam que tenham lugar reacções mais rápidas do que as referidas condições de impedimento estérico. O impedimento estérico da reacção de reticulação deve ser susceptível de ser obtido de diversas maneiras, mas uma forma de realização da presente invenção a este respeito é representada pelo caso em que o impedimento estérico compreende a diluição do meio aquoso no qual tem lugar a reacção de reticulação, para se conseguir uma concentração mais baixa do polissacárido do referido meio. A reintrodução de condições de desimpedimento estérico deve também ser possível de diferentes maneiras, mas uma forma de realização preferida a este respeito, refere-se ao caso que compreende a evaporação do meio aquoso no qual tem lugar a reacção de reticulação, para se conseguir uma concentração mais elevada do polissacárido no referido meio. Uma outra forma de realização preferida a este respeito é representada pelo caso que compreende a diálise do meio aquoso no qual a reacção de reticulação tem lugar.

De acordo com uma forma de realização preferida da invenção o impedimento estérico da reacção de reticulação é conseguido antes de ter sido consumido o agente de reticulação. Isto, por sua vez, significa também, de uma maneira geral, que a reintrodução de condições de desimpedimento estérico é iniciada na presença do referido agente de reticulação não consumido. O impedimento estérico da reacção de reticulação pode, de uma maneira geral, ser iniciado ou realizado na gama de 50-90% do tempo de gelificação total utilizado no processo de acordo com a presente invenção, tomando-se também em consideração uma elasticidade ou consistência apropriadas para a utilização 8 7% pretendida da composição. A ideia inventiva deve ser aplicável a qualquer polissacárido biocompatível que seja reticulável e solúvel num meio aquoso. Deste modo, a expressão “solúvel em água” deve ser interpretada num sentido lato, não sendo necessariamente exigível a água pura. Ou seja, solução aquosa significa qualquer solução em que a água é o componente principal. Um sub-grupo preferido de polissacáridos em ligação com a presente invenção é, porém, um glicose-amina-glucano, de que o ácido hialurónico constitui um exemplo especialmente interessante. O agente de reticulação a ser utilizado em ligação com a invenção é qualquer agente de reticulação previamente conhecido útil em associação com polissacáridos, tendo em conta que se deve garantir que os pré-requisitos de biocompatibilidade são preenchidos. De preferência, contudo, o agente de reticulação é escolhido de entre o grupo que consiste em aldeídos, epóxidos, compostos poliaziridílicos, éteres glicidílicos e divinilsulfonas. Destes os éteres glicidílicos representam um grupo especialmente preferido, de que pode referir-se como um exemplo preferido o éter diglicidílico de 1,4-butandiol. A este respeito deve também mencionar-se que “polifuncional” inclui difúncional.

A reacção de reticulação inicial na presença de um agente de reticulação polifuncional pode ter lugar para valores de pH variáveis, dependendo principalmente do facto de se pretender ou não reacçoes éter ou éster. De preferência, isto significa que a referida reacção de reticulação tem lugar a um pH alcalino, em especial superior a pH 9, por exemplo na gama de pH 9-12 quando da promoção de formações de éter. Quando se promovem formações de éster, realiza-se de preferência a referida reacção de reticulação a um pH ácido, especialmente a pH 9

2-6.

Um aspecto interessante da presente invenção é representado pelo caso em que se utiliza a composição de gel à base de políssacárido reticulado assim preparada como tal na medida em que a presente invenção permite a preparação de uma composição viscoelástica. Uma tal composição viscoelástica é por exemplo útil na cirurgia ocular, como substituto do fluido sinovíal e como gotas oculares, e conforme foi referido anteriormente a presente invenção toma possível ajustar as propriedades viscoelásticas para tais utilizações. Deste modo, pela utilização da tecnologia histérica de acordo com a presente invenção é possível obter em extensões da cadeia, ramificações da cadeia e reticulações, de uma maneira mais controlada do que pelas técnicas utilizadas anteriormente com sítios de acoplamento mais ou menos aleatórios.

Além disso, muito embora o facto de os geles obtidos de acordo com a presente invenção não retenham o seu volume original na presença de um meio aquoso, os novos produtos não provocam qualquer interferência ou efeitos de volume negativos nestes ou em outros usos médicos ou clínicos.

De acordo com a presente invenção é também possível incluir na composição de gel à base de polissacárido qualquer substância biologicamente activa para a qual é desejável ou aceitável um veículo de gel à base de polissacárido. Neste contexto, a técnica de diluição-concentração utilizada no processo reivindicado permite encerrar a substância biologicamente activa referida anteriormente antes de se submeter o polissacárido às condições de desimpedimento estérico. Ou seja, muito embora condições de desimpedimento estérico signifiquem, de uma maneira geral, uma operação de concentração, uma tal operação significa que a substância 10 7>f biologicamente activa se encontrará presente numa fase que é mais compacta do que quando a referida substância foi incluída no referido veículo. Por outras palavras, a substância biologicamente activa pode ser retida durante muito mais tempo quando comparada com as reacções de reticulação de gel conhecidas anteriormente. Deste modo, é possível obter um melhor perfil de libertação retardada para a substância activa.

Em ligação com a incorporação da substância biologicamente activa na composição é preferível realizar um ajustamento das condições do pH fisiológico e das condições salinas para se ter uma preparação pronta para uso clínico. Um tal ajustamento fisiológico é preferido igualmente no que diz respeito às condições reaccionais uma vez que se descobriu que a segunda fase do processo prossegue bem sob tais condições. A invenção não deve ficar limitada de qualquer modo no que respeita à substância biologicamente activa quando comparada com o uso da referida substância em casos anteriores. Por outras palavras, o estado ou condição a ser tratado deve ser decisivo para a substância específica a ser escolhida.

Porém, podem escolher-se substâncias interessantes em ligação com a invenção a partir do grupo que consiste em hormonas, citoquinas, vacinas, células e substâncias que aumentam o tecido. Assim, a combinação única de propriedades da nova composição de gel de acordo com a presente invenção toma-a extremamente vantajosa em ligação com estas substâncias, isto é principal mente graças às superiores propriedades de libertação retardada ou depot e às propriedades de não inchamento.

Um grupo interessante de substâncias biologicamente activas é assim constituído por substâncias que aumentam o tecido uma vez que um gel de polissacárido constitui um veículo vantajoso para o mesmo. Outros pormenores relativos a tais produtos podem ser encontrados na patente de invenção WO 94/21299. Mais especificamente, uma substância que aumenta o tecido preferida compreende um polímero escolhido de entre colagéneo, amido, dextranómero, polilactido e os seus copolímeros, e ροΐι-β-hidroxibutirato e os seus copolimeros.

Em ligação com as hormonas são especialmente preferidas a eritropoeitina e a calcitonina. O processo de acordo com a presente invenção permite igualmente a incorporação da substância biologicamente activa por reacção química com a estrutura do gel de polissacárido, ou o agente de reticulação para o mesmo, desde que a referida substância activa contenha grupos funcionais reactivos com os mesmos. Pode deste modo obter-se propriedades únicas ou combinações de propriedades já que num tal caso por exemplo a velocidade de libertação do ingrediente activo será decidida pela degradação ou decomposição da rede polimérica em vez de o ser pela velocidade de dissolução ou de migração da substância referida a partir da rede do gel.

Uma modificação da técnica mencionada em último lugar de acordo com a presente invenção significa que os grupos funcionais da substância activa podem ter sido previamente reagidos com um agente de reticulação para o polissacárido. De preferência, utiliza-se o mesmo agente de reticulação tal como é utilizado na reticulação do polissacárido.

Dado que o processo de acordo com a presente invenção proporciona uma 7$£ nova composição ou estrutura de gel à base de polissacárido, um outro aspecto da presente invenção é representado pela nova composição de gel à base de polissacárido assim preparada. A este respeito, o âmbito da protecção engloba não só a composição de gel à base de polissacárido desde que preparada pelo referido processo mas também qualquer composição de gel à base de polissacárido que seja susceptível de ser obtida por uma técnica similar.

Expresso por outras palavras, a presente invenção proporciona também uma composição de gel à base de polissacárido biocompatível reticulado, que é susceptível de ser obtida por reticulação de um polissacárido reticulável com um agente de reticulação polifuncional para o mesmo em duas fases, sendo a primeira fase de reticulação terminada antes de ocorrer a gelifícação, por um impedimento estérico da reacção de reticulação, e sendo a segunda fase de reticulação iniciada pela reintrodução de condições de desimpedimento estérico para a referida reacção de reticulação de modo a prosseguir a mesma até à obtenção de um gel viscoelástico.

Todas essas características que foram apresentadas como características preferidas ou de interesse em ligação com o processo reivindicado são aplicáveis igualmente à referida composição de gel de polissacárido de per si e não há qualquer necessidade de se voltar a repetir mais uma vez.

Ainda um outro aspecto da presente invenção é representado pelo caso em que se obtém um produto intermediário da fase final da reacção de reticulação com condições de desimpedimento estérico para um estádio ou sítio ulterior, por exemplo na fase de utilização final da composição. Deste modo, descobriu-se que o produto intermediário obtido após o impedimento estérico da reacção de reticulação possui uma estabilidade tal que a terminação da reacção de reticulação pode ter lugar num 13 7S4 estádio ulterior. A invenção refere-se também à composição definida anteriormente para utilização como composição médica ou profiláctica.

Um outro aspecto da presente invenção é o uso da referida composição para a preparação de uma composição médica ou profiláctica para qualquer das finalidades médicas ou terapêuticas específicas mencionadas anteriormente, sendo aplicações preferidas o aumento de tecido e o tratamento hormonal de um mamífero, especialmente de um ser humano.

EXEMPLOS A invenção será agora exemplificada pelos exemplos não limitativos seguintes.

Exemplo 1

Activação do polímero. a. Sob condições alcalinas

Dissolve-se polissacárido sob a forma de 10 g de ácido hialurónico preparado mediante fermentação de Streptococcus em 100 ml de 1% de NaOH pH > 9. Adiciona-se o agente de reticulação sob a forma de éter diglicidílico de 1,4--butanodiol para uma concentração de 0,2%. Incubou-se a solução à temperatura de 40°C durante 4 horas. b. Sob condições ácidas

Realizou-se a experiência tal como em la mas para um pH ácido de cerca de 2-6 pela adição de 1 % de ácido acético à solução em vez de NaOH de acordo com la.

Exemplo 2 14 7$4

Preparação de um gel viscoelástico.

Diluí-se os produtos incubados de acordo com la e 1b até um volume que era igual a duas vezes o volume finalmente desejado ou cerca de 0,5-1% e neutralizou-se. Submeteu-se então o gel a evaporação rotativa para se obter um gel viscoelástico.

Exemplo 3

Preparação de um gel que contém partículas de dextranómero.

Diluí-se os produtos incubados de acordo com la e lb até uma força de 1% e misturou-se com a solução 20 g de partículas de dextranómero seco (Sephadex®25, Pharmacia), sendo as partículas encerradas pela reticulação do polímero de ácido hialurónico após alguns minutos como uma consequência da concentração de ácido hialurónico que se consegue por uma absorção de água pelas bolas de dextranómero.

Os geles viscoelásticos obtidos eram estáveis, autoclaváveis e injectáveis por meio de agulhas hipodérmicas finas.

Exemplo 4

Preparação de um gel para uso como produto medicinal depot contendo eritropoeitina (ΈΡΟ),

Diluí-se o produto incubado obtido no Exemplo la até a uma força de 1% e ajustou-se o pH pela adição de um tampão de citrato de acordo com as instruções do fabricante (Ortho Biotech Inc., Raritan USA) para uma boa estabilidade em solução aquosa. Adicionou-se com agitação 5 x 106 UI de EPO. Após evaporação da solução até 1/4 do volume reticulou-se o polímero para se obter uma composição depot e isolou-se uma quantidade de 20 000 UI de EPO/ml.

Exemplo 5

Preparação de um gel para uso como preparação depot que contém 15 calcitonina.

Misturou-se calcitonina de salmão 100 Ul/ml (Miacalcic® Sandoz) com 2% de solução de polímero preparada de acordo com o Exemplo lb e concentrou-se a solução até 5% (250 UI/ml) mediante evaporação rotativa. Tratou-se um cavalo com claudicação crónica na pata dianteira direita com uma injecção de 2 ml s.c. por semana durante duas semanas. Nas seis semanas que se seguem o referido cavalo deixou de ter dores. O cálcio do soro baixou de apenas 12%.

Exemplo 6

Preparação de um gel que contém heparina a ser libertada de maneira retardada.

Num polímero activado diluído de acordo com o Exemplo 4 dissolveu-se hepanna em uma quantidade de 5% do polímero. Equilibrou-se a mistura obtida durante 1 hora, após o que se evaporou até 1/4 do volume. Anotou-se a sua libertação de inibição de coagulação durante 16 dias de incubação em soro fisiológico.

Exemplo 7

Preparação de um gel com heparina ligada covalentemente em uma posição estericamente controlada.

Precipitou-se um polímero activado de acordo com o Exemplo 1 em metanol sob agitação vigorosa. Secou-se o precipitado filamentoso fino assim obtido durante a noite. Activou-se a heparina de acordo com o exemplo 1. Após a referida incubação (4 horas à temperatura de 40°C) misturou-se o polímero precipitado com a solução de heparina activada. Incubou-se a mistura durante a noite e no dia seguinte neutralizou-se a solução do gel, particulou-se e lavou-se a partir dos 16 7% resíduos reaccionais. O gel formado era susceptível de ligar o factor de crescimento, entre outros o factor de crescimento de fibroblástos básico (“basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)”), mas não mostrou qualquer inibição da coagulação do sangue total.

Exemplo 8

Preparação de um gel que contém grupos de quitosano carregados positivamente.

Realizou-se uma incubação de uma mistura de 7,5 g de polímero de ácido hialurónico e 2,5 g de quitosano (See Cure® Protan) formado de acordo com o exemplo 1. Após uma dissolução e uma neutralização obteve-se uma solução viscoelástica copolimerizada. A referida solução possuía propriedades promotoras da cicatrização após ter sido aplicada a uma ferida difícil de cicatrizar.

Exemplo 9

Preparação de um gel que foi acoplado estericamente.

Activou-se 7,5 g de ácido hialurónico de acordo com o Exemplo la. Do mesmo modo activou-se 2,5 g de dextrano. Precipitou-se o ácido hialurónico em metanol, misturando-se o precipitado com 500 ml de uma solução de dextrano activado diluído a 0,5%. Após agitação e ajustamento do pH e concentração do sal obteve-se uma solução viscoelástica. Submeteu-se a iníusão 5 ml da referida solução num revestimento do tendão de Aquiles que mostrava inflamação repetidamente sob a forma de irritabilidade e “chiadeira”. Decorridas quatro semanas os problemas do tendão de Aquiles tinham desaparecido.

Exemplo 10

Preparação de um gel para utilização como produto medicinal depot contendo 17 7% GMCSF.

Preparou-se o produto de acordo com o Exemplo 5 mas em vez da calcitonina adicionou-se macrófago de Granulócito - factor estimulador de colónias, GMCSF (Leucomax®) 1 mg/g de polímero.

Exemplo 11

Preparação de gel que contém vírus mortos de tipo Influenza A2.

Realizou-se a preparação tal como no Exemplo 4 mas em vez de EPO 40 960 HAU adicionaram-se vírus mortos de influenza de cavalo por 100 ml de solução de polímero activo diluído a 1%. Após contracção 4x a preparação continha 1 600 HAU por ml. Mediante vacinação de mais de 100 cavalos em ligação com uma influenza epidémica descobriu-se que a preparação era altamente eficaz como protecção contra a infecção, protecção essa que se manteve durante um longo intervalo de tempo (mais de 6 meses).

Exemplo 12

Preparação de um gel fresco que contém uma suspensão de células vivas.

Misturou-se 5 ml de uma cultura de fibroblastos com 100 ml de uma solução neutralizada de acordo com o exemplo la. Oxidou-se a mistura e secou-se até metade do volume. Obteve-se uma solução viscoelástica que continha células vivas.

Exemplo 13

Preparação de um gel micronizado denso que contém péptidos pequenos. A um gel neutralizado activado de acordo com o Exemplo 1 a adicionou-se 5 ml de um péptido com 12 aminoácidos. Evaporou-se o gel durante a agitação até 10% e suspendeu-se em óleo mineral. Após a adição de metanol eliminaram-se as partículas secas de gel mediante filtração e lavaram-se para as limpar dos resíduos 18 7% oleosos.

Exemplo 14

Preparação de um gel que contém o gel micronizado denso com péptidos pequenos de acordo com o Exemplo 13. A uma solução a 1% de polímero neutralizado activado de acordo com o Exemplo la adicionaram-se microesferas do Exemplo 13. Evaporou-se então o gel até metade do seu volume. Formou-se um gel homogéneo injectável e estável que contém microesferas finamente dispersas.

Exemplo 15

Preparação de um gel que contém bolas esféricas de polimetilmetacrilato ΓΡΜΜA) tendo um tamanho de 40 - 120 um. A 5 g de um polímero diluído até 1% e neutralizado e activado de acordo com o Exemplo la adicionou-se 100 mg de esferas de polimetilmetacrilato (PMMA). A evaporação até 3% do gel polimérico proporcionou um gel viscoelástico estável e injectável.

Exemplo 16

Preparação de um gel oue contém fragmentos de PMMA de 500 nm aos quais se adicionou antigénio hidrófobo.

Absorveu-se o antigénio de hemaglutinina preparado a partir de vírus A2 de acordo com o Exemplo 11 mediante interacção hidrofóbica em partículas de PMMA com 500 nm. Adicionou-se as referidas partículas a uma solução a 1% de acordo com o Exemplo 15 e conseguiu-se a redução até metade do volume. Formou-se um gel viscoelástico homogéneo e estável que era útil como vacina com um efeito adjuvante elevado. 19 7ί£

Exemplo 17

Comparação entre o grau de reinchamento para disponibilidade livre de água entre geles preparados convencionalmente e geles preparados de acordo com a presente invenção.

Secaram-se geles de ácido hialurónico preparados de acordo com Laurent et al 1963 e de acordo com os Exemplos 1 e 2 anteriores até metade dos seus volumes de inchamento. Em seguida, voltaram a introduzir-se nas suas soluções originais. Os geles previamente conhecidos incharam até ao seu volume original enquanto que as composições de gel de acordo com os presentes Exemplos 1 e 2 incharam apenas marginalmente (10%).

Exemplo 18

Comparação entre a actividade biológica de EPO copolimerizado com ácido hialurónico para um gel e o gel de acordo com o Exemplo 1 no qual foi encerrado EPO para uma concentração do referido gel.

Trataram-se quatro pacientes sob tratamento com Eprex® (CILAG) no tocante à sua anemia provocada por urémia crónica durante dois meses com uma dose de cada mês de acordo com o regime seguinte:

Paciente N°. 1 2 3 4 Dose UI 60 000 70 000 70 000 50 000 Mês 1 Directamente gelifica-do depot. Directamente gelificado depot. Controlo Controlo Mês 2 Controlo Controlo Concentrado Concentrado

Depot gelificado directamente: Epóxido reticulado sob condições suaves de acordo com o Exemplo 11 na presença de EPO.

Controlo: EPO dissolvido em ácido hialurónico a 4% com PM igual a cerca de 6x106 a partir de cristã de galo preparado de acordo com a patente dé invenção 20 US 4 141 973 (Healon® Pharmacia).

Concentrado: EPO encerrado dentro do gel activado que foi gelificado mediante concentração.

Escolheu-se a dose como sendo a dose total por mês que era normalmente necessária para o paciente manter o nível de hemoglobina. Analisou-se o nível do soro de EPO em intervalos regulares por meio de um método imunoquímico.

Resultados

Um método comum para exprimir o efeito funcional de preparações depot consiste em calcular a área da curva (unidades de EPO x dias). Este estudo proporciona também a biodisponibilidade sob a forma de hemoglobina no sangue com 0 = retido, + ~ aumentado e - = reduzido.

Quadro

Paciente N°./mès 1/1 1/2 2/1 2/2 3/1 3/2 4/1 4/2 Área sob a curva 41 424 57 534 224 952 567 656 Controlo de hemoglobina - + - + 0 + + +

Conclusão

Uma inclusão de EPO em depot contraído proporciona a libertação mais alta possível durante a análise. Tentativas para se conseguir a reacção de gelifícação na presença de EPO destruíram as hormonas de tal modo que foi possível registar um nível muito baixo de libertação.

Lisboa, 29 de Agosto de 2001

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O JOSÉ DE SAMPAIO A.O.P.l.

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Claims

Reivindicações 1. Processo para a preparação de uma composição de gel à base de polissacárido biocompatível reticulável, que compreende: a formação de uma solução aquosa de um polissacárido reticulável, solúvel em água; a iniciação de uma reticulação do referido polissacárido na presença de um agente de reticulação polifúncional para o mesmo; o impedimento estérico da reacção de reticulação terminar antes de ocorrer a gelificação, obtendo-se deste modo um polissacárido activado; e a reintrodução de condições de desimpedimento estérico para o referido polissacárido activado de modo a prosseguir a sua reticulação até à obtenção de um gel viscoelástico.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se escolher o polissacárido de entre o grupo que consiste em glicose-amina--glucanos.
3. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo facto de o referido glicose-amina-glucano compreender ácido hialurónico.
4. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se escolher o agente de reticulação de entre o grupo que consiste em epóxidos, compostos de poliaziridilo e éteres glicidílicos.
5. Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo facto de o referido éter glicidílico compreender éter diglicidílico de 1,4-butanodiol.
6. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de o impedimento estérico da reacção de reticulação compreender a diluição do meio aquoso no qual tem lugar a reacção de reticulação. 2 7SS para se conseguir uma concentração menor do polissacárido do referido meio.
7. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de a referida reintrodução de condições estericamente desimpedidas compreenderem a evaporação do meio aquoso no qual tem lugar a reacção de reticulação, de modo a conseguir-se uma concentração mais elevada do polissacárido no referido meio.
8. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-6, caracterizado pelo facto de a referida reintrodução de condições estericamente desimpedidas compreender a diálise do meio aquoso no qual tem lugar a reacção de reticulação.
9. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se realizar a reacção de reticulação inicial na presença de um agente de reticulação polífuncional a um pH alcalino, sendo deste modo promovidas as reacções de reticulação de éter.
10. Processo de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo facto de o referido pH alcalino ser superior a pH 9.
11. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-10, caracterizado pelo facto de se realizar a reacção de reticulação inicial na presença de um agente de reticulação polífuncional a um pH ácido, sendo deste modo promovidas reacções de reticulação de éster.
12. Processo de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo facto de o referido pH ácido ser pH 2-6.
13. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se conseguir o referido impedimento estérico da reacção 3 7½ de reticulação antes de ter sido consumido o referido agente de reticulação.
14. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se encerrar uma substância biologicamente activa na composição de gel à base de polissacárido reticulado durante a sua preparação.
15. Processo de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo facto de se encerrar a referida substancia biologicamente activa em condições de pH e de concentração de sal fisiológicas.
16. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 14 e 15, caracterizado pelo facto de se encerrar a referida substancia activa na composição de gel mediante dissolução ou dispersão da mesma no referido polissacárido activado antes de se submeter o polissacárido mencionado em último lugar a condições de desimpedimento estérico.
17. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 14-16, caracterizado pelo facto de se escolher a referida substancia biologicamente activa de entre o grupo que consiste em hormonas, citoquinas, vacinas, células e substâncias que aumentam os tecidos.
18. Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de a referida substância que aumenta os tecidos compreender um polímero escolhido de entre colagéneo, amido, dextranómero, polilactido e os seus copolimeros, e poli--β-hidroxibutirato e os seus copolimeros.
19. Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de se escolher a referida hormona de entre o grupo que consiste em eritropoeitina e calcitonina.
20. Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 14-19, 4 caracterizado pelo facto de a referida substância biologicamente activa conter grupos reactivos funcionais com o polissacárido e se encontrar encerrada na estrutura do gel mediante reacção química com a mesmo.
21. Processo de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo facto de se preparar a referida substância biologicamente activa que contém grupos funcionais com um agente de reticulação para o referido polissacárido.
22. Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o agente de reticulação ser o mesmo agente de reticulação que foi utilizado na reticulação do polissacárido.
23. Composição de gel à base de polissacárido biocompatível reticulado susceptível de ser preparada por um processo conforme reivindicado em uma qualquer das reivindicações 1-22.
24. Composição de gel à base de polissacárido activado biocompatível parcialmente reticulado conforme obtida por um processo de acordo com uma qualquer das reivindicações 1-22 antes de prosseguir a reticulação do polissacárido activado mediante reticulação das referidas condições de desimpedimento estérico para a reacção de reticulação.
25. Composição de acordo com a reivindicação 23 para utilização como composição médica ou profiláctica.
26. Composição de acordo com a reivindicação 25 que é adaptável como preparação depot.
27. Utilização de uma composição de acordo com a reivindicação 23 para a preparação de uma composição médica ou profiláctica para o aumento do tecido de um mamífero, especialmente de um ser humano. 5
28. Utilização de acordo com a reivindicação 27 para a preparação de uma composição médica ou profiláctica depot, especialmente para o tratamento hormonal de um mamífero, em particular de um ser humano. Lisboa, 29 de Agosto de 2001 O Agdftte Oficial da Propriedade industrial

JOSÉ DE SAMPAIO A.O.P.l. Rua do Salitre, 195, r/c-Drt. 1269-063 LISBOA