SE458525B - Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel - Google Patents

Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel

Info

Publication number
SE458525B
SE458525B SE8502574A SE8502574A SE458525B SE 458525 B SE458525 B SE 458525B SE 8502574 A SE8502574 A SE 8502574A SE 8502574 A SE8502574 A SE 8502574A SE 458525 B SE458525 B SE 458525B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
gel
crosslinking
reagent
procedure
agar
Prior art date
Application number
SE8502574A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8502574D0 (sv
SE8502574L (sv
Inventor
G E S Lindgren
Original Assignee
Pharmacia Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharmacia Ab filed Critical Pharmacia Ab
Priority to SE8502574A priority Critical patent/SE458525B/sv
Publication of SE8502574D0 publication Critical patent/SE8502574D0/sv
Priority to US06/860,201 priority patent/US4973683A/en
Priority to EP86850174A priority patent/EP0203049B1/en
Priority to DE8686850174T priority patent/DE3669722D1/de
Priority to JP61110966A priority patent/JP2565490B2/ja
Publication of SE8502574L publication Critical patent/SE8502574L/sv
Publication of SE458525B publication Critical patent/SE458525B/sv

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0036—Galactans; Derivatives thereof
    • C08B37/0039—Agar; Agarose, i.e. D-galactose, 3,6-anhydro-D-galactose, methylated, sulfated, e.g. from the red algae Gelidium and Gracilaria; Agaropectin; Derivatives thereof, e.g. Sepharose, i.e. crosslinked agarose
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/262—Synthetic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. obtained by polycondensation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B01J20/267—Cross-linked polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28011—Other properties, e.g. density, crush strength
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3071—Washing or leaching
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3085—Chemical treatments not covered by groups B01J20/3007 - B01J20/3078
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Description

458 525 ' 2 " mindre retardation varvid resultatet blir en separation efter molekylstorlek. Denna typ av separation kallas molekylsikt eller gelfiltrering. Det förutsättes dock att den del av gelmatrisen som är exponerad mot molekylerna inte har några andra interagerande egenskaper, dvs gelmatrisen skall vara fullständigt inert mot den kromatograferade molekylblandningen.
Inom andra separationstekniker, såsom jonbyte, hydrofob interaktion, affinitet etc, utnyttjas antingen i gelmatrisen naturligt inbyggda egenskaper eller egenskaper som genom kemisk förändring av gelmatrisen byggts in i porerna.
Separationstekniken har under senare år utvecklats mot kortare separationstid och högre upplösning. Detta medför att rigida, små (5-10 mikrometer) partiklar har använts som matriser. Traditionella polysackarider har på grund av sin mjukhet tillverkats i partikelfördelningar från 40 mikrometer och uppåt. Trots detta har separationen i vissa fall tagit 10-20 timmar att genomföra. Speciellt gäller detta gelfiltre- ring och alldeles speciellt då uteslutningsgränsen varit hög. Denna beror, som tidigare nämnts, på koncentrationen av polysackarid.
En annan vanlig matris som uppfyller dessa nya krav är kiselsyrabaserade geler. Kiselsyra har emellertid den egenheten att inte vara stabil i vattenlösning speciellt_vid förhöjt pH. Eftersom de flesta separationer av biomolekyler sker i vattenlösning är detta otillfredsställande. Kiselsyra innehåller dessutom silanolgrupper som i sig har en jonbytande och/eller stark vätebindande effekt.
De traditionella polysackaridgelmatriserna kan stabiliseras genom att kemiskt tvärbinda polymerkedjorna med varandra.
Denna tvärbindning sker bl a mellan pá polysackariderna tillgängliga hydroxylgrupper. Detta har utnyttjats för exempelvis agaros som tvärbundits med epiklorhydrin (US 3,507,85l) eller andra bifunktionella reagens (US 3,860,573). “3' 453 525 Med bifunktionellt reagens avses här en kemisk förening som under samma betingelser kan reagera med sina båda funktionella grupper. Andra bifunktionella reagens som används är bisepoxider, divinylsulfon och dikarboxylsyraklorider (GB 1352613).
Agar och agaros samt en del liknande polysackarider gelar vid bestämda temperaturer. Vid gelning fås en makroporös gel varvid storleken pà porerna bestäms bl a som tidigare nämnts av koncentrationen av polysackarid. Polysackaridkedjorna kommer därvid att genom vätebindningar inta vissa bestämda avstånd och bilda kedjeliknande buntar mellan vilka porerna uppstår. Genom att tvärbinda inom dessa buntar pâverkas ej porernas storlek utan enbart rigiditeten. J Porath et al (J of Chromatography lgâ (1975) 49-62) har speciellt studerat inflytandet av tvärbindare med olika kedjelängd på agaros- gelernas egenskaper och konstaterade att en gelmatris med avsevärt förbättrad rigiditet erhölls med tvärbindare där den införda molekylkedjan har en längd av 5 atomer. En tvärbindare som uppfyllde dessa villkor var divinylsulfon, som är en homobifunktionell tvärbindare.
I Eruopa-patentansökan 848502l5.9 beskrivs användandet av homopolyfunktionella tvärbindare, där det visas att ytter- ligare förlängning av antalet atomer vid tvärbindningen ger en förbättring av rigiditeten.
Nackdelen med användandet av dylika homobifunktionella resp homopolyfunktionella tvärbindare är flera. Ett väsentligt krav är att tvärbindaren skall vara så hydrofil som möjligt.
Med ökande avstånd mellan de hydrofila, funktionella grupperna minskas hydrofiliciteten. Detta kan kompenseras genom att använda tvärbindare innehållande hydroxylgrupper eller tvärbindare som efter tvärbindning bildar hydroxylgrupper.
Dessa hydroxylgrupper påverkar dock tvärbindningen. Som tidigare nämnts sker tvärbindningen mellan på polysackarider tillgängliga hydroxylgrupper. Det har visats av L Holmberg (Doctorial Thesis, Swedish University of Agricultural 458 525 ' 4 ' Sciences 1983, s. 28-29) att vid tvärbindning av polysackarider med epiklorhydrin sker mycket lite monomer tvärbindning dvs tvärbindning där endast monomer epiklorhydrin deltar.
Tvärtom påpekar Holmberg att huvuddelen (>98 %) är polymer tvärbindning och/eller substitution. Härvid inses att man under tvärbindningsreaktionens gång inte har någon vetskap om antalet atomer i den erhållna tvärbindningsbryggan. Detta visar också resultatet med divinylsulfon (J Porath, J of Chromatogr 103 (1975) 49-62), vilket uppvisar låg reproducer- barhet beträffande tryck/flöde.
De homopolyfunktionella tvärbindarna är dessutom hydrofobare än epiklorhydrin. Epiklorhydrin ger vid tvärbindníng upphov till den mest hydrofila bryggan och borde alltså vara idealisk, dock fås alltså polymer tvärbindning.
REDOGÖRELSE FÖR UPPFINNINGEN Avsikten med föreliggande uppfinning är att avsevärt förbättra rigiditeten och samtidigt minimera den icke-specifika interaktionen hos en porös agar- eller agarosgel genom styrd uppbyggnad av längden på tvärbindaren. Därmed kan partiklarna göras mindre och ändå uppfylla kravet på rigiditet. Härigenom kan rigiditeten helt styras och önskad rigiditet uppnås genom att välja ett visst antal reaktionssteg. Förfarandet enligt uppfinningen har erhållit de i patentkraven angivna kännetecknen.
DETALJBESKRIVNING För att kunna ha fullständig kontroll över tvärbindnings- reaktionen måste det använda reagenset uppfylla följandeí \ 1. Reagenset skall i första reaktionssteget endast kunna reagera monomert, dvs icke tvärbinda utan substituera. " 5 “ 458 525 2. Reagenset skall innehålla minst en aktiverbar funktionell grupp. 3. Reagenset skall efter aktivering och tvärbindning ge en hydrofil brygga av bestämd längd.
Som exempel kan följande monofunktionella reagens med en aktiverbar funktionell grupp användas: X - CHZCH = CH2 där X är en reaktiv gruPP, t ex en halogen.
Om en polysackaridgel, t ex agarosgel =(:) derivatiseras med detta reagens erhålles: (:)-o-cnzcn = CH steg 1 2 Dubbelbindningen kan lätt aktiveras och exempelvis ge upphov till en halohydrin eller en epoxid enligt: on 1 (:)-o-cH2cH-cnz-Hel _ steg 2A /\ resp(:)-o-cnzcn-cnz steg 2B Båda dessa kan reagera med en hydroxylgrupp pà<:)eller med vatten. Därvid kan, om agaroskedjorna ligger tillräckligt nära varandra, en första tvärbindning alternativt hydrolys ske enligt: * on f (:)-o-cH2cH-cH2o-(:) steg 3A en reep(:)-o-CH2-ca-cH2oH steg sn 458 525 ' ° ' Efter det att dessa steg genomförts testas gelen med avseende på rigiditet och flöde. Av vikt är då att avvikelsen vid testet från det teoretiska värdet, som fàs ur Blake-Kozeny's ekvation är liten, dvs det tryck som fås efter en cykel, ger motsvarande maximala flöde. Om tryck/flödeskurvan ej är tillfredsställande upprepas stegen 1, 2 och 3 ytterligare en gång varefter trycket/flödet åter kontrolleras. Dessa steg upprepas tills gelen är tillräckligt hård. På detta sätt inses att kontrollen över maximala antalet atomer i tvärbind- ningsbryggan är total. Nedan ges det möjliga antalet atomer i tvärbindningen efter ett visst antal cykler.
Antal cykler Antal atomer 3 och/eller 7 3 och/eller 7 och/eller ll 3 och/eller 7 och/eller 11 och/eller 15 etc Genom att i den generella reagensformeln X-CHZCH = CH2 variera antalet kolatomer kan ett eller flera reaktionssteg överhoppas. Exempelvis ger epoxíden 0 / \ HZC - CH-CH2-O-CHZCH = CH2 en produkt där 7 och/eller 15 atomer erhålles redan i cykel 1.
Allmänt kan skrivas z A-B där kravet på B är att den skall innehålla minst en grupp som kan aktiveras efter det att reagenset har substituerats på polysackariden via A. Respektive gruppers struktur beror = ' 7 ' 458 525 sedan på vad matrisen skall användas till. I gelfiltrering eftersträvas att uppnå så lite icke-specifik interaktion som möjligt, dvs reagenset skall vara hydrofilt. Inom andra tekniker som hydrofob interaktion kan reagenset väljas hydrofobt t ex en grenad lång helkedja substituerad i B eller A. Inom jonbyteskromatografi kan an- resp katjon- bytaregrupper få ingå i reagenset.
Uppfinningen komer nu att áskàdliggöras med ett antal exempel med varierande polysackaridkoncentration och varierande antal upprepníngscykler av reaktionsprocessen OVäIl .
Exempel 1 Sepharose® 6B uppslammas i vatten (volymförhållande 1:3).
Därefter tillsätts bas (molförhållande 1:15), allylbromid (molförhållande 1:10) och natriumborhydrid (molförhållande 1:2). Reaktionsblandningen omröres vid rumstemperatur. Efter 3-18 timmar filtreras gelen på glasfilter och tvättas med aceton, etanol och vatten till neutralt pH.
Gelen slammas i vatten (volymförhållande 1:3). Bromvatten tillsätts tills en bestående gul färg erhålls (ca 10 min).
Blandningen neutraliseras, filtreras och tvättas med vatten.
Gelen slammas ånyo i vatten enligt ovan och omröres med bas (molförhàllande 1:2) vid rumstemperatur (3-18 timmar). Gelen filtreras och tvättas med vatten till neutralt pH.
Gelen packas på känt sätt och tryck/flödeskurvan upptas.
Ovanstående förfarande ger en gelstyrkeökning motsvarande 50 ggr Sepharose® GB (tabell 1). Förfarandet upprepas enligt ovan tills önskvärd rigiditet uppnåtts (tabell 1). 458 525 ' 8 ' Exempel 2 :i Sepharose® GB utbyts mot Sepharoseø 4B. I övrigt upprepas förfarandet i Exempel 1 tills önskvärd rigiditet uppnåtts å (tabell 1).
Exempel 3 Sepharose® 6B utbyts mot Sepharose® 2B. I övrigt upprepas förfarandet i Exempel 1 tills önskvärd rigiditet uppnåtts (tabell 1).
Exempel 4 Agarospartiklar med en koncentration av 8,7 % framställda enligt känd teknik och siktade i intervallet 40-60 mikrometer reagerades enligt samma mönster som Exempel 1. Efter tre cykler uppnáddes ett flöde av 2 230 cm.h-1.
Exempel 5 Agarospartiklar med en koncentration av 10,7 % framställda enligt känd teknik och siktade i intervallet 40-60 mikrometer reagerades enligt samma mönster som Exempel 1. Efter tre cykler upprepades ett flöde av 3 200 cm.h_1 vid trycket 2,3 MPa. Det teoretiska tryckfallet över kolonnen enligt Blake-Kozeny's ekvation var 2,0 MPa.
De enligt ovanstående exempel tvärbundna gelerna kan givetvis stabiliseras ytterligare genom användande av de inledningsvis omnämnda bi- eller polyfunktionella tvärbindarna pâ i och för sig känt sätt. Detta kan göras efter ett godtyckligt antal cykler. Exempel 6 nedan avser en kombination av de båda tvärbindningsmetoderna. ' 9 ' 458 525 Exempel 6 30 ml gel framställd enligt Exempel 4 (flöde 2 230 cm.h-1) slammas i 60 ml vatten. Under 5 timmar tillsättes ll ml epiklorhydrin, 2 g natriumborhydríd och 10 ml 45 % natrium- hydroxid. Blandningen omröres vid S0 OC. Därefter filtreras och tvättas blandningen med vatten till neutralt pH. Gelen packas på känt sätt och tryck/flödeskurvan upptas. Denna visade ett maximalt flöde av 3 060 cm.h_l.
KROMATOGRAFISKT UPPTRÄDANDE Den i Exempel 5 framställda matrisen packades i kolonn och testades med avseende på gelfiltrering. Matrisen visade en 5 daltons. uteslutningsgräns för proteiner vid omkring 3.10 Proteiner, som normalt är svåra att gelfiltrera (chymo- trypsinogen, cytochrom c), visade god línearitet med den upptagna molekylviktskurvan vid en salthalt av 0.1 M natrium- klorid och pH 7 (0,0l M fosfatbuffert). _ 10 _ 4 5 8 5 2 5 Tabell l celtyp Flöde (cmJflx Förbättring mot Sepharosea B mot SepharoseR CL-B SepharoseR 68 141 SepharoseR CL-6B 301 Ex l, 1 cykel 720 50 25 Ex l, 2 cykler 1 670 I 120 55 Ex 1, 3 cykler 2 250 160 75 sepharoseR 4:a 11,51 SepharoseR CL-4B 261 Ex 2, 1 cykel 900 - 78 35 Ex 2, 2 cykler 1 100 95 42 SepharoseR 2B 101 SepharoseR CL-2B 151 Ex 3, 1 cykel 160 16. ll Ex 3, 2 cykler 400 40 27 Ex 3, 3 cykler 500 50 33 Ex 4, 3 cykler 2 230 Ex 5, 3 cykler 3 200. » Ex 6 3 060 Data hämtad ur "Gel filtratíon, theory and practice", Pharmacia Fine Chemicals, 1979 _

Claims (1)

  1. _ 11 _ 458 525* PATENTKRAV 1. Förfarande för tvärbindning av en porös agar- eller agarosgel, k ä n n e t e c k n a t a v följande Steg: a) att gelen derivatiseras med ett monofunktionellt reagens med minst en aktiverbar funktionell grupp, b) att reagensets funktionella grupp aktiveras, c) att den aktiverade gruppen reageras, d) att den resulterande produkten eventuellt omsättes med det monofunktionella reagenset, ' e) att stegen b) och c) upprepas, och f) att stegen d) och e) upprepas minst en gäng till. Förfarande enligt kravet 1, aV k ä n n e t e c k n a t att den resulterande produkten efter steget c) omsättes med en bi- eller polyfunktionell tvärbindare på i och för sig känt sätt.
SE8502574A 1985-05-23 1985-05-23 Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel SE458525B (sv)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8502574A SE458525B (sv) 1985-05-23 1985-05-23 Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel
US06/860,201 US4973683A (en) 1985-05-23 1986-05-06 Method of cross-linking a porous polysaccharide gel
EP86850174A EP0203049B1 (en) 1985-05-23 1986-05-16 Method of cross-linking a porous polysaccharide gel
DE8686850174T DE3669722D1 (de) 1985-05-23 1986-05-16 Verfahren zur vernetzung von poroesen polysaccharid-gelen.
JP61110966A JP2565490B2 (ja) 1985-05-23 1986-05-16 多孔性ポリサツカライドの架橋方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8502574A SE458525B (sv) 1985-05-23 1985-05-23 Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8502574D0 SE8502574D0 (sv) 1985-05-23
SE8502574L SE8502574L (sv) 1986-11-24
SE458525B true SE458525B (sv) 1989-04-10

Family

ID=20360335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8502574A SE458525B (sv) 1985-05-23 1985-05-23 Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4973683A (sv)
EP (1) EP0203049B1 (sv)
JP (1) JP2565490B2 (sv)
DE (1) DE3669722D1 (sv)
SE (1) SE458525B (sv)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0328256A1 (en) * 1988-01-21 1989-08-16 Owens-Corning Fiberglas Corporation Glass fibers coated with agarose for use as column packing or chromatographic media for bioseparations
SE468814B (sv) * 1991-07-22 1993-03-22 Inovata Ab Foerfarande foer att binda en foerening innehaallande en nukleofil grupp till en amin -och/eller hydroxigrupphaltig polymer
US5827937A (en) * 1995-07-17 1998-10-27 Q Med Ab Polysaccharide gel composition
CN1057607C (zh) * 1995-12-04 2000-10-18 广州市博普生物技术有限公司 一种双功能层析材料及制备方法和应用
CN1057608C (zh) * 1995-12-04 2000-10-18 广州市博普生物技术有限公司 一种亲和层析材料及制备方法和应用
US5789578A (en) * 1996-01-11 1998-08-04 Massey University Methods for the preparation of resins with ligands attached thereto through a linking group comprising sulfide, sulfoxide or sulfone functionality
SE9601368D0 (sv) * 1996-04-11 1996-04-11 Pharmacia Biotech Ab Process for the production of a porous cross-linked polysaccharide gel
SE9700768D0 (sv) * 1997-03-04 1997-03-04 Pharmacia Biotech Ab Förfarande för att introducera funktionalitet
US5998606A (en) * 1997-11-10 1999-12-07 Grandics; Peter Mn(IV)-mediated crosslinking and functionalization of chromatography media
US6586176B1 (en) * 1998-08-07 2003-07-01 Cellay, Llc Gel microdrops in genetic analysis
US7101862B2 (en) * 2001-12-31 2006-09-05 Area Laboratories, Llc Hemostatic compositions and methods for controlling bleeding
WO2005078016A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-25 Millipore Corporation Room temperature stable agarose solutions
WO2005078028A1 (en) * 2004-02-05 2005-08-25 Millipore Corporation Method of forming polysaccharide structures
SE0402322D0 (sv) * 2004-09-22 2004-09-22 Amersham Biosciences Ab Method of preparing a chromatography matrix
AU2005287430B2 (en) * 2004-09-22 2010-09-23 Cytiva Bioprocess R&D Ab Method of preparing a chromatography matrix
JP5058159B2 (ja) * 2005-07-06 2012-10-24 ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ 分離マトリックスの製造方法
US9045566B2 (en) * 2007-05-04 2015-06-02 Bio-Works Technologies Ab Method for the manufacture of agarose gels
SG149759A1 (en) 2007-07-10 2009-02-27 Millipore Corp Media for affinity chromatography
KR20130028939A (ko) * 2010-07-29 2013-03-20 이엠디 밀리포어 코포레이션 크로마토그래피 매질 성능을 개선하기 위한 그라프팅 방법
US9441051B2 (en) * 2012-11-26 2016-09-13 Albert Ludwigs Universitäfreiburg Matrices comprising modified polysaccharides and modified polysaccharides
CN106582578B (zh) * 2016-12-22 2019-06-14 苏州楚博生物技术有限公司 耐高压亲和层析介质
JPWO2023058409A1 (sv) 2021-10-05 2023-04-13
CN116813967B (zh) * 2023-07-10 2024-04-19 杭州毫厘科技有限公司 多孔琼脂糖微球制备方法及多孔琼脂糖微球

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3507851A (en) * 1966-03-24 1970-04-21 Victor Ghetie Synthesis derivatives of agarose having application in electrophoresis on gel and in chromatography
US3723408A (en) * 1970-05-26 1973-03-27 Gen Mills Chem Hydroxyalkyl polygalactomannans by reaction with certain halo fatty acid compounds
US3723409A (en) * 1970-05-26 1973-03-27 Gen Mills Inc Mixed derivatives of polygalactomannans and process of preparing same
US3959251A (en) * 1970-06-25 1976-05-25 Exploaterings Aktiebolaget T.B.F. Stabilized agar product and method for its stabilization
SE413986B (sv) * 1973-03-23 1980-07-07 Exploaterings Ab Tbf Sett att separera amfipatiska emnen innehallande bade hydrofila och hydrofoba grupper samt gelprodukt for genomforande av separationen
SE417431B (sv) * 1975-12-12 1981-03-16 Pharmacia Fine Chemicals Ab Dextranderivatgel for elektroforetisk separation
JPS5844084B2 (ja) * 1977-04-01 1983-09-30 住友化学工業株式会社 イオン性プルランゲルの製造法
JPS5713561A (en) * 1980-06-27 1982-01-23 Hitachi Ltd Memory device
US4319975A (en) * 1980-10-20 1982-03-16 Fmc Corporation Derivatized agarose and method of making and using same
SE437270B (sv) * 1983-07-19 1985-02-18 Pharmacia Ab Separationsmaterial av tverbunden agaros och dess framstellning separationsmaterial av tverbunden agaros och dess framstellning

Also Published As

Publication number Publication date
JPS6225102A (ja) 1987-02-03
JP2565490B2 (ja) 1996-12-18
SE8502574D0 (sv) 1985-05-23
SE8502574L (sv) 1986-11-24
EP0203049A1 (en) 1986-11-26
DE3669722D1 (de) 1990-04-26
US4973683A (en) 1990-11-27
EP0203049B1 (en) 1990-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SE458525B (sv) Foerfarande foer tvaerbindning av en poroes agar- eller agarosgel
AU735537B2 (en) An adsorption/separation method and a medium for adsorption/separation
US4029583A (en) Chromatographic supports and methods and apparatus for preparing the same
JP2558007B2 (ja) 液体クロマトグラフィー用充填剤およびその製造方法
CA2281846C (en) Matrices for separation and separation exploiting said matrices
US6860393B2 (en) Filter device and filter element comprising at least one negatively charged membrane
JP5692059B2 (ja) 免疫グロブリン精製用セルロース系ゲル
EP0966488B1 (en) Process for introducing a functionality
US7423070B2 (en) Surface-modified base matrices
Adly et al. Cyclodextrin‐functionalized monolithic capillary columns: preparation and chiral applications
JP2013532829A (ja) クロマトグラフィーの媒介性能を改善するためのグラフト法
SE470099B (sv) Sulfonaktiverade tioeteradsorbenter för separation av t ex protein
JPH0320706B2 (sv)
AU2002353736B2 (en) Post-modification of a porous support
US20060249457A1 (en) Matrix for separation of polyethers and method of separation
JPH0564748A (ja) イオン交換体
DE69832502T2 (de) Beschichtetes polymerarticle und seine verwendung
JPS63159755A (ja) クロマトグラフイ−用吸着担体
KR950003417B1 (ko) 친수성의 약염기성 음이온 교환수지의 제조방법
RU2057763C1 (ru) Гидрофильный полимерный сорбент
KR950011930B1 (ko) 친수성의 약산성 양이온 교환 수지의 제조 방법
JPH0219902B2 (sv)
JPS63159754A (ja) クロマトグラフイ−用吸着担体

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8502574-0

Format of ref document f/p: F