JPS63159755A - クロマトグラフイ−用吸着担体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アフィニティークロマトグラフィーをはじめ
として各種クロマトグラフィーに利用することのできる
クロマトグラフィー用吸着担体に関する。

従来の技術 クロマトグラフィー技術の１つとして、アフィニティー
クロマトグラフィーは互いに特異的な相互作用を及ぼし
合う物質対の親和性を利用して分離・精製を行なうもの
であシ、例えば生体物質をその生物学的特性即ち分子上
のある特定の化学構造を識別して精製する場合に有用で
ある。

アフィニティークロマトグラフィー用吸着担体（アフィ
ニティーグル）は、例えば不溶性の担体（マトリックス
）に結合基（スペーサー）を結合させて得られる活性支
持体の前記スペーサーにリガンドを結合させたものであ
シ、このリガンドと互いに相互作用を及ぼし合う物質の
組合せを選択して吸着操作を行なう。

リガンドの１つとして、エチレンジアミンジ酢酸は、ア
ルカリ土類、希土類、遷移金属など多くの金属と極めて
安定な錯塩を形成することが知られている。一方、蛋白
質もその構成アミノ酸の種類に応じて金属と配位するこ
とが知られてお９、従ってエチレンジアミンジ酢酸をリ
ガンドとするアフィニティクロマトグラフィー用吸着体
は金属を介した状態で蛋白質の分離精製に有用と考えら
れる。

例、ｔ　バーＣチレンジアミンジ酢酸をリガントトシ、
蛋白質を吸着目的物質とする様なアフィニティークロマ
トグラフィーによる分離・精製や分析において、前記ア
フィニティークロマトグラフィー用吸着拓体の主構成分
である活性支持体に望まれる性質としては、非特異的吸
着が少ないこと、高い多孔性を有すること、リガンドの
結合が容易であシ固定化可能容量が大きいこと、化学的
に安定で声域、塩濃度、温度の広範な条件下で十分安定
であシ体積変化がないこと、十分な機械的強度と安定性
を有し流動特性が良いこと、生物学的汚染に耐えること
、などが挙げられる。

従来よシアフィニティークロマトグラフイー用吸着担体
の基材として用いられているセルロース、デキストラン
、ポリアクリルアミド、アガロース等は、必ずしもこれ
ら望まれる性質を具有していない。とりわけ、硬さが不
足した所謂ソフトグルであるため流動特性が悪く、分離
特性が良くないという重大な欠点を有し、また寿命も短
い。

更に、近年用いられているシリカビーズは、硬さの点で
は満足できるものの、アルカリ性条件下では使用できな
いため、分離条件や溶出・洗浄の条件の選択に大きな制
約が加わるという問題点を有していた。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、前記従来のクロマトグラフィー用吸着
担体の欠点を克服して、アフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着担体に望まれる前述した諾性質を千金に具有
するクロマトグラフィー用吸着担体を提供することにあ
る。

問題点を解決するだめの手段 本発明によって上記目的を達成し得るクロマトグラフィ
ー用吸着担体が提供される。

即チ、本発明は、（Ａ）グリシジルモノビニルエステル
又はグリシジルモノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレ
ングリコールジビニルエステル成分成分トし前記ｃＡ）
成分が＜Ｂ）成分で架橋されたグル状共重合体（以下、
本発明に係るグル状共重合体という）の前記（Ａ）成分
に基づくエポキシ基に結合基を介して共有結合によシ結
合したエチレンジアミンジ酢酸を含有する多孔性の共重
合体から成ることを特徴とするクロマトグラフィー用吸
着担体に関する。

以下、本発明のクロマトグラフィー用吸着担体について
説明する。

本発明に係るケ゛ル状共重合体は、特開昭６０−１０４
２５６号公報等に記載されている様に、例えば、（Ａ）
グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモノビニ
ルエーテル、！＝　ＣＢ）アルキレンクリコールジビニ
ルエステルとを水不溶性の有機希釈剤の存在下で水性懸
濁重合せしめて多孔性のケ°ルを得ることによシ調整す
ることができる。

前記（Ａ）成分及び（Ｂ）成分は水に難溶性であるため
水性懸濁重合方式によって共重合させることができ、水
性懸濁重合は簡単な水中油型懸濁方式で行なうことがで
きる。共重合は有機希釈剤の存在下に行なわれ、この有
機希釈剤の存在に起因して、（Ｂ）のアルキレングリコ
ールジビニルエステル成分が主な架橋成分として作用し
、（Ａ）のグリシジルモノビニルエステル又はグリシノ
ルモノビニルエーテル成分中のエポキシ基の大部分は開
環することなくそのまま生成共重合体中に残留せしめ°
ると共に、生成する多孔性グルの孔径調整にも役立つ。

前記（Ａ）成分としては、炭素数３〜１２のモノビニル
カルビン酸のグリシジルエステルまたは炭素数３〜１２
のモノビニルアルコールのグリシツルエーテルが用いら
れる。これらのうち炭素数の少ないものが特に好ましく
用いられ、その例の中にはメタクリル酸グリシジルエス
テル、アクリル酸グリシジルエステル、アリルグリシジ
ルエーテル等が含まれる。

一方架橋成分として働く（Ｂ）成分としては炭素数２又
は３のアルキレングリコールまたはそのポリアルキレン
グリコールとアクリル酸もしくはメタクリル酸とのエス
テルが好ましく用いられる。例としてエチレングリコー
ルジアクリレート、エチレングリコールジメタクリレー
ト、プロピレングリコールソアクリレート、フロピレン
ゲリコールジメタクリレートの如きアルキレングリコー
ルジビニルエステル及びホリエチレングリコールジメタ
フリレート、ポリグロビレングリコールジメタクリレー
トの如きポリアルキレングリコールジビニルエステルが
挙げられる。

（Ａ）成分対（Ｂ）成分の割合は、前者１０〜９０モル
％に対し後者９０〜１０モル％とする。好ましくは、（
Ａ）成分４０〜８０モル％、（Ｂ）成分６０〜２０モル
％である。（Ａ）成分の半量以下をコモノマー即ちメチ
ルメタクリレート、メチルアクリレート、酢酸ビニルの
如き低級のビニルエステルで置きかえることができる。

（Ａ）成分の割合が大きい程もちろん共重合体中のエポ
キシ基の含有量は増大する。

ＣＢ）成分の割合が大きい程共重合体の架橋度は大とな
り、従って網目構造が密で膨潤度が小さく硬くなる。上
記両成分の割合の範囲外では所期の特徴と特性を充分だ
みたすグル状共重合体が得られない。

用いられる有機希釈剤は、重合反応に不活性で、水に不
溶乃至難溶性であるが原料モノマーを溶解するものであ
ればよい。使用Ｉはモノマー成分と有機希釈剤との含量
に基づき少くとも３０容量％とし、好ましくは４０〜８
０容量％である。使用量が多い程重合過程におけるエポ
キシ基の開環が抑制される。一般的に云って、使用（Ａ
）成分の仕込量中の含有エポキシ基の６０〜９５％程度
を容易に生成重合体中に残留せしめることができる。残
余は重合過程で加水分解されまた一部は架橋に費される
ものと思われる。

以上の如く生成グル中のエポキシ基の含量は、（Ａ）成
分の使用量即ち（Ｂ）成分に対する割合又はコモノマー
による部分的代替によって、そしてまた有機希釈剤の用
量によって、調節することができるが、生成重合体中に
エポキシ酸素量として表わして１重量％以上存在せしめ
るようにすることが好ましく、最高約１０重量％である
。

前述した様に、水性懸濁重合時における有機希釈剤の使
用はまた、生成多孔性グルの孔径調節にも役立つ。生成
グルに対し膨潤性の小さい有機希釈剤を使用すると、重
合過程で懸濁粒子内に相分離が起シ、その結果孔径の大
きいダル所謂巨大有孔構造を有するグルを得ることがで
きる。これ九対し、膨潤性の大きい希釈剤を使用すると
、重合過程で生成物が膨潤状態で重合が進行するから、
相分離は起り難く膨潤によって形成された比較的小さい
孔径の重合体が得られる。膨潤性の大小は、有機希釈剤
の溶解パラメーターに基づいて知ることができる。本発
明において好適に用いうる有機希釈剤の例として、生成
グルに対する膨潤性の大きいものの順に挙げれば、シク
ロヘキサノン、クロロベンゼン、ベンゼン、トルエン、
ｎ−７’ロピルアセテート、ｎ−ブチルアセテート、ｎ
−オクタン等である。

水性懸濁重合は、遊離基発生触媒の存在下にそれ自体は
公知の常法に従って行なうことができる。

水相の量は有機相の量に基づきほぼ同容量またはそれ以
上とし、特に制約はないが約１０倍容量までの量で用い
られる。

本発明に係るグル状共重合体への前記結合基の導入は、
本発明に係るケ゛ル状共重合体の前記（Ａｌ成分に基く
エポキシ基の反応性を利用して行なうことができるが、
この場合、結合基がエチレンジアミンジ酢酸と共有結合
可能な官能基を有していることが必要であるが、結合基
の構造だついて前記官能基を有すること以外に特に制限
はない。前記エチレンジアミンジ酢酸と共有結合可能な
官能基としては、例えばエポキシ基、カルブキシル基等
が例示される。この場合、結合基の導入は公知の方法を
用いて容易尾行なうことができ、又、必ずしも一段階の
反応工程で導入する必要はなく、２段階以上の反応工程
に別けて導入することもできる。以下尾、結合基の導入
の具体例について説明する。

（ｉ）　　官能基としてエポキシ基を有する結合基の導
入 例えば、本発明に係るケ９ル状共重合体の前記（Ａ、１
成分に基づくエポキシ基を水等の水酸基含有化合物によ
シ開環変性して生成するヒドロキシル基にグリシジル基
を有する化合物を結合させて、グリシジル基に基づくエ
ポキシ基を有する結合基を導入する。（以下、この様に
してグリシジル基が導入された重合体を、本発明に係る
変性ケゝル状共重合体という。） 開環変性は、酸又はアルカリの存在下で行なわれるが、
例えば酸の存在下で行なわれる場合には、硫酸または塩
酸を触媒として水中でこれらの共重合体を７０℃〜１０
０℃に約２時間加熱することによシ行われる。酸の濃度
は０．１規定〜０．５規定が好ましい。開環変性はほぼ
定量的に行われる。

かくして開環変性によシ生成するヒドロキシル基に結合
される、グリシツル基を有する化合物としテハ、エピク
ロロヒドリン、エピブロモヒドリンナトのエビハロヒド
リン類、エチレングリコ！ルジグリシジルエーテル、１
．４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、ポリエチ
レングリコールジグリシジルエーテルなどのジグリシジ
ルエーテル類、１．３−ブタジエンジエポキサイド、１
，７−オクタジニンジエポキサイドなどのアルキルジエ
ンノエポキサイド類などが挙げられる。

グリシジル基を有する化合物を作用させる忙は、例えば
開環変性されたグル状共重合体に水酸化ナトリウムまた
は炭酸カリウム等の無機塩基の水溶ｉ中でエビクロロヒ
ドリンを反応させるか、または親水性共重合体に水素化
ホウ素ナトリウムを含む水酸化ナトリウムまたは炭酸カ
リウム等の無機塩基の水溶液中で、エチレングリコール
または１．４−ブタンジオールジグリシジルエーテル、
またはポリエチレングリコールジグリシジルエーテルと
反応させるなどして行われる。用いられるポリエチレン
グリコールジグリシジルエーテルの繰返し単位−Ｃ２Ｈ
４０−の繰返し数が１〜１０のものを用いるのが好まし
い。

（１１）官能基としてカルボキシル基を有する結合基の
導入 例えば、カルボキシル基を有する結合基の導入方法とし
て、本発明に係るグル状共重合体の（Ａ）成分に基づく
エポキシ基又は本発明に係る変性ケ゛ル状共重合体のグ
リシジル基に基づくエポキシ基に、一般式（Ｉ） Ｈ２ＮＲ′ （式中、Ｒ′は水素原子、アミノ基、ω−アミノアルキ
ル基又はω−カル？キシアルキル基ヲ表わｔ）で表わさ
れるアミン化合物を作用させ、又は該アミノ化合物とし
て前記Ｒ′がω−カル？キシアルキル基以外のアミン化
合物を作用させた場合に更にアルキレンカルデン酸無水
物を作用させて、前記エポキシ基又はグリシジル基に、
一般式（■）　ＮＨＲ （式中、Ｒはω−カルゲキシアルキル基、ω−カルボキ
シアルカノイル基、ω−カルボキシアルカノイルアミノ
基又はω−カルボキシアルカノイルアミノアルキル基を
表わす。） で表わされる結合基を導入する方法がある。

この場合、反応は、下記反応式に従って、行なうことが
できる。

本発明に係るグル状共重合体又は本発明に係るこれら共
重合体中の１つのエポキシ基又はグリシジル基を表わす
ものとする。式中、ｍは１又は２、”ｅＰｓｑ及びｒは
それぞれ１以上（よシ好ましくは１〜１２）の整数であ
る。

本発明に係るグル状共重合体のエポキシ基又は本発明に
係る変性グル状共重合体のグリシジル基に、前記反応式
中式（Ｄ）、一般式（Ｄ′）又は一般式（Ｆ′）の化合
物を作用させるのは、溶媒の存在下で行なうことができ
るが、これらの化合物が反応条件下で液体の場合は特に
溶媒を用いないでもよい。

溶媒としては、水が通常用いられるが、その他ｎ−へキ
サン、ベンゼン、キシレンナトの炭化水素類、テトラヒ
ドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類、クロロホル
ム、クロロベンゼン−１，ト（Ｄ塩素化炭化水素類、エ
タノールやメテルセロンルブなどのアルコール類、アセ
トンやメチルイソブチルケトンなどのケトン類などの他
、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイドなど
も用いられ、又これらは単一でも混合溶媒系でも良い。

又、特と触媒は用いないでもよいが、水酸化ナトリウム
や炭酸カリウムなどのアルカリ又はアルカリ土類金属の
水酸化物又は炭酸塩などを用いることもできる。

一般式（Ｄ′）の化合物としては、エチレンジアミン、
１，３−ジアミノプロパン、１，４−ジアミノブタン、
１，５−ジアミノ４ンタン、１．６−ジアミツヘキサン
、１，７−ジアミノへブタン、１，８−ジアミノオクタ
ン、１，９−ジアミノノナン、１，１〇−ジアミノデカ
ン、１，１２−ジアミノドデカンなどのジアミノアルカ
ン類が挙げられる。

一般式（Ｆ）の化合物としては、グリシン、β−アラニ
ン、４−アミノ酪酸、６−アミノカブロン酸、８−アミ
ノカプリル酸などのアミンカルがン酸類を例示すること
ができる。

反応条件については必ずしも制限はないが、一般に次の
様な条件を選択して反応を行なうのが好ましい。

本発明に係るケ゛ル状共重合体又は本発明に係る変性グ
ル状共重合体の重量（ａ）と式（Ｄ）、一般式（Ｄ′）
又は一般式（Ｆ）の化合物の重量 （ｂ）の比：　。

ａ　：　ｂ＝１　：　０．３〜１０ よシ好ましくは、 ａ　：　　ｂ＝１　：　０．３〜３ 反応温度：０〜１５０℃、よシ好ましくは室温〜１００
℃、 反応時間＝１〜６０時間、よシ好ましくは１〜３０時間
、 反応圧カニ常圧〜ｌ　Ｑ　ａｔｍ、よシ好ましくは常邑
反応後の後処理についても特別な要件はなく、炉別、洗
浄等、通常行なわれている方法にて適宜実施される。

以上で得られた本発明だ係るクロマトグラフィー用担体
は、式（Ｄ）又は一般式（Ｄ′）の化合物を用いた場合
につき、次いで必要があれば、既に一般式で示した如く
活性支持基の末端のアミン基を一般式（Ｅ）の酸無水物
を作用させることによりカルボキシル基を有する活性支
持基に変換することができる。反応の溶媒としては水が
通常用いられるが、その他テトラヒドロフラン、ジオキ
サンなどのエーテル類、酢酸などのカルデン酸類、ピリ
ジンなども用いられる。又、特に触媒は用いないでもよ
いが、塩酸、硫酸などの酸や、水酸化ナトリウムや炭酸
カリウムなどのアルカリの添加によシ、反芯液の−を調
整することもできる。

反応式中一般式（Ｅ）又は一般式（Ｅ′）のアルキレン
カルボン酸無水物としては、コハク酸無水物、ゲルター
ル酸無水物、アジピン酸無水物、ピメリン酸無水物、ス
ペリン酸無水物、アゼライン酸無水物、セパチン酸無水
物などを例示することができる・ 反応条件については必ずしも制限はないが、一般に次の
様な条件を選択して反応を行なうのが好ましい。

本発明に係るグル状共重合体又は本発明に係る変性グル
状共重合体のアミン化合物の重量（ａ′）と一般式（Ｅ
）又は一般式（Ｅ′）の化合物の重量（ｂ′）の比： ａ’：　ｂ’　　＝１　：　０．３〜１０よシ好ましく
は、 ａ’：　ｂ’　　＝　１　：　０．３〜３反応温度：０
〜１５０℃、よシ好ましくは室温〜１００℃、 反応時間＝１〜６０時間、よシ好ましくは１〜３０時間
、 反応圧カニ常圧〜１０　ａｔｍ、よシ好ましくは常圧。

反応後の後処理についても特別な要件はなく、戸別、洗
浄等、通常行なわれている方法にて適宜実施される。

また、官能基としてカルボキシル基を有する結合基を導
入する別の方法として、水酸基を有するアミノカルボン
酸を本発明に係るグル状共重合体の（５）成分に基づく
エポキシ基又は本発明に係る変性グル状共重合体のグリ
シツル基に作用させて結合させる方法がある。

水酸基を有するアミノカルボン酸としては、セリン、ホ
モセリン、スレオニン、４−ヒドロキシプロリン、４−
アミノニ３−ヒドロキシ酪酸、Ｎ−トリス（ヒドロキシ
メチル）、メチルグリシン等のアミノ酸誘導体や、グル
コサミン酸等のアミノ糖誘導体などを例示することがで
きる。

結合の状態は、本発明に係るグル状共重合体のエポキシ
基又は本発明に係る変性グル状共重合体のグリシジル基
が水酸基を有するアミノカルボン酸のアミン基と結合し
た結果、該エポキシ基又はグリシジル基は開環し、水酸
基と水酸基を有するカルブキシル残基が生成することに
なる。

水酸基を有するアミノカルがン酸を作用させるのは、溶
媒の存在下で行なうことができる。

溶媒としては、水が通常用いられるが、その他ｎ−ヘキ
サン、ベンゼン、キシレンなどの炭化水素類、テトラヒ
ドロフラン、ジオキサンなどのエーテル類、クロロホル
ム、クロロベンゼン’Ｉト（Ｄ塩素化炭化水素類、エタ
ノールやメチルセロンルブなどのアルコール類、アセト
ンやメチルイソブチルケトンなどのケトン類などの他、
ツメチルホルムアミド、ジメチルスルホキサイドなども
用いられ、又これらは単一でも混合溶媒系でも良い。

又、特に触媒は用いないでもよいが、水酸化ナトリウム
や炭酸カリウムなどのアルカリ又はアルカリ土類金属の
水酸化物又は炭酸塩などを用いることもできる。

反応条件については特に制限はなく、例えば前記一般式
（１）の化合物を作用させる場合と同じ様な条件にする
ことができる。

この様々水酸基を有するアミノカルボン酸を用いて結合
基を導入すると、前記基材以外、即ち結合基の部分に基
づく疎水性に由来する非特異的吸着をも排除することが
できる。

結合基にエチレンジアミンジ酢酸を共有結合させるに際
しては、結合基が有する官能基に応じて必要であれば、
適宜触媒や反応試薬などを用いて適当な溶媒下で行なう
ことが出来る。例えば触媒としては、塩酸や炭酸ナトリ
ウム又は炭酸水素ナトリウムなどの酸、アルカリが主と
して官能基がエポキシ基の場合に用いられ、又、例えば
反応試薬としてはＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、ジシ
クロへキシルカルボジイミド又は１−エチル−３−（３
−ジメチルアミノグロビル）カルボジイミドのような縮
合剤が官能基がカルボキシル基の場合に用いられる等々
を例示することが出来る。又溶媒としては通常水が用い
られるが必要に応じてリン酸や酢酸緩衝液として用いる
ことも出来、又塩化ナトリウムなどの無機塩類を添加し
て用いることも可能である。

エチレンジアミンジ酢酸との反応条件については必ずし
も制限は無いが一般に次のような範囲で行なうことが適
当である。

結合基を結合させた本発明に係るｒル状共重合体又は変
性ｒル状共重合体とエチレンジアミンジ酢酸の重量比：
１：０．０１〜０．３、好ましくは１：Ｏ，ＯＳ〜０．
２；反応温度：０°Ｃ〜室温、好ましくは４℃〜室温；
反応時間：１〜７２時間、好ましくは２〜１２時間。

反応後の後処理についても特別な要件は無く、戸別、洗
浄等通常行なわれている方法にて適宜実施される。

発明の効果 本発明により提供されるクロマトグラフィー用吸着担体
は、前述のアフィニティークロマトグラフィー用吸着担
体として望まれる性質を総て具備する基剤を用い、これ
に適当な結合基を介してエチレンジアミンジ酢酸を共通
結合させたものである為、本発明の吸着担体を用いるこ
とによシ、従来のソフトダルを用いた吸着担体と同じよ
うなアフィニティークロマトグラフィー用充填剤として
使用できるばかりでなく、特に耐圧カラムに充填し、加
圧下でも充分使用することができるということは、作業
時間を大巾に短縮させる為、従って分離精製の能率を大
きく向上させ得るという最大の利点が得られるものであ
シ、この利点が例えば高速液体クロマトグラフィーへの
応用や工業用の分離精製設備への応用を計るには不可欠
であることは言を俟たない。

特に、前記の如く多くの利点を有するケ゛ル状共重合体
に対し、やはシ前記の如く結合基を介して共有結合によ
りエチレンジアミンジ酢酸を結合させた吸着担体は、例
えば、一般に用いられている臭化シアンを介したアフィ
ニティークロマトグラフィー用吸着担体などに比して、
使用時のリガンドの脱落が無く、又結合基の長さを任意
に調整することが可能である為、リガンドの目的物質に
対する吸着能が優れており、更に非特異的吸着も少ない
こと等も併せ七本発明によシ提供されるクロマトグラフ
ィー用吸着担体の効果は大きい。

実施例 以下に、公知物質よシの本発明のクロマトグラフィー用
吸着担体の製造法について代表的な例を示し、更に具体
的に説明する。但し、これらは説明の為の単なる例示で
あって、本発明はこれらに何ら制限されないのは言うま
でもない。

実施例１ グリシゾルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ダル状共重合体
を水によシ該エポキシ基を開環変性し、更に１，４−ブ
タンソオールジグリシジルエーテルでエポキシ基を導入
しだグル（エポキシ基：乾燥グル１ｇ当り０．３・ミリ
モル）　１．０．９をエチレンジアミンジ酢酸二ナトリ
ウム塩０．３５．！７の２モル炭酸す）　ＩＪウム水溶
液３　ｍｌにおける溶液に加えて６５℃で２４時間振盪
後、４℃で一夜放置した。グルを７取し１０％酢酸水溶
液及び水で洗浄した。こうして得られた吸着担体は、乾
燥グルＩＩ当りエチレンジアミンジ酢酸０．０７０ミリ
モル担持させていることが吸着担体を０．１規定水酸化
ナトリウム水溶液で滴定することによシ確められた。

実施例２ グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタ
クリレートから得られたエポキシ基含有ダル状共重合体
を水により該エポキシ基を開環変性し、次いでエチレン
グリコールジグリシジルエーテルでエポキシ基を導入し
た後、更に４−アミノ酪酸でカルブキシル基を導入した
グル１．０Ｊを無水ジオキサンで充分洗浄した後、無水
ジオキサン４　ｍｌ中に加え、更ＫＮ−ヒドロキシコハ
ク酸イミド８０ｒｎ９及びジシクロへキシルカルボジイ
ミド１４４ｍ９を加えて室温で２時間振盪した後グルを
７取し、無水ジオキサン２０ｒｎ１１メタノール６　ｍ
ｌ、冷水３　ｍｌの順で素早く洗浄した。このグルをエ
チレンジアミンジ酢酸二ナトリウム塩０．２．９の０．
１モル炭酸水素ナトリウムの水２　ｒｎｌにおける溶液
に加え室温で２時間振盪後、４℃で一夜放置した。

グルを７取し１モル塩化すｌ−ＩＪウム水溶液及び水で
洗浄した。こうして得られた吸着担体は乾燥ダルＩＩ当
シエチレンジアミンジ酢酸を０．０５２ミリモル担持さ
せていることが確められた。

試験例１ 実施例１で得られた吸着担体４．６φＸ７５ｍｍのステ
ンレス製カラムに充填し、高速液体クロマトグラフ装置
を用いて先ず５０ミリモル硫酸鋼水溶液を流して銅を配
位させた後、分析用溶離液で充分洗浄したものを用い、
シチジン（１）、ウリジン（２）。

グアノシン（３ン、アデノシン（４）、及びデオキシア
デノシン（５λを分析したところ、図１のようなりロマ
トダラムが得られた。

分析条件 １１ｆｔ液：ｏ、ｏｓモル４−エチルモルホリン酢酸緩
衝液（ｐＨ５，６５）、溶離速度：　０．５　ｍ／ｍｔ
ｎ、カラム温度＝２５℃、検出器：紫外分光光度計試験
例２ 試験例１で用いたカラムを用いて試験例１と同様に銅を
配位させ、洗浄した後、トランスフェリンを分析したと
ころ、図２のようなりロマトグラムが得られた。溶離液
■で吸着したトランスフェリンが溶離液■に切シ換える
と溶出する・ことを示している。

分離条件 溶離液：０．０１モルリン酸ナトリウム緩衝液ｐＨ７，
０（溶離液■）、０．０５モルトリス塩酸緩衝ｉ０．１
５モル塩化アンモニウムｐＨ８，０（溶１１ｍ液■）、
流速：　Ｑ、　５　ｍＪ／ｍｉｎ、検出器：紫外分光光
度計２８０　ｎｍ

【図面の簡単な説明】

図１及び図２は、本発明によるエチレンジアミンジ酢酸
吸着担体を用いた高速液体クロマトグラフ用カラムによ
る、分離の７９ターンを示す図である。 １・・・シチジン、２・・・ウリジン、３・・・グアノ
シン、４・・・アデノシン、′５・・・デオキシアデノ
シン。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （Ａ）グリシジルモノビニルエステル又はグリシジルモ
   ノビニルエーテル及び（Ｂ）アルキレングリコールジビ
   ニルエステルを主成分とし前記（Ａ）成分が（Ｂ）成分
   で架橋されたゲル状共重合体の前記（Ａ）成分に基づく
   エポキシ基に結合基を介して共有結合により結合したエ
   チレンジアミンジ酢酸を含有する多孔性の共重合体から
   成ることを特徴とするクロマトグラフィー用吸着担体。