JP2007506095A - ポリエーテル分離用マトリックス及び分離方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】 なし
Description
本発明出願においては、「ペグ化」という用語は、ポリエチレングリコールで修飾されていることを意味する。
(a)表面にポリマー鎖が結合した担体からなり、各ポリマー鎖が繰返しプロトン供与基を示し、上記担体の少なくとも表面が実質的に親水性である、分離マトリックスを提供する段階と、
(b)約6未満のpHで、前記液を前記分離マトリックスと接触させて、前記分離マトリックスのプロトン供与基と前記1種以上の目標物質のプロトン受容エーテル酸素との間の水素結合を可能にする段階と、適宜、
(c)前記分離マトリックスを溶出液と接触させることによって、1種以上の目標物質を前記マトリックスから回収する段階とを含む。
図1は、担体に結合したポリマー鎖の上に存在するプロトン供与基が、ポリエーテル目的物質の酸素原子とどのように相互作用するかを模式的に図示することによって、本発明において用いる水素結合の原理を示す。したがって、この図は、例えばPEGが本発明の分離マトリックスにどのように吸着しているかを示す。
50mLの架橋多孔質アガロースゲル(Sepharose FF)を、水酸化ナトリウムとアリルグリシジルエーテルを含有する水溶液中で、標準的な手順に従って、アリル濃度0.30ミリモル/mlまでアリル化した。次いでアリル化ゲルを、ガラスフィルターで蒸留水500mlを用いて洗浄し、真空乾燥した。洗浄した材料を、プロペラ式撹拌機を備えた三つ口丸底フラスコに移した。その後、水100ml、アクリル酸20ml、及び4,4’−アゾ−ビス(4−シアノペンタン酸)0.25gを加えた。70℃で撹拌しながら一晩反応を行った。30分後、反応混合物は粘稠になった。反応後、粒子を過剰(約1.5L)の水、エタノール及び23%エタノールで洗浄した。
実施例1の記載に従って調製したポリ(アクリル酸)グラフトSepharose(商標)6FF(Amersham Biosciences、ウプサラ、スウェーデン)1mlを、HR5/5カラム(Amersham Biosciences、ウプサラ、スウェーデン)に充填した。次いでこのカラムを、Amersham BiosciencesのAKTA(商標)Explorerクロマトグラフィーシステムに接続した。屈折率検出器を用いてクロマトグラフィーの運転を監視した。
弱いカルボキシメチルカチオン交換基を有する架橋アガロース担体である、CM Sepharose(商標)FF(Amersham Biosciences、ウプサラ、スウェーデン)1mlを、HR5/5カラム(Amersham Biosciences、ウプサラ、スウェーデン)に充填し、Amersham BiosciencesのAKTA(商標)Explorerクロマトグラフィーシステムに接続した。屈折率検出器を用いてクロマトグラフィーの運転を監視した。水酸化ナトリウムでpH3に調整した20mMギ酸を溶出液として用いた。
Claims (26)
- 表面にポリマー鎖が結合した担体からなる分離マトリックスであって、各ポリマー鎖が繰返しプロトン供与基を示し、上記担体の少なくとも表面が実質的に親水性である、分離マトリックス。
- 前記高分子担体が架橋炭水化物担体である、請求項1記載の分離マトリックス。
- 前記担体が、表面が水酸基を示す表面修飾多孔質合成ポリマー担体である、請求項1記載の分離マトリックス。
- 前記表面修飾多孔質合成ポリマーが架橋スチレン及び/又はジビニルベンゼンである、請求項3記載の分離マトリックス。
- 前記担体が多孔質である、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックス。
- 前記プロトン供与基が主にカルボキシル基である、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックス。
- 前記ポリマー鎖が主にポリ(アクリル酸)鎖である、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックス。
- 各ポリマー鎖が約100〜500個のモノマー単位からなる、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックス。
- 液体クロマトグラフィー法において、ポリエーテル目標物質を他の成分から分離することができる、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックス。
- 液体クロマトグラフィー法において、ポリ(エチレングリコール)(PEG)をペグ化タンパク質及び/又は未変性タンパク質から分離することができる、請求項9記載の分離マトリックス。
- クロマトグラフィーカラムに、前記請求項のいずれか1項記載の分離マトリックスを含むシステム。
- PEGを液中のペグ化及び/又は未変性化合物から除去するための、請求項1乃至請求項10のいずれか1項記載の分離マトリックスの使用又は請求項11記載のシステムの使用。
- ペグ化化合物を液中のPEG及び/又は未変性化合物から単離するための、請求項1乃至請求項10のいずれか1項記載の分離マトリックスの使用又は請求項11記載のシステムの使用。
- 前記化合物がタンパク質である、請求項12又は請求項13記載の使用。
- 1種以上のポリエーテル目標物質を液の他の成分から分離する方法であって、
(a)表面にポリマー鎖が結合した担体からなる分離マトリックスであって、各ポリマー鎖が繰返しプロトン供与基を示し、上記担体の少なくとも表面が実質的に親水性である、分離マトリックスを提供する段階と、
(b)約6未満のpHで、前記液を前記分離マトリックスと接触させて、前記分離マトリックスのプロトン供与基と前記1種以上のポリエーテル目標物質のプロトン受容エーテル酸素との間の水素結合を可能にする段階と、適宜、
(c)前記分離マトリックスを溶出液と接触させることによって、1種以上の目標物質を前記マトリックスから回収する段階と
を含む方法。 - 前記分離マトリックスの前記プロトン供与基が主にカルボキシル基である、請求項15記載の方法。
- 前記分離マトリックスの前記ポリマー鎖が主にポリ(アクリル酸)鎖である、請求項15又は請求項16記載の方法。
- 段階(b)において、pHが約4未満、好ましくは約3未満である、請求項15乃至請求項17のいずれか1項記載の方法。
- 段階(c)の前記溶出液が上昇pHグラジエントを含む、請求項15乃至請求項18のいずれか1項記載の方法。
- 前記ポリエーテル目標物質がPEG又はタンパク質などのペグ化化合物である、請求項15乃至請求項19のいずれか1項記載の方法。
- 反応混合物からペグ化化合物を精製する方法であって、PEGを除去する前処理段階と、1種以上のペグ化化合物を単離する後段階とを含み、前記前処理が段階15乃至段階19のいずれか1項記載の方法である精製方法。
- 前記化合物がタンパク質である、請求項21記載の方法。
- 1種以上のペグ化化合物を単離する前記後段階が液体クロマトグラフィー段階である、請求項21又は請求項22記載の方法。
- イオン交換マトリックスを、請求項1乃至請求項10のいずれか1項記載の分離マトリックスに変換する方法であって、前記イオン交換マトリックスの担体表面をポリ(アクリル酸)基で修飾する段階を含む方法。
- イオン交換マトリックスを、請求項1乃至請求項10のいずれか1項記載の分離マトリックスに変換する方法であって、前記イオン交換マトリックスの担体表面上にビニルエーテルをグラフトする段階を含む方法。
- 前記イオン交換マトリックスの担体表面にビニルエーテルモノマーをグラフトする、請求項25記載の方法。
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