KR20240004960A - Ras 억제제 - Google Patents

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KR20240004960A
KR20240004960A KR1020237041843A KR20237041843A KR20240004960A KR 20240004960 A KR20240004960 A KR 20240004960A KR 1020237041843 A KR1020237041843 A KR 1020237041843A KR 20237041843 A KR20237041843 A KR 20237041843A KR 20240004960 A KR20240004960 A KR 20240004960A
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KR1020237041843A
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엘레나 에스. 콜툰
제임스 크레그
아드리안 엘. 길
존 이. 녹스
양 리우
지. 레슬리 버넷
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레볼루션 메디슨즈, 인크.
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Abstract

본 개시내용은 거대환식 화합물, 그리고 Ras 단백질을 억제시킬 수 있는 이의 약학적 조성물 및 단백질 복합체, 그리고 암의 치료에서 그들의 용도를 특성화한다.

Description

RAS 억제제
관련된 출원에 대한 교차-참조
본원은 2021년 5월 5일 출원된 미국 출원 번호 63/184,599에 우선권의 이익을 주장하고, 이는 그 전체가 이로써 참고로 편입된다.
배경
대다수의 소분자 약물은 표적 단백질에서 기능적으로 중요한 포켓을 결합시킴으로써 작용함으로써, 그 단백질의 활성을 조절한다. 예를 들어, 스타틴으로서 알려진 콜레스테롤-저하 약물은 HMG-CoA 환원효소의 효소 활성 부위를 결합시키고, 그래서 효소가 이의 기질과 관여하는 것을 방지한다. 많은 그러한 약물/표적 상호작용 쌍이 알려진다는 사실은 일부 사람들이 소분자 조절제가 상당한 양의 시간, 노력, 및 자원에 제공된, 모두는 아니지만, 대부분의 단백질에서 발견될 수 있다고 믿도록 오도할 수 있다. 이것은 사실과 거리가 멀다. 현재 판단은 모든 인간 단백질의 약 10%만이 소분자에 의해 표적가능하다는 것이다. Bojadzic 및 Buchwald, Curr Top Med Chem 18: 674-699 (2019). 나머지 90%는 상기-언급된 소분자 약물 발견에 대해 다루기 어렵거나 다루기 힘든 것으로 현재 간주된다. 그러한 표적은 "약물치료할 수 없는" 것으로서 흔히 지칭된다. 이들 약물치료할 수 없는 표적은 의학적으로 중요한 인간 단백질의 방대하고 주로 미개발된 저장소를 포함한다. 그래서, 그러한 약물치료할 수 없는 표적의 기능을 조절할 수 있는 새로운 분자성 양식을 발견하는데 많은 관심이 있다.
Ras 단백질 (K-Ras, H-Ras 및 N-Ras)이 다양한 인간 암에서 필수적 역할을 하고 그러므로 항암 요법에 대하여 적합한 표적이라는 것이 문헌에서 잘 확립되었다. 정말로, Ras 단백질에서의 돌연변이는 미국에서 모든 인간 암의 대략 30%를 차지하고, 이들 중 다수는 치명적이다. 활성화 돌연변이에 의한 Ras 단백질의 조절장애, 과발현 또는 업스트림 활성화는 인간 종양에서 흔하고, Ras에서 활성화 돌연변이는 인간 암에서 빈번하게 발견된다. 예를 들어, Ras 단백질에서 코돈 12에 활성화 돌연변이는 양쪽 GTP의 GTPase-활성화 단백질 (GAP)-의존적 및 내재적 가수분해 속도를 억제시킴으로써 기능하여, Ras 돌연변이체 단백질의 집단을 "온" (GTP-결합된) 상태 (Ras(ON))로 상당히 왜곡시켜, 종양원성 MAPK 신호전달을 초래한다. 현저히, Ras는 GTP에 대하여 피코몰 친화성을 나타내어, 이러한 뉴클레오타이드의 저 농도의 존재 하에서 조차 Ras를 활성화되게 한다. Ras의 코돈 13 (예를 들면, G13D) 및 61 (예를 들면, Q61K)에 돌연변이는 일부 암에서 종양원성 활성을 또한 담당한다.
지난 수십년 동안 Ras에 대해 방대한 약물 발견 노력에도 불구하고, Ras를 직접적으로 표적화하는 약물은 여전히 승인되지 않았다. 추가의 노력은 다양한 Ras 돌연변이에 의해 구동된 암에 대하여 추가의 약제를 발굴하기 위해 필요해진다.
개요
Ras 억제제가 본원에 제공된다. 본원에 기재된 접근법은 합성 리간드와 정상 생리적 조건 하에서 상호작용하지 않는 2개 세포내 단백질: 관심의 표적 단백질 (예를 들면, Ras), 및 세포에서 널리 발현된 시토졸성 샤페론 (프리젠터 단백질) (예를 들면, 사이클로필린 A)사이 고 친화성 3-성분 복합체, 또는 접합체의 형성을 수반한다. 더욱 구체적으로, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 Ras의 억제제는 Ras 단백질과 널리 발현된 시토졸성 샤페론, 사이클로필린 A (CYPA) 사이 고 친화성 3-복합체, 또는 접합체의 형성을 구동시킴으로써 Ras내 새로운 결합 포켓을 유도한다. 이론에 의한 구속됨 없이, 본 발명자는 Ras에 관한 억제성 효과가 본 발명의 화합물 및 이들이 형성하는 복합체, 또는 접합체에 의해 영향받는 하나의 방식이, 종양원성 신호를 전파하는데 필요한, Ras와 다운스트림 효과기 분자, 예컨대 RAF 및 PI3K 사이 상호작용 부위의 입체 폐색에 의한 것이라고 믿는다.
이에 따라, 일부 구현예에서, 본 개시내용은 구조식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 특성화한다:
화학식 I
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
L1은 부재이거나 링커이고;
W는 비닐 케톤, 비닐 술폰, 이논, 또는 알키닐 술폰을 포함하는 가교기이고;
R1은 수소, 임의로 치환된 3 내지 10-원 헤테로사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이다.
화학식 I의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다. 표 1의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다.
필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 필요로 하는 대상체에서 Ras 단백질-관련된 장애의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
세포에서 Ras 단백질의 억제 방법으로서, 세포를 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 추가로 제공된다.
본 발명의 일 구현예에 관하여 논의된 임의의 제한이 본 발명의 임의의 기타 구현예에 적용할 수 있다는 것이 구체적으로 고려된다. 게다가, 본 발명의 임의의 화합물 또는 조성물은 본 발명의 임의의 방법에서 사용될 수 있고, 본 발명의 임의의 방법은 본 발명의 임의의 화합물 또는 조성물을 생산하는데 또는 활용하는데 사용될 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1a 및 도 1b: H가 2개 상이한 세포-기반된 검정의 맥락에서 (S)Me로 대체되는 본 발명의 특정 화합물 (화학식 BB) (우측 지점) 및 상응하는 화학식 AA (좌측 지점)의 화합물의 효력의 매칭된 쌍 분석. y 축은 H358 세포주에서 측정된 경우에 pERK EC50 (도 1a) 또는 CTG IC50 (도 1b)을 나타낸다.
도 2a-2c: 화학식 AA의 화합물이 11.233 분 및 11.346 분의 체류 시간을 갖는 분리불가능한 부분입체이성질체를 제공함을 보여주는 HPLC 추적 (도 2a). 대조적으로, 화학식 BB의 화합물을 형성하기 위한 메틸기의 첨가는 11.364 분의 체류 시간을 갖는 하나의 부분입체이성질체 (도 2b), 및 10.045 분의 체류 시간을 갖는 다른 부분입체이성질체 (도 2c)와, 부분입체이성질체의 용이한 분리를 허용한다. 화합물의 구조는 각 HPLC 추적 위에 표시된다.
정의 및 화학적 용어
본원에서, 문맥으로부터 달리 명확하지 않는 한, (i) 용어 "한"은 "하나 이상"을 의미하고; (ii) 용어 "또는"은, 본 개시내용이 대안 및 "및/또는"만을 지칭하는 정의를 뒷받침하여도, 대안만을 지칭하거나 대안이 상호 배타적임을 명시적으로 표시되지 않는 한 "및/또는"을 의미하는데 사용되고; (iii) 용어 "포함하는" 및 "포함한"은 스스로 또는 하나 이상의 추가의 성분 또는 단계와 함께 제시되든 항목화된 성분 또는 단계를 포괄하는 것으로 이해되고; (iv) 범위가 제공되는 경우, 종점은 포함된다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "약"은 값을 결정하는데 이용되고 있는 장치 또는 방법에 대하여 오차의 표준 편차를 값이 포함한다는 것을 표시하는데 사용된다. 특정 구현예에서, 용어 "약"은, 달리 언급되지 않는 한 또는 달리 문맥으로부터 명백하지 않는 한 (예를 들면, 상기 숫자가 가능한 값의 100%를 초과하는 경우), 명시된 값의 어느 한쪽 방향으로 (초과 또는 미만) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 그 이하에 해당하는 값의 범위를 지칭한다.
본원에 사용된 경우에, 인접한 원자 설명하기의 맥락에서 용어 "인접한"은 공유 결합에 의해 직접적으로 연결되는 2가 원자를 지칭한다.
본원에 사용된 경우에 "본 발명의 화합물" 및 유사 용어는, 명시적으로 언급되든 아니든, 화학식 I 및 이의 하위화학식의 화합물, 예를 들어, 표 1의 화합물, 뿐만 아니라 이들의 염 (예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염), 용매화물, 수화물, 입체이성질체 (회전장애이성질체 포함), 및 호변이성질체를 포함하는, 본원에 기재된 Ras 억제제를 지칭한다.
용어 "야생형"은 (돌연변이체, 이환된, 변경된, 등과 대조되는 경우에) "정상" 상태 또는 맥락으로 자연에서 발견된 대로 구조 또는 활성을 갖는 실체를 지칭한다. 당업자는 야생형 유전자 및 폴리펩타이드가 여러 상이한 형태 (예를 들면, 대립유전자)로 종종 실재한다.
당업자는 본원에 기재된 특정 화합물이 하나 이상의 상이한 이성질체성 (예를 들면, 입체이성질체, 기하 이성질체, 회전장애이성질체, 호변이성질체) 또는 동위원소성 (예를 들면, 하나 이상의 원자가 원자의 상이한 동위원소로 치환된 것, 예컨대 중수소에 대하여 치환된 수소) 형태로 실재할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 달리 표시되지 않는 한 또는 문맥으로부터 분명하지 않는 한, 묘사된 구조는 임의의 상기 이성질체성 또는 동위원소성 형태를 개별적으로 또는 조합으로 나타내도록 이해될 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 비대칭적 (예를 들면, 하나 이상의 입체중심을 가짐)일 수 있다. 모든 입체이성질체, 예컨대 거울상이성질체 및 부분입체이성질체는 달리 표시되지 않는 한 의도된다. 비대칭적으로 치환된 탄소 원자를 함유하는 본 개시내용의 화합물은 광학적으로 활성 또는 라세미 형태로 단리될 수 있다. 광학적으로 활성 출발 물질로부터 광학적으로 활성 형태를 어떻게 제조하는 지에 관한 방법은 당업계에서, 예컨대 라세미 혼합물의 분해에 의해 또는 입체선택적 합성에 의해 알려진다. 올레핀, C=N 이중 결합, 및 기타 등등의 많은 기하 이성질체는 본원에 기재된 화합물에서 또한 존재할 수 있고, 모든 상기 안정한 이성질체는 본 개시내용에서 고려된다. 본 개시내용의 화합물의 시스 및 트란스 기하 이성질체는 기재되고 이성질체의 혼합물로서 또는 분리된 이성질체성 형태로서 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 묘사된 하나 이상의 화합물은 상이한 호변이성질체성 형태로 실재할 수 있다. 문맥에서 분명해질 수 있듯이, 명시적으로 제외되지 않는 한, 이러한 화합물 지칭은 모든 이러한 호변이성질체성 형태를 포괄한다. 일부 구현예에서, 호변이성질체성 형태는 단일 결합의 인접한 이중 결합과의 스와핑 그리고 수반하는 양성자의 이동에서 비롯한다. 특정 구현예에서, 호변이성질체성 형태는, 참조 형태와 동일한 실험식 및 총 전하를 갖는 이성질체성 양성자화 상태인, 프로토트로픽 호변이성질체일 수 있다. 프로토트로픽 호변이성질체성 형태를 가진 모이어티의 예는 케톤 - 에놀 쌍, 아미드 - 이미드산 쌍, 락탐 - 락팀 쌍, 아미드 - 이미드산 쌍, 엔아민 - 이민 쌍, 및 양성자가 헤테로환식 시스템의 2개 이상의 위치를 차지할 수 있는 환상 형태, 예컨대, 1H- 및 3H-이미다졸, 1H-, 2H- 및 4H-1,2,4-트리아졸, 1H- 및 2H- 이소인돌, 및 1H- 및 2H-피라졸이다. 일부 구현예에서, 호변이성질체성 형태는 평형에 있을 수 있거나 적합한 치환에 의해 입체적으로 잠금될 수 있다. 특정 구현예에서, 호변이성질체성 형태는 아세탈 상호전환에서 비롯한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 묘사된 구조는 하나 이상의 동위원소적으로 풍부해진 원자의 존재 하에서만 상이한 화합물을 포함하도록 또한 의미된다. 본 발명의 화합물로 편입될 수 있는 예시적 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소, 및 요오드의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 32P, 33P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I를 포함한다. 동위원소적으로-표지화된 화합물 (예를 들면, 3H 및 14C로 표지화된 것들)은 화합물 또는 기질 조직 분포 검정에서 유용할 수 있다. 삼중수소 (즉, 3H) 및 탄소-14 (즉,　14C) 동위원소는 그들의 제조의 용이성 및 검출가능성으로 유용할 수 있다. 추가로, 더 무거운 동위원소 예컨대 중수소 (즉, 2H)를 이용한 치환은 더 큰 대사적 안정성 (예를 들면, 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투약 요건)에서 비롯하는 특정 치료적 이점을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 수소 원자는 2H 또는 3H에 의해 대체되거나, 하나 이상의 탄소 원자는 13C- 또는　14C-풍부해진 탄소에 의해 대체된다. 양전자 방출 동위원소 예컨대　15O,　13N, 11C, 및　18F는 기질 수용체 점유를 시험하기 위해 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용하다. 동위원소적으로 표지화된 화합물의 제조는 당업자에 알려진다. 예를 들어, 동위원소적으로 표지화된 화합물은, 비-동위원소적으로 표지화된 시약을 동위원소적으로 표지화된 시약으로 치환함으로써, 본원에 기재된 본 발명의 화합물에 대하여 개시된 것들과 유사한 절차를 따름으로써 일반적으로 제조될 수 있다.
임의의 위치 "R"이 중수소 (D)일 수 있는 본 발명의 화합물에서 하나 이상의 중수소 치환을 함유할 수 있는 모이어티의 비-제한 예는
및 을 포함한다. 추가의 예는 모이어티 예컨대 및 및 유사한 R1-유형 모이어티의 중수소화를 포함하고, 여기서 R1의 정의는 본원에서 (예를 들면, 화학식 I, Ia, II-5, II-5a, II-6, II-6a, II-6b, 및 II-6c의 화합물에서) 발견된다. 본 발명의 화합물에서 치환체 W 내에 모이어티의 중수소화는 또한 고려되고, 여기에서 W는 본원에 정의된다 (예를 들면, 일반식 I 및 II 및 이의 하위화학식 뿐만 아니라 본원에 기재된 W의 구체적 예, 예컨대 및 참고). 더욱이, 본원에 기재된 화학식, 예컨대 및 의 화합물의 임의의 A 모이어티에서 이용가능한 위치의 중수소화가 또한 고려된다. 추가로, 중수소 치환은 링커 위치에 본 발명의 화합물, 예컨대
에서 또한 일어날 수 있다.
추가 구현예에서, 실릴화 치환은, 예컨대 하기와 같은 링커에서 또한 고려된다:
.
당업계에서 알려진 바와 같이, 많은 화학적 실체는 다양한 상이한 고체 형태 예컨대, 예를 들어, 무정형 형태 또는 결정형 형태 (예를 들면, 다형체, 수화물, 용매화물)를 채택할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 임의의 고체 형태를 포함하여 임의의 상기 형태로 활용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 또는 묘사된 화합물은 수화물 또는 용매화물 형태로 제공 또는 활용될 수 있다.
본 명세서에서 다양한 위치에, 본 개시내용의 화합물의 치환체는 그룹으로 또는 범위로 개시된다. 본 개시내용이 상기 그룹 및 범위의 구성원들의 각각 및 모든 개별 하위조합을 구체적으로 포함하기 위한 것이다. 예를 들어, 용어 "C1-C6 알킬"은 구체적으로 메틸, 에틸, C3 알킬, C4 알킬, C5 알킬, 및 C6 알킬을 개별적으로 개시하기 위한 것이다. 게다가, 치환체가 그룹으로 또는 범위로 개시되는 복수의 위치를 화합물이 포함하는 경우, 달리 표시되지 않는 한, 본 개시내용은 각 위치에 구성원들의 각각 및 모든 개별 하위조합을 함유하는 개별 화합물 및 화합물들의 그룹 (예를 들면, 속 및 아속)을 포함하기 위한 것이다.
용어 "임의로 치환된 X" (예를 들면, "임의로 치환된 알킬")은 "X, 여기서 X는 임의로 치환됨" (예를 들면, "알킬, 여기서 상기 알킬은 임의로 치환됨")과 등가이기 위한 것이다. 속성 "X" (예를 들면, 알킬)가 그 자체로 선택적인 것을 의미하기 위한 것은 아니다. 본원에 기재된 경우에, 관심의 특정 화합물은 하나 이상의 "임의로 치환된" 모이어티를 함유할 수 있다. 일반적으로, 용어 "치환된"은, 용어 "임의로"에 의해 선행되든 아니든, 지정된 모이어티의 하나 이상의 수소가 적당한 치환체, 예를 들면, 본원에 기재된 치환체 또는 기의 임의의 것으로 대체되는 것을 의미한다. 달리 표시되지 않는 한, "임의로 치환된" 기는 기의 각 치환가능한 위치에 적당한 치환체를 가질 수 있고, 임의의 주어진 구조에서 1개 초과 위치가 특정된 기로부터 선택된 1개 초과 치환체로 치환될 수 있는 경우, 치환체는 모든 위치에서 어느 한쪽 동일한 또는 상이한 것일 수 있다. 예를 들어, 용어 "임의로 치환된 C1-C6 알킬-C2-C9 헤테로아릴"에서, 알킬 부문, 헤테로아릴 부문, 또는 양쪽은 임의로 치환될 수 있다. 본 개시내용에 의해 구상된 치환체의 조합은 바람직하게는 안정한 또는 화학적으로 가능한 화합물의 형성을 초래하는 것들이다. 용어 "안정한"은, 본원에 사용된 경우에, 본원에 개시된 목적들 중 하나 이상을 위하여 그들의 생산, 검출, 및, 특정 구현예에서 그들의 회수, 정제, 및 사용을 허용하는 조건에 적용된 때 실질적으로 변경되지 않는 화합물을 지칭한다.
"임의로 치환된" 기의 치환가능한 탄소 원자에서 적당한 1가 치환체는, 독립적으로, 중수소; 할로겐; -(CH2)0-4Ro; -(CH2)0-4ORo; -O(CH2)0-4Ro; -O-(CH2)0-4C(O)ORo; -(CH2)0-4CH(ORo)2; -(CH2)0-4SRo; Ro으로 치환될 수 있는 -(CH2)0-4Ph; Ro으로 치환될 수 있는 -(CH2)0-4O(CH2)0-1Ph; Ro으로 치환될 수 있는 -CH=CHPh; Ro으로 치환될 수 있는 -(CH2)0-4O(CH2)0-1-피리딜; 4-8 원 포화된 또는 불포화된 헤테로사이클로알킬 (예를 들면, 피리딜); 3-8 원 포화된 또는 불포화된 사이클로알킬 (예를 들면, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 또는 사이클로펜틸); -NO2; -CN; -N3; -(CH2)0-4N(Ro)2; -(CH2)0-4N(Ro)C(O)Ro; -N(Ro)C(S)Ro; -(CH2)0-4N(Ro)C(O)NRo 2; -N(Ro)C(S)NRo 2; -(CH2)0-4N(Ro)C(O)ORo; -N(Ro)N(Ro)C(O)Ro; -N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2; -N(Ro)N(Ro)C(O)ORo; -(CH2)0-4C(O)Ro; -C(S)Ro; -(CH2)0-4C(O)ORo; -(CH2)0-4-C(O)-N(Ro)2; -(CH2)0-4-C(O)-N(Ro)-S(O)2-Ro; -C(NCN)NRo 2; -(CH2)0-4C(O)SRo; -(CH2)0-4C(O)OSiRo 3; -(CH2)0-4OC(O)Ro; -OC(O)(CH2)0-4SRo; -SC(S)SRo; -(CH2)0-4SC(O)Ro; -(CH2)0-4C(O)NRo 2; -C(S)NRo 2; -C(S)SRo; -(CH2)0-4OC(O)NRo 2; -C(O)N(ORo)Ro; -C(O)C(O)Ro; -C(O)CH2C(O)Ro; -C(NORo)Ro; -(CH2)0-4SSRo; -(CH2)0-4S(O)2Ro; -(CH2)0-4S(O)2ORo; -(CH2)0-4OS(O)2Ro; -S(O)2NRo 2; -(CH2)0-4S(O)Ro; -N(Ro)S(O)2NRo 2; -N(Ro)S(O)2Ro; -N(ORo)Ro; -C(NORo)NRo 2; -C(NH)NRo 2; -P(O)2Ro; -P(O)Ro 2; -P(O)(ORo)2; -OP(O)Ro 2; -OP(O)(ORo)2; -OP(O)(ORo)Ro, -SiRo 3; -(C1-4 직선형 또는 분지형 알킬렌)O-N(Ro)2; 또는 -(C1-4 직선형 또는 분지형 알킬렌)C(O)O-N(Ro)2일 수 있고, 식중 각 Ro은 하기 정의된 경우에 치환될 수 있고 독립적으로 수소, -C1-6 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, -CH2-(5-6 원 헤테로아릴 고리), 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 3-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리이거나, 상기 정의에도 불구하고, Ro의 2개 독립적 발생은, 그들의 개재 원자(들)와 합쳐져서, 하기 정의된 경우에 치환될 수 있는, 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 3-12-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 단환식 또는 이환식 고리를 형성한다.
Ro에서 적당한 1가 치환체 (또는 Ro의 2개 독립적 발생을 그들의 개재 원자와 합침으로써 형성된 고리)는, 독립적으로, 할로겐, -(CH2)0-2R●, -(할로R●), -(CH2)0-2OH, -(CH2)0-2OR●, -(CH2)0-2CH(OR●)2; -O(할로R●), -CN, -N3, -(CH2)0-2C(O)R●, -(CH2)0-2C(O)OH, -(CH2)0-2C(O)OR●, -(CH2)0-2SR●, -(CH2)0-2SH, -(CH2)0-2NH2, -(CH2)0-2NHR●, -(CH2)0-2NR● 2, -NO2, -SiR● 3, -OSiR● 3, -C(O)SR●, -(C1-4 직선형 또는 분지형 알킬렌)C(O)OR●, 또는 -SSR●일 수 있고 식중 각 R●은 미치환되거나 "할로"에 의해 선행되는 경우 하나 이상의 할로겐으로만 치환되고, C1-4　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리로부터 독립적으로 선택된다. Ro의 포화된 탄소 원자에서 적당한 2가 치환체는 =O 및 =S를 포함한다.
"임의로 치환된" 기의 포화된 탄소 원자에서 적당한 2가 치환체는 하기: =O, =S, =NNR* 2, =NNHC(O)R*, =NNHC(O)OR*, =NNHS(O)2R*, =NR*, =NOR*, -O(C(R* 2))2-3O-, 또는 -S(C(R* 2))2-3S-를 포함하고, 식중 R*의 각 독립적 발생은 수소, 하기 정의된 경우에 치환될 수 있는 C1-6　지방족, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 미치환된 5-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리로부터 선택된다. "임의로 치환된" 기의 근접 치환가능한 탄소에 결합되는 적당한 2가 치환체는 -O(CR* 2)2-3O-를 포함하고, 식중 R*의 각 독립적 발생은 수소, 하기 정의된 경우에 치환될 수 있는 C1-6　지방족, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 미치환된 5-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리로부터 선택된다.
R*의 지방족 기에서 적당한 치환체는 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2를 포함하고, 식중 각 R●은 미치환되거나 "할로"로 의해 선행된 경우에 하나 이상의 할로겐으로만 치환되고, 독립적으로 C1-4　지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리이다.
"임의로 치환된" 기의 치환가능한 질소에서 적당한 치환체는 -R†, -NR† 2, -C(O)R†, -C(O)OR†, -C(O)C(O)R†, -C(O)CH2C(O)R†, -S(O)2R†, -S(O)2NR† 2, -C(S)NR† 2, -C(NH)NR† 2, 또는 -N(R†)S(O)2R†를 포함하고; 식중 각 R†는 독립적으로 수소, 하기 정의된 경우에 치환될 수 있는 C1-6 지방족, 미치환된 -OPh, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 미치환된 3-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리이거나, 상기 정의에도 불구하고, R†의 2개 독립적 발생은 그들의 개재 원자(들)와 합쳐져서 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 미치환된 3-12-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 단환식 또는 이환식 고리를 형성한다.
R†의 지방족 기에서 적당한 치환체는 독립적으로 할로겐, -R●, -(할로R●), -OH, -OR●, -O(할로R●), -CN, -C(O)OH, -C(O)OR●, -NH2, -NHR●, -NR● 2, 또는 -NO2이고, 식중 각 R●은 미치환되거나 "할로"에 의해 선행된 경우에 하나 이상의 할로겐으로만 치환되고, 독립적으로 C1-4 지방족, -CH2Ph, -O(CH2)0-1Ph, 또는 질소, 산소, 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 0-4 헤테로원자를 갖는 5-6-원 포화된, 부분적으로 불포화된, 또는 아릴 고리이다. R†의 포화된 탄소 원자에서 적당한 2가 치환체는 =O 및 =S를 포함한다.
용어 "아세틸"은, 본원에 사용된 경우에, 기 -C(O)CH3을 지칭한다.
용어 "알콕시"는, 본원에 사용된 경우에, -O-C1-C20 알킬 기를 지칭하고, 식중 알콕시 기는 산소 원자를 통해서 화합물의 나머지에 부착된다.
용어 "알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 1 내지 20개 (예를 들면, 1 내지 10개 또는 1 내지 6개) 탄소를 함유하는 포화된, 직선형 또는 분지형 1가 탄화수소 기를 지칭한다. 일부 구현예에서, 알킬 기는 미분지형 (즉, 선형)이고; 일부 구현예에서, 알킬 기는 분지형이다. 알킬 기는, 비제한적으로, 메틸, 에틸, n- 및 이소-프로필, n-, sec-, 이소- 및 tert-부틸, 및 네오펜틸에 의해 예시된다.
용어 "알킬렌"은, 본원에 사용된 경우에, 2개 수소 원자의 제거에 의해 직선형 또는 분지형 쇄 포화된 탄화수소에서 유래된 포화된 2가 탄화수소 기를 나타내고, 메틸렌, 에틸렌, 이소프로필렌, 및 기타 등등에 의해 예시된다. 용어 "Cx-Cy 알킬렌"은 x와 y 탄소 사이 갖는 알킬렌 기를 나타낸다. x에 대하여 예시적 값은 1, 2, 3, 4, 5, 및 6이고, y에 대하여 예시적 값은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 또는 20 (예를 들면, C1-C6, C1-C10, C2-C20, C2-C6, C2-C10, 또는 C2-C20 알킬렌)이다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 본원에 정의된 경우에 1, 2, 3, 또는 4개 치환기로 추가로 치환될 수 있다.
용어 "알케닐"은, 본원에 사용된 경우에, 달리 특정되지 않는 한, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 2 내지 20개 탄소 (예를 들면, 2 내지 6개 또는 2 내지 10개 탄소)의 1가 직선형 또는 분지형 쇄 기를 나타내고 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 2-메틸-1-프로페닐, 1-부테닐, 및 2-부테닐에 의해 예시된다. 알케닐은 양쪽 시스 및 트란스 이성질체를 포함한다. 용어 "알케닐렌"은, 본원에 사용된 경우에, 달리 특정되지 않는 한, 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 2 내지 20개 탄소 (예를 들면, 2 내지 6개 또는 2 내지 10개 탄소)의 2가 직선형 또는 분지형 쇄 기를 나타낸다.
용어 "알키닐"은, 본원에 사용된 경우에, 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 2 내지 20개 탄소 원자 (예를 들면, 2 내지 4개, 2 내지 6개, 또는 2 내지 10개 탄소)의 1가 직선형 또는 분지형 쇄 기를 나타내고 에티닐, 및 1-프로피닐에 의해 예시된다.
용어 "알키닐 술폰"은, 본원에 사용된 경우에, 구조 을 포함하는 기를 나타내고, 식중 R은 본원에 기재된 임의의 화학적으로 가능한 치환체이다.
용어 "아미노"는, 본원에 사용된 경우에, -N(R†)2, 예를 들면, -NH2 및 -N(CH3)2를 나타낸다.
용어 "아미노알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 하나 이상의 아미노 모이어티로 하나 이상의 탄소 원자에서 치환된 알킬 모이어티를 나타낸다.
용어 "아미노산"은, 본원에 기재된 경우에, 측쇄, 아미노 기, 및 산 기 (예를 들면, -CO2H 또는 -SO3H)를 갖는 분자를 지칭하고, 여기서 아미노산은 측쇄, 아미노 기, 또는 산 기 (예를 들면, 측쇄)에 의해 모체 분자성 기에 부착된다. 본원에 사용된 경우에, 용어 "아미노산"은 이의 가장 넓은 의미에서, 예를 들면, 하나 이상의 펩타이드 결합의 형성을 통해서 폴리펩타이드 쇄에 편입될 수 있는 임의의 화합물 또는 서브스턴스를 지칭한다. 일부 구현예에서, 아미노산은 일반 구조 H2N-C(H)(R)-COOH를 갖는다. 일부 구현예에서, 아미노산은 자연-발생 아미노산이다. 일부 구현예에서, 아미노산은 합성 아미노산이고; 일부 구현예에서, 아미노산은 D-아미노산이고; 일부 구현예에서, 아미노산은 L-아미노산이다. "표준 아미노산"은 자연 발생 펩타이드에서 흔히 발견된 20개 표준 L-아미노산들 중 임의의 것을 지칭한다. 예시적 아미노산은 알라닌, 아르기닌, 아스파르트산, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 임의로 치환된 하이드록실노르발린, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 피롤리신, 셀레노시스테인, 세린, 타우린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 및 발린을 포함한다.
용어 "아릴"은, 본원에 사용된 경우에, 탄소 원자에 의해 형성된 1가 단환식, 이환식, 또는 다환식 고리 시스템을 나타내고, 여기서 현수 기에 부착된 고리는 방향족이다. 아릴 기의 예는 페닐, 나프틸, 페난트레닐, 및 안트라세닐이다. 아릴 고리는 안정한 구조를 초래하는 임의의 헤테로원자 또는 탄소 고리 원자에서 이의 현수 기에 부착될 수 있고 고리 원자들 중 임의의 것은 달리 특정되지 않는 한 임의로 치환될 수 있다.
용어 "C0"은, 본원에 사용된 경우에, 결합을 나타낸다. 예를 들어, 용어 -N(C(O)-(C0-C5 알킬렌-H)-의 부분은, -N(C(O)-H)-에 의해 또한 표시되는, -N(C(O)-(C0 알킬렌-H)-를 포함한다.
용어 "탄소환식" 및 "카르보사이클릴"은, 본원에 사용된 경우에, 브릿징될 수 있거나, 융합될 수 있거나 스피로환식일 수 있는 1가, 임의로 치환된 C3-C12 단환식, 이환식, 또는 삼환식 고리 구조를 지칭하고, 여기에서 모든 고리는 탄소 원자에 의해 형성되고 적어도 하나의 고리는 비-방향족이다. 탄소환식 구조는 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 및 사이클로알키닐 기를 포함한다. 카르보사이클릴 기의 예는 사이클로헥실, 사이클로헥세닐, 사이클로옥티닐, 1,2-디하이드로나프틸, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 플루오레닐, 인데닐, 인다닐, 데칼리닐, 및 기타 등등이다. 탄소환식 고리는 안정한 구조를 초래하는 임의의 고리 원자에서 이의 현수 기에 부착될 수 있고 고리 원자들 중 임의의 것은 달리 특정되지 않는 한 임의로 치환될 수 있다.
용어 "카르보닐"은, 본원에 사용된 경우에, C=O로서 또한 표시될 수 있는, C(O) 기를 나타낸다.
용어 "카르복실"은, 본원에 사용된 경우에, -CO2H, (C=O)(OH), COOH, 또는 C(O)OH 또는 미양성자화된 대응물을 의미한다.
용어 "시아노"는, 본원에 사용된 경우에, -CN 기를 나타낸다.
용어 "사이클로알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 달리 특정되지 않는 한, 브릿징될 수 있거나, 융합될 수 있거나 3 내지 8개 고리 탄소를 갖는 스피로환식일 수 있는, 1가 포화된 환식 탄화수소 기를 나타내고, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 및 사이클로헵틸에 의해 예시된다.
용어 "사이클로알케닐"은, 본원에 사용된 경우에, 달리 특정되지 않는 한, 브릿징될 수 있거나, 융합될 수 있거나 3 내지 8개 고리 탄소를 갖는, 그리고 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 스피로환식일 수 있는, 1가, 비-방향족, 포화된 환식 탄화수소 기를 나타낸다.
용어 "부분입체이성질체"는, 본원에 사용된 경우에, 서로의 거울상이 아니고 서로에서 비-중첩가능한 입체이성질체를 의미한다.
용어 "거울상이성질체"는, 본원에 사용된 경우에, 적어도 80% (즉, 하나의 거울상이성질체의 적어도 90% 및 다른 하나의 거울상이성질체의 최대 10%), 바람직하게는 적어도 90% 및 더욱 바람직하게는 적어도 98%의 (당업계에서 표준 방법에 의해 결정된 경우에) 광학 순도 또는 거울상이성질체성 과량을 갖는, 본 발명의 화합물의 각 개별 광학적으로 활성 형태를 의미한다.
용어 "구아니디닐"은, 구조: 를 갖는 기를 지칭하고, 식중 각 R은, 독립적으로, 본원에 기재된 임의의 임의의 화학적으로 가능한 치환체이다.
용어 "구아니디노알킬 알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 하나 이상의 구아니디닐 모이어티로 하나 이상의 탄소 원자에서 치환된 알킬 모이어티를 나타낸다.
용어 "할로아세틸"은, 본원에 사용된 경우에, 수소들 중 적어도 하나가 할로겐에 의해 대체된 아세틸 기를 지칭한다.
용어 "할로알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 상이한 할로겐 모이어티의 동일한 것의 하나 이상으로 하나 이상의 탄소 원자에서 치환된 알킬 모이어티를 나타낸다.
용어 "할로겐"은, 본원에 사용된 경우에, 브롬, 염소, 요오드, 또는 불소로부터 선택된 할로겐을 나타낸다.
용어 "헤테로알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 적어도 하나의 탄소 원자가 헤테로원자 (예를 들면, O, N, 또는 S 원자)로 대체된, 본원에 정의된 경우에, "알킬" 기를 지칭한다. 헤테로원자는 라디칼의 중간에서 또는 끝에 나타날 수 있다.
용어 "헤테로아릴"은, 본원에 사용된 경우에, 적어도 하나의 완전히 방향족 고리를 함유하는 1가, 단환식 또는 다환 고리 구조를 나타낸다: 즉, 이들은 단환식 또는 다환 고리 시스템 내에서 4n+2 파이 전자를 함유하고 그 방향족 고리에서 N, O, 또는 S로부터 선택된 적어도 하나의 고리 헤테로원자를 함유한다. 예시적 미치환된 헤테로아릴 기는 1 내지 12개 (예를 들면, 1 내지 11개, 1 내지 10개, 1 내지 9개, 2 내지 12개, 2 내지 11개, 2 내지 10개, 또는 2 내지 9개) 탄소이다. 용어 "헤테로아릴"은 상기 헤테로방향족 고리들 중 임의의 것이 하나 이상의, 아릴 또는 탄소환식 고리, 예를 들면, 페닐 고리, 또는 사이클로헥산 고리에 융합되는 이환식, 삼환식, 및 사환식 기를 포함한다. 헤테로아릴 기의 예는, 비제한적으로, 피리딜, 피라졸릴, 벤조옥사졸릴, 벤조이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 이미다졸릴, 티아졸릴, 퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 및 4-아자인돌릴을 포함한다. 헤테로아릴 고리는 안정한 구조를 초래하는 임의의 고리 원자에서 이의 현수 기에 부착될 수 있고 고리 원자들 중 임의의 것은 달리 특정되지 않는 한 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 1, 2, 3, 또는 4개 치환기로 치환된다.
용어 "헤테로사이클로알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 가교될 수 있거나, 융합될 수 있거나 스피로환식일 수 있는, 1가 단환식, 이환식 또는 다환 고리 시스템을 나타내고, 여기서 적어도 하나의 고리는 비-방향족이고 여기서 비-방향족 고리는 질소, 산소, 및 황으로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된 1, 2, 3, 또는 4개 헤테로원자를 함유한다. 5-원 고리는 0 내지 2개 이중 결합을 갖고, 6- 및 7-원 고리는 0 내지 3개 이중 결합을 갖는다. 예시적 미치환된 헤테로사이클로알킬 기는 1 내지 12개 (예를 들면, 1 내지 11개, 1 내지 10개, 1 내지 9개, 2 내지 12개, 2 내지 11개, 2 내지 10개, 또는 2 내지 9개) 탄소이다. 용어 "헤테로사이클로알킬"은 하나 이상의 탄소 또는 헤테로원자가 단환식 고리, 예를 들면, 퀴누클리디닐 기의 2개 비-인접한 구성원을 브릿징하는 브릿징된 다환식 구조를 갖는 헤테로환식 화합물을 또한 나타낸다. 용어 "헤테로사이클로알킬"은 상기 헤테로환식 고리의 임의의 것이 하나 이상의 방향족, 탄소환식, 헤테로방향족, 또는 헤테로환식 고리, 예를 들면, 아릴 고리, 사이클로헥산 고리, 사이클로헥센 고리, 사이클로펜탄 고리, 사이클로펜텐 고리, 피리딘 고리, 또는 피롤리딘 고리에 융합되는 이환식, 삼환식, 및 사환식 기를 포함한다. 헤테로사이클로알킬 기의 예는 피롤리디닐, 피페리디닐, 1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀리닐, 데카하이드로퀴놀리닐, 디하이드로피롤로피리딘, 및 데카하이드로나프티리디닐이다. 헤테로사이클로알킬 고리는 안정한 구조를 초래하는 임의의 고리 원자에서 이의 현수 기에 부착될 수 있고 고리 원자들 중 임의의 것은 달리 특정되지 않는 한 임의로 치환될 수 있다.
용어 "하이드록시"는, 본원에 사용된 경우에, -OH 기를 나타낸다.
용어 "하이드록시알킬"은, 본원에 사용된 경우에, 하나 이상의 -OH 모이어티로 하나 이상의 탄소 원자에서 치환된 알킬 모이어티를 나타낸다.
용어 "이성질체"는, 본원에 사용된 경우에, 본 발명의 임의의 화합물의 임의의 호변이성질체, 입체이성질체, 아트로피오스머, 거울상이성질체, 또는 부분입체이성질체를 의미한다. 본 발명의 화합물이 하나 이상의 키랄 중심 또는 이중 결합을 가질 수 있고, 그러므로, 입체이성질체, 예컨대 이중-결합 이성질체 (즉, 기하 E/Z 이성질체) 또는 부분입체이성질체 (예를 들면, 거울상이성질체 (즉, (+) 또는 (-)) 또는 시스/트란스 이성질체)로서 실재한다는 것이 인지된다. 본 발명에 따라, 본원에 묘사된 화학적 구조, 및 그러므로 본 발명의 화합물은 모든 상응하는 입체이성질체, 즉, 양쪽 입체이성질체적으로 순수한 형태 (예를 들면, 기하적으로 순수한, 거울상이성질체적으로 순수한, 또는 부분입체이성질체적으로 순수한) 및 거울상이성질체성 및 입체이성질체성 혼합물, 예를 들면, 라세미체를 포괄한다. 본 발명의 화합물의 거울상이성질체성 및 입체이성질체성 혼합물은 잘-알려진 방법, 예컨대 키랄-상 기체 크로마토그래피, 키랄-상 고성능 액체 크로마토그래피, 키랄 염 복합체로서 화합물 결정화하기, 또는 키랄 용매에서 화합물 결정화하기에 의해 그들의 성분 거울상이성질체 또는 입체이성질체로 전형적으로 분해될 수 있다. 거울상이성질체 및 입체이성질체는 잘-알려진 비대칭적 합성 방법에 의해 입체이성질체적으로 거울상이성질체적으로 순수한 중간체, 시약, 및 촉매로부터 또한 수득될 수 있다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "링커"는 제1 모이어티 (예를 들면, 거대환식 모이어티)를 제2 모이어티 (예를 들면, 가교기)에 연결하는 2가 유기 모이어티를 지칭한다. 일부 구현예에서, 링커는 아래 실시예에서 제공된 Ras-RAF 붕괴 검정 프로토콜에서 2 uM 이하의 IC50을 달성할 수 있는 화합물을 초래하고, 다만 여기에서:
본 생화학적 검정의 목적은 뉴클레오타이드-로딩된 Ras 아이소폼과 사이클로필린 A 사이 삼원 복합체 형성을 촉진하는 테스트 화합물의 능력을 측정하는 것이고; 생성된 삼원 복합체는 BRAFRBD 작제물에 결합을 붕괴시켜, RAF 효과기를 통해서 Ras 신호전달을 억제시킨다.
25 mM HEPES pH 7.3, 0.002% Tween20, 0.1% BSA, 100 mM NaCl 및 5 mM MgCl2를 함유하는 검정 완충액에서, 태그리스 사이클로필린 A, His6-K-Ras-GMPPNP (또는 기타 Ras 변이체), 및 GST-BRAFRBD는 25 μM, 12.5 nM 및 50 nM, 각각의 최종 농도로 384-웰 검정 플레이트에서 조합된다. 화합물은 30 μM의 최종 농도로 시작하는 10-점 3-배 희석 시리즈로서 플레이트 웰에서 존재한다. 25℃에 3 시간 동안 인큐베이션 후, 항-His Eu-W1024 및 항-GST 알로피코시아닌의 혼합물은 그 다음 10 nM 및 50 nM, 각각의 최종 농도로 검정 샘플 웰에 첨가되고, 반응은 추가의 1.5 시간 동안 인큐베이션된다. TR-FRET 신호는 마이크로플레이트 판독기 (Ex 320 nm, Em 665/615 nm)에서 판독된다. Ras:RAF 복합체의 붕괴를 촉진시키는 화합물은 DMSO 대조군 웰에 비해 TR-FRET 비에서 감소를 이끌어내는 것들로서 식별된다.
일부 구현예에서, 링커는 20개 이하 선형 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 15개 이하 선형 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 10개 이하 선형 원자를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 500 g/mol 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 400 g/mol 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 300 g/mol 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 200 g/mol 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 100 g/mol 미만의 분자량을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 50 g/mol 미만의 분자량을 갖는다.
본원에 사용된 경우에, "1가 유기 모이어티"는 500 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 400 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 300 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 200 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 100 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 50 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 25 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 20 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 15 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 10 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 1 kDa 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 500 g/mol 미만이다. 일부 구현예에서, "1가 유기 모이어티"는 500 g/mol 내지 500 kDa 범위이다.
용어 "입체이성질체"는, 본원에 사용된 경우에, 모든 가능한 상이한 이성질체성 뿐만 아니라 화합물이 소유할 수 있는 형태적 형태 (예를 들면, 본원에 기재된 임의의 화학식의 화합물), 특히 모든 가능한 입체이성질체적으로 및 형태적으로 이성질체성 형태, 회전장애이성질체를 포함하는, 기본 분자성 구조의 모든 부분입체이성질체, 거울상이성질체 또는 형태이성질체를 지칭한다. 본 발명의 일부 화합물은 상이한 호변이성질체성 형태로 실재할 수 있고, 후자들 모두는 본 발명의 범위 내에 포함된다.
용어 "술포닐"은, 본원에 사용된 경우에, -S(O)2- 기를 나타낸다.
용어 "티오카르보닐"은, 본원에 사용된 경우에, -C(S)- 기를 지칭한다.
용어 "비닐 케톤"은, 본원에 사용된 경우에, 탄소-탄소 이중 결합에 직접적으로 연결된 카르보닐 기를 포함하는 기를 지칭한다.
용어 "비닐 술폰"은, 본원에 사용된 경우에, 탄소-탄소 이중 결합에 연결된 지시된 술포닐 기를 포함하는 기를 지칭한다.
용어 "이논"은, 본원에 사용된 경우에, 구조 를 포함하는 기를 지칭하고, 식중 R은 본원에 기재된 임의의 임의의 화학적으로 가능한 치환체이다.
당업자는, 본 개시내용을 판독하면, 본원에 기재된 특정 화합물이 임의의 다양한 형태 예컨대, 예를 들어, 염 형태, 보호된 형태, 전구-약물 형태, 에스테르 형태, 이성질체성 형태 (예를 들면, 광학적 또는 구조적 이성질체), 동위원소성 형태, 등으로 제공 또는 활용될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 특정한 화합물 지칭은 그 화합물의 특이적 형태에 관련할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정한 화합물 지칭은 임의의 형태로 그 화합물에 관련할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 화합물의 단일 입체이성질체의 제조물은 화합물의 라세미 혼합물보다 화합물의 상이한 형태인 것으로 간주될 수 있고; 화합물의 특정한 염은 화합물의 또 다른 염 형태와 상이한 형태인 것으로 간주될 수 있고; 이중 결합의 1개 형태적 이성질체 ((Z) 또는 (E))를 함유하는 제조물은 이중 결합의 다른 형태적 이성질체 ((E) 또는 (Z))를 함유하는 것과 상이한 형태인 것으로 간주될 수 있고; 하나 이상의 원자가 참조 제조물에서 존재하는 것과 상이한 동위원소인 제조물은 상이한 형태인 것으로 간주될 수 있다.
상세한 설명
화합물
Ras 억제제가 본원에 제공된다. 본원에 기재된 접근법은, 정상 생리적 조건 하에서 상호작용하지 않는 2개 세포내 단백질: 관심의 표적 단백질 (예를 들면, Ras), 및 세포에서 널리 발현된 시토졸성 샤페론 (프리젠터 단백질) (예를 들면, 사이클로필린 A)과 합성 리간드 사이, 높은 친화성 3-성분 복합체, 또는 접합체의 형성을 수반한다. 더욱 구체적으로, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 Ras의 억제제는, Ras 단백질과 널리 발현된 시토졸성 샤페론, 사이클로필린 A (CYPA) 사이, 높은 친화성 3-복합체, 또는 접합체의 형성을 구동시킴으로써 Ras에서 새로운 결합 포켓을 유도한다. 이론에 의한 구속됨 없이, 본 발명자는 Ras에 관한 억제성 효과가 이들이 형성하는 본 발명의 화합물 및 복합체, 또는 접합체에 의해 영향받는 하나의 방식이, 종양원성 신호를 전파하는데 필요한, Ras와 다운스트림 효과기 분자, 예컨대 RAF 사이 상호작용 부위의 입체 폐색에 의한 것이라고 믿는다.
이론에 의한 구속됨 없이, 본 발명자는 본 발명의 화합물의 Ras 및 샤페론 단백질 (예를 들면, 사이클로필린 A)과의 양쪽 공유 및 비-공유 상호작용이 Ras 활성의 억제에 기여할 수 있다고 가정한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 Ras 단백질의 측쇄 (예를 들면, 돌연변이체 Ras 단백질의 위치 12 또는 13에서 시스테인의 술프하이드릴 측쇄)와 공유 부가물을 형성한다. 공유 부가물은 Ras의 다른 측쇄와 또한 형성될 수 있다. 이외에도 또는 대안적으로, 비-공유 상호작용은 작동중일 수 있다: 예를 들어, 반 데르 발스, 소수성, 친수성, 및 수소 결합 상호작용, 그리고 이들의 조합은 복합체를 형성하고 Ras 억제제로서 작용하는 본 발명의 화합물의 능력에 기여할 수 있다. 따라서, 다양한 Ras 단백질은 본 발명의 화합물 (예를 들면, K-Ras, N-Ras, H-Ras, 및 위치 12, 13 및 61에서 이들의 돌연변이체, 예컨대 G12C, G12D, G12V, G12S, G13C, G13D, 및 Q61L, 및 본원에 기재된 기타)에 의해 억제될 수 있다.
공유 부가물 형성의 결정 방법은 당업계에서 알려진다. 공유 부가물 형성의 하나의 결정 방법은 "가교" 검정 예컨대 이들 조건 하에서 수행하는 것이다 (주석 - 하기 프로토콜은 본 발명의 화합물에 K-Ras G12C (GMP-PNP)의 가교를 모니터링하는 절차를 설명한다. 본 프로토콜은 다른 Ras 단백질 또는 뉴클레오타이드를 대체하여 또한 시행될 수 있다).
본 생화학적 검정의 목적은 뉴클레오타이드-로딩된 K-Ras 아이소폼을 공유적으로 표지화하는 테스트 화합물의 능력을 측정하는 것이다. 12.5 mM HEPES pH 7.4, 75 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 1 mM BME, 5 μM 사이클로필린 A 및 2 μM 테스트 화합물을 함유하는 검정 완충액에서, GMP-PNP-로딩된 K-Ras (1-169) G12C의 5 μM 스톡은 10-배 희석되어 0.5 μM의 최종 농도를 산출하고; 최종 샘플 부피는 100 μL이다.
샘플은 최대 24 시간의 시기 동안 25℃에 인큐베이션된 다음 10 μL의 5% 포름산의 첨가에 의해 퀀칭된다. 퀀칭된 샘플은 벤치탑 원심분리기에서 15 분 동안 15000 rpm으로 원심분리된 다음 10 μL 분취량을 역상 C4 컬럼에 주사되고 이동상에서 증가하는 아세토니트릴 구배로 질량 분석계에 용리된다. 미가공 데이터의 분석은, 결합된 %가 표지화된 및 미표지화된 K-Ras에 대하여 디콘볼루션된 단백질 피크로부터 계산되는, Waters MassLynx MS 소프트웨어를 사용하여 실시될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 K-Ras G13C에 비해 K-Ras G12C를 더욱 강력하게 억제한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 K-Ras G12C에 비해 K-Ras G13C를 더욱 강력하게 억제한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 당업계에 알려진 화합물에 비해 K-Ras G13C를 더욱 강력하게 억제한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 K-Ras G13C에 비해 K-Ras G12C를 더 큰 정도로 가교시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 K-Ras G12C에 비해 K-Ras G13C를 더 큰 정도로 가교시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 100% G13C 가교를 나타내면서 G12C 가교 없음을 입증한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 100% G12C 가교를 나타내면서 G13C 가교 없음을 입증한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 당업계에 알려진 화합물에 비해 K-Ras G13C를 더 큰 정도로 가교시킨다. 본 발명의 특정 화합물에 의한 다른 Ras 돌연변이체 (즉, G12C)에 비해 G13C Ras 돌연변이체를 표적화하기에 대한 선호는 전형적으로, 적어도 부분적으로, 링커 (예를 들면, L1)의 성격, 특히 링커의 길이에 기인한다.
따라서, 화학식 I의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 본원에 제공된다:
화학식 I,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
L1은 부재이거나 링커이고;
W는 비닐 케톤, 비닐 술폰, 이논, 또는 알키닐 술폰을 포함하는 가교기이고;
R1은 수소, 임의로 치환된 3 내지 10-원 헤테로사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이다.
일부 구현예에서, W는 비닐 케톤, 비닐 술폰, 또는 이논을 포함하는 가교기이다.
일부 구현예에서, 화학식 Ia의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 본원에 제공된다:
화학식 Ia.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 티아졸, 임의로 치환된 옥사졸, 임의로 치환된 모르폴리노, 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 아제티디닐, 임의로 치환된 피라지닐, 임의로 치환된 피리미딘, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 옥사디아졸, 임의로 치환된 티아디아졸, 임의로 치환된 트리아졸, 임의로 치환된 티오모르폴리노, 또는 임의로 치환된 페닐이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 구조식 II-1의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 특성화한다:
화학식 II-1.
일부 구현예에서, 화학식 II-2의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
화학식 II-2,
식중 R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-3의 구조, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는다:
화학식 II-3.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-4의 구조, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는다:
화학식 II-4.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, R2는 또는 이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, R3은 이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, R3은 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이다. 일부 구현예에서, R3은 이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이다. 일부 구현예에서, A는
또는 이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 페닐이다. 일부 구현예에서, A는 또는 이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌이다. 일부 구현예에서, A는 하기, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택된다:
또는
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, 링커는 화학식 III의 구조를 갖는다:
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D1)-(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2
화학식 III,
식중 A1은 링커와 CH(R3) 사이의 결합이고; A2는 W와 링커 사이의 결합이고; B1, B2, B3, 및 B4는 각각, 독립적으로, 임의로 치환된 C1-C2 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬렌, O, S, 및 NRN으로부터 선택되고; 각 RN은, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 알케닐, 임의로 치환된 C2-C4 알키닐, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴, 또는 임의로 치환된 C1-C7 헤테로알킬이고; C1 및 C2는 각각, 독립적으로, 카르보닐, 티오카르보닐, 술포닐, 또는 포스포릴로부터 선택되고; f, g, h, i, j, 및 k는 각각, 독립적으로, 0 또는 1이고; D1은 임의로 치환된 C1-C10 알킬렌, 임의로 치환된 C2-C10 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C10 알키닐렌, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴렌, 임의로 치환된 C2-C10 폴리에틸렌 글리콜렌, 또는 임의로 치환된 C1-C10 헤테로알킬렌, 또는 A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-를 -(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2에 결합시키는 화학적 결합이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, 링커는 환식 모이어티이거나 상기 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 화학식 IIIa의 구조를 갖는다:
화학식 IIIa,
식중 o는 0 또는 1이고;
R7은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
X1은 부재, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, O, NCH3, 또는 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌이고;
Cy는 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 12-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-10 원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
L2는 부재, -SO2-, -NH-, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌이다.
일부 구현예에서, 링커는 다음, 또는 이의 이성질체로부터 선택된다:
또는
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-5의 구조, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는다:
화학식 II-5,
식중 Cy1은 임의로 치환된 스피로환식 8 내지 11-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 7 내지 9-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
식중 W는 비닐 케톤 또는 비닐 술폰을 포함한다.
일부 구현예에서, Cy1은 임의로 치환된 스피로환식 10 내지 11-원 헤테로사이클로알킬렌이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-5a의 구조를 갖는다:
화학식 II-5a,
식중 X2는 O, C(R11)2, NR12, S, 또는 SO2이다.
r은 1 또는 2이고;
각 t는, 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;
R11 및 R12는 각각, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 3 내지 5-원 사이클로알킬이고;
각 R13은, 독립적으로, -CH3이다.
일부 구현예에서, r은 1이다. 일부 구현예에서, r은 2이다. 일부 구현예에서, X2는 O이다. 일부 구현예에서, X2는 S이다. 일부 구현예에서, X2는 SO2이다.
일부 구현예에서, X2는 NR12이다. R12는 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택된다:
또는 -H.
일부 구현예에서, X2는 C(R11)2이다. 일부 구현예에서, 각 R11은 수소이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, W는 비닐 케톤을 포함하는 가교기이다. 일부 구현예에서, W는 화학식 IVa의 구조를 갖는다:
화학식 IVa,
식중 R8a, R8b, 및 R8c는, 독립적으로, 수소, -CN, 할로겐, 또는 -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, W는 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택된다:
또는 .
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, W는 비닐 술폰을 포함하는 가교기이다. 일부 구현예에서, W는 화학식 IVc의 구조를 갖는다:
화학식 IVc,
식중 R10a, R10b, 및 R10c는, 독립적으로, 수소, -CN, 또는 -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬이다. 일부 구현예에서, W는
이다.
본 발명의 화합물의 일부 구현예에서, W는 이논을 포함하는 가교기이다. 일부 구현예에서, W는 화학식 IVb의 구조를 갖는다:
화학식 IVb,
식중 R9는 수소, -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, W는 다음으로부터 선택된다:
또는
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-6의 구조를 갖는다:
화학식 II-6,
식중 Q1은 CH2, NRN, 또는 O이고;
Q2는 CO, NRN, 또는 O이고;
Z는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이거나;
식중 Q1-Q2-Z는 임의로 치환된 9 내지 10-원 스피로환식 헤테로사이클로알킬렌이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-6a의 구조를 갖는다:
화학식 II-6a,
식중 R14는 플루오로, 수소, 또는 C1-C3 알킬이고;
u는 0 또는 1이다.
일부 구현예에서, R14는 플루오로이고 u는 1이다. 일부 구현예에서, R14는 수소이고 u는 0이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-6b의 구조를 갖는다:
화학식 II-6b.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 화학식 II-6c의 구조를 갖는다:
화학식 II-6c.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 입체이성질체는 표 1로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 회전장애이성질체는 표 1로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 입체이성질체는 표 2로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 회전장애이성질체는 표 2로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 표 2로부터 선택된 화합물이 아니다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 입체이성질체는 표 2로부터 선택된 화합물이 아니다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 회전장애이성질체는 표 2로부터 선택된 화합물이 아니다.
일부 화합물은 결합이 평평하거나 쐐기 모양으로 표시되는 것을 유의한다. 일부 사례에서, 입체이성질체의 상대 입체화학이 결정되었고; 일부 사례에서, 절대 입체화학이 결정되었다. 일부 사례에서, 단일 예시 번호는 입체이성질체의 혼합물에 상응한다. 전술한 표의 화합물의 모든 입체이성질체가 본 발명에 의해 고려된다. 특정한 구현예에서, 상기 표의 화합물의 회전장애이성질체가 고려된다. 괄호는 무시되어야 한다.
일부 구현예에서, 화합물은, 이의 개시내용이 이 전체가 본원에 참고로 편입되는, WO 2020/132597에 들어있는 화합물이 아니다. 일부 구현예에서, 화합물은, 이의 개시내용이 이 전체가 본원에 참고로 편입되는, WO 2021/091982에 들어있는 화합물이 아니다.
본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 또한 제공된다.
화학식 V의 구조를 포함하는 접합체, 또는 이의 염이 추가로 제공된다:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIa의 구조를 갖는다:
화학식 VIa,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
X2는 O, C(R11)2, NR12, S, 또는 SO2이고;
r은 1 또는 2이고;
각 t는, 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;
R11 및 R12는 각각, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 3 내지 5-원 사이클로알킬이고;
각 R13은, 독립적으로, -CH3이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
화학식 V의 구조를 포함하는 접합체, 또는 이의 염이 추가로 제공된다:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIb의 구조를 갖는다:
화학식 VIb,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R14는 플루오로, 수소, 또는 C1-C3 알킬이고;
u는 0 또는 1이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
화학식 V의 구조를 포함하는 접합체, 또는 이의 염이 추가로 제공된다:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIc의 구조를 갖는다:
화학식 VIc,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
화학식 V의 구조를 포함하는 접합체, 또는 이의 염이 추가로 제공된다:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VId의 구조를 갖는다:
화학식 VId,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
본 발명의 접합체의 일부 구현예에서, 1가 유기 모이어티는 단백질이다. 일부 구현예에서, 단백질은 Ras 단백질이다. 일부 구현예에서, Ras 단백질은 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C이다. 본 발명의 접합체의 일부 구현예에서, 링커는 1가 유기 모이어티의 아미노산 잔기의 술프하이드릴 기에 결합을 통해서 1가 유기 모이어티에 결합된다.
암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 추가로 제공된다. 암은, 예를 들어, 췌장암, 결장직장암, 비-소 세포 폐암, 급성 골수양 백혈병, 다발성 골수종, 갑상선 선암종, 골수이형성 증후군, 또는 편평 세포 폐 암종일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 Ras 돌연변이, 예컨대 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C를 포함한다. 기타 Ras 돌연변이는 본원에 기재된다.
Ras 단백질-관련된 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에서 이를 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 추가로 제공된다.
세포에서 Ras 단백질의 억제 방법으로서, 세포를 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 추가로 제공된다. 예를 들어, Ras 단백질은 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C이다. 기타 Ras 단백질은 본원에 기재된다. 세포는 암 세포, 예컨대 췌장암 세포, 결장직장암 세포, 비-소 세포 폐암 세포, 급성 골수양 백혈병 세포, 다발성 골수종 세포, 갑상선 선암종 세포, 골수이형성 증후군 세포, 또는 편평 세포 폐 암종 세포일 수 있다. 기타 암 유형은 본원에 기재된다. 세포는 생체내 또는 시험관내일 수 있다.
화학식 II-5의 화합물로 K-Ras G13C 돌연변이체 암을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
화학식 II-6의 화합물로 K-Ras G12C 돌연변이체 암을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 발명의 화합물에 관하여, 하나의 입체이성질체는 또 다른 입체이성질체보다 양호한 억제를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 하나의 회전장애이성질체가 억제를 나타낼 수 있고, 반면에 다른 하나의 회전장애이성질체는 거의 또는 전혀 억제를 나타낼 수 없다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법 또는 용도는 추가의 항-암 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 추가의 항-암 요법은 HER2 억제제, EGFR 억제제, 제2 Ras 억제제, SHP2 억제제, SOS1 억제제, Raf 억제제, MEK 억제제, ERK 억제제, PI3K 억제제, PTEN 억제제, AKT 억제제, mTORC1 억제제, BRAF 억제제, PD-L1 억제제, PD-1 억제제, CDK4/6 억제제, 또는 이들의 조합이다. 일부 구현예에서, 추가의 항암 요법은 SHP2 억제제이다. 기타 추가의 항-암 요법은 본원에 기재된다.
합성의 방법
본원에 기재된 화합물은 상업적으로 이용가능한 출발 물질로부터 만들어질 수 있거나 알려진 유기, 무기, 또는 효소 공정을 사용하여 합성될 수 있다.
본 발명의 화합물은 유기 합성 분야의 숙련가에게 잘 알려진 다수의 방식으로 제조될 수 있다. 예로써, 본 발명의 화합물은, 합성 유기 화학의 분야에서 알려진 합성 방법, 또는 당업자에 의해 인식된 경우에 그에 관한 변형과 함께, 하기 반응식에서 기재된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 이들 방법은 비제한적으로 하기 반응식에서 기재된 그들 방법을 포함한다.
반응식 1. 거대환식 에스테르의 일반 합성
거대환식 에스테르의 일반 합성은 반응식 1에서 개괄된다. 적합하게 치환된 아릴-3-(5-브로모-1-에틸-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (1)은, 팔라듐 매개된 커플링, 알킬화, 및 탈-보호 반응을 포함하는, 보호된 3-(5-브로모-2-요오도-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 및 적합하게 치환된 보론산에서 출발하여 3 단계에서 제조될 수 있다. 메틸-아미노-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트-보론산 에스테르 (2)는 보호, 이리듐 촉매 매개된 보릴화, 및 메틸 메틸 (S)-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트와의 커플링을 포함하는, 3 단계에서 제조될 수 있다.
적합하게 치환된 아세틸피롤리딘-3-카르보닐-N-메틸-L-발린 (또는 대안적 아미노산 유도체 (4)는 메틸-L-발리네이트 및 보호된 (S)-피롤리딘-3-카르복실산의 커플링, 이어서 탈보호, 적합하게 치환된 마이클 수용체를 함유하는 카르복실산과 커플링, 및 가수분해 단계에 의해 만들어질 수 있다.
최종 거대환식 에스테르는 Pd 촉매의 존재 하에서 메틸-아미노-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트-보론산 에스테르 (2) 및 아릴-3-(5-브로모-1-에틸-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (1)의 커플링 이어서 가수분해 및 거대락톤화 단계에 의해 만들어져서 적합하게 보호된 거대환식 중간체 (5)를 초래할 수 있다. 탈보호 그리고 적합하게 치환된 중간체 4와의 커플링은 거대환식 생성물을 초래한다. 추가의 탈보호 또는 기능화 단계는 최종 화합물을 생산하는데 필요할 수 있다.
반응식 2. 거대환식 에스테르의 대안적 일반 합성
대안적으로, 거대환식 에스테르는 반응식 2에 기재된 경우에 제조될 수 있다. 적합하게 보호된 브로모-인돌릴 (6)은 Pd 촉매의 존재 하에서 보론산 에스테르 (3)와 커플링, 이어서 요오드화, 탈보호, 및 에스테르 가수분해될 수 있다. 메틸 (S)-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트와의 후속 커플링, 이어서 가수분해 및 거대락톤화는 요오도 중간체 (7)를 초래할 수 있다. Pd 촉매의 존재 하에서 적합하게 치환된 보론산 에스테르와의 커플링 그리고 알킬화는 완전히 보호된 거대환 (5)을 산출할 수 있다. 추가의 탈보호 또는 기능화 단계는 최종 화합물을 생산하는데 필요하다.
이외에도, 본 개시내용의 화합물은, 합성 유기 화학의 분야에서 알려진 합성 방법, 또는 당업자에 의해 인식된 경우에 그에 관한 변형과 함께, 하기 실시예에서 기재된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 이들 방법은 비제한적으로 하기 실시예에서 기재된 것들을 포함한다. 예를 들어, 당업계에서 숙련된 사람은, 본원에 실시예 섹션에서 예시된 방법을 사용함으로써 포함하는, 거대환식 에스테르에, B, L 및 W가 본원에 정의되는, 원하는 화학식 (I)의 화합물의 -B-L-W 기를 설치할 수 있을 것이다.
본원에 표 1의 화합물은 본원에 개시된 방법을 사용하여 제조되었거나 당업자의 지식과 조합된 본원에 개시된 방법을 사용하여 제조되었다. 표 2의 화합물은 본원에 개시된 방법을 사용하여 제조될 수 있거나 당업자의 지식과 조합된 본원에 개시된 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
반응식 3. 거대환식 에스테르의 일반 합성
거대환식 에스테르의 대안적 일반 합성은 반응식 3에서 개괄된다. 적합하게 치환된 인돌릴 보론산 에스테르 (8)는, 팔라듐 매개된 커플링, 알킬화, 탈보호, 및 팔라듐 매개된 보릴화 반응을 포함하는, 보호된 3-(5-브로모-2-요오도-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 및 적합하게 치환된 보론산에서 출발하는 4 단계로 제조될 수 있다.
메틸-아미노-3-(4-브로모티아졸-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (10)는 (S)-2-아미노-3-(4-브로모티아졸-2-일)프로판산 (9)과 메틸 (S)-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트의 커플링을 통해 제조될 수 있다.
최종 거대환식 에스테르는 Pd 촉매의 존재 하에서 메틸-아미노-3-(4-브로모티아졸-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (10) 및 적합하게 치환된 인돌릴 보론산 에스테르 (8)의 커플링 이어서 가수분해 및 거대락톤화 단계에 의해 만들어져서 적합하게 보호된 거대환식 중간체 (11)를 초래할 수 있다. 탈보호 그리고 적합하게 치환된 중간체 4와의 커플링은 거대환식 생성물을 초래할 수 있다. 추가의 탈보호 또는 기능화 단계는 최종 화합물 13 또는 14를 생산하는데 필요해질 수 있다.
반응식 4. 거대환식 에스테르의 일반 합성
거대환식 에스테르의 대안적 일반 합성은 반응식 4에서 개괄된다. 적합하게 치환된 모르폴린 또는 대안적 헤레사이클릭 중간체 (15)는 팔라듐 매개된 커플링을 통해 적합하게 보호된 중간체 1과 커플링될 수 있다. 후속 에스테르 가수분해, 및 피페라조산 에스테르와의 커플링은 중간체 16을 초래한다.
거대환식 에스테르는 가수분해, 탈보호 및 거대환화 순서에 의해 만들어질 수 있다. 후속 탈보호 및 중간체 4 (또는 유사체)와의 커플링은 적합하게 치환된 최종 거대환식 생성물을 초래한다. 추가의 탈보호 또는 기능화 단계는 최종 화합물 17을 생산하는데 필요해질 수 있다.
반응식 5. 거대환식 에스테르의 일반 합성
거대환식 에스테르의 대안적 일반 합성은 반응식 5에서 개괄된다. 적합하게 치환된 거대환 (20)은, 팔라듐 매개된 커플링, 가수분해, 피페라조산 에스테르와의 커플링, 가수분해, 탈보호, 및 거대환화 단계를 포함하는, 적합하게 보호된 보론산 에스테르 18 및 브로모 인돌릴 중간체 (19)에서 출발하여 제조될 수 있다. 적합하게 치환된 보호된 아미노산과의 후속 커플링 이어서 팔라듐 매개된 커플링은 중간체 21을 생성한다. 알킬화를 포함하는, 추가의 탈보호 및 유도체화 단계는 이 지점에 필요해질 수 있다.
최종 거대환식 에스테르는 중간체 (22) 및 적합하게 치환된 카르복실산 중간체 (23)의 커플링에 의해 만들어질 수 있다. 추가의 탈보호 또는 기능화 단계는 최종 화합물 (24)을 생산하는데 필요해질 수 있다.
이외에도, 본 개시내용의 화합물은, 합성 유기 화학의 분야에서 알려진 합성 방법, 또는 당업자에 의해 인식된 경우에 그에 관한 변형과 함께, 하기 실시예에서 기재된 방법을 사용하여 합성될 수 있다. 이들 방법은 비제한적으로 하기 실시예에서 기재된 그들 방법을 포함한다. 예를 들어, 당업계에서 숙련된 사람은, 본원에 실시예 섹션에서 예시된 방법을 사용함으로써 포함하는, 거대환식 에스테르에, B, L 및 W가 본원에 정의되는, 원하는 화학식 (I)의 화합물의 -B-L-W 기를 설치할 수 있을 것이다.
약학적 조성물 및 사용 방법
약학적 조성물 및 투여 방법
본 발명이 관련되는 화합물은 Ras 억제제이고, 암의 치료에서 유용하다. 따라서, 본 발명의 일 구현예는 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 함유하는 약학적 조성물, 뿐만 아니라 상기 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 화합물의 사용 방법을 제공한다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "약학적 조성물"은 약학적으로 허용가능한 부형제와 함께 제형화된 화합물, 예컨대 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 지칭한다.
일부 구현예에서, 화합물은 관련한 집단에 투여된 때 예정된 치료적 효과를 달성할 통계적으로 유의미한 확률을 나타내는 치료적 용법에서 투여에 적합한 단위 용량 양으로 약학적 조성물에 존재한다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은, 하기에 순응된 것들을 포함하여, 고체 또는 액체 형태로 투여를 위하여 특별히 제형화될 수 있다: 경구 투여, 예를 들어, 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들면, 협측, 설하, 및 전신 흡수를 위하여 표적화된 것들, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; 예를 들어, 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속된-방출 제형으로서, 예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의한 비경구 투여; 예를 들어, 피부, 폐, 또는 구강에 적용되는 크림, 연고, 또는 제어된-방출 패치 또는 스프레이로서 국부 적용; 예를 들어, 페서리, 크림 또는 발포물로서 질내 또는 직장내; 설하로; 눈으로; 경피적으로; 또는 비강, 폐, 및 기타 점막 표면.
"약학적으로 허용가능한 부형제"는, 본원에 사용된 경우에, 대상체에서 비독성 및 비-염증성의 특성을 갖는 임의의 불활성 구성성분 (예를 들어, 활성 화합물을 현탁 또는 분해시킬 수 있는 비히클)을 지칭한다. 전형적 부형제는, 예를 들어 접착방지제, 산화방지제, 결합제, 코팅제, 압축 보조제, 붕해제, 염료 (색소), 연화제, 유화제, 충전제 (희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 방향제, 향료, 활택제 (유동 향상제), 윤활제, 방부제, 인쇄 잉크, 흡착제, 현탁 또는 분산 제제, 감미제, 또는 수화수를 포함한다. 부형제는, 비제한적으로 부틸화된 임의로 치환된 하이드록실톨루엔 (BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘 (이염기성), 스테아르산칼슘, 크로스카르멜로스, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 임의로 치환된 하이드록실프로필 셀룰로스, 임의로 치환된 하이드록실프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 스테아르산마그네슘, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미정질 셀룰로오스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 전호화 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 쉘락, 이산화규소, 나트륨 카르복시메틸 셀룰로오스, 시트르산나트륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 소르비톨, 전분 (옥수수), 스테아르산, 스테아르산, 수크로스, 활석, 이산화티타늄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨을 포함한다. 당업자는 부형제로서 유용한 다양한 제제 및 물질에 익숙하다. 예를 들면, 예를 들면, Ansel, 등, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, 등, Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; and Rowe, Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005, 참고. 일부 구현예에서, 조성물은 적어도 2개 상이한 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함한다.
본원에 기재된 화합물은, 분명하게 언급되든 아니든, 반대로 명확하게 언급되지 않는 한, 염 형태, 예를 들면, 약학적으로 허용가능한 염 형태로 제공 또는 활용될 수 있다. 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은, 본원에 사용 경우에, 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 및 기타 등등 없이 인간 및 기타 동물의 조직과 접촉하여 사용에 적당하고, 합리적인 이익/위험 비율에 부합하는 본원에 기재된 화합물의 그들 염을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에서 잘 알려진다. 예를 들어, 약학적으로 허용가능한 염은 Berge 등, J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977에 그리고 Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (Eds. P.H. Stahl 및 C.G. Wermuth), Wiley-VCH, 2008에 기재된다. 염은 본원에 기재된 화합물의 최종 단리 및 정제 중 또는 별도로 유리 염기 기를 적당한 유기 산과 반응시킴으로써 제자리에서 제조될 수 있다.
본 발명의 화합물은 약학적으로 허용가능한 염으로서 제조될 수 있도록 이온화가능한 기를 가질 수 있다. 이들 염은 무기 또는 유기 산을 포함하는 산 부가 염일 수 있거나 염은, 본 발명의 화합물의 산성 형태의 경우에서, 무기 또는 유기 염기로부터 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 약학적으로 허용가능한 산 또는 염기의 부가 생성물로서 제조된 약학적으로 허용가능한 염으로서 제조 또는 사용된다. 적당한 약학적으로 허용가능한 산 및 염기, 예컨대 산 부가 염을 형성하기 위하여 염산, 황산, 브롬화수소산, 아세트산, 락트산, 시트르산, 또는 타르타르산, 그리고 염기성 염을 형성하기 위하여 수산화칼륨, 수산화나트륨, 수산화암모늄, 카페인, 각종 아민, 및 기타 등등이 당업계에서 잘-알려진다. 적합한 염의 제조 방법은 당업계에서 잘-확립된다.
대표적 산 부가 염은 아세테이트, 아디페이트, 알지네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 바이술페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실술페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미술페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 2-임의로 치환된 하이드록실-에탄술포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔술포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 및 기타 등등을 포함한다. 대표적 알칼리 또는 알칼리토 금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 기타 등등, 뿐만 아니라 비독성 암모늄, 4차 암모늄, 그리고 비제한적으로 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민, 및 기타 등등을 포함하는 아민 양이온을 포함한다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "대상체"는 동물 왕국의 임의의 구성원을 지칭한다. 일부 구현예에서, "대상체"는 임의의 발달 시기에서 인간을 지칭한다. 일부 구현예에서, "대상체"는 인간 환자를 지칭한다. 일부 구현예에서, "대상체"는 비-인간 동물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 비-인간 동물은 포유동물 (예를 들면, 설치류, 마우스, 랫트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류, 또는 돼지)이다. 일부 구현예에서, 대상체는, 비제한적으로, 포유류, 조류, 파충류, 양서류, 어류 또는 벌레를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 유전자이식 동물, 유전적으로-조작된 동물, 또는 클론일 수 있다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "투약 형태"는 대상체에 투여를 위하여 화합물의 물리적으로 별개의 단위 (예를 들면, 본 발명의 화합물)를 지칭한다. 각 단위는 화합물의 예정된 정량을 함유한다. 일부 구현예에서, 그러한 정량은 관련한 집단에 투여된 때 원하는 또는 유익한 성과와 상관관계가 있는 것으로 결정된 용량화 용법에 (즉, 치료적 용량화 용법에) 따라 투여에 적합한 단위 투약 양 (또는 이들의 전체 분획)이다. 당업자는 특정한 대상체에 투여된 치료적 조성물 또는 화합물의 총량이 1명 이상의 주치의에 의해 결정되고 다중 투약 형태의 투여를 포함할 수 있다는 것을 인식한다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "용량화 용법"은 시간의 기간에 의해 전형적으로 분리된, 대상체에 개별적으로 투여되는 (전형적으로 1개 초과) 단위 용량의 한 세트를 지칭한다. 일부 구현예에서, 주어진 치료적 화합물 (예를 들면, 본 발명의 화합물)은, 하나 이상의 용량을 포함할 수 있는, 권장된 용량화 용법을 갖는다. 일부 구현예에서, 용량화 용법은 이들의 각각이 동일한 길이의 시기만큼 서로 분리되는 복수의 용량을 포함하고; 일부 구현예에서, 용량화 용법은 복수의 용량 그리고 개별 용량을 분리시키는 적어도 2개 상이한 시기를 포함한다. 일부 구현예에서, 용량화 용법 내에서 모든 용량은 동일한 단위 용량 양이다. 일부 구현예에서, 용량화 용법 내에서 상이한 용량은 상이한 양이다. 일부 구현예에서, 용량화 용법은 제1 용량 양으로 제1 용량, 이어서 제1 용량 양과 상이한 제2 용량 양으로 하나 이상의 추가의 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 용량화 용법은 제1 용량 양으로 제1 용량, 이어서 제1 용량 양과 동일한 제2 용량 양으로 하나 이상의 추가의 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 용량화 용법은 관련한 집단에 걸쳐서 투여된 때 원하는 또는 유익한 성과와 상관관계가 있다 (즉, 치료적 용량화 용법이다).
"치료적 용법"은 관련한 집단에 걸쳐서 투여가 원하는 또는 유익한 치료적 성과와 상관관계가 있는 용량화 용법을 지칭한다.
용어 "치료" (또한 "치료하다" 또는 "치료하기")는, 이의 가장 넓은 의미에서, 특정한 질환, 장애, 또는 병태의 하나 이상의 증상, 속성, 또는 원인을 부분적으로 또는 완전히 경감시키는, 호전시키는, 완화시키는, 억제시키는, 이의 개시를 지연시키는, 이의 중증도를 감소시키는, 또는 이의 발생을 감소시키는 서브스턴스 (예를 들면, 본 발명의 화합물)의 임의의 투여를 지칭한다. 일부 구현예에서, 그러한 치료는 관련한 질환, 장애 또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체에, 또는 상기 질환, 장애, 또는 병태의 초기 징후만을 나타내는 대상체의 투여될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 일부 구현예에서, 치료는 관련한 질환, 장애, 또는 병태의 하나 이상의 확립된 징후를 나타내는 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 관련한 질환, 장애, 또는 병태로 고통받는 것으로 진단된 대상체에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료는 관련한 질환, 장애, 또는 병태의 발병의 증가된 위험과 통계적으로 상관관계가 있는 하나 이상의 감수성 인자를 갖는 것으로 알려진 대상체의 것일 수 있다.
용어 "치료적으로 유효량"은, 치료적 용량화 용법에 따라 질환, 장애, 또는 병태로 고통받거나 이에 취약한 집단에 투여된 때, 상기 질환, 장애, 또는 병태를 치료하는데 충분한 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 치료적으로 유효량은 질환, 장애, 또는 병태의 하나 이상의 증상의 발생 또는 중증도를 감소시키는, 또는 이의 개시를 지연시키는 것이다. 당업자는 용어 "치료적으로 유효량"이 사실상 특정한 개체에서 달성되도록 성공적 치료를 요구하지 않는다는 것을 이해할 것이다. 오히려, 치료적으로 유효량은 그러한 치료를 필요로 하는 환자에 투여된 때 상당한 수의 대상체에서 특정한 원하는 약리학적 반응을 제공하는 그 양일 수 있다. 특정한 대상체가, 사실상, "치료적으로 유효량"에 "난치성"일 수 있다는 것이 구체적으로 이해된다. 일부 구현예에서, 치료적으로 유효량 지칭은 하나 이상의 특이적 조직 (예를 들면, 질환, 장애 또는 병태에 의해 영향받은 조직) 또는 유체 (예를 들면, 혈액, 타액, 혈청, 땀, 눈물, 소변)에서 측정된 경우 양의 지칭일 수 있다. 당업자는, 일부 구현예에서, 치료적으로 유효량이 단일 용량으로 제형화 또는 투여될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 치료적으로 유효량은, 예를 들어, 용량화 용법의 부분으로서 복수의 용량으로 제형화 또는 투여될 수 있다.
대상체의 치료로서 사용을 위하여, 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 약학적 또는 수의학적 조성물로서 제형화될 수 있다. 치료될 대상체, 투여의 모드, 및 원하는 치료의 유형, 예를 들면, 예방, 예방법, 또는 요법에 의존하여, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 이들 파라미터와 조화하는 방식으로 제형화된다. 그러한 기법의 개요는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21 st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, (2005); 및 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick 및 J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York에서 찾아질 수 있고, 이들의 각각은 본원에 참고로 편입된다.
조성물은 종래 혼합, 과립화 또는 코팅 방법, 각각에 따라 제조될 수 있고, 본 약학적 조성물은, 중량 또는 부피 기준으로, 약 0.1% 내지 약 99%, 약 5% 내지 약 90%, 또는 약 1% 내지 약 20%의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 조성물, 예컨대 약학적 조성물의 총 중량의 1-95중량%를 합계하는 양으로 존재할 수 있다.
조성물은 관절내, 경구, 비경구 (예를 들면, 정맥내, 근육내), 직장, 피부, 피하, 국소, 경피, 설하, 비강, 질, 방광내, 요도내, 척추강내, 경막외, 귀, 또는 안구 투여에, 또는 주사, 흡입, 또는 코, 비뇨생식기, 생식기 또는 구강 점막과의 직접 접촉에 의해 적당한 투약 형태로 제공될 수 있다. 그래서, 약학적 조성물은, 예를 들면, 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 현탁액, 유탁액, 용액, 하이드로겔을 포함하는 겔, 페이스트, 연고, 크림, 고약, 드렌치, 삼투성 전달 장치, 좌약, 관장제, 주사제, 임플란트, 스프레이, 이온삼투 전달에 적합한 제조물, 또는 에어로졸의 형태일 수 있다. 조성물은 종래 약학적 관행에 따라 제형화될 수 있다.
본원에 사용된 경우에, 용어 "투여"는 대상체 또는 시스템에 조성물 (예를 들면, 화합물, 또는 본원에 기재된 경우에 화합물을 포함하는 제조물)의 투여를 지칭한다. 동물 대상체에 (예를 들면, 인간에) 투여는 임의의 적합한 루트에 의한 것일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 투여는 기관지 (기관지 점적 포함), 협측, 장, 피간, 동맥내, 피내, 위내, 골수내, 근육내, 비강내, 복강내, 척수강내, 정맥내, 뇌실내, 점막, 비강, 경구, 직장, 피하, 설하, 국부, 기관 (기관내 점적 포함), 경피, 질, 또는 유리체일 수 있다.
제형은 전신 투여 또는 국부 또는 국소 투여에 적당한 방식으로 제조될 수 있다. 전신 제형은 주사 (예를 들면, 근육내, 정맥내 또는 피하 주사)를 위하여 설계된 것들을 포함하거나 경피, 경점막, 또는 경구 투여를 위하여 제조될 수 있다. 제형은 일반적으로 희석제 뿐만 아니라, 일부 경우에서, 아쥬반트, 완충액, 방부제 및 기타 등등을 포함할 것이다. 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 리포솜 조성물 또는 마이크로에멀젼으로서 또한 투여될 수 있다.
주사의 경우에, 제형은 액체 용액 또는 현탁액으로서 또는 주사에 앞서 액체내 용액 또는 현탁액에 적당한 고체 형태로서 또는 유탁액으로서 종래 형태로 제조될 수 있다. 적당한 부형제는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 및 기타 등등을 포함한다. 그러한 조성물은 비독성 보조 서브스턴스 예컨대 습윤 또는 유탁화 제제, pH 완충 제제 및 기타 등등, 예컨대, 예를 들어, 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 및 기타 등등의 양을 또한 함유할 수 있다.
약물에 대하여 다양한 지속된 방출 시스템은 또한 고안되었다. 예를 들어, 미국 특허 번호　5,624,677, 참고.
전신 투여는 상대적으로 비침습적 방법 예컨대 좌약의 사용, 경피 패치, 경점막 전달 및 비강내 투여를 또한 포함할 수 있다. 경구 투여는 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 또한 적당하다. 적당한 형태는, 당업계에서 이해되는 바와 같이, 시럽, 캡슐, 및 정제를 포함한다.
각 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은, 본원에 기재된 경우에, 당업계에서 알려지는 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법의 제1 및 제2 제제는 함께 또는 별도로 제형화될 수 있다. 조합 요법의 다른 양식은 본원에 기재된다.
개별적으로 또는 별도로 제형화된 제제는 키트로서 함께 패키징될 수 있다. 비-제한 예는, 비제한적으로, 예를 들면, 2개 환제, 환제 및 분말, 바이알내 좌약 및 액체, 2개 국부 크림, 등을 함유하는 키트를 포함한다. 키트는 대상체에 단위 용량의 투여에 일조하는 선택적 구성요소, 예컨대 분말 형태를 재구성하기 위한 바이알, 주사를 위한 주사기, 맞춤화된 IV 전달 시스템, 흡입기, 등을 포함할 수 있다. 추가적으로, 단위 용량 키트는 조성물의 제조 및 투여를 위한 지침을 함유할 수 있다. 키트는 하나의 대상체를 위한 단일 용도 단위 용량, (일정한 용량에서 또는 요법이 진행함에 따라 개별 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 효력에서 다양할 수 있는) 특정한 대상체에 대하여 여러 용도로서 제작될 수 있거나; 키트는 여러 대상체에 투여에 적당한 다중 용량을 함유할 수 있다 ("벌크 패키징"). 키트 구성요소는 카톤, 블리스터 팩, 병, 튜브, 및 기타 등등으로 조립될 수 있다.
경구 사용을 위한 제형은 비-독성 약학적으로 허용가능한 부형제와의 혼합물에서 활성 구성성분(들)을 함유하는 정제를 포함한다. 이들 부형제는, 예를 들어, 불활성 희석제 또는 충전제 (예를 들면, 수크로스, 소르비톨, 당, 만니톨, 미세결정성 셀룰로스, 감자 전분을 포함하는 전분, 탄산칼슘, 염화나트륨, 락토스, 인산칼슘, 황산칼슘, 또는 인산나트륨); 과립화 및 붕해 제제 (예를 들면, 미세결정성 셀룰로스를 포함하는 셀룰로스 유도체, 감자 전분을 포함하는 전분, 크로스카르멜로스 나트륨, 알기네이트, 또는 알긴산); 결합 제제 (예를 들면, 수크로스, 글루코스, 소르비톨, 아카시아, 알긴산, 알긴산나트륨, 젤라틴, 전분, 전호화 전분, 미세결정성 셀룰로스, 규산알루미늄마그네슘, 카르복시메틸셀룰로스 나트륨, 메틸셀룰로스, 임의로 치환된 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 또는 폴리에틸렌 글리콜); 및 윤활 제제, 활택제 및 항부착제 (예를 들면, 스테아르산마그네슘, 스테아르산아연, 스테아르산, 실리카, 수소화된 식물성 오일, 또는 활석)일 수 있다. 기타 약학적으로 허용가능한 부형제는 착색제, 방향 제제, 가소제, 보습제, 완충 제제, 및 기타 등등일 수 있다.
2개 이상의 화합물은 정제, 캡슐, 또는 기타 비히클에서 함께 혼합될 수 있거나, 구획될 수 있다. 하나의 예에서, 제1 화합물은 정제의 내부에서 함유되고, 제2 화합물은 외부에 있고, 이로써 제2 화합물의 실질적 부문이 제1 화합물의 방출에 앞서 방출된다.
경구 사용을 위한 제형은 저작가능한 정제로서, 또는 활성 구성성분이 불활성 고체 희석제 (예를 들면, 감자 전분, 락토스, 미세결정성 셀룰로스, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린)와 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 구성성분이 물 또는 오일 매체, 예를 들어, 땅콩 오일, 액체 파라핀, 또는 올리브 오일와 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 또한 제공될 수 있다. 분말, 과립, 및 펠렛은, 예를 들면, 혼합기, 유동층 기구 또는 분무 건조 장비를 사용하여 종래 방식으로 정제 및 캡슐에서 상기 언급된 구성성분을 사용하여 제조될 수 있다.
용해 또는 확산-제어된 방출은 정제, 캡슐, 펠렛, 또는 화합물의 과립 제형의 적합하게 코팅시킴으로써, 또는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 적합한 매트릭스에 편입시킴으로써 달성될 수 있다. 제어된 방출 코팅물은 상기 언급된 코팅 서브스턴스들 중 하나 이상 또는, 예를 들면, 셸락, 밀랍, 글리코왁스, 피마자 왁스, 카나우바 왁스, 스테아릴 알코올, 글리세릴 모노스테아레이트, 글리세릴 디스테아레이트, 글리세롤 팔미토스테아레이트, 에틸셀룰로스, 아크릴 수지, dl-폴리락트산, 셀룰로스 아세테이트 부티레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐 아세테이트, 비닐 피롤리돈, 폴리에틸렌, 폴리메타크릴레이트, 메틸메타크릴레이트, 2-임의로 치환된 하이드록실메타크릴레이트, 메타크릴레이트 하이드로겔, 1,3 부틸렌 글리콜, 에틸렌 글리콜 메타크릴레이트, 또는 폴리에틸렌 글리콜을 포함할 수 있다. 제어된 방출 매트릭스 제형에서, 매트릭스 물질은, 예를 들면, 수소화된 메틸셀룰로스, 카나우바 왁스 및 스테아릴 알코올, 카르보폴 934, 실리콘, 글리세릴 트리스테아레이트, 메틸 아크릴레이트-메틸 메타크릴레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리에틸렌, 또는 할로겐화된 플루오로카본을 또한 포함할 수 있다.
화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 본 발명의 조성물이 경구로 투여를 위하여 편입될 수 있는 액체 형태는 수성 용액, 적당히 방향화된 시럽, 수성 또는 오일 현탁액, 및 식용유 예컨대 면실유, 참기름, 코코넛 오일, 땅콩 오일, 뿐만 아니라 엘릭서 및 유사한 약학적 비히클을 가진 방향화된 유탁액을 포함한다.
일반적으로, 인간에 투여된 경우, 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 임의의 것의 경구 투약량은 화합물의 성질에 의존할 것이고, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 투약량은, 예를 들어, 1일에 약 0.001 mg 내지 약 2000 mg, 1일에 약 1 mg 내지 약 1000 mg, 1일에 약 5 mg 내지 약 500 mg, 1일에 약 100 mg 내지 약 1500 mg, 1일에 약 500 mg 내지 약 1500 mg, 1일에 약 500 mg 내지 약 2000 mg, 또는 그안에서 유도가능한 임의의 범위일 수 있다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 항증식성 활성을 갖는 추가의 화합물을 추가로 포함할 수 있다. 투여의 모드에 의존하여, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 손쉬운 전달을 허용하기에 적당한 조성물로 제형화될 것이다. 조합 요법의 각 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 당업계에서 알려지는 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법의 제1 및 제2 제제는 함께 또는 별도로 제형화될 수 있다. 바람직하게는, 제1 및 제2 제제는 제제의 동시 또는 거의 동시 투여를 위하여 함께 제형화된다.
본 발명의 화합물 및 약학적 조성물이 제형화될 수 있고 조합 요법에서 이용될 수 있다는 것, 즉, 화합물 및 약학적 조성물이 하나 이상의 기타 원하는 치료학 또는 의학적 절차로 제형화될 수 있거나 이와 동시에, 이전에, 또는 이후에 투여될 수 있다는 것이 인식될 것이다. 조합 용법에서 이용하기 위한 요법 (치료학 또는 절차)의 특정한 조합은 원하는 치료학 또는 절차의 달성되고자 하는 원하는 치료적 효과와의 양립성을 고려할 것이다. 이용된 요법이 동일한 장애에 대하여 원하는 효과를 달성할 수 있다는 것, 또는 이들이 상이한 효과 (예를 들면, 임의의 부작용의 제어)를 달성할 수 있다는 것이 또한 인식될 것이다.
조합 요법에서 각 약물의 투여는, 본원에 기재된 경우에, 독립적으로, 1일 내지 1년 동안 날마다 1 내지 4회일 수 있고, 심지어 대상체의 평생 동안일 수 있다. 만성, 장기 투여가 지시될 수 있다.
사용 방법
일부 구현예에서, 본 발명은 Ras 돌연변이체로 인한 이상 Ras 활성을 특징으로 하는 질환 또는 장애의 치료 방법을 개시한다. 일부 구현예에서, 질환 또는 장애는 암이다.
따라서, 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 상기 화합물 또는 염을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암, 비-소 세포 폐암, 소-세포 폐암, 췌장암, 충수암, 흑색종, 급성 골수양 백혈병, 소장암, 팽대부암, 생식 세포암, 자궁경부암, 미지 1차 기원의 암, 자궁내막암, 식도위암, GI 신경내분비암, 난소암, 성삭 기질 종양 암, 간담도암, 또는 방광암이다. 일부 구현예에서, 암은 충수, 자궁내막 또는 흑색종이다. 필요로 하는 대상체에서 Ras 단백질-관련된 장애의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 상기 화합물 또는 염을 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 상기 화합물 또는 염을 포함하는 약학적 조성물, 및 본원에 제공된 방법은 종양 예컨대 폐, 전립선, 유방, 뇌, 피부, 자궁경부 암종, 고환 암종, 등을 포함하는 매우 다양한 암의 치료에 사용될 수 있다. 더욱 특히, 화합물 또는 이의 염, 상기 화합물 또는 염을 포함하는 약학적 조성물, 및 본 발명의 방법에 의해 치료될 수 있는 암은, 비제한적으로 종양 유형 예컨대 성상세포, 유방, 자궁경부, 결장직장, 자궁내막, 식도, 위, 두경부, 간세포, 후두, 폐, 구강, 난소, 전립선, 및 갑상선 암종 및 육종을 포함한다. 기타 암은, 예를 들어:
심장, 예를 들어: 육종 (혈관육종, 섬유육종, 횡문근육종, 지방육종), 점액종, 횡문근종, 섬유종, 지방종, 및 기형종;
폐, 예를 들어: 기관지형성 암종 (편평 세포, 미분화된 소세포, 미분화된 대세포, 선암종), 폐포 (세기관지) 암종, 기관지 선종, 육종, 림프종, 연골종 과오종, 중피종;
위장, 예를 들어: 식도 (편평 세포 암종, 선암종, 평활근육종, 림프종), 위 (암종, 림프종, 평활근육종), 췌장 (관샘암종, 인슐린종, 글루카곤종, 가스트린종, 카르시노이드 종양, 비포마), 소장 (선암종, 림프종, 카르시노이드 종양, 카포시 육종, 평활근종, 혈관종, 지방종, 신경섬유종, 섬유종), 대장 (선암종, 관상 선종, 융모 선종, 과오종, 평활근종);
비뇨생식기관, 예를 들어: 신장 (선암종, 윌름스 종양 (신모세포종), 림프종, 백혈병), 방광 및 요도 (편평 세포 암종, 이행 세포 암종, 선암종), 전립선 (선암종, 육종), 고환 (정액종, 기형종, 배아 암종, 기형암종, 융모막암종, 육종, 간질 세포 암종, 섬유종, 섬유선종, 선종양 종양, 지방종);
간, 예를 들어: 간암 (간세포 암종), 담관암종, 간모세포종, 혈관육종, 간세포 선종, 혈관종;
담도, 예를 들어: 담낭 암종, 팽대부 암종, 담관암종;
골, 예를 들어: 골형성 육종 (골육종), 섬유육종, 악성 섬유성 조직구종, 연골육종, 유잉 육종, 악성 림프종 (세망 세포 육종), 다발성 골수종, 악성 거대 세포 종양 척색종, 골연골종 (골연골성 외골종), 양성 연골종, 연골모세포종, 연골점액섬유종, 골양 골종, 및 거대 세포 종양;
신경계, 예를 들어: 두개골 (골종, 혈관종, 육아종, 황색종, 기형 골염), 수막 (수막종, 수막육종, 신경교종증), 뇌 (성상세포종, 수모세포종, 신경아교종, 뇌실막종, 배아세포종 (송과체종), 다형 교모세포종, 희소돌기신경교종, 신경초종, 망막모세포종, 선천성 종양), 척수 신경섬유종, 제1형 신경섬유종증, 수막종, 신경교종, 육종);
부인과, 예를 들어: 자궁 (자궁내막 암종, 자궁 암종, 자궁 체부 자궁내막 암종), 자궁경부 (자궁경부 암종, 종양전 자궁경부 이형성증), 난소 (난소 암종 (장액성 낭선암, 점액성 낭선암, 미분류 암종), 과립막 세포 종양, 세르톨리-라이디히 세포 종양, 생식이상종, 악성 기형종), 외음부 (편평 세포 암종, 상피내 암종, 선암종, 섬유육종, 흑색종), 질 (투명 세포 암종, 편평 세포 암종, 보트로이드 육종 (난관 횡문근육종), 나팔관 (암종);
혈액학적, 예를 들어: 혈액 (골수양 백혈병 (급성 및 만성), 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 골수증식성 질환 (예를 들면, 골수섬유증 및 골수증식성 신생물), 다발성 골수종, 골수이형성 증후군), 호지킨병, 비-호지킨 림프종 (악성 림프종);
피부, 예를 들어: 악성 흑색종, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 카포시 육종, 두더지 이형성 모반, 지방종, 혈관종, 피부섬유종, 켈로이드, 건선; 및
부신, 예를 들어: 신경모세포종을 포함한다.
일부 구현예에서, Ras 단백질은 야생형 (RasWT)이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 RasWT (예를 들면, K-RasWT, H-RasWT 또는 N-RasWT)를 포함하는 암을 갖는 환자의 치료 방법에서 이용된다. 일부 구현예에서, Ras 단백질은 Ras 증폭 (예를 들면, K-Rasamp)이다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 Rasamp (K-Rasamp, H-Rasamp 또는 N-Rasamp)를 포함하는 암을 갖는 환자의 치료 방법에서 이용된다. 일부 구현예에서, 암은 Ras 돌연변이, 예컨대 본원에 기재된 Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 돌연변이는
(a) 하기 K-Ras 돌연변이체: G12D, G12V, G12C, G13D, G12R, G12A, Q61H, G12S, A146T, G13C, Q61L, Q61R, K117N, A146V, G12F, Q61K, L19F, Q22K, V14I, A59T, A146P, G13R, G12L, 또는 G13V, 및 이들의 조합;
(b) 하기 H-Ras 돌연변이체: Q61R, G13R, Q61K, G12S, Q61L, G12D, G13V, G13D, G12C, K117N, A59T, G12V, G13C, Q61H, G13S, A18V, D119N, G13N, A146T, A66T, G12A, A146V, G12N, 또는 G12R, 및 이들의 조합; 및
(c) 하기 N-Ras 돌연변이체: Q61R, Q61K, G12D, Q61L, Q61H, G13R, G13D, G12S, G12C, G12V, G12A, G13V, G12R, P185S, G13C, A146T, G60E, Q61P, A59D, E132K, E49K, T50I, A146V, 또는 A59T, 및 이들의 조합;
또는 상술한 것들 중 임의의 것의 조합으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 G12C, G12D, G13C, G12V, G13D, G12R, G12S, Q61H, Q61K 및 Q61L로 이루어지는 군으로부터 선택된 K-Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 G12C, Q61H, Q61K, Q61L, Q61P 및 Q61R로 이루어지는 군으로부터 선택된 N-Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 Q61H 및 Q61L로 이루어지는 군으로부터 선택된 H-Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 G12C, G13C, G12A, G12D, G13D, G12S, G13S, G12V 및 G13V로 이루어지는 군으로부터 선택된 Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 G12C, G13C, G12A, G12D, G13D, G12S, G13S, G12V 및 G13V로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 2개 Ras 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 1개 초과 Ras 돌연변이체를 억제시킨다. 예를 들어, 화합물은 양쪽 K-Ras G12C 및 K-Ras G13C를 억제시킬 수 있다. 화합물은 양쪽 N-Ras G12C 및 K-Ras G12C를 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 양쪽 K-Ras G12C 및 K-Ras G12D를 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 양쪽 K-Ras G12V 및 K-Ras G12C를 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 화합물은 양쪽 K-Ras G12V 및 K-Ras G12S를 억제시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 추가의 Ras 돌연변이 (예를 들면, K-, H- 또는 N-RasWT 및 K-Ras G12D, G12V, G12C, G13D, G12R, G12A, Q61H, G12S, A146T, G13C, Q61L, Q61R, K117N, A146V, G12F, Q61K, L19F, Q22K, V14I, A59T, A146P, G13R, G12L, 또는 G13V; K, H 또는 N-RasWT 및 H-Ras Q61R, G13R, Q61K, G12S, Q61L, G12D, G13V, G13D, G12C, K117N, A59T, G12V, G13C, Q61H, G13S, A18V, D119N, G13N, A146T, A66T, G12A, A146V, G12N, 또는 G12R; 또는 K, H 또는 N-RasWT 및 N-Ras Q61R, Q61K, G12D, Q61L, Q61H, G13R, G13D, G12S, G12C, G12V, G12A, G13V, G12R, P185S, G13C, A146T, G60E, Q61P, A59D, E132K, E49K, T50I, A146V, 또는 A59T) 이외에 RasWT를 억제시킨다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 추가의 Ras 돌연변이 (예를 들면, K-, H- 또는 N-Rasamp 및 K-Ras G12D, G12V, G12C, G13D, G12R, G12A, Q61H, G12S, A146T, G13C, Q61L, Q61R, K117N, A146V, G12F, Q61K, L19F, Q22K, V14I, A59T, A146P, G13R, G12L, 또는 G13V; K, H 또는 N-Rasamp 및 H-Ras Q61R, G13R, Q61K, G12S, Q61L, G12D, G13V, G13D, G12C, K117N, A59T, G12V, G13C, Q61H, G13S, A18V, D119N, G13N, A146T, A66T, G12A, A146V, G12N, 또는 G12R; 또는 K, H 또는 N-Rasamp 및 N-Ras Q61R, Q61K, G12D, Q61L, Q61H, G13R, G13D, G12S, G12C, G12V, G12A, G13V, G12R, P185S, G13C, A146T, G60E, Q61P, A59D, E132K, E49K, T50I, A146V, 또는 A59T) 이외에 Rasamp를 억제시킨다.
Ras 돌연변이의 검출 방법은 당업계에서 알려진다. 그러한 수단은, 예를 들면, TheraScreen PCR; AmoyDx; PNAClamp; RealQuality; EntroGen; LightMix; StripAssay; Hybcell plexA; Devyser; Surveyor; Cobas; 및 TheraScreen Pyro를 포함하여, 이 전체가 참고로 본원에 편입된, Domagala, 등, Pol J Pathol 3: 145-164 (2012)에 기재된 경우에, 직접 서열분석, 및 (CE-IVD 마크가 있는) 고-감도 진단 검정의 활용을, 비제한적으로, 포함한다. 또한, 예를 들면, WO 2020/106640, 참고.
일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 Ras 돌연변이는 K-Ras 돌연변이, 예컨대 K-Ras G12C, K-Ras G12V 또는 K-Ras G12D를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암이고 Ras 돌연변이는 K-Ras 돌연변이, 예컨대 K-Ras G12C, K-Ras G12V 또는 K-Ras G12D를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암이고 Ras 돌연변이는 K-Ras 돌연변이, 예컨대 K-Ras G12D 또는 K-Ras G12V를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암이고 Ras 돌연변이는 N-Ras 돌연변이, 예컨대 N-Ras G12D를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종이고 Ras 돌연변이는 N-Ras 돌연변이, 예컨대 N-Ras Q61R 또는 N-Ras Q61K를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 Ras 단백질은 K-Rasamp이다. 이미 특정되지 않는다면 상술의 임의의 것에서, 화합물은 RasWT (예를 들면, K-, H- 또는 N-RasWT) 또는 Rasamp (예를 들면, K-, H- 또는 N-Rasamp)를 또한 억제시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 암은 Ras 돌연변이 및 STK11LOF, KEAP1, EPHA5 또는 NF1 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 K-Ras G12C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 K-Ras G12C 돌연변이 및 STK11LOF 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 K-Ras G12C 돌연변이 및 STK11LOF 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 K-Ras G13C Ras 돌연변이 및 STK11LOF, KEAP1, EPHA5 또는 NF1 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 K-Ras G12D 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 비-소 세포 폐암이고 K-Ras G12V 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암이고 K-Ras G12C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암이고 K-Ras G12C 또는 K-Ras G12D 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암이고 K-Ras G12V 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 자궁내막암, 난소암, 담관암종, 또는 점액성 충수암이고 K-Ras G12C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 위장암이고 K-Ras G12C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 폐암, 결장직장암, 또는 췌장암이고 K-Ras G13C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 폐암 또는 췌장암이고 K-Ras G13C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 폐암이고 K-Ras G13C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 췌장암이고 K-Ras G13C 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암이고 K-Ras G13C 돌연변이를 포함한다. 상술의 임의의 것에서, 화합물은 RasWT (예를 들면, K-, H- 또는 N-RasWT) 또는 Rasamp (예를 들면, K-, H- 또는 N-Rasamp)를 또한 억제시킬 수 있다.
세포에서 Ras 단백질의 억제 방법으로서, 세포를 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 또한 제공된다. RAF-Ras 결합의 억제 방법으로서, 세포를 유효량의 본 발명의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 또한 제공된다. 세포는 암 세포일 수 있다. 암 세포는 본원에 기재된 암들 중 임의의 유형일 수 있다. 세포는 생체내 또는 시험관내일 수 있다.
조합 요법
본 발명의 방법은 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 요법 (예를 들면, 비-약물 치료 또는 치료적 제제)과 결합하여 사용된 본 발명의 화합물을 포함할 수 있다. 추가의 요법 (예를 들면, 비-약물 치료 또는 치료적 제제) 중 하나 이상의 투약량은 단독으로 투여된 때 표준 투약량으로부터 감소될 수 있다. 예를 들어, 용량은 약물 조합 및 순열로부터 실증적으로 결정될 수 있거나 등각선 분석 (예를 들면, Black 등, Neurology 65:S3-S6 (2005))에 의해 추론될 수 있다.
본 발명의 화합물은 상기 추가의 요법들 중 하나 이상 전에, 후에, 또는 동시에 투여될 수 있다. 조합된 경우, 본 발명의 화합물의 투약량 및 하나 이상의 추가의 요법 (예를 들면, 비-약물 치료 또는 치료적 제제)의 투약량은 치료적 효과 (예를 들면, 상승작용적 또는 부가 치료적 효과)를 제공한다. 본 발명의 화합물 및 추가의 요법, 예컨대 항-암 제제는 함께, 예컨대 단일성 약학적 조성물에서, 또는 별도로 투여될 수 있고, 별도로 투여된 경우, 이것은 동시에 또는 순차적으로 발생할 수 있다. 그러한 순차적 투여는 시간상 가깝거나 멀 수 있다.
일부 구현예에서, 추가의 요법은 부작용 제한 제제 (예를 들면, 치료의 부작용의 발생 또는 중증도를 약화시키기 위한 제제의 투여이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 메스꺼움을 치료하는 치료적 제제와 결합하여 또한 사용될 수 있다. 메스꺼움을 치료하는데 사용될 수 있는 제제의 예는 드로나비놀, 그라니세트론, 메토클로프라미드, 온단세트론, 및 프로클로르페라진, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 비-약물 치료 (예를 들면, 수술 또는 방사선 요법)를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 치료적 제제 (예를 들면, 항-혈관형성 제제, 신호 전달 억제제, 항증식성 제제, 해당작용 억제제, 또는 자가포식 억제제인 화합물 또는 생물제)를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 비-약물 치료 (예를 들면, 수술 또는 방사선 요법) 및 치료적 제제 (예를 들면, 항-혈관형성 제제, 신호 전달 억제제, 항증식성 제제, 해당작용 억제제, 또는 자가포식 억제제인 화합물 또는 생물제)를 포함한다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 2개 치료적 제제를 포함한다. 더욱 다른 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 3개 치료적 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 4개 이상 치료적 제제를 포함한다.
이러한 조합 요법 섹션에서, 모든 참고문헌은, 그 자체로 명시적으로 진술되든 아니든, 기재된 제제에 대하여 참고로 편입된다.
비-약물 요법
비-약물 치료의 예는, 비제한적으로, 방사선 요법, 냉동요법, 온열요법, 수술 (예를 들면, 종양 조직의 외과적 절제), 및 T 세포 입양 전이 (ACT) 요법을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 수술 후 아쥬반트 요법으로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 수술에 앞서 네오-아쥬반트 요법으로서 사용될 수 있다.
방사선 요법은 대상체 (예를 들면, 포유동물 (예를 들면, 인간))에서 초증식성 장애, 예컨대 암을 치료하는데 또는 비정상 세포 성장을 억제시키는데 사용될 수 있다. 방사선 요법을 투여하기 위한 기법은 당업계에서 알려진다. 방사선 요법은, 제한 없이, 외부-빔 요법, 내부 방사선 요법, 임플란트 방사선, 정위 방사선수술, 전신 방사선 요법, 방사선요법, 및 영구 또는 임시 간질 브라키 요법을 포함하는 몇몇 방법들 중 하나, 또는 방법들의 조합을 통해서 투여될 수 있다. 용어 "브라키 요법"은, 본원에 사용된 경우에, 종양 또는 기타 증식성 조직 질환 부위에서 또는 근처에서 신체에 삽입된 공간적으로 국한된 방사성 물질에 의해 전달된 방사선 요법을 지칭한다. 상기 용어는, 제한 없이, 방사성 동위원소 (예를 들면, At-211, I-131, I-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32, 및 Lu의 방사성 동위원소)에 노출을 포함하기 위한 것이다. 본 발명의 세포 컨디셔너로서 사용에 적당한 방사선원은 양쪽 고체 및 액체를 포함한다. 비-제한 예의 방식으로써, 방사선원은 방사성핵종, 예컨대 고체원으로서 I-125, I-131, Yb-169, Ir-192, 고체원으로서 I-125, 또는 광자, 베타 입자, 감마 선, 또는 기타 치료적 광선을 방출하는 기타 방사성핵종일 수 있다. 방사성 물질은 또한 방사성핵종(들)의 임의의 용액, 예를 들면, I-125 또는 I-131의 용액으로 만들어진 유체일 수 있거나, 방사성 유체는 고체 방사성핵종, 예컨대 Au-198, 또는 Y-90의 작은 입자를 함유하는 적당한 유체의 슬러리를 사용하여 생산될 수 있다. 더욱이, 방사성핵종(들)은 겔 또는 방사성 미소 구체로 구현될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 비정상 세포를 상기 세포의 성장 억제 또는 사멸의 목적을 위하여 방사선을 이용한 치료에 더욱 민감하게 만들 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로, 그 양이 방사선을 이용한 치료에 비정상 세포를 감작시키는데 효과적인, 본 발명의 화합물의 양을 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 방사선을 이용한 치료에 포유동물에서의 비정상 세포를 감작시키는 방법에 관한 것이다. 본 방법에서 화합물의 양은 본원에 기재된 상기 화합물의 유효량을 확정하기 위한 수단에 따라 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물은 방사선 요법 후 아쥬반트 요법으로서 또는 방사선 요법에 앞서 네오-아쥬반트 요법으로서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 비-약물 치료는 T 세포 입양 전이 (ACT) 요법이다. 일부 구현예에서, T 세포는 활성화된 T 세포이다. T 세포는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현시키기 위해 변형될 수 있다. CAR 변형된 T (CAR-T) 세포는 당업계에서 알려진 임의의 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, CAR-T 세포는 T 세포에 CAR을 인코딩하는 적당한 발현 벡터를 도입함으로써 생성될 수 있다. T 세포의 확장 및 유전적 변형에 앞서, T 세포의 공급원은 대상체로부터 수득된다. T 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염의 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직, 및 종양을 포함하는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 본 발명의 특정 구현예에서, 당업계에서 이용가능한 임의의 수의 T 세포주가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포는 자가 T 세포이다. 바람직한 단백질 (예를 들면, CAR)을 발현시키기 위해 T 세포의 유전적 변형 이전 또는 이후든, T 세포는, 예를 들어, 미국 특허 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 7,572,631; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 및 6,867,041에 기재된 경우에 방법을 일반적으로 사용하여 활성화 및 확장될 수 있다.
치료적 제제
치료적 제제는 암 또는 이와 연관된 증상의 치료에서 사용된 화합물일 수 있다.
예를 들어, 치료적 제제는 스테로이드일 수 있다. 따라서, 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 스테로이드를 포함한다. 적당한 스테로이드는, 비제한적으로, 21-아세톡시프레그네놀론, 알클로메타손, 알제스톤, 암시노니드, 베클로메타손, 베타메타손, 부데소니드, 클로로프레드니손, 클로베타솔, 클로코르톨론, 클로프레드놀, 코르티코스테론, 코르티손, 코르티바졸, 데플라자코르트, 데소니드, 데속시메타손, 덱사메타손, 디플로라손, 디플루코톨론, 디푸프레드네이트, 에녹솔론, 플루자코르트, 피우클로로니드, 플루메타손, 플루니솔리드, 플루오시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루오코르틴 부틸, 플루오코르톨론, 플루오로메톨론, 플루페롤론 아세테이트, 플루프레드니덴 아세테이트, 플루프레드니솔론, 플루란드레놀리드, 플루티카손 프로피오네이트, 포르모코르탈, 할시노니드, 할로베타솔 프로피오네이트, 할로메타손, 하이드로코르티손, 로테프레드놀 에타보네이트, 마지프레돈, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니솔론, 모메타손 푸로에이트, 파라메타손, 프레드니카르베이트, 프레드니솔론, 프레드니솔론 25-디에틸아미노아세테이트, 프레드니솔론 나트륨 포스페이트, 프레드니손, 프레드니발, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코르톨, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 트리암시놀론 베네토니드, 트리암시놀론 헥사세토니드, 및 이들의 염 또는 유도체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물과 조합 요법에서 사용될 수 있는 치료적 제제의 추가 예는 하기 특허: 미국 특허 번호 6,258,812, 6,630,500, 6,515,004, 6,713,485, 5,521,184, 5,770,599, 5,747,498, 5,990,141, 6,235,764, 및 8,623,885, 그리고 국제 특허 출원 WO01/37820, WO01/32651, WO02/68406, WO02/66470, WO02/55501, WO04/05279, WO04/07481, WO04/07458, WO04/09784, WO02/59110, WO99/45009, WO00/59509, WO99/61422, WO00/12089, 및 WO00/02871에 기재된 화합물을 포함한다.
치료적 제제는 암 또는 이와 연관된 증상의 치료에서 사용된 생물제 (예를 들면, 사이토카인 (예를 들면, 인터페론 또는 인터류킨 예컨대 IL-2))일 수 있다. 일부 구현예에서, 생물제는 표적을 효능화시켜 항-암 반응을 자극시키거나 암에 중요한 항원을 길항시키는 면역글로불린-기반된 생물제, 예를 들면, 단클론성 항체 (예를 들면, 인간화된 항체, 완전히 인간 항체, Fc 융합 단백질, 또는 이들의 기능적 단편)이다. 항체-약물 접합체가 또한 포함된다.
치료적 제제는 T-세포 관문 억제제일 수 있다. 일 구현예에서, 관문 억제제는 억제성 항체 (예를 들면, 단일특이적 항체 예컨대 단클론성 항체)이다. 항체는, 예를 들면, 인간화된 또는 완전히 인간일 수 있다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 융합 단백질, 예를 들면, Fc-수용체 융합 단백질이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 관문 단백질과 상호작용하는 제제, 예컨대 항체이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 관문 단백질의 리간드와 상호작용하는 제제, 예컨대 항체이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 CTLA-4 (예를 들면, 항-CTLA-4 항체 또는 융합 단백질)의 억제제 (예를 들면, 억제성 항체 또는 소 분자 억제제)이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 PD-1의 억제제 또는 길항제 (예를 들면, 억제성 항체 또는 소 분자 억제제)이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 PD-L1의 억제제 또는 길항제 (예를 들면, 억제성 항체 또는 소 분자 억제제)이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 PD-L2 (예를 들면, PD-L2/Ig 융합 단백질)의 억제제 또는 길항제 (예를 들면, 억제성 항체 또는 Fc 융합 또는 소 분자 억제제)이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, B-7 패밀리 리간드, 또는 이들의 조합의 억제제 또는 길항제 (예를 들면, 억제성 항체 또는 소 분자 억제제)이다. 일부 구현예에서, 관문 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, PDR001 (NVS), REGN2810 (Sanofi/Regeneron), PD-L1 항체 예컨대, 예를 들면, 아벨루맙, 두르발루맙, 아테졸리주맙, 피딜리주맙, JNJ-63723283 (JNJ), BGB-A317 (BeiGene & Celgene), 또는, 제한 없이, 이필리무맙, 트레멜리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, AMP224, AMP514/ MEDI0680, BMS936559, MEDl4736, MPDL3280A, MSB0010718C, BMS986016, IMP321, 릴리루맙, IPH2101, 1-7F9, 및 KW-6002를 포함하는, Preusser, M. 등. (2015) Nat. Rev. Neurol.에 개시된 관문 억제제이다.
치료적 제제는 항-TIGIT 항체, 예컨대 MBSA43, BMS-986207, MK-7684, COM902, AB154, MTIG7192A, 또는 OMP-313M32 (에티길리맙)일 수 있다.
치료적 제제는 암 또는 이와 연관된 증상을 치료하는 제제 (예를 들면, 세포독성 제제, 비-펩타이드 소 분자, 또는 암 또는 이와 연관된 증상의 치료에서 유용한 기타 화합물, 집합적으로, "항-암 제제")일 수 있다. 항-암 제제는, 예를 들면, 화학치료제 또는 표적화된 요법 제제일 수 있다.
항-암 제제는 유사분열 억제제, 삽입 항생제, 성장 인자 억제제, 세포 주기 억제제, 효소, 토포이소머라제 억제제, 생물학적 반응 조절제, 알킬화 제제, 대사 억제제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 및 관련 억제제, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 항생제, L-아스파라기나제, 토포이소머라제 억제제, 인터페론, 백금 배위 복합체, 안트라센디온 치환된 요소, 메틸 하이드라진 유도체, 부신피질 억압제, 부신피질 스테로이드, 프로게스틴, 에스트로겐, 항에스트로겐, 안드로겐, 항안드로겐, 및 성선자극호르몬-방출 호르몬 유사체를 포함한다. 추가 항-암 제제는 류코보린 (LV), 이레노테칸, 옥살리플라틴, 카페시타빈, 파클리탁셀, 및 도세탁셀을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 2개 이상의 항-암 제제를 포함한다. 2개 이상의 항-암 제제는 조합으로 투여되도록 또는 별도로 투여되도록 칵테일에서 사용될 수 있다. 조합 항-암 제제의 적당한 용량화 용법은 당업계에서 알려지고, 예를 들어, Saltz 등, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 18:233a (1999), 및 Douillard 등, Lancet 355(9209):1041-1047 (2000)에 기재된다.
항-암 제제의 기타 비-제한 예는 Gleevec® (이마티닙 메실레이트); Kyprolis® (카르필조밉); Velcade® (보르테조밉); Casodex (비칼루타미드); Iressa® (제피티닙); 알킬화 제제 예컨대 티오테파 및 사이클로스포스파미드; 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 그리고 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에티일렌티오포스포르아미드 및 트리메틸롤로멜라민을 포함하는 메틸아멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인 A; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벤비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라니무스틴; 항생제 예컨대 에네디인 항생제 (예를 들면, 칼리케아미신, 예컨대 칼리케아미신 감마1 및 칼리케아미신 오메가1 (예를 들면, Agnew, Chem. Intl. Ed Engl. 33:183-186 (1994) 참고); 다이네미신 예컨대 다이네미신 A; 비스포스포네이트 예컨대 클로드로네이트; 에스페라미신; 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 발색단백질 에네디인 항생물질 발색단, 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카미노마이신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조- 5-옥소-L-노르류신, 아드리아마이신 (독소루비신), 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 데옥시독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 예컨대 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 켈라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물질 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체 예컨대 데노프테린, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항- 부신 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄; 엽산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐루라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론 예컨대 에포틸론 B; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카바진; PSK® 다당류 복합체 (JHS Natural Products, Eugene, OR); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 예컨대 T- 2 톡신, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안귀딘; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들면, Taxol® (파클리탁셀), Abraxane® (파클리탁셀의 크로모포-없는, 알부민-조작된 나노입자 제형), 및 Taxotere® (독세탁셀); 클로란부실; 타목시펜 (Nolvadex™); 랄록시펜; 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸; 4-하이드록시타목시펜; 트리옥시펜; 케옥시펜; LY 117018; 오나프리스톤; 토레미펜 (Fareston®); 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 고세렐린; 클로람부실; Gemzar® 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 백금 배위 복합체 예컨대 시스플라틴, 옥살리플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; Navelbine® (비노렐빈); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 이리노테칸 (예를 들면, CPT-11); 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레티노이드 예컨대 레티노산; 에스페라미신; 카페시타빈 (예를 들면, Xeloda®); 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
항-암 제제의 추가의 비-제한 예는 트라스투주맙 (Herceptin®), 베바시주맙 (Avastin®), 세툭시맙 (Erbitux®), 리툭시맙 (Rituxan®), Taxol®, Arimidex®, ABVD, 아비신, 아바고보맙, 아크리딘 카르복사미드, 아데카투무맙, 17-N-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 알파라딘, 알보시딥, 3-아미노피리딘-2-카르복스알데하이드 티오세미카르바존, 아모나피드, 안트라센디온, 항-CD22 면역독소, 항종양제 (예를 들면, 세포-주기 비특이적 항신생물성 제제, 및 본원에 기재된 기타 항신생물제), 항종양원성 허브, 아파지쿠온, 아티프리모드, 아자티오프린, 벨로테칸, 벤다무스틴, BIBW 2992, 비리코다르, 브로스탈리신, 브리오스타틴, 부티오닌 술폭시민, CBV (화학요법), 칼리쿨린, 디클로로아세트산, 디스코더몰리드, 엘사미트루신, 에노시타빈, 에리불린, 엑사테칸, 엑시술린드, 페루기놀, 포로데신, 포스페스트롤, 얼음 화학요법 용법, IT-101, 이멕손, 이미퀴모드, 인돌로카르바졸, 이로풀벤, 라니퀴다르, 라로탁셀, 레날리도미드, 루칸톤, 루르토테칸, 마포스파미드, 미토졸로미드, 나폭시딘, 네다플라틴, 올라파립, 오르타탁셀, PAC-1, 포포, 픽산트론, 프로테아솜 억제제, 레베카마이신, 레시퀴모드, 루비테칸, SN-38, 살리노스포르아미드 A, 사파시타빈, 스탠포드 V, 스와인소닌, 탈라포르핀, 타리퀴다르, 테가푸르-우라실, 테모다르, 테세탁셀, 트리플라틴 테트라니트레이트, 트리스(2-클로로에틸)아민, 트록사시타빈, 우라무스틴, 바디메잔, 빈플루닌, ZD6126, 및 조수퀴다르를 포함한다.
항-암 제제의 추가 비-제한 예는 자연 산물 예컨대 빈카 알칼로이드 (예를 들면, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 비노렐빈), 에피디포도필로톡신 (예를 들면, 에토포시드 및 테니포시드), 항생제 (예를 들면, 닥티노마이신 (악티노마이신 D), 다우노루비신, 및 이다루비신), 안트라사이클린, 미톡산트론, 블레오마이신, 플리카마이신 (미트라마이신), 미토마이신, 효소 (예를 들면, L-아스파라긴을 전신적으로 대사하고 그들의 자체 아스파라긴을 합성하는 능력을 갖지 않는 세포를 박탈하는 L-아스파라기나아제), 항혈소판 제제, 항증식성/항유사분열성 알킬화 제제 예컨대 질소 머스타드 (예를 들면, 메클로레타민, 사이클로포스파미드 및 유사체, 멜팔란, 및 클로람부실), 에틸렌이민 및 메틸멜라민 (예를 들면, 헥사아메틸멜라아민 및 티오테파), CDK 억제제 (예를 들면, CDK4/6 억제제 예컨대 아베마시클립, 리보시클립, 팔보시클립; 셀리시클립, UCN-01, P1446A-05, PD-0332991, 디나시클립, P27-00, AT-7519, RGB286638, 및 SCH727965), 알킬 술포네이트 (예를 들면, 부술판), 니트로소우레아 (예를 들면, 카르무스틴 (BCNU) 및 유사체, 및 스트렙토조신), 트라젠-다카르바지닌 (DTIC), 항증식성/항유사분열 항대사물질 예컨대 엽산 유사체, 피리미딘 유사체 (예를 들면, 플루오로우라실, 플록수리딘, 및 사이타라빈), 퓨린 유사체 및 관련된 억제제 (예를 들면, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 펜토스타틴, 및 2-클로로데옥시아데노신), 아로마타제 억제제 (예를 들면, 아나스트로졸, 엑세메스탄, 및 레트로졸), 및 백금 배위 복합체 (예를 들면, 시스플라틴 및 카르보플라틴), 프로카르바진, 하이드록시우레아, 미토탄, 아미노글루테티미드, 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 억제제 (예를 들면, 트리코스타틴, 나트륨 부티레이트, 아피시단, 수베로일 아닐리드 하이드로암산, 보리노스타트, LBH 589, 로미뎁신, ACY-1215, 및 파노비노스타트), mTOR 억제제 (예를 들면, 비스투저팁, 템시롤리무스, 에베롤리무스, 리다포롤리무스, 및 시롤리무스), KSP(Eg5) 억제제 (예를 들면, Array 520), DNA 결합 제제 (예를 들면, Zalypsis®), PI3K 억제제 예컨대 PI3K 델타 억제제 (예를 들면, GS-1101 및 TGR-1202), PI3K 델타 및 감마 억제제 (예를 들면, CAL-130), 코판리십, 알펠리십 및 이델랄리십; 다중-키나제 억제제 (예를 들면, TG02 및 소라페닙), 호르몬 (예를 들면, 에스트로겐) 및 호르몬 효능제 예컨대 황체형성호르몬 방출 호르몬 (LHRH) 효능제 (예를 들면, 고세렐린, 류프롤리드 및 트립토렐린), BAFF-중화 항체 (예를 들면, LY2127399), IKK 억제제, p38MAPK 억제제, 항-IL-6 (예를 들면, CNT0328), 텔로머라제 억제제 (예를 들면, GRN 163L), 오로라 키나제 억제제 (예를 들면, MLN8237), 세포 표면 단클론성 항체 (예를 들면, 항-CD38 (HUMAX-CD38), 항-CSl (예를 들면, 엘로투주맙), HSP90 억제제 (예를 들면, 17 AAG 및 KOS 953), P13K / Akt 억제제 (예를 들면, 페리포신), Akt 억제제 (예를 들면, GSK-2141795), PKC 억제제 (예를 들면, 엔자스타우린), FTIs (예를 들면, Zarnestra™), 항-CD138 (예를 들면, BT062), Torcl/2 특이적 키나제 억제제 (예를 들면, INK128), ER/UPR 표적화 제제 (예를 들면, MKC-3946), cFMS 억제제 (예를 들면, ARRY-382), JAK1/2 억제제 (예를 들면, CYT387), PARP 억제제 (예를 들면, 올라파립 및 벨리파립 (ABT-888)), 및 BCL-2 길항제를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 메클로레타민, 캄프토테신, 이포스파미드, 타목시펜, 랄록시펜, 젬시타빈, Navelbine®, 소라페닙, 또는 상술의 임의의 유사체 또는 유도체 변이체로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 HER2 억제제이다. HER2 억제제의 비-제한 예는 단클론성 항체 예컨대 트라스투주맙 (Herceptin®) 및 퍼투주맙 (Perjeta®); 소 분자 티로신 키나제 억제제 예컨대 제피티닙 (Iressa®), 에를로티닙 (Tarceva®), 필리티닙, CP-654577, CP-724714, 카네르티닙 (CI 1033), HKI-272, 라파티닙 (GW-572016; Tykerb®), PKI-166, AEE788, BMS-599626, HKI-357, BIBW 2992, ARRY-334543, 및 JNJ-26483327을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 ALK 억제제이다. ALK 억제제의 비-제한 예는 세리티닙, TAE-684 (NVP-TAE694), PF02341066 (크리조티닙 또는 1066), 알렉티닙; 브리가티닙; 엔트렉티닙; 엔사르티닙 (X-396); 로를라티닙; ASP3026; CEP-37440; 4SC-203; TL-398; PLB1003; TSR-011; CT-707; TPX-0005, 및 AP26113을 포함한다. ALK 키나제 억제제의 추가의 예는 WO05016894의 실시예 3-39에 기재된다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 수용체 티로신 키나제 (RTK)/성장 인자 수용체 (예를 들면, SHP2 억제제 (예를 들면, SHP099, TNO155, RMC-4550, RMC-4630, JAB-3068, JAB-3312, RLY-1971, ERAS-601, SH3809, PF-07284892, 또는 BBP-398), SOS1 억제제 (예를 들면, BI-1701963, BI-3406, SDR5, MRTX0902, RMC-5845, 또는 BAY-293), Raf 억제제, MEK 억제제, ERK 억제제, PI3K 억제제, PTEN 억제제, AKT 억제제, 또는 mTOR 억제제 (예를 들면, mTORC1 억제제 또는 mTORC2 억제제)의 다운스트림 구성원의 억제제이다. 일부 구현예에서, 항-암 제제는 JAB-3312이다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 추가의 Ras 억제제 또는 Ras 백신, 또는 Ras의 종양원성 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 감소시키도록 설계된 또 다른 치료적 양식이다. 일부 구현예에서, 항-암 제제는 추가의 Ras 억제제이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 이의 활성 상태, 또는 GTP-결합 상태 (Ras(ON))에서 Ras를 표적화한다. 일부 구현예에서, Ras(ON) 억제제는 RMC-6291, RMC-6236, RMC-9805 또는 RMC-8839이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는, 그들 전체가 참고로 본원에 편입된, WO 2021091956, WO 2021091967, WO 2021091982, WO 2022060836, 또는 WO 2020132597에 개시된 RAS(ON) 억제제, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 이성질체 (예를 들면, 입체이성질체), 전구약물, 또는 호변이성체이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 이의 불활성 상태, 또는 GDP-결합 상태에서 Ras를 표적화한다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 예컨대 K-Ras G12C의 억제제, 예컨대 AMG 510, MRTX1257, MRTX849, JNJ-74699157 (ARS-3248), LY3499446, 또는 ARS-1620, ARS-853, BPI-421286, LY3537982, JDQ443, ERAS-3490, JAB-21000, BPI-421286, D-1553, JAB-21822, GH-35, ICP-915, IBI351, RMC-6291, 또는 GDC-6036이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 K-Ras G12D의 억제제, 예컨대 ERAS-4, MRTX1133, RMC-9805, 또는 JAB-22000이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 K-Ras G12V 억제제 예컨대 JAB-23000이다. 일부 구현예에서, Ras 억제제는 RMC-6236이다. 본 발명의 Ras 억제제와 조합될 수 있는 Ras 억제제의 기타 예는 그들 전체가 참고로 본원에 편입된 하기에 제공된다: WO 2022087624, WO 2022087375, WO 2022087371, WO 2022083616, WO 2022083569, WO 2022081655, WO 2022078414, WO 2022076917, WO 2022072783, WO 2022066805, WO 2022066646, WO 2022063297, WO 2022061251, WO 2022056307, WO 2022052895, WO 2022047093, WO 2022042630, WO 2022040469, WO 2022037560, WO 2022031678, WO 2022028492, WO 2022028346, WO 2022026726, WO 2022026723, WO 2022015375, WO 2022002102, WO 2022002018, WO 2021259331, WO 2021257828, WO 2021252339, WO 2021248095, WO 2021248090, WO 2021248083, WO 2021248082, WO 2021248079, WO 2021248055, WO 2021245051, WO 2021244603, WO 2021239058, WO 2021231526, WO 2021228161, WO 2021219090, WO 2021219090, WO 2021219072, WO 2021218939, WO 2021217019, WO 2021216770, WO 2021215545, WO 2021215544, WO 2021211864, WO 2021190467, WO 2021185233, WO 2021180181, WO 2021175199, 2021173923, WO 2021169990, WO 2021169963, WO 2021168193, WO 2021158071, WO 2021155716, WO 2021152149, WO 2021150613, WO 2021147967, WO 2021147965, WO 2021143693, WO 2021142252, WO 2021141628, WO 2021139748, WO 2021139678, WO 2021129824, WO 2021129820, WO 2021127404, WO 2021126816, WO 2021126799, WO 2021124222, WO 2021121371, WO 2021121367, WO 2021121330, WO 2020050890, WO 2020047192, WO 2020035031, WO 2020028706, WO 2019241157, WO 2019232419, WO 2019217691, WO 2019217307, WO 2019215203, WO 2019213526, WO 2019213516, WO 2019155399, WO 2019150305, WO 2019110751, WO 2019099524, WO 2019051291, WO 2018218070, WO 2018217651, WO 2018218071, WO 2018218069, WO 2018206539, WO 2018143315, WO 2018140600, WO 2018140599, WO 2018140598, WO 2018140514, WO 2018140513, WO 2018140512, WO 2018119183, WO 2018112420, WO 2018068017, WO 2018064510, WO 2017201161, WO 2017172979, WO 2017100546, WO 2017087528, WO 2017058807, WO 2017058805, WO 2017058728, WO 2017058902, WO 2017058792, WO 2017058768, WO 2017058915, WO 2017015562, WO 2016168540, WO 2016164675, WO 2016049568, WO 2016049524, WO 2015054572, WO 2014152588, WO 2014143659, WO 2013155223, CN 114195804, CN 114195788, CN 114057776, CN 114057744, CN 114057743, CN 113999226, CN 113980032, CN 113980014, CN 113929676, CN 11 3754653, CN 113683616, CN 113563323, CN 113527299, CN 113527294, CN 113527293, CN 113493440, CN 113429405, CN 113248521, CN 113087700, CN 113024544, CN 113004269, CN 112920183, CN 112778284, CN 112390818, CN 112390788, CN 112300196, CN 112300194, CN 112300173, CN 112225734, CN 112142735, CN 112110918, CN 112094269, CN 112047937, 및 CN 109574871, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 이성질체 (예를 들면, 입체이성질체), 전구약물, 또는 호변이성질체.
일부 구현예에서, 본 발명의 화합물과 조합될 수 있는 치료적 제제는 MAP 키나제 (MAPK) 경로의 억제제 (또는 "MAPK 억제제")이다. MAPK 억제제는, 비제한적으로, Cancers (Basel) 2015 Sep; 7(3): 1758-1784에 기재된 하나 이상의 MAPK 억제제를 포함한다. 예를 들어, MAPK 억제제는 트라메티닙, 비니메티닙, 셀루메티닙, 코비메티닙, LErafAON (NeoPharm), ISIS 5132; 베무라페닙, 피마세르팁, TAK733, RO4987655 (CH4987655); CI-1040; PD-0325901; CH5126766; MAP855; AZD6244; 레파메티닙 (RDEA 119/BAY 86-9766); GDC-0973/XL581; AZD8330 (ARRY-424704/ARRY-704); RO5126766 (Roche, PLoS One. 2014 Nov 25;9(11)에 기재됨); 및 GSK1120212 (또는 JTP-74057, Clin Cancer Res. 2011 Mar 1;17(5):989-1000에 기재됨) 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다. MAPK 억제제는 PLX8394, LXH254, GDC-5573, 또는 LY3009120일 수 있다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 RAS-RAF-ERK 또는 PI3K-AKT-TOR 또는 PI3K-AKT 신호전달 경로의 붕괴제 또는 억제제이다. PI3K/AKT 억제제는, 비제한적으로, Cancers (Basel) 2015 Sep; 7(3): 1758-1784에 기재된 하나 이상의 PI3K/AKT 억제제를 포함할 수 있다. 예를 들어, PI3K/AKT 억제제는 NVP-BEZ235; BGT226; XL765/SAR245409; SF1126; GDC-0980; PI-103; PF-04691502; PKI-587; GSK2126458 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 항-암 제제는 PD-1 또는 PD-L1 길항제이다.
일부 구현예에서, 추가의 치료적 제제는 ALK 억제제, HER2 억제제, EGFR 억제제, IGF-1R 억제제, MEK 억제제, PI3K 억제제, AKT 억제제, TOR 억제제, MCL-1 억제제, BCL-2 억제제, SHP2 억제제, 프로테아솜 억제제, 및 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 치료적 제제는 범-RTK 억제제, 예컨대 아파티닙일 수 있다.
IGF-1R 억제제는 린시티닙, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
EGFR 억제제는, 비제한적으로, 소 분자 길항제, 항체 억제제, 또는 특이적 안티센스 뉴클레오타이드 또는 siRNA를 포함한다. EGFR의 유용한 항체 억제제는 세툭시맙 (Erbitux®), 파니투무맙 (Vectibix®), 잘루투무맙, 니모투주맙, 및 마투주맙을 포함한다. 추가 항체-기반된 EGFR 억제제는 이의 자연 리간드에 의해 EGFR 활성화를 부분적으로 또는 완전히 차단시킬 수 있는 임의의 항-EGFR 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 항체-기반된 EGFR 억제제의 비-제한 예는 Modjtahedi 등, Br. J. Cancer 1993, 67:247-253; Teramoto 등, Cancer 1996, 77:639-645; Goldstein 등, Clin. Cancer Res. 1995, 1:1311-1318; Huang 등, 1999, Cancer Res. 15:59(8):1935-40; 및 Yang 등, Cancer Res.1999, 59:1236-1243에 기재된 것들을 포함한다. EGFR 억제제는 단클론성 항체 Mab E7.6.3 (Yang, 1999 상동), 또는 Mab C225 (ATCC Accession No. HB-8508), 또는 이들의 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편일 수 있다.
EGFR의 소 분자 길항제는 제피티닙 (Iressa®), 에를로티닙 (Tarceva®), 및 및 라파티닙 (TykerB®)을 포함한다. 예를 들면, Yan 등, Pharmacogenetics and Pharmacogenomics In Oncology Therapeutic Antibody Development, BioTechniques 2005, 39(4):565-8; 및 Paez 등, EGFR Mutations In Lung Cancer Correlation With Clinical Response To Gefitinib Therapy, Science 2004, 304(5676):1497-500, 참고. 일부 구현예에서, EGFR 억제제는 오시머티닙 (Tagrisso®)이다. 소 분자 EGFR 억제제의 추가 비-제한 예는 하기 특허 공보에 기재된 EGFR 억제제들 중 임의의 것, 및 상기 EGFR 억제제의 모든 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다: EP 0520722; EP 0566226; WO96/33980; 미국 특허 번호 5,747,498; WO96/30347; EP 0787772; WO97/30034; WO97/30044; WO97/38994; WO97/49688; EP 837063; WO98/02434; WO97/38983; WO95/19774; WO95/19970; WO97/13771; WO98/02437; WO98/02438; WO97/32881; DE 19629652; WO98/33798; WO97/32880; WO97/32880; EP 682027; WO97/02266; WO97/27199; WO98/07726; WO97/34895; WO96/31510; WO98/14449; WO98/14450; WO98/14451; WO95/09847; WO97/19065; WO98/17662; 미국 특허 번호 5,789,427; 미국 특허 번호 5,650,415; 미국 특허 번호 5,656,643; WO99/35146; WO99/35132; WO99/07701; 및 WO92/20642. 소 분자 EGFR 억제제의 추가의 비-제한 예는 Traxler 등, Exp. Opin. Ther. Patents 1998, 8(12):1599-1625에 기재된 EGFR 억제제들 중 임의의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, EGFR 억제제는 ERBB 억제제이다. 인간에서, ERBB 패밀리는 HER1 (EGFR, ERBB1), HER2 (NEU, ERBB2), HER3 (ERBB3), 및 HER (ERBB4)을 함유한다.
MEK 억제제는, 비제한적으로, 피마세르팁, 셀루메티닙, 코비메티닙 (Cotellic®), 트라메티닙 (Mekinist®) 및 비니메티닙 (Mektovi®)을 포함한다. 일부 구현예에서, MEK 억제제는 D67N; P124L; P124S; 및 L177V로부터 선택된 부류 I MEK1 돌연변이인 MEK 돌연변이를 표적화한다. 일부 구현예에서, MEK 돌연변이는 △E51-Q58; △F53-Q58; E203K; L177M; C121S; F53L; K57E; Q56P; 및 K57N으로부터 선택된 부류 II MEK1 돌연변이이다.
PI3K 억제제는, 비제한적으로, 보르트만닌; WO06/044453에 기재된 17-하이드록시보르트만닌 유사체; (픽틸리십 또는 GDC-0941로서 또한 알려지고 WO09/036082 및 WO09/055730에 기재된) 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸술포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린; (BEZ 235 또는 NVP-BEZ 235로서 또한 알려지고, WO06/122806에 기재된) 2-메틸-2-[4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디하이드로이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐]프로피오니트릴;(WO08/070740에 기재된) (S)-1-(4-((2-(2-아미노피리미딘-5-일)-7-메틸-4-모르폴리노티에노[3,2-d]피리미딘-6-일)메틸)피페라진-1-일)-2-하이드록시프로판-1-온; LY294002 (2-(4-모르폴리닐)-8-페닐-4H-1-벤조피란-4-온 (Axon Medchem으로부터 이용가능); PI 103 하이드로클로라이드 (3-[4-(4-모르폴리닐피리도-[3',2':4,5]푸로[3,2-d]피리미딘-2-일] 페놀 하이드로클로라이드 (Axon Medchem으로부터 이용가능); PIK 75 (2-메틸-5-니트로-2-[(6-브로모이미다조[1,2-a]피리딘-3-일)메틸렌]-1-메틸하이드라지드-벤젠술폰산, 모노하이드로클로라이드) (Axon Medchem으로부터 이용가능); PIK 90 (N-(7,8-디메톡시-2,3-디하이드로-이미다조[1,2-c]퀴나졸린-5-일)-니코틴아미드 (Axon Medchem으로부터 이용가능); AS-252424 (5-[l-[5-(4-플루오로-2-하이드록시-페닐)-푸란-2-일]-메트-(Z)-일리덴]-티아졸리딘-2,4-디온 (Axon Medchem으로부터 이용가능); TGX-221 (7-메틸-2-(4-모르폴리닐)-9-[1-(페닐아미노)에틸]-4H-피리도-[1,2-a]피리르니딘-4-온 (Axon Medchem으로부터 이용가능); XL-765; 및 XL-147을 포함한다. 기타 PI3K 억제제는 데메톡시비리딘, 페리포신, CAL101, PX-866, BEZ235, SF1126, INK1117, IPI-145, BKM120, XL147, XL765, Palomid 529, GSK1059615, ZSTK474, PWT33597, IC87114, TGI 00-115, CAL263, PI-103, GNE-477, CUDC-907, 및 AEZS-136을 포함한다.
AKT 억제제는, 비제한적으로, Akt-1-1 (Aktl 억제시킴) (Barnett 등, Biochem. J. 2005, 385(Pt. 2): 399-408); Akt-1-1,2 (Akl 및 2 억제시킴) (Barnett 등, Biochem. J. 2005, 385(Pt. 2): 399-408); API-59CJ-Ome (예를 들면, Jin 등, Br. J. Cancer 2004, 91:1808-12); 1-H-이미다조[4,5-c]피리디닐 화합물 (예를 들면, WO 05/011700); 인돌-3-카르비놀 및 이의 유도체 (예를 들면, 미국 특허 번호 6,656,963; Sarkar and Li J Nutr. 2004, 134(12 Suppl):3493S-3498S); 페리포신 (예를 들면, Akt 막 국소화 방해; Dasmahapatra 등. Clin. Cancer Res. 2004, 10(15):5242-52); 포스파티딜이노시톨 에테르 지질 유사체 (예를 들면, Gills and Dennis Expert. Opin. Investig. Drugs 2004, 13:787-97); 및 트리시리빈 (TCN 또는 API-2 또는 NCI 식별자: NSC 154020; Yang 등, Cancer Res. 2004, 64:4394-9)을 포함한다.
mTOR 억제제는, 비제한적으로, ATP-경쟁적 mTORC1/mTORC2 억제제, 예를 들면, PI-103, PP242, PP30; Torin 1; FKBP12 향상제; 4H-1-벤조피란-4-온 유도체; 및 템시롤리무스 (Torisel®); 에베롤리무스 (Afinitor®; WO94/09010); (데로롤리무스 또는 AP23573으로서 또한 알려진) 리다포롤리무스를 포함하는 (시롤리무스로서 또한 알려진) 라파마이신 및 이의 유도체; 예를 들면, WO98/02441 및 WO01/14387에 개시된 경우에 라팔로그, 예를 들면 AP23464 및 AP23841; 40-(2-하이드록시에틸)라파마이신; (CC1779로서 또한 알려진) 40-[3-하이드록시(하이드록시메틸)메틸프로파노에이트]-라파마이신; (ABT578로서 또한 불리는) 40-에피-(테트라졸리트)-라파마이신; 32-데옥소라파마이신; 16-펜티닐옥시-32(S)-디하이드로라파나이신; WO05/005434에 개시된 유도체; 미국 특허 번호 5,258,389, 5,118,677, 5,118,678, 5,100,883, 5,151,413, 5,120,842, 및 5,256,790에, 그리고 WO94/090101, WO92/05179, WO93/111130, WO94/02136, WO94/02485, WO95/14023, WO94/02136, WO95/16691, WO96/41807, WO96/41807, 및 WO2018204416에 개시된 유도체; 및 인-함유 라파마이신 유도체 (예를 들면, WO05/016252)를 포함한다. 일부 구현예에서, mTOR 억제제는 비스테릭 억제제 (예를 들면, WO2018204416, WO2019212990 및 WO2019212991, 참고), 예컨대 다음 구조를 갖는 RMC-5552이다
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본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 BRAF 억제제는, 예를 들어, 베무라페닙, 다브라페닙, 및 엔코라페닙을 포함한다. BRAF는 부류 3 BRAF 돌연변이를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 부류 3 BRAF 돌연변이는 인간 BRAF에서 하기 아미노산 치환들 중 하나 이상으로부터 선택된다: D287H; P367R; V459L; G466V; G466E; G466A; S467L; G469E; N581S; N581I; D594N; D594G; D594A; D594H; F595L; G596D; G596R; 및 A762E.
MCL-1 억제제는, 비제한적으로, AMG-176, MIK665, 및 S63845를 포함한다. 골수양 세포 백혈병-1 (MCL-1) 단백질은 B-세포 림프종-2 (BCL-2) 단백질 패밀리의 핵심 항-세포자살 구성원들 중 하나이다. MCL-1의 과-발현은 전통적 화학요법 뿐 아니라 BCL-2 억제제 예컨대 ABT-263을 포함하는 표적화된 치료제에 대한 내성과 뿐만 아니라 종양 진행과 밀접하게 관련되어 있다.
일부 구현예에서, 추가의 치료적 제제는 SHP2 억제제이다. SHP2는 증식, 분화, 세포 주기 유지 및 이주를 포함하는 여러 세포성 기능에 기여하는 PTPN11 유전자에 의해 인코딩된 비-수용체 단백질 티로신 포스파타제이다. SHP2는 2개 N-말단 Src 상동성 2 도메인 (N-SH2 및 C-SH2), 촉매적 도메인 (PTP), 및 C-말단 꼬리를 갖는다. 2개 SH2 도메인은 SHP2의 아세포성 국소화 및 기능적 조절을 제어한다. 분자는 양쪽 N-SH2 및 PTP 도메인으로부터 잔기를 포함하는 결합 네트워크에 의해 안정화된 비활성, 자가-억제된 형태로 실재한다. 예를 들어, 수용체 티로신 키나제 (RTK)를 통해서 작용하는 사이토카인 또는 성장 인자에 의한 자극은 SHP2의 효소적 활성화를 초래하는 촉매적 부위의 노출로 이어진다.
SHP2는 RAS-미토겐-활성화된 단백질 키나제 (MAPK), JAK-STAT 또는 포스포이노시톨 3-키나제-AKT 경로를 통해서 신호전달에 관여된다. PTPN11 유전자에서 그리고 후속적으로 SHP2에서 돌연변이는 몇몇 인간 발달성 질환, 예컨대 누난 증후군 및 레오파드 증후군, 뿐만 아니라 인간 암, 예컨대 소아 골수단구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 급성 골수양 백혈병 및 유방, 폐 및 결장의 암에서 식별되었다. 이들 돌연변이의 일부는 SHP2의 자동-억제된 형태를 불안정하게 만들고 SHP2의 자동활성화 또는 향상된 성장 인자 구동된 활성화를 촉진시킨다. SHP2는, 그러므로, 암을 포함하는 다양한 질환의 치료를 위하여 신규한 요법의 개발에 대하여 매우 매력적인 목표를 나타낸다. RAS 경로 억제제 (예를 들면, MEK 억제제)와 결합하여 SHP2 억제제 (예를 들면, RMC-4550 또는 SHP099)는 시험관내 여러 암 세포주 (예를 들면, 췌장, 폐, 난소 및 유방 암)의 증식을 억제시키는 것으로 나타났다. 그래서, RAS 경로 억제제와 SHP2 억제제를 포함하는 조합 요법은 넓은 범위의 악성종양에서 종양 내성을 예방하기 위한 일반 전략일 수 있다.
당업계에서 알려지는 상기 SHP2 억제제의 비-제한 예는 하기 간행물에서 찾아진 것들을 포함한다: Chen 등. Mol Pharmacol. 2006, 70, 562; Sarver 등, J. Med. Chem. 2017, 62, 1793; Xie 등, J. Med. Chem. 2017, 60, 113734; 및 Igbe 등, Oncotarget, 2017, 8, 113734; 및 특허 출원: WO 2022063190, WO 2022043685, WO 2022042331, WO 2022033430, WO 2022033430, WO 2022017444, WO 2022007869, WO 2021259077, WO 2021249449, WO 2021 249057, WO 2021244659, WO 2021218755, WO 2021281752, WO 2021197542, WO 2021176072, WO 2021149817, WO 2021148010, WO 2021147879, WO 2021143823, WO 2021143701, WO 2021143680, WO 2021121397, WO 2021119525, WO 2021115286, WO 2021110796, WO 2021088945, WO 202 1073439, WO 2021061706, WO 2021061515, WO 2021043077, WO 2021033153, WO 2021028362, WO 2021033153, WO 2021028362 , WO 2021018287, WO 2020259679, WO 2020249079, WO 2020210384, WO 2020201991, WO 2020181283, WO 2020177653, WO 2020165734, WO 2020165733, WO 2 020165732, WO 2020156243, WO 2020156242, WO 2020108590, WO 2020104635, WO 2020094104, WO 2020094018, WO 2020081848, WO 2020073949, WO 2020073945, WO 2020072656, WO 2020065453, WO 2020065452, WO 2020063760, WO 2020061103, WO 2020061101, WO 2020 033828, WO 2020033286, WO 2020022323, WO 2019233810, WO 2019213318, WO 2019183367, WO 2019183364, WO 2019182960, WO 2019167000, WO 2019165073, WO 2019158019, WO 2019152454, WO 2019051469, WO 2019051084, WO 2018218133, WO 2018172984, WO 2018160731, WO 201 8136265, WO 2018136264, WO 2018130928, WO 2018129402, WO 2018081091, WO 2018057884, WO 2018013597, WO 2017216706 , WO 2017211303, WO 2017210134, WO 2017156397, WO 2017100279, WO 2017079723, WO 2017078499, WO 2016203406, WO 2016203405, WO 2016203404, WO 2 016196591, WO 2016191328, WO 2015107495, WO 2015107494, WO 2015107493, WO 2014176488, WO 2014113584, US 20210085677, US 10858359, US 10934302, US 10954243, US 10988466, US 11001561, US 11033547, US 11034705, US 11044675, CN 114213417, CN 11416 3457, CN 113896710, CN 113248521, CN 113248449, CN 113135924, CN 113024508, CN 112920131, CN 112823796, CN 112402385, CN 111848599, CN 111704611, CN 111265529, 및 CN 108113848, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 이성질체 (예를 들면, 입체이성질체), 전구약물, 또는 호변이성질체, 이들의 각각은 본원에 참고로 편입됨.
일부 구현예에서, SHP2 억제제는 활성 부위에서 결합한다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 혼합된-유형 비가역적 억제제이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 알로스테릭 부위 예를 들면, 비-공유 알로스테릭 억제제를 결합시킨다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 공유 SHP2 억제제, 예컨대 포스파타제의 활성 부위 밖에 있는 시스테인 잔기 (C333)를 표적하는 억제제이다. 일부 구현예에서 SHP2 억제제는 가역적 억제제이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 비가역적 억제제이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 SHP099이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 TNO155이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 RMC-4550이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 RMC-4630이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 JAB-3068이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 JAB-3312이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 RLY-1971이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 ERAS-601이다. 일부 구현예에서, SHP2 억제제는 BBP-398이다.
일부 구현예에서, 추가의 치료적 제제는 MEK 억제제, HER2 억제제, SHP2 억제제, CDK4/6 억제제, mTOR 억제제, SOS1 억제제, 및 PD-L1 억제제로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 추가의 치료적 제제는 MEK 억제제, SHP2 억제제, 및 PD-L1 억제제로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 예를 들면, Hallin 등, Cancer Discovery, DOI: 10.1158/2159-8290 (October 28, 2019) 및 Canon 등, Nature, 575:217 (2019), 참고. 일부 구현예에서, 본 발명의 Ras 억제제는 MEK 억제제 및 SOS1 억제제와 결합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 Ras 억제제는 PD-L1 억제제 및 SOS1 억제제와 결합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 Ras 억제제는 PD-L1 억제제 및 SHP2 억제제와 결합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 Ras 억제제는 MEK 억제제 및 SHP2 억제제와 결합하여 사용된다. 일부 구현예에서, 암은 결장직장암이고 치료는 제2 또는 제3 치료적 제제와 결합하여 본 발명의 Ras 억제제의 투여를 포함한다.
프로테아솜 억제제는, 비제한적으로, 카르필조밉 (Kyprolis®), 보르테조밉 (Velcade®), 오프로조밉을 포함한다.
면역 요법은, 비제한적으로, 단클론성 항체, 면역조절성 이미드 (IMiD), GITR 효능제, 유전적으로 조작된 T-세포 (예를 들면, CAR-T 세포), 이중특이적 항체 (예를 들면, BiTE), 및 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-CTLA4, 항-LAGl, 및 항-OX40 제제)를 포함한다.
면역조절성 제제 (IMiD)는 이미드 기를 함유하는 면역조절성 약물 (면역 반응을 조정하는 약물)의 한 부류이다. IMiD 부류는 탈리도미드 및 이의 유사체 (레날리도미드, 포말리도미드, 및 아프레밀라스트)를 포함한다.
예시적 항-PD-1 항체 및 그들의 사용 방법은 Goldberg 등, Blood 2007, 110(1):186-192; Thompson 등, Clin. Cancer Res. 2007, 13(6):1757-1761; 및 WO06/121168 A1)에 의해 기재되고, 뿐만 아니라 본원에 다른 곳에 기재된다.
GITR 효능제는, 비제한적으로, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체 (예를 들면, 2가 항-GITR 항체), 예컨대, 미국 특허 번호 6,111,090, , 미국 특허 번호 8,586,023, WO2010/003118 및 WO2011/090754에 기재된 GITR 융합 단백질; 또는 예를 들면, 미국 특허 번호 7,025,962, EP 1947183, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국 특허 번호 8,388,967, 미국 특허 번호 8,591,886, 미국 특허 번호 7,618,632, EP 1866339, 및 WO2011/028683, WO2013/039954, WO05/007190, WO07/133822, WO05/055808, WO99/40196, WO01/03720, WO99/20758, WO06/083289, WO05/115451, 및 WO2011/051726에 기재된 항-GITR 항체를 포함한다.
본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 치료적 제제의 또 다른 예는 항-혈관형성 제제이다. 항-혈관형성 제제는, 비제한적으로, 시험관내 합성적으로 제조된 화학적 조성물, 항체, 항원 결합 영역, 방사성핵종, 그리고 이들의 조합 및 접합체를 포함한다. 항-혈관형성 제제는 효능제, 길항제, 알로스테릭 조절제, 독소일 수 있거나, 더욱 일반적으로, 이의 표적 (예를 들면, 수용체 또는 효소 활성화 또는 억제)를 억제 또는 자극하는 역할을 할 수 있고, 이에 의해 세포 사멸을 촉진 또는 세포 성장을 정지시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 항-혈관형성 제제를 포함한다.
항-혈관형성 제제는 MMP-2 (매트릭스-메탈로프로테이나제 2) 억제제, MMP-9 (매트릭스-메탈로프로테이나제 9) 억제제, 및 COX-II (사이클로옥시게나제 11) 억제제일 수 있다. 항-혈관형성 제제의 비-제한 예는 라파마이신, 템시롤리무스 (CCI-779), 에베롤리무스 (RAD001), 소라페닙, 수니티닙, 및 베바시주맙을 포함한다. 유용한 COX-II 억제제의 예는 알레콕십, 발데콕십, 및 로페콕십을 포함한다. 유용한 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제의 예는 WO96/33172, WO96/27583, WO98/07697, WO98/03516, WO98/34918, WO98/34915, WO98/33768, WO98/30566, WO90/05719, WO99/52910, WO99/52889, WO99/29667, WO99007675, EP0606046, EP0780386, EP1786785, EP1181017, EP0818442, EP1004578, 및 US20090012085, 그리고 미국 특허 번호 5,863,949 및 5,861,510에 기재된다. 바람직한 MMP-2 및 MMP-9 억제제는 MMP-1을 억제시키는 활성을 거의 또는 전혀 없는 것들이다. 더욱 바람직하게는, 기타 매트릭스-메탈로프로테이나제 (즉, MAP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP- 7, MMP- 8, MMP-10, MMP-11, MMP-12, 및 MMP-13)에 비해 MMP-2 또는 AMP-9를 선택적으로 억제시키는 것들이다. MMP 억제제의 일부 특이적 예는 AG-3340, RO 32-3555, 및 RS 13-0830이다.
추가 예시적 항-혈관형성 제제는 KDR (키나제 도메인 수용체) 억제성 제제 (예를 들면, 키나제 도메인 수용체에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 영역), 항-VEGF 제제 (예를 들면, VEGF (예를 들면, 베바시주맙), 또는 가용성 VEGF 수용체를 특이적으로 결합시키는 항체 또는 항원 결합 영역 또는 이들의 리간드 결합 영역) 예컨대 VEGF-TRAP™, 및 항-VEGF 수용체 제제 (예를 들면, 거기에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역), EGFR 억제성 제제 (예를 들면, 거기에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역) 예컨대 Vectibix® (파니투무맙), 에를로티닙 (Tarceva®), 항-Angl 및 항-Ang2 제제 (예를 들면, 거기에 또는 그들의 수용체, 예를 들면, Tie2/Tek에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역), 및 항-Tie2 키나제 억제성 제제 (예를 들면, 거기에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역)를 포함한다. 기타 항-혈관형성 제제는 Campath, IL-8, B-FGF, Tek 길항제 (US2003/0162712; US6,413,932), 항-TWEAK 제제 (예를 들면, 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역, 또는 가용성 TWEAK 수용체 길항제; US6,727,225 참고), 인테그린의 이의 리간드에의 결합을 길항시키는 ADAM 디스트인테그린 도메인 (US 2002/0042368), 특이적으로 결합하는 항-eph 수용체 또는 항-에프린 항체 또는 항원 결합 영역 (미국 특허 번호 5,981,245; 5,728,813; 5,969,110; 6,596,852; 6,232,447; 6,057,124 및 이들의 특허 패밀리 구성원), 및 항-PDGF-BB 길항제 (예를 들면, 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역) 뿐만 아니라 PDGF-BB 리간드에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역, 및 PDGFR 키나제 억제성 제제 (예를 들면, 거기에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 영역)를 포함한다. 추가의 항-혈관형성 제제는 SD-7784 (Pfizer, USA); 실렌지티드 (Merck KGaA, Germany, EPO 0770622); 페갑타닙 옥타소듐, (Gilead Sciences, USA); 알파스타틴, (BioActa, UK); M-PGA, (Celgene, USA, US 5712291); 일로마스타트, (Arriva, USA, US5892112); 에막사닙, (Pfizer, USA, US 5792783); 바탈라닙, (Novartis, Switzerland); 2-메톡시에스트라디올 (EntreMed, USA); TLC ELL-12 (Elan, Ireland); 아네코르타브 아세테이트 (Alcon, USA); 알파-D148 Mab (Amgen, USA); CEP-7055 (Cephalon, USA); 항-Vn Mab (Crucell, Netherlands), DAC항혈관신생 (ConjuChem, Canada); 안지오시딘 (InKine Pharmaceutical, USA); KM-2550 (Kyowa Hakko, Japan); SU-0879 (Pfizer, USA); CGP-79787 (Novartis, Switzerland, EP 0970070); ARGENT 테크놀로지 (Ariad, USA); YIGSR-Stealth (Johnson & Johnson, USA); 피브리노겐-E 단편 (BioActa, UK); 혈관형성 억제제 (Trigen, UK); TBC-1635 (Encysive Pharmaceuticals, USA); SC-236 (Pfizer, USA); ABT-567 (Abbott, USA); 메타스타틴 (EntreMed, USA); 마스핀 (Sosei, Japan); 2-메톡시에스트라디올 (Oncology Sciences Corporation, USA); ER-68203-00 (IV AX, USA); BeneFin (Lane Labs, USA); Tz-93 (Tsumura, Japan); TAN-1120 (Takeda, Japan); FR-111142 (Fujisawa, Japan, JP 02233610); 혈소판 인자 4 (RepliGen, USA, EP 407122); 혈관 내피 성장 인자 길항제 (Borean, Denmark); 베바시주맙 (pINN) (Genentech, USA); 혈관형성 억제제 (SUGEN, USA); XL 784 (Exelixis, USA); XL 647 (Exelixis, USA); MAb, 알파5베타3 인테그린, 2 세대 (Applied Molecular Evolution, USA and Medlmmune, USA); 엔자스타우린 하이드로클로라이드 (Lilly, USA); CEP 7055 (Cephalon, USA and Sanofi-Synthelabo, France); BC 1 (Genoa Institute of Cancer Research, Italy); rBPI 21 및 BPI-유래된 항혈관형성 (XOMA, USA); PI 88 (Progen, Australia); 실렌지티드 (Merck KGaA, German; Munich Technical University, Germany, Scripps Clinic and Research Foundation, USA); AVE 8062 (Ajinomoto, Japan); AS 1404 (Cancer Research Laboratory, New Zealand); SG 292, (Telios, USA); 엔도스타틴 (Boston Childrens Hospital, USA); ATN 161 (Attenuon, USA); 2-메톡시에스트라디올 (Boston Childrens Hospital, USA); ZD 6474, (AstraZeneca, UK); ZD 6126, (Angiogene Pharmaceuticals, UK); PPI 2458, (Praecis, USA); AZD 9935, (AstraZeneca, UK); AZD 2171, (AstraZeneca, UK); 바탈라닙 (pINN), (Novartis, Switzerland and Schering AG, Germany); 조직 인자 경로 억제제, (EntreMed, USA); 페갑타닙 (Pinn), (Gilead Sciences, USA); 크산토르히졸, (Yonsei University, South Korea); 백신, 유전자-기반된, VEGF-2, (Scripps Clinic and Research Foundation, USA); SPV5.2, (Supratek, Canada); SDX 103, (University of California at San Diego, USA); PX 478, (ProlX, USA); METASTATIN, (EntreMed, USA); 트로포닌 I, (Harvard University, USA); SU 6668, (SUGEN, USA); OXI 4503, (OXiGENE, USA); o-구아니딘, (Dimensional Pharmaceuticals, USA); 모투포라민 C, (British Columbia University, Canada); CDP 791, (Celltech 그룹, UK); 아티프리모드 (pINN), (GlaxoSmithKline, UK); E 7820, (Eisai, Japan); CYC 381, (Harvard University, USA); AE 941, (Aeterna, Canada); 백신, 혈관형성, (EntreMed, USA); 우로키나제 플라스미노겐 활성화제 억제제, (Dendreon, USA); 오글루파니드 (pINN), (Melmotte, USA); HIF-lalfa 억제제, (Xenova, UK); CEP 5214, (Cephalon, USA); BAY RES 2622, (Bayer, Germany); 안지오시딘, (InKine, USA); A6, (Angstrom, USA); KR 31372, (Korea Research Institute of Chemical Technology, South Korea); GW 2286, (GlaxoSmithKline, UK); EHT 0101, (ExonHit, France); CP 868596, (Pfizer, USA); CP 564959, (OSI, USA); CP 547632, (Pfizer, USA); 786034, (GlaxoSmithKline, UK); KRN 633, (Kirin Brewery, Japan); 약물 전달 시스템, 안내, 2-메톡시에스트라디올; 안지넥스 (Maastricht University, Netherlands, 및 Minnesota University, USA); ABT 510 (Abbott, USA); AAL 993 (Novartis, Switzerland); VEGI (ProteomTech, USA); 종양 괴사 인자-알파 억제제; SU 11248 (Pfizer, USA and SUGEN USA); ABT 518, (Abbott, USA); YH16 (Yantai Rongchang, China); S-3APG (Boston Childrens Hospital, USA and EntreMed, USA); MAb, KDR (ImClone Systems, USA); MAb, 알파5 베타 (Protein Design, USA); KDR 키나제 억제제 (Celltech Group, UK, and Johnson & Johnson, USA); GFB 116 (South Florida University, USA and Yale University, USA); CS 706 (Sankyo, Japan); 콤브레타스타틴 A4 전구약물 (Arizona State University, USA); 콘드로이티나제 AC (IBEX, Canada); BAY RES 2690 (Bayer, Germany); AGM 1470 (Harvard University, USA, Takeda, Japan, and TAP, USA); AG 13925 (Agouron, USA); 테트라티오몰리브데이트 (University of Michigan, USA); GCS 100 (Wayne State University, USA) CV 247 (Ivy Medical, UK); CKD 732 (Chong Kun Dang, South Korea); 이르소글라딘, (Nippon Shinyaku, Japan); RG 13577 (Aventis, France); WX 360 (Wilex, Germany); 스쿠알라민, (Genaera, USA); RPI 4610 (Sirna, USA); 헤파라나제 억제제 (InSight, Israel); KL 3106 (Kolon, South Korea); Honokiol (Emory University, USA); ZK CDK (Schering AG, Germany); ZK Angio (Schering AG, Germany); ZK 229561 (Novartis, Switzerland, and Schering AG, Germany); XMP 300 (XOMA, USA); VGA 1102 (Taisho, Japan); VE-카드헤린-2 길항제(ImClone Systems, USA); 바소스타틴 (National Institutes of Health, USA); Flk-1 (ImClone Systems, USA); TZ 93 (Tsumura, Japan); 툼스타틴 (Beth Israel Hospital, USA); 절두된 가용성 FLT 1 (혈관 내피 성장 인자 수용체 1) (Merck & Co, USA); Tie-2 리간드 (Regeneron, USA); 및 트롬보스폰딘 1 억제제 (Allegheny Health, Education and Research Foundation, USA)를 포함한다.
본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 치료적 제제의 추가 예는 성장 인자의 활성을 특이적으로 결합시키고 억제시키는 제제 (예를 들면, 항체, 항원 결합 영역, 또는 가용성 수용체), 예컨대 간세포 성장 인자 (HGF, 산란 인자로서 또한 알려짐)의 길항제, 그리고 이의 수용체, c-Met를 특이적으로 결합시키는 항체 또는 항원 결합 영역을 포함한다.
본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 치료적 제제의 또 다른 예는 자가포식 억제제이다. 자가포식 억제제는, 비제한적으로 클로로퀸, 3-메틸아데닌, 하이드록시클로로퀸 (Plaquenil™), 바필로마이신 A1, 5-아미노-4-이미다졸 카르복사미드 리보시드 (AICAR), 오카다산, 유형 2A 또는 유형 1의 단백질 포스파타제를 억제시키는 자가포식-억압성 조류 독소, cAMP의 유사체, 및 cAMP 수준의 상승시키는 약물 예컨대 아데노신, LY204002, N6-메르캅토퓨린 리보시드, 및 빈블라스틴을 포함한다. 이외에도, (자가포식에 연루되는) ATG5를 비제한적으로 포함하는 단백질의 발현을 억제시키는 안티센스 또는 siRNA가 또한 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 자가포식 억제제를 포함한다.
본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 치료적 제제의 또 다른 예는 항-신생물성 제제이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 요법은 항-신생물성 제제를 포함한다. 항-신생물성 제제의 비-제한 예는 아세만난, 아클라루비신, 알데스류킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알트레타민, 아미포스틴, 아미노레불린산, 암루비신, 암사크린, 아나그렐리드, 아나스트로졸, 안세르, 안세스팀, 아르글라빈, 삼산화비소, BAM-002 (Novelos), 벡사로텐, 비칼루타미드, 브록수리딘, 카페시타빈, 셀몰류킨, 세트로렐릭스, 클라드리빈, 클로트리마졸, 사이타라빈 옥포스페이트, DA 3030 (Dong-A), 다클리주맙, 데닐류킨 디프티톡스, 데슬로렐린, 덱스라족산, 딜라제프, 도세탁셀, 도코사놀, 독서칼시페롤, 독시플루리딘, 독소루비신, 브로모크립틴, 카르무스틴, 사이타라빈, 플루오로우라실, HIT 디클로페낙, 인터페론 알파, 다우노루비신, 독소루비신, 트레티노인, 에델포신, 에드레콜로맙, 에플로르니틴, 에미에푸르, 에피루비신, 에포에틴 베타, 에토포시드 포스페이트, 엑세메스탄, 엑시술린드, 파드로졸, 필그라스팀, 피나스테리드, 플루다라빈 포스페이트, 포르메스탄, 포테무스틴, 질산갈륨, 젬시타빈, 젬투주맙 조가미신, 기메라실/오테라실/테가푸르 조합, 글리코핀, 고세렐린, 헵타플라틴, 인간 융모막 성선자극호르몬, 인간 태아 알파 태아단백질, 이반드론산, 이다루비신, (이미퀴모드, 인터페론 알파, 인터페론 알파, 자연, 인터페론 알파-2, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-NI, 인터페론 알파-n3, 인터페론 알파콘-1, 인터페론 알파, 자연, 인터페론 베타, 인터페론 베타-Ia, 인터페론 베타-Ib, 인터페론 감마, 자연 인터페론 감마- Ia, 인터페론 감마-Ib, 인터류킨-1 베타, 아이오벤구안, 이리노테칸, 이르소글라딘, 란레오티드, LC 9018 (Yakult), 레플루노미드, 레노그라스팀, 황산렌티난, 레트로졸, 백혈구 알파 인터페론, 류프로렐린, 레바미솔 + 플루오로우라실, 리아로졸, 로바플라틴, 로니다민, 로바스타틴, 마소프로콜, 멜라르소프롤, 메토클로프라미드, 미페프리스톤, 밀테포신, 미리모스팀, 미스매치된 이중 가닥 RNA, 미토구아존, 미토락톨, 미톡산트론, 몰그라모스팀, 나파렐린, 날록손 + 펜타조신, 나르토그라스팀, 네다플라틴, 닐루타미드, 노스카핀, 신규 적혈구생성 자극 단백질, NSC 631570 옥트레오티드, 오프렐베킨, 오사테론, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드론산, 페가스파르가제, 페그인터페론 알파-2b, 펜토산 폴리술페이트 나트륨, 펜토스타틴, 피시바닐, 피라루비신, 토끼 항흉선세포 다클론성 항체, 폴리에틸렌 글리콜 인터페론 알파-2a, 포르피머 나트륨, 랄록시펜, 랄티트렉스드, 라스부리엠보디멘트, 레늄 Re 186 에티드로네이트, RII 레티나미드, 리툭시맙, 로무르티드, 사마륨 (153 Sm) 렉시드로남, 사르그라모스팀, 시조피란, 소부족산, 소네르민, 스트론튬-89 클로라이드, 수라민, 타소네르민, 타자로텐, 테가푸르, 테모포르핀, 테모졸로미드, 테니포시드, 테트라클로로데카옥시드, 탈리도미드, 티말파신, 티로트로핀 알파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙-요오드 131, 트라스투주맙, 트레오술판, 트레티노인, 트리로스탄, 트리메트렉세이트, 트립토렐린, 종양 괴사 인자 알파, 자연, 우베니멕스, 방광암 백신, 마루야마 백신, 흑색종 용해물 백신, 발루비신, 베르테포르핀, 비노렐빈, 비룰리진, 지노스타틴 스티말라머, 또는 졸레드론산; 아바렐릭스; AE 941 (Aeterna), 암바무스틴, 안티센스 올리고뉴클레오티드, bcl-2 (Genta), APC 8015 (Dendreon), 데시타빈, 덱사미노글루테티미드, 디아지쿠온, EL 532 (Elan), EM 800 (Endorecherche), 에닐우라실, 에타니다졸, 펜레티니드, 필그라스팀 SD01 (Amgen), 풀베스트란트, 갈로시타빈, 가스트린 17 면역원, HLA-B7 유전자 요법 (Vical), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자, 히스타민 다하이드로클로라이드, 이브리투모맙 티욱세탄, 일로마스타트, IM 862 (Cytran), 인터류킨-2, 이프록시펜, LDI 200 (Milkhaus), 레리디스팀, 린투주맙, CA 125 MAb (Biomira), 암 MAb (Japan Pharmaceutical Development), HER-2 및 Fc MAb (Medarex), 유전자형 105AD7 MAb (CRC Technology), 유전자형 CEA MAb (Trilex), LYM-1-요오드 131 MAb (Techni clone), 다형성 상피 뮤신-이트륨 90 MAb (Antisoma), 마리마스타트, 메노가릴, 미투모맙, 모텍사핀 가돌리늄, MX 6 (Galderma), 넬라라빈, 놀락트렉스드, P 30 단백질, 페그비소만트, 페메트렉세드, 포르피로마이신, 프리노마스타트, RL 0903 (Shire), 루비테칸, 사트라플라틴, 페닐아세트산나트륨, 스파르포스산, SRL 172 (SR Pharma), SU 5416 (SUGEN), TA 077 (Tanabe), 테트라티오몰리브데이트, 탈리블라스틴, 트롬보포이에틴, 주석 에틸 에티오푸르푸린, 티라파자민, 암 백신 (Biomira), 흑색종 백신 (New York University), 흑색종 백신 (Sloan Kettering Institute), 흑색종 종양용해물 백신 (New York Medical College), 바이러스성 흑색종 세포 용해물 백신 (Royal Newcastle Hospital), 또는 발스포다르를 포함한다.
본 발명의 화합물과 결합하여 사용될 수 있는 치료적 제제의 추가의 예는 이필리무맙 (Yervoy®); 트레멜리무맙; 갈릭시맙; BMS-936558 (Opdivo®)로서 또한 알려진, 니볼루맙; 펨브롤리주맙 (Keytruda®); 아벨루맙 (Bavencio®); AMP224; BMS-936559; RG7446으로서 또한 알려진, MPDL3280A; MEDI-570; AMG557; MGA271; IMP321; BMS-663513; PF-05082566; CDX-1127; 항-OX40 (Providence Health Services); huMAbOX40L; 아타시셉트; CP-870893; 루카투무맙; 다세투주맙; 무로모납-CD3; 이필루무맙; MEDI4736 (Imfinzi®); MSB0010718C; AMP 224; 아달리무맙 (Humira®); 아도-트라스투주맙 엠탄신 (Kadcyla®); 아플리버셉트 (Eylea®); 알렘투주맙 (Campath®); 바실릭시맙 (Simulect®); 벨리무맙 (Benlysta®); 바실릭시맙 (Simulect®); 벨리무맙 (Benlysta®); 브렌툭시맙 베도틴 (Adcetris®); 카나키누맙 (Ilaris®); 세르톨리주맙 페골 (Cimzia®); 다클리주맙 (Zenapax®); 다라투무맙 (Darzalex®); 데노수맙 (Prolia®); 에쿨리주맙 (Soliris®); 에팔리주맙 (Raptiva®); 젬투주맙 오조가미신 (Mylotarg®); 골리무맙 (Simponi®); 이브리투모맙 티욱세탄 (Zevalin®); 인플릭시맙 (Remicade®); 모타비주맙 (Numax®); 나탈리주맙 (Tysabri®); 오비누투주맙 (Gazyva®); 오파투무맙 (Arzerra®); 오말리주맙 (Xolair®); 팔리비주맙 (Synagis®); 페르투주맙 (Perjeta®); 페르투주맙 (Perjeta®); 라니비주맙 (Lucentis®); 락시바쿠맙 (Abthrax®); 토실리주맙 (Actemra®); 토시투모맙; 토시투모맙-i-131; 토시투모맙 및 토시투모맙-i-131 (Bexxar®); 우스테키누맙 (Stelara®); AMG 102; AMG 386; AMG 479; AMG 655; AMG 706; AMG 745; 및 AMG 951을 포함한다.
본원에 기재된 화합물은, 치료 중인 병태에 의존하여, 본원에 개시된 제제 또는 기타 적당한 제제와 결합하여 사용될 수 있다. 그래서, 일부 구현예에서 본 개시내용의 하나 이상의 화합물은 본원에 기재된 경우에 기타 요법과 공-투여될 것이다. 조합 요법에서 사용된 경우, 본원에 기재된 화합물은 제2 제제와 동시에 또는 별도로 투여될 수 있다. 이러한 조합으로의 투여는 동일한 투약 형태로 2개 제제의 동시 투여, 별도 투약 형태로 동시 투여, 및 별도 투여를 포함할 수 있다. 즉, 본원에 기재된 화합물 및 본원에 기재된 제제들 중 임의의 것은 동일한 투약 형태로 함께 제형화될 수 있고 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물 및 본원에 기재된 요법들 중 임의의 것은 동시에 투여될 수 있고, 여기서 양쪽 제제는 별도 제형으로 존재한다. 또 다른 대안으로, 본 개시내용의 화합물 이어서 본원에 기재된 요법들 중 임의의 것이 투여될 수 있고, 그 반대도 마찬가지이다. 별도 투여 프로토콜의 일부 구현예에서, 본 발명의 화합물 및 본원에 기재된 요법들 중 임의의 것은 몇 분 떨어져서, 또는 몇 시간 떨어져서, 또는 몇 일 떨어져서 투여된다.
본원에 기재된 방법들 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 제1 요법 (예를 들면, 본 발명의 화합물) 및 하나 이상의 추가의 요법은 동시에 또는, 어느 한쪽 순서로 순차적으로 투여된다. 제1 치료적 제제는 하나 이상의 추가의 요법 이전 또는 이후 즉시, 최대 1 시간, 최대 2 시간, 최대 3 시간, 최대 4 시간, 최대 5 시간, 최대 6 시간, 최대 7 시간, 최대, 8 시간, 최대 9 시간, 최대 10 시간, 최대 11 시간, 최대 12 시간, 최대 13 시간, 14 시간, 최대 시간 16, 최대 17 시간, 업 18 시간, 최대 19 시간 최대 20 시간, 최대 21 시간, 최대 22 시간, 최대 23 시간, 최대 24 시간, 또는 최대 1-7, 1-14, 1-21 또는 1-30 일 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 (a) 본원에 기재된 제제 (예를 들면, 본 발명의 화합물)을 포함하는 약학적 조성물, 및 (b) 본원에 기재된 방법들 중 임의의 것을 수행하기 위한 지침이 있는 패키지 삽입물을 포함하는 키트를 특성화한다. 일부 구현예에서, 키트는 (a) 본원에 기재된 제제 (예를 들면, 본 발명의 화합물)를 포함하는 약학적 조성물, (b) 하나 이상의 추가의 요법 (예를 들면, 비-약물 치료 또는 치료적 제제), 및 (c) 본원에 기재된 방법들 중 임의의 것을 수행하기 위한 지침이 있는 패키지 삽입물을 포함한다.
본 발명의 일 양태가 별도로 투여될 수 있는 약학적으로 활성 화합물들의 조합으로 질환 또는 이와 연관된 증상의 치료를 고려함에 따라, 본 발명은 추가로 키트 형태로 별도 약학적 조성물들을 조합하는 것에 관련한다. 키트는 2개 별도 약학적 조성물: 본 발명의 화합물, 및 하나 이상의 추가의 요법을 포함할 수 있다. 키트는 별도 조성물을 함유하기 위한 용기 예컨대 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함할 수 있다. 용기의 추가의 예는 주사기, 박스, 및 백을 포함한다. 일부 구현예에서, 키트는 별도 성분의 사용을 위하여 지시를 포함할 수 있다. 키트 형태는 별도 성분이 상이한 투약 형태 (예를 들면, 경구 및 비경구)로 바람직하게는 투여되는, 상이한 투약 간격으로 투여되는 경우, 또는 조합의 개별 성분들의 적정이 처방 건강 관리 전문가에 의해 요구되는 경우 특히 유리하다.
넘버링된 구현예
1. 화학식 I의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
,
화학식 I
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
L1은 부재이거나 링커이고;
W는 비닐 케톤, 비닐 술폰, 이논, 또는 알키닐 술폰을 포함하는 가교기이고;
R1은 수소, 임의로 치환된 3 내지 10-원 헤테로사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이다.
2. 구현예 1에 있어서, A가 임의로 치환된 티아졸, 임의로 치환된 옥사졸, 임의로 치환된 모르폴리노, 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 아제티디닐, 임의로 치환된 피라지닐, 임의로 치환된 피리미딘, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 옥사디아졸, 임의로 치환된 티아디아졸, 임의로 치환된 트리아졸, 임의로 치환된 티오모르폴리노, 또는 임의로 치환된 페닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
3. 구현예 1 또는 2에 있어서, 화학식 II-1의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-1.
4. 구현예 1 또는 2에 있어서, 화학식 II-2의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-2,
식중 R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
5. 구현예 4에 있어서, 화학식 II-3의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-3.
6. 구현예 4에 있어서, 화학식 II-4의 구조를 갖는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-4.
7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, R2가 또는 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, R3이 임의로 치환된 C1-C6 알킬인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
9. 구현예 8에 있어서, R3이 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
10. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, R3이 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
11. 구현예 10에 있어서, R3이 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
12. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, A가 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
13. 구현예 12에 있어서, A가
또는 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
14. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, A가 임의로 치환된 페닐인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
15. 구현예 14에 있어서, A가 또는 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
16. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, A가 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
17. 구현예 16에 있어서, A가 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택되는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
또는 .
18. 구현예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서, 링커가 화학식 III의 구조인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D1)-(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2
화학식 III,
식중 A1은 링커와 CH(R3) 사이의 결합이고; A2는 W와 링커 사이의 결합이고; B1, B2, B3, 및 B4는 각각, 독립적으로, 임의로 치환된 C1-C2 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬렌, O, S, 및 NRN으로부터 선택되고; 각 RN은, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 알케닐, 임의로 치환된 C2-C4 알키닐, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴, 또는 임의로 치환된 C1-C7 헤테로알킬이고; C1 및 C2는 각각, 독립적으로, 카르보닐, 티오카르보닐, 술포닐, 또는 포스포릴로부터 선택되고; f, g, h, i, j, 및 k는 각각, 독립적으로, 0 또는 1이고; D1은 임의로 치환된 C1-C10 알킬렌, 임의로 치환된 C2-C10 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C10 알키닐렌, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴렌, 임의로 치환된 C2-C10 폴리에틸렌 글리콜렌, 또는 임의로 치환된 C1-C10 헤테로알킬렌, 또는 A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-를 -(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2에 연결시키는 화학적 결합이다.
19. 구현예 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서, 링커가 환식 모이어티이거나 상기 모이어티를 포함하는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
20. 구현예 19에 있어서, 링커가 화학식 IIIa의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 IIIa,
식중 o는 0 또는 1이고;
R7은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
X1은 부재, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, O, NCH3, 또는 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌이고;
Cy는 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 12-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-10 원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
L2는 부재, -SO2-, -NH-, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌이다.
21. 구현예 20에 있어서, 링커가 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택되는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
또는
22. 구현예 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 화합물이 표 2의 화합물이 아닌, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 화학식 II-5의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-5,
식중 Cy1은 임의로 치환된 스피로환식 8 내지 11-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 2환식 7 내지 9-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
식중 W는 비닐 케톤 또는 비닐 술폰을 포함한다.
24. 구현예 23에 있어서, Cy1이 임의로 치환된 스피로환식 10 내지 11-원 헤테로사이클로알킬렌인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
25. 구현예 24에 있어서, 화학식 II-5a의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-5a,
식중 X2는 O, C(R11)2, NR12, S, 또는 SO2이다.
r은 1 또는 2이고;
각 t는, 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;
R11 및 R12는 각각, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 3 내지 5-원 사이클로알킬이고;
각 R13은, 독립적으로, -CH3이다.
26. 구현예 25에 있어서, r이 1인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
27. 구현예 25에 있어서, r이 2인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
28. 구현예 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, X2가 O인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
29. 구현예 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, X2가 S인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
30. 구현예 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, X2가 SO2인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
31. 구현예 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, X2가 NR12인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
32. 구현예 31에 있어서, R12가 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택되는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
또는 -H.
33. 구현예 25 내지 27 중 어느 하나에 있어서, X2가 C(R11)2인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
34. 구현예 33에 있어서, 각 R11이 수소인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
35. 구현예 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, W가 비닐 케톤을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
36. 구현예 35에 있어서, W가 화학식 IVa의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 IVa,
식중 R8a, R8b, 및 R8c는, 독립적으로, 수소, -CN, 할로겐, 또는 -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬이다.
37. 구현예 36에 있어서, W가 다음, 또는 이의 입체이성질체로부터 선택되는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
또는
38. 구현예 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, W가 비닐 술폰을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
39. 구현예 38에 있어서, W가 화학식 IVc의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 IVc,
식중 R10a, R10b, 및 R10c는, 독립적으로, 수소, -CN, 또는 -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬이다.
40. 구현예 39에 있어서, W가 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
41. 구현예 1 내지 34 중 어느 하나에 있어서, W가 이논을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
42. 구현예 41에 있어서, W가 화학식 IVb의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 IVb,
식중 R9는 수소, -OH, -O-C1-C3 알킬, -NH2, -NH(C1-C3 알킬), -N(C1-C3 알킬)2, 또는 4 내지 7-원 포화된 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체로 임의로 치환된 -C1-C3 알킬, 또는 4 내지 7-원 포화된 헤테로사이클로알킬이다.
43. 구현예 42에 있어서, W가 다음으로부터 선택되는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
또는
44. 구현예 42 또는 43에 있어서, 화학식 II-6의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-6,
식중 Q1은 CH2, NRN, 또는 O이고;
Q2는 CO, NRN, 또는 O이고;
Z는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이거나;
식중 Q1-Q2-Z는 임의로 치환된 9 내지 10-원 스피로환식 헤테로사이클로알킬렌이다.
45. 구현예 42 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 화학식 II-6a의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-6a,
식중 R14는 플루오로, 수소, 또는 C1-C3 알킬이고;
u는 0 또는 1이다.
46. 구현예 45에 있어서, R14가 플루오로이고 u가 1인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
47. 구현예 45에 있어서, R14가 수소이고 u가 0인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
48. 구현예 42 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 화학식 II-6b의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-6b.
49. 구현예 42 내지 44 중 어느 하나에 있어서, 화학식 II-6c의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
화학식 II-6c.
50. 표 1로부터 선택된, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
51. 구현예 1 내지 50 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학적 조성물.
52. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIa의 구조를 갖는다:
화학식 VIa,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
X2는 O, C(R11)2, NR12, S, 또는 SO2이고;
r은 1 또는 2이고;
각 t는, 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;
R11 및 R12는 각각, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 3 내지 5-원 사이클로알킬이고;
각 R13은, 독립적으로, -CH3이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
53. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIb의 구조를 갖는다:
화학식 VIb,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R14는 플루오로, 수소, 또는 C1-C3 알킬이고;
u는 0 또는 1이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
54. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VIc의 구조를 갖는다:
화학식 VIc,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
55. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
M-L-P
화학식 V,
식중 L은 링커이고;
P는 1가 유기 모이어티이고;
M은 화학식 VId의 구조를 갖는다:
화학식 VId,
식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성한다.
56. 구현예 52 내지 55 중 어느 하나에 있어서, 1가 유기 모이어티가 단백질인, 접합체, 또는 이의 염.
57. 구현예 56에 있어서, 단백질이 Ras 단백질인, 접합체, 또는 이의 염.
58. 구현예 57에 있어서, Ras 단백질이 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C인, 접합체, 또는 이의 염.
59. 구현예 52 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 링커가 1가 유기 모이어티의 아미노산 잔기의 술프하이드릴 기에 결합을 통해서 1가 유기 모이어티에 결합되는, 접합체, 또는 이의 염.
60. 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 구현예 1 내지 50 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 구현예 51의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
61. 구현예 60에 있어서, 암이 췌장암, 결장직장암, 비-소 세포 폐암, 또는 자궁내막암인, 방법.
62. 구현예 60 또는 61에 있어서, 암이 Ras 돌연변이를 포함하는, 방법.
63. 구현예 62에 있어서, Ras 돌연변이가 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C인, 방법.
64. 필요로 하는 대상체에서 Ras 단백질-관련된 장애의 치료 방법으로서, 대상체에 치료적으로 유효량의 구현예 1 내지 50 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 구현예 51의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
65. 세포에서 Ras 단백질의 억제 방법으로서, 세포와 유효량의 구현예 1 내지 50 중 어느 하나의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 구현예 51의 약학적 조성물과 접촉하는 단계를 포함하는, 방법.
66. 구현예 64 또는 65에 있어서, Ras 단백질이 K-Ras G12C, K-Ras G13C, H-Ras G12C, H-Ras G13C, N-Ras G12C, 또는 N-Ras G13C인, 방법.
67. 구현예 65 또는 66에 있어서, 세포가 암 세포인, 방법.
68. 구현예 67에 있어서, 암 세포가 췌장암 세포, 결장직장암 세포, 비-소 세포 폐암 세포, 또는 자궁내막암 세포인, 방법.
69. 구현예 60 내지 68 중 어느 하나에 있어서, 본 방법 또는 용도가 추가의 항-암 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법 또는 용도.
70. 구현예 69에 있어서, 추가의 항-암 요법이 EGFR 억제제, 제2 Ras 억제제, SHP2 억제제, SOS1 억제제, Raf 억제제, MEK 억제제, ERK 억제제, PI3K 억제제, PTEN 억제제, AKT 억제제, mTORC1 억제제, BRAF 억제제, PD-L1 억제제, PD-1 억제제, CDK4/6 억제제, HER2 억제제, 또는 이들의 조합인, 방법.
71. 구현예 69 또는 70에 있어서, 추가의 항-암 요법이 SHP2 억제제인, 방법.
실시예
본 개시내용은, 본원에 기재된 구체적 절차로 범위 또는 사상에서 본 개시내용을 제한하는 것으로서 해석되지 않는, 하기 실시예 및 합성예에 의해 추가로 예시된다. 실시예가 특정 구현예를 예시하도록 제공되는 것 그리고 본 개시내용의 범위에 대한 제한이 이에 의해 의도되지 않는다는 것이 이해되어야 한다. 본 개시내용의 사상 또는 첨부된 청구항의 범위를 벗어남이 없이 당업자에 제안할 수 있는 이들의 다양한 기타 구현예, 수정, 및 등가물에 의지할 수 있음이 추가로 이해되어야 한다.
화학적 합성
하기 실시예 및 본원에 다른 곳에 사용된 정의는 다음이다:
CH2Cl2, DCM 염화메틸렌, 디클로로메탄
CH3CN, MeCN 아세토니트릴
CuI 요오드화구리 (I)
DIPEA 디이소프로필에틸 아민
DMF N,N-디메틸포름아미드
EtOAc 에틸 아세테이트
h 시간
H2O 물
HCl 염산
K3PO4 인산칼륨 (3염기성)
MeOH 메탄올
Na2SO4 황산나트륨
NMP N-메틸 피롤리돈
Pd(dppf)Cl2 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)
계측
질량 분석 데이터 수집은 어느 한쪽 QDa 검출기 또는 SQ 검출기 2가 있는 Shimadzu LCMS-2020, Agilent 1260LC-6120/6125MSD, Shimadzu LCMS-2010EV, 또는 Waters Acquity UPLC로 이루어졌다. 샘플은 그들의 액체 상으로 C-18 역상 컬럼에 주사되었다. 화합물은 아세토니트릴 구배를 사용하여 컬럼에서 용리되었고 질량 분석기에 공급되었다. 초기 데이터 분석은 어느 한쪽 Agilent ChemStation, Shimadzu LabSolutions 또는 Waters MassLynx로 이루어졌다. NMR 데이터는 어느 한쪽 Bruker AVANCE III HD 400MHz, Bruker Ascend 500MHz 계기, 또는 Varian 400MHz로 수집되었고, 미가공 데이터는 어느 한쪽 TopSpin 또는 Mestrelab Mnova로 분석되었다.
중간체의 합성
중간체 1. 3-(5-브로모-1-에틸-2-[2-[(1 S )-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올의 합성
단계 1. 0 ℃에 N2의 대기 하에서 DCM (120 mL)내 3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로파노일 클로라이드 (65 g, 137 mmol, 미정제)의 혼합물에 DCM (137 mL, 137 mmol)내 1M SnCl4가 천천히 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (40 mL)내 5-브로모-1H-인돌 (26.8 g, 137 mmol)의 용액이 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 45 분 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (300 mL)로 희석되었고, 염수 (100 mL x 4)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 1-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로판-1-온 (55 g, 75% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + Na] C29H32BrNO2SiNa에 대한 계산치 556.1; 측정치 556.3.
단계 2. 0 ℃에 N2의 대기 하에서 THF (100 mL)내 1-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로판-1-온 (50 g, 93.6 mmol)의 혼합물에 LiBH4 (6.1 g, 281 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 60 ℃로 가열되었고 20 시간 동안 교반되었고, 그 다음 MeOH (10 mL) 및 EtOAc (100 mL)가 첨가되었고 혼합물은 염수 (50 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 DCM (50 mL)으로 희석되었고, 10 ℃로 냉각되었고 딜루딘 (9.5 g, 37.4 mmol) 및 TsOH.H2O (890 mg, 4.7 mmol) 첨가되었다. 혼합물은 10 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 1-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로판-1-온 (41 g, 84% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C29H34BrNOSi에 대한 계산치 519.2; 측정치 520.1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 5H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 7.23 - 7.19 (m, 2H), 6.87 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 3.40 (s, 2H), 2.72 (s, 2H), 1.14 (s, 9H), 0.89 (s, 6H).
단계 3. rt에 THF (15 mL)내 1-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로판-1-온 (1.5 g, 2.9 mmol) 및 I2 (731 mg, 2.9 mmol)의 혼합물에 AgOTf (888 mg, 3.5 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 rt에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (200 mL)로 희석되었고 포화된 Na2S2O3 (100 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 5-브로모-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-요오도-1H-인돌 (900 mg, 72% 수율)을 고체로서 제공하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.70 (s, 1H), 7.68 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.64 - 7.62 (m, 4H), 7.46 - 7.43 (m, 6H), 7.24 - 7.22 (d, 1H), 7.14 - 7.12 (dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H), 2.63 (s, 2H), 1.08 (s, 9H), 0.88 (s, 6H).
단계 4. 0 ℃에 Ar의 대기 하에서 TEA (728 g, 7.2 mol)내 HCOOH (66.3 g, 1.44 mol)의 교반된 혼합물에 (4S,5S)-2-클로로-2-메틸-1-(4-메틸벤젠술포닐)-4,5-디페닐-1,3-디아자-2-루테나사이클로펜탄 사이멘 (3.9 g, 6.0 mmol)이 부문식으로 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 15 분 동안 교반되었고, 그 다음 rt로 냉각되었고 1-(3-브로모피리딘-2-일)에타논 (120 g, 600 mmol)이 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 추가의 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 용매는 감압 하에서 농축되었다. 염수 (2 L)는 잔류물에 첨가되었고, 혼합물은 EtOAc (4 x 700 mL)로 추출되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (1S)-1-(3-브로모피리딘-2-일)에탄올 (100 g, 74% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C7H8BrNO에 대한 계산치 201.1; 측정치 201.9.
단계 5. 0 ℃에 DMF (1 L)내 (1S)-1-(3-브로모피리딘-2-일)에탄올 (100 g, 495 mmol)의 교반된 혼합물에 오일내 NaH, 60% 분산액 (14.25 g, 594 mmol)이 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었다. MeI (140.5 g, 990 mmol)는 0 ℃에 적가되었고 혼합물은 rt로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 0 ℃로 냉각되었고 포화된 NH4Cl (5 L)이 첨가되었다. 혼합물은 EtOAc (3 x 1.5 L)로 추출되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-브로모-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (90 g, 75% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C8H10BrNO에 대한 계산치 215.0; 측정치 215.9.
단계 6. Ar의 대기 하에서 rt에 톨루엔 (900 mL)내 3-브로모-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (90 g, 417 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (30.5 g, 41.7 mmol)의 교반된 혼합물에 비스(피나콜라토)디보론 (127 g, 500 mmol) 및 KOAc (81.8 g, 833 mmol)가 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 100 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 Al2O3 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 2-[(1S)-1-메톡시에틸]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (100 g, 63% 수율)을 반-고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C14H22BNO3에 대한 계산치 263.2; 측정치 264.1.
단계 7. Ar의 대기 하에서 rt에 1,4-디옥산 (1.4 L)내 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-요오도-1H-인돌 (140 g, 217 mmol) 및 2-[(1S)-1-메톡시에틸]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (100 g, 380 mmol)의 교반된 혼합물에 K2CO3 (74.8 g, 541 mmol), Pd(dppf)Cl2 (15.9 g, 21.7 mmol), 및 H2O (280 mL)가 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 85 ℃로 가열되었고 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 냉각되었고, H2O (5 L)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 2 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 1 L)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌 (71 g, 45% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C37H43BrN2O2Si에 대한 계산치 654.2; 측정치 655.1.
단계 8. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (0.8 L)내 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌 (71 g, 108 mmol)의 교반된 혼합물에 Cs2CO3 (70.6 g, 217 mmol) 및 EtI (33.8 g, 217 mmol)가 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 rt로 가온되었고 16 시간 동안 교반되었고 그 다음 H2O (4 L)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 1.5 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 1 L)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌 (66 g, 80% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C39H47BrN2O2Si에 대한 계산치 682.3; 측정치 683.3.
단계 9. N2의 대기 하에서 rt에 THF (660 mL)내 TBAF (172.6 g, 660 mmol)의 교반된 혼합물에 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌 (66 g, 97 mmol)이 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 50 ℃로 가열되었고 16 시간 동안 교반되었고, 냉각되었고, H2O (5 L)로 희석되었고, EtOAc (3 x 1.5 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 1 L)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(5-브로모-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (30 g, 62% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C23H29BrN2O2에 대한 계산치 444.1; 측정치 445.1.
중간체 1. 피셔 인돌 루트를 통한 대안적 합성.
단계 1. -10 ℃에 N2의 대기 하에서 i-PrMgCl (THF내 내 2M, 0.5 L)의 혼합물에 15 분 동안 헥산내 n-BuLi, 2.5 M (333 mL, 833 mmol)이 적가되었다. 혼합물은 30 분 동안 -10 ℃에 교반되었고 그 다음 THF (0.5 L)내 3-브로모-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (180 g, 833 mmol)이 30 분 동안 -10 ℃에 적가되었다. 생성된 혼합물은 -5 ℃로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 THF (1.2 L)내 3,3-디메틸옥산-2,6-디온 (118 g, 833 mmol)이 30 분 동안 -5 ℃에 적가되었다. 혼합물은 0 ℃로 가온되었고 1.5 시간 동안 교반되었고, 그 다음 0 ℃에 1,4-디옥산 (0.6 L)내 사전-냉각된 4M HCl의 첨가로 퀀칭되어 pH ~5 조정하였다. 혼합물은 빙수 (3 L)로 희석되었고 EtOAc (3 x 2.5 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 5-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-2,2-디메틸-5-옥소펜탄산 (87 g, 34% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C15H21NO4에 대한 계산치 279.2; 측정치 280.1.
단계 2. N2의 대기 하에서 rt에 EtOH (0.78 L)내 5-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-2,2-디메틸-5-옥소펜탄산 (78 g, 279 mmol)의 혼합물에 (4-브로모페닐)하이드라진 HCl 염 (68.7 g, 307 mmol)이 부문으로 첨가되었다. 혼합물은 85 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, rt로 냉각되었고, 그 다음 1,4-디옥산내 4M HCl (69.8 mL, 279 mmol)이 적가되었다. 혼합물은 85 ℃로 가열되었고 추가의 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 TFA (0.78 L)에서 용해되었다. 혼합물은 60 ℃로 가열되었고 1.5 시간 동안 교반되었고, 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 포화된 NaHCO3을 이용하여 pH ~5로 조정되었고, 그 다음 EtOAc (3 x 1.5 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(5-브로모-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판산 및 에틸 (S)-3-(5-브로모-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (78 g, 미정제)를 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C21H23BrN2O3에 대한 계산치 430.1 및 C23H27BrN2O3에 대한 계산치 458.1; 측정치 431.1 및 459.1.
단계 3. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (1.8 L)내 3-(5-브로모-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판산 및 에틸 (S)-3-(5-브로모-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (198 g, 459 mmol)의 혼합물에 Cs2CO3 (449 g, 1.38 mol)이 부문으로 첨가되었다. DMF (200 mL)내 EtI (215 g, 1.38 mmol)가 그 다음 0 ℃에 적가되었다. 혼합물은 rt로 가온되었고 4 시간 동안 교반되었고 그 다음 염수 (5 L)로 희석되었고 EtOAc (3 x 2.5 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 1.5 L)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 에틸 3-(5-브로모-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (160 g, 57% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C25H31BrN2O3에 대한 계산치 486.2; 측정치 487.2.
단계 4. 0 ℃에 N2의 대기 하에서 THF (1.6 L)내 에틸 3-(5-브로모-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (160 g, 328 mmol)의 혼합물에 LiBH4 (28.6 g, 1.3 mol)가 첨가되었다. 혼합물은 60 ℃로 16 시간 동안 가열되었고, 냉각되었고, 사전-냉각된 (0 ℃) 수성 NH4Cl (5 L)로 퀀칭되었다. 혼합물은 EtOAc (3 x 2 L)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 1 L)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올의 (단일 회전장애이성질체로서) 2개 회전장애이성질체 (60 g, 38% 수율) 및 (40 g, 26% 수율) 양쪽을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M + H] C23H29BrN2O2에 대한 계산치 444.1; 측정치 445.2.
중간체 2. tert -부틸 ((6 3 S ,4 S , Z )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00245
단계 1. 실온에 THF (500 mL) 및 H2O (200 mL)내 메틸 (2S)-3-(4-브로모-1,3-티아졸-2-일)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노에이트 (110 g, 301.2 mmol)의 용액에 LiOH (21.64 g, 903.6 mmol)가 첨가되었다. 생성된 용액은 1 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 1 M HCl을 이용하여 pH 6으로 조정되었고 그 다음 DCM (3 x 500 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 원하는 생성물 (108 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C11H15BrN2O4S에 대한 계산치: 351.00; 측정치 351.0.
단계 2. 0 ℃에 DCM (500 mL)내 (S)-3-(4-브로모티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산 (70 g, 199.3 mmol)의 용액에 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 비스(트리플루오로아세트산) 염 (111.28 g, 298.96 mmol), NMM (219.12 mL. 1993.0 mmol), EDCI (76.41 g, 398.6 mmol) 및 HOBt (5.39 g, 39.89 mmol)가 첨가되었다. 생성된 용액은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었다. 반응은 그 다음 H2O (500 mL)로 퀀칭되었고 EtOAc (3 x 500 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 크로마토그래피 (0→50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (88.1 g, 92.6% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C17H25BrN4O5S에 대한 계산치: 477.08; 측정치 477.1.
단계 3. 실온에 톨루엔 (500 mL)내 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (60 g, 134.7 mmol)의 용액에 비스(피나콜라토)디보론 (51.31 g, 202.1 mmol), Pd(dppf)Cl2 (9.86 g, 13.48 mmol) 및 KOAc (26.44 g, 269.4 mmol)가 첨가되었다. 그 다음 반응 혼합물은 그 다음 90 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었다. 반응 용액은 그 다음 실온으로 냉각되었고 감압 하에서 농축되었다. 실리카 겔 크로마토그래피 (0→50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제는 원하는 생성물 (60.6 g, 94.0% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C29H41BN2O4에 대한 계산치: 493.32; 측정치 493.3.
단계 4. 실온에 톨루엔 (600 mL), 디옥산 (200 mL), 및 H2O (200 mL)내 (S)-3-(1-에틸-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (30 g, 60.9 mmol)의 용액에 메틸 (S)-1-((S)-3-(4-브로모티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (43.62 g, 91.4mmol), K3PO4 (32.23 g, 152.3 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (8.91 g, 12.18 mmol)가 첨가되었다. 생성된 용액은 70 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 실온으로 냉각되었고 H2O (200 mL)로 퀀칭되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (3 x 1000 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 크로마토그래피 (0→90% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (39.7 g, 85.4% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C40H54N6O7S에 대한 계산치: 763.39; 측정치 763.3.
단계 5. 실온에 THF (400 mL) 및 H2O (100 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (39.7 g, 52.0 mmol)의 용액에 LiOH·H2O (3.74 g, 156.2 mmol)가 첨가되었다. 생성된 혼합물은 1.5 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 1 M HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화되었고 DCM (3 x 1000 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 원하는 생성물 (37.9 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C39H52N6O7S에 대한 계산치: 749.37; 측정치 749.4.
단계 6. 0 ℃에 DCM (4 L)내 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (37.9 g, 50.6 mmol), HOBt (34.19 g, 253.0 mmol) 및 DIPEA (264.4 mL, 1518 mmol)의 용액에 EDCI (271.63 g, 1416.9 mmol)가 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온으로 가온되었고 밤새 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 H2O로 퀀칭되었고 1 M HCl (4 x 1 L)로 세정되었다. 유기 층은 분리되었고 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 크로마토그래피 (0→70% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (30 g, 81.1% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C39H50N6O6S에 대한 계산치: 731.36; 측정치 731.3.
중간체 3. ( S )-3-브로모-5-요오도-2- (1-메톡시에틸) 피리딘의 합성
단계 1. THF (320 mL)내 3-브로모-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (80.00 g, 370.24 mmol, 1.00 당량) 및 비스(피나콜라토)디보론 (141.03 g, 555.3 mmol, 1.50 당량)의 교반된 용액에 dtbpy (14.91 g, 55.5 mmol) 및 클로로(1,5-사이클로옥타디엔)이리듐(I) 이량체 (7.46 g, 11.1 mmol)가 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 16 시간 동안 75 ℃에 아르곤 대기 하에서 교반되었다. 혼합물은 감압 하에서 농축되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (200 mL)에 용해되었고 혼합물은 물 (600 mL)내 Na2CO3 (40 g) 및 NaOH (10 g) (질량 4:1)를 사용하여 pH 10으로 조정되었다. 수성 층은 EtOAc (800mL)로 추출되었다. 수성 상은 HCl (6 N)을 사용하여 pH = 6으로 산성화되어 원하는 고체를 침전시켜 5-브로모-6-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일보론산 (50g, 52.0%수율)을 담황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C8H11BBrNO3에 대한 계산치 259.0; 측정치 260.0.
단계 2. ACN (230 mL)내 5-브로모-6-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일보론산 (23.00 g, 88.5 mmol)의 교반된 용액에 NIS (49.78 g, 221.2 mmol)가 실온에 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 밤새 동안 80 ℃에 아르곤 대기 하에서 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었다. 생성된 혼합물은 DCM (2.1 L)에 용해되었고 Na2S2O3 (3 x 500 mL)으로 세정되었다. 유기층은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (S)-3-브로모-5-요오도-2-(1-메톡시에틸)피리딘 (20 g, 66.0%수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C8H9BrINO에 대한 계산치 340.9; 측정치 341.7.
중간체 4. tert -부틸 ((6 3 S ,4 S , Z )-11-에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트의 합성
Figure pct00247
단계 1. 아르곤의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 3L 3-목 둥근-바닥 플라스크에, 3-브로모-5-요오도-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (147 g, 429.8 mmol) 벤질 피페라진-1-카르복실레이트 (94.69 g, 429.8 mmol), Pd(OAc)2 (4.83 g, 21.4 mmol), BINAP (5.35 g, 8.6 mmol), Cs2CO3 (350.14 g, 1074.6 mmol), 톨루엔 (1 L)이 배치되었다. 생성된 용액은 밤새 동안 100 ℃에 오일 바스에서 교반되었다. 반응 혼합물은 반응이 완료된 후 25 ℃로 냉각되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 에틸 아세테이트/헥산 (1:1)이 있는 실리카 겔 컬럼에 적용되었다. 감압 하에서　용매의 제거는 벤질 (S)-4-(5-브로모-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (135 g, 65.1% 수율)를 암황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C20H24BrN3O3에 대한 계산치 433.1; 측정치 434.1.
단계 2. 아르곤의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 3-L 3-목 둥근-바닥 플라스크에, 벤질 4-[5-브로모-6-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]피페라진-1-카르복실레이트 (135 g, 310.8 mmol), 비스(피나콜라토)디보론 (86.82 g, 341.9 mmol), Pd(dppf)Cl2 (22.74 g, 31.0 mmol), KOAc (76.26 g, 777.5 mmol), 톨루엔 (1 L)이 배치되었다. 생성된 용액은 2 일 동안 90 ℃에 오일 바스에서 교반되었다. 반응 혼합물은 25 ℃로 냉각되었다. 생성된 혼합물은 진공 하에서 농축되었다. 잔류물은 에틸 아세테이트/헥산 (1:3)이 있는 중성 알루미나 컬럼에 적용되었다. 감압 하에서 용매의 제거는 벤질 (S)-4-(6-(1-메톡시에틸)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (167 g, 미정제)를 암황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C26H36BN3O5에 대한 계산치 481.3; 측정치 482.1.
단계 3. 아르곤의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 3-L 3-목 둥근-바닥 플라스크에, (S)-4-(6-(1-메톡시에틸)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (167 g, 346.9 mmol), 5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-요오도-1H-인돌 (224.27 g, 346.9 mmol), Pd(dppf)Cl2 (25.38 g, 34.6 mmol), 디옥산 (600 mL), H2O (200 mL), K3PO4 (184.09 g, 867.2 mmol), 톨루엔 (200 mL)이 배치되었다. 생성된 용액은 밤새 동안 70 ℃에 오일 바스에서 교반되었다. 반응 혼합물은 반응이 완료된 후 25 ℃로 냉각되었다. 생성된 혼합물은 진공 하에서 농축되었다. 잔류물은 에틸 아세테이트/헥산 (1:1)이 있는 실리카 겔 컬럼에 적용되었다. 감압 하에서 용매의 제거는 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (146 g, 48.1% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C49H57BrN4O4Si에 대한 계산치 872.3; 측정치 873.3.
단계 4. DMF (1200 mL)내 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (146 g, 167.0 mmol) 및 Cs2CO3 (163.28 g, 501.1 mmol)의 교반된 혼합물에 C2H5I (52.11 g, 334.0 mmol)가 부문들로 0 ℃에 N2 대기 하에서 첨가되었다. 최종 반응 혼합물은 25 ℃에 12 시간 동안 교반되었다. 원하는 생성물은 LCMS에 의해 검출될 수 있었다. 생성된 혼합물은 EA (1 L)로 희석되었고 염수 (3 x 1.5L)로 세정되었다. 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되어 추가 정제 없이 다음 단계에 직접적으로 사용된 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (143 g, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C51H61BrN4O4Si에 대한 계산치 900.4; 측정치 901.4.
단계 5. DMF (1250 mL)내 벤질 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (143 g, 158.5 mmol)의 교반된 혼합물에 CsF (72.24 g, 475.5 mmol)가 첨가되었다. 그 다음 반응 혼합물은 60 ℃에 2 일 동안 N2 대기 하에서 교반되었다. 원하는 생성물은 LCMS에 의해 검출될 수 있었다. 생성된 혼합물은 EA (1 L)로 희석되었고 염수 (3 x 1L)로 세정되었다. 그 다음 유기 상은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되었고, PE/EA (1/3)로 용리되어 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 A (38 g, 36% 수율, RT = 3 분 LCMS(0.1% FA) 안에 1.677 분) 및 B (34 g, 34% 수율, RT = 3 분 LCMS(0.1% FA) 안에 1.578 분)의 2개 회전장애이성질체 양쪽을 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C35H43BrN4O4에 대한 계산치 663.2; 측정치 662.2.
단계 6. 질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 500-mL 3-목 둥근-바닥 플라스크에, 벤질 (S)-4-(5-(5-브로모-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 A (14 g, 21.1 mmol), 비스(피나콜라토)디보론 (5.89 g, 23.21 mmol), Pd(dppf)Cl2 (1.54 g, 2.1 mmol), KOAc (5.18 g, 52.7 mmol), 톨루엔 (150 mL)이 배치되었다. 생성된 용액은 5 시간 동안 90 ℃에 오일 바스에서 교반되었다. 반응 혼합물은 25 ℃로 냉각되었다. 생성된 혼합물은 진공 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되었고, PE/EA (1/3)로 용리되어 벤질 (S)-4-(5-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (12 g, 76.0% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C41H55BN4O6에 대한 계산치 710.4; 측정치 711.3.
단계 7. 아르곤의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크에, 벤질 (S)-4-(5-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (10.8 g, 15.2 mmol), 메틸 (3S)-1-[(2S)-3-(4-브로모-1,3-티아졸-2-일)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (7.98 g, 16.7 mmol), Pd(dtbpf)Cl2 (0.99 g, 1.52 mmol), K3PO4 (8.06 g, 37.9 mmol), 톨루엔 (60 mL), 디옥산 (20 mL), H2O (20 mL)가 배치되었다. 생성된 용액은 3 시간 동안 70 ℃에 오일 바스에서 교반되었다. 반응 혼합물은 25 ℃로 냉각되었다. 생성된 용액은 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출되었고 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 에틸 아세테이트/헥산 (10:1)이 있는 실리카 겔 컬럼에 적용되었다. 용매의 제거로 메틸 (S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((벤질옥시)카르보닐)피페라진-1-일)-2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (8 g, 50.9% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C52H68N8O9S에 대한 계산치 980.5; 측정치 980.9.
단계 8. THF (100 mL)/H2O (100 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((벤질옥시)카르보닐)피페라진-1-일)-2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (12 g, 12.23 mmol)의 교반된 혼합물에 LiOH (2.45 g, 61.1 mmol)가 N2 대기 하에서 첨가되었고 생성된 혼합물은 2 시간 동안 25 ℃에 교반되었다. 원하는 생성물은 LCMS에 의해 검출될 수 있었다. THF는 감압 하에서 농축되었다. 수성 상의 pH는 0 ℃에 HCL (1N)을 사용하여 5로 산성화되었다. 수성 층은 DCM (3 x 100ml)으로 추출되었다. 유기 상은 감압 하에서 농축되어 (S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((벤질옥시)카르보닐)피페라진-1-일)-2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (10 g, 84.5% 수율)을 담황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C51H66N8O9S에 대한 계산치 966.5; 측정치 967.0.
단계 9. 질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 3-L 둥근-바닥 플라스크에, (S)-1-((S)-3-(4-(2-(5-(4-((벤질옥시)카르보닐)피페라진-1-일)-2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-일)티아졸-2-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (18 g, 18.61 mmol), ACN (1.8 L), DIEA (96.21 g, 744.4 mmol), EDCI (107.03 g, 558.3 mmol), HOBT (25.15 g, 186.1 mmol)가 배치되었다. 생성된 용액은 밤새 동안 25 ℃에 교반되었다. 생성된 혼합물은 반응이 완료된 후 진공 하에서 농축되었다. 생성된 용액은 DCM (1 L)으로 희석되었다. 생성된 혼합물은 HCl (3 x 1 L, 1N 수성)로 세정되었다. 생성된 혼합물은 물 (3 x 1 L)로 세정되었다. 그 다음 유기층은 농축되었고, 잔류물은 에틸 아세테이트/헥산 (1:1)이 있는 실리카 겔 컬럼에 적용되었다. 감압 하에서 용매의 제거는 벤질 4-(5-((63 S,4S,Z)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-11-에틸-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-12-일)-6-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (10.4 g, 54.8% 수율)를 담황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C51H64N8O8S에 대한 계산치 948.5; 측정치 949.3.
단계 10. 질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 250-mL 둥근-바닥 플라스크에, 벤질 4-(5-((63 S,4S,Z)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-11-에틸-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-12-일)-6-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)피페라진-1-카르복실레이트 (10.40 g, 10.9 mmol), Pd(OH)2/C (5 g, 46.9 mmol), MeOH (100 mL)가 배치되었다. 생성된 용액은 3 시간 동안 25 ℃에 2 atm H2 대기 하에서 교반되었다. 고체는 여과제거되었고 필터 케이크는 MeOH (3 x 100 mL)로 세정되었다. 그 다음 조합된 유기 상은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-(피페라진-1-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (8.5 g, 90.4% 수율)를 담황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C43H58N8O6S에 대한 계산치 814.4; 측정치 815.3.
단계 11. 질소의 불활성 대기로 퍼징되고 유지된 1000-mL 둥근-바닥 플라스크에, tert-부틸 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-(피페라진-1-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (8.5 g, 10.4 mmol), MeOH (100 mL), AcOH (1.88 g, 31.2 mmol)가 배치되었고 15 분 동안 교반되었다. 그 다음 HCHO (1.88 g, 23.15 mmol, 37% 수용액) 및 NaBH3CN (788 mg, 12.5 mmol)은 25 ℃에 첨가되었다. 생성된 용액은 3 시간 동안 25 ℃에 교반되었다. 생성된 혼합물은 100 mL 물로 퀀칭되었고 감압 하에서 농축되어 MeOH를 제거하였다. 생성된 용액은 300 mL의 DCM으로 희석되었다. 생성된 혼합물은 물 (3 x 100 mL)로 세정되었다. 용매의 제거는 tert-부틸 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-티아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (8.2 g, 90.1% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H] C44H60N8O6S에 대한 계산치 828.4; 측정치 829.3.
중간체 5. (6 3 S ,4 S )-4-아미노-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-5,7-디온의 합성
Figure pct00248
단계 1. 실온에 DMF (1 L)내 (2S)-3-(3-브로모페닐)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로판산 (100 g, 290 mmol)의 용액에 NaHCO3 (48.8 g, 581.1 mmol) 및 MeI (61.9 g, 435.8 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 교반되었고 그 다음 H2O (1 L)로 퀀칭되었고 EtOAc (3 x 1 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층은 염수 (3 x 500 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (13% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 최종 생성물 (109 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+Na] C15H20BrNO4에 대한 계산치 380.05; 측정치: 380.0.
단계 2. 디옥산 (3.2 L)내 메틸 (2S)-3-(3-브로모페닐)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노에이트 (108 g, 301.5 mmol) 및 비스(피나콜라토)디보론 (99.53 g, 391.93 mmol)의 교반된 용액에 KOAc (73.97 g, 753.70 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (22.06 g, 30.15 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 90 ℃로 3 시간 동안 가열되었고 그 다음 실온으로 냉각되었고 EtOAc (2 x 3 L)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 800 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (5% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 생성물 (96 g, 78.6% 수율)를 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + Na] C21H32BNO6에 대한 계산치 428.22; 측정치: 428.1.
단계 3. 디옥산 (1.5 L) 및 H2O (300 mL)내 메틸 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐]프로파노에이트 (94 g, 231.9 mmol) 및 3-(5-브로모-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (75.19 g, 231.93 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (64.11 g, 463.85 mmol) 및 Pd(DtBPF)Cl2 (15.12 g, 23.19 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 70 ℃로 가열되었고 4 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 EtOAc (2 x 2 L)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 600 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (20% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 생성물 (130 g, 미정제)를 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C30H38N2O6에 대한 계산치 523.28; 측정치: 523.1.
단계 4. -10 ℃에 THF (1 L)내 메틸 (2S)-3-(3-[3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-1H-인돌-5-일]페닐)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노에이트 (95.0 g, 181.8 mmol) 및 요오드 (36.91 g, 145.41 mmol)의 용액에 AgOTf (70.0 g, 272.7 mmol) 및 NaHCO3 (22.9 g, 272.65 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 30 분 동안 교반되었고 그 다음 0 ℃에 포화된 수성 Na2S2O3 (100 mL)의 첨가에 의해 퀀칭되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (3 x 1 L)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 500 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 메틸 (S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-요오도-1H-인돌-5-일)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노에이트 (49.3 g, 41.8% 수율)를 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C30H37IN2O6에 대한 계산치 649.18; 측정치: 649.1.
단계 5. THF (600 mL)내 메틸 (2S)-3-(3-[3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-2-요오도-1H-인돌-5-일]페닐)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노에이트 (60 g, 92.5 mmol)의 용액에 H2O (460 mL)내 LiOHㆍH2O (19.41 g, 462.5 mmol)의 용액이 첨가되었다. 생성된 용액은 밤새 교반되었고 그 다음 pH는 HCl (1 M)을 사용하여 6으로 조정되었다. 생성된 용액은 EtOAc (2 x 500 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 500 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 생성물 (45 g, 82.1% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + Na] C27H33IN2O6에 대한 계산치 615.13; 측정치: 615.1.
단계 6. DCM (400 mL)내 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-요오도-1H-인돌-5-일]페닐]프로판산 (30 g, 50.6 mmol) 및 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (10.9 g, 75.9 mmol)의 용액에 NMM (40.97 g, 405.08 mmol), HOBt (2.05 g, 15.19 mmol), 및 EDCI (19.41 g, 101.27 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 밤새 교반되었고 그 다음 혼합물은 포화된 수성 NH4Cl (2 x 200 mL) 및 염수 (2 x 200 mL)로 세정되었고, 혼합물은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 생성물 (14 g, 38.5% 수율)를 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C33H43IN4O6에 대한 계산치 718.23; 측정치: 719.4.
단계 7. 0 ℃에 THF (920 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-요오도-1H-인돌-5-일)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (92 g, 128.0 mmol)의 용액에 H2O (640 mL)내 LiOHㆍH2O (26.86 g, 640.10 mmol)의 용액이 첨가되었다. 반응 혼합물은 2 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되어 생성물 (90 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C32H41IN4O6에 대한 계산치 705.22; 측정치: 705.1.
단계 8. 0 ℃에 DCM (10 L)내 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-요오도-1H-인돌-5-일]페닐]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (90 g, 127.73 mmol)의 용액에 HOBt (34.52 g, 255.46 mmol), DIPEA (330.17 g, 2554.62 mmol) 및 EDCI (367.29 g, 1915.96 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 혼합물은 DCM (2 x 2 L)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 1 L)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 생성물 (70 g, 79.8% 수율)를 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C32H39IN4O5에 대한 계산치 687.21; 측정치: 687.1.
단계 9. 1 L 둥근-바닥 플라스크는 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-요오도-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (22.0 g, 32.042 mmol), 톨루엔 (300.0 mL), Pd2(dba)3 (3.52 g, 3.845 mmol), S-Phos (3.95 g, 9.613 mmol), 및 KOAc (9.43 g, 96.127 mmol)로 실온에 충전되었다. 혼합물에 4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란 (26.66 g, 208.275 mmol)이 실온에 교반하면서 적가되었다. 생성된 용액은 3 시간 동안 60 ℃에 교반되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고, 필터 케이크는 EtOAc로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 남은 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (22 g, 90% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C38H51BN4O7에 대한 계산치: 687.3; 측정치: 687.4.
단계 10. N2의 대기 하에서 디옥산 (50 mL) 및 H2O (10 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-12-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (2.0 g, 2.8 mmol), 3-브로모-2--[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘 (0.60 g, 2.8 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0.39 g, 0.5 mmol), 및 K3PO4 (1.2 g, 6.0 mmol)의 혼합물은 70 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 H2O (50 mL)로 희석되었고 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 50 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (1.5 g, 74% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C40H49N5O6에 대한 계산치 695.4; 측정치: 696.5.
단계 11. 0 ℃에 DMF (150 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일) 카르바메이트 (20 g, 28.7 mmol) 및 Cs2CO3 (18.7 g, 57.5 mmol)의 용액에 DMF (50 mL)내 EtI (13.45 g, 86.22 mmol)의 용액이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 밤새 35 ℃에 교반되었고 그 다음 H2O (500 mL)로 희석되었다. 혼합물은 EtOAc (2 x 300 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 100 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (4.23 g, 18.8% 수율) 및 회전장애이성질체 (5.78 g, 25.7% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C42H53N5O6에 대한 계산치: 724.4; 측정치: 724.6.
단계 12. TFA (10 mL) 및 DCM (20 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (1.3 g, 1.7 mmol)의 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (1.30 g, 미정제)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C37H45N5O4에 대한 계산치 623.3; 측정치: 624.4.
중간체 6: ( S )-3-(5-브로모-1-에틸-2-(5-요오도-2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1 H -인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트의 합성
Figure pct00249
단계 1. DCM (1 L)내 (S)-3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (100 g, 224.517 mmol) 및 Et3N (45.44 g, 449.034 mmol)의 교반된 용액에 DMAP (2.74 g, 22.452 mmol) 및 Ac2O (27.50 g, 269.420 mmol)를 부문들로 0 ℃에 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 3 시간 동안 실온에 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었고 그 다음 EtOAc (1000 mL)로 희석되었다. 생성된 혼합물은 1M HCl (500 mL)로 세정되었고 그 다음 포화된 NaHCO3 (500 mL) 및 염수 (500 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 석유 에테르 (500 mL)로 분쇄에 의해 정제되어 생성물 (93.3 g, 85% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C25H31BrN2O3에 대한 계산치: 487.16; 측정치: 489.2
단계 2. THF (370 mL)내 (S)-3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (93.3 g, 191.409 mmol) 및 B2PIN2 (72.91 g, 287.113 mmol)의 교반된 용액에 dtbpy (7.71 g, 28.711 mmol) 및 클로로(1,5-사이클로옥타디엔)이리듐(I) 이량체 (6.43 g, 9.570 mmol)가 부문들로 실온에 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 밤새 75 ℃에 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (190 g, 미정제)을 오일로서 제공하였다. LCMS(ESI) m/z [M + H]; C25H32BBrN2O5에 대한 계산치: 531.17; 측정치: 533.3
단계 3. THF (550 mL)내 (S)-(5-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-5-브로모-1-에틸-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)보론산 (110 g, 207.059 mmol) 및 클로라민-T 삼수화물 (349.96 g, 1242.354 mmol)의 교반된 용액에 H2O (225 mL)내 NaI (186.22 g, 1242.354 mmol)의 용액이 부문들로 0 ℃에 공기 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 밤새 50 ℃에 아르곤 대기 하에서 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었고 그 다음 CHCl3 (500 mL)으로 세정되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고, 필터 케이크는 CHCl3 (3 x 250 mL)으로 세정되었다. 여과물은 CHCl3 (3 x 500 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2S2O3 (500 mL)으로 세정되었고, 염수 (2 x 200 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼에 의해 정제되었다
중간체 7: 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-(( S )-1-메톡시에틸)-5-(( R )-옥타하이드로-2 H -피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1 H -인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트의 합성
Figure pct00250
톨루엔 (63 mL)내 3-(5-브로모-1-에틸-2-{5-요오도-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (9 g, 14.674 mmol), (R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진 (2.469 g, 17.609 mmol), Cs2CO3 (11.9523 g, 36.685 mmol) 및 BINAP (456.85 mg, 0.734 mmol)의 교반된 용액에 Pd(OAc)2 (329.44 mg, 1.467 mmol)가 부문들로 실온에 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 생성된 혼합물은 6 시간 동안 100 ℃에 교반되었고 그 다음 혼합물은 여과되었고, 필터 케이크는 EtOAc (100 mL)로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 분취형-TLC (8% MeOH/DCM)에 의해 정제되어 생성물 (6 g, 65% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C33H45BrN4O3 계산치: 625.28; 측정치: 627.4
중간체 8. (6 3 S ,4 S )-4-아미노-1 1 -에틸-2 5 -(플루오로메틸)-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-5,7-디온의 합성
Figure pct00251
단계 1. DCM (2 L)내 (3-브로모-5-요오도페닐)메탄올 (175.0 g, 559.227 mmol)의 용액에 BAST (247.45 g, 1118.454 mmol)가 0 ℃에 적가되었다. 생성된 혼합물은 16 시간 동안 실온에 교반되었다. 반응은 포화된 수성 NaHCO3으로 0 ℃에 퀀칭되었다. 유기 층들은 H2O (3 x 700 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (3% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (120 g, 68% 수율)을 제공하였다.
단계 2. 1000 mL 3-목 둥근-바닥 플라스크에 DMF (350.0 mL)내 Zn 분말 (32.40 g, 495.358 mmol) 및 I2 (967.12 mg, 3.810 mmol)가 첨가되었다. 혼합물에 DMF (10 mL)내 메틸 (2R)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-요오도프로파노에이트 (27.0 g, 82.03 mmol)의 용액이 첨가되었다. 혼합물은 30 ℃로 10 분 동안 가열되었다. 혼합물에 그 다음 DMF (20 mL)내 메틸 (2R)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-요오도프로파노에이트 (54.0 g, 164.07 mmol)의 용액이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 30 분 동안 실온에 교반되었고 여과되었다. 생성된 용액은 아르곤 대기 하에서 실온에 DMF (400 mL)내 1-브로모-3-(플루오로메틸)-5-요오도벤젠 (60 g, 190.522 mmol), 트리스(푸란-2-일)포스판 (2.65 g, 11.431 mmol), 및 Pd2(dba)3 (3.49 g, 3.810 mmol)의 혼합물에 첨가되었고 반응 혼합물은 60 ℃로 10 분 동안 가열되었고 그 다음 오일 바스에서 제거되었다. 생성된 혼합물은 온도가 50 ℃로 냉각된 때까지 약 1 시간 동안 교반되었다. 반응은 수성 NH4Cl (3000 mL)로 퀀칭되었고 생성된 혼합물은 EtOAc (3 x 1000 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2x 1000 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (9% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (45 g, 60% 수율)을 제공하였다.
단계 3. 디옥산 (900 mL) 및 H2O (180 mL)내 메틸 (2S)-3-[3-브로모-5-(플루오로메틸)페닐]-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노에이트 (75.28 g, 192.905 mmol), (S)-3-(1-에틸-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (95 g, 192.905 mmol), Pd(dppf)Cl2 (14.11 g, 19.291 mmol) 및 K2CO3 (53.32 g, 385.810 mmol)의 혼합물은 2 시간 동안 80 ℃에 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었고 그 다음 H2O로 희석되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (3 x 1200 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 H2O (3 x 500 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (105 g, 80% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C39H50FN3O6에 대한 계산치: 676.38; 측정치 676.1.
단계 4. THF (500 mL)내 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-5-(플루오로메틸)페닐)프로파노에이트 (108 g, 159.801 mmol)의 교반된 용액에 H2O (500 mL)내 LiOH·H2O (11.48 g, 479.403 mmol)의 용액이 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 2 시간 동안 0 ℃에 교반되었고 그 다음 1 M HCl (수성)을 사용하여 pH 6으로 산성화되었다. 혼합물은 EtOAc (3 x 800 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (2x200 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되어 원하는 생성물 (101 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C38H48FN3O6에 대한 계산치: 662.36; 측정치 662.1.
단계 5. DCM (1200 mL)내 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-5-(플루오로메틸)페닐)프로판산 (103 g, 155.633 mmol) 및 NMM (157.42 g, 1556.330 mmol)의 교반된 용액에 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (33.66 g, 233.449 mmol), HOBt (10.51 g, 77.816 mmol) 및 EDCI (59.67 g, 311.265 mmol)가 부문들로 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에 16 시간 동안 교반되었다. 유기 층들은 그 다음 0.5 M HCl (2 x 1000 mL) 및 염수 (2 x 800 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (103 g, 83% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C44H58FN5O7에 대한 계산치: 788.44; 측정치 788.1.
단계 6. THF (700 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-5-(플루오로메틸)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (103 g, 130.715 mmol)의 교반된 용액에 H2O (700 mL)내 LiOH·H2O (27.43 g, 653.575 mmol)의 용액이 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 2 시간 동안 0 ℃에 교반되었고 그 다음 1 M HCl을 사용하여 pH 6으로 중성화되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (3 x 800 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 600 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 원하는 생성물 (101 g, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C43H56FN5O7에 대한 계산치: 774.43; 측정치 774.1.
단계 7. DCM (5500 mL)내 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-5-(플루오로메틸)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (101 g, 130.50 mmol)의 교반된 용액에 DIPEA (227.31 mL, 1305.0 mmol) 및 HOBt (88.17 g, 652.499 mmol), 및 EDCI (375.26 g, 1957.498 mmol)가 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에 밤새 교반되었다. 혼합물은 그 다음 0.5 M HCl (2 x 2000 mL), 염수 (2 x 2000 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제되어 원하는 생성물 (68 g, 65% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C43H54FN5O6에 대한 계산치: 756.42; 측정치 756.4.
단계 8. DCM (4 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-25-(플루오로메틸)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카바메이트 (350 mg, 0.403 mmol)의 교반된 용액에 TFA (1.50 mL)가 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온에 1.5 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되어 원하는 생성물 (600 mg, 미정제)을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z: [M + H] C38H46FN5O4에 대한 계산치: 656.36; 측정치 656.4.
중간체 9. (6 3 S )-4-아미노-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-2 1 ,2 2 ,2 3 ,2 6 ,6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -데카하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온의 합성
Figure pct00252
단계 1. 무수 MeCN (150 mL)내 메틸 (tert-부톡시카르보닐)-L-세리네이트 (10 g, 45 mmol)의 용액에, DIPEA (17 g, 137 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 45 ℃에 2 시간 동안 교반되어 용액내 생성물을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+Na] C9H15NO4에 대한 계산치 201.1; 측정치 224.1.
단계 2. 0 ℃에 무수 MeCN (150 mL)내 메틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)아크릴레이트 (12 g, 60 mmol)의 용액에, DMAP (13 g, 90 mmol) 및 (Boc)2O (26 g, 120 mmol)가 첨가되었다. 반응은 6 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (100 mL)로 퀀칭되었고 DCM (3 x 200 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (150 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (12.5 g, 65% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+Na] C14H23NO6에 대한 계산치 301.2; 측정치 324.1.
단계 3. Ar의 대기 하에서 MeOH (120 mL)내 5-브로모-1,2,3,6-테트라하이드로피리딘 (8.0 g, 49 mmol)의 혼합물에 메틸 2-{비스[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}프로프-2-에노에이트 (22 g, 74 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 16 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (12 g, 47% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C19H31BrN2O6에 대한 계산치 462.1; 측정치 463.1.
단계 4. 디옥산 (30 mL) 및 H2O (12 mL)내 메틸 2-(비스(tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(5-브로모-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)프로파노에이트 (14 g, 30 mmol)의 혼합물에 LiOH (3.6 g, 151 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 35 ℃로 가열되었고 12 시간 동안 교반되었고, 그 다음 1M HCl이 첨가되었고 ~3-4로 pH 조정되었다. 혼합물은 DCM (2 x 300 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (10 g, 85% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C13H21BrN2O4에 대한 계산치 348.1; 측정치 349.0.
단계 5. Ar의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (100 mL)내 3-(5-브로모-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산 (10 g, 30 mmol), DIPEA (12 g, 93 mmol) 및 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (5.4 g, 37 mmol)의 혼합물에 HATU (13 g, 34 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (2 x 300 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 역상 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (9.0 g, 55% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C19H31BrN4O5에 대한 계산치 474.1; 측정치 475.1.
단계 6. Ar의 대기 하에서 디옥산 (90 mL) 및 H2O (10 mL)내 메틸 (3S)-1-(3-(5-브로모-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (9.0 g, 18 mmol), K2CO3 (4.5 g, 32 mmol), Pd(dppf)Cl2.DCM (1.4 g, 2 mmol), 3-(1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올 (9.8 g, 20 mmol)의 혼합물은 75 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었다. H2O는 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (4.0 g, 25% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C42H60N6O7에 대한 계산치 760.5; 측정치 761.4.
단계 7. 0 ℃에 THF (35 mL)내 메틸 (3S)-1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(5-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (4.1 g, 5.0 mmol)의 혼합물에 LiOH (0.60 g, 27 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1.5 시간 동안 교반되었고, 그 다음 1M HCl 첨가되어 pH를 ~6-7로 조정하였고 혼합물은 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (3.6 g, 80% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C41H58N6O7에 대한 계산치 746.4; 측정치 747.4.
단계 8. Ar의 대기 하에서 DCM (700 mL)내 (3S)-1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(5-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (3.6 g , 5.0 mmol) 및 DIPEA (24 g ,190 mmol)의 혼합물에 EDCI·HCl (28 g, 140 mmol) 및 HOBt (6.5 g, 50 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 30 ℃로 가열되었고 16 시간 동안 30 ℃에 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 EtOAc (200 mL)로 희석되었고 H2O (2 x 200 mL), 염수 (200 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (1.45 g, 40% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C41H56N6O6에 대한 계산치 728.4; 측정치 729.4.
단계 9, 0 ℃에 DCM (1.0 mL)내 tert-부틸 ((63 S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (130 mg, 0.20 mmol)의 혼합물에 TFA ( 0.3 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 생성물을 제공하였고, 이는 직접적으로 다음 단계에서 직접적으로 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C36H48N6O4에 대한 계산치 628.4; 측정치: 629.4.
중간체 10. (6 3 S ,4 S )-4-아미노-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)-5-(( R )-옥타하이드로-2 H -피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-2 1 ,2 2 ,2 3 ,2 6 ,6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -데카하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온의 합성
Figure pct00253
단계 1. 톨루엔 (20 mL)내 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (1 g, 1.598 mmol) 및 B2Pin2 (0.81 g, 3.196 mmol)의 교반된 용액에 KOAc (0.39 g, 3.995 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.12 g, 0.16 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 2 시간 동안 90 ℃에 질소 대기 하에서 교반되었다. 혼합물은 그 다음 포화된 수성 NaHCO3을 사용하여 pH 8로 염기성화되었다. 생성된 혼합물은 DCM (3 x 40 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 40 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (2% MeOH/DCM)에 의해 정제되어 생성물 (0.9 g, 83% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C39H57BN4O5에 대한 계산치: 673.45; 측정치: 673.6
단계 2. 톨루엔 (13.5 mL), 디옥산 (90 mL), 및 H2O (4.5 mL)내 3-(1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (0.9 g, 1.338 mmol), 메틸 (3S)-1-[(2S)-3-(3-브로모-5,6-디하이드로-2H-피리딘-1-일)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (1.02 g, 2.141 mmol), K2CO3 (0.46 g, 3.345 mmol), 및 X-Phos (0.26 g, 0.535 mmol)의 교반된 용액에 Pd2(dba)3 (0.37 g, 0.401 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 2 시간 동안 70 ℃에 질소 대기 하에서 교반되었다. 혼합물은 그 다음 포화된 수성 NaHCO3을 사용하여 pH 8로 염기성화되었다. 생성된 혼합물은 DCM (3 x 100 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 100 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (2% MeOH/DCM)에 의해 정제되어 생성물 (1.1 g, 87% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C52H76N8O8에 대한 계산치: 941.59; 측정치: 941.8
단계 3. THF (8 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-3-(5-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)-2-((tert-부톡시카보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카복실레이트 (1.1 g, 1.169 mmol)의 교반된 용액에 H2O (8 mL)내 LiOH (0.14 g, 5.845 mmol)의 용액이 0 ℃에 질소 대기 하에서 적가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 그 다음 진한 HCl을 사용하여 pH 6으로 산성화되었다. 생성된 혼합물은 DCM (3 x 50 mL)으로 추출되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (1.0 g, 96% 수율)을 고체로서 제공하였고, 이는 추가 정제 없이 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C49H72N8O7에 대한 계산치: 885.56; 측정치: 885.5
단계 4. DCM (100 mL)내 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(5-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-3,6-디하이드로피리딘-1(2H)-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (1.0 g, 1.13 mmol) 및 HOBt (0.76 g, 5.65 mmol)의 교반된 용액에 EDC·HCl (6.06 g, 31.64 mmol) 및 DIPEA (5.11 g, 39.55 mmol)가 0 ℃에 질소 대기 하에서 적가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 그 다음 포화된 수성 NaHCO3을 사용하여 pH 8로 염기성화되었다. 생성된 혼합물은 DCM (3 x 100 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 100 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (3% MeOH/DCM)에 의해 정제되어 생성물 (650 mg, 66% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C49H70N8O6에 대한 계산치: 867.55; 측정치: 867.5
단계 5. DCM (3 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (300 mg, 0.346 mmol)의 교반된 용액에 TFA (3 mL)가 0 ℃에 질소 대기 하에서 적가되었다. 생성된 혼합물은 1 시간 동안 0 ℃에 교반되었다. 혼합물은 그 다음 포화된 수성 NaHCO3을 사용하여 pH 8로 염기성화되었다. 생성된 혼합물은 DCM (3 x 50 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 50 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되어 생성물 (260 mg, 98% 수율)을 고체로서 제공하였고, 이는 추가 정제 없이 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C44H62N8O4에 대한 계산치: 767.50; 측정치: 767.2
중간체 11. (2 2 S ,6 3 S ,4 S )-4-아미노-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온의 합성
Figure pct00254
단계 1. EtOAc (1 L)내 tert-부틸 (2R)-2-(하이드록시메틸)모르폴린-4-일 포르메이트 (50 g, 230 mmol)의 용액에 TEMPO (715 mg, 4.6 mmol) 및 NaHCO3 (58 g, 690 mmol)이 실온에 첨가되었다. 혼합물은 -50 ℃로 냉각되었고, 그 다음 EtOAc (100 mL)내 TCCA (56 g, 241mmol)가 30 분 동안 적가되었다. 반응 혼합물은 5 ℃로 2 시간 동안 가온되었고, 그 다음 10% Na2S2O3 (200 mL)로 퀀칭되었고 20 분 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고 유기 상은 분리되었다. 수성 상은 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 H2O (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세정되었고, 그 다음 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 유기 층은 감압 하에서 농축되어 생성물 (50 g, 미정제)을 오일로서 제공하였다.
단계 2. MeCN (300 mL)내 tert-부틸 (2R)-2-포르밀모르폴린-4-일 포르메이트 (49 g, 153 mmol) 및 메틸 2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (60 g, 183 mmol)의 용액에 테트라메틸구아니딘 (35 g, 306 mmol)이 0-10 ℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 10 ℃에 30 분 동안 교반되었고 그 다음 실온으로 2 시간 동안 가온되었다. 반응 혼합물은 DCM (200 mL)으로 희석되었고 10% 시트르산 (200 mL) 및 10% NaHCO3 수성 (200 mL)으로 세정되었다. 유기 상은 감압 하에서 농축되었고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (36 g, 90% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+Na] C21H28N2O4에 대한 계산치 420.2; 측정치: 443.1
단계 3. MeOH (500 mL)내 tert-부틸 (S,Z)-2-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)모르폴린-4-카르복실레이트 (49 g, 0.12 mol)의 용액에 (S,S)-Et-DUPHOS-Rh (500 mg, 0.7 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 H2 (60 psi) 대기 하에서 48 시간 동안 교반되었다. 반응은 농축되었고 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (44 g, 90% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+Na] C21H30N2O7에 대한 계산치 422.2; 측정치: 445.2.
단계 4. EtOAc (2 mL)내 tert-부틸 (S)-2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)모르폴린-4-카르복실레이트 (2.2 g, 5.2 mmol)의 교반된 용액에 HCl/EtOAc (25 mL)이 15 ℃에 첨가되었다. 반응은 15 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 생성물 (1.51 g, 90% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C16H22N2O5에 대한 계산치 322.1; 측정치 323.2.
단계 5. DCM (800 mL)내 3-(5-브로모-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-3-일)-2,2-디메틸프로판-1-올( 100 g, 0.22 mol) 및 이미다졸 (30.6 g, 0.45 mol)의 용액에 DCM (200 mL)내 TBSCl (50.7 g, 0.34 mol)이 0 ℃에 첨가되었다. 반응은 실온에 2 시간 동안 교반되었다. 생성된 용액은 H2O (3 x 300 mL) 및 염수 (2 x 200 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제되어 생성물 (138 g, 90% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M + H] C29H43BrN2O2Si에 대한 계산치 558.2; 측정치: 559.2.
단계 6. 디옥산 (500 mL)내 (S)-5-브로모-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌 (50 g, 89.3 mmol)의 교반된 용액에 메틸 (2S)-2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-3-[(2S)-모르폴린-2-일]프로파노에이트 (31.7 g, 98.2 mmol), RuPhos (16.7 g, 35.7 mmol), 디-μ-클로로비스(2-아미노-1,1-비페닐-2-일-C,N)디팔라듐(II) (2.8 g, 4.4 mmol) 및 탄산세슘 (96 g, 295 mmol) 이어서 RuPhos-Pd-G2 (3.5 g, 4.4 mmol)가 105 ℃에 N2 대기 하에서 첨가되었다. 반응 혼합물은 6 시간 동안 105 ℃에 N2 대기 하에서 교반되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 분취-TLC 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (55 g, 73% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C45H64N4O7Si에 대한 계산치 800.5; 측정치 801.5.
단계 7. THF (270 mL)내 메틸 (2S)-2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일)모르폴린-2-일]프로파노에이트 (10 g, 12 mmol)의 용액에 H2O (45 mL)내 LiOH (1.3 g, 31 mmol)가 실온에 첨가되었다. 반응은 실온에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 1N HCl으로 처리되어 pH를 4~5로 0~5 ℃에 조정하였다. 생성된 혼합물은 EtOAc (2 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었다. 유기 상은 그 다음 감압 하에서 농축되어 생성물 (9.5 g, 97% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C44H62N4O7Si에 대한 계산치 786.4; 측정치 787.4.
단계 8. DMF (150 mL)내 (2S)-2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-3-[(2S)-4-(3-{3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일)모르폴린-2-일]프로판산 (10 g, 12.7 mmol)의 교반된 용액에, 메틸 (S)-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (2 g, 14 mmol)가 첨가되었고, 그 다음 0 ℃로 냉각되었고, DIPEA (32.8 g, 254 mmol) 이어서 HATU (9.7 g, 25.4 mmol)가 0~5 ℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0~5 ℃에 1 시간 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (500 mL) 및 H2O (200 mL)로 희석되었다. 유기 층은 분리되었고 H2O (2 x 100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세정되었고, 무수 황산나트륨 상에서 건조되었다. 용액은 여과되었고 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생산물을 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C50H72N6O8Si에 대한 계산치 912.5; 측정치 913.4.
단계 9. THF (8 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-((S)-4-(3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (8.5 g, 9 mmol)의 용액은 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (THF내 1M, 180 mL, 180 mmol) 및 AcOH (11 g, 200 mmol)의 혼합물이 실온에 첨가되었다. 반응 혼합물은 75 ℃에 3 시간 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 EtOAc (150 mL)로 희석되었고 H2O (6 x 20 mL)로 세정되었다. 유기 상은 감압 하에서 농축되어 생성물 (7.4 g, 100% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C44H58N6O8에 대한 계산치 799.4; 측정치 798.4.
단계 10. THF (200 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-((S)-4-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (8 g, 10 mmol)의 용액에 H2O (30 mL)내 LiOH (600 mg, 25 mmol)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 1N HCl로 처리되어 pH를 4~5로 0~5 ℃에 조정하였고, EtOAc (2 x 500 mL)로 추출되었다. 유기 상은 염수로 세정되었고 감압 하에서 농축되어 생성물 (8 g, 미정제)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C43H56N6O8에 대한 계산치 784.4; 측정치 785.4.
단계 11. DCM (800 mL)내 (S)-1-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-((S)-4-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (8 g, 10.2 mmol) 및 DIPEA (59 g, 459 mmol)의 교반된 용액에 EDCI (88 g, 458 mmol) 및 HOBt (27.6 g, 204 mmol)가 실온에 아르곤 대기 하에서 첨가되었다. 반응 혼합물은 실온에 16 시간 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 생성물 (5 g, 66% 수율)를 고체로서 제공하였다; LCMS (ESI) m/z [M+H] C43H54N6O7에 대한 계산치 766.4; 측정치 767.4.
단계 12. MeOH (20 mL)내 벤질 ((22 S,63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (400 mg, 0.5 mmol)의 용액에 Pd/C (200 mg) 및 아세트산암모늄 (834 mg, 16 mmol)이 실온에 H2 대기 하에서 첨가되었고 혼합물은 2 시간 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 DCM (20 mL)에서 용해되었고 H2O (5 mL x 2)로 세정되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 생성물 (320 mg, 97% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI) m/z [M+H] C35H48N6O5에 대한 계산치 632.4; 측정치 633.3.
중간체 12. (2 S )-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부탄산의 합성
단계 1. 0 ℃에 디트리클로로메틸 카르보네이트 (135mg, 0.45 mmol) 및 DCM (1 mL)의 혼합물에 DCM (1 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 (200 mg, 1.4 mmol) 및 피리딘 (327 mg, 4.1 mmol)의 혼합물이 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (2 mL)내 tert-부틸 1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (353 mg, 1.4 mmol), TEA (418 mg, 4.1 mmol)가 0 ℃에 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 염수 (20 mL)는 잔류물에 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 20 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 tert-부틸 9-{[(2S)-1-메톡시-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)카르바모일}-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (335 mg, 57% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C21H37N3O6에 대한 계산치 427.3; 측정치 428.2.
단계 2. 0 ℃에 DCM (2.4 mL)내 tert-부틸 9-{[(2S)-1-메톡시-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)카르바모일}-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (330 mg, 0.77 mmol)의 혼합물에 TFA (0.8 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~7로 염기성화되었고 혼합물은 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸(1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부타노에이트 (280 mg, 미정제)를 담황색 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C16H29N3O4에 대한 계산치 327.2; 측정치 328.1.
단계 3. 0 ℃에 DCM (3 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸(1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부타노에이트 (270 mg, 0.83 mmol) 및 TEA (1.67 g, 16.5 mmol)의 혼합물에 아크릴로일 클로라이드 (75 mg, 0.83 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부타노에이트 (230 mg, 73 % 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C19H31N3O5에 대한 계산치 381.2; 측정치 382.2.
단계 4. 0 ℃에 THF (1.8 mL) 및 H2O (0.6 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부타노에이트 (220 mg, 0.58 mmol)의 혼합물에 LiOH (21 mg, 0.87 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 일 동안 교반되었고, 그 다음 수성 HCl을 사용하여 pH ~4로 산성화되었고 혼합물은 DCM (3 x 20 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2S)-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부탄산 (137 mg, 65% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C18H29N3O5에 대한 계산치 367.2; 측정치 368.2.
중간체 13. 메틸 N -(( S )-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)- N -메틸-L-발리네이트 및 메틸 N -(( R )-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)- N -메틸-L-발리네이트의 합성
단계 1. DCM (50 mL)내 tert-부틸 4-(아미노메틸)-4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (5.0 g, 21.7 mmol)의 혼합물에 MgSO4 (10 g), Cs2CO3 (7.07 g, 21.7 mmol) 및 아세트알데하이드 (0.96 g, 21.7 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 여과되었고 필터 케이크는 EtOAc (5 x 100 mL)로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (6 g)를 오일로서 제공하였고, 이는 다음 단계에서 직접적으로 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C13H24N2O3에 대한 계산치 256.2; 측정치 257.4.
단계 2. 0 ℃에 DCM (50 mL)내 tert-부틸 2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (5.9 g, 23.0 mmol)의 혼합물에 TEA (6.99 g, 69.1 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (2.08 g, 23.0 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 얼음/H2O는 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (4 x 30 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.7 g, 38%)를 오일로서 제공하였다.
단계 3. 0 ℃에 DCM (26 mL)내 tert-부틸 3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.65 g, 8.5 mmol)의 혼합물에 TFA (13 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 1-(2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일)프로프-2-엔-1-온 (4.8 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C11H18N2O2에 대한 계산치 210.1; 측정치 211.2.
단계 4. 0 ℃에 DCM (10 mL)내 BTC (0.40 g, 1.4 mmol)의 혼합물에 DCM (7 mL)내 메틸 메틸-L-발리네이트 HCl (0.73 g, 4.1 mmol) 및 피리딘 (1.28 g, 16.2 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM내 TEA (4.10 g, 40.5 mmol) 및 1-(2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일)프로프-2-엔-1-온 (1.70 g, 8.1 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 얼음/H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 분취형-TLC 및 분취형-HPLC에 의해 정제되어 메틸 N-((S)-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발리네이트 (750 mg) 및 메틸 N-((R)-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발리네이트 (730 mg)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C19H31N3O5에 대한 계산치 381.2; 측정치 382.2.
중간체 14. (2 S )-3-메틸-2-{메틸[1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산, 리튬 염의 합성
단계 1. 0 ℃에 THF (200 mL)내 tert-부틸 [4-시아노-4-(메틸아미노)피페리딘-1-일] 포르메이트 (14.4 g, 63 mmol) 및 피리딘 (8 g, 125.6 mmol)의 혼합물에 TFAA (15.8 g, 75.2 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 EtOAc (100 mL)에 용해되었고, 1N HCl (100 mL)로 세정되었고, 그 다음 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 4-시아노-4-(2,2,2-트리플루오로-N-메틸아세트아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (15.9 g, 71% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+Na]+ C14H20F3N3NaO3에 대한 계산치 358.1; 측정치 358.2.
단계 2. EtOH (100 mL)내 tert-부틸 4-시아노-4-(2,2,2-트리플루오로-N-메틸아세트아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (9.6 g, 28 mmol) 및 라니 Ni (2 g)의 혼합물은 H2 (15 psi)의 대기 하에서 16 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 4-(아미노메틸)-4-(2,2,2-트리플루오로- -메틸아세트아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (3.9 g, 40% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C14H24F3N3O3에 대한 계산치 339.2; 측정치 340.2.
단계 3. MeOH (40 mL) 및 H2O (8 mL)내 tert-부틸 4-(아미노메틸)-4-(2,2,2-트리플루오로- -메틸아세트아미도)피페리딘-1-카르복실레이트 (3.9 g, 12 mmol)의 혼합물에 KOH (3.45 g, 60 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 80 ℃로 가열되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 MeOH를 제거하였다. 수성은 DCM (30 mL x 3)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 4-(아미노메틸)-4-(메틸아미노)피페리딘-1-카르복실레이트 (2.9 g, 92% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C12H25N3O2에 대한 계산치 243.2; 측정치 244.2.
단계 4. Et2O (15 mL)내 [4-(아미노메틸)-4-(메틸아미노)피페리딘-1-일] tert-부틸 포르메이트 (1.4 g, 5.7 mmol)의 혼합물에 파라포름알데하이드 (0.77 g, 25.6 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 여과되었고 필터 케이크는 DCM으로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 {1-메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일} 포르메이트 (1.2 g, 77% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C13H25N3O2에 대한 계산치 255.2; 측정치 256.3.
단계 5. 0 ℃에 H2O (15 mL) 및 DCM (15 mL)내 tert-부틸 {1-메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일} 포르메이트 (1.4 g, 5.5 mmol), NaHCO3 (1.16 g, 13.7 mmol)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (0.55 g, 6 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (30 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (50 mL x 3)으로 추출되었다. 수득된 유기 층들은 염수로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 [1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일] 포르메이트 (0.8 g, 43% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C16H27N3O3에 대한 계산치 309.2; 측정치 310.3.
단계 6. DCM (6 mL)내 tert-부틸 [1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일] 포르메이트 (800 mg, 2.6 mmol)의 혼합물에 TFA (2 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되어 1-{1-메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-3-일}프로프-2-엔-1-온 (540 mg)을 제공하였고, 이것은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C11H19N3O에 대한 계산치 209.2; 측정치 210.3.
단계 7. 0 ℃에 DCM (10 mL)내 1-{1-메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-3-일}프로프-2-엔-1-온 (540 mg, 2.6 mmol) 및 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (589 mg, 2.83 mmol)의 혼합물에 TEA (781 mg, 7.74 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (30 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (50 mL x 3)으로 추출되었다. 수득된 유기 층들은 염수로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[1-안 오일을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C19H32N4O4에 대한 계산치 380.2; 측정치 381.3.
단계 8. THF (3 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (600 mg, 1.6 mmol)의 혼합물에 H2O (2 mL)내 LiOH (75.5 mg, 3.15 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 동결건조되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산, 리튬 염 (500 mg, 78% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C18H30N4O4에 대한 계산치 366.2; 측정치 367.2.
중간체 15. (2 S )-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산의 합성
단계 1. MeOH (52 mL) 및 3M NaOH (260 mL)내 tert-부틸 4-(아미노메틸)-4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (26 g, 112.9 mmol)의 혼합물에 HCHO (H2O내 37 wt.%; 52 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 동안 교반되었고 실온에 16 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (100 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (28.8 g)를 오일로서 제공하였다. 미정제 생성물은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C12H22N2O3에 대한 계산치 242.2; 측정치 243.2.
단계 2. 0 ℃에 DCM (75 mL) 및 H2O (75 mL)내 tert-부틸 1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (14.4 g, 59.4 mmol) 및 NaHCO3 (14.97 g, 178.2 mmol)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (8.06 g, 89.1 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (50 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (10 g, 54% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C15H24N2O4에 대한 계산치 296.2; 측정치 297.2.
단계 3. DCM (6 mL)내 tert-부틸 3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.0 g, 3.4 mmol)의 혼합물에 TFA (2 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 1-{1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일}프로프-2-엔-1-온 (0.67 g)을 오일로서 제공하였다. 생성물은 다음 단계에 직접적으로 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C10H16N2O2에 대한 계산치 196.1; 측정치 197.1.
단계 4. 0 ℃에 DCM (10 mL)내 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)아미노]-3-메틸부타노에이트 (0.66 g, 3.4 mmol) 및 TEA (1.72 g, 17 mmol)의 혼합물에 1-{1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일}프로프-2-엔-1-온 (0.67 g, 3.4 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (30 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (30 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (600 mg, 47% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C18H29N3O5에 대한 계산치 367.2; 측정치 368.3.
단계 5. THF (5 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (600 mg, 1.63 mmol)의 혼합물에 H2O (5 mL)내 수산화리튬 (78 mg, 3.3 mmol)의 용액이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 1N HCl을 사용하여 pH ~4로 조정되었고, DCM (20 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산 (500 mg)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C17H27N3O5에 대한 계산치 353.2; 측정치 354.2.
중간체 16. (2 S )-3-메틸-2-{메틸[4-(프로프-2-에노일)-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일]카르보닐아미노}부탄산, 리튬 염의 합성
단계 1. DCM (10 mL)내 tert-부틸 9-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (1.0 g, 2.6 mmol) 및 프로파날 (0.3 g, 5.2 mmol)의 혼합물에 실온에 20 분 동안 교반되었다. NaBH(OAc)3 (1.1 g, 5.2 mmol)은 첨가되었고 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (20 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 9-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (0.7 g, 62% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C24H37N3O4에 대한 계산치 431.3; 측정치 432.3.
단계 2. THF (10 mL)내 tert-부틸 9-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (600 mg, 1.39 mmol) 및 10% Pd/C (148 mg, 1.39 mmol)의 혼합물은 H2 (15 psi)의 대기 하에서 실온에 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (500 mg)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C16H31N3O2에 대한 계산치 297.2; 측정치 298.2.
단계 3. 0 ℃에 DCM (5 mL)내 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (314 mg, 1.5 mmol)의 혼합물에 TEA (458 mg, 4.5 mmol) 및 tert-부틸 1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (450 mg, 1.5 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (20 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 9-{[(2S)-1-메톡시-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)카르바모일}-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (650 mg, 83% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C24H44N4O5에 대한 계산치 468.3; 측정치 469.3.
단계 4. 0 ℃에 DCM (6 mL)내 tert-부틸 9-{[(2S)-1-메톡시-3-메틸-1-옥소부탄-2-일](메틸)카르바모일}-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (550 mg, 1.17 mmol)의 혼합물에 TFA (2 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 15 분 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸({1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일}카르보닐)아미노]부타노에이트 (435 mg)를 제공하였고, 이것은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C19H36N4O3에 대한 계산치 368.3; 측정치 369.3.
단계 5. 0 ℃에 DCM (5 mL) 및 H2O (5 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-[메틸({1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일}카르보닐)아미노]부타노에이트 (435 mg, 1.18 mmol)의 혼합물에 NaHCO3 (991 mg, 11.8 mmol) 및 프로프-2-에노일 클로라이드 (214 mg, 2.36 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (20 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[4-(프로프-2-에노일)-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (460 mg, 83% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C22H38N4O4에 대한 계산치 422.3; 측정치 423.3.
단계 6. THF (1 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[4-(프로프-2-에노일)-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (100 mg, 0.24 mmol)의 혼합물에 H2O (1.5 mL)내 LiOH (11.3 mg, 0.47 mmol)의 혼합물이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 동결건조되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[4-(프로프-2-에노일)-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일]카르보닐아미노}부탄산, 리튬 염 (96 mg)을 고체로서 제공하였고, 이것은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C21H36N4O4에 대한 계산치 408.3; 측정치 409.3.
중간체 17. N-(( S )-3-아크릴로일-4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발린 메틸 에스테르의 합성
Figure pct00260
단계 1. 니트로에탄 (1 L)의 용액에 tert-부틸 (4-옥소피페리딘-1-일) 포르메이트 (200 g, 1 mol, 1 당량) 및 TBD (13.9 g, 0.1 mol, 0.1 당량)가 0 ℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 20 ℃에 16 시간 동안 교반되었다. 생성된 혼합물은 감압 하에서 농축되었고 남은 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 4-하이드록시-4-(1-니트로에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (135g, 수율 49%)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 299.2 [M+H]+, 계산된 MW: 274.15.
단계 2. MeOH (1350 mL)내 tert-부틸 4-하이드록시-4-(1-니트로에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (135 g, 0.49 mol, 1 당량) 및 HCOONH4 (269 g, 4.3 mol, 8.7 당량)의 용액에 Pd/C (13.6 g, 0.13 mol, 0.26 당량) 및 AcOH (0.29 g, 4.9 mmol, 0.01 당량)가 실온에 첨가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 교반되었고 그 후 혼합물은 TEA (4.96 g, 0.1 당량)를 사용하여 8의 pH 값으로 조정되었고 여과되었다. 필터 케이크는 DCM/MeOH (200 mL, 5/1)로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 알칼리성 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 4-(1-아미노에틸)-4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트 (135 g, 수율 89%)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 189.3 [M+H-tBu]+, 계산된 MW: 244.34.
단계 3. ACN (800 mL)내 [4-(1-아미노에틸)-4-하이드록시피페리딘-1-일] tert-부틸 포르메이트 (40 g, 0.16 mol, 1 당량)의 용액에 MgSO4 (39.1 g, 0.33 mol,2 당량), Cs2CO3 (79.7 g, 0.25 mol, 1.5 당량) 및 (HCHO)n (19.6 g, 0.65 mol, 4 당량)이 첨가되었다. 혼합물은 50 ℃에 2시간 동안 N2 하에서 교반되었다. 반응 혼합물은 여과되었고 여과물은 진공에서 농축되어 tert-부틸 {4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일} 포르메이트 (40 g, 수율 97%)를 무색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 257.3 [M+H]+, 계산된 MW: 256.35.
단계 4. DCM (500 mL) 및 H2O (500 mL)내 tert-부틸 {4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일} 포르메이트 (40 g, 155.4 mmol, 1 당량) 및 NaHCO3 (52.2 g, 621.6 mmol, 3 당량)의 혼합물에 프로프-2-에노일 클로라이드 (15.5 g, 170.9 mmol, 1 당량)가 0 ℃에 적가되었고 0 ℃에 1시간 동안 교반되었다. 생성물은 여과되었고, 여과물은 DCM (200 mL X2)으로 추출되었다. 유기 상은 염수 (100 mL)로 세정되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 [4-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일] 포르메이트 (33 g, 수율 68%)를 무색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 311.1 [M+H]+, 계산된 MW: 310.39.
단계 5. TFA/DCM (700 ml, 1/3, 2 L)내 tert-부틸 [4-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일] 포르메이트 (200 g, 0.64 mol, 1 당량)의 혼합물은 1 시간 동안 0℃에 교반되었다. 혼합물은 감압 하에서 0~10℃에 농축되어 미정제 1-(4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일)프로프-2-엔-1-온 (350 g TFA 염, 순도 36%)을 제공하였다. ESI-MS m/z = 211.2 [M+H]+, 계산된 MW: 210.28.
단계 6. DCM (600 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 (63 g, 0.345 mol, 1당량) 및 DIEA (360 g, 2.8 mol, 8 당량)의 용액에 BTC (36.5 g, 0.14 mol, 0.4 당량)가 부문들로 0℃에 첨가되었고, 혼합물은 0℃에 1시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 -40℃로 냉각되었고 300 ml DCM내 1-{4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일}프로프-2-엔-1-온 (TFA 염, 36%, 175 g, 0.32 mol, 0.92 당량)의 용액이 적가되었다. 반응 혼합물은 그 다음 실온으로 가온하게 되었고 12 시간 동안 실온에 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 감압 하에서 농축되었고 남은 잔류물은 EA (0.5 L)로 희석되었다. 혼합물은 염수 (200 ml X 2)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 감압 하에서 농축되어 미정제 잔류물을 제공하였다. 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 N-(3-아크릴로일-4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발리네이트를 라세믹 혼합물 (168 g, 64% 수율)로서 제공하였다. 라세믹 생성물 (85 g)의 한 부문은 키랄 SFC를 사용하여 분리되어 N-((S)-3-아크릴로일-4-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발린 메틸 에스테르를 제공하였다 ESI-MS m/z = 382.2 [M+H]+, 계산된 MW: 381.2. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 6.72 - 6.24 (m, 2H), 5.85 - 5.70 (m, 1H), 5.22 - 4.99 (m, 2H), 4.01 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.88 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 3.25 - 3.06 (m, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 1.82 - 1.63 (m, 4H), 1.19 (dd, J = 6.5, 2.3 Hz, 3H), 0.95 (dd, J = 12.3, 6.6 Hz, 6H).
중간체 18. 메틸 ( 2S )-2-[(3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일)카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트의 합성
단계 1. DCM/H2O=1/1 (20 mL)내 tert-부틸 {1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일} 포르메이트 (2 g, 8.2 mmol, 1 당량) 및 NaHCO3 (2.1 g, 25 mmol, 3 당량)의 용액에 CbzCl (1.7 g, 9.8 mmol, 1.2 당량)이 첨가되었다. 혼합물은 0℃에 20 분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 H2O (20 mL)로 처리되었고, DCM (30 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세정되었고 그 다음 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되어 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 (3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일) 포르메이트 (2 g, 61% 수율)를 무색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 399.3 [M+Na]+; 계산된 MW: 376.2
단계 2. DCM (12 mL)내 tert-부틸 (3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일) 포르메이트 (2 g, 5.3 mmol, 1 당량)의 용액에 TFA (6 g, 53 mmol, 10 당량)가 20℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 20℃에 40 분 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 농축되어 황색 오일을 제공하였다. 황색 오일은 DCM (30 ml)에 용해되었고 포화된 NaHCO3 수성을 사용하여 pH=8~9로 조정되었다. 생성된 혼합물은 DCM (30 mL x 3)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 물 (20 mL), 및 염수 (20 mL)로 세정되었다. 유기 층은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되어 (3-{1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일}페닐)메틸 포르메이트 (1.5 g, 98% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 277.3 [M+H]+; 계산된 MW: 276.2
단계 3. DCM (20 mL)내 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (1.1 g, 5.1 mmol, 1 당량) 및 TEA (1.6 g, 15 mmol, 3 당량)의 용액에 (3-{1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일}페닐)메틸 포르메이트 (1.4 g, 5.1 mmol, 1 당량)가 첨가되었다. 혼합물은 0℃에 0.5 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 H2O (20 mL)로 처리되었고, DCM (30 mL x 3)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 물 (20 mL), 및 염수 (20 mL)로 세정되었다. 유기 층은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되어 미정제 생성물을 제공하였다. 미정제 생성물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-2-[(3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일)카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (1.7 g, 70% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 448.3 [M+H]+, 계산된 MW: 447.2
단계 4. THF(1 mL)내 메틸 (2S)-2-[(3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일)카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (400 mg, 0.89 mmol, 1 당량)의 용액에 H2O (1.5 mL)내 LiOH (64 mg, 2.7 mmol, 3 당량)의 용액이 첨가되었다. 혼합물은 20℃에 12 시간 동안 교반되었다. 생성된 용액은 1N HCl을 사용하여 pH = 6 조정되었고 DCM (30 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 물 (20 mL), 및 염수 (20 mL)로 세정되었고 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되어 (2S)-2-[(3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일)카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부탄산 (380 mg, 88% 수율)을 황색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 434.3 [M+H]+, 계산된 MW: 433.2
중간체 19. ( 2S )-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일]카르보닐아미노}부탄산의 합성
단계 1. EtOH (30 mL)내 tert-부틸 3-옥소아제티딘-1-카르복실레이트 (10 g, 0.058 mol, 1 당량)의 용액에 CH2NO2 (12 mL) 및 트리에틸아민 (0.59 g, 0.0058 mol, 0.1 당량)이 첨가되었다. 생성된 혼합물은 16 시간 동안 20℃에 교반되었다. 혼합물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 3-하이드록시-3-(니트로메틸)아제티딘-1-카르복실레이트 (13.5 g, 95% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 255.1 [M+Na]+; 계산된 MW: 232.11
단계 2. MeOH (100 mL)내 tert-부틸 3-하이드록시-3-(니트로메틸)아제티딘-1-카르복실레이트 (13.5 g, 0.058 mol, 1.0 당량)의 용액에 Pd/C (1 g)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 그 다음 20℃에 16 시간 동안 수소 (15 psi) 하에서 교반되었다. 생성된 혼합물은 여과되었고 여과물은 농축되어 tert-부틸 3-(아미노메틸)-3-하이드록시아제티딘-1-카르복실레이트 (12 g, 97% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 103.2 [M-Boc+H]+; 계산된 MW: 202.13
단계 3. MeOH (3 mL)내 tert-부틸 3-(아미노메틸)-3-하이드록시아제티딘-1-카르복실레이트 (1.5 g, 7.4 mmol, 1.0 당량) 및 NaOH(15 mL, 2 mol/L 수성)의 용액에 HCHO (3 mL) (H2O내 37 wt%)가 첨가되었고 반응 혼합물은 16 시간 동안 20℃에 교반되었다. 생성된 용액은 DCM (3*10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (1 g, 미정제)를 황색 고체로서 제공하였다. 미정제 생성물은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. ESI-MS m/z = 215.1 [M +H]+; 계산된 MW: 214.13
단계 3. 프로프-2-에노일 클로라이드(633 mg, 7.0 mmol, 1.5 당량)는 0℃에 DCM (5 mL) 및 H2O (5 mL)내 (tert-부틸 5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (1.0 g, 4.7 mmol, 1.0 당량) 및 NaHCO3 (1.2 g, 14 mmol, 3.0 당량)의 용액에 첨가되었다. 생성된 혼합물은 0℃에 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 그 다음 DCM (20 mL)으로 희석되었고 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세정되었다. 유기 상은 수집되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 농축되었다. 생성된 잔류물은 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (660 mg, 50% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 269.1 [M+H]+; 계산된 MW: 268.14
단계 4. DCM (6 mL)내 tert-부틸 7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (660 mg, 2.46 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (2 mL)가 20 ℃에 첨가되었다. 생성된 용액은 20 ℃에 1 시간 동안 교반되었다. 용매는 감압 하에서 제거되어 1-{5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-7-일}프로프-2-엔-1-온 (510 mg, 미정제)을 황색 고체로서 제공하였다. 이 미정제 생성물은 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. ESI-MS m/z = 169.2 [M+H]+; 계산된 MW:168.09.
단계 5. DCM (5 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-(메틸아미노)부타노에이트 (357 mg, 2.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리에틸아민 (1492 mg, 14.7 mmol, 6 당량) 및 트리포스겐 (365 mg, 1.23 mmol, 0.5 당량)이 0 ℃에 첨가되었다. 생성된 용액은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다.
단계 6. DCM (15 mL)내 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (509 mg, 2.46 mmol, 1 당량) 및 트리에틸아민 (1492 mg, 14.7 mmol, 6 당량)의 용액에 1-{5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-7-일}프로프-2-엔-1-온 (413 mg, 2.46 mmol, 1 당량)이 0℃에 첨가되었다. 혼합물은 0℃에 0.5 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 그 다음 DCM (20 mL)으로 희석되었고 H2O (30*2 mL)로 세정되었다. 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (605 mg, 69% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 340.2 [M+H]+; 계산된 MW: 339.18
단계 7. DCE (10 mL)내 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (300 mg, 0.88 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리메틸틴 하이드록사이드 (1.9 g, 10.6 mmol, 12 당량)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 85℃에 16 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 DCM (10 mL)으로 희석되었다. 생성된 혼합물은 1 N HCl (10 mL)로 세정되었고 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일]카르보닐아미노}부탄산 (200 mg, 66% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 326.1 [M+H]+; 계산된 MW: 325.16
중간체 P1 및 P2. ( 2S )-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (P1 + P2)의 합성
단계 1. EtOH (30 mL)내 tert-부틸 3-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (10 g, 0.058 mol, 1 당량)의 용액에 CH2NO2(12 mL) 및 트리에틸아민 (0.59 g, 5.8 mol, 0.1 당량)이 첨가되었다. 반응 혼합물은 16 시간 동안 20℃에 교반되었다. 그 후 혼합물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 3-하이드록시-3-(니트로메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (13.3g, 80% 수율)를 황색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 269.1 [M+Na]+; 계산된 MW: 246.12
단계 2. EtOH (100 mL) 및 THF(20 mL)내 tert-부틸 3-하이드록시-3-(니트로메틸)피롤리딘-1-카르복실레이트 (9.7 g, 0.039 mol, 1.0 당량)의 용액에 라니 Ni (2 g) 및 NH3H2O (3 mL, 순도:28~30%)가 첨가되었다. 생성된 반응 혼합물은 20℃에 4 시간 동안 수소 (15 psi) 하에서 교반되었다. 반응 혼합물은 여과되었고 여과물은 농축되어 tert-부틸 3-(아미노메틸)-3-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (9.3 g, 87% 수율)를 황색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 117.3 [M-Boc+H]+; 계산된 MW: 216.15
단계 3. MeOH (20 mL) 및 3 N NaOH (100 mL)내 tert-부틸 3-(아미노메틸)-3-하이드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (9 g, 41.6 mmol, 1 당량)의 용액에 HCHO (20 mL, H2O내 37 wt%)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 16시간 동안 20℃에 교반되었다. 그 후 생성된 용액은 DCM (3*100 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르복실레이트 (6.1 g, 미정제)를 무색 오일로서 제공하였다. 미정제 생성물은 직접적으로 다음 단계에서 사용되었다. ESI-MS m/z = 129.3 [M-Boc+H]+; 계산된 MW: 228.15
단계 4. 프로프-2-에노일 클로라이드 (3.6 g, 40 mmol, 1.5 당량)는 0℃에 DCM (60 mL) 및 H2O (60 mL)내 tert-부틸 1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르복실레이트 (6.1 g, 26.7 mmol, 1.0 당량) 및 NaHCO3 (6.7 g, 80 mmol, 3 당량)의 용액에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0℃에 1시간 동안 교반되었다. 혼합물은 그 다음 DCM (100 mL)으로 희석되었고, 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세정되었다. 유기 상은 수집되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르복실레이트 (2.4 g, 30% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 305.1 [M+Na]+; 계산된 MW: 282.16
단계 5. DCM (30 mL)내 tert-부틸 3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르복실레이트 (2.4 g, 8.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (10 mL)가 20 ℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 20℃에 1 시간 동안 교반되었다. 용매는 감압 하에서 제거되어 1-{1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-3-일}프로프-2-엔-1-온 (1.6 g, 미정제)을 황색 고체로서 제공하였다. 미정제 생성물은 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. ESI-MS m/z = 183.1 [M+H]+; 계산된 MW:182.22
단계 6. DCM (20 mL)내 메틸 (2S)-2-[(클로로카르보닐)(메틸)아미노]-3-메틸부타노에이트 (1.75 g, 8.5 mmol, 1.0 당량) 및 트리에틸아민 (5131 mg, 51 mmol, 6.0 당량)의 용액에 1-{1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-3-일}프로프-2-엔-1-온 (1540 mg, 8.5 mmol, 1.0 당량)이 0℃에 첨가되었다. 혼합물은 0℃에 0.5 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 DCM (100 mL)으로 희석되었고 H2O (100*2 mL)로 세정되었다. 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (1.78 g, 56% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. 원하는 생성물은 키랄 분해 (크로마토그래픽 컬럼: 키랄팍-ADMobile Phase:CO2-MeOH(0.1%DEA))를 통해 분리되어 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부타노에이트(P1, 800 mg; P2, 780 mg)를 제공하였다. ESI-MS m/z = 354.2 [M+H]+; 계산된 MW: 353.20
중간체 P1-OH. ( 2S )-3-메틸-2-{메틸[(5R)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산의 합성
단계 1. DCE (10 mL)내 (P1) 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (330 mg, 0.93 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리메틸틴 하이드록사이드 (2.5g, 14 mmol, 15 당량)가 첨가되었다. 반응 혼합물은 85℃에 16 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 DCM (10 mL)으로 희석되었고 생성된 혼합물은 1 N HCl (10 mL)로 세정되었다. 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[(5R)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산 (150 mg, 45% 수율)을 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 340.2 [M+H]+; 계산된 MW: 339.18
중간체 P2-OH. ( 2S )-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산의 합성
DCE (2 mL)내 (P2) 메틸 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부타노에이트 (165 mg, 0.47 mmol, 1.0 당량) 및 (Me)3SnOH (1.7 g, 9.3 mmol, 20 당량)의 혼합물은 85℃에 24 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 DCM (20 mL)으로 희석되었고, 그 다음 1 N HCl (20 mL), 물 (15 mL) 및 염수 (15 mL)로 세정되었다. 유기 상은 수집되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산 (100 mg, 60% 수율)을 회백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 340.2 [M+H]+. 계산된 MW: 339.18
실시예 1. 1-(4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일)- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-4-플루오로- N -메틸피페리딘-4-카르복사미드의 합성
단계 1. CO의 대기 하에서 DMF (50 mL) 및 MeOH (1 mL)내 (2M)-5-브로모-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌 (10.0 g, 14.6 mmol), Pd(dppf)Cl2.DCM (1.19 g, 1.46 mmol) 및 TEA (2.66 g, 26.3 mmol)의 혼합물은 100 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었다. H2O (100 mL)가 첨가되었고, 혼합물은 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복실레이트 (8.0 g, 74% 수율)를 발포물로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H50N2O4Si에 대한 계산치 662.4; 측정치 663.4.
단계 2. 0 ℃에 THF (10 mL) 및 MeOH (30 mL)내 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복실레이트 (3.90 g, 5.9 mmol)의 혼합물에 H2O (30 mL)내 LiOH (0.70 g, 29.2 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 수성 HCl을 사용하여 pH ~7로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 20mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복실산 (2.89 g)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H48N2O4Si에 대한 계산치 648.3; 측정치 649.3.
단계 3. 0 ℃에 DCM (20 mL)내 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복실산 (2.00 g, 3.1 mmol) 및 K2CO3 (0.85 g, 6.2 mmol)의 혼합물에 이소프로필 클로로포르메이트 (0.76 g, 6.2 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 실온에 45 분 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 DCM (20 mL)에 용해되었고 에틸 [(Z)-N-하이드록시카르밤이미도일]포르메이트 (0.81 g, 6.2 mmol) 및 K2CO3 (0.85 g, 6.2 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 30mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 에틸 [(Z)-N-[(Z)-(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르보닐옥시]카르밤이미도일]포르메이트 (1.23 g, 45% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C44H54N4O6Si에 대한 계산치 762.4; 측정치 763.3.
단계 4. 에틸 [(Z)-N-[(Z)-(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르보닐옥시]카르밤이미도일]포르메이트 (1.30 g, 1.7 mmol)는 150 ℃로 가열되었고 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 에틸 5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복실레이트 (600mg, 28% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C44H52N4O5Si에 대한 계산치 744.4; 측정치 745.3.
단계 5. 0 ℃에 EtOH (6 mL) 및 THF (6 mL)내 에틸 5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-카르복실레이트 (1.1 g, 1.5 mmol)의 혼합물에 NaBH4 (112 mg, 3.0 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 혼합물은 0 ℃로 냉각되었고 포화된 NH4Cl이 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (30 mL)로 추출되었다. 유기 층은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 [5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]메탄올 (900 mg, 78% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H50N4O4Si에 대한 계산치 702.4; 측정치 703.4.
단계 6. DCM (9 mL)내 [5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]메탄올 (900 mg, 1.3 mmol) 및 Ph3P (504 mg, 1.92 mmol)의 혼합물에 CBr4 (637 mg, 1.92 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2M)-5-[3-(브로모메틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌 (700 mg, 36% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H49BrN4O3Si에 대한 계산치 764.3; 측정치 765.2.
단계 7. 0 ℃에 톨루엔 (4.2 mL) 및 DCM (1.8 mL)내 (2M)-5-[3-(브로모메틸)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌 (1.0 g, 1.3 mmol) 및 tert-부틸 2-[(디페닐메틸리덴)아미노]아세테이트 (579 mg, 2.0 mmol)의 혼합물에 H2O (2 mL)내 KOH (7.0 g, 124.8 mmol) 및 신코나늄 (158 mg, 0.26 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (5 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-2-[(디페닐메틸리덴)아미노]프로파노에이트 (350 mg, 25% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C61H69N5O5Si에 대한 계산치 979.5; 측정치 980.4.
단계 8. 0 ℃에 DCM (18 mL)내 tert-부틸 3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-2-[(디페닐메틸리덴)아미노]프로파노에이트 (1.80 g, 1.8 mmol)의 혼합물에 TFA (18 mL)가 적가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 2-아미노-3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로판산 (4 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C44H53N5O5Si에 대한 계산치 759.4; 측정치 760.2.
단계 9. THF (20mL) 및 H2O (20mL)내 2-아미노-3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로판산 (4.0 g, 5.3 mmol) 및 NaHCO3 (2.65 g, 30 mmol)의 혼합물에 Boc2O (1.72 g, 7.9 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 실온에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로판산 (1.2 g, 21% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H61N5O7Si에 대한 계산치 859.4; 측정치 860.2.
단계 10. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (10 mL)내 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-[(2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로판산 (1.00 g, 1.2 mmol), 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (0.34 g, 2.3 mmol), HOBT (0.08 g, 0.6 mmol) 및 DIPEA (1.50 g, 11.6 mmol)의 혼합물에 EDCI (0.33 g, 1.7 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (50 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-(3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일)-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (800 mg, 63% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C55H71N7O8Si에 대한 계산치 985.5; 측정치 986.6.
단계 11. N2의 대기 하에서 0 ℃에 THF (5mL)내 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-(3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일)-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (800 mg, 0.8 mmol)의 혼합물에 THF (5 mL)내 1M TBAF가 적가되었다. 혼합물은 60 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 H2O (100 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (680 mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C38H51N7O8에 대한 계산치 733.3; 측정치 734.3.
단계 12. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (100 mL)내 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[5-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (500 mg, 0.68 mmol), HOBT (460 mg, 3.4 mmol) 및 DIPEA (2.64 g, 20.4 mmol)의 혼합물에 EDCI (2.61 g, 13.6 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (22 mg,18% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C38H49N7O7에 대한 계산치 715.4; 측정치 716.2.
단계 13. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (0.30 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (20 mg, 0.03 mmol)의 혼합물에 TFA (0.1 mL)가 적가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 (63 S,4S,Z)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (30 mg)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H41N7O5에 대한 계산치 615.3; 측정치 616.4.
단계 14. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (1 mL)내 (63 S,4S,Z)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (20 mg, 0.03 mmol), DIPEA (42 mg, 0.33 mmol) 및 (2S)-2-(1-[1-[4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일]-4-플루오로피페리딘-4-일]-N-메틸포름아미도)-3-메틸부탄산 (19 mg, 0.05 mmol)의 혼합물에 HATU (16 mg, 0.04 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 분취형-HPLC에 의해 정제되어 1-(4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일)-N-((2S)-1-(((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(5,3)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-4-플루오로-N-메틸피페리딘-4-카르복사미드 (2.4 mg, 7% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C53H71FN10O8에 대한 계산치 994.5; 측정치 995.4; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.78 (dd, J = 4.7, 1.7 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.95 - 7.68 (m, 3H), 7.55 (dd, J = 7.7, 4.7 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.07 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.62 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 7H), 3.70 - 3.49 (m, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.17 - 3.03 (m, 5H), 2.98 - 2.89 (m, 3H), 2.77 (t, J = 12.2 Hz, 1H), 2.46 - 2.41 (m, 1H), 2.20 (dd, J = 10.7, 6.6 Hz, 7H), 2.15 - 2.03 (m, 5H), 1.81 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 1.65 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 1.37 (t, J = 6.3 Hz, 9H), 1.03 - 0.86 (m, 10H), 0.88 - 0.80 (m, 2H), 0.80 - 0.74 (m, 3H).
실시예 2. 1-(4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일)- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(3,5)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-4-플루오로- N -메틸피페리딘-4-카르복사미드의 합성
Figure pct00267
단계 1. 0 ℃에 EtOH (248 mL)내 3-포르밀-1H-인돌-5-카르보니트릴 (24.8 g, 145.7 mmol)의 혼합물에 NaBH4 (8.05 g, 218.6 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고 그 다음 포화된 NH4Cl (500 mL)이 첨가되었고, 휘발물은 감압 하에서 제거되었다. 혼합물은 DCM (3 x 200 mL)으로 추출되었고 조합된 유기 층들은 물 (3 x 200 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(하이드록시메틸)-1H-인돌-5-카르보니트릴 (21 g, 84% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C10H8N2O에 대한 계산치 172.1; 측정치 171.1.
단계 2. Ar의 대기 하에서 -40 ℃에 THF (200 mL)내 3-(하이드록시메틸)-1H-인돌-5-카르보니트릴 (20.0 g, 116.2 mmol)의 혼합물에 [(1-메톡시-2-메틸프로프-1-엔-1-일)옥시]트리메틸실란 (50.62 g, 290.4 mmol) 및 TMSOTf (19.36 g, 87.1 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 -40 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 염수 (200 mL)가 0 ℃에 첨가되었다. 수성 및 유기 층들은 분배되었고 유기 층은 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 3-(5-시아노-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (22 g, 74% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C15H16N2O2에 대한 계산치 256.1; 측정치 255.1.
단계 3. 0 ℃에 THF (220 mL)내 메틸 3-(5-시아노-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로파노에이트 (22 g, 85.8 mmol)의 혼합물에 THF내 1M LiAlH4 (171.7 mL, 171.7 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 Na2SO4.10H2O가 첨가되었고, 혼합물은 여과되었고 필터 케이크는 DCM (3 x 300 mL)으로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-카르보니트릴 (12.8 g, 65% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C14H16N2O에 대한 계산치 228.1; 측정치 255.1.
단계 4. 0 ℃에 DCM (150 mL)내 3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-1H-인돌-5-카르보니트릴 (15.0 g, 65.7 mmol)의 혼합물에 이미다졸 (11.18 g, 164.3 mmol) 및 TBDPSCl (23.48 g, 85.4 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1H-인돌-5-카르보니트릴 (30 g, 97% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C30H34N2OSi에 대한 계산치 466.2; 측정치 465.2.
단계 5. N2의 대기 하에서 0 ℃에 THF (180 mL)내 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1H-인돌-5-카르보니트릴 (18.0 g, 38.6 mmol)의 혼합물에 NaHCO3 (3.89 g, 46.3 mmol), AgOTf (10.9 g, 42.4 mmol) 및 I2 (8.81 g, 34.7 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 5% 수성 Na2S2O3이 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 물 (3 x 200 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-요오도-1H-인돌-5-카르보니트릴 (18.2g, 80% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+Na]+ C30H33IN2NaOSi에 대한 계산치 615.1; 측정치 615.0.
단계 6. Ar의 대기 하에서 1,4-디옥산 (150 mL) 및 H2O (30 mL)내 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-요오도-1H-인돌-5-카르보니트릴 (18.2 g, 30.7 mmol) 및 2-[(1S)-1-메톡시에틸]-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (32.33 g, 122.9 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (10.60 g, 76.8 mmol), Pd(dppf)Cl2 (4.49 g, 6.1 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 50 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌-5-카르보니트릴 (20 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C38H43N3O2Si에 대한 계산치 601.3; 측정치 602.3.
단계 7. 0 ℃에 DMF (220 mL)내 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1H-인돌-5-카르보니트릴 (22.0 g, 36.6 mmol)의 혼합물에 Cs2CO3 (35.73 g, 109.7 mmol) 및 EtI (34.21 g, 219.3 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (300 mL)로 추출되었다. 유기 층은 H2O (3 x 300 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르보니트릴 (15.6 g, 63% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H47N3O2Si에 대한 계산치 629.3; 측정치 630.0.
단계 8. MeOH (156 mL)내 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르보니트릴 (15.60 g, 24.8 mmol)의 혼합물에 NH2OH, H2O내 50% (9.81 g, 296.9 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 50 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-N-하이드록시-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복스이미드아미드 (14.6g, 89% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H50N4O3Si에 대한 계산치 662.4; 측정치 663.2.
단계 9. -5 ℃에 DCM (146 mL)내 3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-N-하이드록시-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-카르복스이미드아미드 (14.60 g, 22.0 mmol)의 혼합물에 DIPEA (14.23 g, 110.1 mmol), HOBt (0.60 g, 4.4 mmol), 이어서 EDC.HCl (5.07 g, 26.4 mmol)이 부문들로 2 분 동안 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온하게 되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 4-(3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일)메탄이미드아미도 1-메틸 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]부탄디오에이트 (18.1 g, 92% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H65N5O8Si에 대한 계산치 891.5; 측정치 892.3.
단계 10. 1,4-디옥산 (900 mL)내 4-(3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일)메탄이미드아미도 1-메틸 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]부탄디오에이트 (18 g, 20.2 mmol)의 혼합물은 90 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-(3-{3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]프로파노에이트 (16.5 g, 94% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H63N5O7Si에 대한 계산치 873.4; 측정치 874.4.
단계 11. THF (180 mL)내 메틸 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-(3-{3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일)-1,2,4-옥사디아졸-5-일]프로파노에이트 (18 g, 20.6 mmol)의 혼합물에 THF (180 mL)내 1M TBAF가 적가되었다. 혼합물은 60 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 300 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (6 x 300 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로판산 (14 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C33H43N5O7에 대한 계산치 621.3; 측정치 620.3.
단계 12. 0 ℃에 MeOH (140 mL)내 2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로판산 (14 g, 22.5 mmol)의 혼합물에 TMSCHN2 (12.86 g, 112.6 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (2R)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로파노에이트 (3.5 g, 25% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H45N5O7에 대한 계산치 635.3; 측정치 636.4.
단계 13. 1,4-디옥산 (20 mL)내 메틸 (2R)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로파노에이트 (2.0 g, 3.2 mmol)의 혼합물에 1,4-디옥산 (20 mL)내 HCl이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 메틸 (2R)-2-아미노-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로파노에이트 (1.5 g, 89% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C29H37N5O5에 대한 계산치 535.3; 측정치 536.4.
단계 14. 0 ℃에 THF (30 mL) 및 H2O (6 mL)내 메틸 (2R)-2-아미노-3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}프로파노에이트 (3.0 g, 5.6 mmol)의 혼합물에 NaHCO3 (1.18 g, 14.0 mmol) 및 알릴 클로로카르보네이트 (1.01 g, 8.4 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로파노에이트 (1.5 g, 43% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H41N5O7에 대한 계산치 619.3; 측정치 620.4.
단계 15. 0 ℃에 THF (15 mL)내 메틸 3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로파노에이트 (1.5 g, 2.1 mmol)의 혼합물에 H2O (15 mL)내 LiOH (16 mg, 6.8 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 수성 HCl을 사용하여 pH ~4로 산성화되었고 DCM (3 x 30 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2R)-3-[3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-2-[[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노]프로판산 (1.46 g)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C32H39N5O7에 대한 계산치 605.3; 측정치 606.3.
단계 16. 0 ℃에 DCM (15 mL)내 (2R)-3-[3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일]-2-[[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노]프로판산 (1.46 g, 2.4 mmol)의 혼합물에 (Z)-N,N'-디이소프로필tert-부톡시메탄이미드아미드 (2.41 g, 12.1 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 20 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 수성 NH4Cl (3 x 40 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로파노에이트 (2.3 g)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H47N5O7에 대한 계산치 661.4; 측정치 662.4.
단계 17. -5 ℃에 DCM (23 mL)내 tert-부틸 3-{3-[(2M)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로파노에이트 (2.30 g, 3.5 mmol)의 혼합물에 DMAP (85 mg, 0.7 mmol), (3S)-1,2-비스(tert-부톡시카르보닐)-1,2-디아지난-3-카르복실산 (3.44 g, 10.4 mmol) 및 EDCI (0.87 g, 4.5 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(2-[[(2M)-5-[5-[(2R)-3-(tert-부톡시)-3-옥소-2-[[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노]프로필]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일]메틸]-2-메틸프로필)1,2-디-tert-부틸 (3S)-1,2-디아지난-1,2,3-트리카르복실레이트 (2.29 g, 68% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C51H71N7O12에 대한 계산치 973.5; 측정치 974.4.
단계 18. 0 ℃에 DCM (30 mL)내 3-(2-[[(2M)-5-[5-[(2R)-3-(tert-부톡시)-3-옥소-2-[[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노]프로필]-1,2,4-옥사디아졸-3-일]-1-에틸-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]인돌-3-일]메틸]-2-메틸프로필)1,2-디-tert-부틸 (3S)-1,2-디아지난-1,2,3-트리카르복실레이트 (2.29 g, 2.4 mmol)의 혼합물에 TFA (10 mL)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 5 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 혼합물은 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~7로 염기성화되었고 DCM (3 x 300 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 H2O (3 x 60 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 3-{3-[(2M)-3-{3-[(3S)-1,2-디아지난-3-카르보닐옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로판산 (1.4 g, 83% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C37H47N7O8에 대한 계산치 717.4; 측정치 716.5.
단계 19. 0 ℃에 DCM (7.2 mL)내 3-{3-[(2M)-3-{3-[(3S)-1,2-디아지난-3-카르보닐옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일]-1,2,4-옥사디아졸-5-일}-2-{[(프로프-2-엔-1-일옥시)카르보닐]아미노}프로판산 (720 mg, 1.0 mmol)의 혼합물에 DIPEA (3.89 g, 30.1 mmol) 및 HATU (4.58 g, 12.0 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 프로프-2-엔-1-일 N-[(7S,13S,19M)-21-에틸-20-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-17,17-디메틸-8,14-디옥소-4,15-디옥사-3,9,21,27,28-펜타아자펜타사이클로[17.5.2.1^[2,5].1^[9,13].0^[22,26]]옥타코사-1(25),2,5(28),19,22(26),23-헥사엔-7-일]카르바메이트 (230 mg, 33% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C37H45N7O7에 대한 계산치 699.3; 측정치 699.9.
단계 20. Ar의 대기 하에서 THF (1.35 mL)내 알릴 ((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(3,5)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (135 mg, 0.19 mmol)의 혼합물에 모르폴린 (50 mg, 0.58 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (22.29 mg, 0.019 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 35 ℃로 가열되었고 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 직접적으로 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (63 S,4S,Z)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(3,5)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (120 mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H41N7O5에 대한 계산치 615.3; 측정치 616.4.
단계 21. 0 ℃에 DMF (1 mL)내 (63 S,4S,Z)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(3,5)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (100 mg, 0.16 mmol)의 혼합물에 DIPEA (315 mg, 2.44 mmol), (2S)-2-(1-[1-[4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일]-4-플루오로피페리딘-4-일]-N-메틸포름아미도)-3-메틸부탄산 (129 mg, 0.32 mmol) 및 COMU (104 mg, 0.24 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 분취형-HPLC에 의해 정제되어 1-(4-(디메틸아미노)-4-메틸펜트-2-이노일)-N-((2S)-1-(((63 S,4S,Z)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(3,5)-옥사디아졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-4-플루오로-N-메틸피페리딘-4-카르복사미드 (25 mg, 15% 수율) 고체로서. LCMS (ESI): m/z [M-H]+ C53H71FN10O8에 대한 계산치 994.5; 측정치 995.8; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.78 (dd, J = 4.8, 1.8 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 17.0 Hz, 2H), 7.86 - 7.75 (m, 2H), 7.71 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 7.7, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.16 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.71 - 4.49 (m, 1H), 4.41 - 4.06 (m, 7H), 3.68 - 3.47 (m, 3H), 3.23 (s, 4H), 3.15 - 3.05 (m, 3H), 2.94 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 2.79 - 2.61 (m, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.26 - 1.95 (m, 12H), 1.85 - 1.63 (m, 2H), 1.57 - 1.42 (m, 1H), 1.39 - 1.24 (m, 9H), 1.03 - 0.71 (m, 12H), 0.34 (s, 3H).
실시예 3. (4a R ,7a S )-4-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((2 3 R ,6 3 S ,4 S )-1 2 -(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-1 1 -(2,2,2-트리플루오로에틸)-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸헥사하이드로피롤로[3,4- b ][1,4]옥사진-6(2 H )-카르복사미드의 합성
Figure pct00268
단계 1. N2의 대기 하에서 1,4-디옥산 (85 mL) 및 H2O (17 mL)내 3-[(2M)-5-브로모-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸] 피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸) 인돌-3-일]-2,2-디메틸프로판-1-올 (10.0 g, 20.0 mmol) 및 tert-부틸 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-5,6-디하이드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (9.29 g, 30.0 mmol)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl2 (0.73 g, 1.0 mmol) 및 K2CO3 (6.92 g, 50.1 mmol)이 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 80 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 혼합물은 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 100 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]-5,6-디하이드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (9.0 g, 67% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H42F3N3O4에 대한 계산치 601.3; 측정치 602.3.
단계 2. THF (60 mL)내 tert-부틸 3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]-5,6-디하이드로-2H-피리딘-1-카르복실레이트 (6.00 g, 10.0 mmol) 및 Pd/C (605 mg, 5.7 mmol)의 혼합물은 밤새 H2의 대기 하에서 교반되었다. 혼합물은 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-카르복실레이트 (5.8 g)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H44F3N3O4에 대한 계산치 603.3; 측정치 604.3.
단계 3. N2의 대기 하에서 0 ℃에 1,4-디옥산 (30 mL)내 tert-부틸 3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-카르복실레이트 (5.70 g, 9.4 mmol)의 혼합물에 1,4-디옥산 (30 mL)내 HCl이 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 수성 NaHCO3이 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 3-[(2M)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-5-(피페리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸) 인돌-3-일]-2,2-디메틸프로판-1-올 (4.8 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C28H36F3N3O2에 대한 계산치 503.3; 측정치 504.3.
단계 4. N2의 대기 하에서 DMF (46 mL)내 3-[(2M)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸] 피리딘-3-일]-5-(피페리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸) 인돌-3-일]-2,2-디메틸프로판-1-올 (4.6 g, 9.1 mmol)의 혼합물에 tert-부틸 N-[(3S)-2-옥소옥세탄-3-일]카르바메이트 (3.46 g, 18.3 mmol) 및 Cs2CO3 (7.44 g, 22.8 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 50 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐) 아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일]프로판산 (2.7 g, 39% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H49F3N4O6에 대한 계산치 690.4; 측정치 691.1.
단계 5. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (20 mL)내 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (835 mg, 5.79 mmol)의 혼합물에 NMM (2.93 g, 29.0 mmol), (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일] 프로판산 (2.00 g, 2.9 mmol), EDCI (833 mg, 4.3 mmol) 및 HOBT (196 mg, 1.5 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온에 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (2.0 g, 72% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H59F3N6O7에 대한 계산치 816.4; 측정치 817.5.
단계 6. N2의 대기 하에서 THF (20 mL)내 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (2.0 g, 2.5 mmol)의 혼합물에 1M LiOH (12.24 mL, 12.24 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 교반되었고, 그 다음 1M HCl을 사용하여 pH ~6으로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (1.8 g)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H57F3N6O7에 대한 계산치 802.4; 측정치 803.5.
단계 7. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (360 mL)내 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-[3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]피페리딘-1-일]프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (1.80 g, 2.2 mmol)의 혼합물에 DIPEA (8.69 g, 67.3 mmol), HOBT (1.51 g, 11.2 mmol) 및 EDCI (8.60 g, 44.8 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온에 시간 동안 교반되었고, H2O가 첨가되었고, 혼합물은 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 ((63 S, 4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (160 mg, 9% 수율) 및 (140 mg, 8% 수율)의 2개 부분입체이성질체를 양쪽 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H55F3N6O6에 대한 계산치 784.4; 측정치 785.7.
단계 8. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (2 mL)내 tert-부틸 ((63 S, 4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (170 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 TFA (0.6 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 수성 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 산성화되었고 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (23 R,63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (160 mg)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H47F3N6O4에 대한 계산치 684.4; 측정치 685.4.
단계 9. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (2 mL)내 (23 R,63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (150 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 DIPEA (283 mg, 2.2 mmol), (2S)-2-[(4aR,7aS)-4-(tert-부톡시카르보닐)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6-카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부탄산 (127 mg, 0.33 mmol) 및 HATU (100 mg, 0.26 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 (4aR,7aS)-6-(((2S)-1-(((23 R,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카르복실레이트 (150 mg, 52% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H76F3N9O9에 대한 계산치1051.6; 측정치 1052.5.
단계 10. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (2 mL)내 tert-부틸 (4aR,7aS)-6-(((2S)-1-(((23 R,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카르복실레이트 (150 mg, 0.14 mmol)의 혼합물에 TFA (0.70 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 산성화되었고 혼합물은 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (4aR,7aS)-N-((2S)-1-(((23 R,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)--61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (130 mg)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68F3N9O7에 대한 계산치 951.5; 측정치 952.6.
단계 11. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (2 mL)내 (4aR,7aS)-N-((2S)-1-(((23 R,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)--61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (120 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 DIPEA (163 mg, 1.26 mmol), 아크릴산 (13.6 mg, 0.19 mmol) 및 HATU (57.5 mg, 0.15 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온하게 되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다.조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (4aR,7aS)-4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((23 R,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (16 mg, 12% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H70F3N9O8에 대한 계산치 1005.5; 측정치 1006.9; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 8.83 (dd, J = 4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.84 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.71 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 7.8, 4.7 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.94 - 6.79 (m, 1H), 6.25 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.87 - 5.77 (m, 2H), 5.77 (s, 1H), 5.59 - 5.42 (m, 1H), 5.34 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.31 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.93 (d, J = 11.3 Hz, 5H), 3.82 - 3.62 (m, 4H), 3.67 - 3.56 (m, 4H), 3.59 - 3.44 (m, 5H), 3.44 - 3.31 (m, 1H), 3.23 (d, J = 5.7 Hz, 4H), 3.09 (s, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 7H), 2.73 - 2.59 (m, 3H), 2.35 (m, 2 H), 2.29 (s, 1H), 2.12 (s, 4H), 2.06 (s, 1H), 1.84 (s, 1H), 1.74 - 1.56 (m, 4H), 1.45 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.35 - 1.04 (m, 1H), 1.05 - 0.91 (m, 2H), 0.92 - 0.63 (m, 8H), 0.43 (s, 3H).
실시예 4. (4a R ,7a S )-4-아크릴로일- N -((2S)-1-(((2 3 S ,6 3 S ,4 S )-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-1 1 -(2,2,2-트리플루오로에틸)-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸헥사하이드로피롤로[3,4- b ][1,4]옥사진-6(2 H )-카르복사미드의 합성
단계 1. 0 ℃에 DCM (2 mL)내 tert-부틸 ((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일) 카르바메이트 (200 mg, 0.26 mmol)의 혼합물에 TFA (0.7 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 산성화되었고 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (23 S,63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (200mg)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H47F3N6O4에 대한 계산치 684.4; 측정치 985.4.
단계 2. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (2 mL)내 (23 S,63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (200 mg, 0.29 mmol)의 혼합물에 DIPEA (378 mg, 2.9 mmol), (2S)-2-[(4aR,7aS)-4-(tert-부톡시카르보닐)-헥사하이드로피롤로[3,4-b] [1,4] 옥사진-6-카르보닐 (메틸) 아미노]-3-메틸부탄산 (169 mg, 0.44 mmol) 및 HATU (133 mg, 0.35 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 (4aR,7aS)-6-(((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸) 카르바모일)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카르복실레이트 (230 mg, 67% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H76F3N9O9에 대한 계산치 1051.6; 측정치 1052.6.
단계 3. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (3 mL)내 tert-부틸 (4aR,7aS)-6-(((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸) 카르바모일)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카르복실레이트 (230 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 TFA가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 10 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (4aR,7aS)-N-((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (220 mg)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68F3N9O7에 대한 계산치 951.5; 측정치 952.5.
단계 4. N2의 대기 하에서 0 ℃에 ACN (3 mL)내 (4aR,7aS)-N-((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (220 mg, 0.23 mmol)의 혼합물에 DIPEA (299 mg, 2.3 mmol), 아크릴산 (25 mg, 0.35 mmol) 및 CIP (77 mg, 0.28 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (4aR,7aS)-4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피페리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카르복사미드 (20 mg, 8% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H70F3N9O8에 대한 계산치1005.5; 측정치 1006.9; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 8.75 (dd, J = 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 7.58 - 7.48 (m, 2H), 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 17.2, 10.6 Hz, 1H), 6.20 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.80 - 5.59 (m, 2H), 5.48 (s, 1H), 5.11 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 15.3 Hz, 2H), 4.35 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.21 - 4.04 (m, 2H), 3.99 - 3.71 (m, 6H), 3.67 - 3.49 (m, 3H), 3.30 - 3.05 (m, 7H), 3.04 - 2.91 (m, 3H), 2.77 - 2.60 (m, 9H), 2.09 (d, J = 42.2 Hz, 5H), 1.81 (d, J = 28.6 Hz, 2H), 1.64 - 1.56 (m, 5H), 1.40 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.82 (t, J = 6.4 Hz, 6H), 0.21 (s, 3H).
실시예 5. 4-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-1 1 -(2,2,2-트리플루오로에틸)-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드의 합성
Figure pct00270
단계 1. Ar의 대기 하에서 1,4-디옥산 (60 mL) 및 H2O (12 mL)내 (S)-3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌 (6.3 g, 8.0 mmol) 및 4-요오도-2-(트리이소프로필실릴)-1,3-옥사졸 (8.46 g, 24.1 mmol)의 혼합물에 K3PO4 (4.26 g, 20.1 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (0.59 g, 0.80 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 70 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (S)-4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)-2-(트리이소프로필실릴)옥사졸 (8.84 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C51H66F3N3O3Si2에 대한 계산치 881.5; 측정치 882.5.
단계 2. 0 ℃에 THF (90 mL)내 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-5-[2-(트리이소프로필실릴)-1,3-옥사졸-4-일]인돌 (8.84 g, 10.0 mmol)의 혼합물에 THF내 1M TBAF (10.0 mL, 10.0 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NH4Cl (3 x 100 mL)로 세정되었다. 조합된 수성 층들은 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출되었고 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-5-(1,3-옥사졸-4-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌 (8.4 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H46F3N3O3Si에 대한 계산치 725.3; 측정치 726.4.
단계 3. N2의 대기 하에서 0 ℃에 THF (45 mL)내 (2M)-3-[3-[(tert-부틸디페닐실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필]-2-[2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-5-(1,3-옥사졸-4-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌 (4.5 g, 6.2 mmol)의 혼합물에 1M TMPMgCl.LiCl (12.2 mL, 12.2 mmol)이 적가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 THF (10 mL)내 I2 (1.89 g, 7.4 mmol)의 혼합물은 적가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 0 ℃로 재-냉각되었고 포화된 NH4Cl이 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 10mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (2 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 (S)-4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)-2-요오도옥사졸 (3.0 g, 57% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H45F3IN3O3Si에 대한 계산치 851.2; 측정치 852.3.
단계 4. Ar의 대기 하에서 DMF (10 mL)내 Zn (645 mg, 9.9 mmol)의 혼합물에 I2 (125 mg, 0.49 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 45 ℃로 가열되었고 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 DMF (5 mL)내 메틸 (2R)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-요오도프로파노에이트 (1.22 g, 3.7 mmol)가 45 ℃에 적가되었다. 혼합물은 45 ℃에 2 시간 동안 교반되었고 그 다음 0 ℃로 냉각되었고 (S)-4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)-2-요오도옥사졸 (2.1 g, 2.5 mmol), 그 다음 DMF (20 mL)내 Pd(PPh3)2Cl2 (173 mg, 0.25 mmol)이 적가되었다. 혼합물은 75 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 염수 (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (1.6 g, 70% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C51H61F3N4O7Si에 대한 계산치 926.4; 측정치 927.5.
단계 5. 0 ℃에 DCM (1.8 mL)내 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (2.4 g, 2.6 mmol)의 혼합물에 TFA (0.6 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3이 첨가되었고 혼합물은 DCM / MeOH (10:1; 3 x 50 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 메틸 (S)-2-아미노-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (2.1 g, 98% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C46H53F3N4O5Si에 대한 계산치 826.4; 측정치 827.5.
단계 6. 0 ℃에 THF (15 mL) 및 H2O (5 mL)내 (S)-2-아미노-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (2.1 g, 2.5 mmol)의 혼합물에 NaHCO3 (0.64 g, 7.6 mmol) 및 벤질 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 카르보네이트 (0.95 g, 3.8 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고 그 다음 EtOAc (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었다. 유기 층은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (2.2 g, 90% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H59F3N4O7Si에 대한 계산치 960.4; 측정치 961.4.
단계 7. 0 ℃에 ACN (11 mL)내 메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (2.2 g, 2.3 mmol)의 혼합물에 HF-피리딘 (11 mL, 122 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~7로 염기성화되었다. 수성 및 유기 층들은 분배되었고 유기 층은 감압 하에서 농축되어 메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (1.7 g)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C38H41F3N4O7에 대한 계산치 722.3; 측정치 723.3.
단계 8. 0 ℃에 THF (1.2 mL) 및 H2O (0.4 mL)내 메틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (1.7 g, 2.4 mmol)의 혼합물에 LiOH (0.08 g, 3.5 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 밤새 교반되었고, 그 다음 수성 HCl을 사용하여 pH ~4로 산성화되었다. 혼합물은 DCM/MeOH (10:1; 3 x 20 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2S)-2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-3-{4-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]-1,3-옥사졸-2-일}프로판산 (1.5 g, 90% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C37H39F3N4O7에 대한 계산치 708.3; 측정치 709.3.
단계 9. DCM (15 mL)내 (2S)-2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-3-{4-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]-1,3-옥사졸-2-일}프로판산 (1.5 g, 2.1 mmol) 및 (Z)-N,N'-디이소프로필 tert-부톡시메탄이미드아미드 (2.12 mL, 10.6 mmol)의 혼합물에. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (1.6 g, 99% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H47F3N4O7에 대한 계산치 764.3; 측정치 765.3.
단계 10. 0 ℃에 DCM (16 mL)내 tert-부틸 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로파노에이트 (1.8 g, 2.4 mmol)의 혼합물에 (3S)-1,2-비스(tert-부톡시카르보닐)-1,2-디아지난-3-카르복실산 (1.04g, 3.1 mmol) 및 DCC (0.65 g, 3.1 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 3-(3-(5-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)옥사졸-4-일)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필) 1,2-디-tert-부틸 (S)-테트라하이드로피리다진-1,2,3-트리카르복실레이트 (1.8 g, 80% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C56H71F3N6O12에 대한 계산치 1076.5; 측정치 1077.4.
단계 11. 0 ℃에 DCM (15 mL)내 3-(3-(5-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(tert-부톡시)-3-옥소프로필)옥사졸-4-일)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필) 1,2-디-tert-부틸 (S)-테트라하이드로피리다진-1,2,3-트리카르복실레이트 (1.8 g, 1.7 mmol)의 혼합물에 TFA (5 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3이 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 10 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-(((S)-헥사하이드로피리다진-3-카르보닐)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로판산 (1.27 g, 93% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H47F3N6O8에 대한 계산치 820.3; 측정치 821.4.
단계 12. 0 ℃에 DCM (175 mL)내 (S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(3-(3-(((S)-헥사하이드로피리다진-3-카르보닐)옥시)-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)옥사졸-2-일)프로판산 (870 mg, 1.1 mmol) 및 DIPEA (4.1 g, 31.8 mmol)의 혼합물에 HOBt (1.15 g, 8.5 mmol) 및 EDCI (8.13 g, 42.4 mmol)가 부문들로 15 분 동안 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온하게 되었고 밤새 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 벤질 ((63 S,4S,Z)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (180 mg, 21% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C42H45F3N6O7에 대한 계산치 802.3; 측정치 803.4.
단계 13. THF (2mL)내 벤질 ((63 S,4S,Z)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (150 mg, 0.19 mmol) 및 10% Pd/C (0.1g)의 혼합물은 1 시간 동안 H2 (풍선)의 대기 하에서 35 ℃에 교반되었다. 혼합물은 셀라이트의 패드를 통해서 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (63 S,4S,Z)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (112 mg, 90% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H39F3N6O5에 대한 계산치 668.3; 측정치 669.3.
단계 14. 0 ℃에 ACN (1 mL)내 (63 S,4S,Z)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (91 mg, 0.14 mmol)의 혼합물에 DIPEA (352 mg, 2.7 mmol) 및 (2S)-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부탄산 (75 mg, 0.20 mmol) 및 2-클로로-1,3-디메틸-4,5-디하이드로-1H-이미다졸-3-이움; 헥사플루오로포스페이트(V) (46 mg, 0.16 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63 S,4S,Z)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-2(4,2)-옥사졸라-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (29.6 mg, 21% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H66F3N9O9에 대한 계산치 1017.5; 측정치 1018.7; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.77 (dd, J = 4.7, 1.8 Hz, 1H), 8.45 - 8.21 (m, 3H), 7.94 - 7.70 (m, 2H), 7.63 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (m, 1H), 6.84 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 5.62 - 5.50 (m, 2H), 5.08 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.94 - 4.75 (m, 1H), 4.35 (td, J = 12.1, 3.2 Hz, 1H), 4.34 - 4.15 (m, 2H), 3.94 - 3.80 (m, 1H), 3.65 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.57 - 3.48 (m,6H), 3.28 (s, 4H), 3.19 - 2.93 (m, 4H), 2.93 - 2.62 (m, 5H), 2.40 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.20 - 2.04 (m, 2H), 1.86 - 1.57 (m,5H), 1.58 - 1.40 (m, 2H), 1.37 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.98 - 0.77 (m, 9H), 0.28 (s, 3H).
실시예 6. 4-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-1 1 -(2,2,2-트리플루오로에틸)-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드의 합성
Figure pct00271
단계 1. 교반 막대가 장착된 40 mL 바이알에 광촉매 Ir[dF(CF3)ppy]2(dtbbpy)PF6 (62 mg, 0.055 mmol), 메틸 4-브로모벤조에이트 (1.5 g, 2.8 mmol), 4-브로모테트라하이드로피란 (981 mg, 4.2 mmol) 트리스(트리메틸실릴)실란 (689 mg, 2.8 mmol), 및 무수 탄산나트륨 (587 mg, 5.54 mmol)이 첨가되었다. 바이알은 밀봉되었고 N2의 대기 하에서 배치되었고 그 다음 DME (15 mL)가 첨가되었다. 별도 바이알에 NiCl2 ·글라임 (6.1 mg, 0.028 mmol) 및 4,4'-디-tert-부틸-2,2'-비피리딘 (7.4 mg, 0.028 mmol)이 첨가되었다. 촉매 바이알은 밀봉되었고, N2로 퍼징되었고 DME (2 mL)가 첨가되었고, 그 다음 이 혼합물은 5 분 초음파처리되었고, 그 후, 혼합물은 광촉매에 첨가되었다. 혼합물은 N2로 10 분 동안 탈기되었고, 그 다음 혼합물은 34 W 청색 LED 램프 (7 cm 떨어짐, 실온에 반응 온도를 유지하기 위한 냉각 팬이 있음으로부터 조사 하에서 교반되었다. 혼합물은 실온에 6 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 3-[(2M)-3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-카르복실레이트 (700 mg, 41% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H42F3N3O5에 대한 계산치 617.3; 측정치 618.4.
단계 2. 0 ℃에 DCM (8 mL)내 tert-부틸 3-[(2M)-3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-카르복실레이트 (800 mg, 1.3 mmol)의 혼합물에 TFA (2.95 g, 25.9 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 염기성화되었고 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 3-[(2M)-5-(아제티딘-3-일)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-3-일]-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (650 mg, 97%)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C28H34F3N3O3에 대한 계산치 517.3; 측정치 518.3.
단계 3. DMF (9 mL)내 3-[(2M)-5-(아제티딘-3-일)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-3-일]-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (900 mg, 1.7 mmol)의 혼합물에 tert-부틸 N-[(3S)-2-옥소옥세탄-3-일]카르바메이트 (488 mg, 2.6 mmol) 및 Cs2CO3 (567 mg, 1.7 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 30 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과 후, 여과물은 감압 하에서 농축되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (2S)-3-{3-[(2M)-3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로판산 (400 mg, 33% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H47F3N4O7에 대한 계산치 704.3; 측정치 705.4.
단계 4. 0 ℃에 THF (2.8 mL)내 (2S)-3-{3-[(2M)-3-[3-(아세틸옥시)-2,2-디메틸프로필]-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]프로판산 (400 mg, 0.57 mmol)의 혼합물에 1M LiOH (2.84 mL, 2.84 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (30 mL)으로 희석되었다. 유기 층은 H2O (3 x 30 mL)로 세정되었고 조합된 수성 층들은 1M HCl을 사용하여 pH ~5로 산성화되었고, 그 다음 EtOAc (3 x 40 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (40 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로판산 (300 mg, 80%)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H45F3N4O6에 대한 계산치 662.3; 측정치 663.4.
단계 5. 0 ℃에 DCM (3 mL)내 (2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로판산 (300 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 DIPEA (351 mg, 2.7 mmol), 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (131 mg, 0.91 mmol) 및 HATU (258 mg, 0.68 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 30mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (290 mg, 81%)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H55F3N6O7에 대한 계산치 788.4; 측정치 789.5.
단계 6. 0 ℃에 THF (1.8 mL)내 메틸 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 (290 mg, 0.37 mmol)의 혼합물에 1M LiOH (1.84 mL, 1.84 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (20 mL)이 첨가되었고 혼합물은 H2O (3 x 30 mL)로 세정되었다. 조합된 수성 층들은 1M HCl을 사용하여 pH ~5로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 60 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (230 mg, 81% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C39H53F3N6O7에 대한 계산치 774.4; 측정치 775.5.
단계 7. DCM (56 mL)내 (3S)-1-[(2S)-2-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-3-{3-[(2M)-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)인돌-5-일]아제티딘-1-일}프로파노일]-1,2-디아지난-3-카르복실산 (280 mg, 0.36 mmol)의 혼합물에 DIPEA (1.4 g, 10.8 mmol), HOBT (293 mg, 2.2 mmol) 및 EDCI (2.1 g, 10.8 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 30 ℃로 가온되었고 밤새 교반되었고 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (3 x 50 mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (100 mg, 37% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C39H51F3N6O6에 대한 계산치 756.4; 측정치 757.4.
단계 8. 0 ℃에 DCM (2 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (100 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 TFA (301 mg, 2.64 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 4 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 (63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-5,7-디온 (80 mg, 92% 수율)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H43F3N6O4에 대한 계산치 656.3; 측정치 657.5.
단계 9. 0 ℃에 DMF (2 mL)내 (63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-5,7-디온 (90 mg, 0.14 mmol)의 혼합물에 DIPEA (106 mg, 0.82 mmol), (2S)-3-메틸-2-[메틸(4-(프로프-2-에노일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐)아미노]부탄산 (76 mg, 0.21 mmol) 및 COMU (88 mg, 0.21 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-아제티디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (37 mg, 27% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H70F3N9O8에 대한 계산치 1005.5; 측정치 1006.8; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.73 (dd, J = 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.71 - 7.69 (m, 2H), 7.58 - 7.46 (m, 2H), 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.86 - 6.71 (m, 1H), 6.11 (dd, J = 16.3, 9.7 Hz, 1H), 5.65 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 5.46 (dq, J = 17.2, 8.8 Hz, 1H), 5.29 - 5.15 (m, 2H), 4.87 - 4.74 (m, 1H), 4.23 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 4.11 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.86 - 3.71 (m, 2H), 3.61 - 3.47 (m, 12H), 3.23 (m, 5H), 3.07 - 2.87 (m, 5H), 2.78 (s, 3H), 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.32 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.78 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 1.58 (dd, J = 16.6, 6.9 Hz, 4H), 1.48 - 1.38 (m, 1H), 1.32 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.88 - 0.75 (m, 9H), 0.24 (s, 3H).
실시예 7. (2 R )-3-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-2 1 ,2 2 ,2 3 ,2 6 ,6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -데카하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N ,2-디메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드의 합성
단계 1. THF (4 mL) 및 H2O (4 mL)내 메틸 N-((R)-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발리네이트 (430 mg, 1.127 mmol, 1.00 당량)의 혼합물에 NaOH (225 mg, 5.6 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 16 시간 동안 실온에 교반되었고, 그 다음 1M HCl을 사용하여 pH ~5로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (4 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 N-((R)-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발린 (300 mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C18H29N3O5에 대한 계산치 367.2; 측정치 368.3.
단계 2. 0 ℃에 DCM (10 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (1.0 g, 1.4 mmol)의 혼합물에 1,4-디옥산 (5 mL)내 HCl이 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 (63 S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온 HCl (1.0 g)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C36H48N6O4에 대한 계산치 628.4; 측정치 629.6.
단계 3. 0 ℃에 DMF (5 mL)내 (63 S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온 HCl (460 mg, 0.73 mmol) 및 N-((R)-3-아크릴로일-2-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)-N-메틸-L-발린 (269 mg, 0.73 mmol)의 혼합물에 DIPEA (2.84 g, 22.0 mmol) 및 COMU (282 mg, 0.66 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (5 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 6 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (2R)-3-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N,2-디메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 (50 mg, 7% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H75N9O8에 대한 계산치 977.6; 측정치 978.6; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.83-8.67 (m, 1H), 7.89 (dd, J = 18.7, 8.2 Hz, 2H), 7.62 - 7.33 (m, 4H), 6.57 (dd, J = 16.7, 10.3 Hz, 1H), 6.38 - 6.11 (m, 2H), 5.75 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 5.61 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.16 (q, J = 6.2 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.92 - 3.68 (m, 4H), 3.63 (s, 2H), 3.18 (d, J = 61.5 Hz, 6H), 2.95 (d, J = 33.8 Hz, 5H), 2.78 (t, J = 11.8 Hz, 1H), 2.64 (d, J = 24.7 Hz, 7H), 2.42 - 1.83 (m, 7H), 1.89 - 1.45 (m, 7H), 1.40 (dd, J = 11.9, 5.7 Hz, 6H), 1.10 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.94 - 0.64 (m, 9H), 0.52 (s, 3H).
실시예 8. 3-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((2 3 S ,6 3 S ,4 S )-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-1 1 -(2,2,2-트리플루오로에틸)-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드의 합성
Figure pct00273
단계 1. Ar의 대기 하에서 디옥산 (100 mL) 및 H2O (20 mL)내 (S)-3-(5-브로모-2-(2-(1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (10 g, 18.5 mmol) 및 tert-부틸 3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (8.18 g, 27.7 mmol)의 혼합물에 Pd(DTBPF)Cl2 (1.20 g, 1.85 mmol) 및 K3PO4 (9.80 g, 46.2 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 85 ℃로 가열되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (8 x 5 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 (S)-3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (13 g, 89% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H42F3N3O5에 대한 계산치 629.3; 측정치 630.4.
단계 2. MeOH (100 mL)내 tert-부틸 (S)-3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)-2,5-디하이드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (10.75 g, 17.1 mmol) 및 Pd(OH)2/C (3.2 g, 22.8 mmol)의 혼합물은 40 ℃로 및 H2의 대기 하에서 2 시간 동안 가열되었다. 혼합물은 여과되었고 필터 케이크는 DCM (10 x 10 mL)으로 세정되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 tert-부틸 3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (6.4 g, 56% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C34H44F3N3O5에 대한 계산치 631.3; 측정치 632.4.
단계 3. 디옥산 (70 mL)내 tert-부틸 3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (7.0 g, 11.1 mmol)의 혼합물에 1,4-디옥산 (17.5 mL)내 HCl이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되어 3-(2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-5-(피롤리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (7.6 g)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C29H36F3N3O3에 대한 계산치 531.3; 측정치 532.5.
단계 4. ACN (80 mL)내 3-(2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-5-(피롤리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (7.7 g, 14.5 mmol)의 혼합물에 tert-부틸 (S)-(2-옥소옥세탄-3-일)카르바메이트 (4.07 g, 21.7 mmol) 및 Cs2CO3 (11.80 g, 36.2 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 진한 HCl을 사용하여 pH ~7로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (500 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 100 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 (2S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산 (2.3 g, 19% 수율)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C37H49F3N4O7에 대한 계산치 718.4; 측정치 719.5.
단계 5. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (60 mL)내 메틸 (S)-헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (0.69 g, 4.8 mmol), DIPEA (16.54 g, 128 mmol) 및 (2S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로판산 (2.3 g, 3.2 mmol)의 혼합물에 HATU (1.46 g, 3.84 mmol)가 부문들로 첨가되었다. 생성된 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 400 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 메틸 (3S)-1-((2S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (2 g, 70% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C43H59F3N6O8에 대한 계산치 844.4; 측정치 845.6.
단계 6. H2O (10 mL) 및 MeOH (20 mL)내 메틸 (3S)-1-((2S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (2.0 g, 2.4 mmol) 및 LiOH (0.28 g, 11.8 mmol)의 혼합물은 실온에 교반되었다. 혼합물은 수성 HCl을 사용하여 pH ~6으로 산성화되었고 혼합물은 DCM (4 x mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (6 x 4 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-1-((2S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (1.9 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H55F3N6O7에 대한 계산치 788.4; 측정치 789.4.
단계 7. N2의 대기 하에서 DCM (340 mL)내 (3S)-1-((2S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-인돌-5-일)피롤리딘-1-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (1.87 g, 2.4 mmol)의 혼합물에 DIPEA (9.19 g, 71.1 mmol), HOBt (1.60 g, 11.9 mmol) 및 EDCI (9.09 g, 47.4 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 밤새 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (2 x mL)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 3 mL)로 세정되었고 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (410 mg, 21% 수율)를 고체로서 제공하였다.
단계 8. 부분입체이성질체는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피의 사용에 의해 분리되어 각각의 이성질체를 제공하였다.
이성질체 1에 대한 데이터 (Rf = 1:1 석유 에테르 / EtOAc에서 0.4): LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H53F3N6O6에 대한 계산치 770.4; 측정치 771.4.
이성질체 2에 대한 데이터 (Rf = 1:1 석유 에테르 / EtOAc에서 0.7): LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C40H53F3N6O6에 대한 계산치 770.4; 측정치 771.4.
단계 9. 0 ℃에 DCM (5 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (410 mg, 0.53 mmol)의 혼합물에 TFA (1.7 mL, 22.9 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~6으로 염기성화되었고 혼합물은 EtOAc (6 x 3 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (5 x 3 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (23 S,63S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸) 피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (390 mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C35H45F3N6O4에 대한 계산치 670.4; 측정치 671.7.
단계 10. N2의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (3 mL)내 (23 S,63 S,4S)-4-아미노-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (270 mg, 0.4 mmol) 및 DIPEA (2.1 g, 16.1 mmol)의 혼합물에 (2S)-3-메틸-2-[메틸(3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐)아미노]부탄산 (142 mg, 0.4 mmol) 및 CIP (227 mg, 0.81 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (4 x 30 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (5 x 30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 3-아크릴로일-N-((2S)-1-(((23 S,63 S,4S)-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-11-(2,2,2-트리플루오로에틸)-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(3,1)-피롤리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 (45 mg, 10% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H70F3N9O8에 대한 계산치 1005.5; 측정치 1006.9; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.76 (dd, J = 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.54 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.24 - 6.14 (m, 1H), 5.74 (td, J = 10.2, 2.3 Hz, 1H), 5.58 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 5.46 (dt, J = 17.2, 8.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 5.01 (s, 1H), 4.81 (dt, J = 18.2, 9.0 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.80 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.60 - 3.55 (m, 1H), 3.45 (s, 1H), 3.12 (dt, J = 17.2, 9.6 Hz, 3H), 2.76 (d, J = 13.0 Hz, 5H), 2.61 (q, J = 7.8, 6.9 Hz, 2H), 2.42 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.29 - 1.87 (m, 4H), 1.80 (t, J = 12.5 Hz, 3H), 1.65 (dt, J = 22.2, 8.9 Hz, 3H), 1.58 - 1.48 (m, 2H), 1.38 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.98 - 0.83 (m, 6H), 0.81 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.26 (s, 3H).
실시예 9. 4-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)-5-(( R )-옥타하이드로-2 H -피리도[1,2- a ]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H -8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N -메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드의 합성
Figure pct00274
단계 1. O2의 대기 하에서 DCM (230 mL)내 (S)-(5-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-5-브로모-1-에틸-1H-인돌-2-일)-6-(1-메톡시에틸)피리딘-3-일)보론산 (7.7 g, 14.5 mmol) 및 (R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진 (3.9 g, 27.8 mmol)의 혼합물에 TEA (14.7 g, 145.3 mmol) 및 4Å 분자체 (26 g)가 첨가되었다. 혼합물은 실온에 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 Cu(OAc)2 (2.4 g, 13.2 mmol)가 첨가되었고, 혼합물은 40 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었다. 얼음/H2O가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (5 x 200 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 정제되어 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (3.5 g, 27% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C33H45BrN4O3에 대한 계산치 624.3; 측정치 625.5.
단계 2. 디옥산 (19 mL) 및 H2O (3.8 mL)내 3-(5-브로모-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-3-일)-2,2-디메틸프로필 아세테이트 (1.9 g, 3.0 mmol) 및 메틸 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (1.89 g, 3.6 mmol)의 혼합물에 K2CO3 (1.05 g, 7.6 mmol) 및 Pd(dtbpf)Cl2 (395 mg, 0.61 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 70 ℃로 가열되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (40 mL)로 희석되었고, 얼음/H2O가 첨가되었고, 혼합물은 EtOAc (3 x 10 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 정제되어 메틸 (S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (1.1 g, 29% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C53H73N7O8에 대한 계산치 935.6; 측정치 936.8.
단계 3. 0 ℃에 THF (4.5 mL), MeOH (4.5 mL) 및 H2O (4.5 mL)내 메틸 (S)-1-((S)-3-(3-(3-(3-아세톡시-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)페닐)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (900 mg, 0.92 mmol)의 혼합물에 LiOH.H2O (89 mg, 3.7 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 3 시간 동안 교반되었고, 그 다음 얼음/H2O (10 mL)가 첨가되었고, 혼합물은 시트르산을 사용하여 pH ~5로 산성화되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (900 mg)을 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H69N7O7에 대한 계산치 879.5; 측정치 880.6.
단계 4. 0 ℃에 DCM (67 mL)내 (S)-1-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-(1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)페닐)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (670 mg, 0.76 mmol)의 혼합물에 DIPEA (3.94 g, 30.4 mmol), EDCI (4.4 g, 22.8 mmol) 및 HOBT (514 mg, 3.8 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 밤새 교반되었고, 그 다음 얼음/H2O (100 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 포화된 NH4Cl (3 x 100 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 정제되어 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (450 mg, 62% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H67N7O6에 대한 계산치 861.5; 측정치 862.7.
단계 5. 0 ℃에 DCM (2 mL)내 tert-부틸 ((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)카르바메이트 (230 mg, 0.27 mmol)의 혼합물에 TFA (1 mL)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 0 ℃에 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 염기성화되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 30mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (63 S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-5,7-디온 (300 mg)을 고체로서 제공하였고, 이는 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C45H59N7O4에 대한 계산치 761.5; 측정치 762.8.
단계 6. Ar의 대기 하에서 0 ℃에 DMF (3 mL)내 (63 S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-5,7-디온 (300 mg, 0.39 mmol) 및 (2S)-2-[4-(tert-부톡시카르보닐)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부탄산 (211 mg, 0.51 mmol)의 혼합물에 DMF (0.1 mL)내 DIPEA (1.53 g, 11.8 mmol) 및 COMU (168 mg, 0.39 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 얼음/H2O (3 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (3 x 30mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 정제되어 tert-부틸 9-(((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (200 mg, 59% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C65H92N10O9에 대한 계산치 1156.7; 측정치 1158.2.
단계 7. DCM (4 mL)내 tert-부틸 9-(((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-4-카르복실레이트 (200 mg, 0.17 mmol) 및 ZnBr2 (195 mg, 0.87 mmol)의 혼합물은 35 ℃로 가열되었고 밤새 교반되었다. 얼음/H2O (5 mL)가 첨가되었고 혼합물은 0 ℃에 포화된 NaHCO3을 사용하여 pH ~8로 염기성화되었고, 그 다음 EtOAc (3 x 30mL)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (3 x 30 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 N-((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (200 mg)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C60H84N10O7에 대한 계산치 1056.7; 측정치 1058.1.
단계 8. Ar의 대기 하에서 0 ℃에 DCM (2 mL)내 N-((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (200 mg, 0.19 mmol) 및 TEA (57 mg, 0.57 mmol)의 혼합물에 아크릴로일 클로라이드 (12 mg, 0.13 mmol)가 적가되었다. 혼합물은 0 ℃에 추가의 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63 S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(1,3)-벤제나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-4,9-디아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (40 mg, 19% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C63H86N10O8에 대한 계산치 1110.7; 측정치 1112.1; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.46 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.17 - 8.05 (m, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.74 - 7.54 (m, 3H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 7.01 - 6.81 (m,2H), 6.28 - 6.11 (m, 1H), 5.73 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 9.4 Hz, 2H), 4.40 - 4.17 (m, 2H), 4.10 (dq, J = 21.9, 7.1, 6.5 Hz, 2H), 3.95 (t, J = 12.0 Hz, 1H), 3.77 (dt, J = 25.3, 13.0 Hz, 3H), 3.69 - 3.64 (m, 3H), 3.64 - 3.55 (m, 3H), 3.54 - 3.48 (m, 2H), 3.15 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.79 (m, 4H), 2.66 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.42 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 2.23 (td, J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 2.07 - 1.89 (m, 4H), 1.82 (d, J = 12.2 Hz, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 4H), 1.59 (d, J = 12.6 Hz, 3H), 1.47 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 1.36 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 1.19 (m, 3H), 1.00 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.90 - 0.70 (m, 9H), 0.57 (s, 3H).
실시예 10. (3 S )-1-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-2 1 ,2 1 -디옥시도-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸피롤리딘-3-카르복사미드의 합성
단계 1. DCM (200 mL)내 tert-부틸 2-(하이드록시메틸)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (17.8 g, 60 mmol)의 혼합물에 데스-마틴 페리오디난 (56.6 g, 130 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 2-포르밀티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (30 g)를 시럽으로서 제공하였고, 이것은 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M- t Bu+H]+ C6H9NO5S에 대한 계산치 207.2; 측정치 208.0; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.88 (s, 1H), 4.17 (d, J = 39.4, 33.7 Hz, 4H), 3.15 (d, J = 34.2 Hz, 3H), 1.48 (s, 10H).
단계 2. 0 ℃에 ACN (400 mL)내 tert-부틸 2-포르밀티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (58 g, 60 mmol)의 혼합물에 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (30.5 g, 200 mmol) 및 메틸 2-{[(벤질옥시)카르보닐]아미노}-2-(디메톡시포스포릴)아세테이트 (43.8 g, 130 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 2 시간 동안 교반되었고 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 EtOAc (200 mL)로 희석되었고 H2O (150 mL x 3)로 세정되었고, 그 다음 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 2-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로프-1-엔-1-일)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (8 g, 2 단계에 걸쳐 25% 수율)를 시럽으로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+Na]+ C21H28N2NaO8S에 대한 계산치 491.2; 측정치 491.2.
단계 3. MeOH (200 mL)내 tert-부틸 2-(2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로프1-엔-1-일)티오모르폴린-4-카르복실레이트 (8 g, 17.0 mmol), 10% Pd/C (4 g) 및 NH4Cl (9.1 g, 170 mmol)의 혼합물은 48 시간 동안 H2의 대기 하에서 실온에 교반되었다. 혼합물은 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 tert-부틸 2-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (6.3 g)를 오일로서 제공하였고, 이것은 다음 단계에 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C13H24N2O6S에 대한 계산치 336.1; 측정치 337.1.
단계 4. 0 ℃에 건조한 DMF (20 mL)내 tert-부틸 2-(2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (6.3 g, 10 mmol) 및 (2S)-2-({3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}(메틸)아미노)-3-메틸부탄산 (5 g, 10 mmol)의 혼합물에 DIPEA (49.2 g, 30 mmol) 및 HATU (7.2 g, 10 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (100 mL)로 희석되었고 H2O (50 mL x 3)로 세정되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 tert-부틸 2-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-메톡시-3-옥소프로필)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (5 g, 2 단계에 걸쳐 57% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C27H41N3O9S에 대한 계산치 583.3; 측정치 584.3.
단계 5. 0 ℃에 DCM (80 mL)내 tert-부틸 2-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-메톡시-3-옥소프로필)티오모르폴린-4-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (12 g, 20 mmol)의 혼합물에 TFA (20 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 1.5 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었다. 잔류물은 EtOAc (50 mL)로 희석되었고 포화된 Na2CO3을 사용하여 pH ~9로 조정되었다. 유기 층은 감압 하에서 농축되어 메틸 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노에이트 (9.1 g, 수율 94%)를 시럽으로서 제공하였고, 이것은 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C22H33N3O7S에 대한 계산치 483.2; 측정치 484.2.
단계 6. 실온에 DCM (50 mL)내 메틸 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노에이트 (5.9 g, 12 mmol)의 혼합물에 (3-{3-[(tert-부틸디메틸실릴)옥시]-2,2-디메틸프로필}-1-에틸-2-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}인돌-5-일)보란디올 (6.4 g, 12 mmol), Cu(OAc)2 (2.2 g, 12 mmol) 및 피리딘 (2.8 g, 36 mmol)이 첨가되었다. 혼합물은 실온에 48 시간 동안 교반되었고, 그 다음 혼합물은 여과되었고, 여과물은 EtOAc (30 mL)로 희석되었고 H2O (80 mL x 3)로 세정되었다. 유기 층은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 메틸 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노에이트 (7.59 g, 66% 수율)를 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C51H75N5O9SSi에 대한 계산치 961.5; 측정치 962.3.
단계 7. 0 ℃에 THF (40 mL)내 메틸 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노에이트 (7.59 g, 7.9 mmol)의 혼합물에 H2O (8 mL)내 LiOH (0.38 g, 16 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1.5 시간 동안 교반되었고, 그 다음 pH는 3M HCl (5 mL)을 사용하여 pH ~7로 조정되었고, 혼합물은 염수 (15 mL)로 희석되었고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되어 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로판산 (7.4 g, 98% 수율)을 시럽으로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H73N5O9SSi에 대한 계산치 947.5; 측정치 948.4.
단계 8. 0 ℃에 DMF (50 mL)내 2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로판산 (7.4 g, 7.8 mmol)의 혼합물에 메틸 (3S)-1,2-디아지난-3-카르복실레이트 디하이드로클로라이드 (2.6 g, 12 mmol), DIPEA (20 g, 160 mmol) 및 HATU (4.6 g, 12 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 2 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (300 mL)로 희석되었고 H2O (100 mL x 2)로 세정되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제되어 (3S)-메틸 1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (8.08 g, 96 % 수율)를 시럽으로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C56H83N7O10SSi에 대한 계산치 1073.6; 측정치 1074.5.
단계 9. THF내 1M TBAF (38 mL, 38 mmol) 및 AcOH (2.3 g, 38 mmol)의 혼합물에 (3S)-메틸 1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-3-(3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2,2-디메틸프로필)-1-에틸-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (8.08 g, 7.5 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 55 ℃로 가열되었고 16 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (200 mL)로 희석되었고 H2O (150 mL x 2)로 세정되었다. 조합된 유기 층들은 감압 하에서 농축되어 (3S)-메틸 1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (7.2 g, 99% 수율)를 시럽으로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C50H69N7O10S에 대한 계산치 959.5; 측정치 960.3.
단계 10. DCE (30 mL)내 (3S)-메틸 1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실레이트 (7.2 g, 7.5 mol)의 혼합물에 Me3SnOH (6.7 g, 38 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 65 ℃로 가열되었고 16 시간 동안 교반되었고, 그 다음 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (13 g)을 오일로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H67N7O10S에 대한 계산치 945.5; 측정치 946.4.
단계 11. 0 ℃에 DCM (400 mL)내 (3S)-1-(2-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미도)-3-(4-((R)-1-에틸-3-(3-하이드록시-2,2-디메틸프로필)-2-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-1H-인돌-5-일)-1,1-디옥시도티오모르폴린-2-일)프로파노일)헥사하이드로피리다진-3-카르복실산 (13 g, 7.4 mmol; 약 55% 순도)의 혼합물에 DIPEA (38 g, 300 mmol), HOBT (10 g, 74 mmol) 및 EDCI (42 g, 220 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 실온으로 가온되었고 48 시간 동안 교반되었고, 그 다음 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 EtOAc (200 mL)로 희석되었고 H2O (100 mL x 2)로 세정되었다. 유기 층은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되어 벤질 ((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바메이트를 제공하였다 [4개 이성질체; 이성질체 1 및 이성질체 2의 혼합물, 1.6 g; 이성질체 3 (651 mg, 9.5% 수율); 이성질체 4 (332 mg, 4.8% 수율)]. 이성질체 1 및 이성질체 2의 혼합물은 분취형-HPLC에 의해 추가로 정제되어 이성질체 1 (470 mg, 6.8% 수율) 및 이성질체 2 (797 mg, 12% 수율)를 제공하였다.
이성질체 1에 대한 데이터: LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H65N7O9S에 대한 계산치 927.5; 측정치 928.4; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.74 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.36 - 8.13 (m, 1H), 7.91 (dd, J = 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 7.8, 4.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.25 (m, 6H), 7.21 - 7.07 (m, J = 8.8 Hz, 1H), 5.59 - 5.40 (m, 2H), 5.28 - 5.05 (m, 2H), 4.45 (d, 1H), 4.17 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 2H), 3.97 - 3.62 (m, 6H), 3.50 - 3.34 (m, 2H), 3.27 - 3.04 (m, 4H), 3.01 - 2.83 (m, 4H), 2.78 (s, 2H), 2.64 - 2.32 (m, 2H), 2.24 - 1.90 (m, 5H), 1.84 - 1.65 (m, 2H), 1.46 (dd, J = 16.6, 6.6 Hz, 3H), 1.36 - 1.17 (m, 4H), 1.02 (s, 2H), 0.94 - 0.70 (m, 6H), 0.58 (s, 3H).
이성질체 2에 대한 데이터: LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H65N7O9S에 대한 계산치 927.5; 측정치 928.4; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.18 - 8.01 (m, 1H), 7.83 (dd, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.23 (m, 6H), 7.20 (s, 1H), 7.06 (dd, J = 8.9, 2.1 Hz, 1H), 5.66 - 5.50 (m, 1H), 5.29 - 5.05 (m, 2H), 4.36 - 4.18 (m, 3H), 4.17 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m , 5H), 3.75 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.27 (s, 1H), 3.21 - 3.06 (m, 4H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.81 - 2.63 (m, 2H), 2.47 - 2.35 (m, 1H), 2.34 - 2.09 (m, 3H), 2.00 - 1.93 (m, 1H), 1.86 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 1.79 - 1.63 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.28 (s, 1H), 1.01 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 0.91 - 0.77 (m, 10H), 0.57 (s, 3H).
이성질체 3에 대한 데이터: LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H65N7O9S에 대한 계산치 927.5; 측정치 928.4; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 - 8.66 (m, 1H), 8.17 - 8.04 (m, 1H), 7.88 (dd, J = 19.8, 5.4 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 7.7, 4.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.16 (m, 7H), 7.15 - 6.98 (m, 1H), 5.50 - 5.38 (m, 1H), 5.16 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 4.32 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 2H), 4.00 - 3.72 (m, 5H), 3.62 (dd, J = 30.7, 6.5 Hz, 2H), 3.28 - 3.14 (m, 2H), 3.11 - 2.92 (m, 5H), 2.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 2.74 - 2.54 (m, 1H), 2.52 - 2.12 (m, 4H), 1.94 - 1.65 (m, 2H), 1.61 - 1.47 (m, 1H), 1.43 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.38 - 1.25 (m, 2H), 1.18 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.98 - 0.73 (m, 9H), 0.68 (s, 3H).
이성질체 4에 대한 데이터: LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H65N7O9S에 대한 계산치 927.5; 측정치 928.4; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.79 - 8.61 (m, 1H), 8.21 (d, J = 47.9 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.64 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.20 (m, 5H), 7.07 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.84 - 5.45 (m, 1H), 5.26 - 5.02 (m, 2H), 4.42 - 3.38 (m, 11H), 3.27 - 3.06 (m, 4H), 3.05 - 2.94 (m, 3H), 2.93 - 2.70 (m, 4H), 2.53 (t, 1H), 2.27 - 2.09 (m, 2H), 2.01 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 1.87 - 1.54 (m, 3H), 1.52 - 1.26 (m, 3H), 1.26 - 0.98 (m, 4H), 0.97 - 0.40 (m, 12H).
단계 12. MeOH (10 mL)내 벤질 ((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바메이트 (이성질체 1; 380 mg, 0.41 mmol), H2O가 있는 Pd/C, 50% wt (100 mg) 및 NH4Cl (220 mg, 4.1 mmol)의 혼합물은 15 ℃에 10 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고, 잔류물은 포화된 NaHCO3 (20 mL)로 희석되었고 DCM (20 mL x 5)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2S)-N-((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미드 (300 mg, 92% 수율)를 고체로서 제공하였고, 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H59N7O7S에 대한 계산치 793.4; 측정치 794.4.
유사한 반응은 출발 물질로서 이성질체 2, 3 및 4를 사용하여 착수되어 개별 생성물을 제공하였다.
이성질체 2에 대한 데이터: (170 mg, 0.18 mmol)로부터 출발하여 (140 mg, 98% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H59N7O7S에 대한 계산치 793.4; 측정치 794.4.
이성질체 3에 대한 데이터: (390 mg, 0.42 mmol)로부터 출발하여 (300 mg, 90% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H59N7O7S에 대한 계산치 793.4; 측정치 794.3.
이성질체 4에 대한 데이터: (240 mg, 0.26 mmol)로부터 출발하여 (200 mg, 96% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C41H59N7O7S에 대한 계산치 793.4; 측정치 794.3.
단계 13. 0 ℃에 DMF (5 mL)내 (2S)-N-((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)-3-메틸-2-(메틸아미노)부탄아미드 (이성질체 1; 120 mg, 0.15 mmol) 및 (3S)-1-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}피롤리딘-3-카르복실산 (56 mg, 0.23 mmol)의 혼합물에 DIPEA (390 mg, 3 mmol) 및 HATU (87 mg, 0.23 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (20 mL)로 희석되었고 H2O (20 mL x 2)로 세정되었다. 유기 층은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제되어 벤질 (3S)-3-(((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (111 mg, 72% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H72N8O10S에 대한 계산치 1024.5; 측정치 1025.3.
유사한 반응은 출발 물질로서 이성질체 2, 3 및 4를 사용하여 착수되어 개별 생성물을 제공하였다.
이성질체 2 데이터: (150 mg, 0.19 mmol)로부터 출발하여 (120 mg, 62% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H72N8O10S에 대한 계산치 1024.5; 측정치 1025.4.
이성질체 3에 대한 데이터: (300 mg, 0.38 mmol)로부터 출발하여 (300 mg, 77% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H72N8O10S에 대한 계산치 1024.5; 측정치 1025.5.
이성질체 4에 대한 데이터: (199 mg, 0.25 mmol)로부터 출발하여 (220 mg, 85% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C54H72N8O10S에 대한 계산치 1024.5; 측정치 1025.4.
단계 14. MeOH (20 mL)내 벤질 (3S)-3-(((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (이성질체 1; 111 mg, 0.11 mmol), H2O가 있는 Pd/C, 50% wt. (30 mg) 및 NH4Cl (60 mg, 1.1 mmol)의 혼합물은 15 ℃에 10 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 DCM (20 mL)으로 희석되었고 포화된 NaHCO3으로 세정되었다. 유기 층은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (3S)-N-((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸피롤리딘-3-카르복사미드 (77 mg, 79% 수율)를 고체로서 제공하였고, 이것은 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용되었다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C46H66N8O8S에 대한 계산치 890.5; 측정치 891.4.
유사한 반응은 출발 물질로서 이성질체 2, 3 및 4를 사용하여 착수되어 개별 생성물을 제공하였다.
이성질체 2에 대한 데이터: (120 mg, 0.12 mmol)로부터 출발하여 (85 mg, 89% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C46H66N8O8S에 대한 계산치 890.5; 측정치 891.4.
이성질체 3에 대한 데이터: (300 mg, 0.34 mmol)로부터 출발하여 (220 mg, 73% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C46H66N8O8S에 대한 계산치 890.5; 측정치 891.5.
이성질체 4에 대한 데이터: (220 mg, 0.21 mmol)로부터 출발하여 (147 mg, 71% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C46H66N8O8S에 대한 계산치 890.5; 측정치 891.4.
단계 15. 0 ℃에 DCM (2mL)내 (3S)-N-((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸피롤리딘-3-카르복사미드 (이성질체 1; 77 mg, 0.086 mmol)의 혼합물에 포화된 NaHCO3 (2 mL) 및 DCM (1 mL)내 프로프-2-에노일 클로라이드 (7 mg, 0.077 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 30 분 동안 교반되었고, 그 다음 H2O가 첨가되었고 혼합물은 DCM (10mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고, 여과물은 감압 하에서 농축되었고 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 (3S)-1-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,21-디옥시도-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-티오모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸피롤리딘-3-카르복사미드 (23 mg, 28% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68N8O9S에 대한 계산치 944.5; 측정치 945.4; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.75 - 8.74 (m, 1H), 7.92 - 7.90 (m, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 1H), 7.43 (dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 6.32 - 6.25 (m, 1H), 5.77 (dd, J = 10.5, 1.9 Hz, 1H), 5.53 - 5.48 (m, 1H), 4.62 (dd, J = 24.9, 11.1 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.13 - 4.03 (m, 3H), 3.89 - 3.76 (m, 6H), 3.69 - 3.63 (m, 2H), 3.60 - 3.35 (m, 3H), 3.25 - 3.21 (m, 3H), 3.13 - 3.11 (m, 1H), 3.00 (d, J = 2.3 Hz, 5H), 2.90 (d, J = 3.5 Hz, 2H), 2.25 - 2.20 (m, 2H), 2.16 - 2.09 (m, 3H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.80 - 1.72 (m, 2H), 1.46 - 1.43 (m, 3H), 1.29 (m, 3H), 1.26 - 1.22(m, 3H), 1.01 - 0.98 (m, 3H), 0.95 - 0.88(m, 3 H), 0.84 - 0.81(m, 3H), 0.62 - 0.59 (m, 2H).
유사한 반응은 출발 물질로서 이성질체 2, 3 및 4를 사용하여 착수되어 개별 생성물을 제공하였다.
이성질체 2에 대한 데이터: (110 mg, 0.12 mmol)로부터 출발하여 (24.5 mg, 21% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68N8O9S에 대한 계산치 944.5; 측정치 945.3; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.7 Hz, 1H), 7.91 - 7.78 (m, 1H), 7.52 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 1H), 7.25 - 7.03 (m, 2H), 6.65 - 6.56 (m, 1H), 6.30 - 6.22 (m, 1H), 5.76-5.70 (m, 1H), 5.67 - 5.48 (m, 1H), 5.27 (dd, J = 11.7, 8.2 Hz, 1H), 4.69 (dd, J = 10.9, 3.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 3H), 3.97 - 3.83 (m, 4H), 3.82 - 3.62 (m, 4H), 3.60 - 3.41 (m, 3H), 3.28 - 3.20 (m, 2H), 3.14 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 3.06 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.96 (s, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.73 - 2.55 (m, 1H), 2.48 - 2.34 (m, 1H), 2.33 - 2.18 (m, 3H), 2.13 - 1.95 (m, 2H), 1.90 - 1.84 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (m, 3H), 1.27 (s, 1H), 1.14 - 0.95 (m, 4H), 0.94 - 0.85 (m, 4H), 0.82 (d, J = 6.2 Hz, 5H), 0.56 (d, J = 8.7 Hz, 3H).
이성질체 3에 대한 데이터: (120 mg, 0.13 mmol)로부터 출발하여 (32 mg, 11% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68N8O9S에 대한 계산치 944.5; 측정치 945.5; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.73 (dt, J = 3.8, 1.9 Hz, 1H), 7.93 - 7.86 (m, 1H), 7.53 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.13 - 6.99 (m, 1H), 6.65 (ddd, J = 35.6, 16.8, 10.5 Hz, 1H), 6.28 (ddd, J = 16.8, 4.9, 1.9 Hz, 1H), 5.75 (td, J = 10.4, 1.9 Hz, 1H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 4.63 (dd, J = 13.4, 11.3 Hz, 1H), 4.26 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 4.00 - 3.82 (m, 5H), 3.82 - 3.45 (m, 7H), 3.41 - 3.33 (m, 1H), 3.14 - 3.02 (m, 4H), 3.02 - 2.87 (m, 5H), 2.62 - 2.34 (m, 3H), 2.33 - 2.17 (m, 3H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.46 - 1.39 (m, 3H), 1.27 (s, 2H), 1.23 - 1.16 (m, 3H), 1.16 - 1.01 (m, 2H), 0.96 - 0.90 (m, 3H), 0.88 - 0.74 (m, 6H), 0.73 - 0.63 (m, 3H).
이성질체 4에 대한 데이터: (147 mg, 0.16 mmol)로부터 출발하여 (47.2 mg, 31% 수율)을 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C49H68N8O9S에 대한 계산치 944.5; 측정치 945.3; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.73 - 8.72 (m, 1H), 7.92 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.53 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.46 (m, 1H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 7.07 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.65 - 6.56 (m, 1H), 6.28 - 6.23 (m, 1H), 5.76 - 5.71 (m, 2H), 4.59 - 4.55 (m, 1H), 4.34 - 4.30 (m, 1H), 4.13 - 4.03 (m, 4H), 3.88 - 3.72 (m, 6H), 3.68 - 3.48 (m, 5H), 3.30 - 3.20 (m, 4H), 3.08 - 3.07 (m, 3H), 3.02 (d, J = 4.1 Hz, 4H), 2.55 - 2.53 (m, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 3H), 2.11 - 2.00 (m, 3H), 1.90 - 1.88 (m, 1H), 1.76 - 1.74 (m, 2H), 1.44 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.29 (s, 1H), 1.23 - 1.20 (m, 3H), 0.91 - 0.86 (m, 3H), 0.78 - 0.75 (m, 5H), 0.69 - 0.66 (m, 3H).
실시예 11. 3-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((2 2 S ,6 3 S ,4 S )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)- N ,1-디메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드의 합성
0 ℃에 DMF (5 mL)내 (22S,63S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (150 mg, 0.24 mmol) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[1-메틸-3-(프로프-2-에노일)-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부타노에이트, 리튬 염 (132 mg, 0.36 mmol)의 혼합물에 HATU (108 mg, 0.28 mmol) 및 DIPEA (459 mg, 3.5 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 EtOAc (30 mL)로 희석되었고, H2O (10 mL x 2) 및 염수 (10 mL)로 세정되었다. 유기 층은 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 및 분취형-HPLC에 의해 정제되어 3-아크릴로일-N-((2S)-1-(((22S,63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N,1-디메틸-1,3,8-트리아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 (6.9 mg, 3% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C53H76N10O8에 대한 계산치 980.6; 측정치 367.2; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 7.8, 4.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 2H), 6.67 - 6.44 (m, 1H), 6.31 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 5.65 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 4.51 - 4.13 (m, 2H), 4.33 (s, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 3H), 3.87 - 3.77 (m, 3H), 3.76 - 3.65 (m, 4H), 3.64 - 3.51 (m, 3H), 3.28 - 3.24 (m, 1H), 3.16 (s, 3H), 3.10 - 3.02 (m, 1H), 2.99 - 2.90 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 5H), 2.70 - 2.53 (m, 2H), 2.40 - 2.30 (m, 3H), 2.27 - 2.18 (m, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 2H), 1.98 - 1.88 (m, 3H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 3H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.04 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.80 - 0.60 (m, 6H).
실시예 12. 2-아크릴로일- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1 -에틸-1 2 -(2-(( S )-1-메톡시에틸)-5-(( R )-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-2 1 ,2 2 ,2 3 ,2 6 ,6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -데카하이드로-1 1 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 합성
단계 1. 0 ℃에 DMF (2 mL)내 (63S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (150 mg, 0.23 mmol)의 혼합물에 (2S)-2-({2-[(tert-부톡시)카르보닐]-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일}카르보닐(메틸)아미노)-3-메틸부탄산 (125 mg, 0.30 mmol), DIPEA (310 mg, 2.34 mmol) 및 HATU (134 mg, 0.35 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (150 mL) 및 EtOAc (150 mL x 2)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 H2O (50 mL), 염수 (50 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 tert-부틸 8-(((2S)-1-(((63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트 (130 mg, 40% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C64H95N11O8에 대한 계산치 1145.7; 측정치 1146.7.
단계 2. 0 ℃에 DCM (1.0 mL)내 tert-부틸 8-(((2S)-1-(((63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)(메틸)카르바모일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-2-카르복실레이트 (130 mg, 0.12 mmol)의 혼합물에 TFA (0.5 mL)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 DCM (5 mL)으로 희석되었고 포화된 NaHCO3이 첨가되어 pH ~9 조정하였다. DCM내 프로프-2-에노일 클로라이드 (10 mg, 0.11 mmol)는 0 ℃에 첨가되었고, 혼합물은 0 ℃에 15 분 동안 교반되었다. 혼합물은 H2O (50 mL)에 부어졌고 DCM (150 mL x 2)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 H2O (50 mL), 염수 (50 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-TLC에 의해 정제되어 2-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)-5-((R)-옥타하이드로-2H-피리도[1,2-a]피라진-2-일)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C62H89N11O7에 대한 계산치 1099.7; 측정치 1100.6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.45 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.65 (m, 1H), 6.41 - 6.21 (m, 2H), 5.93 (dd, J = 7.6, 3.8 Hz, 1H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 4.50 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 3.98 - 3.71 (m, 8H), 3.63 - 3.48 (m, 2H), 3.46 - 3.36 (m, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 3H), 3.12 - 2.97 (m, 6H), 2.93 - 2.76 (m, 6H), 2.64 (t, J = 11.2 Hz, 2H), 2.55 (d, J = 11.6 Hz, 9H), 2.45 - 2.12 (m, 4H), 1.99 - 1.83 (m, 2H), 1.80 - 1.55 (m, 10H), 1.48 - 1.29 (m, 6H), 1.22 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.93 (dd, J = 22.8, 6.4 Hz, 9H), 0.72 (s, 3H).
실시예 13. 3-아크릴로일-N-((2 S )-1-(((2 2 S,6 3 S,4S)-1 1 -에틸-1 2 -(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -헥사하이드로-1 1 H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드의 합성
(22S,63S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-5,7-디온 (450 mg, 0.7 mmol)의 혼합물에. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 EtOAc (30 mL x 3)로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 및 분취형-HPLC에 의해 정제되어 3-아크릴로일-N-((2S)-1-(((22S,63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-61,62,63,64,65,66-헥사하이드로-11H-8-옥사-2(4,2)-모르폴리나-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복사미드 (297 mg, 40% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C52H73N9O9에 대한 계산치 967.6; 측정치 968.6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.72 - 8.69 (m, 1H), 8.10 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.80 (m, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 1H), 7.17 - 7.01 (m, 2H), 6.62 - 6.45 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.85 - 5.71 (m, 1H), 5.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.46 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 2H), 3.99 - 3.61 (m, 8H), 3.61 - 3.33 (m, 6H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.99 - 2.71 (m, 6H), 2.68 - 2.46 (m, 2H), 2.30 - 2.17 (m, 1H), 2.12 - 2.02 (m, 2H), 1.96 - 1.54 (m, 8H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.15 - 0.97 (m, 3H), 0.96 - 0.79 (m, 6H), 0.77 - 0.53 (m, 6H).
실시예 14. 4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((6 3 S,4S)-1 1 -에틸-1 2 -(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-2 1 ,2 2 ,2 3 ,2 6 ,6 1 ,6 2 ,6 3 ,6 4 ,6 5 ,6 6 -데카하이드로-1 1 H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드의 합성
0 ℃에 DMF (2 mL)내 (63S,4S)-4-아미노-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-5,7-디온 (113 mg, 0.18 mmol) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[4-(프로프-2-에노일)-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-일]카르보닐아미노}부탄산, 리튬 염 (88 mg, 0.22 mmol)의 혼합물에 DIPEA (464 mg, 3.6 mmol) 및 HATU (82 mg, 0.23 mmol)가 첨가되었다. 혼합물은 0 ℃에 1 시간 동안 교반되었고, 그 다음 H2O (20 mL)가 첨가되었고 혼합물은 DCM (20 mL x 3)으로 추출되었다. 조합된 유기 층들은 염수 (20 mL)로 세정되었고, 무수 Na2SO4 상에서 건조되었고 여과되었다. 여과물은 감압 하에서 농축되었고 미정제 잔류물은 분취형-HPLC에 의해 정제되어 4-아크릴로일-N-((2S)-1-(((63S,4S)-11-에틸-12-(2-((S)-1-메톡시에틸)피리딘-3-일)-10,10-디메틸-5,7-디옥소-21,22,23,26,61,62,63,64,65,66-데카하이드로-11H-8-옥사-1(5,3)-인돌라-6(1,3)-피리다지나-2(5,1)-피리디나사이클로운데카판-4-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-N-메틸-1-프로필-1,4,9-트리아자스피로[5.5]운데칸-9-카르복사미드 (26 mg, 14% 수율)를 고체로서 제공하였다. LCMS (ESI): m/z [M+H]+ C57H82N10O7에 대한 계산치 1018.6; 측정치 1019.6; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.73 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.90 (dd, J = 8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 3H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 6.90 - 6.74 (m, 1H), 6.30 - 6.18 (m, 2H), 5.91 - 5.88 (m, 1H), 5.80 - 5.75 (m, 1H), 4.59 - 4.46 (m, 1H), 4.10 - 3.47 (m, 15H), 3.19 - 2.72 (m, 17H), 2.42 - 2.15 (m, 8H), 2.08 - 1.63 (m, 7H), 1.48 - 1.44 (m, 6H), 1.16 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 0.93 - 0.86 (m, 9H), 0.66 (s, 3H).
실시예 15. ( 2S )-N-[(6S,8S,14S,20M)-21-[5-(4-사이클로프로필피페라진-1-일)-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-22-에틸-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐]아미노}부탄아미드의 합성
DMF (3 mL)내 ((6S,8S,14S)-8-아미노-21-[5-(4-사이클로프로필피페라진-1-일)-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-22-에틸-18,18-디메틸-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-9,15-디온 (60 mg, 0.08 mmol, 1 당량) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산 (42 mg, 0.119 mmol, 1.5 당량)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸아민 (205 mg, 1.59 mmol, 20 당량) 이어서 HATU (60 mg, 0.159 mmol, 2 당량)가 -5~0℃에 첨가되었다. 이 반응은 -5~0℃에 1시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 물 (5 mL)로 퀀칭되었고 EA (10 mL x 3)로 추출되었다. 조합된 유기 상은 물 (10 mL x 1) 및 염수 (10 mL x 1)로 세정되었다. 유기 상은 농축 건조되었고 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S,20M)-21-[5-(4-사이클로프로필피페라진-1-일)-2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일]-22-에틸-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.12,6.110,14,023,27]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐]아미노}부탄아미드 (16 mg, 18% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 1092.6[M+H]+; 계산된 MW: 1091.7; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.29 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 22.5, 5.9 Hz, 2H), 7.06 - 6.91 (m, 2H), 6.51 - 6.16 (m, 2H), 5.75 - 5.63 (m, 1H), 5.55 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.09 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.00 (s, 1H), 4.57 - 4.32 (m, 2H), 4.09 - 3.95 (m, 2H), 3.98 - 3.50 (m, 9H), 3.52 - 3.21 (m, 7H), 3.23 - 3.03 (m, 8H), 3.03 (s, 3H), 2.85 (dd, J = 26.6, 15.7 Hz, 2H), 2.69 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.61 - 2.41 (m, 2H), 2.22 - 2.07 (m, 1H), 1.99 (dd, J = 18.3, 12.0 Hz, 2H), 1.94 - 1.09 (m, 13H), 0.98 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.81 (dd, J = 27.0, 6.5 Hz, 6H), 0.64 (d, J = 28.9 Hz, 6H), 0.50 - 0.32 (m, 4H).
실시예 16. ( 2S )-N-[(8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-16-옥사-6,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),2,20,23(27),24-펜타엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐]아미노}부탄아미드의 합성
DMF(2 mL)내 (8S)-8-아미노-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-일}-18,18-디메틸-16-옥사-6,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),2,20,23(27),24-펜타엔-9,15-디온 (70 mg, 0.10 mmol, 1.0 당량) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일]카르보닐아미노}부탄산 (40 mg, 0.12 mmol, 1.2 당량)의 용액에 HATU(44 mg, 0.12 mmol, 1.2 당량) 및 DIEA (187 mg, 1.44 mmol, 15.0 당량)가 0℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0℃에 1시간 동안 교반되었다. 용액은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-16-옥사-6,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.12,6.110,14,023,27]노나코사-1(26),2,20,23(27),24-펜타엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐]아미노}부탄아미드 (20.5 mg, 18% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 1062.5[M+H]+; 계산된 MW: 1061.64. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.43 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7. 58 - 7.49 (m, 2H), 7.45- 7.35(m, 2H), 6. 65 - 6. 41 (m, 1H), 6. 38 - 6. 32 (m, 1H), 6. 29 (s, 1H), 5. 91 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 5. 84 - 5.78 (m, 1H), 5. 21 (dd, J = 7.6, 4.0 Hz, 1H), 5. 12 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 4. 50 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 4. 18 - 3. 02 (m, 3H), 3. 00 - 3. 81 (m, 4H), 3. 76 - 3.70 (m, 1H), 3. 59 (s, 1H), 3. 52 - 3. 42 (m, 2H), 3.42- 3.34 (m, 6H), 3.28- 3.20 (m, 2H), 3.14- 3.07 (m, 1H), 3.06 - 2.98 (m, 3H), 2.90- 2.74 (m, 7H), 2.70 - 2.62 (m, 4H), 2. 62 - 2. 56 (m, 1H), 2.44- 2.29 (m, 6H), 2.26- 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.89- 1.78 (m, 3H), 1.76- 1.64 (m, 3H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.92 - 0.82(m, 6H), 0.71 (s, 3H).
실시예 17. ( 2S )-N-[(6S,8S,14S,20P)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-2-({3-[(2E)-4-플루오로부트-2-에노일]-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐}(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미드의 합성
단계 1. DMF (3 mL)내 (2S)-2-[(3-{3-[(포르밀옥시)메틸]페닐}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일)카르보닐(메틸)아미노]-3-메틸부탄산 (308 mg, 0.71 mmol, 1.5 당량) 및 (6S,8S,14S)-8-아미노-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-9,15-디온 (300 mg, 0.47 mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA (184 mg, 1.4 mmol, 3 당량) 및 HATU (216 mg, 0.57 mmol, 1.2 당량)가 0℃에 첨가되었다. 혼합물은 0℃에 0.5 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 H2O (30 mL)로 퀀칭되었고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출되었고, 조합된 유기 층들은 물 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세정되었고, Na2SO4 상에서 건조되었다. 혼합물은 여과되었고 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 [3-(8-{[(1S)-1-{[(6S,8S,14S)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]카르바모일}-2-메틸프로필](메틸)카르바모일}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일)페닐]메틸 포르메이트 (300 mg, 60% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 1048.5 [M+H]+, 계산된 MW: 1047.6
단계 2. i-PrOH (10 mL)내 [3-(8-{[(1S)-1-{[(6S,8S,14S)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]카르바모일}-2-메틸프로필](메틸)카르바모일}-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-일)페닐]메틸 포르메이트 (300 mg, 0.29 mmol, 1 당량)의 용액에 20% Pd(OH)2/C (30 mg, 60%물)가 첨가되었다. 혼합물은 20℃에 20 분 동안 H2 (15 psi) 대기 하에서 교반되었다. 혼합물은 여과되었고 여과물은 감압 하에서 농축되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-[메틸({1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일}카르보닐)아미노]부탄아미드 (200 mg, 61% 수율)를 갈색 오일로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 914.4 [M+H]+, 계산된 MW: 913.5
단계 3. DMF (3 mL)내 (2S)-N-[(6S,8S,14S)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-[메틸({1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-일}카르보닐)아미노]부탄아미드 (200 mg, 0.22 mmol, 1 당량), (2E)-4-플루오로부트-2-엔산 (23 mg, 0.22 mmol, 1 당량) 및 TEA (111 mg, 0.11 mmol, 5 당량)의 용액에 T3P (278 mg, 0.44 mmol, 2 당량, 50% EtOAc)가 0℃에 첨가되었다. 반응 혼합물은 0℃에 0.5 시간 동안 교반되었다. 반응 혼합물은 그 다음 물 (20 mL)로 퀀칭되었고 생성된 혼합물은 EtOAc (15 mL x 4)로 추출되었다. 조합된 유기 상들은 염수 (10 mL x 4)로 세정되었고, 무수 황산나트륨 상에서 건조되었고, 여과되었고, 감압 하에서 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S,20P)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.12,6.110,14,023,27]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-2-({3-[(2E)-4-플루오로부트-2-에노일]-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르보닐}(메틸)아미노)-3-메틸부탄아미드 (56.7 mg, 26% 수율)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 1000.6 [M+H]+, 계산된 MW: 999.6. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.74 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 8.0, 4.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.13 - 7.09 (m, 2H), 7.02 - 6.88 (m, 1H), 6.51 - 6.26 (m, 1H), 5.73 - 5.60 (m, 1H), 5.29 - 5.01 (m, 4H), 4.49 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.17 - 4.11 (m, 1H), 4.02 - 3.78 (m, 6H), 3.72 - 3.67 (m, 2H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.54 - 3.45 (m, 2H), 3.44 - 3.36 (m, 2H), 3.31 - 3.24 (m, 2H), 3.19 (s, 3H), 3.00 - 2.91 (m, 1H), 2.90 - 2.74 (m, 5H), 2.71 - 2.54 (m, 2H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.17 - 2.05 (m, 2H), 1.98 - 1.85 (m, 4H), 1.77 - 1.72 (m, 3H), 1.69 - 1.60 (m, 1H), 1.46 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.07 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 0.96 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 0.83 - 0.58 (m, 6H).
실시예 18. ( 2S )-N-[(6S,8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐]아미노}부탄아미드의 합성
DMF(4 mL)내 (6S,8S,14S)-8-아미노-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-9,15-디온 (250 mg, 0.40 mmol, 1.0 당량) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일]카르보닐아미노}부탄산 (200 mg, 0.60 mmol, 1.5 당량)의 용액에 HATU(180 mg, 0.47 mmol, 1.2 당량) 및 DIEA (766 mg, 5.2 mmol, 15 당량)가 0℃에 적가되었다. 반응 혼합물은 0℃에 1시간 동안 교반되었다. 용액은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.12,6.110,14,023,27]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[7-(프로프-2-에노일)-5-옥사-2,7-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르보닐]아미노}부탄아미드 (124.3 mg, 수율: 33%)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 940.5[M+H]+; 계산된 MW: 939.52 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.16 - 7.05 (m, 2H), 6.61 - 6.27 (m, 2H), 5.86 - 5.76 (m, 1H), 5.67 - 5.58 (m, 1H), 5.18 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.46 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.29 - 4.19 (m, 3H), 4.18 - 4.10 (m, 3H), 4.07 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.99 - 3.90 (m, 3H), 3.89 - 3.82 (m, 1H), 3.82 - 3.78 (m, 2H), 3.77 - 3.66 (m, 2H), 3.54 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.16 (s, 3H), 2.94 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 2.85 - 2.74 (m, 5H), 2.71 - 2.64 (m, 1H), 2.63 - 2.49 (m, 1H), 2.26 - 2.16 (m, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 2H), 1.92 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 1.81 - 1.69 (m, 1H), 1.68 - 1.56 (m, 1H), 1.44 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.33 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 1.04 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.76 (s, 3H), 0.68 (s, 3H).
실시예 19. ( 2S )-N-[(6S,8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]아미노}부탄아미드의 합성
DMF(4 mL)내 (6S,8S,14S)-8-아미노-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-9,15-디온 (160 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산 (137 mg, 0.4 mmol, 1.6 당량)의 용액에 HATU (115 mg, 0.3 mmol, 1.2 당량) 및 DIEA (490 mg, 3.7 mmol, 15.0 당량)가 0℃에 적가되었다. 반응 혼합물은 0℃에 1시간 동안 교반되었다. 용액은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.12,6.110,14,023,27]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[(5S)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]아미노}부탄아미드 (65.5 mg, 수율: 27%)를 백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z = 954.5[M+H]+; 계산된 MW: 953.54. 1H NMR (400 MHz, CD3OD δ 8.71 (dd, J = 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 7.6, 4.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.16 - 7.02 (m, 2H), 6.61 - 6.36 (m, 1H), 6.36 - 6.27 (m, 1H), 5.83 - 5.76 (m, 1H), 5.64 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.21 (dd, J = 11.2, 4.0 Hz, 1H), 5.11 (q, J = 6.0 Hz, 1H), 4.47 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.25 - 4.18(m, 1H), 4.17 - 4.12 (m, 1H), 4.04 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 3.97 - 3.64 (m, 11H), 3.55 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.40 (m, 2H), 3.26 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.98 - 2.75 (m, 6H), 2.68 - 2.49 (m, 2H), 2.25 - 2.15 (m, 2H), 2.15 - 2.01 (m, 3H), 1.92 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 1.81 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.05 (t, J = 6.4 Hz, 3H), 1.00 - 0.85 (m, 6H), 0.80 - 0.60 (m, 6H).
실시예 20. ( 2S )-N-[(6S,8S,14S,20M)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1 2,6 .1 10,14 ,0 23,27 ]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[(5R)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-카르보닐]아미노}부탄아미드의 합성 의 합성
DMF (1 mL)내 (6S,8S,14S)-8-아미노-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-9,15-디온 (160 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량) 및 (2S)-3-메틸-2-{메틸[3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄산 (103 mg, 0.30 mmol, 1.2 당량) 및 DIPEA (653 mg, 5.1 mmol, 20 당량)의 용액에 HATU (96 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량)가 0℃에 첨가되었고, 그 다음 혼합물은 0-5℃에 1 시간 동안 교반되었다. 혼합물은 EA (20 mL)로 희석되었고, 그 다음 물 (20 mL*2) 및 염수 (20 mL)로 세정되었다. 유기 상은 수집되었고, Na2SO4 상에서 건조되었고, 여과되었고 농축되었다. 생성된 잔류물은 크로마토그래피에 의해 정제되어 (2S)-N-[(6S,8S,14S)-22-에틸-21-{2-[(1S)-1-메톡시에틸]피리딘-3-일}-18,18-디메틸-9,15-디옥소-5,16-디옥사-2,10,22,28-테트라아자펜타사이클로[18.5.2.1^{2,6}.1^{10,14}.0^{23,27}]노나코사-1(26),20,23(27),24-테트라엔-8-일]-3-메틸-2-{메틸[(5R)-3-(프로프-2-에노일)-1-옥사-3,7-디아자스피로[4.4]노난-7-일]카르보닐아미노}부탄아미드 (92 mg, 38% 수율)를 회백색 고체로서 제공하였다. ESI-MS m/z: 954.4 [M+H]+. 계산된 MW: 953.54. 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 8.72 - 8.70 (m, 1H), 7.85 - 7.82 (m, 1H), 7.51 - 7.51 (m, 1H), 7.38 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.15 - 7.01 (m, 2H), 6.59 - 6.41 (m, 1H), 6.35 - 6.27 (m, 1H), 5.85 - 5.73 (m, 1H), 5.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.19 - 5.10 (m, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.46 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 4.23 - 4.11 (m, 2H), 3.92 - 3.82 (m, 7H), 3.76 - 3.63 (m, 4H), 3.50 - 3.49 (m, 4H), 3.26 (s, 1H), 3.15 (s, 3H), 2.95 - 2.74 (m, 1H), 2.88 - 2.73 (m, 5H), 2.65 - 2.54 (m, 2H), 2.29 - 2.18 (m, 1H), 2.23 - 2.02 (m, 4H), 1.92 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 1.73 - 1.62 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.10 - 1.02 (m, 3H), 0.94 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.60 - 0.50 (m, 6H).
매칭된 쌍 분석
도 1a-1b는 (화학식 AA에서) 수소가 (화학식 BB에서) (S)Me로 대체되는 화학식 BB의 화합물 (우측 지점) 및 화학식 AA의 상응하는 화합물 (좌측 지점)의 2개 상이한 세포-기반된 검정에서 효력을 비교한다. y 축은 H358 세포주에서 측정된 경우에 pERK EC50 (도 1a) 또는 CTG IC50 (도 1b)을 나타낸다. 검정 프로토콜은 하기이다. 링크된 지점은 H와 (S)Me 치환 사이만 상이한 매칭된 쌍을 나타낸다. 의외로, 화학식 BB의 각 화합물은 화학식 AA의 상응하는 화합물과 비교하여 세포 검정에서 증가된 효력을 입증하였다.
입체이성질체
본 발명의 화학식 I의 화합물은 입체이성질체 (예를 들면, 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 또는 회전장애이성질체)를 형성할 수 있다. 본 발명의 화합물 (예를 들면, 화학식 Ia의 화합물)의 특정 입체이성질체는 다른 이성질체보다 개선된 생물학적 활성 (예를 들면, K-Ras G12C 또는 K-Ras G13C pERK 효력 검정에서 더 낮은 IC50, 세포 생존력 검정에서 더 낮은 IC50, Raf-Ras 결합 검정에서 더 낮은 IC50, K-Ras G12C 또는 K-Ras G13C 가교 검정에서 더 큰 가교 퍼센트, 본원에 기재된 생물학적 검정에 의해 측정된 경우에 임의의 개선된 활성, 또는 이러한 특성들의 조합)을 가질 수 있다. 그러므로 증가된 입체화학적 순도를 갖는 제조물을 생산하는 것이 바람직하다.
회전장애이성질체 분리
메틸 기 (예를 들면, 도 1a 또는 도 1b의 화학식 BB의 화합물)의 첨가는 회전장애이성질체 분리를 가능하게 한다는 예상치 못한 이점을 가져왔다. 도 2a에 도시된 대로, (수소만 함유하는) 화학식 AA의 화합물은 2개의 중첩, 분리불가능한 회전장애이성질체를 나타낸다. 화학식 BB의 화합물을 형성하기 위한 메틸기의 첨가는 회전장애이성질체가 종래 크로마토그래피 방법에 의해 용이하게 분리되도록 한다 (도 2b). 화합물이 이미 부분입체이성질체성인 것을 감안하면, (메틸 기의 첨가에 의한) 또 다른 입체발생적 탄소의 첨가가 손쉬운 분리를 허용한다는 것은 의외이었다.
게다가, 화학식 BB에서 메틸 기의 존재는 중간체 1의 회전장애이성질체 분리를 허용하였다. 중간체 1은 종래 수단에 의해 분리될 수 있는 부분입체이성질체성 회전장애이성질체를 함유하는 반면, des-메틸-중간체 1은 (예를 들면, 키랄 크로마토그래피를 사용하여) 거울상이성질체의 힘든 분리를 필요로 한다.
중간체 1. 데스-메틸 중간체 1.
입체이성질체의 활성
화학식 I의 화합물은 화학식 CC 및 화학식 DD에 도시된 대로, 피리딜 기의 입체화학에서 상이한 회전장애이성질체를 형성할 수 있다.
화학식 CC 화학식 DD
화학식 CC 및 화학식 DD의 회전장애이성질체는 상이한 효력을 나타낸다. 일반적으로, 표 4에 나타난 대로, 화학식 CC의 피리딜 입체화학을 갖는 회전장애이성질체는 화학식 DD의 상응하는 화합물보다 증가된 효력을 입증한다. 표 4에서의 모든 검정은 본원에 기재된 대로 K-Ras G12C 세포주에서 수행된다.
생물학적 검정
본원에 표 1의 10개 화합물을 제외한 모두는 아래 기재된 H358 (K-Ras G12C) pERK 효력 검정에서 1μM 이하의 IC50을 나타냈다. 10개 화합물 (A36, A37, A38, A121, A124, A128, A136, A189, A191, A192)은 1μM을 초과하였다. 화합물 A130은 0.89μM 초과 IC50을 가졌다. 본원에 표 1의 화합물은 아래 기재된 MiaPaCa-2 (K-Ras G13C) pERK 효력 검정에서 3μM 이하의 IC50을 나타냈다.
표 1의 5개 화합물을 제외한 모두는 아래 기재된 세포 생존력 검정 (NCI-H358 (K-Ras G12C))에서 1μM 미만의 IC50을 나타냈다. 5개 화합물 (A38, A39, A128, A191, A192)은 1μM을 초과하였다.
표 1의 모든 화합물은 아래 기재된 Raf-Ras (FRET 또는 MOA) 결합 검정 re: K-Ras G12C에서 3.5μM 미만의 IC50을 나타냈다. 표 1의 3개 화합물을 제외한 모두는 아래 기재된 Raf-Ras (FRET 또는 MOA) 결합 검정 re: K-Ras G13C에서 1.5μM 미만의 IC50을 나타냈다. 3개 화합물 (A169, A171, A175)은 1.5μM을 초과하였다.
A168 및 A170을 제외한 표 1의 모든 화합물은 K-Ras G12C 또는 K-Ras G13C와 관련하여 아래 기재된 가교 검정에서 4시간의 인큐베이션 기간 하에서 0 초과의 가교 퍼센트를 나타냈다.
효력 검정: pERK
본 검정의 목적은 세포에서 K-Ras를 억제시키는 테스트 화합물의 능력을 측정하는 것이었다. 활성화된 K-Ras는 트레오닌 202 및 티로신 204 (pERK)에서 ERK의 증가된 인산화를 유도한다. 이러한 절차는 테스트 화합물에 반응하여 세포성 pERK에서 감소를 측정한다. NCI-H358 세포에서 하기 기재된 절차는 K-Ras G12C에 적용가능하다.
주석: 본 프로토콜은, 예를 들어, AsPC-1 (K-Ras G12D), Capan-1 (K-Ras G12V), 또는 NCI-H1355 (K-Ras G13C)를 포함하는, 다른 RAS 변이체의 억제제를 특성규명하기 위해 다른 세포주를 치환하여 시행될 수 있다.
NCI-H358 세포는 ATCC에 의해 권장된 배지 및 절차를 사용하여 성장 및 유지되었다. 화합물 첨가 전날에, 세포는 384-웰 세포 배양 플레이트 (40 μl/웰)에 플레이팅되었고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 밤새 성장되었다. 테스트 화합물은, 10 mM의 고 농도로, DMSO에 10, 3-배 희석으로 제조되었다. 검정의 당일에, 40 nL의 테스트 화합물은 Echo550 액체 핸들러 (LabCyte®)를 사용하여 세포 배양 플레이트의 각 웰에 첨가되었다. 테스트 화합물의 농도는 이중으로 테스트되었다. 화합물 첨가 후, 세포는 37℃, 5% CO2에 4 시간 인큐베이션되었다. 인큐베이션 이후, 배양 배지는 제거되었고 세포는 인산염 완충된 식염수로 1회 세정되었다.
일부 실험에서, 세포성 pERK 수준은 AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 Assay Kit (PerkinElmer)를 사용하여 결정되었다. 세포는, 600 RPM으로 실온에 진탕하면서, 25 μL 용해 완충액에서 용해되었다. 용해물 (10 μL)은 384-웰 Opti-플레이트 (PerkinElmer)로 옮겨졌고 5 μL 수령체 믹스가 첨가되었다. 어둠 속에서 2-시간 인큐베이션 후, 5 μL 공여체 믹스가 첨가되었고, 플레이트는 밀봉되었고, 실온에 2 시간 인큐베이션되었다. 신호는 표준 AlphaLISA 셋팅을 사용하여 Envision 플레이트 판독기 (PerkinElmer)에서 판독되었다. 미가공 데이터의 분석은 Excel (Microsoft) 및 Prism (GraphPad)에서 실시되었다. 신호는 화합물 농도의 10년 로그에 대해 플롯팅되었고, IC50은 4-파라미터 S자형 농도 반응 모델을 맞춤화시킴으로써 결정되었다.
다른 실험에서, 세포성 pERK는 In-Cell Western에 의해 결정되었다. 화합물 치료 이후, 세포는 200 μL 트리스 완충된 식염수 (TBS)로 2회 세정되었고 TBS내 150 μL 4% 파라포름알데하이드로 15 분 동안 고정되었다. 고정된 세포는 0.1% Triton X-100 (TBST)을 함유하는 TBS로 5 분 동안 4 회 세정되었고 그 다음 100 μL Odyssey 차단 완충액 (LI-COR)으로 60 분 동안 실온에 차단되었다. 일차 항체 (pERK, CST-4370, Cell Signalling Technology)는 차단 완충액에서 1:200 희석되었고, 50 μL는 각 웰에 첨가되었고 밤새 4℃에 인큐베이션되었다. 세포는 TBST로 5 분 동안 4 회 세정되었다. 이차 항체 (IR-800CW 토끼, LI-COR, 1:800 희석됨) 및 DNA 염색 DRAQ5 (LI-COR, 1:2000 희석됨)가 첨가되었고 실온에 1-2 시간 인큐베이션되었다. 세포는 TBST로 5 분 동안 4 회 세정되었다. 플레이트는 Li-COR Odyssey CLx Imager에서 스캐닝되었다. 미가공 데이터의 분석은 Excel (Microsoft) 및 Prism (GraphPad)에서 실시되었다. 신호는 화합물 농도의 10년 로그에 대해 플롯팅되었고, IC50은 4-파라미터 S자형 농도 반응 모델을 맞춤화시킴으로써 결정되었다.
G13C와 관련하여, 또 다른 pERK 검정 프로토콜은 다음과 같다.
주석: 본 프로토콜은, 예를 들어, AsPC-1 (K-Ras G12D), Capan-1 (K-Ras G12V), 또는 NCI-H358 (K-Ras G12C)를 포함하는, 다른 RAS 변이체의 억제제를 특성규명하기 위해 다른 세포주를 치환하여 시행될 수 있다.
MIA PaCa-2 KRAS G13C A12 세포는 ATCC에 의해 권장된 배지 및 절차를 사용하여 성장되었고 유지되었다. 화합물 첨가 전날에, 세포는 384-웰 세포 배양 플레이트 (8,000개 세포/40μl/웰)에 플레이팅되었고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 밤새 성장되었다. 테스트 화합물은 10, 1 또는 0.1 mM의 고농도로 DMSO에서 10, 3-배 희석액으로 제조되었다. 검정 당일에, 40 nL의 테스트 화합물은 Echo550 액체 핸들러 (LabCyte®)를 사용하여 세포 배양 플레이트의 각 웰에 첨가되었다. 테스트 화합물의 농축물은 이중으로 테스트되었다. 화합물 첨가 후, 세포는 37℃, 5% CO2에서 4시간 인큐베이션되었다. 인큐베이션 이후, 배양 배지는 제거되었고 세포는 인산염 완충 식염수로 1회 세정되었다.
일부 실험에서, 세포성 pERK 수준은 AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2 검정 키트 (PerkinElmer)를 사용하여 결정되었다. 세포는 실온에서 600 RPM으로 진탕하면서 25 μL 용해 완충액에서 용해되었다. 용해물 (10μL)은 384-웰 Opti-플레이트 (PerkinElmer)로 옮겨졌고 5 μL 수용체 믹스는 첨가되었다. 암실에서 2-시간 인큐베이션 후, 5 μL 기증자 믹스는 첨가되었고, 플레이트는 밀봉되었고, 실온에서 2 시간 인큐베이션되었다. 신호는 표준 AlphaLISA 설정을 사용하여 Envision 플레이트 판독기 (PerkinElmer)에서 판독되었다. 원시 데이터의 분석은 Genedata Screener 및 Prism (GraphPad)에서 실행되었다. 데이터는 하기 계산에 의해 정규화되었다: ((샘플 신호 - 평균 낮은 대조군)/(평균 DMSO - 평균 낮은 대조군))*100. 신호는 화합물 농도의 10 로그에 대해 플롯팅되었고, IC50은 4-매개변수 S자형 농도 반응 모델을 적합화함으로써 결정되었다.
다른 실험에서, 세포성 pERK는 In-Cell Western에 의해 결정되었다. 화합물 처리 이후, 세포는 200 μL 트리스 완충 식염수 (TBS)로 2회 세정되었고 TBS 중 150 μL 4% 파라포름알데하이드로 15 분 동안 고정되었다. 고정된 세포는 0.1% Triton X-100 (TBST)을 함유하는 TBS로 5 분 동안 4 회 세정되었고 그 다음 100 μL Odyssey 차단 완충액 (LI-COR)으로 60 분 동안 실온에서 차단되었다. 1차 항체 (pERK, CST-4370, Cell Signaling Technology)는 차단 완충액에서 1:200 희석되었고, 50 μL는 각 웰에 첨가되었고 밤새 4℃에 인큐베이션되었다. 세포는 TBST로 5 분 동안 4 회 세정되었다. 2차 항체 (IR-800CW 토끼, LI-COR, 1:800 희석됨) 및 DNA 염색 DRAQ5 (LI-COR, 1:2000 희석됨)는 첨가되었고 실온에서 1-2 시간 동안 인큐베이션되었다. 세포는 TBST로 5 분 동안 4 회 세정되었다. 플레이트는 Li-COR Odyssey CLx Imager에서 스캔되었다. 원시 데이터의 분석은 엑셀 (Microsoft) 및 Prism (GraphPad)에서 실행되었다. 신호는 화합물 농도의 10 로그에 대해 플롯팅되었고, IC50은 4-매개변수 S자형 농도 반응 모델을 적합화함으로써 결정되었다.
RAS 돌연변이체 암 세포주에서 세포 생존력의 결정
프로토콜: CellTiter-Glo® 세포 생존력 검정
주석 - 하기 프로토콜은 본 발명의 화합물에 반응하여 K-Ras 돌연변이체 암 세포주의 세포 생존력을 모니터링하기 위한 절차를 설명한다. 다른 RAS 아이소폼은, 씨딩될 세포의 수가 사용된 세포주에 기반하여 다양할 것이어도, 이용될 수 있다.
본 세포성 검정의 목적은 CellTiter-Glo® 2.0 Reagent (Promega)을 사용하여 종료점에 존재하는 ATP의 양을 정량화시킴으로써 5-일 치료 기간 동안 3개 인간 암 세포주 (NCI-H358 (K-Ras G12C), AsPC-1 (K-Ras G12D), 및 Capan-1 (K-Ras G12V))의 증식에서 테스트 화합물의 효과를 결정하는 것이었다.
세포는 384-웰 검정 플레이트에서 40 μL의 성장 배지내 250 세포/웰로 씨딩되었고 37℃에 5% CO2의 습화된 대기에서 밤새 인큐베이션되었다. 검정의 당일에, 테스트 화합물의 10 mM 원액은 100% DMSO가 있는 3 mM 용액으로 먼저 희석되었다. 잘-혼합된 화합물 용액 (15 μL)은 30 μL의 100% DMSO를 함유하는 다음 웰로 옮겨졌고, (10 μM의 검정 농도에서 시작하여) 9-농도 3-배 시리얼 희석이 실시되는 때까지 반복되었다. 테스트 화합물 (132.5 nL)은 세포를 함유하는 검정 플레이트에 직접적으로 분배되었다. 플레이트는 15 초 동안 300 rpm으로 진탕되었고, 원심분리되었고, 5 일 동안 37 ℃에 5% CO2의 습화된 대기에서 인큐베이션되었다. 5 일차에, 검정 플레이트 및 그들의 내용물은 대략 30 분 동안 실온으로 평형화되었다. CellTiter-Glo® 2.0 Reagent (25 μL)은 첨가되었고, 플레이트 내용물은 궤도 진탕기에서 2 분 동안 혼합된 다음 실온에 10 분 동안 인큐베이션되었다. 발광은 PerkinElmer Enspire를 사용하여 측정되었다. 데이터는 하기: (샘플 신호/평균 DMSO)*100에 의해 정규화되었다. 데이터는 4-파라미터 로지스틱 적합을 사용하여 적합화되었다.
MIA PaCa-2 KRAS G13C A12 (K-Ras G13C와 관련하여 이용된 또 다른 CTG 검정 프로토콜은, 특히, 다음과 같다, 주석: 다른 RAS 아이소폼 (예를 들면, NCI-H358 (K-Ras G12C), AsPC-1 (K-Ras G12D), 및 Capan-1 (K-Ras G12V))은, 씨딩될 세포의 수가 사용된 세포주에 기반하여 다양할 것이어도, 이용될 수 있다).
이 세포성 검정의 목적은 CellTiter-Glo® 2.0 Reagent (Promega)를 사용하여 종료점에 존재하는 ATP의 양을 정량화함으로써 5-일의 치료 기간에 걸쳐 인간 암 세포주의 증식에 관한 테스트 화합물의 효과를 결정하는 것이었다.
세포를 384-웰 검정 플레이트내 40 μL의 성장 배지에 250개 세포/웰로 씨딩되었고 37℃에 5% CO2의 가습된 대기에서 밤새 인큐베이션되었다. 테스트 화합물은 10, 1 또는 0.1 mM의 고농도로 DMSO에서 9 점, 3-배 희석액으로 제조되었다. 검정 당일에, 테스트 화합물 (40 nL)은 세포가 들어있는 검정 플레이트에 직접 분배되었다. 플레이트는 300 rpm으로 15 초 동안 진탕되었고, 원심분리되었고, 5 일 동안 37℃에 5% CO2의 가습된 대기에서 인큐베이션되었다. 5 일차에, 검정 플레이트 및 그 내용물은 대략 30 분 동안 실온으로 평형화되었다. CellTiter-Glo® 2.0 Reagent (25 μL)는 첨가되었고, 플레이트 내용물은 궤도 진탕기에서 2 분 동안 혼합된 다음 실온에 10 분 동안 인큐베이션되었다. 발광은 PerkinElmer Enspire를 사용하여 측정되었다. 데이터는 하기: (샘플 신호/평균 DMSO)*100에 의해 정규화되었다. 데이터는 4-파라미터 로지스틱 적합을 사용하여 적합화되었다.
(FRET 검정 또는 MOA 검정으로 또한 불리는) 본 발명의 화합물에 의한 K-Ras와의 B-Raf Ras-결합 도메인 (BRAF RBD ) 상호작용의 붕괴
주석 - 하기 프로토콜은 본 발명의 화합물에 의한 BRAF RBD 에 결합하는 K-Ras G12C (GMP-PNP)의 붕괴를 모니터링하기 위한 절차를 설명한다. 본 프로토콜은 기타 Ras 단백질 또는 뉴클레오타이드를 치환하여 또한 시행될 수 있다.
본 생화학적 검정의 목적은 뉴클레오타이드-로딩된 K-Ras 아이소폼과 사이클로필린 A 사이 삼원 복합체 형성을 촉진시키는 테스트 화합물의 능력을 측정하는 것이었고; 생성된 삼원 복합체는 BRAFRBD 작제물에의 결합을 붕괴시켜, RAF 효과기를 통해서 K-Ras 신호전달을 억제시킨다. 데이터는 IC50 값으로서 보고되었다.
25 mM HEPES pH 7.3, 0.002% Tween20, 0.1% BSA, 100 mM NaCl 및 5 mM MgCl2를 함유하는 검정 완충액에서, 태그리스 사이클로필린 A, His6-K-Ras-GMPPNP, 및 GST-BRAFRBD는 25 μM, 12.5 nM, 및 50 nM, 각각의 최종 농도로 384-웰 검정 플레이트에서 조합되었다. 화합물은 30 μM의 최종 농도에서 시작하는 10-점 3-배 희석 시리즈로서 플레이트 웰에서 존재하였다. 3 시간 동안 25 ℃에 인큐베이션 후, Anti-His Eu-W1024 및 항-GST 알로피코시아닌의 혼합물은 그 다음 10 nM 및 50 nM, 각각의 최종 농도로 검정 샘플 웰에 첨가되었고, 반응은 추가의 1.5 시간 동안 인큐베이션되었다. TR-FRET 신호는 마이크로플레이트 판독기 (Ex 320 nm, Em 665/615 nm)에서 판독되었다. K-Ras:RAF 복합체의 붕괴를 촉진시키는 화합물은 DMSO 대조군 웰에 비해 TR-FRET 비에서 감소를 이끌어내는 것들로서 식별되었다.
접합체를 형성하기 위한 본 발명의 화합물과 Ras 단백질의 가교
하기 가교 검정은 Ras 단백질과 본 발명의 화합물에 의한 공유 부가물 형성을 결정하는 방법을 기재한다.
(주석 - 하기 프로토콜은 본 발명의 화합물에 대한 K-Ras G12C (GMP-PNP)의 가교를 모니터링하기 위한 절차를 기재한다. 이 프로토콜은 또한 다른 Ras 단백질 또는 뉴클레오티드를 대체하여 실행될 수 있다).
이 생화학적 검정의 목적은 뉴클레오티드-로딩된 K-Ras 아이소폼을 공유적으로 표지하는 테스트 화합물의 능력을 측정하는 것이었다. 12.5 mM HEPES pH 7.4, 75 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 1 mM BME, 5 μM 사이클로필린 A 및 2 μM 테스트 화합물을 함유하는 검정 완충액에, GMP-PNP-로딩된 K-Ras (1-169) G12C의 5 μM 스톡은 10-배 희석되어 0.5 μM의 최종 농도를 산출하였고; 최종 샘플 부피는 100 μL이었다.
샘플은 25℃에 최대 24 시간 동안 인큐베이션된 다음 10 μL의 5% 포름산의 첨가에 의해 퀀칭되었다. 퀀칭된 샘플은 벤치탑 원심분리기에서 15 분 동안 15000 rpm으로 원심분리된 다음 10 μL 분취량을 역상 C4 컬럼에 주사되었고 이동상에서 아세토니트릴 구배를 증가시키면서 질량 분석기에 용출되었다. 원시 데이터의 분석은, 표지된 및 미표지된 K-Ras에 대하여 디컨볼루션된 단백질 피크로부터 계산된 % 경계로, Waters MassLynx MS 소프트웨어를 사용하여 실행되었다.
시험관내 세포 증식 패널
세포 성장의 억제를 위한 효력은 표준 방법을 사용하여 CrownBio에서 사정될 수 있다. 간단히, 세포주는 적합한 배지에서 배양되고, 그 다음 3D 메틸셀룰로스에서 플레이팅된다. 세포 성장의 억제는 화합물의 증가하는 농도로 5 일의 배양 후 CellTiter-Glo®에 의해 결정된다. 화합물 효력은 50% 억제 농도 (절대 IC50)로서 보고된다.
검정은 7 일 동안 실시하였다. 1 일차에, 2D 배양에서 세포는 대수적 성장 동안 수확되고 배양 배지에서 1x105 세포/ml로 현탁된다. 더 높은 또는 더 낮은 세포 밀도는 이전 최적화에 기반된 일부 세포주에 사용된다. 3.5 ml의 세포 현탁액은 1% 메틸셀룰로스가 있는 6.5% 성장 배지와 혼합되어, 0.65% 메틸셀룰로스내 세포 현탁액을 초래한다. 90 μl의 이러한 현탁액은 2개 96-웰 플레이트의 웰에서 분포된다. 1개 플레이트는 0 일차 판독에 사용되고 1개 플레이트는 종료점 실험에 사용된다. 플레이트는 밤새 37 C에 5% CO2로 인큐베이션된다. 2 일차에, (t0 판독을 위한) 1개 플레이트는 제거되고 10 μl 성장 배지 더하기 100 μl CellTiter-Glo® Reagent는 각 웰에 첨가된다. 혼합 및 10 분 인큐베이션 후, 발광은 EnVision Multi-Label Reader (Perkin Elmer)에서 기록된다. DMSO내 화합물은 화합물의 최종, 최대 농도가 10 μM이고, 시리얼 4-배 희석물이 9-점 농도 시리즈를 생성하기 위해 수행되도록 성장 배지에서 희석된다. 10 배 최종 농도로 10 μl의 화합물 용액은 제2 플레이트의 웰에 첨가된다. 플레이트는 그 다음 120 시간 동안 37C 및 5% CO2에 인큐베이션된다. 7 일차에 플레이트는 제거되고, 100 μl CellTiter-Glo® Reagent는 각 웰에 첨가되고, 혼합 및 10 분 인큐베이션 후, 발광은 EnVision Multi-Label Reader (Perkin Elmer)에서 기록된다. 데이터는 화합물 반응에 대하여 IC50을 결정하기 위해 GeneData Screener로 보내지고 S자형 농도 반응 모델로 모델링되었다. 주어진 RAS 돌연변이를 가진 모든 세포주가, 유출 수송체의 차등적 발현, 성장을 위한 RAS 경로 활성화에 관한 다양한 의존성, 또는 기타 이유로 인해, 그 돌연변이를 표적화하는 RAS 억제제에 동등하게 민감하지 않을 수 있다. 이것은, KRAS G12C 돌연변이를 가짐에도 불구하고, KRAS G12C (OFF) 억제제 MRTX-849 (Hallin 등, Cancer Discovery 10:54-71 (2020))에 민감하지 않은 세포주 KYSE-410, 및 KRAS G12C (OFF) 억제제 AMG510 (Canon 등, Nature 575:217-223 (2019))에 민감하지 않은 세포주 SW1573에 의해 예시되었다.
본 발명이 이의 구체적 구현예과 관련하여 설명되었어도, 추가 수정이 가능하고 본 출원이, 일반적으로, 본 발명의 원리에 따르고 본 발명이 속하며 본원에 제시된 필수 속성에 적용될 수 있는 기술 분야 내에서 공지되거나 관례적인 관행 내에 있는 본 개시내용으로부터의 그러한 이탈을 포함하는 본 발명의 임의의 변형, 용도, 또는 개조를 포함하기 위한 것이 이해될 것이다.
우선권 출원 미국 출워 번호 63/184,599를 포함하는, 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 이의 전체가 참고로 편입되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 그들 전체가 참고로 본원에 편입된다.

Claims (26)

  1. 화학식 I의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    ,
    화학식 I
    식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    L1은 부재이거나 링커이고;
    W는 비닐 케톤, 비닐 술폰, 이논, 또는 알키닐 술폰을 포함하는 가교기이고;
    R1은 수소, 임의로 치환된 3 내지 10-원 헤테로사이클로알킬, 또는 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬이고;
    R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬임.
  2. 제 1 항에 있어서, A가 임의로 치환된 티아졸, 임의로 치환된 옥사졸, 임의로 치환된 모르폴리노, 임의로 치환된 피롤리디닐, 임의로 치환된 피리딜, 임의로 치환된 아제티디닐, 임의로 치환된 피라지닐, 임의로 치환된 피리미딘, 임의로 치환된 피페리디닐, 임의로 치환된 옥사디아졸, 임의로 치환된 티아디아졸, 임의로 치환된 트리아졸, 임의로 치환된 티오모르폴리노, 또는 임의로 치환된 페닐인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, R2가 또는 인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 임의로 치환된 C1-C6 알킬인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, A가 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, A가 임의로 치환된 페닐인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  8. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, A가 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가 화학식 III의 구조인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-(D1)-(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2
    화학식 III,
    식중 A1은 상기 링커와 CH(R3) 사이의 결합이고; A2는 W와 상기 링커 사이의 결합이고; B1, B2, B3, 및 B4는 각각, 독립적으로, 임의로 치환된 C1-C2 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬렌, O, S, 및 NRN으로부터 선택되고; 각 RN은, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 알케닐, 임의로 치환된 C2-C4 알키닐, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴, 또는 임의로 치환된 C1-C7 헤테로알킬이고; C1 및 C2는 각각, 독립적으로, 카르보닐, 티오카르보닐, 술포닐, 또는 포스포릴로부터 선택되고; f, g, h, i, j, 및 k는 각각, 독립적으로, 0 또는 1이고; D1은 임의로 치환된 C1-C10 알킬렌, 임의로 치환된 C2-C10 알케닐렌, 임의로 치환된 C2-C10 알키닐렌, 임의로 치환된 3 내지 14-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6 내지 10-원 아릴렌, 임의로 치환된 C2-C10 폴리에틸렌 글리콜렌, 또는 임의로 치환된 C1-C10 헤테로알킬렌, 또는 A1-(B1)f-(C1)g-(B2)h-를 -(B3)i-(C2)j-(B4)k-A2에 결합시키는 화학적 결합임.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 링커가 환식 모이어티이거나 상기 모이어티를 포함하는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 링커가 화학식 IIIa의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    화학식 IIIa,
    식중 o는 0 또는 1이고;
    R7은 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
    X1은 부재, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, O, NCH3, 또는 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌이고;
    Cy는 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 12-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-10 원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    L2는 부재, -SO2-, -NH-, 임의로 치환된 C1-C4 알킬렌, 임의로 치환된 C1-C4 헤테로알킬렌, 또는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌임.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물이 표 2의 화합물이 아닌, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 II-5의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    화학식 II-5,
    식중 Cy1은 임의로 치환된 스피로환식 8 내지 11-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 2환식 7 내지 9-원 헤테로사이클로알킬렌이고;
    식중 W는 비닐 케톤 또는 비닐 술폰을 포함함.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, W가 비닐 케톤을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  15. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, W가 비닐 술폰을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  16. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, W가 이논을 포함하는 가교기인, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  17. 제 16 항에 있어서, 화학식 II-6의 구조를 갖는, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:

    화학식 II-6,
    식중 Q1은 CH2, NRN, 또는 O이고;
    Q2는 CO, NRN, 또는 O이고;
    Z는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이거나;
    식중 Q1-Q2-Z는 임의로 치환된 9 내지 10-원 스피로환식 헤테로사이클로알킬렌임.
  18. 표 1로부터 선택된, 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약학적 조성물.
  20. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
    M-L-P
    화학식 V,
    식중 L은 링커이고;
    P는 1가 유기 모이어티이고;
    M은 화학식 VIa의 구조를 갖는다:

    화학식 VIa,
    식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
    X2는 O, C(R11)2, NR12, S, 또는 SO2이고;
    r은 1 또는 2이고;
    각 t는, 독립적으로, 0, 1, 또는 2이고;
    R11 및 R12는 각각, 독립적으로, 수소, 임의로 치환된 C1-C4 알킬, 임의로 치환된 C2-C4 헤테로알킬, 또는 임의로 치환된 3 내지 5-원 사이클로알킬이고;
    각 R13은, 독립적으로, -CH3이고;
    R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
    R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
    R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성함.
  21. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
    M-L-P
    화학식 V,
    식중 L은 링커이고;
    P는 1가 유기 모이어티이고;
    M은 화학식 VIb의 구조를 가지며:

    화학식 VIb,
    식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
    R14는 플루오로, 수소, 또는 C1-C3 알킬이고;
    u는 0 또는 1이고;
    R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
    R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
    R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성함.
  22. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
    M-L-P
    화학식 V,
    식중 L은 링커이고;
    P는 1가 유기 모이어티이고;
    M은 화학식 VIc의 구조를 가지며:

    화학식 VIc,
    식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
    R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
    R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
    R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성함.
  23. 화학식 V의 구조를 포함하는, 접합체, 또는 이의 염:
    M-L-P
    화학식 V,
    식중 L은 링커이고;
    P는 1가 유기 모이어티이고;
    M은 화학식 VId의 구조를 가지며:

    화학식 VId,
    식중 A는 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬렌, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬렌, 임의로 치환된 6-원 아릴렌, 또는 임의로 치환된 5 내지 10-원 헤테로아릴렌이고;
    R2는 임의로 치환된 C1-C6 알킬이고;
    R3은 임의로 치환된 C1-C6 알킬 또는 임의로 치환된 C1-C3 헤테로알킬이고;
    R4, R5, 및 R6은 각각 독립적으로 수소, 임의로 치환된 C1-C6 알킬, 임의로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 사이클로알킬, 임의로 치환된 3 내지 6-원 헤테로사이클로알킬로부터 선택되거나;
    R4 및 R5는 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성하거나;
    R4 및 R6은 이들이 부착되는 원자와 조합하여 임의로 치환된 3 내지 8-원 사이클로알킬 또는 임의로 치환된 3 내지 8-원 헤테로사이클로알킬을 형성함.
  24. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암의 치료 방법으로서, 상기 대상체에 치료적으로 유효량의 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 제 19 항의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  25. Ras 단백질-관련된 장애의 치료를 필요로 하는 대상체의 치료를 하는 방법으로서, 상기 대상체에 치료적으로 유효량의 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 제 19 항의 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  26. 세포에서 Ras 단백질의 억제 방법으로서, 세포와 유효량의 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 제 19 항의 약학적 조성물과 접촉하는 단계를 포함하는, 방법.
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