KR20230019855A - Kras g12c 단백질의 억제제 및 그의 용도 - Google Patents

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지앤 왕
빙 호우
종양 쉬
펭 첸
후이 위웬
싱취앤 마
주 두
제이 메이
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Abstract

KRAS 단백질의 억제제로서 유용한 신규 화합물, 뿐만 아니라 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 이들 화합물 또는 제약 조성물의 투여에 의한 치료 방법이 제공된다.

Description

KRAS G12C 단백질의 억제제 및 그의 용도
본 개시내용은 일반적으로 KRAS 단백질의 억제제로서 유용한 신규 화합물, 뿐만 아니라 이들 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 이들 화합물 또는 제약 조성물의 투여에 의한 치료 방법에 관한 것이다.
KRAS 종양단백질은 GTPase이고, 종양 세포 성장 및 생존에 관여하는 세포내 신호전달 경로의 필수 매개자이다. 정상 세포에서, KRAS는 불활성 GDP-결합된 상태와 활성 GTP-결합된 상태 사이를 교대하는 분자 스위치로서 기능한다. 이들 상태 사이의 전이는 GTP를 로딩하고 KRAS를 활성화시키는 구아닌 뉴클레오티드-교환 인자 및 GTPase-활성화 단백질에 의해 촉매되어 KRAS를 불활성화시키는 GTP 가수분해에 의해 용이해진다. KRAS에 대한 GTP 결합은 RAF-MEK-ERK (MAPK) 경로를 포함한 신호 전달 경로를 촉발하는 이펙터의 결합을 촉진한다.
KRAS에서의 활성화 돌연변이는 암의 특징이고, GTPase-활성화 단백질의 회합을 방지하여, 이펙터 결합을 안정화시키고 KRAS 신호전달을 증진시킨다. KRAS G12C는 폐 선암종의 대략 13%, 결장직장암의 3% 및 다른 고형 종양의 2%에 존재한다. 따라서, KRAS, 특히 KRAS G12C는 이례적으로 중요한 종양학 표적으로 널리 간주된다.
KRAS G12C를 표적화하기 위한 진전이 이루어졌지만, 이 유전자를 소분자로 표적화하는 것은 여전히 도전과제이다. 따라서, 관련 기술분야에서는 KRAS, 특히 KRAS G12C를 억제하는 개선된 소분자 화합물을 개발할 필요가 있다.
본 개시내용의 개요
본 개시내용은 KRAS G12C 단백질을 조정할 수 있는 화합물 (그의 입체이성질체, 제약상 허용되는 염, 호변이성질체 및 전구약물 포함)을 제공한다. 다양한 질환 또는 상태, 예컨대 암의 치료를 위한 이러한 화합물의 사용 방법이 또한 제공된다.
한 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
여기서
고리 A는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
L1은 결합, O, S 또는 N(Ra)이고;
L2는 결합, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 및 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1은 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환되고;
R2는 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환되고,
R3은 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, -C(O)NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
R4 및 R5, R4 및 R6, R4 및 R7은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
W는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 1개 이상의 Rg로 임의로 치환되고,
L3은 결합, 알킬 또는 -NRd-이고;
B는 K-Ras G12C 돌연변이 단백질의 위치 12에서의 시스테인 잔기와 공유 결합을 형성할 수 있는 친전자성 모이어티이고;
Ra는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
각각의 Rb는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, 아실, -NRdRe, 카르바모일, 카르복실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕실, 알콕실알킬, 시클로알킬알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rc는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRdRe, -C(O)ORa, -C(O)N(Rd)(Re), 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 알콕실, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rd 및 Re는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴 및 헤테로아릴은 시아노, 할로겐, 히드록시 또는 아미노로 임의로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRcRd, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rg는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 카르바모일, 카르복시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 및 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 히드록시, 카르복시, 카르바모일, 할로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00002
Figure pct00003
여기서
J1은 부재하거나, CH(R4), NR4, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J2는 부재하거나, CR5, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J3은 부재하거나, CH(R6), NR6, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J4는 부재하거나, CR7, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J5는 부재하거나, CH(R8), NR8, SO2 또는 P(O)CH3이고;
R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
R2, 및 R4, R5, R6, R7 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R3, 및 R4, R5, R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R4, 및 R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R6 및 R8은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은
(a) 암이 KRAS G12C 돌연변이와 연관됨을 결정하고;
(b) 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 투여하는 것
을 포함한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 종양 전이를 억제하는 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물과 반응시키는 것을 포함하는, KRAS G12C 돌연변이 단백질의 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 반응시켜 표지된 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 생성하는 것을 포함하는, 표지된 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 제조하는 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이를 억제하기 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 암을 치료하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이를 억제하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 제공한다.
본 개시내용의 상세한 설명
이제 본 개시내용의 특정 실시양태를 상세하게 언급할 것이며, 그의 예는 첨부된 구조 및 화학식으로 예시된다. 본 개시내용이 열거된 실시양태와 함께 기재될 것이지만, 이들은 본 개시내용을 이들 실시양태로 제한하는 것으로 의도되지 않음을 이해할 것이다. 반대로, 본 개시내용은 청구범위에 의해 정의된 바와 같은 본 개시내용의 범주 내에 포함될 수 있는 모든 대안, 변형 및 등가물을 포괄하는 것으로 의도된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용의 실시에 사용될 수 있는, 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 다수의 방법 및 물질을 인식할 것이다. 본 개시내용은 어떠한 방식으로도 기재된 방법 및 물질로 제한되지 않는다. 정의된 용어, 용어 용법, 기재된 기술 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 포함된 참고문헌 및 유사한 자료 중 하나 이상이 본 출원과 상이하거나 모순되는 경우에, 본 개시내용이 우선한다. 본 개시내용에 인용된 모든 참고문헌, 특허, 특허 출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
명확성을 위해, 별개의 실시양태의 맥락에서 기재된 본 개시내용의 특정 특색은 또한 단일 실시양태와 조합으로 제공될 수 있음이 인정된다. 반대로, 간결성을 위해 단일 실시양태의 맥락에서 기재된 본 개시내용의 다양한 특색은 또한 개별적으로 또는 임의의 적합한 하위-조합으로 제공될 수 있다. 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한, 그의 복수 형태를 포함한다는 것을 주목해야 한다. 따라서, 예를 들어 "화합물"에 대한 언급은 복수의 화합물을 포함한다.
정의
구체적 관능기 및 화학 용어의 정의는 하기에 보다 상세하게 기재된다. 본 개시내용의 목적상, 화학 원소는 문헌 [Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.]의 표지 안쪽의 원소 주기율표, CAS 버전에 따라 확인되고, 구체적 관능기는 일반적으로 본원에 기재된 바와 같이 정의된다. 추가로, 유기 화학의 일반적 원리, 뿐만 아니라 구체적 관능성 모이어티 및 반응성은 문헌 [Organic Chemistry, Thomas Sorrell, 2nd Edition, University Science Books, Sausalito, 2006; Smith and March March's Advanced Organic Chemistry, 6th Edition, John Wiley & Sons, Inc., New York, 2007; Larock, Comprehensive Organic Transformations, 3rd Edition, VCH Publishers, Inc., New York, 2018; Carruthers, Some Modern Methods of Organic Synthesis, 4th Edition, Cambridge University Press, Cambridge, 2004]에 기재되어 있으며; 이들 각각의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
본 개시내용의 다양한 위치에서, 연결 치환기가 기재된다. 구체적으로, 각각의 연결 치환기는 연결 치환기의 정방향 및 역방향 형태 둘 다를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, -NR(CR'R")-는 -NR(CR'R")- 및 -(CR'R")NR- 둘 다를 포함한다. 구조가 명백하게 연결기를 필요로 하는 경우에, 그 기에 대해 열거된 마쿠쉬 가변기는 연결기인 것으로 이해된다. 예를 들어, 구조가 연결기를 필요로 하고 그 가변기에 대한 마쿠쉬 군 정의가 "알킬"을 열거하는 경우, "알킬"은 연결 알킬렌 기를 나타내는 것으로 이해된다.
치환기에 대한 결합이 고리 내의 2개의 원자를 연결하는 결합을 가로지르는 것으로 제시된 경우에, 이러한 치환기는 고리 내의 임의의 원자에 결합될 수 있다. 치환기가 주어진 화학식의 화합물의 나머지에 결합되는 원자를 나타내지 않으면서 이러한 치환기가 열거된 경우에, 이러한 치환기는 이러한 화학식 내의 임의의 원자를 통해 결합될 수 있다. 치환기 및/또는 가변기의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용가능하다.
임의의 가변기 (예를 들어, Ri)가 화합물에 대한 임의의 구성성분 또는 화학식에서 1회 초과로 발생하는 경우에, 각 경우에서의 그의 정의는 모든 다른 경우에서의 그의 정의와 독립적이다. 따라서, 예를 들어 기가 0-2개의 Ri 모이어티로 치환된 것으로 제시된 경우에, 기는 최대 2개의 Ri 모이어티로 임의로 치환될 수 있고, 각 경우에서의 Ri는 Ri의 정의로부터 독립적으로 선택된다. 또한, 치환기 및/또는 가변기의 조합이 허용되지만, 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용된다.
본원에 사용된 용어 "Ci-j"는 탄소 원자 수의 범위를 나타내며, 여기서 i 및 j는 정수이고, 탄소 원자 수의 범위는 종점 (즉 i 및 j) 및 그 사이의 각각의 정수 점을 포함하며, 여기서 j는 i보다 크다. 예를 들어, C1-6은 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자 및 6개의 탄소 원자를 포함한, 1 내지 6개의 탄소 원자의 범위를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 용어 "C1-12"는 1 내지 12개, 특히 1 내지 10개, 특히 1 내지 8개, 특히 1 내지 6개, 특히 1 내지 5개, 특히 1 내지 4개, 특히 1 내지 3개 또는 특히 1 내지 2개의 탄소 원자를 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "아실"은 -C(=O)-R을 지칭하며, 여기서 R은 치환기, 예컨대 수소, 알킬, 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로시클릴이고, 여기서 알킬, 시클로알킬, 아릴 및 헤테로시클릴은 본원에 정의된 바와 같다.
본원에 사용된 용어 "알킬"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 독립적으로 하기 기재된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있는 포화 선형 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 용어 "Ci-j 알킬"은 i 내지 j개의 탄소 원자를 갖는 알킬을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 9개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알킬 기는 1 내지 8개의 탄소 원자, 1 내지 7개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 1 내지 5개의 탄소 원자, 1 내지 4개의 탄소 원자, 1 내지 3개의 탄소 원자 또는 1 내지 2개의 탄소 원자를 함유한다. "C1-10 알킬"의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐 및 데실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "C1-6알킬"의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, i-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸, 3,3-디메틸-2-부틸 등이다.
본원에 사용된 용어 "알케닐"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 독립적으로 본원에 기재된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있는, 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 선형 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 지칭하고, "시스" 및 "트랜스" 배향, 또는 대안적으로 "E" 및 "Z" 배향을 갖는 라디칼을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 12개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 11개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 11개의 탄소 원자, 2 내지 10개의 탄소 원자, 2 내지 9개의 탄소 원자, 2 내지 8개의 탄소 원자, 2 내지 7개의 탄소 원자, 2 내지 6개의 탄소 원자, 2 내지 5개의 탄소 원자, 2 내지 4개의 탄소 원자, 2 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고, 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2개의 탄소 원자를 함유한다. 알케닐 기의 예는 에틸레닐 (또는 비닐), 프로페닐 (알릴), 부테닐, 펜테닐, 1-메틸-2 부텐-1-일, 5-헥세닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "알키닐"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 독립적으로 본원에 기재된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있는, 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 선형 또는 분지형 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 알케닐 기는 2 내지 12개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 11개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2 내지 11개의 탄소 원자, 2 내지 10개의 탄소 원자, 2 내지 9개의 탄소 원자, 2 내지 8개의 탄소 원자, 2 내지 7개의 탄소 원자, 2 내지 6개의 탄소 원자, 2 내지 5개의 탄소 원자, 2 내지 4개의 탄소 원자, 2 내지 3개의 탄소 원자를 함유하고, 일부 실시양태에서, 알키닐 기는 2개의 탄소 원자를 함유한다. 알키닐 기의 예는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "알콕실"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 산소 원자를 통해 모 분자에 부착된 상기 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 용어 "Ci-j알콕시"는 알콕시 기의 알킬 모이어티가 i 내지 j개의 탄소 원자를 갖는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 알콕시 기는 1 내지 10개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알콕시 기는 1 내지 9개의 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 알콕시 기는 1 내지 8개의 탄소 원자, 1 내지 7개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 1 내지 5개의 탄소 원자, 1 내지 4개의 탄소 원자, 1 내지 3개의 탄소 원자 또는 1 내지 2개의 탄소 원자를 함유한다. "C1-6알콕실"의 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시 (예를 들어 n-프로폭시 및 이소프로폭시), t-부톡시, 네오펜톡시, n-헥속시 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "알콕실알킬"은 화학식 -R"OR'의 라디칼을 지칭하며, 여기서 R' 및 R"는 독립적으로 상기 정의된 바와 같은 알킬이다.
본원에 사용된 용어 "아미노"는 -NH2 기를 지칭한다. 아미노 기는 또한 1개 이상의 기, 예컨대 알킬, 아릴, 카르보닐 또는 다른 아미노 기로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아릴"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 총 5 내지 20개의 고리원을 갖는 모노시클릭 및 폴리시클릭 고리계를 지칭하며, 여기서 계 내 적어도 1개의 고리는 방향족이고, 계 내 각각의 고리는 3 내지 12개의 고리원을 함유한다. "아릴"의 예는 1개 이상의 치환기를 보유할 수 있는 페닐, 비페닐, 나프틸, 안트라실 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본원에 사용된 용어 "아릴"의 범주 내에는 방향족 고리가 1개 이상의 추가의 고리에 융합된 기가 포함된다. 폴리시클릭 고리계의 경우에, 고리 중 1개만이 방향족일 필요가 있지만 (예를 들어, 2,3-디히드로인돌), 모든 고리는 방향족일 수 있다 (예를 들어, 퀴놀린). 제2 고리는 또한 융합 또는 가교될 수 있다. 폴리시클릭 아릴의 예는 벤조푸라닐, 인다닐, 프탈리미딜, 나프티미딜, 페난트리디닐 또는 테트라히드로나프틸 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 아릴 기는 1개 이상의 고리 위치에서 상기 기재된 바와 같은 치환기로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "카르바모일"은 -C(O)NH2를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르복시"는 -COOH를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 1가 비-방향족, 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 및 폴리시클릭 고리계를 지칭하며, 여기서 모든 고리 원자는 탄소이고, 이는 적어도 3개의 고리 형성 탄소 원자를 함유한다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬은 3 내지 12개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 10개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 9개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 8개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 7개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 6개의 고리 형성 탄소 원자, 3 내지 5개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 12개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 10개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 9개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 8개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 7개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 6개의 고리 형성 탄소 원자, 4 내지 5개의 고리 형성 탄소 원자를 함유할 수 있다. 시클로알킬 기는 포화 또는 부분 불포화일 수 있다. 시클로알킬 기는 치환될 수 있다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 포화 시클릭 알킬 기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 그의 고리계에 적어도 1개의 이중 결합 또는 삼중 결합을 함유하는 부분 불포화 시클릭 알킬 기일 수 있다. 일부 실시양태에서, 시클로알킬 기는 모노시클릭 또는 폴리시클릭일 수 있다. 모노시클릭 시클로알킬 기의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 1-시클로펜트-1-에닐, 1-시클로펜트-2-에닐, 1-시클로펜트-3-에닐, 시클로헥실, 1-시클로헥스-1-에닐, 1-시클로헥스-2-에닐, 1-시클로헥스-3-에닐, 시클로헥사디에닐, 시클로헵틸, 시클로옥틸, 시클로노닐, 시클로데실, 시클로운데실 및 시클로도데실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 폴리시클릭 시클로알킬 기의 예는 아다만틸, 노르보르닐, 플루오레닐, 스피로-펜타디에닐, 스피로[3.6]-데카닐, 비시클로[1,1,1]펜테닐, 비시클로[2,2,1]헵테닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬알킬"은 화학식 -R'R"의 라디칼을 지칭하며, 여기서 R'는 상기 정의된 바와 같은 알킬이고, R"는 상기 정의된 바와 같은 시클로알킬이다.
본원에 사용된 용어 "시아노"는 -CN을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로겐"은 플루오린 (또는 플루오로), 염소 (또는 클로로), 브로민 (또는 브로모) 및 아이오딘 (또는 아이오도)으로부터 선택된 원자를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "할로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로겐에 의해 치환된 상기 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 할로알킬의 예는 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리클로로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1,2-디플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 1,2-디브로모에틸 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "헤테로원자"는 질소, 산소 또는 황을 지칭하고, 질소 또는 황의 임의의 산화된 형태, 및 염기성 질소의 임의의 4급화된 형태 (N-옥시드 포함)를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은, 또 다른 용어의 일부로서든 또는 독립적으로 사용되든, 탄소 원자 이외에도 1개 이상의 헤테로원자를 갖는 아릴 기를 지칭한다. 헤테로아릴 기는 모노시클릭일 수 있다. 모노시클릭 헤테로아릴의 예는 티에닐, 푸라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 옥사디아졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 티아디아졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 인돌리지닐, 퓨리닐, 나프티리디닐, 벤조푸라닐 및 프테리디닐을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 헤테로아릴 기는 또한 헤테로방향족 고리가 1개 이상의 아릴, 시클로지방족 또는 헤테로시클릴 고리에 융합된 폴리시클릭 기를 포함하며, 여기서 라디칼 또는 부착 지점은 헤테로방향족 고리 상에 있다. 폴리시클릭 헤테로아릴의 예는 인돌릴, 이소인돌릴, 벤조티에닐, 벤조푸라닐, 벤조[1,3]디옥솔릴, 디벤조푸라닐, 인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤즈티아졸릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 디히드로퀴놀리닐, 디히드로이소퀴놀리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 4H-퀴놀리지닐, 카르바졸릴, 아크리디닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "헤테로시클릴"은 1개 이상의 고리 원자가 산소, 황, 질소, 인 등으로부터 독립적으로 선택된 헤테로원자이고, 나머지 고리 원자가 탄소이며, 여기서 1개 이상의 고리 원자가 독립적으로 1개 이상의 치환기로 임의로 치환될 수 있는 것인 포화 또는 부분 불포화 카르보시클릴 기를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴은 포화 헤테로시클릴이다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴은 그의 고리계에 1개 이상의 이중 결합을 갖는 부분 불포화 헤테로시클릴이다. 일부 실시양태에서, 헤테로시클릴은 탄소, 질소 또는 황의 임의의 산화된 형태, 및 염기성 질소의 임의의 4급화된 형태를 함유할 수 있다. "헤테로시클릴"은 또한 헤테로시클릴 라디칼이 포화, 부분 불포화 또는 완전 불포화 (즉, 방향족) 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리와 융합된 라디칼을 포함한다. 헤테로시클릴 라디칼은 가능한 경우에 탄소 연결되거나 질소 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클은 탄소 연결된다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클은 질소 연결된다. 예를 들어, 피롤로부터 유래된 기는 피롤-1-일 (질소 연결됨) 또는 피롤-3-일 (탄소 연결됨)일 수 있다. 추가로, 이미다졸로부터 유도된 기는 이미다졸-1-일 (질소 연결됨) 또는 이미다졸-3-일 (탄소 연결됨)일 수 있다.
일부 실시양태에서, 용어 "3- 내지 12-원 헤테로시클릴"은 질소, 산소 또는 황으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3- 내지 12-원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 또는 폴리시클릭 헤테로시클릭 고리계를 지칭한다. 융합된, 스피로 및 가교된 고리계는 또한 이 정의의 범주 내에 포함된다. 모노시클릭 헤테로시클릴의 예는 옥세타닐, 1,1-디옥소티에타닐피롤리딜, 테트라히드로푸릴, 테트라히드로티에닐, 피롤릴, 푸라닐, 티에닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 피페리딜, 피페라지닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 트리아지닐, 피리도닐, 피리미도닐, 피라지노닐, 피리미도닐, 피리다조닐, 피롤리디닐, 트리아지노닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 융합된 헤테로시클릴의 예는 페닐 융합된 고리 또는 피리디닐 융합된 고리, 예컨대 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 테트라히드로퀴놀리닐, 테트라히드로이소퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리지닐, 퀴나졸리닐, 아자인돌리지닐, 프테리디닐, 크로메닐, 이소크로메닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 인돌리지닐, 인다졸릴, 퓨리닐, 벤조푸라닐, 이소벤조푸라닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조티에닐, 벤조티아졸릴, 카르바졸릴, 페나지닐, 페노티아지닐, 페난트리디닐, 이미다조[1,2-a]피리디닐, [1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피리디닐, [1,2,3]트리아졸로[4,3-a]피리디닐 기 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 스피로 헤테로시클릴의 예는 스피로피라닐, 스피로옥사지닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 가교된 헤테로시클릴의 예는 모르파닐, 헥사메틸렌테트라미닐, 3-아자-비시클로[3.1.0]헥산, 8-아자-비시클로[3.2.1]옥탄, 1-아자-비시클로[2.2.2]옥탄, 1,4-디아자비시클로[2.2.2]옥탄 (DABCO) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "히드록실"은 -OH를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "옥소"는 =O 치환기를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "부분 불포화"는 적어도 1개의 이중 또는 삼중 결합을 포함하는 라디칼을 지칭한다. 용어 "부분 불포화"는 불포화의 다중 부위를 갖는 고리를 포괄하는 것으로 의도되지만, 방향족 (즉, 완전 불포화) 모이어티를 포괄하는 것으로 의도되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "치환된"은, 용어 "임의로"가 앞에 있든 없든, 지정된 모이어티의 1개 이상의 수소가 적합한 치환기로 대체된 것을 의미한다. "치환" 또는 "~로 치환된"은 이러한 치환이 치환된 원자의 허용되는 원자가에 따르고, 치환이 예를 들어 재배열, 고리화, 제거 등에 의한 것과 같은 변환을 자발적으로 겪지 않는 안정한 또는 화학적으로 실현가능한 화합물을 생성한다는 내포적 단서를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 달리 나타내지 않는 한, "임의로 치환된" 기는 기의 각각의 치환가능한 위치에서 적합한 치환기를 가질 수 있고, 임의의 주어진 구조에서 1개 초과의 위치가 명시된 기로부터 선택된 1개 초과의 치환기로 치환될 수 있는 경우에, 치환기는 모든 위치에서 동일하거나 상이할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 적절한 경우에 치환기 자체가 치환될 수 있다는 것을 이해할 것이다. "비치환된"으로서 구체적으로 언급되지 않는 한, 본원에서 화학적 모이어티에 대한 언급은 치환된 변이체를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, "아릴" 기 또는 모이어티에 대한 언급은 치환 및 비치환된 변이체 둘 다를 함축적으로 포함한다.
화합물
본 개시내용은 화학식 (I)의 신규 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염, 화합물을 제조하는 합성 방법, 그를 함유하는 제약 조성물 및 개시된 화합물의 다양한 용도를 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 하기 화학식 (I)를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
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여기서
고리 A는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
L1은 결합, O, S 또는 N(Ra)이고;
L2는 결합, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 및 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R1은 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환되고;
R2는 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환되고,
R3은 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, -C(O)NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
R4 및 R5, R4 및 R6, R4 및 R7은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
W는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 1개 이상의 Rg로 임의로 치환되고,
L3은 결합, 알킬 또는 -NRd-이고;
B는 K-Ras G12C 돌연변이 단백질의 위치 12에서의 시스테인 잔기와 공유 결합을 형성할 수 있는 친전자성 모이어티이고;
Ra는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
각각의 Rb는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, 아실, -NRdRe, 카르바모일, 카르복실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕실, 알콕실알킬, 시클로알킬알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rc는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRdRe, -C(O)ORa, -C(O)N(Rd)(Re), 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 알콕실, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rd 및 Re는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴 및 헤테로아릴은 시아노, 할로겐, 히드록시 또는 아미노로 임의로 치환되고;
각각의 Rf는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRcRd, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 Rg는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 카르바모일, 카르복시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 및 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 히드록시, 카르복시, 카르바모일, 할로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이다.
일부 실시양태에서, 고리 A는 헤테로아릴이다.
일부 실시양태에서, L1은 O이다.
일부 실시양태에서, L2는 결합이다.
일부 실시양태에서, L2는 알킬이다.
일부 실시양태에서, L2는 메틸, 에틸 또는 프로필이다.
일부 실시양태에서, R1은 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rb는 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, 아실, -NRdRe, 알킬, 알콕실, 알콕실알킬 및 시클로알킬알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R1은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고:
Figure pct00005
이들 각각은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 각각의 Rb는 옥소, 할로겐, 아실, -NRdRe, 알킬, 알콕실, 알콕실알킬 및 시클로알킬알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rb는 할로겐 또는 알킬이다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rb는 플루오로, 클로로 또는 메틸이다.
일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00006
이다.
일부 실시양태에서, -L1-L2-R1은
Figure pct00007
이다.
일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00008
이다.
일부 실시양태에서, -L1-L2-R1은
Figure pct00009
이다.
일부 실시양태에서, R2는 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 아릴이다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐, 시아노, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아릴이고:
Figure pct00010
이들 각각은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 플루오로, 클로로, 히드록실, 메틸, 에틸, 2-메틸프로페닐, 메톡실 및 시클로프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Figure pct00011
일부 실시양태에서, R2는 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 헤테로아릴이다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴이고:
Figure pct00012
이들 각각은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 할로겐 또는 알킬이다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rc는 플루오로, 클로로, 메틸, 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R2는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Figure pct00013
일부 실시양태에서, R3은 옥소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 알킬 및 아릴은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된다. 특정 실시양태에서, Rc는 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRcRd, 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, R3은 옥소, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 2개의 R3은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 시아노, 할로겐, 히드록시, 및 -NRcRd로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬을 형성한다.
일부 실시양태에서, W는 1개 이상의 Rg로 임의로 치환된 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이다. 특정 실시양태에서, Rg는 시아노, 할로겐, 및 히드록실로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된 알킬이다.
일부 실시양태에서, W는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로시클릴이고:
Figure pct00014
이들 각각은 1개 이상의 Rg로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 각각의 Rg는 시아노로 임의로 치환된 알킬이다. 특정 실시양태에서, 각각의 Rg는 시아노로 임의로 치환된 메틸이다.
일부 실시양태에서, W는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Figure pct00015
Figure pct00016
일부 실시양태에서, L3은 결합 또는 -NRd-이다.
일부 실시양태에서, B는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다.
Figure pct00017
Figure pct00018
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00019
여기서
J1은 부재하거나, CH(R4), NR4, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J2는 부재하거나, CR5, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J3은 부재하거나, CH(R6), NR6, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J4는 부재하거나, CR7, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
J5는 부재하거나, CH(R8), NR8, SO2 또는 P(O)CH3이고;
R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
R2, 및 R4, R5, R6, R7 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R3, 및 R4, R5, R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R4, 및 R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
R6 및 R8은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00020
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00021
여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00022
Figure pct00023
여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00024
Figure pct00025
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00026
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00027
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00028
여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00029
여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00030
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00031
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00032
Figure pct00033
일부 실시양태에서, L2는 알킬이다.
일부 실시양태에서, R1은
Figure pct00034
이다.
일부 실시양태에서, R3은 메틸, 에틸 또는 트리플루오로메틸로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
본원에 제공된 화합물은 일반적 화학식 및 구체적 화합물 둘 다를 참조하여 기재된다. 또한, 본 개시내용의 화합물은 전구약물, 연질 약물, 활성 대사 유도체 (활성 대사물) 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 상이한 형태 또는 유도체로 존재할 수 있으며, 이들 모두는 본 개시내용의 범주 내에 있다.
본원에 사용된 용어 "전구약물"은 생리학적 조건 하에 대사되는 경우에 또는 가용매분해에 의해 전환되는 경우에 목적하는 활성 화합물을 생성하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 지칭한다. 전구약물은 비제한적으로 활성 화합물의 에스테르, 아미드, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레이드, 용매화물 또는 수화물을 포함한다. 전형적으로, 전구약물은 불활성이거나, 또는 활성 화합물보다 덜 활성이지만, 하나 이상의 유리한 취급, 투여, 및/또는 대사 특성을 제공할 수 있다. 예를 들어, 일부 전구약물은 활성 화합물의 에스테르이고; 대사용해(metabolysis) 동안, 에스테르 기는 절단되어 활성 약물을 생성한다. 또한, 일부 전구약물은 효소적으로 활성화되어, 활성 화합물, 또는 추가의 화학 반응시 활성 화합물을 생성하는 화합물을 생성한다. 전구약물은 단일 단계에서 전구약물 형태로부터 활성 형태로 진행될 수 있거나, 또는 그 자체가 활성을 가질 수 있거나 불활성일 수 있는 1종 이상의 중간체 형태를 가질 수 있다. 전구약물의 제조 및 용도는 문헌 [T. Higuchi and V. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, in Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; in Prodrugs: Challenges and Rewards, ed. V. Stella, R. Borchardt, M. Hageman, R. Oliyai, H. Maag, J. Tilley, Springer-Verlag New York, 2007]에 논의되고, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 사용된 용어 "연질 약물"은 약리학적 효과를 발휘하지만, 활성이 제한된 시간을 갖도록 불활성 대사물 분해물로 분해되는 화합물을 지칭한다. 예를 들어, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 ["Soft drugs: Principles and methods for the design of safe drugs", Nicholas Bodor, Medicinal Research Reviews, Vol. 4, No. 4, 449-469, 1984]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "대사물", 예를 들어 활성 대사물은 상기 기재된 바와 같은 전구약물과 중첩된다. 따라서, 이러한 대사물은 약리학적 활성 화합물, 또는 대상체의 체내에서 대사 과정으로부터 생성되는 유도체인 약리학적 활성 화합물로 추가로 대사되는 화합물이다. 예를 들어, 이러한 대사물은 투여된 화합물 또는 염 또는 전구약물의 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 탈아미드화, 에스테르화, 탈에스테르화, 효소적 절단 등으로부터 생성될 수 있다. 이들 중, 활성 대사물은 이러한 약리학적 활성 유도체 화합물이다. 전구약물의 경우, 전구약물 화합물은 일반적으로 불활성이거나 또는 대사 산물보다 더 낮은 활성을 갖는다. 활성 대사물의 경우에, 모 화합물은 활성 화합물일 수 있거나 불활성 전구약물일 수 있다.
전구약물 및 활성 대사물은 관련 기술분야에 공지된 상용 기술을 사용하여 확인될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Bertolini et al., 1997, J Med Chem 40:2011-2016; Shan et al., J Pharm Sci 86:756-757; Bagshawe, 1995, DrugDev Res 34:220-230; Wermuth, 상기 문헌]을 참조한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은 물질 또는 조성물이 제제를 구성하는 다른 성분 및/또는 그로 치료되는 대상체와 화학적으로 및/또는 독성학적으로 상용성인 것을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은, 달리 나타내지 않는 한, 명시된 화합물의 유리 산 및 염기의 생물학적 유효성을 보유하고 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 염을 포함한다. 고려되는 제약상 허용되는 염 형태는 모노, 비스, 트리스, 테트라키스 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 염은 이들이 투여되는 양 및 농도에서 비-독성이다. 이러한 염의 제제는 그의 생리학적 효과를 발휘하는 것을 방해하지 않으면서 화합물의 물리적 특징을 변경시킴으로써 약리학적 용도를 용이하게 할 수 있다. 물리적 특성에서의 유용한 변경은 융점을 저하시켜 경점막 투여를 용이하게 하고, 용해도를 증가시켜 보다 높은 농도의 약물 투여를 용이하게 하는 것을 포함한다.
제약상 허용되는 염은 산 부가염, 예컨대 술페이트, 클로라이드, 히드로클로라이드, 푸마레이트, 말레에이트, 포스페이트, 술파메이트, 아세테이트, 시트레이트, 락테이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트, 벤젠술포네이트, p-톨루엔술포네이트, 시클로헥실술파메이트 및 퀴네이트를 함유하는 것을 포함한다. 제약상 허용되는 염은 산, 예컨대 염산, 말레산, 황산, 인산, 술팜산, 아세트산, 시트르산, 락트산, 타르타르산, 말론산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클로헥실술팜산, 푸마르산 및 퀸산으로부터 수득될 수 있다.
제약상 허용되는 염은 또한, 산성 관능기, 예컨대 카르복실산 또는 페놀이 존재하는 경우에, 염기성 부가염, 예컨대 벤자틴, 클로로프로카인, 콜린, 디에탄올아민, 에탄올아민, t-부틸아민, 에틸렌디아민, 메글루민, 프로카인, 알루미늄, 칼슘, 리튬, 마그네슘, 칼륨, 나트륨, 암모늄, 알킬아민 및 아연을 함유하는 것을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 19thed., Mack Publishing Co., Easton, PA, Vol. 2, p. 1457, 1995; "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth, Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002]을 참조한다. 이러한 염은 적절한 상응하는 염기를 사용하여 제조될 수 있다.
제약상 허용되는 염은 표준 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 화합물의 유리-염기 형태를 적합한 용매, 예컨대 적절한 산을 함유하는 수성 또는 수성-알콜 용액 중에 용해시킨 다음, 용액을 증발시킴으로써 단리할 수 있다. 따라서, 특정한 화합물이 염기인 경우에, 목적하는 제약상 허용되는 염은 관련 기술분야에서 이용가능한 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 염기를 무기 산, 예컨대 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등으로, 또는 유기 산, 예컨대 아세트산, 말레산, 숙신산, 만델산, 푸마르산, 말론산, 피루브산, 옥살산, 글리콜산, 살리실산, 피라노시딜산, 예컨대 글루쿠론산 또는 갈락투론산, 알파-히드록시산, 예컨대 시트르산 또는 타르타르산, 아미노산, 예컨대 아스파르트산 또는 글루탐산, 방향족 산, 예컨대 벤조산 또는 신남산, 술폰산, 예컨대 p-톨루엔술폰산 또는 에탄술폰산 등으로 처리함으로써 제조될 수 있다.
유사하게, 특정한 화합물이 산인 경우에, 목적하는 제약상 허용되는 염은 임의의 적합한 방법, 예를 들어 유리 산을 무기 또는 유기 염기, 예컨대 아민 (1급, 2급 또는 3급), 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 등으로 처리함으로써 제조될 수 있다. 적합한 염의 예시적인 예는 아미노산, 예컨대 L-글리신, L-리신 및 L-아르기닌, 암모니아, 1급, 2급 및 3급 아민, 및 시클릭 아민, 예컨대 히드록시에틸피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린 또는 피페라진으로부터 유래된 유기 염, 및 나트륨, 칼슘, 칼륨, 마그네슘, 망가니즈, 철, 구리, 아연, 알루미늄 및 리튬으로부터 유래된 무기 염을 포함한다.
또한, 본 개시내용의 화합물은 비용매화 형태, 용매화 형태 (예를 들어, 수화 형태) 및 고체 형태 (예를 들어, 결정 또는 다형체 형태)로 존재할 수 있고, 본 개시내용은 모든 이러한 형태를 포괄하는 것으로 의도되는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "용매화물" 또는 "용매화 형태"는 화학량론적 또는 비-화학량론적 양의 용매를 함유하는 용매 부가 형태를 지칭한다. 일부 화합물은 결정질 고체 상태의 용매 분자의 고정 몰비를 트랩하여 용매화물을 형성하는 경향을 갖는다. 용매가 물인 경우에 형성된 용매화물은 수화물이고; 용매가 알콜인 경우에, 형성된 용매화물은 알콜레이트이다. 수화물은 1개 이상의 물 분자와, 물이 H2O로서 그의 분자 상태를 유지하는 물질의 1개의 분자의 조합에 의해 형성된다. 용매화물을 형성하는 용매의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, DMSO, 에틸 아세테이트, 아세트산 및 에탄올아민을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "결정 형태", "결정질 형태", "다형체 형태" 및 "다형체"는 상호교환가능하게 사용될 수 있고, 화합물 (또는 그의 염 또는 용매화물)이 상이한 결정 패킹 배열로 결정화될 수 있는 결정 구조를 의미하며, 이들 모두는 동일한 원소 조성을 갖는다. 상이한 결정 형태는 통상적으로 상이한 X선 회절 패턴, 적외선 스펙트럼, 융점, 밀도 경도, 결정 형상, 광학적 및 전기적 특성, 안정성 및 용해도를 갖는다. 재결정화 용매, 결정화 속도, 저장 온도 및 다른 인자는 하나의 결정 형태가 우세하도록 할 수 있다. 화합물의 결정 다형체는 상이한 조건 하의 결정화에 의해 제조될 수 있다.
본 개시내용은 또한 화합물 내의 원자의 모든 동위원소를 포함하는 것으로 의도된다. 원자의 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함한다. 예를 들어, 달리 명시되지 않는 한, 본 개시내용의 화합물에서 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오린, 염소, 브로마이드 또는 아이오딘은 또한 그의 동위원소, 예컨대 비제한적으로 1H, 2H, 3H, 11C, 12C, 13C, 14C, 14N, 15N, 16O, 17O, 18O, 31P, 32P, 32S, 33S, 34S, 36S, 17F, 18F, 19F, 35Cl, 37Cl, 79Br, 81Br, 124I, 127I 및 131I를 포함하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, 수소는 경수소, 중수소 및 삼중수소를 포함한다. 일부 실시양태에서, 탄소는 12C 및 13C를 포함한다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용의 화합물이 상이한 호변이성질체 형태로 존재할 수 있고, 모든 이러한 형태가 본 개시내용의 범주 내에 포괄된다는 것을 인식할 것이다. 용어 "호변이성질체" 또는 "호변이성질체 형태"는 낮은 에너지 장벽을 통해 상호전환가능한 상이한 에너지의 구조 이성질체를 지칭한다. 이성질체 형태의 존재 및 농도는 화합물이 발견되는 환경에 따라 달라지며, 예를 들어 화합물이 고체인지 또는 유기 또는 수성 용액인지에 따라 상이할 수 있다. 예로서, 양성자 호변이성질체 (양성자성 호변이성질체로도 공지됨)는 양성자의 이동을 통한 상호전환, 예컨대 케토-엔올, 아미드-이미드산, 락탐-락팀, 이민-엔아민 이성질화, 및 양성자가 헤테로시클릭계의 2개 이상의 위치를 점유할 수 있는 환상 형태를 포함한다. 원자가 호변이성질체는 결합 전자 중 일부의 재구성에 의한 상호전환을 포함한다. 호변이성질체는 평형 상태일 수 있거나 또는 적절한 치환에 의해 한 형태로 입체적으로 고정될 수 있다. 하나의 특정한 호변이성질체 형태로서 명칭 또는 구조에 의해 확인된 본 개시내용의 화합물은 달리 명시되지 않는 한 다른 호변이성질체 형태를 포함하는 것으로 의도된다.
화합물의 합성
본원에 제공된 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)의 합성은 실시예의 합성 반응식에 예시되어 있다. 본원에 제공된 화합물은 임의의 공지된 유기 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있고, 임의의 수많은 가능한 합성 경로에 따라 합성될 수 있으며, 따라서 이들 반응식은 단지 예시적이며, 본원에 제공된 화합물을 제조하는 데 사용될 수 있는 다른 가능한 방법을 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 추가로, 반응식에서의 단계는 보다 우수한 예시를 위한 것이고, 적절하게 변경될 수 있다. 실시예의 화합물의 실시양태는 연구 및 잠재적으로 규제 기관에 제출하기 위한 목적으로 합성되었다.
본 개시내용의 화합물을 제조하기 위한 반응은 유기 합성 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 선택될 수 있는 적합한 용매 중에서 수행될 수 있다. 적합한 용매는 반응을 수행하는 온도, 예를 들어 용매의 동결 온도 내지 용매의 비등 온도의 범위일 수 있는 온도에서, 출발 물질 (반응물), 중간체, 또는 생성물과 실질적으로 비-반응성일 수 있다. 주어진 반응은 1종의 용매 또는 1종 초과의 용매의 혼합물 중에서 수행될 수 있다. 특정한 반응 단계에 따라, 특정한 반응 단계에 적합한 용매는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
본 개시내용의 화합물의 제조는 다양한 화학적 기의 보호 및 탈보호를 포함할 수 있다. 보호 및 탈보호에 대한 필요성, 및 적절한 보호기의 선택은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 보호기의 화학은, 예를 들어 문헌 [T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999), P. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, 2003, 및 Peter G.M. Wuts, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, 5th Edition, Wiley, 2014]에서 찾아볼 수 있으며, 이들 모두는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
반응은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법에 따라 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 생성물 형성은 분광학적 수단, 예컨대 핵 자기 공명 분광분석법 (예를 들어 1H 또는 13C), 적외선 분광분석법, 분광광도측정법 (예를 들어 UV-가시광선), 질량 분광측정법에 의해, 또는 크로마토그래피 방법, 예컨대 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 액체 크로마토그래피-질량 분광분석법 (LCMS), 또는 박층 크로마토그래피 (TLC)에 의해 모니터링될 수 있다. 화합물은 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC) ("Preparative LC-MS Purification: Improved Compound Specific Method Optimization" Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs J. Combi. Chem. 2004, 6(6), 874-883, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨), 및 정상 실리카 크로마토그래피를 포함한 다양한 방법에 의해 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 정제될 수 있다.
실시예의 화합물의 구조는 핵 자기 공명 (NMR)에 의해 특징화된다. NMR 스펙트럼은 각각 1H에 대해 400 MHz 및 13C에 대해 101 MHz에서 작동하는 브루커 아반스(Bruker AVANCE) III HD 400 핵 자기 공명 분광계 상에서 획득하였다. 1H NMR 스펙트럼을 400 MHz에서 CHCl3-d, (CH3)2SO-d 6 및 (CH3)2CO-d 6 에서 내부 표준으로서 잔류 CHCl3 (7.26 ppm), DMSO (2.50 ppm) 및 (CH3)2CO (2.05 ppm)를 사용하여 기록하였다. 13C NMR 스펙트럼은 내부 참조로서 잔류 CHCl3 (77.16 ppm), DMSO (39.52 ppm) 및 (CH3)2CO (29.84 ppm 및 206.26 ppm)를 사용하여 CHCl3-d, (CH3)2SO-d 6 및 (CH3)2CO-d 6 중 101 MHz에서 기록하였다.
질량 분광측정법은 써모 사이언티픽(Thermo Scientific) QExactive 질량 분광계 (ESI) 상에서 칭화 대학교(Tsinghua University)의 제약 과학 학회(School of Pharmaceutical Sciences)의 질량 분광측정 시설에서 수행하였다.
박층 크로마토그래피는 머크 키젤겔(Merck Kieselgel) 60 Å F254 플레이트 상에서 지시된 용매로 용리하여 수행하고, 254 nm UV 램프에 의해 가시화하고, 12-몰리브도인산의 에탄올성 용액으로 염색하였다. 화합물을 플래쉬 크로마토그래피 (실리카 겔 60 Å, 230-400 메쉬, 실리사이클 인크.(Silicycle Inc.))를 사용하여 정제하였다.
본 개시내용의 공지된 출발 물질은 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용함으로써 또는 그에 따라 합성될 수 있거나, 또는 상업적 공급업체로부터 구입할 수 있다. 달리 나타내지 않는 한, 분석 등급 용매 및 상업적으로 입수가능한 시약을 추가 정제 없이 사용하였다.
달리 명시되지 않는 한, 본 개시내용의 반응은 모두 질소 또는 아르곤의 양압 하에 또는 무수 용매 중 건조 튜브를 사용하여 수행하였고, 반응 플라스크에는 전형적으로 시린지를 통한 기질 및 시약의 도입을 위한 고무 격막이 장착되었다. 유리제품은 오븐 건조시키고/거나 열 건조시켰다.
예시적 목적을 위해, 하기 실시예 섹션은 본 개시내용의 화합물 뿐만 아니라 주요 중간체를 제조하기 위한 합성 경로를 제시한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 발명의 화합물을 합성하기 위해 다른 합성 경로가 사용될 수 있음을 인지할 것이다. 구체적인 출발 물질 및 시약이 도시되었지만, 다른 출발 물질 및 시약으로 용이하게 대체하여 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공할 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 많은 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 화학을 사용하여 본 개시내용의 관점에서 추가로 변형시킬 수 있다.
화합물의 용도
한 측면에서, 본 개시내용은 KRAS 단백질, 특히 KRAS G12C 단백질을 억제할 수 있는 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.
본원에 사용된 용어 "요법"은 그의 증상 중 하나, 일부 또는 모두를 완전히 또는 부분적으로 완화시키기 위해, 또는 기저 병리상태를 교정 또는 보상하여 유익하거나 목적하는 임상 결과를 달성하기 위해 질환을 다루는 그의 정상적 의미를 갖는 것으로 의도된다. 본 개시내용의 목적을 위해, 유익한 또는 목적하는 임상 결과는 검출가능하든 검출불가능하든 증상의 완화, 질환 정도의 감소, 질환의 안정화된 (즉, 악화되지 않는) 상태, 질환 진행의 지연 또는 둔화, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 차도 (부분적이든 전체적이든)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "요법"은 또한 이를 받지 않는 경우에 예상되는 생존과 비교하여 생존을 연장시키는 것을 의미할 수 있다. 요법을 필요로 하는 대상체는 상태 또는 장애를 이미 가진 대상체뿐만 아니라 상태 또는 장애를 갖기 쉬운 대상체 또는 상태 또는 장애가 예방되어야 하는 대상체를 포함한다. 용어 "요법"은 또한 달리 구체적으로 나타내지 않는 한 예방을 포괄한다. 용어 "치료적" 및 "치료적으로"는 상응하는 방식으로 해석되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "예방"은 그의 통상적인 의미를 갖는 것으로 의도되고, 질환의 발생을 방지하기 위한 1차 예방 및 질환이 이미 발생하였고 환자가 질환의 악화 또는 심각화 또는 질환과 연관된 새로운 증상의 발생에 대해 일시적으로 또는 영구적으로 보호되는 2차 예방을 포함한다.
용어 "치료"는 "요법"과 동의어로 사용된다. 유사하게, 용어 "치료하다"는 "요법"이 본원에 정의된 바와 같은 경우에 "요법을 적용하는 것"으로 간주될 수 있다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 요법에 사용하기 위한, 예를 들어 KRAS 단백질과 연관된 요법에 사용하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
일부 실시양태에서, 암은 KRAS 단백질에 의해 매개된다. 일부 실시양태에서, 암은 KRAS-G12C 돌연변이 단백질에 의해 매개된다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이를 억제하기 위한 의약의 제조에서의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 암을 치료하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이를 억제하기 위한 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 본 개시내용의 제약 조성물을 제공한다.
제약 조성물
추가 측면에서, 본 개시내용의 1종 이상의 분자 또는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용의 1종 이상의 분자 또는 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
본원에 사용된 용어 "제약 조성물"은 본 개시내용의 분자 또는 화합물을 대상체에게 투여하기에 적합한 형태로 함유하는 제제를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 부형제"는 일반적으로 안전하고, 비-독성이고, 생물학적으로도 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌 제약 조성물을 제조하는 데 유용한 부형제를 의미하고, 수의학적 용도 뿐만 아니라 인간 제약 용도에 허용되는 부형제를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "제약상 허용되는 부형제"는 1종 및 1종 초과의 이러한 부형제를 둘 다 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 부형제"는 또한 "제약상 허용되는 담체" 및 "제약상 허용되는 희석제"를 포괄한다.
사용되는 특정한 부형제는 본 개시내용의 화합물이 적용되는 수단 및 목적에 따라 달라질 것이다. 용매는 일반적으로 인간을 포함한 포유동물에게 투여하기에 안전한 것으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인식되는 용매에 기초하여 선택된다. 일반적으로, 안전한 용매는 비-독성의 수성 용매, 예컨대 물 및 물에 수용성이거나 또는 혼화성인 다른 비-독성 용매이다. 적합한 수성 용매는 물, 에탄올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어, PEG 400, PEG 300) 등 및 그의 혼합물을 포함한다.
일부 실시양태에서, 적합한 부형제는 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기 산; 항산화제, 예컨대 아스코르브산 및 메티오닌; 보존제 (예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 적합한 부형제는 1종 이상의 안정화제, 계면활성제, 습윤제, 윤활제, 유화제, 현탁화제, 보존제, 항산화제, 불투명화제, 활택제, 가공 보조제, 착색제, 감미제, 퍼퓸제, 향미제, 및 약물 (즉, 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약 조성물)의 우아한 외양을 제공하거나 또는 제약 제품 (즉, 의약)의 제조를 보조하는 다른 공지된 첨가제를 포함할 수 있다. 활성 제약 성분은 또한, 예를 들어 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어 각각 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 내에, 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로구체, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 내에 또는 마크로에멀젼 내에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다. "리포솜"은 약물 (예컨대 본원에 개시된 화합물 및 임의로 화학요법제)을 인간을 포함한 포유동물에게 전달하는 데 유용한 다양한 유형의 지질, 인지질 및/또는 계면활성제로 구성된 작은 소포이다. 리포솜의 성분은 통상적으로 생물학적 막의 지질 배열과 유사한 이중층 형태로 배열된다.
본원에 제공된 제약 조성물은 조성물이 인간을 포함하나 이에 제한되지는 않는 대상체에게 투여되도록 하고, 의도된 투여 경로와 상용성이도록 제제화되는 임의의 형태일 수 있다.
본원에 제공된 제약 조성물에 대해 다양한 경로가 고려되고, 따라서 본원에 제공된 제약 조성물은 의도된 투여 경로에 따라 벌크 또는 단위 투여 형태로 공급될 수 있다. 예를 들어, 경구, 협측 및 설하 투여를 위해, 분말, 현탁액, 과립, 정제, 환제, 캡슐, 겔캡 및 캐플릿은 고체 투여 형태로서 허용될 수 있고, 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 현탁액 및 용액은 액체 투여 형태로서 허용될 수 있다. 주사 투여를 위해, 에멀젼 및 현탁액은 액체 투여 형태, 및 고체 투여 형태로서 적절한 용액으로 재구성하기에 적합한 분말로서 허용될 수 있다. 흡입 투여를 위해, 용액, 스프레이, 건조 분말 및 에어로졸이 허용되는 투여 형태일 수 있다. 국소 (협측 및 설하 포함) 또는 경피 투여를 위해, 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액 및 패치가 허용되는 투여 형태일 수 있다. 질 투여를 위해, 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 및 스프레이가 허용되는 투여 형태일 수 있다.
조성물의 단위 투여 형태 중 활성 성분의 양은 치료 유효량이고, 수반되는 특정한 치료에 따라 달라진다. 본원에 사용된 용어 "치료 유효량"은 확인된 질환 또는 상태를 치료, 개선 또는 예방하거나, 또는 검출가능한 치료 또는 억제 효과를 나타내는 분자, 화합물, 또는 분자 또는 화합물을 포함하는 조성물의 양을 지칭한다. 효과는 관련 기술분야에 공지된 임의의 검정 방법에 의해 검출될 수 있다. 대상체에 대한 정확한 유효량은 대상체의 체중, 크기 및 건강; 상태의 성질 및 정도; 투여 속도; 투여를 위해 선택된 치료제 또는 치료제의 조합; 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 것이다. 주어진 상황에 대한 치료 유효량은 임상의의 기술 및 판단 내에 있는 상용 실험에 의해 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 경구 투여용 제제의 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 정제 제제의 형태일 수 있다. 정제 제제에 적합한 제약상 허용되는 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 락토스, 탄산나트륨, 인산칼슘 또는 탄산칼슘; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알겐산; 결합제, 예컨대 전분; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석; 보존제, 예컨대 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트; 및 항산화제, 예컨대 아스코르브산이 포함된다. 정제 제제는 비코팅되거나, 또는 위장관 내에서 활성 성분의 붕해 및 후속 흡수를 변형시키거나, 또는 그의 안정성 및/또는 외관을 개선시키기 위해 (어느 경우든 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 코팅제 및 절차를 사용하여) 코팅될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐의 형태, 또는 활성 성분이 물 또는 오일, 예컨대 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 수현탁액의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 미세 분말 형태의 활성 성분을 1종 이상의 현탁화제, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 알긴산나트륨, 폴리비닐-피롤리돈, 트라가칸트 검 및 아카시아 검; 분산제 또는 습윤제 예컨대 레시틴 또는 알킬렌 옥시드와 지방산의 축합 생성물 (예를 들어 폴리옥시에틸렌 스테아레이트), 또는 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알콜의 축합 생성물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 또는 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트, 또는 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유래된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트와 함께 함유한다. 수현탁액은 또한 1종 이상의 보존제 (예컨대, 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트), 항산화제 (예컨대, 아스코르브산), 착색제, 향미제 및/또는 감미제 (예컨대, 수크로스, 사카린 또는 아스파르탐)를 함유할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 유성 현탁액의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 식물성 오일 (예컨대 아라키스 오일, 올리브 오일, 참깨 오일 또는 코코넛 오일) 또는 미네랄 오일 (예컨대 액체 파라핀) 중에 현탁된 활성 성분을 함유한다. 유성 현탁액은 또한 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알콜을 함유할 수 있다. 상기 설명된 것과 같은 감미제 및 향미제를 첨가하여 맛우수한 경구 제제를 제공할 수 있다. 이들 조성물은 항산화제, 예컨대 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 수중유 에멀젼의 형태일 수 있다. 유성 상은 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일 또는 아라키스 오일, 또는 미네랄 오일, 예컨대 예를 들어 액체 파라핀 또는 이들 중 임의의 것의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 자연-발생 검, 예컨대 아카시아 검 또는 트라가칸트 검, 자연-발생 포스파티드, 예컨대 대두, 레시틴, 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르 (예를 들어 소르비탄 모노올레에이트), 및 상기 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드의 축합 생성물 (예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)일 수 있다. 에멀젼은 또한 감미제, 향미제 및 보존제를 함유할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 제약 조성물은 시럽 및 엘릭시르 형태일 수 있으며, 이는 감미제, 예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 소르비톨, 아스파르탐 또는 수크로스, 완화제, 보존제, 향미제 및/또는 착색제를 함유할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 주사 투여를 위한 제제의 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 멸균 주사가능한 제제, 예컨대 멸균 주사가능한 수성 또는 유질 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 상기 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 공지된 기술분야에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사가능한 제제는 또한 비-독성의 비경구로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사가능한 용액 또는 현탁액, 예컨대 1,3-부탄디올 중의 용액일 수 있거나, 또는 동결건조된 분말로서 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 또한, 멸균 고정 오일이 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세리드를 포함한 임의의 무자극 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 지방산, 예컨대 올레산이 마찬가지로 주사제의 제조에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 흡입 투여를 위한 제제의 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 임의의 적절한 용매 및 임의로 다른 화합물, 예컨대 비제한적으로 안정화제, 항미생물제, 항산화제, pH 조절제, 계면활성제, 생체이용률 조절제 및 이들의 조합을 함유하는 수성 및 비수성 (예를 들어, 플루오로카본 추진제 중) 에어로졸의 형태일 수 있다. 담체 및 안정화제는 특정한 화합물의 요건에 따라 달라지지만, 전형적으로 비이온성 계면활성제 (트윈, 플루로닉스 또는 폴리에틸렌 글리콜), 무해 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 소르비탄 에스테르, 올레산, 레시틴, 아미노산, 예컨대 글리신, 완충제, 염, 당 또는 당 알콜을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 국소 또는 경피 투여를 위한 제제의 형태일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 제약 조성물은 크림, 연고, 겔 및 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액의 형태일 수 있으며, 이는 일반적으로 활성 성분을 통상적인 국소로 허용되는 부형제, 예컨대 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 그의 혼합물과 함께 제제화함으로써 수득될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 경피 피부 패치의 형태로 제제화될 수 있다.
상기 기재된 그러한 대표적인 투여 형태 이외에, 제약상 허용되는 부형제 및 담체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 일반적으로 알려져 있고 따라서 본 개시내용에 포함된다. 이러한 부형제 및 담체는, 예를 들어 문헌 ["Remingtons Pharmaceutical Sciences" Mack Pub. Co., New Jersey (1991), "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Ed. University of the Sciences in Philadelphia, 21st Edition, LWW (2005)]에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 단일 투여 형태로서 제제화될 수 있다. 단일 투여 형태의 본원에 제공된 화합물의 양은 치료되는 대상체 및 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 0.001-1000 mg/kg 체중/일, 예를 들어 0.01-800 mg/kg 체중/일, 0.01-700 mg/kg 체중/일, 0.01-600 mg/kg 체중/일, 0.01-500 mg/kg 체중/일, 0.01-400 mg/kg 체중/일, 0.01-300 mg/kg 체중/일, 0.1-200 mg/kg 체중/일, 0.1-150 mg/kg 체중/일, 0.1-100 mg/kg 체중/일, 0.5-100 mg/kg 체중/일, 0.5-80 mg/kg 체중/일, 0.5-60 mg/kg 체중/일, 0.5-50 mg/kg 체중/일, 1-50 mg/kg 체중/일, 1-45 mg/kg 체중/일, 1-40 mg/kg 체중/일, 1-35 mg/kg 체중/일, 1-30 mg/kg 체중/일, 1-25 mg/kg 체중/일의 투여량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 투여될 수 있도록 제제화될 수 있다. 일부 경우에, 상기 언급된 범위의 하한치 미만의 투여량 수준이 보다 적절할 수 있고, 다른 경우에는 훨씬 더 많은 용량이 어떠한 유해 부작용도 유발하지 않으면서 사용될 수 있으며, 단 이러한 더 많은 용량은 먼저 하루에 걸쳐 수회의 적은 용량으로 분할되어 투여된다. 투여 경로 및 투여 요법에 대한 추가의 정보에 대해서는, 구체적으로 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Chapter 25.3 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참조한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 제약 조성물은 단기-작용, 신속-방출, 장기-작용 및 지속-방출로서 제제화될 수 있다. 따라서, 본 개시내용의 제약 제제는 또한 제어 방출 또는 느린 방출을 위해 제제화될 수 있다.
추가 측면에서, 1종 이상의 본 개시내용의 분자 또는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 수의학적 담체를 포함하는 수의학적 조성물이 또한 제공된다. 수의학적 담체는 조성물을 투여하는 목적에 유용한 물질이고, 달리 불활성이거나 또는 수의학 분야에서 허용되고 활성 성분과 상용성인 고체, 액체 또는 기체상 물질일 수 있다. 이들 수의학적 조성물은 비경구로, 경구로 또는 임의의 다른 목적하는 경로에 의해 투여될 수 있다.
제약 조성물 또는 수의학적 조성물은 약물을 투여하는 데 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 포장될 수 있다. 예를 들어, 분배를 위한 물품은 적절한 형태의 조성물이 그 안에 침착되어 있는 용기를 포함할 수 있다. 적합한 용기는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 병 (플라스틱 및 유리), 사쉐, 앰플, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 용기는 또한 포장의 내용물에 대한 무분별한 접근을 방지하기 위해 부정 조작 방지 조립물 (tamper-proof assemblage)을 포함할 수 있다. 또한, 용기는 용기의 내용물을 기재하는 라벨이 그 위에 배치되어 있다. 라벨은 또한 적절한 경고문을 포함할 수 있다. 조성물은 또한 단위-용량 또는 다중-용량 용기, 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알에 포장될 수 있고, 사용 직전에 주사를 위한 멸균 액체 담체, 예를 들어 물의 첨가만을 필요로 하는 동결-건조 (동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 이전에 기재된 종류의 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조된다.
추가 측면에서, 제1 활성 성분 및 제2 활성 성분으로서 본 개시내용의 1종 이상의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물이 또한 제공된다.
일부 실시양태에서, 제2 활성 성분은 본원에 제공된 화합물에 대해 상보적 활성을 가져서, 이들이 서로 유해한 영향을 미치지 않도록 한다. 이러한 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합되어 적합하게 존재한다.
질환의 치료 방법
추가 측면에서, 본 개시내용은 유효량의 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 상기 방법은 암, 예컨대 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 혈액암, 결장직장암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, MYH 연관 폴립증 또는 뇌하수체 선종의 치료에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 암은 KRAS G12C 돌연변이와 연관된다. 특정 실시양태에서, 암은 혈액암, 췌장암, MYH 연관 폴립증, 결장직장암 또는 폐암이다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 또한 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 방법은
(a) 암이 KRAS G12C 돌연변이와 연관됨을 결정하고;
(b) 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물을 투여하는 것
을 포함한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 종양 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 종양 전이를 억제하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 개시내용은 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 본 개시내용의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물과 반응시키는 것을 포함하는, KRAS G12C 돌연변이 단백질의 활성을 조절하는 방법을 제공한다.
추가 측면에서, 본 개시내용은 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 본원에 제공된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 반응시켜 표지된 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 생성하는 것을 포함하는, 표지된 KRAS G12C 돌연변이 단백질을 제조하는 방법을 제공한다.
실시예
예시를 위해, 하기 실시예가 포함된다. 그러나, 이들 실시예는 본 개시내용을 제한하지 않으며, 단지 본 개시내용을 실시하는 방법을 제안하는 것으로 의도되는 것으로 이해되어야 한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 기재된 화학 반응이 본 개시내용의 다수의 다른 화합물을 제조하기 위해 용이하게 적합화될 수 있고, 본 개시내용의 화합물을 제조하는 대안적 방법이 본 개시내용의 범주 내에 속하는 것으로 간주된다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 본 개시내용에 따른 비-예시된 화합물의 합성은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 변형에 의해, 예를 들어 간섭 기를 적절하게 보호함으로써, 기재된 것 이외의 관련 기술분야에 공지된 다른 적합한 시약 및 빌딩 블록을 이용함으로써, 및/또는 반응 조건의 상용 변형을 수행함으로써 성공적으로 수행될 수 있다. 대안적으로, 본원에 개시되거나 관련 기술분야에 공지된 다른 반응이 본 개시내용의 다른 화합물을 제조하기 위해 적용될 수 있는 것으로 인지될 것이다.
실시예 1
Figure pct00041
단계 1: 화합물 1-2의 합성
Figure pct00042
무수 DMF (3.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (270 mg, 0.574 mmol, 1.0 당량) 및 나프탈렌-1-아민 (82 mg, 0.574 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (0.28 mL, 1.722 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (435 mg, 1.144 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 17%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.941분; MS m/z (ESI): 596.3 [M+H]+.
단계 2: 화합물 1-3의 합성
Figure pct00043
EtOH (1 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.0504 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (1 mL) 및 AcOH (6 방울)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 145℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(6-메틸-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 18%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.966분; MS m/z (ESI): 620.3 [M+H]+.
단계 3: 화합물 1-4의 합성
Figure pct00044
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(6-메틸-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (15 mg, 0.024 mmol)의 혼합물에 Pd(OH)2/C (10 mg, 20% wt)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 (S)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (12 mg, 100%)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.557분; MS m/z (ESI): 486.2 [M+H]+.
단계 4: 화합물 1의 합성
Figure pct00045
DCM (1 mL) 중 (S)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (12 mg, 0.024 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (7 mg, 0.072 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (2.2 mg, 0.024 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 염기성 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (3.5 mg, 27%, 1)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.839분; MS m/z (ESI): 540.3 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.04 (d, J =8.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J =8.2 Hz, 1H), 7.65 - 7.50 (m, 3H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 6.68 - 6.58 (m, 1H), 6.42 - 6.34 (m, 1H), 5.83 - 5.73 (m, 1H), 5.12 - 4.75 (m, 1H), 4.70 - 4.22 (m, 4H), 3.95 - 3.70 m, 6H), 3.17 - 2.82 (m, 4H), 2.42 - 2.13 (m, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.41 - 1.22 (m, 2H).
실시예 2
Figure pct00046
단계 1: 화합물 2-2의 합성
Figure pct00047
무수 DMF (4.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (300 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량) 및 나프탈렌-1-아민 (59 mg, 0.412 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.29 mL, 1.77 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (224 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (20:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (223 mg, 60%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 635; RT = 1.242분.
단계 2: 화합물 2-3의 합성
Figure pct00048
(S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 0.071 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (346 mg, 1.06 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 7분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 60 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (43 mg, 46%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 659; RT = 1.194분.
단계 3: 화합물 2-4의 합성
Figure pct00049
i-PrOH (1.5 mL) 및 THF (1.5 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (43 mg, 0.065 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd/C (10% w/w, 7 mg, 0.0065 mmol, 0.1 당량) 및 Pd(OH)2/C (10% w/w, 9 mg, 0.0065 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (풍선) 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18 mg, 53%)을 담황색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 525; RT = 0.381분 & 0.565분.
단계 4: 화합물 2의 합성
Figure pct00050
DCM (1.5 mL) 중 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (18 mg, 0.034 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (10.4 mg, 0.103 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.3 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (3.1 mg, 0.034 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 2.1 mg, 9.9%, 2·0.63HCOOH) (C32H34N8O3·0.63HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 579; RT = 0.994분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 8.32 (s, 0.63H), 8.13 (dd, J = 13.4, 8.2 Hz, 2H), 7.76 - 7.50 (m, 4H), 6.95 - 6.81 (m, 1H), 6.20 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.59 - 5.36 (m, 1H), 5.10 - 4.77 (m, 2H), 4.49 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.38 - 4.28 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 1H), 3.33 - 3.12 (m, 4H), 3.02 - 2.92 (m, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.37 - 2.28 (m, 4H), 2.18 (dd, J = 17.0, 8.6 Hz, 1H), 2.06 - 1.84 (m, 4H), 1.73 - 1.55 (m, 3H).
실시예 3
Figure pct00051
단계 1: 화합물 3-2의 합성
Figure pct00052
무수 DMF (3.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (120 mg, 0.255 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (68 mg, 0.383 mmol, 1.5 당량)의 혼합물에 DIEA (99 mg, 0.765 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (194 mg, 0.51 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)를 사용하여 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 50%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.951분; MS m/z (ESI): 630.2 [M+H]+.
단계 2: 화합물 3-3의 합성
Figure pct00053
AcOH (0.5 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (30 mg, 0.0477 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (116 mg, 0.715 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 15분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (32 mg, 100%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.969분; MS m/z (ESI): 654.3 [M+H]+.
단계 3: 화합물 3-4의 합성
Figure pct00054
DCM (2 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (63 mg, 0.0965 mmol)의 혼합물에 Et3SiH (45 mg, 0.386 mmol) 및 Et3N (39 mg, 0.386 mmol)에 이어서 PdCl2 (2 mg, 0.00964 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. Et3SiH (45 mg, 0.386 mmol) 및 Et3N (39 mg, 0.386 mmol) 및 PdCl2 (8 mg, 0.0386 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 켄칭하고, DCM/MeOH (10/1, 3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 (S)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (50 mg, 100%)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.549분; MS m/z (ESI): 520.2 [M+H]+.
단계 4: 화합물 3의 합성
Figure pct00055
DCM (2 mL) 중 (S)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (50 mg, 0.0965 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (29 mg, 0.2895 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (8.8 mg, 0.0965 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (6 mg, 10.9%, 3)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.825분; MS m/z (ESI): 574.3 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.27 (s, 0.89H), 8.26 - 8.23 (m, 1H), 8.18 - 8.10 (m, 1H), 7.82 - 7.55 (m, 4H), 6.85 (dd, J = 16.6, 10.4 Hz, 1H), 6.17 (dd, J = 16.7, 2.1 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 10.4, 2.2 Hz, 1H), 4.47 - 4.17 (m, 5H), 4.15 - 4.09 (m, 1H), 3.83 - 3.70 (m, 4H), 2.98 - 2.93 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.22 - 2.13 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 3H), 1.97 - 1.86 (m, 1H), 1.73 - 1.54 (m, 3H).
실시예 4
Figure pct00056
단계 1: 화합물 4-3의 합성
Figure pct00057
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (200 mg, 0.393 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (49 mg, 0.275 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (152 mg, 1.179 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (149 mg, 0.393 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 51%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.955분; MS m/z (ESI): 669.3 [M+H]+.
단계 2: 화합물 4-5의 합성
Figure pct00058
(S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 0.1348 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (0.8 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (332 mg, 2.020 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 8분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (64 mg, 62%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.929분; MS m/z (ESI): 693.0 [M+H]+.
단계 3: 화합물 4-6의 합성
Figure pct00059
CH3CN (5.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (64 mg, 0.0925 mmol, 1 당량)의 혼합물에 TMSI (148 mg, 0.740 mmol, 8 당량)를 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 35℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물에 Et3N (149 mg, 1.48 mmol, 16 당량)을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 H2O (15 mL)로 희석하고, DCM/MeOH (10/1, 3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (8:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 96%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.379분; MS m/z (ESI): 559.3 [M+H]+.
단계 4: 화합물 4의 합성
Figure pct00060
DCM (2 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (50 mg, 0.085 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (26 mg, 0.255 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.7 mg, 0.085 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 38%, 4)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.996분; MS m/z (ESI): 580.2 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.20 (s, 0.64H), 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.86 - 7.67 (m, 3H), 7.60 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.95 - 6.80 (m, 1H), 6.21 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.65 - 4.70 (m, 3H), 4.53 - 4.31 (m, 1.5H), 4.22 - 4.12 (m, 1.5H), 3.76 - 3.41 (m, 2H), 3.25 - 2.90 (m, 4H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.10 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 2.00 - 1.92 (m, 1H), 1.77 - 1.57 (m, 3H).
실시예 5
Figure pct00061
단계 1: 화합물 5-3의 합성
Figure pct00062
무수 DMF (3.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (120 mg, 0.255 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (68 mg, 0.383 mmol, 1.5 당량)의 혼합물에 DIEA (99 mg, 0.765 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (194 mg, 0.51 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)를 사용하여 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 50%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.951분; MS m/z (ESI): 630.2 [M+H]+.
단계 2: 화합물 5-5의 합성
Figure pct00063
AcOH (0.8 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (90 mg, 0.143 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 트리에톡시메탄 (317 mg, 2.145 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 8분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 55%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.951분; MS m/z (ESI): 640.2 [M+H]+.
단계 3: 화합물 5-6의 합성
Figure pct00064
DCM (3 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.078 mmol)의 혼합물에 Et3SiH (73 mg, 0.626 mmol) 및 Et3N (63 mg, 0.626 mmol)에 이어서 PdCl2 (4.1 mg, 0.0235 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 30%의 목적하는 MS가 관찰되었음을 나타냈다. Et3SiH (73 mg, 0.626 mmol) 및 Et3N (63 mg, 0.626 mmol) 및 PdCl2 (8 mg, 0.047 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 Cl-제거 생성물이 관찰되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (15 mL)로 켄칭하고, DCM/MeOH (10/1, 3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 (S)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (36.7 mg, 100%)을 황색 오일로서 수득하였고, 이를 추가 정제없이 후속 단계에 직접 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.385분; MS m/z (ESI): 472.2 [M+H]+.
단계 4: 화합물 5의 합성
Figure pct00065
DCM (2 mL) 중 (S)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (36.7 mg, 0.078 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (24 mg, 0.234 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (5.7 mg, 0.0624 mmol, 0.8 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (7 mg, 17%, 5)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.819분; MS m/z (ESI): 526.2 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.29 (s, 0.93H), 8.27 (s, 1H), 8.19 - 8.06 (m, 2H), 7.74 - 7.54 (m, 5H), 6.87 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 16.7, 2.3 Hz, 1H), 5.74 (dd, J = 10.4, 2.3 Hz, 1H), 4.38 - 4.25 (m, 4H), 4.19 - 4.13 (m, 1H), 3.84 - 3.69 (m, 5H), 2.98 - 2.92 (m, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (q, J = 8.6 Hz, 1H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.74 - 1.59 (m, 3H).
실시예 6
Figure pct00066
단계 1: 화합물 6-2의 합성
Figure pct00067
EtOH (400 mL) 및 AcOH (40 mL) 중 나프탈렌-1,8-디아민 (20 g, 126.58 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 이소아밀니트라이트 (16.6 mL, 124.05 mmol, 0.98 당량)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOH (200 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 86%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 170; RT = 1.219분.
단계 2: 화합물 6-3의 합성
Figure pct00068
수성 HBr (48%, 200 mL) 중 구리 터닝물 (0.5 g, 7.81 mmol, 0.07 당량)의 냉각된 (0℃) 혼합물에 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 106.51 mmol, 1.0 당량)을 천천히 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 이어서 수성 KOH (45%, w/ w)를 첨가하여 pH = 11-12로 조정하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-브로모나프탈렌-1-아민 (15.8 g, 67%)을 수득하고, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ =222; RT = 1.575분.
단계 3: 화합물 6-4의 합성
Figure pct00069
디옥산 (40 mL) 및 H2O (10 mL) 중 8-브로모나프탈렌-1-아민 (6 g, 27.15 mmol, 1.0 당량) 및 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (10.22 g, 81.45 mmol, 3.0 당량)의 용액에 PdCl2(dtbpf) (0.89 g, 1.36 mmol, 0.05 당량) 및 K3PO4 (17.27 g, 81.45 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (10%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 8-메틸나프탈렌-1-아민 (1.2 g, 29%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 158; RT = 1.253분.
단계 4: 화합물 6-5의 합성
Figure pct00070
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (150 mg, 0.319 mmol, 1.0 당량) 및 8-메틸나프탈렌-1-아민 HCl (62 mg, 0.319 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (123 mL, 0.957 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (121 mg, 0.319 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용 TLC에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)를 사용하여 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-메틸나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (56 mg, 29%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 610; RT = 0.943분.
단계 5: 화합물 6-6의 합성
Figure pct00071
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-메틸나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (20 mg, 0.033 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (0.2 mL)의 용액에 1,1,1-트리에톡시에탄 (78 mg, 0.493 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (13 mg, 64%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 634; RT = 1.230분.
단계 6: 화합물 6-7의 합성
Figure pct00072
MeOH (0.2 mL) 중 벤질 (S)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (43 mg, 0.118 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 20%, 약 50% 물로 습윤됨, 8.4 mg, 0.012 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 (S)-2-메틸-3-(8-메틸나프탈렌-1-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (33 mg, 99%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 500; RT = 0.664분;
단계 7: 화합물 6의 합성
Figure pct00073
DCM (2 mL) 중 (S)-2-메틸-3-(8-메틸나프탈렌-1-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (33 mg, 0.067 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (20.2 mg, 0.200 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (5.0 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (60 mg, 0.067 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-2-메틸-3-(8-메틸나프탈렌-1-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (HCOOH 염, 5.6 mg, 15%, 6·HCOOH) (C31H35N7O3·HCOOH)을 수득하였다 .
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 554; RT = 1.014분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.71 - 7.62 (m, 1H), 7.59 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.45 (m, 1H), 7.39 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.85 (dd, J = 16.8, 10.8 Hz, 1H), 6.17 (dd, J = 16.8, 2.8 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 4.32 (dd, J = 10.4, 4.8Hz, 4H), 4.17 - 4.10 (m, 1H), 3.85-3.64 (m, 5H), 2.96 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 2.02 (s, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.73 - 1.57 (m, 3H).
실시예 7
Figure pct00074
단계 1: 화합물 7-2의 합성
Figure pct00075
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-메틸나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1) (230 mg, 0.354 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (2.5 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (863 mg, 5.32 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 4.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 90 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (30 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (52 mg, 22%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 673; RT = 1.233분.
단계 2: 화합물 7-3의 합성
Figure pct00076
MeOH (5 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (2) (52 mg, 0.077 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd/C (10% w/w, 8.2 mg, 0.0077 mmol, 0.1 당량) 및 Pd(OH)2/C (10% w/w, 11 mg, 0.0077 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (풍선) 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (39 mg, 94%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 539; RT = 0.809분.
단계 3: 화합물 7의 합성
Figure pct00077
DCM (3.0 mL) 중 2-((S)-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (3) (39 mg, 0.072 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (36 mg, 0.360 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (1.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (8 mg, 0.086 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(6-메틸-7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 5.94 mg, 13%, 7·0.6HCOOH) (C33H36N8O3·0.6HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 593; RT = 1.575분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (s, 0.6H), 8.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.63 (m, 1H), 7.61 - 7.54 (m, 1H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.93 - 6.81 (m, 1H), 6.20 (dd, J = 16.6, 2.2 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.14 - 4.74 (m, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.33 (dd, J = 10.8, 4.8 Hz, 1H), 4.19 - 4.12 (m, 1H), 3.23 - 3.06 (m, 4H), 3.04 - 2.90 (m, 3H), 2.66 - 2.52 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.24 - 2.12 (m, 4H), 2.05 (s, 3H), 1.99 - 1.90 (m, 1H), 1.73 - 1.57 (m, 3H).
실시예 8
Figure pct00078
단계 1: 화합물 8-2의 합성
Figure pct00079
무수 THF (15 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (1.00 g, 3.76 mmol, 1.0 당량) (1)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 THF (15 mL) 중 tert-부틸 (2S,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (805 mg, 3.76 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (0.93 mL, 5.64 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 0℃에서 40분 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈고, 목적 생성물이 LCMS에 의해 검출되었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (10:1에서 4:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (1.51 g, 90%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 444; RT = 2.029분.
단계 2: 화합물 8-3의 합성
Figure pct00080
무수 DMF (10 mL) 중 에틸 6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (1.51 g, 3.40 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (1.1 mL, 6.80 mmol, 2.0 당량)의 교반 혼합물에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (588 mg, 5.10 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (20:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (1.51 g, 85%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 523; RT = 1.168분.
단계 3: 화합물 8-4의 합성
Figure pct00081
무수 EtOH (48 mL)/DMF (16 mL) 중 에틸 6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (1.51 g, 2.89 mmol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (3.26 g, 14.1 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (80 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 120 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (60 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (664 mg, 47%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 493; RT = 1.090분.
단계 4: 화합물 8-5의 합성
Figure pct00082
MeOH (6.0 mL)/H2O (1.0 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (664 mg, 1.35 mmol, 1.0 당량)의 용액에 LiOH·H2O (283 mg, 6.74 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (1 M)을 사용하여 pH = 2-3일 때까지 산성화시킨 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (918 mg)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 465; RT = 0.930분.
단계 5: 화합물 8-6의 합성
Figure pct00083
무수 DMF (4.0 mL) 중 5-아미노-6-((2S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (400 mg, 0.861 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (92 mg, 0.517 mmol, 0.6 당량)의 용액에 DIEA (0.43 mL, 2.58 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (328 mg, 0.861 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (2S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 20%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 624; RT = 1.293분.
단계 6: 화합물 8-7의 합성
Figure pct00084
tert-부틸 (2S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.176 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (428 mg, 2.64 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 40 mL)으로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (2S,5S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 31%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 648; RT = 1.286분.
단계 7: 화합물 8-8의 합성
Figure pct00085
DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 (2S,5S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (35 mg, 0.054 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (TFA 염, 32 mg, 91%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 548; RT = 0.709분.
단계 8: 화합물 8의 합성
Figure pct00086
DCM (2.5 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,5S)-2,5-디메틸피페라진-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (TFA 염, 32 mg, 0.048 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (24 mg, 0.242 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (5.2 mg, 0.058 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 8-((2S,5S)-4-아크릴로일-2,5-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (HCOOH 염, 2.37 mg, 7.6%, 8·HCOOH) (C32H36ClN7O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.709분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90 - 7.65 (m, 3H), 7.60 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.95 - 6.61 (m, 1H), 6.13 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.69 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.57 - 4.05 (m, 4H), 3.29 (s, 3H), 2.98 - 2.92 (m, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.35 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 2.24 - 2.14 (m, 1H), 2.12 - 1.87 (m, 4H), 1.76 - 1.53 (m, 3H), 1.48 - 1.27 (m, 3H), 1.18 (s, 3H).
실시예 9
Figure pct00087
단계 1: 화합물 9-2-중간체의 합성
Figure pct00088
EtOH (400 mL) 및 AcOH (40 mL) 중 나프탈렌-1,8-디아민 (20 g, 126.58 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 이소아밀니트라이트 (16.6 mL, 124.05 mmol, 0.98 당량)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOH (200 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 86%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 170; RT = 1.219분.
화합물 9-3-중간체의 합성
Figure pct00089
수성 HBr (48%, 200 mL) 중 구리 터닝물 (0.5 g, 7.81 mmol, 0.07 당량)의 냉각된 (0℃) 혼합물에 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 106.51 mmol, 1.0 당량)을 천천히 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 이어서 수성 KOH (45w%)를 첨가하여 pH = 11-12로 조정하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-브로모나프탈렌-1-아민 (15.8 g, 67%)을 수득하고, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ =222; RT = 1.575분.
단계 3: 화합물 9-4-중간체의 합성
Figure pct00090
디옥산 (20 mL) 및 H2O (5 mL) 중 8-브로모나프탈렌-1-아민 (1 g, 4.52 mmol, 1.0 당량) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-비닐-1,3,2-디옥사보롤란 (1.39 g, 9.04 mmol, 2.0 당량)의 용액에 PdCl2(dtbpf) (0.296 g, 0.45 mmol, 0.1 당량) 및 K3PO4 (2.88 g, 13.38 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (10%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 8-비닐나프탈렌-1-아민 (500 mg, 65%, 9-4-중간체)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 170; RT = 1.790분.
단계 4: 화합물 9-1의 합성
Figure pct00091
무수 DMF (4.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (300 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량) 및 8-비닐나프탈렌-1-아민 (99 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량)의 용액에 DIEA (0.29 mL, 1.768 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (223 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((8-비닐나프탈렌-1-일)카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 54%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 661; RT = 1.213분.
단계 5: 화합물 9-2의 합성
Figure pct00092
벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((8-비닐나프탈렌-1-일)카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.303 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (736 mg, 4.54mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 40 mL)으로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-비닐나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 53%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 685; RT = 1.190분.
단계 6: 화합물 9-3의 합성
Figure pct00093
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-비닐나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.161 mmol)의 용액에 Pd/C (50 mg)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 농축시켜 2-((S)-4-(7-(8-에틸나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (73 mg, 82%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 7: 화합물 9의 합성
Figure pct00094
DCM (2.5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-에틸나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (73 mg, 0.13mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (40 mg, 0.39 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (12 mg, 0.13 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-에틸나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 20.5 mg, 25.6%, 9·HCOOH) (C34H38N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 607; RT = 1.020분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.45 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.95 - 6.79 (m, 1H), 6.20 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 4.35- 4.13 (m, 6H), 3.44 - 2.82 (m, 6H), 2.63 - 2.51 (m, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.74 - 1.54 (m, 3H), 1.06 (t, J = 4 Hz, 3H).
실시예 10
Figure pct00095
단계 1: 화합물 10-2의 합성
Figure pct00096
디옥산 (40 mL) 및 H2O (10 mL) 중 8-브로모나프탈렌-1-아민 (1) (1.00 g, 4.50 mmol, 1.0 당량) 및 시클로프로필보론산 (773 mg, 9.00 mmol, 2.0 당량)의 용액에 PdCl2(dtbpf) (293 mg, 0.45 mmol, 0.1 당량) 및 K3PO4 (2.87 g, 13.5 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (10%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 8-시클로프로필나프탈렌-1-아민 (380 mg, 46%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 184; RT = 1.785분.
단계 2: 화합물 10-3의 합성
Figure pct00097
무수 DMF (4.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (300 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량) 및 8-시클로프로필나프탈렌-1-아민 (76 mg, 0.412 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.29 mL, 1.77 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (224 mg, 0.589 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-시클로프로필나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (94 mg, 24%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 675; RT = 1.254분.
단계 3: 화합물 10-4의 합성
Figure pct00098
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-시클로프로필나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (94 mg, 0.139 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (372 mg, 2.09 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 7분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 40 mL)으로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (56 mg, 57%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 699; RT = 1.303분.
단계 4: 화합물 10-5의 합성
Figure pct00099
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (56 mg, 0.080 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd/C (10% w/w, 8.5 mg, 0.0080 mmol, 0.1 당량) 및 Pd(OH)2/C (10% w/w, 11 mg, 0.0080 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (풍선) 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(7-(8-시클로프로필나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (40 mg, 89%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 565; RT = 0.409분 & 0.757분.
단계 5: 화합물 10의 합성
Figure pct00100
DCM (3.0 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-시클로프로필나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (40 mg, 0.071 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (36 mg, 0.354 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.7 mg, 0.085 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-시클로프로필나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 18.64 mg, 39%, 10·HCOOH) (C35H38N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 619; RT = 1.623분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.26 (s, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.92 - 6.82 (m, 1H), 6.20 (dd, J = 16.6, 2.2 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.04 - 4.81 (m, 2H), 4.48 (s, 1H), 4.35 - 4.28 (m, 1H), 4.17 - 4.11 (m, 1H), 3.20 - 3.09 (s, 4H), 3.02 - 2.90 (m, 3H), 2.59 - 2.54 (m, 1H), 2.35 (d, J = 2.0 Hz, 3H), 2.18 (dd, J = 17.0, 8.6 Hz, 1H), 2.08 (s, 3H), 1.98 - 1.90 (m, 1H), 1.80 - 1.57 (m, 4H), 0.81 - 0.71 (m, 1H), 0.63 - 0.56 (m, 1H), 0.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H).
실시예 11
Figure pct00101
단계 1: 화합물 11-2의 합성
Figure pct00102
EtOH (400 mL) 및 AcOH (40 mL) 중 나프탈렌-1,8-디아민 (20 g, 126.58 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 이소아밀니트라이트 (16.6 mL, 124.05 mmol, 0.98 당량)를 적가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOH (200 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 86%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 170; RT = 1.219분.
단계 2: 화합물 11-3의 합성
Figure pct00103
수성 HBr (48%, 200 mL) 중 구리 터닝물 (0.5 g, 7.81 mmol, 0.07 당량)의 냉각된 (0℃) 혼합물에 1H-나프토[1,8-데][1,2,3]트리아진 (18 g, 106.51 mmol, 1.0 당량)을 천천히 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 이어서 수성 KOH (45%, w/ w)를 첨가하여 pH = 11-12로 조정하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-브로모나프탈렌-1-아민 (15.8 g, 67%)을 수득하고, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ =222; RT = 1.575분.
단계 3: 화합물 11-4의 합성
Figure pct00104
디옥산 (10 mL) 및 H2O (2 mL) 중 8-브로모나프탈렌-1-아민 (1 g, 4.52 mmol, 1.0 당량) 및 4,4,5,5-테트라메틸-2-(프로프-1-엔-2-일)-1,3,2-디옥사보롤란 (1.14 g, 6.79 mmol, 1.5 당량)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (0.33 g, 0.45 mmol, 0.1 당량) 및 K2CO3 (1.88 g, 13.56 mmol, 3.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 100℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (10%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-아민 (592 mg, 69%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 184; RT = 1.726분.
단계 4: 화합물 11-5의 합성
Figure pct00105
무수 DMF (4 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (200 mg, 0.392 mmol, 1.0 당량) 및 8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-아민 (71.9 mg, 0.392 mmol, 1.0 당량)의 용액에 DIEA (0.37 mL, 1.18mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (149 mg, 0.392 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (251 mg, 95%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 675; RT = 1.265분.
단계 5: 화합물 11-6의 합성
Figure pct00106
(S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (299.3 mg, 0.44 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (3.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (1.08 g, 6.66 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 30 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (91 mg, 29.6%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 699; RT = 1.248분.
단계 6: 화합물 11-7의 합성
Figure pct00107
MeOH (3.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (45 mg, 0.064 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 20%, 약 50% 물로 습윤됨, 4.23 mg, 0.006 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (36 mg, 99%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 565; RT = 0.728분;
단계 7: 화합물 11의 합성
Figure pct00108
DCM (3.0 mL) 중 냉각된 (0℃) 용액 (36.4 mg, 0.065 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (19.6 mg, 0.194 mmol, 3.0 당량)에 DCM (3 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (758 mg, 0.095 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(8-(프로프-1-엔-2-일)나프탈렌-1-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 2.21 mg, 5.5%, 11·HCOOH) (C35H38N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 619; RT = 1.603분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (s, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.55 (m, 1H), 7.54 - 7.42 (m, 1H), 7.42 - 7.27 (m, 2H), 6.60 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 6.41 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.83 - 4.63 (m, 3H), 4.18 - 3.07 (m, 5H), 2.96 (s, 5H), 2.76 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.29 (s, 2H), 2.18 - 2.05 (m, 4H), 2.02 - 1.88 (m, 4H), 1.80 (d, J = 2.8 Hz, 3H).
실시예 12
Figure pct00109
단계 1: 화합물 12-2의 합성
Figure pct00110
MeOH (120 mL) 중 나프탈렌-1,3-디올 (10.0 g, 62.5 mmol, 1.0 당량)의 용액에 진한 HCl (4.0 mL, 62.5 mmol, 0.76 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 소모되고 신규 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, NaHCO3 (60 mL)로 희석하고, DCM (60 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 합하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (4:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 3-메톡시나프탈렌-1-올 (7.2 g, 66.7%)을 수득하였다.
단계 2: 화합물 12-3의 합성
Figure pct00111
무수 DMF (5.0 mL) 중 3-메톡시나프탈렌-1-올 (500 mg, 2.87 mmol, 1.0 당량)의 용액에 CsCO3 (1.87 g, 5.74 mmol, 2.0 당량) 및 1,1,1-트리플루오로-N-페닐-N-((트리플루오로메틸)술포닐)메탄술폰아미드 (1.34 g, 3.74 mmol, 1.3 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 0℃에서 6시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 소모되고 신규 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (20 mL x 3)로 희석하였다. 합한 유기 분획을 염수 (25 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (4:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 3-메톡시나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (689 mg, 78.4%)를 수득하였다.
단계 3: 화합물 12-4의 합성
Figure pct00112
톨루엔 (4.0 mL) 중 3-메톡시나프탈렌-1-일 트리플루오로메탄술포네이트 (389 mg, 1.27 mmol, 1.0 당량) 및 벤조페논 이민 (299.1 mg, 1.65 mmol, 1.3 당량)의 용액에 K2CO3 (228.1 mg, 1.65 mmol, 1.3 당량), Cs2CO3 (538.7 mg, 1.65 mmol, 1.3 당량) 및 BINAP (102.6 mg, 0.165 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 이어서 Pd2 (dba)3 (75.6 mg, 0.083 mmol, 0.05 당량)를 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 N-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-1,1-디페닐메탄이민 (396 mg, 92%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 338; RT = 2.321분.
단계 4: 화합물 12-5의 합성
Figure pct00113
N-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-1,1-디페닐메탄이민 (396 mg, 1.17 mmol) 및 MeOH (4.0 mL) 및 H2O (4.0 mL)의 혼합물에 HCl (1.5 mL)을 적가하였다. 혼합물을 70℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 Pet.에테르/EtOAc (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 3-메톡시나프탈렌-1-아민 (193 mg, 95.5%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 174; RT = 1.428분.
단계 5: 화합물 12-6의 합성
Figure pct00114
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (310 mg, 0.609 mmol, 1.0 당량) 및 3-메톡시나프탈렌-1-아민 (73.7 mg, 1.27 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.30 mL, 1.827 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (232 mg, 0.609 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (25 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((3-메톡시나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (150 mg, 37.1%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 665; RT = 1.218분.
단계 6: 화합물 12-7의 합성
Figure pct00115
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((3-메톡시나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (153 mg, 0.23 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.2 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (559 mg, 3.45 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (126 mg, 79.7%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 689; RT = 1.195분.
단계 7: 화합물 12-8의 합성
Figure pct00116
MeOH (8.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (126 mg, 0.183 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 20%, 약 50% 물로 습윤됨, 12.6 mg, 0.018 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (53 mg, 53%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 555; RT = 0.349분;
단계 8: 화합물 12의 합성
Figure pct00117
DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (53 mg, 0.095 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (29 mg, 0.287 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (5.0 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (8.6 mg, 0.095 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 20.3 mg, 35.2%, 12·HCOOH) (C33H36N8O4·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 609; RT = 0.985분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 3H), 6.96 - 6.78 (m,, 1H), 6.28 - 6.13 (m, 1H), 5.84 - 5.72 (m, 1H), 5.53 - 4.42 (m, 4H), 4.36 - 4.29 (m, 1H), 4.14 (dd, J = 10.8, 5.6 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 3.01 - 2.92 (m, 3H), 2.56 (s, 1H), 2.36 - 2.32 (m, 3H), 2.17 (dd, J = 17.2, 8.6 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H), 1.98 - 1.89 (m, 1H), 1.72 - 1.57 (m, 3H).
실시예 13
Figure pct00118
단계 1: 화합물 13-2의 합성
Figure pct00119
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (500 mg, 0.981 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (122 mg, 0.687 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.81 mL, 4.91 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (373 mg, 0.981 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (446 mg, 68%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 669; RT = 1.226분.
단계 2: 화합물 13-3의 합성
Figure pct00120
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 0.314 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (2.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시프로판 (830 mg, 4.71 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 7분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 90 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 29%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 707; RT = 1.303분.
단계 3: 화합물 13-4의 합성
Figure pct00121
무수 ACN (5.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 0.092 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TMSI (184 mg, 0.920 mmol, 10.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. Et3N (0.5 mL, 3.60 mmol, 39.1 당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (8:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (48 mg, 91%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 573; RT = 0.708분.
단계 4: 화합물 13의 합성
Figure pct00122
DCM (3.0 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (48 mg, 0.084 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (42 mg, 0.419 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (9.1 mg, 0.100 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 16.0 mg, 30%, 13·0.3HCOOH) (C33H35ClN8O3·0.3HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 627; RT = 1.050분
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31(s, 0.3H), 8.26 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.83 - 7.75 (m, 1H), 7.75 - 7.64 (m, 2H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 6.97 - 6.84 (m, 1H), 6.21 (d, J = 18.4 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.38 - 4.84 (m, 3H), 4.51 - 4.09 (m, 3H), 3.81 - 3.50 (m, 2H), 3.26 - 3.11 (m, 2H), 2.97 - 2.93 (m, 1H), 2.60 - 2.51 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.22 - 2.06 (m, 2H), 1.99 - 1.89 (m 1H), 1.74 - 1.54 (m, 3H), 1.20 - 1.03 (m, 3H).
실시예 14:
Figure pct00123
단계 1: 화합물 14-2의 합성
Figure pct00124
무수 DMF (10.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (500 mg, 0.982 mmol, 1.0 당량) 및 나프탈렌-1-아민 (98.3 mg, 0.688 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.49 mL, 2.58 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (373 mg, 0.982 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (40 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (424 mg, 68.2%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 635; RT = 1.189분.
단계 2: 화합물 14-3의 합성
Figure pct00125
벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 0.220 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1.4 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시프로판 (582.9 mg, 3.312 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 25 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (12 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (93 mg, 62.9%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 673; RT = 1.271분.
단계 3: 화합물 14-4의 합성
Figure pct00126
MeOH (8.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (93 mg, 0.138 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 20%, 약 50% 물로 습윤됨, 9.8 mg, 0.014 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (36 mg, 48.6%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 539; RT = 0.355분;
1. 단계 4: 화합물 14의 합성
Figure pct00127
DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (36 mg, 0.067 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (25 mg, 0.20 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.8 mg, 0.86 mmol, 1.3 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(6-에틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 6.6 mg, 16.7%, 14·HCOOH) (C33H36N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 593; RT = 1.008분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.42 (s, 1H), 8.13 (dd, J = 14.0, 8.0 Hz, 2H), 7.75 - 7.47 (m, 5H), 6.89 (s, 1H), 6.21 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.82 - 5.71 (m, 1H), 5.62 - 4.74 (m, 3H), 4.55 - 4.11 (m, 3H), 3.03 - 2.77 (m, 4H), 2.67 - 2.53 (m, 2H), 2.43 - 2.32 (m, 5H), 2.17 (dd, J = 16.8, 8.8 Hz, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 2H), 1.72 - 1.56 (m, 3H), 1.06 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 15
Figure pct00128
단계 1: 화합물 15-2의 합성
Figure pct00129
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (250 mg, 0.491 mmol, 1.0 당량) 및 퀴놀린-5-아민 (71 mg, 0.491 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (190 mg, 1.473 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (187 mg, 0.491 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(퀴놀린-5-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (140 mg, 45%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.851분; MS m/z (ESI): 636.3 [M+H]+.
단계 2: 화합물 15-3의 합성
Figure pct00130
벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(퀴놀린-5-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (130 mg, 0.2046 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (0.8 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (506 mg, 3.0694 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(퀴놀린-5-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 82%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.879분; MS m/z (ESI): 660.3 [M+H]+.
단계 3: 화합물 15-5의 합성
Figure pct00131
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(퀴놀린-5-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 0.167 mmol)의 혼합물에 Pd(OH)2/C (50 mg, 20% wt)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(퀴놀린-5-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (84 mg, 95%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.352분; MS m/z (ESI): 526.3 [M+H]+.
단계 4: 화합물 15의 합성
Figure pct00132
DCM (2 mL) 중 2-((S)-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(퀴놀린-5-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (84 mg, 0.16 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (48 mg, 0.48 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (14.4 mg, 0.16 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 염기성 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7-(퀴놀린-5-일)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (20 mg, 21%, 15)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.996분; MS m/z (ESI): 580.2 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.02 (dd, J = 4.1, 1.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 8.16 - 8.04 (m, 1H), 7.97 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.84 - 7.75 (m, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 1H), 6.96 - 6.80 (m, 1H), 6.21 (dd, J = 16.7, 1.8 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 5.64 - 4.70 (m, 3H), 4.58 - 4.08 (m, 3H), 3.84 - 3.35 (m, 2H), 3.24 - 2.88 (m, 4H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.35 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 2.17 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 2.03 (d, J = 10.7 Hz, 3H), 1.98 - 1.85 (m, 1H), 1.76 - 1.48 (m, 3H).
실시예 16
Figure pct00133
단계 1: 16-2-중간체의 합성
Figure pct00134
톨루엔 (20 mL) 중 N-벤질-5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (2.00 g, 6.50 mmol, 1.0 당량)의 용액에 페닐메탄아민 (2.08 g, 19.5 mmol, 3.0 당량), 탄산세슘 (6.35 g, 19.5 mmol, 3.0 당량), 1.1'-비나프틸-2.2'-디페닐 포스핀 (404 mg, 0.65 mmol, 0.1 당량) 및 Pd2(dba)3 (594 mg, 0.65 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 용액을 농축시키고, 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (10%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 표제 화합물 (1.9 g, 수율 87%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 336; RT = 2.047분.
단계 2: 16-2-중간체의 합성
Figure pct00135
메탄올 (20 mL) 중 N-벤질-5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.9 g)의 용액에 Pd/C (20%, w/w)를 첨가하고, 수소 분위기 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (1.2 g, 수율 86%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS: [M+1]+ =246; RT = 1.493분.
단계 3: 화합물 16-2의 합성
Figure pct00136
무수 DMF (4 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (400 mg, 0.786 mmol, 1.0 당량) 및 5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (135 mg, 0.550 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (304 mg, 2.358 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (298 mg, 0.0.786 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 MeOH/DCM (10%, v/v)으로 용리시키면서 정제하여 벤질 (2S)-4-(5-아미노-6-((5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (291 mg, 50%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 637; RT = 0.915분.
단계 4: 화합물 16-3의 합성
Figure pct00137
(2S)-4-(5-아미노-6-((5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (291 mg, 0.396 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (1 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (962 mg, 5.940 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 4분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 40 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (331 mg, 110%)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 761; RT = 0.915분.
단계 5: 화합물 16-4의 합성
Figure pct00138
DCM (3 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(5,6-디메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (331 mg, 0.436 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 10 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 MeOH/DCM (10%, v/v)으로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (127 mg, 43%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 677; RT = 0.898분.
단계 6: 화합물 16-5의 합성
Figure pct00139
MeOH (3 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (127 mg, 0.189 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 10%, 약 50% 물로 습윤됨, 12 mg)를 첨가하고, 반응 혼합물을 H2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (92 mg, 90%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 543; RT = 0.332분.
단계 7: 화합물 16의 합성
Figure pct00140
DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (92 mg, 0.170 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (51 mg, 0.510 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (12 mg, 0.136 mmol, 0.8 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (3 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% NH4HCO3)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(5,6-디메틸-1H-인다졸-4-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (5.82 mg, 5.8%, 16) (C31H36N10O3)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 597; RT = 1.061분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.47 (s, 1H), 7.63 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.40 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 5.85 - 5.80 (m, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.87 - 4.57 (m, 3H), 4.06 - 3.83 (m, 1H), 3.66 - 3.34 (m, 4H), 2.85 - 2.71 (m, 5H), 2.42 (s, 3H), 2.26 - 2.18 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.02 - 1.93 (m, 2H), 1.77 - 1.61 (m, 1H), 1.47 - 1.23 (m, 1H), 0.91 (t, J = 7.3 Hz, 1H).
실시예 17
Figure pct00141
단계 1: 화합물 17-1의 합성
Figure pct00142
무수 DMF (10.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (500 mg, 0.982 mmol, 1.0 당량) 및 나프탈렌-1-아민 (98.3 mg, 0.688 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.49 mL, 2.58 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (373 mg, 0.982 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (40 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (424 mg, 68.2%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 635; RT = 1.189분.
2. 단계 2: 화합물 17-3의 합성
Figure pct00143
벤질 (S)-4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.315 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (2.0 mL)의 혼합물에 (트리에톡시메틸)벤젠 (1.0 g, 4.725 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 50 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (85 mg, 37.5%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 721; RT = 1.265분.
단계 3: 화합물 17-4의 합성
Figure pct00144
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (85 mg, 0.118 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (탄소 상 20%, 약 50% 물로 습윤됨, 8.46 mg, 0.012 mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (69 mg, 99%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 587; RT = 0.763분;
단계 4: 화합물 17의 합성
Figure pct00145
DCM (5 mL) 중 2-((S)-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (69 mg, 0.118 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (45.6 mg, 0.354 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (5.0 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (10.6 mg, 0.118 mmol, 1 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 2.37 mg, 3.2%, 17·HCOOH) (C37H36N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 641; RT = 1.061분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 8.02 - 7.87 (m, 2H), 7.79 - 7.70 (m, 1H), 7.61 - 7.4 (m, 3H), 7.34 - 7.21 (m, 2H), 7.19 - 6.99 (m, 3H), 6.96 - 6.78 (m, 2H), 6.19 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 5.15 - 4.84 (m, 3H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.19 (dd, J = 16.4, 9.0 Hz, 1H), 3.22 - 3.09 (m, 4H), 2.95 (dd, J = 9.2, 3.6 Hz, 2H), 2.61 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.19 (dd, J = 16.8, 8.4 Hz, 1H), 1.99 - 1.92 (m, 1H), 1.74 - 1.58 (m, 3H).
실시예 18
Figure pct00146
단계 1: 화합물 18-2의 합성
Figure pct00147
벤질 (S)-4-(5-아미노-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-(나프탈렌-1-일카르바모일)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (65.6 mg, 0.11 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (0.4 mL)의 혼합물에 (트리에톡시메틸)벤젠 (371 mg, 1.65 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 2.5분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 25 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (27.3 mg, 36.4%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 682; RT = 1.277분.
단계 2: 화합물 18-3의 합성
Figure pct00148
DCM (4.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-7-(나프탈렌-1-일)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (65 mg, 0.095 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Et3N (65 mg, 0.095 mmol, 10.0 당량) 및 Et3SiH (110.5 mg, 0.095 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 이어서 PdCl (16. mg, 0.951 mmol, 10.0 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 (S)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-2-페닐-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (51 mg, 99%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 548; RT = 0.868분.
단계 3: 화합물 18의 합성
Figure pct00149
DCM (3 mL) 중 (S)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-2-페닐-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (52.2 mg, 0.095 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (19.3 mg, 0.285 mmol, 0.7 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (6.02 mg, 0.095 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-3-(나프탈렌-1-일)-2-페닐피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (HCOOH 염, 3.0 mg, 5.2%, 18·HCOOH) (C35H35N7O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.055분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 8.06 - 7.86 (m, 2H), 7.77 (dd, J = 6.4, 3.6 Hz, 1H), 7.55 (dd, J = 6.4, 2.6 Hz, 3H), 7.46 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.19 (m, 2H), 7.14 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.05 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.85 (dd, J = 16.4, 10.4 Hz, 1H), 6.15 (dd, J = 16.6, 2.4 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 10.4, 2.4 Hz, 1H), 4.59 - 4.01 (m, 6H), 3.75 (d, J = 22.8 Hz, 5H), 3.01 - 2.92 (m, 1H), 2.64 - 2.55 (m, 1H), 2.35 (d, J = 15.6 Hz, 3H), 2.29 - 2.10 (m, 1H), 1.96 (dd, J = 11.6, 7.6 Hz, 1H), 1.80 - 1.54 (m, 3H).
실시예 19
Figure pct00150
단계 1: 화합물 19-3의 합성
Figure pct00151
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (200 mg, 0.393 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (49 mg, 0.275 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (152 mg, 1.179 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (149 mg, 0.393 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (30 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 51%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.955분; MS m/z (ESI): 669.3 [M+H]+.
단계 2: 화합물 19-4의 합성
Figure pct00152
DCM (2 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (80 mg, 0.120 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 0℃에서 DIEA (46 mg, 0.360 mmol)에 이어서 트리포스겐 (35 mg, 0.120 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1)는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (15 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,8-디옥소-5,6,7,8-테트라히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (58 mg, 70%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.875분; MS m/z (ESI): 695.2 [M+H]+.
단계 3: 화합물 19-5의 합성
Figure pct00153
CH3CN (2.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,8-디옥소-5,6,7,8-테트라히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (58 mg, 0.0836 mmol, 1 당량)의 혼합물에 TMSI (134 mg, 0.6686 mmol, 8 당량)를 첨가하고, 혼합물을 N2 하에 35℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1)는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물에 Et3N (135 mg, 1.3376 mmol, 16 당량)을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 H2O (15 mL)로 희석하고, DCM/MeOH (10/1, 3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (8:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,8-디옥소-5,6,7,8-테트라히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (46 mg, 100%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.379분; MS m/z (ESI): 561.0 [M+H]+.
단계 4: 화합물 19의 합성
Figure pct00154
DCM (2 mL) 및 CH3CN (2 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,8-디옥소-5,6,7,8-테트라히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (46 mg, 0.0821 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (25 mg, 0.2463 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.4 mg, 0.0821 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,8-디옥소-5,6,7,8-테트라히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 8 mg, 16%, 19·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.737분; MS m/z (ESI): 615.3 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.27 (s, 1.42H, HCOOH), 8.10 - 7.97 (m, 2H), 7.70 - 7.62 (m, 1H), 7.58 - 7.54 (m, 1H), 7.52 - 7.45 (m, 1H), 7.41 - 7.30 (m, 1H), 7.00 - 6.80 (m, 1H), 6.20 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.42 - 4.60 (m, 1H), 4.50 - 3.91 (m, 4H), 3.71 - 3.60 (m, 1H), 3.08 - 2.86 (m, 4H), 2.82 - 2.61 (m, 2H), 2.43 (d, J = 11.8 Hz, 3H), 2.35 - 2.25 (s, 1H), 2.04 - 1.87 (m, 1H), 1.81 - 1.49 (m, 3H).
실시예 20
Figure pct00155
3. 단계 1: 화합물 20-2의 합성
Figure pct00156
무수 DCM (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (14.0 g, 66.67 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 PPTS (1.68 g, 6.68 mmol 0.1 당량)를 첨가하였다. 이어서, DHP (16.83 g, 200.02 mmol, 3 당량)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (15%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (10.8 g, 55%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 295; RT = 2.158분.
단계 2: 화합물 20-3의 합성
Figure pct00157
무수 THF (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (5.0 g, 17.00 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (-78℃) 용액에 B(O-iPr)3 (6.4 g, 34.00 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 이어서, n-BuLi (THF 중 2.5 mol/L, 13.0 mL, 31.46 mmol, 1.85 당량)를 상기 용액에 30분의 기간에 걸쳐 적가하면서, 반응 온도를 -70℃ 내지 -65℃로 유지하였다. 첨가한 후, 반응물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl의 용액 (20 mL)으로 켄칭하고, MTBE (30 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 MTBE (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 MTBE (10 mL) 중에 용해시켰다. 석유 에테르를 용액에 0℃에서 적가하였다. 석유 에테르 첨가 동안 백색 고체가 침전되었다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 석유 에테르 (30 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 (5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)보론산 (4.2 g, 95%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 261; RT = 1.242분.
단계 3: 화합물 20-4의 합성
Figure pct00158
H2O (20 mL) 중 (5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)보론산 (3.0 g, 11.54 mmol, 1.0 당량) 및 시클로헵트-2-엔-1-온 (3.8 g, 34.62 mmol, 3.0 당량)의 용액에 NaHCO3 (1.94 g, 23.08 mmol, 2.0 당량) 및 [RhCl(COD)]2 (0.28 g, 0.58 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (20%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 3-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)시클로헵탄-1-온 (1.3 g, 35%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 327; RT = 1.662분.
단계 4: 화합물 20-5의 합성
Figure pct00159
THF (5.0 mL) 중 3-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)시클로헵탄-1-온 (763 mg, 2.34 mmol, 1.0 당량) 및 디메틸 카르보네이트 (4.0 mL, 46.81 mmol, 20.0 당량)의 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 140 mg, 5.85 mmol, 2.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 켄칭하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (20%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 메틸 4-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-옥소시클로헵탄-1-카르복실레이트 (684 mg, 76%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 385; RT = 1.918분 & 2.315분.
단계 5: 화합물 20-6의 합성
Figure pct00160
무수 MeOH (4.0 mL) 중 메틸 4-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-옥소시클로헵탄-1-카르복실레이트 (684 mg, 1.78 mmol, 1.0 당량) 및 메틸 카르밤이미도티오에이트 (1238 mg, 8.90 mmol, 5.0 당량)의 용액에 NaOMe (962 mg, 17.8 mmol, 10.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (60%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-올 (40 mg, 5%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 425; RT = 1.557분.
단계 6: 화합물 20-7의 합성
Figure pct00161
무수 DCM (3 mL) 중 8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-올 (40 mg, 0.094 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (37 mg, 0.282 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (1 mL) 중 Tf2O (32 mg, 0.113 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (2 mL)로 켄칭하고, DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (50 mg, 96%)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 557; RT = 1.988분.
단계 7: 화합물 20-8의 합성
Figure pct00162
무수 DMF (3 mL) 중 8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일 트리플루오로메탄술포네이트 (50 mg, 0.090 mmol, 1.0 당량) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (33 mg, 0.180 mmol, 2.0 당량)의 교반 혼합물에 DIEA (34 mg, 0.270 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc (10 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (60%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (48 mg, 91%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 593; RT = 1.580분;
단계 8: 화합물 20-9의 합성
Figure pct00163
무수 DCM (3 mL) 중 tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (48 mg, 0.082 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 m-CPBA (33.47 mg, 0.165 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (2 mL)로 켄칭하고, DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸술포닐)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (77 mg, 150%)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 625; RT = 2.018분;
단계 9: 화합물 20-10의 합성
Figure pct00164
무수 THF (5 mL) 중 ((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (28 mg, 0.248 mmol, 2.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 24 mg, 0.620 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(메틸술포닐)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (77 mg, 0.124 mmol, 1.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (2 mL)로 켄칭하고, DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 85%)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 660; RT = 0.962분.
단계 10: 화합물 20-11의 합성
Figure pct00165
DCM (3 mL) 중 tert-부틸 4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (70 mg, 0.106 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜 8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘 (75 mg, 150%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 476; RT = 0.588분.
단계 11: 화합물 20의 합성
Figure pct00166
DCM (3 mL) 중 8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-4-(피페라진-1-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘 (75 mg, 0.158 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (48 mg, 0.474 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (1 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (14.29 mg, 0.158 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (5 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% NH4HCO3)에 의해 정제하여 1-(4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-일)프로프-2-엔-1-온 (2.42 mg, 2.9%, 20) (C30H39N7O2)을 수득하였다 .
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 530; RT = 1.493분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.20 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.22 - 7.07 (m, 1H), 6.70 - 6.52 (m, 1H), 6.43 - 6.25 (m, 1H), 5.84 - 5.66 (m, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.51 (s, 1H), 3.97 - 3.67 (m, 4H), 3.60 - 3.19 (m, 5H), 3.16 - 2.59 (m, 6H), 2.48 - 1.96 (m, 8H), 1.65 (s, 3H), 1.59 - 1.05 (m, 5H).
실시예 21
Figure pct00167
4. 단계 1: 화합물 21-1의 합성
Figure pct00168
무수 MeOH (25 mL) 중 에틸 1-벤질-3-옥소피페리딘-4-카르복실레이트 (2.00 g, 7.66 mmol, 1.0 당량)의 용액에 메틸 카르밤이미도티오에이트 (0.7 g, 7.66 mmol, 1.0 당량) 및 NaOMe (2.1 g, 38.31 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응물을 농축시키고, 물 (100 mL)에 의해 용해시키고, 여과하였다. 여과물 케이크를 농축시켜 7-벤질-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (1.2 g, 54%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 288; RT = 0.798분.
단계 2: 화합물 21-2의 합성
Figure pct00169
무수 DCE (10 mL) 중 7-벤질-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-올 (1.0 g, 3.48 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (0.6 mL, 3.48 mmol, 1.0 당량)의 교반 혼합물에 POCl3 (5 ml, 28 mmol, 8.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 7-벤질-4-클로로-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘 (0.8 g, 75%)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 306; RT = 2.023분.
단계 3: 화합물 21-3의 합성
Figure pct00170
무수 DMF (10 mL) 중 7-벤질-4-클로로-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘 (500 mg, 1.64 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (634 mg, 4.92 mmol, 3.0 당량)의 교반 혼합물에 tert-부틸 메틸(피롤리딘-3-일) 카르바메이트 (328 mg, 1.64 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EA (1:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (1-(7-벤질-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (520 mg, 68%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 470; RT = 2.064분.
단계 4: 화합물 21-4의 합성
Figure pct00171
무수 DCE (16 mL) 중 tert-부틸 (1-(7-벤질-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (500 mg, 1.1 mmol, 1.0 당량)의 용액에 1-클로로에틸 카르보노클로리데이트 (305 mg, 2.1 mmol, 2.0 당량)를 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 실온에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 메틸(1-(2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (180 mg, 45%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 380; RT =0.668분.
단계 5: 화합물 21-5의 합성
Figure pct00172
톨루엔 (10 mL) 중 tert-부틸 메틸(1-(2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (100 mg, 0.26 mmol, 1.0 당량) 및 1-브로모-8-클로로나프탈렌 (190 mg, 0.79 mmol, 3.0 당량)의 용액에 CS2CO3 (258 mg, 0.26 mmol, 3.0 당량), Ruphos (24 mg, 0.05 mmol, 0.2 당량) 및 Pd2(dba)3 (36 mg, 0.04 mmol, 0.15 당량)를 첨가하고, 혼합물을 Ar 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EA (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (48 mg, 33%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 540; RT = 2.100분.
단계 6: 화합물 21-6의 합성
Figure pct00173
CHCl3 (4.0 mL) 중 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(메틸티오)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (45 mg, 0.08 mmol, 1.0 당량)의 용액에 m-CPBA (16 mg, 0.09 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(메틸술피닐)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (23 mg, 50%)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 556; RT = 1.913분.
단계 7: 화합물 21-7의 합성
Figure pct00174
THF (5.0 mL) 중 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(메틸술피닐)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (20 mg, 0.03 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (8.3 mg, 0.06 mmol, 2.0 당량) 및 t-BuOK (4.4 mg, 0.04 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 물 (30 mL)로 희석하고, DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (16 mg, 72%)를 수득하였다.
단계 8: 화합물 21-8의 합성
Figure pct00175
DCM (1.0 mL) 중 tert-부틸 (1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)(메틸)카르바메이트 (16 mg, 0.02 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시키고, 1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-N-메틸피롤리딘-3-아민 (TFA 염, 12 mg, 90%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 직접 사용하였다.
단계 9: 화합물 21의 합성
Figure pct00176
DCM (2.5 mL) 중 1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)-N-메틸피롤리딘-3-아민 (TFA 염, 12 mg 0.02 mmol) 및 Et3N (12 mg, 0.12 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (2.6 mg, 0.028 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 반응물을 농축시키고, 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 N-(1-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘-4-일)피롤리딘-3-일)-N-메틸아크릴아미드 (HCOOH 염, 2.02 mg, 12%, 21·HCOOH) (C31H37ClN6O2·HCOOH)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 561; RT = 0.991분;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.39 (s, 3H ), 7.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 2H), 7.47 - 7.41 (m, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.15 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 23.2 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.08 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.02 - 3.92 (m, 2H), 3.74 (s, 1H), 3.61 (s, 1H), 3.04 - 2.84 (m, 7H), 2.32 (d, J = 3.7 Hz, 6H), 2.22 - 1.98 (m, 4H), 1.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.62 (m, 3H).
실시예 22
Figure pct00177
단계 1: 화합물 22-2의 합성
Figure pct00178
무수 DCM (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (14.0 g, 66.67 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 PPTS (1.68 g, 6.68 mmol 0.1 당량)를 첨가하였다. 이어서, DHP (16.83 g, 200.02 mmol, 3 당량)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (15%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (10.8 g, 55%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 2.158분; MS m/z (ESI): 297.1 [M+3]+.
단계 2: 화합물 22-3의 합성
Figure pct00179
무수 디옥산 (50 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (2 g, 6.80 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 BnNH2 (2.18 g, 20.4 mmol 3 당량), BINAP (423 mg, 0.68 mmol) 및 Cs2CO3 (6.63 g, 20.4 mmol)에 이어서 Pd2(dba)3 (622 mg, 0.68 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르/EtOAc (5/1-2/1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 N-벤질-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.9 g, 87%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 1.813분; MS m/z (ESI): 322.1 [M+H]+.
단계 3: 화합물 22-4의 합성
Figure pct00180
무수 MeOH (20 mL) 중 N-벤질-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.95 g, 6.07 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 Pd/C (600 mg, 10% wt)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (30 psi) 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.28 g, 91%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 1.249분; MS m/z (ESI): 232.1 [M+H]+.
단계 4: 화합물 22-6의 합성
Figure pct00181
무수 DMF (3.0 mL) 중 (S)-5-아미노-6-(4-((벤질옥시)카르보닐)피페라진-1-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (160 mg, 0.34 mmol, 1.0 당량) 및 5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (79 mg, 0.34 mmol, 1 당량)의 혼합물에 DIEA (155 mg, 1.02 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (155 mg, 0.408 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (80 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 80 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 26%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.946분; MS m/z (ESI): 684.4 [M+H]+.
단계 5: 화합물 22-8의 합성
Figure pct00182
AcOH (0.5 mL) 중 벤질 4-(5-아미노-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6-((1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (45 mg, 0.0659 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (160 mg, 0.988 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 8분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 관찰되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액 (20 mL)으로 켄칭하여 pH=8-9로 조정하고, DCM (3 X 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 벤질 4-(6-메틸-7-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (60 mg, >100%)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.946분; MS m/z (ESI): 708.4 [M+H]+.
단계 6: 화합물 22-9의 합성
Figure pct00183
DCM (6 mL) 중 벤질 4-(6-메틸-7-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.1415 mmol, 1 당량)의 혼합물에 TFA (2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (69 mg, 78%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.887분; MS m/z (ESI): 624.3 [M+H]+.
단계 7: 화합물 22-10의 합성
Figure pct00184
iPrOH (1 mL) 및 THF (1 mL) 중 벤질 (S)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (69 mg, 0.1107 mmol)의 혼합물에 Pd(OH)2/C (15 mg, 20% wt)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (30 psi) 하에 30℃에서 41시간 동안 교반하였다. LCMS는 목적 MS가 관찰되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 MeOH (30 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 (S)-2-메틸-3-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (50 mg, 92%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.311분; MS m/z (ESI): 490.3 [M+H]+.
단계 8: 화합물 22의 합성
Figure pct00185
DCM (1 mL) 및 THF (1 mL) 중 (S)-2-메틸-3-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-(피페라진-1-일)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (50 mg, 0.1022 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (31 mg, 0.3066 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.5 mg, 0.0818 mmol, 0.8 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 목적 MS가 관찰되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아크릴로일피페라진-1-일)-2-메틸-3-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6-((1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (HCOOH 염, 2.5 mg, 4.5%, 22)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.768분; MS m/z (ESI): 544.2 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.35 (s, 1H), 8.33 (s, 1.85H), 7.96 (s, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.17 (dd, J = 16.7, 2.2 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 10.5, 2.2 Hz, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 4H), 4.15 - 4.11 (m, 1H), 3.83 - 3.70 (m, 5H), 2.97 - 2.91 (m, 1H), 2.59 - 2.54 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.97 - 1.90 (m, 1H), 1.71 - 1.59 (m, 3H).
실시예 23
Figure pct00186
단계 1: 화합물 23-2의 합성
Figure pct00187
무수 DCM (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (14.0 g, 66.67 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온에서 PPTS (1.68 g, 6.68 mmol 0.1 당량)를 첨가하였다. 이어서, DHP (16.83 g, 200.02 mmol, 3 당량)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (15%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (10.8 g, 55%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 2.158분; MS m/z (ESI): 297.1 [M+3]+.
단계 2: 화합물 23-3의 합성
Figure pct00188
무수 디옥산 (50 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (2 g, 6.80 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 BnNH2 (2.18 g, 20.4 mmol 3 당량), BINAP (423 mg, 0.68 mmol) 및 Cs2CO3 (6.63 g, 20.4 mmol)에 이어서 Pd2(dba)3 (622 mg, 0.68 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피에 의해 석유 에테르/EtOAc (5/1-2/1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 N-벤질-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.9 g, 87%)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 1.813분; MS m/z (ESI): 322.1 [M+H]+.
단계 3: 화합물 23-4의 합성
Figure pct00189
무수 MeOH (20 mL) 중 N-벤질-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.95 g, 6.07 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 Pd/C (600 mg, 10% wt)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (30 psi) 하에 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 검출되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (1.28 g, 91%)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 1.249분; MS m/z (ESI): 232.1 [M+H]+.
단계 4: 화합물 23-6의 합성
Figure pct00190
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (250 mg, 0.491 mmol, 1.0 당량) 및 5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-아민 (79 mg, 0.344 mmol, 0.7 당량)의 혼합물에 DIEA (190 mg, 1.493 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (186 mg, 0.491 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (50 mL)로 희석하고, 염수 (3 X 50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (1/0-10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (2S)-4-(5-아미노-6-((5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 34%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.937분; MS m/z (ESI): 723.3 [M+H]+.
단계 5: 화합물 23-8의 합성
Figure pct00191
AcOH (0.75 mL) 중 벤질 (2S)-4-(5-아미노-6-((5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.138 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (342 mg, 2.077 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 7분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 관찰되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액 (20 mL)으로 켄칭하여 pH=8-9로 조정하고, DCM (3 X 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (124 mg, 100%)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.951분; MS m/z (ESI): 747.4 [M+H]+.
단계 6: 화합물 23-9의 합성
Figure pct00192
DCM (6 mL) 중 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (124 mg, 0.166 mmol, 1 당량)의 혼합물에 TFA (2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 15℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 수성 NaHCO3 용액을 사용하여 pH = 8-9로 조정하고, DCM (3 X 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (73 mg, 66%)를 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.864분; MS m/z (ESI): 663.3 [M+H]+.
단계 7: 화합물 23-10의 합성
Figure pct00193
MeOH (2 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (73 mg, 0.110 mmol)의 혼합물에 Pd(OH)2/C (20 mg, 20% wt)를 첨가하고, 혼합물을 H2 (50 psi) 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 2-((S)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (45 mg, 77%)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS: Rt: 0.934분; MS m/z (ESI): 529.2 [M+H]+.
단계 8: 화합물 23의 합성
Figure pct00194
DCM (3 mL) 중 2-((S)-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (45 mg, 0.0852 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (26 mg, 0.2556 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (7.7 mg, 0.0852 mmol, 1.0 당량)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 N2 하에 -20℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 X 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 HCOOH 정제용-HPLC 분리에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(6-메틸-7-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 4.0 mg, 8%, 23)을 수득하였다.
LCMS: Rt: 0.823분; MS m/z (ESI): 583.3 [M+H]+;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.37 (s, 1H), 8.33 (s, 1.92H), 7.92 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.02 - 6.76 (m, 1H), 6.20 (d, J = 18.2 Hz, 1H), 5.79 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.63 - 4.73 (m, 3H), 4.49 - 4.30 (m, 1.5H), 4.17 - 4.11 (m, 1.5H), 3.78 - 3.64 (m, 2H), 3.14 - 2.93 (m, 4H), 2.60 - 2.52 (m, 1H), 2.36 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.12 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.98 - 1.89 (m, 1H), 1.71 - 1.59 (m, 3H).
실시예 24
Figure pct00195
단계 1: 화합물 24-2의 합성
Figure pct00196
무수 THF (50 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.0 g, 0.019 mol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (30 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.75 g, 0.019 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (4.6 mL, 0.028 mol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 Ar 하에 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet. 에테르/EtOAc (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.2 g, 조 물질)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 430; RT = 2.141분.
단계 2: 화합물 24-3의 합성
Figure pct00197
무수 DMF (60.0 mL) 중 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.2 g, 0.019 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (6.3 ml, 0.038 mol, 2.0 당량)의 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.3 g, 0.029 mol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.8 g, 91% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 509; RT = 1.099분.
단계 3: 화합물 24-4의 합성
Figure pct00198
무수 DMF (20 mL)/EtOH (60 mL) 중 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.8 g, 0.017 mol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (19.6 g, 0.087 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (120 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 180 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (160 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.3 g, 40% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 479; RT = 0.867분.
단계 4: 화합물 24-5의 합성
Figure pct00199
MeOH (60 mL) 및 H2O (10 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.3 g, 0.007 mol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH·H2O (1.45 g, 0.034 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (0.5 M)을 사용하여 pH = 6으로 산성화시킨 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (5.06 g, 조 물질)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 451; RT = 0.928분.
단계 5: 화합물 24-6의 합성
Figure pct00200
무수 DMF (5.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (800 mg, 1.78 mmol, 1.0 당량) 및 8-메틸나프탈렌-1-아민 (220 mg, 1.24 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (0.88 mL, 5.33 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (675 mg, 1.78 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (430 mg, 57% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 688.0; RT = 1.406분.
단계 6: 화합물 24-7의 합성
Figure pct00201
무수 ACN (3.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.33 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (259 mg, 3.28 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (414 mg, 1.97 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 25 mL)로 켄칭하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 49% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 610; RT = 1.227분.
단계 7: 화합물 24-8의 합성
Figure pct00202
무수 DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.15 mmol)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)-2,3-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4(1H)-온 (TFA 염, 96 mg, 94% 수율)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 588; RT = 0.791분.
단계 8: 화합물 24-a & 24-b의 합성
Figure pct00203
무수 DCM (2.5 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)-2,3-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4(1H)-온 (TFA 염, 96 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (71 mg, 0.70 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (13 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (6.4 mg, 15% 수율, 24-a), 및 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (7.4 mg, 18% 수율, 24-b)을 수득하였다.
24-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 642; RT = 1.840분; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.53 (m, 2H), 7.44 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 6.71 - 6.53 (m, 1H), 6.39 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.69 - 5.29 (m, 1H), 4.69 - 4.27 (m, 3H), 4.05 - 3.80 (m, 1H), 3.71 - 3.52 (m, 2H), 3.47 - 3.14 (m, 2H), 2.93 (s, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.44 (s, 1H), 2.21 - 2.00 (m, 2H), 1.97 - 1.78 (m, 3H), 1.45 - 1.37(m, 3H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.8.
24-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 642; RT = 1.831분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.53 (m, 2H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 6.68 - 6.51 (m, 1H), 6.39 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.69 - 5.28 (m, 1H), 4.74 - 4.29 (m, 3H), 4.07 - 3.79 (m, 1H), 3.69 - 3.49 (m, 2H), 3.44 - 3.15 (m, 2H), 2.85 (s, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.42 - 2.33 (m, 1H), 2.28 - 1.97 (m, 2H), 1.95 - 1.75 (m, 3H), 1.48 - 1.37(m, 3H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.9.
실시예 25
Figure pct00204
단계 1: 화합물 25-3의 합성
Figure pct00205
무수 THF (50 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.0 g, 0.019 mol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (40 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (4.9 g, 0.019 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (3.6 g, 0.028 mol, 1.5 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 (S)-6-(4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.3 g, 69% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 489; RT = 1.948분.
단계 2: 화합물 25-4의 합성
Figure pct00206
무수 THF (100 mL) 중 1-(tert-부틸) 2-메틸(2S,4R)-4-플루오로피롤리딘-1,2-디카르복실레이트 (10.0 g, 0.040 mol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiAlH4 (5.4 g, 0.142 mol, 3.5 당량)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 희석한 다음, H2O (54 mL), 15% 수성 NaOH (54 mL) 및 H2O (162 mL)로 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 격렬히 교반하고, 침전물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 EtOAc (20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 여과물을 합하고, 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 ((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (4.06 g, 75% 수율)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 3: 화합물 25-5의 합성
Figure pct00207
무수 DMF (60 mL) 중 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.3 g, 0.013 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (3.3 g, 0.026 mol, 2.0 당량)의 용액에 ((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (2.6 g, 0.019 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (4.4 g, 58% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 586; RT = 1.092분.
단계 4: 화합물 25-6의 합성
Figure pct00208
무수 DMF (20 mL)/EtOH (60 mL) 중 에틸 6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (4.0 g, 0.07 mol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (7.7 g, 0.34 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (120 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 180 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (120 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.4 g, 63% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 556; RT = 1.025분.
단계 5: 화합물 25-7의 합성
Figure pct00209
MeOH (60 mL) 및 H2O (10 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.4 g, 0.004 mol, 1.0 당량)의 용액에 LiOH·H2O (0.91 g, 0.022 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (1.0 M)을 사용하여 산성화시켜 pH = 6으로 조정한 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (3.9 g, 조 물질)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 528; RT = 1.120분.
단계 6: 화합물 25-9의 합성
Figure pct00210
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (3.9 g, 7.0 mmol, 1.0 당량) 및 8-메틸나프탈렌-1-아민 (0.9 g, 5.0 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (2.9 g, 20 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (3.1 g, 8.0 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (80 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (80 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (2.0 g, 59% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 687; RT = 1.222분.
단계 7: 화합물 25-10의 합성
Figure pct00211
무수 ACN (3.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.00 g, 1.46 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (1.15 g, 14.6 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (1.84 g, 8.75 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 40 mL)로 켄칭하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 11% 수율)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 764; RT = 1.371분.
단계 8: 화합물 25-11의 합성
Figure pct00212
무수 ACN (5.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.131 mmol)의 용액에 TMSI (262 mg, 1.31 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 Et3N (1.0 mL)으로 처리하고, 농축시키고, 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (10 mg, 85% 수율)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 631; RT = 0.870분.
단계 9: 화합물 25-a & 25-b의 합성
Figure pct00213
DCM (2.5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (70 mg, 0.10 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (31 mg, 0.31 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (13.8 mg, 0.14 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일) (3.2 mg, 4% 수율, 25-a) 및 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일) (3.5 mg, 4% 수율, 25-b)을 수득하였다.
25-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 685; RT = 1.178분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.67 - 7.55 (m, 2H), 7.52 - 7.41 (m, 2H), 6.72 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 5.84 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.70 - 4.77 (m, 3H), 4.64 (s, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.86 - 3.45 (m, 2H), 3.26 (s, 1H), 2.98 - 2.87 (m, 1H), 2.87 - 2.71 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.41 - 2.09 (m, 3H), 1.39 - 1.27 (m, 2H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.79, -170.75.
25-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 685; RT = 1.704분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.09 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.56 (m, 2H), 7.49 - 7.42 (m, 2H), 6.71 - 6.53 (m, 1H), 6.42 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 5.56 - 4.84 (m, 3H), 4.70 - 4.45 (m, 2H), 4.13 - 3.82 (m, 1H), 3.76 - 3.44 (m, 2H), 3.20 (s, 1H), 2.89 (s, 1H), 2.86 - 2.62 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 2.40 - 2.11 (m, 3H), 1.39 - 1.26 (m, 2H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.83, -170.74.
실시예 26
Figure pct00214
단계 1: 화합물 26-3의 합성
Figure pct00215
무수 DMF (20 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (1.80 g, 4.0 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (0.49 g, 3.0 mmol, 0.7 당량)의 용액에 DIEA (1.55 g, 12.0 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (1.52 g, 4.0 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (100 mL)로 희석하고, EtOAc (60 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.06 g, 63% 수율, 26-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 610; RT = 1.259분.
단계 2: 화합물 26-5의 합성
Figure pct00216
tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (5.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (2.25 mL, 12.3 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 3분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 수성 NaHCO3 (120 mL)로 켄칭하고, DCM (60 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 35% 수율, 26-5)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 634; RT = 1.174분.
단계 3: 화합물 26-6의 합성
Figure pct00217
DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (180 mg, 0.28 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (136 mg, 89% 수율, 26-6)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 534; RT = 0.758분.
단계 4: 화합물 26-a 및 26-b의 합성
Figure pct00218
무수 DCM (5 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (130 mg, 0.24 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (74 mg, 0.73 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (28 mg, 0.43 mmol, 1.3 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (22 mg, 15% 수율, 26-a), 및 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (20 mg, 15% 수율, 26-b)을 수득하였다.
26-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 588; RT = 1.745분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.58 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 1H), 7.39 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.71 - 6.53 (m, 1H), 6.44 - 6.34 (m, 1H), 5.77 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 5.34 - 4.27 (m, 3H), 4.12 - 3.70 (m, 1H), 3.67 - 3.48 (m, 2H), 3.43 - 2.82 (m, 3H), 2.59 (s, 3H), 2.46 - 2.27 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 2.00 - 1.69 (m, 4H), 1.40 - 1.35 (m, 3H).
26-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 588; RT = 1.752분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.69 - 6.53 (m, 1H), 6.38 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.77 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.35 - 4.32 (m, 3H), 4.13 - 3.73 (m, 1H), 3.67 - 3.47 (m, 2H), 3.40 - 3.06 (m, 2H), 2.92 (s, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.29 - 2.21 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.10 - 2.05 (m, 1H), 1.86 - 1.81 (m, 4H). 1.38 (d, J = 8.0 Hz, 3H).
실시예 27
Figure pct00219
단계 1: 화합물 27-3의 합성
Figure pct00220
tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (500 mg, 0.82 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (5.0 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시프로판 (2.5 mL, 12.3 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 3분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 수성 NaHCO3 (120 mL)로 켄칭하고, DCM (60 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 41% 수율, 27-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 648; RT = 1.218분.
단계 2: 화합물 27-4의 합성
Figure pct00221
DCM (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (220 mg, 0.34 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-에틸-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (170 mg, 90% 수율, 27-4)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 548; RT = 0.720분.
단계 3: 화합물 27-a & 27-b의 합성
Figure pct00222
무수 DCM (5 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-에틸-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (170 mg, 0.31mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (94 mg, 0.93 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (42 mg, 0.47 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-에틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (32 mg, 17% 수율, 27-a), 및 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-에틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (25 mg, 13% 수율, 27-b)을 수득하였다.
27-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.840분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.73 - 6.49 (m, 1H), 6.37 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.40 - 4.28 (m, 3H), 4.13 - 3.70 (m, 1H), 3.67 - 3.44 (m, 2H), 3.38 - 3.03 (m, 2H), 2.87 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.44 - 2.16 (m, 5H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.43 - 1.33 (m, 3H), 1.16 (t, J = 6.9 Hz, 3H).
27-b:
CMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.847분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.55 (dd, J = 7.4, 0.9 Hz, 1H), 7.43 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 6.73 - 6.50 (m, 1H), 6.37 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 5.51 - 4.34 (m, 3H), 4.09 - 3.77 (m, 1H), 3.68 - 3.42 (m, 2H), 3.37 - 3.05 (m, 2H), 2.90 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.46 - 2.13 (m, 5H), 2.12 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.74 (m, 3H), 1.38 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 28
Figure pct00223
단계 1: 화합물 28-3의 합성
Figure pct00224
무수 THF (40 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.21 g, 23.4 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (30 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.00 g, 23.4 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (4.52 g, 35.0 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (2:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.80 g, 85% 수율, 28-3)를 수득하였다.
단계 2: 화합물 28-5의 합성
Figure pct00225
무수 DMF (30 mL) 중 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.80 g, 19.7 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (5.13 g, 39.7 mmol, 2.0 당량)의 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.43 g, 29.8 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 용액을 염수 (120 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (10.00 g, 96% 수율, 28-5)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 523; RT = 1.125분.
단계 3: 화합물 28-6의 합성
Figure pct00226
무수 EtOH (50 mL)/DMF (50 mL) 중 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (10.00 g, 19.2 mmol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (21.66 g, 96.0 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (150 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 200 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (120 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.00 g, 21% 수율, 28-6)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 451; RT = 0.928분.
단계 4: 화합물 26-7의 합성
Figure pct00227
MeOH (10 mL) 및 물 (3 mL) 중 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.00 g, 4.06 mmol, 1.0 당량)의 용액에 LiOH·H2O (854 mg, 20.3 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 수성 HCl (0.5 M)을 사용하여 산성화시켜 pH = 6으로 조정한 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (3.38 g, 조 물질, 28-7)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 465; RT = 1.079분.
단계 5: 화합물 28-9의 합성
Figure pct00228
무수 DMF (30 mL) 중 6-아미노-4-클로로-1-(2,6-디메틸페닐)피리미딘-2(1H)-온 (3.38 g, 7.3 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (1.03 g, 5.8 mmol, 0.8 당량)의 용액에 DIEA (2.82 g, 21.8 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (3.32 g, 8.7 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 용액을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 염수 (120 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.30 g, 29% 수율, 28-9)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 624; RT = 1.340분.
단계 6: 화합물 28-11의 합성
Figure pct00229
tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.30 g, 2.1 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (15 mL)의 혼합물에 1,1,1-트리에톡시에탄 (5.11 g, 31.5 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 135℃에서 3분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 수성 NaHCO3 (120 mL)로 켄칭하고, DCM (60 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-메틸-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (710 mg, 52% 수율, 28-11)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 648; RT = 1.306분.
단계 7: 화합물 28-12의 합성
Figure pct00230
DCM (5 mL) 중 tert-부틸 4-(1-(2,6-디메틸페닐)-6-(2-플루오로벤즈아미도)-2-옥소-1,2-디히드로피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (710 mg, 1.1 mmol, 1.0 당량)의 용액에 트리플루오로아세트산 (2.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 NaHCO3 (포화 30 mL)으로 처리하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (15 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (550 mg, 92% 수율, 28-12)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 548; RT = 0.697분.
단계 9: 화합물 28-a 및 28-b의 합성
Figure pct00231
무수 DCM (3 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (550 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (305 mg, 3.0 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (90.5 mg, 1.0 mmol, 1.0 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (25 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (12.35 mg, 2% 수율, 28-a), 및 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-메틸-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (3.56 mg, 0.6% 수율, 28-b)을 수득하였다.
28-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.787분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.64 (m, 1H), 7.59 (dd, J = 7.4, 1.0 Hz, 1H), 7.47 (dd, J = 16.2, 8.2 Hz, 2H), 6.59 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 5.72 - 5.55 (m, 1H), 4.92 - 4.77 (m, 2H), 4.25 - 4.00 (m, 3H), 3.87 - 3.70 (m, 4H), 3.04 - 2.90 (m, 4H), 2.33 (s, 1H), 2.13 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.49 (t, J = 6.8 Hz, 6H).
28-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602; RT = 1.793분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (dd, J = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.3, 0.9 Hz, 1H), 7.68 - 7.62 (m, 1H), 7.58 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 2H), 6.60 (dd, J = 16.8, 10.4 Hz, 1H), 6.44 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.80 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 5.72 - 5.50 (m, 1H), 4.71 - 4.36 (m, 2H), 4.21 - 4.03 (m, 2H), 3.84 - 3.70 (m, 2H), 3.48 - 2.97 (m, 2H), 2.88 - 2.26 (m, 5H), 2.17 (s, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.48 (dd, J = 6.5, 4.4 Hz, 6H).
실시예 29
Figure pct00232
단계 1: 화합물 29-2의 합성
Figure pct00233
무수 THF (40 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.21 g, 23.4 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (30 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (5.00 g, 23.4 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (4.52 g, 35.0 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 완결되었음을 나타냈다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (2:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.80 g, 85% 수율, 29-2)를 수득하였다.
단계 2: 화합물 29-3의 합성
Figure pct00234
무수 DMF (30 mL) 중 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.80 g, 19.7 mmol, 1.0 당량) 및 DIEA (5.13 g, 39.7 mmol, 2.0 당량)의 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.43 g, 29.8 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 용액을 염수 (120 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (10.00 g, 96% 수율, 29-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 523; RT = 1.125분.
단계 3: 화합물 29-4의 합성
Figure pct00235
무수 EtOH (50 mL)/DMF (50 mL) 중 에틸 6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (10.00 g, 19.2 mmol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (21.66 g, 96.0 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (150 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 200 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (120 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.00 g, 21% 수율, 29-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 451; RT = 0.928분.
단계 4: 화합물 29-5의 합성
Figure pct00236
MeOH (6.0 mL) 및 H2O (1 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (630 mg, 1.28 mmol, 1.0 당량)의 용액에 LiOH·H2O (269 mg, 6.40 mmol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (1.0 M)을 사용하여 pH = 6으로 산성화시킨 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (720 mg, 조 물질, 29-5)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 465; RT = 1.096분.
단계 5: 화합물 29-6의 합성
Figure pct00237
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (720 mg, 1.55 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (192 mg, 1.09 mmol, 0.7 당량)의 혼합물에 DIEA (600 mg, 4.65 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (649 mg, 1.71 mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (300 mg, 44% 수율, 29-6)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 624; RT = 1.233분.
단계 6: 화합물 29-7의 합성
Figure pct00238
무수 ACN (10.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.32 mmol, 1.0 당량)의 용액에 피리딘 (254 mg, 3.20 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (202 mg, 1.92 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 25 mL)로 켄칭하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (110 mg, 49% 수율, 29-7)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 702; RT = 1.189분.
단계 7: 화합물 29-8의 합성
Figure pct00239
DCM (5.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.14 mmol)의 용액에 TFA (2.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 농축시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (TFA 염, 100 mg, 조 물질, 29-8)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 602.3; RT = 0.955분.
단계 8: 화합물 29a 및 29b의 합성
Figure pct00240
DCM (3 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (100 mg, 0.14 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (71 mg, 0.70 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (19 mg, 0.21 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (4.5 mg, 9% 수율, 29-a), 및 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로 메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (5.6 mg, 11% 수율, 29-b)을 수득하였다.
29-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 656; RT =2.107분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.56 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 2H), 6.64 - 6.54 (m, 1H), 6.50 - 6.41 (m, 1H), 5.84 - 5.77 (m, 1H), 5.46 - 4.57 (m, 3H), 4.23 - 4.05 (m, 2H), 3.87 - 3.71 (m, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.34 - 1.92 (m, 5H), 1.49 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 1.28 - 1.21 (m, 3H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.7.
29-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 656; RT = 2.100분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 2H), 6.64 - 6.55 (m, 1H), 6.51 - 6.41 (m, 1H), 5.85 - 5.78 (m, 1H), 5.49 - 4.45 (m, 3H), 4.24 - 4.05 (m, 2H), 3.86 - 3.70 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.20 - 1.85 (m, 5H), 1.55 - 1.49 (m, 6H), 1.29 - 1.22 (m, 3H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.7.
실시예 30
Figure pct00241
단계 1: 화합물 30-2의 합성
Figure pct00242
무수 DCM (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1H-인다졸 (14.0 g, 66.67 mmol, 1.0 당량)의 용액에 실온 (r.t.)에서 PPTS (1.68 g, 6.68 mmol 0.1 당량)를 첨가하였다. 이어서, DHP (16.83 g, 200.02 mmol, 3 당량)를 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (15%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (10.8 g, 55% 수율, 30-2)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 295; RT = 2.158분.
단계 2: 화합물 30-3의 합성
Figure pct00243
무수 THF (30 mL) 중 4-브로모-5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸 (5.0 g, 17.00 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (-78℃) 용액에 (i-PrO)3B (6.4 g, 34.00 mmol, 2.0 당량)을 첨가하였다. 이어서, n-BuLi (THF 중 2.5 mol/L, 13.0 mL, 31.46 mmol, 1.85 당량)를 상기 용액에 30분의 기간에 걸쳐 적가하면서, 반응 온도를 -70℃ 내지 -65℃로 유지하였다. 첨가한 후, 반응물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl의 용액 (포화 20 mL)으로 켄칭하고, MTBE (30 mL)로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 MTBE (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 MTBE (10 mL) 중에 용해시켰다. Pet.에테르를 용액에 0℃에서 적가하였다. 백색 고체가 Pet.에테르 첨가 동안 침전되었다. 생성된 현탁액을 여과하고, 필터 케이크를 Pet.에테르 (30 mL)로 세척하였다. 필터 케이크를 진공 하에 건조시켜 (5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)보론산 (4.2 g, 95% 수율, 30-3)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 261; RT = 1.242분.
단계 3: 화합물 30-4의 합성
Figure pct00244
H2O (20 mL) 중 (5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)보론산 (3.0 g, 11.54 mmol, 1.0 당량) 및 시클로헵트-2-엔-1-온 (3.8 g, 34.62 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 NaHCO3 (1.94 g, 23.08 mmol, 2.0 당량) 및 클로로(1,5-시클로옥타디엔)로듐(I) 이량체 (0.28 g, 0.58 mmol, 0.05 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (20%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 3-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)시클로헵탄-1-온 (1.3 g, 35% 수율, 30-4)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 327; RT = 1.662분.
단계 4: 화합물 30-5의 합성
Figure pct00245
THF (5.0 mL) 중 3-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)시클로헵탄-1-온 (763 mg, 2.34 mmol, 1.0 당량) 및 디메틸 카르보네이트 (4.0 mL, 46.81 mmol, 20.0 당량)의 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 140 mg, 5.85 mmol, 2.5 당량)를 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 켄칭하고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (20%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 메틸 4-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-옥소시클로헵탄-1-카르복실레이트 (684 mg, 76%, 30-5)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 385; RT = 1.918분 & 2.315분.
단계 5: 화합물 30-6의 합성
Figure pct00246
무수 MeOH (20 mL) 중 메틸 4-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-옥소시클로헵탄-1-카르복실레이트 (1.74 g, 4.52 mmol, 1.0 당량) 및 우레아 (1.09 g, 18.1 mmol, 4.0 당량)의 용액에 NaOMe (MeOH 중 1.0 M, 13.6 mL, 13.6 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 80℃에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 MeOH/DCM (10%, v/v)으로 용리시키면서 정제하여 8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-1,5,6,7,8,9-헥사히드로-2H-시클로헵타[d]피리미딘-2,4(3H)-디온 (732 mg, 41%, 30-6)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 789; RT = 1.507분.
단계 6: 화합물 30-7의 합성
Figure pct00247
8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-1,5,6,7,8,9-헥사히드로-2H-시클로헵타[d]피리미딘-2,4(3H)-디온 (732 mg, 1.86 mmol) 및 POCl3 (15 mL)의 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (50 mL) 중에 용해시키고, DIEA를 사용하여 pH = 8-9로 염기성화시켰다. 유기 층을 H2O (15 mL x 2)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 2,4-디클로로-8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘 (1.40 g, 조 물질, 30-7)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 347; RT = 1.972분.
단계 7: 화합물 30-9의 합성
Figure pct00248
무수 DMF (14 mL) 중 2,4-디클로로-8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘 (1.40 g, 4.03 mmol, 1.0 당량) 및 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (1.57 g, 6.05 mmol, 1.5 당량)의 용액에 DIEA (3.4 mL, 20.57 mmol, 5.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고, DCM (25 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (30%에서 70%, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (2S)-4-(2-클로로-8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (235 mg, 10%, 30-9)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 570; RT = 1.957분 & 2.185분.
단계 8: 화합물 30-10의 합성
Figure pct00249
무수 DCM (5 mL) 중 (2S)-4-(2-클로로-8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (235 mg, 0.412 mmol, 1.0 당량)의 용액에 PPTS (16 mg, 0.064 mmol, 0.15 당량)를 첨가하고, 이어서 DHP (139 mg, 1.65 mmol, 4.0 당량)를 1 부분으로 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 정제용-TLC에 의해 EtOAc/Pet.에테르 (2:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 (2S)-4-(2-클로로-8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (236 mg, 87% 수율, 30-10)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 654; RT = 1.940분 & 2.107분.
단계 9: 화합물 30-12의 합성
Figure pct00250
톨루엔 (10 mL) 중 (2S)-4-(2-클로로-8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (236 mg, 0.361 mmol, 1.0 당량), (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (125 mg, 1.08 mmol, 3.0 당량) 및 Cs2CO3 (353 mg, 1.08 mmol, 3.0 당량)의 혼합물에 Pd2(dba)3 (33 mg, 0.0361 mmol, 0.1 당량) 및 BINAP (22 mg, 0.0361 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 100℃에서 10시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 정제용-TLC에 의해 MeOH/DCM (1:10, v/v)으로 용리시키면서 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (76 mg, 29% 수율, 30-12)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 733; RT = 1.162분.
단계 10: 화합물 30-13의 합성
Figure pct00251
무수 DCM (3.0 mL) 중 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(8-(5-메틸-1-(테트라히드로-2H-피란-2-일)-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (76 mg, 0.104 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 15 mL)을 사용하여 pH = 7-8로 염기성화시켰다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (8 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 MeOH/DCM (1:10, v/v)으로 용리시키면서 정제하여 벤질 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (51 mg, 75% 수율, 30-13)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 649; RT = 1.153분.
단계 11: 화합물 30-14의 합성
Figure pct00252
MeOH (5.0 mL) 중 (2S)-2-(시아노메틸)-4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (50 mg, 0.077 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (10%, w/w)를 첨가하고, 혼합물을 H2(풍선) 하에 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축 건조시켜 2-((2S)-4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (36 mg, 91% 수율, 30-14)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 515; RT = 0.449분 & 0.573분.
단계 12: 화합물 30의 합성
Figure pct00253
무수 DCM (2.5 mL) 중 2-((2S)-4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (36 mg, 0.070 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (35 mg, 0.350 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (-10℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (8.2 mg, 0.091 mmol, 1.3 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 -10℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% NH4HCO3)에 의해 정제하여 2-((2S)-1-아크릴로일-4-(8-(5-메틸-1H-인다졸-4-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-6,7,8,9-테트라히드로-5H-시클로헵타[d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (2.30 mg, 5.7%, 30)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 569; RT = 1.506분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.09 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.18 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (brs, 1H), 6.39 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 5.37 - 4.34 (m, 3H), 4.22 - 4.13 (m, 1H), 3.96 (brs, 0.5H), 3.80 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.77 - 3.75 (m, 0.5H), 3.74 - 3.69 (m, 1H), 3.64 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.35 - 3.24 (m, 2H), 3.22 - 3.13 (m, 2H), 3.09 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 3.05 - 2.88 (m, 3H), 2.80 - 2.68 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.38 (s, 3H), 2.35 - 2.28 (m, 2H), 2.27 - 2.19 (m 1H), 2.18 - 2.10 (m, 1H), 2.09 - 2.02 (m, 1H), 1.79 - 1.74 (m, 2H), 1.53 - 1.47 (m, 1H).
실시예 31
Figure pct00254
단계 1: 화합물 31-3의 합성
Figure pct00255
무수 THF (90 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (4.2 g, 0.016 mol, 1.0 당량) 및 벤질 (S)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (4.1 g, 0.016 mol, 1.0 당량)의 용액에 DIEA (3.9 mL, 0.023 mol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 PE/EA (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 (S)-6-(4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 ((5.4 g, 75%, 31-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 489; RT = 1.948분.
단계 2: 화합물 31-4의 합성
Figure pct00256
무수 DMF (60.0 mL) 중 에틸 (S)-6-(4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.4 g, 0.01 mol, 1.0 당량)의 혼합물에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (1.9 g, 0.02 mmol, 1.5 당량) 및 DIEA (3.6 ml, 0.02 mol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (40 mL)로 켄칭하고, EA (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.4 g, 86%, 31-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 568; RT = 1.097분.
단계 3: 화합물 31-5의 합성
Figure pct00257
DMF (20 mL) 및 EtOH (60 mL)의 혼합물 용매 중 에틸 6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.4 g, 0.01 mol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (10.8 g, 0.05 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (120 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 180 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (160 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.7 g, 53%, 31-5)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 538; RT = 0.984분.
단계 4: 화합물 31-6의 합성
Figure pct00258
MeOH (60 mL) 및 H2O (10 mL)의 혼합물 용매 중 에틸 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (2.7 g, 0.005 mol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH·H2O (1.1 g, 0.025 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (3.7 g, 조 물질, 31-6)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 510; RT = 0.973분.
단계 5: 화합물 31-8의 합성
Figure pct00259
무수 DMF (4.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (400 mg, 0.79 mmol, 1.0 당량) 및 8-클로로나프탈렌-1-아민 (84 mg, 0.471 mmol, 0.6 당량)의 용액에 DIEA (0.4 mL, 2.36 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (299 mg, 0.79 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (214 mg, 41%, 31-8)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 669.4; RT = 1.255분.
단계 6: 화합물 31-9의 합성
Figure pct00260
무수 ACN (2.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (189 mg, 0.282 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (112 mg, 1.41 mmol, 5.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (178 mg, 0.847 mmol, 3.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 40℃로 2시간 동안 가열하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (49 mg, 23% 수율, 31-9)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 747.1; RT = 1.280분.
단계 7: 화합물 31-10의 합성
Figure pct00261
무수 ACN (2.5 mL) 중 벤질 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (49 mg, 0.066 mmol)의 용액에 TMSI (105 mg, 0.524 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 Et3N (1.0 mL)으로 처리하고, 농축시키고, 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (28 mg, 70% 수율, 31-10)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 613.2; RT = 0.805분.
단계 8: 화합물 31-a & 31-b의 합성
Figure pct00262
DCM (2.5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (140 mg, 0.228 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (115 mg, 1.14 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (25 mg, 0.274 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% NH4HCO3)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (40.45 mg, 26%, 31)을 수득하였다.
31:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 667.1; RT = 1.669분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.71 - 6.55 (m, 1H), 6.42 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.36 (d, J = 49.2 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.54 (t, J = 11.6 Hz, 1H), 4.40 (dt, J = 11.1, 5.7 Hz, 1H), 4.20 - 3.39 (m, 4H), 3.13 (s, 1H), 2.96 - 2.68 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.08 - 1.98 (m, 1H), 1.87 - 1.75 (m, 4H).
19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -64.50, -64.78, -64.81.
화합물 31 (23 mg)을 SFC 분리에 의해 분리하여 2종의 생성물 31-a (1.76 mg) 및 31-b (2.86 mg)를 수득하였다.
31-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 667.2; RT = 1.760분;
31-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 667.2; RT = 1.750분;
단계 9: 화합물 32-a & 32-b의 합성
Figure pct00263
무수 DMF (4.0 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (100 mg, 0.163 mmol, 1.0 당량) 및 2-플루오로아크릴산 (29 mg, 0.327 mmol, 2 당량)의 용액에 DIEA (63 mg, 0.49 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (124 mg, 0.327 mmol, 2.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (15 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (22.30 mg, 20%, 32)을 수득하였다. 생성물을 SFC 분리에 의해 분리하여 2종의 생성물 32-a (4 mg) 및 32-b (5 mg)를 수득하였다.
32-a:
LCMS_(ESI, m/z): [M+1]+ = 685.4; RT = 1.030분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.29 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 48.5 Hz, 2H), 5.27 (dd, J = 16.8, 3.6 Hz, 1H), 4.86 (ddd, J = 14.8, 11.6, 4.0 Hz, 3H), 3.81 (t, J = 133.4 Hz, 5H), 3.02 - 2.82 (m, 6H), 2.30 - 2.09 (m, 6H).
19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -64.83, -72.48, -74.38.
32-b:
LCMS_(ESI, m/z): [M+1]+ = 685.3; RT = 1.175분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.39 (s, 1H), 8.09 (dd, J = 8.4, 1.0 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 8.2, 0.9 Hz, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 1H), 7.58 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 10.8, 4.8 Hz, 2H), 5.45 (d, J = 47.8 Hz, 2H), 5.28 (dd, J = 16.8, 3.7 Hz, 1H), 5.02 - 4.77 (m, 2H), 4.62 (dd, J = 11.9, 4.4 Hz, 1H), 4.00 (d, J = 155.7 Hz, 2H), 3.56 (dd, J = 12.5, 5.7 Hz, 2H), 3.36 - 3.25 (m, 1H), 2.96 (dd, J = 17.0, 7.1 Hz, 1H), 2.86 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.80 (s, 3H), 2.70 (dd, J = 18.2, 8.2 Hz, 1H), 2.02 (dddd, J = 21.8, 17.6, 15.1, 9.6 Hz, 6H).
19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -64.86, -72.23, -74.12.
실시예 32
Figure pct00264
단계 1: 화합물 33-3의 합성
Figure pct00265
무수 DMF (8 mL) 중 화합물 33-1 (600 mg, 1.29 mmol, 1.0 당량) 및 화합물 33-2 (274 mg, 1.55 mmol, 1.2 당량)의 용액에 DIEA (416 mg, 3.23 mmol, 2.5 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (590 mg, 1.55 mmol, 1.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 아르곤 분위기 하에 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-메틸나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (550 mg, 68% 수율, 33-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 624; RT = 1.429분.
단계 2: 화합물 33-4의 합성
Figure pct00266
아르곤 분위기 하에 얼음/MeOH 조에서 ACN (4 mL) 중 화합물 33-3 (170 mg, 0.28 mmol, 1.0 당량) 및 피리딘 (220 mg, 2.80 mmol, 10.0 당량)의 혼합물에 ACN (1 mL) 중 TFAA (294 mg, 1.40 mmol, 5.0 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 약 -5℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 수성 NaHCO3 (20 mL)으로 켄칭하고, EA (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 tert-부틸 (3S,5S)-3,5-디메틸-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트의 조 생성물 (260 mg, 99% 수율, 33-4)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 682; RT = 1.589분.
단계 3: 화합물 33-5의 합성
Figure pct00267
DCM (5 mL) 중 화합물 33-4 (260 mg, 0.38 mmol)의 용액에 실온에서 TFA (1 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 수성 NaHCO3 (포화 20 mL)으로 처리하였다. 생성된 혼합물을 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-메틸나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (180 mg, 81% 수율, 33-5)으로 농축시켰으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 582; RT = 1.147분.
단계 4: 화합물 33-a 및 33-b의 합성
Figure pct00268
무수 DCM (4 mL) 중 화합물 33-5 (180 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (94 mg, 0.93 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (2 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (41 mg, 0.46 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 33-a (2.4 mg, 1% 수율) 및 33-b (18.5 mg, 9% 수율)를 수득하였다.
33-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 636; RT = 1.309분;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.08 (d, J = 76.6 Hz, 2H), 7.70 (d, J = 33.6 Hz, 2H), 7.45 (d, J = 37.3 Hz, 2H), 6.79 (s, 1H), 6.23 (d, J = 15.5 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 4.31 (d, J = 65.3 Hz, 2H), 4.03 (s, 3H), 3.66 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 2.96 (s, 1H), 2.59 (s, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.23 (s, 4H), 1.96 (s, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.43 (s, 6H).
19F NMR (400 MHz, DMSO) δ -63.57.
33-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 636; RT = 1.316분;
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.17 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 - 7.62 (m, 2H), 7.53 - 7.46 (m, 1H), 7.39 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 6.79 (dd, J = 16.7, 10.4 Hz, 1H), 6.22 (dd, J = 16.7, 2.3 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.4, 2.2 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.39 (dd, J = 10.8, 5.0 Hz, 1H), 4.21 (dd, J = 10.8, 6.2 Hz, 1H), 4.02 (t, J = 15.5 Hz, 3H), 3.65 (dd, J = 14.4, 3.6 Hz, 1H), 2.99 - 2.93 (m, 1H), 2.62 (dd, J = 14.0, 5.9 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.00 - 1.91 (m, 1H), 1.72 - 1.59 (m, 3H), 1.40 (dd, J = 6.4, 4.2 Hz, 6H).
19F NMR (400 MHz, DMSO) δ -63.53.
실시예 33
Figure pct00269
단계 1: 화합물 34-3의 합성
Figure pct00270
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (250 mg, 0.54 mmol, 1.0 당량) 및 8-플루오로나프탈렌-1-아민 (69 mg, 0.43 mmol, 0.8 당량)의 혼합물에 DIEA (209 mg, 1.62 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (208 mg, 0.54 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-플루오로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (230 mg, 70% 수율, 34-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 609; RT = 1.138분.
단계 2: 화합물 34-4의 합성
Figure pct00271
무수 ACN (5.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((8-플루오로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (230 mg, 0.38 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (79 mg, 3.8 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (477 mg, 2.28 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 25 mL)로 켄칭하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 조 물질, 34-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 686; RT = 0.973분.
단계 3: 화합물 34-5의 합성
Figure pct00272
DCM (6.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.29 mmol)의 용액에 TFA (3.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 농축시켜 8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (TFA 염, 120 mg, 조 물질, 34-5)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 586; RT = 0.997분.
단계 4: 화합물 34-a 및 34-b의 합성
Figure pct00273
DCM (3 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (120 mg, 0.21 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (64 mg, 0.63 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (28 mg, 0.32 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (4.5 mg, 1.75% 수율, 34-a), 및 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (5.6 mg, 6.17% 수율, 34-b)을 수득하였다.
34-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 640; RT = 1.288분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.45 (ddd, J = 17.4, 10.2, 6.1 Hz, 2H), 7.13 (dd, J = 13.2, 7.7 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 16.7, 10.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 16.7, 1.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 1.8 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.54 (d, J = 50.2 Hz, 2H), 4.19 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 12.6, 3.4 Hz, 1H), 3.86 - 3.72 (m, 2H), 3.29 (s, 1H), 3.00 (s, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.48 (s, 1H), 2.14 (s, 1H), 1.86 (s, 4H), 1.49 (dd, J = 6.4, 2.0 Hz, 6H).
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.82, 121.79.
34-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 640; RT = 1.293분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 - 7.61 (m, 1H), 7.48 (q, J = 7.8 Hz, 2H), 7.15 (dd, J = 13.3, 7.1 Hz, 1H), 6.59 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.74 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 13.1 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 12.8, 3.5 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 3.74 (dt, J = 11.8, 5.9 Hz, 3H), 2.98 (s, 3H), 2.34 (dd, J = 14.0, 9.6 Hz, 1H), 2.29 - 1.90 (m, 5H), 1.51 (d, J = 6.5 Hz, 6H).
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.92, 121.71.
실시예 34
Figure pct00274
단계 1: 화합물 35-3의 합성
Figure pct00275
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((2S,6S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (300 mg, 0.65 mmol, 1.0 당량) 및 3-메톡시나프탈렌-1-아민 (112 mg, 0.65 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 DIEA (252 mg, 1.95 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (250 mg, 0.65 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((3-메톡시나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (210 mg, 52.5% 수율, 35-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 620; RT = 1.189분.
단계 2: 화합물 35-4의 합성
Figure pct00276
무수 ACN (5.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(5-아미노-6-((3-메톡시나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (190 mg, 0.31 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (245 mg, 3.10 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (387 mg, 1.86 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 25 mL)로 켄칭하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 조 물질, 35-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 698; RT = 1.218분.
단계 3: 화합물 35-5의 합성
Figure pct00277
DCM (6.0 mL) 중 tert-부틸 (3S,5S)-4-(7-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3,5-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.29 mmol)의 용액에 TFA (3.0 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 농축시켜 8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (TFA 염, 120 mg, 조 물질, 35-5)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 598; RT = 0.833분.
단계 4: 화합물 35-a 및 35-b의 합성
Figure pct00278
DCM (3 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-8-((2S,6S)-2,6-디메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (150 mg, 0.25 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (78 mg, 0.75 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (35 mg, 0.38 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 이어서 SFC에 의해 정제하여 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (24.51 mg, 14.98% 수율, 35-a), 및 8-((2S,6S)-4-아크릴로일-2,6-디메틸피페라진-1-일)-3-(3-메톡시나프탈렌-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (35.44 mg, 21.67% 수율, 35-b)을 수득하였다.
35-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 652; RT = 1.306분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.49 (ddd, J = 8.2, 6.3, 1.7 Hz, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 3H), 7.12 (s, 1H), 6.59 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 16.8, 2.0 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 2.0 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 4.44 (d, J = 49.5 Hz, 2H), 4.20 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 12.8, 3.5 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.86 - 3.69 (m, 2H), 3.15 (s, 1H), 2.78 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.33 (s, 1H), 2.09 (s, 1H), 1.79 (s, 4H), 1.53 - 1.45 (m, 6H).
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.20.
35-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 652; RT = 1.312분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.49 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 3H), 7.20 (s, 1H), 6.59 (dd, J = 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 16.7, 1.9 Hz, 1H), 5.81 (dd, J = 10.3, 1.9 Hz, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.60 (d, J = 90.6 Hz, 2H), 4.18 (t, J = 14.1 Hz, 1H), 4.08 (dd, J = 12.8, 3.3 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.86 - 3.72 (m, 2H), 3.34 (s, 1H), 3.08 (s, 1H), 2.60 (d, J = 62.2 Hz, 4H), 2.38 - 1.56 (m, 5H), 1.50 (d, J = 5.4 Hz, 6H).
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.44.
실시예 35
Figure pct00279
단계 1: 화합물 36-3의 합성
Figure pct00280
무수 THF (100 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (10.0 g, 0.038 mol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (50 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (7.5 g, 0.038 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (7.25 g, 0.057 mol, 1.5 당량)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet.에테르/EtOAc (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.6 g, 53% 수율, 36-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 429.9; RT = 1.482분.
단계 2: 화합물 36-5의 합성
Figure pct00281
무수 DMF (60 mL) 중 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (7.0 g, 0.016 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (4.2 g, 0.033 mol, 2.0 당량)의 용액에 ((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.3 g, 0.024 mmol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.7 g, 81.7% 수율, 36-5)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 527; RT = 2.500분.
단계 3: 화합물 36-6의 합성
Figure pct00282
무수 DMF (30 mL)/EtOH (90 mL) 중 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (6.7 g, 0.012 mol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (14.4 g, 0.064 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (200 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 200 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (200 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.6 g, 57% 수율, 36-6)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 497; RT = 1.061분.
단계 4: 화합물 36-7의 합성
Figure pct00283
MeOH (80 mL) 및 H2O (8 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.6 g, 0.006 mol, 1.0 당량)의 용액에 LiOH·H2O (1.4 g, 0.030 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (0.5 M)을 사용하여 산성화시켜 pH = 6으로 조정한 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (5.4 g, 조 물질, 36-7)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 469; RT = 1.020분.
단계 5: 화합물 36-9의 합성
Figure pct00284
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (0.8 g, 1.7 mmol, 1.0 당량) 및 8-메틸나프탈렌-1-아민 (0.74 g, 1.4 mmol, 0.8 당량)의 용액에 DIEA (0.66 g, 5.1 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (0.66 g, 1.7 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (100 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.66 g, 62% 수율, 36-9)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 628; RT = 1.103분.
단계 6: 화합물 36-10의 합성
Figure pct00285
무수 ACN (5.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((8-클로로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (0.4 g, 0.64 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (0.5 g, 6.4 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (0.8 g, 3.84 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 40 mL)로 켄칭하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 조 물질, 36-10)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 706; RT = 1.154분.
단계 7: 화합물 36-11의 합성
Figure pct00286
무수 DCM (6.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(8-클로로나프탈렌-1-일)-2-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (450 mg, 0.64 mmol, 1.0 당량)의 용액에 TFA (3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (50 mL)으로 처리하고 EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 증발시켜 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (390 mg, 조 물질, 36-11)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 606; RT = 0.950분.
단계 8: 화합물 36-a 및 36-b의 합성
Figure pct00287
DCM (5 mL) 중 3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (390 mg, 0.62 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (187 mg, 1.24 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (1 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (88.0 mg, 0.93 mmol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (50 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 TLC에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)에 이어서 SFC를 사용하여 정제하여 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (34.63 mg, 19% 수율, 36-a) 및 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(8-클로로나프탈렌-1-일)-6-(((2S,4R)-4-플루오로-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (48.56 mg, 19% 수율, 36-b)을 수득하였다.
36-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 660; RT = 1.228분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 6.61 (dd, J = 27.4, 16.7 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 16.9 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 5.56 (s, 1H), 5.17 (d, J = 56.5 Hz, 1H), 4.77 - 4.25 (m, 3H), 3.94 (dd, J = 60.2, 9.3 Hz, 1H), 3.73 - 2.91 (m, 5H), 2.60 (d, J = 44.4 Hz, 4H), 2.28 (d, J = 23.6 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 1.38 (dd, J = 21.2, 12.4 Hz, 4H).
19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -64.81 (d, J = 12.6 Hz).
36-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 660; RT = 1.223분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.08 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.45 (dd, J = 10.1, 5.5 Hz, 2H), 6.69 - 6.53 (m, 1H), 6.40 (d, J = 16.6 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.15 (d, J = 55.5 Hz, 1H), 4.65 - 4.33 (m, 3H), 4.09 - 3.80 (m, 1H), 3.70 - 2.84 (m, 5H), 2.59 (ddd, J = 32.4, 11.8, 2.7 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 1.99 (dddd, J = 25.6, 20.9, 13.5, 8.5 Hz, 1H), 1.39 (dd, J = 28.3, 12.4 Hz, 4H).
19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -64.86 (s).
실시예 36
Figure pct00288
단계 1: 화합물 37-2의 합성
Figure pct00289
무수 DMF (8.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (800 mg, 1.57 mmol, 1.0 당량) 및 8-플루오로나프탈렌-1-아민 (152 mg, 0.94 mmol, 0.6 당량)의 용액에 DIEA (1.02 g, 7.85 mmol, 5.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (597 mg, 1.57 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-플루오로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (284 mg, 28% 수율, 37-2)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 653; RT = 1.176분.
단계 2: 화합물 37-3의 합성
Figure pct00290
ACN (2.0 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-플루오로나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (260 mg, 0.40 mmol, 1.0 당량)의 혼합물에 피리딘 (316 mg, 4.0 mmol, 10.0 당량) 및 TFAA (502 mg, 2.4 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 25분 동안 교반하고, 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (76 mg, 26% 수율, 37-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 731; RT = 1.260분.
단계 3: 화합물 37-4의 합성
Figure pct00291
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (76 mg, 0.1 mmol)의 용액에 Pd/C (50 mg)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 농축시켜 2-((S)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (60 mg, 97% 수율, 37-4)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 4: 화합물 37의 합성
Figure pct00292
DCM (2.5 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (60 mg, 0.1 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (51 mg, 0.5 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (11 mg, 0.12 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (15 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (8 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-플루오로나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 5.19 mg, 7.9% 수율, 37) (C32H30F4N8O3·HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 651; RT = 1.627분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.17 - 7.11 (m, 1H), 6.66 - 6.59 (m, 1H), 6.42 (d, J = 16 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 12 Hz, 1H), 5.50 - 5.10 (m, 2H), 4.68 - 4.49 (m, 2H), 4.05 - 3.76 (m, 2H), 3.54 - 3.32 (m, 2H), 2.94 - 2.83 (m, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.64 - 2.29 (m, 1H), 2.12 - 1.87 (m, 6H).
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -64.97, -121.59.
실시예 37
Figure pct00293
단계 1: 화합물 38-3의 합성
Figure pct00294
무수 DMF (10 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-((벤질옥시)카르보닐)-3-(시아노메틸)피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (1.20 g, 2.35 mmol, 1.0 당량), 2-플루오로-6-메톡시아닐린 (266 mg, 1.88 mmol, 0.8 당량) 및 DIEA (1.2 mL, 7.05 mmol, 3.0 당량)의 용액에 HATU (894 mg, 2.35 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (80 mL)로 희석하고, EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (80 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (v/v, 10:1)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((2-플루오로-6-메톡시페닐)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (468 mg, 31%, 38-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 633; RT = 1.086분.
단계 2: 화합물 38-4의 합성
Figure pct00295
무수 ACN (10 mL) 중 벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((2-플루오로-6-메톡시페닐)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메틸)피페라진-1-카르복실레이트 (468 mg, 0.740 mmol, 1.0 당량) 및 피리딘 (1.17 g, 14.8 mmol, 20.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 TFAA (1.86 g, 8.88 mmol, 12.0 당량)를 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (v/v, 10:1)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2-플루오로-6-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (257 mg, 49%, 38-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 711; RT = 1.255분.
단계 3: 화합물 38-5의 합성
Figure pct00296
MeOH (5 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(2-플루오로-6-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (257 mg, 0.362 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2/C (20% w/w, 25 mg, 36.2 μmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 혼합물을 H2(풍선) 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(7-(2-플루오로-6-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (234 mg, 조 물질, 38-5)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 577; RT = 0.701분.
단계 4: 화합물 38의 합성
Figure pct00297
무수 DCM (3 mL) 중 2-((S)-4-(7-(2-플루오로-6-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (234 mg, 0.406 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (82 mg, 0.812 mmol, 2.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (18 mg, 0.203 mmol, 0.5 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (20 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(2-플루오로-6-메톡시페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 10.08 mg, 3.6%, 38) (C29H30F4N8O4·0.4HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 631; RT = 1.589분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 7.65 (dd, J = 15.3, 8.5 Hz, 1H), 7.21 - 7.07 (m, 2H), 6.97 - 6.82 (m, 1H), 6.20 (d, J = 16.4 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 5.39 - 4.83 (m, 3H), 4.55 - 4.29 (m, 2H), 4.26 - 4.07 (m, 2H), 3.80 (d, J = 2.1 Hz, 3H), 3.64 - 3.52 (m, 2H), 3.21 - 3.14 (m, 1H), 3.00 - 2.88 (m, 2H), 2.61 - 2.54 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.19 (q, J = 8.7 Hz, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.73 - 1.56 (m, 3H).
19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -67.03, -120.76.
실시예 38
Figure pct00298
단계 1: 화합물 39-2의 합성
Figure pct00299
벤질 (S)-4-(5-아미노-6-((8-메틸나프탈렌-1-일)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-2-(시아노메1,1,1-트리에톡시프로판에틸)피페라진-1-카르복실레이트 (251 mg, 0.387 mmol, 1.0 당량) 및 AcOH (2.5 mL)의 혼합물에 (트리에톡시메틸)벤젠 (1.30 g, 5.80 mmol, 15.0 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 내에서 135℃에서 3분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 150 mL)로 켄칭하여 pH = 7-8로 조정하고, 이를 DCM (30 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 42%, 39-2)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 735; RT = 1.302분.
단계 2: 화합물 39-3의 합성
Figure pct00300
MeOH (5.0 mL) 중 벤질 (S)-2-(시아노메틸)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (120 mg, 0.163 mmol, 1.0 당량)의 용액에 Pd(OH)2 (20% w/w, 11.5 mg, 0.0163 mmol, 0.1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 H2 (풍선) 하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (96 mg, 98%, 39-3)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 601; RT = 0.828분.
단계 3: 화합물 39의 합성
Figure pct00301
무수 DCM (3.0 mL) 중 2-((S)-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (96 mg, 0.160 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (81 mg, 0.799 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (0.5 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (17.4 mg, 0.192 mmol, 1.2 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 대부분의 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-HPLC (ACN-H2O + 0.1% HCOOH)에 의해 정제하여 2-((S)-1-아크릴로일-4-(7-(8-메틸나프탈렌-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-페닐-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)피페라진-2-일)아세토니트릴 (HCOOH 염, 16.46 mg, 15%, 39) (C34H38N8O3·0.9HCOOH)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 655; RT = 1.670분.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.84 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 - 7.34 (m, 4H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 7.09 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 6.87 (dd, J = 26.0, 14.6 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.40 - 4.78 (m, 3H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.27 - 4.07 (m, 3H), 3.65 - 3.47 (m, 2H), 3.17 (s, 1H), 3.03 - 2.96 (m, 1H), 2.88 - 2.73 (m, 1H), 2.70 - 2.61 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.37 (s, 2H), 2.24 (dd, J = 16.4, 8.3 Hz, 1H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.77 - 1.58 (m, 3H).
실시예 39
Figure pct00302
단계 1: 화합물 40-2의 합성
Figure pct00303
무수 THF (50 mL) 중 에틸 2,6-디클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (5.0 g, 0.019 mol, 1.0 당량)의 냉각된 (-60℃) 용액에 무수 THF (30 mL) 중 tert-부틸 (S)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (3.75 g, 0.019 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (4.6 mL, 0.028 mol, 1.5 당량)의 용액을 적가하였다. 혼합물을 Ar 하에 -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 Pet. 에테르/EtOAc (3:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.2 g, 조 물질, 40-2)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 430; RT = 2.141분.
단계 2: 화합물 40-3의 합성
Figure pct00304
무수 DMF (60.0 mL) 중 에틸 (S)-6-(4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-클로로-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.2 g, 0.019 mol, 1.0 당량) 및 DIEA (6.3 ml, 0.038 mol, 2.0 당량)의 용액에 (S)-(1-메틸피롤리딘-2-일)메탄올 (3.3 g, 0.029 mol, 1.5 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (100 mL)로 희석하고, EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.8 g, 91% 수율, 40-3)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 509; RT = 1.099분.
단계 3: 화합물 40-4의 합성
Figure pct00305
무수 DMF (20 mL)/EtOH (60 mL) 중 에틸 6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-5-니트로피리미딘-4-카르복실레이트 (8.8 g, 0.017 mol, 1.0 당량)의 용액에 SnCl2·2H2O (19.6 g, 0.087 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar 하에 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축시켜 EtOH를 제거한 다음, EtOAc (120 mL)로 희석한 후, 수성 NaHCO3 (포화 180 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (160 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (15:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.3 g, 40% 수율, 40-4)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 479; RT = 0.867분.
단계 4: 화합물 40-5의 합성
Figure pct00306
MeOH (60 mL) 및 H2O (10 mL) 중 에틸 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실레이트 (3.3 g, 0.007 mol, 1.0 당량)의 혼합물에 LiOH·H2O (1.45 g, 0.034 mol, 5.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 HCl (0.5 M)을 사용하여 pH = 6으로 산성화시킨 다음, 농축 건조시켜 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (5.06 g, 조 물질, 40-5)을 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 451; RT = 0.928분.
단계 5: 화합물 40-6의 합성
Figure pct00307
무수 DMF (6.0 mL) 중 5-아미노-6-((S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-2-메틸피페라진-1-일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-카르복실산 (1.00 g, 2.22 mmol, 1.0 당량) 및 2-플루오로아닐린 (197 mg, 1.77 mmol, 0.8 당량)의 용액에 DIEA (1.1 mL, 6.66 mmol, 3.0 당량)를 첨가하고, 이어서 HATU (844 mg, 2.22 mmol, 1.0 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 Ar 하에 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (20 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((2-플루오로페닐)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (775 mg, 64% 수율, 40-6)를 수득하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 544; RT = 1.363분.
단계 6: 화합물 40-7의 합성
Figure pct00308
무수 ACN (12 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(5-아미노-6-((2-플루오로페닐)카르바모일)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (395 mg, 0.726 mmol, 1.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 피리딘 (575 mg, 7.26 mmol, 10.0 당량)을 첨가하고, 이어서 TFAA (916 mg, 4.36 mmol, 6.0 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 40 mL)로 켄칭하고 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 tert-부틸 (S)-4-(7-(2-플루오로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (361 mg, 조 물질, 40-7)를 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 622; RT = 1.462분.
단계 7: 화합물 40-8의 합성
Figure pct00309
무수 DCM (6.0 mL) 중 tert-부틸 (S)-4-(7-(2-플루오로페닐)-2-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-8-옥소-6-(트리플루오로메틸)-7,8-디히드로피리미도[5,4-d]피리미딘-4-일)-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (361 mg, 0.581 mmol)의 용액에 TFA (4 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (포화 60 mL)을 사용하여 pH = 7-8로 염기성화시키고, DCM (30 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켜 3-(2-플루오로페닐)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (273 mg, 조 물질, 40-8)을 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 522; RT = 0.930분.
단계 8: 화합물 40-a 및 40-b의 합성
Figure pct00310
무수 DCM (10 mL) 중 3-(2-플루오로페닐)-8-((S)-2-메틸피페라진-1-일)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (273 mg, 0.523 mmol, 1.0 당량) 및 Et3N (265 mg, 2.62 mmol, 5.0 당량)의 냉각된 (0℃) 용액에 무수 DCM (1 mL) 중 아크릴로일 클로라이드 (62 mg, 0.681 mmol, 1.3 당량)의 용액을 적가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타냈다. 물 (10 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (5 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)에 이어서 SFC로 용리시키면서 정제하여 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(2-플루오로페닐)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (4.57 mg, 1.5% 수율, 40-a), 및 8-((S)-4-아크릴로일-2-메틸피페라진-1-일)-3-(2-플루오로페닐)-6-(((S)-1-메틸피롤리딘-2-일)메톡시)-2-(트리플루오로메틸)피리미도[5,4-d]피리미딘-4(3H)-온 (4.27 mg, 1.4% 수율, 40-b)을 수득하였다.
40-a:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 576; RT = 1.975분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 3H), 6.53 (dd, J = 26.5, 17.3 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.71 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 5.28 (s, 1H), 4.92 - 4.12 (m, 3H), 4.01 - 3.71 (m, 1H), 3.52 (s, 2H), 3.43 - 3.00 (m, 2H), 2.89 - 2.27 (m, 4H), 2.16 - 1.90 (m, 3H), 1.61 - 1.50 (m, 2H), 1.33 (d, J = 6.3 Hz, 4H);
19F NMR (400 MHz, CDCl3) δ -65.7, -119.8.
40-b:
LCMS (ESI, m/z): [M+1]+ = 576; RT = 1.977분;
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 - 7.52 (m, 1H), 7.34 - 7.28 (m, 3H), 6.67 - 6.52 (m, 1H), 6.39 (d, J = 15.3 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.72 - 4.23 (m, 3H), 4.09 - 3.74 (m, 1H), 3.66 - 3.49 (m, 2H), 3.45 - 2.99 (m, 2H), 2.92 - 2.20 (m, 5H), 2.05 (s, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.40 (d, J = 6.5 Hz, 4H);
19F NMR_ATG012-439-2 (400 MHz, CDCl3) δ -65.7, -120.0.
실시예 40
Figure pct00311
단계 1: 화합물 41-3의 합성
Figure pct00312
DCM (2.00 mL) 중 화합물 41-1 (500 mg, 1.08 mmol, 1.00 당량)의 용액에 20℃에서 T3P (3.42 g, 5.38 mmol, 3.20 mL, 50% 순도, 5.00 당량) 및 화합물 41-2 (185 mg, 1.29 mmol, 181 uL, 1.20 당량)를 첨가한 다음, DIEA (417 mg, 3.23 mmol, 562 uL, 3.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 41-1이 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 희석하고, EtOAc (10.0 mL x 2)로 추출하고, 유기 층을 H2O (10.0 mL), 염수 (10.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (이스코®; 20 g 세파플래쉬(SepaFlash)® 실리카 플래쉬 칼럼, 0~10% MeOH/DCM의 용리액 @ 30 mL/분), TLC (디클로로메탄/메탄올 = 10/1, Rf = 0.35)에 의해 정제하였다. 잔류물을 추가로 정제용-HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트(Welch Ultimate) XB-CN 250*70*10 um; 이동상: [헵탄-EtOH]; B%: 1%-40%, 15분)에 의해 정제하였다. 화합물 41-3 (510 mg, 865 umol, 80.3% 수율)을 수득하고, H NMR에 의해 확인하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.69 (s, 1H), 8.04 - 7.93 (m, 2H), 7.89 - 7.82 (m, 2H), 7.62 - 7.54 (m, 3H), 6.18 (s, 2H), 4.44 (d, J = 5.6 Hz, s, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.42 - 3.27 (m, 4H), 3.17 (s, 2H), 2.05 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 5.6 Hz, 1H), 1.84 - 1.64 (m, 3H), 1.43 (s, 9H), 0.94 (d, J = 5.6 Hz, 6H).
단계 2. 화합물 41-4의 합성
Figure pct00313
ACN (20.0 mL) 중 화합물 41-3 (400 mg, 678 umol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 Py (536 mg, 6.78 mmol, 547 uL, 10.0 당량)를 첨가한 다음, 0℃에서 TFAA (855 mg, 4.07 mmol, 566 uL, 6.00 당량)를 첨가한 다음, 혼합물을 0℃에서 10.0분 동안 교반하였다. TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.45)는 화합물 41-3이 완전히 소모되고 1개의 새로운 스팟이 형성되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (10.0 mL)로 희석하고, EtOAc (10.0 mL x 2)로 추출하고, 유기 층을 H2O (10.0 mL), 염수 (10.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 화합물 41-4 (400 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 3. 화합물 41-5의 합성
Figure pct00314
DCM (5.00 mL) 중 화합물 41-4 (400 mg, 599 umol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 TMSOTf (266 mg, 1.20 mmol, 216 uL, 2.00 당량)를 첨가한 다음, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 41-4가 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3을 사용하여 pH = 8로 조정하고, H2O (10.0 mL)로 희석하고, DCM (10.0 mL x 2)으로 추출하고, 유기 층을 H2O (10.0 mL), 염수 (10.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 화합물 41-5 (400 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 4. 화합물 41-a 및 41-b의 합성
Figure pct00315
피리딘 (5.00 mL) 중 화합물 41-5 (400 mg, 704 umol, 1.00 당량) 및 화합물 41-6 (101 mg, 1.41 mmol, 96.7 uL, 2.00 당량)의 용액에 0℃에서 EDCI (540 mg, 2.82 mmol, 4.00 당량)를 첨가한 다음, 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 41-5가 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (10.0 mL)로 희석하고, DCM (10.0 mL x 2)으로 추출하고, 유기 층을 H2O (10.0 mL), 염수 (10.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 유니실(Unisil) 3-100 C18 울트라 150*50 mm*3 um; 이동상: [물 (FA)-ACN]; B%: 18%-48%, 10분)에 의해 정제하였다. 이어서, 혼합물을 SFC 분리 (칼럼: 다이셀 키랄셀(DAICEL CHIRALCEL) OD (250 mm*30 mm, 10 um); 이동상: [0.1%NH3H2O MEOH]; B%: 45%-45%, 4.0분; 20분)에 의해 추가로 정제하였다. 41-a (6.00 mg, 9.61 umol, 1.36% 수율, 99.5% 순도) 및 41-b (20.0 mg, 31.2 umol, 4.44% 수율, 97.2% 순도)를 수득하였다.
41-a:
LC-MS: RT = 0.838분, (M+H)+ = 622.5
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 - 7.65 (m, 2H), 7.64 - 7.59 (m, 1H), 7.58 - 7.52 (m, 1H), 6.79 (dd, J1 = 10.4 Hz, J2 = 16.8 Hz, 1H), 6.22 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 16.4 Hz, 1H), 5.80 - 5.74 (m, 1H), 5.50 - 5.23 (m, 1H), 4.39 (dd, J1 = 5.2 Hz, J2 = 10.8 Hz, 1H), 4.22 (dd, J1 = 5.6 Hz, J2 = 10.0 Hz, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 3H), 3.66 (dd, J1 = 3.6 Hz, J2 = 14.4 Hz, 1H), 2.97 (s, 1H), 2.66 - 2.57 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.72 - 1.56 (m, 3H), 1.41 (t, J = 6.4 Hz, 6H), 1.23 (s, 1H).
HPLC: 99.5% 순도
SFC: RT = 1.894분, 100% ee
41-b:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.75 - 7.66 (m, 2H), 7.64 - 7.58 (m, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 6.79 (dd, J1 = 10.4 Hz, J2 = 16.8 Hz, 1H), 6.22 (dd, J1 = 2.4 Hz, J2 = 16.8 Hz, 1H), 5.80 - 5.73 (m, 1H), 5.50 - 5.24 (m, 1H), 4.40 (dd, J1 = 5.2 Hz, J2 = 10.8 Hz, 1H), 4.19 (dd, J1 = 6.0 Hz, J2 = 10.8 Hz, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 3H), 3.65 (dd, J1 = 3.6 Hz, J2 = 14.4 Hz, 1H), 3.01 - 2.90 (m, 1H), 2.60 (s, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.25 - 2.15 (m, 1H), 2.01 - 1.89 (m, 1H), 1.74 - 1.57 (m, 3H), 1.42 (t, J = 5.6 Hz, 6H), 1.23 (s, 1H).
LC-MS: RT = 0.839분, (M+H)+ = 622.5
HPLC: 97.2% 순도
SFC: RT = 2.335분, 100% ee
실시예 41
Figure pct00316
단계 1: 화합물 42-2의 합성
Figure pct00317
DCM (10.0 mL) 중 화합물 42-1 (400 mg, 0.86 mmol) 및 2,3-디히드로-1H-인덴-4-아민 (137.62 mg, 1.03 mmol)의 용액에 DIEA (333.85 mg, 2.58 mmol) 및 HATU (491.08 mg, 1.29 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10.0 mL)에 의해 켄칭한 다음, DCM (15.0 mL)으로 희석하고, DCM (15.0 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 DCM/MeOH (10:1, v/v)로 용리시키면서 정제하여 42-2 (365 mg, 73.1% 수율)를 수득하였다.
단계 2: 화합물 42-3의 합성
Figure pct00318
ACN (35 mL) 중 화합물 42-2 (365 mg, 0.63 mmol)의 용액에 0℃에서 Py (498 mg, 6.30 mmol) 및 TFAA (793.4 mg, 3.78 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.45)는 화합물 42-2가 완전히 소모되고 보다 큰 극성을 갖는 1개의 주요 새로운 스팟이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NH4Cl (15 mL) 수용액을 첨가하여 켄칭한 다음, EtOAc (15 mL)로 희석하고, 용매 EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물 42-3 (512 mg, 조 물질)을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 3: 화합물 42-4의 합성
Figure pct00319
DCM (10.0 mL) 중 화합물 42-3 (512 mg, 0.78 mmol)의 용액에 0℃에서 TMSOTf (259.51 mg, 1.17 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.1)는 화합물 42-3이 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NaHCO3 (10.0 mL) 수용액을 첨가하여 켄칭한 다음, DCM (10.0 mL)으로 희석하고, 용매 DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물 42-4 (520 mg, 조 물질)를 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 4: 화합물 42-5의 합성
Figure pct00320
DCM (10.0 mL) 중 화합물 42-4 (520 mg, 0.93 mmol)의 용액에 0℃에서 프로피온산 (89.81 mg, 1.21 mmol), DIEA (361.58 mg, 2.80 mmol) 및 HATU (531.87 mg,1.40 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.3)는 화합물 42-4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 여러 새로운 스팟이 TLC 상에서 나타났다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NH4Cl (8.0 mL) 수용액의 첨가에 의해 켄칭한 다음, DCM (10.0 mL)으로 희석하고, 용매 DCM (10.0 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.3)에 의해 정제하여 목적 생성물 42-5 (70 mg, 11.9% 수율)를 수득하였다.
단계 5: 화합물 42의 합성
EtOH (7.0 mL) 중 화합물 42-5 (70 mg, 0.11 mmol)의 용액에 TEA (247.48 mg, 2.45 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 88℃에서 12시간 동안 교반하였다. TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.4)는 화합물 42-5가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 20℃로 냉각시키고, H2O (10 mL)를 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 DCM (15.0 mL)으로 희석하고, 용매 DCM (10.0 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-TLC (DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.4)에 의해 정제하여 목적 생성물 42 (4 mg, 5.9% 수율)를 수득하였다. m/z: 612.1 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.06 (s, 1 H) 7.40 (s, 1 H) 6.81 - 6.83 (br d, J=1.76 Hz, 1 H) 6.63 (d, J=1.76 Hz, 1 H) 6.23 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 5.78 (d, J=2.26 Hz, 1 H) 4.65 (s, 1 H) 4.36 - 4.40 (m, 2 H) 4.18 - 4.22 (m, 2 H) 4.00 (br d, J=2.76 Hz, 2 H) 3.63 - 3.65 (m, 2 H) 2.98 - 3.01 (m, 4 H) 2.44 (br d, J=3.26 Hz, 1 H) 2.30 - 2.34 (m, 1 H) 2.12 (s, 3 H) 1.80 - 1.87 (m, 2 H) 1.66 - 1.70 (m, 4 H) 1.33 - 1.34 (m, 6 H).
실시예 42
Figure pct00321
단계 1. 화합물 43-2의 합성
Figure pct00322
에틸 아세테이트 (10.0 mL) 중 화합물 7 (100 mg, 568 umol, 1.00 당량)의 용액에 N2 하에 Pd/C (20.0 mg, 568 umol, 10.0% 순도, 1.00 당량)를 첨가하고, 반응 혼합물을 H2 (15 psi) 하에 20℃에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 43-7이 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 화합물 43-2 (82.88 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 2. 화합물 43-3의 합성
Figure pct00323
DCM (5.00 mL) 중 화합물 43-1 (1.32 g, 2.83 mmol, 1.00 당량)의 용액에 T3P (3.60 g, 5.66 mmol, 3.37 mL, 50.0% 순도, 2.00 당량), DIEA (1.46 g, 11.3 mmol, 1.97 mL, 4.00 당량) 및 화합물 43-2 (414 mg, 2.83 mmol, 1.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS (EW29115-57-P1A1, 생성물: RT = 0.900분) 및 HPLC (EW29115-57-P1A3)는 화합물 43-1이 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O 100 mL로 희석하고, DCM 75.0 mL (25.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트 XB-CN 250*70*10 um; 이동상: [헥산-EtOH (0.1% NH3.H2O)]; B%: 10%-50%, 15분)에 의해 정제하였다. 화합물 43-3 (1.10 g, 1.86 mmol, 65.5% 수율)을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 10.0 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.65 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 - 7.28 (m, 2H), 7.19 - 7.15 (m, 1H), 5.72 (s, 2H), 4.45 - 4.39 (m, 1H), 4.32 - 4.26 (m, 1H), 3.89 - 3.88 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.59 - 3.29 (m, 3H), 3.17 - 3.13 (m, 1H), 2.81 - 2.75 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.38 - 2.34 (m, 1H), 2.15 - 2.11 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.02 (d, J = 6.4 Hz, 6H)
SFC: RT = 1.427분, 100% ee
단계 3. 화합물 43-4의 합성
Figure pct00324
무수 ACN (15.0 mL) 중 화합물 43-3 (300 mg, 506 umol, 1.00 당량)의 용액에 Py (400 mg, 5.06 mmol, 409 uL, 10.0 당량)를 첨가하고, 이어서 TFAA (638 mg, 3.04 mmol, 422 uL, 6.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 43-3이 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 염화암모늄 수용액 200 mL의 첨가에 의해 켄칭하고, 에틸 아세테이트 75.0 mL (25.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 화합물 43-4 (330 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 4. 화합물 43-5의 합성
Figure pct00325
DCM (15.0 mL) 중 화합물 43-4 (330 mg, 492 umol, 1.00 당량)의 용액에 TMSOTf (219 mg, 984 umol, 178 uL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 43-4가 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 중탄산나트륨 용액 50.0 mL의 첨가에 의해 켄칭한 다음, H2O 100 mL로 희석하고, DCM 75.0 mL (25.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 화합물 43-5 (250 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 5. 화합물 43의 합성
Figure pct00326
Py (3.00 mL) 중 화합물 43-5 (250 mg, 438 umol, 1.00 당량), 아크릴산 (63.2 mg, 876 umol, 60.1 uL, 2.00 당량)의 용액에 EDCI (336 mg, 1.75 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 43-5가 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 염화암모늄 수용액 150 mL의 첨가에 의해 켄칭한 다음, H2O 100 mL로 희석하고, DCM 75.0 mL (25.0 mL * 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트 XB-CN 250*25*10 um; 이동상: [헵탄-EtOH (0.1%NH3H2O)]; B%: 35%-75%,15분)에 의해 정제하였다. 43 (10.0 mg, 조 물질)을 수득하고, 정제용-TLC (SiO2, DCM/MeOH = 10/1, 플레이트 1, DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.34)에 의해 정제하여 43 (1.52 mg, 2.24 umol, 14.01% 수율, 92.2% 순도)을 수득하였다.
LC-MS: RT = 0.842분, (M+H)+ = 625.1
실시예 43
Figure pct00327
단계 1: 화합물 44-3의 합성
Figure pct00328
DCM (5.00 mL) 중 화합물 1 (500 mg, 1.08 mmol, 1.00 당량), 화합물 2의 용액에 DIEA (417 mg, 3.23 mmol, 562 uL, 3.00 당량) 및 T3P (3.42 g, 5.38 mmol, 3.20 mL, 50.0% 순도, 5.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS (EW28938-58-P1A, 생성물: RT = 0.779분)는 화합물 1이 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 H2O (30.0 mL)로 희석하고, DCM (30.0 mL x 3)으로 추출하고, 유기 층을 H2O (30.0 mL), 염수 (30.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 합한 잔류물 (EW28938-55 및 EW28938-58)을 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, DCM/MeOH = 10/1, 플레이트 1, DCM/MeOH = 10/1, Rf = 0.4)에 의해 정제하였다. 화합물 3 (565 mg, 961 umol, 89.3% 수율, 100% 순도)을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d 6 ): δ 9.77 (s, 1 H), 7.37 - 7.31 (m, 1 H), 6.98 - 6.89 (m, 2 H), 6.17 (s, 2 H), 4.70 - 4.57 (m, 2 H), 3.81 - 3.44 (m, 11 H), 2.85 (s, 3 H), 2.24 - 2.20 (m, 1 H), 1.99 - 1.78 (m, 4 H), 1.42 (s, 9 H), 0.92 (d, J = 5.6 Hz, 6 H).
SFC: RT = 0.993분, 100% ee
단계 2: 화합물 44-4의 합성
Figure pct00329
ACN (20.0 mL) 중 화합물 44-3 (400 mg, 681 umol, 100% 순도, 1.00 당량)의 용액에 Py (538 mg, 6.81 mmol, 549 uL, 10.0 당량)를 첨가하고, 이어서 TFAA (858 mg, 4.08 mmol, 568 uL, 6 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 44-3이 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 40.0 mL x 3)로 켄칭하고, EtOAc (30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (40.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 화합물 44-4 (500 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 3: 화합물 44-5의 합성
Figure pct00330
DCM (40.0 mL) 중 화합물 44-4 (500 mg, 751 umol, 1.00 당량)의 용액에 TMSOTf (334 mg, 1.50 mmol, 271 uL, 2.00 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 44-4가 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3으로 켄칭하고 (포화 15.0 mL x 3), DCM (20.0 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (40.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 화합물 44-5 (300 mg, 조 물질)를 수득하였다.
단계 4: 화합물 44-7의 합성
Figure pct00331
Py (4.00 mL) 중 화합물 44-5 (250 mg, 442 umol, 1.00 당량), 화합물 44-6 (63.7 mg, 884 umol, 60.7 uL, 2.00 당량)의 용액에 EDCI (127 mg, 663 umol, 1.50 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 44-5가 완전히 소모되고 목적 질량이 검출되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 수성 NH4Cl (포화 40.0 mL x 3)로 켄칭하고, DCM (30.0 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수 (40.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 페노메넥스 시너지(Phenomenex Synergi) C18 150*25 mm* 10 um; 이동상: [물(0.225%FA)-ACN]; B%: 13%-43%,10분)에 의해 정제하였다. 화합물 44-7 (13.0 mg, 17.4 umol, 3.94% 수율, 83.1% 순도)을 수득하였다.
LC-MS: RT = 0.809분, 83.1% 순도, (M+H)+ = 620.3
SFC: RT = 1.994분, 2.561분
단계 5: 화합물 44의 합성
Figure pct00332
화합물 44-7 (13.0 mg)을 정제용-SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IC (250 mm*30 mm, 10 um); 이동상: [0.1% NH3H2O MEOH]; B%: 50%-50%, 2.2;60분)에 의해 정제하였다. 44-a (5.00 mg, 7.27 umol, 41.7% 수율, 90.1% 순도) 및 44-b (4.00 mg, 5.98 umol, 34.32% 수율, 92.7% 순도)를 수득하였다.
44-a:
LC-MS: RT = 1.988분, (M+H)+ = 620.3
HPLC: 80.0% 순도
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.52 - 7.46 (m, 1 H), 6.91 - 6.84 (m, 2 H), 6.62 - 6.55 (m, 1 H), 6.47 - 6.43 (m, 1 H), 5.81 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 4.77 - 4.50 (m, 2 H), 4.20 - 4.04 (m, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 3.75 - 3.70 (m, 2 H), 3.49 (s, 3 H), 3.24 (s, 1 H), 2.76 (s, 2 H), 2.29 - 2.15 (m, 6 H), 1.49 - 1.47 (m, 6 H)
SFC: RT = 1.824분, 99.2% ee
44-b:
LC-MS: RT = 1.975분, (M+H)+ = 620.3
HPLC: 82.5% 순도
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.44 - 7.38 (m, 1 H), 6.82 - 6.77 (m, 2 H), 6.55 - 6.48 (m, 1 H), 6.40 - 6.36 (m, 1 H), 5.73 (d, J = 10.4 Hz, 1 H), 4.55 - 4.39 (m, 2 H), 4.13 - 3.99 (m, 2 H), 3.74 (s, 3 H), 3.68 - 3.62 (m, 2 H), 3.42 (s, 3 H), 3.31 - 3.20 (m, 1 H), 2.57 (s, 2 H), 2.20 - 2.08 (m, 6 H), 1.42 - 1.33 (m, 6 H).
SFC: RT = 2.325분, 99.0% ee
실시예 44
Figure pct00333
단계 1: 화합물 45-9의 합성
Figure pct00334
디옥산 (15.0 mL) 및 H2O (3.00 mL) 중 화합물 45-7 (1.50 g, 6.75 mmol, 1.00 당량)의 용액에 화합물 45-8 (995 mg, 7.43 mmol, 1.10 당량), K2CO3(4.67 g, 33.8 mmol, 5.00 당량) 및 Pd(dppf)Cl2 (198 mg, 270 umol, 0.04 당량)을 첨가한 다음, 혼합물을 N2 분위기 하에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 45-7이 완전히 소모되고 목적 질량을 갖는 1개의 주요 피크가 검출되었음을 나타냈다. 혼합물을 여과하고, 농축시켜 생성물을 수득하였다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피 (SiO2, PE/EtOAc = 5/1)에 의해 정제하였다. TLC (PE/EtOAc = 5/1, Rf = 0.4). 화합물 45-9 (800 mg, 4.73 mmol, 70.0% 수율)를 수득하고, H NMR에 의해 확인하였다.
H NMR: (400MHz, CDCl3): δ 7.82 - 7.69 (m, 2H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.30 - 7.29 (m, 1H), 7.26 - 7.23 (m, 2H), 6.71 (dd, J 1 = 2.0 Hz, J 2 = 6.8 Hz, 1H), 5.60 (dd, J 1 = 1.6 Hz, J 2 = 17.2 Hz, 1H), 5.45 (dd, J 1 = 2.0 Hz, J 2 = 10.8 Hz, 1H), 4.80 - 4.12 (m, 2H).
단계 2. 화합물 45-2의 합성
Figure pct00335
MeOH (10.0 mL) 중 화합물 45-9 (800 mg, 4.73 mmol, 1.00 당량)의 용액에 Pd/C (80.0 mg, 9.46 mmol, 10.0% 순도, 2.00 당량)를 N2 분위기 하에 첨가한 다음, 혼합물을 H2 (15 psi) 분위기 하에 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 45-9가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 여러 새로운 피크가 LC-MS 상에서 나타났고, 목적 화합물의 ~57%가 검출되었다. 혼합물을 여과하고, 농축시켜 생성물을 수득하였다. 잔류물을 HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트 XB-CN 250*70*10 um; 이동상: [헵탄-EtOH (0.10%NH3H2O)]; B%: 1%-35%, 15분)에 의해 정제하였다. 화합물 45-2 (620 mg, 3.62 mmol, 76.6% 수율)를 수득하고, H NMR에 의해 확인하였다.
H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ 7.56 (dd, J 1 = 1.2 Hz, J 2 = 8.0 Hz, 1H), 7.26 - 7.23 (m, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 3H), 6.79 (dd, J 1 = 2.0 Hz, J 2 = 6.8 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 3.30 - 3.24 (m, 2H), 1.28 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
단계 3. 화합물 45-3의 합성
Figure pct00336
DCM (10.0 mL) 중 화합물 45-1 (500 mg, 1.08 mmol, 1.00 당량)의 용액에 DIEA (604 mg, 4.67 mmol, 814 uL, 4.00 당량) 및 HATU (888 mg, 2.34 mmol, 2.00 당량)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 화합물 45-2 (400 mg, 2.34 mmol, 2.00 당량)를 첨가하고, 이어서 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. LC-MS (EW29126-73-P1A1, 생성물: RT = 1.321분)는 화합물 1의 ~29%가 남아있음을 나타냈다. 여러 새로운 피크가 LC-MS 상에서 나타났고, 목적 화합물의 ~31%가 검출되었다. 반응 혼합물을 물 (50.0 mL)에 의해 켄칭한 다음, DCM (50.0 mL)으로 희석하고, DCM (50.0 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트 XB-SiOH250*70*10 um; 이동상: [헥산-EtOH (0.1% NH3·H2O)]; B%: 1%-20%, 20분)에 의해 정제하였다. 화합물 45-3 (340 mg, 550 umol, 47.1% 수율)을 수득하고, H NMR 및 SFC에 의해 확인하였다.
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 10.28 (s, 1H), 7.81 - 7.74 (m, 3H), 7.50 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 2H), 5.74 (s, 2H), 4.35 (dd, J 1 = 5.2 Hz, J 2 = 10.4 Hz, 1H), 4.21 (dd, J 1 = 6.4 Hz, J 2 = 10.4 Hz, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 3.90 (s, 2H), 3.42 - 3.32 (m, 2H), 3.11 (br t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.75 - 2.62 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.31 (br d, J = 8.0 Hz, 1H), 2.12 - 2.08 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H), 1.66 (br s, 6H), 1.50 (s, 9H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 6H).
SFC: RT = 1.382분, 100% ee
단계 4. 화합물 45-4의 합성
Figure pct00337
MeCN (15.0 mL) 중 화합물 45-3 (220 mg, 356 umol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 Py (282 mg, 3.56 mmol, 287 uL, 10.0 당량) 및 TFAA (449 mg, 2.14 mmol, 297 uL, 6.00 당량)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 45-3이 완전히 소모되었음을 나타냈다. 여러 새로운 피크가 LC-MS 상에서 나타났고, 목적 화합물의 ~54%가 검출되었다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NH4Cl (100 mL) 수용액의 첨가에 의해 켄칭한 다음, EtOAc (100 mL)로 희석하고, 용매 EtOAc (100 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 화합물 45-4 (240 mg, 345 umol, 96.9% 수율)를 수득하였다.
LC-MS: RT = 0.926분, (M+H)+ = 696.3
단계 5. 화합물 45-5의 합성
Figure pct00338
DCM (10.0 mL) 중 화합물 45-4 (240 mg, 345 umol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 TMSOTf (115 mg, 517 umol, 93.5 uL, 1.50 당량)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 45-4가 완전히 소모되었음을 나타냈다. 여러 새로운 피크가 LC-MS 상에서 나타났고, 목적 화합물의 ~10%가 검출되었다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 수용액 (100 mL)에 의해 켄칭한 다음, DCM (100 mL)으로 희석하고, DCM (100 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50.0 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. 화합물 45-5 (200 mg, 336 umol, 97.3% 수율)를 수득하였다.
LC-MS: RT = 0.770분, (M+H)+ = 596.4
단계 6. 화합물 45-a 및 45-b의 합성
Figure pct00339
피리딘 (5.00 mL) 중 화합물 45-5 (200 mg, 336 umol, 1.00 당량)의 용액에 0℃에서 화합물 45-6 (48.4 mg, 672 umol, 46.1 uL, 2.00 당량) 및 EDCI (257 mg, 1.34 mmol, 4.00 당량)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. LC-MS는 화합물 45-5의 ~9%가 남아있음을 나타냈다. 여러 새로운 피크가 LC-MS 상에서 나타났고, 목적 화합물의 ~33%가 검출되었다. 반응 혼합물을 0℃에서 포화 NH4Cl (100 mL) 수용액의 첨가에 의해 켄칭한 다음, DCM (100 mL)으로 희석하고, 용매 DCM (100 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 정제용-HPLC (칼럼: 웰치 얼티메이트 C18 150*25 mm*5 um; 이동상: [헥산-EtOH (0.1% NH3·H2O)]; B%: 20%-60%, 15분)에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였으며, 이를 추가로 SFC (칼럼: 다이셀 키랄팩 IG (250*30 mm, 10 um); 이동상: [0.1%NH3H2O ETOH]; B%: 50%-50%, 4.9; 50분)에 의해 분리하였다. 화합물 45-a (15.0 mg, 22.5 umol, 6.68% 수율, 97.2% 순도) 및 화합물 45-b (11.0 mg, 15.9 umol, 4.75% 수율, 94.1% 순도)를 수득하였다.
45-a:
LC-MS: RT = 0.864분, (M+H)+ = 650.5
HPLC: 97.2% 순도
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.0 Hz 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.44 - 7.43 (m, 1H), 7.32 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.63 - 6.45 (m, 2H), 5.83 (br d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.74 - 4.72 (m, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.22 (d, J = 14.0 Hz 1H), 4.13 - 4.09 (m, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 2H), 3.41 - 3.05 (m, 1H), 2.74 - 2.68 (m, 5H), 2.17 (s, 1H), 2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.71 - 1.62 (m, 5H), 1.54 - 1.46 (m, 6H), 1.26 - 1.20 (m, 3H).
SFC: RT = 1.172분, 99.9% ee
45-b:
LC-MS: RT = 0.857, (M+H)+ = 650.5
HPLC: 94.1% 순도
1H NMR (400MHz, CDCl3): δ 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.60 - 7.46 (m, 2H), 7.43 - 7.41 (m, 1H), 7.30 (br d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.65 - 6.56 (m, 1H), 6.49 - 6.44 (m, 1H), 5.82 (dd, J 1 = 1.2 Hz, J 2 = 10 Hz, 1H), 4.78 - 4.64 (m, 2H), 4.23 - 4.08 (m, 2H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 3.55 (br s, 1H), 3.34 (br s, 1H), 2.83 (br s, 2H), 2.74 - 2.54 (m, 3H), 2.27 - 2.20 (m, 1H), 2.12 - 1.91 (m, 6H), 1.51 - 1.46 (m, 6H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
SFC: RT = 1.750분, 99.0% ee
실시예 45
생화학적 검정
검정 1: KRAS G12C 뉴클레오티드 교환 검정
물질 및 시약:
HEPES (시그마, 카탈로그 번호 H3375-500g)
DMSO (시그마, 카탈로그 번호 34869-4L)
MgCl2 (시그마, 카탈로그 번호 M2670-500g)
GTP (시그마, 카탈로그 번호 G8877)
GDP (시그마, 카탈로그 번호 G7127)
MANT-GTP (시그마, 69244-1.5UMOL)
글리세롤 (시그마, 카탈로그 번호 G6279-1L)
트윈-20 (시그마, 카탈로그 번호 P2287-100 mL)
SOS1 단백질, aa564-1049, 6xHis 태그 (사이토스켈레톤(CYTOSKELETON), CS-GE02-XL)
EDTA, pH 8.0 (깁코(Gibco), 15575-038, 100 mL)
피어스 쿠마시(Pierce Coomassie) (브래드포드(Bradford)) 단백질 검정 키트 (써모 피어스(Thermo Pierce), 23200)
일루스트라(Illustra) NAP-5 칼럼 (GE, 17085301)
384-웰 플레이트 (코닝(Corning), 제품 번호 3573)
KRas(1-169) G12C 단백질
SOS1(594-1049) 단백질
SOS1(564-1049) 단백질
KRAS G12C 및 SOS1 단백질을 5 UL/튜브 또는 20 UL/튜브에 패킹하고, -80℃ 냉장고에서 동결시켰다.
실험 방법:
1. 완충제 제조:
1x로딩 완충제: 20 mM HEPES, pH 7.5, 50 mM NaCl, 0.5 mM MgCl2, 1 mM DTT, 5 mM EDTA
1x평형 완충제: 20 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 1 mM DTT
1x 검정 완충제: 20 mM HEPES, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 0.01% 트윈-20, 1 mM DTT
2. 맨트 GDP를 KRAS G12C에 로딩한다:
a. 100 UL 맨트 GDP 및 KRAS G12C의 혼합 용액을 1x 로딩 완충제: 60 um KRAS G12C, 600 um 맨트 GTP를 사용하여 제조하고, 실온에서 60분 동안 인큐베이션하고, 반응을 암실 조건에서 수행한다.
b. 1 uL 1 m MgCl2 (최종 농도 10 mm)를 첨가하여 반응을 정지시키고, 용액을 원심분리 튜브에서 뒤집어 혼합하고, 3-5초 동안 원심분리하고, 실온에서 30분 동안 인큐베이션한다.
c. 30분 동안의 인큐베이션과 동시에, nap-5 칼럼을 액체가 떨어지지 않을 때까지 10 ml 1x 장비 완충제로 균형을 맞춘다.
d. 100 uL 맨트 GDP 및 KRAS G12C의 혼합 용액을 nap-5 칼럼의 중심 내로 떨어뜨린다. 샘플이 nap-5 칼럼에 완전히 들어간 후, 액체가 떨어지지 않을 때까지 400 UL 1x 장비 완충제를 첨가한다.
e. 용리를 위해 500 ul 1x 장비 완충제를 첨가하고, 용리액을 수집한다.
f. 브래드포드 단백질 정량적 키트를 사용하여 KRAS G12C 맨트 GDP를 결정한다.
3. 뉴클레오티드 교환 실험:
a. 50 NL DMSO / 화합물을 에코550을 갖는 384 웰 플레이트로 옮긴다.
b. 10 uL 효소 믹스를 384 세공 플레이트에 첨가하고, DMSO / 화합물과 함께 15분 동안 인큐베이션한다.
c. 10 UL Sos1 / GTP 믹스를 사용하여 초기 반응시킨다.
d. 반응 직후, ex360 / em440 형광 값을 니보(Nivo)로 동역학적 모드로 판독한다.
4. 데이터 분석:
a. 그래프패드(Graphpad) 소프트웨어를 사용하여 데이터를 처리하고 그림을 그린다.
b. 1상 실험 데크 모델을 피팅함으로써 그래프패드 소프트웨어에서 K 값을 수득한다.
c. Z'=1-3*(SdKmax+SdKmin)/(AveKmax-AveKmin)
d. In%는 하기 식에 의해 계산된다:
Inh%=(Kmax-K샘플)/(Kmax-Kmin)*100
Max: KRAS-mGDP + SOS1+ GTP
Min: KRAS-mGDP + 완충제
화학식 (I)의 예시적인 화합물에 대한 결과를 표 1에 나타낸다. 결과가 제시되지 않은 다른 실시예 화합물의 경우, 모두 60 μM 이하의 KRAS G12C에 대한 IC50을 갖는다. 이들 화합물 중 일부는 KRAS G12C에 대해 50 μM 이하, 일부는 40 μM 이하, 일부는 30 μM 이하, 일부는 20 μM 이하, 또는 10 μM 이하, 또는 5 μM 이하, 또는 4 μM 이하, 또는 3 μM 이하, 또는 2 μM 이하, 또는 1 μM 이하, 500 nM 이하, 400 nM 이하, 300 nM 이하, 200 nM 이하, 또는 심지어 100 nM 이하의 IC50을 갖는다.
표 1
Figure pct00340
검정 2: KRAS GDP FI 검정
1. 화합물 희석 플레이트를 제조한다.
2. 억제제/DMSO를 에코에 의해 검정 플레이트로 옮긴다.
3. 1x 검정 완충제를 제조한다.
4. KRAS G12C 믹스 & SOS1 믹스 & GTP 믹스 & 검출 시약 믹스를 제조한다.
5. KRAS G12C 믹스, SOS1 믹스, GTP 믹스를 첨가한다.
6. 검출 시약 믹스를 검정 플레이트에 첨가한다.
7. 120분 동안 Ex580/Em620을 사용하여 동역학 판독한다.
화학식 (I)의 예시적인 화합물에 대한 결과를 표 2에 나타낸다.
표 2
Figure pct00341
검정 3: 종양 세포 항증식 검정 (CTG 검정)
시험된 종양 세포주 (MIA PaCa-2, NCI-H358, 및 A549)를 96-웰 플레이트에 밤새 시딩한 다음, 세포를 9개의 연속 희석된 농도의 시험 화합물로 삼중으로 처리하였다. 시험 화합물과 함께 3일 인큐베이션 후, CTG 검정을 수행하여 IC50을 평가하였다. 3종의 세포주를 동일한 방식으로 시험하였다. 시스플라틴을 양성 대조군으로서 사용하였다.
물질 및 시약:
RPMI-1640 (하이클론, 카탈로그 번호: SH30809.01)
DMEM 배지 (하이클론, 카탈로그 번호: SH30243.01)
햄 F12K (깁코, 카탈로그 번호: 21127-022)
FBS (카탈로그 번호 10099-141, 깁코)
셀타이터-글로(CellTiter-Glo)® 발광 세포 생존율 검정 (카탈로그 번호 G7572, 프로메가(Promega), -20℃에서 저장함).
96-웰 플레이트, 뚜껑 있음, 백색, 편평 바닥, TC-처리됨, 폴리스티렌 (카탈로그 번호: 3610, 코닝®)
0.25% 트립신-EDTA (카탈로그 번호 25200072, 깁코)
장비:
BMRP004; CO2 인큐베이터, 산요 일렉트릭 캄파니, 리미티드(SANYO Electric Co., Ltd) (02100400059).
역현미경, 충광(Chongguang) XDS-1B, 충칭 광디안 코포레이션(Chongqing Guangdian Corp.) (TAMIC0200)
엔비전 2104 멀티 라벨 판독기, 미국 소재의 퍼킨엘머(PerkinElmer) (TAREA0011)
Vi-Cell XR, 베크만 쿨터(Beckman Coulter) (TACEL0030)
방법:
제-1일: 세포주에 대한 세포 플레이팅
1. 배지를 사용하여 세포 농도를 적절한 수로 조정하고, 96-웰 플레이트의 각각의 웰에 대해, 90 μl 세포 현탁액을 첨가한다 (세포 농도는 데이터 베이스 또는 밀도 최적화 검정에 따라 조정될 것임).
2. 플레이트를 5% CO2를 갖는 37℃의 가습 인큐베이터에서 밤새 인큐베이션한다.
제0일: T0 플레이트 판독 및 화합물 처리
3. T0 판독을 위해 10 μL 배양 배지를 플레이트 A의 각각의 웰에 첨가한다.
4. 플레이트 및 그의 내용물을 RT에서 대략 30분 동안 평형화시킨다.
5. T0 판독을 위해 50 μL 셀타이터-글로® 시약을 각각의 웰에 첨가한다.
6. 내용물을 2분 동안 오비탈 진탕기 상에서 혼합하여 세포 용해를 용이하게 한다.
7. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨다. 주: 표준 플레이트 내의 불균등한 발광 신호는 온도 구배, 세포의 불균등한 시딩 또는 다중벽 플레이트에서의 에지 효과에 의해 유발될 수 있다.
8. 각 플레이트의 바닥에 블랙 백실(BackSeal) 스티커를 위치시킨다.
9. 엔비전 다중 표지 판독기를 사용하여 발광을 기록한다.
10. 시험 화합물 및 양성 대조군 (시스플라틴)을 희석한다. 10X 시험 화합물 작업 용액 10 μL를 상응하는 웰에 첨가한다. 시험 플레이트를 가습 인큐베이터에서 5% CO2로 37℃에서 인큐베이션한다.
제3일: 3-일 검정을 위한 플레이트 판독
11. 현미경 하에 모니터링하여 대조군 웰 내의 세포가 건강한지를 확인한다.
12. 3일 인큐베이션 후에, 50 μL 셀타이터-글로® 시약을 각각의 웰에 첨가한다.
13. 내용물을 2분 동안 오비탈 진탕기 상에서 혼합하여 세포 용해를 용이하게 한다.
14. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하여 발광 신호를 안정화시킨다.
15. 주: 표준 플레이트 내의 불균등한 발광 신호는 온도 구배, 세포의 불균등한 시딩 또는 다중벽 플레이트에서의 에지 효과에 의해 유발될 수 있다.
16. 각 플레이트의 바닥에 블랙 백실 스티커를 위치시킨다.
17. 엔비전 다중 표지 판독기를 사용하여 발광을 기록한다.
데이터 분석:
데이터를 그래프패드 프리즘 5.0을 사용하여 그래프로 나타냈다. IC50을 계산하기 위해, 용량-반응 곡선을 S자형 용량 반응을 갖는 비선형 회귀 모델을 사용하여 피팅하였다. 생존율의 식을 하기에 나타냈고, IC50은 그래프패드 프리즘 5.0에 의해 자동적으로 생성되었다.
생존율 (%) = (Lum시험 화합물 - Lum배지 대조군) / (Lum비처리-Lum배지 대조군) x 100%.
Lum비처리-Lum배지 대조군을 100%로 설정하고, Lum배지 대조군을 0% 생존율로 설정하였다. T0 값은 처리된 Lum비처리의 백분율로서 제시될 것이다.
표 3은 화학식 (I)의 예시적인 화합물에 대한 결과를 제공한다.
표 3
Figure pct00342
Figure pct00343
실시예 46
약동학 연구
본 연구의 목적은 정맥내 또는 경구 투여 후 ICR 마우스에서 화합물의 혈장에서의 약동학 파라미터를 결정하는 것이다.
시험 물품 제조
제제는 스폰서의 권고에 기초하였고, 시험 시설에 의해 제조될 것이다.
비히클: 60% PEG400 + 10% 에탄올 + 30% 물 (pH 7-8)
시험 시스템
종 및 계통: ICR 마우스 (수컷)
공급원: 상하이 소재의 시노-브리티쉬 SIPPR 랩 애니멀 리미티드(Sino-British SIPPR Lab Animal Ltd)
동물의 수: 주문: 8; 필요: 6
연구 설계
Figure pct00344
*동물을 경구 투여 전에 금식시켰다. 경구 투여된 동물로의 음식 공급은 투여 4시간 후에 재개하였다.
투여
시험 물품을 단일 IV 또는 PO 투여를 통해 투여하였다.
수집 간격
IV 군: 투여 후 5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 및 24시간.
PO 군: 투여 후 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간 및 24시간.
30~ 40 μL/ 샘플. 샘플을 헤파린 나트륨을 함유하는 튜브에 넣고, 원심분리할 때까지 얼음 상에 저장하였다.
분석 절차
PK 혈액 샘플을 대략 6800G에서 6분 동안 2-8℃에서 원심분리하고, 생성된 혈장을 혈액 수집/원심분리 2시간 내에 적절하게 표지된 튜브로 옮기고, 대략 -70℃에서 동결 저장하였다.
시험 물품 (나트륨 헤파린 항응고제)에 대한 방법 개발 및 생물학적 샘플 분석은 LC-MS/MS에 의해 시험 시설에 의해 수행하였다. 분석 결과는 검정내 변동에 대한 품질 관리 샘플을 사용하여 확인하였다. 품질 관리 샘플의 >66.7%의 정확도는 공지된 값(들)의 80-120%였다.
약동학 분석
곡선하 면적 (AUC(0-t) 및 AUC(0-∞)), 소실 반감기 (T1/2), 최대 혈장 농도 (Cmax) 및 최대 혈장 농도에 도달하는 시간 (Tmax) 및 다른 파라미터를 포함하는 파라미터의 표준 세트를 연구 디렉터에 의해 피닉스 윈논린(Phoenix WinNonlin) 7.0 (파르사이트(Pharsight), 미국)을 사용하여 계산하였다.
표 4는 화학식 (I)의 예시적인 화합물에 대한 결과를 제공한다.
Figure pct00345
상기 설명은 단지 본 개시내용의 원리를 예시하는 것으로 간주된다. 추가로, 수많은 변형 및 변화가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이기 때문에, 본 발명을 상기 기재된 바와 같은 정확한 구성 및 방법으로 제한하는 것은 바람직하지 않다. 따라서, 모든 적합한 변형 및 등가물이 하기 청구범위에 의해 규정된 바와 같은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 간주될 수 있다.

Claims (75)

  1. 화학식 (I)를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00346

    여기서
    고리 A는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    L1은 결합, O, S 또는 N(Ra)이고;
    L2는 결합, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 및 헤테로알키닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R1은 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환되고;
    R2는 H, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환되고,
    R3은 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, -C(O)NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
    R4 및 R5, R4 및 R6, R4 및 R7은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
    W는 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 1개 이상의 Rg로 임의로 치환되고,
    L3은 결합, 알킬 또는 -NRd-이고;
    B는 K-Ras G12C 돌연변이 단백질의 위치 12에서의 시스테인 잔기와 공유 결합을 형성할 수 있는 친전자성 모이어티이고;
    Ra는 독립적으로 수소 또는 알킬이고;
    각각의 Rb는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, 아실, -NRdRe, 카르바모일, 카르복실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕실, 알콕실알킬, 시클로알킬알킬, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 Rc는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRdRe, -C(O)ORa, -C(O)N(Rd)(Re), 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 알콕실, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴, 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 Rd 및 Re는 독립적으로 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴, 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 아릴 및 헤테로아릴은 시아노, 할로겐, 히드록시 또는 아미노로 임의로 치환되고;
    각각의 Rf는 독립적으로 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRcRd, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 Rg는 독립적으로 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 카르바모일, 카르복시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 및 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRdRe, 히드록시, 카르복시, 카르바모일, 할로알킬, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되고;
    n은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
  2. 제1항에 있어서, 고리 A가 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항에 있어서, 고리 A가 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항에 있어서, 고리 A가 헤테로아릴인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항에 있어서, L1이 O인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항 또는 제5항에 있어서, L2가 결합인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제1항 또는 제5항에 있어서, L2가 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제7항에 있어서, L2가 메틸, 에틸 또는 프로필인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제8항에 있어서, R1이 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴이 1개 이상의 Rb로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제9항에 있어서, 각각의 Rb가 옥소, 시아노, 할로겐, 히드록시, 아실, -NRdRe, 알킬, 알콕실, 알콕실알킬 및 시클로알킬알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  11. 제9항에 있어서, R1이 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴이고:
    Figure pct00347

    Figure pct00348

    이들 각각은 1개 이상의 Rb로 임의로 치환된 것인, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  12. 제11항에 있어서, 각각의 Rb가 옥소, 할로겐, 아실, -NRdRe, 알킬, 알콕실, 알콕실알킬 및 시클로알킬알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  13. 제11항에 있어서, 각각의 Rb가 할로겐 또는 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  14. 제11항에 있어서, 각각의 Rb가 플루오로, 클로로 또는 메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  15. 제11항에 있어서, R1이
    Figure pct00349
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제11항에 있어서, R1이
    Figure pct00350
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 제1항에 있어서, -L1-L2-R1이
    Figure pct00351
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  18. 제1항에 있어서, -L1-L2-R1이
    Figure pct00352
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  19. 제1항에 있어서, R2가 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 아릴인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  20. 제19항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐, 시아노, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  21. 제1항에 있어서, R2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 아릴이고:
    Figure pct00353

    이들 각각은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 것인, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  22. 제21항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  23. 제21항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐, 히드록실, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  24. 제21항에 있어서, 각각의 Rc가 플루오로, 클로로, 히드록실, 메틸, 에틸, 2-메틸프로페닐, 메톡실, 및 시클로프로필로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  25. 제1항에 있어서, R2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00354
  26. 제1항에 있어서, R2가 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 헤테로아릴인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  27. 제26항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  28. 제1항에 있어서, R2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로아릴이고:
    Figure pct00355

    이들 각각은 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 것인, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  29. 제28항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알콕실, 및 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  30. 제29항에 있어서, 각각의 Rc가 할로겐 또는 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  31. 제30항에 있어서, 각각의 Rc가 플루오로, 클로로, 메틸, 및 에틸로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  32. 제1항에 있어서, R2가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00356
  33. 제1항에 있어서, R3이 옥소, 알킬 및 아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 알킬 및 아릴이 1개 이상의 Rc로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  34. 제1항에 있어서, Rc가 할로겐, 시아노, 히드록시, -NRcRd, 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  35. 제1항에 있어서, R3이 옥소, 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸 및 페닐로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  36. 제1항에 있어서, 2개의 R3이 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 시아노, 할로겐, 히드록시, 및 -NRcRd로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬을 형성하는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  37. 제1항에 있어서, W가 1개 이상의 Rg로 임의로 치환된 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  38. 제35항에 있어서, Rg가 시아노, 할로겐, 및 히드록실로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  39. 제1항에 있어서, W가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로시클릴이고:
    Figure pct00357

    이들 각각은 1개 이상의 Rg로 임의로 치환된 것인, 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  40. 제37항에 있어서, 각각의 Rg가 시아노로 임의로 치환된 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  41. 제38항에 있어서, 각각의 Rg가 시아노로 임의로 치환된 메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  42. 제1항에 있어서, W가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00358
  43. 제1항에 있어서, L3이 결합 또는 -NRd-인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  44. 제1항에 있어서, B가 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00359

    Figure pct00360
  45. 제1항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00361

    여기서
    J1은 부재하거나, CH(R4), NR4, SO2 또는 P(O)CH3이고;
    J2는 부재하거나, CR5, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
    J3은 부재하거나, CH(R6), NR6, SO2 또는 P(O)CH3이고;
    J4는 부재하거나, CR7, N, SO2 또는 P(O)CH3이고;
    J5는 부재하거나, CH(R8), NR8, SO2 또는 P(O)CH3이고;
    R4, R5, R6, R7 및 R8은 각각 독립적으로 수소, 옥소, 할로겐, 시아노, 히드록실, -NRdRe, 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 각각의 알킬, 알케닐, 알키닐, 헤테로알킬, 헤테로알케닐, 헤테로알키닐, 시클로알킬, 헤테로시클릴, 아릴 및 헤테로아릴은 1개 이상의 Rf로 임의로 치환되거나; 또는
    R2, 및 R4, R5, R6, R7 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
    R3, 및 R4, R5, R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
    R4, 및 R6 및 R8 중 어느 하나는 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환되거나; 또는
    R6 및 R8은 이들이 각각 부착되어 있는 원자와 함께 포화 또는 부분 불포화 시클로알킬, 또는 포화 또는 부분 불포화 헤테로시클릴을 형성하고, 여기서 각각의 시클로알킬 및 헤테로시클릴은 시아노, 할로겐, 히드록시, -NRcRd, 카르복시, 카르바모일, 아릴 또는 헤테로아릴로 임의로 치환된다.
  46. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00362
  47. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00363

    Figure pct00364

    여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
  48. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00365

    Figure pct00366

    여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
  49. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00367
  50. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00368
  51. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00369
  52. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00370

    여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
  53. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00371

    여기서 m은 0, 1, 2, 3 또는 4이다.
  54. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00372
  55. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00373
  56. 제45항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00374
  57. 제45항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, L2가 알킬인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  58. 제45항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00375
    인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  59. 제45항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 메틸, 에틸 또는 트리플루오로메틸로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  60. 제1항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식을 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure pct00376

    Figure pct00377

    Figure pct00378

    Figure pct00379

    Figure pct00380
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  62. 제61항에 있어서, 경구 투여용으로 제제화된 제약 조성물.
  63. 제61항에 있어서, 주사용으로 제제화된 제약 조성물.
  64. 유효량의 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 암의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  65. 제64항에 있어서, 암이 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 혈액암, 결장직장암, 난관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양, 뇌간 신경교종, MYH 연관 폴립증 또는 뇌하수체 선종인 방법.
  66. 제64항에 있어서, 암이 KRas G12C 돌연변이와 연관된 것인 방법.
  67. 제66항에 있어서, 암이 혈액암, 췌장암, MYH 연관 폴립증, 결장직장암 또는 폐암인 방법.
  68. 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    (a) 암이 KRas G12C 돌연변이와 연관됨을 결정하고;
    (b) 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하는 것
    을 포함하는 방법.
  69. 종양 전이의 억제를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 종양 전이를 억제하는 방법.
  70. KRas G12C 돌연변이 단백질을 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물과 반응시키는 것을 포함하는, KRas G12C 돌연변이 단백질의 활성을 조절하는 방법.
  71. KRas G12C 돌연변이 단백질을 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염과 반응시켜 표지된 KRas G12C 돌연변이 단백질을 생성하는 것을 포함하는, 표지된 KRas G12C 돌연변이 단백질을 제조하는 방법.
  72. 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 용도.
  73. 종양 전이를 억제하기 위한 의약의 제조에서의 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 용도.
  74. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물.
  75. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 전이를 억제하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 제약 조성물.
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