CN113004269A - Kras-G12C抑制剂杂环化合物 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及一类式I所示Kras‑G12C抑制剂杂环化合物,及其制备方法和该类化合物在肿瘤疾病,如肺癌、结直肠癌和胰腺癌等中的预防和治疗用途。在制备过程中,通过SN2反应、上保护、偶联反应、脱保户、缩合反应等一系列反应,得到通式化合物I。
Description
技术领域
本发明涉及一类新型KRAS-G12C抑制剂,及其制备方法和该类化合物在肿瘤疾病,如肺癌、结直肠癌和胰腺癌等中的预防和治疗用途。本发明还涉及包含式(I)所示化合物的药物组合物及制备方法,以及所述化合物在肿瘤疾病,如肺癌、结直肠癌等中的预防和治疗用途。
背景技术
RAS蛋白是一类与GTP/GDP结合并具有GTP水解酶活性的小G蛋白。作为分子开关,RAS通过结合GTP而激活下游MAPK及PI3K-AKT等信号通路,从而调控细胞生长、增殖、分化和凋亡等生命过程,其突变与癌症发生发展密切相关。其有三个家族成员:HRAS、KRAS和NRAS。KRAS突变是RAS家族中最常见的突变类型。KRAS突变将导致其丧失GTP水解酶活性,从而持续激活下游信号通路,促使细胞增殖失控而癌变;同时,KRAS突变是肿瘤细胞的维持生长增殖所必需条件,也是肿瘤获得性耐药的关键原因之一。据统计,RAS突变频率最高的5种癌症分别是胰腺导管腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肺癌和皮肤黑色素瘤。肺癌中,肺腺癌的32%中可见RAS基因的突变,其中KRAS突变占96%。KRAS突变有多种类型,其中最常见的突变之一是G12C突变,在非小细胞肺癌中发生的比例约为14%,在结肠癌中的比例约为4%,在胰腺癌中的比例约为2.9%。近年来,针对G12C突变KRAS,在被称为开关II的区域附近显示出变构口袋的存在(Nature,503,548,2013),并且报道了通过与突变半胱氨酸形成共价键而不可逆地与G12C突变KRAS结合的化合物(Nature,503,548,2013、Angew.Chem.,Int.Ed.Engl.,53,199,2014、CancerDiscov.,6,316,2016)。G12C突变KRAS选择性抑制剂通过与G12C突变KRAS形成共价键来抑制从非活性型向活性型的转变、切断下游信号,由此诱导癌细胞死亡。
到目前为止,已报道了多种选择性靶向KRAS-G12C的小分子抑制剂(WO2015054572、WO2017201161、WO2018217651等),其中有部分候选药物(AMG510,MRTX849等)处于临床试验研究阶段。
本发明以KRAS-G12C为靶点,研发了一种新型的杂环小分子化合物,用于治疗肿瘤痰病如肺癌、结直肠癌等。
发明内容
本发明提供式I所示的化合物或其药学上可接受的盐,
其中,
R1选自C1-C6烷基、或C3-C8环烷基、或C1-C6烷基-O-,所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6烷基-O-任选地被一个或多个卤素取代;
R2选自C6-C10芳基和C5-C10杂芳基,所述C5-C10杂芳基含有1~3个选自N、O、或S的杂原子,并且R2任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基-O-、C1-C6烷基-NH-、或(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)-N-取代;
R3为C3-C10杂环烷基,所述C3-C10杂环烷基可任选地被卤素、C1-6烷基、或者C1-6烷基-O-取代;
R4为H或F;
n为0、1、2、或3。
在本发明的部分实施方案中,R1选自C1-C3烷基,所述C1-C3烷基任选地被一个或多个F、Cl、或Br取代。
在本发明的部分实施方案中,R1选自甲基、乙基、丙基和环丙基。
在本发明的部分实施方案中,R1选自甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丁氧基、甲氧乙氧基和N,N-二甲基乙氧基。
在本发明的部分实施方案中,R2选自 并且R2任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基-O-、C1-C6烷基-NH-、或(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)-N-取代。
在本发明的部分实施方案中,R2任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代。
在本发明的部分实施方案中,R4为H。
本发明提供以下化合物或其药学上可接受的盐,
另一方面,本发明提供一种药物组合物,其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中,本发明的药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
另一方面,本发明提供治疗哺乳动物由KRAS突变介导的疾病的方法,其包括对需要该治疗的哺乳动物,优选人类,给予治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面,本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备治疗由KRAS突变介导的疾病的药物中的用途。
在本发明的部分实施方式中,所述由KRAS突变介导的疾病为癌症。优选地,所述癌症为实体瘤或血液肿瘤,更优选地,所述癌症为肺癌、结肠癌、或胰腺癌,
定义
除非另有说明,本发明中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的,而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时,意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代,只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即=O)时,意味着两个氢原子被取代,氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生,该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。例如,乙基“任选”被卤素取代,指乙基可以是未被取代的(CH2CH3)、单取代的(如CH2CH2F)、多取代的(如CHFCH2F、CH2CHF2等)或完全被取代的(CF2CF3)。本领域技术人员可理解,对于包含一个或多个取代基的任何基团,不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
本文中的“Cm-n”,是该部分具有给定范围中的整数个碳原子。例如“C1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时,其在每一种情况下的定义都是独立的。因此,例如,如果一个基团被2个R所取代,则每个R都有独立的选项。
当其中一个变量选自共价键时,表示其连接的两个基团直接相连,比如A-L-Z中L代表共价键时表示该结构实际上是A-Z。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“氨基”指-NH2基团。
术语“烷基”是指通式为CnH2n+1的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如,术语“C1-6烷基”指含有1至6个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等)。类似地,烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺酰基和烷硫基的烷基部分(即烷基)具有上述相同定义。
术语“环烷基”指完全饱和的并且可以以呈单环、桥环或螺环存在的碳环。除非另有指示,该碳环通常为3至10元环。环烷基非限制性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基等。
术语“杂环烷基”是指完全饱和的并且可以以单环、桥环或螺环存在的环状基团。除非另有指示,该杂环通常为含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至7元环。3元杂环烷基的实例包括但不限于环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基,4元杂环烷基的非限制性实例包括但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基,5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基,6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基、,7元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基。优选为具有5或6个环原子的单环杂环烷基。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如,芳基可以具有6-20个碳原子,6-14个碳原子或6-12个碳原子。芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氢化萘等。
术语“杂芳基”是指单环或稠合多环体系,其中含有至少一个选自N、O、S的环原子,其余环原子为C,并且具有至少一个芳香环。优选的杂芳基具有单个4至8元环,尤其是5至8元环,或包含6至14个,尤其是6至10个环原子的多个稠合环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、三唑基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等。
术语“治疗”意为将本发明所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状,且包括:
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现,特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态,但尚未被诊断为已患有该疾病状态时;
(ii)抑制疾病或疾病状态,即遏制其发展;
(iii)缓解痰病或疾病状态,即使该疾病或疾病状态消退。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍,(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状,或(iii)预防或延迟本文中所述的特定痰病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“治疗有效量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变,但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”,是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言,它们在可靠的医学判断的范围之内,适用于与人类和动物的组织接触使用,而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症,与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐,例如,可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
术语“药物组合物”是指一种或多种本发明的化合物或其盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本发明的化合物。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用,而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的,例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义,即“包括但不限于”。
本发明的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在,并且所有这样的形式包含于本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如,质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变,如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分,其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。
本发明还包括与本文中记载的那些相同的,但一个或多个原子被原子量或质量数不同于自然中通常发现的原子量或质量数的原子置换的同位素标记的本发明化合物。可结合到本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素,诸如分别为2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125I和36Cl等。
某些同位素标记的本发明化合物(例如用3H及14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素对于由于它们易于制备和可检测性是尤其优选的。正电子发射同位素,诸如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描(PET)研究以测定底物占有率。通常可以通过与公开于下文的方案和/或实施例中的那些类似的下列程序,通过同位素标记试剂取代未经同位素标记的试剂来制备同位素标记的本发明化合物。
本发明化合物可以是不对称的,例如,具有一个或多个立体异构体。除非另有说明,所有立体异构体都包括,如对映异构体和非对映异构体。本发明的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分,或通过使用手性原料或手性试剂合成。
本发明的药物组合物可通过将本发明的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备,例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂,如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本发明化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本发明的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造,如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中,药物组合物是口服形式。对于口服给药,可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合,来配制该药物组合物。这些辅料能使本发明的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等,用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如,可通过下述方法获得:将所述的活性化合物与固体辅料混合,任选地碾磨所得的混合物,如果需要则加入其它合适的辅料,然后将该混合物加工成颗粒,得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于:粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药,如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备,包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式,优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的,所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物,有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
合成方法
流程1
可按照流程1中所述路线制备本发明化合物。流程1中反应所得的每一个产物可以通过传统分离技术来得到,这种传统技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱分离等。起始原料可以通过自己合成或从商业机构(例如,但不限于Adrich或Sigma)购买获得。这些原料可以使用常规手段进行表征,比如物理常数和光谱数据。本发明所描述的化合物可以使用合成方法得到单一的异构体或者是异构体的混合物。
在流程1中,使用合适的碱,原料1和原料2进行SN2反应,接着上保护基得到中间体3,中间体3经过钯催化的偶联反应接上R3基团得到中间体4,接着脱去苄基保户基得到中间体5。中间体5经过钯催化的偶联反应接上R2基团得到中间体6,中间体6脱去保户基得到中间体7。中间体7与含有R1基团的烯酸发生缩合反应得到通式化合物I。
实施例
下述非限制性实施例仅仅是说明性的,不以任何方式限制本发明。
除非另有说明,否则温度是摄氏温度。试剂购自国药集团化学试剂北京有限公司,阿法埃莎(Alfa Aesar)、或北京百灵威科技有限公司等商业供应商,并且这些试剂可直接使用无需进一步纯化,除非另有说明。
除非另有说明,否则下列反应在无水溶剂中、氮气或氩气的正压下或使用干燥管进行;反应瓶上装有橡胶隔膜,以便通过注射器加入底物和试剂;玻璃器皿烘干和/或加热干燥。
除非另有说明,否则柱色谱纯化使用青岛海洋化工厂的200-300目硅胶;制备薄层色谱分离使用烟台市化学工业研究所生产的薄层色谱硅胶预制板(HSGF254);MS的测定用Thermo LCQ Fleet型(ESI)液相色谱-质谱联用仪。
核磁数据(1H NMR)使用Varian设备于400MHz下运行。核磁数据使用的溶剂有CDCl3、CD3OD、D2O、DMSO-d6等,以四甲基硅烷(0.00ppm)为基准或以残留溶剂为基准(CDCl3:7.26ppm;CD3OD:3.31ppm;D2O:4.79ppm;DMSO-d6:2.50ppm)。当标明峰形多样性时,以下简写表示不同峰形:s(单峰)、d(双重峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双双重峰)、dt(双三重峰)。如果给出了耦合常数,则以Hertz(Hz)为单位。
缩略语:
实施例1
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代-2-烯酸甲脂
步骤A:7-苄基-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇
冰浴冷却下,向无水乙醇(1.6L)中分批加入Na(15g),加完继续搅拌至无气泡生成,随后向混合液中加入1-苄基-3-氧杂-4-哌啶甲酸乙酯(80g)和尿素(39g)。加料结束后,将混合液升温至90℃搅拌24小时。冷却至室温,将反应混合物旋干后加入水(150ml)溶解,用2N HCl调节溶液pH至中性,产品析出,过滤收集固体,用水洗涤固体,干燥后得到产物(43g)。
1H NMR(400MHz,DMSO),10.89(s,1H),10.57(s,1H),7.22-7.33(m,5H),3.59(s,2H),3.10(s,2H),2.57(t,J=6.0Hz,2H),2.19(t,J=6.0Hz,2H)。
步骤B:7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶
室温下,将7-苄基-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(18.43g)分散于POCl3(186ml)中,随后升温至115℃回流过夜。冷却至室温,减压旋干溶剂,加入二氯甲烷混合,随后分批倒入冰水中,用NaOH调节溶液pH至9,二氯甲烷萃取,合并有机相,减压浓缩,残留物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/10)分离得到产物(12.95g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.26-7.33(m,5H),3.70(s,2H),3.63(s,2H),2.78-2.85(m,4H)。
0℃下,向(R)-1-叔丁氧羰基-3-羟甲基哌嗪(4.00g)的二氯甲烷(120mL)溶液中加入咪唑(1.26g),然后慢慢滴加氯化亚砜(4mL),加完继续搅拌15分钟,随后慢慢升至室温(20℃)搅拌24小时。冷却下,滴加饱和氯化铵水溶液(80mL),搅拌15分钟,分层,有机相分离,水相用二氯甲烷萃取。合并有机相,依次用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂得到产物(4.80g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.78(dd,J=7.6Hz,6.4Hz,1H),4.57(t,J=7.6Hz,1H),4.49(dd,J=8.4Hz,5.6Hz,1H),4.07-4.26(m,3H),3.89(dd,J=9.2Hz,8.0Hz,1H),3.57-3.65(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤D:(R)-四氢-[1,2,3]氧杂噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-(3H)-甲酸叔丁酯1,1-二氧化物
0℃下,向(3aR)-四氢-[1,2,3]氧杂噻唑并[3,4-a]吡嗪-5(3H)-甲酸叔丁酯1-氧化物(4.80g)的乙腈(100mL)溶液中依次加入RuCl3·H2O(0.2g)和NaIO4(5.1g)水溶液(40mL),加毕,升至室温搅拌1小时。加入饱和氯化铵水溶液(200mL),乙酸乙酯萃取(3×200mL)。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/1),得到白色固体产物(4.2g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.63(dd,J=8.4Hz,6.4Hz,1H),3.97-4.33(m,3H),3.60-3.67(m,1H),3.45(d,J=11.6Hz,1H),3.05-3.19(m,1H),2.88-3.02(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤E:(S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
室温下,向(R)-四氢-[1,2,3]氧杂噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-(3H)-甲酸叔丁酯1,1-二氧化物(1.25g,)的乙腈(40mL)溶液中加入氰化四乙基铵(1.40g),升至室温搅拌45分钟。滴加0.5moL/L盐酸(45mL),10分钟加完,继续搅拌1小时。冷却下,用NaOH水溶液(5moL/L)调pH至11,加入饱和硫酸铁水溶液(30mL),搅拌1小时。减压浓缩除去大部分溶剂和水,向残余物加入二氯甲烷(100mL),搅拌15分钟,用硅藻土过滤,二氯甲烷∶甲醇=20∶1洗(100mL)。收集滤液,减压浓缩除去溶剂得到产物粗品(2.2g,纯度50%),直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.03-4.18(m,3H),3.46-3.49(m,1H),3.27-3.31(m,1H),2.90-3.26(m,3H),2.76(dd,J=16.8Hz,10.4Hz,1H),1.54(s,9H)。
步骤F:(S)-2-(哌嗪-2-基)乙腈盐酸盐
0℃下,向(S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.2g)中滴加4moL/L氯化氢二氧六环溶液(15mL,由浓盐酸∶水=1∶2混合制得)。加毕,升至室温搅拌2小时。减压浓缩。向残余物加入无水乙醇(10mL),搅拌15分钟,过滤,收集固体得到白色产物(0.87g)。
1H NMR(400MHz,DMSO),8.82-11.02(brs,4H),3.82-3.88(m,1H),3.42-3.54(m,2H),3.23-3.32(m,2H),3.09-3.20(m,4H)。
步骤G:(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
室温下,将7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶(13g)和DIEA(36ml)溶于乙腈(150ml)中,随后向混合液中加入2-哌嗪乙腈盐酸盐(9.6g),室温下搅拌8小时,加入DIEA(22ml)和Boc酸酐(20ml),室温搅拌过夜,减压浓缩,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/2)分离得到产物(18g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.26-7.34(m,5H),4.53-4.60(m,1H),4.94-4.12(m,2H),3.84-3.91(m,1H),3.63-3.71(m,3H),3.54(d,J=18.0Hz,1H),3.27(dd,J=14.0Hz,4.0Hz,1H),3.08-3.23(m,1H),2.99-3.07(m,1H),2.58-2.77(m,6H),1.49(s,9H)。
步骤H:(S)-(5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲醇
冰浴下,将(S)-5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-羧酸(10g)溶于THF(100ml),随后缓慢滴加入LiAlH4(7.8g)(30min加完),升温至室温继续搅拌1小时至无气泡生成。随后在氮气保护下,升温至80℃搅拌2小时。冷却至室温,冰浴下缓慢加入饱和Na2SO4水溶液,垫藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,收集滤液,减压浓缩后得到产物(5.7g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),3.68(dd,J=10.8Hz,3.6Hz,1H),3.43(dd,J=10.8Hz,2.4Hz,1H),2.61-2.68(m,2H),2.58(d,J=8.8Hz,1H),2.34(s,3H),1.94(dd,J=12.4Hz,4.4Hz,1H),1.43(dd,J=12.8Hz,7.6Hz,1H),0.47-0.58(m,4H)。
步骤I:(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg)、(S)-(5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲醇(214mg)、Ru-Phos-Pd-G3催化剂(26mg)和Cs2CO3(606mg)加入甲苯(15ml)中,随后在氮气保护下升至120℃搅拌过夜。冷却至室温,旋干甲苯溶剂,加入乙酸乙酯溶解残余物,过硅藻土过滤,滤液旋干,通过硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)纯化得到产物(367mg)。LCMS ESI[M+H]+:588。
步骤J:(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在将(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(367mg)和Pd/C(100mg)加入异丙醇(25ml)中,随后用氢气充分换气后升至60℃搅拌过夜。冷却至室温,通过硅藻土过滤,将滤液旋干,所得残余物直接用于后续反应。
步骤K:(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下,将(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(150mg)、1-溴-8-甲基萘(140mg)、Cs2CO3(495mg)、Pd2(dba)3(56mg)和Xantphos(70mg)依次加入甲苯(10ml)中,随后在氮气保护下升至110℃搅拌过夜。冷却至室温,旋干溶剂,加入乙酸乙酯溶解残余物,过硅藻土过滤,所得滤液旋干,通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/20)纯化得到产物(106mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.63(t,J=7.2Hz,1H),7.36-7.42(m,1H),7.32(t,J=7.2Hz,1H),7.18-7.25(m,2H),4.88-5.10(m,1H),4.56-4.64(m,1H),4.47-4.55(m,1H),3.64-4.30(m,6H),3.26-3.62(m,3H),2.80-3.22(m,11H),2.66-2.79(m,2H),2.56-2.62(m,1H),2.08-2.16(m,2H),1.50(s,9H),0.62-0.94(m,4H)。
步骤L:2-((S)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg)加入圆底烧瓶,在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液(2ml)(TFA/DCM=1∶2),随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩除去溶剂及过量TFA,残余物直接用于后续反应。
步骤M:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代-2-烯酸甲脂
在室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(60mg)和富马酸单甲酯(25mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.08ml)和HATU(71.48mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(10ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,残留物通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/15)纯化得到产物(37mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.62-7.69(m,2H),7.30-7.42(m,3H),7.20-7.25(m,2H),6.78-6.85(m,1H),4.98-5.09(m,1H),4.36-4.72(m,3H),4.12-4.32(m,2H),3.88-4.10(m,2H),3.70-3.84(m,4H),3.38-3.66(m,3H),2.97-3.34(m,8H),2.82-2.92(m,4H),2.56-2.76(m,2H),2.22-2.29(m,1H),2.04-2.12(m,1H),0.72-0.84(m,4H).
实施例2
2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯醇基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(5g)、(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(3.6g)、Ru-Phos-Pd-G3催化剂(0.433g)和Cs2CO3(10.2g)加入甲苯(100ml)中,随后在氮气保护下升至120℃搅拌过夜。冷却至室温,旋干溶剂,加入乙酸乙酯溶解残余物,过硅藻土过滤,所得滤液旋干,残留物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)纯化得到产物(3.8g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.27-7.36(m,5H),4.51-4.63(m,1H),4.31(dd,J=10.8Hz,5.2Hz,1H),3.89-4.12(m,3H),3.82(d,J=12.0Hz,1H),3.61-3.72(m,3H),3.48(d,J=15.2Hz,1H),3.05-3.20(m,3H),2.92(td,J=12.0Hz,3.6Hz,1H),2.52-2.82(m,7H),2.45(s,3H),2.22-2.29(m,1H),1.97-2.06(m,1H),1.65-1.91(m,3H),1.49(s,9H)。
步骤B:(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在将(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.3g)和Pd/C(1.5g)加入装有异丙醇(150ml)的圆底烧瓶中,随后在氢气充分换气后升温至60℃搅拌过夜。冷却至室温,通过硅藻土过滤,将滤液旋干,所得残余物直接用于后续反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.50-4.62(m,1H),4.40(dd,J=10.8Hz,5.6Hz,1H),4.14(dd,J=10.8Hz,6.8Hz,1H),3.80-4.06(m,4H),3.07-3.21(m,4H),2.89-2.98(m,2H),2.40-2.78(m,9H),2.30-2.36(m,1H),2.01-2.08(m,1H),1.70-1.91(m,3H),1.48(s,9H)。
步骤C:(S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下,将(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg)、2-氯-6-溴三氟甲基苯(109mg)、Cs2CO3(205mg)、Pd2(dba)3(40mg)和Xantphos(48mg)依次加入甲苯(10ml)中,随后在氮气保护下升温至110℃搅拌过夜。冷却至室温,旋干溶剂,加入乙酸乙酯溶解残余物,过硅藻土过滤,所得滤液旋干,残留物通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/20)纯化得到产物(40mg)。
步骤D:2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(40mg)加入圆底烧瓶,在搅拌下缓慢加入TFA的二氯甲烷溶液(2ml)(TFA/DCM=1∶2),随后继续在室温下搅拌0.5小时。减压浓缩,残余物直接用于后续反应。
步骤E:(E)-4-氧代戊基-2-烯酸
冰水冷却下,向(E)-4-氧代戊基-2-烯酸甲酯(1.28g)的THF(10mL)溶液中缓慢加入LiOH(0.26g)的水(5mL)溶液中,加完搅拌20分钟,用1N的盐酸溶液调至pH=2~3,乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,减压浓缩除去溶剂,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/3)分离得到产物(1.05g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ7.80-10.01(brs,1H),7.08(d,J=16.0Hz,1H),6.63(d,J=16.0Hz,1H),2.37(s,3H)。
步骤F:2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯醇基)哌嗪-2-基)乙腈
在室温下,将2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(38mg)和3-乙酰基丙烯酸(12mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.1ml)和HATU(61mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,真空干燥,通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/15)纯化得到产物(4.3mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.39(t,J=8.0Hz,1H),7.16-7.27(m,3H),7.06(d,J=15.2Hz,1H),5.02-5.09(m,1H),4.46-4.56(m,1H),4.14-4.26(m,1H),4.07(s,2H),3.82-4.02(m,2H),3.34-3.74(m,4H),3.08-3.28(m,3H),2.66-3.04(m,6H),2.23-2.42(m,8H),1.58-1.67(m,2H)。
实施例3
2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯醇基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(E)-4-氧代己基-2-烯酸
将2-乙基呋喃(0.96g)、NaH2PO4(1.8g)和NaClO2(2.7g)溶于叔丁醇(15mL)和水(3mL)中,后于室温搅拌2小时,旋干溶液,加水,用氯仿萃取,有机相用饱和食盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,过滤,滤波减压浓缩得到粘稠状产物,后将粘稠状物质溶于THF(10mL)、丙酮(8mL)和水(2mL)中,随后加入吡啶(0.2mL),于室温搅拌过夜。减压浓缩,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/3)分离得到产物(0.42g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ7.13(d,J=16.0Hz,1H),6.66(d,J=16.0Hz,1H),2.68(q,J=7.6Hz,2H),1.13(t,J=7.6Hz,3H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯醇基)哌嗪-2-基)乙腈
在室温下,将2-((S)-4-{7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(43mg)和(E)-4-氧己基-2-烯酸(15mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.07ml)和HATU(60mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,残留物通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/15)纯化得到产物(18mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.38(t,J=8.0Hz,1H),7.23-7.27(m,2H),7.10-7.20(m,2H),5.02-5.12(m,1H),4.44-4.72(m,1H),4.34-4.41(m,1H),3.90-4.17(m,5H),3.56-3.69(m,1H),3.02-3.38(m,5H),2.62-2.92(m,7H),2.47(s,3H),2.24-2.32(m,1H),1.98-2.08(m,1H),1.68-1.89(m,3H),1.13(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例4
2-((S)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:2,4-二溴-1-氨基萘
室温下,向溴素(12.30g)的冰醋酸(40mL)溶液中滴加1-氨基萘(5.00g)的冰醋酸(40mL)溶液,加毕,慢慢升温至70℃继续搅拌7小时。冷却至室温,过滤,用少量冰醋酸洗涤固体。随后将固体分批倒入20%氢氧化钠溶液(40mL),搅拌15分钟,过滤,水洗,收集固体,得到产物(10.40g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),8.10(d,J=8.8Hz,1H),7.71-7.74(m,2H),7.51-7.55(m,1H),7.45-7.49(m,1H),4.59(s,2H)。
步骤B:4-溴-1-重氮基-萘-2-酚盐
冰水冷却下,向2,4-二溴-1-氨基萘(9.40g)在冰醋酸(135mL)和丙酸(25mL)中的溶液中分批加入亚硝酸钠(2.59g),约10分钟加完,然后继续搅拌20分钟,升至室温搅拌30分钟。将反应液倒入冰水中(600mL),搅拌10分钟后过滤,收集固体(18g,湿重),直接用于下一步反应。
步骤C:1-溴-3-羟基萘
冰浴下,向4-溴-1-重氮基-萘-2-酚盐(18g)的乙醇(100mL)溶液中分批加入硼氢化钠(2.34g),约12分钟加完。升温至室温搅拌4小时,减压浓缩,向残余物加水,乙酸乙酯(3×60mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/10~1/1)分离得到产物(2.50g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),8.12(d,J=8.4Hz,1H),7.65(d,J=8.4Hz,1H),7.40-7.48(m,2H),7.13(s,1H),5.33-5.54(brs,1H)。
步骤D:3-苄氧基-1-溴萘
氮气保护下,向乙腈(20mL)中依次加入1-溴-3-羟基萘(0.80g)、无水碳酸钾(1.49g)和溴苄(0.74g),随后加热至80℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温,加入水,乙酸乙酯(3×20mL)萃取。萃取液用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/10)分离得到产物(0.90g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),8.14(dd,J=8.4Hz,1.6Hz,1H),7.70(dd,J=8.4Hz,1.6Hz,1H),7.60(d,J=2.8Hz,1H),7.33-7.50(m,7H),7.20(d,J=2.8Hz,1H),5.18(s,2H)。
步骤E:(S)-4-{7-[3-(苄氧基)萘-1-基]-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.18g)的无水甲苯(5mL)溶液中依次加入3-苄氧基-1-溴萘(0.24g)、Ruphos-Pd-G3(53mg)和碳酸铯(0.38g),加热至120℃搅拌12小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(0.14g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),8.06(d,J=8.4Hz,1H),7.71(d,J=8.4Hz,1H),7.47-7.49(m,2H),7.31-7.44(m,5H),6.98(d,J=2.0Hz,1H),6.89(s,1H),5.16(s,2H),4.99-5.04(m,1H),4.54-4.66(m,2H),4.17-4.34(m,3H),3.86-4.14(m,3H),3.50-3.69(m,1H),3.24-3.44(m,3H),2.66-3.25(m,10H),1.98-2.38(m,4H),1.50(s,9H)。
步骤F:(S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-4-{7-[3-(苄氧基)萘-1-基]-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(80mg)溶于无水甲醇(4mL)中,并向该溶液中加入10%Pd/C(30mg),在氢气(轮胎)充分换气后加热至45℃搅拌过夜。冷却至室温,过滤,滤液减压蒸干得到产物(69mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.98(d,J=9.2Hz,1H),7.61(d,J=7.6Hz,1H),7.36(t,J=7.6Hz,1H),7.24-7.27(m,1H),7.12-7.18(m,1H),6.91(s,1H),6.78(s,1H),4.98-5.14(m,1H),4.49-4.62(m,2H),4.12-4.32(m,3H),3.84-4.01(m,3H),3.52-3.68(m,1H),2.56-3.42(m,13H),2.02-2.38(m,4H),1.49(s,9H)。
步骤G:2-((S)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(69mg)溶于二氯甲烷(0.50mL)中,并向该溶液中加入三氟乙酸(0.2mL),搅拌1小时。减压蒸干得到产物,粗品直接用于下一步反应。
步骤H:2-((S)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(3-羟基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈三氟乙酸盐(69mg)溶于无水DMF(1mL)中,依次加入(E)-4-氧代己基-2-烯酸(7mg)、HATU(40mg)和DIEA(0.20mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(15mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD),8.05(d,J=8.4Hz,1H),7.62(d,J=8.4Hz,1H),7.34-7.38(m,2H),7.22-7.27(m,1H),6.93-7.01(m,1H),6.86(d,J=2.4Hz,1H),6.78(d,J=2.4Hz,1H),4.96-5.12(m,1H),4.73-4.77(m,1H),4.53-4.58(m,2H),3.98-4.01(m,5H),3.84-3.94(m,1H),3.61-3.78(m,2H),3.38-3.48(m,2H),3.18-3.28(m,2H),2.91-3.12(m,7H),2.72-2.78(m,2H),2.34-2.42(m,1H),1.98-2.23(m,3H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例5
2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:1-溴-8-甲基萘
在-10℃的冰盐浴下,将1.8-二溴萘(4.70g)溶于无水THF(50mL)中,在氮气保护下,将甲基锂的乙醚溶液(1.6M,11.2mL)用注射器缓慢加入上述溶液中,保持0℃搅拌1小时,降至-10℃,将碘代甲烷(9.30g)的THF(10mL)溶液缓慢加到反应液中,缓慢回升至室温,继续搅拌5小时,用饱和氯化钠水溶液淬灭反应,随后用乙酸乙酯萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,残留物经柱色谱分离得到黄色固体(4.10g),将黄色固体用叔丁醇重结晶得到白色片状晶体(2.15g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.81(d,J=7.2Hz,1H),7.76(d,J=7.6Hz,1H),7.67-7.71(m,1H),7.31-7.36(m,2H),7.19(t,J=7.6Hz,1H),3.11(s,3H)。
步骤B:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.30g)的无水甲苯(10mL)溶液中依次加入8-甲基-1-溴萘(0.16g)、Pd2(dba)3(100mg)、XantPhos(120mg)和碳酸铯(0.60g),加热至120℃搅拌16小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(0.18g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.41H),7.63(t,J=8.4Hz,1H),7.36-7.42(m,1H),7.32(t,J=7.6Hz,1H),7.16-7.25(m,2H),4.53-4.64(m,1H),4.28-4.48(m,1H),3.73-4.26(m,6H),3.45-3.54(m,1H),3.01-3.38(m,5H),2.86-2.99(m,4H),2.40-2.78(m,7H),2.18-2.36(m,1H),1.97-2.12(m,1H),1.68-1.92(m,3H),1.50(s,9H)。
步骤C:2-((S)-4-{2-[((2S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.18g)溶于二氯甲烷(15mL)中,并向该溶液中加入TsOH(0.20g),于室温下搅拌,待反应完成后,加入饱和碳酸氢钠溶液,DCM萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压蒸干得到产物(0.15g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.64(m,1H),7.35-7.41(m,1H),7.32(t,J=7.6Hz,1H),7.18-7.25(m,2H),4.33-4.41(m,1H),4.08-4.23(m,2H),3.71-4.03(m,3H),3.43-3.50(m,1H),2.81-3.36(m,11H),2.60-2.70(m,1H),2.49-2.58(m,3H),2.42-2.48(m,3H),2.21-2.30(m,1H),1.99-2.08(m,1H),1.64-1.86(m,4H)。
步骤D:2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)溶于无水DCM(0.50mL),依次加入(E)-4-氧代戊基-2-烯酸(3mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(6mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.63-7.70(m,2H),7.36-7.50(m,2H),7.27-7.33(m,2H),7.24(d,J=7.6Hz,1H),6.86-6.94(m,1H),4.98-5.02(m,1H),4.71-4.75(m,1H),4.41-4.61(m,2H),4.23-4.31(m,1H),4.08-4.15(m,2H),3.61-3.90(m,4H),3.49-3.61(m,2H),3.16-3.28(m,4H),2.97-3.14(m,5H),2.88-2.94(m,3H),2.69-2.80(m,1H),2.31-2.42(m,4H),1.97-2.22(m,3H)。
实施例6
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸异丙酯
步骤A:(E)-4-异丙氧基-4-氧代丁-2-烯酸
将顺丁烯二酸酐(2.00g)溶于异丙醇(15mL)中,后于120℃搅拌过夜,冷至室温,旋干溶剂后加入饱和碳酸钠溶液,用乙酸乙酯洗涤,水相用1N的盐酸溶液调至pH=2~3,后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩得到产物(1.05g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ10.70-11.72(brs,1H),6.36(d,J=12.4Hz,1H),6.31(d,J=12.4Hz,1H),5.08-5.17(m,1H),1.29(d,J=6.0Hz,6H)。
步骤B:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸异丙酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)溶于无水DCM(0.50mL),依次加入(E)-4-异丙氧基-4-氧代丁-2-烯酸(4mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(7mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD),δ7.62-7.69(m,2H),7.38-7.43(m,1H),7.26-7.33(m,2H),7.23(d,J=7.2Hz,1H),6.70-6.83(m,1H),6.10-6.19(m,1H),4.92-5.06(m,2H),4.67-4.77(m,1H),4.05-4.60(m,4H),3.49-3.89(m,5H),3.30-3.47(m,2H),3.07-3.25(m,4H),2.99-3.06(m,4H),2.87-2.97(m,4H),2.66-2.77(m,1H),2.30-2.41(m,1H),1.95-2.21(m,3H),1.24-1.28(m,6H)。
实施例7
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸正丁酯
步骤A:(E)-4-正丁氧基-4-氧代丁-2-烯酸
将顺丁烯二酸酐(2.00g)溶于正丁醇(15mL)中,后于120℃搅拌过夜,冷至室温,旋干溶剂后加入饱和碳酸钠溶液,用乙酸乙酯洗涤,水相用1N的盐酸溶液调至pH=2~3,后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,旋干得到产物(1.65g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ8.40-10.80(brs,1H),6.41(d,J=12.8Hz,1H),6.35(d,J=12.8Hz,1H),4.26(t,J=16.8Hz,2H),1.64-1.71(m,2H),1.34-1.44(m,2H),0.93(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤B:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸正丁酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)溶于无水DCM(0.50mL),依次加入(E)-4-正丁氧基-4-氧代丁-2-烯酸(4mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(8mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ7.60-7.68(m,2H),7.30-7.42(m,2H),7.17-7.25(m,2H),6.52-6.69(m,1H),6.06-6.15(m,1H),4.94-5.02(m,1H),3.35-4.38(m,11H),2.98-3.19(m,5H),2.71-2.92(m,4H),2.58-2.68(m,2H),2.43-2.46(m,3H),2.20-2.28(m,1H),1.97-2.06(m,2H),1.58-1.86(m,5H),1.34-1.42(m,2H),0.92(t,J=7.6Hz,3H)。
实施例8
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸乙酯
步骤A:(E)-4-乙氧基-4-氧代丁-2-烯酸
将顺丁烯二酸酐(2.00g)溶于乙醇(15mL)中,后于120℃搅拌过夜,冷至室温,旋干溶剂后加入饱和碳酸钠溶液,用乙酸乙酯洗涤弃去,水相用1N的盐酸溶液调至PH=2~3,后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,减压浓缩除去溶剂,旋干得到产物(1.35g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ10.12-11.12(brs,1H),6.38(d,J=12.8Hz,1H),6.34(d,J=12.8Hz,1H),4.30(q,J=7.2Hz,2H),1.32(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤B:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸乙酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)溶于无水DCM(0.50mL),依次加入(E)-4-正丁氧基-4-氧代丁-2-烯酸(3mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到是产物(5mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ7.60-7.67(m,2H),7.29-7.41(m,2H),7.18-7.25(m,2H),6.53-6.71(m,1H),6.05-6.14(m,1H),4.93-5.02(m,1H),4.56-4.82(m,2H),3.94-4.43(m,5H),3.43-3.84(m,6H),2.97-3.37(m,8H),2.78-2.92(m,5H),2.57-2.64(m,1H),2.04-2.36(m,4H),1.26(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例9
2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(2S,4R)-(1-叔丁氧羰基-4-甲氧基-2-吡咯烷基)甲酸甲酯
冰水冷却下,向(2S,4R)-(1-叔丁氧羰基-4-羟基-2-吡咯烷基)甲酸甲酯(2.00g)的无水DMF(25mL)溶液中分批加入60%NaH(0.49g),加完搅拌30分钟,滴加碘甲烷(1.50mL),加完慢慢升温至室温继续搅拌2小时。将反应液慢慢倒入冰水中(100mL),乙酸乙酯(3×40mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,残余物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/5~1/1)分离得到产物(1.50g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.28-4.38(m,1H),3.89-3.99(m,1H),3.72(s,0.5H),3.71(s,2.5H),3.46-3.65(m,2H),3.30(s,2.5H),3.25(s,0.5H),2.21-2.38(m,1H),1.99-2.06(m,1H),1.38-1.46(m,9H)。
步骤B:[(2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇
冰水冷却下,向(2S,4R)-(1叔丁氧羰基-4-甲氧基-2-吡咯烷基)甲酸甲酯(1.50g)的无水四氢呋喃(30mL)溶液中分批加入四氢铝锂(0.66g),约10分钟加完,然后慢慢升温至70℃搅拌120分钟。冷却至室温,向反应液中慢慢滴加饱和酒石酸钠钾溶液(20mL),搅拌60分钟,垫硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,收集滤液,减压浓缩得到产物粗品(0.78g),直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),3.81-3.87(m,1H),3.63(dd,J=11.2Hz,3.6Hz,1H),3.34-3.40(m,2H),3.25(s,3H),2.62-2.77(brs,1H),2.55-2.61(m,1H),2.28-2.31(m,4H),1.99-2.07(m,1H),1.78-1.84(m,1H)。
步骤C:(S)-4-{7-苄基-2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.25g)的无水甲苯(7mL)溶液中依次加入[(2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇(0.19g)、Ruphos-Pd-G3(50mg)和碳酸铯(0.68g),加热至120℃搅拌5小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(0.18g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.25-7.35(m,5H),4.32-4.88(m,3H),3.76-4.32(m,8H),3.50-3.74(m,4H),3.27-3.30(m,3H),2.46-3.24(m,11H),1.84-2.06(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤D:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-4-{7-苄基-2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.18g)溶于异丙醇(4mL)中,并向该溶液中加入10%Pd/C(60mg),在氢气(轮胎)充分换气后加热至60℃搅拌过夜。冷却至室温,过滤,滤液减压蒸干得到产物(0.15g),直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.70-4.82(m,1H),4.52-4.60(m,1H),4.36-4.46(m,1H),3.78-4.13(m,7H),3.29-3.32(m,3H),3.10-3.26(m,3H),2.96-3.08(m,2H),2.76-2.90(m,4H),2.58-2.72(m,4H),2.18-2.28(m,1H),2.04-2.14(m,1H),1.95-2.03(m,1H),1.49(s,9H)。
步骤E:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.15g)的无水甲苯(5mL)溶液中依次加入8-甲基-1-溴萘(0.17g)、Pd2(dba)3(60mg)、XantPhos(90mg)和碳酸铯(0.31g),加热至120℃搅拌16小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到是产物(33mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.60-7.63(m,1H),7.35-7.40(m,1H),7.31(t,J=7.6Hz,1H),7.17-7.23(m,2H),4.88-5.10(m,1H),4.50-4.64(m,2H),3.64-4.32(m,8H),3.38-3.50(m,2H),3.28-3.32(m,3H),2.94-3.23(m,8H),2.90(s,3H),2.67-2.80(m,2H),2.54-2.62(m,1H),2.18-2.36(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤F:2-((S)-4-{2-[((2S,4E)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(33mg)溶于二氯甲烷(0.50mL)中,并向该溶液中加入三氟乙酸(0.2mL),搅拌1小时。减压蒸干得到产物,粗品直接用于下一步反应。
步骤G:2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈三氟乙酸盐(12mg)溶于无水DMF(0.50mL),依次加入(E)-4-氧代己基-2-烯酸(3mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),室温搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(7mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.61-7.68(m,2H),7.37-7.42(m,1H),7.30-7.34(m,1H),7.18-7.24(m,3H),7.01(d,J=15.6Hz,1H),4.99-5.10(m,1H),4.50-4.78(m,2H),3.99-4.40(m,5H),3.72-3.96(m,3H),3.42-3.58(m,2H),3.06-3.36(m,11H),2.79-2.94(m,4H),2.56-2.75(m,4H),2.39-2.44(m,1H),2.21-2.29(m,1H),1.09-1.13(m,3H)。
实施例10
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg)、1-溴异喹啉(125mg)、碳酸铯(326mg)、Xantphos(46mg)和Pd2(dba)3(37mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(45mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11-8.15(m,2H),7.77(d,J=8.0Hz,1H),7.63(t,J=7.6Hz,1H),7.54(t,J=7.6Hz,1H),7.27(d,J=6.0Hz,1H),4.96-5.24(m,1H),4.42-4.68(m,4H),3.94-4.21(m,3H),3.61-3.80(m,3H),3.29(dd,J=41.0Hz,2.8Hz,1H),2.64-3.24(m,11H),1.97-2.39(m,4H),1.51(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(10mg)、(E)-4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酸(4mg)、HATU(14mg)和N,N-二异丙基乙胺(7mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(4mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11-8.14(m,2H),7.77(d,J=7.6Hz,1H),7.64(t,J=7.6Hz 1H),7.56(t,J=7.6Hz,1H),7.37(d,J=15.6Hz,1H),7.28(d,J=6.0Hz,1H),6.82(d,J=15.6Hz,1H),5.01-5.07(m,1H),4.51-4.71(m,4H),4.26-4.34(m,1H),4.02-4.14(m,1H),3.90-3.94(m,1H),3.59-3.81(m,7H),3.42-3.45(m,1H),3.21-3.27(m,1H),2.86-3.14(m,8H),2.68-2.74(m,1H),2.10-2.41(m,4H)。
实施例11
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg)、8-溴异喹啉(125mg)、碳酸铯(326mg)、Xantphos(46mg)和Pd2(dba)3(37mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(55mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.91(dd,J=4.4Hz,2.0Hz,1H),8.14(dd,J=8.0Hz,1.6Hz,1H),7.47-7.48(m,2H),7.41(dd,J=8.4Hz,4.0Hz,1H),7.17-7.19(m,1H),4.55-4.66(m,1H),4.49(s,2H),3.94-4.26(m,4H),3.77-3.84(m,1H),3.43-3.68(m,3H),3.27(dd,J=13.6Hz,4.0Hz,1H),2.66-3.19(m,11H),1.97-2.39(m,4H),1.51(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(10mg)、(E)-4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酸(4mg)、HATU(14mg)和N,N-二异丙基乙胺(7mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.59(s,1H),8.45(d,J=6.0Hz,1H),7.86(d,J=6.0Hz,1H),7.77(t,J=8.0Hz,1H),7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.51-7.61(m,1H),7.37(d,J=7.2Hz,1H),6.70-6.78(m,1H),5.03-5.11(m,1H),4.68-4.78(m,2H),4.50-4.60(m,2H),4.20-4.40(m,4H),4.05-4.10(m,1H),3.80(s,3H),3.62-3.68(m,2H),3.25-3.54(m,4H),2.98-3.23(m,7H),2.33-2.40(m,1H),1.96-2.22(m,3H)。
实施例12
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg)、8-溴喹啉(125mg)、碳酸铯(326mg)、Xantphos(46mg)和Pd2(dba)3(37mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(40mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(d,J=4.0Hz,1H),8.14(d,J=7.6Hz,1H),7.38-7.40(m,3H),7.17-7.21(m,,1H),4.94-5.16(m,1H),4.58-4.64(m,2H),4.49(s,2H),4.22(d,J=14.0Hz,1H),3.84-4.14(m,3H),3.75-3.82(m,1H),3.52-3.68(m,2H),3.24-3.30(m,1H),2.81-3.20(m,9H),2.68-2.74(m,1H),2.04-2.38(m,4H),1.50(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(15mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)、(E)-4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酸(4mg)、HATU(14mg)和N,N-二异丙基乙胺(7mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(6mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.90(dd,J=4.0Hz,1.2Hz,1H),8.14(dd,J=8.0Hz,2.0Hz,1H),7.46-7.48(m,2H),7.37-7.43(m,2H),7.18(dd,J=4.8Hz,4.0Hz,1H),6.83-6.89(m,1H),5.02-5.10(m,1H),4.42-4.76(m,5H),4.25-4.32(m,1H),4.07-4.13(m,1H),3.91-3.96(m,1H),3.57-3.82(m,8H),3.36-3.44(m,1H),2.88-3.11(m,7H),2.71-2.77(m,1H),2.30-2.39(m,1H),2.04-2.24(m,3H)。
实施例13
2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(15mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(4mg)、HATU(17mg)和N,N-二异丙基乙胺(8mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(7mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.87-8.92(m,1H),8.14(d,J=8.0Hz,1H),7.38-7.50(m,3H),7.17-7.24(m,2H),7.05(d,J=15.6Hz,1H),4.92-5.14(m,1H),4.42-4.72(m,3H),4.02-4.34(m,3H),3.95(d,J=13.2Hz,1H),3.54-3.86(m,4H),3.35-3.42(m,1H),2.64-3.24(m,10H),2.37(s,3H),1.95-2.32(m,4H)。
实施例14
2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg)、4-溴异喹啉(125mg)、碳酸铯(326mg)、Xantphos(46mg)和Pd2(dba)3(37mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(50mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(s,1H),8.23(s,1H),8.13(d,J=8.4Hz,1H),8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.76(t,J=7.2Hz,1H),7.64(t,J=7.2Hz,1H),5.02-5.20(m,1H),4.56-4.66(m,2H),4.32(s,2H),4.23(d,J=13.6Hz,1H),3.86-4.14(m,3H),3.38-3.65(m,3H),3.30-3.35(m,1H),2.98-3.04(m,5H),2.78-2.96(m,4H),2.65-2.72(m,1H),2.26-2.40(m,2H),2.06-2.22(m,2H),1.50(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(15mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(4mg)、HATU(17mg)和N,N-二异丙基乙胺(8mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(4mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.00(s,1H),8.23(d,J=8.0Hz,1H),8.18(s,1H),8.13(d,J=8.4Hz,1H),7.85(t,J=7.6Hz,1H),7.73(t,J=7.6Hz,1H),7.37-7.51(m,1H),6.86-6.94(m,1H),5.01-5.10(m,1H),4.70-4.80(m,2H),4.50-4.62(m,2H),4.05-4.38(m,5H),3.85-3.94(m,1H),3.62-3.76(m,2H),3.36-3.58(m,3H),3.19-3.26(m,1H),2.92-3.12(m,6H),2.36-2.42(m,3H),1.97-2.28(9m,4H)。
实施例15
2-((S)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:2-((S)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-8-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(10mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(4mg)、HATU(14mg)和N,N-二异丙基乙胺(7mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(3mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.21(d,J=8.0Hz,1H),8.06(d,J=6.0Hz,1H),7.85(d,J=8.0Hz,1H),7.69(t,J=7.6Hz,1H),7.60(t,J=7.6Hz,1H),7.42-7.51(m,1H),7.36(d,J=6.0Hz,1H),6.86-6.94(m,1H),5.04-5.12(m,1H),4.54-4.60(m,1H),4.50(s,2H),4.29-4.40(m,2H),4.05-4.26(m,3H),3.52-3.76(m,3H),2.77-3.38(m,9H),2.53(s,3H),2.34-2.42(m,2H),1.79-1.86(m,2H),1.54-1.62(m,2H)。
实施例16
2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(94mg)、4-溴喹啉(125mg)、碳酸铯(326mg)、Xantphos(46mg)和Pd2(dba)3(37mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(52mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J=4.4Hz,1H),8.08(d,J=7.6Hz,1H),7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.66(t,J=8.0Hz,1H)7.49(t,J=8.0Hz,1H),6.87(d,J=4.8Hz,1H),4.94(dd,J=12.0Hz,8.0Hz,1H),4.54-4.61(m,1H),4.50(dd,J=12.0Hz,4.0Hz,1H),4.33(s,2H),4.19(d,J=13.6Hz,1H),3.92-4.08(m,2H),3.57-3.72(m,2H),3.44-3.52(m,2H),3.31(dd,J=13.6Hz,4.0Hz,1H),3.06-3.24(m,2H),2.80-2.99(m,7H),2.66(dd,J=16.4Hz,5.2Hz,1H),2.16-2.32(m,2H),1.98-2.09(m,2H),1.47(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(20mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(4mg)、HATU(17mg)和N,N-二异丙基乙胺(8mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(7mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.59(d,J=6.0Hz,1H),8.26(d,J=7.6Hz,1H),7.96(d,J=8.0Hz,1H),7.84(t,J=8.0Hz,1H),7.67(t,J=7.6Hz,1H),7.55(d,J=16.0Hz,0.5H),7.35-7.42(m,1H),7.18(d,J=6.0Hz,1H),6.79(d,J=16.0Hz,0.5H),4.50-4.74(m,6H),4.16-4.32(m,2H),3.82-4.08(m,3H),3.42-3.80(m,4H),3.08-3.38(m,3H),3.04(s,3H),2.36-2.98(m,5H),1.91-2.26(m,4H)。
实施例17
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁基-2-烯酸-2-(二甲基氨基)乙酯
步骤A:(E)-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-4-氧代丁-2-烯酸
氮气保护下,将含有呋喃-2,5-二酮(1.0g)和2-(二甲基氨基)乙烷-1-醇(742mg)的四氢呋喃(20mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,过滤并用乙酸乙酯萃取,有机相去除溶剂后得到产物(500mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ6.74(d,J=16.0Hz,1H),6.54(d,J=16.0Hz,1H),4.32(t,J=5.2Hz,2H),3.01(t,J=5.2Hz,2H),2.51(s,6H)。
步骤B:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸-2-(二甲基氨基)乙酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(30mg)、(E)-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-4-氧代丁-2-烯酸(24mg)、HATU(45mg)和N,N-二异丙基乙胺(15mg)混合于二氯甲烷(6mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(10mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.63-7.82(m,3H),7.38-7.43(m,1H),7.27-7.33(m,2H),7.22-7.24(m,1H),6.74-6.80(m,1H),4.99-5.11(m,1H),4.68-4.78(m,2H),4.42-4.62(m,5H),4.07-4.30(m,3H),3.62-3.92(m,4H),3.46-3.58(m,3H),3.08-3.34(m,4H),2.89-3.03(m,12H),2.68-2.78(m,1H),2.32-2.42(m,1H),1.97-2.19(m,4H)。
实施例18
2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代庚基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(E)-4-氧代庚-2-烯酸
室温下,将2-丙基呋喃(1.1g)、磷酸二氢钠(1.8g)和次氯酸钠(2.7g)混合于叔丁醇(10mL)和水(2mL)的混合溶剂中,搅拌3小时。将溶剂蒸干,残留物用氯仿和水分液,蒸干有机相,向其中加入四氢呋喃(5mL)、丙酮(4mL)、水(1mL)和吡啶(1mL),搅拌过夜。将溶剂蒸干,残留物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/10~1/3)分离得到产物(0.5g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.10(d,J=16.0Hz,1H),6.65(d,J=16.0Hz,1H),2.62(t,J=7.2Hz,2H),1.62-1.71(m,2H),0.94(t,J=7.6Hz,3H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代庚基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(30mg)、(E)-4-氧代庚-2-烯酸(14mg)、HATU(38mg)和N,N-二异丙基乙胺(13mg)混合于二氯甲烷(6mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(6mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.63(t,J=8.4Hz,1H),7.30-7.41(m,2H),7.10-7.24(m,4H),5.02-5.12(m,1H),4.39-4.58(m,1H),3.70-4.26(m,7H),3.42-3.54(m,2H),2.94-3.22(m,5H),2.89(s,3H),2.72-2.83(m,2H),2.56-2.64(m,3H),2.47-2.54(m,3H),2.27-2.38(m,1H),1.96-2.10(m,1H),1.65-1.90(m,5H),0.95(t,J=7.6Hz,3H)。
实施例19
2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(47mg)、5-溴喹啉(63mg)、碳酸铯(163mg)、Xantphos(23mg)和Pd2(dba)3(19mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(25mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.88-8.96(brs,1H),8.53(d,J=8.8Hz,1H),7.81-7.90(brs,1H),7.64(t,J=8.0Hz,1H),7.41(dd,J=8.4Hz,4.0Hz,1H),7.17(d,J=7.6Hz,1H),5.04-5.18(m,1H),4.54-4.62(m,2H),4.19-4.27(m,3H),3.84-4.10(m,3H),3.48-3.62(m,1H),3.28-3.42(m,3H),3.06-3.26(m,2H),3.01(s,3H),2.81-2.96(m,4H),2.68(dd,J=16.8Hz,6.0Hz,1H),2.24-2.38(m,2H),2.04-2.20(m,2H),1.49(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(25mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(喹啉-5-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(15mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(13mg)、HATU(45mg)和N,N-二异丙基乙胺(15mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(8mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.83(dd,J=4.4Hz,1.6Hz,1H),8.69(d,J=8.4Hz,1H),7.76(d,J=8.4Hz,1H),7.71(t,J=8.0Hz,1H),7.54(dd,J=8.4Hz,4.4Hz,1H),7.37-7.50(m,1H),7.31(d,J=7.2Hz,1H),6.79-6.89(m,1H),4.99-5.02(m,1H),4.72-4.76(m,1H),4.52-4.57(m,1H),3.99-4.36(m,5H),3.84-3.92(m,1H),3.66-3.76(m,3H),3.38-3.42(m,1H),3.18-3.28(m,3H),2.93-3.11(m,7H),2.35-2.42(m,3H),1.97-2.22(m,4H)。
实施例20
2-((S)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(47mg)、5-溴异喹啉(63mg)、碳酸铯(163mg)、Xantphos(23mg)和Pd2(dba)3(19mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至110℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水并用二氯甲烷萃取,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(25mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.28(s,1H),8.54(d,J=6.0Hz,1H),7.95(d,J=5.6Hz,1H),7.71(d,J=8.4Hz,1H),7.55(t,J=8.0Hz,1H),7.31(d,J=7.6Hz,1H),4.90-5.08(m,1H),4.52-4.62(m,2H),4.19-4.24(m,3H),3.96-4.10(m,2H),3.70-3.88(m,1H),3.28-3.45(m,4H),3.07-3.24(m,2H),2.82-3.01(m,7H),2.69(dd,J=16.8Hz,6.0Hz,1H),2.19-2.36(m,2H),2.02-2.16(m,2H),1.49(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(20mg)溶于二氯甲烷(2mL)中,向其中滴加三氟乙酸(0.5mL),搅拌0.5小时。将溶剂蒸干即得到产品粗品,直接投于下一步反应。
步骤C:2-((S)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-5-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(15mg)、(E)-4-氧代戊-2-烯酸(13mg)、HATU(45mg)和N,N-二异丙基乙胺(15mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(5mg)。
1H MR(400MHz,CD3OD)δ9.25(s,1H),8.47(d,J=6.0Hz,1H),8.12(d,J=6.0Hz,1H),7.84(d,J=8.0Hz,1H),7.66(t,J=8.0Hz,1H),7.50(d,J=7.6Hz,1H),7.36-7.42(m,1H),6.77-6.90(m,1H),4.92-5.02(m,1H),4.70-4.78(m,2H),4.46-4.62(m,3H),4.17-4.38(m,4H),3.99-4.04(m,1H),3.84-3.92(m,1H),3.64-3.79(m,3H),3.42-3.50(m,2H),3.16-3.26(m,2H),3.01-3.11(m,7H),2.36-2.42(m,1H),1.98-2.01(m,3H)。
实施例21
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
步骤A:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸甲酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(20mg)、(E)-4-甲氧基-4-氧代丁-2-烯酸(11mg)、HATU(31mg)和N,N-二异丙基乙胺(11mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(6mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.99(s,1H),8.22(d,J=8.0Hz,1H),8.17(s,1H),8.12(d,J=8.0Hz,1H),7.84(t,J=7.6Hz,1H),7.72(t,J=7.6Hz,1H),7.51-7.65(m,1H),6.66-6.77(m,1H),5.01-5.10(m,1H),4.73-4.77(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.16-4.38(m,4H),4.02-4.09(m,1H),3.86-3.94(m,1H),3.79(s,3H),3.62-3.75(m,2H),3.36-3.58(m,3H),3.17-3.34(m,2H),2.92-3.15(m,7H),2.35-2.43(m,1H),1.97-2.22(m,3H)。
实施例22
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯
步骤A:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷基-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯
室温下,将2-((S)-4-{7-(异喹啉-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(20mg)、(E)-4-乙氧基-4-氧代丁-2-烯酸(11mg)、HATU(31mg)和N,N-二异丙基乙胺(11mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(5mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.96(s,1H),8.19-8.23(m,1H),8.18(s,1H),8.10(d,J=8.4Hz,1H),7.79-7.84(m,1H),7.68-7.72(m,1H),6.74-6.84(m,1H),6.14-6.22(m,1H),4.96-5.08(m,1H),4.44-4.60(m,1H),4.08-4.39(m,8H),3.34-3.82(m,4H),2.92-3.26(m,6H),2.73-2.82(m,1H),2.49-2.52(m,3H),2.32-2.40(m,1H),2.05-2.14(m,1H),1.66-1.85(m,3H),1.23-1.26(m,3H)。
实施例23
2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(500mg)、1-溴-8-氯萘(770mg)、碳酸铯(1728mg)、Xantphos(243mg)和Pd2(dba)3(193mg)的甲苯(20mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,经硅藻土过滤,滤液用二氯甲烷和水分液,有机相去除溶剂后经硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)得到产物(350mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(d,J=8.4Hz,1H),7.58-7.61(m,1H),7.48-7.51(m,1H),7.40-7.45(m,1H),7.29-7.33(m,1H),7.18-7.23(m,1H),4.94-5.20(m,1H),4.54-4.63(m,2H),4.22-4.44(m,2H),3.75-4.12(m,4H),3.50-3.62(m,2H),2.81-3.40(m,10H),2.64-2.79(m,2H),2.50-2.58(m,1H),2.24-2.38(m,2H),2.10-2.22(m,1H),1.49(s,9H)。
步骤B:2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(350mg)和对甲苯磺酸(946mg)混合于二氯甲烷(10mL)中,搅拌3小时。加饱和NaHCO3溶液洗涤,有机相去除溶剂后经硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/10)得到产物(250mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.73(d,J=8.0Hz,1H),7.58(dd,J=8.0Hz,2.4Hz,1H),7.50(dd,J=7.2Hz,1.2Hz,1H),7.40-7.45(m,1H),7.31(t,J=8.0Hz,1H),7.20(td,J=8.0Hz,1.2Hz,1H),4.35-4.42(m,2H),4.09-4.15(m,1H),3.68-4.04(m,3H),3.50-3.56(m,1H),2.80-3.34(m,8H),2.61-2.71(m,1H),2.46-2.54(m,6H),2.22-2.29(m,1H),1.98-2.08(m,1H),1.69-1.89(m,4H)。
步骤C:2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(20mg)、(E)-4-氧代己-2-烯酸(10mg)、HATU(29mg)和N,N-二异丙基乙胺(10mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(6mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(d,J=8.4Hz,1H),7.58-7.62(m,1H),7.50(d,J=7.2Hz,1H),7.40-7.46(m,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),7.19-7.25(m,2H),7.06(d,J=15.6Hz,1H),4.99-5.10(m,1H),4.42-4.64(m,2H),4.07-4.28(m,1H),3.78-4.01(m,2H),3.36-3.67(m,4H),2.54-3.28(m,15H),2.22-2.31(m,1H),1.95-2.10(m,3H),1.12(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例24
2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-苄基-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g)、(R)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(715mg)、碳酸铯(2.7g)和RuPhos-Pd-G3(87mg)的甲苯(30mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,经硅藻土过滤,滤液用二氯甲烷和水分液,有机相去除溶剂后经硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)得到产物(900mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30-7.35(m,2H),7.24-7.27(m,1H),7.12-7.17(m,2H),4.52-4.62(m,1H),4.30-4.36(m,1H),4.11(dd,J=10.4Hz,2.4Hz,1H),3.88-4.04(m,2H),3.78-3.84(m,1H),3.61-3.71(m,3H),3.48(d,J=17.2Hz,1H),3.05-3.19(m,3H),2.88-2.96(m,1H),2.54-2.78(m,7H),2.45(s,3H),2.23-2.30(m,1H),1.98-2.06(m,1H),1.64-1.88(m,3H),1.49(s,9H)。
步骤B:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-2-(氰甲基)-4-{7-苄基-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(900mg)和钯碳(10%,300mg)混合于异丙醇(15mL)中,氢气置换后,加热至60℃搅拌2天。冷却至室温,经硅藻土过滤,将滤液蒸干即可得到产品(640mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.51-4.61(m,1H),4.30-4.38(m,1H),3.74-4.14(m,6H),2.84-3.22(m,6H),2.48-2.78(m,5H),2.46(s,3H),2.23-2.30(m,1H),1.94-2.08(m,2H),1.67-1.86(m,3H),1.44-1.48(m,9H)。
步骤C:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(260mg)、1-溴-8-甲基萘(365mg)、碳酸铯(717mg)和RuPhos-Pd-G3(24mg)的甲苯(15mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,经硅藻土过滤,滤液用二氯甲烷和水分液,有机相去除溶剂后经硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)得到产物(60mg)。
步骤D:2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg)和对甲苯磺酸(172mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌2小、时。加饱和NaHCO3溶液洗涤,有机相去除溶剂后经制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(35mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(d,J=8.4Hz,1H),7.63(d,J=8.4Hz,1H),7.38(t,J=8.0Hz,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),7.20-7.24(m,2H),4.60-4.74(m,1H),4.30-4.44(m,1H),4.06-4.22(m,2H),3.73-3.96(m,3H),3.44-3.64(m,2H),2.76-3.38(m,15H),2.51-2.57(m,2H),2.16-2.26(m,1H),1.87-2.14(m,3H)。
步骤E:2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((R)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(35mg)、(E)-4-氧代己-2-烯酸(18mg)、HATU(53mg)和N,N-二异丙基乙胺(18mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(8mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.60-7.67(m,2H),7.29-7.41(m,2H),7.15-7.24(m,3H),7.01(d,J=15.2Hz,1H),4.98-5.08(m,1H),4.38-4.68(m,3H),4.07-4.24(m,2H),3.84-4.06(m,2H),3.63-3.81(m,3H),3.36-3.52(m,2H),2.85-3.28(m,11H),2.52-2.81(m,4H),2.27-2.36(m,1H),1.99-2.18(m,3H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例25
2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇
0℃下,向(2R,4R)-4-氟-2-(2-甲氧基-2-氧乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1g)的THF(15mL)悬浊液中缓慢加入氢化铝锂(912mg),搅拌至无气泡冒出。将混合液加热至80℃搅拌2小时。冷却至室温,加入饱和Na2SO4溶液(15mL)和乙酸乙酯(15mL),搅拌1小时,悬浊液经硅藻土过滤,将滤液蒸干即可得到产物(200mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ4.99-5.18(m,1H),3.69(dd,J=11.2Hz,3.6Hz,1H),3.42-3.55(m,3H),2.56-2.68(m,1H),2.38(s,3H),1.99-2.10(m,2H)。
步骤B:(S)-2-(氰甲基)-4-{7-苄基-2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(725mg)、((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(200mg)、碳酸铯(2.0g)和RuPhos-Pd-G3(63mg)的甲苯(20mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,经硅藻土过滤,滤波用二氯甲烷和水分液,有机相去除溶剂后经硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/20)得到产物(180mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.25-7.35(m,5H),5.04-5.23(m,1H),4.49-4.62(m,1H),4.35(dd,J=10.8Hz,4.8Hz,1H),4.17(dd,J=10.8Hz,6.0Hz,1H),3.88-4.08(m,2H),3.79-3.83(m,1H),3.46-3.71(m,5H),2.89-3.20(m,4H),2.53-2.78(m,7H),2.48(s,3H),2.19-2.33(m,1H),1.81-1.99(m,2H),1.49(s,9H)。
步骤C:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-2-(氰甲基)-4-{7-苄基-2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(180mg)和钯碳(10%,120mg)混合于异丙醇(10mL)中,氢气置换4次,加热至60℃搅拌过夜。冷却至室温,经硅藻土过滤,将滤液蒸干即可得到产物(120mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.02-5.22(m,1H),4.46-4.59(m,1H),4.34(dd,J=10.8Hz,4.4Hz,1H),4.16(dd,J=10.8Hz,6.0Hz,1H),3.74-4.06(m,5H),3.44-3.55(m,1H),2.87-3.21(m,6H),2.49-2.78(m,5H),2.46(s,3H),2.20-231(m,1H),1.88-1.99(m,1H),1.46(s,9H)。
步骤D:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,将含有(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(120mg)、1-溴-8-甲基萘(165mg)、碳酸铯(408mg)、Xantphos(58mg)和Pd2(dba)3(46mg)的甲苯(10mL)悬浊液加热至120℃搅拌过夜。冷却至室温后,经硅藻土过滤,滤液用二氯甲烷和水分液,有机相去除溶剂后经制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/20)得到产物(60mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.29-7.40(m,2H),7.21-7.25(m,2H),5.13-5.32(m,1H),4.55-4.82(m,2H),4.35-4.48(m,1H),3.73-4.27(m,7H),3.28-3.50(m,2H),2.85-3.21(m,8H),2.67-2.81(m,5H),2.52-2.61(m,1H),2.11-2.44(m,2H),1.48(s,9H)。
步骤E:2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(60mg)和对甲苯磺酸(164mg)混合于二氯甲烷(5mL)中,搅拌2小时。加饱和NaHCO3溶液洗涤,有机相去除溶剂后经制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(30mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,J=8.0Hz,1H),7.62(d,J=8.4Hz,1H),7.39(t,J=7.6Hz,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),7.19-7.25(m,2H),5.16-5.36(m,1H),4.74-5.01(m,1H),4.34-4.42(m,1H),3.74-4.24(m,5H),3.22-3.66(m,4H),2.70-3.18(m,12H),2.35-2.68(m,4H),2.08-2.32(m 1H)。
步骤F:2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(30mg)、(E)-4-氧代己-2-烯酸(15mg)、HATU(46mg)和N,N-二异丙基乙胺(15mg)混合于二氯甲烷(3mL)中,搅拌过夜。将溶剂蒸干,加入乙酸乙酯和水分液,有机相去除溶剂后用制备TLC纯化(MeOH/DCM=1/10)得到产物(10mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.64(m,1H),7.35-7.40(m,1H),7.30-7.33(m,1H),7.18-7.24(m,3H),6.99-7.05(m,1H),5.30-5.47(m,1H),4.98-5.09(m,1H),4.54-4.77(m,2H),3.56-4.38(m,8H),3.20-3.40(m,3H),2.94-3.18(m,7H),2.88(s,3H),2.32-2.80(m,6H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例26
2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-环丙基-4-氧代丁基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(E)-4-环丙基-4-氧代丁基-2-烯酸
向乙醛酸甲酯(0.84g)的乙酸(20mL)溶液中加入环丙基甲基酮(0.84g),加热至120℃搅拌过夜。减压除去溶剂得粗产品,柱层析分离(PE/EA=1/1)分离得到产物(0.36g)。
1H NMR(400MHz,DMSO),12.96-13.24(brs,1H),7.01(d,J=16.0Hz,1H),6.67(d,J=16.0Hz,1H),2.44-2.50(m,1H),0.91-1.01(m,4H).
步骤B:2-((S)-4-{7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-环丙基-4-氧代丁基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-[((S)-1--甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-)哌嗪-2-基)乙腈(40mg)溶于无水DCM(5mL),依次加入(E)-4-环丙基-4-氧代丁基-2-烯酸(13mg)、HATU(43mg)和DIEA(15mg),搅拌6小时。减压除去溶剂,加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=2/25)分离得到产物(24mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.74(d,J=8.0Hz,1H),7.58-7.62(m,1H),7.50(d,J=7.2Hz,1H),7.41-7.47(m,1H),7.32(t,J=8.0Hz,1H),7.12-7.25(m,3H),4.98-5.10(m,1H),4.58-4.70(m,2H),4.16-4.41(m,2H),3.68-4.06(m,5H),3.44-3.58(m,2H),3.01-3.31(m,8H),2.80-2.87(m,1H),2.68-2.76(m,1H),2.56-2.60(m,1H),2.32-2.41(m,1H),2.07-2.24(m,4H),1.12-1.18(m,2H),1.01-1.07(m,2H).
实施例27
2-((S)-1-((E)-4--环丙基-4-氧代丁基-2-烯酰基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(23mg)溶于无水DMF(5mL),依次加入(E)-4-环丙基-4-氧代丁基-2-烯酸(8mg)、HATU(26mg)和DIEA(9mg过),搅拌6小时。减压蒸馏除去溶剂,加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=2/25)分离得到产物(12mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.66(d,J=8.0Hz,1H),7.60-7.63(m,1H),7.34-7.40(m,1H),7.28-7.32(m,1H),7.17-7.24(m,3H),7.11(d,J=15.6Hz,1H),4.98-5.01(m,1H),4.54-4.66(m,2H),3.91-4.36(m,4H),3.64-3.86(m,3H),3.37-3.54(m,2H),2.92-3.31(m,8H),2.88(s,3H),2.70-2.84(m,2H),2.54-2.62(m,1H),2.29-2.37(m,1H),1.98-2.26(m,4H),1.10-1.15(m,2H),0.99-1.04(m,2H)。
实施例28
2-((S)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊-2-烯醇基)哌嗪-2-基)乙腈
在室温下,将2-((S)-4-{2-[((S)-5-甲基-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(30mg)和3-乙酰基丙烯酸(6mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.05ml)和HATU(42mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(10ml)淬灭反应,用DCM萃取3次,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,残留物通过硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/13)纯化得到产物(11mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.64(t,J=8.0Hz,1H),7.31-7.43(m,3H),7.18-7.25(m,2H),7.09(d,J=15.2Hz,1H),5.04-5.14(m,1H),4.42-4.51(m,1H),3.72-4.26(m,6H),3.43-3.56(m,2H),2.88-3.22(m,8H),2.46-2.84(m,8H),2.37(s,3H),2.98-2.16(m,2H),0.48-0.68(m,4H).
实施例29
2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:4-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑
在室温下,将4-溴-5-甲基-1H-吲唑(340mg)、3,4-二氢-2H-吡喃(0.3ml)、对甲苯磺酸(28mg)加入二氯甲烷(10mL)中,搅拌2小时。减压浓缩,残余物干燥,得目标产物(470mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.97(s,1H),7.43(d,J=8.4Hz,1H),7.23(d,J=8.4Hz,1H),5.66(dd,J=8.8Hz,2.8Hz,1H),3.96-4.02(m,1H),3.68-3.75(m,1H),2.48(s,3H),2.01-2.16(m,2H),1.60-1.78(m,4H).
步骤B:(2S)-2-(氰甲基)-4-{7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在氮气保护下,将(S)-2-(氰基甲基)-4-{2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(380mg)、4-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(470mg)、Cs2CO3(787mg)、Pd2(dba)3(147mg)和Xantphos催化剂(185mg)依次加入甲苯(35ml)中,在氮气保护下升温至100℃搅拌过夜。冷却至室温,减压浓缩,加入乙酸乙酯溶解残余物,垫硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,滤液减压浓缩,残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/30)纯化得到产物(484mg)。
步骤C:2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(2S)-2-(氰甲基)-4-{7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(484mg)加入DCM溶剂(30ml)中,在搅拌下缓慢加入TsOH(1.21g),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加入水淬灭反应,DCM萃取,萃取液减压浓缩,残余物(220mg)直接用于下一步反应。
步骤D:2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
在室温下,将2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(40mg)和(E)-4-氧己基-2-烯酸(21mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.1ml)和HATU(84mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/5)纯化得到产物(21mg)。
1H NMR(400MHz,CD3OD),8.06(s,1H),7.35-7.49(m,1H),7.23-2.28(m,2H),6.92-6.99(m,1H),5.01-5.09(m,1H),4.73-4.78(m,1H),4.52-4.57(m,1H),4.29-4.37(m,1H),4.26(s,2H),4.15-4.21(m,1H),4.02-4.09(m,1H),3.84-3.93(m,1H),3.59-3.74(m,2H),3.52(t,J=5.2Hz,2H),3.32-3.44(m,1H),3.17-3.28(m,2H),2.81-3.08(m,7H),2.71-2.79(m,2H),2.34-2.42(m,4H),1.98-2.01(m,3H),1.08(t,J=7.2Hz,3H)。实施例30
2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代戊基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
在室温下,将2-((S)-4-{7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(40mg)和3-乙酰基丙烯酸(14mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.1ml)和HATU(61mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,过滤,滤液减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/5)纯化得到产物(9mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),12.26-12.88(brs,1H),8.05(s,1H),7.16-7.26(m,3H),7.05(d,J=15.6Hz,1H),5.01-5.08(m,1H),4.48-4.58(m,1H),4.30(s,2H),4.09-4.24(m,2H),3.88-3.98(m,2H),3.35-3.62(m,4H),3.12-3.22(m,2H),2.68-3.04(m,8H),2.06-2.42(m,9H),1.57-1.67(m,2H).
实施例31
2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(11mg)溶于无水DCM(0.50mL),依次加入(E)-4-氧代己基-2-烯酸(3mg)、HATU(13mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(5mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),δ7.60-7.67(m,2H),7.29-7.40(m,2H),7.16-7.25(m,3H),7.02(d,J=15.6Hz,1H),4.96-5.08(m,1H),4.55-4.72(m,2H),3.62-4.36(m,7H),3.36-3.56(m,2H),2.93-3.30(m,8H),2.48-2.90(m,8H),2.26-2.36(m,1H),2.02-2.21(m,3H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例32(SY-5512)
2-((S)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(2S)-(1-叔丁氧羰基-4,4-二氟-2-吡咯烷基)甲酸甲酯
冰水冷却下,向(2S,4R)-(1-叔丁氧羰基-4-羰基-2-吡咯烷基)甲酸甲酯(3.3g)的无水DCM(25mL)溶液中分批加入DAST(4mL)的DCM(4mL)溶液,加完于室温搅拌120分钟,后于冰水浴下将反应液慢慢倒入饱和碳酸氢钠溶液中(50mL),后用DCM(3×40mL)萃取。合并萃取液,依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩除去溶剂,得到产物(3.20g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.40-4.54(m,1H),3.72-3.86(m,5H),2.59-2.75(m,1H),2.38-2.49(m,1H),1.40(s,4H),1.45(s,5H)。
步骤B:[(2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇
冰水冷却下,向(2S)-(1-叔丁氧羰基-4,4-二氟-2-吡咯烷基)甲酸甲酯(1.60g)的无水四氢呋喃(30mL)溶液中分批加入四氢铝锂(1.53g),约10分钟加完,然后慢慢升温至70℃搅拌120分钟。冷却至室温,向反应液中慢慢滴加饱和酒石酸钠钾溶液(20mL),搅拌60分钟,垫硅藻土过滤,乙酸乙酯洗涤,收集滤液,减压浓缩得到产物粗品(0.75g),直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),3.72-3.76(m,1H),3.36-3.45(m,2H),2.65-2.76(m,2H),2.22-2.49(m,6H).
步骤C:(S)-4-{7-苄基-2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.24g)的无水甲苯(10mL)溶液中依次加入[(2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇(0.16g)和Ruphos-Pd-G3(50mg)和碳酸铯(0.50g),加热至120℃搅拌5小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/30)分离得到产物(0.3g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.27-7.37(m,5H),4.52-4.62(m,1H),4.38(dd,J=11.2Hz,4.8Hz,1H),4.19(dd,J=7.2Hz,2.4Hz,1H),3.90-4.08(m,2H),3.82(d,J=12.8Hz,1H),3.62-3.77(m,3H),3.35-3.52(m,3H),3.08-3.21(m,2H),2.90-2.98(m,2H),2.56-2.84(m,6H),2.37-2.54(m,4H),2.16-2.32(m,1H),1.49(s,9H).
步骤D:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-4-{7-苄基-2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.15g)溶于异丙醇(4mL)中,并向该溶液中加入10%Pd/C(60mg),在氢气(轮胎)充分换气后加热至60℃搅拌过夜。冷却至室温,过滤,滤液减压蒸干得到产物粗品(0.10g),直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.50-4.60(m,1H),4.41(dd,J=11.2Hz,4.8Hz,1H),4.14-4.32(m,3H),3.94-4.11(m,2H),3.70-3.86(m,2H),3.36-3.58(m,2H),2.84-3.32(m,6H),2.42-2.82(m,4H),2.16-2.30(m,2H),2.03(s,3H),1.47(s,9H)。
步骤E:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氮气保护下,向(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.11g)的无水甲苯(10mL)溶液中依次加入8-甲基-1-溴萘(0.17g)、Pd2(dba)3(50mg)、XantPhos(75mg)和碳酸铯(0.31g),加热至120℃搅拌12小时。冷却,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(40mg)。LCMS ESI[M+H]+::649。
步骤F:2-((S)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯(40mg)溶于二氯甲烷(1.50mL)中,并向该溶液中加入三氟乙酸(0.5mL),搅拌1小时。减压蒸干得到产物,粗品直接用于下一步反应。
步骤G:2-((S)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将2-((S)-4-{2-[((2S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d[嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈三氟乙酸盐(25mg)溶于无水DCM(2.50mL),依次加入(E)-4-氧代己基-2-烯酸(6mg)、HATU(25mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(12mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.68(d,J=8.0Hz,1H),7.63(t,J=8.0Hz,1H),7.30-7.42(m,3H),7.11-7.25(m,3H),5.02-5.15(m,1H),4.49-4.70(m,1H),4.40-4.45(m,1H),3.70-4.28(m,6H),3.34-3.56(m,3H),2.92-3.23(m,5H),2.90(s,3H),2.57-2.84(m,8H),2.42-2.56(m,1H),2.17-2.32(m,1H),1.13(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例33
2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
步骤A:(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯
室温下,将7-苄基-2,4-二氯-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶(0.65g)和DIEA(1.8ml)溶于乙腈(10mL)中,随后向混合溶液中加入2-哌嗪乙腈盐酸(0.48g),室温下搅拌10小时,然后加入DIEA(1ml)和Cbz-Cl(0.60g),室温搅拌过夜,旋干溶剂,残留物经硅胶柱层析(EtOAc/PE=1/2)分离得到产物(0.92g)。LCMS ESI[M+H]+:518。
步骤B:[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇
室温下,向L-脯氨醇(1.09g)的无水DCM(30mL)溶液中加入三乙胺(1.50g)和(Boc)2O(1.25g),搅拌120分钟。加水,DCM萃取,合并有机相,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩,残留物经柱色谱分离得到产物(1.20g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),4.74(d,J=6.4Hz,1H),3.89-3.99(m,1H),3.52-3.64(m,2H),3.40-3.46(m,1H),3.25-3.31(m,1H),1.94-2.03(m,1H),1.71-1.84(m,2H),1.47-1.56(m,1H),1.45(s,9H)。
步骤C:(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯
氮气保护下,向(S)-4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯(0.26g)的无水甲苯(10mL)溶液中依次加入[(2S)-1-甲基吡咯烷-2-基]甲醇(0.20g)、Ruphos-Pd-G3(50mg)和碳酸铯(0.68g),加热至120℃搅拌12小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(0.21g)[C28H30ClN6O2]+:518.11。
步骤D:(S)-2-(氰甲基)-4-{2-[((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将(S)-4-{7-苄基-2-[((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯(0.21g)溶于DCE(10mL)中,向该溶液中加入氯甲酸-1-氯乙酯(0.21g)和DIEA(0.24g),搅拌过夜。旋干溶剂,加入无水甲醇(15mL),加热至40℃搅拌2小时,减压蒸干,残留物经柱色谱(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(0.13g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.29-7.39(m,5H),5.14-5.20(m,2H),4.53-4.66(m,1H),4.03-4.19(m,2H),3.76-4.03(m,3H),3.54-3.64(m,3H),3.24-3.49(m,8H),2.97-3.16(m,1H),2.77-2.96(m,1H),2.59-2.75(m,1H),1.69-2.01(m,4H),1.43(s,9H)。
步骤E:(S)-4-{2-[((S)-1-叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯
氮气保护下,向(S)-4-{2-[((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯(0.13g)的无水甲苯(10mL)溶液中依次加入8-甲基-1-溴萘(0.12g)、Pd2(dba)3(30mg)、XantPhos(45mg)和碳酸铯(0.21g),加热至120℃搅拌16小时。冷却至室温,乙酸乙酯稀释,垫硅藻土过滤,滤波减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/20)分离得到产物(48mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.62(t,J=7.6Hz,1H),7.30-7.42(m,7H),7.15-7.25(m,2H),5.18(s,2H),4.50-4.70(m,1H),3.73-4.34(m,8H),2.92-3.53(m,8H),2.89(s,3H),2.66-2.84(m,2H),2.52-2.62(m,1H),1.78-2.06(m,4H),1.42(s,9H).
步骤F:(S)-2-{[(4-((S)-3-(氰甲基))哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
室温下,将(S)-4-{2-[((S)-1-叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基基)甲氧基]-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苄酯(48mg)溶于异丙醇(5.0mL)中,并向该溶液中加入10%Pd/C(10mg),在氢气(气囊)充分换气后加热至60℃搅拌过夜。冷却至室温,过滤,滤液减压蒸干得到产物粗品(20mg),直接用于下一步反应。
步骤G:(S)-2-{[((4-((S)-3-(氰基甲基)-4-((E)-4-氧己基-2-烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
室温下,将(S)-2-{[(4-((S)-3-(氰甲基))哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基]甲基}吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(20mg)溶于无水DCM(1.50mL),依次加入(E)-4-氧代己基-2-烯酸(6mg)、HATU(20mg)和DIEA(0.10mL),搅拌2小时。加水稀释,乙酸乙酯(3×15mL)萃取,萃取液依次用水和饱和食盐水洗,无水硫酸钠干燥,过滤,滤液减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(8mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.69(d,J=8.0Hz,1H),7.63-7.66(m,1H),7.32-7.43(m,2H),7.12-7.26(m,4H),5.03-5.17(m,1H),4.52-4.72(m,1H),3.76-4.34(m,8H),3.46-3.57(m,1H),2.95-3.43(m,7H),2.91(s,3H),2.73-2.87(m,1H),2.56-2.71(m,3H),1.80-2.09(m,4H),1.43(s,9H),1.15(t,J=7.2Hz,3H)。
步骤H:2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}-1-((E)-4-氧代己基-2-烯酰基)哌嗪-2-基)乙腈
室温下,将(叔丁基(S)-2-{[((4-((S)-3-(氰基甲基)-4-((E)-4-氧己基-2-烯酰基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基]甲基}吡咯烷-1-甲酸(7mg)溶于二氯甲烷(2.50mL)中,并向该溶液中加入TsOH(10mg)中,搅拌2小时。加水,DCM萃取,饱和碳酸氢钠水溶液洗涤,有机相用无水硫酸钠干燥,减压浓缩。残余物用制备薄层板(MeOH/DCM=1/12)分离得到产物(2mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.60-7.67(m,2H),7.30-7.41(m,2H),7.07-7.25(m,4H),4.80-5.16(m,1H),4.31-4.67(m,2H),3.61-4.22(m,5H),2.39-3.53(m,17H),1.66-1.94(m,4H),1.12(t,J=7.2Hz,3H)。
实施例34
(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸(3-氨基-3-氧代丙)酯
步骤A:3-羟基丙酰胺
将3-羟基丙酸甲酯(500mg)和氨水(15ml)封管100℃搅拌过夜。冷却至室温后,减压浓缩,残余物直接用于下一步反应(残余物中目标产物纯度为70%)。
1H NMR(400MHz,DMSO),7.23(s,1H),6.73(s,1H),3.55(t,J=6.8Hz,2H),2.16(t,J=6.8Hz,2H).
步骤B:(E)-4-(3-氨基-3-氧代丙氧基)-4-氧代丁-2-烯酸
将3-羟基丙酰胺(300mg)、马来酸酐(360mg)和THF(15ml)封管90℃搅拌过夜。冷却至室温后,残余物加水(100ml)溶解,用NaHCO3调节溶液pH至9-10,乙酸乙酯(100ml)洗涤,分离舍去有机相,用柠檬酸调节水相pH至3-4,乙酸乙酯(80ml)萃取,有机相合并减压浓缩,残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/5)纯化得到产物(40mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO),7.38(s,1H),6.87(s,1H),6.34(d,J=12.4Hz,1H),6.24(d,J=12.4Hz,1H),4.22(t,J=6.4Hz,2H),2.39(t,J=6.4Hz,2H).
步骤C:(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸(3-氨基-3-氧代丙)酯
在室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(50mg)和(E)-4-(3-氨基-3-氧代丙氧基)-4-氧代丁-2-烯酸(37mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.1ml)、HATU(80mg),随后继续在室温下搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/8)纯化得到产物(45mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.60-7.63(m,1H),7.35-7.41(m,1H),7.29-7.32(m,1H),7.17-7.25(m,2H),6.53-6.57(m,1H),6.05-6.14(m,1H),5.76-5.86(brs,1H),5.02-5.16(brs,1H),4.91-5.01(m,1H),3.42-4.68(m,13H),2.70-3.41(m,12H),2.52-2.67(m,4H),2.02-2.37(m,4H)。
实施例35
(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸(2-甲氧基乙)酯
步骤A:(E)-4-(2-甲氧基乙氧基)-4-氧代丁-2-烯酸
将乙二醇甲醚(2g)、马来酸酐(3.1mg)和THF(15ml)封管90℃搅拌过夜。冷却至室温后,减压浓缩,残余物加水(100ml)溶解,用NaHCO3调节溶液pH至9-10,乙酸乙酯(100ml)洗涤,分离舍去有机相,用HCl(1mol/L)调节水相pH至3-4,乙酸乙酯(80ml)萃取,有机相合并减压浓缩,得到产物(1.3g)。
1H NMR(400MHz,DMSO),12.50-13.30(brs,1H),6.36(d,J=12.0Hz,1H),6.34(d,J=12.0Hz,1H),4.16-4.18(m,2H),3.50-3.52(m,2H),3.23(s,3H).
步骤B:(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸(2-甲氧基乙)酯
在室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(42mg)和(E)-4-(2-甲氧基乙氧基)-4-氧代丁-2-烯酸(29mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.07ml)、HATU(63mg),搅拌0.5小时。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/10)纯化得到产物(35mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.64(m,1H),7.36-7.41(m,1H),7.29-7.34(m,1H),7.19-7.25(m,2H),6.54-6.59(m,1H),6.11-6.20(m,1H),5.08-5.18(m,1H),4.94-5.03(m,1H),4.54-4.59(m,1H),4.15-4.40(m,4H),3.87-4.10(m,2H),3.76-3.82(m,1H),3.44-3.69(m,6H),3.30-3.39(m,4H),2.98-3.24(m,7H),2.78-2.94(m,5H),2.57-2.66(m,1H),2.24-2.37(m,2H),2.02-2.18(m,2H)。
实施例36
(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸[2-(甲基氨基)乙基]酯
步骤A:(2-羟乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下,将N-甲基-2-羟基乙胺(1g)溶于DCM(20ml),随后加入(Boc)2O(6ml)和DIEA(6.6ml)搅拌5小时。减压浓缩,残余物用硅胶柱层析(100%PE~100%EtOAc)得产物(2.03g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),3.73(q,J=4.8Hz,2H),3.38(t,J=4.8Hz,2H),2.90(s,3H),1.45(s,9H),0.95-1.06(brs,1H)。
步骤B:(E)-4-[2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基]-4-氧代丁-2-烯酸
将(2-羟乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2g)、马来酸酐(1.57g)和MeCN(30ml)封管120℃搅拌过夜。冷却至室温后,加水(100ml),用NaHCO3调节溶液pH至9-10,乙酸乙酯(100ml)洗涤,分离舍去有机相,用柠檬酸调节水相pH至3-4,乙酸乙酯(80ml)萃取,有机相合并减压浓缩,残余物通过硅胶柱层析(MeOH/DCM=1/5)纯化得到产物(1.3g)。
1H NMR(400MHz,DMSO),12.40-13.50(brs,1H),6.26-6.41(m,2H),4.15(t,J=5.2Hz,2H),3.39(t,J=5.2Hz,2H),2.76(s,3H),1.35(s,9H)。
步骤C:(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4.d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸[2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基]酯
在室温下,将2-((S)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶基[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-2-基)乙腈(48mg)、(E)-4-[2-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙氧基]-4-氧丁-2-烯酸(52mg)溶于DMF(3ml),依次加入DIEA(0.1ml)、HATU(72mg),随后继续在室温下反应0.5h。加水(15ml)淬灭反应,用DCM萃取3次,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/15)纯化得到产物(40mg)。1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.4Hz,1H),7.61-7.64(m,1H),7.35-7.41(m,1H),7.29-7.34(m,1H),7.19-7.25(m,2H),6.54-6.66(m,1H),6.06(d,J=11.6Hz,1H),4.94-5.21(m,2H),4.57(d,J=12.0Hz,1H),3.90-4.40(m,6H),3.31-3.84(m,8H),2.82-3.24(m,15H),2.60-2.66(m,1H),1.98-2.39(m,4H),1.43(s,9H)。
步骤D:(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷酮-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧代丁-2-烯酸[2-(甲基氨基)乙基]酯
在室温下,将(E)-4-((S)-2-(氰甲基)-4-{7-(8-甲基萘-1-基)-2-[((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基}哌嗪-1-基)-4-氧丁-2-烯酸[2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基]酯(25mg)溶于DCM(3ml),加入对甲基苯磺酸(57mg),搅拌1小时。加水淬灭反应,用DCM萃取,收集有机相,饱和食盐水洗涤,无水Na2SO4干燥,减压浓缩,残余物经硅胶制备板层析(MeOH/DCM=1/10)纯化得到产物(4mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3),7.67(d,J=8.0Hz,1H),7.61-7.65(m,1H),7.36-7.41(m,1H),7.32(t,J=7.6Hz,1H),7.19-7.24(m,2H),6.52-6.62(m,1H),6.33-6.41(m,1H),4.88-5.18(m,2H),4.42-4.58(m,2H),4.15-4.31(m,2H),3.37-3.86(m,10H),2.54-3.26(m,18H),1.97-2.35(m,4H)。
生物活性试验
1.化合物对KRASG12C的体外酶学活性检测
本专利中化合物对KRASG12C的酶学活性(检测化合物的半抑制浓度IC50值)的检测采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法进行。将化合物从1mM开始用100%DMSO进行10倍的梯度稀释(共5个浓度),每个浓度取2μL的化合物加入到38μL的反应缓冲液(50mM HEPES,150mM NaCl,5mM MgCl2,0.05%Tween 20)中进行稀释混匀。上述稀释化合物每个浓度取2μL加入到48μL的反应缓冲液中进行进一步稀释混匀。取24μL最终稀释后的化合物加入到96孔板(购自CORNING)中,然后加入24μL的His-KRASG12C(终浓度为1nM),将96孔板放于孵育箱中23℃反应1小时后,每孔加入48μL能够与KRASG12C不可逆结合的生物素标记的标签化合物(终浓度100nM),23℃孵育箱中继续反应1小时。取上述反应混合液40μL加入链霉亲和素包被的96孔板(购自Thermo Fisher Scientific)中,每孔补加60μL洗涤液(20mM Tris-HCl,pH 7.5,500mM NaCl,0.05%Tween20,0.1%BSA)至100μL,23℃孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液,洗涤液洗涤3次。之后每孔加入洗涤液稀释的anti-RAS抗体(购自Abcam,1∶2000稀释)100μL,23℃孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液,洗涤液洗涤3次。每孔加入洗涤液稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体(购自康为世纪,1∶5000稀释)100μL,23℃孵育箱中反应1小时。弃去孔内溶液,洗涤液洗涤3次。每孔加入100μL辣根过氧化物酶底物TMB(购自康为世纪),23℃孵育箱中反应25分钟后,最后每孔加入50μL 0.5mol/L H2SO4终止显色反应,在Flexstation3上读取450nm下的光吸收值。每个化合物分别在5个浓度下测定其与KRASG12C的结合活性,使用GraphPad Prism软件计算得到该化合物的IC50值。
2.化合物抑制NCI-H358细胞增殖的活性测定
人非小细胞肺癌细胞系NCI-H358细胞使用RPMI-1640培养基加10%的胎牛血清(FBS,购自Biological Industries,BI)和1%青霉素/链霉素(P/S,购自Thermo FisherScientific)进行培养,培养条件为37℃,5%CO2。将NCI-H358细胞以2000个细胞/195μL/孔的浓度铺于96孔板(#3917,购自CORNING)中。24小时后将化合物从10mM开始用100%DMSO进行3倍的梯度稀释混匀(共10个浓度),然后每个浓度取2μL的化合物加入到48μL的RPMI-1640培养基中进行稀释混匀。稀释后的化合物每个浓度取5μL加入铺好的细胞悬液中,将化合物与细胞在细胞培养箱中共孵育120小时(5天)。之后去除培养基后加入25μL的Cell-Titer Glo(G7570,购自Promega)试剂,室温摇床反应5-10分钟。在Envision上读取化学发光值,数据使用GraphPad Prism软件进行处理,计算得到该化合物对细胞增殖抑制的IC50值。
上述部分化合物的测试结果如表1所示。
表1:化合物的体外细胞学活性结果
Claims (12)
1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐,
其中,
R1选自C1-C6烷基、或C3-C8环烷基、或C1-C6烷基-O-,所述C1-C6烷基、C3-C8环烷基、或C1-C6烷基-O-任选地被一个或多个卤素取代;
R2选自C6-C10芳基和C5-C10杂芳基,所述C5-C10杂芳基含有1~3个选自N、O、或S的杂原子,并且R2任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基-O-、C1-C6烷基-NH-、或(C1-C6烷基)(C1-C6烷基)-N-取代;
R3为C3-C10杂环烷基,所述C3-C10杂环烷基可任选地被卤素、C1-6烷基、或者C1-6烷基-O-取代;
R4为H或F;
n为0、1、2、或3。
2.根据权利要求1所述的化合物,其中R1选自C1-C3烷基,所述C1-C3烷基任选地被一个或多个F、Cl、或Br取代。
3.根据权利要求1所述的化合物,其中R1选自甲基、乙基、丙基、环丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丁氧基、甲氧乙氧基和N,N-二甲基乙氧基。
5.根据权利要求1或4所述的化合物,其中R2任选地被一个或多个卤素、羟基、氨基、C1-C6烷基、或C1-C6卤代烷基取代。
7.根据权利要求1所述的化合物,其中R4为H。
9.一种药物组合物,其包含根据权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐,并任选地包含药学上可接受的辅料。
10.权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、或者根据权利要求9所述的药物组合物在制备治疗由KRAS突变介导的疾病的药物中的用途。
11.根据权利要求8所述的用途,其中所述由KRAS突变介导的疾病为癌症。
12.根据权利要求8所述的用途,其中所述由KRAS突变介导的疾病为肺癌、结肠癌、或胰腺癌。
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WO2024081674A1 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Aadi Bioscience, Inc. | Combination therapies for the treatment of cancer |
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TW201938555A (zh) * | 2017-11-15 | 2019-10-01 | 美商米拉蒂醫療股份有限公司 | Kras g12c抑制劑 |
-
2019
- 2019-12-19 CN CN201911314608.0A patent/CN113004269A/zh active Pending
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