TW201938555A

TW201938555A - Kras g12c抑制劑

Info

Publication number: TW201938555A
Application number: TW107140665A
Authority: TW
Inventors: 詹姆士 F 布萊克; 羅倫斯Ｅ伯格斯; 馬克約瑟夫奇卡雷利; 詹姆士蓋爾克里斯坦森; 亞當庫克; 傑布萊德佛費爾; 約翰Ｐ費雪; 馬修亞諾德馬克思; 馬瑟當尼爾Ｊ梅嘉; 帕維爾薩弗錢科夫; 蓋ＰＡ威格斯; 克里斯多福羅納德史密斯; 瑪莎Ｅ羅德里格斯
Original assignee: 美商米拉蒂醫療股份有限公司; 美商亞雷生物製藥股份有限公司
Priority date: 2017-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2019-10-01
Also published as: CN111989321A; EP3710439A1; WO2020101736A1; EA202091186A1; SG11202004427TA; TWI809005B; CL2020001271A1; FIC20240021I1; JP7346565B2; DK3710439T3; US20230373999A1; HUE061599T2; RS64182B1; IL274601B2; AU2018369759A1; PH12020550622A1; JP2021502993A; CN111989321B; IL274601B1; US20240101553A1

Abstract

本發明係有關於抑制KRas G12C之化合物。尤其，本發明係有關於不可逆地抑制KRas G12C活性之化合物、包括有該化合物之醫藥組成物、以及其使用方法。

Description

KRAS　G12C抑制劑

本發明係有關於抑制KRas G12的化合物。尤其，本發明係有關於不可逆地抑制KRas G12C活性之化合物、包括有所述化合物之醫藥組成物、以及其使用方法。

克斯汀氏鼠肉瘤-2病毒致癌基因同源物(“KRas”)為一種小GTP酶，是Ras致癌基因家族的成員之一。KRas係充作在非活性（結合GDP）與活性（結合GTP）狀態之間循環的分子開關，以將從多種酪胺酸激酶接收的上游細胞信息傳導到下游效應子，而調節多種過程，包含細胞增殖（例如，參見Alamgeer等人, (2013) Current Opin Pharmcol. 13:394-401）。

在三十年前就觀察到活化的KRas在惡性腫瘤中的作用（例如，參見Santos等人, (1984) Science 223:661-664）。KRas的異常表現佔所有癌症高達20％，並且是致癌KRas突變的原因，已有報告指出在25-30%的肺腺癌中該突變使GTP穩定結合並導致KRas及下游信息傳導的組成性活化（例如，參見Samatar及Poulikakos (2014) Nat Rev Drug Disc 13(12): 928-942 doi: 10.1038/nrd428）。導致KRas一級胺基酸序列的密碼子12和13處的錯義突變之單核苷酸取代在肺腺癌中佔了這些KRas驅動突變的約40%，且最常見的活化突變為G12C倒轉（例如，參見Dogan等人, (2012) Clin Cancer Res. 18(22):6169-6177, 線上發表日2012 Sep 26. doi: 10.1158/1078-0432.CCR-11-3265）。

KRAs在惡性腫瘤中眾所周知的角色以及在各種腫瘤類型中發現這些KRas頻繁突變，使得KRas成為製藥工業中對於癌症治療的高度吸引人的目標。儘管三十年來為開發用於治療癌症之KRas抑制劑有大規模的探索努力，但仍沒有KRas抑制劑展露出足夠的安全性及/或功效而得到監管機構批准（例如，參見McCormick (2015) Clin Cancer Res. 21 (8):1797-1801）。

儘管以KRas為目標的失敗嘗試很多，但抑制KRas活性的化合物仍然是非常需要且正在研究中，包含那些破壞諸如鳥嘌呤核苷酸交換因子的效應物之化合物（例如，參見Sun等人, (2012) Agnew Chem Int Ed Engl. 51(25):6140-6143 doi: 10.1002/anie201201358）以及以KRas G12C為目標之化合物（例如，參見Ostrem等人, (2013) Nature 503:548-551）。顯然仍有開發KRas抑制劑的持續興趣及嘗試，特別是活化KRas突變體之抑制劑，包含KRas G12C。

因此，仍有開發可展現出對治療KRas G12C介導的癌症有足夠的功效、穩定性及/或安全性之新KRas G12C抑制劑的需求。本發明之化合物及組成物係藉由提供選擇性KRas G12C抑制劑而有利克服一或多個先前的缺點。

於本發明之一態樣中，提供了抑制KRas G12C活性的化合物。於某些實施例中，該等化合物係由式(I)表示：

式(I)

或其醫藥學上可接受的鹽，其中：

X為4-12員飽和或部分飽和的單環、橋接環或螺環，其中該飽和或部分飽和的單環視情況經一或多個R⁸ 取代；

Y為一鍵、O、S或NR⁵ ；

R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 或–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p ；

R² 為氫、烷基、羥烷基、二羥烷基、烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基、-Z-NR⁵ R¹⁰ 、雜環基、雜環基烷基、芳基、雜芳基或雜芳基烷基，其中Z、雜環基、雜環基烷基、芳基、雜芳基及雜芳基烷基中之每一者可視情況經一或多個R⁹ 取代；

Z為C1 – C4伸烷基；

各R³ 獨立地為C1 – C3烷基、側氧基或鹵烷基；

L為一鍵、-C(O)-或C1 – C3伸烷基；

R⁴ 為氫、環烷基、雜環基、芳基、芳烷基或雜芳基，其中環烷基、雜環基、芳基、芳烷基及雜芳基中之每一者可視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代；

各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基；

R⁶ 為環烷基、雜環基、雜環烷基、芳基或雜芳基，其中環烷基、雜環基、芳基或雜芳基中之每一者可視情況經一或多個R⁷ 取代；

各R⁷ 獨立地為鹵素、羥基、C1 – C6烷基、環烷基、烷氧基、鹵烷基、胺基、氰基、雜烷基、羥烷基或Q-鹵烷基，其中Q為O或S；

R⁸ 為側氧基、C1 – C3烷基、C2 – C4炔基、雜烷基、氰基、-C(O)OR⁵ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-N(R⁵ )₂ ，其中C1 – C3烷基可視情況經氰基、鹵素、-OR⁵ 、-N(R⁵ )₂ 或雜芳基取代；

各R⁹ 獨立地為氫、側氧基、醯基、羥基、羥烷基、氰基、鹵素、C1 – C6烷基、芳烷基、鹵烷基、雜烷基、環烷基、雜環基、雜環基烷基、烷氧基、二烷基胺基、二烷基醯胺基烷基或二烷基胺基烷基，其中C1 – C6烷基可視情況經環烷基取代；

各R¹⁰ 獨立地為氫、醯基、C1 – C3烷基、雜烷基或羥烷基；

R^A 不存在、或為氫或C1 – C3烷基；

各R^B 獨立地為氫、C1 – C3烷基、烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基；

m為零或1與2之間的整數；

p為一或二；且其中，

如果為參鍵，則R^A 不存在，R^B 存在且p等於一，

或如果為雙鍵，則R^A 存在，R^B 存在且p等於二，或R^A 、R^B 與它們所連接的碳原子形成經一或多個R⁷ 取代之5-8員部分飽和的環烷基。

也包含了具有式I-A之式I化合物：

式I-A

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R¹⁰ 、L及m係如式I所定義，R¹¹ 為氫、C1 – C3烷基或羥烷基，且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。

也包含了具有式I-B之式I化合物：

式I-B

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、L及m係如式I所定義，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環烷基，其中R⁹ 係如式I所定義，且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。

於某些實施例中，該等化合物係由式(II)表示：

式(II)

或其醫藥學上可接受的鹽：

其中：

X為4-12員飽和或部分飽和的單環、橋接環或螺環，其中該飽和或部分飽和的單環視情況經一或多個R⁸ 取代

Y為一鍵、O、S或NR⁵ ；

R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 或–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p ；

各個Z為C1 – C4伸烷基；

各R³ 獨立地為C1 – C3烷基、側氧基、鹵烷基、羥基或鹵素；

L為一鍵、-C(O)-或C1 – C3伸烷基；

R⁴ 為氫、環烷基、雜環基、芳基、芳烷基或雜芳基，其中環烷基、雜環基、芳基、芳烷基及雜芳基中之每一者可視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代；

各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基；

各R¹⁰ 獨立地為氫、醯基、C1 – C3烷基、雜烷基或羥烷基；

R¹¹ 為鹵烷基；

R^A 不存在、或為氫、氘、氰基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基；

各R^B 獨立地為氫、氘、氰基、C1 – C3烷基、羥烷基、雜烷基、C1 – C3烷氧基、鹵素、鹵烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基、雜芳基、雜芳基烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代，其中該雜芳基烷基之雜芳基或雜芳基部分視情況經一或多個R⁷ 取代；

或當為雙鍵且p為二時，一個R^B 為氫且R^A 與一個R^B 與它們所連接的碳原子形成經側氧基取代之5-8員部分飽和的環烷基；

m為零或1與2之間的整數；

p為一或二；且其中，

如果為參鍵，則R^A 不存在，p等於一且R^B 為羥基烷基，

或如果為雙鍵，則R^A 存在，R^B 存在且p等於二，其中且R^A 為氫或C1 – C3烷基，至少一個R^B 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥基烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之取代基取代；或如果各R^B 為氫，則R^A 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 、羥基烷基或雜烷基。

也包含了具有式II-A之式II化合物：

式II-A

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R¹⁰ 、L及m係如式II所定義，R¹¹ 為氫、C1 – C3烷基或羥烷基，且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式II所定義。

也包含了具有式II- B之式II化合物：

式II-B

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁸ 、L及m係如式II所定義，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環烷基，且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式II所定義。

於本發明之另一態樣中，其提供包括有治療有效量之本發明化合物或其醫藥學上可接受的鹽及醫藥學上可接受的賦形劑。

於本發明之又一態樣中，抑制細胞中KRas G12C活性之方法包括使細胞與式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物接觸。於一實施例中，該接觸為活體外接觸。於一實施例中，該接觸為活體內接觸。

本文亦提供一種在活體外或活體內抑制細胞增殖之方法，該方法包括使細胞與有效量之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽，或其醫藥組成物接觸。

本文亦提供在患者中治療癌症的方法，包括向有需要之患者投與治療有效量之本發明化合物或醫藥組成物或其醫藥學上可接受的鹽。

本文亦提供一種在需要此類治療之患者中治療KRas G12C相關疾病或病症的方法，該方法包括向該患者投與治療有效量之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文亦提供一種用於療法中之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文亦提供一種用於治療癌症中之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文亦提供用於抑制KRas G12C之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物。

本文亦提供用於治療KRas G12C相關疾病或病症之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物或其醫藥組成物。

本文亦提供如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物用於製造供治療癌症用之藥劑的用途。

本文亦提供如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物用於製造供抑制KRas G12C活性用之藥劑的用途。

本文亦提供如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物用於製造供治療KRas G12C相關疾病或病症之藥劑的用途。

本文亦提供一種在有需要之患者中治療癌症的方法，該方法包括(a)判定該癌症與KRas G12C突變相關（例如KRas G12C相關癌症）；以及(b)向該患者投與治療有效量之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B，或其醫藥學上可接受的鹽，或其醫藥組成物。

本文亦提供一種製備式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物之方法。

本文亦提供藉由製備如本文所述之化合物的方法所獲得之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽。

本發明係有關於KRas G12C之抑制劑。尤其，本發明係有關於不可逆地抑制KRas G12C活性之化合物、包括有一治療有效量之所述化合物之醫藥組成物、以及其使用方法。
定義

除非另有定義，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與一般熟習本發明所屬技術者通常所理解相同之含義。本文提及之所有專利、專利申請案、及專利公開案均以引用方式併入。

如本文中所用，「KRas G12C」係指哺乳動物Kras的突變形式，其在胺基酸位置12含有用半胱胺酸取代甘胺酸之胺基酸取代。人類Kras之胺基酸密碼子及殘基位置的分配係基於由UniProtKB/Swiss-Prot P01116: 變異型p.Gly12Cys所鑑別的胺基酸序列。

如本文中所用，「KRas G12C抑制劑」係指如本文中所述之由式(I)表示之本發明化合物。這些化合物能夠負向調節或抑制KRas G12C之全部或部分的酶活性。本發明之KRas G12C抑制劑藉由與位置12之半胱胺酸殘基的硫醇基支鏈形成共價加合物而與KRas G12C交互作用且不可逆結合於其上，導致KRas G12C的酶活性的抑制。

如本文中所用，「KRas G12C相關疾病或病症」係指與KRas G12C突變相關、或由KRas G12C突變介導、或具有KRas G12C突變之疾病或病症。KRas G12C突變相關疾病或病症的非限制性實例為KRas G12C相關癌症。

如本文所用，術語「個體(subject)」、「個體(individual)」或「患者」可互換使用，係指任何動物，包括哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、其他嚙齒動物、兔、犬、貓、豬、牛、綿羊、馬、靈長類動物及人類。於一些實施例中，患者為人類。於一些實施例中，個體已經歷及/或展現所治療及/或預防之疾病或病症的至少一種症狀。於一些實施例中，個體已經鑑別或診斷患有具KRas G12C突變之癌症（例如如使用管制機構批准的測定法或套組所確定）。在一些實施例中，個體具有對KRas G12C突變呈陽性的腫瘤（例如如使用管制機構批准的測定法或套組所確定）。該個體可以是一個具有對KRas G12C突變呈陽性的腫瘤之個體（例如使用管制機構批准的(例如經FDA批准)測定法或套組而識別呈陽性）。該個體可以是一個其腫瘤具有KRas G12C突變之個體（例如，其中該腫瘤照此使用管制機構批准的(例如經FDA批准)套組或測定法而識別）。於一些實施例中，該個體懷疑患有KRas G12C基因相關癌症。於一些實施例中，該個體之臨床記錄表明，該個體患有具KRas G12C突變之腫瘤（且視情況，臨床記錄表明該個體應用本文提供之任何組成物治療）。

於本文所述之任何方法或用途之一些實施例中，用於使用來自該患者（例如懷疑患有KRas G12C相關癌症之患者、具有一或多種KRas G12C相關癌症的症狀、及/或發生KRas G12C相關癌症的風險增加之患者）的樣本（例如生物樣本或檢體樣本（例如石蠟包埋的檢體樣本））來判定該患者是否具有KRas G12C突變之測定法可包含(例如)次世代定序、免疫組織化學、螢光顯微鏡、分離FISH分析、南方墨點法、西方墨點法、FACS分析、北方墨點法及基於PCR的擴增（例如RT-PCR及定量即時RT-PCR）。如本領域中所眾所周知，該等測定法一般(例如)是用至少一種經標記的核酸探針或至少一種經標記的抗體或其抗原結合片段來執行。

術語「管制機構」係指國家批准醫藥劑之醫療用途的國家機構。舉例而言，管制機構之非限制性實例為美國食品和藥物管理局(FDA)。

術語「胺基」係指–NH₂ 。

術語「醯基」係指-C(O)CH₃ 。

本文採用之術語「烷基」係指具有自1至12個碳原子、1－8個碳原子、1－6個碳原子或1－3個碳原子之直鏈及支鏈脂族基團，該等脂族基視情況經一、二或三個取代基取代。烷基的實例包含(不限於)甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基及己基。

術語「鹵烷基」係指其中的一或多個氫已被鹵素取代之烷基鏈。鹵烷基的實例為三氟甲基、二氟甲基及氟甲基。

術語「鹵烷氧基」係指-O-鹵烷基。

「伸烷基」為如上文定義之烷基，其係位於兩個其它化學基團之間且用以連接它們。例示性的伸烷基包含(不限於)亞甲基、伸乙基、伸丙基及伸丁基。

術語「烷氧基」係指–OC1 – C6烷基。

術語「環烷基」包含了具有3至12個碳原子、較佳3至8個碳原子、及另一個3至6個碳原子實例之飽和及部分不飽和之環烴基，其中該環烷基另外視情況經取代。環烷基實例包含(不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環庚基及環辛基。

術語「雜烷基」係指如上文定義之烷基，其中鏈中的一或多個碳原子經選自由O、S及N所組成之群的雜原子取代。

如本文中所用，術語「羥烷基」係指–烷基-OH。

術語「二羥烷基」係指如本文中定義之其中兩個碳原子各經羥基取代之烷基。

術語「烷基胺基」係指–NR^x -烷基，其中R^x 為氫。於一實施例中，R^x 為氫。

術語「二烷基胺基」係指–N(R^y )₂ ，其中各R^y 為C1 – C3烷基。

術語「烷基胺基烷基」係指–烷基-NR^x -烷基，其中R^x 為氫。於一實施例中，R^x 為氫。

術語「二烷基胺基烷基」係指–烷基-N(R^y )₂ ，其中各R^y 為C1 – C4烷基，其中所述–烷基-N(R^y )₂ 的烷基可視情況經羥基或羥基烷基取代。

「芳基」係為包含一至三個芳族環之C₆ -C₁₄ 芳族部分，該芳族部分視情況經取代。以一實施例為例，該芳基為C₆ -C₁₀ 芳基。芳基的實例包含(不限於)苯基、萘基、蒽基、茀基及二氫苯並呋喃基。

「芳烷基(aralkyl)」或「芳基烷基(arylalkyl)」包括共價連接至烷基之芳基，其任一者可獨立視情況經取代或未經取代。芳烷基的實例為(C₁ -C₆ )烷基(C₆ -C₁₀ )芳基，包括(不限於)苄基、苯乙基及萘甲基。經取代的芳烷基的實例為其中該烷基經羥烷基取代。

「雜環基」或「雜環的」基團，為具有從大約3至大約12個原子（例如4至8個原子）的環結構，其中1或多個原子係選自N、O和S所組成之群，其餘的環原子為碳。雜環基係可為單環、雙環、螺環或橋接環系統。可視需要在1或多個位置處，在碳或氮上用R⁷ 取代雜環的基團，R⁷ 係如式I所定義。亦可視需要分別在氮上，以烷基、芳基、芳烷基、烷羰基、烷基磺醯基、芳羰基、芳基磺醯基、烷氧羰基、芳烷氧羰基，或在硫上以氧基或低碳數烷基取代雜環的基團。雜環基團的實例包含(不限於)環氧基、氮雜環丁基、氮丙啶基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、吡咯啶基、吡咯啶酮基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、噻唑烷基、二噻烷基、三噻烷基、二氧戊環基(dioxolanyl)、噁唑啶基、噁唑烷酮基、十氫喹啉基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、硫嗎啉基、硫嗎啉基1,1二氧化物、嗎啉基、氧氮雜環庚烷基、氮雜雙環己烷、氮雜雙環庚烷及氧雜氮雜雙環庚烷。特別從該名詞之範圍中排除的，是具有相鄰環形O及/或S原子的化合物。

術語「雜環基烷基」係指如本文所定義之雜環基經由烷基連接子而連接至分子的剩餘部分，其中該雜環基烷基的烷基連接子可視情況經羥基或羥烷基取代。

如本文所用，術語「雜芳基」係指基團具有5至14個環原子，較佳為5、6、9或10個環原子；具有6、10或14個在一環狀排列共享之π電子；且具有除碳原子之外選自由N、O及S所組成之群的一或三個雜原子。雜芳基的實例包含吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異噁唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH－咔唑基、咔啉基、丙並二氫哌喃基(chromanyl)、丙並哌喃基(chromenyl)、噌啉基、呋喃基、呋吖基、咪唑啉基、咪唑基、1H－吲唑基、伸吲哚基(indolenyl)、吲哚啉基,吲嗪基、吲哚基、3H－吲哚基、異苯并呋喃基、異色滿基(isochromanyl)、異吲唑基、異吲哚啉基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、亞甲基二氧苯基、萘啶基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3－噁二唑基、1,2,4－噁二唑基、1,2,5－噁二唑基、1,3,4－噁二唑基、噁唑啶基、噁唑基、噁唑啶基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、氧硫雜蒽基、啡噁嗪基、呔嗪基、向日葵基、喋啶基、嘌呤基、哌喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、嗒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯啉基、2H－吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H－喹嗪基、喹噁啉基、奎寧環基(quinuclidinyl)、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、四唑基、6H－1,2,5－噻二嗪基、1,2,3－噻二唑基、1,2,4－噻二唑基、1,2,5－噻二唑基、1,3,4－噻二唑基、噻嗯基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3－三唑基、1,2,4－三唑基、1,2,5－三唑基、1,3,4－三唑基及呫噸基(xanthenyl)。

「雜芳基烷基」包括共價連接至烷基之雜芳基，其中該自由基在烷基上，其獨立視情況經取代或未經取代。雜芳基烷基的實例包含連接至C1－C6烷基之具有5、6、9或10個環原子之雜芳基。雜芳烷基的實例包含吡啶基甲基、吡啶基乙基、吡咯基甲基、吡咯基乙基、咪唑基甲基、咪唑基乙基、噻唑基甲基、噻唑基乙基、苯并咪唑基甲基、苯并咪唑基乙基、喹唑啉基甲基、喹啉基甲基、喹啉基乙基、苯并呋喃基甲基、吲哚啉基乙基、異喹啉基甲基、異吲哚基甲基(isoinodylmethyl)、噌啉基甲基及苯并噻吩基乙基。特別排除在此術語範圍之外的是具有相鄰的環O及/或S原子的化合物。

如本文所用，化合物的「有效量」為足以負向調節或抑制KRas G12C活性之數量。這樣的數量可以單一劑量投與或可根據治療方案投與，由此它是有效的。

如本文所用，化合物的「治療有效量」為足以改善或以某種方式減輕症狀或停止或逆轉病症的進展，或負向調節或抑制KRas G12C的活性之數量。這樣的數量可以單一劑量投與或可根據治療方案投與，由此它是有效的。

如本文所用，治療是指改善病症、障礙或疾病的症狀或病狀或以其他方式有益地改變的任何方式。治療亦涵蓋本文中之組成物的任何醫藥學上用途。

如本文所用，通過施用特定醫藥組成物改善特定病症的症狀是指可歸因於施用該組成物或與施用該組成物相關的任何減輕，無論是永久的還是暫時的，持續的或短暫的。
化合物

於本發明之一態樣中，提供由式(I)表示之化合物：

式(I)

或其醫藥學上可接受的鹽，其中：

Y為一鍵、O、S或NR⁵ ；

R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 或–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p ；

Z為C1 – C4伸烷基；

各R³ 獨立地為C1 – C3烷基、側氧基或鹵烷基；

L為一鍵、-C(O)-或C1 – C3伸烷基；

各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基；

各R¹⁰ 獨立地為氫、醯基、C1 – C3烷基、雜烷基或羥烷基；

R^A 不存在、或為氫或C1 – C3烷基；

m為零或1與2之間的整數；

p為一或二；且其中，

如果為參鍵，則R^A 不存在，R^B 存在且p等於一，

於某些實施例中，R¹ -X為：

其中R¹ 係如式I所定義且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。於某些實施例中，R⁸ 為C1 – C3烷基且其中該烷基視情況經氰基、OR⁵ 或-C(O)N(R⁵ )₂ 取代，其中各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基。

於特定實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中R^A 、R^B 及p係如式I所定義。於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為參鍵且R^A 不存在，p為一且R^B 為C1 – C3烷基。於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且R^A 為氫或C1 – C3烷基，p為二且各R^B 獨立地為氫、C1 – C3烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基。於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A ) =C(R^B )_p ，其中R^A 為氫或C1 – C3烷基，p為二，所述R^B 中的一個為氫、C1 – C3烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基且另一個R^B 為氫或C1 – C3烷基。於一實施例中，R¹ 為–C(O)CH=CH₂ 。

於一實施例中，Y為O或NR⁵ 且R² 係選自由以下組成之群：烷基、羥烷基、二羥烷基、烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基、雜環基、雜環基烷基及雜芳基。於一實施例中，Y為O且R² 為羥烷基、二羥烷基、烷基胺基烷基或二烷基胺基烷基，其中該烷基胺基烷基或二烷基胺基烷基視情況經一或多個R⁹ 取代。於一實施例中，經取代的烷基胺基烷基或二烷基胺基烷基獨立地選自甲基胺基丙-2-基、二甲基胺基乙基、甲基乙基胺基乙基、二甲基胺基丙基、二甲基胺基丙-2-基、二甲基胺基丁基、二甲基胺基丁-2-基、2-二甲基胺基丙醇或二乙基胺基乙基。於一實施例中，Y為O或NR⁵ 且R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環基或雜環烷基。當R² 為雜環基或雜環烷基時，一或多個R⁹ 的非限制性實例包含C1 – C3烷基、醯基、側氧基、氰基、烷氧基、環烷基、環烷基甲基、鹵素及羥基。視情況經一或多個R⁹ 取代之R² 雜環基的非限制性實例包含氮雜環丁基、經C1-C3烷基取代的氮雜環丁基(例如甲基氮雜環丁基)、經鹵素取代的氮雜環丁基(例如二氟氮雜環丁基)、四氫吡喃基、吡咯啶基、經C1-C3烷基取代的吡咯啶基(例如甲基吡咯啶基、二甲基吡咯啶基及異丙基吡咯啶基)、環烷基烷基吡咯啶基、羥吡咯啶基、經鹵素取代的吡咯啶基(例如氟吡咯啶基及二氟吡咯啶基)、甲氧基乙基吡咯啶基、(N-甲基)甲氧基吡咯啶基、哌嗪基、二甲基胺基吡咯啶基、嗎啉基、甲基嗎啉基、1,4-氧氮雜環庚烷基、哌啶基、經C1-C3烷基取代的哌啶基(例如甲基哌啶基)、醯基哌啶基、氰基哌啶基、環烷基哌啶基、鹵哌啶基(例如氟哌啶基)、二鹵哌啶基(例如二氟哌啶基)、烷氧基哌啶基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、硫嗎啉基1,1二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基及氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基。

於一實施例中，Y為O且R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜芳基烷基。於一實施例中，該雜芳基烷基的雜芳基部分為吡啶基。

於一實施例中，Y為O且R² 為-ZR⁵ R¹⁰ 。於一實施例中，R⁵ 為C1 – C3烷基且R¹⁰ 係獨立地選自醯基、羥烷基或烷氧基。

於一實施例中，Y為一鍵且R² 為氫、雜環基或芳基，其中所述雜環基及芳基係視情況經一或多個R⁹ 取代。

於一實施例中，Y為一鍵且R² 為氫。

於一實施例中，Y為一鍵且R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環基。於一實施例中，Y為一鍵且R² 為視情況經甲基、鹵素或二甲胺基取代之雜環基。R² 雜環基的非限制性實例包含氮雜環丁基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基及吡咯啶基。

於一實施例中，Y為一鍵且R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之芳基。於一實施例中，所述芳基為經雜環烷基取代之苯基。

於某些其他的實施例中，當X為單環，則R⁴ 為芳基。於一實施例中，R⁴ 係選自由苯基及萘基所組成之群且視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。R⁷ 取代基的實例包含鹵素、羥基、C1- C6烷基(例如C1- C3烷基)、環烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、胺基、氰基、羥烷基及烷氧基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及三氟甲硫基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經Q-鹵烷基及羥基或氟取代之苯基。

於一實施例中，R⁴ 為芳基且其中芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1 – C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 取代基取代之萘基。

於一實施例中，該芳基為視情況經一或多個鹵素取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基、三氟甲基或C1 – C3烷基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基取代之萘基。

於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁷ 取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、烷氧基及胺基之R⁷ 取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁷ 取代之吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶基或苯并[d]噻唑基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、烷氧基及胺基之R⁷ 取代之吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶基或苯并[d]噻唑基。

又於其他實施例中，R⁴ 為雜芳基，可選地為吲哚基或吲唑基，其各可經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自由鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基所組成之群之R⁷ 取代基取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或二個獨立地選自烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 取代之吲唑基。於其它實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自胺基、羥基、C1 – C3烷基及羥基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經選自羥基及胺基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於其它實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ （諸如羥基、一或二個C1 – C3烷基，或羥基及一或二個C1 – C3烷基）取代之苯并[d]噻唑基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。

於一實施例中，其中X為單環，R⁴ 為芳烷基。於某些實施例中，所述芳烷基為苯甲基。於其它實施例中，所述苯甲基基團的烷基係視情況經羥烷基取代。

於一實施例中，L為一鍵。

於一實施例中，m為一且R³ 為C1 – C3烷基。

於一實施例中，m為一且R³ 為側氧基。

於一實施例中，R⁸ 為視情況經-OR⁵ 、氰基或雜芳基取代之雜烷基、C2-C4炔基或C1 – C3烷基。於一實施例中，R⁸ 為甲基、氰基甲基、甲氧基甲基、羥甲基。於一實施例中，R⁸ 為甲基。於一實施例中，R⁸ 為氰基甲基。於一實施例中，R⁸ 為羥甲基。

於一實施例中，式I包含了具有式I-A之化合物：

1其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R¹⁰ 、L及m係如式I所定義，R¹¹ 為氫、甲基或羥烷基，且哌啶基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。於一實施例中，L為一鍵。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，各R⁷ 係獨立地選自羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基。於一實施例中，R⁵ 及R¹⁰ 各為C1 – C3烷基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及三氟甲硫基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經Q-鹵烷基及羥基或氟取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中， R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1- C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為視情況經一或多個鹵素取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基及三氟甲基或C1 – C3烷基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 取代之吲唑基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自胺基、羥基、C1-C3烷基及羥基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ （諸如羥基、一或二個C1 – C3烷基，或羥基及一或二個C1 – C3烷基）取代之苯并[d]噻唑基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R¹¹ 為甲基。於一實施例中，該哌啶基環未經取代。於一實施例中，該哌啶基環係經R⁸ 取代。於一實施例中，R⁸ 為視情況經氰基或羥基取代之C1 – C3烷基。於一實施例中，R⁸ 為甲基、氰基甲基或羥甲基。於一實施例中，R⁸ 為甲基。於一實施例中，R⁸ 為氰基甲基。於一實施例中，R⁸ 為羥甲基。於另一實施例中，R⁵ 及R¹⁰ 係各為C1 – C3烷基，R¹¹ 為甲基，R⁸ 為甲基、氰基甲基或羥甲基，L為一鍵，且R⁴ 為芳基或雜芳基，各視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。

於一實施例中，式I包含具有式I-B之化合物：

式I-B
且R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁹ 、L及m係如式I所定義，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環烷基，且該哌啶基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。於一實施例中，R² 雜環烷基的雜環基部分為具有一或二個獨立地選自N及O之環雜原子的單環、雙環、或橋接環系統。於一實施例中，R² 雜環基為吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、1,4-氧氮雜環庚烷基、硫嗎啉基-1,1-二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基、及氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基，視情況經一或多個R⁹ 取代。於一實施例中，各R⁹ 係選自醯基、側氧基、鹵素、氰基、C1 – C3烷基、烷氧基、羥烷基、雜烷基、雜環基、環烷基、芳烷基及二烷基胺基烷基。於一實施例中，L為一鍵。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，各R⁷ 係獨立地選自羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及三氟甲硫基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經Q-鹵烷基及羥基或氟取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1- C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為視情況經一或多個鹵素取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基及三氟甲基或C1 – C3烷基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 取代之吲唑基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自胺基、羥基、C1-C3烷基及羥基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ （諸如羥基、一或二個C1 – C3烷基，或羥基及一或二個C1 – C3烷基）取代之苯并[d]噻唑基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R¹¹ 為甲基。於一實施例中，該哌啶基環未經取代。於一實施例中，該哌啶基環係經R⁸ 取代。於一實施例中，該哌啶基環未經取代。於一實施例中，該哌啶基環係經R⁸ 取代。於一實施例中，R⁸ 為視情況經氰基、羥基或甲氧基取代之C1 – C3烷基。於一實施例中，R⁸ 為甲基、氰基甲基、羥甲基或甲氧基甲基。

於一實施例中，X為飽和的橋接環系統。橋接環系統的非限制性實例包含二氮雜雙環庚烷及二氮雜雙環辛烷。於某些實施例中，若X為飽和的橋接環系統，則R¹ 為–C(O)CH=CH₂ 。於一實施例中，該橋接環系統係經一或二個獨立地選自R⁸ 之基團取代，其中R⁸ 係如I所定義。於一實施例中，該橋接環系統係未經取代。於一實施例中，該橋接環系統為二氮雜雙環[3.2.1]辛-8-基或二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基。

於一實施例中， R¹ -X為：

其中A及B為螺環系統，其中A與B相同或不同，且獨立地表示一個4-6員飽和環系統，其中該等環視情況經一或多個R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式I所定義。於某些實施例中，R¹ 為–C(O)CH=CH₂ 。於某些實施例中，環A與B係未經取代。

於一實施例中，該螺環系統係未經取代。螺環系統的非限制性實例包含：
,,,,,
, 及。

於某些實施例中，若A及B表示螺環系統，則R¹ 為–C(O)CH=CH₂ 。

於式I之一實施例中，R² 係選自由羥烷基、二烷基胺基烷基、雜環基及雜環烷基所組成之群，其中雜環基或雜環烷基係各獨立地視情況經R⁹ 取代。於另一實施例中，R² 為雜環基及雜環烷基，其中雜環基或雜環烷基係各獨立地視情況經一或多個R⁹ 取代。於某些實施例中，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之二烷基胺基烷基。非限制性實例包含二甲基胺基乙基、二甲基胺基丙基、二甲基胺基丙-2-基、二甲基胺基丁基、二甲基胺基丁-2-基、2-二甲基胺基丙醇或二乙基胺基乙基。

於一實施例中，Y為O且R² 係選自由羥烷基、二烷基胺基烷基、雜環基、雜環烷基及-ZR⁵ R¹⁰ 所組成之群，其中R⁵ 及R¹⁰ 係如式I所定義。

於一實施例中，Y為O且R² 係選自由羥烷基、二烷基胺基烷基、雜環基及雜環烷基，其中雜環基或雜環烷基各視情況獨立地經R⁹ 取代。於另一實施例中，R² 為雜環基及雜環烷基，其中雜環基或雜環烷基各獨立地視情況經一或多個R⁹ 取代。R⁹ 的非限制性實例包含醯基、側氧基、鹵素、氰基、C1 – C6烷基、烷氧基、羥烷基、雜烷基、環烷基、芳烷基或二烷基胺基烷基。於某些實施例中，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之二烷基胺基烷基。非限制性實例包含二甲基胺基乙基、二甲基胺基丙基、二甲基胺基丙-2-基、二甲基胺基丁基、二甲基胺基丁-2-基、2-二甲基胺基丙醇或二乙基胺基乙基。

於式I之一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代之芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代之苯基或萘基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁷ 取代之苯基或萘基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1 – C3烷基、環烷基、烷氧基、鹵烷基或Q-鹵烷基(其中Q為O或S)之R⁷ 取代基取代的苯基或萘基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及甲硫基之R⁷ 取代基取代的苯基或萘基。

於一實施例中，R⁴ 為視情況經胺基取代之異喹啉基。於一實施例中，R⁴ 為芳烷基。於某些實施例中，所述芳烷基為苯甲基。於一實施例中，所述芳烷基為苯甲基且其中該烷基部分係經羥基或羥烷基取代。

式(I)、式I-A及式I-B化合物的非限制性實例係選自由以下組成之群：
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, 及。

及其醫藥學上可接受的鹽。

式(I)、式I-A及式I-B化合物之更多非限制性實例係選自由以下組成之群：
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,, 及。

及其醫藥學上可接受的鹽。

於本發明的一態樣中，提供由式(II)表示之化合物：

式(II)

或其醫藥學上可接受的鹽：

其中：

Y為一鍵、O、S或NR⁵ ；

R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 或–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p ；

各個Z為C1 – C4伸烷基；

各R³ 獨立地為C1 – C3烷基、側氧基、鹵烷基、羥基或鹵素；

L為一鍵、-C(O)-或C1 – C3伸烷基；

各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基；

各R¹⁰ 獨立地為氫、醯基、C1 – C3烷基、雜烷基或羥烷基；

R¹¹ 為鹵烷基；

或當為雙鍵且p為二時，一個R^B 為氫且R^A 與一個R^B 與它們所連接的碳原子形成經側氧基取代之4-8員部分飽和的環烷基；

m為零或1與2之間的整數；

p為一或二；且其中，

如果為參鍵，則R^A 不存在，p等於一且R^B 為羥基烷基，

或如果為雙鍵，則R^A 存在，R^B 存在且p等於二，其中且R^A 為氫或C1 – C3烷基，至少一個R^B 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥基烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代；或如果各R^B 為氫，則R^A 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 、羥基烷基或雜烷基。

於某些實施例中，R¹ -X為：

其中R¹ 係如式II所定義且該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式II所定義。於某些實施例中，R⁸ 為C1 – C3烷基且其中該烷基視情況經氰基或OR⁵ 取代，或為-C(O)N(R⁵ )₂ ，其中各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基。

於特定實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中R^A 、R^B 及p係如式II所定義。於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為參鍵且R^A 不存在，p為一且R^B 為羥烷基。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且R^A 為氫或C1 – C3烷基， p為二且至少一個R^B 為氘、氰基、C1 – C3烷基、羥烷基、雜烷基、C1 – C3烷氧基、鹵素、鹵烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基、雜芳基、雜芳基烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代，其中該雜芳基烷基之雜芳基或雜芳基部分視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，若為雙鍵，則該雙鍵係呈E組態。於一實施例中，該雙鍵係呈Z組態。

於某些實施例中，一個R^B 為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之取代基取代的雜環烷基，且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該雜環烷基之雜環部分為經鹵素取代之氮雜環丁基。於某些實施例中，該鹵素為氟。於一實施例中，該雜環烷基之雜環部分為經一或多個鹵素取代之吡咯啶基。於某些實施例中，所述經鹵素取代的吡咯啶基為氟吡咯啶基或二氟吡咯啶基。

於某些實施例中，一個R^B 為鹵素且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該鹵素為氯。

於某些實施例中，一個R^B 為鹵烷基且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該鹵素為氯甲基、氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。

於某些實施例中，一個R^B 為雜烷基且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該雜烷基為甲氧基甲基。

於某些實施例中，一個R^B 為-ZNR⁵ R¹¹ ，其中Z為亞甲基，R⁵ 為甲基且R¹¹ 為三氟甲基或2,2,2-三氟乙基，且另一個R^B 為氫。

於某些實施例中，一個R^B 為羥烷基且另一個R^B 為氫。

於某些實施例中，一個R^B 為視情況經一或多個R⁷ 取代之雜芳基且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該雜芳基為吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各視情況經一或多個R⁷ 取代。

於某些實施例中，一個R^B 為視情況經一或多個R⁷ 取代之雜芳基烷基且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該雜芳基烷基的雜芳基部分為吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，該一或多個R⁷ 為C1 – C3烷基。

於某些實施例中，一個R^B 為-C(O)N(R⁵ )₂ 且另一個R^B 為氫。於一實施例中，各R⁵ 為氫。於一實施例中，各R⁵ 為C1 – C3烷基。

於某些實施例中，一個R^B 為-NHC(O)C1 – C3烷基或-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基，且另一個R^B 為氫。於一實施例中，該C1 – C3烷基為甲基。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A ) =C(R^B )_p ，其中R^A 為氘、氰基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基，p為二，各R^B 為氫。於一實施例中，R^A 為鹵素。於一實施例中，該鹵素為氟或氯。於一實施例中，R^A 為鹵烷基。於一實施例中，該鹵烷基為三氟甲基。於一實施例中，R^A 為氰基。於一實施例中，R^A 為雜烷基。於一實施例中，該雜烷基為甲氧基。於一實施例中，R^A 為羥烷基。

於一實施例中， R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且R^A 為氘，p為二且至少一個R^B 為氘。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且p為二，一個R^B 為氫且R^A 與一個R^B 與它們所連接的碳原子形成經側氧基取代之5-8員部分飽和的環烷基。

於一實施例中， R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且p為二，一個R^B 為氫，第二個R^B 為二烷基胺基烷基，且R^A 為鹵素。

於一實施例中，Y為O或NR⁵ 且R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環基或雜環烷基。當R² 為雜環基或雜環烷基時，一或多個R⁹ 的非限制性實例包含C1 – C3烷基、醯基、側氧基、氫基、烷氧基、環烷基、環烷基甲基、鹵素及羥基。當R² 為雜環基或雜環烷基時，一或多個R⁹ 的非限制性實例包含C1 – C3烷基、醯基、側氧基、氫基、烷氧基、環烷基、環烷基甲基、鹵素及羥基。視情況經一或多個R⁹ 取代之R² 雜環基的非限制性實例包含氮雜環丁基、經C1-C3烷基取代的氮雜環丁基(例如甲基氮雜環丁基)、經鹵素取代的氮雜環丁基(例如二氟氮雜環丁基)、四氫吡喃基、吡咯啶基、經C1-C3烷基取代的吡咯啶基(例如甲基吡咯啶基、二甲基吡咯啶基及異丙基吡咯啶基)、環烷基烷基吡咯啶基、羥吡咯啶基、經鹵素取代的吡咯啶基(例如氟吡咯啶基及二氟吡咯啶基)、甲氧基乙基吡咯啶基、(N-甲基)甲氧基吡咯啶基、哌嗪基、二甲基胺基吡咯啶基、嗎啉基、甲基嗎啉基、1,4-氧氮雜環庚烷基、哌啶基、經C1-C3烷基取代的哌啶基(例如甲基哌啶基)、醯基哌啶基、氰基哌啶基、環烷基哌啶基、鹵哌啶基(例如氟哌啶基)、二鹵哌啶基(例如二氟哌啶基)、烷氧基哌啶基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、硫嗎啉基1,1二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基及氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基。

於一實施例中，該雜環烷基的雜環基部分為N-甲基吡咯啶基。於一實施例中，該雜環烷基的雜環基部分為3,3-二氟-1-甲基吡咯啶基。

於某些其它實施例中，R⁴ 為芳基。於一實施例中，R⁴ 係選自由苯基及萘基所組成之群且視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。R⁷ 取代基的實例包含鹵素、羥基、C1- C6烷基(例如C1- C3烷基)、環烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、胺基、氰基、羥烷基及烷氧基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自甲基、羥基、三氟甲基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經三氟甲基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。

於一實施例中，R⁴ 為芳基且其中芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1 – C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，經取代的萘基為8-氯萘基或8-甲基萘基。

於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、烷氧基及胺基之R⁷ 或R⁸ 取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶基或苯并[d]噻唑基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自側氧基、鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、烷氧基及胺基之R⁷ 或R⁸ 取代之吲哚基、吲唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶基或苯并[d]噻唑基。

又於其他實施例中，R⁴ 為雜芳基，可選地為吲哚基或吲唑基，其各可經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或多個獨立地選自由鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基所組成之群之R⁷ 或R⁸ 取代基取代之雜芳基。於一實施例中，R⁴ 為視情況經一或二個獨立地選自側氧基、三氟甲基、烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 或R⁸ 取代之吲唑基。於其它實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自胺基、羥基、C1 – C3烷基及羥基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經選自羥基及胺基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基、三氟甲基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。

於一實施例中，L為一鍵。

於一實施例中， m為零。

於一實施例中，式II包含了具有式II-A之化合物：

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R¹⁰ 、L及m係如式II所定義，R¹¹ 為氫、甲基或羥烷基，且哌啶基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式II所定義。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且R^A 為氫或C1 – C3烷基，p為二且至少一個R^B 為氘、氰基、C1 – C3烷基、羥烷基、雜烷基、C1 – C3烷氧基、鹵素、鹵烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基、雜芳基、雜芳基烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代，其中該雜芳基烷基之雜芳基或雜芳基部分視情況經一或多個R⁷ 取代。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A ) =C(R^B )_p ，其中R^A 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基，p為二，且各R^B 為氫。於一實施例中，R^A 為鹵素。於一實施例中，該鹵素為氟或氯。於一實施例中，R^A 為鹵烷基。於一實施例中，該鹵烷基為三氟甲基。於一實施例中，R^A 為氰基。於一實施例中，R^A 為雜烷基。於一實施例中，該雜烷基為甲氧基甲基。於一實施例中，R^A 為羥烷基。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且R^A 為氘，p為二且至少一個R^B 為氘。

於一實施例中，R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p ，其中為雙鍵且p為二，一個R^B 為氫，第二個R^B 為二烷基胺基烷基，且R^A 為鹵素。

於一實施例中，L為一鍵。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，各R⁷ 或R⁸ 係獨立地選自側氧基、羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基。於一實施例中，R⁵ 及R¹⁰ 各為C1 – C3烷基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及三氟甲硫基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經Q-鹵烷基及羥基或氟取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中， R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1- C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 或R⁸ 取代基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為視情況經一或多個鹵素取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基及三氟甲基或C1 – C3烷基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自側氧基、烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 或R⁸ 取代之吲唑基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自胺基、羥基、C1-C3烷基及羥基之R⁷ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R¹¹ 為甲基。於一實施例中，該哌啶基環未經取代。於一實施例中，該哌啶基環係經R⁸ 取代。於一實施例中，R⁸ 為視情況經氰基或羥基取代之C1 – C3烷基。於一實施例中，R⁸ 為甲基、氰基甲基或羥甲基。於一實施例中，R⁸ 為甲基。於一實施例中，R⁸ 為氰基甲基。於一實施例中，R⁸ 為羥甲基。於另一實施例中，R⁵ 及R¹⁰ 係各為C1 – C3烷基，R¹¹ 為甲基，R⁸ 為甲基、氰基甲基或羥甲基，L為一鍵，且R⁴ 為芳基或雜芳基，各視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。

於一實施例中，式II包含了具有II-B之化合物：

式II-B

其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、L及m係如式II所定義，R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環烷基且其中R⁹ 係如式II所定義，且哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R⁸ 係如式II所定義。

於一實施例中，R² 雜環烷基的雜環基部分為具有一或二個獨立地選自N及O之環雜原子的單環、雙環、或橋接環系統。於一實施例中，R² 雜環基為氮雜環丁基、甲基氮雜環丁基、乙基氮雜環丁基、異丙基氮雜環丁基、二氟氮雜環丁基、環丙基氮雜環丁基、四氫吡喃基氮雜環丁基、四氫哌喃、吡咯啶基、甲基吡咯啶基、二甲基吡咯啶基、異丙基吡咯啶基、環烷基烷基吡咯啶基、羥基吡咯啶基、氟吡咯啶基、二氟吡咯啶基、(N-甲基)氟吡咯啶基、(N-甲基)二氟吡咯啶基、甲氧基乙基吡咯啶基、經烷氧基取代的N-甲基吡咯啶基(例如，(N-甲基)甲氧基吡咯啶基)、哌嗪基、二甲基胺基吡咯啶基、吡咯啶酮、甲基吡咯啶酮、嗎啉基、甲基嗎啉基、乙基嗎啉基、異丙基嗎啉基、氧雜丁環基、1,4-氧氮雜環庚烷基、哌啶基、甲基哌啶基、醯基哌啶基、氰基哌啶基、環烷基哌啶基、鹵哌啶基、二鹵哌啶基、氟哌啶基、二氟哌啶基、烷氧基哌啶基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、四氫吡咯烷基、硫嗎啉基-1,1-二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基、或氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基，視情況經一或多個R⁹ 取代。於一實施例中，各R⁹ 係選自醯基、側氧基、鹵素、氰基、C1 – C3烷基、烷氧基、羥烷基、雜烷基、環烷基、芳烷基、雜環基及二烷基胺基烷基。於一實施例中，L為一鍵。於一實施例中，該R² 雜環烷基的雜環部分為(N-甲基)二氟吡咯啶基，包含3,3-二氟-1-甲基吡咯啶基。於一實施例中，該R² 雜環烷基的雜環部分為N-甲基吡咯啶基。

於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。於一實施例中，R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁷ 取代。於一實施例中，各R⁷ 係獨立地選自羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自甲基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、羥基、三氟甲氧基、羥基、氟、氯、異丙基、環丙基及三氟甲硫基之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一至三個獨立地選自羥基、氟及氯之R⁷ 基團取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經羥基及C1 – C3烷基或兩個C1 – C3烷基取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經Q-鹵烷基及羥基或氟取代之苯基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、C1- C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經一或多個獨立地選自鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基及羥基之R⁷ 基團取代之萘基。於一實施例中， R⁴ 為經一或多個獨立地選自羥基、鹵素、C1- C3烷基、胺基及鹵烷基之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為經一至三個獨立地選自二氟甲基、甲基、羥基、胺基、氟及氯之R⁷ 取代基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為視情況經一或多個鹵素取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基及三氟甲基或C1 – C3烷基取代之萘基。於一實施例中，該芳基為經羥基取代之萘基。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自烷氧基、鹵烷基及C1-C6烷基之R⁷ 取代之吲唑基。

於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。於一實施例中，R⁴ 為雜芳基，其中該雜芳基為喹啉基或異喹啉基，其各視情況經一或多個獨立地選自側氧基、胺基、羥基、C1-C3烷基及羥基之R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個獨立地選自C1 – C3烷基、鹵素及鹵烷基之R⁷ 取代之吡啶基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代之吲哚基。於一實施例中，R⁴ 雜芳基為視情況經一或二個獨立地選自羥基及C1 – C3烷基之R⁷ 取代之吲哚基。於一實施例中，R¹¹ 為甲基。於一實施例中，該哌嗪基環未經取代。於一實施例中，式II-B的哌嗪基環係經R⁸ 取代。於一實施例中，R⁸ 為視情況經氰基、羥基或甲氧基取代之C1 – C3烷基。於一實施例中，R⁸ 為甲基、氰基甲基、羥甲基或甲氧基甲基。

式(II)、式II-A及式II-B化合物的非限制性實例係選自由以下組成之群：
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及。

或其醫藥學上可接受的鹽。

於一實施例中，式I化合物包含上述化合物的三氟乙酸鹽。式(I)、式I-A、式I-B、式(II)、式II-A或式II-B化合物可調配成醫藥組成物。
醫藥組成物

於另一態樣中，本發明提供了包括有根據本發明之KRas G12C抑制劑及一醫藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑之醫藥組成物。本發明化合物可藉由本領域中眾所周知的任何方法調配，且可經製備以藉任何途徑投藥，包含(但不限於)非經腸、口腔、舌下、經皮、外用、鼻內、氣管內或直腸內。於某些實施例中，本發明化合物係以靜脈內方式在醫院環境中投藥。於一實施例中，可藉由口腔途徑投藥。

載劑之特徵係依投藥途徑而定。如本文所用，術語「醫藥學上可接受的」意指可與生物系統相容之無毒性物質，諸如細胞、細胞培養物、組織或生物體，且不會干擾活性成份之生物學活性之有效性。因此，除了抑制劑以外，根據本發明之組成物可含有稀釋劑、填料、鹽、緩衝劑、安定劑、增溶劑及本領域中眾所周知的其他物質。醫藥學上可接受的製劑之製備係描述於(例如) Remington氏醫藥科學，第18版，A. Gennaro編著，Mack出版公司，Easton, Pa., 1990。

如本文中所用，術語「醫藥學上可接受的鹽」意指會保持上文所鑑別化合物之所要生物學活性的鹽，且其展現出最少或未展現不期望的毒物學作用。這類鹽的實例包含(但不限於)與無機酸類（例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等）所形成之酸加成鹽，及與有機酸類所形成之鹽，該有機酸諸如為醋酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、雙羥萘酸、海藻酸、聚麩胺酸、萘磺酸、萘二磺酸及聚半乳糖醛酸。該等化合物亦可以熟習該項技術者已知之醫藥學上可接受的四級鹽類投藥，其特別包含式-NR+Z-之四級銨鹽，其中R為氫、烷基或苯甲基，且Z為抗衡離子，包含氯根、溴根、碘根、-O-烷基、甲苯磺酸根、甲基磺酸根、磺酸根、磷酸根或羧酸根（諸如苯甲酸根、琥珀酸根、醋酸根、乙醇酸根、順丁烯二酸根、蘋果酸根、檸檬酸根、酒石酸根、抗壞血酸根、苯甲酸根、桂皮酸根、苯乙醇酸根、苯甲酸根及二苯基醋酸根）。

活性化合物係以足以將治療有效量遞送給患者的量包含在該醫藥學上可接受的載劑或稀釋劑中，而不會在所治療的患者中引起嚴重的毒性效應。於一實施例中，對於所有上述病症，活性化合物的劑量範圍為約0.01至300 mg/kg，例如每天0.1至100 mg/kg，進一步實例為每天0.5至約25 mg每千克接受者體重。在合適的載體中之典型的局部劑量範圍為0.01-3% wt/wt。醫藥學上可接受的衍生物之有效劑量範圍可以基於待遞送的原構化合物的重量來計算。如果衍生物本身表現出活性，則可以如上所述使用衍生物的重量或通過熟習該項技術者已知的其他方式估計有效劑量。

包含本發明化合物的藥物組合物可以用於本文所述使用方法中。
使用方法

在另一態樣中，本發明提供了在細胞中抑制KRas G12C活性的方法，其包括使希望抑制KRas G12C活性的細胞與治療有效量之式(II)、式II-A或式II-B化合物、其醫藥學上可接受的鹽或者含有所述化合物或其醫藥學上可接受的鹽之醫藥組成物接觸。於一實施例中，該接觸為活體外接觸。於一實施例中，該接觸為活體內接觸。

如本文中所用，術語「接觸」係指將一活體外系統或一活體內系統中所指示的部分聚集在一起。例如，將KRas G12C與本文所提供化合物「接觸」係包含將本文所提供化合物投與帶有KRas G12C之個體或患者（諸如人類），以及(例如)將本文所提供化合物引入包含有具KRas G12C之細胞製劑或純化製劑的樣本中。

於一實施例中，使希望抑制KRas G12C活性的細胞與有效量的式(II)、式II-A或式II-B化合物接觸以負向調節KRas G12C活性。於其他實施例中，可使用治療有效量之醫藥學上可接受的鹽或者含有式(II)、式II-A或式II-B化合物之醫藥組成物。

通過負向調節KRas G12C的活性，設計本文所述方法以抑制由細胞內KRas G12C活性增強所引起之不期望的細胞增殖。根據特定的治療方案，細胞可以以單劑量或多劑量接觸，以實現所期望的KRas G12C負向調節。KRas G12C的共價修飾程度可(例如)藉由測量抑制KRas G12C活性的磷酸化ERK數量(包含下文實例B中所述的方法)來監測，以評估治療的有效性，並且劑量可以由主治醫師相應地調整。

在另一個態樣中，提供了在有需要之患者中治療癌症的方法，包括向該患者投與治療有效量之式(I)、式II-A或式II-B化合物、其醫藥學上可接受的鹽或者包括有所述化合物或其醫藥學上可接受的鹽之醫藥組成物。

本文提供的組成物及方法可用於在有需要之患者中治療KRas G12C相關癌症，包括向該患者投與治療有效量之式(II)、式II-A或式II-B化合物、其醫藥學上可接受的鹽或者包括有所述化合物或其醫藥學上可接受的鹽之醫藥組成物。於一實施例中，該KRas G12C相關癌症為肺癌。

本文提供的組成物及方法可用於治療多種癌症，包含諸如肺癌、前列腺癌、乳腺癌、腦癌、皮膚癌、子宮頸癌、睾丸癌等的腫瘤。更特別地，可通過本發明之組成物及方法治療的癌症包含(但不限於)諸如星形細胞瘤、乳腺癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、頭頸癌、肝細胞癌、喉癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、前列腺癌和甲狀腺癌和肉瘤的腫瘤類型。更具體地，這些化合物可用於治療：心臟：肉瘤（血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤）、黏液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤及畸胎瘤；肺：支氣管原惡性腫瘤（鱗狀細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺泡（小支氣管）惡性腫瘤、支氣管腺癌、肉瘤、淋巴瘤、軟骨缺陷瘤、中皮瘤；胃腸道：食道（鱗細胞惡性腫瘤、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤）、胃（惡性腫瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤）、胰臟（管腺癌、胰島素瘤、升糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、VIP瘤）、小腸（腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維瘤、纖維瘤）、大腸（腺癌、管狀腺瘤、絨毛腺瘤、缺陷瘤、平滑肌瘤）；生殖泌尿道：腎臟（腺癌、威爾姆氏瘤(腎胚細胞瘤)、淋巴瘤、白血病）、膀胱及尿道（鱗細胞惡性腫瘤、移行細胞惡性腫瘤、腺癌）、前列腺（腺癌、肉瘤）、睪丸（精細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎上皮癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質細胞惡性腫瘤、纖維瘤、腺維腺瘤、腺瘤樣腫瘤、脂肪瘤）；肝臟：肝腫瘤（肝細胞惡性腫瘤）、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；膽道：膽囊癌、壺腹狀惡性腫瘤、膽管癌；骨：骨原性肉瘤（骨肉瘤）、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤英氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、惡性淋巴瘤（網狀細胞肉瘤）、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞腫瘤、脊索瘤、骨軟骨瘤（骨軟骨外生性骨瘤）、良性脊索瘤、軟骨胚細胞瘤、軟骨黏液纖維瘤、骨樣骨瘤及巨細胞腫瘤；神經系統：顱骨（骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃瘤、畸形性骨炎）、腦膜（腦脊髓膜瘤、腦脊髓膜肉瘤、神經膠瘤病）、腦（星細胞瘤、神經管胚細胞瘤、神經膠瘤、室管膜瘤、胚細胞瘤(松果體瘤)、多形性神經膠質母細胞瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、神經韒瘤、視網膜胚細胞瘤、先天瘤）、脊髓神經纖維瘤、腦脊髓膜瘤、神經膠瘤、肉瘤；婦科：子宮(子宮內膜癌)、子宮頸(子宮頸癌、腫瘤前子宮頸病變(pre-tumor cervical dysplasia))、卵巢(卵巢癌(漿液性囊腺癌、黏液素囊腺癌、未分類的惡性腫瘤)、粒層細胞及韒細胞瘤、支持-間質細胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、惡性胚胎瘤、惡性畸胎瘤）、陰唇（鱗細胞惡性腫瘤、上皮內癌，腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤）、陰道（透明細胞惡性腫瘤、鱗細胞惡性腫瘤、葡萄形肉瘤（胚胎型橫紋肌肉瘤）、輸卵管（惡性腫瘤）；血液性：血液（骨髓性白血病(急性及慢性)、急性淋巴胚細胞白血病、慢性淋巴性白血病、骨髓增生病、多發性骨髓瘤、骨髓增生不良症候群）、霍金氏病、非霍金氏淋巴瘤(惡性淋巴瘤)；皮膚：惡性黑色素瘤、基底細胞惡性腫瘤、鱗細胞惡性腫瘤、卡波西氏肉瘤、黑痣發育不良母斑、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢瘤及牛皮癬；以及腎上腺：神經胚細胞瘤。於某些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌。

向患者給藥的濃度和途徑將根據待治療的癌症而變化。該等化合物、其醫藥學上可接受的鹽以及包括有這類化合物和鹽之醫藥組成物也可以與其他抗腫瘤化合物(例如化學療法)共同施用，或者與其他治療(例如輻射或手術介入)聯合使用，作為手術前或手術後的輔助。

本文也提供了用於療法中之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文也提供了用於治療癌症之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文也提供了用於抑制KRas G12C之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物。

本文也提供了用於治療KRas G12C相關疾病或病症之如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或其醫藥組成物。

本文亦提供如本文所定義之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽或溶劑合物用於製造供治療KRas G12C相關疾病或病症用之藥劑的用途。

本文亦提供在有需要之患者中治療癌症的方法，該方法包括：(a)判定該癌症是與KRas G12C突變相關（例如，KRas G12C相關癌症）（例如如使用管制機構批准(例如經FDA批准)的分析或套組所判定）；及(b)向該患者投與治療有效量之式I、式I-A、式I-B、式II、式II-A或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽，或其醫藥組成物。

熟習此項技術者將認識到，使用適合的已知及公認細胞及/或動物模型進行之活體內與活體外試驗預測測試化合物治療或預防所指定病症之能力。

熟習此項技術者將進一步認識到，可根據臨床及醫學技術中熟知的方法完成人類臨床試驗，包括在健康患者及/或罹患所指定病症之彼等者中進行之首用於人類的劑量範圍及功效試驗。
反應流程與實例

本發明化合物可從市售試劑且使用本文所述合成方法與反應流程來製備，或使用熟習此項技術者熟知的其他試劑及習用方法來製備。

例如，本發明化合物可根據通用反應流程I及II來製備。
通用反應流程

流程I

其中之L及Y為鍵、R² 為氫且R⁴ 為芳基或雜芳基之式I化合物係可根據流程I製備。在步驟A中，適當官能基化的二氫吡啶并嘧啶(1)係耦合至含有親核胺種類之雜環基，且另一個結合至保護基以得到化合物(2)。此耦合作用係於諸如二氯甲烷之溶劑中在諸如三乙胺或許尼希氏鹼(Hunig’s base)之鹼存在下繼續進行。在步驟B中，化合物(2)的Boc基團係使用本領域中已知的條件移除，例如在諸如二氯甲烷之溶劑中用三氟乙酸移除，以得到化合物(3)。在步驟C中，以鈀耦合方式使用適宜官能基化的芳基或雜芳基系統（例如芳基三氟甲磺酸鹽），在鈀催化劑（諸如在例如甲苯的溶劑中之Pd₂ DBA₃ /Xantphos）的存在下，用諸如第三丁醇鈉之鹼引入取代基R⁴ ，以得到化合物(4)。在步驟D中，化合物(4)的環X保護基係藉由Pd/C的氫解反應，在H₂ 存在下於諸如EtOH/THF之極性溶劑中來移除，以得到化合物(5)。在最後的步驟中，引入E, R¹ 以得到式I化合物，例如藉由用具有式Cl–C(O)C(R^A )C(R^B )_p or Cl–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p 之醯氯、或具有式C(R^B )_p C(R^A )C(O)OC(O)C(R^A )C(R^B )_p 之酐處理，其中R^A 、R^B 及p係如式I所定義。例如，在R¹ 為丙烯醯基的情況下，此反應(例如)於諸如二氯甲烷之溶劑中在丙烯醯氯或丙烯醯酐及諸如許尼希氏鹼之鹼存在下繼續進行。在一些情況下，化學種R⁴ 也將含有保護基，其可在合成程序的後續步驟中移除。

以上流程I 所顯示及描述之化合物(1)、(2)、(3)、(4)及(5)有用於做為用於製備式I化合物之中間物，且提供做為本發明之另外的態樣。

流程II

其中之L為一鍵、–Y-R² 不是氫且R⁴ 為芳基或雜芳基之式I化合物係可根據流程II製備。在步驟A中，適當官能基化的二氫吡啶并嘧啶(6)係耦合至含有親核胺種類之雜環基，且另一個結合至保護基以得到化合物(7)。此耦合作用係於諸如二氯甲烷之溶劑中在諸如三乙胺或許尼希氏鹼之鹼存在下繼續進行。在步驟B中，藉由親核劑（例如於極性溶劑(諸如二噁烷)中的(S)-1-(二甲基胺基-丙-2-醇)）取代氯而引入取代基–Y-R² ，以得到化合物(8)。在步驟C中，Boc基團係使用本領域中已知的條件移除，例如在諸如二氯甲烷之溶劑中用三氟乙酸移除，以得到化合物(9)。在步驟D中，以鈀耦合方式使用適宜官能基化的芳基或雜芳基系統（例如芳基三氟甲磺酸鹽），在鈀催化劑（諸如在例如甲苯的溶劑中之Pd₂ DBA₃ /Xantphos）的存在下，用諸如第三丁醇鈉之鹼引入取代基R⁴ ，以得到化合物(10)。在步驟E中，環X保護基係藉由Pd/C的氫解反應，在H₂ 存在下於諸如EtOH/THF之極性溶劑中來移除，以得到化合物(11)。在步驟F中，引入R¹ 以得到式I化合物，例如藉由用具有式Cl–C(O)C(R^A )C(R^B )_p or Cl–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p 之醯氯、或具有式C(R^B )_p C(R^A )C(O)OC(O)C(R^A )C(R^B )_p 之酐處理，其中R^A 、R^B 及p係如式I所定義。例如，在R¹ 為丙烯醯基的情況下，此反應(例如)於諸如二氯甲烷之溶劑中在丙烯醯氯或丙烯醯酐及諸如許尼希氏鹼之鹼存在下繼續進行。在一些情況下，化學種R⁴ 也可含有保護基，其可在合成程序的後續步驟中移除。

以上流程2所顯示及描述之化合物(6)、(7)、(8)、(9)、(10)及(11)有用於做為用於製備式I、式I-A或式I-B化合物之中間物，且提供做為本發明之另外的態樣。

因此，也提供了一種製備式I化合物的方法，包括：

(a)對於其中Y為一鍵且R² 為氫之式I化合物，使式5化合物

其中X、R³ 及R⁴ 係如式I所定義，與具有式Cl–C(O)C(R^A )C(R^B )_p or Cl–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p 之醯氯、或具有式C(R^B )_p C(R^A )C(O)OC(O)C(R^A )C(R^B )_p 之酐於鹼存在下反應，其中R^A 、R^B 及p係如式I所定義；或者

(b)對於其中L為一鍵且–Y-R² 不是氫之式I化合物，使式(11)化合物

其中L為一鍵，–Y-R² 不是氫，且X、R³ 及R⁴ 係如式I所定義，與具有式Cl–C(O)C(R^A )C(R^B )_p or Cl–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p 之醯氯、或具有式C(R^B )_p C(R^A )C(O)OC(O)C(R^A )C(R^B )_p 之酐於鹼存在下反應，其中R^A 、R^B 及p係如式I所定義；且

可選地形成其鹽。

本發明化合物可具有一或多個旋光性中心且可合成為立體異構體混合物，在空間中的原子排列不同的具有相同構造的異構體。所述化合物可以做為混合物使用，或者可以使用市售試劑和本領域技術人員熟知之用於分離立體異構體及對映異構體的常規方法（例如，根據製造商的說明使用CHIRALPAK® (Sigma-Aldrich公司)或CHIRALCEL® (Diacel公司)旋光性色譜HPLC管柱）分離各個組分/異構體。或者，可以使用光學純的旋光性試劑及中間物來合成本發明化合物以製備個別異構體或對映異構體。除非另外指明，所有旋光性（對映異構體及非對映異構體）及外消旋形式都在本發明的範圍內。除非另外指明，每當說明書（包括申請專利範圍）引用本發明的化合物時，術語「化合物」應理解為包括所有旋光性（對映異構體及非對映異構體）及外消旋形式。

以下實例係意欲進一步說明本發明的某些實施例，而不是要限制本發明的範圍。
中間物1

三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯

將三氟甲烷磺酸3-羥基萘-1-基酯(13.101 g, 44.831 mmol)溶解於二氯甲烷(100 mL)中且在0°C下攪拌。向此溶液添加氯(甲氧基)甲烷(3.7456 ml, 49.315 mmol)及許尼希氏鹼(Hunig’s base) (11.745 mL, 67.247 mmol)。在0°C下將反應物攪拌4小時(h)。用1M HCl使反應物分溶，且用飽和碳酸氫鈉洗滌。合併的有機層係經硫酸鎂乾燥且真空濃縮。將濃縮物裝填在使用二氯甲烷的120克的RediSep® Gold矽膠管柱上且用正相層析法（CombiFlash®, 0%-20%乙酸乙酯/己烷做為溶離液）純化，以得到三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯(11.785 g, 35.045 mmol, 78.171 %產率)。
中間物2

2-溴-7-(甲氧基甲氧基)萘

向7-溴萘-2-醇(2.0 g, 9.0 mmol)之二甲基乙醯胺(40 mL)溶液添加氯(甲氧基)甲烷(1.4 g, 18 mmol)及碳酸銫(5.8 g, 18 mmol)，且在室溫下將反應混合物攪拌隔夜。用水稀釋反應物且用乙酸乙酯洗滌水層。合併的有機層係經水及鹽水洗滌，經硫酸鎂乾燥且真空濃縮。藉由使用5-50%乙酸乙酯/己烷做為溶離液的正相層析法來純化粗製物，以得到2-溴-7-(甲氧基甲氧基)萘(1.0 g, 3.7 mmol, 42 %產率)。

中間物3

2-溴-1-氟-3-(甲氧基甲基)苯

在室溫於氮氣下向於22 mL四氫呋喃中的2-溴-3-氟苯酚(1422 mg, 7.445 mmol)攪拌溶液逐份添加未攙水之呈固體的NaH (327.6 mg, 8.190 mmol)。在15分鐘之後，已形成溶液。藉由針筒添加氯(甲氧基)甲烷(678.6 µL, 8.934 mmol)。在攪拌2小時之後，用飽和氯化銨溶液使反應物淬滅，接著使其分溶於乙酸乙酯(30 mL)與水(30 mL)之間。合併的有機層係經分離，用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物裝入最少量的二氯甲烷中，裝填於用己烷預濕之40克RediSep®管柱上且用乙酸乙酯/己烷梯度(0%至20%乙酸乙酯)溶離。將含有產物之分餾物合併及濃縮，以得到呈澄清油狀物之產物(1.45g, 83%)。
中間物4

2-溴-1-氟-4-(甲氧基甲氧基)苯

在室溫於氮氣下向於5.1 mL四氫呋喃中的3-溴-4-氟苯酚(327 mg, 1.71 mmol)攪拌溶液逐份添加未攙水之呈固體的NaH (75.3 mg, 1.88 mmol)。在15分鐘之後，已形成溶液。藉由針筒添加氯(甲氧基)甲烷(156 µL, 2.05 mmol)。在攪拌2小時之後，用飽和氯化銨溶液使反應物淬滅，接著使其分溶於乙酸乙酯與水之間。合併的有機層係經用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物裝入最少量的二氯甲烷中，裝填於用己烷預濕之24克RediSep®管柱上且用乙酸乙酯/己烷梯度(0%至20%乙酸乙酯)溶離。將含有產物之分餾物合併及濃縮，以得到呈澄清油狀物之產物(120 mg, 29.8%)。
中間物5

4-溴-5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑

向冷卻至0°C之4-溴-5-甲基-1H-吲唑(0.7 g, 3.3 mmol)之二甲基乙醯胺(30 mL)溶液分批添加NaH (0.19 g, 4.6 mmol)且用氮氣沖淨反應混合物。攪拌反應物20分鐘，接著添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷(0.83 g, 5.0 mmol)且攪拌反應物2小時同時升溫至室溫。藉由傾注入水使反應物淬滅，且萃取水層於乙酸乙酯中。合併的有機層係以水及鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。粗製物係藉由層析法使用10-50%乙酸乙酯/己烷做為溶離液來純化，以得到4-溴-5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(0.87 g, 79%)。
中間物6

(R)-1-(吡咯啶-1-基)丙-2-醇

在一密封管中，將R-(+)-環氧丙烯(3.69 mL, 52.7 mmol)冷卻至-78°C且接著用無水二甲胺鼓泡數分鐘。將反應混合物加熱至70°C持續16小時。將反應物冷卻且真空濃縮20分鐘，以得到(R)-1-(吡咯啶-1-基)丙-2-醇(5.35 g, 41.4 mmol, 98.2%產率)。
中間物7

(R)-1-嗎啉丙-2-醇

在一密封管中，將R-(+)-環氧丙烯(2.111 mL, 30.13 mmol)及嗎啉(1.490 mL, 17.22 mmol)加熱至70°C持續20小時。將反應物冷卻且真空濃縮，以得到(R)-1-嗎啉丙-2-醇(2.47 g, 17.01 mmol, 98.80%產率)。
中間物8

(R)-1-(二甲基胺基)丁-2-醇

在一密封管中，將R-(+)-環氧丙烯(4.00 g, 55.5 mmol)及二甲胺(1.00 g, 22.2 mmol)加熱至65°C持續18小時。將反應物冷卻且真空濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到(R)-1-(二甲基胺基)丁-2-醇(1.38 g, 11.8 mmol, 53.1%產率)。
中間物9

(R)-1-((R)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇

在一密封管中，將(R)-3-甲氧基吡咯啶鹽酸鹽(1.00 g, 7.27 mmol)、TEA (2.03 mL, 14.5 mmol)及R-(+)-環氧丙烯(1.27 mL, 18.2 mmol)加熱至65°C持續18小時。將反應物冷卻且真空濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到(R)-1-((R)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇(775 mg, 4.87 mmol, 67.0%產率)。
中間物10

(R)-1-((S)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇

在一密封管中，將(S)-3-甲氧基吡咯啶鹽酸鹽(1.00 g, 7.27 mmol)、TEA (2.03 mL, 14.5 mmol)及R-(+)-環氧丙烯(1.27 mL, 18.2 mmol)加熱至65°C持續18小時。將反應物冷卻且真空濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到(R)-1-((S)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇(781 mg, 4.90 mmol, 67.5%產率)。
中間物11

(R)-1-((S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-基)丙-2-醇

在一密封管中，將R-(+)-環氧丙烯(0.609 mL, 8.69 mmol)及(S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶(1.00 g, 4.97 mmol)加熱至70°C持續20小時。將反應物冷卻且真空濃縮，以得到(R)-1-((S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-基)丙-2-醇(1.29 g, 4.20 mmol, 84.6%產率)。
中間物12

2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯

在0°C於氮氣下向氯化鋰(246 mg, 5.81 mmol)及硼氫化鋰(126 mg, 5.81 mmol)之乙醇(9 mL)懸浮液，逐滴添加4-甲基哌嗪-1,2-二甲酸1-(第三丁基)2-甲酯(750 mg, 2.90 mmol)之無水THF (6 mL)溶液。將反應物攪拌隔夜形成白色沉澱物。將沉澱物過濾且用乙醇洗滌。將合併的濾液及有機萃取物濃縮，以得到白色殘餘物且用乙酸乙酯萃取。合併的有機層係經飽和氯化鈉溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法使用等度之於DCM中的10% MeOH及0.2% NH₄ OH來純化，以得到2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(104 mg, 0.452 mmol, 15.6%產率)。
中間物13

(S)-2-(2-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇

將在4-mL小管中的(S)-2-甲基哌啶(100 mg, 1.01 mmol)、2-溴乙醇(78 μL, 139 mg, 1.11 mmol, 1.1 eq.)、碘化鈉(151 mg, 1 eq.)、碳酸鉀(418 mg, 3 eq.)及乙腈(1 mL)混合物用氮氣沖淨，密封且在室溫下攪拌2天。使反應混合物分溶於乙酸乙酯(15 mL)與水(2 mL)之間。乙醚層係用鹽水(2 mL)洗滌，用TFA酸化且在高真空下乾燥2天。以乙醚(3 mL)洗滌殘餘物，用水(0.5 mL)稀釋且用10M NaOH (0.2 mL)鹼化。分離各層且小心將上層經NaOH乾燥。於氮氣下使乙醚溶液蒸發，以得到呈無色油狀物之粗製(S)-2-(2-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇(100 mg, 0.698 mmol, 69.24%產率)。
中間物14

(R)-2-(2-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用(R)-2-甲基哌啶(99 mg, 1 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物15

(S)-2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用(S)-3-甲氧基哌啶(173 mg, 1.50 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物16

(R)-2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用R-3-甲氧基哌啶(173 mg, 1.50 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物17

3-(1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)丙-1-醇

向一小管添加高嗎啉(0.250 g, 2.472 mmol)、乙腈(4.943 mL, 2.472 mmol)及3-溴-1-丙醇(0.2459 mL, 2.719 mmol)。添加碳酸鉀 (0.6832 g, 4.943 mmol)且將混合物升溫至50°C並攪拌6小時。將混合物冷卻至環境溫度，用DCM稀釋，過濾且用DCM洗滌所收集的固體。將濾液真空濃縮且經由管柱層析法(Biotage Isolera, 12克的Isco RediSep Gold, 10-20% MeOH/DCM及0.2% NH₄ OH)純化粗製油狀物，以得到呈無色油狀物之3-(1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)丙-1-醇(0.272 g, 1.708 mmol)。
中間物18

3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇

根據中間物17的方法合成，使用(1S,4S)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷(0.250 g, 2.522 mmol)代替高嗎啉。
中間物19

2-(4-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用4-甲氧基哌啶(173 mg, 1.50 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物20

2-(4,4-二氟哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用4,4-二氟哌啶鹽酸鹽(173 mg, 1.50 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物21

(S)-2-(3-氟哌啶-1-基)乙-1-醇

根據中間物13的方法合成，使用S-3-氟哌啶鹽酸鹽(209 mg, 1.50 mmol)代替(S)-2-甲基哌啶。
中間物22

4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(甲基亞磺醯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

步驟A：4-羥基-2-(甲硫基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：在25°C於氮氣下向3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁基4-乙酯(50.0 g, 184 mmol, 1.00 eq)之MeOH (1.00 L)攪拌溶液添加NaOMe (49.8 g, 921 mmol, 5.00 eq)，隨後添加呈固體之2-甲異硫脲(62.4 g, 331 mmol, 1.80 eq, H₂ SO₄ )。將反應混合物在25°C下攪拌16小時。用HCl (2 M)調整該反應混合物至pH 5，且在減壓環境下將混合物濃縮以移除MeOH。使殘餘物懸浮於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中且快速攪拌。將懸浮液過濾且收集白色固體。將濾液分離且用水(1 × 300 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌有機層。合併的有機層係經分離，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈白色固體之4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 138 mmol, 75.4%產率, 81.0%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 298.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C下向4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 171 mmol, 1.00 eq)之DCM (500 mL)攪拌溶液添加DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL, 2.00 eq)，隨後於氮氣下添加三氟甲烷磺酸酐(72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL, 1.50 eq)。立即會形成褐色溶液。在25°C下攪拌16小時之後，將反應物濃縮以得到褐色油狀物。該褐色油狀物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1:0至10:1)來純化，以得到呈黃色固體之2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(46.0 g, 107 mmol, 62.4%產率)。ESI MS m/z 430.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：向2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(46.0 g, 107 mmol, 1.00 eq)之DMF (500 mL)攪拌溶液添加DIEA (27.7 g, 214 mmol, 37.4 mL, 2.00 eq)，隨後添加哌嗪-1-甲酸苯甲酯(25.9 g, 117 mmol, 22.7 mL, 1.10 eq)。於氮氣環境下將反應物加熱至100°C持續1小時。將反應混合物傾注入乙酸乙酯(300 mL)中，用H₂ O (300 mL × 3)及鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1:0至5:1)來純化，以得到呈白色固體之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 96.9 mmol, 90.5%產率, 92.0 %純度)。ESI MS m/z 500.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(25.0 g, 50.0 mmol, 1.00 eq)之DCM (50.0 mL)溶液添加TFA (85.6 g, 750 mmol, 55.6 mL, 15.0 eq)。在25°C下攪拌1小時之後，將反應混合物在減壓環境下濃縮。將殘餘物溶解於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中且快速攪拌。用Na₂ CO₃ 調整該混合物至pH 8。有機層係以水(1 × 300 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(19.0 g, 46.6 mmol, 93.2%產率, 98.0%純度)。ESI MS m/z 400.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於二噁烷(300 mL)中之3-苯甲氧基-1-溴-萘(16.3 g, 52.1 mmol, 1.30 eq)、4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 g, 40.1 mmol, 1.00 eq)、Cs₂ CO₃ (32.6 g, 100 mmol, 2.50 eq)、Pd₂ (dba)₃ (5.50 g, 6.01 mmol, 0.15 eq)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (3.74 g, 8.01 mmol, 0.20 eq)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次。在85°C於氮氣環境下攪拌混合物5小時。藉由在0°C下添加水(200 mL)使反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 10/1至5/1)來純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 g, 22.8 mmol, 56.9%產率, 90.0%純度)。ESI MS m/z 632.5 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C於氮氣下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(8.00 g, 12.7 mmol, 1.00 eq)之DCM (200 mL)攪拌溶液添加m-CPBA (2.73 g, 12.7 mmol, 80.0%純度, 1.00 eq)。在0°C於氮氣環境下攪拌2小時之後，藉由在0°C下添加Na₂ S₂ O₃ (10.0 mL)使反應混合物淬滅，用水(100 mL)稀釋且DCM (200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 1/0至10/1)來純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.50 g, 4.92 mmol, 38.8%產率, 91.0%純度)。ESI MS m/z 648.5 [M+H]⁺ 。
中間物23

(R)-1-(4-(2-羥丙基)哌嗪-1-基)乙-1-酮

步驟A：1-[4-[(2R )-2-羥丙基]哌嗪-1-基]乙酮：將(2R )-2-甲基環氧乙烷(1.00 g, 17.2 mmol, 1.20 mL, 1.00eq )及1-哌嗪-1-基乙酮(8.00 g, 62.4 mmol, 3.62eq )放入微波管中。將密封的微波管在微波下加熱至150°C持續1小時。將混合物溶解於DCM (80.0 mL)中，添加(Boc)₂ O (3.62 eq,13.6 g)且在20°C下攪拌1小時。殘餘物係藉由管柱層析法(DCM/MeOH 100/1至10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之1-[4-[(2R )-2-羥丙基]哌嗪-1-基]乙酮(3.80 g, 13.5 mmol, 78.2 %產率, 66.0 %純度)。
中間物24

1-(苯甲氧基)-3-溴-5-環丙苯

步驟A：1-苯甲氧基-3,5-二溴-苯：向於MeCN (30.0 mL)中之3,5-二溴苯酚(1.50 g, 5.95 mmol, 1.00eq )及K₂ CO₃ (2.47 g, 17.9 mmol, 3.00eq )混合物添加溴甲苯(benzyl bromide)(1.07 g, 6.25 mmol, 742 µL, 1.05eq )，在80°C下攪拌該反應混合物2小時。將反應混合物過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化，以得到呈無色油狀物之1-苯甲氧基-3,5-二溴苯(1.60 g, 4.68 mmol, 78.6%產率)。

步驟B：1-苯甲氧基-3-溴-5-環丙苯：向於H₂ O (4.00 mL)及二噁烷(20.0 mL)中之1-苯甲氧基-3,5-二溴苯(1.20 g, 3.51 mmol, 1.00eq )及環丙基硼酸(392 mg, 4.56 mmol, 1.30eq )混合物添加Pd(dppf)Cl₂ (513 mg, 702 µmol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (2.29 g, 7.02 mmol, 2.00eq )。在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物2小時。將反應混合物添加至水(20 mL)且用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1:1)純化，以得到呈無色油狀物之1-苯甲氧基-3-溴-5-環丙基-苯(270 mg, 890 µmol, 25.4%產率)。
中間物25

4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

步驟A：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C下向於THF (100 mL)中之3-嗎啉丙-1-醇(5.46 g, 37.6 mmol, 2.00eq )混合物分批添加NaH (2.26 g, 56.4 mmol, 60.0%純度, 3.00eq )，在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時之後，添加4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(10.0 g, 18.8 mmol, 1.00eq )之THF (100 mL)溶液，且在0°C於N₂ 下攪拌該反應混合物1.5小時。將反應混合物傾注入NH₄ Cl水溶液(300 mL)，且用DCM (2 × 200 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=50:1至10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(7.70 g, 12.8 mmol, 67.8%產率, 98.8%純度)。ESI MS m/z 597.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於DCM (80.0 mL)中之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(7.70 g, 12.9 mmol, 1.00eq )混合物添加TFA (119 g, 1.04 mol, 76.9 mL, 80.6eq )，在15°C下攪拌該反應混合物1小時。將反應混合物濃縮，接著用DCM (100 mL)稀釋且用NaOH水溶液調整至pH 8。有機層係經分離，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(6.00 g, 11.2 mmol, 86.9%產率, 92.8%純度)。ESI MS m/z 497.4 [M+H]⁺ 。
中間物26

4-(苯甲氧基)-2-溴-1-氟苯

向3-溴-4-氟苯酚(4.00 g, 20.9 mmol, 1.00eq )及K₂ CO₃ (8.68 g, 62.8 mmol, 3.00eq )之ACN (80.0 mL)溶液添加溴甲苯(3.65 g, 21.4 mmol, 2.54 mL, 1.02eq )，且在60°C下攪拌該反應混合物2小時。該反應混合物係經過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚:乙酸乙酯；梯度自1:0至10:1)純化，以得到呈黃色固體之4-苯甲氧基-2-溴-1-氟-苯(5.02 g, 17.0 mmol, 81.0 %產率, 95%純度)。
中間物27

2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙-1-醇

步驟A：3-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在-40°C於氮氣環境下向3-羥基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(10.0 g, 53.4 mmol, 1.00eq )之DCM (150.00 mL)溶液添加三氟化二乙基胺基硫(DAST) (12.9 g, 80.1 mmol, 10.6 mL, 1.50eq )。在-40°C下攪拌2小時之後，將混合物升溫至20°C且攪拌16小時。將混合物傾注入5%碳酸氫鈉水溶液(200 mL)且用二氯甲烷(2 × 100 mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯為100:1至5:1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之3-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.30 g, 22.7 mmol, 42.6 %產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 5.27 (t,J = 3.6 Hz, 0.5H), 5.13 (t,J = 3.6 Hz, 0.5H), 3.77 -3.38 (m, 4H), 2.26 - 2.15 (m, 1H), 2.08 - 1.85 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。

步驟B：3-氟吡咯啶：在0°C下向3-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.30 g, 22.7 mmol, 1.00eq )之DCM (50.00 mL)溶液逐滴添加HCl/二噁烷(4 M, 35.0 mL, 6.16eq )。將該混合物升溫至20°C且攪拌1小時。將反應物真空濃縮。將殘餘物用二異丙醚(20 mL)濕磨且將沉澱物過濾及真空乾燥，以得到呈白色固體之3-氟吡咯啶(2.70 g, 21.5 mmol, 94.6%產率, HCl)。¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 5.51 (t,J = 3.6 Hz, 0.5H), 5.38 (t,J =3.6 Hz, 1H), 3.66 -3.27 (m, 5H), 2.45 - 2.12 (m, 2H)。

步驟C：2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯：將3-氟吡咯啶(2.70 g, 21.5 mmol, 1.00eq , HCl)之DCM (27.00 mL)懸浮液冷卻至0° C。添加三乙胺(5.44 g, 53.8 mmol, 7.45 mL, 2.50eq )及2-溴乙酸甲酯(3.62 g, 23.7 mmol, 2.23 mL, 1.10eq )且在20°C下攪拌反應混合物16小時。將反應混合物用CH₂ Cl₂ (100 mL)及水稀釋(50 mL)。有機層用5%檸檬酸水溶液(1 × 50 mL)洗滌。以飽和碳酸鈉水溶液(20 mL)使水層鹼化，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係經硫酸鈉乾燥且真空濃縮，以得到2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯(2.20 g, 13.7 mmol, 63.5 %產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 5.22 - 5.02 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.35 (s, 2H), 3.07 - 2.93 (m, 1H), 2.91 - 2.77 (m, 2H), 2.67 (dt,J = 5.2, 8.4 Hz, 1H), 2.21 - 1.93 (m, 2H)。

步驟D：2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙醇：在0°C下向LiAlH₄ (706 mg, 18.6 mmol, 1.50eq )之THF (20 mL)溶液逐滴添加2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯(2.00 g, 12.4 mmol, 1.00eq )之THF (10 mL)溶液。將該混合物升溫至20°C且攪拌3小時。用飽和硫酸鈉水溶液(1 mL)使混合物淬滅。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。產物係經矽膠層析法使用於DMC中之5% MeOH純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙醇(1.20 g, 9.01 mmol, 72.6 %產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 5.28 - 5.05 (m, 1H), 3.68 -3.61 (m, 2H), 2.99 - 2.73 (m, 4H), 2.72 - 2.67 (m, 2H), 2.58 - 2.45 (m, 1H), 2.28 - 1.97 (m, 2H)。
中間物28

哌嗪-1,3-二甲酸1-(第三丁基)3-甲酯

步驟A：哌嗪-2-甲酸甲酯：向於MeOH (50.0 mL)中之哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(5.0 g, 22.6 mmol, 1.00 eq)混合物添加HCl/二噁烷(4.0 M, 134 mL)。將反應混合物脫氣且用氮氣沖淨3次，在25°C於氮氣環境下攪拌該混合物12小時。將反應混合物在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈白色固體之哌嗪-2-甲酸甲酯(4.89 g, 2HCl，粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟B：哌嗪-1,3-二甲酸1-(第三丁基)3-甲酯：向哌嗪-2-甲酸甲酯(4.30 g, 粗製)及TEA (8.02 g, 79.2 mmol, 11.0 mL)之MeOH (50.0 mL)溶液添加二碳酸二第三丁酯(4.32 g, 19.8 mmol, 4.55 mL)。在25°C下攪拌12小時之後，將反應混合物過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 1:0至20:1)純化，以得到呈無色油狀物之哌嗪-1,3-二甲酸1-(第三丁基)3-甲酯(4.80 g, 19.7 mmol, 兩個步驟(two steps), 99.0 %產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 4.10 -3.85 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.71 -3.65 (m, 1H), 3.47 -3.38 (m, 1H), 3.10 - 2.98 (m, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 1H), 2.17 (s, 1H), 1.46 (s, 9H)。
中間物29

4-溴萘-2-醇

步驟A：2,4-二溴萘-1-胺：在環境溫度下向Br₂ (246 g, 1.54 mol, 79.3 mL, 2.18eq )之AcOH (750 mL)溶液添加萘-1-胺(101 g, 705 mmol, 99.0 mL, 1.00eq )之AcOH (500 mL)溶液，在70°C下攪拌該反應物1小時。在室溫下冷卻該反應混合物且過濾。以AcOH (300 mL)洗滌濾餅，接著添加至20% NaOH (1.2 L)水溶液。攪拌該混合物20分鐘且過濾。分離出的固體係以水(1 L)洗滌且真空乾燥，以得到呈灰色固體之2,4-二溴萘-1-胺(200 g, 664 mmol, 94.2%產率)。ESI MS m/z 301. 9 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉：在5-8 °C下向2,4-二溴萘-1-胺(60.0 g, 199 mmol, 1.00eq )於AcOH (900 mL)及丙酸(150 mL)中之溶液逐份添加NaNO₂ (16.5 g, 239 mmol, 13.0 mL, 1.20eq )歷時30分鐘，接著在5°C至8°C下攪拌該反應混合物30分鐘。將反應混合物傾注入冰水(4000 mL)中，收集所得固體且用水(2 × 50 mL)洗滌，以得到呈灰色固體之4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉(150 g，濕粗製物)，其直接用於下個步驟中。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.12 - 8.10 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H)。

步驟C：4-溴萘-2-醇：在13-15 °C下向4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉(100 g, 402 mmol, 1.00eq )之EtOH (2.00 L)溶液逐份添加NaBH₄ (30.4 g, 803 mmol, 2.00eq )歷時1小時，接著在15°C至18°C下攪拌該反應混合物3小時。將反應物過濾且濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (1000 mL)中且用水(500 mL × 2)洗滌。有機相係經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由矽膠管柱層析法純化，用二乙醚/乙酸乙酯(60:1至10:1)溶離。分離出的產物係進一步藉由逆相式HPLC純化，以得到呈灰色固體之4-溴萘-2-醇(40.0 g, 139 mmol, 17.3%產率, 77.4%純度)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.07 – 8.05 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.60 – 7.58 (d,J =7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 3H), 7.07 (s, 1H)。

步驟D：3-苯甲氧基-1-溴-萘：將於MeCN (500 mL)中之4-溴萘-2-醇(30.0 g, 134 mmol, 1.00eq )、溴甲苯(25.3 g, 148 mmol, 17.6 mL, 1.10eq )及K₂ CO₃ (55.7 g, 403 mmol, 3.00eq )混合物加熱至80°C持續1小時。將反應混合物過濾且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由矽膠管柱層析法純化，用二乙醚/乙酸乙酯(100:1至60:1)溶離以得到呈黃色油狀物之3-苯甲氧基-1-溴-萘(40.0 g, 128 mmol, 95 %產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.19 – 8.17 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.75 – 7.32 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.63 (d,J =2.4 Hz,1H), 7.52 – 7.37 (m, 7H), 7.23 – 7.21 (d,J =2.0 Hz,1H), 5.2 (s, 2H)。
中間物30

三氟甲烷磺酸3-甲氧基萘-1-基酯

步驟A：3-甲氧基萘-1-醇：在0°C下向萘-1,3-二醇(3.00 g, 18.7 mmol, 1.00 eq)之MeOH (60.0 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 60.0 mL, 12.8 eq)。在25°C下攪拌該混合物60小時。在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=10:1至5:1)純化，以得到呈褐色固體之3-甲氧基萘-1-醇(2.10 g, 12.1 mmol, 64.4%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ -d₆ ) δ = 8.10 - 8.08 (d,J =8.4 Hz, 1H).7.73 - 7.71 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.45(m, 1H), 7.38 - 7.35(m, 1H), 6.80 - 6.79 (d,J =2.0 Hz, 1H), 6.56 - 6.55 (d,J =2.4 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H)。

步驟B：三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯：在0°C下向3-甲氧基萘-1-醇(2.10 g, 12.0 mmol, 1.00 eq)之DCM (40.0 mL)溶液添加DIEA (7.79 g, 60.3 mmol, 10.5 mL, 5.00 eq)及三氟甲烷磺酸酐(5.10 g, 18.1 mmol, 2.98 mL, 1.50 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。以DCM (30 mL)及水(10 mL)稀釋混合物且用DCM (20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=20:1至10 :1)純化，以得到呈褐色油狀物之三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯(3.00 g, 8.52 mmol, 70.7 %產率, 87.0 %純度)。ESI MS m/z 307.1 [M+H]⁺ 。
中間物31

7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶

步驟A：7-苯甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇：向EtOH (600 mL)分批添加Na (5.56 g, 241 mmol, 5.73 mL, 2.40 eq)。攪拌該反應混合物1小時。向該混合物添加1-苯甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(30.0 g, 100 mmol, 1.00 eq, HCl)及尿素(14.5 g, 242 mmol, 13.0 mL, 2.40 eq)。在75°C下攪拌反應混合物36小時，接著在真空下移除溶劑。將殘餘物溶解於水(50 mL)中且用HCl (120 mL, 2M)酸化。藉由過濾收集從該溶液沉澱出的白色固體。將濾餅在真空下乾燥，以得到呈白色固體之7-苯甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(22.0 g, 83.8 mmol, 83.2 %產率, 98 %純度)。¹ HNMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ = 10.97 (br s, 1H), 10.66 (br s, 1H), 7.55 - 6.95 (m, 5H), 3.81 -3.50 (m, 2H), 3.26 - 2.91 (m, 2H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.34 - 2.09 (m, 2H)。

步驟B：7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：向DIEA (30.1 g, 233 mmol, 40.7 mL, 3.00 eq)之POCl₃ (330 g, 2.15 mol, 200 mL)溶液添加7-苯甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(20.0 g, 77.7 mmol, 1.00 eq)。在110°C下攪拌該反應混合物5小時。將反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM (400 mL)中且傾注入飽和NaHCO₃ (200 mL)中。用DCM (2 × 400 mL)萃取混合物。合併的有機層係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:DCM=10:1至0 :1)純化，以得到呈褐色油狀物之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶 (7.70 g, 26.2 mmol, 33.7 %產率)。¹ HNMR (300 MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 – 7.28 (m, 5H), 3.73 (s, 2H), 3.66 (br s, 2H), 2.84 (br s, 4H)。
中間物32

4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-(甲磺醯基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H )-甲酸第三丁酯

步驟A：4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在25°C於氮氣下向3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁基4-乙酯(44.0 g, 162 mmol, 1.00eq )之MeOH (1.00 mL)攪拌溶液以針筒添加NaOMe (35.0 g, 649 mmol, 4.00eq )之MeOH (600 mL)溶液，隨後添加2-甲異硫脲(61.1 g, 324 mmol, 2.00eq , H₂ SO₄ )。在25°C下攪拌16小時之後，將反應混合物在減壓環境下濃縮以移除MeOH。將殘餘物懸浮於500 mL的乙酸乙酯及500 mL的水中並快速攪拌。用HCl (2 M)調整該反應混合物至pH 5。將沉澱物過濾且白色固體係以乙酸乙酯洗滌且真空乾燥，以得到呈白色固體之4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(33.0 g, 103 mmol, 63.8%產率, 93.2 %純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 4.19 (s, 2 H), 3.49 (br s, 2 H), 2.46 (s, 3 H), 2.35 (br t,J = 5.2 Hz, 2 H), 1.42 (s, 9 H)。

步驟B：2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C於氮氣下向4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(15.0 g, 50.4 mmol, 1.00eq )之DCM (200 mL)攪拌懸浮液以針筒添加DIEA (26.1 g, 202 mmol, 35.2 mL, 4.00eq )且隨後添加三氟甲烷磺酸酐(28.5 g, 101 mmol, 16.6 mL, 2.00eq )。立即會形成褐色溶液。在25°C下攪拌該反應混合物12小時。反應混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1:0至10:1)純化，以得到呈白色固體之2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(16.7 g, 35.7 mmol, 70.9%產率, 91.9 %純度)。ESI MS m/z 374.0 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：向2-甲基氫硫基-4-(三氟甲基磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(16.7 g, 38.9 mmol, 1.00eq )之DMF (100 mL)攪拌溶液添加DIEA (10.0 g, 77.9 mmol, 2.00eq )及哌嗪-1-甲酸苯甲酯(9.41 g, 42.8 mmol, 1.10eq )。將反應物加熱至100°C且在氮氣環境下攪拌1小時。該反應混合物係以水(150 mL)稀釋且用HCl (2 M)調整該反應混合物至pH 5，且用DCM (3× 200 mL)萃取。合併的有機層係以飽和NaHCO₃ (3 × 150 mL)、鹽水(3 × 150 mL)及H₂ O (3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(18.1 g, 36.2 mmol, 93.0%產率, 94.1 %純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 500.1 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C於氮氣下向4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(14.4 g, 28.9 mmol, 1.00 eq)之DCM (150 mL)攪拌溶液添加呈間氯過氧苯甲酸固體(17.4 g, 101 mmol, 3.50 eq)。在0°C於氮氣環境下攪拌2小時之後，該反應混合物係以水(300 mL)洗滌且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該反應混合物至pH 8，且用DCM (3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 10:1至1:2)純化，以得到呈白色固體之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(11.0 g, 19.7 mmol, 68.6 %產率, 95.4 %純度)。ESI MS m/z 532.1 [M+H]⁺ 。
中間物33

(1-溴異喹啉-3-基)胺基甲酸第三丁酯

步驟A：在70°C下攪拌1-溴異喹啉-3-胺(400 mg, 1.79 mmol, 1.00 eq)及第三丁氧基羰基第三丁基碳酸酯(3.91 g, 17.9 mmol, 4.12 mL, 10.0 eq)之混合物16小時。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二乙醚/乙酸乙酯= 5:1)純化，以得到呈黃色固體之N-(1-溴-3-異喹啉基)胺基甲酸第三丁酯(400 mg, 1.24 mmol, 69.2 %產率)。ESI MS m/z 322.1, 324.1 [M+H]⁺ 。
中間物34

三氟甲烷磺酸3-甲氧基-6-甲基萘-1-基酯

步驟A：3-甲氧基萘-1-醇：在0°C下向萘-1,3-二醇(40.0 g, 250 mmol, 1.00eq )之MeOH (800 mL)溶液添加HCl (4 M, 750 mL, 12.0eq , 4 M於MeOH中)。將該混合物升溫至18 °C且攪拌30分鐘。將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯 100/1至1/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈紅色油狀物之3-甲氧基萘-1-醇(17.7 g, 96.5 mmol, 38.6%產率, 95 %純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.17 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (ddd,J = 1.2, 6.8, 8.0 Hz, 1H), 7.38 (ddd,J =1.2, 6.8, 8.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J =2.0 Hz, 1H), 6.76 (br s, 1H), 6.62 (d,J =2.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H)。

步驟B：第三丁基-[(3-甲氧基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷：在0°C下向3-甲氧基萘-1-醇(20.0 g, 115 mmol, 1.00eq )與咪唑(23.5 g, 344 mmol, 3.00eq )之THF (400 mL)溶液逐滴添加TBSCl (26.0 g, 172 mmol, 21.1 mL, 1.50eq )。將該混合物升溫至25°C且攪拌16小時。以石油醚(600 mL)及乙酸乙酯(200 mL)稀釋混合物，接著用水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至10/1)純化。得到呈無色油狀物之第三丁基-[(3-甲氧基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷(28.0 g, 97.1 mmol, 84.6 %產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.01 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 (dt,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.24 (dt,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 6.71 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.48 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.23 (s, 6H)。

步驟C：第三丁基-[[3-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1-萘基]氧基]-二甲基-矽烷及第三丁基((3-甲氧基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)萘-1-基)氧基)二甲基矽烷：將於己烷(500 mL)中之第三丁基-[(3-甲氧基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷(26.0 g, 90.1 mmol, 1.00eq )、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧雜環戊硼烷(45.8 g, 180 mmol, 2.00eq )、(1Z ,5Z )-1,5-環辛二烯;2,4-二甲基-BLAH雙環[1.1.0]丁烷(2.39 g, 3.61 mmol, 0.04eq )及4-第三丁基-2-(4-第三丁基-2-吡啶基)吡啶(1.45 g, 5.41 mmol, 0.06eq )混合物在100°C於氮氣環境下攪拌16小時。以水(500 mL)及乙酸乙酯(1000 mL)稀釋混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 500 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至10/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈淺黃色油狀物之第三丁基-[[3-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1-萘基]氧基]-二甲基-矽烷與第三丁基((3-甲氧基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)萘-1-基)氧基)二甲基矽烷混合物(38.0 g, 85.3 mmol, 94.6 %產率, 93 %純度)。ESI MS m/z 415.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：8-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-6-甲氧基-萘-2-醇：在0°C下向於丙酮(400 mL)中之第三丁基-[[3-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-1-萘]氧基]-二甲基-矽烷與第三丁基((3-甲氧基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3, 2-二氧雜環戊硼烷-2-基)萘-1-基)氧基)二甲基矽烷混合溶液(36.0 g, 86.9 mmol, 1.00eq )添加過一硫酸氫鉀(58.7 g, 95.6 mmol, 1.10eq )之H₂ O (400 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。以5%硫代硫酸鈉水溶液使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 300 mL)萃取。萃取物係經合併且以水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯200/1至20/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之8-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-6-甲氧基-萘-2-醇(9.00 g, 28.4 mmol, 32.7%產率, 96%純度)，及呈白色固體之5-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-7-甲氧基-萘-2-醇(9.00 g, 29.0 mmol, 33.4%產率, 98%純度)。ESI MS m/z 305.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：三氟甲烷磺酸[5-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-7-甲氧基-2-萘基]酯：在-40°C下向5-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-7-甲氧基-萘-2-醇(11.0 g, 36.1 mmol, 1.00eq )及DIEA (14.0 g, 108 mmol, 18.9 mL, 3.00eq )之DCM (150 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (12.2 g, 43.4 mmol, 7.15 mL, 1.20eq )。攪拌該混合物1小時。以二氯甲烷(200 mL)稀釋混合物且用水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至10/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈白色固體之三氟甲烷磺酸[5-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-7-甲氧基-2-萘基]酯(13.0 g, 29.8 mmol, 82.4%產率, 100 %純度)。ESI MS m/z 436.9 [M+H]⁺ 。

步驟F：第三丁基-[(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷：於氮氣環境下向三氟甲烷磺酸[5-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基-7-甲氧基-2-萘]酯(12.5 g, 28.6 mmol, 1.00 eq)及K₂ CO₃ (11.9 g, 85.9 mmol, 3.00 eq)之二噁烷(160 mL)溶液添加Pd(PPh₃ )₄ (3.31 g, 2.86 mmol, 0.10 eq)及三甲基硼氧烴三聚物(14.4 g, 57.3 mmol, 16.0 mL, 2.00 eq)。將反應物加熱至100°C持續16小時。以乙酸乙酯(200 mL)稀釋混合物且接著用水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至5/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物呈紅色固體之第三丁基-[(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷(8.00 g, 24.6 mmol, 85.9%產率, 93 %純度)。ESI MS m/z 303.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：3-甲氧基-6-甲基-萘-1-醇：在0°C下向第三丁基-[(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)氧基]-二甲基-矽烷(8.00 g, 26.5 mmol, 1.00 eq)之THF (100 mL)溶液添加TBAF (10.4 g, 39.7 mmol, 1.50 eq)。在0°C下攪拌該混合物3小時。以水(100 mL)及乙酸乙酯(200 mL)稀釋混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯50/1至5/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈紅色固體之3-甲氧基-6-甲基-萘-1-醇(4.70 g, 25.0 mmol, 94.4 %產率)。ESI MS m/z 188.4 [M+H]⁺ 。

步驟H：三氟甲磺酸3-甲氧基-6-甲基-1-萘酯：在-40°C下向3-甲氧基-6-甲基-萘-1-醇(4.70 g, 25.0 mmol, 1.00 eq)及DIEA (9.68 g, 74.9 mmol, 13.1 mL, 3.00 eq)之DCM (3.00 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (8.45 g, 30.0 mmol, 4.94 mL, 1.20 eq)。攪拌該混合物1小時。以二氯甲烷(200 mL)稀釋混合物且用水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至10/1)純化。得到呈無色油狀物之三氟甲磺酸3-甲氧基-6-甲基-1-萘酯(7.70 g, 24.0 mmol, 96.2%產率, 99.9 %純度)。ESI MS m/z 320.7 [M+H]⁺ 。

以下中間物係根據中間物3的製備方法而製備，用合適的苯酚取代2-溴-3-氟苯酚。
中間物44

2-溴-3-氟-1-(甲氧基甲氧基)-4-甲苯

步驟1：將3-氟-4-甲基苯酚(1.016 g, 8.055 mmol)置於Cs₂ (3.9 mL, 64.44 mmol)中且冷卻至0^o C。添加Br₂ (0.4150 mL, 8.055 mmol)且在室溫下攪拌該混合物2小時。添加10% Na₂ S₂ O₂ 且用DCM萃取該混合物。有機層係經合併，乾燥且過濾，以得到2-溴-3-氟-4-甲基苯酚(1.389 g, 6.775 mmol, 84.10%產率)，其直接用於下個步驟中。

步驟2：根據中間物8的程序使用2-溴-3-氟-4-甲苯酚代替2-溴-3-氟苯酚，製備2-溴-3-氟-1-(甲氧基甲氧基)-4-甲苯。
中間物45

2-溴-1-異丙氧基-4-(甲氧基甲氧基)苯

步驟1：將4-異丙氧基苯酚(1.00 g, 6.57 mmol)及TEA (1.83 mL, 13.1 mmol)置於DCM (25 mL)中。逐滴添加乙醯氯(7.56 mL, 7.56 mmol)且在室溫下攪拌該反應物2小時。添加水且用DCM萃取該混合物。有機層係經乾燥，過濾且濃縮，以得到乙酸4-異丙氧基苯酯(1.24 g, 6.38 mmol, 97.2%產率)，其直接用於下個步驟中。

步驟2：將乙酸4-異丙氧基苯酯(1.24 g, 6.585 mmol)置於ACN (20 mL)中且添加N-溴琥珀醯亞胺(1.173 g, 6.590 mmol)。攪拌該混合物18小時。添加水且用乙醚萃取該混合物。有機層係經合併，乾燥，且濃縮，以得到乙酸3-溴-4-異丙氧基苯酯(1.584 g, 5.800 mmol, 88.00%產率)，其直接用於下個步驟中。

步驟3：將乙酸3-溴-4-異丙氧基苯酯(500 mg, 1.83 mmol)置於MeOH (7 mL)中。向該混合物添加KOH (111 mg, 1.98 mmol)之水(2 mL)溶液且在室溫下攪拌1小時。藉由添加1N HCl調整該反應混合物至pH 3。用DCM萃取該混合物。萃取物係經合併，乾燥，過濾且濃縮，以得到粗製3-溴-4-異丙氧基苯酚，其直接用於下個反應中。

步驟4：根據中間物8的程序使用乙酸3-溴-4-異丙氧基苯酯代替2-溴-3-氟苯酚，製備2-溴-1-異丙氧基-4-(甲氧基甲氧基)苯。
中間物46

1-溴-3-氯-2-異丙氧基-5-(甲氧基甲氧基)苯

步驟1：將1-溴-3-氯-2-異丙基-5-甲氧苯(952 mg, 3.61 mmol)置於DCM (3 mL)中且冷卻至0^o C。添加BBr3 (9030 µL, 9.03 mmol)且在0^o C下攪拌該反應物2小時。添加水且用DCM萃取該混合物。萃取物係經合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-20% EtOAc於己烷中)純化，以得到3-溴-5-氯-4-異丙苯酚(575 mg, 2.30 mmol, 63.8%產率)。

步驟2：根據中間物8的程序使用3-溴-5-氯-4-異丙苯酚代替2-溴-3-氟苯酚，製備1-溴-3-氯-2-異丙基-5-(甲氧基甲氧基)苯。
中間物47

1-碘-3-(甲氧基甲氧基)萘

向4-碘萘-2-醇(0.80 g, 3.0 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(1.1 mL, 5.9 mmol)及氯(甲氧基)甲烷(0.29 g, 3.6 mmol)，在室溫下攪拌該反應物4小時，且在添加2小時後加入額外的氯(甲氧基)甲烷(0.15 g)。該反應物係用鹽水洗滌且真空濃縮。所述物質係藉由層析法使用梯度0至10%的EtOAc/己烷做為溶離液而純化，以得到1-碘-3-(甲氧基甲氧基)萘(0.80 g, 2.5 mmol, 86 %產率)。
中間物48
3-苯甲氧基-1-溴-萘

步驟A：2,4-二溴萘-1-胺：在室溫下向Br₂ (246 g, 1.54 mol, 79.3 mL)之AcOH (750 mL)溶液添加萘-1-胺(101 g, 705 mmol, 99.0 mL)之AcOH (500 mL)溶液，且在70°C下攪拌該反應物1小時。將反應混合物冷卻至室溫且過濾。以AcOH (300 mL)洗滌濾餅。將固體接著懸浮於20%NaOH (1.2 L)水溶液中。將混合物攪拌20分鐘且過濾。固體係以水(1 L)洗滌且真空乾燥，以得到呈灰色固體之2,4-二溴萘-1-胺(200 g, 664 mmol, 94.2%產率)。ES+APCI MS m/z 301.9 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉：在5-8 °C下向2,4-二溴萘-1-胺(60.0 g, 199 mmol)之AcOH (900 mL)及丙酸(propionic acid)(150 mL)溶液逐份添加NaNO₂ (16.5 g, 239 mmol, 13.0 mL)歷時30分鐘，且在5-8 °C攪拌該反應混合物30分鐘。將反應混合物傾注入冰水(4000 mL)中，將漿液過濾且用水(2 × 50 mL)洗滌固體，以得到4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉(150 g, 濕粗製物)，其立即以粗製物使用在下個步驟中。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.12 - 8.10 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.62 - 7.58 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.37 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H)。

步驟C：4-溴萘-2-醇：在13-15 °C下向4-溴-1-重氮-萘-2-酸鈉(100 g, 402 mmol)之EtOH (2.00 L)溶液逐份添加NaBH₄ (30.4 g, 803 mmol)歷時1小時，且在15-18 °C下攪拌反應物3小時。該反應物係經過濾且濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (1000 mL)中且用水(500 mL × 2)洗滌。有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由層析法使用石油醚/EtOAc (60/1 à 10/1)溶離而純化，且藉由逆相式HPLC將該等物質再純化，以得到呈灰色固體之4-溴萘-2-醇(40.0 g, 139 mmol, 17.3%產率, 77.4%純度)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 8.07 – 8.05 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.60 – 7.58 (d,J =7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.36 (m, 3H), 7.07 (s, 1H)。

步驟D：3-苯甲氧基-1-溴-萘：將於MeCN (500 mL)中之4-溴萘-2-醇(30.0 g, 134 mmol)、BnBr (25.3 g, 148 mmol, 17.6 mL)及K2CO3 (55.7 g, 403 mmol)混合物加熱至80°C持續1小時。該反應混合物係經過濾且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由矽膠管柱使用PE/EA (100/1至60/1)溶離而純化，以得到3-苯甲氧基-1-溴-萘(40.0 g, 128 mmol, 95 %產率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.19 – 8.17 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.75 – 7.32 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.64 - 7.63 (d, J=2.4 Hz,1H), 7.52 – 7.37 (m, 7H), 7.23 – 7.21 (d, J=2.0 Hz,1H), 5.2 (s, 2H)。
中間物49
4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(甲基亞磺醯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

步驟A：4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：於氮氣下向3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁基4-乙酯(50.0 g, 184 mmol)之MeOH (1.00 L)溶液添加NaOMe (49.8 g, 921 mmol)及2-甲異硫脲(62.4 g, 331 mmol, H₂ SO₄ )。在25°C下攪拌該反應混合物16小時。向該反應混合物添加HCl (2 M)直至pH~5，且接著於減壓條件下將該混合物濃縮。將殘餘物懸浮於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中。過濾懸浮液。有機相係以水(1 × 300 mL)、鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 138 mmol, 75.4%產率, 81.0 %純度)，其直接用於下個反應中。ES+APCI MS m/z 298.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C於氮氣下向4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 171 mmol)之DCM (500 mL)溶液依序添加DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL)及Tf₂ O (72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL)。將該反應混合物升溫至25°C且攪拌16小時。該反應混合物係經濃縮且殘餘物係藉由管柱層析法使用EtOAc/石油醚 0 à 10%溶離而純化，以得到2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(46.0 g, 107 mmol, 62.4 %產率)。ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：向2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(46.0 g, 107 mmol)之DMF (500 mL)溶液添加DIEA (27.7 g, 214 mmol, 37.4 mL)及哌嗪-1-甲酸苯甲酯(25.9 g, 117 mmol, 22.7 mL)。於N₂ 環境下將反應物加熱至100°C持續1小時。將反應混合物傾注入乙酸乙酯(300 mL)中。用水H₂ O (300 mL × 3)洗滌該混合物。有機相係以鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à20% EtOAc/石油醚做為溶離液而純化，以得到4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 96.9 mmol, 90.5%產率, 92.0%純度)。ES+APCI MS m/z 500.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(25.0 g, 50 mmol)之DCM (50 mL)溶液添加TFA (85.6 g, 750 mmol, 55.6 mL)。在25°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物在減壓環境下濃縮，且將殘餘物溶解於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中，並添加Na₂ CO₃ 直至pH~8。有機層係以水(1 × 300 mL)、鹽水(1 × 200 mL)洗滌，且經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 400.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於二噁烷(300 mL)中之3-苯甲氧基-1-溴-萘(16.3 g, 52.1 mmol)、4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 g, 40.1 mmol)、Cs₂ CO₃ (32.6 g, 100 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (5.50 g, 6.01 mmol)及RuPhos (3.74 g, 8.01 mmol)混合物用N₂ 脫氣3次，且在85 °C於N₂ 環境下攪拌該混合物5小時。在0°C下藉由添加水(200 mL)使該反應混合物淬滅，且用EtOAc (3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用10à20% MeOH/DCM溶離而純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 g, 22.8 mmol, 56.9%產率, 90.0 %純度)。ES+APCI MS m/z 632.5 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C於氮氣環境下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(8.00 g, 12.7 mmol)之DCM (200 mL)溶液添加m-CPBA (2.73 g, 12.7 mmol, 80.0%純度)。在0°C下攪拌該反應混合物2小時。在0°C下藉由添加Na₂ S₂ O₃ (10 mL)使該反應混合物淬滅，且接著用水(100 mL)稀釋且用DCM (200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à10% MeoH/DCM溶離而純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.50 g, 4.92 mmol, 38.8%產率, 91.0 %純度)。ES+APCI MS m/z 648.5 [M+H]⁺ 。
中間物50
4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯

步驟A：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在0°C於氮氣下向4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(14.4 g, 28.9 mmol)之DCM (150 mL)攪拌溶液添加m-CPBA固體(17.4 g, 101 mmol)。在0°C下攪拌2小時之後，反應混合物係以水(300 mL)稀釋且用飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH ~ 8，接著DCM (3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯10/1至1/2)純化，以得到4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(11.0 g, 19.7 mmol, 68.6%產率, 95.4%純度)。ES+APCI MS m/z 532.1 [M+H]⁺ 。
中間物51
4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑

步驟B：4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑：向於DCM (30 mL)中之4-溴-5-甲基-1H -吲唑(3 g, 14.2 mmol)及3,4-二氫-2H -吡喃(2.39 g, 28.4 mmol, 2.60 mL)混合物添加TsOH*H₂ O (270 mg, 1.42 mmol)，且在15 °C下攪拌該混合物2小時。在完成後，將反應混合物真空濃縮，殘餘物係藉由管柱層析法使用5à20% EtOAc/石油醚做為溶離液而純化，以得到呈白色固體之4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(4 g, 13.6 mmol, 95.3%產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.01 (s, 1H), 7.47 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.25 (d,J =8.4 Hz, 1H), 5.70 (dd,J =2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.05 -3.96 (m, 1H), 3.79 -3.70 (m, 1H), 2.66 - 2.44 (m, 4H), 2.25 - 2.04 (m, 2H), 1.84 - 1.56 (m, 3H)。
中間物52
4-溴-5-甲氧基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑

按照中間物51的製備，以4-溴-5-甲氧基-1H-吲唑取代步驟A中的4-溴-5-甲基-1H -吲唑，製備4-溴-5-甲氧基-1-(四氫-2H-哌喃-2-基)-1H-吲唑。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.00 (s, 1H), 7.53 (d,J =9.2 Hz, 1H), 7.16 (d,J =9.2 Hz, 1H), 5.70 (dd,J =2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.04 -3.98 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.55 - 2.49 (m, 1H), 2.23 - 2.05 (m, 2H), 1.83 - 1.69 (m, 3H).
中間物53
3-(苯甲氧基)-1-溴-2-甲基萘

步驟A：2-甲基-3-側氧基-4-苯基-丁酸乙酯：向乾燥的250 ml三頸燒瓶添加3-側氧基-4-苯基-丁酸乙酯(4.00 g, 19.4 mmol. )、THF (50.0 mL)、氫化鈉(931 mg, 23.3 mmol)，且在0°C下攪拌該反應物0.5小時。接著逐滴添加碘甲烷(3.03 g, 21.3)溶液。在添加完成後，將反應混合物升溫至20°C且在20°C下攪拌2小時。藉由在20°C下添加水(10.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(20.0 mL)稀釋且分離各層。接著用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚:乙酸乙酯 20:1至10:1)純化，以得到呈無色油狀物之2-甲基-3-側氧基-4-苯基-丁酸乙酯(3.60 g, 16.3 mmol, 84.3%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 7.38 - 7.28 (m, 3H), 7.25 - 7.19 (m, 2H), 4.22 - 4.15 (m, 2H), 3.87 (d,J = 2.0 Hz, 2H), 3.65 (q,J = 7.2 Hz, 1H), 1.34 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 - 1.26 (m, 3H)。

步驟B：2-甲基萘-1,3-二醇：將2-甲基-3-側氧基-4-苯基-丁酸乙酯(3.60 g, 16.3 mmol)之濃硫酸(19.9 g, 203 mmol)溶液在15 °C下攪拌12小時。將反應混合物傾注入冰水(30.0 mL)中，藉由過濾收集所得的固體且真空乾燥，以得到呈紅色固體之2-甲基萘-1,3-二醇(1.80 g, 10.3 mmol, 63.2%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.02 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.29 - 4.20 (s, 2H), 2.41 - 2.24 (s, 3H)。

步驟C：3-甲氧基-2-甲基-萘-1-醇：將2-甲基萘-1,3-二醇(1.70 g, 9.76 mmol)添加至HCl/MeOH (2 M, 35.0 mL)且在30°C下攪拌所得混合物3天。將反應物真空濃縮，殘餘物係藉由Prep-TLC (石油醚:乙酸乙酯1:1)純化，以得到呈白色固體之3-甲氧基-2-甲基-萘-1-醇(800 mg, 4.25 mmol, 43.5%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.02 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.14 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 2.29 (s, 3H)。

步驟D：三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-2-甲基-1-萘基)酯：在0°C於N₂ 環境下向於DCM (10.0 mL)中之3-甲氧基-2-甲基-萘-1-醇(800 mg, 4.25 mmol.)及吡啶(504 mg, 6.38 mmol)混合物逐滴添加三氟乙酸酐(1.44 g, 5.10 mmol)。將該混合物升溫至20°C且再攪拌5小時。在真空下移除溶劑，且殘餘物係藉由Prep-TLC (石油醚:乙酸乙酯1:1)純化，以得到呈白色固體之三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-2-甲基-1-萘基)酯(1.30 g, 4.06 mmol, 95.5%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) = 7.97 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.79 - 7.74 (m, 1H), 7.52 - 7.43 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 2.42 (s, 3H)。

步驟E：1-溴-3-甲氧基-2-甲基-萘：在一密封管中將三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-2-甲基-1-萘基)酯(466 mg, 1.45 mmol)、t-Bu-Brettphos (154 mg, 290 umol)、溴化鉀(259 mg, 2.17 mmol)、PEG-200 (175 mg)、2-丁酮(157 mg, 2.17 mmol)及Pd₂ (dba)₃ (133 mg, 145 umol)添加在甲苯(toluene)(10.0 mL)內，且用N₂ 使該混合物脫氣5分鐘。接著，在20°C下逐滴添加三異丁基鋁(431 mg, 2.17 mmol)。將該混合物加熱至100°C持續24小時。將該反應混合物傾注入水(30.0 mL)中，且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取水層。合併的有機物係用鹽水(30.0 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且真空濃縮以得到殘餘物，該殘餘物係藉由管柱層析法(石油醚:乙酸乙酯10:1)預純化，接著用Prep-TLC (石油醚:乙酸乙酯10:1)純化，以得到呈白色固體之1-溴-3-甲氧基-2-甲基-萘(700 mg, 2.79 mmol, 64.1%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.73 - 7.69 (m, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 7.09 (s, 1H), 3.98 -3.95 (m, 3H), 2.56 (s, 3H)。

步驟F：4-溴-3-甲基-萘-2-醇：在10分鐘期間內，於N₂ 下向冷卻至-78°C之1-溴-3-甲氧基-2-甲基-萘(580 mg, 2.31 mmol)及四丁基碘化銨(2.13 g, 5.78 mmol)之DCM (11.0 mL)溶液逐滴添加BCl₃ (1 M, 5.78 mL)溶液。將該反應混合物升溫至0°C且在室溫下攪拌2小時。接著在真空下移除溶劑，殘餘物係藉由Prep-TLC (石油醚:乙酸乙酯5:1)純化，以得到呈白色固體之4-溴-3-甲基-萘-2-醇(500 mg, 2.11 mmol, 91.3%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.26 - 8.15 (m, 1H), 7.63 (dd,J = 3.6, 6.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 2H), 7.11 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 2.60 (s, 3H), 1.56 (s, 3H)。

步驟G：3-苯甲氧基-1-溴-2-甲基-萘：在20°C於N₂ 下向於乙腈 (3.00 mL)中之4-溴-3-甲基-萘-2-醇(265 mg, 1.12 mmol)及溴甲苯(201 mg, 1.18 mmol)混合物一次添加入碳酸鉀 (310 mg, 2.24 mmol)。接著在60°C下攪拌該混合物2小時。在真空下移除溶劑，殘餘物係藉由Prep-TLC (石油醚:乙酸乙酯5:1)純化，以得到呈白色固體之3-苯甲氧基-1-溴-2-甲基-萘(250 mg, 695 umol, 31.0%產率, 91.0%純度)。ES+APCI MS m/z 327.0, 329.0 [M+H]⁺ 。
中間物54
2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯

步驟A：(4-溴-2-萘基)2,2-二甲基丙酸酯。在0°C下向4-溴萘-2-醇(10 g, 44.8 mmol) 及TEA (9.07 g, 89.7 mmol)之DCM (200 mL)溶液添加2,2-二甲基丙醯氯(8.11 g, 67.2 mmol)。在0°C下攪拌該反應混合物10分鐘。藉由添加水(50 mL)使該反應混合物淬滅，且分離各層。有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA =1:0至100:1)純化，以得到呈紅色油狀物之(4-溴-2-萘基)2,2-二甲基丙酸酯(9 g, 29.3 mmol, 65.4%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.63 - 7.49 (m, 4H), 1.41 (s, 9H)。
中間物55
4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯

步驟A：7-苯甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2,4-二醇。向EtOH (600 mL)分批添加Na (5.56 g, 241 mmol)且攪拌該混合物1小時。向此溶液添加1-苯甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(30.0 g, 100 mmol)及尿素(14.5 g, 242 mmol)且在75 °C下攪拌該反應混合物36小時。在真空下移除溶劑，將殘餘物溶解於水(50 mL)中且在有固體沉澱的時間點藉由添加HCl (120 mL, 2M)酸化。將固體過濾且將濾餅真空乾燥，以得到7-苯甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2,4-二醇(22.0 g, 83.8 mmol)。¹ HNMR (400MHz, DMSO-d₆ ) δ = 10.97 (br s, 1H), 10.66 (br s, 1H), 7.55 - 6.95 (m, 5H), 3.81 -3.50 (m, 2H), 3.26 - 2.91 (m, 2H), 2.77 - 2.58 (m, 2H), 2.34 - 2.09 (m, 2H)。

步驟B：7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。向DIEA (30.1 g, 233 mmol)之POCl₃ (330 g, 2.15 mol)溶液添加7-苯甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(20.0 g, 77.7 mmol)，且在110°C下攪拌該反應混合物5小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM (400 mL)中且傾注入飽和NaHCO₃ (200 mL)中並分離各層。用DCM (2 × 400 mL)淬取水層。合併的有機物係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/DCM = 10/1至0/1)純化，以得到7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(7.70 g, 26.2 mmol)。¹ HNMR (300MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.28 (m, 5H), 3.73 (s, 2H), 3.66 (br s, 2H), 2.84 (br s, 4H)。

步驟C：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(17.3 g, 58.8 mmol)之DMSO (200 mL)溶液添加DIEA (19.0 g, 147 mmol)及哌嗪-1-甲酸第三丁酯(11.5 g, 61.7 mmol)，且在55 °C下攪拌該混合物10小時。將反應混合物傾注入乙酸乙酯(200 mL)中且用水(3x200mL)洗滌。合併的有機物係以鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(24 g, 52.9 mmol)。ES+APCI MS m/z 444.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(300 mL)中之3-嗎啉丙-1-醇(11.8 g, 81.1 mmol)、4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(18 g, 40.5 mmol)、BINAP (5.05 g, 8.11 mmol)、t -BuONa (9.74 g, 101 mmol)及Pd₂ (dba)₃ (3.71 g, 4.05 mmol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，在110°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。將反應混合物傾注入H₂ O (200 mL)中且用乙酸乙酯(3x300 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至5/1)純化，以得到4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(14 g, 22.5 mmol)。ES+APCI MS m/z 553.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(14 g, 25.3 mmol)之MeOH (1 L)溶液添加無水Pd/C (3 g, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物10小時。將混合物過濾且將濾液真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1TFA)/乙腈]純化，以得到4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(6.5 g, 13.9 mmol)。ES+APCI MS m/z 463.4 [M+H]⁺ 。
中間物56

三氟甲烷磺酸萘-1-基酯。在3頸燒瓶內將　-萘酚(4 g, 27.74 mmol)溶解於DCM (200 mL)中。於冰浴中將反應物冷卻至10°C。將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(4.846 ml, 27.74 mmol)及三氟甲烷磺酸酐(4.668 ml, 27.74 mmol)逐滴添加至該溶液。在10°C下攪拌該反應物2小時。TLC (25% EtOAc, UV vis)顯示反應已完成。有機物係以水(2X)及鹽水(2X)洗滌。有機物係經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。該濃縮物係使用正相層析法於CombiFlash (0%-12% EtOAc:己烷)上純化。全部含有純淨產物的分餾物係經合併且真空濃縮，以得到三氟甲烷磺酸萘-1-基酯(6.77 g, 24.51 mmol, 88.34 %產率)。
中間物57

(S)-2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯

向(S)-1-Boc-2-羥甲基哌嗪(1.0 g, 4.62 mmol)之DCE (92.47 ml, 4.624 mmol)溶液添加甲醛(3.474 ml, 46.24 mmol) (37%於水中)，隨後添加三乙醯氧基硼氫化鈉(4.9 g, 23.12 mmol)。在室溫下劇烈攪拌該混合物2.5小時。以飽和碳酸氫鈉(30 mL)處理該混合物，攪拌10分鐘，接著用DCM (3 x 10 mL)萃取。合併的有機相層係經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。ES+APCI MS m/z 231.1 [M+H]⁺ 。
中間物58

(R)-2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯

標題化合物係如中間物57所製備，以(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯取代(S)-1-Boc-2-羥甲基哌嗪。ES+APCI MS m/z 231.1 [M+H]⁺ 。
中間物59

1-溴-3-氯-2-氟-5-(甲氧基甲氧基)苯

向圓底燒瓶添加THF (8.87 ml, 4.44 mmol)，隨後添加於礦物油中之60 %氫化鈉懸浮液(0.213 g, 5.32 mmol)。將混合物冷卻至0°C，接著逐份添加3-溴-5-氯-4-氟苯酚(1.0 g, 4.44 mmol)。一旦鼓泡停止，在0°C下攪拌所得深色混合物30分鐘。接著添加氯甲基甲基醚(0.421 ml, 5.54 mmol)且將該混合物升溫至環境溫度並攪拌2小時。添加飽和氯化銨水溶液且用DCM萃取該混合物。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將粗製物層析(0-15% EtOAc於己烷中s)，以得到呈澄清油狀物之產物。
中間物60
4-溴-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑

步驟A：4-溴-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑。向4-溴-5-(三氟甲基)-1H-吲唑(500 mg, 1.89 mmol, 1eq )之DCM (10 mL)溶液添加3,4-二氫-2H-吡喃(476 mg, 5.66 mmol, 517 uL, 3eq )及TsOH·H₂ O (35.9 mg, 188 umol, 0.1eq )。在15 °C下攪拌該混合物1小時。將該混合物濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA=10:1至1:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-溴-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(480 mg, 1.37 mmol, 72.9%產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.20 (s, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 2H), 5.70 (dd,J =2.8, 8.8 Hz, 1H), 4.05 -3.96 (m, 1H), 3.79 -3.70 (m, 1H), 2.56 - 2.50 (m, 1H), 2.27 - 2.04 (m, 2H), 1.80 - 1.74 (m, 2H), 1.60 - 1.54 (m, 1H)。
中間物61

8-溴-6-(甲氧基甲氧基)喹啉：將8-溴喹啉-6-醇(1.00 g, 4.46 mmol)之DCM (20 mL)攪拌懸浮液冷卻至0^o C且添加二異丙基乙胺 (1.2 mL, 6.7 mmol, 1.5 eq.)，隨後逐滴添加氯(甲氧基)甲烷(0.41 mL, 5.4 mmol, 1.2 eq.)，使反應混合物升溫至室溫隔夜。接著添加濃氨水(0.5 mL, ~5 mmol)且在室溫下攪拌所得混合物1小時。在真空下使該混合物蒸發且在矽膠上層析（Redisep 40g，使用20% EtOAc/己烷作為溶離液），以得到無色粉末(0.52 g, 44%)。ES+APCI MS m/z 268.0, [M+H]⁺ 。
中間物62

向丁-3-烯腈(80.0 g, 1.19 mol, 96.4 mL, 1.00 eq)之三級丁醇(130 mL)及石油醚(480 mL)溶液添加Br₂ (191 g, 1.19 mol, 61.5 mL, 1.00 eq)之三級丁醇(130 mL)溶液。在10°C下攪拌該混合物4小時。該混合物係不經任何處理即直接用於下個步驟中。

向上述混合物(274 mL)添加N ,N '-二苯甲基乙烷-1,2-二胺(160 g, 445 mmol, 157 mL, 2 HOAc)及Et₃ N (178 g, 1.76 mol, 245 mL)之甲苯(300 mL)溶液。在110°C下攪拌2小時之後，該反應物係經過濾且濾液係經真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色油狀物之2-(1, 4-二苯甲基哌嗪-2-基)乙腈(75.0 g, 246 mmol, 兩個步驟55.7 %產率)。LCMS [ESI, M+1]: 306。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.37 - 7.23 (m, 10H), 3.80 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.60 -3.42 (m, 3H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.95 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.53 (m, 4H), 2.52 - 2.35 (m, 3H).

在15 °C下向2-(1,4-二苯甲基哌嗪-2-基)乙腈(160 g, 524 mmol, 1.00 eq)之二氯乙烷(1.50 L)溶液添加氯甲酸1-氯乙酯(300 g, 2.10 mol, 4.00 eq)。在85 °C下攪拌48小時，將該混合物真空濃縮。殘餘物係接著溶解於甲醇(1.50 L)中且加熱至回流持續1小時。將該混合物濃縮。固體係以甲基第三丁基醚(1.00 L)處理，得到呈白色固體之2-哌嗪-2-基乙腈(中間物62, 90.0 g, 454 mmol, 86.7%產率, 2HCl)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 10.19 (br s, 2H), 4.01 -3.73 (m, 1H), 3.69 -3.41 (m, 4H), 3.32 (dt,J = 2.8, 13.2 Hz, 1H), 3.27 -3.10 (m, 3H).
中間物63

向(3R )-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80.0 g, 370 mmol, 1.0eq ) 之乙酸乙酯(1400 mL)溶液添加NaHCO₃ (93.2 g, 1.11 mol, 43.2 mL, 3.0eq )、H₂ O (700 mL)及氯甲酸苯甲酯(82.0 g, 481 mmol, 68.4 mL, 1.30eq )。在25°C下攪拌該混合物12小時(hr/hrs)。在完成後，將有機相分離，用水(500 mL x 2)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=40/1至1/1)純化。得到呈黃色油狀物之產物(2R )-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(85.0 g, 235 mmol, 64%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M-99]: 251。

向(2R )-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(20.0 g, 57.1 mmol, 1.0eq )之2-甲基四氫呋喃(240 mL)溶液添加TEA (17.3 g, 171.23 mmol, 23.8 mL, 3.0eq )及甲烷磺醯氯(7.74 g, 67.6 mmol, 5.23 mL, 1.18eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。藉由在20°C下添加H₂ O (150 mL)使該反應混合物淬滅。用乙酸乙酯(300 mL x 2)萃取該反應混合物。有機層係以H₂ O (100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且過濾。在真空下移除溶劑。得到呈黃色油狀物之(2R )-2-(甲磺醯基氧基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(22.0 g, 粗製)。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

向(2R )-2-(甲磺醯基氧基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(22.0 g, 51.3 mmol)之DMA (150 mL)溶液添加NaCN (10.4 g, 211 mmol)。在60°C下攪拌該混合物12小時。在真空下移除溶劑以得到油狀殘餘物。以H₂ O (40.0 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(80.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=40/1至5:1)純化。得到呈黃色油狀物之產物(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(18.5 g, 46.4 mmol，兩個步驟產率72%)。LCMS [ESI, M+1]: 360。

向(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-第三丁酯(18.5 g, 43.3 mmol, 1.00 eq)之二噁烷(40.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 54.1 mL, 5.0 eq)。在20°C下攪拌該混合物1小時。接著添加NaHCO₃ 至該反應混合物至pH＞7，且在減壓環境下濃縮以移除二噁烷。以H₂ O (50.0 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(50.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以H₂ O (20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色油狀物之產物(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物63 (Int. 63), 11.5 g, 91.8%純度, 95%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 26。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.37 - 7.31 (m, 5H), 5.14 (s, 2H), 4.49 (br, s, 1H), 3.93 (br, s, 1H), 3.07 - 2.81 (m, 5H), 2.78 - 2.54 (m, 2H).
中間物64

將於DMF (20.0 mL)中之2-甲基氫硫基-4 -(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.81 g, 8.87 mmol, 1.0 eq)、(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物63, 2.30 g, 8.87 mmol, 1.0 eq)、DIEA (3.44 g, 26.6 mmol, 4.63 mL, 3.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成後，在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至1:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.6 g, 6.16 mmol, 69%產率, 92.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 539。

將於DCM (20.0 mL)中之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H 吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(6.0 g, 11.1 mmol, 1.0 eq)、TFA (30.8 g, 270 mmol, 20.0 mL, 24.3 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在20°C於N₂ 環境下攪拌該反應混合物3小時。在完成後，以飽和NaHCO₃ 溶液(500 mL)使反應混合物淬滅。將混合物用乙酸乙酯(3 × 300 mL)萃取，且使有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。在真空下移除溶劑，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.8 g, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

將於甲苯(30.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.8 g)、1-溴萘(3.8 g, 18.35 mmol, 2.55 mL)、Pd₂ (dba)₃ (1.0 g, 1.09 mmol)、RuPhos (1.02 g, 2.19 mmol)及Cs₂ CO₃ (12.0 g, 36.8 mmol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。在完成後，過濾反應混合物。在真空下移除有機溶劑，以得到油狀殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=5/1至3:1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.2 g, 3.31 mmol, 85.3%純度, 兩步驟產率30%)。LCMS [ESI, M+1]: 565。

將於DCM (4.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.8 g, 3.97 mmol, 1.0 eq)、m-CPBA (1.05 g, 5.16 mmol, 1.3 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成後，藉由添加飽和Na₂ SO₃ 溶液(50 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取該混合物。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。將溶劑移除以得到油狀殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 甲醇/乙酸乙酯=1/20至1:10)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 1.5 g, 2.35 mmol, 59%產率, 90.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 581。
中間物65

在0°C下向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(24.3 g, 45.0 mmol, 1.0eq )之乙酸乙酯(480 mL)溶液逐份添加m-CPBA (8.69 g, 42.8 mmol, 85%純度, 0.95eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(50.0 mL)稀釋混合物，且用乙酸乙酯(2 × 300 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。以飽和碳酸氫鈉溶液中和該混合物，真空濃縮以移除MeCN，且用乙酸乙酯(3 × 1000 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(22.8 g, 39.3 mmol, 87%產率, 95.8%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.37 - 7.23 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.75 - 4.41 (m, 3H), 4.17 - 4.05 (m, 2H), 3.86 (d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 -3.62 (m, 1H), 3.46 -3.18 (m, 3H), 3.10 (d,J = 3.6, 12.0 Hz, 1H), 2.81 (d,J = 3.2 Hz, 3H), 2.77 - 2.56 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).

向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(5.0 g, 9.01 mmol, 1.0eq )及[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(1.82 g, 15.8 mmol, 1.88 mL, 1.75eq )之甲苯(50.0 mL)溶液添加t-BuONa (1.73 g, 18.0 mmol, 2.0eq )。在完成後，將混合物添加冷水(50.0 mL)且用乙酸乙酯(5 × 50.0 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。所得產物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE : EA = 10:1 - EA : MeOH = 5:1)純化，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.80 g, 4.62 mmol, 51.0%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.44 - 7.35 (m, 5H), 5.21 (s, 2H), 4.73 - 4.54 (m, 2H), 4.44 - 4.33 (m, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 3.41 -3.93 (m, 1H), 3.82 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.39 -3.22 (m, 3H), 3.11 (br t,J = 7.8 Hz, 1H), 2.99 (d,J = 3.6, 12.8 Hz, 1H), 2.90 - 2.56 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.07 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).

向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.40 g, 3.96 mmol, 1.0eq )之DCM (8.0 mL)溶液添加TFA (13.9 g, 122 mmol, 9.0 mL, 30.7eq )。在15 °C下攪拌該混合物2小時。在完成後，將混合物濃縮。添加飽和NaHCO₃ 水溶液至殘餘物且用DCM (5 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之產物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 1.40 g, 2.77 mmol, 70%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 506。

中間物66

步驟A：在0°C下向7-苯甲基-4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(20.0 g, 65.4 mmol, 1 eq)之DCE (200 mL)溶液添加氯甲酸1-氯乙酯(28.1 g, 196 mmol, 3 eq)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘且於70°C下攪拌15小時。將該混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於MeOH (200 mL)中且在70°C下攪拌0.5小時。在完成時。將反應物真空濃縮。用甲基第三丁基醚(60 mL)濕磨殘餘物。沉澱物係經過濾收集，以甲基第三丁基醚(20 mL)洗滌且真空乾燥，以得到呈黃色固體之4-氯-2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(17.2 g，粗製，HCl)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 4.35 (s, 2H), 3.60 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 3.05 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H).

步驟B：在0°C下向4-氯-2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(16.5 g，粗製，HCl)及TEA (20.0 g, 196 mmol, 27.3 mL)之THF (400 mL)溶液逐滴添加氯甲酸苯甲酯(16.7 g, 98.1 mmol, 13.9 mL)。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，混合物係以水(80 mL)稀釋，且分離出有機層。用EtOAc (200 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 80/1至5/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(19.6 g, 50.4 mmol, 兩個步驟86%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (300 MHz, 氯仿-d) δ = 7.37 (s, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 3.877 (d,J = 8.0, 2H), 2.80 (br s, 2H), 2.54 (s, 3H).

步驟C：向4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(21.5 g, 55.3 mmol, 1.00 eq)之DMF (400 mL)溶液添加DIEA (35.7 g, 277 mmol, 48.2 mL, 5.00 eq)及2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈(6.92 g, 55.3 mmol, 1.00 eq)。在80°C下攪拌2小時之後，將(Boc)₂ O (60.4 g, 277 mmol, 63.5 mL, 5.00 eq)天加入上述混合物中且於80°C下再攪拌2小時。在完成時，以水(800 mL)稀釋混合物且用EtOAc (2 × 400 mL)萃取。有機層係以鹽水(300 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 10/1至1/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(24.3 g, 43.0 mmol, 78%產率, 95%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.29 (m, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.76 - 4.54 (m, 2H), 4.46 (br d,J = 18.4 Hz, 1H), 4.08 -3.69 (m, 4H), 3.53 -3.35 (m, 1H), 3.34 -3.03 (m, 2H), 3.03 - 2.89 (m, 1H), 2.81 - 2.55 (m, 4H), 2.50 (s, 3H), 1.51 (s, 9H).

步驟D：在0°C下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(24.3 g, 45.1 mmol, 1 eq)之EtOAc (480 mL)溶液逐份添加m -CPBA (8.70 g, 42.9 mmol, 85%純度, 0.95 eq)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(800 mL)稀釋混合物。用NaHCO₃ 調整pH至8，且分離出有機層。用EtOAc (2 × 400 mL)萃取水相。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(EtOAc/MeOH 100/1至10/1)純化，以得到呈白色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(20.9 g, 36.4 mmol, 81%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 555。

步驟E：在0°C下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(20.9 g, 37.6 mmol, 1 eq)及[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(8.67 g, 75.3 mmol, 8.94 mL, 2 eq)之甲苯(400 mL)溶液添加t -BuONa (7.23 g, 75.3 mmol, 2 eq)。在0°C下攪拌10分鐘後，將該混合物真空濃縮。以水(200 mL)稀釋殘餘物且用EtOAc (2 × 400 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。以飽和碳酸氫鈉溶液中和該混合物，且真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 1000 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(13.5 g, 20.5 mmol, 54%產率, 92%純度。LCMS [ESI, M+1]: 606。

步驟F：在N₂ 下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(3.50 g, 5.78 mmol, 1 eq)之MeOH (60.0 mL)溶液添加NH₃ /MeOH (60.0 mL)、Pd/C (1.00 g, 10%純度)。將懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物4小時。在完成時，濾除催化劑且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 2.33 g, 4.55 mmol, 79%產率, 92%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 4.58 (br s, 1H), 4.34 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.11 (dd,J = 6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.08 -3.88 (m, 4H), 3.84 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.25 -3.03 (m, 4H), 3.01 - 2.88 (m, 2H), 2.82 - 2.51 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.27 (dt,J = 7.2, 9.2 Hz, 1H), 2.11 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.75 (m, 3H), 1.50 (s, 9H).
中間物67

2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯

步驟A：4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。在25°C於氮氣下向3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁基4-乙酯(50.0 g, 184 mmol, 1.00 eq)之MeOH (1.00 L)攪拌溶液添加NaOMe (49.8 g, 921 mmol, 5.00 eq)，隨後添加呈固體之2-甲異硫脲(62.4 g, 331 mmol, 1.80 eq, H₂ SO₄ )。在25°C下攪拌該反應混合物16小時。用HCl (2 M)使反應混合物酸化直至pH~5，接著將該混合物在減壓環境下濃縮以移除MeOH。將殘餘物懸浮於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中且快速攪拌。過濾該懸浮液且收集白色固體。分離出濾液且用水(1 × 300 mL)及鹽水(1× 200 mL)洗滌有機物。有機物係經分離，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮成白色固體。得到呈白色固體之4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 138 mmol, 75.4%產率, 81 %純度)，且不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [M+1]: 298。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.33 (s, 2H), 3.61 ( t,J =5.6 Hz, 2H), 2.68 - 2.49 (m, 5H), 1.50 (s, 9H).

步驟B：2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。在0°C向4-羥基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(51.0 g, 171 mmol, 1.00 eq)之DCM (500 mL)攪拌懸浮液添加DIEA (44.3 g, 343 mmol, 59.9 mL, 2.00 eq)，隨後於氮氣下添加Tf₂ O (72.6 g, 257 mmol, 42.4 mL, 1.50 eq)。立即會形成褐色溶液。在25°C下攪拌16小時之後，將反應物濃縮以得到褐色油狀物。該褐色油狀物係藉由管柱層析法純化(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至10/1)。得到呈黃色固體之所述標題化合物2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(46.0 g, 107 mmol, 62 %產率)。LCMS [M+1]: 430。
中間物68

4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯

步驟A：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。將於DMF (20.0 mL)中之2-甲基氫硫基-4 -(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.81 g, 8.87 mmol, 1.0 eq)、(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物63, 2.30 g, 8.87 mmol, 1.0 eq)、DIEA (3.44 g, 26.6 mmol, 4.63 mL, 3.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成後，在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至1:1)純化，以得到呈黃色固體之所述標題化合物4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.6 g, 6.16 mmol, 69%產率, 92.2%純度)。
中間物69

1-溴-8-甲基萘

步驟A：1-溴-8-甲基-萘。在0°C下向1,8-二溴萘(1 g, 3.50 mmol, 1eq )之THF (20 mL)溶液逐滴添加MeLi (1.6 M於二乙醚中, 2.62 mL, 1.2eq )。在0°C下攪拌30分鐘之後，逐滴添加碘甲烷(3.38 g, 23.8 mmol, 1.48 mL, 6.81eq )。將該混合物升溫至25°C且再攪拌3小時。以水(20 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 70%, 28 分鐘; 40% min)純化。在凍乾之後得到呈黃色固體之所述標題化合物1-溴-8-甲基-萘(340 mg, 1.49 mmol, 43%產率, 97%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 (dd,J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 0.8, 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 7.13 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 3.05 (s, 3H).
中間物70

1-溴-8-氯萘

步驟A：1H -萘并[1,8-de][1,2,3]三嗪。在2小時期間內，於溫度控制在18°C及21°C之間在冷水浴下，向萘-1,8-二胺(100 g, 632 mmol, 1eq )之AcOH (200 mL)及EtOH (1000 mL)溶液逐滴添加亞硝酸異戊酯(isoamyl nitrite) (72.6 g, 619 mmol, 83.4 mL, 0.98eq )。在添加之後，在25°C下攪拌所得的紅色懸浮液16小時。藉由過濾收集固體，用乙醇(2 × 500 mL)洗滌且真空乾燥。得到呈紅色結晶固體之化合物1H -萘并[1,8-de][1,2,3]三嗪(triazine) (84 g, 496 mmol, 79%產率)，且不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 170。

步驟B：8-氯萘-1-胺。向1H -萘并[1,8-de][1,2,3]三嗪(84 g, 496 mmol, 1eq )之HCl (1.5 L)溶液添加Cu (2.10 g, 33.1 mmol, 234 uL, 0.0665eq )。在25°C下攪拌該混合物12小時。以水(500 mL)稀釋所得混合物且加熱至85 °C持續30分鐘。所得的幾乎澄清水溶液係經過濾，冷卻，用氨水（直到石蕊試紙呈藍色）鹼化，且用乙酸乙酯(2 × 1000 mL)萃取該溶液。合併萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至5/1)純化。得到呈紅色固體之化合物8-氯萘-1-胺(57 g, 259 mmol, 52%產率, 81%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 178。

步驟C：1-溴-8-氯-萘。在-5 °C下向8-氯萘-1-胺(57 g, 320 mmol, 1eq )及TsOH•H₂ O (219 g, 1.16 mol, 3.6eq )之MeCN (1000 mL)溶液添加NaNO₂ (39.8 g, 577 mmol, 1.8eq )及CuBr (138 g, 963 mmol, 29.3 mL, 3eq )之H₂ O (120 mL)溶液，接著在25°C下攪拌該反應混合物12小時。向該反應混合物添加飽和Na₂ SO₃ 溶液(100 mL)且攪拌15分鐘，接著用乙酸乙酯(1000 mL×3)萃取。合併的有機層係以鹽水(500 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚)純化。得到呈白色固體之所述標題化合物1-溴-8-氯-萘(56 g, 229 mmol, 72%產率, 99%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.93 (dd,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.82 (dd,J = 1.2, 8.4, 1H), 7.79 (dd,J = 1.2, 8.4, 1H), 7.67 (dd,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.37 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (t,J = 8.0 Hz, 1H).
中間物71

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.5 g, 791 umol, 1 eq)之二噁烷(5 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 5.00 mL, 25.3 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮以得到呈褐色固體之不純產物(500 mg，粗製，HCl)。將60 mg的不純產物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.04% NH₃ •H₂ O + 10mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 50% - 80%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾以得到呈灰白色固體之所述標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(19.3 mg, 36.1 umol, 34%純化產率, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]:532。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (dd,J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (dd,J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.44 (dt,J = 3.6, 7.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 1H), 7.22 (t,J = 6.8 Hz, 1H), 4.46 - 4.34 (m, 2H), 4.15 (td,J =6.4, 10.6 Hz, 1H), 4.04 (br d,J =12.4 Hz, 0.5H), 3.95 -3.79 (m, 2H), 3.74 (br d,J =12.8 Hz, 0.5H), 3.63 -3.48 (m, 1H), 3.40 - 2.99 (m, 7H), 2.98 - 2.80 (m, 2H), 2.73 - 2.61 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (d,J =2.4 Hz, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.82 - 1.68 (m, 3H).
中間物72

2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯。將於甲苯(8 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.22 g, 1.98 mmol, 1.0 eq)、1-溴-2,3-二甲基-苯(1.10 g, 5.93 mmol, 802 uL, 3.0 eq)、Cs₂ CO₃ (1.93 g, 5.93 mmol, 3 eq)、RuPhos (185 mg, 396 umol, 0.2 eq)及Pd₂ (dba)₃ (181 mg, 198 umol, 0.1 eq)混合物脫氣且接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。以水(20 mL)稀釋殘餘物且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1 % FA)/乙腈]純化。收集的所要分餾物係以飽和碳酸氫鈉水溶液中和，真空濃縮以移除MeCN，且接著用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯(380 mg, 623 umol, 32%產率, 100 %純度)。LCMS [ESI, M+1]: 610。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下將NH₃ 鼓泡於MeOH (20 mL)內持續30分鐘。於N₂ 下將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(380 mg, 623 umol, 1.0 eq)添加至上述溶液中，隨後添加Pd/C (200 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該反應物1小時。完成時，將催化劑過濾且將濾液濃縮，以得到呈黃色固體之所述標題化合物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg, 459 umol, 74%產率, 95%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.11 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.14 (dd,J = 7.2, 9.6 Hz, 1H), 4.02 – 3.95 (m, 3H), 3.84 – 3.78 (m, 1H), 3.31 – 3.19 (m, 1H), 3.17 – 3.04 (m, 5H), 3.04 – 2.95 (m, 1H), 2.89 (dd,J = 9.2, 11.6 Hz, 1H), 2.76 – 2.62 (m, 3H), 2.58 – 2.50 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.29 - 2.23 (m, 4H), 2.12 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.76 (m, 3H).
中間物73

(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(8.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.60 g, 3.96 mmol, 1.0 eq)、1-溴-2,3-二甲基-苯(1.61 g, 8.70 mmol, 1.18 mL, 2.20 eq)、Pd₂ (dba)₃ (362 mg, 395 umol, 0.10 eq)、RuPhos (369 mg, 791 umol, 0.20 eq)及Cs₂ CO₃ (3.87 g, 11.9 mmol, 3.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(80.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=3 : 1至乙酸乙酯:甲醇= 10 : 1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(900 mg, 1.59 mmol, 40%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 509。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.11 (t,J = 15.6 Hz, 1H), 6.95(d,J = 8.0 Hz,2H), 4.63 (br s, 1H), 4.10 – 3.93 (m, 4H), 3.89 (br d,J = 4.8 Hz, 1H), 3.27 (dd,J = 3.6 Hz,J = 13.6 Hz, 1H),3.24 – 3.05 (m, 3H), 3.05 – 2.95 (m, 1H), 2.89 – 2.67 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.28 (s, 3H ), 1.52 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於DCM (5.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 983 umol, 1.0 eq)、3-氯苯羰過氧酸(200 mg, 983 umol, 1.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=3 : 1至乙酸乙酯:甲醇= 10 : 1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 793 umol, 81%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]:525。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.52 mmol, 1.0 eq)、[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(369 mg, 3.20 mmol, 380 uL, 2.10 eq)、t -BuONa (293 mg, 3.05 mmol, 2.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。用水(20.0 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取粗製混合物。合併的萃取物係以鹽水(80.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=5:1至二氯甲烷:甲醇= 10:1)純化。得到呈黃色固體之所述標題化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(740 mg, 1.22 mmol, 80%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 576。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.10 (t,J = 15.2 Hz, 1H), 6.95 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8 Hz,J = 9.6 Hz,1H), 4.13 – 4.00 (m, 4H), 3.89 (br d,J = 12.4 Hz 1H), 3.27 – 3.13 (m, 3H), 3.13 – 2.95 (m, 3H), 2.87 – 2.65 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.27 (s, 3H ), 2.09 – 2.06 (m, 1H), 2.06 – 2.04 (m, 1H), 1.93 – 1.62 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).
實例1

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於2 mL的二甲基乙醯胺中合併4-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.0 g, 3.7 mmol)、三乙胺(1.0 mL, 7.4 mmol)及1-哌嗪甲酸苯甲酯(0.86 mL, 4.4 mmol)。將反應容器密封且在攪拌下將反應混合物加熱至90°C。在5小時之後，以鹽水稀釋該反應物且用甲基第三丁醚萃取。合併的有機層係依序以飽和氯化銨及鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，且在減壓環境下濃縮成濃稠油狀物。該油狀物係經層析(RediSep®, 24 g)用1:1乙酸乙酯/己烷溶離，以得到4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.3 g, 2.9 mmol, 77 %產率)。ES+APCI MS m/z 454.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.58 g, 3.484 mmol)之二氯甲烷(11.61 mL, 3.484 mmol)溶液添加三氟乙酸(2.668 mL, 34.84 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物3小時。將反應物真空濃縮且將殘餘物溶解於二氯甲烷中。該溶液係依序以1M NaOH及鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。粗產物係藉由管柱層析法(Biotage Isolera, 24G Isco RediSep® Gold, 10至20%甲醇/二氯甲烷)純化，以得到呈灰白色泡沫的產物(1.1 g, 89%)。ES+APCI MS m/z 354.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.0069 g, 0.0075 mmol)、外消旋-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘(0.0096 g, 0.015 mmol)及甲苯(0.62 mL, 0.19 mmol)。使氬氣鼓泡通過該混合物5分鐘，且接著蓋上該小管並將混合物加熱至100°C持續15分鐘。將該混合物冷卻至環境溫度，接著添加第三丁醇鈉(0.036 g, 0.37 mmol)且隨後添加1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(0.050 g, 0.19 mmol)及4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.13 g, 0.37 mmol)。蓋上該小管且將混合物加熱至100°C持續20分鐘。將該混合物冷卻至環境溫度，以二氯甲烷稀釋且過濾通過GF/F濾紙。將濾液濃縮且通過管柱層析法(Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 10-50%乙酸乙酯/二氯甲烷)純化，以得到呈灰白色泡沫的產物(0.062 g, 61%)。ES+APCI MS m/z 540.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶：向4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.061 g, 0.11 mmol)之乙醇(1.1 mL, 0.11 mmol)及四氫呋喃(1.1 mL, 0.11 mmol)溶液添加鈀(0.024 g, 0.011 mmol) (Degussa型，10 wt.%, 50% H₂ O)。藉由真空將H₂ 環境引入到反應容器內，接著使反應混合物保持在H₂ 環境下。在環境溫度下攪拌該混合物2.5小時，接著以甲醇稀釋並過濾通過GF/F濾紙。以甲苯將無色濾液真空濃縮，以得到灰白色泡沫(0.048 g, 105%)且直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 406.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：在環境溫度下向7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(0.046 g, 0.11 mmol)之二氯甲烷(1.1 mL, 0.11 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯(acryloyl chloride) (1.2 mL, 0.12 mmol) (新鮮製備的0.1 M二氯甲烷溶液)且隨後添加三乙胺(0.032 mL, 0.23 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物1小時。將該混合物濃縮且將產物藉由管住層析法(Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®,乙酸乙酯)純化，以得到呈灰白色固體泡沫的產物(0.042 g, 79%)。ES+APCI MS m/z 460.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(0.034 g, 0.074 mmol)之乙酸乙酯(0.74 mL, 0.074 mmol)溶液添加氫氯酸(於2-丙醇中之5至6 N溶液(0.44 mL, 2.2 mmol)。在環境溫度下攪拌該混合物5小時。該混合物係以乙酸乙酯(10 mL)稀釋，過濾通過聚丙烯過濾器，且將收集的固體用乙酸乙酯及己烷洗滌，以得到HCl鹽產物。將該不純物質以1 mL的氫氧化銨/甲醇使酸淬滅，且藉由管柱層析法(Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 2%至5% 甲醇/乙酸乙酯)純化，以得到呈灰白色固體的產物(0.008 g, 25%)。ES+APCI MS m/z 416.2 [M+H]⁺ 。

1H NMR (CD3OD, 400 MHz) 8.49 (s, 1H), 8.07 (app d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.61 (app d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.25 (m, 1H), 6.80 (m, 3H), 6.23 (dd, J = 16.8, 1.6 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 10.6, 2.0 Hz, 1H), 4.22 (br s, 2H), 3.80 (app t, J = 4.7 Hz, 4H), 3.63 (br s, 4H), 3.35 (br s, 2H), 3.03 (br s, 2H).
實例2

1-(4-(7-(7-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例1的製備方法來合成，使用2-溴-7-(甲氧基甲氧基)萘代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 416.1 [M+H]⁺ 。
實例3

1-(4-(7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 的製備方法來合成，使用1-碘萘代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 400.2 [M+H]⁺ 。
實例4

1-(4-(7-(2-氟-6-羥基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 的製備方法來合成，使用2-溴-1-氟-3-(甲氧基甲基)苯代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 384.2 [M+H]⁺ 。
實例5

1-(4-(7-(2-氟-5-羥基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 的製備方法來合成，使用2-溴-1-氟-4-(甲氧基甲氧基)苯代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 384.2 [M+H]。
實例6

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A-C：4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：根據實例 1 步驟A-C的製備方法來合成，使用4-氯-6-甲基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯代替步驟A中的4-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸酯。ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]⁺ 。

步驟D1：4-(7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.05 g, 0.09 mmol)之異丙醇(10 mL)溶液添加氯化氫(5-6M於異丙醇中) (0.02 mL, 0.09 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物1小時。將反應物真空濃縮且使濃縮物分溶於乙酸乙酯與水之間，以將所述物質轉換成游離鹼。合併的有機層係以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到4-(7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.005 g, 0.010 mmol, 11%產率)。ES+APCI MS m/z 510.3 [M+H]⁺ 。

步驟D2：4-(7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-醇：根據實例 1 步驟D的方法來製備。

步驟E：1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：根據實例 1 步驟E的方法來製備。
實例7

1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A-D：4-(7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：根據通用流程1步驟A-C來合成，使用4-溴-5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。

步驟D1：4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.16 g, 0.26 mmol)之二氯甲烷(10 mL)溶液添加2,2,2-三氟乙酸(0.89 g, 7.8 mmol)，隨後添加苯甲醚(0.028 g, 0.26 mmol)，在室溫下攪拌該反應物3小時。將反應物真空濃縮且將濃縮物溶解於乙酸乙酯中且用鹼性鹽水洗滌。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。粗製物係使用0%至10%甲醇/二氯甲烷做為溶離液層析，以得到4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.05g, 38%)。ES+APCI MS m/z 484.2 [M+H]⁺ 。

步驟D2：7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶：根據實例 1 步驟D的方法來製備。

步驟E：1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：根據實例 1 步驟E的方法來製備。
實例8

(S)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將1-哌嗪甲酸苯甲酯(1.268 mL, 6.575 mmol)及2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3 4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸第三丁酯(2 g, 6.575 mmol)溶解於二甲基乙醯胺(10 mL)中且用N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(3.445 mL, 19.73 mmol)處理。在85°C下攪拌該反應混合物2小時。將反應混合物冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋，用水及鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。濃縮物係藉由層析法(CombiFlash®, 0%-50% 乙酸乙酯:己烷做為溶離液)純化，以得到產物(2.69g, 83%)。ES+APCI MS m/z 488.2, 490.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(235 mg, 0.482 mmol)及(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇(497 mg, 4.82 mmol)添加至二噁烷(0.5 mL)且加熱至100°C持續3天。將反應物濃縮且所得殘餘物係藉由矽膠(Biotage Isolera, 於二氯甲烷中之0-12%甲醇)純化，以得到(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(200 mg, 0.361 mmol, 74.9 %產率)。ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(200 mg, 0.3606 mmol)之二氯甲烷(1202 µL, 0.3606 mmol)溶液添加三氟乙酸(828.3 µL, 10.82 mmol)且在室溫下攪拌反應物3小時。將反應物真空濃縮且將殘餘物溶解於二氯甲烷中。該溶液係以1M NaOH洗滌，隨後以鹽水洗滌，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。粗產物係藉由管柱層析法(Biotage Isolera, 24G Isco RediSep®Gold, 10%至20% 甲醇/二氯甲烷)純化，以得到呈灰白色泡沫的產物(0.135 g, 83%)。ES+APCI MS m/z 455.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (21.8 mg, 0.0238 mmol)、外消旋-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘(30.4 mg, 0.0488 mmol)及甲苯(991 µL, 0.297 mmol)。使氬氣鼓泡通過該混合物5分鐘，且接著蓋上該小管並將混合物加熱至100°C持續15分鐘。將該混合物冷卻至環境溫度，接著添加第三丁醇鈉(57.2 mg, 0.595 mmol)且隨後添加三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯(100 mg, 0.297 mmol)及(S)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(135 mg, 0.297 mmol)。蓋上該小管且將混合物加熱至100°C持續18小時。將該混合物冷卻且濃縮。粗製物係藉由矽膠(Biotage Isolera, 0-11% 甲醇/二氯甲烷)純化，以得到(S)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(68 mg, 0.106 mmol, 35.7%產率)。ES+APCI MS m/z 641.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-2-((7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙-1-胺：向(S)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(68 mg, 0.11 mmol)之乙醇(1061 µL, 0.11 mmol)及四氫呋喃(1061 µL, 0.11 mmol)溶液添加鈀(113 mg, 0.053 mmol) (Degussa型，10 wt.%, 50% H₂ O)。藉由真空將H₂ 環境引入，接著使反應容器保持在H₂ 環境下。在環境溫度下攪拌該混合物3小時。以甲醇稀釋該混合物且過濾通過GF/F濾紙。將無色濾液濃縮，以得到(S)-2-((7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙-1-胺(54 mg, 100 %產率)，其不經純化即用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 507.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(S)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：在環境溫度下向(S)-2-((7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙-1-胺(54 mg, 0.11 mmol)之二氯甲烷(1066 µL, 0.11 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯(1279 µL, 0.13 mmol) (新鮮製備的0.1 M DCM溶液)且隨後添加三乙胺(30 µL, 0.21 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物20分鐘。將該混合物濃縮且將產物藉由管柱層析法(Biotage Isolera, 12G Isco RediSep®, 0-15% 甲醇/二氯甲烷)純化，以得到(S)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(51 mg, 0.091 mmol, 85%產率)。ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將(S)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(51 mg, 0.091 mmol)添加至一含有350 µL甲醇與幾滴四氫呋喃的小管中且蓋上該反應小管。在攪拌下添加HCl (379 µL, 2.3 mmol) (6M水溶液)，且將該混合物加熱至55 °C持續3小時。將反應物冷卻且真空濃縮。添加飽和碳酸氫鹽溶液且用於二氯甲烷中之10%甲烷來萃取反應物。有機層係經合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(Biotage Isolera, 於二氯甲烷中之4-20%甲醇，具有1%濃氯化銨)純化，以得到標題產物(25.3 mg, 54%)。ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]⁺ 。

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ 7.90 (d, 1H, J=8.314Hz), 7.54 (d, 1H, J=8.021), 7.34 (m, 1H), 7.24 (m, 1H). 6.72 (m, 1H), 6.56-6.48 (m, 2H), 6.32 (dd, 1H, J=16.726, 1.858), 5.73 (dd, 1H, J=10.368, 1.858), 5.45 (m, 1H), 4.09-3.94 (m, 2H), 3.63 (bs, 2H), 3.47 (bs, 2H), 3.31 (m, 4H), 3.16 (bs, 2H), 2.84 (m, 1H), 2.60 (bs, 2H), 2.45 (m, 1H), 2.43 (s, 6H), 1.31 (d, 3H, J=6.162 Hz)
實例9

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(二甲基胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 503.2 [M+H]⁺ 。
實例10

1-(4-(2-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-(二甲基胺基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例11

1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-(二甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例12

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(4-甲基哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-甲基哌嗪代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 514.3 [M+H]⁺ 。
實例13

1-(4-(2-(3-(二甲基胺基)吡咯啶-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用N,N-二甲基吡咯啶-3-胺代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 528.3 [M+H]⁺ 。
實例14

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯並使用2-(二甲基胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例15

(R)-1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，以(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯並以2-(二甲基胺基)乙-1-醇取代步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例16

1-(6-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-2-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯並以2-(二甲基胺基)乙-1-醇取代步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 515.3 [M+H]⁺ 。
實例17

1-(4-(2-(4-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用N,N-二甲基哌啶-4-胺代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 580.3 [M+H]⁺ 。
實例18

1-(6-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-2-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯並以1-(二甲基胺基)丙-2-醇取代步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例19

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例20

1-(6-(2-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-2-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯並以3-(二甲基胺基)丙-1-醇取代步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例21

1-(4-(2-((4-(二甲基胺基)丁-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用4-(二甲基胺基)丁-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]⁺ 。
實例22

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-4-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-甲基哌啶-4-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例23

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-3-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-甲基吡咯啶-3-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 515.3 [M+H]⁺ 。
實例24

1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-(二甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，使用1-溴萘代替步驟D中的三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯，且剔除步驟G。ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]⁺ 。
實例25

1-(4-(2-(3-(二甲基胺基)丙氧基)-7-(1-苯基乙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-(二甲基胺基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，使用(1-溴乙基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯，且剔除步驟G。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例26

1-(4-(2-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。在步驟D之後，進行隨後的皂化反應：將4-(2-(4-(2-乙醯氧基乙基)哌嗪-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯溶解於THF (5 mL)中且添加2 M LiOH (1 mL)。在環境溫度下攪拌該混合物24小時。添加飽和NH₄ Cl且用DCM萃取該反應物。合併的有機層係經濃縮，且所得殘餘物係藉由矽膠(Biotage Isolera Gold, 用於DCM中的0-10% MeOH溶離)純化，以得到4-(2-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。合成的其餘部分係如實例8步驟E進行。ES+APCI MS m/z 544.3 [M+H]⁺ 。
實例27

1-((S)-4-(2-(((R)-1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯且使用(R)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]⁺ 。
實例28

(S)-1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯代替步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯且使用2-(二甲基胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]⁺ 。
實例29

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-嗎啉乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-嗎啉基乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]⁺ 。
實例30

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-嗎啉-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用嗎啉代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]⁺ 。
實例31

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用吡咯啶代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 485.2 [M+H]⁺ 。
實例32

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(吡咯啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-(吡咯啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例33

1-(4-(2-(2-(1,1-二氧離子基硫代嗎啉基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(10.0 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 463.12 µmol, 1.00 eq)及2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙醇(166 mg, 926 µmol, 2.00 eq)混合物添加NaOBu-t (133 mg, 1.39 mmol, 3.00 eq)、BINAP (57.7 mg, 92.6 µmol, 0.20 eq)、Pd₂ (dba)₃ (42.4 mg, 46.3 µmol, 0.10 eq)。在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。將反應混合物。將該反應混合物過濾且將濾餅以DCM (3 × 10 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(40 % MeCN於水中(0.1 % TFA)純化，以得到呈褐色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 301 µmol, 65.1%產率)。ESI MS m/z 763.5 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：於N₂ 下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(190 mg, 249 µmol, 1.00 eq)之MeOH (10.0 mL)溶液添加Pd/C (100 mg)。將懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物4小時。將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈褐色固體之4-[2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(90.0 mg, 167 µmol, 67.1%產率)。ESI MS m/z 539.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向4-[2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(90.0 mg, 167 µmol, 1.00 eq)及DIEA (64.8 mg, 501 µmol, 87.5 µL, 3.00 eq)之DCM (2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(19.0 mg, 150 µmol, 0.90 eq)。在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。用1 mL of MeOH使反應混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC管柱純化：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1% TFA)-ACN]; B%: 12%-42%,11 分鐘，以得到呈褐色油狀物之1-[4-[2-[2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯(32.6 mg, 50.2 µmol, 30.0%產率, 91.3%純度)。ESI MS m/z 593.5 [M+H]⁺ 。
實例34

1-(4-(2-(3-(1,1-二氧離子基硫代嗎啉基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

根據實例 33 的製備方法來合成，使用3-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)丙-1-醇代替步驟A中的2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙醇（2-(1,1-二側氧基-1,4-thiazinan-4-基)乙醇）。ESI MS m/z 607.5 [M+H]⁺ 。
實例35

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(4-嗎啉丁氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

根據實例 33 的製備方法來合成，使用4-嗎啉丁-1-醇代替步驟A中的2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙醇。ESI MS m/z 573.4 [M+H]⁺ 。
實例36

(R)-1-(4-(2-((1-(4-乙醯基哌嗪-1-基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 33 的製備方法來合成，使用1-[4-[(2R )-2-羥丙基]哌嗪-1-基]乙酮代替步驟A中的2-(1,1-二側氧基-1,4-噻嗪烷-4-基)乙醇。ESI MS m/z 600.6 [M+H]⁺ 。
實例37

1-(4-(2-(2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[2-[2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基]-7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C下向1-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酮(277 mg, 1.61 mmol, 2.60 eq)之THF (8.00 mL)溶液添加NaH (49.4 mg, 1.23 mmol, 60%純度, 2.00 eq)。在0°C下攪拌該反應混合物15分鐘。向該混合物添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 618 µmol, 1.00 eq)之THF (2.00 mL)溶液。在0°C下攪拌該反應混合物20分鐘。用飽和NH₄ Cl (6 mL)及水(6 mL)使該反應混合物淬滅。用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取該反應混合物。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之4-[2-[2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基]-7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(450 mg, 534 µmol, 86.5%產率, 89.7 %純度)。ESI MS m/z 756.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：1-[4-[2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮：在N₂ 下向4-[2-[2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基]-7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 264 µmol, 1.00 eq)之THF (10.0 mL)溶液添加Pd/C (100 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾餅用THF (3 × 5 mL)洗滌。將濾液真空濃縮，以得到呈褐色固體之1-[4-[2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮(80.0 mg, 150 µmol, 56.9%產率)。

步驟C：1-[4-[2-[2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向1-[4-[2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙基]哌嗪-1-基]乙酮(80.0 mg, 150 µmol, 1.00 eq)及DIEA (58.3 mg, 451 µmol, 78.8 µL, 3.00 eq)之DCM (2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(14.2 mg, 113 µmol, 0.75 eq)歷時0.5小時。用MeOH (1 mL)使反應混合物淬滅且用DCM (20 mL)稀釋，接著以水(5 mL)洗滌。合併的有機層係以鹽水(5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。該反應混合物係藉由製備型HPLC純化：Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 30%-55%, 10 分鐘，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(4-乙醯基哌嗪-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(13.8 mg, 23.3 µmol, 15.5%產率, 98.7 %純度)。ESI MS m/z 586.3 [M+H]⁺ 。
實例38

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 37 的製備方法來合成，使用3-(1-哌啶基)丙-1-醇代替步驟A中的1-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酮。ESI MS m/z 557.5 [M+H]⁺ 。
實例39

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-(吡咯啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 37 的製備方法來合成，使用3-吡咯啶-1-基丙-1-醇代替步驟A中的1-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酮。ESI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例40

1-(4-(2-(4-(二甲基胺基)丁氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 37 的製備方法來合成，使用4-(二甲基胺基)丁-1-醇代替步驟A中的1-[4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]乙酮。ESI MS m/z 531.4 [M+H]⁺ 。
實例41

1-(4-(7-(3-環丙基-5-羥基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-5-環丙基-苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯：向甲苯(10.0 mL)中之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 805 µmol, 1.00eq )及1-苯甲氧基-3-溴-5-環丙基-苯(268 mg, 886 µmol, 1.10eq )混合物添加2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (75.2 mg, 161 µmol, 0.20eq )、Pd₂ (dba)₃ (111 mg, 121 µmol, 0.15eq )及Cs₂ CO₃ (656 mg, 2.01 mmol, 2.50eq )。在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。將反應混合物添加水(15 mL)且用DCM (2 × 15 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3:1至二氯甲烷:甲醇 = 10:1)純化，以得到呈褐色油狀物之4-[7-(3-苯甲氧基-5-環丙基-苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(170 mg, 230 µmol, 28.5%產率, 97.2 %純度)。ESI MS m/z 719.6 [M+H]⁺ 。

步驟B：3-環丙基-5-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基])苯酚：向於MeOH (10.0 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-5-環丙基-苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 209 µmol, 1.00eq )混合物添加Pd/C (150 mg, 10%純度)及CH₃ COOH (25.1 mg, 417.3 µmol, 23.9 µL, 2.00eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(15 Psi)下攪拌該混合物2小時。將反應混合物過濾通過Celite®(矽藻土)且將濾液濃縮。得到呈黃色油狀物之產物二乙酸3-環丙基-5-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯酚酯(80.0 mg, 130 µmol, 62.4 %產率)。ESI MS m/z 495.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[7-(3-環丙基-5-羥基-苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向DCM (2.00 mL)中之二乙酸3-環丙基-5-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯酚酯(80.0 mg, 130 µmol, 1.00eq )混合物添加DIEA (168 mg, 1.30 mmol, 227 µL, 10.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(13.1 mg, 104 µmol, 0.80eq )，在-78°C下攪拌該反應混合物0.5小時。以MeOH (2 eq, 10 mg)使反應混合物淬滅，接著濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (儀器: GX-K; 管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 條件: 水 (0.1 % TFA)-ACN; 開始B: 8; 結束B: 38; 梯度時間(分鐘): 11; 100% B 持續時間(分鐘): 2; 流速(mL/分鐘): 25)純化。將分離出的產物藉由凍乾濃縮。得到呈黃色固體之產物1-[4-[7-(3-環丙基-5-羥基-苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯(21.5 mg, 31.1 µmol, 23.9%產率, 95.8 %純度)。ESI MS m/z 549.5 [M+H]⁺ 。
實例42

1-(4-(7-(2-氟-5-羥基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 41 的製備方法來合成，使用4-(苯甲氧基)-2-溴-1-氟苯代替步驟A中的1-苯甲氧基-3-溴-5-環丙基-苯。ESI MS m/z 527.4 [M+H]⁺ 。
實例43

1-(4-(7-(3-羥基-6-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(3.00 mL)中之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 1.01 mmol, 1.00eq )、三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)酯(483 mg, 1.51 mmol, 1.50eq )、Cs₂ CO₃ (820 mg, 2.52 mmol, 2.50eq )、2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (93.9 mg, 201.3 µmol, 0.20eq )及Pd₂ (dba)₃ (92.2 mg, 100 µmol, 0.10eq )混合物在90°C下攪拌10小時。用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋該混合物。藉由過濾將沉澱物移除，且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相管柱層析法經矽膠(0.1% TFA 水/乙腈)純化。將所要分餾物合併且用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化(2.00 mL)，接著真空濃縮。用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取殘餘物。合併的萃取物係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400. mg, 599 µmol, 59.4%產率, 100 %純度)。ESI MS m/z 667.6 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[3-[[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉：在N₂ 下向4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(370 mg, 554 µmol, 1.00eq )之MeOH (10.0 mL)溶液添加Pd-C (100 mg, 10%純度)及AcOH (66.6 mg, 1.11 mmol, 2.00eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物2小時。將反應混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[3-[[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (295 mg, 553 µmol, 99.8 %產率)，其不經純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 533.6 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於DCM (2.00 mL)中之丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(56.8 mg, 450 µmol, 0.80eq )及DIEA (727 mg, 5.63 mmol, 983 µL, 10.0eq )混合物添加4-[3-[[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (300 mg, 563 µmol, 1.00eq )之DCM (1.00 mL)溶液。攪拌該混合物1小時。藉由在-40°C下添加MeOH (50 µL)使反應混合物淬滅，以水(10.0 mL)稀釋，用DCM(10.0 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到1-[4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(270 mg, 460 µmol, 81.7%產率)。ESI MS m/z 587.6 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[7-(3-羥基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向1-[4-[7-(3-甲氧基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(100 mg, 170 µmol, 1.00eq )之DCM (3.00 mL)溶液添加BBr₃ (213 mg, 852 µmol, 82.1 µL, 5.00eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物冷卻至-78°C且用DCM (20.0 mL)稀釋，藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液(5.00 mL)淬滅，且在-78°C下攪拌10分鐘，接著升溫至0°C。該混合物係經DCM (2 × 15.0 mL)萃取，以鹽水(1 × 20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50 mm*, 10 µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 27%-57%, 12 分鐘)純化，以得到呈褐色固體之1-[4-[7-(3-羥基-6-甲基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(11.0 mg, 18.6 µmol, 10.9%產率, 97.0%純度)。ESI MS m/z 573.6 [M+H]⁺ 。
實例44

1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(20.0 mL)中之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 1.01 mmol, 1.00eq )、2-[(4-溴-5-甲基-吲唑-1-基)甲氧基]乙基-三甲基矽烷(448 mg, 1.31 mmol, 1.30eq )、Cs₂ CO₃ (822 mg, 2.53 mmol, 2.50eq )、Pd₂ (dba)₃ (138 mg, 151 µmol, 0.15eq )及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (94.3 mg, 202 µmol, 0.20eq )混合物脫氣且用氮氣沖淨3次，且在90°C於氮氣環境下攪拌10小時。以水(50 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相HPLC (0.1% TFA 水/乙腈)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(420 mg, 554 µmol, 54.9 %產率)。ESI MS m/z 757.6 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(370 mg, 488 µmol, 1.00eq )之MeOH (10.0 mL)溶液添加三乙胺(98.9 mg, 977 µmol, 135 µL, 2.00 eq)、Pd/C(100 mg, 10%純度)及第三丁氧基羰基第三丁基碳酸酯(213 mg, 977 µmol, 224 µL, 2.00eq )。使懸浮液於真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於(15 psi)下攪拌該混合物2小時。將反應混合物過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 1:0至10:1)純化，以得到呈褐色油狀物之4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(340 mg, 470 µmol, 96.2 %產率)。ESI MS m/z 723.5 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[3-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉三氟乙酸酯：向4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 207 µmol, 1.00eq )之DCM (500 µL)溶液添加TFA (354 mg, 3.11 mmol, 230 µL, 15.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之4-[3-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉三氟乙酸酯(125 mg, 206 µmol, 99.3 %產率)，其不經純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 493.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於二氯甲烷(2.00 mL)中之4-[3-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉三氟乙酸酯(120 mg, 197 µmol, 1.00eq , TFA)及DIEA (255 mg, 1.98 mmol, 345 µL, 10.0eq )混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(19.9 mg, 158 µmol, 0.80eq )之二氯甲烷(1.00 mL)溶液。攪拌該混合物1小時。在-40°C下添加MeOH (50.0 µL)使反應混合物淬滅，以水(10.0 mL)稀釋，用二氯甲烷(10.0 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 30%-60%,10 分鐘)純化，以得到呈白色固體之1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(19.0 mg, 34.4 µmol, 17.4%產率, 99.0 %純度)。ESI MS m/z 547.5 [M+H]⁺ 。
實例45

1-((1R,5S)-3-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-8-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯：向於DMSO (18.0 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(920 mg, 3.13 mmol, 1.00eq )及3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(677 mg, 3.19 mmol, 1.02eq )混合物添加DIEA (1.21 g, 9.39 mmol, 1.64 mL, 3.00eq )。在60°C下攪拌該反應混合物1小時。將混合物係以EtOAc (3 × 20 mL)萃取，用水(10 mL)、1N HCl (5 mL)、NaHCO₃ (15 mL)及鹽水(15 mL)洗滌。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之3-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(1.30 g, 2.41 mmol, 76.9%產率, 87.0 %純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 470.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：3-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯：在15 °C於N₂ 下向1-(二甲基胺基)丙-2-醇(857 mg, 8.31 mmol, 942 µL, 3.00eq )之THF (40.0 mL)溶液添加NaH (222 mg, 5.54 mmol, 60.0%純度, 2.00eq )。在15 °C攪拌0.5小時之後，添加3-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(1.30 g, 2.77 mmol, 1.00eq )。在100°C下於一密封管中攪拌該混合物12小時。以水(3 mL)使該反應物緩慢淬滅，接著真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(DCM/MeOH 60:1至10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之3-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.07 mmol, 38.8%產率, 82.4 %純度)。

步驟C：3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向3-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.30 mmol, 1.00eq )之MeOH (30.0 mL)溶液添加Pd/C (200 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨4次。在40°C於氫氣(50 psi)下攪拌該混合物12小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(DCM/MeOH 50:1至5:1)純化，以得到呈黃色油狀物之3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(500 mg, 952 µmol, 73.2%產率, 85.0 %純度)。

步驟D：3-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯：將Pd₂ (dba)₃ (84.1 mg, 91.8 µmol, 0.10eq )添加至3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(410 mg, 918 µmol, 1.00eq )、3-苯甲氧基-1-溴-萘(293 mg, 936 µmol, 1.02eq )、2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (85.7 mg, 184 µmol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (897 mg, 2.75 mmol, 3.00eq )之二噁烷(9.00 mL)溶液。在100°C於N₂ 下攪拌該反應混合物7小時，接著真空濃縮。以水(5 mL)稀釋殘餘物且用DCM (2 × 20 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(DCM/MeOH 100:1至20:1)純化，以得到呈黃色油狀物之3-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(317 mg, 441 µmol, 48.1%產率, 94.5 %純度)。ESI MS m/z 679.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯：向3-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(340 mg, 501 µmol, 1.00eq )之MeOH (6.80 mL)溶液添加Pd/C (120 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨4次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物1.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色固體之3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(210 mg, 316 µmol, 63.1%產率, 88.6 %純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 589.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[4-(3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-3-基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯：向3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯(180 mg, 306 µmol, 1.00eq )之DCM (230 µL)溶液添加TFA (349 mg, 3.06 mmol, 226 µL, 10.0eq )。在18°C下攪拌該反應混合物0.5小時。將該混合物在真空下濃縮，以得到呈紅色油狀物之4-[4-(3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-3-基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯(528 mg,粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 489.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：1-[3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-8-基]丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向4-[4-(3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-3-基)-2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯(149 mg, 306 µmol, 1.00eq )及DIEA (1.36 g, 10.5 mmol, 1.84 mL, 34.5eq )之DCM (1.50 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(30.9 mg, 245 µmol, 0.80eq )。在-40°C下攪拌該混合物且接著在-20°C下攪拌30分鐘。以MeOH (19.6 mg)使該反應物淬滅且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型TLC (DCM/MeOH 7:1)純化，以得到呈黃色油狀物之1-[3-[2-[2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-8-基]丙-2-烯-1-酮(18.9 mg, 32.8 µmol, 10.7%產率, 94.3 %純度)。ESI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例46

1-((1R,5S)-8-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛-3-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 4 的製備方法來合成，使用(1R,5S)-3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-3-甲酸第三丁酯代替步驟A中的3,8-二氮雜二環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯。ESI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例47

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-8-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(苯甲基胺基)丙酸乙酯：向2-溴丙酸乙酯(30.0 g, 165 mmol, 21.6 mL, 1.00 eq)、BnNH₂ (23.1 g, 215 mmol, 23.6 mL, 1.30 eq)之MeCN (600 mL)溶液添加K₂ CO₃ (45.8 g, 331 mmol, 2.00 eq)。在80°C下攪拌該混合物2小時。將反應混合物過濾且將濾餅以DCM (300 mL)洗滌。濾液係經真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=10:1至4:1)純化，以得到呈無色油狀物之2-(苯甲基胺基)丙酸乙酯(34.0 g, 163 mmol, 98.4%產率, 99.4 %純度)。

步驟B：步驟4-[苯甲基-(2-乙氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基)胺基]丁酸乙酯：向2-(苯甲基胺基)丙酸乙酯(31.0 g, 150 mmol, 1.00 eq)及4-溴丁酸乙酯(87.5 g, 449 mmol, 64.4 mL, 3.00 eq)之MeCN (600 mL)及水(60.0 mL)溶液添加Cs₂ CO₃ (97.5 g, 299.12 mmol, 2.00 eq)及KI (4.97 g, 29.9 mmol, 0.20 eq)。在80-90°C下攪拌該反應混合物40小時。將反應混合物過濾且將濾餅以DCM (2 × 100 mL)洗滌。濾液係經真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM (300 mL)中且以鹽水(80 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係經急驟矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯= 1:0至20:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[苯甲基-(2-乙氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基)胺基]丁酸乙酯(28.0 g, 87.1 mmol, 58.3 %產率)。

步驟C：1-苯甲基-2-甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯：向4-[苯甲基-(2-乙氧基-1-甲基-2-側氧基-乙基)胺基]丁酸乙酯(28.0 g, 87.1 mmol, 1.00 eq)之THF (600 mL)溶液添加tBuOK (19.6 g, 174 mmol, 2.00 eq)。在18°C下攪拌該反應混合物1小時。以水(100 mL)使該反應混合物淬滅且用MTBE (3 × 300mL)及DCM (2 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。粗產物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=100:1至20:1)純化，以得到呈黃色油狀物之1-苯甲基-2-甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(20.0 g, 58.8 mmol, 67.5%產率, 81.0%純度)。ESI MS m/z 276.0 [M+H]⁺ 。

步驟D：7-苯甲基-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇：向EtOH (400 mL)添加Na (3.76 g, 163 mmol, 3.88 mL, 2.50 eq)。在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。向該混合物添加1-苯甲基-2-甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(18.0 g, 65.4 mmol, 1.00 eq)及尿素(9.82 g, 163 mmol, 8.77 mL, 2.50 eq)，且在80°C攪拌該反應混合物80小時。在真空下移除溶劑。將殘餘物溶解於水(100 mL)中且用MTBE (3 × 50 mL)洗滌。用HCl (15 mL, 12 M)調整水相至pH 6-7。將該混合物過濾且濾餅係以水(30 mL)洗滌且真空乾燥，以得到呈褐色固體之7-苯甲基-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(12.0 g, 44.2 mmol, 67.7%產率, 100 %純度)。ESI MS m/z 272.0 [M+H]⁺ 。

步驟E：苯甲基-2,4-二氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶：將於POCl₃ (305 g, 1.99 mol, 185 mL, 108 eq)中之7-苯甲基-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(5.00 g, 18.4 mmol, 1.00 eq)混合物加熱至110°C持續12小時。在真空下移除溶劑。將殘餘物溶解於DCM (500 mL)中且傾注入飽和NaHCO₃ (200 mL)，同時保持pH大於7。有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥。將該溶液過濾通過矽膠墊且將濾餅以DCM (3 × 400 mL)洗滌。合併的有機層係經真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之7-苯甲基-2,4-二氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(4.50 g, 14.6 mmol, 79.2 %產率)。

步驟F：4-(7-苯甲基-2-氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸酯：向7-苯甲基-2,4-二氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(3.00 g, 9.73 mmol, 1.00 eq)及DIEA (2.52 g, 19.5 mmol, 3.40 mL, 2.00 eq)之二噁烷(60.0 mL)溶液添加哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.90 g, 10.2 mmol, 1.05 eq)。在60°C下攪拌該反應混合物12小時。溶劑係於真空下移除。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=2:1)純化，以得到呈黃色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.30 g, 7.15 mmol, 73.5%產率, 99.3 %純度)。ESI MS m/z 458.1 [M+H]⁺ 。

步驟G：4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(二甲基胺基)乙醇(583 mg, 6.54 mmol, 655 µL, 3.00 eq)之甲苯(20.0 mL)溶液添加Pd(OAc)₂ (48.9 mg, 218 µmol, 0.10 eq)、4-(7-苯甲基-2-氯-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.00 g, 2.18 mmol, 1.00 eq)、Cs₂ CO₃ (2.13 g, 6.54 mmol, 3.00 eq)及BINAP (272 mg, 436 µmol, 0.20 eq)。在110°C於N₂ 下攪拌該反應混合物3小時。將反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於水(10 mL)中且用DCM (3 × 40 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯=5:1至2:1，接著DCM:MeOH = 50:1至5:1)純化，以得到呈褐色固體之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(900 mg, 1.76 mmol, 80.8 %產率)。ESI MS m/z 511.2 [M+H]⁺ 。

步驟H：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.57 mmol, 1.00 eq)之MeOH (20.0 mL)溶液添加Pd/C (100 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(50 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾餅以MeOH (3 × 200 mL)洗滌。將濾液真空濃縮以得到呈褐色油狀物之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 1.07 mmol, 68.2 %產率)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ESI MS m/z 421.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於二噁烷(8.00 mL)中之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(380 mg, 904 µmol, 1.00 eq)及3-苯甲氧基-1-溴-萘(311 mg, 994 µmol, 1.10 eq)混合物添加Cs₂ CO₃ (883 mg, 2.71 mmol, 3.00 eq)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (84.3 mg, 181 µmol, 0.20 eq)及Pd₂ (dba)₃ (82.7 mg, 90.4 µmol, 0.10 eq)。在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。將反應混合物真空濃縮。使殘餘物分溶於DCM (50 mL)及水(20 mL)之間。用DCM (50 mL)萃取該反應混合物。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(二乙醚:乙酸乙酯= 5:1接著DCM:MeOH =100:1至5:1)純化，隨後藉由製備型TLC (DCM: MeOH=10:1)純化分離出的產物，以得到呈褐色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 306 µmol, 33.9 %產率)。ESI MS m/z 653.4 [M+H]⁺ 。

步驟J：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇雙-三氟乙酸酯：向4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 177 µmol, 1.00 eq)之DCM (130.00 µL)溶液添加TFA (202 mg, 1.78 mmol, 132 µL, 10.00 eq)。在20°C下攪拌該反應混合物1小時。在真空下移除溶劑，以得到呈褐色油狀物之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇雙-三氟乙酸酯(175.00 mg)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟K：1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-8-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇雙-三氟乙酸酯(97.4 mg, 141 µmol, 1.00 eq)之DCM (500.00 µL)溶液添加DIEA (222 mg, 1.72 mmol, 300 µL, 12.2 eq)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(14.2 mg, 113 µmol, 0.80 eq)。在-40°C下攪拌該反應混合物0.5小時。用一滴MeOH使該反應混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型TLC (DCM:MeOH =10:1)純化，接著藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1%TFA)-ACN]; B%: 15%-45%, 13 分鐘)純化，以得到呈褐色油狀物之1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-8-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(10.7 mg, 20.7 µmol, 三個步驟6.8 %產率)。ESI MS m/z 517.2 [M+H]⁺ 。
實例48

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

步驟A：4-[苯甲基-(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)胺基]戊酸乙酯：在12-18 °C下將4-側氧基戊酸乙酯(47.0 g, 326 mmol, 46.5 mL, 1.50eq )、2-(苯甲基胺基)乙酸乙酯(42.0 g, 217.3 mmol, 1.00eq )及AcOH (13.0 g, 217 mmol, 12.4 mL, 1.00eq )之DCM (800 mL)溶液攪拌30分鐘，接著冷卻至0-5°C，逐份添加NaBH(OAc)₃ (138 g, 652 mmol, 3.00eq )。將該混合物升溫至10-18 °C且攪拌16小時。用水(1000 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (2 × 500 mL)萃取。合併的有機相係經乾燥，且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由矽膠管柱使用二乙醚/乙酸乙酯(60:1至40:1)溶離而純化，以得到呈無色油狀物之4-[苯甲基-(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)胺基]戊酸乙酯(42.0 g, 91.5 mmol, 42.1%產率, 70 %純度)。ESI MS m/z 322.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：1-苯甲基-2-甲基-5-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯：將4-[苯甲基-(2-乙氧基-2-側氧基-乙基)胺基]戊酸乙酯(37.00 g, 115.12 mmol, 1.00eq )及t-BuOK (16.8 g, 150 mmol, 1.30eq )之甲苯(30.0 mL)溶液在25°C下攪拌5小時。以水(50 mL)使該反應物淬滅，且用乙酸乙酯(2 x 30 mL)萃取。合併的有機萃取物係經乾燥，且濃縮至乾燥，以提供呈黃色油狀物之1-苯甲基-2-甲基-5-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(14.6 g, 53.0 mmol, 46 %產率)，其直接用於下個步驟中。

步驟C：7-苯甲基-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇：將Na (3.05 g, 133 mmol, 3.14 mL, 2.50eq )溶解於EtOH (280 mL)中，接著添加1-苯甲基-2-甲基-5-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(14.6 g, 53.0 mmol, 1.00eq )及尿素(7.96 g, 133 mmol, 7.11 mL, 2.50eq )。在N₂ 下將反應混合物加熱至回流(78 °C)持續16小時。將反應混合物濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於水(100 mL)中，以MTBE (100 mL)洗滌。用6N HCl (2 mL)將水相的pH調整至pH 6-7。藉由過濾收集所得固體，且在60°C下真空乾燥，以得到呈淺黃色固體之7-苯甲基-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(5.00 g, 17.1 mmol, 32.3%產率, 93 %純度)。

步驟D：7-苯甲基-2,4-二氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：在回流下將POCl₃ (49.5 g, 323 mmol, 30.0 mL, 58.4eq )及7-苯甲基-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2,4-二醇(1.50 g, 5.53 mmol, 1.00eq )加熱至100°C持續12小時。將反應物濃縮至乾燥以移除POCl₃ 。將殘餘物溶解於DCM (40 mL)且用飽和NaHCO₃ 水溶液/飽和Na₂ CO₃ 水溶液(1/1, 60 mL)洗滌。將該混合物過濾，有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之7-苯甲基-2,4-二氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(2.08 g, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 307.9, 309.9 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-(7-苯甲基-2-氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸酯：向二噁烷(50.0 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(2.50 g, 8.11 mmol, 1.00eq )及哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.54 g, 8.27 mmol, 1.02eq )混合物添加DIEA (3.14 g, 24.3 mmol, 4.25 mL, 3.00eq )。在60°C下攪拌該混合物20小時。將該混合物真空濃縮。以水(20 mL)稀釋殘餘物且用DCM (2 × 80 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由自動急驟層析系統(二乙醚/乙酸乙酯50:1至2:1)純化，以得到呈黃色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.59 g, 5.29 mmol, 65.2%產率, 93.5 %純度)。

步驟F：4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在15°C於N₂ 下向2-(二甲基胺基)乙醇(701 mg, 7.86 mmol, 788 µL, 3.00eq )之THF (45.0 mL)溶液添加NaH (210 mg, 5.24 mmol, 60.0%純度, 2.00eq )。在15 °C下攪拌0.5小時之後，添加4-(7-苯甲基-2-氯-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.20 g, 2.62 mmol, 1.00eq )。在110°C下於一密封管中攪拌該混合物18小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ (DCM/MeOH 100:1至10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.38 g, 2.36 mmol, 90.3%產率, 87.5%純度)。ESI MS m/z 511.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 2.94 mmol, 1.00eq )之MeOH (80.0 mL)溶液添加Pd/C (450 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨4次。在40°C於氫氣(50 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(DCM/MeOH 40/1至10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.15 g, 2.46 mmol, 83.7%產率, 90.0 %純度)。

步驟H：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將Pd₂ (dba)₃ (109 mg, 119 µmol, 0.10eq )添加至4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 1.19 mmol, 1.00eq )、3-苯甲氧基-1-溴-萘(410 mg, 1.31 mmol, 1.10eq )、2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (111 mg, 238 µmol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (1.16 g, 3.57 mmol, 3.00eq )之二噁烷(10.0 mL)溶液。在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。將該混合物真空濃縮。以水(5 mL)稀釋殘餘物且用DCM (2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ (DCM/MeOH 100/1至10/1)純化且藉由製備型TLC (DCM/MeOH 5:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(309 mg, 453 µmol, 38.1%產率, 95.8 %純度)。

步驟I：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在N₂ 下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(340 mg, 521 µmol, 1.00eq )之MeOH (6.80 mL)溶液添加Pd/C (120 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨4次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物1.5小時。將混合物真空濃縮，以得到呈粉紅色固體之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 312 µmol, 59.8%產率, 83.5 %純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 563.3 [M+H]⁺ 。

步驟J：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯：向4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6-甲基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 320 µmol, 1.00eq )之DCM (240 µL)溶液添加TFA (365 mg, 3.20 mmol, 237 µL, 10.0eq )。在18°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯(273 mg)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟K：1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6-甲基-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇三氟乙酸酯(148 mg, 320 µmol, 1.00eq )及DIEA (494 mg, 3.83 mmol, 668 µL, 12.0eq )之DCM (500 µL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(32.3 mg, 256 µmol, 0.80eq )。在-40°C至-20°C下攪拌該混合物30分鐘。以MeOH (20.5 mg)使反應物淬滅且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1% TFA)-ACN]; B%: 8%-38%,13 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6-甲基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯(73.7 mg, 113 µmol, 35.2%產率, 96.3 %純度)。ESI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。

實例49

1-(4-(2-(2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：將於甲苯(50.00 mL)中之2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙醇(401 mg, 3.01 mmol, 1.60eq )、4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-甲磺醯基- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.00 g, 1.88 mmol, 1.00eq )、Cs₂ CO₃ (1.84 g, 5.64 mmol, 3.00eq )、Pd(OAc)₂ (42.2 mg, 188 µmol, 0.10eq )及BINAP (234 mg, 376 µmol, 0.20eq )混合物在110°C下攪拌3小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯10:1至100:1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.20 g, 1.07 mmol, 56.8%產率, 52 %純度)。ESI MS m/z 585.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C下向4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.20 g, 2.05 mmol, 1.00eq )之DCM (10.00 mL)溶液添加TFA (3.51 g, 30.8 mmol, 2.28 mL, 15.00eq )。將該混合物升溫至25°C且攪拌16小時。以水(100 mL)稀釋混合物且用DCM (2 × 100 mL)萃取該溶液。用飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)使水層鹼化且接著用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。將綠意真空濃縮，以得到呈黃色膠狀物之4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(800 mg, 1.65 mmol, 80.4 %產率)。ESI MS m/z 485.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(70.00 mL)中之4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(750 mg, 1.55 mmol, 1.00eq )、三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯(949 mg, 3.10 mmol, 2.00eq )、2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (144.66 mg, 310.00 µmol, 0.20eq )、Pd₂ (dba)₃ (141.94 mg, 155.00 µmol, 0.10eq )及Cs₂ CO₃ (1.52 g, 4.65 mmol, 3.00eq )混合物在110°C下攪拌16小時。將該混合物真空濃縮且接著用乙酸乙酯(100 mL)及水(100 mL)稀釋。分離出的有機層係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯10:1至乙酸乙酯/甲醇 10:1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈褐色固體之4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700 mg, 961 µmol, 62.0%產率, 88%純度)。ESI MS m/z 641.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶：將於MeOH中之4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700.00 mg, 1.09 mmol, 1.00eq )混合物在40°C下以無水Pd/C (140 mg)做為催化劑氫化4小時。將催化劑過濾通過Celite®毛皮且將濾液真空濃縮，以得到呈褐色固體之2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(500 mg, 987 µmol, 90.6%產率)。

步驟E：1-[4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於二氯甲烷(8 mL)中之2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(500 mg, 987 µmol, 1.00eq )及DIEA (255 mg, 1.97 mmol, 345 µL, 2.00eq )混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(124 mg, 987 µmol, 1.00eq )之二氯甲烷(2 mL)溶液。將該混合物升溫至25°C且攪拌1小時。以水(20 mL)及二氯甲烷(30 mL)稀釋該混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 30 mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(二氯甲烷/甲醇 100/1至10/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(450 mg, 714 µmol, 72.4%產率, 89%純度)。ESI MS m/z 561.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-[4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-70°C於氮氣環境下向1-[4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(400 mg, 713 µmol, 1.00eq )之DCM (2.00 mL)溶液添加BBr₃ (1.30 g, 5.19 mmol, 500 µL, 7.27eq )。將該混合物升溫至0°C且攪拌1小時。該混合物係以二氯甲烷(20 mL)稀釋，接著用飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)淬滅。分離出的有機層係以鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1%TFA)-ACN]; B%: 18%-48%,12 分鐘)純化。收集所要的分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(3-氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(40.0 mg, 63.7 µmol, 8.92%產率, 87%純度)。ESI MS m/z 547.3 [M+H]⁺ 。
實例50

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(羥甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：向7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(2.00 g, 6.80 mmol, 1.00 eq)之DMSO (40.0 mL)溶液添加DIEA (1.76 g, 13.6 mmol, 2.38 mL, 2.00 eq)及2-甲基哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁酯(1.74 g, 7.14 mmol, 1.05 eq)。在55 °C下攪拌該混合物16小時。以水(100 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二乙醚/乙酸乙酯= 1:0至3:1)純化，以得到呈黃色半固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(3.10 g, 5.70 mmol, 83.8%產率, 92.3%純度)。ESI MS m/z 502.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：將於甲苯(60.0 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(3.00 g, 5.98 mmol, 1.00 eq)、2-(二甲基胺基)乙醇(1.07 g, 12.0 mmol, 1.20 mL, 2.00 eq)、Cs₂ CO₃ (4.87 g, 15.0 mmol, 2.50 eq)、Pd(OAc)₂ (201 mg, 897 µmol, 0.15 eq)及BINAP (744 mg, 1.20 mmol, 0.20 eq)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次，接著在110°C於氮氣環境下攪拌該混合物3小時。以水(50 mL)稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 1:0至5:1)純化，以得到呈黑色油狀物之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(3.10 g, 4.45 mmol, 80.4%產率, 86.0%純度)。ESI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：在N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(2.33 g, 4.20 mmol, 1.00 eq)之MeOH (50.0 mL)溶液添加Pd/C (233 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在40°C於氫氣(50 psi)下攪拌該混合物36小時。將反應混合物過濾且將有機相濃縮至乾燥，以得到呈無色油狀物之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.50 g, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟D：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：將於二噁烷(100 mL)中之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.50 g，粗製)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(1.49 g, 4.76 mmol, 1.30 eq)、Cs₂ CO₃ (2.98 g, 9.15 mmol, 2.50 eq)、Pd₂ (dba)₃ (503 mg, 549 µmol, 0.15 eq)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (342 mg, 732 µmol, 0.20 eq)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次，且在85°C於氮氣環境下攪拌該混合物5小時。在0°C下藉由添加水(50 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1至5:1)純化，以得到呈黃色之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.72 g, 2.25 mmol, 53.5%產率, 91%純度)。ESI MS m/z 697.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-甲酸甲酯：在0°C下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.32 g, 1.89 mmol, 1.00 eq)之DCM (20.0 mL)溶液添加TFA (4.31 g, 37.8 mmol, 2.80 mL, 20.0 eq)，在25°C下攪拌該反應混合物2小時。將反應混合物在減壓環境下濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (50 mL)及H₂ O (20 mL)中，且用飽和NaHCO₃ 將該反應混合物調整至pH 8。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈褐色油狀物之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-甲酸甲酯(1.12 g, 1.87 mmol, 69.6%產率, 70%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 597.4 [M+H]⁺ 。

步驟F：[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]甲醇：在0°C下向於THF (5.00 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-甲酸甲酯(400 mg, 0.670 mmol)混合物添加LiAlH₄ (102 mg, 2.68 mmol, 4.00 eq)。該反應混合物係經脫氣且用氮氣沖淨3次，在0°C於氮氣環境下攪拌2小時。在0°C下藉由添加Na₂ SO₄ ·10 H₂ O (0.5 g)使該反應混合物淬滅，接著用DCM (50 mL)稀釋。合併的有機層係經過濾，經Na₂ SO₄ 乾燥且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色半固體之[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]甲醇(280 mg, 0.493 mmol, 73.6%產率)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 569.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[3-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基] 哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N,N-二甲基-乙胺：在0°C下向[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]甲醇(250 mg, 440 µmol, 1.00 eq)及NaH (176 mg, 4.40 mmol, 60.0%純度, 10.0 eq)之THF (10.0 mL)攪拌溶液添加第三丁基二甲基氯矽烷(232 mg, 1.54 mmol, 189 µL, 3.50 eq)。在25°C於氮氣環境下攪拌該混合物12小時。在0°C下藉由添加水(25 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 30 mL萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由製備型TLC (SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1)純化，以得到呈無色半固體之2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[3-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N,N-二甲基-乙胺(128 mg, 180 µmol, 40.9%產率, 96.0%純度)。ESI MS m/z 683.3 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N,N-二甲基-乙胺(128 mg, 187 µmol, 1.00 eq)及三乙胺(47.4 mg, 469 µmol, 65.0 µL, 2.50 eq)之DCM (5.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(35.5 mg, 281 µmol, 1.50 eq)且攪拌30分鐘。將反應混合物在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由製備型TLC (SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(92.0 mg, 101 µmol, 54.0%產率, 81.0%純度)。ESI MS m/z 737.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(羥甲基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：將於DCM (8.00 mL)中之1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(92.0 mg, 125 µmol, 1.00 eq)混合物添加BBr₃ (17.0 mg, 67.8 µmol, 6.53 µL, 10.0 eq)。在-40°C於氮氣環境下攪拌該混合物30分鐘，接著在25°C於減壓環境下濃縮至乾燥。向該殘餘物添加飽和NaHCO₃ 水溶液(0.5 mL)。在0°C下調整該溶液至pH 8，接著添加MeOH (2.0 mL)。該溶液係藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1 % TFA)- ACN]; B %: 15 % - 45 %, 11 分鐘)純化。收集所要分餾物且於減壓環境下濃縮以移除MeCN並凍乾，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(羥甲基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(6.30 mg, 11.2 µmol, 9.00%產率, 95.0%純度)。ESI MS m/z 533.2 [M+H]⁺ 。
實例51

1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-N,N-二甲基哌嗪-2-羧醯胺

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-第三丁氧基羰基-哌嗪-2-甲酸：向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(300 mg, 431 µmol, 1.00 eq)之THF (4.00 mL)及H₂ O (1.00 mL)溶液添加NaOH (68.9 mg, 1.72 mmol, 4.00 eq)。在25°C於氮氣環境下攪拌該混合物12小時。以水(50 mL)稀釋該反應混合物且用HCl (6 M)調整該反應混合物至pH 6，接著用DCM (3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-第三丁氧基羰基-哌嗪-2-甲酸(310 mg, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 683.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向於DCM (10.0 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-第三丁氧基羰基-哌嗪-2-甲酸(310 mg，粗製)及DIEA (352 mg, 2.72 mmol, 476 µL)混合物逐份添加HATU (259 mg, 681 µmol)。在攪拌30分鐘之後，一次添加入N-甲基甲胺(130 mg, 1.59 mmol, 146 µL, HCl)。將反應混合物脫氣且用氮氣沖淨3次。在25°C於氮氣環境下攪拌12小時之後，在0°C下以水(50 mL)稀釋該反應混合物且用DCM (3 × 50 mL)萃取。用HCl (1 M)將合併的有機層調整至pH 6，用鹽水(3 × 50 mL)及水(3 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈黃色半固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(345 mg, 428 µmol, 兩個步驟94.2%產率, 88.0%純度)。ESI MS m/z 710.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在N₂ 下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(345 mg, 486 µmol, 1.00 eq)之MeOH (5.00 mL)溶液添加Pd/C (80.0 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在25°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物8小時。將該反應混合物過濾且將濾液在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈褐色固體之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(197 mg, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 620.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-N,N-二甲基-哌嗪-2-羧醯胺：在0°C下向於DCM (5.00 mL)中之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(二甲基胺甲醯基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(197 mg，粗製)混合物添加HCl/二噁烷(4 M, 1.61 mL)。將反應混合物脫氣且用氮氣沖淨3次，並在25°C於氮氣環境下攪拌2小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.05 % HCl)- ACN]; B %: 10 % -30 %, 7.8 分鐘)純化。將所收集的水相凍乾至乾燥，以得到呈褐色固體之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-N,N-二甲基-哌嗪-2-羧醯胺(90.0 mg, 171 µmol, 53.1%產率, 99.0%純度)。ESI MS m/z 520.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-N,N-二甲基-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-羧醯胺：在0°C下向4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-N,N-二甲基-哌嗪-2-羧醯胺(70.0 mg, 135 µmol, 1.00 eq)之DMAC (500 µL)溶液添加三乙胺(40.9 mg, 404 µmol, 56.0 µL, 3.00 eq)，接著添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(2.55 mg, 20.2 µmol, 0.15 eq)。在0°C於氮氣環境下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物過濾且將收集的有機相藉由製備型HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*, 10 µ; 移動相：[水(0.1 % TFA)-ACN]; B %: 15 % - 45 %, 12 分鐘)純化。將所收集的水相凍乾，以得到呈黃色半固體之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-N,N-二甲基-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-羧醯胺(10.0 mg, 16.5 µmol, 12.2%產率, 94.6%純度)。ESI MS m/z 574.2 [M+H]⁺ 。
實例52

1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-苯甲基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向-(1-哌啶基)乙醇 (872 mg, 6.75 mmol, 899 µL, 3.00 eq)之甲苯(40.0 mL)溶液添加Pd(OAc)₂ (50.5 mg, 225 µmol, 0.10 eq)、Cs₂ CO₃ (2.20 g, 6.75 mmol, 3.00 eq)、BINAP (280 mg, 450 µmol, 0.20 eq)及4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.00 g, 2.25 mmol, 1.00 eq)。在110°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時，接著真空濃縮。以水(10.0 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，用鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM /MeOH = 10:1)純化，以得到呈紅色固體之4-[7-苯甲基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.30 mmol, 58.0%產率)。ESI MS m/z 537.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於MeOH (50.0 mL)中之4-[7-苯甲基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.12 mmol, 1.00 eq)混合物添加Pd/C (67.2 mg, 10 %)。在40°C於50 psi的H₂ 下攪拌該混合物24小時。將該混合物過濾且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之4-[2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ESI MS m/z 447.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向4-[2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg)及三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯(343 mg, 1.12 mmol)之甲苯(6.00 mL)溶液添加2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (52.3 mg, 112 µmol)、Pd₂ (dba)₃ (32.19 mg, 55.98 µmol)及Cs₂ CO₃ (548 mg, 1.68 mmol)。在110°C於N₂ 下攪拌72小時之後，將該混合物真空濃縮，以水(20.0 mL)稀釋，用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取，用鹽水(1 × 50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 232 µmoL, 兩個步驟, 41.5%產率)。ESI MS m/z 603.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶：將於DCM (1.00 mL)中之4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 199 µmol, 1.00 eq)及TFA (340 mg, 2.99 mmol, 221 µL, 15.0 eq)混合物在25°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色固體之7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶雙-三氟乙酸酯(145 mg, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ESI MS m/z 503.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-[4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶雙-三氟乙酸酯(145 mg，粗製)及Et₃ N (221 mg, 2.18 mmol, 303 µL)之DCM (2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(25.0 mg, 198 µmol)。在0°C下攪拌0.5小時之後，以MeOH使該混合物淬滅且真空濃縮。該混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(90.0 mg, 162 µmol, 兩個步驟 81.5%產率)。ESI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向1-[4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(90.0 mg, 162 µmol, 1.00 eq)之DCM (2.00 mL)溶液添加BBr₃ (405 mg, 1.62 mmol, 156 µL, 10.0 eq)。在0°C下攪拌1小時之後，在-78°C下以飽和碳酸氫鈉水溶液使該混合物淬滅且在0°C下攪拌0.5小時。該混合物係用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取，用鹽水(1 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係製備型HPLC (Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%,10 分鐘)純化，以得到呈黃色油狀物之1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(6.19 mg, 10.8 µmol, 6.71%產率, 95%純度)。ESI MS m/z 543.2 [M+H]⁺ 。
實例53

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-苯甲基-2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯：將於DMSO (50.0 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d] 嘧啶(3.00 g, 10.2 mmol, 1.00 eq)、哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(2.62 g, 10.7 mmol, 1.05 eq)、DIEA (3.30 g, 25.5 mmol, 4.45 mL, 2.50 eq)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次。在100°C於氮氣環境下攪拌該混合物12小時。該反應混合物係以DCM (200 mL)稀釋，用鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 10:1至3:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(7-苯甲基-2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(2.10 g, 3.81 mmol, 37.4%產率, 91.0%純度)。ESI MS m/z 502.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(7-苯甲基-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯：將於甲苯(60.0 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(2.10 g, 4.17 mmol, 1.00 eq)、2-(二甲基胺基)乙醇(929 mg, 10.4 mmol, 1.04 mL, 2.50 eq)、Pd(OAc)₂ (140 mg, 625 µmol, 0.15 eq)、BINAP (519 mg, 833 µmol, 0.20 eq)及Cs₂ CO₃ (3.39 g, 10.4 mmol, 2.50 eq)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次。在110°C於氮氣環境下攪拌該混合物3小時。將反應混合物過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 30:1至10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(7-苯甲基-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(1.30 g, 1.67 mmol, 40.0%產率, 71.4%純度)。ESI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯：在N₂ 下向4-(7-苯甲基-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(1.30 g, 2.34 mmol, 1.00 eq)之MeOH (15.0 mL)溶液添加Pd/C (300 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用氫氣沖淨數次。在45°C於氫氣(50 psi)下攪拌該混合物48小時。濾除催化劑且將濾液在減壓環境下濃縮，以得到呈無色油狀物之4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(780 mg, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟D：4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯：將於二噁烷(20.0 mL)中之4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(780 mg，粗製)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(684 mg, 2.18 mmol)、Pd2(dba)3 (231 mg, 252 µmol)、Cs₂ CO₃ (1.37 g, 4.20 mmol)及2-二環己基膦基-2′,6′-二異丙氧基聯苯(RuPhos) (157 mg, 336 µmol)混合物脫氣且用氮氣沖淨3次。在85°C於氮氣環境下攪拌該混合物5小時。將該反應混合物過濾且在減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 10:1至5:1)純化，以得到呈黃色固體之4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(750 mg, 1.02 mmol, 兩個步驟43.6%產率, 95.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 - 7.31 (m, 8H), 7.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.75 (br s, 1H), 4.45 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 4.42 - 4.34 (m, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 1H), 4.15 (br s., 2H), 4.13 -3.91 (m, 1H), 3.85 -3.70 (m, 5H), 3.49 -3.33 (m, 2H), 3.31 -3.07 (m, 2H), 2.99 (br s, 1H), 2.83 - 2.68 (m, 3H), 2.35(s, 6H), 1.48 (s, 9H)。

步驟E：1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲酸甲酯：在0°C下向4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,3-二甲酸1-第三丁基3-甲酯(200 mg, 287 µmol, 1.00 eq)之DCM (5.00 mL)溶液添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 µL, 23.5 eq)。在25°C於氮氣環境下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於DCM (100 mL)及水(50 mL)中，用飽和Na₂ CO₃ 水溶液將該溶液調整至pH 8，接著用DCM (3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲酸甲酯(171 mg, 263 µmol, 91.6%產率, 91.7%純度)。ESI MS m/z 597.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：(1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)甲醇：在0°C下向於THF (5.00 mL)中之1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲酸甲酯(171 mg, 287 µmol, 1.00 eq)混合物添加LiAlH₄ (65.3 mg, 1.72 mmol, 6.00 eq)。在25°C下攪拌2小時之後，在0°C下藉由添加水(30 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 30 mL)洗滌。收集的有機相係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈無色半固體之(1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)甲醇(160 mg, 281 µmol, 98.2%產率, 100%純度)。ESI MS m/z 569.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-((7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-4-(2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基乙胺：在0°C下向於THF (5.00 mL)中之(1-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)甲醇(160 mg, 281 µmol, 1.00 eq)混合物添加NaH (94.0 mg, 2.35 mmol, 60.0%純度, 8.00 eq)。在攪拌30分鐘之後，逐滴添加第三丁基二甲基氯矽烷(133 mg, 881 µmol, 108 µL, 3.00 eq)。在25°C於氮氣環境下攪拌該混合物6小時。反應混合物係於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之2-((7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-4-(2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基乙胺(133 mg, 165 µmol, 56.1%產率, 84.6%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 683.2 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-(4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向2-((7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-4-(2-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基乙胺(133 mg, 165 µmol, 1.00 eq)及TEA (39.4 mg, 389 µmol, 54.0 µL, 2.00 eq)之DCM (3.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(31.9 mg, 253 µmol, 1.30 eq)。在-40°C下攪拌2小時之後，以MeOH (1 M)使反應混合物淬滅且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之1-(4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(140 mg，粗製)。ESI MS m/z 737.2 [M+H]⁺ 。

步驟I：在-40°C下向1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：1-(4-(7-(3-(苯甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(140 mg，粗製)之DCM (5.00 mL)溶液添加BBr₃ (476 mg, 1.90 mmol, 183 µL)。在-40°C於氮氣環境下攪拌2小時之後，將該混合物在減壓環境下濃縮至乾燥。添加水(0.5 mL)及MeOH (2.5 mL)，所得溶液係藉由製備型HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(10 mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B %: 27 % - 57 %, 11 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(羥甲基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(4.32 mg, 7.94 µmol, 4.18%產率, 97.9%純度)。ESI MS m/z 533.4 [M+H]⁺ 。
實例54

1-[4-[7-(3-胺基-1-異喹啉基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-羥基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：在N₂ 下向Na (4.24 g, 184 mmol, 4.37 mL, 2.50 eq)之EtOH (400 mL)溶液添加3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸1-第三丁基4-乙酯(20.0 g, 73.7 mmol, 1.00 eq)及乙酸甲脒(11.5 g, 111 mmol, 1.50 eq)。在70°C下攪拌該混合物5小時。用HCl (1N)調整該反應混合物至pH 7，用DCM (3 × 200 mL)萃取，用鹽水(1 × 400 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色固體之4-羥基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(16.0 g, 63.7 mmol, 86.4%產率)。ESI MS m/z 274.0 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：向4-羥基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶-7-甲酸第三丁酯(16.0 g, 63.7 mmol, 1.00 eq)之DMF (4.00 mL)溶液添加DBU (29.1 g, 191 mmol, 28.8 mL, 3.00 eq)及六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶基鏻(PYBOP) (39.8 g, 76.4 mmol, 1.20 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。添加哌嗪-1-甲酸苯甲酯(21.0 g, 95.5 mmol, 18.5 mL, 1.50 eq)且在25°C下攪拌該反應混合物16小時。以乙酸乙酯(500 mL)稀釋該混合物且用水(3 × 400 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二乙醚/乙酸乙酯= 1:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.00 g, 4.41 mmol, 6.93%產率)。ESI MS m/z 454.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：將於DCM (2.00 mL)中之4-(4-苯甲氧基羰基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.20 g, 2.65 mmol, 1.00 eq)及TFA (4.53 g, 39.7 mmol, 2.94 mL, 15.0 eq)混合物在25°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮。用飽和Na₂ CO₃ 水溶液調整濃縮物至pH 8，接著用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取，經(1 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(800 mg, 2.26 mmol, 85.4%產率)。ESI MS m/z 354.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-[3-(第三丁氧基羰基胺基)-1-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於DMSO (3.00 mL)中之N -(1-溴-3-異喹啉基)胺基甲酸第三丁酯(330 mg, 1.02 mmol, 1.00 eq)、DIEA (264 mg, 2.04 mmol, 357 µL, 2.00 eq)及4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(541 mg, 1.53 mmol, 1.50 eq)混合物在80°C下攪拌10小時。以水(5.00 mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併的萃取物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相管柱(TFA, 0.1 %)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-[3-(第三丁氧基羰基胺基)-1-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 665 µmol, 65.2%產率)。ESI MS m/z 596.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：N -[1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-3-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯：將於H₂ O (2.40 mL)及正丁醇(2.40 mL)中之4-[7-[3-(第三丁氧基羰基胺基)-1-異喹啉基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 403 µmol, 1.00 eq)、KOH (36.2 mg, 645 µmol, 1.60 eq)混合物在100°C下攪拌12小時。以乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)稀釋混合物，用鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之N -[1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-3-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg, 325 µmol, 80.7%產率)。ESI MS m/z 462.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)異喹啉-3-胺三氟乙酸酯：將N-[1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)-3-異喹啉基]胺基甲酸第三丁酯(150 mg, 325 µmol, 1.00 eq)及TFA (556 mg, 4.87 mmol, 361 µL, 15.0 eq)之DCM (360 µL)溶液在25°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色固體之1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)異喹啉-3-胺三氟乙酸酯 (154.52 mg, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟G：1-[4-[7-(3-胺基-1-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向1-(4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基)異喹啉-3-胺三氟乙酸酯(150 mg，粗製)及Et₃ N (319 mg, 3.15 mmol, 437 µL)之DCM (2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(31.8 mg, 252 µmol)，接著在-40°C下攪拌0.5小時。藉由添加MeOH (20.22 mg, 630.96 µmol)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由製備型HPLC (Phenomenex Gemini 150*25mm*, 10 µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 26%-56%,10 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(3-胺基-1-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(35.4 mg, 82.5 µmol, 26.2%產率, 96.8%純度)。ESI MS m/z 416.3 [M+H]⁺ 。
實例55

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)-3-羥基丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(二甲基胺基)丙烷-1,3-二醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 533.3[M+H]⁺ 。
實例56

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-嗎啉丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-嗎啉丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例57

(S)-5-(((4-(4-氟丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-2-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-5-(羥甲基)吡咯啶-2-酮代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例58

(R)-5-(((4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-2-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-5-(羥甲基)吡咯啶-2-酮代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]⁺ 。
實例59

N-(2-((4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)乙醯胺

根據實例 8 的製備方法來合成，使用N-(2-羥乙基)乙醯胺代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例60

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丁-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-(二甲基胺基)丁-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]⁺ 。
實例61

(S)-6-(((4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)哌啶-2-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用6-(羥甲基)哌啶-2-酮代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且產物係藉由旋光性層析法分離。波峰2係予以(S)立體化學構型而這未經過確認。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例62

(R)-6-(((4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)哌啶-2-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用6-(羥甲基)哌啶-2-酮代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇且藉由旋光性層析法分離。波峰1係予以(R)立體化學構型但此立體化學構型未經過確認。ES+APCI MS m/z 543.2 [M+H]⁺ 。
實例63

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R)-1-((R)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-((R)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例64

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R)-1-((S)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-((S)-3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例65

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R)-1-((S)-3-羥基吡咯啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-((S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例66

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-3-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-1-甲基哌啶-3-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]。
實例67

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-3-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-甲基哌啶-3-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例68

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-碘萘代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]⁺ 。
實例69

1-(4-(7-(異喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 的製備方法來合成，使用4-溴異喹啉代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 401.2 [M+H]⁺ 。
實例70

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-(甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 503.3 [M+H]⁺ 。
實例71

1-(4-(7-(2-羥基-1-苯基乙基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 的製備方法來合成，使用甲烷磺酸2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-苯基乙基酯代替步驟C中的1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘。ES+APCI MS m/z 394.2 [M+H]⁺ 。
實例72

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(1-甲基哌啶-3-基)甲醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例73

1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(二甲基胺基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.2 [M+H]⁺ 。
實例74

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例75

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(哌啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-(哌啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例76

(R)-1-(4-(7-(3-氯-5-羥基-2-異丙基苯基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-溴-3-氯-2-異丙基-5-(甲氧基甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]⁺ 。
實例77

1-(4-(2-(2-((1S,4R)-2-氮雜二環[2.2.1]庚-2-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-((1S,4R)-2-氮雜二環[2.2.1]庚-2-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 555.2 [M+H]⁺ 。
實例78

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(5-羥基-2-(三氟甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-4-(甲氧基甲氧基)-1-(三氟甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。
實例79

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(5-羥基-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-4-(甲氧基甲氧基)-1-(三氟甲基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 535.2 [M+H]⁺ 。
實例80

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-甲基哌嗪-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(4-甲基哌嗪-2-基)甲醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 544.3 [M+H]⁺ 。
實例81

1-(2-((4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)乙基)哌啶-4-甲腈

根據實例 8 的製備方法來合成，使用1-(2-羥乙基)哌啶-4-甲腈代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 568.2 [M+H]⁺ 。
實例82

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 572.4 [M+H]⁺ 。
實例83

1-(4-(2-(2-((2-羥乙基)(甲基)胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-((2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)(甲基)胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 533.3 [M+H]⁺ 。
實例84

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(2-氟-6-羥基-3-甲基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-3-氟-1-(甲氧基甲氧基)-4-甲苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 499.3 [M+H]⁺ 。
實例85

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(吡咯啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]⁺ 。
實例86

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(2-羥基-5-(三氟甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-1-(甲氧基甲氧基)-4-(三氟甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。
實例87

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-氟-2-羥基-6-甲基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-4-氟-3-(甲氧基甲氧基)-1-甲苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 499.2 [M+H]⁺ 。
實例88

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(2-甲基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-2-(2-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.2 [M+H]⁺ 。
實例89

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(1-甲基吡咯啶-3-基)甲醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例90

1-(4-(7-(5-羥基-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且使用2-溴-4-(甲氧基甲氧基)-1-(三氟甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]⁺ 。
實例91

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基-5-(三氟甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-溴-1-(甲氧基甲氧基)-5-(三氟甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。
實例92

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(4-甲基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(4-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.2 [M+H]⁺ 。
實例93

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-嗎啉丁-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用4-嗎啉丁-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例94

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(5-羥基-2-甲氧基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-溴-1-(甲氧基甲氧基)-4-甲氧苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 497.2 [M+H]⁺ 。
實例95

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(2-羥基-6-甲基苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-溴-1-(甲氧基甲氧基)-3-甲苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 481.2 [M+H]⁺ 。
實例96

1-(4-(7-(5-羥基-2-異丙氧基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且使用2-溴-4-(甲氧基甲氧基)-1-(異丙氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。
實例97

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(2-甲基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-2-(2-甲基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.3。
實例98

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例99

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-2-(3-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例100

1-(4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(1-環丙基哌啶-4-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。
實例101

1-(4-(2-(3-(1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(3-(1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例102

1-(4-(2-(3-(1,4-氧氮雜環庚烷-4-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(二乙基胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]⁺ 。
實例103

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-3-基)甲醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例104

1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例105

1-(4-(7-(5-羥基-2-甲基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且使用2-溴-4-(甲氧基甲氧基)-1-甲苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 523.3 [M+H]⁺ 。
實例106

1-(4-(7-(4-羥基-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且使用2-溴-5-(甲氧基甲氧基)-1-(三氟甲氧基)苯代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]⁺ 。
實例107

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-((2-甲氧基乙基)(甲基)胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-((2-甲氧基乙基)(甲基)胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]⁺ 。
實例108

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(4-甲氧基哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(4-甲氧基哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例109

1-(4-(2-(2-(4,4-二氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-(4,4-二氟哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 579.2 [M+H]⁺ 。
實例110

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-(1-甲基吡咯啶-3-基)甲醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例111

(S)-1-(4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-2-(3-氟哌啶-1-基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]⁺ 。
實例112

1-(4-(7-(3-(二氟甲基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇，且使用1-溴-3-(二氟甲基)萘(0.129 g, 0.503 mmol) 代替步驟D中的三氟甲烷磺酸(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯。ES+APCI MS m/z 593.2 [M+H]⁺ 。
實例113

4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮

步驟A：4-(6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向4-氯-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.07 g, 5.83 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(2.09 mL, 11.7 mmol)，隨後添加哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.19 g, 6.41 mmol)，且在室溫下攪拌反應物2小時。反應混合物係以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到4-(6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.8 g, 92.6%)，其直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 334.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(6-(苯甲氧基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向苯基甲醇(0.65 g, 6.0 mmol)之DMA (10 mL)溶液分批添加氰化鈉(0.24 g, 6.0 mmol)，同時用氮氣脫氣且在室溫下攪拌反應混合物30分鐘。向該反應物添加呈固體之4-(6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.0 g, 3.0 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物3小時。將反應物傾注入水(300 mL)中且用乙酸乙酯萃取水層。有機層係以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。粗製物係使用梯度0至100%的乙酸乙酯/DCM做為溶離液層析而得到4-(6-(苯甲氧基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.4 g, 0.95 mmol, 32%產率)。ES+APCI MS m/z 422.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向經氮氣沖淨之4-(6-(苯甲氧基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.40 g, 0.95 mmol)之95%乙醇(30 mL)溶液添加Pd/C (0.10 g, 0.95 mmol)。以真空將反應物排氣且回填氫氣三次。在第三次回填之後在室溫下攪拌反應混合物4小時。用氮氣使反應物再次脫氣，將漿液過濾通過Celite®且將濾液真空濃縮，以得到4-(6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.4g, 126%)。ES+APCI MS m/z 334.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於一密封管中向4-(6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.28 g, 0.84 mmol)之二噁烷(4 mL)溶液添加磷酸鉀 (0.36 g, 1.7 mmol)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.074 g, 0.84 mmol)及1-碘-3-(甲氧基甲氧基)萘(0.53 g, 1.7 mmol)。用氬氣使該反應物鼓泡20分鐘，隨後添加碘化銅(I) (0.16 g, 0.84 mmol)。將反應容器密封且加熱至100°C隔夜。以水稀釋該反應物且用乙酸乙酯(2 x 150 mL)萃取水層。將有機物用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將所述物質使用梯度0至10%的乙酸乙酯/DCM做為溶離液層析而得到4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.30 g, 0.58 mmol, 69%產率)。ES+APCI MS m/z 520.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：7-(3-羥基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮：向4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-6-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.30 g, 0.58 mmol)之甲醇(10 mL)溶液添加氯化氫水溶液(0.38 mL, 2.3 mmol)且將反應物在50^o C下攪拌隔夜。將反應物真空濃縮以得到雙HCl鹽7-(3-羥基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮 (0.26g, 100%)。ES+APCI MS m/z 376.1 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮：向於1:1 DCM/乙腈(10 mL)溶液中之7-(3-羥基萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮二鹽酸鹽(0.26 g, 0.58 mmol)漿液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.45 g, 3.5 mmol)及丙烯醯氯 (0.052 g, 0.58 mmol)且將反應物在室溫下攪拌1小時。將反應物真空濃縮且將所述物質藉由逆相製備型HPLC (使用5至95% ACN/水的梯度)純化，以得到4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮 (0.038 g, 0.088 mmol, 15%產率)。ES+APCI MS m/z 430.2 [M+H]⁺ 。
實例114

4-(6-丙烯醯基-2,6-二氮雜螺[3.3]庚-2-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-7,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-6(5H)-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-2-甲酸第三丁酯鹽酸鹽(305 mg, 1.54 mmol)代替步驟B中的哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.19 g, 6.41 mmol)。ES+APCI MS m/z 442.2 [M+H]⁺ 。
實例115

1-((S)-4-(2-(((R)-1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.155 g, 4.931 mmol)代替步驟A中的1-哌嗪甲酸苯甲酯。ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]⁺ 。
實例116

(S)-1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.155 g, 4.931 mmol)代替步驟A中的1-哌嗪甲酸苯甲酯。此外，使用2-(二甲基胺基)乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。
實例117

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-嗎啉乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用2-嗎啉基乙-1-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]⁺ 。
實例118

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-嗎啉-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用嗎啉代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 501.3 [M+H]⁺ 。
實例119

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用吡咯啶代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 485.2 [M+H]⁺ 。
實例120

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(吡咯啶-1-基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法來合成，使用(R)-1-(吡咯啶-1-基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例121

4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮

步驟A：2,4-二氯-8-側氧基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯。向圓底燒瓶添加2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸第三丁酯(1.0 g, 3.29 mmol)及EtOAc (16.4 mL)。添加過碘酸鈉 (2.11 g, 9.86 mmol)之水(16.4 mL)溶液。添加氯化釕(III) (0.102 g, 0.493 mmol)，粗略蓋上該混合物且在環境溫度下劇烈攪拌6小時。使混合物分溶於水及EtOAc之間，且分離各層。僅一步用EtOAc (2 x 20 mL)萃取水層，將合併的萃取物用鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。粗產物係經由管柱層析法(10-30% EtOAc/己烷，以CH₂ Cl₂ 裝填)純化，以得到呈灰白色固體之產物0.864克(82%)。

步驟B：4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-8-側氧基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯。向2,4-二氯-8-側氧基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.400 g, 1.26 mmol)之CH₂ Cl₂ (5.0 mL)溶液添加N,N-二異丙基乙胺 (0.325 g, 2.51 mmol)，隨後添加1-哌嗪甲酸苯甲酯(0.255 mL, 1.32 mmol)，且將反應物在環境溫度下攪拌1.5小時。該反應混合物係以CH₂ Cl₂ (10 mL)稀釋，用0.5M KHSO₄ 溶液(5 mL)洗滌，隨後用飽和NaHCO₃ 水溶液及鹽水洗滌。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物於10 mL MTBE中超音波處理，藉由真空過濾分離出所得固體。將固體真空乾燥，以得到呈灰白色固體之所要產物0.507克(80%)，其直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 502.1[M+H]⁺ 。

步驟C：4-(2-氯-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將 4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-8-側氧基-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.255 g, 0.5080 mmol)之CH₂ Cl₂ (1.0 mL)溶液冷卻至0°C。添加三氟乙酸(0.3890 mL, 5.080 mmol)且將混合物升溫至環境溫度。在1小時之後用CH₂ Cl₂ 稀釋該混合物，添加至鹽水(10 mL)與3.0 M NaOH (1.7 mL, 5.080 mmol)之混合物中。合併各層且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH 8。分離各層且用2×10 mL的CH₂ Cl₂ 萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色/橘色泡沫之所述標題化合物(0.223 g, 定量)。ES+APCI MS m/z 402.1[M+H]⁺ 。

步驟D：4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向一小管添加N-羥基丙基嗎啉(0.687 g, 4.73 mmol) and4-(2-氯-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.190 g, 0.473 mmol)，且隨後添加二噁烷(1.6 mL)。添加碳酸銫(0.462 g, 1.42 mmol)且在65 °C下攪拌該混合物15小時。以CHCl₃ 稀釋該混合物且過濾，用額外的CHCl₃ 洗滌固體。將濾液真空濃縮且藉由管柱層析法(2-10% MeOH/DCM，具有1% NH₄ OH)純化，以得到成濃稠無色油狀物之所要產物0.061克(25%)。ES+APCI MS m/z 511.2[M+H]⁺ 。

步驟E：4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向一小管添加4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.060 g, 0.12 mmol)、N,N'-二甲基乙二胺(0.010 g, 0.12 mmol)及1-碘-3-(甲氧基甲氧基)萘(0.074 g, 0.24 mmol)，隨後添加二噁烷(0.78 mL)及磷酸三鉀(0.050 g, 0.24 mmol)。用鼓泡Ar方式沖淨該反應物持續10分鐘，接著添加碘化銅(I) (0.022 g, 0.12 mmol)且密封該小管。將該混合物加熱至110°C且攪拌16小時。冷卻該混合物至室溫，用水稀釋且用EtOAc (3 x 10 mL)萃取。合併的有機萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。該混合物係經由管柱層析法(2-8% MeOH/DCM)純化，以得到0.062克(76%)之呈棕色泡沫的產物。ES+APCI MS m/z 697.3[M+H]⁺ 。

步驟F：7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮。向4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-8-側氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.062 g, 0.089 mmol)之EtOH (0.44 mL)及THF (0.44 mL)溶液添加鈀碳(0.038 g, 0.018 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空且隨後藉氣球壓力引入氫氣環境。在環境溫度下攪拌該混合物1.5小時，接著升溫至45 °C且攪拌1小時。用EtOAc稀釋該混合物且過濾通過尼龍過濾器。將濾液真空濃縮，以得到淺棕色泡沫(0.052g)，使其乾燥隔夜且重新提交至上述相同反映條件。於環境溫度下攪拌5小時之後，添加額外的Pd/C (0.050 g)且在環境溫度下再攪拌反應物2小時。用EtOAc稀釋該混合物且過濾通過尼龍過濾器。固體係以EtOAc及MeOH洗滌，且將濾液真空濃縮，以得到0.029克(58%)之呈淺棕色泡沫的所要產物。ES+APCI MS m/z 563.3[M+H]⁺ 。

步驟G：4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮。在-78°C下向7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮 (0.028 g, 0.050 mmol)之CH₂ Cl₂ (0.50 mL)溶液添加三乙胺(0.014 mL, 0.100 mmol)。添加丙烯醯氯 (0.55 mL, 0.055 mmol, 新鮮製備的0.1M CH₂ Cl₂ )且接著攪拌該反應物0.5小時。用CHCl₃ 稀釋該混合物且添加飽和NH₄ Cl水溶液。分離各層且用CHCl₃ (2 x 10 mL)萃取水層。合併的萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。粗產物係經由管柱層析法(4-6% MeOH/DCM)純化，以得到0.018克(59%)之呈灰白色固體泡沫的所述標題化合物。ES+APCI MS m/z 617.3[M+H]⁺ 。

步驟H：4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮。向4-(4-丙烯醯基哌嗪-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,7-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-8(5H)-酮 (0.018 g, 0.0292 mmol)之1/1 MeOH/THF (0.6 mL)溶液添加HCl (0.0486 mL, 0.292 mmol, 6 N水溶液)。在35°C下攪拌該混合物7小時。用10% IPA/CHCl₃ (2 x 10 mL)及CHCl₃ (10 mL)萃取該混合物。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。粗產物係經由管柱層析法(6-10% MeOH/DCM)純化，以得到0.012克(71%)之呈灰白色固體的產物。ES+APCI MS m/z 573.3[M+H]⁺ 。
實例122

(R,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮雙-三氟乙酸酯

步驟A-E：根據實例8步驟A至步驟E的製備方法來合成(R)-2-((7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙-1-胺，使用(R)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。

步驟F：(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇二鹽酸鹽：向(R)-2-((7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙-1-胺(75 mg, 0.15 mmol)之DCM (2.9 mL)溶液添加於iPrOH中之6N HCl (247 µl, 1.5 mmol)，且在環境溫度下攪拌該混合物1小時。將反應混合物濃縮至乾燥，以得到(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇二鹽酸鹽，其直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 463.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：(R,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮雙-三氟乙酸酯：將(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇二鹽酸鹽(7 mg, 0.01 mmol)、HATU (6.2 mg, 0.02 mmol)、(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(2.1 mg, 0.02 mmol)、DIEA (6.9 µl, 0.04 mmol)之DCM (131 µl)溶液在環境溫度下攪拌1小時。將殘餘物過濾且將濾液直接裝填於Gilson C18 prep HPLC上，使用5-95%乙腈/具有0.1% TFA添加物的水來溶離。將含有所要產物的分餾物濃縮，以得到(R,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮雙-三氟乙酸酯。ES+APCI MS m/z 574.2 [M+H]⁺ 。
實例123

1-(4-(2-(2-羥基-3-嗎啉丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例8的製備方法來合成，使用3-嗎啉丙烷-1,2-二醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇。ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]⁺ 。
實例124

(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(4-氟-3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：將(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(221 mg, 0.345 mmol)置於ACN (2 mL)中且將該混合物冷卻至0°C。添加SelectFluor (183 mg, 0.517 mmol)且在室溫下攪拌該反應物30分鐘。添加水且用DCM萃取混合物。將有機層合併且濃縮。所得殘餘物係藉由逆相層析法(5-95% ACN:水，具有0.1% TFA)純化，以得到(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(4-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯三氟乙酸酯(48 mg, 0.0729 mmol, 21.1%產率)。

步驟B：依據實例33步驟D-F，以(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(4-氟-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸酯三氟乙酸酯取代4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯，來製備(R)-1-(4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(4-氟-3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 535.2 [M+H]⁺ 。
實例125

(R)-1-(4-(7-(4-氯-3-羥基萘-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：將(R)-4-(2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(83 mg, 0.130 mmol)及NCS (21.6 mg, 0.162 mmol)置於ACN (2 mL)中且在室溫下攪拌3小時。添加水且用DCM (3x15 mL)萃取混合物。將有機層合併且濃縮。所得殘餘物係藉由逆相層析法(5-95% ACN:水，具有0.1% TFA)純化，以得到R)-4-(7-(4-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯三氟乙酸酯(17 mg, 0.0252 mmol, 19.4%產率)。

步驟B：依據實例33步驟D-F，以(R)-4-(7-(4-氯-3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸酯三氟乙酸酯取代4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯且在步驟D中使用THF做為溶劑，來製備(R)-1-(4-(7-(4-氯-3-羥基萘-1-基)-2-((1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。
實例126

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯

步驟A：4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在微波爐中向於二噁烷中之4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.20 g, 0.35 mmol)漿液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.45 g, 3.5 mmol)、Cs₂ CO₃ (0.34 g, 1.0 mmol)及2-(吡啶-2-基)乙-1-醇(0.43 g, 3.5 mmol)，且在微波爐中將該反應物加熱至15 °C持續1小時。該反應物係以EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將所述物質使用梯度0至100%的EtOAc/DCM做為溶離液層析而得到4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.16 g, 0.24 mmol, 70%產率)。

步驟B：4-(4-(哌嗪-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇：向固體狀4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.12 g, 0.18 mmol)添加MeOH (20 mL)。將該溶液用氮氣脫氣5分鐘，隨後添加Pd/C (0.058 g, 0.54 mmol)。以真空將反應容器排氣且回填H₂ 。執行此程序三次，且在第三次回填之後留下漿液於氫氣環境下攪拌1小時。用氮氣使反應物再次脫氣5分鐘。接著將漿液過濾通過Celite®且用MeOH (100 mL)洗滌Celite®。將合併的有機萃取物濃縮，且用10 mL的1:1 TFA/DCM處理2小時。將反應物再次真空濃縮，以得到4-(4-(哌嗪-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇(0.096 g, 0.20 mmol, 110%產率)。

步驟C：1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向4-(4-(哌嗪-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-醇(0.096 g, 0.20 mmol)之DCM溶液添加許尼希氏鹼(0.17 mL, 0.99 mmol)及丙烯醯氯 (0.018 g, 0.20 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物30分鐘。將反應物真空濃縮，粗製物係藉由逆相製備型HPLC純化，以得到1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮三氟乙酸酯(0.0057 g, 0.011 mmol, 5.3%產率)。ES+APCI MS m/z 537.2 [M+H]⁺ 。
實例127
(S)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶

步驟A：4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：向2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)- 甲酸第三丁酯(8 g, 26.30 mmol)之DMA (263.0 ml, 26.30 mmol)溶液添加哌嗪-1-甲酸苯甲酯(5.793 g, 26.30 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(4.721 ml, 26.30 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物2小時。以TLC (20% EtOAc/DCM)及UV顯影顯示反應完成。反應物係接著傾注入水中且用DCM萃取。有機物係接著以水(2x)、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將濃縮物裝填於220克的RegiSep管柱上於CombiFlash (0%-10%, EtOAc:DCM)上層析。全部含有所要產物的分餾物係經合併且濃縮，以得到呈白色泡沫之4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(9.768 g, 20.02 mmol, 76.11%產率)。ES+APCI MS m/z 488.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(9.768 g, 20.02 mmol)溶解於二氯甲烷中(200.2 ml, 20.02 mmol)且用2,2,2-三氟乙酸(15.33 ml, 200.2 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應混合物4小時。在完成之後接著將該反應物真空濃縮，溶解於EtOAc中，有機物係經1M NaOH (2X)、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(7.406 g, 19.09 mmol, 95.39 %產率)以粗製物使用在下個反應中。ES+APCI MS m/z 388.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於氬氣下向4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯, BINAP (0.275 g, 0.442 mmol)及Pd2(dba)3 (0.203 g, 0.221 mmol)添加甲苯(221 ml, 11.1 mmol)且以氬氣使該反應物鼓泡10分鐘，隨後加熱至100°C持續10分鐘。接著將反應物冷卻至室溫，且將呈固體之4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.29 g, 11.1 mmol)及第三丁醇鈉(2.13 g, 22.1 mmol)添加至該深色溶液中。最後，添加呈油狀物之三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯(7.44 g, 22.1 mmol)且將反應物加熱至100°C持續1小時。將反應物冷卻至室溫且真空濃縮。將濃縮物以EtOAc溶解，且用水及鹽水洗滌。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將殘餘物裝填於CombiFlash上且使用0%--＞50% 己烷:EtOAc做為溶離液而層析。將含有純淨產物的分餾物合併且真空濃縮，以得到4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.6 g, 4.53 mmol, 40.9%產率)。ES+APCI MS m/z 574.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一微波管中將4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 0.523 mmol)溶解於二噁烷(6532 µl, 0.523 mmol)中且用碳酸銫(511 mg, 1.57 mmol)、許尼希氏鹼(913 µl, 5.23 mmol)及N-甲基-L-脯胺醇 (421 mg, 3.66 mmol)處理。接著蓋上該微波管且在170°C下微波3小時。使該反應物過濾通過GF/F濾紙。將濾液真空濃縮且將殘餘物裝填於12克的RegiSep Gold管柱上且在CombiFlash (0%-15%, DCM:MeOH)上層析。全部含有純淨產物的分餾物係經合併且真空濃縮，以得到 (S)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(220 mg, 0.337 mmol, 64.5%產率)。ES+APCI MS m/z 653.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶：將(S)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(220 mg, 0.337 mmol)之EtOH (3370 µl, 0.337 mmol)及THF (3370 µl, 0.337 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀碳(179 mg, 0.0843 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並用N₂ 再沖淨5分鐘。該溶液接著在經由真空且隨後藉氣球壓力引入的H₂ 下攪拌。接著在環境溫度下攪拌隔夜。LC/MS顯示該反應已完成。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮且獲得粗製物(S)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(91 mg, 0.175 mmol, 52.1%產率)。ES+APCI MS m/z 519.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(S)-1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：在環境溫度下向(S)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(92 mg, 0.18 mmol)之二氯甲烷(1774 µl, 0.18 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (1774 µl, 0.18 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(62 µl, 0.35 mmol)。接著在環境溫度下攪拌該反應物1小時。接著將該混合物濃縮且裝填於4克的RegiSep Gold管柱上且在CombiFlash (0%-15%, DCM:MeOH)上層析。將全部含有純淨產物的分餾物合併且真空濃縮，以得到(S)-1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(74 mg, 0.13 mmol, 73%產率)。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將(S)-1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(74 mg, 0.13 mmol)溶解於甲醇(4307 µl, 0.13 mmol)中且用氯化氫水溶液(1077 µl, 6.5 mmol)處理。在55°C攪拌該反應物1小時。將反應混合物真空濃縮且懸浮於1.5 mL的MeOH中。將懸浮液裝填於Gilson (prep HPLC)上，以5--＞95% ACN/於水中之0.1% TFA/0.1% TFA溶離。將全部含有純淨產物的分餾物合併且凍乾隔夜，以得到(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(26 mg, 0.049 mmol, 38%產率)。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例128
1-(4-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.20 g, 0.35 mmol)之二噁烷溶液添加N,N-二甲基氮雜環丁-3-胺鹽酸鹽(0.24 g, 1.7 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.45 g, 3.5 mmol)，且將反應物加熱至80°C持續72小時。將反應物真空濃縮且將殘餘物使用0--＞20% MeOH/DCM做為溶離液層析，以得到4-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.25g, 105%)。ES+APCI MS m/z 638.3 [M+H]⁺ 。

根據實例127，以4-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁-1-基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟E中的(S)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯而製備1-(4-(2-(3-(二甲基胺基)氮雜環丁-1-基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 514.2 [M+H]⁺ 。
實例129
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R)-1-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：將於THF (10 mL)中之BH₃ -Me₂ S (10 M, 549 uL)及(3aS )-1-甲基-3,3-二苯基-3a,4,5,6-四氫吡咯并[1,2-c ][1,3,2]氧雜氮雜硼雜環戊烷(1.00 M, 844 uL)混合物在15 °C下攪拌1小時。向此混合物添加(2R )-2-乙醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.90 g, 4.22 mmol)之THF (10 mL)溶液，且在15 °C下攪拌該混合物1小時。藉由添加甲醇(2.00 mL)使該混合物淬滅，且將該反應物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1 - 5/1)純化，以得到呈無色油狀物之(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.60 g, 2.79 mmol, 66.0%產率)。¹ H NMR (400MHz, CD₃ OD) δ = 5.18 (br s, 1H), 3.73 (dt,J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 3.70 -3.43 (m, 2H), 3.28 (td,J = 6.64, 10.8 Hz, 1H), 1.96 (qd,J = 7.2, 12.8 Hz, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 2H), 1.62 (br s,J = 6.4 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H), 1.15 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.70 g, 1.08 mmol)及(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(349 mg, 1.62 mmol)之THF (10 mL)溶液添加t-BuONa (312 mg, 3.24 mmol)，且在10°C下攪拌該混合物1小時。以水(10 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.35 g, 412 umol, 38.1%產率)。ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於二氯甲烷(0.42 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.30 g, 375 umol)及TFA (642 mg, 5.63 mmol, 417 uL)混合物在10°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(305 mg)。LCMS [M+1]: ES+APCI MS m/z 699.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲醇(3.00 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.30 g，粗製)、甲醛(210 mg, 1.85 mmol, 192 uL, 37 %水)及AcOH (22.16 mg, 369 umol, 21.1 uL)混合物在15°C下攪拌0.5小時。向此混合物添加NaBH₃ CN (58.0 mg, 923 umol)且在15°C下攪拌48小時。藉由在0°C下添加H₂ O (5 mL)使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(15.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.10 %甲酸)/乙腈]純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.10 g, 126 umol)。ES+APCI MS m/z 713.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：在-78°C下將氨氣鼓泡至甲醇(3 mL)內持續30分鐘。接著添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.09 g, 126 umol)及無水10% Pd/C (0.10 g)，且在10°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-[2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(0.04 g，粗製)。ES+APCI MS m/z 489.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向4-[2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(0.04 g)及Et₃ N (124 mg, 1.23 mmol, 171 uL)之DCM (2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(7.23 mg, 57.3 umol)且在-40°C下攪拌該反應物0.5小時。藉由添加甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 10%-37% 超過10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(9.13 mg, 15.5 umol)。ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例130
1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((S )-1-((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

依據實例 129 ，以(3aR)-1-甲基-3,3-二苯基-3a,4,5,6-四氫吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧雜氮雜硼雜環戊烷取代步驟A中的(3aS )-1-甲基-3,3-二苯基-3a,4,5,6-四氫吡咯并[1,2-c ][1,3,2]氧雜氮雜硼雜環戊烷，同時也以(2S )-2-乙醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟A中的(2R )-2-乙醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯，製備1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((S )-1-((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例131
1-[4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇：將(2R )-2-甲基環氧乙烷(540 mg, 9.31 mmol, 651 uL)添加至N -甲基乙胺(500 mg, 8.46 mmol, 725 uL)之MeOH (10 mL)溶液中。在一密封管中將所得溶液在80°C下攪拌3小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到呈淺黃色之(2R )-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇(260 mg, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇(217 mg, 1.85 mmol)之甲苯(20 mL)溶液添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 617 umol)、Pd₂ (dba)₃ (56.6 mg, 61.8 umol)、BINAP (76.9 mg, 124 umol)及NaOtBu (178 mg, 1.85 mmol)，用N₂ 使該混合物脫氣15分鐘且接著於N₂ 下加熱至90°C持續16分鐘。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相層析法純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(110 mg, 153 umol, 24.8%產率, 97.5%純度)。ES+APCI MS m/z 701.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 143 umol)之MeOH (3.00 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 143 uL)，隨後於N₂ 下添加Pd(OH)₂ /C (50 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物4小時。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液濃縮，以得到4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(76.0 mg, 125 umol, 87.5%產率, 90.3%純度, 2 HCl)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 477.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(70 mg, 127 umol, 2 HCl)及DIEA (98.8 mg, 764 umol, 133 uL)之DCM (1.50 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(12.9 mg, 102 umol)。在-40°C至-20°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，藉由添加MeOH (17.0 mg)使該混合物淬滅，且真空濃縮。以水(1 mL)稀釋殘餘物，且用DCM (3 × 6 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空過濾。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 48%-78%,10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(9.23 mg, 17.2 umol, 13.5%產率, 98.7%純度)。ES+APCI MS m/z 531.3 [M+H]⁺ 。
實例132
1-[4-[2-[(1-環己基吡咯啶-3-基)甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：1-環己基吡咯啶-3-甲酸酯：在0°C下向吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.00 g, 6.04 mmol, HCl)及DIEA (780 mg, 6.04 mmol, 1.05 mL)之溶液添加環己酮(652 mg, 6.64 mmol, 686 uL)及HOAc (725 mg, 12.1 mmol, 691 uL)。在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在0°C下向該反應混合物分批添加NaBH(OAc)₃ (3.84 g, 18.12 mmol)。在0°C至15°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，藉由添加水(5 mL)使該反應混合物淬滅，且將有機物真空濃縮。用DCM (10 mL × 2)萃取水層，且用飽和NaHCO₃ (10 mL)及Na₂ CO₃ (2 mL)調整pH至pH＞8。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。用MTBE/石油醚 (1:3, 20 mL)濕磨該殘餘物，且將濾液真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之1-環己基吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.00 g, 4.73 mmol, 78.4%產率)。ES+APCI MS m/z 212.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(1-環己基吡咯啶-3-基)甲醇：在-10°C下向1-環己基吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.00 g, 4.73 mmol)之THF (20 mL)溶液添加LiAlH₄ (413 mg, 10.9 mmol)。在-10°C下攪拌該反應混合物0.5小時。藉由添加飽和Na₂ SO₄ (2 mL)使該反應混合物淬滅，將混合物過濾且用THF (3 × 50 mL)洗滌濾餅。將合併的有機物真空濃縮，以得到呈無色油狀物之(1-環己基吡咯啶-3-基)甲醇(800 mg, 4.36 mmol, 92.3%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.71 (dd,J = 4.1, 10.0 Hz, 1H), 3.53 (dd,J =4.4, 10.0 Hz, 1H), 2.90 (dt,J =4.4, 8.8 Hz, 1H), 2.74 (dd,J = 3.2, 8.8 Hz, 1H), 2.53 (dd,J = 6.8, 8.8 Hz, 1H), 2.36 - 2.24 (m, 2H), 2.04 - 1.93 (m, 2H), 1.90 (br s, 2H), 1.78 - 1.64 (m, 3H), 1.61 - 1.52 (m, 1H), 1.33 - 1.12 (m, 5H)。

依據實例 131 ，以(1-環己基吡咯啶-3-基)甲醇取代步驟B中的(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇，製備1-[4-[2-[(1-環己基吡咯啶-3-基)甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 597.4 [M+H]⁺ 。
實例133
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉基丙基胺基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉基丙基胺基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 617 umol)及3-嗎啉丙-1-胺(534 mg, 3.70 mmol, 540 uL)之DMSO (4.00 mL)溶液加熱至100°C持續12小時。在完成時，以水(4 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ 以乙酸乙酯/石油醚 (20à100%)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉基丙基胺基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(245 mg, 320 umol, 51.8%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 728.6 [M+H]⁺ 。

依據實例 131 ，以4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉基丙基胺基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟C中的4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯，製備1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉基丙基胺基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 558.6 [M+H]⁺ 。
實例134
(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(哌啶-3-基甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：(3R )-3-(羥甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯：在15°C下將TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL)添加至[(3R )-3-哌啶基]甲醇(1.0 g, 8.68 mmol)之THF (25.0 mL)溶液，隨後添加Boc₂ O (1.89 g, 8.68 mmol, 1.99 mL)之THF (5 mL)溶液。在15°C下攪拌該混合物12小時。在真空下移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯(50 ml)及H₂ O (30 mL)中。用HCl (6 M)使該溶液酸化至pH~6，且分離各層。有機物係以鹽水(3 × 50 mL)洗滌，將合併的有機物濃縮至乾燥，以得到呈無色結晶之 (3R )-3-(羥甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(1.68 g, 7.80 mmol, 89.9%產率, 100%純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.73 (br s, 2H), 3.51 (br d,J = 6.8 Hz, 2H), 3.05 (br s, 2H), 1.83 - 1.71 (m, 2H), 1.62 (br s, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.37 (m, 1H), 1.35 - 1.22 (m, 1H)。

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基-3-哌啶基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(3R )-3-(羥甲基) 哌啶-1-甲酸第三丁酯(332 mg, 1.54 mmol)之THF (5 mL)溶液添加t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)。接著添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 772 umol)之THF (5 mL)溶液且在0°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物過濾且在減壓環境下濃縮，殘餘物係藉由管柱層析法以石油醚/乙酸乙酯(10/1至3/1)溶離而純化，以得到呈白色固體之b4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基-3-哌啶基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(510 mg, 628 umol, 81.4%產率, 98.4%純度)。ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯：將4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基-3-哌啶基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 313 umol)之MeOH (5 mL)溶液用NH₃ (10 %, w/w)沖淨，且接著添加10% Pd/C (50 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾，且在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈無色油狀物之(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(126 mg, 211 umol, 67.4%產率, 96.2%純度)。ES+APCI MS m/z 575.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯：在-40°C下向 (3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(126 mg, 219 umol)及TEA (33.3 mg, 329 umol, 45.8 uL)之DCM (5.0 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(24.9 mg, 197 umol)，接著在-40°C下攪拌該反應物30分鐘。藉由添加MeOH (0.5 mL)使該反應混合物淬滅，且濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於EtOAc (50 mL)及H₂ O (20 mL)中。用HCl (1 M)使所得溶液酸化至pH~6，且分離各層。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之 (3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 172 umol, 78.5%產率, 90.2%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 629.6 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-3-哌啶基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在0°C下向(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 191 umol)之DCM (3.0 mL)溶液添加TFA (326 mg, 2.86 mmol, 212 uL)。在15°C於N₂ 環境下攪拌該混合物2小時。用NH₃ (30 %於水中，三滴)使該反應混合物鹼化，且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 5% -35%,10 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-3-哌啶基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(24.5 mg, 38.9 umol, 20.4%產率)。ES+APCI MS m/z 529.4 [M+H]⁺ 。
實例135
1-[4-[2-[3-(4-乙醯基哌嗪-1-基)丙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：1-[4-(3-羥丙基)哌嗪-1-基]乙酮：向1-哌嗪-1-基乙酮(2.00 g, 15.6 mmol)及K₂ CO₃ (4.31 g, 31.2 mmol)之CH₃ CN (50.0 mL)溶液添加3-溴丙-1-醇(3.25 g, 23.4 mmol)。在80°C下攪拌該混合物5小時。將固體過濾且將濾液蒸發，以得到呈無色油狀物之1-[4-(3-羥丙基)哌嗪-1-基]乙酮(2.00 g, 10.7 mmol, 68.8%產率)。

依據實例 131 ，以1-[4-(3-羥丙基)哌嗪-1-基]乙酮取代步驟C中的4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯，製備1-[4-[2-[3-(4-乙醯基哌嗪-1-基)丙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]⁺ 。
實例136
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇：向3-甲氧基吡咯啶(450 mg, 3.27 mmol, HCl)及2-溴乙醇(408 mg, 3.27 mmol)之CH₃ CN (10 mL)溶液添加K₂ CO₃ (1.36 g, 9.81 mmol)。在80°C下攪拌該混合物3小時。將固體過濾且將濾液蒸發，以得到呈無色油狀物之2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇(450 mg, 3.10 mmol, 94.8%產率)。

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(10 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 771 umol)、2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇(224 mg, 1.54 mmol)及t-BuONa (222 mg, 2.32 mmol)混合物在20°C於N₂ 環境下攪拌1小時。將該混合物冷卻至0°C，且添加HCl (2M)直至pH~7。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à10% MeOH/DCM做為溶離液而純化，以得到呈4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(110 mg, 147.9 umol, 19.1%產率)。ES+APCI MS m/z 729.2 [M+H]⁺ 。

依據實例 131 ，以4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟C中的4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯，製備1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例137
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[3-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-1-醇：向3-甲氧基吡咯啶(500 mg, 3.63 mmol, HCl)及3-溴丙-1-醇(505 mg, 3.63 mmol)之CH₃ CN (10 mL)溶液添加K₂ CO₃ (1.51 g, 10.9 mmol)。在20°C下攪拌該混合物5小時。將固體過濾且將濾液蒸發，以得到3-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-1-醇(540 mg, 3.39 mmol, 93.3%產率)。

依據實例 131 ，以(3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙-1-醇取代步驟B中的(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇，製備1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[3-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例138
1-[4-[2-[2-(3,3-二氟氮雜環丁-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(3,3-二氟氮雜環丁-1-基)乙醇：向3,3-二氟氮雜環丁烷（500 mg, 3.86 mmol,HCl )及2-溴乙醇(482 mg, 3.86 mmol, 274 uL)之CH₃ CN (10 mL)溶液添加K₂ CO₃ (1.60 g, 11.5 mmol)，在80°C下攪拌反應物16小時。將反應物過濾且使濾液蒸發，以得到2-(3,3-二氟氮雜環丁-1-基)乙醇(300 mg, 2.19 mmol, 56.7%產率)。

依據實例 131 ，以2-(3,3-二氟氮雜環丁-1-基)乙醇取代步驟B中的(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇，製備1-[4-[2-[2-(3,3-二氟氮雜環丁-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 551.4 [M+H]⁺ 。
實例139
1-[4-[2-[2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯：向冷卻至0°C之2-溴乙酸甲酯(1.17 g, 7.67 mmol, 723 uL)之DCM (10 mL)懸浮液添加TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL)及3,3-二氟吡咯啶(1.00 g, 6.97 mmol, HCl)，在20°C下攪拌該反應混合物16小時。將反應物過濾且使濾液蒸發。殘餘物係藉由管柱層析法以0.5%--＞20% MeOH/DCM做為溶離液而純化，以得到2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯(580 mg, 3.24 mmol, 46.4%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.73 (s, 3H), 3.38 (s, 2H), 3.11 (t,J = 13.6 Hz, 2H), 2.92 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 2.36-2.26 (m, 2H)。

步驟B：2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙醇：在0°C下向LiAlH₄ (184 mg, 4.86 mmol)之THF (5.0 mL)溶液逐滴添加2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙酸甲酯(580 mg, 3.24 mmol)之THF (5.0 mL)溶液。將該混合物升溫至20°C且攪拌3小時。藉由添加飽和硫酸鈉水溶液(1.50 mL)使該混合物淬滅。將反應物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈無色油狀物之2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙醇(330 mg, 2.18 mmol, 67.4%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.64 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 2.97 (t,J = 13.2 Hz, 2H), 2.82 (t,J = 7.2 Hz, 2H), 2.68 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 2.49 (br. s, 1H), 2.34-2.24 (m, 2H)。

依據實例 131 ，以2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙醇取代步驟B中的(2R )-1-[乙基(甲基)胺基]丙-2-醇，製備1-[4-[2-[2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 565.3 [M+H]⁺ 。
實例140
2-[3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-基]-N ,N -二甲基-乙醯胺

步驟A：1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-甲酸甲酯：將吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.00 g, 6.04 mmol, HCl)及 NaHCO3 (1.01 g, 12.1 mmol, 470 uL)之ACN (200.0 mL)溶液在10°C下攪拌5分鐘。接著在10°C下添加2-溴-N,N-二甲基-乙醯胺 (1.00 g, 6.04 mmol)之ACN (5.00 mL)溶液，隨後在10°C下攪拌反應物6小時，且在50°C下攪拌2小時。將該混合物過濾且用DCM (3 × 15 ml)洗滌固體。將濾液真空濃縮，殘餘物係界由管柱層析法使用0à10% MeOH/DCM做為溶離液而純化，以得到1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-甲酸甲酯(480 mg, 2.02 mmol, 33.4%產率)。

步驟B：2-[3-(羥甲基)吡咯啶-1-基]-N ,N -二甲基-乙醯胺：在-60°C下向1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-甲酸甲酯(500 mg, 2.33 mmol)之THF (10 mL)溶液添加LiAlH₄ (203 mg, 5.36 mmol)且在-60°C下攪拌該反應混合物10分鐘。藉由添加飽和Na₂ SO₄ (0.4 mL)使該反應混合物淬滅，且將漿液過濾。將濾餅用THF (3 X 50 mL)洗滌，且將濾液真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[3-(羥甲基)吡咯啶-1-基]-N ,N -二甲基-乙醯胺 (400 mg, 2.15 mmol, 92.2%產率)。ES+APCI MS m/z 187.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(10 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 772 umol)、2-[3-(羥甲基)吡咯啶-1-基]-N,N-二甲基-乙醯胺 (216 mg, 1.16 mmol)及NaOBu-t (148 mg, 1.54 mmol)混合物在15°C下攪拌15分鐘。將反應混合物直接藉由矽膠層析法使用20à100% EtOAc/石油醚來純化，以得到呈褐色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(310 mg, 395 umol, 51.1%產率, 98%純度)。ES+APCI MS m/z 770.4 [M+H]⁺ 。

依據實例 131 ，以4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[1-[2-(二甲基胺基)-2-側氧基-乙基]吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟C中的4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-2-[乙基(甲基)胺基]-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯，製備2-[3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-基]-N ,N -二甲基-乙醯胺。ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]⁺ 。
實例141
1-[4-[2-[[1-(2-羥乙基)吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：吡咯啶-3-甲酸甲酯：在0°C下向吡咯啶-1,3-二甲酸1-(第三丁基)3-甲酯(10.0 g, 43.6 mmol)之DCM (50 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 109 mL)且在0°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之吡咯啶-3-甲酸甲酯(7.00 g，粗製，HCl)。¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 3.77 (s, 3H), 3.56 -3.53 (m, 2H), 3.41 -3.37 (m, 3H), 2.40 - 2.24 (m, 2H)。

步驟B：1-(2-苯甲基氧基乙基)吡咯啶-3-甲酸甲酯：將吡咯啶-3-甲酸甲酯(3.0 g, 18.1 mmol, HCl)、Cs₂ CO₃ (17.7 g, 54.3 mmol)及KI (301 mg, 1.81 mmol)之MeCN (60 mL)溶液在15°C下攪拌5分鐘。接著在15°C下向該混合物添加2-溴乙氧基甲苯 (4.67 g, 21.7 mmol, 3.43 mL)之ACN (15 mL)溶液且在15°C下攪拌1小時。接著將該混合物升溫至50°C且在50°C下攪拌12小時。將反應混合物過濾且將濾餅用DCM (3 × 30 mL)洗滌，並將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.1%TFA)-ACN];B%: 10ACN%-40ACN%,30分鐘, 40%min)純化，以得到呈褐色油狀物之1-(2-苯甲基氧基乙基)吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.48 g, 5.06 mmol, 27.9%產率, 90.0%純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.36 - 7.28 (m, 5H), 4.56 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.61 -3.58 (t,J =6.0 Hz, 2H), 3.02 – 3.00 (m, 2H), 2.78 - 2.67 (m, 4H), 2.58 - 2.49 (m, 1H), 2.11 - 2.08 (m, 2H)。

步驟C：(1-(2-(苯甲氧基)乙基)吡咯啶-3-基)甲醇：在-10°C下向1-(2-苯甲基氧基乙基)吡咯啶-3-甲酸甲酯(1.38 g, 5.24 mmol)之THF (27 mL)溶液添加LiAlH₄ (457 mg, 12 mmol)且在-10°C下攪拌0.5小時。藉由添加飽和Na₂ SO₄ (1 mL)使該反應混合物淬滅且過濾，濾餅係以THF (5 × 30 mL)洗滌，將濾液真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之(1-(2-(苯甲氧基)乙基)吡咯啶-3-基)甲醇(1.30 g, 3.31 mmol, 63.3%產率, 60.0%純度)。ES+APCI MS m/z 236.1 [M+H]⁺ 。

依據實例 136 ，以(1-(2-(苯甲氧基)乙基)吡咯啶-3-基)甲醇取代步驟B中的2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇，製備1-[4-[2-[[1-(2-羥乙基)吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 559.3 [M+H]⁺ 。
實例142
1-[4-[2-(2-羥基乙氧基)-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

依據實例 136 ，以2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙醇取代步驟B中的2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇，製備1-[4-[2-(2-羥基乙氧基)-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 476.2 [M+H]⁺ 。
實例143
1-[4-[2-(2,3-二羥基丙氧基)-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

依據實例 136 ，以(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)甲醇取代步驟B中的2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇，製備1-[4-[2-(2,3-二羥基丙氧基)-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。
實例144
(S )-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向於THF (50 mL)中之NaH (2.38 g, 59.6 mmol, 60%純度)漿液添加(2S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(10 g, 49.69 mmol)之THF (50 mL)溶液且在10°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下逐滴添加溴甲基苯(12.8 g, 74.5 mmol, 8.85 mL)且在10°C下攪拌該混合物16小時。藉由添加飽和氯化銨水溶液(20 mL)使該混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(200 mL)及水(100 mL)稀釋。分離出的有機層係以水(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至5/1)純化，以得到呈無色油狀物之(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(8.2 g, 28.06 mmol, 56.5%產率, 99.7%純度)。ES+APCI MS m/z 192.1 [M+H-Boc]⁺ 。

步驟B：(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶：在0°C於氮氣環境下向(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(8.2 g, 28.14 mmol)之CH₂ Cl₂ (28 mL)溶液逐滴添加TFA (43.1 g, 378 mmol, 28.0 mL)。在15°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係以二氯甲烷稀釋(100mL)，接著用1M氫氧化鈉水溶液(10 mL)洗滌直至水層達到pH ~ 10。分離出的有機層係以鹽水(2 × 20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(4 g, 20.9 mmol, 74.3%產率)。LCMS ES+APCI MS m/z 192.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶：將於CH₃ CN (20 mL)中之1-溴-2-甲氧基-乙烷(0.9 g, 6.48 mmol, 608 uL)、(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(1.24 g, 6.48 mmol)及K₂ CO₃ (2.68 g, 19.4 mmol)混合物在15°C下攪拌1小時，接著在78°C下攪拌12小時。用乙酸乙酯(50 mL)及水(50 mL)稀釋該混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(乙酸乙酯/二氯甲烷/甲醇 1/1/0至10/10/2)純化，以得到呈無色油狀物之(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶(900 mg, 3.61 mmol, 55.7%產率)。ES+APCI MS m/z 250.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-(1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲醇：向(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶(900 mg, 3.61 mmol)之MeOH (20 mL)溶液添加10% Pd/C (721.88 umol)且在10°C於H₂ (50 psi)下攪拌該漿料16小時。將反應物過濾且將濾液真空濃縮，以得到(S)-(1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲醇(450 mg, 2.83 mmol, 78.30%產率)。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於THF (5 mL)中之[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲醇(245 mg, 1.54 mmol)、4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 772 umol)及t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)混合物在20°C於N₂ 環境下攪拌0.5小時。將反應混合物傾注入H₂ O (30 mL)中且用乙酸乙酯(3x30 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 300/1至10:1)純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 349 umol, 45.3%產率)。ES+APCI MS m/z 743.4 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 環境下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 323 umol)及(Boc)₂ O (141 mg, 646 umol, 148 uL)之MeOH (150 mL)溶液添加10% Pd/C (100 mg)。使懸浮液脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾液濃縮，以得到4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(215 mg, 粗製)。ES+APCI MS m/z 619.1 [M+H]⁺ 。

步驟G：4-[2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：向4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(215 mg, 347 umol)之DCM (500 uL)溶液添加TFA (594 mg, 5.21 mmol, 385 uL)且在15°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮，以得到4-[2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(219 mg, 346 umol)。ES+APCI MS m/z 519.4 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：於氮氣環境下將冷卻至-40°C之於二氯甲烷(4.00 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(219 mg, 346 umol)及DIEA (447 mg, 3.46 mmol, 603 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(34.9 mg, 276.92 umol)之二氯甲烷(1.00 mL)溶液。在-40°C下攪拌該混合物1小時。藉由添加飽和NaHCO₃ (2.00 mL)使該反應物淬滅，且將該混合物傾注入冰水(20 mL)中，並用二氯甲烷(20 mL×2)萃取。合併的有機物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 32%-62%, 12 分鐘)純化，以得到1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(27 mg, 46.7 umol)。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。
實例145
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶- 2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(2S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.24 g, 6.17 mmol)及4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2 g, 3.09 mmol)之THF (50 mL)溶液添加t-BuONa (890 mg, 9.26 mmol)且在15 °C下攪拌該反應物0.5小時。將該反應混合物清注入H₂ O (100 mL)中且用乙酸乙酯(3X100 mL)萃取。合併的有機物係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至1:1) 純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.62 g, 2.02 mmol, 65.5%產率)。ES+APCI MS m/z 785.6 [M+H]⁺ 。

步驟B：(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸酯：在15 °C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (50 mL)內持續30分鐘。在N₂ 下向此溶液添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.6 g, 2.04 mmol)，隨後添加無水10 % Pd/C (500 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於氫氣(15 psi)下攪拌該混合物12小時。接著將混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.00 g, 1.78 mmol)。ES+APCI MS m/z 561.5 [M+H]⁺ 。

步驟C：(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-[4-(2,2,2-三氟乙醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.43 mmol)之DCM (5.00 mL)溶液添加TFAA (599 mg, 2.85 mmol)及DIEA (737 mg, 5.71 mmol)且在在0°C下攪拌反應物0.5小時。將反應混合物傾注入H₂ O (50 mL)中且用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取。合併的有機物係以鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-[4-(2,2,2-三氟乙醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.5 g, 粗製)。ES+APCI MS m/z 657.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮：向(2S )-2-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-[4-(2,2,2-三氟乙醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(300 mg，粗製)之DCM (500 uL)溶液添加TFA (521 mg, 4.57 mmol, 338 uL)且將該混合物在15 °C下攪拌1小時。將該反應物真空濃縮，以得到2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮(306 mg)。ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮：向丙酮(132 mg, 2.28 mmol, 167 uL)及2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮(306 mg，粗製，TFA)之MeOH (5.00 mL)溶液添加AcOH (54.8 mg, 912 umol, 52.2 uL)及NaBH₃ CN (115 mg, 1.83 mmol)，且在15 °C下攪拌該混合物16小時。以H₂ O (20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL ×3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮(300 mg, 粗製)。ES+APCI MS m/z 599.5 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：向2,2,2-三氟-1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]乙酮(300 mg，粗製)之MeOH (10 mL)溶液添加K₂ CO₃ (346 mg, 2.51 mmol)，且在15 °C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物過濾，且將濾液濃縮，以得到4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(250 mg)。ES+APCI MS m/z 503.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：於氮氣環境下向冷卻至- 40°C之於DCM (5.00 mL)中的4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(250 mg，粗製)及DIEA (643 mg, 4.97 mmol, 866 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(50.2mg, 398 umol)之DCM (1 mL)溶液。在-40°C下攪拌該混合物1小時。藉由添加飽和NaHCO₃ (2.00 mL)使該反應物淬滅。將混合物傾注入冰水(20 mL)中且用DCM (20 mL×2)萃取。合併的有機物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 52%-78%, 12分鐘)純化。得到1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(10 mg, 17.6 umol)。ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例146
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於THF (10 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.50 g, 772 umol)、(3R )-3-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(311 mg, 1.54 mmol)及t-BuONa (223 mg, 2.32 mmol)混合物在20°C下攪拌1小時。以水(10 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取水層。合併的有機物係以飽和氯化鈉(1 × 30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.40 g, 499 umol)。ES+APCI MS m/z 785.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(10 mL)內持續30分鐘。將4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.25 g, 319 umol)及10% Pd/C (0.10 g)添加至該混合物內且在10°C於H₂ (15 psi)下攪拌1小時。將混合物過濾且真空濃縮，以得到(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.17 g, 303 umol)。ES+APCI MS m/z 561.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：向冷卻至-40°C之(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.17 g, 303 umol)及Et₃ N (153 mg, 1.52 mmol, 211 uL)之二氯甲烷(4.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(26.8 mg, 212 umol)，且在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。藉由添加甲醇(0.10 mL)使該反應物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲烷 = 10/1)純化，以得到(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.12 g, 189 umol)。ES+APCI MS m/z 615.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：將於二氯甲烷(0.20 mL)中之(3R )-3-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.10 g, 163 umol)及TFA (278 mg, 2.44 mmol, 181 uL)混合物在10°C下攪拌1小時。藉由添加NH₃ •H₂ O使該混合物淬滅且調整pH直至pH = 7。該混合物係藉由prep-HPLC (管柱：Venusil XBP C8 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 15%-45%, 10分鐘)純化，以得到1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(22.8 mg, 42.9 umol)。ES+APCI MS m/z 515.4 [M+H]⁺ 。
實例147
2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(Z )及(E )-4-溴丁-2-烯腈：在15 °C下向丁-3-烯腈(98 g, 1.46 mol, 118 mL)之三級丁醇(150 mL)及石油醚 (575 mL)溶液添加Br₂ (233 g, 1.46 mol, 75.3 mL)之三級丁醇(150 mL)溶液，且攪拌反應物30分鐘。將乙氧鈉之乙醇溶液(100 g, 0.6 mol, 850 mL)添加至該反應物中。在15 °C下攪拌該反應混合物2小時。接著將反應物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用2à20%乙酸乙酯/石油醚做為溶離液而純化，以得到呈微黃色油狀物之(Z )與(E )-4-溴丁-2-烯腈混合物(141 g,E/Z = 2.5/1，粗製)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) (E ), δ = 6.79 (td,J = 7.2, 16.0 Hz, 1H), 5.63 (d,J = 16.0 Hz, 1H), 4.00 (dd,J = 1.2, 6.8 Hz, 2H); (Z ), δ = 6.66 (td,J = 8.0, 10.8 Hz, 1H), 5.44 (d,J = 10.8 Hz, 1H), 4.16 (dd,J = 0.8, 8.0 Hz, 2H)。

步驟B：2-(1,4-二苯甲基哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向於甲苯(1 L)中之N ,N '-二苯甲基乙烷-1,2-二胺(115 g, 480 mmol, 113 mL)及TEA (97.0 g, 959 mmol, 133 mL)混合物逐滴添加4-溴丁-2-烯腈(70 g, 粗製)，且在15°C下攪拌該反應物12小時。將反應混合物過濾且將濾液在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用5à50% EtOAc/石油醚做為溶離液而純化，以得到呈微黃色半固體之2-(1,4-二苯甲基哌嗪-2-基)乙腈(82 g, 240 mmol, 兩個步驟37%產率, 89.3%純度)。ES+APCI MS m/z 306.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-哌嗪-2-基乙腈：在0°C下向2-(1,4-二苯甲基哌嗪-2-基)乙腈(164 g, 536 mmol)之DCE (1500 mL)溶液逐滴添加氯甲酸1-氯乙酯(306 g, 2.14 mol)。在添加之後，將該反應混合物加熱至85°C持續約48小時。使二氯乙烷蒸發且將殘餘物溶解於MeOH (1500 mL)中且加熱至70°C持續1小時。將反應混合物在減壓環境下濃縮，且用MTBE (3X3 L)濕磨固體，將固體在減壓環境下乾燥，以得到2-哌嗪-2-基乙腈。粗產物係藉由用乙醇及水(8:1, v:v)再結晶而純化，以得到呈灰白色固體之2-哌嗪-2-基乙腈 (53 g, 428 mmol, 40.0%產率, 96.4%純度, 2 HCl)。ES+APCI MS m/z 126.2 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, D₂ O) δ = 4.01 -3.96 (m, 1H), 3.81 -3.67 (m, 3H), 3.46 -3.27 (m, 3H), 3.09 (d,J = 6.0 HZ, 2H)。

步驟D：2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈：向於二噁烷(24 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.2 g, 4.08 mmol)及2-哌嗪-2-基乙腈 (808 mg, 4.08 mmol, 2HCl)混合物添加DIEA (2.64 g, 20.4 mmol, 3.55 mL)。在50°C下攪拌該反應混合物3小時。在完成時，用水(50 mL)稀釋該反應混合物且用EtOAc (3 × 80 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈(1.56 g, 4.07 mmol, 100%產率)。

步驟E：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈(1.56 g, 4.07 mmol)添加(Boc)₂ O (9.50 g, 43.5 mmol, 10 mL)，且將該混合物加熱至50°C持續2小時。在完成時，該反應混合物係藉由矽膠層析法使用10à50% EtOAc/石油醚做為溶離液而純化，以得到呈褐色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.2 g, 2.44 mmol, 59.9%產率, 98.3%純度)。ES+APCI MS m/z 483.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(655.74 mg, 5.69 mmol, 676 uL)之THF (25 mL)溶液添加NaH (182 mg, 4.55 mmol, 60%純度)，且在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。向該混合物添加4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 2.28 mmol)，且在70°C於N₂ 下在一密封管中攪拌該反應混合物12小時。在完成時，藉由添加飽和NH₄ Cl (20 mL)使該反應混合物淬滅，且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色固體之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 1.86 mmol, 81.7%產率, 95%純度)。ES+APCI MS m/z 562.4 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將氨氣鼓泡入MeOH (30 mL)內持續5分鐘。向此溶液添加4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(950 mg, 1.69 mmol)及10% Pd/C (200 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次，且在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物9小時。在完成時，將反應混合物過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 15%-40%,30;58%min)而純化，以得到呈褐色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 830 umol, 49.1%產率, 97.8%純度)。ES+APCI MS m/z 472.4 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.59 (br s, 1H), 4.43 - 4.28 (m, 1H), 4.18 - 4.09 (m, 1H), 4.07 -3.90 (m, 4H), 3.88 -3.78 (m, 1H), 3.21 (br dd,J = 3.2, 13.6 Hz, 2H), 3.16 -3.05 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 2H), 2.82 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.91 - 1.62 (m, 4H), 1.51 (s, 9H)。

步驟H：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 318 umol)、1-溴萘(98.8 mg, 477 umol, 66.3 uL)、Cs₂ CO₃ (311 mg, 954 umol)及RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol)之甲苯(3 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (29.1 mg, 31.8 umol)，使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨3次。在100°C下攪拌該反應混合物12小時。使該混合物分溶於水(10 mL)及EtOAc (20 mL)之間，且分離各層。合併的有機物係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(70 mg, 111 umol, 35.0%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 598.6 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.21 - 8.20 (m, 1H), 7.87 - 7.85 (m, 1H), 7.61 - 7.59 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.41 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.13 (d,J =7.2 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.46 (br s, 1H), 4.33 - 4.28 (m, 4H), 4.10 - 4.07 (m, 2H), 3.97 -3.94 (br d,J =11.6 Hz, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.31 -3.27 (br d,J =14.0 Hz, 1H), 3.07 -3.01 (m, 2H), 2.77 (br s, 3H), 2.55 (br s, 3H), 2.35 (br s, 1H), 1.82 (br s, 7H), 1.52 (s, 9H)。

步驟I：2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在15 °C下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(60 mg, 100 umol)之DCM (0.1 mL)溶液添加TFA (154 mg, 1.35 mmol, 0.1 mL)，且在15 °C下攪拌1小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(50 mg)。

步驟J：2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(50 mg, 81.8 umol, TFA)及DIEA (106 mg, 817 umol, 142 uL)之DCM (0.2 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(11.3 mg, 89.9 umol)且在0-15°C下攪拌該反應物1.5小時。將該反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 15%-45%,10.5分鐘)而純化，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(9.16 mg, 15.1 umol, 18.5%產率, 98.7%純度, Formate)。ES+APCI MS m/z 552.5 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.45 (br s, 1H), 8.22 - 8.19 (m, 1H), 7.87 - 7.85 (m, 1H), 7.62 - 7.60 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.49 (m, 2H), 7.45 - 7.43 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.15 - 7.13 (d,J =7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.42 - 6.38 (m, 1H), 5.84 - 5.82 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.78 - 4.53 (br dd,J =6.8, 11.6 Hz, 2H), 4.42 - 4.40 (m, 1H), 4.27 (br s, 2H), 4.21 - 4.18 (br d,J =14.0 Hz, 1H), 4.12-3.78 (br d,J =12.8 Hz, 2H), 3.68 -3.07 (m, 7H), 3.05 - 2.84 (m, 3H), 2.77 (d,J =1.6 Hz, 3H), 2.71 - 2.64 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 1H), 2.11 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 2H)。
實例148
2-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol)、4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(188 mg, 636 umol)、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol)及Cs₂ CO₃ (414 mg, 1.27 mmol)之甲苯(6 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol)，且在100°C於N₂ 下攪拌該反應物12小時。在完成時，將該混合物直接藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=3:1至0:1)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 149 umol, 35.1%產率, 85.0%純度)。ES+APCI MS m/z 686.6 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.04 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 5.70 (dd,J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.39 (br s, 1H), 4.34 - 4.28 (m, 2H), 4.20 - 4.14 (m, 1H), 4.05 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.91 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.81 -3.72 (m, 1H), 3.53 (br t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.27 (br d,J = 10.8 Hz, 2H), 3.10 (br d,J = 6.8 Hz, 1H), 3.06 - 2.96 (m, 1H), 2.90 - 2.65 (m, 5H), 2.59 (br d,J = 10.2 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.23 - 2.15 (m, 1H), 2.11 (br s, 2H), 1.90 - 1.65 (m, 7H), 1.54 (s, 9H)。

步驟B：2-[4-[7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 219 umol)之DCM (0.2 mL)溶液添加TFA (616 mg, 5.40 mmol, 0.4 mL)，且在15 °C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，在真空下移除溶劑，以得到呈紅色油狀物之2-[4-[7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(159 mg, 218 umol, 99.6%產率, 2TFA)。

步驟C：2-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-40°C下向2-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(159 mg, 218 umol, 2TFA)及DIEA (366 mg, 2.83 mmol, 493 uL)之DCM (4 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(24.7 mg, 196 umol)，且在-20°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，藉由添加水(2 mL)使該反應混合物淬滅，且分離出水層並用DCM (2 × 10 mL)反萃取。將合併的有機物真空濃縮，殘餘物係藉由矽膠層析法(DCM: MeOH=50:1至5:1)純化，隨後藉由逆相prep HPCL (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 4%-34%超過10分鐘)來純化，以得到2-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(1.77 mg, 3.10 umol)。ES+APCI MS m/z 556.5 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.00 (s, 1H), 7.18 (br s, 1H), 7.16 - 7.11 (m, 1H), 6.52 (br s, 1H), 6.37 - 6.21 (m, 1H), 5.75 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 4.99 (br s, 1H), 4.67 (br dd,J = 6.4, 11.6 Hz, 1H), 4.34 (br dd,J = 3.9, 11.6 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.11 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.94 (br s, 1H), 3.57 -3.40 (m, 4H), 3.29 (br d,J = 13.8 Hz, 1H), 3.19 (br s, 1H), 3.02 (br dd,J =12.4, 19.7 Hz, 2H), 2.87 (br dd,J =8.4, 16.4 Hz, 2H), 2.76 - 2.58 (m, 6H), 2.35 (s, 3H), 2.22 - 2.10 (m, 1H), 2.01 (br d,J =8.4 Hz, 1H), 1.89 (br s, 2H)。
實例149
2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(3.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 276 umol)、2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(120 mg, 303 umol)、Pd₂ (dba)₃ (50.5 mg, 55.1 umol),RuPhos (51.5 mg, 110 umol)、Cs₂ CO₃ (225 mg, 689 umol)用N₂ 脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (EtOAc/MeOH 8/1)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 169 umol, 61.4%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 786.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 178 umol)之DCM (3.00 mL)溶液添加2,6-二甲基吡啶(229 mg, 2.14 mmol)及TMSOTf (238 mg, 1.07 mmol)。在15 °C下攪拌該混合物2小時。在完成時，藉由添加MeOH (0.5 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 686.6 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(122 mg, 178 umol)及DIEA (138 mg, 1.07 mmol, 186 uL)之DCM (3.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.0 mg, 143 umol)。在20°C下攪拌該混合物1.5小時。在完成時，以水(0.5 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取。有機層係以經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (EA/MeOH 10/1)及prep-HPLC (管柱：Boston pH-lex 150*25 10um;移動相：[水(0.1%TFA)-ACN];B%: 39%-69%,10分鐘)來純化，以得到2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(54.0 mg, 43.8 umol)。ES+APCI MS m/z 740.6 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(20 mg, 27.0 umol)之DCM (60 uL)溶液添加TFA (30.8 mg, 270 umol)。在20°C下攪拌該混合物1小時。該反應並未完成，故添加額外的TFA (30.8 mg)，且在20°C下再攪拌該反應物0.5小時。在完成時，藉由添加飽和NaHCO₃ (1 mL)水溶液將該混合物的pH調整至8，且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。用MeOH (0.5 mL)稀釋殘餘物，添加NH₃ · H₂ O (0.5 mL)，在20°C下攪拌該混合物0.5小時。該混合物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 15%-45%,10.5分鐘)來純化，以得到呈白色固體之2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(2.68 mg, 3.99 umol)。ES+APCI MS m/z 610.5 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (s, 1H), 7.68 (d,J =9.2 Hz, 1H), 7.45 (d,J =8.8 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.45 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d,J =11.2 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.71 - 4.60 (m, 1H), 4.42 - 4.27 (m, 3H), 4.17 (br d,J =11.2 Hz, 1H), 4.01 (br d,J =12.4 Hz, 2H), 3.78 -3.31 (m, 5H), 3.23 -3.03 (m, 2H), 3.02 - 2.75 (m, 4H), 2.71 (s, 3H), 2.66 - 2.57 (m, 1H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 3H). ES+APCI MS m/z 610.1 [M+H]⁺ 。
實例150
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-[7-苯甲基-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲苯(20 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 1.04 mmol)、(2R )-1-(二甲基胺基)丙-2-醇(214 mg, 2.07 mmol)及第三丁醇鈉(298 mg, 3.11 mmol)混合物添加BINAP (129 mg, 207 umol)及Pd₂ (dba)₃ (94.8 mg, 104 umol)，用氮氣使該混合物鼓泡且隨後在90°C下攪拌5小時。用乙酸乙酯(100 mL)及水(100 mL)稀釋該混合物，分離出有機層且經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸水)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸鈉水溶液(5 mL)中和，且用10% MeOH/DCM (2 × 50 mL)萃取。合併的有機物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到4-[7-苯甲基-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 480 umol)。ES+APCI MS m/z 550.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向4-[7-苯甲基-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 2.00 mmol)之MeOH (10 mL)溶液添加NH₃ (792 mg, 46.5 mmol)之MeOH (3.96 g, 123.56 mmol, 5 mL)溶液，隨後添加10% Pd/C (500 mg)。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物12小時。將反應物過濾且將濾液在減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(756 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 460.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(10 mL)中之(4-溴-2-萘基)2,2-二甲基丙酸酯(304 mg, 990 umol)、2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 761 umol)、[2-(2-胺基乙基)苯基]-氯-鈀、二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(84.4 mg, 114 umol)及Cs₂ CO₃ (620 mg, 1.90 mmol)混合物用N₂ 沖淨3次，在70°C於N₂ 環境下攪拌16小時。將反應混合物傾注入H₂ O (50 mL)中且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機物係以鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1 %甲酸)/乙腈]純化，以得到2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 303 umol)。ES+APCI MS m/z 686.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：向2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 306 umol)之二氯甲烷(300 uL)溶液添加TFA (523 mg, 4.59 mmol, 340 uL)且在15 °C下攪拌混合物2小時。將該混合物真空濃縮，以得到[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(214 mg, 305 umol)。ES+APCI MS m/z 586.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：於氮氣環境下向冷卻至-40°C之於二氯甲烷(5.00 mL)中的[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(214 mg, 305 umol, TFA)及DIEA (395 mg, 3.06 mmol, 532 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(38.6 mg, 305 umol)之二氯甲烷(1.00 mL)溶液。將該混合物升溫至0°C且攪拌1小時。將該混合物真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% 三氟乙酸)\乙腈]純化，以得到[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(100 mg, 156 umol)。ES+APCI MS m/z 640.7 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向冷卻至0°C之[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(90 mg, 141 umol)之THF (500 uL)溶液添加NaOH (2 M, 281.34 uL)，且在15 °C下攪拌混合物16小時。藉由添加20 %甲酸溶液將該混合物的pH調整至7。接著用二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取該水溶液。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 7%-37%, 10 分鐘)來純化，以得到2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(5 mg, 8.82 umol, 6.27%產率, 98%純度)。ES+APCI MS m/z 556.3 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 8.54 (br s, 0.6 H), 8.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.37 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.21 (m, 1H), 6.91 - 6.72 (m, 3H), 6.29 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 5.48 (br s, 1H), 5.26 - 4.96 (m, 1H), 4.57 (br s, 1H), 4.24 - 4.09 (m, 4H), 3.74 -3.54 (m, 1H), 3.48 (m, 2H), 3.22 (m, 2H), 3.10 - 2.86 (m, 5H), 2.78 (br d,J = 14.4 Hz, 1H), 2.53 (br s, 6H), 1.37 (dd,J = 2.0, 6.4 Hz, 3H)。
實例151
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R )-1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

依據實例 150 ，以1-溴萘取代步驟C中的(4-溴-2-萘基) 2,2-二甲基丙酸酯並省略步驟F，製備(2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R )-1-(二甲基胺基)丙-2-基)氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。ES+APCI MS m/z 540.3 [M+H]⁺ .¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 8.51 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.25 - 7.18 (m, 1H), 6.82 (br s, 1H), 6.30 (br d,J = 17.2 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.62-5.53 (m, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.70 - 4.39 (m, 1H), 4.26 - 4.11 (m, 4H), 3.94 -3.59 (m, 1H), 3.48 -3.34 (m, 2H), 3.28-3.18 (m, 3H), 3.13 - 2.92 (s, 5H), 2.79 - 2.61 (s, 6H), 1.48 (dd,J = 2.0, 6.0 Hz, 3H)。
實例152
2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.50 g, 1.09 mmol)、4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(482 mg, 1.63 mmol)、t -BuONa (314 mg, 3.26 mmol)及 [2-(2-胺基乙基)苯基]-氯-鈀;二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(80.4 mg, 109 umol)混合物在70°C下攪拌10分鐘。用水(10 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取水層。合併的有機層係以飽和氯化鈉溶液(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(甲酸, 0.1 %.)/乙腈]純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.40 g, 522 umol, 48.0%產率)。ES+APCI MS m/z 674.3 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.03 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.27 (m, 2H), 5.68 (dd,J = 2.4, 9.6 Hz, 1H), 5.31 (br s, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.28 (s, 2H), 4.08 -3.94 (m, 3H), 3.86 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.79 -3.71 (m, 1H), 3.52 (br t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.24 (br d,J = 12.8 Hz, 2H), 3.04 - 2.91 (m, 1H), 2.87 - 2.67 (m, 5H), 2.65 - 2.47 (m, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.32 (br s, 6H), 2.17 (br d,J = 4.0 Hz, 1H), 2.09 (br s, 1H), 1.77 (br t,J = 10.8 Hz, 3H), 1.52 (s, 9H), 1.36 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。

步驟B：2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.38 g, 564 umol)之二氯甲烷(10 mL)溶液添加TMSOTf (752 mg, 3.38 mmol)及2,6-二甲基吡啶(725 mg, 6.77 mmol)，且在10°C下攪拌該混合物1小時。藉由添加甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相層析法[水(甲酸, 0.1 %)/乙腈]純化。將收集的分餾物合併，且藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液將pH調整至pH ＞ 7，並用二氯甲烷/甲醇(10/1) (3 × 10 mL)萃取水層。萃取物係經飽和氯化鈉溶液(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.30 g, 粗製)。ES+APCI MS m/z 574.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.20 g，粗製)及TEA (176mg, 1.74 mmol, 243 uL)之二氯甲烷(1.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(44.0 mg, 349 umol)，且在0°C下攪拌該反應物0.5小時。藉由添加甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(甲酸, 0.1 %)/乙腈]純化。合併收集的分餾物且藉由添加飽和碳酸氫鈉將pH調整至pH ＞ 7，且用二氯甲烷/甲醇萃取(10/1) (3 × 5.00 mL)水層。用飽和氯化鈉溶液(1 × 10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.10 g, 127 umol, 兩個步驟36.6%產率)。ES+APCI MS m/z 628.6 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：將於乙腈(3 mL)中之2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(40 mg, 63.7 umol)及TsOH (1.10 mg, 6.37 umol)混合物在90°C下攪拌1小時。在0°C下藉由添加飽和碳酸氫鈉(2 mL)使該混合物淬滅且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 5/1)純化。將收集的所要分餾物真空濃縮以得到白色固體。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 35%-65%, 3分鐘)及(管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 15%-45%, 10分鐘)來純化。將所要分餾物匯集且凍乾，以得到2-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(2.99 mg, 5.50 umol)。ES+APCI MS m/z 544.5 [M+H]⁺ 。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.36 (br s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.24 - 7.20 (m, 1H), 6.62 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 6.47 - 6.24 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.50 (br s, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.31 (s, 2H), 4.12 (br d,J = 14.4 Hz, 1H), 3.99 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 3.55 (br t,J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 -3.29 (m, 1H), 3.10 (br s, 1H), 3.00 - 2.68 (m, 7H), 2.49 (s, 6H), 2.43 (s, 3H), 1.39 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。
實例153
2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 773 umol)及3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(219 mg, 1.39 mmol)之甲苯(10 mL)添加tBuONa (111 mg, 1.16 mmol)。在18 °C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成時，該混合物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc= 3:1至0:1接著EA: MeOH=50:1至10:1)純化，隨後藉由逆相急驟層析法(50%至90 % MeCN於水中，鹼性條件)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 156 umol, 20.5%產率, 97.9%純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.19 - 8.12 (m, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 1H), 7.55 - 7.43 (m, 2H), 7.29 (d,J =1.6 Hz, 1H), 6.84 (d,J =2.0 Hz, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.42 - 4.35 (m, 3H), 4.26 (br d,J =5.2 Hz, 2H), 4.12 - 4.03 (m, 3H), 3.96 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 3.62 (dd,J =1.6, 7.6 Hz, 1H), 3.50 (br s, 2H), 3.31 (br d,J =13.6 Hz, 3H), 3.11 - 2.97 (m, 2H), 2.94 (br d,J =8.8 Hz, 1H), 2.89 - 2.69 (m, 5H), 2.54 (br d,J =9.8 Hz, 1H), 2.00 - 1.92 (m, 2H), 1.90 - 1.83 (m, 1H), 1.73 (br d,J =10.0 Hz, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.41 (s, 9H) 。

步驟B：4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：將2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 162 umol)之TFA (370 mg, 3.24 mmol, 240 uL)溶液在18 °C下攪拌1小時。在完成時，在真空下移除溶劑，以得到呈褐色油狀物之4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(140 mg, 161 umol, 99.5%產率, 2TFA)。

步驟C：[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：在0°C下向[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(140 mg, 161 umol)及DIEA (167 mg, 1.29 mmol, 225 uL)之DCM (2 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(30.5 mg, 242 umol)。在18 °C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，藉由添加水(5 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 10 mL)萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(鹼性條件，於水中之MeCN/NH₃ •H₂ O: 50%至80%)純化，以得到[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(60 mg, 86.5 umol, 53.6%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 - 8.13 (m, 1H), 7.84 - 7.78 (m, 1H), 7.56 - 7.45 (m, 2H), 7.31 (d,J =2.0 Hz, 1H), 6.86 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.62 (br s, 1H), 6.47 - 6.37 (m, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 1H), 5.24 - 4.88 (m, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 3H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 4.15 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.64 (dd,J =1.6, 7.6 Hz, 2H), 3.51 (br s, 2H), 3.38 (br s, 2H), 3.14 (br s, 1H), 3.08 - 2.73 (m, 7H), 2.56 (br d,J =10.0 Hz, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 2H), 1.88 (br d,J =9.6 Hz, 1H), 1.78 - 1.70 (m, 1H), 1.61 (s, 9H), 1.43 (s, 9H)。

步驟D：2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(60 mg, 86.5 umol)之THF (0.5 mL)溶液添加NaOH (2 M, 600 uL)。在18 °C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，藉由添加4滴的HCOOH (20 %於水中)使反應混合物酸化，且用DCM (5 × 8 mL)萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 10%-40%,10分鐘)純化，以得到呈褐色固體之2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(19.8 mg, 28.3 umol, 32.8%產率, 93.8%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 610.5 [M+H]⁺ 。
實例154
2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3 g, 7.42 mmol)、1-溴萘(3.07 g, 14.8 mmol, 2.06 mL)及Cs₂ CO₃ (7.25 g, 22.2 mmol)之甲苯(60 mL)溶液添加XPhos palladacycle gen 3 (628 mg, 742 umol)，使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。將該混合物升溫至70°C且在70°C下攪拌10小時。將所得混合物過濾，且用EtOAc (3 × 20 mL)洗滌濾餅。合併的有機物係於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自50:1至3:1)純化，以得到呈褐色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.55 g, 6.02 mmol, 81.2%產率, 90.0%純度)。ES+APCI MS m/z 531.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.95 g, 5.56 mmol)之DCM (60 mL)溶液添加m-CPBA (1.13 g, 5.56 mmol, 85.0%純度)且在0°C下攪拌1小時。在0°C下藉由添加飽和Na₂ S₂ O₃ (20 mL)使該反應混合物淬滅且分離各層，用水(20 mL)稀釋水層且用EtOAc (60 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1%甲酸) = 100 %)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.7 g, 2.80 mmol, 50.3%產率, 90.0%純度)。ES+APCI MS m/z 574.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 549 umol)及3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(160 mg, 1.02 mmol)之甲苯(6 mL)溶液添加tBuONa (79.1 mg, 823 umol)。在18°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成時，反應混合物係藉由矽膠層析法(PE:EA= 3:1至0:1接著EA:MeOH=50:1至10:1)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 249 umol, 45.3%產率, 79.6%純度)。ES+APCI MS m/z 640.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將於TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 uL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 313 umol)反應混合物在18 °C下攪拌1小時。在完成時，在真空下移除溶劑，以得到呈褐色油狀物之2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(271 mg，粗製)。

步驟E：2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(271 mg, 502 umol)及DIEA (323 mg, 2.50 mmol, 0.435 mL)之DCM (6 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(60 mg, 476 umol)，且在18°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，藉由添加一滴水使該反應混合物淬滅，且藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=3:1至0:1)純化，接著藉由prep HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 33%-63%,12分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(23.8 mg, 40.0 umol, 7.97%產率)。ES+APCI MS m/z 594.5 [M+H]⁺ 。
實例155
(S )-1-(4-(7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向於THF (100 mL)中之[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(4.15 g, 36.0 mmol, 4.28 mL)混合物分批添加NaH (2.16 g, 54.06 mmol, 60%純度)。在0°C下攪拌該混合物1小時之後，添加4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(8.0 g, 18.02 mmol)之THF (60 mL)溶液，在70°C下攪拌該混合物11小時。在完成之後，將反應混合物傾注入NH₄ Cl (160 mL)水溶液中，用EtOAc (2 × 100 mL)萃取水層。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=10:1)純化，以得到呈灰色固體之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.9 g, 8.70 mmol, 48.3%產率, 92.8%純度)。ES+APCI MS m/z 523.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於MeOH (30 mL)中之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.20 g, 4.21 mmol混合物添加Pd(OH)₂ /C (700 mg, 10%純度)，使該混合物在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次，並在40°C於H₂ (15 Psi)下攪拌該反應物12小時。在完成之後，使反應混合物過濾通過矽藻土且將濾液濃縮，以得到呈黑色固體之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.80 g, 4.02 mmol, 95.6%產率, 96.7%純度)。ES+APCI MS m/z 433.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲苯(4 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 462 umol)及4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(204 mg, 694 umol)混合物添加Pd₂ (dba)₃ (63.5 mg, 69.4 umol)、RuPhos (43.2 mg, 92.5 umol)及Cs₂ CO₃ (301 mg, 925 umol)，在110°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。在完成之後，使反應混合物分溶於水(10 mL)及EtOAc之間，且分離各層。隨後用EtOAc (2 × 10 mL)萃取水層，合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=5/1至乙酸乙酯/MeOH=10/1)純化，以得到呈褐色油狀物之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 310 umol, 67.1%產率, 83.6%純度)。ES+APCI MS m/z 647.6 [M+H]⁺ 。

步驟D：7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：向於DCM (1 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 371 umol)混合物添加TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1 mL)，在15°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應混合物濃縮以得到呈褐色固體之7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(250 mg, 309 umol, 83.4%產率, 85.5%純度, 2TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 463.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向於DCM (2 mL)中之7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(250 mg, 362 umol, 2TFA)混合物添加DIEA (702 mg, 5.43 mmol, 946 uL)，且將該混合物冷卻至-50°C。在-50°C下將丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(36.5 mg, 289 umol)分批添加至該反應物，且在-50°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，藉由添加MeOH (1 mL)使該反應混合物淬滅，且將該混合物濃縮。將殘餘物溶解於DCM (10 mL)中，且以H₂ O (2 × 8 mL)洗滌有機物。有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC ((儀器: gx-l; 管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 條件: 水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN; 開始B: 32; 結束B: 62; 梯度時間(分鐘): 12; 100%B 保持時間(分鐘): 2; 流速(ml/分鐘): 25)來純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(48.6 mg, 92.9 umol, 25.7%產率, 98.7%純度)。ES+APCI MS m/z 517.5 [M+H]⁺ 。
實例156
(S )-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

依據實例 155 ，以4-溴-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(中間物60)取代步驟C中的4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑，製備(S )-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 571.4 [M+H]⁺ 。
實例157
(S)-1-(4-(7-(5-甲氧基-1H-吲唑-4-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

依據實例 155 ，以4-溴-5-甲氧基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑取代步驟C中的4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑，製備(S )-1-(4-(7-(5-甲氧基-1H -吲唑-4-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 533.4 [M+H]⁺ 。
實例158
1-[4-[7-(2-異丙基苯基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(2-異丙基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(4.00 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 462 umol)、1-溴-2-異丙基-苯(120 mg, 601 umol)、Cs₂ CO₃ (452 mg, 1.39 mmol)及XPHOS PALLADACYCLE GEN 3 (78.3 mg, 92.5 umol)以N₂ 脫氣，且接著於N₂ 下加熱至100°C持續10小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液濃縮。粗產物係藉由矽膠層析法用EtOAc/MeOH= 50/1至5/1溶離而純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(2-異丙基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(84.6 mg, 134 umol, 28.9%產率, 87.0%純度)。ES+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。

依據實例 155 ，以4-[7-(2-異丙基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯取代步驟D中的4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯，製備1-[4-[7-(2-異丙基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 505.6 [M+H]⁺ 。
實例159
(S)-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

依據實例 155 ，以1-溴-2-(三氟甲基)苯取代步驟C中的4-溴-5-甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑，製備(S )-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 531.5 [M+H]⁺ 。
實例160
1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[2-甲基氫硫基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(50 mL)中之4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.15 g, 7.88 mmol)、2-[(4-溴-5-甲基-吲唑-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(3.50 g, 10.2 mmol)、Cs₂ CO₃ (6.42 g, 19.70 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (1.08 g, 1.18 mmol)及RuPhos (735 mg, 1.58 mmol)以N₂ 脫氣3次，且在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物10小時。藉由添加水(100 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用1à33% EtOAc/石油醚來純化，以得到4-[2-甲基氫硫基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.30 g, 2.93 mmol, 37.1%產率)。ES+APCI MS m/z 660.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-[2-甲基氫硫基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.30 g, 3.49 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加m-CPBA (601 mg, 3.49 mmol)。在0°C於N₂ 環境下攪拌該反應混合物1小時。在0°C下藉由添加Na₂ S₂ O₃ (10 mL)使該反應混合物淬滅，接著用水(100 mL)稀釋且用DCM (200 mL)萃取水層。合併的有機物係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用1à10% MeOH/DCM做為溶離液來純化，以得到4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.00 g, 2.84 mmol, 81.4%產率)。ES+APCI MS m/z 676.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於THF (10 mL)中之4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 739 umol)及3-(1-哌啶基)丙-1-醇(211 mg, 1.48 mmol)混合物逐份添加t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)，在20°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。將反應混合物冷卻至0°C，且添加HCl (2M)直至pH~7。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法使用水 5à95% 0.5% TFA/水/乙腈做為溶離液來純化，以得到4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 385. umol, 52.1%產率)。ES+APCI MS m/z 755.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶：於N₂ 下向4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 397 umol)之MeOH (20 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 1.99 mL)及Pd(OH)₂ (200 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將反應混合物過濾且將濾液濃縮，以得到7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(250 mg, 360 umol, 90.7%產率)。

步驟E：1-[4-[7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於DCM(8.00 mL)中之7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-2-(3-(哌啶-1-基)丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(250 mg, 360 umol, 2HCl)及DIEA (465 mg, 3.60 mmol, 629 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(36.3 mg, 288 umol)之DCM (2.00 mL)溶液，且攪拌該反應物1小時。在-40°C下藉由添加NaHCO₃ (500 uL)使該反應混合物淬滅，接著用水(10 mL)稀釋，且用DCM (10 ml)萃取水層。有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, DCM/MeOH 1/0至5/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN]; B%: 8%-28%, 10分鐘)純化，以得到1-[4-[7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(16.0 mg, 29.1 umol, 8.07%產率)。ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]⁺ 。
實例161
1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[(1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

依據實例 160 ，以(1-甲基吡咯啶-3-基)甲醇取代步驟C中的3-(1-哌啶基)丙-1-醇，製備1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[(1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 517.4 [M+H]⁺ 。
實例162
1-[4-[2-[(1R)-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯中之(2R )-1-(二甲基胺基)丙-2-醇(183 mg, 1.78 mmol) (8.00 mL)、4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 592 umol)及NaOtBu (114 mg, 1.18 mmol)混合物在15 °C下攪拌0.5小時。將該反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ (石油醚/乙酸乙酯 10/1至0/1)純化，以得到4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(280 mg, 352 umol)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.08 (s, 1H), 7.46 - 7.39 (m, 5H), 7.38 - 7.33 (m, 2H), 5.76 (s, 2H), 5.43 - 5.33 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 3.72 -3.67 (m, 4H), 3.64 -3.56 (m, 4H), 3.55 -3.47 (m, 4H), 2.87 - 2.80 (m, 2H), 2.74 (dd,J =6.8, 12.8 Hz, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.47 - 2.40 (m, 1H), 2.36 (s, 6H), 1.42 (d,J =6.4 Hz, 3H), 0.98 - 0.92 (m, 2H), 0.00 (s, 9H)。

步驟B：4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 280 umol)及(Boc)₂ O (122 mg, 559 umol, 129 uL)之MeOH (6.00 mL)溶液添加10% Pd/C (80 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。於H₂ (15 psi)下在25°C攪拌該混合物1小時且在35°C攪拌1小時。在完成時，過濾該混合物且將濾液真空濃縮，以得到呈混合物之4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯及(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺(110 mg)。ES+APCI MS m/z 681.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺：(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺(TFA)及[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-5-甲基-吲唑-1-基]甲醇。將含有110 mg的4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯與(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺混合物之TFA (3.08 g, 27.0 mmol)溶液在30°C下攪拌1小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮，以得到260 mg的(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺與[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-5-甲基-吲唑-1-基]甲醇混合物。ES+APCI MS m/z 451.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向冷卻至- 50°C之含有260 mg的(2R )-N ,N -二甲基-2-[[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙-1-胺與[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-5-甲基-吲唑-1-基]甲醇混合物的DCM (1.00 mL)溶液逐滴添加DIEA (594 mg, 4.59 mmol)，隨後添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.0 mg, 143 umol)，且在-50°C至-40°C之間攪拌該混合物30分鐘。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到100 mg的1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮與1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[1-(羥甲基)-5-甲基-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮混合物。ES+APCI MS m/z 505.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向於THF (22 mL)及水(550 uL)中之100 mg的1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮與1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-[1-(羥甲基)-5-甲基-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮混合物添加NaOH (44.8 mg, 1.12 mmol)，且在10°C下攪拌該混合物3小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。以水(1 mL)稀釋該殘餘物，且用DCM (3 × 5 mL)萃取。合併的有機物層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 10%-40%,12分鐘)來純化，以得到呈灰白色固體之1-[4-[2-[(1R )-2-(二甲基胺基)-1-甲基-乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(16.2 mg, 29.2 umol, 99.0%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 505.2 [M+H]⁺ 。
實例163
1-(4-(2-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於THF (10 mL)中之4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 739 umol)及2-(二乙基胺基)乙醇(173 mg, 1.48 mmol, 197 uL)混合物添加t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)，在20°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。將該混合物冷卻至0°C，且添加HCl (2 M)直至pH~7。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à10% MeOH/DCM做為溶離液來純化得到不純的物質，且將其進一步藉由逆相層析法純化，以得到4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(220 mg, 295 umol, 39.9%產率)。ES+APCI MS m/z 729.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：N ,N -二乙基-2-[[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙胺：於N₂ 下向4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(120 mg, 164 umol)之MeOH (10 mL)溶液添加Pd(OH)₂ (99.4 mg, 10%純度)及HCl/MeOH (4 M, 823.05 uL)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮，以得到N ,N -二乙基-2-[[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙胺(105 mg, 157.24 umol)。ES+APCI MS m/z 595.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於DCM (8 mL)中之N ,N -二乙基-2-[[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]乙胺(105 mg, 158 umol, 2 HCl)及DIEA (204 mg, 1.58 mmol, 276 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(15.9 mg, 126.4 umol)之DCM (2 mL)溶液，且攪拌反應物1小時。在-40°C下藉由添加NaHCO₃ (500 uL)使該反應混合物淬滅，且接著用水(10 mL)稀釋。將水層以DCM (10 ml)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à20% MeOH/DCM做為溶離液純化，以得到1-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(60.0 mg, 71.2 umol, 45.0%產率)。ES+APCI MS m/z 649.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向1-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(50 mg, 77.0 umol)之DCM (500 uL)溶液添加TFA (175 mg, 1.54 mmol, 114 uL)。在15°C下攪拌該混合物16小時。將反應混合物真空濃縮，將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 32%-62%, 12分鐘)純化，以得到1-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(16.0 mg, 30.2 umol, 39.2%產率)。ES+APCI MS m/z 519.3 [M+H]⁺ 。
實例164
1-(4-(7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙酮

步驟A：4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 739 umol)及2-(1-哌啶基)乙醇 (191 mg, 1.48 mmol, 197 uL)之甲苯(20 mL)溶液添加t-BuONa (213 mg, 2.22 mmol)。在20°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。將該混合物冷卻至0°C且添加HCl (2 M)直至pH~7。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法使用0à10% MeOH/DCM做為溶離液來純化，以得到4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 404 umol, 54.7%產率)。ES+APCI MS m/z 741.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：將4-[7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 337 umol)之TFA (10 mL)溶液在80°C下攪拌1小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(200 mg, 283 umol, 84.1%產率)。ES+APCI MS m/z 477.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於DCM (8 mL)中之7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-哌嗪-1-基-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(200 mg, 283 umol, 2TFA)及DIEA (366 mg, 2.84 mmol, 495 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(28.6 mg, 227 umol)之DCM (2 mL)溶液，且攪拌該反應物1小時。在-40°C下藉由添加NaHCO₃ (500 uL)使該反應混合物淬滅，接著用水(10 mL)及DCM (10 ml)稀釋。分離出的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 30% - 60%, 12分鐘)純化。得到1-[4-[7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(6.00 mg, 11.1 umol, 3.94%產率, 99.0%純度)。ES+APCI MS m/z 531.4 [M+H]⁺ 。
實例165
1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-甲氧基萘-1-醇：在0°C下向萘-1,3-二醇(20 g, 125 mmol)之MeOH (150 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 250 mL)。將該混合物升溫至18°C且攪拌36小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至1/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈淡黃色固體之乙氧基萘-1-醇(11 g, 62.5 mmol, 50.1%產率, 99%純度)。ES+APCI MS m/z 175.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-溴-3-甲氧基-萘-1-醇：在0°C下向3-甲氧基萘-1-醇(0.50 g, 2.87 mmol)之THF (10 mL)溶液添加NBS (562 mg, 3.16 mmol)之THF (3.00 mL)溶液。在0°C下攪拌2小時之後，將該混合物真空濃縮，以H₂ O (5 mL)稀釋，用二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取。合併的萃取物係以飽和氯化鈉(1 × 20 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色固體之4-溴-3-甲氧基-萘-1-醇(0.43 g, 1.43 mmol, 49.7%產率)。ES+APCI MS m/z 253 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-溴-2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇：在-40°C下向4-溴-3-甲氧基-萘-1-醇(4.00 g, 15.8 mmol)之乙腈(20 mL)溶液添加1-(氯甲基)-4-氟-1,4-偶氮雙環[2.2.2]辛烷雙四氟硼酸鹽(6.72 g, 19.0 mmol)之乙腈(20 mL)溶液。在-40°C下攪拌1小時且在10°C下攪拌3小時之後，將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色固體之4-溴-2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇(4.00 g, 10.6 mmol, 67.2%產率)。ES+APCI MS m/z 271.0 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇：將於乙酸乙酯(20 mL)中之4-溴-2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇(2.00 g, 7.38 mmol)及10% Pd/C (0.01 g)混合物在10°C於H₂ (15 psi)下攪拌1小時。將該混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇(1.60 g, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 193.0 [M+H]⁺ 。

步驟E：三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘)酯：在-78°C下向2-氟-3-甲氧基-萘-1-醇(1.60 g，粗製)及TEA (1.85 g, 18.3 mmol, 2.55 mL)之二氯甲烷(30 mL)溶液添加三氟甲烷磺酸三氟甲磺醯基酯(2.35 g, 8.33 mmol, 1.37 mL)持續1小時。用飽和氯化銨(30 mL)使該混合物淬滅，用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，以飽和氯化鈉(1 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色固體之三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘)酯(1.10 g, 2.07 mmol, 兩個步驟24.9%產率)。ES+APCI MS m/z 324.9 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(10 mL)中之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.40 g, 865 umol)、三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)酯(561 mg, 1.73 mmol)、RuPhos (80.7 mg, 173 umol)、Pd₂ (dba)₃ (79.2 mg, 86.5 umol)及t-BuONa (249 mg, 2.59 mmol)混合物在110°C於N₂ 下攪拌5小時。以水(10 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取。萃取物係以飽和氯化鈉(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1 %甲酸)/乙腈]純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.35 g, 495 umol, 57.2%產率)。ES+APCI MS m/z 637.1 [M+H]⁺ 。

步驟G：4-[3-[[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉：將於二氯甲烷(0.70 mL)中之4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.40 g, 628. umol)及TFA (1.07 g, 9.42 mmol, 698 uL)混合物在10°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之4-[3-[[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (0.41 g，粗製，TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 537.5 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向4-[3-[[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (0.41 g，粗製，TFA鹽)及TEA (635 mg, 6.27 mmol, 873 uL)之二氯甲烷(5.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(79.1 mg, 627 umol)。在-40°C下攪拌0.5小時之後，用甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(0.25 g, 411 umol, 兩個步驟65.5%產率)。ES+APCI MS m/z 591.0 [M+H]⁺ 。

步驟I：1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(0.20 g, 339 umol)之二氯甲烷(4.00 mL)溶液添加BBr₃ (424 mg, 1.69 mmol, 163 uL)持續0.5小時，且在0°C下攪拌2小時。在-78°C下用飽和碳酸氫鈉(5 mL)使該混合物淬滅，在0°C下攪拌0.5小時。用二氯甲烷(3 × 10 mL)萃取該混合物，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 13%-45%,7分鐘)來純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(35.2 mg, 60.8 umol, 17.9%產率, 99.4%純度)。ES+APCI MS m/z 577.0[M+H]⁺ 。
實例166
1-[4-[7-(6-羥基-2-甲基-1,3-苯并噻唑
-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-三異丙基矽烷基氧基苯胺：向4-胺苯酚(5.00 g, 45.8 mmol, 7.14 mL)之DCM (50.0 mL)溶液添加咪唑(4.06 g, 59.6 mmol)。將TIPSCl (13.3 g, 68.7 mmol, 14.7 mL)逐滴添加至該混合物。在15 °C下攪拌該混合物12小時。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由自動急驟層析系統(PE/EA 100/1至3/1)純化，以得到呈黑色油狀物之4-三異丙基矽烷基氧基苯胺(9.46 g, 33.9 mmol, 73.9%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.74 - 6.71 (m, 1H), 6.71 - 6.69 (m, 1H), 6.60 - 6.58 (m, 1H), 6.58 - 6.55 (m, 1H), 3.66 - 2.98 (m, 2H), 1.28 - 1.16 (m, 3H), 1.11 - 1.06 (m, 18H)

步驟B：2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基苯胺：在0°C下向4-三異丙基矽烷基氧基苯胺(7.30 g, 27.5 mmol)之DCM (73.0 mL)及MeOH (73.0 mL)溶液逐滴添加Br₂ (11.0 g, 68.8 mmol, 3.55 mL)之DCM (5 mL)溶液。在15 °C下攪拌該混合物5小時。在完成時，以亞硫酸鈉溶液(60 mL)稀釋該混合物，且用DCM (3 × 200 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(PE/EA 50/1至1/1)純化，以得到呈褐色油狀物之2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基苯胺(10.8 g, 23.2 mmol, 84.4%產率, 90.8%純度)。ES+APCI MS m/z 423.9[M+H]⁺ 。

步驟C：N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)乙醯胺：向2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基苯胺(10.4 g, 24.6 mmol)及CH₃ COOH (52 mL)之溶液添加乙酸酐(10.9 g, 107 mmol, 10 mL)。在90°C攪拌該反應混合物1小時。在完成時，添加水(100 mL)及DCM (200 mL)，且分離各層。用DCM (100 mL × 2)萃取水相。合併的萃取物係以5 % Na₂ CO₃ (80 mL)洗滌，以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(PE/EA 50/1至1:1)純化，以得到呈褐色油狀物之N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)乙醯胺 (7.32 g, 14.2 mmol, 57.6%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.16 (s, 1H), 7.11 (s, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.28 - 1.24 (m, 3H), 1.12 - 1.09 (m, 18H).

步驟D：N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)硫代乙醯胺：向N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)乙醯胺 (7.22 g, 15.5 mmol)之甲苯(116 mL)溶液添加勞森試劑(LAWESSON'S REAGENT) (3.14 g, 7.76 mmol)。將該混合物加熱至110°C持續2小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(PE/EA 100/1至1/1)純化，以得到呈黃色油狀物之N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)硫代乙醯胺 (5.41 g, 8.40 mmol, 54.1%產率, 74.7%純度)。ES+APCI MS m/z 481.9[M+H]⁺ 。

步驟E：4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-醇：將CuI (94.2 mg, 494 umol)添加至N -(2,6-二溴-4-三異丙基矽烷基氧基-苯基)硫代乙醯胺 (2.38 g, 4.94 mmol)、1,10-啡啉 (134 mg, 741 umol)及Cs₂ CO₃ (4.83 g, 14.8 mmol)之DME (48.0 mL)溶液。接著在80°C於N₂ 下攪拌該反應混合物持續12小時。在完成時，將該反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(PE/EA 50/1至0/1)純化，以得到呈褐色油狀物之4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-醇(1.33 g, 3.54 mmol, 71.7%產率, 65.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ = 7.33 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.14 (d,J =2.4 Hz, 1H), 3.40 -3.33 (m, 1H), 2.72 (s, 3H).

步驟F：6-苯甲氧基-4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑：向於ACN (26.0 mL)中之4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-醇(1.28 g, 5.24 mmol)及K₂ CO₃ (2.17 g, 15.72 mmol)混合物添加BnBr (988 mg, 5.76 mmol, 685 uL)。在45°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，將該反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(PE/EA 200/1至10/1)純化，以得到呈淺黃色固體之6-苯甲氧基-4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑(1.10 g, 3.13 mmol, 59.7%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 336.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：4-[7-(6-苯甲氧基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 805 umol)、6-苯甲氧基-4-溴-2-甲基-1,3-苯并噻唑(323 mg, 967 umol)、RuPhos (75.2 mg, 161 umol)、Cs₂ CO₃ (787 mg, 2.42 mmol)及Pd₂ (dba)₃ (73.8 mg, 80.6 umol)之甲苯(16 mL)溶液在85 °C於N₂ 下攪拌16小時。在完成時，將該反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ (PE/EA 10/1至0/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(6-苯甲氧基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(340 mg, 408 umol, 50.7%產率, 90.0%純度)。ES+APCI MS m/z 750.5[M+H]⁺ 。

步驟H：2-甲基-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-1,3-苯并噻唑-6-醇：於N₂ 下向4-[7-(6-苯甲氧基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(160 mg, 213 umol)之MeOH (4 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 533 uL)，隨後添加Pd(OH)₂ /C (80 mg, 533 umol)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物8小時。在完成時，將該反應混合物過濾且將濾液濃縮，以得到呈黃色固體之2-甲基-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-1,3-苯并噻唑-6-醇(110 mg, 126 umol, 59.2%產率, 68.7%純度, 2 HCl)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 526.2[M+H]⁺ 。

步驟I：1-[4-[7-(6-羥基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向2-甲基-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-1,3-苯并噻唑-6-醇(110 mg, 184 umol, 2 HCl)及DIEA (143 mg, 1.10 mmol, 193 uL)之DCM (2.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.5 mg, 147 umol)。在-40°C至-20°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係以水(2 mL)稀釋，且用DCM (3 × 6 mL)萃取。殘餘物係藉由管柱層析法經Al₂ O₃ (DCM/MeOH 20/1至10/1)、prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 21%-51%,12分鐘)來純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(6-羥基-2-甲基-1,3-苯并噻唑-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(32.4 mg, 55.4 umol, 30.2%產率, 99.1%純度)。ES+APCI MS m/z 580.4[M+H]⁺ 。
實例167
1-(4-(7-(5-羥基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-溴-4-甲氧基苯胺：在-10°C下向4-甲氧基苯胺(100 g, 812 mmol)之THF (3 L)溶液分三份添加N -溴琥珀醯亞胺 (152 g, 853 mmol)，且在相同溫度下攪拌該混合物30分鐘。將該混合物於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯15/1)純化，以得到呈紅色油狀物之2-溴-4-甲氧基苯胺(30.58 g, 18.6%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.01 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.74-6.70 (m, 2H), 3.85-3.74 (m, 2H), 3.73 (s, 3H)。

步驟B：1-(2-胺基-3-溴-5-甲氧基苯基)-2-氯丙-1-酮：向0°C的2-溴-4-甲氧基-苯胺 (15.0 g, 74.2 mmol)之1,1-二氯乙烷(220 mL)溶液添加三氯化硼 (1.00 M, 89.1 mL)、2-氯丙腈(9.97 g, 111 mmol)及四氯化鈦(16.9 g, 89.1 mmol)。將該混合物加熱至85 °C持續24小時。在0°C下將該混合物傾注入冰及氫氯酸(20%, 300 mL)中，濃縮，且使殘餘物回流持續0.5小時。在0°C下用氫氧化鈉(飽和水溶液, 120 mL)使此混合物鹼化直至達到pH 4，接著用乙酸乙酯(300 mL × 2)萃取。合併的有機萃取物係以鹽水(200 mL)洗滌，經無硫酸鈉乾燥，且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷 50/1/1)純化，以得到呈黃色固體之1-(2-胺基-3-溴-5-甲氧基苯基)-2-氯丙-1-酮 (18.7 g, 86.3%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.37 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 6.60 (brs, 2H), 5.25 (q,J = 6.4 Hz, 1H), 3.80 (s, 3H), 1.74 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。

步驟C：7-溴-5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚：向1-(2-胺基-3-溴-5-甲氧基-苯基)-2-氯-丙-1-酮 (18.7 g, 64.1 mmol)之二噁烷(500 mL)及H₂ O (50 mL)溶液添加NaBH₄ (2.67 g, 70.5 mmol)，且在100°C下攪拌此混合物15小時。將該混合物冷卻，用氫氯酸(水溶液, 0.10 M, 100 mL)稀釋，且用二氯甲烷(300 mL × 2)萃取。有機物係以鹽水(200 mL)洗滌，以無水硫酸鈉乾燥，且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(石油醚/乙酸乙酯25/1)純化，以得到呈黃色固體之7-溴-5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚 (7.01 g, 45.6%產率)。¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 7.91 (brs, 1H), 7.03-6.91 (m, 2H), 6.23 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.46 (s, 3H)。

步驟D：4-(7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於2-甲基-2-丁醇(15.0 mL)中之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(275 mg, 594 umol)及7-溴-5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚 (130 mg, 540 umol)混合物添加t-BuONa (104 mg, 1.08 mmol)及氯(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)[2-(2-胺基乙基苯基)]鈀(II)甲基第三丁基醚加合物(44.1 mg, 54.0 umol)。在90°C於N₂ 環境下攪拌此混合物8小時。將該混合物過濾，於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (二氯甲烷/甲醇 10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(131 mg, 36.8%產率)。ES+APCI MS m/z 622.4[M+H]⁺ 。

步驟E：4-[3-[[7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉：向0°C的4-[7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(131 mg, 211 umol)之二氯甲烷(10 mL)溶液逐滴添加三氟乙酸(2.00 mL)，且在15 °C下攪拌反應物3小時。將該混合物於減壓環境下濃縮，且殘餘物係不經進一步純化即用於下個步驟中(126 mg粗產物)。ES+APCI MS m/z 522.4[M+H]⁺ 。

步驟F：1-(4-(7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向-60°C的4-[3-[[7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (74 mg, 116 umol, 三氟乙酸鹽)之二氯甲烷(5 mL)溶液添加二異丙基乙胺 (45.1 mg, 349 umol, 60.8 uL)，且在相同溫度下攪拌該混合物10分鐘。以檸檬酸(水溶液, 1.00 mL)使該混合物淬滅，用二氯甲烷(10 mL × 2)萃取，用鹽水(15 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC純化，以得到呈黃色固體之1-(4-(7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(31 mg, 39.2%產率)。ES+APCI MS m/z 576.4[M+H]⁺ 。

步驟G：1-(4-(7-(5-羥基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向-78°C的1-[4-[7-(5-甲氧基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(26 mg, 45.2 umol)之二氯甲烷(5 mL)溶液添加三溴化硼(56.6 mg, 226 umol, 21.8 uL)。使該反應物升溫至0°C且攪拌12小時。該混合物係以NaHCO₃ (aq., 3 mL)中和，用二氯甲烷(5 mL × 2)萃取，用鹽水(10 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC純化，以得到呈黃色固體之1-(4-(7-(5-羥基-2-甲基-1H -吲哚-7-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(8.16 mg, 29.1%產率, 90.3%純度)。ES+APCI MS m/z 562.5[M+H]⁺ 。
實例168
1-(3-(羥甲基)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.50 g, 16.2 mmol)之THF (30 mL)溶液添加NaH (3.24 g, 80.9 mmol, 60.0%純度)。在攪拌30分鐘之後，一次添加入TBDPSCl (6.67 g, 24.3 mmol, 6.23 mL)。將該混合物升溫至10°C且於N₂ 環境攪拌12小時。在0°C下藉由添加水使該反應混合物淬滅，接著用DCM (200 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯1/0至1/2)純化，以得到呈無色油狀物之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(6.34 g, 12.1 mmol, 74.8%產率, 86.8%純度)。ES+APCI MS m/z455.3[M+H]⁺ 。

步驟B：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向DMSO (60 mL)於中之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(7.25 g, 13.9 mmol)、7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(3.89 g, 13.2 mmol)及DIEA (4.27 g, 33.0 mmol, 5.77 mL)混合物在55 °C於N₂ 環境下攪拌24小時。用乙酸乙酯(300 mL)稀釋該反應混合物且用鹽水(3 × 150 mL)洗滌。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯1/0至3/1)純化，以得到呈黃色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.50 g, 5.91 mmol, 44.7%產率, 93.5%純度)。ES+APCI MS m/z 721.3[M+H]⁺ 。

步驟C：4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.00 g, 2.81 mmol)、3-嗎啉丙-1-醇(815 mg, 5.62 mmol)、Pd(OAc)₂ (94.6 mg, 422 umol)、BINAP (350 mg, 562 umol)及t-BuONa (674 mg, 7.03 mmol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著將該混合物加熱至110°C且在N₂ 環境下攪拌3小時。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH 70/1至20/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 1.69 mmol, 60.0%產率, 92.3%純度)。ES+APCI MS m/z 821.4[M+H]⁺ 。

步驟D：3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 1.83 mmol)之MeOH (20 mL)溶液添加Pd-C (10 %, 1.5 g)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在50°C於H₂ (50 psi)下攪拌該混合物24小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈無色油狀物之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(988 mg, 1.21 mmol, 66.1%產率, 89.5%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 731.5[M+H]⁺ 。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(15 mL)中之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(731 mg, 1.00 mmol)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(783 mg, 2.50 mmol)、甲烷磺酸[2-(2-胺基苯基)苯基]鈀(1+);二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷;酯(169 mg, 200 umol)、Cs₂ CO₃ (815 mg, 2.50 mmol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著將該混合物在60°C於N₂ 環境下攪拌24小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥，且藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 70/1至30/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 188 umol, 18.8%產率, 72.3%純度)。ES+APCI MS m/z 963.4[M+H]⁺ 。

步驟F：3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 188 umol)之MeOH (3 mL)溶液添加10% Pd/C (0.25 g)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在50°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物3小時。在完成之後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈深黃色固體之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 128 umol, 68.1%產率, 62.0%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 873.4[M+H]⁺ 。

步驟G：4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：將於THF (1.5 mL)中之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 149 umol)、吡啶氫氟酸鹽(123 mg, 744 umol, 112 uL, 60.0%純度)混合物在25°C於N₂ 環境下攪拌12小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由逆相HPLC (TFA條件; MeCN於H₂ O中; 0 ~ 30 %，流速40 mL/分鐘)純化。將所要分餾物於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色半固體之4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(84 mg, 104 umol, 69.6%產率, 94.1%純度, 2TFA)。ES+APCI MS m/z 535.3 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-[3-(羥甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向於DCM (3 mL) 中之4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(84.0 mg, 114 umol, 2TFA)、DIEA (36.9 mg, 285 umol, 49.8 uL)混合物逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(8.63 mg, 68.44 umol)，接著在-40°C於N₂ 環境下攪拌0.5小時。藉由添加MeOH (0.5 mL)使該反應混合物淬滅，且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Venusil XBP C8 150 * 25 * 10 um; 移動相：[水(0.225 %甲酸)-ACN]; B%: 10% - 40%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾至乾燥，以得到呈黃色固體之1-[3-(羥甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(9.75 mg, 14.5 umol, 12.7%產率, 94.4%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 589.3[M+H]⁺ 。
實例169
1-[3-(羥甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲苯(25 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(495 mg, 694 umol)、[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(160 mg, 1.39 mmol, 165 uL)及第三丁醇鈉(200 mg, 2.08 mmol)混合物添加BINAP (86.5 mg, 139 umol)及Pd₂ (dba)₃ (63.6 mg, 69.5 umol)。以氮氣環境使該混合物鼓泡，且在80°C下攪拌6小時。用水(10 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取。合併的有機層係以水(2 × 30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 30/1至1:1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(207 mg, 262 umol, 37.7%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ =7.62 - 7.53 (m, 4H), 7.43 - 7.28 (m, 11H), 4.42 - 4.29 (m, 1H), 4.26 -3.87 (m, 4H), 3.81 (br d,J = 13.2 Hz, 2H), 3.75 – 3.60 (m, 4H), 3.44 (dd,J = 1.6, 17.2 Hz, 1H), 3.24 -3.04 (m, 3H), 2.96 (br s, 1H), 2.75 (br s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.43 - 2.28 (m, 2H), 2.10 - 1.96 (m, 2H), 1.91 - 1.80 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.02 - 0.89 (m, 9H)。

步驟B：3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在-40°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(30 mL)內持續30分鐘。向於上述混合物中之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[ 第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(530 mg, 670 umol)溶液添加無水10% Pd/C(0.30 g)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物10小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(394 mg, 427 umol, 63.8%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.57 (br t,J = 6.0 Hz, 4H), 7.43 - 7.33 (m, 6H), 4.43 (br dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.00 (m, 4H), 3.99 -3.89 (m, 2H), 3.88 -3.65 (m, 4H), 3.27 - 2.89 (m, 6H), 2.81 (br d,J = 8.4 Hz, 2H), 2.56 - 2.50 (m, 3H), 2.42 (br d,J = 16.8 Hz, 2H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 1.88 (br d,J = 6.8 Hz, 1H), 1.79 (br d,J = 5.2 Hz, 2H), 1.43 (s, 9H), 0.95 (br s, 9H)。

步驟C：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(4 mL)中之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.16 g, 228 umol)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(143 mg, 457 umol)、[2-(2-胺基乙基)苯基]-氯-鈀;二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷(16.9 mg, 22.8 umol)及t-BuONa (43.9 mg, 457 umol)混合物在70°C於N₂ 下攪拌12小時。以水(5.00 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取。有機層係以飽和氯化鈉(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(甲酸, 0.1 %)/乙腈]純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.15 g, 157 umol, 68.9%產率)。ES+APCI MS m/z 933.1[M+H]⁺ 。

步驟D：3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(10 mL)內持續30分鐘。添加4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.10 g, 107 umol)及無水10% Pd/C (0.01 g)，在10°C於15 psi的H₂ 下攪拌該混合物1小時。將漿液過濾通過矽藻土濾墊，且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.09 g, 粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 843.0 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇：將於二氯甲烷(2 mL)中之3-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.04 g，粗製)及吡啶氫氟酸鹽(118 mg, 712 umol, 106 uL)混合物在0°C下攪拌1小時且在10°C下攪拌12小時。藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液(3.00 mL)將該混合物的pH調整至pH＞7。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 5/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(0.04 g，粗製)。ES+APCI MS m/z 505.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-[3-(羥甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向4-[4-[2-(羥甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]萘-2-醇(0.02 g，粗製)及TEA (40.1 mg, 396 umol, 55.17 uL)之二氯甲烷(2 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(999 ug, 7.93 umol)，接著在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。藉由添加甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 5/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮。殘餘係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]; B%: 38%-68%, 3分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到1-[3-(羥甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(1.08 mg, 1.73 umol)。ES+APCI MS m/z 559.5 [M+H]⁺ 。
實例170
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(7-苯甲基-2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-(第三丁基)2-甲酯：向7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶(5.00 g, 17.0 mmol)及哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(4.24 g, 17.3 mmol)之DMSO (80 mL)溶液添加DIEA (5.49 g, 42.5 mmol, 7.42 mL)。在55 °C下攪拌12小時之後，該混合物係用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，以鹽水(3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE/EA = 3/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(8.00 g, 15.9 mmol, 93.8%產率)。ES+APCI MS m/z 502.1[M+H]⁺ 。

步驟B：4-(7-苯甲基-2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-(第三丁基)2-甲酯：將於甲苯(30 mL)中之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(8.00 g, 15.9 mmol)、2-(二甲基胺基)乙醇(2.84 g, 31.9 mmol, 3.19 mL)、Cs₂ CO₃ (13.0 g, 39.8 mmol)、Pd(OAc)₂ (537 mg, 2.39 mmol)及BINAP (1.98 g, 3.19 mmol)混合物在110°C於氮氣下攪拌3小時。該混合物係以水(30 mL)稀釋且接著用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相HPLC (TFA, 0.1 %)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(6.00 g, 10.8 mmol, 67.9%產率)。ES+APCI MS m/z 555.3[M+H]⁺ 。

步驟C：4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：將於MeOH (100 mL)中之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(6.00 g, 10.8 mmol)及10% Pd/C (600 mg, 10.8 mmol)混合物在40°C於50 psi的H₂ 下攪拌12小時。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(4.50 g, 粗製)。ES+APCI MS m/z 465.3[M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯：將於1,4-二噁烷(150 mL)中之4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(2.90 g, 6.24 mmol)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(2.54 g, 8.12 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (857 mg, 936 umol)、RuPhos (728 mg, 1.56 mmol)及Cs₂ CO₃ (5.08 g, 15.6 mmol)混合物在85 °C於N₂ 下攪拌5小時。將該混合物用水(100 mL)稀釋，且用DCM (1 × 200 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 300 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相HPLC (TFA, 0.1 %)純化，以得到呈褐色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(3.50 g, 5.02 mmol, 兩步驟，72.5 %產率)。ES+APCI MS m/z 697.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在-60°C下向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.00 g, 1.44 mmol)之THF (10 mL)溶液分批添加LiAlH₄ (219 mg, 5.76 mmol)。在攪拌2小時之後，用飽和硫酸鈉溶液(0.3 mL)使該混合物淬滅，過濾且將濾餅用DCM (100 mL)洗滌。將合併的濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(750 mg, 1.12 mmol, 77.8%產率)。ES+APCI MS m/z 669.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將於DMF中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 149 umol)、TBAI (11.1 mg, 29.9 umol)、1-(p-甲苯磺醯基)咪唑(79.9 mg, 359 umol)、NaCN (0.12 g, 2.45 mmol)及TEA (37.8 mg, 374 umol, 51.8 uL)混合物在155 °C下攪拌6小時。將該混合物真空濃縮，用水(1 × 5 mL)稀釋且接著用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC 管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-70%, 28 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg, 277 umol, 37.1%產率)。ES+APCI MS m/z 578.5[M+H]⁺ 。

步驟G：2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60 mg, 104 umol)及DIEA (67.1 mg, 519 umol, 90.7 uL)之DCM (2 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(13.1 mg, 104 umol)。在10°C下攪拌4小時之後，用MeOH (0.1 mL)使該混合物淬滅，接著真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH 10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(40.0 mg, 63.3 umol, 61.0%產率)。ES+APCI MS m/z 632.3[M+H]⁺ 。

步驟H：2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-78°C下向2-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(30 mg, 47.5 umol)之DCM (2 mL)溶液添加BBr₃ (35.7 mg, 142 umol, 13.7 uL)。將該混合物升溫至0°C且攪拌2小時。將該混合物真空濃縮，且接著在-78°C至0°C下用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅。該混合物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , DCM/MeOH = 5/1)純化，接著進一步藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 30%-60%,12分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(810 ug, 1.46 umol, 3.07%產率, 97.5%純度)。ES+APCI MS m/z 542.5 [M+H]⁺ 。
實例171
1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(3-側氧基哌嗪-2-基)乙酸乙酯：向(E )-丁-2-烯酸二乙二酯(30.2 g, 175 mmol, 28.8 mL)之i -PrOH (300 mL)溶液添加乙烷-1,2-二胺(11.0 g, 183 mmol, 12.2 mL)。在25°C下攪拌12小時之後，將反應物於減壓環境下濃縮至乾燥。用MTBE (500 mL)洗滌粗製白色固體，且真空乾燥，以得到呈白色固體之2-(3-側氧基哌嗪-2-基)乙酸乙酯(26.0 g, 140 mmol, 79.6%產率, 100%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.55 (br s, 1H), 4.15 (q,J = 6.8 Hz, 2H), 3.80 -3.72 (m, 1H), 3.47 (dt,J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 3.36 -3.22 (m, 1H), 3.18 -3.08 (m, 1H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.76 - 2.70 (m, 1H), 1.25 (t,J = 7.2 Hz, 3H)。

步驟B：2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-哌嗪-2-基]乙酸乙酯：在0°C下向於甲醇(400 mL)中之2-(3-側氧基哌嗪-2-基)乙酸乙酯(23.6 g, 127 mmol)混合物添加4-甲氧基苯甲醛(18.9 g, 139 mmol, 16.9 mL)及CH₃ COOH (15.2 g, 253 mmol, 14.5 mL)。在0°C下攪拌1小時之後，將反應混合物冷卻至-10°C。向該混合物分批添加NaBH₃ CN (23.9 g, 380 mmol)且將該反應混合物升溫至15°C並再攪拌11小時。藉由添加水(400 ML)使該混合物淬滅，且用DCM (2 × 300 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物再用乙酸乙酯(300 mL)溶解，接著用0.5 M HCl溶液(2 × 200 mL)洗滌。用Na₂ CO₃ 固體將水相調整至pH 7 ~ 8，接著用DCM (2 × 300 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈無色油狀物之2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-哌嗪-2-基]乙酸乙酯(27.2 g, 87.6 mmol, 69.0%產率, 98.5%純度)。ES+APCI MS m/z 307.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙醇：在0°C下向於THF (500 mL)中之2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-側氧基-哌嗪-2-基]乙酸乙酯(27.2 g, 88.8 mmol)混合物分批添加LiAlH₄ (10.1 g, 266 mmol)。在0°C下攪拌1小時之後，將反應混合物加熱至70°C且攪拌11小時。在完成後，用飽和Na₂ SO₄ 水溶液(40 mL)使該反應物淬滅，過濾且接著濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙醇(20 g，粗製)。ES+APCI MS m/z 251.1 [M+H]⁺ 。

步驟D：第三丁基-[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙氧基]-二苯基-矽烷：在0°C下向於THF (300 mL)中之2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙醇(20 g，粗製)混合物分批添加NaH (15.9 g, 399 mmol, 60%純度)，接著添加TBDPSCl (65.9 g, 239 mmol, 61.6 mL)之THF (100 mL)溶液。將該混合物升溫至15°C且再攪拌12小時。在完成後，將該反應物傾注入NH₄ Cl溶液(300 mL)，且用DCM (2 × 300 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯 3/1至二氯甲烷/甲醇 10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之第三丁基-[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基] 哌嗪-2-基]乙氧基]-二苯基-矽烷(29.5 g, 59.9 mmol, 兩個步驟35 %, 99.2%純度)。ES+APCI MS m/z 489.4[M+H]⁺ 。

步驟E：3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於MeOH (200 mL)中之第三丁基-[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙氧基]-二苯基-矽烷(11.0 g, 22.5 mmol)混合物添加TEA (6.83 g, 67.5 mmol, 9.36 mL)及(Boc)₂ O (9.82 g, 45.0 mmol, 10.3 mL)。在15°C下攪拌3小時之後，將該反應物濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯 1/0至5/1)純化，以得到呈無色油狀物之3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(11.0 g, 18.7 mmol, 82.9%產率, 100%純度)。ES+APCI MS m/z 589.4 [M+H]⁺ 。

步驟F：3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於MeOH (150 mL)中之3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(9.00 g, 15.3 mmol)混合物添加10% Pd/C (849 umol)。在40°C於H₂ (50 Psi)下攪拌該混合物18小時。在完成後，使反應混合物過濾通過矽藻土插塞且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯10/1至3:1)純化，以得到呈無色油狀物之3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(5.80 g, 12.2 mmol, 79.5%產率, 98.2%純度)。ES+APCI MS m/z 469.4 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙氧基-第三丁基-二苯基-矽烷：將於DMSO (80 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶(4.00 g, 13.6 mmol)、第三丁基-[2-[1-[(4-甲氧基苯基)甲基] 哌嗪-2-基]乙氧基]-二苯基-矽烷(6.98 g, 14.3 mmol)及DIEA (4.39 g, 34.0 mmol, 5.93 mL)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，並將該混合物加熱至55 °C且於N₂ 環境下攪拌12小時。用水(300 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯1/0至3/1)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙氧基-第三丁基-二苯基-矽烷(9.00 g, 11.7 mmol, 86.0%產率, 97.0%純度)。ES+APCI MS m/z 746.4[M+H]⁺ 。

步驟H：2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺：將於甲苯(100 mL)中之2-(二甲基胺基)乙醇(2.39 g, 26.8 mmol, 2.69 mL)、2-[4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-[(4- 甲氧基苯基)甲基]哌嗪-2-基]乙氧基-第三丁基-二苯基-矽烷(8.00 g, 10.7 mmol)、Pd(OAc)₂ (361 mg, 1.61 mmol)、BINAP (1.34 g, 2.14 mmol)及Cs₂ CO₃ (8.73 g, 26.8 mmol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。將該混合物加熱至110°C且於N₂ 環境下攪拌3小時。將該反應混合物過濾且將濾液於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH 50/1至10/ 1)純化，以得到呈黃色半固體之2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(6.50 g，粗製)。ES+APCI MS m/z 799.4 [M+H]⁺ 。

步驟I：2-[4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙醇：將2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(6.50 g，粗製)之TFA (80 mL)溶液在80°C下攪拌12小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥，且將殘餘物再溶解於DCM (300 mL)內並以水(200 mL)洗滌。收集水相且用飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH ~ 8，接著用DCM (3 × 200 mL)萃取。合併的有機相係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色半固體之2-[4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙醇(3.00 g，粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟J：2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺：在0°C下向2-[4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基] 哌嗪-2-基]乙醇(3.0 g，粗製)之THF (40 mL)添加NaH (1.36 g, 34.1 mmol, 60.0%純度)。在攪拌30分鐘之後，分批添加TBDPSCl (2.81 g, 10.2 mmol, 2.63 mL)。將該混合物升溫至25°C且於N₂ 環境下再攪拌2小時。在0°C下藉由添加水(30 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈黃色油狀物之2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(6.00 g，粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 679.4 [M+H]⁺ 。

步驟K：4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於MeOH (3 mL)中之2-[[7-苯甲基-4-[3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基] 哌嗪-1-基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(6.0 g，粗製)、Boc₂ O (18.5 g, 84.8 mmol, 19.5 mL)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。將該混合物加熱至80°C且於N₂ 環境下攪拌3小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM /MeOH 1/0至10/1)純化，以得到呈半固體之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.10 g, 3.28 mmol, 四個步驟30.7%產率, 82.2%純度)。ES+APCI MS m/z 779.4 [M+H]⁺ 。

步驟L：2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.10 g, 3.28 mmol, 82.2%純度)之MeOH (60 mL)溶液添加Pd-C (10 %, 2 g)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在50°C於H₂ (50 psi)下攪拌該混合物36小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥，以得到呈黃色固體之2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.20 g, 2.75 mmol, 83.8%產率, 86.0%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 689.4 [M+H]⁺ 。

步驟M：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(40 mL)中之2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.85 g, 2.69 mmol)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(1.09 g, 3.49 mmol)、Cs₂ CO₃ (2.19 g, 6.71 mmol)、甲烷磺酸[2-(2-胺基苯基)苯基]鈀(1+);二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷;酯(341 mg, 403 umol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，且在65°C於N₂ 環境下攪拌該混合物10小時。在完成後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH 1/0至10 /1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.85 g, 1.69 mmol, 63.2%產率, 84.3%純度)。ES+APCI MS m/z 922.5 [M+H]⁺ 。

步驟N：1-[4-[7-(3-苯甲基氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 543 umol)、2,6-二甲吡啶(700 mg, 6.51 mmol, 759 uL)之DCM (10 mL)溶液添加TMSOTf (724 mg, 3.26 mmol, 588 uL)。在40°C於N₂ 環境下攪拌2小時之後，將該反應混合物冷卻至-40°C，且逐份添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(137 mg, 1.09 mmol)。將該反應混合物升溫至25°C且於N₂ 環境下攪拌12小時。在完成後，該反應混合物係直接藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH 30/1至10/1)純化，以得到呈半固體之1-[4-[7-(3-苯甲基氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(256 mg, 226 umol, 41.6%產率, 77.2%純度)。ES+APCI MS m/z 875.5 [M+H]⁺ 。

步驟O：1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(133 mg, 152 umol)之DCM (5.00 mL)溶液逐滴添加BBr₃ (571 mg, 2.28 mmol, 220 uL)。將該反應混合物升溫至0°C且於攪拌3小時。將該混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。用MTBE (25 mL)洗滌粗製物且收集固體。在0°C下以飽和NaHCO₃ 溶液(0.5 mL)洗滌固體至pH ~ 8，且溶解於MeOH (3 mL)中。該混合物係直接藉由prep-HPLC(管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225 %甲酸)-ACN]; B %: 15 % -39 %, 10 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(16.7 mg, 28.2 umol, 18.5%產率, 99.9%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]⁺ 。
實例172
1-(4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於DMSO (60 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶(3.04 g, 10.3 mmol)、3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(5.08 g, 10.8 mmol)、DIEA (3.34 g, 25.8 mmol, 4.51 mL)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。將該混合物加熱至55°C且於N₂ 環境下攪拌16小時。在冷卻至室溫後，用水(100 mL)洗滌該反應混合物，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯1/0至3/1)純化，以得到呈黃色半固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.50 g, 4.53 mmol, 43.9%產率, 94.0%純度)。ES+APCI MS m/z 726.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(40 mL)中之2-(二甲基胺基)乙醇(1.07 g, 12.1 mmol, 1.21 mL)、4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.50 g, 4.82 mmol)、Pd(OAc)₂ (162 mg, 723 umol)、BINAP (600 mg, 964 umol)及Cs₂ CO₃ (3.92 g, 12.1 mmol)之混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。將該混合物加熱至110°C且於N₂ 環境下攪拌3小時。在冷卻至室溫之後，將該返用混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 1/0至10/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.30 g, 2.57 mmol, 53.3%產率, 87.0%純度)。ES+APCI MS m/z 779.5 [M+H]⁺ 。

步驟C：3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.30 g, 2.95 mmol)之MeOH (40 mL)溶液添加Pd-C(10%, 1.5 g)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在50°C於H₂ (50 psi)下攪拌36小時之後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈無色油狀物之3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.58 g, 1.83 mmol, 61.9%產率, 79.6%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 689.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-(3-苯甲基氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.48 g, 2.15 mmol)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(875 mg, 2.80 mmol)、Cs₂ CO₃ (1.75 g, 5.38 mmol)、甲烷磺酸[2-(2-胺基苯基)苯基]鈀(1+);二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷;酯(273 mg, 323 umol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在65°C於N₂ 環境下攪拌該混合物24小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , DCM/MeOH = 1/0至20/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-苯甲基氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.20 g, 1.07 mmol, 49.7%產率, 82.0%純度)。S+APCI MS m/z 921.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺：在0°C下向於DCM (10 mL)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 326 umol)及2,6-二甲吡啶 (419 mg, 3.91 mmol, 455 uL)混合物逐份添加TMSOTf (434 mg, 1.95 mmol, 353 uL)。將該混合物升溫至10°C且於N₂ 環境下攪拌12小時。該反應混合物係直接藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , DCM/MeOH 1/0至50/1)純化，以得到呈黃色半固體之2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(210 mg, 229 umol, 70.3%產率, 89.5%純度)。ES+APCI MS m/z 821.5 [M+H]⁺ 。

步驟F：1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於DCM (10 mL)中之2-[[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-4-[2-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(210 mg, 256 umol)及DIEA (49.6 mg, 384 umol, 67.0 uL)混合物逐份添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(33.9 mg, 269 umol)。在相同溫度下攪拌30分鐘之後，將反應混合物直接藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , DCM/MeOH 1/0至50/1)純化，以得到呈微黃色半固體之1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(221 mg, 214 umol, 83.6%產率, 84.7%純度)。 ES+APCI MS m/z 875.4 [M+H]⁺ 。

步驟G：1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向於DCM (10 mL)中之1-[4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-[2-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基乙基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(221 mg, 253 umol)混合物添加BBr₃ (949 mg, 3.79 mmol, 365 uL)。在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮至乾燥。粗產物係以MTBE (25 mL)洗滌，在0°C下以飽和NaHCO₃ 溶液(0.5 mL)調整至pH ~ 8，且溶解於MeOH (3 mL)。所得溶液係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225 %甲酸)- ACN]; B %: 11 % - 41 %, 10 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(2-羥乙基)哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(26.7 mg, 44.0 umol, 17.4%產率, 97.8%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 547.3 [M+H]⁺ 。
實例173
1-(4-(7-(3-羥基-2-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 165 1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基] 丙-2-烯-1-酮的程序來製備1-(4-(7-(3-羥基-2-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮，以三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-2-甲基-1-萘基)酯取代步驟F中的三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)酯，以得到呈黃色固體之所要產物1-(4-(7-(3-羥基-2-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(10.4 mg, 13.1%產率, 98.1%純度)。ES+APCI MS m/z 573.5 [M+H]⁺ 。
實例174
(R)-1-(4-(2-((5,5-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：(5R )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在15 °C下向(2R )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-甲酸(500 mg, 2.06 mmol)之無水THF (4 mL)溶液逐滴添加BH₃ -Me₂ S (2 M, 1.23 mL)。將該反應物加熱至50°C持續5分鐘。在冰浴中冷卻之後，向該混合物添加甲醇(20 mL)。在25°C下將該反應混合物於減壓環境下濃縮。得到呈白色固體之(5R )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 1.74 mmol, 84.9%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 3.97 -3.81 (m, 1H), 3.62 (dd,J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.45 -3.33 (m, 1H), 2.02 - 1.79 (m, 3H), 1.79 - 1.67 (m, 1H), 1.49 - 1.41 (m, 12H), 1.32 (s, 3H).

步驟B：4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(5R )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(212 mg, 926 umol)及4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 463 umol)之THF (10 mL)溶液添加t-BuONa (133 mg, 1.39 mmol)。在15 °C下攪拌1小時之後，將該反應混合物傾注入H₂ O (20 mL)中且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。有機相係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈]純化。收集所要分餾物且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯(110 mg, 129 umol, 28.1%產率, 96%純度)。ES+APCI MS m/z 813.5 [M+H]⁺ 。

步驟C：(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在-40°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (30 mL)內持續30分鐘。於N₂ 下向於上述混合物(NH₃ /MeOH)中之4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 246 umol)溶液添加無水Pd-C (10%, 100 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液濃縮，以得到呈黃色固體之產物(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 244 umol, 99.4%產率, 96%純度)，其不經純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 589.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：在-40°C於氮氣環境下向於二氯甲烷(3 mL)中之(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 221 umol)及DIEA (285 mg, 2.21 mmol, 385 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(22.3 mg, 176 umol)之二氯甲烷(1 mL)溶液，在-40°C下攪拌該混合物1小時。藉由添加飽和NaHCO₃ (2 mL)水溶液使該反應物淬滅。接著將該混合物傾注入水(20 mL)中，且用二氯甲烷(20 mL × 2)萃取。合併的有機物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二氯甲烷/甲醇 = 1/0至10/1)純化。得到呈褐色油狀物之(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 217 umol, 98.6%產率)。ES+APCI MS m/z 643.6 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-[4-[2-[[(2R )-5,5-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：向(5R )-5-[[7-(3-羥基-1-萘基)-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 187 umol)之二氯甲烷(200 uL)溶液添加TFA (212 mg, 1.87 mmol, 138 uL)。在15°C下攪拌該混合物1小時。該反應混合物係經真空濃縮，接著用二氯甲烷(5 mL)稀釋，且藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液而調整至PH=7。用二氯甲烷(10 mL × 3)萃取該混合物。合併的有機相係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 45 %-75 %, 12分鐘)純化。藉由凍乾而得到呈黃色固體之1-[4-[2-[[(2R )-5,5-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(30 mg, 53.6 umol, 28.7%產率, 97%純度)。ES+APCI MS m/z 543.5 [M+H]⁺ 。
實例175
(S)-1-(4-(7-(3-羥基-2-甲基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例165的程序來合成(S )-1-(4-(7-(3-羥基-2-甲基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮，在步驟F中以4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯取代4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯，並以三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-2-甲基-1-萘基)酯取代三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)酯，以得到呈白色固體之1-[4-[7-(3-羥基-2-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(10.2 mg, 17.3 umol, 21.4%產率, 100%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 543.4 [M+H]⁺ 。
實例176
2-[(2S)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(3aR )-1-側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯：在0°C下向咪唑(15.7 g, 231 mmol)之DCM (100 mL)溶液添加SOCl₂ (8.25 g, 69.4 mmol, 5.03 mL)。在15 °C下攪拌該反應混合物1小時。在-70°C下向該混合物添加(3R )-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(5 g, 23.1 mmol)之DCM (100 mL)溶液。在15 °C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，藉由添加飽和NH₄ Cl (100 mL)使該反應混合物淬滅，將其分離，且用DCM (40 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色固體之(3aR )-1-側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯(5.8 g, 22.1 mmol, 95.6%產率)。

步驟B：(3aR )-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯：在0°C下向(3aR )-1-側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯(7.5 g, 28.6 mmol)之MeCN (225 mL)溶液添加NaIO₄ (7.95 g, 37.2 mmol, 2.06 mL)之水(75 mL)溶液，隨後添加RuCl₃ .H₂ O (129 mg, 572 umol)。在15°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成時，用飽和NH₄ Cl (10 mL)使該反應混合物淬滅，且用EtOAc (20 mL)萃取。有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=3:1至1:1)純化，以得到呈白色固體之(3aR )-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯(7 g, 25.2 mmol, 88.0%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.64 (dd,J =6.4, 8.0 Hz, 1H), 4.36 -3.94 (m, 3H), 3.64 (ddt,J =3.6, 6.0, 9.2 Hz, 1H), 3.46 (br d,J =11.6 Hz, 1H), 3.13 (br s, 1H), 2.96 (dt,J =3.2, 11.2 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H)。

步驟C：(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向(3aR )-1,1-二側氧基-3a,4,6,7-四氫-3H -氧雜噻唑并[3,4-a]吡嗪-5-甲酸第三丁酯(5 g, 18.0 mmol)之DMF (100 mL)溶液添加KCN (1.04 g, 16.0 mmol, 684.94 uL)。將該反應混合物加熱至50°C持續16小時。在完成時，用HCl (2 M, 50 mL)使該反應混合物淬滅，且在15 °C下攪拌1小時。以NaOH (40 %, 10 mL)使該混合物鹼化且用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=3:1至0:1接著EtOAc: MeOH= 100:1至10:1)純化，以得到呈褐色油狀物之(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 4.88 mmol, 27.2%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.05 -3.71 (m, 2H), 3.08 - 2.88 (m, 3H), 2.84 - 2.62 (m, 2H), 2.56 - 2.37 (m, 2H), 1.47 (s, 9H)。

步驟D：2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈：將(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(850 mg, 3.77 mmol)及HCl/二噁烷(4 M, 20 mL)之反應混合物在15 °C下攪拌1小時。在完成時，在真空下移除溶劑，以得到呈白色固體之2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈(740 mg, 3.74 mmol, 99.0%產率, 2HCl)。¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 4.04 -3.90 (m, 1H), 3.81 -3.70 (m, 2H), 3.69 -3.61 (m, 2H), 3.53 -3.36 (m, 2H), 3.13 (d,J =6.4 Hz, 2H)。

步驟E：2-[(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈：向於二噁烷(25 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.3 g, 4.42 mmol)及2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈(1.17 g, 5.91 mmol, 2HCl)混合物添加DIEA (2.86 g, 22.1 mmol, 3.85 mL)。在50°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，用水(50 mL)稀釋該反應混合物且用EtOAc (3 × 80 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之2-[(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈(1.69 g, 4.41 mmol, 100%產率)。

步驟F：(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將2-[(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基]乙腈(1.69 g, 4.41 mmol)及(Boc)₂ O (10.3 g, 47.2 mmol, 10.8 mL)之反應混合物加熱至50°C持續2小時。在完成時，該反應混合物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=10:1至1:1)純化，以得到呈褐色油狀物之(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 2.12 mmol, 48.0%產率, 93%純度)。ES+APCI MS m/z 483.4 [M+H]⁺ 。

步驟G：(2S )-4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向2-(二甲基胺基)乙醇(415 mg, 4.66 mmol, 468 uL)之THF (20 mL)溶液添加NaH (149 mg, 3.73 mmol, 60%純度)。在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。向該混合物添加(2S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(900 mg, 1.86 mmol)。在70°C於N₂ 下在一密封管中攪拌該反應混合物12小時。在完成時，用水(10 mL)使該反應混合物淬滅，且用EtOAc (3 × 40 mL)萃取。合併的有機層係以活性碳處理且過濾。將濾液真空濃縮，以得到呈褐色固體之(2S )-4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.12 mmol, 60.1%產率)。

步驟H：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將NH₃ 鼓泡至MeOH (20 mL)內持續5分鐘。向該溶液添加(2S )-4-[7-苯甲基-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.12 mmol)及10% Pd/C (200 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物16小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾餅用MeOH (3 × 30 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex luna(2) C18 250*50 10u;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: %-%,30分鐘;60%min)純化，以得到呈無色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(167 mg, 331 umol, 29.6%產率, 88.3%純度)。ES+APCI MS m/z 446.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 404 umol)、(4-溴-2-萘基) 2,2-二甲基丙酸酯(248 mg, 808 umol)及Cs₂ CO₃ (395 mg, 1.21 mmol)之甲苯(6 mL)溶液添加XPHOS Palladacycle Gen 3 (34.20 mg, 40.4 umol)。在70°C於N₂ 下攪拌該反應混合物4小時。在完成時，該反應混合物係藉由矽膠層析法(PE:EA= 5:1至0:1)純化，以得到呈褐色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 272 umol, 67.3%產率, 91.3%純度)。ES+APCI MS m/z 672.0 [M+H]⁺ 。

步驟J：[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 298 umol)之DCM (0.3 mL)溶液添加TFA (420 mg, 3.68 mmol, 273 uL)。在15°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(238 mg, 298 umol, 99.9%產率, 2TFA)。

步驟K：[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：在0°C下向[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(238 mg, 298 umol, 2TFA)及DIEA (308 mg, 2.38 mmol, 415 uL)之DCM (5 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(56.3 mg, 446 umol)。在15°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，用一滴水使該反應混合物淬滅。該混合物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc= 1:1至0:1接著EtOAc: MeOH= 50:1至3:1)純化，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(300 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 626.4 [M+H]⁺ 。

步驟L：2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(300 mg, 479 umol)之THF (3 mL)溶液添加NaOH (2 M, 3 mL)水溶液。在15 °C下攪拌該反應混合物8小時。在完成時，以0.5 mL的甲酸(20 %於水中)使該反應混合物酸化至pH=7，且用DCM (5 × 10 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。

殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%: 25%-49%,10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(18.3 mg, 30.2 umol, 兩個步驟10.1%產率, 96.7%純度，甲酸鹽)。ES+APCI MS m/z 542.5 [M+H]⁺ 。
實例177
2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在18 °C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 549 umol) 及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(126 mg, 1.10 mmol)之(6 mL)甲苯溶液添加t-BuONa (79.1 mg, 823 umol)，且在18 °C下攪拌該反應混合物0.5小時。接著向該混合物添加EtOAc (20 mL)及水(15 mL)，接著用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1%甲酸) = 42 %)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 331 umol, 60.4%產率, 99.0%純度)。ES+APCI MS m/z 598.3[M+H]⁺ 。

步驟B：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 334 umol)及TFA (763 mg, 6.69 mmol, 495 uL)之混合物在18 °C下攪拌1小時。將反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(250 mg，粗製，2TFA)。

步驟C：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(250 mg, 344 umol, 2TFA)及DIEA (356 mg, 2.76 mmol, 480 uL)之DCM (5 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(65.2 mg, 517 umol)，且在18 °C下攪拌該混合物1.5小時。以水(3 mL)使該反應混合物淬滅且用DCM (3 × 6 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 30%-60%,3分鐘)純化，以得到呈白色固體之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(9.98 mg, 17.0 umol, 4.94%產率, 94.1%純度)。ES+APCI MS m/z 552.5[M+H]⁺ 。
實例178
2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇：將MeOH (1000 mL)及Na (22.0 g, 957 mmol, 22.7 mL)之懸浮液攪拌30分鐘。在15 °C下向此混合物添加1-苯甲基-3-側氧基-哌啶-4-甲酸乙酯(50 g, 191 mmol)及2-甲異硫脲(47.9 g, 344 mmol, 0.5 H₂ SO₄ )。在15 °C下攪拌該反應混合物30小時。以HCl (2 M) (300 mL)使該反應混合物酸化直至pH=6，且於減壓環境下濃縮。使殘餘物懸浮於200 mL的水中且快速攪拌。將該懸浮液過濾且收集白色固體，並以乙酸乙酯洗滌。得到呈白色固體之7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(68 g, 151 mmol, 79.1%產率, 64.0%純度)。

步驟B：7-苯甲基-4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：向7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(50 g, 174 mmol)之CHCl₃ (1000 mL)溶液添加POCl₃ (166 g, 1.08 mol, 100 mL)，且在80°C下攪拌該混合物13小時。在完成時，將該反應混合物真空濃縮。殘餘物係以EtOAc (500 mL)稀釋且使用飽和Na₂ CO₃ (800 mL)鹼化至pH=7。用乙酸乙酯(3 × 400 mL萃取該混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA 自100:1至80:1)純化，以得到呈褐色油狀物之7-苯甲基-4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(21.7 g, 67.4 mmol, 38.7%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 306.1[M+H]⁺ 。

步驟C：4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向7-苯甲基-4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(2.6 g, 8.50 mmol)及2-哌嗪-2-基乙腈(1.68 g, 8.50 mmol, 2HCl)之DMSO (52 mL)溶液添加DIEA (5.49 g, 42.5 mmol, 7.40 mL)。將該混合物升溫至80°C且在80°C下攪拌6小時。向該混合物添加(Boc)₂ O (18.5 g, 85.0 mmol, 19.5 mL)且在80°C下攪拌該混合物1小時。添加水(150 mL)且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取該混合物。合併的有機相係以鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA 自10:1至0:1)純化，以得到呈褐色固體之4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.74 g, 5.26 mmol, 61.9%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 495.4[M+H]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.51 g, 5.07 mmol)及DIEA (1.97 g, 15.2 mmol, 2.65 mL)之DCE (50 mL)溶液添加氯甲酸1-氯乙酯(1.81 g, 12.7 mmol)，且在15 °C下攪拌該混合物3小時。將該反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於MeOH (50 mL)中且在70°C下攪拌該反應混合物1.5小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 23%-48%,30;50%min)來純化，以得到呈粉紅色固體之2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.13 g, 2.51 mmol, 49.5%產率, 90.0%純度)。ES+APCI MS m/z 405.3[M+H]⁺ 。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(730 mg, 1.80 mmol)、(4-溴-2-萘基) 2,2-二甲基丙酸酯(832 mg, 2.71 mmol)及Cs₂ CO₃ (1.76 g, 5.41 mmol)之甲苯(18 mL)溶液添加甲烷磺酸[2-(2-胺基苯基)苯基]鈀(1+);二環己基-[2-(2,4,6-三異丙基苯基)苯基]磷烷酯(153 mg, 180 umol)，使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在70°C下攪拌該反應混合物4小時。在完成時，添加水(20 mL)至該混合物。用EtOAc (4 × 20 mL)萃取所得混合物。合併的有機層係以鹽水(40 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自30:1至0:1)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(740 mg, 1.15 mmol, 63.7%產率, 98.0%純度)。ES+APCI MS m/z 631.5[M+H]⁺ 。

步驟F：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 158 umol)之DCM (2 mL)溶液添加m-CPBA (32.2 mg, 158 umol, 85.0%純度)，且在0°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下用飽和Na₂ S₂ O₃ (4 mL)使該反應混合物淬滅，將其分離，接著以水(10 mL)稀釋且用乙酸乙酯(10 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA 自10:1至0:1)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(90 mg, 125 umol, 79.0%產率, 90.0%純度)。ES+APCI MS m/z 647.5[M+H]⁺ 。

步驟G：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(560 mg, 866 umol)、[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(199 mg, 1.73 mmol)之甲苯(10 mL)溶液添加t-BuONa (125 mg, 1.30 mmol)，且在0°C下攪拌該混合物0.5小時。使該混合物分溶於EtOAc (20 mL)與水(15 mL)之間，且將其分離。接著用EtOAc (3 × 20 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱純化，以得到呈褐色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(340 mg, 481 umol, 55.5%產率, 98.7%純度)。ES+APCI MS m/z 698.4[M+H]⁺ 。

步驟H：[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：在15 °C下向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 201 umol)之DCM (0.2 mL)溶液添加TFA (229 mg, 2.01 mmol, 148 uL)，且在15 °C下攪拌該混合物5小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(170 mg，粗製，2TFA)。

步驟I：[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯：在0°C下向[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(170 mg, 206 umol, 2TFA)及DIEA (213 mg, 1.65 mmol, 287 uL)之DCM (0.3 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(38.9 mg, 309 umol)，且在15°C下攪拌此混合物1小時。以水(0.5 mL)使該反應混合物淬滅，接著真空濃縮。殘餘物(DCM: MeOH=10:1)係藉由矽膠層析法(自PE: EtOAc=2:1至EtOAc: MeOH=0:1)純化，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(170 mg, 182 umol, 88.7%產率, 70.0%純度)。ES+APCI MS m/z 652.6[M+H]⁺ 。

步驟J：2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(170 mg, 261 umol)之THF (1.5 mL)溶液添加NaOH (2 M, 1.5 mL)，且在15 °C下攪拌該反應物6小時。以HCOOH (20 %, 0.1 mL)中和該反應混合物至pH=7。所得混合物係以DCM (3 × 5 mL)萃取，合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。該殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u;移動相：[水(0.225%甲酸)-ACN];B%:12%-39%,10分鐘)來純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(6.88 mg, 11.6 umol, 4.44%產率, 95.6%純度)。ES+APCI MS m/z 568.5[M+H]⁺ 。
實例179
2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇：在0°C下向(3R )-3-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1 g, 4.97 mmol)之THF (40 mL)溶液添加LiAlH₄ (377 mg, 9.94 mmol)，接著將該混合物升溫至70°C且在70°C下攪拌4小時。以飽和Na₂ SO₄ (3 mL)使該反應混合物淬滅且過濾，並用THF (5 × 20 mL)洗滌濾餅。將合併的有機相真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(820 mg，粗製)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 3.66 -3.62 (dd,J =4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.53 -3.49 (dd,J =5.6, 10.0 Hz, 1H), 3.35 -3.18 (m, 1H), 2.77 - 2.68 (m, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.45 (m, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.31 - 2.26 (m, 1H), 2.04 - 1.93 (m, 1H), 1.69 - 1.59 (m, 1H)。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 773 umol)及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(178 mg, 1.55 mmol)之甲苯(10 mL)溶液添加t-BuONa (111 mg, 1.16 mmol)，且在15 °C下攪拌此混合物0.5小時。向該混合物添加乙酸乙酯(20 mL)及水(15 mL)，接著用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。用鹽水(20 mL)洗滌合併的有機層。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1%甲酸) = 42 %)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 245 umol, 31.7%產率, 95.0%純度)。ES+APCI MS m/z 698.6[M+H]⁺ 。

步驟C：[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：將2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 258 umol)及TFA (588 mg, 5.16 mmol, 382 uL)之混合物在20°C下攪拌1.5小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(200 mg，粗製，2TFA)。

步驟D：[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯：在0°C下向[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R)-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(200 mg, 242 umol, 2TFA)及DIEA (470 mg, 3.63 mmol, 633 uL)之DCM (0.6 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(30.5 mg, 242 umol)，且在15°C下攪拌該反應物1小時。該反應混合物係經真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA= 2:1~0:1至DCM: MeOH=50:1~1:1)純化，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(630 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 652.6[M+H]⁺ 。

步驟E：2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在18 °C下向[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(630 mg, 966 umol)之THF (3 mL)溶液添加NaOH (2 M, 3 mL)，且在18 °C下攪拌該混合物2小時。以HCOOH (20 %, 0.5 mL)中和該反應混合物至pH=7。所得混合物係以DCM (3 × 5 mL)萃取，合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 35%-65%,3分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(9.4 mg, 15.8 umol, 1.64%產率, 95.5%純度)。ES+APCI MS m/z 568.5[M+H]⁺ 。
實例180
4-(3-(4-(哌嗪-1-基)-7-(5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基氧基)丙基)嗎啉

步驟A：2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷：在0°C下向4-溴-5-(三氟甲基)-1H-吲唑(650 mg, 2.45 mmol, 1 eq)之DMF (30 mL)溶液添加NaH (117.71 mg, 2.94 mmol, 60%純度, 1.2 eq)。在0°C下攪拌1小時之後，逐滴添加2-(氯甲氧基)乙基三甲基-矽烷(531.56 mg, 3.19 mmol, 564.29 uL, 1.3 eq)之DMF (10 mL)溶液。將該混合物升溫至15°C且攪拌2小時。以飽和氯化銨水溶液(50.0 mL)使該混合物淬滅，用水(100.0 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(3 × 100.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 10:1)純化。得到呈無色油狀物之2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(680 mg, 1.70 mmol, 69.44%產率, 99.0%純度)。ES+APCI MS m/z 395.0[M+H]⁺ 。

步驟B：4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(40 mL)中之2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(444.35 mg, 1.12 mmol, 1.3 eq)、4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 864.71 umol, 1 eq)、RuPhos (80.70 mg, 172.94 umol, 0.2 eq)、Pd₂ (dba)₃ (118.77 mg, 129.71 umol, 0.15 eq) ,及Cs₂ CO₃ (845.21 mg, 2.59 mmol, 3 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，在90°C於氮氣下攪拌該混合物12小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以移除甲苯。用水(100 mL)稀釋該殘餘物，且用300 mL的乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併的有機層係以300 mL的水(100 mL x 3)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, DCM: CH₃ OH = 30:1至20:1)純化。得到呈黃色固體之4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 446.87 umol, 51.68%產率, 86.8%純度)。ES+APCI MS m/z 773.3[M+H]⁺ 。

步驟C：4-[3-[[4-哌嗪-1-基-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉：在25°C下向4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 111.72 umol, 1 eq)之DCM (2 mL)添加TFA (254.77 mg, 2.23 mmol, 165.43 uL, 20 eq)。在25°C下攪拌該反應混合物12小時。將該反應混合物真空濃縮。得到呈褐色油狀物之4-[3-[[4-哌嗪-1-基-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (200 mg，粗製，TFA)。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ES+APCI MS m/z 547.5[M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向4-[3-[[4-哌嗪-1-基-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基]丙基]嗎啉 (200 mg, TFA)及DIEA (600 mg, 4.64 mmol, 808.63 uL)之DCM (2 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(13 mg, 103.08 umol)。在-50°C下攪拌該混合物30分鐘。該混合物係以水淬滅且用乙酸乙酯(50 mL)萃取，有機層係以水(1 × 20 mL)及鹽水(1 × 20 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (FA條件) 管柱：Luna C18 150*25 5u;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 15%-36%,10分鐘]純化。得到呈黃色固體之1-[4-[2-(3-嗎啉丙氧基)-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(18.26 mg, 28.12 mmol, 兩個步驟23%, 99.6%純度, FA)。ES+APCI MS m/z 601.4[M+H]⁺ 。
實例181
1-(4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)- 7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向3-((1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇(107 mg, 681 umol)之THF (2 mL)溶液添加t-BuONa (98.1 mg, 1.02 mmol)，隨後添加4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 340 umol)。在0°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物傾注入水(10 mL)中且用DCM (2x10 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。所得到的產物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.1%TFA)- ACN]; B%: 25%-55%, 12分鐘)純化，以得到呈黃色固體之4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(110 mg, 143 umol, 42.0%產率)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.08 - 8.01 (m, 1H), 7.45 - 7.43 (m, 4H), 7.37 - 7.31 (m, 3H), 5.76 (s, 2H), 5.24 (s, 2H), 4.76 - 4.63 (m, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 3H), 4.42 (s, 2H), 4.36 - 4.24 (m, 1H), 3.96 -3.83 (m, 2H), 3.79 -3.65 (m, 8H), 3.64 -3.53 (m, 6H), 3.12 - 2.92 (m, 1H), 2.90 – 2.77 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.44 - 2.41 (m, 1H), 2.36 - 2.12 (m, 3H), 0.98 - 0.93 (m, 2H), 0.01 - -0.03 (m, 9H)。

步驟B：4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 環境下向4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(90 mg, 117 umol)及BOC₂ O (51.1 mg, 234.1 umol, 53.8 uL)之MeOH (2 mL)溶液添加Pd/C (10 %, 50 mg)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物12小時。將該混合物過濾且濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (SiO₂ , DCM/MeOH = 10 : 1)純化，以得到4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(30 mg, 40.8 umol)。ES+APCI MS m/z 735.6[M+H]⁺ 。

步驟C：(1S ,4S )-5-(3-((7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷：向4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(30 mg, 40.8 umol)之DCM (0.5 mL)溶液逐滴添加TFA (770 mg, 6.75 mmol)。在15°C下攪拌該混合物2小時。將該混合物真空濃縮，以得到(1S ,4S )-5-(3-((7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷(30 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 505.5[M+H]⁺ 。

步驟D：1-(4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：在-50°C下向(1S ,4S )-5-(3-((7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)丙基)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷(20 mg, 39.6 umol, 1eq )及DIEA (30.7 mg, 238 umol, 41.4 uL, 6eq )之DCM (2 mL)添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(4.00 mg, 31.7 umol, 0.8eq )。在-40°C至-20°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮。所得的產物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 35%-65%,12分鐘)純化。得到呈白色固體的產物1-(4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(5-甲基-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(6.48 mg, 11.2 umol, 兩個步驟28.3%產率, 96.8%純度)。ES+APCI MS m/z 559.5[M+H]⁺ 。
實例182
2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向於甲苯(5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 403 umol)、(4-溴-2-萘基) 2,2-二甲基丙酸酯(248 mg, 806 umol)及Cs₂ CO₃ (394 mg, 1.21 mmol)混合物添加XPHOS Palladacycle Gen 3 (34.1 mg, 40.29 umol)，在70°C於N₂ 下攪拌該反應混合物4小時。在完成時，該反應混合物係藉由矽膠層析法(PE: EA=3:1至0:1)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(95 mg, 118 umol)。ES+APCI MS m/z 698.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯。在15 °C下向2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(40 mg, 57.3 umol)之DCM (0.1 mL)溶液添加TFA (154 mg, 1.35 mmol)。在15 °C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，在真空下移除溶劑，以得到[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(47 mg, 56.9 umol)。

步驟C：[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯。在0°C下向[4-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(47 mg, 56.9 umol)及DIEA (58.9 mg, 455 umol)之DCM (1 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(10.8 mg, 85.4 umol)。在完成時，藉由添加一滴水使反應混合物淬滅。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=3:1至EtOAc: MeOH =3:1)純化，以得到[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(130 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 652.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向[4-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(250 mg, 384 umol)之THF (1.5 mL)溶液添加NaOH (2 M, 1.5 mL)水溶液。在15 °C下攪拌該反應混合物9小時。在完成時，藉由添加兩滴甲酸(20 %於水中)使該反應混合物酸化而達到pH=7，且用DCM (5 × 10 mL)萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC(管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-47%,10分鐘)來純化，以得到2-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(13.1 mg, 21.2 umol)。ES+APCI MS m/z 568.5 [M+H]⁺ 。
實例183
2-[4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 549 umol)及[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(126 mg, 1.10 mmol, 130 uL)之甲苯(6.00 mL)溶液添加t-BuONa (105 mg, 1.10 mmol)。在20°C下攪拌該混合物0.25小時。在完成時，過濾混合物且濃縮濾液。殘餘物係藉由矽膠層析法(EA/MeOH 50/1至10/1)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 427 umol)。ES+APCI MS m/z 598.6 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(270 mg, 452 umol)之DCM (330 uL)添加TFA (515 mg, 4.52 mmol)。在20°C下攪拌該混合物0.5小時且真空濃縮。接著添加TFA (334 uL)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg，粗製)。ES+APCI MS m/z 498.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(276 mg, 451 umol)及DIEA (1.46 g, 11.3 mmol)之DCM (4.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(51.2 mg, 406 umol)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用水(0.5 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12分鐘)純化，以得到2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(37.1 mg, 66.3 umol)。ES+APCI MS m/z 552.4 [M+H]⁺ 。
實例184
1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-羥基丙氧基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

依據實例 136 ，以3-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丙-1-醇取代步驟B中的2-(3-甲氧基吡咯啶-1-基)乙醇，製備1-[4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-(3-羥基丙氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。ES+APCI MS m/z 490.3 [M+H]⁺ 。
實例185
1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇：向一小管添加(1R,4R)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷HCl鹽 (0.250 g, 2.522 mmol)、CH₃ CN (5.04 mL)及3-溴-1-丙醇(0.274 mL, 3.026 mmol)。接著添加K₂ CO₃ (1.05 g, 7.57 mmol)，且將該混合物升溫至50°C且在此溫度下攪拌16小時。接著將混合物冷卻至環境溫度，用CH₂ Cl₂ 稀釋且過濾，且用CH₂ Cl₂ 洗滌固體。接著將濾液濃縮，將粗製油狀物係經由管柱層析法(具有0.2% NH₄ OH之5% MeOH/DCM)純化，以得到呈無色油狀物之產物。

步驟B：1-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：根據實例 127 的製備方法來合成，使用以下程序代替步驟D中概述的程序。向一小管添加3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇(0.171 g, 1.09 mmol)及4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.125 g, 0.218 mmol)，隨後添加二噁烷(0.435 mL)。接著添加Cs₂ CO₃ (0.213 g, 0.653 mmol)且將該混合物加熱至100°C持續15分鐘。該反應物係以CH₂ Cl₂ 稀釋，過濾，且用CH₂ Cl₂ 洗滌殘餘的固體。該濾液係接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(具有0.2% NH₄ OH之4% MeOH/DCM)純化，以得到呈黃色泡沫之產物。ES+APCI MS m/z 571.2 [M+H]⁺ 。
實例186
4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-(嗎啉基甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-(嗎啉基甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：根據實例127的製備方法來合成，使用以下程序代替步驟D中概述的程序。向4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.150 g, 0.261mmol)及3-(4-嗎啉基甲基)-苯硼酸酯鹽酸鹽(0.266 g, 0.784 mmol)之二噁烷(2.61 mL)溶液添加Na₂ CO₃ (0.523 mL, 1.0452 mmol, 2.0M 水溶液)。藉由用氬氣鼓泡5分鐘而使該反應物脫氣。接著添加四(三苯基膦)鈀(0) (0.030 g, 0.026 mmol)，且將該混合物加熱至95 °C且在此溫度下攪拌7小時。將該反應物冷卻至環境溫度，接著用CH₂ Cl₂ 稀釋且過濾。用CH₂ Cl₂ 洗滌固體。接著將濾液經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。粗製殘餘物係藉由管柱層析法(30-50% EtOAc/DCM)純化，以得到呈黃色泡沫之產物)。ES+APCI MS m/z 591.3 [M+H]⁺ 。
實例187
(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以N-甲基-D-脯胺醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 529.3 [M+H]⁺ 。
實例188
(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 ，以(3S)-(1-甲基-吡咯啶-3-基)-甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 529.2 [M+H]⁺ 。
實例189
1-(4-(2-((1-苯甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-(4-(2-((1-苯甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。依據實例 127 ，以(1-苯甲基吡咯啶-3-基)甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 605.3 [M+H]⁺ 。
實例190
1-(4-(2-((1-環丙基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-(4-(2-((1-環丙基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。依據實例 127 ，以(1-環丙基-3-吡咯啶基)methano取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。
實例191
1-((2S,6R)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-((3S,5R)-4-(第三丁氧基羰基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(500 mg, 1.48 mmol)、順式-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(349 mg, 1.63 mmol)及DIEA (0.26 mL)之N,N- 二甲基乙醯胺(1 mL)懸浮液在室溫下攪拌隔夜。將該反應混合物分配於EtOAc (15 mL)與1M NaHCO₃ (5 mL)之間，且分離各層。有機層係以2M Na₂ CO₃ 及鹽水(各2 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係於矽膠Redisep 24g管柱上使用於己烷中之20%至50% EtOAc做為溶離液層析而得到無色固體(0.440 g, 58%)。ES+APCI MS m/z 516.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-((3S,5R)-4-(第三丁氧基羰基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將在4-mL小管中之4-((3S,5R)-4-(第三丁氧基羰基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(400 mg, 0.775 mmol)、3-嗎啉丙-1-醇(400 mg, 2.33 mmol, 5 eq.)、碳酸銫(1.26 g, 3.88 mmol, 5 eq.)及二噁烷(3 mL)混合物用氮氣沖淨。將該小管蓋上且將該混合物在110^o C下攪拌20小時，接著在110^o C下攪拌隔夜。將該反應物冷卻，用EtOAc (10 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且真空蒸發。產物係藉由層析法在矽膠(Redisep 40g)上使用2%至10% MeOH/DCM +0.2% NH₄ OH做為溶離液而純化，以得到淺黃色非晶固體(272 mg, 56%)。

步驟C：(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將4-((3S,5R)-4-(第三丁氧基羰基)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(272 mg, 0.095 mmol)、鈀碳(50 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (5 mL)及THF (5 mL)之混合物用氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌3小時。該反應混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土。合併的有機物係經真空蒸發且在高真空下乾燥超過2天，以得到灰白色泡沫(205 mg, 96%)。ES+APCI MS m/z 491.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：(2S,6R)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在室溫於氮氣下向三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (19 mg, 0.020 mmol)之無水脫氣甲苯(0.5 mL)攪拌懸浮液添加(+/-)-2,2`-雙(二苯膦基)-1,1`-聯萘(24 mg, 0.038 mmol)。接著將該混合物加熱至100°C持續15分鐘。將所得的深色混合物冷卻至室溫，添加固體的第三丁醇鈉(39 mg, 0.41 mmol)，隨後添加三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯(82 mg, 0.25 mmol)及(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 0.20 mmol)之脫氣無水甲苯(0.5 mL)溶液。將該燒瓶密閉且在攪拌下加熱至100°C持續30分鐘。將反應混合物冷卻且分配於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間。有機層係經分離，且以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 40g)上使用4% MeOH + 於DCM中之0.1% NH₄ OH做為溶離液而純化，以得到無色固體(87 mg, 63%)。ES+APCI MS m/z 684.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-((2S,6R)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將 (2S,6R)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(87 mg, 0.129 mmol)溶解於1M TFA/DCM中。反應混合物轉變為紅棕色，接著變成深紅色。LCMS指示Boc及MOM有非選擇性的保護去除。在室溫下攪拌30分鐘之後，添加額外0.2 mL的TFA且將該反應混合物再保持在室溫下30分鐘。所得的雙向混合物係經真空蒸發，分配於水(5 mL)與DCM (10 mL) + NEt₃ (0.5 mL)之間，且分離出有機層。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係藉由層析法於矽膠(Redisep 40g)上使用於DCM中之6% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液而純化，以得到另一殘餘物並以逆相層析(C18, 5-95% MeCN-H₂ O +0.1%TFA)再純化，以得到假定為具有TFA (1.35 mg, 1.3%)的雙鹽產物。ES+APCI MS m/z 587.3 [M+H]⁺ 。
實例192
(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以3-哌啶甲醇,1-甲基-,(3R)-取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例193
1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(4-甲基-2-嗎啉基)甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 545.3 [M+H]⁺ 。
實例194
1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以4-甲基-3-(羥甲基)嗎啉取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 545.2 [M+H]⁺ 。
實例195
(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(R)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(R)-(1-甲基哌啶-2-基)甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例196
(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(S)-(1-甲基哌啶-2-基)甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 543.2 [M+H]⁺ 。
實例197
(S)-1-(4-(2-((1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(2-((1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以[(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例198
(S,E)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮

S,E)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以反式-巴豆醯氯取代步驟F中的丙烯醯氯。ES+APCI MS m/z 543.2[M+H]⁺ 。
實例199
(S,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮

(S,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例127製備，用以下程序取代步驟F。將7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-4a,5,6,7,8,8a-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(150 mg, 0.288 mmol)溶解於DCM (5 mL)中且用(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(74.4 mg, 0.576 mmol)及許尼希氏鹼(252 µl, 1.44 mmol)處理。向此溶液添加未攙水之呈粉末的EDC (55.2 mg, 0.288 mmol)及HOBT (38.9 mg, 0.288 mmol)。在室溫下攪拌該反應混合物1小時且加熱至35°C再3小時。將該反應混合物真空濃縮，且在CombiFlash (0%-15% DCM/MeOH w/ 1% NH4OH修飾劑)上純化。全部含有純淨所要產物之分餾物係經合併且真空濃縮，以得到(E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4a,5,6,7,8,8a-六氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮 (105 mg, 0.166 mmol, 57.7%產率)。該產物相應地按照實例127的其餘步驟，以得到(S,E)-4-(二甲基胺基)-1-(4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丁-2-烯-1-酮 (14.8 mg, 0.025 mmol, 15.2%產率)。ES+APCI MS m/z 586.3[M+H]⁺ 。
實例200
(S)-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以三氟甲烷磺酸萘-1-基酯取代步驟C中的三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯且不進行步驟F。ES+APCI MS m/z 513.3 [M+H]⁺ 。
實例201
1-((R)-2-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-((R)-2-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯，並以三氟甲烷磺酸萘-1-基酯取代步驟C中的三氟甲烷磺酸3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基酯且不進行步驟F。ES+APCI MS m/z 527.3 [M+H]⁺ 。
實例202
1-((S)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-((S)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例203
1-((S)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

1-((S)-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮。此化合物係依據實例 127 製備，以(S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟A中的哌嗪-1-甲酸苯甲酯，並以N-甲基-D-脯胺醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇。ES+APCI MS m/z 543.3 [M+H]⁺ 。
實例204
1-(4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.13 mmol)、1-環丙基哌啶-4-胺(55 mg, 0.39 mmol)及二噁烷(0.5 mL)之混合物加熱至120^o C持續36小時。將該反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (10 mL)與水(3 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發，殘餘物係於矽膠(Redisep 24g)上使用於DCM中的6%至10% MeOH+0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體。(43 mg, 49%)。ES+APCI MS m/z 678.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：1-(4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)-萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(43 mg, 0.063 mmol)、鈀碳(20 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (1.5 mL)及THF (1.5 mL)之混合物以氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌3小時。該混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。殘餘物係溶解於DCM (5 mL)中且在攪拌下於冰鹽浴上冷卻。接著立即添加三乙胺(0.03 mL)，隨後添加丙烯醯氯 (10 μL)。在1分鐘後於-5^o C下以NH₄ OH (0.05 mL)使該反應物淬滅且真空蒸發。殘餘物係與DCM (5 mL)一起攪拌5分鐘，過濾且在矽膠(Redisep 12g)上使用於DCM中之6%至20% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(22 mg, 48%)。ES+APCI MS m/z 598.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-(4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向於MeOH與THF 1:1 (3 mL)混合物中之1-(4-(2-((1-環丙基哌啶-4-基)胺基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(22 mg, 0.037 mmol)攪拌溶液立即全部添加入6M HCl (0.3 mL, 34 eq.)水溶液，且在攪拌下於50^o C加熱該溶液1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與0.5M Na₂ CO₃ (10 mL)之間，且分離出有機層。合併的有機物係以鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係於矽膠(Redisep 12 g)上使用於DCM中之8%至10% MeOH +0.2 % NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(15 mg, 74%)。ES+APCI MS m/z 554.3 [M+H]⁺ 。
實例205
1-(4-(7-(6-羥基喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-(6-(甲氧基甲氧基)喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在室溫於氮氣下向於脫氣無水甲苯(0.5 mL)中之三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (17 mg, 0.019 mmol)攪拌懸浮液添加(+/-)-2,2`-雙(二苯膦基)-1,1`-聯萘(24 mg, 0.038 mmol)，且加熱該混合物至100°C持續15分鐘。將該深色混合物冷卻至室溫，接著添加第三丁醇鈉(36 mg, 0.38 mmol)固體，隨後添加8-溴-6-(甲氧基甲氧基)喹啉(61 mg, 0.23 mmol)及4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(94 mg, 0.19 mmol)之脫氣無水甲苯(0.5 mL)溶液。將該燒瓶密閉且加熱至100°C持續1小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，且分離出有機層。有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係於矽膠(Redisep 24g)上使用於二氯甲烷中之4%至10% MeOH (+0.2% NH₄ OH)做為溶離液層析而得到黃色固體(28 mg, 22%)。ES+APCI MS m/z 684.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：1-(4-(7-(6-(甲氧基甲氧基)喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將4-(7-(6-(甲氧基甲氧基)喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(28 mg, 0.095 mmol)、Pd/C (15 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (2 mL)及THF (2 mL)之混合物用氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌2小時。該反應混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土，且使合併的有機物真空蒸發。將所得固體溶解於DCM (5 mL)中且在攪拌下於冰鹽浴中冷卻。接著立即添加入三乙胺(0.04 mL, 3 eq.)，隨後添加丙烯醯氯 (16 μL, 2 eq.)。在1分鐘之後於-5^o C下以NH₄ OH (0.05 mL)使該反應物淬滅且真空蒸發。將該混合物過濾通過棉塞，在矽膠(Redisep 12g)上使用於DCM中之6%至10% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到另一殘餘物並以逆相層析(C18, 5至95% MeCN, +0.1% HCO₂ H)再純化，以得到假定為雙甲酸鹽之黃色固體產物(12 mg, 42%)。ES+APCI MS m/z 604.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-(4-(7-(6-羥基喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向於MeOH及THF 1:1 (1 mL)混合物中之1-(4-(7-(6-(甲氧基甲氧基)喹啉-8-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(12 mg, 0.017 mmol)攪拌溶液立即添加入6M HCl (0.1 mL, 35 eq.)水溶液，且在攪拌下於50^o C加熱該溶液1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與pH 8之0.5M的磷酸鈉緩衝液(5 mL)之間，且分離各層。合併的有機物係以鹽水(1 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 12 g)上使用於DCM中之7%至10% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液而純化，以得到一殘餘物且藉由逆相層析法再純化，而得到呈無色固體之tris TFA產物(4.87 mg, 31%)。 ES+APCI MS m/z 560.3 [M+H]⁺ 。
實例206
1-(4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙-1-醇：將於4-mL小管中之3-氮雜二環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(200 mg, 1.67 mmol)、3-溴丙-1-醇(166 μL, 1.84 mmol, 1.1 eq.)、K₂ CO₃ (0.69 g, 5.02 mmol, 3 eq.)、NaI (251 mg, 1.67 mmol, 1 eq.)乙腈(2 mL)混合物用N₂ 沖洗。將該小管蓋上且在室溫下攪拌2天。用水(2 mL)稀釋該混合物且用乙醚(15 mL)萃取。該乙醚溶液係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，傾析至梨形燒瓶內且添加三氟乙酸(128 μL, 1 eq)，並將該混合物濃縮至~5 mL。傾析乙醚上層且丟棄，將殘餘油狀液體真空乾燥隔夜。用水(0.5 mL)稀釋該油狀液體，接著在攪拌下添加乙醚(10 mL)，隨後添加50% NaOH (0.2 mL, 2.5 mmol, 2 eq.)。分離各層，使有機溶液經KOH乾燥且小心在氮氣下濃縮，以產生呈無色油狀物之粗製3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙-1-醇。其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟B：4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)-萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於1.7-mL小管中之4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.13 mmol)、粗製3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙-1-醇(55 mg, 0.39 mmol, 3 eq.)、Cs₂ CO₃ (213 mg, 0.65 mmol, 5 eq.)及二噁烷(0.5 mL)混合物用氮氣沖淨。將該小管蓋上且在120^o C下攪拌整個週末。將反應混合物冷卻，分配於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，真空蒸發，且於矽膠(Redisep 24g)上使用4%至10% MeOH + 1% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物。ES+APCI MS m/z 679.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-(4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)-萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(49 mg, 0.072 mmol)、鈀碳(12 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (1.5 mL)及THF (1.5 mL)之混合物用氫氣沖淨，且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌3小時。該反應混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土。合併的有機物係經真空蒸發。所得無色固體係溶解於DCM (5 mL)中，在攪拌下於冰鹽浴中冷卻，且立即添加入三乙胺(0.04 mL, 3 eq.)，隨後添加丙烯醯氯 (16 μL, 2 eq.)。在一分鐘之後於-5^o C下以NH₄ OH (0.05 mL)使該反應物淬滅且真空蒸發。將粗產物溶解於DCM (5 mL)中，過濾通過棉塞，且在矽膠(Redisep 12g)上使用於DCM中之6%至10% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(30 mg, 69%)。ES+APCI MS m/z 599.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-(4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向於MeOH及THF 1:1 (3 mL)混合物中之1-(4-(2-(3-(3-氮雜二環[3.1.0]己-3-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(30 mg, 0.050 mmol)攪拌溶液添加6M HCl (0.3 mL, 36 eq.)水溶液，且在攪拌下於50^o C加熱該溶液1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (20 mL)與0.5M Na₂ CO₃ (5 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水(1 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係於矽膠(Redisep 12 g)上使用於DCM中之6% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(20.62 mg, 74%)。ES+APCI MS m/z 555.4 [M+H]⁺ 。
實例207
(R)-1-(4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：(R)-2-(3-氟哌啶-1-基)乙-1-醇：將於4-mL小管中之R-3-氟哌啶鹽酸鹽(209 mg, 1.50 mmol)、2-溴乙-1-醇(117 μL, 1.65 mmol, 1.1 eq.)、K₂ CO₃ (0.62 g, 4.5 mmol, 3 eq.)、碘化鈉 (225 mg, 1.5 mmol, 1 eq.)乙腈(2 mL)混合物用N₂ 沖洗。將該小管蓋上且在室溫下攪拌2天。用水(2 mL)稀釋所得懸浮液且用乙醚(15 mL)萃取。該乙醚溶液係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，傾析至梨形燒瓶內且添加三氟乙酸(115 μL, 1 eq)，並將該混合物濃縮至~5 mL。傾析乙醚上層且丟棄，將殘餘油狀液體真空乾燥隔夜。用水(0.5 mL)稀釋該油狀液體，接著在攪拌下添加乙醚(10 mL)，隨後添加50% NaOH (0.2 mL, 2.5 mmol, 2 eq.)。分離各層，使有機溶液經KOH乾燥，過濾且小心在氮氣下濃縮，以產生呈無色油狀物之粗製胺醇(120 mg, 54%)。

步驟B：(R)-4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於1.7-mL小管中之4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.13 mmol)、粗製(R)-2-(3-氟哌啶-1-基)乙-1-醇(58 mg, 0.39 mmol)、Cs2CO3 (213 mg, 0.65 mmol)及二噁烷(0.5 mL)混合物用氮氣沖淨。將該小管蓋上且在110^o C下攪拌48小時。將反應混合物冷卻，以EtOAc (1 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOAc (2 x 2 mL)洗滌矽藻土，並將合併的有機物真空蒸發。殘餘物係於矽膠(Redisep 24g)上使用於DCM中之6 %MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(30 mg, 34%)。ES+APCI MS m/z 685.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：(R)-1-(4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將(R)-4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)-萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30 mg, 0.044 mmol)、鈀碳(10 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (1.5 mL)及THF (1.5 mL)之混合物以氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌2小時。該混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。殘餘物係溶解於DCM (3 mL)中且在攪拌下於冰鹽浴中冷卻。接著立即添加三乙胺(0.02 mL, 3 eq.)，隨後添加丙烯醯氯 (7 μL, 2 eq.)。在1分鐘後於-10^o C下以NH₄ OH (0.03 mL)使該反應物淬滅且真空蒸發。殘餘物係溶解於DCM (5 mL)中，過濾且在矽膠(Redisep 12g)上使用於DCM中之6%至10% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(22 mg, 83%)。ES+APCI MS m/z 605.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：(R)-1-(4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向於MeOH及THF 1:1 (3 mL)混合物中之(R)-1-(4-(2-(2-(3-氟哌啶-1-基)乙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(22 mg, 0.036 mmol)攪拌溶液添加6M HCl (0.3 mL)水溶液，且在攪拌下於50^o C加熱該溶液1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (20 mL)與0.5M Na₂ CO₃ (5 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水(1 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係於矽膠(Redisep 12 g)上使用於DCM中之6% MeOH + 0.2% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到無色固體(16.86 mg, 83%)。ES+APCI MS m/z 561.2 [M+H]⁺ 。
實例208
1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙-1-醇：將於7-mL小管中之(3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶鹽酸鹽(200 mg, 1.39 mmol)、3-溴丙-1-醇(126 μL, 1.39 mmol, 1.0 eq.)、碳酸鉀 (577 mg, 4.18 mmol, 3 eq.)、碘化鈉 (209 mg, 1.39 mmol, 1 eq.)及乙腈(2 mL)混合物用N₂ 沖洗。將該小管蓋上且在室溫下攪拌2天。用水(2 mL)稀釋該混合物且用乙醚(15 mL)萃取。該乙醚溶液係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，傾析至梨形燒瓶內。接著添加三氟乙酸(107 μL, 1 eq)，並使該混合物蒸發且真空乾燥。用水(0.5 mL)稀釋殘餘物，且用乙醚(5 mL)洗滌。直接將二乙醚(15 mL)添加至水層，隨後添加10M NaOH (0.2 mL, 5 mmol)且攪拌該混合物1小時。有機層係經分離，經固體KOH乾燥，過濾通過棉塞且在N₂ 下蒸發，以得到無色油狀物(80 mg, 35%)，其以粗製物使用在下個反應中。

步驟B：4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於1.7-mL小管中之4-(2-氯-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.13 mmol)、粗製2-(4,4-二氟哌啶-1-基)乙-1-醇(65 mg, 0.39 mmol)、碳酸銫(213 mg, 0.65 mmol, 5 eq.)及二噁烷(0.5 mL)混合物用氮氣沖淨。將該小管蓋上且在110^o C下攪拌整個週末。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 24g)上使用於DCM中之3% MeOH做為溶離液而純化，以得到無色固體(46 mg, 50%)。ES+APCI MS m/z 703.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(46 mg, 0.065 mmol)、鈀碳(15 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )、EtOH (1 mL)及THF (1 mL)之混合物以氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌3小時。該混合物係以EtOH (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用EtOH (2 x 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。殘餘物係溶解於DCM (3 mL)中且在攪拌下於冰鹽浴中冷卻。接著添加三乙胺(0.02 mL)，隨後添加丙烯醯氯 (7 μL, 2 eq.)。在1分鐘後於-10^o C下以NH₄ OH (0.03 mL)使該反應物淬滅且真空蒸發。殘餘物係溶解於DCM (3 mL)中，過濾，且藉由層析法在矽膠(Redisep 12g)上使用於DCM中之5% MeOH做為溶離液來純化，以得到無色固體(29 mg, 71%)。ES+APCI MS m/z 623.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：向於MeOH及THF 1:1 (2 mL)混合物中之1-(4-(2-(3-((3R,4S)-3,4-二氟吡咯啶-1-基)丙氧基)-7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(29 mg, 0.047 mmol)攪拌溶液添加6M HCl (0.2 mL)水溶液，且在攪拌下於50^o C加熱該溶液1.5小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與0.5M Na₂ CO₃ (10 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係藉由層析法於矽膠(Redisep 12 g)上使用於DCM中之5% MeOH做為溶離液來純化，以得到無色固體(12.87 mg, 48%)。ES+APCI MS m/z 579.2 [M+H]⁺ 。
實例209
1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-溴-5-甲基-1-(三異丙基矽烷基)-1H-吲哚：於氮氣下將4-溴-5-甲基-1H-吲哚 (100 mg, 0.476 mmol)之無水THF (2 mL)溶液在冰鹽浴中攪拌冷卻。添加氫化鈉(23 mg 60%於油中, 0.57 mg, 1.2 eq.)且在-5^o C下攪拌該混合物30分鐘接著在室溫下攪拌1小時（氣體停止逸出）。接著添加三異丙基氯矽烷(0.10 mL, 0.48 mmol, 1 eq.)且在室溫下攪拌該反應混合物2小時。使反應物分配於EtOAc (15 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。有機層係以水(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發。殘餘物係於矽膠上使用己烷做為溶離液純化，以得到產物(107 mg, 63%)。

步驟B：4-(7-(5-甲基-1-(三異丙基矽烷基)-1H-吲哚-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在氮氣下將於無水脫氣甲苯(0.5 mL)中之三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (17 mg, 0.019 mmol)及(+/-)-2,2`-雙(二苯膦基)-1,1`-聯萘(24 mg, 0.038 mmol)攪拌混合物加熱至100°C持續15分鐘。將該混合物冷卻至室溫，接著添加第三丁醇鈉(37 mg, 0.38 mmol)固體，隨後添加4-溴-5-甲基-1-(三異丙基矽烷基)-1H-吲哚 (90 mg, 0.25 mmol)及4-(2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(94 mg, 0.19 mmol)之無水脫氣甲苯(0.5 mL)溶液。將該反應燒瓶密閉且加熱至100°C隔夜。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。有機層係以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 24g)上使用於二氯甲烷中之3%至5% MeOH做為溶離液來純化，以得到淺黃色固體(28 mg, 19%)。ES+APCI MS m/z 782.3 [M]⁺ 。

步驟C：1-(4-(7-(5-甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將於EtOH (1 mL)及THF (1 mL)中之4-(7-(5-甲基-1-(三異丙基矽烷基)-1H-吲哚-4-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(46 mg, 0.065 mmol)、鈀碳(35 mg,Degussa 型， 10 wt%, 50% H2O )混合物以氫氣沖淨且在H₂ 環境(橡膠氣球)下攪拌隔夜。該反應混合物係以二噁烷(3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且用二噁烷(2 x 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發，且在高真空下乾燥。殘餘物係於N₂ 下溶解於THF (1 mL)中，接著在攪拌下添加1M 正四丁基氟化銨之THF (0.07 mL, 2 eq.)溶液，且在0°C下攪拌該溶液15分鐘。使反應混合物分配於乙醚(15 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。有機層係以水(3 mL)、鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且在氮氣下蒸發。將粗產物溶解於DCM (3 mL)中且在攪拌下於冰-鹽-乾冰浴(-20^o C)中冷卻。接著添加三乙胺(10 μL, 2 eq.)，隨後添加丙烯醯氯 (2 μL, 0.75 eq.)。在10分鐘之後於-20^o C下以NH₄ OH (0.03 mL)使該反應物淬滅，且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠管柱上使用5 % MeOH/DCM + 0.1% NH₄ OH做為溶離液來純化，以得到無色固體(3.69 mg, 19%)。ES+APCI MS m/z 546.3 [M+H]⁺ 。
實例210
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(8.00 g, 26.3 mmol)、許尼希氏鹼(22.9 ml, 132 mmol)及2-(哌嗪-2-基)乙腈二鹽酸鹽(5.21 g, 26.3 mmol)置於DMA (75 mL)中且在室溫下攪拌20分鐘。將水添加至該反應物，且用EtOAc (3x100 mL)萃取該混合物。將萃取物合併，且用水(3x 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。ES+APCI MS m/z 393.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(10.5 g, 26.7 mmol)及TEA (5.6 ml, 40.1 mmol)置於THF (100 mL)中且冷卻至0°C。添加氯甲酸苯甲酯(5.7 ml, 40.1 mmol)且攪拌該反應物30分鐘。將水添加至該反應物，且用DCM (3x 50 mL)萃取該混合物，並將萃取物合併且濃縮。殘餘物係藉由矽膠(0-60% EtOAc於己烷中做為溶離液)純化，以得到4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(12.9 g, 24.5 mmol, 92%產率)。ES+APCI MS m/z 527.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：在一密封管中將4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.50 g, 2.85 mmol)溶解於二噁烷(1.42 ml, 2.85 mmol)中且用研磨碳酸銫(1.85 g, 5.69 mmol)及(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇(1.64 g, 14.2 mmol)處理。將該密封管蓋上且加熱至90°C持續24小時。將反應物冷卻至室溫且添加水。用DCM (3x 25 mL)萃取該混合物，並將合併的有機物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中， w/0.2% NH₄ OH做為溶離液)純化，以得到4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(831 mg, 1.37 mmol, 48%產率)。ES+APCI MS m/z 606.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(831 mg, 1.37 mmol)置於DCM (15 mL)中且添加TFA (2114 µL, 27.4 mmol)，並在室溫下攪拌1小時。將該反應物濃縮。添加飽和碳酸氫鹽且用DCM (3x25 mL)萃取該混合物。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(665 mg, 1.32 mmol, 96%產率)且按原樣使用。ES+APCI MS m/z 506.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(103 mg, 0.316 mmol)、2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(80 mg, 0.158 mmol)、Rhuphos Pd G3 (13.2 mg, 0.016 mmol)、1-溴-2-(三氟甲基)苯(53.4 mg, 0.237 mmol)及1,4-二噁烷(1582 µL, 0.158 mmol)，且用Ar使該小管脫氣，密封且加熱至70°C持續24小時。將水及NH₄ Cl添加至該反應物且用DCM萃取該混合物。將有機層真空濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中，w/0.2% NH₄ OH做為溶離液)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(20.5 mg, 0.032 mmol, 20%產率)。ES+APCI MS m/z 650.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(20.5 mg, 0.032 mmol)之EtOH (316 µL, 0.0316 mmol)及THF (316 µL, 0.032 mmol)溶液添加鈀(16.8 mg, 0.008 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空且隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境並攪拌2小時。接著以MeOH稀釋該混合物且過濾通過GF/F濾紙。接著濃縮該濾液，以得到所要產物且按原樣使用。ES+APCI MS m/z 516.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(16.3 mg, 0.032 mmol)及三乙胺(13.2 µL, 0.095 mmol)置於CH₂ Cl₂ (316 µL, 0.032 mmol)中且冷卻至0°C。添加丙烯醯氯 (632 µL, 0.063 mmol) (於DCM中之新鮮製備的0.1M溶液)且在0°C下攪拌該反應物1小時。將該混合物濃縮，且所得殘餘物係藉由逆相層析法(0-50% ACN:水 w/ 0.1%TFA)純化，以得到所要產物(18.9 mg, 0.027 mmol, 87%產率)。ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例211
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲氧基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例210步驟E-G，使用1-溴-2-(三氟甲氧基)苯代替步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來合成。ES+APCI MS m/z 586.3 [M+H]+。
實例212
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例210步驟E-G，使用3-溴-4-(三氟甲基)吡啶代替步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來合成。ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]+。
實例213
1-(4-(7-(5-羥基-2,3-二甲基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-溴-4,5-二甲基苯酚：於一密封管內將DPPE (0.431 g, 1.08 mmol)、4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷(1.73 g, 13.5 mmol)、(1,5-環辛二烯)-eta5-茚基)銥(I) (0.449 g, 1.08 mmol)及1-溴-2,3-二甲苯(1.00 g, 5.40 mmol)置於環己烷(6 mL)中且加熱至100°C持續50分鐘。將反應物濃縮並將其加入丙酮(5 mL)中，且添加Oxzone (3.32 g, 5.40 mmol)攪拌10小時。以飽和NaHSO₃ 使該反應物淬滅，且用DCM (3x20 ml)萃取。將萃取物用鹽水及水洗滌，且濃縮。使殘餘物通過矽膠插塞用DCM溶離，以得到3-溴-4,5-二甲基苯酚(238 mg, 1.18 mmol, 22%產率)。

步驟B：1-溴-5-(甲氧基甲氧基)-2,3-二甲苯：根據中間物3的製備，以3-溴-4,5-二甲基苯酚取代2-溴-3-氟苯酚來製備。

步驟C：1-(4-(7-(5-羥基-2,3-二甲基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮2,2,2-三氟乙酸酯：根據實例1步驟C-F，於步驟C中以中間物25取代4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯並以1-溴-5-(甲氧基甲氧基)-2,3-二甲苯取代1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘來製備。ES+APCI MS m/z 537.3 [M+H]⁺ 。
實例214
1-(4-(7-(5-羥基-2-((三氟甲基)硫代)苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：3-溴-4-((三氟甲基)硫代)苯酚：於一密封管內將3-溴苯酚(575 mg, 3.32 mmol)及N,4-二甲基-N-(三氟甲基)苯肼基乙(1010 mg, 3.99 mmol)置於無水DCE (6 mL)中。緩慢添加三氟甲磺酸(295 µL, 3.32 mmol)且接著將反應物加熱至80°C持續18小時。將反應物冷卻，在真空下移除溶劑，所得殘餘物係藉由矽膠(0-20% EtOAc於己烷中s)純化，以得到3-溴-4-((三氟甲基)硫代)苯酚(650 mg, 2.38 mmol, 72%產率)。

步驟B：(2-溴-4-(甲氧基甲氧基)苯基)(三氟甲基)硫烷：根據中間物3的製備，以3-溴-4-((三氟甲基)硫代)苯酚取代2-溴-3-氟苯酚來製備。

步驟C：1-(4-(7-(5-羥基-2-((三氟甲基)硫代)苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：根據實例1步驟C-F，於步驟C中以中間物25取代4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯，並以(2-溴-4-(甲氧基甲氧基)苯基)(三氟甲基)硫烷取代1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘來製備。ES+APCI MS m/z 609.2 [M+H]⁺ 。
實例215
(R)-1-(4-(2-(2-羥基-3-嗎啉丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

藉由實例 123 的SFC旋光性離析，使用Phenomenex OZ-H管柱(4.6mm x250mm, 5u)且用40-60% MeOH:IPA:DEA (80:20:1)以4mL/分鐘溶離，而得到所述標題化合物。收集假定為所要化合物的第一溶離波峰，該波峰的立體化學構型係任意分配。ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]⁺ 。
實例216
(S)-1-(4-(2-(2-羥基-3-嗎啉丙氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

藉由實例 123 的SFC旋光性離析，使用Phenomenex OZ-H管柱(4.6mm x250mm, 5u)且用40-60% MeOH:IPA:DEA (80:20:1)以4mL/分鐘溶離，而得到所述標題化合物。收集假定為所要化合物的第二溶離波峰，該波峰的立體化學構型係任意分配。
實例217
1-(4-(2-((1-羥基-3-嗎啉丙-2-基)氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 8 的製備方法，使用3-嗎啉丙烷-1,2-二醇代替步驟B中的(S)-1-(二甲基胺基)丙-2-醇來合成。ES+APCI MS m/z 575.2 [M+H]⁺ 。
實例218
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一密封小管中，將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 0.27 mmol)之二噁烷(2712 µL, 0.27 mmol)溶液用氬氣鼓泡，且於氬氣下依序添加(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯(270 mg, 0.81 mmol)、Cs2CO3 (265 mg, 0.81 mmol)、Rhuphos Pd G3 (22.7 mg, 0.027 mmol)，並再鼓泡5分鐘。將反應混合物蓋上且加熱至100°C持續2小時。添加水且用DCM (3x 15 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且濃縮，所得殘餘物係藉由矽膠(0-40 % EtOAc於己烷中s)純化，以得到4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(113 mg, 0.13 mmol, 49%產率)。

步驟B：(2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：向4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(113 mg, 0.133 mmol)之EtOH (1.3 mL, 0.133 mmol)及THF (1.3 mL, 0.133 mmol)溶液添加鈀(70.9 mg, 0.033 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。接著在環境溫度下攪拌該混合物2小時。接著以1:1 MeOH及THF稀釋，並過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮以得到粗產物且按原樣使用。

步驟C：(2S,4R)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：將(2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(95 mg, 0.13 mmol)及三乙胺(56 µL, 0.40 mmol)置於CH₂ Cl₂ (1331 µL, 0.13 mmol)中且冷卻至0°C。添加丙烯醯氯 (2661 µL, 0.27 mmol) (新鮮製備之於DCM中的0.1M溶液)，且在0°C下攪拌該反應物30分鐘。將水添加至該反應物，且用DCM (3x 10 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。

步驟D：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(2S,4R)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(92 mg, 0.12 mmol)置於DCM (3 mL)中，添加TFA (92 µL, 1.2 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物2小時。將飽和碳酸氫鹽添加至該反應物，且用DCM (3x15 mL)萃取該混合物。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(80 mg, 0.12 mmol)、甲醛(45.0 µL, 0.60 mmol)及Na(OAc)3BH (50.8 mg, 0.24 mmol) 置於THF (2 mL)中且攪拌2小時。添加飽和碳酸氫鹽，且用10% MeOH之DCM (3x15 mL)溶液萃取該混合物。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。

步驟F：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯：將2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(81 mg, 0.119 mmol)置於DCM (5 mL)中，添加HCl (594 µL, 2.38 mmol)，且攪拌該反應物1小時。該反應物係經濃縮且所述物質係藉由逆相層析法純化(0-50% ACN:水，具有0.1% TFA)，以得到2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(38.9 mg, 0.057 mmol, 48%產率)。ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例219
1-(4-(2-((1,4-二甲基哌嗪-2-基)甲氧基)-7-(3-羥基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

以如同實例127的製備方法，以(1,4-二甲基-2-哌嗪基)甲醇取代步驟D中的N-甲基-L-脯胺醇來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 558.3 [M+H]⁺ 。
實例220
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(4.00 g, 7.59 mmol)之DCM (25.3 ml, 7.59 mmol)溶液添加三氟乙酸(17.4 ml, 227.7 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物3小時。將反應物濃縮為濃稠油狀物。緩慢添加飽和碳酸氫鹽，且用10% MeOH之DCM (3x 50 mL)溶液萃取該混合物。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥且濃縮，以得到所要產物(3.24 g, 7.6 mmol, 100%產率)且按原樣使用。ES+APCI MS m/z 506.2 [M]⁺ 。

步驟B：4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一圓底燒瓶添加碳酸銫(8.01 g, 24.6 mmol)、4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.5 g, 8.2 mmol)、1-溴萘(4.6 ml, 32.8 mmol)及RuPhos Pd G3 (1.0 g, 1.23 mmol)。在將燒瓶排氣之後，在氬氣流下通過隔片添加1,4-二噁烷(82.0 ml, 8.20 mmol)。使氬氣鼓泡通過該混合物5分鐘，接著將混合物加熱至70°C隔夜。將該反應物冷卻且添加水，用乙酸乙酯萃取且將有機物真空濃縮。將黃色固體溶解於最少量的DCM中且藉由矽膠層析法(25-60% EtOAc於己烷中s)純化，以得到4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.0 g, 3.6 mmol, 44.1%產率)。ES+APCI MS m/z 553.2 [M]⁺ 。

步驟C：4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一小管內將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(120 mg, 0.22 mmol)溶解於二噁烷(108 µL, 0.217 mmol)中，且用碳酸銫(141 mg, 0.434 mmol)及(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟-2-羥甲基吡咯啶(47.6 mg, 0.217 mmol)處理。接著將管子蓋上且加熱至90°C持續12小時。將該反應物過濾通過GF/F濾紙且濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(0-6% MeOH於DCM中)純化。ES+APCI MS m/z 736.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(125 mg, 0.170 mmol)之DCM (170 µL, 0.170 mmol)溶液添加三氟乙酸(195 µL, 2.55 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物2小時。有機物係以碳酸氫鈉洗滌，且用DCM反萃取水層。將合併的有機層濃縮且其不經進一步純化即使用。ES+APCI MS m/z 636.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(105 mg, 0.1652 mmol)之DCE (3303 µL, 0.1652 mmol)溶液添加甲醛(124.1 µL, 1.652 mmol) (37%於水中)，隨後添加(175.0 mg, 0.8258 mmol)。在室溫下劇烈攪拌該混合物2.5小時。用飽和碳酸氫鈉(30 mL)處理該混合物，攪拌10分鐘，接著用DCM (3 x 10 mL)萃取。合併的有機相係經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，並按原樣使用於下個反應中。ES+APCI MS m/z 650.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(85 mg, 0.13 mmol)之EtOH (1308 µL, 0.13 mmol)及THF (1308 µL, 0.13 mmol)溶液添加鈀(70 mg, 0.033 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。接著在環境溫度下攪拌該混合物隔夜。接著以MeOH稀釋該混合物，且過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮，以得到2-(4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。ES+APCI MS m/z 516.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向2-(4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(65 mg, 0.126 mmol)之DCM (1261 µL, 0.126 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (2521 µL, 0.252 mmol) (於DCM中之新鮮製備的0.1M溶液)，隨後添加三乙胺(35.1 µL, 0.252 mmol)。接著在0°C下攪拌該反應物45分鐘。將該反應物濃縮且藉由逆相層析法純化(0-50% CAN:水，具有0.1% TFA)以得到所述標題化合物。ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例221
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4S)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 220 步驟C-G的製備方法，使用(2S,4S)-4-氟-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯代替步驟C中的(2S,4R)-4-氟-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯來合成。ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例222
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4S)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

依據實例 220 (步驟C-G)，以(2S,4S)-2-(羥甲基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟C中的(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟-2-羥甲基吡咯啶來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 582.3 [M+H]⁺ 。
實例223
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基哌嗪-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A-F：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基哌嗪-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 220 (步驟C-G)，以(S)-2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯取代代替步驟C中的(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟-2-羥甲基吡咯啶來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 567.3 [M+H]⁺ 。
實例224
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基哌嗪-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

依據實例 220 (步驟C-G)，以(R)-2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯取代步驟C中的(S)-2-(羥甲基)-4-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 567.3 [M+H]⁺ 。
實例225
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-2-(三氟甲氧基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以2-溴-4-氟-1-(三氟甲氧基)苯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 604.3 [M+H]⁺ 。
實例226
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以3-溴-2-(三氟甲基)吡啶取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例227
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氟苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴-2-氟苯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 520.3 [M+H]⁺ 。
實例228
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴-2,3-二甲苯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 530.3 [M+H]⁺ 。
實例229
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氯苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴-2-氯苯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 536.2 [M]⁺ 。
實例230
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例231
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(3-羥基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-(2-(3-羥基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：以如同在實例 220 步驟C中的製備方法，以丙烷-1,3-二醇取代(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟-2-羥甲基吡咯啶來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 593.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加2-(氰基甲基)-4-(2-(3-羥基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(77.6 mg, 0.131 mmol)，將其溶解於DCM (655 µL, 0.131 mmol)中。將該混合物冷卻至0°C，接著添加三乙胺(36.5 µL, 0.262 mmol)且隨後添加4-(二甲基胺基)-吡啶(4.80 mg, 0.04 mmol)。接著添加第三丁基二甲基氯矽烷(29.6 mg, 0.196 mmol)，將該混合物攪拌隔夜且同時升溫至室溫。將該反應混合物傾注於飽和鹽水溶液(5ml)上，且以EtOAc (10 mL)萃取該混合物兩次。有機相係經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將粗製反應產物按原樣使用。ES+APCI MS m/z 707.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(106 mg, 0.150 mmol)之EtOH (1499 µL, 0.150 mmol)及THF (1499 µL, 0.150 mmol)溶液添加鈀(79.8 mg, 0.0375 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。接著在環境溫度下攪拌該混合物隔夜。接著以MeOH稀釋該混合物並過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮，以得到無色固體，其不經進一步純化即使用。ES+APCI MS m/z 573.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在-78°C下向2-(4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(75 mg, 0.131 mmol)之DCM (1309 µL, 0.131 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (2619 µL, 0.262 mmol) (於DCM中之新鮮製備的0.1M溶液)，隨後添加三乙胺(36.5 µL, 0.262 mmol)。接著在0°C下攪拌該反應物30分鐘。反應物係經濃縮且以粗製物使用在下個反應中。ES+APCI MS m/z 627.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(3-羥基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向2-(1-丙烯醯基-4-(2-(3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(90 mg, 0.14 mmol)之DCM (1436 µL, 0.14 mmol)溶液添加氫氯酸(4.0 M的1,4-二噁烷溶液) (359 µL, 1.4 mmol)。攪拌該反應物30分鐘，此時已飽和碳酸氫鈉使其淬滅，且萃取至10% IPA之CHCl₃ (3x15 ml)溶液內。將合併的有機層濃縮，且殘餘物係藉由逆相層析法(具有0.1 TFA 之0-95% ACN:H2O)純化。ES+APCI MS m/z 513.2 [M+H]⁺ 。
實例232
1-(4-(7-(3-氯-2-氟-5-羥基苯基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

根據實例 1 步驟C-F，於步驟C中以中間物25取代4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯，並以1-溴-3-氯-2-氟-5-(甲氧基甲氧基)苯取代1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘來製備標題化合物。ES+APCI MS m/z 561.2 [M]⁺ 。
實例233
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。依據實例 147 ，以(S)-(1-乙基吡咯啶-2-基)甲醇取代N-甲基-L-脯胺醇取代步驟F中的[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇來製備此化合物。ES+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例234
2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：在0°C下向於乙酸乙酯(46.2 ml)及水(46.2 ml)中之(R)-1-Boc-3-羥甲基哌嗪(5.00 g, 23.1 mmol)及NaHCO₃ (5.83 g, 69.4 mmol)攪拌雙相溶液逐滴添加氯甲酸苯甲酯(4.95 ml, 34.7 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應混合物隔夜。該反應混合物係以EtOAc (50.0 ml)稀釋，且有機層係經分離，乾燥(Na₂ SO₄ )且濃縮。粗產物係藉由急驟層析法用10-50% EtOAc/己烷梯度溶離來純化，以得到所述標題化合物(7.62 g, 21.7 mmol, 94.1%)。ESI MS m/z 251.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟B：(R)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：在0°C下向(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(1.69 g, 4.83 mmol)及三乙胺(1.01 ml, 7.25 mmol)之CH₂ Cl₂ (32.2 ml)溶液逐滴添加未攙水的MsCl (0.561 ml, 7.25 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物10分鐘。將該反應混合物傾注入分液漏斗內，用乙酸乙酯稀釋，接著依序以1N HCl、水、NaHCO₃ (飽和)及鹽水洗滌，以得到所述標題化合物(1.9 g, ~100%, 以粗製物使用在下個步驟中)。ESI MS m/z 329.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：將(R)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(2.10 g, 4.90 mmol)、氰化鈉 (0.480 g, 9.80 mmol)之DMA (49.0 ml)溶液加熱至55°C持續1天。該反應物接著以HPLC (15分鐘方法)處理。使該混合物分溶於EtOAc/鹽水之間，有機層係以鹽水(3x)洗滌，經MgSO₄ 乾燥且濃縮。殘餘物係藉由急驟層析法以0-100% EtOAc/己烷梯度來純化，以得到所述標題化合物(1.40 g, 3.90 mmol, 79.5%)。將水層鹼化且於氰化物廢物流中處置。ESI MS m/z 260.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟D：(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽：將(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(5.32 g, 14.8 mmol)置於CH₂ Cl₂ (25 mL)中，添加HCl (4.0 N的二噁烷溶液， 18.5 ml, 74.0 mmol)，且在環境溫度下攪拌該反應物1天。將該反應混合物濃縮以得到所述標題化合物(4.3 g, 99%)。ESI MS m/z 260.1 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.01 g, 3.89 mmol)、2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸第三丁酯(1.18 g, 3.89 mmol)及DIEA (1.36 ml, 7.79 mmol)之DMSO (19.5 ml)溶液加熱至50°C持續1天。使反應混合物分溶於乙酸乙酯與鹽水之間，且分離出有機物。有機相係以鹽水(3x),洗滌，經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到所述標題化合物(1.63 g, 3.09 mmol, 79.4%)。ESI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於具有PTFE螺旋蓋的250 mL厚壁圓底燒瓶內添加(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.64 g, 3.11 mmol)之二噁烷(31.1 ml)溶液，且用氬氣使該混合物鼓泡。於氬氣下向該混合物依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(1.08 g, 9.34 mmol)、Cs₂ CO₃ (3.04 g, 9.34 mmol)及Ruphos-Pd Gen3 催化劑(0.260 g, 0.311 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且加熱至100°C持續1天。用乙酸乙酯稀釋該反應混合物，且用鹽水(2x)洗滌有機物。有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到一殘餘物且將其以急驟層析法用於DCM中之0-20% (MeOH + 2% NH₄ OH)溶離而純化，以得到所述標題化合物(1.42 g, 2.34 mmol, 75.3%)。ESI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯雙-三氟乙酸鹽：將4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(38 mg, 0.063 mmol)之CH₂ Cl₂ (627 µl)及TFA (242 µl, 3.1 mmol)溶液在室溫下攪拌1天。該反應混合物係經濃縮且以雙TFA鹽使用於下個反應中(46 mg, 0.063 mmol, 100%)。ESI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。

步驟H：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯雙三氟乙酸鹽(46 mg, 0.063 mmol)、1-溴萘(39.3 mg, 0.190 mmol)及 Cs₂ CO₃ (61.9 mg, 0.190 mmol)之二噁烷(633 µl)懸浮液用氬氣鼓泡5分鐘。向此混合物添加Ruphos Pd Gen 3 (5.29 mg, 0.006 mmol)，且再以氬氣使所得懸浮液鼓泡1分鐘。將該小管蓋上且加熱至100°C持續2小時。將該反應混合物分溶於EtOAc與水之間，且用EtOAc (3x)萃取水層。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮。殘餘物係藉由急驟層析法用等度之5% MeOH/1%NH₄ OH/CH₂ Cl₂ 溶離而純化，以得到所述標題化合物(31.9 mg, 0.050 mmol, 79.8%)。ESI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向經氮氣鼓泡之(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(31 mg, 0.049 mmol)之甲醇(981 µl)及THF (981 µl)溶液添加Pd/C (10.4 mg, 0.00491 mmol)，且在氣球壓力於H₂ 環境下攪拌該混合物1天。將該反應混合物過濾通過PTFE針筒過濾器(25mm)，且將濾液濃縮，以得到所述標題化合物(23.4 mg, 0.047 mmol, 95.8%)。ESI MS m/z 498.3 [M+H]⁺ 。

步驟J：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(23.4 mg, 0.047 mmol)之CH₂ Cl₂ (470 µl)溶液添加DIEA (41.1 µl, 0.235 mmol)，接著添加丙烯醯氯 (12 µl, 0.141 mmol)。在環境溫度下攪拌該所得混合物15分鐘。使該反應混合物分溶於EtOAc、2N K₂ CO₃ 與鹽水之間。用EtOAc (2x)萃取水層。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮。殘餘物係藉由急驟層析法用於CH₂ Cl₂ 中之5% MeOH / 1% NH₄ OH溶離而純化，以得到所述標題化合物(19.2 mg, 0.035 mmol, 74.0%)。ESI MS m/z 552.3 [M+H]⁺ 。
實例235
2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向來自實例 234 步驟I之2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(25 mg, 0.0502 mmol)、(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(13.0 mg, 0.100 mmol)、DIEA (43.9 µl, 0.251 mmol)之CH₂ Cl₂ (502 µl)溶液添加HATU (28.7 mg, 0.0754 mmol)，且在環境溫度下攪拌所得混合物1小時。使該反應混合物分溶於EtOAc與鹽水之間。用EtOAc (2x)萃取水層。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮。殘餘物係藉由製備型C18管柱用5-95%ACN/H₂ O + 0.1% TFA溶離而純化。使所要分餾物分溶於EA/2M K₂ CO₃ 之間。用EtOAc (2x)萃取水層。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到所述標題化合物(19.0 mg, 0.031 mmol, 62.1%)。ESI MS m/z 609.4 [M+H]⁺ 。
實例236
2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(E-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A。根據實例 235 來製備2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(E-4-(哌啶-1-基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈，取代(2E)-4-(1-哌啶基)-2-丁烯酸HCl鹽，以得到所述標題化合物(30 mg, 0.046 mmol, 92.0%)。ESI MS m/z 649.3 [M+H]⁺ 。
實例237
2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯

根據實例 234 ，以1-溴-2-(三氟甲基)苯取代1-溴萘來合成。ES+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例238
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(6-甲基-1H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：7-溴-6-甲基-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑：將7-溴-6-甲基-1H-吲唑(200 mg, 0.948 mmol)之四氫呋喃(2 ml, 0.948 mmol)溶液在攪拌下於冰浴中冷卻。向該混合物逐份添加氫化鈉(45.5 mg, 1.14 mmol)，且在0°C下攪拌該反應物1小時。接著添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基矽烷(0.201 ml, 1.14 mmol)，攪拌該反應物2小時同時升溫至室溫。使該混合物分配於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。有機層係以水(2 x 10 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠上使用20%至40% EtOAc/己烷做為溶離液來純化，以得到7-溴-6-甲基-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑(46 mg, 14%)與異構物7-溴-6-甲基-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(214 mg, 66%)。ES+APCI MS m/z 341.1 [M]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(7-(6-甲基-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50 mg, 0.099 mmol)、7-溴-6-甲基-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑(46 mg, 0.13 mmol)、Cs₂ CO₃ (97 mg, 0.30 mmol)、Ruphos Pd G3 (83 mg, 0.099 mmol)及二噁烷(1 mL)之混合物用氮氣沖淨且在70°C下攪拌6小時。將反應混合物冷卻至室溫，分配於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。有機層係以水(5 mL)及鹽水(5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 24g)上使用2%至20% MeOH/DCM做為溶離液來純化，以得到無色固體(50 mg, 66%)。ES+APCI MS m/z 766.4 [M]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(7-(6-甲基-1H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將未攙水的2-(氰基甲基)-4-(7-(6-甲基-2-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-2H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10 mg, 0.0131 mmol)溶解於三氟乙酸(1 ml, 13.1 mmol)中，在室溫下攪拌該黃褐色溶液1.5小時。將反應混合物傾注入乙酸乙酯(20 mL)內，小心用2M Na₂ CO₃ (10 mL, 20 mmol)、水(2 x 3 mL)、鹽水(5 mL)洗滌有機物，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發，以得到微黃固體(8 mg, 96%)。ES+APCI MS m/z 636.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(1-丙烯醯基-4-(7-(6-甲基-1H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(氰基甲基)-4-(7-(6-甲基-1H-吲唑-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16 mg, 0.02517 mmol)、甲醇(1.5 ml, 0.02517 mmol)、四氫呋喃(1.815 mg, 0.02517 mmol)及鈀碳(10 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之攪拌混合物脫氣且在氫氣環境下攪拌1小時。將混合物過濾通過矽藻土 (2 mL)且用THF (3 x 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空濃縮至~0.5 mL，溶解於DCM (5 mL)中，於EtOH-H₂ O-CO₂ 浴中在攪拌下冷卻至-30^o C。接著添加三乙胺(0.02 mL, 5 eq.)，隨後添加丙烯醯氯 (0.006134 ml, 0.07550 mmol)，在-30^o C下攪拌該反應混合物1分鐘。用NH₄ OH (0.03 mL)使該反應物淬滅，且真空濃縮。將殘餘物分配於1M NaHCO₃ (3 mL)與EtOAc (15 mL)之間，且分離各層。有機層係以水(3mL)及鹽水(3mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由層析法於矽膠(Redisep 12g)上使用10%至20% MeOH/DCM +0.2% NH₄ OH做為溶離液來純化，以得到無色固體(5.96 mg, 43%)。ES+APCI MS m/z 556.3 [M+H]⁺ 。
實例239
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 210 步驟E-G，使用4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽代替步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來合成。ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例240
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 210 步驟E-G，使用1-溴-2-(2,2,2-三氟乙基)苯代替步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯來合成。ES+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。
實例241
2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

步驟A：於一小管中將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 0.198 mmol)溶解於二噁烷(98.9 µl, 0.198 mmol)中，且用碳酸銫(129 mg, 0.396 mmol)及2-氟-3-(三氟甲基)吡啶(163 mg, 0.989 mmol)處理。接著蓋上該小管且加熱至90°C持續12小時。將反應物過濾通過GF/F濾紙且濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(0-12% MeOH於DCM中)純化。

步驟B：根據實例 210 步驟F-G，使用2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯代替步驟F中的2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯來合成。ES+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例242
2-(1-(丁-2-炔醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(603 µL, 0.06 mmol)之25 mL RBF添加2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.06 mmol)及三乙胺(12.2 mg, 0.12 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入2-丁炔酸(6.08 mg, 0.07 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(26.9 µl, 0.09 mmol)添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌2小時。添加水且用EtOAc (2x 25 mL)萃取該反應物。用LiCl、NaCl及水(每次洗滌10 mL)洗滌有機層。乾燥且濃縮成固體，且藉由逆相prep HPLC (5-95% ACN:H₂ O，具有0.1% TFA)純化，以得到所述標題化合物。
實例243
2-[4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.05 g, 2.60 mmol)、2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(1.13 g, 2.86 mmol)、RuPhos (484 mg, 1.04 mmol)及Cs₂ CO₃ (2.11 g, 6.49 mmol)之甲苯(20 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (475 mg, 519 umol)，使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。將該混合物升溫至90°C且在90°C下攪拌7小時。將反應混合物過濾且將濾餅用EtOAc (3 × 20 mL)洗滌。合併的有機層係經真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EA 自30:1至4:1)純化，接著藉由逆相急驟管柱(ACN: 100%)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(850 mg, 1.12 mmol, 43.3%產率, 95.0%純度)。ESI MS m/z 719.5 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(850 mg, 1.18 mmol)之DCM (17 mL)溶液添加m-CPBA (240 mg, 1.18 mmol, 85.0%純度)，且在0°C下攪拌1小時。在0°C下以飽和Na₂ S₂ O₃ (15 mL)使該反應混合物淬滅且分離，接著用水(10 mL)稀釋，且用EtOAc (30 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 80 %)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(730 mg, 944 umol, 79.8%產率, 95.0%純度)。ESI MS m/z 735.5 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在15 °C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 408 umol)及 [(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(94.0 mg, 816 umol)之甲苯(6 mL)溶液添加t-BuONa (58.8 mg, 612 umol)，且在15 °C下攪拌0.5小時。向該混合物添加EtOAc (15 mL)及水(5 mL)，接著用EtOAc (3 × 10 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) =54 %)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(216 mg, 261 umol, 64.0%產率, 95.0%純度)。ESI MS m/z 786.6[M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 242 umol)及2,6-二甲基吡啶(311 mg, 2.90 mmol, 338 uL)之DCM (4 mL)溶液添加TMSOTf (645 mg, 2.90 mmol, 524 uL)，且在20°C下攪拌1小時。以MeOH (1 mL)使該反應混合物淬滅，接著真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) =40 %)純化。得到呈白色固體之2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(85 mg, 123 umol, 50.8%產率, 99.0%純度)。ESI MS m/z 686.5 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(85.0 mg, 124 umol)、DIEA (96.1 mg, 744 umol, 130 uL)之DCM (2 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(23.4 mg, 186 umol)，且在20°C下攪拌該混合物1小時。以水(2 mL)使該反應混合物淬滅。用DCM (3 × 5 mL)萃取所得混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) =48 %)純化，以得到呈白色固體之2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(45 mg, 54.7 umol, 44.2%產率, 90.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.16 (s, 1H), 7.71 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.52 (d,J =8.8 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d,J =10.4 Hz, 1H), 5.76 (s, 2H), 5.12 (s, 1H), 4.44 - 4.28 (m, 3H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 3.98 (br d,J =12.0 Hz, 1H), 3.63 -3.54 (m, 2H), 3.48 -3.39 (m, 2H), 3.32 (br s, 1H), 3.10 (br s, 2H), 2.99 - 2.86 (m, 2H), 2.80 (br s, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.28 (br s, 1H), 2.05 (br s, 1H), 1.77 (br s, 4H), 0.94 - 0.88 (m, 2H), -0.04 (s, 9H)。

步驟F：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(45 mg, 60.8 umol)之DCM (0.15 mL)溶液添加TFA (208 mg, 1.82 mmol, 135 uL)，且在20°C下攪拌該混合物1小時。以飽和NaHCO₃ (2 mL)使該反應混合物鹼化至pH=8。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 10%-40%,10.5分鐘)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(8.2 mg, 12.0 umol, 19.8%產率, 96.2%純度, FA)。ESI MS m/z 610.4 [M+H]⁺ 。
實例244
2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 445 umol)、8-溴異喹啉(185 mg, 891 umol)、RuPhos (41.6 mg, 89.1 umol)及Cs₂ CO₃ (435 mg, 1.34 mmol)之甲苯(4.5 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (40.8 mg, 44.5 umol)。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。將混合物過濾且將濾餅以EtOAc (3 × 10 mL)洗滌。將合併的有機層真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) =20 %)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(160 mg, 240 umol, 54.0%產率, 90.0%純度)。ESI MS m/z 599.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將2-(氰基甲基)-4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 317 umol)及TFA (724 mg, 6.35 mmol, 470 uL)之溶液在20°C下攪拌1小時。將反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg，粗製，2TFA)。

步驟C：2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg, 316 umol, 2TFA)及DIEA (409 mg, 3.17 mmol, 551 uL)之DCM (5 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(47.9 mg, 380 umol)，接著在20°C下攪拌該混合物1小時。添加水(5 mL)至該混合物。用DCM (3 × 5 mL)萃取所得混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 1%-20%,10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(8-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(12.5 mg, 19.7 umol, 6.23%產率, 94.5%純度, FA)。ESI MS m/z 553.2 [M+H]⁺ 。
實例245
2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸(7-甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯：在-5 °C下向7-甲基萘滿-1-酮(7-甲基萘滿-1-酮) (2.00 g, 12.5 mmol)及DIPEA (4.84 g, 37.5 mmol, 6.52 mL)之DCM (30 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (5.28 g, 18.7 mmol, 3.09 mL)。在20°C下攪拌該混合物3小時。在完成時，將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EA 1/0至100/1)純化，以得到呈黃色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.53 g, 4.45 mmol, 35.6%產率, 85.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.17 (s, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 6.01 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 2.83 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 2.50 (dt,J = 4.8, 8.0 Hz, 2H), 2.36 (s, 3H)。

步驟B：三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯：將於二噁烷(28 mL)中之三氟甲烷磺酸(7-甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.40 g, 4.79 mmol)及DDQ (2.17 g, 9.58 mmol)混合物在105 °C下攪拌12小時。在完成時，將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EA 1/0至100/1)純化，以得到三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯(1.10 g, 3.41 mmol, 71.2%產率, 90.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.87 - 7.79 (m, 3H), 7.49 - 7.38 (m, 3H), 2.59 (s, 3H)。

步驟C：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於二噁烷(100 mL)中之7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(10 g, 34.0 mmol)、2-哌嗪-2-基乙腈(10.1 g, 51.0 mmol, 2 HCl)及DIEA (17.6 g, 136 mmol, 23.7 mL)混合物在50°C下攪拌2小時。添加Boc₂ O (14.8 g, 68.0 mmol, 15.6 mL)且在50°C下攪拌該混合物2小時。將該混合物真空濃縮且用乙酸乙酯(500 mL)稀釋殘餘物。分離出的有機層係以水(1 × 300 mL)及鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。用乙酸乙酯(100 mL)濕磨殘餘物。將沉澱物過濾且將濾餅用乙酸乙酯(50 mL)洗滌，且真空乾燥，以得到灰色固體。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯100/1至1/2)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到固體，接著合併上述固體而得到呈呈黃色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(15 g, 29.10 mmol, 85.6%產率, 93.7%純度)。ESI MS m/z 483.1 [M+H]⁺ 。

步驟D：4-[7-苯甲基-2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸酯：在0°C下向[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(1.19 g, 10.4 mmol, 1.23 mL, 2.5 eq)之THF (30.0 mL)溶液添加NaH (331 mg, 8.28 mmol, 60%純度於礦物油中, 2.00 eq)，且在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.00 g, 4.14 mmol, 1.00 eq)添加至該混合物內，且在80°C下攪拌該混合物4小時。將該混合物傾注入冰水(100 mL)中，且用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取。有機層係以飽和氯化鈉溶液(1 × 200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黑色油狀物之4-[7-苯甲基-2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.86 g，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ESI MS m/z 562.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(70.0 mL)內持續30分鐘。將4-[7-苯甲基-2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.00 g，粗製)及Pd/C (0.20 g, 10%純度)添加至該混合物內。在40°C於15 psi的H₂ 下攪拌該混合物24小時。將該混合物過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析[水(FA, 0.1 %)/乙腈]純化。用飽和碳酸氫鈉溶液(5.00 mL)將所要分餾物調整至pH ＞7，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取水層。合併的有機層係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.40 g, 845 umol, 兩個步驟29.4%產率)。ESI MS m/z 472.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(185 mg, 392 umol)、三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯(159 mg, 549 umol)、Pd₂ (dba)₃ (35.9 mg, 39.2 umol)、RuPhos (36.6 mg, 78.5 umol)及Cs₂ CO₃ (320 mg, 981 umol)之甲苯(30 mL)溶液用N₂ 脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析[水(0.1% NH₃ •H₂ O)/乙腈]純化以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 283 umol, 72.1%產率, 96.1%純度)。ESI MS m/z 612.6 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 294 umol)之TFA (671 mg, 5.88 mmol, 436 uL)溶液在20°C下攪拌1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.37 g，粗製，TFA)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟H：2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(189 mg，粗製，TFA)及DIEA (976 mg, 7.55 mmol, 1.32 mL)之DCM (4 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(38.1 mg, 302 umol)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用MeOH (0.5 mL)使該反應物淬滅，以水(1 mL)稀釋，且用DCM (3 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 15% - 45%,10.5 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(13.2 mg, 21.3 umol, 兩個步驟14.2%產率, 98.4%純度, FA)。ESI MS m/z 566.5 [M+H]⁺ 。
實例246
2-[4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈.

根據實例 147 的製備方法，以1-溴-4-氟萘取代步驟H中的1-溴萘來合成。ESI MS m/z 570.5 [M+H]⁺ 。
實例247
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(喹啉-8-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 的製備方法，以8-溴喹啉取代步驟H中的1-溴萘來合成。ESI MS m/z 553.2 [M+H]⁺ 。
實例248
(S)-1-(4-(7-(5-異丙基-1H-吲唑-4-基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：2-(2-溴-4-氟-苯基)丙-2-醇：在-50°C下向1-(2-溴-4-氟-苯基)乙酮(10 g, 46.1 mmol)之THF (100 mL)溶液添加MeMgBr (於乙醚中) (3 M, 46.08 mL)。使該混合物升溫至0°C且攪拌3小時。在-50°C下用飽和氯化銨水溶液(10 mL)使該混合物淬滅。使該混合物升溫至15°C，接著用乙酸乙酯(500 mL)稀釋。分離出的有機層係以水(1 × 500 mL)及鹽水(1 × 500 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之2-(2-溴-4-氟-苯基)丙-2-醇(10 g, 36.5 mmol, 79.2%產率, 85%純度)。

步驟B：2-溴-4-氟-1-異丙基-苯：向2-(2-溴-4-氟-苯基)丙-2-醇(9 g, 38.6 mmol)之二氯甲烷(100 mL)溶液添加Et₃ SiH (8.98 g, 77.2 mmol, 12.3 mL)及TFA (65.1 g, 571 mmol, 42.3 mL)。在15 °C下攪拌該混合物1小時，接著加熱至50°C持續1小時。將反應混合物真空濃縮，接著用乙酸乙酯(100 mL)稀釋。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液將水層的pH調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機相係以鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯= 1/0至100/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮。得到呈無色油狀物之2-溴-4-氟-1-異丙基-苯(7 g, 32.2 mmol, 83.5%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.36-7.27 (m, 2H), 7.09 - 7.02 (m, 1H), 3.46-3.31 (m, 1H), 1.28 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。

步驟C：2-溴-6-氟-3-異丙基-苯甲醛：在-70°C於氮氣環境下向於THF (100 mL)中之2-溴-4-氟-1-異丙基-苯(7 g, 32.2 mmol)混合物添加LDA (2 M於甲苯中，24.2 mL)。攪拌該混合物0.5小時，接著添加DMF (7.07 g, 96.7 mmol, 7.44 mL)。在-70°C攪拌該混合物2小時。以水(100 mL)使該反應物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, PE\EA = 1\0至10\1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-溴-6-氟-3-異丙基-苯甲醛(2.4 g, 9.79 mmol, 30.4%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.41 (s, 1H), 7.48 (dd,J = 5.6, 8.8 Hz, 1H), 7.13(t,J = 9.2, 1H), 3.57 -3.46 (m, 1H), 1.26 (d,J = 7.2 Hz, 6H)。

步驟D：4-溴-5-異丙基-1H -吲唑：將N₂ H₄ •H₂ O (15.4 g, 302 mmol, 15 mL, 98%純度)添加至2-溴-6-氟-3-異丙基-苯甲醛(2.4 g, 9.79 mmol)之DMSO (3 mL)溶液，且將該混合物加熱至110°C並攪拌16小時。有機相係以鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至5/1)純化，以得到呈黃色固體之4-溴-5-異丙基-1H -吲唑(650 mg, 2.72 mmol, 27.8%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.24 (br s, 1H), 8.08 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.43 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.56 (td,J = 6.8, 13.6 Hz, 1H), 1.29 (d,J = 6.8 Hz, 6H)。

步驟E：4-溴-5-異丙基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑：向3,4-二氫-2H -吡喃(457 mg, 5.44 mmol, 497 uL, 2eq )之二氯甲烷(15 mL)溶液添加TsOH•H₂ O (51.7 mg, 271 umol)及4-溴-5-異丙基-1H -吲唑(650 mg, 2.72 mmol)。在20°C下攪拌該混合物3小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至5/1)純化，且進一步藉由逆相急驟層析[水(0.1%甲酸)/乙腈]純化，以得到呈黃色油狀物之4-溴-5-異丙基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(170 mg, 494 umol, 18.2%產率, 94%純度)。ESI MS m/z 323.0 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-[7-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(3 mL)中之4-溴-5-異丙基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(136 mg, 420 umol)、4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 323 umol)、RuPhos (15.1 mg, 32.4 umol)、RuPhos-Pd-G2 (25.1 mg, 32.4 umol)及t -BuONa (77.7 mg, 809 umol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。用乙酸乙酯(20 mL)稀釋該混合物，且用水(20 mL)洗滌。有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, DCM/MeOH = 100/1至10/1)純化，收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[7-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(70 mg, 96.5 umol, 29.8%產率, 93%純度)。ESI MS m/z 675.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：7-(5-異丙基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：向4-[7-(5-異丙基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(40 mg, 59.3 umol)之二氯甲烷(100 uL)溶液添加TFA (101 mg, 889 umol, 65.8 uL)。在25°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之7-(5-異丙基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(42 mg, 58.4 umol, 98.6%產率, 2 TFA)，其不經純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 491.4 [M+H]⁺ 。

步驟H：1-[4-[7-(5-異丙基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C於氮氣環境下向於二氯甲烷(2 mL)中之7-(5-異丙基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(42 mg, 58.4 umol)及DIEA (75.5 mg, 584 umol, 102 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(7.37 mg, 58.4 umol, 1eq )之二氯甲烷(1 mL)溶液。在-40°C攪拌該混合物1小時。藉由添加飽和NaHCO₃ (2 mL)水溶液使該反應物淬滅。接著將該混合物傾注入水(20 mL)中，且用二氯甲烷(20 mL × 2)萃取。合併的有機物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 5% -38%, 10 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(5-異丙基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(4.5 mg, 7.93 umol, 13.6%產率, 96%純度)。ESI MS m/z 545.2 [M+H]⁺ 。
實例249
1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(7 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.50 g, 1.16 mmol)、三氟甲烷磺酸(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)酯(562 mg, 1.73 mmol)、RuPhos (108 mg, 231 umol)、Pd₂ (dba)₃ (106 mg, 116 umol)及t -BuONa (333 mg, 3.47 mmol)混合物在110°C於氮氣環境下攪拌3小時。將該混合物冷卻且藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液將水層的pH調整至7，且用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取水層。合併的有機層係經飽和氯化鈉溶液洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化，且將混合物濃縮以得到呈黃色固體之4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.20 g, 274 umol, 11.8%產率)。ESI MS m/z 607.0 [M+H]⁺ 。

步驟B：7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：將於二氯甲烷(0.4 mL)中之4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.20 g, 330 umol)及TFA (564 mg, 4.94 mmol, 366 uL)混合物在10°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(205 mg，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。ESI MS m/z 507.0 [M+H]⁺ 。

步驟C：1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(0.20 g，粗製)及TEA (399 mg, 3.95 mmol, 549 uL)之二氯甲烷(5mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(49.8 mg, 394 umol)，接著在-40°C下攪拌0.5小時。用甲醇(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析[水(0.1 % TFA)/乙腈]純化。藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液將水層的pH調整至7，且用二氯甲烷/甲醇(10/1) (3 × 10mL)萃取水層。合併的有機層係以飽和氯化鈉(1 × 5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(0.10 g, 174 umol, 44.1%產率)。ESI MS m/z 561.5 [M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-78°C下向1-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(0.10 g, 174 umol)之二氯甲烷(3mL)溶液添加BBr₃ (223 mg, 892 umol, 85.9 uL)。在-78°C下攪拌該混合物0.5小時且在0°C下攪拌2小時。將該混合物真空濃縮，用二氯甲烷(3mL)及水稀釋，且在-78°C至0°C下藉由添加飽和碳酸氫鈉溶液將水層的pH調整至＞ 7。接著用二氯甲烷(3 × 5.00 mL)萃取水層。將合併的有機物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化，且將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 30% - 60%, 3 分鐘)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 20% - 50%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(2-氟-3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(1.59 mg, 2.91 umol, 1.63%產率, 100%純度, FA)。ESI MS m/z 547.2[M+H]⁺ 。
實例250

1-[4-[7-(5-氯-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-溴-5-氯-1-四氫哌喃-2-基-吲唑：向4-溴-5-氯-1H -吲唑(100 mg, 432.0 umol)之DCM (3 mL)溶液添加TsOH·H₂ O (8.22 mg, 43.2 umol)及3,4-二氫-2H -吡喃(72.7 mg, 864 umol, 79.0 uL)。在20°C下攪拌該混合物2小時。以水(20 mL)洗滌該反應物，且用乙酸乙酯(20 mL x 2)萃取水層。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，且在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 10:1)純化，以得到呈白色固體之4-溴-5-氯-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(270 mg, 810 umol, 93.8%產率)。ESI MS m/z 547.2[M+H]⁺ 。

步驟B：4-[7-(5-氯-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於二噁烷(10 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(123 mg, 284.4 umol)、4-溴-5-氯-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(135 mg, 427 umol)、Pd₂ (dba)₃ (26.0 mg, 28.4 umol)、RuPhos (20.0 mg, 42.9 umol)及Cs₂ CO₃ (278 mg, 853 umol)混合物脫氣且用N₂ 沖淨，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。藉由添加水(20 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取該混合物。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，且將溶劑真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH= 10/1) 純化，以得到呈白色固體之4-[7-(5-氯-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130.0 mg, 188.4 umol, 66.3%產率)。ESI MS m/z 668.2[M+H]⁺ 。

步驟C：7-(5-氯-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶：向4-[7-(5-氯-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(50.0 mg, 74.9 umol)之DCM (2 mL)溶液添加TFA (1.95 mL)。在20^o C下攪拌該混合物1小時。在真空下移除有機溶劑，以得到呈黃色油狀物之7-(5-氯-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(40.0 mg，粗製，2TFA)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。ESI MS m/z 483.4[M+H]⁺ 。

步驟D：1-[4-[7-(5-氯-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：於N₂ 環境下向7-(5-氯-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(40.0 mg, 2TFA)及DIEA (50 mg, 387 umol, 67.4 uL)之DCM (3mL)溶液逐滴添加丙烯酐(9.0 mg, 71.4 umol)。在-70°C下攪拌該混合物15分鐘。藉由添加水(10 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(10 mL x 3)萃取該混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 10%-37%,10 分鐘)純化且凍乾，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(5-氯-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(11.9 mg, 20.8 umol, 兩個步驟27.3%,100% e.e.)。ESI MS m/z 537.2 [M+H]⁺ 。
實例251
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於一微波管內將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.362 mmol)溶解於二噁烷(181 µl, 0.362 mmol)中且用碳酸銫(236 mg, 0.723 mmol)及(S)-2-(羥甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(389 mg, 1.81 mmol)處理。接著將該微波管蓋上且加熱至90°C持續2小時。LC/MS顯示該反應已完成。將反應物冷卻至室溫且過濾通過GF/F濾紙。將濾液真空濃縮，且在CombiFlash (0%-10% DCM:MeOH)上層析。將全部含有純淨產物的分餾物合併且濃縮，以得到4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(264 mg, 0.361 mmol, 99.7%產率)。ES+APCI MS m/z 732.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(264 mg, 0.361 mmol)溶解於二氯甲烷(3607 µl, 0.361 mmol)中，且用TFA (556 µl, 7.21 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。LC/MS顯示該反應已完成。將反應物真空濃縮且用飽和碳酸氫鹽處理。用DCM (2X)萃取水層，合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(210 mg, 0.332 mmol, 92.2%產率)。ES+APCI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(105 mg, 0.1662 mmol)溶解於甲酸(94.05 µl, 2.493 mmol)中，且用甲醛(1868 µl, 24.93 mmol)處理。在85°C下攪拌該反應混合物1小時。LC/MS顯示該反應已完成。將反應物冷卻至室溫，用飽和碳酸氫鹽處理，以DCM (2X)萃取該混合物，將有機物合併且經Na₂ SO₄ 乾燥。將合併的有機物真空濃縮，且在CombiFlash (0%-10% DCM:MeOH)上層析。將全部含有純淨產物的分餾物合併且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.1161 mmol, 69.88%產率)。ES+APCI MS m/z 646.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(117 mg, 0.181 mmol)之EtOH (1812 µl, 0.181 mmol)及THF (1812 µl, 0.181 mmol)溶液用N2沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀 (96.4 mg, 0.0453 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H2O)，且立即蓋上並用N2再沖淨5分鐘。接著於H2環境下攪拌該溶液1小時。LC/MS顯示有純淨的所要產物。用MeOH稀釋該混合物，且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮，以得到2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(88 mg, 0.172 mmol, 94.9%產率)。ES+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。在環境溫度下向2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(88 mg, 0.17 mmol)之二氯甲烷(1720 µl, 0.17 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯(14 µl, 0.17 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(60 µl, 0.34 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物30分鐘。LC/MS顯示該反應已完成。將該反應混合物真空濃縮。將濃縮物再懸浮於60:40之ACN:H₂ O混合物，且在Gilson (prep HPLC)上使用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA做為溶離液來純化。將含有產物的分餾物合併，用飽和碳酸氫鹽游離鹼化，且用DCM萃取有機物。將有機物經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(14 mg, 0.025 mmol, 14%產率)。ES+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例252
2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)- 6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯

步驟A：(S )-吡咯啶-2-基甲醇：在0°C於氮氣環境下向(S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2 g, 9.94 mmol)之CH₂ Cl₂ (40 mL)溶液添加HCl (4 M的二噁烷溶液， 49.69 mL)。在15 °C下攪拌30分鐘之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色固體之(S )-吡咯啶-2-基甲醇(1.37 g, 9.96 mmol, 100%產率, HCl)。

步驟B：[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇：將於MeOH (20 mL)中之[(2S )-吡咯啶-2-基]甲醇(750 mg, 7.41 mmol, 724 uL)及丙酮(4.31 g, 74.2 mmol, 5.46 mL)混合物在15 °下於H₂ (30 psi)下以Pd/C (100 mg, 7.41 mmol, 10%純度)氫化3小時。將該混合物過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇(0.821 g, 5.73 mmol, 77.3%產率)。¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 3.54 (dd,J = 4.0, 10.8 Hz, 1H), 3.40 -3.35 (m, 1H), 2.99 - 2.86 (m, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.15 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.08 (d,J = 6.4 Hz, 3H)。

步驟C：向於THF (5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶 - 4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 549 umol)及[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇(157 mg, 1.10 mmol)混合物添加t -BuONa (158 mg, 1.65 mmol)。在20°C下攪拌0.5小時之後，用HCl (1 M)將該反應混合物中和至pH = 7，同時保持溶液溫度至0°C，接著於減壓環境下濃縮該混合物。殘餘物係藉由逆相急驟層析[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(200mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(174 mg, 278 umol, 50.7%產率, 100%純度)。ESI MS m/z 626.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於氮氣環境下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(174 mg, 278 umol)之CH₂ Cl₂ (5 mL)溶液添加TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.00 mL)。在15°C下攪拌15分鐘之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(178 mg，粗製，TFA)。ESI MS m/z 526.1 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於CH₂ Cl₂ (5 mL)中之2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(178 mg，粗製，TFA鹽)及DIEA (360 mg, 2.78 mmol, 485 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(28.1 mg, 223 umol)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下藉由添加飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 25 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 27% - 54%, 10 分鐘)純化。得到呈褐色固體之2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(11.7 mg, 18.3 umol, 兩個步驟6.58%產率, 97.9%純度, FA)。ESI MS m/z 580.2 [M+H]⁺ 。
實例253
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(7-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯：在0°C於N₂ 下向於DCM (35 mL)中之7-氯萘滿-1-酮 (2 g, 11.1 mmol, 1 eq)及DIEA (4.29 g, 33.2 mmol, 5.79 mL)混合物一次添加入Tf₂ O (4.69 g, 16.6 mmol, 2.74 mL)。在25°C下攪拌該混合物5小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至50/1)純化。得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯(2.25 g, 7.02 mmol, 63.4%產率, 97.6%純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.32 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.24 (dd,J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.10 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 2.88 - 2.80 (m, 2H), 2.53 (dt,J = 4.8, 8.0 Hz, 2H)。

步驟B：三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯：於N₂ 下向於二噁烷(35 mL)中之三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.57 g, 5.02 mmol)混合物一次添加入DDQ (2.28 g, 10.0 mmol)。在25°C下攪拌該混合物30分鐘，接著加熱至105 °C且攪拌5小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以移除1,4-二噁烷。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至50/1)純化。得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯(1.24 g, 3.94 mmol, 78.5%產率, 98.7%純度)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.05 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.83 (m, 2H), 7.57 - 7.47 (m, 3H)。

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 586.1 [M+H]⁺ 。
實例254
2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴-5-氟萘取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例255
2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯：向7-甲氧基萘滿-1-酮 (1 g, 5.67 mmol)及DIEA (2.20 g, 17.0 mmol, 2.97 mL)之DCM (15 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (2.40 g, 8.51 mmol, 1.40 mL)，接著在20°C下攪拌該混合物12小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至100:1)純化，以得到呈黃色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.7 g, 5.24 mmol, 92.3%產率, 95.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.06 (d,J =8.4 Hz, 1H), 6.75 (dd,J =2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 2.68 (t,J =8.4 Hz, 2H)。

步驟B：三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯：將於二噁烷(30 mL)中之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.7 g, 5.51 mmol)及DDQ (2.50 g, 11.0 mmol)混合物在105 °C下攪拌12小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至50:1)純化，以得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯(1.41 g, 4.14 mmol, 75.1%產率, 90.0%純度)。¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.84 (d,J =9.2 Hz, 1H), 7.78 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.65 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 2H), 7.15 (d,J =2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H)。

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 582.4 [M+H]⁺ 。
實例256
1-(2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將2-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.715 g, 3.10 mmol)之N,N-二甲基乙醯胺(3 ml)溶液在攪拌下於冰浴上冷卻，且分小份添加2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(1.00 g, 2.96 mmol)固體，隨後添加DIPEA (0.57 mL, 3.25 mmol, 1.1 eq.)。使所得溶液升溫至室溫超過1小時，接著分配於水(15 mL)與MTBE (50 mL)之間。有機層係經水(2 x 10 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發，以得到黃色固體(1.54 g, 98%)。ES+APCI MS m/z 532.3, [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將粗製4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(500 mg, 0.940 mmol)、(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(216 mg, 1.88 mmol)、Cs₂ CO₃ (612 mg, 1.88 mmol)及二噁烷(0.5 mL)混合物用氮氣沖洗。蓋上該小管且在120°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，分配於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。該化合物係藉由矽膠層析法(Redisep 40g)用4%至10% MeOH/DCM +0.2%NH₄ OH溶離而純化，以得到黃色固體(197 mg, 34%)。ES+APCI MS m/z 611.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(197 mg, 0.323 mmol)、甲醇(10 mL)及鈀碳(10 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )混合物脫氣且在氫氣環境(氣球)下攪拌1小時。將反應混合物過濾通過矽藻土 (2 mL)，以MeOH (3 x 3 mL)洗滌，真空蒸發，且藉由在高真空下與甲苯真空蒸發乾燥，以得到無色固體(150 mg, 98%)。ES+APCI MS m/z 477.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并-[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 0.315 mmol)、Cs₂ CO₃ (308 mg, 0.944 mmol)、二噁烷(1 mL)、1-碘萘(0.0689 ml, 0.472 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (26.3 mg, 0.0315 mmol) (RuPhos-Pd-G3)之混合物用氮氣沖淨，將燒瓶蓋上且在70°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，分配於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。該化合物係藉由矽膠層析法(Redisep 40g)用4%至10% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液而純化，以得到無色固體131 mg。ES+APCI MS m/z 603.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-(2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 0.2157 mmol)溶解於1M三氟乙酸之DCM溶液中，使所得溶液保持在室溫下1小時。將該反應混合物分配於2M Na₂ CO₃ (5 mL)及DCM (15 mL)之間，且將有機層真空蒸發。將固體殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，在攪拌下於冰-EtOH-CO₂ 浴上冷卻至-30°C，且添加三乙胺(0.09 ml, 0.64 mmol)，隨後添加丙烯醯氯 (0.035 ml, 0.43 mmol)。在-30^o C下1分鐘之後，以NH₄ OH (0.05 mL)使反應混合物淬滅，且真空蒸發並在高真空下乾燥。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，過濾通過棉塞，且藉由矽膠層析法(Redisep 40g)用5%至10% MeOH/DCM +0.25% NH₄ OH來純化，以得到無色固體(19.6 mg, 16%). ES+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例257
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於錐底小瓶內，將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.362 mmol)之二噁烷(3616 µl, 0.362 mmol)溶液以氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加(S)-(1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲醇(168 mg, 1.08 mmol)、Cs2CO3 (353 mg, 1.08 mmol)、Rhuphos Pd G3 (30.2 mg, 0.0362 mmol)且再以氬氣鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且加熱至100°C持續1小時。LC/MS顯示該反應已完成。添加EtOAc且以鹽水(2x)洗滌。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將濃縮物藉由急驟層析法以0%至20% DCM/MeOH + 2% NH4OH溶離而純化。全部含有純淨所要產物的分餾物係經合併且濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(90 mg, 0.134 mmol, 37.0%產率)。ES+APCI MS m/z 672.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(90 mg, 0.13 mmol)之EtOH (1340 µl, 0.13 mmol)及THF (1340 µl, 0.13 mmol)溶液以N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(36 mg, 0.033 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並再用N₂ 沖淨5分鐘。接著於經由真空且隨後藉氣球壓力引入的H₂ 環境下攪拌該溶液。接著在環境溫度下攪拌該混合物1小時。LC/MS顯示有所要產物。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(71 mg, 0.13 mmol, 99%產率)。ES+APCI MS m/z 538.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於環境溫度下向2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(71 mg, 0.132 mmol)之二氯甲烷(1320 µl, 0.132 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (10.7 µl, 0.132 mmol)，且隨後添加許尼希氏鹼(46.1 µl, 0.264 mmol)。接著在環境溫度下攪拌該反應物1小時。LC/MS顯示該反應已完成。將該反應混合物真空濃縮。將濃縮物再懸浮於60:40之ACN:H₂ O混合物，且在Gilson (prep HPLC)上使用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，用飽和碳酸氫鹽游離鹼化，且用DCM萃取有機物。將有機物經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15.7 mg, 0.0265 mmol, 20.1%產率)。ES+APCI MS m/z 592.4[M+H]⁺ 。
實例258
2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴異喹啉取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 553.3 [M+H]⁺ 。
實例259
2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸(6-氟-1-萘基)酯：在0°C下向6-氟萘-1-醇(0.10 g, 617 umol)及DIEA (159 mg, 1.23 mmol, 215 uL)之二氯甲烷(3 mL)溶液添加三氟甲烷磺酸三氟甲磺醯基酯(191 mg, 678 umol, 112 uL)。在0°C下攪拌1小時之後，該混合物係以水(5 mL)稀釋，且用二氯甲烷(3 × 5 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(6-氟-1-萘基)酯(0.17 g, 543 umol, 88.1%產率)。¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.10 (dd,J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 2H)。

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以三氟甲烷磺酸1(6-氟-1-萘基)酯取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例260
2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以4-溴異喹啉取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 553.1 [M+H]⁺ 。
實例261
2-[1-(2-甲基丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴萘取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以2-甲基丙-2-烯醯氯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 566.4[M+H]⁺ 。
實例262
2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以5-溴異喹啉取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 553.4 [M+H]⁺ 。
實例263
2-[1-[(E)-丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以1-溴萘取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以(E )-丁-2-烯醯氯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 566.4 [M+H]⁺ 。
實例264
2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以5-溴喹啉取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。ESI MS m/z 553.4 [M+H]⁺ 。
實例265
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例210步驟E-G，使用1-溴-3-甲基-2-(三氟甲基)苯代替步驟E中的1-溴萘來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。
實例266
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例147步驟F-J，使用(S)-(1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲醇代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 596.3 [M+H]⁺ 。
實例267
2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例234，使用(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 552.3 [M+H]⁺ 。
實例268
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 220 （步驟C-G），使用(2S,4R)-2-(羥甲基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯代替步驟C中的(2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-氟-2-羥甲基吡咯啶來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 582.3 [M+H]⁺ 。
實例269
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)-2-甲基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 ，以2-二甲基胺基-2-甲基-1-丙醇取代步驟F中的(S)-(1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 554.4 [M+H]⁺ 。
實例270
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 （步驟F-J），使用(R)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例271
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 （步驟F-J），使用(S)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例272
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 （步驟F-J），使用(R)-3-(羥甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例273
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 147 （步驟F-J），使用(S)-3-(羥甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例274
2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 234 （步驟G-J），使用(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇代替步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇並使用1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯代替步驟H中的1-溴萘來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例275
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 210 （步驟E-G），使用2-溴-1-氟-3-(三氟甲基)苯代替步驟E中的1-溴萘來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例276
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 210 （步驟E-G），使用1-溴-4-氟-2-(三氟甲基)苯代替步驟E中的1-溴萘來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例277
2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

根據實例 210 （步驟E-G），使用1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯代替步驟E中的1-溴萘並以THF代替步驟F中的EtOH/THF來合成標題化合物。ES+APCI MS m/z 604.3 [M+H]⁺ 。
實例278
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 步驟E-G中的製備方法，以4-溴喹啉取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例279
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)乙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以N, N-二甲基-乙醇胺取代步驟C中的(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例280
2-(4-(2-(3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯醯基哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以3-((1R,4R)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇取代步驟C中的(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例281
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以(R)-(1-甲基吡咯啶-3-基)甲醇取代步驟C中的(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例282
2-(1-(3-甲基丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以1-溴萘取代步驟E中的1-溴-2-(三氟甲基)苯並以3-甲基丁-2-烯醯氯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例283
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以(2R)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇取代步驟C中的(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例284
2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以如同在實例 210 中的製備方法，以N, N-二乙基-乙醇胺取代步驟C中的(2S)-1-乙基-2-吡咯啶基]甲醇並以丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯取代步驟G中的丙烯醯氯來製備標題化合物。
實例285

2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)- 6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯

步驟1：(S )-吡咯啶-2-基甲醇。在0°C於氮氣環境下向(S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2 g, 9.94 mmol, 1eq )之CH₂ Cl₂ (40 mL)溶液添加HCl (4 M的二噁烷溶液， 49.69 mL, 20eq )。在15 °C下攪拌30分鐘之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(S )-吡咯啶-2-基甲醇(1.37 g, 9.96 mmol, 100%產率, HCl)。

步驟2：[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇。將於MeOH (20 mL)中之[(2S )-吡咯啶-2-基]甲醇(750 mg, 7.41 mmol, 724 uL, 1eq )及丙酮(4.31 g, 74.2 mmol, 5.46 mL, 10eq )混合物在15 °C於H₂ (30 psi)下用Pd/C (100 mg, 7.41 mmol, 10%純度, 1eq )作為催化劑氫化3小時。將該混合物過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇(0.821 g, 5.73 mmol, 77.3%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 3.54 (dd,J = 4.0, 10.8 Hz, 1H), 3.40 -3.35 (m, 1H), 2.99 - 2.86 (m, 3H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 1.94 - 1.82 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.15 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.08 (d,J = 6.4 Hz, 3H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向於THF (5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶 - 4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 549 umol, 1eq )及[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇(157 mg, 1.10 mmol, 2eq )混合物添加t -BuONa (158 mg, 1.65 mmol, 3eq )。在20°C下攪拌0.5小時之後，在0°C下用HCl (1 mol/L)中和該反應混合物至pH = 7，接著於減壓環境下濃縮該反應物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(200mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(174 mg, 278 umol, 50.7%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 626。

步驟B：2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於氮氣環境下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(174 mg, 278 umol, 1eq )之CH₂ Cl₂ (5 mL)溶液添加TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.00 mL, 243eq )。在15°C下攪拌0.5小時之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(178 mg，粗製，TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

步驟C：2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向於CH₂ Cl₂ (5 mL)中之2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(178 mg，粗製，TFA)及DIEA (360 mg, 2.78 mmol, 485 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(28.1 mg, 223 umol)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下以飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)使該混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 25 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 500 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 27% - 54%, 10 分鐘)純化。得到呈褐色固體之標題化合物2-[4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(11.7 mg, 18.3 umol, 兩個步驟6.58%產率, 97.9%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 580。

¹ H NMR (400MHz, Acetic acid-d 4) δ = 8.28 - 8.19 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.94 - 6.71 (m, 1H), 6.38 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.92 - 4.54 (m, 4H), 4.42 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 4.34 (br s, 2H), 4.13 (br s, 2H), 3.95 (br s, 1H), 3.85 -3.21 (m, 7H), 3.20 - 2.84 (m, 3H), 2.42 - 2.25 (m, 1H), 2.24 - 2.07 (m, 3H), 1.43 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.39 (d,J = 6.4 Hz, 3H).
實例286

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(7-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟1：三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯。在0°C於N₂ 下向於DCM (35 mL)中之7-氯萘滿-1-酮 (2 g, 11.1 mmol, 1 eq)及DIEA (4.29 g, 33.2 mmol, 5.79 mL, 3 eq)混合物一次添加入Tf₂ O (4.69 g, 16.6 mmol, 2.74 mL, 1.5 eq)。在25°C下攪拌該混合物5小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至50/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯(2.25 g, 7.02 mmol, 63.4%產率, 97.6%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.32 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.24 (dd,J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 7.12 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.10 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 2.88 - 2.80 (m, 2H), 2.53 (dt,J = 4.8, 8.0 Hz, 2H).

步驟2：三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯。於N₂ 下向於二噁烷(35 mL)中之三氟甲烷磺酸(7-氯-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.57 g, 5.02 mmol, 1 eq)混合物一次添加入DDQ (2.28 g, 10.0 mmol, 2 eq)，在25°C下攪拌該混合物30分鐘，接著加熱至105 °C且攪拌5小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮以移除1,4-二噁烷。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至50/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯(1.24 g, 3.94 mmol, 78.5%產率, 98.7%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.05 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.83 (m, 2H), 7.57 - 7.47 (m, 3H).

步驟A：4-[7-(7-氯-1-萘基)-2 -[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向於甲苯(20 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol, 1 eq)及三氟甲烷磺酸(7-氯-1-萘基)酯(264 mg, 848 umol, 2 eq)混合物添加Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol, 0.1 eq)、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2 eq)及Cs₂ CO₃ (414 mg, 1.27 mmol, 3 eq)。將該混合物加熱至110°C且攪拌5小時。以水(10.0 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 15.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1 % TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(1 × 30 mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物4-[7-(7-氯-1-萘基)-2 -[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 316 umol, 74.6%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.20 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.38 (m, 2H), 7.18 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.43 (br dd,J = 4.8, 10.3 Hz, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 3H), 4.09 -3.89 (m, 2H), 3.42 (br s, 1H), 3.35 – 3.20 (m, 3H), 3.17 - 2.65 (m, 7H), 2.52 (s, 3H), 2.33 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.88 - 1.71 (m, 4H).

步驟B：2-[4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 下向於DCM (2.5 mL)中之4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 316 umol, 1 eq)混合物一次添加入TFA (541 mg, 4.75 mmol, 351 uL, 15 eq)。接著在25°C下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮。得到呈褐色固體之化合物2-[4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(204 mg, 316 umol, 99.8%產率, TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟C：2-[4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向於DCM (1.5 mL)中之2-[4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(204 mg, 316 umol, 1 eq, TFA)及TEA (160 mg, 1.58 mmol, 220 uL, 5 eq)混合物一次添加入丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(39.8 mg, 316 umol, 1 eq)。在25°C下攪拌1小時之後，以飽和NaHCO₃ 溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，接著以水(2 mL)稀釋且用DCM (5 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(5 mL × 1)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150 × 30 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 30% - 54%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[7-(7-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(36.0 mg, 56.1 umol, 17.8%產率, 98.7%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 586。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.42 (br s, 1H), 8.19 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.60 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 2H), 7.19 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.61 (br s, 1H), 6.40 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.91 - 4.75 (m, 2H), 4.48 (td,J = 4.4, 12.0 Hz, 1H), 4.23 (br s, 3H), 4.07 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 3.82 -3.58 (m, 2H), 3.56 -3.08 (m, 6H), 3.08 - 2.92 (m, 2H), 2.89 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 2.85 - 2.70 (m, 2H), 2.28 (qd,J = 8.4, 12.5 Hz, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.11 - 1.94 (m, 2H).
實例287

2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol, 1.30eq )及1-溴-5-氟-萘(73.4 mg, 326 umol, 1.0eq )之甲苯(5.0 mL)溶液添加Cs₂ CO₃ (319 mg, 979 umol, 3.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (29.9 mg, 32.6umol, 0.10eq )及RuPhos (22.8 mg, 48.9 umol, 0.15eq )。在110°C下攪拌該混合物12小時。於減壓環境下濃縮該反應混合物以移除甲苯。以H₂ O (10.0 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(10.0 mL* 3)萃取。合併的有機層係以H₂ O (10.0 mL)洗滌，且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.100%甲酸)/乙腈]純化。得到呈白色固體之化合物2-(氰基甲基)-4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 211 umol, 64.5%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

步驟B：2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 211 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.00 mL, 128eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在真空下移除有機溶劑。得到呈黃色油狀物之化合物2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製)。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 517。

步驟C：2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, TFA)之DCM (3.0 mL)溶液添加Et₃ N (200 mg, 1.98 mmol, 275 uL)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(40.0 mg, 317 umol)。在20°C下攪拌該混合物2小時。以水(10.0 mL)洗滌該反應物。用乙酸乙酯(20.0 mL*3)萃取粗製混合物。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 26%-53%,10分鐘)純化且凍乾。得到呈灰白色固體之標題化合物2-[4-[7-(5-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(48.4 mg, 82.6 umol, 兩個步驟40.0%產率, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.41 (s, 1H), 7.91 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.38-7.32 (m, 1H), 7.13-7.07 (m, 2H), 6.54-6.52 (m, 1H), 6.33 (m, 1H), 5.76 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.10-4.98 (br, 4H), 4.74-4.69 (m, 1H), 4.41-4.36 (m, 1H), 4.16 (m, 3H), 3.99 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.61-3.60 (m, 1H), 3.14-3.29 (m, 4H), 3.11 (br, 2H), 2.92-2.85 (m, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.74-2.67 (m, 2H), 2.21-2.16 (m, 1H), 2.09-2.04 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 2H).
實例288

2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯。向7-甲氧基萘滿-1-酮 (1 g, 5.67 mmol, 1eq )、DIEA (2.20 g, 17.0 mmol, 2.97 mL, 3eq )之DCM (15 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (2.40 g, 8.51 mmol, 1.40 mL, 1.5eq )，接著在20°C下攪拌該混合物12小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至100:1)純化，以得到呈黃色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.7 g, 5.24 mmol, 92.3%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.06 (d,J =8.4 Hz, 1H), 6.75 (dd,J =2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.04 - 2.96 (m, 2H), 2.68 (t,J =8.4 Hz, 2H).

步驟2：三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯。將於二噁烷(30 mL)中之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-3,4-二氫萘-1-基)酯(1.7 g, 5.51 mmol, 1eq )及DDQ (2.50 g, 11.0 mmol, 2eq )混合物在105 °C下攪拌12小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至50:1)純化，以得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯(1.41 g, 4.14 mmol, 75.1%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.84 (d,J =9.2 Hz, 1H), 7.78 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.65 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.24 - 7.21 (m, 2H), 7.15 (d,J =2.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 200 mg, 424 umol, 1eq )、三氟甲烷磺酸(7-甲氧基-1-萘基)酯(260 mg, 848 umol, 2eq )、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2eq )、Cs₂ CO₃ (414 mg, 1.27 mmol, 3eq )之甲苯(6 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol, 0.1eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。添加水(5 mL)至該混合物內。以EtOAc (5 mL)稀釋所得混合物且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 34 %)純化，以得到呈褐色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 151 umol, 35.7%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 628。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.69 (d,J =9.2 Hz, 1H), 7.63 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.17 (dd,J =2.4, 9.2 Hz, 1H), 7.09 (d,J =2.0 Hz, 1H), 7.03 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.96 (dd,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.52 - 4.30 (m, 3H), 4.20 (ddd,J =3.2, 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 (br d,J =13.6 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.87 (br d,J =13.2 Hz, 1H), 3.76 -3.68 (m, 1H), 3.55 -3.43 (m, 1H), 3.25 (br dd,J =3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t,J =7.6 Hz, 1H), 3.05 - 2.94 (m, 1H), 2.92 - 2.77 (m, 3H), 2.76 - 2.65 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.92 - 1.74 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 159 umol, 1eq )及TFA (363 mg, 3.19 mmol, 236 uL, 20eq )之混合物在18 °C下攪拌1小時。將該反應混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg，粗製，2TFA)。

步驟C：2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 159 umol, 1eq , 2TFA)、DIEA (205 mg, 1.59 mmol, 276 uL, 10eq )之DCM (2.5 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(24.0 mg, 190 umol, 1.2eq )且在18 °C下攪拌1小時。添加水(5 mL)至該混合物內。以DCM (3 × 5 mL)萃取所得混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 45%-75%,10分鐘)純化，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[4-[7-(7-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(10.6 mg, 17.8 umol, 兩個步驟11.2%產率, 97.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.63 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.17 (dd,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.09 (d,J =2.0 Hz, 1H), 7.03 (d,J =2.4 Hz, 1H), 6.97 (dd,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.57 (br d,J =10.4 Hz, 1H), 6.43 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.25 - 4.15 (m, 1H), 4.08 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.96 (br s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.72 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.54 (br d,J =5.6 Hz, 2H), 3.30 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.22 - 2.95 (m, 3H), 2.93 (d,J =8.4 Hz, 1H), 2.86 (br d,J =4.8 Hz, 2H), 2.79 - 2.65 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.16 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.67 (m, 4H).
實例289

2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於DMSO (4.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.20 g, 424 umol, 1.00 eq)、1-溴異喹啉(132 mg, 636 umol, 1.50 eq)及DIEA (109 mg, 848 umol, 148 uL, 2.00 eq)混合物在110°C下攪拌3小時。以水(5.00 mL)稀釋該混合物，用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液(6.00 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.15 g, 233 umol, 54.9%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 599。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.17 - 8.11 (m, 2H), 7.78 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 4.69 - 4.55 (m, 3H), 4.42 - 4.35 (m, 1H), 4.15 - 4.01 (m, 3H), 3.96 -3.81 (m, 2H), 3.57 (ddd,J = 4.0, 8.0, 16.8 Hz, 1H), 3.27 (dd,J = 4.0, 13.6 Hz, 1H), 3.18 -3.16 (m, 1H), 3.16 - 2.95 (m, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(0.40 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.15 g, 250.53 umol, 1.00 eq)及TFA (428 mg, 3.76 mmol, 278 uL, 15.0 eq)混合物在15 °C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黑色油狀物之2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg，粗製，TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 499。

步驟C：2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg，粗製，TFA)及TEA (253 mg, 2.50 mmol, 348 uL)之二氯甲烷(4.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(31.5 mg, 250 umol)，接著在15 °C下攪拌1小時。以飽和碳酸氫鈉溶液(1.00 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC 管柱：(Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%, FA)- ACN]; B%: 10% - 24%, 7 分鐘)及(管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%, FA)- ACN]; B%: 10% - 24%, 7 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[4-[7-(1-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(31.2 mg, 52.1 umol, 兩個步驟20.9%產率, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 553。

¹ H NMR (400MHz, acetic) δ = 8.44 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 - 7.95 (m, 2H), 7.89 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.82 (br t,J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.91 - 6.69 (m, 1H), 6.37 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 5.10 (br s, 2H), 4.78 (br s, 3H), 4.53 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 4.32 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 4.13 (br s, 3H), 3.90 (br s, 2H), 3.79 -3.40 (m, 3H), 3.26 (br s, 3H), 3.12 (br s, 3H), 3.07 - 2.84 (m, 2H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H).
實例290

2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：三氟甲烷磺酸(6-氟-1-萘基)酯。在0°C下向6-氟萘-1-醇(0.10 g, 617 umol, 1.00 eq)及DIEA (159 mg, 1.23 mmol, 215 uL, 2.00 eq)之二氯甲烷(3.00 mL)溶液添加三氟甲烷磺酸三氟甲磺醯基酯(191 mg, 678 umol, 112 uL, 1.10 eq)。在0°C下攪拌1小時之後，以水(5.00 mL)稀釋該混合物且用二氯甲烷(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 5.00 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(6-氟-1-萘基)酯(0.17 g, 543 umol, 88.1%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.10 (dd,J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.48 - 7.40 (m, 2H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(2.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.20 g, 424 umol, 1.00 eq)、三氟甲烷磺酸(6-氟-1-萘基)酯(150 mg, 509 umol, 1.20 eq)、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20 eq)、Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10 eq)及Cs₂ CO₃ (415 mg, 1.27 mmol, 3.00 eq)混合物在110°C於N₂ 下攪拌3小時。以水(5 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取，有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.20 g, 322 umol, 75.8%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (dd,J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.57 - 7.52 (m, 1H), 7.48 - 7.42 (m, 2H), 7.29 – 7.24 (m, 1H) 7.10 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.22 (m, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 3.95 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.44 (br s, 1H), 3.35 -3.25 (m, 2H), 3.23 - 2.90 (m, 4H), 2.86 - 2.63 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H) 1.89 - 1.74 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(0.40 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1v (0.20 g, 322 umol, 1.00 eq)及TFA (556 mg, 4.87 mmol, 361 uL, 15.0 eq)混合物在15 °C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黑色油狀物之2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(205 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟C：2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(205 mg，粗製，TFA)及TEA (328 mg, 3.24 mmol, 451 uL)之二氯甲烷(4.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(40.9 mg, 324 umol)，接著在15 °C下攪拌1小時。以飽和碳酸氫鈉溶液(1.00 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225 %, FA)- ACN]; B%: 17%-44%, 9分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[4-[7-(6-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(85.6 mg, 139 umol, 42.8%產率, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400MHz, acetic) δ = 8.28 (dd,J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.60 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.45 (m, 2H), 7.31 (dt,J = 2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.18 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.94 - 6.68 (m, 1H), 6.38 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.16 (br s, 1H), 4.84 (br s, 2H), 4.74 - 4.54 (m, 1H), 4.42 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 4.33 (br s, 2H), 4.25 - 4.08 (m, 1H), 3.92 (br s, 2H), 3.81 -3.47 (m, 3H), 3.46 -3.16 (m, 4H), 3.11 (br s, 3H), 3.08 - 2.87 (m, 3H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 2.25 - 2.11 (m, 3H).
實例291

2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.15 g, 318 umol, 1.00 eq)、4-溴異喹啉(99.3 mg, 477 umol, 1.50 eq)、RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol, 0.20 eq)、Pd₂ (dba)₃ (29.1 mg, 31.8 umol, 0.10 eq)及Cs₂ CO₃ (311 mg, 954 umol, 3.00 eq)混合物在110°C於N₂ 下攪拌3小時。以水(6.00 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.1 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉溶液(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.17 g, 273 umol, 85.9%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 599。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.03 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.14 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.73 (dt,J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 3H), 4.15 - 4.03 (m, 2H), 3.95 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.59 -3.49 (m, 1H), 3.40 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 3.34 -3.19 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 4H), 2.90 - 2.79 (m, 2H), 2.77 - 2.66 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.10 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(0.30 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.15 g, 251 umol, 1.00 eq)及TFA (428 mg, 3.76 mmol, 278 uL, 15.0 eq)混合物在15 °C下攪拌0.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黑色油狀物之2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 499。

步驟C：2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg，粗製，TFA)及Et₃ N (254 mg, 2.51 mmol, 349 uL)之二氯甲烷(2.00 mL)溶液中添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(31.6 mg, 251 umol)。在15 °C下攪拌1小時之後，以飽和碳酸氫鈉溶液(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/1)及prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225%, FA)- ACN]; B%: 12%-36%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[4-[7-(4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(28.3 g, 43.4 umol, 兩個步驟17.3%產率, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 553。

¹ H NMR (400MHz, acetic) δ = 9.45 (s, 1H), 8.51 - 8.36 (m, 3H), 8.17 (br t,J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 - 7.97 (m, 1H), 6.92 - 6.67 (m, 1H), 6.37 (br d,J = 16.0 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.14 (br s, 1H), 4.82 (br s, 2H), 4.66 - 4.48 (m, 3H), 4.40 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 4.22 -3.80 (m, 3H), 3.79 -3.49 (m, 4H), 3.32 -3.09 (m, 7H), 3.07 - 2.88 (m, 2H), 2.47 - 2.36 (m, 1H), 2.24 - 2.11 (m, 3H).
實例292

2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(6.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol, 1.00eq )、5-溴異喹啉(115 mg, 551 umol, 1.30eq )、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20eq )、Cs₂ CO₃ (415 mg, 1.27 mmol, 3.00eq )及Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10eq )混合物脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(217 mg, 344 umol, 81.0%產率, 94.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 599。

步驟B：2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將2-(氰基甲基)-4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(217 mg, 362 umol, 1.00eq )之TFA (620 mg, 5.44 mmol, 403 uL, 15.0eq )溶液在25°C下攪拌1小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(222 mg，粗製，TFA)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 499。

步驟C：2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(222 mg, 362 umol, TFA)及TEA (367 mg, 3.62 mmol, 504 uL)之DCM (4.50 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(45.7 mg, 362 umol)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該反應物淬滅，以水(2 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 4% - 20%, 8 分鐘)純化且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[4-[7-(5-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(73.0 mg, 117 umol, 兩個步驟32.2%產率, 95.6%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]:553。

¹ H NMR (400MHz, Acetic) δ = 9.71 (s, 1H), 8.69 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 8.53 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 8.15 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.91 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.78 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.97 - 6.68 (m, 1H), 6.38 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.81 (br d,J = 4.4 Hz, 2H), 4.67 - 4.51 (m, 1H), 4.49 - 4.31 (m, 3H), 4.28 - 4.04 (m, 1H), 3.91 (br s, 2H), 3.78 -3.64 (m, 1H), 3.63 -3.37 (m, 4H), 3.36 -3.20 (m, 1H), 3.11 (br s, 5H), 3.08 - 2.86 (m, 2H), 2.46 - 2.33 (m, 1H), 2.24 - 2.10 (m, 3H).
實例293

2-[1-[(E)-丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(3.0 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 212 umol, 1.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (19.4 mg, 21.2 umol, 0.10eq )、RuPhos (14.8 mg, 31.8 umol, 0.15eq )及Cs₂ CO₃ (207 mg, 636 umol, 3.0eq )混合物逐滴添加1-溴萘(65.9 mg, 318 umol, 44.2 uL, 1.5eq )。使反應混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，並在110°C於N₂ 環境下攪拌該混合物4小時。以水(20.0 mL)洗滌該反應物。用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於水中, 0-80% MeCN)純化。得到呈灰白色固體之化合物2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80.0 mg, 116 umol, 54.6%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

步驟B：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80.0 mg, 134 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 202eq )。在20°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在真空下移除有機溶劑。得到呈黃色油狀物之粗產物2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]:498。

步驟C：2-[1-[(E )-丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg, 152 umol, 2TFA)之DCM (2.00 mL)溶液添加DIEA (100 mg, 774 umol, 135 uL)及(E )-丁-2-烯醯氯(35.0 mg, 335 umol, 32.1 uL)。在0°C下攪拌該混合物1小時。以水(10.0 mL)洗滌該反應物。用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取粗製混合物。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-50%,10分鐘)純化且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[1-[(E )-丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(13.3 mg, 23.4 umol, 99.7%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) 　 8.37 (s, 1H), 8.14-8.13 (m, 1H), 7.80-7.78 (m, 1H), 7.54 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.46-7.42 (m, 2H), 7.36 (m, 1H), 7.07 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.22 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 5.05-4.91 (br, 1H), 4.67-4.63 (m, 1H), 4.37-4.32(m, 1H), 4.24-4.20 (m, 2H), 4.12 (d,J = 14.8 Hz, 1H), 3.96 (d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.51-3.49 (m, 1H), 3.39-3.29 (m, 2H), 3.18-3.12 (m, 7H), 2.90-2.76 (m, 2H), 2.71 (s, 3H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.18-2.12 (m, 1H), 2.00-1.95 (m, 1H), 1.90-1.86 (m, 5H).
實例294

2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(6.00 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol, 1.00eq )、5-溴喹啉(115 mg, 551 umol, 1.30eq )、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.20eq )、Cs₂ CO₃ (415 mg, 1.27 mmol, 3.00eq )及Pd₂ (dba)₃ (38.8 mg, 42.4 umol, 0.10eq )混合物脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將該反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化，以得到呈褐色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 315 umol, 74.4%產率, 94.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 599。

步驟B：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 334 umol, 1.00eq )之TFA (571 mg, 5.01 mmol, 371 uL, 15.0eq )溶液在25°C下攪拌1小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(204 mg，粗製，TFA)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 499。

步驟C：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(204 mg, 333 umol, 1.00eq , TFA)及TEA (337 mg, 3.33 mmol, 463 uL)之DCM (4.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(42.0 mg, 333 umol)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該反應物淬滅，以水(2 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (DCM/MeOH 8/1)及prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 7%-34%,10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(49.1 mg, 79.5 umol, 兩個步驟23.9%產率, 96.9%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]:553。

¹ H NMR (400MHz, Acetic) δ = 9.22 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 9.15 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.09 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 - 7.90 (m, 1H), 7.50 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.98 - 6.71 (m, 1H), 6.37 (br d,J = 17.2 Hz, 1H), 5.88 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.15 (br s, 1H), 4.81 (br s, 2H), 4.77 - 4.52 (m, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 3H), 4.14 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.91 (br s, 2H), 3.79 -3.66 (m, 1H), 3.65 -3.32 (m, 4H), 3.12 (br s, 6H), 3.05 (br d,J = 16.8 Hz, 2H), 2.46 - 2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.09 (m, 3H).
實例295

2-[4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯。將於甲苯(5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 0.15 g, 318 umol, 1.00 eq)、4-溴喹啉(99.3 mg, 477 umol, 1.50 eq)、RuPhos (29.7 mg, 63.6 umol, 0.20 eq)、Pd₂ (dba)₃ (29.1 mg, 31.8 umol, 0.10 eq)及Cs₂ CO₃ (311 mg, 954 umol, 3.00 eq)混合物在100°C於N₂ 下攪拌3小時。以水(5.00 mL)洗滌該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.1 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.17 g, 269 umol, 84.8%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 599。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.77 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 8.07 (dd,J = 8.0, 16.0 Hz, 2H), 7.70 (dt,J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 6.92 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.44 - 4.33 (m, 3H), 4.15 - 4.04 (m, 2H), 3.95 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.74 -3.64 (m, 1H), 3.46 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 3.37 -3.21 (m, 2H), 3.18 - 2.93 (m, 4H), 2.93 - 2.79 (m, 2H), 2.72 (br dd,J = 6.0, 16.8 Hz, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.36 - 2.26 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.79 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(0.30 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(165 mg, 276 umol, 1.00 eq)及TFA (471 mg, 4.13 mmol, 306 uL, 15.0 eq)混合物在15 °C下攪拌0.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黑色油狀物之2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(168 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 499。

步驟C：2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(168 mg，粗製，TFA)及Et₃ N (277 mg, 2.74 mmol, 382 uL)之二氯甲烷(3.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(34.6 mg, 274.22 umol)。在15°C攪拌1小時之後，以飽和碳酸氫鈉(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/1)及prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%, FA)- ACN]; B%: 1% - 21%, 7 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例295, 23.4 mg, 39.6 umol, 兩個步驟13.4%產率, 93.6%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 553。

SFC條件：OD-3S_3_40_3 ML管柱: Chiralcel OD-3 100 × 4.6mm I.D., 3 um, 移動相: 40%甲醇(0.05 % DEA)於CO₂ 中, 流速: 3 mL/分鐘, 波長: 220 nm。

¹ H NMR (400MHz, acetic) δ = 8.65 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 8.35 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.99 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.77 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.74 (dd,J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.32 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (dd,J = 1.2, 10.8 Hz, 1H), 5.01 (br s, 1H), 4.85 - 4.74 (m, 2H), 4.42 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 4.35 - 4.19 (m, 3H), 4.16 -3.76 (m, 4H), 3.66 (br d,J = 14.0 Hz, 2H), 3.51 -3.40 (m, 1H), 3.39 -3.16 (m, 4H), 3.13 (s, 3H), 3.07 - 2.90 (m, 2H), 2.49 - 2.39 (m, 1H), 2.26 - 2.17 (m, 3H).
實例296

2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 266 umol, 1.0eq )及2-(二甲基胺基)乙醇(47.4 mg, 531 umol, 53.3 uL, 2.0eq )之甲苯(1.0 mL)溶液添加t-BuONa (51.1 mg, 531 umol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)至該反應物且用(10 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。所得產物係藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0 - 40% MeCN)純化。升級所要分餾物且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH ~ 7，接著真空濃縮。用EA (10 mL × 3)萃取剩餘液體。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 254 umol, 95.8%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 590。

步驟B：2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 254 umol, 1.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加TFA (29.0 mg, 254 umol, 18.8 uL, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。添加飽和NaHCO₃ 水溶液(5 mL)至殘餘物且用DCM (10 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 490。

步驟C：在0°C下向2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(125 mg, 255 umol, 1.0eq )及DIEA (198 mg, 1.53 mmol, 267 uL, 6.0eq )之DCM (1.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(32.2 mg, 255 umol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。所得產物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 10分鐘)純化。接著濃縮且凍乾。得到呈白色固體之產物2-[4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例296, 30.7 mg, 51.8 umol, 20.3%產率, 99.5%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 544。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.45 (br s, 1H), 7.67 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.71 - 6.49 (m, 1H), 6.47 - 6.29 (m, 1H), 5.82 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 - 4.97 (m, 1H), 4.54 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 4.12 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.98 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.40 -3.30 (m, 2H), 3.22 -3.09 (m, 4H), 3.05 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 2.92 (dd,J = 8.0, 16.8 Hz, 1H), 2.86 - 2.81 (m, 1H), 2.79 - 2.70 (m, 2H), 2.56 (s, 6H).
實例297

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 354 umol, 1.0eq )及3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(中間物18, 111 mg, 708 umol, 2.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液添加t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0eq )，在0°C下攪拌該反應物0.5小時。在完成之後，添加水(10 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 ×10 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 60% MeCN於水中)純化，用飽和NaHCO₃ 水溶液將所得產物調整至pH~8，接著濃縮，用EA (2 ×10.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈白色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 197 umol, 55.7%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 658。

步驟B：2-[4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向於DCM (0.5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(70.0 mg, 106 umol, 1.0eq )混合物添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL, 63.5eq )。在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(83.0 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 558。

步驟C：2-[4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向於DCM (1.0 mL)中之2-[4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(83.0 mg, 106 umol, 1.0eq , 2TFA)混合物添加DIEA (81.9 mg, 634 umol, 110 uL, 6.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(13.3 mg, 106 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (0.5 mL)使反應混合物淬滅且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC ((儀器: ACSWH-GX-G; 管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um；條件: 水 (0.225%FA)-ACN; 開始B:12; 結束B:42; 梯度時間(分鐘): 10.5; 100%B 保持時間(分鐘): 2; 流速(ml/分鐘): 2)來純化，將所得產物濃縮且接著凍乾。得到呈黃色固體之2-[4-[2-[3-[(1R ,4R )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例297, 17.6 mg, 26.3 umol,兩個步驟產率24.9%產率, 98.1%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 612。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.69 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.59 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.72 - 6.52 (m 1H), 6.40 (d,J = 16.4 Hz,1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.16 - 5.02 (m, 1H), 4.58 - 4.51 (m, 1H), 4.38 (br t,J = 5.8 Hz, 2H), 4.21 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 3.99 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.74 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 3.42 -3.29 (m, 2H), 3.27 -3.04 (m, 6H), 3.04 - 2.61 (m, 6H), 2.28 - 2.07 (m, 3H), 2.04 - 1.92 (m, 1H).
實例298

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇。在0°C下向(3R )-3-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.0 g, 9.94 mmol, 1.0eq )之THF (30.0 mL)分批添加LiAlH₄ (754 mg, 19.9 mmol, 2.0eq )。在添加之後，在70°C下攪拌該反應物3小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(2.4 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯萃取(100 mL)。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。在真空下移除溶劑，以得到呈黃色油狀物之[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(1.0 g，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.64 (dd,J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.52 (dd,J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.67 (m, 1H), 2.60 - 2.45 (m, 2H), 2.42 - 2.23 (m, 5H), 2.08 - 1.91 (m, 1H), 1.72 - 1.57 (m, 1H).

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 177 umol, 1.0eq )及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(61.2 mg, 531 umol, 3.0eq )之甲苯(1.0 mL)溶液添加t-BuONa (34.0 mg, 354 umol, 2.0eq )，且在0°C下攪拌反應物0.5小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)至該反應混合物，接著用乙酸乙酯(2 ×10 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 50% MeCN於水中)純化。得到呈白色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(40.0 mg, 63.4 umol, 35.8%產率, 97.6%純度。LCMS [ESI, M+1]: 616。

步驟C：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向於DCM (0.5 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(40.0 mg, 64.9 umol, 1.0eq )混合物添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 500 uL, 104eq )。在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(48.0 mg，粗製，2TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟D：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向於DCM (1.0 mL)中之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(48.0 mg, 64.6 umol, 1.0eq , 2TFA)混合物添加，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，用甲醇(0.5 mL)使該反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC ((儀器: ACSWH-GX-M; 管柱：Gemini 150*25 5u; 條件: 水 (0.04% NH₃ H₂ O)-ACN; 開始B: 60; 結束B: 81; 梯度時間(分鐘): 10; 100%B 保持時間(分鐘):3; 流速(ml/分鐘): 25)純化，將所得產物濃縮且接著凍乾，以得到呈褐色固體之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(5.48 mg, 9.26 umol, 14.4%產率, 96.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.54 - 6.44 (m, 1H), 6.32 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.75 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.12 - 4.92 (m, 1H), 4.13 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 4.07 -3.97 (m, 3H), 3.92 -3.84 (m, 1H), 3.62 -3.42 (m, 1H), 3.31 -3.22 (m, 1H), 3.16 - 2.95 (m, 3H), 2.89 - 2.49 (m, 7H), 2.47 - 2.35 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 2H).
實例299

2-[4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.70 g, 9.15 mmol, 1.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (1.26 g, 1.37 mmol, 0.15eq )、RuPhos (854 mg, 1.83 mmol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (7.45 g, 22.9 mmol, 2.50eq )之甲苯(74.0 mL)溶液添加1-溴-2-(三氟甲基)苯(4.12 g, 18.3 mmol, 2.49 mL, 2.0eq )。在100°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，添加水(100 mL)至該混合物且用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0-90% MeCN)純化。得到呈黃色固體之產物2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.90 g, 3.46 mmol, 37.8%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.69 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.57 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 - 7.37 (m, 2H), 7.22 - 7.11 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.03 (br d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.88 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.68 -3.47 (m, 1H), 3.30 -3.08 (m, 4H), 3.02 (dt,J = 3.2, 12.4 Hz, 1H), 2.94 - 2.69 (m, 4H), 2.51 (s, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 2.46 mmol, 1.0eq )之DCM (15.0 mL)溶液添加m-CPBA (593 mg, 2.75 mmol, 1.12eq, 80%純度)。在完成之後，添加飽和Na₂ S₂ O₃ 水溶液(30.0 mL)至該混合物且用乙酸乙酯(30.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0-90 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.16 g, 2.05 mmol, 83.6%產率)。 LCMS [ESI, M+1]:565。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 354 umol, 1.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液添加[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(81.6 mg, 708.4 umol, 2.0eq )及t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物20分鐘。在完成之後，以水(10.0 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取粗製混合物。合併的有機層係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於水中, 0-80% MeCN)純化。得到呈白色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(170 mg, 275 umol, 77.7%產率)。LCMS [ESI, M+1]:616。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) 8.08 (s, 1H), 7.61 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.51 (t,J = 7.7 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 5.02 - 4.78 (m, 1H), 4.58 - 4.43 (m, 2H), 4.17 (br t,J = 12.5 Hz, 1H), 4.08 -3.86 (m, 5H), 3.64 -3.51 (m, 1H), 3.23 (br dd,J = 3.8, 13.8 Hz, 1H), 3.11 -3.01 (m, 3H), 2.96 (s, 3H), 2.84 - 2.58 (m, 4H), 2.31 - 2.03 (m, 2H), 2.02 - 1.94 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.19 (t,J = 7.2 Hz, 1H).

步驟D：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(170 mg, 276 umol, 1.0eq )之DCM (1.50 mL)溶液添加TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 73.4eq )。在20°C於N₂ 環境下攪拌該混合物15分鐘。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。得到呈黃色油狀物之粗產物2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟E：2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg, 2TFA)之DCM (3.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(40.0 mg, 317 umol)及DIEA (130 mg, 1.01 mmol, 175 uL)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。以水(20.0 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(20.0 mL×3)萃取粗製混合物。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,3分鐘)純化。得到呈白色固體之化合物2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例299, 10.2 mg, 16.8 umol, 94.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.58 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.40 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.85 (d,J = 7.1 Hz, 1H), 4.66 - 4.39 (m, 1H), 4.20 (d,J = 11.1 Hz, 1H), 4.13 -3.95 (m, 4H), 3.70 -3.55 (m, 2H), 3.45-3.20 (m, 2H), 3.16 - 2.99 (m, 3H), 2.98 - 2.91 (m, 4H),2.85 - 2.70 (m, 4H), 2.33 - 2.14 (m, 2H), 2.10 - 2.01 (m, 2H).
實例300

2-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 354 umol, 1.0eq )及2-(二乙基胺基)乙醇(83.0 mg, 708 umol, 93.9 uL, 2.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液添加t-BuONa (68.1 mg, 708 umol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)至該混合物且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0 - 40% MeCN)純化。得到呈無色油狀物之產物2-(氰基甲基)-4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 291 umol, 82.3%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 618。

步驟B：2-(4-(2-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。向2-(氰基甲基)-4-(2-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 291 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (33.2 mg, 291 umol, 21.6 uL, 1.0eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加乙酸乙酯(10.0 mL)至該反應混合物，且用飽和NaHCO₃ 溶液調整至pH ＞ 7。用乙酸乙酯(30 ml × 3)萃取該混合物，有基層係經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。在真空下移除溶劑。得到呈黃色油狀物之產物2-(4-(2-(2-(二乙基胺基)乙氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(150 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 518。

步驟C：2-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)之DCM (3.0 mL)溶液添加DIEA (129 mg, 1.0 mmol, 174 uL)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(44.1 mg, 0.35 mmol)。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在20°C下藉由添加甲醇(10.0 mL)使該反應混合物淬滅。向該反應混合物添加水(10.0 mL)，且用DCM (10.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04%NH3H2O)-ACN]; B%: 65%-83%,10分鐘)純化。得到呈白色固體之產物2-[4-[2-[2-(二乙基胺基)乙氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例300, 41.6 mg, 72.7 umol, 100%純度,兩個步驟產率25.0%)。LCMS [ESI, M+1]: 572。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.28 (m, 1H), 6.70 - 6.49 (m, 1H), 6.39 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.82 (d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br, s, 1H), 4.39 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 4.14 - 4.00 (m, 3H), 4.02 -3.84 (m, 1H), 3.32 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.24 -3.16 (m, 1H), 3.15 -3.04 (m, 2H), 2.96 - 2.88 (m, 4H), 2.87 - 2.70 (m, 1H), 2.68 - 2.61 (m, 4H), 1.89 (br s, 3H), 1.07 (t,J = 7.0 Hz, 6H).
實例301

2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(5S )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在25°C下向(2S )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-甲酸(400 mg, 1.64 mmol, 1.00eq )之無水THF (7.00 mL)溶液逐滴添加BH₃ •Me₂ S (10 M, 493 uL, 3.00eq )。將反應物加熱至50°C持續5分鐘。在完成時，於藉由冰浴冷卻之後，以甲醇(10 mL)使該混合物淬滅。將該反應混合物於減壓環境下濃縮，以得到呈無色油狀物之(5S )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(360 mg, 1.57 mmol, 95.9%)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟B：4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(20 g, 46.5 mmol, 1.00eq )之DMF (300 mL)攪拌溶液添加DIEA (18.1 g, 139 mmol, 24.3 mL, 3eq )及2-哌嗪-2-基乙腈(10.2 g, 51.2 mmol, 495 uL, 1.10eq , 2 HCl)。於N₂ 環境下將反應物加熱至100°C且攪拌1小時。得到4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(18.8 g，粗製)，且不經後處理及純化即直接用於下個步驟中。

步驟C：4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(18.8 g，粗製)之DMF (200 mL)溶液添加DIEA (12.0 g, 92.9 mmol, 16.2 mL)及氯甲酸苯甲酯(11.9 g, 69.7 mmol, 9.91 mL)。在50°C攪拌該混合物1小時。以水(300 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 30/1至3/1)純化。以得到呈黃色油狀物之4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(20 g, 31.6 mmol, 兩個步驟68.0%產率, 85%純度)。LCMS [ESI, M+1]:539。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 - 7.36 (m, 5H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 4.73 - 4.55 (m, 2H), 4.39 (d,J = 18.8 Hz, 1H), 3.97 (d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.90 -3.69 (m, 2H), 3.41 -3.16 (m, 3H), 3.00 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.86 - 2.53 (m, 5H), 2.51 (s, 3H), 1.49 (s, 9H).

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(11 g, 20.4 mmol, 1.00eq ) 之二噁烷(100 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 102 mL, 20eq )。在25°C下攪拌1小時之後，將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物溶解於300 mL的乙酸乙酯及300 mL的水中，且快速攪拌。接著添加飽和Na₂ CO₃ 水溶液直至pH~9。有機物係以水(1 × 300 mL)及鹽水洗滌(1 × 200 mL)，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(8.2 g, 15.2 mmol, 74.2%產率, 81%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]:439。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於二噁烷(100 mL)中之2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(5.07 g, 11.6 mmol, 1.1eq )、1-溴萘(2.83 g, 13.7 mmol, 1.90 mL, 1.3eq )、Cs₂ CO₃ (8.57 g, 26.3 mmol, 2.50eq )、Pd₂ (dba)₃ (1.45 g, 1.58 mmol, 0.15eq )及RuPhos (982 mg, 2.11 mmol, 0.20eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在85 °C於N₂ 環境下攪拌該混合物5小時。以水(200 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至2/1)純化。得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.6 g, 4.65 mmol, 40.1%產率, 73%純度)。LCMS [ESI, M+1]:565。

步驟F：2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基氫硫基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.1 g, 5.49 mmol, 1eq )之甲基四氫呋喃(50 mL)溶液添加未攙水的m -CPBA (1.18 g, 5.49 mmol, 80%純度, 1eq )固體。在0°C於N₂ 環境下攪拌1小時之後，在0°C下藉由添加10 %的Na₂ S₂ O₃ (100 mL)水溶液使該反應混合物淬滅，接著用水(200 mL)稀釋且用乙酸乙酯(200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10/1)純化，且進一步藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液將所要分餾物調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.3 g, 2.19 mmol, 39.9%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]:581。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 - 8.13 (m, 1H), 7.92 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 - 7.32 (m, 5H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.54 - 4.36 (m, 2H), 4.34 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.58 -3.17 (m, 5H), 3.01 (m, 2H), 2.93 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.90 - 2.79 (m, 1H), 2.77 - 2.65 (m, 1H).

步驟G：向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(430 mg, 741 umol, 1.00eq )及(5S )-5-(羥甲基)-2,2-二甲基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(340 mg, 1.48 mmol, 2.00eq )之甲苯(8.00 mL)溶液添加t -BuONa (142 mg, 1.48 mmol, 2.00eq )。在20°C下攪拌該混合物0.25小時。在完成之後，將反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化，以得到呈黃色固體之4-[2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 318 umol, 43.0%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 746。

步驟H：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-5,5-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向4-[2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基-5,5-二甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 268 umol, 1.00eq )之二噁烷溶液(4.00 mL)添加HCl•二噁烷(4 M, 4.00 mL, 59.7eq )。在25°下攪拌該混合物2小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-5,5-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(180 mg, 251 umol, 93.5%產率, 95.0%純度, HCl)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟I：2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-5,5-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(180 mg, 264 umol, 1.00eq , HCl)及甲醛(107 mg, 1.32 mmol, 98.2 uL, 5.00eq, 37%於水中)之MeOH (3.00 mL)溶液添加CH₃ COOH (31.7 mg, 528 umol, 30.2 uL, 2.00eq )及NaBH₃ CN (66.3 mg, 1.06 mmol, 4.00eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用1 M HCl (0.2 mL)使該混合物淬滅，用水(1 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 6 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(96.0 mg, 131 umol, 49.6%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.23 - 8.17 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.42 (m, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.27 - 5.16 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.41 (dd,J = 4.4, 10.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.01 (m, 3H), 3.95 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 3.40 -3.21 (m, 3H), 3.13 - 2.91 (m, 2H), 2.91 - 2.69 (m, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.13 - 1.96 (m, 1H), 1.75 - 1.54 (m, 5H), 1.15 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).

步驟J：2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (6.00 mL)內持續3分鐘。於N₂ 下將2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.10 g, 152 umol, 1.00eq )之MeOH (6.00 mL)溶液添加至該NH₃ 溶液且添加Pd/C (0.05 g, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該反應物1小時。在完成時，濾除催化劑且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(63.0 mg, 103 umol, 68.0%產率, 86.0%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 526。

步驟K：2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(75.0 mg, 143 umol, 1.00eq )及TEA (72.2 mg, 713 umol, 99.3 uL, 5.00eq )之DCM (2.00 mL)逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.0 mg, 143 umol, 1.00eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該反應物淬滅，用水(2 mL)稀釋，且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-TLC (EtOAc/MeOH 9/1)及prep-HPLC(管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 60% - 90%, 12 分鐘)純化並凍乾，以得到呈白色固體之2-[4-[7-(1-萘基)-2-[[(2S )-1,5,5-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例301, 14.7 mg, 25.3 umol, 17.8%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]:580。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.25 - 8.17 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.45 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.44 (br s, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 2H), 4.17 -3.80 (m, 4H), 3.79 -3.21 (m,4H), 3.19 - 2.63(m, 6H), 2.34 (br s, 3H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 1.69 (br s, 3H), 1.16 (br s, 3H), 0.94 (s, 3H).
實例302

2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-2-哌啶基]乙腈

插圖：三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯。在-5°C下向7-氟萘-1-醇(250 mg, 1.54 mmol, 1eq )及DIEA (598 mg, 4.63 mmol, 806 uL, 3eq )之DCM (10 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (652 mg, 2.31 mmol, 382 uL, 1.5eq )。在20°C下攪拌該混合物3小時。在攪拌之後，將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯= 100/1至10/1)純化。得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯(450 mg, 1.53 mmol, 99.2%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 8.08 (dd,J = 5.6, 9.2 Hz, 1H), 8.01 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 - 7.39 (m, 4H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(20 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(182 mg, 386 umol, 1eq )、三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯(227 mg, 772 umol, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (35.3 mg, 38.6 umol, 0.1eq )、RuPhos (36.0 mg, 77.2 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (377 mg, 1.16 mmol, 3eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。以H₂ O (30 mL)使該混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(20 mL)萃取該混合物。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(1 ×100 mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(158 mg, 257 umol, 66.5%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.92 - 7.79 (m, 2H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 – 7.25 (m, 1H), 7.19 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.63 (br d,J = 2.1 Hz, 1H), 4.40 (br dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.20 - 4.00 (m, 4H), 3.95 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.52 -3.37 (m, 1H), 3.36 -3.16 (m, 3H), 3.15 - 2.63 (m, 6H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於氮氣環境下向2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 162 umol, 1eq )之二噁烷(10 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 1.62 mL, 40eq )。在25°C下攪拌該混合物2小時。在攪拌之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg，粗製，HCl)。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟C：2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-2-哌啶基]乙腈。在0°C下向於DMF (5 mL)中之2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg，粗製，HCl)及DIEA (234 mg, 1.81 mmol, 315 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.3 mg, 145 umol)。在25°C下攪拌1小時之後，以飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(2 × 25 mL)淬滅。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(乙酸乙酯/MeOH = 50/1至1/1)純化。將收集的液體真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 12% - 42%, 10 分鐘)及(管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 55% - 85%,12 分鐘)來純化。得到呈白色固體之2-[4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-2-哌啶基]乙腈(實例302, 4.23 mg, 7.19 umol, 兩個步驟4.29%產率, 96.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.93 - 7.77 (m, 2H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.19 (d,J =7.3 Hz, 1H), 6.59 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 6.41 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.23 - 4.52 (m, 1H), 4.40 (dd,J = 4.8, 10.6 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.21 - 4.11 (m, 2H), 4.03 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.86 -3.04 (m, 6H), 3.03 - 2.58 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.23 (m, 1H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
實例303

2-[4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向2-(1-哌啶基)乙醇 (89.0 mg, 689 umol, 91.5 uL, 2.0eq )之甲苯(2.0 mL)溶液添加t-BuONa (66.2 mg, 689 umol, 2.0eq )。接著向該溶液添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 344 umol, 1.0eq )，且在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)至該混合物內且用EA (10 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。所得產物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA=10:1 - EA:MeOH=20:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 296 umol, 86%產率, 95.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (10.0 mL)內持續30分鐘。接著於N₂ 下將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(180 mg, 279 umol, 1.0 eq)及Pd/C (100 mg, 10.0%純度)添加至上述液體。使懸浮液脫氣且用H₂ 沖淨3次。在20°C於H₂ (15 Psi )下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，該混合物係經矽藻土過濾且真空濃縮。所得產物係藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1 % FA於水中, 0 - 40% MeCN)純化，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg, 176 umol, 63%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg, 176 umol, 1.0eq )及DIEA (136 mg, 1.06 mmol, 184 uL, 6.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(22.2 mg, 176 umol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (20.0 mg)使該混合物淬滅，且真空濃縮。所得產物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 60% - 90%, 12分鐘)純化，以得到呈白色固體之2-[4-[7-(1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例303, 11.2 mg, 19.7 umol, 11%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.24 - 8.19 (m, 1H), 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.70 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.47 (br t,J = 6.0 Hz, 2H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.12 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 4.06 -3.98 (m, 1H), 3.55 -3.45 (m, 1H), 3.43 -3.24 (m, 2H), 3.22 -3.09 (m, 1H), 3.04 - 2.72 (m, 6H), 2.68 - 2.42 (m, 4H), 1.61 - 1.56 (m, 6H), 1.50 - 1.40 (m, 2H).
實例304

2-[4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲醇。將於乙腈(70.0 mL)中之[(2R )-吡咯啶-2-基]甲醇(0.70 g, 6.92 mmol, 673 uL, 1.00eq )、2-溴乙氧基-第三丁基-二甲基-矽烷(1.66 g, 6.92 mmol, 1.00eq )及K₂ CO₃ (4.78 g, 34.6 mmol, 5.00eq )混合物在83 °C下回流12小時。接著將該混合物過濾且用甲醇洗滌濾炳。有機層係經真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(乙酸乙酯/甲醇 = 50/1至1/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基] 甲醇(1.40 g, 5.40 mmol, 78.0%產率, 100%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.68 (dd,J = 5.2, 6.4 Hz, 2H), 3.57 (dd,J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.42 -3.25 (m, 1H), 3.23 - 2.96 (m, 2H), 2.95 - 2.82 (m, 1H), 2.72 - 2.61 (m, 1H), 2.48 (td,J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 1H), 1.77 - 1.62 (m, 3H), 0.83 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).

步驟A：4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在25°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 861 umol, 1 eq)及[(2R )-1-[2-[ 第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲醇(447 mg, 1.72 mmol, 2 eq)之甲苯(10 mL)溶液一次添加入t -BuONa (248 mg, 2.58 mmol, 3 eq)，且在25°C下攪拌該混合物0.5小時。用1 M HCl溶液使該混合物酸化至pH = 8，且用乙酸乙酯(100 mL)及水(10 mL)稀釋該混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(乙酸乙酯/甲醇 100/1至10/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈淡黃色固體之4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(480 mg, 582 umol, 68%產率, 94.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 776。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.28 - 8.11 (m, 1H), 7.95 - 7.77 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.29 (m, 8H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.29 - 5.15 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.41 -3.88 (m, 7H), 3.83 -3.68 (m, 2H), 3.57 - 2.69 (m, 12H), 2.67 - 2.49 (m, 1H), 2.37 (q,J = 8.4 Hz, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.83 - 1.74 (m, 3H), 1.00 - 0.79 (m, 9H), 0.13 -0.01 (m, 6H).

步驟B：2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(60.0 mL)內持續30分鐘。將4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.20 g, 258 umol, 1.00 eq)及Pd/C (0.10 g, 10.0%純度)添加入該混合物內。在20°C於15 psi的H₂ 下攪拌該混合物1小時。接著將該混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.15 g，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 642

步驟C：2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.15 g，粗製)及Et₃ N (236 mg, 2.34 mmol, 325 uL)之二氯甲烷(2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(29.5 mg, 234 umol)。在20°C下攪拌1小時之後，以飽和碳酸氫鈉溶液(0.50 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.10 g, 135 umol, 兩個步驟52.3%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 696。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 6.40 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.22 - 4.94 (m, 1H), 4.36 (td,J = 3.6, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.20 (m, 2H), 4.15 - 4.05 (m, 2H), 4.04 -3.97 (m, 1H), 3.75 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.35 (br d,J = 11.2 Hz, 2H), 3.21 -3.15 (m, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 2H), 2.99 - 2.92 (m, 2H), 2.63 - 2.54 (m, 1H), 2.42 - 2.33 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.84 - 1.73 (m, 3H), 1.66 (br s, 4H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (s, 6H).

步驟D：2-[4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (0.10 mL)中之2-[4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.09 g, 129 umol, 1 eq)及TBAF (1.00 M於THF中, 1.29 mL, 10 eq)混合物在10°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.1 %)/乙腈]、管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/3)及prep-HPLC (管柱：Boston pH-lex 150*25 10um; 移動相：[水(0.10 % TFA)- ACN]; B%: 22% - 52%, 10 分鐘及管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 47% - 77%, 12 分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(23.9 mg, 41.0 umol, 31.7%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.44 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 – 4.50 (m, 1H), 4.38 - 4.24 (m, 3H), 4.22 - 4.09 (m, 2H), 4.00 (br d,J = 11.5 Hz, 2H), 3.73 -3.57 (m, 2H), 3.45 (br s, 1H), 3.36 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.23 - 2.77 (m, 9H), 2.62 (td, J=3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
實例305

3-(4-((S )-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H )-基)異菸鹼甲腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氰基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 791 umol, 1.0eq )及3-溴吡啶-4-甲腈 (289 mg, 1.58 mmol, 2.0eq )之甲苯(10.0 mL)溶液添加Cs₂ CO₃ (516 mg, 1.58 mmol, 2.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (72.4 mg, 79.1 umol, 0.1eq )及RuPhos (73.8 mg, 158 umol, 0.2eq )，且在100°C下攪拌該反應混合物3小時。在完成之後，添加水(15 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 ×15.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=5/1至石油醚/乙酸乙酯/甲醇=5/1/0.1)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氰基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 266 umol, 34%產率, 80.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 608。

步驟B：3-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]吡啶-4-甲腈。向2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氰基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(170 mg, 226 umol, 1.0eq )之MeOH (5.0 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (49.4 ug, 49.4umol, 5.0 mL)及Pd/C (150 mg, 10%純度)，使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成之後，使反應物過濾通過矽藻土，且將濾液濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 30% MeCN於水中)純化，用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮直至沒有溶劑殘留，且接著向該固體添加DCM (10.0 mL)且在20°C下攪拌0.5小時，將該固體過濾且將濾液濃縮，以得到呈白色固體之3-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]吡啶-4-甲腈 (35.0 mg, 73.9 umol, 33%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 474。

步驟C：3-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]吡啶-4-甲腈。在0°C下向於DCM (1.0 mL)中之3-[4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]吡啶-4-甲腈 (35.0 mg, 73.9 umol, 1.0 eq)混合物添加DIEA (28.7 mg, 222 umol, 38.6 uL, 3.0 eq)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(9.32 mg, 73.9 umol, 1.0 eq)，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (0.5 mL)使該反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC ((儀器: ACSWH-GX-M; 管柱：Gemini 150*25 5u; 條件: 水 (0.04%NH_3• H₂ O)-ACN; 開始B:32; 結束B:56; 梯度時間(分鐘): 10; 100%B 保持時間(分鐘):3; 流速(ml/分鐘):100)純化，濃縮所得產物，接著凍乾。得到呈黃色固體之產物3-[4-[3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]吡啶-4-甲腈 (實例305, 13.0 mg, 24.5 umol, 33%產率, 99.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 528。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.52 (s, 1H), 8.33 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 7.46 (d,J = 4.8 Hz, 1H), 6.69 - 6.53 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 5.19 - 5.01 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 3H), 4.27 - 4.08 (m, 2H), 4.07 -3.81 (m, 3H), 3.78 -3.33 (m, 3H), 3.23 - 2.99 (m, 3H), 2.97 - 2.83 (m, 2H), 2.81 - 2.61 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 2.16 - 1.99 (m, 1H), 1.95 - 1.76 (m, 3H).
實例306

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在0°C下向(2S ,4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(5.0 g, 20.2 mmol, 1.0eq )之THF (100 mL)溶液分批添加LiAlH₄ (1.53 g, 40.4 mmol, 2.0eq )。在0°C於N₂ 下攪拌該反應混合物1小時之後，將該反應混合物加熱至70°C且在70°C於N₂ 下攪拌2小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(4.5 mL)使該反應混合物淬滅，接著過濾，將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=5/1至石油醚/乙酸乙酯/甲醇=3/1/0.1)純化，以得到呈黃色油狀物之[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基] 甲醇(1.5 g, 11.3 mmol, 56%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.24 - 4.97 (m, 1H), 3.73 (dd,J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.61 -3.40 (m, 2H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.69 (ddd,J = 0.8, 2.8, 12.0 Hz, 1H), 2.61 (dd,J = 2.4, 12.0 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.18 - 1.98 (m, 2H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 800 mg, 1.38 mmol, 1.0eq )及[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(367 mg, 2.76 mmol, 2.0eq )之甲苯(15.0 mL)溶液添加t-BuONa (265 mg, 2.76 mmol, 2.0eq )，在0°C下攪拌該反應物0.5小時。在完成之後，添加水(30 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 ×15 mL)萃取，合併的有機層係以鹽水(1 × 30 mL)洗滌，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯=5/1至石油醚/乙酸乙酯/甲醇=3/1/0.1)純化，以得到呈淺黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(720 mg, 997 umol, 72%產率, 90.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(670 mg, 1.03 mmol, 1.0eq )之MeOH (15.0 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (1.03 mmol, 15.0 mL, 1.0eq )及Pd/C (400 mg, 10%純度)，使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應物過濾通過矽藻土，且將濾液濃縮，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg, 478 umol, 46%產率, 94.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (5.0 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg, 504 umol, 1.0 eq)混合物添加DIEA (196 mg, 1.51 mmol, 263 uL, 3.0 eq)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(63.6 mg, 504 umol, 1.0 eq)，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC ((儀器: ACSWH-GX-H; 管柱：Gemini 150*25 5u;條件: 水 (0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN; 開始B:42; 結束B:72; 梯度時間(分鐘): 12; 100%B 保持時間(分鐘):1.8; 流速(ml/分鐘): 25)純化，將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈黃色固體之產物2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例306, 65.6 mg, 115 umol, 23%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.27 - 8.17 (m, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 1H), 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.45 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.17 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.68 - 6.56 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.30 - 4.99 (m, 2H), 4.45 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 3H), 4.15 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 4.03 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.70 - 2.72 (m, 11H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.54 (s, 3H), 2.41 - 2.27 (m, 1H), 2.10 - 1.90 (m, 1H).
實例307

2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8 -二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 300 mg, 636 umol, 1.00eq )、1-溴-2-氟-3-甲氧基-苯(261 mg, 1.27 mmol, 2.00eq )、Pd₂ (dba)₃ (117 mg, 127 umol, 0.20eq )、RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.30eq )及Cs₂ CO₃ (622 mg, 1.91 mmol, 3.00eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。向該反應混合物添加H₂ O (200 mL)及乙酸乙酯(250 mL)。分離出的有機相係以鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(100mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈淡黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 353 umol, 55.4%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 596。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.00 (dt,J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.74 - 6.56 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.44 - 4.34 (m, 1H), 4.28 - 4.10 (m, 3H), 4.01 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 4H), 3.56 -3.40 (m, 1H), 3.25 (br dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (dt,J = 2.8, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.63 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.06 (m, 3H), 1.90 - 1.68 (m, 3H), 1.60 - 1.42 (m, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於氮氣環境下向2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 168 umol, 1.00eq )之DCM (1 mL)溶液添加TFA (1.63 g, 14.3 mmol, 1.06 mL, 85.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時，接著將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(210 mg，粗製，TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 496。

步驟C：2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (3 mL)中之2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(102 mg，粗製TFA)及DIEA (216 mg, 1.67 mmol, 291 uL)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(16.9 mg, 134 umol)。在25°C下攪拌1小時之後，在0°C下以飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)使反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 25 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38% - 68%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之2-[4-[7-(2-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例307, 7.47 mg, 13.6 umol, 兩個步驟17%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 550。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.07 - 6.95 (m, 1H), 6.74 - 6.51 (m, 3H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.6 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.38 (dd,J = 4.8, 10.5 Hz, 1H), 4.31 - 4.12 (m, 3H), 4.07 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 4.03 -3.82 (m, 5H), 3.68 -3.44 (m, 2H), 3.39 -3.21 (m, 2H), 3.10 (br t,J = 7.8 Hz, 2H), 2.95 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.62 (m, 3H).
實例308

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-甲氧基苯基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 300 mg, 636 umol, 1 eq)、1-溴-3-氟-2-甲氧基-苯(261 mg, 1.27 mmol, 2 eq)、Pd₂ (dba)₃ (117 mg, 127 umol, 0.2 eq)、RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.3 eq)及Cs₂ CO₃ (622 mg, 1.91 mmol, 3 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。向該反應混合物添加H₂ O (200 mL)及乙酸乙酯(250 mL)。分離出有機相，以鹽水(200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用(1 × 100 mL)萃取。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(170 mg, 277 umol, 43.6%產率, 97.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 596。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.96 (dt,J = 6.0, 8.0 Hz, 1H), 6.83 - 6.69 (m, 1H), 6.83 - 6.68 (m, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.14 (m, 3H), 4.04 (br d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.94 (d,J = 0.8 Hz, 4H), 3.62 -3.47 (m, 1H), 3.26 (br dd,J = 4.0, 13.6 Hz, 2H), 3.12 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.99 (dt,J = 2.8, 12.0 Hz, 1H), 2.88 - 2.64 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.22 - 2.07 (m, 2H), 1.94 - 1.64 (m, 3H), 1.56 - 1.46 (m, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於N₂ 下向於DCM (2.50 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(170 mg, 285 umol, 1 eq)混合物一次添加入TFA (651 mg, 5.71 mmol, 423 uL, 20 eq)。在25°C下攪拌2小時之後，將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈褐色固體之化合物2-[4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(173 mg, 284 umol, 99.4%產率, TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 496。

步驟C：2-[4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於N₂ 下向於DCM (3 mL)中之2-[4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(173 mg, 284 umol, 1 eq, TFA)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(35.8 mg, 284 umol, 1 eq)混合物分批添加TEA (144 mg, 1.42 mmol, 198 uL, 5 eq)。在25°C下攪拌0.5小時之後，藉由在0°C下添加飽和NaHCO₃ (1.5 mL)使該反應混合物淬滅，接著以水(2 mL)稀釋且用DCM (20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(15 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至MeOH/EA = 1/2)純化。收集所要分餾物且於減壓環境下濃縮。接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150 × 25mm × 10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 48% - 78%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[7-(3-氟-2-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例308, 28.2 mg, 50.4 umol, 17.8%產率, 98.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 550。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.97 (dt,J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 6.83 - 6.76 (m, 1H), 6.72 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 6.40 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.56 (br s, 1H), 4.39 (br dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 4.04 -3.96 (m, 1H), 3.95 (d,J = 0.8 Hz, 3H), 3.73 -3.46 (m, 2H), 3.38 -3.22 (m, 2H), 3.16 - 2.99 (m, 2H), 2.96 - 2.59 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.22 (m, 1H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.68 (m, 3H).
實例309

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

插圖：1-溴-8-甲基-萘。在0°C下向8-二溴萘(1 g, 3.50 mmol, 1eq )之THF (20 mL)溶液逐滴添加MeLi (1.6 M於二乙醚中, 2.62 mL, 1.2eq )。在0°C下攪拌30分鐘之後，逐滴添加碘甲烷(3.38 g, 23.8 mmol, 1.48 mL, 6.81eq )。將該混合物升溫至25°C且再攪拌3小時。以水(20 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 70%, 28 分鐘; 40% min)純化。在凍乾後得到呈黃色固體之1-溴-8-甲基-萘(340 mg, 1.49 mmol, 43%產率, 97%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 (dd,J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 0.8, 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.30 - 7.22 (m, 2H), 7.13 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 3.05 (s, 3H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之1-溴-8-甲基-萘(122 mg, 551 umol, 1.3eq )、2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 200 mg, 424 umol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (345 mg, 1.06 mmol, 2.5eq )、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (77.7 mg, 84.8 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在110°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液將該混合物調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 224 umol, 53%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 612。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.42 (dd,J = 8.0, 16.0 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.30 - 4.16 (m, 2H), 4.10 -3.71 (m, 4H), 3.58-3.45 (m, 1H), 3.43-3.25 (m, 1H), 3.23 -3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.85 (m, 5H), 2.83 - 2.55 (m, 4H), 2.49 (br s, 3H), 2.40 - 2.20 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 2H), 1.55 - 1.44 (m, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(110 mg, 179 umol, 1eq )之DCM (200 uL)溶液添加TFA (307 mg, 2.70 mmol, 199 uL, 15eq )。在25°C下攪拌1小時之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(112 mg, 179 umol, 100%產率, TFA)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(112 mg, 179 umol, 1eq , TFA)之DCM (2 mL)溶液添加TEA (181 mg, 1.79 mmol, 249 uL, 10eq )。接著在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(18.1 mg, 143 umol, 0.8eq )之DCM (1 mL)溶液。將所得混合物在25°C下攪拌1小時。以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，以水(10 mL)稀釋且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 10/1至1/3)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 55% - 85%, 12 分鐘)純化。在凍乾之後得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例309, 16.2 mg, 28.4 umol, 16%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

SFC條件：“OJ-3S_5_5_40_3ML管住: Chiralcel OJ-3 100 × 4.6mm I.D., 3um移動相: 乙醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t,J = 6.4 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.68-6.52 (mJ = 9.9 Hz, 1H), 6.46 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 4.03 -3.82 (m, 2H), 3.85-3.67 (m, 1H), 3.61 -3.33 (m, 2H), 3.24 - 2.99 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.77 (m, 1H), 2.71 - 2.59 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.34 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 1H), 1.85 - 1.74 (m, 3H).
實例310

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

插圖：1-溴-8-氯萘。在-78°C下向六氯乙烷(1.66 g, 6.99 mmol, 792 uL, 1eq )之THF (30 mL)溶液逐滴添加n -BuLi (2.5 M於己烷中, 4.20 mL, 1.5eq )。在–78°C下再攪拌10分鐘之後，添加1,8-二氯甲烷(2 g, 6.99 mmol, 1eq )之THF (10 mL)溶液。將該混合物升溫至25°C且攪拌3小時。以水(100 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 41 ACN%-71 ACN%, 30 分鐘; 50% min)純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液將該混合物調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之1-溴-8-氯萘(850 mg, 3.52 mmol, 50%產率, 100%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.92 (dd,J = 1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.80 (ddd,J = 0.8, 8.0, 12.4 Hz, 2H), 7.67 (dd,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.38 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (t,J = 8.0 Hz, 1H).

步驟A：4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之1-溴-8-氯-萘(133 mg, 551 umol, 1.3eq )、2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 424 umol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (345 mg, 1.06 mmol, 2.5eq )、RuPhos (39.6 mg, 84.8 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (77.7 mg, 84.8 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在110°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液將該混合物調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之化合物4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 237 umol, 56%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 2H), 4.22 - 4.15 (m, 1H), 4.10 -3.77 (m, 4H), 3.57 (br s, 1H), 3.41 -3.01 (m, 6H), 3.01 - 2.86 (m, 1H), 2.85 - 2.63 (m, 3H), 2.62 - 2.43 (m, 4H), 2.31 (br s, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.78 (br s, 2H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 237 umol, 1eq )之DCM (200 uL)溶液添加TFA (405 mg, 3.56 mmol, 263 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg, 236 umol, 100%產率, TFA)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟C：2-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(153 mg, 237 umol, 1 eq, TFA)之DCM (2 mL)溶液添加TEA (239 mg, 2.37 mmol, 329 uL, 10 eq)。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(23.9 mg, 189 umol, 0.8 eq)於DCM(1 mL)中。在25°C下攪拌所得混合物1小時。以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使反應混合物淬滅，且以水(20 mL)稀釋，用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 52% - 82%, 12 分鐘)純化。在凍乾之後得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例310, 37 mg, 61.2 umol, 26%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 586。

SFC條件：“AD-3S_4_40_3ML管柱: Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 40%異丙醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.35 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.84 - 4.25 (m, 3H), 4.22 -3.72 (m, 5H), 3.71-3.53 (m, 1H), 3.50-3.34 (m, 1H), 3.32 - 2.96 (m, 5H), 2.91 - 2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.52 (m, 2H), 2.48 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.72 (m, 3H).
實例311

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氟萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟1：2-氟萘-1-醇。向萘-1-醇(2 g, 13.9 mmol, 5.00 mL, 1eq )之CH₃ CN (50 mL)溶液添加Select-F (4.91 g, 13.9 mmol, 1eq )。在20°C下攪拌殘餘物3小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE/EA = 3/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 40% - 70%, 10分鐘)純化。以飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之化合物2-氟萘-1-醇(400 mg, 2.44 mmol, 18%產率, 99%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.21 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.47(t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 5.2, 8.8 Hz, 1H), 7.31 (d,J =9.6 Hz, 1H), 5.58 (br s, 1H).

步驟2：三氟甲烷磺酸(2-氟-1-萘基)酯。在0°C下向2-氟萘-1-醇(400 mg, 2.47 mmol, 1eq )之DCM (10 mL)溶液添加Tf₂ O (765 mg, 2.71 mmol, 448 uL, 1.1eq )及DIEA (637 mg, 4.93 mmol, 859 uL, 2eq )。在0°C下攪拌1小時之後，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物，且用水(20 mL × 3)洗滌。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至3/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物三氟甲烷磺酸(2-氟-1-萘基)酯(500 mg, 1.65 mmol, 67%產率, 97%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.95 - 7.85 (m, 2H), 7.70 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (t,J = 9.2 Hz, 1H).

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之三氟甲烷磺酸(2-氟-1-萘基)酯(243 mg, 827 umol, 1.3eq )、2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 636 umol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (518 mg, 1.59 mmol, 2.5eq )、RuPhos (59.4 mg, 127 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (116 mg, 127 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物過濾且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之化合物2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 155 umol, 25%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.33 (br s, 1H), 7.84 (d,J = 7.76 Hz, 1H), 7.75-7.64 (m, 1H), 7.57 - 7.41 (m, 2H), 7.25-7.21 (m, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.47 - 4.16 (m, 4H), 4.13 -3.82 (m, 4H), 3.61 -3.25 (m, 3H), 3.20 - 2.90 (m, 4H), 2.81 - 2.56 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.38 - 2.19 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.88-1.69 (m, 2H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 162 umol, 1eq )之DCM (200 uL)溶液添加TFA (278 mg, 2.44 mmol, 180 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(102 mg, 162 umol, 100%產率, TFA)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516

步驟C：2-[4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(102 mg, 197 umol, 1eq , TFA)之DCM (2 mL)溶液添加TEA (200 mg, 1.98 mmol, 275 uL, 10eq )。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(19.9 mg, 158 umol, 0.8eq )之DCM (1 mL)溶液。在25°C下攪拌1小時之後，以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，且以水(20 mL)稀釋，用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 52% - 82%, 12 分鐘)純化。在凍乾後得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[7-(2-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例311, 11 mg, 18.9 umol, 9.6%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

SFC條件：“OD-3S_3_40_3ML管柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 40% 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.34 (br s, 1H), 7.84 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 4.4, 8.8 Hz, 1H), 7.52 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.47 (t,J = 6.8 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 1H), 6.65-6.50 (m,J = 10.5 Hz, 1H), 6.40 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.43 -3.85 (m, 7H), 3.81 -3.30 (m, 3H), 3.24 - 2.95 (m, 3H), 2.94 - 2.56 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.36 - 2.20 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.93 - 1.75 (m, 3H).
實例312

2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯。向(2S ,4R )-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(10 g, 55.1 mmol, 1 eq, HCl)之乙酸乙酯(10 mL)溶液添加咪唑(7.50 g, 110 mmol, 2 eq)及TBDPSCl (16.7 g, 60.6 mmol, 15.6 mL, 1.1 eq)。在25°C下攪拌該混合物16小時。將沉澱物濾除。將濾液於減壓環境下濃縮，且將殘餘物溶解於乙酸乙酯(200 mL)及水(100 mL)內。有機相係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯10/1至1/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯(2.9 g, 7.41 mmol, 13%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 384。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.64 (dt,J = 1.2, 7.2 Hz, 4H), 7.47 - 7.35 (m, 6H), 4.40 (td,J = 2.4, 4.8 Hz, 1H), 4.07 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.03 - 2.96 (m, 1H), 2.96 - 2.89 (m, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 1H), 1.84 - 1.77 (m, 1H), 1.07 (s, 9H).

步驟B：(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯。向(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯(2.7 g, 7.04 mmol, 1 eq)及甲醛(37%水溶液, 2.86 g, 35.2 mmol, 2.62 mL, 5 eq)之MeOH (20 mL)溶液添加CH₃ COOH (423 mg, 7.04 mmol, 403 uL, 1 eq)及NaBH₃ CN (1.77 g, 28.2 mmol, 4 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。用乙酸乙酯(200 mL)稀釋，且以水(2 × 100 mL)及鹽水(1 × 100 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯20/1至3/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(2.4 g, 5.71 mmol, 81%產率, 94.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 398。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.63 (ddd,J = 1.2, 4.0, 7.6 Hz, 4H), 7.46 - 7.32 (m, 6H), 4.47 - 4.39 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.32 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 3.24 (dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.43 - 2.40 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.23 - 2.00 (m, 2H), 1.07 (s, 9H).

步驟C：[(2S , 4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在0°C下向(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(2.20 g, 5.53 mmol, 1.00 eq)之THF (40 mL)溶液添加LiAlH₄ (840 mg, 22.1 mmol, 4.00 eq)。在0°C下攪拌該混合物1小時。以水(1.00 mL)、氫氧化鈉(15.0 %, 2.00 mL)及水(3.00 mL)使該混合物淬滅。將沉澱物濾除且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化，以得到呈無色油狀物之[(2S , 4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.70 g, 4.55 mmol, 82%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 370。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 - 7.61 (m, 4H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 4.35 - 4.26 (m, 1H), 3.62 (dd,J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.34 (dd,J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 3.14 (dd,J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.43 (dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.92 - 1.84 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).

步驟D：4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.30 g, 531 umol, 1.00 eq)及[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(295 mg, 797 umol, 1.50 eq)之THF (5 mL)溶液添加t -BuONa (102 mg, 1.06 mmol, 2.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，以HCl溶液(1.00 M, 0.40 mL)調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/3)純化，以得到呈白色固體之4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.22 g, 238 umol, 45%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 870。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.61 (m, 4H), 7.57 (br t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.34 (m, 7H), 7.33 - 7.28 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 2H), 4.09 -3.95 (m, 4H), 3.87 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.28 -3.15 (m, 4H), 3.10 (ddd,J = 3.6, 7.2, 12.0 Hz, 2H), 3.02 - 2.93 (m, 1H), 2.88 - 2.67 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.45 - 2.34 (m, 2H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 1H), 1.52 (s, 9H), 1.06 (s, 9H).

步驟E：2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(150 uL)中之4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.08 g, 91.9 umol, 1.00 eq)及TFA (157 mg, 1.38 mmol, 102 uL, 15.0 eq)混合物在10°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(81.3 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 770。

步驟F：2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.08 g，粗製，TFA)及Et₃ N (91.6 mg, 905 umol, 125.96 uL)之二氯甲烷(2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(11.4 mg, 90.5 umol)。在20°C下攪拌0.5小時之後，以水(0.20 mL)使該反應物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.06 g, 65.5 umol, 兩個步驟72%產率)。LCMS [ESI, M/2+1]: 412。

步驟G：2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (0.50 mL)中之2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.05 g, 60.7 umol, 1.00 eq)及TBAF (1.00 M, 607 uL, 10.0 eq)混合物在20°C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇 = 3/1)及逆相急驟層析法[水(FA, 0.10 %)/乙腈]來純化，接著進一步藉由prep-HPLC 管柱：Boston pH-lex 150*25 10um; 移動相：[水(0.10%, TFA)- ACN]; B%: 31%-61%,10 分鐘及管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 42% - 72%, 12 分鐘純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例312, 3.70 mg, 6.30 umol, 10%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 586。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.69 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.57 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 6.39 (dd,J = 1.6, 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.06 (br s, 1H), 4.49 - 4.42 (m, 1H), 4.37 (ddd,J = 3.2, 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.25 - 4.17 (m, 1H), 4.15 - 4.06 (m, 3H), 3.97 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 3.60 (br s, 1H), 3.43 (dd,J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.33 (br s, 1H), 3.23 -3.16 (m, 1H), 3.15 -3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.89 (m, 3H), 2.88 - 2.66 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.33 (dd,J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 2.13 - 1.93 (m, 2H).
實例313

2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷。在0°C下向4-溴-5-(三氟甲基)-1H -吲唑(1 g, 3.77 mmol, 1eq )之DMF (45 mL)溶液添加NaH (181 mg, 4.53 mmol, 60.0%純度, 1.2eq )。在0°C下攪拌1小時之後，逐滴添加SEM-Cl (818 mg, 4.91 mmol, 868 uL, 1.3eq )之DMF (15 mL)溶液。將該混合物升溫至20°C且攪拌1小時。以飽和氯化銨水溶液(50 mL)使該反應物淬滅，以水(100 mL)稀釋且接著用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至100:1)純化，以得到呈無色油狀物之2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(430 mg, 1.03 mmol, 27.4%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.18 (s, 1H), 7.74 - 7.66 (m, 1H), 7.63 - 7.56 (m, 1H), 5.76 (s, 2H), 3.59 -3.49 (m, 2H), 0.93 - 0.86 (m, 2H), -0.01 - -0.08 (m, 9H).

步驟B：4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.59 g, 8.36 mmol, 1eq )、2-哌嗪-2-基乙腈(中間物62, 1.99 g, 10.0 mmol, 1.2eq , 2HCl)之DMF (30 mL)溶液添加DIEA (2.16 g, 16.7 mmol, 2.91 mL, 2eq )，接著將該混合物加熱至80°C且在80°C下攪拌2小時。將水(80 mL)添加至該混合物。用EtOAc (20 mL)稀釋所得混合物，且用EtOAc (5 × 60 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(80 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1 % FA) = 40 %)純化，以得到呈褐色固體之4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.37 g, 5.27 mmol, 63.1%產率, 90.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 405。

步驟C：4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向4-[3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.37 g, 5.86 mmol, 1eq )、NaHCO₃ (1.48 g, 17.6 mmol, 684 uL, 3eq )之EtOAc (30 mL)及水(15 mL)溶液逐滴添加CbzCl (2.00 g, 11.7 mmol, 1.67 mL, 2eq )，接著在25°C下攪拌該混合物13小時。將該混合物以EtOAc (15 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 15 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(15 mL) 洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc=20:1~0:1)純化，以得到呈黃色固體之4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.91 g, 5.13 mmol, 87.6%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 539。

步驟D：4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。在0°C下向4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.91 g, 5.40 mmol, 1eq )之EtOAc (60 mL)及ACN (20 mL)溶液添加m-CPBA (1.10 g, 5.40 mmol, 85.0%純度, 1eq )，接著在0°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下以飽和Na₂ S₂ O₃ (30 mL)使該反應混合物淬滅，接著用EtOAc (50 mL)萃取。有機層係以經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% NH₃ •H₂ O) = 62 %)純化，以得到呈白色固體之4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.65 g, 4.73 mmol, 87.6%產率, 99.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 555。

步驟E：4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。在0°C下向4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.2 g, 3.97 mmol, 1eq )、[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(914 mg, 7.93 mmol, 2eq )之甲苯(44 mL)溶液添加t-BuONa (572 mg, 5.95 mmol, 1.5eq )，接著在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將水(15 mL)添加至該混合物。將所得混合物以EtOAc (10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 45 %)純化，以得到呈白色固體之4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.64 g, 2.52 mmol, 63.5%產率, 93.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 605。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.44 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.71 - 4.54 (m, 2H), 4.35 (br d,J =19.2 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.11 -3.92 (m, 2H), 3.79 (br d,J =12.4 Hz, 2H), 3.28 (br d,J =12.8 Hz, 3H), 2.98 (dt,J =3.2, 12.4 Hz, 1H), 2.87 - 2.44 (m, 8H), 2.36 (s, 3H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.87 (br s, 2H), 1.49 (s, 9H).

步驟F：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.64 g, 2.71 mmol, 1eq )之二噁烷(30 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 30 mL, 44.32eq )，且在25°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 35.5 %)純化，以得到呈白色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.95 g, 1.78 mmol, 65.9%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 506。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.32 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.25 - 4.07 (m, 3H), 4.01 -3.91 (m, 3H), 3.83 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 3.38 -3.18 (m, 2H), 3.16 -3.07 (m, 1H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.81 (br s, 1H), 2.75 - 2.65 (m, 3H), 2.60 (br d,J =5.6 Hz, 3H), 2.55 - 2.45 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.14 - 1.97 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 2H).

步驟G：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(510 mg, 1.01 mmol, 1eq )、2-[[4-溴-5-(三氟甲基)吲唑-1-基]甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(399 mg, 1.01 mmol, 1eq )、RuPhos (188 mg, 403 umol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (986 mg, 3.03 mmol, 3eq )之甲苯(10 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (185 mg, 202 umol, 0.2eq )，使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。將該混合物升溫至90°C且在90°C下攪拌14小時。將反應混合物過濾，將濾餅用EtOAc (2 × 15 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 55 %)純化，以得到呈褐色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(365 mg, 423 umol, 41.9%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 820。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.15 (s, 1H), 7.70 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.52 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 5.76 (s, 2H), 5.24 - 5.16 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.42 - 4.27 (m, 2H), 4.21 (br d,J =6.8 Hz, 2H), 4.06 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 3.90 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.61 -3.54 (m, 2H), 3.50 -3.38 (m, 2H), 3.31 (br d,J =11.6 Hz, 2H), 3.10 - 2.99 (m, 1H), 2.86 (br s, 2H), 2.81 - 2.66 (m, 4H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.56 - 2.44 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 2.04 - 1.96 (m, 1H), 1.69 - 1.56 (m, 1H), 0.95 - 0.87 (m, 2H), -0.03 - -0.10 (m, 9H).

步驟H：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將NH₃ 鼓泡至MeOH (6 mL)內持續5分鐘。於N₂ 下向該溶液添加2-(氰基甲基)-4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(310 mg, 378 umol, 1eq )、Pd/C (150 mg, 10.0%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在28°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該混合物過濾，將濾液真空濃縮。殘餘物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(165 mg, 240 umol, 63.6%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 686。

步驟I：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(190 mg, 277 umol, 1eq )、DIEA (107 mg, 831 umol, 145 uL, 3eq )之DCM (4 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(41.9 mg, 332 umol, 1.2eq )，接著在28°C下攪拌該混合物1小時。以水(1 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 4 mL萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(230 mg, 233 umol, 84.2%產率, 75.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 740。

步驟J：2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(220 mg, 297 umol, 1eq )之DCM (1 mL)溶液添加TFA (1.70 g, 14.9 mmol, 1.10 mL, 50eq )，在28°C下攪拌該混合物1小時。用NaHCO₃ (12 mL)使該反應混合物鹼化至pH=8。用DCM: MeOH (10:1) (3 × 15 mL)萃取所得混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(EtOAc: MeOH=100:1~10:1)純化，接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 44%-74%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之2-[4-[2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-7-[5-(三氟甲基)-1H -吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例313, 1.23 mg, 2.01 umol, 6.74e-1%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 610。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 8.38 (s, 1H), 7.70 (d,J =8.8 Hz, 1H), 7.57 (d,J =8.8 Hz, 1H), 6.84 (br s, 1H), 6.31 (br d,J =16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 5.13 (br s, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.37 - 4.20 (m, 5H), 4.14 (br d,J =11.6 Hz, 1H), 3.64 (br s, 1H), 3.50 (br d,J =4.8 Hz, 2H), 3.41 -3.34 (m, 1H), 3.29 -3.16 (m, 2H), 3.03 (br d,J =6.4 Hz, 1H), 2.94 (br s, 2H), 2.88 - 2.80 (m, 1H), 2.80 - 2.72 (m, 1H), 2.69 (br t,J =6.8 Hz, 2H), 2.58 - 2.51 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.17 - 2.06 (m, 1H), 1.75 - 1.64 (m, 1H).
實例314

2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 900 mg, 1.78 mmol, 1.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (245 mg, 267 umol, 0.15eq )、RuPhos (166 mg, 356 umol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (1.16 g, 3.56 mmol, 2.0eq )之甲苯(10.0 mL)溶液添加三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯(中間物30, 1.09 g, 3.56 mmol, 2.0eq )。在100°C下攪拌該混合物5小時。在完成之後，向該混合物添加水(20.0 mL)且用EA (20 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE : EA = 10:1 - EA : MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.0 g, 1.42 mmol, 79%產率, 93.8%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.08 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.32 (m, 7H), 6.91 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.80 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.27 - 5.15 (m, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.51 - 4.33 (m, 1H), 4.30 - 4.03 (m, 5H), 3.94 -3.87 (m, 3H), 3.53 -3.40 (m, 1H), 3.32 (br d,J = 12.4 Hz, 3H), 3.16 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 3.06 (dt,J = 3.6, 12.6 Hz, 1H), 2.97 - 2.72 (m, 6H), 2.52 (s, 3H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.74 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (50.0 mL)內持續30分鐘。於N₂ 環境下將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.0 g, 1.51 mmol, 1.0 eq)及Pd/C (1.0 g, 10%純度)添加至上述液體中。使懸浮液脫氣且用H₂ 沖淨3分鐘。在20°C於H₂ (15 Psi )下攪拌該混合物2小時。在完成之後，使該混合物過濾通過矽藻土，且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(600 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 528。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(600 mg, 1.14 mmol, 1.0eq )及DIEA (882 mg, 6.82 mmol, 1.19 mL, 6.0eq )之DCM (6.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(143 mg, 1.14 mmol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (100 mg)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 52%-80%, 12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例314, 90.5 mg, 155 umol, 14.0%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.45 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.36 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 6.91 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.19 - 4.50 (m, 1H), 4.40 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.31 - 4.08 (m, 4H), 4.07 -3.85 (m, 5H), 3.79 -3.41 (m, 2H), 3.41 -3.22 (m, 2H), 3.20 -3.04 (m, 2H), 3.02 - 2.75 (m, 4H), 2.72 - 2.65 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.71 (m, 3H).
實例315

2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 0.90 g, 1.55 mmol, 1.00 eq)及[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(687 mg, 1.86 mmol, 1.20 eq)之THF (20.0 mL)溶液添加t -BuONa (298 mg, 3.10 mmol, 2.00 eq)。在25°C下攪拌1小時之後，該混合物係用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋，以水(30.0 mL)及鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.90 g, 873 umol, 56%產率)。LCMS [ESI, M/2+1]: 443。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.71 - 7.57 (m, 5H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 12H), 7.14 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.43 - 4.36 (m, 1H), 4.33 (br dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.16 - 4.03 (m, 3H), 3.93 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.47 (br s, 1H), 3.30 (br d,J = 10.4 Hz, 3H), 3.17 (br dd,J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.11 - 2.96 (m, 3H), 2.84 (br s, 2H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.48 - 2.37 (m, 4H), 2.11 (ddd,J = 4.8, 8.4, 12.8 Hz, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(50 mL)內持續0.5小時。向該混合物添加(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.90 g, 1.02 mmol, 1.00 eq)及Pd/C (0.10 g, 10.0%純度)。在20°C於15 psi的H₂ 下攪拌1小時之後，將該混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(763 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 752。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.76 g，粗製)及Et₃ N (511 mg, 5.05 mmol, 703 uL)之二氯甲烷(5.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(127 mg, 1.01 mmol)。在20°C下攪拌1小時之後，以飽和碳酸氫鈉(0.20 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.50 g, 552 umol, 兩個步驟55%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 806。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.25 - 8.17 (m, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.68 - 7.58 (m, 5H), 7.50 (td,J = 2.4, 5.2 Hz, 2H), 7.46 - 7.35 (m, 7H), 7.14 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.67 - 6.51 (m, 1H), 6.46 - 6.31 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 2H), 4.27 (br s, 2H), 4.16 - 4.00 (m, 4H), 3.67 -3.55 (m, 1H), 3.46 (br s, 1H), 3.31 (br dd,J = 8.4, 14.4 Hz, 2H), 3.17 (br dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 3.11 - 2.73 (m, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.42 (br dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.11 (tt,J = 4.0, 8.4 Hz, 1H), 1.96 - 1.84 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (10.0 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.40 g, 496 umol, 1.00 eq)、KF (57.7 mg, 992 umol, 23.3 uL, 2.00 eq)及18-冠醚-6 (262 mg, 992 umol, 2.00 eq)混合物在30°C下攪拌24小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]純化。以飽和碳酸氫鈉(2.00 mL)調整所要分餾物至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 37 % - 67 %,12 分鐘)純化。將所要分餾物濃縮且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例315, 51.5 mg, 90.7 umol, 18%產率, 96.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 568。

SFC："AS-3S_3_5_40_3ML管柱: Chiralpak AS -3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05 %, DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.47 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 3H), 4.15 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 4.02 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.61 (br s, 1H), 3.53 -3.41 (m, 2H), 3.34 (br s, 2H), 3.12 (br s, 1H), 3.05 - 2.89 (m, 3H), 2.88 - 2.66 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.34 (dd,J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 2.16 - 1.94 (m, 2H).
實例316

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2 -[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 1.0 g, 1.98 mmol, 1.0eq )及1-溴-4-氟-萘(2.23 g, 9.89 mmol, 5.0eq )之甲苯(20.0 mL)溶液添加Cs₂ CO₃ (1.93 g, 5.93 mmol, 3.0eq )、XPhos-Pd-G3 (335 mg, 396 umol, 0.2eq )，且將該反應混合物在70°C於N₂ 下攪拌24小時。在完成之後，向該反應物添加水(20.0 mL)，用EA (2 × 20.0 mL)萃取，有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20:1)純化，以得到呈白色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2 -[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(680 mg, 957 umol, 48%產率, 91.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1 -甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(650 mg, 1.0 mmol, 1.0eq )之MeOH (15 mL)添加NH₃ •MeOH (1.0 mmol, 15.0 mL, 1.0eq )及Pd/C (500 mg, 10%純度)，使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 Psi)下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，使反應物過濾通過矽藻土，且將濾液濃縮，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1 -甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(460 mg, 824 umol, 82%產率, 92.4%純度)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (10 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(460 mg, 892 umol, 1.0eq )混合物添加DIEA (461 mg, 3.57 mmol, 622 uL, 4.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(113 mg, 892 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC ((Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 53% - 83%, 12 分鐘)純化，將所得產物濃縮且接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例316, 100 mg, 175 umol, 20%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.28 - 8.22 (m, 1H), 8.17 - 8.10 (m, 1H), 7.63 - 7.55 (m, 2H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 6.70 - 6.55 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 - 4.48 (m, 1H), 4.41 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.10 (m, 4H), 4.09 -3.92 (m, 2H), 3.78 -3.20 (m, 4H), 3.19 -3.07 (m, 2H), 3.05 - 2.64 (m, 5H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.73 (m, 3H).
實例317

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲苯(20.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 880 mg, 1.87 mmol, 1.0eq )及(4-溴-2-萘基)2,2-二甲基丙酸酯(中間物54, 745 mg, 2.43 mmol, 1.3eq )混合物添加Cs₂ CO₃ (1.22 g, 3.73 mmol, 2.0eq )、RuPhos (174 mg, 373 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (171 mg, 187 umol, 0.1eq )，且在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。在完成之後，添加水(30 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 × 20 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20/1)純化，以得到呈褐色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(750 mg, 774 umol, 41%產率, 72.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 698。

步驟B：[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(750 mg, 774 umol, 1.0eq )之DCM (5.0 mL)溶液添加TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.0 mL, 87.3eq )，且在20°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將反應物濃縮，以得到呈褐色油狀物之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(550 mg，粗製，TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 598。

步驟C：[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯：在0°C下向於DCM (5 mL)中之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基] 2,2-二甲基丙酸酯(550 mg, 773 umol, 1.0eq , TFA)混合物添加TEA (469 mg, 4.64 mmol, 645 uL, 6.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(97.5 mg, 773 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=10/1)純化，以得到呈黃色固體之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(270 mg, 323 umol, 42%產率, 78.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 652。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向於THF (2.0 mL)中之[4-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]-2-萘基]2,2-二甲基丙酸酯(270 mg, 323 umol, 1.0eq )混合物添加NaOH (38.8 mg, 969 umol, 3.0eq )之H₂ O (2.0 mL)，在20°C下攪拌該反應混合物4小時。在完成之後，添加水(10 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 ×10 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl 150_30_5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35% - 62%, 3分鐘)純化，將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈粉紅色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例317, 26.6 mg, 46.3 umol, 14%產率, 98.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 568。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.01 - 7.93 (m, 1H), 7.64 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (br t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.33 - 7.29 (m, 2H), 6.88 (s, 1H), 6.66 - 6.50 (m, 2H), 6.39 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.89 (br s, 1H), 4.64 - 4.49 (m, 1H), 4.32 - 4.21 (m, 1H), 4.11 (br s, 2H), 4.00 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 3.94 -3.71 (m, 2H), 3.47 -3.08 (m, 4H), 2.93 - 2.61 (m, 10H), 2.47 - 2.33 (m, 1H), 2.25 - 2.06 (m, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 3H).
實例318

2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(中間物64, 500 mg, 901 umol, 1.00eq )及[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(208 mg, 1.80 mmol, 2.00eq )之甲苯(10.0 mL)溶液添加t -BuONa (173 mg, 1.80 mmol, 2.00eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成時，以水(5 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1 % FA)/乙腈]純化。用飽和碳酸氫鈉溶液調整pH至7，且用乙酸乙酯(2 × 30 mL)萃取該混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(340 mg, 505 umol, 56%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.45 - 7.32 (m, 5H), 5.28 - 5.12 (m, 2H), 4.70 - 4.55 (m, 2H), 4.42 - 4.29 (m, 2H), 4.15 -3.93 (m, 3H), 3.90 -3.75 (m, 2H), 3.43 -3.16 (m, 3H), 3.09 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.54 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.05 - 1.96 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.49 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(340 mg, 561 umol, 1.00eq )之二噁烷(4.00 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 4.00 mL)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。用飽和碳酸氫鈉水溶液調整pH至8，且用混合溶劑(DCM/i-PrOH 2/1, 2 × 9 mL)萃取該混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(255 mg, 444 umol, 79%產率, 88.0%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 506。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(2.00 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(210 mg, 366 umol, 1.00eq )、1-溴-4-氟-萘(247 mg, 1.10 mmol, 3.00eq )、RuPhos (68.2 mg, 146 umol, 0.40eq )、t -BuONa (87.8 mg, 914 umol, 2.50eq )及Pd₂ (dba)₃ (66.9 mg, 73.1 umol, 0.20eq )混合物脫氣且於N₂ 下加熱至90°C持續15小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以水(3 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。以飽和碳酸氫鈉溶液中和該混合物，真空濃縮以移除MeCN，且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(120 mg, 175 umol, 48%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.23 (dd,J = 2.0, 4.4 Hz, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.60 - 7.52 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 5H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 5.28 - 5.16 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 4H), 4.07 (br s, 1H), 3.95 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.54 -3.15 (m, 4H), 3.14 -3.03 (m, 2H), 3.00 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 1.97 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 3H).

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (5.00 mL)內持續3分鐘。於N₂ 下向該溶液添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(120 mg, 185 umol, 1.00eq )之MeOH (5.00 mL)溶液及Pd/C (60.0 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該反應物1小時。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg, 147 umol, 79%產率, 94.6%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg, 155 umol, 1.00eq )及TEA (78.5 mg, 776 umol, 108 uL, 5.00eq )之DCM (2.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(19.6 mg, 155 umol, 1.00eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用MeOH (0.5 mL)使該反應物淬滅，以水(2 mL)稀釋，且用EtOAc (2 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1)及prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 52% - 82%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例318, 21.0 mg, 36.7 umol, 24%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

SFC條件：OD-3S_3_40_3ML管柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3um移動相: 40%甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220 nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.33 - 8.22 (m, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.36 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.87 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.10 (m, 4H), 4.09 -3.78 (m, 2H), 3.77 -3.23 (m, 2H), 3.22 - 2.53 (m, 8H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
實例319

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(1.31 g, 11.4 mmol, 3eq )之THF (10 mL)溶液添加NaH (304 mg, 7.59 mmol, 60%純度於礦物油中, 2eq )，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(2 g, 3.79 mmol, 1eq )添加至該混合物內，且在80°C下攪拌該混合物3小時。以冰水(20 mL)使該反應混合物淬滅且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色油狀物之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(1 g, 1.60 mmol, 42%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 606。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.75 - 4.64 (m, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.44 (d,J = 18.8 Hz, 1H), 4.35 (br s, 1H), 4.21 - 4.11 (m, 1H), 4.07 -3.64 (m, 4H), 3.43 (br s, 1H), 3.30-3.15 (m, 2H), 3.10 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 2.83 - 2.55 (m, 5H), 2.53 - 2.42 (m, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.88 - 1.74 (m, 3H), 1.51 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (100 mL)內持續30分鐘。於N₂ 下向在上述混合物中之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(900 mg, 1.49 mmol, 1eq )溶液添加無水Pd/C (500 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(650 mg, 1.24 mmol, 84%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 472。

步驟C：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯(1.32 g, 5.09 mmol, 4eq )、(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.27 mmol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5eq )、Pd₂ (dba)₃ (233 mg, 254 umol, 0.2eq )及RuPhos (118 mg, 254 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 100/1至10:1)純化，且進一步藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(370 mg, 569 umol, 45%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿 -d) δ = 7.40 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 - 7.24 (m, 1H), 7.19 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.24 - 4.14 (m, 1H), 4.13 -3.98 (m, 4H), 3.95 -3.80 (m, 1H), 3.39 - 2.95 (m, 6H), 2.93 - 2.62 (m, 5H), 2.52 (br s, 3H), 2.32 (br s, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 1.85-1.71 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟D：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(370 mg, 569 umol, 1eq )之DCM (700 uL)溶液添加TFA (973 mg, 8.54 mmol, 632 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(377 mg, 567 umol, 99%產率, TFA)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 550。

步驟E：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(377 mg, 567 umol, 1 eq, TFA)之DCM (5 mL)溶液添加TEA (574 mg, 5.68 mmol, 790 uL, 10 eq)。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(57.3 mg, 454 umol, 0.8 eq)之DCM (1 mL)溶液。在25°C下攪拌1小時之後，用飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅。接著以水(20 mL)稀釋且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , EA/MeOH = 100/1至10:1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12 分鐘)純化。在凍乾後得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例319, 95 mg, 154 umol, 27%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 604。

SFC條件：“OD-3S_3_5_40_3ML管柱: Chiralcel OD -3 100 × 4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 1H), 7.19 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.71 - 6.51 (m, 1H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.25-4.52 (m, 1H), 4.38 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.04 (m, 4H), 3.96 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.74 -3.02 (m, 5H), 2.99 - 2.61 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.14 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 3H).
實例320

2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C下向於甲苯(15.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 300 mg, 517 umol, 1.0eq )、[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲醇(148 mg, 1.03 mmol, 2.0eq )混合物分批添加t -BuONa (99.3 mg, 1.03 mmol, 2.0eq )，將該反應混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，以水(10.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於水中, 0-60% MeCN)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整所得產物至pH~8，接著濃縮，用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取該水溶液，且合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈白色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(180 mg, 272 umol, 53%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 660。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(20.0 mL)內持續30分鐘。將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 197 umol, 1.0eq )及Pd/C (80.0 mg, 197 umol, 10%純度, 1.0eq )添加至上述混合物，接著使該混合物脫氣且用H₂ 沖淨數次，並接著在25°C於H₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將粗製混合物過濾通過矽藻土濾墊。以甲醇(30.0 mL)洗滌濾餅，且將濾液在高真空下乾燥。得到呈灰色固體之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(75.0 mg, 132 umol, 67%產率, 92.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 環境下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 190 umol, 1.0eq )之DCM (5.00 mL)溶液添加DIEA (73.8 mg, 571 umol, 99.4 uL, 3.0eq )且逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(36.0 mg, 285 umol, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以水(10.0 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(3 × 15.0 mL)萃取粗製混合物。合併的萃取物係以鹽水(30.0 mL)洗滌，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl 150_30_5um; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 52% - 82%, 3分鐘)純化且凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-異丙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例320, 21.3 mg, 36.1 umol, 19%產率, 98.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 580。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.24 - 8.21 (m, 1H), 7.89 - 7.87 (m, 1H), 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 2H), 7.45 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 - 6.57 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.8, 16.8 Hz, 1H), 5.86 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.16 - 4.51 (m, 1H) , 4.35 - 4.22 (m, 3H), 4.15 -3.95 (m, 4H), 3.68 -3.47 (m, 1H), 3.42 - 2.77 (m, 11H), 2.58 - 2.52 (m, 1H),1.90 - 1.75 (m, 3H), 1.17 (d,J = 6.4 Hz, 3H), 1.10 (d,J = 6.4 Hz, 3H).
實例321

1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(3S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(2 g, 6.80 mmol, 1eq )、(3S )-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 7.48 mmol, 1.1eq )、DIEA (1.76 g, 13.6 mmol, 2.37 mL, 2eq )之NMP (40 mL)溶液在100°C下攪拌7小時。添加水(80 mL)至該混合物內。以EtOAc (20 mL)稀釋所得混合物，且用EtOAc (3 × 80 mL)萃取。將合併的有機層以(40 mL)鹽水洗滌。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將該混合物過濾，且將濾餅EtOAc (3 × 5 mL)以洗滌。將濾液真空濃縮。將殘餘物用(PE: EtOAc=3:1, 20 mL)濕磨且過濾，將濾餅以(PE: EtOAc=3:1, 40 mL)洗滌。得到呈白色固體之化合物(3S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.44 g, 3.14 mmol, 46.2%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 458。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.29 - 4.20 (m, 1H), 4.16 -3.81 (m, 2H), 3.76 (br s, 1H), 3.73 (br s, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.61 (d,J = 10.4 Hz, 2H), 3.37 -3.28 (m, 1H), 3.11 (br s, 2H), 2.73 - 2.58 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.23 (d,J = 6.8 Hz, 3H).

步驟B：(3S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(830 mg, 7.21 mmol, 855 uL, 2.5eq )之THF (25 mL)溶液添加NaH (230 mg, 5.76 mmol, 60%純度, 2eq )，且在0°C下攪拌0.5小時。接著將(3S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.32 g, 2.88 mmol, 1eq ) 添加至該混合物。於N₂ 下在一管子中將該反應混合物加熱至70°C持續12小時。以水(10 mL)使該反應混合物淬滅。將所得混合物以EtOAc (20 mL)稀釋，且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 40%)純化，以得到呈褐色油狀物之(3S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.35 g, 2.39 mmol, 82.9%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 537。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 - 7.27 (m, 5H), 4.37 (br dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 4.07 -3.73 (m, 2H), 3.71 -3.64 (m, 3H), 3.63 -3.49 (m, 2H), 3.34 -3.24 (m, 1H), 3.21 - 2.92 (m, 3H), 2.79 - 2.64 (m, 2H), 2.63 - 2.56 (m, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.33 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.69 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.20 (d,J = 6.8 Hz, 3H).

步驟C：(3S )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(3S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.43 g, 2.66 mmol, 1eq )之MeOH (28 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (500 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物4小時。將反應混合物過濾，將濾餅以MeOH (3 × 20 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 40%)純化，以得到呈黃色固體之(3S )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(810 mg, 1.72 mmol, 64.7%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 447。

步驟D：(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(3S )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 1.12 mmol, 1eq )、2-溴-1-氟-3-甲氧基-苯(459 mg, 2.24 mmol, 2eq )及t -BuONa (323 mg, 3.36 mmol, 3eq )之甲苯(10 mL)溶液添加BrettPhos-Pd-G3 (304 mg, 336 umol, 0.3eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物16小時。將水(10 mL)添加至該混合物內。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(自PE: EtOAc 2:1~0:1至EtOAc: MeOH 1:0~5:1)純化，接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 32%-57%,30;80%min)純化，以得到呈褐色油狀物之(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 300 umol, 26.8%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 571。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.02 (dt,J = 6.4, 8.4 Hz, 1H), 6.75 - 6.65 (m, 2H), 4.36 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.24 - 4.17 (m, 1H), 4.12 - 4.09 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.74 -3.65 (m, 1H), 3.38 -3.27 (m, 3H), 3.24 - 2.94 (m, 3H), 2.67 (br d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.08 (br d,J =3.2 Hz, 1H), 2.04 - 1.98 (m, 1H), 1.87 - 1.69 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.25 - 1.21 (m, 3H).

步驟E：7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-4-[(2S )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。將(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 368 umol, 1eq )及TFA (839 mg, 7.36 mmol, 545 uL, 20eq )之溶液在25°C下攪拌0.5小時。將該反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-4-[(2S )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(260 mg，粗製，2TFA)。

步驟F：1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在0°C下向7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-4-[(2S )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(260 mg，粗製，2TFA)、DIEA (481 mg, 3.72 mmol, 648 uL)之DCM (5 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(46.9 mg, 372 umol)，接著在25°C下攪拌該混合物1小時。以水(1 mL)使該反應混合物淬滅。將所得混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 33 %)純化，以得到呈白色固體之1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(130 mg, 235 umol, 63.2%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 525。

步驟G：3-溴-1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-1-酮。向1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-甲氧基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(80 mg, 152 umol, 1 eq)之PhBr (2 mL)溶液添加BBr₃ (764 mg, 3.05 mmol, 294 uL, 20 eq)。在90°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮。將殘餘物以飽和NaHCO₃ (2 mL)淬滅，且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。得到呈褐色油狀物之3-溴-1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-1-酮 (90 mg，粗製)。粗產物不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟H：1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。向3-溴-1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-1-酮 (90 mg, 152 umol, 1 eq)之THF (2 mL)溶液添加TEA (154 mg, 1.52 mmol, 212 uL, 10 eq)。在20°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (DCM: MeOH= 10:1 )及接著prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 48%-78%,12分鐘)純化，以得到呈黃色固體之標題化合物1-[(3S )-4-[7-(2-氟-6-羥基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例321, 10.6 mg, 20.1 umol, 13%產率, 96.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 511。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 7.17 - 6.97 (m, 1H), 6.93 - 6.76 (m, 1H), 6.71 (d,J =8.4 Hz, 1H), 6.61 (dd,J =8.8, 11.2 Hz, 1H), 6.29 (br dd,J =4.8, 16.4 Hz, 1H), 5.82 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.27 (m, 4H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 4.03 -3.87 (m, 1H), 3.68 -3.39 (m, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.25 -3.05 (m, 2H), 2.82 (br s, 2H), 2.75 (td,J =6.8, 13.6 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.36 (q,J =9.2 Hz, 1H), 2.13 - 2.08 (m, 1H), 1.89 - 1.78 (m, 2H), 1.77 - 1.67 (m, 1H), 1.28 (br d,J =5.2 Hz, 3H).
實例322

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(4-氟萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(40.0 mL)中之2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.00 g, 4.56 mmol, 1.00eq. )、1-溴-4-氟-萘(1.54 g, 6.84 mmol, 1.50eq. )、Pd₂ (dba)₃ (418 mg, 456 umol, 0.100eq. )、RuPhos (426 mg, 912 umol, 0.20eq. )及碳酸銫(4.46 g, 13.7 mmol, 3.00eq. )混合物脫氣，接著於N₂ 環境下加熱至110°C持續3小時。在20°C下藉由添加水(20.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(30 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯=1/1至0/1)純化，以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.00 g, 3.43 mmol, 75.2%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) δ = 8.24 (dt,J =1.6, 4.8 Hz, 1H), 8.16 - 8.08 (m, 1H), 7.64 - 7.53 (m, 2H), 7.47 - 7.34 (m, 5H), 7.15 - 7.03 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.72 (br s, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 2H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.95 (br d,J =12.0 Hz, 1H), 3.51 -3.19 (m, 3H), 3.14 - 2.68 (m, 5H), 2.54 (s, 3H).

步驟B：2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在20°C於N₂ 環境下向於乙酸乙酯(33.0 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.06 g, 1.82 mmol, 1.00eq. )混合物一次添加入m-CPBA (332 mg, 1.64 mmol, 85.0%純度, 0.90eq. )。在20°C下攪拌該混合物5小時。將反應物以飽和硫代硫酸鈉(20.0 mL)淬滅，接著用乙酸乙酯(20.0 mL×3)萃取，將合併的有機相以鹽水(30.0 mL)洗滌，且濃縮以得到呈黃色固體之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.00 g, 1.67 mmol, 91.8%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [M+1]: 599.1。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C於N₂ 環境下向於甲苯(10.0 mL)中之2-(氰基甲基)-4-[7-(4-氟-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 835.16 umol, 1.00eq. )及[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇(216 mg, 1.67 mmol, 2.00eq. )混合物一次添加入第三丁醇鈉(120 mg, 1.25 mmol, 1.50eq. )。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下藉由添加水(10.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(10.0 mL)稀釋，且用乙酸乙酯EtOAc (10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物，且將其藉由Prep-HPLC (TFA條件)純化，以得到呈無色固體之2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 292 umol, 35.0%產率, 97.0%純度)。LCMS [M+1]: 664.5。

步驟D：2-[4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下將NH₃ (g)鼓泡至甲醇(2 mL)內持續5分鐘，接著添加至2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 301umol, 1.00eq. )之甲醇(2.00 mL)溶液內，接著於N₂ 環境下添加Pd/C (100 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將其過濾且濃縮，以得到呈黑色固體之2-[4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [M+1]: 530.5。

步驟E：2-[4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：於N₂ 環境下向於DCM (2.00 mL)中之2-[4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 189 umol, 1.00eq. )及DIEA (73.2 mg, 566 umol, 98.7 uL, 3.00eq. )混合物逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(47.6 mg, 378 umol, 2.00eq. )之DCM (1.00 mL)溶液。在20°C下攪拌該混合物30分鐘，將甲醇(1.00 mL)添加至該反應混合物，接著移除溶劑以得到殘餘物，且將其藉由Prep-TLC (SiO2, DCM: MeOH = 10:1，添加一滴NH₄ OH)純化以得到粗產物。接著藉由Prep-HPLC (鹼性條件)以得到呈白色固體之標題化合物2-[4-[2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(4-氟-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(14.9 mg, 25.0 umol, 13.2%產率, 97.9%純度)。LCMS [M+1]: 584.5。

¹ H NMR (400 MHz, CDCl₃ ) 　 = 8.25 (dd,J =2.4, 4.8 Hz, 1H), 8.19 - 8.08 (m, 1H), 7.63 - 7.54 (m, 2H), 7.15 - 7.03 (m, 2H), 6.61 (br s, 1H), 6.47 - 6.38 (m, 1H), 5.86 (br d,J =10.2 Hz, 1H), 5.12 (br s, 1H), 4.38 (dd,J =4.4, 10.6 Hz, 1H), 4.24 (br s, 2H), 4.20 - 4.10 (m, 2H), 4.04 (br d,J =12.0 Hz, 2H), 3.76 - 2.67 (m, 12H), 2.52 - 2.37 (m, 1H), 2.32 - 2.21 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.16 (t,J =7.2 Hz, 3H).
實例323

2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基] -1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：甲基(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯。在15 °C下向(2R ,4S )-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(3 g, 20.7 mmol, 1eq , HCl)及甲醛(8.39 g, 103 mmol, 7.69 mL, 37%純度, 5eq )之MeOH (30 mL)溶液添加AcOH (1.24 g, 20.7 mmol, 1.18 mL, 1eq )。在攪拌30分鐘之後，添加NaBH₃ CN (3.25 g, 51.7 mmol, 2.5 eq)。攪拌該混合物16小時。向該混合物添加飽和碳酸鈉水溶液(50 mL)，接著用二氯甲烷/甲醇10/1 (3 × 50 mL)萃取。將合併的有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(2 g, 12.6 mmol, 61%產率)。

步驟B：(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯。向(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(1.70 g, 10.7 mmol, 1.00eq )之DMF (10.0 mL)溶液添加咪唑(1.67 g, 24.6 mmol, 2.30eq )及第三丁基二苯基氯矽烷(3.52 g, 12.8 mmol, 3.29 mL, 1.20eq )。在20°C下攪拌該混合物10小時。該混合物係用乙酸乙酯(20.0 mL)稀釋，以鹽水(3 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/10)純化，以得到呈無色油狀物之(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(3.00 g, 7.24 mmol, 68%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 398。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.63 (ddd,J = 1.6, 3.6, 7.6 Hz, 4H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 4.47 - 4.40 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.32 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 3.25 (dd,J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 2.42 (br d,J = 5.2 Hz, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.18 - 2.01 (m, 2H), 1.07 (s, 9H).

步驟C：[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在-40°C下向(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(1.50 g, 3.77 mmol, 1.00eq )之THF (10.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (573 mg, 15.1 mmol, 4.00eq )。在-40°C下攪拌1小時之後，將該混合物以水(0.50 mL)、NaOH溶液(15.0 %, 1.00 mL)、水(1.50 mL)淬滅。將形成的沉澱物濾除，且將濾餅用乙酸乙酯(40.0 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯1/10)純化，以得到呈黃色油狀物之[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.20 g, 3.18 mmol, 84%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 370。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.67 - 7.62 (m, 4H), 7.46 - 7.36 (m, 6H), 4.37 - 4.24 (m, 1H), 3.63 (dd,J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.35 (dd,J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 3.15 (dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.76 (br t,J = 8.0 Hz, 1H), 2.44 (dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.04 - 1.85 (m, 2H), 1.06 (s, 9H).

步驟D：(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(305 mg, 827 umol, 1.20eq )之THF (5.00 mL)溶液添加t -BuONa (132 mg, 1.38 mmol, 2.00eq )，隨後添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 0.40 g, 689 umol, 1.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，該混合物係用乙酸乙酯(30.0 mL)稀釋，以鹽水(1 × 20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/3)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.35 g, 328 umol, 48%產率)。LCMS [ESI, M/2+1]: 444。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.69 - 7.59 (m, 5H), 7.52 - 7.48 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 12H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.42 - 4.36 (m, 1H), 4.32 (br dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (br d,J = 6.8 Hz, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 3.98 -3.88 (m, 1H), 3.47 (br s, 1H), 3.29 (br d,J = 10.8 Hz, 3H), 3.16 (br dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 1H), 3.11 - 2.95 (m, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 3H), 2.47 - 2.36 (m, 4H), 2.11 (ddd,J = 4.8, 8.4, 13.2 Hz, 1H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.06 (s, 9H).

步驟E：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(40.0 mL)內持續0.5小時。將(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.32 g, 361 umol, 1.00 eq)及Pd/C (0.10 g, 10.0%純度)添加至該混合物。在25°C於15 psi的H₂ 下攪拌1小時之後，將該混合物過濾，且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.27 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M/2+1]: 377。

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.27 g，粗製)及TEA (182 mg, 1.80 mmol, 250 uL)之二氯甲烷(2.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(45.3 mg, 359 umol)。在25°C下攪拌0.5小時之後，將該混合物用甲醇(0.10 mL)淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/3)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.16 g, 171 umol, 兩個步驟48%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 806。

步驟G：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (2.00 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.16 g, 198 umol, 1.00 eq)、KF (46.1 mg, 794 umol, 18.6 uL, 4.00 eq)及18-冠醚-6 (18-crown-6) (210 mg, 794 umol, 4.00 eq)混合物在40°C下攪拌12小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(2.00 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (Phenomenex Gemini 150 * 25mm * 10um; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38%-66%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4S )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例323, 36.3 mg, 63.9 umol, 32%產率, 98.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 568。

SFC："OJ-3S_3_5_40_3ML 管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.25 - 8.18 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.62 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.46 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 9.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.53 (m, 1H), 4.47 (quin,J = 5.6 Hz, 1H), 4.41 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.19 (m, 3H), 4.14 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 4.02 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.63 (br s, 1H), 3.46 (br dd,J = 6.0, 9.6 Hz, 2H), 3.36 (br s, 2H), 3.12 (br s, 1H), 3.07 - 2.90 (m, 3H), 2.90 - 2.67 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (dd,J = 5.2, 9.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.04 - 1.96 (m, 1H).
實例324

2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(30 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 300 mg, 593 umol, 1.00eq )、1-溴-3-甲氧基-2-甲基-苯(239 mg, 1.19 mmol, 2eq )、Cs₂ CO₃ (580 mg, 1.78 mmol, 3eq )、Pd₂ (dba)₃ (109 mg, 119 umol, 0.2eq )及RuPhos (83.1 mg, 178 umol, 0.3eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。向該反應混合物添加H₂ O (1 × 200 mL)及以乙酸乙酯(1 × 250 mL)。分離出有機相，以鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和至pH = 7，且用乙酸乙酯(100mL)萃取。萃取物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(170 mg, 270 umol, 45%產率, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 626。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.33 (m, 5H), 7.16 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 6.72 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.80 (br dd,J = 6.8, 11.6 Hz, 1H), 4.68 (br s, 1H), 4.45 (br dd,J = 4.4, 12.0 Hz, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 3H), 4.05 (s, 2H), 3.94 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.67 -3.56 (m, 1H), 3.32 (br d,J = 11.2 Hz, 3H), 3.24 -3.01 (m, 3H), 2.95 - 2.67 (m, 8H), 2.32 - 2.10 (m, 5H), 2.00 (br s, 1H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：將於MeOH (50 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 416 umol, 1.00eq )、Pd/C (130 mg, 10%純度)及NH₃ 混合物脫氣且用H₂ 沖淨3次，接著在25°C於壓力15 psi的H₂ 下攪拌該混合物1小時。在攪拌之後，濾除催化劑且將濾液真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 376 umol, 91%產率, 92.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 492。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (10 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 407 umol, 1.00 eq)及TEA (206 mg, 2.03 mmol, 283 uL, 5.00 eq)混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(41.0 mg, 325 umol, 0.800 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下用飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 25 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至3/1)純化。殘餘物係進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 48% - 78%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例324, 35.2 mg, 63.6 umol, 16%產率, 98.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 546。

SFC條件："OD-3S_3_40_3ML管柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 40%甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.17 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 6.73 (d,J = 8.0, 1H) 6.68 (d,J = 8.4, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.20 - 4.09 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 4.02 -3.92 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.59 (br s, 1H), 3.31 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.22 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.17 -3.02 (m, 3H), 3.02 - 2.62 (m, 6H), 2.49 (s, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.70 (m, 2H).
實例325

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(7-氯萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氰基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(30 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 320 mg, 633 umol, 1 eq)及2-溴苯甲腈(230 mg, 1.27 mmol, 2 eq)混合物一次添加入Cs₂ CO₃ (619 mg, 1.90 mmol, 3 eq)、RuPhos (59.1 mg, 127 umol, 0.2 eq)、Pd₂ (dba)₃ (58.0 mg, 63.3 umol, 0.1 eq)。將該混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著加熱至90°C且攪拌5小時。以水(10 mL)稀釋使該反應混合物，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(30 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)中和，且用乙酸乙酯(100 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氰基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(139 mg, 210 umol, 33%產率, 91.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 607。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.62 (dd,J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 7.09 - 7.00 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.38 (br dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.19 - 4.01 (m, 3H), 3.92 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.78 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.44 -3.21 (m, 3H), 3.15 - 2.95 (m, 3H), 2.85 - 2.61 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).

步驟B：2-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯甲腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2-氰基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(160 mg, 264 umol, 1 eq)之MeOH (12 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (20 mL)及Pd/C (20 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物係不經純化即直接用於下個步驟中。得到呈綠色固體之化合物2-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯甲腈 (119 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 473。

步驟C：2-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯甲腈：在0°C於N₂ 環境下向在DCM (5 mL)中之2-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯甲腈 (119 mg，粗製)及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(31.8 mg, 252 umol)混合物分批添加入TEA (127 mg, 1.26 mmol, 175 uL)。將該混合物加熱至25°C且攪拌0.5小時。在0°C下藉由添加飽和NaHCO₃ (5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用DCM (10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(15 mL × 1)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 43% - 73%, 12 分鐘)純化。得到呈無色油狀物之標題化合物2-[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-丙-2-烯醯基-哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-基]苯甲腈 (實例325, 35.1 mg, 65.1 umol, 兩個步驟25%產率, 97.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.62 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.34 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.38 (dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 3.99 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.86 -3.52 (m, 2H), 3.39 (br s, 2H), 3.18 - 2.99 (m, 3H), 2.97 - 2.59 (m, 5H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 2.17 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.79 (m, 2H).
實例326

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(7-甲基萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯。在0°C下向7-甲基萘滿-1-酮 (2.5 g, 15.6 mmol, 1.0eq )之DCM (40 mL)溶液分批添加DIEA (6.05 g, 46.8 mmol, 8.15 mL, 3.0eq )及Tf₂ O (6.60 g, 23.4 mmol, 3.86 mL, 1.5eq )，且在0°C至20°C於N₂ 下攪拌該反應混合物3小時。在完成之後，緩慢添加冰水(40 mL)至該反應物，分離出有機層，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=1:0)純化，以得到呈黃色油狀物之三氟甲烷磺酸(7-甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯(4.0 g, 13.7 mmol, 88%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.18 (s, 1H), 7.12 - 7.06 (m, 2H), 6.02 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 2.85 (t,J = 8.2 Hz, 2H), 2.54 - 2.45 (m, 2H), 2.37 (s, 3H).

步驟B：三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯。向三氟甲烷磺酸(7-甲基-3,4-二氫萘-1-基)酯(4.0 g, 13.7 mmol, 1.0eq )之二噁烷(80.0 mL)溶液添加DDQ (6.21 g, 27.4 mmol, 2.0eq )，且在105 °C 下攪拌該反應混合物12小時。在完成之後，將反應物濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=1:0)純化。得到呈黃色油狀物之產物三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯(3.4 g, 11.7 mmol, 86%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.89 - 7.81 (m, 3H), 7.49 - 7.40 (m, 3H), 2.60 (s, 3H).

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(20.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 1.20 g, 2.37 mmol, 1.0eq )及三氟甲烷磺酸(7-甲基-1-萘基)酯(1.03 g, 3.56 mmol, 1.50eq )混合物添加Cs₂ CO₃ (1.55 g, 4.75 mmol, 2.0eq )及Xphos-Pd-G3 (301 mg, 356 umol, 0.15eq )，在70°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。在完成之後，添加水(20.0 mL)至該反應混合物，接著用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20:1)純化。得到呈褐色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(820 mg, 1.22 mmol, 51%產率, 95.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(790 mg, 1.22 mmol, 1.0eq )之MeOH (15.0 mL)溶液添加NH_3• MeOH (1.22 mmol, 15.0 mL, 1.0eq )及Pd/C (500 mg, 10%純度)，使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物過濾通過矽藻土濾墊，且以DCM (2 × 20 mL)洗滌濾餅，將濾液濃縮。得到呈白色固體之產物2-[(2S )-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(490 mg, 934 umol, 76%產率, 97.5%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (8.0 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(490 mg, 958 umol, 1.0eq )混合物添加DIEA (495 mg, 3.83 mmol, 667 uL, 4.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(121 mg, 958 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，將所得粗產物濃縮並藉由prep-HPLC ((管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 57%-87%, 12分鐘)再純化，且將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(7-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例326, 133 mg, 235 umol, 25%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.00 (s, 1H), 7.78 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 7.13 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.69 - 6.49 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.20 - 4.52 (m, 1H), 4.42 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 4.06 -3.95 (m, 2H), 3.76 -3.22 (m, 4H), 3.21 -3.07 (m, 2H), 3.04 - 2.63 (m, 5H), 2.56 (s, 3H), 2.51 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.14 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.75 (m, 3H).
實例327

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟1：(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯。向(2S ,4R )-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(9 g, 36.7 mmol, 1eq )之CH₃ CN (150 mL)溶液添加Ag₂ O (25.5 g, 110 mmol, 3eq )及CH₃ I (54.3 g, 383 mmol, 23.8 mL, 10.4eq )。在25°C下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=20/1至3:1)純化。得到呈無色油狀物之化合物(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(9 g, 34.7 mmol, 95%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.94 -3.79 (m, 1H), 3.66 (dd,J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.44 -3.34 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.92 - 2.53 (m, 2H), 2.40 - 2.25 (m, 4H),, 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.79 (m, 1H).

步驟2：[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。向(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(5 g, 19.28 mmol, 1eq )之THF (100 mL)溶液添加LiAlH₄ (2.20 g, 57.8 mmol, 3eq )。在80°C下攪拌該混合物2小時。將反應混合物以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(6 mL)淬滅。接著將該混合物過濾且將濾液濃縮。得到呈無色油狀物之化合物[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.8 g, 12.4 mmol, 64%產率)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.43 - 4.23 (m, 1H), 3.45 -3.90 (m, 1H), 3.78 -3.69 (m, 3H), 3.68 -3.43 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.43 - 2.24 (m, 1H), 2.12-1.95 (m, 1H), 1.52 - 1.33 (m, 9H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(600 mg, 4.13 mmol, 3eq )及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(800 mg, 1.38 mmol, 1eq )之THF (10 mL)溶液添加t -BuONa (397 mg, 4.13 mmol, 3eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。以乙酸乙酯(30 mL)稀釋該反應混合物且用水(20 mL)洗滌。有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH=200/1至20:1)純化。得到呈黃色油狀物之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(910 mg, 1.28 mmol, 93%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 662。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (80 mL)內持續10分鐘。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(850 mg, 1.28 mmol, 1eq )之MeOH (30 mL)添加上述NH₃ •MeOH (20 mL)及無水Pd/C (500 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾且將濾液濃縮。得到呈無色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(620 mg, 1.18 mmol, 91%產率)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 528

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(620 mg, 1.18 mmol, 1eq )之二氯甲烷(10 mL)溶液添加TEA (1.19 g, 11.7 mmol, 1.64 mL, 10eq )。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(118 mg, 940 umol, 0.8eq )之二氯甲烷(1 mL)溶液。將該反應混合物以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)淬滅。接著以水(20 mL)稀釋且用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , EA/MeOH=100/1至10:1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 75%, 12分鐘)純化。藉由凍乾而得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(101 mg, 167 umol, 14%產率, 96.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.17 (m, 1H), 7.91 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.41 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.53 (m, 1H), 4.42 (dd,J = 4.4, 10.4 Hz, 1H), 4.34 - 4.17 (m, 3H), 4.13 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 4.04 -3.93 (m, 2H), 3.70 -3.42 (m, 3H), 3.31 (s, 5H), 3.22 - 2.69 (m, 7H), 2.48 (s, 3H), 2.33 (dd,J = 5.6, 9.6 Hz, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H).
實例328

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(20.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.0 g, 1.98 mmol, 1.0eq )及1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(2.88 g, 11.9 mmol, 6.0eq )混合物添加Cs₂ CO₃ (1.29 g, 3.96 mmol, 2.0eq )、RuPhos (185 mg, 396 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (272 mg, 297 umol, 0.15eq )，在100°C於N₂ 下攪拌該混合物18小時。在完成之後，將水(30.0 mL)添加至該反應混合物，接著用乙酸乙酯萃取(2 × 20.0 mL)，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20:1)純化。接著將所得產物再藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於MeCN中)純化，用NaHCO₃ 固體將所得產物調整至pH~7，用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取該混合物，且使有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈褐色油狀物之產物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(160 mg, 236 umol, 12%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 668。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(460 mg, 689 umol, 1.0eq )之MeOH (10 mL)溶液添加Pd/C (300 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (10 mL)，使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物10分鐘。在完成之後，將反應物過濾通過矽藻土濾墊，且將濾液濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(320 mg, 591 umol, 86%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 534。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (8.0 mL)中之2-[(2S )-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(320 mg, 599 umol, 1.0eq )混合物添加DIEA (310 mg, 2.40 mmol, 418 uL, 4.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(75.6 mg, 599 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，接著將所得產物濃縮且再藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 51%-81%, 12分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(86.8 mg, 145 umol, 24%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 588。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.55 - 7.45 (m, 1H), 7.08 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.68 - 6.53 (m, 1H), 6.41 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.85 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.11 - 4.52 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.17 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.14 - 4.07 (m, 3H), 3.98 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.72 -3.52 (m, 1H), 3.42 -3.25 (m, 2H), 3.23 - 2.58 (m, 9H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.91 - 1.73 (m, 3H).
實例329

2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲醇。將於乙腈(30.0 mL)中之[(2R )-吡咯啶-2-基]甲醇(0.50 g, 4.94 mmol, 481 uL, 1.00 eq)、2-溴乙氧基-第三丁基-二甲基-矽烷(1.18 g, 4.94 mmol, 1.00 eq)及K₂ CO₃ (3.42 g, 24.7 mmol, 5.00 eq)混合物在83 °C下攪拌12小時。將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 10/1)純化，以得到呈無色油狀物之[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲醇(0.50 g, 1.93 mmol, 39%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.70 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.60 (dd,J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.36 (dd,J = 3.6, 10.8 Hz, 1H), 3.20 (td,J = 4.4, 9.2 Hz, 1H), 2.89 (td,J = 6.4, 12.8 Hz, 1H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 2.50 (td,J = 5.2, 12.8 Hz, 1H), 2.42 - 2.32 (m, 1H), 1.92 - 1.81 (m, 1H), 1.78 - 1.66 (m, 3H), 0.90 (d,J = 0.8 Hz, 9H), 0.07 (d,J = 0.4 Hz, 6H).

步驟A：(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲醇(344 mg, 1.33 mmol, 1.10 eq)之THF (10.0 mL)溶液添加t -BuONa (232 mg, 2.41 mmol, 2.00 eq)及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 0.70 g, 1.21 mmol, 1.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，該混合物係用乙酸乙酯(10.0 mL)稀釋，以水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/石油醚 = 3/1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.60 g, 704 umol, 58%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 776。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.23 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.34 (m, 6H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.70 (br s, 1H), 4.34 (br dd,J = 4.2, 10.6 Hz, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 2H), 4.17 -3.89 (m, 4H), 3.75 (t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.49 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 3.38 -3.13 (m, 4H), 3.10 - 2.90 (m, 4H), 2.89 - 2.70 (m, 3H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 3H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (d,J = 1.2 Hz, 6H).

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(50.0 mL)內持續10分鐘。將(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.60 g, 773 umol, 1.00 eq)及Pd/C (0.1 g, 10%純度)添加至上述溶液內。在25°C於15 psi 的H₂ 下攪拌1小時之後，濾除催化劑，且用THF (10.0 mL)洗滌濾餅。將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.50 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M/2+1]: 321。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.50 g，粗製)及TEA (394 mg, 3.89 mmol, 542 uL)之二氯甲烷(5.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(98.2 mg, 779 umol)。在25°C下攪拌1小時之後，以飽和碳酸氫鈉(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯 = 10/1)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.35 g, 427 umol, 兩個步驟55%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 696。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (5.00 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(0.35 g, 503 umol, 1.00 eq)、KF (146 mg, 2.51 mmol, 58.9 uL, 5.00 eq)及18-冠醚-6 (665 mg, 2.51 mmol, 5.00 eq)混合物在40°C下攪拌12小時。將該混合物真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]及prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150 * 25mm * 10um; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 75%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例329, 146 mg, 245 umol, 49%產率, 97.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]:582。

SFC條件："管柱: Chiralcel OJ-3 100 × 4.6 mm I.D., 3 um, 移動相:甲醇(0.05 % DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ =8.29 - 8.18 (m, 1H), 7.95 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.46 - 6.31 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.19 - 4.47 (m, 1H), 4.38 - 4.22 (m, 3H), 4.21 - 4.09 (m, 2H), 4.02 (br d,J = 11.2 Hz, 2H), 3.71 -3.57 (m, 2H), 3.53 -3.27 (m, 3H), 3.22 - 2.76 (m, 9H), 2.62 (td,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.41 - 2.28 (m, 1H), 2.11 - 1.95 (m, 1H), 1.89 - 1.77 (m, 3H).
實例330

2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯。向MeOH (264 mg, 8.23 mmol, 333 uL, 2.00eq )之DMF (25.0 mL)溶液添加NaH (329 mg, 8.23 mmol, 60%純度於礦物油中, 2.00eq )。在室溫(25°C)下混合該溶液30分鐘，此時間之後添加1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(1.00 g, 4.12 mmol, 1.00eq )。在25°C下攪拌該溶液0.5小時。在完成時，以水(50 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 1/0至100/1)純化，以得到呈無色油狀物之1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯(880 mg, 3.11 mmol, 75%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.34 - 7.27 (m, 2H), 6.99 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯。將於甲苯(30.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 550 mg, 1.09 mmol, 1.00eq )、1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯(416 mg, 1.63 mmol, 1.50eq )、RuPhos (152 mg, 326 umol, 0.30eq )、Cs₂ CO₃ (1.06 g, 3.26 mmol, 3.00eq )及Pd₂ (dba)₃ (149 mg, 163 umol, 0.15eq )混合物脫氣，且接著於N₂ 下加熱至90°C持續12小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。以水(10 mL)稀釋該殘餘物，且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。將所收集的分餾物以飽和碳酸氫鈉溶液中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 321 umol, 30%產率, 94.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 680。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 338 umol, 1.00eq )之MeOH (4.00 mL)溶液添加NH₃ /MeOH (7 M, 4.00 mL)、Pd/C (70.0 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，濾除催化劑且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 242 umol, 72%產率, 88.1%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 546。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 242 umol, 1.00eq )及TEA (122 mg, 1.21 mmol, 168 uL, 5.00eq )之DCM (3.00 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(30.5 mg, 242 umol, 1.00eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，以MeOH (0.1 mg)及水(2 mL)使混合物淬滅。分離各層。用EtOAc (2 × 8 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (EtOAc/MeOH 7/1)純化，接著藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12 分鐘)純化，且凍乾而得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-[3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例330, 28.2 mg, 45.6 umol, 19%產率, 96.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 600。

SFC條件：管柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.42 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.79 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.46 - 6.34 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.37 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 4H), 4.01 -3.77 (m, 5H), 3.75 -3.21 (m, 3H), 3.20 - 2.98 (m, 3H), 2.97 - 2.56 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.12 - 1.98 (m, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 3H).
實例331

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(700 mg, 1.16 mmol, 1.00eq , 2 HCl)及TEA (1.76 g, 17.4 mmol, 2.42 mL, 15.0eq )之無水DCM (17.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(146 mg, 1.16 mmol, 1.00eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用MeOH (1 mL)及水(10 mL)使該混合物淬滅。用EtOAc (2 × 20 mL)萃取分離出的水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯2/1至0/1)純化，且接著藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 52%-82%, 12分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例331, 122 mg, 205 umol, 18%產率, 98.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]:586。

SFC條件：管柱: Chiralpak AD-3 100 × 4.6 mm I.D., 3 um, 移動相: 40%異丙醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 13.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.45 - 6.33 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 2H), 4.22 -3.66 (m, 5H), 3.63 -3.32 (m, 2H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.91 - 2.52 (m, 4H), 2.48 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 3H).
實例332

2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 751 umol, 1.0eq )及[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(218 mg, 1.50 mmol, 2.0eq )之甲苯(20.0 mL)溶液添加t -BuONa (144 mg, 1.50 mmol, 2.0eq )。在10°C下攪拌該混合物10小時。在20°C下藉由添加H₂ O (10.0 mL)使該反應混合物淬滅，且以EA( 20.0 mL × 3)萃取反應混合物。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 1/1至EA/MeOH = 10/1)純化。得到呈白色固體之產物(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.30 g, 413 umol, 55%產率, 93.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 680。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(270 mg, 397 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 68.1eq )。在20°C下攪拌該混合物10分鐘。將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之產物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製，2TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 58。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 371 umol, 1.0eq , 2TFA)之DCM (3.0 mL)溶液添加DIEA (480 mg, 3.71 mmol, 647 uL, 10.0eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。在20°C下藉由添加MeOH (10.0 mL)使該反應混合物淬滅，且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12 分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(27.6 mg, 43.5 umol, 兩個步驟10%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 634。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.32 - 7.40 (m, 1H) 7.19 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.57 (br, d,J = 14.1 Hz, 1H), 6.44 - 6.37 (m, 1H), 5.84 (br, d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.1 (br, s, 1H), 4.45 - 4.35 (m, 1H), 4.19 (br, dd,J = 5.9, 10.9 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H), 4.00 -3.90 (m, 2H), 3.75 -3.4 (m, 2H), 3.40-3.00 (m, 8H), 3.00 - 2.65 (m, 5H), 2.45 (s, 3H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 2.00 - 1.90 (m, 1H).
實例333

2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯。在-5°C下向7-氟萘-1-醇(980 mg, 6.04 mmol, 1eq )及DIEA (2.34 g, 18.1 mmol, 3.16 mL, 3eq )之DCM (40 mL)溶液逐滴添加Tf₂ O (2.56 g, 9.07 mmol, 1.50 mL, 1.5eq )。在25°C下攪拌該混合物3小時。接著將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯= 100/1至10/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯(1.63 g, 5.54 mmol, 92%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.92 (dd,J = 5.6, 9.0 Hz, 1H), 7.87 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.70 (dd,J = 2.4, 9.9 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.42 - 7.34 (m, 1H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(30 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 330 mg, 463 umol, 1eq )、三氟甲烷磺酸(7-氟-1-萘基)酯(273 mg, 927 umol, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (84.9 mg, 92.7 umol, 0.2eq )、RuPhos (64.9 mg, 139 umol, 0.3eq )及Cs₂ CO₃ (453 mg, 1.39 mmol, 3eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。添加H₂ O (1 × 200 mL)及乙酸乙酯(1 × 250 mL)至該反應混合物。分離出有機相，以鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和至pH = 7，且接著用乙酸乙酯(1 × 200 mL))萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 308 umol, 100%純度, 67%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.80 - 7.70 (m, 2H), 7.53 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 6H), 7.24 - 7.16 (m, 1H), 7.10 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.19 - 5.09 (m, 2H), 4.62 (br s, 1H), 4.51 (dd,J = 6.0, 11.2 Hz, 1H), 4.26 (dd,J = 5.6, 11.3 Hz, 1H), 4.15 (s, 2H), 4.11 -3.99 (m, 2H), 3.90 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.38 -3.11 (m, 5H), 3.08 - 2.95 (m, 2H), 2.93 - 2.71 (m, 3H), 2.70 - 2.62 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.53 - 2.42 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.96 - 1.75 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於MeOH (7 M, 150 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(7-氟-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(810 mg, 1.25 mmol, 1eq )、Pd/C (400 mg, 10%純度)及NH₃ 混合物脫氣且用H₂ 沖淨3次，且接著在25°C於壓力15 psi 的H₂ 環境下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物過濾且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(600 mg, 1.16 mmol, 93%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 516。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.89 - 7.79 (m, 2H), 7.61 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 1H), 7.19 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.51 (dd,J = 5.6, 10.9 Hz, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 3H), 4.05 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.88 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.37 -3.21 (m, 4H), 3.19 -3.09 (m, 2H), 3.06 - 2.84 (m, 5H), 2.61 - 2.53 (m, 5H), 2.47 - 2.36 (m, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.97 - 1.76 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (30 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(600 mg, 1.16 mmol, 1eq )及TEA (589 mg, 5.82 mmol, 810 uL, 5eq )混合物添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(117 mg, 931 umol, 0.8eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下用飽和NaHCO₃ 溶液(10 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至3/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(7-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例333, 139 mg, 244 umol, 21%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

SFC條件："管柱: Chiralpak AD-3 100 × 4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%,，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.92 - 7.80 (m, 2H), 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 1H), 7.20 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.62 (br s, 1H), 6.47 - 6.37 (m, 1H), 5.85 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.27 - 4.52 (m, 1H), 4.41 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.25 (br s, 2H), 4.22 - 4.10 (m, 2H), 4.09 -3.87 (m, 2H), 3.77 -3.25 (m, 2H), 3.24 -3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.59 (m, 6H), 2.50 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 3H).
實例334

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(7-氯萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2R )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向NaH (1.11 g, 27.8 mmol, 60%純度, 1.2 eq)之THF (80 mL)添加(2R )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.67 g, 23.2 mmol, 1 eq)之THF (20 mL)溶液，且在0°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下逐滴添加BnBr (5.95 g, 34.8 mmol, 4.13 mL, 1.5 eq)，且在25°C下攪拌該混合物4小時。在0°C下用飽和氯化銨溶液(20 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 100 mL)稀釋。有機層係以水(1 × 150 mL)及鹽水(1 × 150 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至2/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物(2R )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(5.03 g, 17.3 mmol, 74%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.37 - 7.14 (m, 5H), 4.47 (br s, 2H), 4.07 -3.77 (m, 1H), 3.67 -3.07 (m, 4H), 2.08 - 1.68 (m, 4H), 1.38 (s, 9H).

步驟B：(2R )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶：向於二噁烷(80 mL)中之(2R )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4 g, 13.7 mmol, 1 eq)混合物添加HCl/二噁烷(4 M, 120 mL, 35 eq)。在25°C下攪拌該混合物2小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈白色固體之化合物(2R )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(3.13 g，粗製，HCl)。

¹ H NMR (400MHz, DMSO-d₆ ) δ = 9.76 (br s, 1H), 9.11 (br s, 1H), 7.43 - 7.23 (m, 5H), 4.55 (s, 2H), 3.75 -3.61 (m, 3H), 3.13 (br d,J = 4.4 Hz, 2H), 2.07 - 1.76 (m, 3H), 1.66 - 1.56 (m, 1H).

步驟C：(2R )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基-吡咯啶：在25°C下向於CH₃ CN (65 mL)中之(2R )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(3 g，粗製，HCl)及碘乙烷(2.05 g, 13.2 mmol, 1.05 mL)混合物分批添加K₂ CO₃ (1.82 g, 13.2 mmol)。在25°C下攪拌該混合物1小時，接著加熱至78 °C且攪拌11小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL × 2)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至乙酸乙酯/甲醇 = 5/1)純化。得到呈褐色油狀物之化合物(2R )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基-吡咯啶(2.41 g, 10.4 mmol, 兩個步驟79%產率, 95%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.30 - 7.18 (m, 5H), 4.47 (s, 2H), 3.46 (dd,J = 4.8, 9.2 Hz, 1H), 3.30 (dd,J = 6.4, 9.2 Hz, 1H), 3.10 (ddd,J = 2.4, 6.8, 8.8 Hz, 1H), 2.88 (qd,J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 2.62 - 2.49 (m, 1H), 2.24 (qd,J = 7.2, 12.4 Hz, 1H), 2.14 - 2.03 (m, 1H), 1.92 - 1.80 (m, 1H), 1.78 - 1.51 (m, 3H), 1.04 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟D：[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇。向(2R )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基-吡咯啶(2 g, 9.12 mmol, 1 eq)之MeOH (60 mL)溶液添加HCl/MeOH (4 M, 30 mL, 13.2 eq)以調整pH至3 ~ 4，接著於N₂ 下添加Pd(OH)₂ /C (300 mg, 20%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在25°C於H₂ (50 psi)下攪拌該混合物12小時。過濾催化劑，且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇(1.68 g，粗製，HCl)。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 3.88 (dd,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 3.75 -3.45 (m, 4H), 3.21 -3.08 (m, 2H), 2.30 - 1.82 (m, 4H), 1.37 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟E：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇(334 mg, 2.01 mmol, 1.95 eq, HCl)溶解於飽和碳酸鈉溶液(5 mL)內，接著用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取。萃取物係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。在0°C於N₂ 下向於甲苯(35 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 600 mg, 1.03 mmol, 1 eq)與上述殘餘物之混合物分批添加t -BuONa (298 mg, 3.10 mmol, 3 eq)。將該混合物升溫至25°C且攪拌10分鐘。將該反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，在0°C下用2M HCl調整pH至8-9，接著用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取。合併的有機層係以水(15 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和Na₂ CO₃ 溶液(3 mL)中和，且用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈白色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(350 mg, 526 umol, 51%產率, 97.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(305 mg, 472 umol, 1 eq)之MeOH (40 mL)及NH₃ •MeOH (20 mL)溶液添加Pd/C (300 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈綠色固體之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟G：2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向於DCM (10 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg，粗製)混合物添加TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 uL)，接著在0°C於N₂ 下分批添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(59.2 mg, 469 umol)。將該混合物升溫至25°C且攪拌0.5小時。在0°C下藉由添加飽和NaHCO₃ 溶液 (2 mL)使該反應混合物淬滅，且接著用DCM (20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(15 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至乙酸乙酯/甲醇 = 5/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 59% - 89%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例334, 44.2 mg, 75.2 umol, 兩個步驟16%產率, 96.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.90 - 7.83 (m, 1H), 7.62 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.47 - 6.35 (m, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.39 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.19 - 4.09 (m, 2H) , 4.02 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.47 (br s, 2H), 3.34 (br s, 2H), 3.26 -3.07 (m, 3H), 3.05 - 2.63 (m, 5H), 2.44 (br dd,J = 6.8, 12.0 Hz, 1H), 2.26 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 2.12 - 1.94 (m, 1H), 1.80 (br d,J = 4.0 Hz, 4H), 1.15 (br t,J = 7.2 Hz, 3H).
實例335

2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：甲基(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯。向(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(5.00 g, 19.3 mmol, 1.0eq )之DCM (5.0 mL)溶液添加TFA (7.70 g, 67.5 mmol, 5.0 mL, 3.50eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將混合物濃縮。得到呈黃色油狀物之產物(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯(3.0 g，粗製，TFA)。

步驟2：(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2 -甲酸甲酯。向(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-2-甲酸甲酯(3.0 g, 11.0 mmol, 1.0eq , TFA)及K₂ CO₃ (4.55 g, 32.9 mmol, 3.0eq )之MeCN (30.0 mL)溶液分批添加碘乙烷(1.71 g, 11.0 mmol, 878 uL, 1.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時並加熱至78 °C，接著在78 °C下攪拌11小時。在完成之後，將混合物過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA=10:1 - EA:MeOH=10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(1.20 g, 6.41 mmol, 兩個步驟33%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.04 -3.95 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.55 -3.33 (m, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.83 - 2.70 (m, 1H), 2.53 - 2.35 (m, 2H), 2.14 (dd,J = 5.6, 8.0 Hz, 2H), 1.09 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟3：[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲醇。向(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-甲酸甲酯(1.20 g, 6.41 mmol, 1.0eq )之THF (15.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (730 mg, 19.2 mmol, 3.0eq )。在-78°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ (0.30 mL)水溶液使該混合物淬滅，且過濾，並用THF (10.0 mL)洗滌。將母液濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA=10:1 - EA;MeOH=5:1)純化，以得到呈黃色油狀物之[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲醇(600 mg, 3.77 mmol, 59%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.92 -3.83 (m, 1H), 3.66 (dd,J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.49 -3.35 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.89 - 2.76 (m, 2H), 2.40 - 2.27 (m, 2H), 2.07 - 1.97 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.08 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟A：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲醇(266 mg, 1.67 mmol, 2.00eq )之THF (5.0 mL)溶液添加t-BuONa (241 mg, 2.50 mmol, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 835 umol, 1.0eq )添加至上述液體。在添加之後，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將水(10.0 mL)添加至該混合物，且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA=20:1 - EA:MeOH=10:1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(440 mg, 513 umol, 62%產率, 81%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 694。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.41 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.63 (br s, 1H), 4.42 (br dd,J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.06 (m, 4H), 4.06 -3.96 (m, 2H), 4.06 -3.96 (m, 1H), 3.92 -3.86 (m, 1H), 3.36 -3.20 (m, 6H), 3.18 - 2.96 (m, 4H), 2.94 - 2.66 (m, 4H), 2.58 - 2.39 (m, 1H), 2.37 - 2.30 (m, 1H), 2.14 - 2.07 (m, 1H), 2.02 - 1.91 (m, 1H), 1.53 (s, 9H), 1.13 (t,J = 7.4 Hz, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(390 mg, 455 umol, 1.0eq )之DCM (1.00 mL)溶液添加TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 29.7eq )。在25°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成之後，將混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg，粗製，2 TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 594。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-30°C下向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg, 487 umol, 1.0eq , 2 TFA)之DCM (2.0 mL)溶液添加DIEA (629 mg, 4.87 mmol, 847 uL, 10.0eq )。接著在-30°C下將丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(92.0 mg, 730 umol, 1.50eq )添加至上述液體，且在-30°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (0.50 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將標題化合物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12分鐘)純化，得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-1-乙基-4-甲氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例335, 120 mg, 182 umol, 兩個步驟28%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 648。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.42 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.21 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.68 - 6.55 (m, 1H), 6.42 (dd,J = 1.6, 16.4 Hz 1H), 5.85 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.20 - 4.51 (m, 1H), 4.42 (dd,J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 4H), 4.04 -3.72 (m, 3H), 3.70 -3.41 (m, 2H), 3.39 -3.22 (m, 5H), 3.20 - 2.79 (m, 7H), 2.76 (br s, 1H), 2.50 - 2.40 (m, 1H), 2.33 (dd,J = 5.2, 10.0 Hz, 1H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.13 (t,J = 7.2 Hz, 3H).
實例336

1-[(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(2R , 5S )-4-(7-苯甲基-2-氯- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ] 嘧啶(2.70 g, 9.18 mmol, 1.00 eq)、(2R ,5S )-2,5-二甲基哌嗪-1 -甲酸第三丁酯(1.77 g, 8.26 mmol, 0.90 eq)及DIEA (2.37 g, 18.4 mmol, 3.20 mL, 2.00 eq)之NMP (30.0 mL)溶液在100°C下攪拌7小時。用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋該混合物，且用鹽水(3 × 100 mL)洗滌。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 3/1)純化，以得到呈黃色固體之(2R , 5S )-4-(7-苯甲基-2-氯- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.80 g, 5.69 mmol, 62%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 472。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 - 7.29 (m, 5H), 4.45 - 4.19 (m, 2H), 3.71 -3.61 (m, 4H), 3.54 -3.43 (m, 3H), 3.41 -3.36 (m, 1H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 1.48 (s, 9H), 1.20 (d,J = 6.8 Hz, 3H), 1.17 (d,J = 6.8 Hz, 3H).

步驟B：(2R ,5S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(854 mg, 7.41 mmol, 880 uL, 2.50 eq)之THF (20.0 mL)溶液添加NaH (237 mg, 5.93 mmol, 60.0%純度, 2.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，添加(2R , 5S )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.40 g, 2.97 mmol, 1.00 eq)。在80°C下攪拌該混合物4小時。該混合物係以水(20.0 mL)稀釋，用乙酸乙酯(3 × 30.0mL)，有機層係以鹽水(1 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 1/ 10)純化，以得到呈黃色固體之(2R ,5S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.55 g, 2.56 mmol, 86%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 551。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ =7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.31 (br dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 2H), 4.16 - 4.08 (m, 1H), 3.72 -3.62 (m, 4H), 3.61 -3.56 (m, 1H), 3.52 -3.43 (m, 2H), 3.38 (br s, 1H), 3.08 (br t,J = 8.0 Hz, 1H), 2.81 - 2.48 (m, 6H), 2.45 (s, 3H), 2.33 - 2.20 (m, 1H), 2.04 - 1.95 (m, 1H), 1.78 - 1.65 (m, 3H), 1.48 (s, 9H), 1.17 (br d,J = 6.4 Hz, 6H).

步驟C：(2R ,5S )-2,5-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(150 mL)內持續15分鐘。將(2R ,5S )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.80 g, 5.08 mmol, 1.00 eq)及Pd/C (0.50 g, 10.0%純度)添加至該混合物內。在40°C於15 psi的H₂ 下攪拌5小時之後，將該混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2R ,5S )-2,5-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.20 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 461。

步驟D：將於甲苯(30.0 mL)中之(2R ,5S )-2,5-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.00 g，粗製)、3-苯甲氧基-1-溴-萘(1.02 g, 3.26 mmol, 1.50 eq)、RuPhos (203 mg, 434 umol)、Pd₂ (dba)₃ (199 mg, 217 umol)及Cs₂ CO₃ (2.12 g, 6.51 mmol)混合物在110°C於N₂ 下攪拌5小時。有機層係以鹽水(1 × 50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。用水(20.0 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 40.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，接著用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取。將有機層以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2R ,5S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.06 g, 1.47 mmol, 兩個步驟68%產率)。LCMS [ESI, M/2+1]: 347。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.11 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.77 - 7.71 (m, 1H), 7.52 - 7.40 (m, 5H), 7.39 - 7.33 (m, 2H), 6.99 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.90 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.48 - 4.42 (m, 1H), 4.38 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.32 - 4.25 (m, 1H), 4.20 (br d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.16 - 4.09 (m, 1H), 3.76 (br s, 1H), 3.70 -3.61 (m, 1H), 3.60 -3.52 (m, 1H), 3.45 (br s, 2H), 3.24 (br s, 1H), 3.10 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.93 (br s, 1H), 2.80 - 2.61 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.25 (m, 1H), 2.12 - 2.03 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.27 - 1.22 (m, 6H).

步驟E：(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲醇(40.0 mL)中之(2R ,5S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.90 g, 1.30 mmol, 1.00 eq)及Pd/C (0.10 g, 10.0%純度)混合物在25°C於15 psi的H₂ 下攪拌。將混合物過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.72 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 603。

步驟F：4-[4-[(2S ,5R )-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]萘-2-醇。將於二氯甲烷(1.20 mL)下之(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.70 g，粗製)及TFA (1.99 g, 17.42mmol, 1.29 mL)混合物在25°C下攪拌0.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-[4-[(2S ,5R )-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]萘-2-醇(849 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 503。

步驟G：1-[(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在-40°C下向4-[4-[(2S ,5R )-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]萘-2-醇(0.84 g，粗製，2TFA)及TEA (1.16 g, 11.5 mmol, 1.60 mL)之二氯甲烷(3.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(102 mg, 805 umol)。在-40°C下攪拌0.5小時之後，以水(0.10 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)-乙腈]及prep-HPLC (管柱：Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl 150_30_5um; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 45% - 75%, 3 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物1-[(2R ,5S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2,5-二甲基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例336, 55.8 mg, 94.1 umol, 三個步驟8.2%產率, 93.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]:557。

SFC："管柱: Chiralpak AS-3 50×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.97 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.26 (dt,J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.90 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 6.61 - 6.43 (m, 1H), 6.39 - 6.26 (m, 1H), 5.73 (br t,J = 8.8 Hz, 1H), 4.83 (br s, 1H), 4.55 (br d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.04 (m, 4H), 3.91 (br d,J = 17.2 Hz, 1H), 3.77 -3.26 (m, 5H), 3.19 (br t,J = 8.0 Hz, 1H), 3.06 - 2.68 (m, 3H), 2.63 (br s, 3H), 2.57 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 2.41 - 2.33 (m, 1H), 2.15 - 1.83 (m, 4H), 1.11 - 0.96 (m, 6H).
實例337

2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：1-(2-溴-6-氯-苯基)乙醇。於N₂ 下將2-溴-6-氯-苯甲醛(10.0 g, 45.6 mmol, 1eq )及THF (100 mL)添加至配有磁性攪拌棒之經火焰乾燥的100 mL圓底燒瓶中。將該混合物冷卻至0°C且接著逐滴添加MeMgBr (3 M於Et₂ O中, 22.8 mL, 1.5eq )超過20分鐘。將所得懸浮液在0°C下攪拌2小時。藉由逐滴添加飽和NH₄ Cl水溶液(10 mL)使該反應混合物淬滅。將混合物冷卻，倾注入100 mL之含有水(150 mL)的分液漏斗內，並用乙酸乙酯(2 × 150 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚/乙酸乙酯= 100/1至10/1)純化。得到呈黃色油狀物之化合物1-(2-溴-6-氯-苯基)乙醇 (8.00 g, 32.6 mmol, 72%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M-17]: 219。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.46 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 6.96 (m, 1H), 5.68 - 5.44 (m, 1H), 3.24 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 1.61 (d,J = 4.4 Hz, 3H).

步驟2：1-溴-3-氯-2-乙基-苯：在0°C下向於DCE (150 mL)中之1-(2-溴-6-氯-苯基)乙醇(8.00 g, 34.0 mmol, 1eq )混合物分批添加BF₃ .Et₂ O (14.5 g, 102 mmol, 12.6 mL, 3eq )及Et₃ SiH (19.8 g, 170 mmol, 27.1 mL, 5eq )。在50°C下攪拌該混合物6小時。反應混合物係以飽和NaHCO₃ 水溶液(2 × 75 mL)及飽和鹽水(1 × 75 mL)洗滌，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚)純化。將殘餘藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 65ACN% - 95ACN%, 30 分鐘; 60% min)純化。得到呈黃色油狀物之化合物1-溴-3-氯-2-乙基-苯(1.50 g, 6.83 mmol, 20%產率, 100%純度)。

步驟A：(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將於甲苯(30 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 300 mg, 636 umol, 1eq )、1-溴-3-氯-2-乙基-苯(279 mg, 1.27 mmol, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (117 mg, 127 umol, 0.2eq )、RuPhos (89.1 mg, 191 umol, 0.3eq )及Cs₂ CO₃ (622 mg, 1.91 mmol, 3eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。添加H₂ O (1 × 200 mL)及乙酸乙酯(1 × 250 mL)至該反應混合物。有機相係經分離，以鹽水(1 × 200 mL)洗滌，經硫酸鈉，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和至pH = 7，且用乙酸乙酯(1 × 200 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(155 mg, 0.254 mmol, 100%純度, 40%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 610。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.20 - 7.16 (m, 1H), 7.13 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 5.2, 10.6 Hz, 1H), 4.16 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.09 -3.95 (m, 4H), 3.91 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.26 (dd,J = 3.6, 13.7 Hz, 1H), 3.22 - 2.96 (m, 5H), 2.90 (q,J = 7.4 Hz, 2H), 2.84 - 2.63 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 3H), 1.52 (s, 9H), 1.22 (t,J = 7.4 Hz, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於氮氣環境下向(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(310 mg, 508 umol, 1eq )之DCM (600 uL)溶液添加TFA (869 mg, 7.62 mmol, 564 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在攪拌之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(850 mg，粗製，2 TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 510。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向於DCM (8 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(850 mg，粗製，2 TFA)及丙-2-烯醯氯(59.8 mg, 660 umol, 53.8 uL)混合物分批添加TEA (514 mg, 5.08 mmol, 707 uL)。在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下以NaHCO₃ 飽和溶液(2 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ;乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至3/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04% NH_3• H₂ O)- ACN]; B%: 65% - 95%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-氯-2-乙基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例337, 142 mg, 252 umol, 兩個步驟50%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 564。

SFC條件："管柱: Chiralpak AD-3 100×4.6mm I.D., 3 um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400 MHz, dmso-d₆ ) δ = 7.21 (s, 3H), 6.78 (dd,J = 10.4, 16.8 Hz, 1H), 6.15 (dd,J = 2.0, 16.8 Hz, 1H), 5.74 (dd,J = 2.0, 10.6 Hz, 1H), 4.84 (br s, 1H), 4.28 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 4.05 -3.90 (m, 4H), 3.39 (br s, 1H), 3.27 (br dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.20 -3.05 (m, 3H), 2.99 - 2.93 (m, 2H), 2.93 - 2.76 (m, 4H), 2.61 - 2.52 (m, 2H), 2.40 - 2.31 (m, 3H), 2.22 (q,J = 8.4 Hz, 1H), 2.00 - 1.87 (m, 1H), 1.77 - 1.54 (m, 3H), 1.19 (t,J = 7.2 Hz, 3H).
實例338

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(8-氟萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

插圖：1-溴-8-氟-萘。在-78°C下向1,8-二溴萘(2 g, 6.99 mmol, 1eq )之THF (50 mL)溶液逐滴添加n -BuLi (2.5 M於己烷中, 4.20 mL, 1.5eq )。在-78°C下攪拌10分鐘之後，逐滴添加N -(苯磺醯基)-N -氟-苯磺醯胺(4.41 g, 13.9 mmol, 2eq )之THF (10 mL)溶液。將該混合物升溫至25°C且攪拌3小時。以水(10 mL)使該反應混合物淬滅且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 50% - 75%, 25 分鐘)純化。藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之1-溴-8-氟-萘(560 mg, 2.46 mmol, 35%產率, 99%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.81 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.66 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.31 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.23 (td,J = 0.8, 5.2 Hz, 1H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之1-溴-8-氟-萘(310 mg, 1.38 mmol, 1.3eq )、(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 500 mg, 1.06 mmol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (863 mg, 2.65 mmol, 2.5eq )、RuPhos (98.9 mg, 212 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (194 mg, 212 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整所要分餾物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(370 mg, 570 umol, 54%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.64 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.56 (br d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.47 - 4.27 (m, 2H), 4.23 - 4.14 (m, 2H), 4.11 -3.82 (m, 3H), 3.81 -3.65 (m, 1H), 3.44 -3.23 (m, 2H), 3.19 -3.07 (m, 2H), 3.02 - 2.79 (m, 3H), 2.77 – 2.66 (m, 2H), 2.56 (br s, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.34-2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.82 - 1.72 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(370 mg, 600 umol, 1eq )之DCM (600 uL)溶液添加TFA (1.03 g, 9.01 mmol, 667 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(378 mg, 600 umol, 99%產率, TFA)，其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(261 mg, 506 umol, 1eq , TFA)之DCM (5 mL)溶液添加TEA (512 mg, 5.07 mmol, 705 uL, 10eq )。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(51.1 mg, 405 umol, 0.8eq )之DCM (1 mL)溶液。在25°C下攪拌1小時之後，以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 48% - 78%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氟-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例338, 93.5 mg, 163 umol, 32%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

SFC條件：“OD-3_MeOH (DEA)_40_3mL-35T 管柱: Chiralcel OD-3 50 ×4.6mm I.D., 3um 移動相: 40% 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.64 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.35 (m, 2H), 7.19-7.09 (m, 2H), 6.60 (br s, 1H), 6.40 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.30 - 4.48 (m, 1H), 4.46 - 4.28 (m, 2H), 4.27 -3.85 (m, 5H), 3.73 (br s, 1H), 3.56 - 2.54 (m, 10H), 2.49 (s, 3H), 2.37 - 2.21 (m, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 1H), 1.95 - 1.79 (m, 3H).
實例339

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S )-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向NaH (1.19 g, 49.6 mmol, 2.0eq )之THF (50.0 mL)溶液添加(2S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(5.00 g, 24.8 mmol, 1.0eq )之THF (50.0 mL)溶液，且在10°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下將溴甲基苯(6.38 g, 37.3 mmol, 4.43 mL, 1.50eq )逐滴添加至上述混合物，且在10°C下攪拌該混合物16小時。在完成之後，以飽和NH₄ Cl水溶液(20.0 mL)使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(50.0 ml)稀釋。分離出的有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=10:1 -3:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(6.60 g, 10.4 mmol, 42%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ 7.44 - 7.26 (m, 5H), 4.53 (s, 2H), 4.00 -3.85 (m, 1H), 3.61 -3.39 (m, 2H), 3.38 -3.33 (m, 2H), 2.04 - 1.77 (m, 4H), 1.50 - 1.36 (m, 9H).

步驟B：(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶。在0°C於氮氣環境下向(2S )-2-(苯甲氧甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(6.60 g, 22.7 mmol, 1.0eq )之DCM (23.0 mL)溶液逐滴添加TFA (34.7 g, 304 mmol, 22.5 mL, 13.4eq )。在15°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(10.0 g，粗製，TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 192。

步驟C：(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基吡咯啶。向(2S )-2-(苯甲氧基甲基)吡咯啶(2.0 g, 6.55 mmol, 1.0eq , TFA)及乙醛(1.44 g, 32.8 mmol, 1.84 mL, 5.0eq )之MeOH (30.0 mL)溶液添加 CH₃ COOH (787 mg, 13.1 mmol, 749 uL, 2.0eq )及NaBH₃ CN (1.65 g, 26.2 mmol, 4.0eq )。在20°C下攪拌該混合物2小時。在完成之後，用1 M HCl水溶液(15.0 mL)調整pH至3，且真空濃縮以移除MeOH。以混合溶劑(PE/EA = 10:1, 2 × 60.0 mL)萃取該混合物。以飽和Na₂ CO₃ 水溶液(10.0 mL)調整水相至pH ~ 9，且以混合溶劑(EA/MeOH = 10:1, 4 × 60.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將所得產物藉由逆相急驟層析法(0.1% TFA條件)純化，以得到呈無色油狀物之(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基吡咯啶(707 mg, 3.18 mmol, 49%產率, 99.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.36 - 7.31 (m, 4H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 4.58 - 4.54 (s, 2H), 3.52 (dd,J = 4.8, 9.2 Hz, 1H), 3.37 (dd,J = 6.4, 9.2 Hz, 1H), 3.20 -3.12 (m, 1H), 3.01 - 2.89 (m, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 1H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.21 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.87 (m, 1H), 1.83 - 1.62 (m, 3H), 1.11 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟D：[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇。向(2S )-2-(苯甲氧基甲基)-1-乙基-吡咯啶(860 mg, 3.92 mmol, 1.00eq )之MeOH (3.00 mL)溶液添加HCl•MeOH (4 M, 0.80 mL)及Pd(OH₎₂ /C (300 mg, 20%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (50 psi)下攪拌該混合物16小時。在完成之後，將該混合物過濾且濃縮。得到呈白色固體之產物[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇(460 mg, 3.56 mmol, 91%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 130。

步驟E：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 668 umol, 1.0eq )及[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲醇(173 mg, 1.34 mmol, 2.0eq )之甲苯(8.0 mL)溶液添加t-BuONa (128 mg, 1.34 mmol, 2.0eq )，且在0°C下攪拌該反應物0.5小時。在完成之後，添加水(30.0 mL)至該反應混合物，接著用EA (2 ×20.0 mL)萃取，合併的有機層係以飽和鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=5/1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，以得到呈淺黃色固體之(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 353 umol, 53%產率, 97.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 664。

步驟F：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 361 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 74.8eq )，在20°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(280 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 564。

步驟G：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向於DCM (5.0 mL)中之2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(280 mg, 496 umol, 1.0eq , 2TFA)混合物添加DIEA (642 mg, 4.96 mmol, 865 uL, 10.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(62.6 mg, 496 umol, 1.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (5.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC ((管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 12 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-乙基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例339, 31.9 mg, 50.2 umol, 10%產率, 97.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 618。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.37 - 7.29 (m, 1H), 7.23 - 7.18 (m, 1H), 7.11 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.58 - 6.46 (m, 1H), 6.32 (dd,J = 0.8, 16.4 Hz, 1H), 5.76 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 - 4.37 (m, 1H), 4.28 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.09 -3.96 (m, 4H), 3.89 (br d,J = 12.4 Hz, 2H), 3.69 -3.41 (m, 1H), 3.33 - 2.51 (m, 12H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.00 - 1.80 (m, 3H), 1.06 (t,J = 7.2 Hz, 3H).
實例340

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(4-甲氧基吡啶-3-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(25.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(580 mg, 1.23 mmol, 1.0eq )、3-溴-4-甲氧基-吡啶(694 mg, 3.69 mmol, 3.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (113 mg, 123 umol, 0.1eq )、RuPhos (115 mg, 246 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (1.20 g, 3.69 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。在完成之後，在真空下移除有機溶劑，且以水(20.0 mL)洗滌。用乙酸乙酯(2 × 30.0 mL)萃取水相。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0-70% MeCN]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液將所得產物調整至pH~8，接著濃縮，用乙酸乙酯(2 × 50.0 mL)萃取水溶液，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(230 mg, 397 umol, 32%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 579。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 605 umol, 1.0eq )之二噁烷(3.0 mL)溶液添加4M HCl/二噁烷(5.0 mL)，在20°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，接著用DCM (10.0 mL)萃取，以飽和NaHCO₃ 水溶液(2 × 10.0 mL)洗滌有機層，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 479。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-60°C下向於DCM (5.0 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg, 543 umol, 1.0eq )混合物添加TEA (220 mg, 2.17 mmol, 302 uL, 4.0eq )及丙-2-烯醯氯(63.9 mg, 706 umol, 57.6 uL, 1.3eq )，在-60°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (2.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯=3:1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04%NH₃ H₂ O)-ACN]; B%: 30%-54%,10 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(4-甲氧基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例340, 83.6 mg, 155 umol, 29%產率, 98.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 533。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.25 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 6.82 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 6.38 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 6.44 - 6.33 (m, 1H), 5.82 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.21 - 4.52 (m, 1H), 4.37 (dd,J = 4.8 Hz, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.26 (m, 1H), 4.24 - 4.13 (m, 2H), 4.06 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 4.02 -3.88 (m, 5H), 3.72 -3.37 (m, 2H), 3.36 -3.23 (m, 2H), 3.16 -3.02 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.87 - 2.72 (m, 3H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.27 (m, 1H), 2.10 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
實例341

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(2-(((S )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲醇。於N₂ 下向於MeCN (30 mL)中之[(2S )-吡咯啶-2-基]甲醇(500 mg, 4.94 mmol, 481 uL, 1 eq)及2-溴乙氧基-第三丁基-二甲基-矽烷(1.30 g, 5.44 mmol, 1.1 eq)混合物分批添加K₂ CO₃ (3.42 g, 24.7 mmol, 5 eq)。在50°C下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾液於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至5/1)純化。得到呈褐色油狀物之化合物[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲醇(437 mg, 1.68 mmol, 34.0%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.71 (dd,J = 5.2, 6.4 Hz, 2H), 3.63 -3.58 (m, 1H), 3.37 (dd,J = 3.2, 10.8 Hz, 1H), 3.21 (td,J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 2.90 (td,J = 6.4, 12.8 Hz, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 1H), 2.52 (td,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 1.97 - 1.80 (m, 1H), 1.79 - 1.55 (m, 3H), 0.92 - 0.87 (m, 9H), 0.11 - 0.00 (m, 6H).

步驟A：(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(35 mL)中之[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲醇(447 mg, 1.72 mmol, 2 eq)混合物分批添加t -BuONa (248 mg, 2.58 mmol, 3 eq)，接著(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物66, 500 mg, 861 umol, 1 eq)向該溶液添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物66, 500 mg, 861 umol, 1 eq)。將該混合物升溫至25°C且攪拌1小時。在0°C下將反應混合物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋且用2M HCl調整pH至8-9，接著用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(15 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至1/2)純化。得到呈無色油狀物之化合物(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 494 umol, 57.4%產率, 95.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 776。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(380 mg, 490 umol, 1 eq)之MeOH (30 mL)添加Pd/C (230 mg, 490 umol, 10%純度, 1.00 eq)及NH₃ •MeOH (25 mL)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(314 mg, 489 umol, 99.9%產率)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 642。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-40°C於N₂ 下向於DCM (15 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(314 mg, 489 umol, 1 eq)混合物分批添加TEA (148 mg, 1.47 mmol, 204 uL, 3 eq)及丙-2-烯醯氯(57.6 mg, 636 umol, 51.9 uL, 1.3 eq)。在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在-40°C下藉由添加飽和NaHCO₃ 溶液(3 mL)使該反應混合物淬滅，接著用DCM (20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(15 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至1/3)純化。得到呈無色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(210 mg, 300 umol, 61.4%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 696。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向於THF (3 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-[2-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基乙基]吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(205 mg, 295 umol, 1 eq)混合物分批添加KF (171 mg, 2.95 mmol, 69.0 uL, 10 eq)及18-冠醚-6 (779 mg, 2.95 mmol, 10 eq)。在40°C下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 75%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例341, 43.4 mg, 71.6 umol, 24.3%產率, 95.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

SFC: "OJ-3S_3_5_40_3ML管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 6.60 (br s, 1H), 6.40 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.84 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.36 - 4.22 (m, 3H), 4.16 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 2H), 4.01 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.72 -3.55 (m, 3H), 3.53 -3.26 (m, 3H), 3.24 - 2.68 (m, 10H), 2.62 (td,J = 4.0, 12.5 Hz, 1H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.90 - 1.75 (m, 3H).
實例342

2-[(2S )-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.00 g, 5.57 mmol, 1.00 eq)之二噁烷(30.0 mL)添加HCl/二噁烷(4.00 M, 30.0 mL, 21.6 eq)。在25°C下攪拌1小時之後，將混合物真空濃縮。殘餘物係以水(4.00 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉(10.0 mL)調整至pH ＞，且用乙酸乙酯萃取(3 × 30.0 mL)。萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於真空下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 甲醇/乙酸乙酯= 10/1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.10 g, 4.02 mmol, 72%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 439。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.46 - 7.30 (m, 5H), 5.25 - 5.14 (m, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.14 - 4.05 (m, 1H), 4.04 -3.90 (m, 3H), 3.84 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.26 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.12 (td,J = 5.2, 12.4 Hz, 1H), 3.05 - 2.91 (m, 2H), 2.79 (br s, 1H), 2.74 - 2.56 (m, 3H), 2.49 (s, 3H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(30.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.00 g, 4.56 mmol, 1.00 eq)、1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(1.66 g, 6.84 mmol, 1.50 eq)、Pd₂ (dba)₃ (418 mg, 456 umol, 0.10 eq)、RuPhos (426 mg, 912 umol, 0.20 eq)及Cs₂ CO₃ (2.97 g, 9.12 mmol, 2.00 eq)混合物在90°C下攪拌5小時。將該混合物以水(20.0 mL)稀釋，用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，用乙酸乙酯(3 × 30.0 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.00 g, 2.90 mmol, 64%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 601。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.53 - 7.44 (m, 1H), 7.43 - 7.29 (m, 5H), 7.07 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 - 6.91 (m, 1H), 5.26 - 5.13 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.16 - 4.10 (m, 3H), 4.04 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.87 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.39 -3.22 (m, 3H), 3.19 -3.09 (m, 1H), 3.04 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.83 (br s, 2H), 2.76 - 2.67 (m, 2H), 2.51 (s, 3H).

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.90 g, 3.16 mmol, 1.00 eq)之乙酸乙酯(50.0 mL)溶液添加m-CPBA (610 mg, 3.01 mmol, 85%純度, 0.95 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，將混合物以水(30.0 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉(10.0 mL)調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/3)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.20 g, 1.73 mmol, 55%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 617。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.55 - 7.47 (m, 1H), 7.44 - 7.33 (m, 5H),, 7.08 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.03 - 6.94 (m, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.31 - 4.09 (m, 4H), 4.02 (br d, J=12.0 Hz, 1H), 3.46 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.40 -3.09 (m, 4H), 2.90 (br d,J = 2.8 Hz, 6H), 2.74 - 2.64 (m, 1H).

步驟D：(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(145 mg, 392 umol, 1.10 eq)之THF (5.00 mL)溶液添加t -BuONa (68.6 mg, 714 umol, 2.00 eq)。接著將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.22 g, 357 umol, 1.00 eq)添加至該混合物內。在0°C下攪拌0.5小時之後，將混合物用乙酸乙酯(10.0 mL)及水(10.0 mL)稀釋，接著用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/3)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.18 g, 185 umol, 52%產率)。LCMS [ESI, M/2+1]: 462。

步驟E：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下將NH₃ 鼓泡至甲醇(30.0 mL)內持續15分鐘。將(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.18 g, 195 umol, 1.00 eq)及Pd/C (0.10 g, 10%純度)添加至該混合物內。在40°C於15 psi的H₂ 下攪拌1小時之後，濾除催化劑，且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4 -[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.13 g，粗製)。LCMS [ESI, M/2+1]: 395。

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。將於二氯甲烷(5 mL)中之(E )-4-溴丁-2-烯酸(0.50 g, 3.03 mmol, 1.00 eq)及草醯氯 (3.85 g, 30.31 mmol, 2.65 mL, 10.0 eq)混合物在0°C下攪拌0.5小時且在40°C下攪拌2小時。將混合物真空濃縮。在0°C下將上述殘餘物(93.0 mg，粗製)添加至於二氯甲烷(0.50 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg，粗製)及Py (80.3 mg, 1.02 mmol, 82.0 uL)混合物內。在0°C下攪拌0.5小時之後，添加N -甲基甲胺(69.4 mg, 508 umol, 77.9 uL)，且在20°C下攪拌該混合物1小時。接著將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)]純化。，用飽和碳酸氫鈉(1 × 5.00 mL)將所要分餾物調整至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(0.06 g, 48.05 umol, 兩個步驟65%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 899。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]-4-[7-[3 -氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於THF (0.10 mL)中之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(0.06 g, 66.7 umol, 1.00 eq)、KF (38.8 mg, 667 umol, 15.6 uL, 10.0 eq)及18-冠醚-6 (176 mg, 667 umol, 10.0 eq)混合物在40°C下攪拌12小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %/乙腈)]及prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 30% - 60%, 12 分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基]-4-[7-[3 -氟-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S ,4R )-4-羥基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例342, 4.60 mg, 6.91 umol, 10%產率, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]:661。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.52 - 7.44 (m, 1H), 7.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.00 - 6.90 (m, 2H), 6.46 (br d,J = 15.2 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.50 - 4.42 (m, 1H), 4.36 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.22 (dd,J = 5.6, 10.8 Hz, 1H), 4.16 - 4.06 (m, 3H), 3.96 (br d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.60 (br s, 1H), 3.43 (dd,J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.39 -3.23 (m, 2H), 3.20 -3.05 (m, 4H), 3.05 - 2.79 (m, 4H), 2.78 - 2.62 (m, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 7H), 2.12 - 1.92 (m, 2H).
實例343

(S )-7-(2,3-二甲基苯基)-2-((1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-4-(4-(乙烯基磺醯基)哌嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶

步驟A：7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶。向4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 652 umol, 1.0eq )之二噁烷(3.0 mL)溶液添加4M HCl/二噁烷(5.0 mL)，在20°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，接著添加DCM (10.0 mL)，以飽和NaHCO₃ 水溶液(2 × 10.0 mL)洗滌有機層，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(280 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 437。

步驟B：7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-乙烯基磺醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶：在-60°C下向於DCM (5.0 mL)中之7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(280 mg, 641 umol, 1.0eq )混合物添加TEA (195 mg, 1.92 mmol, 268 uL, 3.0eq )及乙烯磺醯氯(122 mg, 962 umol, 1.5eq )，且在-60°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1.0 mL)使反應混合物淬滅，且濃縮。餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯=3:1~乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 62%-92%,12分鐘)再純化，將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-乙烯基磺醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(實例343, 98.2 mg, 185 umol, 29%產率, 99.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.12 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.00 - 6.94 (m, 2H), 6.47 (dd,J = 10.0 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.30 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 6.11 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.15 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.62 (t,J = 4.6 Hz, 4H), 3.30 (t,J = 4.6 Hz, 4H), 3.19 -3.05 (m, 3H), 2.80 - 2.62 (m, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.32 - 2.25 (m, 7H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).
實例344

2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於10分鐘內在0°C下向[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(101 mg, 874 umol, 1.2eq )之甲苯(15 mL)溶液添加t -BuONa (140 mg, 1.46 mmol, 2eq )。接著在0°C下將(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 500 mg, 728 umol, 1eq )之甲苯(10 mL)溶液逐滴添加至該混合物。在0°C下攪拌0.5小時之後，將該反應混合物以H₂ O (1 × 7 mL)及乙酸乙酯(1 × 25 mL)稀釋。分離出有機相，以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ; 石油醚/乙酸乙酯= 10/1至0/1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(390 mg, 489 umol, 67%產率, 92.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 738。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 7.46 - 7.34 (m, 10H), 7.00 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 5.24 - 5.15 (m, 4H), 4.70 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.7 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 2H), 4.20 - 4.11 (m, 3H), 3.93 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.56 -3.19 (m, 4H), 3.14 - 2.61 (m, 7H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.84 - 1.69 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (100 mL)內持續20分鐘。於N₂ 下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(360 mg, 488 umol, 1eq )之MeOH (25 mL)溶液添加Pd/C (300 mg, 10%純度)及上述溶液(NH₃ •MeOH, 25 mL)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑，且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 514。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-40°C下向於DCM (8 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg，粗製)及TEA (453 mg, 4.48 mmol, 623 uL)混合物分批添加丙-2-烯醯氯(40.5 mg, 448 umol, 36.5 uL)，在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下以NaHCO₃ 飽和溶液(2 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ;乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至3/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38% - 68%, 12 分鐘)純化。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例344, 25.6 mg, 44.8 umol, 兩個步驟9.2%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 568。

SFC條件："AS-3_MeOH (DEA) _5_40_3mL-35T 管柱: Chiralpak AS-3 50×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400 MHz, acetic) δ = 8.08 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.29 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.90 - 6.68 (m, 2H), 6.38 (br d,J = 17.6 Hz, 1H), 5.87 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.17 (br s, 1H), 4.82 (br s, 2H), 4.59 (br s, 1H), 4.45 - 4.25 (m, 3H), 4.21 -3.61 (m, 4H), 3.60 -3.19 (m, 5H), 3.17 - 2.83 (m, 7H), 2.45 - 2.31 (m, 1H), 2.23 - 2.10 (m, 3H).
實例345

2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.48 mmol, 1.0eq )、4-氯-3-甲基-吡啶(379 mg, 2.97 mmol, 2.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (204 mg, 223 umol, 0.15eq )、RuPhos (139 mg, 297 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (1.45 g, 4.45 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。在真空下移除有機溶劑，且以水(15.0 mL)洗滌。用乙酸乙酯(3×25.0 mL)萃取水相。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0-45% MeCN]純化。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，將水溶液用乙酸乙酯(3×50.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ ，乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(270 mg, 475 umol, 32%產率, 99.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]:563。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 355 umol, 1.0eq )之二噁烷(3.0 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 3.0 mL, 33.8eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在真空下移除有機溶劑。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，該水溶液係用乙酸乙酯(3×15.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(125 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]:463。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下向2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(125 mg，粗製)之DCM (3.0 mL)溶液添加TEA (137 mg, 1.35 mmol, 188 uL)及丙-2-烯醯氯(36.7 mg, 405 umol, 33.1 uL)。在-60°C下攪拌該混合物30分鐘。以甲醇(10.0 mL)使該反應物淬滅，且在真空下移除混合物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 32%-62%,12分鐘)純化且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例345, 25.3 mg, 48.4 umol, 18%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]:517。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.33 – 8.29 (m, 2H), 6.83 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 6.65 – 6.50 (m, 1H), 6.38 (dd,J = 1.6 Hz,J = 16.8 Hz,1H), 5.82 (d,J = 10.8 Hz 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.36 (dd,J = 4.8 Hz,J = 10.4 Hz,1H), 4.20 – 4.06 (m, 4H), 4.97 (br d,J = 11.6 Hz 2H),3.68 – 3.45 (m, 1H), 3.40 – 3.31 (m, 2H),3.26 – 3.15 (m, 1H),3.15 – 3.03 (m, 2H), 2.97 – 2.60 (m, 5H), 2.31 (s, 3H), 2.29 -2.21 (m, 3H) 2.15 – 2.10 (m, 1H), 2.09 – 2.00 (m, 1H) 1.88 – 1.70 (m, 3H).
實例346

2-[4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：向(E )-4-溴丁-2-烯酸(1.0 g, 6.06 mmol, 1.0eq )之DCM (5.0 mL)溶液添加(COCl)₂ (8.70 g, 68.5 mmol, 6 mL, 11.3eq )。在60°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。在真空下移除有機溶劑。得到呈黃色液體之粗產物(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(1.3 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.30 g, 2.17 mmol, 1.0eq )及[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(500 mg, 4.34 mmol, 515 uL, 2.0eq )之甲苯(20.0 mL)溶液添加t -BuONa (417 mg, 4.34 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在20°C下藉由添加飽和鹽水(30 mL)使該反應混合物淬滅，且用EtOAc (3 × 30.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯=3/1至EA/MeOH = 10/1)純化。得到呈黃色固體之產物(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.10 g, 1.62 mmol, 75%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶 - 4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 308 umol, 1.0eq )之二噁烷(2.0 mL)溶液HCl/二噁烷(4 M, 2.0 mL, 26.0eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在真空下移除有機溶劑。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，該水溶液係用乙酸乙酯(3×20.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶 - 4-基]哌嗪-2-基]乙腈(130 mg，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]:551。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 1812 umol, 1.0eq )及吡啶(115 mg, 1.45 mmol, 117 uL, 8.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(133 mg, 727 umol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在初始材料消耗掉之後，將嗎啉 (79.2 mg, 909 umol, 80.0 uL, 5.0eq )添加至上述混合物且在0°C下攪拌3.5小時。在真空下移除有機溶劑。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，該水溶液係用乙酸乙酯(3×15.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例346, 21.7 mg, 30.6 umol, 16.9%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 703。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 (t,J = 8.0 Hz,J = 8.0 Hz 1H), 7.28 (s, 1H), 7.19 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.00 – 6.93(m, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.57 – 6.40 (m, 1H), 5.18 – 5.03 (m, 1H), 4.38 (dd,J = 4.8 Hz,J = 10.4 Hz,1H), 4.16 (d d,J = 6.8 Hz,J = 10.4 Hz, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 3H), 4. 04 – 3.88 (m, 2H), 3.74 (t,J = 4.4 Hz,J = 4.8 Hz, 4H), 3.52 (br s, 1H), 3.41 – 3.23 (m, 2H), 3.18 (d,J = 5.6 Hz, 3H), 3.12 – 3.08 (m, 2H),2.95 - 2.85 (m, 2H), 2.30 - 2.15 (m, 3H), 2.55 – 2.45 (m, 7H), 2.34 – 2.24 (m, 1H), 2.13 – 2.00 (m, 1H ), 1.90 – 1.75 (m, 3H).
實例347

2-[(2S) -4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-吡咯啶-1-基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(E )-4-溴丁-2-烯醯氯。將(E )-4-溴丁-2-烯酸(1.00 g, 6.06 mmol, 1.00eq )之(COCl)₂ (14.5 g, 114 mmol, 10.0 mL, 18.9eq )及DCM (10.0 mL)溶液在70°C下攪拌2小時。在完成之後，將混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(1.00 g，粗製)。該粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.08 mmol, 1.0eq )之二噁烷(5.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 7.0 mL, 26.0eq )。在0°C下攪拌該混合物2小時。在完成之後，將該混合物濃縮，且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至添pH~7，接著用EA (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg, 669 umol, 62%產率, 92%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 550。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 364 umol, 1.00eq )及吡啶(230 mg, 2.91 mmol, 235 uL, 8.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(267 mg, 1.45 mmol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物添加水(10.0 mL)且用DCM (10.0 mL × 2)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈褐色油狀物之產物2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製)。

步驟C：2-[(2S) -4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-吡咯啶-1-基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向吡咯啶(306 mg, 4.30 mmol, 359 uL, 10.0eq )、K₂ CO₃ (297 mg, 2.15 mmol, 5.0eq )及KI (21.4 mg, 129 umol, 0.30eq )之THF (2.0 mL)溶液分批添加2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 430 umol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)至該混合物且用DCM (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10 um; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 70%-100%,3分鐘)來純化，以得到呈黃色油狀物之標題化合物2-[(2S) -4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-吡咯啶-1-基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例347, 17.1 mg, 24.5 umol, 兩個步驟7%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 687。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.41 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.28 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.06 - 6.95 (m, 1H), 6.47 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 5.20 - 4.60 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 4H), 3.97 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.42 -3.23 (m, 3H), 3.21 -3.04 (m, 3H), 2.96 - 2.86 (m, 2H), 2.79 - 2.64 (m, 5H), 2.62 - 2.54 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.83 - 1.70 (m, 7H).
實例348

2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。將於THF (10 mL)中之BH₃ •Me₂ S (10 M於DMS中, 610 uL, 1.3eq )及(3aS )-1-甲基-3,3-二苯基-3a,4,5,6-四氫吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧雜氮雜硼雜環戊烷(1 M於甲苯中，938 uL, 0.2eq )混合物在25°C下攪拌1小時。接著添加(2R )-2-乙醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.00 g, 4.69 mmol, 1eq )之THF (10 mL)溶液，且在25°C下攪拌該混合物1小時。以MeOH (4 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , PE/EtOAC = 50/1至5/1)純化。得到呈白色固體之(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(690 mg, 3.21 mmol, 68%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 5.19 (br s, 1H), 3.79 -3.59 (m, 2H), 3.49 (br s, 1H), 3.35 -3.18 (m, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.88 - 1.68 (m, 3H), 1.47 (d,J = 0.8 Hz, 9H), 1.20 - 1.11 (m, 3H).

步驟A：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2R )-2-[(1R )-1-羥乙基]吡咯啶-1 -甲酸第三丁酯(263 mg, 1.22 mmol, 1.2eq )之甲苯(15 mL)溶液添加t -BuONa (196 mg, 2.04 mmol, 2eq )歷時10分鐘。在0°C下向該混合物逐滴添加(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700 mg, 1.02 mmol, 1eq )之甲苯(15 mL)溶液。在0°C下攪拌0.5小時之後，添加H₂ O (1 × 7 mL)與乙酸乙酯(1 × 35 mL)至該反應混合物。有機相係經分離，以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(1 × 100 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(470 mg, 536 umol, 53%產率, 95.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 838。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.73 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 - 7.48 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 10H), 7.00 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.78 - 5.44 (m, 1H), 5.30 - 5.08 (m, 4H), 4.70 (br s, 1H), 4.35 - 4.20 (m, 3H), 4.08 -3.79 (m, 2H), 3.72 -3.13 (m, 7H), 3.12 - 2.64 (m, 4H), 2.01 - 1.71 (m, 5H), 1.46 (s, 9H), 1.26 - 1.23 (m, 3H).

步驟B：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C於氮氣環境下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(450 mg, 537 umol, 1eq )之DCM (600 uL)溶液添加TFA (918 mg, 8.05 mmol, 596 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。接著將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700 mg，粗製，TFA)。

步驟C：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於MeOH (15 mL)中之(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(650 mg, 763 umol, 1eq , TFA)、甲醛(310 mg, 3.81 mmol, 284 uL, 5eq , 37%於水中)及AcOH (45.8 mg, 763 umol, 43.6 uL, 1eq )混合物在25°C下攪拌0.5小時。接著添加NaBH₃ CN (120 mg, 1.91 mmol, 2.5eq )，且在25°C下攪拌該混合物1小時。在0°C下以H₂ O (10 mL)使該混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(3 × 15 mL)萃取，以鹽水(1 × 15 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液中和至pH = 7，且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 339 umol, 兩個步驟68%產率, 97.9%純度)。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (100 mL)內持續20分鐘。於N₂ 下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 346 umol, 1eq )之MeOH (15 mL)溶液添加Pd/C (200 mg, 10%純度)及上述混合物(NH₃ •MeOH, 15 mL)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑，且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 300 umol, 87%產率, 88.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 528。

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在-40°C下向於DCM (8 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 341 umol, 1eq )及TEA (345 mg, 3.41 mmol, 475 uL, 10eq )混合物分批添加丙-2-烯醯氯(30.9 mg, 341 umol, 27.8 uL, 1eq )，且在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下以NaHCO₃ 飽和溶液(2 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ;乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至3/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 42% - 72%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[(1R )-1-[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例348, 23.5 mg, 39.9 umol, 12%產率, 99.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 582。

SFC條件："OJ-3S_3_5_40_3ML 管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 1H), 6.98 - 6.74 (m, 3H), 6.31 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.85 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.15 (m, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.62 (br s, 1H), 4.33 - 4.00 (m, 5H), 3.75 -3.38 (m, 2H), 3.27 - 2.81 (m, 7H), 2.75 - 2.62 (m, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.47 - 2.31 (m, 1H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.86 - 1.69 (m, 3H), 1.34 (d,J = 6.4 Hz, 3H).
實例349

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2,6-二甲基苯基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟1：2-溴-6-氟-3-甲基-苯甲醛。在-78°C於氮氣環境下向2-溴-4-氟-1-甲基-苯(10 g, 52.9 mmol, 1 eq)之THF (200 mL)溶液添加LDA (2 M於甲苯中，31.7 mL, 1.2 eq)。在-78°C下攪拌2小時之後，在-78°C下添加DMF (4.64 g, 63.5 mmol, 4.88 mL, 1.2 eq)溶液。將該混合物小心地升溫至25°C且攪拌0.5小時。以水(5 mL)使該混合物淬滅，且用石油醚/乙酸乙酯(50 mL/5 mL)及水(50 mL)稀釋。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈無色油狀物之化合物2-溴-6-氟-3-甲基- 苯甲醛(11.5 g, 52.9 mmol, 100%產率)。

步驟2：(2-溴-6-氟-3-甲基-苯基)甲醇。在0°C下向2-溴-6-氟-3-甲基-苯甲醛(11.5 g, 52.9 mmol, 1 eq)之MeOH (100 mL)溶液添加NaBH₄ (2.20 g, 58.2 mmol, 1.1 eq)。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在0°C下以水使該混合物淬滅，且將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯50/1至3/1)純化。收集所要分餾物，且真空濃縮。得到呈白色固體之化合物(2-溴-6-氟-3-甲基-苯基)甲醇(8.5 g, 38.4 mmol, 73%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M-17]: 201。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.20 (dd,J = 6.4, 8.4 Hz, 1H), 6.98 (t,J = 8.8 Hz, 1H), 4.88 (d,J = 2.0 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.35 - 2.11 (m, 1H).

步驟3：3-溴-2-(溴甲基)-1-氟-4-甲基-苯：在0°C下向於THF (100 mL)中之(2-溴-6-氟-3-甲基-苯基)甲醇(5 g, 22.8 mmol, 1eq )混合物分批添加PBr₃ (12.4 g, 45.6 mmol, 2eq )。在25°C下攪拌1小時之後，將該混合物真空濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋且用冰水(1 × 50 mL)、10%碳酸氫鈉水溶液(2 × 50 mL)及鹽水(1× 20 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至10/1)純化。得到呈無色油狀物之化合物3-溴-2-(溴甲基)-1-氟-4-甲基-苯(5.6 g, 19.9 mmol, 87%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.20 (dd,J = 6.4, 8.0 Hz, 1H), 6.97 (t,J = 8.8 Hz, 1H), 4.70 (d,J = 2.0 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H).

步驟4：3-溴-1-氟-2,4-二甲基-苯。在25°C下向3-溴-2-(溴甲基)-1-氟-4-甲基-苯(5.6 g, 19.9 mmol, 1eq )之DMF (50 mL)溶液添加NaBH₄ (1.50 g, 39.7 mmol, 2eq )及AgNO₃ (6.75 g, 39.7 mmol, 6.68 mL, 2eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。該反應混合物係以水(20 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。將該混合物於減壓環境下濃縮。得到呈無色油狀物之化合物3-溴-1-氟-2,4-二甲基-苯(2.1 g, 9.93 mmol, 50%產率, 96%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.05 (dd,J = 6.0, 8.4 Hz, 1H), 6.91 (t,J = 8.8 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.35 (d,J = 2.4 Hz, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 1.06 mmol, 1eq )、3-溴-1-氟-2,4-二甲基-苯(430 mg, 2.12 mmol, 2eq )、RuPhos-Pd-G3 (177 mg, 212 umol, 0.2eq )、Cs₂ CO₃ (863 mg, 2.65 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在70°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10/1)純化，且進一步藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(20 mg, 28.6 umol, 3%產率, 85%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 594。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-氟- 2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(20 mg, 33.7 umol, 1eq )之DCM (100 uL)溶液添加TFA (57.6 mg, 505 umol, 37.4 uL, 15eq )。在25°C下攪拌1小時之後，將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(20.5 mg, 33.7 umol, 100%產率, TFA)。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(20.5 mg, 33.7 umol, 1eq , TFA)之DCM (1 mL)溶液添加TEA (34.1 mg, 337 umol, 46.9 uL, 10eq )。接著逐滴添加丙-2-烯醯氯(3.05 mg, 33.7 umol, 2.75 uL, 1eq )之DCM (1 mL)溶液，且在-40°C下攪拌該混合物1小時。以飽和NaHCO₃ 水溶液(0.1 mL)使該反應混合物淬滅，且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (SiO₂ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 * 25 * 10um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 16% - 43%, 9分鐘)純化。得到呈無色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-氟-2,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例349, 0.39 mg, 0.693 umol, 2%產率, 97.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 548。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.06 - 6.92 (m, 1H), 6.84 (t,J = 8.8 Hz, 1H), 6.70 - 6.49 (m, 1H), 6.42 (d,J = 15.2 Hz, 1H), 5.85 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.60 (br s, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 1H), 4.25 -3.83 (m, 5H), 3.75 -3.22 (m, 5H), 3.19 - 2.47 (m, 10H), 2.34 - 2.21 (m, 6H), 2.21 - 1.89 (m, 4H).
實例350

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(3-羥基萘-1-基)-2-(((R )-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(50 mL)中之3-苯甲氧基-1-溴-萘(中間物29, 1.01 g, 3.21 mmol, 1.3eq )、(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 1 g, 2.47 mmol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (2.01 g, 6.18 mmol, 2.5eq )、RuPhos (230 mg, 494 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (452 mg, 494 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物5小時。以水(50 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至3/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.2 g, 1.71 mmol, 69%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 637。

步驟B：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.2 g, 1.88 mmol, 1eq )之乙酸乙酯(50 mL)溶液添加m -CPBA (382 mg, 1.88 mmol, 85%純度, 1eq )。在0°C下攪拌0.5小時之後，以飽和Na₂ S₂ O₃ 水溶液(20 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 100/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(900 mg, 1.30 mmol, 69%產率, 94%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 653。

步驟C：(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(793 mg, 1.22 mmol, 1eq )之甲苯(10 mL)溶液添加t -BuONa (350 mg, 3.65 mmol, 3eq )及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(420 mg, 3.65 mmol, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(30 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 10/1至0/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 944 umol, 78%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 704。

步驟D：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在-60°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (100 mL)內持續10分鐘。於N₂ 下向(2S )-4-[7-(3-苯甲氧基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 994 umol, 1eq )之MeOH (20 mL)溶液添加無水Pd/C (300 mg, 10%純度)及上述NH₃ •MeOH溶液(20mL)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 619 umol, 62%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.02 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.38 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.88 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.70 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 4.57 (br s, 1H), 4.36 - 4.22 (m, 2H), 4.17 - 4.14 (m, 1H), 4.02 (br d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.85 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.47 -3.08 (m, 3H), 3.07 - 2.64 (m, 12H), 2.56 (s, 3H), 2.27 - 2.14 (m, 1H), 1.89 - 1.75 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 651 umol, 1eq )之DCM (500 uL)溶液添加TFA (743 mg, 6.52 mmol, 482 uL, 10eq )。在25°C下攪拌1小時之後，將反應混合物真空濃縮。得到呈褐色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(409 mg，粗製，TFA)，其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 514。

步驟F：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C向2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(409 mg, 651 umol, 1eq , TFA)之DCM (10 mL) 溶液添加TEA (659 mg, 6.52 mmol, 907 uL, 10eq )。在添加之後，在-40°C下逐滴添加丙-2-烯醯氯(53.1 mg, 586 umol, 47.8 uL, 0.9eq )之DCM (1 mL)溶液。在-40°C下攪拌所得混合物0.5小時。用飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 100/1至5/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 11% - 41%, 10 分鐘)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 8，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈褐色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例350, 25.5 mg, 39.9 umol, 6%產率, 89%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 568。

¹ H NMR (400MHz, Acetic acid-d₄ ) δ = 8.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 6.96 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.75 (br s, 1H), 6.38 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.87 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.23 - 5.01 (m, 1H), 4.98 - 4.49 (m, 4H), 4.43 (s, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.23 - 4.00 (m, 1H), 3.99 -3.51 (m, 5H), 3.50 -3.23 (m, 4H), 3.17 - 2.91 (m, 8H), 2.63 - 2.24 (m, 1H).
實例351

2-[(2S )-4-[2-(1H -咪唑-2-基甲氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-甲酸乙酯。將於THF (100 mL)中之1H -咪唑-2-甲酸乙酯(5 g, 35.7 mmol, 1eq )、DHP (33.0 g, 392 mmol, 35.9 mL, 11.0eq )及PTSA•H₂ O (400 mg, 2.32 mmol, 6.51e-2eq )混合物在60°C (油浴溫度)下攪拌16小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮，接著用乙酸乙酯(100 mL)及水(100 mL)稀釋。分離出的有機層係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法經矽膠(石油醚/乙酸乙酯20/1至1/1)純化，以得到呈淺黃色油狀物之1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-甲酸乙酯(6.2 g, 26.0 mmol, 73%產率, 94%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 0.8 Hz, 1H), 6.21 (dd,J = 2.0, 10.0 Hz, 1H), 4.39 (dq,J = 0.8, 7.2 Hz, 2H), 4.20 - 4.10 (m, 1H), 3.71 (dt,J = 2.8, 11.6 Hz, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 1H), 1.80 - 1.55 (m, 4H), 1.42 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟2：(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲醇。在0°C下向1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-甲酸乙酯(2 g, 8.92 mmol, 1eq )之THF (40 mL)溶液分三份添加LiAlH₄ (758 mg, 20.0 mmol, 2.24eq )。在0°C下攪拌該混合物至0°C。在完成時，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(2.89 mL)使該混合物淬滅，過濾且將濾液濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 1/0至10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲醇(1.57 g, 7.75 mmol, 87%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) δ = 7.27 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.89 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 5.54 (dd,J = 2.4, 10.0 Hz, 1H), 4.74 - 4.61 (m, 2H), 4.15 -3.99 (m, 1H), 3.76 -3.68 (m, 1H), 2.06 - 1.88 (m, 3H), 1.84 - 1.60 (m, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-甲基亞磺醯基-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物64, 380 mg, 654 umol, 1eq )及(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲醇(238 mg, 1.31 mmol, 2eq )之甲苯(0.4 mL)溶液添加t -BuONa (126 mg, 1.31 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物20分鐘。在完成時，將該混合物真空濃縮。殘餘物係以水(10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(SiO₂ , PE/EtOAc 3/1至1/3)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(270 mg, 363.19 umol, 56%產率, 94%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 699。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (3 mL)內持續10分鐘。將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 372 umol, 1eq )之MeOH (3 mL)溶液添加至上述溶液，接著於N₂ 下添加Pd/C (100 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨6次。在28°C於H₂ (15 psi)下攪拌該反應物1小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg, 275 umol, 74%產率, 97%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 565。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg, 283 umol, 1.00eq )及DIEA (73.2 mg, 567 umol, 98.7 uL, 2.00eq )之DCM (3 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯氯(38.5 mg, 425 umol, 34.7 uL, 1.50eq )。在-40°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成時，向該混合物添加飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)汲水(3 mL)。分離各層。用EtOAc (2 × 5 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 50/1至10/1)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 101 umol, 36%產率, 78%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 619。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-(1H -咪唑-2-基甲氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。將2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-2-[(1-四氫吡喃-2-基咪唑-2-基)甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(67 mg, 84.5 umol, 1eq )及TsOH•H₂ O (48.2 mg, 253 umol, 3eq )之MeCN (1.5 mL)溶液在60°C下攪拌3小時。在完成時，在0°C下以飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該混合物淬滅。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% NH₃ •H₂ O)/乙腈]純化。收集所要分餾物且凍乾。將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：PhenomenexSynergi C18 150*30mm*4um; 移動相：[水(0.225%FA)- ACN]; B%: 20% - 50%, 10.5 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-(1H -咪唑-2-基甲氧基)-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例351, 2.55 mg, 4.22 umol, 5.4%產率, 96%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 535。

SFC條件：管柱:Chiralpak AS-3 50×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.20 (m, 1H), 7.92 - 7.82 (m, 1H), 7.63 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t,J =8.0 Hz, 1H), 7.17 (d,J =7.2 Hz, 1H), 7.08 - 6.99 (m, 2H), 6.69 - 6.52 (m, 1H), 6.46 - 6.32 (m, 1H), 5.84 (br d,J =11.2 Hz, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 2H), 5.24 - 4.90 (m, 1H), 4.88 - 4.14 (m, 4H), 4.14 -3.79 (m, 2H), 3.79 -3.37 (m, 3H), 3.35 - 2.64 (m, 4H), 2.61 - 2.49 (m, 1H).
實例352

2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

3-溴-4-環丙基-吡啶。將於DMF (15.0 mL)及H₂ O (3.0 mL)中之3,4-二溴吡啶(3.0 g, 12.7 mmol, 1.0eq )、環丙基硼酸(1.09 g, 12.7 mmol, 1.0eq )、Pd(dppf)Cl₂ (927 mg, 1.27 mmol, 0.10eq )、K₃ PO₄ (8.06 g, 38.0 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在60°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。以水(80.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(300 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=30 :1 至20: 1 )純化。得到呈黃色油狀物之化合物3-溴-4-環丙基-吡啶(630mg, 3.17 mmol, 25%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 198。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.69 – 8.61 (m, 1H), 8.39 – 8.32 (m, 1H), 6.75 – 6.71 (m, 1H), 2.29 – 2.18 (m, 1H), 1.20 – 1.12 (m, 2H), 0.84 – 0.77 (m, 2H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 500 mg, 1.06 mmol, 1.0eq )、3-溴-4-環丙基-吡啶(315 mg, 1.59 mmol, 1.50eq )、Pd₂ (dba)₃ (97.09 mg, 106 umol, 0.10eq )、RuPhos (99.0 mg, 212 umol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物12小時。以水(15.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% NH₃ •H₂ O於水中, 0-60% MeCN]純化。接著將所得產物濃縮，用EA (3×50 mL)萃取水溶液，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 260 umol, 24.5%產率, 85%純度)。LCMS [ESI, M+1]:589。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(30.0 mg, 43.3 umol, 1.0eq )之二噁烷(1.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 1.0 mL, 92.4eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在真空下移除有機溶劑。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，該水溶液係用乙酸乙酯(3×10.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30.0 mg，粗製)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 489。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-60°C下向2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30.0 mg, 61.4 umol, 1.0eq )之DCM (1.50 mL)溶液添加TEA (31.1 mg, 307 umol, 42.7 uL, 5.0eq )及丙-2-烯醯氯(8.34 mg, 92.1 umol, 7.51 uL, 1.50eq )。在-60°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。以甲醇(6.0 mL)使該反應物淬滅，且在真空下移除。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 33%-63%,12分鐘)純化且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(4-環丙基-3-吡啶基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例352, 2.71 mg, 4.97 umol, 8.1%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 543。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.29 (s 1H), 8.26 (d,J =5.2 Hz, 1H), 6.68 (d,J =5.2 Hz, 1H), 6.64 – 6.53 (m, 1H), 6.40 (dd,J =0.8 Hz,J =16.8 Hz, 1H), 5.52 (d,J =10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.39 (dd,J =4.8 Hz,J =10.4 Hz, 1H), 4.29 – 4.23 (m, 1H), 4.21 – 4.15 (m, 2H), 4.13 – 4.07 (m, 1H), 4.00 – 3.95 (m, 1H), 3.57 (br s, 1H), 3.44 – 3.24 (m, 4H), 3.17 – 3.03 (m, 2H), 2.94 (dd,J =8.8 Hz,J =16.8 Hz, 1H), 2.87 – 2.80 (m, 2H), 2.73 – 2.64 (m, 1H ), 2.49 (s, 3H), 2.35 – 2.22 (m, 3H), 2.11 – 2.00 (m, 1H), 1.89 – 1.76 (m, 3H),1.17 – 1.11 (m, 2H ), 0.90 – 0.77 (m, 3H).
實例353

1-[(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(3R )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.5 g, 5.10 mmol, 1eq )、(3R )-3-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.12 g, 5.61 mmol, 1.1eq )、DIEA (1.32 g, 10.2 mmol, 1.78 mL, 2eq )之NMP (30 mL)溶液在100°C下攪拌7小時。添加水(90 mL)至該混合物內。將所得混合物以EtOAc (20 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。將合併的有機層以鹽水(40 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物用(PE: EtOAc = 3:1, 20 mL)漿化且過濾，並將濾餅用(PE: EtOAc = 3:1, 40 mL)洗滌，以得到呈灰色固體之(3R )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.9 g, 1.73 mmol, 34%產率, 88.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 458。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.38 - 7.27 (m, 5H), 4.28 - 4.18 (m, 1H), 4.16 -3.80 (m, 2H), 3.74 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.65 -3.52 (m, 2H), 3.41 -3.27 (m, 1H), 3.21 - 2.89 (m, 2H), 2.74 - 2.58 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.23 (d,J = 6.8 Hz, 3H).

步驟B：(3R )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(566 mg, 4.91 mmol, 583 uL, 2.5eq )之THF (20 mL)溶液添加NaH (157 mg, 3.93 mmol, 60.0%純度, 2eq )且在0°C下攪拌0.5小時。接著將(3R )-4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(900 mg, 1.97 mmol, 1eq )添加至該混合物。於N₂ 下在一管子中將反應混合物加熱至70°C持續12小時。以水(15 mL)使該混合物淬滅。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(40 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 35 %)純化，以得到呈褐色固體之(3R )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(680 mg, 1.14 mmol, 58%產率, 90.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 537。

步驟C：(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(3R )-4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(680 mg, 1.27 mmol, 1eq )之MeOH (14 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (340 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物4小時。將該反應混合物過濾，將濾餅以MeOH (3 × 10 mL)洗滌，將濾液真空濃縮，以得到呈褐色固體之(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(540 mg, 1.09 mmol, 86%產率, 90.0%純度)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟D：(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(520 mg, 1.16 mmol, 1eq )、1-溴萘(482 mg, 2.33 mmol, 324 uL, 2eq )、RuPhos (109 mg, 233 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (1.14 g, 3.49 mmol, 3eq )之甲苯(11 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (107 mg, 116 umol, 0.1eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次，在105°C於N₂ 下攪拌該混合物7小時。將水(10 mL)添加至該混合物內。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自5:1至0:1)純化。接著將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 61 %)純化。得到呈黃色固體之化合物(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(330 mg, 547 umol, 47%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 573。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.89 - 7.84 (m, 1H), 7.60 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.41 (dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 3H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.03 -3.68 (m, 2H), 3.45 -3.00 (m, 6H), 2.84 (br s, 2H), 2.69 (br d,J = 6.4 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.12 - 2.06 (m, 1H), 1.91 - 1.70 (m, 4H), 1.50 (s, 9H), 1.32 - 1.27 (m, 3H).

步驟E：4-[(2R )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。將(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(330 mg, 576 umol, 1eq )及TFA (657 mg, 5.76 mmol, 427 uL, 10eq )混合物在30°C下攪拌40分鐘。將該混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之4-[(2R )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(340 mg，粗製，TFA)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟F：1-[(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在-40°C下向4-[(2R )-2-甲基哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(340 mg，粗製，TFA)、TEA (586 mg, 5.80 mmol, 807 uL)之DCM (6 mL)溶液添加丙-2-烯醯氯(78.7 mg, 869 umol, 70.9 uL)，且在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。以飽和NaHCO₃ (2 mL)使該混合物淬滅。以EtOAc (5 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (10 mL)萃取。有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物1-[(3R )-3-甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例353, 85.5 mg, 162 umol, 兩個步驟28%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.23 (br d,J = 9.2 Hz, 1H), 7.90 - 7.84 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.70 - 6.52 (m, 1H), 6.37 (dd,J = 1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.77 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 4.66 - 4.31 (m, 3H), 4.27 (s, 2H), 4.14 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 -3.73 (m, 2H), 3.64 -3.25 (m, 4H), 3.24 - 2.99 (m, 2H), 2.86 (br s, 2H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.28 (br d,J = 4.4 Hz, 3H).
實例354

1-[3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將7-苯甲基-2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(1.5 g, 5.10 mmol, 1eq )及3,3-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.37 g, 20.4mmol, 4eq )之溶液在130°C下攪拌22小時。殘餘物係直接用於純化。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至10:1)純化，接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*80mm*10 um;移動相：[水(0.225 %FA)- ACN]; B%: 30 %-60 %, 35 分鐘, 60 % min)純化，以得到呈黃色固體之4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1 g, 2.12 mmol, 42%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 472。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.39 - 7.28 (m, 5H), 4.01 (t,J = 5.6 Hz, 2H), 3.69 (s, 2H), 3.55 -3.44 (m, 6H), 2.78 - 2.66 (m, 4H), 1.51 (s, 6H), 1.48 (s, 9H).

步驟B：4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(610 mg, 5.30 mmol, 629 uL, 2.5eq )之THF (20 mL)溶液添加NaH (169 mg, 4.24 mmol, 60%純度, 2eq )，且在0°C下攪拌0.5小時。接著將4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1 g, 2.12 mmol, 1eq )添加至該混合物。於N₂ 下在一管子中將反應混合物加熱至70°C持續12小時。以水(10 mL)使該反應混合物淬滅。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 25 %-50 %,30;79 % min)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(980 mg, 1.69 mmol, 80%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 551。

步驟C：3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3,3-二甲基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(980 mg, 1.78 mmol, 1eq )之MeOH (20 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (500 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物4小時。將該混合物過濾，將濾餅以MeOH (3 × 10 mL)洗滌。將濾液真空濃縮，以得到呈無色油狀物之3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(780 mg, 1.69 mmol, 95%產率, 100%純度)，其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 461。

步驟D：3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 868 umol, 1eq )、1-溴萘(360 mg, 1.74 mmol, 241 uL, 2eq )、Cs₂ CO₃ (849 mg, 2.61 mmol, 3eq )及RuPhos (81.0 mg, 174 umol, 0.2eq )之甲苯(8 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (79.5 mg, 86.8 umol, 0.1eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在95°C於N₂ 下攪拌該混合物8小時。添加水(10 mL)至該混合物內。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1)純化。接著將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1 % FA) = 52 %)純化，以得到呈白色固體之3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 340 umol, 39%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 587。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (dd,J = 3.2, 6.4 Hz, 1H), 7.87 - 7.82 (m, 1H), 7.58 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 2H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.39 - 4.27 (m, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 3H), 3.60 -3.26 (m, 6H), 3.14 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.79 (br s, 2H), 2.74 - 2.65 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.39 - 2.28 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 4H), 1.58 (br d,J = 4.0 Hz, 6H), 1.49 (s, 9H).

步驟E：4-(2,2-二甲基哌嗪-1-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。將3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 358 umol, 1eq )及TFA (408 mg, 3.58 mmol, 265 uL, 10eq )之溶液在30°C下攪拌0.5小時。將該混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之4-(2,2-二甲基哌嗪-1-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(210 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟F：1-[3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在40°C下向4-(2,2-二甲基哌嗪-1-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(210 mg，粗製，TFA)及TEA (531 mg, 5.24 mmol, 730 uL)之DCM (4 mL)溶液添加丙-2-烯醯氯(47.5 mg, 524 umol, 42.8 uL)，且在40°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(2 mL)使該混合物淬滅。以EtOAc (5 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (10 mL)萃取。有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 73 %-100 %,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物1-[3,3-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例354, 104 mg, 189 umol, 53%產率, 98.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 541。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.85 (dd,J = 3.2, 6.4 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (dd,J = 3.2, 6.4 Hz, 2H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.48 - 6.33 (m, 1H), 5.79 - 5.70 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 2H), 4.21 (br t,J = 5.6 Hz, 1H), 4.17 - 4.06 (m, 3H), 3.80 (s, 1H), 3.78 -3.69 (m, 2H), 3.61 (s, 1H), 3.39 (br s, 2H), 3.13 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.80 (br s, 2H), 2.73 - 2.65 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.09 - 1.99 (m, 1H), 1.94 - 1.68 (m, 3H), 1.62 (br s, 6H).
實例355

1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向7-苯甲基-4-氯-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(5.0 g, 16.4 mmol, 1.0eq )及哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.57 g, 24.5 mmol, 1.50eq )之DMSO (20.0 mL)溶液添加DIEA (6.34 g, 49.1 mmol, 8.54 mL, 3.0eq )。在60°C下攪拌該混合物5小時。在完成之後，將該混合物添加水(200 mL)且用EA (200 mL × 3)萃取。有機層係以鹽水(500 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE : EA = 50:1 - 5:1)純化，以得到呈淺褐色固體之4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(7.0 g, 15.4 mmol, 93%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 456。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.40 - 7.27 (m, 5H), 3.68 (s, 2H), 3.58 (s, 2H), 3.54 -3.48 (m, 4H), 3.47 -3.38 (m, 4H), 2.65 (s, 4H), 1.48 (s, 9H).

步驟B：4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向4-(7-苯甲基-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(7.0 g, 15.4 mmol, 1.0eq )及DIEA (5.96 g, 46.1 mmol, 8.03 mL, 3.0eq )之DCE (100 mL)溶液添加氯甲酸1-氯乙酯(5.49 g, 38.4 mmol, 2.5eq )。在15°C下攪拌該混合物2小時。接著將混合物濃縮。將殘餘物溶解於MeOH (100 mL)且加熱至70°C，在70°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。將所得產物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0-50% MeCN)純化，以得到呈黃色固體之4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.6 g, 12.6 mmol, 82%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 366。

步驟C：向4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.60 g, 9.85 mmol, 1.0eq )、三氟甲烷磺酸(3-甲氧基-1-萘基)酯(中間物30, 7.54 g, 24.6 mmol, 2.50eq )、RuPhos (919 mg, 1.97 mmol, 0.20eq )及Cs₂ CO₃ (9.63 g, 29.6 mmol, 3.0eq )之甲苯(30.0 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (1.35 g, 1.48 mmol, 0.15eq )。將該混合物在真空下脫氣且用N₂ 沖淨3次。接著在90°C下攪拌該混合物8小時。在完成之後，將該混合物添加水(50.0 mL)，且用EA (50.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA = 20:1 - EA:MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(4.60 g, 8.82 mmol, 89%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 522。

驟D：在0°C下向4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(3.80 g, 7.28 mmol, 1.0eq )之EA (40.0 mL)溶液添加m-CPBA (1.41 g, 6.56 mmol, 0.90eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以飽和NaHSO₃ 水溶液(30.0 mL)使該混合物淬滅，且用EA (50.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2.70 g, 5.02 mmol, 69%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.07 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 - 7.42 (m, 1H), 7.39 - 7.33 (m, 1H), 6.92 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 4.42 (br s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.61 (br d,J = 4.0 Hz, 8H), 3.52 -3.34 (m, 2H), 3.08 - 2.81 (m, 5H), 1.50 (s, 9H).

步驟E：4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.49 mmol, 1.0eq )及t-BuONa (286 mg, 2.98 mmol, 2.0eq )之甲苯(8.0 mL)溶液添加[(2S,4R)-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(396 mg, 2.98 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物2小時。在完成之後，將該混合物添加水(10.0 mL)，且用EA (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1 % FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(670 mg, 1.10 mmol, 74%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 1H), 6.90 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 5.29 - 5.06 (m, 1H), 4.44 (dd,J = 4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.27 - 4.20 (m, 3H), 3.92 (s, 3H), 3.66 -3.43 (m, 9H), 3.36 (br s, 2H), 3.11 - 2.99 (m, 1H), 2.85 (br s, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.40 - 2.26 (m, 1H), 2.05 - 1.91 (m, 1H), 1.50 (s, 9H).

步驟F：2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3 -甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶。向4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1 -甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(650 mg, 1.07 mmol, 1.0eq )之DCM (1.50 mL)溶液添加TFA (2.39 g, 21.0 mmol, 1.55 mL, 19.6eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3 -甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(780 mg，粗製，2 TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 507。

步驟G：1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在-50°C下向2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(780 mg, 1.06 mmol, 1.0eq , 2 TFA)及DIEA (1.65 g, 12.7 mmol, 2.22 mL, 12.0eq )之DCM (8.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(201 mg, 1.59 mmol, 1.50eq )。在-50°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1 mL)使該混合物淬滅，接著真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 46%-76%, 12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例355, 300 mg, 528 umol, 兩個步驟49%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 561。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.10 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H), 7.40 - 7.32 (m, 1H), 6.91 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.61 (dd,J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.36 (dd,J = 2.0, 16.8 Hz, 1H), 5.77 (dd,J = 1.6, 10.4 Hz, 1H), 5.28 - 5.07 (m, 1H), 4.44 (dd,J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 3H), 3.93 (s, 3H), 3.84 (br s, 2H), 3.72 (br s, 2H), 3.65 -3.50 (m, 5H), 3.37 (br s, 2H), 3.10 -3.01 (m, 1H), 2.87 (br s, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.42 - 2.26 (m, 1H), 2.07 - 1.90 (m, 1H).
實例356

1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。向(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-(第三丁基)O 2-甲酯(1.8 g, 6.94 mmol, 1.0eq )之THF (30.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (790 mg, 20.8 mmol, 3.0eq )。在-40°C下攪拌該混合物1小時。接著在80°C於N₂ 下攪拌該混合物2小時。以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(6.0 mL)使該反應混合物淬滅。接著將該混合物過濾，且將濾液濃縮。得到呈無色油狀物之化合物[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.1 g, 6.82 mmol, 98%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.90 -3.82 (m, 1H), 3.66 (dd,J = 3.2 Hz, 10.8 Hz, 1H), 3.46 -3.37 (m, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.77 - 2.65 (m, 1H), 2.64 - 2.57 (m, 1H), 2.35 - 2.30 (m, 4H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H).

步驟B：4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5.0 mL)中之4-[7-(3-甲氧基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.49 mmol, 1.0eq )、[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(454 mg, 3.12 mmol, 2.1eq )、t -BuONa (286 mg, 2.98 mmol, 2.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，將該反應混合物添加水(15.0 mL)，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的萃取物係以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0-60% MeCN]純化。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，該水溶液係用EA (3 × 50.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之化合物4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 808 umol, 54%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 619。

步驟C：2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶。向4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 727 umol, 1.0eq )之DCM (6.0 mL)溶液添加TFA (6.93 g, 60.8 mmol, 4.50 mL, 83.6eq )。在25°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，在真空下移除有機溶劑，以得到呈黃色油狀物之2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(540 mg，粗製，2TFA)。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 519。

步驟D：1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。於N₂ 環境下向2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(540 mg, 2TFA)之DCM (6.0 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(130 mg, 1.03 mmol)及DIEA (800 mg, 6.19 mmol, 1.08 mL)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，以甲醇(10.0 mL)使該反應物淬滅，且在真空下移除該混合物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 48% - 78%, 12 分鐘)純化且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-甲氧基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例356, 112 mg, 196 umol, 99%純度, 18%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 573。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.09 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 - 7.44 (m, 1H), 7.38 - 7.34 (m, 1H), 6.91 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.81 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 6.61 (dd,J = 10.4 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.35 (dd,J = 2.0 Hz, 16.8 Hz, 1H), 5.76 (dd,J = 1.6 Hz, 9.6 Hz, 1H), 4.41 (dd,J = 4.8 Hz, 10.8 Hz, 1H), 4.24 (s, 2H), 4.22 - 4.16 (m, 1H ), 4.00 -3.94 (m, 1H ), 3.92 (s, 3H), 3.83 -3.67 (m, 4H), 3.62 -3.48 (m, 4H), 3.47 -3.42 (m, 1H), 3.40 -3.33 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.94 - 2.82 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.33 (dd,J = 6.0 Hz, 10.0 Hz, 1H), 2.12 - 2.04 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 1H ).
實例357

1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-[7-苯甲基-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(631 mg, 4.74 mmol, 3.76eq )之THF (7. 0 mL)溶液添加NaH (126 mg, 3.16 mmol, 60%純度, 2.51eq )。接著在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將4-(7-苯甲基-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(700 mg, 1.26 mmol, 1.0eq )添加至上述混合物。在添加之後，在70°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，以飽和NH₄ Cl水溶液(15.0 mL)使該混合物淬滅，且用EA (3 × 20.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二氯甲烷: 甲醇 = 20:1至 10:1) 純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-苯甲基-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(530 mg, 980 umol, 78%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 541。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 7.24 - 7.13 (m, 5H), 5.08 - 4.91 (m, 1H), 4.23 (dd,J = 4.4 Hz, 10.8 Hz, 1H), 4.04 (dd,J = 6.0 Hz, 10.8 Hz, 1H), 3.53 (s, 2H), 3.45 -3.42 (m, 2H), 3.38 -3.33 (m, 5H), 3.31 -3.27 (m, 4H), 2.90 - 2.84 (m, 1H), 2.52 - 2.46 (m, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.21 - 2.09 (m, 1H), 1.87 - 1.73 (m, 3 H), 1.34 (s, 9H).

步驟B：4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[7-苯甲基-2-[[(2S ,4R)-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(480 mg, 887 umol, 1eq )之MeOH (6.0 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (270 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物2小時。在完成之後，將該混合物過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , EA/MeOH = 20:1至 10:1)純化。得到呈黃色油狀物之4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 706 umol, 79%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]:451。

步驟C：向於甲苯(10.0 mL)中之4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 621 umol, 1.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (85.3 mg, 93.2 umol, 0.15eq )、RuPhos (58.0 mg, 124.3 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO3 (404 mg, 1.24 mmol, 2.0eq )混合物添加(4-溴-2-萘基) 2,2-二甲基丙酸酯(中間物54, 572 mg, 1.86 mmol, 3.0eq )。在110°C於N₂ 下攪拌該混合物5小時。以水(15.0 mL)使該混合物淬滅，且用EA (3 × 20.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC (¹⁸ C, 0.1% FA於水中, 0-70% MeCN)純化。以飽和NaHCO₃ 水溶液調整所得產物至pH-8，接著濃縮，該水溶液係用EA (3 × 40.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 272 umol, 44%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 677。

步驟D：[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯：在25°C於N₂ 下向於DCM (1.5 mL)中之4-[7-[3-(2,2-二甲基丙醯基氧基)-1-萘基]-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(110 mg, 162 umol, 1.0eq )混合物分批添加TFA (2.31 g, 20.2 mmol, 1.5 mL, 124eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈黃色固體之[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯(200 mg，粗製，2TFA)，且其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 577。

步驟E：[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯：在25°C於N₂ 下向於DCM (2.0 mL)中之[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯(200 mg, 2TFA)及TEA (493 mg, 4.87 mmol, 678 uL)混合物分批添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(40.9 mg, 324 umol)。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下以MeOH (3.0 mL)使反應混合物淬滅，接著於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , EA/MeOH = 20:1至10:1)純化。得到呈黃色油狀物之化合物[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯(100 mg, 153 umol, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]:631。

步驟F：1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。將於THF (1.5 mL)及H₂ O (1.5 mL)中之[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-2-萘基]-2,2-二甲基丙酸酯(39.0 mg, 61.8 umol, 1.0eq )及NaOH (61.8 mg, 1.55 mmol, 25.0eq )混合物在25°C下攪拌14小時。在完成之後，以水(10.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用EA (3 ×15.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B: 38%-68%, 12分鐘)純化且凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物1-[4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(3-羥基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例357, 10.1 mg, 18.4 umol, 30%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 547。

SFC條件：100% ee。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d ) δ 8.04 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t,J = 7.2 Hz, 1 H), 7.30 - 7.34 (m, 1H), 6.88 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.72 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.60 (dd,J = 10.4 Hz, 16.8 Hz, 1H), 6.37 (dd,J = 1.6 Hz, 16.8 Hz, 1H), 5.79 (dd,J = 2.0 Hz, 10.2 Hz, 1H), 5.28 - 5.14 (m, 1H), 4.46 (dd,J = 4.8 Hz, 11.2 Hz, 1H), 4.32 (dd,J = 5.2 Hz, 11.2 Hz, 1H), 4.18 (s, 2H), 3.82 -3.68 (m, 2H), 3.66 -3.55 (m, 4H), 3.52 -3.42 (m 4H), 3.35 -3.21 (m, 2H), 3.17 -3.10 (m, 1H), 2.82 - 2.68 (m, 2H), 2.63 - 2.74 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.40 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 1.94 (m, 1H).
實例358

1-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟A：(2S )-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔酸。向(2S)-2-胺基戊-4-炔酸(5 g, 44.2 mmol, 1 eq)之THF (15 mL)懸浮液添加H₂ O (15 mL)、K₂ CO₃ (18.3 g, 133 mmol, 3 eq)及Boc₂ O (11.1 g, 50.8 mmol, 11.7 mL, 1.15 eq)。添加額外的水以產生一溶液，且將其在25°C下攪拌12小時。接著將有機層蒸發，將水溶液用甲基第三丁醚洗滌，接著用1N HCl酸而酸化至pH = 3。用乙酸乙酯(2 × 100 mL)萃取該溶液。將溶劑蒸發，以得到呈無色油狀物之(2S )-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔酸(8 g, 37.5 mmol, 85%產率)，且其不經純化即使用。LCMS [ESI, M+1]: 589。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.21 - 4.01 (m, 3H), 3.96 -3.79 (m, 2H), 3.60 (br d,J = 6.8 Hz, 1H), 3.44 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.53 (m, 4H), 2.48 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.29 (br d,J = 8.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).

步驟B：2-[苯甲基-[(2S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔醯基]胺基]乙酸乙酯。在25°C下向(2S )-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔酸(7.75 g, 36.4 mmol, 1 eq)、2-(苯甲基胺基)乙酸乙酯(7.02 g, 36.4 mmol, 1 eq)及HATU (16.6 g, 43.5 mmol, 1.20 eq)之DMF (50 mL)溶液添加TEA (7.35 g, 72.7 mmol, 10.1 mL, 2.00 eq)。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。用乙酸乙酯(150 mL)稀釋該混合物，且用水(3 × 200 mL)及鹽水(1 × 100 mL)洗滌。分離出的有機層係以水(1 × 100 mL)及鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物不經進一步純化即用於下個步驟中。得到呈紅色油狀物之化合物2-[苯甲基-[(2S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔醯基]胺基]乙酸乙酯(13.7 g, 32.1 mmol, 88.3%產率, 91%純度)，且其在25°C下放置16小時會變為紅色固體。LCMS [ESI, M-99]: 289。

步驟C：(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪-2,5-二酮。在°C下向2-[苯甲基-[(2S)-2-(第三丁氧基羰基胺基)戊-4-炔醯基]胺基]乙酸乙酯(11.7 g, 30.1 mmol, 1 eq)之DCM (40 mL)溶液添加TFA (46.2 g, 405 mmol, 30 mL, 13.5 eq)，且在25°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮，且添加甲苯(30 mL)。在100°C下攪拌1小時之後，將該混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於乙酸乙酯(200 mL)內，且用飽和碳酸鈉水溶液鹼化至pH = 8。分離出的有機層係以水(1 × 200 mL)及鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物用(乙酸乙酯/石油醚 1/5, 100 mL)濕磨，且將沉澱物過濾。將濾餅真空乾燥。得到呈白色固體之化合物(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪-2,5-二酮(5 g, 20.5 mmol, 68%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 243。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.46 - 7.20 (m, 5H), 6.59 (br s, 1H), 4.76 (d,J = 14.4 Hz, 1H), 4.50 (d,J = 14.4 Hz, 1H), 4.20 (br d,J = 4.4 Hz, 1H), 4.04 -3.90 (m, 1H), 3.89 -3.76 (m, 1H), 2.95 - 2.69 (m, 2H), 2.05 (t,J = 2.8 Hz, 1H).

步驟D：(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪：在25°C下向於THF (50.0 mL)中之(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪-2,5-二酮(5.00 g, 20.6 mmol, 1.00 eq)混合物添加LiAlH₄ (3.13 g, 82.6 mmol, 4.00 eq)。在25°C下攪拌12小時之後，將該混合物過濾且將濾餅用乙酸乙酯(100 mL)洗滌。將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪(4.10 g, 19.1 mmol, 93%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.37 - 7.24 (m, 5H), 3.55 -3.47 (m, 2H), 3.03 - 2.86 (m, 3H), 2.85 - 2.78 (m, 1H), 2.73 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 2.33 - 2.20 (m, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 1H), 2.02 (t,J = 2.8 Hz, 1H), 1.90 - 1.83 (m, 1H).

步驟E：(2S )-4-苯甲基-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將(3S )-1-苯甲基-3-丙-2-炔基-哌嗪(2.00 g, 9.33 mmol, 1.00 eq)、TEA (2.83 g, 28.0 mmol, 3.90 mL, 3.00 eq)及(Boc)₂ O (10.2 g, 46.7 mmol, 10.7 mL, 5.00 eq)於THF (20.0 mL)中之混合物在25°C下攪拌1小時。以水(1 × 20.0 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 5/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之(2S )-4-苯甲基-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.50 g, 4.20 mmol, 45%產率, 88%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 315。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.38 - 7.27 (m, 5H), 4.26 (br s, 1H), 3.99 -3.74 (m, 1H), 3.59 -3.45 (m, 2H), 3.08 - 2.89 (m, 2H), 2.79 - 2.68 (m, 2H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 2.11 (dd,J = 3.6, 11.2 Hz, 1H), 2.06 - 1.98 (m, 1H), 1.89 (t,J = 2.8 Hz, 1H), 1.48 - 1.45 (m, 9H).

步驟F：(2S )-2-丙-2-炔基哌嗪。將於DCE (20.0 mL)中之(2S )-4-苯甲基-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.40 g, 4.45 mmol, 1.00 eq)、1-氯-1-(1-氯乙烯基氧基)乙烷 (2.51 g, 17.8 mmol, 4.00 eq)混合物在85 °C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮將殘餘物溶解於甲醇(20.0 mL)中且在65 °C下攪拌1小時。將該混合物真空濃縮，且用石油醚(10.0 mL)濕磨，以得到呈黃色固體之(2S )-2-丙-2-炔基哌嗪(0.80 g，粗製，2 HCl)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 甲醇-d4) δ = 4.56 - 4.44 (m, 1H), 3.88 -3.80 (m, 1H), 3.79 -3.73 (m, 1H), 3.62 -3.34 (m, 4H), 2.87 - 2.76 (m, 3H).

步驟G：4-苯甲氧基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶。將於甲苯(20.0 mL)中之4-苯甲氧基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶(2.00 g, 5.64 mmol, 1.00 eq)、1-溴萘(1.75 g, 8.46 mmol, 1.18 mL, 1.50 eq)、Pd₂ (dba)₃ (517 mg, 564 umol, 0.10 eq)、RuPhos (527 mg, 1.13 mmol, 0.20 eq)及Cs₂ CO₃ (3.68 g, 11.3 mmol, 2.00 eq)混合物在110°C於N₂ 下攪拌3小時。將該混合物以水(5.00 mL)稀釋，用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(TFA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)調整至pH ＞ 7，接著用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之4-苯甲氧基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(1.34 g, 2.78 mmol, 49%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 481。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 - 8.16 (m, 1H), 7.89 - 7.82 (m, 1H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 4H), 7.45 - 7.33 (m, 4H), 7.14 (dd,J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 5.49 (s, 2H), 4.45 (dd,J = 5.6, 10.4 Hz, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 3H), 3.55 -3.24 (m, 2H), 3.12 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.89 (br s, 2H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H).

步驟H：2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇。將在甲醇(200 mL)中之4-苯甲氧基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(1.30 g, 2.70 mmol, 1.00 eq)及Pd/C (0.20 g, 10%純度)混合物在25°C於15 psi的H₂ 下攪拌1小時。濾除催化劑且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇(1.00 g, 1.90 mmol, 70%產率, 74%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 391。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.24 - 8.16 (m, 1H), 7.90 - 7.81 (m, 1H), 7.59 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.42 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.43 - 4.31 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 3.38 (br s, 2H), 3.18 -3.10 (m, 1H), 2.79 (br s, 2H), 2.70 - 2.54 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.32 (dt,J = 7.2, 9.6 Hz, 1H), 2.02 - 1.96 (m, 1H), 1.91 - 1.75 (m, 3H).

步驟I：三氟甲烷磺酸[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]酯。在-40°C下向2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇(0.40 g, 1.02 mmol, 1.00 eq)及TEA (207 mg, 2.05 mmol, 285 uL, 2.00 eq)之二氯甲烷(10.0 mL)溶液添加Tf₂ O (318 mg, 1.13 mmol, 186 uL, 1.10 eq)。在-40°C下攪拌0.25小時之後，將該混合物以水(3.00 mL)稀釋，接著用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 5.00 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 10/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色固體之三氟甲烷磺酸[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]酯(0.40 g, 528 umol, 52%產率, 69%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 523。

步驟J：2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-4-[(3S )-3-丙-2-炔基哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶。將於DMF (4.00 mL)中之三氟甲烷磺酸[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]酯(0.38 g, 727 umol, 1.00 eq)、(2S )-2-丙-2-炔基哌嗪(350 mg，粗製，2 HCl)及DIEA (939 mg, 7.27 mmol, 1.27 mL, 10.0 eq)混合物在100°C下攪拌0.25小時。將該混合物以水(5.00 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.1%)/乙腈]純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色油狀物之2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-4-[(3S )-3-丙-2-炔基哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(0.20 g, 336 umol, 46%產率, 99%純度, 2 FA)。LCMS [ESI, M+1]: 497。

步驟K：1-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在-40°C下向2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-4-[(3S )-3-丙-2-炔基哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(145 mg, 246 umol, 1.00 eq, 2 FA)及TEA (374 mg, 3.69 mmol, 514 uL, 15.0 eq)之二氯甲烷(4.00 mL)溶液添加丙-2-烯醯氯(22.3 mg, 246 umol, 20.1 uL, 1.00 eq)。在25°C下攪拌0.25小時之，將該混合物以水(3.00 mL)稀釋，接著用二氯甲烷(3 × 3.00 mL)萃取。萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(10 mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 57% - 87%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈褐色固體之標題化合物1-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-丙-2-炔基-哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例358, 25.6 mg, 46.3 umol, 19%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 551。

SFC條件："OD-3S_3_40_3ML 管柱: Chiralcel OD-3 100×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 40% 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.21 (m, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 1H), 7.60 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.46 - 7.39 (m, 1H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 6.36 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.77 (dd,J = 2.0, 10.8 Hz, 1H), 5.00 - 4.52 (m, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.34 -3.81 (m, 6H), 3.47 (m, 1H), 3.38 -3.21 (m, 2H), 3.19 - 2.90 (m, 4H), 2.84 (br s, 1H), 2.73 - 2.52 (m, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.10 - 2.03 (m, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 4H).
實例359

2-((S )-1-丙烯醯基-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之1-溴-8-甲基-萘(中間物69, 507 mg, 1.65 mmol, 1.3eq )、(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 600 mg, 1.27 mmol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5eq )、RuPhos (118 mg, 254 umol, 0.2eq )及Pd₂ (dba)₃ (233 mg, 254 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物2小時。以水(30 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(310 mg, 501 umol, 39%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 612。

¹ HNMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.60 (m, 2H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.30 - 4.14 (m, 2H), 4.10 -3.72 (m, 4H), 3.60 -3.44 (m, 1H), 3.38 (br dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.24 -3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.84 (m, 5H), 2.82 - 2.53 (m, 4H), 2.52 - 2.42 (m, 3H), 2.29 (br s, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 2H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(310 mg, 506 umol, 1eq )之DCM (500 uL)溶液添加TFA (866 mg, 7.60 mmol, 562 uL, 15eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(317 mg, 506 umol, 99%產率, TFA)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(317 mg, 506 umol, 1eq , TFA)之DCM (5 mL)溶液添加TEA (512 mg, 5.07 mmol, 705 uL, 10eq )。在添加之後，在0°C下逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(51.1 mg, 405 umol, 0.8eq )之DCM (1 mL)溶液。在25°C下攪拌所得混合物1小時。用飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例359, 60.2 mg, 105 umol, 21%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

SFC條件：“OJ-3S_5_5_40_3ML 管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 乙醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘波長: 220nm”。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 - 7.60 (m, 2H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.46 - 6.33 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.20 - 4.03 (m, 3H), 3.98 -3.83 (m, 1H), 3.78 -3.62 (m, 1H), 3.60 -3.36 (m, 2H), 3.23 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.74 (m, 1H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H).

或者，實例359亦可製備如下：

步驟A：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(18.8 g, 61.7 mmol, 1eq )之DMF (200 mL)溶液添加DIEA (15.9 g, 123 mmol, 21.5 mL, 2eq )及(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物63, 16.0 g, 61.7 mmol, 1eq )。在80°C下攪拌1.5小時之後，將該反應混合物用乙酸乙酯(200 mL)稀釋，且用水(200 mL × 3)洗滌。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至2/1)純化。得到呈白色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(26 g, 48.8 mmol, 79%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.34 (m, 5H), 5.20 (s, 2H), 4.73 - 4.60 (m, 2H), 4.45 (d,J = 19.2 Hz,, 1H), 4.13 - 4.02 (m, 2H), 3.94 -3.75 (m, 2H), 3.45 -3.25 (m, 3H), 3.11 (td,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.88 - 2.59 (m, 4H), 1.60 (s, 9H).

步驟B：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基 -3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。將於甲苯(450 mL)中之[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(10.5 g, 91.1 mmol, 10.8 mL, 2 eq)、4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(24 g, 45.6 mmol, 1 eq)、Pd₂ (dba)₃ (6.18 g, 6.84 mmol, 0.15 eq)、RuPhos (4.26 g, 9.12 mmol, 0.2 eq)及Cs₂ CO₃ (37.1 g, 114 mmol, 2.5 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物5小時。將該反應混合物以水(200 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(500 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ ,乙酸乙酯/甲醇 = 1/0至10/1)純化。得到呈黃色固體之化合物4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基 -3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(25 g, 35.9 mmol, 79%產率, 87%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 606。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(16 g, 26.4 mmol, 1eq )之二噁烷(100 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 99.1 mL, 15eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。將二噁烷傾析且收集固體。將固體殘餘物以水(50 mL)及二氯甲烷(200 mL)稀釋，接著用飽和Na₂ CO₃ 水溶液調整至pH = 8，且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 13.5 g, 24.5 mmol, 93%產率, 91.6%純度)，且其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 506。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.45 - 7.31 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.65 (br s, 1H), 4.40 - 4.31 (m, 1H), 4.14 - 4.04 (m, 2H), 4.03 -3.91 (m, 3H), 3.91 -3.77 (m, 1H), 3.24 (d,J = 13.2 Hz, 2H), 3.16 -3.05 (m, 2H), 3.04 - 2.89 (m, 2H), 2.81 (br s, 1H), 2.75 - 2.51 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.08 - 2.00 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).

步驟D：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(100 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10 g, 19.8 mmol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(中間物69, 5.68 g, 25.7 mmol, 1.3eq )、RuPhos (2.77 g, 5.93 mmol, 0.3eq )、Cs₂ CO₃ (16.1 g, 49.5 mmol, 2.5eq )及Pd₂ (dba)₃ (3.62 g, 3.96 mmol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。以水(100 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(500 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之標題化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(9 g, 12.9 mmol, 33%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

¹ H NMR (400MHz, C₂ D₂ Cl₄ ) δ = 7.32 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 7H), 6.91 – 6.78 (m, 2H), 4.81 (s, 2H), 4.30 (s, 1H), 4.13 -3.95 (m, 1H), 3.88 -3.33 (m, 6H), 3.22 - 2.87 (m, 2H), 2.86 - 2.65 (m, 4H), 2.65 - 2.42 (m, 5H), 2.41 - 2.32 (m, 1H), 2.30 - 2.13 (m, 2H), 2.07 (d,J = 7.2 Hz, 3H), 1.92 (br s, 1H), 1.72 - 1.45 (m, 4H).

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(8 g, 12.4 mmol, 1eq )之MeOH (100 mL)溶液添加Pd/C (2 g, 10%純度)及NH₃ •MeOH (50 mL, 15%)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將混合物真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(5.7 g, 10.0 mmol, 81%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 512。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.69 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 3.2, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (td,J = 4.4, 7.6 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.46 - 4.34 (m, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 2H), 3.97 -3.69 (m, 3H), 3.49 -3.44 (m, 1H), 3.39 -3.07 (m, 5H), 3.06 - 2.83 (m, 6H), 2.76 - 2.63 (m, 1H), 2.62 - 2.51 (m, 3H), 2.48 (d,J = 3.2 Hz, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.13 - 1.98 (m, 1H), 1.83 - 1.69 (m, 3H).

步驟F：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(6.4 g, 12.5 mmol, 1eq )之二氯甲烷(120 mL)溶液添加TEA (19 g, 187 mmol, 26 mL, 15eq )。在添加之後，在-40°C下逐滴添加丙-2-烯醯氯(1.70 g, 18.8 mmol, 1.53 mL, 1.5eq )之二氯甲烷(2 mL)溶液。在-40°C下攪拌0.5小時之後，用飽和NaHCO₃ 水溶液(10 mL)使該反應混合物淬滅，接著以水(50 mL)稀釋，且用二氯甲烷(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM/MeOH = 100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Kromasil 250*50mm*10um; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 20% - 50%, 28 分鐘)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例359, 2.3 g, 4.03 mmol, 32%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿 -d) δ = 7.74 - 7.59 (m, 2H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 6.70 - 6.47 (s, 1H), 6.39 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.82 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.16 - 4.47 (m, 1H), 4.44 - 4.32 (m, 1H), 4.30 -3.62 (m, 6H), 3.58 -3.26 (m, 2H), 3.25 - 2.95 (m, 5H), 2.91 (s, 3H), 2.86 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (d,J = 5.2 Hz, 3H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.67 (m, 3H).
實例360

2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：1-溴-8-乙基-萘。在-78°C下向1,8-二溴萘(2.0 g, 6.99 mmol, 1.0eq )及Pd(dppf)Cl₂ (367 mg, 501 umol, 7.16 e^-2 eq )之THF (15.0 mL)溶液添加二乙基鋅(1.0 M於甲苯中，3.50 mL, 0.50eq )。在-78°C至20°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(30.0 mL)且用EA (30.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物用PE (60.0 mL)濕磨且過濾。將濾餅用PE (10.0 mL × 2)洗滌，將母液濃縮。將所得產物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1% FA於水中, 0 - 100 % MeCN)純化，以得到呈黃色油狀物之1-溴-8-乙基-萘(600 mg, 2.45 mmol, 35%產率, 96%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.72 - 7.63 (m, 2H), 7.58 (dd,J = 2.4, 7.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.23 (m, 2H), 7.13 - 7.04 (m, 1H), 3.43 (q,J = 7.6 Hz, 2H), 1.22 (t,J = 7.6 Hz, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 300 mg, 636 umol, 1.0eq )、t-BuONa (183 mg, 1.91 mmol, 3.0eq )、RuPhos (59.4 mg, 127 umol, 0.2eq )及RuPhos-Pd-G3 (106 mg, 127 umol, 0.20eq )之甲苯(5.0 mL)溶液添加1-溴-8-乙基-萘(299 mg, 1.27 mmol, 2.0eq )。在90°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用EA (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1 % FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 221 umol, 34%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 626。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 208 umol, 1.0eq )、(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 208 umol, 1.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 65.0eq )。在25°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成之後，將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製，2TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 199 umol, 1.0eq , 2TFA)及DIEA (309 mg, 2.39 mmol, 416 uL, 12.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(37.7 mg, 299 umol, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1.0 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 53%-83%, 12分鐘)純化，以得到呈粉紅色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例360, 20.0 mg, 33.8 umol, 17%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 580。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.46 - 7.35 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 2H), 6.64 - 6.60 (m, 1H), 6.46 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.20 - 4.50 (m, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.17 -3.96 (m, 3H), 3.93 -3.84 (m, 1H), 3.74 (br d,J = 18.0 Hz, 1H), 3.65 -3.39 (m, 3H), 3.37 - 2.92 (m, 7H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (br d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.80 - 1.72 (m, 3H), 1.17 (t,J = 7.4 Hz, 3H).
實例361

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇。向(3R )-3-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.0 g, 4.97 mmol, 1.0eq )之THF (20.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (377 mg, 9.94 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時，接著加熱至70°C且在70°C下攪拌2小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(1.0 mL)使該反應混合物淬滅，且過濾。以THF (10.0 mL)洗滌濾餅。接著將母液濃縮，以得到呈無色油狀物之[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基] 甲醇(500 mg, 4.34 mmol, 87%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.65 (dd,J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 3.52 (dd,J = 5.6, 10.0 Hz, 1H), 3.05 - 2.69 (m, 2H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.40 - 2.25 (m, 5H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.72 - 1.59 (m, 1H).

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基] 甲醇(178 mg, 1.55 mmol, 3.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液添加t-BuONa (124 mg, 1.29 mmol, 2.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 516 umol, 1.0eq )添加至上述混合物。在添加之後，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用EA (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於水中, 0-60% MeCN)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(220 mg, 342 umol, 66%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(360 mg, 569 umol, 1.0eq )之DCM (1.50 mL)溶液添加TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 35.6eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(450 mg，粗製，2TFA)。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(450 mg, 592 umol, 1.0eq , 2TFA)及DIEA (918 mg, 7.10 mmol, 1.24 mL, 12.0eq )之DCM (4.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(112 mg, 888 umol, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1.0 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04% NH₃ •H₂ O)-ACN]; B%: 70%-82%,10 分鐘)純化，以得到呈灰色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例361, 32.6 mg, 53.8 umol, 9%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 586。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.68 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.41 -7.32 (m, 1H), 7.26 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 - 7.11 (m, 1H), 6.60 - 6.43 (m, 1H), 6.32 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.75 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.15 - 4.50 (m, 1H), 4.41 - 4.28 (m, 1H), 4.18 - 4.10 (m, 2H), 4.09 -3.88 (m, 2H), 3.87 -3.68 (m, 2H), 3.57 -3.45 (m, 1H), 3.42 -3.26 (m, 1H), 3.25 - 2.87 (m, 5H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.73 - 2.57 (m, 3H), 2.56 - 2.47 (m, 2H), 2.46 - 2.37 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.07 - 1.90 (m, 1H). LCMS [ESI, M+1]: 586.
實例362

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向2-(1-哌啶基)乙醇(133 mg, 1.03 mmol, 137 uL, 3.0eq )之甲苯(2.0 mL)溶液添加t-BuONa (66.2 mg, 688 umol, 2.0eq )。在20°C下攪拌該混合物0.5小時。接著在0°C下將(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 344 umol, 1.0eq )添加至上述液體。在添加之後，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(5.0 mL)且用EA (5.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE:EA = 3:1 - EA:MeOH = 10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 221 umol, 64%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.64 - 4.61 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 3H), 4.14 -3.92 (m, 3H), 3.90 -3.76 (m, 1H), 3.63 -3.54 (m, 1H), 3.36 (br dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.26 -3.06 (m, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 1H), 2.82 - 2.76 (m, 2H), 2.71 (br d,J = 6.8 Hz, 1H), 2.64 - 2.58 (m, 1H), 2.58 - 2.50 (m, 4H), 2.48 - 2.42 (m, 1H), 2.06 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 1.64 - 1.57 (m, 5H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 387 umol, 1.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 34.9eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製，2TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 546。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 388 umol, 1.0eq , 2TFA)及DIEA (601 mg, 4.65 mmol, 810 uL, 12.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(73.3 mg, 581 umol, 1.5eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1.0 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%,12分鐘)純化，以得到呈無色油狀物之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例362, 54.0 mg, 88.1 umol, 23%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 600。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.58 - 6.62 (m, 1H), 6.44 - 6.36 (m, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.15 - 4.55 (m, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 3H), 4.20 -3.97 (m, 2H), 3.95 -3.75 (m, 2H), 3.66 -3.54 (m, 1H), 3.51 -3.37 (m, 1H), 3.34 - 2.97 (m, 4H), 2.94 - 2.67 (m, 4H), 2.65 - 2.57 (m, 1H), 2.55 - 2.48 (m, 4H), 1.65 - 1.60 (m, 4H), 1.49 - 1.39 (m, 2H).
實例363

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基] 甲醇。在0°C下向(2R )-2-(羥甲基) 嗎啉-4-甲酸第三丁酯(1.50 g, 6.90 mmol, 1.0eq )之THF (20.0 mL)溶液分批添加LiAlH₄ (524 mg, 13.8 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時，接著加熱至60°C，且在60°C下攪拌12小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(1.50 mL)使該反應混合物淬滅，且過濾。用THF (20.0 mL × 2)洗滌濾餅。接著將母液濃縮，以得到呈黃色油狀物之[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基] 甲醇(800 mg, 6.10 mmol, 88%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.92 -3.86 (m, 1H), 3.73 -3.52 (m, 4H), 2.84 - 2.56 (m, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (dt,J = 3.6, 11.6 Hz, 1H), 1.93 (t,J = 10.8 Hz, 1H).

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲醇(203 mg, 1.55 mmol, 3.0eq )之甲苯(4.0 mL)溶液添加t-BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 516 umol, 1.0eq )添加至上述混合物。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用EA (10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所得產物藉由管柱層析法(SiO₂ , PE: EA=3:1 - EA: MeOH=10:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 366 umol, 71%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 648。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz , 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 4.68 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.31 (m, 2H), 4.29 - 4.19 (m, 1H), 4.16 - 4.01 (m, 3H), 4.00 -3.82 (m, 4H), 3.79 -3.69 (m, 1H), 3.63 -3.53 (m, 1H), 3.36 (br dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.29 -3.06 (m, 3H), 3.01 - 2.86 (m, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 3H), 2.63 - 2.45 (m, 1H), 2.36 - 2.28 (m, 3H), 2.19 (dt,J = 3.6, 11.6 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 370 umol, 1.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加TFA (1.54 g, 13.5 mmol, 1.0 mL, 36.5eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈淺紅色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製，2TFA)。LCMS [ESI, M+1]: 548。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 387 umol, 1.0eq , 2TFA)及DIEA (599 mg, 4.64 mmol, 808 uL, 12.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(73.1 mg, 580 umol, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以MeOH (1.0 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04% NH₃ •H₂ O)-ACN]; B%: 45%-75%,10 分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-4-甲基嗎啉-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例363, 42.7 mg, 70.4 umol, 18%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 602。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.65 - 6.52 (m, 1H), 6.39 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.25 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 2H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 3.99 -3.89 (m, 3H), 3.88 -3.76 (m, 1H), 3.75 -3.68 (m, 1H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.52 -3.35 (m, 1H), 3.31 - 2.98 (m, 4H), 2.92 - 2.55 (m, 5H), 2.31 (s, 3H), 2.18 (dt,J = 3.2, 11.4 Hz, 1H), 2.02 (dt,J = 1.6, 10.8 Hz, 1H).
實例364

2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯。向MeOH (1.32 g, 41.2 mmol, 1.67 mL, 2eq )之DMF (125 mL)溶液添加NaH (1.65 g, 41.2 mmol, 60.0%純度, 2eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。接著向該混合物添加1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(5 g, 20.6 mmol, 1eq )，且在25°C下攪拌0.5小時。以冰水(20 mL)使該反應混合物淬滅。將水(300 mL)添加至該混合物內，且用MTBE (3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE)純化，以得到呈無色油狀物之1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯(5.28 g, 18.6 mmol, 91.0%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.34 - 7.28 (m, 2H), 7.01 - 6.97 (m, 1H), 3.91 (s, 3H).

步驟2：1-甲氧基-3-甲基-2-(三氟甲基)苯。於N₂ 下向1-溴-3-甲氧基-2-(三氟甲基)苯(5.28 g, 20.7 mmol, 1eq )、Cs₂ CO₃ (20.2 g, 62.1 mmol, 3eq )、甲基硼酸(6.20 g, 104 mmol, 5eq )之二噁烷(105 mL)及水(21 mL)溶液添加Pd(dppf)Cl₂ (2.27 g, 3.11 mmol, 0.15eq )。在100°C於N₂ 下攪拌該混合物6小時。將水(50 mL)添加至該混合物內。將該混合物以EtOAc (30 mL)稀釋，且用EtOAc (100 mL)萃取。有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE)純化，以得到呈黃色油狀物之1-甲氧基-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(3.2 g, 15.1 mmol, 73.1%產率, 90.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.33 (t,J =8.0 Hz, 1H), 6.87 (br d,J =8.4 Hz, 1H), 6.83 (d,J =7.2 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.49 (q,J =3.6 Hz, 3H).

步驟A：3-甲基-2-(三氟甲基)苯酚。在-40°C下向1-甲氧基-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(3.2 g, 16.8 mmol, 1eq )之DCE (65 mL)溶液添加BBr₃ (21.1 g, 84.1 mmol, 8.11 mL, 5eq )，且在-40°C至-10°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(100 mL)使該反應混合物淬滅。該混合物係以EtOAc (20 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至50:1)純化，以得到呈黃色固體之3-甲基-2-(三氟甲基)苯酚(740 mg, 4.08 mmol, 24.2%產率, 97.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.29 - 7.24 (m, 1H), 6.87 - 6.77 (m, 2H), 5.95 (q,J =6.4 Hz, 1H), 2.46 (q,J =2.8 Hz, 3H).

步驟4：三氟甲烷磺酸[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]酯。在40°C下向3-甲基-2-(三氟甲基)苯酚(600 mg, 3.41 mmol, 1eq )、TEA (1.38 g, 13.6 mmol, 1.90 mL, 4eq )之EtOAc (12 mL)溶液添加Tf₂ O (1.44 g, 5.11 mmol, 843 uL, 1.5eq )，且在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(10 mL)使該混合物。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (30 mL)萃取。有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc 自1:0至100:1)純化，以得到呈無色油狀物之三氟甲烷磺酸[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]酯(590 mg, 1.82 mmol, 53.0%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.53 - 7.47 (m, 1H), 7.33 (d,J =7.6 Hz, 1H), 7.29 (d,J =8.4 Hz, 1H), 2.57 (q,J =2.8 Hz, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 600 mg, 973 umol, 1eq )、三氟甲烷磺酸[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]酯(450 mg, 1.46 mmol, 1.5eq )、Cs₂ CO₃ (951 mg, 2.92 mmol, 3eq )及RuPhos (90.8 mg, 195 umol, 0.2eq )之甲苯(12 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (89.1 mg, 97.3 umol, 0.1eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物4小時。將水(15 mL)添加至該混合物內。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (30 mL)萃取。有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(自PE: EtOAc = 5:1 ~ 1:1至EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 20:1)純化。接著將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 50.0 %)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 354 umol, 36%產率, 98.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 664。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.41 - 7.35 (m, 6H), 7.18 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.07 (d,J =7.6 Hz, 1H), 7.10 - 7.04 (m, 1H), 5.20 (s, 2 H), 4.69 (br s, 1H), 4.38 (dd,J =5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.16 (t,J =3.2 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.89 (br d,J =12.0 Hz, 1H), 3.30 (br s, 2H), 3.21 - 2.95 (m, 5H), 2.92 - 2.62 (m, 6H), 2.52 (q,J =3.6 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.05 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 3H).

步驟B：將NH₃ 鼓泡至MeOH (5 mL)內持續50分鐘。於N₂ 下向此溶液添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 362 umol, 1eq )、Pd/C (50 mg, 10.0%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在30°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將反應混合物過濾，將濾液真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 336 umol, 93.0%產率, 99.0%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 530。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(170 mg, 321 umol, 1eq )及TEA (97.4 mg, 963 umol, 134 uL, 3eq )之DCM (3.5 mL)溶液添加丙-2-烯醯氯(43.6 mg, 482 umol, 39.3 uL, 1.5eq )，且在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。以水使該反應混合物淬滅且進行分離。用EtOAc (4 mL)萃取水相。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[3-甲基-2-(三氟甲基)苯基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例364, 110 mg, 188 umol, 58.0%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 584。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.35 (m, 1H), 7.19 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.08 (d,J =7.6 Hz, 1H), 6.59 (br s, 1H), 6.40 (dd,J =1.6, 16.8 Hz, 1H), 5.83 (br d,J =10.4 Hz, 1H), 5.09 (br s, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.37 (dd,J =4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.96 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.60 (br s, 1H), 3.30 (br s, 1H), 3.22 -3.01 (m, 4H), 2.98 - 2.62 (m, 5H), 2.52 (q,J =3.2 Hz, 3H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.90 - 1.68 (m, 3H).
實例365

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇。向(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚烷(500 mg, 3.69 mmol, 1.0eq , HCl)、3-溴丙-1-醇(513 mg, 3.69 mmol, 333 uL, 1.0eq )之CH₃ CN (6.0 mL)溶液添加K₂ CO₃ (1.53 g, 11.1 mmol, 3.0eq )。在50°C下攪拌該混合物2小時。在完成之後，將反應混合物過濾且將濾液蒸發。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯: MeOH = 50: 1至20: 1)純化，以得到呈無色油狀物之3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(195 mg, 1.12 mmol, 30%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.42 (s, 1H), 3.99 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 3.82 (t,J = 5.6 Hz, 2H), 3.65 -3.61 (m, 1H), 3.53 -3.45 (m, 2H), 2.99 - 2.92 (m, 2H), 2.84 - 2.77 (m, 1H), 2.67 - 2.61 (m, 1H), 1.86 - 1.80 (m, 1H), 1.79 - 1.58 (m, 3H).

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲苯(2.0 mL)中之3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚- 5-基]丙-1-醇(325 mg, 2.06 mmol, 3.0eq )、t -BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 3.0eq )混合物分批添加(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物71, 步驟A, 400 mg, 688 umol, 1.0eq )之甲苯(2.0 mL)溶液。在完成之後，將有機溶劑添加水(10.0 mL)。用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚 :乙酸乙酯=3 : 1至乙酸乙酯 : MeOH= 20 : 1) 純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(320 mg, 432 umol, 62%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 674。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(340 mg, 504 umol, 1.0eq )之二噁烷(3.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4.0 M, 3.0 mL, 23.8eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物15分鐘。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。以飽和NaHCO₃ 水溶液(10 mL)調整所得產物，用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(270 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 574。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(270 mg, 470 umol, 1.0eq )之DCM (4.0 mL)溶液添加TEA (143 mg, 1.41 mmol, 196 uL, 3.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(178 mg, 1.41 mmol, 3.0eq )。在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚:乙酸乙酯= 3: 1至 1: 1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 12 分鐘)再純化並凍乾。得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例365, 43.1 mg, 67.7 umol, 14%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 628。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 1H ), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 - 7.16 (m, 1H ), 6.67 - 6.54 (m, 1H ), 6.40 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.82 (d,J = 10.8 Hz, 1H), 5.16 - 5.03 (m, 1H ), 4.48 - 4.40 (m, 1H ), 4.38 - 4.34 (m, 3H), 4.22 - 4.08 (m, 1H), 4.07 -3.99 (m, 2H ), 3.97 -3.74 (m, 2H ), 3.64 -3.55 (m, 2H ), 3.54 -3.35 (m, 2H ), 3.31 -3.20 (m, 1H ), 3.19 -3.14 (m, 1H ), 3.13 - 2.99 (m, 2H ), 2.92 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.81 (m, 1H ), 2.80 - 2.76 (m, 1H ), 2.75 - 2.68 (m, 1H ), 2.64 - 2.57 (m, 1H ), 2.52 (d,J =10.0 Hz, 1H), 1.98 - 1.89 (m, 2H), 1.85 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 1.74 - 1.70 (m, 2H).
實例366

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

插圖：向(2S )-4,4-二氟吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(300 mg, 1.13 mmol, 1.0eq )之THF (8.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (129 mg, 3.39 mmol, 3.0eq )。在-40°C下攪拌該混合物1小時。接著在80°C於N₂ 環境下攪拌該混合物2小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(6.0 mL)使該反應混合物淬滅，且經Na₂ SO₄ 乾燥。接著將混合物過濾，且將濾液濃縮。得到呈無色油狀物之[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基] 甲醇(165 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(156 mg, 1.03 mmol, 3.0eq )之甲苯(2.0 mL)溶液添加t -BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 3.0eq )且在0°C於N₂ 下逐滴添加(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 344 umol, 1.0eq )之甲苯(1.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該反應混合物30分鐘。在完成之後，將有機溶劑添加水(10 mL)，用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取。合併的萃取物係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且將濾液濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯 = 5:1至1:1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(160 mg, 230 umol, 67%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 668。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(137 mg, 205 umol, 1.0eq )之二噁烷(1.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 1.0 mL, 19.5eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物15分鐘。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。所得產物係以飽和NaHCO₃ 水溶液(10 mL)調整，用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 568。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg, 194 umol, 1.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加TEA (196 mg, 1.94 mmol, 270 uL, 10.0eq )及丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(73.3 mg, 581 umol, 3.0eq )。在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物30分鐘。在完成之後，以甲醇(6.0 mL)使該反應混合物淬滅，且在真空下移除該混合物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55% - 85%, 12 分鐘)純化並凍乾。得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例366, 34.1 mg, 54.5 umol, 28%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 622。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.42 (m, 1H ), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H ), 6.63 - 6.57 (m, 1H ), 6.40 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.84 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.02 - 4.98 (m, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H ), 4.31 - 4.22 (m, 1H ), 4.19 -3.97 (m, 2H), 3.96 -3.89 (m, 1H), 3.88 -3.77 (m, 1H ), 3.76 -3.65 (m, 1H ), 3.64 -3.55 (m, 1H ), 3.52 -3.37 (m, 2H ), 3.36 -3.10 (m, 3H ), 3.07 - 2.95 (m, 2H ), 2.94 - 2.80 (m, 1H ), 2.79 - 2.48 (m, 4H ), 2.47 - 2.45 (m, 3H ), 2.36 - 2.24 (m, 1H ).
實例367

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物71, 步驟A, 200 mg, 316 umol, 1.0eq )之二噁烷(1.5 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 1.5 mL, 19.0eq )。在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。以飽和NaHCO₃ 水溶液(10 mL)調整所得產物，用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且將濾液濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(130 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 282 umol, 1.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加吡啶(446 mg, 5.64 mmol, 455 uL, 20.0eq )及(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(155 mg, 846 umol, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(190 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 680。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈：向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(190 mg, 280 umol, 1.0eq )、KI (9.29 mg, 56.0 umol, 0.20eq )及K₂ CO₃ (387 mg, 2.80 mmol, 10.0eq )之DCM (5.0 mL)溶液添加嗎啉 (146 mg, 1.68 mmol, 148 uL, 6.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以甲醇(10.0 mL)使該反應混合物淬滅，且在真空下移除混合物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 60%-90%, 12 分鐘)純化並凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例367, 31.6 mg, 45.2 umol, 16%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 685。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.78 - 7.73 (m, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.51 (m, 1H), 7.48 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.55 - 6.42 (m, 1H), 5.15 - 5.01 (m, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 2H), 4.20 - 4.13 (m, 1H), 4.12 - 4.04 (m, 1H), 3.95 -3.79 (m, 2H), 3.78 -3.65 (m, 5H), 3.62 -3.63 (m, 1H), 3.52 -3.36 (m, 1H), 3.30 -3.14 (m, 4H), 3.13 - 2.97 (m, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.73 - 2.53 (m, 3H), 2.52 - 2.46 (m, 7H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.70 (m, 3H).
實例368

2-((2S,5S)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：((2R,5S)-5-甲基哌嗪-2-基)甲醇：將環(L-Ala-L-Ser) (400 mg, 2.53 mmol)用硼烷-四氫呋喃複合物(18716 µl, 18.7 mmol)稀釋，置於氮氣下且加熱至70°C。在攪拌12小時之後，使該反應物冷卻。於冰浴中將反應物冷卻至0°C，隨後緩慢逐滴添加MeOH (5116 µl, 126 mmol)，隨後添加HCl (1096 µl, 6.58 mmol)。在攪拌1小時之後，將反應物濃縮，以得到((2R,5S)-5-甲基哌嗪-2-基)甲醇(328 mg, 2.52 mmol, 99.6%產率)。

步驟B：(6S,8aR)-6-甲基-3-側氧基四氫-3H-噁唑基[3,4-a]吡嗪-7(1H)-甲酸第三丁酯：將((2R,5S)-5-甲基哌嗪-2-基)甲醇(500 mg, 3.84 mmol)用甲醇(5 mL)稀釋，置於氮氣下且冷卻至0°C。添加TEA (2141 µl, 15.4 mmol)且隨後添加BOC-酸酐(2675 µl, 11.5 mmol) (於甲醇中5 mL, 超過15分鐘)。將反應物保持在＜10°C下持續1小時，接著移除冰浴。再1小時之後，將反應物加熱至50°C。在50°C下攪拌12小時之後，將反應物濃縮，以得到(6S,8aR)-6-甲基-3-側氧基四氫-3H-噁唑基[3,4-a]吡嗪-7(1H)-甲酸第三丁酯(980 mg, 3.82 mmol, 99.6%產率)。

步驟C：(2S,5R)-5-(羥甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯：將(6S,8aR)-6-甲基-3-側氧基四氫-3H-噁唑基[3,4-a]吡嗪-7(1H)-甲酸第三丁酯(980 mg, 3.82 mmol)用乙醇(10047 µl, 172 mmol)稀釋，隨後添加NaOH (9559 µl, 19.1 mmol)。將反應物置於氮氣下，加熱至95°C且攪拌4小時。用KMNO₄ 的TLC (甲醇/DCM/NH4OH, 10/89/1)染色顯示出稍微較高的rf點已消失。使反應物冷卻，接著置於冰浴中。以2N HCl將pH調整至~9，接著用DCM萃取兩次。使該DCM經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到(2S,5R)-5-(羥甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(850 mg, 3.69 mmol, 96.5%產率)。

步驟D：(2R,5S)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：將(2S,5R)-5-(羥甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 1.52 mmol)用THF (4 mL)稀釋，置於氮氣下且冷卻至0°C。添加NaOH (1672 µl, 1.67 mmol)且隨後添加氯甲酸苯甲酯(228 µl, 1.52 mmol)。在攪拌2小時之後，將反應物用乙酸乙酯及水稀釋。使該水再萃取兩次且合併乙酸乙酯，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10-80%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(2R,5S)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(300 mg, 0.823 mmol, 54.2%產率). ESI+APCI MS m/z 265.1 [M+H]⁺ (減Boc)。

步驟E：(2R,5S)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：將(2R,5S)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(300 mg, 0.823 mmol)用DCM (4 mL)稀釋，置於氮氣下且冷卻至0°C。添加DIEA (216 µl, 1.23 mmol)且隨後添加甲烷磺醯氯(70.1 µl, 0.905 mmol)。在0°C下攪拌2小時之後，將反應物用DCM及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，且使該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10-50%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(2R,5S)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(290 mg, 0.655 mmol, 79.6%產率)。

步驟F：(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：將(2R,5S)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(290 mg, 0.655 mmol)用DMA (4 mL)稀釋，隨後添加NaCN (64.2 mg, 1.31 mmol)。將反應物加熱至55°C且攪拌12小時。使反應物冷卻，用MTBE稀釋，且用飽和碳酸氫鈉、水及鹽水洗滌。使該MTBE經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10-50%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(200 mg, 0.536 mmol, 81.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 274.2 [M+H]⁺ (減Boc)。

步驟G：(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(200 mg, 0.536 mmol)用DCM (2 mL)稀釋，隨後添加HCl (669 µl, 2.68 mmol)。在攪拌3小時之後，將反應物濃縮，以得到(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(146 mg, 0.534 mmol, 99.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 274.1 [M+H]⁺ 。

步驟H：4-((2S,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸第三丁酯(211 mg, 0.695 mmol)用DMA (4 mL)稀釋，隨後添加(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(190 mg, 0.695 mmol)及DIEA (364 µl, 2.09 mmol)。使該反應物在環境溫度下攪拌12小時。使該反應物冷卻，用乙酸乙酯及水稀釋。使該乙酸乙酯用水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10-50%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到4-((2S,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(53 mg, 0.0980 mmol, 14.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 541.2 [M+H]⁺ 。

步驟I：(2S,5S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-((2S,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(53 mg, 0.098 mmol)用DCM稀釋，隨後添加HCl (122 µl, 0.49 mmol)。在攪拌4小時之後，將該反應物濃縮，以得到(2S,5S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(43 mg, 0.098 mmol, 100%產率)。ESI+APCI MS m/z 441.1 [M+H]⁺ 。

步驟J：(2S,5S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(2S,5S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(43 mg, 0.0975 mmol)、1-碘萘(124 mg, 0.488 mmol)、Cs2CO3 (95.3 mg, 0.293 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (12.5 mg, 0.0146 mmol)用DMA (600 uL)稀釋，用氬氣沖淨，密封且加熱至92°C。在攪拌12小時之後，使該反應物冷卻，用乙酸乙酯及水稀釋。分離各層，且將該乙酸乙酯用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10-50%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(2S,5S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(26.5 mg, 0.0467 mmol, 47.9%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟K：2-((2S,5S)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(2S,5S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(26.5 mg, 0.0467 mmol)、甲烷磺酸(s)-(二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-二苯基]-2-基)-l5-磷烷基)(2'-(甲基胺基)-[1,1'-二苯基-2-基)鈀(III)酯(7.96 mg, 0.00935 mmol)及Cs2CO3 (76.1 mg, 0.234 mmol)用DMA (300 uL)稀釋，隨後添加N-甲基-l-脯胺醇 (21.5 mg, 0.187 mmol)。將該反應物用氬氣沖淨，密封且加熱至90°C。在攪拌12小時之後，使該反應物冷卻，用乙酸乙酯及水稀釋。使該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10%甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到(2S,5S)-2-(氰基甲基)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(8 mg, 0.0124 mmol, 26.5%產率)及2-((2S,5S)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(10 mg, 0.0195 mmol, 41.8%產率)。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟L：2-((2S,5S)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((2S,5S)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(10 mg, 0.020 mmol)用DCM (200 uL)稀釋，隨後添加DIEA (6.8 µl, 0.039 mmol)。將該反應物置於氮氣下且冷卻至0°C。添加丙烯醯氯 (1.8 µl, 0.021 mmol)且將該反應物攪拌2小時。將反應物傾注入10%碳酸氫鈉溶液，且用DCM萃取。使該DCM經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將所述物質在矽膠上使用10%甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物2-((2S,5S)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例368, 6 mg, 0.011 mmol, 54%產率)。ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例369

2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯醯基哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(10 g, 34 mmol)溶解於DMA (68 ml, 34 mmol)中。接著向此溶液添加2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(9.3 g, 30 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(24 ml, 135 mmol)且在室溫下攪拌該反應物1小時。接著將該反應物傾注入鹼水內，且用MTBE萃取。將有機物以額外的水、鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。將該物質使用10%至70% EtOAc:己烷做為溶離液層析，以得到(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(12 g, 23 mmol, 67%產率)。ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1 g, 2 mmol)溶解於DCM (19 ml, 2 mmol)中且用氫氯酸(4.0 M的1,4-二噁烷溶液) (2 ml, 9 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。將該反應物真空濃縮，且再懸浮於DCM中。以1M NaOH洗滌懸浮液。用DCM (2X)萃取水層。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥，真空濃縮，得到粗製(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.8 g, 2 mmol, 99%產率)。ESI+APCI MS m/z 427.1 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (343 mg, 0.375 mmol)及2-(二環己基膦基)-2',4',6'-三異丙基-1,1'-二聯苯(357 mg, 0.750 mmol)溶解於1,4-二噁烷(18740 µl, 1.87 mmol)，且在氬氣下沖淨5分鐘。在100°C於氬氣下攪拌該反應物再15分鐘。於氬氣下向此溶液添加(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(800 mg, 1.87 mmol)、1-溴-8-甲基萘(1243 mg, 5.62 mmol)及碳酸銫(1832 mg, 5.62 mmol)。於氬氣下蓋上該反應物，且在100°C下攪拌隔夜。將反應物冷卻至室溫，且過濾通過GF/F濾紙。將濾液真空濃縮，且藉由正相層析法在CombiFlash上用0%-15% DCM:MeOH(+2% NH4OH修飾劑)溶離而純化，以得到(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(378 mg, 0.667 mmol, 35.6%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一圓底燒瓶中，將(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.3 g, 0.529 mmol)之二噁烷(5.29 ml, 0.529 mmol)溶液用氬氣鼓泡。於氬氣下依序添加3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇(0.250 g, 1.59 mmol)、Cs2CO3 (0.517 g, 1.59 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.0969 g, 0.106 mmol)及9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基-膦基)呫噸(Xanthene) (0.122g, 0.212mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱2小時。將反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物藉由矽膠用0-12% MeOH於具有2% NH₄ OH的DCM中溶離而純化，以得到(S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.155 g, 0.225 mmol, 42.6%產率)。ESI+APCI MS m/z 688.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將於EtOH (2253 µl, 0.225 mmol)及THF (2253 µl, 0.225 mmol)及EtOH (2253 µl, 0.225 mmol)中之(S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(155 mg, 0.225 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(60.0 mg, 0.0563 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並用N₂ 再沖淨5分鐘。接著在H₂ 環境攪拌該溶液。接著以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(98 mg, 0.177 mmol, 78.5%產率)。以此獲得粗製物。ESI+APCI MS m/z 554.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯醯基哌嗪-2-基)乙腈：於環境溫度下向2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(98 mg, 0.177 mmol)之二氯甲烷(1770 µl, 0.177 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯(14.4 µl, 0.177 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(61.8 µl, 0.354 mmol)。接著將反應物在環境溫度下攪拌2小時。將反應混合物真空濃縮。將濃縮物再懸浮於60:40之ACN: H₂ O混合物，且於Gilson (逆相prep HPLC)上用5--＞95% 於水/0.1% TFA中之ACN/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，且分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM中。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-4-(2-(3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯醯基哌嗪-2-基)乙腈(實例369, 63.5 mg, 0.104 mmol, 59.0%產率)。ESI+APCI MS m/z 608.3 [M+H]⁺ 。
實例370

(S)-2-(1-丙烯醯基-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

(S)-2-(1-丙烯醯基-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(3-嗎啉丙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例369，在步驟D中以N-羥基丙基嗎啉取代3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇並以甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II)取代三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)及9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基-膦基)呫噸，來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]⁺ 。
實例371

(S)-3-((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺

(S)-3-((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺。依據實例369，在步驟D中以3-羥基-N,N-二甲基丙醯胺取代3-((1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙-1-醇並以甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II)取代三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)及9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基-膦基)呫噸，來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例372

2-((S)-1-((E)-丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.05863 mmol)及3-(E)-丁-2-烯酸(6.562 mg, 0.07622 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (20.48 µl, 0.1173 mmol)及1-丙基膦酸環酐(52.35 µl, 0.08795 mmol)。在攪拌12小時之後，將反應物用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，且使該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質於矽膠上用10%甲醇/DCM (1% NH4OH)溶離而純化，以得到標題化合物2-((S)-1-((E)-丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例372, 10 mg, 0.01725 mmol, 29.42%產率)。ESI+APCI MS m/z 580.3 [M+H]⁺ 。
實例373

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一微波管中，將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 0.198 mmol)溶解於二噁烷(98.9 µl, 0.198 mmol)中，且用碳酸銫(129 mg, 0.396 mmol)及2-氟-3-(三氟甲基)吡啶(163 mg, 0.989 mmol)處理。接著蓋上該微波管且加熱至90°C持續12小時。將該反應物冷卻且過濾通過GF/F濾紙，且將濾液濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法(0-12% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(70 mg, 0.11 mmol, 54%)。

步驟B：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例375步驟F-G，以2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟F中的2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯，來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例374

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 375 步驟E-G，以1-溴-2-(2,2,2-三氟乙基)苯取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽來製備。ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。
實例375

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(8.0 g, 26.3 mmol)、許尼希氏鹼(22.9 ml, 132 mmol)及2-(哌嗪-2-基)乙腈二鹽酸鹽(5.21 g, 26.3 mmol)置於DMA (75 mL)中且在室溫下攪拌20分鐘。添加水且用EtOAc (3x100 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且用水(3x 50 mL)洗滌，接著用硫酸鈉乾燥。將固體過濾，且將濾液濃縮，以得到粗製2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯。ESI+APCI MS m/z 337.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(10.50 g, 26.725 mmol)及TEA (5.5876 ml, 40.088 mmol)製於THF (100 mL)中且冷卻至0°C。添加氯甲酸苯甲酯(5.6518 ml, 40.088 mmol)，且在0°C下攪拌該反應物30分鐘。添加水且用DCM (3x 50 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-60% EtOAc之己烷溶液)純化，以得到4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(12.939 g, 24.551 mmol, 91.865%產率)。ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於一錐底小管中，將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(3.28g, 6.22 mmol)之二噁烷(62.2 ml, 6.22 mmol)溶液用氬氣鼓泡，於氬氣下依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(2.15 g, 18.7 mmol)、Cs2CO3 (6.08 g, 18.7 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.795 g, 0.934 mmol)且再鼓泡5分鐘。將反應混合物蓋上且加熱至100°C持續18小時。將反應物冷卻且添加水。用DCM (3x15mL)萃取該混合物，並將萃取物合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12%之於DCM中的MeOH，及0.25% NH₄ OH)純化，以得到4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(2.65 g, 4.37 mmol, 70.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.6 g, 1.0 mmol)溶解於二氯甲烷(10 ml, 1.0 mmol)中，且用氫氯酸(4.0 M之1,4-二噁烷溶液) (1 ml, 5 mmol)處理，並在室溫下攪拌該反應物1小時。接著將反應物真空濃縮，且使該物質分溶於EtOAc與鹼水之間，並分離各層。接著將有機物用鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.4 g, 0.8 mmol, 80%產率)。ESI+APCI MS m/z 506.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(193 mg, 0.593 mmol)、2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(60 mg, 0.119 mmol)及Rhuphos Pd G3 (9.92 mg, 0.0119 mmol)以及4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽(93.4 mg, 0.356 mmol)。將該小管密封，且通過隔片添加1,4-二噁烷(1187 µl, 0.119 mmol)。將Ar鼓泡通過該混合物5分鐘，接著將該混合物加熱至70°C持續7小時。將反應物冷卻，過濾通過定量紙且濃縮。將黃色固體溶解於最少量的DCM中且藉由矽膠層析法(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(35 mg, 0.0541 mmol, 45.6%)。ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(35.2 mg, 0.0541 mmol)之EtOH (541 µl, 0.0541 mmol)及THF (541 µl, 0.0541 mmol)溶液添加鈀(28.8 mg, 0.0135 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H2O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。在環境溫度下攪拌該混合物1小時。接著以MeOH稀釋該混合物並過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮，以得到2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(26.4 mg, 0.0511 mmol, 94.5%產率)。

步驟G：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在-78°C下向2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(26.4 mg, 0.0511 mmol)之CH2Cl2 (511 µl, 0.0511 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (1022 µl, 0.102 mmol) (新鮮製備之0.1M DCM溶液)，隨後添加三乙胺(14.2 µl, 0.102 mmol)。接著在0^o C下攪拌該反應物45分鐘。LC-MS顯示產物已形成。將反應物濃縮，且藉由prep HPLC純化，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例375, 3 mg, 0.00526 mmol, 10.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例376

2-(1-(丁-2-炔醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯

步驟A：2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(8.0 g, 26.3 mmol)、許尼希氏鹼(22.9 ml, 132 mmol)及2-(哌嗪-2-基)乙腈二鹽酸鹽(5.21 g, 26.3 mmol)置於DMA (75 mL)中，且在室溫下攪拌20分鐘。添加水且用EtOAc (3x100 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且用水(3x 50 mL)洗滌，接著用硫酸鈉乾燥。將固體過濾且將濾液濃縮，以得到粗製2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯。ESI+APCI MS m/z 337.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將2-氯-4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(10.50 g, 26.73 mmol)及TEA (5.59 ml, 40.0 mmol)置於THF (100 mL)中，且冷卻至0°C。添加氯甲酸苯甲酯(5.65 ml, 40.0 mmol)，且在0°C下攪拌30分鐘。添加水且用DCM (3x 50 mL)萃取該混合物。將萃取物合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-60% EtOAc之己烷溶液)純化，以得到4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(12.94 g, 24.6 mmol, 92%產率)。ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於一錐底小管中將 (S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(3.28g, 6.22 mmol)之二噁烷(62.2 ml, 6.22 mmol)溶液用氬氣鼓泡，且於氬氣下依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(2.15 g, 18.7 mmol)、Cs2CO3 (6.08 g, 18.7 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.795 g, 0.934 mmol)並再鼓泡5分鐘。蓋上該反應混合物且加熱至100°C持續18小時。將反應物冷卻且添加水。用DCM (3x 15 mL)萃取該混合物，並將萃取物合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-12% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(2.65 g, 4.37 mmol, 70%產率)。ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.6 g, 1.0 mmol)溶解於二氯甲烷(10 ml, 1.0 mmol)中，且用氫氯酸(4.0 M的1,4-二噁烷溶液) (1 ml, 5 mmol)處理，並在室溫下攪拌該反應物1小時。將該反應物真空濃縮，且使該物質分溶於EtOAc與鹼水之間，並分離各層。將有機物以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.4 g, 0.8 mmol, 80%產率)。ESI+APCI MS m/z 506.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(193 mg, 0.59 mmol)、2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(60 mg, 0.12 mmol)及Rhuphos Pd G3 (9.92 mg, 0.012 mmol)以及1-溴萘(49.8 µl, 0.36 mmol)。將該小管密封，且通過隔片添加1,4-二噁烷(1187 µl, 0.12 mmol)。將Ar鼓泡通過該混合物5分鐘，接著將該混合物加熱至70°C持續7小時。將反應物冷卻，過濾通過定量紙且濃縮。將黃色固體溶解於最少量的DCM中且藉由矽膠層析法(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(28 mg, 0.044 mmol, 37%產率)。ESI+APCI MS m/z 632.4 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(45 mg, 0.071 mmol)之EtOH (712 µl, 0.071 mmol)及THF (712 µl, 0.071 mmol)溶液添加鈀(38 mg, 0.018 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。在環境溫度下攪拌該混合物1小時。接著以MeOH稀釋並過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮，以得到2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.060 mmol, 85%產率)。ESI+APCI MS m/z 498.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-(1-(丁-2-炔醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(603 µl, 0.060 mmol)之25 mL RBF添加2-(4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.060 mmol)及三乙胺(12.2 mg, 0.12 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入2-丁炔酸(6.08 mg, 0.072 mmol)。將1-丙基膦酸環酐(26.9 µl, 0.090 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌2小時。添加水且用EtOAc (2x 25 mL)萃取該反應物。用LiCl、NaCl及水(每次洗滌10 mL)洗滌有機層。乾燥且濃縮成固體，且藉由prep HPLC (5-95% ACN:H2O, TFA)純化，以得到標題化合物2-(1-(丁-2-炔醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯(實例376, 11.2 mg, 0.02 mmol, 33%產率)。ESI+APCI MS m/z 564.3 [M+H]⁺ 。
實例377

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.30 g, 0.54 mmol)之二噁烷溶液添加(S)-(1-甲基哌啶-2-基)甲醇(0.49 g, 3.8 mmol)及Cs₂ CO₃ (0.53 g, 1.6 mmol)，且用氬氣使該反應物脫氣15分鐘，隨後添加Rhuphos Pd G3 (0.068 g, 0.081 mmol)且將反應物加熱至100^o C隔夜。將反應物冷卻且過濾通過GFF濾紙，並將濾液真空濃縮。接著將殘餘物使用具有2%氫氧化銨之1à15% MeOH/DCM做為溶離液層析而得到2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.23 g, 0.45 mmol, 83%產率)。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向冷卻至0°C之2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.23 g, 0.45 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.16 ml, 0.90 mmol)，隨後添加丙烯醯氯 (0.037 ml, 0.45 mmol) (in 10 mL of DCM)溶液，且在0^o C下攪拌該反應物10分鐘。接著向該反應物添加1 mL的甲醇，且將該反應物真空濃縮。接著將該物質使用具有2% NH₄ OH之1à 10% MeOH/DCM做為溶離液而層析兩次，以得到固體且將其進一步藉由逆相prep HPLC使用5à95% ACN/水，具有0.1%TFA做為修飾劑來純化，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例377, 0.030 g, 0.053 mmol, 12%產率)。ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例378

2-((2S,5R)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2R,5R)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：將(2R,5R)-5-(羥甲基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.0 g, 4.34 mmol)溶解於水(50 mL)中，隨後添加EtOAc (6.68 ml, 4.34 mmol)及sodium hydrogen carbonate (1.09 g, 13.0 mmol)並攪拌該反應物3分鐘。向該反應物一次添加入氯甲酸苯甲酯(0.648 ml, 4.56 mmol) (內溫從19 --＞ 25°C)，並在室溫下攪拌該反應物隔夜。接著分離各層且將有機物用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物使用10à70% EtOAc/乙烷做為溶離液層析而得到(2R,5R)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(1.2 g, 3.29 mmol, 75.8%產率)。ESI+APCI MS m/z 265.2 [M+H-boc]⁺ 。

步驟B：(2R,5R)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：向冷卻至0°C之(2R,5R)-2-(羥甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(1.2 g, 3.3 mmol)之DCM溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.64 g, 4.9 mmol)及甲烷磺醯氯(0.30 ml, 3.6 mmol)，且在0^o C下攪拌該反應物2小時。接著將有機物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將該物質使用10à70% EtOAc/乙烷做為溶離液層析而得到(2R,5R)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(1.3 g, 2.9 mmol, 89%產率)。ESI+APCI MS m/z 343.1 [M+H-boc]⁺ 。

步驟C：(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：向(2R,5R)-5-甲基-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(1.3 g, 2.9 mmol)之DMA (20 mL)溶液添加氰基鈉(0.29 g, 5.9 mmol)，且在55^o C下攪拌該反應物48小時。接著將該反應物用鹼水(220 mL)稀釋，且用MTBE萃取水層。接著將有機物以水(2x50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將該物質使用10à50% EtOAc/乙烷做為溶離液層析而得到(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(0.90 g, 2.4 mmol, 82%產率)。ESI+APCI MS m/z 274.1 [M+H-boc]⁺ 。

步驟D：(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽：向(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(0.90 g, 2.4 mmol)之DCM溶液添加氯化氫(3.0 ml, 12 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物2小時(在1小時的時候再添加5 eq的HCl)。接著將反應物真空濃縮，且將該物質以粗製物用於下個反應中。ESI+APCI MS m/z 274.2 [M+H]⁺ 。

步驟E：4-((2R,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：向固體狀(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(0.75 g, 2.4 mmol)及2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.74 g, 2.4 mmol)添加DMA (10 mL)，隨後添加許尼希氏鹼(1.3 ml, 7.3 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物隔夜。接著將該反應物傾注入水中，且用MTBE萃取水層。將該MTBE層以水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將該物質藉由管柱層析法使用10à70% EtOAc/乙烷做為溶離液來純化，以得到4-((2R,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.72 g, 1.3 mmol, 55%產率)。ESI+APCI MS m/z 541.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(2S,5R)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-((2R,5S)-4-((苯甲氧基)羰基)-5-(氰基甲基)-2-甲基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.72 g, 1.3 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加氯化氫(1.7 ml, 6.7 mmol) (4 M的二噁烷溶液)，且在室溫下攪拌該反應物1小時。接著將反應物真空濃縮，且使殘餘物分溶於EtOAc與鹼水之間。分離出有機物且用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。該物質係以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 441.2 [M+H]⁺ 。

步驟G：(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(2S,5R)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.48 g, 1.1 mmol)之二噁烷(40 mL)溶液添加1-碘萘(1.4 g, 5.4 mmol)及Cs₂ CO₃ (1.1 g, 3.3 mmol)，且將該反應物用Ar脫氣15分鐘，隨後添加甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.14 g, 0.16 mmol)，且將反應物加熱至100^o C持續5小時。接著將該反應物冷卻，過濾通過GFF濾紙且真空濃縮。接著將該物質使用10à70 EtOAc/乙烷做為溶離液層析，以得到(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.8 g, 5.1 mmol, 64%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟H：2-((2S,5R)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(2S,5R)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)-5-甲基哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.48 g, 0.85 mmol)之二噁烷(40 mL)溶液添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(0.39 g, 3.4 mmol)及Cs₂ CO₃ (1.4 g, 4.2 mmol)，且將該反應物用Ar脫氣15分鐘，隨後添加甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.11 g, 0.13 mmol)，且將該反應物加熱至100^o C隔夜。接著將該反應物冷卻，過濾通過GFF濾紙且真空濃縮。接著將該物質使用1à15% (MeOH +2% NH₄ OH)/DCM層析，以得到(2S,5R)-2-(氰基甲基)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.20 g, 0.31 mmol, 37%產率)及2-((2S,5R)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.14 g, 0.27 mmol, 32%產率)。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：2-((2S,5R)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向冷卻至0°C之2-((2S,5R)-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.14 g, 0.274 mmol)添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.0982 ml, 0.547 mmol)，隨後添加丙烯醯氯 (0.0225 ml, 0.274 mmol)，且在0^o C下攪拌該反應物10分鐘。將1 mL的甲醇添加至該反應物，且將該反應物真空濃縮。接著將該物質藉由Gilson 逆相prep 2 HPLC純化兩次且使用5à95% ACN/水，具有0.1% TFA作為修飾劑來溶離。接著將合併的分餾物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((2S,5R)-1-丙烯醯基-5-甲基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例378, 0.0118 g, 0.0209 mmol, 7.62%產率)。ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例379

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-2-(三氟甲基)苯取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例380

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟C-G，以(S)-(1-(2-甲氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲醇取代步驟C中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇並以1-溴萘取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽而製備。ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]⁺ 。
實例381

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S,4R)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：其係依據實例 375 步驟C-F，以(2S,4R)-2-(羥甲基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟C中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇並以1-溴萘取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽而製備。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(2-(((2S,4R)-1-(第三丁氧基羰基)-4-甲氧基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(27.0 mg, 0.04 mmol , 甲醛(15.7 µl, 0.2 mmol)、Na(OAc)3BH (17.7 mg, 0.08 mmol)置於THF (2 mL)中且攪拌2小時。添加飽和碳酸氫鹽，且用10% MeOH於DCM (3x15 mL)中萃取該混合物。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥，且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。

步驟C：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟F及G，以2-(氰基甲基)-4-(2-(((2S,4R)-4-甲氧基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟F中的2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯而製備。ESI+APCI MS m/z 582.3 [M+H]⁺ 。
實例382

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟F-J，以(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇取代步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇並以1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ r。
實例383

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以3-溴-5-氟-4-(三氟甲基)吡啶取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 589.3 [M+H]⁺ 。
實例384

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.37 g, 10.2 mmol)置於DCM (75 mL)中且冷卻至0°C。添加HCl (12.7 ml, 50.9 mmol)且使該反應物升溫至室溫並攪拌2小時。將該反應物濃縮且將其加入DCM中。添加飽和碳酸氫鹽且用DCM (3x 50 mL)萃取該混合物。將有機層合併，乾燥且濃縮，以得到(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.33 g, 10.1 mmol, 99%產率)，且將其按原樣使用。

步驟B：(S)-4-(2-氯-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(2.29 g, 7.0 mmol)、(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.00 g, 2.3 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.30 g, 0.35 mmol)、3-溴-5-氟-4-(三氟甲基)吡啶(1.29 g, 5.3 mmol)及1,4-二噁烷(15.6 ml, 2.3 mmol)，且將該小管用Ar脫氣並接著加熱至90°C持續24小時。將該反應物冷卻，添加水及飽和NH₄ Cl，且用DCM萃取該混合物。將有機層合併且濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠(5-75% EtOAc於己烷中)純化，以得到(S)-4-(2-氯-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(634 mg, 1.1 mmol, 46%產率)。

步驟C：(2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：於一錐底小管內，將(S)-4-(2-氯-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(634 mg, 1.07 mmol)之二噁烷(10746 µl, 1.07 mmol)溶液用氬氣鼓泡。於氬氣下依序添加(2S,4R)-4-氟-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(942 mg, 4.30 mmol)、Cs2CO3 (1050 mg, 3.22 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (137 mg, 0.161 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且在100°C下加熱18小時。將反應物冷卻且添加水。用DCM (3x 20 mL)萃取該混合物，且將萃取物合併且濃縮。所得殘餘物係藉由矽膠(0-10% MeOH)純化，以得到(2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(579 mg, 0.907 mmol, 84%產率)。

步驟D：(2S,4R)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：將(2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(579 mg, 0.907 mmol)、三乙胺(379 µl, 2.72 mmol)置於CH₂ Cl₂ (9066 µl, 0.907 mmol)中且冷卻至0°C。添加丙烯醯氯 (6044 µl, 1.81 mmol)(新鮮製備之0.3M DCM溶液)，且在0°C下攪拌該反應物45分鐘。添加水且用DCM (3x 15 mL)萃取該混合物。將各層合併且濃縮，以得到粗製物且其係按原樣使用。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於一密封容器中，將(2S,4R)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(628 mg, 0.91 mmol)置於MeOH (2 mL)中。添加HCl (756 µl, 4.53 mmol) (6M水溶液)且在室溫下攪拌該混合物5小時。緩慢添加飽和碳酸氫鹽而導致pH ~9。用DCM (3x20 mL)萃取該混合物。將該萃取物合併、乾燥、過濾且濃縮，以得到粗製物且其係按原樣使用。

步驟F：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(175 mg, 0.30 mmol)、甲醛(111 µl, 1.48 mmol)、Na(OAc)3BH (125 mg, 0.59 mmol)置於THF (2 mL)中且攪拌2小時。將萃取物合併，用硫酸鈉乾燥，且濃縮。所得殘餘液係藉由矽膠純化，以得到2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(69.7 mg, 0.115 mmol, 39%產率)。ESI+APCI MS m/z 607.2 [M+H]⁺ 。
實例385

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氯-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氯-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以3-溴-5-氯-4-(三氟甲基)吡啶取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH而製備。ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]⁺ 。
實例386

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-異丙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4R)-4-氟-1-異丙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 384 步驟F的製備方法，以丙-2-酮取代步驟F中的甲醛而製備。ESI+APCI MS m/z 635.3 [M+H]⁺ 。
實例387

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氯-4-甲基吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氯-4-甲基吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以3-溴-5-氯-4-甲基吡啶取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 551.2 [M+H]⁺ 。
實例388

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-3-氟-2-甲苯取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 534.3 [M+H]⁺ 。
實例389

2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：向於3L燒瓶中之(R)-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(76.0 g, 351 mmol)添加水(500 mL)，且攪拌該漿液直至物質完全溶解。向此混合物添加EtOAc (541ml, 351 mmol)，隨後添加NaHCO₃ (88.6 g, 1.05 mol)，且攪拌所得混合物3分鐘(內溫 = 20°C)。向此混合物添加Cbz-Cl (52.5 ml, 369 mmol)超過3分鐘(內溫從20°C至25°C，且在此時點看到廢氣)，且在室溫下攪拌該反應物1天。將該反應混合物移至分液漏斗，將有機層以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，且真空濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法用10-70% EtOAc/乙烷溶離而純化，以得到(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(114.6 g, 327.0 mmol, 93%產率)。ESI+APCI MS m/z 251.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟B：(R)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：向冷卻至0°C之(R)-2-(羥甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(32 g, 91.3 mmol)之CH₂ Cl₂ (457 mL, 0.2 M)溶液添加DIEA (24.6 ml, 137 mmol)且隨後添加甲烷磺醯氯(7.77 ml, 100 mmol)超過1分鐘，並在0°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物移至分液漏斗且用1:1的水/鹽水(500 mL)洗滌。收集有機層，經MgSO₄ 乾燥，且真空濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法用10-60% EtOAc/乙烷溶離而純化，以得到(R)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(33 g, 77.0 mmol, 84.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 329.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯：向(R)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(12.6 g, 29.4 mmol)之DMA (368 ml, 73.5 mmol)溶液用氬氣鼓泡。向該溶液添加氰化鈉 (3.60 g, 73.5 mmol)，在55°C下攪拌該反應物1天，藉由HPLC (長程法)監測，以判定反應完成。將該反應混合物移至分液漏斗，以0.5M NaOH (800 mL)稀釋，接著用MTBE (2x)萃取。接著將合併的有機層以鹼水(2x 200 mL)、鹽水(100 mL)洗滌，經MgSO₄ 乾燥，且真空濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法用10--＞60% EtOAc/乙烷做為溶離液而純化，以得到(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(7.9 g, 22.0 mmol, 75%產率)。ESI+APCI MS m/z 260.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟D：(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽：向(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1,4-二甲酸1-苯甲基4-(第三丁)酯(20.4 g, 56.8 mmol)之DCM (50 mL)溶液添加氯化氫(99.3 ml, 397 mmol) (4.0 M之二噁烷溶液)，且在室溫下攪拌該反應物1.5小時。將反應混合物真空濃縮且真空乾燥，以得到呈泡沫之(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(16.8 g, 56.8 mmol, 100%產率)。ESI+APCI MS m/z 260.1 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：向(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(16.8 g, 56.8 mmol)之DMA (114 ml, 56.8 mmol)溶液添加2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(15.5 g, 51.1 mmol)，隨後添加DIEA (39.7 ml, 227 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物1小時。將該反應混合物用1 L的水稀釋，且用MTBE (2x)萃取。將合併的有機物以水(2x200 mL)、鹽水洗滌，經MgSO₄ 濃縮且真空濃縮。將該殘餘物藉由急驟層析法用10-60% EtOAc/乙烷做為溶離液溶離而純化，以得到(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(22.8 g, 43.3 mmol, 76%產率)。ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於具有PTFE螺旋蓋的250 mL厚壁RBF (圓底燒瓶)內，將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.55 g, 10.5 mmol)之二噁烷(60.2 ml, 10.5 mmol)溶液用氬氣鼓泡，依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(3.64 g, 31.6 mmol)、Cs₂ CO₃ (10.3 g, 31.6 mmol)、Ruphos Pd G3 (0.881 g, 1.05 mmol)，且將所得混合物再用氬氣鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且在100°C下攪拌1天。在初始材料消耗掉時，將反應混合物冷卻至環境溫度，於必要時添加Cbz-Cl以將經Cbz水解的產物轉換為標題化合物。接著使反應混合物分溶於EtOAc/10%鹽水之間。用EtOAc (2x)萃取水層。合併的有機層係經MgSO₄ 乾燥且濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法，以1.5%MeOH/0.15% NH₄ OH/DCM至11.25%MeOH/1.125% NH₄ OH/DCM的梯度 (預混15%MeOH/1.5%NH₄ OH之DCM溶液且從此DCM混合溶液從10-75%加入)溶離而純化，以得到所述標題化合物(4.51 g, 7.45 mmol, 71%)。ESI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(7.2 g, 12 mmol)之DCM (1.0 g, 12 mmol)溶液添加HCl (4M的二噁烷溶液， 15 ml, 59 mmol)。在室溫下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物濃縮成雙HCl鹽。將殘餘物分溶於DCM / NaHCO₃ (飽和)之間，且用DCM (3x)萃取水層。合併的有機層係經乾燥且濃縮，以得到標題化合物4.72克(0.009 mmol, 79%)。ESI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。

步驟H：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(967 mg, 2.97 mmol)、(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 0.989 mmol)、Rhuphos Pd G3 (124 mg, 0.148 mmol)、1-溴-2,3-二甲苯(915 mg, 4.94 mmol)及1,4-二噁烷(9889 µl, 0.989 mmol)，將該小管用Ar脫氣且密封，接著加熱至75°C持續24小時。添加水及飽和NH₄ Cl，且用DCM萃取該混合物。將有機層合併且濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠(0-12% MeOH於DCM中， w/0.25% NH₄ OH)純化，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(505mg, 0.828 mmol, 83.7%產率)。ESI MS m/z 610.4 [M+H]⁺ 。

步驟I：2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(505 mg, 0.828 mmol)之EtOH (8282 µl, 0.828 mmol)及THF (8282 µl, 0.828 mmol)溶液添加鈀(441 mg, 0.207 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境。接著在環境溫度下攪拌該混合物2小時。接著用1:1的MeOH與THF來稀釋該混合物，且過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮，以得到粗產物且按原樣使用。ESI MS m/z 476.3 [M+H]⁺ 。

步驟J：2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(4415 µl, 0.4415 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(210 mg, 0.44 mmol)及三乙胺(122.7 µl, 0.88 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入丁-2-炔酸(44.54 mg, 0.53 mmol)。將1-丙基膦酸環酐(197.1 µl, 0.66 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌2小時。添加水且過濾固體。將固體藉由矽膠(於DCM中之5-18% MeOH，具有0.25% NH4OH)純化，以得到化合物2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例389, 144 mg, 0.27 mmol, 60%)。ESI+APCI MS m/z 542.3 [M+H]⁺ 。
實例390

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3S)-3-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-(((2R,3S)-1-(第三丁氧基羰基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：其係依據實例 440 步驟C-E，以(2R,3S)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟C中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇而製備。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3S)-3-羥基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(2R,3S)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(363 mg, 0.473 mmol)置於MeOH (10 mL)中。添加6M HCl水溶液且在室溫下攪拌6小時。將該反應物冷卻至0°C，且緩慢添加飽和碳酸氫鹽。用DCM (3x20 ml)萃取該混合物。將萃取物合併、乾燥、過濾且濃縮，以得到粗製物且按原樣使用。

步驟C：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3S)-3-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例384步驟F，以2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3S)-3-羥基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈取代2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈而製備。ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例391

2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 389 步驟H-J，以1-溴-8-氯萘取代步驟H中的1-溴-2,3-二甲苯而製備。ESI+APCI MS m/z 598.2 [M+H]⁺ 。
實例392

2-((S)-1-(環丁-1-烯-1-羰基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-(環丁-1-烯-1-羰基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 389 步驟J，以環丁-1-烯1-甲酸取代丁-2-炔酸而製備。ESI+APCI MS m/z 556.3 [M+H]⁺ 。
實例393

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將(S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 0.22 mmol)、K2CO3 (329 µl, 0.66 mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三硼環己烷(82.6 mg, 0.658 mmol)及Tetrakis (25.3 mg, 0.022 mmol)置於二噁烷(731 µl, 0.22 mmol)中且加熱至90°C持續18小時。添加水且用於DCM (3x15 mL)中的10% MeOH萃取該反應物。將萃取物合併且濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠(2-80% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.11 mmol, 52%產率)。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟I及J，以(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-甲基-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟I中的(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯而製備。ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。
實例394

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-2,3-二甲苯取代步驟H中的1-溴萘而製備。ESI+APCI MS m/z 530.3 [M+H]⁺ 。
實例395

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一微波管中，將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.362 mmol)溶解於二噁烷(181 µl, 0.362 mmol)中，且用碳酸銫(236 mg, 0.723 mmol)及(S)-2-(羥甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(389 mg, 1.81 mmol)處理。接著蓋上該微波管且加熱至90°C持續2小時。將該反應物冷卻且過濾通過GF/F濾紙。將濾液真空濃縮，且在CombiFlash上用0%-10% DCM:MeOH溶離而層析。將全部含有純淨產物的分餾物合併且濃縮，以得到4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(264 mg, 0.361 mmol, 99.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 732.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(264 mg, 0.361 mmol)溶解於二氯甲烷(3607 µl, 0.361 mmol)且用TFA (556 µl, 7.21 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。將該反應物真空濃縮，且用飽和碳酸氫鹽處理。將水溶液用DCM (2X)萃取，且將合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥。將有機物真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(210 mg, 0.332 mmol, 92.2%產率)。ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-2-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(105 mg, 0.1662 mmol)溶解於甲酸(94.05 µl, 2.493 mmol)中，且用甲醛(1868 µl, 24.93 mmol)處理。在85°C下攪拌該反應混合物1小時。將反應物冷卻至室溫且用飽和碳酸氫鹽處理。將水溶液用DCM (2X)萃取。將合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥，真空濃縮，且在CombiFlash上用0%-10% DCM:MeOH溶離而層析。將全部含有純淨產物的分餾物合併且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(75 mg, 0.1161 mmol, 69.88%產率)。ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(117 mg, 0.181 mmol)之EtOH (1812 µl, 0.181 mmol)及THF (1812 µl, 0.181 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(96.4 mg, 0.0453 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並用N₂ 再沖淨5分鐘。接著在H₂ 環境下攪拌該溶液。接著以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(88 mg, 0.172 mmol, 94.9%產率)。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於環境溫度下向2-(4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(88 mg, 0.17 mmol)之二氯甲烷(1720 µl, 0.17 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (14 µl, 0.17 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(60 µl, 0.34 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物30分鐘。接著將反應混合物真空濃縮。使該濃縮物懸浮於60:40的ACN: H₂ O混合物中，且於Gilson (逆相prep HPLC)上純化，且用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離。使含有產物的分餾物分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(14 mg, 0.025 mmol, 14%產率)。ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例396

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一錐底小管內，將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.362 mmol)之二噁烷(3616 µl, 0.362 mmol)溶液用氬氣鼓泡，且於氬氣下依序添加(S)-(1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲醇(168 mg, 1.08 mmol)、Cs₂ CO₃ (353 mg, 1.08 mmol)、Rhuphos Pd G3 (30.2 mg, 0.0362 mmol)，並再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且在100°C下加熱1小時。將反應物冷卻至室溫。添加EtOAc且用鹽水(2x)洗滌。合併的有機物係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將濃縮物藉由急驟層析法用0-20% DCM/MeOH + 2% NH₄ OH溶離而純化。將全部含有純淨所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(90 mg, 0.134 mmol, 37.0%產率)。ESI+APCI MS m/z 672.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(90 mg, 0.13 mmol)之EtOH (1340 µl, 0.13 mmol)及THF (1340 µl, 0.13 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(36 mg, 0.033 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並再用N₂ 沖淨5分鐘。接著在H₂ 環境下攪拌該溶液。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。將濾液真空濃縮，以得到粗製2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(71 mg, 0.13 mmol, 99%產率)。ESI+APCI MS m/z 538.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於環境溫度下向2-(4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(71 mg, 0.132 mmol)之二氯甲烷(1320 µl, 0.132 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (10.7 µl, 0.132 mmol)且隨後添加許尼希氏鹼(46.1 µl, 0.264 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物1小時。將反應混合物真空濃縮。使該濃縮物懸浮於60:40的ACN: H2O混合物中，且於Gilson (逆相prep HPLC)上用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，且分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例396, 15.7 mg, 0.0265 mmol, 20.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 592.4 [M+H]⁺ 。
實例397

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)-2-甲基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(2-(二甲基胺基)-2-甲基丙氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。依據實例 396 ，以2-二甲基胺基-2-甲基-1-丙醇取代步驟A中的(S)-(1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲醇來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 554.4 [M+H]⁺ 。
實例398

2-((2S)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺

步驟A：2-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一微波管中，將4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.362 mmol)溶解於二噁烷(181 µl, 0.362 mmol)中，且用碳酸銫(236 mg, 0.723 mmol)及N-第三丁氧基羰基-L-脯胺醇 (364 mg, 1.81 mmol)處理。接著蓋上該微波管且加熱至90°C隔夜。將該反應混合物冷卻至室溫，過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物在CombiFlash上用0%-10% DCM:MeOH溶離而純化。將全部含有純淨產物的分餾物合併且濃縮，以得到4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(225 mg, 0.313 mmol, 86.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 718.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(225 mg, 0.313 mmol)溶解於二氯甲烷(3134 µl, 0.313 mmol)中，且用TFA (483 µl, 6.27 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。將反應物真空濃縮且用飽和碳酸氫鹽洗滌有機物。將有機物用DCM (3X)萃取。將合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(111 mg, 0.180 mmol, 57.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 618.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(111 mg, 0.1797 mmol)溶解於二氯甲烷(1797 µl, 0.1797 mmol)中，且用N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(156.9 µl, 0.8984 mmol)及氯乙醯基二甲胺(46.20 µl, 0.4492 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物30分鐘。再添加2當量的鹼且再攪拌該反應物3小時。將反應物真空濃縮，且於CombiFlash上用0%-15% DCM/MeOH + 0.5% NH₄ OH修飾劑溶離而層析。將全部含有純淨所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(73 mg, 0.1039 mmol, 57.80%產率)。ESI+APCI MS m/z 703.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((2S)-2-(((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺：將2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(73 mg, 0.10 mmol)之EtOH (1039 µl, 0.10 mmol)及THF (1039 µl, 0.10 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(28 mg, 0.026 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並再用N₂ 沖淨5分鐘。接著在H₂ 環境下攪拌該溶液。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。將濾液真空濃縮，以得到2-((2S)-2-(((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺(43 mg, 0.076 mmol, 73%產率)。ESI+APCI MS m/z 569.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((2S)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺：於環境溫度下向2-((2S)-2-(((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺(43 mg, 0.0756 mmol)之二氯甲烷(756 µl, 0.0756 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯 (6.14 µl, 0.0756 mmol)且隨後添加許尼希氏鹼(26.4 µl, 0.151 mmol)。接著在環境溫度下攪拌該反應物1小時。將反應混合物真空濃縮，再懸浮於60:40的ACN: H₂ O混合物中，且於Gilson (逆相prep HPLC)上用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，且分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到2-((2S)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺(14.9 mg, 0.0239 mmol, 31.6%產率)。ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]⁺ 。
實例399

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。依據實例 396 ，以(3R)-(1-甲基-吡咯啶-3-基)-甲醇取代步驟A中的(S)-(1-(環丙基甲基)吡咯啶-2-基)甲醇來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]⁺ 。
實例400

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.0 g, 9.5 mmol)之DCM (50 mL)溶液添加氯化氫(12 ml, 47 mmol, 4 M的二噁烷溶液)，且在室溫下攪拌該反應物1小時。接著將該反應物濃縮呈濃稠漿液，且添加EtOAc/水混合物。將水層以1M NaOH鹼化，且用EtOAc (2X)萃取水層。將合併的有機物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.0 g, 9.4 mmol, 99%產率)。ESI+APCI MS m/z 427.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(3.4 g, 8.0 mmol)之二噁烷(40 mL)溶液添加1-碘萘(6.0 ml, 40 mmol)及碳酸銫(5.2 g, 16 mmol)，且將該反應物用氬氣脫氣15分鐘，隨後添加Rhuphos Pd G3 (1.00 g, 1.2 mmol)，且將反應物加熱至100°C隔夜。接著使該反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。接著將該物質使用10--＞70 EtOAc/己烷做為溶離液層析而得到(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.8 g, 5.1 mmol, 64%產率)。ESI+APCI MS m/z 553.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於一錐底小管內，將(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 0.452 mmol)之二噁烷(4520 µl, 0.452 mmol)溶液用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加(3R)-(1-乙基-吡咯啶-3-基)-甲醇(175 mg, 1.36 mmol)、Cs2CO3 (442 mg, 1.36 mmol)、Rhuphos Pd G3 (37.8 mg, 0.0452 mmol)，並再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且在100°C下加熱1小時。將反應物冷卻至室溫且添加乙酸乙酯。將有機物用鹽水(2x)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將濃縮物藉由急驟層析法用0-20% (MeOH + 2% NH4OH)/DCM溶離而純化。將全部含有純淨所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(118 mg, 0.183 mmol, 40.4%產率)。ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(237 mg, 0.367 mmol)之EtOH (3670 µl, 0.367 mmol)及THF (3670 µl, 0.367 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(97.6 mg, 0.0917 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並再用N₂ 沖淨5分鐘。接著在H₂ 環境下攪拌該溶液。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮，以得到2-((S)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(155 mg, 0.303 mmol, 82.5%產率)。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於環境溫度下向2-((S)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(226 mg, 0.442 mmol)之二氯甲烷(4417 µl, 0.442 mmol)懸浮液添加丙烯醯氯(35.9 µl, 0.442 mmol)且隨後添加許尼希氏鹼(154 µl, 0.883 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物2小時。將反應混合物真空濃縮且裝填於12克的RediSep Gold管柱上，並於CombiFlash (0%-15% DCM:MeOH +1% NH₄ OH修飾劑)上層析。將全部含有產物的分餾物合併且真空濃縮。使濃縮物懸浮於60:40的ACN:H₂ O混合物中，在Gilson (逆相prep HPLC)上純化且用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離。將含有產物的分餾物合併且使其分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例400, 136 mg, 0.240 mmol, 54.4%產率)。ESI+APCI MS m/z 566.2 [M+H]⁺ 。
實例401

2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(150 mg, 0.293 mmol)、(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(75.7 mg, 0.586 mmol)、DIEA (256 µl, 1.47 mmol)之DCM (2932 µl, 0.293 mmol)溶液添加HATU (167 mg, 0.440 mmol)，且在室溫下將所得混合物攪拌5小時。使該反應混合物分溶於EtOAc與鹽水之間。用EtOAc (2x)萃取水溶液。將合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。將濃縮物稀釋於60:40的ACN:H2O中，且在Gilson (逆相 prep HPLC)上用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，且使其分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(2-(((S)-1-乙基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例401, 27.6 mg, 0.0443 mmol, 15.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 623.4 [M+H]⁺ 。
實例402

2-((S)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺

2-((S)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-基)-N,N-二甲基乙醯胺：其係依據實例 398 ，以(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟A中的4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]⁺ 。
實例403

(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((S)-3-(二甲基胺基)吡咯啶-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((S)-3-(二甲基胺基)吡咯啶-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：其係依據實例 400 ，以(3S)-(-)-3-(二甲基胺基)吡咯啶取代步驟C中的(3R)-(1-乙基-吡咯啶-3-基)-甲醇而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]⁺ 。
實例404

2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於一圓底燒瓶中，將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5 g, 9.487 mmol)之二噁烷(94.87 ml, 9.487 mmol)溶液用氬氣鼓泡，且於氬氣下依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(3.278 g, 28.46 mmol)、Cs₂ CO₃ (9.273 g, 28.46 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.8078 g, 0.9487 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱隔夜。將反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物在Combi Flash (0-12% MeOH於具有2% NH₄ OH的DCM中)上純化，以得到4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.425 g, 8.508 mmol, 89.68%產率)。ESI+APCI MS m/z 606.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.4 g, 8.915 mmol)溶解於二氯甲烷(89.15 ml, 8.915 mmol)中，且用氫氯酸(4.0M的1,4-二噁烷溶液) (11.14 ml, 44.57 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。接著用更多的DCM及1M NaOH稀釋該反應物，且分離各層。接著將有機物以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.364 g, 8.631 mmol, 96.82%產率)。ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於一圓底燒瓶中，將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.364 g, 8.631 mmol)之二噁烷(43.15 ml, 8.631 mmol)溶液用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加1-溴-2,3-二甲苯(5.851 ml, 43.15 mmol)、Cs2CO3 (14.06 g, 43.15 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.7348 g, 0.8631 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱隔夜。將反應物冷卻至室溫。添加乙酸乙酯，且將反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物經由正相層析法純化兩次，且在CombiFlash上使用於具有2% NH₄ OH的DCM中之0-15% MeOH做為溶離液。將含有所要產物之分餾物收集且真空濃縮，以得到2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.411 g, 0.8641 mmol, 100.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 476.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(95 mg, 0.200 mmol)、(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(51.6 mg, 0.399 mmol)、DIEA (174 µl, 0.999 mmol)之DCM (1997 µl, 0.200 mmol)溶液添加HATU (114 mg, 0.300 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物5分鐘。將反應混合物以鹽水洗滌，且用DCM (2x)萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，濃縮，稀釋於60:40的ACN:H₂ O中，並在Gilson (逆相prep HPLC)上純化且用5%-95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離。將含有產物的分餾物合併，用飽和碳酸氫鹽游離鹼化，且用DCM萃取有機物。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(38 mg, 0.0648 mmol, 32.4%產率)。ESI+APCI MS m/z 587.4 [M+H]⁺ 。
實例405

2-((2S)-1-丙烯醯基-4-(2-(3-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((2S)-1-丙烯醯基-4-(2-(3-(二甲基胺基)哌啶-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 400 ，以N,N-二甲基哌啶-3-胺取代步驟C中的(3R)-(1-乙基-吡咯啶-3-基)-甲醇而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 565.4 [M+H]⁺ 。
實例406

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2-氯-3-氟苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2-氯-3-氟苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 ，以1-溴-2-氯-3-氟苯取代步驟H中的1-溴萘而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 554.2 [M+H]⁺ 。
實例407

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氟苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氟苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 ，以1-溴-2,3-二氟苯取代步驟H中的1-溴萘來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 538.2 [M+H]⁺ 。
實例408

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 0.542 mmol)溶解於二噁烷中，且用(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲胺(356 µl, 2.71 mmol)處理。在80°C下攪拌該反應物3小時。將反應物冷卻至室溫，且使其分溶於水與EtOAc之間。用EtOAc (2X)萃取水層。將合併的有機物以水及鹽水洗滌，接著經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。將濾液真空濃縮，且在CombiFlash上用0%-15% DCM:MeOH + 2% NH4OH溶離而層析，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)胺基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯乙腈(146 mg, 0.231 mmol, 42.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 631.3 [M+H]⁺ 。該標題化合物的其他合成步驟係依據實例 396 步驟B到C來完成。ESI+APCI MS m/z 551.3 [M+H]⁺ 。
實例409

(S)-2-(1-丙烯醯基-4-(7-(萘-1-基)-2-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

(S)-2-(1-丙烯醯基-4-(7-(萘-1-基)-2-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 400 ，以1-哌啶乙醇取代步驟C中的(3R)-(1-乙基-吡咯啶-3-基)-甲醇來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 556.3 [M+H]⁺ 。
實例410

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 400 ，以(R)-3-(羥甲基)-1-甲基吡咯啶取代步驟C中的(3R)-(1-乙基-吡咯啶-3-基)-甲醇來製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]⁺ 。
實例411

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟E-G，以1-溴-3-氟-2-甲苯取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽來製備。ESI+APCI MS m/z 534.3 [M+H]⁺ 。
實例412

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-氟-6-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟E-G，以2-溴-1-氟-3-(三氟甲基)苯取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽來製備。ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例413

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟E-G，以1-溴-4-氟-2-(三氟甲基)苯取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽來製備。ESI+APCI MS m/z 588.3 [M+H]⁺ 。
實例414

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 375 步驟E-G，以1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯取代步驟E中的4-溴-3-(三氟甲基)吡啶氫溴酸鹽並以THF取代步驟F中的MeOH來製備。ESI+APCI MS m/z 604.2 [M+H]⁺ 。
實例415

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2R,4S)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(2-氯-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加碳酸銫(4.01 g, 12.3 mmol)、4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.75 g, 4.10 mmol)及Rhuphos Pd G3 (0.343 g, 0.410 mmol)及1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(4.98 g, 20.5 mmol)。將該小管密封，且通過隔片添加1,4-二噁烷(41.0 ml, 4.10 mmol)。將Ar鼓泡通過該混合物5分鐘，接著將該混合物加熱至70°C持續7小時。將反應物冷卻，過濾通過定量紙且濃縮。將黃色固體溶解於最少量的DCM中，且藉由矽膠層析法(0-12% MeOH於DCM中)純化，以得到4-(2-氯-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.3 g, 2.21 mmol, 54%產率)。

步驟B：4-(2-(((2R,4S)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向4-(2-氯-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 0.255 mmol)之二噁烷(2547 µl, 0.255 mmol)溶液用氬氣鼓泡，且於氬氣下依序添加(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯(211 mg, 0.637 mmol)、Cs2CO3 (249 mg, 0.76 mmol)、Rhuphos Pd G3 (21.3 mg, 0.026 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱4小時。將反應物過濾通過GF/F濾紙，濃縮，且將殘餘物溶解於DCM中，並用水洗滌，分離出水溶液且用DCM (3x15 mL)萃取。將萃取物合併且濃縮，且將所得殘餘物藉由矽膠(0-50 %EtOAc/乙烷 20CV, 50% EA/乙烷 2CV, 50-100% EA/乙烷 10CV)純化，以得到4-(2-(((2R,4S)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(95 mg, 0.107 mmol, 42%產率)。

步驟C：(2R,4S)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：其係依據實例375步驟F及G，以4-(2-(((2R,4S)-1-(第三丁氧基羰基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代步驟F中的2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯來製備。

步驟D：2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2R,4S)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例390步驟B及C，以(2R,4S)-2-(((4-(4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟B中的(2R,3S)-2-(((4-((S)-4-丙烯醯基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-3-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯來製備。ESI+APCI MS m/z 604.3 [M+H]⁺ 。
實例416

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2R,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2R,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 415 步驟B-D，以(2R,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟B中的(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯來製備。ESI+APCI MS m/z 604.3 [M+H]⁺ 。
實例417

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,4S)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,4S)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 415 步驟B-D，以(2R,4S)-4-氟-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟B中的(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯來製備。ESI+APCI MS m/z 606.2 [M+H]⁺ 。
實例418

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1,2-二甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氟-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 415 步驟B-D，以(R)-2-(羥甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟B中的(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯來製備。ESI+APCI MS m/z 602.3 [M+H]⁺ 。
實例419

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4S)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((2S,4S)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 415 步驟A-D，以1-溴萘取代步驟A中的1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯並以(2S,4S)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯取代步驟B中的(2S,4R)-4-{[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基}-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸酯來製備。ESI+APCI MS m/z 568.3 [M+H]⁺ 。
實例420

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-3-氯-2-甲苯取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH來製備。ESI+APCI MS m/z 550.3 [M+H]⁺ 。
實例421

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氯苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氯苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-2,3-二氯苯取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH來製備。ESI+APCI MS m/z 570.2 [M+H]⁺ 。
實例422

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-甲氧基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-3-氯-2-甲氧苯取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH來製備。ESI+APCI MS m/z 566.2 [M+H]⁺ 。
實例423

2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 234 步驟F-J，以(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇取代步驟F中的(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇，以1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯取代步驟H中的1-溴萘，並以THF取代步驟I中的MeOH來製備。

步驟B：2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：將N,N'-二異丙基乙胺 (29.5 µl, 0.166 mmol)及O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲PF6 HATU (25.2 mg, 0.066 mmol)添加至反式-4-二甲基胺基-丁烯酸(6.42 mg, 0.05 mmol)及2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈2,2,2-三氟乙酸酯(22 mg, 0.033 mmol)之二氯甲烷(331 µl, 0.033 mmol)溶液。在室溫下攪拌該反應物18小時。將該混合物以鹽水洗滌，用30% iPrOH/CHCl3 (3x)萃取，合併萃取物且濃縮。將所得殘餘物藉由逆相層析法(5-95% ACN/H₂ O，具有0.1% TFA)純化，用DCM及碳酸氫鹽水溶液游離鹼化，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(實例423, 10 mg, 0.015 mmol, 46%產率). ESI+APCI MS m/z 661.3[M+H]⁺ 。
實例424

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟-2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(4-氟-2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-4-氟-2,3-二甲苯取代步驟H中的1-溴萘來製備。ESI+APCI MS m/z 548.3 [M+H]⁺ 。
實例425

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2-氯-3-甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 234 步驟H-J，以1-溴-2-氯-3-甲苯取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH來製備。ESI+APCI MS m/z 550.2 [M+H]⁺ 。
實例426

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C下將於二氯甲烷(9171 µl, 1.38 mmol)中之(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲硫基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(741 mg, 1.38 mmol)混合物用氫氯酸(1720 µl, 6.88 mmol)處理，且於升溫至室溫後攪拌1小時。以飽和NaHCO₃ 使該混合物淬滅，將水相分離且用DCM (3x)萃取。合併的萃取物係經乾燥、過濾且濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(608 mg, 1.39 mmol, 100%產率)。ESI+APCI MS m/z 439.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向一小管添加於1,4-二噁烷(11.2 ml, 1.69 mmol)中之碳酸銫(1.65 g, 5.06 mmol)、(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.74 g, 1.69 mmol)、及1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯(0.876 g, 3.37 mmol)混合物。將該混合物用Ar沖淨10分鐘，且用甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-胺基甲基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) RuPhos Pd G4 (0.215 g, 0.253 mmol)處理。將該混合物用Ar沖淨10分鐘，將所得混合物加熱至100°C持續4小時。將反應物濃縮，以水處理，用30% iPrOH/CHCl₃ (3x)萃取，乾燥，過濾且濃縮，將所得殘餘物藉由矽膠(2-16% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到(S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(388 mg, 0.63 mmol, 37%產率)。 ESI+APCI MS m/z 617.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：(2S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲基亞磺醯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在0°C下向(S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(388 mg, 0.566 mmol)之二氯甲烷(5659 µl, 0.566 mmol)溶液添加間氯過氧苯甲酸(117.6 mg, 0.680 mmol)。在此溫度下攪拌該混合物90分鐘。以飽和Na₂ S₂ O₃ 使該混合物淬滅，將水層分離且用EtOAc (3x)萃取。將萃取物合併，乾燥，過濾且濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠(0-100% EA/乙烷)純化，以得到(2S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲基亞磺醯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(282 mg, 0.445 mmol, 79%產率)。

步驟D：((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇：於0°C於氮氣下向(2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-甲酸甲酯(3.65 g, 13.3 mmol)之四氫呋喃(66.7 ml, 13.3 mmol)懸浮液緩慢添加硼氫化鋰(13.3 ml, 26.7 mmol)。使該反應物升溫至室溫，且在室溫下攪拌該混合物18小時。以飽和NH₄ Cl使該反應混合物緩慢淬滅，以水稀釋且用EtOAc (20 mL)萃取兩次。將合併的有機相乾燥，過濾且濃縮，並藉由矽膠(0-80% EA/乙烷)純化，以得到((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(1.8 g, 5.87 mmol, 44%產率)。

步驟E：(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(2S,4R)-1-boc-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-2-(羥甲基)吡咯啶(144 mg, 0.587 mmol)及(2S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(甲基亞磺醯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯 2,2,2-三氟乙酸酯(258 mg, 0.294 mmol)之甲苯(2935 µl, 0.294 mmol)溶液添加第三丁醇鈉(42.3 mg, 0.440 mmol)。在室溫下攪拌該反應物1小時。將反應物以水洗滌，用30% iPrOH/CHCl3 (3x)萃取，將萃取物合併，乾燥，過濾且濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠(0-100% EA/乙烷 20 CV)純化，以得到(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(57 mg, 0.070 mmol, 23%產率)。

步驟F：2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(56 mg, 0.069 mmol)之THF (688 µl, 0.069 mmol)溶液添加鈀(29 mg, 0.028 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，接著經由真空隨後藉氣球壓力引入H₂ 環境，且攪拌6小時。接著將該混合物以MeOH稀釋，且過濾通過GF/F濾紙。接著將濾液濃縮以得到所要產物並按原樣使用。

步驟G：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((2S,4R)-4-羥基-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例384步驟D及E，以2-((S)-4-(2-(((2S,4R)-4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈取代步驟D中的(2S,4R)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-氟-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-4-氟吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。ESI+APCI MS m/z 620.2 [M+H]⁺ 。
實例427

2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 234 ，以(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇取代步驟A中的(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇。ESI+APCI MS m/z 661.3[M+H]⁺ 。
實例428

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(3-氯-2-(三氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 234 步驟H-J，以1-溴-3-氯-2-(三氟甲基)苯取代步驟H中的1-溴萘並以THF取代步驟I中的MeOH。ESI+APCI MS m/z 604.2 [M+H]⁺ 。
實例429

1-(2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：向2-(甲氧基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(0.715 g, 3.10 mmol)之N,N-二甲基乙醯胺(3 ml, 2.96 mmol)攪拌溶液在冰浴上冷卻，接著分小份添加固體的2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(1.00 g, 2.96 mmol)，隨後添加DIPEA (0.57 mL, 3.25 mmol)。將所得溶液升溫至室溫且攪拌1小時。使該反應混合物分溶於水(15 mL)與MTBE (50 mL)之間，且分離各層。將有機層以水(2*10 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發，並以粗製物使用在下個反應中。

步驟B：4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將粗製4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(500 mg, 0.940 mmol)、(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(216 mg, 1.88 mmol)、Cs₂ CO₃ (612 mg, 1.88 mmol)及二噁烷(0.5 mL)之混合物用氮氣沖洗，將小管蓋上且在100°C下攪拌2小時，接著在120°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間。將有機層分離，以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。殘餘物係藉由矽膠使用4至10%MeOH/DCM +0.2%NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(197 mg, 34%)。ESI+APCI MS m/z 611.4 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(197 mg, 0.323 mmol)、甲醇(10 mL)及鈀碳(10 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物脫氣，且在氫氣環境下攪拌1小時。將該混合物過濾通過矽藻土 (2 mL)，且用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的濾液真空蒸發，通過用甲苯蒸發共沸，且在高真空下乾燥，以得到產物(150 mg, 98%)。ESI+APCI MS m/z 477.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 0.315 mmol)、Cs₂ CO₃ (308 mg, 0.944 mmol)、二噁烷(1 mL)、1-碘萘(0.0689 ml, 0.472 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 26.3 mg, 0.0315 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上燒瓶且在70°C下攪拌該反應物隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (15 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4至10% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(131 mg, 69%). ESI+APCI MS m/z 603.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：1-(2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將2-(甲氧基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 0.2157 mmol)溶解於1M TFA/DCM中，且在室溫下攪拌1小時。使該溶液分溶於2M Na₂ CO₃ (5 mL)與DCM (15 mL)之間，分離各層，且將有機層真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，且在攪拌下冷卻至-30^o C，添加三乙胺(0.09018 ml, 0.6470 mmol)且隨後添加丙烯醯氯 (0.03504 ml, 0.4313 mmol)。在-30^o C下1分鐘之後，以NH₄ OH (0.05 mL)使該反應混合物淬滅，且真空蒸發，在高真空下乾燥。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，過濾通過棉塞且在矽膠上使用5至10% MeOH/DCM +0.25% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例429, 19.55 mg, 16%)。ESI+APCI MS m/z 557.3 [M+H]⁺ 。
實例430

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於2 mL的二噁烷中之(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(125 mg, 0.247 mmol)、Cs₂ CO₃ (242 mg, 0.742 mmol)、8-溴異喹啉(77.2 mg, 0.371 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 20.7 mg, 0.0247 mmol)混合物用氮氣沖淨，將燒瓶蓋上且在80°C下攪拌2.5小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(100 mg, 64%)。ESI+APCI MS m/z 633.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 0.1580 mmol)之MeOH-THF (1:1; 3 mL)溶液添加鈀碳(30 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )，將該混合物在真空下脫氣且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物2小時。將該反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，且用EtOH (3*2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。將殘餘物溶解於DCM (10 mL)中，且在攪拌下將該溶液冷卻至-30°C。向該溶液添加NEt₃ (0.14 mL)且隨後添加丙烯醯氯 (0.02568 ml, 0.3161 mmol)，且在-30^o C下攪拌該反應混合物1分鐘。添加NH4OH (0.05 mL)使該反應物淬滅，且真空濃縮。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，過濾通過棉塞，且在矽膠上使用6至10% MeOH/DCM +0.6% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例430, 22.19 mg, 25%)。ESI+APCI MS m/z 553.3 [M+H]⁺ 。
實例431

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(酞嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(酞嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於1,4-二噁烷(0.5 ml, 0.200 mmol)中之(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(101 mg, 0.200 mmol)、1-氯呔(65.8 mg, 0.400 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.0696 ml, 0.400 mmol)之1,4-二噁烷(0.5 ml, 0.200 mmol)混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌16小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由在矽膠上使用6% MeOH/DCM +0.6% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(53 mg, 42%). ESI+APCI MS m/z 634.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(酞嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(酞嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(60 mg, 0.09467 mmol)、甲醇(2 ml)及鈀碳(20 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，於氫氣環境下攪拌該反應物4小時。將反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，且用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。將殘餘物溶解於DCM (5 mL)中，且在攪拌下冷卻至-30^o C。接著向該溶液添加三乙胺(0.06598 ml, 0.4734 mmol)，隨後添加丙烯醯氯 (0.02308 ml, 0.2840 mmol)，且在-30^o C下攪拌該反應混合物5分鐘。藉由添加飽和NaHCO₃ (1 mL)使該反應物淬滅。使該混合物升溫至室溫，添加水(2 mL)，且分離各層。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發，並將殘餘物在矽膠上使用4至10% MeOH +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到不純的產物，且將其在Gilson逆相prep HPCL上用於水中之5至95%乙腈+0.1% TFA溶離。使含有產物之分餾物分溶於DCM與飽和Na₂ CO₃ 之間，且分離各層。接著將有機物用鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物(實例431, 1.1 mg, 2%)。ESI+APCI MS m/z 554.2 [M+H]⁺ 。
實例432

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(2-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將於1,4-二噁烷(2 mL)中之(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 0.452 mmol)、(R)-(1-甲基哌啶-2-基)甲醇(175 mg, 1.36 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (19.2 mg, 0.0226 mmol)混合物用氮氣沖淨且在80^o C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，分溶於MTBE (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物溶解於MeOH (5 mL)中，隨後添加鈀碳(70 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )。將反應混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於H₂ 環境下攪拌該反應物1.5小時。將該反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土，且真空濃縮以得到產物，且其以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 512.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將粗製2-((S)-4-(2-(((R)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(292 mg, 0.57068 mmol)溶解於DCM (10 mL)中，隨後添加三乙胺(238.63 µl, 1.7120 mmol)，且將該溶液冷卻至-30^o C。接著向該反應物逐滴添加丙烯醯氯 (92.728 µl, 1.1414 mmol)且將該混合物冷卻至-30^o C持續10分鐘。接著添加EtOH (0.1 mL)且使該反應物升溫至0^o C。將該混合物直接在矽膠上使用5%MeOH +0.5% NH₄ OH/DCM做為溶離液來層析，隨後使用相同溶離條件而再純化該物質，以得到標題化合物(實例432, 107.47 mg, 33%)。ESI+APCI MS m/z 566.3 [M+H]⁺ 。
實例433

1-((S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

步驟A：(S)-2-(2-羥乙基)哌嗪-1,4-二甲酸4-苯甲基1-(第三丁)酯：向固體狀(S)-2-(2-羥乙基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯鹽酸鹽(500 mg, 1.874 mmol)及NaHCO₃ (629.8 mg, 7.497 mmol)添加EtOAc及水 (各10 mL)，且將該混合物冷卻至0^o C，隨後逐滴添加氯甲酸苯甲酯(0.4013 ml, 2.811 mmol)，且將該反應混合物攪拌隔夜，同時升溫至室溫。接著分離各層，將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將該物質在矽膠上使用20%至40% EtOAc/己烷做為溶離液層析而得到產物(578 mg, 85%). ESI+APCI MS m/z 256.2 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1,4-二甲酸4-苯甲基1-(第三丁)酯：將(S)-2-(2-羥乙基)哌嗪-1,4-二甲酸4-苯甲基1-(第三丁)酯(270 mg, 0.741 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(3 ml, 0.741 mmol)攪拌溶液於N₂ 下冷卻至-20^o C，隨後一次添加入氫化鈉(44.4 mg, 1.11 mmol)。接著向該反應物添加碘甲烷(0.138 ml, 2.22 mmol)，且將該反應混合物升溫至室溫超過1小時，且在室溫下繼續攪拌1小時。藉由添加冰(~5g)使該反應物淬滅，將該混合物分溶於MTBE (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮以得到產物，其係以粗製物使用在下個反應中(252 mg, 90%)。ESI+APCI MS m/z 279.1 [M-Boc+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲醇(5 ml)中之(S)-2-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1,4-二甲酸4-苯甲基1-(第三丁)酯(252 mg, 0.666 mmol)混合物添加鈀碳(50 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )，使該反應物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物3小時。將該漿液過濾通過矽藻土 (2 mL)，用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空濃縮且於高真空下乾燥，以得到產物(140 mg, 86%)。ESI+APCI MS m/z 245.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將粗製(S)-2-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(140 mg, 0.573 mmol)及N,N-二甲基乙醯胺(0.5 ml, 0.573 mmol)之溶液冷卻至0^o C，且一次添加入2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸苯甲酯(194 mg, 0.573 mmol)。將反應混合物攪拌隔夜，隨後添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.150 ml, 0.859 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物1小時。使該反應混合物分溶於MTBE (20 mL)與飽和NaHCO₃ (5 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物在矽膠上使用2% MeOH/DCM做為溶離液層析而得到產物(190 mg, 61%)。

步驟E：4-((S)-4-(第三丁氧基羰基)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-(第三丁氧基羰基)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(190 mg, 0.348 mmol)、(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(120 mg, 1.04 mmol)、Cs₂ CO₃ (340 mg, 1.04 mmol)及1,4-二噁烷(0.5 ml)之混合物於N₂ 環境下加熱至120^o C持續20小時。將反應物冷卻，用EtOAc (3 mL)稀釋，過濾通過矽藻土且真空濃縮。將殘餘物在矽膠上使用4至8% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(77 mg, 35%)。ESI+APCI MS m/z 625.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向於甲醇(5 ml)中之4-((S)-4-(第三丁氧基羰基)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(77 mg, 0.12 mmol)混合物添加鈀碳(20 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )，將漿液在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物隔夜。將該漿液過濾通過矽藻土 (2 mL)，用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空濃縮，與甲苯(2 X 2 mL)共沸，以得到產物，且其以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 491.3 [M+H]⁺ 。

步驟G：(S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將粗製(S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(60 mg, 0.122 mmol)、Cs₂ CO₃ (120 mg, 0.367 mmol)、二噁烷(2 mL)、1-碘萘(0.0268 ml, 0.183 mmol) (1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 10.2 mg, 0.0122 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用5% MeOH/DCM +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(56 mg, 74%)。ESI+APCI MS m/z 617.4 [M+H]⁺ 。

步驟H：4-((S)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶：向固體的(S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(56 mg, 0.091 mmol)添加氯化氫(0.5 ml, 2.0 mmol)且在0^o C下攪拌該反應物，隨後升溫至室溫持續15分鐘，固體在此時點形成。將有機物傾析，且將固體分溶於DCM (12 mL)與2M Na₂ CO₃ (1 mL)之間，且分離各層。將有機層經K₂ CO₃ 乾燥，且真空濃縮，以得到粗產物。ESI+APCI MS m/z 517.3 [M+H]⁺ 。

步驟I：1-((S)-2-(2-甲氧基乙基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：將粗製4-((S)-3-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶(39 mg, 0.07548 mmol)溶解於DCM (10 mL)中，隨後添加三乙胺(31.56 µl, 0.2264 mmol)且將該溶液冷卻至-40^o C攪拌5分鐘，隨後逐滴添加丙烯醯氯 (12.26 µl, 0.1510 mmol)。在-30^o C下攪拌該反應混合物10分鐘，隨後添加MeOH (0.05 mL)。使該混合物升溫至0^o C，且用0.5M Na₂ CO₃ 洗滌有機物。將有機層真空蒸發，在矽膠上使用於DCM中之5%MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例433, 25.45 mg, 59%)。ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例434

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：三氟甲烷磺酸8-(三氟甲基)萘-1-基酯：在0°C下向8-(三氟甲基)萘-1-醇(500 mg, 2.36 mmol)之DCM (10 mL)攪拌溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(616 µl, 3.53 mmol)，隨後逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(475 µl, 2.83 mmol)。接著將反應物用己烷(20 mL)及MTBE (5 mL)稀釋，將有機物用飽和NaHCO₃ 、水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。將殘餘物溶解於10% EtOAc/10% DCM之己烷溶液，且將該物質過濾通過矽膠塞。將有機物濃縮且在矽膠上使用5至10% EtOAc/己烷做為溶離液來層析而得到不純物質。最後將固體從己烷中結晶，且用少量的冷己烷洗滌固體而得到產物(482 mg, 59%)。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將粗製(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700 mg, 1.38 mmol)、Cs₂ CO₃ (1353 mg, 4.15 mmol)、甲苯(7 ml)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq.,116 mg, 0.138 mmol)及三氟甲烷磺酸8-(三氟甲基)萘-1-基酯(715 mg, 2.08 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在90°C下攪拌5小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (50 mL)與水(20 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘於在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(86 mg, 9%)。ESI+APCI MS m/z 700.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(86 mg, 0.123 mmol)、甲醇(3 ml, 74.2 mmol)及鈀碳(30 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W)之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於H₂ 環境下攪拌該反應物1小時。接著將該反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，且用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空濃縮以得到粗產物(60 mg, 86%)。

步驟D：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.08839 mmol)溶解於DCM (10 mL)中，隨後添加三乙胺(36.96 µl, 0.2652 mmol)，將該溶液冷卻至-40^o C且攪拌5分鐘，隨後逐滴添加丙烯醯氯 (14.36 µl, 0.1768 mmol)。將反應混合物在-30^o C下攪拌10分鐘，隨後添加0.01 mL的丙烯醯氯。接著將MeOH (0.05 mL)添加至該反應物，且將該混合物升溫至0^o C。接著將該反應物用0.5M Na₂ CO₃ 洗滌，且分離出有機物。將有機物真空蒸發，且在矽膠上使用於DCM中之5%MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例434, 39 mg, 71%)。
實例435

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.396 mmol)、Cs₂ CO₃ (387 mg, 1.19 mmol)、二噁烷(0.5 mL)、7-溴-2,3-二氫苯並呋喃 (118 mg, 0.593 mmol, 1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 33.7 mg, 0.0396 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，接著分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(97 mg, 39%)。ESI+APCI MS m/z 624.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(97 mg, 0.16 mmol)、甲醇(4 ml)、THF (4 mL)及鈀碳(30 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物隔夜。將殘餘物過濾通過矽藻土 (1 mL)，用MeOH (3 X 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發，以得到粗產物ESI+APCI MS m/z 490.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(2,3-二氫苯並呋喃-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(69 mg, 0.1409 mmol)之DCM (5 mL)溶液在攪拌下冷卻至-30^o C。添加三乙胺(58.93 µl, 0.4228 mmol)，隨後添加丙烯醯氯 (22.90 µl, 0.2818 mmol)，且在-30^o C下攪拌該反應物5分鐘。接著藉由添加MeOH (0.05 mL)使該反應物淬滅，且將反應物升溫至室溫。將有機物以0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用5% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例435, 45.85 mg, 60%). ESI+APCI MS m/z 544.3 [M+H]⁺ 。
實例436

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：7-碘-1-甲基-1H-吲哚：將7-碘-1H-吲哚 (4.11 ml, 2.06 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(4 ml, 51.9 mmol)攪拌溶液冷卻至-20^o C，分小份添加氫化鈉(123 mg, 3.09 mmol)，隨後添加碘甲烷(0.256 ml, 4.11 mmol)，且使該混合物升溫至室溫超過2小時時間。使該混合物分溶於MTBE (40 mL)與冰水混合物(20 mL)之間，且分離各層。將有機層以水(2X20 mL)、鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發。用MTBE (1 mL)洗滌該固體。將固體從MTBE中再結晶以得到產物(0.31 g, 59%)。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.396 mmol)、Cs₂ CO₃ (387 mg, 1.19 mmol)、二噁烷(0.5 mL)、7-碘-1-甲基-1H-吲哚 (153 mg, 0.593 mmol) (1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 33.7 mg, 0.0396 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在90°C下攪拌5小時且接著在80^o C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物藉由在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離物層析而得到產物(65 mg, 26%)。ESI+APCI MS m/z 635.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(65 mg, 0.10 mmol)、甲醇(6 ml)及鈀碳(30 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物以真空脫氣，且回填氫氣，在氫氣環境下攪拌該混合物隔夜。將該漿液過濾通過矽藻土 (1 mL)，用MeOH (3 X 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發而得到粗產物。ESI+APCI MS m/z 501.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(51 mg, 0.1019 mmol)之DCM (5 mL)溶液在攪拌下冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(42.60 µl, 0.3056 mmol)及丙烯醯氯 (16.55 µl, 0.2037 mmol)。在-30^o C下攪拌5分鐘之後，以MeOH (0.05 mL)使反應混合物淬滅，且升溫至室溫。將有機物以0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用5% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例436, 36 mg, 64%)。ESI+APCI MS m/z 555.3 [M+H]⁺ 。
實例437

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.1013 mmol)之DCM (5 mL)溶液冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(42.35 µl, 0.3039 mmol)及丙烯醯氯 (16.46 µl, 0.2026 mmol)。在-30^o C下攪拌5分鐘之後，以MeOH (0.05 mL)使反應混合物淬滅，且升溫至室溫。將有機物以0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH + 0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例437, 34 mg, 61%)。ESI+APCI MS m/z 548.3 [M+H]⁺ 。
實例438

2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((2S,4R)-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.1013 mmol)之DCM (1 mL)溶液添加(2E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(26.17 mg, 0.2026 mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.03529 ml, 0.2026 mmol)及O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(57.77 mg, 0.1519 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物4小時。接著添加水(1 mL)且攪拌該反應混合物5分鐘。使該混合物分溶於EtOAc (10 mL)及飽和NaHCO₃ (5 mL)之間，且分離各層。將有機層用NaHCO₃ 、鹽水洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用5% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例438, 45 mg, 74%)。ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]⁺ 。
實例439

2-(4-丙烯醯基-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將於DCM (20 mL)及iPrOH (10 mL)混合物中之2-(哌嗪-2-基)乙腈(0.2 g, 1.278 mmol)攪拌溶液冷卻至-30^o C，逐滴添加氯甲酸苯甲酯(0.2190 ml, 1.534 mmol)且攪拌該反應物1小時，同時升溫至室溫。將有機物在緩慢N₂ 流中蒸發。將殘餘物溶解於N,N-二甲基乙醯胺(1 ml, 1.278 mmol)中，隨後添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.3340 ml, 1.917 mmol)及2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(0.3888 g, 1.278 mmol)。將反應混合物加熱至70^o C持續2小時，隨後在室溫下攪拌4天。使該反應物分溶於水(5 mL)及MTBE (20 mL)中，且分離各層。將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用40至100% EtOAc/己烷做為溶離液層析而得到產物(134 mg, 20%)。ESI+APCI MS m/z 527.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-(4-((苯甲氧基)羰基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將4-(4-((苯甲氧基)羰基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(134 mg, 0.254 mmol)、Cs₂ CO₃ (249 mg, 0.763 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (21.6 mg, 0.0254 mmol)、(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(146 mg, 1.27 mmol)及1,4-二噁烷(2 ml, 0.254 mmol)之混合物用N₂ 沖淨，蓋上該反應物且在80^o C下攪拌3小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機物以鹽水(5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH + 0.4% NH₄ OH/DCM層析而得到產物(60 mg, 39%)。ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：3-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將未攙水的(4-(4-((苯甲氧基)羰基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(60 mg, 0.09905 mmol))以DCM (0.2 mL)稀釋。將該反應物冷卻至0^o C，且在攪拌下添加4M HCl之二噁烷(0. 50 mL, 20 eq)溶液。將反應混合物升溫至室溫，且放在冰箱裡隔夜，此時沉澱出固體。將液相傾析，使固體分溶於DCM (10 mL)及2M Na₂ CO₃ (0.5 mL)之間，且分離各層。將有機物經K₂ CO₃ 乾燥，且在N₂ 流下蒸發。產物以粗製物使用在下個反應中。

步驟D：3-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將粗製3-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50 mg, 0.0989 mmol)、Cs₂ CO₃ (96.7 mg, 0.297 mmol)、二噁烷(0.5 mL)、1-碘萘(37.7 mg, 0.148 mmol, 1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 8.42 mg, 0.00989 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌2小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到不純產物，將其藉由逆相prep HPLC層析法用5至95% MeCN/水 +0.1%TFA (第一溶離化合物)溶離而純化。將目標分餾物以2M Na₂ CO₃ 稀釋，隨後用DCM (3 X 20 mL)萃取水溶液。合併的萃取物係以鹽水(15 mL)洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥且真空蒸發而得到產物(26 mg, 42%)。ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將3-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(26 mg, 0.041 mmol)、甲醇(2 ml)及鈀碳(10 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物1.5小時。將該反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發以得到產物，且其以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 498.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(4-丙烯醯基-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-(1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15 mg, 0.03014 mmol)之DCM (5 mL)溶液在攪拌下冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(12.60 µl, 0.09043 mmol)及丙烯醯氯 (4.898 µl, 0.06028 mmol)。在-30^o C下攪拌5分鐘之後，藉由添加MeOH (0.05 mL)使該反應混合物淬滅，且升溫至室溫。有機物係以0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經Na₂ CO₃ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH + 0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例439, 8.43 mg, 51%)。ESI+APCI MS m/z 552.2 [M+H]⁺ 。
實例440

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2R,3R)-3-氟吡咯啶-2-甲酸：向固體的(2R, 3R)-1-Boc-3-氟吡咯啶-甲酸(400 mg, 1.71 mmol)逐滴添加4M氯化氫(2144 µl, 8.57 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物1.5小時。將反應混合物真空蒸發，隨後添加固體的NaHCO₃ (173 mg, 2.06 mmol)及甲醇(1715 µl, 1.71 mmol)，且在室溫下攪拌該懸浮液隔夜。向該混合物添加額外一份的MeOH (10 mL)且攪拌該反應混合物30分鐘，且以超音波處理直至半固體完全分散。此漿液係以粗製物使用在下個反應中。

步驟B：(2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-甲酸：向粗製(2R,3R)-3-氟吡咯啶-2-甲酸(228 mg, 1.71 mmol)之MeOH (12 mL)懸浮液添加鈀碳(30 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W)，隨後添加甲醛水溶液(159 µl, 2.14 mmol)，將該反應混合物用氫氣脫氣且於氫氣下攪拌隔夜。將該反應混合物過濾通過矽藻土，且以MeOH (3x2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發。將該半固體溶解於二噁烷中且於N₂ 下蒸發整個週末。產物以粗製物使用在下個反應中。

步驟C：((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇：將粗製1-Boc-2-(S)- 吡咯啶二羧酸、3-(R)-氟-(252 mg, 1.71 mmol)之THF攪拌懸浮液於氮氣下冷卻至0^o C，隨後逐滴添加2.4M鋁氫化鋰(0.999 ml, 2.40 mmol)且攪拌該反應物30分鐘，同時升溫至室溫。將反應物超音波處理，隨後添加另一份鋁氫化鋰之THF溶液(0.999 ml, 2.40 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物。將該漿液冷卻至0^o C，且接連添加水(0.18 mL)、15% NaOH (0.18 mL)及(0.54 mL)使其淬滅。將該漿液用乙醚(20 mL)稀釋，分離出沉澱物。將反應混合物過濾通過矽藻土，且用乙醚(3 X 3 mL)洗滌矽藻土。向合併的有機物添加4M HCl/二噁烷(0.45 mL, 1.1 eq.)。該混合物從無色懸浮液轉變成微紅色沉澱物。將上清溶液真空蒸發。將殘餘的紅色固體用最少量的水萃取，過濾通過棉塞，且用少量的水洗滌棉塞。合併的水溶液係以KOH使其飽和，且用乙醚(3 X 7 mL)萃取。合併的萃取物係經NaOH乾燥，且於氮氣下部分蒸發，以得到呈乙醚溶液的產物(340 mg的40%乙醚溶液, 60%)。

步驟D：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 0.2712 mmol)、Cs₂ CO₃ (265.1 mg, 0.8137 mmol)、1,4-二噁烷(1 ml)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (23.09 mg, 0.02712 mmol)及RuPhos (9.492 mg, 0.02034 mmol)之混合物在氮氣下脫氣，且在70^o C下攪拌1.5小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用3% MeOH +0.3% NH₄ OH之DCM溶液做為溶離液層析而得到產物(108 mg, 61%)。ESI+APCI MS m/z 650.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(108 mg, 0.166 mmol)、甲醇(5 ml)及鈀碳(35 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物1.5小時。將該反應物過濾通過矽藻土 (2 mL)，用MeOH (3 X 3 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發，以得到粗產物且使用於下個步驟中。

步驟F：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(2-(((2R,3R)-3-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(78 mg, 0.1513 mmol)之DCM (5 mL)溶液冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(63.25 µl, 0.4538 mmol)及丙烯醯氯 (24.58 µl, 0.3025 mmol)。在-30^o C下攪拌5分鐘之後，以MeOH (0.05 mL)使反應混合物淬滅，且升溫至室溫。將混合物以0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經Na₂ CO₃ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4%至10% MeOH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例440, 63 mg, 73%)。ESI+APCI MS m/z 570.3 [M+H]⁺ 。
實例441

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(500 mg, 0.949 mmol)、(D)-(R)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(328 mg, 2.85 mmol)(3 eq.)、Cs₂ CO₃ (927 mg, 2.85 mmol)、二噁烷(1 mL)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 79.3 mg, 0.0949 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在70°C下攪拌5小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4至10% MeOH +0.5% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(150 mg, 26%)。ESI+APCI MS m/z 606.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(296 mg, 0.489 mmol)之DCM (2.5 mL)溶液在乾冰上冷卻，隨後添加4M HCl之二噁烷(1.2 mL)溶液且攪拌該反應物3小時，同時升溫至室溫，沉澱物在此時形成。將液體層傾析，且用DCM (2 mL)洗滌沉澱物。接著將固體與DCM (20 mL)及2M Na₂ CO₃ (3 mL)之混合物一起攪拌1小時。分離各層，將有機物經Na₂ CO₃ 乾燥，過濾且真空蒸發。將該物質以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將粗製(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(247 mg, 0.489 mmol)、Cs₂ CO₃ (477 mg, 1.47 mmol)、二噁烷(2 mL)、1-碘萘(107 µl, 0.733 mmol, 1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2-胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G3, 0.1 eq., 40.9 mg, 0.0489 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌隔夜。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用5% MeOH/DCM +0.25% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(216 mg, 70%)。ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(216 mg, 0.3419 mmol)之MeOH-THF (1:1, 3 mL)攪拌溶液添加鈀碳(50 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )，且將該混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物4小時。將該反應混合物過濾通過矽藻土 (2 mL)，用EtOH (3 X 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發，且將殘餘物溶解於DCM (10 mL)。將該溶液冷卻至-30°C，隨後添加NEt₃ (0.28 mL, 1.71 mmol)、丙烯醯氯 (0.08333 ml, 1.026 mmol)且在-30^o C下攪拌該反應物1小時。添加NH₄ OH (0.05 mL)使該反應物淬滅，且升溫至室溫。將該溶液真空蒸發。將殘餘物溶解於DCM (10 mL)中，過濾通過棉塞，且在矽膠上使用於DCM中之5至10% MeOH +0.25% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例441, 109 mg, 58%)。ESI+APCI MS m/z 552.3 [M+H]⁺ 。
實例442

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：5-碘吲：向冷卻至-80^o C之吲(5.69 ml, 1.71 mmol)及N1,N1,N2,N2-四甲基乙烷-1,2-二胺(0.282 ml, 1.88 mmol)的無水四氫呋喃(5.7 ml, 1.71 mmol)攪拌溶液逐滴添加丁基鋰(120 mg, 1.88 mmol)溶液。將該混合物冷卻至-80^o C且添加iodine (433 mg, 1.71 mmol)之無水THF (3 mL)溶液。將反應混合物升溫至室溫，且以飽和氯化銨溶液處理。將有機層分離，且用己烷萃取水層。將合併的有機物經無水Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將粗產物藉由管柱層析法在矽膠上使用己烷做為溶離液來純化而得到產物(216 mg)。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將粗製(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 0.198 mmol)、Cs₂ CO₃ (193 mg, 0.593 mmol)、二噁烷(0.5 mL)、5-碘吲(72.1 mg, 0.297 mmol) (1.5 eq.)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 16.8 mg, 0.0198 mmol)之混合物用氮氣沖淨，蓋上該反應物且在80°C下攪拌4小時。將反應混合物冷卻，使其分溶於EtOAc (20 mL)與水(10 mL)之間，且分離各層。將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH/DCM +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到產物(74 mg, 60%)。ESI+APCI MS m/z 621.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(74 mg, 0.12 mmol)、甲醇(5 ml)及鈀碳(20 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物在真空下脫氣，且回填氫氣，並於氫氣環境下攪拌該反應物2小時。將該漿液過濾通過矽藻土 (1 mL)，用MeOH (3 X 2 mL)洗滌矽藻土。將合併的有機物真空蒸發而得到產物，且其以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 487.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(吲-5-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.1027 mmol)之DCM (5 mL)溶液冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(42.96 µl, 0.3082 mmol)及丙烯醯氯 (16.70 µl, 0.2055 mmol)。在-30^o C下攪拌5分鐘之後，以飽和NaHCO₃ (1 mL)使該反應混合物淬滅，且升溫至室溫，隨後添加水(2 mL)。分離各層，將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH +0.4% NH₄ OH做為溶離液層析而得到標題化合物(實例442, 33 mg, 59%)。ESI+APCI MS m/z 571.3 [M+H]⁺ 。
實例443

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2R)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯：其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(65 mg, 0.118 mmol)及(R)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉 (76.6 mg, 0.353 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(2R)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(49 mg, 0.0668 mmol, 56.8%產率)。ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽：其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(2R)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(49 mg, 0.067 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(45 mg, 0.067 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(45 mg, 0.067 mmol)、甲醛(54 mg, 0.67 mmol) (37 wt%於MeOH/水之中)之DCM (671 µl, 0.067 mmol)及THF (671 µl, 0.067 mmol)溶液添加NaBH(OAc)₃ (142 mg, 0.67 mmol)，且在室溫下攪拌所得混合物15分鐘。使該反應混合物分溶於乙酸乙酯與1N NaOH之間。用乙酸乙酯(1x)萃取水層。將合併的有機物經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到殘餘物並將其藉由急驟層析法用梯度25至50%之於DCM中的10%MeOH/1%NH4OH/DCM混合物溶離而純化。將含有產物的分餾物濃縮，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(22 mg, 0.034 mmol, 51%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(22 mg, 0.034 mmol)而製備，以得到2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(15.9 mg, 0.031 mmol, 91%)。ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(16 mg, 0.031 mmol)而製備，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例443, 8.0 mg, 0.014 mmol, 46%)。ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例444

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯：其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(65 mg, 0.118 mmol)及(S)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(76.6 mg, 0.353 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(2S)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(43mg, 0.059 mmol, 49.9%產率)。ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽：其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(2S)-2-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(43 mg, 0.059 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(39 mg, 0.058 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(39 mg, 0.067 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(17 mg, 0.026 mmol, 45%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(17 mg, 0.026 mmol)而製備，以得到2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(13.5 mg, 0.026 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(13.5 mg, 0.026 mmol)而製備，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例444, 9.5 mg, 0.017 mmol, 65%)。ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例445

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(3S)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(65 mg, 0.118 mmol)及(R)-3-(羥甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(76.6 mg, 0.353 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(3S)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(80 mg, 0.109 mmol, 92.8%產率)。ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(3S)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(80 mg, 0.11 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(73 mg, 0.11 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(73 mg, 0.109 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(27.6 mg, 0.042 mmol, 39%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(27.6 mg, 0.042 mmol)而製備，以得到2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20.2 mg, 0.039 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-(4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20.2 mg, 0.0393 mmol)而製備，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例445, 15 mg, 0.026 mmol, 67%). ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例446

2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(3R)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(65 mg, 0.118 mmol)及(S)-3-(羥甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(76.6 mg, 0.353 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(3R)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(50 mg, 0.068 mmol, 58.0%產率)。ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(3R)-3-(((4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(50 mg, 0.068 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(46 mg, 0.068 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(73 mg, 0.109 mmol)而製備，以得到2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(23.0 mg, 0.036 mmol, 52%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(23.0 mg, 0.036 mmol)而製備，以得到2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(18.2 mg, 0.036 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]。

步驟E：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-(4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(18.2 mg, 0.036 mmol)而製備，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-3-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例446, 14 mg, 0.025 mmol, 69%)。ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例447

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50 mg, 0.090 mmol)及(S)-4,4-二氟-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(64.3 mg, 0.271 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(15 mg, 0.020 mmol, 22.0%產率)。ESI+ MS m/z 754.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸酯(18 mg, 0.024 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(16 mg, 0.023 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 654.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16 mg, 0.023 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 mg, 0.024 mmol, 52%)。ESI+ MS m/z 668.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.0 mg, 0.024 mmol)而製備，以得到2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8.0 mg, 0.015 mmol, 63%)。ESI+ MS m/z 534.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8.0 mg, 0.015 mmol)而製備，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例447, 4 mg, 0.007 mmol, 45%). ESI+ MS m/z 588.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例448

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(R)-6-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5] 辛-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(25 mg, 0.045 mmol)及(R)-6-(羥甲基)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-4-甲酸第三丁酯(33.0 mg, 0.136 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(R)-6-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛e-4-甲酸第三丁酯(35 mg, 0.0461 mmol, 100%產率)。ESI+ MS m/z 760.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-(((R)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(R)-6-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛e-4-甲酸第三丁酯(35 mg, 0.046 mmol)而製備，以得到(S)-4-(2-(((R)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(32 mg, 0.046 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 660.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為(S)-4-(2-(((R)-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(32 mg, 0.046 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(31 mg, 0.046 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 674.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(31.0 mg, 0.046 mmol)而製備，以得到2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(18.0 mg, 0.033 mmol, 72%)。ESI+ MS m/z 540.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(18.0 mg, 0.033 mmol)而製備，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例448, 5.8 mg, 0.010 mmol, 29%)。ESI+ MS m/z 594.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例449

2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-(氰基甲基)-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於二噁烷(593 µl, 0.0593 mmol)中之2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30 mg, 0.0593 mmol)、1-溴-2-二氟甲基苯 (36.8 mg, 0.178 mmol)、BINAP Palladacycle Gen. 3 (5.9 mg, 0.006 mmol)、Cs2CO3 (77.3 mg, 0.237 mmol)混合物用Ar鼓泡5分鐘，接著密封且在100°C下加熱1天。將反應混合物裝填於矽膠試樣上並藉由急驟層析法用1-10% MeOH/DCM (1% NH₄ OH)梯度溶離而純化，以得到2-(氰基甲基)-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(12 mg, 0.019 mmol, 32%)。ESI+ MS m/z 632.3 (100%) [M+H]+。

步驟B：2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基-7-氧雜-4-氮雜螺[2.5]辛-6-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為2-(氰基甲基)-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(12.0 mg, 0.019 mmol)而製備，以得到2-(4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(9.5 mg, 0.019 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 498.3 (100%) [M+H]+。

步驟C：2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-(4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(9.5 mg, 0.019 mmol)而製備，以得到標題化合物2-(1-丙烯醯基-4-(7-(2-(二氟甲基)苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例449, 4.2 mg, 0.008 mmol, 40%)。ESI+ MS m/z 552.3 (100%) [M+H]+。
實例450

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 443 步驟A的程序，取代為(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(95 mg, 0.172 mmol)及(R)-N-Boc-2-羥甲基嗎啉 (112 mg, 0.515 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(126 mg, 0.172 mmol, 100%產率)。ESI+ MS m/z 734.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(126 mg, 0.172 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(109 mg, 0.172 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 634.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(109 mg, 0.172 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(76 mg, 0.117 mmol, 68%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(76 mg, 0.117 mmol)而製備，以得到2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(57.1 mg, 0.111 mmol, 95%)。ESI+ MS m/z 514.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟F：2-(1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-((S)-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(56 mg, 0.11 mmol)而製備，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((R)-4-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例450, 50 mg, 0.088 mmol, 81%). ESI+ MS m/z 568.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例451

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5-甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(95 mg, 0.172 mmol)及(2R,5R)-2-(羥甲基)-5-甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(119 mg, 0.515 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5-甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(128 mg, 0.171 mmol, 100%產率)。ESI+ MS m/z 748.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-5-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(2R,5R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5-甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(128 mg, 0.171 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-5-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯 (111 mg, 0.171 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 648.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-5-甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(111 mg, 0.171 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(56 mg, 0.085 mmol, 49%)。ESI+ MS m/z 662.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(56 mg, 0.085 mmol)而製備，以得到2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(44.3 mg, 0.084 mmol, 99%)。ESI+ MS m/z 528.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟G的程序，取代為2-((S)-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(43 mg, 0.081 mmol)而製備，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((2R,5R)-4,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例451, 32 mg, 0.055 mmol, 68%)。ESI+ MS m/z 582.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例452

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5,5-二甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯。其係根據實例 375 步驟C的程序，取代為(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(95 mg, 0.172 mmol)及(R)-2-(羥甲基)-5,5-二甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(126 mg, 0.515 mmol)而製備，且藉由急驟層析法用25-100% 己烷/EtOAc溶離而純化，以得到(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5,5-二甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(131 mg, 0.172 mmol, 100%產率)。ESI+ MS m/z 762.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-5,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 375 步驟D的程序，取代為(R)-2-(((4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)-5,5-二甲基嗎啉-4-甲酸第三丁酯(131 mg, 0.172 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-5,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(114 mg, 0.172 mmol, 100%)。ESI+ MS m/z 662.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。其係根據實例 443 步驟C的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((R)-5,5-二甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(114 mg, 0.172 mmol)而製備，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(77 mg, 0. 114 mmol, 66%)。ESI+ MS m/z 676.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 375 步驟F的程序，取代為(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(77 mg, 0.114 mmol)而製備，以得到2-((S)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(47 mg, 0.087 mmol, 77%)。ESI+ MS m/z 542.3 (100%) [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。其係根據實例 1 步驟G的程序，取代為2-((S)-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(46 mg, 0.085 mmol)而製備，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(萘-1-基)-2-(((R)-4,5,5-三甲基嗎啉-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例452, 36 mg, 0.060 mmol, 71%). ESI+ MS m/z 582.3 (100%) [M+H]⁺ 。
實例453

1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟1：3-溴-1,2,4-三甲基-5-硝基-苯。向1,2,4-三甲基-5-硝基-苯(10 g, 60 mmol, 1eq )之DCE (200 mL)溶液添加FeBr₃ (358 mg, 1.21 mmol, 0.02eq )、Fe (879 mg, 15.7 mmol, 0.26eq )且隨後添加Br₂ (11.6 g, 72.6 mmol, 3.74 mL, 1.2eq )。在25°C下攪拌1小時之後，以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將粗產物於水中漿化，且過濾收集。得到呈白色固體之3-溴-1,2,4-三甲基-5-硝基-苯(8.6 g, 34.9 mmol, 58%產率, 99%純度)。

步驟2：3-溴-2,4,5-三甲基-苯胺。向3-溴-1,2,4-三甲基-5-硝基-苯(5.2 g, 21.3 mmol, 1eq )之EtOH (100 mL)溶液添加(5.95 g, 107 mmol, 5eq )及AcOH (12.8 g, 213 mmol, 12.2 mL, 10eq )。在60°C下攪拌該混合物3小時。在完成時，將反應混合物過濾且將濾液濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 水溶液中和，接著在真空下濃縮以移除MeCN，並且用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之3-溴-2,4,5-三甲基-苯胺 (3.4 g, 14.3 mmol, 67%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.51 (s, 1H), 3.56 (br s, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.26 (s, 3H).

步驟3：4-溴-5,6-二甲基-1H -吲唑。在0°C下將3-溴-2,4,5-三甲基-苯胺 (200 mg, 934.14 umol, 1eq )逐滴溶解於三氟硼烷;氫氟酸(1.69 g, 7.71 mmol, 1.20 mL, 8.25eq, 40% 於水中 )。冷卻的NaNO₂ (96.7 mg, 1.40 mmol, 1.5eq )水溶液(於最低量的水之飽和水溶液中)。在添加之後，在0°C下攪拌該混合物1小時，且在25°C下攪拌0.5小時。在0°C下添加NaNO₂ (64 mg, 於最低量的水之飽和水溶液中)。接著，將所得沉澱物過濾，用(i -Pr)₂ O (40 mL)洗滌，且真空濃縮，於N₂ 下將其直接一次添加入於CHCl₃ (8 mL)中之KOAc (183 mg, 1.87 mmol, 2eq )及18-冠醚-6 (12.4 mg, 46.7 umol, 0.05eq )內。在35°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 100/1至5/1)純化，以得到呈黃色固體之4-溴-5,6-二甲基-1H -吲唑(70 mg, 280 umol, 30%產率, 90%純度)。

步驟4：4-溴-5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑。向4-溴-5,6-二甲基-1H -吲唑(290 mg, 1.29 mmol, 1eq )之DCM (6 mL)溶液添加TsOH•H₂ O (24.5 mg, 129 umol, 0.1eq )，隨後添加DHP (217 mg, 2.58 mmol, 236 uL, 2eq )及MeCN (1 mL)。在25°C下攪拌該混合物5小時。在完成時，以飽和NaHCO₃ 水溶液(5 mL)使該混合物淬滅，且用水(20 mL)稀釋。分離各層，且用EtOAc (2 × 200 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 100/1至25/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-溴-5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑(320 mg, 828 umol, 64%產率, 80%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 309。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.94 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.66 (dd,J = 2.8, 9.2 Hz, 1H), 4.06 -3.97 (m, 1H), 3.79 -3.67 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.16 (qd,J = 4.4, 7.6 Hz, 1H), 2.06 (qd,J = 3.2, 13.2 Hz, 1H), 1.83 - 1.64 (m, 4H).

步驟A：4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(30 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(385 mg, 890 umol, 1eq )、4-溴-5,6-二甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(303 mg, 979 umol, 1.10eq )、Pd₂ (dba)₃ (163 mg, 178 umol, 0.2eq )、RuPhos (166 mg, 356 umol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (725 mg, 2.23 mmol, 2.5eq )混合物脫氣，且接著於N₂ 下加熱至90°C持續8小時。在完成時，將混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(EtOAc/MeOH 100/1至5/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 275 umol, 31%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 661。

步驟B：7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。向4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 288 umol, 1eq )之DCM (0.4 mL)溶液添加TFA (924 mg, 8.10 mmol, 0.6 mL, 28.2eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(220 mg，粗製，2TFA)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟C：1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮：在-40°C下向7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(200 mg, 284 umol, 1eq , 2 TFA)及TEA (574 mg, 5.68 mmol, 790 uL, 20eq )之DCM (4 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(35.8 mg, 284 umol, 1eq )。在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該混合物淬滅，用水(5 mL)稀釋，接著用DCM (2 × 10 mL)萃取。萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 100/1至10/1)及prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 12 分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例453, 45.3 mg, 85.2 umol, 兩個步驟30%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]:531。

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um, 移動相:甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 10.84 (br s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.59 (dd,J = 10.4, 16.8 Hz, 1H), 6.34 (dd,J = 1.2, 16.8 Hz, 1H), 5.79 - 5.68 (m, 1H), 4.40 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.17 (dd,J = 6.8, 10.4 Hz, 1H), 3.90 -3.39 (m, 10H), 3.09 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.89 - 2.62 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.30 - 2.23 (m, 1H), 2.09 - 1.97 (m, 1H), 1.91 - 1.69 (m, 3H).
實例454

2-[(2S) -4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：4,4-二氟哌啶。向4,4-二氟哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.0 g, 9.04 mmol, 1.0eq )之DCM (0.50 mL)溶液添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 7.47 e^-1 eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之產物4,4-二氟哌啶(1.50 g，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟2：1-(2-苯甲基氧基乙基)-4,4-二氟-哌啶。向4,4-二氟哌啶(1.50 g, 6.38 mmol, 1.0eq , TFA)之MeCN (20.0 mL)溶液添加NaOH (765 mg, 19.1 mmol, 3.0eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將2-溴乙氧基甲苯 (1.65 g, 7.65 mmol, 1.21 mL, 1.20eq )及KI (212 mg, 1.28 mmol, 0.20eq )添加至上述液體內，在90°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將反應混合物添加水(20.0 mL)，接著用EA (3 × 20.0 mL)萃取，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯= 10:1至 0:1)純化，以得到呈黃色油狀物之1-(2-苯甲基氧基乙基)-4,4-二氟-哌啶(600 mg, 2.35 mmol, 兩個步驟37%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 4.54 (s, 2H), 3.82 -3.72 (m, 2H), 3.33 - 2.94 (m, 6H), 2.37 - 2.15 (m, 4H).

步驟3：2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙醇。將1-(2-苯甲基氧基乙基)-4,4-二氟-哌啶(400 mg, 1.57 mmol, 1.0eq )及Pd/C (200 mg, 10%純度)之EtOH (5.0 mL)溶液在25°C於H₂ (15 Psi)下攪拌12小時。在完成之後，將反應混合物過濾通過矽藻土，將濾餅用THF (10.0 mL)洗滌。收集濾液且濃縮，以得到呈無色油狀物之產物2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙醇 (170 mg, 1.03 mmol, 66%產率)。該產物不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.84 -3.70 (m, 2H), 2.98 - 2.89 (m, 4H), 2.86 - 2.80 (m, 3H), 2.24 - 2.11 (m, 4H).

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙醇 (102 mg, 619 umol, 3.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液及(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 206 umol, 1.0eq )添加t -BuONa (39.7 mg, 413 umol, 2.0eq )，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用EA (3 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% NH₃ •H₂ O, 0 - 60% MeCN)純化，以得到呈黃色油狀物之產物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(90.0 mg, 132 umol, 64%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 682。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(30.0 mg, 44.0 umol, 1.0eq )之DCM (0.5 mL)溶液添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.50 mL, 154eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將混合物濃縮。以飽和NaHCO₃ 水溶液調整該殘餘物至pH ~ 7，接著用EA (3 × 5.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(26.0 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟C：2-[(2S) -4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(26.0 mg, 44.7 umol, 1.0eq )及DIEA (69.3 mg, 536 umol, 93.4 uL, 12.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(8.45 mg, 67.0 umol, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，藉由添加MeOH (1.0 mL)使該混合物淬滅，接著濃縮以得到殘餘物。接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 47% - 77%, 12 分鐘)來純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S) -4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(4,4-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例454, 6.35 mg, 9.82 umol, 兩個步驟22%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 636。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 6.40 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 5.20 - 4.56 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 3H), 4.22 - 4.01 (m, 2H), 3.98 -3.75 (m, 2H), 3.66 -3.57 (m, 1H), 3.53 -3.36 (m, 1H), 3.31 - 2.98 (m, 4H), 2.91 - 2.80 (m, 3H), 2.79 - 2.49 (m, 6H), 2.09 - 1.94 (m, 4H).
實例455

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：1-(2-苯甲基氧基乙基)-3,3-二氟-哌啶。在25°C下向3,3-二氟哌啶(1.0 g, 6.35 mmol, 1.0eq , HCl)之MeCN (6.0 mL)溶液一次添加NaOH (761 mg, 19.0 mmol, 3.0eq )。在25°C下攪拌該混合物5分鐘，接著添加2-溴乙氧基甲苯 (1.64 g, 7.61 mmol, 1.20 mL, 1.20eq )及KI (211 mg, 1.27 mmol, 0.20eq )。在90°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將反應混合物添加H₂ O (15.0 mL)，接著用EA (3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 10:1至 5:1)純化，以得到呈無色油狀物之1-(2-苯甲基氧基乙基)-3,3-二氟-哌啶(1.40 g, 5.48 mmol, 86%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.38 - 7.31 (m, 5H), 4.56 (s, 2H), 3.64 (t,J = 5.8 Hz, 2H), 2.79 - 2.73 (m, 4H), 2.55 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 1.85 - 1.85 (m, 2H), 1.82 - 1.76 (m, 2H).

步驟2：2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙醇。於N₂ 下向1-(2-苯甲基氧基乙基)-3,3-二氟-哌啶(400 mg, 1.57 mmol, 1.0eq )之MeOH (5.0 mL)溶液添加Pd/C (200 mg, 10%純度)。將懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將反應混合物過濾且濃縮，以得到呈無色油狀物之2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙醇 (240 mg, 1.45 mmol, 93%產率)。產物不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 3.64 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 2.73 (t,J = 11.2 Hz, 2H), 2.63 (t,J = 5.4 Hz, 2H), 2.54 (t,J = 5.2 Hz, 2H), 1.97 - 1.87 (m, 2H), 1.82 - 1.76 (m, 2H).

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5.0 mL)中之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(230 mg, 396 umol, 1.0eq )、2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙醇 (196 mg, 1.19 mmol, 3.0eq )、t -BuONa (114 mg, 1.19 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在0°C於N₂ 環境下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以H₂ O (5.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用EA (3 × 10.0 mL)萃取。將合併的有機層以飽和NaCl水溶液(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3:1至0:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 344 umol, 87%產率, 94%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.77 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.42 (m, 1H), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 4.67 - 4.64 (m, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 3H), 4.06 (d,J = 12.8 Hz, 1H), 4.01 -3.80 (m, 3H), 3.60 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 3.37 (dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 1H), 3.27 -3.10 (m, 3H), 2.97 - 2.90 (m, 3H), 2.84 - 2.78 (m, 3H), 2.61 - 2.57 (m, 2H), 1.89 - 1.85 (m, 3H), 1.72 - 1.54 (m, 3H), 1.53 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在25°C於N₂ 下向於DCM (1.50 mL)中之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 293 umol, 1.0eq )混合物一次添加TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.50 mL, 69.0eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg，粗製，2TFA)。產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 582。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於N₂ 下向於DCM (2.0 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg, 494 umol，粗製，2TFA)及TEA (727 mg, 7.18 mmol, 1.0 mL)混合物一次添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(100 mg, 793 umol)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，在0°C下藉由添加MeOH (3.0 mL)使該混合物淬滅，且接著濃縮以得到殘餘物。接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 移動相：[水(10.0 mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 57%-87%, 10 分鐘)純化且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[2-(3,3-二氟-1-哌啶基)乙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例455, 48.4 mg, 75.8umol, 26%產率, 99%純度)。

SFC條件：100%.e.e.。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.78 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.36 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 1H), 6.60 - 6.58 (m, 1H), 6.44 - 6.39 (m, 1H), 5.85 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.10 - 4.66 (m, 1H), 4.49 - 4.40 (m, 3H), 4.18 - 4.08 (m, 2H), 3.94 -3.89 (m, 1H), 3.85 -3.73 (m, 1H), 3.63 -3.60 (m, 1H), 3.50 -3.41 (m, 1H), 3.33 -3.02 (m, 4H), 2.94 - 2.76 (m, 6 H), 2.64 - 2.61 (m, 3H), 1.95 - 1.85 (m, 2H), 1.80 - 1.78 (m, 2H). LCMS [ESI, M+1]: 636.
實例456

5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮

插圖步驟1：2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯胺。在10°C下向4,5-二甲基-2-硝基-苯胺 (5 g, 30.1 mmol, 1eq )之CHCl₃ (100 mL)溶液逐滴添加Br₂ (7.21 g, 45.1 mmol, 2.33 mL, 1.5eq )。在10°C下攪拌該反應混合物30分鐘，且在25°C下攪拌30分鐘。在完成之後，將反應混合物用飽和NaHCO₃ 水溶液(80 mL)洗滌。用CHCl₃ (30 mL)萃取水溶液。將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾通過矽膠墊，接著濃縮至乾燥。得到呈黃色固體之2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯胺 (7 g, 28.5 mmol, 95%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+3]: 247。

步驟2：3-溴-1,2-二甲基-4,5-二硝基-苯。在10°C下向2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯胺 (7 g, 28.6 mmol, 1eq )之TFA (50 mL)溶液逐滴添加過氧化氫(25.9 g, 229 mmol, 22.0 mL, 30%純度, 8.0eq )。在10°C下攪拌該反應混合物30分鐘，且在25°C下攪拌30分鐘，並接著在40°C下再攪拌2小時。將反應混合物冷卻至5°C至10°C，且接著過濾。用PE (3 × 20 mL)洗滌濾餅。接著在50°C於減壓環境下乾燥。得到呈黃色固體之3-溴-1,2-二甲基-4,5-二硝基-苯(5 g, 18.2 mmol, 64%產率)。

步驟A：4-[7-(2,3-二甲基-5,6-二硝基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(25 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 578 umol, 1eq )、3-溴-1,2-二甲基-4,5-二硝基-苯(318 mg, 1.16 mmol, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (52.9 mg, 57.8 umol, 0.1eq )、RuPhos (40.5 mg, 86.7 umol, 0.15eq )及Cs₂ CO₃ (377 mg, 1.16 mmol, 2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物8小時。以H₂ O (100 mL × 1)及乙酸乙酯(100 mL × 2)稀釋該反應混合物。分離出的有機相係以鹽水(100 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 50/1至3/1)及逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(1 × 100 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之4-[7-(2,3-二甲基-5,6-二硝基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(22.0 mg, 140 umol, 6%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 627。

步驟B：4-[7-(2,3-二胺基-5,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[7-(2,3-二甲基-5,6-二硝基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 191 umol, 1eq )之MeOH (10 mL)溶液添加Pd/C (24.0 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之4-[7-(2,3-二胺基-5,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 567。

步驟C：4-[7-(5,6-二甲基-2-側氧基-1,3-二氫苯并咪唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向4-[7-(2,3-二胺基-5,6-二甲基-苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 176 umol, 1eq )之THF (10 mL)溶液添加CDI (57.2 mg, 353 umol, 2eq )。在50°C下攪拌1小時之後，添加CDI (171 mg)，且在70°C下再攪拌該混合物3小時。以H₂ O (3 mL × 1)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 17% - 47%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物，以飽和Na₂ CO₃ 溶液中和，且用乙酸乙酯(1 × 30 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之4-[7-(5,6-二甲基-2-側氧基-1,3-二氫苯并咪唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(20.0 mg, 33.7 umol, 兩個步驟19%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 593。

步驟D：5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮。在0°C下向4-[7-(5,6-二甲基-2-側氧基-1,3-二氫苯并咪唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(16.0 mg, 27.0 umol, 1eq )之二噁烷(2 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 101 uL, 15eq )。在25°C下攪拌0.5小時之後，將混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮 (20.0 mg，粗製，HCl)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 493。

步驟E：5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮。在-40°C下向於DCM (2 mL)中之5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮 (20.0 mg, 37.8 umol, 1eq , HCl)及TEA (38.3 mg, 378 umol, 52.6 uL, 10eq )混合物一次添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(4.77 mg, 37.8 umol, 1eq )。在-40°C下攪拌30分鐘之後，在0°C下以飽和NaHCO₃ 溶液(0.5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用CH₂ Cl₂ (2 × 10 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水洗滌(1 × 10 mL)，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 * 25 * 10um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 10% -37%, 9分鐘)純化。收集所要分餾物且於減壓環境下濃縮以移除CAN，接著凍乾。得到呈褐色固體之標題化合物5,6-二甲基-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-(4-丙-2-烯醯基哌嗪-1-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-基]-1,3-二氫苯并咪唑-2-酮 (實例456, 3.15 mg, 5.25 umol, 兩個步驟14%產率, 98.8%純度, HCOOH)。LCMS [ESI, M+1]: 547。

¹ H NMR (400 MHz, 甲醇-d₄ ) 6.90 - 6.81 (m, 1H), 6.80 - 6.72 (m, 1H), 6.28 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 5.82 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 4.72 - 4.46 (m, 2H), 4.32 - 4.01 (m, 2H), 3.93 -3.53 (m, 10H), 3.53 -3.38 (m, 1H), 3.21 -3.02 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 2.95 - 2.58 (m, 2H), 2.48 - 2.32 (m, 1H), 2.31 (br s, 3H), 2.29 (br s, 3H), 2.19 - 1.94 (m, 3H).
實例457

1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮

步驟1：(E )-2-(2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯基)-N ,N -二甲基-乙烯胺。向3-溴-1,2,4-三甲基-5-硝基-苯(2 g, 8.19 mmol, 1eq )之DMF (20 mL)溶液添加DMFDMA (5.86 g, 49.2 mmol, 6.53 mL, 6eq )。在130°C下攪拌該混合物10小時。在完成時，將混合物真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之(E )-2-(2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯基)-N ,N -二甲基-乙烯胺(2.5 g，粗製)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟2：4-溴-5,6-二甲基-1H -吲哚。向(E )-2-(2-溴-3,4-二甲基-6-硝基-苯基)-N ,N -二甲基-乙烯胺(2.5 g, 8.36 mmol, 1eq )之EtOH (50 mL)溶液添加Fe (2.33 g, 41.8 mmol, 5eq )及AcOH (5.02 g, 83.6 mmol, 4.78 mL, 10eq )。在60°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，將混合物過濾且將濾液濃縮。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 1/0至50/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-溴-5,6-二甲基-1H -吲哚 (380 mg, 1.46 mmol,兩個步驟產率18%, 86%純度) (100 mL × 1)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.12 (br s, 1H), 7.20 - 7.10 (m, 2H), 6.59 - 6.52 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.43 (s, 3H).

步驟3：2-[(4-溴-5,6-二甲基-吲哚-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷。在0°C下向4-溴-5,6-二甲基-1H -吲哚 (450 mg, 2.01 mmol, 1eq )之THF (9 mL)溶液添加NaH (161 mg, 4.02 mmol, 60%純度, 2eq )。在0°C於N₂ 下攪拌該反應物15分鐘。使該反應物升溫至25°C且攪拌0.5小時。將反應物再次冷卻至0°C。在0°C下逐滴添加SEM-Cl (502 mg, 3.01 mmol, 533 uL, 1.5eq )之THF (100 uL)溶液。在攪拌5分鐘之後，使該混合物升溫至室溫(25°C)且再攪拌5小時。在完成時，用飽和氯化銨水溶液(20 mL)使混合物淬滅，用水(10 mL)稀釋，接著用乙酸乙酯(2 × 30 mL)萃取。萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 1/0至50/1)純化，以得到呈黃色油狀物之2-[(4-溴-5,6-二甲基-吲哚-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(440 mg, 1.18 mmol, 59%產率, 95%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.25 (s, 1H), 7.11 (d,J = 3.2 Hz, 1H), 6.51 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 3.52 -3.40 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.46 (s, 3H), 0.92 - 0.87 (m, 2H), -0.01 - -0.08 (m, 9H).

步驟A：4-[7-[5,6-二甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲哚-4-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(30 mL)中之4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物66, 450 mg, 1.04 mmol, 1eq )、2-[(4-溴-5,6-二甲基-吲哚-1-基)甲氧基]乙基-三甲基-矽烷(406 mg, 1.14 mmol, 1.1eq )、Pd₂ (dba)₃ (191 mg, 208 umol, 0.2eq )、RuPhos (194 mg, 416 umol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (847 mg, 2.60 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且接著於N₂ 下加熱至90°C持續8小時。在完成時，將混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(EtOAc/MeOH 50/1至10/1)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-[5,6-二甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲哚-4-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(106 mg, 135 umol, 13%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 706。

步驟B：4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向4-[7-[5,6-二甲基-1-(2-三甲基矽烷基乙氧基甲基)吲哚-4-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(70 mg, 99.2 umol, 1eq )之DMF (0.35 mL)溶液添加TBAF (1 M於THF中, 496 uL, 5eq )，隨後添加乙烷-1,2-二胺(8.94 mg, 149 umol, 9.95 uL, 1.5eq )。在85 °C下攪拌該混合物3小時。在完成時，將混合物以EtOAc (3 mL)及水(2 mL)稀釋。分離出的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (DCM/MeOH 10/1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(50 mg, 60.8 umol, 61%產率, 70%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 576。

步驟C：7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。向4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(45 mg, 78.2 umol, 1eq )之DCM (70 uL)溶液添加TFA (89.1 mg, 782 umol, 57.9 uL, 10eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(60 mg，粗製，2 TFA)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟D：1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮。在-40°C下向7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-4-哌嗪-1-基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(55 mg, 78.2 umol, 1eq , 2 TFA)及TEA (158 mg, 1.56 mmol, 218 uL, 20eq )之DCM (1 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯(9.86 mg, 78.2 umol, 1eq )。在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，以MeOH (0.5 mL)使該混合物淬滅，用水(5 mL)稀釋，接著用DCM (2 × 10 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 100/1至10/1)及prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.1% TFA)-ACN]; B%: 16%-43%, 12 分鐘)來純化。收集所要分餾物，且用飽和NaHCO₃ 水溶液中和，用DCM (2 × 15 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之標題化合物1-[4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲哚-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-基]丙-2-烯-1-酮(實例457, 9.81 mg, 18.3 umol, 兩個步驟23%產率, 98.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 530。

SFC條件：OJ-3S_3_5_40_3ML 管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (br s, 1H), 7.09 (s, 1H), 7.07 - 7.03 (m, 1H), 6.60 (dd,J = 10.8, 16.8 Hz, 1H), 6.53 - 6.48 (m, 1H), 6.34 (dd,J = 2.0, 16.9 Hz, 1H), 5.76 (dd,J = 2.0, 10.4 Hz, 1H), 4.49 - 4.10 (m, 4H), 3.81 (br s, 2H), 3.76 -3.38 (m, 8H), 3.13 (br t,J = 7.2 Hz, 1H), 3.02 - 2.56 (m, 3H), 2.50 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.34 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.84 - 1.71 (m, 3H).
實例458

2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：1-溴-8-甲基萘：向冷卻至-78°C之1,8-二溴萘(33.8 g, 118 mmol)之THF (200 mL)溶液以內溫不超過-69°C的速率添加丁基鋰(49.6 ml, 124 mmol)。在完成添加後，將反應物冷卻至-78°C，一次添加入碘甲烷(14.8 ml, 236 mmol)而使得內溫增加至-40°C。在添加碘甲烷之後，將乾冰/丙酮浴移除，且使反應物升溫至室溫。接著將反應物傾注入鹽水中，且用EtOAc (300 mL)萃取水層，並將有機物分離。接著將有機物經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，且將殘餘物使用己烷做為溶離液而層析，以得到白色固體(24 g)。接著將固體於IPA (ca. 60 mL)中漿化，將漿液加熱至60°C，固體於此時溶解。將所得漿液過濾且將固體真空乾燥，以得到1-溴-8-甲基萘(16 g, 72.4 mmol, 61%產率)，純度＞95%。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將xantphos (4.5 g, 7.8 mmol)及Pd2(dba)3 (3.5 g, 3.9 mmol)之二噁烷(100 mL)溶液用氬氣脫氣15分鐘，隨後在100°C下加熱該溶液20分鐘。接著將該溶液冷卻至室溫，且將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(9.8 g, 19 mmol)、1-溴-8-甲基萘(13 g, 58 mmol)及Cs2CO3 (32 g, 97 mmol)、Pd2(dba)3 (3.5 g, 3.9 mmol)添加至該溶液，且將該混合物用氬氣再脫氣20分鐘，並將反應物加熱至100°C隔夜。接著將該反應物冷卻至室溫，過濾通過GFF濾紙，且將濾液真空濃縮。接著將殘餘物使用1--＞10%(MeOH+2% NH4OH)/DCM層析3次，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(7.8 g, 12 mmol, 62%產率)。ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(7.8 g, 12 mmol)之1:1 EtOH/THF (100 mL)溶液用N₂ 脫氣5分鐘，隨後添加Pd/C (2.6 g, 2.4 mmol)。將該漿液在真空下脫氣，且回填H₂ (3X)。在第三次回填時在氫氣氣球下攪拌隔夜。用N₂ 使該漿液再次脫氣，且將漿液過濾通過矽藻土。將合併的濾液真空濃縮，將固體使用1--＞10%(MeOH+2% NH4OH)/DCM做為溶離液而層析，以得到2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(5.0 g, 9.8 mmol, 81%產率)。

步驟D：2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(1954 µl, 0.391 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(200 mg, 0.391 mmol)及三乙胺(136 µl, 0.977 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入丁-2-炔酸(49.3 mg, 0.586 mmol)。將丙基膦酸環酐(175 µl, 0.293 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在室溫下攪拌18小時。添加水且將固體過濾。將固體藉由矽膠(5-18% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到2-((S)-1-(丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例458, 110 mg, 0.190 mmol, 49%產率)。ESI+APCI MS m/z 578.3 [M+H]⁺ 。
實例459

2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(100 mg, 0.1954 mmol)、(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(37.86 mg, 0.2932 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(2 mL, 25.58 mmol)之攪拌溶液於冰鹽浴上冷卻，且立即添加三乙胺(0.02724 mL, 0.1954 mmol)，隨後添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物之50% EtOAc (0.1745 mL, 0.2932 mmol)溶液。使反應混合物升溫至室溫超過5分鐘，接著在室溫下攪拌3小時。使反應混合物分溶於EtOAc (50 mL)與0.5 M Na₂ CO₃ (20 mL)之間，分離出有機物，將有機層以水及鹽水(各10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。在矽膠上以於DCM中之5至10% MeOH + 0.5% NH₄ OH層析以得到粗產物，且將其以逆相層析法(Gilson, 5至95% MeCN +0.1% TFA 於水中)純化。將目標分餾物合併，以2M Na₂ CO₃ 鹼化，且用DCM (3*20 mL)萃取。將合併的萃取物以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將固體殘餘物溶解於DCM (3 mL)中，過濾且蒸發，以產生呈無色固體之標題化合物(實例459, 40 mg, 33%)。ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]⁺ 。
實例460

2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 500 mg, 989 umol, 1.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (181 mg, 198 umol, 0.20eq )、Xantphos (172 mg, 297 umol, 0.30eq )及Cs₂ CO₃ (967 mg, 2.97 mmol, 3.0eq )之甲苯(5.0 mL)溶液添加1-溴-8-甲基-萘(中間物69, 284 mg, 1.29 mmol, 1.30eq )。在90°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用乙酸乙酯(10.0 mL × 4)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱(C18, 0.1%於甲酸中, 0-70%乙腈)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 619 umol, 63%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(700 mg, 1.08 mmol, 1.0eq )及NH₃ •MeOH (20.0 mL, 30%純度)之甲醇(20.0 mL)溶液添加Pd/C (200 mg, 10%純度)。將該混合物用氮氣沖淨3次。接著在25°C於氫氣(15 Psi)環境下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應混合物過濾通過矽藻土，用四氫呋喃(20.0 mL)洗滌濾餅。收集母液且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(500 mg, 977 umol, 90%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 3.2, 7.2 Hz, 1H), 7.43 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.22 (dd,J = 6.8, 18.0 Hz, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 4.07 -3.89 (m, 1H), 3.89 -3.70 (m, 2H), 3.52 -3.45 (m, 2H), 3.38 -3.20 (m, 1H), 3.19 -3.04 (m, 4H), 3.03 - 2.94 (m, 2H), 2.93 - 2.82 (m, 4H), 2.70 - 2.60 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.31 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.88 - 1.76 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(250 mg, 489 umol, 1.0eq )及吡啶(309 mg, 3.91 mmol, 316 uL, 8.0eq )之二氯甲烷(4.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(359 mg, 1.95 mmol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮以得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(330 mg，粗製)。產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 658。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製)及K₂ CO₃ (630 mg, 4.55 mmol, 10.0eq )之二氯甲烷(2.0 mL)溶液添加嗎啉(238 mg, 2.73 mmol, 241 uL, 6.0eq )。在0°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%, 12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-嗎啉基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例460, 48.2 mg, 72.5 umol, 16%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 665。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (dd,J = 7.6, 15.2 Hz 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.02 - 6.91 (m, 1H), 6.55 - 6.39 (m, 1H), 5.23 - 4.47 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.09 (m, 2H), 4.07 -3.83 (m, 2H), 3.81 -3.64 (m, 5H), 3.59 -3.40 (m, 2H), 3.24 -3.13 (m, 4H), 3.12 - 2.94 (m, 3H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.75 - 2.54 (m, 3H), 2.50 (br s, 4H), 2.48 - 2.45 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.10 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).
實例461

2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：在0°C下向4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。2,4-二氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ] 嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3 g, 9.86 mmol, 1eq )之DMAc (60 mL)溶液添加DIEA (3.82 g, 29.6 mmol, 5.15 mL, 3eq )及2-哌嗪-2-基乙腈(中間物62, 2.15 g, 10.9 mmol, 1.1eq , 2HCl)。在25°C下攪拌該混合物1.5小時。接著在0°C下向該溶液添加DIEA (2.55 g, 19.7 mmol, 3.43 mL, 2eq )及氯甲酸苯甲酯(2.52 g, 14.8 mmol, 2.10 mL, 1.5eq )。在25°C下攪拌該混合物2.5小時。向該反應混合物添加H₂ O (40 mL)及乙酸乙酯(100 mL)。分離的有機相係以5 %檸檬酸水溶液(40 mL × 1)、飽和Na₂ CO₃ 水溶液(40 mL × 1)及鹽水(40 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥且過濾。將濾液於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物用甲基第三丁基醚(25 mL)濕磨以得到純產物。得到呈白色固體之4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(4.10 g, 7.62 mmol, 79%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.43 - 7.29 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.71 - 4.55 (m, 2H), 4.48 - 4.37 (m, 1H), 4.21 -3.97 (m, 2H), 3.92 -3.67 (m, 2H), 3.40 – 3.20 (m, 3H), 3.09 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.88 - 2.57 (m, 4H), 1.47 (s, 9H).

SFC條件(40935)：管柱: Chiralcel OD -3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm。

步驟B：4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。將4-[4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.20 g, 4.17 mmol, 1eq )藉由SFC (管柱：OD (250mm * 30mm, 10um); 移動相：[0.1% NH₃ H₂ O MeOH]; B%: 40% - 40%, 3.1 分鐘: 180 分鐘)分離。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈白色固體之4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(940 mg, 1.78 mmol, 43%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 527。

SFC條件：管柱: Chiralcel OD -3 50 × 4.6 mm I.D., 3 um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm。

步驟C：4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。將於甲苯(20 mL)中之4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(290 mg, 550 umol, 1eq )、[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(127 mg, 1.10 mmol, 131 uL, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (60.5 mg, 66.0 umol, 0.12eq )、RuPhos (51.4 mg, 110 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (448 mg, 1.38 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物7小時。向該反應混合物添加H₂ O (25 mL × 1)及乙酸乙酯(25 mL × 2)。分離出的有機相係以鹽水(100 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，且接著過濾。將濾液於減壓環境下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用HCl水溶液(1 mol/L)酸化至pH = 3 ~ 4。向分離出的水層添加乙酸乙酯(60 mL)，且以飽和Na₂ CO₃ 水溶液鹼化至pH = 8 ~ 9。將有機相分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(225 mg, 0.36 mmol, 66%產率, 97.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 606。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.47 - 7.30 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.73 - 4.52 (m, 2H), 4.44 - 4.26 (m, 2H), 4.22 - 4.14 (m, 1H), 4.03 -3.74 (m, 3H), 3.41 -3.21 (m, 3H), 3.08 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.97 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.89 - 2.53 (m, 5H), 2.46 (s, 3H), 2.38 - 2.10 (m, 2H), 2.08 - 2.03 (m, 1H), 1.89 - 1.65 (m, 3H), 1.48 (s, 9H).

SFC條件：管柱: Chiralpak AD -3 50 × 4.6 mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm。

步驟D：(2R )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向4-[(3R )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(620 mg, 1.02 mmol, 1eq )之二噁烷(12 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 12.4 mL, 48.5eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。將該液體傾析且將殘餘物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之(2R )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(470 mg，粗製，HCl)，且將其溶解於DCM (10 mL)中。以飽和碳酸鈉水溶液使該混合物鹼化至pH = 9。將有機相分離，以鹽水(5 mL × 1)洗滌，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物，且其純度足夠而不需進一步純化。得到呈黃色固體之(2R )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 718 umol, 77%產率, 90.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 506。

步驟E：(2R )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將於甲苯(7 mL)中之(2R )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(210 mg, 415 umol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(中間物69, 119 mg, 540 umol, 1.3eq ) Pd₂ (dba)₃ (76.1 mg, 83.1 umol, 0.2eq )、Cs₂ CO₃ (406 mg, 1.25 mmol, 3eq )及Xantphos (72.1 mg, 125 umol, 0.3eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物8小時。向該反應混合物添加H₂ O (20 mL × 1)，且用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取該混合物。分離出的萃取物係經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。將殘餘物用乙酸乙酯(50 mL)稀釋，且用HCl水溶液(1 mol/L)酸化至pH = 3 ~ 4。向水層添加乙酸乙酯(60 mL)，且以飽和Na₂ CO₃ 水溶液鹼化至pH = 8 ~ 9。將有機相分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 50/1至5/1)純化。得到呈黃色固體之(2R )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(86 mg, 0.128 mmol, 31%產率, 96.0 純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟E：2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2R )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 201 umol, 1eq )之MeOH (15 mL)溶液添加Pd/C (25 mg, 15.5 umol, 10%純度)及NH₃ •MeOH (15.5 umol, 15 mL, 20%純度)。將該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將催化劑通過矽藻土墊濾除。將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 0.183 mmol, 91%產率, 93.5%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟F：2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈：向於DCM (10 mL)中之2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 195 umol, 1eq )及TEA (198 mg, 1.95 mmol, 272 uL, 10eq )混合物分批添加丙-2-烯醯氯(17.7 mg, 195 umol, 15.9 uL, 1eq )。在-40°C下攪拌30分鐘之後，以MeOH (2 mL)使該混合物淬滅，且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1至10/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8 分鐘)及(管柱：Gemini 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 57% - 87%, 12 分鐘)純化。將所要分餾物於減壓環境下濃縮以移除乙腈，接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2R )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例461, 17.6 mg, 31.0 umol, 16%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 566。

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 50 × 4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm。

¹ H NMR (400M Hz, 氯仿-d) δ = 7.77 - 7.63 (m, 2H), 7.48 - 7.32 (m, 2H), 7.31 - 7.18 (m, 2H), 6.61 (br s, 1H), 6.48 - 6.37 (m, 1H), 5.85 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 5.27 - 4.49 (m, 1H), 4.45 - 4.33 (m, 1H), 4.33 - 4.06 (m, 4H), 4.05 -3.62 (m, 3H), 3.61 -3.34 (m, 2H), 3.33 - 2.99 (m, 5H), 2.94 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.57 (m, 2H), 2.54 - 2.44 (m, 3H), 2.30 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 2.15 – 1.95 (m, 1H), 1.95 - 1.79 (m, 3H).
實例462

2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(20 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.27 mmol, 1eq )、4-溴-5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑(511 mg, 1.65 mmol, 1.3eq )、RuPhos (237 mg, 509 umol, 0.4eq )、Cs₂ CO₃ (1.04 g, 3.18 mmol, 2.5eq )及Pd₂ (dba)₃ (233 mg, 254 umol, 0.2eq )混合物脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續8小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 水溶液中和。將該混合物真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。將有機層以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(365 mg, 469 umol, 37%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 700。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.99 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd,J = 2.8, 9.6 Hz, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.40 (br dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.09 -3.97 (m, 3H), 3.90 (br d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.80 -3.71 (m, 1H), 3.50 (br t,J = 4.8 Hz, 2H), 3.25 (br s, 2H), 3.09 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.99 (br t,J = 11.2 Hz, 1H), 2.83 - 2.51 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.21 - 2.13 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 8H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(720 mg, 1.03 mmol, 1eq )之DCM (1 mL)溶液添加TFA (4.62 g, 40.5 mmol, 3 mL, 39.4eq )。在20°C下攪拌該混合物4小時。在完成時，以DCM (10 mL)稀釋該混合物且以飽和NaHCO_3. 水溶液中和。接著用EtOAc (2 × 30 mL)萃取水相。有機層係經合併，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(880 mg，粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 516。

步驟C：(2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)及TEA (177 mg, 1.75 mmol, 243 uL)之DCM (4 mL)溶液逐滴添加丙-2-烯醯氯(13.2 mg, 145 umol, 11.9 uL)。在-40°C下攪拌30分鐘之後，使飽和NaHCO₃ 水溶液(1 mL)使該混合物淬滅，且用DCM (2 × 10 mL)淬滅。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 1/0至10/1)純化，且隨後藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 200*30 10μ; 移動相：[水(10 mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 40%-70%, 6.0 分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物(2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-丙-2-烯醯基-哌嗪-2-基]乙腈(實例462, 15.6 mg, 27.2 umol, 兩個步驟15%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]:570。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 10.26 (br s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.57 (br d,J = 9.6 Hz, 1H), 6.39 (dd,J = 1.2, 16.4 Hz, 1H), 5.83 (br d,J = 10.4 Hz, 1H), 5.12 - 4.38 (m, 2H), 4.28 (s, 2H), 4.23 -3.84 (m, 4H), 3.73 -3.40 (m, 3H), 3.32 (br s, 1H), 3.10 (br t,J = 7.6 Hz, 2H), 2.98 - 2.61 (m, 5H), 2.48 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.32 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H).
實例463

(S,E)-3-((4-(3-(氰基甲基)-4-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺

步驟A：(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將(S)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯鹽酸鹽(10 g, 34 mmol)溶解於DMA (68 ml, 34 mmol)中。接著向該溶液添加2,4-二氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(9.3 g, 30 mmol)，隨後添加許尼希氏鹼(24 ml, 135 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物1小時。接著將該反應物傾注入鹼水內且用MTBE萃取。有機物係以額外的水、鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將濃縮物用10à70% EtOAc/己烷做為溶離液層析，以得到(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(12 g, 67%產率). ESI+APCI MS m/z 580.3 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(1.5 g, 2.8 mmol)溶解於DCM (28 ml, 2.8 mmol)中，且用氫氯酸溶液(4.0 M的1,4-二噁烷溶液) (3.6 ml, 14 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。將有機物以1M NaOH洗滌。用DCM (2X)萃取水層。將合併的有機物經Na₂ SO₄ 乾燥，真空濃縮而獲得粗製(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.2 g, 99%產率)。ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.51 g, 0.56 mmol)及Xantphos (0.54 g, 1.1 mmol)溶解於1,4-二噁烷(28 ml, 2.8 mmol)中且用氬氣沖淨5分鐘，隨後在100°C於氬氣下攪拌15分鐘。接著將反應物冷卻至室溫。於氬氣下向該反應物添加(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.2 g, 2.8 mmol)、 1-溴-8-甲基萘(1.9 g, 8.4 mmol)及碳酸銫(2.7 g, 8.4 mmol)。於氬氣下蓋上該反應物且在100°C下攪拌隔夜。將反應物冷卻至室溫，且過濾通過GF/F濾紙。將濾液真空濃縮，藉由正相層析法在CombiFlash上使用0% à75% 己烷/EtOAc做為溶離液來純化，以得到(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.45 g, 28%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟D：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,4-二氫吡嗪-1(2H)-甲酸苯甲酯：於一微波管中將(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 0.441 mmol)之二噁烷(4408 µl, 0.441 mmol)溶液用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加3-羥基-N,N-二甲基丙醯胺 (155 mg, 1.32 mmol)、碳酸銫(431 mg, 1.32 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)，且再將該反應物以氬氣鼓泡5分鐘。將反應混合物蓋上且在100°C下加熱1小時。將反應物冷卻至室溫且添加乙酸乙酯。將反應物過濾通過GF/F濾紙，且將濾液真空濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法用0 à20% MeOH + 2% NH₄ OH/DCM溶離而純化。將全部含有純淨所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-3,4-二氫吡嗪-1(2H)-甲酸苯甲酯(140 mg, 49.2%產率)。ESI+APCI MS m/z 648.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-3-((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(3-(二甲基胺基)-3-側氧基丙氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(140 mg, 0.216 mmol)之EtOH (2161 µl, 0.216 mmol)及THF (2161 µl, 0.216 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(57.5 mg, 0.0540 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，將該反應物蓋上且再用N₂ 沖淨5分鐘。於1大氣壓的H₂ 下攪拌該溶液隔夜。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到粗製(S)-3-((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺 (111 mg, 100.0%產率)。ESI+APCI MS m/z 514.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(S,E)-3-((4-(3-(氰基甲基)-4-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺：向冷卻至0^o C之含有二氯甲烷(2161 µl, 0.216 mmol)的25 mL圓底燒瓶添加(S)-3-((4-(3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺 (111 mg, 0.216 mmol)及許尼希氏鹼(226 µl, 1.30 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加(E)-4-(二甲基胺基)丁-2-烯酸(167 mg, 1.30 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(772 µl, 1.30 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。在0°C下攪拌該反應物2小時。將該反應物用鹼水處理，且用EtOAc (3X)萃取水層。將合併的有機物真空濃縮，且在Gilson (prep HPLC)上用5à95% ACN +0.1% TFA /水+0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，以1M NaOH稀釋，且用DCM萃取水層。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物(S,E)-3-((4-(3-(氰基甲基)-4-(4-(二甲基胺基)丁-2-烯醯基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N,N-二甲基丙醯胺 (17.6 mg, 13.0%產率)。ESI+APCI MS m/z 625.4 [M+H]⁺ 。
實例464

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.396 mmol)、Cs₂ CO₃ (644 mg, 1.98 mmol)、1,8-二溴萘(339 mg, 1.19 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (72.4 mg, 0.0791 mmol)及XANTPHOS (91.6 mg, 0.158 mmol)以甲苯(1582 µl, 0.396 mmol)稀釋。將反應物用氬氣沖淨，密封且加熱至100°C。在攪拌23小時之後，將反應物冷卻，且用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，使該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用1-10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH做為添加劑)溶離而純化，以得到(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(68 mg, 24.2%產率)。ESI+APCI MS m/z 712.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(25 mg, 0.035 mmol)用TFA (2 mL)稀釋，置於氮氣下且加熱至90°C。在攪拌2小時之後，將反應物冷卻且濃縮。將該物質用DCM稀釋，且用飽和碳酸氫鈉洗滌。將該DCM經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH做為添加劑)溶離而純化，以得到2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8 mg, 39%產率)。ESI-APCI MS m/z 578.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8 mg, 0.014 mmol)用DCM (200 uL)稀釋，隨後添加丙烯醯氯 (1.4 mg, 0.015 mmol)及DIEA (4.8 µl, 0.028 mmol)。在攪拌12小時之後，用飽和碳酸鈉稀釋該反應物，且用DCM萃取兩次。將該DCM經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH做為添加劑)溶離而純化，以得到標題化合物2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例464, 6 mg, 69%產率)。ESI+APCI MS m/z 632.2 [M+H]⁺ 。
實例465

(R)-4-丙烯醯基-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲腈

步驟A：(R)-4-(4-(第三丁氧基羰基)-2-氰基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將2,4-二氯-5,6-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(8H)-甲酸苯甲酯(700 mg, 2.07 mmol)、R-1-N-Boc-3-氰基哌嗪(656 mg, 3.10 mmol)、N,N-二甲基乙醯胺(1 ml)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.433 ml, 2.48 mmol)之混合物在60°C於氮氣環境下攪拌48小時。將該反應混合物冷卻，使其分溶於MTBE (50 mL)與0.2M Na₂ CO₃ (15 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。用MTBE (5 mL)稀釋後，該物質結晶。將母液傾析，用MTBE (2*1 mL)洗滌固體，隨後藉由在矽膠上使用40至60% EtOAc/己烷做為溶離液而純化，以得到產物(308 mg, 29%)。ESI+APCI MS m/z 513.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：4-((R)-4-(第三丁氧基羰基)-2-氰基哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯：將(R)-4-(4-(第三丁氧基羰基)-2-氰基哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(308 mg, 0.600 mmol)、Cs₂ CO₃ (587 mg, 1.80 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 51.1 mg, 0.0600 mmol)、(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(346 mg, 3.00 mmol)及1,4-二噁烷(4 ml)之混合物用N₂ 沖淨，蓋上該小管且在70^o C下攪拌2小時。使反應混合物分溶於水(5 mL)與EtOAc (20 mL)之間，且分離出有機層。將有機物以水及鹽水(各3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH + 0.4% NH₄ OH/DCM做為溶離物層析，以得到含異構物之混合物產物。(214 mg of ~60%純度, 36%)。ESI+APCI MS m/z 592.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：(R)-3-氰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將粗製4-((R)-4-(第三丁氧基羰基)-2-氰基哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸苯甲酯(214 mg, 0.362 mmol)、甲醇(7 ml, 0.362 mmol)及鈀碳(20 mg, 5%，Degussa型E101 NO/W )之混合物脫氣且於氫氣環境下攪拌1.5小時。將該反應混合物過濾通過矽藻土 (2 mL)，以MeOH (3*3 mL)洗滌矽藻土，且將合併的有機物真空蒸發以得到產物，且其以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 458.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：(R)-3-氰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：將(R)-3-氰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(165 mg, 0.361 mmol)、Cs₂ CO₃ (352 mg, 1.08 mmol)、二噁烷(0.5 mL)、1-碘萘(0.0790 ml, 0.541 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (RuPhos-Pd-G4, 0.1 eq., 30.7 mg, 0.0361 mmol)之混合物用氮氣沖淨，將燒瓶蓋上且在70°C下攪拌1.5小時。將反應混合物冷卻，分溶於EtOAc (20 mL)與水(5 mL)之間，且分離各層。將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH+0.4% NH₄ OH /DCM做為溶離液層析而得到產物(120 mg, 57%)。ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。

步驟E：(R)-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲腈：將(R)-3-氰基-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基哌嗪-1-甲酸第三丁酯(120 mg, 0.206 mmol)溶解於二氯甲烷中(0.5 ml)且冷卻至0^o C，隨後添加4M氯化氫(1.03 ml, 4.11 mmol)且攪拌該反應物1小時，同時使其升溫至室溫。將該混合物真空蒸發，使殘餘物分溶於DCM (10 mL)與2M Na₂ CO₃ (0.5 mL)之間，且分離各層。該物質係以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 484.2 [M+H]⁺ 。

步驟F：(R)-4-丙烯醯基-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲腈：將(R)-1-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-甲腈 (79 mg, 0.1634 mmol)之DCM (5 mL)溶液在攪拌下冷卻至-30^o C，隨後添加三乙胺(68.31 µl, 0.4901 mmol)及丙烯醯氯 (26.54 µl, 0.3267 mmol)。在-30^o C下5分鐘之後，藉由添加MeOH (0.05 mL)使該反應物淬滅，且將該反應物升溫至室溫。接著分離出有機物且用0.5M Na₂ CO₃ (4 mL)洗滌，經Na₂ CO₃ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物在矽膠上使用4% MeOH + 0.4% NH₄ OH/DCM做為溶離液層析，以得到標題化合物(實例465, 17 mg, 19%)。ESI+APCI MS m/z 538.3 [M+H]⁺ 。
實例466

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。標題化合物係依據實例 454 製備，以中間物66取代步驟A中的4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。
實例467

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：標題化合物係依據實例 447 製備，以實例 447 步驟A中的(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代實例 447 步驟A中的(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。
實例468

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：標題化合物係依據實例 447 製備，以實例 447 步驟A中的(S)-4-(2-氯-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯取代實例 447 步驟A中的(S)-4-(2-氯-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。
實例469

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：標題化合物係依據實例457製備，以實例 139 步驟B的產物2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙醇取代步驟E之中間物66製備方法中的[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇，接著依循實例457步驟B-D。
實例470

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮：標題化合物係依據實例 453 製備，以實例 139 步驟B中的產物2-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)乙醇取代步驟E之中間物66製備方法中的[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇，接著依循實例 453 步驟B-C。
實例471

2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

(E)-4-溴丁-2-烯醯氯。向(E )-4-溴丁-2-烯酸(500 mg, 3.03 mmol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加(COCl)₂ (4.35 g, 34.3 mmol, 3.0 mL, 11.3eq )。在60°C下攪拌該混合物12小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈褐色油狀物之粗產物(E)-4-溴丁-2-烯醯氯(500 mg，粗製)。

步驟A：(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.30 g, 2.17 mmol, 1.0eq )及[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(500 mg, 4.34 mmol, 515 uL, 2.0eq )之甲苯(20.0 mL)溶液添加t -BuONa (417 mg, 4.34 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在20°C下藉由添加飽和鹽水(30.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用EA (3×30.0 mL)萃取。將合併的有機層用飽和鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO2, 石油醚/乙酸乙酯=3/1至EA/MeOH = 10/1)純化。得到呈黃色固體之產物(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 1.62 mmol, 75%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 154 umol, 1.00eq )之二噁烷(0.5 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 1.00 mL, 26.0eq )。在0°C下攪拌該混合物10小時。將反應混合物於減壓環境下濃縮以移除二噁烷。將殘餘物用飽和NaHCO₃ 水溶液(10.0 mL)稀釋，且用EA (10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈白色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]:550。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg, 145 umol, 1.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加Py (115 mg, 1.45 mmol, 117 uL, 10.0eq )及(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(107 mg, 582 umol, 4.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。在初始材料消耗掉之後，接著向該反應混合物添加3,3-二氟吡咯啶(156 mg, 1.45 mmol, 10.0eq )之DCM (6.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 62%-92%,12min)純化。且將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除CAN，接著凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-[3-氯-2-(三氟甲基)苯基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3,3-二氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例471, 15.4 mg, 20.8 umol, 14%產率, 97.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 723。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 (t,J =8.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.26 (m, 1H), 7.19 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.05 - 6.90 (m, 1H), 6.60 - 6.40 (m, 1H), 5.08 (br s, 1H), 4.39 (br dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.17 (br dd,J =6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.1 (br s, 2H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.97 (br d,J =10.8 Hz, 2H), 3.70 -3.53 (m, 1H), 3.35 -3.25 (m, 3H), 3.17 -3.07 (m, 2H), 2.96 (br t,J =13.2 Hz, 3H), 2.90 - 2.85 (m, 1H), 2.81 (br t,J = 6.8 Hz, 3H), 2.75 - 2.65 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.40 - 2.27 (m, 3H), 2.15 - 1.95 (m, 1H), 1.95 - 1.72 (m, 5H).
實例472

2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

2-氯丙-2-烯醯氯。向2-氟丙-2-烯酸(400 mg, 4.44 mmol, 1.0eq )之DCM (1.50 mL)溶液添加(COCl)₂ (846 mg, 6.66 mmol, 583 uL, 1.50eq )及DMF (32.5 mg, 444 umol, 34.2 uL, 0.10eq )。在25°C下攪拌該混合物2小時。將2-氯丙-2-烯醯氯(400 mg，粗製)直接用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 347 umol, 1.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 77.8eq )。在20°C下攪拌該混合物10分鐘。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之產物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg，粗製，TFA)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 339 umol, 1.0eq , TFA)之DCM (2.0 mL)溶液添加DIEA (1.11 g, 8.61 mmol, 1.50 mL, 25.4eq )及2-氟丙-2-烯醯氯(200 mg, 1.84 mmol, 5.43eq )之DCM (2.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-83%, 12分鐘)純化。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例472, 120 mg, 217 umol, 兩個步驟62%產率, 98.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 548。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.11 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.01 - 6.91 (m, 2H), 5.52 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd, J=3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.70 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.02 (m, 5H), 3.97 (d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.43 -3.73 (br s, 1H) 3.32 (d,J = 13.2 Hz, 1H), 3.25 -3.16 (m, 1H), 3.15 -3.02 (m, 3H), 3.01 - 2.91 (m, 1H), 2.90 -2.80 (m, 2H) 2.79 - 2.60 (m, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.31-2.28 (m, 7H), 2.13 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 3H).
實例473

2-[(2S )-1-(2-氯丙-2-烯醯基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

2-氯丙烯醯氯。在25°C下攪拌2-氯丙-2-烯酸(400 mg, 3.76 mmol, 1.0eq )及(COCl)₂ (715 mg, 5.63 mmol, 493 uL, 1.50eq )之DCM (1.0 mL)溶液0.5小時。在完成之後，不對該反應混合物進行處理，且直接用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物73, 400 mg, 695 umol, 1.0eq )之DCM (0.50 mL)溶液添加TFA (3.08 g, 27.0 mmol, 2.0 mL, 38.9eq )。在20°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物濃縮，用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~7，接著用DCM (5.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(400 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟B：2-[(2S )-1-(2-氯丙-2-烯醯基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-78°C下向2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 631 umol, 1.0eq )及DIEA (245 mg, 1.89 mmol, 330 uL, 3.0eq )之DCM (1.0 mL)溶液添加2-氯丙-2-烯醯氯(236 mg, 1.89 mmol, 3.0eq )。在-78°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物添加飽和NaHCO₃ 水溶液(2.0 mL)，且用EA (10.0 mL × 3)萃取。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 53%-83%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氯丙-2-烯醯基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例473, 4.72 mg, 8.35 umol, 兩個步驟1%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 564。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.11 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 6.98 - 6.94 (m, 2H), 5.86 - 5.78 (m, 1H), 5.77 - 5.72 (m, 1H), 5.15 - 4.78 (m, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 1H), 4.21 - 4.12 (m, 1H), 4.10 - 4.03 (m, 3H), 3.96 (br d,J = 12.4 Hz, 2H), 3.30 (br dd,J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.23 -3.04 (m, 4H), 3.04 - 2.54 (m, 6H), 2.50 (br s, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 7H), 2.12 - 2.02 (m, 1H), 1.91 - 1.66 (m, 3H).
實例474

2-((S )-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)-4-(2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向於甲苯(20 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(中間物65, 1 g, 1.58 mmol, 1 eq)及1-溴萘(655 mg, 3.16 mmol, 440 uL, 2 eq)混合物一次添加Pd₂ (dba)₃ (145 mg, 158 umol, 0.1 eq)、RuPhos (148 mg, 316 umol, 0.2 eq)、Cs₂ CO₃ (1.55 g, 4.75 mmol, 3 eq)。將該混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著加熱至90°C且攪拌2小時。將反應混合物用水(15 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(50 mL × 1)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% TFA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 溶液(6 mL)中和，且用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(515 mg, 726 umol, 45.9%產率, 89.1%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1 g, 1.58 mmol, 1 eq)之MeOH (60 mL)溶液添加Pd/C (500 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (20%, 50 mL)。將懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(680 mg, 1.26 mmol, 80%產率, 92.3%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 498。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.89 - 7.83 (m, 1H), 7.60 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.16 - 7.12 (m, 1H), 4.41 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.16 (dd,J = 7.2, 10.8 Hz, 1H), 4.01 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.95 -3.82 (m, 1H), 3.44 -3.21 (m, 3H), 3.18 - 2.97 (m, 4H), 2.95 - 2.76 (m, 3H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.55 (dd,J = 1.2, 5.6 Hz, 2H), 2.51 - 2.46 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.80 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸(172 mg, 803 umol, 2eq )及DIEA (155 mg, 1.21 mmol, 210 uL, 3eq )之MeCN (5 mL)溶液添加MsCl (92.1 mg, 803 umol, 62.2 uL, 2eq )。在0°C下攪拌20分鐘之後，向該混合物添加2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 402 umol, 1eq )，且在25°C下攪拌該混合物2小時。接著將該反應混合物加熱至80°C且攪拌10小時。將反應混合物以水(20 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Boston Green ODS 150*30 5u; 移動相：[水(0.225% FA)-ACN]; B%: 25% - 45%, 10 分鐘)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 75%, 12 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例474, 1.43 mg, 2.39 umol, 1%產率, 96.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 580。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.22 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.90 - 7.82 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.44 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.26 - 4.89 (m, 1H), 4.60 - 4.34 (m, 4H), 4.33 - 4.16 (m, 3H), 4.14 -3.96 (m, 1H), 3.95 -3.80 (m, 1H), 3.78 -3.50 (m, 2H), 3.50 -3.28 (m, 2H), 3.27 -3.07 (m, 3H), 3.06 - 2.82 (m, 3H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.51 (d,J =12.4 Hz, 3H), 2.38 - 2.24 (m, 1H), 2.14 - 2.00 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 2H).
實例475

2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在5 °C下向氘代2,3,3-三氘代丙-2-烯酸酯(68.8 mg, 904 umol, 3 eq)及DIEA (234 mg, 1.81 mmol, 315 uL, 6 eq)之MeCN (3 mL)溶液添加MsCl (69.1 mg, 603 umol, 46.7 uL, 2 eq)歷時0.5小時。向所得反應物添加2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 301 umol, 1 eq)。在5°C下攪拌該反應混合物1小時。接著將反應混合物加熱至80°C持續12小時。在完成時，以水(0.5 mL)使該反應混合物淬滅。將殘餘混合物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 50%-80%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例475, 34.2 mg, 60.2 umol, 20%產率, 97.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 555。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.28 - 8.16 (m, 1H), 7.91 - 7.83 (m, 1H), 7.63 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.16 (d,J =7.2 Hz, 1H), 5.28 - 4.94 (m, 1H), 4.41 (dd,J =5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.24 (m, 2H), 4.23 - 4.11 (m, 2H), 4.04 (br d,J =11.6 Hz, 2H), 3.73 -3.25 (m, 3H), 3.22 - 2.74 (m, 7H), 2.69 (td,J =6.4, 13.2 Hz, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.83 - 1.77 (m, 3H).
實例476

2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(E)-4-溴丁-2-烯醯氯。在70°C下向(E )-4-溴丁-2-烯酸(1.0 g, 6.06 mmol, 1.0eq )之(COCl)₂ (14.5 g, 114 mmol, 10.0 mL, 18.9eq )及DCM (10.0 mL)溶液攪拌2小時。在完成之後，將混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(1.0 g，粗製)。該粗製化合物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(中間物73, 200 mg, 347 umol, 1.0eq )之二噁烷(2.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4.0 M, 2.0 mL, 23.0eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該殘餘物至pH=7，且用EA (5.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之產物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E)-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg, 336 umol, 1.0eq )之DCM (6.0 mL)溶液添加Py (532 mg, 6.73 mmol, 543 uL, 20.0eq )及(E)-4-溴丁-2-烯醯氯(246 mg, 1.35 mmol, 4.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下藉由添加MeOH (5.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-1-[(E)-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 622。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-[(E)-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 321 umol, 1.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加K₂ CO₃ (88.8 mg, 642 umol, 2.0eq )、KI (2.67 mg, 16.1 umol, 0.05eq )及3-氟吡咯啶(403 mg, 3.21 mmol, 10.0eq , HCl鹽)。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該殘餘物至pH=7，且用EA (10.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.04%NH3H2O)-ACN];B%: 60%-84%,10分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮且接著凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(2,3-二甲基苯基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例476, 123 mg, 193 umol, 56%產率於三個步驟中, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 631。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.16 - 7.07 (m, 1H), 7.02 - 6.92 (m, 3H), 6.59 - 6.41 (m, 1H), 5.31 - 5.10 (m, 1H), 5.09 - 4.46 (m, 1H), 4.38 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.26 -3.83 (m, 6H), 3.80 -3.45 (m, 1H), 3.42 -3.24 (m, 3H), 3.23 -3.15 (m, 1H), 3.14 -3.03 (m, 3H), 3.02 - 2.83 (m, 4H), 2.82 - 2.62 (m, 4H), 2.54 - 2.49 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.32 - 2.26 (m, 6H), 2.25 - 2.17 (m, 1H), 2.16 - 2.09 (m, 1H), 2.08 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.78 (m, 4H).
實例477

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈：在5°C下向氘代2,3,3-三氘代丙-2-烯酸酯(56.6 mg, 744 umol, 3eq )及DIEA (481 mg, 3.72 mmol, 648 uL, 15eq )之ACN (3 mL)溶液添加MsCl (56.8 mg, 496 umol, 38.4 uL, 2eq )，在5°C下攪拌該混合物0.5小時。接著向該混合物添加2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 150 mg, 248 umol, 1eq , 2 HCl)，在5°C下攪拌所得混合物0.5小時。接著將該混合物加熱至80°C且在80°C下攪拌12小時。以水(0.5 mL)使該混合物淬滅。將反應混合物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 50 % - 80 %,10 分鐘)純化，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2,3,3-三氘代丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例477, 13.0 mg, 21.6 umol, 9%產率, 98.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 589。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.21 - 4.01 (m, 3H), 3.96 -3.79 (m, 2H), 3.60 (br d,J = 6.8 Hz, 1H), 3.44 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.32 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.53 (m, 4H), 2.48 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.29 (br d,J = 8.8 Hz, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.87 - 1.71 (m, 3H).
實例478

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

2-氟丙-2-烯醯氯。向2-氟丙-2-烯酸(400 mg, 4.44 mmol, 1eq )之DCM (4 mL)溶液添加(COCl)₂ (846 mg, 6.66 mmol, 583 uL, 1.5eq )及DMF (32.5 mg, 444 umol, 34.2 uL, 0.1eq )。在25°C下攪拌該混合物2小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以移除部分溶劑，且得到於DCM中的殘餘物。得到呈黃色液體之化合物2-氟丙-2-烯醯氯(400 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈：向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg, 528 umol, 1eq , HCl)之DCM (5 mL)溶液添加DIEA (1.73 g, 13.4 mmol, 2.33 mL, 25.4eq )及2-氟丙-2-烯醯氯(286 mg, 2.64 mmol, 5eq )之DCM (5 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al₂ O₃ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1至10/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 55% - 85%, 12分鐘)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 * 30mm * 4um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 20% - 50%, 10.5分鐘)純化。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以移除CAN，接著凍乾。得到呈褐色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例478, 24.1 mg, 36.7 umol, 7%產率, 99.1%純度, FA)。

SFC條件："AD -3S_3_5_40_3ML 管柱: Chiralpak AD -3 100 × 4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400 MHz, Acetic) δ = 7.82 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.41 - 7.30 (m, 2H), 5.58 - 5.25 (m, 2H), 5.17 - 4.59 (m, 4H), 4.57 - 4.28 (m, 3H), 4.24 -3.78 (m, 4H), 3.67 -3.13 (m, 7H), 3.08 (br d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.98 (br d,J = 6.4 Hz, 1H), 2.83 - 2.61 (m, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 1H), 2.24 - 2.08 (m, 3H).
實例479

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(E )-4-氟丁-2-烯酸乙酯。將於乙腈 (20.0 mL)中之混合物在25°C下攪拌12小時。將混合物過濾，且用THF (10.0 mL)洗滌，接著真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(E )-4-氟丁-2-烯酸乙酯(2.50 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ =7.04 - 6.89 (m, 1H), 6.12 (qd,J = 2.0, 16.0 Hz, 1H), 5.14 - 4.94 (m, 2H), 4.22 (q,J = 6.8 Hz, 2H), 1.30 (t,J = 6.8 Hz, 3H).

步驟B：(E )-4-氟丁-2-烯酸。將於THF (1.00 mL)及H₂ O (1.00 mL)中之(E )-4-氟丁-2-烯酸乙酯(0.10 g，粗製)及NaOH (121 mg, 3.03 mmol)混合物在25°C下攪拌2小時。以HCl (1N, 5.00 mL)將pH值調整至1~3，用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(E )-4-氟丁-2-烯酸(0.02 g, 192 mmol, 兩個步驟46%)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.37 - 7.31 (m, 1H), 7.15 - 7.01 (m, 1H), 6.15 (dd, J=1.6, 16.0 Hz, 1H), 5.22 - 4.96 (m, 2H).

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向(E )-4-氟丁-2-烯酸(7.32 mg, 70.4 umol, 2 eq)及Py (8.35 mg, 106 umol, 8.52 uL, 3.00 eq)之乙腈 (1.00 mL)溶液添加MsCl (8.06 mg, 70.4 umol, 5.45 uL, 2.00 eq)。在-78°C至20°C下攪拌該混合物12小時。在0°C下攪拌1小時之後，將2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.02 g, 35.2 umol, 1.00 eq, HCl)添加至該混合物內。在25°C下攪拌該混合物12小時。將該混合物以水(5.00 mL)，用乙酸乙酯(3 × 5.00 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈褐色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例479, 3.01 mg, 4.82 umol, 14%產率, 98.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 618。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 7.09 - 6.91 (m, 1H), 6.59 (br d,J = 15.6 Hz, 1H), 5.19 - 5.05 (m, 2H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.22 -3.79 (m, 5H), 3.76 - 2.96 (m, 8H), 2.92 - 2.55 (m, 4H), 2.48 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.29 (br d,J = 9.6 Hz, 1H), 2.06 (br d,J = 10.0 Hz, 1H), 1.83 - 1.71 (m, 3H).
實例480

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(E )-4-溴丁-2-烯醯氯。向(E )-4-溴丁-2-烯酸(930 mg, 5.64 mmol, 1.0 eq)之DCM (2.0 mL)溶液添加(COCl)₂ (2.90 g, 22.9 mmol, 2.0 mL, 4.05 eq)。在60°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(650 mg，粗製)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 150 mg, 282 umol, 1.0 eq)之DCM (3.0 mL)溶液添加Py (446 mg, 5.64 mmol, 455 uL, 20.0 eq)及(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(207 mg, 1.13 mmol, 4.0 eq)之DCM (1.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈褐色油狀物之2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 680。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 221 umol, 1.0eq )之DCM (10.0 mL)溶液添加K₂ CO₃ (366 mg, 2.65 mmol, 12.0eq )、KI (1.83 mg, 11.0 umol, 0.05eq )及3-氟吡咯啶(277 mg, 2.21 mmol, 10.0eq , HCl)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該殘餘物至pH~7，且用EA (3 × 10 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04%NH₃ •H₂ O)-ACN]; B%: 60%-84%, 10 分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮且接著凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟吡咯啶-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例480, 9.67 mg, 14.0 umol, 6%產率, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 687。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 (br d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.05 - 6.92 (m, 1H), 6.57 - 6.42 (m, 1H), 5.32 - 5.11 (m, 1H), 5.10 - 4.50 (m, 1H), 4.47 - 4.35 (m, 2H), 4.19 - 4.00 (m, 2H), 3.95 -3.75 (m, 2H), 3.65 -3.55 (m, 1H), 3.47 -3.28 (m, 3H), 3.24 -3.05 (m, 4H), 3.04 - 2.86 (m, 4H), 2.85 - 2.71 (m, 2H), 2.70 - 2.50 (m, 3H), 2.47 - 2.45 (m, 3H), 2.32 - 2.15 (m, 2H), 2.14 - 2.02 (m, 2H), 1.87 - 1.67 (m, 4H).
實例481

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(E )-4-溴丁-2-烯醯氯。向(E )-4-溴丁-2-烯酸(1 g, 6.06 mmol, 1.0eq )之DCM (5.0 mL)溶液添加草醯氯 (7.25 g, 57.1 mmol, 5.0 mL, 9.4eq )。在60°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(850 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：中間物71, 2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在25°C下向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(310 mg, 414 umol, 1.0eq )之二噁烷(4.0 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4.0 M, 4.0 mL, 39.0eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以飽和NaHCO₃ 水溶液(20.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用EtOAc (3 × 40.0 mL)萃取。將合併的有機層用飽和NaCl水溶液(100.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色固體之殘餘物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(250 mg，粗製)。粗產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 150 mg, 282 umol, 1.0eq ，粗製) 之DCM (6.0 mL)溶液添加Py (446 mg, 5.6 mmol, 455 uL, 20.0eq )及(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(207 mg, 1.2 mmol, 4.0eq ，粗製) 之DCM (1.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該混合物1小時。接著在0°C下添加K₂ CO₃ (779 mg, 5.6 mmol, 20.0eq )、KI (4.6 mg, 28.2 umol, 0.1eq )及3-氟氮雜環丁烷(472 mg, 4.2 mmol, 15.0eq , HCl)。接著在25°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 移動相：[水(10.0 mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 55%-85%, 10分鐘)純化且凍乾，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例481, 10.8 mg, 15.7 umol, 6%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 673。

SFC條件：100% .e.e.。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.77 (d,J = 8.0 Hz, 1 H), 7.63 (t,J = 7.8 Hz, 1 H), 7.54 (d,J = 7.2 Hz, 1 H), 7.50-7.43 (m, 1 H), 7.35 (t,J = 7.8 Hz, 1 H), 7.26 - 7.21 (m, 1 H), 6.89 (d,J = 15.2 Hz, 1 H), 6.42 (d,J = 14.8 Hz, 1 H), 5.26-4.62 (m, 1 H), 5.11 (t,J = 5.2 Hz, 1 H), 4.80 - 4.37 (m, 2 H), 4.20 - 4.08 (m, 2 H), 3.92 (br d,J = 17.6 Hz, 1 H), 3.86 -3.71 (m, 3 H), 3.60 (s, 1 H), 3.52 -3.47 (m, 1 H), 3.45 -3.33 (m , 1 H), 3.28 -3.21 (m, 3 H), 3.16 -3.11 (m, 3 H), 3.03 (dd,J = 8.4, 16.8 Hz, 1 H), 2.82 - 2.60 (m, 4 H), 2.49 (d,J = 2.8 Hz, 3 H), 2.37 - 2.25 (m, 1 H), 2.09 - 2.03 (m, 1 H), 1.86 - 1.83 (m, 1 H), 1.78 - 1.76 (m, 3 H).
實例482

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-[甲基(2,2,2-三氟乙基)胺基]丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

插圖：(E )-4-溴丁-2-烯醯氯。將(E )-4-溴丁-2-烯酸(600 mg, 3.64 mmol, 1.0eq )之(COCl)₂ (10.2 g, 80.0 mmol, 7.0 mL, 22.0eq )及DCM (7.0 mL)溶液在70°C下攪拌12小時。在完成之後，將反應混合物濃縮以得到呈黃色油狀物之(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(500 mg，粗製)。粗產物不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 188 umol, 1.0eq )及吡啶(119 mg, 1.50 mmol, 121 uL, 8.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(138 mg, 752 umol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(130 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 678, 680。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-[甲基(2,2,2-三氟乙基)胺基]丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(128 mg, 189 umol, 1.0eq )、K₂ CO₃ (130 mg, 943 umol, 5.0eq )及KI (9.39 mg, 56.6 umol, 0.30eq )之DCM (3.0 mL)溶液分批添加2,2,2-三氟-N-甲基-乙胺(213 mg, 1.88 mmol, 10.0eq )。在0°C至25°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將混合物真空濃縮。將所得產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.04% NH₃ •H₂ O)-ACN]; B%: 70%-100%, 10 分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-[甲基(2,2,2-三氟乙基)胺基]丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例482, 2.87 mg, 3.84 umol, 2%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 711。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.95 -6.79 (m, 1H), 6.54 - 6.38 (m, 1H), 5.12 - 4.50 (m, 1H) , 4.48 - 4.35 (m, 2H), 4.24 -3.99 (m, 3H), 3.96 -3.78 (m, 2H), 3.77 -3.64 (m, 1H), 3.61 -3.53 (m, 1H), 3.52 -3.34 (m, 3H), 3.33 - 2.97 (m, 7H), 2.92 - 2.76 (m, 1H), 2.75 -2.65 (m, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.49 (br d,J = 3.2 Hz, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.67 (m, 3H).
實例483

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸(129 mg, 564 umol, 1.50 eq)及DIEA (194 mg, 1.50 mmol, 262 uL, 4.00 eq)之DMF (2.00 mL)溶液添加HATU (214 mg, 564 umol, 1.50 eq)。在0°C下攪拌10分鐘之後，將2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.20 g, 376 umol, 1.00 eq)添加至該混合物內。在25°C下攪拌12小時之後，將混合物用乙酸乙酯(10.0 mL)稀釋，以鹽水(3 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)中和至pH ＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%, FA)- ACN]; B%: 10% - 40%, 10 分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例483, 10.1 mg, 15.3 umol, 4.1%產率, 99.6%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400MHz, Acetic acid-d4) δ = 7.82 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.31 (m, 2H), 5.14 - 4.73 (m, 4H), 4.70 - 4.23 (m, 5H), 4.01 -3.81 (m, 3H), 3.80 -3.51 (m, 3H), 3.49 -3.17 (m, 4H), 3.09 (m, 5H), 2.81 - 2.63 (m, 1H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 3H).
實例484

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4,4-二氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：4,4-二氟-3-羥基–丁酸酯。在0°C下向4,4-二氟-3-側氧基-丁酸乙酯(5.00 g, 30.1 mmol, 1.00 eq)之甲苯(150 mL)溶液添加NaBH₄ (1.20 g, 31.7 mmol, 1.05 eq)。在25°C下攪拌4小時之後，在0°C下以水(50.0 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之4,4-二氟-3-羥基-丁酸乙酯(4.30 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 6.05 - 5.87 (m, 1H), 5.86 - 5.72 (m, 1H), 4.11 - 4.01 (m, 2H), 2.57 (dd,J = 4.0, 15.6 Hz, 1H), 2.38 (dd,J = 9.2, 15.6 Hz, 1H), 1.21 - 1.17 (m, 3H).

步驟2：(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸乙酯。在0°C下向4,4-二氟-3-羥基-丁酸乙酯(3.00 g，粗製)之二氯甲烷(20.0 mL)溶液添加TEA (1.81 g, 17.8 mmol, 2.48 mL)及MsCl (3.68 g, 32.1 mmol, 2.49 mL)。在攪拌4小時之後，在0°C下向該混合物添加TEA (3.61 g, 35.68 mmol, 4.97 mL, 2 eq)。在升溫至25°C且攪拌12小時之後，將該混合物以水(10.0 mL)稀釋，以HCl (1N, 1 × 20.0 mL)及鹽水(1 × 20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸乙酯(1.40 g, 9.33 mmol, 兩個步驟44%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.81 (m, 1H), 6.29 (dt,J = 2.8, 1.6 Hz, 1H), 6.23 (dd,J = 4.0, 55.2 Hz, 1H), 4.25 (q,J = 7.2 Hz, 2H), 1.31 (t,J = 7.2 Hz, 3H).

步驟3：(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸。將於THF (5.00 mL)及H₂ O (5.00 mL)下之(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸乙酯(1.30 g, 8.66 mmol, 1.00 eq)及NaOH (1.39 g, 34.6 mmol, 4.00 eq)混合物在25°C下攪拌2小時。以HCl (2N, 20.0 mL)使該混合物酸化至pH = 1 ~ 3，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸(0.35 g, 2.87 mmol, 33%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.92 (m, 1H), 6.32 (dtd,J = 0.8, 2.8, 16.8 Hz, 1H), 6.27 (dtd,J = 1.2, 54.8 Hz, 4.0, 1H).

步驟A：2-[(2_S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2_S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5_H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4,4-二氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。將於Py (3 mL)中之(E )-4,4-二氟丁-2-烯酸(68.8 mg, 564 umol, 1.50 eq)、EDCI (108 mg, 564 umol, 1.50 eq)及HOBt (50.8 mg, 376 umol, 1.00 eq)混合物在0°C下攪拌15分鐘，接著將2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 0.20 g, 376 umol, 1.00 eq)添加至該混合物內。在0°C下攪拌1小時且在25°C下攪拌1小時之後，將該混合物以水(10.0 mL)洗滌，用乙酸乙酯(1 × 10.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(1 × 10.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.10 %)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和碳酸氫鈉(5.00 mL)中和，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 55% - 85%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2_S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2_S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5_H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4,4-二氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例484, 66.9 mg, 104 umol, 28%產率, 98.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 636。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 6.45 - 6.12 (m, 1H), 5.17 - 4.59 (m, 1H), 4.55 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.33 (m, 1H), 4.21 -3.69 (m, 5H), 3.64 -3.32 (m, 2H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.96 - 2.52 (m, 4H), 2.47 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 3H).
實例485

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[2-(甲氧基甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：1-(2-(乙氧基羰基)烯丙基)-1,4-二氮雜二環[2.2.2]辛-1-鎓溴。向2-(溴甲基)丙-2-烯酸乙酯(15 g, 77.7 mmol, 1eq )之THF (5 mL)溶液添加DABCO (10.5 g, 93.6 mmol, 10.3 mL, 1.20eq )，且在25°C下攪拌所得混合物2小時。沉澱物形成且於氮氣環境下過濾。收集濾餅，以得到呈淺黃色固體之1-(2-(乙氧基羰基)烯丙基)-1,4-二氮雜二環[2.2.2]辛-1-鎓溴(15 g, 49.6 mmol, 64%產率)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟2：2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸乙酯。將於MeOH (150 mL)中之1-(2-(乙氧基羰基)烯丙基)-1,4-二氮雜二環[2.2.2]辛-1-鎓溴(15 g, 49.6 mmol, 1eq )及TEA (10.5 g, 104 mmol, 14.5 mL, 2.09eq )混合物在25°C下攪拌16小時。將溶劑真空蒸發(25°C)。將殘餘物溶解於DCM (40 ml內，接著以5%檸檬酸水溶液(1 × 40 mL)及飽和碳酸氫鈉水溶液(1 × 40 mL)洗滌。有機層係於25°C下經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色液體之2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸乙酯(5.3 g, 36.8 mmol, 74%產率)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟3：2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸。在5 °C下向2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸乙酯(5.1 g, 35.4 mmol, 1eq )之THF (71 mL)溶液添加NaOH (5.66 g, 142 mmol, 4eq )之H₂ O (71 mL)溶液。在25°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，將THF真空蒸發。以1 M HCl將該混合物的pH調整至3，且用EtOAc (3 × 70 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈淺黃色液體之2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸(3.4 g, 26.4 mmol, 75%產率, 90%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 6.45 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 5.98 (q,J = 1.6 Hz, 1H), 4.16 (t,J = 1.2 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H).

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[2-(甲氧基甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸(175 mg, 1.50 mmol, 2eq )及DIEA (389 mg, 3.01 mmol, 524 uL, 4eq )之DCM (8 mL)溶液添加HATU (429 mg, 1.13 mmol, 1.5eq )。在-40°C下攪拌10分鐘之後，將2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 400 mg, 752 umol, 1eq )添加至該混合物內。在-40°C下攪拌該混合物20分鐘，在0°C下攪拌0.5小時，且在25°C下攪拌1小時。在完成時，向該混合物添加水(10 mL)，且用DCM (2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 100/1至40/1)純化，且藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[2-(甲氧基甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例485, 73.0 mg, 116 umol, 15%產率, 98.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]:630。

SFC條件：管柱: Chiralpak AS-3 100×4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 13.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 5.32 (br s, 1H), 5.19 - 4.58 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.23 - 4.07 (m, 4H), 4.06 -3.78 (m, 3H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.39 (s, 3H), 3.36 - 2.72 (m, 8H), 2.71 - 2.53 (m, 2H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.22 (m, 1H), 2.14 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
實例486

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：於一圓底燒瓶中，將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5 g, 9.487 mmol)之二噁烷(94.87 ml, 9.487 mmol)溶液用氬氣鼓泡，於氬氣下依序添加(S)-(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇(3.278 g, 28.46 mmol)、Cs2CO3 (9.273 g, 28.46 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.8078 g, 0.9487 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱隔夜。將反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物在Combi Flash (0-12% MeOH於具有2% NH₄ OH的DCM中)上純化，以得到4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.425 g, 8.508 mmol, 89.68%產率)。ESI+APCI MS m/z 606.4 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(5.4 g, 8.915 mmol)溶解於二氯甲烷(89.15 ml, 8.915 mmol中，且用氫氯酸(4.0M的1,4-二噁烷溶液) (11.14 ml, 44.57 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。以更多的DCM及1M NaOH稀釋該反應物，且分離各層。接著將有機物以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.364 g, 8.631 mmol, 96.82%產率)。ESI+APCI MS m/z 506.3 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於一圓底燒瓶中，將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.364 g, 8.631 mmol)之二噁烷(43.15 ml, 8.631 mmol)溶液用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加1-溴-2,3-二甲苯(5.851 ml, 43.15 mmol)、Cs2CO3 (14.06 g, 43.15 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (0.7348 g, 0.8631 mmol)，且再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱隔夜。將反應物冷卻至室溫。添加乙酸乙酯，且將反應物過濾通過GF/F濾紙，且真空濃縮。將濃縮物經由正相層析法在CombiFlash上使用於具有2% NH₄ OH的DCM中之0-15% MeOH做為溶離液而純化。收集含有所要產物的分餾物且真空濃縮，以得到2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.411 g, 0.8641 mmol, 100.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 476.3 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(200 mg, 0.420 mmol)、4,4,4-三氟丁烯酸(118 mg, 0.841 mmol)、DIEA (367 µl, 2.10 mmol)之DCM (4205 µl, 0.420 mmol)溶液添加HATU (240 mg, 0.631 mmol)，在室溫下攪拌所得混合物5小時。將反應混合物以鹽水洗滌，且用DCM (2x)萃取水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，濃縮，稀釋於60:40的ACN:H₂ O中，且在Gilson (逆相 prep HPLC)上用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，用飽和碳酸氫鹽游離鹼化，且用DCM萃取有機物。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(實例486, 28 mg, 0.0468 mmol, 11.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]⁺ 。
實例487

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(三氟甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(三氟甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 486 ，以2-(三氟甲基)丙烯酸取代步驟D中的4,4,4-三氟丁烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]⁺ 。
實例488

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(羥甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(羥甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 486 ，以2-(羥甲基)丙-2-烯酸取代步驟D中的4,4,4-三氟丁烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 560.3 [M+H]⁺ 。
實例489

2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.1051 mmol)之DCM (1 mL)溶液添加(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(24.41 mg, 0.2102 mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.03662 ml, 0.2102 mmol)及O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲PF₆ (59.96 mg, 0.1577 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物4小時。接著添加水(1 mL)且攪拌該反應混合物5分鐘。將該混合物分配於EtOAc (10 mL)與0.5M NaHCO₃ (5 mL)之間，且分離各層。有機物係以鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上使用3% MeOH + 0.3% NH₄ OH至4% MeOH + 0.4% NH₄ OH做為溶離液層析，以得到標題化合物(實例489, 26 mg, 43%). ESI+APCI MS m/z 574.4 [M+H]⁺ 。
實例490

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.6 g, 1.2 mmol)之二噁烷(10 mL)溶液添加1-溴-8-氯萘(0.37 g, 1.5 mmol)，且將該反應物用Ar脫氣15分鐘，隨後添加Cs₂ CO₃ (1.2 g, 3.6 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (0.22 g, 0.24 mmol)及2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(0.11 g, 0.24 mmol)，且將反應物加熱至100^o C隔夜。接著將反應物過濾通過GFF濾紙，且真空過濾濃縮。接著將殘餘物使用1à10% (MeOH+2% NH₄ OH)/DCM層析，以得到(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.20 g, 0.30 mmol, 25%產率)。ESI+APCI MS m/z 666.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.17 g, 0.255 mmol)之THF (30 mL)溶液用N₂ 沖淨，隨後添加Pd/C (0.0272 g, 0.255 mmol)。以真空將反應物排氣且回填H₂ 三次，且在室溫下攪拌該混合物3天。用N₂ 使該反應物再次沖淨，隨後過濾通過矽藻土且將濾液真空濃縮。該物質係以粗製物使用在下個反應中。ESI+APCI MS m/z 532.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：向2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.055 g, 0.10 mmol)之DCM (20 mL)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.040 g, 0.31 mmol)、(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸(0.017 g, 0.12 mmol)及1-丙基膦酸環酐(0.033 g, 0.10 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物30分鐘。接著添加額外的TEP3及酸(0.24 mmol)，且使其反應再1小時。接著將有機物以1 N NaOH、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。將該物質在正相矽膠上(1à 10% (MeOH+2% NH₄ OH)/DCM)層析兩次，隨後藉由gilson逆相prep HPLC使用5à95% ACN/水，具有0.1% TFA做為添加劑而純化。將純產物傾注入鹼水中且用EtOAc萃取。有機物係以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(實例490, 0.0094 g, 0.014 mmol, 14%產率)。ESI+APCI MS m/z 654.2 [M+H]⁺ 。
實例491

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(2932 µl, 0.293 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(150 mg, 0.293 mmol)及許尼希氏鹼(102 µl, 0.586 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸(49.3 mg, 0.352 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(262 µl, 0.440 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌2小時。將該反應物以鹼水處理，且用EtOAc (3X)萃取水層。將合併的有機物真空濃縮，且再懸浮於60:40的ACN: H₂ O混合物中，且在Gilson (逆相prep HPLC)上用5--＞95% ACN/0.1% TFA水溶液/0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，使其分溶於飽和碳酸氫鹽與DCM之間。再用DCM萃取水層兩次。將有機層合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4,4,4-三氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(實例491, 74.5 mg, 0.118 mmol, 40.1%產率)。ESI+APCI MS m/z 634.3 [M+H]⁺ 。
實例492

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(三氟甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-(三氟甲基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 491 ，以2-(三氟甲基)丙烯酸取代步驟A中的(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 634.2 [M+H]⁺ 。
實例493

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-2-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-2-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 491 ，以3-(吡啶-2-基)丙烯酸取代步驟A中的(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]⁺ 。
實例494

2-((S)-1-((E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-((E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 491 ，以(2E)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙烯酸取代步驟A中的(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 646.4 [M+H]⁺ 。
實例495

2-((S)-1-((E)-4,4-二氟丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-((E)-4,4-二氟丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 491 ，以4,4-二氟丁-2-烯酸取代步驟A中的(E)-4,4,4-三氟丁-2-烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 616.3 [M+H]⁺ 。
實例496

2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基哌啶-2-基)甲氧基)-7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-3-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：向2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(0.12 g, 0.23 mmol)之DCM (10 mL)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.13 ml, 0.70 mmol)、(E)-3-(吡啶-3-基)丙烯酸 (0.070 g, 0.47 mmol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(0.30 g, 0.47 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物3小時。接著將該反應物傾注入1N NaOH內，且分離各層。接著將有機物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮。接著將該物質藉由Gilson逆相prep HPLC用5à95 ACN/水，具有0.1% TFA做為修飾劑溶離而純化。將含有產物的分餾物傾注入1N NaOH中，且用EtOAc (3X)萃取水層。將合併的有機物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-3-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(實例496, 0.040 g, 0.062 mmol, 27%產率)。ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]⁺ 。
實例497

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(3-側氧基環戊-1-烯-羰基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(3-側氧基環戊-1-烯-羰基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.05863 mmol)及3-側氧基環戊-1-烯羥酸(9.612 mg, 0.07622 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (20.48 µl, 0.1173 mmol)及1-丙基膦酸環酐(52.35 µl, 0.08795 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(3-側氧基環戊-1-烯-羰基)哌嗪-2-基)乙腈(實例497, 2.3 mg, 0.003711 mmol, 6.329%產率)。ESI+APCI MS m/z 620.3 [M+H]⁺ 。
實例498

2-((S)-1-((E)-4-氯丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-氯丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.05863 mmol)及γ-氯丁烯酸(10.60 mg, 0.08795 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (20.48 µl, 0.1173 mmol)及1-丙基膦酸環酐(55.84 µl, 0.09381 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物2-((S)-1-((E)-4-氯丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例498, 4.5 mg, 0.007327 mmol, 12.50%產率)。ESI+APCI MS m/z 614.3 [M+H]⁺ 。
實例499

(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基-4-側氧基丁-2-烯醯胺

步驟A：(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯：將富馬酸單乙酯(442 mg, 3.07 mmol)用DCM (5 mL)稀釋，隨後添加乙二醯氯 (1533 µl, 3.07 mmol)及一滴DMF。在攪拌15分鐘之後，用乙酸乙酯及水稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10-70%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(382 mg, 2.23 mmol, 72.8%產率)。ESI+APCI MS m/z 172.1 [M+H]⁺ 。

步驟B：(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸：將(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸乙酯(382 mg, 2.23 mmol)用甲醇(8 mL)稀釋，隨後添加NaOH (4463 µl, 8.93 mmol)。在攪拌4小時之後，用2N HCl (4.5 mL)稀釋該反應物，且用乙酸乙酯萃取。將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸。

步驟C：(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基-4-側氧基丁-2-烯醯胺：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.05863 mmol)用DMF稀釋，隨後添加(E)-4-(二甲基胺基)-4-側氧基丁-2-烯酸(10.07 mg, 0.07036 mmol)、DIEA (20.48 µl, 0.1173 mmol)及1-丙基膦酸環酐(52.35 µl, 0.08795 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基-4-側氧基丁-2-烯醯胺 (實例499, 3.7 mg, 0.005810 mmol, 9.910%產率)。ESI+APCI MS m/z 637.3 [M+H]⁺ 。
實例500

(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯醯胺

步驟A：(E)-3-氰基丙烯酸乙酯：將順式-(β-氰基)丙烯酸乙酯 (1.0 g, 7.99 mmol)用ACN (30 mL)稀釋，置於氮氣下且加熱至回流3天。使該反應物冷卻且接著濃縮。將該物質在矽膠上用乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(E)-3-氰基丙烯酸乙酯 (300 mg, 2.40 mmol, 30.0%產率)。

步驟B：(E)-4-胺基-4-側氧基丁-2-烯酸：將(E)-3-氰基丙烯酸乙酯 (300 mg, 2.40 mmol)用HCl (3996 µl, 24.0 mmol)稀釋。將該反應物置於氮氣下且加熱至100°C持續4小時。使該反應物冷卻且接著濃縮，以得到(E)-4-胺基-4-側氧基丁-2-烯酸(214 mg, 1.86 mmol, 77.6%產率)。

步驟C：(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯醯胺：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20 mg, 0.039 mmol)、HATU (30 mg, 0.078 mmol)及(E)-4-胺基-4-側氧基丁-2-烯酸(9.0 mg, 0.078 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (14 µl, 0.078 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯醯胺 (實例500, 2.9 mg, 0.0048 mmol, 12%產率)。ESI+APCI MS m/z 609.3 [M+H]⁺ 。
實例501

(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈

步驟A：(E)-3-氰基丙烯酸乙酯：將順式-(β-氰基)丙烯酸乙酯 (1.0 g, 7.99 mmol)用ACN (30 mL)稀釋，置於氮氣下且加熱至回流3天。使該反應物冷卻且接著濃縮。將該物質在矽膠上用己烷溶離而純化，以得到(E)-3-氰基丙烯酸乙酯 (300 mg, 2.40 mmol, 30.0%產率)。

步驟B：(E)-3-氰基丙烯酸：將(E)-3-氰基丙烯酸乙酯 (10 mg, 0.080 mmol)用HCl (133 µl, 0.80 mmol)稀釋，置於氮氣下且加熱至100°C。在攪拌15分鐘之後，使該反應物濃縮以得到(E)-3-氰基丙烯酸(7.5 mg, 0.077 mmol, 97%產率)。

步驟C：(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20 mg, 0.03909 mmol)及(E)-3-氰基丙烯酸 (5.312 mg, 0.05472 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (13.65 µl, 0.07817 mmol)及1-丙基膦酸環酐(34.90 µl, 0.05863 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物(E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈(實例501, 3.5 mg, 0.005925 mmol, 15.16%產率)。ESI+APCI MS m/z 591.3 [M+H]⁺ 。
實例502

(Z)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈

步驟A：(Z)-3-氰基丙烯酸：將順式-(β-氰基)丙烯酸乙酯(50 mg, 0.40 mmol)用HCl (200 µl, 1.2 mmol)稀釋，置於氮氣下且加熱至100°C。在攪拌1小時之後，使該反應物冷卻且接著濃縮，以得到(Z)-3-氰基丙烯酸(35 mg, 0.36 mmol, 90%產率)。

步驟B：(Z)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20 mg, 0.03909 mmol)及(Z)-3-氰基丙烯酸(6.071 mg, 0.06254 mmol)用DMF (400 uL)稀釋，隨後添加DIEA (13.65 µl, 0.07817 mmol)及1-丙基膦酸環酐(39.56 µl, 0.06645 mmol)。在攪拌12小時之後，用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋該反應物。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到標題化合物(Z)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯腈(實例502, 2.1 mg, 0.003555 mmol, 9.095%產率)。ESI+APCI MS m/z 591.3 [M+H]⁺ 。
實例503

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)-2-氟-丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：(E )-4-[第三丁氧基羰基(甲基)胺基]-2-氟-丁-2-烯酸：向2-二乙氧基磷醯基-2-氟-乙酸乙酯(2 g, 8.26 mmol, 1.68 mL, 1 eq)及N -甲基-N -(2-側氧基乙基)胺基甲酸第三丁酯(2.15 g, 12.4 mmol, 1.5 eq)之THF (40 mL)溶液添加NaH (661 mg, 16.5 mmol, 60%純度, 2 eq)。在25°C下攪拌該混合物1.5小時。在完成時，以飽和NH₄ Cl (8 mL)使該反應混合物淬滅，且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10 um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 20ACN%-50ACN%,30分鐘; 50%min)純化，以得到呈褐色油狀物之(E )-4-[第三丁氧基羰基(甲基)胺基]-2-氟-丁-2-烯酸(820 mg, 3.16 mmol, 38.3%產率, 90%純度)。

步驟A：N -[(E )-4-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-3-氟-4-側氧基-丁-2-烯基]-N -甲基-胺基甲酸第三丁酯：在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 300 mg, 564 umol, 1 eq)、(E )-4-[第三丁氧基羰基(甲基)胺基]-2-氟-丁-2-烯酸(600 mg, 2.57 mmol, 4.56 eq)及DIEA (729 mg, 5.64 mmol, 982 uL, 10 eq)之DCM (10 mL)溶液添加HATU (643 mg, 1.69 mmol, 3 eq)。在25°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，以水(3 mL)使該反應混合物淬滅，且用DCM (3 × 8 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(FA條件: 60 % MeCN於水中(0.1% FA))純化，以得到呈褐色固體之N -[(E )-4-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-3-氟-4-側氧基-丁-2-烯基]-N -甲基-胺基甲酸第三丁酯(330 mg, 404 umol, 72%產率, 91.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 747。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-2-氟-4-(甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈：向N -[(E )-4-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-3-氟-4-側氧基-丁-2-烯基]-N -甲基-胺基甲酸第三丁酯(300 mg, 401 umol, 1 eq)之DCM (1 mL)溶液添加TFA (915 mg, 8.03 mmol, 594 uL, 20 eq)。在25°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，將該反應混合物以DCM (10 mL)稀釋，且藉由飽和NaHCO₃ (8 mL)鹼化。用DCM (3 × 10 mL)萃取該混合物。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-2-氟-4-(甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg, 356 umol, 89%產率, 95.9%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 647。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)-2-氟-丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈：向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-2-氟-4-(甲基胺基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 185 umol, 1 eq)及para甲醛(83.5 mg, 927 umol, 5 eq)、HCOOH (26.7 mg, 556 umol, 3 eq)之MeOH (5 mL)溶液添加NaBH₃ CN (35.0 mg, 556 umol, 3 eq)。在25°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，用水(0.5 mL)使反應混合物淬滅且過濾。殘餘物係藉由矽膠層析(EA:MeOH:NH₃ •H₂ O=50:1:0至10:1:0.1)純化，接著藉由prep-HPLC(管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um;移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )-ACN];B%:50%-100%,10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(二甲基胺基)-2-氟-丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例503, 26.7 mg, 40.2 umol, 22%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 661。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.54 (t,J =7.2 Hz, 1H), 7.45 (d,J =7.2 Hz, 1H), 7.37 (td,J =7.6, 12.8 Hz, 1H), 7.26 (t,J =8.0 Hz, 1H), 7.19 - 7.08 (m, 1H), 5.81 - 5.60 (m, 1H), 5.04 - 4.41 (m, 1H), 4.40 - 4.25 (m, 2H), 4.16 -3.91 (m, 3H), 3.88 -3.71 (m, 2H), 3.66 -3.46 (m, 2H), 3.36 (br d,J =10.8 Hz, 1H), 3.27 - 2.69 (m, 9H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.55 - 2.46 (m, 1H), 2.40 (d,J =2.4 Hz, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 7H), 2.06 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.72 (m, 3H).
實例504

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[2-(三氟甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[2-(三氟甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-(三氟甲基)丙-2-烯酸(39.5 mg, 282 umol, 1.50 eq)、2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 0.10 g, 188 umol, 1.00 eq)及DIEA (48.6 mg, 376 umol, 65.5 uL, 2.00 eq)之二氯甲烷(0.20 mL)溶液添加HATU (107 mg, 282 umol, 1.50 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，以水稀釋該混合物且分離各層。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱層析[水(FA, 0.1%)/乙腈]及prep HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 56%-86%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[2-(三氟甲基)丙-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例504, 13.1 mg, 19.6 umol, 10.5%產率, 97.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 654。

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 50×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d ) δ = 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 10.0 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 6.18 (br s, 1H), 5.86 (br s, 1H), 5.11 (br s, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 2H), 4.33 - 4.10 (m, 2H), 4.04 (br d,J = 12.8 Hz, 1H), 3.97 -3.79 (m, 2H), 3.66 -3.54 (m, 1H), 3.50 -3.33 (m, 1H), 3.29 -3.07 (m, 4H), 3.04 - 2.72 (m, 4H), 2.63 - 2.50 (m, 4H), 2.45 - 2.32 (m, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H), 1.90 (br s, 3H).
實例505

2-((S)-1-((Z)-3-氯丙烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-((Z)-3-氯丙烯醯基)-4-(7-(2,3-二甲基苯基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係依據實例 389 步驟J，以(Z)-3-氯丙烯酸取代丁-2-炔酸來製備。ESI+APCI MS m/z 564.3 [M+H]⁺ 。
實例506

2-((S)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(3909 µl, 0.39 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(200 mg, 0.391 mmol)及三乙胺(136 µl, 0.98 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入(E)-4-氟丁-2-烯酸(61.0 mg, 0.59 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(175 µl, 0.59 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在室溫下攪拌18小時。添加水且用EtOAc (3x 15 mL)萃取該混合物。將萃取物合併，以水(1x 10 mL)洗滌且濃縮。將殘餘物藉由矽膠(5-18% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到標題化合物2-((S)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例506, 89.3 mg, 0.15 mmol, 38%產率). ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]⁺ 。
實例507

2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8 g, 15.63 mmol)用DMF (78.17 ml, 15.63 mmol)稀釋，置於氮氣下且冷卻至0°C。添加DIEA (6.827 ml, 39.09 mmol)，隨後添加2-氟丙烯酸(2.112 g, 23.45 mmol)，且逐滴添加1-丙基膦酸環酐(9.307 ml, 15.63 mmol)。在0°C下攪拌該反應物6小時，且將其再攪拌10小時，升溫至環境溫度。將反應物傾注入5%碳酸氫鈉溶液，且用乙酸乙酯萃取兩次。將該乙酸乙酯以水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用1-10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH做為添加劑)溶離而純化，以得到標題化合物2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例507, 6.6 g, 11.31 mmol, 72.32%產率)。ESI+APCI MS m/z 584.3 [M+H]⁺ 。
實例508

2-((S)-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-(4-羥基丁-2-炔醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：其係根據實例 458 ，以4-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)丁-2-炔酸取代丁-2-炔酸來製備。ESI+APCI MS m/z 594.3 [M+H]⁺ 。
實例509

2-((S)-1-((E)-4-(1H-吡唑-1-基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(E)-4-(1H-吡唑-1-基)丁-2-烯酸。將4-溴丁烯酸(100 mg, 0.606 mmol)及吡唑(37.1 mg, 0.546 mmol)之乙腈 (1 ml, 19.1 mmol)溶液於一密閉小管中在攪拌下加熱至60^o C持續48小時。將所得淺綠色溶液分配於水(5 mL)及EtOAc (15 mL)之間，將有機物分離，將有機層以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將該物質在矽膠上以2至5% MeOH/DCM + 0.2% TFA層析。將所得固體溶解於最少量的6M HCl中且於慢速N₂ 流下蒸發。此物質不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟B：2-((S)-1-((E)-4-(1H-吡唑-1-基)丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(42.37 mg, 0.08281 mmol)、(E)-4-(1H-吡唑-1-基)丁-2-烯酸(12.6 mg, 0.08281 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(1 mL, 12.79 mmol)之攪拌溶液於冰鹽浴上在攪拌下冷卻，且立即添加三乙胺(0.03463 mL, 0.2484 mmol)，隨後添加2,4,6-三丙基l-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物之50% EtOAc (0.07395 mL, 0.1242 mmol)溶液。使該反應混合物升溫至室溫超過5分鐘，且在室溫下攪拌隔夜。將該反應混合物分配於0.5M Na₂ CO₃ (5 mL)與EtOAc (10 mL)之間，分離出有機物，將有機層以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。產物係藉由矽膠層析法使用於DCM中之5%MeOH +0.5% NH₄ OH而純化，以得到無色固體之標題化合物(實例509, 11.46 mg, 23%). ESI+APCI MS m/z 646.3 [M+H]⁺ 。
實例510

2-((S)-1-((E)-4-羥基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(E)-4-羥基丁-2-烯酸。向4-溴丁烯酸(4824 mg, 29.24 mmol)之水(48 mL)溶液逐滴添加2M氫氧化鉀(4.921 g, 87.72 mmol)溶液，且將所得溶液加熱至回流5分鐘。將該反應混合物置於N₂ 氣流下以冷卻及濃縮。將殘餘物於冰浴上冷卻，以4M H₂ SO₄ 酸化至pH 1-2，將所得懸浮液真空蒸發一半，接著用EtOAc (3*60 mL)萃取。合併的萃取物係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將該物質藉由層析法使用2至5% MeOH +0.2% TFA純化，以得到無色結晶之目標酸(2.165 g, 73%)。

步驟B：2-((S)-1-((E)-4-羥基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。向2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(100 mg, 0.1954 mmol)、(2E)-4-羥基丁-2-烯酸(39.90 mg, 0.3909 mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.06809 ml, 0.3909 mmol)之DCM (5 mL)攪拌溶液立即添加O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(111.5 mg, 0.2932 mmol)，且在室溫下攪拌該反應混合物4小時。添加水(1 mL)，攪拌該反應混合物5分鐘，且將其分配於EtOAc (10 mL)與飽和NaHCO₃ (5 mL)之間。將有機層分離，以NaHCO₃ 、鹽水(各5 mL)洗滌，經K₂ CO₃ 乾燥且真空蒸發。將殘餘物在矽膠上用5% MeOH +0.5% NH₄ OH層析。得到呈無色固體之標題化合物(實例510, 29 mg, 25%)。ESI+APCI MS m/z 596.3 [M+H]⁺ 。
實例511

2-((S)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(250 mg, 0.4886 mmol)、(E)-4-甲氧基丁-2-烯酸(85.10 mg, 0.7329 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(2 mL, 25.58 mmol)之攪拌混合物在冰鹽浴上冷卻，且立即添加三乙胺(0.2043 mL, 1.466 mmol)，隨後添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物之50% EtOAc (0.4363 mL, 0.7329 mmol)溶液。使反應混合物升溫至室溫超過5分鐘，且在室溫下攪拌2小時。將所得溶液分配於0.5M Na₂ CO₃ (10 mL)及EtOAc (30 mL)之間，將有機層分離，以水及鹽水(各10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。將該物質藉由逆相層析法(Gilson, 25至75% MeCN/H₂ O + 0.1% TFA)進一步純化。以過量的2M Na₂ CO₃ 將目標分餾物鹼化，且用DCM (3*50 mL)萃取。將合併的有機萃取物以鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。得到呈淺黃色固體之標題化合物(實例511, 123 mg, 41%)。ESI+APCI MS m/z 610.3 [M+H]⁺ 。
實例512

2-[(2S )-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2,2-二甲氧基丙酸甲酯。向2-側氧基丙酸乙酯(4.00 g, 34.5 mmol, 3.81 mL, 1.00 eq)及三甲氧基甲烷(4.75 g, 44.8 mmol, 4.91 mL, 1.30 eq)之甲醇(10.0 mL)溶液添加H₂ SO₄ (33.8 mg, 344 umol, 18.4 uL, 0.01 eq)。在65°C下攪拌4小時之後，以KOH (120 mg於20.0 mL水中)將pH調整至＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。在60°C於油泵下蒸餾該殘餘物，以得到呈無色油狀物之2,2-二甲氧基丙酸甲酯(4.00 g, 27.0 mmol, 78%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).

步驟B：2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯。向2,2-二甲氧基丙酸甲酯(2.00 g, 13.5 mmol, 1.00 eq)之DMF (20.0 mL)溶液分批添加P₂ O₅ (1.05 g, 7.42 mmol, 458 uL, 0.55 eq)。在加熱至100°C持續1小時之後，將該混合物用飽和碳酸氫鈉(20.0 mL)稀釋，用異丙醚(3 × 30.0 mL)萃取，以鹽水(3 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。於油泵下蒸餾該殘餘物，以得到呈無色油狀物之2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯(0.65 g, 5.60 mmol, 41%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟C：2-甲氧基丙-2-烯酸。將於H₂ O (5.00 mL)及THF (5.00 mL)中之2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯(0.60 g, 5.17 mmol, 1.00 eq)及NaOH (827 mg, 20.7 mmol, 4.00 eq)混合物在60°C下攪拌1小時。以濃HCl (10.0 mL)調整該混合物至pH ＜ 3，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈粉紅色油狀物之2-甲氧基丙-2-烯酸(0.40 g, 1.96 mmol, 38%產率, 50%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.63 (br s, 1H), 5.52 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.75 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H).

步驟D：2-[(2S )-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.14 g, 274 umol, 1.00 eq)、2-甲氧基丙-2-烯酸(112 mg, 1.09 mmol, 4.00 eq)及DIEA (141 mg, 1.09 mmol, 191 uL, 4.00eq)之二氯甲烷(5.00 mL)溶液添加HATU (208 mg, 547umol, 2.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，用水(3.00 mL)稀釋該混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.10%)/乙腈]及prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 60% - 90%, 12分鐘)來純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例512, 10.27 mg, 17.22 umol, 6.3%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 596。

SFC條件："IC-3S_3_40_3ML 管柱: Chiralpak IC-3 100×4.6mm I.D., 3 um, 移動相: 40%甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220 nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.05 - 4.61 (m, 1H), 4.48 (br s, 1H), 4.37 (td,J = 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.30 -3.98 (m, 4H), 3.96 -3.74 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 -3.28 (m, 2H), 3.27 - 2.93 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.51 (m, 4H), 2.47 (d,J = 3.2 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.89 - 1.74 (m, 3H).
實例513

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：(E )-4-羥基丁-2-烯酸乙酯。在-10°C下向(E )-4-乙氧基-4-側氧基-丁-2-烯酸(1.0 g, 7.29 mmol, 1.0eq )之THF (6.0 mL)溶液逐滴添加BH₃ -Me₂ S (10.0 M, 692 uL, 0.95eq )之THF (8.0 mL)溶液。使反應混合物逐漸升溫至25°C且攪拌17小時。在完成之後，藉由添加水(30.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(30.0 mL×3)萃取。合併的有機層係以鹽水(30.0 mL×2)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈無色油狀物之化合物(E )-4-羥基丁-2-烯酸乙酯(900 mg，粗製)。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟2：(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸酯。將於DCM (5.0 mL)中之(E )-4-羥基丁-2-烯酸乙酯(900 mg，粗製)、[氯(二苯基)甲基]苯(2.89 g, 10.4 mmol)、DMAP (84.5 mg, 692 umol)、TEA (1.4 g, 13.8 mmol, 1.9 mL)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在25°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成之後，藉由添加H₂ O (10.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(10.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=20:1至 15: 1)純化。得到呈無色油狀物之化合物(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸乙酯(340 mg, 913 umol, 13%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.38 - 7.35 (m, 6 H), 7.26 - 7.22 (m, 6 H), 7.18 - 7.15 (m, 3 H), 6.88 (dt,J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.29 (dt,J = 15.6, 2.2 Hz, 1 H), 4.16 (q,J = 7.1 Hz, 2 H), 3.72 (dd,J = 2.4, 2.0 Hz, 2 H), 1.25 (t,J = 7.0 Hz, 3 H).

步驟3：(E)-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸。向(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸乙酯(170 mg, 456 umol, 1.0eq )之MeOH (1.0 mL)溶液添加NaOH (54.5 mg, 1.37 mmol, 3.0eq )之H₂ O (0.5 mL)溶液，且在40°C於N₂ 環境下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下藉由添加1M HCl使該反應混合物淬滅直至pH = 5，接著用乙酸乙酯(8.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3:1至1:1)純化。得到呈白色固體之化合物(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸(113 mg, 328 umol, 72%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.38 - 7.36 (m, 6 H), 7.26 - 7.24 (m, 5 H), 7.20 - 7.16 (m, 4 H), 7.0 (dt,J = 15.6, 3.6 Hz, 1 H), 6.32 (dt,J = 15.6, 2.0 Hz, 1 H), 3.76 (dd,J = 3.2, 2.4 Hz, 2 H).

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(中間物71, 60.0 mg, 113 umol, 1.0eq )、(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸(77.8 mg, 226 umol, 2.0eq )及DIEA (73.0 mg, 564 umol, 98 uL, 5.0eq )之DCM (2.0 mL)溶液一次添加HATU (64 mg, 169 umol, 1.5eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，。藉由添加H₂ O (8.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(10.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)，且該粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 858。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)之DCM (1.0 mL)溶液添加TFA (1.0 ml, 13.5 mmol)。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下藉由添加NaHCO₃ 水溶液使該反應混合物淬滅直至pH = 8，接著用乙酸乙酯(10.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25 mm*10 um; 移動相：[水(0.04% NH₃ H₂ O + 10 mM NH₄ HCO₃ )-ACN]; B%: 48%-72%, 10分鐘)純化且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例513, 8.21 mg, 13.3 umol, 7.6%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

SFC條件: 100% e.e.。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.68 (d,J = 8.0 Hz, 1 H), 7.70-7.33 (m, 1 H), 7.49 (dd,J = 6.8, 0.8 Hz, 1 H), 7.37 (dt,J = 11.98, 7.82 Hz, 1 H), 7.26 (t,J = 11.8 Hz, 1 H), 7.19 - 7.11 (m, 1 H), 6.99 (dt,J = 14.8, 3.4 Hz, 1 H), 6.56 (br s, 1 H), 5.02-4.57 (m, 1 H), 4.39-4.29 (m, 4 H), 4.12-4.06 (m, 1 H), 4.03-3.99 (m, 2 H), 3.85-3.72 (m, 2 H), 3.67-3.36 (m, 3 H), 3.24-3.09 (m, 2 H), 3.03-2.89 (m, 3 H), 2.73 (br s, 1 H), 2.63-2.61 (m, 1 H), 2.50 (br s, 1 H), 2.41 (s, 3 H), 2.25-2.19 (m, 1 H), 2.03-1.92 (m, 1 H), 1.70-1.60 (m, 3 H).
實例514

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：2,2-二甲氧基丙酸甲酯。向2-側氧基丙酸乙酯(4.00 g, 34.5 mmol, 3.81 mL, 1.00 eq)及三甲氧基甲烷(4.75 g, 44.8 mmol, 4.91 mL, 1.30 eq)之甲醇(10.0 mL)溶液添加H₂ SO₄ (33.8 mg, 344 umol, 18.4 uL, 0.01 eq)。在65°C下攪拌4小時之後，以KOH水溶液(120 mg於20.0 mL水中)調整該反應混合物pH值至＞ 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。有機層係以鹽水(1 × 30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。在60°C於真空下蒸餾該殘餘物，以得到呈無色油狀物之2,2-二甲氧基丙酸甲酯(4.00 g, 27.0 mmol, 78%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 3.81 (s, 3H), 3.28 (s, 6H), 1.52 (s, 3H).

步驟2：2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯。向2,2-二甲氧基丙酸甲酯(2.00 g, 13.5 mmol, 1.00 eq)之DMF (20.0 mL)溶液分批添加P₂ O₅ (1.05 g, 7.42 mmol, 458 uL, 0.55 eq)。在100°C下攪拌1小時之後，用飽和碳酸氫鈉(20.0 mL)稀釋該混合物，且用異丙醚(3 × 30.0 mL)萃取。萃取物係以鹽水(3 × 40.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。於真空下蒸餾該殘餘物，以得到呈無色油狀物之2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯(0.65 g, 5.60 mmol, 41%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 5.36 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 4.63 (d,J = 2.8 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.66 (s, 3H).

步驟3：2-甲氧基丙-2-烯酸。將於H₂ O (5.00 mL)及THF (5.00 mL)中之2-甲氧基丙-2-烯酸甲酯(0.60 g, 5.17 mmol, 1.00 eq)及NaOH (827 mg, 20.7 mmol, 4.00 eq)混合物在60°C下攪拌1小時。以濃HCl (10.0 mL)調整該混合物至pH ＜ 3，且用乙酸乙酯萃取(3 × 20.0 mL)。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈粉紅色油狀物之2-甲氧基丙-2-烯酸(0.40 g, 1.96 mmol, 38%產率, 50%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(0.20 g, 376 umol, 1.00 eq)、2-甲氧基丙-2-烯酸(153 mg, 1.50 mmol, 4.00 eq)及DIEA (194 mg, 1.50 mmol, 262 uL, 4.00 eq)之二氯甲烷 (5.00 mL)溶液添加HATU (286 mg, 752 umol, 2.00 eq)。在0°C下攪拌0.5小時之後，將反應物藉由逆相急驟層析法[水(FA, 0.1%)/乙腈]、 prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u;移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8 分鐘)且進一步藉prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 55% - 79%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-甲氧基丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例514, 30.1 mg, 48.9 umol, 13%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

SFC條件："AS-3_ MeOH (DEA)_5_40_3mL-35T管柱: Chiralpak AS-3 50×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇(0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.44 (td,J = 7.6, 13.6 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.07 - 4.63 (m, 1H), 4.57 - 4.29 (m, 4H), 4.21 -3.96 (m, 3H), 3.95 -3.77 (m, 2H), 3.69 (br s, 3H), 3.59 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 3.51 -3.32 (m, 1H), 3.30 -3.02 (m, 5H), 2.89 - 2.50 (m, 4H), 2.47 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 2.32 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.89 - 1.72 (m, 3H).
實例515

2-[(2S )-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 293 umol, 1.0eq )及吡啶(186 mg, 2.35 mmol, 189 uL, 8.0eq )之二氯甲烷(4.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(215 mg, 1.17 mmol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將反應混合物濃縮以得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg，粗製)。產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 658。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 228 umol, 1.0eq )及K₂ CO₃ (315 mg, 2.28 mmol, 10.0eq )之乙腈 (2.0 mL)溶液添加3-氟氮雜環丁烷(152 mg, 1.37 mmol, 6.0eq , HCl)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(5.0 mL)且用乙酸乙酯(5.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 60%-90%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例515, 45.0 mg, 66 umol, 29%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 653。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 7.41 (dd,J = 7.6, 15.2 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 6.92 -6.82 (m, 1H), 6.52 - 6.31 (m, 1H), 5.28 - 5.08 (m, 1H), 5.07 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 4.32 - 4.01 (m, 4H), 4.01 -3.79 (m, 2H), 3.79 -3.56 (m, 3H), 3.55 -3.37 (m, 2H), 3.36 -3.31 (m, 2H), 3.30 -3.24 (m, 1H), 3.23 -3.18 (m, 2H), 3.17 -3.15 (m, 1H), 3.14 -3.06 (m, 2H), 3.05 - 2.95 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.75 (m, 1H), 2.71 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.88 - 1.67 (m, 3H).
實例516

2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((R )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。將於甲苯(100 mL)中之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(5.5 g, 10.4 mmol, 1eq )、[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(2.40 g, 20.9 mmol, 2.25 mL, 2eq )、Pd₂ (dba)₃ (1.91 g, 2.09 mmol, 0.2eq )、RuPhos (1.95 g, 4.17 mmol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (8.50 g, 26.1 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物5小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。用乙酸乙酯(100 mL)及水(50 mL)稀釋該殘餘物。接著以1 M HCl水溶液使該混合物酸化至pH ~ 4。分離出水相且以飽和Na₂ CO₃ 水溶液鹼化至pH ~ 8，接著用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取該混合物。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(4 g, 5.55 mmol, 53%產率, 84%純度)，且其不經純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.46 - 7.31 (m, 5H), 5.23 (s, 2H), 4.74 - 4.49 (m, 2H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 4.21 -3.70 (m, 5H), 3.42 -3.17 (m, 3H), 3.09 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 2.98 (td,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.86 - 2.74 (m, 1H), 2.74 - 2.54 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.49 (s, 9H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.7 g, 6.11 mmol, 1eq )之二噁烷(20 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 22.9 mL, 15eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。將液體傾析且收集固體。以水(50 mL)及二氯甲烷(100 mL)稀釋固體殘餘物，接著用飽和Na₂ CO₃ 水溶液使該混合物鹼化至pH ~ 8，且用二氯甲烷(100 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.6 g, 4.89 mmol, 80%產率, 95%純度)，且其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 506。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(50 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.3 g, 4.55 mmol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(中間物69,1.31 g, 5.91 mmol, 1.3eq )、Cs₂ CO₃ (3.71 g, 11.4 mmol, 2.5eq )、Pd₂ (dba)₃ (833 mg, 909 umol, 0.2eq )及Xantphos (1.05 g, 1.82 mmol, 0.4eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物6小時。以水(100 mL × 1)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.6 g, 2.48 mmol, 54%產率)。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將於MeOH (20.0 mL)及NH₃ (20% w/w於MeOH中, 7 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.60 g, 2.48 mmol, 1.00 eq)混合物在25°C下以Pd/C (100 mg, 2.48 mmol, 10%純度, 1.00 eq)做為催化劑氫化3小時。將催化劑通過矽藻土墊濾除，且將濾液真空濃縮。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈淺黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.20 g, 2.35 mmol, 95%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟E：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2 -[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於N₂ 下向於二氯甲烷(3.00 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(140 mg, 274 umol, 1.00 eq)及2-氟丙-2-烯酸(73.9 mg, 821 umol, 3.00 eq)混合物一次添加DIEA (212 mg, 1.64 mmol, 286 uL, 6.00 eq)、HATU (312 mg, 821 umol, 3.00 eq)。在0°C下攪拌30分鐘之後，以水(10.0 mL)稀釋該反應混合物，且用二氯甲烷(2 × 10.0 mL)萃取。合併的有機層係以水(1 × 10.0 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.04% NH₃ H₂ O + 10 mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 55% - 85%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2 -[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例516, 48.7 mg, 82.1 umol, 30%產率, 98.4%純度)。

SFC條件："管柱: Chiralcel OJ-3 50 × 4.6 mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3 mL/分鐘，波長: 220 nm"。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.31 - 4.22 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 2H), 4.10 - 4.02 (m, 1H), 3.89 (br d,J = 18.0 Hz, 1H), 3.78 (d,J = 18.4 Hz, 1H), 3.59 -3.40 (m, 2H), 3.27 -3.15 (m, 2H), 3.14 -3.04 (m, 2H), 3.03 - 2.90 (m, 4H), 2.90 - 2.73 (m, 2H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H).
實例517

2-((S )-1-((E )-4-羥基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((R )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 234 umol, 1eq )、TEA (142 mg, 1.41 mmol, 195 uL, 6eq )及(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸(96.9 mg, 281 umol, 1.2eq )之乙酸乙酯(2 mL)溶液添加T3P (448 mg, 703 umol, 418 uL, 50%純度於EtOAc中, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(5 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 200/1至10/1)純化。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(90 mg, 103 umol, 44%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 838。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 95.5 umol, 1eq )之二氯甲烷(200 uL)溶液添加TFA (218 mg, 1.91 mmol, 141 uL, 20eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。以水(5 mL)稀釋該反應混合物，且用NaHCO水溶液(2 mL)鹼化至pH ~ 8。用二氯甲烷(5 mL × 3)萃取該混合物。合併的有機層係以鹽水(3 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 12 分鐘)純化。收集該混合物且凍乾。得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例517, 10.2 mg, 16.8 umol, 18%產率, 98.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 596。

SFC條件：管柱: Chiralcel OD-3 50 × 4.6mm I.D., 3um, 移動相: 40%甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.06 (d,J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 5.25 - 4.53 (m, 1H), 4.48 - 4.32 (m, 3H), 4.30 -3.95 (m, 4H), 3.93 -3.82 (m, 1H), 3.81 -3.61 (m, 1H), 3.59 -3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.53 (m, 4H), 2.47 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.34 - 2.21 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.82 (m, 3H).
實例518

2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：(2R ,4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸O1-第三丁基O2-甲酯。向(2R ,4R )-1-第三丁氧基羰基-4-氟-吡咯啶-2-甲酸(300 mg, 1.29 mmol, 1.0eq )及K₂ CO₃ (533 mg, 3.86 mmol, 3.0eq )之DMF (2.0 mL)溶液添加MeI (4.80 g, 33.8 mmol, 2.11 mL, 26.3eq )。在20°C下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(5.0 mL)且用乙酸乙酯(10.0 mL × 2)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=10:1-1:1)純化，以得到呈黃色油狀物之產物(2R ,4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸O1-第三丁基O2-甲酯(300 mg, 1.21 mmol, 94%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.30 - 5.10 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 3.94 -3.76 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.72 -3.55 (m, 1H), 2.54 - 2.23 (m, 2H), 1.52 - 1.40 (m, 9H).

步驟2：[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在-40°C下向(2R ,4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸O1-第三丁基O2-甲酯(300 mg, 1.21 mmol, 1.0eq )之THF (3.0 mL)溶液添加LiAlH₄ (138 mg, 3.64 mmol, 3.0eq )。在此溫度下攪拌該混合物1小時，接著加熱至70°C且在70°C下攪拌2小時。在完成之後，以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(0.30 mL)使該反應混合物淬滅，接著過濾。收集母液且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之產物[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(130 mg, 976 umol, 80%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.18 - 4.98 (m, 1H), 3.76 -3.70 (m, 1H), 3.54 -3.43 (m, 1H), 3.38 -3.28 (m, 1H), 2.51 - 2.44 (m, 1H), 2.42 - 2.37 (m, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.34 - 2.26 (m, 1H), 2.21 - 2.09 (m, 1H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基] 甲醇(103 mg, 773 umol, 2.0eq )及t-BuONa (55.8 mg, 580 umol, 1.50eq )之甲苯(2.0 mL)溶液添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 387 umol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10.0 mL)且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC (C18, 0.1 % FA於水中, 0 - 60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之產物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(210 mg, 316 umol, 82%產率)。LCMS [ESI, M+1]:664。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.6 Hz, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 7H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 5.24 - 5.02 (m, 3H), 4.73 - 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.11 -3.96 (m, 2H), 3.94 -3.81 (m, 1H), 3.81 -3.67 (m, 1H), 3.58 -3.47 (m, 1H), 3.46 -3.29 (m, 2H), 3.24 -3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.96 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.82 - 2.71 (m, 2H), 2.70 - 2.51 (m, 2H), 2.50 - 2.47 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H).

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 301 umol, 1.0eq )及NH₃ •MeOH (2.0 mL, 20%純度)之甲醇(4.0 mL)溶液添加Pd/C (80 mg, 10%純度)。將該混合物用N₂ 沖淨3次，接著在25°C於H₂ 環境(15 psi)下攪拌1小時。在完成之後，將反應混合物過濾通過矽藻土。將母液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(140 mg, 264 umol, 88%產率)。該產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]:664。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 226 umol, 1.0eq )、2-氟丙-2- 烯酸(61.2 mg, 680 umol, 3.0eq )及DIEA (176 mg, 1.36 mmol, 238 uL, 6.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加HATU (258.44 mg, 679.69 umol, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(5.0 mL)且用乙酸乙酯(5.0 mL × 3)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例518, 37.9 mg, 60.1 umol, 27%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 602。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.2 Hz, 1H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.30 - 5.22 (m, 1H), 5.21 - 5.03 (m, 1H), 4.97 - 4.68 (m, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.29 - 4.20 (m, 2H), 4.18 - 4.03 (m, 2H), 3.95 -3.68 (m, 2H), 3.60 -3.41 (m, 2H), 3.39 -3.30 (m, 1H), 3.26 -3.15 (m, 2H), 3.15 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.46 (m, 4H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.13 - 1.97 (m, 1H).
實例519

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟1：(2R ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯。向(2R ,4R )-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(2.1 g, 8.56 mmol, 1eq )之MeCN (42 mL)溶液添加Ag₂ O (5.95 g, 25.7 mmol, 3eq )及CH₃ I (7.75 g, 54.6 mmol, 3.40 mL, 6.38eq )。在33°C下攪拌該反應混合物12小時。將該反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 8/1至5/1)純化，以得到呈無色油狀物之(2R ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(1.88 g, 6.89 mmol, 80%產率, 95.0%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 4.45 - 4.26 (m, 1H), 3.96 -3.89 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.68 -3.55 (m, 1H), 3.54 -3.43 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.38 - 2.17 (m, 2H), 1.51 - 1.37 (m, 9H).

步驟2：[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在0°C下向(2R ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(2.98 g, 11.5 mmol, 1eq )之THF (60 mL)溶液添加LiAlH₄ (872 mg, 23.0 mmol, 2eq )，且在0°C下攪拌該混合物1小時。接著將該反應混合物加熱至80°C且攪拌2小時。以飽和Na₂ SO₄ 水溶液(3 mL)使該混合物淬滅，接著過濾且將濾餅以THF (3 × 20 mL)洗滌。將濾液真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.53 g, 10.0 mmol, 87%產率, 95.0%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 3.82 -3.76 (m, 1H), 3.69 (dd,J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.45 (dd,J = 1.6, 10.8 Hz, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.18 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 2.62 (br s, 1H), 2.42 (tdd,J = 2.8, 6.4, 9.2 Hz, 1H), 2.38 - 2.33 (m, 1H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (ddd,J = 6.8, 8.8, 14.0 Hz, 1H), 1.92 (tdd,J = 1.6, 6.8, 14.0 Hz, 1H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(1.37 g, 9.42 mmol, 2.8eq )之甲苯(40 mL)溶液添加t -BuONa (970 mg, 10.1 mmol, 3eq )，接著在0°C下添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2 g, 3.36 mmol, 1eq )，在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。將水(20 mL)添加至該混合物內。以EtOAc (10 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 57 %)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.8 g, 2.53 mmol, 75%產率, 95.0%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 676。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.45 (br dd,J = 4.4, 10.0 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 4.10 -3.96 (m, 2H), 3.96 -3.65 (m, 3H), 3.59 -3.40 (m, 2H), 3.29 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 -3.06 (m, 4H), 3.00 (dt,J = 3.6, 12.4 Hz, 1H), 2.91 (s, 3H), 2.81 - 2.55 (m, 4H), 2.45 (d,J = 6.0 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.88 - 1.68 (m, 2H).

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2 g, 2.96 mmol, 1eq )及NH₃ •MeOH (20 mL, 20%純度)之MeOH (40 mL)溶液添加Pd/C (1 g, 10%純度)。將該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將反應混合物過濾，且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.29 g, 2.26 mmol, 76%產率, 95%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 542。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 277 umol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(74.8 mg, 831 umol, 3eq )及TEA (336 mg, 1.66 mmol, 462 uL, 50%純度, 6eq )之EtOAc (3 mL)溶液添加T3P (264 mg, 831 umol, 247 uL, 3eq )，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將水(4 mL)添加至該混合物內。以EtOAc (3 × 8 mL)萃取該混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1 % FA) = 32 %)純化。接著將該殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例519, 59.5 mg, 97.0 umol, 35%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.50 - 4.41 (m, 1H), 4.30 -3.99 (m, 4H), 3.96 -3.71 (m, 3H), 3.59 -3.40 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.25 -3.15 (m, 3H), 3.14 - 2.94 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 2.45 (d,J = 5.6 Hz, 3H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.81 (br dd,J = 7.2, 14.4 Hz, 1H).
實例520

2-[(2S )-4-[2-[[(2S) -4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(609.98 mg, 4.04 mmol, 3.0eq )及t -BuONa (388 mg, 4.04 mmol, 3.0eq )之甲苯(2.0 mL)逐滴添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d] 嘧啶 - 4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(800 mg, 1.35 mmol, 1.0eq )之甲苯(4.0 mL)溶液。在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物以水(15.0 mL)洗滌，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。將合併的萃取物以鹽水(50.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0-80% MeCN]純化。接著將所得產物濃縮，用乙酸乙酯(3 × 50.0 mL)萃取水溶液，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(750 mg, 1.08 mmol, 80.1%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 682。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。將(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(650 mg, 953 umol, 1.0eq )及Pd/C (200 mg, 10%純度)添加至MeOH (8.0 mL)及NH₃ ·MeOH (8.0 mL, 20%純度)中，接著使該混合物脫氣且用H₂ 沖淨3次，並接著在20°C於H₂ (15 psi)環境下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將粗製混合物過濾通過矽藻土濾墊。以MeOH (50.0 mL)洗滌濾餅，且將濾液在高真空下乾燥。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(420 mg, 736 umol, 77.2%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 548。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(420 mg, 822 umol, 1.0eq )及吡啶(520 mg, 6.57 mmol, 531 uL, 8.0eq )之DCM (6.0 mL)溶液添加(E )-4-溴丁-2-烯醯氯(603 mg, 3.29 mmol, 4.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(500 mg，粗製)。該粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 695。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S) -4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-1-[(E )-4-溴丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(500 mg, 720 umol, 1.0eq )及K₂ CO₃ (995 mg, 7.20 mmol, 10.0eq )之MeCN (12.0 mL)溶液添加3-氟氮雜環丁烷(482 mg, 4.32 mmol, 6.0eq , HCl)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以水(10.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯= 3: 1至乙酸乙酯:甲醇 = 100:1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150×25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-79%,10分鐘];B%: 45%-75%,12分鐘)純化並凍乾。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S) -4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例520, 45.8 mg, 66.5 umol, 9.24%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 689。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 6.88 (br d,J = 15.3Hz, 1H), 6.42 (br d,J = 15.4 Hz, 1H), 5.27 - 5.05 (m, 1H), 4.64 (br s, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 2H), 4.16 -3.95 (m, 2H), 3.94 -3.84 (m, 1H), 3.82 -3.66 (m, 3H), 3.54 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 3.50 -3.36 (m, 2H), 3.34 (br d,J = 3.8 Hz, 2H), 3.30 -3.24 (m, 1H), 3.24 -3.08 (m, 4H), 3.07 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.76 - 2.57 (m, 3H), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.46 (d,J = 4.5 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).
實例521

2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(720 mg, 1.03 mmol, 1eq )之DCM (1 mL)溶液添加TFA (4.62 g, 40.5 mmol, 3 mL, 39.4eq )。在20°C下攪拌該混合物4小時。在完成時，以DCM (10 mL)稀釋該混合物且以飽和NaHCO_3. 水溶液中和。接著用EtOAc (2 × 30 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(880 mg，粗製)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(500 mg，粗製)、2-氟丙-2-烯酸(61.1 mg, 679 umol)及TEA (294 mg, 2.91 mmol, 405 uL)之DMF (10 mL)溶液添加T3P (926 mg, 1.45 mmol, 865 uL, 50%純度於EtOAc中)。接著在-40°C下攪拌該混合物0.5小時，且在0°C下再攪拌0.5小時。在完成時，以水(20 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用飽和NaHCO₃ 水溶液中和，且用EtOAc (2 × 70 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 10%-40%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(實例521, 52.5 mg, 79.8 umol, 兩個步驟15%產率, 96.4%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]:588。

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 100×4.6mm I.D., 3um, 移動相: 甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.03 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 5.25 (br dd,J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.02 - 4.61 (m, 3H), 4.43 (dd,J = 4.8, 11.6 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.19 (br d,J = 13.2 Hz, 1H), 4.01 (br d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.68 -3.56 (m, 1H), 3.55 -3.50 (m, 2H), 3.49 -3.21 (m, 3H), 3.14 (br s, 1H), 2.98 (br s, 1H), 2.91 - 2.61 (m, 7H), 2.41 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (qd,J = 8.4, 12.4 Hz, 1H), 2.14 - 1.95 (m, 3H).
實例522

2-((S )-4-(2-(((2R ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-羥基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 378 umol, 1.0eq )、(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸(169 mg, 491 umol, 1.3eq )及DIEA (293 mg, 2.27 mmol, 395 uL, 6.0eq )之DCM (3.0 mL)溶液添加HATU (431 mg, 1.13 mmol, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該混合物添加水(10 mL)，且用乙酸乙酯(2 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20:1)純化。得到呈黃色固體之產物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(290 mg, 339 umol, 90%產率)。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-羥基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(290 mg, 339 umol, 1.0 eq)之二氯甲烷(1.5 mL)溶液添加TFA (2.31 g, 20.3 mmol, 1.5 mL, 59.8 eq)，在20°C下攪拌0.5小時。在完成之後，將該反應混合物濃縮，接著添加二氯甲烷(10.0 mL)，將有機層用飽和NaHCO₃ 水溶液(2 × 10.0 mL)洗滌，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=20:1)純化。接著將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 45%-75%,12 分鐘)再純化，將所得產物濃縮且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-羥基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例522, 61.3 mg, 99.9 umol, 29%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.06 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.27 - 4.97 (m, 1H), 4.74 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.34 (m, 3H), 4.31 - 4.16 (m, 2H), 4.15 -3.96 (m, 2H), 3.94 -3.58 (m, 3H), 3.56 -3.48 (m, 1H), 3.46 -3.41 (m, 1H), 3.36 -3.29 (m, 1H), 3.26 -3.07 (m, 3H), 3.04 - 2.97 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.85 - 2.57 (m, 4H), 2.49 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.45 - 2.34 (m, 1H), 2.29 - 1.91 (m, 2H).
實例523

2-[(2S )-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 369 umol, 1eq )、(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯酸(254 mg, 738 umol, 2eq )及TEA (374 mg, 3.69 mmol, 514 uL, 10eq )之EtOAc (4 mL)溶液添加T3P (705 mg, 1.11 mmol, 659 uL, 50%純度, 3eq )，接著在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將水(10 mL)添加至該混合物內。將該混合物以EtOAc (5 mL)稀釋且用EtOAc (5 mL)萃取。有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 70 %)純化，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg, 262 umol, 71%產率, 99%純度)。

步驟B：2-[(2S )-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-三苯甲基氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(230 mg, 265 umol, 1eq )之DCM (2.3 mL)溶液添加TFA (3.54 g, 31.1 mmol, 2.3 mL, 117eq )，在15 °C攪拌該混合物1時。以飽和NaHCO₃ (30 mL)使該反應混合物鹼化至pH=7~8，接著用DCM (2 × 15 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1% FA) = 32 %)純化。接著將該殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 37%-67%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-羥基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例523, 41.7 mg, 66.6 umol, 25%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 626。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.07 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 6.62 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.85 - 4.55 (m, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 3H), 4.30 -3.97 (m, 4H), 3.94 -3.65 (m, 2H), 3.58 -3.40 (m, 2H), 3.29 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.45 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.42 - 2.28 (m, 2H), 1.81 (br dd,J = 8.9, 13.6 Hz, 1H).
實例524

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(100 mg, 0.1879 mmol)、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(32.73 mg, 0.2819 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(1 mL, 12.79 mmol)之攪拌混合物冷卻至0^o C，隨後添加三乙胺(0.07859 mL, 0.5638 mmol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物之50% EtOAc (0.1678 mL, 0.2819 mmol)溶液。攪拌該反應混合物2小時，同時升溫至室溫。使該混合物分溶於0.5M Na₂ CO₃ (5 mL)與EtOAc (15 mL)之間，且分離出有機物。接著將有機物以水及鹽水(各5 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空蒸發。接著將殘餘物在矽膠上使用4%MeOH + 0.4% NH₄ OH/DCM做為溶離液層析而得到不純產物，且將其藉由Gilson逆相prep HPLC用5至75% ACN+0.1% TFA /H₂ O +0.1% TFA溶離而純化。將含有純產物的分餾物合併，使其分溶於DCM與飽和Na₂ CO₃ 溶液之間，且分離各層。接著將有機物以鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到純的標題化合物(實例524, 33 mg, 28%). ESI+APCI MS m/z 630.3 [M⁺ ]。
實例525

N-(3-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-側氧基丙-1-en-2-基)乙醯胺

步驟A：N-(3-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-側氧基丙-1-en-2-基)乙醯胺：向冷卻至0^o C之含有二氯甲烷(2932 µl, 0.2932 mmol)的25 mL圓底燒瓶添加2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(150 mg, 0.2932 mmol)及許尼希氏鹼(307.2 µl, 1.759 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加2-乙醯胺基丙烯酸 (227.1 mg, 1.759 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(1047 µl, 1.759 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。在0°C下攪拌該反應物2小時。將該反應物用鹼水處理，且用EtOAc (3X)萃取水層。將合併的有機物真空濃縮，且在Gilson (prep HPLC)上用5à95% ACN +0.1% TFA /水+0.1% TFA溶離而純化。將含有產物的分餾物合併，以1M NaOH鹼化，且用DCM (2X)萃取水層。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到標題化合物N-(3-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-側氧基丙-1-en-2-基)乙醯胺 (實例525, 124.2 mg, 68.03%產率)。ESI+APCI MS m/z 623.3 [M+H]⁺ 。
實例526

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-4-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-3-(吡啶-4-基)丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：依據實例 525 ，以Trans-3-(4-吡啶基)丙烯酸取代步驟A中的2-乙醯胺基丙烯酸而製備標題化合物。ESI+APCI MS m/z 643.3 [M+H]⁺ 。
實例527

2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯。向1-溴-5-氟-2-碘-3-甲基-苯(2 g, 6.35 mmol, 1 eq)之DMF (40 mL)溶液添加CuI (7.26 g, 38.1 mmol, 6 eq)及2,2-二氟-2-氟磺醯基-乙酸甲酯(7.32 g, 38.1 mmol, 4.85 mL, 6 eq)。在60°C下攪拌該混合物12小時。以乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物且用水(20 mL × 3)洗滌。將有機層以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至10/1)純化。得到呈黃色油狀物之1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(1.3 g, 3.74 mmol, 59%產率, 74%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.33 (dd,J = 2.4, 7.6 Hz, 1H), 6.95 (dd,J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 2.54 (q,J = 3.6 Hz, 3H).

2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛。在-60°C於氮氣環境下向於THF (20 mL)中之1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(900 mg, 3.50 mmol, 1 eq)混合物添加LDA (2 M於THF中, 3.50 mL, 2 eq)。在- 60°C下攪拌該混合物1小時。以飽和NH₄ Cl水溶液(10 mL)使該反應物淬滅，接著用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機相係以鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至5/1)純化。得到呈黃色油狀物之2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛(700 mg, 2.46 mmol, 70%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.35 (s, 1H), 7.08 (d,J = 10.4 Hz, 1H), 2.66 - 2.58 (m, 3H).

4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑。將2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛(600 mg, 2.11 mmol, 1 eq)及單水合肼(2.11 g, 42.1 mmol, 2.05 mL, 20 eq)之DMSO (8 mL)溶液在60°C下攪拌2小時。以乙酸乙酯(50 mL)稀釋該混合物且用水(3 × 50 mL)及鹽水(1 × 50 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係不經進一步純化即用於下個步驟中。得到呈白色固體之4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)- 1H-吲唑(550 mg, 1.97 mmol, 94%產率)。

4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑。向4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)- 1H-吲唑(500 mg, 1.79 mmol, 1 eq)之DCM (10 mL)溶液添加4-甲苯磺酸水合物(34.1 mg, 1791 umol, 0.1 eq)，隨後添加DHP (603 mg, 7.17 mmol, 655 uL, 4 eq)之CH₃ CN (2 mL)溶液。在25°C下攪拌該混合物16小時。以乙酸乙酯(100 mL)稀釋該混合物且用水(2 × 100 mL)及鹽水(1 × 50 mL)洗滌。有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯20/1至3/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈淺黃色膠狀物之4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(600 mg, 1.54 mmol, 86%產率, 93%純度)。LCMS [MSI, M+1]: 363。

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(20 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 848 umol, 1 eq)、4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(431 mg, 1.19 mmol, 1.4 eq) Pd₂ (dba)₃ (155 mg, 170 umol, 0.2 eq)、RuPhos (158 mg, 339 umol, 0.4 eq)及Cs₂ CO₃ (691 mg, 2.12 mmol, 2.5 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 環境下攪拌該混合物16小時。向該混合物添加H₂ O (20 mL × 1)及乙酸乙酯(20 mL × 1)。將有機相分離，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由矽膠層析法(乙酸乙酯/甲醇 = 50/1至2/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 535 umol, 32%產率, 80.7%純度)。LCMS [MSI, M+1]: 754。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(470 mg, 503 umol, 1 eq)之DCM (1 mL)溶液添加TFA (2.29 g, 20.1 mmol, 1.49 mL, 40 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。向該混合物添加二氯甲烷(5 mL)，且用飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH = 8 ~ 9。分離出有機相，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(420 mg, 453 umol, 90%產率, 61.4%純度) 且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [MSI, M+1]: 570。

步驟C：2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：在-40°C下向2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(380 mg, 410 umol, 1 eq)、2-氟丙-2-烯酸(18.4 mg, 205 umol, 0.5 eq)及TEA (124 mg, 1.23 mmol, 171 uL, 3 eq)之DMF (8 mL)溶液添加T3P (391 mg, 614 umol, 365 uL, 50%純度於DMF中, 1.5 eq)。接著在-40°C下攪拌該混合物0.5小時，且在0°C下再攪拌0.5小時。添加2-氟丙-2-烯酸(11 mg)及T3P (100 uL)，且又在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物以水(15 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 22% - 42%, 7.8 分鐘)及(管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10um; 移動相：[水(0.04% NH₃ H₂ O + 10 mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 50% - 68%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(實例527)。
實例528

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-(3-氟氮雜環丁-1-基)丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 520 修飾中間物66部分來製備，以(S)-(4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇取代步驟E之中間物66中的(1-甲基吡咯啶-2-基)甲醇，經修飾的中間物66係使用步驟A之中間物71的條件去保護，接著取代實例 520 步驟A中的中間物66。
實例529

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 467 ，使用實例 479 步驟C的條件以(E)-4-氟丁-2-烯酸取代丙烯醯氯而製備。LCMS [ESI, M+1]: 634。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.32 - 4.93 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.45 (td,J = 5.2, 11.2 Hz, 1H), 4.32 -3.63 (m, 6H), 3.58 -3.36 (m, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.50 (m, 3H), 2.46 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 1H).

SFC條件：管柱: Chiralcel OJ-3 50×4.6mm I.D., 3um, 移動相:甲醇 (0.05% DEA)於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm。
實例530

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 467 ，使用實例 478 步驟A的條件以2-氟丙-2-烯醯氯取代丙烯醯氯而製備。LCMS [ESI, M+1]:620。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.63 (m, 2H), 7.46 - 7.33 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.54 - 5.33 (d,J = 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.05 - 4.62 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 1H), 4.31 - 4.13 (m, 3H), 4.12 - 4.05 (m, 1H), 3.97 -3.73 (m, 1H), 3.59 -3.36 (m, 3H), 3.27 - 2.95 (m, 6H), 2.92 (s, 3H), 2.89 - 2.49 (m, 5H), 2.46 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.17 (m, 1H).

SFC: "管柱: Chiralcel OJ -3 50×4.6 mm I.D., 3 um移動相:甲醇(0.05% DEA) 於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。
實例531

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 467 ，使用實例 489 步驟A的條件以(甲氧基甲基)丙-2-烯酸取代丙烯醯氯而製備。
實例532

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-羥基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 467 ，使用實例 483 步驟A的條件以4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸取代丙烯醯氯而製備。
實例533

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-氟丁-2-烯-1-酮

標題化合物係依據實例 469 ，以(E)-4-氟丁-2-烯酸取代實例 479 步驟C中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例534

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲氧基丁-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 469 ，以2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸取代實例 489 步驟A中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例535

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氟丙-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 469 ，以2-氟丙烯酸取代實例 478 步驟A中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例536

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-羥基丁-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 469 ，以4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸取代實例 469 步驟D中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯並依據實例 483 步驟A中的程序而製備。
實例537

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氟丙-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 470 ，以(E)-4-氟丁-2-烯酸取代實例 478 步驟A中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例538

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-氟丁-2-烯-1-酮

標題化合物係依據實例 470 ，以(E)-4-氟丁-2-烯酸取代實例 479 步驟C中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例539

(S)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氟丙-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 470 ，以2-氟丙烯酸取代實例 478 步驟A中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例540

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-甲氧基丁-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 470 ，以2-(甲氧基甲基)丙-2-烯酸取代實例 489 步驟A中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例541

(S,E)-1-(4-(2-((4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-羥基丁-2-en-1-酮

標題化合物係依據實例 470 ，以4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸取代實例 470 步驟C中的丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯並依據實例 483 步驟A中的程序而製備。
實例542

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 468 ，使用實例 479 步驟C的條件以2-氟丙-2-烯醯氯取代丙烯醯氯而製備。LCMS [ESI, M+1]: 655。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.60 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.26 - 5.03 (m, 2H), 4.90 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 2H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 4.19 -3.98 (m, 2H), 3.97 -3.72 (m, 2H), 3.66 - 7.56 (m, 1H), 3.53 -3.37 (m, 2H), 3.34 -3.11 (m, 3H), 3.07 - 2.92 (m, 2H), 2.89 - 2.79 (m, 1H), 2.77 - 2.48 (m, 4H), 2.47 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.18 (m, 1H).
實例543

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 468 ，使用實例 478 步驟A的條件以2-氟丙-2-烯醯氯取代丙烯醯氯而製備。LCMS [ESI, M+1]: 640。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 5.54 - 5.33 (dd,J = 2.8, 47.6 Hz, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 4.31 -3.77 (m, 4H), 3.69 -3.54 (m, 1H), 3.41 (m, 2H), 3.35 - 2.48 (m, 11H), 2.47 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.16 (m, 1H).

SFC: "管柱: Cellucoat 50 × 4.6mm I.D., 3um 移動相: 甲醇 (0.05 % DEA) 於CO₂ 中，自5%至40%，流速: 3mL/分鐘，波長: 220nm"。
實例544

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 468 ，使用實例 489 步驟A的條件以(甲氧基甲基)丙-2-烯酸取代丙烯醯氯而製備。
實例545

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-羥基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 468 ，使用實例 483 步驟A的條件以4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸取代丙烯醯氯而製備。
實例546

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 527 ，使用實例 479 步驟C的條件以2-氟丙-2-烯醯氯取代丙烯醯氯而製備。
實例547

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 527 ，使用實例 478 步驟A的條件以2-氟丙-2-烯醯氯取代丙烯醯氯而製備。
實例548

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-甲氧基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 527 ，使用實例 489 步驟A的條件以(甲氧基甲基)丙-2-烯酸取代丙烯醯氯而製備。
實例549

2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-((E)-4-羥基丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

標題化合物係依據實例 527 ，使用實例 483 步驟A的條件以4-[第三丁基(二甲基)矽烷基]氧基丁-2-炔酸取代丙烯醯氯而製備。
實例550

2-((S)-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-1-丙烯醯基-4-(7-(5,6-二甲基-1H-吲哚-4-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。標題化合物係依據實例 466 ，使用實例 483 步驟A的條件以2-氟丙烯酸取代於實例 478 步驟A中所述之丙-2-烯醯基丙-2-烯酸酯而製備。
實例551

2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 378 umol, 1.0eq )、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(110 mg, 944 umol, 2.5eq )之DMF (3.0 mL)溶液添加TEA (382 mg, 3.78 mmol, 526 uL, 10.0eq )及T3P (721 mg, 1.13 mmol, 674 uL, 50%純度, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，以水(10.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3×10.0 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且過濾。在真空下移除溶劑。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯= 10: 1至1:1)純化，接著將粗產物濃縮且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150×25mm×10um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 48%-78%,9-10分鐘)再純化並凍乾，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(實例551, 50 mg, 79.6 umol, 21%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 628。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.05 - 6.94 (m, 1H), 6.55 (br d,J = 15.0 Hz, 1H), 5.23 - 5.03 (m, 1H), 4.66 (br s, 1H), 4.52 - 4.42 (m, 1H), 4.30 - 4.18 (m, 2H), 4.18 – 3.94 (m, 4H), 3.93 -3.84 (m, 1H), 3.83 -3.65 (m, 1H), 3.54 (br d,J = 6.7 Hz, 1H), 3.44 (s, 3H), 3.42 -3.26 (m, 2H), 3.25 -3.15 (m, 2H), 3.05 (br dd,J = 8.5, 16.4 Hz, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.88 - 2.58 (m, 4H), 2.57 -2.35 (m, 5H), 2.14 - 1.96 (m, 1H).
實例552

2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 277 umol, 1eq )、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(64.3 mg, 554 umol, 2eq )及TEA (280 mg, 2.77 mmol, 385 uL, 10eq )之DMF (3 mL)溶液添加T3P (529 mg, 831 umol, 494 uL, 50%純度, 3eq )，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。添加水(10 mL)至該混合物內。將該混合物以EtOAc (5 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。將合併的有機層以鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1 % FA) = 35 %)純化。接著將該殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)- ACN]; B %: 50 % - 74 %,10分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例552, 37.1 mg, 57.2 umol, 21%產率, 98.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 640。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 6.55 (br d,J = 15.2 Hz, 1H), 5.07 (br s, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.31 - 4.04 (m, 5H), 3.95 -3.68 (m, 3H), 3.63 -3.47 (m, 2H), 3.44 (s, 3H), 3.42 -3.35 (m, 1H), 3.30 (d,J = 1.2 Hz, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.76 (br dd,J = 8.0, 16.8 Hz, 1H), 2.72 - 2.52 (m, 3H), 2.45 (d,J = 5.2 Hz, 3H), 2.41 - 2.27 (m, 2H), 1.81 (br dd,J = 7.2, 14.0 Hz, 1H).
實例553

2-((S )-1-((E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((R )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：3-羥基-4-甲氧基-丁酸甲酯。在0°C下向4-甲氧基-3-側氧基-丁酸甲酯(20 g, 137 mmol, 1.0eq )之甲苯(300 mL)溶液添加NaBH₄ (5.44 g, 144 mmol, 1.05eq )。接著在20°C下攪拌該混合物4小時。在完成之後，在0°C下以水(100 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。萃取物係以鹽水(200 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之3-羥基-4-甲氧基-丁酸甲酯(7.5 g，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.23 - 4.15 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.44 -3.38 (m, 2H), 3.37 (s, 3H), 3.04 (br s, 1H), 2.51 (d,J = 6.4 Hz, 2H).

步驟B：(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸乙酯。在0°C下向3-羥基-4-甲氧基-丁酸甲酯(7.5 g，粗製)之DCM (50.0 mL)溶液添加TEA (5.12 g, 50.6 mmol, 7.05 mL)及MsCl (8.70 g, 75.9 mmol, 5.88 mL)。在攪拌4小時之後，在0°C下向該混合物添加TEA (10.2 g, 101 mmol, 14.1 mL)。在完成之後，該混合物係以水(50.0 mL)稀釋，以HCl (1N, 15.0 mL)及鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至50:1)純化，以得到呈黃色油狀物之(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸甲酯(1.7 g, 11.8 mmol, 兩個步驟8.6%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.93 (td,J = 4.3, 15.8 Hz, 1H), 6.04 (td,J = 2.0, 15.8 Hz, 1H), 4.06 (dd,J = 2.0, 4.3 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.36 (s, 3H).

步驟C：(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸。將於MeOH (2.0 mL)及H₂ O (2.0 mL)中之(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸甲酯(300 mg, 2.31 mmol, 1.0eq )及KOH (517 mg, 9.22 mmol, 4.0eq )混合物在20°C下攪拌2小時。在完成之後，以HCl (2N, 5.0 mL)將該混合物酸化至pH = 1 – 3，且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(200 mg, 1.55 mmol, 67.3%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 11.13 (br s, 1H),7.06 (td,J = 4.1, 15.7 Hz, 1H), 6.08 (td,J = 2.0, 15.7 Hz, 1H), 4.12 (dd,J = 2.0, 4.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 3H).

步驟D：2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 391 umol, 1eq )、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(113 mg, 977 umol, 2.5eq )、TEA (395 mg, 3.91 mmol, 544 uL, 10eq )之DMF (4 mL)溶液添加T3P (746 mg, 1.17 mmol, 697 uL, 50%純度, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.3小時。以乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物且接著用水(10 mL × 3)洗滌。有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 100/1至10:1)純化，且藉由prep-HPLC (管柱：Boston pH - lex 150*25 10 um; 移動相：[水(0.1%TFA)- ACN]; B%: 35% - 59%, 8分鐘)進一步純化。收集該混合物且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(實例553, 37.5 mg, 60.4 umol, 15%產率, 98.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 610。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.77 - 7.57 (m, 2H), 7.46 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d,J = 14.4 Hz, 1H), 6.55 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.24 - 4.49 (m, 1H), 4.46 - 4.32 (m, 1H), 4.32 -3.74 (m, 7H), 3.73 -3.25 (m, 6H), 3.25 - 2.94 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.86 - 2.54 (m, 4H), 2.49 (d,J = 5.6 Hz, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.00 (m, 1H), 1.93 - 1.65 (m, 3H).
實例554

2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(850 mg, 1.80 mmol, 1.0eq )、1-溴-8-甲基-萘(1.20 g, 5.41 mmol, 3.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (330 mg, 360 µmol, 0.20eq )、Xantphos (417 mg, 721 µmol, 0.40eq )及Cs₂ CO₃ (1.76 g, 5.41 mmol, 3.0eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 下攪拌該混合物8小時。在完成之後，用2 N HCl (2 × 15.0 mL)洗滌反應物。用固體的NaHCO₃ 將水相鹼化至pH ~ 7，且用乙酸乙酯(2 × 50.0 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0 - 65% MeCN]純化，且用固體的NaHCO₃ 調整至pH ~ 7，且用乙酸乙酯(2 × 150 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈白色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(650 mg, 1.03 mmol, 57%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 612。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 4.63 - 4.52 (m, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.09 -3.95 (m, 2H), 3.93 -3.73 (m, 2H), 3.57 -3.47 (m, 1H), 3.42 -3.27 (m, 1H), 3.22 -3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.94 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.81 - 2.54 (m, 4H), 2.53 - 2.47 (m, 3H), 2.40 - 2.26 (m, 1H), 2.12 - 2.05 (m, 1H), 1.92 - 1.71 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在25°C下向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 981 µmol, 1.0 eq)之二噁烷(3.0 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 3.0 mL, 12.2 eq)，且在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下以飽和NaHCO₃ 水溶液(8.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著以H₂ O (5.0 mL)稀釋且用乙酸乙酯(3 × 15.0 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(410 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 293 µmol, 1.0eq )、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(102 mg, 880 µmol, 3.0eq )之乙酸乙酯(3.0 mL)溶液添加TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 µL, 8.0eq )及T3P (560 mg, 880 µmol, 523 µL, 50%純度, 3.0eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，添加水(5.0 mL)。將有機層分離，且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯= 3: 1至乙酸乙酯:甲醇 = 50 : 1)純化，接著將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10 分鐘)再純化並凍乾。得到呈白色固體之化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(38.6 mg, 62.4 µmol, 21%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟D：2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 293 µmol, 1.0eq )、(E )-4-甲氧基丁-2-烯酸(102 mg, 880 µmol, 3.0eq )之乙酸乙酯(3.0 mL)溶液添加TEA (237 mg, 2.35 mmol, 326 µL, 8.0eq )及T3P (560 mg, 880 µmol, 523 µL, 50%純度, 3.0eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，添加水(5.0 mL)。將有機層分離，且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取水相。合併的萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯= 3: 1至乙酸乙酯:甲醇 = 50 : 1)純化，接著將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN];B%: 50%-77%,10 分鐘)再純化並凍乾。得到呈白色固體之化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-甲氧基丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(38.6 mg, 62.4 µmol, 21%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 610。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 6.99 (br d,J = 15.2 Hz, 1H), 6.55 (br d,J = 15.6 Hz, 1H), 5.20 - 4.50 (m, 1H) 4.43 - 4.33 (m, 1H), 4.29 -3.96 (m, 6H), 3.94 -3.83 (m, 1H), 3.81 -3.63 (m, 1H), 3.58 -3.37 (m, 5H), 3.23 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.54 (m, 4H), 2.52 - 2.43 (m, 3H), 2.33 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.01 (m, 1H), 1.87 - 1.72 (m, 3H).
實例555

2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯。向1-溴-5-氟-2-碘-3-甲基-苯(2 g, 6.35 mmol, 1 eq)之DMF (40 mL)溶液添加CuI (7.26 g, 38.1 mmol, 6 eq)及2,2-二氟-2-氟磺醯基-乙酸甲酯(7.32 g, 38.1 mmol, 4.85 mL, 6 eq)。在60°C下攪拌該混合物12小時。用乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物且用水(20 mL × 3)洗滌。有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/0至10/1)純化。得到呈黃色油狀物之1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(1.3 g, 3.74 mmol, 59%產率, 74%純度)。

2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛。在-60°C於氮氣下向於THF (20 mL)中之1-溴-5-氟-3-甲基-2-(三氟甲基)苯(900 mg, 3.50 mmol, 1 eq)混合物添加LDA (2 M於THF中, 3.50 mL, 2 eq)。在攪拌0.5小時之後，向該混合物添加DMF (768 mg, 10.5 mmol, 808 µL, 3 eq)。在-60°C下攪拌該混合物1小時。以飽和NH₄ Cl水溶液(10 mL)使該反應物淬滅，接著用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機相係以鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 200/1至5/1)純化。得到呈黃色油狀物之2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛(700 mg, 2.46 mmol, 70%產率)。

4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)- 1H-吲唑。將2-溴-6-氟-4-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛(600 mg, 2.11 mmol, 1 eq)及單水合肼(2.11 g, 42.1 mmol, 2.05 mL, 20 eq)之DMSO (8 mL)溶液在60°C下攪拌2小時。以乙酸乙酯(50 mL)稀釋該混合物且用水(3 × 50 mL)及鹽水(1 × 50 mL)洗滌。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係不經進一步純化即用於下個步驟中。得到呈白色固體之4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)- 1H-吲唑(550 mg, 1.97 mmol, 94%產率)。

4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑。向4-溴-6-甲基-5-(三氟甲基)- 1H-吲唑(500 mg, 1.79 mmol, 1 eq)之DCM (10 mL)溶液添加4-甲苯磺酸水合物(34.1 mg, 1791 µmol, 0.1 eq)，隨後添加DHP (603 mg, 7.17 mmol, 655 µL, 4 eq)之CH₃ CN (2 mL)溶液。在25°C下攪拌該混合物16小時。以乙酸乙酯(100 mL)稀釋該混合物且用水(2 × 100 mL)及鹽水(1 × 50 mL)洗滌。將有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法在矽膠上(石油醚/乙酸乙酯20/1至3/1)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈淺黃色膠狀物之4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(600 mg, 1.54 mmol, 86%產率, 93%純度)。LCMS [MSI, M+1]: 363。

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(20 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 848 µmol, 1 eq)、4-溴-6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑(431 mg, 1.19 mmol, 1.4 eq) Pd₂ (dba)₃ (155 mg, 170 µmol, 0.2 eq)、RuPhos (158 mg, 339 µmol, 0.4 eq)及Cs₂ CO₃ (691 mg, 2.12 mmol, 2.5 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在100°C於N₂ 下攪拌16小時。向該混合物添加H₂ O (20 mL × 1)及乙酸乙酯(20 mL × 1)。有機相係經分離，過濾且在減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由矽膠層析法(乙酸乙酯/m甲醇 = 50/1至2/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 535 µmol, 32%產率, 80.7%純度)。LCMS [MSI, M+1]: 754。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-1-四氫吡喃-2-基-5-(三氟甲基)吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(470 mg, 503 µmol, 1 eq)之DCM (1 mL)溶液添加TFA (2.29 g, 20.1 mmol, 1.49 mL, 40 eq)。在25°C下攪拌該混合物1小時。向該混合物添加二氯甲烷(5 mL)且用飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH = 8 ~ 9。有機相係經分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓環境下濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(420 mg, 453 µmol, 90%產率, 61.4%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [MSI, M+1]: 570。

步驟C：2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。在-40°C下向2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(380 mg, 410 µmol, 1 eq)、2-氟丙-2-烯酸(18.4 mg, 205 µmol, 0.5 eq)及TEA (124 mg, 1.23 mmol, 171 µL, 3 eq)之DMF (8 mL)溶液添加T3P (391 mg, 614 µmol, 365 µL, 50%純度於DMF中, 1.5 eq)。接著在-40°C下攪拌該混合物0.5小時，且在0°C下再攪拌0.5小時。將2-氟丙-2-烯酸(11 mg)及T3P (100 µL)添加，且在-40°C下再攪拌該混合物0.5小時。以水(15 mL)稀釋該反應物，且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- MeCN]; B%: 22% - 42%, 7.8 分鐘)及(管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10µm; 移動相：[水(0.04% NH₃ H₂ O + 10 mM NH₄ HCO₃ )- MeCN]; B%: 50% - 68%, 12 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基-5-(三氟甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)。LCMS [ESI, M+1]: 642。
實例556

2-[(2S)-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

3-溴-1-(甲氧基甲氧基)萘。向4-溴萘-2-醇(3.50 g, 15.7 mmol, 1.0 eq)之DMF (35.0 mL)溶液添加NaH (941 mg, 23.5 mmol, 60%純度, 1.50 eq)。在完成之後，在此溫度下攪拌該混合物0.5小時，接著在0°C下逐滴添加氯(甲氧基)甲烷(5.90 g, 73.3 mmol, 5.57 mL, 4.67 eq)。將該混合物升溫至30°C且再攪拌1小時。在完成之後，將合併的反應混合物以水(100 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 50.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(200 mL洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=1/0至100/1)純化。得到呈紅色油狀物之化合物3-溴-1-(甲氧基甲氧基)萘(3.50 g, 13.1 mmol, 84%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.19 - 8.12 (m, 1H), 7.78 - 7.71 (m, 1H), 7.61 - 7.57 (m, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 7.40 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.53 (s, 3H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯：向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(800 mg, 1.70 mmol, 1.0eq )及1-溴-3-(甲氧基甲氧基)萘(680 mg, 2.54 mmol, 1.50eq )之甲苯(10.0 mL)溶液添加Cs₂ CO₃ (2.21 g, 6.79 mmol, 4.00eq )、RuPhos (158 mg, 339 µmol, 0.20eq )及Pd₂ (dba)₃ (233 mg, 254 µmol, 0.15eq )。在90°C下攪拌該混合物6小時。用H₂ O 100 mL稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)洗滌。合併的有機層係於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物進一步藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。以NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH=7，且用乙酸乙酯(3 × 50.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到產物。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 426 µmol, 25%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 658。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.09 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.75 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 7.45 (t,J = 7.0 Hz, 1H), 7.40 - 7.34 (m, 1H), 7.16 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 6.87 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 5.30 (s, 2H), 4.63 (br s, 1H), 4.40 (dd,J = 4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 2H), 4.21 - 4.16 (m, 1H), 4.09 -3.86 (m, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.51 -3.40 (m, 1H), 3.37 -3.17 (m, 3H), 3.15 - 2.96 (m, 3H), 2.89 - 2.73 (m, 3H), 2.72 - 2.64 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.33 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.05 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-[3-(甲氧基甲氧基)-1-萘基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(260 mg, 395 µmol, 1.0eq )之二噁烷(2.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 98.8 µL, 1.0eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該殘餘物至pH = 7，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 373 µmol, 94%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 514。

步驟C：2-[(2S)-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 389 µmol, 1.0 eq)及2-氟丙-2-烯酸(105 mg, 1.17 mmol, 3.0 eq)之DMF (4.00 mL)溶液添加TEA (158 mg, 1.56 mmol, 217 µL, 4.0 eq)及T3P (743 mg, 1.17 mmol, 695 µL, 50%純度, 3.0 eq)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，用H₂ O (10.0 mL)稀釋該反應混合物且用DCM (3 ×10.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(Al2O3, 石油醚/乙酸乙酯=10/1至DCM/ MeOH = 5/1)純化，且將該殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10µm;移動相：[水(0.04%NH3H2O+10mM NH4HCO3)-MeCN];B%: 45%-75%,12分鐘)純化。得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S)-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(3-羥基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(50.0 mg, 85.0 µmol, 22%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 586。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.94 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.52 (br s, 1H), 5.51 - 5.29 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.95 - 4.35 (m, 2H), 4.24 (dd,J = 4.4, 11.2 Hz, 1H), 4.15 -3.93 (m, 3H), 3.85 -3.69 (m, 1H), 3.45 -3.26 (m, 1H), 3.25 -3.18 (m, 2H), 3.17 - 2.95 (m, 2H), 2.94 - 2.73 (m, 3H), 2.72 - 2.62 (m, 5H), 2.60 - 2.50 (m, 1H), 2.45 - 2.35 (m, 1H), 2.15 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.93 (m, 1H), 1.88 - 1.74 (m, 3H).
實例557

2-[(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(934 mg, 8.11 mmol, 3.0eq )及t -BuONa (780 mg, 8.11 mmol, 3.0eq )之甲苯(15.0 mL)溶液逐滴添加4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(1.5 g, 2.70 mmol, 1.0eq )之甲苯(10.0 mL)溶液。在0°C下再攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，以水(30.0 mL)使該反應物淬滅。用乙酸乙酯(2 × 50.0 mL)萃取粗製混合物。將合併的萃取物以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著在真空下將溶劑移除。殘餘物係藉由逆相急驟層析法HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0 - 65% MeCN]純化，用NaHCO₃ 酸化至pH = 8，且用乙酸乙酯(2 × 150 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈白色固體之化合物4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(820 mg, 1.26 mmol, 47%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 606。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.42 - 7.29 (m, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.69 (br d,J = 18.6 Hz, 1H), 4.59 (br s, 1H), 4.44 (d,J = 18.8 Hz, 1H), 4.34 (br s, 1H), 4.05 -3.69 (m, 4H), 3.42 (br s, 1H), 3.24 (br d,J = 13.0 Hz, 2H), 3.09 (br t,J = 7.6 Hz, 1H), 3.02 - 2.90 (m, 1H), 2.81 - 2.56 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.28 (dt,J = 7.2, 9.4 Hz, 1H), 2.05 - 1.99 (m, 1H), 1.89 - 1.67 (m, 4H), 1.51 (s, 9H).

步驟B：(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在-70°C下將NH₃ 鼓泡至MeOH (10.0 mL)內持續0.5小時。將4-[(3S)-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(820 mg, 1.35 mmol, 1.0 eq)及Pd/C (250 mg, 10%純度)添加至上述混合物及MeOH (10.0 mL)中，接著使該混合物脫氣且用H₂ 沖淨3次，並接著在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將粗製混合物過濾通過矽藻土濾墊。以MeOH (50.0 mL)洗滌濾餅，且將濾液在高真空下乾燥。得到呈白色固體之化合物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.27 mmol, 94%產率, 100%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 472。

步驟C：(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10.0 mL)中之(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(550 mg, 1.17 mmol, 1.0 eq)、1-溴-8-氯-萘(845 mg, 3.50 mmol, 3.0 eq)、Pd₂ (dba)₃ (160 mg, 175 µmol, 0.15 eq)、Xantphos (135 mg, 233 µmol, 0.20 eq)及Cs₂ CO₃ (1.14 g, 3.50 mmol, 3.0 eq)混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 下攪拌該混合物8小時。在完成之後，以HCl (2N 2 × 15 mL)水溶液洗滌該反應物。將水相以NaHCO₃ 鹼化至pH 8，且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC [C18, 0.1% FA於水中, 0 - 65% MeCN]純化，且用NaHCO₃ 酸化至pH = 8，且用乙酸乙酯(2 × 150 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈白色固體之化合物(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 930 µmol, 80%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.75 (br d,J = 8.2 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.44 (td,J = 7.8, 15.2 Hz, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 4.61 (br s, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.10 -3.91 (m, 3H), 3.90 -3.78 (m, 1H), 3.63 -3.53 (m, 1H), 3.34 (br dd,J = 3.6, 13.8 Hz, 1H), 3.30 -3.01 (m, 5H), 2.95 (dt,J = 3.5, 12.3 Hz, 1H), 2.89 - 2.75 (m, 1H), 2.70 (br s, 2H), 2.57 (br d,J = 14.2 Hz, 1H), 2.53 - 2.46 (m, 3H), 2.35 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.06 (m, 1H), 1.93 - 1.66 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 316 µmol, 1.0eq )之二噁烷(2.0 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 2.0 mL, 25.3eq )。在20°C於N₂ 下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，在真空下移除有機溶劑。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整所得產物至Ph = 8，接著濃縮。將水相用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈黃色固體之粗產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(145 mg, 259 µmol, 82%產率, 95%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟E：2-[(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(125 mg, 235 µmol, 1.0 eq)、2-氟丙-2-烯酸(42.3 mg, 470 µmol, 2.0 eq)之乙酸乙酯(2.0 mL)溶液添加TEA (190 mg, 1.88 mmol, 262 µL, 8.0 eq)及T3P (449 mg, 705 µmol, 419 µL, 50%純度, 3.0 eq)。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以水(5.0 mL)洗滌該有機溶劑。用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水相。合併的有機萃取物係以鹽水(20.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，接著將粗產物濃縮，且藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150 × 25 mm × 10 µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN];B%: 55% - 85%,11.5 分鐘)再純化並凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(22.5 mg, 37.1 µmol, 16%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 605。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.51 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (br dd,J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 4.90 (br s, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 2H), 4.24 - 4.01 (m, 3H), 3.97 -3.78 (m, 2H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 3.32 - 2.95 (m, 5H), 2.94 - 2.43 (m, 7H), 2.38 - 2.20 (m, 1H), 2.14 – 1.99 (m, 1H) 1.91 - 1.71 (m, 3H).
實例558

2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(169 mg, 1.27 mmol, 1.5eq )之甲苯(4.0 mL)溶液添加t -BuONa (163 mg, 1.69 mmol, 2.0eq )，在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時之後，將4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(470 mg, 847 µmol, 1.0eq )添加至該混合物，在0°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物添加水(10 mL)，接著且用乙酸乙酯(2 × 10.0 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，以得到呈白色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(330 mg, 484 µmol, 57%產率, 92%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 624。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.40 - 7.30 (m, 5H), 5.24 - 5.03 (m, 3H), 4.69 (d,J = 18.8 Hz, 1H), 4.61 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.38 (m, 2H), 4.23 (dd,J = 7.6, 10.4 Hz, 1H), 4.08 -3.73 (m, 4H), 3.52 -3.11 (m, 4H), 3.04 - 2.91 (m, 1H), 2.81 - 2.57 (m, 5H), 2.55 - 2.36 (m, 5H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.51 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(330 mg, 529 µmol, 1.0eq )之甲醇(3.0 mL)及NH₃ .MeOH (529 µmol, 3 mL, 20%純度, 1.0eq )溶液添加Pd/C (50 mg, 529 µmol, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物3小時。在完成之後，將混合物過濾，將濾餅用THF (2 × 3.0 mL)洗滌，且將濾液濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(0.1% FA於MeCN中)純化。將該混合物用固體的NaHCO₃ 調整至pH~8，接著濃縮。將水層(20.0 mL)用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈白色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 299 µmol, 58%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 490。

步驟C：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 306 µmol, 1.0eq )及1-溴-8-氯-萘(148 mg, 618 µmol, 2.0eq )之甲苯(3.0 mL)溶液添加XantPhos (35.5 mg, 61.3 µmol, 0.2eq )、Pd₂ (dba)₃ (42.1 mg, 45.9 µmol, 0.15eq )及Cs₂ CO₃ (399 mg, 1.23 mmol, 4.0eq )，在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物過濾通過矽藻土，且將濾液用1N HCl水溶液(2 × 10.0 mL)洗滌，將水層用固體的Na₂ CO₃ 調整至pH~8，接著用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取，將有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(0.1% FA於MeCN中)純化。將所得產物用固體的NaHCO₃ 調整至pH~8，且濃縮。將水層(20 mL)用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈白色固體之產物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(85 mg, 129 µmol, 43%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1, M+23]: 650, 672。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.24 - 5.03 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.36 (m, 2H), 4.23 (dd,J = 7.6, 10.4 Hz, 1H), 4.13 -3.77 (m, 4H), 3.65 -3.52 (m, 1H), 3.43 - 2.86 (m, 7H), 2.84 - 2.64 (m, 3H), 2.62 - 2.38 (m, 5H), 2.16 - 1.98 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(85.0 mg, 131 µmol, 1.0eq )之二噁烷(1.0 mL)溶液添加4M HCl/二噁烷(1.0 mL)，且在20°C下攪拌該反應混合物4小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，將該混合物添加二氯甲烷(10 mL)，接著用飽和Na₂ CO₃ 水溶液調整至pH~8，將有機層分離，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾起濃縮。得到呈褐色固體之產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 550。

步驟E：2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg, 120 µmol,73% 純度 , 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(21.7 mg, 241 µmol, 2.0eq )之乙酸乙酯(2.0 mL)溶液添加T3P (230 mg, 361 µmol, 215 µL, 50%純度, 3.0eq )及TEA (97.6 mg, 962 µmol, 134 µL, 8.0eq )，在20°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)，接著將有機層分離，且用乙酸乙酯(2 × 10.0 mL)萃取水相。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=10:1)純化，將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10µm; 移動相：[水(0.04%NH₃ H₂ O + 10mM NH₄ HCO₃ )-MeCN]; B%: 48%-78%, 12 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，接著凍乾。得到呈白色固體之產物標題化合物2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2R ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(10.9 mg, 17.3 µmol, 14%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 622。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.50 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.22 - 5.04 (m, 1H), 4.98 - 4.72 (m, 1H), 4.54 - 4.37 (m, 2H), 4.30 - 4.02 (m, 3H), 3.96 -3.75 (m, 2H), 3.66 -3.54 (m, 1H), 3.51 - 2.99 (m, 6H), 2.98 - 2.67 (m, 3H), 2.64 - 2.36 (m, 6H), 2.14 - 1.97 (m, 1H).
實例559

2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺。於N₂ 下向7-苯甲基-2-氯-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(5 g, 17.3 mmol, 1eq )、2-(二甲基胺基)乙醇(3.08 g, 34.5 mmol, 3.46 mL, 2eq )、Cs₂ CO₃ (5.62 g, 17.3 mmol, 1eq )及BINAP (2.15 g, 3.45 mmol, 0.2eq )之甲苯(100 mL)溶液添加Pd(OAc)₂ (387 mg, 1.73 mmol, 0.1eq )。使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在100°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾。向該濾液添加HCl (2 M, 200 mL)，接著分離。用NaHCO₃ 及K₂ CO₃ 將水相鹼化至pH = 8~9，接著用EtOAc (5 × 80 mL)萃取。將合併的有機相用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(4.8 g, 12.6 mmol, 73%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.40 - 7.28 (m, 5H), 4.40 (t,J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.76 - 2.69 (m, 4H), 2.62 - 2.56 (m, 2H), 2.32 (s, 6H).

步驟B：2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺。於N₂ 下向2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(4.8 g, 14.0 mmol, 1eq )之MeOH (100 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (2 g, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物18小時。向該混合物添加HCl/MeOH (4 M, 7.01 mL, 2eq )。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在40°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物2小時。將該混合物過濾，將濾餅用NH₃ •MeOH (10 %, 3 × 30 mL)洗滌。將濾液真空濃縮。將殘餘物溶解於水(10 mL)及EtOAc (10 mL)中，接著用K₂ CO₃ 將該混合物鹼化至pH = 11。用EtOAc (8 × 20 mL)萃取該混合物。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(2.58 g, 8.69 mmol, 62%產率, 85%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 253。

步驟C：2-[[4-甲氧基-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺。於N₂ 下向2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(2.28 g, 7.68 mmol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(2.55 g, 11.5 mmol, 1.5eq )、Cs₂ CO₃ (7.51 g, 23.0 mmol, 3eq )及Xantphos (889 mg, 1.54 mmol, 0.2eq )之甲苯(70 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (703 mg, 768 µmol, 0.1eq )。使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在100°C於N₂ 下攪拌該混合物16小時。將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc = 10:1 ~ 0:1至EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 10:1)純化，以得到呈褐色固體之2-[[4-甲氧基-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(3.2 g, 7.34 mmol, 95%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 393。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.69 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.64 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 4.44 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 4.17 - 4.05 (m, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.81 (d,J = 17.6 Hz, 1H), 3.57 -3.48 (m, 1H), 3.20 (dt,J = 4.0, 11.2 Hz, 1H), 2.94 - 2.82 (m, 4H), 2.75 (t,J = 6.4 Hz, 2H), 2.67 (br d,J = 16.4 Hz, 1H), 2.34 (s, 6H).

步驟D：2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇。向EtSH (1.96 g, 31.5 mmol, 2.33 mL, 3.64eq )之DMF (60 mL)溶液添加NaH (693 mg, 17.3 mmol, 60%純度, 2eq )，在10°C下攪拌該混合物0.5小時。接著添加2-[[4-甲氧基-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基]-N ,N -二甲基-乙胺(3.4 g, 8.66 mmol, 1eq )之DMF (10 mL)溶液，將該混合物加熱至60°C且攪拌1小時。將該混合物傾注入冰水(200 mL)內，且用EtOAc (30 mL)萃取。將水相用HCl (2 M)酸化至pH = 7~8，接著用EtOAc (6 × 80 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物用PE: EtOAc = 5:1濕磨，以得到呈白色固體之2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇(2.4 g, 6.28 mmol, 72%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 379。

步驟E：[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]三氟甲烷磺酸鹽。在-40°C下向2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-醇(1 g, 2.64 mmol, 1eq )及TEA (668 mg, 6.61 mmol, 919 µL, 2.5eq )之DCM (20 mL)溶液添加Tf₂ O (1.12 g, 3.96 mmol, 654 µL, 1.5eq )，在-40°C下攪拌該混合物10分鐘。向該混合物添加水(10 mL)，接著分離。用EtOAc (20 mL)萃取水相。有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法(PE: EtOAc = 5:1~0:1)純化，以得到呈褐色油狀物之[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]三氟甲烷磺酸鹽 (650 mg, 1.15 mmol, 43%產率, 90%純度)。

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]三氟甲烷磺酸鹽 (350 mg, 685 µmol, 1eq )及2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈(111 mg, 754 µmol, 1.1eq )之DMAC (4 mL)溶液添加DIEA (177 mg, 1.37 mmol, 239 µL, 2eq )，在10°C下攪拌該混合物10分鐘。將該混合物藉由逆相急驟管柱(MeCN/水 (0.1% FA) = 40 %)純化，以得到呈褐色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60 mg, 121 µmol, 18%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 486。

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C向2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60 mg, 123 µmol, 1 eq)、2-氟丙-2-烯酸(22.2 mg, 247 µmol, 2 eq)及TEA (100 mg, 988 µmol, 138 µL, 8 eq)之EtOAc (1.2 mL)溶液添加T3P (236 mg, 370 µmol, 220 µL, 50%純度, 3 eq)，在10°C下攪拌該混合物0.5小時。添加水(5 mL)至該混合物內。將該混合物以EtOAc (2 × 8 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由Al₂ O₃ 層析法(EtOAc: MeOH = 1:0 ~ 20:1)純化。接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Gemini 150*25 5µ;移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)-MeCN];B%: 53 % - 83 %, 12 分鐘)純化，以得到呈灰色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[2-(二甲基胺基)乙氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(39.5 mg, 70.4 µmol, 57%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 558。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 5.52 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.47 - 4.37 (m, 2H), 4.31 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.01 (m, 2H), 3.94 -3.84 (m, 1H), 3.77 (d,J = 18.0 Hz, 1H), 3.58 -3.41 (m, 2H), 3.25 - 2.95 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.77 (m, 2H), 2.77 - 2.70 (m, 2H), 2.68 - 2.56 (m, 1H), 2.34 (d,J = 3.6 Hz, 6H).
實例560

2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

(2S , 4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯。在0°C下向(2S ,4R )-1-第三丁氧基羰基-4-氟-吡咯啶-2-甲酸(2.0 g, 8.58 mmol, 1.0eq )及Ag₂ O (3.97 g, 17.2 mmol, 2.0eq )之CH₃ CN (20.0 mL)溶液分批添加MeI (2.43 g, 17.2 mmol, 1.07 mL, 2.0eq )，在15°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成之後，將反應混合物添加至水(30.0 mL)，接著將有機層分離，將水相用乙酸乙酯(30.0 mL×2)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯=3:1至乙酸乙酯:甲醇=10:1)純化。得到呈無色油狀物之(2S , 4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.98 g, 8.01 mmol, 93%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.29-5.15 (m, 1H), 4.49-4.38 (m, 1H), 3.92-3.74 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.60-3.56 (m, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 2.17-2.05 (m, 1H), 1.44 (d,J =18.0 Hz, 9H).

[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在-40°C下向(2S ,4R )-4-氟吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.98 g, 8.0 mmol, 1.0eq )之THF (20.0 mL)溶液緩慢添加LiAlH₄ (912 mg, 24.0 mmol, 3.0eq )，在完成之後於-40°C下攪拌該混合物0.5小時，接著使該混合物升溫至70°C，且在此溫度下攪拌3小時。在完成之後，在0°C下藉由添加Na₂ SO₄ 溶液(6.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用THF (10.0 mL)稀釋，接著過濾且用乙酸乙酯(30.0 mL)洗滌固體。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(800 mg, 6.01 mmol, 75%產率)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.13-4.97 (m, 1H), 3.67-3.63 (m, 1H), 3.51-3.37 (m, 2H), 2.95 (s, 1H), 2.74-2.68 (m, 1H), 2.63-2.51 (m, 1H), 2.33 (s, 3H), 2.07-2.02 (m, 1H), 1.99-1.95 (m, 1H).

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。將於甲苯(8.0 mL)中之[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(480 mg, 3.6 mmol, 2.0eq )及t -BuONa (295 mg, 3.1 mmol, 1.7eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次且在0°C下攪拌該混合物，接著添加4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(1 g, 1.8 mmol, 1.0eq )之甲苯(8.0 mL)溶液。在0°C於N₂ 下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，藉由添加H₂ O (25.0 mL)使該混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(30.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC (¹⁸ C, 0.1% FA於水中, 0-60% MeCN)純化。將所得產物用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH~8，接著濃縮，將水層用乙酸乙酯(100.0 mL×3)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈白色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(860 mg, 1.38 mmol, 76%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 624。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.31-7.25 (m, 5H), 5.15-5.02 (m, 3H), 4.63-4.58 (m, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.39-4.31 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 3.99-3.88 (m, 3H), 3.71 (br d,J = 11.2 Hz, 1H), 3.52-3.41 (m, 1H), 3.36 (br s, 1H), 3.19-3.16 (m, 2H), 2.99-2.86 (m, 2H), 2.71-2.48 (m, 5 H), 2.43 (s, 3H), 2.76-2.17 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 1H), 1.74 (br s, 1H), 1.43 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(860 mg, 1.4 mmol, 1.0eq )之MeOH (20.0 mL)及NH₃ •MeOH (10.0 mL, 50% w/w)溶液添加Pd/C (200 mg, 10%純度, 1.0eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈白色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(620 mg，粗製)。該粗產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 490。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 5.16-5.02 (m, 1H), 4.51 (br s, 1H), 4.31 (dd,J = 4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.13 (dd,J = 6.0, 11.2 Hz, 1H), 3.87 (s, 2H), 3.76 (d,J = 12.4 Hz, 1H), 3.52-3.41 (m, 1H), 3.14 (dd,J = 3.6, 13.6 Hz, 2H), 3.06-3.03 (m, 1H), 2.99-2.88 (m, 3H), 2.74-2.48 (m, 6H), 2.43 (s, 3H), 2.29-2.18 (m, 1H), 1.96-1.80 (m, 1H), 1.68-1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).

步驟C：-(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.2 mol, 1.0eq )、1-溴-8-甲基-萘(812 mg, 3.7 mmol, 3.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (168 mg, 184 µmol, 0.15eq )、Cs₂ CO₃ (1.2 g, 3.7 mmol, 3.0eq )及Xantphos (142 mg, 246 µmol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物，接著將該殘餘物用EA (15.0 mL)溶解，接著用0.5 M HCl調整至pH~2。有機層係以H₂ O (15.0 mL× 3)洗滌，接著將固體的NaHCO₃ 添加至合併的水相直至pH到達8，之後用乙酸乙酯(50.0 mL×3)萃取水相，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC (¹⁸ C, 0.1% TFA於水中, 0-50% MeCN)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整所得產物至pH 8，接著濃縮，將水層以EA (100.0 mL×3)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 467 µmol, 35%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 630。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在25°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 318 µmol, 1.0eq )之二噁烷(1.5 mL)添加HCl/二噁烷(4 M, 2.0 mL, 25.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，在0°C下藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液(6.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用H₂ O (10.0 mL)稀釋且用EA (15.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)。該產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 530。

步驟E：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 283 µmol, 1.0eq )之乙酸乙酯(1.0 mL)溶液添加2-氟丙-2-烯酸(42.9 mg, 476 µmol, 1.68eq ) 之乙酸乙酯(0.5 mL)溶液，接著添加TEA (1.93 g, 19 mmol, 2.65 mL, 67.0eq )及T3P (455 mg, 715 µmol, 425 µL, 50%純度, 2.5eq )，在0°C下攪拌該混合物，之後使該反應混合物升溫至20°C且攪拌1小時。在完成之後，藉由添加H₂ O (10.0 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(15.0 mL×3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN]; B%: 58%-88%, 11.5分鐘)純化並凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(50.1 mg, 82.9 µmol, 兩個步驟26%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 602。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.72 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.67 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.46-7.43 (m, 2H), 7.26-7.21 (m, 2H), 5.50-5.38 (m, 1H), 5.30-5.11 (m, 2H), 4.89 (br s, 1H), 4.45-4.40 (m, 1H), 4.30-4.20 (m, 2H), 4.19-4.13 (m, 1H), 4.10-4.05 (m, 1H), 3.92-3.88 (m, 1H), 3.82-3.77 (m, 1H), 3.62-3.46 (m, 3H), 3.25-3.18 (m, 2H), 3.15-3.09 (m, 1H), 3.08-2.98 (m, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.90-2.77 (m, 2H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.51 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.07-1.89 (m, 1H).
實例561

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯。向(2S ,4R )-1-第三丁氧基羰基-4-羥基-吡咯啶-2-甲酸(2 g, 8.65 mmol, 1eq )及Ag₂ O (6.01 g, 26.0 mmol, 3eq )之MeCN (40 mL)溶液添加CH₃ I (10.0 g, 70.8 mmol, 4.41 mL, 8.19eq )，在30°C下攪拌該混合物14小時。向該混合物添加CH₃ I (13.2 g, 93.1 mmol, 5.80 mL, 10.8eq )，在30°C下攪拌該混合物6小時。將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE: EtOAc = 20:1~10:1純化，以得到呈黃色油狀物之(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲酯(1.85 g, 6.99 mmol, 81%產率, 98%純度)。

[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇。在0°C下向(2S ,4R )-4-甲氧基吡咯啶-1,2-二甲酸O 1-第三丁基O 2-甲酯(1.85 g, 7.13 mmol, 1eq )之THF (50 mL)溶液添加LiAlH₄ (542 mg, 14.3 mmol, 2eq )，在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將該混合物加熱至70°C且攪拌3小時。接著在10°C下添加LiAlH₄ (542 mg, 14.27 mmol, 2 eq)，將該混合物加熱至80°C且攪拌6小時。藉由添加飽和Na₂ SO₄ (5 mL)使該反應混合物淬滅，接著過濾。將濾餅用THF (3 × 30 mL)洗滌。將濾液真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(840 mg, 5.21 mmol, 73%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 3.93 -3.83 (m, 1H), 3.68 (dd,J = 3.2, 11.2 Hz, 1H), 3.48 -3.36 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.67 - 2.58 (m, 1H), 2.40 - 2.30 (m, 4H), 2.08 (td,J = 8.0, 13.2 Hz, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 1H).

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(367 mg, 2.52 mmol, 2eq )之甲苯(18 mL)溶液添加t -BuONa (364 mg, 3.79 mmol, 3eq )，接著在0°C下添加4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(700 mg, 1.26 mmol, 1eq )，在8 °C下攪拌該反應混合物1小時。添加水(30 mL)至該混合物內。將該混合物以EtOAc (10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取。將合併的有機層以鹽水(20 mL)洗滌。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟管柱(MeCN/水 (0.1 % FA) = 30 %)純化，以得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(450 mg, 694 µmol, 55%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 636。

步驟B：-(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(490 mg, 771 µmol, 1eq )及NH₃ •MeOH (5 mL, 25%純度)之MeOH (5 mL)溶液添加Pd/C (100 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾，將濾餅用MeOH (3 × 5 mL)洗滌。將濾液真空濃縮以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(360 mg, 682 µmol, 88%產率, 95%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(360 mg, 718 µmol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(238 mg, 1.08 mmol, 1.5eq )、Cs₂ CO₃ (701 mg, 2.15 mmol, 3eq )及Xantphos (83.0 mg, 143 µmol, 0.2eq )之甲苯(8 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (65.7 mg, 71.8 µmol, 0.1eq )。使該懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(自PE: EtOAc = 5:1~1:1至EtOAc: MeOH = 1:0~20:1)純化。接著將殘餘物藉由逆相急驟管柱(ACN/水 (0.1 % FA) = 45 %)純化，以得到呈褐色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 414 µmol, 58%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 642。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.60 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 4.61 (br s, 1H), 4.39 (ddd,J = 4.8, 6.8, 11.2 Hz, 1H), 4.30 - 4.20 (m, 1H), 4.16 - 4.11 (m, 1H), 4.11 -3.89 (m, 4H), 3.88 -3.68 (m, 1H), 3.56 -3.47 (m, 1H), 3.46 -3.32 (m, 2H), 3.30 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 3.21 -3.05 (m, 3H), 3.01 - 2.85 (m, 5H), 2.81 - 2.67 (m, 2H), 2.65 - 2.54 (m, 1H), 2.46 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.35 - 2.26 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 2.00 - 1.88 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 436 µmol, 1eq )之二噁烷(1 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 1.64 mL, 15eq )，在10°C下攪拌1小時。將該反應混合物真空濃縮。將該混合物以飽和NaHCO₃ 鹼化至pH = 8~9，且用EtOAc (3 × 15 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(210 mg, 349 µmol, 80%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 542。

步驟E：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 185 µmol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(33.2 mg, 369 µmol, 2eq )及TEA (149 mg, 1.48 mmol, 206 µL, 8eq )之EtOAc (2 mL)溶液添加T3P (352 mg, 554 µmol, 329 µL, 50%純度, 3eq )，在10°C下攪拌該混合物0.5小時。添加水(3 mL)至該混合物內。將該混合物用EtOAc (2 × 3 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm;移動相：[水(0.05 %氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 52 % - 82 %,12 分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(28.1 mg, 45.5 µmol, 25%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.65 - 7.54 (m, 2H), 7.38 - 7.30 (m, 1H), 7.27 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 5.46 - 5.26 (m, 1H), 5.18 (br dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.83 (br s, 1H), 4.37 - 4.27 (m, 1H), 4.23 -3.94 (m, 4H), 3.92 -3.85 (m, 1H), 3.84 -3.76 (m, 1H), 3.70 (br d,J = 18.0 Hz, 1H), 3.46 (br d,J = 8.8 Hz, 1H), 3.42 -3.31 (m, 2H), 3.22 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 3.18 -3.07 (m, 2H), 3.06 - 2.87 (m, 2H), 2.87 - 2.64 (m, 6H), 2.59 - 2.49 (m, 1H), 2.38 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.24 (ddd,J = 3.2, 6.0, 9.6 Hz, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 1H).
實例562

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇。在0°C下向(3R )-3-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(0.5 g, 2.48 mmol, 1eq )之THF (20 mL)溶液添加LiAlH₄ (189 mg, 4.97 mmol, 2eq )，接著使該混合物升溫至70°C且在70°C下攪拌0.5小時。在完成時，以飽和Na₂ SO₄ (1 mL)使該反應混合物淬滅。將沉澱物濾除，且將濾餅用THF (3 × 20 mL)洗滌。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈無色油狀物之[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(220 mg, 1.72 mmol, 69%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 3.67 -3.57 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 6.0, 10.0 Hz, 1H), 3.45 -3.18 (m, 1H), 2.70 (dt,J = 4.8, 8.8 Hz, 1H), 2.56 - 2.44 (m, 2H), 2.42 - 2.24 (m, 5H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.68 - 1.54 (m, 1H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1eq )及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(194 mg, 1.68 mmol, 2eq )之甲苯(10 mL)溶液添加t -BuONa (162 mg, 1.68 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成時，將該混合物以水(10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(EtOAc/MeOH 50/1至3/1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(290 mg, 427 µmol, 51%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 5H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 5.28 - 5.15 (m, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.30 - 4.01 (m, 6H), 4.00 -3.73 (m, 2H), 3.56 -3.31 (m, 2H), 3.26 -3.06 (m, 3H), 3.05 - 2.94 (m, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.82 - 2.70 (m, 4H), 2.70 - 2.57 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.20 - 2.07 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 1H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(290 mg, 449 µmol, 1eq )之MeOH (4 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (2 mL, 15%純度)、Pd/C (100 mg, 449 µmol, 10%純度, 1eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 279 µmol, 62%產率, 95%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 235 µmol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(42.2 mg, 469 µmol, 2eq )及TEA (71.2 mg, 704 µmol, 97.9 µL, 3eq )之DMF (2 mL)溶液添加T3P (224 mg, 352 µmol, 209 µL, 50%純度於EtOAc中, 1.5eq )。接著在-40°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將該混合物以水(2 mL)稀釋，且用混合溶液(EtOAc/MeOH 10/1, 5 × 5 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 50/1至20/1)純化，且隨後藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Gemini 150*25mm*10µm; 移動相：[水(10mM NH₄ HCO₃ )- ACN]; B%: 50%-100%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(16.0 mg, 26.5 µmol, 11%產率, 96.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 584。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.33 - 4.02 (m, 5H), 4.01 -3.65 (m, 2H), 3.61 -3.36 (m, 2H), 3.27 - 2.97 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.74 (m, 2H), 2.74 - 2.56 (m, 4H), 2.55 - 2.42 (m, 2H), 2.36 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.66 - 1.52 (m, 1H).
實例563

2-[(2S)-1-[(E)-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

2-[(2S)-1-[(E)-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg, 508 µmol, 1.0 eq)之乙酸乙酯(1.5 mL)溶液添加(E)-4-氟丁-2-烯酸(106 mg, 1.02 mmol, 2.0 eq)之乙酸乙酯(0.5 mL)溶液、TEA (206 mg, 2.03 mmol, 283 µL, 4.0 eq)及T3P (647 mg, 1.02 mmol, 605 µL, 50%純度, 2.0 eq)，且在-40°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以H₂ O (10.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 15.0 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 25%-45%, 7.8 分鐘)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液將所得產物調整至pH~8，接著濃縮，將水層用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S)-1-[(E)-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(132 mg, 220 µmol, 43%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.70 - 7.62 (m, 2H), 7.43 - 7.38 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 7.04 - 6.94 (m, 1H), 6.59 (d,J = 14.4 Hz, 1H), 5.17 - 4.60 (m, 3H), 4.41 - 4.35 (m, 1H), 4.28 -3.44 (m, 9H), 3.20 -3.08 (m, 4H), 3.05 - 2.99 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.83 - 2.77 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 2H), 2.47 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.32 - 2.25 (m, 1H), 2.09 - 2.01 (m, 1H), 1.88 - 1.70 (m, 3H).
實例564

2-[(2S)-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S,4S)-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯。在0°C下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(800 mg, 1.44 mmol, 1eq )之甲苯(20 mL)溶液添加t -BuONa (277 mg, 2.88 mmol, 2eq )及3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(340 mg, 2.16 mmol, 1.5eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將反應混合物以水(30 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1 %甲酸)/乙腈)]純化。將該混合物用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到產物。得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(500 mg, 725 µmol, 50%產率, 94%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 648。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.44 - 7.30 (m, 5H), 5.19 (s, 2H), 4.79 - 4.53 (m, 2H), 4.51 - 4.30 (m, 4H), 4.09 -3.71 (m, 5H), 3.67 -3.58 (m, 1H), 3.54 -3.36 (m, 2H), 3.32 -3.12 (m, 2H), 3.04 - 2.87 (m, 2H), 2.85 - 2.46 (m, 7H), 2.00 - 1.89 (m, 2H), 1.85 ( d,J =9.2 Hz, 1H), 1.72 ( d,J =9.2 Hz, 1H), 1.51 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向4-[(3S )-4-第三丁氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸苯甲酯(900 mg, 1.39 mmol, 1eq )之MeOH (30 mL)溶液添加Pd/C (100 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (20 mL, 25%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(650 mg, 1.06 mmol, 77%產率, 84%純度)，且其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 514。

步驟C：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 350 µmol, 1eq )、1-溴-8-氯-萘(127 mg, 526 µmol, 1.5eq )、Cs₂ CO₃ (342 mg, 1.05 mmol, 3eq )及RuPhos (65.4 mg, 140 µmol, 0.4eq )之甲苯(6 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (64.2 mg, 70.1 µmol, 0.2eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物10小時。將反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(自PE: EtOAc = 5:1 ~ 1:1至EtOAc: MeOH = 1:0~20:1)純化，以得到呈褐色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(130 mg, 173 µmol, 50%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 674。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 222 µmol, 1eq )之二噁烷(0.6 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 556 µL, 10eq )，在10°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於水(15 mL)及EtOAc (10 mL)中，接著分離。將水相用固體的NaHCO₃ 鹼化至pH = 8~9，且用EtOAc (2 × 15 mL)萃取。將合併的有機層以鹽水(20 mL)洗滌。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈褐色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 162 µmol, 73%產率, 93%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 574。

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 174 µmol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(31.4 mg, 348 µmol, 2eq )及TEA (141 mg, 1.39 mmol, 194 µL, 8eq )之EtOAc (2 mL)溶液添加T3P (332 mg, 522 µmol, 311 µL, 50%純度, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。添加水(3 mL)至該混合物內。將該混合物以EtOAc (2 × 3 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 10μ 250 mm *50mm;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 45%-75%,12分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(26.5 mg, 41 µmol, 24%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.45 (td,J = 7.6, 12.4 Hz, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.12 - 4.64 (m, 1H), 4.49 - 4.31 (m, 4H), 4.21 -3.98 (m, 3H), 3.95 -3.76 (m, 2H), 3.68 -3.55 (m, 2H), 3.52 -3.36 (m, 2H), 3.33 - 2.97 (m, 4H), 2.95 - 2.66 (m, 5H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 1.93 (m, 2H), 1.84 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 1.71 (br d,J = 10.0 Hz, 1H).
實例565

2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(10 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(350 mg, 681 µmol, 1eq )、1-溴-8-甲基-萘(226 mg, 1.02 mmol, 1.5eq )、Xantphos (78.9 mg, 136 µmol, 0.2eq )、Pd₂ (dba)₃ (62.4 mg, 68.1 µmol, 0.1eq )及Cs₂ CO₃ (555 mg, 1.70 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 下攪拌該混合物12小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)洗滌。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 300/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(270 mg, 379 µmol, 56%產率, 92%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 654。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.34 (t,J =7.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 4.62 (br s, 1H), 4.45 - 4.31 (m, 3H), 4.30 - 4.16 (m, 1H), 4.10 -3.70 (m, 5H), 3.61 (br d,J =7.6 Hz, 1H), 3.57 -3.44 (m, 2H), 3.43 -3.25 (m, 1H), 3.24 -3.05 (m, 3H), 3.03 - 2.86 (m, 5H), 2.84 - 2.67 (m, 4H), 2.66 - 2.48 (m, 2H), 2.00 - 1.88 (m, 2H), 1.84 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 1.72 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 382 µmol, 1 eq)之二噁烷(2 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 1.91 mL, 1.00 eq)。在0°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮。以水(20 mL)稀釋該殘餘物，接著用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 7，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(260 mg，粗製)，其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 554。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 216 µmol, 1eq )、TEA (87.7 mg, 866 µmol, 121 µL, 4eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(45.1 mg, 433 µmol, 2eq )之乙酸乙酯(2 mL)溶液添加T3P (276 mg, 433 µmol, 258 µL, 50%純度, 2eq )。在-70°C下攪拌該混合物0.5小時。用HCl (1 N, 1 mL)稀釋該反應混合物使其淬滅，接著用水(20 mL)稀釋。用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取該混合物。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(14.5 mg, 22.5 µmol, 10%產率, 99.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 640。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.09 - 6.91 (m, 1H), 6.59 (d,J = 15.2 Hz, 1H), 5.29 - 4.48 (m, 3H), 4.44 - 4.31 (m, 3H), 4.29 -3.72 (m, 6H), 3.71 -3.40 (m, 4H), 3.28 - 2.96 (m, 4H), 2.95 - 2.88 (m, 4H), 2.87 - 2.56 (m, 5H), 2.52 (d,J = 10.0 Hz, 1H), 1.99 - 1.87 (m, 2H), 1.84 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 1.71 (d,J = 9.6 Hz, 1H).
實例566

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 181 µmol, 1eq )及2-氟丙-2-烯酸(32.5 mg, 361 µmol, 2eq )之DCM (1 mL)溶液添加HATU (137 mg, 361 µmol, 2eq )及DIEA (93.4 mg, 722 µmol, 126 µL, 4eq )。在0°C下攪拌0.5小時之後，用水(10 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由TLC (DCM/MeOH = 10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 10μ 250 mm *50mm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 12分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(12 mg, 19.1 µmol, 11%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 626。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.63 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t,J = 8.4 Hz, 1H),7.39 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.09 (m, 2H), 5.35 (d,J = 48.8 Hz, 1H), 5.18 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.04 - 4.40 (m, 1H), 4.37 -3.89 (m, 7H), 3.86 -3.61 (m, 2H), 3.59 -3.32 (m, 4H), 3.20 - 2.40 (m, 14H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.78 (d,J = 9.6 Hz, 1H), 1.65 (d,J = 9.6 Hz, 1H).
實例567

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-[8-(羥甲基)-1-萘基]-2-[[(2S) -1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

8-溴萘-1-羧醛。在-70°C下向1,8-二溴萘(5 g, 17.5 mmol, 1eq )之THF (100 mL)溶液逐滴添加n-BµLi (2.5 M, 9.09 mL, 1.3eq )。在-70°C攪拌30分鐘之後，逐滴添加DMF (12.8 g, 175 mmol, 13.5 mL, 10eq )。使混合物升溫至12 °C且再攪拌0.5小時。在完成時，以飽和NH₄ Cl水溶液(20 mL)使該混合物淬滅。用EtOAc (2 × 50 mL)萃取分離出的水相。將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之8-溴萘-1-羧醛(4.5 g，粗製)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 11.4 (s, 1H), 8.04 - 7.92 (m, 2H), 7.90 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.60 - 7.55 (m, 1H), 7.39 (t,J = 8.0 Hz, 1H).

(8-溴-1-萘基)甲醇。在0°C下向於MeOH (80 mL)中之8-溴萘-1-羧醛(4.5 g, 19.1 mmol)混合物一次添加NaBH₄ (2.90 g, 76.6 mmol)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，向該混合物添加水(1 mL)且將該混合物真空濃縮。將殘餘物用水(10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 30/1至3/1)純化，以得到呈黃色固體之(8-溴-1-萘基)甲醇(3.3 g, 12.5 mmol, 兩個步驟72%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.92 - 7.82 (m, 3H), 7.71 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.49 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 - 7.27 (m, 1H), 5.48 (br s, 2H).

2-[(8-溴-1-萘基)甲氧基]四氫吡喃。在12°C下向(8-溴-1-萘基)甲醇(0.5 g, 2.11 mmol, 1eq )之DCM (10 mL)溶液添加DHP (355 mg, 4.22 mmol, 386 µL, 2eq )，隨後添加TsOH•H₂ O (40.1 mg, 211 µmol, 0.1eq )。在12°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，以飽和NaHCO₃ 水溶液(2 mL)使該混合物淬滅，且用水(5 mL)稀釋。將分離出的水相用EtOAc (10 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 500/1至100/1)純化，以得到呈無色油狀物之2-[(8-溴-1-萘基)甲氧基]四氫吡喃 (560 mg, 1.57 mmol, 74%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.94 - 7.88 (m, 2H), 7.85 (t,J = 8.4 Hz, 2H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 1H), 5.63 (s, 2H), 4.92 (t,J = 3.6 Hz, 1H), 4.07 -3.97 (m, 1H), 3.69 -3.61 (m, 1H), 2.08 - 1.76 (m, 4H), 1.75 - 1.65 (m, 2H).

步驟A：(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(20 mL)中之2-[(8-溴-1-萘基)甲氧基]四氫吡喃(476 mg, 1.48 mmol, 1.5 eq)、(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 989 µmol, 1 eq)、Cs2CO3 (806 mg, 2.47 mmol, 2.5 eq)、(5-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-呫噸-4-基)-二苯基-磷烷(229 mg, 396 µmol, 0.4 eq)及Pd2(dba)3 (181 mg, 198 µmol, 0.2 eq)混合物脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續10小時。在完成時，使該混合物過濾通過矽藻土濾墊且將濾液真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA) /乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 水溶液中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(280 mg, 338 µmol, 34%產率, 90%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 746。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(280 mg, 375 µmol, 1eq )之MeOH (6 mL)溶液添加NH₃ /MeOH (4 mL, 20%純度)、Pd/C (120 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將混合物過濾通過矽藻土濾墊，且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(200 mg, 294 µmol, 78%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 612。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 294 µmol, 1eq )、T3P (562 mg, 883 µmol, 525 µL, 50%純度於EtOAc中, 3eq )及TEA (238 mg, 2.35 mmol, 328 µL, 8eq )之EtOAc (4 mL)溶液添加2-氟丙-2-烯酸(53.0 mg, 588 µmol, 2eq )。在15°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將該混合物以水(4 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用NaHCO₃ 中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(160 mg, 227 µmol, 77%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 684。

步驟D：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-[8-(羥甲基)-1-萘基]-2-[[(2S) -1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-[8-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)-1-萘基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 219 µmol, 1eq )之DCM (160 µL)溶液添加TFA (250 mg, 2.19 mmol, 162 µL, 10eq )。在15°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，將該混合物用二氯甲烷(3 mL)稀釋，且用飽和Na₂ CO₃ 水溶液調整至pH = 9。將分離出的水相用DCM (5 mL)萃取。將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 42%-72%, 8分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-[8-(羥甲基)-1-萘基]-2-[[(2S) -1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(62.0 mg, 103 µmol, 47%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 600。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.84 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (dd,J = 3.2, 7.2 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 3H), 7.44 - 7.38 (m, 1H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.94 (m, 2H), 4.89 (br t,J = 13.2 Hz, 1H), 4.41 -3.90 (m, 7H), 3.66 -3.39 (m, 2H), 3.37 -3.00 (m, 5H), 3.00 - 2.58 (m, 4H), 2.50 - 2.43 (m, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.90 - 1.73 (m, 3H).
實例568

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。在0°C於N₂ 下向於DMAc (250 mL)中之2-甲基氫硫基-4-(三氟甲磺醯基氧基)- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(20.0 g, 46.6 mmol, 1.00 eq)及(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(13.3 g, 51.2 mmol, 1.10 eq)混合物分批添加DIEA (18.1 g, 140 mmol, 24.3 mL, 3 eq)。將該混合物加熱至50°C且攪拌1小時。用水(100 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 300 mL)萃取。將合併的有機層以水(3 × 500 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至1/1)純化。得到呈黃色固體之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(23.0 g, 42.7 mmol, 92%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 539。

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向於二噁烷(200 mL)中之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(23.0 g, 42.7 mmol, 1.00 eq)混合物添加HCl/二噁烷(4 M, 192 mL, 18.0 eq)。在20°C下攪拌0.5小時之後，將反應混合物過濾，且將濾餅溶解在乙酸乙酯(200 mL)中。用飽和Na₂ CO₃ 溶液將pH調整至8-9，接著用水稀釋(20.0 mL)。將分離出的水層用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。合併的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體中之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.1 g, 34.5 mmol, 81%產率, 94%純度)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.42 - 7.33 (m, 5H), 5.25 - 5.12 (m, 2H), 4.66 (br s, 1H), 4.11 - 4.04 (m, 1H), 4.03 -3.90 (m, 3H), 3.84 (br d,J = 13.6 Hz, 1H), 3.34 -3.17 (m, 2H), 3.11 (td,J = 5.2, 10.4 Hz, 1H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.88 - 2.76 (m, 1H), 2.75 - 2.56 (m, 3H), 2.50 (s, 3H).

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向於甲苯(350 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(16.1 g, 36.7 mmol, 1.00 eq)及1-溴-8-甲基-萘(10.6 g, 47.7 mmol, 1.30 eq)混合物添加Pd₂ (dba)₃ (6.72 g, 7.34 mmol, 0.20 eq)、Xantphos (8.50 g, 14.7 mmol, 0.40 eq)及Cs₂ CO₃ (35.9 g, 110 mmol, 3.00 eq)。將該混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。在90°C下攪拌8小時之後，用水(1 × 100 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取。合併的有機層係以水(1 × 300 mL)及鹽水(1 × 300 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 100/1至2/1)純化，且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(15.3 g, 26.5 mmol, 72%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.68 - 7.55 (m, 2H), 7.40 - 7.28 (m, 7H), 7.22 (s, 2H), 5.22 - 5.09 (m, 2H), 4.64 (br s, 1H), 4.27 - 4.14 (m, 1H), 4.05 -3.84 (m, 2H), 3.83 -3.68 (m, 1H), 3.55 -3.30 (m, 2H), 3.18 -3.03 (m, 3H), 3.01 - 2.79 (m, 5H), 2.78 - 2.50 (m, 3H), 2.45 (d,J = 4.8 Hz, 3H).

步驟D：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C於N₂ 下向於EtOAc (200 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(13.3 g, 23.0 mmol, 1.00 eq)混合物添加m-CPBA (4.67 g, 23.0 mmol, 85%純度, 1.00 eq)。在0°C下攪拌30分鐘之後，在0°C下以飽和Na₂ S₂ O₃ (100 mL)使該反應混合物淬滅。將分離出的有機層用水(1 × 100 mL)稀釋，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至0/1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(9.60 g, 15.3 mmol, 67%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 595。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.25 - 5.17 (m, 2H), 4.67 (br s, 1H), 4.48 - 4.21 (m, 2H), 4.10 -3.88 (m, 2H), 3.66 -3.46 (m, 2H), 3.42 -3.04 (m, 4H), 3.02 - 2.83 (m, 6H), 2.81 - 2.60 (m, 1H), 2.81 - 2.60 (m, 3H).

步驟E：(2S )-4-[2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C於N₂ 下向於甲苯(10.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1.00 eq)及2S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(338 mg, 1.68 mmol, 2.00 eq)混合物分批添加t -BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3.00 eq)。在0°C下攪拌30分鐘之後，在0°C下藉由添加氫氯酸(1 M)(2 mL)及水(10 mL)使該反應混合物淬滅。用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取該混合物。合併的有機層係以水(30 mL × 1)及鹽水(30 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至0/1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(330 mg, 473 µmol, 56%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.26 - 7.15 (m, 2H), 5.27 - 5.14 (m, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.42 - 4.17 (m, 3H), 4.07 -3.73 (m, 3H), 3.58 -3.29 (m, 5H), 3.25 - 2.88 (m, 8H), 2.86 - 2.51 (m, 3H), 2.03 - 1.76 (m, 4H), 1.44 (d,J = 4.8 Hz, 9H).

步驟F：(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向於MeOH (15 mL)中之(2S )-4-[2-[[(2S )-1-第三丁氧基羰基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(330 mg, 473 µmol, 1.00 eq)混合物一次添加NH₃ •MeOH (15 mL, 20%純度)、Pd(OH)₂ /C (80 mg, 20%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。濾除催化劑且將濾液於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。該粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 335 µmol, 71%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

步驟G：(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在0°C於N₂ 下向於DCM (15.0 mL)中之(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-7-(8 -甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(190 mg, 318 µmol, 1.00 eq)及2-氟丙-2-烯酸(42.9 mg, 477 µmol, 1.50 eq)混合物一次添加DIEA (123 mg, 954 µmol, 166 uL, 3.00 eq)及HATU (181 mg, 477 µmol, 1.50 eq)。在0°C下攪拌30分鐘之後，以水(10 mL)稀釋該反應混合物。分離出的有機層係以鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , DCM: MeOH= 50:1至5:1)純化。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 292 µmol, 92%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 670。

步驟H：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向於DCM (5.00 mL)中之(2S )-2-[[4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(210 mg, 314 µmol, 1.00 eq)混合物一次添加TFA (1.07 g, 9.41 mmol, 696 µL, 30.0 eq)。在20°C下攪拌30分鐘之後，將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 × 30mm × 4µm; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 20%-50%,5 分鐘)純化。得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(75.5 mg, 122 µmol, 39%產率, 99.8%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 570。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 2H), 6.49 - 5.98 (m, 1H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.58 - 4.42 (m, 2H), 4.36 -3.87 (m, 5H), 3.86 -3.67 (m, 1H), 3.64 -3.37 (m, 2H), 3.35 -3.26 (m, 2H), 3.25 - 2.94 (m, 4H), 2.92 - 2.70 (m, 5H), 2.66 - 2.51 (m, 1H), 2.18 - 1.81 (m, 4H).
實例569

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

(5S )-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮。向於DCM (80.0 mL)中之(5S )-5-(羥甲基)吡咯啶-2-酮 (5.00 g, 43.4 mmol, 1.00 eq)及DHP (3.65 g, 43.4 mmol, 3.97 mL, 1.00 eq)混合物添加TsOH.H₂ O (826 mg, 4.34 mmol, 0.10 eq)。在15°C下攪拌該混合物12小時。將反應混合物以鹽水(30.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 20/1至0:1)純化。得到呈黃色油狀物之(5S )-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮 (5.70 g, 28.6 mmol, 66%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 6.36 - 6.01 (m, 1H), 4.66 - 4.47 (m, 1H), 3.92 -3.71 (m, 2.5H), 3.64 -3.43 (m, 2H), 3.24 (dd,J = 8.0, 9.6 Hz, 0.5H), 2.42 - 2.10 (m, 3H), 1.86 - 1.64 (m, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 4H).

(5S )-1-甲基-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮。在-40°C於N₂ 下向於DMF (60.0 mL)中之(5S )-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮 (5.60 g, 28.1 mmol, 1.00 eq)混合物分批添加NaH (1.35 g, 33.7 mmol, 60%純度, 1.20 eq)。在-40°C下攪拌該混合物30分鐘，接著添加CH₃ I (6.58 g, 46.4 mmol, 2.89 mL, 1.65 eq)且在0°C下攪拌2.5小時。藉由添加NaHSO₃ 水溶液(30.0 mL)使該反應混合物淬滅，且用EA (3 × 50.0 mL)萃取。將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮至乾燥。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 10/1至0/1)純化。得到呈黃色油狀物之化合物(5S )-1-甲基-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮 (4.40 g, 20.6 mmol, 73%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 4.59 (td,J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.93 -3.73 (m, 2H), 3.63 -371 (m, 1H), 3.57 -3.44 (m, 2H), 2.88 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.54 - 2.40 (m, 1H), 2.38 - 2.24 (m, 1H), 2.07 -2.20 (m, 1H), 1.93 - 1.53 (m, 7H).

(5S )-5-(羥甲基)-1-甲基-吡咯啶-2-酮。向於DCM (20.0 mL)中之(5S )-1-甲基-5-(四氫吡喃-2-基氧基甲基)吡咯啶-2-酮 (2.20 g, 10.3 mmol, 1.00 eq)混合物添加TFA (23.5 g, 206 mmol, 15.3 mL, 20.0 eq)。在15°C下攪拌該混合物30分鐘。將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈紅色油狀物之化合物(5S )-5-(羥甲基)-1-甲基-吡咯啶-2-酮 (2.60 g，粗製)。

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C於N₂ 下向於THF (30.0 mL)中之(5S )-5-(羥甲基)-1-甲基-吡咯啶-2 -酮 (543 mg, 4.20 mmol, 5.00 eq)混合物分批添加t -BuONa (808 mg, 8.41 mmol, 10.0 eq)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘，接著添加(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1.00 eq)，使其升溫至15°C且攪拌0.5小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(50 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(10.0 mL)中和，且用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(162 mg, 243 µmol, 29%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 660。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向於MeOH (2.00 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 197 µmol, 1.00 eq)混合物添加NH₃ •MeOH (1.00 mL, 20%純度)及Pd/C (35.0 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈褐色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(70.0 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 下向於EA (1.00 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60.0 mg, 114 µmol, 1.00 eq)及2-氟丙-2-烯酸(20.6 mg, 228 µmol, 2.00 eq)混合物分批添加TEA (92.4 mg, 913 µmol, 127 uL, 8.00 eq)、T₃ P (218 mg, 342 µmol, 204 uL, 50%純度, 3.00 eq)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。用水(5.00 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以水(10.0 mL × 1)及鹽水(10.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 × 25 mm × 5 um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 42%-72%,10 分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(26.8 mg, 43.9 µmol, 兩個步驟26%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.46 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.55 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.63 (m, 1H), 4.53 - 4.39 (m, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 1H), 4.25 - 4.00 (m, 3H), 3.97 -3.71 (m, 3H), 3.59 -3.35 (m, 2H), 3.29 - 2.98 (m, 4H), 2.91 (d,J = 5.6 Hz, 8H), 2.69 - 2.58 (m, 1H), 2.57 - 2.45 (m, 1H), 2.42 - 2.29 (m, 1H), 2.28 - 2.14 (m, 1H), 2.06 - 1.91 (m, 1H).
實例570

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

(2R )-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-丙酸。在0°C於氮氣下向(2R )-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-羥基-丙酸 (27 g, 132 mmol, 1eq )之DMF (270 mL)溶液添加咪唑(45.4 g, 667 mmol, 5.07eq )。在該溶液變澄清之後，添加TBDPSCl (90.4 g, 329 mmol, 84.5 mL, 2.5eq )。使該反應物升溫至15 °C。在15 °C下攪拌24小時之後，將反應混合物真空濃縮，用乙醚(250 ml)稀釋，且傾注入飽和NaCl (100 mL)內。將分離出的有機層用10% HC1 (25 mL)與飽和NaCl (50 mL)之混合物洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，且於減壓環境下濃縮。將殘餘物用乙腈稀釋，接著形成白色沉澱物。將沉澱物過濾，且將濾餅真空乾燥，以得到呈白色固體之(2R )-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-丙酸 (45 g, 90 mmol, 69%產率, 89%純度)。

N -[(1R )-1-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-2-(2,2-二甲基-4,6-二側氧基-1,3-二噁烷-5-基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯。在0°C下向(2R )-2-(第三丁氧基羰基胺基)-3-[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基-丙酸 (24 g, 54.1 mmol, 1eq )之DCM (400 mL)溶液添加2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(8.19 g, 56.8 mmol, 1.05eq )及DMAP (16.0 g, 131 mmol, 2.42eq )，隨後分小份添加BOP (25.1 g, 56.8 mmol, 1.05eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物用1N KHSO₄ (2 × 360 mL)洗滌。將有機物經Na₂ SO₄ 乾燥，且在室溫下真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之N -[(1R )-1-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-2-(2,2-二甲基-4,6-二側氧基-1,3-二噁烷-5-基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(35 g，粗製)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

(2R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3,5-二側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在77 °C下使N -[(1R )-1-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-2-(2,2-二甲基-4,6-二側氧基-1,3-二噁烷-5-基)-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(35 g, 61.43 mmol, 1eq )在EtOAc (600 mL)中回流1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(2R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3,5-二側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(30 g，粗製)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3-羥基-5-側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在0°C下將(2R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3,5-二側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(30 g, 64.2 mmol, 1eq )溶解於DCM (480 mL)中，隨後分小份將NaBH₄ (3.78 g, 99.9 mmol, 1.56eq )溶解於其中。在18 °C下攪拌該懸浮液16小時。在完成時，將該反應混合物傾注入水(300 ml)中，且攪拌直至沒有固體殘餘。分離出的有機層係以水(150 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 10/1至2/1)純化，隨後藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用NaHCO₃ 中和，且真空濃縮以移除MeCN，接著用DCM (2 × 50 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3-羥基-5-側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.13 g, 3.99 mmol, 三個步驟7.6%產率, 88%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, DMSO-d₆ ) δ = 7.72 (dd,J = 1.6, 8.0 Hz, 2H), 7.59 (dd,J = 1.2, 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 6H), 5.67 (d,J = 4.0 Hz, 1H), 4.57 - 4.46 (m, 1H), 4.09 -3.97 (m, 2H), 3.83 (dd,J = 2.8, 10.0 Hz, 1H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.62 - 2.53 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 0.93 (s, 9H).

(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在20°C下向(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-3-羥基-5-側氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.55 g, 5.43 mmol, 1eq )之DCM (50 mL)溶液添加DHP (913 mg, 10.9 mmol, 993 µL, 2eq )，隨後添加TsOH•H₂ O (103 mg, 543 µmol, 0.1eq )。在20°C下攪拌該混合物16小時。在完成時，用飽和NaHCO₃ 水溶液(10 mL)使該混合物淬滅，用水(5 mL)稀釋，且用DCM (2 × 40 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(PE/EtOAc 15/1至7/1)純化，以得到呈黃色固體之(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.62 g, 4.64 mmol, 85%產率, 98%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 (td,J = 1.2, 7.6 Hz, 2H), 7.66 (td,J = 1.6, 8.0 Hz, 2H), 7.47 - 7.34 (m, 6H), 4.75 - 4.68 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.20 - 4.17 (m, 1H), 3.99 -3.88 (m, 2H), 3.87 -3.74 (m, 1H), 3.60 -3.50 (m, 1H), 3.23 -3.01 (m, 1H), 2.76 (ddd,J = 8.8, 10.4, 16.8 Hz, 1H), 2.01 - 1.80 (m, 2H), 1.79 - 1.62 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 1.02 (d,J = 8.0 Hz, 9H).

(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2- one。向(2R ,3R )-2-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.62 g, 4.73 mmol, 1eq )之MeCN (50 mL)溶液添加Mg(ClO₄ )₂ (211 mg, 946 µmol, 95.6 µL, 0.2eq )。在70°C下攪拌該反應混合物12小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (1.14 g, 2.29 mmol, 48%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 454。

(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮。在0°C於N₂ 下向(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (0.95 g, 2.09 mmol, 1eq )之THF (20 mL)溶液分批添加NaH (168 mg, 4.19 mmol, 60%純度於礦物油中, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物30分鐘，接著添加CH₃ I (594 mg, 4.19 mmol, 261 uL, 2eq )。於0°C下再攪拌0.5小時之後，以水(10 mL)使該混合物淬滅，且用EtOAc (2 × 30 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈褐色油狀物之(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (820 mg, 1.67 mmol, 80%產率, 95%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 - 7.70 (m, 2H), 7.70 - 7.65 (m, 2H), 7.48 - 7.36 (m, 6H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.59 - 4.48 (m, 1H), 4.07 -3.77 (m, 2H), 3.77 -3.66 (m, 1H), 3.65 -3.56 (m, 1H), 3.55 -3.40 (m, 1H), 2.89 - 2.79 (m, 3H), 2.79 - 2.53 (m, 2H), 1.90 - 1.69 (m, 2H), 1.68 - 1.53 (m, 4H), 1.09 - 1.03 (m, 9H).

(4R ,5R )-5-(羥甲基)-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮。向於DMSO (10 mL)中之(4R ,5R )-5-[[第三丁基(二苯基)矽烷基]氧基甲基]-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (1.07 g, 2.29 mmol, 1eq )混合物添加CsF (1.04 g, 6.86 mmol, 253 µL, 3eq )。在65°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 50/1至5/1)純化，以得到呈黃色油狀物之(4R ,5R )-5-(羥甲基)-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (380 mg, 1.49 mmol, 65%產率, 90%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 4.80 - 4.52 (m, 2H), 3.98 -3.81 (m, 3H), 3.72 -3.61 (m, 1H), 3.60 -3.48 (m, 1H), 2.87 (d,J = 9.6 Hz, 3H), 2.67 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 2.60 - 2.46 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.67 - 1.51 (m, 4H).

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(280 mg, 471 µmol, 1eq )及(4R ,5R )-5-(羥甲基)-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (140 mg, 612 µmol, 1.3eq )之甲苯(6 mL)溶液添加t -BuONa (90.5 mg, 942 µmol, 2eq )。在0°C下攪拌10分鐘之後，以水(5 mL)稀釋該混合物，且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用NaHCO₃ 中和，且真空濃縮以移除MeCN，並以EtOAc (2 × 20 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 258 µmol, 55%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 760。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 7H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.84 - 4.43 (m, 5H), 4.30 -3.70 (m, 8H), 3.59 -3.34 (m, 3H), 3.25 - 2.98 (m, 4H), 2.96 - 2.90 (m, 6H), 2.81 - 2.56 (m, 4H), 1.83 - 1.63 (m, 2H), 1.60 - 1.47 (m, 4H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 197 µmol, 1eq )之MeOH (3 mL)溶液添加NH₃ /MeOH (3 mL, 20%純度)、Pd/C (75 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在20°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 144 µmol, 73%產率, 90%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 626。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 160 µmol, 1eq )之DCM (100 µL)溶液添加TFA (273 mg, 2.40 mmol, 177 µL, 15eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用DCM (5 mL)稀釋該混合物，且用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH = 8。將分離出的水層用EtOAc (3 × 5 mL)萃取。將合併的有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 126 µmol, 79%產率, 85%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。

步驟D：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 148 µmol, 1eq )、TEA (44.8 mg, 443 µmol, 61.7 µL, 3eq )及2-氟丙-2-烯酸(26.6 mg, 295 µmol, 2eq )之EA (3 mL)溶液添加T3P (141 mg, 222 µmol, 132 uL, 50%純度於EtOAc中, 1.5eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，用飽和NaHCO₃ 水溶液(5 mL)使該混合物淬滅，且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 1/0至10/1)純化，隨後藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 34%-64%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(11.8 mg, 19.1 µmol, 13%產率, 99.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 614。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.71 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.63 (m, 1H), 7.41 (q,J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (dd,J = 5.6, 12.0 Hz, 1H), 4.79 (dd,J = 5.6, 12.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.49 (m, 2H), 4.39 -3.94 (m, 3H), 3.89 -3.77 (m, 2H), 3.76 -3.63 (m, 1H), 3.61 -3.44 (m, 2H), 3.38 - 2.99 (m, 4H), 2.91 (d,J = 7.2 Hz, 6H), 2.89 - 2.70 (m, 2H), 2.70 - 2.55 (m, 2H), 2.46 (dt,J = 5.2, 16.0 Hz, 1H).
實例571

2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S )-吡咯啶-2-基甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。向7-苯甲基-2-氯-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶(4.00 g, 13.8 mmol, 1.00eq )及(2S )-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(5.56 g, 27.6 mmol, 2.00eq )之甲苯(80.0 mL)溶液添加BINAP (1.72 g, 2.76 mmol, 0.20eq )、Pd(OAc)₂ (310 mg, 1.38 mmol, 0.10eq )及Cs₂ CO₃ (13.5 g, 41 mmol, 3.00eq )。在110°C下攪拌該混合物8小時。在完成之後，將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物用H₂ O (200 mL)及乙酸乙酯(200 mL)稀釋。用HCl (2N)水溶液將該混合物酸化至pH~3。將水相分離且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1)純化，以得到呈黃色油狀物之(2S )-2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(3.80 g, 8.26 mmol, 60%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 455。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.37 - 7.27 (m, 5H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.25 - 4.16 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.43 -3.33 (m, 2H), 2.76 - 2.72 (m, 2H), 2.62 - 2.57 (m, 2H), 2.04 - 1.90 (m, 3H), 1.85 - 1.76 (m, 1H), 1.61 - 1.54 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).

步驟B：(2S )-2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(2S )-2-[(7-苯甲基-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(3.80 g, 8.36 mmol, 1.00eq )之甲醇(100 mL)溶液添加Pd(OH)₂ /C (1.00 g, 10.3 mmol, 20%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨3次。在40°C於H₂ (45 psi)下攪拌該混合物24小時。在完成之後，將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。得到呈黃色油狀物之化合物(2S )-2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.70 g, 7.17 mmol, 86%產率, 97%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 365。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 4.54 - 4.35 (m, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.48 (s, 1H), 3.43 -3.33 (m, 2H), 3.13 -3.04 (m, 2H), 2.56 - 2.46 (m, 2H), 2.10 - 1.93 (m, 3H), 1.87 - 1.82 (m, 1H), 1.45 (s, 9H).

步驟C：(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-2-[(4-甲氧基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基)氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.5 g, 6.86 mmol, 1.0eq )及1-溴-8-氯-萘(3.31 g, 13.7 mmol, 2.0eq )之甲苯(50 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (1.26 g, 1.37 mmol, 0.2eq )、Cs₂ CO₃ (5.59 g, 17.2 mmol, 2.5eq )及RuPhos (1.28 g, 2.74 mmol, 0.4eq )，在90°C於N₂ 下攪拌該反應混合物12小時。在完成之後，將該反應混合物過濾通過矽藻土，且將濾液用飽和鹽水(1 × 80 mL)洗滌，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.3 g, 2.46 mmol, 36%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 525。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.74 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.51 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.43 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.60 - 4.37 (m, 1H), 4.34 - 4.16 (m, 3H), 4.03 (s, 3H), 3.87 (br d,J = 17.2 Hz, 1H), 3.63 -3.57 (m, 1H), 3.45 -3.30 (m, 2H), 3.21 -3.10 (m, 1H), 2.99 (br s, 1H), 2.62 (br d,J = 16.8 Hz, 1H), 2.07 - 1.79 (m, 4H), 1.45 (s, 9H).

步驟D：(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-羥基-6,8 -二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在15 °C下向NaH (168 mg, 4.19 mmol, 60%純度, 2.0eq )之DMF (15 mL)溶液分批添加EtSH (391 mg, 6.29 mmol, 465 µL, 3.0eq )。在攪拌0.5小時之後，將(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-甲氧基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.1 g, 2.10 mmol, 1.0eq )之DMF (7.0 mL)溶液添加至該混合物，在60°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將該反應混合物傾注入冰水(10 mL)中，接著用1N HCl水溶液調整該混合物至pH 7~8將該混合物過濾，將濾餅溶解於二氯甲烷(10 mL)中，用飽和鹽水(2 × 15 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=10:1)純化，以得到呈黃色固體之(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-羥基-6,8 -二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(670 mg, 1.28 mmol, 61%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 511。

步驟E：(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在-40°C下向(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-羥基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(640 mg, 1.25 mmol, 1.0eq )之DCM (10 mL)溶液添加TEA (380 mg, 3.76 mmol, 523 µL, 3.0eq )、4A分子篩(500 mg)及Tf₂ O (530 mg, 1.88 mmol, 310 µL, 1.5eq )，且在-40°C下攪拌該反應混合物10分鐘。在完成之後，在-40°C下分批添加水(10 mL)，接著使該反應混合物升溫至15 °C且將有機層分離並用飽和鹽水(1 × 10 mL)洗滌，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=10/1至3/1)純化。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 616 µmol, 49%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 643。

步驟F：(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-(三氟甲磺醯基氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 622 µmol, 1.0eq )之DMAC (4.0 mL)溶液添加2-[(2S )-哌嗪-2-基]乙腈(86.5 mg, 622 µmol, 1.0eq )及DIEA (161 mg, 1.24 mmol, 217 µL, 2.0eq )，在15°C下攪拌該反應混合物10分鐘。在完成之後，將反應混合物傾注入冰水(10 mL)中，將沉澱的固體過濾，用乙酸乙酯(15 mL)溶解，將有機層用飽和鹽水(2 × 15 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(0.1% FA條件, 20%-30% MeCN於水中)純化，將所得產物用NaHCO₃ 固體調整至pH~8，接著濃縮，將水溶液用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取，將有機層用飽和鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 480 µmol, 77%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 618。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.47 - 7.42 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 (br t,J = 6.2 Hz, 1H), 4.71 - 4.31 (m, 2H), 4.29 - 4.06 (m, 3H), 3.95 -3.69 (m, 2H), 3.63 -3.28 (m, 4H), 3.26 - 2.82 (m, 7H), 2.72 - 2.46 (m, 3H), 2.02 - 1.79 (m, 4H), 1.45 (s, 9H).

步驟G：(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 162 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(29.1 mg, 324 µmol, 2.0eq )之乙酸乙酯(1.5 mL)溶液分批添加TEA (131 mg, 1.29 mmol, 180 µL, 8.0eq )及T3P (309 mg, 485 µmol, 289 µL, 50%純度, 3.0eq )，在0°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，添加水(10 mL)，接著將有機層分離，且用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取水相，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至1/1)純化。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(110 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 690。

步驟H：2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S )-吡咯啶-2-基甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈。向(2S )-2-[[7-(8-氯-1-萘基)-4-[(3S )-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-2-基]氧基甲基]吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(90.0 mg, 130.40 µmol, 1.0eq )之二氯甲烷(0.5 mL)溶液添加TFA (770 mg, 6.75 mmol, 0.5 mL, 51.8eq )，且在20°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將該反應混合物濃縮，接著用乙酸乙酯(10 mL)溶解，用飽和Na₂ CO₃ 水溶液(1 × 10 mL)洗滌，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯:甲醇=10:1)純化，接著藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10µm; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 20%-50%, 10 分鐘)純化，將所得產物濃縮且凍乾。得到呈灰白色固體之標題化合物2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S )-吡咯啶-2-基甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(24.7 mg, 38.1 µmol, 29%產率, 98%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 590。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.89 - 4.52 (m, 1H), 4.64 - 4.45 (m, 2H), 4.42 - 4.23 (m, 2H), 4.17 -3.92 (m, 4H), 3.89 -3.78 (m, 2H), 3.51 -3.42 (m, 1H), 3.35 -3.05 (m, 5H), 2.95 - 2.73 (m, 2H), 2.62 - 2.51 (m, 1H), 2.21 - 1.84 (m, 4H).
實例572

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C於N₂ 下向於THF (20.0 mL)中之(5S )-5-(羥甲基)-1-甲基-吡咯啶-2- one (556 mg, 4.30 mmol, 5.00 eq)混合物分批添加t -BuONa (827 mg, 8.60 mmol, 10.0 eq)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘，隨後添加(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 860 µmol, 1.00 eq)。將該混合物升溫至15°C且攪拌0.5小時。用乙酸乙酯(50.0 mL)稀釋該反應混合物，且用水(30 mL × 2)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA) /乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(10.0 mL)中和，且用乙酸乙酯(50.0 mL ×3)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(125 mg, 193 µmol, 22%產率)。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (dd,J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.52 (dd,J = 0.8, 7.2 Hz, 1H), 7.45 (q,J = 8.0 Hz, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 1H), 7.23 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 4.70 - 4.31 (m, 3H), 4.10 -3.82 (m, 4H), 3.65 -3.51 (m, 1H), 3.46 - 2.99 (m, 5H), 2.98 - 2.82 (m, 3H), 2.79 - 2.37 (m, 5H), 2.22 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 1.93 - 1.59 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向於二噁烷(1.50 mL)中之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(100 mg, 155 µmol, 1.00 eq)混合物添加HCl/二噁烷(4 M, 967 µL, 25.0 eq)。在20°C下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物用乙酸乙酯(10.0 mL)溶解且用飽和NaHCO₃ 溶液(3.00 mL)鹼化至pH = 8，且用乙酸乙酯(5.00 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。粗產物係不經進一步純化即用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 546。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 下向於EA (1 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60.0 mg, 110 µmol, 1.00 eq)及2-氟丙-2-烯酸(19.8 mg, 220 µmol, 2.00 eq)混合物分批添加TEA (89.0 mg, 879 µmol, 122 µL, 8.00 eq)、T₃ P (210 mg, 330 µmol, 196 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 3.00 eq)。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。用水(5 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(10 mL × 3)洗滌。合併的有機層係以水(10 mL × 1)及鹽水(10 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 × 25mm × 5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 10分鐘)純化。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(11.3 mg, 18.2 umol, 17%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 618。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.77 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.63 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.46 (td,J = 8.0, 10.4 Hz, 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 5.52 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.92 (br s, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.27 -3.77 (m, 5H), 3.61 (br d,J = 10.8 Hz, 1H), 3.46 (br d,J = 12.0 Hz, 1H), 3.36 - 2.94 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.90 - 2.79 (m, 1H), 2.64 - 2.48 (m, 2H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.28 - 2.17 (m, 1H), 2.05 - 1.95 (m, 1H).
實例573

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 482 µmol, 1eq )及(4R ,5R )-5-(羥甲基)-1-甲基-4-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-酮 (144 mg, 626 µmol, 1.3eq )之甲苯(6 mL)溶液添加t -BuONa (92.6 mg, 964 µmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成時，用水(5 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用NaHCO₃ 中和，將其真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 20 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(280 mg, 345 µmol, 72%產率, 92%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 746。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 - 7.57 (m, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.50 - 7.41 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 4.88 - 4.69 (m, 1H), 4.68 - 4.47 (m, 4H), 4.46 - 4.35 (m, 1H), 4.11 -3.74 (m, 6H), 3.65 -3.48 (m, 2H), 3.44 - 2.99 (m, 5H), 2.96 (dd,J = 2.8, 8.4 Hz, 3H), 2.91 - 2.51 (m, 5H), 1.81 - 1.64 (m, 2H), 1.52 (s, 13H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-1-甲基-5-側氧基-3-四氫吡喃-2-基氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 268 µmol, 1eq )之DCM (0.15 mL)溶液添加TFA (458 mg, 4.02 mmol, 298 µL, 15eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物用DCM (5 mL)稀釋，且用飽和碳酸氫鈉水溶液鹼化至pH = 8。將分離出的水層用EtOAc (5 × 5 mL)萃取。將合併的有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 230 µmol, 86%產率, 86%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 562。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 267 umol, 1eq )、TEA (81.0 mg, 801 umol, 111 uL, 3eq )及2-氟丙-2-烯酸(48.1 mg, 534 umol, 2eq )之EtOAc (4 mL)溶液添加T3P (255 mg, 400 umol, 238 uL, 50%純度於EtOAc中, 1.5eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，用飽和NaHCO₃ 水溶液(5 mL)使該混合物淬滅，且用EtOAc (2 × 10 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 1/0至20/1)純化，隨後藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 33%-63%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,3R )-3-羥基-1-甲基-5-側氧基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(22.0 mg, 34.5 umol, 13%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 634。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.77 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (dd,J = 4.4, 8.0 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.46 (dt,J = 6.0, 8.0 Hz, 1H), 7.35 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.21 (m, 1H), 5.54 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd,J = 2.8, 17.2 Hz, 1H), 4.88 (dd,J = 1.6, 12.0 Hz, 1H), 4.80 (dd,J = 6.0, 12.0 Hz, 1H), 4.64 - 4.48 (m, 2H), 4.47 -3.94 (m, 4H), 3.91 -3.65 (m, 3H), 3.64 -3.43 (m, 2H), 3.37 - 2.98 (m, 4H), 2.91 (d,J = 7.6 Hz, 3H), 2.89 - 2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.53 (m, 2H), 2.46 (dt,J = 5.2, 16.4 Hz, 1H).
實例574

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向於甲苯(12.0 mL)中之[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(275 mg, 2.06 mmol, 2.0eq )混合物分批添加t -BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 2.0eq )，在0°C下攪拌0.5小時之後，添加(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.03 mmol, 1.0eq )，且在0°C下攪拌0.5小時。在完成之後，添加水(15.0 mL)，將所得混合物用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1%TFA於水中, 30%-50% MeCN)純化，用NaHCO₃ 固體調整所得產物至pH=8，接著濃縮，將該水相用乙酸乙酯(2 × 15.0 mL)萃取，將有機層用飽和鹽水(20.0 mL)洗滌，接著經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(510 mg, 769 µmol, 75%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 650。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.80 - 7.72 (m, 1H), 7.62 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 - 7.50 (m, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.29 - 5.07 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.17 (m, 1H), 4.06 -3.76 (m, 3H), 3.65 -3.47 (m, 2H), 3.41 - 2.86 (m, 7H), 2.84 - 2.45 (m, 7H), 2.40 - 2.24 (m, 1H), 2.04 - 1.86 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(500 mg, 769 µmol, 1.0eq )之二噁烷(5.0 mL)溶液添加4N HCl•二噁烷(5.0 mL)，在15 °C下攪拌1小時。在完成之後，將反應混合物過濾，且將固體用二氯甲烷(15.0 mL)溶解，將有機層用飽和鹽水(1 × 15 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈淺黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(360 mg, 635 µmol, 85%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 550。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(120 mg, 218 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(39.3 mg, 436 µmol, 2.0eq )之乙酸乙酯(1.2 mL)溶液添加TEA (177 mg, 1.75 mmol, 243 µL, 8.0eq )及T3P (416 mg, 654 µmol, 389 µL, 50%純度, 3.0eq )，在0°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將該反應混合物添加飽和鹽水(10.0 mL)，接著用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取，將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 45%-75%, 10 分鐘]; B%: 45%-75%, 10 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(50.9 mg, 81.0 µmol, 37%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 622。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.30 - 5.07 (m, 2H), 5.01 - 4.66 (m, 1H), 4.53 - 4.35 (m, 2H), 4.29 -3.98 (m, 3H), 3.96 -3.78 (m, 2H), 3.73 -3.33 (m, 3H), 3.32 - 2.98 (m, 5H), 2.94 - 2.71 (m, 2H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.51 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.08 - 1.87 (m, 1H).
實例575

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(297 mg, 2.58 mmol, 2.50eq )之甲苯(6.0 mL)溶液添加t -BuONa (198 mg, 2.06 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。接著將(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.03 mmol, 1.0eq )添加至上述液體。在添加之後，在0°C下再攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(20.0 mL)且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取所得混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1% FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(430 mg, 680 µmol, 66%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.75 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.15 (m, 1H), 4.67 - 4.55 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.08 -3.75 (m, 4H), 3.65 -3.50 (m, 1H), 3.39 -3.02 (m, 5H), 3.00 - 2.86 (m, 1H), 2.81 - 2.64 (m, 4H), 2.62 - 2.46 (m, 4H), 2.35 (s, 3H), 2.15 - 2.05 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(400 mg, 632 µmol, 1.0eq )之二噁烷(2.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4.0 M, 2.0 mL, 12.6eq )。在15°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，將該反應混合物濃縮。用NaHCO₃ (10.0 mL)調整該殘餘物至pH~7，接著用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(240 mg, 451 µmol, 71%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80.0 mg, 150 µmol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(27.1 mg, 301 µmol, 2.0eq )及TEA (122 mg, 1.20 mmol, 167 µL, 8.0eq )之乙酸乙酯(2.0 mL)溶液添加T3P (287 mg, 451 umol, 268 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，用HCl (12.0 M, 60.0 uL於2.0的水中)使該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 8，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10µm; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN]; B%: 25%-45%, 8 分鐘)純化，接著濃縮。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該水層至pH ~ 8，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(35.9 mg, 57.5 µmol, 38%產率, 96.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 604。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.78 - 7.73 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.30 - 5.21 (m, 1H), 5.04 - 4.75 (m, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 1H), 4.27 - 4.17 (m, 2H), 4.16 -3.96 (m, 2H), 3.89 -3.75 (m, 1H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.51 -3.32 (m, 1H), 3.30 - 2.98 (m, 4H), 2.96 - 2.67 (m, 4H), 2.66 - 2.46 (m, 4H), 2.37 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 2.14 - 2.06 (m, 1H), 1.70 - 1.57 (m, 1H).
實例576

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 516 µmol, 1eq )之甲苯(5.00 mL)溶液添加t -BuONa (124 mg, 1.29 mmol, 2.5eq )及[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(149 mg, 1.03 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10:1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 265 µmol, 51%產率, 88%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 662。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 302 µmol, 1eq )之二噁烷(1.00 mL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 1.13 mL, 1.00eq )。在20°C下攪拌該混合物1小時。將反應混合物真空濃縮，且以水(20 mL)稀釋。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 8，且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到殘餘物。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg, 154.60 µmol, 70%產率, 79%純度)，其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 562。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(110 mg, 195 µmol, 1 eq)之乙酸乙酯(1.00 mL)溶液添加2-氟丙-2-烯酸(35.3 mg, 391 µmol, 2 eq)、T3P (374 mg, 587 µmol, 349 µL, 50%純度, 3 eq)及TEA (158 mg, 1.57 mmol, 218 µL, 8 eq)。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(30 mL × 3)萃取。將合併的有機層以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 45% - 75%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色膠狀物之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(17 mg, 26.7 µmol, 14%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 634。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 5.42 (d,J = 49.2 Hz, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.54 - 4.34 (m, 2H), 4.27 - 4.00 (m, 3H), 3.96 -3.77 (m, 2H), 3.67 -3.54 (m, 1H), 3.51 -3.37 (m, 1H), 3.37 - 2.96 (m, 9H), 2.95 - 2.64 (m, 3H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 2.52 - 2.27 (m, 5H), 1.91 - 1.74 (m, 1H).
實例577

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(300 mg, 2.06 mmol, 2.0eq )及t -BuONa (149 mg, 1.55 mmol, 1.50eq )之甲苯(7.0 mL)溶液添加(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(600 mg, 1.03 mmol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(20.0 mL)且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取該所得混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1 % FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 652 µmol, 63%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 662。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 4.12 -3.91 (m, 4H), 3.90 -3.75 (m, 1H), 3.65 -3.53 (m, 1H), 3.50 -3.39 (m, 1H), 3.38 -3.32 (m, 1H), 3.30 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 3.28 -3.06 (m, 3H), 3.02 - 2.85 (m, 2H), 2.83 - 2.64 (m, 2H), 2.62 - 2.52 (m, 1H), 2.47 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.35 - 2.29 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 1H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(450 mg, 680 µmol, 1.0eq )之二噁烷(4.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4 M, 4.0 mL, 23.6eq )。在15°C下攪拌該混合物5小時。在完成之後，將該反應混合物濃縮。用飽和NaHCO₃ 水溶液(10.0 mL)調整該殘餘物至pH~7，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(300 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 562。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg, 160 µmol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(28.8 mg, 320 µmol, 2.0eq )及TEA (130 mg, 1.28 mmol, 178 µL, 8.0eq )之EA (3.0 mL)溶液添加T3P (306 mg, 480 µmol, 286 µL, 50%純度, 3.0eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，添加水(10.0 mL)且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取所得混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 50%-80%,10 分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(32.0 mg, 50.3 µmol, 31%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 635。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.10 - 4.70 (m, 1H), 4.52 - 4.34 (m, 2H), 4.27 -3.80 (m, 6H), 3.69 -3.54 (m, 1H), 3.50 -3.37 (m, 2H), 3.30 (d,J = 1.6 Hz, 3H), 3.28 -3.02 (m, 4H), 2.98 - 2.68 (m, 3H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.47 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 1H).
實例578

2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 840 µmol, 1.00eq )之甲苯(10.0 mL)溶液添加t -BuONa (202 mg, 2.10 mmol, 2.50eq )及[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(224 mg, 1.68 mmol, 2.00eq )。在0°C下攪拌1小時之後，用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(50 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 100/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(340 mg, 502 µmol, 60%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 664。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 301 µmol, 1.00eq )之MeOH (15.0 mL)溶液添加Pd/C (30.0 mg, 10%純度)及NH₃ /MeOH (5.00 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將催化劑濾除。將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(159 mg, 294 µmol, 98%產率, 98%純度)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 530。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(140 mg, 264 µmol, 1.00eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(82.5 mg, 793 µmol, 3.00eq )之乙酸乙酯(2.00 mL)溶液添加TEA (160 mg, 1.59 mmol, 220 µL, 6.00eq )及T3P (505 mg, 793 µmol, 472 µL, 50%純度, 3.00eq )。在-70°C下攪拌該混合物1小時。在-70°C下用HCl (12 N, 130 µL於2 mL的水中)使該反應混合物淬滅。使該混合物升溫至0°C，用飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH = 8，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 45% - 75%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(34.5 mg, 55.8 umol, 21%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 616。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.46 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.59 (d,J = 15.2 Hz, 1H), 5.30 - 4.51 (m, 4H), 4.48 - 4.35 (m, 1H), 4.30 -3.66 (m, 6H), 3.63 -3.34 (m, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.53 (m, 4H), 2.50 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.40 - 2.22 (m, 1H), 2.10 - 1.86 (m, 1H) (m, 3H).
實例579

2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1eq )之甲苯(10 mL)溶液添加t -BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3eq )及[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(194 mg, 1.68 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/MeOH = 100/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 338 µmol, 40%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 646。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 372 µmol, 1eq )之MeOH (15 mL)溶液添加Pd/C (30 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (5 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將催化劑濾除。將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 352 µmol, 95%產率)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 195 umol, 1 eq)及(E )-4-氟丁-2-烯酸(40.7 mg, 391 umol, 2 eq)之EtOAc (2 mL)溶液添加TEA (79.1 mg, 782 umol, 109 uL, 4 eq)及T3P (249 mg, 391 umol, 232 uL, 50%純度於EtOAc中, 2 eq)。在-70°C下攪拌該混合物1小時。以HCl (60 uL (12 M)於2 mL的水中)使該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 8，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5u; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 25% - 45%, 7.8分鐘)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 52%-79%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色膠狀物之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(16.6 mg, 27.7 umol, 14%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.16 (m, 2H), 7.07 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (d,J = 15.6 Hz, 1H), 5.26 - 4.51 (m, 3H), 4.39 (s, 1H), 4.31 -3.33 (m, 9H), 3.27 - 2.97 (m, 5H), 2.92 (s, 3H), 2.87 - 2.76 (m, 1H), 2.65 (m, 2H), 2.49 (br d,J =4.6 Hz, 3H), 2.29 (m, 1H), 2.15 - 1.96 (m, 1H), 1.92 - 1.67 (m, 3H).
實例580

2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於氮氣下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(240 mg, 372 µmol, 1eq )之MeOH (15 mL)溶液添加Pd/C (30 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (5 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將催化劑濾除。將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 352 µmol, 95%產率)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 195 µmol, 1 eq)及(E )-4-氟丁-2-烯酸(40.7 mg, 391 umol, 2 eq)之EtOAc (2 mL)溶液添加TEA (79.1 mg, 782 µmol, 109 µL, 4 eq)及T3P (249 mg, 391 µmol, 232 µL, 50%純度於EtOAc中, 2 eq)。在-70°C下攪拌該混合物1小時。以HCl (60 uL (12 M)於2 mL的水中)使該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH = 8，且用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Luna C18 150*25 5µ; 移動相：[水(0.225% FA)- MeCN]; B%: 25% - 45%, 7.8分鐘)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5µ; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- MeCN]; B%: 52%-79%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色膠狀物之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(16.6 mg, 27.7 µmol, 14%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 628。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.62 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 7.08 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d,J = 16.0 Hz, 1H), 5.26 - 4.54 (m, 3H), 4.40 (m, 1H), 4.31 -3.69 (m, 7H), 3.61 -3.36 (m, 3H), 3.30 (d,J = 2.0 Hz, 3H), 3.24 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.91 - 2.55 (m, 4H), 2.47 (d,J = 4.8 Hz, 3H), 2.37 - 2.26 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 2.01 - 1.89 (m, 1H).
實例581

2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(450 mg, 757 umol, 1eq )及[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲醇(131 mg, 1.13 mmol, 1.5eq )之甲苯(9 mL)溶液添加t -BuONa (145 mg, 1.51 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物10分鐘。在完成時，添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(30 mL × 2)萃取所得混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用NaHCO₃ 中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈粉紅色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 455 µmol, 60%產率, 98%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 5H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.30 -3.78 (m, 7H), 3.59 -3.29 (m, 2H), 3.25 - 2.94 (m, 4H), 2.91 (s, 3H), 2.82 - 2.62 (m, 4H), 2.62 - 2.53 (m, 2H), 2.53 - 2.42 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.05 (s, 1H), 1.66 - 1.51 (m, 1H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 465 µmol, 1eq )之MeOH (4 mL)溶液添加Pd/C (150 mg, 10%純度)及NH₃ /MeOH (4 mL, 20%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈粉紅色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(210 mg, 369 µmol, 80%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 512。

步驟C：2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(70 mg, 137 µmol, 1eq )、TEA (41.5 mg, 410 µmol, 57.1 µL, 3eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(28.5 mg, 274 µmol, 2eq )之EtOAc (2 mL)溶液添加T3P (131 mg, 205 µmol, 122 µL, 50%純度於EtOAc中, 1.5eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，在-40°C下用1 M HCl (0.4 mL)使該反應混合物淬滅且攪拌直至沒有冰殘留。將分離出的水層真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4µm; 移動相：[水(0.225%FA)-MeCN]; B%: 20%-50%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈灰色固體之標題化合物2-[(2S )-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(13.7 mg, 20.8 µmol, 15%產率, 97.7%純度, FA)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.32 (td,J = 7.6, 11.6 Hz, 1H), 7.26 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.19 - 7.07 (m, 2H), 7.00 - 6.83 (m, 1H), 6.52 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.31 (m, 3H), 4.29 -3.96 (m, 3H), 3.94 -3.53 (m, 7H), 3.45 (br d,J = 6.8 Hz, 4H), 3.15 - 2.88 (m, 7H), 2.84 (s, 3H), 2.81 - 2.74 (m, 1H), 2.61 - 2.47 (m, 2H), 2.18 (br s, 1H), 1.85 (br s, 1H).
實例582

2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2S ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2S ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 327 µmol, 1.0eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(102 mg, 982 µmol, 3.0eq )之溶液添加TEA (265 mg, 2.62 mmol, 364 µL, 8.0eq )及T3P (833 mg, 1.31 mmol, 778 µL, 50%純度, 4.0eq )，且在-65 °C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，在-65 °C下用2 N HCl使該反應混合物淬滅且調整至pH~7，接著分離出有機層，用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取水相，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，且將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN]; B%: 50%-80%, 8 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-((S )-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((2S ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(72.2 mg, 113 µmol, 34%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 637。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.79 - 7.73 (m, 1H), 7.62 (t,J = 7.0 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 1H), 6.59 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.29 - 5.03 (m, 3H), 4.54 - 4.52 (m, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.30 -3.78 (m, 5H), 3.76 -3.35 (m, 3H), 3.32 - 2.96 (m, 5H), 2.91 - 2.54 (m, 4H), 2.51 (d,J = 3.2 Hz, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.08 - 1.86 (m, 1H).
實例583

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 267 µmol, 1.0eq )、(E )-4-氟丁-2-烯酸(55.6 mg, 534 µmol, 2.0eq )及TEA (108 mg, 1.07 mmol, 149 µL, 4.0eq )之乙酸乙酯(4.0 mL)溶液添加T3P (340 mg, 534 µmol, 317 µL, 50%純度, 2.0eq )。在-70°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，以HCl (12 M, 60.0 µL於2.0 mL的水中)使該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH~8，且用乙酸乙酯(3 × 20.0 mL)萃取。合併的有機層係以飽和鹽水(60.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN]; B%: 50%-80%, 8 分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S ,4R )-4-甲氧基-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(39.6 mg, 60.9 µmol, 23%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 619。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 5.25 - 5.03 (m, 2H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.21 -3.77 (m, 5H), 3.65 -3.55 (m, 1H), 3.51 -3.37 (m, 1H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.54 (m, 4H), 2.48 (d,J = 3.6 Hz, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 3H).
實例584

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2 -[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2 -[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 188 µmol, 1.0eq )、(E )-4-氟丁-2-烯酸(39.1 mg, 376 µmol, 2.0eq )及TEA (95.1 mg, 940 µmol, 131 µL, 5.0eq )之乙酸乙酯(3.0 mL)溶液添加T3P (179 mg, 282 µmol, 168 µL, 50%純度, 1.50eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，在-40°C下用HCl (12 M, 5.0 eq)使該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH~8，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10µm; 移動相：[水(0.225%FA)-MeCN]; B%: 30%-50%, 8 分鐘)純化，以得到呈黃色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2 -[[(3R )-1-甲基吡咯啶-3-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(15.7 mg, 24.9 µmol, 13%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 619。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.08 - 6.92 (m, 1H), 6.74 - 6.46 (m, 1H), 5.25 - 4.95 (m, 3H), 4.75 - 4.55 (m, 1H), 4.47 - 4.36 (m, 1H), 4.35 - 4.26 (m, 2H), 4.14 -3.92 (m, 2H), 3.91 -3.76 (m, 1H), 3.64 -3.55 (m, 1H), 3.53 -3.35 (m, 1H), 3.33 -3.04 (m, 7H), 3.03 - 2.72 (m, 4H), 2.67 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.64 - 2.51 (m, 1H), 2.31 - 2.19 (m, 1H), 1.98 - 1.85 (m, 1H).
實例585

2-((S )-4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯：在0°C下向於甲苯(3.0 mL)中之3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙-1-醇(150 mg, 954 µmol, 1.85eq )混合物分批添加t -BuONa (99.2 mg, 1.03 mmol, 2.0eq )，在0°C下攪拌0.5小時之後，將添加至(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(300 mg, 516 µmol, 1.0eq )該混合物，且在0°C下攪拌0.5小時。在完成之後，添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取所得混合物，合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1%TFA於水中, 30%-50% MeCN)純化，用NaHCO₃ 固體調整所得產物至pH~8，接著濃縮，將水相用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取，將有機層用飽和鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈淺黃色固體之產物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(180 mg, 267 µmol, 52%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 674。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.48 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 1H), 4.66 - 4.54 (m, 1H), 4.50 - 4.29 (m, 4H), 4.08 -3.77 (m, 5H), 3.65 -3.54 (m, 2H), 3.51 -3.44 (m, 1H), 3.39 -3.31 (m, 1H), 3.29 -3.02 (m, 4H), 3.00 - 2.87 (m, 2H), 2.84 - 2.46 (m, 6H), 1.99 - 1.82 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(150 mg, 222 µmol, 1.0eq ) 二噁烷(1.0 mL)溶液添加4 N HCl•二噁烷(1.0 mL)，在15°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，將反應混合物濃縮，添加二氯甲烷(10 mL)，接著用飽和Na₂ CO₃ 水溶液(1 × 10 mL)洗滌，有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。得到呈褐色油狀物之產物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 172 µmol, 77%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 574。

步驟A：2-((S )-4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈。在-65 °C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[3-[(1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基]丙氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.0 mg, 157 µmol, 1.0eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(48.9 mg, 470 µmol, 3.0eq )之乙酸乙酯(1.0 mL)溶液分批添加TEA (127 mg, 1.25 mmol, 175 µL, 8.0eq )及T3P (399 mg, 627 µmol, 373 µL, 50%純度, 4.0eq )，在-65 °C下攪拌該反應混合物1小時。在完成之後，在-65 °C下用2 N HCl使該反應混合物淬滅且調整至pH~7，接著將有機層分離，將水相用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取，將合併的有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(鹼性Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯=3/1至乙酸乙酯/甲醇=20/1)純化，將粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN]; B%: 44%-74%, 8 分鐘)再純化，將所得產物濃縮，且凍乾。得到呈白色固體之標題化合物2-((S )-4-(2-(3-((1S ,4S )-2-氧雜-氮雜二環[2.2.1]庚-5-基)丙氧基)-7-(8-氯萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(10.6 mg, 16.0 µmol, 10%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 660。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.4 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.34 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d,J = 14.0 Hz, 1H), 5.26 - 5.01 (m, 2H), 4.76 - 7.54 (m, 1H), 4.52 - 4.29 (m, 4H), 4.19 -3.97 (m, 3H), 3.95 -3.69 (m, 2H), 3.66 -3.37 (m, 4H), 3.33 - 2.99 (m, 4H), 2.97 - 2.67 (m, 5H), 2.65 - 2.48 (m, 2H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.90 - 1.82 (m, 1H), 1.76 - 1.69 (m, 1H).
實例586

2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲醇(99.1 mg, 860 µmol, 2.50eq )之甲苯(5.0 mL)溶液分批添加t -BuONa (66.2 mg, 688 µmol, 2.0eq )及(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 344 µmol, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，添加水(20.0 mL)且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取所得混合物。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法(C18, 0.1 % FA於水中, 0-60 % MeCN)純化，以得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 313 µmol, 91%產率, 99%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.77 - 7.73 (m, 1H), 7.61 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 1H), 7.33 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.27 - 7.16 (m, 1H), 4.67 - 4.56 (m, 1H), 4.47 - 4.35 (m, 2H), 4.23 - 4.15 (m, 1H), 4.09 -3.89 (m, 3H), 3.88 -3.77 (m, 1H), 3.63 -3.53 (m, 1H), 3.41 -3.30 (m, 1H), 3.22 -3.03 (m, 4H), 3.01 - 2.85 (m, 1H), 2.74 - 2.67 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 2H), 2.49 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.90 - 1.74 (m, 3H), 1.52 (s, 9H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(200 mg, 316 µmol, 1.0eq )之二噁烷(3.0 mL)溶液添加HCl•二噁烷(4.0 M, 3.0 mL, 37.9eq )。在15°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成之後，將該反應混合物濃縮。用飽和NaHCO₃ 水溶液(10.0 mL)調整該殘餘物至pH~7，接著用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg，粗製)。該產物不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 532。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 188 µmol, 1.0eq )及(E )-4-氟丁-2- 烯酸(39.1 mg, 376 µmol, 2.0eq )之乙酸乙酯(2.0 mL)溶液添加TEA (76.1 mg, 752 µmol, 105 µL, 4.0eq )及T3P (239 mg, 376 µmol, 224 µL, 50%純度, 2.0eq )。在-70°C下攪拌該混合物1小時。在完成之後，用HCl (12.0 M, 60.0 µL於2.0 mL的水中)此該反應混合物淬滅。用飽和NaHCO₃ 水溶液將該混合物調整至pH = 8，且用乙酸乙酯(3 × 10.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5µm; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-MeCN]; B%: 598%-89%, 8分鐘)純化，以得到呈白色固體之標題化合物2-[(2S )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2R )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(13.97 mg, 22.2 µmol, 12%產率, 98.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 619。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.76 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.62 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 1H), 7.34 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 1H), 7.08 - 6.94 (m, 1H), 6.67 - 6.54 (m, 1H), 5.25 - 5.03 (m, 2H), 4.80 - 4.60 (m, 1H), 4.48 - 4.34 (m, 2H), 4.21 -3.77 (m, 5H), 3.65 -3.55 (m, 1H), 3.51 -3.37 (m, 1H), 3.31 - 2.97 (m, 5H), 2.88 - 2.54 (m, 4H), 2.48 (d,J = 3.6 Hz, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.11 - 2.01 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 3H).
實例587

N-((E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯-1-基)-N-甲基乙醯胺

步驟A：(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸乙酯：將(E)-4-乙醯胺基丁-2-烯酸乙酯(140 mg, 0.818 mmol)用DMF (4 mL)稀釋，隨後添加NaH (21.6 mg, 0.900 mmol)及MeI (56.2 µl, 0.900 mmol)。在攪拌12小時之後，將該反應物用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，且將有機層經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10-70%乙酸乙酯/己烷溶離而純化，以得到(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸乙酯(120 mg, 0.648 mmol, 79.2%產率)。

步驟B：(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸：將(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸乙酯(20 mg, 0.11 mmol)用甲醇(1 mL)稀釋，隨後添加NaOH (270 µl, 0.54 mmol)。在攪拌4小時之後，將該反應物用2N HCl稀釋至pH ~4，且用乙酸乙酯萃取水層。將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸(15 mg, 0.095 mmol, 88%產率)。

步驟C：N-((E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯-1-基)-N-甲基乙醯胺：將2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(20 mg, 0.039 mmol)用DMF稀釋，隨後添加DIEA (13.65 µl, 0.07817 mmol)。添加(E)-4-(N-甲基乙醯胺基)丁-2-烯酸(9.83 mg, 0.0625 mmol)，隨後添加1-丙基膦酸環酐(39.6 µl, 0.0664 mmol)。在攪拌12小時之後，將該反應物用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，且將乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到N-((E)-4-((S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-4-側氧基丁-2-烯-1-基)-N-甲基乙醯胺 (2.1 mg, 0.0032 mmol, 8.2%產率)。ESI+APCI MS m/z 651.4 [M+H]⁺ 。
實例588

2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(140 mg, 0.277 mmol)、1,8-二溴萘(238 mg, 0.831 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (25.4 mg, 0.0277 mmol)、Cs₂ CO₃ (451 mg, 1.38 mmol)及XANTPHOS (32.0 mg, 0.0554 mmol)用甲苯(111 µl, 0.277 mmol)稀釋。將該反應物用氬氣沖淨，密封且加熱至110°C且同時攪拌12小時。使該反應物冷卻且用乙酸乙酯及水稀釋。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用1-10% 甲醇/DCM (1%NH₄ OH)溶離而純化，以得到(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(80 mg, 0.113 mmol, 40.7%產率)。

步驟B：2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(80 mg, 0.11 mmol)用TFA (2 mL)稀釋，置於氮氣下且加熱至90°C。在攪拌2小時之後，將該反應物冷卻且濃縮。將該物質用DCM稀釋且用飽和碳酸氫鈉洗滌。將該DCM經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(23 mg, 0.040 mmol, 35%產率)。

步驟C：2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(23 mg, 0.040 mmol)用DMF (350 µL)稀釋，隨後添加DIEA (22 µl, 0.13 mmol)及2-氟丙烯酸(5.4 mg, 0.060 mmol)。添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(25 mg, 0.040 mmol)，且在室溫下攪拌該反應物12小時。將該反應物用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到2-((S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(9 mg, 0.014 mmol, 35%產率)。ESI+APCI MS m/z 650.2 [M+H]⁺ 。
實例589

2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(24 mg, 0.042 mmol)用DMF (400 µL)稀釋，添加DIEA (19 µl, 0.11 mmol)且隨後添加2-氟丙烯酸(6.1 mg, 0.068 mmol)並添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(30 µl, 0.047 mmol)。在環境溫度下攪拌該反應物10小時。將該反應物傾注入5%碳酸氫鈉溶液，且用乙酸乙酯萃取兩次。將該乙酸乙酯用水、鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用1-10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-(三氟甲基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(5 mg, 0.0078 mmol, 18%產率)。ESI+APCI MS m/z 638.3 [M+H]⁺ 。
實例590

2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(7-(8-溴萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30 mg, 0.042 mmol)及二氯[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]鈀 (II)二氯甲烷加合物(14 mg, 0.017 mmol)用環丙基溴化鋅(253 µl, 0.13 mmol)稀釋。將該反應物用氬氣沖淨，密封且加熱至90°C。在攪拌12小時之後，使該反應物冷卻，且用乙酸乙酯及水稀釋。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(7 mg, 0.010 mmol, 25%產率)。

步驟B：2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(9 mg, 0.01 mmol)用甲醇(1 mL)稀釋，隨後添加Pd-C (1 mg, 0.01 mmol)。將該反應物配置氫氣球且沖淨3次，隨後在1大氣壓的氫氣下攪拌4小時。藉由過濾而收集固體，用甲醇沖洗，且將合併的有機相濃縮，以得到2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(7 mg, 0.01 mmol, 97%產率)。

步驟C：2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(10 mg, 0.019 mmol)用DMF (500 µL)稀釋，隨後添加DIEA (11 µl, 0.065 mmol)、2-氟丙烯酸(2.5 mg, 0.028 mmol)及2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷2,4,6-三氧化物(13 µl, 0.020 mmol)。在攪拌12小時之後，將反應物用乙酸乙酯及飽和碳酸氫鈉稀釋。分離各層，將該乙酸乙酯經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將該物質在矽膠上用10% 甲醇/DCM (1% NH₄ OH)溶離而純化，以得到2-((S)-4-(7-(8-環丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(0.9 mg, 0.0015 mmol, 7.9%產率)。ESI+APCI MS m/z 610.3 [M+H]⁺ 。
實例591

2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-異丙基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以與實例 590 相同的方式，以異丙基溴化鋅取代步驟A中的環丙基溴化鋅來合成。ESI+APCI MS m/z 612.3 [M+H]⁺ 。
實例592

2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(1-甲基異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

以與實例 588 相同的方式，以8-溴-1-甲基異喹啉取代步驟A中的1,8-二溴萘來合成。ESI+APCI MS m/z 585.3 [M+H]⁺ 。
實例593

2-((S)-4-(7-(5-氯異喹啉-4-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

以與實例 588 相同的方式，以4-溴-5-氯異喹啉取代步驟A中的1,8-二溴萘來合成。ESI+APCI MS m/z 605.2 [M+H]⁺ 。
實例594

2-((S)-4-(7-(8-溴異喹啉-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

以與實例 588 相同的方式，以8-溴-1-氯異喹啉取代步驟A中的1,8-二溴萘來合成。ESI+APCI MS m/z 651.2 [M+H]⁺ 。
實例595

2-((S)-4-(7-(1-氯異喹啉-8-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

以與實例 589 相同的方式，以8-溴-1-氯異喹啉取代步驟A中的1,8-二溴萘來合成。ESI+APCI MS m/z 605.3 [M+H]⁺ 。
實例596

2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(3 g, 5.7 mmol)溶解於DCM (57 ml, 5.7 mmol)中且用氫氯酸溶液處理(4.0M的1,4-二噁烷溶液) (7.1 ml, 28 mmol)。在室溫下攪拌該反應物1小時。將反應物以1M NaOH洗滌。將水相用額外的DCM (2X)萃取，將合併的有機相經MgSO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.4 g, 5.6 mmol, 99%產率)。ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (1.030 g, 1.124 mmol)及9,9-二甲基-4,5-雙(二苯膦基)呫噸(1.301 g, 2.249 mmol)溶解於1,4-二噁烷(56.22 ml, 5.622 mmol)中，且用氬氣沖淨5分鐘。在100°C於氬氣下攪拌該混合物15分鐘，且將該反應物冷卻至室溫。於氬氣下向該反應物添加(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.4 g, 5.622 mmol)、 1-溴-8-甲基萘(3.729 g, 16.87 mmol)及碳酸銫(5.495 g, 16.87 mmol)。於氬氣下蓋上該反應物且在100°C下攪拌隔夜。將反應物冷卻至室溫，且將固體藉由過濾移除。將濾液真空濃縮，且藉由正相層析法(2X)於CombiFlash上使用0à75%己烷/EtOAc做為溶離液而純化，以得到(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(2.532 g, 4.465 mmol, 79.42%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：於一微波管內將(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 0.441 mmol)之二噁烷(2204 µl, 0.441 mmol)溶液用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加(S)-(-)-1-苯甲基-2-吡咯啶甲醇(169 mg, 0.882 mmol)、Cs₂ CO₃ (431 mg, 1.32 mmol)、甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)，且再用Ar將反應物鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上，且在100°C下加熱2小時。將反應物冷卻至室溫且添加乙酸乙酯。將固體藉由過濾移除，且將濾液濃縮並藉由急驟層析法用0à20% DCM/MeOH + 2% NH₄ OH溶離而純化。將全部含有所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(120 mg, 0.204 mmol, 77.2%產率)。ESI+APCI MS m/z 722.4 [M+H]⁺ 。

步驟D：2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 0.277 mmol)之EtOH (2770 µl, 0.277 mmol)及THF (2770 µl, 0.277 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(73.7 mg, 0.0693 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並用N₂ 再沖淨5分鐘。該溶液接著在1大氣壓的H₂ 下攪拌1小時。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到粗製2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(160 mg, 0.272 mmol, 98.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 588.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有二氯甲烷(2722 µl, 0.272 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(160 mg, 0.272 mmol)及許尼希氏鹼(95.1 µl, 0.544 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加入2-氟丙烯酸(98.1 mg, 1.09 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(243 µl, 0.408 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌2小時。將該反應物用鹼水處理，且用DCM (3X)萃取水層。將合併的有機相真空濃縮，且使殘餘物再懸浮於60:40的MeCN:H₂ O混合物並純化(prep HPLC)，用5à95% MeCN/0.1% TFA於水中/0.1% TFA溶離而得到產物。將純的分餾物匯集，用EtOAc及1N NaOH稀釋，且分離各層。將合併的有機相用鹽水洗滌，經MgSO₄ 乾燥，且真空濃縮，以得到2-((S)-4-(2-(((S)-1-苯甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(8 mg, 0.0121 mmol, 4.45%產率)。ESI+APCI MS m/z 660.4 [M+H]⁺ 。
實例597

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(2-氟乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(2 g, 3.795 mmol)溶解於DCM (37.95 ml, 3.795 mmol)中，且用氫氯酸溶液(4.0 M的1,4-二噁烷溶液) (4.744 ml, 18.97 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。將該反應物用1M NaOH洗滌，且用DCM (2X)萃取水層。將有機相合併，經Na₂ SO₄ 乾燥且濃縮，以得到(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.619 g, 3.792 mmol, 99.93%產率)。ESI+APCI MS m/z 427.2 [M+H]⁺ 。

步驟B：(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將三(二亞苄基丙酮)二鈀(0) (0.6946 g, 0.7585 mmol)及9,9-二甲基-4,5-雙(二苯膦基)呫噸(0.8778 g, 1.517 mmol)溶解於1,4-二噁烷(37.92 ml, 3.792 mmol)，於氬氣下沖淨5分鐘且在100°C於氬氣下攪拌15分鐘，且將該反應物冷卻至室溫。於氬氣下向該混合物添加(S)-4-(2-氯-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.619 g, 3.792 mmol)、 1-溴-8-甲基萘(2.515 g, 11.38 mmol)及碳酸銫(3.707 g, 11.38 mmol)。將該反應物蓋上且在100°C下攪拌隔夜。將反應物冷卻至室溫，且藉由過濾將固體移除。將濾液真空濃縮，且藉由正相層析法(2X)使用0à75%己烷/EtOAc做為溶離液以得到(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(958 mg, 1.689 mmol, 44.54%產率)。ESI+APCI MS m/z 567.2 [M+H]⁺ 。

步驟C：(S)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：於一微波管中，將(S)-4-(2-氯-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(250 mg, 0.441 mmol)之二噁烷(2204 µl, 0.441 mmol)容易用氬氣鼓泡5分鐘。於氬氣下依序添加(S)-(-)-1-(第三丁氧基羰基)-2-吡咯啶甲醇(222 mg, 1.10 mmol)、Cs₂ CO₃ (431 mg, 1.32 mmol)及甲磺酸根基(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-二苯基)(2'-甲基胺基-1,1'-二苯基-2-基)鈀(II) (37.5 mg, 0.0441 mmol)，且將反應物用Ar再鼓泡5分鐘。將該反應混合物蓋上且加熱至100°C持續2小時。將該反應物冷卻至室溫且添加乙酸乙酯。藉由過濾將固體移除，將濾液濃縮且藉由急驟層析法用0à20% DCM/MeOH + 2% NH₄ OH溶離而純化。將全部含有所要產物的分餾物合併且濃縮，以得到(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(306 mg, 0.418 mmol, 94.8%產率)。ESI+APCI MS m/z 598.3 [M+H]+。

步驟D：(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(93 mg, 0.1556 mmol)溶解於二氯甲烷(1556 µl, 0.1556 mmol)中且用許尼希氏鹼(135.9 µl, 0.7779 mmol)及氯甲酸苯甲酯(33.31 µl, 0.2334 mmol)處理。在室溫下攪拌該反應物2小時。使該反應物分溶於DCM與水之間，且分離各層。用DCM (2X)萃取水層。將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥，真空濃縮，且將殘餘物藉由層析法使用0à15% DCM/MeOH + 2% NH₄ OH做為溶離液來純化。將全部含有產物的分餾物合併且濃縮，以得到(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(367 mg, 0.5014 mmol, 322.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 732.4 [M+H]⁺ 。

步驟E：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將(S)-4-(2-(((S)-1-(第三丁氧基羰基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(367 mg, 0.501 mmol)溶解於DCM (5014 µl, 0.501 mmol)中且用TFA (193 µl, 2.51 mmol)處理，且在室溫下攪拌該反應物1小時。未觀察到有反應作用。將該混合物真空濃縮且再懸浮於DCM中。向此溶液添加HCl (4M的二噁烷溶液， 500μL)，且在室溫下攪拌該反應物1小時。將該反應物真空濃縮，且使殘餘物分溶於1M NaOH及DCM之間。將合併的有機相真空濃縮，以得到粗製(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(192 mg, 0.304 mmol, 60.6%產率)。ESI+APCI MS m/z 632.3 [M+H]⁺ 。

步驟F：(S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 0.23742 mmol)之2.5 mL DMF溶液添加氫化鈉(60%分散在礦物油中(8.5465 mg, 0.35614 mmol))。在15分鐘後添加(2-溴乙氧基)(第三丁基)二甲基矽烷(142.00 mg, 0.59356 mmol)且將該反應物加熱至75°C持續3.5小時。將反應物冷卻至室溫，使其分溶於水與EtOAc之間，且分離各層。用EtOAc萃取水層，將合併的有機相用更多的水及鹽水洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到粗製(S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(187 mg, 0.237 mmol, 99.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 790.4 [M+H]⁺ 。

步驟G：2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(187 mg, 0.237 mmol)之EtOH (2367 µl, 0.237 mmol)及THF (2367 µl, 0.237 mmol)溶液用N₂ 沖淨5分鐘。向此溶液添加鈀(63.0 mg, 0.0592 mmol) (Degussa型，10 wt%, 50% H₂ O)，且立即蓋上並用N₂ 再沖淨5分鐘。該溶液接著在1大氣壓的H₂ 下攪拌隔夜。以MeOH稀釋該混合物且過濾通過填密的矽藻土。接著將濾液真空濃縮以得到粗製2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(134 mg, 0.204 mmol, 86.3%產率)。ESI+APCI MS m/z 656.4 [M+H]⁺ 。

步驟H：2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：在0°C下向含有N,N-二甲基甲醯胺(2043 µl, 0.204 mmol)之25 mL RBF添加2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(134 mg, 0.204 mmol)及許尼希氏鹼(71.4 µl, 0.409 mmol)。劇烈攪拌該反應混合物，同時一次添加2-氟丙烯酸(22.1 mg, 0.245 mmol)。接著，將1-丙基膦酸環酐(182 µl, 0.306 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。使該反應物在0°C下攪拌1小時。將該反應物用NaOH水溶液處理，且用EtOAc (3X)萃取水溶液。將合併的有機相真空濃縮，以得到粗製2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(120 mg, 0.165 mmol, 80.7%產率)。ESI+APCI MS m/z 728.4 [M+H]⁺ 。

步驟I：2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(2-(((S)-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(2-(((S)-1-(2-((第三丁基二甲基矽烷基)氧基)乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(50 mg, 0.069 mmol)溶解於二氯甲烷(687 µl, 0.069 mmol)中且用氯化氫(52 µl, 0.21 mmol) (4M的二噁烷溶液)處理。在室溫下攪拌該反應物1小時。接著將反應物真空濃縮，再懸浮於60:40的MeCN:H₂ O混合物中，並用5à95% MeCN/0.1% TFA於水中/0.1% TFA溶離來純化(prep HPLC)。將含有產物的分餾物合併，使其分溶於1M NaOH與DCM之間，且分離各層，並用額外的DCM萃取水層。將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(2-(((S)-1-(2-羥乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(2.7 mg, 0.0044 mmol, 6.4%產率)。ESI+APCI MS m/z 614.3 [M+H]⁺ 。
實例598

2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(2-氟乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(2-氟乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈：將2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(30 mg, 0.0508 mmol)溶解於乙腈 (508 µl, 0.0508 mmol)中且一次添加碳酸銫(19.9 mg, 0.0610 mmol)。接著向此混合物添加1-氟-2-碘乙烷(3.72 µl, 0.0458 mmol)，且在60°C下攪拌該反應物隔夜。將反應物冷卻至室溫，藉由過濾將固體移除，接著將濾液真空濃縮。將殘餘物再懸浮於60:40的MeCN:水中，並用5à95% MeCN/0.1% TFA於水中/0.1% TFA溶離來純化(prep HPLC)。將含有所要產物的分餾物合併，使其分溶於EtOAc與1M NaOH之間，且分離各層。用額外的EtOAc (2X)萃取水層。將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(2-氟乙基)吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈(4.8 mg, 0.00755 mmol, 14.8%產率)。ESI+APCI MS m/z 636.3 [M+H]⁺ 。
實例599

2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(S)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：將冷卻至0°C之(S)-2-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(3.0 g, 14.91 mmol)之DCM (74.53 ml, 14.91 mmol)溶液添加N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(4.01 ml, 22.36 mmol)，隨後以1分鐘的時間添加甲烷磺醯氯 (1.38 ml, 17.89 mmol)，且在0°C下攪拌該反應物1小時。接著用1:1 水/鹽水(10 mL)洗滌該反應物，且分離各層。接著將合併的有機相經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。接著將該物質藉由層析法使用於DCM中之0-10% MeOH做為溶離液來純化，以得到(S)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(3.786 g, 13.55 mmol, 90.9%產率)。

步驟B：(S)-2-(((3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯：將(S)-2-(((甲磺醯基)氧基)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.00 g, 7.16 mmol)及Cs₂ CO₃ (4.665 g, 14.32 mmol)至於二噁烷(10 mL)中，且在室溫下攪拌3小時。添加NaOH (0.5M)DCM萃取該混合物。將合併的有機相濃縮，且將殘餘物藉由矽膠(0-12% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到(S)-2-(((3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.172 g, 7.16 mmol, 99%產率)。

步驟C：(S)-3-(((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)丙酸甲酯：向一小管添加(S)-2-(((3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代)甲基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.172 g, 7.16 mmol)之甲酸(6.751 ml, 179.0 mmol)溶液，隨後添加甲醛(10.76 ml, 143.2 mmol) (37%水溶液)。接著將該混合物加熱至65 ºC且攪拌18小時。將反應物冷卻，緩慢添加飽和碳酸氫鹽，且用於DCM中之10% MeOH (3x20 mL)萃取該混合物。將萃取物合併，經MgSO₄ 乾燥且濃縮。將殘餘物藉由矽膠(5-20% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到(S)-3-(((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)丙酸甲酯(186 mg, 0.86 mmol, 12%產率)。

步驟D：4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯：將(S)-3-(((1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)丙酸甲酯(186 mg, 0.854 mmol)置於二噁烷(5 mL)中。添加KOtBu (1708 µl, 1.71 mmol)且攪拌該混合物30分鐘。添加(S)-4-(4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(300 mg, 0.569 mmol)且將該混合物加熱至80ºC持續24小時。將混合物冷卻，用水稀釋且用DCM (3x15 mL)萃取。將萃取物合併且濃縮。將殘餘物藉由矽膠(0-15% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(72 mg, 0.116 mmol, 20.3%產率)。

步驟E：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：將4-((S)-4-((苯甲氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,8-二氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-甲酸第三丁酯(72 mg, 0.12 mmol)置於DCM (5 mL)中且冷卻至0°C。添加HCl (145 µl, 0.58 mmol)，且使該反應物升溫至室溫並攪拌18小時。將該反應物濃縮且將其加入DCM中。添加飽和碳酸氫鹽且用DCM (3x 20 mL)萃取該混合物。將有機層合併，經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(61 mg, 0.12 mmol)。

步驟F：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：向(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(61 mg, 0.12 mmol)之甲苯(2 mL)溶液添加1-溴-8-甲基萘(78 mg, 0.35 mmol)，將該反應物用氬氣脫氣15分鐘，隨後添加Cs₂ CO₃ (190 mg, 0.58 mmol)、Pd₂ (dba)₃ (21 mg, 0.023 mmol)及Xantphos (27 mg, 0.047 mmol)，且將該反應物加熱至100ºC持續18小時。藉由過濾將固體移除，且將濾液真空濃縮。接著將殘餘物藉由層析法使用具有2% NH₄ OH之1à12%MeOH/DCM做為添加劑來純化，以得到(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(54 mg, 0.082 mmol, 70%產率)。

步驟G：2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：將(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(54 mg, 0.082 mmol)置於DCM (10 mL)中，且將該反應物冷卻至0ºC。添加AcOH (14.01 µl, 0.244 mmol)及TMS-I (69.67 µl, 0.490 mmol)，將該反應物緩慢升溫至室溫且攪拌1小時。添加飽和碳酸氫鹽，且用DCM萃取該混合物。將萃取物濃縮，將殘餘物藉由逆相層析法(5-95% MeCN於水中，具有0.1% TFA)純化。接著藉由將分離出的產物加入DCM中且添加飽和碳酸氫鹽而游離鹼化。將有機層分離，經MgSO₄ 乾燥且濃縮，以得到2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8 mg, 0.15 mmol, 19%)。

步驟H：2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈：向0^o C之N,N-二甲基甲醯胺(152 µl, 0.015 mmol)溶液添加2-((S)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(8.0 mg, 0.015 mmol)及三乙胺(7.37 µl, 0.053 mmol)。將反應混合物劇烈攪拌，同時一次添加2-氟丙烯酸(4.10 mg, 0.046 mmol)。接著將1-丙基膦酸環酐(13.5 µl, 0.023 mmol)緩慢添加至該攪拌混合物。在室溫下攪拌該反應物20分鐘。添加水，用DCM萃取該混合物，且將萃取物濃縮。將殘餘物藉由矽膠(0-12% MeOH於具有0.25% NH₄ OH的DCM中)純化，以得到2-((S)-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-((((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲基)硫代)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(2.3 mg, 0.0038 mmol, 25.3%產率)。ES+APCI MS m/z 600.3 [M+H]⁺ 。
實例600

2-((S)-4-(7-(5-氯-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

2-((S)-4-(7-(5-氯-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈，其係根據實例 359 ，以3,5-二氯-4-(三氟甲基)吡啶取代步驟A中的1-溴-8-甲基萘來製備。ES+APCI MS m/z 623.2 [M+H]⁺ 。
實例601

2-[(2S)-4-[2-[[(2S)-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-[(E)-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1eq )及[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(191 mg, 1.26 mmol, 1.5eq )之甲苯(10 mL)溶液添加t -BuONa (162 mg, 1.68 mmol, 2eq )。在0°C下攪拌該混合物30分鐘。在完成時，將混合物用水(10 mL)稀釋且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用NaHCO₃ 中和，將其真空濃縮以移除MeCN並用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 418 µmol, 50%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 682。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(260 mg, 381 µmol, 1eq )之MeOH (4 mL)溶液添加Pd/C (120 mg, 10%純度)、NH₃ /MeOH (3 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在15°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 296 µmol, 78%產率, 90%純度)，且其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 548。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在-70°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(150 mg, 274 umol, 1eq )、TEA (222 mg, 2.19 mmol, 305 uL, 8eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(57.0 mg, 548 µmol, 2eq )之EA (3 mL)溶液添加T3P (523 mg, 822 µmol, 489 µL, 50%純度於EA中, 3eq )。在-70°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，在-70°C下用1 M HCl (2.2 mL)使該反應混合物淬滅，且攪拌直至沒有冰殘留。分離各層。將有機層用NaHCO₃ 水溶液鹼化至pH = 8，且用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(Al₂ O₃ , EtOAc/MeOH 1/0至20/1)純化，隨後藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(50.6 mg, 78 µmol, 29%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 634。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (t,J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.38 (m, 1H), 7.38 - 7.32 (m, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 1H), 6.60 (br d,J = 14.8 Hz, 1H), 5.32 - 4.93 (m, 3H), 4.64 (br s, 1H), 4.45 (td,J = 5.2, 11.2 Hz, 1H), 4.32 -3.63 (m, 6H), 3.58 -3.36 (m, 3H), 3.25 - 2.96 (m, 5H), 2.93 (s, 3H), 2.88 - 2.77 (m, 1H), 2.75 - 2.50 (m, 3H), 2.46 (d,J = 4.4 Hz, 3H), 2.34 - 2.15 (m, 1H).
實例602

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(10 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 593 umol, 1.0eq )、1-溴萘(184 mg, 890 µmol, 124 µL, 1.5eq )、Pd₂ (dba)₃ (54.3 mg, 59.3 µmol, 0.1eq )、Cs₂ CO₃ (483 mg, 1.48 mmol, 2.5eq )及RuPhos (55.4 mg, 119 umol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物3小時。在完成時，以水(10 mL)稀釋該混合物，用乙酸乙酯(1 × 50 mL)萃取，將有機層分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相HPLC (0.1% FA條件)純化。殘餘物係以飽和NaHCO₃ 水溶液鹼化且調整至pH ~ 8，接著用乙酸乙酯(2 × 25 mL)萃取。將有機相分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 317 µmol, 53%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 632。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 158 µmol, 1.0eq )之MeOH (10 mL)溶液添加Pd/C (20 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (8 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(70 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 498。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60 mg, 121 umol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(21.7 mg, 241 µmol, 2.0eq )及Et₃ N (97.6 mg, 965 umol, 134 uL, 8.0eq )之乙酸乙酯(6 mL)溶液添加T3P (230 mg, 362 µmol, 215 µL, 50%純度, 3.0eq )。在0°C至25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用水(6 mL)稀釋該混合物。將有機層分離，用鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。該混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 20 / 1至5 / 1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 60% - 78%, 10 分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7.23 mg, 12.7 µmol, 11%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 571。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.27 - 8.16 (m, 1H), 7.91 - 7.81 (m, 1H), 7.61 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 - 7.47 (m, 2H), 7.43 (t,J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 5.56 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.2, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.41 (dd,J = 5.2, 10.8 Hz, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 2H), 4.22 -3.96 (m, 4H), 3.75 -3.21 (m, 4H), 3.12 (br t,J = 6.8 Hz, 2H), 3.04 - 2.92 (m, 2H), 2.87 (m, 2H), 2.70 (m, 1H), 2.50 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 1H), 2.15 - 1.99 (m, 1H), 1.94 - 1.73 (m, 3H).
實例603

2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在-10°C下向環戊基甲醇(50.5 mg, 504 µmol, 54.6 µL, 3.0eq )及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 168 µmol, 1.0eq )之甲苯(5 mL)溶液添加t -BuONa (48.5 mg, 504 umol, 3.0eq )。在-10°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，在-10°C下以水(5 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至3/1)純化。得到呈白色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(58 mg, 91.6 µmol, 54%產率, 99.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 631。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 7H), 7.26 - 7.16 (m, 2H), 5.27 - 5.15 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.32 -3.72 (m, 7H), 3.59 -3.30 (m, 2H), 3.24 - 2.87 (m, 7H), 2.87 - 2.30 (m, 4H), 1.90 - 1.76 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 1.57 - 1.51 (m, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(58 mg, 92.0 µmol, 1.0eq )之MeOH (3 mL)溶液添加Pd/C (20 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (2 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將混合物真空濃縮。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(34 mg，粗製)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 497。

步驟C：2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30 mg, 60.4 µmol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(16.3 mg, 181 umol, 3.0eq )及Et₃ N (55.0 mg, 544 µmol, 75.7 µL, 9.0eq )之EA (2.0 mL)溶液添加T3P (154 mg, 242 umol, 144 uL, 50%純度, 4.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用水(6 mL)稀釋該混合物。將有機層分離，用鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。該混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 20/1至1/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 65%-95%, 10 分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-(環戊基甲氧基)-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(8.85 mg, 15.3 µmol, 兩個步驟17%產率, 98.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 569。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.70 (br d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.17 (m, 2H), 5.56 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.89 (br s, 1H), 4.33 -3.98 (m, 5H), 3.95 -3.72 (m, 2H), 3.60 -3.39 (m, 2H), 3.30 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (s, 3H), 2.91 - 2.73 (m, 2H), 2.69 - 2.54 (m, 1H), 2.45 - 2.29 (m, 1H), 1.93 - 1.74 (m, 2H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.53 (m, 2H), 1.45 - 1.25 (m, 2H).
實例604

2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(20 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1 g, 1.98 mmol, 1eq )、4-溴-5,6-二甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(795 mg, 2.57 mmol, 1.3eq )、RuPhos (369 mg, 791 umol, 0.4eq )、Cs₂ CO₃ (1.61 g, 4.94 mmol, 2.5eq )及Pd₂ (dba)₃ (362 mg, 396 umol, 0.2eq )混合物脫氣，接著於N₂ 下加熱至90°C持續8小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，用固體的NaHCO₃ 中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈褐色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(900 mg, 1.23 mmol, 62%產率, 100%純度)。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.43 - 7.33 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd,J = 2.8, 9.6 Hz, 1H), 5.20 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.0 Hz, 1H), 4.25 (s, 2H), 4.18 - 4.14 (m, 1H), 4.04 (br d,J = 12.0 Hz, 2H), 3.95 -3.84 (m, 1H), 3.75 (dt,J = 2.8, 10.8 Hz, 1H), 3.50 (br t,J = 5.2 Hz, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 2H), 2.95 - 2.52 (m, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.30 - 2.23 (m, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.07 (br d,J = 3.2 Hz, 1H), 1.89 - 1.63 (m, 8H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(0.9 g, 1.23 mmol, 1eq )之MeOH (20 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (20 mL, 20%純度)、Pd/C (0.45 g, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，藉由過濾通過矽藻土插塞以移除催化劑。於減壓環境下移除溶劑。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(620 mg, 1.03 mmol, 84%產率, 100%純度)，其不經進一步純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 600。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(600 mg, 1.00 mmol, 1eq )之DMF (8 mL)溶液添加2-氟丙-2-烯酸(180 mg, 2.00 mmol, 2eq )之EA (4 mL)及TEA (304 mg, 3.00 mmol, 414 µL, 3eq )溶液，隨後添加T3P (955 mg, 1.50 mmol, 892 µL, 50%純度於EtOAc中, 1.5eq )。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，用水(20 mL)稀釋該混合物且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用固體的NaHCO₃ 中和，真空濃縮以移除MeCN，且用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(380 mg, 554 µmol, 55%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 672。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd,J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 5.51 - 5.32 (m, 1H), 5.25 (br dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.09 - 4.59 (m, 1H), 4.44 - 4.33 (m, 1H), 4.26 (br s, 2H), 4.19 - 4.14 (m, 1H), 4.05 (br d,J = 14.4 Hz, 2H), 4.00 -3.91 (m, 1H), 3.76 (dt,J = 2.4, 11.2 Hz, 1H), 3.59 -3.39 (m, 3H), 3.37 -3.21 (m, 1H), 3.14 -3.02 (m, 2H), 2.90 - 2.52 (m, 6H), 2.48 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.29 - 2.23 (m, 1H), 2.22 - 2.08 (m, 2H), 1.90 - 1.69 (m, 8H).

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(360 mg, 536 µmol, 1eq )之DCM (0.4 mL)溶液添加TFA (1.22 g, 10.7 mmol, 794 µL, 20eq )。在25°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，以DCM (10 mL)稀釋該混合物且以飽和NaHCO_3. 溶液中和。用DCM (2 × 10 mL)萃取分離出的水層。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以NaHCO₃ 固體中和，且真空濃縮以移除MeCN，並用EtOAc (2 × 15 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(73.3 mg, 120 µmol, 22%產率, 96.6%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 588。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 9.97 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.55 - 5.31 (m, 1H), 5.26 (dd,J = 3.6, 16.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.50 (m, 1H), 4.39 (dd,J = 4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.20 -3.68 (m, 4H), 3.65 -3.27 (m, 4H), 3.10 (br t,J = 7.8 Hz, 2H), 3.02 - 2.72 (m, 4H), 2.71 - 2.60 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.31 - 2.24 (m, 1H), 2.12 - 2.01 (m, 1H), 1.93 - 1.73 (m, 3H).
實例605

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在-10°C下向2-吡啶基甲醇(55.1 mg, 504 µmol, 48.7 µL, 3.0eq )及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫- 5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 168 µmol, 1.0eq )之甲苯(5.00 mL)溶液添加t -BuONa (48.5 mg, 504 µmol, 3.0eq )。在-10°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(5.00 mL)使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 50/1至1/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(64.0 mg, 98.8 µmol, 59%產率, 98.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 641。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(64.0 mg, 100 µmol, 1.0eq )之MeOH (3.00 mL)溶液添加Pd/C (20.0 mg, 10%純度)及NH₃ •MeOH (2.00 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。在完成時，將混合物真空濃縮。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二氯甲烷/甲醇 = 100/1至8/1)純化。得到呈黃色油狀物之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(15.0 mg, 19.3 µmol, 19%產率, 64.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 506。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(10.0 mg, 19.8 µmol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(5.34 mg, 59.3 µmol, 3.0eq )及Et₃ N (18.0 mg, 178 µmol, 24.8 µL, 9.0eq )之EtOAc (2.00 mL)溶液添加T3P (50.3 mg, 79.1 µmol, 47.1 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 4.0eq )。在25°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，用水(3.00 mL)稀釋該混合物。將有機層分離，以鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 50% - 80%, 10 分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-(2-吡啶基甲氧基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(1.41 mg, 2.44 umol, 12%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 579。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.61 - 8.55 (m, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 3H), 7.55 - 7.48 (m, 1H), 7.45 - 7.32 (m, 2H), 7.26 - 7.17 (m, 3H), 5.52 - 5.48 (m, 2H), 5.47 - 5.33 (m, 1H), 5.25 (dd,J = 3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.79 (br s, 1H), 4.38 -3.73 (m, 6H), 3.61 -3.41 (m, 2H), 3.26 -3.12 (m, 2H), 3.09 - 2.95 (m, 2H), 2.92 (s, 3H), 2.85 - 2.56 (m, 2H).
實例606

2-((S )-4-(7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-(((2S ,4R )-4-氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(100 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(5.0 g, 11.4 mmol, 1.0eq )、4-溴-5,6-二甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(7.05 g, 22.8 mmol, 2.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (2.09 g, 2.28 mmol, 0.2eq )、RuPhos (2.13 g, 4.56 mmol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (9.29 g, 28.5 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物8小時。以水(100 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(100 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 20/1至2/1)純化，且進一步藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 7，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.90 g, 7.20 mmol, 63%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 667。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.98 (s, 1H), 7.50 - 7.31 (m, 5H), 7.22 (s, 1H), 5.66 (dd,J =2.4, 9.6 Hz, 1H), 5.27 - 5.13 (m, 2H), 4.69 (br s, 1H), 4.27 (s, 2H), 4.13 -3.97 (m, 3H), 3.89 (d,J = 11.6 Hz, 1H), 3.81 -3.68 (m, 1H), 3.51 (t,J =5.2 Hz, 2H), 3.30 (br s, 2H), 3.04 (t,J = 11.6 Hz, 1H), 2.93 - 2.66 (m, 4H), 2.62 - 2.48 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 1H), 2.11 - 2.05 (m, 1H), 1.85 - 1.67 (m, 3H).

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 749 µmol, 1.0eq )之甲苯(10 mL)溶液添加m -CPBA (152 mg, 749 µmol, 85%純度, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。以水(10 mL)稀釋該混合物，且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至pH ~ 7。接著用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取該混合物。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 539 µmol, 72%產率, 92%純度)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 683。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(350 mg, 512 µmol, 1.0eq )之甲苯(10 mL)溶液添加t -BuONa (148 mg, 1.54 mmol, 3.0eq )及[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(136 mg, 1.03 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 7，且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(280 mg, 372 µmol, 73%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 752。

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(230 mg, 306 umol, 1.0eq )之甲醇(2.0 mL)溶液添加無水Pd/C (50.0 mg, 10%純度)及NH₃ /甲醇(1.00 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(180 mg, 285 µmol, 93%產率, 98%純度)，且其不經純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 618。

步驟D：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(30 mg, 48.6 µmol, 1.0eq )之二氯甲烷(300 uL)溶液添加TFA (221 mg, 1.94 mmol, 144 µL, 40eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮且用水(10 mL)稀釋。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 8，且用二氯甲烷(3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 26% - 56%, 1分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H-吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7.08 mg, 13.1 µmol, 27%產率, 98.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 534。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.14 (br s, 1H), 8.04 (d,J =0.8 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.32 - 5.03 (m, 1H), 4.44 (dd,J =4.4, 11.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 3H), 4.00 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 3.82 (br d,J =12.0 Hz, 1H), 3.65 -3.41 (m, 3H), 3.27 (br d,J =6.4 Hz, 1H), 3.17 - 2.95 (m, 4H), 2.90 (br dd,J =10.0, 12.4 Hz, 1H), 2.83 - 2.47 (m, 8H), 2.41 (s, 3H), 2.38 - 2.23 (m, 4H), 2.09 - 1.90 (m, 1H).

步驟E：2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 187 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(25.3 mg, 281 µmol, 1.5eq )之乙酸乙酯(2.0 mL)溶液添加T3P (477 mg, 749 µmol, 446 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 4.0eq )及TEA (114 mg, 1.12 mmol, 156 µL, 6.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38% - 68%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-2-[[(2S ,4R )-4-氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(8 mg, 12.8 umol, 7%產率, 96.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 606。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.03 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.42 (dd,J =6.4 Hz,J =47.2 Hz 1H), 5.31 - 5.05 (m, 2H), 5.04 -3.76 (m, 9H), 3.65 -3.47 (m, 3H), 3.42 -3.25 (m, 1H), 3.20 - 2.70 (m, 6H) 2.70 - 2.55 (m, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.38 - 2.25 (m, 4H), 2.10 - 1.87 (m, 1H).
實例607

2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(6-甲基異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於甲苯(5 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(250 mg, 530 µmol, 1.0eq )、4-溴-6-甲基-異喹啉(235 mg, 1.06 mmol, 2.0eq )、RuPhos (98.9 mg, 212 µmol, 0.4eq )、Pd₂ (dba)₃ (97.1 mg, 106 umol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (432 mg, 1.33 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物8小時。以水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(230 mg, 349 µmol, 66%產率, 93%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 613。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(50 mg, 81.6 µmol, 1.0eq )之二噁烷(400 µL)溶液添加HCl/二噁烷(4 M, 408 uL)。在25°C下攪拌該混合物0.3小時。將該混合物真空濃縮且用水(10 mL)稀釋。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 8，且用二氯甲烷(3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 28% - 58%, 1 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(19 mg, 37 µmol, 45%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 513。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.94 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.92 - 7.83 (m, 2H), 7.45 (dd,J =1.2, 8.4 Hz, 1H), 4.40 (dd,J =4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.29 (s, 2H), 4.17 (dd,J =6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.03 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 3.86 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.42 (br t,J =5.2 Hz, 2H), 3.33 -3.22 (m, 1H), 3.17 - 2.80 (m, 7H), 2.72 - 2.63 (m, 1H), 2.61 - 2.52 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 2.33 - 2.23 (m, 1H), 2.11 - 2.06 (m, 1H), 1.89 - 1.68 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 195 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(35.1 mg, 390 umol, 2.0eq )之乙酸乙酯(2 mL)溶液添加T3P (372 mg, 585 µmol, 348 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 3.0eq )及TEA (158 mg, 1.56 mmol, 217 µL, 8.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38% - 62%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(6-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(11 mg, 18.6 µmol, 9%產率, 98.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 585。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.96 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.93 - 7.85 (m, 2H), 7.46 (dd,J =1.2, 8.4 Hz, 1H), 5.49 - 5.36 (m, 1H), 5.26 (dd,J =3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.88 (br s, 1H), 4.50 - 4.29 (m, 3H), 4.27 -3.96 (m, 4H), 3.61 -3.30 (m, 4H), 3.22 -3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.77 (m, 4H), 2.75 - 2.65 (m, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.49 (s, 3H), 2.31 - 2.29 (m, 1H), 2.15 - 1.97 (m, 1H), 1.80 - 1.77 (m, 3H).
實例608

2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S)-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯。向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(240 mg, 508.91 µmol, 1eq )、t-BuONa (146.72 mg, 1.53 mmol, 3eq )、RuPhos (47.50 mg, 101.78 umol, 0.2eq )及RuPhos Pd G3 (85.13 mg, 101.78 µmol, 0.2eq )之甲苯(5 mL)溶液添加1-溴-8-乙基-萘(239.31 mg, 1.02 mmol, 2eq )。在90°C下攪拌該混合物12小時。將該混合物添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。將有機層經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟HPLC (C18, 0.1 % FA於水中, 0-45 % MeCN)純化。得到呈黃色固體之產物(2S)-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(113 mg, 180.57 µmol, 35.48%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]:626。

步驟B：2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在25°C下向(2S)-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸第三丁酯(103 mg, 164.59 µmol, 1eq )之DCM (2 mL)溶液添加TFA (2 mL)。在25°C下攪拌該反應混合物0.5小時。在25°C下藉由添加飽和NaHCO₃ 水溶液使該反應混合物淬滅直至pH = 8，接著用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮。得到呈白色固體之2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(81 mg，粗製)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.19 - 7.14 (m, 1H), 4.36 - 4.26 (m, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 2H), 4.00 -3.62 (m, 3H), 3.56 - 2.73 (m, 11H), 2.65 - 2.34 (m, 7H), 2.26 - 2.14 (m, 1H), 2.02 - 1.88 (m, 1H), 1.82 - 1.62 (m, 4H), 1.13 - 1.02 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在-40°C下向2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(61 mg, 116.04 µmol, 1eq )及2-氟丙-2-烯酸(20.90 mg, 232.08 µmol, 2eq )之DMF (10 mL)溶液添加TEA (281.81 mg, 2.78 mmol, 387.63 µL, 24eq )及T3P (332.29 mg, 1.04 mmol, 310.55 uL, 9eq )。在添加之後，在0°C下攪拌該混合物2小時。以水(3×20 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3×20 mL)稀釋。有機層係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 55%-85%, 10分鐘)純化。以水(3×20 mL)稀釋該混合物，且用乙酸乙酯(3×20 mL)稀釋。有機層係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮，以得到呈黃色固體之2-[(2S)-4-[7-(8-乙基-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫- 5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(7 mg, 11.63 µmol, 10.02%產率, 99.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]:598。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.67 - 7.54 (m, 2H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.20 (m, 1H), 7.15 (s, 1H), 5.45 - 5.24 (m, 1H), 5.23 - 5.12 (m, 1H), 4.95 - 4.58 (m, 1H), 4.33 - 4.25 (m, 1H), 4.25 -3.63 (m, 6H), 3.57 -3.33 (m, 3H), 3.21 - 2.49 (m, 10H), 2.44 - 2.35 (m, 3H), 2.27 - 2.15 (m, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H), 1.82 - 1.66 (m, 3H), 1.13 - 1.04 (m, 3H).
實例609

2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 791 µmol, 1.0eq )、4-溴-6-氟-異喹啉(215 mg, 949 µmol, 1.2eq ), Cs₂ CO₃ (773 mg, 2.37 mmol, 3.0eq )及RuPhos (148 mg, 316 µmol, 0.4eq )之甲苯(10 mL)溶液添加Pd₂ (dba)₃ (145 mg, 158 µmol, 0.2eq )。使懸浮液在真空下脫氣且用N₂ 沖淨數次。在90°C於N₂ 下攪拌該混合物10小時。將該反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用固體的NaHCO₃ 鹼化，真空濃縮以移除MeCN，且用乙酸乙酯(2 × 40 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(140 mg, 204 µmol, 26%產率, 95%純度)。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向於MeOH (0.3 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30 mg, 46.1 µmol, 1.0eq )及NH₃ •MeOH (0.3 mL, 20%純度)混合物添加Pd/C (10 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1.5小時。將該反應混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 30%-60%,1分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(9.78 mg, 18.9 µmol, 41%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 517。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.00 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.02 (dd,J =5.6, 9.2 Hz, 1H), 7.74 (dd,J =2.4, 10.4 Hz, 1H), 7.39 (dt,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.41 (dd,J =4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.28 (s, 2H), 4.18 (dd,J =6.8, 10.4 Hz, 1H), 4.02 (br d,J =12.4 Hz, 1H), 3.91 -3.82 (m, 1H), 3.47 -3.35 (m, 2H), 3.33 -3.24 (m, 1H), 3.18 -3.07 (m, 3H), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.93 (dd,J =9.6, 12.8 Hz, 1H), 2.85 (br s, 2H), 2.73 - 2.64 (m, 1H), 2.56 (dd,J =2.4, 6.4 Hz, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.34 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.00 (m, 1H), 1.91 - 1.76 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向於乙酸乙酯(1.5 mL)及DMF (1 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 155 µmol, 1.0eq )、2-氟丙-2-烯酸(41.8 mg, 464 µmol, 3.0eq )及TEA (235 mg, 2.32 mmol, 323 uL, 15eq )混合物添加T3P (493 mg, 774 µmol, 460 uL, 50%純度, 5.0eq )，在25°C下攪拌該混合物1小時。添加水(10 mL)至該混合物內。將該混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀釋且用乙酸乙酯(2 × 5 mL)萃取。將合併的有機層經無水Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 40% - 70%,1分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(6-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(17.4 mg, 29.3 µmol, 19%產率, 99.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 589。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.01 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.03 (dd,J =5.6, 8.8 Hz, 1H), 7.73 (dd,J =2.4, 10.4 Hz, 1H), 7.40 (dt,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 5.52 - 5.35 (m, 1H), 5.27 (dd,J =3.6, 17.2 Hz, 1H), 5.02 - 4.62 (m, 1H), 4.46 - 4.38 (m, 1H), 4.36 - 4.25 (m, 2H), 4.24 - 4.07 (m, 3H), 4.02 (br d,J =13.2 Hz, 1H), 3.62 -3.29 (m, 4H), 3.13 (br s, 2H), 3.03 - 2.93 (m, 2H), 2.91 - 2.77 (m, 2H), 2.72 (br s, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.32 (br d,J =8.4 Hz, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.92 - 1.70 (m, 3H).
實例610

(S )-2-(1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：4-羥基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。向於n-BuOH (30.0 mL)中之3-側氧基哌啶-1,4-二甲酸O 1-第三丁基O 4-乙酯(5.00 g, 18.4 mmol, 1.00 eq)混合物分批添加乙酸甲脒(9.59 g, 92.2 mmol, 5.00 eq)。在120°C下攪拌該混合物12小時。將該混合物濃縮以移除溶劑。將殘餘物添加水(30.0 mL)且過濾。將沉澱物以水(30.0 mL)洗滌且濃縮。粗產物不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈褐色固體之化合物4-羥基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(4.10 g, 16.1 mmol, 87%產率, 98.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 196。

步驟B：4-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向於DCE (60.0 mL)中之4-羥基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(3.30 g, 13.1 mmol, 1.00 eq)混合物分批添加PPh₃ (6.89 g, 26.3 mmol, 2.00 eq)、CCl₄ (6.06 g, 39.4 mmol, 3.79 mL, 3.00 eq)。在70°C下攪拌該混合物3小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=20/1至1/1)純化。得到呈黃色固體之化合物4-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(2.54 g, 9.42 mmol, 72%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 214。

步驟C：4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯：於N₂ 下向於DMAc (30.0 mL)中之4-氯-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.30 g, 4.82 mmol, 1.00 eq)及(2S )-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(1.00 g, 3.86 mmol, 0.80 eq)混合物添加DIEA (3.11 g, 24.1 mmol, 4.20 mL, 5.00 eq)。在100°C下攪拌該混合物2小時。用乙酸乙酯(100 mL)稀釋該反應混合物。將有機層以水(30 mL × 2)及鹽水(30 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯=20/1至0/1)純化。得到呈白色固體之化合物4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.18 g, 2.30 mmol, 48%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 493。

步驟D：(2S )-2-(氰基甲基)-4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4 -d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯：在25°C於N₂ 下向於乙腈(10.0 mL)中之4-[(3S )-4-苯甲氧基羰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-7-甲酸第三丁酯(1.20 g, 2.44 mmol, 1.00 eq)混合物分批添加HCl/二噁烷(4.00 M, 12.2 mL, 20.0 eq)。在25°C下攪拌該混合物30分鐘。將反應混合物於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。該粗產物係不經進一步純化即直接用於下個步驟中。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4 -d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(883 mg, 2.16 mmol, 89%產率, 96%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 393。

步驟E：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯：於N₂ 下向於甲苯(15.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 764 µmol, 1.00 eq)及1-溴萘(317 mg, 1.53 mmol, 212 uL, 2.00 eq)混合物分批添加Pd₂ (dba)₃ (140 mg, 153 µmol, 0.20 eq)、RuPhos (143 mg, 306 µmol, 0.40 eq) Cs₂ CO₃ (747 mg, 2.29 mmol, 3.00 eq)。在90°C下攪拌該混合物5小時。以水(10.0 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(5.00 mL)中和，且用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸酯(150 mg, 289 µmol, 38%產率)。

步驟F：2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(1-萘)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50.0 mg, 96.4 µmol, 1.00 eq)之MeOH (3.00 mL)溶液添加Pd/C (30.0 mg, 10%純度)、NH₃ •MeOH (0.50 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35% - 59%, 10 分鐘)純化。得到呈灰白色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(8.63 mg, 22.4 µmol, 23%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 385。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.63 (s, 1H), 8.26 - 8.19 (m, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.62 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 7.45 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.17 (d,J =7.2 Hz, 1H), 4.35 (s, 2H), 3.99 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 3.83 (br d,J =12.8 Hz, 1H), 3.53 -3.23 (m, 3H), 3.20 -3.07 (m, 2H), 3.07 - 2.90 (m, 4H), 2.63 - 2.49 (m, 2H).

步驟G：在0°C於N₂ 下向於乙酸乙酯(0.60 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60.0 mg, 156 µmol, 1.00 eq)混合物分批添加2-氟丙-2-烯酸(56.2 mg, 624 µmol, 4.00 eq)、TEA (253 mg, 2.50 mmol, 348 uL, 16.0 eq)及T3P (596 mg, 936 µmol, 557 uL, 50%純度, 6.00 eq)。在25°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下藉由添加水(1.00 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(5.00 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(15.2 mg, 32.8 µmol, 21%產率, 98.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 457。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.67 (s, 1H), 8.26 - 8.18 (m, 1H), 7.91 - 7.84 (m, 1H), 7.63 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.56 - 7.49 (m, 2H), 7.45 (t,J =7.6 Hz, 1H), 7.18 (d,J =6.8 Hz, 1H), 5.54 - 5.34 (m, 1H), 5.27 (dd,J =4.0, 17.2 Hz, 1H), 4.91 (br s, 1H), 4.46 - 4.29 (m, 2H), 4.14 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 3.99 (br d,J =13.2 Hz, 1H), 3.63 -3.32 (m, 4H), 3.16 (br t,J =11.2 Hz, 2H), 2.99 (br dd,J =8.0, 16.4 Hz, 3H), 2.90 - 2.77 (m, 1H).
實例611

(S )-2-(1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向於甲苯(8.00 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 255 µmol, 1.00 eq)及1-溴-8-甲基-萘(113 mg, 510 µmol, 10.6 uL, 2.00 eq)混合物一次添加Pd₂ (dba)₃ (46.7 mg, 51.0 µmol, 0.20 eq)、RuPhos (47.6 mg, 102 µmol, 0.40 eq) Cs₂ CO₃ (249 mg, 764 µmol, 3.00 eq)。在90°C下攪拌該混合物5小時。以水(10.0 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(5.00 mL)中和，且用乙酸乙酯(50.0 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg，粗製)。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50.0 mg, 93.9 µmol, 1.00 eq)之甲醇(1.00 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (93.9 µmol, 0.2 mL, 20%純度, 1.00 eq)、Pd/C (15.0 mg, 10%純度)。使懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 38%-62%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(6.13 mg, 15.3 µmol, 16%產率, 99.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 399。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.61 (d,J =4.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.63 (m, 2H), 7.41 (dt,J =2.8, 7.6 Hz, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.27 - 7.22 (m, 2H), 4.32 (br d,J =18.0 Hz, 1H), 4.07 -3.92 (m, 1H), 3.92 -3.86 (m, 1H), 3.86 -3.67 (m, 1H), 3.56 -3.48 (m, 1H), 3.30 -3.24 (m, 1H), 3.24 -3.18 (m, 1H), 3.18 - 2.96 (m, 4H), 2.94 (d,J =2.4 Hz, 3H), 2.92 (br s, 1H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.69 - 2.59 (m, 1H), 2.57 - 2.53 (m, 2H).

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈：在0°C於N₂ 下向於乙酸乙酯(1.00 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60.0 mg, 151 µmol, 1.00 eq)混合物分批添加2-氟丙-2-烯酸(54.2 mg, 602 µmol, 4.00 eq)、TEA (244 mg, 2.41 mmol, 335 uL, 16.0 eq)及T3P (575 mg, 903 µmol, 537 uL, 50%純度, 6.00 eq)。在25°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下藉由添加水(1.00 mL)使該反應混合物淬滅，接著用乙酸乙酯(10 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(5 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 40%-70%, 10 分鐘)純化。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(8.97 mg, 18.7 µmol, 12%產率, 98.2%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 492。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.64 (d,J =7.2 Hz, 1H), 7.74 - 7.64 (m, 2H), 7.47 - 7.39 (m, 1H), 7.39 - 7.32 (m, 1H), 7.29 (br d,J =1.2 Hz, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 1H), 5.53 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd,J =3.6, 17.2 Hz, 1H), 4.87 (br s, 1H), 4.33 (br dd,J =14.8, 18.0 Hz, 1H), 4.19 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 4.12 -3.97 (m, 2H), 3.95 -3.84 (m, 1H), 3.61 -3.42 (m, 2H), 3.27 -3.04 (m, 4H), 2.92 (d,J =2.4 Hz, 3H), 2.89 - 2.62 (m, 3H).
實例612

(S )-2-(4-(7-(5-氯異喹啉-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6, 8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。於N₂ 下向於甲苯(15.0 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 764 µmol, 1.00 eq)及4-溴-5-氯-異喹啉(371 mg, 1.53 mmol, 10.6 µL, 2.00 eq)混合物分批添加Pd₂ (dba)₃ (140 mg, 153 µmol, 0.20 eq)、RuPhos (143 mg, 306 µmol, 0.40 eq)、Cs₂ CO₃ (747 mg, 2.29 mmol, 3.00 eq)。將該混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，並在90°C下攪拌5小時。以水(10.0 mL)稀釋該反應混合物，且用乙酸乙酯(20.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(20.0 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和NaHCO₃ 溶液(5 mL)中和，且用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之化合物(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6, 8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 223 µmol, 29%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 554。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)- 6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30.0 mg, 54.2 µmol, 1.00 eq)之甲醇(3.00 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (0.50 mL, 20%純度)、Pd/C (35.0 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾且於減壓環境下濃縮已得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 22%-46%, 10 分鐘)純化。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(8.51 mg, 20.1 µmol, 37%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 420。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.02 (s, 1H), 8.60 (d,J =4.4 Hz, 1H), 8.35 (d,J =1.6 Hz, 1H), 7.91 (dd,J =1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.75 (dd,J =1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.50 (t,J =7.6 Hz, 1H), 4.54 (br d,J =17.2 Hz, 1H), 4.06 -3.61 (m, 4H), 3.41 -3.08 (m, 5H), 3.07 - 2.85 (m, 2H), 2.72 - 2.59 (m, 1H), 2.58 - 2.49 (m, 2H).

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C於N₂ 下向於乙酸乙酯(0.80 mL)中之2-[(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(60.0 mg, 143 µmol, 1.00 eq)混合物分批添加2-氟丙-2-烯酸(25.7 mg, 286 µmol, 2.00 eq)、TEA (86.8 mg, 857 µmol, 119 uL, 6.00 eq)及T3P (273 mg, 429 µmol, 255 uL, 50%純度, 3.00 eq)。在25°C下攪拌該混合物30分鐘。在0°C下藉由添加水(1.00 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(10.0 mL × 3)萃取。合併的有機層係以鹽水(5.00 mL × 1)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 × 25 5 u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 22%-52%, 10 分鐘)純化。得到呈黃色固體之化合物2-[(2S )-4-[7-(5-氯-4-異喹啉基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(7.88 mg, 16.0 µmol, 11%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 492。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.04 (d,J =3.6 Hz, 1H), 8.65 (d,J =6.4 Hz, 1H), 8.35 (d,J =11.6 Hz, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 1H), 7.76 (dd,J =1.2, 7.2 Hz, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.26 (dd,J =3.2, 16.8 Hz, 1H), 5.03 - 4.70 (m, 1H), 4.55 (br dd,J =6.4, 18.0 Hz, 1H), 4.23 -3.84 (m, 4H), 3.69 (br d,J =6.4 Hz, 1H), 3.50 (br d,J =13.6 Hz, 1H), 3.35 -3.19 (m, 3H), 3.16 -3.00 (m, 1H), 2.97 - 2.61 (m, 3H).
實例613

2-((S )-4-(2-(((S )-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(100 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基氫硫基-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(5.0 g, 11.4 mmol, 1.0eq )、4-溴-5,6-二甲基-1-四氫哌喃-2-基-吲唑(7.05 g, 22.8 mmol, 2.0eq )、Pd₂ (dba)₃ (2.09 g, 2.28 mmol, 0.2eq )、RuPhos (2.13 g, 4.56 mmol, 0.4eq )及Cs₂ CO₃ (9.29 g, 28.5 mmol, 2.5eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次，接著在90°C於N₂ 環境下攪拌該混合物8小時。以水(100 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 20/1至2/1)純化，且進一步藉由[水(0.1%甲酸)/乙腈)]純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 7，且用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(4.90 g, 7.20 mmol, 63%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 667。

步驟B：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基氫硫基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 749 µmol, 1.0eq )之甲苯(10 mL)溶液添加m -CPBA (152 mg, 749 µmol, 85%純度, 1.0eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。用水(10 mL)稀釋該混合物，且用飽和NaHCO₃ 水溶液調整至 pH ~ 7。接著用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到產物。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 539 µmol, 72%產率, 92%純度)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 683。

步驟C：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(900 mg, 1.32 mmol, 1.0eq )之甲苯(20 mL)溶液添加t -BuONa (379 mg, 3.95 mmol, 3.0eq )及[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲醇(398 mg, 2.64 mmol, 2.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(30 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(630 mg, 793 µmol, 60%產率, 97%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 770。

步驟D：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(400 mg, 519 µmol, 1.0eq )之甲醇(2 mL)溶液添加無水Pd/C (50 mg, 10%純度)及NH₃ /甲醇(1 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(330 mg, 519 µmol, 99%產率)，且其不經純化即直接用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 636。

步驟E：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1-四氫吡喃-2-基-吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(50 mg, 78.6 µmol, 1.0eq )之二氯甲烷(50 uL)溶液添加TFA (359 mg, 3.15 mmol, 233 µL, 40eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮且用水(10 mL)稀釋。用飽和NaHCO₃ 水溶液調整該混合物至pH ~ 8，且用二氯甲烷(3 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮而得到產物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 30% - 60%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7.29 mg, 13.2 µmol, 17%產率, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 552。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.95 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 4.48 (dd,J =4.4, 10.8 Hz, 1H), 4.33 - 4.19 (m, 3H), 4.00 (br d,J =11.6 Hz, 1H), 3.83 (br d,J =11.6 Hz, 1H), 3.51 (t,J =5.2 Hz, 2H), 3.42 (dt,J =5.6, 11.7 Hz, 1H), 3.26 (br s, 1H), 3.17 - 2.95 (m, 4H), 2.94 - 2.85 (m, 1H), 2.84 - 2.62 (m, 3H), 2.61 - 2.49 (m, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.32 - 2.18 (m, 1H).

步驟F：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 181 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(24.5 mg, 272 µmol, 1.5eq )之DMF (2 mL)溶液添加T3P (461 mg, 725 µmol, 431 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 4.0eq )及TEA (147 mg, 1.45 mmol, 202 uL, 8.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 ×30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 38% - 68%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈灰白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(11 mg, 17.5 µmol, 10%產率, 99.2%純度, 100% ee)。LCMS [ESI, M+1]: 624。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.27 - 9.49 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 5.55 - 5.34 (m, 1H), 5.26 (dd,J =3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (br s, 1H), 4.46 (dd,J =4.8, 10.8 Hz, 1H), 4.34 -3.88 (m, 6H), 3.66 -3.25 (m, 5H), 3.19 - 2.62 (m, 7H), 2.60 - 2.45 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 2.32 - 2.19 (m, 1H).
實例614

2-((S )-4-(2-(((S )-4,4-二氟-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)-1-((E )-4-氟丁-2-烯醯基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 181 µmol, 1.0eq )及(E )-4-氟丁-2-烯酸(28.3 mg, 272 µmol, 1.5eq )之DMF (2 mL)溶液添加T3P (461 mg, 725 µmol, 431 uL, 50%純度於乙酸乙酯中, 4.0eq )及TEA (147 mg, 1.45 mmol, 202 uL, 8.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 40% - 70%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S )-4,4-二氟-1-甲基-吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(5,6-二甲基-1H -吲唑-4-基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-[(E )-4-氟丁-2-烯醯基]哌嗪-2-基]乙腈(12 mg, 18.3 µmol, 10%產率, 97.3%純度, 95% ee)。LCMS [ESI, M+1]: 638。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 10.06 (br s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.07 - 6.97 (m, 1H), 6.61 (br d,J =14.8 Hz, 1H), 5.20 – 5.07 (m, 3H), 4.48 (dd,J =4.8, 11.2 Hz, 1H), 4.31 - 4.27 (m, 3H), 4.20 -3.80 (m, 3H), 3.55 (br t,J =5.2 Hz, 3H), 3.49 -3.27 (m, 2H), 3.13 (br s, 1H), 3.05 - 2.63 (m, 6H), 2.62 - 2.46 (m, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 1H).
實例615

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲醇(217 mg, 1.51 mmol, 68.2 µL, 3eq )及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 504 µmol, 1eq )之甲苯(15 mL)溶液添加t -BuONa (145 mg, 1.51 mmol, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(10 mL)使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 50 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA) /乙腈]純化。收集所要分餾物，以飽和Na₂ CO₃ 溶液(10 mL)中和，且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。分離出的有機層係經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(180 mg, 267 µmol, 53%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 675。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.73 - 7.60 (m, 2H), 7.27 (s, 9H), 5.21 (s, 2H), 4.68 (br s, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 1H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 4.13 - 4.04 (m, 1H), 3.95 -3.69 (m, 2H), 3.56 -3.34 (m, 2H), 3.28 - 2.48 (m, 13H), 2.47 - 2.33 (m, 3H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 1.88 (br dd,J =8.4, 12.6 Hz, 1H), 1.56 (ddd,J =4.6, 7.8, 12.6 Hz, 1H), 1.16 (d,J =4.0 Hz, 3H), 1.10 - 0.98 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 193 µmol, 1eq )之MeOH (4 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (2 mL, 15%純度)及Pd/C (26 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 159 µmol, 85.9%純度)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。LCMS [ESI, M+1]: 540。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90 mg, 143 µmol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(38.7 mg, 430 µmol, 3eq )及Et₃ N (130 mg, 1.29 mmol, 179 uL, 9eq )之乙酸乙酯(15 mL)溶液添加T3P (365 mg, 573 µmol, 341 uL, 50%純度於乙酸乙酯中, 4eq )。在0°C下攪拌該混合物1小時。在完成時，將該混合物用水(3 mL)稀釋。將有機層分離，用鹽水(1 × 10 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。該混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇 = 20/1至10/1)純化。將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 62% - 89%, 10分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-[[(2S )-1,4,4-三甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(12.7 mg, 20.6 µmol, 99.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 612。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.79 - 7.56 (m, 2H), 7.51 - 7.31 (m, 2H), 7.27 - 7.08 (m, 2H), 5.65 - 5.08 (m, 2H), 4.85 (br s, 1H), 4.49 - 4.32 (m, 1H), 4.30 -3.96 (m, 4H), 3.95 -3.71 (m, 1H), 3.59 -3.35 (m, 2H), 3.28 - 2.54 (m, 13H), 2.42 (br s, 3H), 2.16 (br d,J =8.8 Hz, 1H), 1.96 - 1.81 (m, 1H), 1.63 - 1.45 (m, 1H), 1.15 (br s, 3H), 1.06 (br s, 3H).
實例616

2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在0°C下向[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲醇(326 mg, 2.52 mmol, 68.2 uL, 3eq )及(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(8-甲基-1-萘基)-2-甲基亞磺醯基-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(500 mg, 841 µmol, 1eq )之甲苯(20 mL)溶液添加t -BuONa (242 mg, 2.52 mmol, 3eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(10 mL)使該混合物淬滅，且用乙酸乙酯(2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且真空濃縮。殘餘物係藉由逆相HPLC (0.1% FA條件)純化。用飽和NaHCO₃ 水溶液將殘餘物鹼化且調整至pH = 8，且用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。有機層係經分離，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(328 mg, 461 µmol, 55%產率, 92.7%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 661。

步驟B：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(100 mg, 151 µmol, 1eq )之MeOH (4 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (2 mL, 20%純度)及Pd/C (20 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由prep - HPLC (管柱：Phenomenex Synergi C18 150 * 30mm * 4um; 移動相：[水(0.225% FA)- ACN]; B%: 13% - 43%, 10分鐘)純化。之後將該殘餘物藉由prep - HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 55% - 85%, 10分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(13.9 mg, 26.4 µmol, 17%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 526。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.69 (d,J =8.2 Hz, 1H), 7.64 (dd,J =2.6, 7.6 Hz, 1H), 7.40 (dt,J =4.0, 7.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.43 (dt,J =4.8, 10.2 Hz, 1H), 4.28 - 4.11 (m, 2H), 4.07 -3.70 (m, 3H), 3.48 (br d,J =11.8 Hz, 1H), 3.38 - 2.82 (m, 11H), 2.80 - 2.64 (m, 2H), 2.61 - 2.53 (m, 3H), 2.49 (t,J =8.6 Hz, 1H), 2.42 (d,J =2.4 Hz, 3H), 2.35 - 2.15 (m, 2H), 1.39 - 1.25 (m, 1H), 1.08 (d,J =6.8 Hz, 3H).

步驟C：2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(100 mg, 190 µmol, 1eq )、2-氟丙-2-烯酸(51.4 mg, 571 µmol, 3eq )及Et₃ N (173 mg, 1.71 mmol, 238 uL, 9eq )之DMF (10 mL)溶液添加T3P (484 mg, 761 µmol, 452 uL, 50%純度, 4eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，用水(10 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(2 × 20 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(1 × 20 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。該混合物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 二氯甲烷/甲醇 = 10/1)純化。之後，將殘餘物藉由prep - HPLC (管柱：Xtimate C18 150 * 25mm * 5um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v / v)- ACN]; B%: 60% - 90%, 10分鐘)純化。將殘餘物於減壓環境下濃縮以移除ACN，接著凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[2-[[(2S ,4S )-1,4-二甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-7-(8-甲基-1-萘基)-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(22.2 mg, 37.1 µmol, 19%產率, 99.8%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 598。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.37 - 7.31 (m, 1H), 7.26 - 7.17 (m, 2H), 5.53 - 5.32 (m, 1H), 5.26 (dd,J =3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.86 (br s, 1H), 4.48 - 4.35 (m, 1H), 4.30 -3.99 (m, 4H), 3.95 -3.73 (m, 1H), 3.60 -3.39 (m, 2H), 3.29 - 2.94 (m, 5H), 2.93 - 2.67 (m, 7H), 2.66 - 2.56 (m, 1H), 2.55 - 2.47 (m, 1H), 2.43 (d,J =4.6 Hz, 3H), 2.35 - 2.13 (m, 2H), 1.36 - 1.25 (m, 1H), 1.09 (dd,J =3.0, 6.8 Hz, 3H).
實例617

2-((S )-1-(2-氟丙烯醯基)-4-(7-(3-甲基異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈

步驟A：(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於二噁烷(6 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 593 µmol, 1.0eq )、4-溴-3-甲基-異喹啉(198 mg, 890 µmol, 1.5eq )、Cs₂ CO₃ (483 mg, 1.48 mmol, 2.5eq )、BINAP-Pd-G3 (118 mg, 119 µmol, 0.2eq )混合物脫氣且用N₂ 沖淨3次。在110°C下加熱該混合物12小時。用水(20 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯 /甲醇=100/1至10:1)純化。得到呈黃色固體之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(200 mg, 303 µmol, 51%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 647。

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(50 mg, 77.3 µmol, 1.0eq )之甲醇(2 mL)溶液添加無水Pd/C (10 mg, 10%純度)及NH₃ /MeOH (1 mL, 20%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物0.5小時。將該混合物真空濃縮。殘餘物係藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 30% - 60%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(7.81 mg, 14.9 µmol, 19%產率, 98.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 513。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.07 (s, 1H), 8.14 (d,J =8.4 Hz, 1H), 7.97 (d,J =8.0 Hz, 1H), 7.65 (dt,J =1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.58 - 7.47 (m, 1H), 4.41 (br dd,J =4.8, 10.4 Hz, 1H), 4.3 (s, 2H), 4.16 (dd,J =6.8, 10.8 Hz, 1H), 4.10 -3.93 (m, 1H), 3.91 -3.77 (m, 1H), 3.57 -3.37 (m, 2H), 3.36 -3.21 (m, 1H), 3.18 - 2.85 (m, 6H), 2.75 - 2.61 (m, 5H), 2.56 (br d,J =6.8 Hz, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.33 - 2.22 (m, 1H), 2.12 - 1.98 (m, 1H), 1.94 - 1.80 (m, 3H).

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(80 mg, 156 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(28.1 mg, 312 µmol, 2.0eq )之DMF (2 mL)溶液添加T3P (297 mg, 468 µmol, 278 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 3.0eq )及TEA (126 mg, 1.25 mmol, 173 µL, 8.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物且用水(3 × 20 mL)洗滌。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150 * 25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35% - 65%, 10分鐘)純化。將所要分餾物且凍乾。得到呈黃色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(3-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(12 mg, 19.9 µmol, 13%產率, 97.4%純度, 100% ee)。LCMS [ESI, M+1]: 585。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 9.08 (s, 1H), 8.26 - 8.04 (m, 1H), 7.97 (br d,J =7.6 Hz, 1H), 7.73 - 7.60 (m, 1H), 7.58 - 7.49 (m, 1H), 5.42 (d,J =47.6 Hz, 1H), 5.27 (dd,J =3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.85 (br s, 1H), 4.45 -3.92 (m, 7H), 3.83 -3.25 (m, 4H), 3.22 - 2.59 (m, 10H), 2.49 (s, 3H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
實例618

(S )-2-(氰基甲基)-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯

步驟A：(S )-2-(氰基甲基)-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。在25°C下向(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 0.59 mmol, 1.0 eq)之甲苯(10.0 mL)溶液添加4-溴-7-氟-異喹啉(268 mg, 1.19 mmol, 2.0 eq)、RuPhos (111 mg, 237 µmol, 0.40 eq)、Cs₂ CO₃ (483 mg, 1.48 mmol, 2.5 eq)及Pd₂ (dba)₃ (109 mg, 118 µmol, 0.20 eq)，在90°C下攪拌該混合物16小時。用水(5.0 mL)稀釋該反應混合物且用乙酸乙酯(3 × 5.0 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(3 × 5.0 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ , 石油醚/乙酸乙酯= 1/1至石油醚/乙酸乙酯/EtOH (2% NH₃ H₂ O) = 4/3/1)純化。接著將粗產物藉由逆相HPLC (0.1% FA條件)純化。收集所要分餾物且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(S )-2-(氰基甲基)-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(105 mg, 160 µmol, 27%產率, 99%純度)。LCMS [M+1]: 651。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿 -d ) δ = 2.04 - 2.08 (m, 4 H), 2.69 (d,J =5.64 Hz, 1 H), 2.73 (d,J =5.52 Hz, 1 H), 2.81 - 2.85 (m, 3 H), 2.87 -3.02 (m, 3 H), 3.09 -3.19 (m, 1 H), 3.32 -3.45 (m, 3 H), 3.45 -3.55 (m, 1 H), 3.57 -3.68 (m, 1 H), 3.99 (br d,J =12.52 Hz, 1 H), 4.09 - 4.17 (m, 1 H), 4.28 - 4.34 (m, 1 H), 4.31 (m, 1 H), 4.46 (dd,J =11.84, 4.31 Hz, 1 H), 4.63 - 4.74 (m, 1 H), 4.80 (br dd,J =11.32, 6.82 Hz, 1 H), 5.20 - 5.23 (m, 2H), 5.30 - 5.32 (m, 2 H), 7.35 - 7.42 (m, 5 H), 7.47 - 7.53 (m, 1 H), 7.60 (dd,J =8.68, 2.56 Hz, 1 H), 8.16 (dd,J =9.24, 5.25 Hz, 1 H), 8.22 - 8.25 (m, 1 H), 8.95 - 9.00 (m, 1 H).

步驟B：2-((S )-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈。於N₂ 下向(S )-2-(氰基甲基)-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(30.0 mg, 46.1 µmol, 1.0 eq)之MeOH (1.0 mL)溶液添加NH₃ /MeOH (46.1 µmol, 1.5 mL, 15%純度, 1.0 eq)及Pd/C (20.0 mg, 46.1 µmol, 10%純度, 1.0 eq)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ (93.1 ug, 46.1 µmol, 1.0 eq)沖淨數次。在25°C於H₂ (15 psi)下攪拌該混合物1小時。將該反應混合物過濾通過矽藻土，且用MeOH (20 mL)洗滌。在45°C下將濾液於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。將殘餘物藉由prep-HPLC (鹼性條件) (管柱：Xtimate C18 150*25 mm*5 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 43%-73%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈黃色固體之2-((S )-4-(7-(7-氟異喹啉-4-基)-2-(((S )-1-甲基吡咯啶-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(7 mg, 13.3 µmol, 28.8%產率, 98%純度)。LCMS [M+1]: 517。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 1.75 - 1.90 (m, 3 H), 1.99 - 2.13 (m, 1 H), 2.24 - 2.34 (m, 1 H), 2.45 - 2.51 (m, 3 H), 2.53 - 2.58 (m, 2 H), 2.64 - 2.74 (m, 1 H), 2.80 - 2.88 (m, 2 H), 2.89 - 2.96 (m, 1 H), 2.97 -3.06 (m, 1 H), 3.07 -3.18 (m, 3 H), 3.22 -3.33 (m, 1 H), 3.38 -3.48 (m, 2 H), 3.82 -3.89 (m, 1 H), 4.03 (br d,J =12.36 Hz, 1 H), 4.18 (dd,J =10.56, 6.69 Hz, 1 H), 4.30 (s, 2 H), 4.40 (dd,J = 10.64, 4.75 Hz, 1 H), 7.49 (ddd,J =9.16, 8.35, 2.63 Hz, 1 H), 7.60 (dd,J =8.76, 2.50 Hz, 1 H), 8.17 (dd,J = 9.24, 5.38 Hz, 1 H), 8.24 (s, 1 H), 8.96 (s, 1 H).

步驟C：2-[(2S )-4-[7-(7-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-[(2S )-4-[7-(7-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(90.7 mg, 175 µmol, 1.0eq )及2-氟丙-2-烯酸(31.6 mg, 351 µmol, 2.0eq )之DMF (2 mL)溶液添加T3P (335 mg, 526 µmol, 313 µL, 50%純度於乙酸乙酯中, 3.0eq )及TEA (142 mg, 1.40 mmol, 195 µL, 8.0eq )。在0°C下攪拌該混合物0.5小時。用乙酸乙酯(20 mL)稀釋該反應混合物且用水(3 × 20 mL)洗滌。合併的有機層係以鹽水(20 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且於減壓環境下濃縮以得到殘餘物。殘餘物係藉由管柱層析法(SiO₂ ,乙酸乙酯/甲醇=100/1至10/1)純化，且進一步藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 mm*5 um; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)- ACN]; B%: 32% - 59%, 10 分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾。得到呈白色固體之2-[(2S )-4-[7-(7-氟-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-1-(2-氟丙-2-烯醯基)哌嗪-2-基]乙腈(8 mg, 13.4 µmol, 7.6%產率, 98.3%純度, 100% ee)。LCMS [M+1]: 589。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 8.97 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.16 (dd,J =5.2, 9.2 Hz, 1H), 7.60 (dd,J =2.4, 8.8 Hz, 1H), 7.54 - 7.40 (m, 1H), 5.55 - 5.33 (m, 1H), 5.27 (dd,J =3.6, 16.8 Hz, 1H), 4.87 (br s, 1H), 4.44 -3.94 (m, 7H), 3.72 -3.28 (m, 4H), 3.22 -3.06 (m, 2H), 3.04 - 2.93 (m, 2H), 2.93 - 2.74 (m, 2H), 2.72 - 2.66 (m, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.13 - 2.03 (m, 1H), 1.92 - 1.76 (m, 3H).
實例619

2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈

步驟A：(2S )-4-[7-(1-氯-5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯。將於甲苯(10 mL)中之(2S )-2-(氰基甲基)-4-[2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-5,6,7,8-四氫吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(300 mg, 593 µmol, 1.0eq )、4-溴-1-氯-5-甲基-異喹啉(198 mg, 771 µmol, 1.3eq )、Pd₂ (dba)₃ (109 mg, 119 µmol, 0.2eq )及Cs₂ CO₃ (483 mg, 1.48 mmol, 2.5eq )、XantPhos (137 mg, 237 µmol, 0.4eq )混合物脫氣且於N₂ 下加熱至95 °C持續10小時。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。殘餘物係藉由層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯2/1至0/1)純化，隨後藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。收集所要分餾物且用固體的NaHCO₃ 中和，真空濃縮以移除MeCN，且用乙酸乙酯(2 × 15 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮，以得到呈黃色固體之(2S )-4-[7-(1-氯-5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(150 mg, 209 µmol, 35%產率, 95%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 681。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 8.27 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.99 (m, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 5H), 5.25 - 5.17 (m, 2H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 4.41 - 4.32 (m, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 2H), 4.08 -3.88 (m, 2H), 3.83 (br d,J = 17.6 Hz, 1H), 3.61 -3.51 (m, 1H), 3.50 -3.36 (m, 1H), 3.31 - 2.94 (m, 6H), 2.91 (d,J = 2.4 Hz, 3H), 2.81 - 2.59 (m, 4H), 2.46 (d,J = 4.0 Hz, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.92 - 1.72 (m, 3H).

步驟B：2-[(2S )-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。於N₂ 下向(2S )-4-[7-(1-氯-5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-2-(氰基甲基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(130 mg, 191 µmol, 1eq )之MeOH (3 mL)溶液添加NH₃ •MeOH (2 mL, 20%純度)、Pd/C (65 mg, 10%純度)。使該懸浮液在真空下脫氣且用H₂ 沖淨數次。在25°C下攪拌該混合物2小時。在完成時，藉由過濾通過矽藻土插塞以移除催化劑。於減壓環境下將溶劑移除，以得到80 mg的粗產物。將20 mg的粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 28%-58%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈黃色固體之2-[(2S )-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(10.8 mg, 21.0 µmol, 44%產率, 99.9%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 513。

步驟C：2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈。在0°C下向2-氟丙-2-烯酸(24.6 mg, 273 µmol, 2.0eq )及DIEA (70.6 mg, 546 µmol, 95.1 µL, 4.0eq )之DCM (1.4 mL)溶液添加HATU (77.9 mg, 205 µmol, 1.5eq )。在0°C下攪拌20分鐘之後，將2-[(2S )-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(70 mg, 137 µmol, 1.0eq )添加至該混合物內。在25°C下攪拌該混合物40分鐘。在完成時，用水(2 mL)稀釋該混合物且用二氯甲烷(6 × 5 mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由層析法(Al₂ O₃ , 石油醚/乙酸乙酯1/1至乙酸乙酯/甲醇 10/1)純化，隨後藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u; 移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN]; B%: 35%-65%, 10分鐘)純化。收集所要分餾物且凍乾，以得到呈白色固體之2-[(2S )-1-(2-氟丙-2-烯醯基)-4-[7-(5-甲基-4-異喹啉基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]哌嗪-2-基]乙腈(20.6 mg, 34.3 µmol, 25%產率, 97.3%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 585。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 9.03 (d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.30 (d,J = 16.8 Hz, 1H), 7.83 (br d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.44 (m, 2H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 5.31 - 5.18 (m, 1H), 5.09 - 4.48 (m, 1H), 4.43 - 4.34 (m, 1H), 4.32 - 4.07 (m, 4H), 4.06 -3.81 (m, 2H), 3.64 -3.42 (m, 2H), 3.35 -3.26 (m, 1H), 3.25 - 2.96 (m, 4H), 2.92 (d,J = 2.8 Hz, 3H), 2.90 - 2.73 (m, 2H), 2.72 - 2.61 (m, 2H), 2.51 - 2.42 (m, 3H), 2.34 - 2.23 (m, 1H), 2.13 - 1.99 (m, 1H), 1.92 - 1.73 (m, 3H).
實例620

1-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮

步驟A：4-苯甲基-6-氟-1,4–二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。4-苯甲基-6-氟-1,4–二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。在0°C下將(3R)-4-苯甲基-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.5 g, 4.90 mmol, 1eq )之DCM (40 mL)溶液逐滴添加至DAST (3.95 g, 24.48 mmol, 3.23 mL, 5eq )，且在20°C下攪拌該混合物5小時。將該混合物添加飽和NaHCO₃ (30 mL)，且用乙酸乙酯(30 mL×2)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。殘餘物係藉由矽膠管柱層析法(PE: EA=20~5:1)純化，以得到呈黃色油狀物之4-苯甲基-6-氟-1,4–二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(980 mg, 3.18 mmol, 64.91%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 309。

步驟B：6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。將4-苯甲基-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(900.00 mg, 2.92 mmol, 1eq )及Pd/C (200 mg, 2.92 mmol, 10%純度, 1eq )及Pd(OH)₂ (179.92 mg, 1.28 mmol, 4.39e-1eq )之MeOH (20 mL)混合溶液在40°C於H₂ (50 psi)下攪拌12小時。將該混合物過濾且濃縮，以得到呈無色油狀物之6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(630 mg, 2.89 mmol, 98.90%產率)。

步驟C：三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯。在-40°C下向7-(8-氯-1-萘基)-2 -[[(2S)-1 –甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(700 mg, 1.65 mmol, 1eq )及TEA (500.09 mg, 4.94 mmol, 687.88 µL, 3eq )、4A分子篩(500 mg)之DCM (7 mL)溶液添加Tf₂ O (697.18 mg, 2.47 mmol, 407.71 µL, 1.5eq )，且在0°C下攪拌30分鐘。將該混合物添加水(2 mL)，且用DCM (5mL)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由矽膠管柱層析法(PE: EA=10~1:1)純化，以得到呈紅色油狀物之三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯(470 mg, 843.83 µmol, 51.22%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 557。

步驟D：4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8 -二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯。向三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯(440 mg, 789.97 µmol, 1eq )及6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(258.64 mg, 1.18mmol, 1.5eq )之DMAC (5 mL)溶液添加DIEA (306.29 mg, 2.37 mmol, 412.79 µL, 3eq )，且在25°C下攪拌該混合物30分鐘。將該混合物藉由逆相矽膠層析管柱( 0.001 FA)純化，以得到呈黃色固體之4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8 -二氫-5H-吡啶并[3,4-d ]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(260 mg, 415.88 µmol, 52.65%產率)。LCMS [ESI, M+1]: 625。

步驟E：7-(8-氯-1-萘基)-4-(6-氟-1 ,4-二氮雜環庚-1-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶。向4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁酯(240.00 mg, 383.89 µmol, 1eq )之DCM (3 mL)溶液添加TFA (12.32 g, 108.05 mmol, 8.00 mL, 281.45eq )，且在20°C下攪拌該混合物30分鐘。將該混合物濃縮，添加DCM (10 mL)，且用飽和Na₂ CO₃ (5 mL)洗滌。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮，以得到呈黃色固體之7-(8-氯-1-萘)-4-(6-氟-1,4-二氮雜環庚-1-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H吡啶并[3,4-d] 嘧啶(200 mg，粗製)。將一些這種物質(160 mg, 304.73 µmol)直接使用在下個步驟中。將40 mg的粗產物藉由prep-HPLC (管柱：Shim-pack C18 150*25*10um; 移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 4%-34%,10分鐘)純化，接著將殘餘物藉由prep-HPLC (管柱：Xtimate C18 150*25mm*5um;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 60%-90%,10分鐘)純化，以得到7-(8-氯-1-萘基)-4-(6-氟-1 ,4-二氮雜環庚-1-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶(9 mg, 16.99 µmol)。LCMS [ESI, M+1]: 523。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ =7.76 (d,J =8.07 Hz, 1 H) 7.61 (t,J =8.38 Hz, 1 H) 7.52 (br d,J =7.46 Hz, 1 H) 7.44 (dt,J =15.86, 7.90 Hz, 1 H) 7.34 (t,J =7.76 Hz, 1 H) 7.25-7.18 (dd,J =7.46 Hz, 1 H) 4.80 - 5.24 (m, 1 H) 4.31 - 4.46 (m, 2 H) 4.08 - 4.30 (m, 2 H) 3.71 - 4.04 (m, 3 H) 3.50 -3.68 (m, 2 H) 2.81 -3.37 (m, 7 H) 2.46 - 2.73 (m, 5 H) 2.25 - 2.35 (m, 1 H) 2.01 - 2.14 (m, 1 H) 1.82 - 1.91 (m, 3 H).

步驟F：1-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮。在-40°C下向7-(8-氯-1-萘基)-4-(6-氟-1,4-二氮雜環庚-1-基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d] 嘧啶(150.00 mg, 285.68 µmol, 1eq )及2-氟丙-2-烯酸(51.45 mg, 571.36 µmol, 2eq )之EA (2 mL)溶液添加T3P (50 M, 17.14 µL, 3eq )及TEA (231.27 mg, 2.29 mmol, 318.11 µL, 8eq )，且在-40°C下攪拌該混合物30分鐘。用水(2 mL)稀釋該混合物且用乙酸乙酯(2 mL×2)萃取。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物藉由prep- HPLC (管柱：Shim-pack C18 150*25*10um;移動相：[水(0.225%FA)-ACN];B%: 18%-48%, 10分鐘)純化，以得到呈黃色固體之1-[4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-6-氟-1,4-二氮雜環庚-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮(90 mg, 140.78 µmol, 49.28%產率, 93.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 597。

¹ H NMR (400MHz, 氯仿-d) δ = 7.76 (d,J =8.19 Hz, 1 H) 7.58 - 7.66 (m, 1 H) 7.50 - 7.56 (m, 1 H) 7.38 - 7.50 (m, 1 H) 7.31 - 7.37 (m, 1 H) 7.24 - 7.16 (m, 1 H) 4.90 - 5.55 (m, 3 H) 4.32 - 4.48 (m, 2 H) 3.48 - 4.27 (m, 11 H) 3.21 -3.43 (m, 1 H) 2.80 -3.16 (m, 2 H) 2.44 - 2.73 (m, 5 H) 2.25 - 2.36 (m, 1 H) 2.00 - 2.14 (m, 1 H) 1.77 - 1.91 (m, 3 H).
實例621

1-[(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮

步驟A：(3R )-4-苯甲基-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將於MeCN (100 mL)中之(3R )-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(10 g, 46.2 mmol, 1 eq)、BnBr (8.70 g, 50.9 mmol, 6.04 mL, 1.1 eq)及TEA (7.02 g, 69.36 mmol, 9.65 mL, 1.5 eq)反應混合物加熱至80°C持續12小時。在完成時，將反應混合物真空濃縮。將殘餘物溶解於水(30 mL)及乙酸乙酯(50 mL)中。將該混合物用乙酸乙酯( 3 × 50 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(30 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。殘餘物係藉由矽膠層析法(石油醚:乙酸乙酯=5:1至3:1)純化。得到呈白色固體之(3R )-4-苯甲基-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(9 g, 29.4 mmol, 64%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 307。

¹ H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.28 - 7.20 (m, 5H), 3.95 (br d, J = 13.2 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 5.6, 11.6 Hz, 1H), 3.61 (br dd, J = 3.2, 13.6 Hz, 1H), 3.52 (br dd, J = 4.0, 11.2 Hz, 2H), 3.35 (br d, J = 13.3 Hz, 2H), 3.09 (br s, 1H), 2.77 - 2.65 (m, 1H), 2.51 (br s, 1H), 2.20 (ddd, J = 3.2, 8.4, 12.0 Hz, 1H), 1.38 (s, 9H).

步驟B：(3R )-4-苯甲基-3-甲醯基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將DMSO (13.8 g, 176 mmol, 13.8 mL, 6.0 eq)添加至-65°C之(COCl)₂ (11.2 g, 88.1 mmol, 7.71 mL, 3.0 eq)之二氯甲烷(90 mL)溶液。在10分鐘之後，以15分鐘的時間緩慢引入(3R )-4-苯甲基-3-(羥甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(9 g, 29.4 mmol, 1 eq)之二氯甲烷(40 mL)溶液。在-65°C下攪拌1小時之後，添加TEA (29.7 g, 294 mmol, 40.9 mL, 10.0 eq)。使該混合物升溫至28 °C超過30分鐘，接著在此溫度下攪拌30分鐘。在完成時，以水(5 mL)使該反應混合物淬滅並分離。有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。得到呈黃色油狀物之(3R )-4-苯甲基-3-甲醯基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(8.9 g, 29 mmol)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

步驟C：(3R )-4-苯甲基-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。在0°C下向(3R )-4-苯甲基-3-甲醯基-哌嗪-1-甲酸第三丁酯(8.9 g, 29.2 mmol, 1.0 eq)之二氯甲烷(180 mL)溶液添加DAST (9.43 g, 58.5 mmol, 7.73 mL, 2 eq)。在0°C下攪拌該反應混合物2小時。在完成時，以飽和NaHCO₃ (150 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取。合併的有機層係以鹽水(60 mL)洗滌且真空濃縮。將殘餘物(石油醚:乙酸乙酯=5:1)藉由矽膠層析法(石油醚:乙酸乙酯=1:0至10:1)純化。得到呈黃色油狀物之(3R )-4-苯甲基-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.5 g, 4.48 mmol, 兩個步驟15%產率, 97.5%純度)。LCMS [ESI, M+1]:327。

步驟D：(3R )-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。於N₂ 下向(3R )-4-苯甲基-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.5 g, 4.60 mmol, 1.0 eq)之MeOH (10 mL)溶液添加Pd/C (150 mg, 10%純度)、Pd(OH)₂ /C (150 mg, 20%純度)。在完成時，將該混合物過濾且將濾液真空濃縮。得到呈黃色油狀物之(3R )-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(1.0 g, 4.23 mmol, 92%產率)，且其不經進一步純化即用於下個步驟中。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 5.91 - 5.43 (m, 1H), 4.17 -3.78 (m, 2H), 3.13 - 2.66 (m, 5H), 1.48 (s, 9H).

步驟E：三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯。在-40°C下向7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-醇(1.0 g, 2.35 mmol, 1 eq)、4A分子篩(1.0 g)及TEA (953 mg, 9.41 mmol, 1.31 mL, 4.0 eq)之二氯甲烷(20 mL)溶液添加Tf₂ O (996 mg, 3.53 mmol, 582 uL, 1.5 eq)且攪拌0.5小時。在完成時，以水(15 mL)使該反應混合物淬滅。將混合物過濾通過矽藻土濾墊。將濾液分離且用二氯甲烷(30 mL)萃取水層。有機層係以鹽水(10 mL)洗滌，經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將混物物藉由矽膠層析法(SiO₂ , 石油醚:乙酸乙酯 = 5:1至0:1 )純化，以得到呈褐色油狀物之三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯(1.0 g, 1.63 mmol, 69%產率, 91%純度)。LCMS [ESI, M+1]:557。

步驟F：(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯。將三氟甲烷磺酸[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]酯(1.0 g, 1.80 mmol, 1.0 eq)及(3R )-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(780 mg, 3.30 mmol, 1.84 eq)之反應混合物在90°C下攪拌5小時。在完成時，將該反應混合物溶解於MeCN (5 mL)中。該反應混合物係藉由逆相急驟層析法[水(0.1% FA)/乙腈]純化。以固體的NaHCO₃ 使分餾物鹼化至pH ＞7，且真空濃縮。將水層用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取且真空濃縮。將殘餘物藉由prep-TLC (二氯甲烷 :MeOH=7:1)純化，以得到呈褐色油狀物之(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(80 mg, 122 µmol, 7%產率, 98%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 643。

步驟G：7-(8-氯-1-萘基)-4-[(2R )-2-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶。向(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯(20 mg, 31.1 µmol, 1 eq)之二氯甲烷(0.05 mL)溶液添加TFA (70.9 mg, 622 µmol, 46.0 µL, 20 eq)。在25°C下攪拌該反應混合物1小時。在完成時，以飽和Na₂ CO₃ (4 mL)使該反應混合物淬滅，且用二氯甲烷: MeOH (10: 1, 3 × 8 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由Prep-HPLC(管柱：Waters Xbridge 150*25 5u;移動相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN];B%: 43%-73%,10分鐘)純化。將分餾物濃縮且凍乾。得到呈白色固體之7-(8-氯-1-萘基)-4-[(2R )-2-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(4.22 mg, 7.77 µmol, 25%產率, 100%純度)。LCMS [ESI, M+1]:543。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.81 - 7.74 (m, 1H), 7.66 - 7.59 (m, 1H), 7.56 - 7.52 (m, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.35 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.16 (m, 1H), 6.69 - 6.09 (m, 1H), 4.68 - 4.54 (m, 1H), 4.51 - 4.34 (m, 2H), 4.30 - 4.11 (m, 1H), 4.07 -3.68 (m, 2H), 3.63 -3.46 (m, 2H), 3.44 -3.31 (m, 2H), 3.30 -3.21 (m, 1H), 3.20 - 2.97 (m, 4H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.67 (m, 1H), 2.58 - 2.49 (m, 3H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H), 1.94 - 1.73 (m, 3H).

步驟H：1-[(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮。向7-(8-氯-1-萘基)-4-[(2R )-2-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H -吡啶并[3,4-d]嘧啶(45 mg, 82.9 µmol, 1.0 eq)、2-氟丙-2-烯酸(22.4 mg, 249 µmol, 3.0 eq)之乙酸乙酯(1 mL)溶液添加4A分子篩(100 mg)。在25°C下攪拌0.5小時之後，在0°C下添加TEA (126 mg, 1.24 mmol, 173 µL, 15 eq)及T3P (211 mg, 331 µmol, 197 µL, 50%純度, 4 eq)。在25°C下攪拌該混合物0.5小時。在完成時，以水(1 mL)使該反應混合物淬滅，且用乙酸乙酯(3 × 5 mL)萃取。合併的有機層係經Na₂ SO₄ 乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由管柱(Al₂ O₃ , 石油醚 :乙酸乙酯= 3:1至0:1)純化，隨後藉由prep-HPLC (管柱：Waters Xbridge 150*25 5u;移動相：[水(0.05%氫氧化銨 v/v)-ACN];B%: 55%-85%,10分鐘)純化，以得到呈白色固體之1-[(3R )-4-[7-(8-氯-1-萘基)-2-[[(2S )-1-甲基吡咯啶-2-基]甲氧基]-6,8-二氫-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基]-3-(二氟甲基)哌嗪-1-基]-2-氟-丙-2-烯-1-酮(5.98 mg, 9.72 µmol, 11%產率, 99.4%純度)。LCMS [ESI, M+1]: 615。

1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ = 7.81 - 7.75 (m, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 1H), 7.55 (td, J = 1.2, 7.6 Hz, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 1H), 7.36 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.17 (m, 1H), 6.48 - 5.83 (m, 1H), 5.47 - 5.31 (m, 1H), 5.27 - 5.19 (m, 1H), 4.88 - 4.65 (m, 1H), 4.59 - 4.31 (m, 4H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 4.04 -3.76 (m, 2H), 3.69 -3.44 (m, 3H), 3.33 - 2.92 (m, 4H), 2.75 - 2.64 (m, 1H), 2.61 - 2.52 (m, 1H), 2.49-2.48 (m, 3H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 2.13 - 2.02 (m, 1H), 1.88 - 1.72 (m, 3H).

表1中所列之實例622 – 678係使用市售可得的中間物及/或本文中所揭露之中間物，依據該等通用反應流程中概述的方法及所例示實例之教示而製備。
表1
實例622 – 678
實例A
KRas G12C修飾測定

此實例係使用LCMS測定法偵測例示性化合物與KRAS G12C之共價加合物，而說明本發明的例示性化合物共價結合至KRas G12C。

載有GDP之K-Ras (1-169) G12C、C51S、C80L、C118S的蛋白質濃度，以及載有GTP之K-Ras (1-169) G12C、C51S、C80L、C118S、Q61H的蛋白質濃度，係於K-Ras測定緩衝液(25 mM HEPES,150 mM NaCl, 5 mM MgCl₂ ,及pH 7.5之10 mM 辛基β-葡萄哌喃糖苷)中調整至2 µM。將10 µL等份的每種蛋白質溶液轉移到384孔的微量滴定盤中。在DMSO中以其所要的最終測定濃度的50倍來產生初始化合物儲存液。

將例示性式(I)化合物於K-Ras測定緩衝液內稀釋25倍，最後為其最終濃度的兩倍。接著將10 µL等份的每種化合物稀釋液添加到該微量滴定盤中的各種蛋白質溶液內以引發反應。一般最終化合物濃度為3.0、5.0及25.0 µM。在每個時間點，用20 µL的25 mM乙酸溶液使反應物淬滅。通常的測定終點為15、180及1440分鐘。一旦全部的反應物淬滅，將滴定盤熱封並將樣本注入LC/MS系統進行數據採集。

在Agilent 6520 Q-TOF精確質譜儀上採集數據。將樣本以液相注入C-3逆相管柱中以移除測定緩衝液並製備用於質譜儀的樣本。使用乙腈梯度從管柱中溶離出蛋白質，且直接注入質譜分析儀。數據採集後立即在Agilent MassHunter軟體中進行初始原始數據分析。

完整蛋白質的原始數據分析完全是使用Mass Hunter中所設的最大熵解捲法對溶液中每種蛋白質的多電荷狀態進行解捲。為了將複雜性降至最低，僅考慮用有限質量範圍內的數據來分析，最少有1 Dalton (道爾頓)質量階距。將在分析原始數據期間所鑑別出的全部質量高度輸出，在Spotfire®數據分析軟體中進一步分析。

最終的數據分析為Spotfire®數據分析軟件包中的多個步驟過程。簡言之，將每個蛋白質質量計算為該樣本全部訊號的百分比，接著將該百分比歸一化為不存在反應化合物時的蛋白質訊號百分比。將該等歸一化的訊號報告成歸一化的對照百分比(POC)。POC值的增加表示在一給定條件下，一化合物係比相同條件下的其他化合物顯示出更高程度的修飾。例示性式(I)及式(II)化合物在5 µM濃度下3小時的結果係顯示於表2中。符號說明：“A” ≤ 25% POC；“B” ＞ 25% POC - ≤ 50% POC；“C” ＞ 50% POC；ND = 未判定。
表2
例示性化合物的KRas G12C抑制活性
實例B
對KRas G12C依存性之細胞生長的抑制

此實例係說明本發明的例示性化合物抑制了表現有KRas G12C之細胞株的生長。

通過本發明的例示性化合物之細胞KRAs G12C抑制係藉由測量KRas活性的下游標記物，磷酸化ERK (“Phospho-ERK”)，來判定。

將表現有KRas G12C的NCI-H358細胞(ATCC CRL-5807)培養在補充有10%胎牛血清、青黴素/鏈黴素與10 mM HEPES的RPMI培養基中。將細胞以每孔50,000個細胞之濃度塗在覆有聚-D-離胺酸的96孔盤中，使細胞貼附8-12個小時。接著將經稀釋的化合物以最終濃度為0.5 % DMSO來添加。在3小時之後，移除培養基，添加150 µL的4%甲醛，且將孔盤培養20分鐘。將該等孔盤用PBS洗滌，使用150 µL冰冷的100%甲醇透化10分鐘。在室溫下使用100 µL Licor阻斷緩衝液(Li-Cor Biotechnology, Lincoln NE)將結合在孔盤上之非特異性抗體阻斷1小時。將陽性對照樣本及缺乏細胞的樣本與測試樣本並行處理並做為標準物。

使用對磷酸化形式之ERK具有特異性的抗體測定Phospho-ERK的量，並與GAPDH的量進行比較。用於檢測的初級抗體係添加如下：於Licor block + 0.05% Tween 20中以1:500稀釋的Phospho-ERK (Cell Signaling cs9101)及以1:5000稀釋的GAPDH (Millipore MAB374)。將孔盤在室溫下培養2小時。用PBS + 0.05% Tween 20洗滌孔盤。

用於使初級抗體顯像的二級抗體係添加如下：於Licor Block + 0.05% Tween 20中以1:1000稀釋的抗兔子-680及以1:1000稀釋的抗小鼠-800，且在室溫下培養1小時。用PBS + 0.05% Tween 20洗滌孔盤。將100 µL等份的PBS添加至各孔中，且在LICOR AERIUS平盤讀取器上對孔盤讀數。

用GAPDH 的訊號將pERK(Thr202/Tyr204)訊號歸一化，且計算DMSO對照組的百分比。使用劑量響應曲線的4參數擬合產生IC₅₀ 值。式(I)及式(II)例示性化合物的結果係顯示於圖3中。符號說明：“A” ≥ 0.0001 - ≤ 1 µM；“B” ＞ 1 µM；ND = 未判定。
表3
通過例示性化合物對KRas G12C介導的細胞增生之抑制
實例C
在R^A 或R^B 處取代的化合物於全血中之活體外穩定性改善

此實例係說明本發明之包括有在R^A 處的取代或至少在一個R^B 處的取代之例示性化合物相比於R^A 及兩個R^B 取代基皆為氫的化合物，展現出改善的全血穩定性。

材料：以下試劑係按原樣使用：乙腈(HPLC grade, Burdick & Jackson, Madison, WI)、磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、pH 7.4 (Sigma-Aldrich, Co., St. Louis, MO)、水(HPLC grade, JT Baker, Phillipsburg, NJ)、DMSO (EM Science, Merck KGaA, Darmstadt, Germany)及異丙醇 (IPA, reagent grade, EMD Chemicals, Gibbstown, NJ)。丙胺太林(propantheline)及艾司洛爾(esmolol) (Sigma-Aldrich)係做為測定中的陽性對照化合物使用。地西泮(diazepam) (Sigma-Aldrich)係做為定量的內標準物使用。人類全血係獲自BioIVT公司(Westbury, NY)且為男性的。所有其他試劑及溶劑皆為由Sigma公司(St. Louis, MO)提供的最高分析用等級且按原樣使用。

血液培養：本發明的代表性KRas G12C抑制化合物在全血存在下的活體外穩定性係以下列方式進行。已知通過血液及血漿中的酯酶進行酯類水解的艾司洛爾(esmolol)或丙胺太林(propantheline)係做為測定中的陽性對照使用。將含有在DMSO中的丙胺太林(propantheline)、艾司洛爾(esmolol)或本發明化合物之10 mM儲存液用DMSO稀釋至500 μM。將等份的全血(600 μL)以三重複方式置於聚丙烯96-深孔盤(Axygen Scientific, Union City, CA)的適當小孔中。將稀釋的血液在37°C下預培養15分鐘。每個孔同時加入12 μL的500 μM DMSO原液，最終測試濃度為5 μM。將孔盤在平盤振盪器(IKA MTS 2/4 Digital Microtiter Shaker, VWR)上以600 rpm混合10秒。將100 μL等份試樣從含有全血的每個孔中轉移到標記為0、60或240分鐘的三個獨立的96深孔盤。在每個指定的時間點結束時，用100 μL的水將紅血球裂解，以600 rpm混合1分鐘，並用800 μL之含有IS(0.625 µM地西泮)的乙腈終止。將孔盤在平盤振盪器上以600 rpm混合1分鐘，並使用Allegra台式離心機(Beckman Coulter, Fullerton, CA)在室溫下於離心機中以2095 xg 離心旋轉7分鐘。使用液體樣本處理系統(Apricot, Perkin‑Elmer, Boston, MA)將上清液(100 μL)轉移至淺96孔盤(Costar)。向每個上清液樣本添加100 µL的水，最終體積為200 µL。將孔盤密封且藉由LC-MS/MS分析每個孔的內容物。

分析定量：LC-MS/MS系統是由HTS-PAL自動進樣器(Leap Technologies, Carrboro, NC)、HP1200 HPLC(Agilent, Palo Alto, CA)及API4000三重四極桿質譜儀(PE Sciex, Applied Biosystems的一個部門, Foster City, CA)所組成。使用C18管柱(Kinetex^® , 30 x 3.0 mm, 2.6 µm particle size, Phenomenex, Torrance, CA)，結合了採用移動相A (具有1%異丙醇的0.1%甲酸水溶液)及B (0.1%甲酸的乙腈溶液)的梯度條件，來實現分析物及內標準物的層析分離。單次注射的總運行時間（包括重新平衡）為2分鐘。使用ESI⁺ 離子化模式實現分析物的質譜檢測。在丙胺太林(propantheline)、艾司洛爾(esmolol)或本發明代表性測試化合物的儲備溶液輸注期間進行離子電流的優化。藉由多重反應監測(MRM)每種化合物特有的躍遷來測量分析物(包含IS)響應。

計算法：取得數據且用Analyst 1.6.2軟體(Sciex)計算測試化合物及內標準物的波峰面積。藉由對每種測試化合物以及每個樣本的內標準物的波峰面積比(n =3)取平均值來計算平均波峰面積比率。

將波鋒面積表輸出到BioAssay Enterprise (CambridgeSoft, Cambridge, MA)，其中平均的分析物與內標準物波峰面積比率係用於計算剩餘物百分比(%REM)及和半衰期(t_1/2 )。藉由判定每個時間點的波峰面積比率與零時樣本的波峰面積比率之比例來計算剩餘物(f)的百分比。將ln(2)除以k_m 來判定t_1/2 。藉由使‑ln(f(t))對比時間的線性回歸來判定測試化合物損失率(k_m )。所述回歸是利用形式“y=mx”，因此該模型迫使截取100%剩餘物並且假定代謝遵循一級動力學。

將陽性對照化合物（丙胺太林及艾司洛爾）及本發明之代表性KRas G12C抑制化合物於人類全血存在下在37 °C中進行240分鐘培養期的培養。在37°C下培養240分鐘之後的丙胺太林、艾司洛爾及各個測試化合物的半衰期係顯示於表4中。符號說明：A ≤ 200分鐘；B ＞ 200分鐘 - ≤ 1000分鐘；C ＞ 1000分鐘- ≤ 2000分鐘；D ＞ 2000分鐘。
表4
在人類全血中之例示性KRas G12C抑制劑的活體外穩定性

結果：正如所預期的，陽性對照組丙胺太林顯示出短暫的98分鐘半衰期。相比之下，包括有R^A 或R^B 取代之例示性KRas G12C抑制劑於人類全血中的半衰期在一些情況下係比未經取代的化合物增加了大於3倍或4倍，例如實例331及359，導致這些化合物的藥效動力學與藥物動力學特定大幅改善，導致了更高的活體內穩定性且生物可用度增加。

儘管本發明與其特定的實施方案一起被描述，應該理解，其能作進一步修改。本申請案意在涵蓋在大致上參考本發明原理的任何改變、用途或調整，還涵蓋了在本發明所屬領域內已知的或慣例的實踐中對本發明的偏離，只要其中涉及了本發明以及應用了前面闡述的必要特徵，和如下所附申請專利範圍之範疇。

無

Claims

一種式(II)化合物：式(II) 或其醫藥學上可接受的鹽：其中： X為4-12員飽和或部分飽和的單環、橋接環或螺環，其中該飽和或部分飽和的單環視情況經一或多個R⁸ 取代； Y為一鍵、O、S或NR⁵ ； R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 或–SO₂ C(R^A )C(R^B )_p ； R² 為氫、烷基、羥烷基、二羥烷基、烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基、-Z-NR⁵ R¹⁰ 、雜環基、雜環基烷基、芳基、雜芳基或雜芳基烷基，其中Z、雜環基、雜環基烷基、芳基、雜芳基及雜芳基烷基中之每一者可視情況經一或多個R⁹ 取代；各個Z為C1 – C4伸烷基；各R³ 獨立地為C1 – C3烷基、側氧基、鹵烷基、羥基或鹵素； L為一鍵、-C(O)-或C1 – C3伸烷基； R⁴ 為氫、環烷基、雜環基、芳基、芳烷基或雜芳基，其中環烷基、雜環基、芳基、芳烷基及雜芳基中之每一者可視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代；各R⁵ 獨立地為氫或C1 – C3烷基； R⁶ 為環烷基、雜環基、雜環烷基、芳基或雜芳基，其中環烷基、雜環基、芳基或雜芳基中之每一者可視情況經一或多個R⁷ 取代；各R⁷ 獨立地為鹵素、羥基、C1 – C6烷基、環烷基、烷氧基、鹵烷基、胺基、氰基、雜烷基、羥烷基或Q-鹵烷基，其中Q為O或S； R⁸ 為側氧基、C1 – C3烷基、C2 – C4炔基、雜烷基、氰基、-C(O)OR⁵ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-N(R⁵ )₂ ，其中C1 – C3烷基可視情況經氰基、鹵素、-OR⁵ 、-N(R⁵ )₂ 或雜芳基取代；各R⁹ 獨立地為氫、側氧基、醯基、羥基、羥烷基、氰基、鹵素、C1 – C6烷基、芳烷基、鹵烷基、雜烷基、環烷基、雜環基、雜環基烷基、烷氧基、二烷基胺基、二烷基醯胺基烷基或二烷基胺基烷基，其中C1 – C6烷基可視情況經環烷基取代；各R¹⁰ 獨立地為氫、醯基、C1 – C3烷基、雜烷基或羥烷基； R¹¹ 為鹵烷基； R^A 不存在、或為氫、氘、氰基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基；各R^B 獨立地為氫、氘、氰基、C1 – C3烷基、羥烷基、雜烷基、C1 – C3烷氧基、鹵素、鹵烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基、雜芳基、雜芳基烷基、二烷基胺基烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代，其中該雜芳基烷基之雜芳基或雜芳基部分視情況經一或多個R⁷ 取代；或當為雙鍵且p為二時，一個R^B 為氫且R^A 與一個R^B 與它們所連接的碳原子形成經側氧基取代之4-8員部分飽和的環烷基； m為零或1與2之間的整數； p為一或二；且其中，如果為參鍵，則R^A 不存在，p等於一且R^B 為羥基烷基，或如果為雙鍵，則R^A 存在，R^B 存在且p等於二，其中且R^A 為氫或C1 – C3烷基，至少一個R^B 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥基烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基、-CH₂ NHC(O)C1 – C3烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基及C1 – C3烷基之取代基取代；或如果各R^B 為氫，則R^A 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 、羥基烷基或雜烷基。
如申請專利範圍第1項所述之之化合物，其中R¹ -X為：其中該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代。
如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 。
如申請專利範圍第3項所述之化合物，其中為參鍵且R^A 不存在，p為一且R^B 為羥烷基或C1 – C3烷氧基。
如申請專利範圍第3項所述之化合物，其中為雙鍵且R^A 為氫，p為二且至少一個R^B 獨立地為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基或雜環烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之取代基取代。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為鹵素。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為鹵烷基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為-ZNR⁵ R¹¹ 。
如申請專利範圍第8項所述之化合物，其中Z為亞甲基，R⁵ 為甲基且R¹¹ 為三氟甲基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為氰基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為羥烷基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為雜烷基。
如申請專利範圍第12項所述之化合物，其中該雜烷基為甲氧基甲基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為-C(O)N(R⁵ )₂ ，其中各R⁵ 為氫。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為-C(O)N(R⁵ )₂ ，其中各R⁵ 為C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為視情況經一或多個R⁷ 取代之雜芳基。
如申請專利範圍第16項所述之化合物，其中該雜芳基為吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各經一或多個R⁷ 取代。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為視情況經一或多個R⁷ 取代之雜芳基烷基。
如申請專利範圍第18項所述之化合物，其中該雜芳基烷基的雜芳基部分為吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各視情況經一或多個R⁷ 取代。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中該至少一個R^B 為經一或多個R⁷ 取代之雜環烷基。
如申請專利範圍第20項所述之化合物，其中該雜環烷基的雜環基部分為氮雜環丁基、吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉基，各經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之基團取代。
如申請專利範圍第5項至第21項中任一項所述之化合物，其中該雙鍵係呈E組態。
如申請專利範圍第5項至第21項中任一項所述之化合物，其中該雙鍵係呈Z組態。
如申請專利範圍第5項所述之化合物，其中為雙鍵且p為二，各R^B 為氫，且R^A 為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為鹵素。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為鹵烷基。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為氰基。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為雜烷基。
如申請專利範圍第28項所述之化合物，其中該雜烷基為甲氧基甲基。
如申請專利範圍第28項所述之化合物，其中該雜烷基為烷氧基。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為-C(O)N(R⁵ )₂ ，其中各R⁵ 為氫。
如申請專利範圍第24項所述之化合物，其中R^A 為羥烷基。
如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中為雙鍵且p為二，一個R^B 為氫，第二個R^B 為二烷基胺基烷基，且R^A 為鹵素。
如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中為雙鍵且p為二，各R^B 為氘，且R^A 為氘。
如申請專利範圍第2項所述之化合物，其中為雙鍵且p為二，一個R^B 為氫且R^A 與一個R^B 與它們所連接的碳原子形成經側氧基取代之5-8員部分飽和的環烷基。
如申請專利範圍第2項至第35項中任一項所述之化合物，其中Y為O。
如申請專利範圍第2項至第36項中任一項所述之化合物，其中R² 係選自由羥烷基、烷基胺基烷基、二烷基胺基烷基、-ZNR⁵ R¹⁰ 、雜環基及雜環基烷基所組成之群，其中Z、雜環基或雜環基烷基中之每一者獨立地視情況經R⁹ 取代。
如申請專利範圍第37項所述之化合物，其中R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環基烷基。
如申請專利範圍第38項所述之化合物，其中該雜環基烷基之雜環基獨立地為氮雜環丁基、甲基氮雜環丁基、乙基氮雜環丁基、異丙基氮雜環丁基、二氟氮雜環丁基、環丙基氮雜環丁基、四氫哌喃基氮雜環丁基、四氫哌喃基、吡咯啶基、甲基吡咯啶基、二甲基吡咯啶基、異丙基吡咯啶基、環烷基烷基吡咯啶基、羥基吡咯啶基、氟吡咯啶基、二氟吡咯啶基、(N-甲基)氟吡咯啶基、(N-甲基)二氟吡咯啶基、甲氧基乙基吡咯啶基、(N-甲基)甲氧基吡咯啶基、哌嗪基、二甲基胺基吡咯啶基、吡咯啶酮、甲基吡咯啶酮、嗎啉基、甲基嗎啉基、乙基嗎啉基、異丙基嗎啉基、氧雜丁環基、1,4-氧氮雜環庚烷基、哌啶基、甲基哌啶基、醯基哌啶基、氰基哌啶基、環烷基哌啶基、鹵哌啶基、二鹵哌啶基、氟哌啶基、二氟哌啶基、烷氧基哌啶基、吡咯啶酮基、哌啶酮基、四氫吡咯烷基、硫嗎啉基-1,1-二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基、或氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基。
如申請專利範圍第39項所述之化合物，其中該(N-甲基)二氟吡咯啶基為3,3-二氟-1-甲基吡咯啶基。
如申請專利範圍第39項所述之化合物，其中該雜環基為N-甲基吡咯啶基。
如申請專利範圍第37項所述之化合物，其中R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之二烷基胺基烷基。
如申請專利範圍第2項至第42項中任一項所述之化合物，其中R⁴ 為視情況經一或多個R⁷ 取代之芳基。
如申請專利範圍第43項所述之化合物，其中該芳基係選自由視情況經一或多個R⁷ 取代之苯基及萘基所組成之群。
如申請專利範圍第44項所述之化合物，其中該苯基及萘基係各視情況經一或多個選自由鹵素、羥基、C1- C6烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基及烷氧基所組成之群的R⁷ 取代。
如申請專利範圍第45項所述之化合物，其中R⁷ 係選自由鹵素、鹵烷基、甲基、異丙基、甲氧基、Q-鹵烷基、羥基及氰基所組成之群。
如申請專利範圍第2項至第42項中任一項所述之化合物，其中R⁴ 為雜芳基。
如申請專利範圍第2項至第42項中任一項所述之化合物，其中R⁴ 為視情況經一或多個R⁷ 取代之芳烷基。
如申請專利範圍第2項至第48項中任一項所述之化合物，其中m為零。
如申請專利範圍第2項至第49項中任一項所述之化合物，其中L為一鍵。
如申請專利範圍第2項至第50項中任一項所述之化合物，其中R⁸ 為視情況經-OR⁵ 、氰基或雜芳基取代之雜烷基、C2-C4炔基或C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第51項所述之化合物，其中R⁸ 為視情況經氰基取代之C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第51項所述之化合物，其中R⁸ 為氰甲基。
如申請專利範圍第51項至第53項中任一項所述之化合物，其中X係經一個R⁸ 取代。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物為：、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、、或。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物為式II-A：式II-A 其中該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，其中R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁸ 、R¹⁰ 、L及m係如請求項1中所定義，且R¹¹ 為氫、甲基或羥烷基。
如申請專利範圍第56項所述之化合物，其中R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 且為雙鍵且R^A 為氫，p為二且至少一個R^B 獨立地為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基或雜環基烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之取代基取代。
如申請專利範圍第56項所述之化合物，其中R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 且為雙鍵，各R^B 為氫，且R^A 為氘、氰基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基。
如申請專利範圍第57項至第58項中任一項所述之化合物，其中R⁵ 及R¹⁰ 各為C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第59項所述之化合物，其中R¹¹ 為甲基。
如申請專利範圍第59項所述之化合物，其中R⁸ 為視情況經-OR⁵ 、氰基或雜芳基取代之雜烷基、C2-C4炔基或C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第54項至第61項中任一項所述之化合物，其中L為一鍵，且R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。
如申請專利範圍第62項所述之化合物，其中該芳基或雜芳基係經一或多個獨立地選自羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基之R⁷ 取代。
如申請專利範圍第1項所述之化合物，其中該化合物為式II-B：式II-B 其中該哌嗪基環視情況經R⁸ 取代，且R¹ 、R³ 、R⁴ 、R⁸ 、L及m係如請求項1中所定義。
如申請專利範圍第64項所述之化合物，其中R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 且為雙鍵且R^A 為氫，p為二且至少一個R^B 獨立地為氘、氰基、鹵素、鹵烷基、羥烷基、雜烷基、雜芳基、雜芳基烷基、-ZNR⁵ R¹¹ 、-C(O)N(R⁵ )₂ 、-NHC(O)C1 – C3烷基或雜環基烷基，其中該雜環基部分經一或多個獨立地選自鹵素、羥基、烷氧基或C1 – C3烷基之取代基取代。
如申請專利範圍第64項所述之化合物，其中R¹ 為–C(O)C(R^A )C(R^B )_p 且為雙鍵，各R^B 為氫，且R^A 為氘、氰基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、雜烷基、-C(O)N(R⁵ )₂ 或羥烷基。
如申請專利範圍第65項至第66項中任一項所述之化合物，其中R² 為視情況經一或多個R⁹ 取代之雜環基烷基。
如申請專利範圍第67項所述之化合物，其中該雜環烷基的雜環基部分為吡咯啶基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、1,4-氧氮雜環庚烷基、硫嗎啉基-1,1-二氧化物、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷基、2-氧雜-5-氮雜雙環[2.2.1]庚-5-基或氮雜雙環[2.2.1]庚-2-基，各視情況經一或多個R⁹ 取代。
如申請專利範圍第68項所述之化合物，其中各R⁹ 獨立地為醯基、側氧基、鹵素、氰基、C1 – C6烷基、羥烷基、雜烷基、環烷基、芳烷基或二烷基胺基烷基。
如申請專利範圍第69項所述之化合物，其中各R⁹ 獨立地為C1-C6烷基、雜烷基或鹵素。
如申請專利範圍第65項至第70項中任一項所述之化合物，其中該雜環基為視情況經一或多個R⁹ 取代之吡咯啶基。
如申請專利範圍第71項所述之化合物，其中該雜環基為3,3-二氟-1-甲基吡咯啶基。
如申請專利範圍第72項所述之化合物，其中R⁸ 為視情況經-OR⁵ 、氰基或雜芳基取代之雜烷基、C2-C4炔基或C1 – C3烷基。
如申請專利範圍第73項所述之化合物，其中R⁸ 為視情況經氰基取代之C1-C3烷基。
如申請專利範圍第65項至第74項中任一項所述之化合物，其中L為一鍵，且R⁴ 為芳基或雜芳基，其各視情況經一或多個R⁶ 、R⁷ 或R⁸ 取代。
如申請專利範圍第75項所述之化合物，其中該芳基或雜芳基係經一或多個獨立地選自羥基、胺基、鹵素、C1 – C3烷基、鹵烷基、Q-鹵烷基、環烷基及烷氧基之R⁷ 取代。
如申請專利範圍第75項至第76項中任一項所述之化合物，其中R⁴ 為視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代之芳基。
如申請專利範圍第77項所述之化合物，其中R⁴ 為苯基或萘基，其各視情況經一或多個R⁶ 或R⁷ 取代。
如申請專利範圍第77項所述之化合物，其中R⁴ 係視情況經一或多個獨立地選自鹵素、C1-C6烷基及鹵烷基之R⁷ 取代。
如申請專利範圍第65項至第79項中任一項所述之化合物，其中m為零。
一種醫藥組成物，其包括治療有效量之如請求項1-80中任一項之式(II)化合物、式II-A化合物或式II-B化合物，以及一醫藥學上可接受的賦形劑。
一種抑制細胞中KRas G12C活性之方法，其包括使期望抑制KRas G12C活性的細胞接觸治療有效量之如請求項1-80中任一項之式(II)化合物、式II-A化合物或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽，或含有式(II)化合物、式II-A化合物或式II-B化合物之醫藥組成物或其醫藥學上可接受的鹽。
一種治療癌症的方法，包括向患有癌症之患者單獨投與治療有效量之如請求項1-80中任一項之式(II)化合物、式II-A化合物或式II-B化合物，或其醫藥學上可接受的鹽，或與醫藥學上可接受的載劑、賦形劑或稀釋劑結合投與。
如申請專利範圍第83項所述之方法，其中該化合物之治療有效量為約每天0.01至100 mg/kg之間。
如申請專利範圍第84項所述之方法，其中該化合物之治療有效量為約每天0.1至50 mg/kg之間。
如申請專利範圍第84項所述之方法，其中該癌症係選自由以下組成之群：心臟：肉瘤（血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤）、黏液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤及畸胎瘤；肺：支氣管原惡性腫瘤（鱗狀細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺泡（小支氣管）惡性腫瘤、支氣管腺癌、肉瘤、淋巴瘤、軟骨缺陷瘤、中皮瘤；胃腸道：食道（鱗細胞惡性腫瘤、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤）、胃（惡性腫瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤）、胰臟（管腺癌、胰島素瘤、升糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、VIP瘤）、小腸（腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維瘤、纖維瘤）、大腸（腺癌、管狀腺瘤、絨毛腺瘤、缺陷瘤、平滑肌瘤）；生殖泌尿道：腎臟（腺癌、威爾姆氏瘤(腎胚細胞瘤)、淋巴瘤、白血病）、膀胱及尿道（鱗細胞惡性腫瘤、移行細胞惡性腫瘤、腺癌）、前列腺（腺癌、肉瘤）、睪丸（精細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎上皮癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質細胞惡性腫瘤、纖維瘤、腺維腺瘤、腺瘤樣腫瘤、脂肪瘤）；肝臟：肝腫瘤（肝細胞惡性腫瘤）、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；膽道：膽囊癌、壺腹狀惡性腫瘤、膽管癌；骨：骨原性肉瘤（骨肉瘤）、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤英氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、惡性淋巴瘤（網狀細胞肉瘤）、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞腫瘤、脊索瘤、骨軟骨瘤（骨軟骨外生性骨瘤）、良性脊索瘤、軟骨胚細胞瘤、軟骨黏液纖維瘤、骨樣骨瘤及巨細胞腫瘤；神經系統：顱骨（骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃瘤、畸形性骨炎）、腦膜（腦脊髓膜瘤、腦脊髓膜肉瘤、神經膠瘤病）、腦（星細胞瘤、神經管胚細胞瘤、神經膠瘤、室管膜瘤、胚細胞瘤(松果體瘤)、多形性神經膠質母細胞瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、神經韒瘤、視網膜胚細胞瘤、先天瘤）、脊髓神經纖維瘤、腦脊髓膜瘤、神經膠瘤、肉瘤；婦科：子宮（子宮內膜惡性腫瘤(漿液性囊腺癌、黏液素囊腺癌、未分類的惡性腫瘤)、粒層細胞及韒細胞瘤、支持-間質細胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、惡性胚胎瘤、惡性畸胎瘤）、陰唇（鱗細胞惡性腫瘤、上皮內癌、腺癌、纖維肉瘤、黑色素瘤）、陰道（透明細胞惡性腫瘤、鱗細胞惡性腫瘤、葡萄形肉瘤（胚胎型橫紋肌肉瘤）、輸卵管（惡性腫瘤）；血液性：血液（骨髓性白血病(急性及慢性)、急性淋巴胚細胞白血病、慢性淋巴性白血病、骨髓增生病、多發性骨髓瘤、骨髓增生不良症候群）、霍金氏病、非霍金氏淋巴瘤(惡性淋巴瘤)；皮膚：惡性黑色素瘤、基底細胞惡性腫瘤、鱗細胞惡性腫瘤、卡波西氏肉瘤、黑痣發育不良母斑、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢瘤及牛皮癬；以及腎上腺：神經胚細胞瘤。
如申請專利範圍第86項所述之方法，其中該癌症為KRas G12C相關癌症。
如申請專利範圍第83項至第87項中任一項所述之方法，其中該癌症為非小細胞肺癌。
一種在有需要之患者中治療癌症的方法，該方法包括：(a)判定該癌症與KRas G12C突變相關（例如KRas G12C相關癌症）；以及(b)向該患者投與治療有效量之如請求項1-80中任一項之式(II)化合物、式II-A化合物或式II-B化合物或其醫藥學上可接受的鹽，或其醫藥組成物。