JP2024514127A

JP2024514127A - 抗がん剤療法

Info

Publication number: JP2024514127A
Application number: JP2023561730A
Authority: JP
Inventors: 徹哉光冨; 教将古賀; マルコハンスホフマン; ミヒャエルグマクル
Original assignee: ベーリンガーインゲルハイムインターナショナルゲゼルシャフトミットベシュレンクテルハフツング
Priority date: 2021-04-09
Filing date: 2022-04-07
Publication date: 2024-03-28
Also published as: CN117479942A; WO2022214594A1; EP4319757A1

Abstract

本発明は、がんの治療及び／又は予防に使用するためのＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１（ＳＯＳ１）阻害剤及び／又はマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で投与されるか、又はＳＯＳ１阻害剤がＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有するがんの治療、特にがん細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を更に表すがんの治療に使用するための、ＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１（ＳＯＳ１）阻害剤若しくはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせに関する。

Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２カーステン・ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログ（ＫＲＡＳ）は、ＲＡＳＧＴＰアーゼをコードするヒトＲＡＳ遺伝子の１種である。ＫＲＡＳタンパク質は、増殖、代謝及び成長などの多様な細胞プロセスに影響を及ぼす成長因子シグナル伝達経路における分子スイッチとして機能する低分子ＧＴＰアーゼである。ＫＲＡＳは、ＧＤＰ結合型の不活性型構造とＧＴＰ結合型の活性型構造との間で切り替れる。ＳＯＳ１などのグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）の結合により、ＲＡＳファミリータンパク質からのＧＤＰ放出を促進し、ＧＴＰの結合を可能にし、下流経路を活性化する活性形態になる。
ＳＯＳ１（ＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１）は、最初に同定されたショウジョウバエタンパク質ＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１のヒトホモログである。ＳＯＳ１は、がんにおけるＲＡＳファミリータンパク質のシグナル伝達の活性化に決定的に関与している。ＳＯＳ１の触媒部位のＲＡＳファミリータンパク質への結合を選択的薬理学的に阻害することで、ＲＡＳファミリータンパク質のＧＴＰ結合型形態へのＳＯＳ１媒介型活性化を防止でき、ＳＯＳ１阻害剤は、ＲＡＳファミリータンパク質の下流の細胞でのシグナル伝達を阻害する。ＲＡＳファミリータンパク質への依存に関連するがん細胞において、ＳＯＳ１阻害剤は、抗がん効能を提供する。がんの治療に使用するためのＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ）の阻害剤との組み合わせは、国際公開第２０２０／２５４４５１号公報から知られている。
ＫＲＡＳは、がんにおいてよく変異する遺伝子である。ＫＲＡＳ変異、例えば、アミノ酸Ｇ１２、Ｇ１３、Ｑ６１、Ａ１４６は、肺がん、結腸直腸がん及び膵がんなどの様々なヒト癌に見られる。非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）におけるＫＲＡＳ変異の大半は、コドン１２に発生し、おおよそ半分は、グリシンからシステインへの置換（Ｇ１２Ｃ）である。その高頻度にもかかわらず、ＫＲＡＳ変異型のがんに対する標的療法の発展は、長い間満足されていない。近年、Ｇ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳタンパク質の機能を阻害できるいくつかの薬物が開発された。アダグラシブ及びソトラシブなどのいくつかのＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤が臨床試験に到達し、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する転移性非小細胞肺がんにおいて期待できる結果を実証した。

一般的に、標的療法に反応するほぼすべての固形腫瘍において、獲得したオンターゲットの薬剤耐性が必然的に発生し、臨床的再燃（relapse）をもたらす。したがって、獲得耐性を必然的にもたらす標的遺伝子の二次変異の獲得（オンターゲット機序）が、アダグラシブ及びソトラシブを使用する標的療法において発生するであろう。併用療法の可能な標的及びＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性の機序は、現在議論されており（Dunnett-Kane et al., Cancers, 2021, 13（1）, 151）、またアダグラシブ及びソトラシブの両者は、早期臨床試験において、既にＳＨＰ２（Ｓｒｃホモロジー領域２ドメイン含有ホスファターゼ２）阻害剤と組み合わせて検証された（Hata et al., Nat. Med., 2020, 26, 169-170）。
しかしながら、これまでＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する獲得耐性を引き起こすＫＲＡＳでの二次変異を説明するデータは報告されていない。ソトラシブ及びアダグラシブに対して獲得耐性を与えるＫＲＡＳでの二次変異は依然として予想され、この耐性を克服する可能な戦略が必要である。
したがって、本発明の目的は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対して耐性を獲得したがんに対する二次治療のオプションを可能にする阻害剤を提供することである。

ソトラシブ及びアダグラシブに対する獲得したオンターゲット耐性についての細胞株モデルにおいて、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓ（Ｙ９６Ｄ／Ｓ）の二次変異を有するクローンは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ及びアダグラシブに対する耐性を有することが見出された。ＢＩ－３４０６などのＳＯＳ１阻害剤、及びＳＯＳ１阻害剤とトラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤との組み合わせは、Ｇ１２Ｃの一次変異に加えて、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異も有する細胞に対する強力な活性を示した。これにより、ソトラシブ及びアダグラシブによる治療の過程で現れると予想される、ＫＲＡＳの二次変異により引き起こされた獲得耐性を克服するためのセカンドライン療法のオプションを提供する。
第一の観点により、がんの治療及び／又は予防に使用するためのＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１（ＳＯＳ１）阻害剤及び／又はマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で投与されるか、又はＳＯＳ１阻害剤がＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤を提供する。
一態様において、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による以前の治療後に、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有するものとなった。
一態様において、がんは、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有する。
好ましい態様において、がんは、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による以前の治療後に、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有するものとなった。
一態様において、がんのがん細胞は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表す。
一態様において、がんのがん細胞は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表すことが決定されている。

１以上の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、以下の化合物：

からなる群より選択される化合物又はその医薬上許容される塩である。

１以上の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、レファメチニブ並びに以下の化合物：

１以上の態様において、がんは、膵がん、肺がん、結腸直腸がん、胆管細胞がん、多発性骨髄腫、黒色腫、子宮がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、尿路上皮がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部扁平上皮がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道がん、慢性リンパ性白血病、肝細胞がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、神経膠芽腫、腎がん及び肉腫からなる群より選択される。
別の観点は、ＳＯＳ１阻害剤を有効成分として含む医薬組成物に関する。別の観点は、ＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む医薬組成物に関する。別の観点は、がんの治療及び／又は予防に使用するための、ＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む医薬の組み合わせであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記医薬の組み合わせに関する。
別の観点は、１つ以上の容器に、
（ｉ）ＳＯＳ１阻害剤を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい（第１の）医薬組成物若しくは剤形、及び／又は
（ｉｉ）ＭＥＫ阻害剤を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい（第２の）医薬組成物若しくは剤形
を含み、
（ｉｉｉ）説明書を含む添付文書
を含んでもよい、
がんの治療及び／又は予防に使用するためのキットであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記キットに関する。

別の観点は、がんを治療及び／又は予防する方法であって、治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤若しくは治療上有効量のＭＥＫ阻害剤を患者に投与するか、又は治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤を治療上有効量のＭＥＫ阻害剤と組み合わせて患者に投与することを含み、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記方法に関する。
別の観点は、がんの治療用及び／又は予防用の医薬品の製造のための、ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤の使用であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で使用されるか、又はＳＯＳ１阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて使用され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記使用に関する。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の一態様において、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による以前の治療後に、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有するものとなった。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の一態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、本明細書において定義される化合物又はその医薬上許容される塩である。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、本明細書において定義される化合物又はその医薬上許容される塩である。
本明細書に開示されている全すべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の一態様において、がんは、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有する。

本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の好ましい態様において、がんが、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による以前の治療後に、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有するものとなった。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の一態様において、がんのがん細胞は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表す。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の好ましい態様において、がんのがん細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表すものと決定されている。
本明細書に開示されているすべての観点、特に医薬組成物若しくは医学の組み合わせ、キット、方法、又は使用の１以上の態様において、がんは、膵がん、肺がん、結腸直腸がん、胆管細胞がん、多発性骨髄腫、黒色腫、子宮がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、尿路上皮がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部扁平上皮がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道がん、慢性リンパ性白血病、肝細胞がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、神経膠芽腫、腎がん及び肉腫からなる群より選択される。

別の観点は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する獲得耐性を有する個体、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有する個体を検出又は診断するためのインビトロ方法であって、
－個体から採収した生体試料中の、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の存在を決定する工程を含み、
ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の検出に基づいて、個体が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有するもの、及びＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するものに分類される、前記方法に関する。
別の観点は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有するがん若しくはがん細胞、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するがん若しくはがん細胞のバイオマーカーとしての、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の使用に関する。

ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ又はＧ１２Ｖを有する改変されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線。図１Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した細胞を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図１Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ又はＧ１２Ｖを有する改変されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、ＥＮＵ変異誘発により生じた二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線。図２Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した細胞を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図２Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、ＥＮＵ変異誘発により生じた二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。Ｂａ／Ｆ３細胞に導入されたＫＲＡＳＧ１２Ｃ及び二次変異の両方を有する、Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイ。図３Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した細胞を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図３Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイを示す。Ｈ３５８細胞に導入されたＫＲＡＳＧ１２Ｃ及び二次変異を有する、Ｈ３５８細胞の増殖阻害アッセイ。図４Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した細胞を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図４Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、二次変異も有するＨ３５８細胞の増殖阻害アッセイを示す。図５Ａにおいて、指定濃度のＢＩ３４０６で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、Ａ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異（すべて、Ｂａ／Ｆ３細胞に導入された）も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイである。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図５Ｂは、指定濃度のＢＩ３４０６で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、Ａ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異（Ｈ３５８細胞に導入された）も有するＨ３５８細胞の三次元（３Ｄ）増殖阻害アッセイを示す。図５Ｃは、指定濃度のトラメチニブ及び１μＭのＢＩ３４０６で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異（Ｈ３５８細胞に導入された）も有するＨ３５８細胞の三次元（３Ｄ）増殖阻害アッセイを示す。

ＳＯＳ１阻害剤
本明細書において使用されているように、用語「ＳＯＳ１」は、ショウジョウバエタンパク質ＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１のヒトホモログを指す。本明細書において使用されているように、用語「ＳＯＳ１阻害剤」は、ＳＯＳ１のＫＲＡＳへの結合を阻害し、ＳＯＳ１媒介化による、ＫＲＡＳのＧＴＰ結合型への活性化を防止する化合物を指す。一態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、ＳＯＳ１に結合する。異なる化合物クラスに属するＳＯＳ１阻害剤が知られている。
好ましくは、治療方法、使用、組み合わせ及び組成物などのすべての観点及び態様に関して、ＳＯＳ１阻害剤は、
・国際公開第２０１８／１１５３８０号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０１８／１１５３８０号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤Ｉ－１～Ｉ－３８３のすべて、
・国際公開第２０１９／１２２１２９号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０１９／１２２１２９号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤Ｉ－１～Ｉ－１７９のすべて、
・国際公開第２０２０／１８０７６８号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２０／１８０７６８号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～１０３のすべて、
・国際公開第２０２０／１８０７７０号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２０／１８０７７０号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～５４０のすべて、
・国際公開第２０１８／１７２２５０号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０１８／１７２２５０号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～４５８のすべて、
・国際公開第２０１９／２０１８４８号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、及び
・国際公開第２０１９／２０１８４８号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～１００のすべて
からなる群より選択される。該開示のすべての内容は、それぞれの合成及び性質と一緒に、参照として本明細書に含まれる。

また、治療方法、使用、組み合わせ及び組成物などのすべての観点及び態様に関して、ＳＯＳ１阻害剤は、
・国際公開第２０２１／０７４２２７号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／０７４２２７号に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～３４２のすべて、
・国際公開第２０２１／０９２１１５号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／０９２１１５号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～７１及びＰのすべて（表Ａ、表１～２１）、
・国際公開第２０２１／１３０７３１号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／１３０７３１号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例／化合物１～１５２のすべて、
・中国公開第１１３２００９８１号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・中国公開第１１３２００９８１号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例／化合物１～２２のすべて、
・国際公開第２０２１／２４９５１９号公報に一般的に記載及び／又は特に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／２４９５１９号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例／化合物１～２９のすべて、
・国際公開第２０２１／２４９４７５号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／２４９４７５号公報に開示されているＳＯＳ１阻害剤例１～１１２のすべて、
・国際公開第２０２１／１７３５２４号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／１２７４２９号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０２６４６５号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／２０３７６８号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２１／２２８０２８号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０１７３３９号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０１７５１９号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０２６４６５号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０２８５０６号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・国際公開第２０２２／０５８３４４号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤、
・中国公開第１１３８０１１１４号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＳＯＳ１阻害剤
からなる群より選択することができる。該開示のすべての内容は、それぞれの合成及び性質と一緒に、参照として本明細書に含まれる。

本明細書において使用されている用語「ＳＯＳ１阻害剤」はまた、上に示したＳＯＳ１阻害剤の互変異性体、医薬上許容される塩、水和物、又は溶媒和物の形態を含む（医薬上許容される塩の水和物又は溶媒和物を含む）。該用語はまた、あらゆる固体形態、好ましくは結晶形態のＳＯＳ１阻害剤、並びにその医薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物（医薬上許容される塩の水和物又は溶媒和物を含む）のあらゆる結晶形態を含む。
本明細書において使用されている「医薬上許容される塩」は、酸付加塩及び塩基付加塩の両方を含む。医薬上許容される酸付加塩は、遊離塩基の生物学的効果及び性質を保ち、生物学又はその他の点で望ましくない塩ではなく、無機酸又は有機酸で形成される塩を指す。医薬上許容される塩基付加塩は、無機塩基又は非毒性の有機塩基に由来する塩を含む。本明細書において使用されている用語「溶媒和物」は、１種以上の溶媒分子及び本発明の化合物の集合体又は複合体を指す。溶媒の例としては、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸及びエタノールアミンが挙げられる。用語「水和物」は、溶媒分子が水である場合の複合体を指す。

一態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２０又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－２６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－３７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－３８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－４５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－４９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５０又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－５９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－６１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－６９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－７１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－７３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－７７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－７８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－８２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－８７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－９６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－９７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－９８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－９９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１００又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１０１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１０２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１０３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１２１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１２３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１２６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１２８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１３０又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１５６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物Ｉ－１５７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＳＯＳ１阻害剤は、化合物ＢＩ－３４０６又はその医薬上許容される塩である。これらの態様はいずれも、ＳＯＳ１阻害剤の性質に関して好ましい態様である。

ＭＥＫ阻害剤
本明細書において使用されているように、用語「ＭＥＫ」は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼを指す。本明細書において使用されているように、用語「ＭＥＫ阻害剤」は、ＭＥＫの生物活性を阻害する及び／又は低下させる化合物を指す。異なる化合物クラスに属するＭＥＫ阻害剤が知られている。
好ましくは、治療方法、使用、組み合わせ及び組成物などのすべての観点及び態様に関して、ＭＥＫ阻害剤は、
・国際公開第２０１３／１３６２４９号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＭＥＫ阻害剤、
・国際公開第２０１３／１３６２４９号公報に開示されているＭＥＫ阻害剤例１～７９のすべて、
・国際公開第２０１３／１３６２５４号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＭＥＫ阻害剤、
・国際公開第２０１３／１３６２５４号公報に開示されているＭＥＫ阻害剤例１～２１のすべて、
・国際公開第２００５／１２１１４２号公報に一般的に記載及び／又は具体的に開示されているＭＥＫ阻害剤、及び
・国際公開第２００５／１２１１４２号公報に開示されているＭＥＫ阻害剤例である化合物［Ｉ］
からなる群より選択される。該開示のすべての内容は、それぞれの合成及び性質と一緒に、参照として本明細書に含まれる。

本明細書において使用されている「ＭＥＫ阻害剤」はまた、上に示したＭＥＫ阻害剤の互変異性体、医薬上許容される塩、水和物、又は溶媒和物の形態を含む（医薬上許容される塩の水和物又は溶媒和物を含む）。該用語はまた、あらゆる固体形態、好ましくは結晶形態のＭＥＫ阻害剤、並びにその医薬上許容される塩、水和物及び溶媒和物（医薬上許容される塩の水和物又は溶媒和物を含む）のあらゆる結晶形態を含む。
ＭＥＫ阻害剤はまた、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、レファメチニブ及びそれらの医薬上許容される塩からなる群より選択され得る。
ＩＮＮ名トラメチニブと表記される化合物は、式（Ｔ）：
（Ｔ）
によるＭＥＫの低分子阻害剤、その医薬上許容される塩、又はその水和物若しくはその溶媒和物（例えば、そのＤＭＳＯ溶媒和物）である。
国際公開第２００５／１２１１４２号公報には、トラメチニブが実施例４－１として記載されている。該化合物は、市販されている。

また、ＩＮＮがコビメチニブ（ＡＴＣコード：Ｌ０１ＸＥ３８）、ビニメチニブ（ＡＴＣコード：Ｌ０１ＸＥ４１）、セルメチニブ（ＡＴＣコード：Ｌ０１ＥＥ０４）、レファメチニブ（ＢＡＹ８６９７６６）で表される化合物は、当技術分野において公知であり、及び／又は市販されている。
より好ましくは、ＭＥＫ阻害剤は、以下特定のＭＥＫ阻害剤：１－１、１－２、１－３、１－４、１－５、１－６、１－７、１－８、１－９、１－１０、１－１１、１－１２、１－１３、１－１４、１－１５、１－１６、１－１７、１－１８、１－１９、１－２０、１－２１、１－２２、１－２３、１－２４、１－２５、１－２６、１－２７、１－２８、１－２９、１－３０、１－３１、１－３２、１－３３、１－３４、１－３５、１－３６、１－３７、１－３８、１－３９、１－４０、１－４１、１－４２、１－４３、１－４４、１－４５、１－４６、１－４７、１－４８、１－４９、１－５０、１－５１、１－５２、１－５３、１－５４、１－５５、１－５６、１－５７、１－５８、１－５９、１－６０、１－６１、１－６２、１－６３、１－６４、１－６５、１－６６、１－６７、１－６８、１－６９、１－７０、１－７１、１－７２、１－７３、１－７４、１－７５、１－７６、１－７７、１－７８、１－７９、２－１、２－２、２－３、２－４、２－５、２－６、２－７、２－８、２－９、２－１０、２－１１、２－１２、２－１３、２－１４、２－１5, ２－１６、２－１７、２－１８、２－１９、２－２０、及び２－２１からなる群より選択されるＭＥＫ阻害剤又はその塩である。示したＭＥＫ阻害剤はすべて、それぞれの合成及び性質と一緒に、国際公開第２０１３／１３６２４９号公報及国際公開第２０１３／１３６２５４号公報に開示されている。

一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、トラメチニブ又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、コビメチニブ又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、ビニメチニブ又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、セルメチニブ又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、レファメチニブ又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ１阻害剤は、化合物１－１６又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１８又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－１９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２６又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－２９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３８又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－３９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４６又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４８又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－４９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５８又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－５９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６６又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６７又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６８又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－６９又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７０又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７１又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７２又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７３又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７４又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７５又はその医薬上許容される塩である。一態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物１－７９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１０又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１１又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１２又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１３又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１４又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１５又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１６又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１７又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１８又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－１９又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－２０又はその医薬上許容される塩である。別の態様において、ＭＥＫ阻害剤は、化合物２－２１又はその医薬上許容される塩である。これらの態様はいずれも、ＭＥＫ阻害剤の性質に関して好ましい態様である。

組み合わせ
本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤の性質に関するすべての態様と、本明細書に記載のＭＥＫ阻害剤の性質に関するすべての態様との組み合わせにより、特定の組み合わせ又は組み合わせの群となり、これらはすべて具体的に開示されているとみなされ、かつ本発明の態様、並びにその組み合わせ、組成物、キット、方法、用途及び使用するための化合物の態様のすべてとみなされる。好ましい態様は、ＳＯＳ１阻害剤の性質に関する態様Ｉ－１、Ｉ－２、Ｉ－３、Ｉ－４、Ｉ－１３、Ｉ－２０、Ｉ－２１、Ｉ－２２、Ｉ－２３、Ｉ－２５、Ｉ－２６、Ｉ－３７、Ｉ－３８、Ｉ－４５、Ｉ－４９、Ｉ－５０、Ｉ－５２、Ｉ－５３、Ｉ－５４、Ｉ－５５、Ｉ－５７、Ｉ－５８、Ｉ－５９、Ｉ－６１、Ｉ－６９、Ｉ－７１、Ｉ－７３、Ｉ－７７、Ｉ－７８、Ｉ－８２、Ｉ－８７、Ｉ－９６、Ｉ－９７、Ｉ－９８、Ｉ－９９、Ｉ－１００、Ｉ－１０１、Ｉ－１０２、Ｉ－１０３、Ｉ－１２１、Ｉ－１２３、Ｉ－１２６、Ｉ－１２８、Ｉ－１３０、Ｉ－１５６、Ｉ－１５７及びＢＩ－３４０６、又はその医薬上許容される塩と、ＭＥＫ阻害剤の性質に関する態様であるトラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、レファメチニブ、態様１－１、１－２、１－３、１－４、１－５、１－６、１－７、１－８、１－９、１－１０、１－１１、１－１２、１－１３、１－１４、１－１５、１－１６、１－１７、１－１８、１－１９、１－２０、１－２１、１－２２、１－２３、１－２４、１－２５、１－２６、１－２７、１－２８、１－２９、１－３０、１－３１、１－３２、１－３３、１－３４、１－３５、１－３６、１－３７、１－３８、１－３９、１－４０、１－４１、１－４２、１－４３、１－４４、１－４５、１－４６、１－４７、１－４８、１－４９、１－５０、１－５１、１－５２、１－５３、１－５４、１－５５、１－５６、１－５７、１－５８、１－５９、１－６０、１－６１、１－６２、１－６３、１－６４、１－６５、１－６６、１－６７、１－６８、１－６９、１－７０、１－７１、１－７２、１－７３、１－７４、１－７５、１－７６、１－７７、１－７８、１－７９、２－１、２－２、２－３、２－４、２－５、２－６、２－７、２－８、２－９、２－１０、２－１１、２－１２、２－１３、２－１４、２－１５、２－１６、２－１７、２－１８、２－１９、２－２０、及び２－２１、又はその医薬上許容される塩との組み合わせである。

治療に使用するために、ＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤は、投与を容易にするのに適した医薬組成物に別々に又は一緒に含せることができる。よって、化合物は、各投与経路に適した、従来の非毒性の医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含む適切な単位剤形の製剤に、単独で又は一緒に製剤化することができる。ＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を別々に又は一緒に投与するための典型的な医薬組成物の例としては、例えば、錠剤、カプセル剤、坐剤、液剤（例えば、注射液及び輸液）、エリキシル剤、乳剤又は分散性粉末が挙げられる。有効成分の剤形及び製剤は、従来技術において知られている。
ＳＯＳ１阻害剤は、経口投与経路により投与することができ、各投与経路に適した、従来の非毒性の医薬上許容される担体、賦形剤及びビヒクルを含む適切な単位剤形の製剤に、単独で又は一緒に製剤化することができる。同様に、ＭＥＫ阻害剤は、経口投与経路により投与することができ、各投与経路に適した、従来の非毒性の医薬上許容される担体、賦形剤及びビヒクルを含む適切な単位剤形の製剤に、単独で又は組み合わせて製剤化することができる。服薬コンプライアンスの点から見て、経口投与が好ましい場合があるが、本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤の投与経路は、経口投与に限定されず、化合物は、非経口（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、経皮若しくは皮下注射、又は移植）、腸管、経鼻、腟内、直腸内、或いは局所投与により投与することができる。

単剤療法及び併用療法
本発明の目的は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性を獲得したがんに対する二次治療のオプションを提供する。
細胞株モデルにおいて、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を有するクローンは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ及びアダグラシブの両方に対して耐性を有することがｉｎｖｉｔｒｏで見出された。驚くべきことに、ＢＩ－３４０６などのＳＯＳ１阻害剤、及びＳＯＳ１阻害剤とトラメチニブなどのＭＥＫ阻害剤との組み合わせは、Ｇ１２Ｃの一次変異に加えて、Ｙ９６Ｄ及び／又はＹ９６Ｓ（Ｙ９６Ｄ／Ｓ）の二次変異も表す細胞に対する強力な活性を示した。
具体的には、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６による治療、及びＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６とＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとの併用治療により、細胞増殖が低下した。
ソトラシブ及びアダグラシブなどのＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤によるがん治療が従来技術において知られているが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性を獲得したがんに対する二次治療のオプションについての治療コンセプトは依然として不足している。

したがって、本発明は、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する場合の抗がん剤療法に使用するための、本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせに関する。単剤療法について、ＳＯＳ１阻害剤又はＭＥＫ阻害剤は、医薬組成物又は剤形に製剤して投与することができる。併用療法は、ＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤が依存的に製剤化して（例えば、１つの組成物に一緒に製剤化すること）投与するか、又は独立して（例えば、個別の組成物に製剤化すること）投与することができる。言い換えれば、併用療法において、ＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤は、同一の医薬組成物若しくは剤形の一部として投与するか、又は好ましくは、個別の医薬組成物若しくは剤形で投与することができる。
別の観点は、本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤を有効成分として含む医薬組成物に関する。更なる観点は、本明細書に記載のＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む医薬組成物に関する。別の観点は、本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤の両者を有効成分として含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい、がんの治療及び／又は予防に使用するための医薬の組み合わせであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記医薬の組み合わせに関する。

用語「医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクル」は、製剤化されている化合物の薬理活性を破壊しない非毒性の担体、賦形剤若しくはビヒクルを指す。本発明の組成物に使用され得る医薬上許容される担体、賦形剤若しくはビヒクルとしては、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、緩衝物質、例えば、リン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩若しくは電解質（例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩）、ポリビニルピロリドン、セルロースベース物質、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、又はポリエチレングリコールが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書において使用されているように、用語「有効成分」は、薬理活性又は他の直接的な効果を提供することを目的とする成分を指す。
ＳＯＳ１阻害剤、又はＭＥＫ阻害剤、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせは、治療上有効量で投与するか、又は治療上有効量で医薬組成物、剤形若しくは医薬の組み合わせに含ませることができる。「治療上有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な用量及び期間で有効な量を指し、疾患若しくは障害を予防、軽減、若しくは治療するのに必要な最小量、又は治療上有益な効果が化合物の毒性若しくは有害作用を上回る最小量である。

本明細書において使用されているように、用語「医薬の組み合わせ」は、１つの医薬組成物若しくは剤形単位での固定した組み合わせを指すか、又は好ましくは、ＳＯＳ１阻害剤をＭＥＫ阻害剤と独立して同時に投与するか、若しくは時間間隔内で個別に投与することができる併用投与のためのパーツのキットを指すことができる。医薬の組み合わせの化合物は、一緒にしてもよいし、別々にしてもよい。これは、ＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との医薬の組み合わせが、併用についての説明書の有無にかかわらず、別のパートナーの使用、適用若しくは製剤を指すか、又は組み合わせの製品を指すことを意味する。したがって、組み合わせのパートナーは、完全に個別に投与するか、又は完全に個別の医薬剤形であることができる。組み合わせのパートナーは、互いに独立して販売されている医薬組成物であってもよく、それらの併用のための適切な説明書のみが、添付文書（例えば、リーフレット等）において、又は例えば、口頭によるコミュニケーション、書面によるコミュニケーション等によって医師及び医療従事者に提供される他の情報において、共に活性であるための同時又は順次使用のために提供される。本明細書において使用されている用語「一緒に投与する」又は「組み合わせて投与」又は「併用」等は、それを必要とする単一の対象（例えば、患者）へ選択された組み合わせのパートナーの投与を包含することを意図しており、有効成分が必ずしも同じ投与経路で、及び／又は同時に投与されるわけではない治療計画を含むことを意図している。

別の観点は、１つ以上の容器に、
（ｉ）本明細書に記載のＳＯＳ１阻害剤又は医薬上許容されるその塩を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい（第１の）医薬組成物若しくは剤形、及び／又は
（ｉｉ）本明細書に記載のＭＥＫ阻害剤を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい第２の医薬組成物若しくは剤形、
を含み、
（ｉｉｉ）説明書を含む添付文書
を含んでもよい、
がんの治療及び／又は予防に使用するためのキットであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記キットに関する。
本明細書において使用されているように、医薬組成物についての用語「第１」及び「第２」は、これらの組成物が２つの異なる組成物であることを示すことのみを意図している。したがって、これらの用語は、投与の順番や順序を指すものとして理解してはならない。
好ましくは、添付文書は、本明細書に記載の過剰増殖性疾患、特にがんの治療を必要とする患者において、前記過剰増殖性疾患の治療における同時使用、一斉使用、順次使用、連続使用、交互使用又は個別使用のための、印刷された説明書を含む。

本明細書に開示されているＳＯＳ１阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせ、医薬組成物及び医薬の組み合わせのみならず、本明細書に開示されているＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤のすべての製剤は、同時、一斉、順次、連続的、交互又は個別に投与することができる。
用語「同時」は、両化合物／両組成物を実質的に同時に投与することを指す。用語「一斉」は、同じ一般的な期間に、例えば、同日であるが、必ずしも同時ではない、有効成分を投与することを指す。用語「順次」投与は、第１の期間に（例えば、数時間、数日又は１週間のコースにわたって）、１以上の投与量を使用して１つの有効成分を投与した後、第２の期間に（例えば、数時間、数日又は１週間のコースにわたって）、１以上の投与量を使用してもう１つの有効成分を投与することを含む。また、重複するスケジュールを使用してもよく、該スケジュールは、規則的な順序に従う必要がなく、治療期間にわたって異なる日に有効成分を投与することを含む。代わりに、用語「連続的」投与は、第１の化合物の投与が終了したら、直ちに第２の投与工程を行う投与を指す。交互投与は、ある期間に（例えば、数時間、数日又は１週間のコースにわたって）、１つの有効成分を投与した後、その次の期間に（例えば、数時間、数日又は１週間のコースにわたって）、別の有効成分を投与し、続いてそのパターンを１サイクル以上繰り返すことを含み、繰り返しの全体の回数は、選択される投与計画によって異なる。また、これらの一般的な投与形態のバリエーションを使用してもよい。

ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤
本明細書において使用されている用語「ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤」は、Ｇ１２Ｃ変異を示すＫＲＡＳの生物活性を阻害する及び／又は低下させる化合物を指す。異なる化合物クラスに属するＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤が知られている。
例としては、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及びアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）が挙げられる。ソトラシブ及びアダグラシブは、臨床データが報告されているＫＲＡＳＧ１２Ｃの選択的阻害剤である。ＩＮＮアダグラシブとして知られている化合物は、ラボコードＭＲＴＸ８４９としても知られている。例えば、国際公開第２０１７／２０１１６１号公報及び国際公開第２０１９／０９９５２４号公報には、調製のための一般的な反応スキーム、合成経路、及び性質が記載されている。ＩＮＮソトラシブとして知られている化合物は、ラボコードＡＭＧ５１０としても知られている。例えば、国際公開第２０１８／２１７６５１及び国際公開第２０２０／１０２７３０号公報には、調製のための一般的な反応スキーム、合成経路、及び性質が記載されている。本明細書において使用されている用語「ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤」はまた、該化合物の互変異性体、及び医薬上許容される塩、及び他のすべての固体形態を包含する。
更なる例としては、ＪＮＪ－７４６９９１５７及びＬＹ３４９９４４６として知られている化合物が挙げられる。
ＪＮＪ－７４６９９１５７（ＡＲＳ－３２４８）は、最近、ヒトでの臨床試験に到達した別の低分子ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤である。ＬＹ３４９９４４６として知られているＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤も、第１相試験に入ることが知られている(Nagasaka et al., Cancer Treat Rev., 2020, 84, 101974)。

がん
本発明の組み合わせ、組成物、キット、使用、方法及び使用のための化合物は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有するがんの治療に使用することができる。
ある観点により、がんの治療及び／又は予防に使用するためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で投与されるか、又はＳＯＳ１阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤を提供する。
別の観点は、がんの治療及び／又は予防する方法に使用するための、上述した医薬組成物、若しくは組み合わせ、若しくはキットであって、がんが、本明細書に記載のＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記医薬組成物、若しくは組み合わせ、若しくはキットを指す。
別の観点は、がんを治療及び／又は予防する方法であって、治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤若しくは治療上有効量のＭＥＫ阻害剤を患者に投与するか、又は治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤を治療上有効量のＭＥＫ阻害剤と組み合わせて患者に投与することを含み、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記方法に関する。
別の観点は、がんの治療用及び／又は予防用の医薬品の製造のための、ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤の使用であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で使用されるか、又はＳＯＳ１阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて使用され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記使用に関する。

再燃した患者及び／又は１種以上のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性を有する患者は、本発明による併用治療、例えば、セカンド又はサードラインの治療サイクル（１種以上の他の抗がん剤と更に組み合わせてもよい）に対して、又はアドオン組み合わせ若しくは代替療法として、特に適している。
したがって、ＳＯＳ１阻害剤、又はＭＥＫ阻害剤、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせの治療上の適用の可能性には、患者の治療のセカンドライン、サードライン又は更なるラインは含まれ得る。がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤を使用した１種以上の抗がん剤治療に対して、再発性（recurrent）、再燃性、耐性又は不応性であり得る。したがって、患者は、１種以上のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による以前の抗がん剤治療を受けているが、疾患がまだ完治していない場合がある。
ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤を使用する療法、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせを使用する療法は、がんが再燃している対象、がんがＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対して薬剤耐性を獲得した対象、又はがんが、１種以上のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による単剤療法若しくは併用療法の１ライン、２ライン若しくはそれ以上のラインに失敗した対象の治療に有効である。最初はＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に反応したがんが、例えば、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤の投与量を増やしたにもかかわらず、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤が、がんを有する対象の治療にもはや効果がない場合、再燃してＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対して耐性を獲得することがある。

よって、本発明の使用のための組み合わせ、組成物、キット、使用、方法及び化合物の一態様において、がんは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による以前の治療後に、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有するものとなった。別の態様において、がんは、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有するものとなった。好ましい態様において、がんは、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による以前の治療後に、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有するものとなった。
本明細書において使用されているように、用語「がん」は、細胞増殖が正常レベルを超えて増加する悪性疾患の状態を指す。がんは、いくつかの方法：がんが発生した組織のタイプ（組織学的なタイプ）により、原発部位、すなわちがんが最初に発生した体内の位置により、及び／又は分子的特徴表すことにより、分類することができる。
本発明の使用のための組み合わせ、組成物、キット、使用、方法及び化合物の好ましい態様において、がんは、がんのがん細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表す分子的特徴を示すものとして定義される。好ましい態様において、がんのがん細胞は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表すことが決定されている。

本発明の使用のための組み合わせ、組成物、キット、使用、方法及び化合物（すべての態様を含む）は、様々ながん、例えば、膵がん、肺がん、結腸直腸がん、胆管細胞がん、多発性骨髄腫、黒色腫、子宮がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、尿路上皮がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部扁平上皮がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道がん、慢性リンパ性白血病、肝細胞がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、神経膠芽腫、腎がん及び肉腫からなる群より選択されるがんの治療に使用することができる。
肺のがんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺がん（ＳＣＬＣ）を含む。一態様において、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。更なる態様において、がんは、結腸がんである。更なる態様において、がんは、膵がんである。

ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｙ９６Ｘ、及びＹ９６Ｄ、及び／又はＹ９６Ｓ変異
本明細書において使用されているように、用語「Ｙ９６Ｘ」は、チロシンの、別のアミノ酸によるあらゆる置換を指す。好ましくは、チロシンの、セリンによる置換（Ｙ９６Ｓ）又はアスパラギン酸（Ｙ９６Ｄ）による置換である。
腫瘍又はがんがＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｙ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｓ及び／又はＹ９６Ｄ変異を含むか否かについて決定することは、ＫＲＡＳタンパク質をコードするヌクレオチド配列を評価することにより、ＫＲＡＳタンパク質のアミノ酸配列を評価することにより、又は推定上のＫＲＡＳ変異タンパク質の特徴を評価することにより行うことができる。野生型ヒトＫＲＡＳの配列は、当技術分野において知られている。ＫＲＡＳヌクレオチド配列における変異を検出するための方法は、当業者に知られている。かかる方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応－制限断片長多型（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）アッセイ、ポリメラーゼ連鎖反応－一本鎖高次構造多型分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）アッセイ、リアルタイムＰＣＲアッセイ、ＰＣＲシーケンシング、変異アレル特異的ＰＣＲ増幅（ＭＡＳＡ）アッセイ、ダイレクトシーケンシング、プライマー伸長反応、電気泳動、オリゴヌクレオチド連結アッセイ、ハイブリダイゼーションアッセイ、ＴａｑＭａｎアッセイ、ＳＮＰジェノタイピングアッセイ、高解像度融解曲線アッセイ及びマイクロアレイ解析が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ変異について、試料をリアルタイムＰＣＲにより評価する。リアルタイムＰＣＲにおいて、ＫＲＡＳ変異に特異的な蛍光プローブを使用する。変異が存在する場合、プローブが結合し、蛍光が検出される。いくつかの態様において、ＫＲＡＳ遺伝子における特定の領域（例えば、エクソン２及び／又はエクソン３）のダイレクトシーケンシング法を使用し、ＫＲＡＳ変異を同定する。この技術により、配列が決定された領域において可能性のあるすべての変異を同定する。ＫＲＡＳにおける変異を検出するための方法は、当業者に知られている。かかる方法としては、変異タンパク質に特異的な結合剤（例えば、抗体）を使用するＫＲＡＳ変異体の検出、タンパク質電気泳動、ウエスタンブロッティング及びペプチドのダイレクトシーケンシングが挙げられるが、これらに限定されない。

腫瘍又はがんがＫＲＡＳ変異を含むか否かについて決定するための方法は、様々な試料を使用することができる。いくつかの態様において、試料は、腫瘍又はがんを有する対象から採取したものである。いくつかの態様において、試料は、新鮮な腫瘍／がん試料である。いくつかの態様において、試料は、凍結された腫瘍／がん試料である。いくつかの態様において、試料は、ホルマリン固定パラフィン包埋試料である。いくつかの態様において、試料は、細胞溶解物に処理される。いくつかの態様において、試料は、ＤＮＡ又はＲＮＡに処理される。いくつかの態様において、試料は、液体生検であり、試験は、血液の試料に対して行い、血液中に循環している、腫瘍由来のがん細胞、又は血液中に存在する腫瘍細胞からのＤＮＡ断片を探す。
別の観点は、患者のＫＲＡＳ変異状態と本発明による治療に対する潜在的な感受性との関連性を明らかにすることに基づく。治療は、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤のいずれかによる単剤療法、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤による併用療法であってもよい。このような治療は、ＫＲＡＳ変異を有し、かつ他の療法に対して耐性を有するおそれがある患者の治療に有利に使用することができる。したがって、これにより、本発明による治療を受ける患者、特にがん患者を選択するための機会、方法及び手段を提供する。選択は、治療すべき腫瘍細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤（例えば、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９））による治療に対して耐性を有するか、又は前記耐性を有するものとなったか否か（特に、腫瘍細胞が、Ｇ１２ＣをＫＲＡＳの一次変異として、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を表す場合）に基づく。したがって、ＫＲＡＳの遺伝子状態（Ｇ１２ＣＹ９６Ｘ、好ましくはＧ１２ＣＹ９６Ｄ及び／又はＧ１２ＣＹ９６Ｓ）は、本明細書に記載の治療を選択することが有利である可能性を示すバイオマーカーとして使用することができる。

ある観点は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する獲得耐性を有する個体、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有する個体を検出又は診断するためのインビトロ方法であって、
－個体から採収した生体試料中の、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の存在を決定する工程を含み、
ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の検出に基づいて、個体が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤による治療に対する耐性を有するもの、及びＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するものに分類される、前記方法に関する。
本明細書において使用されているように、用語「個体」は、対象又は患者を指す。

別の観点により、ＳＯＳ１阻害剤、又はＭＥＫ阻害剤、又はＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療を受ける患者を選択するための方法であって、
－患者から採取した腫瘍細胞含有試料を提供すること、
－Ｇ１２Ｃの一次変異、及びＹ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異（すなわち、それぞれ、Ｇ１２ＣＹ９６Ｄ又はＧ１２ＣＹ９６Ｓである）を有する変異したＫＲＡＳを表すか否かについて決定すること、並びに
－上記決定に基づいて治療を受ける患者を選択すること
を含む、前記方法が提供される。
方法は、実際の患者の試料単離工程を含んでもよく、除いてもよい。
腫瘍細胞のＤＮＡがＧ１２ＣＹ９６Ｘ変異したＫＲＡＳ遺伝子を有する場合、患者は、治療を受けるために選択され得る。
ある観点において、腫瘍細胞のＤＮＡがＧ１２ＣＹ９６Ｄ変異したＫＲＡＳ遺伝子を有する場合、患者は、治療を受けるために選択され得る。
別の観点において、腫瘍細胞のＤＮＡがＧ１２ＣＹ９６Ｓ変異したＫＲＡＳ遺伝子を有する場合、患者は、治療を受けるために選択され得る。

更なる関連する観点は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有するがん若しくはがん細胞、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するがん若しくはがん細胞のバイオマーカーとしての、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の使用を指す。
本明細書において使用されているように、用語「バイオマーカー」は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性などの特定の生理的状態の存在と関連する生化学的パラメーターを指す。上述したとおり、ＫＲＡＳタンパク質をコードするヌクレオチド配列を評価する決定方法、及び／又はＫＲＡＳヌクレオチド配列における変異を検出するための方法を使用することができる。
別途定義されていない限り、本明細書において使用されている技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を持つ。
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するために供するものであるが、本発明を限定するものではない。

細胞株及び試薬
ＫＲＡＳＧ１２変異を発現するＮＳＣＬＣ細胞株（ＮＣＩ－Ｈ３５８（Ｇ１２Ｃ）細胞、ＮＣＩ－Ｈ２３（Ｇ１２Ｃ）細胞、ＮＣＩ－Ｈ２１２２（Ｇ１２Ｃ）細胞、ＮＣＩ－Ｈ２００９（Ｇ１２Ａ）細胞及びＮＣＩ－Ｈ４４１（Ｇ１２Ｖ）細胞）は、故ＡｄｉＦ．Ｇａｚｄａｒ博士のご厚意により提供された。Ａ５４９（Ｇ１２Ｓ）細胞及びＳＫ－ＬＵ１（Ｇ１２Ｄ）細胞は、故長田啓隆博士のご厚意により提供された。不死化マウスプロＢ細胞株Ｂａ／Ｆ３は、理化学研究所バイオリソース研究センター（つくば市、日本）から入手した。
ＳＫ－ＬＵ１細胞以外の細胞を、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ、和光）を追加した１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、シグマアルドリッチ、セントルイス、ＭＯ、ＵＳＡ）を追加したＲＰＭＩ１６４０培地（和光、大阪、日本）で、３７℃において５％ＣＯ₂で培養した。ＳＫ－ＬＵ１細胞を１０％ＦＢＳ（シグマアルドリッチ）及び１％Ｐ／Ｓ（和光）を有するＤＭＥＭ（シグマアルドリッチ）で培養した。親Ｂａ／Ｆ３細胞をマウスＩＬ－３の存在下で無菌条件下で維持した。ＴａＫａＲａＰＣＲＭｙｃｏｐｌａｓｍａＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｅｔ（タカラ、草津、日本）を使用してマイコプラズマ汚染を確認した。
ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ及びアダグラシブは、メドケムエクスプレス（モンマス・ジャンクション、ＮＪ、ＵＳＡ）から購入した。ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６は、ベーリンガーインゲルハイム（インゲルハイム、ドイツ）から提供された。ＴＮＯ１５５は、セレックバイオテック（ヒューストン、ＴＸ、ＵＳＡ）から購入した。薬物を１０ｍＭジメチルスルホキシド（シグマアルドリッチ）に溶解し、－８０℃において保存した。

方法
Ｂａ／Ｆ３細胞及びＨ３５８細胞へのＫＲＡＳ変異の導入：
ＫｏｇａＴ．ら（Lung Cancer 2018;126:72-79.26）により以前に報告されているように、レトロウイルスシステムを使用し、Ｂａ／Ｆ３細胞又はＨ３５８細胞へのＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ及びＧ１２Ｖ変異の導入を行った。これらの３つの変異は、ＮＳＣＬＣにおけるＫＲＡＳ変異の～８０％を占める。簡潔に説明すると、ＰｒｉｍｅＳＴＡＲＭｕｔａｇｅｎｅｓｉｓＢａｓａｌＫｉｔ（タカラ）を使用し、設計されたプライマーで各ＫＲＡＳ変異をｐＢＡＢＥ－ｐｕｒｏ－ＫＲａｓコンストラクト（Ａｄｄｇｅｎｅ、ケンブリッジ、ＭＡ、ＵＳＡ）に導入した。ＦｕＧＥＮＥ６トランスフェクション試薬（ロシュ・ダイアグノスティックス、バーゼル、スイス）で各ｐＢＡＢＥ－ｐｕｒｏ－ＫＲＡＳコンストラクト及びｐＶＳＶ－Ｇベクター（クロンテック、フリーモント、ＣＡ、ＵＳＡ）をｇｐ－ＩＲＥＳ２９３細胞に同時導入することにより、レトロウイルス粒子を生成した。レトロウイルス濃縮キット（クロンテック）を使用してウイルス粒子を濃縮した。各レトロウイルスをＢａ／Ｆ３細胞（３×１０³）又はＨ３５８細胞（１×１０⁴）に導入して、前記細胞を３７℃において数日培養した。０．８～１．０μｇ／ｍＬ又は２．０μｇ／ｍＬのピューロマイシンにより、導入されたＢａ／Ｆ３細胞又はＨ３５８細胞のそれぞれを選別した。ピューロマイシン選別後、以下のように各ＫＲＡＳ変異の存在を確認した。ｍｉｒＶａｎａｍｉＲＮＡＩｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔ（キアゲン、ヒルデン、ドイツ）を使用して細胞からトータルＲＮＡを抽出し、ＲｅｖｅｒＴｒａＡｃｅ（東洋紡、大阪、日本）を使用して逆転写によりｃＤＮＡを作製した。ＰＣＲにより、ＫＲＡＳコード配列を増幅した。３１３０又は３５００ＸＬジェネティックアナライザ（アプライド・バイオシステムズ、ウォルサム、ＭＡ）を使用したサンガーシーケンシングにより、ＫＲＡＳヌクレオチド配列を確認した。

細胞増殖アッセイ及び増殖阻害アッセイ：
ＫＲＡＳ変異の１つを発現するＢａ／Ｆ３細胞（３×１０⁴）を６ウェルプレートに入れ、ＩＬ－３の非存在下で培養した。対照として、同時導入されていないＢａ／Ｆ３細胞をＩＬ－３の存在下又は非存在下で培養した。ワンセルカウンター（バイオメディカルサイエンス、東京、日本）を用いて、９６時間まで、細胞数を２４時間ごとに３回計数した。
二次元（２Ｄ）増殖阻害アッセイにおいて、５×１０³細胞を９６ウェルプレートにおいて２４時間培養し、１０の異なる濃度の試薬により７２時間処理した。セルカウンティングキット－８（同仁化学研究所、熊本、日本）を使用して細胞生存率アッセイを行った。マルチプレートリーダー（テカン、メンネドルフ、スイス）を使用して４５０ｎｍの吸光度を読み取ることにより、細胞生存率を反映するホルマザン色素の量を測定した。３Ｄ増殖阻害アッセイにおいて、５×１０³細胞を、成長因子低減したマトリゲル（コーニング、ニューヨーク、ＵＳＡ）内に包埋し、９６ウェルプレートにおいて、１０％ＦＢＳ（シグマアルドリッチ）及びＰ／Ｓ（和光）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（和光）で培養した。７２時間のインキュベーション後、細胞を指定濃度で７２時間処理し、上述したように細胞生存率アッセイを行った。グラフパッドプリズム第８版（グラフパッドソフトウェア、サンディエゴ、ＣＡ）での応答を正規化した可変勾配モデルを利用した非線形回帰曲線フィットにより、ＩＣ５０値を決定した。

ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対して耐性を有するクローンの樹立：
Kobayashi Y. et al., Mol Cancer Ther 2017;16:357-364に記載されたように、ソトラシブ及びアダグラシブに対して耐性を有するクローンを作製するためのＥＮＵ（シグマアルドリッチ）による変異誘発を行った。ＫＲＡＳＧ１２Ｃを有するＢａ／Ｆ３細胞（合計で１×１０⁶）を１００μｇ／ｍｌのＥＮＵに２４時間曝した。ＰＢＳによる洗浄後、細胞を４８時間培養し、指定濃度のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤とともに９６ウェルプレートに入れた。細胞を１４～２１日間処理し、培地と薬物を３日～５日ごとに交換した。処理の過程で、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対して耐性を有するクローンが産生した。
免疫ブロッティング：
標準的な方法で、細胞溶解物の調製と免疫ブロッティングを行った。指定濃度のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤又はＤＭＳＯによる処理後、細胞ペレットを溶解バッファーに溶解した。ＢＳＡを標準曲線として、ＤＣプロテインアッセイ（バイオ・ラッド、ハーキュリーズ、ＣＡ）を使用し、タンパク質濃度を測定した。合計で２０～３０μｇのタンパク質を５～２０％アクリルアミドの各ウェルに入れ、１２０Ｖで電気泳動を２時間行った。トランスブロット（登録商標）Ｔｕｒｂｏ（商標）転写システム（バイオ・ラッド）を使用し、分離されたタンパク質をＰＶＤＦ膜（トランスブロット（登録商標）Ｔｕｒｂｏ（商標）ミニ０．２μｍＰＶＤＦ転写パック、バイオ・ラッド）に転写した。ブロッキングバッファー（タカラ）によるブロッキング後、膜を以下のタンパク質に対する抗体で、４℃において一晩プローブした：リン酸化（ｐ）－ｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４、ＣＳＴ#９１０１ｓ）、ｐ４４／４２ＭＡＰＫ（ＣＳＴ#９１０２ｓ）、ｐＭＥＫ１（Ｓ２９８、ＣＳＴ#９１２８ｓ）、ＭＥＫ１（ＣＳＴ#９１４６ｓ）、ｐＳ６（Ｓ２３５／２３６、ＣＳＴ#４８５８ｓ）、Ｓ６（ＣＳＴ#２２１７）、ＫＲＡＳ（ＣＳＴ#５３２７０ｓ）及びβ－アクチン（ＣＳＴ#４９７０ｓ）。２次抗体として、ＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ（ＣＳＴ#７０４０）を標的タンパク質及び１次抗体の複合体と２時間インキュベートした。化学発光アッセイについて、ＥＣＬ溶液（ＧＥヘルスケア、シカゴ、イリノイ州）を膜に添加し、アマシャムイメージャー６８０（ＧＥヘルスケア）でスキャンして標的タンパク質の発現を検出した。

実施例１
ソトラシブ又はアダグラシブで処理した後に発生した二次変異の決定
１．１ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有する細胞におけるソトラシブ及びアダグラシブによる増殖阻害効果の確認
まず、上で説明した２Ｄ及び３Ｄ培養の両方で、ＫＲＡＳＧ１２変異を有する６種のＮＳＣＬＣ細胞株において、臨床段階のＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ及びアダグラシブの増殖阻害活性を評価した。ソトラシブ及びアダグラシブで処理した、ＫＲＡＳＧ１２が変異したＮＳＣＬＣ細胞株であるＨ３５８（Ｇ１２Ｃ）細胞、Ｈ２３（Ｇ１２Ｃ）細胞、Ａ５４９（Ｇ１２Ｓ）細胞、Ｈ２００９（Ｇ１２Ａ）細胞、Ｈ４４１（Ｇ１２Ｖ）細胞、及びＳＫ－ＬＵ１（Ｇ１２Ｄ）細胞の増殖阻害曲線により、両ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＨ３５８細胞及びＨ２１２２細胞において増殖阻害活性を示した一方で、Ｇ１２Ｃ以外のＫＲＡＳ変異を有するＮＳＣＬＣ細胞株が、ソトラシブ及びアダグラシブに対して耐性を有すること（ＫＲＡＳＧ１２Ｃを発現するがソトラシブに対する感受性が低いＨ２３細胞を除く）が確認された。

また、ＫＲＡＳＧ１２が変異したバリアントであるＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｖ又はＧ１２Ｄにより駆動された、Ｂａ／Ｆ３細胞株におけるソトラシブ及びアダグラシブの増殖阻害効果を試験した。図１Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ又はＧ１２Ｖを有する改変されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図１Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ、Ｇ１２Ｄ又はＧ１２Ｖを有する改変されたＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。図１Ａ及び１Ｂから分かるように、ＫＲＡＳＧ１２Ｃを発現するＢａ／Ｆ３細胞は、ソトラシブ及びアダグラシブに対して感受性を有した一方で、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ又はＧ１２Ｖのいずれかの変異を有するＢａ／Ｆ３細胞は、ソトラシブ及びアダグラシブに対して耐性を有した。ＫＲＡＳＧ１２Ｃを有するＢａ／Ｆ３細胞のソトラシブ及びアダグラシブに対するＩＣ₅₀値は、それぞれ１２．４ｎＭ及び１．３ｎＭであった。
これらの結果は、ソトラシブ又はアダグラシブが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を示すＨ３５８細胞及びＢａ／Ｆ３細胞において有効であることを示している。

１．２ソトラシブ又はアダグラシブに対する耐性を引き起こすＫＲＡＳの二次変異の探索
ソトラシブ又はアダグラシブに対する獲得耐性をもたらす二次変異を同定するために、上述したようにＥＮＵ変異誘発スクリーニングを行った。ソトラシブの最低濃度（１００ｎＭ）及びアダグラシブの最低濃度（２０ｎＭ）を、親Ｇ１２ＣＢａ／Ｆ３細胞の増殖を抑制した最低濃度として決定した。ソトラシブの最高濃度（２０００ｎＭ）及びダグラシブの最高濃度（１０００ｎＭ）を、Ｇ１２ＣＢａ／３細胞に対する各ＫＲＡＳ^G12C阻害剤のＩＣ₅₀の１００倍超に決定した。この試験において、合計で１４２個の耐性を有するクローンが産生した。これらのクローンの中で、ＫＲＡＳの二次変異は、８７．３％に相当する１４２クローン中１２４クローンで同定された。ソトラシブで処理したクローンにおいて、ＫＲＡＳの二次変異を有し、かつ耐性を有する６８個のクローンを同定した。高濃度（１０００ｎＭ以上）のソトラシブによる処理後、Ａ５９Ｔ変異（ｎ＝６）、Ｒ６８Ｍ変異（ｎ＝３）及びＹ９６Ｄ変異（ｎ＝１）が同定された一方、より低い濃度のソトラシブで増殖させた細胞において最も一般的に検出されたのは、Ｇ１３Ｄ変異（ｎ＝１３）、Ａ５９Ｓ変異（ｎ＝１１）、Ｒ６８Ｍ変異（ｎ＝８）及びＱ６１Ｌ変異（ｎ＝５）であった。アダグラシブ処理後、耐性を有する７４個のクローンが得られた。Ｙ９６Ｄ変異が、高濃度（５００ｎＭ以上）のアダグラシブで樹立された細胞（ｎ＝１３）において同定された一方で、Ｑ９９Ｌ（ｎ＝３８）、Ｒ６８Ｓ（ｎ＝１０）、Ｖ８Ｅ（ｎ＝５）、Ｍ７２Ｉ（ｎ＝５）及びＡ５９Ｓ（ｎ＝３）が、より低い濃度のアダグラシブで増殖させた細胞において検出された。ソトラシブに対して耐性を有する細胞とアダグラシブに対して耐性を有する細胞との間に共通の二次変異は、Ａ５９Ｓ変異及びＹ９６Ｄ変異であると決定した。

１．３ソトラシブ又はアダグラシブに対して生じた二次変異の交差耐性の決定
交差耐性を評価するために、ＥＮＵ変異誘発により生じた耐性クローンに対して、ソトラシブ及びアダグラシブによる増殖阻害アッセイを行った。図２Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、ＥＮＵ変異誘発により生じた二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図２Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、ＥＮＵ変異誘発により生じた二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害曲線を示す。
ＫＲＡＳＧ１２Ｃの親Ｂａ／Ｆ３細胞に対するソトラシブ及びアダグラシブのＩＣ₅₀値が異なった（それぞれ、１２．４ｎＭ及び１．３ｎＭ）ため、耐性指標（resistance index、ＲＩ）を使用して、各二次変異の耐性程度を明確に比較した。ＲＩは、ＫＲＡＳＫＲＡＳＧ１２Ｃを有する親Ｂａ／Ｆ３細胞についての各薬物のそれぞれのＩＣ₅₀に対する、耐性を有する各クローンについての各薬物のＩＣ₅₀の比として定義された。

表１は、ＥＮＵ変異誘発により生じた、ソトラシブに対して耐性を有するクローン及びアダグラシブに対して耐性を有するクローンの耐性指標（ＲＩ）値をまとめたものである。ＲＩ値を式：耐性を有する各クローンのＩＣ₅₀／ＫＲＡＳＧ１２Ｃを有する親Ｂａ／Ｆ３細胞のＩＣ₅₀により算出した。表１において、低い耐性は、１０未満のＲＩ値に対応し、中程度の耐性は、１０を超えるが１００未満であるＲＩ値に対応し、高い耐性は、１００超のＲＩ値に対応する。
表１：耐性指標（ＲＩ）値

表１から分かるように、ソトラシブに対して、Ｇ１３Ｄ、Ａ５９Ｓ／Ｔ、Ｒ６８Ｍ及びＹ９６Ｄ／Ｓが高い耐性（ＲＩ＞１００）を有した一方で、アダグラシブに対して、Ｙ９６Ｄ／Ｓ及びＱ９９Ｌが高い耐性を有した。

ソトラシブに対して耐性を有するクローンとアダグラシブに対して耐性を有するクローンとの間で、二次変異のスペクトルはかなり異なった。例えば、Ｇ１３Ｄ、Ａ５９Ｓ／Ｔ及びＲ６８Ｍは、ソトラシブに対する耐性を獲得したが、アダグラシブに対する感受性を維持した一方で、Ｑ９９Ｌの二次変異は、アダグラシブに対して耐性を有したが、ソトラシブに対して感受性を有した。
ＥＮＵ変異誘発を受けたＢａ／Ｆ３細胞のモデルは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ又はアダグラシブに対する耐性を示すＫＲＡＳの二次変異を提供する。この方法は人工的であり、今回見られたように、Ｇ：ＣからＡ：Ｔへの転移及びＡ：ＴからＴ：Ａへの塩基転換、並びにＡ：ＴからＧ：Ｃヘの塩基変化が優先されることが知られているが、この方法は、二次変異を有し、かつ耐性を有するクローンを生成するのに効率的である。それにもかかわらず、このアッセイで同定された二次変異は、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ及びＭＥＴ－ＴＫＩ治療の失敗後の臨床現場で見られた獲得耐性の変異と一致する。
しかしながら、このモデルを使用したことによる結果は、Ｙ９６Ｄ／Ｓの二次変異が、耐性変異として、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤であるソトラシブ及びアダグラシブの両方に共通することを示しており、Ｙ９６Ｄ／Ｓの二次変異により、ソトラシブ及びアダグラシブの両方に対する交差耐性を引き起こすことを示している。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、Ｙ９６は、ソトラシブ及びアダグラシブがＫＲＡＳＧ１２Ｃタンパク質に結合する疎水性ポケットの入口に位置すると思われる。

実施例２
ＫＲＡＳのＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓの二次変異の検証
２．１Ｂａ／Ｆ３細胞での、ソトラシブ又はアダグラシブに対する耐性を有する細胞において検出されたＫＲＡＳの二次変異の検証
観察された耐性がＫＲＡＳの二次変異の出現に起因するものであり、未確認の機序に起因するものではないことを確認するために、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、実施例１で決定したＲＩが１００超である７種の二次変異であるＧ１３Ｄ、Ａ５９Ｓ／Ｔ、Ｒ６８Ｍ、Ｙ９６Ｄ／Ｓ、又はＱ９９ＬのいずれかをＢａ／Ｆ３細胞に導入し、その後、これらのＢａ／Ｆ３を使用した増殖阻害アッセイを行った。
図３Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイを示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図３Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイを示す。

表２は、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞の耐性指標（ＲＩ）値をまとめたものである。ＲＩ値を以下の式：再構築された各Ｂａ／Ｆ３細胞のＩＣ₅₀／ＫＲＡＳＧ１２Ｃを有する親Ｂａ／Ｆ３細胞のＩＣ₅₀により算出した。表２において、低い耐性は、１０未満のＲＩ値に対応し、中程度の耐性は、１０を超えるが１００未満のＲＩ値に対応し、高い耐性は、１００超のＲＩ値に対応する。

表２から分かるように、Ｇ１３Ｓ、Ａ５９Ｓ／Ｔ、Ｒ６８Ｍ、Ｑ９９Ｌなどの耐性変異のいくつかは、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤をソトラシブからアダグラシブに、又はその逆に切り替えることにより克服することができたが、高濃度のソトラシブ又はアダグラシブによる処理後に現れたＹ９６Ｄ／Ｓ変異は、両阻害剤に対して高い耐性を有した。

２．２Ｈ３５８細胞での、ソトラシブ又はアダグラシブに対する耐性を有する細胞において検出されたＫＲＡＳの二次変異の検証
更なる試験において、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄ、Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｓ、及びＧ１２Ｃに加えてＡ５９Ｓを、元々ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異を有するＮＣＩ－Ｈ３５８細胞にレトロウイルスにより導入した。図４Ａは、指定濃度のソトラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて二次変異を有するＨ３５８細胞の増殖阻害アッセイを示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。図４Ｂは、指定濃度のアダグラシブで７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて二次変異を有するＨ３５８細胞の増殖阻害アッセイを示す。図４Ａ及び４Ｂから分かるように、増殖阻害アッセイにおいて、Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄを有するＨ３５８細胞、又はＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｓを有するＨ３５８細胞は、親Ｈ３５８細胞と比較して、おおよそ３０倍高いＩＣ₅₀値を示した。
これは、Ｇ１２Ｃに加えてＡ５９Ｓを有するＨ３５８細胞は、Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄを有するＨ３５８細胞又はＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｓを有するＨ３５８細胞と比較して、両ＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性が低かったことを示している（Ｂａ／Ｆ３細胞での結果と一致している）。

実施例３
二次変異Ｙ９６Ｄ及びＹ９６ＳによるＫＲＡＳＧ１２Ｃ阻害剤に対する耐性を克服するための、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６の効果、及びＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとの併用によるＢＩ－３４０６の効果の測定
３．１Ｂａ／Ｆ３細胞におけるＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６の効果の測定
Ｇ１２Ｃに加えて、Ａ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓのいずれかを有するＢａ／Ｆ３細胞を、既述のように、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６、又はＳＨＰ２阻害剤であるＴＮＯ１５５とインキュベートした。図５Ａは、指定濃度のＢＩ－３４０６で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＡ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を有するＢａ／Ｆ３細胞の増殖阻害アッセイを示す。結果は、３回の個別の試験の平均値として示されている。エラーバーは、標準偏差（ＳＤ）を示す。
以下の表３は、指定濃度のＢＩ－３４０６又はＴＮＯ１５５で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて、Ａ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異も有するＢａ／Ｆ３細胞のＩＣ₅₀値をまとめたものである。

Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄ又はＹ９６Ｓのいずれかを有するＢａ／Ｆ３細胞をＢＩ－３４０６で処理すると、ＩＣ₅₀は３８．０ｎＭ及び２５．７ｎＭとなったのに対し、Ｇ１２Ｃに加えて二次変異を有するＢａ／Ｆ３細胞に対するＴＮＯ１５５のＩＣ₅₀値は、１０００ｎＭ超であった。Ｇ１２Ｃに加えてＡ５９Ｓが変異したＢａ／Ｆ３細胞において、ＢＩ－３４０６及びＴＮＯ１５５は、それぞれ４８５０ｎＭ及び３０５０ｎＭのＩＣ₅₀を示したが、いずれも、腫瘍細胞の増殖を減少させることができなかった。
これらの結果は、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６が、Ｇ１２Ｃ及びＹ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を同時に有する（concurrent）インビトロモデルに対して活性を示したことを示している。

３．２ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異とＹ９６Ｄ又はＹ９６Ｓ変異とを有するＨ３５８細胞での、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６単独の効果、及びＢＩ－３４０６とＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとの併用の効果の測定
２Ｄ及び３Ｄの増殖阻害アッセイにおいて、Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄを発現するＨ３５８細胞又はＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｓを発現する細胞を、上記のようにＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６単独、又はＢＩ－３４０６にＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブを併用してインキュベートした。
図５Ｂは、指定濃度のＢＩ－３４０６で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＡ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を有するＨ３５８細胞の三次元（３Ｄ）増殖阻害アッセイを示す。以下の表４は、２Ｄアッセイ及び図５Ｂに示されている３Ｄアッセイにおいて、異なる濃度のＢＩ－３４０６単独で７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えて二次変異Ａ５９Ｓ、Ｙ９６Ｄ及びＹ９６Ｓを有するＨ３５８同質遺伝子細胞のＩＣ₅₀値及びＩＣ₅₀ ^*値をまとめたものである。ＩＣ₅₀ ^*値は、最大阻害と最小阻害との間の中間の反応を示した濃度を示す。

表４及び図５Ｂから分かるように、２Ｄアッセイ及び３Ｄアッセイの両方において、ＢＩ－３４０６の単剤療法は、親Ｈ３５８細胞の増殖のみならず、Ｙ９６Ｄ／Ｓの二次変異も有するＨ３５８細胞の増殖を中程度に阻害した。

図５Ｃは、１μＭのＢＩ－３４０６と指定濃度のトラメチニブとを併用して７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄ又はＹ９６Ｓの二次変異を有するＨ３５８細胞の三次元（３Ｄ）増殖阻害アッセイを示す。表５は、図５Ｃに示されている３Ｄアッセイにおいて、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６とＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとを併用して７２時間処理した、ＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄの二次変異及びＫＲＡＳＧ１２Ｃに加えてＹ９６Ｓの二次変異を有するＨ３５８細胞のＩＣ₅₀値をまとめたものである。

表５及び図５Ｃから分かるように、Ｇ１２Ｃに加えてＹ９６Ｄ／Ｓの二次変異を有するＨ３５８細胞は、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６にＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブを併用することによる処理に対して感受性を有し、それらの感受性は、親Ｈ３５８細胞と同等であった。
これらの結果は、ＳＯＳ１阻害剤であるＢＩ－３４０６単独又はＭＥＫ阻害剤であるトラメチニブとの併用が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃ変異及びＹ９６Ｄ／Ｓの二次変異を有するＢａ／Ｆ３細胞及びＨ３５８細胞において、強力な阻害活性を示したことを示している。これにより、セカンドライン療法に切り替えるためのオプションを提供し、ソトラシブ及びアダグラシブによる治療の過程で耐性を獲得すると、出現すると予想される、ＫＲＡＳの二次変異により引き起こされる獲得耐性を克服する。

Claims

がんの治療及び／又は予防に使用するためのＳｏｎｏｆＳｅｖｅｎｌｅｓｓ１（ＳＯＳ１）阻害剤及び／又はマイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）阻害剤であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で投与されるか、又はＳＯＳ１阻害剤がＭＥＫ阻害剤と組み合わせて投与され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有することを特徴とする、前記ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
がんが、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有する、請求項１に記載の使用のためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
がんのがん細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表す、請求項１又は２に記載の使用のためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
ＳＯＳ１阻害剤が、以下の化合物：

からなる群より選択されるもの又はその医薬上許容される塩である、請求項１～３のいずれか１項に記載の使用のためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
ＭＥＫ阻害剤が、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、レファメチニブ並びに以下の化合物：

からなる群より選択されるもの又はその医薬上許容される塩である、請求項１～４のいずれか１項に記載の使用のためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
がんが、膵がん、肺がん、結腸直腸がん、胆管細胞がん、多発性骨髄腫、黒色腫、子宮がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、尿路上皮がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部扁平上皮がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道がん、慢性リンパ性白血病、肝細胞がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、神経膠芽腫、腎がん及び肉腫からなる群より選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の使用のためのＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤。
がんの治療及び／又は予防に使用するための、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む医薬組成物、又はＳＯＳ１阻害剤及びＭＥＫ阻害剤を有効成分として含む医薬の組み合わせであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記医薬組成物又は医薬の組み合わせ。
１つ以上の容器に、
（ｉ）ＳＯＳ１阻害剤を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい第１の医薬組成物若しくは剤形、及び／又は
（ｉｉ）ＭＥＫ阻害剤を含み、医薬上許容される担体、賦形剤及び／若しくはビヒクルを含んでもよい第２の医薬組成物若しくは剤形、
を含み、
（ｉｉｉ）説明書を含む添付文書
を含んでもよい、
がんの治療及び／又は予防に使用するためのキットであって、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記キット。
がんを治療及び／又は予防する方法であって、治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤若しくは治療上有効量のＭＥＫ阻害剤を患者に投与するか、又は治療上有効量のＳＯＳ１阻害剤を治療上有効量のＭＥＫ阻害剤と組み合わせて患者に投与することを含み、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有する、前記方法。
がんの治療用及び／又は予防用の医薬品の製造のための、ＳＯＳ１阻害剤及び／又はＭＥＫ阻害剤の使用であって、ＳＯＳ１阻害剤若しくはＭＥＫ阻害剤が単独で使用されるか、又はＳＯＳ１阻害剤が、ＭＥＫ阻害剤と組み合わせて使用され、がんが、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有することを特徴とする、前記使用。
ＳＯＳ１阻害剤が、請求項４に記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩であり、及び／又はＭＥＫ阻害剤が、請求項５に記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩である、請求項７に記載の医薬組成物又は医薬の組み合わせ、請求項８に記載のキット、請求項９に記載の方法、或いは請求項１０に記載の使用。
がんが、ソトラシブ（ＡＭＧ５１０）及び／又はアダグラシブ（ＭＲＴＸ８４９）による治療に対する耐性を有する、請求項７に記載の医薬組成物又は医薬の組み合わせ、請求項８に記載のキット、請求項９に記載の方法、或いは請求項１０に記載の使用。
がんのがん細胞が、ＫＲＡＳＧ１２Ｃの一次変異を表し、Ｙ９６Ｘの二次変異、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択されるＹ９６Ｘの二次変異を更に表す、請求項７に記載の医薬組成物又は医薬の組み合わせ、請求項８に記載のキット、請求項９に記載の方法、或いは請求項１０に記載の使用。
がんが、膵がん、肺がん、結腸直腸がん、胆管細胞がん、多発性骨髄腫、黒色腫、子宮がん、子宮内膜がん、甲状腺がん、急性骨髄性白血病、膀胱がん、尿路上皮がん、胃がん、子宮頸がん、頭頸部扁平上皮がん、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道がん、慢性リンパ性白血病、肝細胞がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、神経膠芽腫、腎がん及び肉腫からなる群より選択される、請求項７に記載の医薬組成物又は医薬の組み合わせ、請求項８に記載のキット、請求項９に記載の方法、或いは請求項１０に記載の使用。
ＫＲＡＳ G１２Cの阻害剤による治療に対する獲得耐性を有する個体、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有する個体を検出又は診断するためのインビトロ方法であって、
－個体から採取した生体試料中の、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の存在を決定する工程を含み、
ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の検出に基づいて、個体が、ＫＲＡＳ G１２Cの阻害剤による治療に対する耐性を有するもの、及びＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するものに分類される、前記方法。
ＫＲＡＳＧ１２Ｃの阻害剤による治療に対する耐性を有するがん若しくはがん細胞、及び／又はＳＯＳ１阻害剤、若しくはＭＥＫ阻害剤、若しくはＳＯＳ１阻害剤とＭＥＫ阻害剤との組み合わせによる治療に対する感受性を有するがん若しくはがん細胞のバイオマーカーとしての、ＫＲＡＳ変異であるＹ９６Ｘ、好ましくはＹ９６Ｄ及びＹ９６Ｓからなる群より選択される変異の使用。