KR20110140126A - 항-ｅｇｆｒ 작용제(들) 및 ｉｇｆ-1ｒ 특이적 억제제를 사용하는 조합 요법 - Google Patents

Abstract

IGF-1R 길항제, 예컨대 인간화 항체 및 항증식성 약물의 조합물이 기재되어 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 IGF-1R 항체와 EGFR-억제제류에 속하는 항증식성 약물 (바람직하게는 에를로티닙)의 조합물을 기재한다. 본 발명에 따른 조합물은 IGF-1R 및/또는 EGFR 매개 또는 의존성 종양을 비롯한 종양의 치료에 유용하다.

Description

항-ＥＧＦＲ 작용제(들) 및 ＩＧＦ-1Ｒ 특이적 억제제를 사용하는 조합 요법 {COMBINATION THERAPY USING AN ANTI-EGFR AGENT(S) AND IGF-1R SPECIFIC INHIBITORS}

본 발명은 포유동물에서 항종양 활성을 증진시키기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 인간 IGF-1R에 특이적으로 결합하는 항체 및 수용체 티로신 키나제 억제제를 포함하는 조합물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 IGF-1R 항체 및 티로신 키나제 억제제, 특히 에를로티닙의 투여를 통해 비-소세포 폐암 및 다른 암, 예를 들어 췌장암을 치료하기 위한 조합 요법에 관한 것이다. 상기 조합물 또는 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 방법은 각각의 개별 치료제를 사용하여 관찰된 경우보다 우수한 종양 세포 증식 억제를 초래하여, 개별 성분 단독을 투여하여 발견된 경우보다 더 효과적인 치료를 가져올 수 있다. 특정 측면은 에를로티닙 내성 폐암의 치료를 제공한다.

폐 암종은 남성에서 암으로 인한 사망의 대다수를 차지하고, 여성에서 가장 빈번한 암 사망 원인인 유방 암종을 따라잡고 있다. 폐암에 걸린 환자의 현재 예후는 불량하다. 폐암 사망을 수반하는 사망률은 1930년 이후로 남성 및 여성 모두에게서 10배 증가하였는데, 이는 주로 흡연의 증가 때문이지만 또한 비소, 석면, 크로메이트, 클로로메틸 에테르, 니켈, 폴리시클릭 방향족 탄화수소 및 다른 작용제에의 노출 증가 때문이기도 하다. 문헌 [Scott, Lung Cancer: A Guide to Diagnosis and Treatment, Addicus Books (2000)] 및 [Alberg et al., in Kane et al. (eds.) Biology of Lung Cancer, pp. 11-52, Marcel Dekker, Inc. (1998)]을 참조한다. 미국 암 협회 (American Cancer Society)는 2004년에 173,550건이 넘는 신규 폐암 사례가 존재할 것이라고 평가한다. 추가로, 2004년에 폐암으로 인한 사망이 160,440건으로 평가될 것이다. ACS 웹사이트: 월드 와이드 웹의 확장자 org를 갖는 암.

폐암은 폐에서 기원하는 1차 종양으로부터 생성되거나 장 또는 유방과 같은 또다른 기관에서 퍼진 2차 종양으로부터 생성될 수 있다. 비록 12가지가 넘는 폐암 유형이 존재하지만, 90％ 초과가 하기 두 카테고리 안에 속한다: 소세포 폐암 (SCLC) 및 비-소세포 폐암 (NSCLC) (상기 Scott 문헌 참조). 70-80％는 NSCLC로서 진단된다. 용어 "NSCLC"는 하기 세포 유형을 포함한다: 표피양 암종 세포, 선암종 세포, 및 거대 미분화 암종 세포. 폐암의 진단은 통상 조직 생검에 의해 확인된다.

치료 접근법 및 천연 이력은 상기 두 질환이 상이하다. 미국에서 폐암 원인의 대다수 (80％)는 NSCLC이다. NSCLC 및 SCLC 모두에 대한 중요한 임상 및 예후 인자의 해석에 있어서 과거 20년간 진보가 이루어졌지만, 치료 결과에 있어서는 최소의 개선만이 있었다.

NSCLS는 일반적으로 하기 3가지 유형으로 나뉜다: 편평세포 암종, 선암종 및 대세포 암종. 편평세포 암 및 선암종 모두는 기도를 따라 늘어선 세포로부터 발달하지만, 선암종은 점액을 생성하는 잔모양 세포로부터 발달한다. 따라서, 현미경으로 관찰하였을 때 세포가 크고 둥글게 보이기 때문에 대세포 폐암이라 명명되며, 일반적으로 비교적 미분화된 것으로 생각된다 (문헌 [Yesner, Atlas of Lung Cancer, Lippincott-Raven (1998)] 참조). 비-소세포 암은 4 단계로 나뉘어질 수 있다. 단계 I은 림프절에 암을 갖지 않는 고도로 국소화된 암이다. 단계 II 암은 영향을 받는 폐의 상부에 림프절로 퍼진다. 단계 III 암은 암이 시작하는 곳 근처로 퍼진다. 이는 흉부 벽, 폐의 덮개 (늑막), 흉부의 중앙 (폐종격부) 또는 다른 림프절일 수 있다. 단계 IV 암은 신체의 또다른 부분으로 퍼진다. 단계 I 내지 III의 암은 통상 화학요법의 존재 또는 부재 하에 수술로 치료된다. 단계 IV 암은 통상 화학요법 및/또는 완화 관리로 치료된다.

폐암에서 수많은 염색체 및 유전자 이상이 관찰되었다. NSCLC에서, 염색체 이상은 3p, 9p, 11p, 15p 및 17p 상에서 설명되었고, 염색체 결실은 염색체 7, 11, 13 및 19 상에서 관찰되었다. 문헌 [Skarin (ed.), Multimodality Treatment of Lung Cancer, Marcel Dekker, Inc. (2000)]; 상기 Kane의 문헌 [Gemmill et al., pp. 465-502]; 상기 Kane의 문헌 [Bailey-Wilson et al., pp. 53-98]을 참조한다. SCLC에서 염색체 이상은 1p, 3p, 5q, 6q, 8q, 13q 및 17p 상에서 설명되었다. 또한, 염색체 3p의 짧은 아암(arm)의 손실은 SCLC 종양에서 90％ 초과로, NSCLC 종양에서 대략 50％로 관찰되었다.

수많은 발암유전자 및 종양 억제 유전자가 폐암과 관련되어 있다. 상기 Kane의 문헌 [Mabry, pp. 391-412] 및 상기 Kane의 문헌 [Sclafani et al., pp. 295-316]을 참조한다. SCLC 및 NSCLC 모두에서, p53 종양 억제 유전자는 50％가 넘는 폐암에서 돌연변이된다 (상기 Yesner 문헌 참조). 또다른 종양 억제 유전자 FHIT (염색체 3p 상에서 발견됨)는 담배 연기에 의해 돌연변이된다 (상기 Skarin의 문헌에서와 같음). 또한, SCLC의 95％ 초과 및 NSCLC의 대략 20-60％는 부재하거나 또는 비정상적인 망막아세포종 (Rb) 단백질, 또다른 종양 억제 유전자를 갖는다. ras 발암유전자 (특히 K-ras)는 NSCLC 시편의 20-30％에서 돌연변이되고, c-erbB2 발암유전자는 단계 2 NSCLC 시편의 18％ 및 단계 4 NSCLC 시편의 60％에서 발현된다 (상기 Van Houtte의 문헌 참조). 염색체 9의 영역, 특히 9p21의 영역에서 발견되는 다른 종양 억제 유전자, 예를 들어 p16.sup.INK4A 및 p15.sup.INK4B는 다수의 암 세포에서 결실된다 (상기 Bailey-Wilson의 문헌; 상기 Sclafani et al.의 문헌 참조). 이들 종양 억제 유전자는 또한 폐암 병인과 관련되어 있을 수 있다.

또한, 다수의 폐암 세포는 폐암 세포에 대해 자가분비 또는 주변분비 방식으로 작용할 수 있는 성장 인자를 생성한다 (상기 Kane의 문헌 [Siegfried et al., pp. 317-336], 상기 Kane의 문헌 [Moody, pp. 337-370], 및 상기 Kane의 문헌 [Heasley et al., 371-390] 참조). 다수의 NSCLC 종양은 표피 성장 인자 (EGF) 수용체를 발현하여 NSCLC 세포가 EGF에 대한 반응으로 증식하도록 한다. 인슐린-유사 성장 인자 (IGF-1)는 NSCLC 종양의 80％ 초과에서 상승하며, 자가분비 성장 인자와 같이 기능하는 것으로 생각된다.

비록 폐암 사례의 대다수가 흡연에 기인하지만, 대부분의 흡연자들은 폐암을 발달시키지 않는다. 역학적 증거는 폐암에 대한 감수성이 멘델법칙에 따라 유전될 수 있으며 따라서 유전된 유전 성분을 가짐을 제시하였다 (상기 Bailey-Wilson의 문헌 참조). 따라서, 일부 유전좌위에서의 특정 대립유전자 변이체는 폐암에 대한 감수성에 영향을 줄 수 있다고 생각된다.

폐암에 대한 현행 요법은 꽤 제한되어 있다. 일반적으로, 환자의 선택권은 수술, 방사선 요법 및 화학요법을 포함한다.

대부분의 폐 암종 사례는 화학요법 및 방사선 요법에 의해 치유가능하다. 폐암의 유형 및 단계에 따라, 수술을 사용하여 종양을 일부 주위 폐 조직과 함께 제거할 수 있다. 엽절제술은 폐엽(구획)이 제거되는 것을 지칭한다. 전체 폐가 제거된다면, 그 수술은 폐절제술이라 칭해진다. 단지 엽의 일부만을 제거하는 것은 분엽절제술 또는 설상 절제로 공지되어 있다.

실제로, NSCLC에 걸린 환자에 대한 유일한 치유 선택권은, 종양이 여전히 국소화되어 있는 경우의 초기 단계 질환 (I ＆ II)에 걸린 환자에서의 국소 요법 (외과적 절제 또는 국소 조사). 그러나 진단시, NSCLC에 걸린 환자의 대다수는 수술 단독으로는 치유될 수 없는 진전된 질환을 나타낸다. 질환의 진전된 단계에서, 전신성 화학요법 및/또는 조사는 객관적인 반응 및 증상의 완화를 일으킬 수 있다. 그러나, 그들은 단지 생존에 있어서 알맞은 개선을 제공한다. 절제불가능한 질환에 걸린 환자의 평균 생존은 6개월 내지 12개월이다. 단계 IIIB 및 IV NSCLC에 대한 2년 생존률은 각각 10.8％ 및 5.4％이다. 마찬가지로, 5년 생존률은 3.9％ 및 1.3％이다.

암이 뇌로 퍼지면, 뇌 전이의 제거로부터 이익을 얻을 수 있다. 이는 개두술 (두개골 내의 구멍을 통한 수술)을 포함한다.

방사선 요법의 경우, 여러 방법이 존재한다. 외부 빔 방사선 요법은 암에 초점을 맞추는, 체외로부터 전달된 방사선을 사용한다. 이러한 유형의 방사선 요법은 1차 폐암 또는 그의 다른 기관으로의 전이를 치료하는데 가장 자주 사용된다.

추가로, 방사선 요법은 수술 동안 관찰 또는 제거될 수 없는 매우 작은 암 침착물을 제거하기 위한 수술후 처리로서 사용될 수 있다. 방사선 요법은 또한 폐암의 증상, 예컨대 통증, 출혈, 삼킴 곤란 및 뇌 전이에 의해 유발된 문제를 완화 (경감)시키는데 사용될 수 있다.

화학요법의 경우, 시스플라틴 또는 관련 약물인 카르보플라틴은 NSCLC를 치료하는데 가장 자주 사용되는 화학요법제이다. NSCLC의 치료에 이용가능한 다른 신규 화학 물질은 파클리탁셀 (탁솔(Taxol)), 도세탁셀 (탁소테레(Taxotere)), 토포테칸, 이리노테칸, 비노렐빈 및 젬시타빈을 포함한다. 이들 약물이 이전의 화학요법제 (에토포시드, 시스플라틴 및 카르보플라틴)보다 개선되었지만, 전체적인 치유율은 낮다.

표피 성장 인자 수용체 (EGFR)는 EGFR (ErbB1), HER2/neu (ErbB2). HER3 (ErbB3) 및 HER4 (ErbB4)를 포함하는 밀접하게 관련된 성장 인자 수용체 티로신 키나제류의 구성원이다. 리간드 결합시, 이들 수용체는 동종이량체화하거나 이종이량체화하여 자가인산화를 일으키고, 이후 세포내 신호전달 캐스케이드, 예컨대 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3K)/Akt, MAPK/Erk 및 Jak/Stat 신호전달 경로 (세포 증식, 생존 및 형질전환과 치료 내성에 있어서 주요 역할을 함)의 활성화를 일으킨다.

EGFR의 하류 PI3K 경로는 세포 생존 및 증식을 조절하는데 있어서 중요한 역할을 한다. ErbB3 수용체는 PI3K 경로를 활성화하는데 독특한 역할을 한다. ErbB3은 약한 티로신 키나제 활성을 갖거나 갖지 않지만, EGFR과의 이종이량체화시, 티로신 잔기에서 인산화된다. 티로신-인산화 ErbB3은 PI3K에 직접 결합하여 PI3K를 활성화시킨다. 연구는 PI3K/Akt 신호전달이 TKI-민감성 NSCLC에서 EGFR에 의해 면밀히 조절되며 EGFR TKI가 그 NSCLC 세포주에서만 배타적으로 PI3K/Akt 경로를 하향 조절한다 (또한 성장을 억제한다)는 것을 보여주었다 (문헌 [Engelman, J.A. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA102, 3788-3793 (2005)] 참조).

EGFR은 대다수의 비-소세포 폐 암종 (NSCLC)에서 발현되기 때문에, 치료제의 개발을 위한 매력적인 표적이 되었다. 게피티닙 및 에를로티닙을 비롯한 소분자 EGFR 티로신 키나제 억제제 (TKI)는 NSCLC에 걸린 환자에 대한 임상 실험에서 평가되었다. 두 작용제 다 모든 NSCLC 환자에서 10％ 내지 20％의 부분적인 반응을 일으킨다. EGFR 돌연변이 및/또는 증폭을 갖는 폐암은 EGFR 억제제에 대한 반응을 가장 잘 축소시키는 것 같다. EGFR 유전자에서 체세포 돌연변이를 활성화하는 것은 NSCLC 특허에서 확인되었다. 이들 "기능획득(gain-of-function)" 돌연변이는 치환이거나, 짧은 프레임내(in-frame) 결실이거나, 수용체의 티로신 키나제 도메인의 ATP-결합 포켓을 코딩하는 영역 주위에 밀집된 삽입이다. 이러한 암에서, EGFR은 중요한 성장 및 생존 신호전달 경로의 주요 활성자이므로, 이들 암은 EGFR 활성에 중독된다. EGFR 억제제에 노출되는 경우, 이들 중요한 성장 및 생존 신호전달 경로는 저지되어, 아팝토시스(apoptosis) 및/또는 세포 주기 정지를 일으킨다.

최근의 데이타는 세포증식, 아팝토시스, 혈관신생 및 전이에 관여하는 신호전달 경로를 표적으로 하는 신규한 치료 접근법이 조사되고 있음을 제시한다. 다수의 잠재적 표적 경로 중에서, 표피 성장 인자 (EGF) 수용체 (EGFR) 신호전달 경로가 가장 광범위하게 연구되었는데, 이는 비-소세포 폐암 (NSCLC)의 40％ 내지 80％를 비롯한 수많은 고형 종양에서 EGFR 과발현이 관찰되었기 때문이다. 상기 기재한 바와 같이, 연구자들은 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)를 방해하는 작용제를 시험하였다. EGFR은 부분적으로 비-소세포 폐암을 비롯한 다수 유형의 암 세포의 표면에서 비정상적으로 높은 수준으로 발현되기 때문이다. 이들 실험용 EGFR 억제제의 예로는 게피티닙 (이레사(Iressa)®), 세툭시맙 (에르비툭스(Erbitux)®), 및 에를로티닙 (타르세바(Tarceva)®)이 있다.

에를로티닙에 대한 내성 또는 EGFR 억제 요법은 MAPK 신호전달 경로에서 중요한 하류 신호전달 성분인 KRAS 유전자에서의 돌연변이를 활성화시킴으로 인해 임상에서 관찰되었다 (문헌 [Pao, W. et al. PLoS Med. 2, e73 (2005)] 참조). 에를로티닙 요법에 대해 획득한 내성은 EGFR 엑손 20 (T790M)에서의 2차 돌연변이를 이용한 임상과 관련되었다. 최근의 연구는 또한 ERB3을 인산화하고 에를로티닙 요법에 대한 내성을 부여하는 RTK인 cMET를 확인하였다.

그러나, EGFR TKI에 대한 전체적인 반응 속도는 제한되고, 약물에 대한 내성을 매개하는 메카니즘은 불충분하게 이해된다. 게피티닙 및 에를로티닙을 비롯한 소분자 EGFR 티로신 키나제 억제제 (TKI)는 NSCLC에 걸린 환자에 대한 임상 실험에서 평가되었다. 두 작용제 다 모든 NSCLC 환자의 10％ 내지 20％에서 부분적인 반응을 일으킨다. 2004년에, 예비 치료된 NSCLC 환자와 관련된 단계 II 실험을 이용한 연구자들은, 참가자의 12％에서의 종양이 에를로티닙을 이용한 치료에 반응하였음을 보고하였다. 그러나, 에를로티닙이 환자를 더 오래 살 수 있게 도와주는지는 분명하지 않았다.

2004년에, 비-소세포 폐암 (NSCLC)에 걸린 환자와 관련된 수회의 단계 III 임상 실험은, 표준 화학요법에 더하여 EGFR 억제제 (게피티닙 또는 에를로티닙)를 투여받은 환자가 화학요법만을 받은 환자보다 더 낫지 않다는 것을 보고하였다. 그러나, 같은 해에, 단계 III 캐나다인 실험을 이용한 연구자들은, 에를로티닙이 화학요법에 더 이상 반응하지 않는 암인 NSCLC 환자를 플라시보 에를로티닙을 복용한 환자보다 약 2개월 더 살 수 있게 도와주었다고 보고하였다.

에를로티닙은 환자를 전반적으로 더 오래 살 수 있도록 도와주지 않았다. 에를로티닙을 복용한 환자의 경우 평균 생존은 10.6개월이었고, 이에 비해 플라시보 군의 경우 10.5개월이었다. 두 환자 군은 또한 거의 동일한 "진행 시간" (암이 악화되는데 걸리는 시간)을 경험하였다: 에를로티닙 군의 경우 5.1개월, 플라시보 군의 경우 4.9개월. 상기 기재된 항암 화합물은 당업계에 유의한 기여를 하였지만, 당업계에서 개선된 항암 약제에 대한 조사는 계속되고 있다.

연구자들은 에를로티닙이 세포 막에서 EGFR/IGF-1R 헤테로이량체화를 유도하여 IGF-1R 및 그의 하류 매개자 PI3K/Akt 및 p44/42 MAPK를 통해 생존 신호를 전달함으로써 EGFR의 라파마이신 (mTOR)-매개 합성 및 항아팝토시스 서바이빈(survivin) 단백질의 포유동물 표적을 자극한다고 가정하였다. 그 결과, IGF-1R의 불활성화, mTOR-매개 단백질 합성의 억제, 또는 서바이빈 단백질의 넉다운(knockdown)은 EGFR-과발현 NSCLC 세포를 에를로티닙 치료에 민감하게 만든다 (문헌 [Floriana Morgillo, et al., Cancer Research 66, 10100-10111, October 15, 2006] 참조).

그러나, 에를로티닙 또는 EGFR 억제 요법에 대한 내성은 임상에서 MAPK 신호전달 경로에서 중요한 하류 신호전달 성분인 Kras 유전자에서의 돌연변이를 활성화함으로써 관찰되었다 (Pao, W. et al. PLoS Med. 2, e73 (2005)). 또한, 에를로티닙 요법에 대해 획득된 내성은 임상에서 EGFR 엑손 20 (T790M)에서의 2차 돌연변이와 관련되었다. 또한, 최근의 연구는 ERB3을 인산화하고 에를로티닙 요법에 대한 내성을 부여하는 RTK인 cMET를 확인하였다.

IGF1R 신호전달 경로의 활성화는 최근에 EGFR TKI인 게피티닙에 대한 내성을 매개하는 것과 관련되었다 (Guix M et al., J Clin Invest. 118(7): 2609-2619 (2008)). 저자는 A431 세포를 증가량의 억제제와 함께 오랫동안 인큐베이션하여 게피티닙-내성 (GR) 인간 편평 암종 A431 세포를 단리하였다. GR 세포에서, 억제제는 EGFR, ErbB3 및 Erk의 인산화 수준을 감소시켰지만, Akt의 인산화 수준은 감소시키지 않았다. 이러한 적합한 변화는 IGF-1 수용체 (IGF-1R)에 의해 매개되는 신호전달 사건, 예컨대 IRS-1의 인산화 및 IRS-1과 PI3K의 상호작용의 활성화를 수반하였다. 저자는 IGF-1R의 억제가 IRS-1과 PI3K의 조합을 파괴하며, Akt 인산화를 감소시키고 세포 성장을 억제하는 게피티닙의 능력을 회복시킨다는 것을 보여주었다 (도 1A). 또다른 저자는 세포에서 다발성 수용체 티로신 키나제 활성화가 타르세바에 대한 약물 내성에 기여할 수 있다고 가정하였다. 실제로, EGFR 및 cMET의 활성화는 타르세바 내성 환자로부터의 임상 샘플에서 관찰되었다 (또한 문헌 [Biochemical and Biophysical Research Communications, 355 (3): 700-706 (April 2007)] 참조).

인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 예를 들어 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II는 다양한 세포 유형, 예컨대 종양 세포에 대해 유사분열 활성을 발휘하는 것과 관련되어 왔다. IGF는 인슐린과 구조적으로 유사하며, 각종 질환 및 손상에서 치료학적 도구로서 관련되어 왔다. 인슐린-유사 성장 인자-1 (IGF-1)은 혈장에서 고농도로 순환하는 pI 8.4를 갖는 7649-달톤 폴리펩티드이며, 대부분의 조직에서 검출가능하다 (문헌 [Rinderknecht and Humbel, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73: 2365 (1976); Rinderknecht and Humbel, J. Biol. Chem., 253: 2769 (1978)] 참조). IGF-1은 세포 분화 및 세포 증식을 자극하며, 지속적인 증식을 위해 대부분의 포유동물 세포 유형에서 요구된다. 이들 세포 유형으로는, 특히 인간 이배성 섬유모세포, 상피성 세포, 평활근 세포, T 림프구, 매개자포, 골수성 세포, 연골세포, 골아세포 및 골수 줄기 세포가 포함된다. 각각의 이들 성장 인자는 인슐린-유사 성장 인자 수용체-1 (IGF1R)이라 명명된 통상적인 수용체에 결합함으로써 그의 유사분열 효과를 발휘한다 (Sepp-Lorenzino, (1998) Breast Cancer Research and Treatment 47:235). 또한, 문헌 [Klapper, et al., (1983) Endocrinol. 112:2215] 및 [Rinderknecht, et al., (1978) Febs. Lett. 89:283]을 참조한다. IGF (IGF-1, IGF-2 및 IGF 변이체)의 작용 및 활성화에 대한 많은 문헌이 존재한다. 문헌 [Van Wyk et al., Recent Prog. Horm. Res., 30: 259 (1974)]; [Binoux, Ann. Endocrinol., 41: 157 (1980)]; [Clemmons and Van Wyk, Handbook Exp. Pharmacol., 57: 161 (1981)]; [Baxter, Adv. Clin. Chem., 25:49 (1986)]; 미국 특허 제4,988,675호; WO 91/03253; WO 93/23071]을 참조한다.

IGF 계는 IGF-1, IGF-2 및 인슐린에 대한 막-결합 수용체로 구성된다. 유형 1 IGF 수용체 (IGF-1R)는 구조에 있어서 인슐린 수용체 (IR)와 밀접하게 관련되며, 그의 신호전달 경로 일부를 공유하고 (Jones and Clemmons, Endocr. Rev., 16: 3- 34 (1995); Ullrich et al., Cell 61 : 203 212, 1990), 인슐린 수용체에 구조적으로 유사하다 (Ullrich et al., EMBO J. 5: 2503 2512, 1986)). IGF-1 수용체는 두가지 유형의 소단위로 구성된다: 알파 소단위 (전부 세포외이며 리간드 결합에 있어서 기능을 하는 130개의 135 kD 단백질) 및 베타 소단위 (막횡단 및 세포질 도메인을 갖는 95 kD 막횡단 단백질). IGF-1R은 먼저 단일쇄 예비수용체 폴리펩티드로서 합성되어, 글리코실화, 단백질분해 절단 및 공유결합의 과정을 거쳐, 2개의 알파-소단위 및 2개의 베타-소단위를 포함하는 성숙한 460-kD 이종사량체로 조립된다. 베타 소단위(들)은 리간드-활성화된 티로신 키나제 활성를 갖는다. 이러한 활성은 베타-소단위의 자가인산화 및 IGF-1R 기질의 인산화에 관여하는, 리간드 작용을 매개하는 신호전달 경로와 관련된다.

IGF-1R은 IGF 1 및 IGF 2와 나노몰 친화도, 예를 들어 Kd 1 x 10^-9nM로 결합하지만, 인슐린에는 100배 내지 1000배 더 적은 친화도로 결합할 수 있다. 대표적인 나노몰 친화도 값은 문헌 [FEBS Letters, vol. 565, pages 19-22 (2004)] (이의 전체 내용은 본원에 참고로 포함됨)에서 찾을 수 있다.

시험관내 및 생체내 종양 세포의 유지에 있어서 IGF-1 및/또는 IGF-1R의 역할에 대한 상당한 증거가 존재한다. 예를 들어, "높은 정상" 수준의 IGF-1을 갖는 개체는 "낮은 정상" 범위의 IGF-1 수준을 갖는 개체에 비해 통상적인 암의 위험이 증가하였다 (문헌 [Rosen et al., Trends Endocrinol. Metab. 10: 136 41, 1999] 참조). 각종 인간 종양의 성장에서 IGF-1/IGF-1 수용체 상호작용이 하는 역할의 검토를 위해, 문헌 [Macaulay, Br. J. Cancer, 65: 311 320, 1992]을 참조한다. 정상 세포 성장 및 발달에 있어서의 중요한 역할을 하는 것 외에, IGF-1R 신호전달은 또한 종양 세포의 성장, 세포 형질전환 및 종양생성에서 중요한 역할을 하는 것과 관련되어 왔다. 문헌 [Baserga, Cancer Res., 55:249-252 (1995)]; 검토를 위해, 문헌 [Khandwala et al, Endocr. Rev. 21: 215-244 (2000))]; [Daughaday and Rotwein, Endocrine Rev., 10:68-91 (1989)]을 참조한다. 최근의 데이타는 IGF-1R이 각종 종양 및 종양 세포주에서 발현되고 IGF가 IGF-1R에의 부착을 통해 종양 성장을 증폭시킨다는 결론을 내리게 하였다. 실제로, 형질전환에서 IGF-1R에 의해 수행되는 주요 역할을 명확히 입증했던 중요한 발견은, R-세포 (IGF-1R을 코딩하는 유전자가 불활성화되어 있음)가 통상적으로 세포를 형질전환시킬 수 있는 여러 작용제, 예컨대 소 유두종 바이러스의 E5 단백질, 과발현의 EGFR 또는 PDGFR, SV 40의 T 항원, 활성화된 ras 또는 이들 마지막 두 인자의 조합물에 의해 전반적으로 형질전환에 반응하지 않음을 입증하였다는 것이다 (문헌 [Sell C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90: 11217-11221, 1993]; [Sell C. et al, Mol. Cell. Biol., 14:3604-3612, 1994]; [Morrione A. J., Virol., 69:5300-5303, 1995]; [Coppola D. et al., Mol. Cell. Biol., 14:4588-4595, 1994]; [DeAngelis T et al., J. Cell. Physiol., 164:214-221, 1995] 참조). 이러한 가설을 뒷받침하는 다른 중요한 예로는, IGF-1R에 대한 안티센스 RNA로의 치료에 의한 뮤린 암종 세포의 전이성 표현형의 상실 (Long et al., Cancer Res., 55:1006-1009 (1995)) 및 IGF-1R 항체의 첨가에 의한 인간 흑색종 세포 운동성의 시험관내 억제 (Stracke et al., J. Biol. Chem., 264:21554-21559 (1989)) 및 인간 유방암 세포 성장의 시험관내 억제 (Rohlik et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 149:276-281 (1987))가 포함된다.

발암에 있어서 IGF-1R의 역할을 지지하는 다른 주장은, 수용체에 지시되는 뮤린 모노클로날 항체를 사용하거나 IGF-1R의 음성 우성인자를 사용하는 연구로부터 기인한다. 사실상, IGF-1R에 지시되는 뮤린 모노클로날 항체는 배양액에서 수많은 세포주의 증식을 억제하고 생체내에서 종양 세포의 성장을 억제한다 (문헌 [Arteaga C. et al., Cancer Res., 49:6237-6241, 1989]; [Li et al., Biochem. Biophys. Res. Com., 196:92-98, 1993]; [Zia F et al., J. Cell. Biol., 24:269-275, 1996]; [Scotlandi K et al., Cancer Res., 58:4127-4131, 1998] 참조). 마찬가지로, IGF-1R의 음성 우성인자가 종양 증식을 억제할 수 있다는 것이 문헌 [Jiang et al., Oncogene, 18:6071-6077, 1999]에 나타나 있다.

IGF-1R 수준은 폐 종양에서 상승한다 (문헌 [Kaiser et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol. 119: 665 668, 1993]; [Moody et al., Life Sciences 52: 1161 1173, 1993]; [Macauley et al., Cancer Res., 50: 2511 2517, 1990] 참조).

상기 나타낸 바와 같이, 다수의 요법은 첫번째-라인 요법과 조합하여 사용하거나 또는 다른 요법이 실패할 경우에 한해서 두번째- 및 세번째-라인 작용제와 조합하여 사용하도록 권고된다. 진행중이거나 최근에 완성된 요법 시험에서 다수의 화합물이 존재하지만, 초기 단계 폐암 및 진전되거나 전이된 폐암을 치료할 수 있는 추가적인 치료 화합물에 대한 필요성이 많이 존재한다.

폐암 환자의 경우 5년 생존률은 매우 낮게 유지되며 (≤15), 보다 유효한 치료 전략에 대한 필요성을 강조한다. NSCLC, 특히 에를로티닙 내성 암을 치료하기 위한 효과적인 요법을 개발하려는 이전의 시도들은 보고된 바 없다. 본원에는 이러한 필요성을 충족시키는 신규 조합 치료제 또는 조합 요법제가 기재되어 있다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 발명의 상세한 설명 및 실시예로부터 분명해질 것이다.

본 발명은 항-티로신 키나제 억제제와 인간 인슐린-유사 성장 인자 수용체 유형 1 (IGF-1R)에 특이적으로 결합하는 항체의 조합물을 투여함으로써 포유동물, 전형적으로는 인간에서 암을 치료하기 위한 개선된 조합 치료제 및 방법을 제공한다.

본 발명의 한 측면에서, 티로신 키나제 억제제는 에를로티닙이다.

본 발명의 또다른 측면에서, IGF-1R 항체는 항-IGF-1R 항체인 MK-0646이다.

본 발명의 또다른 측면에서, 조합물의 투여는 티로신 키나제 억제제 단독의 투여에 비해 증진된 치료학적 효능을 나타낸다.

본 발명의 또다른 측면에서, 티로신 키나제 억제제는 전형적으로 IGF-1R 항체 (MK-0646)의 투여 전에 또는 동시에 경구 투여된다.

본 발명의 또다른 측면에서, 항-IGF-1R 항체는 트립신 키나제 억제제의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 항-IGF-1R 항체는 비경구, 예를 들어 피하, 종양내, 정맥내, 피부내, 경구, 경점막 투여되거나 직장 투여될 수 있다. 특정한 실시 이론에 얽매이기를 의도하지 않지만, 항-IGF-1R 항체의 투여를 통한 IGF-1R 매개 신호전달 캐스케이드의 봉쇄는 수용체에 천연 IGF-1R 리간드의 결합을 수반하는 신호전달 캐스케이드를 음성 조절함으로써 항종양 면역성의 효력을 더하는 것으로 생각된다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 하나 이상의 IGF1R 억제제 또는 그의 제약 조성물을 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 의학 상태를 치료 또는 예방하기 위한 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, IGF1R 억제제는

및 IGF1R (예를 들어, 인간 IGF1R)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 항체는 달로투주맙 또는 본원에 기재된, 예를 들어 하기 "IGF1R 억제제" 단락하의 임의의 다른 IGF1R 억제제를 포함한다. 한 실시양태에서, IGF1R 억제제는 하나 이상의 추가의 항암 화학요법제 또는 그의 제약 조성물과 함께 투여된다.

한 실시양태에서, 추가의 항암 화학요법제는 테니포시드 (

), 시스플라틴 (

), 카르보플라틴 (

), 에토포시드 (

), 독소루비신(

), 그의 임의의 리포좀 제제, 예컨대 캘릭스(Caelyx) 또는 독실(Doxil)^®, 시클로포스파미드 (

), 13-시스-레티노산 (

), 이소파미드 (

), 젬시타빈 (

), 이리노테칸 (

), 빈크리스틴 (

), 닥티노마이신 (

), 메토트렉세이트 (

) 및 본원에 기재된, 예를 들어 하기 "추가의 화학요법제" 단락하에 기재된 임의의 다른 화학요법제로 이루어진 군으로부터 선택된 구성원이다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 항-IGF1R 항체의 투여량은 체중 kg 당 약 1-20 mg 또는 약 40-1000 mg/m²의 범위이다. 한 실시양태에서, IGF1R 억제제 및 추가의 항암 치료제는 동시에 투여된다. 한 실시양태에서, IGF1R 억제제 및 추가의 항암 치료제는 비-동시에 투여된다. 한 실시양태에서, 항체는 IgG 불변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 대상체는 인간 (예를 들어, 어린이)이다. 한 실시양태에서, IGF1R 억제제는 항압 요법 절차와 함께 투여된다. 한 실시양태에서, 항암 요법 절차는 외과적 종양 절제술 및/또는 항암 방사선 치료이다.

본 발명의 실시양태에서, 항-IGF1R 항체 또는 그의 항원-결합 단편은 본원에 개시된 바와 같은 하나 이상의 2.12.1 fx CDR (예를 들어, 3개의 경쇄 CDR 및/또는 3개의 중쇄 CDR)을 포함한다.

본 발명은 또한 본원에 제시된 설명에 따라 사용하기 위한 EGFR 억제제(들) 및 항-IGF-1R 길항제를 포함하는 조성물 및 키트를 제공한다.

본원에 사용된 용어 "항체"는, 모노클로날, 폴리클로날, 키메라, 단일 쇄, 이중특이적, 및 인간화 또는 최적화된 항체, 이뿐 아니라 Fab 단편, 예컨대 IGF-1R 단백질에 대한 항체의 결합 특이성을 유지하는 그러한 단편 (본 발명의 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 에피토프를 발현하는 그의 단편 포함)을 포함한다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 이어지는 실시예 및 도면에 따른 설명에서 나타나며, 이들의 범례는 이하에 나타나 있다.

도 1 (A)는 EGF1R 및 IGF1R 간의 크로스토크를 보여주는 도식이다 (필요한 방법은 없음).
도 1 (B)는 P-RTK 어레이로 측정한 EGFR 및 IGF1R 활성화의 요약이다 (상세한 방법 또는 세포 배양, 용해, RTK 어레이 방법 및 영상 조건은 본 문헌에 제시되어 있음).
도 1 (C)는 P-RTK 어레이로부터의 대표적인 영상이며, P-EGFR 및 P-IGF1R에 상응하는 위치가 이 영상에 표시되어 있다 (방법은 도 1 B에서와 동일함).

끊임없는 연구의 결과, 본 발명자들은 항-IGF-1R 항체 또는 그의 제약상 허용되는 염을 티로신 키나제 억제제와 조합하여 사용함으로써 상승작용적 방식으로 탁월한 항암 활성을 달성할 수 있다는 것을 발견하였다. IGF-1R 항체는 달로투주맙, 피지투무맙, 식수투무맙, SHC 717454, 로슈(Roche) R1507, EM164 또는 암젠(Amgen) AMG479 중 하나이다.

본 발명의 넓은 측면은 포유동물에서 항종양 반응을 증강시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 비-소세포 폐암, 유방암, 결장직장암, 연질 조직 또는 골 육종 및 자궁내막암으로 이루어진 군으로부터 선택된 암의 치료에 특히 유용하다. 그러나, 본 발명은 다양한 다른 암, 예컨대 뇌암, 뇌경부암 (cervicocerebral cancer), 식도암, 갑상선암, 소세포 폐암, 폐암, 위암, 담낭/담관암, 간암, 췌장암, 난소암, 융모막암종, 자궁체부암, 자궁자궁경부암, 신우/요관암, 방광암, 전립선암, 음경암, 고환암, 태아암, 윌름암, 피부암, 악성 흑색종, 신경아세포종, 골육종, 유잉 종양, 연질부 육종, 급성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 호지킨 림프종의 치료에 유용한 것으로 나타날 수 있다. 보다 특히, 본 발명은 티로신 키나제 억제제 및 항-IGF-1R 항체를 포함하는 조합물, 및 NSCLC를 치료하기 위해 상기 조합물을 투여하는 방법에 관한 것이다.

정의 및 일반적 기법

본원에 언급된 GenBank 데이타베이스 서열의 등록 번호를 비롯한 참조 논문, 특허, 특허 출원, 및 과학 문헌은 당업자의 지식을 확립하는 것으로, 각각이 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 명시된 것과 동일한 정도로 그 전문이 참조로 본원에 포함된다. 본원에 인용된 임의의 참조문헌과 본 명세서의 특정 교시 간에 임의의 불일치가 존재하는 경우 본 명세서에 우호적인 방향으로 해석될 것이다. 마찬가지로, 당업계에서 이해되고 있는 단어 또는 구문의 정의와 본 명세서에서 특이적으로 교시된 단어 또는 구문의 정의 간에 임의의 불일치가 존재하는 경우 본 명세서에 우호적인 방향으로 해석될 것이다. 또한, 본원에 사용된 용어는 오로지 특정 실시양태를 기술하기 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것으로 의도된 것이 아님을 이해해야 하며, 본 발명의 범위는 오로지 첨부된 청구항에 의해서만 제한될 것이다.

본원에서 및 첨부된 청구항에서 사용된 단수 형태는 문맥상 명백히 다르게 읽혀지지 않는 한, 복수 대상물을 포함한다는 것을 주지해야 한다. 따라서, 예를 들어, "유전적 변이"라는 언급은 복수 개의 그러한 변이를 포함하며, "탐침"이라는 언급은 하나 이상의 탐침 및 당업자에 공지된 그의 등가물에 대한 언급을 포함하는, 등이다.

본원에 언급된 모든 공개물은 이 공개물을 언급한 것과 관련된 방법 및/또는 물질을 개시 및 기술하기 위해 참조로 본원에 포함된다. 본원에 인용된 공개물은 본 출원의 출원일 이전에 개시된 내용에 대해서 언급된다. 여기에서의 어떤 것도 본 발명자들이 발명의 이른 우선일 또는 이전의 날짜의 발명에 의해 상기 공개물에 선행하는 자격을 갖지 않음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 또한, 실제의 공개일은 제시된 날짜와 상이할 수 있으며, 별도의 확인이 필요할 수 있다.

본원에서 다르게 정의되어 있지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학 및 기술 용어는 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의해 통상 이해되는 의미를 가질 것이다. 나아가, 문맥상 다르게 요구되지 않는 한, 단수 형태의 용어는 복수물을 포함하며, 복수 형태의 용어도 단수 형태물을 포함할 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 기법은 당업계에 익히 공지되어 있으며 통상 사용되는 것들이다. 달리 언급하지 않는 한, 본 발명의 방법 및 기법은 일반적으로 당업계에 익히 공지된 통상의 방법에 따라 및 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되고 논의된 다양한 일반적 참조문헌 및 보다 특이적인 참조문헌에 기재된 바에 따라 실시된다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)] 및 [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)], 및 [Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)] (이들은 본원에 참고로 포함됨)을 참고할 수 있다. 효소적 반응 및 정제 기법은 제조업자의 설명서에 따라, 당업계에서 통상 수행되는 바에 따라 또는 본원에 기재된 바에 따라 실시된다. 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 제약 화학과 관련하여 사용된 명명법 및 이들의 실험 절차 및 기법은 당업계에 익히 공지된 것으로 통상 사용되는 것들이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 제약 조제물, 제제, 및 환자에의 전달 및 치료에 있어서 표준 기법이 사용된다.

이하의 용어들은, 달리 언급하지 않는 한, 이하의 의미를 갖는 것으로 이해될 것이다.

본원에서의 목적상, 조직 샘플의 "절편"은 조직 샘플의 단일 부분 또는 조각, 예를 들어 조직 샘플로부터 절단한 조직의 박편 또는 세포를 의미한다. 조직 샘플의 다수의 절편을 취하여 본 발명에 따른 분석에 적용할 수 있음은 물론이다.

"암" 또는 "악성물"은 동일 의미의 용어로 사용되며, 제어되지 않은 비정상적 세포 증식, 이환 세포가 국소적으로 또는 혈류 및 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 퍼지는 (즉, 전이하는) 능력을 가짐, 이뿐 아니라 수많은 특유의 구조적 및/또는 분자적 특징 중 어느 하나를 특징으로 하는 수많은 질환 중의 임의의 질환을 지칭한다. "암성" 또는 "악성 세포"는 특이적인 구조적 특성을 가지며, 분화가 결여되어 있고, 침습 및 전이할 수 있는 세포로 이해된다. 암의 예로는 신장, 결장, 유방, 전립선 및 간의 암이 있다 (문헌 [DeVita, V. et al. (eds.), 2001, Cancer Principles And Practice Of Oncology, 6.sup.th Ed., Lippincott Williams ＆ Wilkins, Philadelphia, Pa.] 참조; 이 참조문헌은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함됨). 보다 구체적으로는, 실시예에서 본원에서 상세된 조합 치료제를 사용한 NSCLC의 치료가 상세히 기재되어 있지만, 용어 "암"은 그에 제한되지 않는다. 이에는 IGF-1R 의존성인 것뿐 아니라 EGFR-의존성인 임의의 모든 종양이 포함된다. 이러한 유형의 예시적인 암에는 예를 들어 췌장암이 있다.

암 세포는 숙주에 의해 제어될 수 없는 방식으로 증식하는 경향을 특징으로 하지만, 특정 암 세포와 관련된 병리는 임의의 형태를 취할 수 있다. 원발성 암 세포 (즉, 악성 변형 부위 근처에서 수득한 세포)는 확립된 병리학 기법, 특히 조직학적 검사를 통해 비-암성 세포로부터 용이하게 구별될 수 있다. 본원에 사용된 암 세포의 정의에는, 원발성 암 세포뿐 아니라, 암 세포 선조로부터 유래한 임의의 세포가 포함된다. 이에는 전이된 암 세포, 및 암 세포로부터 유래한 시험관내 배양물 및 세포주가 포함된다.

세포주 -- "세포주" 또는 "세포 배양물"은 시험관내에서 증식 또는 유지된 고등 진핵 세포를 나타낸다. 세포의 자손은 (형태학상으로, 유전자형적으로, 또는 표현형적으로) 부모 세포와 완전히 동일한 것은 아닐 수 있음은 물론이다. "배양되지 않은" 것으로 기재된 세포는 살아있는 유기체로부터 직접 수득한 것으로서, 제한된 양의 시간 동안 유기체로부터 분리되어 유지된 것인데, 즉, 세포가 실질적 복제를 거칠 수 있게 하는 조건 하에 유지되거나 또는 이를 달성하도록 충분히 긴 시간 동안 유지된 것이 아니다.

본 출원에서 사용된 바 질환을 "진단하는 것"은, 예를 들어, IGF-1R의 발현과 관련된 또는 이에 의해 매개된 병리학적 과증식성 암유발성 장애의 존재의 진단 또는 검출, 상기 질환의 진행에 대한 모니터링, 및 IGF-1R의 발현과 관련된 장애의 지표가 되는 세포 또는 샘플의 동정 또는 검출을 포함하도록 의도된 것이다. 용어 진단, 검출, 동정 등은 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.

본원에서 사용된 "병리" -- 숙주 내의 암 세포에 의해 유발되는 "병리"는 숙주의 건강한 또는 정상적인 생리 현상을 훼손하는 임의의 것이다. 이는, 이들로 한정되지 않지만, 암 세포의 비정상적인 또는 제어되지 않는 성장, 전이, IGF-1R을 내포한 세포의 발현 수준 증가, 또는 부적합한 수준으로 존재하는 다른 생성물, 그의 생리학적 환경에 부적합한 기능의 발현, 주위 세포의 정상적 기능에 대한 방해, 염증성 또는 면역학적 반응의 악화 또는 억제, 또는 비바람직한 화학적 작용제 또는 침습성 유기체의 내포 등을 수반할 수 있다.

개체 또는 세포에 대한 "치료"는 개체 또는 세포의 치료되지 않은 과정을 변경시키고자 하는 시도에서의 임의 유형의 중재이다. 예를 들어, 개체에 대한 치료는 개체에 내포된 암에 의해 유발된 병리를 감소시키거나 제한시키기 위해 수행되는 것일 수 있다. 치료는, 이에 한정되지 않지만, a) 조성물 또는 조합 치료제, 예컨대 IGF-1R 특이적 mAb 및 티로신 키나제 억제제를 포함하는 제약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 용어 "치료성"이란 유기체에서 치료학적 효과를 가져, 비정상적 상태를 적어도 부분적으로 완화 또는 제거하는 것을 지칭한다. 치료성에는, 종양 성장의 억제, 억제된 종양 성장의 유지, 및 관해의 유도가 포함된다.

용어 "예방"이란 유기체가 비정상적 상태에 들어가거나 또는 이를 발전시킬 확률을 감소시키는 것을 지칭한다.

본원에서 사용된 용어 "약"은 언급된 값의 허용 범위 내에서의 근사치를 지칭한다. 바람직하게는 이 범위는 언급된 값의 +/-5％이다.

용어 "또는"은 본원에서, 문맥상 명백히 다르게 기재되어 있지 않은 한, 용어 "및/또는"을 의미하도록 사용되며, 이와 상호교환가능하게 사용된다.

용어 "IGF1R", "IGFR1", "인슐린-유사 성장 인자 수용체-I" 및 "인슐린-유사 성장 인자 수용체, 유형 I"은 당업계에 익히 공지되어 있다. IGF-1R은 임의의 유기체로부터 유래한 것일 수 있지만, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼, 양 또는 개)로부터 및 가장 바람직하게는 인간으로부터 유래한 것이다. 전형적 인간 IGF-1R 전구체의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 Genbank에서, 예컨대, Gene ID 3480 또는 NM000875로서 입수가능하다. 상기 전구체의 절단 (예를 들어, 아미노산 710 및 711 사이)은 α-소단위 및 β-소단위를 생성하며, 이들은 결합하여 성숙 수용체를 형성한다.

"면역글로불린"은 사합체 분자이다. 천연 발생적 면역글로불린에서, 각각의 사합체는 2개의 동일한 1쌍의 폴리펩티드 쇄로 구성되며, 각 쌍은 하나의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100개 내지 110개 또는 그 이상의 아미노산으로 된 가변 영역을 포함하고 있다. 각 쇄의 카르복시-말단 부분은 주로 효과기 기능을 담당하는 불변 영역을 나타낸다. 인간 경쇄는 κ 및 λ 경쇄로 분류된다. 중쇄는 μ, δ, γ, α, 또는 ε으로 분류되며, 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE으로서의 항체의 아이소타입을 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 또는 그 이상의 아미노산으로 된 "J" 영역에 의해 연결되며, 이 때 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산으로 된 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989))] (이의 전문은 모든 목적으로 위해 참고로 포함됨)을 참고할 수 있다. 각 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성하여 무손상 면역글로불린은 2개의 결합 부위를 갖게 된다.

"항체"는 무손상 면역글로불린 또는 특이적 결합에 대해 무손상 항체와 경쟁하는 그의 항원-결합 부분을 지칭한다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기법을 이용하여 또는 무손상 항체의 효소적 또는 화학적 절단을 이용하여 생성할 수 있다. 항원-결합 부분에는, 특히, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, dAb, 및 상보성 결정 영역 (CDR) 단편, 단일-쇄 항체 (scFv), 키메라 항체, 디아바디, 및 해당 폴리펩티드에 대한 특이적 항원 결합능을 부여하기에 충분한 면역글로불린의 일부 이상을 포함하는 폴리펩티드가 포함된다. 당업계에는 여러 개의 항-IGF1R 항체가 공지되어 있다 (예를 들어, WO 03/100008; WO 2002/53596; WO 04/71529; WO 03/106621; US2003/235582; WO 04/83248; WO 03/59951; WO 04/87756 또는 WO 2005/16970 참조). 다른 소분자 IGF1R 억제제도 또한 당업계에 공지되어 있다.

본 출원에 사용된 바, 용어 "항-IGF-1R 항체"는 집합적으로 2003년 12월 16일 출원된 미국 특허 제7,241,444호 (이의 전문은 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 항-IGF-1R 항체를 지칭한다. 각종 CDR, 경쇄 및 중쇄의 아미노산 서열 및 본원에 청구된 완전한 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열도 또한 그 전체가 본원에 참고로 포함된다. 마찬가지로, 일련번호 제11/801,080호의 개시내용도 또한 그 전체가 참고로 본원에 포함된다.

용어 "환자"는 인간 및 수의과적 대상체를 포함한다.

항체 - IGF-1R (h7C10)

본원에 상세된 바, 본 발명의 일 측면은, 티로신 키나제 억제제 - EGFR, 예를 들어, 에를로티닙 및 인간 인슐린-유사 성장 인자 -1 수용체 (IGF-1R)-1에 특이적으로 결합하는 항체를 암을 가진 환자에게 공동 투여함으로써 항암 작용제의 항종양 효능을 향상시키는 방법에 관한 것이다.

그에 따라, 제안된 조합 치료제에 사용되는 IGF-1R 항체는 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체 (IGF-1R)에 특이적으로 결합하는 항체이다. 상기 조합 치료제 및 그의 사용 방법에서 사용되는 예시적인 항-IGF-1R 항체는 미국 특허 제7,241,444호 ('444 특허; 이의 전문은 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 예를 들어 '444 특허의 청구항 1을 참조할 수 있다. "h7C10" 또는 "MK-0646"은 IGF-1R에 결합할 뿐 아니라 IR/IGF-1 하이브리드 수용체에도 결합하는 것을 특징으로 하는 인간화 항체를 기재함에 있어 상호교환가능하게 사용된다. 이러한 항체에는, 바람직하게는, 인간화 항체 또는 그의 단편으로서 경쇄 및/또는 중쇄의 골격 절편 FR1 내지 FR4가 각각 인간 항체 경쇄 및/또는 중쇄의 골격 절편 FR1 내지 FR4에서 유래한 것인 경쇄 및/또는 중쇄를 포함하는 항체 (예를 들어, 상기 '444 특허에 기재된 항체)가 포함된다. 인간화 항체는 서열 1, 2, 또는 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지며 비-인간 원천에서 유래한 적어도 하나 이상의 상보성 결정 영역을 포함하는 하나 이상의 경쇄 및 서열 4, 5 또는 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 적어도 하나 이상의 상보성 결정 영역을 포함하는 하나 이상의 중쇄를 포함할 수 있다. 상기 경쇄는 서열 7 또는 8 중 하나에 개시된 바의 아미노산 서열, 또는 서열 7 또는 8과의 최적 정렬 후 이에 대해 80％ 이상 동일성을 갖는 서열 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 마찬가지로, 상기 중쇄는 서열 9, 10 또는 11 중 하나에 개시된 하나 이상의 아미노산 서열, 또는 서열 9, 10 또는 11과의 최적 정렬 후 이에 대해 80％ 이상의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 치료 방법은 MK-0646에 의해 결합되는 에피토프와 동일한 IGF-1R 상의 에피토프에 결합하는 항체를 투여하는 것을 포함한다.

재조합 항체 (IGF-1R 특이적 mAb)를 발현하기 위한 핵산 분자는 상기 '444 특허에 기재되어 있으며, 이의 내용은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.

본원에 사용된 "핵산" 또는 "핵산 분자"는 임의의 DNA 또는 RNA 분자, 단일- 또는 이중-가닥 및, 단일-가닥인 경우, 선형 또는 원형 형태의 그의 상보적 서열의 분자를 지칭한다. 핵산 분자를 논의함에 있어서, 특정 핵산 분자의 서열 또는 구조는 통상의 관례에 따라 본원에서 상기 서열을 5'에서 3' 방향으로 제시하여 기재할 수 있다. 본 발명의 일부 실시양태에서, 핵산은 "단리"되어 있다. 이 용어는 DNA에 적용될 때, 상기 DNA 분자가 기원한 유기체의 천연 발생 게놈에서 바로 인접해 있는 서열들로부터 분리된 DNA 분자를 지칭한다. 예를 들어, "단리된 핵산"은 벡터 (예컨대 플라스미드 또는 바이러스 벡터) 내로 삽입되거나, 또는 원핵 또는 진핵 세포 또는 숙주 유기체의 게놈 DNA 내로 통합된 DNA 분자를 포함할 수 있다. RNA에 적용될 때, 용어 "단리된 핵산"은 주로 상기 정의된 단리된 DNA 분자에 의해 코딩되는 RNA 분자를 지칭한다. 별법으로, 상기 용어는 그의 천연 상태에서 (즉, 세포 또는 조직에서) 결합되어 있을 다른 핵산으로부터 충분히 분리된 RNA 분자를 지칭하는 것일 수도 있다. 단리된 핵산 (DNA 또는 RNA)은 또한 생물학적 또는 합성 수단에 의해 직접 생성되어 그의 생성 동안 존재한 다른 성분으로부터 분리된 분자를 나타낼 수도 있다.

본 발명의 핵산은 또한 본 발명의 핵산의 단편을 포함한다. "단편"은 길이가 바람직하게는 약 10개 이상인 핵산, 보다 바람직하게는 길이가 약 40개의 핵산, 및 가장 바람직하게는 약 100개의 핵산인 핵산 서열을 지칭한다. "단편"은 또한 하나 이상의 결실, 삽입, 또는 치환을 포함한 약 100개 이상의 연속한 뉴클레오티드의 연장물을 의미할 수도 있다. "단편"은 또한 유전자의 전체 코딩 서열을 의미할 수 있으며, 5' 및 3' 비번역 영역을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 항체로는, 이들로 한정되지 않으나, 모노클로날 항체, 합성 항체, 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (이중-특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단일-쇄 Fv (scfv) (이중-특이적 scFv 포함), 단일 쇄 항체, Fab 단편, F(ab') 단편, 디술피드-연결된 Fv (sdFv), 및 상기 중 어느 하나의 에피토프-결합 단편이 있다. 특히, 본 발명에서 사용되는 항체는, 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적으로 활성인 부분, 즉, IGF-1R에 면역특이적으로 결합하는 IGF-1R 결합 부위를 포함하는 분자를 포함한다. 본 발명에 사용되는 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 타입 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 임의의 하위부류일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 항체는 IgG이고, 보다 바람직하게는, IgG1이다.

본 발명에서 사용되는 항체는 임의의 동물 기원에서 유래할 수 있다. 바람직하게는, 이 항체는 인간화된 모노클로날 항체이다. 별법으로, 이 항체는 상기 '444 특허에서 청구된 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 한, 완전 인간 항체일 수 있다. 본원에서 사용된 "인간" 항체에는, 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하며, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 또는 인간 유전자로부터의 항체를 발현하는 마우스 또는 다른 동물로부터 단리한 항체를 포함한다.

본 발명에서 사용되는 항체는 단일특이적, 이중특이적, 삼중특이적이거나 또는 더 크게 다중특이적일 수 있다. 다중특이적 항체는 폴리펩티드의 여러 에피토프에 면역특이적으로 결합하거나 또는 폴리펩티드뿐 아니라 이종성 에피토프, 예컨대 이종성 폴리펩티드 또는 고체 지지체 물질에도 면역특이적으로 결합할 수 있다. 예를 들어, 국제 공개 번호 WO 93/17715, WO 92/08802, WO 91/0036O5 및 WO 92/05793; 문헌 [Tutt, et al., 1991, J. Immunol 147:60-69]; 미국 특허 제4,474,893호, 제4,714,681호, 제4,925,648호, 제5,573,920호, 및 제5,601,819호; 및 문헌 [Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547-1553]을 참고할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 항체에는 항체의 유도체가 포함된다. 당업자에 공지된 표준 기법을 사용하여 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하여, 이를 본 발명에서 사용되는 방법에 사용할 수 있는데, 상기 표준 기법에는, 예를 들어, 아미노산 치환을 일으키는 부위-지정 돌연변이유발 및 PCR-매개 돌연변이유발이 있다. 바람직하게는, 상기 유도체는 본래의 분자와 비교하여 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 유도체는 비-필수성으로 예측된 하나 이상의 아미노산 잔기에서 이루어진 보존적 아미노산 치환을 갖는다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 전하를 가진 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것이다. 유사한 전하를 가진 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 부류는 당업계에 정의되어 있다. 이들 부류에는, 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 글리신, 아스파라진, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)이 있다. 별법으로, 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 (예컨대 포화 돌연변이유발에 의해) 돌연변이를 도입할 수 있으며, 생성된 돌연변이체에 대해, 활성을 보유한 돌연변이체를 확인하게 하는 생물학적 활성을 갖는 것을 스크리닝할 수 있다. 돌연변이유발 후, 코딩된 단백질을 발현시킬 수 있으며, 단백질의 활성을 측정할 수 있다.

본 발명에서 사용되는 항체에는, 변형된 유도체, 즉, 해당 항체에 대한 임의 타입의 분자의 공유 부착이 변형된 유도체가 포함된다. 예를 들어, 그러나 비제한적으로, 항체 유도체는 변형된 항체, 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지의 보호/차단 기에 의한 유도체화, 단백가수분해성 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 연결, 등에 의해 변형된 항체를 포함한다. 수많은 화학적 변형 중 임의의 것을 공지된 기법으로 수행할 수 있는데, 여기에는, 이들로 한정되지 않지만, 특이적인 화학적 절단, 아세틸화, 포르밀화, 튜니카마이신의 존재 하에서의 합성, 등이 포함된다. 부가적으로, 상기 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.

본 발명은 또한 당업자에 공지된 프레임워크 영역을 포함하는 본 발명에서 사용되는 항체를 제공한다. 특정 실시양태에서, 하나 이상의 프레임워크 영역, 바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 조성물 및 방법에서 사용되는 항체의 모든 프레임워크 영역은 인간의 것이다. 본 발명에서 사용되는 특정 다른 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 항체의 단편 영역은 인간화된 것이다. 특정 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 방법에서 사용되는 항체는 합성 항체, 모노클로날 항체, 내부체 (intrabody), 키메라 항체, 인간 항체, 인간화 키메라 항체, 인간화 항체, 글리코실화 항체, 다중특이적 항체, 인간 항체, 단일-쇄 항체, 또는 이중특이적 항체이다.

특정 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 항체는 IGF-1R에 대한 높은 결합 친화도를 갖는다.

특정 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 항체는 대상체, 바람직하게는 인간에서, 약 12 시간 이상, 약 1일 이상, 약 3일 이상, 약 6일 이상, 약 10일 이상, 약 15일 이상, 약 20일 이상, 약 25일 이상, 약 30일 이상, 약 35일 이상, 약 40일 이상, 약 45일 이상, 약 2개월 이상, 약 3개월 이상, 약 4개월 이상, 또는 약 5개월 이상의 반감기를 갖는다. 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체는 당업자에 공지된 기법으로 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체는 그의 Fc 도메인과 FcRn 수용체 간의 상호작용에 연루된 것으로 밝혀진 아미노산 잔기를 변형함으로써 (예를 들어, 치환, 결실 또는 부가함으로써) 생성시킬 수 있다 (예를 들어, 국제 공개 번호 WO 97/34631 및 존슨 (Johnson) 등에 의해 2001년 12월 12일 출원된, 발명의 명칭이 "Molecules with Extended Half-Lives, Compositions and Uses Thereof"인 미국 특허 출원 일련 번호 제10/020,354호; 및 미국 공개공보 제2005/003700호 및 제2005/0064514호 참고; 이들은 그 전문이 참고로 본원에 포함된다). 이러한 항체에 대해서는 당업자에 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어, 본원에 기재된 면역검정에 의해, 항원에 대한 결합 활성 및 생체내 효능을 시험할 수 있다.

나아가, 항체에 중합체 분자, 예컨대 고분자량 폴리에틸렌글리콜 (PEG)을 부착시킴으로써 증가된 생체내 반감기를 갖는 항체를 생성시킬 수 있다. PEG는 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 PEG의 부위-특이적 접합을 통해 또는 리신 잔기 상에 존재하는 ε-아미노기를 통해 다기능적 링커를 갖거나 갖지 않는 항체에 부착시킬 수 있다. 최소한의 생물학적 활성의 소실을 일으키는 선형 또는 분지형 중합체 유도체화가 사용될 것이다. 항체에 대한 PEG 분자의 적절한 접합이 보장되도록, SDS-PAGE 및 질량 분광측정법으로 면밀히 접합 정도를 모니터링할 것이다. 반응하지 않은 PEG를 항체-PEG 접합체로부터 분리시킬 수 있는데, 예를 들어, 크기 배제 또는 이온-교환 크로마토그래피에 의해서 분리시킬 수 있다. PEG-유도체화 항체에 대해서는 당업자에 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어, 본원에 기재된 면역검정에 의해, 항원에 대한 결합 활성 및 생체내 효능을 시험할 수 있다.

특정 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 항체에는, IGF-1R을 결합시키는 능력을 보유한 무손상 항체의 항원-결합 부분이 포함된다. 이의 예로서는, (i) Fab 단편, 즉 VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 즉 힌지 영역에서 디술피드 가교로 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암(arm)의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (문헌 [Ward et al., (1989) Nature 341:544-546]); 및 (vi) 단리된 상보성 결정 영역 (CDR)이 있다. 나아가, Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH가 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 쇄 (단일 쇄 Fv (scFv)로 공지됨; 예를 들어, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; 및 [Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883] 참고)로 만들어질 수 있게 하는 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 이들을 연결할 수 있다. 이러한 단일 쇄 항체는 용어 "항체"라는 언급에 포함된다.

IGF-1R에 대한 항체를 제조하는 방법은 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 상기 '444 특허를 참조할 수 있다.

항체 특이성에 대한 스크리닝 - 항체를 생성하는 기법은 상기에서 기재한 바 있다. 추가로, 원하는 특정 생물학적 특징을 가진 항체를 선별할 수 있다. 따라서, 항체를 일단 생성한 후, 이를 IGF-1R에 대한 결합 친화도에 대해 스크리닝할 수 있다. IGF-1R에 특이적으로 결합하는 항체에 대한 스크리닝은 마이크로타이터 플레이트를 IGF-1R로 코팅하여 사용하는 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 이용하여 수행할 수 있다. 일부 실시양태에서, 양성적으로 반응하는 클론으로부터의 IGF-1R 결합 항체를 ELISA-기반 검정에서 다른 IGF-1R 이소형, 예를 들어, 다른 IGF-1R 이소형(들)으로 코팅된 마이크로타이터 플레이트를 사용한 IGF-1R에 대한 반응성에 대해 추가로 스크리닝할 수 있다. IGF-1R의 또다른 이소형에 반응성인 항체를 생성하는 클론을 제거하고, IGF-1R에만 반응성인 항체를 생성하는 클론을 선별하여, 추가로 증대시키고 개발할 수 있다. IGF-1R에 대한 항체의 반응성에 대한 확인은, 예를 들어, 난소, 유방, 신장, 결장직장, 폐, 자궁내막, 또는 뇌의 암 세포로부터의 단백질 및 정제된 IGF-1R 및 다른 IGF-1R 이소형을 SDS-PAGE 겔 상에서 영동시키고, 이어서 이를 막 위에서 블랏팅하는 웨스턴 블랏 검정을 사용하여 수행할 수 있다. 상기 막을 이어서 추정 항-IGF-1R 항체로 탐침할 수 있다. IGF-1R에만 반응성이고 또다른 인슐린-유사 수용체 이소형에는 그렇지 않은 것은 IGF-1R에 대한 반응성의 특이성을 확인시켜 준다.

IGF-1R 또는 그의 유도체를 검출하는 일반적 방법 - 본 발명의 항체 또는 그의 결합 단편을 사용하여 IGF-1R을 검출하는 검정 방법에는 특별한 제한이 없다. 임의의 검정 방법이 사용될 수 있지만, 단, 시험되는 유체 중의 항원의 양 (예를 들어, IGF-1R의 수준)에 상응하는 항체, 항원 또는 항체-항원 복합체의 양이 화학적 또는 물리적 수단에 의해 검출가능하고 항원의 양이 공지된 양의 항원을 함유한 표준 용액으로부터 준비한 표준 곡선으로부터 산출될 수 있어야 한다. 본 발명에 포함되는 대표적인 면역검정으로는, 이들로 한정되지 않지만, 미국 특허 제4,367,110호 (이중 모노클로날 항체 샌드위치 검정); 문헌 [Wide et al., Kirkham and Hunter, eds. Radioimmunoassay Methods, E. and S. Livingstone, Edinburgh (1970)]; 미국 특허 제4,452,901호 (웨스턴 블랏); 문헌 [Brown et al., J. Biol. Chem. 255: 4980-4983 (1980)] (표지된 리간드의 면역침전); 및 문헌 [Brooks et al., Clin. Exp. Immunol. 39:477 (1980)] (면역세포화학)에 기재된 것; 광학 현미경적 검출, 유세포 분석적 검출, 또는 형광적 검출과 결합된, 형광 표지된 항체를 이용하는 면역형광 기법 등이 있다. 또한 문헌 [Immunoassays for the 80's, A. Voller et aL, eds., University Park, 1981, Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)]를 참조할 수 있다.

(1) 샌드위치 검정은 각각 검출 대상 단백질의 상이한 면역원성 부분, 또는 에피토프에 결합할 수 있는 2개의 항체를 사용하는 것을 수반한다. 샌드위치 검정에서, 시험 샘플 분석 대상물은 고체 지지체 상에 고정화된 제1 항체에 의해 결합되며, 그 후 제2 항체가 상기 분석 대상물에 결합하여, 불용성 3-부분 복합체를 형성한다. 예를 들어, 미국 특허 제4,376,110을 참고할 수 있다. 상기 제2 항체는 그 자체가 검출가능한 잔기로 표지된 것이거나 (직접 샌드위치 검정), 또는 검출가능한 잔기로 표지된 항-면역글로불린 항체를 이용하여 측정되는 것일 수 있다 (간접 샌드위치 검정). 예를 들어, 샌드위치 검정의 한 가지 유형은 ELISA 검정으로, 이 경우 검출가능한 잔기는 효소이다.

샌드위치 검정에서, 본 발명의 고정화된 항체를 시험 유체와 반응시킨 후 (1차 반응), 표지된 형태의 본 발명의 항체와 반응시키고 (2차 반응), 고정화 담체 상의 표지제의 활성을 측정하는데, 이로써 시험 유체 내의 IGF-1R 수준을 정량할 수 있다. 1차 및 2차 반응은 동시에 또는 일정 시간 간격을 두고 수행될 수 있다. 표지 및 고정화 방법은 상기 기재한 방법을 변형하여 수행될 수 있다. 샌드위치 검정에 의한 면역검정에서, 고정화된 또는 표지된 항체에 사용되는 항체가 반드시 하나의 종에서 유래할 필요는 없으며, 측정 민감도의 증가 등을 위해 2 이상의 종의 항체의 혼합물을 사용할 수 있다. 샌드위치 검정으로 IGF-1R을 분석하는 방법에서, 예를 들어, 1차 반응에 사용되는 항체가 IGF-1R의 C-말단 영역에 있는 부분적 펩티드를 인식하는 경우, 2차 반응에 사용되는 항체는 바람직하게는 C-말단 영역 이외의 부분적 펩티드 (즉, N-말단 영역)를 인식하는 항체이다. 1차 반응에 사용되는 항체가 IGF-1R의 N-말단 영역에 있는 부분적 펩티드를 인식하는 경우, 바람직하게는 2차 반응에 사용되는 항체로서 N-말단 영역 이외의 부분적 펩티드 (즉, C-말단 영역)를 인식하는 항체가 이용된다.

IGF-1R을 검출하는데 또한 유용할 수 있는 다른 유형의 "샌드위치" 검정은 소위 말하는 "동시(simultaneous)" 및 "역(reverse)" 검정이다. 동시 검정은 고체 지지체에 결합된 항체 및 표지된 항체 둘 모두가 시험되는 샘플에 동시에 첨가되는 단일 인큐베이션 단계를 수반한다. 인큐베이션 완료 후, 고체 지지체를 세척하여 유체 샘플의 잔류물 및 복합체를 형성하지 않은 표지된 항체를 제거한다. 이어서, 통상의 "정방향(forward)" 샌드위치 검정에서 행해지는 바와 같이 고체 지지체에 결합된 표지된 항체의 존재를 측정한다.

"역" 검정에서는, 표지된 항체의 용액을 먼저 유체 샘플에 단계적으로 첨가하고, 이어서 적절한 인큐베이션 기간 후 고체 지지체에 결합된 비표지된 항체를 첨가하는 것을 이용한다. 두번째 인큐베이션 후, 고체 상을 통상의 방식으로 세척하여 시험되는 샘플의 잔류물 및 반응하지 않은 표지된 항체의 용액이 제거되도록 한다. 이어서, 고체 지지체에 결합된 표지된 항체를 "동시" 및 "정방향" 검정에서처럼 측정한다. 한 실시양태에서는, 별개의 에피토프에 특이적인 본 발명의 항체들의 조합물을 사용하여 민감한 3-부위 면역방사계측 검정을 구축할 수 있다.

또한, 이러한 유형의 검정을, IGF-1R이 존재할 수 있는 임의의 "샘플" 중에서의 IGF-1R 발현을 정량하기 위해 사용할 수 있다. 따라서, 특정 측면에서, 샌드위치 검정은 이하를 포함한다.

(i) 담체 상에 고정화된 IGF-1R의 N-말단 영역에 있는 부분적 펩티드와 특이적으로 반응하는 항체, C-말단 영역에 있는 부분적 펩티드와 특이적으로 반응하는 표지된 형태의 항체 및 시험 유체를 반응시키는 단계, 및 상기 표지의 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 시험 유체 내에서의 IGF-1R의 발현 수준을 정량하는 방법; 또는

(ii) 담체 상에 고정화된 IGF-1R의 C-말단 영역에 있는 부분적 펩티드와 특이적으로 반응하는 항체, IGF-1R의 표지된 형태의 N-말단 영역에 있는 부분적 펩티드와 특이적으로 반응하는 항체 및 시험 유체를 반응시키는 단계, 및 상기 표지의 활성을 측정하는 단계를 포함하는, 시험 유체 내에서의 IGF-1R 발현을 정량하는 방법; 등.

(2) 경쟁적 결합 검정은 제한된 양의 항체와의 결합에 대해 시험 샘플 분석 대상물과 경쟁하는 표지된 표준물의 능력을 기반으로 한다. 시험 샘플 중의 IGF-1R 단백질의 양은 항체에 결합하게 되는 표준물의 양에 반비례한다. 결합하게 되는 표준물의 양의 측정을 용이하게 하기 위해, 항체를 일반적으로 경쟁 전 또는 후에 불용성이 되도록 하여, 항체에 결합된 표준물 및 분석 대상물이 결합되지 않은 채 존재하는 표준물 및 분석 대상물로부터 편리하게 분리될 수 있도록 한다.

IGF-1R 발현의 수준을 정량함에 있어서, 당업자는 본 발명의 항체 또는 그의 단편, 시험 유체 및 표지된 형태의 IGF-1R을 수합하고/하거나 경쟁적으로 반응시키고, 항체 또는 그의 단편에 결합된 표지된 IGF-1R의 비율을 측정하여 시험 유체 내의 IGF-1R을 정량할 수 있다.

(3) 면역계측 검정

면역계측 검정에서, 시험 유체 중의 항원과 고체 상 항원을 주어진 양의 표지된 형태의 본 발명의 항체와 경쟁적으로 반응시킨 후, 고체 상을 액체 상으로부터 분리시키거나; 또는 시험 유체 중의 항원과 과량의 표지된 형태의 본 발명의 항체를 반응시킨 후, 고체 상 항원을 첨가하여, 반응하지 않은 표지된 형태의 본 발명의 항체를 상기 고체 상에 결합시키고, 이어서 고체 상을 액체 상으로부터 분리시킨다. 그 후, 상기 상 중 임의의 것의 표지된 양을 측정하여 시험 유체 중의 항원 수준을 측정한다.

전형적인 바람직한 면역계측 검정에는, 고체 상에 결합된 항체를 시험되는 샘플과 먼저 접촉시켜 2원(binary) 고체 상 항체-IGF-1R 복합체를 형성시킴으로써 샘플로부터 IGF-1R을 추출하는 "정방향" 검정이 포함된다. 적절한 인큐베이션 기간 후, 반응하지 않은 IGF-1R이 있는 경우 이를 포함하는 유체 샘플의 잔류물을 제거하기 위해 고체 지지체를 세척하고, 이어서 이를 공지된 양의 표지된 항체 ("리포터 분자"로 기능함)를 함유하는 용액과 접촉시킨다. 표지된 항체가 비표지된 항체를 통해 고체 지지체에 결합된 IGF-1R과 복합체를 형성하도록 허용하는 두번째 인큐베이션 기간 후, 고체 지지체를 2회 세척하여 반응하지 않은 표지된 항체를 제거한다. 이러한 유형의 정방향 샌드위치 검정은 IGF-1R이 존재하는지를 결정하는 단순한 "예/아니오" 검정이 되거나, 또는 표지된 항체의 측정치를 공지의 양의 IGF-1R을 함유하는 표준 샘플과 비교하여 정량적인 것으로 될 수 있다. 그러한 "2-부위" 또는 "샌드위치" 검정에 대해서는, 와이드 (Wide) (Radioimmune Assay Method, Kirkham, ed., Livingstone, Edinburgh, 1970, pp. 199 - 206)가 기재한 바 있다.

(4) 비탁법 (nephrometry)

비탁법에서는, 겔 또는 용액에서의 항원-항체 반응의 결과로서 생성되는 불용성 침강물의 양을 측정한다. 시험 유체 중의 항원의 양이 소량이고, 단지 소량의 침강물이 수득되는 경우에도, 레이저 산란을 이용하는 레이저 비탁법이 적합하게 사용될 수 있다.

표지제를 사용하는 상기 언급한 검정 방법 (1) 내지 (4)에서 사용될 수 있는 표지제의 예로는, 방사성 동위원소 (예를 들어, 125I, 131I, 3H, 14C, 32P, 33P, 35S, 등), 형광 물질, 예를 들어, 시아닌 형광 염료 (예를 들어, Cy2, Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7), 플루오레사민, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 등, 효소 (예를 들어, β-갈락토시다제, β-글루코시다제, 알칼리성 포스파타제, 퍼옥시다제, 말레이트 데히드로게나제, 등), 발광 물질 (예를 들어, 루미놀, 루미놀 유도체, 루시페린, 루시게닌, 등), 비오틴, 란탄계 원소, 등이 있다. 또한, 항체를 표지제에 결합시킴에 있어 비오틴-아비딘 시스템이 또한 사용될 수 있다

항원 또는 항체의 고정화에서, 물리적 흡착이 사용될 수 있다. 별법으로, 단백질, 효소, 등의 고정화에 통상 사용되는 화학적 결합도 또한 사용가능하다. 담체의 예로는, 불용성 다당류, 예컨대 아가로스, 덱스트란, 셀룰로스, 등; 합성 수지, 예컨대 폴리스티렌, 폴리아크릴아미드, 실리콘, 등; 또는 유리; 등이 있다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 체액 (예컨대, 혈액, 혈청, 혈장, 객담 등) 중의 IGF-1R 수준을 동정 및 측정함으로써 암 및 종양의 진단에 도움을 준다. IGF-1R이 정상적으로 존재하고, 암유발성 장애의 발달이 비정상적 양 (예를 들어, 정상과 비교한 발현 양)의 세포 표면 수용체 (IGF-1R)에 의해 유발되는 경우, 해당 검정은 생물학적 샘플 내의 IGF-1R 수준을 동일 세포 유형의 정상의 비-암유발성 조직에서 예상되는 범위와 비교해야 한다. 따라서, 대조군 대상체 또는 대상체의 기저수준과 비교하여, 대상체에서 IGF-1R을 내포한 세포의 양 또는 IGF-1R 발현 수준의 통계학적으로 유의미한 증가는, 진행 중이거나 또는 이의 발병 위험에 놓인 암유발성 장애의 진단을 유도할 수 있는 인자일 수 있다. 마찬가지로, 전이의 가능성이 높은 암의 지표가 되는 고수준의 IGF-1R의 존재를 또한 검출할 수 있다. 본 발명의 항체에 의해 인식되는 항원을 발현하는 암, 예를 들어, IGF-1R의 경우, 이 항원을 검출하는 능력은 조기 진단을 제공하여, 조기 치료의 기회를 제공한다. 조기 검출은 초기 단계에서 진단하기가 곤란한 암에 있어 특히 중요하다.

나아가, 체액 샘플, 예컨대 혈액에서 검출 및 측정되는 항원의 수준은, 이들로 한정되지 않으나, 수술, 화학요법, 방사선 요법, 본 발명의 치료학적 방법, 및 이들의 조합을 비롯한 암 또는 종양을 위한 요법의 추이를 모니터링하는 수단을 제공한다. 체액 중의 항원의 수준과 질환의 경중도를 상관시킴으로써, 그러한 항원의 수준을 사용하여 예를 들어, 원발성 종양, 암, 및/또는 전이물의 성공적인 절제를 나타낼 뿐 아니라, 다른 요법의 유효성을 시간 경과에 따라 나타내고/내거나 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 시간 경과에 따른 암 또는 종양-특이적 항원의 수준의 감소는 환자에서 종양 부하량의 감소를 시사한다. 반대로, 시간 경과에 따른 항원 수준이 변화없거나 증가하는 것은 요법의 무효성, 또는 종양 또는 암의 지속적인 성장을 시사한다.

시편에서 항체를 검출하는 것은 당업계에 공지된 기법, 예컨대 면역효소 기법, 예를 들어, 면역과산화효소 염색 기법, 또는 아비딘-비오틴 기법, 또는 면역형광 기법을 이용하여 수행가능하다 (예를 들어, 문헌 [Ciocca et al, 1986, "Immunohistochemical Techniques Using Monoclonal Antibodies", Meth. Enzymol., 121 :562 79] 및 [Introduction to Immunology, Ed. Kimball, (2.sup.nd Ed), Macmillan Publishing Company, 1986, pp. 113 117] 참조). 당업자는 일상적인 실험에 의해 작동성 있는 최적의 검정을 결정할 수 있다.

IGF-1R을 검출하는 전형적 시험관내 면역검정은 IGF-1R에 선택적으로 결합할 수 있는, 검출가능하게 표지된 본 발명의 항-IGF-1R 항체 또는 항원 결합 단편의 존재 하에 생물학적 샘플을 인큐베이션하는 단계, 및 샘플 중에 결합된 상기 표지된 단편 또는 항체를 검출하는 단계를 포함한다. 이 항체는 세포 또는 그의 일부분 (예를 들어, 과다형성성, 이형성 및/또는 암성 세포로부터 분리한 IGF-1R 또는 그의 단편)에 결합시, 상기 세포 또는 그의 일부분의 검출을 허용하기에 효과적인 표지에 결합되어 있다. 생물학적 샘플 중의 임의의 세포 또는 그의 일부분의 존재는 상기 표지를 검출함으로써 검출된다.

생물학적 샘플을, 고정화 세포, 세포 입자, 막, 또는 가용성 단백질을 고정화할 수 있는 고체 상 지지체 또는 담체, 예컨대 니트로셀룰로스, 또는 다른 고체 지지체 또는 매트릭스에 접촉시켜 그에 고정화할 수 있다. 이어서 지지체를 적합한 완충액으로 세척한 후, 검출가능하게-표지된 항-IGF-1R 항체로 처리할 수 있다. 이어서 고체 상 지지체를 완충제로 2회 세척하여 결합하지 않은 항체를 제거할 수 있다. 그런 다음, 고체 지지체 상의 결합된 표지의 양을 상의 수단으로 검출할 수 있다. 따라서, 본 발명의 또다른 실시양태에서는, 고체 상 지지체, 예컨대 본원에 기재된 지지체에 결합된 모노클로날 항체, 또는 그의 결합 단편을 포함하는 조성물이 제공된다.

"고체 상 지지체" 또는 "담체"는 펩티드, 항원 또는 항체를 결합시킬 수 있는 임의의 지지제를 의도한 것이다. 익히 공지된 지지체 또는 담체로는, 유리, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 덱스트란, 나일론, 아밀라제, 천연 및 변형 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스, 및 자철석이 있다. 담체의 성질은 본 발명의 목적상 어느 정도 가용성이거나 또는 불용성일 수 있다. 지지체 물질은, 커플링된 분자가 IGF-1R 또는 항-IGF-1R 항체에 결합할 수 있는 한 사실상 임의의 가능한 구조적 형태를 가질 수 있다. 따라서, 지지체의 형태는 비드에서와 같이 구형이거나, 또는 시험관의 내부 표면, 또는 막대의 외부 표면에서와 같이 원통형일 수 있다. 별법으로, 지지체의 표면은 편평할 수 있는데, 예컨대 시트, 배양 접시, 테스트 스트립, 등과 같을 수 있다. 바람직한 지지체로는 폴리스티렌 비드를 들 수 있다. 당업자는 항체, 펩티드 또는 항원을 결합시키기에 적합한 다수의 다른 담체에 대해 알고 있거나, 또는 일상적인 실험을 통해 이를 확인할 수 있다.

본 발명에 따른 시험관내 검정은 또한 재조합 IGF-1R을 발현하는 세포로부터 단리된 막, IGF-1R의 리간드 결합 절편을 포함하는 가용성 단편, 또는 고체 상 기판에 부착된 단편을 사용하는 것을 포함한다. 이들 검정은 결합 절편 돌연변이 및 변형, 또는 리간드 돌연변이 및 변형, 예를 들어, 리간드 유사체의 효과에 대한 진단학적 측정을 허용한다.

생체내 모델에서 조합 면역요법의 효능에 대한 검정 - 종양 투여 후 다양한 시점에서 당업계에 익히 공지된 기법을 사용하여 종양 부하량을 평가할 수 있다. 항종양 반응을 모니터링하고 조합 면역요법의 효능을 측정하는 검정은 이하에 기재되어 있다. 개선되거나 증진된 항종양 반응이 면역요법의 투여 후 곧, 예를 들어 5 내지 10일 이내에 가장 극적으로 관찰될 수 있지만, 이 반응은, IGF-1R의 발현 수준, 항-IGF-1R 항체의 투여량 및 투여 빈도, 및 티로신 키나제 억제제-에를로티닙의 투여 시점에 대한 항-IGF-1R-1 항체의 상대적인 투여 시점과 같은 인자에 따라 일부 경우 지연될 수도 있다. 따라서, 면역요법 후 항종양 반응을 완전히 평가하기 위해 치료 또는 조합 치료제의 투여 후 다양한 시점에서 수거한 생물학적 샘플에 대해 익히 공지된 검정 중 임의의 검정을 실시할 수 있다.

치료 모니터링 - 당업자라면 본 발명의 조합 치료의 투여시의 치료적 성과 및/또는 전신성 면역 반응을 모니터링하는 수단을 인지하고 있다. 특히, 치료적 성과는 종양 성장의 약화 및/또는 종양 퇴행 및 또는 종양 특이적 마커의 수준을 모니터링하여 평가할 수 있다. 치료에 반응하여 나타나는 종양 성장의 약화 또는 종양 퇴행은, 예를 들어, 종양의 수, 종양 질량 또는 크기, 또는 전이의 감소/방지를 비롯한, 당업자에 공지된 여러 종말점 중 하나 이상을 사용하여 모니터링가능하다.

IGF-1R 억제제:

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 BMS-577098 (

) 또는 AEW-541 (

) 또는

이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/48133에 개시된 피리미딘 유도체 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조

를 포함하는 것이다. 이들 작용제를 투여하여 에를로티닙 내성 암 또는 IGF-1R에 의해 매개되는 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/35614에 개시된 티로신 키나제 억제제 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/35615에 개시된 티로신 키나제 억제제 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/35616에 개시된 티로신 키나제 억제제 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/35619에 개시된 티로신 키나제 억제제 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는, 예를 들어, VEGF-2R, Kit, FLT3 및/또는 PDGFR을 또한 억제하는 다중 표적화 키나제 억제제이며, 예를 들어, SU- 11248 (예를 들어, 수니티닙 말레이트) 또는 Bay43-9006 (소라페닙)이 있다. 이들 작용제를 투여하여 에를로티닙 내성 암 또는 IGF-1R에 의해 매개되는 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/24967에 개시된 화합물 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 04/30625에 개시된 화합물 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 04/30627에 개시된 화합물 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 00/35455에 개시된 헤테로아릴-아릴 우레아 중 어느 하나로서, 예를 들어 이하의 핵심 구조를 포함하는 것이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 WO 03/27246에 개시된 펩티드 중 어느 하나이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는

또는 PCT 출원 공개번호 WO 02/92599에 개시된 임의의 4-아미노-5-페닐-7-시클로부틸-피롤로[2,3-d] 피리미딘 유도체이다.

추가의 화학요법제

본 발명의 범위는 본 발명의 IGF1R 억제제를 추가의 화학요법제와 함께 포함하는 조성물, 및 이와 더불어, IGF1R 억제제를 추가의 화학요법제 (예를 들어, 추가의 항암 화학요법제 또는 항구토제)와 함께 투여함으로써 신경아세포종, 윌름 종양, 골육종, 횡문근육종, 소아과 암 또는 췌장암을 치료하는 방법을 포함한다. 추가의 화학요법제는 투여되는 개체에서 유익한 생리학적 반응을 이끌어내는 임의의 작용제를 포함하며; 예를 들어, 여기서 상기 작용제는 투여되는 대상체 내의 질환 증상 또는 원인을 완화 또는 제거한다. 추가의 화학요법제로는 임의의 항암 화학요법제가 포함된다. 항암 치료제는, 예를 들어, 투여되는 대상체에서 암의 증상 또는 원인을 완화 또는 제거하는, 임의의 작용제이다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 에토포시드 (VP-16;

)와 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암, 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 젬시타빈 (

)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 공개된 미국 특허 출원 번호 U.S. 2004/0209878A1에 개시된 임의의 화합물 (예컨대,

로 표시되는 핵심 구조를 포함하는 화합물) 또는 캘릭스 또는 독실® (독소루비신 HCl 리포좀 주사; 오르토 바이오테크 프로덕츠 엘.피 (Ortho Biotech Products L.P; 미국 뉴저지 라리탄))을 비롯한 독소루비신 (

)과 함께 제공된다. 독실®은 N-(카르보닐-메톡시폴리에틸렌 글리콜 2000)-1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민 나트륨 염 (MPEG-DSPE); 극도 경화 대두 포스파티딜콜린 (HSPC), 및 콜레스테롤로 구성된 스텔스(STEALTH)® 리포좀 담체 중에 독소루비신을 포함하는 것이다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 5'-데옥시-5-플루오로우리딘 (

)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 빈크리스틴 (

)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 테모졸로미드 (

), 임의의 CDK 억제제, 예컨대 ZK-304709, 셀리시슬립 (Seliciclib) (R-로스코비틴;

); 임의의 MEK 억제제, 예컨대 PD0325901 (

), AZD-6244; 카페시타빈 (5'-데옥시-5-플루오로-N-[(펜틸옥시)카르보닐]-시티딘); 또는 L-글루탐산, N-[4-[2-(2-아미노-4,7-디히드로-4-옥소-1H-피롤로[2,3-d]피리미딘-5-일)에틸]벤조일]-, 이나트륨 염, 오수화물 (

; 페메트렉세드 이나트륨 오수화물)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 캄토테신 (

; 문헌 [Stork et al, J. Am. Chem. Soc. 93(16): 4074-4075 (1971)]; [Beisler et al., J. Med. Chem. 14(11): 1116-1117 (1962)]) 또는 이리노테칸 (

; 캄프토사(Camptosar)®로 판매됨; 파마시아 앤 업존 코. (Pharmacia ＆ Upjohn Co.); 미국 미시간 칼라마주)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 폴폭스(FOLFOX) 요법 (옥살리플라틴 (

)과 더불어, 주입용 플루오로우라실 (

) 및 폴린산 (

) (문헌 [Chaouche et al, Am. 1 Clin. Oncol. 23(3):288-289 (2000)]; [de Gramont et at, J. Clin. Oncol. 18(16):2938-2947 (2000)])과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 항에스트로겐, 예컨대

(타목시펜; 아스트라제네카 파마슈티컬스 엘피 (AstraZeneca Pharmaceuticals LP; 미국 델라웨어 윌밍턴)에 의해 놀바덱스(Nolvadex)®로 판매됨) 또는

(토레미펜 시트레이트; 샤이어 유에스, 인크. (Shire US, Inc.; 미국 켄터키 플로렌스)에 의해 파레스톤(Fareston)®으로 판매됨)과 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 아로마타제 억제제, 예컨대

(아나스트라졸; 아스트라제네카 파마슈티컬스 엘피 (미국 델라웨어 윌밍턴)에 의해 아리미덱스(Arimidex)®로 판매됨),

(엑세메스탄; 파마시아 코포레이션 (Pharmacia Corporation; 미국 미시간 칼라마주)에 의해 아로마신(Aromasin)®으로 판매됨) 또는

(레트로졸; 노바티스 파마슈티컬스 코포레이션 (Novartis Pharmaceuticals Corporation; 미국 뉴저지 이스트 하노버)에 의해 페마라(Femara)®로 판매됨)와 함께 제공된다. 이들 작용제를 투여하여 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암을 치료 또는 예방하는 방법은 본 발명의 범위 내에 속한다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 에스트로겐, 예컨대 DES(디에틸스틸베스트롤),

(에스트라디올; 뉴저지주 록어웨이 소재의 워너 칠코트, 인크.(Warner Chilcott, Inc.)사에 의해 에스트롤(등록상표)로서 판매됨) 또는 접합된 에스트로겐 (펜실베니아주 필라델피아 소재의 와이어쓰 파마슈티컬스 인크.(Wyeth Pharmaceuticals Inc.)사에 의해 프리마린(등록상표)으로서 판매됨)과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름(Wilm) 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 베바시주맙 (아바스틴™; 캘리포니아주 샌 프란시스코 소재의 제넨테크사(Genentech)), 항-VEGFR-2 항체 IMC-1C11, 다른 VEGFR 억제제, 예컨대: CHIR-258

(

), WO2004/13145에 기재된 임의의 억제제

(예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

),

WO2004/09542 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

), WO00/71129 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

), WO2004/09601 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

), WO2004/01059 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

) WO01/29025 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

), WO02/32861 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

) 또는 WO03/88900에 기재된 임의의 억제제 (예를 들어, 다음의 코어 구조식을 포함함:

); 3-[5-(메틸술포닐피페라딘메틸)-인돌릴]-퀴놀론; 바탈라닙 (

; PTK/ZK; CPG-79787; ZK-222584), AG-013736

(

); 및 VEGF 트랩 (AVE-0005), VEGF 수용체 1 및 2의 일부를 포함하는 가용성 디코이(decoy) 수용체를 비롯한 항혈관신생 작용제와 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 LHRH (황체 호르몬-유리 호르몬) 효능제, 예컨대 [D-Ser(Bu t) 6 ,Azgly 10] (pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu t)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH₂ 아세테이트 [C₅₉H₈₄N₁₈O₁₄ㆍ(C₂H₄O₂)_X 여기서 x = 1 내지 2.4]의 아세테이트 염;

(고세렐린 아세테이트; 영국 맥클스필드 소재의 아스트라제네카 유케이 리미티드 (AstraZeneca UK Limited)사에 의해 졸라덱스(등록상표)로서 판매됨),

(류프롤라이드 아세테이트; 뉴욕주 뉴욕 소재의 사노피-신써라보 인크.(Sanofi-Synthelabo Inc.)사에 의해 엘리가드(등록상표)로서 판매됨) 또는

(트립토렐린 파모에이트; 미시간주 칼라마주 소재의 파마시아 컴퍼니(Pharmacia Company)사에 의해 트렐스타(등록상표)로서 판매됨)과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 프로게스테론 작용제, 예컨대

(메드록시프로게스테론 아세테이트; 미시간주 칼라마주 소재의 파마시아 앤드 유피존 코.(Pharmacia ＆ Upjohn Co.)사에 의해 프로베라(등록상표)로서 판매됨),

(히드록시프로게스테론 카프로에이트; 17-((1-옥소헥실)옥시)프레근-4-엔-3,20-디온;), 메게스트롤 아세테이트 또는 프로게스틴과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 선택적인 에스트로겐 수용체 조절제 (SERM) 예컨대

(랄록시펜; 인디아나주 인디애나폴리스 소재의 일라이 릴리 앤드 컴퍼니(Eli Lilly and Company)사에 의해 에비스타(등록상표)로서 판매됨)과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는

(바이칼루타마이드; 델라웨어주 윌밍톤 소재의 아스트라제네카 파마슈티컬스 엘피(AstraZeneca Pharmaceuticals LP)사에 의해 카소덱스(등록상표)로 판매됨);

(플루타마이드; 2-메틸-N-[4-니트로-3(트리플루오로메틸)페닐]프로판아미드; 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링 코포레이션(Schering Corporation)사에 의해 유렉신(등록상표)으로서 판매됨);

(닐루타마이드; 미주리주 캔사스 시티 소재의 아벤티스 파마슈티컬스 인크.(Aventis Pharmaceuticals Inc.)사에 의해 닐란드론(등록상표)으로서 판매됨) 및

(메게스트롤 아세테이트; 브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)사에 의해 메거스(등록상표)로서 판매됨)를 포함하지만 이들로 한정되지는 않는, 항-안드로겐과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 CP-724714 (

); TAK-165 (

); HKI-272 (

); OSI-774 (

; 문헌 [erlotinib, Hidalgo et al., J. Clin. Oncol. 19(13): 3267-3279 (2001)), 라파타닙

(

; 문헌 [GW2016; Rusnak et al., Molecular Cancer Therapeutics 1:85-94 (2001); N-{3-클로로-4-[(3-플루오로벤질)옥시]페닐}-6-[5-({[2-(메틸술포닐)에틸]아미노}메틸)-2-푸릴]-4-퀴나졸린아민; PCT 출원 번호 WO99/35146), 카네르티닙 (CI-1033;

; 문헌 [Erlichman et al., Cancer Res. 61(2):739-48 (2001)]; [Smaill et al., J. Med. Chem. 43(7): 1380-97 (2000)]), ABX-EGF 항체 (캘리포니아주 프리몬트 소재의 아브게닉스, 인크.(Abgenix, Inc.); 문헌 [Yang et al., Cancer Res. 59(6): 1236-43 (1999)]; [Yang et al., Crit Rev Oncol Hematol. 38(1):17-23 (2001)]), 에르비툭스 (미국 특허 제6,217,866호; IMC-C225, 세툭시맙; 뉴욕주 뉴욕 소재의 임클론(Imclone)사), EKB-569 (

; 문헌 [Wissner et al., J. Med. Chem. 46(1): 49-63 (2003)), PKI-166 (

; CGP-75166), GW-572016, 임의의 항-EGFR 항체 및 임의의 항-HER2 항체를 포함하지만 이들로 한정되지는 않는, EGF 수용체 또는 HER2의 작용에 길항작용하는 하나 이상의 억제제와 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는

(로나파르닙; 사라사르™; 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링-플로우(Schering-Plough)사)와 연관되어 제공된다. 또다른 실시양태에서, 하기 FPT 억제제 중 하나는 IGF1R 억제제와 연관되어 제공된다:

또는

상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

IGF1R 억제제와 연관되어 제공될 수 있는 다른 FPT 억제제는

BMS-214662 (

; 문헌 [Hunt et al., J. Med. Chem. 43(20):3587-95 (2000)]; [Dancey et al., Curr. Pharm. Des. 8:2259-2267 (2002)]; (R)-7-시아노-2,3,4,5-테트라히드로-1-(1H-이미다졸-4-일메틸)-3-(페닐메틸)-4-(2-티에닐술포닐)-1H-1,4-벤조디아제핀)) 및 R155777 (티피파르닙; 문헌 [Garner et al., Drug Metab. Dispos. 30(7):823-30 (2002)]; [Dancey et al., Curr. Pharm. Des. 8:2259-2267 (2002)]; (B)-6-[아미노(4-클로로페닐)(1-메틸-1H-이미다졸-5-일)-메틸]-4-(3-클로로페닐)-1-메틸-2(1H)-퀴놀리논];

뉴저지주 뉴 브런즈윅 소재의 존슨 앤드 존슨(Johnson ＆ Johnson)사에 의해 자르네스트라™로서 판매됨)을 포함한다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는

(아미포스틴);

(NVP-LAQ824; 문헌 [Atadja et al., Cancer Research 64: 689-695 (2004)),

(수베로일 아날라이드 히드록삼산),

(발프로산; 문헌 [Michaelis et al., Mol. Pharmacol. 65:520-527 (2004)),

(트리코스타틴 A),

(FK-228; 문헌 [Furumai et al., Cancer Research 62: 4916-4921 (2002)),

(SU11248; 문헌 [Mendel et al., Clin. Cancer Res.9(1):327-37 (2003)),

(BAY43-9006),

(KRN951),

(아미노글루테티마이드);

(암사크린);

(아나그렐라이드);

(아나스트로졸; 델라웨어주 윌밍톤 소재의 아스트라제네카 파마슈티컬스 엘피사에 의해 아리미덱스로서 판매됨); 아스파라기나제; 바실러스 칼메트-구어린(Bacillus Calmette-Guerin, BCG) 백신 (문헌 [Garrido et al., Cytobios. 90(360):47-65 (1997));

(블레오마이신);

(부세렐린);

(부술판; 1,4-부탄디올, 디메탄술포네이트; 뉴저지주 에디슨 소재의 이에스피 파마, 인크.(ESP Pharma, Inc.)사에 의해 부설펙스(등록상표)로서 판매됨);

(카르보플라틴; 뉴저지주 프린스톤 소재의 브리스톨-마이어스 스퀴브사에 의해 파라플라틴(등록상표)으로서 판매됨);

(카무스틴);

(클로람부실);

(시스플라틴);

(클라드리빈);

(클로드로네이트);

(시클로포스파미드);

(시프로테론);

(시타라빈);

(다카바진);

(닥티노마이신);

(다우노루비신);

(디에틸스틸베스트롤);

(에피루비신);

(플루다라빈);

(플루드로코르티손);

(플루옥시메스테론);

(플루타마이드);

(히드록시우레아);

(이다루비신);

(이포스파마이드);

(이마티닙; 뉴저지주 이스트 하노버 소재의 노바티스 파마슈티컬스 코포레이션(Novartis Pharmaceuticals Corporation)사에 의해 글리벡(등록상표)로서 판매됨);

(류코보린);

(류프롤라이드);

(레바미솔);

(로무스틴);

(메클로레타민);

(멜파란; 뉴저지주 워렌 소재의 셀진 코포레이션(Celgene Corporation)사에 의해 알케란(등록상표)으로서 판매됨);

(메르캅토퓨린);

(메스나);

(메토트렉세이트);

(미토마이신);

(미토탄);

(미톡산트론);

(닐루타마이드); 옥트레오티드 (L-시스테인아미드, D-페닐알라닐-L-시스테이닐-L-페닐알라닐-D-트립토필-L-리실-L-트레오닐-N-[2-히드록시-1-(히드록시메틸)프로필]-, 시클릭(2_7)-디술피드; [RR＊, R＊)];

;

(문헌 [Katz et al., Clin Pharm. 8(4):255-73 (1989)]; 뉴저지주 이. 하노버 소재의 노바티스 팜. 코프(Novartis Pharm. Corp)사의 샌도스테인 엘에이알(등록상표) 디팟으로서 판매됨); 옥살리플라틴 (

; 뉴욕주 뉴욕 소재의 사노피-신써라보 인크.사에 의해 엘록사틴™으로서 판매됨);

(파미드로네이트; 뉴저지주 이스트 하노버 소재의 노바티스 파마슈티컬스 코포레이션사에 의해 아레디아(등록상표)로서 판매됨);

(펜토스타틴; 캘리포니아주 듀블린 소재의 슈퍼젠(Supergen)사에 의해 니펜트(등록상표)로서 판매됨);

(플리카마이신);

(포르피머; 앨라배마주 버밍햄 소재의 악칸 스칸디팜 인크.(Axcan Scandipharm Inc.)사에 의해 포토프린(등록상표)으로서 판매됨);

(프로카바진);

(랄티트렉세드); 리툭시맙 (캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코 소재의 제넨테크 인크사에 의해 리툭산(등록상표)으로서 판매됨);

(스트렙토조신);

(테니포시드);

(테스토스테론);

(탈리도마이드);

(티오구아닌);

(티오테파);

(트레티노인);

(빈데신) 또는 13-시스-레티노산

(

)과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 페닐알라닌 머스타드, 우라실 머스타드, 에스트라무스틴, 알트레타민, 플록수리딘, 5-데오옥시우리딘, 시토신 아라비노시드, 6-메캅토퓨린, 데옥시코포마이신, 칼시트리올, 발루비신, 미쓰라마이신, 빈블라스틴, 비노렐빈, 토포테칸, 라족신, 마리마스타트, COL-3, 네오바스타트, BMS-275291, 스쿠알라민, 엔도스타틴, SU5416, SU6668, EMD121974, 인터류킨-12, IM862, 안지오스타틴, 비탁신, 드롤록시펜, 이독시펜, 스피로노락톤, 피나스테라이드, 시미티딘, 트라스투주맙, 데니류킨, 디프티톡스, 게피티닙, 보르테지밉, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에피틸론 B, BMS-247550 (예를 들어, 문헌 [Lee et al., Clin. Cancer Res. 7:1429-1437 (2001)]), BMS-310705, 드롤록시펜 (3-히드록시타목시펜), 4-히드록시타목시펜, 피펜독시펜, ERA-923, 아족시펜, 풀베스트란트, 아콜비펜, 라소폭시펜 (CP-336156), 이독시펜, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, 토포테칸, PTK787/ZK 222584 (문헌 [Thomas et al., Semin Oncol. 30(3 Suppl 6):32-8 (2003)]), 인간화 항-VEGF 항체 베바시주맙, VX-745 (문헌 [Haddad, Curr Opin. Investig. Drugs 2(8):1070-6 (2001)]), PD 184352 (문헌 [Sebolt-Leopold, et al. Nature Med. 5: 810-816 (1999)]), 라파마이신, CCI-779 (문헌 [Sehgal et al., Med. Res. Rev., 14:1-22 (1994)]; [Elit, Curr. Opin. Investig. Drugs 3(8): 1249-53 (2002)]), LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646 (문헌 [Vlahos et al., J. Biol. Chem. 269(7): 5241-5248 (1994)]), 월트만닌, BAY-43-9006, (문헌 [Wilhelm et al., Curr. Pharm. Des. 8:2255-2257 (2002)]), ZM336372, L-779,450, 문헌 [Lowinger et al., Curr. Pharm Des. 8:2269-2278 (2002)]에 개시된 임의의 Raf 억제제; 플라보피리돌 (L86- 8275/HMR 1275; 문헌 [Senderowicz, Oncogene 19(56): 6600-6606 (2000)]) 또는 UCN-01 (7-히드록시 스타우로스포린; 문헌 [Senderowicz, Oncogene 19(56): 6600-6606 (2000)]) 중 임의의 하나 이상과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 실시양태에서, IGF1R 억제제는 스티릴 치환된 헤테로아릴 EGFR 억제제를 개시하는 미국 특허 5,656,655; 비스 모노 및/또는 비시클릭 아릴 헤테로아릴 카르보시클릭 및 헤테로카르보시클릭 EGFR 및 PDGFR 억제제를 개시하는 미국 특허 5,646,153; EGFR를 억제하는 트리시클릭 피리미딘 화합물을 개시하는 미국 특허 5,679,683; 수용체 티로신 키나제 억제 활성을 갖는 퀴나졸린 유도체를 개시하는 미국 특허 5,616,582; EGFR를 억제하는 구조를 갖는 화합물을 개시하는 문헌 [Fry et al., Science 265 1093-1095 (1994)] (프라이(Fry) 등의 도 1 참조); EGFR를 억제하는 헤테로아릴에텐디일 또는 헤테로아릴에텐디일아릴 화합물을 개시하는 미국 특허 5,196,446; EGFR, PDGFR, 및 FGFR 패밀리의 수용체를 억제하는 PD166285 (PD 166285는 6-(2,6-디클로로페닐)-2-(4-(2-디에틸아미노에톡시)페닐아미노)-8-메틸-8H-피리도(2,3-d)피리미딘-7-온으로 확인됨)로서 확인된 화합물을 개시하는 문헌 [Panek, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 283: 1433-1444 (1997)]에 개시된 임의의 하나 이상의 화합물과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본 발명의 한 실시양태에서, IGF1R 억제제는 페길화된 또는 비페길화된 인터페론 알파-2a, 페길화된 또는 비페길화된 인터페론 알파-2b, 페길화된 또는 비페길화된 인터페론 알파-2c, 페길화된 또는 비페길화된 인터페론 알파 n-1, 페길화된 또는 비페길화된 인터페론 알파 n-3 및 페길화된, 비페길화된 콘센서스(consensus) 인터페론 또는 알부민-인터페론-알파 중 임의의 하나 이상과 연관되어 제공된다. 상기 작용제의 투여에 의한 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 신경아세포종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 치료 또는 예방 방법이 본 발명의 범주 내에 있다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "인터페론 알파"는 세포 증식을 억제하고 면역 반응을 조절하는 매우 상동성의 종-특이적 단백질의 패밀리를 의미한다. 전형적인 적합한 인터페론-알파는 재조합 인터페론 알파-2b, 재조합 인터페론 알파-2a, 재조합 인터페론 알파-2c, 알파 2 인터페론, 인터페론 알파-n1 (INS), 천연 알파 인터페론의 정제된 블렌드, 콘센서스 알파 인터페론, 예컨대 미국 특허 제4,897,471호 및 제4,695,623호 (특히 그의 실시예 7, 8 또는 9)에 기재된 것, 또는 인터페론 알파-n3, 천연 알파 인터페론의 혼합물을 포함하지만 이들로만 한정되지는 않는다.

인터페론 알파-2a는 (뉴저지주 너틀리 소재의) 호프만-라 로슈(Hoffmann-La Roche)사에 의해 로페론-A(등록상표)로서 판매된다.

인터페론 알파-2b는 (뉴저지주 케닐워쓰 소재의) 쉐링 코포레이션사에 의해 인트론-A(등록상표)로서 판매된다. 인터페론 알파 2b의 제조는 예를 들어, 미국 특허 제4,530,901호에 기재되어 있다.

인터페론 알파-n3은 (펜실베니아주 필라델피아 소재의) 헤미스퍼스 바이오파마, 인크.(Hemispherx Biopharma, Inc.)사에 의해 알페론 엔 인젝션(등록상표)으로서 판매되는 천연 인터페론의 혼합물이다.

인터페론 알파-n1 (INS)은 (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크 소재의) 글락소-스미스-클라인(Glaxo-Smith-Kline)사에 의해 웰페론(등록상표)로서 판매되는 천연 인터페론의 혼합물이다.

콘센서스 인터페론은 (캘리포니아주 브리스번 소재의) 인터뮨, 인크.(Intermune, Inc.)사에 의해 인퍼겐(등록상표)로서 판매된다.

인터페론 알파-2c는 (코네티컷주 릿지필드 소재의) 뵈링어 잉겔하임 파마슈티컬, 인크.(Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc.)사에 의해 베로포(등록상표)로서 판매된다.

천연 인터페론의 정제된 블렌드는 일본 도쿄 소재의 수미토모(Sumitomo)사에 의해 수미페론(등록상표)으로서 판매된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "페길화된 인터페론 알파"는 인터페론 알파, 바람직하게는 인터페론 알파-2a 및 알파-2b의 폴리에틸렌 글리콜 변형된 접합체를 의미한다. 바람직한 폴리에틸렌-글리콜-인터페론 알파-2b 접합체는 PEG 12000-인터페론 알파-2b이다.

본원에 사용된 바와 같은 구문 "인터페론 알파와 접합된 12,000 분자량의 폴리에틸렌 글리콜" 및 "PEG 12000-IFN 알파"는 인터페론 알파-2a 또는 -2b 아미노 기 및 12000의 평균 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 사이의 우레탄 결합을 함유하는, 국제 출원 제WO95/13090호의 방법에 따라 제조되는 접합체를 포함한다. 페길화된 인터페론 알파, PEG 12000-IFN-알파-2b는 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링-플로우 리서치 인스티튜트(Schering-Plough Research Institute)사로부터 이용가능하다.

바람직한 PEG 12000-인터페론 알파-2b는 PEG 중합체를 인터페론 알파-2b 분자 중 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 부착하여 제조될 수 있다. 단일 PEG 12000 분자는 우레탄 결합을 통해서 IFN 알파-2b 분자상에서 유리 아미노 기에 접합될 수 있다. 상기 접합체는 부착된 PEG 12000 분자량을 특징으로 한다. PEG 12000-IFN 알파-2b 접합체는 주사용 동결건조 분말로서 제제화될 수 있다.

페길화된 인터페론 알파-2b는 (뉴저지주 케닐워쓰 소재의) 쉐링 코포레이션사에 의해 페그-인트론(등록상표)으로서 판매된다.

페길화된 인터페론-알파-2a는 (뉴저지주 너틀리 소재의) 호프만-라 로슈사에 의해 페가시스(등록상표)로서 판매된다.

다른 인터페론 알파 접합체는 인터페론 알파와 수용성 중합체를 커플링하여 제조될 수 있다. 상기 중합체의 비제한적인 목록은 다른 폴리알킬렌 옥시드 동종중합체, 예컨대 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌화된 폴리올, 그의 공중합체 및 그의 블록 공중합체를 포함한다. 폴리알킬렌 옥시드-계 중합체에 대해 별법으로서, 비-항원성 물질 예컨대 덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐 알콜, 카르보수화물-계 중합체 등이 효과적으로 사용될 수 있다. 상기 인터페론 알파-중합체 접합체는 예를 들어, 미국 특허 제4,766,106호, 미국 특허 제4,917,888호, 유럽 특허 출원 제0 236 987호 또는 제0 593 868호 또는 국제 출원 WO 95/13090에 기재되어 있다.

비경구 투여에 대해 적합한 페길화된 인터페론 알파의 제약 조성물은 적합한 완충제, 예를 들어, 트리스-HCl, 아세테이트 또는 포스페이트 예컨대 이염기성 나트륨 포스페이트/일염기성 나트륨 포스페이트 완충제, 및 주사용 멸균수 중 제약상 허용되는 부형제 (예를 들어, 수크로스), 담체 (예를 들어, 인간 혈장 알부민), 독성 작용제 (예를 들어, NaCl), 보존제 (예를 들어, 티메로솔, 크레졸 또는 벤질 알콜), 및 계면활성제 (예를 들어, 트윈(tween) 또는 폴리소르베이트)로 제제화될 수 있다. 페길화된 인터페론 알파는 2℃ 내지 8℃에서 냉각 하에 동결건조 분말로서 저장될 수 있다. 재구성된 수용액은 2℃ 내지 8℃ 사이에서 저장하고, 재구성된 지 24시간 내에 사용하는 경우 안정적이다. 예를 들어 미국 특허 제4,492,537호; 제5,762,923호 및 제5,766,582호를 참조하였다. 재구성된 수용액은 또한 약물, 예컨대 인슐린의 전달에 유용한 다중-투여 실린지에 사전 충진되어 저장될 수 있다. 전형적인, 적합한 실린지는 펜-타입(pen-type) 실린지, 예컨대 뉴저지주 케닐워쓰 소재의 쉐링 코포레이션사로부터 시판되는 레디펜(등록상표) 또는 노보 노디스크(Novo Nordisk)사로부터 시판되는 노보 펜(노보렛(등록상표))에 부착되는 사전 충진된 바이알을 포함하는 시스템을 포함한다. 다른 실린지 시스템은 별도의 구획에서 희석제 및 동결건조된 페길화 인터페론 알파 분말을 함유하는 유리 카트리지를 포함하는 펜-타입 실린지를 포함한다.

본 발명의 범주는 또한 하나 이상의 다른 항암 화학요법제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)와 연관되고, 임의로 (즉, 연관이 있거나 없거나) 팔로노세트론 (MGI 파마사에 의해 알록시로서 판매됨), 아프레피탄트 (뉴저지주 라웨이 소재의 머크 앤드 컴퍼니사에 의해 에멘드로서 판매됨), 디펜히드라민 (뉴욕주 뉴욕 소재의 화이자(Pfizer)사에 의해 베나드릴(등록상표)로서 판매됨), 히드록시진 (뉴욕주 뉴욕 소재의 화이자사에 의해 아타락스(등록상표)로서 판매됨), 메토클로프라마이드 (버지니아주 리치몬드 소재의 AH 로빈스 컴퍼니사에 의해 레글란(등록상표)로서 판매됨), 로라제팜 (뉴저지주 매디슨 소재의 와이어쓰(Wyeth)사에 의해 아티반(등록상표)으로서 판매됨), 알프라졸람 (뉴욕주 뉴욕 소재의 화이자에 의해 자낙스(등록상표)로서 판매됨), 할로페리돌 (뉴저지주 라리탄 소재의 오르토 맥네일(Ortho-McNeil)사에 의해 할돌(등록상표)로서 판매됨), 드로페리돌 (이납신(등록상표)), 드로나비놀 (조지아주 마리에타 소재의 솔베이 파마슈티컬스, 인크.(Solvay Pharmaceuticals, Inc.)사에 의해 마리놀(Marinol)(등록상표)로서 판매됨), 덱사메타손 (뉴저지주 라웨이 소재의 머크 앤드 컴퍼니사에 의해 데카드론(등록상표)으로서 판매됨), 메틸프레드니솔론 (뉴욕주 뉴욕 소재의 화이자사에 의해 메드롤(등록상표)로서 판매됨), 프로클로페라진 (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크 소재의 글락소스미스클라인(Glaxosmithkline)사에 의해 콤파진(등록상표)로서 판매됨), 그라니세트론 (뉴저지주 너틀리 소재의 호프만-라 로슈 인크.사에 의해 키트릴(등록상표)로서 판매됨), 온단세트론 (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크 소재의 글락소스미스클라인사에 의해 조프란(등록상표)으로서 판매됨), 돌라세트론 (뉴욕주 뉴욕 소재의 사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)사에 의해 안제메트(등록상표)로서 판매됨), 트로피세트론 (뉴저지주 이스트 하노버 소재의 노바티스사에 의해 나보반(등록상표)으로서 판매됨)을 포함하지만 이들로만 한정되지는 않는 하나 이상의 제토제와 연관된 IGF1R 억제제를 포함하는 조성물을 포함한다.

제토제를 포함하는 조성물은 항암 화학요법의 통상적인 부작용인 구역질을 예방 또는 치료하는데 유용하다. 따라서, 본 발명은 또한 임의로 하나 이상의 다른 화학요법제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)와 연관되고 임의로 하나 이상의 제토제와 연관된 IGF1R 억제제를 투여함으로써 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법을 포함한다.

본 발명은 추가로, 예를 들어 상기 기재한 바와 같이, 치료학적 절차 예컨대, 외과적 종양 절제술 또는 항암 방사선 치료와 연관된 IGFR 억제 작용제; 임의로 추가 화학요법제 및/또는 제토제와 연관된 IGFR 억제 작용제를 투여하여 신경아세포종, 횡문근육종, 윌름 종양, 골육종, 췌장암 또는 임의의 소아과 암의 임의의 단계 또는 유형을 치료 또는 예방하기 위한 방법을 포함한다.

에를로티닙

본 발명의 광범위한 측면은 인간 환자 대상체를 치료하는데 유의한 부작용이 없이 암을 효과적으로 치료하는 방법을 제공한다. 항-IGF-1R 항체 및 에를로티닙을 포함하는 조합 치료가 에를로티닙 내성 암의 치료에서 더 많은 효과가 있을 것이라는 점에서 본 발명에 따른 치료의 임상 결과는 다소 예상치 않은 것이다. 뿐만 아니라, 조합 치료제 (MK-0646 및 에를로티닙의 조합물)가 에를로티닙 그 자체보다 다양한 암 치료에서 더 효과가 있을 것이다. 다른 티로신 키나제 억제제가 IGF-1R 항체와 조합될 수 있을 것으로 이해된다. 별법으로, 조합 치료제는 화학치료 단독과 비교하는 경우, 부작용의 사건 발생이 유의하게 증가하지 않는 둘 이상의 화학요법제를 포함하는 화학요법 혼합제(cocktail)와 조합된 항-IGF-1R 항체를 포함하는 하나 이상의 티로신 키나제 억제제를 포함할 수 있다.

수용체 티로신 키나제는 세포막을 포괄하는 거대 효소이고, 표피 성장 인자와 같은 성장 인자, 막횡단 도메인 및 키나제로서 작용하는 세포내 부분에 대한 세포외 결합 도메인을 소유하여 단백질 내 특이적 티로신 잔기를 인산화하고, 따라서 세포 증식에 영향을 준다. 상기 키나제는 통상적인 인간 암, 예컨대 폐 암종, 유방암, 위장암, 예컨대 결장, 직장 또는 위암, 백혈병, 및 난소, 기관지 또는 췌장암에 종종 비정상적으로 발현된다고 알려져 있다. 티로신 키나제 활성을 소유한 표피 성장 인자 수용체 (EGFR)는 많은 인간 암, 예컨대 뇌, 폐, 편평상피 세포, 방광, 위, 유방, 머리 및 목, 식도, 부인과 종양 및 갑상선 종양에서 돌연변이화 되고/되거나 과발현되는 것으로 또한 밝혀졌다.

따라서, 수용체 티로신 키나제의 억제제가 포유동물 암 세포의 성장의 선택적인 억제제로서 유용하다는 것이 인정된다. 예를 들어, 티로신 키나제 억제제인 어브스타틴은 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제 (EGFR)를 발현시키는 인간 유방 암종이 이식된 가슴샘없는 누드 마우스에서 선택적으로 성장을 약화시키지만, EGF 수용체를 발현시키지 않는 또다른 암종의 성장에는 효과가 없다.

다양한 다른 화합물, 예컨대 스티렌 유도체는 또한 티로신 키나제 억제 특성을 소유하는 것으로 밝혀졌다. 보다 최근의 5개의 유럽 특허 공개, 즉 EP 0 566 226 A1, EP 0 602 851 A1, EP 0 635 507 A1, EP 0 635 498 A1 및 EP 0 520 722 A1은 그의 티로신 키나제 억제 특성에서 기인하는 항암 특성을 소유하는 특정 퀴나졸린 유도체를 개시한다. 또한 PCT 공보 WO 92/20642는 티로신 키나제 억제제로서 비스-모노 및 비시클릭 아릴 및 헤테로아릴 화합물을 개시한다.

에를로티닙을 제조하고 사용하는 방법은 그 전문을 본원에 참고로 포함시킨, 1996년 5월 28일자로 출원되고 최근 화이자 인크.사에 양도된 미국 특허 제5,747,498호에 기재 및 청구되어 있다.

투여량 및 투여 경로

본 발명의 IGF-1R 특이적 항체 및 화학요법제를 포함하는 조합 치료제는 공지된 방법, 예컨대 볼루스(bolus)와 같은 정맥내 투여 또는 시간의 기간에 걸쳐서 연속 투입으로, 근육내, 복막내, 뇌척수액내, 피하, 관절내, 활액내, 경막내, 경구, 국소의, 또는 흡입 경로에 따라 인간 환자에게 투여된다. 항체의 정맥내 또는 피하 투여가 바람직하다. 3가지 구별되는 전달 접근이 본 발명에 따른 항체의 전달에 유용할 것이라고 기대된다. 통상의 정맥내 전달이 다수의 종양에 대해서 아마도 표준 전달 기술이 될 것이다. 그러나, 일부 종양, 예컨대 난소, 담즙관, 다른 관 등의 종양에 의해 예시되는 복막강과 관련하여, 복막내 투여는 종양에서 항체의 높은 투여량을 얻기 위해 유리하다는 것을 증명할 수 있고, 항체 클리어런스를 최소화시킨다. 유사한 방식에서, 특정 고체 종양은 국소 관류에 적절한 혈관계를 소유한다. 국소 관류는 종양 부위에서 항체의 높은 투여량의 수득을 가능케 할 것이고, 항체의 단기 클리어런스를 최소화시킬 것이다.

치료학에 근거한 임의의 단백질 또는 항체 투입과 함께, 안전성은 주로 (i) 사이토킨 방출 증후군, 즉, 저혈압, 열, 전율, 오한, (ii) 물질에 대한 면역성 반응의 발달 (즉, 항체 치료학적, 또는 HAHA 또는 HACA 반응에 대해 환자에 의한 인간 항체의 발달), 및 (iii) EGF 수용체를 발현하는 정상 세포에 대한 독성, 예를 들어 EGFR 및/또는 IGF-1R를 발현하는 간세포와 주로 연관되어 있다. 표준 시험 및 후속 시험(follow up)이 각각의 이들 안전성을 모니터링하기 위해 이용될 것이다. 특히, 간 기능은 필요하다면, 간 손상을 평가하기 위해 임상적 추적(trail) 동안 수시로 모니터링 될 것이다.

질환의 예방 또는 치료의 경우, 항체의 적절한 투여량은 상기 정의된 바와 같은, 치료될 질환의 유형, 질환의 중증도 및 진행, 항체가 예방적 목적 또는 치료학적 목적으로 투여되는지 여부, 사전 요법, 환자의 임상적 히스토리 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 좌우될 것이다. 항체는 적합하게는 한 번 또는 일련의 치료를 통해 환자에게 투여된다. 조합물 치료 요법에서, 본 발명의 조성물은 치료적으로 효과적인 또는 상승작용적인 양으로 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, 치료 유효량은 항-IGF-1R 항체 및 하나 이상의 다른 치료제의 공동-투여, 또는 본 발명의 조성물의 투여가 표적하는 질환 또는 상태의 감소 또는 억제를 초래하도록 하는 양이다. 치료적으로 상승작용적인 양은 특정한 질환과 관련된 상태 또는 증상을 상승작용적으로 또는 유의하게 감소하거나 제거하는데 필요한 항-IGF-1R 항체 및 하나 이상의 다른 치료제의 양이다.

광범위한 실시양태에서, 본 발명의 치료는 항-IGF-1R 항체 및 하나 이상의 화학요법제의 조합 투여와 관련된다. 조합 투여는 순서에 상관 없이 분리된 제제 또는 단일 제약 제제, 및 연속 투여를 사용하는 공동 투여를 포함하고, 바람직하게는 두 가지 (또는 모두) 활성 작용제가 그의 생물학적 활성을 동시에 가하는 동안의 시간 기간이다. 상기 화학 요법제에 대한 제조 및 투여 스케쥴은 제조자의 지시 또는 숙련된 전문가에 의해 경험적으로 결정된 바에 따라 사용될 수 있다. 화학요법에 대한 제조 및 투여 스케쥴은 또한 문헌 [Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams ＆ Wilkins, Baltimore, Md. (1992)]에 기재되어 있다. 화학요법제는 선행될 수 있고, 또는 항체의 투여에 이어서, 또는 그와 함께 동시에 주어질 수 있다. 본 발명의 치료학적 조합물의 임상적 투여량은 현재 임상에서 사용되는 모노클로날 항-IGF-1R 항체 및 티로신 키나제 억제제 (TKI) (에를로티닙 및 게피티닙)로 관찰되는 바와 같이 피부 발진 부작용의 정도에 의해 제한될 것이다.

용어 "치료 유효량" 또는 "치료 유효 투여량"은 관리자 (예컨대 연구원, 의사 또는 수의사)에 의해 발견되는 조직, 시스템, 대상체 또는 숙주의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도할 본 발명의 조성물 (예를 들어, IGF1R 억제제, 예컨대 항-IGF1R 항체)의 양 또는 투여량을 의미하고, 암, 예컨대 비-소세포 폐암 또는 임의의 다른 에를로티닙 또는 IGF-1R 내성 암 (예를 들어, 종양 성장)의 징후, 증상 및/또는 임상적 징후의 임의의 측정가능한 완화 및/또는 임의의 정도로의 암의 진행 또는 전이의 예방, 경감 또는 중지를 포함한다.

적합한 투여량은 의학 전문가에게 알려져 있고, 물론 특정한 질환 상태, 투여될 조성물의 특이적 활성 및 치료를 받고 있는 특정한 환자에 따라 달라질 것이다. 몇가지 예에서, 원하는 치료학적 양을 달성하기 위해, 반복 투여, 즉 특별히 모니터링되거나 또는 계량된 투여량의 반복 개별 투여를 제공하는 것이 필요할 수 있고, 개별 투여는 목적하는 일일 투여량 또는 효과가 달성될 때까지 반복된다. 적합한 투여량에 관한 추가 정보는 하기 실시예에 제공된다.

예를 들어, 한 실시양태에서, 임의의 항 IGF1R 항체의 "치료 유효량", 예를 들어, 돌루투주맙에 상응하는 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 본원에 언급한 임의의 다른 항-IGF1R 항체는 일주일에 한 번, 약 40 및 약 1000 mg/m² (예를 들어, 약 50 mg/m², 60 mg/m², 70 mg/m², 80 mg/m², 90 mg/m², 100 mg/m², 약 200 mg/m², 약 300 mg/m², 약 400 mg/m², 약 500 mg/m², 약 600 mg/m² 또는 약 700 mg/m²) 또는 1-20 mg/kg의 체중 (예를 들어, 약 1 mg/kg의 체중, 약 2 mg/kg의 체중, 약 3 mg/kg의 체중, 약 4 mg/kg의 체중, 약 5 mg/kg의 체중, 약 6 mg/kg의 체중, 약 7 mg/kg의 체중, 약 8 mg/kg의 체중, 약 9 mg/kg의 체중, 약 10 mg/kg의 체중, 약 11 mg/kg의 체중, 약 12 mg/kg의 체중, 약 13 mg/kg의 체중, 약 14 mg/kg의 체중, 약 15 mg/kg의 체중, 약 16 mg/kg의 체중, 약 17 mg/kg의 체중, 약 18 mg/kg의 체중, 약 19 mg/kg의 체중, 약 20 mg/kg의 체중)이다.

투여량 요법은 최적의 목적하는 반응 (예를 들어, 치료학적 반응)을 제공하기 위해 조절될 수 있다. 예를 들어, 단일 투여량이 투여될 수 있거나, 몇몇 분할 투여량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 치료학적으로 긴급 상황에 의해 나타난 바와 같이 투여량이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 예를 들어, 투여량은 환자의 나이, 체중, 신장, 과거 의학 히스토리, 현재의 약물치료 및 교차-반응, 알레르기, 감수성 및 유해 부작용에 대한 잠재성에 따라 당업자 (예를 들어, 전문의 또는 수의사)에 의해 결정되거나 조절될 수 있다. 투여의 편의성 및 투여량의 균일성에 대해 투여량 단위 형태에서 비경구 조성물을 제제화하는 것이 특히 유리하다.

당업계의 통상의 기술을 가지는 전문의 또는 수의사는 필요한 유효량의 제약 조성물을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들어, 전문의 또는 수의사는 목적하는 치료학적 효과를 달성하기 위해, 필요로 하는 것보다 낮은 수준에서 제약 조성물 중 사용되는 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편의 투여량을 출발시킬 수 있고, 원하는 효과를 달성할 때까지 서서히 투여량을 증가시킬 수 있다. 본 발명의 항체 또는 조합물의 주어진 투여량 또는 치료 요법의 효과는 예를 들어, 대상체에서 치료할 종양이 성장하기 위해 수축하는지 또는 중단하는지를 결정함에 의해서 결정될 수 있다. 종양의 크기는 예를 들어, X-선, 자기 공명 영상화법 (MRI) 또는 외과적 절차에서 시각적으로 쉽게 결정될 수 있다. 종양 크기 및 증식은 또한 티미딘 PET 스캔 (예를 들어, 문헌 [Wells et al., Clin. Oncol. 8: 7-14 (1996)]을 참조함)을 사용하여 측정할 수 있다. 일반적으로, 티미딘 PET 스캔은 방사성 추적자, 예컨대 [2-¹¹C]-티미딘의 주사에 이어서 환자의 신체의 PET 스캔을 포함한다 (문헌 [Vander Borght et al., Gastroenterology 101:794-799, 1991; 문헌 [Vander Borght et al., J. Radiat. Appl. Instrum. Part A, 42: 103-104 (1991)]). 사용될 수 있는 다른 추적자는 [¹⁸F]-FDG (18-플루오로데옥시글루코스), [¹²⁴I]IUdR(5-[124I]요오도-2'-데옥시우리딘), [⁷⁶Br]BrdUrd (브로모데옥시우리딘), [¹⁸F]FLT(3'-데옥시-3'플루오로티미딘) 또는 [¹¹C]FMAU (2'-플루오로-5-메틸-1-β-D-아라비노푸라노실우라실)을 포함한다.

예를 들어, NSCLC 진행은 전문의 또는 수의사에 의해 다양한 방법으로 모니터링 될 수 있고, 투여 요법은 그에 따라서 달라질 수 있다. 진행을 모니터링하기 위한 방법은, 예를 들어 CT 스캔 (예를 들어, 종양 크기 모니터링용), MRI 스캔 (예를 들어, 종양 크기 모니터링용), 흉부 X-선(예를 들어, 종양 크기 모니터링용), 골 스캔, 골수생검, 호르몬 시험, 온혈구 시험 (CBC), 요 또는 혈액에서 NSCLC 종양 마커에 대한 시험을 포함한다.

질환의 유형 및 중증도에 따라, 항체의 약 1 .μ.g/kg 내지 50 mg/kg (예를 들어 0.1-20 mg/kg)이 예를 들어, 하나 이상의 개별 투여, 또는 연속 투입에 의해 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량이다. 전형적 일일 투여량은 상기 언급한 인자에 따라 약 1 .μ.g/kg 내지 약 100 mg/kg 또는 초과의 범위일 수 있다. 상태에 따라서, 몇일 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여하는 동안, 질환 증상의 목적하는 억제가 발생할 때까지 치료가 지속된다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있다.

한 측면에서, 본 발명의 항체는 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 범위에서 매주 투입될 수 있거나, 또는 매 2주 내지 3주 투입될 수 있다.

보다 바람직하게는, 상기 투여량 요법은 에를로티닙 내성 암, 예컨대 NSCLC를 치료하기 위한 화학요법 요법과 조합하여 사용된다. 일부 측면에서, 화학요법 요법은 전통적인 높은-투여량의 간헐성 투여를 포함한다. 일부 다른 측면에서, 화학요법제는 계획된 휴지기 (scheduled break) 없이 더 작고 더 많은 빈도의 투여량을 사용하여 투여된다 ("메트로놈 화학요법"). 본 발명의 요법의 진행은 통상의 기술 및 검정에 의해 쉽게 모니터링될 수 있다.

한 실시양태에서, 투여 순서는 IGF-1R 항체와 함께 에를로티닙 (경구)을 투여 하는 것을 포함한다 - IGF-1R 항체 (MK-0646)는 매주 투여되는 반면 에를로티닙은 매일 투여된다. 특히, MK-0646 (IGF-1RmAb)은 매주 정맥내로 10 mg/kg의 투여량으로 투여되는 반면에 에를로티닙은 일일 스케쥴 상 150 mg으로 투여된다.

IGF-1R 항체에 대한 별법의 투여량 요법은 다음과 같다:

(i) 매주 15 mg/kg 로딩에 이어서 7.5 mg/kg 로딩

(ii) 2주마다 20 mg/kg

(iii) 3주마다 30 mg/kg

비경구 투여의 경우, 항체는 제약상 허용되는 비경구 비히클과 함께 용액, 현탁액, 에멀젼 또는 동결건조 분말로서 제제화될 수 있거나 또는 별도로 제공될 수 있다. 상기 비히클의 예는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 1-10％ 인간 혈청 알부민이 있다. 리포좀 및 비수성 비히클, 예컨대 고정유 (fixed oil)가 또한 사용될 수 있다. 비히클 또는 동결건조 분말은 등장성 (예를 들어, 염화나트륨, 만니톨) 및 화학적 안정성 (예를 들어, 완충액 및 보존제)을 유지하는 첨가제를 함유할 수 있다. 제제는 공지된 기술 또는 적합한 기술로 멸균된다. 조합 치료제의 투여는 질환 진행시까지 계속될 수 있다.

일반적인 용어로 본 발명이 기재된 반면, 본 발명의 실시양태는 하기 실시예에 추가로 기재될 것이다.

제조 용품

본 발명의 또다른 실시양태에서, 상기 기재된 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 용품이 제공된다. 제조 용품은 용기, 표지 및 사용설명서(package insert)를 포함한다. 적합한 용기는 예를 들어, 병, 바이알, 실린지 등을 포함한다. 용기는 다양한 물질, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로부터 형성될 수 있다. 용기는 상태를 치료하는데 효과적인 조성물을 담고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 스토퍼(stopper)를 가진 정맥내 용액 백(bag) 또는 바이알일 수 있음). 조성물에서 하나 이상의 활성 작용제는 항-IGF-1R 항체이다. 용기에 붙은 표지 또는 용기와 관련된 표지는 조성물이 선택된 증상을 치료하는데 사용된다는 것을 나타낸다. 제조 용품은 추가로 제약상 허용되는 완충제, 예컨대 포스페이트-완충 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 제조 용품은 또한 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 및 실린지를 비롯한 상업적 관점 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 포함할 수 있다. 또한, 제조 용품은 예를 들어, 환자에게 항-IGF-1R 항체 조성물 및 EGFR-억제제, 예를 들어 에를로티닙 조성물을 투여하기 위해 조성물의 사용자에게 설명하는 것을 포함하는, 사용설명서를 포함한다.

본원에 언급된 모든 출판물은 기재 및 개시의 목적으로 본원에 참고로 포함되고, 예를 들어 구축물, 및 출판물에 기재된 방법론은 현재 기재된 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 상기 논의된 출판물 및 본문 전체는 본 출원의 출원일 전에 그의 개시에 대해 단독으로 제공된다. 본원에서 어느 부분도, 본 발명자들이 선행 발명에 의해 그러한 개시내용을 선행할 자격이 없다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

실시예 1 - EGFR 및 IGF1R의 활성화 및 MK-0646/에를로티닙 조합물에 대한 효능 사이의 상관관계

요약: 세포에서 다발성 수용체 티로신 키나제 활성화는 에를로티닙에 대한 약물 내성에 기여할 수 있다. 사실, EGFR 및 cMET의 활성화는 에를로티닙 내성 환자의 임상 샘플에서 관찰된다.

방법: MK-0646/에를로티닙 조합물에 대응할 종양을 확인하기 위해 폐암 세포주의 패널에서 다양한 RTK의 인산화 상태를 평가하였다. 10개의 폐암 세포주의 패널에 대해서 활성화된 EGFR 및 IGF1R의 수준을 도 1에 나타난 바와 같이 정량화하였다. NCI-H2122 ＆ NCI-H322M에 의해 대표되는 몇몇 세포주는 P-IGF1R 및 P-EGFR 둘 다 높은 수준을 나타내었고, 반면에 EGFR 돌연변이체 세포주, HCC827은 IGF1R의 활성화가 거의 없거나 아주 없는 높은 P-EGFR 수준을 나타냈다.

요약하면, 모든 NSCLC 세포주는 ATCC로부터 수득하였고, ATCC에 의해 명시되는 바와 같이 10％ FBS와 함께 DMEM 또는 RPMI에서 유지하였다. 약 2백만 개의 세포를 10cm 플레이트에서 배양하였고, 단백질 용해물을 보조-전면성장(sub-confluent) 배양으로부터 제조하였고, 제조사에 의해 기재된 바와 같이 P-RTK 어레이(array) (알 앤드 디 바이오사이언스, R＆D bioscience)상에서 블롯팅하였다. 어레이를 HRP-접합된 P-Tyr 항체로 탐색한 다음, 슈퍼시그널(SuperSignal) 화학발광 기질 (피어스, Pierce)로 인큐베이션 시키고, 이어서 블롯(blot)을 코닥 바이오맥스 라이트 필름(Kodak Biomax Light Film)에 노출시켰다. 필름을 스캔하고, 적절한 RTK 스폿의 위치 (이중으로)로 정렬시키고, 덴시토메트리를 사용하여 강도를 결정하고 정량화하였다 (알파 이즈, Alpha Ease). P-RTK의 상대 수준을 막 상에서 스폿팅된 양성 대조군 (P-Tyr 펩티드)으로 정규화에 의해 추정하였다 (막의 네 모서리 상의 이중 스폿).

실시예 2 - MK-0646/에를로티닙 조합물에 의한 PI3K 및 RAS-MAPK 신호전달의 억제

요약: PI3K 및 RAS-MAPK 경로 활성에서 이들 RTK의 억제 효과를 시험하기 위해, 경로에서 핵심 노드(key node)의 인산화 상태를 측정하였다. 도 2에 나타난 바와 같이, EGFR 및 IGF1R의 조합 억제가 두 개의 수용체의 높은 수준을 발현하는 NCI-H2122 ＆ NCI-H322M 세포주 중 P-S6RP ＆ P-S6K에서 실질적 감소에 의해 측정된 바와 같은 PI3K 경로를 차단하는데 보다 더 효과적이다. PI3K 신호전달의 상기 상승작용적 억제는 P-EGFR ＆ P-IGF1R 둘 다 낮은 수준으로 세포주에서 관찰될 수 없다 (A427은 예로서 나타냄). 유사한 결과를 다른 세포주에서 얻었다 (데이터는 나타내지 않았음).

방법:

웨스턴 블롯 분석(western blot analysis)을 사용하여 세포(~0.3 백만)로부터 총 단백질 용해물을 6 웰 플레이트에서 배양하고, 데포롤리무스(Deforolimus) (1OnM) 또는 MK-0646 (10ng/ml) 또는 조합하여 4시간 동안 처리하고, SDS 겔 로딩 염료 (인비트로겐, Invitrogen)에서 획득하였다. 지시된 총 항체 또는 인특이적(phosphospecific) 항체로 샘플을 웨스턴 블롯팅 시키고, 이어서 2급 항체 (세포 신호전달 기술, CST)를 웨스턴 블롯팅 시킨 다음, 슈퍼시그널 화학발광 기질 (피어스)과 함께 인큐베이션 시켰다. 이어서 블롯을 코닥 바이오맥스 라이트 필름에 노출시켰다. ERK, p-ERK (Thr202/Tyr204), AKT 및 p-AKT (Ser473), IGF1RT S6K ＆ P-S6K (T389), IRS1 ＆ P-IRS1 (S302) 및 액틴에 대한 항체를 CST로부터 수득하였다.

실시예 3 - EGFR 및 IGF-1r 신호전달을 둘 다 억제하는 기능적 효과

요약: EGFR ＆ IGF1R 신호전달을 둘 다 억제하는 기능적 효과를 시험하기 위해, 부착 (2D) 및 비부착 (3D) 조건 하에 성장 억제를 평가하였다. 부착 성장 상태 하에서 MK-0646 처리된 세포주 중 유의한 성장 억제가 관찰되지 않았다. 이는 사전 실험과 일치한다 (데이터는 나타내지 않음). 3D 비-부착 조건 하에서 상기 조합물의 효과를 시험하기 위해, 본 발명자들은 증식 검정을 기반으로 초(ultra) 저(low) 부착 플레이트를 개발하였다. 비-부착 조건 하에서 자라는 경우, 오직 7/10 줄만이 측정할 수 있을 정도로 자랐고, 감수성 평가를 위해 사용하였다. NCI-H2122 세포는 비-부착 조건 하에서 에를로티닙/MK-0646 조합물에 대한 감수성에 있어서 실질적인 증가를 나타내었다. 반면에, 낮은 수준의 P-IGF1R 및 EGFR을 갖는 A427 세포는 2D 또는 3D 성장 조건 하에서 유의한 성장 억제를 나타내지 않았다.

방법: 세포 (~3x10^∧3)를 부착 또는 비-부착 (초-저 부착 플레이트; 코닝(Corning)) 96 웰 플레이트에 시딩하였다. 하루에 한 세포를 에를로티닙 또는 MK-0646 또는 조합물의 인큐베이션 농도로 인큐베이션하고, 한 세트의 세포를 DNA 내용물 측정을 위해 획득하였다 (1일). 배지 및 약물을 3일 마다 천천히 대체하였고, 검정의 끝에서 (나타낸 바와 같이) 플레이트를 획득하고, 제조사에 의해 기재된 바와 같이 DNA 내용물을 시퀀트 (Cyquant) 검정을 사용하여 측정하였다. 첫번째 날로부터 검정의 끝까지 DNA 내용물의 증가를 기준으로 고유의 성장을 계산하였다.

실시예 4 - 상기 언급한 결과를 확인하기 위해, 발명자들은 고-처리 (high-throughput) 연질 한천 콜로니 형성 검정을 이용하였다. 앵커리지(anchorage) 비의존성 성장은 형광 생 세포 염료 (라바 셀, Lava Cell)를 사용하여 정량화하였다. MK-0646 ＆ 에를로티닙 조합물은 NCI-H2122 ＆ A549 세포주 둘 다에서 연질 한천 콜로니 형성 (도 4: 대조군에 비해 P >0.0001)을 유의하게 억제하였다. H460 세포는 또한 조합물의 존재 하에 증가된 성장 억제를 나타냈다. 따라서 시험관내 분석은 MK-0646 ＆ 에를로티닙의 조합물에 대해 더 우수한 반응을 나타내는 10개의 세포주 중 3개 (30％)를 확인하였다. 이는 RTK (EGFR ＆ IGF1R) 둘 다의 활성화와 상관관계가 있다.

방법: 연질 한천 검정을 96 웰 유리 바닥 플레이트 (마트리칼, MatriCal)에서 수행하였다. 세포를 0.8 ％ 아가로스로 보강된 동일한 배양 배지로 구성되는 하부 층의 상부에서, 14 ％ FBS 및 0.3 ％ (w/v) 씨플라크(SeaPlaque) 아가로스 (론자 록랜드, 인크, Lonza Rockland, Inc)로 보강된 100 μl RMPI 1640 중 웰 당 3,000 내지 9,000개의 세포의 농도로 시딩하였다. 화합물을 아가로스가 응고된 후 보강된 배양 배지의 100 μl에 첨가시켰다. 세포를 7 내지 14일 동안 인큐베이션한 다음, 라바세포 (액티브 모티프, Active Motif)로 밤새 염색하였다. 결장을 이소사이트(Isocyte™) 레이져 스캐닝 세포측정기를 사용하여 정량화하였다. 앵커리지 비의존성 성장을 억제하기 위한 MK-0646의 능력은 단독 또는 표준 치료제와 조합하여 연질 한천 콜로니 형성 검정에서 평가하였다. RTK 상태를 제조사에 의해 기재된 바와 같이 P-RTK 어레이 (알 앤드 디 바이오사이언시스)를 사용하여 총 단백질 용해물 중 평가하였다. KRAS에서의 활성 돌연변이는 공개된 암 게놈 데이터 염기 (상어, Sanger)로부터 확인하였다.

실시예 5 - kRAS 돌연변이체 폐 종양 이종이식편 모델에서의 에를로티닙 ＆ MK-0646 효능의 평가

사전에, k-RAS 돌연변이체 NCI-H2122 이종이식편 (높은 p-IGF1R 및 p-EGF1R 시험관내)으로부터의 생체내 데이터는 IGF1R 수용체 하향 조절과 상관관계가 있는 종양 성장의 우수한 억제를 나타냈다. PI3K 경로 억제는 또한 MK-0646 처리 다음으로 관찰되었다. 상기 이종이식편 모델을 사용하여, 본 발명자들은 에를로티닙 내성 kRAS 돌연변이체 환자 집단에서 에를로티닙과 조합하여 MK-0646의 효과를 평가하였다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 에를로티닙 (50mpk)과 MK-0646 (2mpk; 일주일에 한 번 투여)의 조합물은 종양 성장의 유의한 억제 및 심지어 이종이식편의 회귀를 유발하였고, 따라서 kRAS 돌연변이체 폐 종양을 특징으로 하는 병리학을 치료하기 위한 MK-0646 및 에를로티닙의 조합물의 기본 원리에 대한 확증을 추가로 제공한다.

방법: 2.5x106 NCI-H2122 인간 NSCLC 세포는 4 내지 6 주령 nu/nu 마우스의 우측면으로 피하로 주사하였다 (찰스 리버 래버러토리즈, Charles River Laboratories). ~300 mm3 (길이* 너비*너비*0.5)의 크기로 종양이 도달하는 경우, 마우스를 처리군으로 랜덤화하였다. 마우스 (n=8/군)에게 비히클을 3주 동안 일주일에 한 번 (qwk x 3) (20 mM L-히스티딘, 15OmM NaCl, 0.5％ PS80 pH= 6) 또는 2 mpk의 MK-0646 내-복막 mg/kg MK-0646 qwk 또는 에를로티닙 (경구 영양에 의해 50 mg/kg)을 매일, 또는 3주 동안 MK-0646과 조합하여 투여하였다. 연구하는 동안 일주일에 2 회 및 종결 시에 동물을 계체하고 종양 부피를 캘리퍼링(calipering)에 의해 결정하였다. 종양 무게를 종결 시에 결정하였다. 하루에 21 마리의 동물을 CO₂ 질식에 의해 희생시켰다. 마우스는 최종 투여 후 24시간에 희생시켰다. 희생 시간에, 조직 샘플을 수집하고 가공하였다.

실시예 6 - 총 단백질 수준의 감소와 효능 사이의 상관관계

요약: 표적 잉게이지먼트(engagement)의 측정과 같이, IGF1R의 총 수준은 웨스턴 블롯 엘리사(ELISA) (데이터는 나타내지 않음)를 통해 검정하였다. 데이터는 총 단백질 수준의 감소와 효능 사이의 우수한 상관 관계를 나타냈다. 도 6에 나타낸 바와 같이, 각각의 패널에서, MK-0646은 비히클과 비교하거나 또는 에를로티닙 단독으로 처리하는 경우 IGF1R의 총 수준을 감소시킬 수 있다. 상기 데이터는 총 IGF1R 수준이 MK-0646의 만성 치료에서 단독으로 또는 다른 표적 작용제와 조합하여 장기간에 걸쳐서 표적 잉게이지먼트 및 효능에 대한 우수한 생물지표로서 제공될 수 있다고 제안한다. 또한 P-AKT, PS6K ＆ PS6RP의 감소에 의해 측정된 바와 같은 극심한 PI3K 경로 억제가 조합물로 처리된 종양에서 관찰되었다. RAS-MAPK 경로는 또한 조합물에 의해 억제되었다. 이들 데이터는 IGF1R 및 EGFR의 조합 억제가 성장 인자 신호전달의 증가된 억제를 야기하여 단독 투여될 각각의 작용제와 비례하여 항종양 효능을 가져온다는 것을 제안한다. 도 7을 참조하면, 에를로티닙 ＆ MK-0646 조합물에서의 유사한 항종양 효능이 또다른 KRAS 돌연변이체 에를로티닙 내화 NSCLC 모델에서 또한 관찰된다.

방법: 이종이식편 샘플로부터의 총 단백질 (500 마이크로그램)을 효능 연구의 끝에서 단리시켰다 (지시된 투여 후 4 주). 6개의 비의존성 종양 샘플을 이스트(east) 처리에 대해 분석하였다. 단백질을 웨스턴 블롯팅 시키고, 사전에 기재된 바와 같이 시각화하였다 (도 2 참조).

서열 목록

SEQUENCE LISTING <110> Merck Sharp & Dohme Corp. Sathyanarayanan, Sriram Kasibhatla, Shailaja Winter, Christopher Chastain, Michael <120> COMBINATION THERAPY USING AN ANTI-EGFR AGENT(S) AND IGF-1R SPECIFIC INHIBITORS <130> MRL-ONC-00013 <150> 61/169,768 <151> 2009-04-16 <160> 13 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 1 Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 2 Lys Val Ser Asn Arg Leu Tyr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 3 Phe Gln Gly Ser His Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 4 Gly Gly Tyr Leu Trp Asn 1 5 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 5 Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Lys Pro Ser Leu Lys Asp 1 5 10 15 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 6 Tyr Gly Arg Val Phe Phe Asp Tyr 1 5 <210> 7 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 7 Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 8 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 8 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 9 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 9 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly 20 25 30 Tyr Leu Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Lys Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Arg Val Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly 20 25 30 Tyr Leu Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Lys Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Arg Val Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 11 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Gly Gly 20 25 30 Tyr Leu Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Lys Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Arg Val Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 12 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 12 Asp Val Leu Met Thr Gln Ile Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Leu Tyr Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly 85 90 95 Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 13 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Completely synthetic amino acid <400> 13 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Gly Gly 20 25 30 Tyr Leu Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Asn Tyr Lys Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Asp Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly Arg Val Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Leu Thr Val Ser Ser 115

Claims (22)

1. 티로신 키나제 억제제 및 IGF-1R 억제제를 포함하는 치료 유효량의 조합 치료제 또는 그의 제약 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 상기 조합 치료제의 투여는 상기 환자를 치료하기에 충분한, EGFR 억제제 또는 IGF-1R 억제제 단독의 투여에 비해 증진된 치료학적 효능을 초래하는 것인, 상기 대상체에서 의학 상태를 치료 또는 예방하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 티로신 키나제 억제제가 에를로티닙인 방법.
3. 제1항에 있어서, 상기 의학 상태가 에를로티닙 내성 암인 방법.
4. 제1항에 있어서, IGF-1R 억제제 또는 그의 기능적 단편 중 하나가 인간 IGF-1R에 특이적으로 결합하는 항체이며, 항체는 비-인간 기원의 하나 이상의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 비-인간 공급원으로부터 유래된 하나 이상의 경쇄 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함하고, IGF-1R에 결합하는 상기 항체는 a) IGF-1R에 결합하지만 IR에는 결합하지 않는 특성; b) 인슐린 수용체 및 인슐린 성장 인자 수용체를 포함하는 하이브리드 수용체 (IR/IGF-1R 하이브리드-R)에는 결합하지만 IR 단독에는 결합하지 않는 특성; c) 인간 IGF-1R과 IGF-1 및/또는 IGF-2 사이의 결합을 억제하는 특성; d) 바람직하게는 본원에서 IGF1 및/또는 IGF2 및/또는 인슐린으로서 지정된 하이브리드-R 및 그의 천연 리간드에 억제 상수 및/또는 IC50 100 nM 미만으로 결합하는 특성; e) 상기 IGF-1R의 티로신 키나제 활성을 특이적으로 억제하는 특성; f) 상기 하이브리드-R의 티로신 키나제 활성을 특이적으로 억제하는 특성; g) 상기 하이브리드-R에 대한 결합 친화도가 10 nM 이하인 특성; h) IGF-1R 발현을 하향-조절하는 특성; i) 하이브리드-R 발현을 하향-조절하는 특성; 및 j) 생체내 종양 성장을 억제하는 특성으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 특성을 갖는 것인 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 IGF-1R 항체가 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 중쇄는 서열 4, 5 또는 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 CDR을 포함하고, 경쇄는 서열 1, 2 또는 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 CDR를 포함하는 것인 방법.
6. 제1항에 있어서, 항-IGF-1R 항체가 달로투주맙, 피지투무맙, 식수투무맙, SHC 717454, 로슈(Roche) R1507 및 암젠(Amgen) AMG479로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
7. 제3항에 있어서, 상기 인간화 항체 또는 그의 기능적 단편 중 하나가 서열 7 또는 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는 서열 9, 10 또는 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 것인 방법.
8. 제7항에 있어서, 항-IGF-1R 항체가 달로투주맙인 방법.
9. 제1항에 있어서, 티로신 키나제 억제제가 에를로티닙이고 10 mg 내지 400 mg의 투여량으로 투여되는 것인 방법.
10. 제1항에 있어서, 티로신 키나제 억제제가 매주 100 내지 300 mg/kg의 투여량으로 투여되는 것인 방법.
11. 제1항에 있어서, 상기 티로신 키나제 억제제 및 상기 IGF-1R 억제제를 포함하는 조합 치료제가 하기와 같이 투여되는, 즉 티로신 키나제는 약 150 mg/kg으로 투여되고 IGF-1R 억제제는 매주 10 mg/kg의 투여량으로 투여되는 것인 방법.
12. 제11항에 있어서, 티로신 키나제 억제제가 에를로티닙이고 주 5회 투여되는 것인 방법.
13. 제11항에 있어서, 달로투주맙이 10 mg/kg의 투여량으로 정맥내 투여되는 것인 방법.
14. 제11항에 있어서, 달로투주맙이 주 1회 투여되는 것인 방법.
15. 제11항에 있어서, 달로투주맙이 2주에 1회 투여되는 것인 방법.
16. 제1항에 있어서, IGF-1R 억제제가 하나 이상의 추가 화학요법제 또는 그의 제약 조성물과 함께 투여되는 것인 방법.
17. 제16항에 있어서, 추가의 화학요법제가 테니포시드 (

    

    ), 시스플라틴 (

    

    ), 카르보플라틴 (

    

    ), 에토포시드 (

    

    ), 독소루비신 (

    

    ), 그의 임의의 리포좀 제제, 시클로포스파미드 (

    

    ), 13-시스-레티노산 (

    

    ), 이소파미드 (

    

    ), 젬시타빈 (

    

    ), 이리노테칸 (

    

    ), 빈크리스틴 (

    

    ), 닥티노마이신 (

    

    ), 칼시트리올, 및 메토트렉세이트 (

    

    )로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구성원인 방법.
18. 제17항에 있어서, IGF1R 억제제 및 추가의 항암 치료제가 동시에 투여되는 것인 방법.
19. 제17항에 있어서, IGF1R 억제제 및 추가의 항암 치료제가 비-동시에 투여되는 것인 방법.
20. 제17항에 있어서, IGF1R 억제제가 항암 요법 절차와 함께 투여되는 것인 방법.
21. 제17항에 있어서, 항암 요법 절차가 외과적 종양 절제술 및/또는 항암 방사선 치료인 방법.
22. 제1항에 있어서, IGF1R 억제제가

    

    및 인간 IGF1R에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 그의 항원-결합 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.

Images