CN112047939B - 一种具有抗肿瘤活性的四氢吡啶并嘧啶类化合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种式(I)所示的四氢吡啶并嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，含有它们的药物组合物以及其在制备预防和/或治疗针对KRAS G12C突变肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于药物学领域，更具体地，本发明涉及一种四氢吡啶并嘧啶类化合物及其在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。
背景技术
Ras是首个被发现的人类原癌基因，其有三个家族成员:Hras、Kras和Nras(Barbacid M,Annu Rev Biochem,1987；56:779-827)。RAS作为一类小G蛋白，具有GTP水解酶活性，定位于胞质膜内侧，通过与GTP/GDP的不同结合而调控其活性。当它与GTP结合时即被活化(开)，而当与GDP结合时则处于非活化状态(关)。RasGTP激酶在许多信号网络中是至关重要的，它们具有信号整合的作用并将信号传递至下游效应器，参与细胞运动、细胞骨架组装、囊泡以及核运输等生命活动，进而调控细胞增殖、分化、衰老和凋亡等生命过程(Fernandez-Medarde A,et al,Genes Cancer,2011；2(3):344-58)。因此，RAS蛋白被视为细胞信号传递中的重要分子开关蛋白。
原癌基因Ras被激活以后就变成有致癌活性的癌基因。Ras基因激活的方式有三种:点突变、过表达、插入激活。其中，Ras基因被激活最常见的方式就是点突变，并主要通过点突变的方式而起致癌作用。目前已发现，151种不同的Ras点突变，主要集中在12、13位甘氨酸以及61位谷氨酰胺的突变(Prior IA,et al,Cancer Res 2012；72(10):2457-67)。在上述突变中，G12点突变最为常见，G12突变在KRAS和Hras中占主导地位。在KRAS突变中，现已发现G12存在15种不同的点突变，包括G12A、G12D、G12F、G12K、G12N、G12S、G12V、G12Y、G12C、G12E、G12I、G12L、G12R、G12T和G12W。其中，G12D突变约占G12全部突变的41％，G12V约占28％，G12C约占14％(Hobbs GA,et al,Cancer Cell,2016；29(3):251-3)。
Ras突变是促进多种癌症发生的一个重要原因，常出现在肿瘤发生早期。这些突变激活的RAS蛋白不受控制的细胞生长及增殖。据统计，Ras突变频率最高的5种癌症分别是胰腺导管腺癌、结直肠癌、多发性骨髓瘤、肺癌和皮肤黑色素瘤，突变频率分别为97.7％、52.2％、42.6％、32.2％和29.1％(Albertini AF,et al,Bull Cancer,2017；104(7/8):662-74)。值得注意的是，在这些Ras突变中，KRAS的突变频率明显高于其他两种突变。例如，在胰腺导管腺癌中，KRAS的突变率高达97.7％，而Nras和Hras则全部为0；而在结直肠癌中，52.2％的Ras突变率中KRAS突变率高达44.7％。在对非小细胞肺癌的研究中发现，Ras突变多发生于密码子12上，最常见的是G12C点突变，其次是G12V和G12D(Yoon YK,et al,MolCarcinog 2010；49(4):353-62)。
KRAS基因的激活突变与人类恶性肿瘤的发生发展及肿瘤的复发密切相关。遗传和生物化学研究证明，KRAS依赖性信号传导在调节多种癌细胞生长、增殖、侵袭和转移中具有重要作用。在病人预后上,KRAS也被视为是一种标记物。在非小细胞肺癌患者中，KRAS突变患者相比KRAS野生型患者有更短的生存期，特别是含有G12C点突变的患者(Svaton M,etal,Anticancer Res,2016；36(3):1077-82)。因此，科学界一直致力于寻找能够与特定突变KRAS蛋白结合的小分子，并抑制KRAS蛋白的活化和功能，进而阻止其下游信号通路的转导，最终起到抑制肿瘤生长的作用。
2013年，霍华德·休斯医学研究所Shokat课题小组在Nature杂志上最先报道了KRAS G12C小分子抑制剂(Ostrem J M,et al,Nature,2013,503(7477):548-551)。这些抑制剂可以结合至KRAS蛋白分子开关Ⅱ区域下方的变构结合口袋，并与附近的Cys12形成共价结合，从而选择性抑制KRAS G12C的活化。基于上述研究，针对KRAS G12C分子开关Ⅱ区变构口袋，2016年Wellspring公司报道了一个新的KRAS G12C不可逆共价抑制剂ARS-853，可以将KRAS蛋白固定在非活性的GDP结合构象，并对多种KRAS G12C突变阳性的肿瘤细胞具有选择性抑制活性(Patricelli M P,et al,Cancer Discov,2016,6(3):316-329；Lito P,etal,Science,2016,351(6273):604-608)。
目前，已试图鉴定作为KRAS G12C共价抑制剂的杂环化合物包括苯并嘧啶酮类、吡啶并嘧啶酮类以及四氢吡啶并嘧啶类等(WO2017/201161、WO2018/119183、WO2018/217651、WO2018/206539、WO2018/143315、WO2017/087528)。上述化合物全部被描述为用于治疗肿瘤的KRAS抑制剂。
发明内容
本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的四氢吡啶并嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，含有它们的药物组合物以及其在制备预防和/或治疗针对KRAS G12C突变肿瘤药物中的应用。本发明所述的化合物可以结合G12C突变的KRAS蛋白，并对KRAS G12C突变的肿瘤细胞具有显著的抑制增殖活性。
本发明的第一方面，涉及式(I)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐:
其中，
R1选自
R2选自芳基、杂芳基或
R3选自H、
R1a选自杂环基、-NR4aR5a；
R2a选自烷基酰基、环烷基酰基、杂环基酰基、芳基酰基、杂芳基酰基、二甲氧基磷酰基；
R3a选自氢、烷基、炔基、卤素；
R4a和R5a独立地选自氢、C1-4烷基、芳基或杂芳基、烷基酰基、烷氧酰基；
m选自1、2、3；
R4选自-CH2CHF2、-CH2CN、-CH3、-CD3、环丙基、
R5选自H或F。
在一些实施方案中，R1a选自N-烷基取代吡咯烷基、N-环烷基取代吡咯烷基、3,3-二氟-1-甲基-吡咯烷基、N-氘代甲基吡咯烷基或3,3-二氟-1-氘代甲基-吡咯烷基。
在一些实施方案中，m选自1。
在一些实施方案中，R1选自
在一些实施方案中，R1选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2a选自H、烷基、烷基酰基、环烷基酰基、杂环基酰基、芳基酰基、杂芳基酰基、二甲氧基磷酰基。
在一些实施方案中，R2a选自H、C1-4烷基、C1-4烷基酰基、二甲氧基磷酰基、氨基乙酰基、N,N-二甲氨基甲酰基。
在一些实施方案中，R2a选自H、甲基、乙基、乙酰基、
在一些实施方案中，R3a选自氢。
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R1选自
R2选自
在一些实施方案中，R1选自
在一些实施方案中，R3选自
在一些实施方案中，R4选自-CH2CHF2、-CH2CN、-CD3、环丙基、
在一些实施方案中，R5选自H。
在一些实施方案中，R5选自F。
在一些实施方案中，R1选自
R2选自
R3选自
R5选自H或F。
在一些实施方案中，当R1选自
时，R2选自
且R2a选自乙基、乙酰基、
在一些实施方案中，当R1选自
时，R2选自
且R2a选自乙酰基、
在一些实施方案中，式(I)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐选自式(II)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐：
其中，R1选自
R2选自芳基或杂芳基；
R3选自氢或
R4选自-CH2CHF2、-CH2CN、-CD3、环丙基或
在一些实施方案中，R1选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R2选自
在一些实施方案中，R3选自
在一些实施方案中，式(I)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐选自式(III)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐：
其中，R1a选自杂环基、-NR4aR5a；
R2a选自烷基酰基、环烷基酰基、杂环基酰基、芳基酰基、杂芳基酰基或二甲氧基磷酰基；
R3a选自氢、烷基、炔基或卤素；
R4a和R5a独立地选自氢、C1-4烷基、芳基或杂芳基、烷基酰基或烷氧酰基；
m独立地选自1、2或3。
在一些实施方案中，R1a选自N-烷基取代吡咯烷基、N-环烷基取代吡咯烷基、3,3-二氟-1-甲基-吡咯烷基、N-氘代甲基吡咯烷基或3,3-二氟-1-氘代甲基-吡咯烷基。
在一些实施方案中，R2a选自C1-4烷基酰基、C3-6环烷基酰基、二甲氧基磷酰基或氨基乙酰基。
在一些实施方案中，R2a选自C1-4烷基酰基或C3-6环烷基酰基。
在一些实施方案中，R3a选自氢。
在一些实施方案中，m选自1。
在一些实施方案中，式(I)所示化合物或其异构体、溶剂合物或前体，或它们的药学上可接受的盐选自以下化合物、其异构体、溶剂合物、前体或其药学上可接受的盐：
另一方面，本发明还提供药物组合物，其包含式(I)所示化合物或其药学可接受的盐和药学上可接受的辅料。
另一方面，本发明涉及治疗哺乳动物中与KRAS G12C相关疾病的方法，包括对需要该治疗的哺乳动物，优选人类，给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
另一方面，本发明涉及式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在制备用于预防或治疗KRAS G12C相关疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明涉及式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物在预防或者治疗KRAS G12C相关疾病中的用途。
另一方面，本发明涉及预防或者治疗KRAS G12C相关疾病的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐、或其药物组合物。
术语
除非另有说明，本发明说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本发明说明书记载的范围内。
术语“烷基”表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基等；优选地，“C1-4烷基”应理解为表示具有1、2、3、4个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。除非特别说明，否则烷基可以无取代或被单取代或多取代，优选一个到四个独立地选自以下基团取代:卤素(F、Cl、Br或I)、C2-8烯基、C2-8炔基、-CF3、-OCF3、-NO2、-CN、-OH、烷氧基、氨基、-COOH、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基。
本文所用的术语“芳基”指C6-14单环或多环芳香性基团，优选为C6-10单环或双环芳香性基团，或C10-14多环芳香性基团。芳基具体实例包括但不限于苯基、萘基、菲基及联苯基等。芳基也指C10-14双环及三环碳环，其中一个环为芳香环且其他环为饱和环、部分不饱和环或芳香环，例如二氢萘基、四氢萘基、茚基、二氢茚基等。除非特别说明，否则芳基可以无取代或被单取代或多取代，优选一个到四个独立地选自以下基团取代:卤素(F、Cl、Br或I)、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基-、-CF3、-OCF3、-NO2、-CN、-OH、烷氧基、氨基、-COOH、-CO2C1-8烷基、-OCOC1-8烷基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基；优选地,芳基还可以被一个或多个-OPO(OC1-3烷基)2取代。
本文所用的术语“杂芳基”指含有一个到三个芳香环并且在芳香环中含有1个到4个选自氮、氧及硫的杂原子的单环或多环系统(例如双环)。在某些实施例中，杂芳基具有5到20个、5到15个、5到10个或5到7个环原子。杂芳基也指10-14元双环及三环，其中一个环为芳香环且其他环是饱和、部分不饱和或芳香环。杂芳基具体包括但不限于，呋喃基、咪唑基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、四唑基、三嗪基、三唑基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并硫苯基、苯并三唑基、苯并噁唑基、呋喃并吡啶基、咪唑并吡啶基、咪唑并噻唑基、吲哚嗪基、吲哚基、吲唑基、异苯并呋喃基、异苯并噻吩基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、萘啶基、噁唑并吡啶基、酞嗪基、喋啶基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、吡咯并吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噻二唑并嘧啶基及噻吩并吡啶基。除非特别说明，否则杂芳基可以无取代或被单取代或多取代，优选1个到4个或1个或2个取代基取代。上述取代基独立地选自以下基团:卤素(F、Cl、Br或I)、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、-CF3、-OCF3、-NO2、-CN、-OH、烷氧基、氨基、-COOH、-CO2C1-8烷基、-OCOC1-8烷基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基。
术语“杂环基”意指饱和的或部分饱和的一价单环、并环、螺环或桥环，其包含1-5个，优选1-3个选自N、O、B和S的杂原子。特别地，所述杂环基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、1,3,2-二氧杂硼戊烷基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或部分饱和的6元环如四氢吡啶基；或7元环，如二氮杂环庚烷基。任选地，所述杂环基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。含氮原子的环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基；根据本发明，所述杂环基是无芳香性的。
术语“C3-10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，优选具有3～10个碳原子的烃环。如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。术语“C3-6环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3～6个碳原子。
术语“烷基酰基”是指“烷基-(CO)-”。
术语“烷氧基酰基”是指“烷基-O-(CO)-”。
术语“环烷基酰基”是指“环烷基-(CO)-”。
术语“杂环基酰基”是指“杂环基-(CO)-”。
术语“芳基酰基”是指“芳基-(CO)-”。
术语“杂芳基酰基”是指“杂芳基-(CO)-”。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。适用于上述制剂的典型的“药学上可接受的载体”的实例为：糖类，淀粉类，纤维素及其衍生物等在药物制剂中常用到的辅料。
术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。
词语“包括(comprise)”、“含有(comprise)”或“包含(comprise)”及其英文变体例如comprises或comprising应理解为开放的、非排他性的意义，即“包括但不限于”。
本文所用的术语“异构体”包括:几何异构体、对映异构体、非对映异构体(如顺反异构体、构象异构体、阻转异构体)。
本文所用的术语“溶剂合物”表示携带有溶剂分子的化合物，例如，所述的溶剂合物可以是水合物。
本文所用的术语“前体”指当用适当的方法服用后，该化合物的前体在病人体内进行代谢或化学反应而转变成结构式(I)的一种化合物，或化学结构式(I)的一个化合物所组成的盐或溶液。
本文所用的术语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。这些盐包括(但不限于):(1)与如下无机酸形成的盐:如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸；(2)与如下有机酸形成的盐，如乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸、马来酸、或精氨酸。其它的盐包括与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐。
本发明还包括上述式(I)化合物的异构体、溶剂合物、前体，或它们的药学上可接受的盐，只要它们也具有与式(I)化合物具有相同或基本相同的功能。化合物具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。
本领域人员应理解，在得知了本发明化合物的结构以后，可通过市售可得或通过多种本领域熟知的方法、利用公知的原料，来获得本发明的化合物，比如参照本发明实施例所述方法。这些方法均可被包含在本发明中。
本申请的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。
给予本申请化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本申请的药物组合物可以采用本领域众所周知的方法制造，如常规的混合法、溶解法、制粒法、制糖衣药丸法、磨细法、乳化法、冷冻干燥法等。
在一些实施方案中，药物组合物是口服形式。对于口服给药，可以通过将活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的辅料混合，来配制该药物组合物。这些辅料能使本申请的化合物被配制成片剂、丸剂、锭剂、糖衣剂、胶囊剂、液体、凝胶剂、浆剂、悬浮剂等，用于对患者的口服给药。
可以通过常规的混合、填充或压片方法来制备固体口服组合物。例如，可通过下述方法获得：将所述的活性化合物与固体辅料混合，任选地碾磨所得的混合物，如果需要则加入其它合适的辅料，然后将该混合物加工成颗粒，得到了片剂或糖衣剂的核心。适合的辅料包括但不限于：粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。
药物组合物还可适用于肠胃外给药，如合适的单位剂型的无菌溶液剂、混悬剂或冻干产品。
本文所述的通式Ⅰ化合物的所有施用方法中，每天给药的剂量为0.01到100mg/kg体重，优选为0.05到50mg/kg体重，更优选0.1到30mg/kg体重，以单独或分开剂量的形式。
本发明具体实施方式的化学反应是在合适的溶剂中完成的，所述的溶剂须适合于本发明的化学变化及其所需的试剂和物料。为了获得本发明的化合物，有时需要本领域技术人员在已有实施方式的基础上对合成步骤或者反应流程进行修改或选择。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造商所建议的条件。
应理解，本领域技术人员能够通过类似方法或通过组合本领域技术人员已知的其他方法制备这些化合物。还应理解，本领域技术人员应能够通过使用适当的起始组分并且按需要修改合成参数，以下文所述的类似方式制备下文未具体示例性说明的其他结构(式I)的化合物。一般而言，起始组分及相关化学试剂可从诸如Sigma Aldrich、LancasterSynthesis Inc、Acros Organics等商业来源中获得，或根据本领域技术人员已知的来源合成(参见，例如Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms and Structure，第5版，Wiley，2000年12月)，或如本发明中所述制备。其中，化合物1(2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈)，作为阳性对照分子，参考专利US 20180072723或WO2017201161所报道的方法合成，化合物结构经液相色谱-质谱和核磁共振氢谱确证。
实施例1、(S)-1-(4-(2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物2)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-4-(7-苄基-2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体2-3)的合成
室温下将4-(7-苄基-2-氯-5,6,7,8-四氢吡并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2-1)(1g,参考专利US 20180072723或WO 2017201161报道的方法合成)、叔丁醇钠(639mg)、Pd2(dba)3(744mg)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(300mg)和(S)-(1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲醇(2-2)(744mg,参考专利WO 2018215801报道的方法合成)加入到20mL甲苯中，氮气氛围，110℃反应1小时至原料转化完全。将反应液过滤，水洗、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色固体标题化合物(760mg)。
MS:m/z(ESI):573.4[M+H]+
步骤2:(S)-4-(2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体2-4)的合成
室温下将中间体2-3(660mg)溶于甲醇(5mL)和4mol/L的氨甲醇(5mL)混合溶液中，然后加入10％钯碳(200mg)，反应液在氢气氛围下抽换气三次，40℃反应1小时至原料转化完全。将反应液进行过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(300mg)。
MS:m/z(ESI):483.4[M+H]+
步骤3:(S)-4-(2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体2-6)的合成
室温下将中间体2-4(150mg)、碳酸铯(336mg)、Pd2(dba)3(28.5mg)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(39mg)和4-溴萘-2-基特戊酸酯(2-5)(114mg,参考专利US 20180072723或WO2017201161报道的方法合成)依次加入到3mL甲苯中，氮气氛围，110℃反应2小时至原料转化完全。将反应液过滤，水洗、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色固体标题化合物(195mg)。
MS:m/z(ESI):709.4[M+H]+
步骤4:(S)-4-(2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基特戊酸酯(中间体2-7)的合成
室温下将中间体2-6(190mg)溶于二氯甲烷(5mL)和盐酸二氧六环(5mL)的混合溶液中，反应两个小时至原料转化完全，减压浓缩反应液，得到黄色固体标题化合物(110mg)。
MS:m/z(ESI):609.3[M+H]+
步骤5:(S)-4-(4-(4-丙烯酰哌嗪-1-基)-2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基特戊酸酯(中间体2-8)的合成
将中间体2-7(110mg)溶于5mL二氯甲烷中，0℃条件下，依次加入N,N-二异丙基乙胺(48mg)和丙烯酰氯(17mg)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(80mg)。
MS:m/z(ESI):663.5[M+H]+
步骤6:(S)-1-(4-(2-((1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物2)的合成
室温下将中间体2-8(140mg)溶于2mL四氢呋喃中，加入2mol/L氢氧化钠溶液(0.2mL)，室温反应1小时至原料转化完全。减压浓缩反应液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到白色固体标题目标化合物2(43.3mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，20％-40％乙腈运行至7分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):579.8[M+H]+。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.66(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(t,J＝7.1Hz,1H),7.31(t,J＝7.1Hz,1H),6.91(d,J＝1.9Hz,1H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),6.60(dd,J＝16.8,10.5Hz,1H),6.36(dd,J＝16.8,1.8Hz,1H),6.05–5.83(m,1H),5.82–5.70(m,1H),4.35–4.10(m,4H),3.77(m,4H),3.56(m,4H),3.43–3.19(m,4H),3.04(m,1H),2.85(m,3H),2.46(m,2H),2.00(m,1H),1.89–1.65(m,3H)。
实施例2、1-(4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物3)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体3-3)的合成
室温下将2-(5,8-二氧杂-10-氮杂吡唑[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙烷-1-醇(3-2)(228mg,参考专利US20070167470所报道的方法合成)溶于10mL四氢呋喃中，0℃条件下，加入叔丁醇钠(164.7mg)，反应0.5小时，再将4-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(3-1)(0.37g，参考专利US20180072723或WO 2017201161所报道的方法合成)加入到上述反应液中，氮气保护，继续反应0.5小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色固体标题化合物(180mg)。
MS:m/z(ESI):783.4[M+H]+。
步骤2:4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-4-(哌嗪-1-基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-酚(中间体3-4)的合成
将中间体3-3(0.18g)溶于甲醇(10mL)和3mol/L的氨甲醇(10mL)混合溶液中，加入10％钯碳(150mg)，室温反应4小时至原料转化完全。将反应液进行过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(80mg)。
MS:m/z(ESI):559.4[M+H]+。
步骤3:1-(4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-2-烯-1-酮(化合物3)的合成
-40℃条件下，将中间体3-4(80mg)溶于10ml二氯甲烷中，再依次加入丙烯酰氯(13mg)和三乙胺(46.3mg)，室温反应1小时至原料转化完全，减压浓缩反应液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到白色固体标题目标化合物3(10.4mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，45％-55％乙腈运行至10分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):613.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.65(s,1H),8.01(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(t,J＝7.2Hz,1H),7.27(t,J＝7.2Hz,1H),6.88–6.79(m,2H),6.77(d,J＝2.0Hz,1H),6.15(dd,J＝16.8,2.4Hz,1H),5.73(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),4.29(t,J＝5.6Hz,2H),4.08(s,2H),3.77–3.62(m,8H),3.53(s,4H),3.26(s,2H),2.90(s,2H),2.79–2.70(m,4H),2.65(s,2H),0.73(q,J＝4.4Hz,2H),0.49(q,J＝4.4Hz,2H).
实施例3、2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物4)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷(中间体4-2)的合成
室温下将(S)-吡咯烷-2-基甲醇(4-1)(5.0g)、叔丁基二苯基氯硅烷(16.3g)和咪唑(8.5g)溶于100mL N,N-二甲基甲酰胺中，氮气氛围，20℃反应4小时至原料转化完全。水淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:1)，得到黄色油状标题化合物(13g)。
MS:m/z(ESI):340.3[M+H]+。
步骤2:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-环丙基吡咯烷(中间体4-4)的合成
室温下将中间体4-2(4.0g)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(4-3)(4g)、氰基硼氢化钠(1.4g)和冰醋酸(15mL)溶于甲醇(100mL)，氮气氛围下60℃反应19小时至原料转化完全。向反应液中加入1mol/L碳酸氢钠溶液(100mL)，淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得到黄色油状标题化合物(4g)。
MS:m/z(ESI):380.2[M+H]+。
步骤3:(S)-(1-环丙基吡咯烷-2-基)甲醇(中间体4-5)的合成
室温下将中间体4-4(4g)加入到20mL盐酸甲醇溶液中，氮气保护下，反应12小时至原料转化完全。向反应液中加入氨水，淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色油状标题化合物(300mg)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ3.72(dt,J＝17.2,8.8Hz,1H),3.50(dd,J＝10.8,6.8Hz,1H),3.09(d,J＝6.8Hz,1H),2.78(s,1H),2.59(d,J＝7.9Hz,1H),2.08–1.92(m,1H),1.85–1.64(m,4H),0.62–0.31(m,4H).
步骤4:(S)-2-(氰甲基)-4-(2-(甲硫基)7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体4-8)的合成
将(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(4-6)(2.66g，参考专利US 20180072723所报道的方法合成)、4-溴萘-2-基特戊酸酯(4-7)(2.24g，参考专利US20180072723或WO 2017201161所报道的方法合成)、Pd2(dba)3(0.83g)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(0.57g)和碳酸铯(4.94g)依次加入到100mL二氧六环中，氮气氛围下，85℃加热反应5小时至原料转化完全。将反应液冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，合并滤液，水洗、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚(1:10))，得到黄色固体标题化合物(2.66g)。
MS:m/z(ESI):665.4[M+H]+。
步骤5:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基亚磺酰基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体4-9)的合成
0℃下将间氯过氧苯甲酸(0.81g)缓慢加入到中间体4-8(2.66g)的无水二氯甲烷溶液(50mL)中，氮气保护，反应2小时至原料转化完全。向反应液中依次加入饱和亚硫酸钠溶液(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(2.6g)。
MS:m/z(ESI):681.2[M+H]+。
步骤6:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体4-10)的合成
室温下将(S)-(1-环丙基吡咯烷-2-基)甲醇(4-5)(108mg)和叔丁醇钠(54mg)加入到2mL无水四氢呋喃中，氮气保护，室温反应20分钟。将预先溶于2mL四氢呋喃中的中间体4-9(270mg)缓慢滴加至上述反应液中，继续反应10分钟至原料转化完全。向反应液中加入冰水(200mL)，淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:3)，得到黄色固体标题化合物(180mg)。
MS:m/z(ESI):758.4[M+H]+。
步骤7:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体4-11)的合成
室温下将中间体4-10(180mg)溶于6.5mL甲醇/四氢呋喃(1:1.5)混合溶液中，加入2mol/L氢氧化钠溶液(1mL)，反应10分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得到黄色固体标题化合物(0.11g)。
MS:m/z(ESI):674.4[M+H]+。
步骤8:2-((S)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体4-12)的合成
室温下将中间体4-11(110mg)、钯碳(500mg)和氨水(5mL)分别加入到50mL甲醇中。抽换气3次，氢气氛围下，反应24小时至原料转化完全。将反应液进行过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:100～1:10)，得到黄色固体标题化合物(62mg)。
MS:m/z(ESI):540.4[M+H]+。
步骤9:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基丙烯酸酯(中间体4-13)的合成
室温下将中间体4-12(62mg)溶于10mL二氯甲烷，并于0℃下向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(57mg)和丙烯酰氯(20mg)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液。得到黄色固体标题化合物(40mg)。
MS:m/z(ESI):648.4[M+H]+。
步骤10:2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物4)的合成
室温下将中间体4-13(40mg)溶解于2.5mL甲醇/四氢呋喃(1:1.5)混合溶液中，再加入2mol/L氢氧化钠溶液(1mL)，反应10分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到白色固体标题目标化合物(2.77mg)。
高效液相制备色谱法仪器:Gilson(Gx-281)制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，40％-60％乙腈运行至10分钟，60％乙腈运行至13分钟，95％乙腈运行至16分钟,10％乙腈运行至18分钟结束。
MS:m/z(ESI):594.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(t,J＝10.0Hz,1H),7.48–7.21(m,2H),6.95-6.75(m,3H),6.29(d,J＝16.8Hz,1H),5.83(d,J＝10.6Hz,1H),5.16-5.01(m,1H),4.57(dd,J＝10.6,4.8Hz,1H),4.28–4.04(m,5H),3.76–3.57(m,1H),3.52–3.32(m,4H),3.17–2.80(m,7H),2.73–2.50(m,1H),2.18–1.98(m,1H),1.95–1.57(m,4H),0.67–0.32(m,4H).
实施例4、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物5)
合成路线及具体合成步骤:
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-N-甲基-1-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲胺(中间体5-2)的合成
室温下将(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(20g)溶于150mL二氯甲烷中，并于0℃条件下，向该溶液中缓慢滴加甲磺酰氯(22.0g)，氮气保护，25℃反应2小时至原料转化完全。加入饱和碳酸氢钠溶液(150ml)，淬灭反应，二氯甲烷(150mL x 3)萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体中间体(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲基甲磺酸酯(8.5g)。
MS:m/z(ESI):195.3[M+H]+
室温下，将上述中间体(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲基甲磺酸酯(8.5g)溶于80mL甲醇中，并于0℃条件下，向该溶液中缓慢滴加甲胺/甲醇溶液(30ml)。氮气保护，25℃反应1时至原料转化完全。减压浓缩反应液，乙酸乙酯溶解，过滤，减压浓缩滤液，得到黄色液体标题化合物(4.9g)。
MS:m/z(ESI):129.3[M+H]+。
步骤2:4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(中间体5-3)的合成
室温下将(S)-4-(4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-氯-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁基酯(5-1)(600mg,参考专利US 0180072723或WO2017201161所报道的方法合成)溶于5mL正丁醇中，再加入N,N-二异丙基乙胺(4ml)和中间体5-2(876mg)。160℃微波反应1小时至原料转化完全。浓缩反应液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～2:1)，得到黄色固体标题化合物(576mg)。
MS:m/z(ESI):619.4[M+H]+。
步骤3:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体5-4)的合成
室温下将中间体5-3溶于9mL二氯甲烷中，再加入三氟乙酸(3mL)，25℃反应1小时至原料转化完全。加入饱和碳酸氢钠溶液(20ml)，淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液(20mL x3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(480mg)。
MS:m/z(ESI):519.4[M+H]+。
步骤4:(S)-4-(7-(3-(苄氧基)萘-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(腈基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体5-6)的合成
室温下，将中间体5-4(240mg)溶于10mL 1,4-二氧六环中，再加入3-(苄氧基)-1-溴萘(5-5)(217mg，参考Journal of Medicinal Chemistry,52(20),6193-6196所报道的方法合成)、碳酸铯(377mg)和Ruphos-Pd-G3(38mg)，氮气氛围，85℃反应5小时至原料转化完全。将反应液过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1～1:10)，得到黄色固体标题化合物(320mg)。
MS:m/z(ESI):751.5[M+H]+。
步骤5:2-((S)-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体5-7)的合成
室温下，将中间体5-6(320mg)溶于20mL氨甲醇溶液中，加入钯碳(160mg)，氢气氛围，室温反应36小时至原料转化完全。将反应液过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:二氯甲烷:甲醇＝100:1～100:15)，得到黄色固体标题化合物(72mg)。
MS:m/z(ESI):527.5[M+H]+。
步骤6:4-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基丙烯酸酯(中间体5-8)的合成
室温下将中间体5-7(72mg)溶于3mL二氯甲烷中，再于0℃条件下，依次加入N,N-二异丙基乙胺(105mg)和丙烯酰氯(31mg)，氮气保护，室温反应2小时至原料转化完全，加水(20ml)，淬灭反应。二氯甲烷萃取稀溶液(20mL x 3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(70mg)。
MS:m/z(ESI):635.5[M+H]+。
步骤7:2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物5)的合成
室温下将中间体5-8(72mg)溶于四氢呋喃(1ml)和甲醇(2ml)的混合溶液中，再加入2mol/L的氢氧化钠溶液(0.1mL)，反应1小时至原料转化完全，浓缩反应液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到黄色固体标题目标化合物6(10mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，45％-55％乙腈运行至10分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):581.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.09-8.06(d,J＝12Hz,1H),7.63-7.61(d,J＝8Hz,1H),7.38-7.34(t,J＝8Hz,1H),7.28-7.24(t,J＝8Hz,1H),6.86-6.77(m,3H),6.30-6.26(m,1H),5.84-5.81(d,J＝12Hz,1H),4.11-4.10(m,5H),3.92-3.88(m,1H),3.63-3.58(m,2H),3.51-3.47(m,2H),3.31(m,5H),3.17-3.16(m,1H),2.92-2.88(m,4H),2.83-2.78(m,2H),2.50(s,3H),2.47-2.43(m,1H),2.01-1.93(m,1H),1.76-1.68(m,3H)。
实施例5、2-((S)-2-(((4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙腈(化合物6)
合成路线及具体合成步骤:
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体6-3)的合成
将(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(6-1)(7g，参考专利US 20180072723所报道的方法合成)、4-溴-5-甲基-1-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(6-2)(6.54g,参考专利US 20180072723或WO2017201161所报道的方法合成)、Pd2(dba)3(2.1g)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(1.75g)和碳酸铯(13g,39.9mmol)加入到400mL二氧六环中，氮气氛围，85℃反应5小时至原料转化完全，冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，合并滤液，水洗、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相、无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚(1:10))，得到黄色固体标题化合物(6.5g)。
MS:m/z(ESI):653.3[M-SMe]+。
步骤2:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体6-4)的合成
0℃下将间氯过氧苯甲酸(0.26g)缓慢加入到中间体6-3(0.9g)的无水二氯甲烷溶液中，氮气保护，反应2小时至原料转化完全。依次加入饱和亚硫酸钠溶液(10mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，淬灭反应。二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(0.9g)。
MS:m/z(ESI):715.3[M+H]+。
步骤3:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(氰基甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体6-6)的合成
室温下将(S)-2-(2-羟甲基-吡咯烷-1-基)乙腈(6-5)(0.98g)溶于10mL THF中，冷却至0℃，再加入叔丁醇钠(70.6mg)，反应0.5小时，将中间体6-4(0.35g)加入到上述反应液中，氮气保护，继续反应0.5小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色固体标题化合物(0.32g)。
MS:m/z(ESI):791.5[M+H]+。
步骤4:2-((S)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙腈(中间体6-7)的合成
将中间体6-6(0.28g)加入到甲醇(10mL)和3mol/L的氨甲醇(10mL)混合溶液中，再向该溶液加入10％钯碳(150mg)，室温反应4小时至原料转化完全。将反应液过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(0.18g)。
MS:m/z(ESI):657.5[M+H]+。
步骤5:2-((S)-2-(((4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙腈(中间体6-8)的合成
室温下将中间体6-7(180mg)溶于5mL二氯甲烷，然后加入三氟醋酸(3mL)，反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，氨甲醇溶液(10mL)溶解搅拌3小时，减压浓缩，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得到黄色固体标题化合物(0.05g)。
MS:m/z(ESI):527.4[M+H]+。
步骤6:2-((S)-2-(((4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(1-丙烯酰-5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙腈(中间体6-9)的合成
在0℃下将中间体6-8(0.05g)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后依次加入DIEA(61.4mg)和丙烯酰氯(0.017g)，反应1小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色油状物。再依次加入THF(1mL)、1mol/L NaOH溶液(0.2mL)，室温下反应1小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到白色固体标题化合物(60mg)。
MS:m/z(ESI):635.4[M+H]+。
步骤7:2-((S)-2-(((4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-2-基)氧基)甲基)吡咯烷-1-基)乙腈(化合物6)的合成
室温下将中间体6-9(60mg)溶于四氢呋喃(2ml)和甲醇(2ml)的混合溶液中，再加入2mol/L的氢氧化钠溶液(0.1mL)，反应1小时至原料转化完全，浓缩反应液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到白色固体标题目标化合物6(8.32mg)。
高效液相制备色谱法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，45％-55％乙腈运行至10分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):581.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),8.10(s,1H),7.21(m,2H),7.01–6.73(m,1H),6.19(d,J＝16.4Hz,1H),5.78(d,J＝10.8Hz,1H),5.19–4.66(m,1H),4.17(m,4H),3.93(m,4H),3.44(m,3H),3.15(m,2H),2.97(m,4H),2.81(m,2H),2.36(m,5H),1.94(m,1H),1.60-2.0(m,3H)。
实施例6、2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物7)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体7-3)的合成
室温条件下，将7-2(0.3g，参考Tetrahedron,1981,37(23),4111-19所提供合成方法获得)溶于10mL四氢呋喃中，冷却至0℃，加入叔丁醇钠(96mg)，反应0.5小时。再向该反应液中加入7-1(0.54g,参考实施例6)，氮气保护，继续反应0.5小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得黄色固体标题化合物(0.18g)。
MS:m/z(ESI):849.5[M+H]+。
步骤2:(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体7-4)的合成
室温条件下，将中间体7-3(180mg)溶于5mL二氯甲烷中，再缓慢加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，得到黄色固体标题化合物(0.15g)。
MS:m/z(ESI):719.4[M+H]+。
步骤3:2-((S)-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体7-5)的合成
将中间体7-4(0.15g)和10％钯碳(150mg)加入到甲醇(10mL)和3mol/L的氨甲醇(10mL)混合溶液中，室温反应4小时至原料转化完全。过滤反应液，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.1g)。
MS:m/z(ESI):585.4[M+H]+。
步骤4:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物7)的合成
0℃条件下，将中间体7-5(0.1g)溶于5mL二氯甲烷中，再向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.11g)和丙烯酰氯(0.046g)，转至室温反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液得黄色油状物。向该油状物中加入四氢呋喃(1mL)，1mol/L氢氧化钠(0.2mL)，搅拌反应1小时。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体的标题目标化合物7(7mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，18％乙腈运行至7分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):639.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.19–12.78(m,1H),8.22(s,1H,HCOOH),8.10(s,1H),7.25–7.17(m,2H),6.98–6.72(m,1H),6.18(d,J＝16Hz,1H),5.77(d,J＝12Hz,1H),5.08–4.68(m,1H),4.65–4.31(m,1H),4.29–4.20(m,1H),4.14(m,2H),4.06–3.87(m,4H),3.58(m,1H),3.24(m,1H),3.15(m,1H),3.04(m,2H),2.99–2.90(m,3H),2.80(m,2H),2.75(m,1H),2.68–2.61(m,2H),2.34(m,4H),2.29(m,3H),2.16(m,2H),1.93–1.80(m,2H),1.74–1.65(m,2H),1.59(m,3H),1.51–1.41(m,1H)。
实施例7、2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物8)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体8-3)的合成
将(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(8-1)(13.5g，参考实施例4)、4-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(8-2)(9.09g，参考专利US 20180072723或WO 2017201161所报道的方法合成),Pd2(dba)3(4.05g),Ruphos(3.4g)和碳酸铯(25.07g)依次加入到400mL二氧六环中，氮气保护，85℃反应5小时至原料转化完全。将反应冷却至室温，过滤反应液，滤饼用乙酸乙酯洗涤，合并滤液，依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，柱层析分离(洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚(1:10))，得黄色固体标题化合物(13.6g)。
MS:m/z(ESI):653.3[M+H]+。
步骤2:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体8-4)的合成
将中间体8-3(13.6g)溶解于400mL干燥二氯甲烷中，0℃条件下,向该溶液中分批缓慢加入间氯过氧苯甲酸(4.23g)，氮气保护，反应2小时至原料转化完全。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液(100mL)和饱和碳酸氢钠溶液(500mL)，淬灭反应。分离有机相，二氯甲烷萃取水相，合并有机相，依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(13.5g)。
MS:m/z(ESI):669.3[M+H]+。
步骤3:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体8-6)的合成
0℃条件下，将中间体8-5(0.25g，参考实施例4)溶于10mL四氢呋喃中，再加入叔丁醇钠(0.1g,1.08mmol)，反应0.5小时。将中间体8-4(0.6g)加入到上述反应液中，氮气保护，继续反应0.5小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得黄色固体标题化合物(0.6g)。
MS:m/z(ESI):746.5[M+H]+。
步骤4:2-((2S)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体8-7)的合成
室温条件下，将中间体8-6(550mg)和10％钯碳(300mg)依次加入到甲醇(5mL)和4mol/L氨甲醇(5mL)的混合溶液中，氢气氛围下，抽换气三次，反应4小时至原料转化完全。过滤反应液，减压浓缩，得黄色固体标题化合物(0.25g)。
MS:m/z(ESI):612.5[M+H]+。
步骤5:2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体8-8)的合成
室温条件下，将中间体8-7(0.25g)加入到10mL二氯甲烷中，冷却至0℃，向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(105mg)和丙烯酰氯(45mg)，继续反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.2g)。
MS:m/z(ESI):666.3[M+H]+。
步骤6:2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物8)的合成
室温条件下将中间体8-8(0.2g,0.3mmol)溶于5mL二氯甲烷中，再缓慢加入三氟乙酸(1mL)，反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3水溶液调节溶液pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体标题目标化合物8(43mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，50％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):582.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.99(s,1H),8.11(s,1H),7.27–7.17(m,2H),6.87(s,1H),6.18(d,J＝16Hz,1H),5.77(d,J＝12Hz,1H),4.99-4.70(m,1H),4.42(m,1H),4.17(m,2H),4.12–3.89(m,4H),3.60-3.44(m,3H),3.30(s,2H),3.17(m,2H),2.97(m,4H),2.81(m,1H),2.36(m,3H),1.92(m,1H),1.78(m,1H),1.64(m,3H),0.52–0.32(m,3H),0.26(s,1H)。
实施例8、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物9)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷(中间体9-2)的合成
0℃条件下，将(S)-吡咯烷-2-基甲醇(9-1)(5.0g)、叔丁基二苯基氯硅烷(16.3g)和咪唑(8.5g)溶于100mL干燥二氯甲烷中，氮气保护，20℃反应4小时至原料转化完全。用水淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:1)，得黄色油状液体标题化合物(13g)。
MS:m/z(ESI):340.3[M+H]+。
步骤2:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-(甲基-d3)吡咯烷(中间体9-3)的合成
室温下将中间体9-2(2.0g)和碳酸钾(1.6g)溶于40mL干燥N,N-二甲基甲酰胺中，氮气保护，反应0.5小时。再将预先溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的氘代碘甲烷(898mg)缓慢滴加至上述反应液中，继续反应12小时至原料转化完全。向反应液中加入100mL水，淬灭反应。乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得黄色油状液体标题化合物(1.2g)。
MS:m/z(ESI):357.2[M+H]+。
步骤3:(S)-(1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲醇(中间体9-4)的合成
室温条件下，将中间体9-3(1.8g)溶于20mL盐酸甲醇溶液中，氮气保护，40℃反应1小时至原料转化完全。向反应液中加入氨水淬灭反应，二氯甲烷/甲醇(10:1)萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得黄色油状液体标题化合物(220mg)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ3.83(dd,J＝12.2,3.9Hz,1H),3.69(dd,J＝12.2,5.5Hz,1H),3.51(ddd,J＝11.4,7.4,4.2Hz,1H),3.02(dt,J＝11.1,8.3Hz,1H),2.23–2.13(m,1H),2.11–2.01(m,1H),1.99–1.83(m,3H)。
步骤4:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体9-6)的合成
室温条件下，将中间体9-4(200mg)和叔丁醇钠(122mg)溶于2mL无水四氢呋喃中，氮气保护，反应20分钟。将预先溶于2mL无水四氢呋喃中的9-5(550mg，参考实施例7)慢慢滴加至上述反应液中，继续反应10分钟至原料转化完全。加入200mL冰水，淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:3)，得黄色固体标题化合物(460mg)。
MS:m/z(ESI):723.3[M+H]+。
步骤5:2-((2S)-4-(7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体9-7)的合成
室温条件下，将中间体9-6(230mg)和钯碳(500mg)加入到氨水(5mL)和甲醇(50mL)的混合溶液中。氢气氛围下，反应24小时至原料转化完全。过滤反应液，减压浓缩，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:100～1:10)，得黄色固体标题化合物(180mg)。
MS:m/z(ESI):589.3[M+H]+。
步骤6:2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体9-8)的合成
室温条件下，将中间体9-7(180mg)溶于10mL二氯甲烷中，冷却至0℃，向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(79mg,0.62mmol)和丙烯酰氯(33mg,0.37mmol)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(100mg)。
MS:m/z(ESI):643.4[M+H]+。
步骤7:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物9)的合成
室温条件下，将中间体9-8(100g)溶于5mL二氯甲烷，再向该溶液中缓慢加入1mL三氟乙酸，室温反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3水溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体标题目标化合物9(12.26mg)。
高效液相制备方法:Gilson(Gx-281)制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，50％-55％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):559.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.98(s,1H),8.10(s,1H),7.24–7.19(m,2H),6.94-6.78(m,1H),6.18(dd,J＝16.4,2.0Hz,1H),5.77(d,J＝12.4Hz,1H),5.06-4.72(m,1H),4.49-4.31(m,1H),4.16–3.98(m,6H),3.54-3.44(m,2H),3.31-3.26(m,2H),3.25-3.10(m,2H),3.04-2.91(m,3H),2.84-2.74(m,2H),2.36(s,3H),2.16(q,J＝8.8Hz,1H),1.97-1.86(m,1H),1.73–1.51(m,3H).
实施例9、2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物10)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体10-3)的合成
室温条件下，将中间体10-2(1.4mmol，参考实施例7)和叔丁醇钠(129mg)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中，氮气保护，反应20分钟。将预先溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中的中间体10-1(500mg，参考实施例8)慢慢滴加至上述反应液中，氮气保护，继续反应10分钟至原料转化完全。加入200mL冰水，淬灭反应。乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:3)，得黄色固体标题化合物(505mg)。
MS:m/z(ESI):770.3[M+H]+。
步骤2:2-((2S)-4-(2-(((S)-1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体10-4)的合成
室温条件下，将中间体10-3(505mg)和钯碳(500mg)依次加入到氨水(5mL)和甲醇(50mL)的混合溶液中。氢气氛围下，抽换气3次，室温反应16小时至原料转化完全，过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:100～1:10)，得黄色固体标题化合物(230mg)。
MS:m/z(ESI):636.5[M+H]+。
步骤3:2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体10-5)的合成
将中间体10-4(0.23g)溶于10mL二氯甲烷中，并于0℃条件下依次加入N,N-二异丙基乙胺(140mg)和丙烯酰氯(40mg)，继续反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.2g)。
MS:m/z(ESI):690.3[M+H]+。
步骤4:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物10)的合成
室温条件下，将中间体10-5(0.2g,0.23mmol)溶于5mL二氯甲烷中，再缓慢加入1mL三氟乙酸，室温反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3水溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体标题目标化合物10(48.39mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，50％-55％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):606.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.09(s,1H),7.32–7.19(m,2H),7.06–6.67(m,1H),6.25(d,J＝16Hz,1H),5.80(m,2H),5.29(m,1H),4.98(m,1H),4.37(m,3H),4.25–4.02(m,4H),3.53(m,4H),3.36(m,1H),3.18(m,1H),3.13–2.99(m,3H),2.97–2.70(m,3H),2.55–2.28(m,4H),2.08(m,1H),1.88–1.63(m,3H)。
实施例10、2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物11)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H)吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(11-3)的合成
室温条件下，将中间体11-1(0.26g，参考实施例5)溶于15mL 1，4-二氧六环溶液中，再向该溶液中依次加入4-溴-5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑(11-2)(0.16g，参考实施例8)、碳酸铯(0.42g)和Ruphos-Pd-G3(0.042g)，抽换气三次，氮气保护，100℃反应4小时至原料转化完全。将反应冷却至室温，过滤反应液，滤饼用乙酸乙酯洗涤，合并滤液，分别用水、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～3:1)，得黄色固体标题化合物(0.15g)。
MS:m/z(ESI):733.4[M+H]+。
步骤2:2-((2S)-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体11-4)的合成
室温条件下，将中间体11-3(120mg)溶于甲醇(5mL)和4mol/L的氨甲醇(5mL)混合溶液中，再向该溶液中加入10％钯碳(100mg)，氢气氛围下，抽换气三次，反应4小时至原料转化完全。将反应液过滤，减压浓缩，得黄色固体标题化合物(0.08g)。
MS:m/z(ESI):599.3[M+H]+。
步骤3:2-((2S)-1-丙烯酰基-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体11-5)的合成
将中间体11-4(0.08g)溶于10mL二氯甲烷中，并于0℃条件下向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(38mg)和丙烯酰氯(14mg)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.08g)。
MS:m/z(ESI):653.3[M+H]+。
步骤4:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(甲基(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲基)氨基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物11)的合成
室温条件下，将中间体11-5(0.08g)溶于5mL二氯甲烷中，缓慢加入1mL三氟乙酸，室温反应12小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3溶液调节pH至9。乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体标题目标化合物11(2mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，40％-50％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):569.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.06(s,1H),7.24(q,J＝8Hz,2H),6.98–6.60(m,1H),6.27(d,J＝16Hz,1H),5.82(d,J＝12Hz,1H),4.20(m,2H),4.14–3.79(m,5H),3.58(m,2H),3.54–3.45(m,3H),3.20–3.07(m,5H),2.99(m,2H),2.78(m,3H),2.46(s,3H),2.42(s,3H),2.37–2.25(m,1H),2.00(m,1H),1.77(m,3H)。
实施例11、(S)-2-(4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯酰基哌嗪-2-基)乙腈(化合物12)合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(2S)-4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体12-3)的合成。
室温条件下将2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙烷-1-醇(12-2)(0.3g，参考实施例2)溶于10mL THF中，并于0℃条件下加入1mol/L叔丁醇钾四氢呋喃溶液(0.9mL)，反应0.5小时。再向该反应液中加入12-1(0.5g,参考实施例5)，氮气保护，继续反应0.5小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得黄色固体标题化合物(0.4g)。
MS:m/z(ESI):804.3[M+H]+。
步骤2:2-((2S)-4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体12-4)的合成
室温条件下，向甲醇(5mL)和4mol/L的氨甲醇(5mL)混合溶液中依次加入中间体12-3(400mg)和10％钯碳(300mg)，氢气氛围下，抽换气三次，室温反应36小时至原料转化完全。过滤反应液，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.25g)。
MS:m/z(ESI):670.3[M+H]+。
步骤3:2-((2S)-4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(5-甲基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯酰哌嗪-2-基)乙腈(中间体12-5)的合成
将中间体12-4(0.25g)溶于10mL二氯甲烷中，0℃条件下，依次加入N,N-二异丙基乙胺(96mg)和丙烯酰氯(40mg)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得黄色固体标题化合物(0.2g)。
MS:m/z(ESI):724.3[M+H]+。
步骤4:(S)-2-(4-(2-(2-(5,8-二氧杂-10-氮杂二螺[2.0.44.33]十一烷-10-基)乙氧基)-7-(5-甲基-1H-吲唑-4-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-丙烯酰哌嗪-2-基)乙腈(化合物12)的合成
室温条件下将中间体12-5(0.2g)溶于5mL二氯甲烷中，再缓慢加入1mL三氟乙酸，室温反应2小时至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，饱和NaHCO3溶液调节pH至9，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得白色固体标题目标化合物12(20mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％TFA)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，50％-55％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):640.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(s,1H),7.32–7.19(m,2H),7.06–6.67(m,1H),6.25(d,J＝16Hz,1H),5.80(d,J＝12Hz,1H),5.20-5.05(m,1H),4.80-4.40(m,3H),4.34-4.03(m,5H),3.92–3.76(m,4H),3.69-3.43(m,3H),3.22-3.11(m,1H),3.04-2.75(m,10H),2.41(s,3H),0.87(q,J＝4.4Hz,2H),0.55(q,J＝4.4Hz,2H).
实施例12、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物13)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:2-((S)-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体13-2)的合成
室温下将化合物13-1(0.65g,参考专利US 20180072723或US 20190144444所报道的方法合成)和氢氧化钯/碳(100mg,10％)溶于异丙醇(20mL)中。反应液在氢气氛下室温搅拌反应8小时至反应完全。将反应液直接过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:100～1:10)纯化，得到黄色固体标题化合物(0.256g)。
MS:m/z(ESI):514.6[M+H]+。
步骤2:(S)-2-氰基甲基-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体13-3)的合成
室温下将中间体13-2(256mg)加入到二氯甲烷(10mL)中，在0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(148mg)和二碳酸二叔丁酯(114mg)。加完后在20℃下继续反应1小时至反应完全。将反应液倾倒入水中，混合物用二氯甲烷萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩。残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:100～1:10)纯化，得到黄色固体标题化合物(0.14g)。
MS:m/z(ESI):614.8[M+H]+。
步骤3:(S)-4-(7-(3-乙酰氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体13-4)的合成
室温下将中间体13-3(140mg)加入到二氯甲烷(10mL)中，在0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(70.76mg)和乙酰氯(21.49mg)。加完后，反应液在20℃下继续反应1小时至反应完全。将反应液倾倒入水中，混合物用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩。残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:100～1:10)纯化，得到黄色固体标题化合物(90mg)。
MS:m/z(ESI):656.6[M+H]+。
步骤4:4-(4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(中间体13-5)的合成
室温下将中间体13-4(90mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，然后加入三氟乙酸(1mL)，反应液在室温下搅拌反应2小时至反应完全。将反应液倾倒入冰水中，用饱和NaHCO3水溶液调节至pH＝9，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，用制备薄层层析法(展开剂：甲醇：二氯甲烷＝1:10)纯化得到白色固体标题化合物(50mg)。
MS:m/z(ESI):556.6[M+H]+。
步骤5:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物13)的合成
室温下将中间体13-5(45mg)加入到二氯甲烷(1mL)中，在0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(23mg)和丙烯酰氯(7.7mg)。加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。将反应液倾倒入冰水中，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩。用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体标题目标化合物13(13.6mg)。
高效液相制备方法:Gilson(Gx-281)制备色谱仪，流动相A:H2O(10mmol％NH4HCO3)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um，运行梯度：10％乙腈运行2分钟，30％-50％乙腈运行至10分钟，95％乙腈运行至14分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):610.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.22(s,1H),7.82(s,1H),7.50(d,J＝3.6Hz,2H),7.31(d,J＝8.8Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),6.86-6.81(m,1H),6.29(d,J＝15.9Hz,1H),5.82(d,J＝21.6Hz,1H),5.09(s,1H),4.72–4.05(m,7H),3.67(s,3H),3.26–2.89(m,7H),2.76(s,1H),2.51(s,3H),2.44–2.25(m,4H),2.10(t,J＝12.4Hz,1H),1.90–1.65(m,3H)。
实施例13、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物14)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷(中间体14-2)的合成
室温下将(S)-吡咯烷-2-基甲醇(14-1)(5.0g)、叔丁基二苯基氯硅烷(16.3g)和咪唑(8.5g)溶于100mL N,N-二甲基甲酰胺中，氮气氛围，20℃反应4小时至原料转化完全。水淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:1)，得到黄色油状标题化合物(13.0g)。
MS:m/z(ESI):340.3[M+H]+。
步骤2:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-环丙基吡咯烷(中间体14-4)的合成室温下将中间体14-2(4.0g)、(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(3-3)(4.0g)、氰基硼氢化钠(1.4g)和冰醋酸(15mL)溶于甲醇(100mL)，氮气氛围下60℃反应19小时至原料转化完全。向反应液中加入1mol/L碳酸氢钠溶液(100mL)，淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得到黄色油状标题化合物(4.0g)。
MS:m/z(ESI):380.2[M+H]+。
步骤3:(S)-(1-环丙基吡咯烷-2-基)甲醇(中间体14-5)的合成
室温下将中间体14-4(4.0g)加入到20mL盐酸甲醇溶液中，氮气保护下，反应12小时至原料转化完全。向反应液中加入氨水，淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得到黄色油状标题化合物(300.0mg)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ3.72(dt,J＝17.2,8.8Hz,1H),3.50(dd,J＝10.8,6.8Hz,1H),3.09(d,J＝6.8Hz,1H),2.78(s,1H),2.59(d,J＝7.9Hz,1H),2.08–1.92(m,1H),1.85–1.64(m,4H),0.62–0.31(m,4H).
步骤4:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体14-8)的合成
将(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(14-6)(2.66g，参考专利US 20180072723所报道的方法合成)、4-溴萘-2-基特戊酸酯(14-7)(2.24g，参考专利US 20180072723或WO 2017201161所报道的方法合成)、Pd2(dba)3(0.83g)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(0.57g)和碳酸铯(4.94g)依次加入到100mL二氧六环中，氮气氛围下，85℃加热反应5小时至原料转化完全。将反应液冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤滤饼，合并滤液，水洗、饱和氯化钠溶液洗涤，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:石油醚～乙酸乙酯/石油醚(1:10))，得到黄色固体标题化合物(2.66g)。
MS:m/z(ESI):665.4[M+H]+。
步骤5:(2S)-2-(氰基甲基)-4-(2-甲基亚磺酰基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体14-9)的合成
0℃下将间氯过氧苯甲酸(0.81g)缓慢加入到中间体14-8(2.66g)的无水二氯甲烷溶液(50mL)中，氮气保护，反应2小时至原料转化完全。向反应液中依次加入饱和亚硫酸钠溶液(50mL)和饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，得到黄色固体标题化合物(2.6g)。
MS:m/z(ESI):681.2[M+H]+。
步骤6:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体14-10)的合成
室温下将(S)-(1-环丙基吡咯烷-2-基)甲醇(14-5)(108mg)和叔丁醇钠(54mg)加入到2mL无水四氢呋喃中，氮气保护，室温反应20分钟。将预先溶于2mL四氢呋喃中的中间体14-9(270mg)缓慢滴加至上述反应液中，继续反应10分钟至原料转化完全。向反应液中加入冰水(200mL)，淬灭反应，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:3)，得到黄色固体标题化合物(180mg)。
MS:m/z(ESI):758.4[M+H]+。
步骤7:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体14-11)的合成
室温下将中间体14-10(180mg)溶于6.5mL甲醇/四氢呋喃(1:1.5)混合溶液中，加入2mol/L氢氧化钠溶液(1mL)，反应10分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得到黄色固体标题化合物(0.11g)。
MS:m/z(ESI):674.4[M+H]+。
步骤8:2-((S)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体14-12)的合成
室温下将中间体14-11(110mg)、钯碳(500mg)和氨水(5mL)分别加入到50mL甲醇中。抽换气3次，氢气氛围下，反应24小时至原料转化完全。将反应液进行过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:100～1:10)，得到黄色固体标题化合物(62mg)。
MS:m/z(ESI):540.4[M+H]+。
步骤9:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基丙烯酸酯(中间体14-13)的合成
室温下将中间体14-12(62mg)溶于10mL二氯甲烷，并于0℃下向该溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(57mg)和丙烯酰氯(20mg)，反应30分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液。得到黄色固体标题化合物(40mg)。
MS:m/z(ESI):648.4[M+H]+。
步骤10:2-((S)-1-丙烯酰基-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-羟基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体14-14)的合成
室温下将中间体14-13(40mg)溶解于2.5mL甲醇/四氢呋喃(1:1.5)混合溶液中，再加入2mol/L氢氧化钠溶液(1mL)，反应10分钟至原料转化完全。将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，高效液相制备色谱分离、纯化，得到白色固体标题化合物(2.77mg)。
高效液相制备方法:Gilson(Gx-281)制备色谱仪；流动相A:H2O(0.1％NH4HCO3)，流动相B:乙腈；色谱柱:Prep xbridge C18 OBD 19*250mm 10um；运行梯度:10％乙腈运行2分钟，40％-60％乙腈运行至10分钟，60％乙腈运行至13分钟，95％乙腈运行至16分钟,10％乙腈运行至18分钟结束。
MS:m/z(ESI):594.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(t,J＝10.2Hz,1H),7.48–7.21(m,2H),6.83(dd,J＝30.1,1.9Hz,3H),6.29(d,J＝16.7Hz,1H),5.83(d,J＝10.5Hz,1H),5.11(s,1H),4.57(dd,J＝10.6,4.7Hz,1H),4.28–3.94(m,6H),3.67(dd,J＝12.2,5.7Hz,1H),3.52–3.32(m,3H),3.17–2.80(m,7H),2.73–2.50(m,1H),2.18–1.98(m,1H),1.95–1.57(m,4H),0.67–0.32(m,4H)。
步骤11:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物14)的合成
将中间体14-14(0.03g)加入到二氯甲烷(5mL)中，在0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(20mg)和乙酰氯(4mg)，继续反应30分钟至反应完全。将反应液倾倒入冰水中，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，再用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体标题目标化合物(8.5mg)。
高效液相制备方法:高效液相制备色谱法仪器：Waters 2767/QDa制备色谱仪，流动相A:H2O(10mmol NH4HCO3)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep xbridge C18 OBD 19*250mm10um，运行梯度：10％乙腈运行2分钟，50％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):636.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.22(d,J＝8Hz,1H),7.88–7.77(m,1H),7.51(dd,J＝8Hz,2H),7.33(s,1H),6.97(d,J＝4Hz,1H),6.85(s,1H),6.29(d,J＝16Hz,1H),5.83(d,J＝12Hz,1H),5.09(m,1H),4.58(m,1H),4.20(m,6H),3.56(m,4H),3.14–2.86(m,7H),2.70–2.52(m,1H),2.32(s,3H),2.09(m,1H),1.83(m,4H),0.66–0.30(m,4H)。
实施例14、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基甘氨酸酯(化合物15)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基(叔丁氧基羰基)甘氨酸酯(中间体15-2)的合成
室温下将化合物1(66mg)溶于乙酸乙酯(10mL)中，再加入化合物15-1N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(25mg)，0℃下将二环己基碳二亚胺(28mg)加入到反应液后，在氮气氛围下室温搅拌反应2小时。反应结束，加入30mL水后用乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥。过滤后，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:10)纯化，得到黄色固体标题化合物(30mg)。
MS:m/z(ESI):725.2[M+H]+。
步骤2:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基甘氨酸酯(化合物15)的合成
室温下将中间体15-2(25mg)溶于无水二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，反应液搅拌30分钟至反应完全。反应液减压浓缩，用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体标题目标化合物(1.2mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪，流动相A:H2O(0.1％FA)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um，运行梯度：10％乙腈运行2分钟，20％-40％乙腈运行至7分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):625.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.24(d,J＝7.4Hz,1H),7.88(d,J＝8.3Hz,1H),7.62–7.50(m,2H),7.47(s,1H),7.06(s,1H),6.80(s,1H),6.30(d,J＝16.5Hz,1H),5.85(d,J＝10.2Hz,1H),4.57(m,2H),4.41(m,1H),4.24m,6H),3.95(m,1H),3.74(m,2H),3.48(s,3H),3.04-2.78(m,8H),2.40(m,1H),2.29–1.95(m,3H),1.42–1.23(m,2H)。
实施例15、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基特戊酸酯(化合物16)
合成路线及具体合成步骤:
步骤1:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)吡咯烷(中间体16-2)的合成
0℃条件下，将(S)-吡咯烷-2-基甲醇(16-1)(5.0g)、叔丁基二苯基氯硅烷(16.3g)和咪唑(8.5g)溶于100mL干燥二氯甲烷中，氮气保护，20℃反应4小时至原料转化完全。用水淬灭反应，二氯甲烷萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:乙酸乙酯:石油醚＝1:20～1:1)，得黄色油状液体标题化合物(13.0g)。
MS:m/z(ESI):340.3[M+H]+。
步骤2:(S)-2-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-(甲基-d3)吡咯烷(中间体16-3)的合成
室温下将中间体16-2(2.0g)和碳酸钾(1.6g)溶于40mL干燥N,N-二甲基甲酰胺中，氮气保护，反应0.5小时。再将预先溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的氘代碘甲烷(898mg)缓慢滴加至上述反应液中，继续反应12小时至原料转化完全。向反应液中加入100mL水，淬灭反应。乙酸乙酯萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:10)，得黄色油状液体标题化合物(1.2g)。
MS:m/z(ESI):357.2[M+H]+。
步骤3:(S)-(1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲醇(中间体16-4)的合成
室温条件下，将中间体16-3(1.8g)溶于20mL盐酸甲醇溶液中，氮气保护，40℃反应1小时至原料转化完全。向反应液中加入氨水淬灭反应，二氯甲烷/甲醇(10:1)萃取稀溶液，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤，减压浓缩滤液，硅胶柱层析分离、纯化(洗脱剂:甲醇:二氯甲烷＝1:20～1:1)，得黄色油状液体标题化合物(220mg)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ3.83(dd,J＝12.2,3.9Hz,1H),3.69(dd,J＝12.2,5.5Hz,1H),3.51(ddd,J＝11.4,7.4,4.2Hz,1H),3.02(dt,J＝11.1,8.3Hz,1H),2.23–2.13(m,1H),2.11–2.01(m,1H),1.99–1.83(m,3H)。
步骤4:(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体16-6)的合成
室温下将中间体16-4(347mg)和叔丁醇钠(423mg)溶于无水四氢呋喃(2mL)中，反应液在氮气氛下室温搅拌反应20分钟，缓慢滴加中间体16-5(1g，参照实施例13所述方法合成)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，反应液在氮气氛下室温搅拌反应10分钟至反应完全。将冰水(50mL)加入反应液搅拌，用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥并过滤，滤液减压浓缩，残余物用硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:20～1:3)纯化，得到黄色固体标题化合物(440mg)。
MS:m/z(ESI):651.4[M+H]+。
步骤5:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-(特戊酰氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体16-7)的合成
室温下将中间体16-6(440mg)和三乙胺(137mg)溶于二氯甲烷(5mL)中，反应液在0℃、氮气氛下搅拌20分钟，缓慢滴加特戊酰氯(97mg)的二氯甲烷(2mL)溶液，室温搅拌10分钟至反应完全。将冰水(100mL)加入反应液搅拌，用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥并过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物粗品(500mg)。
MS:m/z(ESI):735.6[M+H]+。
步骤6:4-(4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基特戊酸酯(中间体16-8)的合成
室温下将中间体16-7(500mg)和氢氧化钯/碳(200mg)溶于异丙醇(10mL)和四氢呋喃(10mL)中，反应液在氢气氛下室温搅拌反应4小时至反应完全。将反应液直接过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物粗品(322mg)。
MS:m/z(ESI):601.3[M+H]+。
步骤7:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基特戊酸酯(化合物16)的合成
室温下将中间体16-8(20mg)加入到二氯甲烷(1mL)中，在0℃下加入N,N-二异丙基乙胺(8.4mg)和丙烯酰氯(3.6mg)，反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。将反应液倾倒入冰水中，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩。残余物用高效液相制备色谱法纯化得到黄色固体标题目标化合物16(1.1mg)。
高效液相制备方法:高效液相制备色谱法仪器：Gilson(Gx-281)制备色谱仪，流动相A:H2O(10mmol％NH4HCO3)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep xbridge C18 OBD 19*250mm10um，运行梯度：30％乙腈运行2分钟，65％-75％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):655.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.22(d,J＝7.7Hz,1H),7.85(d,J＝7.3Hz,1H),7.51(s,2H),7.30(s,1H),6.90(s,2H),6.29(d,J＝16.1Hz,1H),5.84(d,J＝10.1Hz,1H),5.08(s,1H),4.48(m,2H),4.19(m,5H),3.63(s,1H),3.44(m,3H),3.13(s,3H),2.99(s,4H),2.67(s,1H),2.21(s,1H),1.88(m,3H),1.40(s,9H)。
实施例16、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物17)
合成路线及具体合成步骤：
步骤1:2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物17)的合成
室温下将化合物16(80mg)溶于四氢呋喃(5mL)中，加入氢氧化钾溶液(5mL，2M)，反应液在室温下搅拌反应4小时。将冰水倒入反应液中，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，残余物用高效液相制备色谱法纯化得到黄色固体标题化合物17(20mg)。
高效液相制备方法:高效液相制备色谱法仪器：Gilson(Gx-281)制备色谱仪，流动相A:H2O(10mmol％NH4HCO3)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep xbridge C18 OBD 19*250mm10um，运行梯度：30％乙腈运行2分钟，45％-45％乙腈运行至9分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。。
MS:m/z(ESI):571.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.66(s,1H),8.01(d,J＝8.3Hz,1H),7.66(d,J＝8.3Hz,1H),7.49–7.20(m,2H),6.82(dd,J＝37.0,1.9Hz,3H),6.20(dd,J＝16.8,1.9Hz,1H),5.79(dd,J＝10.5,1.9Hz,1H),5.10–4.73(m,1H),4.66–4.20(m,2H),4.17–3.83(m,6H),3.23–3.13(m,3H),3.11–2.72(m,7H),2.18(m,1H),1.94(m,1H),1.71–1.58(m,3H)。
实施例17、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物18)
合成路线及具体合成步骤：
步骤1:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物18)的合成
室温下将化合物17(15mg)和三乙胺(7.2mg)溶于二氯甲烷(1mL)中，反应液在-10℃下搅拌反应10分钟，缓慢滴加乙酰氯(2.25mg)的二氯甲烷(1mL)溶液，反应液在-10℃下搅拌反应20分钟至反应完全。反应液中倒入冰水，混合物用二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩。残余物用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体标题目标化合物18(2.6mg)。
高效液相制备方法:Waters 2767/QDa制备色谱仪，流动相A:H2O(10mmol％HCO2H)流动相B:乙腈，色谱柱：
Prep C18 OBD 19*250mm 10um，运行梯度：20％乙腈运行1分钟，35％-40％乙腈运行至10分钟，35％乙腈运行至10.2分钟，95％乙腈运行至16分钟结束。
MS:m/z(ESI):613.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.26-8.16(m,1H),7.84(dd,J＝6.5,2.8Hz,1H),7.57-7.43(m,2H),7.33(d,J＝1.8Hz,1H),6.97(d,J＝2.1Hz,2H),6.29(d,J＝16.3Hz,1H),5.83(d,J＝10.6Hz,1H),5.08(s,1H),4.61-4.40(m,2H),4.37-3.96(m,5H),3.64(s,1H),3.51-3.34(m,3H),3.25-3.09(m,3H),2.98(m,4H),2.69(s,1H),2.32(s,3H),2.21(m,1H),2.04-1.75(m,3H)。
实施例18、4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基二甲基磷酸酯(化合物19)
合成路线及具体合成步骤：
步骤1:4-溴萘-2-基二甲基磷酸酯(中间体19-2)的合成
室温下将化合物19-1(1-溴-3-羟基萘，700mg)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(318.5mg)，然后在0℃下滴加氯磷酸二甲酯(453.6mg)的无水二氯甲烷溶液(2mL)，滴加完毕后室温搅拌2小时。反应液加入水(15mL)搅拌，二氯甲烷萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:10)纯化，得到黄色油状标题化合物(175mg)。
MS:m/z(ESI):331.1[M+H]+。
步骤2:4-((S)-4-((苄基氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(中间体19-5)的合成
室温下将中间体19-4((S)-(1-环丙基吡咯烷-2-基)甲醇)，254.5mg,按照实施例2的方法合成)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，0℃下将叔丁醇钠(112.6mg)加到反应液中，反应液在0℃、氮气氛围下搅拌反应10分钟，然后缓慢滴加中间体19-3(4-((S)-4-((苄基氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯，500mg，参考专利US 20180072723或US 20190144444所报道的方法合成)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(2mL)，滴加完毕后继续搅拌10分钟。随后，反应液加入水(30mL)搅拌，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:15)纯化，得到黄色固体标题化合物(270mg)。
MS:m/z(ESI):632.3[M+H]+。
步骤3:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体19-6)的合成
室温下将中间体19-5(270mg)溶于无水二氯甲烷(5mL)中，缓慢滴加三氟乙酸(2mL)，反应液在室温下搅拌1小时。反应液中加入水(5mL)搅拌，滴加碳酸氢钠水溶液调节pH＝8，二氯甲烷(20mL×2)萃取，有机相再用饱和食盐水(10mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(226mg)。
MS:m/z(ESI):532.2[M+H]+。
步骤4:(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(3-((二甲氧基磷酰基)氧基)萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体19-7)的合成
室温下将中间体19-6(200mg)溶于二氧六环(15mL)中，然后依次加入中间体19-2(175mg)，碳酸铯(368.7mg)，Pd2(dba)3(51.7mg)，Ruphos(35.1mg)，反应液在氮气氛围下85℃加热搅拌16小时至反应完全。冷却至室温，反应液加入水(15mL)搅拌，乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤并经无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：甲醇：二氯甲烷＝1:15)纯化，得到黄色固体标题化合物(77mg)。
MS:m/z(ESI):782.3[M+H]+。
步骤5:4-(4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基二甲基磷酸酯(中间体19-8)的合成
室温下将中间体19-7(77mg)溶于异丙醇(5mL)中，加入氢氧化钯/碳(50mg),在氢气氛下室温搅拌2小时至反应完全。过滤，滤液经减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(41mg)。
MS:m/z(ESI):648.2[M+H]+。
步骤6:4-(4-((S)-4-丙烯酰基-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-环丙基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶并[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基二甲基磷酸酯(化合物19)的合成
室温下将中间体19-8(41mg)溶于无水二氯甲烷(3mL)，加入三乙胺(12.7mg)，0℃下滴加丙烯酰氯(6.0mg)的无水二氯甲烷溶液(1mL)，滴加完毕后继续反应30分钟。反应液浓缩后用高效液相制备色谱法纯化，得到白色固体标题目标化合物19(1.97mg)。
高效液相制备方法：Waters 2767/QDa制备色谱仪，流动相A:H2O(0.1％FA)流动相B:乙腈，色谱柱：Prep sunfire C18 OBD 19*250mm 10um，运行梯度：10％乙腈运行2分钟，20％-40％乙腈运行至7分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。
MS:m/z(ESI):702.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ8.19(d,J＝26.4,8.0Hz,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.63–7.48(m,2H),7.45(s,1H),7.11(d,J＝20.8Hz,1H),6.84(s,1H),6.31(d,J＝16.4Hz,1H),5.86(d,J＝10.0Hz,1H),5.09(s,2H),4.60(m,5H),4.39(s,1H),4.33–4.08(m,5H),3.94(m,6H),3.79–3.60(m,1H),3.50(s,1H),3.05(m,4H),2.86(s,1H),2.18(s,2H),1.91(m,3H),0.81–0.44(m,4H)。
实施例19、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物20)
步骤1：8-溴-1-萘甲酰氯(中间体20-2)的合成
室温下将8-溴-1-萘甲酸(20-1)(1g,4mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，将氯化亚砜(1ml)加入反应液，零度下缓慢滴加，滴加完毕后继续搅拌10分钟，然后回流3h。TLC检测反应完毕。浓缩干，得到黄色固体标题化合物粗品。粗品直接用于下一步反应。
步骤2：((8-溴萘-1-基)-1-基)甲烷-d2-醇(中间体20-3)的合成
室温下将中间体20-2(1.1g,4mmol)溶于THF(5mL)。零度下缓慢滴加到氘代铝锂氢(0.45g，0.012mmol)的四氢呋喃溶液中，滴加完毕后45℃搅拌2小时，TLC检测反应完毕。然后加入饱和硫酸钠淬灭反应。倒入100ml水中，50ml乙酸乙酯萃取，有机层无水硫酸钠干燥，浓缩干，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：石油醚：乙酸乙酯＝10:1)纯化得到白色固体标题化合物(650mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90–7.80(m,3H),7.70(dd,J＝7.1,1.3Hz,1H),7.52–7.44(m,1H),7.29(d,J＝7.9Hz,1H),2.37(s,1H).
步骤3：8-溴-1-(甲基-d2)萘(中间体20-4)的合成
室温下将中间体20-3(0.6g,2.5mmol)溶于二氯甲烷(10mL)。然后加入三氟乙酸(3ml)，55℃回流温度下滴加三乙基硅氢(1.45g，12.5mmol)，滴加完毕继续反应2小时。TLC检测反应完毕。倒入20ml水中，50ml石油醚萃取，有机层无水硫酸钠干燥，浓缩干，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：纯石油醚)纯化得到白色固体标题化合物(300mg)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.82(dd,J＝7.2,1.2Hz,1H),7.77(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),7.70(dd,J＝6.4,3.6Hz,1H),7.34(q,J＝3.2Hz,2H),7.23–7.16(m,1H),3.09(s,1H).
步骤4：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(甲硫基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体20-6)的合成
室温下将中间体20-4(440mg,1.98mmol)溶于二氧六环(15mL)，然后加入中间体2(789mg,1.8mmol)、碳酸铯(1.76g)、RuphosPd-G3(151mg)，室温下抽换N2三次，反应液在氮气氛围下90℃搅拌反应12小时。反应液加入水(30mL)，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合并有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝15:1)纯化，得到黄色固体标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):581.2[M+H]+。
步骤5：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(甲基亚砜基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体20-7)的合成
室温下将中间体20-6(150mg,0.258mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，0℃再加入间氯过氧苯甲酸(52mg)，室温反应1小时后，将反应液倾倒入冰水(30mL)中，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):597.2[M+H]+。
步骤6：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体20-9)的合成
室温下将中间体20-8(37.6mg,0.327mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，然后在0℃下加入1M叔丁醇钾四氢呋喃溶液(0.4mL)，搅拌反应0.5小时后，在0℃下加入中间体20-7(150mg,0.25mmol)，反应液室温搅拌反应0.5小时至反应完全。反应液加入水(20mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱层析方法(MeOH:DCM＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(114mg)。
MS m/z(ESI):648.3[M+H]+。
步骤7：2-((S)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体20-10)的合成
室温下将中间体20-9(114mg,0.176mmol)溶于四氢呋喃(2mL)和异丙醇(4mL)中，室温下加入氢氧化钯\碳(50mg,10％,Wt＝50％)，然后室温下抽换氢气3次，氢气氛下室温搅拌2个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(40mg)。
MS m/z(ESI):514.2[M+H]+。
步骤8：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物20)的合成
将中间体20-10(40mg,0.078mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入三乙胺(16mg)，滴加丙烯酰氯(7mg,0.078mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。加入水(10mL)终止反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，再用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(3.25mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):568.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1.74H,HCOOH),7.80-7.66(m,2H),7.49-7.43(m,1H),7.40-7.23(m,3H),6.96-6.76(m,1H),6.19(d,J＝16.8Hz,1H),5.78(d,J＝12.0Hz,1H),5.04-4.71(m,1H),4.46-4.19(m,2H),4.08-3.93(m,4H),3.80-3.65(m,4H),3.17-3.02(m,5H),2.96-2.89(m,2H),2.85-2.78(m,1H),2.75-2.65(m,1H),2.34-2.29(m,3H),2.19-2.11(m,1H),1.94-1.88(m,1H),1.70-1.52(m,3H).
实施例20、2-((S)-1-(2-氟丙烯酰基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物21)
步骤1：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(甲基亚砜基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体21-2)的合成
室温下将起始原料21-1(150mg,0.258mmol，可根据实施例19方法合成)溶于二氯甲烷(30mL)中，在0℃下加入间氯过氧苯甲酸(45mg,0.258mmol)，反应液在氮气氛围下室温搅拌30分钟，TLC检测反应完毕。水(30mL)加入反应液，二氯甲烷萃取(20mL×3)，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(150mg)。
MS m/z(ESI):597.2[M+H]。
步骤2：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体21-4)的合成
室温下将(S)-(1-甲基吡咯烷-2-基)甲醇(21-3)(37.6mg,0.327mmol，可根据专利EP 1170281报道方法制备)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后在0℃下加入1M叔丁醇钾四氢呋喃溶液(0.4mL,1M)，搅拌反应0.5小时后，在0℃下加入中间体21-2(150mg,0.25mmol)，反应液室温搅拌反应0.5小时至反应完全。反应液加入水(20mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱层析方法(甲醇:二氯甲烷＝0～10％)纯化得到黄色油状标题化合物(114mg)。
MS m/z(ESI):648.3[M+H]。
步骤3：2-((S)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体21-5)的合成
室温下将中间体21-4(114mg,0.176mmol)溶于异丙醇(5mL)中，室温下加入氢氧化钯\碳(60mg,10％,Wt＝50％)，然后室温下抽换氢气3次，氢气氛下室温搅拌3个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到黄色油状标题化合物(50mg)。
MS m/z(ESI):514.2[M+H]。
步骤4：2-((S)-1-(2-氟丙烯酰基)-4-(7-(8-(甲基-d2)萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)(化合物21)的合成
室温下将中间体21-5(50mg,0.097mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，零度下缓慢加入2-氟丙烯酸(25mg,0.3mmol)。将N,N-二异丙基乙胺(75mg,0.6mmol)和2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(100mg，0.25mmol)加入反应液的二氯甲烷溶液，完毕后继续零度下搅拌1个小时，TLC检测反应完毕。反应液加入水(30mL)，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，粗品用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(26.25mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物.
MS m/z(ESI):586.3[M+H]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.15(s,0.36H,HCOOH),7.79–7.66(m,2H),7.49-7.44(m,1H),7.41–7.23(m,3H),5.44-5.37(m,1H),5.36-5.19(m,1H),5.00-4.76(m,1H),4.28-4.24(m,1H),4.16–3.87(m,5H),3.77–3.61(m,2H),3.26-3.20(m,2H),3.15–2.88(m,6H),2.84-2.80(m,1H),2.71(m,2H),2.39(m,3H),2.31-2.23(m,1H),1.99–1.89(m,1H),1.74-1.57(m,3H).
实施例21、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-甲氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物22)
步骤1：4-((S)-4-((苄氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(甲基亚砜基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁基酯(中间体22-2)的合成
室温下将起始原料22-1(1.5g,2.79mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，在0℃下加入间氯过氧苯甲酸(482mg)，室温反应1小时后，将反应液倾倒入冰水(30mL)中，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(1.4g)。
MS m/z(ESI):555.3[M+H]+。
步骤2：4-((S)-4-((苯氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁酯(中间体22-3)的合成
室温下将(S)-(1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲醇(447mg,3.79mmol,可根据实施例9方法合成)溶于四氢呋喃(10mL)，然后在0℃下加入1M叔丁醇钾四氢呋喃溶液(3.8mL)，搅拌反应0.5小时后，在0℃下加入中间体22-2(1.4g,2.52mmol)，反应液室温搅拌反应0.5小时至反应完全。反应液加入水(20mL)，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱层析方法(甲醇：二氯甲烷＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(970mg)。
MS m/z(ESI):609.3[M+H]+。
步骤3：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体22-4)的合成
室温下将中间体22-3(970mg,1.59mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，反应液在室温下反应2小时至反应完全。反应液加入水(20mL)，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至8，混合物用二氯甲烷(20mL×3)萃取，有机相于无水硫酸钠中干燥，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(700mg)。
MS m/z(ESI):509.2[M+H]+。
步骤4：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-甲氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体22-5)的合成
室温下将1-溴-3-甲氧基萘(325mg,1.38mmol)溶于二氧六环(15mL)，然后加入中间体22-4(350mg,0.69mmol)，碳酸铯(562mg)，RuPhos(64mg)和Pd2(dba)3(63mg)，室温下抽换N2三次，反应液在90℃搅拌反应12小时至反应完全。反应液过滤，滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析方法(甲醇：二氯甲烷＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(300mg)。
MS m/z(ESI):665.3[M+H]+。
步骤5：2-((S)-4-(7-(3-甲氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体22-6)的合成
室温下将中间体22-5(300mg,0.45mmol)溶于四氢呋喃(2mL)和异丙醇(4mL)中，室温下加入氢氧化钯\碳(50mg,10％,Wt＝50％)，然后室温下抽换氢气3次，氢气氛下室温搅拌2个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(198mg)。
MS m/z(ESI):531.2[M+H]+。
步骤6：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-甲氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物22)的合成
将中间体22-6(98mg,0.18mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入三乙胺(36mg)，滴加丙烯酰氯(16.6mg,0.18mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。加入水(10mL)终止反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，所得粗品用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(17.6mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):585.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,0.55H,HCOOH),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.06(s,1H),6.95-6.74(m,2H),6.19(d,J＝18.4Hz,1H),5.78(d,J＝12.4Hz,1H),5.06-4.70(m,1H),4.49-4.20(m,2H),4.16-3.94(m,6H),3.87(s,3H),3.66-3.50(m,1H),3.45-3.28(m,2H),3.08-2.85(m,6H),2.65-2.58(m,1H),2.33-2.16(m,1H),2.00-1.80(m,1H),1.76-1.54(m,3H).
实施例22、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(3-乙氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物23)
步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-乙氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体23-3)的合成
室温下将起始原料23-1(344mg,1.38mmol)溶于二氧六环(10mL)，然后加入中间体23-2(350mg,0.69mmol，可根据实施例23方法制备)，碳酸铯(562mg)，RuPhos(64mg)和Pd2(dba)3(63mg)，室温下抽换N2三次，反应液在90℃搅拌反应12小时至反应完全。反应液过滤，滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析方法(MeOH:DCM＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(308mg)。
MS m/z(ESI):679.3[M+H]+。
步骤2：2-((S)-4-(7-(3-乙氧基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体23-4)的合成
室温下将中间体23-3(308mg,0.45mmol)溶于四氢呋喃(4mL)和异丙醇(8mL)中，室温下加入氢氧化钯\碳(100mg,10％,Wt＝50％)，然后室温下抽换氢气3次，氢气氛下室温搅拌2个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(191mg)。
MS m/z(ESI):545.2[M+H]+。
步骤3：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(化合物24)的合成
将中间体23-4(100mg,0.18mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入三乙胺(36mg)，滴加丙烯酰氯(16.6mg,0.18mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。加入水(10mL)终止反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，再用高效液相制备色谱法纯化得到黄色固体目标化合物(21.3mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):599.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(s,1.02H,HCOOH),8.04(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.46(t,J＝7.2Hz,1H),7.35(t,J＝7.2Hz,1H),7.03(s,1H),6.93-6.73(m,2H),6.19(d,J＝16.4Hz,1H),5.78(d,J＝12.0Hz,1H),5.06-4.69(m,1H),4.48-4.21(m,4H),4.20-4.06(m,6H),4.05-3.95(m,2H),3.65-3.48(m,1H),3.44-3.30(m,1H),2.07-2.80(m,5H),2.64-2.53(m,1H),2.26-2.13(m,1H),2.00-1.87(m,1H),1.77-1.50(m,3H),1.44-1.31(m,3H).
实施例23、4-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基二甲基氨基甲酸酯(化合物24)
步骤1：4-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基二甲基氨基甲酸酯(化合物24)的合成
室温下将化合物1(100mg,0.18mmol)溶解到乙腈(5mL)中，在室温下加入碳酸钾(50mg,0.36mmol)和二甲氨基甲酰氯(19mg,0.18mmol)。加完后反应液在60℃下继续反应3个小时至反应完全。反应液过滤旋干得到的粗品。用高效液相制备色谱法纯化得到目标产物(15mg)。
MS m/z(ESI):639.2[M+H]+。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(s,1.44H,HCOOH),8.15(d,J＝8Hz,1H),7.93–7.85(m,1H),7.61–7.47(m,2H),7.39(d,1H),7.02(d,J＝4Hz,1H),6.96–6.76(m,1H),6.19-6.17(m,1H),5.85–5.67(m,1H),4.88-4.86(m,1H),4.48–4.22(m,2H),4.08-4.10(m,6H),3.42-4.34(m,1H),3.24-3.14(m,3H),3.10(s,3H),3.05–2.87(m,8H),2.59–2.53(m,1H),2.35(s,3H),2.18-2.16(m,1H),1.99–1.88(m,1H),1.64-1.61(m,3H)。
实施例24、N-(1-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)异喹啉-3-基)乙酰胺(化合物25)
步骤1：N-(1-溴异喹啉-3-基)乙酰胺(中间体25-2)的合成
室温下将起始原料25-1(2.0g,14.08mmol)溶于氢溴酸的醋酸溶液(30mL)，室温下抽换N2三次，反应液在室温下搅拌反应0.5小时至反应完全。加入水(30mL)终止反应，过滤，取滤饼经减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(3.1g)。
MS m/z(ESI):265.1[M+H]+。
步骤2：乙酰基(1-溴异喹啉-3-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体25-3)的合成
室温下将中间体25-2(1.0g,3.78mmol)溶于二氯甲烷(15mL)，然后加入二碳酸二叔丁酯(825.7mg,3.78mmol)，4-二甲氨基吡啶(46.1mg,0.378mmol)，反应液在室温下搅拌反应2小时至反应完全。加入水(10mL)终止反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，所得粗品用硅胶柱层析方法(EA:PE＝0～30％)纯化得到黄色固体标题化合物(540mg)。
MS m/z(ESI):365.1[M+H]+。
步骤3：(S)-4-(7-(3-(N-(叔丁氧羰基)乙酰胺)异喹啉-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体25-5)的合成
室温下将中间体25-3(540mg,1.48mmol)溶于二氧六环(15mL)，然后加入中间体25-4(500mg,0.99mmol)，碳酸铯(806mg)，RuphosPd-G3(83mg)，室温下抽换N2三次，反应液在90℃搅拌反应12小时至反应完全。反应液过滤，滤液减压浓缩，所得粗品用硅胶柱层析方法(MeOH:DCM＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(447mg)。
MS m/z(ESI):790.3[M+H]+。
步骤4：乙酰基(1-(4-((S)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体25-6)的合成
室温下将中间体25-5(447mg,0.56mmol)溶于四氢呋喃(2mL)和异丙醇(4mL)中，室温下加入氢氧化钯\碳(100mg,10％,Wt＝50％)，然后室温下抽换氢气3次，氢气氛下室温搅拌2个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(354mg)。
MS m/z(ESI):656.3[M+H]+。
步骤5：乙酰基(1-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)异喹啉-3-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体25-7)的合成
将中间体25-6(354mg,0.54mmol)溶解到二氯甲烷(10mL)中，在0℃冰浴下加入三乙胺(163.6mg)，滴加丙烯酰氯(48.6mg,0.54mmol)的二氯甲烷溶液(5mL)，加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。加入水(10mL)终止反应，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，所得粗品用硅胶柱层析方法(MeOH:DCM＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(177mg)。
MS m/z(ESI):710.2[M+H]+。
步骤6：N-(1-(4-((S)-4-丙烯酰-3-(氰甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-甲基吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)异喹啉-3-基)乙酰胺(化合物25)的合成
将中间体25-7(320mg,0.60mmol)溶解到二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，反应液在室温下反应2小时至反应完全。反应液减压浓缩，所得粗品用高效液相制备色谱法纯化，得到黄色固体目标化合物(14.3mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):610.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.14(s,0.30H,HCOOH),8.11-7.99(m,2H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(t,J＝7.6Hz,1H),7.46(t,J＝7.6Hz,1H),6.97-6.77(m,1H),6.20(d,J＝18.4Hz,1H),5.79(d,J＝12.4Hz,1H),5.07-4.70(m,1H),4.60-4.35(m,4H),4.17-3.93(m,3H),3.83-3.68(m,1H),3.66-3.53(m,1H),3.51-3.41(m,2H),3.28-3.06(m,4H),3.06-2.91(m,4H),2.83(s,3H),2.33-2.08(m,4H),2.04-1.71(m,3H)。
实施例25、2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-((S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物26)
步骤1：(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代吡咯烷-2-羧酸苄酯(中间体26-2)的合成
室温下将(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代吡咯烷-2-羧酸(5.0g,21.8mmol)溶于无水乙腈(50mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(8.4g，65.4mmol)和苄溴(5.6g，32.7mmol)，反应液在室温搅拌过夜，TLC检测反应完毕。将反应液减压浓缩后，倒入水中，乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:5)纯化，得到无色液体标题化合物(5.7g)。
MS m/z(ESI):220.1[M-Boc]-。
步骤2：(S)-1-(叔丁氧基羰基)-4,4-二氟吡咯烷-2-羧酸苄酯(中间体26-3)的合成
室温下将中间体26-2(5.7g,17.8mmol)溶于二氯甲烷(80mL)中，0℃条件下滴加二乙胺基三氟化硫(8.6g53.6mmol),滴加完毕，反应液在氮气氛室温过夜反应。将反应液倒入冰水中，二氯甲烷萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:5)纯化，得到淡黄色液体标题化合物(5g)。
MS m/z(ESI):364.2[M+Na]+。
步骤3：(S)-4,4-二氟吡咯烷-2-羧酸苄酯(中间体26-4)的合成
室温下将中间体26-3(10g,28.6mmol)溶于无水二氯甲烷(50mL)中，室温下加入4M盐酸二氧六环(20ml)，反应液在氮气氛围下室温搅拌2小时至反应完全。饱和碳酸钠溶液滴加入体系中，pH调至9到10，水相用二氯甲烷萃取，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:1)纯化得到淡黄色液体标题化合物(5.6g)。
MS m/z(ESI):242.2[M+H]+。
步骤4：(S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-羧酸苄酯(中间体26-5)的合成
室温下将中间体26-4(5.5g，22.8mmol)和碳酸钾(6.3g,45.6mmol)加入DMF(50mL)溶液中。反应液搅拌3分钟后，滴加氘代碘甲烷(3.3g，22.8mmol)，滴加完毕后反应液在氮气氛围下室温搅拌2小时。反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:3)纯化得到淡黄色液体标题化合物(5.2g)。
MS m/z(ESI):259.2[M+H]+。
步骤5：(S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-甲醇(中间体26-6)的合成
将中间体26-5(5.2g,20mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中，降温至0℃，滴加2.5M的铝锂氢溶液(8ml，20mmol)反应液在氮气气氛下室温搅拌2小时至反应完全。少量饱和硫酸钠溶液淬灭，过滤，滤液经减压浓缩，粗品经硅胶柱色谱层析法(洗脱剂梯度：乙酸乙酯：石油醚＝1:1)得到淡黄色液体标题化合物(1.1g)。
MS m/z(ESI):155.2[M+H]+。
步骤6：(2S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(8-甲基萘-1-基)-2-(甲基亚磺酰基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体26-8)的合成
室温下将中间体26-7(0.6g,1.03mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，0℃再加入间氯过氧苯甲酸(0.21g,1.03mmol)，0.5小时后反应完全。将反应液倾倒入冰水中，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(0.5g)。
MS m/z(ESI):595.1[M+H]+。
步骤7：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体26-9)的合成
室温下将中间体26-6(0.26g,1.68mmol)溶于四氢呋喃(5mL)，然后在0℃下加入1M叔丁醇钾四氢呋喃溶液(1mL,1mmol)，搅拌反应0.5小时后，在0℃下加入中间体26-7(0.5g,0.84mmol),反应液室温搅拌反应0.5小时至反应完全。反应液用水猝灭，混合物用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱(MeOH:DCM＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(0.34g)。
MS m/z(ESI):685.2[M+H]+。
步骤8：2-((S)-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体26-10)的合成
室温下将中间体26-9(150mg,0.22mmol)溶于四氢呋喃(2mL)和异丙醇(4mL)中，室温下加入氢氧化钯/碳(100mg)和钯/碳(50mg)，然后室温下抽换氢气3次，室温搅拌3个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到棕色固体粗品(100mg)。
MS m/z(ESI):551.2[M+H]+。
步骤9：2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-4,4-二氟-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物26)的合成
将中间体26-10(100mg,0.18mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)和丙烯酰氯(16mg,0.18mmol)。加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。反应液用清水(10mL)稀释，二氯甲烷(20mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到的粗品.用高效液相制备色谱法纯化得到目标化合物(11mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):605.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(s,0.3H,HCOOH),7.80–7.62(m,2H),7.52–7.18(m,4H),6.90–6.78(m,1H),6.17(d,J＝16Hz,1H),5.76(d,J＝12Hz,1H),4.95–4.73(m,1H),4.42-4.18(m,3H),4.13–3.79(m,4H),3.77–3.35(m,4H),3.28-3.20(m,2H),3.18–2.94(m,4H),2.93–2.77(m,3H),2.76–2.52(m,3H),2.18-2.10(m,1H).
实施例26、2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物27)
步骤1：(S)-5-(叔丁氧羰基)-5-氮螺环[2.4]庚烷-6-甲酸苄酯(中间体27-2)的合成
室温下将(S)-5-(叔丁氧羰基)-5-氮螺环[2.4]庚烷-6-甲酸(27-1)(7g，29mmol)，N,N-二异丙基乙胺(11.2g，87mmol)和溴苄(7.4g，43mmol)加入无水乙腈(100ml)溶液中，室温30中搅拌过夜反应。TLC检测反应完毕，将溶剂浓缩除去约一半，倒入水(300ml)中。用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩干，粗品湿法上样过柱纯化(洗脱梯度石油醚：乙酸乙酯＝10:1)，得淡黄色液体标题化合物(9.2g)。
MS m/z(ESI):354.2[M+Na]+。
步骤2：(S)-5-氮螺环[2.4]庚烷-6-甲酸苄酯(中间体27-3)的合成
室温下中间体27-2(9.2g，28mmol)加入到无水二氯甲烷(50ml)中，然后滴加4M浓度的盐酸二氧六环(20ml)，滴加完毕室温搅拌2小时。TLC检测反应完毕，用饱和碳酸钠调节pH到9-10，补加二氯甲烷(50ml)。有机层无水硫酸钠干燥，浓缩干。粗品过柱纯化(洗脱梯度石油醚：乙酸乙酯＝2:1)，得淡黄色液体标题化合物(3.5g)。
MS m/z(ESI):232.2[M+H]+。
步骤3：(S)-5-(甲基-d3)-5-氮螺环[2.4]庚烷-6-甲酸苄酯(中间体27-4)的合成
室温下将中间体27-3(3g，13mmol)和碳酸钾(3.6g，26mmol)加入到无水DMF(50ml)中，氮气保护下降温至0-10℃，滴加氘代碘甲烷(1.9g，13mmol)。滴加完毕后室温搅拌30分钟，TLC检测反应完毕。将反应液倒入水中，产品用乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩干，过柱纯化(洗脱梯度石油醚：乙酸乙酯3:1)，得淡黄色液体标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):249.1[M+H]+。
步骤4：(S)-(5-(甲基-d3)-5-氮螺环[2.4]庚烷-6-基)甲醇(中间体27-5)的合成室温下将中间体27-4(1.5g，6mmol)无水THF(20ml)中，氮气保护下降温至0-10℃，滴加2.5M铝锂氢溶液(7.2ml，6mmol)。滴加完毕后室温搅拌60分钟，TLC检测反应完毕。向反应液中加入约0.5ml饱和硫酸钠溶液，浓缩干，二氯甲烷溶解，无水硫酸钠干燥，浓缩干。过柱纯化(洗脱梯度二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得淡黄色液体标题化合物(0.3g)。
MS m/z(ESI):145.2[M+H]+。
步骤5：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体27-7)的合成
零摄氏度下将叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(0.25mL 0.25mmol)缓慢加入中间体27-6(102mg,0.173mmol,可根据实施例26方法制备)的四氢呋喃(3mL)溶液中。反应液搅拌3分钟后，滴加中间体27-5(50mg0.347mmol)的四氢呋喃溶液，滴加完毕后反应液在氮气氛围下零度搅拌10分钟至反应完全。水(30mL)加入反应液，乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(75mg)。
MS m/z(ESI):675.4[M+H]+。
步骤6：2-((S)-4-(2-(((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体27-8)的合成
室温下将中间体27-7(75mg,0.11mmol)溶于异丙醇(3mL)中，加入氢氧化钯碳(30mg)，反应液在氢气氛下室温搅拌2小时至反应完全。过滤，滤液经减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(53mg)。
MS m/z(ESI):541.4[M+H]+。
步骤7：2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-(((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物27)的合成
室温下将三乙胺(20mg,0.196mmol)加入中间体27-8(150mg,0.28mmol)的无水二氯甲烷(3mL)溶液中，零度下缓慢滴加丙烯酰氯(9mg,0.098mmol)的无水二氯甲烷溶液，滴加完毕后继续搅拌10分钟，TLC检测反应完毕。水(30mL)加入反应液，二氯甲烷萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，粗品用高效液相制备色谱法：Waters 2767/QDa制备色谱仪，流动相A:H2O(0.1％FA)流动相B:乙腈，色谱柱：Prepsunfire C18 OBD 19*250mm 10um，运行梯度：10％乙腈运行2分钟，20％-40％乙腈运行至7分钟，95％乙腈运行至16分钟，10％乙腈运行至18分钟。得到目标化合物(12.44mg)。
MS m/z(ESI):595.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.23(s,0.39H,HCOOH),7.77-7.68(m,2H),7.49-7.43(m,1H),7.39-7.26(m,3H),6.96-6.77(m,1H),6.19(d,J＝16.4Hz,1H),5.86–5.74(m,1H),5.03-4.70(m,1H),4.50–4.25(m,2H),4.19–3.82(m,5H),3.77-3.66(m,2H),3.16-2.99(m,4H),2.93-2.86(m,4H),2.82–2.67(m,2H),2.66–2.53(m,2H),2.48–2.32(m,1H),1.99-1.94(m,1H),1.64–1.51(m,1H),0.44(s,4H).
实施例27、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物28)
步骤1：(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(中间体28-3)的合成
零摄氏度下将叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(0.56mL 0.56mmol)缓慢加入起始原料28-1(102mg,0.173mmol,可根据专利US 20190270743报道方法合成)的四氢呋喃(10mL)溶液中。反应液搅拌3分钟后，滴加中间体28-2(124mg,0.86mmol,可根据实施例26方法合成)的四氢呋喃溶液，滴加完毕后反应液在氮气氛围下零度搅拌10分钟至反应完全。水(30mL)加入反应液，乙酸乙酯萃取，有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相于无水硫酸钠中干燥，减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(120mg)。
MS m/z(ESI):611.2[M+H]+。
步骤2：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体28-4)的合成
室温下将中间体28-3(120mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，然后加入4M盐酸1，4二氧六环溶液(2mL)，搅拌反应1小时至反应完全。加入固体Na2CO3至pH＝10，过滤旋干滤液，得到粗品标题化合物直接用于下步反应(100mg)。
MS m/z(ESI):561.2[M+H]+。
步骤3：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-5-(甲基-d3)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-6-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物28)的合成
将中间体28-4(100mg,0.18mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(50.67mg,0.39mmol)和丙烯酰氯(17mg,0.19mmol)。加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。反应液用清水(10mL)稀释，二氯甲烷(20mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到的粗品。用高效液相制备色谱法纯化得到目标化合物(10mg).
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物.
MS m/z(ESI):615.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.47(s,0.16H,HCOOH),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.61(t,J＝7.2Hz,1H),7.52(d,J＝6.4Hz,1H),7.48-7.41(m,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,1H),7.26–7.17(m,1H),6.69–6.47(m,1H),6.39(d,J＝16.7Hz,1H),5.82(d,J＝10.9Hz,1H),5.20–4.65(m,1H),4.61–4.35(m,2H),4.31-4.24(m,1H),4.14-4.07(m,2H),3.97–3.76(m,2H),3.68-3.38(m,2H),3.27-3.00(m,5H),2.94–2.70(m,3H),2.66–2.50(m,2H),2.16-2.11(m,1H),1.73–1.65(m,1H),0.67-0.48(m,4H).
实施例28、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物29)
步骤1：(S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-2-(氰基甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体29-2)的合成
室温下将三(二亚苄基丙酮)二钯(110mg,0.12mmol)和2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(112mg,0.24mmol)溶于甲苯(2mL)中，室温下吹入氮气1分钟，然后110℃下搅拌0.5个小时，微波管冷却至室温时，加入中间体29-1(0.6g,1.17mmol,可根据实施例21方法合成)，1-溴-8-氯萘(0.57g,2.34mmol)和碳酸铯(0.76g,2.34mmol)，室温下通入氮气，然后110℃下搅拌18个小时至反应完全。混合物倒入水中用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱(甲醇:二氯甲烷＝0～10％)纯化棕色固体标题化合物(450mg)。
MS m/z(ESI):669.1[M+H]+
步骤2：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体29-3)的合成
室温下将中间体29-2(150mg,0.22mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，然后依次加入二氯化钯(39mg,0.22mmol)，三乙基硅烷(52mg,0.44mmol)和三乙胺(22mg,0.22mmol)，反应液室温下搅拌0.5个小时至反应完全。混合物过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用制备硅胶板(甲醇:二氯甲烷＝1:10)纯化得到棕色固体标题化合物(80mg)。
MS m/z(ESI):535.1[M+H]+
步骤3：2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物29)的合成
将中间体29-3(80mg,0.15mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.3mmol)和丙烯酰氯(14mg,0.15mmol)。加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。反应液用水(10mL)稀释，二氯甲烷(20mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到的粗品。用高效液相制备色谱法纯化得到目标化合物(10mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化。
MS m/z(ESI):589.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.21(s,0.21H HCOOH),7.92(d,J＝8Hz,1H),7.74(m,1H),7.62–7.48(m,2H),7.45(t,J＝8Hz,1H),7.38-7.31(m,1H),6.85(s,1H),6.18(d,J＝16Hz,1H),5.78(d,J＝12Hz,1H),5.03-4.71(m,1H),4.48-4.32(m,1H),4.27–4.10(m,2H),4.10–3.91(m,3H),3.90–3.55(m,2H),3.52-3.42(m,2H),3.25–2.98(m,5H),2.98–2.83(m,2H),2.75-2.65(m,1H),2.24–2.09(m,1H),1.96-1.87(m,1H),1.71-1.63(m,2H),1.61–1.50(m,1H).
实施例29、2-((S)-1-丙烯酰-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物30)
步骤1：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体30-2)的合成
室温下将中间体30-1(200mg,0.39mmol,可根据实施例21方法制备),1-溴-8-甲基萘(130mg,0.59mmol),RuPhos-Pd-G3(50mg,0.06mmol)和碳酸铯(0.76g,2.34mmol)依次加入甲苯溶液中(3mL)中，然后在氮气氛下110℃搅拌18个小时至反应完全。混合物倒入水中用乙酸乙酯萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用制备硅胶板(甲醇:二氯甲烷＝0～10％)纯化得到棕色固体标题化合物(27mg)。
MS m/z(ESI):649.3[M+H]+
步骤2：2-((S)-4-(2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体30-3)的合成
室温下将中间体30-2(70mg,0.11mmol)溶于异丙醇(3mL)中，加入氢氧化钯碳(10mg)，反应液在氢气氛下室温搅拌6小时至反应完全。过滤，滤液经减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(30mg)。
MS m/z(ESI):515.2[M+H]+
步骤3：2-((S)-1-丙烯酰-4-(2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-7-(8-甲基萘-1-基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物30)的合成
将中间体30-3(30mg,0.06mmol)溶解到二氯甲烷(5mL)中，在0℃冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.3mmol)和丙烯酰氯(14mg,0.15mmol)。加完后反应液在0℃下继续反应30分钟至反应完全。反应液用清水(10mL)稀释，二氯甲烷(20mL*2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤旋干得到的粗品。用高效液相制备色谱法纯化得到目标化合物(2.26mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):569.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.39(s,0.48H,HCOOH),7.75–7.60(m,2H),7.46–7.32(m,2H),7.24–7.19(m,2H),6.58(s,1H),6.37(d,J＝16.9Hz,1H),5.81(d,J＝10.4Hz,1H),4.77–4.74(m,1H),4.43–4.36(m,1H),4.12–4.19(m,3H),3.99-3.92(m,1H),3.86-3.73(m,1H),3.59-3.49(m,3H),3.26–3.10(m,4H),3.08–2.97(m,1H),2.91(s,3H),2.76–2.59(m,3H),2.25–2.07(m,4H),2.01–1.95(m,2H).
实施例30、2-((S)-1-(2-氟丙烯酰)-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物31)
步骤1：4-((S)-4-((苯氧基)羰基)-3-(氰基甲基)哌嗪-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁基酯(中间体31-3)的合成
室温下将中间体31-2(0.8g,6.8mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，然后在0℃下加入1M叔丁醇钾四氢呋喃溶液(6.8mL)，搅拌反应0.5小时后，在0℃下加入中间体31-1(3g,4.9mmol)，反应液室温搅拌反应0.5小时至反应完全。反应液用水(20mL)淬灭，混合物用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，得到的粗品用硅胶柱层析方法(甲醇:二氯甲烷＝0～10％)纯化得到黄色固体标题化合物(2g)。
MS m/z(ESI):609.2[M+H]+。
步骤2：(S)-2-(氰基甲基)-4-(2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体31-4)的合成
室温下将中间体31-3(2g,3.2mmol)溶于二氯甲烷(15mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，反应液在室温下搅拌2小时。TLC检测反应完毕后，减压浓缩，残余物加入水(10mL)，用饱和NaHCO3水溶液调节pH至7～8，二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，得到黄色固体标题化合物(1.5g)。
MS m/z(ESI):509.3[M+H]+。
步骤3：(S)-2-(氰基甲基)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(中间体31-6)的合成
室温下将中间体31-4(1.5g,2.9mmol)溶于二氧六环(15mL)中，然后依次加入1-溴-8-氯萘(1.5g,5.8mmol)，碳酸铯(1.9g)，Ruphos(135mg)，Pd2(dba)3(133mg),反应液在氮气氛围下，90℃搅拌16小时。TLC检测反应完毕后，加入水(30mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，合并有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，所得粗品经硅胶柱层析方法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝15:1)纯化，得到黄色固体标题化合物(800mg)。
MS m/z(ESI):695.2[M+H]+。
步骤4：2-((S)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体31-7)的合成
室温下将中间体31-6(500mg,0.72mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(364mg)，三乙基硅烷(418mg)，PdCl2(13mg)，反应液在氮气氛下室温搅拌0.5个小时，TLC检测反应完毕。加入水(30mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相再用饱和食盐水(20mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，所得粗品固体标题化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):561.4[M+H]+。
步骤5：2-((S)-1-(2-氟丙烯酰)-4-(7-(3-(甲氧基甲氧基)萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(中间体31-9)的合成
室温下将中间体31-7(400mg,0.71mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入DIEA(275mg)，HATU(324mg),再加入2-氟丙烯酸(31-8)(64mg,0.71mmol)，在室温下搅拌2个小时，TLC检测反应完毕。水(15mL)加入反应液，二氯甲烷(10mL X 3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，经硅胶柱层析方法(洗脱剂梯度：二氯甲烷：甲醇＝15:1)纯化，得到黄色固体目标化合物(400mg)。
MS m/z(ESI):633.2[M+H]+。
步骤6：2-((S)-1-(2-氟丙烯酰)-4-(7-(3-羟基萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)哌嗪-2-基)乙腈(化合物31)的合成
室温下将中间体31-9(200mg,0.32mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，0℃下加入三甲基溴硅烷(245mg,1.6mmol)。反应液在0℃下搅拌反应0.5小时后，加入水(10mL)，用饱和碳酸氢钠水溶液调节反应液pH至7～8，再用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，粗品60mg用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(14mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):589.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,0.79H,HCOOH),8.07(d,J＝8.4Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.39-7.35(m,1H),7.28-7.24(m,1H),6.87(d,J＝4Hz,1H),6.79(d,J＝4Hz,1H),5.39-5.27(m,2H),4.91-4.89(m,1H),4.45-4.43(m,2H),4.35-4.09(m,5H),3.48-3.31(m,5H),3.19-3.00(m,6H),2.68-2.66(m,1H),2.23-2.18(m,1H),1.96-1.82(m,3H)
实施例31、4-(4-((S)-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙烯酰)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物32)
步骤1：4-(4-((S)-3-(氰基甲基)-4-(2-氟丙烯酰)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,8-二氢吡啶[3,4-d]嘧啶-7(6H)-基)萘-2-基乙酸酯(化合物32)的合成
室温下将化合物31(120mg,0.2mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，加入DIEA(79mg,0.6mmol),乙酰氯(16mg,0.2mmol)。反应液在室温下搅拌反应0.5小时后，加入水(10mL)，再用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥后过滤，滤液减压浓缩，粗品用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(14mg)。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
MS m/z(ESI):631.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(s,0.24H,HCOOH),8.21-8.20(m,1H),7.85-7.82(m,1H),7.56-7.41(m,2H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),6.97(d,J＝2.0Hz,1H),5.38-5.27(m,2H),5.10-4.98(m,1H),4.40-4.36(m,2H),4.32-4.04(m,5H),3.44-3.30(m,5H),3.16-2.99(m,5H),2.88-2.86(m,1H),2.47-2.41(m,1H),2.32(s,3H),2.15-2.10(m,1H),1.94-1.80(m,2H),1.76-1.67(m,1H).
实施例32、2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(化合物33)
步骤1：2-((S)-4-(7-(8-氯萘-1-基)-2-(((S)-1-(甲基-d3)吡咯烷-2-基)甲氧基)-5,6,7,8-四氢吡啶[3,4-d]嘧啶-4-基)-1-(2-氟丙烯酰)哌嗪-2-基)乙腈(化合物33)的合成
室温下将中间体33-1(50mg,0.09mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入DIEA(24mg)，HATU(34mg),再加入2-氟丙烯酸(8.1mg,0.09mmol)，在室温下搅拌2个小时，TLC检测反应完毕。水(15mL)加入反应液，二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相经饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥、过滤。滤液减压浓缩得到粗品，用高效液相制备色谱法纯化得到白色固体目标化合物(6.48mg)。
MS m/z(ESI):607.3[M+H]+。
高效液相制备色谱法:沃特世waters(waters)2767制备色谱仪，流动相A(Mobilephase A):0.1％FA in water,流动相B(Mobile phase B):乙腈，色谱柱:Sunfire(PrepC18 OBD 19*250mm 10um),梯度(Gradient):10％ACN运行3min,30％-35％ACN运行至13min，95％ACN运行至16min,10％ACN运行至18min结束纯化，得到目标化合物。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,2.47H,HCOOH),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.4Hz,1H),7.57–7.45(m,2H),7.41–7.29(m,2H),5.45–5.19(m,2H),5.01-4.88(m,1H),4.57–4.19(m,7H),3.75-3.71(m,1H),3.64-3.57(m,1H),3.51–3.43(m,1H),3.23–3.12(m,6H),2.97-2.95(m,1H),2.75-2.72(m,2H),2.22-2.19(m,1H),1.96-1.85(m,3H).
生物学活性及相关性质实施例
实施例33、KRAS G12C蛋白结合试验
试验原理简介:KRAS(G12C)-GDP蛋白和待测化合物共价结合之后，蛋白整体的分子量会有所提高，利用LC-MS定量分析分子量提高的蛋白和分子量不变的蛋白含量的比例，得到在一定化合物浓度和一定时间点下，KRAS(G12C)-GDP蛋白被待测化合物共价结合的比例，以表征待测化合物结合KRAS(G12C)-GDP蛋白的能力。实验方法主要参考文献:Janes MRet al,Targeting KRAS Mutant Cancers with a Covalent G12C-Specific Inhibitor,Cell 2018Jan 25；172(3):578-589.
实验材料和仪器:
GDP购自Sigma(USA)。
KRAS(G12C)由康龙化成提供(中国，北京)。
DMSO购自Sigma(USA)。
Formic acid购自Honeywell(USA)。
Waters Acquity I Class(Waters，USA)。
Sepax Bio-C4，2.1x50mm，3μm(Sepax，USA)。
实验方法:
1.将GDP装载到KRAS(G12C)蛋白上:将等体积的2 x GDP装载缓冲液和142μM的KRAS(G12C)蛋白轻柔混合，室温孵育1.5小时。
2.KRAS-G12C和化合物的结合反应:在96孔板中配置合适的待测浓度的化合物，加入GDP-loaded KRAS(G12C)和孵育缓冲液，室温孵育5min，KRAS(G12C)蛋白终浓度为2μM，加入Formic acid终止反应，转移到1.5mL EP管中，15000rpm离心10分钟。
3.上机进行LC-MS检测。
数据分析:
结合的KRAS(G12C)％＝复合物的峰高/[复合物的峰高+未结合的KRAS(G12C)的峰高]x 100％
实验结果:
在本试验条件下，受试化合物与KRAS G12C蛋白的结合率越高，则表示受试化合物与KRAS G12C蛋白的结合活性越强；反之，结合率越低，则表示受试化合物与KRAS G12C蛋白的结合活性越弱。受试化合物与KRAS G12C蛋白的结合活性具体见表1。
表1
| 化合物 | 结合活性 |
| 化合物1 | +++ |
| 化合物2 | - |
| 化合物3 | - |
| 化合物4 | +++ |
| 化合物5 | ++ |
| 化合物6 | +++ |
| 化合物7 | ++ |
| 化合物8 | +++ |
| 化合物9 | +++ |
| 化合物10 | +++ |
| 化合物11 | + |
| 化合物12 | +++ |
在上表中，用于指示结合活性的符号所表示含义为:
+++表示受试化合物与KRAS G12C蛋白结合率范围为>70％；
++表示受试化合物与KRAS G12C蛋白结合率范围为50～70％(含70％)；
+表示受试化合物与KRAS G12C蛋白结合率范围为20～50％(含50％)；
-表示受试化合物与KRAS G12C蛋白结合率范围为<20％(含20％)；
试验结果显示，本发明四氢吡啶并嘧啶类化合物能与KRAS G12C蛋白结合，且部分化合物与KRAS G12C蛋白的结合率大于70％，显示出很强的蛋白结合活性。
实施例34、人非小细胞肺癌H358细胞增殖抑制试验
试验原理简介:
人非小细胞肺癌H358携带KRAS-G12C突变，增殖活性由KRAS突变基因驱动，可以抑制KRAS-G12C活性的化合物理论上讲即可以抑制H358增殖的活性，可以通过CTG检测来表征。实验方法主要参考文献:Janes MR et al,Targeting KRAS Mutant Cancers with aCovalent G12C-Specific Inhibitor,Cell 2018Jan 25；172(3):578-589.
实验材料和仪器:
NCI-H358细胞购自ATCC(USA)。
384孔板购自Corning(USA)。
RPMI-1640培养基购自Invitrogen(USA)。
FBS购自Gibco(USA)。
Penicillin-streptomycin购自Invitrogen(USA)。
1640完全培养基:RPMI1640培养基+10％FBS+1％Penicillin-streptomycin
Celltiter Glo assay kit(2D-CTG试剂)购自Promega(USA)。
Echo 550 Liquid Handler(Labcyte,USA)
读板仪器:Envision(PerkinElmer,USA)。
实验方法:
1.第一天，384孔板中每孔铺800个H358细胞，每孔加入40μL 1640完全培养基，37℃，5％CO2培养箱中培养过夜。
2.第二天，用Echo 550每孔加入200nL待测化合物，37℃，5％CO2培养箱培养。
3.第五天，每孔加入20μL 2D-CTG试剂，室温孵育20min。
4.Envision读取Luminescence信号。
数据分析:
利用non-linear regression equation拟合化合物的IC50:
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:Log of cpd concentration
Y:Percent inhibition(％inh)
试验结果:
在本试验条件下，受试化合物对带有KRAS G12C突变的人非小细胞肺癌H358细胞增殖具有显著的抑制活性。其中，化合物13、化合物18对H358细胞的抗增殖活性明显优于阳性对照化合物1；此外，化合物32(化合物31的乙酰化物)对H358细胞的抗增殖活性也显著优于化合物31。受试化合物与KRAS G12C蛋白的结合活性具体见表2。
表2
实施例35、人非小细胞肺癌H358细胞p-ERK抑制试验
试验原理简介：
人非小细胞肺癌H358携带KRAS G12C突变，ERK的磷酸化在KRAS信号通路的下游，具有KRAS G12C抑制活性的化合物理论上即可以抑制H358细胞中ERK的磷酸化(p-ERK)。p-ERK可以通过AlphaLISA试剂盒来定量检测，检测方法可参考p-ERK 1/2 AlphaLISA AssayKit说明书。
实验材料和仪器：
NCI-H358细胞购自ATCC(USA)。
384孔板购自Corning(USA)。
HBSS购自Invitrogen(USA)。
p-ERK 1/2 AlphaLISA Assay Kit购自PerkinElmer(USA)。
Echo 550 Liquid Handler(Labcyte，USA)
读板仪器：Envision(PerkinElmer,USA)。
实验方法：
1.在384孔板中每孔种入30,000个H358细胞/8μL HBSS，37℃，5％CO2培养箱中，孵育2h。
2.用Echo 550在每孔加入40nL稀释好的化合物，DMSO终浓度为0.5％，于37℃，5％CO2培养箱中培养一定时间。
3.每孔加入2μL 5x裂解液，1000rpm，室温离心1min，350rpm震荡10min。
4.每孔加入5μL配置好的Acceptor Mixture，1000rpm，室温离心1min，350rpm震荡2min。
5.每孔加入5μL配置好的Donor Mixture，1000rpm，室温离心1min，350rpm震荡2min。
6.于25℃培养箱中孵育过夜。
7.Envision读数。
数据分析：
利用non-linear regression equation拟合化合物的IC50：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
X:Log of cpd concentration
Y:％inhibition(AlphaLISA signal)
试验结果:
在本试验条件下，化合物13和化合物18在不同作用时间下对H358细胞ERK的磷酸化具有显著的抑制活性，半数抑制浓度(IC50)均在100nmol/L以下。同时，在各自受试条件下，化合物13和化合物18对H358细胞ERK磷酸化的抑制活性优于阳性对照化合物1。受试化合物对H358细胞ERK磷酸化的抑制活性具体见表3。
表3
Claims (5)
1.式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
R1选自
R2选自
R3选自
R4选自-CH3、-CD3、环丙基；
R5选自H或F。
2.根据权利要求1所述的式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，R1选自
R2选自
R3选自
R5选自H或F。
3.以下化合物或其药学可接受的盐：
4.一种药物组合物，所述组合物包含权利要求1至3任一项的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料。
5.权利要求1至3任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或者治疗KRASG12C相关疾病的药物中的用途。
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