CN113387962A - 吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物、其药物组合物及应用 - Google Patents

吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物、其药物组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种如式(I)所示的吡唑[3,4‑d]嘧啶‑3‑酮衍生物和/或其药学上可接受的盐，以及含有如式(I)所示化合物的组合物和/或其药学上可接受的盐，制备方法和其作为Wee1和/或PLK1抑制剂的用途及其作为癌症的化学疗法或放射性疗法的增敏剂中的用途；本发明的吡唑[3,4‑d]嘧啶‑3‑酮衍生物可以有效的抑制Wee1和/或PLK1及相关信号通路，具有良好的治疗和/或缓解癌症的作用。

Description

吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物、其药物组合物及应用
技术领域
本发明涉及一种可以抑制Wee1和/或PLK1及其信号通路的吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物及其药学上可接受的盐，包含所述衍生物及其药学上可接受盐的药物组合物，以及所述衍生物及其药学上可接受盐在治疗由Wee1和/或PLK1介导的疾病及制备用于治疗Wee1和/或PLK1介导的疾病的药物方面的应用。
背景技术
Wee1(Wee1 G2检测点激酶；基因编号：7465)和PLK1(polo样激酶1；基因编号：5347)都是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族中的一员。
Wee1可直接磷酸化细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)，磷酸化位点为CDK1的酪氨酸15残基，该位点是一个抑制性磷酸化位点，对CDK1活性起消极调节作用。G2检测点的激活主要是通过抑制有丝分裂，促进细胞周期蛋白B-CDK1复合物。正常细胞在G1逮捕期内对损伤的DNA进行修复，然而癌细胞G1-S检测点常常缺失，需要依靠G2-M检测点的功能来进行DNA修复。例如，P53缺陷肿瘤细胞缺乏G1检测点的功能，因而依赖G2检测点作为细胞周期停滞对DNA损伤进行应答反应。DNA受损后，G2检测点阻止受损细胞进入有丝分裂，进而保护其免受有丝分裂灾难及细胞凋亡。Wee1是G2检测点功能发挥中必不可少的因素。通过Wee1抑制剂来废除G2检测点可能选择性的使P53缺陷性癌细胞对DNA损伤敏感，避免对周围正常组织产生影响。Wee1也调节S期的CDK活性，阻止正常的S期进程中DNA损伤的诱导。此外，Wee1在同源重组(HR)修复中起积极调解作用，同源重组修复是DNA双链断裂修复的重要路径。Wee1的高度表达与多种类型癌症的不良预后有关。抑制Wee1可引起一些P53失活肿瘤细胞的凋亡。抑制Wee1可使对化疗及放疗产生抵抗的癌细胞变的敏感。最新的研究(SophiaX.Pfister,et al,2015)展示了合成致死与H3K36me3缺失、部分癌细胞表观遗传学改变及Wee1抑制之间的相互作用，从而对Wee1抑制和更精确的靶向基因改变明确的癌症患者之间的关系提供了强有力的证据。
PLK1在细胞有丝分裂的起始和终止、中心体成熟和分离、染色体单体的分离、有丝分裂纺锤体组装和胞质分裂中起到重要作用。PLK1还参与DNA复制和染色体/微管动力学过程。此外，PLK1也参与DNA损伤应答的反应过程，包括DNA检查点的激活、维持记忆损伤修复。PLK1在所有胚胎组织及成年增殖性组织(例如睾丸和骨髓)中高表达，这些证据也表明细胞增殖是PLK1表达的主要驱动力。PLK1表达的异常增加与许多的肿瘤不良预后相关，研究表明，正常细胞的存活对PLK1的依赖型明显小于肿瘤细胞。PLK1表达的下调可调控多种蛋白水平发生变化，进一步下调促癌基因(Ras，C-myc和HIF)的表达和上调抑癌基因(p53和PTEN)的表达，导致抑制肿瘤细胞生长增值、并诱导肿瘤细胞的凋亡。此外，PLK1通过Ser53的磷酸化直接调节WEE1的活性，从而导致WEE1的泛素化和随后的蛋白酶体降解(van VugtMA,et al,2004)。
在多种不同类型的癌症中可见Wee1的上调，包括肝细胞癌(Tsutomu Masaki,etal,2003)，乳腺癌，宫颈癌，肺癌(Elizabeth Iorns,et al,2009)，鳞状细胞癌(Gry IreneMagnussen,et al,2013)，神经胶质瘤DIPG(Sabine Mueller,et al,2014)，恶性胶质瘤(Shahryar Mir,et al,2010；Darija Music,et al,2016)，成神经管细胞瘤(Peter SHarris,et al,2014)，白血病(Raoul Tibes,et al,2012；CC Porter,et al,2012)，黑色素瘤(Gry Irene Magnussen,et al,2012)，及卵巢癌(Ana Slipicevic,et al,2014)等。同时，在多种癌症中也发现PLK1的过表达，例如：卵巢癌、黑色素瘤，结直肠癌，非小细胞肺癌(Takai N,et al,2005)，膀胱癌(Yamamoto Y,et al,2006)，食管癌(Tokumitsu Y,,et al,1999)，胰腺癌(Gray PJ Jr,et al,2004)，前列腺癌(Weichert W,et al,2004)等。
因而，目前Wee1和PLK1成为癌症治疗领域高度引人注目的治疗靶点。除了已有的对Wee1和PLK1的研究外，仍然还有很多机遇去扩展它的应用并从中获益。目前尚无以Wee1和PLK1作为治疗靶点的药物上市。本发明所描述的化合物、其组合物和应用方法将有助于Wee1和PLK1抑制剂的发展，满足临床未满足的用药需求。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于，提供了一种新型吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物、其药物组合物及应用。本发明的吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-酮衍生物对Wee1和/或PLK1及相关信号通路具有良好的抑制作用，可以有效治疗和/或缓解癌症。
本发明提供了一种如式(I)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐；
Figure BDA0002972897270000021
其中，G为
Figure BDA0002972897270000022
X1为S、O或NRa，Y1为连接键或C(Rb)2；L1为S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
X2和Y2分别独立地为N或CRb；L2为连接键、S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
W为N或CH；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6烯基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基或5-6元杂芳基；
R2和R3分别独立地为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基为未取代，或者选择性地被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、-CD3、-CN、-NO2、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R2和R3分别为独立取代基，或者R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自氧代基、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基的取代基取代在任意位置；
R4为氢、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
R5为氢、-C(O)ORc、-C(O)Rc、-C(O)N(Rc)2、-S(O)1-2Rc、-S(O)(NH)Rc、-S(O)2N(Rc)2、-ORc、-N(Rc)2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-6烷基、3-8元杂环烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或5-6元杂芳基C1-6烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-6烷基、3-8元杂环烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或5-6元杂芳基C1-6烷基为未取代，或者选择性被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氨基C1-6烷基、-D、-CD3、-CN、-NO2、＝O、＝NRd、＝N-ORd、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R6为氢、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；
R5和R6分别为独立取代基，或者R5和R6通过-(CR2)mL3(CR2)n-连接形成杂环基团；
L3为连接键、-O-、-CO-、-S(O)2-、-S(O)(NH)-或-NR-；
每个R独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷基；或者，两个R与其共同连接的碳原子一起形成氧代基(＝O)；
每个Ra和每个Re分别独立地为氢或C1-6烷基；
每个Rb独立地为氢、卤素或C1-6烷基；
每个Rc和每个Rd分别独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基为未取代，或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
m和n分别为0～8的任一整数，并且，m+n≥1。
以下所述的如式I所述的所有实施方案、及任意实施方案的组合均包含在本发明如式I所示的结构式的范围中。
在一些实施方案中，Ra为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Rb为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Rc为H、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基和3-6元杂环烷基的取代基取代在任意位置。
在一些实施方案中，Rd为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Re为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，R2为C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-8环烷基、3-10元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基、苯基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基；所述R2为未取代，或者选择性被1～4个或1～3个取代基取代在任意位置；所述取代基定义如上所述。
在一些实施方案中，所述R2被取代时，选择性被如下1～4个或1～3个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、-CD3、-CN、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的取代基取代在任意位置；其中，Rd和Re的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述R2被取代时，选择性被如下1～3个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基和-CD3的取代基取代在任意位置。
在一些实施方案中，R2为C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、3-10元杂环烷基或3-8元杂环烷基C1-4烷基；所述R2为未取代，或者选择性被1～3个取代基取代在任意位置；所述取代基定义如上所述。
在一些实施方案中，R2为：
Figure BDA0002972897270000041
Figure BDA0002972897270000042
Figure BDA0002972897270000051
在一些实施方案中，R3为H。
在一些实施方案中，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000052
Figure BDA0002972897270000053
所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被一个或多个选自C1-6烷基或卤代C1-4烷基的取代基取代在任意位置。
在一些实施方案中，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被1-4个或1-3个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代在任意位置。
在一些实施方案中，所述R1为氢、卤素、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-3烷基、氨基C1-3烷基、C1-3烷氧基C1-3烷基或C1-4烷氨基C1-3烷基。
在一些实施方案中，所述R1为H、F、-CH3、-OCH3、-OCF3、-CH2OH或-CH2OCH3。
在一些实施方案中，所述R1为H、F、-CN、-CH3、-OCH3、-OCF3、-CH2OH或-CH2OCH3。
在一些实施方案中，所述R4为氢、C2-6烯基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被1～3个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
在一些实施方案中，所述R4为乙烯基、乙炔基、异丙基或环丙基。
在一些实施方案中，所述R5为H、-C(O)ORc、-C(O)Rc、-C(O)N(Rc)2、-S(O)1-2Rc、-S(O)(NH)Rc、-S(O)2N(Rc)2、-ORc、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基为未取代，或者选择性地被如下1-5个、1-4个或1-3个选自卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、-CN、-NO2、＝O、＝NRd、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的取代基取代在任意位置；其中，Rc、Rd和Re的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述R5为H、-OH、-NH2、-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-CH(CH3)2、-(CH2)3CH3、-C(CH3)3、
Figure BDA0002972897270000061
Figure BDA0002972897270000062
在一些实施方案中，R6为H。
在一些实施方案中，R5和R6通过-(CH2)mL3(CH2)n-相互连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，X1为O或NRa，Y1为连接键或C(Rb)2；L1为S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；Ra、Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述G为
Figure BDA0002972897270000071
X1为O或S，Y1为C(Rb)2，L1为C(O)；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述G为
Figure BDA0002972897270000072
X2为N或CRb，Y2为CRb，L2为C(O)；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述G为
Figure BDA0002972897270000073
X2为N或CRb，Y2为N或CRb，L2为连接键；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述G为
Figure BDA0002972897270000074
X2为N或CRb，Y2为N或CRb；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，所述G中，W为N。
在一些实施方案中，所述G为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000075
Figure BDA0002972897270000076
Figure BDA0002972897270000081
在一些实施方案中，如式(I)所示化合物和/或药学上可接受的盐为如式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)或(VII)所示化合物和/或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002972897270000082
其中，W、R1、R2、R4、R5和R6的定义如前所述。
在一些实施方案中，如式(I)所示化合物和/或药学上可接受的盐为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000083
Figure BDA0002972897270000091
Figure BDA0002972897270000101
Figure BDA0002972897270000111
Figure BDA0002972897270000121
在一些实施方案中，如式(I)所示化合物和/或药学上可接受的盐为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000122
Figure BDA0002972897270000131
Figure BDA0002972897270000141
Figure BDA0002972897270000151
Figure BDA0002972897270000161
一种如式(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐：
Figure BDA0002972897270000171
其中，X2和Y2分别独立地为N或CRb；
L2为连接键、S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
W为N或CH；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6烯基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基或5-6元杂芳基；
R2和R3分别独立地为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基为未取代，或者选择性地被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、-CN、-NO2、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R2和R3分别为独立取代基，或者R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自氧代基、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基的取代基取代在任意位置；
R4为氢、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
R5和R6通过-(CR2)mL3(CR2)n-、CR＝CR-(CR2)mL3(CR2)n-或-C≡C-(CR2)mL3(CR2)n-连接形成杂环基团；
L3为连接键、-O-、-CO-、-S(O)2-、-S(O)(NH)-或-NR-；
每个R独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷基；或者，两个R与其共同连接的碳原子一起形成氧代基(＝O)；
每个Ra和每个Re分别独立地为氢或C1-6烷基；
每个Rb独立地为氢、卤素或C1-6烷基；
每个Rc和每个Rd分别独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基为未取代，或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
m和n分别为0～8的任一整数，并且，m+n≥1。
以下所述的如式I’所述的所有实施方案、及任意实施方案的组合均包含在本发明如式I’所示的结构式的范围中。
在一些实施方案中，Ra为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Rb为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Rc为H、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基和3-6元杂环烷基的取代基取代在任意位置。
在一些实施方案中，Rd为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，Re为H或C1-6烷基。
在一些实施方案中，R2为C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-8环烷基、3-10元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基、苯基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基；所述R2为未取代，或者选择性被1～4个或1～3个取代基取代在任意位置；所述取代基定义如上所述。
在一些实施方案中，所述R2被取代时，选择性被如下1～4个或1～3个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、C1-4烷氧基C1-4烷基、C1-4烷氨基C1-4烷基、-CN、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1- 2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的取代基取代在任意位置；其中，Rd和Re的定义如前所述。
在一些实施方案中，R2为：
Figure BDA0002972897270000181
Figure BDA0002972897270000182
在一些实施方案中，R3为H。
在一些实施方案中，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000191
Figure BDA0002972897270000192
所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被一个或多个选自C1-6烷基或卤代C1-4烷基的取代基取代在任意位置。
在一些实施方案中，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被1-4个或1-3个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代在任意位置。
在一些实施方案中，所述R1为氢、卤素、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-3烷基、氨基C1-3烷基、C1-3烷氧基C1-3烷基或C1-4烷氨基C1-3烷基。
在一些实施方案中，所述R1为H、F、-CN、-CH3、-OCH3、-OCF3、-CH2OH或-CH2OCH3。
在一些实施方案中，所述R4为氢、C2-6烯基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被1～3个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
在一些实施方案中，所述R4为氢或乙烯基。
在一些实施方案中，R5和R6通过-(CR2)mL3(CR2)n-、-CH＝CH-(CR2)mL3(CR2)n-或-C≡C-(CR2)mL3(CR2)n-连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，R5和R6通过-CH＝CH-(CH2)mL3(CH2)n-或-C≡C-(CH2)mL3(CH2)n-相互连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，R5和R6通过-CH＝CH-(CR2)mL3(CR2)n-相互连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
在一些实施方案中，R5和R6通过-CH＝CH-(CR2)mL3(CR2)n-相互连接形成杂环基团；其中，
Figure BDA0002972897270000193
为E构型或Z构型；R2为H、甲基或羟基；L3为连接键、-O-或-S(O)2-；m为1、2、3或4；n为0、1、2或3。
在一些实施方案中，X2为N或CRb，Y2为CRb，L2为C(O)；W为N；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，X2为N或CRb，Y2为N或CRb，L2为连接键；Rb和R5的定义如前所述。
在一些实施方案中，基团
Figure BDA0002972897270000194
为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000195
Figure BDA0002972897270000201
在一些实施方案中，如式(I’)所示化合物和/或药学上可接受的盐为如下任一结构：
Figure BDA0002972897270000202
Figure BDA0002972897270000211
本发明还提供了所述如式(I)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐的制备方法，其为如下任一方法：
方法1：
Figure BDA0002972897270000212
其中，Lev为Br或I；
方法1中，所述R1、R2、R3、R4和G的定义均同前所述；方法1包括如下步骤：步骤1)将1a与G-Lev通过buchwald偶联反应得到化合物1b；步骤2)将化合物1b中的甲硫基用间氯过氧苯甲酸(m-CPBA)氧化为亚砜得到化合物1c；步骤3)将化合物1c和1d在碱性条件下反应得到通式I所示化合物。
方法1中，所述的条件和步骤可为本领域常规的反应的条件和步骤，本发明特别优选以下反应条件：步骤1)氮气保护下，在1,4-二氧六环溶剂中，在碱(1,2-N,N-二甲基乙二胺、碳酸钾)和氯化亚铜的作用下反应得到，所述剂的用量优选1～50mL/mmol化合物G-Lev，所述反应时间优选0-24小时，温度优选室温到溶剂回流，更优选为80～100℃，化合物G-Lev和1a的摩尔比优选1:0.9～1:1.5。步骤2)二氯甲烷溶剂中，用间氯过氧苯甲酸氧化化合物1b得到化合物1c；所述剂的用量优选1～50mL/mmol化合物1b，所述反应时间优选0-24小时，温度优选0℃～室温，化合物1b和m-CPBA的摩尔比优选1:1～1:3；步骤3)二氯甲烷或甲苯中，碱性条件下(N,N-二异丙基乙胺或三乙胺)，1c(1c’)和1d反应得到通式I所示化合物，所述剂的用量优选1～50mL/mmol化合物1c，所述反应时间优选0-24小时，温度优选室温到溶剂回流，化合物1c(1c’)、1d和碱的摩尔比优选1:0.9:1～1:2.5:2.5。
方法1中，当步骤2和步骤3溶剂均为二氯甲烷时，步骤2反应得到含有1c的反应液可以不经任何后处理直接投入步骤3反应。
在上述方法最后的合成步骤中使用对甲苯磺酸、盐酸、氯化氢、或三氟乙酸等酸性体系，或在纯化过程中，例如：prep-HPLC的流动相中存在上述酸性体系时，则所述的如式I所示的化合物将会是相应的对甲苯磺酸盐、盐酸盐或三氟乙酸盐等。上述方法最后的合成步骤的纯化过程中，例如：使用硅胶柱层析或prep-TLC的洗脱条件为石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、正己烷中的一种或多种、或prep-HPLC的流动相使用碳酸氢铵等碱性体系时，则所述的如式I或I’所示的化合物将会是游离碱形式。
在上述方法中，在1a、G-Lev或1d中存在不参与反应的氨基基团、羟基基团或羧基基团时，该氨基基团、羟基基团或羧基基团优选通过保护基保护，避免有任何副反应发生。如果存在上述氨基保护基团或羟基保护基团则需要经过后续的脱保护步骤后，得到如式I所示化合物。任何合适的氨基保护基团，例如：叔丁氧羰基(Boc)基团，均可以用于保护氨基基团。如果使用Boc作为保护基，后续的脱保护反应可以在标准条件，例如，对甲苯磺酸/甲醇体系，二氯甲烷/三氟乙酸体系、饱和的氯化氢乙醚溶液、或三氟甲磺酸三甲基硅酯/2,6-二甲基吡啶/二氯甲烷体系中进行；任何合适的羟基保护基团，例如：苄基，均可以用于保护氨基基团，后续的脱保护反应可以在标准条件，例如，钯碳/氢气；任何合适的羧基保护基团，例如：形成羧酸酯基团(例如，羧酸甲酯，羧酸乙酯)，均可以用于保护羧基基团，后续的脱保护反应可以在标准条件，例如，氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂在四氢呋喃、水和/或甲醇溶剂中脱保护。上述脱保护反应优选在最后一步进行。
所述如式(I)或(I’)所示化合物，其药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。
一般情况下，盐的制备可以通过游离碱或酸与等化学当量或者过量酸(无机酸或有机酸)或碱(无机碱或有机碱)在合适的溶剂或溶剂组合物中反应制得。
本发明还提供了一种药物组合物，其包括治疗有效量的活性组分以及药学上可接受的辅料；所述活性组分包括如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物和药学上可接受的盐中的一种或多种。
所述药物组合物中，所述活性组分还可包括癌症的其它治疗剂。
所述药物组合物中，所述药学上可接受的辅料可包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
根据治疗目的，可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)等，优选液体、悬浮液、乳液、栓剂和针剂(溶液及悬浮液)等。
为了使片剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。例如，载体，如乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素和硅酸等；粘合剂，如水、乙醇、丙醇、普通糖浆、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明胶溶液，羧甲基纤维素、紫胶、甲基纤维素和磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，如干淀粉、藻酸钠、琼脂粉和海带粉，碳酸氢钠、碳酸钙、聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘酯、淀粉和乳糖等；崩解抑制剂，如白糖、甘油三硬脂酸酯、椰子油和氢化油；吸附促进剂，如季胺碱和十二烷基硫酸钠等；润湿剂，如甘油、淀粉等；吸附剂，如淀粉、乳糖、高岭土、膨润土和胶体硅酸等；以及润滑剂，如纯净的滑石，硬脂酸盐、硼酸粉和聚乙二醇等。还可以根据需要选用通常的涂渍材料制成糖衣片剂、涂明胶膜片剂、肠衣片剂、涂膜片剂、双层膜片剂及多层片剂。
为了使丸剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知的并广泛使用的赋形剂，例如，载体，如乳糖，淀粉，椰子油，硬化植物油，高岭土和滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯树胶粉，黄蓍胶粉，明胶和乙醇等；崩解剂，如琼脂和海带粉等。
为了使栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋性剂，例如，聚乙二醇，椰子油，高级醇，高级醇的酯，明胶和半合成的甘油酯等。
为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油等)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可使用本领域内任何常用的载体。例如，水，乙醇，丙二醇，乙氧基化的异硬脂醇，聚氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可加入通常的溶解剂、缓冲剂和止痛剂等。
本发明中，所述的组合物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择，通常可为质量百分比的5～95％，较佳的为质量百分比30～80％。
本发明中，所述药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据病人年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。例如，片剂、丸剂、溶液、悬浮液、乳液、颗粒剂或胶囊口服给药；针剂可以单独给药，或者和注射用输送液(如葡萄糖溶液及氨基酸溶液)混合进行静脉注射；栓剂为给药到直肠。
本发明还提供了如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物在制备Wee1和/或PLK1抑制剂中的应用。
本发明还提供了如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物在制备癌症的化学疗法或放射性疗法的增敏剂中的应用。其中，所述化学疗法或放射线疗法的增敏剂是指在癌症治疗领域中个，通过与放射线疗法和/或使用抗癌剂的化学疗法组合使用，相加地或协同地提高这些放射线疗法和/或化学疗法的治疗效果的药物。
本发明还提供了如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物在制备治疗和/或缓解由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病的药物中的应用；本发明优选提供了如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物在制备治疗和/或预防由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病的药物中的应用；所述疾病包括肿瘤和非肿瘤性疾病。所述疾病优选为癌症。
本发明优选用所述如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物在制备治疗和/或缓解癌症药物中的应用。
本发明还进一步提供了用所述如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物治疗癌症的方法，包括：给予哺乳动物治疗所需剂量的如式(I)或(I’)所述化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或药物组合物。
所述哺乳动物，优选人。
本发明还进一步提供了所述如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物还可和一种或多种其它种类的治疗剂和/或治疗方法联合用于治疗和/或缓解由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病，所述的疾病优选为癌症。
本发明还进一步提供一种联合制剂，包括如式(I)或(I’)所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或所述药物组合物和其它种类的用于治疗癌症的治疗剂和/或治疗方法合用。
本发明中，所述其它种类的治疗剂(例如：用于治疗癌症的其它种类的治疗剂)可以和所述的如式(I)或(I’)所示化合物做成单一给药的治疗剂型，或者分别先后给药的治疗剂型。
本发明中，所述其它种类的用于治疗癌症的治疗剂和/或治疗方法可包括但不限于用于癌症治疗的：微管蛋白抑制剂、烷化剂、拓扑酶I/II抑制剂、铂类化合物、抗生素、抗代谢类药物、激素和激素类似物、靶向治疗(例如：特殊的激酶抑制剂)、免疫治疗剂、干扰素、其它用于癌症治疗的抗癌剂和放疗中的一种或多种。
本发明中，所述微管蛋白抑制剂可选自但不限于：长春碱系列(例如：长春碱、长春新碱、长春瑞滨、长春地辛)、紫杉烷类(多西他赛、紫杉醇)和甲磺酸艾日布林中的一种或多种。
本发明中，所述烷化剂可选自但不限于：氮芥、乙烯亚胺衍生物、甲烷磺酸酯类、亚硝脲类和三氮烯类中的一种或多种。
本发明中，所述拓扑酶I/II抑制剂可选自但不限于：喜树碱、10-羟基喜树碱、伊立替康、伊立替康代谢产物SN-38、拓扑替康、喜诺替康、Exactecan、Karenitecin、9-硝基喜树碱、阿霉素和右雷佐生中的一种或多种。
本发明中，所述铂类化合物可选自但不限于：顺铂、卡铂、奈达铂、奥沙利铂、奥马铂、四铂、异丙铂、螺铂、顺-二氨二水铂(II)-离子、或二氯(乙二胺)-铂(II)。
本发明中，所述抗代谢类药物可选自但不限于：叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物、腺苷脱氨酶抑制剂，例如：甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脲苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉西他滨中的一种或多种。
本发明中，所述免疫治疗剂可选自但不限于：抗肿瘤疫苗(例如：合成肽、DNA疫苗和重组病毒)、溶瘤病毒、单克隆抗体(例如：PD-1单抗、PD-L1单抗、CTLA-4单抗等)、新型佐剂、细胞因子治疗(例如：IL2和GM-CSF)、嵌合抗原受体T细胞治疗法(CAR-T)、小分子免疫调节剂、肿瘤微环境调节剂和抗血管生成因子中的一种或多种。
本发明中，所述用于癌症治疗的抗生素可选自但不限于：放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司和戊柔比星中的一种或多种。
本发明中，所述用于癌症治疗的干扰素可选自但不限于：干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a或干扰素γ-n1等。
本发明中，所述的癌症包括转移性的和非转移性的癌症，也包括家族遗传性的和偶发性的癌症，还可包括固体肿瘤和非固体肿瘤。
本发明中，所述固体肿瘤的具体例子可包括但不限于：眼、骨、肺、胃、胰腺、乳腺、前列腺、脑(包括胶质母细胞瘤和髓母细胞瘤)、卵巢(包括那些从上皮细胞产生的基质细胞，生殖细胞和间质细胞)、膀胱、睾丸、脊髓、肾脏(包括腺癌、肾母细胞瘤)、口、唇、咽喉、口腔(包括鳞状细胞癌)、鼻腔、小肠、结肠、直肠、甲状旁腺、胆囊、胆管、宫颈、心、咽下腺、支气管、肝、输尿管、阴道、肛门、喉腺、甲状腺(包括甲状腺癌和髓样癌)，食道、鼻咽腺垂体、唾液腺、肾上腺、头颈部上皮内瘤样病变(包括Bowen病和Paget氏病)，肉瘤(包括平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、骨肉瘤)、皮肤(包括黑色素瘤、卡波氏肉瘤、basocellular癌和鳞状细胞癌)等相关的肿瘤。
本发明中，所述固体肿瘤优选为人的眼癌、骨癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、脑癌(包括但不限于噁性胶质瘤、成神经管细胞瘤)、卵巢癌、膀胱癌、子宫颈癌、睾丸癌、肾癌(包括但不限于腺癌、肾母细胞癌)、口腔癌(包括鳞状细胞癌)、舌癌、喉癌、鼻咽癌、头颈癌、结肠癌、小肠癌、直肠癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、食管癌、胆囊癌、胆管癌、宫颈癌、肝癌、肺癌(包括但不限于小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、绒毛上皮癌、骨肉瘤、尤文瘤、软组织肉瘤和皮肤癌中的一种或多种。
本发明中，所述非固体肿瘤(包括血液学肿瘤)的具体例子可包括但不限于：淋巴性白血病(包括急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、T细胞慢性淋巴性白血病、B细胞慢性淋巴性白血病)、髓性相关的白血病(包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病)和AIDs相关的白血病中的一种或多种。
本发明中，除非另有说明，术语“选择性地被一个或多个基团取代在任意位置”是指基团上所指定的一个或多个原子的任何一个或者多个氢原子用所指定的基团取代，条件是不超过指定原子的正常化合价，所述取代在任意位置均为本领域常见的合理取代。
本发明中，当与取代基的键合显示与连接环中两个原子的键合相交时，那么这样的取代基可键合在环上的任何可键合的环原子。
除非另有说明，在本发明说明书和权利要求书中出现的以下术语具有下述含义：
术语“Ct-q”是指包括起点到终点的范围，其中t和q及其范围中的各点均为整数，表示碳原子的数目，例如C1-4表示碳原子数目为1、2、3或4；C1-6表示碳原子数目为1、2、3、4、5或6；C3-8表示碳原子数目为3、4、5、6、7或8；Ct-q可以跟任何包含碳原子的基团联合使用用于限定碳原子的个数，例如C1-6烷基、C2-6烯基、C3-8环烷基、C6-10芳基、C1-4烷氧基、C3-8环烷基C1-4烷基等。
术语“烷基”是指包含1-20个碳原子的饱和直链或支链烃基，优选1-10个碳原子，更优选1-8，1-6，1-4或1-3个碳原子，烷基的代表性例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、正戊基、正己基、正庚基、辛基、壬基、癸基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、4,4-二甲基戊基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、2,2,4-三甲基戊基、十一烷基、十二烷基，及它们的各种异构体等。
术语“亚烷基”是指包含1-20个碳原子的饱和直链或支链非桥连性的二价烷基，优选1-6个碳原子，更优选1-4或1-3个碳原子，例如亚甲基(＝CH2)、亚乙基(＝CHCH3)、2-异丙亚基(＝CH(CH3)2)等。
术语“环烷基”是指包含3-20个碳原子的饱和或部分不饱和(包含1或2个双键)的单环或多环基团。“单环环烷基”优选3-10元单环烷基，更优选3-8或3-6元单环烷基，例如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环癸基、环十二烷基、环己烯基。“多环环烷基”包括“桥环基”、“稠合环烷基”和“螺环烷基”，“桥环基”的代表性例子包括但不限于：冰片基、双环[2.2.1]庚烯基、双环[3.1.1]庚烷基、双环[2.2.1]庚烷基、双环[2.2.2]辛烷基、双环[3.2.2]壬烷基、双环[3.3.1]壬烷基、双环[4.2.1]壬烷基和金刚烷基等。“稠合环烷基”包含稠合到苯基、环烷基、或杂芳基上的环烷基环，稠合环烷基包括但不限于：苯并环丁烯、2,3-二氢-1-H-茚、2,3-环戊烯并吡啶、5,6-二氢-4H-环戊基[B]噻吩、十氢萘等。“螺环烷基”是指两个单环环烷基共用一个碳原子形成的双环基团，螺环烷基包括但不限于：螺[2,5]辛基、螺[2,4]庚基、螺[4,5]癸基等。所述多环环烷基优选包含7～12个碳原子。单环环烷基或多环环烷基可以通过环上任意的1个或2个碳原子链接到母体分子上。
术语“杂环烷基”指由碳原子以及选自氮、氧、硫、硼、硅等杂原子组成的饱和或部分不饱和(包含1或2个双键)的非芳香环状基团，此环状基团可为单环或多环基团，在本发明中，杂环烷基中杂原子个数优选1、2、3或4，杂环烷基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化。氮原子可任选进一步被其他基团取代而形成叔胺或季铵盐。“单环杂环烷基”优选3-10元单环杂环烷基，更优选3-8元单环杂环烷基。例如：氮丙啶基、氮杂环丁基、氮杂环庚基、氧杂环丁基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基-S-氧化物、哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基等。“多环杂环烷基”包括“稠合杂环烷基”、“螺杂环基”和“桥杂环烷基”。“稠合杂环烷基”包含稠合到苯基、环烷基、杂环烷基或杂芳基的单环杂环烷基环，稠合杂环烷基包括但不限于：2,3-二氢苯并呋喃基、1,3-二氢异苯并呋喃基、二氢吲哚基、2,3-二氢苯并[b]噻吩基、二氢苯并哌喃基、1,2,3,4-四氢喹啉基等。“螺杂环基”是指两个杂环烷基或一个环烷基和一个杂环烷基共用一个碳原子形成的双环基团，螺杂环基包括但不限于：5-氮杂[2.5]辛基
Figure BDA0002972897270000271
4-氮杂[2.5]辛基
Figure BDA0002972897270000272
4-氮杂[2.4]庚基
Figure BDA0002972897270000273
4,7-二氮杂螺[2.5]辛基
Figure BDA0002972897270000274
1,7-二氮杂螺[3.5]壬基
Figure BDA0002972897270000275
或2,7-二氮杂螺[3.5]壬基
Figure BDA0002972897270000276
等。“桥杂环烷基”是指单环杂环烷基任意两个不相链接的环原子被1到3个额外的碳原子或杂原子形成的直链基团桥连接(所述的直链基团选自但不限于：-CH2-、-CH2CH2-、-CH2O-、-CH2NH-、-CH2CH2CH2-)，桥杂环烷基包括但不限于：(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA0002972897270000277
(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA0002972897270000278
(1S,4S)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA0002972897270000279
(1R，4R)-2-氧-5-氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA00029728972700002710
(1S,4R)-2-氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA00029728972700002711
(1R,4S)-2-氮杂双环[2.2.1]庚基
Figure BDA00029728972700002712
等。单环杂环烷基和多环杂环烷基可以通过环上任意的1个或2个环原子链接到母体分子上。上述环原子特指组成环骨架的碳原子和/或氮原子。
术语“环烷基烷基”是指环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“环烷基烷基”包含上述烷基和环烷基的定义。
术语“杂环烷基烷基”是指杂环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“杂环烷基烷基”包含上述烷基和杂环烷基的定义。
术语“烷氧基”指通过氧桥连接的具有所述碳原子数目的环状或者非环状烷基，包含烷基氧基、环烷基氧基和杂环烷基氧基。由此，“烷氧基”包含上述烷基、杂环烷基和环烷基的定义。
术语“烷氧基烷基”指烷基上任意一个或多个氢原子被烷氧基所取代，包括但不限于：-CH2OCH3、-CH2CH2OCH3、-CH2OCH2CH3、-CH2CH2C(CH3)2OCH3。由此，“烷氧基烷基”包含上述烷氧基和烷基的定义。
术语“羟基烷基”是指烷基上任意一个或多个氢原子被羟基所取代，包括但不限于：-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2C(CH3)2OH、-CH(CH3)2OH。
术语“烷硫基”指通过硫桥连接的具有所述碳原子数目的环状或者非环状烷基，所述烷硫基包含烷基硫基、环烷基硫基和杂环烷基硫基。由此，“烷硫基”包含上述烷基、杂环烷基和环烷基的定义。
术语“烯基”指含有至少1个碳碳双键的直链、支链或者环状非芳香烃基。其中可以存在1-3个碳碳双键，优选存在1个碳碳双键。术语“C2-4烯基”是指具有2-4个碳原子的烯基，术语“C2-6烯基”是指具有2-6个碳原子的烯基，包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和环己烯基。所述的烯基可以被取代。
术语“炔基”是指含有至少1个碳碳三键的直链、支链或者环状烃基。其中可以存在1-3个碳碳三键，优选存在1个碳碳三键。术语“C2-6炔基”是指具有2-6个碳原子的炔基，包括乙炔基、丙炔基、丁炔基和3-甲基丁炔基。
术语“芳基”是指任何稳定的6-20元单环或多环芳香族基团，例如：苯基、萘基、四氢萘基、2,3-二氢化茚基或联苯基等。
术语“杂芳基”是指至少1个环上的碳原子被选自氮、氧或硫的杂原子置换所形成的芳香环基团，其可为5-7元单环结构或7-20稠合环结构，优选5-6元杂芳基。在本发明中，杂原子个数优选1、2或3，包括但不限于：吡啶基、嘧啶基、哌嗪基、哒嗪-3(2H)-酮基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、1,2,5-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,3,4-噻二唑、1,2,4-三氮唑基、1,2,3-三氮唑基、四氮唑基、吲唑基、异吲唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并[d][1,3]二氧戊环基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、1H-苯并[d][1,2,3]三氮唑基、喹啉基、异喹啉基、异喹啉酮基、喹唑啉基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、4-羟基噻吩并[3,2-c]吡啶基、4,5-二氢-4-氧代呋喃[3,2]吡啶基、4-羟基-5-氮杂吲哚基、呋喃[2,3-c]并吡啶-7(6H)-酮基、噻吩[2,3-c]并吡啶-7(6H)-酮基等。
术语“芳基烷基”是指芳基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“芳基烷基”包含上述烷基和芳基的定义。
术语“杂芳基烷基”是指杂环烷基与母核结构之间通过烷基连接。由此，“杂芳基烷基”包含上述烷基和杂芳基的定义。
术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘。
术语“卤代烷基”是指被卤素任意取代的烷基。由此，“卤代烷基”包含以上卤素和烷基的定义。
术语“卤代烷氧基”是指被卤素任意取代的烷氧基。由此，“卤代烷氧基”包含以上卤素和烷氧基的定义。
术语“氨基”是指-NH2，术语“烷氨基”是指氨基上至少一个氢原子被烷基所取代，包括“单烷氨基”和“双烷氨基”，具体例子包括但不限于：-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCH2CH3、-N(CH2CH3)2。术语“氨基烷基”是指烷基上任意一个氢原子被氨基所取代，包括但不限于：-CH2NH2、-CH2CH2NH2。由此，“氨基烷基”和“烷氨基”包含上述烷基和氨基的定义。
术语“烷氨基烷基”是指烷基上任意一个氢原子被烷氨基所取代，例子包括但不限于：-CH2N(CH3)2、-CH2CH2N(CH3)2、-CH2CH2CH2N(CH3)2、-CH2NHCH3。由此，“烷氨基烷基”包含上述烷氨基和烷基的定义。
术语“硝基”是指-NO2。
术语“羧基”是指-C(O)OH。
术语“氰基”是指-CN。
术语“巯基”是指-SH。
术语“氧代基”是指＝O。
本发明所述“室温”是指15-30℃。
所述的同位素取代衍生物包括：式I中任意的氢原子被1-5个氘原子取代得到的同位素取代衍生物、式I中任意的碳原子被1-3个碳14原子取代得到的同位素取代衍生物或式I中任意的氧原子被1-3个氧18原子取代得到的同位素取代衍生物。
所述的“前药”是指化合物在体内代谢后转换成原始活性化合物。代表性地讲，前药为非活性物质，或者比活性母体化合物活性小，但可以提供方便的操作、给药或者改善代谢特性。
本发明所述的“药学上可接受的盐”在Berge，et al.，“Pharmaceuticallyacceptable salts”，J.Pharm.Sci.,66,1-19(1977)中有讨论，并对药物化学家来说是显而易见，所述的盐是基本上无毒性的，并能提供所需的药代动力学性质、适口性、吸收、分布、代谢或排泄等。本发明所述化合物可以具有酸性基团、碱性基团或两性基团，典型的药学上可接受的盐包括通过本发明化合物和酸反应制备得到的盐，例如：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、甲酸盐、丙烯酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、(D,L)-酒石酸，柠檬酸，马来酸，(D,L)-苹果酸，富马酸，丁二酸、琥珀酸盐、乳酸盐、三氟甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、扁桃酸盐、丙酮酸盐、硬脂酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐。当本发明化合物含有酸性基团时，其药学上可接受的盐还可以包括：碱金属盐，例如钠或钾盐；碱土金属盐，例如钙或镁盐；有机碱盐，例如和氨、烷基氨类、羟基烷基氨类、氨基酸(赖氨酸、精氨酸)、N-甲基葡糖胺等形成的盐。
本发明所述“异构体”是指本发明的式(I)化合物可以有不对称中心和外消旋体、外消旋混合物和单个非对映异构体，所有这些异构体，包括立体异构体、几何异构体均包含在本发明中。在本发明中，式I化合物或其盐以立体异构的形式(例如，其含有一个或多个不对称碳原子)存在时，单独的立体异构体(对映异构体和非对映异构体)以及它们的混合物包括在本发明的范围内。本发明还包括式I表示的化合物或盐的单独异构体，以及与其中一个或多个手性中心反转的异构体的混合物。本发明的范围包括：立体异构体的混合物，以及纯化的对映异构体或对映异构体/非对映异构体富集的混合物。本发明包括所有对映异构体及非对应异构体所有可能的不同组合的立体异构体的混合物。本发明包括上文定义的所有具体基团的立体异构体的全部组合和子集。本发明还包括式I化合物或其盐的几何异构体，所述几何异构体包括顺反异构体。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
本发明所有化合物的结构可通过核磁共振(1H NMR)和/或质谱检测(MS)鉴定。
1H NMR化学位移(δ)以PPM记录(10-6)。NMR通过Bruker AVANCE-400光谱仪进行。合适的溶剂是氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，氘代二甲亚砜(DMSO-d6)，四甲基硅烷作为内标(TMS)。
低分辨率质谱(MS)由Agilent 1200HPLC/6120质谱仪测定，使用XBridge C18，4.6×50mm，3.5μm，梯度洗脱条件1：80-5％溶剂A1和20-95％溶剂B1(1.8分钟)，然后95％溶剂B1和5％溶剂A1(3分钟以上)，百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A1：0.01％三氟乙酸(TFA)的水溶液；溶剂B1：0.01％三氟乙酸的乙腈溶液；百分数为溶质占溶液的体积百分数。梯度洗脱条件2：80-5％溶剂A2和20-95％溶剂B2(1.5分钟)，然后95％溶剂B2和5％溶剂A2(2分钟以上)，百分数为某一溶剂占总溶剂体积的体积百分数。溶剂A2：10mM的碳酸氢铵的水溶液；溶剂B2：乙腈。
本发明所有化合物可通过高效液相色谱仪、硅胶柱层析色谱、薄层层析色谱、或快速柱层析色谱进行分离。
高效液相色谱仪(prep-HPLC)使用岛津LC-20制备液相色谱，色谱柱为：watersxbridge Pre C18，10um，19mmx250mm。分离条件1：流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱流动相B从15％到60％，洗脱时间20分钟；从60％到15％，洗脱时间5分钟。分离条件2：流动相A：10mmol/L碳酸氢铵水溶液，流动相B：乙腈；梯度洗脱流动相B从20％到80％，洗脱时间20分钟；从80％到20％，洗脱时间5分钟。
快速柱层析(Flash柱层析)(flash system/CheetahTM)使用的是AgelaTechnologies MP200，配套使用的分离柱为Flash columm Silica-CS(80g)，CatNo.CS140080-0。
薄层层析色谱(prep-TLC)是烟台新诺化工，涂层厚度0.2±0.03mm，规格20×20cm。硅胶柱层析一般使用烟台黄海200-300目硅胶作为载体。
硅胶柱层析色谱、薄层层析色谱或快速柱层析色谱使用的洗脱剂或展开剂选自乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、石油醚和正己烷中的一种或多种。
本发明所有立体异构体混合物可以通过超临界流体色谱仪(SFC)进行分离和分析。
超临界流体色谱仪使用SFC-150(Waters)色谱仪，流速为120g/min，柱温为35℃。检测波长为214。手性柱AD-20×250mm,10um(Daicel)，流动相为二氧化碳/乙醇(含有0.5％的7M氨甲醇溶液)＝40/60，样品配制：113mg样品溶解在50mL甲醇二氯甲烷溶液中，进样量：0.5mL。
超临界流体色谱分析仪使用Analytical-SFC conditions(UPCC,Waters)，流速为3mL/min，柱温为40℃；检测波长为214nM。手性分析条件A：手性柱CHIRALPAK AD-3 4.6×100mm,3um(Daicel)，流动相为二氧化碳/乙醇(含有0.5％的7M氨甲醇溶液)＝55/45，进样量：5μL。
本发明实施例中所述微波反应使用
Figure BDA0002972897270000313
Initiator+Microwave System EU(356006)型微波反应器。本发明无特殊注明外，所有实施例中的反应均在氮气氛或氩气氛下进行。
本发明实施例中所述氢气氛是用氢气球来提供。
中间体的合成：
6-溴-4-乙基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(中间体1.1)的合成
Figure BDA0002972897270000311
将碘乙烷(272mg，1.75mmol)加入到6-溴-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(200mg，0.87mmol)和碳酸钾(241mg，1.75mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，反应液在50℃下搅拌2小时。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取。合并有机相用饱和食盐水洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩得中间体1.1(220mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+257.0。
利用中间体1.1的合成方法，将碘乙烷替换为相应的卤代物或三氟甲磺酸酯得到中间体1.2-1.13(表1)：
表1：
Figure BDA0002972897270000312
Figure BDA0002972897270000321
1-乙基-7-碘-1,8-萘啶-2(1H)-酮(中间体2.1)的合成
Figure BDA0002972897270000322
步骤1：冰浴条件下，向2,6-二氨基吡啶(3.5g，32.1mmol)和DL-苹果酸(4.73g，35.3mmol)的混合物中缓慢滴加浓硫酸(20mL)。得到的混合物升至室温，然后缓慢加热到110℃并搅拌2小时。反应液冷却至室温后倒入冰水中淬灭反应，然后用氨水(25％-28％)调节pH＝8，有固体析出。过滤，滤饼用水洗涤，真空干燥后得到7-氨基-1,8-萘啶-2(1H)-酮(4.2g)为灰色固体。m/z:[M+H]+162.2。
步骤2：冰浴条件下，向7-氨基-1,8-萘啶-2(1H)-酮(3.5g，21.7mmol)的浓盐酸(30mL)和水(60mL)的混合溶液中缓慢滴加亚硝酸钠(2.25g，32.6mmol)的水溶液(6mL)。有大量气泡产生。加毕，在此温度下继续搅拌1小时，加水淬灭反应，过滤。滤液用二氯甲烷/甲醇(10/1)萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得到7-氯-1,8-萘啶-2(1H)-酮(710mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+181.0。
步骤3：向7-氯-1,8-萘啶-2(1H)-酮(500mg，2.77mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入碳酸钾(460mg，3.32mmol)和碘乙烷(518mg，3.32mmol)。得到的混合物室温搅拌过夜。加水淬灭反应，过滤，滤饼用水洗涤。真空干燥后得到7-氯-1-乙基-1,8-萘啶-2(1H)-酮(490mg)为灰白色固体。m/z:[M+H]+209.2；1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝9.6Hz,1H),7.17(d,J＝8.0Hz,1H),6.75(d,J＝9.6Hz,1H),4.53(q,J＝6.8Hz,2H),1.34(t,J＝6.8Hz,3H)。
步骤4：将7-氯-1-乙基-1,8-萘啶-2(1H)-酮(450mg，2.16mmol)，乙酰氯(340mg，4.31mmol)和碘化钠(1.62g，10.8mmol)加入到微波管(50mL)，然后加入乙腈(15mL)。体系密封于80℃微波反应3小时。加水淬灭反应，过滤，滤饼真空干燥后得中间体2.1(390mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+301.0。
2-(7-溴-2-氧代-1,8-萘啶-1(2H)-基)乙腈(中间体2.2)的合成
Figure BDA0002972897270000331
步骤1：将7-氯-1,8-萘啶-2(1H)-酮(100mg，0.55mmol)溶于氢溴酸醋酸溶液(33％)(2mL)中。将体系密封，于95℃加热搅拌1小时。待冷至室温后减压浓缩。固体加饱和碳酸氢钠水溶液调pH＝8。过滤，滤饼用水洗涤，真空干燥后得到7-溴-1,8-萘啶-2(1H)-酮(100mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+225.0。
步骤2：向7-溴-1,8-萘啶-2(1H)-酮(100mg，0.44mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中依次加入碳酸钾(92mg，0.66mmol)和溴乙腈(80mg，0.66mmol)。得到的混合物在室温下搅拌过夜。加水淬灭反应，过滤，滤饼用水洗涤后真空干燥得到中间体2.2(101mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+264.0。
利用中间体2.2的合成方法，将步骤2中溴乙腈替换为相应的卤代物或三氟甲磺酸酯得到中间体2.3-2.12(表2)：
表2：
编号 名称 m/z:[M+H]<sup>+</sup>
2.3 7-溴-1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 297.0
2.4 7-溴-1-(2-羟基乙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 269.0
2.5 3-(7-溴-2-氧代-1,8-萘啶-1(2H)-基)丙腈 278.0
2.6 7-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 307.0
2.7 2-(7-溴-2-氧代-1,8-萘啶-1(2H)-基)-N-甲基乙酰胺 296.0
2.8 7-溴-1-((甲硫基)甲基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 285.0
2.9 (R)-7-溴-1-(2-羟基丙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 283.0
2.10 (S)-7-溴-1-(2-羟丙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 283.0
2.11 7-溴-1-(2-(甲基磺酰基)乙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 331.0
2.12 7-溴-1-(2-氟乙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮 271.0
7-溴-1-((甲磺酰基)甲基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮(中间体2.15)的合成
Figure BDA0002972897270000332
将间氯过氧苯甲酸(139mg，0.68mmol)加入到中间体2.8(92.9mg，0.33mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，反应体系在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用prep-TLC(乙酸乙酯)纯化得中间体2.15(87.5mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+317.0。
6-溴-4-乙基吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(中间体3.1)的合成
Figure BDA0002972897270000341
步骤1：向6-氯-2,3-二氨基吡啶(10g，69.7mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(140mL)溶液中加入碳酸钾(9.63g，69.7mmol)。得到的混合物室温下搅拌1小时，然后加入溴乙酸乙酯(12.8g，76.6mmol)，反应体系在65℃下继续搅拌4小时。待冷至室温，加水淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相后用水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得到2-((2-氨基-6-氯吡啶-3-基)氨基)乙酸乙酯(10.1g)为黑色固体。m/z:[M+H]+230.2。
步骤2：冰浴条件下，向2-((2-氨基-6-氯吡啶-3-基)氨基)乙酸乙酯(5g，21.8mmol)的无水1,4-二氧六环(50mL)溶液中加入钠氢(60％，262mg，6.53mmol)。混合物在110℃下搅拌1小时。冷却至室温后加浓盐酸淬灭反应并调节pH＝8-9，减压浓缩除去大部分溶液，过滤。滤饼分别用水，石油醚/乙酸乙酯(1/1)洗涤。滤饼真空干燥得到6-氯-1,2-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(3.6g)为浅黑色固体。m/z:[M+H]+184.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.91(s,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),6.84(d,J＝8.4Hz,1H),6.35(s,1H),3.82(s,2H).
步骤3：向6-氯-1,2-二氢吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(3.6g，19.6mmol)的1,4-二氧六环(80mL)溶液中加入活性二氧化锰(18.8g，216mmol)。混合物在110℃下搅拌1小时。冷却至室温，过滤。滤饼分别用乙酸乙酯，二氯甲烷/甲醇(10/1)洗涤。滤液减压浓缩得到6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(2.5g)为灰白色固体。m/z:[M+H]+182.0。
步骤4：向6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(500mg，2.75mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入碳酸钾(460mg，3.3mmol)和碘乙烷(560mg，3.58mmol)。混合物在室温下搅拌1小时。加水淬灭反应，过滤，滤饼用水洗涤后真空干燥得到6-氯-4-乙基吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(390mg)为灰白色固体。m/z:[M+H]+210.2。
步骤5：将6-氯-4-乙基吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(100mg，0.47mmol)溶于氢溴酸醋酸溶液(2mL)中。将体系密封，于100℃搅拌1小时。反应液冷却至室温后减压浓缩。向残留物中加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8。过滤，滤饼用水洗涤后真空干燥得到中间体3.1(80mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+254.0。
2-(6-溴-3-氧代吡啶并[2,3-b]吡嗪-4(3H)-基)乙腈(中间体3.2)的合成
Figure BDA0002972897270000351
步骤1：将6-氯吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(2g，11mmol)和氢溴酸醋酸溶液(20mL)加入至封管中，反应液在100℃搅拌3小时。将反应液减压浓缩，残留物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，过滤，滤饼真空干燥得到6-溴吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(2.2g)为黄色固体。m/z:[M+H]+226.0。
步骤2：向6-溴吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(200mg，0.88mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入碳酸钾(244mg，1.77mmol)和溴乙腈(212mg，177mmol)。反应体系在室温下搅拌3小时。加乙酸乙酯(100mL)稀释，有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得中间体3.2(230mg)为淡黄色固体。m/z:[M+H]+265.0。
利用中间体3.2的合成方法，将步骤2中溴乙腈替换为相应的卤代物或三氟甲磺酸酯得到中间体3.3-3.6(表3)：
表3：
编号 名称 m/z:[M+H]<sup>+</sup>
3.3 6-溴-4-(2,2,2-三氟乙基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮 308.0
3.4 6-溴-4-(2-羟基乙基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮 270.0
3.5 (S)-6-溴-4-(2-羟基丙基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮 284.0
3.6 6-溴-4-(2-氟乙基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮 272.0
5-溴-3-乙基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(中间体4.1)的合成
Figure BDA0002972897270000352
冰浴条件下，向5-溴-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶(200mg，1.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中分批加入钠氢(60％，48.5mg，1.2mmol)(钠氢可以替换为等当量的碳酸钾或碳酸铯)。反应体系在此温度下搅拌30分钟，然后向反应体系中滴加碘乙烷(315mg，2.0mmol)，加毕，反应液缓慢升至室温，继续搅拌1.5小时。加水(10mL)淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到中间体4.1(112mg)为白色固体。m/z:[M+H]+227.0。
3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁醇(中间体4.2)的合成
Figure BDA0002972897270000353
步骤1：将6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(200mg，1.01mmol)，3-溴环丁酮(301mg，2.02mmol)和碳酸铯(658mg，2.02mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)的混合物在65℃下搅拌3小时。然后将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相并减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得到3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁酮(100mg)为白色固体。m/z:[M+H]+266.0。
步骤2：将硼氢化钠(14mg，0.38mmol)加入到3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁酮(100mg，0.38mmol)的甲醇(8mL)溶液中。反应液在室温下搅拌16小时，反应液用乙酸乙酯稀释后用水洗，分离有机相减压浓缩得到中间体4.2(70mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+268.0。
(3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4.3)的合成
Figure BDA0002972897270000361
将6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(200mg，1mmol)，(3-羟基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(284mg，1.5mmol)，三苯基膦(794mg，3.0mmol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(698mg，3mmol)的甲苯(4mL)溶液在50℃下搅拌过夜。反应液直接减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到中间体4.3(250mg)为淡黄色油状物。m/z:[M+H]+367.0。
6-溴-1-(乙基磺酰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(中间体4.4)的合成
Figure BDA0002972897270000362
冰浴条件下，向6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(300mg，1.52mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入钠氢(91mg，2.28mmol，60％)，反应体系在此温度下搅拌30分钟，然后加入乙基磺酰氯(235mg，1.83mmol)，反应液室温搅拌3小时，用水淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相并用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到中间体4.4(440mg)为类白色固体。m/z:[M+H]+289.0。
6-溴-N-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-1-甲酰胺(中间体4.5)的合成
Figure BDA0002972897270000363
冰浴条件下，向6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(200mg，1.02mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入钠氢(49mg，1.22mmol，60％)。反应体系在此温度下搅拌1小时，然后滴加甲氨基甲酰氯(114mg，1.22mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1mL)溶液。继续搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得到中间体4.5(320mg)为褐色油状物。m/z:[M+H]+253.9。
6-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶和6-溴-2-(2,2,2-三氟乙基)-2H-吡唑并[3,4-b]吡啶(中间体4.6和4.7)的合成
Figure BDA0002972897270000371
将2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(0.7g，3mmol)和碳酸钾(0.42g，3mmol)加入到6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(0.3g，1.1mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中，反应体系在室温下搅拌过夜，然后加水(20mL)淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得中间体4.6(190mg)和4.7(72mg)，均为黄色固体。m/z:[M+H]+280.0；4.6:1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.37(s,1H),8.29(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),5.38(q,J＝9.2Hz,2H)；4.7:1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.67(s,1H),8.27(d,J＝8.4Hz,1H),7.33(d,J＝8.7Hz,1H),5.57(q,J＝9.2Hz,2H).
3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-1-甲基环丁醇(中间体4.8)的合成
Figure BDA0002972897270000372
冰浴条件下，缓慢将甲基溴化镁的四氢呋喃溶液(1M，0.56mL)滴加到3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁酮(100mg，0.38mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中。反应体系在室温下搅拌2小时后，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，混合物用乙酸乙酯萃取，分离有机相并减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得到中间体4.8(50mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+282.0。
3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁酮肟(中间体4.9)的合成
Figure BDA0002972897270000373
将3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)环丁酮(200mg，0.75mmol)，盐酸羟胺(104mg，1.5mmol)和三乙胺(152mg，1.5mmol)的乙醇(10mL)溶液在室温下搅拌4小时，将反应直接减压浓缩后用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得到中间体4.9(100mg)为白色固体。m/z:[M+H]+281.0。
2-((6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)甲基)-1,1,1,3,3,3-六氘代丙-2-基乙酸酯(中间体4.10)的合成
Figure BDA0002972897270000381
步骤1：将2-羟基乙酸乙酯(2g，19.2mmol)，叔丁基二苯基氯硅烷(5.81g，21.1mmol)，三乙胺(3.8g，38.4mmol)和4-二甲氨基吡啶(1.17g，9.61mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液在室温下搅拌16小时。将反应液直接减压浓缩，残留物用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1)纯化得到2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙酸乙酯(5.8g)为无色油状物。
步骤2：冰浴条件下，将甲基-D3-碘化镁的乙醚溶液(8.7mL，1M)缓慢滴加到2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙酸乙酯(1g，2.92mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中。反应液在室温下搅拌16小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩后得到2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)-1,1,1,3,3,3-六氘代丙-2-醇(800mg)为白色油状物。
步骤3：向2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)-1,1,1,3,3,3-六氘代丙-2-醇(800mg，3.81mmol)的二氯甲烷(10mL)中依次加入醋酐(763mg，7.47mmol)、三乙胺(756mg，7.47mmol)和4-二甲氨基吡啶(10mg)，反应液在室温下搅拌4天，然后直接减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)纯化得2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-1,1,1,3,3,3-六氘代丙-2-基乙酸酯(340mg)为无色油状液体。
步骤4：向2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-1,1,1,3,3,3-六氘代丙-2-基乙酸酯(340mg，0.9mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入四丁基氟化铵水合物(354mg，1.35mmol)，反应液在室温下搅拌3小时，减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得1,1,1,3,3,3-六氘代-2-(羟基甲基)丙-2-基乙酸酯(90mg)为无色油状液体。m/z:[M+H]+399.2。
步骤5：6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(140mg，0.71mmol)、1,1,1,3,3,3-六氘代-2-(羟基甲基)丙-2-基乙酸酯(90mg，0.65mmol)、三苯基膦(278mg，1.06mmol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(244mg，1.06mmol)的甲苯(3mL)溶液在60℃下搅拌过夜，反应液直接减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化得中间体4.10(200mg)为淡黄色油状物。m/z:[M+H]+318.0。
4-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)四氢呋喃-3-醇(中间体4.11)的合成
Figure BDA0002972897270000382
将6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(50mg，0.25mmol)、3,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷(35mg，0.75mmol)和碳酸铯(123mg，0.38mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)混合物在80℃下搅拌16小时，然后将反应体系倒入冰水中，用乙酸乙酯萃取，有机相减压浓缩得到中间体4.11(80mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+284.0。
利用中间体4.1的合成方法，用5-溴-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶、6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶或6-溴-1H-吡唑[3,4-b]吡啶和相应的卤代物或三氟甲磺酸酯反应得到中间体4.12-4.32、4.36-4.40、4.42-4.43；利用中间体4.6和4.7的合成方法，用6-溴-1H-吡唑[3,4-b]吡啶和1-溴-2-甲基丙-2-醇反应得到化合物4.33-4.34；利用中间体4.2的合成方法，用6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶反应得到中间体4.35；利用中间体4.11的合成方法，用3-N-叔丁氧羰基-6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷反应得到中间体4.41(表4)：
表4：
Figure BDA0002972897270000391
Figure BDA0002972897270000401
(3-(6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)-1-氧硫杂环丁-1-亚基)氨基甲酸叔丁酯(中间体4.44)的合成
Figure BDA0002972897270000402
步骤1：冰浴条件下，向6-溴-1-(硫杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶(940mg，3.48mmol)的甲醇(20mL)溶液中滴加单过硫酸氢钾(2.14g，3.48mmol)的水溶液(10mL)。加毕，室温搅拌2小时。加水稀释，水相用二氯甲烷萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得到中间体4.44(550mg)为白色固体。m/z:[M+H]+286.0。
步骤2：向中间体4.44(550mg，1.92mmol)，醋酸碘苯(1.24g，3.84mmol)，氨基甲酸叔丁酯(450mg，3.84mmol)，氧化镁(310mg，7.69mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入醋酸铑(85mg,0.19mmol)，反应液室温搅拌过夜。过滤，滤液用水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物经prep-TLC(二氯甲烷/甲醇＝100/1)纯化得到中间体4.45(250mg)为白色固体。m/z:[M+H]+401.0。
5-溴-3-乙基噁唑啉并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(中间体5.1)的合成
Figure BDA0002972897270000403
冰浴条件下，向5-溴噁唑啉并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(100mg，0.5mmol)，乙醇(64.3mg，1.4mmol)和三苯基膦(243mg，0.9mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中滴加偶氮二甲酸二异丙酯(188mg，0.9mmol)，加毕，反应液室温搅拌过夜。然后直接浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到中间体5.1(86mg)为淡黄色固体。m/z:[M+H]+243.0。
5-溴-3-乙基-1-甲基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(中间体6.1)的合成
Figure BDA0002972897270000411
步骤1：将2,6-二溴-3-硝基吡啶(3g，10.6mmol)溶于无水乙醇(15mL)中，然后向其中滴加乙胺醇溶液(33％，3.63g，26.6mmol)。加毕，室温搅拌5小时。倒入水中淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化得6-溴-N-乙基-3-硝基吡啶-2-胺(1.9g)为黄色固体。m/z:[M+H]+246.0。
步骤2：向6-溴-N-乙基-3-硝基吡啶-2-胺(500mg，2.03mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入雷尼镍(50mg)，反应体系用氢气置换三次后在氢气氛中室温搅拌8小时。过滤，固体用二氯甲烷洗涤。合并滤液后减压浓缩得6-溴-N2-乙基吡啶-2,3-二胺(420mg)为黑色固体。m/z:[M+H]+216.0。
步骤3：冰浴条件下，向6-溴-N2-乙基吡啶-2,3-二胺(200mg，0.92mmol)和三乙胺(94mg，0.92mmol)的四氢呋喃(10mL)中加入三光气(91mg，0.3mmol)。反应体系在此温度下搅拌0.5小时。加水淬灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得5-溴-3-乙基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(200mg)为黑色固体。m/z:[M+H]+241.9。
步骤4：向5-溴-3-乙基-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2(3H)-酮(200mg，0.82mmol)和碳酸钾(228mg，1.65mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)混合物中加入碘甲烷(235mg，1.65mmol)，反应室温搅拌过夜。加水淬灭反应，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩后得到中间体6.1(207mg)为黑色固体。m/z:[M+H]+256.0。
7-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[c][1,2]噻嗪-2,2-二氧化物(中间体7.1)的合成
Figure BDA0002972897270000412
步骤1：冰浴条件下，向2-氨基-4-溴苯甲酸甲酯(1g，4.35mmol)和吡啶(860mg，10.9mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中滴加甲磺酰氯(0.5g，4.35mmol)，反应液在室温下搅拌16小时。将反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取，有机相减压浓缩后得到4-溴-2-(甲基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(1.35g)为黄色固体。m/z:[M+H]+308.0。
步骤2：将2,2,2-三氟乙基三氟甲烷磺酸酯(226mg，0.97mmol)加入到4-溴-2-(甲基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(200mg，0.65mmol)和碳酸钾(179mg，1.3mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中。反应液在50℃下搅拌16小时。将反应液倒入水中，过滤、滤饼真空干燥得到4-溴-2-(N-(2,2,2-三氟乙基)甲基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(250mg)为粉色固体。m/z:[M+H]+390.0。
步骤3：冰浴条件下，将钠氢(60％，51mg，1.28mmol)加入到4-溴-2-(N-(2,2,2-三氟乙基)甲基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(250mg，0.64mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中。反应液在室温下搅拌16小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相并浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得到7-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[c][1,2]噻嗪-4(3H)-酮-2,2-二氧化物(120mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+360.0。
步骤4：冰浴条件下，将硼氢化钠(106mg，2.79mmol)加入到7-溴-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-苯并[c][1,2]噻嗪-4(3H)-酮-2,2-二氧化物(500mg，1.4mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中。反应液在室温下搅拌16小时。将反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相并浓缩得到中间体7.1(490mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+343.0。
(3-氧代-4-(2,2,2-三氟乙基)-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-6-基)硼酸(中间体10.1)的合成
Figure BDA0002972897270000421
步骤1：将中间体1.2(420mg，1.35mmol)，联硼酸频那醇酯(516mg，2.03mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(111mg，0.14mmol)和碳酸钾(606mg，4.39mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，反应体系用氮气置换三次后在95℃下搅拌16小时。将反应液冷却至室温后直接浓缩，残留物用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得到6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(450mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+358.0。
步骤2：将步骤1所得产物(450mg，1.26mmol)的乙腈(5mL)和盐酸(6N，5mL)混合溶液在60℃下搅拌16小时。将反应液直接浓缩后用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到中间体10.1(125mg)为白色固体。m/z:[M+H]+276.1。
化合物的合成：
实施例1：6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]吡啶-1-基)-4-乙基-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(化合物1-1)的合成
Figure BDA0002972897270000431
步骤1：将中间体1.1(203mg，0.79mmol)，2-烯丙基-6-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(160mg，0.72mmol)，N,N'-二甲基乙二胺(63mg，0.72mmol)，碘化亚铜(137mg，0.72mmol)和碳酸钾(298mg，2.16mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，反应体系用氮气置换三次后在100℃下搅拌16小时。反应液冷却至室温后过滤，滤饼用乙酸乙酯淋洗，合并滤液并减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物1(270mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+399.2。
步骤2：将间氯过氧苯甲酸(71mg，0.35mmol)加入到化合物1(70mg，0.18mmol)的甲苯(5mL)溶液中，反应液室温搅拌1小时后，加入4-(4-甲基哌嗪)苯胺(67mg，0.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(45mg，0.35mmol)。反应体系在室温下搅拌16小时后直接减压浓缩，残留物用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物1-1(28.1mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+542.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.12(br.s,1H),8.78(s,1H),7.74-7.62(br.s,1H),7.57-7.46(m,2H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),6.86(d,1H,J＝9.2Hz),5.72-5.61(m,1H),5.03(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),4.92(dd,J＝17.2,1.2Hz,1H),4.79(s,2H),4.50(br.s,2H),3.96(q,J＝6.8Hz,2H),3.05(t,J＝4.8Hz,4H),2.41(t,J＝4.80Hz,4H),2.18(s,3H),1.12(t,J＝7.2Hz,3H)。
实施例2～73：化合物1-2～1-73的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体1.2～1.12、2.1～2.7、2.15、2-9～2.11、2.13、3.1～3.6、4.14～4.16、4.4、4.5、4.17、4.21、4.22、4.12、4.1、4.13、4.23、4.18、4.6、4.19、4.34、4.24、4.25、5.1、6.1、4.7、7.1、4.33、4.2、4.35、4.8、4.27～4.31、4.3、4.32、4.20、4.9、4.37、4.10、4.38、4.39、4.11、4.40、4.41或1.13反应得到化合物1-2～1-73(表5)：
Figure BDA0002972897270000432
表5：
Figure BDA0002972897270000433
Figure BDA0002972897270000441
Figure BDA0002972897270000451
Figure BDA0002972897270000461
Figure BDA0002972897270000471
Figure BDA0002972897270000481
Figure BDA0002972897270000491
Figure BDA0002972897270000501
Figure BDA0002972897270000511
Figure BDA0002972897270000521
Figure BDA0002972897270000531
实施例75～85：化合物2-1～2-11的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体1.1、1.3、1.13、1.2、1.4、1.10、2.1、2.2、2.15、3.1、4.34为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为3-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪)苯胺反应得到化合物2-1～2-11(表6)：
Figure BDA0002972897270000541
表6：
Figure BDA0002972897270000542
Figure BDA0002972897270000551
实施例86～92：化合物3-1～3-7的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体2.1、2.12、3.2、3.1、2.9、3.6、2.13为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为4-(4-吗啉基)苯胺反应得到化合物3-1～3-7(表7)：
Figure BDA0002972897270000561
表7：
Figure BDA0002972897270000562
Figure BDA0002972897270000571
实施例93～100：化合物4-1～4-8的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体2.1、1.4、3.1、2.13、3.6、2.9、4.34、4.22为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为4-(2-(二甲氨基)乙基)苯胺反应得到化合物4-1～4-8(表8)：
Figure BDA0002972897270000572
表8：
Figure BDA0002972897270000573
Figure BDA0002972897270000581
实施例101～113：化合物5-1～5-13的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体4.10为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为相应的胺反应得到化合物5-1～5-13(表9)：
Figure BDA0002972897270000582
表9：
Figure BDA0002972897270000583
Figure BDA0002972897270000591
Figure BDA0002972897270000601
实施例114～122：化合物6-1～6-9的合成
利用化合物1-1的合成方法，用中间体2.6、4.22为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为4-(2-(二甲氨基)乙氧基)苯胺反应得到化合物6-1～6-2；用中间体2.1为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为1,2,3,4-四氢异喹啉-6-胺或2-甲基-1,2,3,4-四氢异喹啉-6-胺反应得到化合物6-3～6-4；用中间体4.2为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为4-(1-甲基哌嗪-4-基)苯胺反应得到化合物6-5；用中间体4.20为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为相应取代的苯胺反应得到化合物6-6～6-7；利用化合物1-1的合成方法，用中间体4.24为起始原料，将步骤2中的4-(4-甲基哌嗪)苯胺替换为4-(4-乙基哌嗪)苯胺或4-(4-(2H3)甲基哌嗪)苯胺反应得到化合物6-8～6-9(表10)：
表10：
Figure BDA0002972897270000611
Figure BDA0002972897270000621
实施例123：6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-(2-氯乙基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-3(4H)-酮(化合物7-1)的合成
Figure BDA0002972897270000631
向化合物1-28(80mg，144μmol)的氯仿(3mL)溶液中滴加氯化亚砜(0.5mL)，反应体系在50℃下搅拌1小时。减压浓缩后倒入饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)中，然后用乙酸乙酯萃取(3×15mL)，合并有机相后用水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用prep-HPLC(条件2)纯化得化合物7-1(7.7mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+573.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.33(br.s,1H),8.88(s,1H),8.69-8.41(m,1H),8.33(s,1H),8.22-7.92(m,1H),7.69-7.44(m,2H),7.09-6.86(m,2H),5.75-5.62(m,1H),5.04(dd,J＝1.2,10.0Hz,1H),4.97(dd,J＝1.2,16.8Hz,1H),4.74(d,J＝6.0Hz,2H),4.65(t,J＝6.8Hz,2H),3.96(t,J＝6.8Hz,2H),3.18-3.06(m,4H),2.48-2.44(m,4H),2.23(s,3H)。
实施例124：6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-(2-氯乙基)-1,8-萘啶-2(1H)-酮(化合物7-2)的合成
Figure BDA0002972897270000632
利用化合物7-1的合成方法，用化合物3-4反应得到化合物7-2为黄色固体。m/z:[M+H]+572.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.31(s,1H),8.87(s,1H),8.43(s,1H),8.04(d,J＝9.6Hz,1H),7.90(s,1H),7.58(s,2H),6.96(d,J＝7.4Hz,2H),6.71(d,J＝9.6Hz,1H),5.74-5.62(m,1H),5.04(d,J＝10.2Hz,1H),4.96(d,J＝17.0Hz,1H),4.79-4.66(m,4H),3.92(t,J＝6.7Hz,2H),3.36(m,4H),3.12(s,4H),2.24(s,3H)。
实施例125：6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-4-(2,2,2-三氟乙基)-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4H)-酮(化合物8-1)的合成
Figure BDA0002972897270000633
步骤1：将化合物10.1(124mg，0.45mmol)，2-烯丙基-6-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(100mg，0.45mmol)和醋酸铜(164mg，0.90mmol)加入到吡啶(2mL)和氯仿(10mL)中，反应体系敞口加热到60℃搅拌16小时。将反应液浓缩后用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物2(90mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+452.2。
步骤2：将间氯过氧苯甲酸(69mg，0.4mmol)加入到化合物2(90mg，0.2mmol)的甲苯(5mL)溶液中，反应液室温搅拌1小时后，向反应液中加入4-(4-甲基哌嗪)苯胺(57mg，0.3mmol)和二异丙基乙胺(52mg，0.4mmol)。反应在室温下搅拌16小时后，将反应液浓缩，残留物用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物8-1(40.8mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+595.2；1HNMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.06(s,1H),8.82(s,1H),7.60-7.45(m,3H),7.26(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(d,J＝8.4Hz,2H),5.74-5.60(m,1H),5.08(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),5.01-4.90(m,3H),4.84(s,2H),4.24(s,2H),3.07(t,J＝4.8Hz,4H),2.48(t,J＝4.8Hz,4H),2.24(s,3H)。
实施例126：2-烯丙基-1-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物9-1)的合成
Figure BDA0002972897270000641
化合物5-9溶解于二氯甲烷(2mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温搅拌3小时，浓缩并用乙醇重结晶得到化合物9-1(29mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+541.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.29(br.s,1H),8.88(s,1H),8.68(s,2H),8.47(d,J＝8.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.82(d,J＝8.4Hz,1H),7.70-7.50(m,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),5.73-5.59(m,1H),4.97(dd,J＝1.2,10.4Hz,1H),4.88-4.74(m,4H),4.36(s,2H),3.16-3.05(m,4H),2.48-2.43(m,4H),1.16(s,5H)。
实施例127：(S)-2-烯丙基-1-(1-(2-羟基丙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物9-2)的合成
Figure BDA0002972897270000642
利用化合物9-1的合成方法，用中间体4.24反应得到化合物9-2。m/z:[M+H]+527.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.21(br.s,1H),8.79(s,1H),8.72(br.s,2H),8.38(d,J＝8.4Hz,1H),8.11(s,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.57(br.s,2H),6.93(d,J＝8.4Hz,2H),5.66-5.51(m,1H),4.88(d,J＝9.2Hz,1H),4.81-4.62(m,3H),4.39-4.27(m,1H),4.23-4.14(m,1H),4.14-4.03(m,1H),3.26-3.20(m,4H),3.18(br.s,4H),1.01(d,J＝6.0Hz,3H)。
实施例128：2-烯丙基-1-(1-((1-羟基环丙基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物10-1)的合成
Figure BDA0002972897270000651
步骤1：将化合物10(100mg，0.295mmol)，(1-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)环丙基)甲醇(61mg，0.35mmol)，三苯基膦(232mg，0.88mmol)和偶氮二甲酸二叔丁酯(204mg，0.88mmol)的甲苯(10mL)溶液用氮气置换3次后，加热到65℃搅拌4小时。将反应液减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物11(110mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+494.2。
步骤2：将间氯过氧苯甲酸(90mg，0.45mmol)加入到化合物11(110mg，0.22mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，反应液室温搅拌1小时后直接减压浓缩，向残留物中依次加入4-(4-甲基哌嗪)苯胺(55mg，0.29mmol)，二异丙基乙胺(58mg，0.45mmol)和异丙醇(5mL)。反应体系在65℃下搅拌4小时，然后直接浓缩，加入氯化氢乙醇溶液(1M，10mL)，反应液室温搅拌2小时后直接减压浓缩，残留物用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物10-1(32.1mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+553.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.23(s,1H),8.86(s,1H),8.54-8.42(m,1H),8.21(s,1H),7.82(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(s,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),5.72-5.58(m,1H),5.55(s,1H),4.98(dd,J＝10.0,1.2Hz,1H),4.90-4.73(m,3H),4.54(s,2H),3.20-2.98(m,4H),2.49-2.40(m,4H),2.23(s,3H),0.84-0.71(m,2H),0.65(t,J＝3.3Hz,2H)。
实施例129：2-烯丙基-1-(1-(异恶唑啉-4-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物10-2)的合成
Figure BDA0002972897270000652
利用化合物10-1的合成方法，用化合物10和2-(4-(甲苯磺酰基氧代)异恶唑烷-2-羰基)苯甲酸甲酯反应得到化合物10-2。m/z:[M+H]+554.2。
实施例130：(R)-2-烯丙基-1-(1-(2,3-二羟基丙基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物11-1)的合成
Figure BDA0002972897270000653
向化合物1-57(100mg，0.16mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中，加入盐酸(2N，2mL)，反应液在室温下搅拌过夜。加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，残留物经prep-HPLC纯化(条件2)得化合物11-1(43.9mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+556.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(br.s,1H),8.82(s,1H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.78-7.41(m,4H),6.90(d,J＝9.2Hz,2H),6.55(d,J＝3.6Hz,1H),5.74-5.61(m,1H),5.05-4.93(m,2H),4.85(d,J＝17.2Hz,1H),4.77(t,J＝5.6Hz,1H),4.67(br.s,2H),4.47-4.34(m,1H),4.18-4.05(m,1H),3.92-3.79(m,1H),3.40-3.33(m,2H),3.16-2.98(m,4H),2.48-2.36(m,4H),2.22(s,3H)。
实施例131～132：化合物11-2～11-3的合成
利用化合物11-1的合成方法，用化合物1-58或1-59为起始原料反应得到化合物11-2～11-3(表11)：
Figure BDA0002972897270000661
表11：
Figure BDA0002972897270000662
实施例133：2-烯丙基-6-((4-((1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)苯基)氨基)-1-(1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物12-1)的合成
Figure BDA0002972897270000663
Figure BDA0002972897270000671
步骤1：将6-溴-1H-吡唑[3,4-b]吡啶(500mg，2.52mmol)，3,4-二氢-2H-吡喃(425mg，5.05mmol)和对甲苯磺酸一水合物(48mg，0.25mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中在60℃下搅拌3小时。然后将反应液倒入水中，水相用乙酸乙酯萃取，分离有机相减压浓缩后得到化合物14.1(700mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+282.0。
步骤2：将化合物14.1(700mg，2.48mmol)，2-烯丙基-6-(甲基硫代)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(551mg，2.48mmol)，N,N'-二甲基乙二胺(219mg，2.48mmol)，碘化亚铜(473mg，2.48mmol)和碳酸钾(686mg，4.96mmol)加入到1,4-二氧六环(15mL)中，反应体系用氮气置换三次后，将反应液加热到100℃搅拌16小时。反应液冷却至室温后过滤，滤饼用乙酸乙酯淋洗，合并滤液并减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物9(500mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+424.2。
步骤3：将氯化氢乙醇溶液(10mL，1M)加入到化合物9(500mg，1.18mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中。反应在室温下搅拌4小时。然后将反应液旋干后得到化合物10(400mg)为白色固体。m/z:[M+H]+340.2。
步骤4：利用化合物1-1的合成方法，用化合物10和4-((1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)苯胺反应得到化合物16-1为黄色固体。m/z:[M+H]+495.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.58(s,1H),10.22(s,1H),8.85(s,1H),8.49(s,1H),8.21(d,J＝2.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(s,2H),6.69(d,J＝9.2Hz,2H),5.755.65(m,1H),5.01(d,J＝9.6Hz,1H),4.87(d,J＝17.2Hz,1H),4.73-4.59(m,3H),4.36(s,1H),3.08(s,1H),2.84(d,J＝4.8Hz,3H),2.69(d,J＝5.2Hz,1H),2.39(d,J＝11.2Hz,1H),2.22-2.11(m,1H)。
实施例134～135：化合物12-2～12-3的合成
利用化合物12-1的合成方法，用6-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶、5-溴-3H-[1,2,3]三氮唑[4,5-b]吡啶为起始原料，将步骤4中的4-((1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基)苯胺替换为4-(4-甲基哌嗪)苯胺反应得到化合物12-2～12-3(表12)：
Figure BDA0002972897270000672
表12：
Figure BDA0002972897270000673
Figure BDA0002972897270000681
实施例136：2-烯丙基-1-(1-氨基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮三氟乙酸盐(化合物13-1)
Figure BDA0002972897270000682
步骤1：将化合物10(50mg，0.15mmol)和碳酸铯(192mg，0.589mmol)加入到N,N二甲基甲酰胺(5mL)中，反应液室温搅拌15分钟后，加入二苯基膦酰羟胺(69mg，0.30mmol)。反应液在室温下搅拌3小时后，倒入水中，水相用乙酸乙酯萃取，分离有机相并减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物12(42mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+355.2。
步骤2：用化合物1-1的合成方法，用化合物12反应得到化合物13-1为黄色固体。m/z:[M+H]+498.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.29(s,1H),9.92(s,1H),8.87(s,1H),8.43(d,J＝8.0Hz,1H),8.02(s,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.64(s,2H),7.02(d,J＝8.6Hz,2H),5.75-5.65(m,1H),4.98(d,J＝10.2Hz,1H),4.87(d,J＝17.8Hz,1H),4.81(d,J＝4.8Hz,2H),3.93-3.66(m,4H),3.27-3.05(m,4H),2.87(s,3H)。.
实施例137：2-烯丙基-1-(1-(氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物14-1)的合成
Figure BDA0002972897270000683
Figure BDA0002972897270000691
步骤1：向化合物10(150mg，0.44mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3mL)溶液中加入碳酸铯(216mg，0.66mmol)和3-溴氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(156mg，0.66mmol)，反应体系在50℃下搅拌16小时，冷却至室温用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相用水和饱和食盐水洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到化合物17(70mg)为类白色固体。m/z:[M+H]+459.2。
步骤2：用化合物1-1的合成方法，用化合物17反应得到化合物18为黄色固体。m/z:[M+H]+638.2。
步骤3：向化合物18(40mg，62.7μmol)的二氯甲烷(1mL)溶液中滴加三氟乙酸(1mL)，反应液室温搅拌2小时。然后直接减压浓缩，残留物用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物14-1(11.3mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+538.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.23(s,1H),8.85(s,1H),8.48(s,1H),8.28(s,1H),7.84(s,1H),7.58(s,2H),6.94(d,J＝7.6Hz,2H),5.75-5.69(m,1H),5.00(d,J＝9.8Hz,1H),4.86(d,J＝17.4Hz,1H),4.74(d,J＝5.6Hz,2H),4.14(t,J＝7.8Hz,2H),3.80(t,J＝7.8Hz,2H),3.48-3.36(m,2H),3.11(s,4H),2.46(s,4H),2.22(s,3H)。
实施例138～141：化合物14-2～14-5的合成
利用化合物14-1的合成方法，用化合物10和相应的溴化物反应得到化合物14-2～14-4(表13)；利用化合物14-1的合成方法，用化合物10和3-氟-N,N-二甲基-1H-吡唑-1-磺酰胺反应得到化合物14-5：
Figure BDA0002972897270000692
表13：
Figure BDA0002972897270000693
Figure BDA0002972897270000701
实施例142：1-(1-乙酰基-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物15-1)的合成
Figure BDA0002972897270000702
步骤1：将化合物17(1.3g，2.63mmol)加入到三氟乙酸(3mL)和二氯甲烷(10mL)中，反应液室温搅拌2小时，减压浓缩得到化合物19(1.6g)为黄色固体。m/z:[M+H]+395.0。
步骤2：向化合物19(100mg，0.25mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中依次加入三乙胺(103mg，1.01mmol)和乙酸酐(52mg，0.5mmol)，反应体系室温搅拌过夜。加饱和碳酸氢钠溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，分离有机相并用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物经prep-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得化合物20(40mg)为浅棕色固体。m/z:[M+H]+437.0。
步骤2：用化合物1-1的合成方法，用化合物20反应得到化合物15-1为黄色固体。m/z:[M+H]+580.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(br.s,1H),8.86(s,1H),8.53(d,J＝10.4Hz,1H),8.34(s,1H),7.89(s,1H),7.58(s,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),5.82-5.63(m,2H),5.05-4.97(m,1H),4.93-4.83(m,1H),4.80-4.64(m,3H),4.60-4.52(m,1H),4.46-4.36(m,1H),4.34-4.24(m,1H),3.12(s,4H),2.49-2.43(m,4H),2.23(s,3H),1.85(s,3H)。
实施例143：2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1-(1-(1-(甲基磺酰基)氮杂环丁-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物16-1)的合成
Figure BDA0002972897270000711
步骤1：向化合物19(100mg，0.25mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中依次加入三乙胺(60mg，0.6mmol)和甲磺酰氯(34mg，0.3mmol)，反应体系室温搅拌过夜。加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物经prep-TLC(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得化合物21(130mg)为浅黄色油状物。m/z:[M+H]+473.0。
步骤2：用化合物1-1的合成方法，用化合物21反应得到化合物16-1为黄色固体。m/z:[M+H]+616.0；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(s,1H),8.87(s,1H),8.54(d,J＝8.8Hz,1H),8.38(s,1H),7.89(s,1H),7.58(s,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),5.895.77(m,1H),5.75-5.63(m,1H),5.01(dd,J＝10.4,1.6Hz,1H),4.89(dd,J＝16.8,1.6Hz,1H),4.75(d,J＝6.0Hz,2H),4.43(d,J＝7.2Hz,4H),3.23-3.01(m,7H),2.50-2.43(m,4H),2.24(s,3H)。
实施例144：2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1-(1-((甲基磺酰基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物17-1)的合成
Figure BDA0002972897270000712
步骤1：将化合物23(利用化合物1-1的合成方法，用化合物4.36反应得到化合物23)(90mg，0.2mmol)和间氯过氧苯甲酸(195mg，1.1mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液在室温下搅拌5小时。待反应完全后，将反应液直接减压浓缩得到化合物24(90mg)为淡黄色油状物。m/z:[M+H]+464.2。
步骤2：将化合物24(90mg，0.2mmol)，4-(4-甲基哌嗪)苯胺(44.6mg，0.2mmol)和N,N-二异丙基乙胺(125.5mg，1.0mmol)的异丙醇(3mL)溶液在60℃下搅拌6小时。待反应完全后，将反应液减压浓缩，残留物用prep-HPLC(分离条件2)纯化得到化合物17-1(7.3mg)为淡黄色固体。m/z:[M+H]+575.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.28(s,1H),8.87(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),8.39(s,1H),7.96(s,1H),7.60(s,2H),6.97(d,J＝7.6Hz,2H),5.99(s,2H),5.67-5.60(m,1H),4.91(dd,J＝23.2,14.4Hz,2H),4.82(d,J＝6.2Hz,2H),3.14(s,3H),3.12(s,4H),2.47(t,4H),2.23(s,3H)。
实施例145～146：化合物17-2～17-3的合成
利用化合物17-1的合成方法，用中间体4.42或4.43反应得到化合物17-2～17-3(表14)：
Figure BDA0002972897270000721
表14：
Figure BDA0002972897270000722
实施例147：6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1-(1-(3,3,3-三氘代-2-羟基-2-((2H3)甲基)丙基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物18-1)的合成
Figure BDA0002972897270000723
向化合物1-67(17mg，0.03mmol)的甲醇(1mL)、四氢呋喃(0.5mL)和水(0.5mL)混合溶液中加入氢氧化钠(11mg，0.28mmol)，反应液在室温下搅拌16小时后直接用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物18-1(5mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+561.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.23(br.s,1H),8.85(s,1H),8.48(br.s,1H),8.15(s,1H),7.78(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(br.s,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),5.71-5.61(m,1H),5.00-4.82(m,3H),4.73(d,J＝5.6Hz,2H),3.93(d,J＝6.0Hz,2H),3.08(s,4H),2.60-2.50(m,4H),2.26(s,3H)。
实施例148：2-烯丙基-1-(1-(呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物19-1)的合成
Figure BDA0002972897270000731
步骤1：氮气保护下，将化合物10(150mg，0.44mmol)溶解于吡啶(2mL)中，加入呋喃-2-硼酸(50mg，0.44mmol)和醋酸铜(50mg，0.28mmol)，反应在80℃下搅拌16小时，加入乙酸乙酯稀释，得到的混合物用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物25(8mg)为类白色固体。m/z:[M+H]+406.0。
步骤2：利用化合物16-1步骤2，用化合物25反应得到化合物19-1。m/z:[M+H]+549.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.30(br.s,1H),8.90(s,1H),8.63(br.s,1H),8.48(s,1H),8.40(s,1H),7.91(br.s,1H),7.90(d,J＝1.6Hz,1H),7.62(br.s,2H),7.25(d,J＝1.6Hz,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,2H),5.74-5.66(m,1H),5.02-4.77(m,4H),3.14-3.11(m,4H),2.49-2.47(m,4H),2.25(s,3H)。
实施例149：2-烯丙基-1-(1-(4-羟基吡咯烷-3-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物20-1)的合成
Figure BDA0002972897270000732
向化合物1-72(80mg，0.12mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸，反应液在室温下搅拌2小时，减压浓缩，残留物用浓氨水中和后直接用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物20-1(15mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+568.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.25(br.s,1H),8.86(s,1H),8.50(br.s,1H),8.23(s,1H),7.85(br.s,1H),7.60(br.s,2H),6.95(d,J＝8.4Hz,2H),5.74-5.64(m,1H),5.31(d,J＝4.4Hz,1H),5.14-5.10(m,1H),5.00-4.76(m,4H),4.50-4.42(m,1H),3.23-3.18(m,1H),3.15-3.10(m,4H),3.04-2.99(m,1H),2.81-2.77(m,1H),2.47-2.45(m,4H),2.23(s,3H)。
实施例150：2-烯丙基-1-(1-(3-氯四氢呋喃-2-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-6-基)-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2H)-酮(化合物21-1)的合成
Figure BDA0002972897270000733
步骤1：将化合物10(300mg，0.88mmol)，2,3-二氯四氢呋喃(249mg，1.77mmol)和N,O-双三甲硅基乙酰胺(899mg，4.42mmol)的乙腈(10mL)溶液在60℃下搅拌40分钟，然后向反应液中缓慢滴加四氯化锡(1.6g，6.19mmol)，保持60℃继续搅拌1小时。将反应液倒入冷的饱和碳酸钠水溶液中，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得化合物26(150mg)为淡黄色固体。m/z:[M+H]+444.2。
步骤2：利用化合物16-1步骤2，用化合物26反应得到化合物21-1。m/z:[M+H]+587.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.33(s,1H),9.64(s,1H),8.89(s,1H),8.52(d,J＝8.4Hz,1H),8.34(s,1H),7.93(s,1H),7.65(s,2H),7.03(d,J＝8.6Hz,2H),6.59(d,J＝2.2Hz,1H),5.75-5.67(m,1H),5.17-5.13(m,1H),5.00(dd,J＝10.4,1.4Hz,1H),4.89(dd,J＝17.2,1.4Hz,1H),4.77-4.67(m,2H),4.27-4.18(m,2H),3.82(d,J＝13.2Hz,2H),3.54(d,J＝11.6Hz,2H),3.18(d,J＝10.8Hz,2H),3.07-3.00(m,1H),3.00-2.90(m,2H),2.88(d,J＝3.6Hz,3H)。
实施例151：(S)-1-(6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)丙-2-基醋酸酯(化合物22-1)的合成
Figure BDA0002972897270000741
将化合物1-47(170mg，0.31mmol)、4-二甲氨基吡啶(10mg，0.08mmol)和醋酸酐(5mL)的二氯甲烷(10mL)溶液在室温下搅拌2天，减压浓缩后用prep-HPLC(条件2)纯化得到化合物22-1(100mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+583.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.26(s,1H),8.87(s,1H),8.50(d,J＝8.8Hz,1H),8.21(s,1H),7.86(s,1H),7.60(s,2H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),5.76-5.63(m,1H),5.36-5.27(m,1H),5.03-4.96(m,1H),4.92-4.83(m,1H),4.77(d,J＝6.0Hz,2H),4.66-4.52(m,2H),3.14-3.06(m,4H),2.48-2.43(m,4H),2.22(s,3H),1.75(s,3H),1.24(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例152：(S)-1-(6-(2-烯丙基-6-((4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡啶-1-基)丙-2-基特戊酸酯(化合物22-2)的合成
Figure BDA0002972897270000742
利用化合物22-1的合成方法，将醋酸酐替换为特戊酸酐得到化合物22-2。m/z:[M+H]+625.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.24(s,1H),8.87(s,1H),8.50(d,J＝8.8Hz,1H),8.22(s,1H),7.81(s,1H),7.59(s,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,2H),5.78-5.67(m,1H),5.33-5.23(m,1H),5.02(dd,J＝10.4,1.6Hz,1H),4.94-4.86(m,1H),4.82-4.73(m,1H),4.73-4.67(m,1H),4.66-4.54(m,2H),3.17-3.02(m,4H),2.48-2.40(m,4H),2.23(s,3H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H),0.72(s,9H)。
实施例153：化合物25-1的合成
Figure BDA0002972897270000751
步骤1：冰浴条件下，向6-溴-7-氮杂吲哚(1.0g，5.08mmol)的无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中分批加入钠氢(60％，245mg，6.09mmol)。反应体系在此温度下搅拌1小时，然后滴加5-溴-1-戊烯(908mg，6.09mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。继续搅拌2小时，加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取。合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物用Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化后得到中间体11.1(1.2g)为褐色油状物。m/z:[M+H]+265.0。
步骤:2：利用化合物1的合成方法，将化合物11.1反应得到化合物3为白色固体。m/z:[M+H]+407.2。
步骤3：将化合物3(300mg，0.74mmol)和Hoveyda-Grubbs二代催化剂(46mg，0.07mmol)溶于无水二氯甲烷(300mL)中，体系用氮气置换三次后密封，在40℃下搅拌16小时。减压浓缩，残留物经Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到化合物4(330mg)为浅褐色固体。m/z:[M+H]+379.2。
步骤4：利用化合物1-1步骤2的合成方法，用化合物4反应得到化合物25-1为浅紫色固体。m/z:[M+H]+522.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.11(br.s,1H),8.82(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(s,2H),7.57(d,J＝3.2Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝3.6Hz,1H),6.06-5.94(m,1H),5.62-5.50(m,1H),4.22(br.s,4H),3.17-3.05(m,4H),2.49-2.41(m,4H),2.23(s,3H),2.00(br.s,2H),1.86(br.s,2H)。
实施例154～156：化合物25-2～25-4的合成
利用化合物25-1的合成方法，用相应的溴代物为起始原料反应得到化合物25-2～25-4(表14)：
表15：
Figure BDA0002972897270000752
Figure BDA0002972897270000761
实施例157：化合物25-5的合成
Figure BDA0002972897270000762
步骤1：将烯丙基(溴甲基)硫醚(0.89g，5.33mmol)，碳酸铯(1.16g，3.55mmol)和四丁基碘化铵(0.03g，0.09mmol)加入到7-溴-1,8-萘啶-2(1H)-酮(0.40g，1.78mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中，反应体系在室温下搅拌两天后加水(20mL)淬灭，水相用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，合并有机相后用饱和食盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物12.1(180mg)为黄色油状物。m/z:[M+H]+311.0。
步骤2：将间氯过氧苯甲酸(258mg，1.27mmol)加入到化合物12.1(180mg，0.58mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，反应体系在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物倒入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)中，用二氯甲烷(2×20mL)萃取，合并有机相后用无水硫酸钠干燥，过滤、减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化得化合物12.2(57.3mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+343.0。
步骤3：利用化合物1的合成方法，用化合物12.2反应得到化合物5为为黄色固体。m/z:[M+H]+485.2。
步骤4：Hoveyda-Grubbs二代催化剂(1.5mg，2.39μmol)加入到化合物5(11.6mg，23.9μmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，反应体系在室温下搅拌过夜，减压浓缩，残留物用prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化得化合物6(11mg)为黄色固体。m/z:[M+H]+457.0。
步骤5：利用化合物1-1步骤2的合成方法，用化合物6反应得到化合物25-5为黄色固体。m/z:[M+H]+600.1。
实施例158：化合物25-6的合成
Figure BDA0002972897270000771
步骤1：向6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(500mg，2.54mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20mL)溶液中依次加入碳酸铯(1.24g，3.81mmol)和溴丙酮(521mg，3.81mmol)，反应体系在65℃搅拌3小时，反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，分离有机相用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物经Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得化合物15.1(510mg)为浅黄色固体。m/z:[M+H]+253.0。
步骤2：冰浴条件下，向化合物15.1(510mg，2.02mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入丙烯基氯化镁的四氢呋喃溶液(2mL，1M)，反应液在0℃下搅拌1.5小时，然后加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，有机相合并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩，残留物经Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化得化合物15.2(410mg)为浅褐色油状物。m/z:[M+H]+295.0。
步骤3～5：利用化合物20-5步骤3～5的合成方法，用化合物15.2反应得到化合物25-6为黄色固体。m/z:[M+H]+552.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(br.s,1H),8.83(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝9.2Hz,2H),7.48(s,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),6.54(d,J＝3.2Hz,1H),6.07-5.94(m,1H),5.70(br.s,1H),5.13(s,1H),4.58-4.04(m,4H),3.98(s,2H),3.12(s,4H),2.47(s,4H),2.24(s,3H)。
实施例159：化合物25-7的合成
Figure BDA0002972897270000781
步骤1：向6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(500mg，2.54mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液中加入碳酸铯(1.2g，3.81mmol)和4-溴-1-丁烯(514mg，3.81mmol)，反应体系在56℃下搅拌3小时，然后将反应液用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相分别用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩得化合物13.1(630mg)为浅黄色固体。m/z:[M+H]+251.0。
步骤2：向化合物13.1(630mg，2.51mmol)的四氢呋喃(10mL)和水(5mL)混合溶液中加入N-甲基-N-氧化吗啉(230mg，5.02mmol)和锇酸钾(42mg)，反应体系室温下搅拌过夜，然后向反应体系中加入高碘酸钠(1.0g，2.05mmol)并继续搅拌3小时，反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化得化合物13.2(350mg)为无色油状物。m/z:[M+H]+253.0。
步骤3：冰浴条件下，向化合物13.2(350mg，1.38mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液中加入乙烯基溴化镁的四氢呋喃溶液(1.4mL，1M)，反应液在0℃搅拌2小时，加水淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取(20mLx2)，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化得化合物13.3(320mg)为无色油状物。m/z:[M+H]+281.0。
步骤4～6：利用化合物20-5步骤3～5的合成方法，用化合物13.3反应得到化合物25-7为黄色固体。m/z:[M+H]+538.2。将化合物20-7用SFC分离得到4个单一立体异构化合物：25-7A(RT＝2.10分钟)：m/z:[M+H]+538.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.10(br.s.,1H),8.82(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(br.s,2H),7.60(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝3.2Hz,1H),6.08-6.02(m,1H),6.57(t,J＝10.0Hz,1H),4.67(d,J＝3.6Hz,1H),4.40-4.04(m,5H),3.12-3.07(m,4H),2.47-2.44(m,4H),2.23(s,3H),2.02-1.80(m,2H)；25-7B：(RT＝3.35分钟)：m/z:[M+H]+538.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(br.s,1H),8.82(s,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(br.s,2H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.56(d,J＝3.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝3.6Hz,1H),6.00-5.93(m,1H),5.01-4.91(m,2H),4.40-4.04(m,4H),3.19-3.09(m,5H),2.55-2.45(m,4H)2.26(s,3H),2.02-1.80(m,2H)；25-7C：(RT＝3.76分钟)：m/z:[M+H]+538.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.10(br.s,1H),8.82(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.64(br.s,2H),7.60(d,J＝3.6Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝3.2Hz,1H),6.08-6.02(m,1H),6.57(t,J＝10.0Hz,1H),4.67(d,J＝3.6Hz,1H),4.40-4.04(m,5H),3.12-3.07(m,4H),2.47-2.44(m,4H),2.23(s,3H),2.02-1.80(m,2H)；25-7D：(RT＝4.92分钟)：m/z:[M+H]+538.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(br.s,1H),8.82(s,1H),8.21(d,J＝8.4Hz,1H),7.65(br.s,2H),7.58(d,J＝8.4Hz,1H),7.56(d,J＝3.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),6.56(d,J＝3.6Hz,1H),6.00-5.93(m,1H),5.01-4.91(m,2H),4.40-4.04(m,4H),3.19-3.09(m,5H),2.55-2.45(m,4H)2.26(s,3H),2.02-1.80(m,2H)。
实施例160：化合物25-8的合成
Figure BDA0002972897270000791
步骤1：向6-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(500mg，2.54mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中依次加入碳酸铯(1.07g，3.30mmol)和2-氯-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(450mg，3.30mmol)，反应体系在60℃搅拌2小时，然后用乙酸乙酯(50mL)稀释，有机相依次用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤、滤液减压浓缩，残留物经Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化得化合物16.1(690mg)为白色固体。m/z:[M+H]+298.0。
步骤2：冰浴条件下，向化合物16.1(690mg，2.31mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液中加入丙烯基氯化镁的四氢呋喃溶液(2.3mL，1M)，反应液在0℃下搅拌2小时，然后加人饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液浓缩，残留物经Flash柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化得化合物16.2(460mg)为浅褐色油状物。m/z:[M+H]+279.0。
步骤3：冰浴条件下，向化合物16.2(460mg，1.65mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液中加入硼氢化钠(62mg，1.65mmol)，反应液在0℃下搅拌1小时，然后加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥、过滤，滤液减压浓缩得化合物16.3(460mg)为浅褐色油状物。m/z:[M+H]+281.0。
步骤4～6：利用化合物20-5步骤3～5的合成方法，用化合物16.3反应得到25-8为黄色固体。m/z:[M+H]+538.3；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.09(br.s,1H),8.83(s,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(d,J＝9.2Hz,2H),7.48(s,1H),6.96(d,J＝8.8Hz,2H),6.54(d,J＝3.2Hz,1H),6.07-5.94(m,1H),5.70(br.s,1H),5.13(s,1H),4.58-4.04(m,4H),3.98(s,2H),3.12(s,4H),2.47(s,4H),2.24(s,3H)。
生物测试实施例
实施例1：酶活性检测
PLK1酶活性检测方法：本发明中，运用ADP-Glo发光检测激酶试剂盒(Promega)进行PLK1酶催化试验。通过定量检测激酶反应后溶液中产生的ADP数量来评价激酶活性。试验中发光信号与ADP数量呈正比，即与激酶活性呈正比。试验中化合物浓度范围为0.05nM～1μM。将化合物用DMSO溶解，稀释至100μM，3倍梯度稀释，取2.5μL至47.5μL反应缓冲液中摇匀。取1μL的溶液加入到5μL的反应体系中，最终反应中DMSO的浓度为1％。37℃下反应90分钟。5μL反应混合液中包含40mM三羟甲基氨基甲烷，pH7.4，20mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，2mM DTT，2M STK-1底物，15μM ATP及PLK1。酶促反应后，加入5μL ADP-Glo Reagent，并在室温下孵化40分钟。去除剩余的ATP之后，加入10μL Kinase Detection Reagent,室温下孵化30分钟。使用酶标仪测量发光信号。在部分试验中，加入已知的PLK1抑制剂作为阳性对照。运用Graphpad软件分析发光数据。将PLK1缺失情况下的发光强度和PLK1存在情况下的发光强度差定义为100％活性(Lut–Luc)。利用化合物存在情况下的发光强度信号(Lu)，％活性按照以下方法计算：
％活性＝{(Lut–Lu)/(Lut–Luc)}×100％，其中Lu＝化合物的发光强度：
运用非线性回归分析绘制％活性值与对应系列化合物浓度量效曲线，方程式为Y＝B+(T-B)/1+10((LogEC50-X)×Hill Slope)，Y＝活性百分比，B＝最小活性百分比，T＝最大活性百分比，X＝化合物和Hill坡度的对数＝坡度因子或Hill系数。IC50值由引起半数最大活性百分比浓度决定。
Wee1酶活性检测方法一：运用ATP-Glo Max发光检测激酶试剂盒(Promega)进行Wee1酶催化试验。通过定量检测激酶反应后溶液中保留的ATP数量来评价激酶活性。试验中发光信号与ATP数量呈正比，与激酶活性呈反比。试验中化合物浓度范围为0.5nM～30μM。将化合物用10％DMSO溶解，取5μL的溶液加入到50μL的反应中，最终反应中DMSO的浓度为1％。30℃下反应50分钟。50μL反应混合液中包含40mM三羟甲基氨基甲烷，pH7.4，10mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，2mM DTT，0.1mg/ml Poly(Lys,Tyr)底物，10μM ATP及Wee1。酶促反应后，加入50μL ATP-Glo Max发光检测激酶试验溶液(Promega)，并在室温下孵化15分钟。使用酶标仪测量发光信号。在部分试验中，加入已知的Wee1抑制剂作为阳性对照。运用Graphpad软件分析发光数据。将Wee1缺失情况下的发光强度和Wee1存在情况下的发光强度差定义为100％活性(Lut–Luc)。利用化合物存在情况下的发光强度信号(Lu)，％活性按照以下方法计算：
％活性＝{(Lut–Lu)/(Lut–Luc)}×100％，其中Lu＝化合物的发光强度：
运用非线性回归分析绘制％活性值与对应系列化合物浓度量效曲线，方程式为Y＝B+(T-B)/1+10((LogEC50-X)×Hill Slope)，Y＝活性百分比，B＝最小活性百分比，T＝最大活性百分比，X＝化合物和Hill坡度的对数＝坡度因子或Hill系数。IC50值由引起半数最大活性百分比浓度决定(结果见表16)。
Wee1酶活性检测方法二：运用ADP-Glo发光检测激酶试剂盒(Promega)进行Wee1酶催化试验。通过定量检测激酶反应后溶液中产生的ADP数量来评价激酶活性。试验中发光信号与ADP数量呈正比，即与激酶活性呈正比。试验中化合物浓度范围为0.05nM～1μM。将化合物用DMSO溶解，稀释至200μM，3倍梯度稀释，取2.5μL至97.5μL反应缓冲液中摇匀。取1μL的溶液加入到5μL的反应体系中，最终反应中DMSO的浓度为0.5％。30℃下反应50分钟。5μL反应混合液中包含40mM三羟甲基氨基甲烷，pH7.4，10mM MgCl2，0.1mg/ml BSA，2mM DTT，0.1mg/ml Poly(Lys,Tyr)底物，10μM ATP及Wee1。酶促反应后，加入5μL ADP-Glo Reagent，并在室温下孵化40分钟。去除剩余的ATP之后，加入10μL Kinase Detection Reagent,室温下孵化30分钟。使用酶标仪测量发光信号。在部分试验中，加入已知的Wee1抑制剂作为阳性对照。运用Graphpad软件分析发光数据。将Wee1缺失情况下的发光强度和Wee1存在情况下的发光强度差定义为100％活性(Lut-Luc)。利用化合物存在情况下的发光强度信号(Lu)，％活性按照以下方法计算：
％活性＝{(Lut–Lu)/(Lut–Luc)}×100％，其中Lu＝化合物的发光强度：
运用非线性回归分析绘制％活性值与对应系列化合物浓度量效曲线，方程式为Y＝B+(T-B)/1+10((LogEC50-X)×Hill Slope)，Y＝活性百分比，B＝最小活性百分比，T＝最大活性百分比，X＝化合物和Hill坡度的对数＝坡度因子或Hill系数。IC50值由引起半数最大活性百分比浓度决定(结果见表17)。
表16：
Figure BDA0002972897270000811
Figure BDA0002972897270000821
表17：
Figure BDA0002972897270000822
Figure BDA0002972897270000831
实施例2：细胞增殖试验
本发明中，运用细胞试验法来评价化合物的生物活性。MG63(ATCC CRL-1427)，人类骨肉瘤细胞系，将细胞种于Dulbecco’s Modified Eagle’s介质96孔板中培养，补给10％胎牛血清及1％(V/V)左旋谷酰胺，培养环境为37℃及5％CO2。化合物浓度范围为4.5nM～30μM。将Wee1抑制剂储备液溶入DMSO并加入至指示浓度的介质中，孵化72小时。阴性对照细胞仅用vehicle进行处理。在部分试验中，加入已知的Wee1抑制剂作为阳性对照。在产品说明书的指示下运用细胞计数试剂盒-8(CCK-8，Sigma-Aldrich)来评价细胞活性。运用Graphpad软件对数据进行分析，并得到IC50值及化合物拟合曲线(结果见表18)。
表18：
Figure BDA0002972897270000832
Figure BDA0002972897270000841

Claims (21)

1.一种如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐；
Figure FDA0002972897260000011
其中，G为
Figure FDA0002972897260000012
X1为S、O或NRa，Y1为连接键或C(Rb)2；L1为S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
X2和Y2分别独立地为N或CRb；L2为连接键、S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
W为N或CH；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6烯基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基或5-6元杂芳基；
R2和R3分别独立地为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基为未取代，或者选择性地被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、-CD3、-CN、-NO2、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R2和R3分别为独立取代基，或者R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自氧代基、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基的取代基取代在任意位置；
R4为氢、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
R5为氢、-C(O)ORc、-C(O)Rc、-C(O)N(Rc)2、-S(O)1-2Rc、-S(O)(NH)Rc、-S(O)2N(Rc)2、-ORc、-N(Rc)2、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-6烷基、3-8元杂环烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或5-6元杂芳基C1-6烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-6烷基、3-8元杂环烷基C1-6烷基、苯基C1-6烷基或5-6元杂芳基C1-6烷基为未取代，或者选择性被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、C1-6亚烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氨基C1-6烷基、-D、-CD3、-CN、-NO2、＝O、＝NRd、＝N-ORd、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R6为氢、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；
R5和R6分别为独立取代基，或者R5和R6通过-(CR2)mL3(CR2)n-连接形成杂环基团；
L3为连接键、-O-、-CO-、-S(O)2-、-S(O)(NH)-或-NR-；
每个R独立地为氢、氰基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷基；或者，两个R与其共同连接的碳原子一起形成氧代基(＝O)；
每个Ra和每个Re分别独立地为氢或C1-6烷基；
每个Rb独立地为氢、卤素或C1-6烷基；
每个Rc和每个Rd分别独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基为未取代，或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
m和n分别为0～8的任一整数，并且，m+n≥1。
2.如权利要求1所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，Ra为H或C1-6烷基；
和/或，Rb为H或C1-6烷基；
和/或，Rc为H、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基和3-6元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
和/或，Rd为H或C1-6烷基。
3.如权利要求1所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，G选自以下任一情况：
1)G为
Figure FDA0002972897260000031
X1为O或S，Y1为C(Rb)2，L1为C(O)；
2)G为
Figure FDA0002972897260000032
X2为N或CRb，Y2为CRb，L2为C(O)；
3)G为
Figure FDA0002972897260000033
X2为N或CRb，Y2为N或CRb，L2为连接键；或，
4)G为
Figure FDA0002972897260000034
X2为N或CRb，Y2为N或CRb。
4.如权利要求1或3所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，W为N。
5.如权利要求1所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，G为
Figure FDA0002972897260000035
Figure FDA0002972897260000036
Figure FDA0002972897260000041
6.如权利要求1～5任一项所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，R1为氢、卤素、羟基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-3烷基、氨基C1-3烷基、C1-3烷氧基C1-3烷基或C1-4烷氨基C1-3烷基；
和/或，R2为C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、3-10元杂环烷基或3-8元杂环烷基C1-4烷基；所述R2为未取代，或者选择性被1～3个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基和-CD3的取代基取代在任意位置；
和/或，R3为H，或者，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被1～3个C1-4烷基或卤代C1-4烷基取代在任意位置；
和/或，R4为氢、C2-6烯基、C2-6烯基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被1～3个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
和/或，R5为H、-C(O)ORc、-C(O)Rc、-C(O)N(Rc)2、-S(O)1-2Rc、-S(O)(NH)Rc、-S(O)2N(Rc)2、-ORc、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、5-6元杂芳基、C3-8环烷基C1-4烷基、3-8元杂环烷基C1-4烷基或5-6元杂芳基C1-4烷基为未取代，或者选择性地被如下1～5个选自卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、羟基C1-4烷基、氨基C1-4烷基、-CN、-NO2、＝O、＝NRd、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的取代基取代在任意位置。
7.如权利要求1～5任一项所述的如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，R1为H、F、-CN、-CH3、-OCH3、-OCF3、-CH2OH或-CH2OCH3；
和/或，R2为
Figure FDA0002972897260000042
Figure FDA0002972897260000051
或，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为如下任一结构：
Figure FDA0002972897260000052
Figure FDA0002972897260000053
所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被一个或多个选自C1-6烷基或卤代C1-4烷基的取代基取代在任意位置；
和/或，R4为乙烯基、乙炔基、异丙基或环丙基；
和/或，R5为H、-OH、-NH2、-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-CH(CH3)2、-(CH2)3CH3、-C(CH3)3、
Figure FDA0002972897260000054
Figure FDA0002972897260000055
Figure FDA0002972897260000061
8.如权利要求1所述的如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，R5和R6通过-(CH2)mL3(CH2)n-相互连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
9.如权利要求1～8任一项所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，所述如式I所示化合物为如式II、III、IV、V、VI或VII所示化合物和/或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002972897260000062
其中，W、R1、R2、R4、R5和R6的定义如权利要求1～8任一项所述。
10.如权利要求1所述的如式I所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，所述的如式I所示的化合物为如下任一结构：
Figure FDA0002972897260000063
Figure FDA0002972897260000071
Figure FDA0002972897260000081
Figure FDA0002972897260000091
Figure FDA0002972897260000101
Figure FDA0002972897260000111
Figure FDA0002972897260000121
Figure FDA0002972897260000131
Figure FDA0002972897260000141
11.一种如式I’所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐：
Figure FDA0002972897260000151
其中，X2和Y2分别独立地为N或CRb；
L2为连接键、S(O)2、S(O)(NH)、C(O)、C(NH)或C(NOH)；
W为N或CH；
R1为氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、羧基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6烯基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基、C6-10芳基或5-6元杂芳基；
R2和R3分别独立地为氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基；所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、C3-10环烷基、3-10元杂环烷基、C6-10芳基、5-10元杂芳基、C3-10环烷基C1-6烷基、3-10元杂环烷基C1-6烷基、C6-10芳基C1-6烷基、6-10元杂芳基C1-6烷基、C2-6烯基或C2-6炔基为未取代，或者选择性地被如下一个或多个选自卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、羟基C1-6烷基、氨基C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-4烷基、C1-6烷氨基C1-4烷基、-CN、-NO2、-SRd、-ORd、-OC(O)Rd、-OC(O)ORd、-OC(O)N(Rd)2、-C(O)ORd、-C(O)Rd、-C(O)N(Rd)2、-N(Rd)2、-NReC(O)Rd、-N(Re)C(O)ORd、-N(Re)C(O)N(Rd)2、-NReS(O)2Rd、-S(O)1-2Rd、-S(O)(NH)Rd、-S(O)2N(Rd)2和-NReS(O)2N(Rd)2的基团取代在任意位置；
R2和R3分别为独立取代基，或者R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自氧代基、卤素、C1-6烷基或卤代C1-6烷基的取代基取代在任意位置；
R4为氢、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环烷基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代，或者选择性被一个或多个选自卤素、氰基、羟基、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
R5和R6通过-(CR2)mL3(CR2)n-、-CH＝CH-(CR2)mL3(CR2)n-或-C≡C-(CR2)mL3(CR2)n-连接形成杂环基团；
L3为连接键、-O-、-CO-、-S(O)2-、-S(O)(NH)-或-NR-；
每个R独立地选自氢、氰基、羟基、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代C1-6烷基；或者，两个R与其共同连接的碳原子一起形成氧代基(＝O)；
每个Ra和每个Re分别独立地为氢或C1-6烷基；
每个Rb独立地为氢、卤素或C1-6烷基；
每个Rc和每个Rd分别独立地为氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基；所述C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-8环烷基或3-8元杂环烷基为未取代，或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氨基、卤代C1-6烷氧基、C3-8环烷基和3-8元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
m和n分别为0～8的任一整数，并且，m+n≥1。
12.如权利要求11所述的如式I’所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，Ra为H或C1-6烷基；
和/或，Rb为H或C1-6烷基；
和/或，Rc为H、C2-6烯基、C2-6炔基或C1-6烷基；所述C1-6烷基为未取代或者选择性地被1～3个选自卤素、羟基、氨基、羧基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氨基、卤代C1-4烷氧基、C3-6环烷基和3-6元杂环烷基的取代基取代在任意位置；
和/或，Rd为H或C1-6烷基；
和/或，Re为H或C1-6烷基。
13.如权利要求11所述的如式I’所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，R4为氢或乙烯基；
和/或，R2为
Figure FDA0002972897260000161
Figure FDA0002972897260000162
和/或，R1为H、F、-CH3、-OCH3、-OCF3、-CH2OH或-CH2OCH3；
或，R2和R3相互连接形成5-10元杂环烷基，所述5-10元杂环烷基为如下任一结构：
Figure FDA0002972897260000163
Figure FDA0002972897260000164
所述5-10元杂环烷基为未取代或者选择性被一个或多个选自C1-6烷基或卤代C1-4烷基的取代基取代在任意位置；
和/或，基团
Figure FDA0002972897260000171
为
Figure FDA0002972897260000172
Figure FDA0002972897260000173
14.如权利要求11～13任一项所述的如式I’所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，R5和R6通过-CH＝CH-(CH2)mL3(CH2)n-或-C≡C-(CH2)mL3(CH2)n-相互连接形成杂环基团；其中，m为1、2、3或4；n为0、1、2、3或4。
15.如权利要求11所述的如式I’所示的化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，其特征在于，所述的如式I’所示的化合物为如下任一结构：
Figure FDA0002972897260000174
Figure FDA0002972897260000181
16.一种药物组合物，其包括治疗有效量的活性组分以及药学上可接受的辅料；所述活性组分包括如权利要求1～15任一项所述的如式I所述化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐；所述的药学上可接受的辅料为药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
17.如权利要求1～15任一项所述的如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或如权利要求16所述药物组合物在制备Wee1和/或PLK1抑制剂中的应用。
18.如权利要求1～15任一项所述的如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或如权利要求16所述药物组合物在制备癌症的化学疗法或放射性疗法的增敏剂中的应用。
19.如权利要求1～15任一项所述的如式I所示化合物、其异构体、前药、稳定的同位素衍生物或药学上可接受的盐，或如权利要求16所述药物组合物在制备治疗和/或缓解由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病的药物中的应用。
20.如权利要求19所述的应用，其特征在于，所述药物进一步和一种或多种其它种类的治疗剂和/或治疗方法联合使用，用于治疗和/或缓解由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病。
21.如权利要求19或20任一项所述的应用，其特征在于，所述的由Wee1和/或PLK1介导的相关疾病为癌症。
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