TW202330553A - Ｒａｓ抑制劑 - Google Patents

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愛蕾娜 S 蔻登
詹姆士 桂格
愛德萊恩 L 吉爾
約翰 Ｅ 納克斯
劉陽
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美商銳新醫藥公司
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Abstract

本揭示案之特徵在於能夠抑制Ras蛋白之巨環化合物以及其醫藥組成物及蛋白質複合物，及其在癌症治療中之用途。

Description

RAS抑制劑
絕大多數的小分子藥物係藉由結合目標蛋白上功能重要之口袋，藉此調節該蛋白質之活性來起作用。舉例而言，稱為他汀類藥物(statins)之降膽固醇藥結合HMG-CoA還原酶之酶活性位點，由此防止該酶與其受質接合。事實上，已知許多此類藥物/目標相互作用對，可能誤導人們相信能夠發現針對大多數(若非全部)蛋白質之小分子調節劑進而提供合理量之時間、努力及資源。但情況遠非如此。目前，據估計，所有人體蛋白質中僅約10%可作為小分子之目標。Bojadzic及Buchwald, Curr Top Med Chem 18: 674-699 (2019)。其餘90%當前被認為係以上提及之小分子藥物發現難以治癒或難處理的。此類目標通常稱為「不可入藥(undruggable)」的。此等不可入藥之目標包括醫學上重要之人體蛋白質的大部分且通常未開發之儲庫。因此，人們對發現能夠調節此類不可入藥目標之功能的新穎分子模態非常感興趣。
文獻中已充分確定，Ras蛋白(K-Ras、H-Ras及N-Ras)在多種人類癌症中起到至關重要的作用且因此成為抗癌療法的適當目標。實際上，在美國，所有人類癌症中的約30%係由Ras蛋白突變引起，該等癌症中有許多為致命的。由活化突變、過度表現或上游活化引起之Ras蛋白失調在人類腫瘤中較為常見，且在人類癌症中常常發現Ras之活化突變。舉例而言，在Ras蛋白中密碼子12處之活化突變藉由抑制GTP酶活化蛋白(GAP)依賴性及固有GTP水解速率，明顯使Ras突變蛋白群偏向「開啟」(GTP結合)狀態(Ras(ON))，導致致癌性MAPK信號傳導來起作用。值得注意的是，Ras對GTP展現皮莫耳濃度之親和力，使得Ras即便是在低濃度此核苷酸存在下亦能夠活化。在Ras中密碼子13 (例如G13C)及61 (例如Q61K)處之突變亦引起在一些癌症中之致癌活性。
儘管在過去數十年中，針對Ras進行了廣泛的藥物發現嘗試，但在美國僅兩種靶向K-Ras G12C突變體之藥劑經批准(索托拉西布(sotorasib)及阿達格拉西布(adagrasib))。需要付出更多的努力來發現針對由各種Ras突變驅動之癌症的其他醫藥。
本文提供Ras抑制劑。本文所描述之方法需要在合成配體與兩種細胞內蛋白質之間形成高親和力三組分複合物或結合物，該兩種細胞內蛋白在正常生理條件下不會相互作用：所關注之目標蛋白(例如Ras)，以及在細胞中廣泛表現之細胞質伴侶蛋白(呈現蛋白)(例如親環蛋白A)。更具體言之，在一些實施例中，本文所描述之Ras抑制劑藉由驅動在Ras蛋白與廣泛表現之細胞質伴侶蛋白親環蛋白A (CYPA)之間形成高親和力三重複合物或結合物而在Ras中誘導新結合口袋。不受理論束縛，本發明者咸信，本發明化合物以及其形成之複合物或結合物對Ras發揮抑制作用之一種方式係在空間上阻塞Ras與傳播致癌信號所需之下游效應分子諸如RAF及PI3K之間的相互作用位點。
因此，在一些實施例中，本揭示案之特徵在於一種結構式I之化合物或其醫藥學上可接受之鹽： ， 式I 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； L 1不存在或為連接體； W為交聯基團，其包含乙烯基酮、乙烯基砜、炔酮或炔基砜； R 1為氫、視情況經取代之3至10員雜環烷基或視情況經取代之C 1-C 6雜烷基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基；且 R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。
亦提供醫藥組成物，其包含式I之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之賦形劑。亦提供包含表1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組成物。
亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，提供一種治療有需要之個體之Ras蛋白相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
進一步提供一種抑制細胞中之Ras蛋白的方法，該方法包括使該細胞與有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。
具體言之，經審慎考慮，所論述的關於本發明之一個實施例的任何限制可適用於本發明之任何其他實施例。另外，本發明之任何化合物或組成物均可用於本發明之任何方法中，且本發明之任何方法均可用於製造或利用本發明之任何化合物或組成物。 定義及化學術語
在本申請案中，除非自上下文另有清晰說明，否則(i)術語「a (一)」意指「一或多」；(ii)術語「或」用於指「及/或」，除非明確指示該術語係指替代選擇係唯一的或該替代選擇係相互排斥的，然而，本揭示案支持之定義係指唯一替代選擇及「及/或」；(iii)術語「包含」及「包括」應理解為涵蓋列出之組分或步驟，無論僅呈現該等組分或步驟自身抑或呈現其與一或多種額外組分或步驟之組合；以及(iv)在提供範圍時，端點包括在內。
如本文所使用，術語「約」用於指示一個值包括用於測定該值之裝置或方法的誤差的標準偏差。在某些實施例中，術語「約」係指值之沿任一方向(大於或小於)在所述值的25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更低百分比內的範圍，除非另外規定或自上下文另外顯而易見(例如在該數字將超過可能值之100%時)。
如本文所使用，在描述相鄰原子之情形中，術語「相鄰」係指經共價鍵直接連接之二價原子。
如本文所使用，「本發明之化合物」及類似術語，無論明確指示與否，均係指本文所描述之Ras抑制劑，包括式I及其子式之化合物，例如表1之化合物，以及其鹽(例如醫藥學上可接受之鹽)、溶劑合物、水合物、立體異構物(包括阻轉異構物)及互變異構物。
術語「野生型」係指具有在自然界中在「正常」(與突變、患病、改變等相對)狀態或情形中所見之結構或活性的實體。熟習此項技術者應理解，野生型基因及多肽通常以多種不同形式(例如對偶基因)存在。
熟習此項技術者應瞭解，本文所描述之某些化合物可以一或多種不同異構形式(例如立體異構物、幾何異構物、阻轉異構物、互變異構物)或同位素形式(例如其中一或多個原子經該原子之不同的同位素取代，諸如氫經氘取代)存在。除非另外指示或自上下文清楚可見，所描繪之結構可理解為表示個別或組合的任何此類異構或同位素形式。
本文所描述之化合物可為不對稱的(例如具有一或多個立體中心)。除非另外指示，否則涵蓋所有立體異構物，諸如鏡像異構物及非鏡像異構物。含有不對稱取代之碳原子的本揭示案之化合物可以光學活性形式或外消旋形式分離。此項技術中已知由光學活性起始物質製備光學活性形式之方法，諸如藉由拆分外消旋混合物或藉由立體選擇性合成来製備。烯烴、C=N雙鍵及類似物之許多幾何異構物亦可存在於本文所描述之化合物中，且所有此類穩定異構物均涵蓋在本揭示案中。本揭示案之化合物的順式及反式幾何異構物已有描述且可以異構物混合物形式或以分開之異構形式分離。
在一些實施例中，本文所描繪的一或多種化合物可以不同互變異構形式存在。自上下文將清楚可見，除非明確地排除，否則提及該等化合物涵蓋所有此類互變異構形式。在一些實施例中，互變異構形式係由一個單鍵與相鄰雙鍵交換且伴隨質子之遷移得到。在某些實施例中，互變異構形式可為質子轉移互變異構物，該互變異構物係具有與參考形式相同之經驗式及總電荷的異構物質子化狀態。具有質子轉移互變異構形式之部分的實例有酮-烯醇對、醯胺-亞胺酸對、內醯胺-內醯亞胺對、醯胺-亞胺酸對、烯胺-亞胺對及環狀形式，在該等環狀形式中，質子可佔據雜環系統之兩個或兩個以上位置，諸如1H-咪唑及3H-咪唑、1H-三唑、2H-三唑及4H-1,2,4-三唑、1H-異吲哚及2H-異吲哚，以及1H-吡唑及2H-吡唑。在一些實施例中，互變異構形式可處於平衡狀態或藉由適當取代而在空間上鎖定於一種形式。在某些實施例中，互變異構形式係由縮醛相互轉化得到。
除非另外規定，否則本文所描繪之結構亦意欲包括僅因一或多個同位素富集之原子之存在而不同的化合物。可併入本發明之化合物中的例示性同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯及碘之同位素，諸如 2H、 3H、 11C、 13C、 14C、 13N、 15N、 15O、 17O、 18O、 32P、 33P、 35S、 18F、 36Cl、 123I及 125I。同位素標記之化合物(例如標記 3H及 14C之化合物)可用於化合物或受質組織分佈分析中。氚化(亦即， 3H)及碳-14 (亦即， 14C)同位素因其易於製備及偵測而可用。另外，用較重同位素，諸如氘(亦即， 2H)取代可由於代謝穩定性增強(例如活體內半衰期增加或劑量需求減小)而提供某些治療益處。在一些實施例中，一或多個氫原子經 2H或 3H置換，或者一或多個碳原子經 13C或 14C富集之碳置換。正電子發射同位素，諸如 15O、 13N、 11C及 18F可用於正電子發射斷層掃描(PET)研究中以檢查受質受體佔有情況。同位素標記之化合物的製備為熟習此項技術者所知的。舉例而言，同位素標記之化合物一般可遵循與所揭示的關於本文所描述之本發明化合物之程序類似的程序，藉由用同位素標記之試劑取代未同位素標記之試劑製備。
在本發明化合物中可含有一或多個氘取代之部分(其中任何位置「R」均可為氘(D))的非限制性實例包括 、 及 。額外實例包括諸如以下部分： 、 、 及 ，以及類似R 1型部分之氘化，其中R 1之定義見於本文中(例如見於式I、Ia、II-5、II-5a、II-6、II-6a、II-6b及II-6c之化合物中)。亦涵蓋在本發明化合物中取代基W內之部分的氘化，其中W如本文所定義(參見例如通式I及II以及其子式，以及本文所描述之W的具體實例，諸如 、 及 )。此外，亦涵蓋本文所描述各式之化合物的任何A部分中可用位置之氘化，諸如 、 及 。另外，氘取代亦可在本發明化合物中之連接體位置處發生，諸如 。
在另一個實施例中，亦涵蓋矽化取代，諸如在以下連接體中： 。
如此項技術中所知，許多化學實體可呈現多種不同的固體形式，諸如非晶形或結晶形式(例如多晶型物、水合物、溶劑合物)。在一些實施例中，本發明之化合物可以任何此類形式使用，包括任何固體形式。在一些實施例中，本文所描述或描繪之化合物可以水合物形式或溶劑合物形式提供。
在本說明書中各處，本揭示案之化合物的取代基係以群組或以範圍揭示。具體言之，預期本揭示案包括該等群組及範圍各成員之每一個別子組合。舉例而言，術語「C 1-C 6烷基」特定地意欲個別地揭示甲基、乙基、C 3烷基、C 4烷基、C 5烷基及C 6烷基。此外，在一種化合物包括多個位置，且在該等位置處，取代基係以群組或以範圍揭示時，除非另外指示，否則本揭示案意欲涵蓋在各位置處含有成員之每一個別子組合的個別化合物及化合物群組(例如種類及子類)。
術語「視情況經取代之X」(例如「視情況經取代之烷基」) 意欲等效於「X，其中X視情況經取代」(例如「烷基，其中該烷基視情況經取代」)。並非意欲指特徵「X」(例如烷基)本身為視情況選擇的。如本文所描述，某些所關注化合物可含有一或多個「視情況經取代」之部分。一般而言，術語「經取代」無論前面是否加有術語「視情況」，均意謂指定部分之一或多個氫經適合取代基，例如本文所描述之取代基或基團中之任一者置換。除非另外指示，否則「視情況經取代」之基團可在該基團之每一可取代位置處具有適合取代基，且當在任何給定結構中之不止一個位置可經選自指定群組之不止一個取代基取代時，在各位置處之取代基可相同或不同。舉例而言，在術語「視情況經取代之C 1-C 6烷基-C 2-C 9雜芳基」中，該烷基部分、該雜芳基部分或兩者可視情況經取代。本揭示案所設想之取代基的組合較佳為形成穩定或化學上可行之化合物的取代基組合。如本文所使用，術語「穩定」係指化合物當經歷允許其產生、偵測及在某些實施例中，允許其回收、純化及用於一或多個本文所揭示之目的之條件時實質上不改變。
「視情況經取代」之基團之可取代碳原子上的適合單價取代基可獨立地為氘；鹵素；-(CH 2) 0- 4R°；-(CH 2) 0- 4OR°；-O(CH 2) 0- 4R o；-O-(CH 2) 0- 4C(O)OR°；-(CH 2) 0- 4CH(OR°) 2；-(CH 2) 0- 4SR°；-(CH 2) 0- 4Ph，其可經R°取代；-(CH 2) 0- 4O(CH 2) 0- 1Ph，其可經R°取代；-CH=CHPh，其可經R°取代；-(CH 2) 0- 4O(CH 2) 0- 1-吡啶基，其可經R°取代；4-8員飽和或不飽和雜環烷基(例如吡啶基)；3-8員飽和或不飽和環烷基(例如環丙基、環丁基或環戊基)；-NO 2；-CN；-N 3；-(CH 2) 0- 4N(R°) 2；-(CH 2) 0- 4N(R°)C(O)R°；-N(R°)C(S)R°；-(CH 2) 0- 4N(R°)C(O)NR° 2；-N(R°)C(S)NR° 2；-(CH 2) 0- 4N(R°)C(O)OR°；-N(R°)N(R°)C(O)R°；-N(R°)N(R°)C(O)NR° 2；-N(R°)N(R°)C(O)OR°；-(CH 2) 0- 4C(O)R°；-C(S)R°；-(CH 2) 0- 4C(O)OR°；-(CH 2) 0- 4-C(O)-N(R o) 2；-(CH 2) 0- 4-C(O)-N(R o)-S(O) 2-R o；-C(NCN)NR° 2；-(CH 2) 0- 4C(O)SR°；-(CH 2) 0- 4C(O)OSiR° 3；-(CH 2) 0- 4OC(O)R°；-OC(O)(CH 2) 0- 4SR°；-SC(S)SR°；-(CH 2) 0- 4SC(O)R°；-(CH 2) 0- 4C(O)NR° 2；-C(S)NR° 2；-C(S)SR°；-(CH 2) 0- 4OC(O)NR° 2；-C(O)N(OR°)R°；-C(O)C(O)R°；-C(O)CH 2C(O)R°；-C(NOR°)R°；-(CH 2) 0- 4SSR°；-(CH 2) 0- 4S(O) 2R°；-(CH 2) 0- 4S(O) 2OR°；-(CH 2) 0- 4OS(O) 2R°；-S(O) 2NR° 2；-(CH 2) 0- 4S(O)R°；-N(R°)S(O) 2NR° 2；-N(R°)S(O) 2R°；-N(OR°)R°；-C(NOR°)NR° 2；-C(NH)NR° 2；-P(O) 2R°；-P(O)R° 2；-P(O)(OR°) 2；-OP(O)R° 2；-OP(O)(OR°) 2；-OP(O)(OR°)R°；-SiR° 3；-(C 1-4直鏈或具支鏈伸烷基)O-N(R°) 2；或-(C 1-4直鏈或具支鏈伸烷基)C(O)O-N(R°) 2，其中各R°可如下文所定義經取代且獨立地為氫、-C 1-6脂族基團、-CH 2Ph、-O(CH 2) 0- 1Ph、-CH 2-(5-6員雜芳基環)，或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或儘管有以上定義，但兩個獨立存在之R°與其插入原子一起形成具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環，其可如下文所定義經取代。
R° (或由兩個獨立存在之R°與其插入原子一起形成的環)上的適合單價取代基可獨立地為鹵素、-(CH 2) 0- 2R ●、-(鹵基R ●)、-(CH 2) 0- 2OH、-(CH 2) 0- 2OR ●、-(CH 2) 0- 2CH(OR ●) 2、-O(鹵基R ●)、-CN、-N 3、-(CH 2) 0- 2C(O)R ●、-(CH 2) 0- 2C(O)OH、-(CH 2) 0- 2C(O)OR ●、-(CH 2) 0- 2SR ●、-(CH 2) 0- 2SH、-(CH 2) 0- 2NH 2、-(CH 2) 0- 2NHR ●、-(CH 2) 0- 2NR ● 2、-NO 2、-SiR ● 3、-OSiR ● 3、-C(O)SR ●、-(C 1- 4直鏈或具支鏈伸烷基)C(O)OR ●或-SSR ●，其中各R ●未經取代或在前面加有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地選自C 1-4脂族基團、-CH 2Ph、-O(CH 2) 0- 1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。R°之飽和碳原子上的適合二價取代基包括=O及=S。
「視情況經取代」之基團之飽和碳原子上的適合二價取代基包括以下：=O、=S、=NNR * 2、=NNHC(O)R *、=NNHC(O)OR *、=NNHS(O) 2R *、=NR *、=NOR *、-O(C(R * 2)) 2- 3O-或-S(C(R * 2)) 2- 3S-，其中R *在每次獨立出現時係選自氫；C 1-6脂族基團，其可如下文所定義經取代；或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。結合至「視情況經取代」之基團之鄰近可取代碳的適合二價取代基包括：-O(CR * 2) 2- 3O-，其中R *在每次獨立出現時係選自氫；C 1-6脂族基團，其可如下文所定義經取代；或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
R *之脂族基團上的適合取代基包括鹵素、-R ●、-(鹵基R ●)、-OH、-OR ●、-O(鹵基R ●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR ●、-NH 2、-NHR ●、-NR ● 2或-NO 2，其中各R ●未經取代或在前面加有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C 1-4脂族基團、-CH 2Ph、-O(CH 2) 0- 1Ph或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。
「視情況經取代」之基團之可取代氮上的適合取代基包括-R †、-NR † 2、-C(O)R †、-C(O)OR †、-C(O)C(O)R †、-C(O)CH 2C(O)R †、-S(O) 2R †、-S(O) 2NR † 2、-C(S)NR † 2、-C(NH)NR † 2或-N(R †)S(O) 2R †；其中各R †獨立地為氫；C 1-6脂族基團，其可如下文所定義經取代；未經取代之-OPh；或具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的未經取代之3-6員飽和、部分不飽和或芳基環，或儘管有以上定義，但兩個獨立存在之R †與其插入原子一起形成具有0-4個獨立地選自氮、氧或硫之雜原子的3-12員飽和、部分不飽和或芳基單環或雙環。
R †之脂族基團上的適合取代基獨立地為鹵素、-R ●、-(鹵基R ●)、-OH、-OR ●、-O(鹵基R ●)、-CN、-C(O)OH、-C(O)OR ●、-NH 2、-NHR ●、-NR ● 2或-NO 2，其中各R ●未經取代或在前面加有「鹵基」之情況下僅經一或多個鹵素取代，且獨立地為C 1-4脂族基團、-CH 2Ph、-O(CH 2) 0- 1Ph或具有0-4個獨立地選氮、氧或硫之雜原子的5-6員飽和、部分不飽和或芳基環。R †之飽和碳原子上的適合二價取代基包括=O及=S。
如本文所使用，術語「乙醯基」係指基團-C(O)CH 3。
如本文所使用，術語「烷氧基」係指-O-C 1-C 20烷基，其中該烷氧基經由氧原子連接至化合物之其餘部分。
如本文所使用，術語「烷基」係指含有1至20個(例如1至10個或1至6個)碳之飽和、直鏈或具支鏈單價烴基。在一些實施例中，烷基為不具支鏈的(亦即，為線性的)；在一些實施例中，烷基為具支鏈的。烷基為例如但不限於甲基、乙基、正丙基及異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基及第三丁基，以及新戊基。
如本文所使用，術語「伸烷基」表示由直鏈或具支鏈飽和烴藉由移除兩個氫原子得到的飽和二價烴基，且其實例有亞甲基、伸乙基、伸異丙基及類似基團。術語「C x-C y伸烷基」表示具有在x與y個之間之碳的伸烷基。例示性x值為1、2、3、4、5及6，且例示性y值為2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20 (例如C 1-C 6、C 1-C 10、C 2-C 20、C 2-C 6、C 2-C 10或C 2-C 20伸烷基)。在一些實施例中，伸烷基可進一步經1、2、3或4個如本文所定義之取代基取代。
除非另外具體說明，否則如本文所使用，術語「烯基」表示含有一或多個碳碳雙鍵的具有2至20個碳(例如2至6個或2至10個碳)之單價直鏈或具支鏈基團且其實例為乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基及2-丁烯基。烯基包括順式及反式異構物兩種。除非另外具體說明，否則如本文所使用，術語「伸烯基」表示含有一或多個碳碳雙鍵的具有2至20個碳(例如2至6個或2至10個碳)之二價直鏈或具支鏈基團。
如本文所使用，術語「炔基」表示含有碳碳參鍵的具有2至20個碳(例如2至4個、2至6個或2至10個碳)之單價直鏈或具支鏈基團且其實例為乙炔基及1-丙炔基。
如本文所使用，術語「炔基碸」表示包含結構 之基團，其中R為本文所描述的任何化學上可行之取代基。
如本文所使用，術語「胺基」表示-N(R †) 2，例如-NH 2及-N(CH 3) 2。
如本文所使用，術語「胺基烷基」表示一或多個碳原子經一或多個胺基部分取代的烷基部分。
如本文所描述，術語「胺基酸」係指具有側鏈、胺基及酸基(例如-CO 2H或-SO 3H)之分子，其中該胺基酸藉由該側鏈、胺基或酸基(例如側鏈)連接至母分子基團。如本文所使用，術語「胺基酸」在最廣泛意義上係指可例如經由形成一或多個肽鍵併入多肽鏈中的任何化合物或物質。在一些實施例中，胺基酸具有通用結構H 2N-C(H)(R)-COOH。在一些實施例中，胺基酸為天然存在之胺基酸。在一些實施例中，胺基酸為合成胺基酸；在一些實施例中，胺基酸為D-胺基酸；在一些實施例中，胺基酸為L-胺基酸。「標準胺基酸」係指天然存在之肽中常見的二十種標準L-胺基酸中之任一種。例示性胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺酸、天冬胺酸、半胱胺酸、麩胺酸、麩醯胺酸、甘胺酸、組胺酸、視情況經取代之羥基正纈胺酸、異白胺酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、正纈胺酸、鳥胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、吡咯離胺酸、硒代半胱胺酸、絲胺酸、牛磺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。
如本文所使用，術語「芳基」表示由碳原子形成的單價單環、雙環或多環系統，其中連接至側接基團之環為芳族環。芳基之實例為苯基、萘基、菲基及蒽基。芳環可在產生穩定結構之任何雜原子或碳環原子處連接至其側接基團且除非另外具體說明，否則任何環原子可視情況經取代。
如本文所使用，術語「C 0」表示鍵。舉例而言，術語-N(C(O)-(C 0-C 5伸烷基-H)-之一部分包括-N(C(O)-(C 0伸烷基-H)-，其亦表示為-N(C(O)-H)-。
如本文所使用，術語「碳環」及「碳環基」係指單價、視情況經取代之C 3-C 12單環、雙環或三環結構，其可為橋接環、稠合環或螺環，其中所有環均由碳原子形成且至少一個環為非芳族環。碳環結構包括環烷基、環烯基及環炔基。碳環基之實例為環己基、環己烯基、環辛炔基、1,2-二氫萘基、1,2,3,4-四氫萘基、茀基、茚基、二氫茚基、十氫萘基及類似基團。碳環可在產生穩定結構之任何環原子處連接至其側接基團且除非另外具體說明，否則任何環原子可視情況經取代。
如本文所使用，術語「羰基」表示C(O)基團，其亦可表示為C=O。
如本文所使用，術語「羧基」意指-CO 2H、(C=O)(OH)、COOH或C(O)OH，或未質子化之對應物。
如本文所使用，術語「氰基」表示-CN基團。
如本文所使用，術語「環烷基」表示單價飽和環狀烴基，除非另外具體說明，否則其可為具有三至八個環碳之橋接環、稠合環或螺環，且其實例為環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環庚基。
如本文所使用，術語「環烯基」表示單價、非芳族飽和環狀烴基，除非另外具體說明，否則其可為具有三至八個環碳且含有一或多個碳碳雙鍵之橋接環、稠合環或螺環。
如本文所使用，術語「非鏡像異構物」意指不互為鏡像且彼此不可重疊的立體異構物。
如本文所使用，術語「鏡像異構物」意指具有至少80% (亦即，至少90%之一種鏡像異構物及至多10%之另一種鏡像異構物)、較佳至少90%且更佳至少98%之光學純度或鏡像異構物過量(如藉由此項技術中之標準方法測定)的本發明化合物之每一個別光學活性形式。
術語「胍基」係指具有以下結構之基團： ，其中各R獨立地為本文所描述的任何化學式可行之取代基。
如本文所使用，術語「胍基烷基烷基」表示在一或多個碳原子上經一或多個胍基部分取代之烷基部分。
如本文所使用，術語「鹵基乙醯基」係指至少一個氫經鹵素置換的乙醯基。
如本文所使用，術語「鹵烷基」表示一或多個碳原子經一或多個相同或不同之鹵素部分取代的烷基部分。
如本文所使用，術語「鹵素」表示選自溴、氯、碘或氟之鹵素。
如本文所使用，術語「雜烷基」係指至少一個碳原子經雜原子(例如O、N或S原子)置換的如本文所定義之「烷基」。雜原子可出現在基團之中間或末端。
如本文所使用，術語「雜芳基」表示含有至少一個完全芳族環之單價、單環或多環結構：亦即，其在該單環或多換系統內含有4 n+2個π電子且在該芳族環中含有至少一個選自N、O或S之雜原子。例示性未經取代之雜芳基具有1至12個(例如1至11個、1至10個、1至9個、2至12個、2至11個、2至10個或2至9個)碳。術語「雜芳基」包括任一上述雜芳族環與一或多個芳環或碳環，例如苯基環或環己烷環稠合的雙環、三環及四環基團。雜芳基之實例包括但不限於吡啶基、吡唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、咪唑基、噻唑基、喹啉基、四氫喹啉基及4-氮雜吲哚基。雜芳基環可在產生穩定結構之任何環原子處連接至其側接基團且除非另外具體說明，否則任何環原子可視情況經取代。在某一實施例中，雜芳基經1、2、3或4個取代基取代。
如本文所使用，術語「雜環烷基」表示至少一個環為非芳族環且其中該非芳族環含有一個、兩個、三個或四個獨立地選自由氮、氧及硫組成之群之雜原子的單價、單環、雙環或多環系統，其可為橋接環、稠合環或螺環。5員環具有零至兩個雙鍵，且6員環及7員環具有零至三個雙鍵。例示性未經取代之雜環烷基具有1至12個(例如1至11個、1至10個、1至9個、2至12個、2至11個、2至10個或2至9個)碳。術語「雜環烷基」亦表示具有橋接多環結構之雜環化合物，其中一或多個碳或雜原子橋接單環之不相鄰成員，例如奎寧環基。術語「雜環烷基」包括任一上述雜環與一或多個芳族環、碳環、雜芳族環或雜環，例如芳基環、環己烷環、環己烯環、環戊烷環、環戊烯環、吡啶環或吡咯啶環稠合的雙環、三環及四環基團。雜環烷基之實例為吡咯啶基、哌啶基、1,2,3,4-四氫喹啉基、十氫喹啉基、二氫吡咯并吡啶基及十氫萘啶基。雜環烷基環可在產生穩定結構之任何環原子處連接至其側接基團且除非另外具體說明，否則任何環原子可視情況經取代。
如本文所使用，術語「羥基」表示-OH基團。
如本文所使用，術語「羥基烷基」表示一或多個碳原子經一或多個-OH部分取代的烷基部分。
如本文所使用，術語「異構物」意指本發明之任何化合物的任何互變異構物、立體異構物、阻轉異構物、鏡像異構物或非鏡像異構物。應認識到，本發明之化合物可具有一或多個對掌性中心或雙鍵，且因此，以立體異構物形式，諸如以雙鍵異構物(亦即，E/Z幾何異構物)或非鏡像異構物(例如鏡像異構物(亦即，(+)或(-))或順/反異構物)形式存在。根據本發明，本文所描繪之化學結構且因此本發明之化合物涵蓋所有相應立體異構物，亦即，立體異構純(例如幾何異構純、鏡像異構物純或非鏡像異構物純)形式以及鏡像異構物及立體異構物混合物，例如外消旋物。本發明化合物之鏡像異構物及立體異構物混合物可典型地藉由熟知方法，諸如對掌性相氣相層析法、對掌性相高效液相層析法、使化合物以對掌性鹽錯合物形式結晶或使化合物在對掌性溶劑中結晶來拆分成其組分鏡像異構物或立體異構物。鏡像異構物及立體異構物亦可由立體異構純或鏡像異構純之中間體、試劑及觸媒，藉由熟知之不對稱合成方法獲得。
如本文所使用，術語「連接體」係指將第一部分(例如巨環部分)連接至第二部分(例如交聯基團)之二價有機部分。在一些實施例中，連接體使得化合物能夠在以下實例中提供以及此處提供之Ras-RAF破壞分析方案中獲得2 uM或更低之IC50： 此生物化學分析之目的係量測測試化合物促進在載有核苷酸之Ras同功型與親環蛋白A之間形成三元複合物的能力；由此得到的三元複合物破壞與BRAF RBD構築體之結合，抑制Ras經由RAF效應子進行之信號傳導。
在含有25 mM HEPES pH 7.3、0.002% Tween20、0.1% BSA、100 mM NaCl及5 mM MgCl 2之分析緩衝液中，將無標記親環蛋白A、His6-K-Ras-GMPPNP (或其他Ras變異體)及GST-BRAF RBD分別以25 µM、12.5 nM及50 nM之最終濃度組合於384孔分析盤中。分析盤各孔中存在之化合物係自30 µM最終濃度起始，經歷10點3倍連續稀釋的稀釋液。在25℃下培育3小時之後，接著將抗His Eu-W1024及抗GST別藻藍蛋白之混合物添加至分析樣品孔中分別達到10 nM及50 nM之最終濃度，且將反應再培育1.5小時。在微孔盤讀取器(Ex 320 nm, Em 665/615 nm)上讀取TR-FRET信號。促進Ras:RAF複合物破壞之化合物經鑑別為使TR-FRET比率相對於DMSO對照孔降低之化合物。
該分析亦可用於評估選擇性。在一些實施例中，與此項技術中已知者相比，本發明化合物對一或多種特定Ras突變體(例如，K-Ras G13C)相較於其他Ras突變體(例如，K-Ras G12C)或野生型具有選擇性。
在一些實施例中，連接體包含20個或更少的線性原子。在一些實施例中，連接體包含15個或更少的線性原子。在一些實施例中，連接體包含10個或更少的線性原子。在一些實施例中，連接體之分子量低於500 g/mol。在一些實施例中，連接體之分子量低於400 g/mol。在一些實施例中，連接體之分子量低於300 g/mol。在一些實施例中，連接體之分子量低於200 g/mol。在一些實施例中，連接體之分子量低於100 g/mol。在一些實施例中，連接體之分子量低於50 g/mol。
如本文所使用，「單價有機部分」小於500 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於400 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於300 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於200 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於100 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於50 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於25 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於20 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於15 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於10 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於1 kDa。在一些實施例中，「單價有機部分」小於500 g/mol。在一些實施例中，「單價有機部分」在500 g/mol與500 kDa之間的範圍內。
如本文所使用，術語「立體異構物」係指一種化合物(例如本文所描述的任何式之化合物)可能具有所有可能的不同異構以及構形形式，特別是基礎分子結構之所有可能的立體化學及構形異構形式、所有非鏡像異構物、鏡像異構物或構形異構物，包括阻轉異構物。本發明之一些化合物可以不同互變異構形式存在，所有該等互變異構形式均包括在本發明之範圍內。
如本文所使用，術語「磺醯基」表示-S(O) 2-基團。
如本文所使用，術語「硫代羰基」係指-C(S)-基團。
如本文所使用，術語「乙烯基酮」係指包含直接連接至碳碳雙鍵之羰基的基團。
如本文所使用，術語「乙烯基砜」係指包含直接連接至碳碳雙鍵之磺醯基的基團。
如本文所使用，術語「炔酮」係指包含結構 之基團，其中R為本文所描述的任何化學上可行之取代基。
熟習此項技術者閱讀本揭示案將理解，本文所描述的某些化合物可以多種形式中之任一種提供或利用，諸如鹽形式、經保護形式、前藥形式、酯形式、異構形式(例如光學或結構異構物)、同位素形式等。在一些實施例中，提及特定化合物可指該化合物之特定形式。在一些實施例中，提及特定化合物可指呈任何形式之該化合物。在一些實施例中，例如，一種化合物之單一立體異構物的製劑可視為該化合物之不同形式而非該化合物之外消旋混合物；一種化合物之特定鹽可視為與該化合物之另一種鹽不同的形式；含有雙鍵之一種構形異構物((Z)或(E))的製劑可視為與含有該雙鍵之另一種構形異構物((E)或(Z))之製劑不同的形式；一或多個原子之同位素不同於參考製劑中存在之同位素的製劑可視為呈不同形式。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2022年1月10日提出申請之美國申請案第63/298,098號的優先權益，該案特此以全文引用之方式併入。 化合物
本文提供Ras抑制劑。本文所描述之方法需要在合成配體與兩種細胞內蛋白質之間形成高親和力三組分複合物或結合物，該兩種細胞內蛋白在正常生理條件下不會相互作用：所關注之目標蛋白(例如Ras)，以及在細胞中廣泛表現之細胞質伴侶蛋白(呈現蛋白)(例如親環蛋白A)。更具體言之，在一些實施例中，本文所描述之Ras抑制劑藉由驅動在Ras蛋白與廣泛表現之細胞質伴侶蛋白親環蛋白A (CYPA)之間形成高親和力三重複合物或結合物而在Ras中誘導新結合口袋。不受理論束縛，本發明者咸信，本發明化合物以及其形成之複合物或結合物對Ras發揮抑制作用之一種方式係在空間上阻塞Ras與傳播致癌信號所需之下游效應分子諸如RAF之間的相互作用位點。
不受理論束縛，本發明者假定，本發明化合物與Ras及伴侶蛋白(例如親環蛋白A)之共價及非共價相互作用可促成對Ras活性之抑制。在一些實施例中，本發明化合物與Ras蛋白之側鏈(例如在突變Ras蛋白12位或13位處之半胱胺酸之硫氫基側鏈)形成共價加合物。亦可與Ras之其他側鏈形成共價加合物。另外或替代地，非共價相互作用可能起到作用：例如，凡德瓦爾(van der Waals)相互作用、疏水相互作用、親水相互作用及氫鍵相互作用，及其組合可促成本發明化合物形成複合物且充當Ras抑制劑的能力。因此，本發明化合物可抑制多種Ras蛋白(例如K-Ras、N-Ras、H-Ras及其在12位、13位及61位突變之突變體，諸如G12C、G12D、G12V、G12S、G13C、G13D及Q61L，以及本文所描述之其他突變體)。
確定共價加合物形成之方法係此項技術中已知的。一種確定共價加合物形成之方法係執行「交聯」分析，諸如在此等條件下之分析。
注意：以下方案描述用於監測 K-Ras G12C (GMP-PNP) 與本發明化合物之交聯的程序。該方案亦可改用其他 Ras 蛋白或核苷酸諸如 G13C 來實施。
此生物化學分析之目的係量測測試化合物共價標記載有核苷酸之K-Ras同功型的能力。在含有12.5 mM HEPES pH 7.4、75 mM NaCl、1 mM MgCl 2、1 mM BME、5 µM 親環蛋白A及2 µM測試化合物之分析緩衝液中，將5 µM載有GMP-PNP之K-Ras (1-169) G12C之儲備液稀釋10倍達到0.5 µM最終濃度；最終樣品體積為100 µL。
在25℃下將樣品培育至多24小時的時間，隨後藉由添加10 µL之5%甲酸淬滅。淬滅之樣品在台式離心機中以15000 rpm離心15分鐘，隨後將10 µL等分試樣注入至逆相C4管柱上且用移動相中遞增之乙腈梯度溶析至質譜儀中。原始資料之分析可使用Waters MassLynx MS軟體進行，其中結合%係自經標記及未標記K-Ras之解卷積蛋白質峰計算。
因此，本文提供一種具有式I之結構的化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 式I， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； L 1不存在或為連接體； W為交聯基團，其包含乙烯基酮、乙烯基砜、炔酮或炔基砜； R 1為氫、視情況經取代之3至10員雜環烷基或視情況經取代之C 1-C 6雜烷基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基；且 R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。
在一些實施例中，W為交聯基團，其包含乙烯基酮、乙烯基砜或炔酮。
在一些實施例中，本文提供一種具有式Ia之結構的化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 式Ia。
在本發明化合物之一些實施例中，A為視情況經取代之噻唑-二基、視情況經取代之噁唑-二基、視情況經取代之嗎啉-二基、視情況經取代之吡咯啶-二基、視情況經取代之吡啶-二基、視情況經取代之氮雜環丁烷-二基、視情況經取代之吡嗪-二基、視情況經取代之嘧啶-二基、視情況經取代之哌啶-二基、視情況經取代之噁二唑-二基、視情況經取代之噻二唑-二基、視情況經取代之三唑-二基、視情況經取代之硫代嗎啉-二基或視情況經取代之伸苯基。
在一些實施例中，本揭示案之特徵在於一種結構式II-1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-1。
在一些實施例中，提供具有式II-2之結構的化合物，或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-2， 其中R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-3之結構，或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-3。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-4之結構，或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-4。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-4b之結構，或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-4b。
在本發明化合物之一些實施例中，R 2為： 或 。
在本發明化合物之一些實施例中，R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基。在一些實施例中，R 3為： 。
在本發明化合物之一些實施例中，R 3為視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。在一些實施例中，R 3為： 。
在本發明化合物之一些實施例中，A為視情況經取代之5至10員伸雜芳基。在一些實施例中，A為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 , 、 或 。
在本發明化合物之一些實施例中，A為視情況經取代之伸苯基。在一些實施例中，A為： 、 、 或 。
在本發明化合物之一些實施例中，A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。在一些實施例中，A係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，A係選自以下或其立體異構物： 、 或 。
在本發明化合物之一些實施例中，該連接體為式III之結構： A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-(D 1)-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k–A 2式III， 其中A 1為在該連接體與CH(R 3)之間的鍵；A 2為在W與該連接體之間的鍵；B 1、B 2、B 3及B 4各自獨立地選自視情況經取代之C 1-C 2伸烷基、視情況經取代之C 1-C 3伸雜烷基、O、S及NR N；各R N獨立地為氫、視情況經取代之C 1–C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4烯基、視情況經取代之C 2-C 4炔基、視情況經取代之3至14員雜環烷基、視情況經取代之6至10員芳基或視情況經取代之C 1-C 7雜烷基；C 1及C 2各自獨立地選自羰基、硫羰基、磺醯基或磷醯基；f、g、h、i、j及k各自獨立地為0或1；且D 1為視情況經取代之C 1-C 10伸烷基、視情況經取代之C 2-C 10伸烯基、視情況經取代之C 2-C 10伸炔基、視情況經取代之3至14員伸雜環烷基、視情況經取代之5至10員伸雜芳基、視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之6至10員伸芳基、視情況經取代之C 2-C 10伸聚乙二醇或視情況經取代之C 1-C 10伸雜烷基或連接A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-與-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k–A 2之化學鍵。
在本發明化合物之一些實施例中，該連接體為或包含環狀部分。在一些實施例中，該連接體具有式IIIa之結構： 式IIIa， 其中o為0或1； R 7為氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之3至8員伸環烷基或視情況經取代之3至8員伸雜環烷基； X 1係不存在、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、O、NCH 3或視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基； Cy為視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之3至12員伸雜環烷基、視情況經取代之6至10員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；且 L 2係不存在、-SO 2-、-NH-、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基或視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。
在一些實施例中，該連接體係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，該連接體係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5之結構，或其醫藥學上可接受之鹽： 式II-5， 其中Cy 1為視情況經取代之螺環8至11員伸雜環烷基或視情況經取代之雙環7至9員伸雜環烷基；且 其中W包含乙烯基酮或乙烯基砜。
在一些實施例中，Cy 1為視情況經取代之螺環10至11員伸雜環烷基。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5a之結構： 式II-5a， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5b之結構： 式II-5b， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； s及t各自獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3、F，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之C 3-C 6環烷基，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之3至6員雜環烷基。
在一些實施例中，R 13為-CH 3。
在一些實施例中，s與t之和為1。在一些實施例中，s與t之和為2。在一些實施例中，s為0且t為1。在一些實施例中，s與t之和為0
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5c之結構： 式II-5c。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5d之結構： 式II-5d。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-5e之結構： 式II-5e。
在一些實施例中，r為1。在一些實施例中，r為2。在一些實施例中，X 2為O。在一些實施例中，X 2為S。在一些實施例中，X 2為SO 2。
在一些實施例中，X 2為NR 12。在一些實施例中，R 12係選自以下或其立體異構物： -CH 3、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或-H。在一些實施例中，R 12係選自以下或其立體異構物： 或 。
在一些實施例中，X 2為C(R 11) 2。在一些實施例中，各R 11為氫。
在本發明化合物之一些實施例中，W為包含乙烯基酮之交聯基團。在一些實施例中，W具有式IVa之結構： 式IVa， 其中R 8a、R 8b及R 8c各自獨立地為氫、-CN、鹵素或視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和雜環烷基。在一些實施例中，W係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 及 。在一些實施例中，W係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
在本發明化合物之一些實施例中，W為包含乙烯基砜之交聯基團。在一些實施例中，W具有式IVc之結構： 式IVc， 其中R 10a、R 10b及R 10c獨立地為氫、-CN或視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和雜環烷基。在一些實施例中，W為： 。
在本發明化合物之一些實施例中，W為包含炔酮之交聯基團。在一些實施例中，W具有式IVb之結構： 式IVb， 其中R 9為氫；視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和環烷基或4至7員飽和雜環烷基。在一些實施例中，W係選自： 或 。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-6之結構： 式II-6， 其中Q 1為CH 2、NR N或O； Q 2為CO、NR N或O；且 Z為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；或 其中Q 1-Q 2-Z為視情況經取代之9至10員螺環伸雜環烷基。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-6a之結構： 式II-6a， 其中R 14為氟、氫或C 1-C 3烷基；且 u為0或1。
在一些實施例中，R 14為氟且u為1。在一些實施例中，R 14為氫且u為0。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-6b之結構： 式II-6b。
在一些實施例中，本發明化合物具有式II-6c之結構： 式II-6c。
在一些實施例中，本發明化合物係選自表1或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構物。在一些實施例中，本發明化合物係選自表1或其醫藥學上可接受之鹽或阻轉異構物。在一些實施例中，該化合物為選自表1之A1至A209之化合物。在一些實施例中，該化合物為選自表1之A210至A368之化合物。 表 1 ：某些本發明化合物
實例編號 結構
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
A10
A11
A12
A13
A14
A15
A16
A17
A18
A19
A20
A21
A22
A23
A24
A25
A26
A27
A28
A29
A30
A31
A32
A33
A34
A35
A36
A37
A38
A39
A40
A41
A42
A43
A44
A45
A46
A47
A48
A49
A50
A51
A52
A53
A54
A55
A56
A57
A58
A59
A60
A61
A62
A63
A64
A65
A66
A67
A68
A69
A70
A71
A72
A73
A74
A75
A76
A77
A78
A79
A80
A81
A82
A83
A84
A85
A86
A87
A88
A89
A90
A91
A92
A93
A94
A95
A96
A97
A98
A99
A100
A101
A102
A103
A104
A105
A106
A107
A108
A109
A110
A111
A112
A113
A114
A115
A116
A117
A118
A119
A120
A121
A122
A123
A124
A125
A126
A127
A128
A129
A130
A131
A132
A133
A134
A135
A136
A137
A138
A139
A140
A141
A142
A143
A144
A145
A146
A147
A148
A149
A150
A151
A152
A153
A154
A155
A156
A157
A158
A159
A160
A161
A162
A163
A164
A165
A166
A167
A168
A169
A170
A171
A172
A173
A174
A175
A176
A177
A178
A179
A180
A181
A182
A183
A184
A185
A186
A187
A188
A189
A190
A191
A192
A193
A194
A195
A196
A197
A198
A199
A200
A201
A202
A203
A204
A205
A206
A207
A208
A209
A210
A211
A212
A213
A214
A215
A216
A217
A218
A219
A220
A221
A222
A223
A224
A225
A226
A227
A228
A229
A230
A231
A232
A233
A234
A235
A236
A237
A238
A239
A240
A241
A242
A243
A244
A245
A246
A247
A248
A249
A250
A251
A252
A253
A254
A255
A256
A257
A258
A259
A260
A261
A262
A263
A264
A265
A266
A267
A268
A269
A270
A271
A272
A273
A274
A275
A276
A277
A278
A279
A280
A281
A282
A283
A284
A285
A286
A287
A288
A289
A290
A291
A292
A293
A294
A295
A296
A297
A298
A299
A300
A301
A302
A303
A304
A305
A306
A307
A308
A309
A310
A311
A312
A313
A314
A315
A316
A317
A318
A319
A320
A321
A322
A323
A324
A325
A326
A327
A328
A329
A330
A331
A332
A333
A334
A335
A336
A337
A338
A339
A340
A341
A342
A343
A344
A345
A346
A347
A348
A349
A350
A351
A352
A353
A354
A355
A356
A357
A358
A359
A360
A361
A362
A363
A364
A365
A366
A367
A368
在一些實施例中，本發明化合物為選自表2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構物。在一些實施例中，本發明化合物為選自表2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或阻轉異構物。
在一些實施例中，本發明化合物不為選自表2之化合物。在一些實施例中，本發明化合物不為選自表2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構物。在一些實施例中，本發明化合物不為選自表2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或阻轉異構物。 表 2 ：某些化合物
實例編號 結構
B551
B552
B553
B554
B555
B556
B557
B558
B559
B560
B561
B562
B563
B564
B565
B566
B567
B568
B569
B570
B571
B572
B573
B574
B575
B576
B577
B578
B579
B580
B581
B582
B583
B584
B585
B586
B587
B588
B589
B590
B591
B592
B593
B594
B595
B596
B597
B598
B599
B600
B601
B602
B603
B604
B605
B606
B607
B608
B609
B610
B611
B612
B613
B614
B615
B616
B617
B618
B619
B620
B621
B622
B623
B624
B625
B626
B627
B628
B629
B630
B631
B632
B633
B634
B635
B636
B637
B638
B639
B640
B641
B642
B643
B644
B645
B646
B647
B648
B649
B650
B651
B652
B653
B654
B655
B656
B657
B658
B659
B660
B661
B662
B663
B664
B665
B666
B667
B668
B669
B670
B671
B672
B673
B674
B675
B676
B677
B678
B679
B680
B681
B682
B683
B684
B685
B686
B687
B688
B689
B690
B691
B692
B693
B694
B695
B696
B697
B698
B699
B700
B701
B702
B703
B704
B705
B706
B707
B708
B709
B710
B711
B712
B713
B714
B715
B716
B717
B718
B719
B720
B721
B722
B723
B724
B725
B726
B727
B728
B729
B730
B731
B732
B733
B734
B735
B736
B737
B738
B739
B740
B741
C1
C2
C3
C4
C5
C6
C7
C11
C12
C13
C18
C21
C22
C25
C27
C28
C29
C30
C32
C34
C38
C47
C64
C65
C66
C70
C73
C74
C75
C76
C77
C81
C83
C85
C86
C87
C88
C89
C90
C91
C96
C97
C102
C103
C104
C106
C107
C109
C111
C112
C113
C115
C116
C117
C118
C119
C120
C121
C122
C123
C124
C126
C127
C128
C129
C130
C131
C132
C139
C140
C141
C142
C143
C144
C145
C146
C147
C148
C149
C150
C161
C162
C163
C164
C165
C167
C168
C169
C170
C171
C172
C173
C174   
C175
C176
C177
C178
C179
C180
C181
C182
C183
C184
C185
C186
C187
C188
C189
C190
C191
C192
C194
C195
C196
C197
C198
C199
C200
C201
C202
C203
C204
C205
C206
C207
C208
C209
C210
C211
C212
C213
C214
C215
C216
C217
C218
C219
C220
C221
C222
C223
C224
C225
C226
C227
C228
C229
C230
C231
C232
C233
C234
C235
C236
C237
C238
C239
C240
C241
C242
C243
C244
C245
C246
C247
C248
C249
C250
C251
C252
C253
C254
C255
C256
C257
C258
C259
C260
C261
C262
C263
C264
C265
C266
C267
C268
C269
C270
C271
C272
C273
C274
C275
C276
C277
C278
C279
C280
C282
C283
C284
C285
C286
C287
C288
C289
C290
C291
C292
C293
C294
C295
C296
C297
C298
C299
C300
C301
C302
C303
C304
C305
C306
C307
C308
C309
C310
C311
C312
C313
C314
C315
C316
C317
C318
C319
C320
C321
C322
C323
C324
C325
C326
C327
C328
C329
C330
C331
C332
C333
C334
C335
C336
C337
C338
C339
C340
C341
C342
C343
C344
C345
C346
C347
C348
C349
C350
C351
C352
C353
C354
C355
C356
C357
C358
C359
C360
C361
C362
C363
C364
C365
C366
C367
C368
C369
C370
C371
C372
C373
C374
C375
C376
C377
C378
C379
C380
C381
C382
C383
C384
C385
C386
C387
C388
C389
C390
C391
C392
C393
C394
C395
C396
C397
C398
C399
C400
C401
C402
C403
C404
C405
C406
C407
C408
C409
C410
C411
C412
C413
C414
C415
C416
C417
C418
C419
C420
C421
C422
C423
C424
C425
應注意，一些化合物中之鍵以平直線或楔形線顯示。在一些情況下，立體異構物之相對立體化學已確定；在一些情況下，絕對立體化學已確定。在一些情況下，單個實例編號對應於立體異構物混合物。上表化合物之所有立體異構物均涵蓋在本發明中。在特定實施例中，涵蓋上表化合物之阻轉異構物。括號可忽略。
亦提供一種醫藥組成物，其包含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之賦形劑。
進一步提供一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIa之結構： 式VIa， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基； 各R 13獨立地為-CH 3；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
進一步提供一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIb之結構： 式VIb， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； R 14為氟、氫或C 1-C 3烷基； u為0或1；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
進一步提供一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIc之結構： 式VIc， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
進一步提供一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VId之結構： 式VId， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
在本發明結合物之一些實施例中，該單價有機部分為蛋白質。在一些實施例中，該蛋白質為Ras蛋白。在一些實施例中，該Ras蛋白為K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。在本發明結合物之一些實施例中，該連接體經由與該單價有機部分之胺基酸殘基之硫氫基的鍵結合至該單價有機部分。
本發明之化合物亦適合用於抗體-藥物結合物以及降解劑應用。
進一步提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明化合物，或其醫藥學上可接受之鹽。該癌症可例如為胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、急性骨髓性白血病、多發性骨髓瘤、甲狀腺腺癌、骨髓發育不良症候群或鱗狀細胞肺癌。在一些實施例中，該癌症包含Ras突變，諸如K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。其他Ras突變在本文中亦有描述。
進一步提供一種治療有需要之個體之Ras蛋白相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明化合物，或其醫藥學上可接受之鹽。
進一步提供一種抑制細胞中之Ras蛋白的方法，該方法包括使該細胞與有效量的本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。舉例而言，該Ras蛋白為K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。其他Ras蛋白在本文中亦有描述。該細胞可為癌細胞，諸如胰臟癌細胞、結腸直腸癌細胞、非小細胞肺癌細胞、急性骨髓性白血病細胞、多發性骨髓瘤細胞、甲狀腺腺癌細胞、骨髓發育不良症候群細胞或鱗狀細胞肺癌細胞。其他癌症類型在本文中亦有描述。該細胞可為活體內或活體外的。
進一步提供一種用式I化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式Ia化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-1化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-2化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-3化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-4化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-5化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-5a化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6a化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6b化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6c化合物治療K-Ras G13C突變型癌症之方法。
進一步提供一種用式I化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式Ia化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-1化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-2化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-3化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-4化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-5化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-5a化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6a化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6b化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。進一步提供一種用式II-6c化合物治療K-Ras G12C突變型癌症之方法。
對於本發明化合物而言，一種立體異構物可展現之抑制作用可優於另一種立體異構物。舉例而言，一種阻轉異構物可展現抑制作用，而另一種阻轉異構物可展現極低或不展現抑制作用。
在一些實施例中，本文所描述之方法或用途進一步包括投與額外抗癌療法。在一些實施例中，該額外抗癌療法為HER2抑制劑、EGFR抑制劑、第二Ras抑制劑、SHP2抑制劑、SOS1抑制劑、Raf抑制劑、MEK抑制劑、ERK抑制劑、PI3K抑制劑、PTEN抑制劑、AKT抑制劑、mTORC1抑制劑、BRAF抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-1抑制劑、CDK4/6抑制劑或其組合。在一些實施例中，該額外抗癌療法為SHP2抑制劑。其他額外抗癌療法在本文中亦有描述。 合成方法
本文所描述之化合物可由市售起始物質製備或使用已知之有機、無機或酶促製程合成。
本發明之化合物可藉由熟習有機合成技術者熟知之多種方式製備。舉例而言，本發明之化合物可使用以下方案中所描述之方法，以及合成有機化學技術中已知之合成方法或熟習此項技術者所理解的關於該等方法之修改來合成。該等方法包括但不限於以下方案中所描述之方法。 方案 1.巨環酯之一般合成
方案1中概述了巨環酯之一般合成。經適當取代之芳基-3-(5-溴-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇( 1)可以經保護之3-(5-溴-2-碘-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇及經適當取代之硼酸為起始物質，分三個步驟製備，包括鈀介導之偶合、烷基化及去保護反應。
甲基-胺基-六氫嗒嗪-3-甲酸酯-硼酸酯( 2)可分三個步驟製備，包括保護、銥觸媒介導之硼基化及與( S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲基甲酯偶合。
經適當取代之乙醯基吡咯啶-3-羰基-N-甲基-L-纈胺酸(或替代性胺基酸衍生物( 4)可藉由以下方式製備：使L-纈胺酸甲酯與經保護之( S)-吡咯啶-3-甲酸偶合，隨後進行去保護、與含有經適當取代之邁克爾受體(Michael acceptor)之羧酸偶合及水解步驟。
最終的巨環酯可藉由以下方式製備：使甲基-胺基-六氫嗒嗪-3-甲酸酯-硼酸酯( 2)與芳基-3-(5-溴-1-乙基-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇( 1)在Pd觸媒存在下偶合，隨後進行水解及巨環內酯化步驟，產生經適當保護之巨環中間體( 5)。去保護且與經適當取代之中間體 4偶合，產生巨環產物。可能需要額外去保護及/或官能化步驟來製備最終化合物。 方案 2. 巨環酯之替代性一般合成
替代地，可如方案2中所描述來製備巨環酯。使經適當保護之溴-吲哚基( 6)在Pd觸媒存在下與硼酸酯( 3)偶合，隨後進行碘化、去保護及酯水解。隨後，與( S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯偶合，隨後進行水解及巨環內酯化可產生碘中間體( 7)。在Pd觸媒存在下與經適當取代之硼酸酯偶合且烷基化可產生完全保護之巨環( 5)。需要額外去保護或官能化步驟來製備最終化合物。
此外，本揭示案之化合物可使用以下實例中所描述之方法，以及合成有機化學技術中已知之合成方法，或熟習此項技術者所理解的關於該等方法之修改來合成。該等方法包括但不限於以下實例中所描述之方法。舉例而言，熟習此項技術者將能夠將式(I)化合物所需之-B-L-W基團裝載於巨環酯中，其中B、L及W如本文所定義，包括藉由使用以上某些方案中及本文實例部分中例示之方法進行。
本文表1中之化合物係使用本文所揭示之方法製備或使用本文所揭示之方法結合熟習此項技術者之知識製備。表2之化合物可使用本文所揭示之方法製備或可使用本文所揭示之方法結合熟習此項技術者之知識製備。 方案 3.巨環酯之一般合成
方案3中概述了巨環酯之替代性一般合成。經適當取代之吲哚基硼酸酯( 8)可以經保護之3-(5-溴-2-碘-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇及經適當取代之硼酸為起始物質，分四個步驟製備，包括鈀介導之偶合、烷基化、去保護及鈀介導之硼基化反應。
甲基-胺基-3-(4-溴噻唑-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸酯( 10)可經由使(S)-2-胺基-3-(4-溴噻唑-2-基)丙酸( 9)與( S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯偶合來製備。
最終的巨環酯可藉由以下方式製備：使甲基-胺基-3-(4-溴噻唑-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸酯( 10)與經適當取代之吲哚基硼酸酯( 8)在Pd觸媒存在下偶合，隨後進行水解及巨環內酯化步驟，產生經適當保護之巨環中間體( 11)。去保護且與經適當取代之中間體 4偶合可產生巨環產物。可能需要額外去保護或官能化步驟來製備最終化合物 13 或 14。 方案 4. 巨環酯之一般合成
方案4中概述了巨環酯之替代性一般合成。經適當取代之嗎啉或替代性雜環中間體( 15)可與經適當保護之中間體 1經由鈀介導之偶合來偶合。隨後進行酯水解且與哌嗪甲酸酯偶合，產生中間體 16。
巨環酯可藉由水解、去保護及巨環化序列製備。隨後去保護且與中間體 4(或類似物)偶合，產生經適當取代之最終巨環產物。可能需要額外去保護或官能化步驟來製備最終化合物 17。 方案 5. 巨環酯之一般合成
方案5中概述了巨環酯之替代性一般合成。經適當取代之巨環( 20)可以經適當保護之硼酸酯 18及溴吲哚基中間體( 19)為起始物質製備，包括鈀介導之偶合、水解、與哌嗪甲酸酯偶合、水解、去保護及巨環化步驟。隨後與經適當取代及保護之胺基酸偶合，接著進行鈀介導之偶合，產生中間體 21。可能需要額外的去保護及包括烷基化在內之衍生化步驟來達到此目的。
最終的巨環酯可藉由使中間體( 22)與經適當取代之羧酸中間體( 23)偶合來製備。可能需要額外去保護或官能化步驟來製備最終化合物( 24)。
此外，本揭示案之化合物可使用以下實例中所描述之方法，以及合成有機化學技術中已知之合成方法，或熟習此項技術者所理解的關於該等方法之修改來合成。該等方法包括但不限於以下實例中所描述之方法。舉例而言，熟習此項技術者將能夠將式(I)化合物所需之-B-L-W基團裝載於巨環酯中，其中B、L及W如本文所定義，包括藉由使用以上某些方案中及本文實例部分中例示之方法進行。 醫藥組成物及使用方法 醫藥組成物及投與方法
本發明所涉及之化合物為Ras抑制劑，且可用於治療癌症。因此，本發明之一個實施例提供含本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之賦形劑的醫藥組成物，以及使用本發明化合物製備此類組成物之方法。
如本文所使用，術語「醫藥組成物」係指與醫藥學上可接受之賦形劑一起調配的化合物，諸如本發明化合物，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，化合物係以適於在治療方案中投與之單位劑量的量存在於醫藥組成物中，該化合物當投與相關群體時顯示出統計顯著的實現預定治療效果的可能性。在一些實施例中，醫藥組成物可特定地調配成以固體或液體形式投與，包括適於以下方式投與者：經口投與，例如藥水(水性或非水性溶液或懸浮液)、錠劑(例如旨在經頰、舌下及全身吸收者)、大丸劑、粉末、顆粒、供施用於舌部之糊劑；非經腸投與，例如藉由皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜外注射，如例如無菌溶液或懸浮液，或持續釋放調配物；表面施用，例如施用於皮膚、肺或口腔之乳霜、軟膏劑或控制釋放貼片或噴霧劑；陰道內或直腸內投與，例如子宮托、乳霜或泡沫劑；舌下投與；經眼投與；經皮投與；或經鼻、肺投與及投與其他黏膜表面。
如本文所使用，「醫藥學上可接受之賦形劑」係指在個體體內無毒及無發炎性的任何無活性成分(例如能夠將活性化合物懸浮或溶解之媒劑)。典型賦形劑包括例如：抗黏附劑、抗氧化劑、黏合劑、包衣劑、壓縮助劑、崩解劑、染料(色素)、軟化劑、乳化劑、填充劑(稀釋劑)、成膜劑或包衣劑、調味劑、芳香劑、助流劑(流動增強劑)、潤滑劑、防腐劑、印刷油墨、吸附劑、懸浮劑或分散劑、甜味劑或水合用水。賦形劑包括但不限於：視情況經取代之丁基化羥基甲苯(BHT)、碳酸鈣、磷酸氫鈣、硬脂酸鈣、交聯所甲基纖維素、交聯聚乙烯基吡咯啶酮、檸檬酸、交聯聚維酮、半胱胺酸、乙基纖維素、明膠、視情況經取代之羥丙基纖維素、視情況經取代之羥丙基甲基纖維素、乳糖、硬脂酸鎂、麥芽糖醇、甘露糖醇、甲硫胺酸、甲基纖維素、對羥基苯甲酸甲酯、微晶纖維素、聚乙二醇、聚乙烯基吡咯啶酮、聚維酮、預膠化澱粉、對羥基苯甲酸丙酯、棕櫚酸視黃酯、蟲膠、二氧化矽、羧甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、羥基乙酸澱粉鈉、山梨糖醇、澱粉(玉米澱粉)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化鈦、維生素A、維生素E、維生素C及木糖醇。熟習此項技術者熟知可用作賦形劑之多種試劑及材料。參見例如Ansel等人, Ansel's Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004；Gennaro等人, Remington: The Science and Practice of Pharmacy.Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000；及Rowe, Handbook of Pharmaceutical Excipients.Chicago, Pharmaceutical Press, 2005。在一些實施例中，組成物包括至少兩種不同的醫藥學上可接受之賦形劑。
除非清楚地作相反陳述，否則本文所描述之化合物，無論是否為清楚地陳述的，均可以鹽形式，例如以醫藥學上可接受之鹽形式提供或使用。如本文所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指在合理醫學判斷之範圍內，適於與人類之組織接觸使用而無過度毒性、刺激、過敏反應及類似情形，且與合理效益/風險比相稱的本文所描述之化合物的鹽。醫藥學上可接受之鹽為此項技術中熟知的。舉例而言，醫藥學上可接受之鹽描述於：Berge等人, J. Pharmaceutical Sciences66:1-19, 1977及 Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (P.H.Stahl及C.G.Wermuth編輯), Wiley-VCH, 2008中。該等鹽可在本文所描述之化合物的最終分離及純化期間原位製備，或藉由使游離鹼性基團與適合有機酸反應來分離。
本發明之化合物可具有可離子化基團，由此能夠製備成醫藥學上可接受之鹽形式。該等鹽可為涉及無機酸或有機酸之酸加成鹽，或在本發明之化合物呈酸形式之情況下，該等鹽可由無機鹼或有機鹼製備。在一些實施例中，該等化合物係製備為醫藥學上可接受之鹽形式或以醫藥學上可接受之鹽形式使用，該等醫藥學上可接受之鹽形式係作為醫藥學上可接受之酸或鹼之加成產物製備。適合醫藥學上可接受之酸及鹼為此項技術中熟知的，諸如鹽酸、硫酸、氫溴酸、乙酸、乳酸、檸檬酸或酒石酸，用於形成酸加成鹽；及氫氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化銨、咖啡因、各種胺及類似物，用於形成鹼鹽。用於製備適當鹽之方法為此項技術中公認的。
代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、褐藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙烷磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-視情況經取代之羥基-乙烷磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、甲烷磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽及類似鹽。代表性鹼金屬或鹼土金屬鹽包括鈉鹽、鋰鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽及類似鹽，以及無毒銨、四級銨及胺陽離子，包括但不限於銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及類似物。
如本文所使用，術語「個體」係指動物王國之任何成員。在一些實施例中，「個體」係指處於任何發育階段之人類。在一些實施例中，「個體」係指人類患者。在一些實施例中，「個體」係指非人類動物。在一些實施例中，非人類動物為哺乳動物(例如囓齒動物、小鼠、大鼠、兔、猴、犬、貓、綿羊、牛、靈長類動物或豬)。在一些實施例中，個體包括但不限於哺乳動物、鳥類、爬行動物、兩棲動物、魚或蟲類。在一些實施例中，個體可為基因轉殖動物、經基因工程改造之動物或純系。
如本文所使用，術語「劑型」係指供投與個體之化合物(例如本發明之化合物)的物理離散單元。各單元含有預定量之化合物。在一些實施例中，該量為適於根據劑量方案投與之單位劑量的量(或其整體部分)，該量當投與相關群體(亦即，根據治療劑量方案)時確定與所希望或有益之結果相關。熟習此項技術者應理解，投與特定個體之治療組成物或化合物的總量係由一或多位主治醫師決定且可涉及投與多種劑型。
如本文所使用，術語「劑量方案」係指個別地投與個體之一組單位劑量(典型地超過一個單位劑量)，該等單位劑量典型地間隔一定時間段。在一些實施例中，給定治療化合物(例如本發明之化合物)具有推薦之劑量方案，其可涉及一或多次劑量。在一些實施例中，劑量方案包含多次劑量，該等劑量各自彼此間隔相同長度之時間段；在一些實施例中，劑量方案包含多次劑量及份分開個別劑量之至少兩個不同時間段。在一些實施例中，劑量方案內之所有劑量均為相同單位劑量之量。在一些實施例中，劑量方案內之不同劑量為不同量。在一些實施例中，劑量方案包含呈第一劑量之量的第一次劑量，隨後為呈不同於該第一劑量之量的第二劑量之量的一或多次額外劑量。在一些實施例中，劑量方案包含呈第一劑量之量的第一次劑量，隨後為呈與該第一劑量之量相同的第二劑量之量的一或多次額外劑量。在一些實施例中，劑量方案當投與相關群體(亦即，為治療性劑量方案)時，與所希望或有益結果相關。
「治療方案」係指在相關群體中之投與與期望或有益治療結果相關的劑量方案。
術語「治療」(「treatment/treat/treating」)在其最廣泛意義上係指部分或完全緩解、改善、減輕、抑制特定疾病、病症或疾患之一或多種症狀、特徵或成因；延遲其發作；降低其嚴重程度；或減少其發生的物質(例如本發明之化合物)之任何投與。在一些實施例中，此類治療可投與未展現相關疾病、病症或疾患之體徵的個體或僅展現該疾病、病症或疾患之早期體徵之個體。替代地或另外地，在一些實施例中，治療可投與展現相關疾病、病症或疾患之一或多種確定之體徵的個體。在一些實施例中，治療可用於經診斷為罹患相關疾病、病症或疾患之個體。在一些實施例中，治療可用於已知具有一或多個在統計上與發展相關疾病、病症或疾患之風險增加相關之易感因素的個體。
術語「治療有效量」意謂當根據治療性劑量方案投與罹患或易患疾病、病症或疾患之群體時足以治療該疾病、病症或疾患的量。在一些實施例中，治療有效量為降低該疾病、病症或疾患之一或多種症狀的發生率或嚴重程度或延遲其發作的量。熟習此項技術者應理解，術語「治療有效量」實際上不需要在特定個體中實現所需之成功治療。事實上，治療有效量可為當投與需要該治療患者時在相當大量個體中提供特定所希望之藥理學反應的量。特別需要瞭解的是，特定個體實際上可為「治療有效量」「難治」的。在一些實施例中，提及之治療有效量可指如在一或多個特定組織(例如受疾病、病症或疾患影響之組織)或流體(例如血液、唾液、血清、汗液、淚液、尿液)中所量測的量。熟習此項技術者應理解，在一些實施例中，治療有效量可調配為單一劑量或以單一劑量投與。在一些實施例中，治療有效量可調配為多次劑量，例如調配為劑量方案之一部分，或以多次劑量投與。
為用作個體之治療，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可調配為醫藥組成物或獸醫學組成物形式。取決於待治療之個體、投與模式及所希望之治療類型，例如預防、防治或治療，該等化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以與該等參數相符之方式調配。關於此類技術之概述可見於 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第 21 版, Lippincott Williams &Wilkins, (2005)；及 Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, J. Swarbrick及J. C. Boylan編輯, 1988-1999, Marcel Dekker, New York，其各自以引用之方式併入本文中。
組成物可分別根據習用混合、製粒或包覆方法製備，且本發明之醫藥組成物以重量或體積計可含有約0.1%至約99%、約5%至約90%或約1%至約20%本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本文所描述之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的存在量以重量計可佔組成物，諸如醫藥組成物總量總計1-95%。
該組成物可以適於以下投與之劑型提供：經關節內、經口、非經腸(例如靜脈內、肌肉內)、直腸、皮膚、皮下、表面、經皮、舌下、經鼻、陰道、囊內、尿道內、鞘內、硬膜外、耳或眼投與，或藉由注射、吸入或與鼻、泌尿生殖器、生殖器或口腔黏膜直接接觸。因此，該醫藥組成物可呈例如錠劑、膠囊、丸劑、粉末、顆粒、懸浮液、乳液、溶液、凝膠(包括水凝膠)、糊劑、軟膏、乳霜、硬膏劑、藥水、滲透遞送裝置、栓劑、灌腸劑、注射劑、植入物、噴霧劑、適於離子電滲遞送之製劑或氣霧劑。該等組成物可根據習用醫藥實踐調配。
如本文所使用，術語「投與」係指將一種組成物(例如化合物或包括如本文所描述之化合物的製劑)投與個體或系統。向動物個體(例如向人類)投與可藉由任何適當的途徑進行。舉例而言，在一些實施例中，投與可為支氣管(包括藉由支氣管滴注)、經頰、經腸、真皮內、動脈內、真皮內、胃內、髓內、肌肉內、鼻內、腹膜內、鞘內、靜脈內、囊內、經黏膜、經鼻、經口、直腸、皮下、舌下、表面、氣管(包括藉由氣管內滴注)、經皮、陰道或玻璃體投與。
調配物可以適於全身投與或者表面或局部投與之方式製備。全身調配物包括設計用於注射(例如肌肉內、靜脈內或皮下注射)之調配物或可製備用於經皮、經黏膜或經口投與。調配物一般將包括稀釋劑，以及在一些情況下，包括佐劑、緩衝劑、防腐劑及類似物。化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可以脂質體組成物或以微乳液形式投與。
為進行注射，可將調配物製備為習用形式，如液體溶液或懸浮液，或適於在注射之前於液體中製備為溶液或懸浮液之固體形式，或乳液形式。適合賦形劑包括例如水、生理食鹽水、右旋糖、甘油及類似物。此等組成物亦可含有一定量無毒輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑及類似物，諸如乙酸鈉、去水山梨糖醇單月桂酸酯等等。
亦已設計出各種持續釋放藥物系統。參見例如美國專利第5,624,677號。
全身投與亦可包括相對無創之方法，諸如使用栓劑、經皮貼片、經黏膜遞送及鼻內投與。經口投與亦適於本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。此項技術中應瞭解，適合形式包括糖漿、膠囊及錠劑。
本文所描述之每種化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以此項技術中已知之多種方式調配。舉例而言，組合療法中之第一藥劑及第二藥劑可一起或分開調配。本文亦描述組合療法之其他模式。
個別或分開調配之藥劑可一起包裝為套組形式。非限制性實例包括但不限於含有例如兩粒丸劑、一粒丸劑及粉末、栓劑或在小瓶中之液體、兩種表面乳霜等的套組。該套組可包括有助於將單位劑量投與個體的視情況選用之組件，諸如用於使粉末形式復原之小瓶、注射用注射器、定製IV遞送系統、吸入器等。另外，單位劑量套組可含有關於該等組成物之製備及投與的說明書。該套組可製造為用於一名個體之一次性單位劑量、用於特定個體之多次使用(在恆定劑量下，或其中個別化合物或其醫藥學上可接受之鹽的效力可隨治療進展而變化)；或該套組可含有適於投與多名個體之多次劑量(「整體包裝」)。該等套組組件可組裝於紙盒、泡罩包裝、瓶、管及類似物中。
供口服使用之調配物包括含活性成分與無毒醫藥學上可接受之賦形劑之混合物的錠劑。該等賦形劑可為例如惰性稀釋劑或填充劑(例如蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纖維素、包括馬鈴薯澱粉之澱粉、碳酸鈣、氯化鈉、乳糖、磷酸鈣、硫酸鈣或磷酸鈉)；製粒劑及崩解劑(例如纖維素衍生物，包括微晶纖維素、包括馬鈴薯澱粉之澱粉、交聯羧甲基纖維素鈉、褐藻酸鹽或褐藻酸)；黏合劑(例如蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯膠、褐藻酸、褐藻酸鈉、明膠、澱粉、預膠化澱粉、微晶纖維素、矽酸鎂鋁、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、視情況經取代之羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯啶酮或聚乙二醇)；及潤滑劑、助流劑及抗黏著劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化矽、氫化植物油或滑石)。其他醫藥學上可接受之賦形劑可為著色劑、調味劑、塑化劑、保濕劑、緩衝劑及類似物。
兩種或兩種以上化合物可一起混合於錠劑、膠囊或其他媒劑中，或可隔開。在一個實例中，第一化合物係包含在錠劑之內側上，且第二化合物係在外側上，由此使該第二化合物之絕大部分在第一化合物釋放之前釋放。
供口服使用之調配物亦可以咀嚼錠形式提供，或以硬明膠膠囊形式提供，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如馬鈴薯澱粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或以軟明膠膠囊形式提供，其中活性成分與水或油介質，例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。粉末、顆粒及細圓粒可使用以上關於錠劑及膠囊所提及之成分，以習用方式，使用例如混合器、流體床裝置或噴霧乾燥設備製備。
溶出或擴散控制性釋放可藉由適當地包覆化合物之錠劑、膠囊、細圓粒或顆粒狀調配物，或藉由將該化合物或其醫藥學上可接受之鹽併入適當基質中來實現。控制釋放包衣可包括一或多種以上提及之包覆物質，例如蟲膠、蜂蠟、糖蠟(glycowax)、蓖麻蠟、巴西棕櫚蠟、硬脂醇、單硬脂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、棕櫚硬脂酸甘油酯、乙基纖維素、丙烯酸系樹脂、dl-聚乳酸、乙酸丁酸纖維素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯啶酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯、2-視情況經取代之羥基甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯水凝膠、1,3丁二醇、乙二醇甲基丙烯酸酯或聚乙二醇。在控制釋放基質調配物中，基質材料亦可包括例如水合甲基纖維素、巴西棕櫚蠟及硬脂醇、卡波普(carbopol) 934、矽酮、三硬脂酸甘油酯、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯或鹵化氟碳化合物。
供經口投與的可併入本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及組成物的液體形式包括水性溶液、經適當調味之糖漿、水性或油性懸浮液及經諸如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油之類食用油調味之乳液，以及酏劑及類似醫藥媒劑。
一般而言，當投與人類時，任何本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的口服劑量將取決於該化合物之性質，且可容易地由熟習此項技術者確定。劑量可為例如每天約0.001 mg至約2000 mg、每天約1 mg至約1000 mg、每天約5 mg至約500 mg、每天約100 mg至約1500 mg、每天約500 mg至約1500 mg、每天約500 mg至約2000 mg或其中衍生之任何範圍。
在一些實施例中，醫藥組成物可進一步包含具有抗增殖活性之額外化合物。取決於投藥模式，化合物或其醫藥學上可接受之鹽將調配成適合組成物以便於遞送。組合療法中之每種化合物或其醫藥學上可接受之鹽均可以此項技術中已知之多種方式調配。舉例而言，組合療法中之第一藥劑及第二藥劑可一起或分開調配。合意地，該第一及第二藥劑係一起調配以便同時或接近同時地投與該等藥劑。
應理解，本發明之化合物及醫藥組成物可經調配且用於組合療法中，亦即，該等化合物及醫藥組成物可與一或多種其他所需治療劑或醫療程序一起調配物或在投與該一或多種其他所需治療劑或醫療程序之同時、之前或之後投與。用於組合方案中的各療法(治療劑或程序)之特定組合應考慮所需治療劑或程序與待實現之所需治療效果的相容性。還應理解，所採用之療法可針對相同病症實現所需作用，或其可實現不同作用(例如控制任何不良作用)。
如本文所描述，組合療法中各藥物之投與可獨立地為每日一至四次，持續一天至一年，且甚至可持續個體之一生。長期(chronic/long-term)投與亦可適用。 使用方法
在一些實施例中，本發明揭示一種治療以Ras突變體引起之異常Ras活性為特徵之疾病或病症的方法。在一些實施例中，該疾病或病症為癌症。
因此，亦提供一種治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或包含此類化合物或鹽之醫藥組成物。在一些實施例中，該癌症為結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胰臟癌、闌尾癌、黑素瘤、急性骨髓性白血病、小腸癌、壺腹癌、生殖細胞癌、子宮頸癌、未知原發部位之癌症、子宮內膜癌、食管胃癌、GI神經內分泌癌、卵巢癌、性索基質瘤癌、肝膽癌症或膀胱癌。在一些實施例中，該癌症為闌尾癌、子宮內膜癌或黑素瘤。亦提供一種治療有需要之個體之Ras蛋白相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或包含此類化合物或鹽之醫藥組成物。
在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、包含此類化合物或鹽的醫藥組成物以及本文所提供之方法可用於治療多種癌症，包括腫瘤，諸如肺癌、前列腺癌、乳癌、腦癌、皮膚癌、子宮頸癌、睪丸癌等。更具體言之，可藉由本發明之化合物或其鹽、包含此類化合物或鹽之醫藥組成物以及方法治療之癌症包括但不限於諸如以下等腫瘤類型：星形細胞、乳房、子宮頸、結腸直腸、子宮內膜、食道、胃、頭頸部、肝細胞、喉、肺、口腔、卵巢、前列腺及甲狀腺癌瘤及肉瘤。其他癌症包括例如： 心臟，例如：肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、黏液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤及畸胎瘤； 肺，例如：支氣管肺癌(鱗狀細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌)、肺泡(細支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨瘤性錯構瘤、間皮瘤； 胃腸，例如：食道(鱗狀細胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰臟(導管腺癌、胰島瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、類癌瘤、血管活性腸肽瘤)、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯構瘤、平滑肌瘤)； 泌尿生殖道，例如：腎(腺癌、威爾姆氏腫瘤(Wilm's tumor)(腎母細胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱及尿道(鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質細胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)； 肝，例如：肝細胞瘤(肝細胞癌)、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤； 膽道，例如：膽囊癌、壺腹癌、膽管癌； 骨骼，例如：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、惡性淋巴瘤(網狀細胞肉瘤)、多發性骨髓瘤、惡性巨細胞瘤、脊索瘤、骨性軟骨瘤(骨軟骨外生性骨疣)、良性軟骨瘤、軟骨母細胞瘤、軟骨黏液樣纖維瘤、骨樣骨瘤及巨細胞腫瘤； 神經系統，例如：顱骨(骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、腦脊膜(腦膜瘤、腦膜肉瘤、膠質瘤病)、腦(星形細胞瘤、髓母細胞瘤、神經膠質瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤(松果體瘤)、多形性膠質母細胞瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、神經鞘瘤、視網膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、脊髓神經纖維瘤、1型神經纖維瘤病、腦膜瘤、神經膠質瘤、肉瘤)； 婦科，例如：子宮(子宮內膜癌、子宮癌、子宮體內膜癌)、子宮頸(子宮頸癌、子宮頸癌前非典型性增生)、卵巢(卵巢癌(漿液性囊腺癌、黏液性囊腺癌、未分類癌)、顆粒-卵泡膜細胞腫瘤、塞萊二氏細胞腫瘤(Sertoli-Leydig cell tumors)、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌、上皮內癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細胞癌、鱗狀細胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管(癌瘤)； 造血系統，例如：血液(骨髓性白血病(急性及慢性)、急性淋巴母細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓增生性疾病(例如骨髓纖維化及骨髓增生性贅瘤、多發性骨髓瘤、骨髓發育不良症候群)、霍奇金氏病(Hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(惡性淋巴瘤)； 皮膚，例如：惡性黑素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西氏肉瘤、痣發育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕疙瘩、牛皮癬；以及 腎上腺，例如：神經母細胞瘤。
在一些實施例中，Ras蛋白係野生型的(Ras WT)。因此，在一些實施例中，本發明之化合物係用於治療患有含Ras WT(例如K-Ras WT、H-Ras WT或N-Ras WT)之癌症之患者的方法中。在一些實施例中，Ras蛋白為Ras擴增(例如K-Ras amp)。因此，在一些實施例中，本發明之化合物係用於治療患有含Ras amp(K-Ras amp、H-Ras amp或N-Ras amp)之癌症之患者的方法中。在一些實施例中，該癌症包含Ras突變，諸如本文所描述之Ras突變。在一些實施例中，突變係選自： (a)     以下K-Ras突變體：G12D、G12V、G12C、G13D、G12R、G12A、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61L、Q61R、K117N、A146V、G12F、Q61K、L19F、Q22K、V14I、A59T、A146P、G13R、G12L或G13V，及其組合； (b)     以下H-Ras突變體：Q61R、G13R、Q61K、G12S、Q61L、G12D、G13V、G13D、G12C、K117N、A59T、G12V、G13C、Q61H、G13S、A18V、D119N、G13N、A146T、A66T、G12A、A146V、G12N或G12R，及其組合； (c)     以下N-Ras突變體：Q61R、Q61K、G12D、Q61L、Q61H、G13R、G13D、G12S、G12C、G12V、G12A、G13V、G12R、P185S、G13C、A146T、G60E、Q61P、A59D、E132K、E49K、T50I、A146V或A59T，及其組合； 或前述任一者之組合。在一些實施例中，該癌症包含選自由以下組成之群的K-Ras突變：G12C、G12D、G13C、G12V、G13D、G12R、G12S、Q61H、Q61K及Q61L。在一些實施例中，該癌症包含選自由以下組成之群的N-Ras突變：G12C、Q61H、Q61K、Q61L、Q61P及Q61R。在一些實施例中，該癌症包含選自由Q61H及Q61L組成之群的H-Ras突變。在一些實施例中，該癌症包含選自由以下組成之群的Ras突變：G12C、G13C、G12A、G12D、G13D、G12S、G13S、G12V及G13V。在一些實施例中，該癌症包含至少兩個選自由以下組成之群的Ras突變：G12C、G13C、G12A、G12D、G13D、G12S、G13S、G12V及G13V。在一些實施例中，本發明之化合物抑制多個Ras突變體。舉例而言，化合物可抑制K-Ras G12C及K-Ras G13C兩者。化合物可抑制N-Ras G12C及K-Ras G12C兩者。在一些實施例中，化合物可抑制K-Ras G12C及K-Ras G12D兩者。在一些實施例中，化合物可抑制K-Ras G12V及K-Ras G12C兩者。在一些實施例中，化合物可抑制K-Ras G12V及K-Ras G12S兩者。在一些實施例中，本發明之化合物抑制Ras WT以及一或多個額外Ras突變(例如K-、H-或N-Ras WT及K-Ras G12D、G12V、G12C、G13D、G12R、G12A、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61L、Q61R、K117N、A146V、G12F、Q61K、L19F、Q22K、V14I、A59T、A146P、G13R、G12L或G13V；K、H或N-Ras WT及H-Ras Q61R、G13R、Q61K、G12S、Q61L、G12D、G13V、G13D、G12C、K117N、A59T、G12V、G13C、Q61H、G13S、A18V、D119N、G13N、A146T、A66T、G12A、A146V、G12N或G12R；或K、H或N-Ras WT及N-Ras Q61R、Q61K、G12D、Q61L、Q61H、G13R、G13D、G12S、G12C、G12V、G12A、G13V、G12R、P185S、G13C、A146T、G60E、Q61P、A59D、E132K、E49K、T50I、A146V或A59T)。在一些實施例中，本發明之化合物抑制Ras amp以及一或多個額外Ras突變(例如K-、H-或N-Ras amp及K-Ras G12D、G12V、G12C、G13D、G12R、G12A、Q61H、G12S、A146T、G13C、Q61L、Q61R、K117N、A146V、G12F、Q61K、L19F、Q22K、V14I、A59T、A146P、G13R、G12L或G13V；K、H或N-Ras amp及H-Ras Q61R、G13R、Q61K、G12S、Q61L、G12D、G13V、G13D、G12C、K117N、A59T、G12V、G13C、Q61H、G13S、A18V、D119N、G13N、A146T、A66T、G12A、A146V、G12N或G12R；或K、H或N-Ras amp及N-Ras Q61R、Q61K、G12D、Q61L、Q61H、G13R、G13D、G12S、G12C、G12V、G12A、G13V、G12R、P185S、G13C、A146T、G60E、Q61P、A59D、E132K、E49K、T50I、A146V或A59T)。
偵測Ras突變之方法係此項技術中已知的。此類方式包括但不限於直接定序及利用高靈敏度診斷分析(利用CE-IVD標記)，例如以全文引用之方式併入本文中的Domagala等人, Pol J Pathol 3: 145-164 (2012)中所述的方法，包括TheraScreen PCR；AmoyDx；PNAClamp；RealQuality；EntroGen；LightMix；StripAssay；Hybcell plexA；Devyser；Surveyor；Cobas；及TheraScreenPyro。亦參見例如WO 2020/106640。
在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且該Ras突變包含K-Ras突變，諸如K-Ras G12C、K-Ras G12V或K-Ras G12D。在一些實施例中，該癌症為結腸直腸癌且該Ras突變包含K-Ras突變，諸如K-Ras G12C、K-Ras G12V或K-Ras G12D。在一些實施例中，該癌症為胰臟癌且該Ras突變包含K-Ras突變，諸如K-Ras G12D或K-Ras G12V。在一些實施例中，該癌症為胰臟癌且該Ras突變包含N-Ras突變，諸如N-Ras G12D。在一些實施例中，該癌症為黑素瘤且該Ras突變包含N-Ras突變，諸如N-Ras Q61R或N-Ras Q61K。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且Ras蛋白為K-Ras amp。在前述任一者中，若未具體說明，則化合物亦可抑制Ras WT(例如K-、H-或N-Ras WT)或Ras amp(例如K-、H-或N-Ras amp)。
在一些實施例中，癌症包含Ras突變及STK11 LOF、KEAP1、EPHA5或NF1突變。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且包含K-Ras G12C突變。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且包含K-Ras G12C突變及STK11 LOF突變。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且包含K-Ras G12C突變及STK11 LOF突變。在一些實施例中，癌症包含K-Ras G13C Ras突變及STK11 LOF、KEAP1、EPHA5或NF1突變。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且包含K-Ras G12D突變。在一些實施例中，該癌症為非小細胞肺癌且包含K-Ras G12V突變。在一些實施例中，該癌症為結腸直腸癌且包含K-Ras G12C突變。在一些實施例中，該癌症為胰臟癌且包含K-Ras G12C或K-Ras G12D突變。在一些實施例中，該癌症為胰臟癌且包含K-Ras G12V突變。在一些實施例中，該癌症為子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌或黏液性闌尾癌且包含K-Ras G12C突變。在一些實施例中，該癌症為胃癌且包含K-Ras G12C突變。在前述任一個中，化合物亦可抑制Ras WT(例如K-、H-或N-Ras WT)或Ras amp(例如K-、H-或N-Ras amp)。
亦提供一種抑制細胞中之Ras蛋白的方法，該方法包括使該細胞與有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。亦提供一種抑制RAF-Ras結合之方法，該方法包括使該細胞與有效量的本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸。該細胞可為癌細胞。該癌細胞可屬於本文所描述之任一類型之癌症。該細胞可在活體內或活體外。 組合療法
本發明之方法可包括單獨使用或與一或多種額外療法(例如非藥物治療或治療劑)組合使用的本發明之化合物。當單獨投與時，該等額外療法(例如非藥物治療或治療劑)中一或多種之劑量可相對於標準劑量有所降低。舉例而言，劑量可根據藥物組合及排列憑經驗確定或可藉由等輻射分析推斷(例如Black等人, Neurology65:S3-S6 (2005))。
本發明之化合物可在投與該等額外療法中之一或多種之前、之後或同時投與。當組合時，本發明化合物之劑量及該一或多種額外療法(例如非藥物治療或治療劑)之劑量提供治療作用(例如協同或加合治療作用)。本發明之化合物及額外療法，諸如抗癌劑，可一起投與，諸如以單一醫藥組成物形式投與，或分開投與，且當分開投與時，該投與可同時或依序發生。此類依序投與可在時間上接近或遠離。
在一些實施例中，該額外療法係投與副作用限制劑(例如意欲減少治療副作用之發生或嚴重程度的藥劑)。舉例而言，在一些實施例中，本發明之化合物亦可與治療噁心之治療劑組合使用。可用於治療噁心之藥劑的實例包括：屈大麻酚(dronabinol)、格拉司瓊(granisetron)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、昂丹司瓊(ondansetron)及丙氯拉嗪(prochlorperazine)，或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，該一或多種額外療法包括非藥物治療(例如手術或放射療法)。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括治療劑(例如作為抗血管生成劑、信號轉導抑制劑、抗增生劑、糖分解抑制劑或自噬抑制劑之化合物或生物製劑)。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括非藥物治療(例如手術或放射療法)及治療劑(例如作為抗血管生成劑、信號轉導抑制劑、抗增生劑、糖分解抑制劑或自噬抑制劑之化合物或生物製劑)。在其他實施例中，該一或多種額外療法包括兩種治療劑。在又其他實施例中，該一或多種額外療法包括三種治療劑。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括四種或更多種治療劑。
在本組合療法部分中，所有參考文獻就所描述之藥劑而言均以引用之方式併入，無論是否如此明確地陳述。 非藥物療法
非藥物治療之實例包括但不限於放射療法、冷療法、高溫處理、手術(例如手術切除腫瘤組織)及T細胞授受性轉移(ACT)療法。
在一些實施例中，本發明之化合物可作為術後輔助療法使用。在一些實施例中，本發明之化合物可作為術前新輔助療法使用。
放射療法可用於在個體(例如哺乳動物(例如人類))中抑制異常細胞生長或治療過度增生性病症，諸如癌症。投與放射療法之技術係此項技術中已知的。放射療法可經由若干方法之一或方法組合投與，包括但不限於外射束療法、內放射療法、植入放射、立體定向放射手術、全身放射療法、放射療法及持久或短暫地插種近接療法。如本文所使用，術語「近接療法」係指藉由插入體內腫瘤或其他增生性組織疾病部位處或附近的空間上限定之放射性物質遞送的輻射療法。該術語意欲但不限於包括暴露於放射性同位素(例如At-211、I-131、I-125、Y-90、Re-186、Re-188、Sm-153、Bi-212、P-32及Lu之放射性同位素)。用作本發明之細胞調理劑的適合放射源包括固體及液體。作為非限制性實例，放射源可為放射性核素，諸如I-125、I-131、Yb-169、作為固體來源之Ir-192、作為固體來源之I-125，或發射光子之其他放射性核素、β粒子、γ放射或其他治療射線。放射性物質亦可為由任何放射性核素溶液製造之流體，例如I-125或I-131之溶液，或放射性流體可使用含有諸如Au-198或Y-90之類固體放射性核素小粒子之適合流體的漿液製備。此外，放射性核素可包埋於凝膠或放射性微球中。
在一些實施例中，本發明之化合物可使異常細胞對放射治療變得敏感，以達到殺滅或抑制此類細胞之生長的目的。因此，本發明進一步係關於一種用於使哺乳動物體內之異常細胞對放射治療敏感之方法，該方法包括向該哺乳動物投與一定量本發明之化合物，該量有效使異常細胞對放射治療敏感。該方法中化合物之量可根據用於確定本文所描述之該等化合物之有效量的方式確定。在一些實施例中，本發明之化合物可用作放射療法之後的輔助療法或用作放射療法之前的新輔助療法。
在一些實施例中，該非藥物治療為T細胞授受性轉移(ACT)療法。在一些實施例中，該T細胞為活化T細胞。該T細胞可修飾成表現嵌合抗原受體(CAR)。CAR修飾之T (CAR-T)細胞可藉由此項技術中已知之任何方法產生。舉例而言，CAR-T細胞可藉由將編碼CAR之適合表現載體引入T細胞中來產生。在對T細胞進行擴增及基因修飾之前，自個體獲得T細胞之來源。T細胞可自多種來源獲得，包括末梢血單核細胞、骨髓、淋巴結組織、臍帶血、胸腺組織、來自感染部位之組織、腹水、胸腔積液、脾組織及腫瘤。在本發明之某些實施例中，可使用此項技術中可獲得的多種T細胞株。在一些實施例中，該T細胞為自體T細胞。在將T細胞基因修飾成表現所需蛋白質(例如CAR)之前或之後，該等T細胞可一般使用如例如以下美國專利中所描述之方法進行活化及擴增：6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；7,572,631；5,883,223；6,905,874；6,797,514；及6,867,041。 治療劑
治療劑可為用於治療癌症或其相關症狀之化合物。本發明化合物可與第二、第三或第四治療劑或更多者組合。本發明化合物可與一或多種治療劑以及一或多種非藥物療法組合。
舉例而言，治療劑可為類固醇。類固醇係此項技術中已知的。因此，在一些實施例中，該一或多種額外療法包括類固醇。適合類固醇可包括但不限於21-乙醯氧基孕烯醇酮(acetoxypregnenolone)、阿氯米松(alclometasone)、阿爾孕酮(algestone)、安西奈德(amcinonide)、倍氯米松(beclomethasone)、倍他米松(betamethasone)、布地奈德(budesonide)、氯普賴松(chloroprednisone)、氯倍他索(clobetasol)、氯可托龍(clocortolone)、氯潑尼醇(cloprednol)、皮質酮(corticosterone)、可的松(cortisone)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羥米松(desoximetasone)、地塞米松(dexamethasone)、二氟拉松(diflorasone)、二氟可龍(diflucortolone)、二氟孕甾丁酯(difuprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟紮可特(fluazacort)、氟氯奈德(fiucloronide)、氟米松 (flumethasone)、氟尼縮松(flunisolide)、氟西奈德(fluocinolone acetonide)、醋酸氟輕鬆(fluocinonide)、氟可丁丁酯(fluocortin butyl)、氟可龍(fluocortolone)、氟米龍(fluorometholone)、醋酸氟培龍(fluperolone acetate)、醋酸氟潑尼定(fluprednidene acetate)、氟潑尼龍(fluprednisolone)、氟氫縮松(flurandrenolide)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、福莫可他(formocortal)、哈西奈德(halcinonide)、丙酸鹵倍他索(halobetasol propionate)、鹵米松(halometasone)、氫化可的松(hydrocortisone)、依碳酸氯替潑諾(loteprednol etabonate)、馬潑尼酮(mazipredone)、甲羥松(medrysone)、甲普賴松(meprednisone)、甲潑尼龍(methylprednisolone)、糠酸莫米他松(mometasone furoate)、帕拉米松(paramethasone)、潑尼卡酯(prednicarbate)、普賴蘇濃(prednisolone)、25-二乙基胺基乙酸普賴蘇濃、普賴蘇濃磷酸鈉、普賴松(prednisone)、普賴蘇濃戊酸酯(prednival)、潑尼立定(prednylidene)、利美索龍(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龍(triamcinolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)，及其鹽或衍生物。
可與本發明之化合物一起用於組合療法中的治療劑之其他實例包括以下專利中所描述之化合物：美國專利第6,258,812號、第6,630,500號、第6,515,004號、第6,713,485號、第5,521,184號、第5,770,599號、第5,747,498號、第5,990,141號、第6,235,764號及第8,623,885號，以及國際專利申請案WO01/37820、WO01/32651、WO02/68406、WO02/66470、WO02/55501、WO04/05279、WO04/07481、WO04/07458、WO04/09784、WO02/59110、WO99/45009、WO00/59509、WO99/61422、WO00/12089及WO00/02871。
治療劑可為用於治療癌症或其相關症狀的生物製劑(例如細胞介素(例如干擾素或介白素，諸如IL-2))。生物製劑係此項技術中已知的。在一些實施例中，該生物製劑係基於免疫球蛋白之生物製劑，例如使目標促效以刺激抗癌反應或拮抗對於癌症很重要之抗原的單株抗體(例如人類化抗體、完全人類抗體、Fc融合蛋白或其功能片段)。亦包括抗體-藥物結合物。
治療劑可為T細胞檢查點抑制劑。此類檢查點抑制劑係此項技術中已知的。在一個實施例中，該檢查點抑制劑為抑制劑性抗體(例如單特異性抗體，諸如單株抗體)。該抗體可為例如人類化或完全人類抗體。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為融合蛋白，例如Fc-受體融合蛋白。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為與檢查點蛋白質相互作用的藥劑，諸如抗體。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為與檢查點蛋白質之配體相互作用的藥劑，諸如抗體。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為CTLA-4之抑制劑 (例如抑制性抗體或小分子抑制劑) (例如抗CTLA-4 抗體或融合蛋白)。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為PD-1抑制劑或拮抗劑(例如抑制性抗體或小分子抑制劑)。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為PD-L1抑制劑或拮抗劑(例如抑制性抗體或小分子抑制劑)。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為PD-L2抑制劑或拮抗劑(例如抑制性抗體或Fc融合物或小分子抑制劑) (例如PD-L2/Ig融合蛋白)。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配體或其組合之抑制劑或拮抗劑(例如抑制性抗體或小分子抑制劑)。在一些實施例中，該檢查點抑制劑為派姆單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、PDR001 (NVS)、REGN2810 (Sanofi/Regeneron)、PD-L1抗體諸如阿維魯單抗(avelumab)、德瓦魯單抗(durvalumab)、阿特珠單抗(atezolizumab)、匹地利珠單抗(pidilizumab)、JNJ-63723283 (JNJ)、BGB-A317 (BeiGene & Celgene)或Preusser, M.等人(2015) Nat. Rev. Neurol.中所揭示之檢查點抑制劑，包括但不限於伊匹單抗(ipilimumab)、曲美目單抗(tremelimumab)、納武單抗、派姆單抗、AMP224、AMP514/ MEDI0680、BMS936559、MEDl4736、MPDL3280A、MSB0010718C、BMS986016、IMP321、利瑞魯單抗(lirilumab)、IPH2101、1-7F9及KW-6002。
治療劑可為抗TIGIT抗體，諸如MBSA43、BMS-986207、MK-7684、COM902、AB154、MTIG7192A或OMP-313M32 (艾替利單抗(etigilimab))。其他抗TIGIT抗體係此項技術中已知的。
治療劑可為治療癌症或其相關症狀之藥劑(例如細胞毒性劑、非肽小分子或可用於治療癌症或其相關症狀之其他化合物，統稱為「抗癌劑」)。抗癌劑可為例如化學治療劑或靶向治療劑。此類藥劑係此項技術中已知的。
抗癌劑包括有絲分裂抑制劑、插入性抗生素、生長因子抑制劑、細胞週期抑制劑、酶、拓撲異構酶抑制劑、生物反應調節劑、烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物及相關抑制劑、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、表鬼臼毒素、抗生素、L-天冬醯胺酶、拓撲異構酶抑制劑、干擾素、鉑配位錯合物、蒽二酮取代之尿素、甲基肼衍生物、腎上腺皮質抑制劑、腎上腺皮質類固醇、黃體素、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素及促性腺激素釋放激素類似物。其他抗癌劑包括甲醯四氫葉酸(leucovorin，LV)、伊立替康(irenotecan)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、卡培他濱(capecitabine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西他賽(doxetaxel)。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括兩種或兩種以上抗癌劑。該兩種或兩種以上抗癌劑可用於混合液中以組合投與或分開投與。組合抗癌劑之適合給藥方案係此項技術中已知的且描述於例如Saltz等人, Proc. Am. Soc. Clin. Oncol.18:233a (1999)，及Douillard等人, Lancet355(9209):1041-1047 (2000)中。
抗癌劑之其他非限制性實例包括Gleevec® (甲磺酸伊馬替尼(Imatinib Mesylate))；Kyprolis® (卡非佐米(carfilzomib))；Velcade® (硼替佐米(bortezomib))；Casodex (比卡魯胺(bicalutamide))；Iressa® (吉非替尼(gefitinib))；烷化劑，諸如噻替哌(thiotepa)及環磷醯胺；烷基磺酸酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan) ；氮雜環丙烷，諸如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替哌(uredopa)；乙烯亞胺及甲基蜜胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙烯蜜胺、三乙烯磷醯胺、三乙烯硫代磷醯胺及三羥甲基蜜胺；多聚乙醯(尤其是布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin) (包括合成類似物拓撲替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；卡利他汀 (callystatin)；CC-1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻素(cryptophycin) (特別是念珠藻素1及念珠藻素8)；海兔毒素(dolastatin)；倍癌黴素 (duocarmycin) (包括合成類似物、KW-2189及CB1-TM1)；伊斯羅賓(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇A (sarcodictyin A)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷醯胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、氧化甲氮芥鹽酸鹽(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、烏拉莫司汀(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲黴素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷諾莫司汀(ranimustine)；抗生素，諸如烯二炔類抗生素(例如刺孢黴素(calicheamicin)，諸如刺孢黴素γll及刺孢黴素ωll (參見例如 Agnew, Chem. Intl. Ed Engl.33:183-186 (1994))；達內黴素(dynemicin)，諸如達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯波黴素(esperamicin)；新制癌菌素發色團(neocarzinostatin chromophore)及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、氮雜絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、刺孢黴素(calicheamicin)、卡拉比星(carabicin)、卡米諾黴素(caminomycin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycins)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿德力黴素(adriamycin)(多柔比星)、N-嗎啉基多柔比星、氰基(N-嗎啉基)多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星、去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycin)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-硫唑嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺素，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；伊達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟米星(elfomithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；艾普塞隆(epothilone)，諸如艾普塞隆B；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；類美登醇(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；尼曲吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋胺氮芥(phenamet)；比柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣複合物(JHS Natural Products, Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecene)，諸如T- 2毒素、疣孢黴素A (verracurin A)、漆斑菌素A (roridin A)及蛇形菌素(anguidine)；烏拉坦(urethane)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托肽(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside) (「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替哌；類紫杉醇(taxoid)，例如Taxol® (太平洋紫杉醇)、Abraxane® (不含聚氧乙烯氫化蓖麻油、經白蛋白工程改造的太平洋紫杉醇之奈米粒子調配物)及Taxotere® (多西他賽)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；他莫昔芬(tamoxifen) (Nolvadex™)；拉洛昔芬(raloxifene)；芳香酶抑制性4(5)-咪唑；4-羥基他莫昔芬；曲沃昔芬(trioxifene)；科沃昔芬(keoxifene)；LY 117018；奧那斯酮(onapristone)；托瑞米芬(toremifene) (Fareston®)；氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)；苯丁酸氮芥；Gemzar®吉西他賓(gemcitabine)；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；鉑配位錯合物，諸如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春花鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；Navelbine®(長春瑞賓(vinorelbine))；能滅瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；道諾黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；伊立替康(irinotecan) (例如CPT-11)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃醇，諸如視黃酸；埃斯波黴素(esperamicins)；卡培他濱(例如Xeloda®)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽。
抗癌劑之額外非限制實例包括曲妥珠單抗(trastuzumab) (Herceptin®)、貝伐珠單抗(bevacizumab) (Avastin®)、西妥昔單抗(cetuximab) (Erbitux®)、利妥昔單抗(rituximab) (Rituxan®)、Taxol®、Arimidex®、ABVD、勒欓鹼(avicine)、阿巴伏單抗(abagovomab)、吖啶甲醯胺(acridine carboxamide)、阿德木單抗(adecatumumab)、17-N-烯丙基胺基-17-去甲氧基格爾德黴素(demethoxygeldanamycin)、阿法拉丁(alpharadin)、艾沃昔布(alvocidib)、3-胺基吡啶-2-甲醛硫代半卡巴腙(thiosemicarbazone)、胺萘非特(amonafide)、蒽二酮(anthracenedione)、抗CD22免疫毒素、抗腫瘤藥(例如細胞週期非特異性抗腫瘤劑及其他本文所描述之抗腫瘤劑)、抗腫瘤發生草藥、阿帕齊醌(apaziquone)、阿替莫德(atiprimod)、硫唑嘌呤(azathioprine)、貝洛替康(belotecan)、苯達莫司汀(bendamustine)、BIBW 2992、比立考達(biricodar)、溴他立辛(brostallicin)、苔蘚抑素(bryostatin)、丁硫胺酸亞碸亞胺(buthionine sulfoximine)、CBV(化學療法)、海綿誘癌素(calyculin)、二氯乙酸、盤皮海綿內酯(discodermolide)、依沙蘆星(elsamitrucin)、依諾他濱(enocitabine)、艾日布林(eribulin)、依沙替康(exatecan)、依昔舒林(exisulind)、彌羅松酚(ferruginol)、呋咯地辛(forodesine)、磷雌酚(fosfestrol)、ICE化學療法方案、IT-101、伊美克(imexon)、咪喹莫特(imiquimod)、吲哚并咔唑(indolocarbazole)、伊洛福芬(irofulven)、蘭尼奎達(laniquidar)、拉洛他賽(larotaxel)、雷利米得(lenalidomide)、甲硫蒽酮(lucanthone)、勒托替康(lurtotecan)、馬磷醯胺(mafosfamide)、米托唑胺(mitozolomide)、萘克沙朵(nafoxidine)、奈達鉑(nedaplatin)、奧拉帕尼(olaparib)、奧他賽(ortataxel)、PAC-1、木瓜、匹杉瓊(pixantrone)、蛋白酶體抑制劑、蝴蝶黴素(rebeccamycin)、瑞喹莫德(resiquimod)、魯比替康(rubitecan)、SN-38、鹽孢菌素A (salinosporamide A)、沙帕他濱(sapacitabine)、Stanford V、苦馬豆素(swainsonine)、他拉泊芬(talaporfin)、他立喹達(tariquidar)、替加氟-尿嘧啶(tegafur-uracil)、替莫達(temodar)、替西他賽(tesetaxel)、四硝酸三鉑(triplatin tetranitrate)、參(2-氯乙基)胺、曲沙他濱(troxacitabine)、烏拉莫司汀(uramustine)、伐地美生(vadimezan)、長春氟寧(vinflunine)、ZD6126及唑喹達(zosuquidar)。
抗癌劑之其他非限制性實例包括天然產品，諸如長春花生物鹼類(例如長春花鹼、長春新鹼及長春瑞賓)、表鬼臼毒素(例如依託泊苷及替尼泊苷)、抗生素(例如放線菌素D (dactinomycin/actinomycin D)、道諾黴素及伊達比星)、蒽環黴素(anthracycline)、米托蒽醌、博來黴素(bleomycins)、光神黴素(plicamycin) (米拉黴素(mithramycin))、絲裂黴素、酶(例如L-天冬醯胺酶，其全身性代謝L-天冬醯胺且除去自身不能合成天冬醯胺之細胞)、抗血小板劑、抗增生/抗有絲分裂烷化劑如氮芥(例如甲氮芥、環磷醯胺及類似物美法侖(melphalan)及苯丁酸氮芥)、乙烯亞胺及甲基蜜胺(例如六甲基蜜胺及噻替哌)、CDK抑制劑(例如CDK4/6抑制劑，諸如阿貝西利(abemaciclib)、瑞博西利(ribociclib)、帕博西利(palbociclib)、塞利西利(seliciclib)、UCN-01、P1446A-05、PD-0332991、迪納西利(dinaciclib)、P27-00、AT-7519、RGB286638及SCH727965)、烷基磺酸酯(例如白消安)、亞硝基脲(例如卡莫司汀(BCNU)及類似物，及鏈佐星(streptozocin))、四氮烯-氮烯唑胺(trazenes-dacarbazinine) (DTIC)、抗增生/抗有絲分裂抗代謝物(諸如葉酸類似物)、嘧啶類似物(例如氟尿嘧啶、氮尿苷及阿糖胞苷)、嘌呤類似物及相關抑制劑 (例如巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、噴司他丁及2-氯去氧腺苷)、芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、依西美坦(exemestane)及來曲唑(letrozole))及鉑配位錯合物(例如順鉑及卡鉑)、丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲、米托坦、胺魯米特、組蛋白去乙醯化酶(HDAC)抑制劑(例如曲古抑菌素(trichostatin)、丁酸鈉、艾匹丹(apicidan)、辛二醯苯胺異羥肟酸(suberoyl anilide hydroamic acid)、伏立諾他(vorinostat)、貝利司他(belinostat)、LBH 589、羅米地辛(romidepsin)、ACY-1215及帕比司他(panobinostat))、mTOR抑制劑(例如維托塞布(vistusertib)、西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、地磷莫司(ridaforolimus)及西羅莫司(sirolimus))、KSP(Eg5)抑制劑(例如Array 520)、DNA結合劑(例如Zalypsis®)、PI3K抑制劑諸如PI3K δ抑制劑 (例如GS-1101及TGR-1202)、PI3K δ及γ抑制劑(例如CAL-130)、庫潘尼西(copanlisib)、阿博利布(alpelisib)及艾代拉里斯(idelalisib)；多激酶抑制劑(例如TG02及索拉非尼(sorafenib))、激素(例如雌激素)及激素促效劑，諸如促黃體激素釋放激素(LHRH)促效劑(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林(leuprolide)及曲普瑞林(triptorelin))、BAFF中和抗體(例如LY2127399)、IKK抑制劑、p38MAPK抑制劑、抗IL-6 (例如CNT0328)、端粒酶抑制劑(例如GRN 163L)、極光激酶抑制劑(例如MLN8237)、細胞表面單株抗體(例如抗CD38 (HUMAX-CD38)、抗CSl (例如埃羅妥珠單抗(elotuzumab))、HSP90抑制劑(例如17 AAG及KOS 953)、P13K/Akt抑制劑(例如哌立福新(perifosine))、Akt抑制劑(例如GSK-2141795)、PKC抑制劑(例如恩紮妥林(enzastaurin))、FTI (例如Zarnestra™)、抗CD138 (例如BT062)、Torcl/2特異性激酶抑制劑(例如INK128)、ER/UPR靶向劑(例如MKC-3946)、cFMS抑制劑(例如ARRY-382)、JAK1/2抑制劑(例如CYT387)、PARP抑制劑(例如奧拉帕尼及維利帕尼(veliparib) (ABT-888))及BCL-2拮抗劑。
在一些實施例中，抗癌劑係選自甲氮芥、喜樹鹼、異環磷醯胺、他莫昔芬、雷洛昔芬、吉西他賓、Navelbine®、索拉非尼(sorafenib)或前述之任何類似物或衍生物變體。
在一些實施例中，該抗癌劑為HER2抑制劑。HER2抑制劑係此項技術中已知的。HER2抑制劑之非限制性實例包括單株抗體，諸如曲妥珠單抗(Herceptin®)及帕妥珠單抗(pertuzumab) (Perjeta®)；小分子酪胺酸激酶抑制劑，諸如吉非替尼(Iressa®)、埃羅替尼(Tarceva®)、皮利替尼(pilitinib)、CP-654577、CP-724714、卡奈替尼(canertinib) (CI 1033)、HKI-272、拉帕替尼(lapatinib) (GW-572016；Tykerb®)、PKI-166、AEE788、BMS-599626、HKI-357、BIBW 2992、ARRY-334543及JNJ-26483327。
在一些實施例中，抗癌劑為ALK抑制劑。ALK抑制劑係此項技術中已知的。ALK抑制劑之非限制性實例包括色瑞替尼(ceritinib)、TAE-684 (NVP-TAE694)、PF02341066 (克唑替尼(crizotinib)或1066)、阿來替尼(alectinib)；布加替尼 (brigatinib)；恩曲替尼(entrectinib)；恩沙替尼(ensartinib) (X-396)；勞拉替尼(lorlatinib)；ASP3026；CEP-37440；4SC-203；TL-398；PLB1003；TSR-011；CT-707；TPX-0005；及AP26113。ALK激酶抑制劑之額外實例描述於WO05016894之實例3-39中。
在一些實施例中，抗癌劑為受體酪胺酸激酶(RTK)/生長因子受體下游成員之抑制劑(例如SHP2抑制劑(例如SHP099、TNO155、RMC-4550、RMC-4630、JAB-3068、JAB-3312、RLY-1971、ERAS-601、SH3809、PF-07284892或BBP-398)，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物)、SOS1抑制劑(例如BI-1701963、BI-3406、SDR5、BAY-293或RMC-5845，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物)、Raf抑制劑、MEK抑制劑、ERK抑制劑、PI3K抑制劑、PTEN抑制劑、AKT抑制劑或mTOR抑制劑(例如mTORC1抑制劑或mTORC2抑制劑)。在一些實施例中，該抗癌劑為JAB-3312。
在一些實施例中，抗癌劑為SOS1抑制劑。SOS1抑制劑係此項技術中已知的。在一些實施例中，該SOS1抑制劑係選自WO 2022146698、WO 2022081912、WO 2022058344、WO 2022026465、WO 2022017519、WO 2021173524、WO 2021130731、WO 2021127429、WO 2021092115、WO 2021105960、WO 2021074227、WO 2020180768、WO 2020180770、WO 2020173935、WO 2020146470、WO 2019201848、WO 2019122129、WO 2018172250及WO 2018115380中揭示之彼等，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，本發明化合物係與SOS1抑制劑組合使用以治療K-Ras G13C癌症。
在一些實施例中，抗癌劑為額外Ras抑制劑或Ras疫苗或設計成直接或間接地降低Ras之致癌活性的另一種治療模態。此類藥劑係此項技術中已知的。在一些實施例中，抗癌劑為額外Ras抑制劑。在一些實施例中，該Ras抑制劑靶向呈活性或GTP結合狀態之Ras。在一些實施例中，該Ras抑制劑靶向呈無活性或GDP結合狀態之Ras。在一些實施例中，該Ras抑制劑為諸如K-Ras G12C抑制劑，諸如AMG 510、MRTX1257、MRTX849、JNJ-74699157、LY3499446或ARS-1620、ARS-853、BPI-421286、LY3537982、JDQ443、JAB-21822、JAB-21000、IBI351、ERAS-3490、RMC-6291或GDC-6036。在一些實施例中，該Ras抑制劑為K-Ras G12D抑制劑，諸如MRTX1133或JAB-22000。在一些實施例中，該Ras抑制劑為K-Ras G12V抑制劑，諸如JAB-23000。在一些實施例中，該Ras抑制劑為RMC-6236。在一些實施例中，該Ras抑制劑係選自以下專利(其以全文引用之方式併入本文)中揭示之Ras(ON)抑制劑(亦即，呈GTP結合狀態之Ras)，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物：WO 2021091982、WO 2021091967、WO 2021091956及WO 2020132597。Ras抑制劑之其他實例係此項技術中已知的，諸如以下專利(其以全文引用之方式併入本文)中：WO 2022271658、WO 2022269508、WO 2022266167、WO 2022266069、WO 2022266015、WO 2022265974、WO 2022261154、WO 2022261154、WO 2022251576、WO 2022251296、WO 2022237815、WO 2022232332、WO 2022232331、WO 2022232320、WO 2022232318、WO 2022223037、WO 2022221739、WO 2022221528、WO 2022221386、WO 2022216762、WO 2022192794、WO 2022192790、WO 2022188729、WO 2022187411、WO 2022184178、WO 2022173870、WO 2022173678、WO 2022135346、WO 2022133731、WO 2022133038、WO 2022133345、WO 2022132200、WO 2022119748、WO 2022109485、WO 2022109487、WO 2022066805、WO 2022002102、WO 2022002018、WO 2021259331、WO 2021257828、WO 2021252339、WO 2021248095、WO 2021248090、WO 2021248083、WO 2021248082、WO 2021248079、WO 2021248055、WO 2021245051、WO 2021244603、WO 2021239058、WO 2021231526、WO 2021228161、WO 2021219090、WO 2021219090、WO 2021219072、WO 2021218939、WO 2021217019、WO 2021216770、WO 2021215545、WO 2021215544、WO 2021211864、WO 2021190467、WO 2021185233、WO 2021180181、WO 2021175199、2021173923、WO 2021169990、WO 2021169963、WO 2021168193、WO 2021158071、WO 2021155716、WO 2021152149、WO 2021150613、WO 2021147967、WO 2021147965、WO 2021143693、WO 2021142252、WO 2021141628、WO 2021139748、WO 2021139678、WO 2021129824、WO 2021129820、WO 2021127404、WO 2021126816、WO 2021126799、WO 2021124222、WO 2021121371、WO 2021121367、WO 2021121330、WO 2020050890、WO 2020047192、WO 2020035031、WO 2020028706、WO 2019241157、WO 2019232419、WO 2019217691、WO 2019217307、WO 2019215203、WO 2019213526、WO 2019213516、WO 2019155399、WO 2019150305、WO 2019110751、WO 2019099524、WO 2019051291、WO 2018218070、WO 2018217651、WO 2018218071、WO 2018218069、WO 2018206539、WO 2018143315、WO 2018140600、WO 2018140599、WO 2018140598、WO 2018140514、WO 2018140513、WO 2018140512、WO 2018119183、WO 2018112420、WO 2018068017、WO 2018064510、WO 2017201161、WO 2017172979、WO 2017100546、WO 2017087528、WO 2017058807、WO 2017058805、WO 2017058728、WO 2017058902、WO 2017058792、WO 2017058768、WO 2017058915、WO 2017015562、WO 2016168540、WO 2016164675、WO 2016049568、WO 2016049524、WO 2015054572、WO 2014152588、WO 2014143659及WO 2013155223。
在一些實施例中，可與本發明之化合物組合之治療劑為MAP激酶(MAPK)路徑抑制劑(或「MAPK抑制劑」)。此類藥劑係此項技術中已知的。MAPK抑制劑包括但不限於Cancers (Basel) 2015年9月;  7(3): 1758–1784中所述之一或多種MAPK抑制劑。舉例而言，MAPK抑制劑可選自以下中之一或多者：曲美替尼(trametinib)、比美替尼(binimetinib)、司美替尼(selumetinib)、考比替尼(cobimetinib)、LErafAON (NeoPharm)、ISIS 5132；維羅非尼(vemurafenib)、匹馬色替(pimasertib)、TAK733、RO4987655 (CH4987655)；CI-1040；PD-0325901；CH5126766；MAP855；AZD6244；瑞法替尼(refametinib) (RDEA 119/BAY 86-9766)；GDC-0973/XL581；AZD8330 (ARRY-424704/ARRY-704)；RO5126766 (Roche，描述於PLoS One.2014年11月25日; 9(11)中)；及GSK1120212 (或JTP-74057，描述於Clin Cancer Res. 2011年3月1日; 17(5):989-1000中)。MAPK抑制劑可為PLX8394、LXH254、GDC-5573或LY3009120。
在一些實施例中，抗癌劑為RAS-RAF-ERK或PI3K-AKT-TOR或PI3K-AKT信號傳導路徑之破壞劑或抑制劑。此類藥劑係此項技術中已知的。PI3K/AKT抑制劑可包括但不限於Cancers (Basel) 2015年9月; 7(3): 1758–1784中所述之一或多種PI3K/AKT抑制劑。舉例而言，PI3K/AKT抑制劑可選自以下中之一或多者：NVP-BEZ235；BGT226；XL765/SAR245409；SF1126；GDC-0980；PI-103；PF-04691502；PKI-587；GSK2126458。
在一些實施例中，抗癌劑為PD-1或PD-L1拮抗劑。此類藥劑係此項技術中已知的。
在一些實施例中，額外治療劑包括ALK抑制劑、HER2抑制劑、EGFR抑制劑、IGF-1R抑制劑、MEK抑制劑、PI3K抑制劑、AKT抑制劑、TOR抑制劑、MCL-1抑制劑、BCL-2抑制劑、SHP2抑制劑、蛋白酶體抑制劑及免疫療法。在一些實施例中，額外治療劑包括FGFR抑制劑、PARP抑制劑、BET抑制劑、PRMT5i抑制劑、MAT2A抑制劑、VEGF抑制劑及HDAC抑制劑。在一些實施例中，治療劑可為泛RTK抑制劑，諸如阿法替尼(afatinib)。
IGF-1R抑制劑係此項技術中已知的且包括林西替尼(linsitinib)或其醫藥學上可接受之鹽。
EGFR抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於小分子拮抗劑、抗體抑制劑或特異性反義核苷酸或siRNA。EGFR之有用抗體抑制劑包括西妥昔單抗(cetuximab) (Erbitux®)、帕尼單抗(panitumumab)  (Vectibix®)、紮魯目單抗(zalutumumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)及馬妥珠單抗(matuzumab)。其他基於抗體之EGFR抑制劑包括可部分或完全地阻斷天然配體對EGFR之活化的任何抗EGFR 抗體或抗體片段。基於抗體之EGFR抑制劑的非限制性實例包括Modjtahedi等人, Br. J. Cancer 1993, 67:247-253；Teramoto等人, Cancer 1996, 77:639-645；Goldstein等人, Clin. Cancer Res. 1995, 1:1311-1318；Huang等人, 1999, Cancer Res. 15:59(8):1935-40；及Yang等人, Cancer Res.1999, 59:1236-1243中所描述之EGFR抑制劑。EGFR抑制劑可為單株抗體Mab E7.6.3 (Yang, 1999，同上文)或Mab C225 (ATCC登錄號HB-8508)或對其具有結合特異性之抗體或抗體片段。
EGFR之小分子拮抗劑包括吉非替尼(Iressa®)、埃羅替尼(Tarceva®)及拉帕替尼(TykerB®)。參見例如Yan等人, Pharmacogenetics and Pharmacogenomics In Oncology Therapeutic Antibody Development, BioTechniques 2005, 39(4):565-8；及Paez等人, EGFR Mutations In Lung Cancer Correlation With Clinical Response To Gefitinib Therapy, Science 2004, 304(5676):1497-500。在一些實施例中，EGFR抑制劑為奧西替尼(osimertinib) (Tagrisso®)。小分子EGFR抑制劑之其他非限制性實例包括以下專利公開案中所述之任何EGFR抑制劑，及此類EGFR抑制劑之所有醫藥學上可接受之鹽：EP 0520722；EP 0566226；WO96/33980；美國專利第5,747,498號；WO96/30347；EP 0787772；WO97/30034；WO97/30044；WO97/38994；WO97/49688；EP 837063；WO98/02434；WO97/38983；WO95/19774；WO95/19970；WO97/13771；WO98/02437；WO98/02438；WO97/32881；DE 19629652；WO98/33798；WO97/32880；WO97/32880；EP 682027；WO97/02266；WO97/27199；WO98/07726；WO97/34895；WO96/31510；WO98/14449；WO98/14450；WO98/14451；WO95/09847；WO97/19065；WO98/17662；美國專利第5,789,427號；美國專利第5,650,415號；美國專利第5,656,643號；WO99/35146；WO99/35132；WO99/07701；及WO92/20642。小分子EGFR抑制劑之其他非限制性實例包括Traxler等人, Exp. Opin. Ther. Patents 1998, 8(12):1599-1625中所描述之任何EGFR抑制劑。在一些實施例中，EGFR抑制劑為ERBB抑制劑。在人類中，ERBB家族含有HER1 (EGFR、ERBB1)、HER2 (NEU、ERBB2)、HER3 (ERBB3)及HER (ERBB4)。
MEK抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於皮馬色替、司美替尼、考比替尼(Cotellic®)、曲美替尼(Mekinist®)及比美替尼(Mektovi®)。在一些實施例中，MEK抑制劑靶向MEK突變，該突變係選自以下之第I類MEK1突變：D67N、P124L、P124S及L177V。在一些實施例中，MEK突變係選自以下之第II類MEK1突變：ΔE51-Q58、ΔF53-Q58、E203K、L177M、C121S、F53L、K57E、Q56P及K57N。
PI3K抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於沃特曼寧(wortmannin)；WO06/044453中所述之17-羥基沃特曼寧類似物；4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺醯基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]嗎啉(亦稱為匹替利昔(pictilisib)或GDC-0941且描述於WO09/036082及WO09/055730中)；2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-側氧基-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氫咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(亦稱為BEZ 235或NVP-BEZ 235，且描述於WO06/122806中)；(S)-l-(4-((2-(2-胺基嘧啶-5-基)-7-甲基-4-(N-嗎啉基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-羥基丙-1-酮(描述於WO08/070740中)；LY294002 (2-(4-嗎啉基)-8-苯基-4H-l-苯并吡喃-4-酮(購自Axon Medchem)；PI 103鹽酸鹽(3-[4-(4-嗎啉基吡啶并[3',2':4,5]呋喃并[3,2-d]嘧啶-2-基]苯酚鹽酸鹽(購自Axon Medchem)；PIK 75 (2-甲基-5-硝基-2-[(6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亞甲基]-1-甲基醯肼-苯磺酸單鹽酸鹽)(購自Axon Medchem)；PIK 90 (N-(7,8-二甲氧基-2,3-二氫-咪唑并[l,2-c]喹唑啉-5-基)-菸鹼醯胺(購自Axon Medchem)；AS-252424 (5-[l-[5-(4-氟-2-羥基-苯基)-呋喃-2-基]-甲-(Z)-亞基]-噻唑啶-2,4-二酮(購自Axon Medchem)；TGX-221 (7-甲基-2-(4-嗎啉基)-9-[1-(苯基胺基)乙基]-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮(購自Axon Medchem)；XL-765；及XL-147。其他PI3K抑制劑包括去甲氧基綠膠黴素(demethoxyviridin)、哌立福辛(perifosine)、CAL101、PX-866、BEZ235、SF1126、INK1117、IPI-145、BKM120、XL147、XL765、Palomid 529、GSK1059615、ZSTK474、PWT33597、IC87114、TGI 00-115、CAL263、PI-103、GNE-477、CUDC-907及AEZS-136。
AKT抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於Akt-1-1 (抑制Aktl) (Barnett等人, Biochem. J. 2005, 385(Pt. 2): 399-408)；Akt-1-1,2 (抑制Akl及2) (Barnett等人, Biochem. J. 2005, 385(Pt. 2): 399-408)；API-59CJ-Ome (例如Jin等人, Br. J. Cancer 2004, 91:1808-12)；1-H-咪唑并[4,5-c]吡啶基化合物 (例如WO 05/011700)；吲哚-3-甲醇及其衍生物(例如美國專利第6,656,963號；Sarkar及Li J Nutr. 2004, 134(12增刊):3493S-3498S)；哌立福辛(例如干擾Akt膜定位；Dasmahapatra等人,Clin. Cancer Res. 2004, 10(15):5242-52)；磷脂醯肌醇醚脂質類似物(例如Gills及Dennis Expert. Opin. Investig. Drugs 2004, 13:787-97)；及曲西立濱(triciribine) (TCN或API-2或NCI標識符：NSC 154020；Yang等人, Cancer Res. 2004, 64:4394-9)。
mTOR抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於ATP競爭性mTORC1/mTORC2抑制劑，例如PI-103、PP242、PP30；Torin 1；FKBP12增強劑；4H-1-苯并吡喃-4-酮衍生物；及雷帕黴素(rapamycin) (亦稱為西羅莫司)及其衍生物，包括：替西羅莫司(temsirolimus) (Torisel®)；依維莫司(Afinitor®；WO94/09010)；地磷莫司(亦稱為地伏莫司(deforolimus)或AP23573)；雷帕黴素類似物(rapalogs)，例如WO98/02441及WO01/14387中所揭示之雷帕黴素類似物，例如AP23464及AP23841；40-(2-羥乙基)雷帕黴素；40-[3-羥基(羥甲基)甲基丙酸酯]-雷帕黴素(亦稱為CC1779)；40-表-(四唑基)-雷帕黴素(亦稱為ABT578)；32-去氧雷帕黴素；16-戊炔氧基-32( S)-二氫雷帕黴素；WO05/005434中所揭示之衍生物；美國專利第5,258,389號、第5,118,677號、第5,118,678號、第5,100,883號、第5,151,413號、第5,120,842號及第5,256,790號中，以及WO94/090101、WO92/05179、WO93/111130、WO94/02136、WO94/02485、WO95/14023、WO94/02136、WO95/16691、WO96/41807、WO96/41807及WO2018204416中所揭示之衍生物；及含磷之雷帕黴素衍生物(例如WO05/016252)。在一些實施例中，mTOR抑制劑為雙重空間抑制劑(bisteric inhibitor)(參見例如WO2018204416、WO2019212990及WO2019212991)，諸如RMC-5552，其具有以下結構 。
可與本發明之化合物組合使用之BRAF抑制劑係此項技術中已知的且包括例如維羅非尼、達拉非尼(dabrafenib)及康奈非尼(encorafenib)。BRAF可包含第3類BRAF突變。在一些實施例中，第3類BRAF突變係選自人類BRAF中以下胺基酸取代中之一或多者：D287H；P367R；V459L；G466V；G466E；G466A；S467L；G469E；N581S；N581I；D594N；D594G；D594A；D594H；F595L；G596D；G596R；及A762E。
MCL-1抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於AMG-176、MIK665及S63845。骨髓細胞白血病-1 (MCL-1)蛋白質為B細胞淋巴瘤-2 (BCL-2)蛋白質家族之關鍵抗細胞凋亡成員之一。MCL-1之過度表現與腫瘤進展以及對不僅傳統化學療法而且包括諸如ABT-263之類BCL-2抑制劑在內之靶向治療劑的抗性密切相關。
在一些實施例中，額外治療劑為SHP2抑制劑。SHP2抑制劑係此項技術中已知的。SHP2為由PTPN11基因編碼之非受體蛋白質酪胺酸磷酸酶，其促成多種細胞功能，包括增殖、分化、細胞週期維持及遷移。SHP2具有兩個N末端Src同源2結構域(N-SH2及C-SH2)、一個催化結構域(PTP)及一個C末端尾。該兩個SH2結構域控制SHP2之亞細胞定位及功能調控。該分子以藉由涉及來自N-SH2及PTP結構域之殘基的結合網路穩定之無活性、自我抑制性構型存在。利用例如經受體酪胺酸激酶(RTK)起作用之細胞介素或生長因子刺激會引起催化位點暴露，引起SHP2之酶活化。
SHP2參與經由RAS-促分裂原活化之蛋白質激酶(MAPK)，即JAK-STAT或磷酸肌醇3-激酶-AKT路徑進行之信號傳導。已在以下中鑑別出PTPN11基因中且隨後SHP2中之突變：若干人類發育病，諸如努南症候群(Noonan Syndrome)及萊帕德症候群(Leopard Syndrome)，以及人類癌症，諸如青少年型骨髓單核球白血病、神經母細胞瘤、黑素瘤、急性骨髓性白血病以及乳癌、肺癌及結腸癌。該等突變中有一些使SHP2之自抑制性構型不穩定且促進SHP2之自活化或增強之生長因子驅動型活化。因此，SHP2表示開發用於治療包括癌症在內之各種疾病之新穎療法的特別值得關注之目標。已經顯示，SHP2抑制劑(例如RMC-4550或SHP099)與RAS路徑抑制劑 (例如MEK抑制劑)之組合可在活體外抑制多種癌細胞株(例如胰臟癌、肺癌、卵巢癌及乳癌)之增殖。因此，涉及SHP2抑制劑及RAS路徑抑制劑之組合療法可為用於預防多種惡性病中之腫瘤耐藥性的一般策略。
此項技術中已知之此類SHP2抑制劑的非限制性實例包括：Chen等人, Mol Pharmacol. 2006, 70, 562；Sarver等人, J. Med. Chem.2017, 62, 1793；Xie等人, J. Med. Chem.2017, 60, 113734；及Igbe等人, Oncotarget, 2017, 8, 113734；及PCT申請案：WO 2022235822、WO 20222084008、WO 2022135568、WO 2021176072、WO 2021171261、WO 2021149817、WO 2021148010、WO 2021147879、WO 2021143823、WO 2021143701、WO 2021143680、WO 2021121397、WO 2021119525、WO 2021115286、WO 2021110796、WO 2021088945、WO 2021073439、WO 2021061706、WO 2021061515、WO 2021043077、WO 2021033153、WO 2021028362、WO 2021033153、WO 2021028362、WO 2021018287、WO 2020259679、WO 2020249079、WO 2020210384、WO 2020201991、WO 2020181283、WO 2020177653、WO 2020165734、WO 2020165733、WO 2020165732、WO 2020156243、WO 2020156242、WO 2020108590、WO 2020104635、WO 2020094104、WO 2020094018、WO 2020081848、WO 2020073949、WO 2020073945、WO 2020072656、WO 2020065453、WO 2020065452、WO 2020063760、WO 2020061103、WO 2020061101、WO 2020033828、WO 2020033286、WO 2020022323、WO 2019233810、WO 2019213318、WO 2019183367、WO 2019183364、WO 2019182960、WO 2019167000、WO 2019165073、WO 2019158019、WO 2019152454、WO 2019051469、WO 2019051084、WO 2018218133、WO 2018172984、WO 2018160731、WO 2018136265、WO 2018136264、WO 2018130928、WO 2018129402、WO 2018081091、WO 2018057884、WO 2018013597、WO 2017216706、WO 2017211303、WO 2017210134、WO 2017156397、WO 2017100279、WO 2017079723、WO 2017078499、WO 2016203406、WO 2016203405、WO 2016203404、WO 2016196591、WO 2016191328、WO 2015107495、WO 2015107494、WO 2015107493、WO 2014176488、WO 2014113584、US 20210085677、US 10858359、US 10934302、US 10954243、US 10988466、US 11001561、US 11033547、US 11034705或US 11044675，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物，各自以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，SHP2抑制劑結合於活性位點。在一些實施例中，SHP2抑制劑為混合型不可逆抑制劑。在一些實施例中，SHP2抑制劑結合別構位點，例如非共價別構抑制劑。在一些實施例中，SHP2抑制劑為共價SHP2抑制劑，諸如靶向位於磷酸酶活性位點外之半胱胺酸殘基(C333)的抑制劑。在一些實施例中，SHP2抑制劑為可逆抑制劑。在一些實施例中，SHP2抑制劑為不可逆抑制劑。在一些實施例中，SHP2抑制劑為SHP099。在一些實施例中，SHP2抑制劑為TNO155，其具有結構： ，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，SHP2抑制劑為RMC-4550。在一些實施例中，SHP2抑制劑為RMC-4630，其具有結構： ，或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，SHP2抑制劑為JAB-3068，其具有結構： ， 或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，SHP2抑制劑為JAB-3312。在一些實施例中，SHP2抑制劑為以下化合物， ， 或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，SHP2抑制劑為RLY-1971，其具有結構 ， 或其醫藥學上可接受之鹽、溶劑合物、異構物(例如立體異構物)、前藥或互變異構物。在一些實施例中，SHP2抑制劑為ERAS-601。在一些實施例中，SHP2抑制劑為BBP-398。
在一些實施例中，額外治療劑係選自由以下組成之群：MEK抑制劑、HER2抑制劑、SHP2抑制劑、CDK4/6抑制劑、mTOR抑制劑、SOS1抑制劑及PD-L1抑制劑。在一些實施例中，額外治療劑係選自由以下組成之群：MEK抑制劑、SHP2抑制劑及PD-L1抑制劑。參見例如Hallin等人, Cancer Discovery, DOI: 10.1158/2159-8290 (2019年10月28日)及Canon等人, Nature, 575:217(2019)。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與MEK抑制劑及SOS1抑制劑組合使用。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與PD-L1抑制劑及SOS1抑制劑組合使用。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與PD-L1抑制劑及SHP2抑制劑組合使用。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與MEK抑制劑及SHP2抑制劑組合使用。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與SHP2抑制劑及抑制多種Ras同功型及/或突變體之Ras抑制劑(例如RMC-6236)組合使用。在一些實施例中，該癌症為肺癌且治療包括投與本發明之Ras抑制劑與第二或第三治療劑(諸如SHP2抑制劑及抑制多種Ras同功型及/或突變體之Ras抑制劑)之組合。在一些實施例中，該癌症為結腸直腸癌且治療包括投與本發明之Ras抑制劑及第二或第三治療劑(諸如SHP2抑制劑及抑制多種Ras同功型及/或突變體之Ras抑制劑)之組合。在一些實施例中，本發明之Ras抑制劑係與免疫療法組合使用，視情況與化學治療劑組合使用。
蛋白酶體抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於卡非佐米(carfilzomib) (Kyprolis®)、硼替佐米(bortezomib)(Velcade®)及奧普佐米(oprozomib)。
免疫療法包括但不限於單株抗體、免疫調節性醯亞胺(IMiD)、GITR促效劑、基因工程改造之T細胞(例如CAR-T細胞)、雙特異性抗體(例如BiTE)以及抗PD-1劑、抗PD-L1劑、抗CTLA4劑、抗LAGl劑及抗OX40劑。其他免疫療法係此項技術中已知的。
免疫調節劑(IMiD)為一類含有醯亞胺基之免疫調節藥物(調節免疫反應之藥物)。IMiD類藥物包括沙立度胺(thalidomide)及其類似物(來那度胺(lenalidomide)、泊馬度胺(pomalidomide)及阿普司特(apremilast))。
例示性抗PD-1抗體及其使用方法描述於Goldberg等人, Blood 2007, 110(1):186-192；Thompson等人, Clin. Cancer Res. 2007, 13(6):1757-1761；及WO06/121168 A1)中，且在本文別處亦有描述。
FGFR抑制劑係此項技術中已知的，諸如培米替尼(pemigatinib)及厄達替尼(erdafitinib)，包括FGFR2抑制劑及FGFR4抑制劑。參見例如Cancers (Basel), 2021年6月; 13(12) 2968。
BET抑制劑係此項技術中已知的，諸如羅米地辛、帕比司他及貝利司他。參見例如British J. Cancer 124:1478 (2021)。
PRMT5i抑制劑係此項技術中已知的，諸如PF-0693999、PJ-68及MRTX1719。參見例如Biomed. Pharmacotherapy 144:112252 (2021)。
MAT2A抑制劑係此項技術中已知的，諸如AG-270及IDE397。參見例如Exp Opin Ther Patents (2022) DOI: 10.1080/13543776.2022.2119127。
GITR促效劑包括但不限於GITR融合蛋白及抗GITR抗體(例如二價抗GITR抗體)，諸如美國專利第6,111,090號、美國專利第8,586,023號、WO2010/003118及WO2011/090754中所述之GITR融合蛋白；或例如美國專利第7,025,962號、EP 1947183、美國專利第7,812,135號；美國專利第8,388,967號；美國專利第8,591,886號；美國專利第7,618,632號、EP 1866339及WO2011/028683、WO2013/039954、WO05/007190、WO07/133822、WO05/055808、WO99/40196、WO01/03720、WO99/20758、WO06/083289、WO05/115451及WO2011/051726中所述之抗GITR抗體。
可與本發明化合物組合使用之治療劑的另一實例為抗血管生成劑。抗血管生成劑係此項技術中已知的且包括但不限於活體外合成製備之化學組成物、抗體、抗原結合區、放射性核種以及其組合及結合物。抗血管生成劑可為促效劑、拮抗劑、別構調節劑、毒素，或更通常可用於抑制或刺激其目標(例如受體或酶活化或抑制)，且由此促進細胞死亡或使細胞生長停滯。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括抗血管生成劑。
抗血管生成劑可為MMP-2 (基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9 (基質金屬蛋白酶9)抑制劑及COX-II (環加氧酶11)抑制劑。抗血管生成劑之非限制性實例包括雷帕黴素、替西羅莫司(CCI-779)、依維莫司(RAD001)、索拉非尼、舒尼替尼及貝伐珠單抗(bevacizumab)。有用COX-II抑制劑之實例包括阿來昔布(alecoxib)、伐地昔布(valdecoxib)及羅非昔布(rofecoxib)。有用的基質金屬蛋白酶抑制劑之實例描述於WO96/33172、WO96/27583、WO98/07697、WO98/03516、WO98/34918、WO98/34915、WO98/33768、WO98/30566、WO90/05719、WO99/52910、WO99/52889、WO99/29667、WO99007675、EP0606046、EP0780386、EP1786785、EP1181017、EP0818442、EP1004578及US20090012085，以及美國專利第5,863,949號及第5,861,510號中。較佳之MMP-2及MMP-9抑制劑為具有極低或不具有MMP-1抑制活性之抑制劑。更佳為相對於其他基質金屬蛋白酶(亦即，MAP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP- 7、MMP-8、MMP-10、MMP-11、MMP-12及MMP-13)選擇性抑制MMP-2或AMP-9之抑制劑。MMP抑制劑之一些具體實例有AG-3340、RO 32-3555及RS 13-0830。
其他例示性抗血管生成劑包括激酶結構域KDR (激酶結構域受體)抑制劑(例如特異性結合至激酶結構域受體之抗體及抗原結合區)、抗VEGF劑(例如特異性結合VEGF之抗體或抗原結合區(例如貝伐珠單抗)或可溶性VEGF受體或其配體結合區)，諸如VEGF-TRAP™，及抗VEGF受體劑(例如特異性結合至VEGF受體之抗體或抗原結合區)、VEGF抑制劑、EGFR抑制劑(例如特異性結合至EGFR之抗體或抗原結合區)，諸如Vectibix® (帕尼單抗(panitumumab))、埃羅替尼(Tarceva®)、抗Angl劑及抗Ang2劑(例如特異性結合至Angl及Ang2或其受體，例如Tie2/Tek之抗體或抗原結合區)，及抗Tie2激酶抑制劑(例如特異性結合至Tie2激酶之抗體或抗原結合區)。其他抗血管生成劑包括坎帕斯(Campath)、IL-8、B-FGF、Tek拮抗劑(US2003/0162712；US6,413,932)、抗TWEAK劑(例如特異性結合之抗體或抗原結合區，或可溶性TWEAK受體拮抗劑；參見US6,727,225)、拮抗整合素與其配體之結合的ADAM解整合素結構域(US 2002/0042368)、特異性結合之抗eph受體或抗蝶素抗體或抗原結合區(美國專利第5,981,245號、第5,728,813號、第5,969,110號、第 6,596,852號、第6,232,447號、第6,057,124號及其專利家族成員)，及抗PDGF-BB拮抗劑(例如特異性結合之抗體或抗原結合區)，以及特異性結合至PDGF-BB配體之抗體或抗原結合區，及PDGFR激酶抑制劑(例如特異性結合至PDGFR激酶之抗體或抗原結合區)。額外抗血管生成劑包括：SD-7784 (Pfizer, USA)；西侖吉肽(cilengitide) (Merck KGaA, Germany, EPO 0770622)；哌加他尼八鈉(pegaptanib octasodium) (Gilead Sciences, USA)；阿法他汀(Alphastatin) (BioActa, UK)；M-PGA (Celgene, USA, US 5712291)；伊洛馬司他(ilomastat) (Arriva, USA, US5892112)；恩沙尼(emaxanib) (Pfizer, USA, US 5792783)；瓦他拉尼(vatalanib)(Novartis, Switzerland)；2-甲氧基雌二醇(EntreMed, USA)；TLC ELL-12 (Elan, Ireland)；乙酸阿奈可他(anecortave acetate) (Alcon, USA)；α-D148 Mab (Amgen, USA)；CEP-7055 (Cephalon, USA)；抗Vn Mab (Crucell, Netherlands)、DAC抗血管生成劑(ConjuChem, Canada)；安格西丁(Angiocidin) (InKine Pharmaceutical, USA)；KM-2550 (Kyowa Hakko, Japan)；SU-0879 (Pfizer, USA)；CGP-79787 (Novartis, Switzerland, EP 0970070)；ARGENT技術(Ariad, USA)；YIGSR-Stealth (Johnson & Johnson, USA)；纖維蛋白原-E片段(BioActa, UK)；血管形成抑制劑 (Trigen, UK)；TBC-1635 (Encysive Pharmaceuticals, USA)；SC-236 (Pfizer, USA)；ABT-567 (Abbott, USA)；米塔斯他汀(Metastatin) (EntreMed, USA)；絲抑蛋白(maspin) (Sosei, Japan)；2-甲氧基雌二醇(Oncology Sciences Corporation, USA)；ER-68203-00 (IV AX, USA)；BeneFin (Lane Labs, USA)；Tz-93 (Tsumura, Japan)；TAN-1120 (Takeda, Japan)；FR-111142 (Fujisawa, Japan, JP 02233610)；血小板因子4 (RepliGen, USA, EP 407122)；血管內皮生長因子拮抗劑(Borean, Denmark)；貝伐珠單抗(pINN) (Genentech, USA)；血管生成抑制劑(SUGEN, USA)；XL 784 (Exelixis, USA)；XL 647 (Exelixis, USA)；第二代α5β3整合素MAb (Applied Molecular Evolution, USA及Medlmmune, USA)；鹽酸恩紮妥林(enzastaurin hydrochloride) (Lilly, USA)；CEP 7055 (Cephalon, USA及Sanofi-Synthelabo, France)；BC 1 (Genoa Institute of Cancer Research, Italy)；rBPI 21及BPI源性抗血管生成劑(XOMA, USA)；PI 88 (Progen, Australia)；西侖吉肽(Merck KGaA, German；Munich Technical University, Germany, Scripps Clinic and Research Foundation, USA)；AVE 8062 (Ajinomoto, Japan)；AS 1404 (Cancer Research Laboratory, New Zealand)；SG 292, (Telios, USA)；內皮抑素(Endostatin) (Boston Childrens Hospital, USA)；ATN 161 (Attenuon, USA)；2-甲氧基雌二醇(Boston Childrens Hospital, USA)；ZD 6474 (AstraZeneca, UK)；ZD 6126 (Angiogene Pharmaceuticals, UK)；PPI 2458 (Praecis, USA)；AZD 9935 (AstraZeneca, UK)；AZD 2171, (AstraZeneca, UK)；瓦他拉尼(pINN) (Novartis, Switzerland及Schering AG, Germany)；組織因子路徑抑制劑(EntreMed, USA)；哌加他尼(Pinn) (Gilead Sciences, USA)；束骨薑黃醇(xanthorrhizol) (Yonsei University, South Korea)；基於基因的VEGF-2疫苗(Scripps Clinic and Research Foundation, USA)；SPV5.2, (Supratek, Canada)；SDX 103 (University of California, San Diego, USA)；PX 478 (ProlX, USA)；METASTATIN (EntreMed, USA)；肌鈣蛋白I (Harvard University, USA)；SU 6668 (SUGEN, USA)；OXI 4503 (OXiGENE, USA)；o-胍(Dimensional Pharmaceuticals, USA)；莫妥拉明C (motuporamine C) (British Columbia University, Canada)；CDP 791 (Celltech Group, UK)；阿替莫德(atiprimod) (pINN) (GlaxoSmithKline, UK)；E 7820 (Eisai, Japan)；CYC 381 (Harvard University, USA)；AE 941 (Aeterna, Canada)；血管生成疫苗 (EntreMed, USA)；尿激酶纖維蛋白溶酶原活化物抑制劑 (Dendreon, USA)；奧穀法奈(oglufanide) (pINN) (Melmotte, USA)；HIF-lα抑制劑 (Xenova, UK)；CEP 5214 (Cephalon, USA)；BAY RES 2622 (Bayer, Germany)；安古西丁 (InKine, USA)；A6 (Angstrom, USA)；KR 31372 (Korea Research Institute of Chemical Technology, South Korea)；GW 2286 (GlaxoSmithKline, UK)；EHT 0101 (ExonHit, France)；CP 868596 (Pfizer, USA)；CP 564959 (OSI, USA)；CP 547632 (Pfizer, USA)；786034 (GlaxoSmithKline, UK)；KRN 633 (Kirin Brewery, Japan)；藥物遞送系統，眼內2-甲氧基雌二醇；安格尼斯(anginex)(Maastricht University, Netherlands，及Minnesota University, USA)；ABT 510 (Abbott, USA)；AAL 993 (Novartis, Switzerland)；VEGI (ProteomTech, USA)；腫瘤壞死因子-α抑制劑；SU 11248 (Pfizer, USA及 SUGEN USA)；ABT 518 (Abbott, USA)；YH16 (Yantai Rongchang, China)；S-3APG (Boston Childrens Hospital, USA及EntreMed, USA)；MAb, KDR (ImClone Systems, USA)；MAb, α5β (Protein Design, USA)；KDR激酶抑制劑 (Celltech Group, UK及Johnson & Johnson, USA)；GFB 116 (South Florida University, USA及Yale University, USA)；CS 706 (Sankyo, Japan)；考布他汀(combretastatin) A4前藥(Arizona State University, USA)；軟骨素酶AC (IBEX, Canada)；BAY RES 2690 (Bayer, Germany)；AGM 1470 (Harvard University, USA, Takeda, Japan，及TAP, USA)；AG 13925 (Agouron, USA)；四硫鉬酸鹽(University of Michigan, USA)；GCS 100 (Wayne State University, USA) ；CV 247 (Ivy Medical, UK)；CKD 732 (Chong Kun Dang, South Korea)；伊索拉定(irsogladine) (Nippon Shinyaku, Japan)；RG 13577 (Aventis, France)；WX 360 (Wilex, Germany)；角鯊胺(Genaera, USA)；RPI 4610 (Sirna, USA)；肝素酶抑制劑(InSight, Israel)；KL 3106 (Kolon, South Korea)；和厚樸酚(Honokiol) (Emory University, USA)；ZK CDK (Schering AG, Germany)；ZK Angio (Schering AG, Germany)；ZK 229561 (Novartis, Switzerland，及Schering AG, Germany)；XMP 300 (XOMA, USA)；VGA 1102 (Taisho, Japan)；VE-鈣黏蛋白-2拮抗劑(ImClone Systems, USA)；血管抑制因子(Vasostatin) (National Institutes of Health, USA)；Flk-1 (ImClone Systems, USA)；TZ 93 (Tsumura, Japan)；TumStatin (Beth Israel Hospital, USA)；截短之可溶性FLT1 (血管內皮生長因子受體1) (Merck & Co, USA)；Tie-2配體(Regeneron, USA)；及凝血栓蛋白1抑制劑 (Allegheny Health, Education and Research Foundation, USA)。
可與本發明之化合物組合使用的治療劑的其他實例包括特異性結合並抑制生長因子活性之藥劑(例如抗體、抗原結合區或可溶性受體)，諸如肝細胞生長因子(HGF，亦稱為離散因子(Scatter Factor))之拮抗劑，以及特異性結合受體c-Met之抗體或抗原結合區。此類藥劑係此項技術中已知的。
可與本發明之化合物組合使用的治療劑之另一實例為自噬抑制劑。自噬抑制劑係此項技術中已知的且包括但不限於氯喹、3-甲基腺嘌呤、羥基氯喹 (Plaquenil™)、巴佛洛黴素A1 (bafilomycin A1)、5-胺基-4-咪唑甲醯胺核糖苷(AICAR)、軟海綿酸、抑制第2A型或第1型蛋白質磷酸酶之自噬抑制性藻毒素、cAMP類似物及增加cAMP含量之藥物，諸如腺苷、LY204002、N6-巰基嘌呤核糖苷及長春新鹼。此外，亦可使用抑制蛋白質，包括但不限於ATG5 (參與自噬)之表現的反義RNA或siRNA。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括自噬抑制劑。
可與本發明之化合物組合使用的治療劑之另一實例為抗腫瘤劑，其係此項技術中已知的。在一些實施例中，該一或多種額外療法包括抗腫瘤劑。抗腫瘤劑之非限制性實例包括醋孟南(acemannan)、阿柔比星(aclarubicin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿侖單抗(alemtuzumab)、阿曲諾英(alitretinoin)、六甲蜜胺、胺磷汀(amifostine)、胺基乙醯丙酸、胺柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、安塞爾(ancer)、安塞司亭(ancestim)、阿格拉賓(arglabin)、三氧化砷、BAM-002 (Novelos)、貝沙羅汀(bexarotene)、比卡魯胺(bicalutamide)、溴尿苷(broxuridine)、卡培他濱、西莫白介素(celmoleukin)、西曲瑞克(cetrorelix)、克拉屈濱(cladribine)、克黴唑(clotrimazole)、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabine ocfosfate)、DA 3030 (Dong-A)、達克珠單抗(daclizumab)、地尼白介素(denileukin diftitox)、地洛瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、地拉齊普(dilazep)、多西他賽、多可沙諾(docosanol)、度骨化醇(doxercalciferol)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、溴麥角環肽(bromocriptine)、卡莫司汀、阿糖胞苷、氟尿嘧啶、HIT雙氯芬酸、干擾素α、道諾黴素、多柔比星、維A酸(tretinoin)、依地福新(edelfosine)、依決洛單抗(edrecolomab)、依氟鳥胺酸(eflornithine)、乙嘧替氟(emitefur)、表柔比星(epirubicin)、貝他依伯汀(epoetin beta)、磷酸依託泊苷(etoposide phosphate)、依西美坦(exemestane)、依昔舒林(exisulind)、法屈唑(fadrozole)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、福美坦(formestane)、福莫司汀(fotemustine)、硝酸鎵、吉西他賓(gemcitabine)、吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab zogamicin)、吉美拉西(gimeracil)/奧特拉西(oteracil)/替加氟(tegafur)組合、格力考品(glycopine)、戈舍瑞林、庚鉑(heptaplatin)、人絨毛膜促性腺素、人胎兒甲胎蛋白、伊班膦酸(ibandronic acid)、伊達比星(idarubicin)、咪喹莫特(imiquimod)、干擾素α、天然干擾素α、干擾素α-2、干擾素α-2a、干擾素α-2b、干擾素α-Nl、干擾素α-n3、複合干擾素-1、天然干擾素α、干擾素β、干擾素β-la、干擾素β-lb、干擾素γ、天然干擾素γ-la、干擾素γ-lb、介白素-1 β、碘苄胍(iobenguane)、伊立替康、伊索拉定(irsogladine)、蘭瑞肽(lanreotide)、LC 9018 (Yakult)、來氟米特(leflunomide)、來格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、來曲唑、白血球α干擾素、亮丙瑞林、左旋咪唑(levamisole) + 氟尿嘧啶、利阿唑(liarozole)、洛鉑(lobaplatin)、氯尼達明(lonidamine)、洛伐他汀(lovastatin)、馬索羅酚(masoprocol)、美拉胂醇(melarsoprol)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、米非司酮(mifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、錯配雙股RNA、米托胍腙、二溴衛矛醇、米托蒽醌、莫拉司亭(molgramostim)、那法瑞林(nafarelin)、納洛酮(naloxone) + 噴他佐辛(pentazocine)、那托司亭(nartograstim)、奈達鉑、尼魯胺、那可丁(noscapine)、新穎促紅細胞生成蛋白、NSC 631570奧曲肽(octreotide)、奧普瑞白介素(oprelvekin)、奧沙特隆(osaterone)、奧沙利鉑、太平洋紫杉醇、帕米膦酸(pamidronic acid)、培門冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇干擾素α-2b、戊聚糖聚硫酸鈉(pentosan polysulfate sodium)、噴司他丁、畢西巴尼(picibanil)、比柔比星、兔抗胸腺細胞多株抗體、聚乙二醇干擾素α-2a、卟吩姆鈉(porfimer sodium)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲賽(raltitrexed)、rasburiembodiment、羥乙膦酸錸Re 186、RII異維A醯胺 (retinamide)、利妥昔單抗(rituximab)、羅莫肽(romurtide)、來昔決南釤(153 Sm)(samarium lexidronam)、沙格司亭(sargramostim)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、索納明(sonermin)、氯化鍶-89、舒拉明(suramin)、他索那明(tasonermin)、他紮羅汀(tazarotene)、替加氟、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、四氯十氧化物(tetrachlorodecaoxide)、沙立度胺、胸腺法新(thymalfasin)、促甲狀腺素α (thyrotropin alfa)、拓撲替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫單抗-碘131 (tositumomab-iodine 131)、曲妥珠單抗、曲奧舒凡(treosulfan)、維A酸、曲洛司坦(trilostane)、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、天然腫瘤壞死因子α、烏苯美司、膀胱癌疫苗、Maruyama疫苗、黑素瘤溶解產物疫苗、戊柔比星(valrubicin)、維替泊芬(verteporfin)、長春瑞賓、維魯利秦(virulizin)、淨司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)或唑來膦酸；阿倍瑞克(abarelix)；AE 941 (Aeterna)、胺莫司汀(ambamustine)、反義寡核苷酸、bcl-2 (Genta)、APC 8015 (Dendreon)、地西他濱(decitabine)、去胺基格魯米特(dexaminoglutethimide)、地吖醌(diaziquone)、EL 532 (Elan)、EM 800 (Endorecherche)、恩尿嘧啶(eniluracil)、依他硝唑(etanidazole)、芬維A胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim) SD01 (Amgen)、氟維司群(fulvestrant)、加洛他濱(galocitabine)、胃泌素17免疫原、HLA-B7基因療法(Vical)、顆粒球巨噬細胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor)、組織胺二鹽酸鹽、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、伊洛馬司他(ilomastat)、IM 862 (Cytran)、介白素-2、伊普昔芬(iproxifene)、LDI 200 (Milkhaus)、勒瑞斯亭(leridistim)、林妥珠單抗(lintuzumab)、CA 125 MAb (Biomira)、癌症MAb (Japan Pharmaceutical Development)、HER-2及Fc MAb (Medarex)、獨特型105AD7 MAb (CRC Technology)、獨特型CEA MAb (Trilex)、LYM-1-碘131 MAb (Techni clone)、多形性上皮黏蛋白-釔90 MAb (Antisoma)、馬立馬斯他(marimastat)、美諾立爾(menogaril)、米妥莫單抗(mitumomab)、莫特沙芬釓(motexafin gadolinium)、MX 6 (Galderma)、奈拉濱(nelarabine)、諾拉曲塞(nolatrexed)、P 30蛋白、培維索孟(pegvisomant)、培美曲塞(pemetrexed)、泊非黴素(porfiromycin)、普啉司他(prinomastat)、RL 0903 (Shire)、魯比特康(rubitecan)、賽特鉑(satraplatin)、苯乙酸鈉、斯帕福斯酸(sparfosic acid)、SRL 172 (SR Pharma)、SU 5416 (SUGEN)、TA 077 (Tanabe)、四硫代鉬酸鹽、塞班斯汀(thaliblastine)、血小板生成素、錫乙基初紅紫素(tin ethyl etiopurpurin)、替拉紮明(tirapazamine)、癌症疫苗(Biomira)、黑素瘤疫苗(New York University)、黑素瘤疫苗(Sloan Kettering Institute)、黑素瘤腫瘤溶解產物疫苗(New York Medical College)、病毒黑素瘤細胞溶解產物疫苗(Royal Newcastle Hospital)或戊司泊達(valspodar)。
可與本發明化合物組合使用之治療劑的額外實例包括伊匹單抗 (Yervoy®)；曲美目單抗；加利昔單抗(galiximab)；納武單抗(nivolumab)，亦稱為BMS-936558 (Opdivo®)；派姆單抗(Keytruda®)；阿維魯單抗 (Bavencio®)；AMP224；BMS-936559；MPDL3280A，亦稱為RG7446；MEDI-570；AMG557；MGA271；IMP321；BMS-663513；PF-05082566；CDX-1127；抗OX40 (Providence Health Services)；huMAbOX40L；阿特昔普 (atacicept)；CP-870893；魯卡木單抗(lucatumumab)；達西珠單抗(dacetuzumab)；莫羅單抗(muromonab)-CD3；易普木單抗(ipilumumab)；MEDI4736 (Imfinzi®)；MSB0010718C；AMP 224；阿達木單抗 (adalimumab)(Humira®)；ado-曲妥珠單抗美坦新(ado-trastuzumab emtansine) (Kadcyla®)；阿柏西普(aflibercept)(Eylea®)；阿侖單抗(alemtuzumab) (Campath®)；巴利昔單抗(basiliximab) (Simulect®)；貝利木單抗(belimumab) (Benlysta®)；巴利昔單抗(basiliximab) (Simulect®)；貝利木單抗(Benlysta®)；維布妥昔單抗(brentuximab vedotin) (Adcetris®)；卡那津單抗(canakinumab) (Ilaris®)；聚乙二醇結合賽妥珠單抗(certolizumab pegol) (Cimzia®)；達克珠單抗 (Zenapax®)；達雷木單抗(daratumumab) (Darzalex®)；地諾單抗(denosumab) (Prolia®)；依庫珠單抗(eculizumab) (Soliris®)；依法利珠單抗(efalizumab) (Raptiva®)；吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin) (Mylotarg®)；戈利木單抗(golimumab) (Simponi®)；替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan) (Zevalin®)；英夫利昔單抗(infliximab) (Remicade®)；莫維珠單抗(motavizumab) (Numax®)；那他株單抗(natalizumab) (Tysabri®)；奧濱尤妥珠單抗(obinutuzumab) (Gazyva®)；奧法木單抗(ofatumumab) (Arzerra®)；奧馬珠單抗(omalizumab) (Xolair®)；帕利珠單抗(palivizumab) (Synagis®)；帕妥珠單抗(pertuzumab) (Perjeta®)；帕妥珠單抗(Perjeta®)；蘭尼單抗(ranibizumab)(Lucentis®)；瑞西巴庫單抗(raxibacumab) (Abthrax®)；托珠單抗(tocilizumab)(Actemra®)；托西莫單抗(tositumomab)；托西莫單抗-i-131；托西莫單抗及托西莫單抗-i-131 (Bexxar®)；優特克單抗(ustekinumab) (Stelara®)；AMG 102；AMG 386；AMG 479；AMG 655；AMG 706；AMG 745；及AMG 951。
取決於所治療之疾患，本文所描述之化合物可與本文所揭示之藥劑或其他適合藥劑組合使用。因此，在一些實施例中，本揭示案之一或多種化合物將與本文所描述之其他療法共投與。當用於組合療法中時，本文所描述之化合物可與第二藥劑同時或分開投與。此組合投與可包括以同一劑型同時投與兩種藥劑、以獨立劑型同時投與及分開投與。亦即，本文所描述之化合物及本文所描述之任何藥劑可一起調配成同一劑型且同時投與。或者，本發明之化合物及本文所描述之任何療法可同時投與，其中兩種藥劑係存在於獨立調配物中。在另一個替代方案中，本揭示案之化合物可先投與且隨後投與本文所描述之任何療法，或反之亦然。在分開投與方案之一些實施例中，本發明之化合物及本文所描述之任何療法係間隔數分鐘或間隔數小時或間隔數天投與。
在本文所描述之任何方法的一些實施例中，第一療法(例如本發明之化合物)及一或多種額外療法係同時投與或以任一次序依序地投與。第一治療劑可在投與該一或多種額外療法之前或之後立即、至多1小時、至多2小時、至多3小時、至多4小時、至多5小時、至多6小時、至多7小時、至多8小時、至多9小時、至多10小時、至多11小時、至多12小時、至多13小時、14小時、至多16小時、至多17小時、至多18小時、至多19小時、至多20小時、至多21小時、至多22小時、至多23小時、至多24小時或至多1-7天、1-14天、1-21天或1-30天投與。
本發明之特徵亦在於套組，其包括(a)包括本文所描述之藥劑(例如本發明之化合物)的醫藥組成物及(b)帶有關於執行本文所描述之任何方法之說明的包裝插頁。在一些實施例中，該套組包括(a)包括本文所描述之藥劑(例如本發明之化合物)的醫藥組成物、(b)一或多種額外療法(例如非藥物治療或治療劑)及(c)帶有關於執行本文所描述之任何方法之說明的包裝插頁。
由於本發明之一個態樣涵蓋用可分開投與的醫藥活性化合物之組合治療疾病或其相關症狀，故本發明進一步係關於以套組形式組合獨立醫藥組成物。該套組可包含兩種獨立醫藥組成物：本發明之化合物及一或多種額外療法。該套組可包含用於容納該等獨立組成物至容器，諸如分裝瓶或分裝箔包裝。容器之額外實例包括注射器、盒及袋。在一些實施例中，該套組可包含關於獨立組分之使用的指導。當該等獨立組分較佳地以不同劑型投與(例如經口或非經腸投與)、當以不同劑量間隔投與時，或當處方健康護理人員希望調定該組合中之個別組分時，該套組形式係特別有利的。 編號之實施例
1. 一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式I之結構： ， 式I 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； L 1不存在或為連接體； W為交聯基團，其包含乙烯基酮、乙烯基砜、炔酮或炔基砜； R 1為氫、視情況經取代之3至10員雜環烷基或視情況經取代之C 1-C 6雜烷基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基；且 R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。
2. 如實施例1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之噻唑-二基、視情況經取代之噁唑-二基、視情況經取代之嗎啉-二基、視情況經取代之吡咯啶-二基、視情況經取代之吡啶-二基、視情況經取代之氮雜環丁烷-二基、視情況經取代之吡嗪-二基、視情況經取代之嘧啶-二基、視情況經取代之哌啶-二基、視情況經取代之噁二唑-二基、視情況經取代之噻二唑-二基、視情況經取代之三唑-二基、視情況經取代之硫代嗎啉-二基或視情況經取代之伸苯基。
3. 如實施例1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-1之結構： 式II-1。
4. 如實施例1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-2之結構： 式II-2， 其中R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
5. 如實施例4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-3之結構： 式II-3。
6. 如實施例4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-4之結構： 式II-4。
7. 如實施例4之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-4b之結構： 式II-4b。
8. 如實施例1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2為： 或 。
9. 如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基。
10. 如實施例9之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3為： 。
11. 如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3為視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。
12. 如實施例11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3為： 。
13. 如實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之5至10員伸雜芳基。
14. 如實施例13之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
15. 如實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之伸苯基。
16. 如實施例15之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為： 、 、 或 。
17. 如實施例1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。
18. 如實施例17之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為： 、 、 , 、 、 、 、 或 。
19. 如實施例17之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為： 、 或 。
20. 如實施例1至19中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體為式III之結構： A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-(D 1)-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k-A 2式III， 其中A 1為在該連接體與CH(R 3)之間的鍵；A 2為在W與該連接體之間的鍵；B 1、B 2、B 3及B 4各自獨立地選自視情況經取代之C 1-C 2伸烷基、視情況經取代之C 1-C 3伸雜烷基、O、S及NR N；各R N獨立地為氫、視情況經取代之C 1–C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4烯基、視情況經取代之C 2-C 4炔基、視情況經取代之3至14員雜環烷基、視情況經取代之6至10員芳基或視情況經取代之C 1-C 7雜烷基；C 1及C 2各自獨立地選自羰基、硫羰基、磺醯基或磷醯基；f、g、h、i、j及k各自獨立地為0或1；且D 1為視情況經取代之C 1-C 10伸烷基、視情況經取代之C 2-C 10伸烯基、視情況經取代之C 2-C 10伸炔基、視情況經取代之3至14員伸雜環烷基、視情況經取代之5至10員伸雜芳基、視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之6至10員伸芳基、視情況經取代之C 2-C 10伸聚乙二醇或視情況經取代之C 1-C 10伸雜烷基，或連接A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-與-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k–A 2之化學鍵。
21. 如實施例1至20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體為或包含環狀部分。
22. 如實施例21之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體具有式IIIa之結構： 式IIIa， 其中o為0或1； R 7為氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之3至8員伸環烷基或視情況經取代之3至8員伸雜環烷基； X 1係不存在、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、O、NCH 3或視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基； Cy為視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之3至12員伸雜環烷基、視情況經取代之6-10員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；且 L 2係不存在、-SO 2-、-NH-、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基或視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。
23. 如實施例22之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
24. 如實施例22之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或 。
25. 如實施例1至24中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物不為表2之化合物。
26. 如實施例1至25中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5之結構： 式II-5， 其中Cy 1為視情況經取代之螺環8至11員伸雜環烷基或視情況經取代之雙環7至9員伸雜環烷基；且 其中W包含乙烯基酮或乙烯基砜。
27. 如實施例26之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Cy 1為視情況經取代之螺環10至11員伸雜環烷基。
28. 如實施例27之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5a之結構： 式II-5a， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3。
29. 如實施例27之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5b之結構： 式II-5b， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； s及t各自獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3、F，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之C 3-C 6環烷基，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之3至6員雜環烷基。
30. 如實施例29之化合物，其中R 13為-CH 3。
31. 如實施例29之化合物，其中s與t之和為1。
32. 如實施例29之化合物，其中s與t之和為2。
33. 如實施例29之化合物，其中s為0且t為1。
34. 如實施例29之化合物，其中s與t之和為0。
35. 如實施例28或29之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5c之結構： 式II-5c。
36. 如實施例28或29之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5d之結構： 式II-5d。
37. 如實施例28或29之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5e之結構： 式II-5e。
38. 如實施例28或29之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中r為1。
39. 如實施例28或29之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中r為2。
40. 如實施例28至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X 2為O。
41. 如實施例28至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X 2為S。
42. 如實施例28至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X 2為SO 2。
43. 如實施例28至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X 2為NR 12。
44. 如實施例43之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 12係選自以下或其立體異構物： -CH 3、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 或-H。
45. 如實施例43之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 12係選自以下或其立體異構物： 或 。
46. 如實施例28至39中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中X 2為C(R 11) 2。
47. 如實施例46之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中各R 11為氫。
48. 如實施例1至47中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含乙烯基酮之交聯基團。
49. 如實施例48之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W具有式IVa之結構： 式IVa， 其中R 8a、R 8b及R 8c獨立地為氫、-CN、鹵素或視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和雜環烷基。
50. 如實施例49之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 及 。
51. 如實施例49之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W係選自以下或其立體異構物： 、 、 、 、 、 、 、 及 。
52. 如實施例1至47中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含乙烯基砜之交聯基團。
53. 如實施例52之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W具有式IVc之結構： 式IVc， 其中R 10a、R 10b及R 10c獨立地為氫、-CN或視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和雜環烷基。
54. 如實施例53之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為： 。
55. 如實施例1至47中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含炔酮之交聯基團。
56. 如實施例55之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W具有式IVb之結構： 式IVb， 其中R 9為氫；視情況經一或多個獨立地選自以下之取代基取代的-C 1-C 3烷基：-OH、-O-C 1-C 3烷基、-NH 2、-NH(C 1-C 3烷基)、-N(C 1-C 3烷基) 2或4至7員飽和環烷基，或4至7員飽和雜環烷基。
57. 如實施例56之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W係選自： 或 。
58. 如實施例56或57之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-6之結構： 式II-6， 其中Q 1為CH 2、NR N或O； Q 2為CO、NR N或O；且 Z為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；或 其中Q 1-Q 2-Z為視情況經取代之9至10員螺環伸雜環烷基。
59. 如實施例56至58中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-6a之結構： 式II-6a， 其中R 14為氟、氫或C 1-C 3烷基；且 u為0或1。
60. 如實施例59之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 14為氟且u為1。
61. 如實施例59之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 14為氫且u為0。
62. 如實施例56至59中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-6b之結構： 式II-6b。
63. 如實施例56至59中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-6c之結構： 式II-6c。
64. 一種選自表1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
65. 一種醫藥組成物，其包含如實施例1至64中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之賦形劑。
66. 一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIa之結構： 式VIa， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基； 各R 13獨立地為-CH 3；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
67. 一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIb之結構： 式VIb， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； R 14為氟、氫或C 1-C 3烷基； u為0或1；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
68. 一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIc之結構： 式VIc， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
69. 一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VId之結構： 式VId， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
70. 如實施例66至69中任一項之結合物或其鹽，其中該單價有機部分為蛋白質。
71. 如實施例70之結合物或其鹽，其中該蛋白質為Ras蛋白。
72. 如實施例71之結合物或其鹽，其中該Ras蛋白為K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。
73. 如實施例72之結合物或其鹽，其中該Ras蛋白為K-Ras G13C。
74. 如實施例66至73中任一項之結合物或其鹽，其中該連接體係經由與該單價有機部分之胺基酸殘基之硫氫基的鍵結合至該單價有機部分。
75. 一種治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的如實施例1至64中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例65之醫藥組成物。
76. 如實施例75之方法，其中該癌症為胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌或子宮內膜癌。
77. 如實施例75或76之方法，其中該癌症包含Ras突變。
78. 如實施例77之方法，其中該Ras突變為K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。
79. 如實施例78之方法，其中該Ras突變為K-Ras G13C。
80. 一種治療有需要之個體之Ras蛋白相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的如實施例1至64中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例65之醫藥組成物。
81. 一種抑制細胞中之Ras蛋白的方法，該方法包括使該細胞與有效量的如實施例1至64中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如實施例65之醫藥組成物接觸。
82. 如實施例80或81之方法，其中該Ras蛋白為K-Ras G12C、K-Ras G13C、H-Ras G12C、H-Ras G13C、N-Ras G12C或N-Ras G13C。
83. 如實施例82之方法，其中該Ras蛋白為K-Ras G13C。
84. 如實施例81至83中任一項之方法，其中該細胞為癌細胞。
85. 如實施例84之方法，其中該癌細胞為胰臟癌細胞、結腸直腸癌細胞、非小細胞肺癌細胞或子宮內膜癌細胞。
86. 如實施例75至85中任一項之方法或用途，其中該方法或用途進一步包括投與額外抗癌療法。
87. 如實施例86之方法，其中該額外抗癌療法為EGFR抑制劑、第二Ras抑制劑、SHP2抑制劑、SOS1抑制劑、Raf抑制劑、MEK抑制劑、ERK抑制劑、PI3K抑制劑、PTEN抑制劑、AKT抑制劑、mTORC1抑制劑、BRAF抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-1抑制劑、CDK4/6抑制劑、HER2抑制劑或其組合。
88. 如實施例86或87之方法，其中該額外抗癌療法為SHP2抑制劑。 實例
本揭示案將藉由以下實例及合成實例進一步說明，該等實例不應解釋為將本揭示案之範圍或精神限制於本文所描述之特定程序。應瞭解，提供的實例旨在說明某些實施例且不打算藉此限制本揭示案之範圍。還應瞭解，亦可在不脫離本揭示案之精神或所附申請專利範圍之範圍的情況下，訴諸於熟習此項技術者可想到的各種其他實施例、其修改及等效物。 化學合成
以下實例及本文中別處中使用的定義如下：
  CH 2Cl 2、DCM 亞甲基氯、二氯甲烷
CH 3CN、MeCN 乙腈
  CuI 碘化銅(I)
  DIPEA 二異丙基乙胺
  DMF N,N-二甲基甲醯胺
  EtOAc 乙酸乙酯
  h 小時
  H 2O 水
  HCl 鹽酸
  K 3PO 4 磷酸鉀(三鹼式)
  MeOH 甲醇
  Na 2SO 4 硫酸鈉
  NMP N-甲基吡咯啶酮
  Pd(dppf)Cl 2 [1,1′-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)
儀器
質譜資料收集係利用帶有QDa偵測器或SQ偵測器2之Shimadzu LCMS-2020、Agilent 1260LC-6120/6125MSD、Shimadzu LCMS-2010EV或Waters Acquity UPLC進行。將樣品以液相注入至C-18逆相上。化合物係使用乙腈梯度自管柱溶析且進給至質量分析儀中。初始資料分析係用Agilent ChemStation、Shimadzu LabSolutions或Waters MassLynx進行。NMR資料係用Bruker AVANCE III HD 400MHz、Bruker Ascend 500MHz儀器或Varian 400MHz收集且原始資料係利用TopSpin或Mestrelab Mnova進行分析。 合成中間體 中間體 1. 合成 3-(5- 溴 -1- 乙基 -2-[2-[(1 S)-1- 甲氧基乙基 ] 吡啶 -3- 基 ] 吲哚 -3- 基 )-2,2- 二甲基丙 -1- 醇
步驟 1.在N 2氛圍下，在0℃下向3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙醯氯(65 g，137 mmol，粗品)於DCM (120 mL)中之混合物中緩慢添加1M SnCl 4之DCM溶液(137 mL，137 mmol)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，接著逐滴添加5-溴-1 H-吲哚(26.8 g，137 mmol)於DCM (40 mL)中之溶液。將混合物在0℃下攪拌45分鐘，接著用EtOAc (300 mL)稀釋，用鹽水(100 mL × 4)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到1-(5-溴-1 H-吲哚-3-基)-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(55 g，75%產率)。LCMS (ESI): C 29H 32BrNO 2SiNa之m/z [M+Na]計算值556.1；實驗值556.3。
步驟 2.在N 2氛圍下，在0℃下向1-(5-溴-1 H-吲哚-3-基)-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(50 g，93.6 mmol)於THF (100 mL)中之混合物中添加LiBH 4(6.1 g，281 mmol)。將混合物加熱至60℃且攪拌20小時，接著添加MeOH (10 mL)及EtOAc (100 mL)且將混合物用鹽水(50 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮濾液。將殘餘物用DCM (50 mL)稀釋，冷卻至10℃且添加二氫吡啶(9.5 g，37.4 mmol)及TsOH.H 2O (890 mg，4.7 mmol)。將混合物在10℃下攪拌2小時，過濾，減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到1-(5-溴-1 H-吲哚-3-基)-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(41 g，84%產率)。LCMS (ESI): C 29H 34BrNOSi之m/z [M+H]計算值519.2；實驗值520.1； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 7.96 (s, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 5H), 7.46 - 7.35 (m, 6H), 7.23 - 7.19 (m, 2H), 6.87 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 3.40 (s, 2H), 2.72 (s, 2H), 1.14 (s, 9H), 0.89 (s, 6H)。
步驟 3.在室溫下，向1-(5-溴-1 H-吲哚-3-基)-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙-1-酮(1.5 g，2.9 mmol)及I 2(731 mg，2.9 mmol)於THF (15 mL)中之混合物中添加AgOTf (888 mg，3.5 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌2小時，接著用EtOAc (200 mL)稀釋且用飽和Na 2S 2O 3(100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之5-溴-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1 H-吲哚(900 mg，72%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.70 (s, 1H), 7.68 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.64 - 7.62 (m, 4H), 7.46 - 7.43 (m, 6H), 7.24 - 7.22 (d, 1H), 7.14 - 7.12 (dd, J= 8.6, 1.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H), 2.63 (s, 2H), 1.08 (s, 9H), 0.88 (s, 6H)。
步驟 4.在Ar氛圍下，在0℃下向HCOOH (66.3 g，1.44 mol)於TEA (728 g，7.2 mol)中之經攪拌之混合物中逐份添加(4 S,5 S)-2-氯-2-甲基-1-(4-甲基苯磺醯基)-4,5-二苯基-1,3-二氮雜-2-釕環戊烷異丙基甲苯(3.9 g，6.0 mmol)。將混合物加熱至40℃且攪拌15分鐘，接著冷卻至室溫且分數份添加1-(3-溴吡啶-2-基)乙酮(120 g，600 mmol)。將混合物加熱至40℃且再攪拌2小時，接著減壓濃縮溶劑。將鹽水(2 L)添加至殘餘物中，將混合物用EtOAc (4 × 700 mL)萃取，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之(1 S)-1-(3-溴吡啶-2-基)乙醇(100 g，74%產率)。LCMS (ESI): C 7H 8BrNO之m/z [M+H]計算值201.1；實驗值201.9。
步驟 5. 在0℃下，向(1 S)-1-(3-溴吡啶-2-基)乙醇(100 g，495 mmol)於DMF (1 L)中之經攪拌之混合物中分數份添加60% NaH於油中之分散液(14.25 g，594 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時。在0℃下，逐滴添加MeI (140.5 g，990 mmol)且將混合物升溫至室溫且攪拌2小時。將混合物冷卻至0℃且添加飽和NH 4Cl (5 L)。將混合物用EtOAc (3 × 1.5 L)萃取，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-溴-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(90 g，75%產率)。LCMS (ESI): C 8H 10BrNO之m/z [M+H]計算值215.0；實驗值215.9。
步驟 6. 在Ar氛圍下，在室溫下向3-溴-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(90 g，417 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(30.5 g，41.7 mmol)於甲苯(900 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加雙(頻哪醇)二硼(127 g，500 mmol)及KOAc (81.8 g，833 mmol)。將混合物加熱至100℃且攪拌3小時。減壓濃縮濾液且藉由Al 2O 3管柱層析法純化殘餘物，得到呈半固體狀之2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(100 g，63%產率)。LCMS (ESI): C 14H 22BNO 3之m/z [M+H]計算值263.2；實驗值264.1。
步驟 7. 在Ar氛圍下，在室溫下向5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1 H-吲哚(140 g，217 mmol)及2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(100 g，380 mmol)於1,4-二噁烷(1.4 L)中之經攪拌之混合物中分數份添加K 2CO 3(74.8 g，541 mmmol)、Pd(dppf)Cl 2(15.9 g，21.7 mmol)及H 2O (280 mL)。將混合物加熱至85℃且攪拌4小時，接著冷卻，添加H 2O (5 L)，且將混合物用EtOAc (3 × 2 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚(71 g，45%產率)。LCMS (ESI): C 37H 43BrN 2O 2Si之m/z [M+H]計算值654.2；實驗值655.1。
步驟 8. 在N 2氛圍下，在0℃下向5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚(71 g，108 mmol)於DMF (0.8 L)中之經攪拌之混合物中分數份添加Cs 2CO 3(70.6 g，217 mmol)及EtI (33.8 g，217 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌16小時，接著添加H 2O (4 L)且將混合物用EtOAc (3 × 1.5 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(66 g，80%產率)。LCMS (ESI): C 39H 47BrN 2O 2Si之m/z [M+H]計算值682.3；實驗值683.3。
步驟 9. 在N 2氛圍下，在室溫下向TBAF (172.6 g，660 mmol)於THF (660 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(66 g，97 mmol)。將混合物加熱至50℃且攪拌16小時，冷卻，用H 2O (5 L)稀釋，且用EtOAc (3 × 1.5 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。過濾後，減壓濃縮濾液。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(30 g，62%產率)。LCMS (ESI): C 23H 29BrN 2O 2之m/z [M+H]計算值444.1；實驗值445.1。 中間體 1. 經由費舍爾吲哚途徑 (Fisher Indole Route) 進行之替代合成。
步驟 1.在N 2氛圍下，在-10℃下經15分鐘向 i-PrMgCl之混合物(2M於THF中，0.5 L)中逐滴添加2.5 M n-BuLi之己烷溶液(333 mL，833 mmol)。將混合物在-10℃下攪拌30分鐘，接著在-10℃下經30分鐘逐滴添加於THF (0.5 L)中之3-溴-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(180 g，833 mmol)。將所得混合物升溫至-5℃且攪拌1小時，接著在-5℃下經30分鐘逐滴添加於THF (1.2 L)中之3,3-二甲基噁烷-2,6-二酮(118 g，833 mmol)。將混合物升溫至0℃且攪拌1.5小時，接著藉由在0℃下添加預先冷卻的4M HCl之1,4-二噁烷溶液(0.6 L)以將pH值調至約5來淬滅。將混合物用冰水(3 L)稀釋且用EtOAc (3 × 2.5 L)萃取。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液，且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之5-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-2,2-二甲基-5-側氧基戊酸(87 g，34%產率)。LCMS (ESI): C 15H 21NO 4之m/z [M+H]計算值279.2；實驗值280.1。
步驟 2.在N 2氛圍下，在室溫下向5-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-2,2-二甲基-5-側氧基戊酸(78 g，279 mmol)於EtOH (0.78 L)中之混合物中分數份添加(4-溴苯基)肼鹽酸鹽(68.7 g，307 mmol)。將混合物加熱至85℃且攪拌2小時，冷卻至室溫，接著逐滴添加4M HCl之1,4-二噁烷溶液(69.8 mL，279 mmol)。將混合物加熱至85℃且再攪拌3小時，接著減壓濃縮，且將殘餘物溶解於TFA (0.78 L)中。將混合物加熱至60℃且攪拌1.5小時，減壓濃縮，且用飽和NaHCO 3將殘餘物調至約pH 5，接著用EtOAc (3 × 1.5 L)萃取。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液，且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到3-(5-溴-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸及丙酸( S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基乙酯(78 g，粗品)。LCMS (ESI): C 21H 23BrN 2O 3及C 23H 27BrN 2O 3之m/z [M+H]計算值430.1 458.1；實驗值431.1及459.1。
步驟 3.在N 2氛圍下，在0℃下向3-(5-溴-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸及( S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(198 g，459 mmol)於DMF (1.8 L)中之混合物中分數份添加Cs 2CO 3(449 g，1.38 mol)。接著，在0℃下逐滴添加於DMF (200 mL)中之EtI (215 g，1.38 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌4小時，接著用鹽水(5 L)稀釋且用EtOAc (3 × 2.5 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1.5 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(160 g，57%產率)。LCMS (ESI): C 25H 31BrN 2O 3之m/z [M+H]計算值486.2；實驗值487.2。
步驟 4.在N 2氛圍下，在0℃下向3-(5-溴-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸乙酯(160 g，328 mmol)於THF (1.6 L)中之混合物中添加LiBH 4(28.6 g，1.3 mol)。將混合物加熱至60℃，保持16小時，冷卻，且用預先冷卻(0℃)的NH 4Cl水溶液(5 L)淬滅。用EtOAc (3 × 2 L)萃取混合物且將合併之有機層用鹽水(2 × 1 L)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到兩種阻轉異構物3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(60 g，38%產率)及(40 g，26%產率) (呈單一阻轉異構物形式)，均呈固體狀。LCMS (ESI): C 23H 29BrN 2O 2之m/z [M+H]計算值444.1；實驗值445.2。 中間體 2. 合成 ((6 3 S,4 S, Z)-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(4,2)- 噻唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯
步驟 1.在室溫下，向(2 S)-3-(4-溴-1,3-噻唑-2-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸甲酯(110 g，301.2 mmol)於THF (500 mL)及H 2O (200 mL)中之溶液中添加LiOH (21.64 g，903.6 mmol)。將所得溶液攪拌1小時且接著減壓濃縮。用1 M HCl將所得殘餘物調至pH 6且接著用DCM (3 × 500 mL)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到所需產物(108 g，粗品)。LCMS (ESI) m/z:C 11H 15BrN 2O 4S之[M + H]計算值：351.00；實驗值351.0。
步驟 2.在0℃下，向( S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(70 g，199.3 mmol)於DCM (500 mL)中之溶液中添加(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯雙(三氟乙酸)鹽(111.28 g，298.96 mmol)、NMM (219.12 mL，1993.0 mmol)、EDCI (76.41 g，398.6 mmol)及HOBt (5.39 g，39.89 mmol)。將所得溶液升溫至室溫且攪拌1小時。接著，用H 2O (500 mL)淬滅反應且用EtOAc (3 × 500 mL)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠層析法(0→50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(88.1 g，92.6%產率)。LCMS (ESI) m/z:C 17H 25BrN 4O 5S之[M + H]計算值：477.08；實驗值477.1。
步驟 3.在室溫下，向3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(60 g，134.7 mmol)於甲苯(500 mL)中之溶液中添加雙(頻哪醇)二硼(51.31 g，202.1 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(9.86 g，13.48 mmol)及KOAc (26.44 g，269.4 mmol)。接著，將反應混合物加熱至90℃且攪拌2小時。接著，將反應溶液冷卻至室溫且減壓濃縮。藉由矽膠層析法(0→50% EtOAc/石油醚)純化，得到所需產物(60.6 g，94.0%產率)。LCMS (ESI) m/z:C 29H 41BN 2O 4之[M + H]計算值：493.32；實驗值493.3。
步驟 4.在室溫下，向( S)-3-(1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(30 g，60.9 mmol)於甲苯(600 mL)、二噁烷(200 mL)及H 2O (200 mL)中之溶液中添加( S)-1-(( S)-3-(4-溴噻唑-2-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(43.62 g，91.4mmol)、K 3PO 4(32.23 g，152.3 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(8.91 g，12.18 mmol)。將所得溶液加熱至70℃且攪拌隔夜。接著，將反應混合物冷卻至室溫且用H 2O (200 mL)淬滅。將所得混合物用EtOAc (3 × 1000 mL)萃取且將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠層析法(0→90% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(39.7 g，85.4%產率)。LCMS (ESI) m/z:C 40H 54N 6O 7S之[M + H]計算值：763.39；實驗值763.3。
步驟 5.在室溫下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(39.7 g，52.0 mmol)於THF (400 mL)及H 2O (100 mL)中之溶液中添加LiOH●H 2O (3.74 g，156.2  mmol)。將所得混合物攪拌1.5小時且接著減壓濃縮。用1 M HCl將殘餘物酸化至pH 6且用DCM (3 × 1000 mL)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到所需產物(37.9 g，粗品)。LCMS (ESI) m/z:C 39H 52N 6O 7S之[M + H]計算值：749.37；實驗值749.4。
步驟 6.在0℃下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(37.9 g，50.6 mmol)、HOBt (34.19 g，253.0 mmol)及DIPEA (264.4 mL，1518 mmol)於DCM (4 L)中之溶液中添加EDCI (271.63 g，1416.9 mmol)。將所得混合物升溫至室溫且攪拌隔夜。接著，將反應混合物用H 2O淬滅且用1 M HCl (4 × 1 L)洗滌。分離有機層且減壓濃縮。藉由矽膠層析法(0→70% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(30 g，81.1%產率)。LCMS (ESI) m/z:C 39H 50N 6O 6S之[M + H]計算值：731.36；實驗值731.3。 中間體 3. 合成 ( S)-3- 溴 -5- 碘 -2-(1- 甲氧基乙基 ) 吡啶
步驟 1.在氬氛圍下，向3-溴-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(80.00 g，370.24 mmol，1.00當量)及雙(頻哪醇)二硼(141.03 g，555.3 mmol，1.50當量)於THF (320 mL)中之經攪拌溶液中添加dtbpy (14.91 g，55.5 mmol)及氯(1,5-環辛二烯)銥(I)二聚體(7.46 g，11.1 mmol)。在氬氛圍下，在75℃下將所得混合物攪拌16小時。減壓濃縮混合物。將所得混合物溶解於EtOAc (200 mL)中且用含Na 2CO 3(40 g)及NaOH (10 g) (質量比4:1)之水(600 mL)將混合物調至pH 10。將水層用EtOAc (800mL)萃取。用HCl (6 N)將水相酸化至pH = 6以使所需固體沈澱，得到呈淺黃色固體狀之5-溴-6-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基硼酸(50g, 52.0%產率)。LCMS (ESI): C 8H 11BBrNO 3之m/z [M+H]計算值259.0；實驗值260.0。
步驟 2.在氬氛圍下，在室溫下向5-溴-6-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基硼酸(23.00 g，88.5 mmol)於ACN (230 mL)中之經攪拌溶液中添加NIS (49.78 g，221.2 mmol)。在氬氛圍下，在80℃下將所得混合物攪拌隔夜。將所得混合物減壓濃縮。將所得混合物溶解於DCM (2.1 L)中且用Na 2S 2O 3(3 × 500 mL)洗滌。將有機層經無水Na2SO4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到( S)-3-溴-5-碘-2-(1-甲氧基乙基)吡啶(20 g，66.0%產率)。LCMS (ESI): C 8H 9BrINO之m/z [M+H]計算值340.9；實驗值341.7。 中間體 4. 合成 ((6 3 S,4 S, Z)-11- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 )-5-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(4,2)- 噻唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯
步驟 1.向用氬吹掃且維持惰性氬氛圍的3L之3頸圓底燒瓶中裝入3-溴-5-碘-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(147 g，429.8 mmol)、哌嗪-1-甲酸苯甲酯(94.69 g，429.8 mmol)、Pd(OAc) 2(4.83 g，21.4 mmol)、BINAP (5.35 g，8.6 mmol)、Cs 2CO 3(350.14 g，1074.6 mmol)、甲苯(1 L)。在油浴中，在100℃下將所得溶液攪拌隔夜。反應完成後，將反應混合物冷卻至25℃。將所得混合物減壓濃縮。用乙酸乙酯/己烷(1:1)將殘餘物施加至矽膠管柱上。減壓移除溶劑，得到呈深黃色固體狀之( S)-4-(5-溴-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(135 g，65.1%產率)。LCMS (ESI): C 20H 24BrN 3O 3之m/z [M+H]計算值433.1；實驗值434.1。
步驟 2.向用氬吹掃且維持惰性氬氛圍的3-L之3頸圓底燒瓶中裝入4-[5-溴-6-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]哌嗪-1-甲酸苯甲酯(135 g，310.8 mmol)、雙(頻哪醇)二硼(86.82 g，341.9 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(22.74 g，31.0 mmol)、KOAc (76.26 g，777.5 mmol)、甲苯(1 L)。在油浴中，在90℃下將所得溶液攪拌2天。將反應混合物冷卻至25℃。真空濃縮所得混合物。用乙酸乙酯/己烷(1:3)將殘餘物施加至中性氧化鋁管柱上。減壓移除溶劑，得到呈深黃色固體狀之( S)-4-(6-(1-甲氧基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(167 g，粗品)。LCMS (ESI): C 26H 36BN 3O 5之m/z [M+H]計算值481.3；實驗值482.1。
步驟 3.向用氬吹掃且維持惰性氬氛圍的3-L之3頸圓底燒瓶中裝入( S)-4-(6-(1-甲氧基乙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸酯(167 g，346.9 mmol)、5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1H-吲哚(224.27 g，346.9 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(25.38 g，34.6 mmol)、二噁烷(600 mL)、H 2O (200 mL)、K 3PO 4(184.09 g，867.2 mmol)、甲苯(200 mL)。在油浴中，在70℃下將所得溶液攪拌隔夜。反應完成後，將反應混合物冷卻至25℃。真空濃縮所得混合物。用乙酸乙酯/己烷(1:1)將殘餘物施加至矽膠管柱上。減壓移除溶劑，得到呈黃色固體狀之( S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(146 g，48.1%產率)。LCMS (ESI): C 49H 57BrN 4O 4Si之m/z [M+H]計算值872.3；實驗值873.3。
步驟 4.在N 2氛圍下，在0℃下向( S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(146 g，167.0 mmol)及Cs 2CO 3(163.28 g，501.1 mmol)於DMF (1200 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加C 2H 5I (52.11 g，334.0 mmol)。將最終反應混合物在25℃下攪拌12小時。所需產物可藉由LCMS偵測。將所得混合物用EA (1 L)稀釋且用鹽水(3 × 1.5L)洗滌。將有機層經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之( S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(143 g，粗品)，其不經進一步純化即直接用於下一步驟。LCMS (ESI): C 51H 61BrN 4O 4Si之m/z [M+H]計算值900.4；實驗值901.4。
步驟 5.向( S)-4-(5-(5-溴-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲基苯甲酯(143 g，158.5 mmol)於DMF (1250 mL)中之經攪拌之混合物中添加CsF (72.24 g，475.5 mmol)。接著，在N 2氛圍下，在60℃下將反應混合物攪拌2天。所需產物可藉由LCMS偵測。將所得混合物用EA (1 L)稀釋且用鹽水(3 × 1L)洗滌。接著，減壓濃縮有機相。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，用PE/EA (1/3)溶析，得到兩種阻轉異構物( S)-4-(5-(5-溴-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯 A(38 g，36%產率，RT = 1.677分鐘，經3分鐘；LCMS(0.1% FA))及 B(34 g，34%產率，RT = 1.578分鐘，經3分鐘；LCMS(0.1% FA))，皆呈黃色固體狀。LCMS (ESI): C 35H 43BrN 4O 4之m/z [M+H]計算值663.2；實驗值662.2。
步驟 6.向用氮氣吹掃且維持惰性氮氣氛圍的500-mL之3頸圓底燒瓶中裝入( S)-4-(5-(5-溴-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯 A(14 g，21.1 mmol)、雙(頻哪醇)二硼(5.89 g，23.21 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(1.54 g，2.1 mmol)、KOAc (5.18 g，52.7 mmol)、甲苯(150 mL)。在油浴中，在90℃下將所得溶液攪拌5小時。將反應混合物冷卻至25℃。真空濃縮所得混合物。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，用PE/EA (1/3)溶析，得到呈黃色固體狀之( S)-4-(5-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(12 g，76.0%產率)。LCMS (ESI): C 41H 55BN 4O 6之m/z [M+H]計算值710.4；實驗值711.3。
步驟 7.向用氬吹掃且維持惰性氬氛圍的250-mL圓底燒瓶中裝入( S)-4-(5-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10.8 g，15.2 mmol)、(3 S)-1-[(2 S)-3-(4-溴-1,3-噻唑-2-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(7.98 g，16.7 mmol)、Pd(dtbpf)Cl 2(0.99 g，1.52 mmol)、K 3PO 4(8.06 g，37.9 mmol)、甲苯(60 mL)、二噁烷(20 mL)、H 2O (20 mL)。在油浴中，在70℃下將所得溶液攪拌3小時。將反應混合物冷卻至25℃。將所得溶液用EtOAc (2 × 50 mL)萃取且減壓濃縮。用乙酸乙酯/己烷(10:1)將殘餘物施加至矽膠管柱上。移除溶劑，得到呈黃色固體狀之( S)-1-(( S)-3-(4-(2-(5-(4-((benzyloxy)羰基)哌嗪-1-基)-2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-( (第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(8 g，50.9%產率)。LCMS (ESI): C 52H 68N 8O 9S之m/z [M+H]計算值980.5；實驗值980.9。
步驟 8.在N 2氛圍下，向( S)-1-(( S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(12 g，12.23 mmol)於THF (100 mL)/H 2O (100 mL)中之經攪拌之混合物中添加LiOH (2.45 g，61.1 mmol)且將所得混合物在25℃下攪拌2小時。所需產物可藉由LCMS偵測。減壓濃縮THF。在0℃下，用HCL (1N)將水相之pH值酸化至5。將水層用DCM (3 × 100ml)萃取。減壓濃縮有機相，得到呈淺黃色固體狀之( S)-1-(( S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(10 g，84.5%產率)。LCMS (ESI): C 51H 66N 8O 9S之m/z [M+H]計算值966.5；實驗值967.0。
步驟 9.向用氮氣吹掃且維持惰性氮氣氛圍的3-L圓底燒瓶中裝入( S)-1-(( S)-3-(4-(2-(5-(4-((苯甲氧基)羰基)哌嗪-1-基)-2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-基)噻唑-2-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(18 g，18.61 mmol)、ACN (1.8 L)、DIEA (96.21 g，744.4 mmol)、EDCI (107.03 g，558.3 mmol)、HOBT (25.15 g，186.1 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌隔夜。反應完成後，真空濃縮所得混合物。將所得溶液用DCM (1 L)稀釋。將所得混合物用HCl (3 × 1 L，1N水溶液)洗滌。用水(3 × 1 L)洗滌所得混合物。接著，濃縮有機層，用乙酸乙酯/己烷(1:1)將殘餘物施加至矽膠管柱上。減壓移除溶劑，得到呈淺黃色固體狀之4-(5-((6 3 S,4 S, Z)-4-((第三丁氧基羰基)胺基)-1 1-乙基-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噻唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-1 2-基)-6-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10.4 g，54.8%產率)。LCMS (ESI): C 51H 64N 8O 8S之m/z [M+H]計算值948.5；實驗值949.3。
步驟 10.向用氮氣吹掃且維持惰性氮氣氛圍的250-mL圓底燒瓶中裝入4-(5-((6 3 S,4 S, Z)-4-((第三丁氧基羰基)胺基)-1 1-乙基-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噻唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-1 2-基)-6-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸苯甲酯(10.40 g，10.9 mmol)、Pd(OH) 2/C (5 g，46.9 mmol)、MeOH (100 mL)。在2 atm H 2氛圍下，在25℃下將所得溶液攪拌3小時。過濾出固體且用MeOH (3 × 100 mL)洗滌濾餅。接著，減壓濃縮合併之有機相，得到呈淺黃色固體狀之((6 3 S,4S,Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噻唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(8.5 g，90.4%產率)。LCMS (ESI): C 43H 58N 8O 6S之m/z [M+H]計算值814.4；實驗值815.3。
步驟 11.向用氮氣吹掃且維持惰性氮氣氛圍的1000-mL圓底燒瓶中裝入((6 3 S,4S,Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噻唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(8.5 g，10.4 mmol)、MeOH (100 mL)、AcOH (1.88 g，31.2 mmol)且攪拌15分鐘。接著，在25℃下添加HCHO (1.88 g，23.15 mmol，37%水溶液)及NaBH 3CN (788 mg，12.5 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌3小時。將所得混合物用100 mL水淬滅且減壓濃縮以移除MeOH。將所得溶液用300 mL DCM稀釋。將所得混合物用水(3 × 100 mL)洗滌。移除溶劑，得到呈黃色固體狀之((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噻唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(8.2 g，90.1%產率)。LCMS (ESI): C 44H 60N 8O 6S之m/z [M+H]計算值828.4；實驗值829.3。 中間體 5. 合成 (6 3 S,4 S)-4- 胺基 -1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(1,3)- 苯并雜環十一蕃 -5,7- 二酮
步驟 1.在室溫下，向(2 S)-3-(3-溴苯基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(100 g，290 mmol)於DMF (1 L)中之溶液中添加NaHCO 3(48.8 g，581.1 mmol)及MeI (61.9 g，435.8 mmol)。將反應混合物攪拌16小時且接著用H 2O (1 L)淬滅且用EtOAc (3 × 1 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 500 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(13% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到最終產物(109 g，粗品)。LCMS (ESI) C 15H 20BrNO 4之 m/z[M+Na]計算值380.05；實驗值：380.0。
步驟 2.向(2 S)-3-(3-溴苯基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸甲酯(108 g，301.5 mmol)及雙(頻哪醇)二硼(99.53 g，391.93 mmol)於二噁烷(3.2 L)中之經攪拌溶液中添加KOAc (73.97 g，753.70 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(22.06 g，30.15 mmol)。將反應混合物加熱至90℃，保持3小時，且接著冷卻至室溫並用EtOAc (2 × 3 L)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 800 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(5% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到產物(96 g，78.6%產率)。LCMS (ESI) C 21H 32BNO 6之 m/z[M+Na]計算值428.22；實驗值：428.1。
步驟 3.向(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基]丙酸甲酯(94 g，231.9 mmol)及乙酸3-(5-溴-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(75.19 g，231.93 mmol)於二噁烷(1.5 L)及H 2O (300 mL)中之混合物中添加K 2CO 3(64.11 g，463.85 mmol)及Pd(DtBPF)Cl 2(15.12 g，23.19 mmol)。將反應混合物加熱至70℃且攪拌4小時。用EtOAc (2 × 2 L)萃取反應混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 600 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(20% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到產物(130 g，粗品)。LCMS (ESI) C 30H 38N 2O 6之 m/z[M + H]計算值523.28；實驗值：523.1。
步驟 4.在-10℃下，向(2 S)-3-(3-[3-[3-(乙醯基氧基)-2,2-二甲基丙基]-1 H-吲哚-5-基]苯基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸甲酯(95.0 g，181.8 mmol)及碘(36.91 g，145.41 mmol)於THF (1 L)中之溶液中添加AgOTf (70.0 g，272.7 mmol)及NaHCO 3(22.9 g，272.65 mmol)。將反應混合物攪拌30分鐘且接著藉由在0℃下添加飽和Na 2S 2O 3水溶液(100 mL)淬滅。用EtOAc (3 × 1 L)萃取所得混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 500 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到( S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1 H-吲哚-5-基)苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸甲酯(49.3 g，41.8%產率)。LCMS (ESI) C 30H 37IN 2O 6之 m/z[M + H]計算值：649.18；實驗值：649.1。
步驟 5.向(2 S)-3-(3-[3-[3-(乙醯氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1 H-吲哚-5-基]苯基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸甲酯(60 g，92.5 mmol)於THF (600 mL)中之溶液中添加LiOH•H 2O (19.41 g，462.5 mmol)於H 2O (460 mL)中之溶液。將所得溶液攪拌隔夜且接著，用HCl (1 M)將pH值調至6。用EtOAc (2 × 500 mL)萃取所得溶液且將合併之有機層用鹽水(2 × 500 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到產物(45 g，82.1%產率)。LCMS (ESI) C 27H 33IN 2O 6之 m/z[M+Na]計算值615.13；實驗值：615.1。
步驟 6.向(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1 H-吲哚-5-基]苯基]丙酸(30 g，50.6 mmol)及(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(10.9 g，75.9 mmol)於DCM (400 mL)中之溶液中添加NMM (40.97 g，405.08 mmol)、HOBt (2.05 g，15.19 mmol)及EDCI (19.41 g，101.27 mmol)。將反應混合物攪拌隔夜且接著，將混合物用飽和NH 4Cl水溶液(2 × 200 mL)及鹽水(2 × 200 mL)洗滌，且將混合物經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到產物(14 g，38.5%產率)。LCMS (ESI) C 33H 43IN 4O 6之 m/z[M + H]計算值718.23；實驗值：719.4。
步驟 7.在0℃下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1 H-吲哚-5-基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(92 g，128.0 mmol)於THF (920 mL)中之溶液中添加LiOH•H 2O (26.86 g，640.10 mmol)於H 2O (640 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌2小時且接著減壓濃縮，得到產物(90 g，粗品)。LCMS (ESI) C 32H 41IN 4O 6之 m/z[M + H]計算值705.22；實驗值：705.1。
步驟 8.在0℃下，向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-碘-1 H-吲哚-5-基]苯基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(90 g，127.73 mmol)於DCM (10 L)中之溶液中添加HOBt (34.52 g，255.46 mmol)、DIPEA (330.17 g，2554.62 mmol)及EDCI (367.29 g，1915.96 mmol)。將反應混合物攪拌16小時且接著減壓濃縮。將混合物用DCM (2 × 2 L)萃取且將合併之有機層用鹽水(3 × 1 L)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到產物(70 g，79.8%產率)。LCMS (ESI) C 32H 39IN 4O 5之 m/z[M + H]計算值687.21；實驗值：687.1。
步驟 9.在室溫下 ，向1 L圓底燒瓶中裝入((6 3 S,4 S)-1 2-碘-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(22.0 g，32.042 mmol)、甲苯(300.0 mL)、Pd 2(dba) 3(3.52 g，3.845 mmol)、S-Phos (3.95 g，9.613 mmol)及KOAc (9.43 g，96.127 mmol)。在室溫下，在攪拌下向混合物中逐滴添加4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷(26.66 g，208.275 mmol)。將所得溶液在60℃下攪拌3小時。過濾所得混合物，且用EtOAc洗滌濾餅。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘留殘餘物，得到呈固體狀之產物(22 g，90%產率)。LCMS (ESI) C 38H 51BN 4O 7之 m/z[M + H]計算值687.3；實驗值：687.4。
步驟 10.在N 2氛圍下，將((6 3 S,4 S)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(2.0 g，2.8 mmol)、3-溴-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶(0.60 g，2.8 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(0.39 g，0.5 mmol)及K 3PO 4(1.2 g，6.0 mmol)於二噁烷(50 mL)及H 2O (10 mL)中之混合物加熱至70℃且攪拌2小時。將混合物用H 2O (50 mL)稀釋且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(1.5 g，74%產率)。LCMS (ESI) C 40H 49N 5O 6之 m/z[M + H]計算值695.4；實驗值：696.5。
步驟 11 .在0℃下，向((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(20 g，28.7 mmol)及Cs 2CO 3(18.7 g，57.5 mmol)於DMF (150 mL)中之溶液中添加EtI (13.45 g，86.22 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液。將所得混合物在35℃下攪拌隔夜且接著用H 2O (500 mL)稀釋。用EtOAc (2 × 300 mL)萃取混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀的產物(4.23 g，18.8%產率)及阻轉異構物(5.78 g，25.7%產率)。LCMS (ESI) C 42H 53N 5O 6之 m/z[M + H]計算值724.4；實驗值：724.6。
步驟 12.在0℃下，將((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(1.3 g，1.7 mmol)於TFA (10 mL)及DCM (20 mL)中之混合物攪拌2小時。減壓濃縮混合物，得到呈固體狀之產物(1.30 g，粗品)。LCMS (ESI) C 37H 45N 5O 4之 m/z[M + H]計算值623.3；實驗值：624.4。 中間體 6 ：合成乙酸 ( S)-3-(5- 溴 -1- 乙基 -2-(5- 碘 -2-(1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-1 H- 吲哚 -3- 基 )-2,2- 二甲基丙酯
步驟 1.在氬氛圍下，在0℃下向( S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(100 g，224.517 mmol)及Et 3N (45.44 g，449.034 mmol)於DCM (1 L)中之經攪拌溶液中分數份添加DMAP (2.74 g，22.452 mmol)及Ac 2O (27.50 g，269.420 mmol)。在室溫下，將所得混合物攪拌3小時。減壓濃縮所得混合物，接著用EtOAc (1000 mL)稀釋。將所得混合物用1M HCl (500 mL)洗滌，接著用飽和NaHCO 3(500 mL)及鹽水(500 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由用石油醚(500 mL)研磨來純化殘餘物，得到呈白色固體狀之產物(93.3 g，85%產率)。LCMS (ESI) C 25H 31BrN 2O 3之 m/z[M + H]計算值：487.16；實驗值：489.2 。
步驟 2.在氬氛圍下，在室溫下向乙酸( S)-3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(93.3 g，191.409 mmol)及B 2PIN 2(72.91 g，287.113 mmol)於THF (370 mL)中之經攪拌溶液中分數份添加dtbpy (7.71 g，28.711 mmol)及氯(1,5-環辛二烯)銥(I)二聚體(6.43 g，9.570 mmol)。將所得混合物在75℃下攪拌隔夜。減壓濃縮所得混合物，得到呈油狀之產物(190 g，粗品)。LCMS(ESI) m/z[M + H]；C 25H 32BBrN 2O 5之計算值：531.17；實驗值：533.3 。
步驟 3.在空氣氛圍下，在0℃下向( S)-(5-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(110 g，207.059 mmol)及氯胺-T (chloramine-T)三水合物(349.96 g，1242.354 mmol)於THF (550 mL)中之經攪拌溶液中分數份添加NaI (186.22 g，1242.354 mmol)於H 2O (225 mL)中之溶液。在氬氛圍下，在50℃下將所得混合物攪拌隔夜。減壓濃縮所得混合物，接著用CHCl 3(500 mL)洗滌。過濾所得混合物，將濾餅用CHCl 3(3 × 250 mL)洗滌。將濾液用CHCl 3(3 × 500 mL)萃取。將合併之有機層用Na 2S 2O 3(500 mL)洗滌，用鹽水(2 × 200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱純化殘餘物 。 中間體 7 ：合成乙酸 3-(5- 溴 -1- 乙基 -2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 )-5-(( R)- 八氫 -2 H- 吡啶并 [1,2-a] 吡嗪 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-1 H- 吲哚 -3- 基 )-2,2- 二甲基丙酯
步驟 1.在氬氛圍下，在室溫下向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-{5-碘-2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(9 g，14.674 mmol)、( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪(2.469 g，17.609 mmol)、Cs 2CO 3(11.9523 g，36.685 mmol)及BINAP (456.85 mg，0.734 mmol)於甲苯(63 mL)中之經攪拌溶液中分數份添加Pd(OAc)2 (329.44 mg，1.467 mmol)。將所得混合物在100℃下攪拌6小時，接著過濾混合物，用EtOAc (100 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。藉由製備型TLC (8% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(6 g，65%產率)。LCMS (ESI) C 33H 45BrN 4O 3之 m/z[M + H]計算值：625.28；實驗值：627.4 中間體 8. 合成 (6 3 S,4 S)-4- 胺基 -1 1- 乙基 -2 5-( 氟甲基 )-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(1,3)- 苯并雜環十一蕃 -5,7- 二酮
步驟 1.在0℃下，向(3-溴-5-碘苯基)甲醇(175.0 g，559.227 mmol)於DCM (2 L)中之溶液中逐滴添加BAST (247.45 g，1118.454 mmol)。在室溫下，將所得混合物攪拌16小時。在0℃下，用飽和NaHCO 3水溶液淬滅反應。將有機層用H 2O (3 × 700 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(3% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(120 g，68%產率)。
步驟 2.向1000 mL之3頸圓底燒瓶中添加於DMF (350.0 mL)中之Zn粉(32.40 g，495.358 mmol)及I 2(967.12 mg，3.810 mmol)。向混合物中添加(2 R)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-碘丙酸甲酯(27.0 g，82.03 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液。將混合物加熱至30℃，保持10分鐘。接著，向混合物中添加(2 R)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-碘丙酸甲酯(54.0 g，164.07 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液。在室溫下，將所得混合物攪拌30分鐘且過濾。在氬氛圍下，在室溫下將所得溶液添加至1-溴-3-(氟甲基)-5-碘苯(60 g，190.522 mmol)、叁(呋喃-2-基)磷烷(2.65 g，11.431 mmol)及Pd 2(dba) 3(3.49 g，3.810 mmol)於DMF (400 mL)中之混合物中且將反應混合物加熱至60℃，保持10分鐘，接著移開油浴。將所得混合物攪拌約1小時，直至溫度冷卻至50℃。用NH 4Cl水溶液(3000 mL)淬滅反應且將所得混合物用EtOAc (3 × 1000 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(2 × 1000 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(9% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(45 g，60%產率)。
步驟 3.在80℃下，將(2 S)-3-[3-溴-5-(氟甲基)苯基]-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸甲酯(75.28 g，192.905 mmol)、( S)-3-(1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(95 g，192.905 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(14.11 g，19.291 mmol)及K 2CO 3(53.32 g，385.810 mmol)於二噁烷(900 mL)及H 2O (180 mL)中之混合物攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物且接著用H 2O稀釋。將所得混合物用EtOAc (3 × 1200 mL)萃取且將合併之有機層用H 2O (3 × 500 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(105 g，80%產率)。LCMS (ESI) m/z: C 39H 50FN 3O 6之[M + H]計算值：676.38；實驗值676.1。
步驟 4.在0℃下，向( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1H-吲哚-5-基)-5-(氟甲基)苯基)丙酸甲酯(108 g，159.801 mmol)於THF (500 mL)中之經攪拌溶液中添加LiOH●H 2O (11.48 g，479.403 mmol)於H 2O (500 mL)中之溶液。將所得混合物在0℃下攪拌2小時且接著用1 M HCl (水溶液)酸化至pH 6。將混合物用EtOAc (3 × 800 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(2× 200 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到所需產物(101 g，粗品)。LCMS (ESI) m/z: C 38H 48FN 3O 6之[M + H]計算值：662.36；實驗值662.1。
步驟 5.在0℃下，向( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-5-(氟甲基)苯基)丙酸(103 g，155.633 mmol)及NMM (157.42 g，1556.330 mmol)於DCM (1200 mL)中之經攪拌溶液中分數份添加(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(33.66 g，233.449 mmol)、HOBt (10.51 g，77.816 mmol)及EDCI (59.67 g，311.265 mmol)。在室溫下，將所得混合物攪拌16小時。接著，將有機層用0.5 M HCl (2 × 1000 mL)及鹽水(2 × 800 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(103 g，83%產率)。LCMS (ESI) m/z: C 44H 58FN 5O 7之[M + H]計算值：788.44；實驗值788.1。
步驟 6.在0℃下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-5-(氟甲基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(103 g，130.715 mmol)於THF (700 mL)中之經攪拌溶液中添加LiOH●H 2O (27.43 g，653.575 mmol)於H 2O (700 mL)中之溶液。將所得混合物在0℃下攪拌2小時且接著用1 M HCl中和至pH 6。將所得混合物用EtOAc (3 × 800 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(2 × 600 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到所需產物(101 g，粗品)。LCMS (ESI) m/z: C 43H 56FN 5O 7之[M + H]計算值：774.43；實驗值774.1。
步驟 7.在0℃下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-5-(氟甲基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(101 g，130.50 mmol)於DCM (5500 mL)中之經攪拌溶液中添加DIPEA (227.31 mL，1305.0 mmol)及HOBt (88.17 g，652.499 mmol)以及EDCI (375.26 g，1957.498 mmol)。在室溫下，將所得混合物攪拌隔夜。接著，將混合物用0.5 M HCl (2 × 2000 mL)、鹽水(2 × 2000 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法(50% EtOAc/石油醚)純化殘餘物，得到所需產物(68 g，65%產率)。LCMS (ESI) m/z: C 43H 54FN 5O 6之[M + H]計算值：756.42；實驗值756.4。
步驟 8.在0℃下，向((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-2 5-(氟甲基)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基) -10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(350 mg，0.403 mmol)於DCM (4 mL)中之經攪拌溶液中添加TFA (1.50 mL)。在室溫下，將所得混合物攪拌1.5小時且接著減壓濃縮，得到所需產物(600 mg，粗品)。LCMS (ESI) m/z: C 38H 46FN 5O 4之[M + H]計算值：656.36；實驗值656.4。 中間體 9. 合成 (3 S)-1-((2 S)-3-(5- 溴 -3-(( 第三丁基 二苯基矽基 ) 氧基 )-3,6- 二氫吡啶 -1(2 H)- 基 )-2-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙醯基 ) 六氫嗒嗪 -3- 甲酸甲酯
步驟 1.在室溫下，向3,5-二溴吡啶(48 g，202.6 mmol，1當量)於ACN (480 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加BnBr (51.9 g，303.9 mmol，1.5當量)。將所得混合物在60℃下攪拌隔夜且接著減壓濃縮，得到呈白色固體狀之1-苄基-3,5-二溴吡啶-1-鎓(76 g，粗品)。ESI-MS m/z = 325.9 [M] +, 327.9 [M+2] +, 329.9[M+4] +；MW計算值：325.9
步驟 2.在0℃下，向1-苄基-3,5-二溴吡啶-1-鎓(40 g，121.9 mmol，1.00當量)於DCM (400 mL)及EtOH (80 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加NaBH(AcO) 3(129.2 g，609.7 mmol，5當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌4小時，之後添加飽和鹽水(3 × 40 mL)。水相用CH 2Cl 2(4 × 50 mL)萃取，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之1-苄基-3,5-二溴-1,2,3,6-四氫吡啶(19.1 g，47.4%產率)。ESI-MS m/z =330.2 [M+H] +, 332.2 [M+H+2] +, 334.2 [M+H+4] +；MW計算值：328.9
步驟 3.在室溫下，向1-苄基-3,5-二溴-1,2,3,6-四氫吡啶(17.4 g，52.6 mmol，1.0當量)於ACN (87 mL)及H 2O (87 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加NaHCO 3(22.08 g，262.800 mmol，5當量)。在氬氛圍下將所得混合物在60℃下攪拌3小時。接著用鹽水(300 mL)稀釋混合物，且用EtOAc (4 x 100 mL)萃取水層。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之1-苄基-5-溴-1,2,3,6-四氫吡啶-3-醇(10 g，70.9%產率)。ESI-MS m/z =268.1 [M+H] +；MW計算值：267.0。
步驟 4.在室溫下，向咪唑(5.1 g，74.6 mmol，2當量)及1-苄基-5-溴-1,2,3,6-四氫吡啶-3-醇(10 g，37.3 mmol，1.01當量)於DCM (100 mL)中之經攪拌之混合物中逐滴添加TBDPSCl (15.4 g，55.9 mmol，1.5當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌隔夜且接著減壓濃縮。藉由層析法純化殘餘物，得到呈黃色油狀之1-苄基-5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-1,2,3,6-四氫吡啶(18 g，95.2%產率)。ESI-MS m/z =506.4 [M+H] +；MW計算值：505.1。
步驟 5.在氬氛圍下，在0℃下向1-苄基-5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-1,2,3,6-四氫吡啶(11.7 g，23.1 mmol，1.0當量)於DCM (1.2 L)中之經攪拌之溶液中逐滴添加氯甲酸2-氯乙酯(13.2 g，92.4 mmol，4當量)。在氬氛圍下將所得混合物在40℃下攪拌4小時且減壓濃縮。接著在氬氛圍下在室溫下逐滴添加MeOH (1.2 L)且在氬氛圍下在70℃下攪拌2小時，之後減壓濃縮所得混合物。藉由層析法純化殘留殘餘物，得到呈黃色油狀之5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-1,2,3,6-四氫吡啶(6.2 g，64.4%產率)。ESI-MS m/z =416.2 [M+H] +；MW計算值：415.1。
步驟 6.在室溫下向5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-1,2,3,6-四氫吡啶(11.2 g，26.9 mmol，1.0當量)於ACN (90 mL)及H 2O (30 mL)中之經攪拌之溶液中添加( S)-(2-側氧基氧雜環丁烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯(6.1 g，32.4 mmol，1.2當量)及Cs 2CO 3(21.9 g，67.5 mmol，2.5當量)。將所得混合物在40℃下攪拌4小時且減壓濃縮。藉由層析法純化殘留殘餘物，得到呈白色固體狀之(2S)-3-(5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(11.2 g，68.7%產率)。ESI-MS m/z =603.0 [M+H] +；MW計算值：602.2。
步驟 7.在0℃下，向(2S)-3-(5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(5.5 g，9.2 mmol，1當量)於DCM (55 mL)中之經攪拌之溶液中添加DIEA (47.5 g，367.1 mmol，40當量)、(S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(1.9 g，13.8 mmol，1.5當量)及CIP (3.3 g，11.9 mmol，1.3當量)。將所得混合物在0℃下攪拌2小時。接著用鹽水(500 mL)稀釋混合物且用DCM (3 x 400 mL)萃取水層。將合併之有機層減壓濃縮且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(3S)-1-((2S)-3-(5-溴-3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(2.2 g，32.8%產率)。ESI-MS m/z =729.1 [M+H] +；MW計算值：728.3。 中間體 10. 合成 (6 3 S )-4- 胺基 -1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -5,7- 二酮
步驟 1.向(第三丁氧基羰基)- L-絲胺酸甲酯(10 g，45 mmol)於無水MeCN (150 mL)中之溶液中添加DIPEA (17 g，137 mmol)。將反應混合物在45℃下攪拌2小時，得到呈溶液形式之產物。LCMS (ESI) C 9H 15NO 4之 m/z[M + Na]計算值201.1；實驗值：224.1。
步驟 2.在0℃下，向2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙烯酸甲酯(12 g，60 mmol)於無水MeCN (150 mL)中之溶液中添加DMAP (13 g，90 mmol)及(Boc) 2O (26 g，120 mmol)。攪拌反應6小時，接著用H 2O (100 mL)淬滅且用DCM (3 × 200 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(12.5 g，65%產率)。LCMS (ESI) C 14H 23NO 6之 m/z[M + Na]計算值301.2；實驗值：324.1。
步驟 3.在Ar氛圍下，向5-溴-1,2,3,6-四氫吡啶(8.0 g，49 mmol)於MeOH (120 mL)中之混合物中添加2-{ 雙[(第三丁氧基)羰基]胺基}丙-2-烯酸甲酯(22 g，74 mmol)。將混合物攪拌16小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之產物(12 g，47%產率)。LCMS (ESI) C 19H 31BrN 2O 6之 m/z[M + H]計算值462.1；實驗值：463.1。
步驟 4.向2-(雙(第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-溴-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)丙酸甲酯(14 g，30 mmol)於二噁烷(30 mL)及H 2O (12 mL)中之混合物中添加LiOH (3.6 g，151 mmol)。將混合物加熱至35℃且攪拌12小時，接著添加1M HCl且將pH值調至約3-4。將混合物用DCM (2 × 300 mL)萃取且將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之產物(10 g，85%產率)。LCMS (ESI) C 13H 21BrN 2O 4之 m/z[M + H]計算值348.1；實驗值：349.0。
步驟 5.在Ar氛圍下，在0℃下向3-(5-溴-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(10 g，30 mmol)、DIPEA (12 g，93 mmol)及(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(5.4 g，37 mmol)於DMF (100 mL)中之混合物中添加HATU (13 g，34 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加H 2O且將混合物用EtOAc (2 × 300 mL)萃取。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由逆相層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(9.0 g，55%產率)。LCMS (ESI) C 19H 31BrN 4O 5之 m/z[M + H]計算值474.1；實驗值：475.1。
步驟 6.在Ar氛圍下，將(3 S)-1-(3-(5-溴-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(9.0 g，18 mmol)、K 2CO 3(4.5 g，32 mmol)、Pd(dppf)Cl 2.DCM (1.4 g，2 mmol)、3-(1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(9.8 g，20 mmol)於二噁烷(90 mL)及H 2O (10 mL)中之混合物加熱至75℃且攪拌2小時。添加H 2O且將混合物用EtOAc (3 × 200 mL)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(4.0 g，25%產率)。LCMS (ESI) C 42H 60N 6O 7之 m/z[M + H]計算值760.5；實驗值：761.4。
步驟 7.在0℃下，向(3 S)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(4.1 g，5.0 mmol)於THF (35 mL)中之混合物中添加LiOH (0.60 g，27 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1.5小時，接著添加1M HCl以將pH值調至約6-7且將混合物用EtOAc (3 × 200 mL)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之產物(3.6 g，80%產率)。LCMS (ESI) C 41H 58N 6O 7之 m/z[M + H]計算值746.4；實驗值：747.4。
步驟 8.在Ar氛圍下，向(3 S)-1-(2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(3.6 g , 5.0 mmol)及DIPEA (24 g ,190 mmol)於DCM (700 mL)中之混合物中添加EDCI●HCl (28 g，140 mmol)及HOBt (6.5 g，50 mmol)。將混合物加熱至30℃且在30℃下攪拌16小時，接著減壓濃縮。將殘餘物用EtOAc (200 mL)稀釋且用H 2O (2 × 200 mL)、鹽水(200 mL)洗滌，經Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(1.45 g，40%產率)。LCMS (ESI) C 41H 56N 6O 6之 m/z[M + H]計算值728.4；實驗值：729.4。
步驟 9.在0℃下，向((6 3 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(130 mg，0.20 mmol)於DCM (1.0 mL)中之混合物中添加TFA (0.3 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮，得到產物，將其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) C 36H 48N 6O 4之 m/z[M + H]計算值628.4；實驗值：629.4。 中間體 11. 合成 (6 3 S,4 S)-4- 胺基 -1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 )-5-(( R)- 八氫 -2 H- 吡啶并 [1,2-a] 吡嗪 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -5,7- 二酮
步驟 1.向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1 g，1.598 mmol)及B 2Pin 2(0.81 g，3.196 mmol)於甲苯(20 mL)中之經攪拌溶液中添加KOAc (0.39 g，3.995 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(0.12 g，0.16 mmol)。在氮氣氛圍下，在90℃下將混合物攪拌2小時。接著，用飽和NaHCO 3水溶液將混合物鹼化至pH 8。將所得混合物用DCM (3 × 40 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(3 × 40 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(2% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(0.9 g，83%產率)。LCMS (ESI) C 39H 57BN 4O 5之 m/z[M + H]計算值：673.45；實驗值：673.6 。
步驟 2.向乙酸3-(1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(0.9 g，1.338 mmol)、(3 S)-1-[(2 S)-3-(3-溴-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(1.02 g，2.141 mmol)、K 2CO 3(0.46 g，3.345 mmol)及X-Phos (0.26 g，0.535 mmol)於甲苯(13.5 mL)、二噁烷(90 mL)及H 2O (4.5 mL)中之經攪拌溶液中添加Pd 2(dba) 3(0.37 g，0.401 mmol)。在氮氣氛圍下，在70℃下將混合物攪拌2小時。接著，用飽和NaHCO 3水溶液將混合物鹼化至pH 8。將所得混合物用DCM (3 × 100 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(2% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(1.1 g，87%產率)。LCMS (ESI) C 52H 76N 8O 8之 m/z[M + H]計算值：941.59；實驗值：941.8 。
步驟 3.在氮氣氛圍下，在0℃下向( S)-1-(( S)-3-(5-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(1.1 g，1.169 mmol)於THF (8 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加LiOH (0.14 g，5.845 mmol)於H 2O (8 mL)中之溶液。將反應混合物攪拌16小時。接著，用濃鹽酸將混合物酸化至pH 6。將所得混合物用DCM (3 × 50 mL)萃取且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之產物(1.0 g，96%產率)，將其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) C 49H 72N 8O 7之 m/z[M + H]計算值：885.56；實驗值：885.5
步驟 4.在氮氣氛圍下，在0℃下向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(1.0 g，1.13 mmol)及HOBt (0.76 g，5.65 mmol)於DCM (100 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加EDC●HCl (6.06 g，31.64 mmol)及DIPEA (5.11 g，39.55 mmol)。將反應混合物攪拌16小時。接著，用飽和NaHCO 3水溶液將混合物鹼化至pH 8。將所得混合物用DCM (3 × 100 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法(3% MeOH/DCM)純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(650 mg，66%產率)。LCMS (ESI) C 49H 70N 8O 6之 m/z[M + H]計算值：867.55；實驗值：867.5。
步驟 5.在氮氣氛圍下，在0℃下向((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(300 mg，0.346 mmol)於DCM (3 mL)中之經攪拌溶液中逐滴添加TFA (3 mL)。將所得混合物在0℃下攪拌1小時。接著，用飽和NaHCO 3水溶液將混合物鹼化至pH 8。將所得混合物用DCM (3 × 50 mL)萃取且將合併之有機層用鹽水(3 × 50 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之產物(260 mg，98%產率)，將其不經進一步純化即直接用於下一步驟中。LCMS (ESI) C 44H 62N 8O 4之 m/z[M + H]計算值：767.50；實驗值：767.2。 中間體 12. 合成 (2 2 S,6 3 S,4 S)-4- 胺基 -1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(4,2)- 嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -5,7- 二酮
步驟 1.在室溫下，向(2 R)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-基甲酸第三丁酯(50 g，230 mmol)於EtOAc (1 L)中之溶液中添加TEMPO (715 mg，4.6 mmol)及NaHCO 3(58 g，690 mmol)。將混合物冷卻至-50℃，接著經30分鐘逐滴添加於EtOAc (100 mL)中之TCCA (56 g，241mmol)。將反應混合物升溫至5℃，保持2小時，接著用10% Na 2S 2O 3(200 mL)淬滅且攪拌20分鐘。過濾所得混合物且分離有機相。將水相用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用H 2O (100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，接著經無水Na 2SO 4乾燥。減壓濃縮有機層，得到呈油狀之產物(50 g，粗品)。
步驟 2.在0-10℃下，向(2 R)-2-甲醯基嗎啉-4-基甲酸第三丁酯(49 g，153 mmol)及2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(60 g，183 mmol)於MeCN (300 mL)中之溶液中添加四甲基胍(35 g，306 mmol)。將反應混合物在10℃下攪拌30分鐘，接著升溫至室溫，保持2小時。將反應混合物用DCM (200 mL)稀釋且用10%檸檬酸(200 mL)及10% NaHCO 3水溶液(200 mL)洗滌。減壓濃縮有機相，且藉由矽膠管柱層析法純化，得到呈固體狀之產物(36 g，90%產率)。LCMS (ESI) C 21H 28N 2O 4之 m/z[M + Na]計算值420.2；實驗值：443.1 。
步驟 3.向( S, Z)-2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(49 g，0.12 mol)於MeOH (500 mL)中之溶液中添加( S, S)-Et-DUPHOS-Rh (500 mg，0.7 mmol)。在H 2(60 psi)氛圍下，在室溫下將混合物攪拌48小時。將反應物濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化，得到呈固體狀之產物(44 g，90%產率)。LCMS (ESI) C 21H 30N 2O 7之 m/z[M + Na]計算值422.2；實驗值：445.2。
步驟 4.在15℃下，向( S)-2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯(2.2 g，5.2 mmol)於EtOAc (2 mL)中之經攪拌溶液中添加HCl/EtOAc (25 mL)。在15℃下攪拌反應2小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之產物(1.51 g，90%產率)。LCMS (ESI) C 16H 22N 2O 5之 m/z[M + H]計算值322.1；實驗值：323.2。
步驟 5.在0℃下，向3-(5-溴-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(100 g，0.22 mol)及咪唑(30.6 g，0.45 mol)於DCM (800 mL)中之溶液中添加於DCM (200 mL)中之TBSCl (50.7 g，0.34 mol)。在室溫下攪拌反應2小時。將所得溶液用H 2O (3 × 300 mL)及鹽水(2 × 200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮。將殘餘物用矽膠管柱層析法純化，得到呈固體狀之產物(138 g，90%產率)。LCMS (ESI) C 29H 43BrN 2O 2Si之 m/z[M + H]計算值558.2；實驗值：559.2。
步驟 6.向( S)-5-溴-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚(50 g，89.3 mmol)於二噁烷(500 mL)中之經攪拌溶液中添加(2 S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-3-[(2 S)-嗎啉-2-基]丙酸甲酯(31.7 g，98.2 mmol)、RuPhos (16.7 g，35.7 mmol)、二µ-氯雙(2-胺基-1,1-聯苯-2-基- C, N)二鈀(II) (2.8 g，4.4 mmol)及碳酸銫(96 g，295 mmol)，隨後在N 2氛圍下，在105℃下添加RuPhos-Pd-G2 (3.5 g，4.4 mmol)。在N 2氛圍下，在105℃下將反應混合物攪拌6小時。過濾所得混合物，且減壓濃縮濾液。藉由製備型TLC層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(55 g，73%產率)。LCMS (ESI) C 45H 64N 4O 7Si之 m/z[M + H]計算值800.5；實驗值：801.5。
步驟 7.在室溫下，向(2 S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-3-[(2 S)-4-(3-{3-[(第三丁基二甲基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)嗎啉-2-基]丙酸甲酯(10 g，12 mmol)於THF (270 mL)中之溶液中添加於H 2O (45 mL)中之LiOH (1.3 g，31 mmol)。在室溫下攪拌反應2小時，接著在0~5℃下用1N HCl處理以將pH值調至4~5。用EtOAc (2 × 50 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。接著，減壓濃縮有機相，得到呈固體狀之產物(9.5 g，97%產率)。LCMS (ESI) C 44H 62N 4O 7Si之 m/z[M + H]計算值786.4；實驗值：787.4。
步驟 8.向(2 S)-2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-3-[(2 S)-4-(3-{3-[(第三丁基二甲基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)嗎啉-2-基]丙酸(10 g，12.7 mmol)於DMF (150 mL)中之經攪拌溶液中添加( S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(2 g，14 mmol)，接著冷卻至0℃，添加DIPEA (32.8 g，254 mmol)，隨後在0~5℃下添加HATU (9.7 g，25.4 mmol)。在0~5℃下，將反應混合物攪拌1小時。用EtOAc (500 mL)及H 2O (200 mL)稀釋所得混合物。分離有機層且用H 2O (2 × 100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥。過濾溶液且減壓濃縮，且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到產物。LCMS (ESI) C 50H 72N 6O 8Si之 m/z[M + H]計算值912.5；實驗值：913.4。
步驟 9.在室溫下，向( S)-1-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(( S)-4-(3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(8.5 g，9 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中添加氟化四丁基銨(1M於THF中，180 mL，180 mmol)及AcOH (11 g，200 mmol)之混合物。將反應混合物在75℃下攪拌3小時。將所得混合物用EtOAc (150 mL)稀釋且用H 2O (6 × 20 mL)洗滌。減壓濃縮有機相，得到呈固體狀之產物(7.4 g，100%產率)。LCMS (ESI) C 44H 58N 6O 8之 m/z[M + H]計算值799.4；實驗值：798.4。
步驟 10.向( S)-1-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(( S)-4-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(8 g，10 mmol)於THF (200 mL)中之溶液中添加於H 2O (30 mL)中之LiOH (600 mg，25 mmol)。在室溫下，將反應混合物攪拌1小時，接著在0~5℃下用1N HCl處理以將pH值調至4~5，且用EtOAc (2 × 500 mL)萃取。將有機相用鹽水洗滌且減壓濃縮，得到呈固體狀之產物(8 g，粗品)。LCMS (ESI) C 43H 56N 6O 8之 m/z[M + H]計算值784.4；實驗值：785.4。
步驟 11.在氬範圍下，在室溫下向( S)-1-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-(( S)-4-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(8 g，10.2 mmol)及DIPEA (59 g，459 mmol)於DCM (800 mL)中之經攪拌溶液中添加EDCI (88 g，458 mmol)及HOBt (27.6 g，204 mmol)。在室溫下，將反應混合物攪拌16小時。減壓濃縮所得混合物，且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之產物(5 g，66%產率)；LCMS (ESI) C 43H 54N 6O 7之 m/z[M + H]計算值766.4；實驗值：767.4。
步驟 12.在H 2氛圍下，在室溫下向((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸苯甲酯(400 mg，0.5 mmol)於MeOH (20 mL)中之溶液中添加Pd/C (200 mg)及乙酸銨(834 mg，16 mmol)且將混合物攪拌2小時。過濾所得混合物且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (20 mL)中且用H 2O (5 mL × 2)洗滌，接著減壓濃縮，得到呈固體狀之產物(320 mg，97%產率)。LCMS (ESI) C 35H 48N 6O 5之 m/z[M + H]計算值632.4；實驗值：633.3。 中間體 13. 合成 ((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯
步驟 1.在氬氛圍下，在80℃下向3-(5-溴-2-(2-(甲氧基甲基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙-1-醇(100 g，200.3 mmol，1當量)及(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(132.3 g，300.4 mmol，1.5當量)於二噁烷(1000 mL)中之經攪拌之溶液中分數份添加於H 2O (200 mL)中之Pd(dppf)Cl 2(14.65 g，20.025 mmol，0.1當量)及K 3PO 4(106.27 g，500.630 mmol，2.5當量)。在氬氛圍下將所得混合物在80℃下攪拌2小時。之後用DCM/MeOH (5/1；3 × 1000mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(2 × 1000mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。粗產物(180g，粗品)不經進一步純化即用於下一步驟中。ESI-MS m/z = 815.1 [M+H] +；MW計算值：814.4。
步驟 2.在0℃下，向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(180 g，220.9 mmol，1當量)於THF (1500 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加於H 2O (300 mL)中之LiOH.H 2O (46.4 g，1104.4 mmol，5當量)且在N 2氛圍下在25℃下攪拌2小時。用HCl (1N)將混合物酸化至pH=6。用DCM/MeOH (5/1；3 × 1500ml)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 1000ml)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。粗產物(180g，粗品)不經進一步純化即用於下一步驟中。ESI-MS m/z = 801.3 [M+H] +；MW計算值：800.4。
步驟 3.在氮氛圍下，在0℃下向( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(5-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吲哚-5-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(200 g，249.7 mmol，1當量)及DIEA (968.2 g，7491.4 mmol，30當量)於DCM (20 L)中之經攪拌之溶液中分數份添加HOBT (168.7 g，1248.6 mmol，5當量)及EDCI (1340.37 g，6991.964 mmol，28當量)。在氮氛圍下將所得混合物在25℃下攪拌16小時。用HCl (1N)將混合物酸化至pH 6-7。用EA (3 × 2000 ml)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 1500 ml)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(100 g，經三個步驟63.7%產率)。ESI-MS m/z = 783.3 [M+H] +；MW計算值：782.4。 中間體 14. 合成 ((6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -10,10- 二氟 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸第三丁酯
步驟 1.在室溫下向圓底燒瓶中裝入Zn (16.4 g，251.3 mmol，1.7當量)。在氬氛圍下，將所得混合物在室溫下攪拌1分鐘。接著在室溫下經1分鐘分數份添加ACN (120 mL)。將所得混合物在室溫下再攪拌5分鐘，之後在室溫下經5分鐘逐滴添加C 2H 4Br 2(30.2 g，162.5 mmol，1.1當量)且將所得混合物在室溫下攪拌1分鐘。接著在0℃下經30分鐘逐滴添加TMSCl (28.9 g，266.0 mmol，1.8當量)。將所得混合物在室溫下再攪拌5分鐘。接著在室溫下經10分鐘向反應混合物中逐滴添加2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(30 g，147.8 mmol，1.0當量)。將所得混合物在室溫下再攪拌1小時。接著在室溫下經5分鐘逐滴添加TMSCl (24.1 g，221.7 mmol，1.5當量)。將所得混合物在室溫下再攪拌1小時。將反應混合物在室溫下經2分鐘用庚烷(110 mL，1097.7 mmol，7.4當量)逐滴稀釋且在室溫下攪拌30分鐘。混合物不經進一步純化即用於下一步驟中。
步驟 2.在氬氛圍下，在0℃下向5-溴-1H-吲哚-3-甲醛(10 g，44.6 mmol，1.0當量)於DCM (200 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加Et 2AlCl (22.3 mL，22.3 mmol，0.5當量)。之後在0℃下經5分鐘逐滴添加[(1-乙氧基-2,2-二氟乙烯基)氧基]三甲基矽烷(205.9 mL，267.7 mmol，6當量)，且將所得混合物在室溫下再攪拌1小時。接著用EtOAc (3 × 100mL)萃取混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 60 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘留殘餘物，得到呈黃色油狀之3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2,2-二氟-3-羥基丙酸乙酯(3.5 g，64%產率)。ESI-MS m/z = 347.9 [M+H] +；MW計算值：347.0。
步驟 3.在空氣氛圍下，在室溫下向3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2,2-二氟-3-羥基丙酸乙酯(3.5 g，10.0mmol，1.0當量)及CsCl (1.69 g，10.053 mmol，1當量)於THF (35 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加BH 3.THF (60.3 mL，60.3 mmol，6當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在65℃下攪拌隔夜。在室溫下用飽和NaHCO 3(水溶液)淬滅反應且用EtOAc (3 × 20mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈黃色油狀之3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2,2 -二氟丙-1-醇(3.6 g，粗品)。ESI-MS m/z = 288.0 [M-H] +；MW計算值：289.0。
步驟 4.在空氣氛圍下，在0℃下向3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-2,2-二氟丙-1-醇(3.5 g，12.0 mmol，1.0當量)及咪唑(2.0 g，30.1 mmol，2.5當量)於DCM (40 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加TBDPSCl (4.3 g，15.6 mmol，1.3當量)。將所得混合物在室溫下攪拌2小時，之後用CH 2Cl 2(3 × 20mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-1H-吲哚(2.1 g，32%產率)。ESI-MS m/z = 530.1 [M+H+2] +；MW計算值：527.0。
步驟 5.在氬氛圍下，在0℃下向5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-1H-吲哚(1.5 g，2.8 mmol，1.0當量)及於THF (20 mL)中之經攪拌之溶液中分數份添加AgOTf (875 mg，3.4 mmol，1.2當量)。接著在0℃下分數份添加I 2(288 mg，1.1 mmol，0.4當量)。將所得混合物在0℃下再攪拌10分鐘。在0℃下藉由添加飽和硫代硫酸鈉(水溶液) (20mL)淬滅反應且用EtOAc (3 × 20mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-2-碘-1H-吲哚(770 mg，41%產率)。ESI-MS m/z = 652.2 [M-H] +；MW計算值：653.0。
步驟 6.在空氣氛圍下，在室溫下向5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-2-碘-1H-吲哚(670 mg，1.0 mmol，1.0當量)及2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(404 mg，1.5 mmol，1.5當量)於二噁烷(10 mL)及H 2O (2 mL)中之經攪拌之溶液中分數份添加Pd(dppf)Cl 2(74 mg，0.1 mmol，0.1當量)及K 2CO 3(353 mg，2.5 mmol，2.5當量)。在氬氛圍下將所得混合物在80℃下攪拌2小時。接著用EtOAc (3 × 10mL)萃取混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘留殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1H-吲哚(500 mg，73%產率)。ESI-MS m/z = 663.2 [M+H] +；MW計算值：662.2。
步驟 7.在空氣氛圍下，在室溫下向5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1H-吲哚(500 mg，0.7 mmol，1.0當量)於DMF (5 mL)中之經攪拌之溶液中分數份添加Cs 2CO 3(613 mg，1.8 mmol，2.5當量)及碘乙烷(152 mg，0.97 mmol，1.3當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時且藉由層析法純化殘留殘餘物，得到呈黃色固體狀之5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚(500 mg，95%產率)。ESI-MS m/z = 693.4 [M+H] +；MW計算值：690.2。
步驟 8.在空氣氛圍下，在室溫下向5-溴-3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二氟丙基}-1-乙基-2-{2-[(1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚(500 mg，0.7 mmol，1.0當量)於THF (5 mL)中之經攪拌之溶液中逐滴添加TBAF (3.6 mL，3.6 mmol，5當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在65℃下攪拌隔夜。之後用EtOAc (3 × 5mL)萃取混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 5 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之3-[(2M)-5-溴-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基]-2,2-二氟丙-1-醇(300 mg，91%產率)。ESI-MS m/z = 455.1 [M+H+2] +；MW計算值：452.1。
步驟 9.在空氣氛圍下，在室溫下向3-[(2 M)-5-溴-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基]-2,2-二氟丙-1-醇(300 mg，0.6 mmol，1.0當量)及(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(414 mg，0.79 mmol，1.2當量)於二噁烷(3 mL)及H 2O (0.6 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加K 3PO 4(351 mg，1.6 mmol，2.5當量)及Pd(dtbpf)Cl 2(43 mg，0.06 mmol，0.1當量)。在氬氛圍下將所得混合物在80℃下攪拌2小時，之後用EtOAc (3 × 10 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2 M) -3-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(400 mg，78%產率)。ESI-MS m/z = 769.7 [M+H] +；MW計算值：768.4。
步驟 10.在空氣氛圍下，在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[3-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(400 mg，0.5 mmol，1.0當量)於THF (4 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加於H 2O (2.6 mL)中之LiOH (62 mg，2.6 mmol，5當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時。用濃鹽酸將混合物酸化至pH 6且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈黃色固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(叔丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[3-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(400 mg，粗品)。ESI-MS m/z = 755.4 [M+H] +；MW計算值：754.4。
步驟 11.在空氣氛圍下，在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[3-(2,2-二氟-3-羥基丙基)-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(440 mg，0.6 mmol，1.0當量)於DCM (44 mL)中之經攪拌之混合物中分數份添加DIEA (2.2 g，17.4 mmol，30當量)、HOBT (393 mg，2.9 mmol，5當量)及EDCI (2.2 g，11.6 mmol，20當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌隔夜，之後減壓濃縮混合物。用EtOAc (3 × 30 mL)萃取所得殘餘物且將合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之阻轉異構物混合物((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-10,10-二氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(270 mg，63%產率)。ESI-MS m/z = 737.6 [M+H] +；MW計算值：736.4。將該阻轉異構物混合物藉由對掌性HPLC純化，得到呈黃色固體狀之異構物1 (80 mg)及呈黃色固體狀之異構物2 (80 mg)。 中間體 15. 合成 ((6 3 S, 4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 哌啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸 第三丁酯
步驟 1.在N 2氛圍下，向3-[(2 M)-5-溴-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙-1-醇(10.0 g，20.0 mmol)及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-甲酸第三丁酯(9.29 g，30.0 mmol)於1,4-二噁烷(85 mL)及H 2O (17 mL)中之混合物中分數份添加Pd(dppf)Cl 2(0.73 g，1.0 mmol)及K 2CO 3(6.92 g，50.1 mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌3小時，接著用EtOAc (3 × 100 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-甲酸第三丁酯(9.0 g，67%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 33H 42F 3N 3O 4之計算值601.3；實驗值602.3。
步驟 2.在H 2氛圍下，將3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-甲酸第三丁酯(6.00 g，10.0 mmol)及Pd/C (605 mg，5.7 mmol)於THF (60 mL)中之混合物攪拌隔夜。將混合物過濾，且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(5.8 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 33H 44F 3N 3O 4之計算值603.3；實驗值604.3。
步驟 3.在N 2氛圍下，在0℃下向3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-甲酸第三丁酯(5.70 g，9.4 mmol)於1,4-二噁烷(30 mL)中之混合物中添加於1,4-二噁烷(30 mL)中之HCl。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加NaHCO 3水溶液，且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之3-[(2 M)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-5-(哌啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙-1-醇(4.8 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 28H 36F 3N 3O 2之計算值503.3；實驗值504.3。
步驟 4.在N 2氛圍下，向3-[(2 M)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-5-(哌啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙-1-醇(4.6 g，9.1 mmol)於DMF (46 mL)中之混合物中添加 N-[(3 S)-2-側氧基氧雜環丁烷-3-基]胺基甲酸第三丁酯(3.46 g，18.3 mmol)及Cs 2CO 3(7.44 g，22.8 mmol)。將混合物加熱至40℃且攪拌2小時，接著添加H 2O，且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙酸(2.7 g，39%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 36H 49F 3N 4O 6之計算值690.4；實驗值691.1。
步驟 5.在N 2氛圍下，在0℃下向(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(835 mg，5.79 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物中分數份添加NMM (2.93 g，29.0 mmol)、(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙酸(2.00 g，2.9 mmol)、EDCI (833 mg，4.3 mmol)及HOBT (196 mg，1.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌小時，接著添加H 2O，且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(2.0 g，72%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 42H 59F 3N 6O 7之計算值816.4；實驗值817.5。
步驟 6.在N 2氛圍下，向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(2.0 g，2.5 mmol)於THF (20 mL)中之混合物中添加1M LiOH (12.24 mL，12.24 mmol)。將混合物在室溫下攪拌，接著用1M HCl酸化至pH ~6且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(1.8 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 41H 57F 3N 6O 7之計算值802.4；實驗值803.5。
步驟 7.在N 2氛圍下，在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]哌啶-1-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(1.80 g，2.2 mmol)於DCM (360 mL)中之混合物中分數份添加DIPEA (8.69 g，67.3 mmol)、HOBT (1.51 g，11.2 mmol)及EDCI (8.60 g，44.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌小時，添加H 2O，且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到皆呈固體狀之((6 3 S, 4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯之兩種非鏡像異構物(160 mg，9%產率)及(140 mg，8%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 41H 55F 3N 6O 6之計算值784.4；實驗值785.7。 中間體 16. 合成 ((6 3 S,4 S, Z)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(4,2)- 噁唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸苄酯
步驟 1.在Ar氛圍下，向( S)-3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚(6.3 g，8.0 mmol)及4-碘-2-(三異丙基矽基)-1,3-噁唑(8.46 g，24.1 mmol)於1,4-二噁烷(60 mL)及H 2O (12 mL)中之混合物中添加K 3PO 4(4.26 g，20.1 mmol)及Pd(dppf)Cl 2(0.59 g，0.80 mmol)。將混合物加熱至70℃且攪拌2小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之( S)-4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)-2-(三異丙基矽基)噁唑(8.84 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 51H 66F 3N 3O 3Si 2之計算值881.5；實驗值882.5。
步驟 2.在0℃下向(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1-(2,2,2-三氟乙基)-5-[2-(三異丙基矽基)-1,3-噁唑-4-基]吲哚(8.84 g，10.0 mmol)於THF (90 mL)中之混合物中添加於THF (10.0 mL，10.0 mmol)中之1M TBAF。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用飽和NH 4Cl (3 × 100 mL)洗滌。用EtOAc (3 × 100 mL)萃取合併之水層且將合併之有機層經無水Na 2SO4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-5-(1,3-噁唑-4-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚(8.4 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 42H 46F 3N 3O 3Si之計算值725.3；實驗值726.4。
步驟 3.在N 2氛圍下，在0℃下向(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-5-(1,3-噁唑-4-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚(4.5 g，6.2 mmol)於THF (45 mL)中之混合物中逐滴添加1M TMPMgCl.LiCl (12.2 mL，12.2 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著逐滴添加I 2(1.89 g，7.4 mmol)於THF (10 mL)中之混合物。將混合物在室溫下攪拌1小時，接著再冷卻至0℃且添加飽和NH 4Cl並用EtOAc (3 × 10mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(2 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到呈固體狀之( S)-4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)-2-碘噁唑(3.0 g，57%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 42H 45F 3IN 3O 3Si之計算值851.2；實驗值852.3。
步驟 4.在Ar氛圍下，向Zn (645 mg，9.9 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物中添加I 2(125 mg，0.49 mmol)。將混合物加熱至45℃且攪拌30分鐘，接著在45℃下逐滴添加於DMF (5 mL)中之(2 R)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-碘丙酸甲酯(1.22 g，3.7 mmol)。將混合物在45℃下攪拌2小時，接著冷卻至0℃，且添加( S)-4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)-2-碘噁唑(2.1 g，2.5 mmol)，接著逐滴添加於DMF (20 mL)中之Pd(PPh 3) 2Cl 2(173 mg，0.25 mmol)。將混合物加熱至75℃且攪拌2小時，接著添加鹽水(20 mL)且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(1.6 g，70%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 51H 61F 3N 4O 7Si之計算值926.4；實驗值927.5。
步驟 5.在0℃下向( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸酯(2.4 g，2.6 mmol)於DCM (1.8 mL)中之混合物中添加TFA (0.6 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加飽和NaHCO 3，且用DCM / MeOH (10:1; 3 × 50 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之( S)-2-胺基-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(2.1 g，98%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 46H 53F 3N 4O 5Si之計算值826.4；實驗值827.5。
步驟 6.在0℃下向( S)-2-胺基-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸酯(2.1 g，2.5 mmol)於THF (15 mL)及H 2O (5 mL)中之混合物中添加NaHCO 3(0.64 g，7.6 mmol)及碳酸苄酯2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(0.95 g，3.8 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加EtOAc (20 mL)，且用鹽水(3 × 10 mL)洗滌混合物。減壓濃縮有機層且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(2.2 g，90%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 54H 59F 3N 4O 7Si之計算值960.4；實驗值961.4。
步驟 7.在0℃下向( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((第三丁基二苯基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(2.2 g，2.3 mmol)於ACN (11 mL)中之混合物中添加HF-吡啶(11 mL，122 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著用飽和NaHCO 3鹼化至pH ~7。分配水層與有機層且減壓濃縮有機層，得到呈固體狀之( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(1.7 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 38H 41F 3N 4O 7之計算值722.3；實驗值723.3。
步驟 8.在0℃下向( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸甲酯(1.7 g，2.4 mmol)於THF (1.2 mL)及H 2O (0.4 mL)中之混合物中添加LiOH (0.08 g，3.5 mmol)。將混合物在0℃下攪拌隔夜，接著用HCl水溶液酸化至pH ~4。用DCM/MeOH (10:1；3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(2 S)-2-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-3-{4-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]-1,3-噁唑-2-基}丙酸(1.5 g，90%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 37H 39F 3N 4O 7之計算值708.3；實驗值709.3。
步驟 9.向(2 S)-2-{[(苄基氧基)羰基]胺基}-3-{4-[(2 M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]-1,3-噁唑-2-基}丙酸(1.5 g，2.1 mmol)於DCM (15 mL)及( Z)- N, N'-二異丙基第三丁氧基甲脒(2.12 mL，10.6 mmol)中之混合物中。將混合物加熱至40℃且攪拌3小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸第三丁酯(1.6 g，99%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 41H 47F 3N 4O 7之計算值764.3；實驗值765.3。
步驟 10.在0℃下向( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸第三丁酯(1.8 g，2.4 mmol)於DCM (16 mL)中之混合物中添加(3 S)-1,2-雙(第三丁氧基羰基)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(1.04g, 3.1 mmol)及DCC (0.65 g，3.1 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之( S)-四氫嗒嗪-1,2,3-三甲酸3-(3-(5-(2-(( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)噁唑-4-基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙基)酯1,2-二-第三丁酯(1.8 g，80%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 56H 71F 3N 6O 12之計算值1076.5；實驗值1077.4。
步驟 11.在0℃下向( S)-四氫嗒嗪-1,2,3-三甲酸3-(3-(5-(2-(( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)噁唑-4-基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙基)酯1,2-二-第三丁酯(1.8 g，1.7 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物中添加TFA (5 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加飽和NaHCO 3且用EtOAc (3 × 100 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((( S)-六氫嗒嗪-3-羰基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸(1.27 g，93%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 42H 47F 3N 6O 8之計算值820.3；實驗值821.4。
步驟 12.在0℃下經15分鐘向( S)-2-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-(4-(3-(3-((( S)-六氫嗒嗪-3-羰基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)噁唑-2-基)丙酸(870 mg，1.1 mmol)及DIPEA (4.1 g，31.8 mmol)於DCM (175 mL)中之混合物中分數份添加HOBt (1.15 g，8.5 mmol)及EDCI (8.13 g，42.4 mmol)。使混合物升溫至室溫且攪拌隔夜，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之((6 3 S,4 S, Z)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噁唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸苄酯(180 mg，21%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 42H 45F 3N 6O 7之計算值802.3；實驗值803.4。 中間體 17. 合成 ((6 3 S,4 S)-12-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 吡咯啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸 第三丁酯
步驟 1.在Ar氛圍下，向乙酸( S)-3-(5-溴-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(10 g，18.5 mmol)及3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(8.18 g，27.7 mmol)於二噁烷(100 mL)及H 2O (20 mL)中之混合物中添加Pd(DTBPF)Cl 2(1.20 g，1.85 mmol)及K 3PO 4(9.80 g，46.2 mmol)。將混合物加熱至85℃且攪拌1小時，接著用EtOAc (10 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(8 × 5 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之( S)-3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(13 g，89%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 34H 42F 3N 3O 5之計算值629.3；實驗值630.4。
步驟 2.將( S)-3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)-2,5-二氫-1 H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(10.75 g，17.1 mmol)及Pd(OH) 2/C (3.2 g，22.8 mmol)於MeOH (100 mL)中之混合物加熱至40℃且在H 2氛圍下2小時。將混合物過濾，且 DCM (10 × 10 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈油狀之3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(6.4 g，56%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 34H 44F 3N 3O 5之計算值631.3；實驗值632.4。
步驟 3.向3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(7.0 g，11.1 mmol)於二噁烷(70 mL)中之混合物中添加於1,4-二噁烷(17.5 mL)中之HCl。將混合物在室溫下攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之乙酸3-(2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(吡咯啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(7.6 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 29H 36F 3N 3O 3之計算值531.3；實驗值532.5。
步驟 4.向乙酸3-(2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5-(吡咯啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(7.7 g，14.5 mmol)於ACN (80 mL)中之混合物中添加( S)-(2-側氧基氧雜環丁烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯(4.07 g，21.7 mmol)及Cs 2CO 3(11.80 g，36.2 mmol)。將混合物加熱至40℃且攪拌2小時，接著用濃鹽酸酸化至pH ~7，且用EtOAc (500 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈油狀之(2 S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(2.3 g，19%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 37H 49F 3N 4O 7之計算值718.4；實驗值719.5。
步驟 5.在N 2氛圍下，在0℃下向( S)-六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(0.69 g，4.8 mmol)、DIPEA (16.54 g，128 mmol)及(2 S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(2.3 g，3.2 mmol)於DCM (60 mL)中之混合物中分數份添加HATU (1.46 g，3.84 mmol)。將所得混合物升溫至室溫且攪拌1小時，添加H 2O且用EtOAc (200 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 400 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈油狀之(3 S)-1-((2 S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(2 g，70%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 43H 59F 3N 6O 8之計算值844.4；實驗值845.6。
步驟 6.將(3 S)-1-((2 S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(2.0 g，2.4 mmol)及LiOH (0.28 g，11.8 mmol)於H 2O (10 mL)及MeOH (20 mL)中之混合物在室溫下攪拌。用HCl水溶液將混合物酸化至pH ~6且用DCM (4 × mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(6 × 4 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(3 S)-1-((2 S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(1.9 g)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 40H 55F 3N 6O 7之計算值788.4；實驗值789.4。
步驟 7.在N 2氛圍下向(3 S)-1-((2 S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲哚-5-基)吡咯啶-1-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(1.87 g，2.4 mmol)於DCM (340 mL)中之混合物中添加DIPEA (9.19 g，71.1 mmol)、HOBt (1.60 g，11.9 mmol)及EDCI (9.09 g，47.4 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜，接著添加H 2O且用DCM (2 × mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 3 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之((6 3 S,4 S)-12-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-吡咯啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(410 mg，21%產率)。
步驟 8.藉由使用矽膠管柱層析法分離非鏡像異構物，得到各相應異構物。
異構物1之資料(R f= 0.4，於1:1石油醚/ EtOAc中): LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 40H 53F 3N 6O 6之計算值770.4；實驗值771.4。
異構物2之資料(R f= 0.7，於1:1石油醚/ EtOAc中): LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 40H 53F 3N 6O 6之計算值770.4；實驗值771.4。 中間體 18. 合成 ((6 3 S ,4 S )-1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 氮雜環丁烷雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸 第三丁酯
步驟 1.向配備有攪拌棒之40 mL小瓶中添加光觸媒Ir[dF(CF 3)ppy] 2(dtbbpy)PF 6(62 mg，0.055 mmol)、4-溴苯甲酸甲酯(1.5 g，2.8 mmol)、4-溴四氫哌喃(981 mg，4.2 mmol)三(三甲基矽基)矽烷(689 mg，2.8 mmol)及無水碳酸鈉(587 mg，5.54 mmol)。將小瓶密封且置於N 2氛圍下，接著添加DME (15 mL)。向另一小瓶中添加NiCl 2•甘醇二甲醚(6.1 mg，0.028 mmol)及4,4'-二-第三丁基-2,2'-聯吡啶(7.4 mg，0.028 mmol)。將觸媒小瓶密封，用N 2吹掃且添加DME (2 mL)，接著將此混合物超音處理5分鐘，之後，將混合物添加至光觸媒。將混合物用N 2脫氣10分鐘，接著將混合物密封且在34 W藍光LED燈(距7 cm，利用冷卻風扇保持反應溫度在室溫下)照射下攪拌。將混合物在室溫下攪拌6小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈固體狀之3-[(2M)-3-[3-(乙醯基氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(700 mg，41%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 33H 42F 3N 3O 5之計算值617.3；實驗值618.4。
步驟 2.在0℃下向3-[(2M)-3-[3-(乙醯基氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁酯(800 mg，1.3 mmol)於DCM (8 mL)中之混合物中添加TFA (2.95 g，25.9 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮且用飽和NaHCO 3將殘餘物鹼化至pH ~8且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之乙酸3-[(2M)-5-(氮雜環丁烷-3-基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙酯(650 mg，97%)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 28H 34F 3N 3O 3之計算值517.3；實驗值518.3。
步驟 3.向乙酸3-[(2M)-5-(氮雜環丁烷-3-基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙酯(900 mg，1.7 mmol)於DMF (9 mL)中之混合物中添加 N-[(3 S)-2-側氧基氧雜環丁烷-3-基]胺基甲酸第三丁酯(488 mg，2.6 mmol)及Cs 2CO 3(567 mg，1.7 mmol)。將混合物加熱至40℃且攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(30 mL)洗滌，經無水Na2SO4乾燥且過濾。過濾後，減壓濃縮濾液。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之(2 S)-3-{3-[(2M)-3-[3-(乙醯基氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(400 mg，33%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 36H 47F 3N 4O 7之計算值704.3；實驗值705.4。
步驟 4.在0℃下向(2 S)-3-{3-[(2M)-3-[3-(乙醯基氧基)-2,2-二甲基丙基]-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(400 mg，0.57 mmol)於THF (2.8 mL)中之混合物中添加1M LiOH (2.84 mL，2.84 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著用DCM (30 mL)稀釋。用H 2O (3 × 30 mL)洗滌有機層且用1M HCl將合併之水層酸化至pH ~5，接著用EtOAc (3 × 40 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(40 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙酸(300 mg，80%)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 34H 45F 3N 4O 6之計算值662.3；實驗值663.4。
步驟 5.在0℃下向(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙酸(300 mg，0.45 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中添加DIPEA (351 mg，2.7 mmol)、(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(131 mg，0.91 mmol)及HATU (258 mg，0.68 mmol)。將混合物在0℃下攪拌3小時，接著添加H 2O且用DCM (3 × 30mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(290 mg，81%)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 40H 55F 3N 6O 7之計算值788.4；實驗值789.5。
步驟 6.在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(290 mg，0.37 mmol)於THF (1.8 mL)中之混合物中添加1M LiOH (1.84 mL，1.84 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加DCM (20 mL)且用H 2O (3 × 30 mL)洗滌混合物。用1M HCl將合併之水層酸化至pH ~5且用EtOAc (3 × 60 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na2SO4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(230 mg，81%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 39H 53F 3N 6O 7之計算值774.4；實驗值775.5。
步驟 7.向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}-1-(2,2,2-三氟乙基)吲哚-5-基]氮雜環丁烷-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(280 mg，0.36 mmol)於DCM (56 mL)中之混合物中添加DIPEA (1.4 g，10.8 mmol)、HOBT (293 mg，2.2 mmol)及EDCI (2.1 g，10.8 mmol)。將混合物升溫至30℃且攪拌隔夜，添加H 2O且用DCM (3 × 50 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到呈固體狀之((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-氮雜環丁烷雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(100 mg，37%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 39H 51F 3N 6O 6之計算值756.4；實驗值757.4。 中間體 19. 合成 ((6 3 S ,4 S )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 )-5-(( R )- 八氫 -2 H - 吡啶并 [1,2- a ] 嗒嗪 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(1,3)- 苯雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基甲酸 第三丁酯
步驟 1.在O 2氛圍下向( S)-(5-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-5-溴-1-乙基-1 H-吲哚-2-基)-6-(1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)硼酸(7.7 g，14.5 mmol)及( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪(3.9 g，27.8 mmol)於DCM (230 mL)中之混合物中添加TEA (14.7 g，145.3 mmol)及4Å分子篩(26 g)。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，接著添加Cu(OAc) 2(2.4 g，13.2 mmol)，將混合物加熱至40℃且攪拌隔夜。添加冰/H2O，且用EtOAc (5 × 200 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且純化殘餘物，得到呈固體狀之乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(3.5 g，27%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 33H 45BrN 4O 3之計算值624.3；實驗值625.5。
步驟 2.向乙酸3-(5-溴-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酯(1.9 g，3.0 mmol)及( S)-1-(( S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(1.89 g，3.6 mmol)於二噁烷(19 mL)及H 2O (3.8 mL)中之混合物中添加K 2CO 3(1.05 g，7.6 mmol)及Pd(dtbpf)Cl 2(395 mg，0.61 mmol)。將混合物加熱至70℃且攪拌3小時，接著用EtOAc (40 mL)稀釋，添加冰/H 2O，且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且純化殘餘物，得到呈固體狀之( S)-1-(( S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(1.1 g，29%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 53H 73N 7O 8之計算值935.6；實驗值936.8。
步驟 3.在0℃下向( S)-1-(( S)-3-(3-(3-(3-乙醯氧基-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)苯基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(900 mg，0.92 mmol)於THF (4.5 mL)、MeOH (4.5 mL)及H 2O (4.5 mL)中之混合物中添加LiOH.H 2O (89 mg，3.7 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌3小時，添加冰/H 2O (10 mL)，用檸檬酸將混合物酸化至pH ~5且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之( S)-1-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(900 mg)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 50H 69N 7O 7之計算值879.5；實驗值880.6。
步驟 4.在0℃下向( S)-1-((S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(3-(1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)苯基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(670 mg，0.76 mmol)於DCM (67 mL)中之混合物中添加DIPEA (3.94 g，30.4 mmol)、EDCI (4.4 g，22.8 mmol)及HOBT (514 mg，3.8 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌隔夜，接著添加冰/H 2O (100 mL)且用EtOAc (3 × 100 mL)萃取混合物。將合併之有機層用飽和NH 4Cl (3 × 100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且純化殘餘物，得到呈固體狀之((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]嗒嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(450 mg，62%產率)。LCMS (ESI): m/z [M+H] +C 50H 67N 7O 6之計算值861.5；實驗值862.7。 中間體 20. 合成 N-(( S)-3- 丙烯醯基 -4- 甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 羰基 )-N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯
步驟 1.在0℃下向硝基乙烷溶液(1 L)中添加(4-側氧基哌啶-1-基)甲酸第三丁酯(200 g，1 mol，1 eq)及TBD (13.9 g，0.1 mol，0.1 eq)。將反應混合物在20℃下攪拌16小時。減壓濃縮所得混合物且藉由矽膠管柱層析法純化殘留殘餘物，得到呈白色固體狀之4-羥基-4-(1-硝基乙基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(135 g，產率49%)。ESI-MS m/z = 299.2 [M+H] +，MW計算值：274.15。
步驟 2.在室溫下向4-羥基-4-(1-硝基乙基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(135 g，0.49 mol，1當量)及HCOONH 4(269 g，4.3 mol，8.7當量)於MeOH (1350 mL)中之溶液中添加Pd/C (13.6 g，0.13 mol，0.26當量)及AcOH (0.29 g，4.9 mmol，0.01當量)。將反應混合物攪拌16小時，之後將混合物用TEA (4.96 g，0.1當量)調節至pH值為8且過濾。用DCM/MeOH (200 mL，5/1)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液且藉由鹼性矽膠管柱層析法純化，得到呈白色固體狀之4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(135 g，產率89%)。ESI-MS m/z = 189.3 [M+H-tBu] +，MW計算值：244.34。
步驟 3.向甲酸[4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-基]第三丁酯(40 g，0.16 mol，1 eq)於ACN (800 mL)中之溶液中添加MgSO 4(39.1 g，0.33 mol，2 eq)、Cs 2CO 3(79.7 g，0.25 mol，1.5 eq)及(HCHO)n (19.6 g，0.65 mol，4 eq)。在N 2下將混合物在50℃下攪拌2小時。過濾反應混合物，且真空濃縮濾液，得到呈無色油狀之{4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基}甲酸第三丁酯(40 g，產率97%)。ESI-MS m/z = 257.3 [M+H] +，MW計算值：256.35。
步驟 4.在0℃下向{4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基}甲酸第三丁酯(40 g，155.4 mmol，1 eq)及NaHCO 3(52.2 g，621.6 mmol，3 eq)於DCM (500 mL)及H 2O (500 mL)中之混合物中逐滴添加丙-2-烯醯氯(15.5 g，170.9 mmol，1 eq)且在0℃下攪拌1小時。過濾所得物，且用DCM (200 mL × 2)萃取濾液。將有機相用鹽水(100 mL)洗滌且減壓濃縮。藉由管柱層析法純化所得殘餘物，得到呈無色油狀之[4-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基]甲酸第三丁酯(33 g，產率68%)。ESI-MS m/z = 311.1 [M+H] +，MW計算值：310.39。
步驟 5.將[4-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基]甲酸第三丁酯(200 g，0.64 mol，1當量)於TFA/DCM (700 ml，1/3，2 L)中之混合物在0℃下攪拌1小時。在0~10℃下減壓濃縮混合物，得到粗1-(4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基)丙-2-烯-1-酮(350 g TFA鹽，純度36%)。ESI-MS m/z = 211.2 [M+H] +，MW計算值：210.28。
步驟 6.在0℃下向(2 S)-3-甲基-2-(甲基胺基)丁酸甲酯(63 g，0.345 mol，1eq)及DIEA (360 g，2.8 mol，8 eq)於DCM (600 mL)中之溶液中分數份添加BTC (36.5 g，0.14 mol，0.4 eq)，且將混合物在0℃下攪拌1小時。接著使反應混合物冷卻至-40℃且逐滴添加1-{4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基}丙-2-烯-1-酮(TFA鹽，36%，175 g，0.32 mol，0.92 eq)於300 ml DCM中之溶液。接著使反應混合物升溫至室溫且在室溫下攪拌12小時。接著減壓濃縮反應混合物且用EA (0.5 L)稀釋殘留殘餘物。將混合物用鹽水(200 ml × 2)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，且減壓濃縮，得到粗殘餘物。藉由層析法純化殘餘物，得到呈外消旋混合物之N-(3-丙烯醯基-4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(168 g，64%產率)。使用對掌性SFC分離一部分外消旋產物(85 g)，得到N-(( S)-3-丙烯醯基-4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯。ESI-MS m/z = 382.2 [M+H] +，MW計算值：381.2。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 6.72 – 6.24 (m, 2H), 5.85 – 5.70 (m, 1H), 5.22 – 4.99 (m, 2H), 4.01 (d, J= 6.5 Hz, 1H), 3.88 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.51 – 3.40 (m, 2H), 3.25 – 3.06 (m, 2H), 2.96 (s, 3H), 2.26 – 2.15 (m, 1H), 1.82 – 1.63 (m, 4H), 1.19 (dd, J= 6.5, 2.3 Hz, 3H), 0.95 (dd, J= 12.3, 6.6 Hz, 6H)。 中間體 21 ：合成呈黃色油狀之 N-(( R)-4- 丙烯醯基 -5- 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 羰基 )-N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯 (150 mg ， 23.6%) 及異構物 2 N-(( S)-4- 丙烯醯基 -5- 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 羰基 )-N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯
步驟 1.在室溫下向100 mL小瓶中添加4-羥基-4-(1-硝基乙基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(4 g，14.5 mmol，1.0當量)、Pd/C (4g)及MeOH (40 mL)。在氫氛圍下將所得混合物在40℃下攪拌隔夜。將所得混合物經矽藻土墊過濾，且用MeOH/DCM = 1:7 (3 × 50 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到呈淺棕色油狀之4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.5 g，粗品)。ESI-MS m/z = 489.5 [M+H] +；MW計算值：488.5。
步驟 2.在0℃下向100 mL 3頸圓底燒瓶中添加4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2 g，8.1 mmol，1當量)、DCM (20 mL)及TEA (2.5 g，24.7 mmol，3當量)。接著在氬氛圍下在0℃下逐滴添加氯乙醯氯(925 mg，8.1 mmol，1.0當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時。用水/冰淬滅反應且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之4-(1-(2-氯乙醯胺基)乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.19 g，7.5%)。ESI-MS m/z = 221.2 [M+H-100] +；MW計算值：320.2。
步驟 3.在0℃下向40 mL小瓶中添加4-(1-(2-氯乙醯胺基)乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(1 g，3.1 mmol，1當量)及THF (10 mL)。接著在0℃下分數份添加t-BuOK (420 mg，3.743 mmol，1.20當量)。在氬氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌2小時。用水/冰淬滅反應且用EtOAc (3 × 100 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 100 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之5-甲基-3-側氧基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(700 mg，64.7%)。ESI-MS m/z = 326.1[M+H+41]+；MW計算值：284.2。
步驟 4.在0℃下向40 mL小瓶中添加5-甲基-3-側氧基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(450 mg，1.5 mmol，1當量)及THF (9 mL)。在氬氛圍下在0℃下向溶液中逐滴添加於THF (6.8 mL)中之1M BH 3。在氬氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌隔夜。用水/冰淬滅反應且用飽和NaHCO 3(水溶液)將混合物鹼化至pH 8。用EtOAc (3 × 50 mL)萃取所得混合物且將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈淺黃色固體狀之5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(500 mg，粗品)。ESI-MS m/z = 271.2 [M+H] +；MW計算值：270.2。
步驟 5.在0℃下向40 mL小瓶中添加5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(400 mg，1.47 mmol，1當量)、DCM (4 mL)及TEA (450 mg，4.4 mmol，3當量)。接著在氬氛圍下在0℃下逐滴添加丙烯醯氯(268 mg，2.9 mmol，2當量)且在氬氛圍下在0℃下攪拌1小時。用水/冰淬滅反應。用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC (EA)純化所得殘餘物，得到呈淺黃色油狀之5-甲基-4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(150 mg，28.1%)。ESI-MS m/z = 325.2 [M+H] +；MW計算值：324.2。
步驟 6.在0℃下向40 mL小瓶中添加5-甲基-4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲酸第三丁酯(350 mg，1.0 mmol，1當量)及DCM (7 mL)。接著在氬氛圍下在0℃下逐滴添加TFA (3.5 mL)。在氬氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌1小時，之後減壓濃縮混合物，得到呈棕色油狀之1-(5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-基)丙-2-烯-1-酮(400 mg，粗品)。ESI-MS m/z = 225.4 [M+H] +；MW計算值：224.2。
步驟 7.在0℃下向40 mL小瓶中添加三光氣(156 mg，0.526 mmol，0.33當量)及DCM (4 mL)。在0℃下經3分鐘逐滴添加於DCM (4 mL)中之吡啶(380 mg，4.8 mmol，2.99當量)及甲基-L-纈胺酸酯鹽酸鹽(300 mg，1.65 mmol，1.0當量)之。將所得混合物在0℃下再攪拌1小時。在氬氛圍下在0℃下向反應混合物中逐滴添加於DCM (4 mL)中之TEA (980 mg，9.6 mmol，6當量)及1-(5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-基)丙-2-烯-1-酮(360 mg，1.605 mmol，1當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌3小時。用水/冰淬滅反應且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到外消旋產物之粗混合物。藉由對掌性HPLC純化殘餘物，得到呈黃色油狀之異構物1 N-((R)-4-丙烯醯基-5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(150 mg，23.6%)及呈黃色油狀之異構物2 N-((S)-4-丙烯醯基-5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(110 mg，17.3%)。ESI-MS m/z = 396.3 [M+H] +；MW計算值：395.2。 中間體 22. 合成 (2 S )-3- 甲基 -2-[ 甲基 (4-( 丙 -2- 烯醯基 )-1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 羰基 ) 胺基 ] 丁酸
步驟 1.在0℃下，向碳酸二-三氯甲酯(135mg, 0.45 mmol)及DCM (1 mL)之混合物中逐滴添加(2 S)-3-甲基-2-(甲基胺基)丁酸甲酯(200 mg，1.4 mmol)及吡啶(327 mg，4.1 mmol)於DCM (1 mL)中之混合物。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著在0℃下逐滴添加於DCM (2 mL)中之1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(353 mg，1.4 mmol)、TEA (418 mg，4.1 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著減壓濃縮。將鹽水(20 mL)添加至殘餘物中且將混合物用DCM (3 × 20 mL)萃取。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之9-{[(2 S)-1-甲氧基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺甲醯基}-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(335 mg，57%產率)。LCMS (ESI): C 21H 37N 3O 6之m/z [M+H] +計算值427.3；實驗值428.2。
步驟 2.在0℃下，向9-{[(2 S)-1-甲氧基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺甲醯基}-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(330 mg，0.77 mmol)於DCM (2.4 mL)中之混合物中添加TFA (0.8 mL)。將混合物在0℃下攪拌小時，接著用飽和NaHCO 3鹼化至約pH 7且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈淺黃色固體狀之(2 S)-3-甲基-2-[甲基(1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸甲酯(280 mg，粗品)。LCMS (ESI): C 16H 29N 3O 4之m/z [M+H] +計算值327.2；實驗值328.1。
步驟 3.在0℃下，向(2 S)-3-甲基-2-[甲基(1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸甲酯(270 mg，0.83 mmol)及TEA (1.67 g，16.5 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中逐滴添加丙烯醯氯(75 mg，0.83 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著減壓濃縮且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸甲酯(230 mg，73%產率)。LCMS (ESI): C 19H 31N 3O 5之m/z [M+H] +計算值381.2；實驗值382.2。
步驟 4.在0℃下，向(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸甲酯(220 mg，0.58 mmol)於THF (1.8 mL)及H 2O (0.6 mL)中之混合物中添加LiOH (21 mg，0.87 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1天，接著用HCl水溶液酸化至約pH 4且用DCM (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸(137 mg，65%產率)。LCMS (ESI): C 18H 29N 3O 5之m/z [M+H] +計算值367.2；實驗值368.2。 中間體 23. 合成 N -(( S)-3- 丙烯醯基 -2- 甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 羰基 )- N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯及 N -(( R)-3- 丙烯醯基 -2- 甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 羰基 )- N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯
步驟 1.向4-(胺基甲基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(5.0 g，21.7 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物中添加MgSO 4(10 g)、Cs 2CO 3(7.07 g，21.7 mmol)及乙醛(0.96 g，21.7 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌2小時，接著過濾且用EtOAc (5 × 100 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到呈油狀之2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(6 g)，將其直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 13H 24N 2O 3之m/z [M+H] +計算值256.2；實驗值257.4。
步驟 2.在0℃下，向2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(5.9 g，23.0 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物中添加TEA (6.99 g，69.1 mmol)及丙烯醯氯(2.08 g，23.0 mmol)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，接著添加冰/H 2O且用EtOAc (4 × 30 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(2.7 g，38%)。
步驟 3.在0℃下，向3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(2.65 g，8.5 mmol)於DCM (26 mL)中之混合物中添加TFA (13 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之1-(2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基)丙-2-烯-1-酮(4.8 g)。LCMS (ESI): C 11H 18N 2O 2之m/z [M+H] +計算值210.1；實驗值211.2。
步驟 4.在0℃下，向BTC (0.40 g，1.4 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中添加於DCM (7 mL)中之甲基-L-纈胺酸甲酯 HCl (0.73 g，4.1 mmol)及吡啶(1.28 g，16.2 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加於DCM中之TEA (4.10 g，40.5 mmol)及1-(2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基)丙-2-烯-1-酮(1.70 g，8.1 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加冰/H 2O且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮濾液。藉由製備型TLC及製備型HPLC純化殘餘物，得到呈油狀的 N-(( S)-3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)- N-甲基-L-纈胺酸甲酯(750 mg)及 N-(( R)-3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)- N-甲基-L-纈胺酸甲酯(730 mg)。LCMS (ESI): C 19H 31N 3O 5之m/z [M+H] +計算值381.2；實驗值382.2。 中間體 24. 合成 (2 S)-3- 甲基 -2-{ 甲基 [1- 甲基 -3-( 丙 -2- 烯醯基 )-1,3,8- 三氮雜螺 [4.5] 癸 -8- 基 ] 羰基胺基 } 丁酸鋰鹽
步驟 1.在0℃下，向[4-氰基-4-(甲基胺基)哌啶-1-基]甲酸第三丁酯(14.4 g，63 mmol)及吡啶(8 g，125.6 mmol)於THF (200 mL)中之混合物中添加TFAA (15.8 g，75.2 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著減壓濃縮。將殘餘物溶解於EtOAc (100 mL)中，用1N HCl (100 mL)洗滌，接著經Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈固體狀之4-氰基-4-(2,2,2-三氟- N-甲基乙醯胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯 (15.9 g，71%產率)。LCMS (ESI): C 14H 20F 3N 3NaO 3之m/z [M+Na] +計算值358.1；實驗值358.2。
步驟 2.在H 2氛圍(15 psi)下，將4-氰基-4-(2,2,2-三氟- N-甲基乙醯胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(9.6 g，28 mmol)於EtOH (100 mL)及雷尼鎳(2 g)之混合物攪拌16小時。將混合物過濾，減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈固體狀之4-(胺基甲基)-4-(2,2,2-三氟- -甲基乙醯胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.9 g，40%產率)。LCMS (ESI): C 14H 24F 3N 3O 3之m/z [M+H] +計算值339.2；實驗值340.2。
步驟 3.向4-(胺基甲基)-4-(2,2,2-三氟- -甲基乙醯胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(3.9 g，12 mmol)於MeOH (40 mL)及H 2O (8 mL)中之混合物中添加KOH (3.45 g，60 mmol)。將混合物加熱至80℃且攪拌1小時，接著減壓濃縮以移除MeOH。用DCM (30 mL × 3)萃取水層，且將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之4-(胺基甲基)-4-(甲基胺基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.9 g，92%產率)。LCMS (ESI): C 12H 25N 3O 2之m/z [M+H] +計算值243.2；實驗值244.2。
步驟 4.向甲酸[4-(胺基甲基)-4-(甲基胺基)哌啶-1-基]第三丁酯(1.4 g，5.7 mmol)於Et 2O (15 mL)中之混合物中添加三聚甲醛(0.77 g，25.6 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著過濾且用DCM洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到呈油狀之{1-甲基-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基}甲酸第三丁酯(1.2 g，77%產率)。LCMS (ESI): C 13H 25N 3O 2之m/z [M+H] +計算值255.2；實驗值256.3。
步驟 5.在0℃下，向{1-甲基-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基}甲酸第三丁酯(1.4 g，5.5 mmol)、NaHCO 3(1.16 g，13.7 mmol)於H 2O (15 mL)及DCM (15 mL)中之混合物中添加丙-2-烯醯氯(0.55 g，6 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (30 mL)且用DCM (50 mL × 3)萃取混合物。將所得有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之[1-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基]甲酸第三丁酯(0.8 g，43%產率)。LCMS (ESI): C 16H 27N 3O 3之m/z [M+H] +計算值309.2；實驗值310.3。
步驟 6.向[1-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基]甲酸第三丁酯(800 mg，2.6 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物中添加TFA (2 mL)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到1-{1-甲基-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-3-基}丙-2-烯-1-酮(540 mg)，將其直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 11H 19N 3O之m/z [M+H] +計算值209.2；實驗值210.3。
步驟 7.在0℃下，向1-{1-甲基-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-3-基}丙-2-烯-1-酮(540 mg，2.6 mmol)及(2 S)-2-[(氯羰基)(甲基)胺基]-3-甲基丁酸甲酯(589 mg，2.83 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中添加TEA (781 mg，7.74 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (30 mL)且用DCM (50 mL × 3)萃取混合物。將所得有機層用鹽水洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之甲基(2 S)-3-甲基-2-{甲基[1-。LCMS (ESI): C 19H 32N 4O 4之m/z [M+H] +計算值380.2；實驗值381.3。
步驟 8.向(2 S)-3-甲基-2-{甲基[1-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸甲酯(600 mg，1.6 mmol)於THF (3 mL)中之混合物中添加於H 2O (2 mL)中之LiOH (75.5 mg，3.15 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著凍乾，得到呈固體狀之(2 S)-3-甲基-2-{甲基[1-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸鋰鹽(500 mg，78%產率)。LCMS (ESI): C 18H 30N 4O 4之m/z [M+H] +計算值366.2；實驗值367.2。 中間體 25. 合成 (2 S)-3- 甲基 -2-{ 甲基 [3-( 丙 -2- 烯醯基 )-1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸 -8- 基 ] 羰基胺基 } 丁酸
步驟 1.向4-(胺基甲基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(26 g，112.9 mmol)於MeOH (52 mL)及3M NaOH (260 mL)中之混合物中添加HCHO (37 wt.%於H 2O中；52 mL)。在室溫下，將混合物攪拌16小時，接著用DCM (100 mL × 3)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到呈油狀之1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(28.8 g)。將粗產物直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 12H 22N 2O 3之m/z [M+H] +計算值242.2；實驗值243.2。
步驟 2.在0℃下，向1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(14.4 g，59.4 mmol)及NaHCO 3(14.97 g，178.2 mmol)於DCM (75 mL)及H 2O (75 mL)中之混合物中添加丙-2-烯醯氯(8.06 g，89.1 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用DCM (50 mL × 3)萃取。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(10 g，54%產率)。LCMS (ESI): C 15H 24N 2O 4之m/z [M+H] +計算值296.2；實驗值297.2。
步驟 3.向3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(1.0 g，3.4 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物中添加TFA (2 mL)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之1-{1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基}丙-2-烯-1-酮(0.67 g)。將產物直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 10H 16N 2O 2之m/z [M+H] +計算值196.1；實驗值197.1。
步驟 4.在0℃下，向(2 S)-2-[(氯羰基)胺基]-3-甲基丁酸甲酯(0.66 g，3.4 mmol)及TEA (1.72 g，17 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中添加1-{1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基}丙-2-烯-1-酮(0.67 g，3.4 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (30 mL)且用DCM (30 mL)萃取混合物。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之(2 S)-3-甲基-2-{甲基[3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸甲酯(600 mg，47%產率)。LCMS (ESI): C 18H 29N 3O 5之m/z [M+H] +計算值367.2；實驗值368.3。
步驟 5.向(2 S)-3-甲基-2-{甲基[3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸甲酯(600 mg，1.63 mmol)於THF (5 mL)中之混合物中添加氫氧化鋰(78 mg，3.3 mmol)於H 2O (5 mL)中之溶液。在室溫下，將混合物攪拌4小時，接著用1N HCl調至約pH 4，且用DCM (20 mL × 3)萃取。將合併之有機層減壓濃縮，得到呈油狀之(2 S)-3-甲基-2-{甲基[3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸(500 mg)。LCMS (ESI): C 17H 27N 3O 5之m/z [M+H] +計算值353.2；實驗值354.2。 中間體 26. 合成 (2 S)-3- 甲基 -2-{ 甲基 [4-( 丙 -2- 烯醯基 )-1- 丙基 -1,4,9- 三氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 基 ] 羰基胺基 } 丁酸鋰鹽
步驟 1.在室溫下，將9-{3-[(甲醯氧基)甲基]苯基}-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(1.0 g，2.6 mmol)及丙醛(0.3 g，5.2 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中攪拌20分鐘。添加NaBH(OAc) 3(1.1 g，5.2 mmol)且將混合物在室溫下攪拌1小時，接著添加H 2O (20 mL)且用DCM (20 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之9-{3-[(甲醯氧基)甲基]苯基}-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(0.7 g，62%產率)。LCMS (ESI): C 24H 37N 3O 4之m/z [M+H] +計算值431.3；實驗值432.3。
步驟 2.在H2 (15 psi)氛圍下，在室溫下將9-{3-[(甲醯氧基)甲基]苯基}-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(600 mg，1.39 mmol)及10% Pd/C (148 mg，1.39 mmol)於THF (10 mL)中之混合物攪拌1小時。將混合物過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(500 mg)。LCMS (ESI): C 16H 31N 3O 2之m/z [M+H] +計算值297.2；實驗值298.2。
步驟 3.在0℃下，向(2 S)-2-[(氯羰基)(甲基)胺基]-3-甲基丁酸甲酯(314 mg，1.5 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中添加TEA (458 mg，4.5 mmol)及1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(450 mg，1.5 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (20 mL)且用DCM (20 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之9-{[(2 S)-1-甲氧基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺甲醯基}-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(650 mg，83%產率)。LCMS (ESI): C 24H 44N 4O 5之m/z [M+H] +計算值468.3；實驗值469.3。
步驟 4.在0℃下，向9-{[(2 S)-1-甲氧基-3-甲基-1-側氧基丁-2-基](甲基)胺甲醯基}-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(550 mg，1.17 mmol)於DCM (6 mL)中之混合物中添加TFA (2 mL)。將混合物在0℃下攪拌15分鐘，接著減壓濃縮，得到(2 S)-3-甲基-2-[甲基({1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基}羰基)胺基]丁酸甲酯(435 mg)，將其直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 19H 36N 4O 3之m/z [M+H] +計算值368.3；實驗值369.3。
步驟 5.在0℃下，向(2 S)-3-甲基-2-[甲基({1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基}羰基)胺基]丁酸甲酯(435 mg，1.18 mmol)於DCM (5 mL)及H 2O (5 mL)中之混合物中添加NaHCO 3(991 mg，11.8 mmol)及丙-2-烯醯氯(214 mg，2.36 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H2O (20 mL)且用DCM (20 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化粗殘餘物，得到呈油狀之(2 S)-3-甲基-2-{甲基[4-(丙-2-烯醯基)-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基]羰基胺基}丁酸甲酯(460 mg，83%產率)。LCMS (ESI): C 22H 38N 4O 4之m/z [M+H] +計算值422.3；實驗值423.3。
步驟 6.向(2 S)-3-甲基-2-{甲基[4-(丙-2-烯醯基)-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基]羰基胺基}丁酸甲酯(100 mg，0.24 mmol)於THF (1 mL)中之混合物中添加LiOH (11.3 mg，0.47 mmol)於H 2O (1.5 mL)中之混合物。在室溫下，將混合物攪拌4小時，接著凍乾，得到呈固體狀之(2 S)-3-甲基-2-{甲基[4-(丙-2-烯醯基)-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基]羰基胺基}丁酸鋰鹽(96 mg)，將其直接用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 21H 36N 4O 4之m/z [M+H] +計算值408.3；實驗值409.3。 中間體 27. 合成 N -((2 S,4 R)-3- 丙烯醯基 -2,4- 二甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 羰基 )- N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯 (52 mg) 及 N -((2 R,4 R)-3- 丙烯醯基 -2,4- 二甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 羰基 )- N- 甲基 -L- 纈胺酸甲酯
步驟 1.在室溫下向500 mL 3頸圓底燒瓶中添加4-羥基-4-(1-硝基乙基)哌啶-1-甲酸第三丁酯(20 g，72.9 mmol，1.0當量)、Pd/C (20 g，187.9 mmol，2.6當量)及MeOH (100 mL，2469.9 mmol，33.9當量)。在氫氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌隔夜。將所得混合物經矽藻土墊過濾且用3 × 100 mL MeOH : DCM=1:7洗滌濾餅。減壓濃縮所得混合物且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈棕色固體狀之4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(10.8 g，60.63%)。藉由對掌性SFC純化外消旋產物(6.8 g)，得到呈黃色油狀之(S)-4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(3 g)及(R)-4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯 (2.9 g)。ESI-MS m/z = 245.3 [M+H] +；MW計算值：244.2。
步驟 2.在0℃下向100 mL 3頸圓底燒瓶中添加(R)-4-(1-胺基乙基)-4-羥基哌啶-1-甲酸第三丁酯(2.9 g，12.0 mmol，1.0當量)、4AMS (2.9 g)、Cs 2CO 3(7.8 g，24.0 mmol，2當量)、ACN (30 mL)及乙醛(0.53 g，12.0 mmol，1當量)。將所得混合物在60℃下攪拌4小時。過濾所得混合物且用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到呈淺黃色固體狀之(4R)-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(2.63 g，粗品)。粗產物不經進一步純化即直接用於下一步驟中。ESI-MS m/z = 271.4 [M+H] +；MW計算值：270.2。
步驟 3.在0℃下向100 mL圓底燒瓶中添加(4R)-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(2.5 g，9.3 mmol，1.0當量)、DCM (25 mL)、丙烯醯氯(845.5 mg，9.3 mmol，1當量)及TEA (2.8 g，28.1 mmol，3當量)。將所得混合物在0℃下攪拌30分鐘。在0℃下用水/冰淬滅反應。用EtOAc (4 × 50 mL)萃取所得混合物且將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之(4R)-2,4-二甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(1.5 g，49.2%)。ESI-MS m/z =269.4 [M-55] +；MW計算值：324.2。
步驟 4.在室溫下向40 mL小瓶中添加(4S)-3-丙烯醯基-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲酸第三丁酯(1.4 g，4.4 mmol，1.0當量)及DCM (14.5 mL)。在0℃下經5分鐘逐滴添加TFA (7.2 mL，97.6 mmol，21.8當量)且將所得混合物在0℃下再攪拌1小時。減壓濃縮混合物，得到呈黃色油狀之1-((4S)-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基)丙-2-烯-1-酮(3.5 g，粗品)。ESI-MS m/z = 225.1 [M+H] +；MW計算值：224.2。
步驟 5.在0℃下向BTC (402 mg，1.3 mmol，0.16當量)於DCM (9 mL)中之經攪拌之溶液中添加甲基-L-纈胺酸甲酯鹽酸鹽(614 mg，4.2 mmol，0.5當量)及吡啶(1340 mg，16.9 mmol，2當量)於DCM (8 ml)中之混合物。將所得混合物在0℃下攪拌1小時，之後在0℃下添加於DCM中之TEA (4285 mg，42.3 mmol，5當量)及1-[(4R)-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸-3-基]丙-2-烯-1-酮 (1.9 g，8.4 mmol，1當量)。將所得混合物在0℃下再攪拌2小時且接著在0℃下用水/冰淬滅。用EtOAc (4 × 30 mL)萃取所得混合物且將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由層析法純化所得殘餘物，得到呈黃色油狀之外消旋N-((4S)-3-乙醯基-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(1.2 g，32%產率)。藉由對掌性HPLC純化外消旋產物(1.2 g)，得到呈黃色油狀之N-((2S,4R)-3-丙烯醯基-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(52 mg)及N-((2R,4R)-3-丙烯醯基-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸甲酯(0.9 g)。ESI-MS m/z = 396.0 [M+H] +；MW計算值：395.2 實例 1. 合成 1-(4-( 二甲基胺基 )-4- 甲基戊 -2- 炔醯基 )- N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(5,3)- 噁二唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-4- 氟 - N - 甲基哌啶 -4- 甲醯胺
步驟 1 .在CO氛圍下，將(2 M)-5-溴-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(10.0 g，14.6 mmol)、Pd(dppf)Cl 2.DCM (1.19 g，1.46 mmol)及TEA (2.66 g，26.3 mmol)於DMF (50 mL)及MeOH (1 mL)中之混合物加熱至100℃且攪拌隔夜。添加H 2O (100 mL)，且將混合物用EtOAc (3 × 100 mL)萃取。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈泡沫狀之(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲酸酯(8.0 g，74%產率)。LCMS (ESI): C 41H 50N 2O 4Si之m/z [M+H] +計算值662.4；實驗值663.4。
步驟 2.在0℃下，向(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲酸酯(3.90 g，5.9 mmol)於THF (10 mL)及MeOH (30 mL)中之混合物中逐滴添加於H 2O (30 mL)中之LiOH (0.70 g，29.2 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌3小時，接著用HCl水溶液酸化至約pH 7且用EtOAc (3 × 20mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(2 × 20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲酸(2.89 g)。LCMS (ESI): C 40H 48N 2O 4Si之m/z [M+H] +計算值648.3；實驗值649.3。
步驟 3.在0℃下，向(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲酸(2.00 g，3.1 mmol)及K 2CO 3(0.85 g，6.2 mmol)於DCM (20 mL)中之混合物中逐滴添加氯甲酸異丙酯(0.76 g，6.2 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌45分鐘，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 50mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。將殘餘物溶解於DCM (20 mL)中且添加[( Z)- N-羥基甲脒醯基]甲酸乙酯(0.81 g，6.2 mmol)及K 2CO 3(0.85 g，6.2 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌2小時，接著添加H2O且用EtOAc (3 × 30mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之[( Z)- N-[( Z)-(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-羰基氧基]甲脒醯基]甲酸乙酯(1.23 g，45%產率)。LCMS (ESI): C 44H 54N 4O 6Si之m/z [M+H] +計算值762.4；實驗值763.3。
步驟 4.將[( Z)- N-[( Z)-(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-羰基氧基]甲脒醯基]甲酸乙酯(1.30 g，1.7 mmol)加熱至150℃且攪拌4小時，接著藉由矽膠管柱層析法純化，得到呈固體狀之5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯(600 mg，28%產率)。LCMS (ESI): C 44H 52N 4O 5Si之m/z [M+H] +計算值744.4；實驗值745.3。
步驟 5.在0℃下，向5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-甲酸乙酯(1.1 g，1.5 mmol)於EtOH (6 mL)及THF (6 mL)中之混合物中分數份添加NaBH 4(112 mg，3.0 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著將混合物冷卻至0℃且添加飽和NH 4Cl，且用EtOAc (30 mL)萃取混合物。將有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]甲醇(900 mg，78%產率)。LCMS (ESI): C 42H 50N 4O 4Si之m/z [M+H] +計算值702.4；實驗值703.4。
步驟 6.向[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]甲醇(900 mg，1.3 mmol)及Ph 3P (504 mg，1.92 mmol)於DCM (9 mL)中之混合物中添加CBr 4(637 mg，1.92 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌3小時，接著添加H 2O且用EtOAc (10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之(2 M)-5-[3-(溴甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基]-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(700 mg，36%產率)。LCMS (ESI): C 42H 49BrN 4O 3Si之m/z [M+H] +計算值764.3；實驗值765.2。
步驟 7.在0℃下，向(2 M)-5-[3-(溴甲基)-1,2,4-噁二唑-5-基]-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚(1.0 g，1.3 mmol)及2-[(二苯基亞甲基)胺基]乙酸第三丁酯(579 mg，2.0 mmol)於甲苯(4.2 mL)及DCM (1.8 mL)中之混合物中添加KOH (7.0 g，124.8 mmol)於H 2O (2 mL)及金雞納鹼(cinchonanium) (158 mg，0.26 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌3小時，接著添加H 2O且用EtOAc (10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(5 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]-2-[(二苯基亞甲基)胺基]丙酸第三丁酯(350 mg，25%產率)。LCMS (ESI): C 61H 69N 5O 5Si之m/z [M+H] +計算值979.5；實驗值980.4。
步驟 8.在0℃下，向3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]-2-[(二苯基亞甲基)胺基]丙酸第三丁酯(1.80 g，1.8 mmol)於DCM (18 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (18 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之2-胺基-3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙酸(4 g)。LCMS (ESI): C 44H 53N 5O 5Si之m/z [M+H] +計算值759.4；實驗值760.2。
步驟 9.向2-胺基-3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙酸(4.0 g，5.3 mmol)及NaHCO 3(2.65 g，30 mmol)於THF (20mL)及H 2O (20mL)中之混合物中逐滴添加Boc 2O (1.72 g，7.9 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 50mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙酸(1.2 g，21%產率)。LCMS (ESI): C 49H 61N 5O 7Si之m/z [M+H] +計算值859.4；實驗值860.2。
步驟 10.在N 2氛圍下，在0℃下向2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-[(2 M)-3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙酸(1.00 g，1.2 mmol)、(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(0.34 g，2.3 mmol)、HOBT (0.08 g，0.6 mmol)及DIPEA (1.50 g，11.6 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中分數份添加EDCI (0.33 g，1.7 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O (50 mL)且用EtOAc (3 × 50 mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-(3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(800 mg，63%產率)。LCMS (ESI): C 55H 71N 7O 8Si之m/z [M+H] +計算值985.5；實驗值986.6。
步驟 11.在N 2氛圍下，在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-(3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(800 mg，0.8 mmol)於THF (5mL)中之混合物中逐滴添加1M TBAF之THF溶液(5 mL)。將混合物加熱至60℃且攪拌隔夜，接著添加H 2O (100 mL)且用EtOAc (3 × 50mL)萃取混合物。將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(680 mg)。LCMS (ESI): C 38H 51N 7O 8之m/z [M+H] +計算值733.3；實驗值734.3。
步驟 12.在N 2氛圍下，在0℃下向(3 S)-1-[(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[5-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-3-基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(500 mg，0.68 mmol)、HOBT (460 mg，3.4 mmol)及DIPEA (2.64 g，20.4 mmol)於DCM (100 mL)中之混合物中分數份添加EDCI (2.61 g，13.6 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌隔夜，接著減壓濃縮且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到呈固體狀之((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(5,3)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(22 mg,18%產率)。LCMS (ESI): C 38H 49N 7O 7之m/z [M+H] +計算值715.4；實驗值716.2。
步驟 13.在N 2氛圍下，在0℃下向((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(5,3)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(20 mg，0.03 mmol)於DCM (0.30 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (0.1 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到呈油狀之(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(5,3)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(30 mg)。LCMS (ESI): C 33H 41N 7O 5之m/z [M+H] +計算值615.3；實驗值616.4。
步驟 14.在N 2氛圍下，在0℃下向(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(5,3)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(20 mg，0.03 mmol)、DIPEA (42 mg，0.33 mmol)及(2 S)-2-(1-[1-[4-(二甲基胺基)-4-甲基戊-2-炔醯基]-4-氟哌啶-4-基]- N-甲基甲醯胺基)-3-甲基丁酸 (19 mg，0.05 mmol)於DMF (1 mL)中之混合物中分數份添加HATU (16 mg，0.04 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著藉由製備型HPLC純化，得到呈固體狀之1-(4-(二甲基胺基)-4-甲基戊-2-炔醯基)- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(5,3)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-4-氟- N-甲基哌啶-4-甲醯胺(2.4 mg，7%產率)。LCMS (ESI): C 53H 71FN 10O 8之m/z [M+H] +計算值994.5；實驗值995.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ8.78 (dd, J= 4.7, 1.7 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.95 - 7.68 (m, 3H), 7.55 (dd, J= 7.7, 4.7 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H), 5.07 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 4.62 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 4.34 - 4.20 (m, 7H), 3.70 - 3.49 (m, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.17 - 3.03 (m, 5H), 2.98 - 2.89 (m, 3H), 2.77 (t, J= 12.2 Hz, 1H), 2.46 - 2.41 (m, 1H), 2.20 (dd, J= 10.7, 6.6 Hz, 7H), 2.15 - 2.03 (m, 5H), 1.81 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 1.65 (d, J= 13.0 Hz, 1H), 1.53 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 1.37 (t, J= 6.3 Hz, 9H), 1.03 - 0.86 (m, 10H), 0.88 - 0.80 (m, 2H), 0.80 - 0.74 (m, 3H)。 實例 2. 合成 1-(4-( 二甲基胺基 )-4- 甲基戊 -2- 炔醯基 )- N-((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -2(3,5)- 噁二唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-4- 氟 - N- 甲基哌啶 -4- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向3-甲醯基-1 H-吲哚-5-甲腈(24.8 g，145.7 mmol)於EtOH (248 mL)中之混合物中分數份添加NaBH 4(8.05 g，218.6 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加飽和NH 4Cl (500 mL)，且減壓移除揮發性物質。用DCM (3 × 200 mL)萃取混合物且將合併之有機層用水(3 × 200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-(羥基甲基)-1 H-吲哚-5-甲腈(21 g，84%產率)。LCMS (ESI): C 10H 8N 2O之m/z [M-H] +計算值172.1；實驗值171.1。
步驟 2.在Ar氛圍下，在-40℃下向3-(羥基甲基)-1 H-吲哚-5-甲腈(20.0 g，116.2 mmol)於THF (200 mL)中之混合物中逐滴添加[(1-甲氧基-2-甲基丙-1-烯-1-基)氧基]三甲基矽烷(50.62 g，290.4 mmol)及TMSOTf (19.36 g，87.1 mmol)。將混合物在-40℃下攪拌2小時，接著在0℃下添加鹽水(200 mL)。將水層與有機層分離且將有機層用EtOAc (3 × 200 mL)萃取。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-(5-氰基-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸甲酯(22 g，74%產率)。LCMS (ESI): C 15H 16N 2O 2之m/z [M-H] +計算值256.1；實驗值255.1。
步驟 3.在0℃下，向3-(5-氰基-1 H-吲哚-3-基)-2,2-二甲基丙酸甲酯(22 g，85.8 mmol)於THF (220 mL)中之混合物中逐滴添加1M LiAlH 4之THF溶液(171.7 mL，171.7 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加Na 2SO 4.10H 2O，過濾混合物且用DCM (3 × 300 mL)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-甲腈(12.8 g，65%產率)。LCMS (ESI): C 14H 16N 2O之m/z [M-H] +計算值228.1；實驗值255.1。
步驟 4.在0℃下，向3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-1 H-吲哚-5-甲腈(15.0 g，65.7 mmol)於DCM (150 mL)中之混合物中添加咪唑(11.18 g，164.3 mmol)及TBDPSCl (23.48 g，85.4 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌隔夜，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1 H-吲哚-5-甲腈(30 g，97%產率)。LCMS (ESI): C 30H 34N 2OSi之m/z [M-H] +計算值466.2；實驗值465.2。
步驟 5.在N 2氛圍下，在0℃下向3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1 H-吲哚-5-甲腈(18.0 g，38.6 mmol)於THF (180 mL)中之混合物中添加NaHCO 3(3.89 g，46.3 mmol)、AgOTf (10.9 g，42.4 mmol)及I 2(8.81 g，34.7 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加5% Na 2S 2O 3水溶液且用EtOAc (3 × 200 mL)萃取混合物。將合併之有機層用水(3 × 200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1 H-吲哚-5-甲腈(18.2g，80%產率)。LCMS (ESI): C 30H 33IN 2NaOSi之m/z [M+Na] +計算值615.1；實驗值615.0。
步驟 6.在Ar氛圍下，向3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-碘-1 H-吲哚-5-甲腈(18.2 g，30.7 mmol)及2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)吡啶(32.33 g，122.9 mmol)於1,4-二噁烷(150 mL)及H 2O (30 mL)中之混合物中添加K 2CO 3(10.60 g，76.8 mmol)、Pd(dppf)Cl 2(4.49 g，6.1 mmol)。將混合物加熱至50℃且攪拌3小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚-5-甲腈(20 g)。LCMS (ESI): C 38H 43N 3O 2Si之m/z [M+H] +計算值601.3；實驗值602.3。
步驟 7.在0℃下，向3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-1 H-吲哚-5-甲腈(22.0 g，36.6 mmol)於DMF (220 mL)中之混合物中添加Cs 2CO 3(35.73 g，109.7 mmol)及EtI (34.21 g，219.3 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (300 mL)萃取混合物。將有機層用H 2O (3 × 300 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾 。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲腈(15.6 g，63%產率)。LCMS (ESI): C 40H 47N 3O 2Si之m/z [M+H] +計算值629.3；實驗值630.0。
步驟 8.向3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲腈(15.60 g，24.8 mmol)於MeOH (156 mL)中之混合物中添加50% NH 2OH之H 2O溶液(9.81 g，296.9 mmol)。將混合物加熱至50℃且攪拌3小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基- N-羥基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲脒(14.6g, 89%產率)。LCMS (ESI): C 40H 50N 4O 3Si之m/z [M+H] +計算值662.4；實驗值663.2。
步驟 9.在-5℃下，向3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基- N-羥基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-甲脒(14.60 g，22.0 mmol)於DCM (146 mL)中之混合物中添加DIPEA (14.23 g，110.1 mmol)、HOBt (0.60 g，4.4 mmol)，隨後經2分鐘分數份添加EDC.HCl (5.07 g，26.4 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁二酸4-(3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基)甲脒基1-甲酯(18.1 g，92%產率)。LCMS (ESI): C 50H 65N 5O 8Si之m/z [M+H] +計算值891.5；實驗值892.3。
步驟 10.將(2 S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丁二酸4-(3-[3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基)甲脒基1-甲酯(18 g，20.2 mmol)於1,4-二噁烷(900 mL)中之混合物加熱至90℃且攪拌3小時。減壓濃縮混合物且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-(3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙酸甲酯(16.5 g，94%產率)。LCMS (ESI): C 50H 63N 5O 7Si之m/z [M+H] +計算值873.4；實驗值874.4。
步驟 11.向2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-[3-(3-{3-[(第三丁基二苯基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)-1,2,4-噁二唑-5-基]丙酸甲酯(18 g，20.6 mmol)於THF (180 mL)中之混合物中逐滴添加1M TBAF之THF溶液(180 mL)。將混合物加熱至60℃且攪拌隔夜，接著添加H 2O且用DCM (3 × 300 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(6 × 300 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸(14 g)。LCMS (ESI): C 33H 43N 5O 7之m/z [M-H] +計算值621.3；實驗值620.3。
步驟 12.在0℃下，向2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸(14 g，22.5 mmol)於MeOH (140 mL)中之混合物中添加TMSCHN 2(12.86 g，112.6 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之(2 R)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸甲酯(3.5 g，25%產率)。LCMS (ESI): C 34H 45N 5O 7之m/z [M+H] +計算值635.3；實驗值636.4。
步驟 13.向(2 R)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸甲酯(2.0 g，3.2 mmol)於1,4-二噁烷(20 mL)中之混合物中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(20 mL)。在室溫下，將混合物攪拌1小時，接著減壓濃縮，得到呈固體狀之(2 R)-2-胺基-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸甲酯(1.5 g，89%產率)。LCMS (ESI): C 29H 37N 5O 5之m/z [M+H] +計算值535.3；實驗值536.4。
步驟 14.在0℃下，向(2 R)-2-胺基-3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}丙酸甲酯(3.0 g，5.6 mmol)於THF (30 mL)及H 2O (6 mL)中之混合物中添加NaHCO 3(1.18 g，14.0 mmol)及氯碳酸烯丙酯(1.01 g，8.4 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸甲酯(1.5 g，43%產率)。LCMS (ESI): C 33H 41N 5O 7之m/z [M+H] +計算值619.3；實驗值620.4。
步驟 15.在0℃下，向3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸甲酯(1.5 g，2.1 mmol)於THF (15 mL)中之混合物中添加於H 2O (15 mL)中之LiOH (16 mg，6.8 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用HCl水溶液酸化至約pH 4且用DCM (3 × 30 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2 R)-3-[3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基]-2-[[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基]丙酸(1.46 g)。LCMS (ESI): C 32H 39N 5O 7之m/z [M+H] +計算值605.3；實驗值606.3。
步驟 16.在0℃下，向(2 R)-3-[3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基]-2-[[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基]丙酸(1.46 g，2.4 mmol)於DCM (15 mL)中之混合物中添加( Z)- N, N'-二異丙基第三丁氧基甲脒(2.41 g，12.1 mmol)。將混合物加熱至40℃且攪拌隔夜，接著添加H 2O且用DCM (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層用NH 4Cl水溶液(3 × 40 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸第三丁酯(2.3 g)。LCMS (ESI): C 36H 47N 5O 7之m/z [M+H] +計算值661.4；實驗值662.4。
步驟 17.在-5℃下，向3-{3-[(2 M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸第三丁酯(2.30 g，3.5 mmol)於DCM (23 mL)中之混合物中分數份添加DMAP (85 mg，0.7 mmol)、(3 S)-1,2-雙 (第三丁氧基羰基)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(3.44 g，10.4 mmol)及EDCI (0.87 g，4.5 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-1,2,3-三甲酸3-(2-[[(2 M)-5-[5-[(2 R)-3-(第三丁氧基)-3-側氧基-2-[[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基]丙基]-1,2,4-噁二唑-3-基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基]甲基]-2-甲基丙基)酯1,2-二第三丁酯(2.29 g，68%產率)。LCMS (ESI): C 51H 71N 7O 12之m/z [M+H] +計算值973.5；實驗值974.4。
步驟 18.在0℃下，向(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-1,2,3-三甲酸3-(2-[[(2 M)-5-[5-[(2 R)-3-(第三丁氧基)-3-側氧基-2-[[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基]丙基]-1,2,4-噁二唑-3-基]-1-乙基-2-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]吲哚-3-基]甲基]-2-甲基丙基)酯1,2-二第三丁酯(2.29 g，2.4 mmol)於DCM (30 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (10 mL)。將混合物在0℃下攪拌5小時，接著減壓濃縮。用飽和NaHCO 3將混合物鹼化至約pH 7且用DCM (3 × 300 mL)萃取。將合併之有機層用H 2O (3 × 60 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之3-{3-[(2 M)-3-{3-[(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-羰基氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸(1.4 g，83%產率)。LCMS (ESI): C 37H 47N 7O 8之m/z [M-H] +計算值717.4；實驗值716.5。
步驟 19.在0℃下，向3-{3-[(2 M)-3-{3-[(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-羰基氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-1,2,4-噁二唑-5-基}-2-{[(丙-2-烯-1-基氧基)羰基]胺基}丙酸(720 mg，1.0 mmol)於DCM (7.2 mL)中之混合物中添加DIPEA (3.89 g，30.1 mmol)及HATU (4.58 g，12.0 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌隔夜，接著減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之 N-[(7 S,13 S,19 M)-21-乙基-20-[2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基]-17,17-二甲基-8,14-二側氧基-4,15-二氧雜-3,9,21,27,28-五氮雜五環[17.5.2.1^[2,5].1^[9,13].0^[22,26]]二十八碳-1(25),2,5(28),19,22(26),23-六烯-7-基]胺基甲酸丙-2-烯-1-基酯(230 mg，33%產率)。LCMS (ESI): C 37H 45N 7O 7之m/z [M-H] +計算值699.3；實驗值699.9。
步驟 20.在Ar氛圍下，向((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(3,5)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸烯丙酯(135 mg，0.19 mmol)於THF (1.35 mL)中之混合物中添加嗎啉(50 mg，0.58 mmol)及Pd(PPh 3) 4(22.29 mg，0.019 mmol)。將混合物加熱至35℃且攪拌4小時，接著藉由矽膠管柱層析法直接純化，得到呈固體狀之(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(3,5)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(120 mg)。LCMS (ESI): C 33H 41N 7O 5之m/z [M+H] +計算值615.3；實驗值616.4。
步驟 21.在0℃下，向(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(3,5)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(100 mg，0.16 mmol)於DMF (1 mL)中之混合物中添加DIPEA (315 mg，2.44 mmol)、(2 S)-2-(1-[1-[4-(二甲基胺基)-4-甲基戊-2-炔醯基]-4-氟哌啶-4-基]- N-甲基甲醯胺基)-3-甲基丁酸(129 mg，0.32 mmol)及COMU (104 mg，0.24 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著藉由製備型HPLC純化，得到呈固體狀之1-(4-(二甲基胺基)-4-甲基戊-2-炔醯基)- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S, Z)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(3,5)-噁二唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-4-氟- N-甲基哌啶-4-甲醯胺(25 mg，15%產率)。LCMS (ESI): C 53H 71FN 10O 8之m/z [M-H] +計算值994.5；實驗值995.8； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.78 (dd, J= 4.8, 1.8 Hz, 1H), 8.45 (d, J= 17.0 Hz, 2H), 7.86 - 7.75 (m, 2H), 7.71 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.54 (dd, J= 7.7, 4.7 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.16 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 4.71 - 4.49 (m, 1H), 4.41 - 4.06 (m, 7H), 3.68 - 3.47 (m, 3H), 3.23 (s, 4H), 3.15 - 3.05 (m, 3H), 2.94 (d, J= 11.1 Hz, 2H), 2.79 - 2.61 (m, 1H), 2.45 - 2.37 (m, 1H), 2.26 - 1.95 (m, 12H), 1.85 - 1.63 (m, 2H), 1.57 - 1.42 (m, 1H), 1.39 - 1.24 (m, 9H), 1.03 - 0.71 (m, 12H), 0.34 (s, 3H)。 實例 3. 合成 (4a R,7a S)-4- 丙烯醯基 - N -((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-((S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 哌啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N- 甲基六氫吡咯并 [3,4- b][1,4] 噁嗪 -6(2 H)- 甲醯胺
步驟 1.在N 2氛圍下，在0℃下向((6 3 S, 4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(中間體15) (170 mg，0.21 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中添加TFA (0.6 mL)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著用飽和NaHCO 3水溶液酸化至約pH 8且用DCM (3 × 10 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(2 3 R,6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-5,7-二酮(160 mg)。LCMS (ESI): C 36H 47F 3N 6O 4之m/z [M+H] +計算值684.4；實驗值685.4。
步驟 2.在N 2氛圍下，在0℃下向(2 3 R,6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-5,7-二酮(150 mg，0.22 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中分數份添加DIPEA (283 mg，2.2 mmol)、(2 S)-2-[(4a R,7a S)-4-(第三丁氧基羰基)-六氫吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6-羰基(甲基)胺基]-3-甲基丁酸(127 mg，0.33 mmol)及HATU (100 mg，0.26 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(4a R,7a S)-6-(((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-4(4a H)-甲酸第三丁酯(150 mg，52%產率)。LCMS (ESI): C 54H 76F 3N 9O 9之m/z [M+H] +計算值1051.6；實驗值1052.5。
步驟 3.在N 2氛圍下，在0℃下向(4a R,7a S)-6-(((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-4(4a H)-甲酸第三丁酯(150 mg，0.14 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中添加TFA (0.70 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著用飽和NaHCO 3酸化至約pH 8且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(4a R,7a S)- N-((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)--6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(130 mg)。LCMS (ESI): C 49H 68F 3N 9O 7之m/z [M+H] +計算值951.5；實驗值952.6。
步驟 4.在N 2氛圍下，在0℃下向(4a R,7a S)- N-((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)--6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(120 mg，0.13 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中分數份添加DIPEA (163 mg，1.26 mmol)、丙烯酸(13.6 mg，0.19 mmol)及HATU (57.5 mg，0.15 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(4a R,7a S)-4-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((2 3 R,6 3 S,4 S)-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(16 mg，12%產率)。LCMS (ESI): C 52H 70F 3N 9O 8之m/z [M+H] +計算值1005.5；實驗值1006.9； 1H NMR (300 MHz, DMSO- d 6) δ 8.83 (dd, J= 4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.84 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 7.71 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.60 (dd, J= 7.8, 4.7 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.24 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 6.94 - 6.79 (m, 1H), 6.25 (d, J= 16.7 Hz, 1H), 5.87 - 5.77 (m, 2H), 5.77 (s, 1H), 5.59 - 5.42 (m, 1H), 5.34 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.31 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 4.22 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.93 (d, J= 11.3 Hz, 5H), 3.82 - 3.62 (m, 4H), 3.67 - 3.56 (m, 4H), 3.59 - 3.44 (m, 5H), 3.44 - 3.31 (m, 1H), 3.23 (d, J= 5.7 Hz, 4H), 3.09 (s, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 7H), 2.73 - 2.59 (m, 3H), 2.35 (m, 2 H), 2.29 (s, 1H), 2.12 (s, 4H), 2.06 (s, 1H), 1.84 (s, 1H), 1.74 - 1.56 (m, 4H), 1.45 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 1.35 - 1.04 (m, 1H), 1.05 - 0.91 (m, 2H), 0.92 - 0.63 (m, 8H), 0.43 (s, 3H)。 實例 4. 合成 (4a R,7a S)-4- 丙烯醯基 - N-((2S)-1-((( 2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )- 6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 哌啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N- 甲基六氫吡咯并 [3,4- b][1,4] 噁嗪 -6(2 H)- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(200 mg，0.26 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中添加TFA (0.7 mL)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著用飽和NaHCO 3酸化至約pH 8且用DCM (3 × 10 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(2 3 S,6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-5,7-二酮(200mg)。LCMS (ESI): C 36H 47F 3N 6O 4之m/z [M+H] +計算值684.4；實驗值985.4。
步驟 2.在N 2氛圍下，在0℃下向(2 3 S,6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-5,7-二酮(200 mg，0.29 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加DIPEA (378 mg，2.9 mmol)、(2 S)-2-[(4a R,7a S)-4-(第三丁氧基羰基)-六氫吡咯并[3,4- b] [1,4]噁嗪-6-羰基(甲基)胺基]-3-甲基丁酸(169 mg，0.44 mmol)及HATU (133 mg，0.35 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之(4a R,7a S)-6-(((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-4(4a H)-甲酸第三丁酯(230 mg，67%產率)。LCMS (ESI): C 54H 76F 3N 9O 9之m/z [M+H] +計算值1051.6；實驗值1052.6。
步驟 3.在N 2氛圍下，在0℃下向(4a R,7a S)-6-(((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基) 胺甲醯基)六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-4(4a H)-甲酸第三丁酯(230 mg，0.22 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中添加TFA。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O且用DCM (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(4a R,7a S)- N-((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(220 mg)。LCMS (ESI): C 49H 68F 3N 9O 7之m/z [M+H] +計算值951.5；實驗值952.5。
步驟 4.在N 2氛圍下，在0℃下向(4a R,7a S)- N-((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(220 mg，0.23 mmol)於ACN (3 mL)中之混合物中添加DIPEA (299 mg，2.3 mmol)、丙烯酸(25 mg，0.35 mmol)及CIP (77 mg，0.28 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之(4a R,7a S)-4-丙烯醯基- N-((2S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-哌啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基六氫吡咯并[3,4- b][1,4]噁嗪-6(2 H)-甲醯胺(20 mg，8%產率)。LCMS (ESI): C 52H 70F 3N 9O 8之m/z [M+H] +計算值1005.5；實驗值1006.9； 1H NMR (300 MHz, DMSO- d 6) δ 8.75 (dd, J= 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.67 (t, J= 9.2 Hz, 2H), 7.58 - 7.48 (m, 2H), 7.17 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 6.86 (dd, J= 17.2, 10.6 Hz, 1H), 6.20 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 5.80 - 5.59 (m, 2H), 5.48 (s, 1H), 5.11 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 4.73 (d, J= 15.3 Hz, 2H), 4.35 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.21 - 4.04 (m, 2H), 3.99 - 3.71 (m, 6H), 3.67 - 3.49 (m, 3H), 3.30 - 3.05 (m, 7H), 3.04 - 2.91 (m, 3H), 2.77 - 2.60 (m, 9H), 2.09 (d, J= 42.2 Hz, 5H), 1.81 (d, J= 28.6 Hz, 2H), 1.64 - 1.56 (m, 5H), 1.40 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.82 (t, J= 6.4 Hz, 6H), 0.21 (s, 3H)。 實例 5. 合成 4- 丙烯醯基 - N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S , Z )-1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H -8- 氧雜 -2(4,2)- 噁唑雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N - 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺
步驟 1.在H 2(氣球)氛圍下，在35℃下將 ((6 3 S,4 S, Z)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噁唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸苯甲酯(中間體16) (150 mg，0.19 mmol)及10% Pd/C (0.1g)於THF (2mL)中之混合物攪拌1小時。將混合物經矽藻土墊過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噁唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(112 mg，90%產率)。LCMS (ESI): C 34H 39F 3N 6O 5之m/z [M+H] +計算值668.3；實驗值669.3。
步驟 2.在0℃下，向(6 3 S,4 S, Z)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噁唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(91 mg，0.14 mmol)於ACN (1 mL)中之混合物中添加DIPEA (352 mg，2.7 mmol)及(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸(75 mg，0.20 mmol)及2-氯-1,3-二甲基-4,5-二氫-1 H-咪唑-3-鎓六氟磷酸鹽(V) (46 mg，0.16 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著減壓濃縮且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之4-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S, Z)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-2(4,2)-噁唑雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺 (29.6 mg，21%產率)。LCMS (ESI): C 52H 66F 3N 9O 9之m/z [M+H] +計算值1017.5；實驗值1018.7； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.77 (dd, J= 4.7, 1.8 Hz, 1H), 8.45 - 8.21 (m, 3H), 7.94 - 7.70 (m, 2H), 7.63 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.54 (m, 1H), 6.84 (t, J= 13.8 Hz, 1H), 6.16 (d, J= 16.5 Hz, 1H), 5.70 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 5.62 - 5.50 (m, 2H), 5.08 (d, J= 11.9 Hz, 1H), 4.94 - 4.75 (m, 1H), 4.35 (td, J= 12.1, 3.2 Hz, 1H), 4.34 - 4.15 (m, 2H), 3.94 - 3.80 (m, 1H), 3.65 (d, J= 5.0 Hz, 2H), 3.57 - 3.48 (m,6H), 3.28 (s, 4H), 3.19 - 2.93 (m, 4H), 2.93 - 2.62 (m, 5H), 2.40 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 2.20 - 2.04 (m, 2H), 1.86 - 1.57 (m,5H), 1.58 - 1.40 (m, 2H), 1.37 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 0.98 - 0.77 (m, 9H), 0.28 (s, 3H)。 實例 6. 合成 4- 丙烯醯基 - N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 氮雜環丁烷雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N - 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-氮雜環丁烷雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(中間體18) (100 mg，0.13 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中添加TFA (301 mg，2.64 mmol)。將混合物在0℃下攪拌4小時，接著減壓濃縮，得到呈固體狀之(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-氮雜環丁烷雜環十一蕃-5,7-二酮(80 mg，92%產率)。LCMS (ESI): C 34H 43F 3N 6O 4之m/z [M+H] +計算值656.3；實驗值657.5。
步驟 2.在0℃下，向(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-氮雜環丁烷雜環十一蕃-5,7-二酮(90 mg，0.14 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加DIPEA (106 mg，0.82 mmol)、(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸(76 mg，0.21 mmol)及COMU (88 mg，0.21 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之4-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-氮雜環丁烷雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺 (37 mg，27%產率)。LCMS (ESI): C 52H 70F 3N 9O 8之m/z [M+H] +計算值1005.5；實驗值1006.8； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.73 (dd, J= 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.71 -  7.69 (m, 2H), 7.58 - 7.46 (m, 2H), 7.10 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.86 - 6.71 (m, 1H), 6.11 (dd, J= 16.3, 9.7 Hz, 1H), 5.65 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 5.46 (dq, J= 17.2, 8.8 Hz, 1H), 5.29 - 5.15 (m, 2H), 4.87 - 4.74 (m, 1H), 4.23 (d, J= 12.3 Hz, 1H), 4.11 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.86 - 3.71 (m, 2H), 3.61 - 3.47 (m, 12H), 3.23 (m, 5H), 3.07 - 2.87 (m, 5H), 2.78 (s, 3H), 2.76 - 2.66 (m, 1H), 2.32 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.78 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 1.71 (d, J= 13.3 Hz, 1H), 1.58 (dd, J= 16.6, 6.9 Hz, 4H), 1.48 - 1.38 (m, 1H), 1.32 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.88 - 0.75 (m, 9H), 0.24 (s, 3H)。 實例 7. 合成 (2 R )-3- 丙烯醯基 - N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N ,2- 二甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺
步驟 1.向 N-(( R)-3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)- N-甲基-L-纈胺酸甲酯(430 mg，1.127 mmol，1.00當量)於THF (4 mL)及H 2O (4 mL)中之混合物中添加NaOH (225 mg，5.6 mmol)。在室溫下，將混合物在室溫下攪拌16小時，接著用1M HCl酸化至約pH 5且用EtOAc (4 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之 N-(( R)-3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)- N-甲基-L-纈胺酸(300 mg)。LCMS (ESI): C 18H 29N 3O 5之m/z [M+H] +計算值367.2；實驗值368.3。
步驟 2.在0℃下，向((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(1.0 g，1.4 mmol)於DCM (10 mL)中之混合物中添加HCl之1,4-二噁烷溶液(5 mL)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著減壓濃縮，得到呈固體狀之(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮HCl (1.0 g)。LCMS (ESI): C 36H 48N 6O 4之m/z [M+H] +計算值628.4；實驗值629.6。
步驟 3.在0℃下，向(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮HCl (460 mg，0.73 mmol)及 N-(( R)-3-丙烯醯基-2-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)- N-甲基-L-纈胺酸(269 mg，0.73 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物中添加DIPEA (2.84 g，22.0 mmol)及COMU (282 mg，0.66 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O且用EtOAc (5 × 10 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 6 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(2 R)-3-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N,2-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(50 mg，7%產率)。LCMS (ESI): C 54H 75N 9O 8之m/z [M+H] +計算值977.6；實驗值978.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.83-8.67 (m, 1H), 7.89 (dd, J= 18.7, 8.2 Hz, 2H), 7.62 - 7.33 (m, 4H), 6.57 (dd, J= 16.7, 10.3 Hz, 1H), 6.38 - 6.11 (m, 2H), 5.75 (d, J= 9.8 Hz, 2H), 5.61 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 5.35 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J= 12.7 Hz, 1H), 4.16 (q, J= 6.2 Hz, 1H), 4.04 (s, 2H), 3.92 - 3.68 (m, 4H), 3.63 (s, 2H), 3.18 (d, J= 61.5 Hz, 6H), 2.95 (d, J= 33.8 Hz, 5H), 2.78 (t, J= 11.8 Hz, 1H), 2.64 (d, J= 24.7 Hz, 7H), 2.42 - 1.83 (m, 7H), 1.89 - 1.45 (m, 7H), 1.40 (dd, J= 11.9, 5.7 Hz, 6H), 1.10 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 0.94 - 0.64 (m, 9H), 0.52 (s, 3H)。 實例 8. 合成 3- 丙烯醯基 - N -((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(3,1)- 吡咯啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N - 甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向((6 3 S,4 S)-12-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-吡咯啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(中間體17) (410 mg，0.53 mmol)於DCM (5 mL)中之混合物中添加TFA (1.7 mL，22.9 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌1小時，接著用飽和NaHCO 3鹼化至約pH 6且用EtOAc (6 × 3 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(5 × 3 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2 3 S,6 3S,4S)-4-胺基-12-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-吡咯啶雜環十一蕃-5,7-二酮(390 mg)。LCMS (ESI): C 35H 45F 3N 6O 4之m/z [M+H] +計算值670.4；實驗值671.7。
步驟 2.在N 2氛圍下，在0℃下向(2 3 S,6 3 S,4 S)-4-胺基-12-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-吡咯啶雜環十一蕃-5,7-二酮(270 mg，0.4 mmol)及DIPEA (2.1 g，16.1 mmol)於DCM (3 mL)中之混合物中添加(2 S)-3-甲基-2-[甲基(3-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)胺基]丁酸(142 mg，0.4 mmol)及CIP (227 mg，0.81 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌30分鐘，接著添加H 2O且用EtOAc (4 × 30 mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(5 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘餘物，得到呈固體狀之3-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((2 3 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(3,1)-吡咯啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(45 mg，10%產率)。LCMS (ESI): C 52H 70F 3N 9O 8之m/z [M+H] +計算值1005.5；實驗值1006.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.76 (dd, J= 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.60 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.13 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.54 (dd, J= 16.8, 10.3 Hz, 1H), 6.24 - 6.14 (m, 1H), 5.74 (td, J= 10.2, 2.3 Hz, 1H), 5.58 (q, J= 6.9 Hz, 1H), 5.46 (dt, J= 17.2, 8.7 Hz, 1H), 5.13 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 5.01 (s, 1H), 4.81 (dt, J= 18.2, 9.0 Hz, 1H), 4.31 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 4.20 (q, J= 6.0 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.80 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 3.60 - 3.55 (m, 1H), 3.45 (s, 1H), 3.12 (dt, J= 17.2, 9.6 Hz, 3H), 2.76 (d, J= 13.0 Hz, 5H), 2.61 (q, J= 7.8, 6.9 Hz, 2H), 2.42 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 2.29 - 1.87 (m, 4H), 1.80 (t, J= 12.5 Hz, 3H), 1.65 (dt, J= 22.2, 8.9 Hz, 3H), 1.58 - 1.48 (m, 2H), 1.38 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.98 - 0.83 (m, 6H), 0.81 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.26 (s, 3H)。 實例 9. 合成 4- 丙烯醯基 - N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 )-5-(( R )- 八氫 -2 H - 吡啶并 [1,2- a ] 吡嗪 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1 H -8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(1,3)- 苯并雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N - 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(中間體19) (230 mg，0.27 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中逐滴添加TFA (1 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著在0℃下用飽和NaHCO 3鹼化至約pH 8且用EtOAc (3 × 30mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(6 3 S,4 S)-4-胺基-11-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-5,7-二酮(300 mg)，將其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 45H 59N 7O 4之m/z [M+H] +計算值761.5；實驗值762.8。
步驟 2.在Ar氛圍下，在0℃下向(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-5,7-二酮(300 mg，0.39 mmol)及(2 S)-2-[4-(第三丁氧基羰基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基(甲基)胺基]-3-甲基丁酸(211 mg，0.51 mmol)於DMF (3 mL)中之混合物中逐滴添加於DMF (0.1 mL)中之DIPEA (1.53 g，11.8 mmol)及COMU (168 mg，0.39 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加冰/H 2O (3 mL)且用EtOAc (3 × 30mL)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且將殘餘物純化，得到呈固體狀之9-(((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(200 mg，59%產率)。LCMS (ESI): C 65H 92N 10O 9之m/z [M+H] +計算值1156.7；實驗值1158.2。
步驟 3. 將9-(((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸第三丁酯(200 mg，0.17 mmol)及ZnBr 2(195 mg，0.87 mmol)於DCM (4 mL)中之混合物加熱至35℃且攪拌隔夜。添加冰/H 2O (5 mL)且在0℃下用飽和NaHCO 3將混合物鹼化至約pH 8，接著用EtOAc (3 × 30mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之 N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(200 mg)。LCMS (ESI): C 60H 84N 10O 7之m/z [M+H] +計算值1056.7；實驗值1058.1。
步驟 4. 在Ar氛圍下，在0℃下向 N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(200 mg，0.19 mmol)及TEA (57 mg，0.57 mmol)於DCM (2 mL)中之混合物中逐滴添加丙烯醯氯(12 mg，0.13 mmol)。將混合物在0℃下再攪拌1小時，接著減壓濃縮且藉由製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之4-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)-5-(( R)-八氫-2 H-吡啶并[1,2- a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(1,3)-苯并雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(40 mg，19%產率)。LCMS (ESI): C 63H 86N 10O 8之m/z [M+H] +計算值1110.7；實驗值1112.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.46 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.17 - 8.05 (m, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.74 - 7.54 (m, 3H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 7.01 - 6.81 (m,2H), 6.28 - 6.11 (m, 1H), 5.73 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 5.43 (d, J= 9.4 Hz, 2H), 4.40 - 4.17 (m, 2H), 4.10 (dq, J= 21.9, 7.1, 6.5 Hz, 2H), 3.95 (t, J= 12.0 Hz, 1H), 3.77 (dt, J= 25.3, 13.0 Hz, 3H), 3.69 - 3.64 (m, 3H), 3.64 - 3.55 (m, 3H), 3.54 - 3.48 (m, 2H), 3.15 (d, J= 11.7 Hz, 2H), 3.07 (s, 3H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.79 (m, 4H), 2.66 (s, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.42 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 2.23 (td, J= 11.6, 3.2 Hz, 1H), 2.07 - 1.89 (m, 4H), 1.82 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 1.77 - 1.63 (m, 4H), 1.59 (d, J= 12.6 Hz, 3H), 1.47 (d, J= 13.1 Hz, 2H), 1.36 (d, J= 6.1 Hz, 3H), 1.19 (m, 3H), 1.00 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 0.90 - 0.70 (m, 9H), 0.57 (s, 3H)。 實例 10. 合成 (3 S)-1- 丙烯醯基 - N-((2 S)-1-(((6 3 S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -2 1,2 1- 二氧離子基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1H-8- 氧雜 -2(4,2)- 硫代嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N- 甲基吡咯啶 -3- 甲醯胺
步驟 1.向2-(羥基甲基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(17.8 g，60 mmol)於DCM (200 mL)中之混合物中添加戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane) (56.6 g，130 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌2小時，接著過濾且減壓濃縮濾液，得到呈漿液狀之2-甲醯基硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(30 g)，將其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 6H 9NO 5S之m/z [M- t Bu+H] +計算值207.2；實驗值208.0； 1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 9.88 (s, 1H), 4.17 (d, J= 39.4, 33.7 Hz, 4H), 3.15 (d, J= 34.2 Hz, 3H), 1.48 (s, 10H)。
步驟 2.在0℃下，向2-甲醯基硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(58 g，60 mmol)於ACN (400 mL)中之混合物中添加1,1,3,3-四甲基胍(30.5 g，200 mmol)及2-{[(苯甲氧基)羰基]胺基}-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(43.8 g，130 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時，接著減壓濃縮。將殘餘物用EtOAc (200 mL)稀釋且用H 2O (150 mL × 3)洗滌，接著乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈漿液狀之2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(8 g，經2個步驟25%產率)。LCMS (ESI): C 21H 28N 2NaO 8S之m/z [M+Na] +計算值491.2；實驗值491.2。
步驟 3. 在H 2氛圍下，在室溫下將2-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙-1-烯-1-基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯(8 g，17.0 mmol)、10% Pd/C (4 g)及NH 4Cl (9.1 g，170 mmol)於MeOH (200 mL)中之混合物攪拌48小時。將混合物過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之2-(2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(6.3 g)，將其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 13H 24N 2O 6S之m/z [M+H] +計算值336.1；實驗值337.1。
步驟 4.在0℃下，向2-(2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(6.3 g，10 mmol)及(2 S)-2-({3-[(甲醯氧基)甲基]苯基}(甲基)胺基)-3-甲基丁酸(5 g，10 mmol)於無水DMF (20 mL)中之混合物中添加DIPEA (49.2 g，30 mmol)及HATU (7.2 g，10 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用EtOAc (100 mL)稀釋且用H 2O (50 mL × 3)洗滌。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之2-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(5 g，經2個步驟57%產率)。LCMS (ESI): C 27H 41N 3O 9S之m/z [M+H] +計算值583.3；實驗值584.3。
步驟 5.在0℃下，向2-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-甲氧基-3-側氧基丙基)硫代嗎啉-4-甲酸第三丁酯1,1-二氧化物(12 g，20 mmol)於DCM (80 mL)中之混合物中添加TFA (20 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌1.5小時，接著減壓濃縮。將殘餘物用EtOAc (50 mL)稀釋且用飽和Na 2CO 3調至約pH 9。減壓濃縮有機層，得到呈漿液狀之2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸甲酯(9.1 g，產率94%)，將其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 22H 33N 3O 7S之m/z [M+H] +計算值483.2；實驗值484.2。
步驟 6.在室溫下，向2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸甲酯(5.9 g，12 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物中添加(3-{3-[(第三丁基二甲基矽基)氧基]-2,2-二甲基丙基}-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基)硼烷二醇(6.4 g，12 mmol)、Cu(OAc) 2(2.2 g，12 mmol)及吡啶(2.8 g，36 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌48小時，接著過濾混合物，將濾液用EtOAc (30 mL)稀釋且用H 2O (80 mL × 3)洗滌。減壓濃縮有機層且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸甲酯(7.59 g，66%產率)。LCMS (ESI): C 51H 75N 5O 9SSi之m/z [M+H] +計算值961.5；實驗值962.3。
步驟 7.在0℃下，向2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸甲酯(7.59 g，7.9 mmol)於THF (40 mL)中之混合物中添加於H 2O (8 mL)中之LiOH (0.38 g，16 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1.5小時，接著用3M HCl (5 mL)將pH調至約pH 7，將混合物用鹽水(15 mL)稀釋且用EtOAc (50 mL × 3)萃取。將合併之有機層減壓濃縮，得到呈漿液狀之2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸(7.4 g，98%產率)。LCMS (ESI): C 50H 73N 5O 9SSi之m/z [M+H] +計算值947.5；實驗值948.4。
步驟 8.在0℃下，向2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙酸(7.4 g，7.8 mmol)於DMF (50 mL)中之混合物中添加(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯二鹽酸鹽(2.6 g，12 mmol)、DIPEA (20 g，160 mmol)及HATU (4.6 g，12 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2小時，接著用EtOAc (300 mL)稀釋且用H 2O (100 mL × 2)洗滌。將合併之有機層減壓濃縮且藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈漿液狀之(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(8.08 g，96%產率)。LCMS (ESI): C 56H 83N 7O 10SSi之m/z [M+H] +計算值1073.6；實驗值1074.5。
步驟 9.向1M TBAF之THF溶液(38 mL，38 mmol)及AcOH (2.3 g，38 mmol)之混合物中添加(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-3-(3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-2,2-二甲基丙基)-1-乙基-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(8.08 g，7.5 mmol)。將混合物加熱至55℃且攪拌16小時，接著用EtOAc (200 mL)稀釋且用H 2O (150 mL × 2)洗滌。將合併之有機層減壓濃縮，得到呈漿液狀之(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(7.2 g，99%產率)。LCMS (ESI): C 50H 69N 7O 10S之m/z [M+H] +計算值959.5；實驗值960.3。
步驟 10.向(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸甲酯(7.2 g，7.5 mol)於DCE (30 mL)中之混合物中添加Me 3SnOH (6.7 g，38 mmol)。將混合物加熱至65℃且攪拌16小時，接著過濾且減壓濃縮濾液，得到呈油狀之(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(13 g)。LCMS (ESI): C 49H 67N 7O 10S之m/z [M+H] +計算值945.5；實驗值946.4。
步驟 11.在0℃下，向(3 S)-1-(2-(( S)-2-(((苯甲氧基)羰基)(甲基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-3-(4-(( R)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-1 H-吲哚-5-基)-1,1-二氧離子基硫代嗎啉-2-基)丙醯基)六氫嗒嗪-3-甲酸(13 g，7.4 mmol；約55%純度)於DCM (400 mL)中之混合物中添加DIPEA (38 g，300 mmol)、HOBT (10 g，74 mmol)及EDCI (42 g，220 mmol)。將混合物升溫至室溫且攪拌48小時，接著減壓濃縮，將殘餘物用EtOAc (200 mL)稀釋且用H 2O (100 mL × 2)洗滌。減壓濃縮有機層且藉由矽膠層析法純化殘餘物，得到((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺基甲酸苯甲酯[四種異構物；異構物1及異構物2之混合物，1.6 g；異構物3 (651 mg，9.5%產率)；異構物4 (332 mg，4.8%產率)]。將異構物1及異構物2之混合物進一步藉由製備型HPLC純化，得到異構物1 (470 mg，6.8%產率)及異構物2 (797 mg，12%產率)。
異構物1之資料：LCMS (ESI): C 49H 65N 7O 9S之m/z [M+H] +計算值927.5；實驗值928.4； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.74 (dd, J= 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.36 - 8.13 (m, 1H), 7.91 (dd, J= 7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.52 (dd, J= 7.8, 4.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.25 (m, 6H), 7.21 - 7.07 (m, J= 8.8 Hz, 1H), 5.59 - 5.40 (m, 2H), 5.28 - 5.05 (m, 2H), 4.45 (d, 1H), 4.17 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 4.13 - 3.97 (m, 2H), 3.97 - 3.62 (m, 6H), 3.50 - 3.34 (m, 2H), 3.27 - 3.04 (m, 4H), 3.01 - 2.83 (m, 4H), 2.78 (s, 2H), 2.64 - 2.32 (m, 2H), 2.24 - 1.90 (m, 5H), 1.84 - 1.65 (m, 2H), 1.46 (dd, J= 16.6, 6.6 Hz, 3H), 1.36 - 1.17 (m, 4H), 1.02 (s, 2H), 0.94 - 0.70 (m, 6H), 0.58 (s, 3H)。
異構物2之資料：LCMS (ESI): C 49H 65N 7O 9S之m/z [M+H] +計算值927.5；實驗值928.4； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.71 (dd, J= 4.8, 1.6 Hz, 1H), 8.18 - 8.01 (m, 1H), 7.83 (dd, J= 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.52 (dd, J= 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.23 (m, 6H), 7.20 (s, 1H), 7.06 (dd, J= 8.9, 2.1 Hz, 1H), 5.66 - 5.50 (m, 1H), 5.29 - 5.05 (m, 2H), 4.36 - 4.18 (m, 3H), 4.17 - 4.09 (m, 2H), 4.05 - 3.86 (m , 5H), 3.75 (d, J= 16.6 Hz, 1H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.27 (s, 1H), 3.21 - 3.06 (m, 4H), 3.03 - 2.91 (m, 1H), 2.88 (s, 3H), 2.81 - 2.63 (m, 2H), 2.47 - 2.35 (m, 1H), 2.34 - 2.09 (m, 3H), 2.00 - 1.93 (m, 1H), 1.86 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 1.79 - 1.63 (m, 2H), 1.43 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.28 (s, 1H), 1.01 (d, J= 5.7 Hz, 3H), 0.91 – 0.77 (m, 10H), 0.57 (s, 3H)。
異構物3之資料：LCMS (ESI): C 49H 65N 7O 9S之m/z [M+H] +計算值927.5；實驗值928.4； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.79 - 8.66 (m, 1H), 8.17 - 8.04 (m, 1H), 7.88 (dd, J= 19.8, 5.4 Hz, 1H), 7.52 (dd, J= 7.7, 4.8 Hz, 1H), 7.45 - 7.16 (m, 7H), 7.15 - 6.98 (m, 1H), 5.50 - 5.38 (m, 1H), 5.16 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 4.32 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 2H), 4.00 - 3.72 (m, 5H), 3.62 (dd, J= 30.7, 6.5 Hz, 2H), 3.28 - 3.14 (m, 2H), 3.11 - 2.92 (m, 5H), 2.88 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 2.74 - 2.54 (m, 1H), 2.52 - 2.12 (m, 4H), 1.94 - 1.65 (m, 2H), 1.61 - 1.47 (m, 1H), 1.43 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 1.38 - 1.25 (m, 2H), 1.18 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 0.98 - 0.73 (m, 9H), 0.68 (s, 3H)。
異構物4之資料：LCMS (ESI): C 49H 65N 7O 9S之m/z [M+H] +計算值927.5；實驗值928.4； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.79 - 8.61 (m, 1H), 8.21 (d, J= 47.9 Hz, 1H), 7.92 (dd, J= 7.7, 1.6 Hz, 1H), 7.64 - 7.46 (m, 2H), 7.44 - 7.20 (m, 5H), 7.07 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 5.84 - 5.45 (m, 1H), 5.26 - 5.02 (m, 2H), 4.42 - 3.38 (m, 11H), 3.27 - 3.06 (m, 4H), 3.05 - 2.94 (m, 3H), 2.93 - 2.70 (m, 4H), 2.53 (t, 1H), 2.27 - 2.09 (m, 2H), 2.01 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 1.87 - 1.54 (m, 3H), 1.52 - 1.26 (m, 3H), 1.26 - 0.98 (m, 4H), 0.97 - 0.40 (m, 12H)。
步驟 12 .在15℃下，將((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺基甲酸苯甲酯(異構物1；380 mg，0.41 mmol)、含50 wt% Pd/C之H 2O (100 mg)及NH 4Cl (220 mg，4.1 mmol)於MeOH (10 mL)中之混合物攪拌10小時。過濾混合物，減壓濃縮濾液，將殘餘物用飽和NaHCO 3(20 mL)稀釋且用DCM (20 mL × 5)萃取。將合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(2S)-N-((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)-3-甲基-2-(甲基胺基)丁醯胺(300 mg，92%產率)，且不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 41H 59N 7O 7S之m/z [M+H] +計算值793.4；實驗值794.4。
使用異構物2、3及4作為起始物質進行類似反應，得到各別產物。
異構物2之資料：以(170 mg，0.18 mmol)起始，得到(140 mg，98%產率)。LCMS (ESI): C 41H 59N 7O 7S之m/z [M+H] +計算值793.4；實驗值794.4。
異構物3之資料：以(390 mg，0.42 mmol)起始，得到(300 mg，90%產率)。LCMS (ESI): C 41H 59N 7O 7S之m/z [M+H] +計算值793.4；實驗值794.3。
異構物4之資料：以(240 mg，0.26 mmol)起始，得到(200 mg，96%產率)。LCMS (ESI): C 41H 59N 7O 7S之m/z [M+H] +計算值793.4；實驗值794.3。
步驟 13.在0℃下，向(2S)-N-((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)-3-甲基-2-(甲基胺基)丁醯胺(異構物1；120 mg，0.15 mmol)及(3 S)-1-{3-[(甲醯氧基)甲基]苯基}吡咯啶-3-甲酸(56 mg，0.23 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物中添加DIPEA (390 mg，3 mmol)及HATU (87 mg，0.23 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用EtOAc (20 mL)稀釋且用H 2O (20 mL × 2)洗滌。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由矽膠層析法純化殘餘物，得到呈固體狀之(3S)-3-(((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(111 mg，72%產率)。LCMS (ESI): C 54H 72N 8O 10S之m/z [M+H] +計算值1024.5；實驗值1025.3。
使用異構物2、3及4作為起始物質進行類似反應，得到各別產物。
異構物2之資料：以(150 mg，0.19 mmol)起始，得到(120 mg，62%產率)。LCMS (ESI): C 54H 72N 8O 10S之m/z [M+H] +計算值1024.5；實驗值1025.4。
異構物3之資料：以(300 mg，0.38 mmol)起始，得到(300 mg，77%產率)。LCMS (ESI): C 54H 72N 8O 10S之m/z [M+H] +計算值1024.5；實驗值1025.5。
異構物4之資料：以(199 mg，0.25 mmol)起始，得到(220 mg，85%產率)。LCMS (ESI): C 54H 72N 8O 10S之m/z [M+H] +計算值1024.5；實驗值1025.4。
步驟 14.在15℃下，將(3S)-3-(((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(異構物1；111 mg，0.11 mmol)、含50 wt.% Pd/C之H 2O (30 mg)及NH 4Cl (60 mg，1.1 mmol)於MeOH (20 mL)中之混合物攪拌10小時。過濾混合物，減壓濃縮濾液，且將殘餘物用DCM (20 mL)稀釋且用飽和NaHCO 3洗滌。將有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮濾液，得到呈固體狀之(3S)-N-((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基吡咯啶-3-甲醯胺(77 mg，79%產率)，將其不經進一步純化即用於下一步驟中。LCMS (ESI): C 46H 66N 8O 8S之m/z [M+H] +計算值890.5；實驗值891.4。
使用異構物2、3及4作為起始物質進行類似反應，得到各別產物。
異構物2之資料：以(120 mg，0.12 mmol)起始，得到(85 mg，89%產率)。LCMS (ESI): C 46H 66N 8O 8S之m/z [M+H] +計算值890.5；實驗值891.4。
異構物3之資料：以(300 mg，0.34 mmol)起始，得到(220 mg，73%產率)。LCMS (ESI): C 46H 66N 8O 8S之m/z [M+H] +計算值890.5；實驗值891.5。
異構物4之資料：以(220 mg，0.21 mmol)起始，得到(147 mg，71%產率)。LCMS (ESI): C 46H 66N 8O 8S之m/z [M+H] +計算值890.5；實驗值891.4。
步驟 15.在0℃下，向(3S)-N-((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基吡咯啶-3-甲醯胺(異構物1；77 mg，0.086 mmol)於DCM (2mL)中之混合物中添加飽和NaHCO 3(2 mL)及於DCM (1 mL)中之丙-2-烯醯氯(7 mg，0.077 mmol)。將混合物在0℃下攪拌30分鐘，接著添加H 2O且用DCM (10mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層經Na2SO4乾燥，過濾，減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化殘餘物，得到呈固體狀之(3S)-1-丙烯醯基-N-((2S)-1-(((6 3S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 1-二氧離子基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-硫代嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基吡咯啶-3-甲醯胺(23 mg，28%產率)。LCMS (ESI): C 49H 68N 8O 9S之m/z [M+H] +計算值944.5；實驗值945.4； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.75 - 8.74 (m, 1H), 7.92 - 7.90 (m, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 1H), 7.43 (dd, J= 8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 1H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 6.32 - 6.25 (m, 1H), 5.77 (dd, J= 10.5, 1.9 Hz, 1H), 5.53 - 5.48 (m, 1H), 4.62 (dd, J= 24.9, 11.1 Hz, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.13 - 4.03 (m, 3H), 3.89 - 3.76 (m, 6H), 3.69 - 3.63 (m, 2H), 3.60 - 3.35 (m, 3H), 3.25 - 3.21 (m, 3H), 3.13 - 3.11 (m, 1H), 3.00 (d, J= 2.3 Hz, 5H), 2.90 (d, J= 3.5 Hz, 2H), 2.25 - 2.20 (m, 2H), 2.16 - 2.09 (m, 3H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.80 - 1.72 (m, 2H), 1.46 - 1.43 (m, 3H), 1.29 (m, 3H), 1.26 - 1.22(m, 3H), 1.01 - 0.98 (m, 3H), 0.95 - 0.88(m, 3 H), 0.84 - 0.81(m, 3H), 0.62 - 0.59 (m, 2H)。
使用異構物2、3及4作為起始物質進行類似反應，得到各別產物。
異構物2之資料：以(110 mg，0.12 mmol)起始，得到(24.5 mg，21%產率)。LCMS (ESI): C 49H 68N 8O 9S之m/z [M+H] +計算值944.5；實驗值945.3； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.71 (dd, J= 4.8, 1.7 Hz, 1H), 7.91 - 7.78 (m, 1H), 7.52 (dd, J= 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 1H), 7.25 - 7.03 (m, 2H), 6.65 - 6.56 (m, 1H), 6.30 - 6.22 (m, 1H), 5.76-5.70 (m, 1H), 5.67 - 5.48 (m, 1H), 5.27 (dd, J= 11.7, 8.2 Hz, 1H), 4.69 (dd, J= 10.9, 3.3 Hz, 1H), 4.37 - 4.28 (m, 1H), 4.26 - 4.18 (m, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 3H), 3.97 - 3.83 (m, 4H), 3.82 - 3.62 (m, 4H), 3.60 - 3.41 (m, 3H), 3.28 - 3.20 (m, 2H), 3.14 (d, J= 10.4 Hz, 3H), 3.06 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 2.96 (s, 1H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.73 - 2.55 (m, 1H), 2.48 - 2.34 (m, 1H), 2.33 - 2.18 (m, 3H), 2.13 - 1.95 (m, 2H), 1.90 - 1.84 (m, 1H), 1.80 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (m, 3H), 1.27 (s, 1H), 1.14 - 0.95 (m, 4H), 0.94 - 0.85 (m, 4H), 0.82 (d, J= 6.2 Hz, 5H), 0.56 (d, J= 8.7 Hz, 3H)。
異構物3之資料：以(120 mg，0.13 mmol)起始，得到(32 mg，11%產率)。LCMS (ESI): C 49H 68N 8O 9S之m/z [M+H] +計算值944.5；實驗值945.5； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.73 (dt, J= 3.8, 1.9 Hz, 1H), 7.93 - 7.86 (m, 1H), 7.53 (dd, J= 7.7, 4.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J= 8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.13 - 6.99 (m, 1H), 6.65 (ddd, J= 35.6, 16.8, 10.5 Hz, 1H), 6.28 (ddd, J= 16.8, 4.9, 1.9 Hz, 1H), 5.75 (td, J= 10.4, 1.9 Hz, 1H), 5.53 - 5.34 (m, 1H), 4.63 (dd, J= 13.4, 11.3 Hz, 1H), 4.26 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 4.12 - 4.01 (m, 2H), 4.00 - 3.82 (m, 5H), 3.82 - 3.45 (m, 7H), 3.41 - 3.33 (m, 1H), 3.14 - 3.02 (m, 4H), 3.02 - 2.87 (m, 5H), 2.62 - 2.34 (m, 3H), 2.33 - 2.17 (m, 3H), 2.10 - 1.94 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.46 - 1.39 (m, 3H), 1.27 (s, 2H), 1.23 - 1.16 (m, 3H), 1.16 - 1.01 (m, 2H), 0.96 - 0.90 (m, 3H), 0.88 - 0.74 (m, 6H), 0.73 - 0.63 (m, 3H)。
異構物4之資料：以(147 mg，0.16 mmol)起始，得到(47.2 mg，31%產率)。LCMS (ESI): C 49H 68N 8O 9S之m/z [M+H] +計算值944.5；實驗值945.3； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.73 - 8.72 (m, 1H), 7.92 (dd, J= 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.53 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.46 (m, 1H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 7.07 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.65 - 6.56 (m, 1H), 6.28 - 6.23 (m, 1H), 5.76 - 5.71 (m, 2H), 4.59 - 4.55 (m, 1H), 4.34 - 4.30 (m, 1H), 4.13 - 4.03 (m, 4H), 3.88 - 3.72 (m, 6H), 3.68 - 3.48 (m, 5H), 3.30 - 3.20 (m, 4H), 3.08 - 3.07 (m, 3H), 3.02 (d, J= 4.1 Hz, 4H), 2.55 - 2.53 (m, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 3H), 2.11 - 2.00 (m, 3H), 1.90 - 1.88 (m, 1H), 1.76 - 1.74  (m, 2H), 1.44 (d, J= 6.3 Hz, 3H), 1.29 (s, 1H), 1.23 - 1.20 (m, 3H), 0.91 - 0.86 (m, 3H), 0.78 - 0.75 (m, 5H), 0.69 - 0.66 (m, 3H)。 實例 11. 合成 3- 丙烯醯基 - N-((2 S)-1-(((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1H-8- 氧雜 -2(4,2)- 嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N,1- 二甲基 -1,3,8- 三氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向(2 2S,6 3S,4S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(150 mg，0.24 mmol)及(2 S)-3-甲基-2-{甲基[1-甲基-3-(丙-2-烯醯基)-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸-8-基]羰基胺基}丁酸鋰鹽(132 mg，0.36 mmol)於DMF (5 mL)中之混合物中添加HATU (108 mg，0.28 mmol)及DIPEA (459 mg，3.5 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用EtOAc (30 mL)稀釋，用H 2O (10 mL × 2)及鹽水(10 mL)洗滌。將有機層經Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法及製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之3-丙烯醯基-N-((2S)-1-(((2 2S,6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,1-二甲基-1,3,8-三氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(6.9 mg，3%產率)。LCMS (ESI): C 53H 76N 10O 8之m/z [M+H] +計算值980.6；實驗值367.2； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.71 (dd, J= 4.8, 1.6 Hz, 1H), 7.86 (dd, J= 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.51 (dd, J= 7.8, 4.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 2H), 6.67 - 6.44 (m, 1H), 6.31 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 5.65 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 4.51 - 4.13 (m, 2H), 4.33 (s, 1H), 4.27 - 4.18 (m, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 1H), 3.96 - 3.87 (m, 3H), 3.87 - 3.77 (m, 3H), 3.76 - 3.65 (m, 4H), 3.64 - 3.51 (m, 3H), 3.28 - 3.24 (m, 1H), 3.16 (s, 3H), 3.10 - 3.02 (m, 1H), 2.99 - 2.90 (m, 2H), 2.87 - 2.74 (m, 5H), 2.70 - 2.53 (m, 2H), 2.40 - 2.30 (m, 3H), 2.27 - 2.18 (m, 1H), 2.14 - 2.05 (m, 2H), 1.98 - 1.88 (m, 3H), 1.79 - 1.68 (m, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 3H), 1.44 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.04 (t, J= 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.80 - 0.60 (m, 6H)。 實例 12. 合成 2- 丙烯醯基 - N -((2 S )-1-(((6 3 S ,4 S )-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S )-1- 甲氧基乙基 )-5-(( R )- 八氫 -2H- 吡啶并 [1,2-a] 吡嗪 -2- 基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N- 甲基 -2,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向(6 3S,4S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(150 mg，0.23 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加(2 S)-2-({2-[(第三丁氧基)羰基]-2,8-二氮雜螺[4.5]癸-8-基}羰基(甲基)胺基)-3-甲基丁酸(125 mg，0.30 mmol)、DIPEA (310 mg，2.34 mmol)及HATU (134 mg，0.35 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著H 2O (150 mL)且用EtOAc (150 mL × 2)萃取。將合併之有機層用H 2O (50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之8-(((2S)-1-(((6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯(130 mg，40%產率)。LCMS (ESI): C 64H 95N 11O 8之m/z [M+H] +計算值1145.7；實驗值1146.7。
步驟 2.在0℃下，向8-(((2S)-1-(((6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)(甲基)胺甲醯基)-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-2-甲酸第三丁酯(130 mg，0.12 mmol)於DCM (1.0 mL)中之混合物中添加TFA (0.5 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著用DCM (5 mL)稀釋且添加飽和NaHCO 3以將pH值調至約9。在0℃下，添加於DCM中之丙-2-烯醯氯(10 mg，0.11 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌15分鐘。將混合物倒入H 2O (50 mL)中且用DCM (150 mL × 2)萃取。將合併之有機層用H 2O (50 mL)、鹽水(50 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型TLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之2-丙烯醯基-N-((2S)-1-(((6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)-5-((R)-八氫-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基-2,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺。LCMS (ESI): C 62H 89N 11O 7之m/z [M+H] +計算值1099.7；實驗值1100.6； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.45 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.65 (m, 1H), 6.41 - 6.21 (m, 2H), 5.93 (dd, J= 7.6, 3.8 Hz, 1H), 5.81 - 5.75 (m, 1H), 4.50 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 3H), 3.98 - 3.71 (m, 8H), 3.63 - 3.48 (m, 2H), 3.46 - 3.36 (m, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 3H), 3.12 - 2.97 (m, 6H), 2.93 - 2.76 (m, 6H), 2.64 (t, J= 11.2 Hz, 2H), 2.55 (d, J= 11.6 Hz, 9H), 2.45 - 2.12 (m, 4H), 1.99 - 1.83 (m, 2H), 1.80 - 1.55 (m, 10H), 1.48 - 1.29 (m, 6H), 1.22 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 0.93 (dd, J= 22.8, 6.4 Hz, 9H), 0.72 (s, 3H)。 實例 13. 合成 3- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((2 2S,6 3S,4S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-((S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1H-8- 氧雜 -2(4,2)- 嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N- 甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺
步驟 1.向(2 2S,6 3S,4S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮(450 mg，0.7 mmol)中之混合物。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (20 mL)且用EtOAc (30 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由矽膠管柱層析法及製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之3-丙烯醯基-N-((2S)-1-(((2 2S,6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺 (297 mg，40%產率)。LCMS (ESI): C 52H 73N 9O 9之m/z [M+H] +計算值967.6；實驗值968.6； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.72 - 8.69 (m, 1H), 8.10 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.80 (m, 1H), 7.56 - 7.47 (m, 1H), 7.45 - 7.35 (m, 1H), 7.17 - 7.01 (m, 2H), 6.62 - 6.45 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.85 - 5.71 (m, 1H), 5.64 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.19 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.46 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 2H), 3.99 - 3.61 (m, 8H), 3.61 - 3.33 (m, 6H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 2.99 - 2.71 (m, 6H), 2.68 - 2.46 (m, 2H), 2.30 - 2.17 (m, 1H), 2.12 - 2.02 (m, 2H), 1.96 - 1.54 (m, 8H), 1.43 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 1.15 - 0.97 (m, 3H), 0.96 - 0.79 (m, 6H), 0.77 - 0.53 (m, 6H)。 實例 14. 合成 4- 丙烯醯基 -N-((2S)-1-(((6 3S,4S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-((S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N- 甲基 -1- 丙基 -1,4,9- 三氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺
步驟 1.在0℃下，向(6 3S,4S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(113 mg，0.18 mmol)及(2 S)-3-甲基-2-{甲基[4-(丙-2-烯醯基)-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基]羰基胺基}丁酸鋰鹽(88 mg，0.22 mmol)於DMF (2 mL)中之混合物中添加DIPEA (464 mg，3.6 mmol)及HATU (82 mg，0.23 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1小時，接著添加H 2O (20 mL)且用DCM (20 mL × 3)萃取混合物。將合併之有機層用鹽水(20 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化粗殘餘物，得到呈固體狀之4-丙烯醯基-N-((2S)-1-(((6 3S,4S)-1 1-乙基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基-1-丙基-1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺 (26 mg，14%產率)。LCMS (ESI): C 57H 82N 10O 7之m/z [M+H] +計算值1018.6；實驗值1019.6； 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.73 (dd, J= 8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.90 (dd, J= 8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.54 - 7.51 (m, 3H), 7.41 - 7.38 (m, 1H), 6.90 - 6.74 (m, 1H), 6.30 - 6.18 (m, 2H), 5.91 - 5.88 (m, 1H), 5.80 - 5.75 (m, 1H), 4.59 - 4.46 (m, 1H), 4.10 - 3.47 (m, 15H), 3.19 - 2.72 (m, 17H), 2.42 - 2.15 (m, 8H), 2.08 - 1.63 (m, 7H), 1.48 - 1.44 (m, 6H), 1.16 (t, J=  6.4 Hz, 3H), 0.93 - 0.86 (m, 9H), 0.66 (s, 3H)。 實例 15. 合成 4- 丙烯醯基 -N-(( 2S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -2 4- 氟 -1 2-(2-( (S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N- 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺 (A335)
步驟 1.在室溫下向100 mL圓底燒瓶中添加3-溴-4-氟吡啶(9 g，1當量)、100 mL ACN及BnBr (10.0 g，1.2當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在70℃下攪拌4小時。用丙酮(3 × 5 mL)洗滌殘餘物，得到呈白色固體狀之1-苄基-3-溴-4-氟-吡啶(13 g，85%產率)。ESI-MS m/z =266.0, 268.0 [M] +；MW計算值：266.0。
步驟 2.在0℃下向500 mL圓底燒瓶中添加1-苄基-3-溴-4-氟-吡啶(13 g，48.7mmol，1.0當量)、EtOH (200 mL)及NaBH 4(7.36 g，194.668 mmol，4當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌4小時。在0℃下用水/冰淬滅反應。減壓濃縮所得混合物且用EtOAc (3 × 30 mL)萃取殘留殘餘物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈油狀之1-苄基-3-溴-4-氟-5,6-二氫-2 H-吡啶(8 g，61%產率)。ESI-MS m/z =270.1, 272.1[M+H] +；MW計算值：269.0。
步驟 3.在0℃下向100 mL圓底燒瓶中添加1-苄基-3-溴-4-氟-5,6-二氫-2 H-吡啶(3000 mg，11.1 mmol，1.0當量)及氯甲酸氯乙酯(3175.2 mg，22.2 mmol，2當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在80℃下攪拌隔夜。減壓濃縮所得混合物。接著在室溫下添加CH 3OH (27.3 mL，673.6 mmol，60.7當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在60℃下攪拌5小時。用HCl (二噁烷)將混合物酸化至pH 2。藉由過濾收集沈澱之固體且用乙腈(3 × 5 mL)洗滌，得到呈灰白色固體狀之3-溴-4-氟-1,2,5,6-四氫吡啶(750 mg，37%產率)。ESI-MS m/z =180.1, 182.1 [M+H] +；MW計算值：179.0。
步驟 4.在室溫下向40 mL小瓶中添加3-溴-4-氟-1,2,5,6-四氫吡啶(500 mg，2.8 mmol，1.0當量)、N-[(3 S)-2-側氧基氧雜環丁烷-3-基]胺基甲酸第三丁酯(779.89 mg，4.165 mmol，1.5當量)、ACN (5 mL)、Cs 2CO 3(2262.4 mg，6.9 mmol，2.5當量)、H 2O (5 mL)。在空氣氛圍下將所得混合物在40℃下攪拌2小時。減壓濃縮所得混合物。藉由逆相急驟利用以下條件純化粗產物，得到呈油狀之( 2S)-3-(3-溴-4-氟-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(900 mg，44%產率)。ESI-MS m/z =367.0, 369.0 [M+H] +；MW計算值：366.1。
步驟 5.在0℃下向100 mL圓底燒瓶中添加( 2S)-3-(3-溴-4-氟-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(900 mg，2.5 mmol，1.0當量)、(3 S)-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(424 mg，2.9 mmol，1.2當量)、DCM (20 mL)、DIEA (3167.6 mg，24.5 mmol，10當量)及HATU (1164.9 mg，3.1 mmol，1.25當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌2小時。在0℃下用水淬滅反應。用CH 2Cl 2(3 × 10 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈油狀之(3 S)-1-[( 2S)-3-(3-溴-4-氟-3,6-二氫-2H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(390 mg，32%產率)。ESI-MS m/z =493.0, 495.0 [M+H] +；MW計算值：492.1。
步驟 6.在室溫下向50 mL密封管中添加3-[(2M)-5-(4,5-二甲基-1,3,2-二氧雜硼雜環戊烷-2-基)-1-乙基-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-3-基]-2,2-二甲基丙-1-醇(395 mg，0.85 mmol，1.20當量)、(3 S)-1-[( 2S)-3-(3-溴-4-氟-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸甲酯(350 mg，0.71 mmol，1.0當量)、K 3PO 4(451.8 mg，2.1 mmol，3當量)、X-Phos (67.6 mg，0.14 mmol，0.2當量)、第3代XPhos預觸媒(120.1 mg，0.14 mmol，0.2當量)、二噁烷(10 mL)及H 2O (2 mL)。在氬氛圍下將所得混合物在70℃下攪拌3小時。在室溫下用水淬滅反應。用EtOAc (3 × 10 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。粗(340 mg)產物所得混合物不經進一步純化即用於下一步驟中。ESI-MS m/z =779.6 [M+H] +；MW計算值：778.4。
步驟 7.在0℃下向100 mL圓底燒瓶中添加( 2S)-3-(3-溴-4-氟-5,6-二氫-2 H-吡啶-1-基)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]丙酸(500 mg，1.0當量)、THF (5 mL)及LiOH (5當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌2小時。在室溫下用水淬滅反應。用CH 2Cl 2(3 × 10 mL)萃取所得混合物。用濃鹽酸將合併之水層酸化至pH 5且用CH 2Cl 2(3 × 30 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到340 mg呈油狀之(3S)-1-[( 2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[(1 S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5-氟-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸。ESI-MS m/z =765.3[M+H] +；MW計算值：764.4。
步驟 8.在0℃下向250 mL圓底燒瓶中添加(3 S)-1-[( 2S)-2-[(第三丁氧基羰基)胺基]-3-{3-[(2M)-1-乙基-3-(3-羥基-2,2-二甲基丙基)-2-{2-[( 1S)-1-甲氧基乙基]吡啶-3-基}吲哚-5-基]-5-氟-5,6-二氫-2H-吡啶-1-基}丙醯基]-1,2-二氮雜環己烷-3-甲酸(340 mg，0.45 mmol，1當量)、DCM (100 mL)、DIEA (1723 mg，13.3 mmol，30當量)、HOBT (600.60 mg，4.440 mmol，10當量)及EDCI (2556.23 mg，13.320 mmol，30當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌6小時。在0℃下用水淬滅反應。用CH 2Cl 2(3 × 30 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2 SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由矽膠管柱層析法純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((6 3S,4S)-11-乙基-23-氟-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(220 mg，66%產率)。ESI-MS m/z =747.5[M+H] +；MW計算值：746.4。
步驟 9.在0℃下向40 mL小瓶中添加((6 3S,4S)-11-乙基-23-氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(220 mg，0.295 mmol，1當量)、DCM (3 mL)及TFA (1 mL，26.926 mmol，91.42當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌3小時。在0℃下用飽和NaHCO 3(水溶液)淬滅反應。用CH 2Cl 2(3 × 10 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈白色固體狀之(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-2 3-氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(210 mg，88%產率)。ESI-MS m/z =647.3[M+H] +；MW計算值：646.4。
步驟 10.在0℃下向40 mL小瓶中添加(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-2 3-氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(200 mg，0.31 mmol，1當量)、DCM (2 mL)、DIEA (239.8 mg，1.9 mmol，6當量)、( 2S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸(136.3 mg，0.37 mmol，1.2當量)及HATU (176.4 mg，0.46 mmol，1.5當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌2小時。在0℃下用水淬滅反應。用CH 2Cl 2(3 × 20 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層經無水Na 2S O 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC純化粗產物(200 mg)，得到呈白色固體狀之4-丙烯醯基-N-(( 2S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-2 4-氟-1 2-(2-( (S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(61.7 mg，20%產率)。ESI-MS m/z =996.7[M+H] +；MW計算值：995.6。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.77 (dd, J= 4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.99 – 7.81 (m, 2H), 7.61 – 7.45 (m, 3H), 7.40 (s, 1H), 6.83 (ddd, J= 16.1, 10.3, 5.2 Hz, 1H), 6.16 (dd, J= 16.2, 6.6 Hz, 1H), 5.77 – 5.48 (m, 3H), 4.31 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 4.13 (dq, J= 38.6, 7.1, 6.6 Hz, 2H), 3.93 – 3.67 (m, 4H), 3.69 – 3.52 (m, 6H), 3.51 (s, 2H), 3.32 – 3.05 (m, 4H), 2.93 (s, 5H), 2.84 – 2.60 (m, 7H), 2.57 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 2.39 (s, 2H), 2.24 (s, 1H), 2.15 – 1.91 (m, 2H), 1.81 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 1.75 – 1.47 (m, 5H), 1.42 (d, J= 6.1 Hz, 4H), 1.10 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 0.81 (dd, J= 23.8, 7.0 Hz, 9H), 0.55 (s, 3H)。 實例 16. 合成 (4 S)-3- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N,4- 二甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺 (A221)
步驟 1.在室溫下，向2 L小瓶中添加於1,4-二噁烷 (700 mL)中之((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(70 g，89.5 mmol，1當量)，添加於1,4-二噁烷(700 mL)中之4N HCl。在氮氛圍下將所得混合物在25℃下攪拌3小時。減壓濃縮所得混合物且用飽和NaHCO 3(2.0L)將殘留殘餘物鹼化至pH =8。用EtOAc (3 × 700 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用鹽水(2 × 100 mL)洗滌且經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液，得到呈灰白色固體狀之粗(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(61 g) ( A1)。ESI-MS m/z = 683.3 [M+H] +。MW計算值：682.3。
步驟 2.在氬氛圍下，在0℃下向(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(61 g，89.4 mmol，1當量)於DCM (600 mL)中之經攪拌之混合物中逐滴添加於DCM (60 mL)中之DIEA (461.2 g，3574.8 mmol，40當量)、N-((S)-3-丙烯醯基-4-甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸(39.39 g，107.276 mmol，1.2當量) (410mL，0.96g/mL於DCM中)、PyBOP (13.98 g，102.8 mmol，1.15當量)。在氮氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌2小時。接著用CH 2Cl 2(600 mL)稀釋混合物。將合併之有機層用鹽水(3 × 300 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。藉由製備型HPLC純化混合物，得到(4 S)-3-丙烯醯基-N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(30.2 g，32.7%產率)。ESI-MS m/z =1032.5 [M+H] +。MW計算值：1031.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.77 (dd, J= 4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.94 (t, J= 8.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 7.65 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.60 – 7.50 (m, 2H), 7.44 (s, 1H), 6.61 – 6.15 (m, 3H), 5.74 (ddd, J= 16.5, 8.9, 2.3 Hz, 2H), 5.48 – 5.33 (m, 2H), 5.20 – 5.05 (m, 1H), 5.02 – 4.92 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.27 (d, J= 12.3 Hz, 1H), 4.07 – 3.83 (m, 5H), 3.69 – 3.57 (m, 2H), 3.50 – 3.42 (m, 1H), 3.32 – 3.30 (m, 1H), 3.28 – 3.14 (m, 2H), 3.04 (s, 4H), 2.87 – 2.66 (m, 7H), 2.57 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 2.48 – 2.43 (m, 1H), 2.23 (s, 2H), 2.08 (ddd, J= 14.7, 12.1, 6.5 Hz, 1H), 1.98 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 1.81 (d, J= 13.9 Hz, 1H), 1.75 – 1.48 (m, 6H), 1.38 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.10 (d, J= 6.4 Hz, 3H), δ 0.85 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.80 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.71 (s, 3H), 0.59 (s, 3H)。 實例 17. 合成 (5 R)-4- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N,5- 二甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺 (A327)
步驟 1.在0℃下，向40 mL小瓶中添加(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮鹽酸鹽(85 mg，0.13 mmol，1當量)、DMF (1 mL)、N-(( R)-4-丙烯醯基-5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸(70 mg，0.18 mmol，1.4當量)及DIEA (670 mg，5.2 mmol，40.6當量)。在氬氛圍下，在0℃下向經攪拌之溶液中逐滴添加於DMF (0.5 mL)中之COMU (50 mg，0.1 mmol，0.9當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時。用水/冰淬滅反應且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘留殘餘物，得到呈白色固體狀之(5 R)-4-丙烯醯基-N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,5-二甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(4.4 mg，3.5)。ESI-MS m/z = 992.7 [M+H] +；MW計算值：991.6。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ8.69 (dd, J= 4.7, 1.8 Hz, 1H), 7.84 (dd, J= 30.9, 8.4 Hz, 2H), 7.50-7.38 (m, 3H), 7.35 (s, 1H), 6.73 (dd, J= 16.6, 10.5 Hz, 1H), 6.23 (s, 1H), 6.08 (d, J= 16.6 Hz, 1H), 5.75-5.59 (m, 2H), 5.54 (d, J= 12.1 Hz, 1H), 4.39-4.17 (m, 2H), 4.15-4.04 (m, 2H), 3.98 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 3.85-3.63 (m, 4H), 3.57 (d, J= 11.5 Hz, 4H), 3.14 (s, 1H), 2.88 (d, J= 31.1 Hz, 8H), 2.71 (t, J= 12.4 Hz, 1H), 2.57 (d, J= 18.7 Hz, 6H), 2.38-1.94 (m, 7H), 1.88 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 1.74 (d, J= 12.3 Hz, 1H), 1.67-1.41 (m, 3H), 1.34 (d, J= 6.1 Hz, 4H), 1.27-0.93 (m, 9H), 0.90-0.58 (m, 10H), 0.45 (s, 3H)。 實例 18. 合成 (5 S)-4- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N,5- 二甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺 (A328)
步驟 1.在0℃下向40 mL小瓶中添加(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮鹽酸鹽(100 mg，0.15 mmol，1當量)、DMF (1 mL)、DIEA (800 mg，6.2 mmol，41.2當量)及(N-( S)-4-丙烯醯基-5-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸(80 mg，0.21 mmol，1.4當量)。接著在氬氛圍下在0℃下逐滴添加於DMF (0.5 mL)中之CIP (45 mg，0.16 mmol，1.1當量)。在氬氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時，用水/冰淬滅且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。將合併之有機層用飽和氯化鈉溶液(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(5 S)-4-丙烯醯基-N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,5-二甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(6.6 mg，4.4%)。ESI-MS m/z = 992.7 [M+H] +；MW計算值：991.6。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ8.69 (d, J= 4.6 Hz, 1H), 8.04-7.69 (m, 2H), 7.60-7.26 (m, 4H), 6.74 (t, J= 13.7 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 6.08 (d, J= 17.0 Hz, 1H), 5.81-5.40 (m, 3H), 4.43-4.18 (m, 2H), 4.16-3.86 (m, 4H), 3.74 (td, J= 28.3, 24.5, 9.6 Hz, 4H), 3.55 (d, J= 4.6 Hz, 4H), 3.04 (s, 4H), 3.00-2.66 (m, 8H), 2.57 (d, J= 17.7 Hz, 6H), 2.38-2.08 (m, 4H), 1.94 (dd, J= 41.0, 10.4 Hz, 3H), 1.74 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 1.65-1.25 (m, 8H), 1.23-0.92 (m, 7H), 0.90-0.59 (m, 10H), 0.46 (s, 3H)。 實例 19. 合成 4- 丙烯醯基 - N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1- 乙基 -10,10- 二氟 -1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-5,7- 二側氧基 -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 十氫 -1 1 H-8- 氧雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜 -2(5,1)- 吡啶雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )- N- 甲基 -1- 氧雜 -4,9- 二氮雜螺 [5.5] 十一烷 -9- 甲醯胺 (A250)
步驟 1.在氮氛圍下將((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-10,10-二氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基甲酸第三丁酯(80 mg，0.12 mmol，1.0當量)及TFA (0.3 mL，4.0 mmol，32.1當量)於DCM (1 mL)中之混合物在0℃下攪拌2小時。用NaHCO 3將混合物酸化至pH 9且用CH 2Cl 2(3 × 10 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到呈淺黃色油狀之(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-10,10-二氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(70 mg，粗品)。ESI-MS m/z = 637.3 [M+H] +；MW計算值：636.3。
步驟 2.在氮氛圍下，在0℃下將(6 3 S,4 S)-4-胺基-1 1-乙基-10,10-二氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基) -2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-5,7-二酮(60 mg，0.09 mmol，1.0當量)於DCM (1 mL)中之溶液用DIEA (487 mg，3.7 mmol，40當量)處理1分鐘，接著在室溫下分數份添加(2 S)-3-甲基-2-[甲基(4-(丙-2-烯醯基)-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羰基)胺基]丁酸(41 mg，0.1 mmol，1.2當量)及CIP (31.5 mg，0.1 mmol，1.2當量)。在氮氛圍下將所得混合物在室溫下攪拌2小時。用CH 2Cl 2(3 × 10 mL)萃取所得混合物且將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化粗產物(70 mg)，得到呈灰白色固體狀之4-丙烯醯基- N-((2 S)-1-(((6 3 S,4 S)-1 1-乙基-10,10-二氟-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-5,7-二側氧基-2 1,2 2,2 3,2 6,6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-十氫-1 1 H-8-氧雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜-2(5,1)-吡啶雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)- N-甲基-1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-甲醯胺(7.2 mg，7%產率)。ESI-MS m/z = 986.7 [M+H] +；MW計算值：985.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ8.77 – 8.71 (m, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.80 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.50 (ddd, J= 18.8, 14.5, 8.5 Hz, 4H), 6.96 – 6.72 (m, 1H), 6.17 (d, J= 21.3 Hz, 2H), 5.79 – 5.68 (m, 2H), 5.39 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.34 – 4.13 (m, 2H), 4.12 – 3.95 (m, 4H), 3.94 – 3.77 (m, 2H), 3.62 (d, J= 23.2 Hz, 4H), 3.47 (dd, J= 22.2, 19.3 Hz, 4H), 3.28 – 3.13 (m, 3H), 3.10 – 3.06 (m, 6H), 2.98 (s, 1H), 2.76 (s, 3H), 2.70 (s, 3H), 2.21 (s, 2H), 2.11 – 2.04 (m, 1H), 1.97 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.64 – 1.53 (m, 5H), 1.42 (s, 1H), 1.33 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 0.99 (t, J= 7.1 Hz, 3H), 0.81 (dd, J= 18.0, 6.6 Hz, 6H)。 實例 20. 合成 (2 R,4 R)-3- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1H-8- 氧雜 -2(4,2)- 嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N,2,4- 三甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺 (A294)
步驟 1.在室溫下向40 mL小瓶中添加(2 2 S,6 3 S,4 S)-4-胺基-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮鹽酸鹽(150 mg，0.22 mmol，1.0當量)、N-((2 R,4 R)-3-丙烯醯基-2,4-二甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸(124.9 mg，0.32 mmol，1.5當量)、DMF、DIEA (1129 mg，8.7 mmol，40當量)、COMU (112 mg，0.26 mmol，1.2當量)。在空氣氛圍下將所得混合物在0℃下攪拌1小時。接著在0℃下用水/冰淬滅反應。用EtOAc (4 × 30 mL)萃取所得混合物且將合併之有機層經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化所得殘餘物，得到呈白色固體狀之(2 R,4 R)-3-丙烯醯基-N-((2 S)-1-(((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,2,4-三甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(92 mg，40%)。ESI-MS m/z = 1051.5 [M+H] +；MW計算值：1049.6。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 8.75 (dd, J= 4.7, 1.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.64-7.45 (m, 2H), 7.08 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 6.67-6.47 (m, 1H), 6.22 (d, J= 16.6 Hz, 1H), 5.75 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 5.42 (d, J= 31.1 Hz, 2H), 5.29-5.05 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.26 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 4.15-3.98 (m, 2H), 3.79 (t, J= 12.6 Hz, 3H), 3.57 (m, 5H), 3.25 (s, 2H),3.16 (s, 4H), 3.04 (s, 1H), 2.74 (s, 5H), 2.17-1.96 (m, 3H), 1.95-1.46 (m, 11H), 1.38 (dd, J= 18.1, 5.6 Hz, 7H), 1.14 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 0.92-0.69 (m, 10H), 0.37 (s, 3H)。 實例 21. 合成 (2 S,4 R)-3- 丙烯醯基 -N-((2 S)-1-(((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1- 甲氧基乙基 ) 吡啶 -3- 基 )-10,10- 二甲基 -5,7- 二側氧基 -1 1-(2,2,2- 三氟乙基 )-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6- 六氫 -1 1H-8- 氧雜 -2(4,2)- 嗎啉雜 -1(5,3)- 吲哚雜 -6(1,3)- 嗒嗪雜環十一蕃 -4- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 )-N,2,4- 三甲基 -1- 氧雜 -3,8- 二氮雜螺 [4.5] 癸烷 -8- 甲醯胺 (A309)
步驟 1.在0℃下，向8 mL小瓶中添加(2 2S,6 3S,4S)-4-胺基-1 2-(2-((S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-5,7-二酮鹽酸鹽(36 mg，0.050 mmol，1.00當量)、N-((2S,4R)-2,4-二甲基-3-(丙-1-烯-2-基)-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-羰基)-N-甲基-L-纈胺酸(22.7 mg，0.06 mmol，1.2當量)、DMF (0.5 mL)、DIEA (257 mg，2.0 mmol，40當量)及COMU (21.30 mg，0.050 mmol，1當量)。將所得混合物在0℃下攪拌1小時。在0℃下用水/冰淬滅反應且用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(3 × 10 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥且過濾。減壓濃縮濾液且藉由製備型HPLC純化殘留殘餘物，得到呈白色固體狀之(2 S,4 R)-3-丙烯醯基-N-((2 S)-1-(((2 2 S,6 3 S,4 S)-1 2-(2-(( S)-1-甲氧基乙基)吡啶-3-基)-10,10-二甲基-5,7-二側氧基-1 1-(2,2,2-三氟乙基)-6 1,6 2,6 3,6 4,6 5,6 6-六氫-1 1H-8-氧雜-2(4,2)-嗎啉雜-1(5,3)-吲哚雜-6(1,3)-嗒嗪雜環十一蕃-4-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)-N,2,4-三甲基-1-氧雜-3,8-二氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺(7 mg，13.4%)。ESI-MS m/z = 1050.8 [M+H] +；MW計算值：1049.6。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ8.75 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.64-7.46 (m, 2H), 7.04 (d, J= 53.9 Hz, 2H), 6.67 (dd, J= 16.5, 10.4 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 5.74 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 5.53-5.28 (m, 3H), 5.15 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.26 (d, J= 16.3 Hz, 2H), 4.11 (d, J= 6.3 Hz, 1H), 3.78 (d, J= 11.1 Hz, 3H), 3.59 (s, 7H), 3.17 (s, 8H), 2.72 (s, 6H), 2.03 (d, J= 34.4 Hz, 2H), 1.78 (d, J= 14.7 Hz, 5H), 1.69-1.44 (m, 7H), 1.36 (d, J= 6.1 Hz, 4H), 1.26-1.01 (m, 4H), 0.91-0.71 (m, 10H), 0.36 (s, 3H)。 表 3 ：藉由本發明之方法製備之例示性化合物注意：由於不同的量測及捨入，值可能與本申請案中其他地方之值略有不同。
實例編號 MW 計算值 [M+H] MW 觀測值 LCMS (ESI) m/z [M+H] 實例編號 MW 計算值 [M+H] MW 觀測值 LCMS (ESI) m/z [M+H]
A1 937.49 938.7 A187 1036.57 1037.7
A2 1079.58 1081.1 A188 1040.55 1041.7
A3 1077.58 1078.7 A189 994.6 995.9
A4 1070.63 1071.5 A190 1036.58 1037.8
A5 1108.61 1109.8 A191 974.54 975.8
A6 1086.64 1087.9 A192 1018.64 1019.8
A7 1030.49 1031.9 A193 977.57 978.7
A8 1054.64 1055.7 A194 1004.62 1005.6
A9 1039.55 1040.9 A195 976.59 977.6
A10 965.48 966.2 A196 977.57 978.7
A11 999.47 1000.7 A197 990.61 991.4
A12 1005.53 1006.9 A198 1017.59 1018.9
A13 990.54 991.9 A199 980.58 981.5
A14 1086.64 1087.8 A200 1035.58 1036.9
A15 1072.63 1073.4 A201 1034.63 1035.5
A16 953.46 954.4 A202 1003.57 1004.5
A17 1046.5 1047.6 A203 980.58 981.5
A18 1013.5 1014.8 A204 1118.65 1119.9
A19 958.53 959.6 A205 979.59 980.5
A20 967.55 968.3 A206 1020.62 1021.6
A21 939.52 940.5 A207 1038.63 1039.5
A22 1065.59 1066.8 A208 992.53 993.8
A23 989.46 990.5 A209 1140.61 1141.8
A24 1009.52 1010.8 A210  1017.53 1018.7
A25 999.48 1000.7 A211 1064.64 1065.8
A26 1005.53 1006.9 A212 1068.64 1069.8
A27 949.54 950.7 A213 977.57 978.6
A28 1032.56 1033.4 A214 981.57 982.7
A29 1017.49 1018.9 A215 991.59 992.8
A30 1099.59 1100.8 A216 977.57 978.8
A31 1015.59 1016.8 A217 979.55 980.5
A32 1068.58 1069.6 A218 1075.66 1076.8
A33 1017.49 1018.7 A219 991.59 992.9
A34 1063.61 1065.1 A220 973.54 974.7
A35 1013.61 1014.4 A221  1031.55 1032.9
A36 974.54 975.6 A222 1102.64 1104.05
A37 949.51 950.5 A223 1088.62 1089.9
A38 1008.62 1009.6 A224 1030.56 1031.4
A39 1064.6 1065.6 A225 1033.52 1034.4
A40 944.52 945.8 A226 995.58 996.5
A41 981.57 982.8 A227 1020.62 1021.9
A42 981.57 982.3 A228 957.55 958.8
A43 1091.65 1092.6 A229 957.55 958.5
A44 1065.64 1066.6 A230 1049.54 1050.8
A45 930.5 931.7 A231 1115.69 1117.1
A46 995.58 996.8 A232 1007.58 1008.8
A47 977.57 978.2 A233 995.58 996.7
A48 981.57 982.8 A234 981.55 982.8
A49 976.52 977.5 A235 991.59 993
A50 1082.63 1083.9 A236 965.57 966.7
A51 1030.64 1031.5 A237 1110.66 1111.9
A52 1061.64 1062.5 A238 1117.67 1119.1
A53 1096.65 1098 A239 981.57 982.7
A54 1018.64 1019.6 A240 1035.54 1036.4
A55 976.59 977.5 A241 1019.55 1020.9
A56 1018.64 1019.5 A242 1033.61 1035.5
A57 971.56 972.7 A243 1039.52 1040.8
A58 977.57 978.8 A244 979.59 980.8
A59 1048.57 1049.5 A245 979.59 980.8
A60 1110.66 1112.1 A246 979.59 980.8
A61 948.56 949.5 A247 979.59 980.5
A62 1096.65 1097.9 A248 965.57 966.9
A63 977.57 978.8 A249 965.57 966.7
A64 977.57 978.8 A250 985.52 986.8
A65 962.57 963.45 A251 1115.69 1116.9
A66 1005.53 1006.8 A252 1053.57 1054.7
A67 990.61 991.6 A253 1130.63 1132
A68 999.56 1000.6 A254 1105.63 1106.9
A69 1020.62 1021.5 A255 1121.62 1122.6
A70 962.57 963.4 A256 995.58 996.5
A71 951.56 952.6 A257 1029.62 1030.6
A72 1022.61 1023.6 A258 1053.53 1056.5
A73 994.6 995.5 A259 1062.59 1063.5
A74 1016.62 1017.6 A260 1058.59 1059.5
A75 1059.66 1060.6 A261 1087.66 1089
A76 1040.6 1041.6 A262 1070.64 1071.8
A77 1034.63 1035.5 A263 1032.62 1033.5
A78 949.51 950.7 A264 1044.58 1045.5
A79 1017.49 1018.7 A265 1058.59 1059.5
A80 1022.63 1023.6 A266 1090.6 1091.5
A81 1004.62 1005.5 A267 1002.61 1003.5
A82 1022.63 1023.6 A268 1070.59 1071.5
A83 1099.69 1100.6 A269 1101.67 1102.9
A84 1008.62 1009.5 A270 1098.63 1099.2
A85 1113.64 1114.6 A271 999.59 1000.1
A86 1031.6 1032.9 A272 559.34* 560.6*
A87 1026.61 1027.5 A273 1101.67 1103
A88 991.59 992.8 A274 1035.54 1036.8
A89 1056.62 1057.8 A275 1071.63 1072.9
A90 1007.58 1008.8 A276 1057.61 1058.8
A91 944.52 945.9 A277 1102.64 1104.1
A92 1036.56 1037.9 A278 1120.64 1121.4
A93 977.57 978.8 A279 1003.48 1004
A94 1005.53 1006.8 A280 1086.55 1087.4
A95 1033.58 1034.9 A281 1088.6 1089.5
A96 1058.59 1059.6 A282 1070.59 1071.5
A97 1062.58 1063.9 A283 1084.61 1085.5
A98 1011.58 1012.8 A284 1062.57 1063.5
A99 1063.57 1064.8 A285 1068.6 1069.7
A100 1049.55 1050.8 A286 993.57 994.9
A101 1061.59 532.2 A287 1031.55 1032.7
A102 1063.57 1064.8 A288 1017.49 1018.6
A103 1033.56 1034.8 A289 963.52 964.6
A104 928.52 929.8 A290 1121.62 1122.5
A105 951.47 952.3 A291 1074.61 1076.2
A106 1001.56 1002.5 A292 1052.55 1053.8
A107 1028.51 1029.6 A293 1044.54 1045.7
A108 953.54 954.4 A294 995.58 996.9
A109 1003.51 1004.8 A295 1023.54 1024.5
A110 1061.61 1062.9 A296 1112.64 1113.8
A111 1029.61 1030.9 A297 1036.61 1037.5
A112 1103.69 1104.5 A298 993.57 994.4
A113 887.47 888.4 A299 1042.56 1043.4
A114 953.54 954.5 A300 1056.58 1057.4
A115 1080.6 1081.9 A301 1062.59 1063.4
A116 991.51 992.7 A302 1072.61 1073.5
A117 1060.52 1062.7 A303 989.57 990.26
A118 994.54 995.4 A304 995.58 996.264
A119 978.52 979.9 A305 995.58 996.264
A120 1079.6 1080.8 A306 995.58 996.264
A121 951.56 952.4 A307 1049.56 1050.24
A122 1064.6 1065.8 A308 1049.56 1050.24
A123 937.49 938.8 A309 1049.56 1050.24
A124 973.54 974.7 A310 1049.56 1050.24
A125 1095.66 1097 A311 1031.55 1032.22
A126 1089.67 1090.7 A312 1035.54 1036.21
A127 994.54 995.8 A313 1099.69 1100.6
A128 983.56 984.5 A314 1046.56 1047.4
A129 1044.6 1045.6 A315 1099.58 1100.4
A130 995.58 996.5 A316 1070.59 1071.5
A131 1020.56 1021.3 A317 1096.61 1097.5
A132 954.46 955.4 A318 1132.72 1133.6
A133 985.58 986.8 A319 1035.54 1036.7
A134 1084.57 1085.8 A320 1035.54 1036.6
A135 934.51 935.5 A321 1037.56 1038.4
A136 953.54 954.7 A322 1102.62 1103.6
A137 1100.55 1101.9 A323 1116.63 1117.5
A138 1047.6 1048.9 A324 1128.72 1129.6
A139 993.56 994.7 A325 1004.62 1005.9
A140 991.51 992.7 A326 997.56 998.5
A141 1027.57 1029.5 A327 991.59 992.7
A142 976.52 977.7 A328 991.59 992.7
A143 1057.54 1058.7 A329 1050.59 1051.8
A144 1046.58 1047.9 A330 1102.62 1103.5
A145 1025.61 1026.5 A331 1102.62 1103.5
A146 937.49 938.4 A332 1114.62 1115.4
A147 1009.6 1010.5 A333 1035.54 1036.5
A148 1059.56 1060.4 A334 1035.54 1036.5
A149 933.48 934.7 A335 995.56 996.7
A150 1093.59 1095 A336 1101.67 1102.7
A151 975.5 976.5 A337 1155.65 1156.6
A152 1046.58 1047.8 A338 1088.62 1089.6
A153 937.49 938.4 A339 1087.62 1088.65
A154 996.49 997.5 A340 1022.6 1023.5
A155 1067.6 1068.9 A341 1076.57 1077.5
A156 1062.59 1063.5 A342 963.56 964.6
A157 1147.57 1148.5 A343 1009.58 1010.6
A158 1115.56 1116.6 A344 1009.58 1010.5
A159 991.59 992.5 A345 1114.62 1115.5
A160 949.49 950.5 A346 1114.62 1115.4
A161 1102.53 1104 A347 993.57 994.8
A162 1046.58 1047.6 A348 993.57 994.8
A163 1037.52 1038.8 A349 1114.62 1115.5
A164 937.49 938.5 A350 1005.53 1006.7
A165 1068.54 1069.6 A351 1124.58 1125.4
A166 1018.47 1019.7 A352 1116.63 1117.5
A167 1059.56 1060.4 A353 1114.62 1115.3
A168 949.49 950.9 A354 1102.62 1103.6
A169 930.54 931.5 A355 1116.63 1117.5
A170 949.49 950.8 A356 1124.58 1125.5
A171 954.54 955.5 A357 1102.62 1103.5
A172 1102.64 1103.6 A358 1102.62 1103.5
A173/A174 1117.63 1118.4 A359 1032.65 1033.6
A175 954.54 955.5 A360 1116.63 1117.6
A176 1081.44 1082.4 A361 1116.63 1117.6
A177/A178 963.56 964.4 A362 1044.58 1045.4
A179 1079.65 1080.4 A363 1044.58 1045.5
A180/A181 1063.66 1064.4 A364 976.59 977.8
A182 978.52 979.5 A365 994.6 995.75
A183 1047.6 1048.8 A366 1004.62 1005.5
A184 949.49 950.7 A367 994.6 995.65
A185 985.58 986.9 A368 991.59 992.6
A186 995.58 996.3
*[M/2+H] 生物分析
本文中所有化合物均在下文各自描述之H358 (K-Ras G12C) pERK效力分析及/或MiaPACA-2 (K-Ras G12C) pERK效力分析中展現出3 µM或更低之IC 50。 效力分析： pERK
本分析之目的係量測測試化合物抑制細胞中之K-Ras的能力。活化之K-Ras誘導ERK在蘇胺酸202及酪胺酸204處之磷酸化(pERK)增加。此程序量測細胞pERK回應於測試化合物之降低。下文以NCI-H358細胞描述之程序適用於K-Ras G12C。
注意：此方案可改用其他細胞株執行以表徵其他 RAS 變異體抑制劑，包括例如 AsPC-1 (K-Ras G12D) 、 Capan-1 (K-Ras G12V) 或 NCI-H1355 (K-Ras G13C) 。關於經工程改造之 G13C 細胞株之額外方案如下。
使用ATCC推薦之培養基及程序使NCI-H358細胞生長及維持。在添加化合物前一天，將細胞塗鋪於384孔細胞培養盤(每孔40 µl)中且使其在37℃、5% CO2培育器中生長隔夜。在DMSO中製備測試化合物之10點3倍稀釋液，其中最高濃度為10 mM。分析當天，使用Echo550液體處理器(LabCyte®)將40 nL測試化合物添加至細胞培養盤各孔中。一式兩份對測試化合物之濃度進行測試。化合物添加後，在37℃、5% CO2下培育細胞4小時。培育後，取出細胞培養基且用磷酸鹽緩衝鹽水洗滌細胞一次。
在一些實驗中，細胞pERK水準係使用AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2分析套組(PerkinElmer)測定。室溫下，在以600 RPM振盪下，將細胞溶解於25 µL溶解緩衝液中。將溶解產物(10 µL)轉移至384孔Opti盤(PerkinElmer)中且添加5 µL受體混合物。在暗處培育2小時後，添加5 µL供體混合物，密封盤且在室溫下培育2小時。在Envision讀板器(PerkinElmer)上，使用標準AlphaLISA設定來讀取信號。原始資料之分析在Excel (Microsoft)及Prism (GraphPad)中進行。將信號對化合物濃度的以10為底之對數作圖，且藉由擬合4參數S形濃度反應模型確定IC 50值。
在其他實驗中，細胞pERK係藉由In-Cell Western測定。在化合物處理後，用200 µL tris緩衝鹽水(TBS)洗滌細胞兩次且用150 µL含4%三聚甲醛之TBS固定15分鐘。用含0.1% Triton X-100之TBS (TBST)洗滌固定之細胞4次，持續5分鐘，且接著在室溫下，用100 µL Odyssey封閉緩衝液(LI-COR)封閉60分鐘。將一次抗體(pERK，CST-4370，Cell Signaling Technology)以1:200稀釋於封閉緩衝液中，且取50 µL添加至各孔中且在4℃下培育隔夜。用TBST洗滌細胞4次，持續5分鐘。添加二次抗體(IR-800CW兔，LI-COR，1:800稀釋)及DNA染色劑DRAQ5 (LI-COR，1:2000稀釋)且在室溫下培育1-2小時。用TBST洗滌細胞4次，持續5分鐘。在Li-COR Odyssey CLx成像儀上掃描各盤。原始資料之分析在Excel (Microsoft)及Prism (GraphPad)中進行。將信號對化合物濃度的以10為底之對數作圖，且藉由擬合4參數S形濃度反應模型確定IC 50值。
下文於經工程改造之MIA PaCa-2 KRAS G13C A12細胞中描述之程序可應用於K-Ras G13C。
使用ATCC推薦之培養基及方案使MIA PaCa-2 KRAS G13C A12細胞生長及維持。在化合物添加之前一天，將細胞塗鋪於384孔細胞培養盤(8,000個細胞/40 µl/孔)中且使其在37℃、5% CO2培育箱中生長隔夜。在DMSO中製備測試化合物之10點3倍稀釋液，其中高濃度為10、1或0.1 mM。分析當天，使用Echo550液體處理器(LabCyte®)將40 nL測試化合物添加至細胞培養盤各孔中。一式兩份對測試化合物之濃度進行測試。化合物添加後，在37℃、5% CO2下培育細胞4小時。培育後，取出細胞培養基且用磷酸鹽緩衝鹽水洗滌細胞一次。
在一些實驗中，細胞pERK水準係使用AlphaLISA SureFire Ultra p-ERK1/2分析套組(PerkinElmer)測定。室溫下，在以600 RPM振盪下，將細胞溶解於25 µL溶解緩衝液中。將溶解產物(10 µL)轉移至384孔Opti盤(PerkinElmer)中且添加5 µL受體混合物。在暗處培育2小時後，添加5 µL供體混合物，密封盤且在室溫下培育2小時。在Envision讀板器(PerkinElmer)上，使用標準AlphaLISA設定來讀取信號。原始資料之分析在Genedata Screener及Prism (GraphPad)中進行。藉由以下計算將數據正規化：((樣品信號 – 平均低對照)/(平均DMSO - 平均低對照))*100。將信號對化合物濃度的以10為底之對數作圖，且藉由擬合4參數S形濃度反應模型確定IC 50值。
在其他實驗中，細胞pERK係藉由In-Cell Western測定。在化合物處理後，用200 µL tris緩衝鹽水(TBS)洗滌細胞兩次且用150 µL含4%多聚甲醛之TBS固定15分鐘。用含0.1% Triton X-100之TBS (TBST)洗滌固定之細胞4次，持續5分鐘，且接著在室溫下，用100 µL Odyssey封閉緩衝液(LI-COR)封閉60分鐘。將一次抗體(pERK，CST-4370，Cell Signaling Technology)以1:200稀釋於封閉緩衝液中，且取50 µL添加至各孔中且在4℃下培育隔夜。用TBST洗滌細胞4次，持續5分鐘。添加二次抗體(IR-800CW兔，LI-COR，1:800稀釋)及DNA染色劑DRAQ5 (LI-COR，1:2000稀釋)且在室溫下培育1-2小時。用TBST洗滌細胞4次，持續5分鐘。在Li-COR Odyssey CLx成像儀上掃描各盤。原始資料之分析在Excel (Microsoft)及Prism (GraphPad)中進行。將信號對化合物濃度的以10為底之對數作圖，且藉由擬合4參數S形濃度反應模型確定IC 50值。 RAS 突變型癌症細胞株中細胞活力之測定 方案：CellTiter-Glo®細胞活力分析
注意：以下方案描述用於監測 K-Ras 突變型癌症細胞株回應於本發明化合物之細胞活力的程序。亦可採用其他 RAS 同功型，然而，接種之細胞數量將基於所用細胞株而變化。
本細胞分析之目的係藉由使用CellTiter-Glo® 2.0試劑(Promega)對在終點時存在之ATP的量進行定量來測定在5天處理期內測試化合物對人類癌症細胞株(MIA PaCa-2 KRAS G13C A12 (K-Ras G13C)、NCI-H358 (K-Ras G12C)、AsPC-1 (K-Ras G12D)及Capan-1 (K-Ras G12V))之效應。
將細胞以250個細胞/孔接種於384孔分析盤中之40 µL生長培養基中且在含5% CO 2之潮濕氛圍中在37℃下培育隔夜。分析當天，先用100% DMSO將測試化合物之10 mM儲備液稀釋成3 mM溶液。將充分混合之化合物溶液(15 µL)轉移至含有30 µL之100% DMSO的下一孔中，且重複操作，直至製備出9種濃度之3倍連續稀釋液(起始分析濃度為10 µM)。將測試化合物(132.5 nL)直接分配至含有細胞之分析盤中。或者，在DMSO中製備測試化合物之9點、3倍稀釋液，其中高濃度為10、1或0.1 mM，且分析當天，將測試化合物(40 nL)直接分配至含有細胞之分析盤中。將該等盤以300 rpm振盪15秒，離心且在含5% CO 2之潮濕氛圍中在37℃下培育5天。第5天，將分析盤及其內含物平衡至室溫，保持約30分鐘。添加CellTiter-Glo® 2.0試劑(25 µL)，且在迴旋振盪器上混合盤內含物2分鐘，隨後在室溫下培育10分鐘。使用PerkinElmer Enspire量測發光。利用下式使數據正規化：(樣品信號/平均DMSO)*100。使用四參數邏輯斯蒂擬合來擬合數據。 本發明化合物破壞 B-Raf Ras 結合結構域 (BRAF RBD) 與 K-Ras 之相互作用 （亦稱為 FRET 分析或 MOA 分析）
注意：以下方案描述用於監測本發明化合物破壞 K-Ras G13C (GMP-PNP) 與 BRAF RBD 之結合的程序。此方案亦可改用其他 Ras 蛋白質或核苷酸 ( 包括 K-Ras G12C) 來執行。
此生物化學分析之目的係量測測試化合物促進在載有核苷酸之K-Ras同功型與親環蛋白A之間形成三元複合物的能力；由此得到的三元複合物破壞與BRAF RBD構築體之結合，抑制K-Ras經由RAF效應子進行之信號傳導。數據係以IC50值報告。
在含有25 mM HEPES pH 7.3、0.002% Tween20、0.1% BSA、100 mM NaCl及5 mM MgCl 2之分析緩衝液中，將無標記親環蛋白A、His6-K-Ras-GMPPNP及GST-BRAF RBD分別以25 µM、12.5 nM及50 nM之最終濃度組合於384孔分析盤中。該盤各孔中存在之化合物係自30 µM最終濃度起始，經歷10點3倍連續稀釋的稀釋液。在25℃下培育3小時之後，接著將抗His Eu-W1024及抗GST別藻藍蛋白之混合物添加至分析樣品孔中分別達到10 nM及50 nM之最終濃度，且將反應再培育1.5小時。在微孔盤讀取器(Ex 320 nm，Em 665/615 nm)上讀取TR-FRET信號。促進K-Ras:RAF複合物破壞之化合物經鑑別為使TR-FRET比率相對於DMSO對照孔降低之化合物。 活體外細胞增殖研究
在CrownBio，使用標準方法評估有關細胞生長抑制之效力。簡言之，在適當培養基中培養細胞株且接著塗鋪於3D甲基纖維素中。細胞生長抑制係在與遞增濃度之化合物一起培養5天後，藉由CellTiter-Glo®測定。化合物效力係以50%抑制濃度(絕對IC50)報告。該分析歷時7天。第1天，在對數生長期間，收集2D培養之細胞，且將其以1×105個細胞/毫升懸浮於培養基中。基於先前的最佳化，一些細胞株使用更高或更低的細胞密度。將3.5 ml細胞懸浮液與含1%甲基纖維素之6.5%生長培養基混合，得到於0.65%甲基纖維素中之細胞懸浮液。將90 µl此懸浮液分配於2個96孔盤各孔中。一個盤用於第0天讀取且1個盤用於終點實驗。在37℃及5% CO2下，將各盤培育隔夜。第2天，取出一個盤(用於t0讀數)且向各孔中添加10 µl生長培養基加100 µl CellTiter-Glo®試劑。在混合及10分鐘培育之後，將發光記錄於EnVision Multi-Label讀取器(Perkin Elmer)上。在生長培養基中稀釋在DMSO中之化合物，由此使化合物之最終、最大濃度為10 µM，且執行連續4倍稀釋，產生9點濃度系列。將10 µl的10倍最終濃度之化合物溶液添加至另一個盤各孔中。接著，在37℃及5% CO2下將盤培育120小時。第7天，取出各盤，且向各孔中添加100 µl CellTiter-Glo®試劑，且在混合及10分鐘培育之後，將發光記錄於EnVision Multi-Label讀取器 (Perkin Elmer)上。將數據導出至GeneData Screener且以S形濃度反應模型建模，以便測定化合物反應之IC50值。
歸因於外排轉運蛋白之差異性表現、生長對RAS路徑活化之不同依賴性或其他原因，並非所有帶有給定RAS突變之細胞株均可對靶向該突變之RAS抑制劑同等地敏感。此已以細胞株KYSE-410及細胞株SW1573為例說明，細胞株KYSE-410儘管8具有KRAS G12C突變，但對KRAS G12C (OFF)抑制劑MRTX-849不敏感(Hallin等人, Cancer Discovery 10:54-71 (2020))，且細胞株SW1573對KRAS G12C (OFF)抑制劑AMG510不敏感(Canon等人, Nature 575:217-223 (2019))。 G13C 之選擇性共價修飾
圖 1A ：NCI-H1975 (WT KRAS)、MIA PaCa-2 (KRAS G12C/G12C)及經工程改造之MIA PaCa-2 (KRAS G13C/G13C)細胞用30 nM化合物A (最終濃度DMSO 0.1%)在完全培養基(DMEM + 10% FBS + 1% PenStrep)中處理1小時。治療期後，細胞在補充有1X Halt蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Thermo)之NP-40裂解緩衝液中裂解。裂解液中之蛋白質藉由SDS-PAGE (NuPage 12% Bis-Tris凝膠，Invitrogen)分離且轉移至硝基纖維素膜。藉由使用抗RAS抗體(Abcam 108602)進行西方墨點分析且使用LiCor Odyssey CLx進行RAS蛋白之偵測。
圖 1B ：NCI-H1975 (WT KRAS)、MIA PaCa-2 (KRAS G12C/G12C)及MOR (KRAS G13C/G13C)細胞用50 nM化合物X (來自WO 2021/091982 (A647)之KRAS G12C抑制劑)及化合物B (本發明之化合物(最終濃度DMSO 0.1%)在完全培養基(RPMI-1640 + 10% FBS + 1% PenStrep，用於NCI-H1975及MOR；DMEM + 10% FBS + 1% PenStrep，用於MIA PaCa-2)中處理2小時。治療期後，細胞在補充有1X Halt蛋白酶及磷酸酶抑制劑(Thermo)之NP-40裂解緩衝液中裂解。裂解液中之蛋白質藉由SDS-PAGE (NuPage 12% Bis-Tris凝膠，Invitrogen)分離且轉移至硝基纖維素膜。藉由用抗RAS抗體(Abcam 108602)探測細胞膜來進行西方墨點分析且使用LiCor Odyssey CLx進行RAS蛋白之偵測。 使用化合物 A ( 本發明化合物 ) 對 KRAS G13C 之單劑量 PK/PD 活體內抑制 方法：
將NCI-H1734 KRAS G13C/wt細胞株來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型用於單劑量藥物動力學(PK)/藥效學(PD)研究。使用Matrigel (與培養基比率為1:1)向雌性NOD SCID小鼠(6-8周齡)右側腹中皮下植入NCI-H1734腫瘤細胞(1 × 10 7個細胞/小鼠)。一旦如藉由卡尺量測腫瘤達到約400-600 mm 3範圍，將小鼠隨機分組以開始投與化合物A或媒劑。化合物A以100 mg/kg藉由口服管飼(po)投與。在給藥後不同時間點採集樣品之治療組總結於下表4中。收集腫瘤樣品以藉由於qPCR分析中量測人類 DUSP6(PD)之mRNA含量來評估RAS/ERK路徑調節。收集血漿樣品以藉由LC-MS生物分析分析法來評估未結合血漿濃度(PK)。 表4. 使用NCI-H1734腫瘤之單劑量藥物動力學/藥效學研究之治療組、劑量及時間點的總結
化合物 / 組 劑量 / 方案 PD ， n = 3/ 時間點 PK ， n = 3/ 時間點
媒劑對照 10 ml/kg po 24小時 24小時
化合物A 100 mg/kg po 3小時、8小時、24小時 0.5小時、1小時、3小時、8小時、24小時
結果：
在圖2中，化合物A在給藥後3小時、8小時及24小時抑制NCI-H1734異種移植腫瘤中之 DUSP6mRNA含量。在3小時及8小時時間點，相對於對照，觀測到 DUSP6含量之有效抑制，抑制作用超過95%。在未檢測到未結合化合物A血漿濃度之24小時時間點， DUSP6含量之抑制仍保持在相對於對照約75%之抑制作用。總之，化合物A有效地抑制 DUSP6mRNA含量，表明在NCI-H1734 KRAS G13C/wt細胞株來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型中RAS/ERK信號傳導之強烈抑制。 使用化合物 A ( 本發明化合物 ) 在 KRASG13C 癌症模型中之腫瘤消退 方法：
將NCI-H1734 KRAS G13C/wt細胞株來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型用於功效研究。使用Matrigel (與培養基比率為1:1)向雌性NOD SCID小鼠(6-8周齡)右側腹中皮下植入NCI-H1734腫瘤細胞(1 × 10 7個細胞/小鼠)。一旦如藉由卡尺量測腫瘤達到約150-250 mm 3範圍，將小鼠隨機分為治療組以開始投與化合物A或媒劑。化合物A以100 mg/kg藉由口服管飼(po)投與。每週量測體重及腫瘤體積(使用卡尺)兩次，直至研究終點。腫瘤體積(mm 3)係基於公式寬度 2× 長度 × 0.5計算。 結果：
圖3展示藉由每日經口管飼以100 mg/kg給與之化合物A導致NCI-H1734 KRAS G13C/wt細胞株來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型中的腫瘤消退。在28天功效研究結束時，達成11%之平均腫瘤消退。 方法：
將ST2822B KRAS G13C/wt患者來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型用於功效研究。ST2822B腫瘤片段係收集自宿主小鼠且植入6-12周齡雌性無胸腺裸(免疫缺陷)小鼠中。一旦如藉由卡尺量測腫瘤達到約150-300 mm 3範圍，將小鼠隨機分為各五隻小鼠之組以開始投與化合物A或媒劑。化合物A以100 mg/kg藉由口服管飼(po)投與。每週量測體重及腫瘤體積(使用卡尺)兩次，直至研究終點。腫瘤體積(mm 3)係基於公式寬度 2× 長度 × 0.5計算。 結果：
圖4展示藉由每日經口管飼以100 mg/kg給與之化合物A導致ST2822B KRAS G13C/wt患者來源之人類非小細胞肺癌異種移植模型中的腫瘤消退。在28天功效研究結束時，達成30%之平均腫瘤消退。
儘管已結合本發明之具體實施例描述本發明，但應瞭解，其能夠進一步修改且本申請案意欲涵蓋一般遵循本發明之原理且包括在本發明所屬領域內之已知或常規實踐範圍內的與本揭示案之背離的本發明之任何變化、應用或改編，且可應用於本文所述之基本特徵。
所有出版物、專利及專利申請案均以全文引用之方式併入本文中，其引用程度就如同具體地且個別地指示每一個別出版物、專利或專利申請案以全文引用之方式併入一般。
圖1A展示本發明化合物(化合物A)對KRAS G13C之選擇性共價修飾。 圖1B展示本發明化合物(化合物B)對KRAS G13C之選擇性共價修飾。化合物X為來自WO 2021/091982 (A647)之KRAS G12C抑制劑。 圖2展示使用化合物A (本發明化合物)之KRAS G13C(NSCLC CDX KRAS G13C/WT模型)之單劑量PK/PD活體內抑制。 圖3展示使用化合物A (本發明化合物)之NSCLC CDX KRAS G13C/WT模型中之腫瘤消退。 圖4展示使用化合物A (本發明化合物)之NSCLC PDX KRAS G13C/WT模型中之腫瘤消退。

Claims (29)

  1. 一種具有式I之結構的化合物或其醫藥學上可接受之鹽： ， 式I 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； L 1不存在或為連接體； W為交聯基團，其包含乙烯基酮、乙烯基砜、炔酮或炔基砜； R 1為氫、視情況經取代之3至10員雜環烷基或視情況經取代之C 1-C 6雜烷基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基；且 R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基。
  2. 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之噻唑-二基、視情況經取代之噁唑-二基、視情況經取代之嗎啉-二基、視情況經取代之吡咯啶-二基、視情況經取代之吡啶-二基、視情況經取代之氮雜環丁烷-二基、視情況經取代之吡嗪-二基、視情況經取代之嘧啶-二基、視情況經取代之哌啶-二基、視情況經取代之噁二唑-二基、視情況經取代之噻二唑-二基、視情況經取代之三唑-二基、視情況經取代之硫代嗎啉-二基或視情況經取代之伸苯基。
  3. 如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 2為： 或 。
  4. 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之5至10員伸雜芳基。
  6. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之伸苯基。
  7. 如請求項1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。
  8. 如請求項1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體為式III之結構： A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-(D 1)-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k–A 2式III， 其中A 1為在該連接體與CH(R 3)之間的鍵；A 2為在W與該連接體之間的鍵；B 1、B 2、B 3及B 4各自獨立地選自視情況經取代之C 1-C 2伸烷基、視情況經取代之C 1-C 3伸雜烷基、O、S及NR N；各R N獨立地為氫、視情況經取代之C 1–C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4烯基、視情況經取代之C 2-C 4炔基、視情況經取代之3至14員雜環烷基、視情況經取代之6至10員芳基或視情況經取代之C 1-C 7雜烷基；C 1及C 2各自獨立地選自羰基、硫羰基、磺醯基或磷醯基；f、g、h、i、j及k各自獨立地為0或1；且D 1為視情況經取代之C 1-C 10伸烷基、視情況經取代之C 2-C 10伸烯基、視情況經取代之C 2-C 10伸炔基、視情況經取代之3至14員伸雜環烷基、視情況經取代之5至10員伸雜芳基、視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之6至10員伸芳基、視情況經取代之C 2-C 10伸聚乙二醇基或視情況經取代之C 1-C 10伸雜烷基或連接A 1-(B 1) f-(C 1) g-(B 2) h-與-(B 3) i-(C 2) j-(B 4) k–A 2之化學鍵。
  9. 如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該連接體具有式IIIa之結構： 式IIIa， 其中o為0或1； R 7為氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之3至8員伸環烷基或視情況經取代之3至8員伸雜環烷基； X 1係不存在、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、O、NCH 3或視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基； Cy為視情況經取代之3至8員伸環烷基、視情況經取代之3至12員伸雜環烷基、視情況經取代之6-10員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；且 L 2係不存在、-SO 2-、-NH-、視情況經取代之C 1-C 4伸烷基、視情況經取代之C 1-C 4伸雜烷基或視情況經取代之3至6員伸雜環烷基。
  10. 如請求項1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物不為表2之化合物。
  11. 如請求項1至10中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5之結構： 式II-5， 其中Cy 1為視情況經取代之螺環8至11員伸雜環烷基或視情況經取代之雙環7至9員伸雜環烷基；且 其中W包含乙烯基酮或乙烯基砜。
  12. 如請求項11之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Cy 1為視情況經取代之螺環10至11員伸雜環烷基。
  13. 如請求項12之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5a之結構： 式II-5a， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3。
  14. 如請求項12之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5b之結構： 式II-5b， 其中X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； s及t各自獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基或視情況經取代之3至5員環烷基；且 各R 13獨立地為-CH 3、F，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之C 3-C 6環烷基，或連接至同一原子之兩個R 13與其所連接之原子一起組合形成視情況經取代之3至6員雜環烷基。
  15. 如請求項13或14之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5c之結構： 式II-5c。
  16. 如請求項13或14之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5d之結構： 式II-5d。
  17. 如請求項13或14之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-5e之結構： 式II-5e。
  18. 如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含乙烯基酮之交聯基團。
  19. 如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含乙烯基砜之交聯基團。
  20. 如請求項1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中W為包含炔酮之交聯基團。
  21. 如請求項20之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式II-6之結構： 式II-6， 其中Q 1為CH 2、NR N或O； Q 2為CO、NR N或O；且 Z為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基；或 其中Q 1-Q 2-Z為視情況經取代之9至10員螺環伸雜環烷基。
  22. 一種選自表1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  23. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及醫藥學上可接受之賦形劑。
  24. 一種結合物或其鹽，其包含式V之結構： M-L-P 式V， 其中L為連接體； P為單價有機部分；且 M具有式VIa之結構： 式VIa， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； X 2為O、C(R 11) 2、NR 12、S或SO 2； r為1或2； 各t獨立地為0、1或2； R 11及R 12各自獨立地為氫、視情況經取代之C 1-C 4烷基、視情況經取代之C 2-C 4雜烷基或視情況經取代之3至5員環烷基； 各R 13獨立地為-CH 3；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基； 或 M具有式VIb之結構： 式VIb， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基； R 14為氟、氫或C 1-C 3烷基； u為0或1；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基； 或 M具有式VIc之結構： 式VIc， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基； 或 M具有式VId之結構： 式VId， 其中A為視情況經取代之3至6員伸雜環烷基、視情況經取代之3至6員伸環烷基、視情況經取代之6員伸芳基或視情況經取代之5至10員伸雜芳基； R 2為視情況經取代之C 1-C 6烷基； R 3為視情況經取代之C 1-C 6烷基或視情況經取代之C 1-C 3雜烷基；且 R 4、R 5及R 6各自獨立地選自氫、視情況經取代之C 1-C 6烷基、視情況經取代之C 1-C 6雜烷基、視情況經取代之3至6員環烷基、視情況經取代之3至6員雜環烷基；或 R 4及R 5與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基；或 R 4及R 6與其所連接之原子組合形成視情況經取代之3至8員環烷基或視情況經取代之3至8員雜環烷基。
  25. 一種治療有需要之個體之癌症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項23之醫藥組成物。
  26. 如請求項25之方法，其中該癌症為胰臟癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌或子宮內膜癌。
  27. 如請求項25或26之方法，其中該癌症包含Ras突變。
  28. 一種治療有需要之個體之Ras蛋白相關病症的方法，該方法包括向該個體投與治療有效量的如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項23之醫藥組成物。
  29. 一種抑制細胞中之Ras蛋白的方法，該方法包括使該細胞與有效量的如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項23之醫藥組成物接觸。
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WO2023240263A1 (en) * 2022-06-10 2023-12-14 Revolution Medicines, Inc. Macrocyclic ras inhibitors
WO2024008834A1 (en) * 2022-07-08 2024-01-11 F. Hoffmann-La Roche Ag Macrocycle compounds useful as kras inhibitors

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3159559A1 (en) * 2019-11-04 2021-05-14 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
TW202132314A (zh) * 2019-11-04 2021-09-01 美商銳新醫藥公司 Ｒａｓ抑制劑
EP4054719A1 (en) 2019-11-04 2022-09-14 Revolution Medicines, Inc. Ras inhibitors
TW202304452A (zh) * 2021-04-09 2023-02-01 美商銳新醫藥公司 Ｓｏｓ１抑制劑與ｒａｓ抑制劑於治療癌症之用途
CR20230570A (es) * 2021-05-05 2024-01-22 Revolution Medicines Inc Inhibidores de ras
CN117715658A (zh) * 2021-05-25 2024-03-15 锐新医药公司 抑制ras的方法

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