KR20060096997A - 신규 ｇｌｐ-1 유도체 - Google Patents

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Abstract

작용의 연장된 프로파일을 갖는 신규 폴리펩티드 유도체.
당뇨병, 폴리펩티드, GLP, 글루카곤, 알부민, 아미노산, 글루코스, 인슐린.

Description

신규 ＧＬＰ-1 유도체{NOVEL GLP-1 DERIVATIVES}
본 발명은 글루카곤-형-펩티드-1 (GLP-1)의 신규 유도체 및 그것의 단편 및 지속적인 작용 프로파일을 갖는 그와같은 단편의 유사체 그리고 그들을 제조하고 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 더 나아가 엑센딘의 신규 유도체 및 그러한 유도체의 사용에 관한 것이다.
펩티드는 의료행위에 광범위하게 사용되며, 그들은 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있기 때문에, 그들의 중대성이 날이 갈수록 또한 증대될 것으로 예상할 수 있다. 천연 펩티드 또는 그것의 유사체는 치료에 사용될 때 그들이 높은 제거율(clearance)을 갖는 것으로 일반적으로 알려져 있다. 반복된 투여가 필요하기 때문에 장기간에 걸쳐 그것의 높은 혈중농도를 유지하는 것이 바람직한 경우에 치료제의 높은 제거율은 불편하다. 높은 제거율을 갖는 펩티드의 실례는 다음과 같다: ACTH, 코르티코트로핀-방출 인자, 안지오텐신, 칼시토닌, 인슐린, 글루카곤, 글루카곤-유사 펩티드-1, 글루카곤-유사 펩티드-2, 인슐린-유사 성장인자-1, 인슐린-유사 성장인자-2, 위 억제 펩티드, 성장호르몬-방출 인자, 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성펩티드, 분비제, 엔테로가스트린, 성장억제호르몬, 성장호르몬, 성장촉진제, 부갑상선 호르몬, 혈소판 조혈인자, 적혈구 조혈인자, 시상하부 방출 인자, 황체자극호르몬, 갑상선 자극호르몬, 엔돌핀, 엔케팔린, 바소프레신(바소프레신), 옥시토신, 합성진통마취제(opiods) 및 그것의 유사체, 수퍼옥시드 디스뮤타제, 인터페론, 아스파라기나제, 알기나제, 알기닌 디아미나제, 아데노신 디아미나제 및 리보뉴클라제. 어떤 경우에, 적당한 약제학적 조성물을 적용시켜 펩티드의 프로파일 방출에 영향을 미치는것이 가능하나, 이런 접근은 다양한 단점을 갖고있고 일반적으로 적용이 가능하지 않다.
흥미로운 생물학적 활성을 갖는 공지된 내생 펩티드와 단백질의 수는 또한 사람 게놈의 진행중의 조사의 결과로서, 빠르게 증가하고 있다. 그들의 생물학적 활성으로 인해, 많은 이들 폴리펩티드는 원칙적으로 치료제로서 사용될 수 있었다. 내생 펩티드는, 그러나, 이들 펩티드는 펩티다아제에 의한 신속한 분해에 의한 및/또는 신장 여과 및 소변으로 배설로 인해 종종 몇 분의 반감기를 가지기 때문에, 약물 후보로서 언제나 적합한 것은 아니다. 사람 혈장에서 폴리펩티드의 반감기 는 강하게(몇분으로부터 1주 이상까지) 변한다. 유사하게는, 작은 분자 약물의 반감기는 또한 매우 가변적이다. 그러나, 펩티드, 단백질, 또는 다른 화합물의 혈장 반감기의 이러한 강한 변이성에 대한 이유는 잘 이해되지 않는다. 따라서, 낮은 독성 및 치료 잇점을 유지하면서 생체내에서 작용의 더 긴 지속시간을 제공하기 위해 치료 화합물을 변경할 필요성이 존재한다. 혈청 알부민은 1주 이상의 반감기를 가지고, 펩티드의 혈장 반감기를 증가시키는 한가지 접근은 펩티드를 혈청 알부민에 결합하는 화학체로 유도시켰다. Knudsen 등(J. Med. Chem. 2000,43, 1664-1669)은 아실화 GLP-1 펩티드는 돼지에서 높은 수용체 효능과 혈장 반감기의 10배 증가를 나타낸다는 것을 보여주었다. Zobel 등 (Bioorg. Med. Chem. Lett. 2003, 13, 1513-1515)은 혈청 알부민에 결합하는 포스페이트 에스테르 기반 작은 분자로 아미노 종말의 유도에서 토끼에서 항응고 펩티드의 혈장 반감기는 10-50배로 증가하였다는 것을 보여주었다.
본 발명은 친수성 스페이서를 통해 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 폴리펩티드와 적어도 5 비-수소 원자를 포함하는(이때 이들 원자의 30-50%는 N 또는 O이다) 화학 부분을 갖는 알부민 결합 잔기로 분리시키는 친수성 스페이서를 통해 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물에 관한 것이다.
본 발명의 한 구체예에서 스페이서는 다음과 같이 정의된다
-(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-, 이때
I, m 및 n은 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G은 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(0)-, 및 -P (OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6 는 독립적으로 수소 또는 C1-6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-,-OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-,-C(O)CH=CH-, -(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O-또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 그것의 프로드러그이다.
본 발명은 또한 다음의 화학식 (I)을 갖는 화합물에 관한 것이다 :
A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 (I)
상기식에서
A는 알부민 결합 잔기,
B 는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-인 친수성 스페이서이고, 이때
I, m 및 n 독립적으로 1-20 이고 p는 0-10이고,
Q 는 -Z-(CH2)1D[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
Y는 B 와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W는 A와 B를 연결하는 화학기이다.
본 발명은 또한 화학식 (II)를 갖는 화합물에 관한 것이다
A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 -Y'-B'-W'-A' (II)
상기식에서
A와 A'는 알부민 결합 잔기이고,
B와 B'는 독립적으로 -(CH2)ID [(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고,
이때
I, m 및 n 는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-이고,
q 는 0 내지 5 범위의 정수이고,
각각의 D, E, 와 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR (O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s 는 0 또는 1이고,
Y 는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
Y'는 B'와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W는 A와 B를 연결하는 화학기이고,
W' 는 A'와 B'를 연결하는 화학기이다.
또다른 관점에서 본 발명은 화학식(III)을 갖는 화합물에 관한 것이다.
Figure 112006019302320-PCT00001
상기식에서
A와 A는 알부민 결합 잔기이고,
B는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고 상기식에서
I, m와 n는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q 는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6) (O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
Y는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W"는 B를 A와 A'와 연결하는 화학기이다.
또다른 관점에서 본 발명은 치료 펩티드와 하나 이상의 알부민 결합 잔기(들) 사이에서 친수성 스페이서를 포함하는 화합물에 관한 것이고, 상기 화합물은 치료 폴리펩티드에 비해 작용의 장기의 프로파일을 갖고, 이때 상기 화합물의 자유 부분은 물론이고 알부민 결합 부분은 둘다 치료 폴리펩티드의 효과를 매개하는 수용체에 결합할 수 있다.
한 구체예에서 친수성 스페이서는 치료 폴리펩티드의 아미노기와 알부민 결합 잔기의 작용기 사이에 다리를 형성하는 두개의 말단에서 적절한 작용기를 갖는 미분지 올리고 에틸렌 글리콜 부분이다.
본 발명의 또다른 관점에서 치료 폴리펩티드는 GLP-1 펩티드이다.
정의
본 명세서에서, 다음의 용어는 지시된 의미를 갖는다:
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "알부민 결합 잔기"는 비-공유결합으로 사람 혈청 알부민에 결합하는 잔기를 의미한다. 치료 폴리펩티드에 부착하는 알부민 결합 잔기는 전형적으로 사람 혈청 알부민에 대해 10 μM 이하의 친화력을 가지고 바람직하게는 1 μM이하이다. 알부민 결합 잔기의 범위는 4-40 탄소 원자를 함유하는 선형과 분지 친유성 부분, 사이클로펜타노페난트렌 골격을 갖는 화합물, 10-30 아미노산 잔기 등을 갖는 펩티드 사이에서 공지된다.
본원에서 사용된 용어 "친수성 스페이서"는 펩티드와, 30-50%가 N 또는 O인 적어도 5 비- 수소 원자를 포함하는 화학 부분을 갖는 알부민 결합 잔기로 분리시키는 스페이서를 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "치료 폴리펩티드"는 치료 용도를 위해 개발되는, 또는 치료 용도를 위해 개발된 폴리펩티드를 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "폴리펩티드"와 "펩티드"는 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 5 구성요소 아미노산으로 구성된 화합물을 의미한다. 구성요소 아미노산은 유전자 코드에 의해 인코딩된 아미노산의 그룹으로부터 있을 수 있고 그들은 합성 아미노산은 물론이고 유전자 코드에 의해 인코딩되지 않은 천연 아미노산이 될 수 있다. 유전자 코드에 의해 인코딩되지 않은 천연 아미노산은 예를 들어 히드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, 오르니틴, 포스포세린, D-알라닌 및 D-글루타민이다. 합성 아미노산은 화학 합성에 의해 제조된 아미노산을 포함한다, 즉, D-알라닌 및 D-류신과 같은 유전자 코드에 의해 인코딩된 D-아미노 산의 이성질체, Aib (α-아미노이소부티르산), Abu (α-아미노부티르산), Tie (tert-부틸글리신), β-알라닌, 3-아미노메틸 벤조산, 안트라닐산이다.
폴리펩티드를 말하는 본원에서 사용된 용어 "유사체"는 펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되고 및/또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 펩티드로부터 결손되고 및/또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 펩티드로부터 결손되고 및 또는 하나 이상의 아미노산 잔기가 펩티드에 추가된 변경된 펩티드를 의미한다. 아미노산 잔기의 그러한 추가 또는 결손은 펩티드의 N-말단 및/또는 펩티드의 C-말단에서 일어날 수 있다. 유사체를 설명하기 위해 간단한 시스템이 사용된다 : 예를 들어 [Arg34] GLP-1(7-37) Lys는 위치 34에서 자연적으로 발생하는 리신은 아르기닌으로 치환되었고 리신 잔기가 C-말단 (위치 38)에 첨가된 GLP-1 유사체를 가리킨다. 펩티드 유사체와 그것의 유도체의 예는 IUPAC-IUB 명명법에 따라 사용된 아미노산에 대한 표준 단일 글자 약어를 사용하여 도출된다.
펩티드와 관련하여 본원에 사용된 용어 "유도체"는 화학적으로 변경된 펩티드 또는 그것의 유사체를 의미하고, 이때 적어도 하나의 치환기는 변경되지 않은 펩티드 또는 그것의 유사체에 존재하지 않고, 즉, 공유결합으로 변경된 펩티드이다. 전형적인 변경은 아미드, 탄수화물, 알킬 기, 아실 기, 에스테르 등이다. GLP-1(7-37)의 유도체의 예는 Nε26-(γ-Glu (Nα-헥사데카노일)))-[Arg34, Lys26]) GLP-1 (7- 37)이다.
본원에 사용된 용어 "GLP-1 펩티드"는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1), GLP-1 유사체, GLP-1 유도체 또는 GLP-1 유사체의 유도체를 의미한다. 한 구체예에서 GLP-1 펩티드는 인슐린 자극제이다.
본원에 사용된 용어 "인슐린 자극제"는 사람 GLP-1 수용체의 작용제인 화합물, 즉, 사람 GLP-1 수용체를 함유하는 적절한 매체에서 cAMP의 형성을 자극하는 화합물을 의미한다. 인슐린 자극제의 효능은 아래에서 기술된 바와 같이 용량-반응 곡선으로부터 EC50 값을 계산함으로써 결정된다.
사람 GLP-1 수용체를 발현하는, 안정한 유전자 전달감염된 세포계, BHK467-12A (tk-ts13)로부터 정제된 혈장 막은 GLP-1 및 펩티드 유사체로 자극하였고, Perkin Elmer Life Sciences로부터 AlphaScreenTM cAMP 분석법 키트를 사용하여 cAMP 제조의 효능을 측정하였다.
안정한 유전자 전달감염된 세포계를 NN 에서 제조하였고 높은 발현 클론을 스크리닝을 위해 선택하였다. DMEM, 5% FCS, 1% Pen/Strep 및 0. 5 mg/ml G418중의 5% C02에서 성장시켰다.
대략 80% 합류를 PBS으로 2X 세척하였고 Versene으로 수확하고, 1000 rpm에서 5 분 원심분리하고 상청액을 제거하였다. 추가 단계를 모두 얼음 위에서 행하였다. 세포 펠릿을 10 ml의 완충액 1 (20 mM Na-HEPES, 10 mM EDTA, pH=7.4)에서 20-30 초동안 Ultrathurax에 의해 균질화하고 , 20.000 rpm에서 15 min 원심분리하고 펠릿을 10 ml의 완충액 2 (20 mM Na-HEPES, 0.1 mM EDTA, pH=7.4)에서 재현탁하였다. 현탁액을 20-30 sec동안 균질화하였고 20.000 rpm에서 15 분 원심분리하였다. 완충액 2에서 현탁액, 균질화 및 원심분리를 한번 반복하였고 막을 완충액 2에서 재현탁하였고 더욱 분석하기 위해 준비하였고 -80℃에서 저장하였다.
The AlphaScreen Technology에 의해 펩티드 유발된 cAMP 제조를 측정함으로써 작용 수용체 분석을 수행하였다. The AlphaScreen Technology의 기본 원리는 내생 cAMP와 외생적으로 첨가된 비오틴-cAMP 사이의 경쟁이다. cAMP의 포획은 수용체 비드에 접합된 특정 항체를 사용함으로써 달성된다. 형성된 cAMP를 계수하고 AlphaFusion Microplate Analyzer에서 측정하였다. Graph-Pad Prisme 소프트웨어를 사용하여 EC50 값을 측정하였다.
본원에서 사용된 용어 "GLP-2 펩티드"는 GLP-2 (1-33), GLP-2 유사체, GLP-2 유도체 또는 GLP-2 유사체의 유도체를 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "엑센딘-4 펩티드"는 엑센딘-4 (1-39), 엑센딘-4 유사체, 엑센딘-4 유도체 또는 엑센딘-4 유사체의 유도체를 의미한다. 한 구체예에서 엑센딘-4 펩티드는 인슐린 자극제이다.
본원에서 사용된 용어 "안정한 엑센딘-4 펩티드" 및 "안정한 GLP-1 펩티드"는 다음 방법에 의해 결정된 바와 같이, 엑센딘-4 (1-39) 또는 GLP-1(7-37)로부터 유도된 화학적으로 변경된 펩티드, 즉, 사람에서 체내에서 적어도 10 시간의 혈장 제거 반감기를 나타내는 유사체 또는 유도체를 의미한다. 사람에서 엑센딘-4 펩티드 또는 GLP-1 펩티드의 혈장 제거 반감기의 결정을 위한 방법은 다음과 같다: 펩티드를 등장 완충액, pH 7.4, PBS 또는 어떠한 다른 적절한 완충액에 용해한다. 복용량이 말초에 바람직하게는 복부 또는 상부 넙적다리에서 주사된다. 활성 펩티드의 결정을 위한 혈액 샘플을 말단 제거 부분을 커버하기에 충분한 지속기간동안, 잦은 간격에서 취한다(예를 들어 복용전, 복용 후 1,2, 3,4, 5,6, 7,8, 10,12, 24 (일 2), 36 (일 2), 48 (일 3), 60 (일 3), 72 (일 4) 및 84 (일 4) 시간 ). Wilken 등, Diabetologia 43(51): A143, 2000에서 기술된 바와 같이 활성 펩티드의 농도의 결정을 수행한다. 시중에서 입수가능한 소프트웨어 WinNonlin Version 2.1 (Pharsight, Cary, NC, USA)을 사용하여, 비-구분된 방법의 사용에 의해 각각의 개인의 대상에 대한 농도-시간 데이타로부터 유도된 약동학 매개변수를 계산한다. 말단 제거 속도 상수는 농도-시간 곡선의 말단 로그-선형부분에서 로그-선형 회귀에 의해 추정되고, 제거 반감기를 계산하기 위해 사용된다.
폴리펩티드를 말하는 본원에서 사용된 용어 "DPP-IV 보호된"은 혈장 펩티다아제 디펩티딜 아미노펩티다아제-4 (DPP-IV)에 저항력있는 상기 화합물을 만들기 위해서 화학적으로 변경된 폴리-펩티드를 의미한다. 혈장에서 DPP-IV 효소가 몇개의 펩티드 호르몬, 예를 들어 GLP-1, GLP-2, 엑센딘-4 등의 분해에서 수반될 것으로 알려져 있다. 따라서, DPP-IV에 의한 분해 속도를 줄이기 위해서 DPP-IV 매개된 가수분해에 민감한 폴리펩티드의 유사체와 유도체를 개발하기 위한 상당한 노력이 만들어진다.
디펩티딜 아미노펩티다아제 IV에 의해 펩티드의 분해에 대한 저항성은 다음의 분해 분석법에 의해 결정된다:
펩티드의 알리콧을 정제된 디펩티딜 아미노펩티다아제 IV의 알리콧으로 4-22 시간동안 pH 7-8에서 적절한 완충액에서 37℃에서 배양한다(완충액은 알부민이 아니다). 트리플루오로아세트산을 추가함으로써 효소 반응을 종료하고, 펩티드 분해 생성물을 분리하고 HPLC 또는 LC-MS 분석을 사용하여 정량한다. 이 분석을 수행하기 위한 하나의 방법은: 혼합물을 Zorbax 300SB-C18 (30 nm 기공, 5 μm 입자) 150 x 2.1 mm 칼럼 위에 도포하고 0.1% 트리플루오로아세트산 중의 아세토니트릴의 선형구배로(30분에 걸쳐서 0%-100% 아세토니트릴) 0.5 ml/min의 유속에서 용출시킨다. 펩티드와 그들의 분해 생성물은 214 nm (펩티드 결합) 또는 280 nm (방향족 아미노산)에서 그들의 흡광도에 의해 모니터링될 수 있고, 그들의 피크 영역의 통합에 의해 정량화된다. 분리된 피크의 MS 스펙트럼이 결정될 수 있는 LC-MS을 사용함으로써 분해 패턴은 결정될 수 있다. 펩티드 DPPIV 안정성의 평가를 위해 주어진 시간에서 퍼센트 손상되지 않은/분해된 화합물을 사용한다.
펩티드는 그것이 주어진 시간에서 퍼센트 손상되지 않은 화합물에 기반한 천연 펩티드보다 10 배 더 안정할때 안정화된 DPPIV로서 정의된다. 따라서, DPPIV 안정화 GLP-1 화합물은 GLP-1(7-37)보다 적어도 10 배 더 안정하다.
본원에서 사용된 용어 "C1 -6-알킬"은 1 내지 6 탄소 원자를 갖는 포화, 분지, 직쇄 또는 환식 탄화수소 기를 의미한다. 대표적인 예는 이것으로 한정되지는 않지만, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, 부틸, 아이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n- 펜틸, 아이소펜틸, 네오펜틸, 테프-펜틸, n-헥실, 아이소헥실, 사이클로헥세인등을 포함한다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 친수성 스페이서를 통해 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 폴리펩티드와, 이들 원자의 30-50% 가 N 또는 O 인 적어도 5 비-수소 원자를 포함하는 화학 부분을 갖는 알부민 결합 잔기를 분리시키는 친수성 스페이서를 통해 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물에 관한 것이다.
본 발명의 한 구체예에서 스페이서는 다음과 같이 정의된다
-(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-, 이때
I, m 및 n은 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G은 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(0)-, 및 -P (OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6 는 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-,-OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-,-C(O)CH=CH-, -(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O-또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 그것의 프로드러그이다.
본 발명은 또한 다음의 화학식 (I)을 갖는 화합물에 관한 것이다 :
A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 (I)
상기식에서
A는 알부민 결합 잔기,
B 는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-인 친수성 스페이서이고, 이때
I, m 및 n 독립적으로 1-20 이고 p는 0-10이고,
Q 는 -Z-(CH2)1D[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1-6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
Y는 B 와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W는 A와 B를 연결하는 화학기이다.
본 발명은 또한 화학식 (II)를 갖는 화합물에 관한 것이다
A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 -Y'-B'-W'-A' (II)
상기식에서
A와 A'는 알부민 결합 잔기이고,
B와 B'는 독립적으로 -(CH2)ID [(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고,
이때
I, m 및 n 는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-이고,
q 는 0 내지 5 범위의 정수이고,
각각의 D, E, 와 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR (O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s 는 0 또는 1이고,
Y 는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
Y'는 B'와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W는 A와 B를 연결하는 화학기이고,
W' 는 A'와 B'를 연결하는 화학기이다.
본 발명의 한 구체예에서 Y'는 -C(O)NH-, -NHC(O)-,-C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-,-OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-,-C(O)CH2-, -CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-,-(CH2 )s-,-C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 W'는 -C(O)NH-,-NHC(O)-,-C(O)NHCH2-,-CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-,-NHC(0)O-, -C(O)CH2-,-CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이다.
또다른 관점에서 본 발명은 화학식(III)을 갖는 화합물에 관한 것이다.
Figure 112006019302320-PCT00002
상기식에서
A와 A는 알부민 결합 잔기이고,
B는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고 상기식에서
I, m와 n는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
Q 는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6) (O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-6-알킬을 나타내고,
Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
Y는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
W"는 B를 A와 A'와 연결하는 화학기이다.
또다른 관점에서 본 발명은 치료 펩티드와 하나 이상의 알부민 결합 잔기(들) 사이에서 친수성 스페이서를 포함하는 화합물에 관한 것이고, 상기 화합물은 치료 폴리펩티드에 비해 작용의 장기의 프로파일을 갖고, 이때 상기 화합물의 자유 부분은 물론이고 알부민 결합 부분은 둘다 치료 폴리펩티드의 효과를 매개하는 수용체에 결합할 수 있다.
한 구체예에서 친수성 스페이서는 치료 폴리펩티드의 아미노기와 알부민 결합 잔기의 작용기 사이에 다리를 형성하는 두개의 말단에서 적절한 작용기를 갖는 미분지 올리고 에틸렌 글리콜 부분이다.
한 구체예에서 Y는 -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-,-CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-,-CH=CHC(O)-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(0) 0-,-OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이다.
또다른 구체예에 있어서 W 는 -C(O)NH-, - NHC(O)-,-C(O)NHCH2-,-CH2NHC(O)-,-OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)CH2-,-CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-,-CH=CHC(O)-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O-,-OC(O)-,-NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이다.
또다른 구체예에 있어서 W"는
Figure 112006019302320-PCT00003
로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0,1 또는 2이다.
또다른 구체예에 있어서 I는 1 또는 2이고, n과 m은 독립적으로 1-10이고 p 는 0-10이다.
또다른 구체예에 있어서 D 는 -O-이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 E 는 -0-이다.
본 발명의 여전히 또다른 구체예에서, 친수성 스페이서는 -CH2O[(CH2)2O]m(CH2)pQq-이고, 이때 m은 1-10이고, p는 1-3이고, Q는 -Z-CH20 [(CH2)2O]m (CH2)p-이다.
또다른 구체예에 있어서 q는 1이다.
또다른 구체예에 있어서 G는 -O-이다.
본 발명의 여전히 또다른 구체예에서 Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, 및 -OC(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
여전히 또다른 구체예에서 q는 0이다.
또다른 구체예에 있어서 I는 2이다.
또다른 구체예에 있어서 n은 2이다.
여전히 또다른 구체예에서 친수성 스페이서 B는 -[CH2CH20]m+1(CH2)pQq-이다.
여전히 또다른 구체예에서 친수성 스페이서 B는 -(CH2)I-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)I-O-(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-, 이때 1, m, n, 과 p는 독립적으로 1-5이고, q는 0-5이다.
여전히 또다른 구체예에서 -W-B-Y-는 하기로 구성되는 군으로부터 선택된다
Figure 112006019302320-PCT00004
여전히 또다른 구체예에서 >W"-B-Y-는
Figure 112006019302320-PCT00005
여전히 또다른 구체예에서 알부민 결합 잔기 A는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되고
Figure 112006019302320-PCT00006
상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00007
상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00008
상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00009
상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00010
상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00011
상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 L 또는 D중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00012
상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00013
상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00014
상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00015
상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
Figure 112006019302320-PCT00016
Figure 112006019302320-PCT00017
Figure 112006019302320-PCT00018
여전히 또다른 구체예에서 친수성 스페이서의 몰 중량은 80D 내지 1000D 또는 80D 내지 300D의 범위이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서, 알부민 결합 잔기는 친유성 잔기이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 생리학적 pH에서 음으로 하전된다. 또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 음으로 하전될 수 있는 기를 포함한다. 음으로 하전될 수 있는 하나의 바람직한 기는 카르복실산 기이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서, 알부민 결합 잔기는 비-공유결합으로 알부민에 결합한다. 또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 약 10 μM 미만 또는 약 1 μM 미만인 사람 혈청 알부민을 향한 결합 친화력을 갖는다.
본 발명의 여전히 또다른 구체예에서 알부민 결합 잔기는 직쇄 알킬기, 분지 알킬 기, ω-카르복실산 기, 부분적으로 또는 완전히 수소화된 사이클로펜타노페난트렌 골격을 갖는 기로부터 선택된다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 사이바크로닐 잔기이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 6 내지 40 탄소 원자, 8 내지 26 탄소 원자 또는 8 내지 20 탄소 원자를 가진다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 CH3(CH2)6CO-를 포함하는 군으로부터 선택된(이때 r는 4 내지 38의 정수, 바람직하게는 4 내지 24의 정수임), 보다 바람직하게는 CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO- 및 CH3(CH2)22CO-을 포함하는 군으로부터 선택된 기를 포함하는 아실 기이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 직쇄-또는 분지 알케인 α, ω-디카르복실산의 아실기이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 HOOC(CH2)sCO-를 포함하는 군으로부터 선택된(이때 s 는 4 내지 38의 정수, 바람직하게는 4 내지 24의 정수), 보다 바람직하게는 HOOC(CH2)14CO-, HOOC(CH2)16CO-, HOOC(CH2)18CO-, HOOC(CH2)20C0- 및 HOOC(CH2)22CO-을 포함하는 군으로부터 선택된 아실기이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 화학식 CH3(CH2)vCO-NHCH (COOH)(CH2)2CO-의 기이고, 이때 v 는 10 내지 24의 정수이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 CH3(CH2)wCO-NHCH ((CH2)2COOH)CO-의 화학식의 기이고, 이때 w 는 8 내지 24의 정수이다.
또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 화학식 COOH(CH2)CO-의 기이고, 이때 x 는 8 내지 24의 정수이다. 또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기 는 화학식 -NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)yCH3의 기이고, 이때 y 는 8 내지 18의 정수이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 알부민 결합 잔기는 40미만 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드와 같은, 펩티드이다. 그들의 동정을 위한 방법은 물론이고, 알부민 결합 잔기인 많은 작은 펩티드는 J. Biol Chem. 277,38 (2002) 35035-35043에서 발견된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 스페이서와 링커를 통한 알부민 결합 잔기가 리신 잔기의 ε-아미노 기를 통해 상기 치료 폴리펩티드에 부착된다.
또다른 구체예에 있어서 스페이서와 링커를 통한 알부민 결합 잔기는 시스테인, 글루타메이트 및 아스파르테이트로부터 선택된 아미노산 잔기를 통해 상기 치료 폴리펩티드에 부착된다.
본 발명의 한 구체예에서 치료 폴리펩티드는 GLP-1 펩티드이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 화학식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 GLP-1 펩티드이다 :
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46
화학식 (IV) (SEQ ID No: 2)
상기식에서
Xaa7 는 L-히스티딘, D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, (3-히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸-히스티딘, 3- 피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 또는 4-피리딜알라닌이고 ;
Xaa8 는 Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-아미노사이클로프로필)카르복실산, (1-아미노사이클로부틸)카르복실산, (1-아미노사이클로펜틸)카르복실산, (1-아미노사이클로헥실)카르복실산, (1-아미노사이클로헵틸)카르복실산, 또는 (1-아미노사이클로옥틸)카르복실산이고;
Xaa16 은 Val 또는 Leu이고;
Xaa18은 Ser, Lys 또는 Arg이고;
Xaa19는 Tyr 또는 Gln이고;
Xaa20 는 Leu 또는 Met이고;
Xaa22 는 Gly, Glu 또는 Aib이고;
Xaa23 는 Gln, Glu, Lys 또는 Arg 이고;
Xaa25 는 Ala 또는 Val 이고;
Xaa26 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
Xaa27 는 Glu 또는 Leu이고;
Xaa30 는 Ala, Glu 또는 Arg이고;
Xaa33 는 Val 또는 Lys이고;
Xaa34 는 Lys, Glu, Asn 또는 Arg이고;
Xaa35 는 Gly 또는 Aib;
Xaa36 는 Arg, Gly 또는 Lys이고;
Xaa37 는 Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, 아미드 또는 부재이고;
Xaa38 는 Lys, Ser, 아미드 또는 부재이다.
Xaa39 는 Ser, Lys, 아미드 또는 부재이고;
Xaa40 는 Gly, 아미드 또는 부재이고;
Xaa41 는 Ala, 아미드 또는 부재이고;
Xaa42 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
Xaa43 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
Xaa44 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
Xaa45 는 Ser, 아미드 또는 부재이고;
Xaa46 는 아미드 또는 부재이고;
단, 만일 Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 또는 Xaa46 가 부재라면, 그때 하류에 있는 각각의 아미노산 잔기도 또한 부재이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 폴리펩티드는 화학식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 GLP-1 펩티드이다 :
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-lle-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
화학식 (V) (SEQ ID No: 3)
상기식에서
Xaa7 는 L-히스티딘, D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, ß-히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸-히스티딘, 3- 피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 또는 4-피리딜알라닌이고 ;
Xaa8 는 Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-아미노사이클로프로필)카르복실산, (1-아미노사이클로부틸)카르복실산, (1-아미노사이클로펜틸)카르복실산, (1-아미노사이클로헥실)카르복실산, (1-아미노사이클로헵틸)카르복실산, 또는 (1-아미노사이클로옥틸)카르복실산이고;
Xaa18 는 Ser, Lys 또는 Arg이고;
Xaa22 는 Gly, Glu 또는 Aib이고;
Xaa23 는 Gln, Glu, Lys 또는 Arg 이고;
Xaa26 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
Xaa30 는 Ala, Glu 또는 Arg이고;
Xaa34 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
Xaa35 는 Gly 또는 Aib이고;
Xaa36 는 Arg 또는 Lys이고;
Xaa37 는 Gly, Ala, Glu 또는 Lys;
Xaa38 는 Lys, 아미드 또는 부재이다.
본 발명의 여전히 또다른 구체예에서 GLP-1 펩티드는 GLP- 1 (7-35), GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-36)-아미드, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1 (7-39), GLP-1 (7-40), GLP-1 (7-41) 또는 그것의 유사체로부터 선택된다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 GLP-1 (7-35), GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-36) 아미드, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1 (7-39), GLP-1 (7-40) 및 GLP-1 (7-41) 또는 그것의 유사체를 포함하는 군으로부터 선택된 펩티드의 단편이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 GLP-1 (A-B)이고(이때 A 는 1 내지 7의 정수이고 B 는 38 내지 45의 정수이다) 또는 친수성 스페이서를 통해 C-말단 아미노산 잔기 및, 선택적으로, 다른 아미노산 잔기 중 하나에 부착된 두번째 알부민 결합 잔기에 부착된 하나의 알부민 결합 잔기를 포함하는 그것의 유사체이다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할때 교환되고, 첨가되거나 또는 삭제된 15 미만의 아미노산 잔기, 또는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할 때 교환되고, 첨가되거나 또는 삭제된 10개 미만의 아미노산 잔기를 포함한다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할때 교환되고, 첨가되거나 또는 삭제된 6미만의 아미노산 잔기를 포함한다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 유전자 코드에 의해 인코딩되지 않은 4미만의 아미노산 잔기를 포함한다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 DPPIV 보호된 GLP-1 펩티드이다.
또다른 구체예에 있어서 본 발명에 따르는 화합물은 DPPIV 안정화된다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 위치 8에서 Aib 잔기를 포함한다.
또다른 구체예에 있어서 상기 GLP-1 펩티드의 위치 7에서 아미노산 잔기는 D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, ß- 히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸- 히스티딘, 3-피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 및 4-피리딜알라닌으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 Arg34GLP-1(7-37), Lys38Arg GLP-1(7-38), Lys38Arg26 ,34GLP-1(7-38)-OH, Lys36Arg26 ,34GLP-1 (7-36), Aib8 ,22,35 GLP-1(7-37), Aib8 ,35GLP-1(7-37), Aib8 ,22 GLP-1(7-37), Aib8 ,22,35Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Arg34Lys3sGLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22Arg34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Lys37GLP-1(7-37), Aib8 ,35Lys37GLP-1(7-37) 및 Aib8 ,22Lys37GLP-1(7-38)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 아미노산 서열 SEQ ID No : 1에 비해 위치 23,26, 34,36 또는 38 에서 아미노산 잔기를 통해 상기 친수성 스페이서에 부착된다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 엑센딘-4 (SEQ ID NO 4)이다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 ZP-10이고, 즉,
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-아미드 (SEQ ID NO 5).
또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX이고, 이때 X = P 또는 Y, 또는 단편 또는 그것의 유사체이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 GLP-1 펩티드는
Arg18, Leu20, Gln34,Lys33(Nε-(γ-아미노부티로일(Nα-헥사데카노일))) 엑센딘-4-(7-45)-아미드 또는
Arg33, Leu20, Gln34,Lys18 (Nε-(γ-아미노부티로일(Nα-헥사데카노일))) 엑센딘-4-(7-45)-아미드,
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 하나의 알부민 결합 잔기는 친수성 스페이서를 통해 GLP-1 펩티드의 C-말단 아미노산 잔기에 부착한다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 두번째 알부민 결합 잔기는 GLP-1 펩티드의 C-말단 아미노산 잔기가 아닌 아미노산 잔기에 부착된다.
또다른 구체예에 있어서, 친유성 치환기는 스페이서의 카르복실기 기가 GLP-1 펩티드의 아미노기와 아미드 결합을 형성하도록 하는 식으로, 친수성 스페이서에 의해 GLP-1 펩티드에 부착된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 화합물은 다음으로 구성되는 군으로부터 선택된다
Nε37_ (2-(2-(2-(도데실아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22,35Lys37] GLP-1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00019
Nε37-(2-(2-(2-(17-술포헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00020
Nε37-{2-[2-(2-(15-카르복시펜타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸}-[Aib8,22,35, Lys37] GLP- 1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00021
Nε37-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35, Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00022
Nε37-(2-(2-(2-(19-카르복시노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Ai b8 , 22. 35, LyS37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00023
[Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴)-OH
Figure 112006019302320-PCT00024
[Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00025
Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노) 에톡시] 에톡시}) 아세틸-[Aib8 ,22,35]GLP-1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00026
Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노) 에톡시] 에톡시}) 아세틸-Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00027
[Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00028
[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[4-[4-(4-아미노-9,10-디옥소-3-술포-9,10-디하이드로-안트라센-1-일아미노)-2-술포-페닐아미노]-6-(2-술포-페닐아미노)-[1, 3,5] 트리아진-2-일아미노]-에톡시}- 에톡시)-아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00029
[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys (({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-카르복시펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸 아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00030
Nε37-([2-(2-{3-[2,5-디옥소-3-(15-카르복시펜타데실술파닐)-피롤리딘-1-일]- 프로피오닐아미노} 에톡시) 에톡시) 아세틸]-[D-Ala8,Lys37]-GLP-1-[7- 37] 아미드
Figure 112006019302320-PCT00031
[Aib8 ,22,35Ala37] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(11-(옥살릴아미노) 운데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-))) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00032
[Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-카르복시-펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00033
[Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[11-(5-디메틸아미노나프탈렌-1- 술포닐아미노) 운데카노일아미노] 에톡시} 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00034
[Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys (([2-(2-{2-[1-(4-클로로벤조일)-5-메톡시-2-메틸-1H-인돌- 3-일] 아세틸아미노} 에톡시) 에톡시] 아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00035
[Aib8,Arg26 ,34,Glu22 ,23,30]GLP-1H (7-37) Lys (2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00036
[Aib8,Arg26 ,34,Glu22 ,23,30] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00037
[Gly8,Arg26 ,34] GLP-1H-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00038
[Aib8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37)Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00039
[Aib8]-GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00040
[Aib8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00041
[Aib8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00042
[Gly8, Arg26 , 34] GLP1-(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00043
[Aib8] GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00044
Nε37-(2-(2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)- 아미드
Figure 112006019302320-PCT00045
Nε37-(2-(2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)- 아미드
Figure 112006019302320-PCT00046
Nε37-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00047
Nε37-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00048
Nε37-(2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22 35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00049
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)-[Aib8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00050
Nε36-(2 (2 (2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸))[Arg26,34,Lys36] GLP- 1(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00051
Nε36-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-[Gly8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00052
Nε37-(2-(2-(2-(4-4 (4,4, 5,5, 6,6, 7,7, 8,8, 9,9, 9-트리데카플루오로노나노일술파모일- 부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00053
Nε37-(2-(2-(2-(3, 3,4, 4,5, 5,6, 6,7, 7,8, 8,9, 9,10, 10, 11, 11, 12,12, 12-헤네이코사플루오로- 도데실옥시아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00054
Nε37-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일술파모일)부티릴아미노)에톡시)에톡시)아세틸)[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00055
[Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys ({2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)))-OH
Figure 112006019302320-PCT00056
[Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00057
Nε20-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-엑센딘 (1-39)
Figure 112006019302320-PCT00058
[Ala8, Arg26 , 34 GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00059
[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00060
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,Arg26,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00061
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Gly8, Arg26 , 34, Lys36] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00062
Nε37-2-(2-(2-(4-(4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00063
Nε37-2-(2-[2-(2-[2-(4-[4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)카르복시부티릴아미노]-4-(S)-카르복시부티릴아미노)에톡시] 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00064
Nε26-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8, Arg34] GLP-1-(7-37)- - OH
Figure 112006019302320-PCT00065
Nε26-2-(2-2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00066
[Gly8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(19-(카르복시)노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)- OH
Figure 112006019302320-PCT00067
[Gly8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(17-(카르복시) 헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))-OH
Figure 112006019302320-PCT00068
[Gly8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(19-(카르복시)노나데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00069
[Gly8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00070
[Gly8, Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)NH2
Figure 112006019302320-PCT00071
Nε20(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(카르복시)헵타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00072
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,Arg26 ,34,Lys36] GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00073
N-ε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Arg26 , 34, LyS36] GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00074
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Gly8, Arg26 ,34, Lys36] GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00075
Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- (옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시)- 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00076
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)-[Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00077
Nε26-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸) [Arg34] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00078
Nε26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸] [Arg34] GLP-1-(7-37)- OH
Figure 112006019302320-PCT00079
Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸- 아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00080
[Gly8, Glu22 ,23,30,Arg18 ,26,34]GLP1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시)) 에톡시) 아세틸)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00081
[이미다졸릴프로피온산7, Asp16, Aib22 ,35]GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
Figure 112006019302320-PCT00082
[이미다졸릴프로피온산7, Aib22 ,35]GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
Figure 112006019302320-PCT00083
및
[3-(5-이미다조일)프로피오닐7, Aib8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00084
또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 GLP-2 펩티드이다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-2 펩티드는 DPPIV-보호된 GLP-2 펩티드이다.
또다른 구체예에 있어서 GLP-2 펩티드는 Gly2-GLP-2 (1-33)이다.
여전히 또다른 구체예에서 GLP-2 펩티드는 Lys17Arg30-GLP-2 (1-33)이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 사람 인슐린 또는 그것의 유사체이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 AspB28-사람 인슐린, LysB28, ProB29-사람 인슐린, LysB3, GluB29-사람 인슐린, GlyA21, Arg531, ArgB32-사람 인슐린 및 des(B30) 사람 인슐린으로 구성되는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 사람 성장 호르몬 또는 그것의 유사체이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 파라티로이드 호르몬 또는 그것의 유사체이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 사람 소포 자극 호르몬 또는 그것의 유사체이다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 100 kDa미만, 50 kDa미만, 또는 10 kDa미만의 몰 중량을 가진다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드는 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF), 형질변환 성장 인자 α (TGF-α), 형질변환 성장 인자 ß (TGF-ß), 표피 성장 인자 (EGF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 인슐린 성장 인자 I (IGF-I), 인슐린 성장 인자 II (IFG-II)과 같은 성장 인자, 에리트로포페틴 (EPO), 트롬보포이에틴 (TPO) 또는 안지오포이에틴과 같은 사마토메딘, 인터페론, 프로-우로키나아제, 우로키나아제, 조직 플라스미노겐 활성제 (t-PA), 플라스미노겐 활성제 저해제 1, 플라스미노겐 활성제 저해제 2, von Willebrandt 인자, 사이토킨, 예를 들어 인터류킨 (IL) 1, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-12, IL- 13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-20 또는 IL-21와 같은 인터류킨, GM-CSF와 같은 콜로니 자극 인자 (CFS), 줄기 세포 인자, TNF-α, 림프독소-α, 림프독소-β, CD40L, 또는 CD30L와 같은 종양 괴사 인자, 프로테아제 저해제 예를 들어 아프로티닌, 효소 이를테면 수퍼옥시드 디스무타아제, 아스파라기나아제, 아르기나아제, 아르기닌 데아미나아제, 아데노신 데아미나아제, 리보누클레아제, 사타라아제, 유리카제, 빌리루빈 옥시다아제, 트립신, 파파인, 알칼리성 포스파타아제, ß-글루코로니다아제, 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라아제 또는 바트록소빈, 오피오이드, 예를 들어 엔돌핀, 엔케팔린 또는 비-천연 오피오이드, 호르몬 또는 뉴로펩티드, 예를 들어 칼시토닌, 글루카곤, 가스트린, 안드레노코르티코트로픽 호르몬 (ACTH), 콜레시스토키닌, 황체형성 호르몬, 고나도트로핀-방출 호르몬, 코리온 고나도트로핀, 코르티코트로핀-방출 인자, 바소프레신, 옥시토신, 항이뇨 호르몬, 티로이드-자극 호르몬, 티로트로핀-방출 호르몬, 릴락신, 프로락틴, 펩티드 YY, 뉴로펩티드 Y, 췌장 폴리펩티드, 렙틴, CART (코카인 및 암페타민 조절된 전사), CART 관련 펩티드, 페릴리핀, 멜라노코르틴 (멜라노사이트-자극 호르몬) 이를테면 MC-4, 멜라닌-농축 호르몬, 나트륨이뇨 펩티드, 아드레노메둘린, 엔도텔린, 세크레틴, 아밀린, 혈관활성 장 펩티드 (VIP), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성 폴리펩티드 (PACAP), 봄베신, 봄베신-형 펩티드, 티모신, 헤파린-결합 단백질, 가용성 CD4, 시상하부 방출 인자, 멜라노토닌 및 그것의 유사체로 구성되는 군으로부터 선택된다.
또다른 관점에서 본 발명은 본 발명에 따르는 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
한 구체예에서 약학적 조성물은 비경구 투여에 적합하다.
또다른 관점에서 본 발명은 약제의 제조를 위해 본 발명에 따르는 화합물의 사용에 관한 것이다.
본 발명의 한 구체예에서 치료 폴리펩티드가 GLP-1 펩티드인 본 발명에 따르는 화합물이 고혈당증, 2형 당뇨병, 손상된 글루코스 내성, 1형 당뇨병, 비만, 고혈압, 증후군 X, 고지혈증, 인지 장애, 아테롬성 동맥 경화증, 심장근육 경색증, 심장 질환 및 다른 심장혈관 장애, 뇌중풍, 염증 장 증후군, 소화불량 및 위궤양의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위해서 사용된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드가 GLP-1 펩티드인 본 발명에 따르는 화합물이 2형 당뇨병에서 질환 진행을 지연시키거나 막기 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드가 GLP-1 펩티드인 본 발명에 따르는 화합물이 음식물 섭취를 줄이고, β-세포 세포자멸사를 줄이고, β-세포 기능 및 β-세포 질량을 증가시키고, 및/또는 β-세포에 대한 글루코스 민감도를 회복시키기 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드가 GLP-2 펩티드인 본 발명에 따르는 화합물이 작은 장 증후군, 염증 장 증후군 또는 Crohns병의 치료를 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 치료 폴리펩티드가 인슐린 펩티드인 본 발명에 따르는 화합물이 고혈당증, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병 또는 β-세포 결핍의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위해 사용된다.
폴리펩티드를 인코딩하고 펩티드의 발현을 허용하는 조건하에서 적절한 영양 배지에서 폴리- 펩티드를 발현할 수 있는 DNA 서열을 함유하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법에 의해 치료 폴리펩티드가 생산될 수 있고, 그후에 결과의 펩티드는 배양으로부터 회수한다.
세포 배양에 사용된 배지는 적당한 보충물을 함유하는 최소의 또는 복합 배지와 같이, 숙주 세포를 성장시키는데 적절한 어떠한 종래의 배지가 될 수 있다. 적절한 배지는 시중의 공급업체로부터 얻을 수 있거나 또는 공개된 조리법에 따라 제조될 수 있다 (예를 들어 American Type Culture Collection의 카다로그에서). 세포에 의해 생산된 펩티드는 그후 원심분리 또는 여과에 의해 배지로부터 숙주 세포를 분리시키는 것, 염, 예를 들어 암모늄 술페이트를 사용하여 상청액 또는 여과액의 단백질성 성분들을 침전하는 것, 문제의 펩티드의 타입에 따라,다양한 크로마토그래피 과정, 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 친화력 크로마토그래피, 등에 의한 정제를 포함하는, 종래의 과정에 의해 배양 배지로부터 회수될 수 있다.
치료 폴리펩티드를 인코딩하는 DNA 서열은 예를 들어 게놈 또는 cDNA 라이브러리를 제조하고, 표준 기술에 따라 합성 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여 부합화에 의해 전부 또는 일부의 폴리펩티드에 대한 DNA 서열 코딩에 대해 스크리닝함으로써 얻어진 게놈 또는 cDNA 기원이 될 수 있다(참조, 예를 들어, Sambrook, J, Fritsch, EF and Maniatis, T, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989). 폴리펩티드를 인코딩하는 DNA 서열은 또한 확립된 표준 방법, 예를 들어 Beaucage and Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869에 의해 기술된 포스포아미다이트 방법, 또는 Matthes 등, EMBO Journal 3(1984), 801-805에 의해 기술된 방법에 의해 합성으로 제조될 수 있다. DNA 서열은 또한 특정 프라이머를 사용하여 폴리머라아제 연쇄 반응에 의해, 예를 들어 US 4,683, 202 또는 Saiki 등, Science 239 (1988), 487-491에서 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
DNA 서열을 편리하게 재조합 DNA 과정을 겪을 수 있는 어떠한 벡터 안에 삽입할 수 있고, 벡터의 선택은 종종 그것이 도입될 숙주 세포에 의존할 것이다. 따라서, 벡터는 자발적으로 복제하는 벡터, 즉, 염색체외의 실체로서 존재하는 벡터가 될 수 있고, 그것의 복제는 염색체 복제, 예를 들어 플라스미드에 독립적이다. 대안으로서, 벡터는 숙주 세포 안에 도입될 때, 숙주 세포 게놈 안으로 통합되고 그것이 통합된 염색체 (들)과 함께 복제되는 것이 될 수 있다.
벡터는 바람직하게는 펩티드를 인코딩하는 DNA 서열은 촉진자와 같은 DNA의 전사에 필요한 추가 세그먼트에 실시가능하게 연결되는 발현 벡터이다. 촉진자는 선택의 숙주 세포에서 전사 활성을 나타내는 어떠한 DNA 서열이 될 수 있고 숙주 세포와 상동 또는 이종인 단백질을 인코딩하는 유전자로부터 유도될 수 있다. 다양한 숙주 세포에서 본 발명의 펩티드를 인코딩하는 DNA의 전사를 지시하기 위해 적절한 촉진자의 예는 당업계에 잘 알려져있다, 참조. 예를 들어 위에서 Sambrook 등.
펩티드를 인코딩하는 DNA 서열은 또한, 만일 필요하다면, 적절한 종결부위, 폴리아데닐화 신호, 전사 인핸서 서열, 및 번역 인핸서 서열에 실시가능하게 연결될 수 있다. 본 발명의 재조합 벡터는 더 나아가 벡터가 문제의 숙주 세포에서 복제가능하게 하는 DNA 서열을 더 포함할 수 있다.
벡터는 또한 선택가능한 마커, 예를 들어 유전자 숙주 세포에서 결함을 보충하는 생성물 또는 약물, 예를 들어 암피실린, 키나마이신, 테트라사이클린, 클로람페니콜, 네오마이신, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트에 저항성을 주는 것을 포함한다.
본 발명의 모 펩티드를 숙주 세포의 분비 경로 안으로 지시하기 위해, 분비 신호 서열 (또한 리더 서열, 프리프로 서열 또는 프리 서열로 알려짐)은 재조합 벡터에 제공될 수 있다. 분비 신호 서열은 정확한 판독 프레임에서 펩티드를 인코딩하는 DNA 서열에 결합된다. 분비 신호 서열은 통상 펩티드를 인코딩하는 DNA 서열에 대해 5'에 위치한다. 분비 신호 서열은 펩티드와 보통 연합되거나 또는 또다른 분비된 단백질을 인코딩하는 유전자로부터 될 수 있다.
현재의 펩티드에 대해 코딩하는 DNA 서열, 촉진자 및 선택적으로 종결부위 및/또는 분비 신호 서열을 각각을 결찰하고 그들을 복제에 필요한 정보를 함유하는 적절한 벡터 안으로 삽입하는데 사용된 과정은 당업자들에게 잘 알려져있다(cf. 예를 들어, 상기 Sambrook 등 참조).
DNA 서열 또는 재조합 벡터가 그 안에 도입되는 숙주 세포는 현재의 펩티드를 제조할 수 있는 어떠한 세포가 될 수 있고 박테리아, 효모, 균류 및 고등 진핵생물 세포를 포함한다. 잘 알려지고 업계에 사용된 적절한 숙주 세포의 예는, 제한없이, E coli, Saccharomyces cerevisiae, 또는 포유동물 BHK 또는 CHO 세포계이다.
본 발명에 따라 GLP-1 부분으로서 유용할 수 있는 화합물의 예는 GLP-1(7-37) 및 그것의 작용 유도체를 포함하는 펩티드 단편과 인슐린 자극제로서 그것의 사용에 관한 International Patent Application No. WO 87/06941 (The General Hos pital Corporation)에 기술된다.
더 나아가 GLP-1 유사체는 GLP-1 (7-36) 및 그것의 작용 유도체를 포함하고 GLP-1 (1-36) 또는 GLP-1 (1-37)의 인슐린자극 활성을 초과하는 인슐린otropic 활성을 갖는 펩티드 단편과 인슐린 자극제로서의 그들의 사용에 관한 International Patent Application No. 90/11296 (The General Hospital Corporation)에 기술된다.
International Patent Application No. 91/11457 (Buckley 등.)은 본 발명에 따라 GLP-1 부분으로서 또한 유용할 수 있는 활성 GLP-1 펩티드 7-34,7-35, 7-36, 및 7-37의 유사체를 개시한다.
약학적 조성물
본 발명에 따라 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 예를 들어 Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 또는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19판, 1995에서 기술된 바와 같은 종래의 기술에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 한가지 목표는 약 0.1 mg/ml 내지 약 25 mg/ml의 농도로 존재하는, 본 발명에 따르는 화합물을 포함하는 약학 제제를 제공하는 것이고, 상기 제제는 2.0 내지 10.0.의 pH를 갖는다. 약학 제제는 약 0.1 mg/ml 내지 약 50 mg/ml의 농도로 존재하는 본 발명에 따르는 화합물을 포함할 수 있고, 상기 제제는 2.0 내지 10.0의 pH를 갖는다. 제제는 완충액 시스템, 보존제(들), 등장성 작용제(들), 킬레이트제(들), 안정화제 및 계면활성제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서 약학 제제는 수성 제제이고, 즉, 제제가 물을 포함한다. 그러한 제제는 전형적으로 용액 또는 현탁액이다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 약학 제제는 수성 용액이다. 용어 "수성 제제"는 적어도 50 % w/w 물을 포함하는 제제로서 정의된다. 마찬가지로, 용어 "수성 용액"은 적어도 50 % w/w 물을 포함하는 용액으로서 정의되고, 용어 "수성 현탁액"은 적어도 50 % w/w 물을 포함하는 현탁액으로서 정의된다.
또다른 구체예에 있어서 약학 제제는 냉동 건조 제제이고, 거기에 내과의사 또는 환자가 사용하기 전에 용제 및/또는 희석제를 첨가한다.
또다른 구체예에 있어서 약학 제제는 어떠한 앞선 용해없이 사용할 준비된 건조 제제이다 (예를 들어 냉동 건조 또는 분무 건조됨).
더 나아간 관점에서 본 발명은 본 발명에 따르는 화합물의 수성 용액, 및 완충액을 포함하는 약학 제제에 관한 것이고, 이때 상기 화합물은 0.1 mg/ml 또는 그 이상의 농도로 존재하고, 이때 상기 제제는 약 2.0 내지 약 10.0의 pH를 가진다.
더 나아간 관점에서 본 발명은 본 발명에 따르는 화합물, 및 완충액의 수성 용액을 포함하는 약학 제제에 관한 것이고, 이때 상기 화합물은 0.1 mg/ml 또는 그 이상의 농도로 존재하고, 이때 상기 제제는 약 7.0 내지 약 8. 5의 pH를 갖는다.
본 발명의 또다른 구체예에서 제제의 pH는 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2. 8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8. 0,8. 1,8. 2,8. 3,8. 4,8. 5,8. 6,8. 7,8. 8,8. 9,9. 0,9. 1,9. 2,9. 3,9. 4,9. 5,9. 6,9. 7,9. 8, 9.9, 및 10.0으로 구성되는 리스트로부터 선택된다. 바람직하게는, 제제의 pH는 본 발명에 따르는 화합물의 등전위점로부터 적어도 1 pH 유닛, 보다 바람직하게는 제제의 pH는 본 발명에 따르는 화합물의 등전위점으로부터 적어도 2 pH 유닛이다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 완충액은 나트륨 아세테이트, 나트륨 카보네이트, 시트레이트, 글리실글리신, 히스티딘, 글리신, 리신, 아르기닌, 나트륨 이수소 포스페이트, 이나트륨 수소 포스페이트, 나트륨 포스페이트, 및 트리스 (히드록시메틸)-아미노메테인, 헵스, 바이신, 트리신, 말산, 숙시네이트, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 아스파르트산 또는 그것의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다. 이들 특정 완충액 중 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 약학적으로 허용가능한 보존제를 더욱 포함한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제는 페놀, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 메틸 p-히드록시벤조에이트, 프로필 p-히드록시벤조에이트, 2-페녹시에탄올, 부틸 p- 히드록시벤조에이트, 2-페닐에탄올, 벤질 알코올, 에탄올, 클로로부탄올, 및 티오메로살, 브로노폴, 벤조산, 이미두레아, 클로로헥시딘, 나트륨 데하이드로아세테이트, 클로로크레졸, 에틸 p-히드록시벤조에이트, 벤제토늄 클로라이드, 클로페네신 (3p-클로르페녹시프로페인-1, 2- 디올) 또는 그것의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제가 0.1 mg/ml 내지 30 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제는 0.1 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제는 0.1 mg/ml 내지 5 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제는 5 mg/ml 내지 10 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 보존제는 10 mg/ml 내지 20 mg/ml의 농도로 존재한다. 이들 특정 보존제의 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다. 약학적 조성물에서 보존제의 사용은 당업자에게 잘 알려져있다. 편의를 위해 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제 19판, 1995를 참조한다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 등장제를 더욱 포함한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 등장제는 염 (예를 들어 나트륨 클로라이드), 당 또는 당 알코올, 아미노산 (예를 들어 L-글리신, L-히스티딘, 아르기닌, 리신, 이소류신, 아스파르트산, 트립토판, 트레오닌), 알디톨 (예를 들어 글리세롤 (글리세린), 1, 2-프로페인디올 (프로필렌글리콜), 1, 3-프로페인디올, 1,3- 부테인디올) 폴리에틸렌글리콜 (예를 들어 PEG400), 또는 그것의 혼합물로 구성되는 군으로부터 선택된다. 예를 들어 프룩토스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 말토스, 락토오스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트란, 풀룰란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 녹말, 히드록시에틸 녹말 및 카르복시메틸셀룰로오스-Na를 포함하여 모노- , 디-, 또는 폴리사카라이드, 또는 물-가용성 글루칸과 같은 어떠한 당이 사용될 수 있다. 한 구체예에서 당 첨가제는 수크로스이다. 당 알코올은 적어도 하나의--OH 기를 갖는 C4-C8 탄화수소로서 정의되고, 예를 들어, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈라시티톨, 덜시톨, 자일리톨, 및 아라비톨을 포함한다. 한 구체예에서 당 알코올 첨가제는 만니톨이다. 위에서 언급한 당 또는 당 알코올은 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 당 또는 당 알코올이 액체 제조에서 가용성이고 본 발명의 방법을 사용하여 달성된 안정화 효과에 나쁜 영향을 주지 않는 한은 사용된 양의 고정된 제한은 없다. 한 구체예에서, 당 또는 당 알코올 농도는 약 1 mg/ml 내지 약 150 mg/ml이다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 등장제는 1 mg/ml 내지 50 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 등장제는 1 mg/ml 내지 7 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 등장제는 8 mg/ml 내지 24 mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 등장제는 25 mg/ml 내지 50 mg/ml의 농도로 존재한다. 이들 특정 등장제의 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
약학적 조성물에서 등장제의 사용은 당업자에게 잘 알려져있다. 편의를 위해서 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제 19판, 1995를 참조한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 더 킬레이트제를 더욱 포함한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 킬레이트제는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 시트르산, 및 아스파르트산의 염, 및 그것의 혼합물로부터 선택된다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 킬레이트제는 0.1 mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 킬레이트제는 0. 1mg/ml 내지 2mg/ml의 농도로 존재한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 킬레이트제는 2mg/ml 내지 5mg/ml의 농도로 존재한다. 이들 특정 킬레이트제의 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다. 약학적 조성물에서 킬레이트제의 사용은 당업자들에게 잘 알려져있다. 편의를 위해서 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제 19판, 1995를 참조한다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 안정화제를 더욱 포함한다. 약학적 조성물에서 안정화제의 사용은 당업자들에게 잘 알려져있다. 편의를 위해서 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제 19판, 1995를 참조한다.
보다 구체적으로는, 본 발명의 조성물은 치료적으로 활성 성분들이 액체 약학 제제에서 저장하는 동안 응집체 형성을 가능하게 나타내는 폴리펩티드를 포함하는 안정화 액체 약학적 조성물이다. "응집체 형성"은 가용성, 또는 용액으로부터 침전하는 큰 가시적 응집체로서 남아있을 수 있는, 올리고머의 형성을 초래하는, 폴리펩티드 분자 사이에서 물리적 상호작용을 의도한다. "저장하는 동안"은 일단 제조 액체 약학 조성물 또는 제제가, 즉시 대상에 투여되지 않는다는 것을 의도한다. 오히려, 제조 후에, 그것은 액체 형태, 냉동 상태로, 또는 대상에 투여하기에 적절한 액체 형태 또는 다른 형태로 나중에 재구성하기 위해 건조 형태로, 저장을 위해 포장된다. "건조 형태"는 액체 약학적 조성물 또는 제제가 동결 건조 (즉, 냉동건조 ; 참조, 예를 들어, Williams and Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38: 48-59), 분무 건조 (참조 Masters (1991) in Spray-Drying Handbook (5th ed; Longman Scientific and Technical, Essez, U. K. ), pp. 491-676; Broadhead 등 (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18: 1169-1206; 및 Mumenthaler 등 (1994) Pharm. Res. 11: 12-20), 또는 공기 건조 (Carpenter and Crowe (1988)Cryobiology 25: 459-470; and Roser (1991) Biopharm. 4: 47-53)에 의해 건조된다는 의도이다. 액체 약학적 조성물을 저장하는 동안 폴리펩티드의 응집체 형성은 그 폴리펩티드의 생물학적 활성에 부정적으로 영향을 줄 수 있고, 약학 조성물의 치료 효능의 손실을 초래한다. 더 나아가, 응집체 형성은 폴리펩티드-함유 약학적 조성물을 주입 시스템을 사용하여 투여할 때 관류, 막, 또는 펌프의 봉쇄와 같은 다른 문제들을 야기할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 조성물을 저장하는 동안 폴리펩티드에 의한 응집체 형성을 감소시키는데 충분한 양의 아미노산 염기를 더욱 포함할 수 있다. "아미노산 염기"는 아미노산 또는 아미노산의 조합을 말하며, 이때 어떠한 주어진 아미노산은 그것의 자유 염기 형태 또는 그것의 염 형태로 존재한다. 아미노산의 조합이 사용될 때, 모든 아미노산은 그들의 자유 염기 형태로 존재할 수 있고, 모두 그들의 염 형태로 존재할 수 있고, 또는 일부는 그들의 자유 염기 형태로 존재할 수 있는 반면, 다른 것들은 그들의 염 형태로 존재한다. 한 구체예에서, 본 발명의 조성물을 제조하기 위해 사용된 아미노산은 아르기닌, 리신, 아스파르트산, 및 글루탐산과 같이 하전된 측쇄를 운반하는 것들이다. 한 구체예에서, 본 발명의 조성물을 제조하기 위해 사용된 아미노산은 글리신이다.
특정한 아미노산 (예를 들어 메티오닌, 히스티딘, 이미다졸, 아르기닌, 리신, 이소류신, 아스파르트산, 트립토판, 트레오닌 및 그것의 혼합물)의 어떠한 입체이성체 (즉, L 또는 D) 또는 이들 입체이성체의 조합은, 특정한 아미노산이 그것의 자유 염기 형태 또는 그것의 염 형태로 존재하는 한, 본 발명의 약학 조성물에 존재할 수 있다. 한 구체예에서 L-입체이성체가 사용된다. 본 발명의 조성물 은 또한 이들 아미노산의 유사체와 함께 조제될 수 있다. "아미노산 유사체"로 액체 약학적 본 발명의 조성물을 저장하는 동안폴리펩티드에 의한 응집체 형성을 감소시키기 위한 원하는 효과를 가져오는, 자연적으로 발생하는 아미노산의 유도체를 의도한다. 적절한 아르기닌 유사체 예를 들어, 아미노구아니딘, 오르니틴 및 N-모노에틸 L-아르기닌을 포함하고, 적절한 메티오닌 유사체는 에티오닌 및 부티오닌을 포함하고 적절한 시스테인 유사체는 S-메틸-L 시스테인을 포함한다.
다른 아미노산과 같이, 아미노산 유사체는 그들의 자유 염기 형태 또는 그들의 염 형태로 조성물 안으로 혼입된다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 아미노산 또는 아미노산 유사체가 단백질의 응집을 막거나 지연시키는데 충분한 농도로 사용된다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 메티오닌 (또는 다른 황 아미노산 또는 유사한 아미노산)은 치료제로서 작용하는 폴리펩티드가 그러한 산화의 영향을 받기 쉬운 적어도 하나의 메티오닌 잔기를 포함하는 폴리펩티드일때, 메티오닌 잔기의 메티오닌 술폭시드로의 산화를 억제하기 위해 첨가될 수 있다. "억제"는 시간에 걸쳐 메티오닌 산화된 종의 최소의 축적을 의도한다. 메티오닌 산화를 억제하는 것은 그것의 적당한 분자 형태에서 폴리펩티드의 더 큰 유지를 초래한다. 메티오닌의 어떠한 입체이성체(L, D 또는 그것의 혼합물)가 사용될 수 있다. 첨가될 양은 메티오닌 술폭시드의 양이 규제 기관에 허용가능하도록, 메티오닌 잔기의 산화를 억제하기에 충분한 양이 되어야 한다. 전형적으로, 이것은 조성물이 약10% 내지 약 30% 미만의 메티오닌 술폭시드를 함유한다는 것을 의미한다. 일반적으로, 이것은 메티오닌 잔기에 첨가된 메티오닌의 비는 약 1: 1 내지 약 1000: 1, 이를테면 10: 1 내지 약 100: 1의 범위가 되도록, 메티오닌을 첨가함으로써 달성될 수 있다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 높은 분자량 폴리머 또는 낮은 분자 화합물의 군으로부터 선택된 안정화제를 더욱 포함한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 안정화제는 폴리에틸렌 글리콜 (예를 들어 PEG 3350), 폴리비닐알코올 (PVA), 폴리비닐피롤리돈, 카르복시-/히드록시셀룰로오스 또는 그것의 유도체 (예를 들어 HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 사이클로덱스트린, 모노티오글리세롤, 티오글리콜산 및 2-메틸티오에탄올과 같은 황-함유 물질, 및 다른 염 (예를 들어 나트륨 클로라이드)로부터 선택된다. 이들 특이적 안정화제의 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
약학적 조성물은 또한 거기에서 치료적 활성 폴리펩티드의 안정성을 더욱 강화하는 추가의 안정화제를 포함할 수 있다. 본 발명에 대해 특정 관심의 안정화제는, 이것으로 한정되지는 않지만, 폴리펩티드를 메티오닌 산화에 대해 보호하는 메티오닌 및 EDTA와, 동결-해동 또는 기계적 전단과 관련된 응집에 대해 폴리펩티드를 보호하는 비이온 계면활성제를 포함한다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 제제는 계면활성제를 더욱 포함한다. 본 발명의 더 나아간 구체예에서 계면활성제는 세정제, 에톡실화 캐스터유, 폴리글리콜화 글리세리드, 아세틸화 모노글리세리드, 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 블록 폴리머 (예를 들어, Pluronie® F68, 폴록사머 188 및 407, 트라이톤 X-100과 같은 폴록사머), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 별모양 PEO, 알킬화 및 알콕실화 유도체와 같은 폴리옥시에틸렌 및 폴리에틸렌 유도체(트윈, 예를 들어 Tween-20, Tween-40, Tween-80 및 Brij-35), 폴리옥시에틸렌 히드록시스테아레이트, 모노글리세리드 또는 그것의 에톡실화 유도체, 디글리세리드 또는 그것의 폴리옥시에틸렌 유도체, 알코올, 글리세롤, 레시틴 및 인지질 (예를 들어, 포스파티딜 세린, 포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 포스파티딜 이노시톨, 디포스파티딜 글리세롤 및 스핑고마이엘린), 인지질의 유도체 (예를 들어, 디팔미토일 포스파티드산) 및 리소인지질 (예를 들어, 팔미토일 리소포스파티딜-L- 세린 및 에탄올아민의 1-아실-sn-글리세로-3-포스페이트 에스테르, 콜린, 세린 또는 트레오닌) 및 알킬, 알콕실 (알킬 에스테르), 리소포스파티딜 및 포스파티딜콜린의 알콕시 (알킬 에테르)-유도체 , 예를 들어 리소포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜콜린의 라우로일 및 미리스토일 유도체, 및 극성 헤드기, 즉 콜린, 에탄올아민, 포스파티드산, 세린, 트레오닌, 글리세롤, 이노시톨의 변형, 및 양으로 하전된 DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, 리소포스파티딜세린 및 리소포스파티딜트레오닌, 및 글리세로인지질 (예를 들어, 세팔린), 글리세로글리콜리피드 (예를 들어, 갈락토파이란소이드), 스핑고글리콜리피드 (예를 들어, 세라미드, 강글리오시드), 도데실포스포콜린, 암탉 달걀 리소레시틴, 푸시드산 유도체-(예를 들어 나트륨 타우로- 디하이드로푸시데이트 등), 장-쇄 지방산 및 C6-C12의 그것의 염 (예를 들어, 올레산 및 카프릴산), 아실카르니틴 및 유도체, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘의 Nα-아실화유도체 , 또는 리신 또는 아르기닌의 측쇄 아실화유도체, 리신, 아르기닌 또는 히스티딘의 어떠한 조합을 포함하는 디펩티드의 Nα-아실화유도체 및 중성 또는 산성 아미노산, 중성 아미노산 및 두개의 하전된 아미노산의 어떠한 조합을 포함하는 트라이펩티드의 N-아실화유도체, DSS (도쿠세이트 나트륨, CAS 등록 번호[577-11- 7]), 도쿠세이트 칼슘, CAS 등록 번호[128-49-4]), 도쿠세이트 칼륨, CAS 등록 번호[7491-09-0] ), SDS (나트륨 도데실 술페이트 또는 나트륨 라우릴 술페이트), 나트륨 카프릴레이트, 콜산 또는 그것의 유도체, 담즙산 및 그것의 염 및 글리신 또는 타우린 접합체, 우르소데옥시콜산, 나트륨 콜레이트, 나트륨 데옥시콜레이트, 나트륨 타우로콜레이트, 나트륨 글리코콜레이트, N-헥사데실-N, N-디메틸-3-맘모니오-1-프로페인술포네이트, 음이온성(알킬-아릴- 술포네이트) 1가 계면활성제, 쌍성이온 계면활성제 (예를 들어 N-알킬-N, N- 디메틸맘모니오-1-프로페인술포네이트, 3-콜아미도-1-프로필디메틸맘모니오-1-프로페인술포네이트, 양이온성 계면활성제 (4차 암모늄 염기) (예를 들어 세틸- 트라이메틸암모늄 브롬화물, 세틸피리디늄 클로라이드), 비-이온성 계면활성제 (예를 들어, 도데실 ß-D-글루코파이라노시드), 프로필렌 옥사이드와 에틸렌 옥사이드의 에틸렌디아민에의 순차적 추가로부터 유도된 테트라작용 블록 코폴리머인, 폴록사민(예를 들어, Tetronic's)으로부터 선택되거나, 또는 계면활성제는 이미다졸린 유도체, 또는 그것의 혼합물의 군으로부터 선택될 수 있다. 이들 특이적 계면활성제의 각각은 본 발명의 대안적인 구체예를 구성한다.
약학적 조성물에서 계면활성제의 사용은 당업자들에게 잘 알려져있다. 편의를 위해서 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 제 19판, 1995을 참조한다.
GLP-1 화합물의 비경구 투여를 위한 조성물은 예를 들어, WO 03/002136에서 제조된 바와 같이 제조될 수 있다.
다른 성분들이 펩티드 본 발명의 약제학적 제제에 존재할 수 있는 것이 가능하다. 그러한 추가의 성분은 습윤제, 유화제, 항산화제, 벌크화제, 독성 변경제, 킬레이트제, 금속 이온, 유성 부형제, 단백질 (예를 들어 , 사람 혈청 알부민, 젤라틴 또는 단백질) 및 쌍성이온 (예를 들어, 베타인, 타우린, 아르기닌, 글리신, 리신 및 히스티딘과 같은 아미노산 )를 포함할 수 있다. 물론, 그러한 추가의 성분은, 본 발명의 약학 제제의 전반적인 안정성에 나쁜 영향을 주지 않아야 한다.
본 발명에 따르는 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 몇몇 부위에서 예를 들어, 국소 부위, 예를 들어, 피부 및 점막 부위, 흡수, 예를 들어, 동맥에서, 정맥에서, 심장에서의 투여를 우회하는 부위, 및 흡수, 예를 들어, 피부에서, 피부 하에서, 근육 또는 복부에서 투여를 수반하는 부위에서 그러한 치료를 필요로하는 환자에게 투여될 수 있다.
본 발명에 따르는 약학 조성물의 투여는 그러한 치료를 필요로하는 환자에게 투여의 몇가지 경로를 통해, 예를 들어, 혀, 설하, 볼뒤, 입안, 경구, 위와 창자에서, 코, 폐, 예를 들어, 세기관지 및 치조 또는 그것의 조합, 표피, 피부, 경피, 질, 직장, 안구, 예를 들어 결막, 요관, 및 비경구를 통해서 행해질 수 있다.
본 발명의 조성물은 몇 가지의 투약 형태로, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 다중 에멀젼, 거품, 고약, 페이스트, 반창고, 연고, 정제, 코팅된 정제, 린스, 캡슐, 예를 들어, 경질 젤라틴 캡슐 및 연 젤라틴 캡슐, 좌약, 직장 캡슐, 드롭, 겔, 스프레이, 분말, 에어로졸, 흡입제, 안구 드롭, 안과 연고, 안과 린스, 질 페서리, 질 링, 질 연고, 주사 용액, 인시투 변형 용액, 예를 들어 인시투 겔화, 인시투 세팅, 인시투 침전, 인시투 결정화, 주입 용액, 및 임플란트로서 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 화합물의 안정성을 더욱 강화하고, 생물학적 이용가능성을 증가시키고, 용해도를 증가시키고, 부작용을 감소시키고, 당업자들에게 잘 알려진 생체시간약물요법을 달성하고, 환자 순응을 증가시키기 위해 또는 그것의 어떠한 조합을 위해 더욱 조제되거나 또는 예를 들어 공유, 소수성 및 정전성 상호작용, 약물 담체, 약물 송달 시스템 및 발전된 약물 송달 시스템을 통해 부착될 수 있다. 담체, 약물 송달 시스템 및 발전된 약물 송달 시스템의 예는, 이것으로 한정되지는 않지만, 폴리머, 예를 들어 셀룰로오스 및 유도체, 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트란 및 유도체, 녹말 및 유도체, 폴리 (비닐 알코올), 아크릴레이트 및 메타크릴레이트 폴리머, 폴리락트 및 폴리글리콜산 및 그것의 블록 코폴리머, 폴리에틸렌 글리콜, 담체 단백질, 예를 들어 알부민, 겔, 예를 들어, 열겔화 시스템, 예를 들어 당업자들에게 잘 알려진 블록 코폴리머 시스템, 미셀, 리포솜, 마이크로스피어, 나노미립자, 액체 결정 및 그것의 분산, 지질-물 시스템에서 상 거동의 당업자들에게 잘 알려진 L2 상 및 그것의 분산, 폴리머 미셀, 다중 에멀젼, 자가- 유화, 자가-마이크로유화, 사이클로덱스트린 및 그것의 유도체, 및 덴드라이머를 포함한다.
본 발명의 조성물은 예를 들어 계량된 용량 흡입기, 건조 분말 흡입기 및 흡입기를 사용하여 화합물의 폐 투여를 위한 고체, 반- 고체, 분말 및 용액의 제제에 유용하고, 모두 당업자들에게 잘 알려진 디바이스이다.
본 발명의 조성물은 제어된, 지속된, 연장된, 늦춰진, 및 느린 방출 약물 송달 시스템의 조제물에서 특히 유용하다. 보다 구체적으로는, 이것으로 한정되지는 않지만, 조성물은 당업자들에게 잘 알려진 비경구 제어 방출 및 지속 방출 시스템의 조제물에 유용하다 (두 시스템 모두 투여의 수에서 몇배 감소를 초래한다). 좀더 바람직하게는, 제어 방출 및 지속 방출 시스템은 피하 투여된다. 본 발명의 범위를 제한하지 않고, 제어 방출 시스템 및 조성물에 유용한 예는 하이드로겔, 유성 겔, 액체 결정, 폴리머 미셀, 마이크로스피어, 나노입자이다.
본 발명의 조성물에 유용한 제어 방출 시스템을 제조하기 위한 방법은 이것으로 한정되지는 않지만, 결정화, 응축, 공-결정화, 침전, 공-침전, 유상화, 분산, 높은 압력 균질화, 캡슐화, 분무 건조, 마이크로캡슐화, 코아세르베이션, 상 분리, 마이크로스피어를 제조하기 위한 용제 증발, 압출 및 초임계 유체 공정을 포함한다. 일반적으로 Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D. L., ed. Mar-Cel Dekker, New York, 2000) 및 Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E. J., ed. Marcel Dekker, New York, 2000)를 참조한다.
비경구 투여는 주사기, 선택적으로 펜-형 주사기에 의해 피하, 근육내, 복막내 또는 정맥내 주사에 의해 수행될 수 있다. 대안으로서, 비경구 투여는 주입 펌프에 의해 수행될 수 있다. 더 나아간 선택은 코 또는 폐 스프레이의 형태로 본 발명에 따르는 화합물의 투여를 위해 용액 또는 현탁액이 될 수 있는 조성물이다.
여전히 더 나아간 옵션으로서, 본 발명의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 또한 경피 투여, 예를 들어 바늘-없는 주사에 의해 또는 패치, 선택적으로 전리요법 패치로부터, 또는 점막을 통해, 예를 들어 볼뒤, 투여에 적합화될 수 있다.
용어 "안정화 제제"는 증가된 물리적 안정성, 증가된 화학적 안정성 또는 증가된 물리적 및 화학적 안정성을 갖는 제제를 말한다.
본원에서 사용된 용어 단백질 제제의 "물리적 안정성"은 단백질이 열-기계적 스트레스 및/또는 소수성 표면과 계면과 같이, 약체화하고 있는 계면과 표면과의 상호작용에 노출된 결과로서, 단백질이 단백질의 생물학적으로 비활성 및/또는 불용성 응집체를 형성하는 경향을 말한다. 수성 단백질 제제의 물리적 안정성은 다양한 시간 기간동안 다른 온도에서 적절한 용기(예를 들어 카트리지 또는 유리병)에 채워진 제제를 기계적인/물리적 스트레스 (예를 들어 교반)에 노출시킨 후에 가시적 정밀조사 및/또는 탁도 측정 에 의해 측정된다. 어두운 배경을 갖는 예리한 촛점화 광에서 제제의 가시적 정밀조사를 수행한다. 제제의 탁도는 예를 들어 0 내지 3의 스케일로(탁도를 나타내지 않는 제제는 가시적 스코어 0에 해당하고, 일광에서 가시적 탁도를 보여주는 제제는가시적 스코어 3에 해당한다) 탁도의 정도를 서열매기는 가시적 스코어에 의해 특징지어진다. 제제는 그것이 일광에서 가시적 탁도를 나타낼때, 단백질 응집에 비해 물리적 불안정한 것으로 분류된다. 대안으로서, 제제의 탁도는 당업자들에게 잘 알려진 간단한 탁도 측정에 의해 평가될 수 있다. 수성 단백질 제제의 물리적 안정성은 또한 단백질의 배좌 상태의 분광제 또는 프로브를 사용함으로써 평가될 수 있다. 프로브는 바람직하게는 단백질의 비-천연 이형태체에 우선적으로 결합하는 작은 분자이다. 단백질 구조의 작은 분자 분광 프로브의 하나의 예는 티오플라빈 T이다. 티오플라빈 T는 아밀로이드 원섬유의 검출을 위해 널리 사용된 형광 염료이다. 원섬유의 존재에 있어서, 아마도 다른 단백질 구성은 물론이고, 티오플라빈 T는 약 450 nm 에서 새로운 여기 최대값과 원섬유 단백질 형태와 결합할때 약 482 nm 에서 강화된 방출을 일으킨다. 미결합 티오플라빈 T는 파장에서 본질적으로 비-형광이다.
다른 작은 분자가 천연에서부터 비-천연 상태까지 단백질 구조의 변화의 프로브로서 사용될 수 있다. 예를 들어 우선적으로 단백질의 노출된 소수성 패치에 결합하는 "소수성 패치" 프로브. 소수성 패치는 일반적으로 그것의 천연 상태로 단백질의 제 3 구조안에 뭍히지만, 단백질이 펼쳐지거나 또는 변성하기 시작할때 노출된다. 이들 작은 분자, 분광 프로브의 예는 방향족, 소수성 염료, 이를테면 안트라센, 아크리딘, 페난트롤린 등이다. 다른 분광 프로브는 소수성 아미노산의 코발트 금속 복합체, 이를테면 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 메티오닌, 및 발린, 등과 같은 금속-아미노산 복합체이다.
본원에서 사용된 용어 단백질 제제의 "화학적 안정성"은 천연 단백질 구조와 비교할때 잠재적인 적은 생물학적 효능 및/또는 잠재적인 증가된 면역성 성질을 갖는 화학적 분해 생성물의 형성을 초래하는 단백질 구조에서의 화학적 공유 변화를 말한다. 다양한 화학적 분해 생성물은 천연 단백질의 타입과 성질 및 단백질이 노출되는 환경에 따라 형성될 수 있다. 화학적 분해의 제거는 대부분 아마도 완전히 피할 수 없고 화학적 분해 생성물의 증가하는 양은 당업자에 의해 잘 알려져 있는 바와 같이 단백질 제제의 저장과 사용하는 동안 종종 나타난다. 대부분의 단백질은 탈아미드화 경향이 있고, 이는 글루타미닐 또는 아스파라기닐 잔기에서의 측쇄 아미드 기가 가수분해되어 유리 카르복실산을 형성하는 과정이다. 다른 분해 경로는 두개이상의 단백질 분자가 공유결합으로 결합된 다이머, 올리고머 및 폴리머 분해 생성물의 형성을 초래하는 트랜스아미드화 및/또는 디술피드 상호작용을 통해 공유결합으로 각각의 다른것에 결합하는, 높은 분자량 변형 생성물의 형성을 수반한다(Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahem. T. J. & Manning M. C., Plenum Press, New York 1992). 화학적 분해의 또다른 변종으로서 산화 (예를 들어 메티오닌 잔기의)가 언급될 수 있다. 단백질 제제의 화학적 안정성은 다른 환경적 조건에 노출된 후에 (분해 생성물의 형성은 종종 예를 들어 증가하는 온도에 의해 가속화될 수 있다) 다양한 시점에서 화학적 분해 생성물의 양을 측정함으로써 평가될 수 있다. 각각의 개별적인 분해 생성물의 양은 종종 다양한 크로마토그래피 기술 (예를 들어 SEC-HPLC 및/또는 RP-HPLC)을 사용하여 분자 크기 및/또는 전하에 따라 분해 생성물을 분리함으로써 결정된다.
따라서, 위에서 약술한 바와 같이, "안정화 제제"는 증가된 물리적 안정성, 증가된 화학적 안정성 또는 증가된 물리적 및 화학적 안정성을 갖는 제제를 말한다. 일반적으로, 제제는 만기일이 도달할 때까지 사용 및 저장하는 동안에 (추천되는 사용 및 저장 조건에 순응하여) 안정적이어야 한다.
본 발명의 한 구체예에서 본 발명에 따르는 화합물을 포함하는 약학 제제는 6 주 이상의 사용 및 3년 이상의 저장 동안 안정하다.
본 발명의 또다른 구체예에 있어서 본 발명에 따르는 화합물을 포함하는 약학 제제는 4주 이상의 사용 및 3년이상의 저장 동안 안정하다.
본 발명의 더 나아간 구체예에서 본 발명에 따르는 화합물을 포함하는 약학 제제는 4주 이상의 사용 및 2년 이상의 저장동안 안정하다.
본 발명의 좀더 나아간 구체예에서 화합물을 포함하는 약학 제제는 2 주의 사용과 2년 이상의 저장 동안 안정하다.
본 발명에 따르는 GLP-1 유도체를 함유하는 약학적 조성물은 그러한 치료를 필요로하는 환자에게 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 주사기, 선택적으로 펜-형 주사기에 의해 피하, 근육내 또는 정맥내주사에 의해 수행될 수 있다. 대안으로서, 비경구 투여는 주입 펌프에 의해 수행될 수 있다. 더 나아간 옵션은 코 또는 폐 스프레이의 형태로 GLP-1 유도체의 투여를 위한 분말 또는 액체가 될 수 있는 조성물이다. 여전히 더 나아간 옵션으로서, 본 발명의 GLP-1 유도체는 또한 경피로 예를 들어 패치로부터, 선택적으로 전리요법 패치, 또는 점막을 통하여, 예를 들어 구강볼로 투여될 수 있다.
따라서, 본 발명의 GLP-1 유도체의 주사가능한 조성물은 원하는 최종 생성물을 제공하기에 적당하기 때문에 성분을 용해하고 혼합하는 것을 수반하는 제약 산업의 종래의 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
하나의 과정에 따라, GLP-1 유도체를 제조될 조성물의 최종 부피보다 다소 적은 상당량의 물에 용해시킨다. 필요하다면 등장제, 보존제 및 완충액을 첨가하고 -만일 필요하다면-산, 예를 들어 염산을 사용하여, 또는 필요하다면 염기, 예를 들어 수성 수산화나트륨을 사용하여 용액의 pH 값을 조절한다. 최종적으로, 용액의 부피는 물로 조절하여 성분의 원하는 농도를 제공한다.
위에서 언급한 성분에 더 나아가, 본 발명에 따르는 GLP-1 유도체를 함유하는 용액은 또한 용해도 및/또는 GLP-1 유도체의 안정성을 개선하기 위해 계면활성제를 함유할 수 있다.
특정 펩티드의 코 투여를 위한 조성물은 예를 들어, 유럽 특허 No. 272097 (Novo Nordisk A/S에 대해) 또는 WO 93/18785에서 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
본 발명의 한가지 바람직한 구체예에 따르면, GLP-1 유도체는 주사에 의해 투여에 적절한 조성물의 형태로 제공된다. 그러한 조성물은 사용할 준비가 된 주사가능한 용액이 될 수 있거나 또는 그것은 상당량의 고체 조성물, 예를 들어 동결건조된 제품이 될 수 있고, 이것은 그것이 주사될 수 있기 전에 용매에 용해되어야 한다. 주사가능한 용액 바람직하게는 약 2 mg/ml이상, 바람직하게는 약 5 mg/ml 이상, 보다 바람직하게는 약 10 mg/ml이상의 GLP-1 유도체, 바람직하게는, 약 100 mg/ml 미만의 GLP-1 유도체를 함유한다.
본 발명의 GLP-1 유도체는 다양한 질환의 치료에 사용될 수 있다. 어떠한 환자를 위한 특정한 GLP-1 유도체 및 최적의 용량 수준은 치료될 질병과 채택된 특이적 펩티드 유도체의 효능, 나이, 체중, 물리적 활성, 및 환자의 식이요법을 포함하는 다양한 인자, 다른 약물과의 가능한 조합, 및 경우의 심각성에 의존할 것이다. 본 발명의 GLP-1 유도체의 투약은 당업자들에 의해 각각의 개별적인 환자에 대해 결정되어야 하는 것이 권고된다.
특히, GLP-1 유도체가 비-인슐린 의존성 당뇨병의 치료를 위해 및/또는 비만의 치료를 위해 작용의 장기의 프로파일을 가지고 약제의 제조를 위해서 유용할 것이라는 것이 파악된다.
또다른 관점에서 본 발명은 약제의 제조를 위해서 본 발명에 따르는 화합물 의 사용에 관한 것이다.
한 구체예에서 본 발명은 고혈당증, 2형 당뇨병, 손상된 글루코스 내성, 1형 당뇨병, 비만, 고혈압, 증후군 X, 고지혈증, β-세포 세포자멸사, β-세포 결핍, 심장근육 경색증, 염증 장 증후군, 소화불량, 인지 장애, 예를 들어 인지 강화, 신경보호, 아테롬성 동맥 경화증, 심장 심장 질환 및 다른 심장혈관 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위해서 본 발명에 따르는 화합물의 사용에 관한 것이다.
또다른 구체예에 있어서 본 발명은 작은 장 증후군, 염증 장 증후군 또는 Crohns 질환의 치료를 위한 본 발명에 따르는 화합물의 사용에 관한 것이다.
또다른 구체예에 있어서 본 발명은 고혈당, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병 또는 β-세포 결핍의 치료를 위한 약제의 제조를 위해서 본 발명에 따르는 화합물의 사용에 관한 것이다.
본 발명에 따르는 화합물로 치료는 또한 예를 들어 항당뇨제, 항비만제, 식욕조절제, 항고혈압제, 당뇨병으로부터 기인하거나 그것과 연관된 합병증의 치료 및/또는 예방을 위한 약제 및 비만과 관련되거나 비만으로부터 기인하는 합병증과 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로부터 선택된, 두번째 또는 보다 약리학적으로 활성 물질과 조합하여 조합될 수 있다. 본 발명의 문맥에서 표현 "항당뇨제"는 인슐린 저항성 및 인슐린 저항성이 병리생리학 메카니즘인 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 화합물을 포함한다.
이들 약리학적으로 활성 물질의 예는 : 인슐린, GLP-1 작용제, 술포닐우레아 (예를 들어 톨부타미드, 글리벤클라미드, 글리피지드 및 글리클라지드), 비구아니드 예를 들어 메트포르민, 메글리티니드, 글루코시다아제 저해제 (예를 들어 아코르보스), 글루카곤 대항제, DPP-IV (디펩티딜 펩티다아제-IV) 저해제, 글루코스신합성 및/또는 글리코겐분해의 자극에 수반된 간장 효소의 저해제, 글루코스 섭취 조절제, 트로글리타존 및 시글리타존과 같은 티아졸리딘에디온, 지질 신진대사를 변경하는 화합물 이를테면 HMG CoA 저해제 (스타틴)와 같은 고지질혈증제, 음식물 섭취를 낮추는 화합물, RXR 작용제 및 β-세포의 ATP-의존성 칼륨 채널에 작용하는 작용제, 예를 들어 글리벤클라미드, 글리피지드, 글리클라지드 및 레파글리니드 ; 콜레스티라민, 콜레스티폴, 클로피브레이트, 겜피브로질, 로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 프로부콜, 덱스트로티록신, 네테글리니드, 레파글리니드 ; 알프레놀롤, 아테놀롤, 티몰롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤 및 메토프롤롤과 같은 β-차단제, 벤나제프릴, 캡토프릴, 에날라프릴, 포시노프릴, 리시노프릴, 알라트리오프릴, 퀴나프릴 및 라미프릴과 같은 ACE (안지오텐신전환 효소) 저해제, 니페디핀, 펠로디핀, 니카르디핀, 이스라디핀, 니모디핀, 딜티아젬 및 베라파밀과 같은 칼슘 채널 차단제, 및 독사조신, 우라피딜, 프라조신 및 테라조신과 같은 α-차단제; CART (코카인 암페타민 조절된 전사) 작용제, NPY (뉴로펩티드 Y) 대항제, MC4 (멜라노-코르틴 4) 작용제, 오렉신 대항제, TNF (종양 괴사 인자) 작용제, CRF (코르티코트로핀 방출 인자) 작용제, CRF BP (코르티코트로핀 방출 인자 결합 단백질) 대항제, 우로코르틴 작용제, ß3 작용제, MSH (멜라노사이트-자극 호르몬) 작용제, MCH (멜라노사이트-농축 호르몬) 대항제, CCK (콜레시스토키닌) 작용제, 세로토닌 재섭취 저해제, 세로토닌 및 노르아드레날린 재-섭취 저해제, 혼합된 세로토닌 및 노르아드레날린성 화합물, 5HT (세로토닌) 작용제, 봄베신 작용제, 갈라닌 대항제, 성장 호르몬, 성장 호르몬 방출 화합물, TRH (티레오트로핀 방출 호르몬) 작용제, UCP 2 또는 3(미결합 단백질 2 또는 3) 조절제, 렙틴 작용제, DA 작용제 (브로모크립틴, 도프렉신), 리파아제/아밀라아제 저해제, RXR (레티노이드 X 수용체) 조절제, TR ß 작용제; 히스타민 H3 대항제.
본 발명에 따르는 화합물과 하나 이상의 위에서 언급한 화합물 및 선택적으로 하나 이상의 더 나아간 약리학적으로 활성 물질과의 어떠한 적절한 조합이 본 발명의 범위 내에 있도록 고려된다는 것을 이해해야 한다.
본 발명은 다음 실시예에 의해 더욱 예증되지만, 보호의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않는다. 앞선 명세서와 하기 실시예에서 개시된 특징들은 개별적으로 그것의 어떠한 조합으로, 그것의 다양한 형태로 발명을 실현하기 위핸 재료가 될 수 있다.
시중에서 입수가능한 화학물질에 대해 하기 약어가 사용된다:
DMF : N, N-디메틸포름아미드.
DCC : N, N-디사이클로헥실카르보디이미드 NMP N-메틸-2-피롤리돈.
TFA : 트리플루오로아세트산.
THF : 테트라하이드로푸란 DIEA 디이소프로필에틸아민
H20 : 물
CH3CN : 아세토니트릴
HBTU : 2- H-벤조트리아졸-1-일)-1, 1,3, 3 테트라메틸우로늄 헥사플루오로- 포스페이트
Fmoc : 9 H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐
Boc : tert 부틸옥시카르보닐
OtBu : tert 부틸 에스테르
tBu ter 부틸
Trt : 트라이페닐메틸
Pmc : 2, 2,5, 7, 8-펜타메틸-크로만-6-술포닐
Dde : 1-(4, 4-디메틸-2, 6-디옥소사이클로헥실리덴) 에틸
DCM : 디클로로메테인
TIS : 트라이이소프로필실레인)
Et20 : : 디에틸에테르
H-Glu (OH)-OBut :: L-글루탐산 α-tert-부틸 에스테르
HOOC-(CH2)12-COONSu : ω-카르복시트리데카노산 2, 5-디옥소피롤리딘-1-일 에스테르.
HOOC-(CH2)14-COONSu : ω-카르복시펜타데카노산 2, 5-디옥소피롤리딘-1-일 에스테르.
HOOC-(CH2)16-COONSu: ω-카르복시헵타데카노산 2, 5-디옥소피롤리딘-1-일 에스테르.
HOOC-(CH2)18-COONSu : ω-카르복시노나데카노산 2, 5-디옥소피롤리딘-1-일 에스테르.
약어:
r. t 실온
PDMS: 플라즈마 탈착 질량 분석법
MALDI-MS : 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 질량 분석법
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
amu: 원자 질량 유닛
분석 :
디펩티딜 아미노펩티다아제 IV에 의한 분해에 대한 펩티드의 저항성은 다음의 분해 분석법에 의해 결정된다:
펩티드의 알리콧을 37℃에서 4-22 시간동안 pH 7-8에서 적절한 완충액에서 (완충액은 알부민이 아니다) 정제된 디펩티딜 아미노펩티다아제 IV의 알리콧으로 배양한다. 트리플루오로아세트산을 추가함으로써 효소 반응을 종료하고, 펩티드 분해 생성물을 분리시키고 HPLC 또는 LC-MS 분석을 사용하여 정량한다. 이 분석을 수행하기 위한 하나의 방법은 : 혼합물을 Zorbax 300SB-C18 (30 nm 기공, 5 μm 입자) 150 x 2.1 mm 칼럼 위에 도포하고 0.5 ml/min의 유속에서 0. 1% 트리플루오로아세트산 (30 분에 걸쳐서 0%-100% 아세토니트릴)에서 아세토니트릴의 선형구배로 용출하였다. 214 nm (펩티드 결합) 또는 280 nm (방향족 아미노산)에서의 그들의 흡광도에 의해 펩티드 및 그들의 분해 생성물을 모니터할 수 있고, 그들의 피크 영역의 통합에 의해 정량한다. 분리된 피크의 MS 스펙트럼이 결정될 수 있는 LC-MS을 사용함으로써 분해 패턴은 결정될 수 있다. 퍼센트 손상되지 않은/분해된 화합물 주어진 시간에서 펩티드 DPPIV 안정성의 평가에 대해 사용된다.
펩티드는 그것이 주어진 시간에서 퍼센트 손상되지 않은 화합물에 기반한 천연 펩티드보다 10 배 더 안정할때 안정화된 DPPIV로서 정의된다. 따라서, DPPIV 안정화 GLP-1 화합물은 GLP-1(7-37)보다 적어도 10 배 더 안정하다.
일반적인 합성 방법
펩티드는 Fmoc 보호된 Rink 아미드 수지 (Novabiochem) 또는 클로로트리틸 수지 또는 고체상 펩티드 합성에 적절한 유사한 수지에서 합성될 수 있다. Boc 화학은 사용될 수 있지만, N-메틸 피롤리돈 (N-메틸 피롤리돈)에서 HBTU (2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1, 1,3, 3 테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트) 매개된 커플링을 채택하는 FastMoc UV 프로토콜과 (HATU은 방해된 커플링에 더욱 적합하다) Fmoc 보호기의 탈보호의 UV 모니터링을 사용하여 0.25 mmol 스케일에서 Biosystems 433A 펩티드 합성기에서 궁극적으로 Fmoc 전략을 사용하는것이 좀더 편리하다. 예를 들어 Current Opinion in Chemical Biology, 2004,8 : 211-221에서 기술된 바와 같은 HBTU와 HATU 이외의 다른 커플링 시약은 또한 사용될 수 있다. 사용된 보호된 아미노산 유도체는 Bachem와 같은 공급업체로부터 구매되고 빈 카트리지로 이동되는 Fmoc-Aib-OH (Fmoc-아미노이소부티르산)와 같은 비천연 아미노산을 제외하고 ABI433A 합성기에 적절한 미리계량된 카트리지 (Applied Biosystems) 에서 공급된 표준 Fmoc-아미노산이 될 수 있다. 커플링된 마지막 아미노산은 보호된 Boc이 될 수 있다.
미정제 수지 결합된 보호된 펩티드에서 측쇄와 링커의 특이적 리신 잔기에 대한 부착은 결국 자동화 합성하는 동안에 Fmoc-Lys (Dde)-OH의 혼합 이어서 히드라진으로 선택적인 탈보호에 의해 특정 위치에서 도입될 수 있다. 다른 직교 보호기는 리신에서 사용될 수 있다.
Dde -보호의 제거를 위한 과정.
수지 (0.25 mmol)를 수동 교반기/여과 장치에 놓고 N-메틸 피롤리돈 (20 ml, 2x12 min)중의 2% 히드라진으로 처리하여 DDE 기를 제거하고 이어서 N-메틸 피롤리 돈 (4x20 ml)으로 세척할 수 있다.
리신 잔기에 측쇄의 부착을 위한 과정.
아미노산 (수지에 대해 4 몰 당량)을 N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1,10 ml)에 용해할 수 있다. 히드록시벤조트리아졸 (HOBt) (수지에 대해 4 몰 당량) 및 디이소프로필카르보디이미드 (수지에 대해 4 몰 당량 )을 첨가하고 용액을 15분동안 교반하였다. 용액을 수지에 첨가하고 디이소프로파이에틸아민 (수지에 대해 4 몰 당량)을 첨가한다. 수지를 실온에서 24 시간 교반한다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (2x20 ml), N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1) (2x20ml) 및 메틸렌 클로라이드 (2x20 ml)으로 세척한다.
Fmoc -보호의 제거를 위한 과정:
수지 (0.25 mmol)를 수동 교반 장치에서 필터 플라스크에 넣고 N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1) (2x20 ml)으로 처리하고 N-메틸 피롤리돈 (1x20 ml), N-메틸 피롤리돈 (3x20 ml, 10 min 각각중의 20% 피페리딘)의 용액으로 처리한다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (2x20 ml), N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1) (2x20ml) 및 메틸렌 클로라이드 (2x20 ml)으로 세척한다.
수지로부터 펩티드를 분열시키기 위한 과정:
실온에서 180 분동안 트리플루오로아세트산, 물 및 트라이이소프로필실레인 (95: 2.5 : 2.5)의 혼합물로 교반함으로써 펩티드가 수지로부터 분열된다. 분열 혼합물은 여과되고 질소의 스트림에 의해 여과액을 오일로 농축시킨다. 미정제 펩티드가 이 오일로부터 45 ml 디에틸 에테르로 침전디고 45 ml 디에틸 에테르로 3 회 세척한다.
정제: 미정제 펩티드를 7 μ C-18 실리카로 채워진 20 mm x 250 mm 칼럼에서 반 예비 HPLC 에 의해 정제할 수 있다. 펩티드에 따라 하나 또는 두개의 정제 시스템이 사용될 수 있다:
암모늄 술페이트: 칼럼을 0.05M (NH4)2SO4중의 40% CH3CN으로 평형유지시키고, 이것을 농축 H2SO4으로 pH 2.5로 조절한다. 건조후에 미정제 펩티드를 5 mi 50% 아세트산 H20에 용해하고 20 ml까지 H2O으로 희석시키고 칼럼 위에 주입하고 이것을 그후 0.05M (NH4)2SO4 40℃에서 50분동안 10 ml/min로 pH 2.5 중의 40%-60% CH3CN의 구배로 용출한다. 소부분들을 함유하는 펩티드를 수집하고 3 부피의 H20으로 희석시키고 Sep-Pak® C18 카트리지 (물 부분. # : 51910)을 통과시키고 이것을 0. 1% TFA으로 평형유지시켰다. 그것을 그후 0. 1 % TFA을 함유하는 70% CH3CN으로 용출하고 물로 용출액을 희석한 후에 동결건조함으로써 정제된 펩티드를 분리시킨다.
TFA: 건조후에 미정제 펩티드를 5 ml 50% 아세트산 H2O에 용해하고 20 mi까지 H20로 희석시키고 칼럼 위에 주입하였고 이것을 그후 0. 1% TFA 10 ml/min중의 40-60 % CH3CN의 구배로 50분동안 40℃에서 용출시킨다. 소부분을 함유하는 펩티드를 모은다. 물로 용출액을 희석한 후에 정제된 펩티드를 동결건조시킨다.
얻어진 최종 생성물은 분석 RP-HPLC(보유 시간) 및 LCMS에 의해 특징지어질 수 있다.
실험 섹션에서 이들에서 수행된 RP-HPLC 분석을 214 nm 에서 UV 검출 및 42℃에서 1 ml/min에서 용리된 Vydac 218TP54 4.6mm x 250mm 51l C-18 실리카 칼럼 (The Seperations Group, Hesperia, USA)을 사용하여 수행하였다. 다른 용출 조건은 다음과 같았다:
A1 : 0.1 M (NH4)2SO4을 함유하는 완충액으로 칼럼의 평형, 이것을 농축 H2SO4 으로 pH 2.5까지 조절하고, 50분동안 동일한 완충액중의 0% 내지 60% CH3CN 의 구배에 의해 용출.
B1 : 50분 동안 0% CH3CN/0. 1 % TFA/H2O 내지 60% CH3CN/0. 1 % TFA/H20의 구배에 의한 0.1% TFA/H20로 칼럼의 평형 및 용출.
B6: 0.1% TFA/H20 으로 칼럼의 평형 및 50분동안 0% CH3CN/0. 1% TFA/H2O 내지 90% CH3CN/0. 1% TFA/H20의 구배에 의한 용출.
대안적인 시스템은 다음과 같았다:
B4: Waters 2487 이중밴드 검출기가 장착된 Alliance 물 2695 시스템을 사용하여 RP-분석을 수행하였다. Symmetry300 C18,5 um, 3.9 mm x 150 mm 칼럼, 42℃을 사용하여 214nm 및 254nm 에서의 UV 검출을 수집하였다. 1.0 min/min의 유속에서 15분에 걸쳐서 5-95% 아세토니트릴, 90-0% 물, 및 물 중의 5% 트리플루오로아세트산 (1.0%)의 선형구배로 용출됨
LCMS을 Hewlett Packard 시리즈 1100 G1312A Bin 펌프, Hewlett Packard 시 리즈 1100 칼럼 구획, Hewlett Packard 시리즈 1100 G1315A DAD 다이오드 어레이 검출기, Hewlett Packard 시리즈 1100 MSD and HP Chemstation 소프트웨어에 의해 제어되는 Sedere 75 Evaporative Light Scattering 검출기로 구성된 셋업에서 수행하였다. HPLC 펌프는 다음을 함유하는 두개의 용리제 저장소에 연결된다:
A: 0.05% TFA/물
B: 0.05% TFA/아세토니트릴
또는 대안으로서 두개의 시스템은 다음이 될 수 있다:
A: 물 중의 10mM NH40H
B: 90% 아세토니트릴 중의 10mM NH40H
적절한 부피의 샘플 (바람직하게는 20 μl)을 칼럼 위로 주입함으로써 23° C에서 분석을 수행하였고 이것을 A 와 B의 구배 로 용출시킨다.
사용된 HPLC 조건, 검출기 세팅 및 질량 스펙트로미터 세팅은 다음의 표에 주어진다.
칼럼 Waters Xterra MS C-18 (50 X 3 mm id 5 μm)
구배 1. 5ml/min에서 6.5 min동안 5%-100% 아세토니트릴 선형
검출 210 nm ( DAD로부터 유사체 출력)
ELS (ELS로부터 유사체 출력)
MS 이온화 모드 API-ES. Scan 550-1500 amu 단계 0.1 amu
대안으로서, LC-MS 분석은 두개의 Perkin Elmer 시리즈 200 마이크로펌프, Perkin Elmer 시리즈 200 오토샘플러, Applied Biosystems 785A UV 검출기 및 Sedex 75 Evaporative Light(증발 광) 스캐터링 검출기가 장착된 PE-Sciex API 100 질량 스펙트로미터에서 수행될 수 있었다. Water Xterra 3.0 mm x 50 mm 5il C-18 실리카 칼럼을 실온에서 1.5 ml/min에서 용출하였다. 그것을 5 % CH3CN/0.05% TFA/H2O로 평형유지하였고 1.0 min동안 5% CH3CN/0.05% TFA/H2O으로 용출하였고 7 분에 걸쳐서 90% CH3CN/0.05% TFA/H2O까지 선형구배로 용출하였다. 검출은 214nm 및 증발 광 스캐터링에서 UV 검출에 의해 이루어졌다. 칼럼 용출액의 소부분은 PE-Sciex API 100 질량 스펙트로미터의 이온스프레이 계면 안으로 도입되었다. 작동하는 동안 매 2초마다 질량 범위 300-2000 amu를 스캔하였다.
MALDI-TOF MS 분석을 지연된 추출이 구비되고 선형 모드에서 작동된 Voyager RP 기구 (PerSeptive Biosystems Inc., Framingham, MA)을 사용하여 수행하였다. 알파-시아노-4-히드록시-신남산을 매트릭스로서 사용하였고, 질량 할당은 외부 눈금측정에 기반하였다.
실시예 1
Nε37-(2-(2-(2-(도데실아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22 35, Lys37] G LP-1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00085
수지 (Rink 아미드, 0.68 mmol/g Novabiochem 0.25 mmole)은 AB1433A 기계 제조 업체의 가이드라인에 따라 1차 서열을 제조하는데 사용되었다. 모든 보호기는 어떠한 다른 리신이라기보다는 이 리신의 특이적 탈보호를 허용하는 위치 37 (Fmo-CLys (ivDde)-OH, Novabiochem)에 사용된 잔기의 예상과 함께 산 불안정하였다.
과정
GLP-1 유사체 아미노산 서열을 함유하는 위에서 제조된 수지 (0.25 mmole)를 수동 교반기/여과 장치에 넣고 (2x12 min. 2x20 ml) 으로 N-메틸 피롤리돈중의 2% 히드라진으로 처리하여 Dde 기를 제거하였다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (4x20 ml)으로 세척하였다. Fmoc-8-아미노-3,6-디옥사옥탄산 (Neosystem FA03202) (수지에 대해 4 몰 당량)을 N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1,20 ml)을 용해하였다. 히드록시벤조트리아졸 (HOBt) (수지에 대해 4 몰 당량) 및 디이소프로필카르보디이미드 (수지에 대해 4 몰 당량) 을 첨가하였고 15분동안 용액을 교반하였다. 용액을 수지에 첨가하였고 디이소프로필에틸아민 (수지에 대해 4 몰 당량)을 첨가하였다. 수지를 24 시간 실온에서 교반하였다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (4x20 ml)으로 세척하였다. N-메틸 피롤리돈 (3x20 ml, 10 min 각각) 중의 20% 피페리딘의 용액을 교반하는 동안 수지에 첨가하였다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (4x20 ml)으로 세척하였다.
도데카노산 (수지에 대해 4 몰 당량)를 N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1,20 ml)에 용해하였다. 히드록시벤조트리아졸 하이드레이트 (HOBt ; H20) (수지에 대해 4 몰 당량) 및 디이소프로필카르보디이미드 (수지에 대해 4 몰 당량)를 첨가하였고 용액을 15분동안 교반하였다. 용액을 수지에 첨가하였고 디이소프로필 에틸아민 (수지에 대해 4 몰 당량)을 첨가하였다. 수지를 24 시간 실온에서 흔들었다. 수지를 N-메틸 피롤리돈 (2x20 ml), N-메틸 피롤리돈/메틸렌 클로라이드 (1: 1) (2x20ml) 및 메틸렌 클로라이드 (2x20 ml)으로 세척하였다. 펩티드는 180분동안 실온에서 트리플루오로아세트산, 물 및 트라이이소프로필실레인 (95: 2.5 : 2.5 15 ml)의 혼합물로 교반함으로써 수지로부터 분할되었다. 분열 혼합물을 여과시켰고 여과액을 진공에서 오일로 농축시켰다. 미정제 펩티드는 45 ml 디에틸 에테르로 이 오일로부터 침전되었고 3 회 45 ml 디에틸 에테르로 세척하였다. 미정제 펩티드를 7μ C-18 실리카로 채워진 20 mm x 250 mm 칼럼에서 예비 HPLC에 의해 정제하였다. 미정제 펩티드를 물 중 5 ml 50% 아세트산에 용해하였고 H20으로 20 ml으로 희석시켰고 칼럼 위에 주입되었고 그것은 그후 40℃에서 50분동안 40-60 % (0. 1% TFA과 함께 물중의 CH3CN) 10 ml/min의 구배로 용출되었다. 소부분을 함유하는 펩티드를 수집하였다. 물로 용출액을 희석한 후에 정제된 펩티드를 동결건조시켰다.
HPLC: (방법 B6): RT=32.8 min
HPLC: (방법 A1) : RT=43.6 min
LCMS: m/z = 765.0 (M+5H)5+, 957.0 (M+4H)4+, 1275.0 (M+3H)3+. 계산치 (M+H)+ = 3825.0
실시예 2
Nε37-(2-(2-(2-(17-술포헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib32235, Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00086
화합물을 실시예 1과 "일반 합성 방법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 A1) : RT=45.5 min
LCMS: m/z = 792.9 (M+5H)5+, 990.9 (M+4H)4+, 1320.9 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3959.9
실시예 3
Nε37-{2-[2-(2-(15-카르복시펜타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸}-[Aib8,22 35, Lys37] GLP- 1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00087
아미드 화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B1) : RT=43.8 min
HPLC: (방법 A1) : RT=42.0 min
LCMS: m/z = 978.3(M+4H)4+, 1303.8 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3909.6
실시예 4
Nε37-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35,Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00088
실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조됨.
HPLC: (방법 B1) : RT=46.4 min
HPLC: (방법 A1) : RT=44.4 min
LCMS: m/z = 985.5 (M+4H)4+, 1313.4 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3937.6
실시예 5
Nε37-(2-(2-(2-(19-카르복시노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35,Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00089
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B1) : RT=49.5 min
HPLC: (방법 A1) : RT=47.1 min
LCMS: m/z = 992.5 (M+4H)4+, 1322.6 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3965.7
실시예 6
[Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴)-OH
Figure 112006019302320-PCT00090
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다/
HPLC: (방법 B6): RT= 36. 28min
LCMS: m/z = 995 (M+4H)4+, 1326 (M+3H)3+ 계산된 (M+H)+ = 3977.6
실시예 7
[Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00091
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT=37. 1min
LCMS: m/z = 999 (M+4H)4+, 1332 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3993.7
실시예 8
Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노)에톡시]에톡시}) 아세틸-[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00092
아미드 화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT=38.2 min LCMS: m/z = 1106.7 (M+4H)4+, 1475.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4433.0
실시예 9
Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노) 에톡시] 에톡시}) 아세틸-[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00093
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT=42.9 min
LCMS: m/z = 1120.9 (M+4H)4+, 1494.2 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4480.4
실시예 10
[Aib8 ,22,35, Arg26 ,34] GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00094
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT=36.0 min
LCMS: m/z = 1032.0 (M+4H)4+, 1374.0 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4122.8
실시예 11
[Aib8 ,22,35, GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[4-[4-(4-아미노-9, 10-디옥소-3-술포-9, 10-디하이드로-안트라센-1-일아미노)-2-술포-페닐아미노]-6-(2-술포-페닐아미노)-[1, 3,5] 트리아진-2-일아미노]-에톡시}- 에톡시)-아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00095
DdeLys (Fmoc)-OH를 Rink 수지 위에 로딩함으로써 제조함. 수지를 그후 "합성 방법"에서와 같이 피페리딘으로 처리하여 Fmoc를 선택적으로 제거하였다. 2-(2-(2-(Fmoc- 아미노) 에톡시) 에톡시) 아세트산을 리신의 엡실론 아민기 위에 커플링시켰고 Fmoc을 제거하였다. DMSO 및 Cibacron Blue 3GA (17 당량) (Sigma C-9534)을 첨가하였고 혼합물을 60℃에서 15시간동안 가열하였고, 물 (3 시간), 메탄올 (2 시간), THF (2 시간) 및 디에틸 에테르 (2 시간)로 세척하였다. Dde 보호기를 제거하였고 남아있는 아미노산을 "합성 방법" 에서와 같이 첨가하였다.
HPLC: (방법 A1) : RT=38.1 min
LCMS: m/z = 1110.4 (M+4H)4+, 1436.4 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4435.9
실시예 12
[Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys (({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-카르복시펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸 아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00096
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 A1) : RT=41.2 min
HPLC: (방법 B6): RT=30.7 min
LCMS: m/z = 1069.1 (M+4H)4+, 1424.6 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4271
실시예 13
Nε37-( [2-(2-{3-[2, 5-디옥소-3-(15-카르복시펜타데실술파닐)-피롤리딘-1-일]- 프로피오닐아미노} 에톡시) 에톡시) 아세틸]-[D-Alas, Lys3']-GLP-1-[7- 37] 아미드
Figure 112006019302320-PCT00097
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 A1) : RT=45.2 min
LCMS: m/z = 1004.0 (M+4H)4+, 1338.2 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4010.7
실시예 14
[Aib8 ,22,35Ala37] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(11-(옥살릴아미노) 운데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-))) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00098
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 A1) : RT=37.9 min
HPLC(방법 B1) : RT=39.5 min
LCMS: m/z = 993.3(M+4H)4+, 1323.9 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3967.6
실시예 15
[Aib8 ,22,35, Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-카르복시-펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00099
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=31.1 min
HPLC(방법 A1) : RT=41.9 min
LCMS: m/z = 1376.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4125.8
실시예 16
[Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[11-(5-디메틸아미노나프탈렌-1- 술포닐아미노) 운데카노일아미노] 에톡시} 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00100
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 A1) : RT=42.6 min
HPLC(방법 B6): RT=30.4 min
LCMS: m/z = 1377.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4128. 8
실시예 17
[Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys (([2-(2-{2-[1-(4-클로로벤조일)-5-메톡시-2-메틸-1H-인돌- 3-일] 아세틸아미노} 에톡시) 에톡시] 아세틸)) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00101
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 A1) : RT=41.1 min
HPLC(방법 B6): RT=31.1 min
LCMS: m/z = 1351.8 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4052.0
실시예 18
[Ajb8, Arg26 ,34,Glu22 ,23,30]GLP-1H (7-37) Lys (2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00102
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=39.3 min
LCMS: m/z = 1366.6 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4095.6
실시예 19
[Ab8, Arg26 ,34, Glu22 ,23,30]GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00103
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=42.6 min
LCMS: m/z = 1375.7 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4123.7
실시예 20
[Gly8 Arg26 , 34] GLP-1H-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세 틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00104
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=38.0 min (99.9%)
HPLC(방법 A1) : RT=49.0 min
LCMS: m/z = 1054.6 (M+4H)4+ 1405.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4211.8
실시예 21
[Aib8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸) }-OH
Figure 112006019302320-PCT00105
화합물을 실시예 1과 "일반 합성 방법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=38.7 min
LCMS: m/z = 1029.2 (M+4H)4+ 1371.4 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4110.8
실시예 22
[Aib8]-GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00106
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 34.7 min
LCMS: m/z = 1000.3 (M+4H)4+ 1337.4 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4110.8
실시예 23
[Aib8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00107
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 37.5 min
LCMS: m/z = 1414.9 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4239.8
실시예 24
[Aib8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00108
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 32.4 min
HPLC(방법 A1) : RT= 43.8 min
LCMS: m/z = 1381.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4140.0
실시예 25
[Gly8, Arg26 ,34] GLP1-(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00109
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 A1) : RT= 42.3 min
LCMS: m/z = 1372.3 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4112.7
실시예 26
[Aib8] GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00110
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 33.5 min LCMS: m/z = 1040.3(M+4H)4+ 1386.6 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4155.8
실시예 27
Nε37-(2-(2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00111
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT=32.8 min
LC-MS: m/z = 765.7 (M+H)5+, 957.0 (M+H)4+, 1275.7 (M+H)3+ = 계산치 (M+H)+ = 3822.9
실시예 28
Nε37-(2-(2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)- 아미드
Figure 112006019302320-PCT00112
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 34,6 min
LC-MS: m/z = 771,4 (M+5H)5+, 964,1 (M+4H)4+, 1284,9 (M+H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3851,5
실시예 29
Nε37-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00113
실시예 1 및 "일반 합성 방법"에서의 방법에 따라 제조됨.
HPLC: (방법 B6): RT= 36,8 min
LC-MS: m/z = 970.7 (M+4H)4+, 1294.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+= 3879,6
실시예 30
Nε37-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00114
화합물을 실시예 1 및 "일반 합성 방법"에서의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 39,4 min
LC-MS: m/z = 977,9 (M+4H)4+, 1303,7 (M+H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3907,6
실시예 31
Nε37-(2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22 35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
Figure 112006019302320-PCT00115
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 42.7min
LC-MS: m/z = 984.8 (M+4H)4+, 1312.8 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3935.7
실시예 32
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)-[Aib8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00116
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) RT= 40.7min
LC-MS: m/z = 792.3(M+5H)5+, 989.8 (M+4H)4+, 1319.2 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+= 3955.5
실시예 33
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)) [Arg26 ,34,Lys36]GLP- 1(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00117
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) RT= 40.5min
LC-MS: m/z = 789.5 (M+5H)5+, 986.3(M+4H)4+, 1314.8 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3941.5
실시예 34
Nε36-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노)에톡시)에톡시]아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-[Gly8, Arg26 ,34, Lys36] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00118
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) RT= 38,3min LC-MS: m/z = 786. 8 (M+5H)5+, 982.8 (M+4H)4+, 1310.1 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+= 3927,5
실시예 35
Nε37-(2-(2-(2-(4-4 (4,4, 5,5, 6,6, 7,7, 8,8, 9,9, 9-트리데카플루오로노나노일술파모일- 부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00119
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) RT= 32.4min
LC-MS: m/z = 1042.7 (M+4H)4+, 1389.9 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4166.4
실시예 36
Nε37-(2-(2-(2-(3, 3,4, 4,5, 5,6, 6,7, 7,8, 8,9, 9,10, 10, 11, 11, 12,12, 12-헤네이코사플루오로- 도데실옥시아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00120
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) RT= 36.7 min
LC-MS: m/z = 1062. 8 (M+4H)4+, 1416.9 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+= 4247.3
실시예 37
Nε37-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일술파모일)부티릴아미노)에톡시)에톡시)아세틸)[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00121
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 37.4min LC-MS: m/z = 1008.8 (M+4H)4+ 1344.3(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4030.7
실시예 38
[Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys ({2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)})-OH
Figure 112006019302320-PCT00122
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 38.5 min
LCMS: m/z = (M+4H)4+ 1025.1 (M+3H)3+ 1366. 7 계산치 (M+H)+ = 4096.0
실시예 39
[Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시)에톡시]아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00123
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 37.7 min
LCMS: m/z = (M+4H)4+ 1057.8 (M+3H)3+ 1410.2 계산치 (M+H)+ = 4235.9
실시예 40
Nε20-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노)에톡시)에톡시]아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-엑센딘 (1-39)
Figure 112006019302320-PCT00124
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 33.6 min
LCMS: m/z = (M+4H)4+ 1205.3(M+3H)3+ 1606.9 계산치 (M+H)+ = 4816.5
실시예 41
[Ala8, Arg26,34] GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00125
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT= 32.1 min
HPLC(방법 A1) : RT= 42.2 min
LCMS : m/z = 1033.3(M+4H)4+ 1376.6 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4126.7
실시예 42
[Aib8 ,22,35]GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00126
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 B1) : RT= 37.4 min
HPLC(방법 A1) : RT= 35.5 min
LCMS: m/z = 1002.5 (M+4H)4+ 1336.7 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4007.5
실시예 43
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,Arg26,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00127
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 39.0 min LC-MS: m/z = 1022.3(M+4H)4+, 1362.3(M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 4084.6
실시예 44
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Gly8,Arg26,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00128
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 38,6 min
LC-MS: m/z = 1015.2 (M+4H)4+, 1353.4 (M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 4056.6
실시예 45
Nε37-2-(2-(2-(4-(4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00129
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B4): RT=10.72min
LCMS: m/z = 1039.0 (M+4H)4+, 1385.0 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4152.0
실시예 46
Nε37-2-(2-[2-(2-[2-(4-[4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)카르복시부티릴아미노]-4-(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35 Lys37] GLP-1-(7-37)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00130
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B4): RT=10.74 min
LCMS: m/z = 1074 (M+4H)4+, 1433(M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4297
실시예 47
Nε26-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8, Arg34] GLP-1-(7-37)- - OH
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
Figure 112006019302320-PCT00131
HPLC: (방법 B4): RT=10. 71min
LCMS :-m/z = 979.0 (M+4H)4+, 1304.0 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3910.0
실시예 48
Nε26-2-(2-2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8, Arg34] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00132
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B4): RT=11. 32 min
LCMS: m/z = 1021 (M+4H)4+, 1362 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4084
Advanced Chemtech 348 펩티드 합성기에서 (0.5 mmol/g, 100 mg 수지/구멍 및 10 구멍이 사용되었다) Fmoc 전략을 사용하여 클로로트리틸 수지 (Novabiochem)에서 펩티드를 합성하였다.
커플링은 1-메틸-피롤리딘-2-온 (NMP)중의 디이소프로필카르보디이미드 (DIC) (Fluka) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt)/1-히드록시-7-aza-벤조트리아졸 (HOAt) (2: 1) (Senn Chemicals)에서 매개되었고 10 몰 당량의 아미노산과 커플링 시약을 도포하였다. 사용된 보호된 아미노산 유도체는 아미노산 Fmoc- Lys (ivDde) (Novabiochem) 및 Fmoc-Glu-OtBu (Bachem)을 제외하고, 표준 Fmoc-아미노산 (Advanced Chemtech)이었다. 수지는 그후에 5 부분 (0.1 mmol)으로 나뉘어졌고 N-말단을 그후 NMP중의 (Boc) 20 및 DIEA (5 몰 당량)으로 처리하였다.
미정제 수지 결합 보호된 펩티드에서 특이적 리신 잔기에 대한 측쇄 및 링커의 부착은 자동화 합성과 이어서 히드라진으로 선택적인 탈보호 동안에 Fmoc- Lys (ivDde)-OH 의 혼합에 의한 특이적 위치에서 수행하였다.
Dde -보호의 제거를 위한 과정. 수지 (0.1 mmol)를 주사기에 놓았고 NMP중의 3% 히드라진 및 3% 피페리딘(실온에서 50 분)으로 처리하여 Dde 기를 제거하고 NMP (4x5 ml)으로 세척하였다.
리신 잔기로 측쇄의 부착을 위한 과정.
OEG 또는 아미노산 (수지에 대해 7 몰 당량)을 NMP에 용해하였다. HOAt (수지에 대해 7 몰 당량) 및 디이소프로필카르보디이미드 (수지에 대해 7 몰 당량) 을 첨가하였고 용액을 15분동안 교반하였다. 그후, 용액을 수지에 첨가하였다. 수지 를 밤새 실온에서 흔들었다. 수지를 NMP (3x5 ml)으로 세척하였다.
Fmoc -보호의 제거를 위한 과정 : 수지 (0.1 mmol)를 NMP (5ml in 20 min)중의 30% 피페리딘의 용액으로 처리된 주사기에 넣었다. 수지를 NMP (2x5 ml) 및 메틸렌 클로라이드 (2x5 ml)로 세척하였다.
펩티드를 수지로부터 분할시키기 위한 과정: 펩티드는 트리플루오로아세트산, 물 및 트라이이소프로필실레인 (94: 3: 3)의 혼합물과 함께 120분동안 실온에서 교반함으로써 수지로부터 분할되었다. 분열 혼합물을 여과시켰고 여과액을 질 소의 스트림에 의해 오일로 농축시켰다. 미정제 펩티드는 10 ml 디에틸 에테르로 이 오일로부터 침전되었고 10 ml 디에틸 에테르 2회 세척하였다.
실시예 49
[Gly8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(19-(카르복시)노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)- OH
Figure 112006019302320-PCT00133
클로로트리틸 수지 (0.5 mmol/g Novabiochem, 0.1 mmole)을 Advanced Chemtech 348 기계에서 1차 서열을 제조하는데 사용하였다. 모든 보호기는 어떠한 다른 리신이라기 보다는 오히려 이 리신의 특이적 탈보호를 가능하게 하는 위치 37 (FmocLys (ivDde)-OH, Novabiochem)에 사용된 잔기를 제외하고는 산 불안정하였다.
과정
GLP-1 유사체 아미노산 서열을 함유하는 위에서 제조된 수지 (0.1 mmole)를 주사기에 넣고 N-메틸 피롤리돈 (50 min)중의 3% 히드라진 및 3% 피페리딘으로 처리하여 Dde기를 제거하였다. 수지를 NMP (4x5 ml)으로 세척하였다.
Fmoc-8-아미노-3,6-디옥사옥탄산 (네오시스템 FA03202) (수지에 대해 7 몰 당량)을 NMP에 용해하였다. HOAt (수지에 대해 7 몰 당량) 및 디이소프로필-카르보 디이미드 (수지에 대해 7 몰 당량)을 첨가하였고 용액을 15분동안 교반하였다. 용액을 그후 수지에 첨가하였다. 수지를 밤새 실온에서 진탕하였다. 수지를 NMP (4x5 ml)으로 세척하였다. NMP (5 ml, 20min)중의 30% 피페리딘의 용액을 수지에 첨가하였다. 수지를 NMP (4x5 ml)으로 세척하였다. C20 및 DIEA의 N-히드록시숙시니미드 에스테르 (수지에 대해 6 몰 당량, KJ. Ross-Petersen A/S)을 NMP에 용해하였고 수지에 첨가하였다. 수지를 밤새 실온에서 진탕하였다. 수지를 NMP (3x5 mi) 및 메틸렌 클로라이드 (2x5 ml)으로 세척하였다. 펩티드는 트리플루오로아세트산, 물과 트라이이소프로필실레인의 혼합물(94: 3: 3,3 ml)과 함께 120분 동안 실온에서 교반함으로써 수지로부터 분할하였다. 분열 혼합물을 여과시켰고 여과액을 오일로 진공에서 농축시켰다. 미정제 펩티드는 10 ml 디에틸 에테르로 이 오일로부터 침전되었고 10 ml 디에틸 에테르로 2 회 세척하였다.
정제
미정제 펩티드는 5-10 mg/200 μl의 농도로 DMSO에 용해되고 40℃에서 작동하는 7. 8 x 300 mm X-Terra Prep MS C18 10 pm 칼럼에 도포되었다. 30% CH3CN, 0.08% TFA, 4 ml/min에서 5 분 후에, 칼럼은 35 분에 걸쳐서 30 내지 65% CH3CN의 선형구배로 용출되었다. 주요 UV 피크를 수동으로 수집하였고 원하는 피크는 MALDI-MS에 의해 확인되었다.
용출액중의 펩티드의 농도는 티로신과 트립토판에 대해 각각 1280 및 3690의 몰 소멸 계수를 가정하고 280 nm 에서 UV 흡수의 측정에 의해 결정되었다.
농도 결정 후에 용출액을 원하는 양을 함유하는 유리병 안으로 알리콧 하였고 진공 원심분리에 의해 건조시켰다.
HPLC: 27.9 min = 52.9% CH3CN 에서 용출한다
MALDI-MS : 3996 (MH+)
실시예 50
[Gly8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(17-(카르복시) 헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))-OH
Figure 112006019302320-PCT00134
화합물을 옥타데칸디오산 C18이 단일보호된 tert-부틸 에스테르 (수지에 대해 3몰 당량)로서 부착되었고 커플링이 NMP중의 HOAt 및 DIC(또한 수지에 대해 3몰 당량)으로 매개된 것을 제외하고, 이전의 실시예와 같이 "합성 방법" 에 따라 제조하였다. 미정제 펩티드를 정제를 위해 22. 5% CH3CN, 0.1 N NaOH에 용해시켰다.
HPLC: 25.4 min = 50.4% CH3CN 에서 용출한다.
MALDI-MS : 3969 (MH+)
실시예 51
[Gly8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(19-(카르복시)노나데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00135
화합물을 두개의 이전의 실시예에서와 같이 "합성 방법"에 따라 제조되었다. 아미노산 Fmoc-Glu (OtBu) (수지에 대해 6 몰 당량) 은 HOAt 및 DIC(수지에 대해 6 몰 당량)로 수지에 커플링되었다. 미정제 펩티드를 정제를 위해 22.5% CH3CN, 0.1 N NaOH에 용해시켰다.
HPLC: 27.2 min = 52.2% CH3CN 에서 용출한다
MALDI-MS : 4124 (MH+)
실시예 52
[Gly8sArg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸)-OH
Figure 112006019302320-PCT00136
추가의 두개의 OEG을 Lys의 측쇄에 커플링하였다는 것을 제외하고는 3가지 이전의 실시예에서와 같이 "합성 방법"에 따라 화합물을 제조하였다.
HPLC: 25.0 min = 50.0% CH3CN에서 용출한다
MALDI-MS : 4259 (MH+)
실시예 53
[Gly8, Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)NH2
Figure 112006019302320-PCT00137
실시예 1에서와 같이 "합성 방법" 에 따라 화합물을 제조하였다.
HPLC(방법 B6): RT=38.8 min
LCMS: m/z = 1022.3(M+4H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4081.7
실시예 54
Nε20 (2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(카르복시)헵타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00138
화합물을 실시예 1과 "일반 합성 방법"에서의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC(방법 A1) : RT= 41.9 min
HPLC(방법 B6): RT= 31.3 min
LCMS: m/z = 1722.7 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 5164.9
실시예 55
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(1 7-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00139
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 34,2 min
LC-MS: m/z = 997,2 (M+4H)4+, 1329,4 (M+3H)3+, 1993,2 (M+2H) 2+, 계산치 (M+H)+= 3985,5
실시예 56
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Arg26 ,34, Lys36] GLP-1(7-37)
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
Figure 112006019302320-PCT00140
HPLC: (방법 B6): RT= 34,2 min LC-MS: m/z = 993.8 (M+4H)4+, 1324.6 (M+3H)3+, 1987. 2 (M+2H) 2+, 계산치 (M+H)+= 3971.5
실시예 57
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(1 7-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Gly8,Arg26 ,34,Lys36] GLP-1(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00141
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 34,2 min
LC-MS: m/z = 990.3(M+4H)4+, 1320.3(M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 3957.4
실시예 58
Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노)에톡시)에톡시)아세틸아민)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)- 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00142
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 37.7 min
LC-MS: m/z = 1216.6 (M+4H)4+, 1621.4 (M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 4861. 5
실시예 59
Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Arg26 ,34, Lys36] GLP-1-(7-37)
Figure 112006019302320-PCT00143
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 39.1 min
LC-MS: m/z = 1018.8 (M+4H)4+, 1357.6 (M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 4070.6
실시예 60
Nε26-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸) [Arg34] GLP-1-(7-37)-OH
Figure 112006019302320-PCT00144
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B4) : RT= 12.1 min
LCMS: m/z = 993.0 (M+4H)4+, 1325.0 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 3970.0
실시예 61
Nε26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸] [Arg34] GLP-1-(7-37)- OH
Figure 112006019302320-PCT00145
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B4): RT= 11.8 min
LCMS: m/z = 1026 (M+4H)4+, 1368 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4100
실시예 62
Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸- 아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
Figure 112006019302320-PCT00146
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 32,3 min
LC-MS: m/z = 1223.9 (M+4H)4+, 1630.8 (M+3H)3+, 계산치 (M+H)+= 4891.5
실시예 63
[Gly8 Glu22 ,23,30, Arg18 ,26,34]GLP1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시)) 에톡시) 아세틸)-NH2
Figure 112006019302320-PCT00147
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6): RT= 32.0 min
HPLC: (방법 A1) : RT=43.4 min
LCMS: m/z = 1438.7 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4311.8
실시예 64
[이미다졸릴프로피온산7, Asp16, Aib22 ,35] GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
Figure 112006019302320-PCT00148
화합물을 실시예 1과 "일반 합성법"의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B1) : RT=32.5 min
HPLC: (방법 A1) : RT=43.5 min
LCMS: m/z = 1028.8 (M+4H)4+ 계산치 (M+H)+ = 4108.7
실시예 65
[이미다졸릴프로피온산7, Aib22 ,35] GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
Figure 112006019302320-PCT00149
화합물을 실시예 1 및 "일반 합성 방법"에서의 방법에 따라 제조하였다.
HPLC: (방법 B6) : RT=33.7 min
HPLC: (방법 A1) : RT=44.8 min
LCMS: m/z = 1024.8 (M+4H)4+ 1365.4 (M+3H)3+ 계산치 (M+H)+ = 4092.8
실시예 66
[3-(5-이미다졸)프로피오닐7, Aib8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노)에톡시)에톡시]아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-OH
Figure 112006019302320-PCT00150
화합물을 실시예 1 및 "일반 합성 방법"에서의 방법에 따라 제조하였다.
MALDI-MS : 4127 (MH+)
HPLC: 용출 : 25.5 min = 50.6% CH3CN
생물학적 발견
i. v. 또는 s. c. 투여 후에 GLP-1 유도체의 연장
본 발명의 수 GLP-1 유도체의 연장은 아래에 기술된 방법을 사용하여, 건강한 피그에게 sc 투여 후에 혈장 중의 그것의 농도를 모니터링함으로써 결정되었다. 비교를 위해 또한 sc. 투여 후 GLP-1(7-37)의 혈장 중에 농도가 이어졌다. 본 발명의 다른 GLP-1 유도체의 연장은 동일한 방식으로 결정될 수 있다.
미니피그에서 GLP-1 유사체의 약동학 테스팅
시험 물질을 피하 또는 정맥내투여에 적절한 부형제에 용해하였다. 농도는 투약 부피가 대략 1 ml이도록 조절하였다.
연구를 Ellegaard Gottingen Minipigs ApS로부터의 12 수컷 Gottingen 미니피그에서 수행하였다. 대략 10 일의 순응 기간은 동물이 연구에 들어가기 전에 인정되었다. 순응 기간의 시작에서 미니피그는 약 5 개월령이었고 8-10 kg의 체중 범위에 있었다.
21-23℃ 에서의 실온 세트와 50% 이상의 상대습도를 갖는 적절한 동물 방에서 연구를 수행하였다. 방에 조명을 비추어 12 시간 광과 12 시간 어둠의 싸이클을 주었다. 광은 06.00 내지 18.00 h였다.
동물은 각각의 펜에서 6마리가 함께 깔짚으로서 짚이 있는 펜에 수용되었다.
동물은 연구하는 동안 가축 양질의 음수 물에 대한 자유 접근을 가졌지만, 투약 후 대략 12 시간까지 투약전날 대략 4 pm 으로부터 단식되었다.
도착시와 투약 일에 동물의 체중을 쟀다.
동물은 단일 정맥내 또는 피하 주사를 받았다. 피하 주사를 귀로부터 대략 5-7 cm 및 목의 중앙으로부터 7-9 cm, 목의 우측에 주었다. 바늘에서 스토퍼로 주사는 주었고, 바늘의 0.5 cm가 침투되었다.
각각의 시험 물질이 3가지 동물에게 주어졌다. 각각의 동물은 2 nmol/kg 체중의 투약을 받았다.
6 동물은 남아있는 6마리가 시험된 동안 1주일에 한번 투약되었다.
전체 혈장 농도-시간 프로파일을 각각의 동물로부터 얻었다. 다음의 스케줄에 따라 혈액 샘플을 수집하였다 :
정맥내 투여후 :
투약전 (0), 주사후 0.17 (10 분), 0.5, 1,2, 4,6, 8,12, 24,48, 72,96, 및 120 시간.
피하 투여 후:
투약전 (0), 주사후 0.5, 1,2, 4,6, 8,12, 24,48, 72,96, 및 120 시간.
각각의 샘플링 시간에서, 각각의 동물로부터 2 ml의 혈액을 뽑았다. 혈액 샘플은 경정맥으로부터 취했다.
GLP-1 유사체의 효소 분해를 막기 위해 안정화를 위한 완충액을 함유하는 시험관 안으로 혈액 샘플을 수집하였다.
혈장을 즉시 마이크로닉-튜브로 이동시켰다. 대략 200 ㎕ 혈장을 각각의 마이크로닉 튜브로 이동시켰다. 혈장을 분석할때까지 -20℃에 저장하였다. 면역분석법을 사용하여, 혈장 샘플을 GLP-1 유사체의 함량에 대해서 분석하였다.
혈장 농도-시간 프로파일을 비-구분된 약동학 분석에 의해 분석하였다. 다음의 약동학 매개변수를 각각의 경우에 계산하였다:
AUC, AUC/Dose, AUC% Extrap, Cmax, tmax, λz, t1 /2. CL, CL/f, Vz, Vz/f 및 MRT.
본 발명의 선택된 화합물을 Danish Landrace 피그에서 시험하였다.
피그에서의 GLP-1 유사체의 약동학 테스팅
피그 (50% Duroc, 25% Yorkshire, 25% Danish Landrace, app 40 kg)는 실험 의 시작부터 단식되었다. 각각의 피그에게 kg 체중 당 0.5 nmol의 시험 화합물의을 50 pM 등장 용액 (5 mM 포스페이트, pH 7.4, 0.02% Tween®-20 (Merck), 45 mg/ml 만니톨 (발열원 없음, Novo Nordisk)으로 투여되었다. 혈액 샘플을 정맥 jugulais에서 카테터로부터 뽑았다. 5 ml의 혈액 샘플을 175 ㎕의 다음의 용액을 함유하는 냉각 글래스 안으로 부었다 : 0.18 M EDTA, 15000 KIE/ml 아프로티닌 (Novo Nordisk) 및 0.30 mM 발린-피롤리다이드 (Novo Nordisk), pH 7.4. 30분 내에, 샘플을 10분동안 5-6000*g에서 원심분리하였다. 온도를 4℃에서 유지하였다. 상청액을 다른 글래스로 피펫으로 옮겼고 사용할때까지 마이너스 20℃에서 유지하였다.
펩티드의 혈장 농도는 샌드위치 ELISA에서 또는 다른 모노-또는 폴리클론 항체를 사용하여 RIA 에 의해 결정되었다. 항체의 선택은 GLP-1 유도체에 의존한다. 혈장중의 피크 농도가 달성되는 시간은 선택된 특정한 GLP-1 유도체에 따라서, 넓은 제한 내에서 변한다.
96-웰 마이크로타이터플레이트에서 샌드위치 ELISA 에 대한 일반 분석법 프 로토콜
코팅 완충액 (PBS): 포스페이트 완충화 식염수, pH7.2
세척-완충액 (PBS-세척): 포스페이트 완충화 식염수, 0.05 % v/v Tween 20, pH 7.2
분석-완충액 (BSA-완충액): 포스페이트 완충화 식염수, 10 g/l 솟과 혈청 알부민 (Fluka 05477), 0.05 % v/v Tween 20, pH 7.2
스트렙타비딘-완충액 : 포스페이트 완충화 식염수, 0.5 M NaCI, 0.05 % v/v Tween 20, pH 7. 2
표준 : 혈장-매트릭스에서 개별적인 화합물
A-TNP : Nonsens 항체
AMDEX : 스트렙타빈-호스래디쉬-퍼옥소다아제(Amersham RPN4401V)
TMB-기질 : 3, 3', 5, 5'테트라메틸벤지딘 (<0.02 %), 과산화수소
다음과 같이 분석법을 수행하였다(부피/웰) :
1.)PBS-완충액중의 100 ㎕ 캐칭 항체 5 pg/ml으로 코팅한다
->배양 o/n, 4℃
-> 5x PBS-세척-> 최소 30 분후에 마지막 세척으로 차단됨
-> 그후 플레이트를 비움
2.) 10 μg/ml A-TNP 와 함께 20 ㎕ 샘플 + BSA-완충액중의 100 ㎕ 비오티닐화 검출 항체 1 μg/ml
-> 교반기에서, 배양 2 h, 실온 - 5x PBS-세척, 그후 플레이트를 비움
3.) 스트렙타비딘-완충액 중의 100 ㎕ AMDEX 1: 8000
-> 교반기에서 45-60 분 배양, 실온
-> 5x PBS-세척, 그후 플레이트를 비움
4.) 100 ㎕ TMB-기질
-> 실온에서 교반기에서 x 분 배양
-> 100 ㎕ 4 M H3PO4 으로 반응을 멈춤
참조로서 620 nm으로 450 nm에서 흡광도를 판독한다.
샘플에서의 농도는 표준 곡선으로부터의 계산치였다.
RIA 을 위한 일반 분석법 프로토콜
DB-완충액: 80 mM 포스페이트 완충액, 0.1 % 사람 혈청 알부민,
10 mM EDTA, 0.6 mM 티오머살, pH 7.5
FAM-완충액 : 40 mM 포스페이트 완충액, 0.1 % 사람 혈청 알부민,
0.6 mM 티오머살, pH 7.5
숯 : 40 mM 포스페이트 완충액, 0.6 mM 티오머살, 16.7 % 솟과 혈장,
15 g/l 활성탄, pH 7.5
(4℃에서 사용하기 최소 1H 전에 현탁액을 혼합)
표준: 혈장-매트릭스에서 개별적인 화합물
분석법을 다음과 같이 미니소프 튜브 12x75 mm (부피/튜브)에서 수행하였다:
Figure 112006019302320-PCT00151
혼합-30 min 4℃에서 배양-3000 rpm에서, 30 min 원심분리 -상청액을 새 튜브로 이동시킨 직후, 스토퍼로 폐쇄하고 1 분동안 감마-카운터에서 계수한다.
샘플의 농도은 개별적인 표준 곡선으로부터 계산되었다.
GLP-1 방사성 수용체 분석법 ( RRA ):
방법은 LEADseeker 이미징 입자를 사용하는 방사성계량-리간드 결합 분석법이다. 분석법은 GLP-1 유사체로 미표지화 GLP-1 수용체, 125I로 표지화된 사람 GLP-1 및 밀배아 응집소 (WGA)로 코팅된 PS LEADseeker 입자를 함유하는 막 단편으로 구성된다. 골드 및 1251-표지 GLP-1는 수용체로의 결합에 대해 경쟁할 것이다. LEADseeker 입자를 첨가할 때 그들은 WGA-잔기를 통해 막 단편 위에서 탄수화물 잔기에 결합할 것이다. 125I-분자와 LEADseeker 입자 사이의 근접은 입자로부터 광 방출을 야기시킨다. LEADseeker는 광출된 광을 이미징할 것이고 그것은 샘플에 존재하는 GLP-1 유사체의 양에 반대로 상호관련될 것이다.
시약 & 재료 :
동물 혈장의 선 치료 : 동물 혈장을 4시간동안 56℃에서 열 치료하였고 10.000 rpm 10 분동안 원심분리하였다. 그후에, Val-Pyr (10 pM) 및 아프로테닌(500 KIE/mL) 을 첨가하였고 <-18℃에서 사용할 때까지 저장하였다.
GLP-1 유사체 칼리브레이터 : GLP-1 유사체는 열 처리된 혈장 안으로 스파이크되어 대략 1 μM 내지 1 pM 범위의 희석 선을 제조한다.
GLP-1 RRA 분석법 완충액 : 25 mM Na-HEPES (pH=7.5), 2.5 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0. 1% 오브알부민, 0.003% 트윈 20,0. 005% 바시트라신, 0.05% NaN3.
GLP-1 수용체 현탁액 : GLP-1 수용체 막 단편은 사람 췌장 GLP-1 수용체를 발현하는 어린 햄스터 신장 (BHK)세포로부터 정제되었다. 사용할때까지 <- 80℃ 저장.
WGA - 커플링된 폴리스티렌 LEADseeker 이미징 비드 ( RPNQ0260 , Amersham ) : 비드를 GLP-1 RRA 분석법 완충액으로 13.3 mg/mL의 농도로 재구성하였다. GLP-1 수용체 막 현탁액을 그후 첨가하였고 사용하기 전에 적어도 1시간동안 엔드-오버-엔드에서 냉각 배양하였다(2-8℃).
[ 125 I]-GLP-1 (7-36) 아미드 (Novo Nordisk AIS). 사용할때까지 <-18℃ 저장함.
에탄올 99.9% vol (De Dansk Spritfabrikker A/S): 사용할때까지 <-18℃ 저장함.
MultiScreen®Solvinert 0. 45μm 소수성 PTFE 플레이트 (MSRPN0450, Millipore Corp.)
폴리 프로필렌 플레이트 (cat. no. 650201, Greiner Bio-One)
White 폴리스티렌 384-웰 플레이트 (cat. no 781075, Greiner Bio-One)
장치 :
수평 플레이트 믹서
표준 스윙-버킷 마이크로타이터 플레이트 로우터 어셈블비로 원심분리
UltraVap-Drydown Sample Concentrator (Porvair)
LEADseekerTM Multimodality 이미징 시스템 (Amersham)
분석법 과정 :
샘플 준비:
화학적-유사한 수용기 플레이트 (즉, 폴리프로필렌 플레이트) 위에 MultiScreenX Solvinert 필터 플레이트를 장착하여 여과액을 수집한다.
150 μL 얼음 냉각 에탄올 99.9%을 MultiScrenn ®Solvinert 필터 플레이트의 빈 웰 안에 첨가하고 이어서 50 μL 칼리브레이터 또는 혈장 샘플을 첨가한다. 저장 뚜껑을 필터 플레이트 위에 놓는다.
수평 플레이트 믹서위에서 18-22℃ 에서 15 분 배양한다.
표준 흔들리는-버킷 마이크로타이터 플레이트 로터 어셈블리 안으로, 뚜껑과 함께, 조립된 필터와 수용기 플레이트를 놓는다. 여과액을 그후 1500 rpm에서 2 분 동안 수용기 플레이트의 빈 웰에 수집한다.
15분의 지속시간 동안 가열된 (40℃)N2 과 함께 UltraVap을 사용함으로써 여과액을 말린다.
100 ㎕ GLP-1 RRA 분석법 완충액을 각각의 웰 안으로 첨가함으로써 건조 재료를 재구성한다. 5 분 동안 수평 믹서에서 배양한다.
GLP-1 방사성 수용체 분석법:
다음의 피펫팅 개략법 및 화이트 폴리스티렌 384-웰 플레이트를 사용한다:
·35 μL GLP-1 RRA 분석법 완충액
·5 μL 재구성된 여과액.
·10 μL [125I]-GLP-1 (7-36) 아미드. 원액 용액을 사용하기 전에 GLP-1 RRA 분석법 완충액에 20.000 cpm/웰까지 희석시켰다.
·15 μL GLP-1 수용체 막 단편 (0. 5 pg/웰) 미리-코팅된 to WGA- 폴리스티렌 LEADseeker 이미징 비드 (0.2 mg/웰)
플레이트를 밀봉하고 18-22℃에서 밤새 배양한다. 10 분의 지속기간동안 LEADseekerTM Multimodality 이미징 시스템을 사용함으로써 각각의 웰로부터 광 방출을 검출한다.
복제된 사람 GLP-1 수용체를 발현하는 세포계에서 cAMP 형성의 자극
사람 GLP-1 수용체를 발현하는, 안정한 유전자 전달감염된 세포계, BHK467- 12A (tk-ts13)로부터 정제된 혈장 막을 GLP-1 및 펩티드 유사체로 자극하였고, Perkin Elmer Life Sciences로부터의 AlphaScreenT" cAMP 분석 키트를 사용하여, cAMP 제조의 효능을 측정하였다.
안정한 유전자 전달감염된 세포계가 NN에서 제조되었고 높은 발현 클론은 스크리닝을 위해 선택되었다. 세포는 DMEM, 5% FCS, 1% Pen/Strep 및 0. 5 mg/ml G418중의 5% C02에서 성장되었다.
대략 80% 합류에 있는 세포는 PBS으로 2X 세척하였고 Versene으로 수확하고, 1000 rpm에서 5 min 원심분리하고 상청액을 제거하였다. 추가의 단계는 모두 얼음 위에서 이루어졌다. 세포 펠릿은 20-30초 동안 Ultrathurax에 의해 10 ml의 완충액 1 (20 mM Na-HEPES, 10 mM EDTA, pH=7.4)중에서 균질화되었고, 20.000 rpm에서 15 min 원심분리되었고 펠릿을 10 ml의 완충액 2 (20 mM Na-HEPES, 0.1 mM EDTA, pH=7.4)에서 재현탁하였다. 현탁액을 20-30 초동안 균질화하였고 20.000 rpm에서 15 min 원심분리되었다. 완충액 2에 현탁, 균질화 및 원심분리를 한번 반복하였고 막을 완충액 2에 재현탁하였고 더 분석하기 위해 준비하거나 또는 -80℃에서 저장하였다.
AlphaScreen Technology에 의해 펩티드 유도된 cAMP 제조를 측정함으로써 작용 수용체 분석법을 수행하였다. AlphaScreen 기술의 기본 원리는 내생 cAMP 과 외생적으로 첨가된 비오틴-cAMP 사이의 경쟁이다. cAMP의 포획은 수용체 비드에 접합된 특정 항체를 사용함으로써 달성된다. 형성된 cAMP를 계수하였고 AlphaFusion Micorplate Analyzer에서 측정되었다. Graph-Pad Prisme 소프트웨어를 사용하여 EC50 값을 계산하였다.
<110> Novo Nordisk A/S <120> Novel GLP-1 derivatives <130> 6692-WO <160> 5 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 2 <211> 40 <212> PRT <213> synthetic construct <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Xaa at position 1 is L-histidine, D-histidine, desamino-histidine, 2-amino-histidine, beta-hydroxy-histidine,homohistidine, N-alpha-acetyl-histidine, alpha-fluoromethyl-histidine, alpha-methyl-histidine, 3-pyridylalanine, 2-pyridylalanine, or 4-pyridylalanine <220> <221> UNSURE <222> (2) <223> Xaa at position2is Ala,Gly,Val,Leu,Ile,Lys,Aib,(1-aminocyclopropyl)carboxylic acid,(1-aminocyclobutyl)carboxylic acid,(1-aminocyclopentyl)carboxylic acid,(1-aminocyclohexyl) carboxylicacid,(1-aminocycloheptyl)carboxylicacid or(1-aminocyclooctyl)carboxylicacid <220> <221> UNSURE <222> (10) <223> Xaa at position 10 is Val or Leu. <220> <221> UNSURE <222> (12) <223> Xaa at position 12 is Ser, Lys or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (13) <223> Xaa at position 13 is Tyr or Gln. <220> <221> UNSURE <222> (14) <223> Xaa at position 14 is Leu or Met. <220> <221> UNSURE <222> (16) <223> Xaa at position 16 is Gly, Glu or Aib. <220> <221> UNSURE <222> (17) <223> Xaa at position 17 is Gln, Glu, Lys or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (19) <223> Xaa at position 19 is Ala or Val. <220> <221> UNSURE <222> (20) <223> Xaa at position 20 is Lys, Glu or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (21) <223> Xaa at position 21 is Glu or Leu. <220> <221> UNSURE <222> (24) <223> Xaa at position 24 is Ala, Glu or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (27) <223> Xaa at position 27 is Val or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (28) <223> Xaa at position 28 is Lys, Glu, Asn or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (29) <223> Xaa at position 29 is Gly or Aib. <220> <221> UNSURE <222> (30) <223> Xaa at position 30 is Arg, Gly or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (31) <223> Xaa at position 31 is Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (32) <223> Xaa at position 32 is Lys, Ser, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (33) <223> Xaa at position 33 is Ser, Lys, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (34) <223> Xaa at position 34 is Gly, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (35) <223> Xaa at position 35 is Ala, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (36) <223> Xaa at position 36 is Pro, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (37) <223> Xaa at position 37 is Pro, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (38) <223> Xaa at position 38 is Pro, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (39) <223> Xaa at position 39 is Ser, amide or is absent. <220> <221> UNSURE <222> (40) <223> Xaa at position 40 is amide or is absent. <400> 2 Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa 1 5 10 15 Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 <210> 3 <211> 32 <212> PRT <213> synthetic construct <220> <221> UNSURE <222> (1) <223> Xaa at position 1 is L-histidine,D-histidine,desamino-histidine,2-amino-histidine, beta-hydroxy-histidine,homohistidine,N-alpha-acetyl-histidine,alp ha-fluoromethyl-histidine,alpha-methyl-histidine,3-pyridylalanine ,2-pyridylalanine,or 4-pyridylalanine. <220> <221> UNSURE <222> (2) <223> Xaa at position2isAla,Gly,Val,Leu,Ile,Lys,Aib,(1-aminocyclopropyl)carbox ylic acid,(1-aminocyclobutyl)carboxylic acid,(1-aminocyclopentyl)carboxylicacid,(1-aminocyclohexyl)carbox ylic acid,(1-aminocycloheptyl)carboxylic acid or(1-aminocyclooctyl)carboxylicacid <220> <221> UNSURE <222> (12) <223> Xaa at position 12 is Ser, Lys or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (16) <223> Xaa at position 16 is Gly, Glu or Aib. <220> <221> UNSURE <222> (17) <223> Xaa at position 17 is Gln, Gly, Lys or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (20) <223> Xaa at position 20 is Lys, Glu or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (24) <223> Xaa at position 24 is Ala, Glu or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (28) <223> Xaa at position 28 is Lys, Glu or Arg. <220> <221> UNSURE <222> (29) <223> Xaa at position 29 is Gly or Aib. <220> <221> UNSURE <222> (30) <223> Xaa at position 30 is Arg or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (31) <223> Xaa at position 31 is Gly, Ala, Glu or Lys. <220> <221> UNSURE <222> (32) <223> Xaa at position 32 is Lys, amide or is absent. <400> 3 Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Xaa Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15 Xaa Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 <210> 4 <211> 39 <212> PRT <213> Gila monster <220> <221> UNSURE <222> (39) <223> Amidation of carboxy group. <400> 4 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 5 <211> 44 <212> PRT <213> synthetic construct <220> <221> UNSURE <222> (44) <223> Amidation of carboxy group. <400> 5 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys 35 40

Claims (74)

  1. 친수성 스페이서를 통해서 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물.
  2. 친수성 스페이서를 통해서 알부민 결합 잔기에 연결된 치료 폴리펩티드를 포함하는 화합물 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-
    (상기식에서
    I, m 및 n은 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
    Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
    q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
    각각의 D, E, 및 G은 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(0)-, 및 -P (OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6 는 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
    Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-,-OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-,-C(O)CH=CH-, -(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O-또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1 또는 약학적으로 허용가능한 염 또는 그것의 프로드러그이다. )
    또는 약학적으로 허용가능한 그것의 염 또는 프로드러그.
  3. 제 2항에 있어서, 하기 화학식을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
    A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 (I)
    상기식에서
    A는 알부민 결합 잔기,
    B 는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)pQq-인 친수성 스페이서이고, 이때
    I, m 및 n 독립적으로 1-20 이고 p는 0-10이고,
    Q 는 -Z-(CH2)1D[(CH2)nG]m(CH2)p-,
    q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
    각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
    Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
    Y는 B 와 치료제를 연결하는 화학기이고,
    W는 A와 B를 연결하는 화학기이다.
  4. 제 2항에 있어서,
    A-W-B-Y-치료 폴리펩티드 -Y'-B'-W'-A' (II)
    상기식에서
    A와 A'는 알부민 결합 잔기이고,
    B와 B'는 독립적으로 -(CH2)ID [(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고,
    이때
    I, m 및 n 는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
    Q는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-이고,
    q 는 0 내지 5 범위의 정수이고,
    각각의 D, E, 와 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR (O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6은 독립적으로 수소 또는 C1 -6-알킬을 나타내고,
    Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- 또는 -NHC(O)-으로부터 선택되고, 이때 s 는 0 또는 1이고,
    Y 는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
    Y'는 B'와 치료제를 연결하는 화학기이고,
    W는 A와 B를 연결하는 화학기이고,
    W' 는 A'와 B'를 연결하는 화학기이다.
  5. 제 4항에 있어서, Y'는 -C(O)NH-, -NHC(O)-,-C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-,-OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-,-C(O)CH2-, -CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-,-(CH2 )s-,-C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제 4항 또는 제 5항에 있어서, W'는 -C(O)NH-,-NHC(O)-,-C(O)NHCH2-,-CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-,-NHC(0)O-, -C(O)CH2-,-CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 제 2항에 있어서, 화학식(III)을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure 112006019302320-PCT00152
    상기식에서
    A와 A는 알부민 결합 잔기이고,
    B는 -(CH2)ID[(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-으로부터 선택된 친수성 스페이서이고 상기식에서
    I, m와 n는 독립적으로 1-20이고 p는 0-10이고,
    Q 는 -Z-(CH2)ID[(CH2)nG]m(CH2)p-,
    q 는 0 내지 5의 범위에 있는 정수이고,
    각각의 D, E, 및 G는 독립적으로 -O-,-NR3-,-N(COR4)-,-PR5(O)-, 및 -P(OR6)(O)-으로부터 선택되고, 이때 R3, R4, R5, 및 R6는 독립적으로 수소 또는 C1-6-알킬을 나타내고,
    Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O- 또는 -NHC(O)-로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1이고,
    Y는 B와 치료제를 연결하는 화학기이고,
    W"는 B를 A와 A'와 연결하는 화학기이다.
  8. 제 7항에 있어서, W"는
    Figure 112006019302320-PCT00153
    로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0,1 또는 2인 것을 특징으로 하는 화합물.
  9. 제 3항 내지 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-,-CH2C(O)-,-C(O)CH=CH-,-CH=CHC(O)-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(0) 0-,-OC(O)-, -NHC(O)- 및 -C(O)NH-로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  10. 제 3항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서, W 는 -C(O)NH-, - NHC(O)-,-C(O)NHCH2-,-CH2NHC(O)-,-OC(O)NH-, -NHC(O)O-,-C(O)CH2-,-CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-,-CH=CHC(O)-,-(CH2)s-,-C(O)-,-C(O)O-,-OC(O)-,-NHC(O)- 및 -C(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되고, 이때 s는 0 또는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  11. 제 2항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, I는 1 또는 2, n과 m은 독립적으로 1-10이고 p는 0-10인 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제 2항 내지 제 11항 중 어느 한 항에 있어서, D 는 -O-인 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 제 2항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, E 는 -0-인 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제 2항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 친수성 스페이서는 -CH2O[(CH2)2O]m(CH2)pQq-이고, 이때 m은 1-10이고, p는 1-3이고, Q는 -Z-CH20 [(CH2)2O]m(CH2)p-인 것을 특징으로 하는 화합물.
  15. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, q는 0 또는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  16. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, q는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  17. 제 2항 내지 제 10항 및 제 12항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, G는 -O-인 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, Z는 -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, 및 -OC(O)NH-으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  19. 제 2항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, q는 0인 것을 특징으로 하는 화합물.
  20. 제 2항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, I는 2인 것을 특징으로 하는 화합물.
  21. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, n은 2인 것을 특징으로 하는 화합물.
  22. 제 2항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, 친수성 스페이서 B는 -[CH2CH20]m+1(CH2)pQq-인 것을 특징으로 하는 화합물.
  23. 제 2항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서, 친수성 스페이서 B는 -(CH2)I-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)I-O-(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-, 이때 1, m, n, 과 p는 독립적으로 1-5이고, q는 0-5인 것을 특징으로 하는 화합물.
  24. 선행하는 항들중 어느 한 항에 있어서, -W-B-Y-는 하기로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure 112006019302320-PCT00154
  25. 제 7항에 있어서, >W"-B-Y-는
    Figure 112006019302320-PCT00155
    인 것을 특징으로 하는 화합물.
  26. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 알부민 결합 잔기 A는 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Figure 112006019302320-PCT00156
    상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00157
    상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00158
    상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00159
    상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00160
    상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00161
    상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 L 또는 D중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00162
    상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00163
    상기식에서 키랄 탄소 원자는 R 또는 S 중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00164
    상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자는 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00165
    상기식에서 두개의 키랄 탄소 원자 독립적으로 R 또는 S중의 하나이고,
    Figure 112006019302320-PCT00166
    Figure 112006019302320-PCT00167
    Figure 112006019302320-PCT00168
  27. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 친수성 스페이서의 몰 중량은 80D 내지 1000D 또는 80D 내지 300D의 범위인 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 친유성 잔기인 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 비-공유결합으로 알부민에 결합하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 생리학적 pH에서 음으로 하전되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  31. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 약 10 μM 미만 또는 약 1 μM 미만인 사람 혈청 알부민을 향한 결합 친화력을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물.
  32. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 직쇄 알킬기, 분지 알킬 기, ω-카르복실산 기, 부분적으로 또는 완전히 수소화된 사이클로펜타노페난트렌 골격을 갖는 기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 사이바크로닐 잔기인 것을 특징으로 하는 화합물.
  34. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 6 내지 40 탄소 원자, 8 내지 26 탄소 원자 또는 8 내지 20 탄소 원자를 가지는 것을 특징으로 하는 화합물.
  35. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 알부민 결합 잔기는 40 미만의 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드와 같은, 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서와 링커를 통한 알부민 결합 잔기가 리신 잔기의 ε-아미노 기를 통해 상기 치료 폴리펩티드에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 스페이서와 링커를 통한 알부민 결합 잔기는 시스테인, 글루타메이트 및 아스파르테이트로부터 선택된 아미노산 잔기를 통해 상기 치료 폴리펩티드에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  38. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드가 GLP-1 펩티 드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  39. 제 34항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 화학식 (IV)의 아미노산 서열을 포함하는 GLP-1 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46
    화학식 (IV) (SEQ ID No: 2)
    상기식에서
    Xaa7 는 L-히스티딘, D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, (3-히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸-히스티딘, 3- 피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 또는 4-피리딜알라닌이고 ;
    Xaa8 는 Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-아미노사이클로프로필)카르복실산, (1-아미노사이클로부틸)카르복실산, (1-아미노사이클로펜틸)카르복실산, (1-아미노사이클로헥실)카르복실산, (1-아미노사이클로헵틸)카르복실산, 또는 (1-아미노사이클로옥틸)카르복실산이고;
    Xaa16 은 Val 또는 Leu이고;
    Xaa18은 Ser, Lys 또는 Arg이고;
    Xaa19는 Tyr 또는 Gln이고;
    Xaa20 는 Leu 또는 Met이고;
    Xaa22 는 Gly, Glu 또는 Aib이고;
    Xaa23 는 Gln, Glu, Lys 또는 Arg 이고;
    Xaa25 는 Ala 또는 Val 이고;
    Xaa26 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
    Xaa27 는 Glu 또는 Leu이고;
    Xaa30 는 Ala, Glu 또는 Arg이고;
    Xaa33 는 Val 또는 Lys이고;
    Xaa34 는 Lys, Glu, Asn 또는 Arg이고;
    Xaa35 는 Gly 또는 Aib;
    Xaa36 는 Arg, Gly 또는 Lys이고;
    Xaa37 는 Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa38 는 Lys, Ser, 아미드 또는 부재이다.
    Xaa39 는 Ser, Lys, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa40 는 Gly, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa41 는 Ala, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa42 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa43 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa44 는 Pro, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa45 는 Ser, 아미드 또는 부재이고;
    Xaa46 는 아미드 또는 부재이고;
    단, 만일 Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 또는 Xaa46 가 부재라면, 그때는 하류에 있는 각각의 아미노산 잔기도 또한 부재이다.
  40. 제 39항에 있어서, 상기 폴리펩티드는 화학식 (V)의 아미노산 서열을 포함하는 GLP-1 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물:
    Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa8-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-lle-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
    화학식 (V) (SEQ ID No: 3)
    상기식에서
    Xaa7 는 L-히스티딘, D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, ß-히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸-히스티딘, 3- 피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 또는 4-피리딜알라닌이고 ;
    Xaa8 는 Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-아미노사이클로프로필)카르복실산, (1-아미노사이클로부틸)카르복실산, (1-아미노사이클로펜틸)카르복실산, (1-아미노사이클로헥실)카르복실산, (1-아미노사이클로헵틸)카르복실산, 또는 (1-아미노사이클로옥틸)카르복실산이고;
    Xaa18 는 Ser, Lys 또는 Arg이고;
    Xaa22 는 Gly, Glu 또는 Aib이고;
    Xaa23 는 Gln, Glu, Lys 또는 Arg 이고;
    Xaa26 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
    Xaa30 는 Ala, Glu 또는 Arg이고;
    Xaa34 는 Lys, Glu 또는 Arg이고;
    Xaa35 는 Gly 또는 Aib이고;
    Xaa36 는 Arg 또는 Lys이고;
    Xaa37 는 Gly, Ala, Glu 또는 Lys;
    Xaa38 는 Lys, 아미드 또는 부재이다.
  41. 제 38항 내지 제 40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 GLP- 1 (7-35), GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-36)-아미드, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1 (7-39), GLP-1 (7-40), GLP-1 (7-41) 또는 그것의 유사체로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제 38항 내지 제 41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할때 교환, 첨가되거나 또는 삭제된 15 미만의 아미노산 잔기, 또는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할 때 교환, 첨가되거나 또는 삭제된 10개 미만의 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제 42항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1)와 비교할때 교환, 첨가되거나 또는 삭제된 6미만의 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  44. 제 42항 또는 제 43항에 있어서, GLP-1 펩티드는 유전자 코드에 의해 인코딩되지 않은 4미만의 아미노산 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  45. 제 38항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 DPPIV 보호된 GLP-1 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  46. 제 38항에 있어서, 상기 화합물은 DPPIV 안정화되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  47. 제 38항 내지 제 46항 중 어느 한 항에 있어서, GLP-1 펩티드는 위치 8에서 Aib 잔기를 포함하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  48. 제 38항 내지 제 47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드의 위치 7에서 아미노산 잔기는 D-히스티딘, 데스아미노-히스티딘, 2-아미노-히스티딘, ß- 히드록시-히스티딘, 호모히스티딘, Nα-아세틸-히스티딘, α-플루오로메틸-히스티딘, α-메틸- 히스티딘, 3-피리딜알라닌, 2-피리딜알라닌 및 4-피리딜알라닌으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  49. 제 38항 내지 제 48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 Arg34GLP-1(7-37), Lys38Arg GLP-1(7-38), Lys38Arg26 ,34GLP-1(7-38)-OH, Lys36Arg26 ,34GLP-1 (7-36), Aib8 ,22,35 GLP-1(7-37), Aib8 ,35GLP-1(7-37), Aib8 ,22 GLP- 1(7-37), Aib8 ,22,35Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg26 ,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Arg26Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Arg34Lys3sGLP-1(7-38), Aib8 ,35Arg34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22Arg34Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8 ,22,35Lys37GLP-1(7-37), Aib8 ,35Lys37GLP-1(7-37) 및 Aib8 ,22Lys37GLP-1(7-38)으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  50. 제 38항 내지 제 49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 아미노산 서열 SEQ ID No : 1에 비해 위치 23,26, 34,36 또는 38 에서 아미노산 잔기를 통해 상기 친수성 스페이서에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  51. 제 38항 내지 제 41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 엑센딘-4 (SEQ ID NO 4)인 것을 특징으로 하는 화합물.
  52. 제 38항 내지 제 41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 GLP-1 펩티드는 ZP-10 이고, 즉, HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-아미드 (SEQ ID NO 5)인 것을 특징으로 하는 화합물.
  53. 제 38항 내지 제 52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 친수성 스페이서를 통해 하나의 알부민 결합 잔기는 GLP-1 펩티드의 C-말단 아미노산 잔기에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  54. 제 53항에 있어서, 두번째 알부민 결합 잔기는 GLP-1 펩티드의 C-말단 아미노산 잔기가 아닌 아미노산 잔기에 부착되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  55. 선행하는 항들 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화합물은 다음으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
    Nε37_ (2-(2-(2-(도데실아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22,35Lys37] GLP-1(7-37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00169
    Nε37-(2-(2-(2-(17-술포헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00170
    Nε37-{2-[2-(2-(15-카르복시펜타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸}-[Aib8,22,35, Lys37] GLP- 1(7-37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00171
    Nε37-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35, Lys37] GLP-1 (7- 37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00172
    Nε37-(2-(2-(2-(19-카르복시노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Ai b8 , 22. 35, LyS37] GLP-1 (7- 37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00173
    [Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00174
    [Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00175
    Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노) 에톡시] 에톡시}) 아세틸-[Aib8 ,22,35]GLP-1(7-37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00176
    Nε37-(2-[2-(2,6-(S)-Bis-{2-[2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노} 헥사노일아미노) 에톡시] 에톡시}) 아세틸-Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00177
    [Aib8 ,22,35,Arg26 ,34]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00178
    [Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[4-[4-(4-아미노-9,10-디옥소-3-술포- 9,10-디하이드로-안트라센-1-일아미노)-2-술포-페닐아미노]-6-(2-술포-페닐아미노)-[1, 3,5] 트리아진-2-일아미노]-에톡시}- 에톡시)-아세틸)) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00179
    [Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys (({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-카르복시펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸 아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸)) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00180
    Nε37-([2-(2-{3-[2,5-디옥소-3-(15-카르복시펜타데실술파닐)-피롤리딘-1-일]- 프로피오닐아미노} 에톡시) 에톡시) 아세틸]-[D-Ala8,Lys37]-GLP-1-[7- 37] 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00181
    [Aib8 ,22,35Ala37] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(11-(옥살릴아미노) 운데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-))) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00182
    [Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-카르복시-펜타데카노일아미노)- 에톡시] 에톡시} 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시} 아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00183
    [Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys ((2-{2-[11-(5-디메틸아미노나프탈렌-1- 술포닐아미노) 운데카노일아미노] 에톡시} 에톡시) 아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00184
    [Aib8 ,22,35,Ala37]-GLP-1(7-37) Lys (([2-(2-{2-[1-(4-클로로벤조일)-5-메톡시-2-메틸-1H-인돌- 3-일] 아세틸아미노} 에톡시) 에톡시] 아세틸)) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00185
    [Aib8,Arg26 ,34,Glu22 ,23,30]GLP-1H (7-37) Lys (2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00186
    [Aib8,Arg26 ,34,Glu22 ,23,30] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00187
    [Gly8,Arg26 ,34] GLP-1H-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00188
    [Aib8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37)Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00189
    [Aib8]-GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00190
    [Aib8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00191
    [Aib8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00192
    [Gly8, Arg26 , 34] GLP1-(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00193
    [Aib8] GLP-1-(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00194
    Nε37-(2-(2-(2-(도데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)- 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00195
    Nε37-(2-(2-(2-(테트라데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1H (7-37)- 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00196
    Nε37-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
    Figure 112006019302320-PCT00197
    Nε37-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8,22,35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
    Figure 112006019302320-PCT00198
    Nε37-(2-(2-(2-(에이코사노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8 ,22 35Lys37] GLP-1(7-37)-아미드
    Figure 112006019302320-PCT00199
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)-[Aib8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00200
    Nε36-(2 (2 (2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸))[Arg26,34,Lys36] GLP- 1(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00201
    Nε36-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-[Gly8,Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00202
    Nε37-(2-(2-(2-(4-4 (4,4, 5,5, 6,6, 7,7, 8,8, 9,9, 9-트리데카플루오로노나노일술파모일- 부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00203
    Nε37-(2-(2-(2-(3, 3,4, 4,5, 5,6, 6,7, 7,8, 8,9, 9,10, 10, 11, 11, 12,12, 12-헤네이코사플루오로- 도데실옥시아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00204
    Nε37-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일술파모일)부티릴아미노)에톡시)에톡시)아세틸)[Aib8,22,35,Lys37] GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00205
    [Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys ({2-(2-(2-(2-[2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)))-OH
    Figure 112006019302320-PCT00206
    [Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00207
    Nε20-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-엑센딘 (1-39)
    Figure 112006019302320-PCT00208
    [Ala8, Arg26 , 34 GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00209
    [Aib8 ,22,35] GLP-1(7-37) Lys ((2-[2-((2-옥살릴아미노-3-카르복시-2-4, 5,6, 7-테트라하이드로- 벤조 [b] 티오펜-6-일-아세틸아미노)) 에톡시] 에톡시아세틸) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00210
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)- [Aib8,Arg26,34,Lys36]GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00211
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Gly8, Arg26 , 34, Lys36] GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00212
    Nε37-2-(2-(2-(4-(4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노)-4-(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-NH2
    Figure 112006019302320-PCT00213
    Nε37-2-(2-[2-(2-[2-(4-[4-(헵타데카노일아미노)-4-(S)카르복시부티릴아미노]-4-(S)-카르복시부티릴아미노)에톡시] 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸-[Aib8 ,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)-NH2
    Figure 112006019302320-PCT00214
    Nε26-(2-(2-(2-(4-(헥사데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-[Aib8, Arg34] GLP-1-(7-37)- - OH
    Figure 112006019302320-PCT00215
    Nε26-2-(2-2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸-[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00216
    [Gly8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(19-(카르복시)노나데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)- OH
    Figure 112006019302320-PCT00217
    [Gly8,Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(17-(카르복시) 헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸))-OH
    Figure 112006019302320-PCT00218
    [Gly8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(4-(19-(카르복시)노나데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00219
    [Gly8,Arg26 ,34]GLP-1(7-37) Lys ((2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(헥사데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00220
    [Gly8, Arg26 , 34] GLP-1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시)- 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)NH2
    Figure 112006019302320-PCT00221
    Nε20(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(카르복시)헵타데카노일아미노)-4-카르복시부티릴아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39)-NH2
    Figure 112006019302320-PCT00222
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Aib8,Arg26 ,34,Lys36] GLP-1(7-37)
    Figure 112006019302320-PCT00223
    N-ε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Arg26 , 34, LyS36] GLP-1(7-37)
    Figure 112006019302320-PCT00224
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Gly8, Arg26 ,34, Lys36] GLP-1(7-37)
    Figure 112006019302320-PCT00225
    Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2- (옥타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시)- 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00226
    Nε36-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(옥타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노)에톡시)에톡시)아세틸아미노)에톡시)에톡시)아세틸)-[Arg26 ,34,Lys36]GLP-1-(7-37)
    Figure 112006019302320-PCT00227
    Nε26-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸) [Arg34] GLP-1-(7-37)-OH
    Figure 112006019302320-PCT00228
    Nε26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-4(S)-카르복시부티릴아미노] 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시] 에톡시) 아세틸] [Arg34] GLP-1-(7-37)- OH
    Figure 112006019302320-PCT00229
    Nε20-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸- 아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸) [Lys20] 엑센딘-4 (1-39) 아미드
    Figure 112006019302320-PCT00230
    [Gly8, Glu22 ,23,30,Arg18 ,26,34]GLP1(7-37) Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸아미노) 에톡시)) 에톡시) 아세틸)-NH2
    Figure 112006019302320-PCT00231
    [이미다졸릴프로피온산7, Asp16, Aib22 ,35]GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
    Figure 112006019302320-PCT00232
    [이미다졸릴프로피온산7, Aib22 ,35]GLP1(7-37) Lys NH ((2-{ [4-(17-카르복시헵타데카노일아미노) 부틸카르바모일] 메톡시} 에톡시) 에톡시))
    Figure 112006019302320-PCT00233
    및
    [3-(5-이미다조일)프로피오닐7, Aib8, Arg26 ,34] GLP-1(7-37) Lys {2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-카르복시헵타노일아미노) 에톡시) 에톡시] 아세틸아미노) 에톡시) 에톡시) 아세틸)}-OH
    Figure 112006019302320-PCT00234
  56. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 GLP-2 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  57. 제 56항에 있어서, 상기 GLP-2 펩티드는 DPPIV-보호된 GLP-2 펩티드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  58. 제 56항에 있어서, 상기 GLP-2 펩티드는 Gly2-GLP-2 (1-33)인 것을 특징으로 하는 화합물.
  59. 제 56항에 있어서, 상기 GLP-2 펩티드는 Lys17Arg30-GLP-2 (1-33)인 것을 특징으로 하는 화합물.
  60. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 사람 인슐린 또는 그것의 유사체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  61. 제 60항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 AspB28-사람 인슐린, LysB28, ProB29-사람 인슐린, LysB3, GluB29-사람 인슐린, GlyA21, Arg531, ArgB32-사람 인슐린 및 des(B30) 사람 인슐린으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  62. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 사람 성장 호르몬 또는 그것의 유사체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  63. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 파라티로이드 호르몬 또는 그것의 유사체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  64. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 사람 소포 자극 호르몬 또는 그것의 유사체인 것을 특징으로 하는 화합물.
  65. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 100 kDa미만, 50 kDa미만, 또는 10 kDa미만의 몰 중량을 가지는 것을 특징으로 하는 화합물.
  66. 제 1항 내지 제 37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 폴리펩티드는 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF), 형질변환 성장 인자 α (TGF-α), 형질변환 성장 인자 ß (TGF-ß), 표피 성장 인자 (EGF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 인슐린 성장 인자 I (IGF-I), 인슐린 성장 인자 II (IFG-II)과 같은 성장 인자, 에리트로포페틴 (EPO), 트롬보포이에틴 (TPO) 또는 안지오포이에틴과 같은 사마토메딘, 인터페론, 프로-우로키나아제, 우로키나아제, 조직 플라스미노겐 활성제 (t-PA), 플라스미노겐 활성제 저해제 1, 플라스미노겐 활성제 저해제 2, von Willebrandt 인자, 사이토킨, 예를 들어 인터류킨 (IL) 1, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-12, IL- 13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-20 또는 IL-21와 같은 인터류킨, GM-CSF와 같은 콜로니 자극 인자 (CFS), 줄기 세포 인자, TNF-α, 림프독소-α, 림프독소-β, CD40L, 또는 CD30L와 같은 종양 괴사 인자, 프로테아제 저해제 예를 들어 아프로티닌, 효소 이를테면 수퍼옥시드 디스무타아제, 아스파라기나아제, 아르기나아제, 아르기닌 데아미나아제, 아데노신 데아미나아제, 리보누클레아제, 사타라아제, 유리카제, 빌리루빈 옥시다아제, 트립신, 파파인, 알칼리성 포스파타아제, ß-글루코로니다아제, 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라아제 또는 바트록소빈, 오피오 이드, 예를 들어 엔돌핀, 엔케팔린 또는 비-천연 오피오이드, 호르몬 또는 뉴로펩티드, 예를 들어 칼시토닌, 글루카곤, 가스트린, 안드레노코르티코트로픽 호르몬 (ACTH), 콜레시스토키닌, 황체형성 호르몬, 고나도트로핀-방출 호르몬, 코리온 고나도트로핀, 코르티코트로핀-방출 인자, 바소프레신, 옥시토신, 항이뇨 호르몬, 티로이드-자극 호르몬, 티로트로핀-방출 호르몬, 릴락신, 프로락틴, 펩티드 YY, 뉴로펩티드 Y, 췌장 폴리펩티드, 렙틴, CART (코카인 및 암페타민 조절된 전사), CART 관련 펩티드, 페릴리핀, 멜라노코르틴 (멜라노사이트-자극 호르몬) 이를테면 MC-4, 멜라닌-농축 호르몬, 나트륨이뇨 펩티드, 아드레노메둘린, 엔도텔린, 세크레틴, 아밀린, 혈관활성 장 펩티드 (VIP), 뇌하수체 아데닐레이트 시클라제 활성 폴리펩티드 (PACAP), 봄베신, 봄베신-형 펩티드, 티모신, 헤파린-결합 단백질, 가용성 CD4, 시상하부 방출 인자, 멜라노토닌 및 그것의 유사체로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  67. 제 1항 내지 제 66항 중 어느 한 항에 따르는 화합물, 및 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  68. 제 67항에 있어서, 비경구 투여에 적합한 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  69. 약제의 제조를 위해 제 1항 내지 제 66항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 사용.
  70. 고혈당증, 2형 당뇨병, 손상된 글루코스 내성, 1형 당뇨병, 비만, 고혈압, 증후군 X, 고지혈증, 인지 장애, 아테롬성 동맥 경화증, 심장근육 경색증, 심장 질환 및 다른 심장혈관 장애, 뇌중풍, 염증 장 증후군, 소화불량 및 위궤양의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 제 38항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 사용.
  71. 2형 당뇨병에서 질환 진행을 지연시키거나 막기 위한 약제의 제조를 위한 제 38항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 사용.
  72. 음식물 섭취를 줄이고, β-세포 세포자멸사를 줄이고, β-세포 기능 및 β-세포 질량을 증가시키고, 및/또는 β-세포에 대한 글루코스 민감도를 회복시키기 위한 약제의 제조를 위한 제 38항 내지 제 55항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 사용.
  73. 작은 장 증후군, 염증 장 증후군 또는 Crohns병의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 제 56항 내지 제 59항 중 어느 한 항에 따르는 화합물의 사용.
  74. 고혈당증, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병 또는 β-세포 결핍의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 제 60항 또는 제 61항에 따르는 화합물의 사용.
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