JP2002504527A - 部分的に組織化したミセル様凝集物を形成する２５％を越えるヘリックス成分を有するｇｌｐ−２誘導体 - Google Patents

部分的に組織化したミセル様凝集物を形成する２５％を越えるヘリックス成分を有するｇｌｐ−２誘導体

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JP2002504527A JP2000533156A JP2000533156A JP2002504527A JP 2002504527 A JP2002504527 A JP 2002504527A JP 2000533156 A JP2000533156 A JP 2000533156A JP 2000533156 A JP2000533156 A JP 2000533156A JP 2002504527 A JP2002504527 A JP 2002504527A
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オラフ フースフェルト，ペル
フランクリン ニールセン，ペル
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ビルク オールセン，ヘーレ
チム，ラルス
エリック ビョールン，セーレン
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    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

(57)【要約】 本発明は、溶解性及び／又は安定性が改善されたＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物に、及びＧＬＰ−２又はそのフラグメントもしくはアナログの溶解性及び／又は安定性を改良するための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の分野 本発明は、溶解性及び安定性が改良されたＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物
に、並びにＧＬＰ−２又はそのフラグメントもしくはアナログの溶解性及び／又
は安定性を改良するための方法に関する。
【０００２】 発明の背景 ペプチドは医学的プラクティスで広く用いられており、それらは組換えＤＮＡ
技術により生産することができるので、それらの重要性は、年々、増加するであ
ろうと予想される。ネイティブペプチド又はそのアナログを治療に用いる場合、
それらは高いクリアランスを有することが一般に見い出されている。治療剤の高
いクリアランスは、長い期間にわたって高い血中レベルを維持することが要求さ
れる場合に不便である。なぜならくり返しの投与が必要であろうからである。高
いクリアランスを有するペプチドの例は、ＡＣＴＨ、コルチコトロピン放出因子
、アンジオテンシン、カルシトニン、インスリン、グルカゴン、グルカゴン様ペ
プチド−１、グルカゴン様ペプチド−２、インスリン様成長因子−１、インスリ
ン様成長因子−２、胃抑制ペプチド、成長ホルモン放出因子、下垂体アデニル酸
シクラーゼ活性化ペプチド、セクレチン、エンテロガストリン、ソマトスタチン
、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、トロンポポエチン、エリ
トロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンド
ルフィン、エンケファリンバソプレッシン、オキシトシン、オピオイド類及びそ
のアナログ、スーパーオキシドジスムターゼ、インターフェロン、アスパラギナ
ーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ及びリ
ボヌクレアーゼである。特定の場合、適切な医薬組成物を適用することによりペ
プチドの放出プロフィールに影響を与えることが可能であるが、このアプローチ
は種々の欠点を有し、一般に適用できない。
【０００３】 ＧＬＰ−２及び他のプレプログルカゴンフラグメントのアミノ酸配列は、例え
ばＳｃｈｍｉｄｔら（Diabetologia 28 704-707 (1985)) に供される。ＧＬＰ−
２の物理化学特性についてはほとんど知られていないが、ＧＬＰ−２は、ＧＬＰ
−１と同様に、かなりフレキシブルで不安定な分子であると予想される。ＧＬＰ
−２及びそのフラグメント並びにＧＬＰ−２のアナログ及びそのフラグメントは
、例えば食欲の抑制及び小腸症候群の治療において潜在的に有用である。しかし
ながら、その高いクリアランスはこれらの化合物の有用性を限定し、これにより
なおこの分野において改良の必要がある。
【０００４】 我々は、最近、この比較的小さくかつ極めてフレキシブルな分子の誘導化が、
その血漿プロフィールが高度に遅延され、なお活性を保持している化合物を作り
出すことを見い出した（ＰＣＴ出願、ＤＫ９７／００３６０）。 ＧＬＰ−２誘導体の物理化学的及び溶液構造特性については現在までほとんど
知られていなかった。このような知見は、例えば生産、精製及び調剤作業の間の
合理的な取扱いのための必要条件であり、最終的に遅延メカニズムのための構造
的基礎の理解のために重要である。
【０００５】 内在性ジアミノペプチジルペプチダーゼの作用に対する溶解性の制限及び低い
安定性はＧＬＰ−２誘導体の有用性を限定し、これによりこの分野における改良
についての必要性がなお存在する。従って、本発明の目的は、改良された溶解性
及び安定性を有するＧＬＰ−２誘導体を含む医薬溶液を供することである。 発明の概要 ＧＬＰ−２の起源であるプレプロコラーゲンは、例えば膵臓及び脳内の遠位回
腸内のＬ細胞において合成される。プレプログルカゴンのＧＬＰ−１及びＧＬＰ
−２へのプロセッシングは主にＬ細胞内でおこる。ＧＬＰ−２は３４アミノ酸残
基まで広がるおそらく特定の組織内の３３アミノ酸残基ペプチドである。ＧＬＰ
−２のフラグメント、アナログ及び誘導体を記述するために簡単なシステムを用
いる。これにより、例えばＬｙｓ20ＧＬＰ−２（１−３３）は、アミノ酸残基番
号３４を削除し、位置２０の天然のアミノ酸残基（−Ａｒｇ）をＬｙｓで置換す
ることによりＧＬＰ−２から形式的に得られるＧＬＰ−２のフラグメントを指す
。同様に、Ａｒｇ30Ｌｙｓ35（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３５
）は、Ｌｙｓ残基のＣ末端の付加、位置３０の天然のアミノ酸残基（Ｌｙｓ）の
Ａｒｇ残基での交換及び位置３５のＬｙｓ残基のε−アミノ基のテトラデカノイ
ル化によりＧＬＰ−２から形式的に得られるＧＬＰ−２の誘導体を指す。
【０００６】 ＰＣＴ出願ＤＫ９７／００３６０は、極めて遅延されることが見い出される種
々のＧＬＰ−２誘導体を記載する。ＧＬＰ−２及びＧＬＰ−２アナログは規定さ
れた溶液構造をとることができない分子であるが、我々は、これらの遅延される
ＧＬＰ−２誘導体のいくつかが、広い濃度範囲にわたって安定である部分的に組
織化したミセル様凝集形態で存在し得ることを見い出した。
【０００７】 ＧＬＰ−２誘導体がそれらの濃度と独立した、特定の部分的に構造化したコン
ホメーションを有することを示すために円偏光二色性（ＣＤ）を用いることがで
きる。対照的に、通常のＧＬＰ−２については、ペプチド自己会合と平行して、
（５００μＭ濃度で）１０〜１５％から３０〜３５％への濃度の増加と共に、ヘ
リックス含有量の増加が見られる。水溶液中で部分的に組織化したミセル様凝集
物を形成するＧＬＰ−２誘導体について、ヘリックス含有量は１０μＭの濃度で
３０％超で一定を維持する。その凝集した組織化したコンホメーションは、いず
れかの更なる構造誘導成分を必要としない、水又は希釈水性緩衝液中に存在する
誘導体の固有の特性である。ＣＤシグナルはペプチドのα−ヘリックスの平均含
有量に比例すること、即ち−１のＣＤ値はこれらの条件下で１０％α−ヘリック
ス含有量に相当することに注意のこと。
【０００８】 これにより、その最も広い態様において、本発明は、約１０μＭのペプチド濃
度で、２５％を超える、好ましくは２５％〜５０％の範囲の、２２±２℃でＨ2 Ｏ中２２２nmのＣＤにより測定したヘリックス含有量を有するＧＬＰ−２誘導体
を含む医薬組成物に関する。 部分的にヘリックスのミセル様凝集物の大きさは、サイズ排除クロマトグラフ
ィーにより評価することができる。同様に、ペプチドの見掛け（臨界ミセル濃度
）ＣＭＣ’ｓは、適切な染料の存在下での濃度依存性蛍光から評価することがで
きる（例えばBrito, R. & Vaz, w. (1986)Anal. Biochem, 152, 250-255)。
【０００９】 誘導体が水溶液中で部分的に組織化したミセル様凝集物コンホメーションを有
することはそれらを、ネイティブペプチドと比べてより溶解性かつ溶液中で安定
にする。溶解度及び安定性の増加は、医薬製剤中で、例えば０．１Ｍ ＮａＣｌ
を加えた５mMリン酸緩衝液、pH６．９中で、誘導体及び通常のＧＬＰ−２（１−
３４）について９日、放置した後に溶解度を比較することにより見ることができ
る。
【００１０】 本文脈において、“アナログ”との名称は、親ペプチドの１又は複数のアミノ
酸残基が別のアミノ酸残基により置換されているペプチド及び／又は親ペプチド
の１又は複数のアミノ酸残基が削除されているペプチド及び／又は複数のアミノ
酸残基が親ペプチドに加えられているペプチドを指す。このような付加は、親ペ
プチドのＮ末端又はＣ末端又は両方のいずれかで行うことができる。
【００１１】 用語“誘導体”は、本文脈において、親ペプチドのアミノ酸残基の１又は複数
が、例えばアルキル化、アシル化、エステル形成又はアミド形成により、化学的
に修飾されているペプチドを指す。 用語“ＧＬＰ−２誘導体”は、本文脈において、ＧＬＰ−２の誘導体又はその
アナログを指す。本明細書において、このような誘導体が形成上側得られる親ペ
プチドは、特定の場合、誘導体の“ＧＬＰ−２成分”と呼ぶ。
【００１２】 好ましい実施形態において、本発明は、請求項１に記載の医薬組成物であって
、ＧＬＰ−２誘導体の濃度が０．５mg／mL以上、好ましくは約５mg／mL以上、よ
り好ましくは約１０mg／mL以上であり、好ましくは約１００mg／mL以下であるも
のに関する。 本発明の医薬組成物は、好ましくは、親ペプチドの少くとも１のアミノ酸残基
が、結合した脂溶性置換基を有しているＧＬＰ−２誘導体を含む。より好ましい
のは、２０〜３４、好ましくは３０〜３４、最も好ましくは３０のアミノ酸残基
のうちのいずれか１つに結合した脂溶性置換基を有するＧＬＰ−２誘導体を含む
組成物である。
【００１３】 本発明による医薬組成物は、好ましくは、以下の物質のうちの１又は複数を更
に含む。 ・医薬として許容されるビヒクル又は担体； ・等張剤、好ましくは塩化ナトリウム、マンニトール及びグリセロールからな
る群から選択されるもの； ・防腐剤、好ましくは、フェノール、ｍ−クレゾール、メチルｐ−ヒドロキシ
ベンゾエート、ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びベンジルアルコールから
なる群から選択されるもの； ・緩衝液、好ましくは酢酸ナトリウム、クエン酸、グリシルグリシン、ヒスチ
ジン、２−フェニルエタノール及びリン酸ナトリウムからなる群から選択される
もの；及び ・ＧＬＰ−２誘導体の溶解性及び／又は安定性を改良することができる界面活
性剤、好ましくはｐｏｌｏｘｙｍｅｒ １８８，ｔｗｅｅｎ ２０及びｔｗｅｅ
ｎ ８０から選択される。
【００１４】 好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、脂溶性置換基が、４〜４
０の炭素原子、好ましくは８〜２５の炭素原子を含むＧＬＰ−２誘導体を含む。 脂溶性置換基は、好ましくは該脂溶性置換基のカルボキシル基がアミノ酸残基
のアミノ基とアミド結合を形成するようにアミノ酸残基に結合しているか、又は
脂溶性置換基は、該脂溶性置換基のアミノ基がアミノ酸残基のカルボキシル基と
アミド結合を形成するようにアミノ酸残基に結合している。
【００１５】 好ましい実施形態において、本発明による医薬組成物は、脂溶性置換基が、ス
ペーサーにより親ペプチドに結合しているＧＬＰ−２誘導体を含む。 スペーサーは、一実施形態において、親ペプチドのアミノ基と脂溶性置換基の
アミノ基との間の架橋を形成する、１〜７のメチレン基、好ましくは２のメチレ
ン基を有する非分枝アルカンα，ω−ジカルボン酸基である。
【００１６】 スペーサーは、好ましくは、別の実施形態において、親ペプチドのアミノ基と
脂溶性置換基のアミノ基との間に架橋を形成する、Ｃｙｓを除くアミノ酸残基、
又はＧｌｙ−Ｌｙｓのようなジペプチド、又は１〜〜７のメチレン基、好ましく
は２〜４のメチレン基を有するいずれかの非分枝アルカンα，ω−アミノ酸であ
る。
【００１７】 好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、部分的に又は完全に水素化され
たシクロペンタノフェナトレン骨格を含む。 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、直鎖又は分枝鎖アルキル基
である。 脂溶性置換基は、好ましくは、直鎖又は分枝鎖の脂肪酸である。アシル基は、
好ましくは、次のものである： ・ＣＨ3 （ＣＨ2 ）n ＣＯ−（式中、ｎは４〜３８である）、好ましくはＣＨ 3 （ＣＨ2 ）6 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）8 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）10ＣＯ−
，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）12ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）14ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）16 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）18ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）20ＣＯ−及びＣＨ3 （Ｃ
Ｈ2 ）22ＣＯ−を含む群から選択されるもの； ・直鎖又は分枝鎖アルカンα，ω−ジカルボン酸のアシル基；又は ・ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）m ＣＯ−，（式中、ｍは４〜３８、好ましくは４〜２４
である）を含む群、より好ましくはＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）14ＣＯ−，ＨＯＯＣ（Ｃ
Ｈ2 ）16ＣＯ−，ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）18ＣＯ−，ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）20ＣＯ−及
びＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）22ＣＯ−を含む群から選択されるもの。
【００１８】 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）p （
（ＣＨ2 ）q ＣＯＯＨ）ＣＨＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＯ−（式中、ｐ及びｑは
整数であり、そしてｐ＋ｑは８〜３３の整数、好ましくは１２〜２８である）の
基である。 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）r Ｃ
Ｏ−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ）2 ＣＯ−（式中、ｒは１０〜２４の整数で
ある）の基である。
【００１９】 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）s Ｃ
Ｏ−ＮＨＣＨ（（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＨ）ＣＯ−（式中、ｓは８〜２４の整数であ
る）の基である。 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ
）（ＣＨ2 ）4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）u ＣＨ3 （式中、ｕは８〜１８の整数であ
る）の基である。
【００２０】 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基が、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ
）（ＣＨ2 ）4 ＮＨ−ＣＯＣＨ（（ＣＨ2 ）u ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ） w ＣＨ3 （式中、ｗは１０〜１６の整数である）の基である。 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ
）（ＣＨ2 ）4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ） x ＣＨ3 （式中、ｘは１０〜１６の整数である）の基である。
【００２１】 別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ
）（ＣＨ2 ）4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ） y ＣＨ3 （式中、ｙは０又は１〜２２の整数である）の基である。 好ましい実施形態において、本発明による医薬組成物は、親ペプチドが、ＧＬ
Ｐ−２（１−３０）；ＧＬＰ−２（１−３１）；ＧＬＰ−２（１−３２）；ＧＬ
Ｐ−２（１−３３）；ＧＬＰ−２（１−３４）及びＧＬＰ−２（１−３５）を含
む群から選択されるＧＬＰ−２誘導体を含む。
【００２２】 更に好ましい実施形態において、本発明による医薬組成物は、親ペプチドが以
下のアミノ酸配列： Ｘ1 ＨＸ2 ＤＧＳＦＳＤＥＭＮＴＸ3 ＬＤＸ4 ＬＡＸ5 Ｘ6 ＤＦＩＮＷＬＸ7 Ｘ8 ＴＫＩＴＤＸ9 （式中、Ｘ1 はＮＨ2 ，ＤＦＰＥＥＶＡＩＶＥＥＬＧＲＲ，ＤＦＰＥＥＶＴＩＶ
ＥＥＬＧＲＲ，ＤＦＰＥＥＶＮＩＶＥＥＬＲＲＲ、又はそのフラグメントであり
、 Ｘ2 はＡｌａ又はＧｌｙであり、 Ｘ3 はＩｌｅ又はＶａｌであり、 Ｘ4 はＡｓｎ，Ｓｅｒ又はＨｉｓであり、 Ｘ5 はＡｌａ又はＴｈｒであり、 Ｘ6 はＡｒｇ又はＬｙｓであり、 Ｘ7 はＩｌｅ又はＬｅｕであり、 Ｘ8 はＧｌｎ又はＨｉｓであり、又は Ｘ9 はＯＨ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｒｇ−Ｌｙｓ，Ｌｙｓ−Ａｒｇ，Ａｒｇ−Ａ
ｒｇ又はＬｙｓ−Ｌｙｓである） を有するＧＬＰ−２誘導体を含む。
【００２３】 本発明による医薬組成物は、好ましくは、全部で１５まで、好ましくは１０ま
で、より好ましくは６までのアミノ酸残基が、遺伝コードによりコードされ得る
いずれかのα−アミノ酸残基と交換されているＧＬＰ−２誘導体を含む。 親ペプチドは、最も好ましくは、 Ｌｙｓ20ＧＬＰ−２（１−３３）； Ｌｙｓ20Ａｒｇ30ＧＬＰ−２（１−３３）； Ａｒｇ30Ｌｙｓ34ＧＬＰ−２（１−３４）； Ａｒｇ30Ｌｙｓ35ＧＬＰ−２（１−３５）； Ａｒｇ30,35 Ｌｙｓ20ＧＬＰ−２（１−３５）； Ａｒｇ35ＧＬＰ−２（１−３５） を含む群から選択される。
【００２４】 更に好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、 Ｌｙｓ20（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３３）； Ｌｙｓ20,30 −ｂｉｓ（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３３）； Ｌｙｓ20（Ｎε−テトラデカノイル）Ａｒｇ30ＧＬＰ−２（１−３３）； Ａｒｇ30Ｌｙｓ35（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３５）； Ａｒｇ30,35 Ｌｙｓ20（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３５）； Ａｒｇ35Ｌｙｓ30（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３５）； Ａｒｇ30Ｌｙｓ34（Ｎε−テトラデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３４）； Ｌｙｓ20（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２（１−３３）
； Ｌｙｓ20,30 −ｂｉｓ（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２
（１−３３）； Ｌｙｓ20（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）Ａｒｇ30ＧＬＰ−２（１
−３３）； Ａｒｇ30Ｌｙｓ35（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２（１
−３５）； Ａｒｇ30,35 Ｌｙｓ20（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２
（１−３５）； Ａｒｇ35Ｌｙｓ30（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２（１
−３５）；及び Ａｒｇ30Ｌｙｓ34（Ｎε−（ω−カルボキシノナデカノイル）ＧＬＰ−２（１
−３４）、 を含む群から選択されるＧＬＰ−２誘導体を含む。
【００２５】 本発明は、更に、ＧＬＰ−２又はそのフラグメントもしくはアナログの溶解性
及び／又は安定性を改良するための方法であって、脂溶性置換基が親ペプチドの
アミノ酸残基のいずれか一に導入されることを特徴とする方法に関する。 この方法により、脂溶性置換基は、好ましくは位置２０〜３４、好ましくは３
０〜３４、最も好ましくは３０のアミノ酸残基のいずれか一に導入される。
【００２６】 脂溶性置換基は、好ましくは４〜４０の炭素原子、より好ましくは８〜２５の
炭素原子を含む。 好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、直鎖又は分枝鎖脂肪酸のアシル
基：好ましくはＣＨ3 （ＣＨ2 ）n ＣＯ−（式中、ｎは４〜３８である）、好ま
しくはＣＨ3 （ＣＨ2 ）6 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）8 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）10ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）12ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）14ＣＯ−，ＣＨ3 （
ＣＨ2 ）16ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）18ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）20ＣＯ−及び
ＣＨ3 （ＣＨ2 ）22ＣＯ−を含む群から選択されるものである。
【００２７】 ＧＬＰ−２親ペプチドは、好ましくは、ＧＬＰ−２（１−３０）；ＧＬＰ−２
（１−３１）；ＧＬＰ−２（１−３２）；ＧＬＰ−２（１−３３）；ＧＬＰ−２
（１−３４）及びＧＬＰ−２（１−３５）である。 発明の詳細な記載 ＧＬＰ−２誘導体の作用の満足いく遅延プロフィールを得るために、ＧＬＰ−
２成分に結合した脂溶性置換基は、好ましくは、４〜４０の炭素原子、特に８〜
２５の炭素原子を含む。脂溶性置換基は、結合したアミノ酸のアミノ基とアミド
結合を形成する脂溶性置換基のカルボキシル基によりＧＬＰ−２成分のアミノ基
に結合し得る。代わりとして、脂溶性置換基は、その脂溶性置換基のアミノ基が
アミノ酸のカルボキシル基とアミド結合を形成するように前記アミノ酸に結合し
得る。更なるオプションとして、脂溶性置換基は、エステル結合を介してＧＬＰ
−２成分に連結し得る。形式的には、そのエステルは、ＧＬＰ−２成分のカルボ
キシル基とそれに対する置換基のヒドロキシル基との間の反応により、又はＧＬ
Ｐ−２のヒドロキシル基とそれに対する置換基のカルボキシル基との間の反応に
より形成することができる。更に代わりとして、脂溶性置換基は、ＧＬＰ−２成
分の一級アミノ基に導入されるアルキル基であってよい。
【００２８】 本発明の１つの好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、スペーサーのカ
ルボキシル基がＧＬＰ−２成分のアミノ基とアミド結合を形成するように、スペ
ーサーによりＧＬＰ−２成分に結合する。適切なスペーサーの例は、コハク酸、
Ｌｙｓ，Ｇｌｕ又ははＡｓｐ、又はＧｌｙ−Ｌｙｓのようなジペプチドである。
スペーサーがコハク酸である場合、その１つのカルボキシル基は、アミノ酸残基
のアミノ基とアミド結合を形成し得、そして他のカルボキシル基は脂溶性置換基
のアミノ基とアミド結合を形成し得る。スペーサーが、Ｌｙｓ，Ｇｌｕ又はＡｓ
ｐである場合、そのカルボキシル基は、アミノ酸残基のアミノ基とアミド結合を
形成し得、そしてそのアミノ基は脂溶性置換基のカルボキシル基とアミド結合を
形成し得る。Ｌｙｓをスペーサーとして用いる場合、特定の例において、更なる
スペーサーをＬｙｓのε−アミノ基と脂溶性置換基との間に挿入することができ
る。１つの好ましい実施形態において、このような更なるスペーサーは、Ｌｙｓ
のε−アミノ基と、及び脂溶性置換基中に存在するアミノ基とアミド結合を形成
するコハク酸である。別の好ましい、実施形態において、このような更なるスペ
ーサーは、Ｌｙｓのε−アミノ基とアミド結合を、及び脂溶性置換基中に存在す
るカルボキシル基と別のアミド結合を形成するＧｌｕ又はＡｓｐである。即ち、
脂溶性置換基はＮε−アシル化リシン残基である。
【００２９】 本発明の別の好ましい実施形態において、脂溶性置換基は、負に荷電し得る基
を有する。負に荷電し得る１つの好ましい基はカルボン酸基である。 親ペプチドは本ポリペプチドをコードし、そのペプチドの発現を許容する条件
下で適切な栄養培地中でポリペプチドを発現することができるＤＮＡ配列を含む
宿主細胞を培養し、その後その培養物から得られたペプチドを回収することを含
む方法によって生産することができる。
【００３０】 細胞を培養するために用いる培地は、宿主細胞を増殖させるために適したいず
れかの慣用的な培地、例えば適切な補足物を含む最小又は複合培地であり得る。
適切な培地は、商業的供給元から利用でき、又は公開されている処方（例えばＡ
ｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎのカタログ
）に従って調製することができる。細胞により生産されるペプチドは、次に、遠
心又はろ過により培地から宿主細胞を分離し、塩、例えば硫酸アンモニウムによ
り上清又はろ液のタンパク質成分を沈殿させ、問題のペプチドの型に依存した種
々のクロマトグラフィー法、例えばイオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過ク
ロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等により精製することを
含む慣用的な方法により培養培地から回収することができる。
【００３１】 親ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、適切には、例えばゲノム又はｃＤＮＡ
ライブラリーを調製し、標準的技術に従って合成オリゴヌクレオチドプローブを
用いるハイブリダイゼーションによりペプチドの全部又は一部をコードするＤＮ
Ａ配列についてスクリーニングすることにより得られるゲノム又はｃＤＮＡ源の
ものであり得る（例えばSambrook, J. Fritsch, EF及びManiatis, T. Molecular
Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New
York, 1989)。ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、確立された標準的方法、例
えばBeaucage及びCaruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859-1869 によ
り記載されるホスホアミジト法、又はＭａｔｔｈｅｓら、EMBO Journal 3 (1984
), 801-805により記載される方法により合成的に調製することもできる。ＤＮＡ
配列は、例えばＵＳ４，６８３，２０２又はＳａｉｋｉら、Science 239 (1988)
, 487-491 に記載される特定のプライマーを用いてポリメラーゼ鎖反応によって
も調製することができる。
【００３２】 そのＤＮＡ配列は、便利には組換えＤＮＡ法にかけることができるいずれかの
ベクターに挿入することができ、ベクターの選択は、しばしば、導入される宿主
細胞に依存するであろう。これにより、ベクターは、自律的に複製するベクター
、即ち染色体外存在物として存在するベクターであって、その複製が染色体複製
と独立しているもの、例えばプラスミドであり得る。あるいは、ベクターは、宿
主細胞に導入した時に宿主細胞ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれている染
色体と一緒に複製されるものであり得る。
【００３３】 ベクターは、好ましくは、ペプチドをコードするＤＮＡ配列がＤＮＡの転写の
ために要求される更なるセグメント、例えばプロモーターに作用可能に連結して
いる発現ベクターである。プロモーターは、選択された宿主細胞中で転写活性を
示すいずれのＤＮＡ配列であってもよく、宿主細胞に対して同種又は異種のタン
パク質をコードする遺伝子から得ることができる。宿主の宿主細胞において本発
明のペプチドをコードするＤＮＡの転写を行うための適切なプロモーターの例は
、当該技術分野において公知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、前掲に記載さ
れる。
【００３４】 本ペプチドをコードするＤＮＡ配列は、必要に応じて、適切なターミネーター
、ポリアデニル化シグナル、転写エンハンサー配列、及び翻訳エンハンサー配列
に作用可能に連結させてもよい。本発明の組換えベクターは、問題の宿主細胞内
でベクターを複製させることができるＤＮＡ配列を更に含んでよい。 ベクターは、選択マーカー例えばその産物が宿主細胞内の欠損を補う遺伝子又
は薬剤、例えばアンピシリン、カナマイシン、テトラサイクリン、クロランフェ
ニコール、ネオマイシン、ヒグロマイシン又はメトトレキセートに対する耐性を
与えるものも含み得る。
【００３５】 本発明の親ペプチドを宿主細胞の分泌経路に向かわせるために、（リーダー配
列、プレプロ配列又はプレ配列としても知られる）分泌シグナル配列を、組換え
ベクターに供してもよい。分泌シグナル配列は、正確な読み枠において本ペプチ
ドをコードするＤＮＡ配列に連結される。分泌シグナル配列は、一般に、本ペプ
チドをコードするＤＮＡ配列に対して５’に位置する。分泌シグナル配列は、本
ペプチドに通常、関連するものであっても、別の分泌されるタンパク質をコード
する遺伝子からのものであってもよい。
【００３６】 本ペプチドをコードするＤＮＡ配列、プロモーター並びに任意にターミネータ
ー及び／又は分泌シグナル配列各々を連結するため、及びそれらを複製のために
必要な情報を含む適切なベクターに挿入するために用いる手順は当業者に公知で
ある（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前掲）を参照のこと。 ＤＮＡ配列又は組換えベクターを導入する宿主細胞は、本ペプチドを生産する
ことができるいずれの細胞であってもよく、細菌、イースト、真菌、及び高等真
核細胞を含む。公知であり、当該技術分野で用いられる適切な宿主細胞の例は、
これらに限らないが、大腸菌、サッカロマイセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａ ｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ）、又は哺乳動物ＢＨＫ又はＣＨＯ細胞
系がある。
【００３７】 本発明のＧＬＰ−２誘導体は、それ自体知られている方法を用いて、親ＧＬＰ
−２又はＧＬＰ−２アナログに脂溶性置換基を導入することにより調製すること
ができる。例えば、その内容が引用により全体が本明細書に組み込まれるＷＯ９
５／０７９３１を参照のこと。 Ｌｙｓ残基のＮε−アシル化は、アシル化剤として導入すべきアシル基の活性
化アミド、例えばベンゾトリアゾールのアミドを用いることにより行うことがで
きる。アルシ化は、塩基の存在下で極性溶媒中で行われる。
【００３８】 組成物の調製及び投与 本発明によるＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物は、治療の必要な患者に非経
口的に又は経口的に投与することができる。非経口的投与は、シリンジ、任意に
ペン様（ｐｅｎ−ｌｉｋｅ）シリンジにより、皮下、筋内又は静脈内注入により
行うことができる。あるいは、非経口投与は、注入ポンプにより行うことができ
る。更なるオプションは、鼻用又は肺用スプレーの形態でＧＬＰ−２誘導体の投
与のための粉末又は液体であり得る組成物である。なお更なるオプションとして
、本発明のＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物は、例えばパッチ、任意にイオン
泳動パッチから皮下に、又は例えば頬から粘膜を介して投与することもできる。
【００３９】 本発明のＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物は、例えばRemington's Pharmace
utical Science, 1985又はRemington : The Science and Practice of Pharmacy
, 19th edition, 1995に記載されるように、慣用的な技術により調製することが
できる。 これにより、本発明のＧＬＰ−２誘導体の注入用組成物は、要求される最終製
品を供するために、適切なら、成分を溶解し及び混合することに関する医薬産業
の慣用的技術を用いて調製することができる。
【００４０】 １つの手順によれば、ＧＬＰ−２誘導体は、調製すべき組成物の最終容量より
いくらか少い量の水に溶かされる。必要に応じて等張剤、防腐剤及び緩衝液が添
加され、その溶液のpH値は、必要に応じて酸、例えば塩酸、又は塩基、例えば水
酸化ナトリウム水溶液を用いて調節される。最後に、その溶液の容量は水で調節
されて要求される成分の濃度を供する。
【００４１】 特定のペプチドの鼻への投与のための組成物は、例えば、欧州特許第２７２０
９７（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ Ａ／Ｓ）又はＷＯ９３／１８７８５に記載さ
れるように調製することができる。 本発明の１つの好ましい実施形態によれば、ＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成
物は、注入による投与のために適した組成物の形態で供される。このような組成
物は、直ちに用いることができる注入用液であっても、注入することができる前
に溶媒に溶かさなければならない特定量の固体組成物、例えば凍結乾燥製品であ
ってもよい。注入用液は、好ましくは、約０．５mg／mL以上、好ましくは約５mg
／mL以上、より好ましくは約１０mg／mL以上のＧＬＰ−２誘導体、及び好ましく
は約１００mg／mL以下のＧＬＰ−２誘導体を含む。
【００４２】 本発明のＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物は種々の疾患、例えば肥満症、小
腸症候群、クローン病、回腸炎、腸の炎症、胃及び十二指腸潰瘍、炎症性腸疾患
（ＩＢＤ）及び腸の癌損傷の治療において用いることができる。用いるべき特定
のＧＬＰ−２誘導体及びいずれかの患者についての至適投与レベルは、治療すべ
き病気に、用いる特定のペプチド誘導体の効能、患者の年齢、体重、身体の活発
さ、及び食事を含む種々の因子に、他の薬剤との可能な組合せに、及びそのケー
スの激しさに依存するであろう。本発明のＧＬＰ−２誘導体の投与量は当業者に
より各々の個々の患者について決定されることが推漿される。
【００４３】 実施例１ Ｌｙｓ30（Ｎε−（γ−グルタミル（Ｎα−テトラデカノイル）））ｈＧＬＰ
−２の合成 ｈＧＬＰ−２−ＯＨ（５mg，１．３３μmol ）、ＥＤＰＡ（４．８mg，３７．
２μmol ）、ＮＭＰ（０．７mL）及び水（０．３５mL）の混合物に、ＮＭＰ（５
１μＬ）中にＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＤＫ９７／００３４０に記載される通り調製し
たＭｙｒ−Ｇｌｕ（ＯＮＳｕ）−ＯＢｕ+ （２mg，４μmol ）の溶液を加えた、
その反応混合物を静かに５分、振とうし、次に室温で更に１０分、放置した。そ
の反応を水（２２μＬ）中グリシン（２．２mg，２９．３μmol ）の溶液を加え
ることにより停止させた。酢酸アンモニウムの０．５％水溶液（１５mL) を加え
、られた混合物をＶａｒｉａｎ ５ｇ Ｃ８ Ｍｅｇａ Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔ（
登録商標）に溶出し、その固定化された化合物を５％アセトニトリル水溶液（２
０mL）で洗い、最後にＴＦＡ（２０mL）での溶出によりそのカートリッジから遊
離させた。その溶出物を真空下で濃縮し、その残留物を、シアノプロピルカラム
（Ｚｏｒｂａｘ ３００ＳＢ−ＣＮ）及び標準的アセトニトリル／ＴＦＡシステ
ムを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。そのカラムを６５℃に加
熱し、アセトニトリル勾配は６０分で０〜１００％であった。標題化合物（０．
１mg，１．８％）を単離し、その産物をＰＤＭＳにより分析した。プロトン化分
子イオンについてのｍ／ｚ値は４１０７．８±３であることが見い出された。得
られた分子量は、これにより、４１０６．８±３amu （理論値４１０６amu ）で
ある。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 14/605 Ｃ０７Ｋ 14/605 Ａ６１Ｋ 37/28 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，Ｇ Ｈ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 フースフェルト，ペル オラフ デンマーク国，デーコー−1411 コペンハ ーゲン コー，５．エムエフ．，アップレ ビース プラッズ 27 (72)発明者 ニールセン，ペル フランクリン デンマーク国，デーコー−3500 ベルレー ゼ，ダルセー パルク 59 (72)発明者 カールショルム，ニールス セー． デンマーク国，デーコー−2720 バンレー ゼ，クラウショルムバイ 38 (72)発明者 オールセン，ヘーレ ビルク デンマーク国，デーコー−3450 アレーレ ズ，スコーレロッデン 23 (72)発明者 チム，ラルス デンマーク国，デーコー−2820 ゲントフ テ，スキフテバイ 22 (72)発明者 ビョールン，セーレン エリック デンマーク国，デーコー−2800 リュンビ ー，マリー グルッベス アレ 47 Ｆターム(参考） 4C076 CC16 CC41 DD08 DD09 DD23D DD26Z DD37R DD37Z DD38D DD41Z DD43Z DD45R DD51Z DD52Z EE23 EE41Z FF06 FF63 4C084 AA01 BA01 BA08 BA19 BA36 CA28 CA32 CA59 NA02 NA03 ZA662 ZA702 4H045 AA20 AA30 BA18 BA55 DA30 EA22 EA28 GA45 HA30

Claims (40)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 約１０μＭのペプチド濃度で、２５％を超える、好ましくは
    ２５％〜５０％の範囲の、２２±２℃でＨ2 Ｏ中で２２２nmでＣＤにより測定し
    たヘリックス成分を有するＧＬＰ−２誘導体を含む医薬組成物。
  2. 【請求項２】 ＧＬＰ−２誘導体の濃度が、０．５mg／mL以上、好ましくは
    約５mg／mL以上、より好ましくは約１０mg／mL以上、及び好ましくは約１００mg
    ／mL以下であることを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 【請求項３】 親ペプチドの少くとも１のアミノ酸残基が、結合した脂溶性
    置換基を有しているＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項１又は２に記載の医薬組成
    物。
  4. 【請求項４】 位置２０〜３４、好ましくは３０〜３４、最も好ましくは３
    ０のアミノ酸残基のいずれか一に結合した脂溶性置換基を有するＧＬＰ−２誘導
    体を含む請求項３に記載の医薬組成物。
  5. 【請求項５】 医薬として許容されるビヒクル又は担体を更に含む、先の請
    求項のいずれか一に記載の医薬組成物。
  6. 【請求項６】 等張剤、好ましくは塩化ナトリウム、マンニトール及びグリ
    セロールからなる群から選択される等張剤を更に含む、先の請求項のいずれか一
    に記載の医薬組成物。
  7. 【請求項７】 防腐剤、好ましくはフェノール、ｍ−クレゾール、メチルｐ
    −ヒドロキシベンゾエート、ブチルｐ−ヒドロキシベンゾエート及びベンジルア
    ルコールからなる群から選択される防腐剤を更に含む先の請求項のいずれか一に
    記載の医薬組成物。
  8. 【請求項８】 緩衝剤、好ましくは酢酸ナトリウム、クエン酸、グリシルグ
    リシン、ヒスチジン、２−フェニルエタノール及びリン酸ナトリウムからなる群
    から選択される緩衝剤を更に含む先の請求項のいずれか一に記載の医薬組成物。
  9. 【請求項９】 ＧＬＰ−２誘導体の溶解性及び／又は安定性を改善すること
    ができる界面活性剤、好ましくはｐｏｌｏｘｙｍｅｒ １８８，ｔｗｅｅｎ ２
    ０及びｔｗｅｅｎ ８０から選択される界面活性剤を更に含む、先の請求項のい
    ずれか一に記載の医薬組成物。
  10. 【請求項１０】 脂溶性置換基が、４〜４０の炭素原子、好ましくは８〜２
    ５の炭素原子を含むＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のいずれか一に記載の
    医薬組成物。
  11. 【請求項１１】 脂溶性置換基が、該脂溶性置換基のカルボキシル基がアミ
    ノ酸残基のアミノ基とアミド結合を形成するようにアミノ酸残基に結合している
    ＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のいずれか一に記載の医薬組成物。
  12. 【請求項１２】 脂溶性置換基が、該脂溶性置換基のアミノ基がアミノ酸残
    基のカルボキシル基とアミド結合を形成するようにアミノ酸残基に結合している
    ＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項１〜１１のいずれか一に記載の医薬組成物。
  13. 【請求項１３】 脂溶性置換基が、スペーサーにより親ペプチドに結合して
    いるＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のいずれか一に記載の医薬組成物。
  14. 【請求項１４】 前記スペーサーが、親ペプチドのアミノ基と脂溶性置換基
    のアミノ基との間の架橋を形成する、１〜７のメチレン基、好ましくは２のメチ
    レン基を有する非分枝アルカンα，ω−ジカルボン酸基であることを特徴とする
    請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 【請求項１５】 前記スペーサーが、親ペプチドのアミノ基と脂溶性置換基
    のアミノ基との間に架橋を形成する、Ｃｙｓを除くアミノ酸残基、又はＧｌｙ−
    Ｌｙｓのようなジペプチド、又は１〜〜７のメチレン基、好ましくは２〜４のメ
    チレン基を有するいずれかの非分枝アルカンα，ω−アミノ酸であることを特徴
    とする請求項１３に記載の医薬組成物。
  16. 【請求項１６】 前記脂溶性置換基が、部分的に又は完全に水素化されたシ
    クロペンタノフェナトレン骨格を含むＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のい
    ずれか一に記載の医薬組成物。
  17. 【請求項１７】 前記脂溶性置換基が、直鎖又は分枝鎖アルキル基であるこ
    とを特徴とする請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  18. 【請求項１８】 脂溶性置換基が、直鎖又は分枝鎖の脂肪酸であるＧＬＰ−
    ２誘導体を含む、請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  19. 【請求項１９】 前記アシル基が、ＣＨ3 （ＣＨ2 ）n ＣＯ−（式中、ｎは
    ４〜３８である）、好ましくはＣＨ3 （ＣＨ2 ）6 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）8 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）10ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）12ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ 2 ）14ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）16ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）18ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）20ＣＯ−及びＣＨ3 （ＣＨ2 ）22ＣＯ−を含む群から選択されること
    を特徴とする請求項１８に記載の医薬組成物。
  20. 【請求項２０】 脂溶性置換基が直鎖又は分枝鎖アルカンα，ω−ジカルボ
    ン酸のアシル基であるＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項３〜５のいずれか一に記
    載の医薬組成物。
  21. 【請求項２１】 前記アシル基が、ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）m ＣＯ−（式中、ｍ
    は４〜３８、好ましくは４〜２４である）を含む群、より好ましくはＨＯＯＣ（
    ＣＨ2 ）14ＣＯ−，ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）16ＣＯ−，ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）18ＣＯ−
    ，ＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）20ＣＯ−及びＨＯＯＣ（ＣＨ2 ）22ＣＯ−を含む群から選
    択されることを特徴とする請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 【請求項２２】 脂溶性置換基が、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）p （（ＣＨ2 ）q ＣＯＯＨ）ＣＨＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＯ−（式中、ｐ及びｑは整数であり、
    そしてｐ＋ｑは８〜３３の整数、好ましくは１２〜２８である）の基であるＧＬ
    Ｐ−２誘導体を含む、請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  23. 【請求項２３】 脂溶性置換基が、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）r ＣＯＮＨＣＨ（
    ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ）2 ＣＯ−（式中、ｒは１０〜２４の整数である）の基であ
    るＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  24. 【請求項２４】 脂溶性置換基が、式：ＣＨ3 （ＣＨ2 ）s ＣＯＮＨＣＨ（
    （ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＨ）ＣＯ−（式中、ｓは８〜２４の整数である）の基である
    ＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  25. 【請求項２５】 脂溶性置換基が、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ） 4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）u ＣＨ3 （式中、ｕは８〜１８の整数である）の基であ
    るＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  26. 【請求項２６】 脂溶性置換基が、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ） 4 ＮＨ−ＣＯＣＨ（（ＣＨ2 ）2 ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）w ＣＨ3 （式
    中、ｗは１０〜１６の整数である）の基であるＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項
    ３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  27. 【請求項２７】 脂溶性置換基が、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ） 4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）x ＣＨ3 （式
    中、ｘは１０〜１６の整数である）の基であるＧＬＰ−２誘導体を含む、請求項
    ３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  28. 【請求項２８】 脂溶性置換基が、式：−ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ2 ） 4 ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）2 ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ2 ）y ＣＨ3 （式
    中、ｙは０又は１〜２２の整数である）の基であるＧＬＰ−２誘導体を含む、請
    求項３〜１５のいずれか一に記載の医薬組成物。
  29. 【請求項２９】 親ペプチドが、ＧＬＰ−２（１−３０）；ＧＬＰ−２（１
    −３１）；ＧＬＰ−２（１−３２）；ＧＬＰ−２（１−３３）；ＧＬＰ−２（１
    −３４）及びＧＬＰ−２（１−３５）を含む群から選択されるＧＬＰ−２誘導体
    を含む、先の請求項のいずれか一に記載の医薬組成物。
  30. 【請求項３０】 親ペプチドが、次のアミノ酸配列：Ｘ1 ＨＸ2 ＤＧＳＦＳ
    ＤＥＭＮＴＸ 3ＬＤＸ4 ＬＡＸ5 Ｘ6 ＤＦＩＮＷＬＸ7 Ｘ8 ＴＫＩＴＤＸ9 （式
    中、Ｘ1 はＮＨ2 ，ＤＦＰＥＥＶＡＩＶＥＥＬＧＲＲ，ＤＦＰＥＥＶＴＩＶＥＥ
    ＬＧＲＲ，ＤＦＰＥＥＶＮＩＶＥＥＬＲＲＲ、又はそれらのフラグメントであり
    、 Ｘ2 はＡｌａ又はＧｌｙであり、Ｘ3 はＩｌｅ又はＶａｌであり、Ｘ4 はＡｓ
    ｎ，Ｓｅｒ又はＨｉｓであり、Ｘ5 はＡｌａ又はＴｈｒであり、Ｘ6 はＡｒｇ又
    はＬｙｓであり、Ｘ7 はＩｌｅ又はＬｅｕであり、Ｘ8 はＧｌｎ又はＨｉｓであ
    り、又はＸ9 はＯＨ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｒｇ−Ｌｙｓ，Ｌｙｓ−Ａｒｇ，Ａｒ
    ｇ−Ａｒｇ又はＬｙｓ−Ｌｙｓである） を有するＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のいずれか一に記載の医薬組成物
    。
  31. 【請求項３１】 全部で１５まで、好ましくは１０まで、より好ましくは６
    までのアミノ酸残基が、遺伝子コードによりコードされ得るいずれかのα−アミ
    ノ酸残基と交換されているＧＬＰ−２誘導体を含む、先の請求項のいずれかに記
    載の医薬組成物。
  32. 【請求項３２】 親ペプチドが、Ｌｙｓ20ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌｙｓ 20 Ａｒｇ30ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａｒｇ30Ｌｙｓ34ＧＬＰ−２（１−３４）
    ；Ａｒｇ30Ｌｙｓ35ＧＬＰ−２（１−３５）；Ａｒｇ30,35 Ｌｙｓ20ＧＬＰ−２
    （１−３５）；Ａｒｇ35ＧＬＰ−２（１−３５）を含む群から選択されるＧＬＰ
    −２誘導体を含む、先の請求項のいずれかに記載の医薬組成物。
  33. 【請求項３３】 ＧＬＰ−２又はそのフラグメントもしくはアナログの溶解
    性及び／又は安定性を改良するための方法であって、親ペプチドのアミノ酸残基
    のいずれか１つに脂溶性置換基を導入することを特徴とする方法。
  34. 【請求項３４】 位置２０〜３４、好ましくは３０〜３４、最も好ましくは
    ３０のアミノ酸残基のいずれか一に脂溶性置換基が導入されることを特徴とする
    請求項３３に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 前記脂溶性置換基が、４〜４０の炭素原子、好ましくは８
    〜２５の炭素原子を含むことを特徴とする請求項３３又は３４に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 前記脂溶性置換基が、直鎖又は分枝鎖脂肪酸のアシル基で
    あることを特徴とする請求項３３〜３５のいずれか一に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 前記アルシ基が、ＣＨ3 （ＣＨ2 ）n ＣＯ−（式中、ｎは
    ４〜３８である）、好ましくはＣＨ3 （ＣＨ2 ）6 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）8 ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）10ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）12ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ 2 ）14ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）16ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）18ＣＯ−，ＣＨ3 （ＣＨ2 ）20ＣＯ−及びＣＨ3 （ＣＨ2 ）22ＣＯ−を含む群から選択されること
    を特徴とする請求項３６に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 前記親ペプチドが、Ｌｙｓ20ＧＬＰ−２（１−３３）；Ｌ
    ｙｓ20Ａｒｇ30ＧＬＰ−２（１−３３）；Ａｒｇ30Ｌｙｓ34ＧＬＰ−２（１−３
    ４）；Ａｒｇ30Ｌｙｓ35ＧＬＰ−２（１−３５）；Ａｒｇ30,35 Ｌｙｓ20ＧＬＰ
    −２（１−３５）；Ａｒｇ35ＧＬＰ−２（１−３５）を含む群から選択されるこ
    とを特徴とする請求項３３〜３７のいずれか一に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 肥満症を治療するための薬剤の調製のための請求項１〜３
    ２のいずれか一に記載の医薬組成物の使用。
  40. 【請求項４０】 小腸症候群、クローン病、回腸炎、腸の炎症、胃及び十二
    指腸潰瘍、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び腸癌損傷を治療するための薬剤の調製の
    ための請求項１〜３２のいずれか一に記載の医薬組成物の使用。
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