NO343825B1 - GLP-1-derivater og farmasøytisk sammensetninger og medisinske anvendelser derav. - Google Patents

GLP-1-derivater og farmasøytisk sammensetninger og medisinske anvendelser derav. Download PDF

Info

Publication number
NO343825B1
NO343825B1 NO20061722A NO20061722A NO343825B1 NO 343825 B1 NO343825 B1 NO 343825B1 NO 20061722 A NO20061722 A NO 20061722A NO 20061722 A NO20061722 A NO 20061722A NO 343825 B1 NO343825 B1 NO 343825B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
ethoxy
glp
lys
aib
arg
Prior art date
Application number
NO20061722A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20061722L (no
Inventor
Nils Langeland Johansen
Kjeld Madsen
Thomas Kruse Hansen
Florencio Zaragoza Dörwald
Paw Bloch
Jesper Lau
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of NO20061722L publication Critical patent/NO20061722L/no
Publication of NO343825B1 publication Critical patent/NO343825B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Description

Den foreliggende oppfinnelsen angår nye derivater av glukagonlignende peptid-1 (GLP-1) med forlenget virkningsprofil og anvendelse av dem som et medikament. Heri beskrivesvidere nye derivater av eksendin og bruken av slike derivater.
Peptider har bred anvendelse innenfor den medisinske praksis, og ettersom de kan fremstilles ved rekombinant DNA-teknologi, er det forventet at de stadig vil bli viktigere i de kommende år. Når naturlige peptider og analoger av disse brukes i terapi, vil man vanligvis finne at de fjernes relativt rask. Rask fjerning av et terapeutisk middel er uhensiktsmessig og ufordelaktig i de tilfeller hvor det er ønskelig å opprettholde et høyt blodnivå med hensyn til nevnte middel over et lengre tidsrom, ettersom det da vil være nødvendig med flere gjentatte administreringer. Eksempler på peptider med rask fjerning er følgende: ACTH, kortikotropinfrigjørende faktor, angiotensin, kalsitonin, insulin, glukagon, glukagonlignende peptid-1, glukagonlignende peptid-2, insulinlignende vekstfaktor-1, insulinlignende vekstfaktor-2, gastrisk hemmende peptid, veksthormonfrigjørende faktor, hypofyseadenylatsyklaseaktiverende peptid, sekretin, enterogastrin, somatostatin, somatropin, somatomedin, paratyroid hormon, trombopoietin, erytropoietin, hypotalamisk frigjørende faktorer, prolaktin, tyroidstimulerende hormoner, endorfiner, enkefaliner, vasopressin, oksytocin, opioider og deres analoger, superoksiddismutase, interferon, asparaginase, arginase, arginindeaminase, adenosindeaminase og ribonuklease. I enkelte tilfeller er det mulig å påvirke peptidenes frigjøringsprofil ved å anvende egnede farmasøytiske sammensetninger, men denne fremgangsmåten har forskjellige ulemper og er generelt ikke anvendbar.
Antall kjente endogene peptider og proteiner med interessante biologiske aktiviteter øker svært raskt, også som et resultat av den pågående undersøkelsen av det humane genom. På grunn av deres biologiske aktiviteter, kan mange av disse polypeptidene i prinsippet brukes som terapeutiske midler. Endogene peptider er imidlertid ikke alltid egnet som medikamentkandidater, ettersom slike peptider ofte har halvliv på et par minutter på grunn av rask nedbrytning av peptidaser og/eller på grunn av nyrefiltrering og utskillelse i urinen. Polypeptidenes halvliv i humant plasma varierer meget sterkt (fra et par minutter til mer enn en uke). På lignende måte er også halvlivet til småmolekylmedikamenter meget variabelt. Denne sterke variabiliteten i plasmahalvlivene for peptider, proteiner og andre forbindelser er imidlertid ikke særlig godt forstått. Det er således et behov for å kunne modifisere terapeutiske forbindelser slik at disse får lengre virkningstid in vivo samtidig som det opprettholdes lav toksitet og terapeutiske fordeler.
Serumalbumin har et halvliv på mer enn en uke, og en fremgangsmåte for å øke plasmahalvlivet for peptider har vært å derivatisere peptidene med en kjemisk gruppe eller enhet som binder seg til serumalbumin.
Knudsen et al. (J. Med. Chem. 2000, 43, 1664-1669) har vist at acylerte GLP-1-peptider har høy reseptorstyrke og en ti gangers økning av plasmahalvlivet i svin.
Zobel et al. (Bioorg. Med. Chem. Lett.2003, 13, 1513-1515) har vist at plasmahalvlivet for et antikoagulerende peptid i kaniner økte med 10-50 ganger ved derivatisering av aminoterminus med fosfatesterbaserte små molekyler som binder seg til serumalbumin.
WO 9943707 A1 beskriver N-terminal modifiserte derivater av human GLP-1 og analoger derav til bruk i behandling av overvekt og diabetes.
WO 0104156 A1 beskriver peptidkonjugater med øket stabilitet og bruk av disse in behandling av overflødig nivå av blodglukose.
Sheffield (Current Drug Targets - Cardiovascular and Haematological Disorders 2001, 1, 1-22) beskriver terapeutiske proteiner som har blitt modifisert kjemisk ved kovalent tilføying av PEG eller dextrankjeder eller ved kryssbinding til andre proteiner med det formål å forlenge halveringstiden.
Ostrovskii (Ukrayins`Kyi Biokhimichnyi Zhurnal 1975, 47(6), 701-707) beskriver at de hydrofobe egenskapene til proteiner karakteriseres av graden av at 2-ptoluidino-naftalen-6-sulfonat-affiniteten.
Heri beskrives en forbindelse som omfatter et terapeutisk polypeptid forbundet med en albuminbindende rest via en hydrofil avstandsgruppe.
Heri beskrives også en forbindelse som omfatter et terapeutisk polypeptid forbundet med en albuminbindende rest via en hydrofil avstandsgruppe som skiller polypeptidet og den albuminbindende resten med en kjemisk gruppe som omfatter minst 5 ikke-hydrogenatomer hvor 30-50% av disse atomene er enten N eller O.
I en utførelse er avstandsgruppen definert som
-(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)pQq- hvor
l, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller formedikament av denne.
Den foreliggende oppfinnelsen angår en forbindelse med formel (I).
A - W - B - Y - terapeutisk polypeptid (I)
Hvor nevnte polypeptid er et GLP-1-peptid omfattende aminosyresekvensen med formel (V):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
Formel (V) (SEQ ID No: 3)
Hvor
Xaa7er L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, βhydroksyhistidin, homohistidin, Nα-acetylhistidin, α-fluormetylhistidin, αmetylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin eller 4-pyridylalanin;
Xaa8er Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-aminocyclopropyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclobutyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclopentyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclohexyl)-karboksylsyre, (1-aminocycloheptyl)-karboksylsyre, eller (1-aminocyclooctyl)-karboksylsyre;
Xaa18er Ser, Lys eller Arg;
Xaa22er Gly, Glu eller Aib;
Xaa23er Gln, Glu, Lys eller Arg;
Xaa26er Lys, Glu eller Arg;
Xaa30er Ala, Glu eller Arg;
Xaa34er Lys, Glu eller Arg;
Xaa35er Gly eller Aib;
Xaa36er Arg eller Lys;
Xaa37er Gly, Ala, Glu eller Lys;
Xaa38er Lys, amid eller er fraværende
A er en albumbindende rest valg fra gruppen bestående av
hvor det kirale karbonatomet enten er R eller S,
hvor det kirale karbonatomet enten er R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene enten er R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene enten er R eller S,
B er -(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-, hvor l, m, n, og p uavhengig er 1-5, og q er 0-5;
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH -, -NHC(O)O-, -C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- and –C(O)NH-, hvori s is 0 eller 1; og
W er en kjemisk gruppe som forbinder A og B, valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH -, -NHC(O)O-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og –C(O)NH-, hvori s er 0 eller 1;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller forløpermedikament derav.
Heri beskrives også en forbindelse med formel (II)
A - W - B - Y - terapeutisk polypeptid - Y' - B' - W' - A' (II)
hvor
A og A' er albuminbindende rester,
B og B' er hydrofile avstandsgrupper uavhengig av hverandre valgt fra -(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)pQq- hvor
l, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1,
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, og
Y' er en kjemisk gruppe som forbinder B' og det terapeutiske middelet, og
W er en kjemisk gruppe som forbinder A og B, og
W' er en kjemisk gruppe som forbinder A' og B'.
I et annet aspekt beskrives heri en forbindelse med formel (III)
hvor
A og A' er albuminbindende rester,
B er hydrofil en avstandsgruppe uavhengig valgt fra -(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)pQq-hvor
l, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1,
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, og
W'' er en kjemisk gruppe som forbinder B med A og A'.
Heri beskrives en forbindelse som omfatter en hydrofil avstandsgruppe mellom et terapeutisk peptid og en eller flere albuminbindende rester og hvor nevnte forbindelse har forlenget virkningsprofil i forhold til terapeutiske polypeptidet, og hvor den albuminbindende delen så vel som den frie delen av nevnte forbindelse begge er i stand til å binde seg til denne reseptoren som styrer effekten av det terapeutiske polypeptidet.
I en utførelse er den hydrofile avstandsgruppen en ugrenet oligoetylenglykolgruppe med passende funksjonelle grupper i begge terminalene og som danner en bro mellom en aminogruppe i det terapeutiske polypeptidet og en funksjonell gruppe i den albuminbindende resten.
I et annet aspekt er det terapeutiske polypeptidet et GLP-1-peptid.
DEFINISJONER
I den foreliggende beskrivelsen har de anvendte begreper de definisjoner som er angitt i det etterfølgende.
Begrepet "albuminbindende rest" slik det brukes her, betyr en rest som ikkekovalent binder seg til humant serumalbumin. Den albuminbindende resten som er knyttet til det terapeutiske polypeptidet har typisk en affinitet under 10 μM til humant serumalbumin og fortrinnsvis under 1 μM. Det er kjent en rekke albuminbindende rester så som lineære og grenede lipofile grupper med 4-40 karbonatomer, forbindelser med et syklopentanfenantrenskjelett, peptider med 10-30 aminosyrerester, osv.
Begrepet "hydrofil avstandsgruppe" slik det brukes her, betyr en avstandsgruppe som skiller et peptid og en albuminbindende rest med en kjemisk gruppe som omfatter minst 5 ikke-hydrogenatomer hvor 30-50% av disse enten er N eller O.
Begrepet "terapeutisk polypeptid" slik det brukes her, betyr et polypeptid som er blitt utviklet for terapeutisk bruk.
Begrepene "polypeptid" og "peptid" slik de bruks her, betyr en forbindelse som er sammensatt av minst fem sammenhengende aminosyrer forbundet med peptidbindinger. De bestående aminosyrer kan være fra gruppen av aminosyrer som kodes av den genetiske koden og de kan være naturlige aminosyrer som ikke kodes av den genetiske koden, så vel som syntetiske aminosyrer. Naturlige aminosyrer som ikke kodes av den genetiske koden er for eksempel hydroksyprolin, �-karboksyglutamat, ornitin, fosfoserin, D-alanin og D-glutamin. Syntetiske aminosyrer omfatter aminosyrer som er fremstilt ved kjemisk syntese, for eksempel D-isomerer av de aminosyrene som kodes av den genetiske koden så som D-alanin og D-leukin, Aib (<α>-aminoisosmørsyre), Abu (<α>-aminosmørsyre), Tle (tertbutylglysin), β-alanin, 3-aminometylbenzosyre og antranilinsyre.
Begrepet "analog" slik det brukes her, betyr et modifisert peptid hvor en eller flere aminosyrerester i peptidet er blitt erstattet med andre aminosyrerester og/eller hvor en eller flere aminosyrerester er blitt fjernet fra peptidet og/eller hvor en eller flere aminosyrerester er blitt fjernet fra peptidet og/eller hvor en eller flere aminosyrerester er blitt tillagt peptidet. Slik tillegging eller fjerning av aminosyrerester kan finne sted ved N-terminalen i peptidet og/eller ved peptidets C-terminal. Det brukes et enkelt system for å beskrive analoger: For eksempel [Arg<34>]GLP-1(7-37)Lys betegner en GLP-1-analog hvor det naturlig forekommende lysinet i posisjon 34 er blitt erstattet med arginin og en lysinrest er blitt tillagt ved C-terminalen (posisjon 38). Formler for peptidanaloger og derivater av disse tegnes ved å bruke den enkeltbokstavsforkortelsen for aminosyrer som anvendt i IUPAC-IUB-nomenklaturen.
Begrepet "derivat" slik det brukes her i forhold til et peptid, betyr et kjemisk modifisert peptid eller en analog av dette hvor minst én substituent ikke er tilstede i det umodifiserte peptidet eller en analog av dette, det vil si et peptid som er kovalent modifisert. Typiske modifikasjoner er amider, karbohydrater, alkylgrupper, acylgrupper, estere og lignende. Et eksempel på et derivat av GLP-1(7-37) er N<ε26>-( γ-Glu(N<α>-heksadekanoyl)))-[Arg<34>, Lys<26>])GLP-1(7-37).
Begrepet "GLP-1-peptid" slik det brukes her, betyr GLP-1(7-37) (SEKV.ID. NR. 1), en GLP-1-analog, et GLP-1-derivat eller et derivat av en GLP-1-analog. I en utførelse er GLP-1-peptidet et insulinotropisk middel.
Begrepet "insulinotropisk middel" slik det brukes her, betyr en forbindelse som er en agonist av den humane GLP-1-reseptoren, det vil si en forbindelse som stimulerer dannelsen av cAMP i et egnet medium som inneholder den humane GLP-1-reseptoren. Styrken på et insulinotropisk middel bestemmes ved å beregne EC50-verdien fra en doseresponskurve slik det er beskrevet i det etterfølgende.
Rensede plasmamembraner fra en stabil transfektert cellelinje, BHK467-12A (tkts13), som uttrykker den humane GLP-1-reseptoren, ble stimulert med GLP-1 og peptidanaloger og styrken på cAMP-produksjonen ble målt ved å bruke AlphaScreen<TM>cAMP-prøvesettet fra Perkin Elmer Life Sciences.
En stabil transfektert cellelinje var blitt fremstilt ved NN og en klon med høy ekspresjon ble valgt ut for screening. Cellene ble dyrket ved 5% CO2i DMEM, 5% FCS, 1% Pen/Strep og 0,5 mg/ml G418.
Celler med omtrent 80% sammenflytning ble vasket 2 ganger med PBS og høstet med Versene, sentrifugert 5 minutter ved 1000 rpm hvoretter supernatanten ble fjernet. Alle de etterfølgende trinnene ble utført på is. Cellepelleten ble homogenisert ved hjelp av Ultrathurax i 20-30 sekunder i 10 ml buffer 1 (20 mM Na-HEPES, 10 mM EDTA, pH = 7,4), sentrifugert i 15 minutter ved 20000 rpm hvoretter pelleten på nytt ble suspendert i 10 ml buffer 2 (20 mM Na-HEPES, 0,1 mM EDTA, pH = 7,4). Suspensjonen ble homogenisert i 20-30 sekunder og så sentrifugert i 15 minutter ved 20000 rpm. Suspenderingen i buffer 2, homogeniseringen og sentrifugeringen ble gjentatt en gang, hvoretter membranene på nytt ble suspendert i buffer 2 og gjort ferdig for ytterligere analyse eller lagret ved -80 ºC.
Den funksjonelle reseptorprøven ble utført ved å måle den peptidinduserte cAMP-produksjonen ved hjelp av AlphaScreen-teknologien. Det grunnleggende prinsippet i AlphaScreen-teknologien er en konkurranse mellom endogent cAMP og eksogent tilsatt biotin-cAMP. Innfangingen av cAMP utføres ved å bruke et spesifikt antistoff som er konjugert til akseptorperler. Dannet cAMP ble telt og målt ved hjelp av en AlphaFusion mikroplateanalysator. EC50-verdiene ble beregnet ved å bruke dataprogrammet Graph-Pad Prism.
Begrepet "GLP-2-peptid" slik det brukes her, betyr GLP-2(1-33), en GLP-2-analog, et GLP-2-derivat eller et derivat av en GLP-2-analog.
Begrepet "eksendin-4-peptid" slik det brukes her, betyr eksendin-4(1-39), en eksendin-4-analog, et eksendin-4-derivat eller et derivat av en eksendin-4-analog. I en utførelse er eksendin-4-peptidet et insulinotropisk middel.
Begrepene "stabilt eksendin-4-peptid" og "stabile GLP-1-peptider" slik de brukes her, betyr kjemisk modifiserte peptider som er avledet fra eksendin-4(1-39) eller GLP-1(7-37), det vil si en analog eller et derivat som har et in vivo plasmaelimineringshalvliv på minst 10 timer i mennesker, slik dette kan bestemmes ved hjelp av den etterfølgende fremgangsmåten. Fremgangsmåten for bestemmelse av plasmaelimineringshalvlivet for et eksendin-4-peptid eller et GLP-1-peptid i mennesker er som følger: Peptidet ble løst i en isoton buffer, pH 7,4, PBS eller enhver annen egnet buffer. Dosen injiseres perifert, fortrinnsvis i buken eller øverst på låret. Blodprøver for bestemmelse av aktivt peptid tas med jevne mellomrom og med tilstrekkelig langt tidsrom til også å dekke den avsluttende elimineringsdelen (for eksempel predose 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 24 (dag 2), 36 (dag 2), 48 (dag 3), 60 (dag 3), 72 (dag 4) og 84 (dag 4) timer etter dosering). Bestemmelse av konsentrasjonen av aktivt peptid ble utført som beskrevet i Wilken et al., Diabetologia 43(51): A143, 2000. Deriverte farmakokinetiske parametere ble beregnet ut fra konsentrasjons-tidsdata for hver enkelt pasient ved å bruke ikkekompartementale fremgangsmåter og ved å bruke det kommersielt tilgjengelige programmet WinNonlin versjon 2.1 (Pharsight, Cary, NC, USA). Den terminale elimineringshastighetskonstanten ble beregnet ved en log-lineær regresjon av den terminale log-lineære delen av konsentrasjons-tidskurven og ble så brukt for å beregne elimineringshalvlivet.
Begrepet "DPP-IV-beskyttet" slik det brukes her, refererer seg til et polypeptid som er blitt kjemisk modifisert for å gjøre nevnte forbindelse resistent for plasmapeptidasedipeptidylaminopeptidase-4 (DPP-IV). DPP-IV-enzymet i plasma er kjent for å gå inn i nedbrytningen av flere peptidhormoner, for eksempel GLP-1, GLP-2, eksendin-4, osv. Det er således gjort betydelige anstrengelser for å utvikle analoger og derivater og polypeptider som er følsomme for en DPP-IV-kontrollert eller -styrt hydrolyse for å redusere nedbrytningshastigheten som skyldes DPP-IV.
Et peptids resistens mot nedbrytning av dipeptidylaminopeptidase IV kan bestemmes ved hjelp av den følgende nedbrytningsprøven:
Porsjoner av peptidene blir innkubert ved 37 ºC med en porsjon av renset dipeptidypaminopeptidase IV i 4-22 timer i en passende buffer ved pH 7-8 (bufferen er ikke albumin). De enzymatiske reaksjonene avsluttes ved å tilsette trifluoreddiksyre og peptidnedbrytningsproduktene blir skilt ut og kvantifisert ved å bruke HPLC- eller LC-MS-analyse. En fremgangsmåte for å gjennomføre denne analysen er som følger: Blandingene ble påsatt en Zorbax 300SB-C18-kolonne (30 nm porer, 5 μm partikler) 150 x 2,1 mm og eluert med en strømhastighet på 0,5 ml/minutt med en lineær gradient av acetonitril i 0,1% trifluoreddiksyre (0%-100% acetonitril i løpet av 30 minutter). Peptidene og deres nedbrytningsprodukter kan kontrolleres ved deres absorpsjon ved 214 nm (peptidbindinger) eller 280 nm (aromatiske aminosyrer) og kan kvantifiseres ved integrering av deres topparealer. Nedbrytningsmønsteret kan bestemmes ved å bruke LC-MS hvor MS-spektraene for den utskilte toppen kan bestemmes. Prosentsatsen intakte/nedbrutte forbindelser på et gitt tidspunkt kan så brukes for å bedømme peptidenes DPPIV-stabilitet.
Et peptid er definert som DPPIV-stabilisert når det er 10 ganger mer stabilt enn det naturlige peptidet, basert på prosenten av intakte forbindelser på et gitt tidspunkt. En DPPIV-stabilisert GLP-1-forbindelse er således minst 10 ganger mer stabil enn GLP-1(7-37).
Begrepet "C1-6-alkyl" slik det brukes her, betyr en mettet, grenet, rett eller syklisk hydrokarbongruppe med fra 1 til 6 karbonatomer. Representative eksempler inkluderer, men er ikke begrenset til, metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, n-pentyl, isopentyl, neopentyl, tert-pentyl, n-heksyl, isoheksyl, sykloheksan og lignende.
Heri beskrives en forbindelse som omfatter et terapeutisk polypeptid forbundet med en albuminbindende rest via en hydrofil avstandsgruppe.
Heri beskrives også en forbindelse som omfatter et terapeutisk polypeptid forbundet med en albuminbindende rest via en hydrofil avstandsgruppe som skiller polypeptidet og den albuminbindende resten med en kjemisk gruppe som omfatter minst 5 ikke-hydrogenatomer hvorfra 30-50% av disse atomene er enten N eller O.
I en utførelse er romgruppen definert som
-(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)pQq- hvor
l, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1
eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller forløpermedikament av denne.
Heri beskrives også en forbindelse som har formel (I):
A - W - B - Y - terapeutisk polypeptid (I)
hvor
A er en albumbindende rest,
B er en hydrofil avstandsgruppe med formel -(CH2)1D[(CH2)nE]m(CH2)pQq- hvor
1, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)1D[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1,
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, og
W er en kjemisk gruppe som forbinder A og B.
Heri beskrives også en forbindelse med formel (II)
A - W - B - Y - terapeutisk polypeptid - Y' - B' - W' - A' (II)
hvor
A og A' er albuminbindende rester,
B og B' er hydrofile avstandsgrupper uavhengig av hverandre valgt fra -(CH2)1D[(CH2)nE]m(CH2)pQq- hvor
1, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)1D[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1,
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, og
Y' er en kjemisk gruppe som forbinder B' og det terapeutiske middelet, og
W er en kjemisk gruppe som forbinder A og B, og
W' er en kjemisk gruppe som forbinder A' og B'.
I en utførelse er Y' valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-,
-NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-, -C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(I)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og -C(O)NH- hvor s er 0 eller 1.
I en ytterligere utførelse er W' valgt fra gruppen bestående av
-C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og -C(O)NH- hvor s er 0 eller 1.
Heri beskrives også en forbindelse med formel (III)
hvor
A og A' er albuminbindende rester,
B er hydrofil en avstandsgruppe uavhengig valgt fra -(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)pQq-hvor
l, m og n uavhengig av hverandre er 1-20 og p er 0-10,
Q er -Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-,
q er et helt tall fra 0 til 5,
hver D, E og G er uavhengig av hverandre valgt fra -O-, -NR<3>-, -N(COR<4>)-, -PR<5>(O)-, og -P(OR<6>)(O)- hvor R<3>, R<4>, R<5>og R<6>uavhengig av hverandre representerer hydrogen eller C1-6-alkyl,
Z er valgt fra -C(O)NH-, -C(O)NHCH2-, -OC(O)NH-, -C(O)NHCH2CH2-, -C(O)CH2-, -C(O)CH=CH-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O- eller -NHC(O)- hvor s er 0 eller 1,
Y er en kjemisk gruppe som forbinder B og det terapeutiske middelet, og
W'' er en kjemisk gruppe som forbinder B med A og A'.
I et annet aspekt beskrives heri en forbindelse som omfatter en hydrofil romgruppe mellom et terapeutisk peptid og en eller flere albuminbindende rester hvor nevnte forbindelse har forlenget virkningsprofil i forhold til det terapeutiske polypeptidet og hvor den albuminbindende fraksjonen så vel som den frie fraksjonen av nevnte forbindelse begge er i stand til å binde seg til den reseptoren som styrer eller kontrollerer effekten av det terapeutiske polypeptidet.
I en utførelse er den hydrofile romgruppen en ugrenet oligoetylenglykolgruppe med passende funksjonelle grupper ved begge terminalene som danner en bro mellom en aminogruppe i det terapeutiske polypeptidet og en funksjonell gruppe i den albuminbindende resten.
I en utførelse er Y valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)O-, -C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(I)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og -C(O)NH- hvor s er 0 eller 1.
I en annen utførelse er W valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og -C(O)NH- hvor s er 0 eller 1.
I en annen utførelse er W'' valgt fra gruppen bestående av
hvor s er 0, 1 eller 2.
I en annen utførelse er l 1 eller 2, n og m er uavhengig av hverandre 1-10 og p er 0-10.
I en annen utførelse er D -O-.
I en annen utførelse er E -O-.
I en ytterligere utførelse er den hydrofile romgruppen -CH2O[(CH2)2O]m(CH2)pQq-, hvor m er 1-10, p er 1-3 og Q er -Z-CH2O[(CH2)2]m(CH2)p-.
I en annen utførelse er q 1.
I en annen utførelse er G -O-.
I en ytterligere utførelse er Z valgt fra gruppen bestående av
-C(O)NH-, -C(O)NHCH2- og -OC(O)NH-.
I en ytterligere utførelse er q lik 0.
I en annen utførelse er l lik 2.
I en annen utførelse er n lik 2.
I nok en utførelse er den hydrofile romgruppen B -[CH2CH2O]m+1(CH2)pQq-.
I nok en ytterligere utførelse er den hydrofile romgruppen B -(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-, hvor l, m, n og p uavhengig av hverandre er 1-5 og q er 0-5.
I en ytterligere utførelse er -W-B-Y- valgt fra gruppen bestående av
I en ytterligere utførelse er >W''-B-Y
I nok en ytterligere utførelse er den albuminbindende resten A valgt fra gruppen bestående av
hvor det kirale karbonatomet er enten R eller S,
hvor det kirale karbonatomet er enten R eller S,
hvor det kirale karbonatomet er enten R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene uavhengig av hverandre er enten R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene uavhengig av hverandre er enten R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene uavhengig av hverandre er enten L eller D,
hvor det kirale karbonatomet er enten R eller S,
hvor det kirale karbonatomet er enten R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene uavhengig av hverandre er enten R eller S,
hvor de to kirale karbonatomene uavhengig av hverandre er enten R eller S,
I en ytterligere utførelse ligger molekylvekten på den hydrofile avstandsgruppen i området fra 80D til 1000D eller i området fra 80D til 300D.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en lipofil rest.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten negativt ladet ved fysiologisk pH. I en annen utførelse omfatter den albuminbindende resten en gruppe som kan være negativt ladet. En foretrukket gruppe som kan være negativt ladet er en karboksylsyregruppe.
I en annen utførelse så binder den albuminbindende resten seg ikke-kovalent til albumin. I en annen utførelse har den albuminbindende resten en bindingsaffinitet i forhold til humant serumalbumin som ligger under 10 μM eller under omtrent 1 μM.
I en ytterligere utførelse er den albuminbindende resten valgt fra en rettkjede alkylgruppe, en grenet alkylgruppe, en gruppe som har en ω-karboksylsyregruppe, et delvis eller fullstendig hydrogenert syklopentanfenantrenskjelett.
I en ytterligere utførelse er den albuminbindende resten en cibakronylrest.
I en ytterligere utførelse har den albuminbindende resten fra 6 til 40 karbonatomer, fra 8 til 26 karbonatomer eller fra 8 til 20 karbonatomer.
I en ytterligere utførelse er den albuminbindende resten en acylgruppe valgt fra gruppen som omfatter CH3(CH2)rCO- hvor r er et helt tall fra 4 til 38, fortrinnsvis fra 4 til 24, og fortrinnsvis valgt fra gruppen bestående av CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3(CH2)10CO-, CH3(CH2)12CO-, CH3(CH2)14CO-, CH3(CH2)16CO-, CH3(CH2)18CO-, CH3(CH2)20CO- og CH3(CH2)22CO-.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en acylgruppe av en rettkjedet eller grenet alkan α, ω-dikarboksylsyre.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en acylgruppe valgt fra gruppen som omfatter HOOC(CH2)sCO- hvor s er et helt tall fra 4 til 38, fortrinnsvis fra 4 til 24, mer foretrukket valgt fra gruppen bestående av HOOC(CH2)14CO-, HOOC(CH2)16CO-, HOOC(CH2)18CO-, HOOC(CH2)20CO- og HOOC(CH2)2CO-.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en gruppe med formelen CH3(CH2)vCO-NHCH(COOH)(CH2)2CO- hvor v er et helt tall fra 10 til 24.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en gruppe med formelen CH3(CH2)wCO-NHCH((CH2)2COOH)CO- hvor w er et helt tall fra 8 til 24.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en gruppe med formelen COOH(CH2)xCO- hvor x er et helt tall fra 8 til 24.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten en gruppe med formelen -NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)yCH3hvor y er et helt tall fra 8 til 18.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten et peptid så som et peptid som omfatter mindre enn 40 aminosyrerester. En rekke mindre peptider som er albuminbindende rester så vel som en fremgangsmåte for deres identifikasjon, er beskrevet i J. Biol. Chem. 277, 38 (2002) 35035-35043.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten via en romgruppe og linkere knyttet til nevnte terapeutiske polypeptid via ε-aminogruppen i en lysinrest.
I en annen utførelse er den albuminbindende resten via en romgruppe og linkere knyttet til nevnte terapeutiske polypeptid via en aminosyrerest valgt fra cystein, glutamat og aspartat.
I en utførelse er det terapeutiske polypeptidet et GLP-1-peptid.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet et GLP-1-peptid som omfatter aminosyresekvensen med formel (IV):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46
Formel (IV) (SEKV.ID. NR. 2)
hvor
Xaa7er L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, βhydroksyhistidin, homohistidin, N<α>-acetylhistidin,<α>-fluormetylhistidin,<α>-metylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin eller 4-pyridylalanin;
Xaa8er Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib (1-aminosyklopropyl)karboksylsyre, (1-aminosyklobutyl)karboksylsyre, (1-aminosyklopentyl)karboksylsyre, (1-aminosykloheksyl)karboksylsyre, (1-aminosykloheptyl)karboksylsyre eller (1-aminosyklooktyl)karboksylsyre;
Xaa16er Val eller Leu;
Xaa18er Ser, Lys eller Arg;
Xaa19er Tyr eller Gln;
Xaa20er Leu eller Met;
Xaa22er Gly, Glu eller Aib;
Xaa23er Gln, Glu, Lys eller Arg;
Xaa25er Ala eller Val;
Xaa26er Lys, Glu eller Arg;
Xaa27er Glu eller Leu;
Xaa30er Ala, Glu eller Arg;
Xaa33er Val eller Lys;
Xaa34er Lys, Glu, Asn eller Arg;
Xaa35er Gly eller Aib;
Xaa36er Arg, Gly eller Lys;
Xaa37er Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, amid eller er fraværende;
Xaa38er Lys, Ser, amid eller er fraværende;
Xaa39er Ser, Lys, amid eller er fraværende;
Xaa40er Gly, amid eller er fraværende;
Xaa41er Ala, amid eller er fraværende;
Xaa42er Pro, amid eller er fraværende;
Xaa43er Pro, amid eller er fraværende;
Xaa44er Pro, amid eller er fraværende;
Xaa45er Ser, amid eller er fraværende;
Xaa46er amid eller er fraværende;
forutsatt at hvis Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45eller Xaa46er fraværende, så er hver aminosyrerest nedstrøms også fraværende.
I en utførelse av oppfinnelsen er polypeptidet et GLP-1-peptid som omfatter aminosyresekvensen med formel (V):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38
Formel (V) (SEKV.ID. NR. 3)
hvor
Xaa7er L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, βhydroksyhistidin, homohistidin, N<α>-acetylhistidin,<α>-fluormetylhistidin,<α>-metylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin eller 4-pyridylalanin;
Xaa8er Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib (1-aminosyklopropyl)karboksylsyre, (1-aminosyklobutyl)karboksylsyre, (1-aminosyklopentyl)karboksylsyre, (1-aminosykloheksyl)karboksylsyre, (1-aminosykloheptyl)karboksylsyre eller (1-aminosyklooktyl)karboksylsyre;
Xaa18er Ser, Lys eller Arg;
Xaa22er Gly, Glu eller Aib;
Xaa23er Gln, Glu, Lys eller Arg;
Xaa26er Lys, Glu eller Arg;
Xaa30er Ala, Glu eller Arg;
Xaa34er Lys, Glu eller Arg;
Xaa35er Gly eller Aib;
Xaa36er Arg eller Lys;
Xaa37er Gly, Ala, Glu eller Lys;
Xaa38er Lys, amid eller er fraværende.
I en ytterligere utførelse er GLP-1-peptidet valgt fra GLP-1(7-35), GLP-1(7-36), GLP-1(7-36)amid, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP-1(7-40) og GLP-1(7-41) eller en analog av disse.
I en ytterligere utførelse er GLP-1-peptidet et fragment av et peptid valgt fra gruppen bestående av GLP-1(7-35), GLP-1(7-36), GLP-1(7-36)amid, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP-1(7-40) og GLP-1(7-41) eller en analog av disse.
I en ytterligere utførelse er GLP-1-peptidet GLP-1(A-B) hvor A er et helt tall fra 1 til 7 og B er et helt tall fra 38 til 45 eller en analog av dette, som omfatter en albuminbindende rest som via en hydrofil romgruppe er knyttet til den C-terminale aminosyreresten og eventuelt, en andre albuminbindende rest knyttet til en av de andre aminosyrerestene.
I en annen utførelse omfatter GLP-1-peptidet ikke mer enn femten aminosyrerester som er blitt byttet ut, tillagt eller fjernet sammenlignet med GLP-1(7-37) (SEKV.ID. NR. 1) eller ikke mer enn ti aminosyrerester som er blitt byttet ut, tillagt eller fjernet sammenlignet med GLP-1(7-37) (SEKV.ID. NR. 1).
I en annen utførelse så omfatter GLP-1-peptidet ikke mer enn seks aminosyrerester som er blitt byttet ut, tillagt eller fjernet sammenlignet med GLP-1(7-37) (SEKV.ID. NR. 1).
I en annen utførelse omfatter GLP-1-peptidet ikke mer enn 4 aminosyrerester som ikke er kodet av den genetiske koden.
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet et DPPIV-beskyttet GLP-1-peptid.
I en annen utførelse er forbindelsen DPPIV-stabilisert.
I en annen utførelse omfatter GLP-1-peptidet en Aib-rest i posisjon 8.
I en annen utførelse er aminosyreresten i posisjon 7 i nevnte GLP-1-peptid valgt fra gruppen bestående av D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, βhydroksyhistidin, homohistidin, N<α>-acetylhistidin,<α>-fluormetylhistidin,<α>-metylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin og 4-pyridylalanin.
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet valgt fra gruppen bestående av
Arg<34>GLP-1(7-37), Lys<38>Arg<26,34>GLP-1(7-38), Lys<36>Arg<26 34>GLP-1(7-38)-OH, Lys<36>Arg<26,34>GLP-1(7-36), Aib<8,22,35>GLP-1(7-37), Aib<8,35>GLP-1(7-37), Aib<8,22>GLP-1(7-37), Aib<8,22,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Lys<37>GLP-1(7-37), Aib<8,35>Lys<37>GLP-1(7-37) og Aib<8,22>Lys<37>GLP-1(7-38).
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet knyttet til nevnte hydrofile romgruppe via aminosyreresten i posisjon 23, 26, 34, 36 eller 38 i forhold til aminosyresekvensen SEKV.ID. NR. 1.
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet eksendin-4 (SEKV.ID. NR. 4).
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet ZP-10, det vil si HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-amid (SEKV.ID. NR. 5).
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX hvor X = P eller Y eller et fragment eller en analog av denne.
I en annen utførelse er GLP-1-peptidet Arg<18>, Leu<20>, Gln<34>, Lys<33>(N<ε>-( γaminobutyroyl(N<α>-heksadekanoyl)))eksendin-4-(7-45)-amid eller Arg<33>, Leu<20>, Gln<34>, Lys<18>(N<ε>-( γ-aminobutyroyl(N<α>-heksadekanoyl)))eksendin-4-(7-45)-amid.
I en annen utførelse av oppfinnelsen er en albuminbindende rest knyttet til den C-terminale aminosyreresten i GLP-1-peptidet via den hydrofile romgruppen.
I en annen utførelse er den andre albuminbindende resten knyttet til en aminosyrerest som ikke er den C-terminale aminosyreresten i GLP-1-peptidet.
I en annen utførelse er den lipofile substituenten knyttet til GLP-1-peptidet ved en hydrofil romgruppe på en slik måte at en karboksylgruppe i romgruppen danner en amidbinding med en aminogruppe i GLP-1-peptidet.
I en annen utførelse er forbindelsen valgt fra gruppen bestående av
N<ε37>-(2-(2-(2-(dodekylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>]GLP-1(7-37)amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(17-sulfoheksadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid
343825
26
Ν<ε37>- { 2- [2-(2-( 15-karboksypentadekanoylamino)etoksy)etoksy] acetyl } -[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-l(7-37)amid
Ο ΗΝ > ΗΝ'
V H C CH Γ
HΟ Η 9 /' °ι v<1>X
Η-Ν ~-N Ε_^ ^-E--QG-T-HF-T'-5S--D-V-S-SS-Y-L~-E--lNJ-Q-A-A-K-E'F-I-A W L-V-K N'VR-K'VNHJ Μ 6 S<■>« Λ /\4<Μ>o<h>ο ^ N<e37>-(2-(3⁄43⁄4-(l<i>7-karboksyheptadel3⁄4noylamino)etoksy)eto3⁄4sy)ac3⁄4tyrp^</,,Sv>^<>v>^<N' 0>o [Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-l(7-37)amid
N<E37>-(2-(2-(2-(19-karboksynonadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-l(7-37)amid
[Aib<8>’<22>’<35>,Arg<26>’<34>]GLP-1-(7-37)Lys(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyryl)-OH
[Aib<8,22,35>,Arg<26,34>]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetyl)-OH
N<ε37>-(2-[2-(2,6-(S)-bis-{2-[2-(2-(dodekanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino}-heksanoylamino)etoksy]etoksy})acetyl-[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)amid
N<ε37>-(2-[2-(2,6-(S)-bis{2-[2-(2-(tetradekanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino}-heksanoylamino)etoksy]etoksy})acetyl-[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)amid
[Aib<8,22,35>,Arg<26 34>]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys((2-{2-[4-[4-(4-amino-9,10-diokso-3-sulfo-9,10-dihydroantracen-1-ylamino)-2-sulfofenylamino]-6-(2-sulfofenylamino)-[1,3,5]triazin-2-ylamino]etoksy}etoksy)acetyl))amid
[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys(({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-karboksypentadekanoylamino)etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}-acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl))amid
N<ε37>-([2-(2-{3-[2,5-diokso-3-(15-karboksypentadecylsulfanyl)pyrrolidin-1-yl]-propionylamino}etoksy)etoksy]acetyl]-[D-Ala<8>,Lys<37>]-GLP-1-[7-37]amid
[Aib<8,22,35>Ala<37>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(2-(11-(oksalylamino)undekanoylamino)-etoksy)etoksy)acetyl)))amid
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-karboksypentadekanoylamino)etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl)amid
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys((2-{2-[11-(5-dimetylaminonaftalen-1-sulfonylamino)undekanoylamino]etoksy}etoksy)acetyl)amid
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys(([2-(2-{2-[1-(4-klorbenzoyl)-5-metoksy-2-metyl-1H-indol-3-yl]acetylamino}etoksy)etoksy]acetyl))amid
[Aib<8>,Arg<26,34>,Glu<22,23,30>]GLP-1 H(7-37)Lys(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)amid
[Aib<8>,Arg<26,34>,Glu<22,23,30>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(eikosanoylamino)etoksy)etoksy)-acetyl)amid
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1 H-(7-37)Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
[Aib<8>,Arg<26,34>]GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)-etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
[Aib<8>]-GLP-1-(7-37)Lys (2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
[Aib<8>,Arg<26,34>] GLP-1(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
[Aib<8>,Arg<26,34>] GLP-1(7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)-etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)acetyl)}-OH
[Gly<8>,Arg<26,34>] GLP-1-(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
[Aib<8>]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
N<ε37>-(2-(2-(2-(dodekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl-[Aib<8 22 35>Lys<37>] GLP-1 H(7-37)amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(tetradekanoylamino)etoksy)etoksy)actyl-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 H(7-37)amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)etoksy)etoksy)actyl-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 (7-37)amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)actyl-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 (7-37)amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(eikosanoylamino)etoksy)etoksy)actyl-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1(7-37)-amid
N<ε37>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))-[Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))[Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)}-[Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-(2-(2-(2-(4-4(4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9-tridekafluornonanoylsulfamoylbutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl))[Aib<8,22,35>,Lys<37>] GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-(2-(2-(2-(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,12,12,12-heneikosafluordodecyloksyacetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylsulfamoyl)butyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-OH
[Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys({2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy]-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)})-OH
[Arg<26,34>] GLP-1(7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4
karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
N<ε20>-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy]-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-eksendin(1-39)
[Ala<8>,Arg<26 34>]GLP-1(7-37)Lys((2-[2-((2-oksalylamino-3-karboksy-2-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]tiofen-6-yl-acetylamino))etoksy]etoksyacetyl)amid
[Aib<6,22,35>]GLP-1(7-37)Lys((2-[2-((2-oksalylamino-3-karboksy-2-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]tiofen-6-yl-acetylamino))etoksy]etoksyacetyl)amid
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε37>-2-(2-(2-(4-(4-(heptadekanoylamino)-4-(S)-karboksybutyrylamino)-4-(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-NH2
N<ε37>-2-(2-[2-(2-[2-(4-[4-(heptadekanoylamino)-4-(S)karboksybutyrylamino]-4-(S)-karboksybutyrylamino)etoksy]etoksy)acetylamino]etoksy]etoksy)acetyl-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-NH2
N<ε26>-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)-acetyl)-[Aib<8>,Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε26>-2-(2-2(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl-[Aib<8>,Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(19-(karboksy)nonadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)-OH
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(17-(karboksy)heptadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))-OH
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(19-(karboksy)nonadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
[Gly<8>,Arg<26 34>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)-etoksy)etoksy)acetyl)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) -OH
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1 (7-37)Lys (2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl NH2
N<ε20>(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(karboksy)heptadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)actylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)-etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Lys<20>]eksendin-4 (1-39)-NH2
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl [Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37)
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl [Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37)
N<ε20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)acetylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Lys20] eksendin-4 (1-39)amid
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)
N<ε26>-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy]etoksy)-acetylamino]etoksy)etoksy]acetyl)[Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε26>-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino]etoksy]acetylamino)etoksy]etoksy)acetyl][Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
N<ε20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Lys<20>] eksendin-4 (1-39) amid
[Gly<8>,Glu<22,23,30>,Arg<18,26,34>]GLP1 (7-37) Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy))etoksy)acetyl)-NH2
[imidazolylpropionsyre<7>, Asp<16>, Aib<22,35>]GLP1(7-37)Lys NH((2-{[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy))
[imidazolylpropionsyre<7>, Aib<22 35>]GLP1(7-37)Lys NH((2-{[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy))
[3-(5-imidazoyl)propionyl<7>, Aib<8>, Arg<26,34>] GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet et GLP-2-peptid.
I en annen utførelse er GLP-2-peptidet et DPPIV-beskyttet GLP-2-peptid.
I en annen utførelse er GLP-2-peptidet Gly<2>-GLP-2(1-33).
I en ytterligere utførelse er GLP-2-peptidet Lys<17>Arg<30>-GLP-2(1-33).
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet humant insulin eller en analog av dette.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet valgt fra gruppen bestående av Asp<B28>-humant insulin, Lys<B28>, Pro<B29>-humant insulin, Lys<B3>, Glu<B29>-humant insulin, Gly<A21>, Arg<B31>, Arg<B32>-humant insulin og des(B30)-humant insulin.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet et humant veksthormon eller en analog av dette.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet et paratyroid hormon eller en analog av dette.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet et humant follikkelstimulerende hormon eller en analog av dette.
I en annen utførelse har det terapeutiske polypeptidet en molekylvekt som er mindre enn 100 kDa, mindre enn 50 kDa eller mindre enn 10 kDa.
I en annen utførelse er det terapeutiske polypeptidet valgt fra gruppen bestående av en vekstfaktor så som en blodplateavledet vekstfaktor (PDGF), transformerende vekstfaktor<α>(TGF-<α>), transformerende vekstfaktor β (TGF- β), epidermal vekstfaktor (EGF), vaskulær endotelisk vekstfaktor (VEGF), et somatomedin så som insulinvekstfaktor I (IGF-I), insulinvekstfaktor II (IGF-II), erytropoietin (EPO), trombopoietin (TPO) eller angiopoietin, interferon, pro-urokinase, urokinase, vevsplasminogenaktivator (t-PA), plasminogenaktivatorhemmer 1, plasminogenaktivatorhemmer 2, von Willebrandt-faktor, et cytokin, for eksempel et interleukin så som interleukin (IL) 1, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-20 eller IL-21, en kolonistimulerende faktor (CFS) så som GM-CSF, stamcellefaktor, en tumornekrosefaktor så som TNF-
<α>, lymfotoksin-<α>, lymfotoksin- β, CD40L eller CD30L, en proteasehemmer, for eksempel aprotinin, et enzym så som superoksiddismutase, asparaginase, arginase, arginindeaminase, adenosindeaminase, ribonuklease, katalase, urikase, bilirubinoksidase, trypsin, papain, alkalisk fosfatase, β-glukoronidase, purinnukleosidfosforylase eller batroksobin, et opioid, for eksempel endorfiner, enkefaliner eller ikke-naturlige opioider, et hormon eller nevropeptid, for eksempel kalsitonin, glukagon, gastriner, adrenokortikotropisk hormon (ACTH), kolecystokininer, luteniserende hormon, gonadotropinfrigjørende hormon, korionisk gonadotropin, kortikotrofinfrigjørende faktor, vasopressin, oksytocin, antidiuretiske hormoner, tyroidstimulerende hormon, tyrotropinfrigjørende hormon, relaksin, prolaktin, peptid YY, nevropeptid Y, pankreatisk polypeptid, leptin, CART (kokainog amfetaminregulert transkript), et CART-relatert peptid, perilipin, melanokortiner (melanocyttstimulerende hormoner) så som MC-4, melaninkonsentrerende hormoner, natriuretiske peptider, adrenomedullin, endotelin, sekretin, amylin, vasoaktivt intestinalt peptid (VIP), hypofyseadenylatsyklaseaktiverende polypeptid (PACAP), bombesin, bombesinlignende peptider, tymosin, heparinbindende protein, løselig CD4, hypotalmisk frigjørende faktor, melatoniner og analoger av disse.
I et annet aspekt angår oppfinnelsen en farmasøytisk sammensetning som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen og et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel.
I en utførelse er den farmasøytiske sammensetningen egnet for parenteral administrering.
I et annet aspekt angår oppfinnelsen bruken av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et medikament.
I en utførelse av oppfinnelsen blir en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, hvor det terapeutiske polypeptidet er et GLP-1-peptid, brukt for fremstillingen av et medikament for behandling eller forebygging av hyperglykemi, type 2 diabetes, svekket glukosetoleranse, type 1 diabetes, overvekt, hypertensjon, syndrom X, dyslipidemi, kognitive lidelser, aterosklerose, myokardialt infarkt, koronar hjertesykdom og andre kardiovaskulære lidelser, slag, inflammatorisk tarmsyndrom, dyspepsi og magesår.
I en annen utførelse av oppfinnelsen blir en forbindelse ifølge oppfinnelsen, hvor det terapeutiske polypeptidet er et GLP-1-peptid, brukt for fremstillingen av et medikament for å forsinke eller for å forebygge sykdomsprogresjon i type 2 diabetes.
I en annen utførelse av oppfinnelsen blir en forbindelse ifølge oppfinnelsen, hvor det terapeutiske polypeptidet er et GLP-1-peptid, brukt for fremstillingen av et medikament for å minske matinntaket, minske β-celleapoptose, øke β-cellefunksjon og β-cellemasse og/eller for å gjenopprette glukosefølsomhet for β-celler.
Heri beskrives en forbindelse hvor det terapeutiske polypeptidet er et GLP-2-peptid, brukt for fremstillingen av et medikament for behandling av tynntarmsyndrom, inflammatorisk tarmsyndrom eller Crohns sykdom.
Heri beskrives en forbindelse hvor det terapeutiske polypeptidet er et insunlinpeptid, brukt for fremstillingen av et medikament for behandling eller for å forebygge hyperglykemi, type 1 diabetes, type 2 diabetes eller β-cellesvikt.
Det terapeutiske polypeptidet kan fremstilles ved en fremgangsmåte som omfatter å dyrke en vertscelle som inneholder en DNA-sekvens som koder polypeptidet og som er i stand til å uttrykke polypeptidet i et egnet næringsmedium under betingelser som gjør det mulig å uttrykke peptidet, hvoretter det resulterende peptidet innvinnes fra kulturen.
Det medium som brukes for å dyrke cellene kan være ethvert vanlig kjent medium som er egnet for dyrking av vertscellene så som minimale eller komplekse media som inneholder passende tilsetninger. Egnede medier er tilgjengelige fra kommersielle kilder eller kan fremstilles ved å følge publiserte oppskrifter (for eksempel i katalogene til American Type Culture Collection). Peptidet som blir fremstilt av cellene kan så innvinnes fra dyrkningsmediet ved hjelp av vanlige fremgangsmåter som inkluderer å skille vertscellene fra mediet ved sentrifugering eller filtrering, utfelle de proteinholdige komponentene fra supernatantene eller filtratet ved hjelp av et salt, for eksempel ammoniumsulfat, rensing ved forskjellige kromatografiske metoder, for eksempel ioneutbyttingskromatografi, gelfiltreringskromatografi, affinitetskromatografi eller lignende, avhengig av det angjeldende peptidet.
DNA-sekvensen som koder det terapeutiske polypeptidet kan egnet være av genomisk eller cDNA-opprinnelse, for eksempel oppnådd ved å fremstille et genomisk eller cDNA-bibliotek og så screene for DNA-sekvenser som koder hele eller en del av polypeptidet ved hybridisering ved å bruke syntetiske oligonukleotidprober ved å bruke standardteknikker (se for eksempel Sambrook, J, Fritsch, EF og Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1989). DNA-sekvensen som koder polypeptidet kan også fremstilles syntetisk ved hjelp av standardmetoder, for eksempel den fosfoamidittmetoden som er beskrevet av Beaucage og Caruthrs, Tetrahedron Letters 22 (19081), 1859-1869 eller den fremgangsmåten som er beskrevet av Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801-805. DNA-sekvensen kan også fremstilles ved polymerasekjedereaksjoner ved å bruke spesifikke primere, for eksempel de som er beskrevet i US 4,683,202 eller Saiki et al., Science 293 (1988), 487-491.
DNA-sekvensen kan innsettes i enhver vektor som hensiktsmessig så kan underkastes rekombinante DNA-prosedyrer og valget av vektor vil ofte være avhengig av den vertscelle i hvilken vektoren skal innføres. Vektoren kan således være en autonom replikerende vektor, det vil si en vektor som eksisterer som en ekstrakromosomal enhet, og hvis replikasjon er uavhengig av den kromosomale replikasjonen, for eksempel et plasmid. Alternativt kan vektoren være en som når den innføres i en vertscelle blir integrert i vertscellens genom og replikeres sammen med den eller de kromosomer i hvilke vektoren er blitt integrert.
Vektoren er fortrinnsvis en ekspresjonsvektor hvor DNA-sekvensen som koder peptidet er operativt forbundet med ytterligere segmenter som er nødvendige for transkripsjon av nevnte DNA så som en promoter. Promoteren kan være enhver DNA-sekvens som har transkriberende aktivitet i den valgte vertscellen og kan være avledet fra gener som koder proteiner som enten er homologe eller heterologe i forhold til vertscellen. Eksempler på egnede promotere som styrer transkriberingen av det DNA som koder peptidet ifølge den foreliggende oppfinnelsen i en rekke forskjellige vertsceller, er velkjente innenfor bioteknologien, se for eksempel Sambrook et al., supra.
DNA-sekvensen som koder peptidet kan også, hvis det er nødvendig, være operativt forbundet med en egnet terminator, polyadenyleringssignaler, transkriberende forsterkersekvenser og translaterende forsterkersekvenser. Den rekombinante vektoren beskrevet heri kan ytterligere omfatte en DNA-sekvens som gjør at vektoren kan replikere seg i den angjeldende vertscellen.
Vektoren kan også omfatte en selekterbar markør, for eksempel et gen hvis produkt komplementerer en svikt i vertscellen eller et som gir resistens mot et medikament, for eksempel ampicillin, kanamycin, tetrasyklin, kloramfenikol, neomycin, hygromycin eller metotreksat.
For å styre et grunnpeptid i det sekretoriske sporet eller reaksjonsveien i vertscellene, kan en sekretorisk signalsekvens (også kjent som ledersekvens, preprosekvens eller presekvens) være tilveiebrakt i den rekombinante vektoren. Den sekretoriske signalsekvensen blir knyttet til DNA-sekvensen som koder peptidet i den riktige leserammen. Sekretoriske signalsekvenser blir vanligvis plassert 5' til DNA-sekvensen som koder peptidet. Den sekretoriske signalsekvensen kan være den som normalt er forbundet eller assosiert med peptidet eller kan være fra et gen som koder et annet utskilt protein.
De fremgangsmåter som brukes for å ligere DNA-sekvensene som koder det foreliggende peptidet, promoteren og eventuelt terminator- og/eller den sekretoriske signalsekvensen henholdsvis, og for å innsette dem i egnede vektorer som inneholder den nødvendige informasjonen for replikasjon, er velkjente for personer med faglig innsikt i bioteknologi (se for eksempel Sambrook et al., supra).
Den vertscelle i hvilken DNA-sekvensen eller den rekombinante vektoren skal innføres kan være enhver celle som er i stand til å produsere det foreliggende peptidet og inkluderer bakterier, gjær, sopp og høyere eukaryote celler. Eksempler på egnede vertsceller er velkjente innenfor bioteknologien og er, uten begrensning, E. coli, Saccharomyces cerevisiae eller pattedyr BHK- eller CHO-cellelinjer.
Eksempler på forbindelser som kan brukes som GLP-1-grupper er beskrevet i internasjonal patentsøknad nr. WO 87/06941 (The General Hospital Corporation) som angår et peptidfragment som omfatter GLP-1(7-37) og funksjonelle derivater av dette og dets anvendelse som et insulinotropisk middel.
Ytterligere GLP-1-analoger er beskrevet i internasjonal patentsøknad nr. 90/11296 (The General Hospital Corporation) som angår peptidfragmenter som omfatter GLP-1(7-36) og funksjonelle derivater av dette, og med en insulinotropisk aktivitet som overstiger den insulinotropiske aktiviteten til GLP-1(1-36) eller GLP-1(1-37) og deres anvendelse som insulinotropiske midler.
Internasjonal patentsøknad nr. 91/11457 (Buckley et al.) beskriver analoger av aktive GLP-1-peptider 7-34, 7-35, 7-36 og 7-37 som også kan brukes som GLP-1-grupper.
Farmasøytiske sammensetninger
Farmasøytiske sammensetninger som inneholder en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan fremstilles ved vanlig kjent teknikk, for eksempel som beskrevet i Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 eller i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Det er en hensikt å tilveiebringe en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen og som er tilstede i en konsentrasjon på fra omtrent 0,1 mg/ml til omtrent 25 mg/ml og hvor nevnte formulering har en pH på fra 2,0 til 10,0. Den farmasøytiske formuleringen kan omfatte en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen og som er tilstede i en konsentrasjon på fra omtrent 0,1 mg/ml til omtrent 50 mg/ml, og hvor nevnte formulering pH på fra 2,0 til 10,0. Formuleringen kan ytterligere omfatte et buffersystem, konserveringsmidler, ett eller flere isotonisitetsmidler, gelaterende midler, stabilisatorer og overflateaktive midler. I en utførelse er den farmasøytiske formuleringen en vandig formulering, det vil si en formulering som omfatter vann. En slik formulering er typisk en løsning eller en suspensjon. I en ytterligere utførelse er den farmasøytiske formuleringen en vandig løsning. Begrepet "vandig formulering" er her definert som en formulering som omfatter minst 50% vekt/vekt vann. På lignende måte er begrepet "vandig løsning" definert som en løsning som omfatter minst 50% vekt/vekt vann og begrepet "vandig suspensjon" er definert som en suspensjon som omfatter minst 50% vekt/vekt vann.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen en frysetørket formulering hvor legen eller pasienten tilsetter løsemidler og/eller fortynningsmidler før bruk.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen en tørket formulering (for eksempel frysetørket eller forstøvningstørket) som er ferdig til bruk uten foregående oppløsning.
Beskrevet heri er en farmasøytisk formulering som omfatter en vandig løsning av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen og en buffer hvor nevnte forbindelse er tilstede i en konsentrasjon fra omtrent 0,1 mg/ml eller over, og hvor nevnte formulering har en pH fra omtrent 2,0 til omtrent 10,0.
Beskrevet heri er en farmasøytisk formulering som omfatter en vandig løsning av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen og en buffer hvor nevnte forbindelse er tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml og over, og hvor nevnte formulering har en pH fra omtrent 7,0 til 8,5.
Formuleringens pH valgt fra listen som består av 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,1, 4,2, 4,3, 4,4, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9, 8,0, 8,1, 8,2, 8,3, 8,4, 8,5, 8,6, 8,7, 8,8, 8,9, 9,0, 9,1, 9,2, 9,3, 9,4, 9,5, 9,6, 9,7, 9,8, 9,9 og 10,0.
Formuleringens pH er fortrinnsvis minst 1 pH-enhet fra det isoelektriske punktet for forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen, eller enda mer foretrukket så er formuleringens pH minst 2 pH-enheter fra det isoelektriske punktet for forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen.
Bufferen utvalgt fra gruppen bestående av natriumacetat, natriumkarbonat, citrat, glysylglysin, histidin, glysin, lysin, arginin, natriumdihydrogenfosfat, dinatriumhydrogenfosfat, natriumfosfat og tris(hydroksymetyl)aminometan, hepes, bicin, tricin, malinsyre, succinat, maleinsyre, fumarsyre, tartarsyre, aspartinsyre eller blandinger av disse. Hver enkelt av disse spesifikke buffere utgjør en alternativ utførelse.
I en ytterligere utførelse omfatter formuleringen et farmasøytisk akseptabelt konserveringsmiddel. Konserveringsmiddelet er valgt fra gruppen bestående av fenol, o-kresol, m-kresol, p-kresol, metyl p-hydroksybenzoat, propyl phydroksybenzoat, 2-fenoksyetanol, butyl p-hydroksybenzoat, 2-fenyletanol, benzylalkohol, etanol, klorbutanol og timerosal, bronopol, benzosyre, imidurea, klorheksidin, natriumdehydroacetat, klorkresol, etyl p-hydroksybenzoat, benzetoniumklorid, klorfenesin (3p-klorfenoksypropan-1,2-diol) eller blandinger av disse. Konserveringsmiddelet er tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 30 mg/ml. Konserveringsmiddelet er tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 20 mg/ml. Konserveringsmiddelet er tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 5 mg/ml. Konserveringsmiddelet er tilstede i en konsentrasjon fra 5 mg/ml til 10 mg/ml. Konserveringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 10 mg/ml til 20 mg/ml. Hver enkelt av disse spesifikke konserveringsmidlene utgjør en alternativ utførelse. Bruken av et konserveringsmiddel i farmasøytiske sammensetninger er velkjente innenfor den farmasøytiske industrien. Hensiktsmessig kan det refereres til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Formuleringen beskrevet heri kan videre omfatte et isotont middel. I en ytterligere utførelse er det isotone middelet valgt fra gruppen bestående av et salt (for eksempel natriumklorid), et sukker eller sukkeralkohol, en aminosyre (for eksempel L-glysin, L-histidin, arginin, lysin, isoleukin, aspartinsyre, tryptofan, treonin), en alditol (for eksempel glyserol (glyserin), 1,2-propandiol (propylenglykol), 1,3-propandiol, 1,3-butandiol), polyetylenglykol (for eksempel PEG400) eller blandinger av disse. Ethvert sukker så som mono-, di- eller polysakkarider eller vannløselige glukaner, for eksempel fruktose, glukose, mannose, sorbose, xylose, maltose, laktose, sukrose, trehalose, dekstran, pullulan, dekstrin, syklodekstrin, løselig stivelse, hydroksyetylstivelse og karboksymetylcellulose-Na kan brukes. I en utførelse er sukkeradditivet sukrose. En sukkeralkohol er definert som et C4-C8-hydrokarbon med minst én -OH-gruppe og inkluderer for eksempel mannitol, sorbitol, inositol, galasititol, dulcitol, xylitol og arabitol. I en utførelse er sukkeralkoholadditivet mannitol. De sukkere og sukkeralkoholer som er nevnt ovenfor kan brukes individuelt eller i kombinasjon. Det er ingen fast grense med hensyn til den anvendte mengden, så lenge sukkeret eller sukkeralkoholen er løselig i det flytende preparatet og ikke skadelig påvirker de stabiliseringseffekter som oppnås ved å bruke fremgangsmåter beskrevet heri. I en utførelse er sukker- eller sukkeralkoholkonsentrasjonen mellom omtrent 1 mg/ml og omtrent 150 mg/ml. I en ytterligere utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra omtrent 1 mg/ml til 50 mg/ml. I en ytterligere utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra omtrent 1 mg/ml til 7 mg/ml. I en ytterligere utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra omtrent 8 mg/ml til 24 mg/ml. I en ytterligere utførelse er det isotone middelet tilstede i en konsentrasjon fra omtrent 25 mg/ml til 50 mg/ml. Hvert av disse spesifikke isotone midlene utgjør en alternativ utførelse. Bruken av et isotont middel i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor den farmasøytiske industrien. Av hensiktsmessighetsgrunner refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Formuleringen beskrevet heri omfatter videre et gelaterende middel. Det gelaterende middelet er valgt fra salter av etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), sitronsyre og aspartinsyre og blandinger av disse. I en ytterligere utførelse er gelateringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 5 mg/ml. I en ytterligere utførelse er gelateringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 0,1 mg/ml til 2 mg/ml. I en ytterligere utførelse er gelateringsmiddelet tilstede i en konsentrasjon fra 2 mg/ml til 5 mg/ml. Hvert enkelt av disse spesifikke gelateringsmidlene utgjør en alternativ utførelse. Bruken av et gelaterende midler i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor den farmasøytiske industrien. Av hensiktsmessighetsgrunner refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
I en ytterligere utførelse omfatter formuleringen beskrevet heri videre en stabilisator. Bruken av en stabilisator i farmasøytiske sammensetninger er velkjent innenfor den farmasøytiske industrien. Av hensiktsmessighetsgrunner refereres det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
Mer spesielt er sammensetninger beskrevet heri stabiliserte flytende farmasøytiske sammensetninger hvis terapeutisk aktive komponenter inkluderer et polypeptid som muligens kan oppvise aggregatdannelse under lagring i de flytende farmasøytiske formuleringene. Med begrepet "aggregatdannelse" forstås en fysisk interaksjon mellom polypeptidmolekylene som resulterer i dannelse av oligomerer som kan forbli løselige eller som kan opptre som store synlige aggregater som utfelles fra løsningen. Begrepet "under lagring" betyr at en flytende farmasøytisk sammensetning eller formulering, så snart den er fremstilt, ikke umiddelbart blir administrert en pasient. Snarere vil den etter fremstilling bli pakket for lagring, enten i flytende form, i frosset tilstand eller i tørket form for senere rekonstituering i en flytende form eller en annen form som er egnet for administrering til en pasient. Med "tørket form" forstås at den flytende farmasøytiske sammensetningen eller formuleringen blir tørket, enten ved frysetørking (se for eksempel Williams og Polli (1984) J. Parental Sci. Technol. 38: 48-59), forstøvningstørking (se Masters (1991) i Spray-Drying Handbook (5. utgave; Longman Scientific and Technical, Essez, U.K.), sidene 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18: 1169-1206; og Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11: 12-29) eller lufttørking (Carpenter og Crowe (1988) Cryobiology 25: 459-470; og Roser (1991) Biopharm.
4: 47-53). Aggregatdannelse av et polypeptid under lagring av en flytende farmasøytisk sammensetning kan skadelig påvirke polypeptidets biologiske aktivitet og resultere i et tap av den terapeutiske effekten av den farmasøytiske sammensetningen. Videre kan aggregatdannelse forårsake andre problemer så som blokkering av rør, membraner og pumper når den polypeptidholdige farmasøytiske sammensetningen administreres ved hjelp av et infusjonssystem.
De farmasøytiske sammensetningene beskrevet heri kan videre omfatte en mengde av en aminosyrebase som er tilstrekkelig til å minske aggregatdannelsen av polypeptidet under lagring av sammensetningen. Med begrepet "aminosyrebase" forstås en aminosyre eller en kombinasjon av aminosyrer hvor enhver gitt aminosyre er tilstede enten i sin frie baseform eller saltform. Når det brukes en kombinasjon av aminosyrer, så kan alle aminosyrene være tilstede i sine frie baseformer, alle kan være tilstede i sine saltformer, eller noen kan være tilstede i sine frie baseformer mens andre er tilstede i sine saltformer. I en utførelse er de aminosyrer som brukes for fremstilling av sammensetningene de som har en ladet sidekjede så som arginin, lysin, aspartinsyre og glutaminsyre. I en utførelse er den aminosyren som brukes for fremstilling av sammensetninger glysin. Enhver stereoisomer (det vil si L eller D) av en spesiell aminosyre (for eksempel metionin, histidin, imidazol, arginin, lysin, isoleukin, aspartinsyre, tryptofan, treonin og blandinger av disse) eller kombinasjoner av disse isomerene, kan være tilstede i de farmasøytiske sammensetningene så lenge den spesielle aminosyren som er tilstede enten er i sin frie baseform eller i sin saltform. I en utførelse blir L-stereoisomeren brukt. Sammensetninger som beskrevet heri kan også formuleres med analoger av disse aminosyrene. Med "aminosyreanalog" forstås et derivat av den naturlig forekommende aminosyren som frembringer den forønskede effekt ved å nedsette aggregatdannelsen av polypeptidet under lagringen av de flytende farmasøytiske sammensetningene. Egnede argininanaloger inkluderer for eksempel aminoguanidin, ornitin og N-monoetyl L-arginin, egnede metioninanaloger inkluderer etionin og butionin og egnede cysteinanaloger inkluderer S-metyl-L-cystein. Som med de andre aminosyrene, kan aminosyreanalogene inkorporeres i sammensetningene enten i sin frie baseform eller i sin sal tform. I en ytterligere utførelse blir aminosyrene eller aminosyreanalogene brukt i en konsentrasjon som er tilstrekkelig til å forebygge eller å forsinke aggregering av proteinet.
I en ytterligere utførelse beskrevet heri kan metionin (eller andre egnede svovelholdige aminosyrer eller aminosyreanaloger) tilsettes for å hemme oksidasjon av metioninrestene til metionsulfoksid når det polypeptidet som virker som det terapeutiske middelet er et polypeptid som omfatter minst én metioninrest som er følsom for slik oksidasjon. Med "hemme" forstås en minimal akkumulering av metioninoksiderte forbindelser over tid. Hemming av metioninoksidasjon resulterer i bedre retensjon av polypeptidet i dets passende molekylære form. Enhver stereoisomer av metionin (L, D eller en blanding av disse) kan brukes. Den mengden som tilsettes bør være tilstrekkelig til å hemme oksidasjon av metionrestene slik at mengden av metioninsulfoksid er akseptabel for de regulerende myndigheter. Typisk betyr dette at sammensetningen ikke inneholder mer enn omtrent 10% til omtrent 30% metioninsulfoksid. Vanligvis kan dette oppnås ved å tilsette metionin slik at forholdet mellom tilsatt metionin og metioninrester varierer fra omtrent 1:1 til omtrent 1000:1, så som 10:1 til omtrent 100:1.
I en ytterligere utførelse omfatter formuleringen videre en stabilisator valgt fra gruppen av høymolekylære polymerer eller lavmolekylære forbindelser. I en ytterligere utførelse blir stabilisatoren valgt fra polyetylenglykol (for eksempel PEG 3350), polyvinylalkohol (PVA), polyvinylpyrrolidon, karboksy-/hydroksycellulose eller derivater av slike (for eksempel HPC, HPC-SL, HPC-L og HPMC), syklodekstriner, svovelholdige stoffer så som monotioglyserol, tioglykolinsyre og 2-metyltioetanol og forskjellige salter (for eksempel natriumklorid). Hver enkelt av disse spesifikke stabilisatorene utgjør en alternativ utførelse.
De farmasøytiske sammensetningene kan også omfatte ytterligere stabiliserende midler som ytterligere bedrer eller forsterker stabiliteten til et foreliggende terapeutisk aktivt polypeptid. Stabiliserende midler av spesiell interesse inkluderer, men er ikke begrenset til, metionin og EDTA, som beskytter polypeptidet mot metioninoksidasjon og et ikke-ionisk overflateaktivt middel som beskytter polypeptidet mot aggregering som er assosiert med frysing-opptining eller mekanisk skjæring.
I en ytterligere utførelse beskrevet heri omfatter formuleringen videre et overflateaktivt middel. I en ytterligere utførelse er det overflateaktive middelet valgt fra et rensemiddel, etoksylert risinusolje, polyglykolyserte glyserider, acetylerte monoglyserider, sorbitanfettsyreestere, polyoksypropylenpolyoksyetylenblokkpolymerer (for eksempel poloksamerer så som Pluronic<�>F68, poloksamer 188 og 407, Triton X-100), polyoksyetylensorbitan fettsyreestere, stjerneformet PEO, polyoksyetylen- og polyetylenderivater så som alkylerte og alkoksylerte derivater (tweens, for eksempel Tween-20, Tween-40, Tween-80 og Brij-35), polyoksyetylenhydroksystearat, monoglyserider eller etoksylerte derivater av disse, diglyserider og polyoksyetylenderivater av disse, alkoholer, glyserol, lecitiner og fosfolipider (for eksempel fosfatidylserin, fosfatidylklolin, fosfatidyletanolamin, fosfatidylinositol, difosfatidylglyserol og sfingomyelin), derivater av fosfolipider (for eksempel dipalmitoylfosfatidinsyre) og lysofosfolipider (for eksempel palmitoyllysofosfatidyl-L-serin og 1-acyl-sn-glysero-3-fosfatestere av etanolamin, colin, serin eller treonin) og alkyl, alkoksy (alkylester), alkoksy (alkyleter) -derivater av lysofosfatidyl og fosfatidylkoliner, for eksempel lauroyl- og myristoylderivater av lysofosfatidylcolin, dipalmitoylfosfatidylkolin og modifikasjoner av den polare toppgruppen, det vil si koliner, etanolaminer, fosfatidinsyre, seriner, treoniner, glyserol, inositol og positivt ladet DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, lysofosfatidylserin og lysofosfatidyltreonin og glyserofosfolipider (for eksempel cefaliner), glyseroglykolipider (for eksempel galaktopyransoid), sfingoglykolipider (for eksempel ceramider, gangliosider), dodecylfosfokolin, høneegglysolecitin, fusidinsyrederivater (for eksempel natriumtaurodihydrofusidat, osv.), langkjedede fettsyrer og salter av disse C6-C12 (for eksempel oleinsyre og kaprylsyre), acylkarnitiner og derivater, N<α>-acylerte derivater av lysin, arginin eller histidin, eller sidekjedeacylerte derivater av lysin eller arginin, N<α>-acylerte derivater av dipeptider som omfatter enhver kombinasjon av lysin, arginin eller histidin og en nøytral eller sur aminosyre, N<α>-acylerte derivater av tripeptider som omfatter enhver kombinasjon av en nøytral aminosyre og to ladde aminosyrer, DSS (dukusatnatrium, CAS-registrering nr. [577-11-7]), dokusatkalsium (CAS-registrering nr. [128-49-4]), dokusatkalium (CAS-registrering nr. [7491-09-0]), SDS (natriumdodecylsulfat eller natriumlaurylsufat), natriumkaprylat, colinsyre eller derivater av denne, gallesyrer og salter av disse og glysin- eller taurinkonjugater, ursodeoksykolinsyre, natriumkolat, natriumdeoksykolat, natriumtaurokolat, natriumglykokolat, N-heksadecyl-N,N-dimetyl-3-ammonio-1-propansulfonat, anioniske (alkylarylsulfonater) monovalente overflateaktive midler, zwitterioniske overflateaktive midler (for eksempel N-alkyl-N,N-dimetylammonio-1-propansulfonater, 3-kolamido-1-propyldimetylammonio-1-propansulfonat), kationiske overflateaktive midler (kvaternære ammoniumbaser) (for eksempel cetyltrimetylammoniumbromid, cetylpyridiniumklorid), ikke-ioniske overflateaktive midler (for eksempel dodecyl β-D-glukopyranosid), poloksaminer (for eksempel Tetronic's) som er tetrafunksjonelle blokksampolymerer avledet fra en sekvensmessig addering av propylenoksid og etylenoksid til etylendiamin, eller det overflateaktive middelet kan velges fra gruppen av imidazolinderivater og blandinger av slike. Hvert enkelt av disse spesifikke overflateaktive midlene utgjør en alternativ utførelse.
Bruken av et overflateaktivt middel i farmasøytiske sammensetninger er velkjente innenfor den farmasøytiske industrien. Av hensiktsmessighetsgrunner henvises det til Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19. utgave, 1995.
En sammensetning for parenteral administrering av GLP-1-forbindelser kan for eksempel fremstilles som beskrevet i WO 03/002136.
Det er også mulig at andre bestanddeler kan være tilstede i den peptidfarmasøytiske formuleringen beskrevet heri. Slike ytterligere bestanddeler kan inkludere fuktemidler, emulgeringsmidler, antioksidanter, volumskapende midler, tonisitetsmodifiserende forbindelser, gelateringsmidler, metallioner, oljeaktige bærervæsker, proteiner (for eksempel humant serumalbumin, gelatin eller proteiner) og et zwitterion (for eksempel en aminosyre så som betain, taurin, arginin, glysin, lysin og histidin). Slike ytterligere bestanddeler må selvsagt ikke skadelig påvirke den generelle stabiliteten til den farmasøytiske formuleringen.
Farmasøytiske sammensetninger som inneholder en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan administreres en pasient som har behov for en slik behandling på flere forskjellige steder, for eksempel topiske steder så som huden eller slimhinnene, steder hvor man unngår absorpsjon, for eksempel administrering i en arterie, i en vene, i hjertet, foruten steder som innbefatter absorpsjon, for eksempel administrering i huden, under huden eller i en muskel eller i buken.
Administrering av farmasøytiske sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan utføres på mange forskjellige måter, for eksempel lingualt, sublingualt, bukalt, i munnen, oralt, i magen eller i tarmkanalen, nasalt, i lungene, for eksempel gjennom bronkiene og alveoli eller en kombinasjon av slik, epidermalt, dermalt, transdermalt, vaginalt, rektalt, okulært, for eksempel gjennom bindevev, uretalt og parenteralt til pasienter som har behov for en slik behandling.
Sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan administreres i flere forskjellige doseringsformer, for eksempel som løsninger, suspensjoner, emulsjoner, mikroemulsjoner, multiple emulsjoner, skum, salver, pastaer, plastere, brannsalver, tabletter, belagte tabletter, rensevæsker, kapsler, for eksempel harde gelatinkapsler og myke gelatinkapsler, stikkpiller, rektale kapsler, dråper, geler, sprayer, pulvere, aerosoler, inhaleringspreparater, øyedråper, øyesalver, rensevæsker for øyet, vaginale pessarer, vaginale ringer, vaginale salver, injeksjonsløsning, in situ transformerende løsninger, for eksempel in situ geldannelse, in situ herding, in situ utfelling, in situ utkrystallisering, infusjonsløsninger eller ved hjelp av implanteringer.
Sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan videre opparbeides i, eller festes til, for eksempel gjennom kovalente, hydrofobe eller elektrostatiske interaksjoner, til en medikamentbærer, et medikamentleveringssystem og avanserte medikamentleveringssystemer for ytterligere å bedre stabiliteten til forbindelsen, bedre biotilgjengeligheten, bedre løseligheten, minske skadelige effekter, oppnå kronoterapi av velkjent type og for å bedre pasientens aksept av sammensetningen eller enhver kombinasjon av disse. Eksempler på bærere, medikamentleveringssystemer og avanserte medikamentleveringssystemer inkluderer, men er ikke begrenset til, polymerer, for eksempel cellulose og dens derivater, polysakkarider, for eksempel dekstran og derivater, stivelse og derivater, poly(vinylalkohol), akrylat- og metakrylatpolymerer, polymelkesyre og polyglykolinsyre og blokksampolymerer av disse, polyetylenglykoler, bærerproteiner, for eksempel albumin, geler, for eksempel termogeldannende systemer, for eksempel blokksampolymere systemer av velkjent type, micel ler, liposomer, mikrokuler, nanopartikler, flytende krystaller og dispersjoner av disse, L2-fase og dispersjoner av disse, noe som tør være velkjent for personer med faglig innsikt i fasereaksjoner eller forekomst i lipid-vannsystemer, polymere miceller, multiple emulsjoner, selvemulgerende, selvmikroemulgerende, syklodekstriner og derivater av disse og dendrimerer.
Sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen som kan brukes for formulering av faste, halvfaste, pulveraktige og løsninger for lungeadministrering av forbindelsen kan for eksempel bruke et doseinhaleringsapparat med en måledyse, en tørrpulverinhaleringsanordning eller en forstøvningsanordning, og alle disse anordningene er velkjente innenfor den farmasøytiske industrien.
Sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen er spesifikt brukbare i formuleringer for kontrollerte, vedvarende forlengede, forsinkede eller langsomt frigjørende medikamentleveringssystemer. Mer spesifikt, men ikke begrenset til, sammensetninger som kan brukes ved formuleringen av parenteralt kontrollerende og frigjørende og vedvarende frigjørende systemer (begge systemene fører til en mange gangers reduksjon i antall administreringer), er velkjente for personer med faglig innsikt. Enda mer foretrukket er kontrollert frigjørende eller vedvarende frigjøringssystemer som administreres subkutant. Uten å begrense oppfinnelsens omfang, så omfatter eksempler på brukbare kontrollert frigjørende systemer og sammensetninger hydrogeler, oljeaktige geler, flytende krystaller, polymere miceller, mikrokuler og nanopartikler.
Fremgangsmåter for å fremstille kontrollerte frigjørende systemer som kan brukes for sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelsen inkluderer, men er ikke begrenset til, utkrystallisering, kondensering, samutkrystallisering, utfelling, samutfelling, emulgering, dispergering, høyttrykks homogenisering, innkapsling, forstøvningstørking, mikroinnkapsling, coacervering, faseseparasjon, løsemiddelfordampning for å få fremstilt mikrokuler, ekstrudering og superkritiske væskeprosesser. I så henseende refereres det generelt til Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., red. Marcel Dekker, New York, 2000) og Drug and the Pharmaceutical Sciences bind 99: Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J., red. Marcel Dekker, New York, 2000).
Parenteral administrering kan utføres subkutant, intramuskulært, intraperitonealt eller ved intravenøs injeksjon ved hjelp av en sprøyte, eventuelt ved hjelp av en blyantlignende sprøyte. Alternativt kan parenteral administrering utføres ved hjelp av en infusjonspumpe. En videre mulighet er en sammensetning som kan være en løsning eller suspensjon for administrering av forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen i form av en nasal eller lungespray. En annen mulighet er videre farmasøytiske sammensetninger som inneholder forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen og som kan tilpasses transdermal administrering, for eksempel ved nålefri injeksjon eller fra et plaster, eventuelt et iontoforetisk plaster, eller via en slimhinne, for eksempel bukal administrering.
Begrepet "stabilisert formulering" refererer seg til en formulering med bedret fysisk stabilitet, bedret kjemisk stabilitet eller bedret fysisk og kjemisk stabilitet.
Begrepet "fysisk stabilitet" for en proteinformulering slik dette begrepet brukes her, refererer seg til proteinets tendens til å danne biologisk inaktive og/eller uløselige aggregater av proteinet som et resultat av at proteinet har blitt eksponert for varmemekanisk stress og/eller interaksjon med indre overflater eller overflater som er destabiliserende så som hydrofobe overflater og interfaser. Fysisk stabilitet for vandige proteinformuleringer kan bedømmes ved hjelp av visuell undersøkelse og/eller turbiditetsmålinger etter at formuleringen i egnede beholdere (for eksempel patroner eller sprøyter) har vært eksponert for mekanisk/fysisk stress (for eksempel røring) ved forskjellige temperaturer i forskjellige tidsrom. Visuell undersøkelse av formuleringene utføres i et skarpt fokusert lys mot en mørk bakgrunn.
Formuleringens turbiditet karakteriseres ved en visuell score hvor graden av turbiditet varierer på en skala fra 0 til 3 (en formulering hvor det er ingen turbiditet tilsvarer en visuell score på 0 og en formulering med sterk visuell turbiditet i dagslys tilsvarer en visuell score på 3). En formulering klassifiseres som fysisk ustabil med hensyn til proteinaggregering når den viser visuell turbiditet i dagslys. Alternativt kan formuleringens turbiditet bedømmes ved hjelp av enkle turbiditetsmålinger slik disse er kjent for personer med faglig innsikt. Fysisk stabilitet for vandige proteinformuleringer kan også bedømmes ved å bruke et spektroskopisk middel eller en probe på proteinets konformelle status. Proben er fortrinnsvis et lite molekyl som fortrinnsvis binder seg til en ikke-naturlig konform utgave av proteinet. Et eksempel på en liten molekylær spektroskopisk probe for oppklaring av proteinstruktur, er til tioflavin T. Tioflavin T er et fluorescerende fargestoff som har vært mye anvendt for påvisning av amyloide fibriller. I nærvær av fibriller og dessuten også muligens andre proteinkonfigurasjoner, vil tioflavin T gi opphav til et nytt eksitasjonsmaksimum på omtrent 450 nm og forsterket emulsjon ved omtrent 482 nm når det er bundet til fibrilproteinformen. Ubundet tioflavin T er i alt vesentlig ikke-fluorescerende ved nevnte bølgelengder.
Andre små molekyler kan brukes som prober for å påvise forandringer i proteinstrukturen fra naturlige til ikke-naturlige tilstander. For eksempel vil "hydrofobe flekk"-prober fortrinnsvis binde seg til eksponerte hydrofobe flekker i et protein. De hydrofobe flekkene forekommer generelt inne i proteinets tertiære struktur i dets naturlige tilstand, men blir eksponert når proteinet begynner å folde seg ut eller blir denaturert. Eksempler på disse småmolekylære spektroskopiske probene er aromatiske, hydrofobe fargestoffer så som antracen, akridin, fenantrolin eller lignende. Andre spektroskopiske prober er metall-aminosyrekomplekser så som koboltmetallkomplekser av hydrofobe aminosyrer så som fenylalanin, leukin, isoleukin, metionin og valin eller lignende.
Begrepet "kjemisk stabilitet" for en proteinformulering slik det brukes her, refererer seg til kjemisk kovalente forandringer i proteinstrukturen som fører til dannelse av kjemisk nedbrytningsprodukter med potensielt mindre biologisk styrke og/eller potensielt forsterkede immunogene egenskaper sammenlignet med den naturlige proteinstrukturen. Det kan danne seg forskjellige kjemiske nedbryningsprodukter avhengig av det naturlige proteinets type og natur og det miljø for hvilket proteinet blir eksponert. En fullstendig eliminering av kjemisk nedbrytning vil sannsynligvis ikke kunne oppnås, og økende mengder av kjemiske nedbrytningsprodukter vil ofte kunne observeres under lagring og bruk av proteinformuleringen, noe som tør være velkjent for personer med faglig innsikt. De fleste proteiner er utsatt for deamidering, en prosess hvor sidekjedeamingruppen i glutaminyl- eller asparaginylrestene blir hydrolysert slik at det dannes en fri karboksylsyre. Andre nedbrytningsreaksjonsveien innbefatter dannelse av høymolekylære transformeringsprodukter hvor to eller flere proteinmolekyler blir kovalent bundet til hverandre ved transamidering og/eller disulfidinteraksjoner, noe som fører til dannelse av kovalent bundne dimer-, oligomer- og polymernedbrytningsprodukter (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. Manning M.C., Plenum Press, New York 1992). Oksidasjon (for eksempel av metioninrester) kan nevnes som en annen variant av kjemisk nedbrytning. Den kjemiske stabiliteten til proteinformuleringen kan bedømmes ved å måle mengden av kjemiske nedbrytningsprodukter på forskjellige tidspunkter etter eksponering overfor forskjellige miljøbetingelser (dannelsen av nedbrytningsprodukter kan ofte akselereres, for eksempel ved å øke temperaturen). Mengden av hvert enkelt nedbrytningsprodukt blir ofte bestemt ved å skille nedbrytningsproduktene, avhengig av molekylstørrelse og/eller ladning, ved å bruke forskjellige typer kromatografiteknikker (for eksempel SEC-HPLC og/eller RP-HPLC).
Som nevnt ovenfor, så refererer en "stabilisert formulering" seg følgelig til en formulering med bedret fysisk stabilitet, bedret kjemisk stabilitet eller bedret fysisk og kjemisk stabilitet. Generelt må en formulering være stabil under bruk og lagring (i overensstemmelse med anbefalte bruks- og lagringsbetingelser) inntil den dato da den utgår.
I en utførelse er den farmasøytiske formuleringen som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen stabil under mer enn 6 ukers bruk og mer enn 3 års lagring.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen stabil under mer enn 4 ukers bruk og mer enn 3 års lagring.
I en annen utførelse er den farmasøytiske formuleringen som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen stabil under mer enn 4 ukers bruk og mer enn 2 års lagring.
I nok en ytterligere utførelse er den farmasøytiske formuleringen som omfatter forbindelsen stabil under mer enn 2 ukers bruk og mer enn 2 års lagring.
Farmasøytiske sammensetninger som inneholder et GLP-1-derivat ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan administreres parenteralt til pasienter som har behov for en slik behandling. Parenteral administrering kan utføres subkutant, intramuskulært eller ved intravenøs injeksjon ved hjelp av en sprøyte, eventuelt en blyantlignende sprøyte. Alternativt kan parenteral administrering utføres ved hjelp av en infusjonspumpe. En ytterligere mulighet er at en sammensetning som kan være i pulverform eller i form av en væske for administrering av GLP-1-derivatet, kan være i form av en nese- eller lungespray. En ytterligere mulighet er at GLP-1-derivatene ifølge oppfinnelsen også kan administreres transdermalt, for eksempel fra et plaster, eventuelt et iontoforetisk plaster eller gjennom slimhinnene, for eksempel bukalt.
Injiserbare sammensetninger av GLP-1-derivatet kan således fremstilles ved å bruke vanlig kjente teknikker fra den farmasøytiske industrien som involverer løsning og blanding av bestanddelene slik det passer seg til det forønskede sluttproduktet.
Ifølge en fremgangsmåte, blir GLP-1-derivatet løst i en vannmengde som er noe mindre enn sluttvolumet for den sammensetningen som skal fremstilles. Et isotont middel, et konserveringsmiddel og en buffer tilsettes etter behov, hvoretter løsningens pH-verdi blir justert - hvis dette er nødvendig - ved å bruke en syre, for eksempel saltsyre eller en base, for eksempel vandig natriumhydroksid, etter behov. Endelig blir løsningens volum justert med vann til den forønskede konsentrasjonen av bestanddelene.
I tillegg til de ovennevnte komponentene, kan løsninger som inneholder et GLP-1-derivat ifølge den foreliggende oppfinnelsen også inneholde et overflateaktivt middel for å bedre GLP-1-derivatets løselighet og/eller stabilitet.
En sammensetning for nasal administrering av visse peptider kan for eksempel fremstilles slik det er beskrevet i europeisk patent nr. 272097 (til Novo Nordisk A/S) eller i WO 93/18785.
Ifølge en foretrukket utførelse beskrevet heri, blir GLP-1-derivatet tilveiebrakt i form av en sammensetning som er egnet for administrering ved injeksjon. En slik sammensetning kan enten være en injiserbar løsning som er ferdig til bruk eller det kan være en mengde av en fast sammensetning, for eksempel et frysetørket produkt som må løses i et løsemiddel før det kan injiseres. Den injiserbare løsningen inneholder fortrinnsvis ikke mindre enn omtrent 2 mg/ml, fortrinnsvis ikke mindre enn omtrent 5 mg/ml og mest foretrukket ikke mindre enn omtrent 10 mg/ml av GLP-1-derivatet, og fortrinnsvis ikke mer enn omtrent 100 mg/ml av GLP-1-derivatet.
GLP-1-derivatene ifølge oppfinnelsen kan brukes for behandling av forskjellige sykdommer. Det spesielle GLP-1-derivatet som skal brukes og det optimale dosenivået for enhver pasient vil være avhengig av den sykdom som skal behandles og en rekke andre faktorer som inkluderer effekten av det spesifikke peptidderivatet som brukes, pasientens alder, kroppsvekt, fysiske aktivitet og diett og en mulig kombinasjon av andre medikamenter, foruten graden av den sykdommen som skal behandles. Det er anbefalt at dosen av GLP-1-derivatet ifølge oppfinnelsen bør bestemmes for hver individuelle pasient av den behandlende legen.
Spesielt ser man for seg at GLP-1-derivatet kan brukes for fremstillingen av et medikament med forlenget virkningsprofil for behandling av ikke-insulinavhengig diabetes mellitus og/eller for behandling av overvekt.
Et annet aspekt av den foreliggende oppfinnelsen angår bruken av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et medikament.
En utførelse av den foreliggende oppfinnelsen angår bruken av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et medikament for behandling av hyperglykemi, type 2 diabetes, svekket glukosetoleranse, type 1 diabetes, overvekt, hypertensjon, syndrom X, dyslipidemi, β-celleapoptose, β-cellesvikt, myokardialt infarkt, inflammatorisk tarmsyndrom, dyspepsi, kognitive lidelser, for eksempel kognitiv forsterkning, nevrobeskyttelse, aterosklerose, koronar hjertesykdom og andre kardiovaskulære lidelser.
En annen utførelse av den foreliggende oppfinnelsen angår bruken av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et medikament for behandling av tynntarmsyndrom, inflammatorisk tarmsyndrom eller Crohns sykdom.
En annen utførelse av den foreliggende oppfinnelsen angår bruken av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for fremstillingen av et medikament for behandling av hyperglykemi, type 1 diabetes, type 2 diabetes eller β-cellesvikt.
Behandlingen med en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan også kombineres med andre eller flere farmakologisk aktive stoffer, for eksempel valgt fra antidiabetiske midler, midler mot overvekt, appetittregulerende midler, antihypertensive midler, midler for behandling og/eller for å forebygge komplikasjoner som er et resultat av eller som er assosiert med diabetes og midler for å behandle og/eller forebygge komplikasjoner og lidelser som er et resultat eller som er assosiert med overvekt. I denne sammenhengen inkluderer uttrykket "antidiabetisk middel" forbindelser for å behandle og/eller å forebygge insulinresistens og sykdommer hvor insulinresistens er den patofysiologiske mekanismen.
Eksempler på disse farmakologisk aktive stoffene er: Insulin, GLP-1-agonister, sulfonylureaforbindelser (for eksempel tolbutamin, glibenklamid, glipizid og gliklazid), biguanider, for eksempel metformin, meglitinider, glukosidasehemmere (for eksempel akorbose), glukagonantagonister, DPP-IV (dipeptidylpeptidase-IV) -hemmere, hemmere av nyreenzymer som innbefatter stimulering av glukoneogenese og/eller glykogenolyse, glukoseopptaksmodulatorer, tiazolidindioner så som troglitazon og ciglitazon, forbindelser som modifiserer lipidmetabolismen så som antihyperlipidemiske midler som HMG CoA-hemmere (statiner), forbindelser som svekker matinntaket, RXR-agonister og midler som virker på den ATP-avhengige kaliumkanalen i β-cellene, for eksempel glibenklamid, glipizid, gliklazid og repaglinid; kolestyramin, kolestipol, klofibrat, gemfibrozin, lovastatin, pravastain, simvastatin, probukol, dekstrotyroksin, neteglinid, repaglinid; β-blokkere så som alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol og metoprolol, ACE (angiotensinomdannende enzym) -hemmere så som benazepril, kaptopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, kinapril og ramipril, kalsiumkanalblokkere så som infedipin, felodipin, nikardipin, isradipin, nimodipin, diltiazem og verapamil og<α>-blokkere så som doksazosin, urapidil, prazosin og terazosin; CART (kokainamfetaminregulert transkript) -agonister, NPY (nevropeptid Y) -antagonister, MC4 (melanokortin 4) -agonister, oreksinantagonister, TNF (tumornekrosefaktor) -agonister, CRF (kortikotropinfrigjørende faktor)
-agonister, CRF BP (kortikotropinfrigjørende faktorbindende protein) -antagonister, urokortinagonister, β3-agonister, MSH (melanocyttstimulerende hormon) -agonister, MCH (melanocyttkonsentrerende hormon) -antagonister, CCK (kolecystokinin) -agonister, hemmere av fornyet opptak av serotonin, hemmere av fornyet opptak av serotonin og noradrenalin, blandede serotonin- og noradrenerge forbindelser, 5HT (serotonin) -agonister, bombesinagonister, galaninantagonister, veksthormon, veksthormonfrigjørende forbindelser, TRH (tyreotropinfrigjørende hormon) -agonister, UCP 2 eller 3 (avkoblende protein 2 eller 3) -modulatorer, leptinagonister, DA-agonister (bromkriptin, dopreksin), lipase/amylasehemmere, RXR (retinoid X-reseptor) -modulatorer, TR β-agonister og histamin H3-antagonister.
Det skal understrekes at enhver egnet kombinasjon av forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen med en eller flere av de ovennevnte forbindelsene og eventuelt ett eller flere ytterligere farmakologisk aktive stoffer, anses å ligge innenfor den foreliggende oppfinnelsen.
Den foreliggende oppfinnelsen er ytterligere illustrert ved hjelp av de følgende eksemplene, som imidlertid ikke må være å anse som begrensende for oppfinnelsens intensjon som sådan. De trekk og detaljer som er beskrevet i den foregående beskrivelsen og i de etterfølgende eksemplene, vil både separat og i enhver kombinasjon kunne brukes for å realisere oppfinnelsen i dens diverse former.
EKSEMPLER
De følgende akronymer er brukt for kommersielt tilgjengelige kjemikalier:
DMF : N,N-dimetylformamid
DCC : N,N-disykloheksylkarbodiimid
NMP : N-metyl-2-pyrrolidon
TFA : Trifluoreddiksyre
THF : Tetrahydrofuran
DIEA : Diisopropyletylamin
H2O : Vann
CH3CN : Acetonitril
HBTU : 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametyluroniumheksafluorfosfat
Fmoc : 9H-fluoren-9-ylmetoksykarbonyl
Boc : Tert-butyloksykarbonyl
OtBu : Tert-butylester
tBu : Tert-butyl
Trt : Trifenylmetyl
Pmc : 2,2,5,7,8-pentametylkroman-6-sulfonyl
Dde : 1-(4,4-dimetyl-2,6-dioksosykloheksyliden)etyl
DCM : Diklormetan
TIS : Triisopropylsilan
Et2O : Dietyleter
H-Glu(OH)-OBu<t>: L-glutaminsyre<α>-tert-butylester
HOOC-(CH2)12-COONSu: ω-karboksytridekanoinsyre 2,5-dioksopyrrolidin-1-ylester
HOOC-(CH2)14-COONSu: ω-karboksypentadekanoinsyre 2,5-dioksopyrrolidin-1-ylester
HOOC-(CH2)16-COONSu: ω-karboksyheptadekanoinsyre 2,5-dioksopyrrolidin-1-ylester
HOOC-(CH2)18-COONSu: ω-karboksynonadekanoinsyre 2,5-dioksopyrrolidin-1-ylester
r.t. : Romtemperatur
PDMS : Plasmadesorpsjonsmassespektrometri
MALDI-MS: Matriseassistert laserdesorpsjon/ioniseringsmassespektrometri HPLC : Høytrykks væskekromatografi
amu : atommasseenheter
Analyse:
Et peptids resistens mot nedbrytning av dipeptidylaminopeptiase IV ble bestemt ved hjelp av den følgende nedbrytningsprøven:
Porsjoner av peptidene ble innkubert ved 37 ºC med en porsjon av renset dipeptidylaminopeptidase IV i 4-22 timer i en passende buffer ved pH 7-8 (bufferen er ikke albumin). Den enzymatiske reaksjonene ble avsluttet ved å tilsette trifluoreddiksyre og peptidnedbrytningsproduktene ble skilt og kvantifisert ved å bruke HPLC- eller LC-MS-analyse. En fremgangsmåte for gjennomføring av denne analysen er som følger: Blandingene ble påsatt en Zorbax 300SB-C18 (30 nm porer, 5 μm partikler) 150 x 2,1 mm kolonne og eluert med en strømhastighet på 0,5 ml/minutt med en lineær gradient av acetonitril i 0,1% trifluoreddiksyre (0%-100% acetonitril i løpet av 30 minutter). Peptidene og deres nedbrytningsprodukter kan kontrolleres ved sin absorpsjon ved 214 nm (peptidbindinger) eller 280 nm (aromatiske aminosyrer) og kan kvantifiseres ved integrering av deres toppområder. Nedbrytningsmønsteret kan bestemmes ved å bruke LC-MS hvor man kan bestemme MS-spektrene for den utskilte toppen. Prosenten av hele/nedbrutte forbindelser på et gitt tidspunkt kan så brukes for å bedømme peptidenes DPPIV-stabilitet.
Et peptid er definert som DPPIV-stabilisert når det er 10 ganger mer stabilt enn det naturlige peptidet basert på prosenten av den intakte forbindelsen på et gitt tidspunkt. En DPPIV-stabilisert GLP-1-forbindelse er således minst 10 ganger mer stabil enn GLP-1(7-37).
Generelle syntesemetoder
Peptidene kan syntetiseres på en Fmoc-beskyttet Rink-amidharpiks (Novabiochem) eller klortritylharpiks eller en tilsvarende harpiks som er egnet for fastfase peptidsyntese. Boc-kjemi kan brukes, men det er mer hensiktsmessig å bruke Fmocstrategi, eventuelt i et Applied Biosystems 433A peptidsynteseapparat i en 0,25 mmol skala ved å bruke FastMoc UV-protokoller som anvender HBTU (2-(1H benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametyluroniumheksafluorfosfat) -kontrollerte koblinger i N-metylpyrrolidon (N-metylpyrrolidon) (HATU er bedre egnet for hindrede koblinger) og UV-kontroll av avbeskyttelsen av den Fmoc-beskyttende gruppen. Andre koblingsreagenser bortsett fra HBTU og HATU kan også brukes, for eksempel slik det er beskrevet i Current Opinion in Chemical Biology, 2004, 8: 211-221. De beskyttede aminosyrederivatene som brukes kan være standard Fmocaminosyrer som leveres i på forhånd oppveide patroner (Applied Biosystems) som er egnet for bruk i ABI433A-synteseapparatet med unntak av unaturlige aminosyrer så som Fmoc-Aib-OH (Fmoc-aminoisosmørsyre) som kan kjøpes fra en fabrikant så som Bachem og overføres til tomme patroner. Den sist tilkoblede aminosyren kan være Boc-beskyttet.
Tilfesting av sidekjeder og linkere til spesifikke lysinrester til det urene harpiksbundne og beskyttede peptidet kan eventuelt innføres i en spesifikk posisjon ved inkorporering av Fmoc-Lys(Dde)-OH under den automatiserte syntesen, fulgt av en selektiv avbeskyttelse med hydrazin. Andre ortogonale beskyttende grupper kan brukes på lysin.
Fremgangsmåte for fjerning av Dde-beskyttelse. Harpiksen (0,25 mmol) kan plasseres i et manuelt riste/filtreringsapparat og behandles med 2% hydrazin i N-metylpyrrolidon (20 ml, 2 x 12 minutter) for å fjerne DDE-gruppen, og deretter vaskes med N-metylpyrrolidon (4 x 20 ml).
Fremgangsmåte for tilknytning av sidekjeder til lysinrester.
Aminosyren (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) kan løses i N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1, 10 ml). Hydroksybenzotriazol (HOBt) (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og diisopropylkarbodiimid (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) tilsettes, og løsningen røres i 15 minutter. Den tilsettes harpiksen, hvoretter det tilsettes diisopropyletylamin (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen). Harpiksen ristes i 24 timer ved romtemperatur. Den ble så vasket med 2 x 20 ml N-metylpyrrolidon, 2 x 20 ml N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1) og 2 x 20 ml metylenklorid.
Fremgangsmåte for fjerning av Fmoc-beskyttelse: Harpiksen (0,25 mmol) blir plassert i en filterkolbe i et manuelt risteapparat og behandlet med N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1) (2 x 20 ml) og med 20 ml N-metylpyrrolidon og en løsning av 20% piperidin i N-metylpyrrolidon (3 x 20 ml, 10 minutter hver gang). Harpiksen ble så vasket med 2 x 20 ml N-metylpyrrolidon, 2 x 20 ml N-metylpyrrolidon/metylen-klorid (1:1) og 2 x 20 ml metylenklorid.
Fremgangsmåte for spalting av peptidet fra harpiksen:
Peptidet spaltes fra harpiksen ved røring i 180 minutter ved romtemperatur med en blanding av trifluoreddiksyre, vann og triisopropylsilan (95:2,5:2,5).
Spaltingsblandingen blir filtrert og filtratet blir konsentrert til en olje ved hjelp av en nitrogenstrøm. Det urene peptidet blir utfelt fra denne oljen med 25 ml dietyleter og så vasket 3 ganger med 45 ml dietyleter.
Rensing: Det urene peptidet kan renses ved semipreparativ HPLC på en 20 mm x 250 mm kolonne pakket med 7 μ C-18-silika. Avhengig av peptidet kan ett av to rensesystemer brukes:
Ammoniumsulfat: Kolonnen ekvilibreres med 40% CH3CN i 0,05 M (NH4)2SO4som justeres til pH 2,5 med konsentrert svovelsyre. Etter tørking blir det urene peptidet løst i 5 ml 50% eddiksyre/vann og fortynnet med 20 ml vann og injisert i kolonnen som så blir eluert med en gradient fra 40%-60% CH3CN i 0,05 M (NH4)2SO4, pH 2,5 med en strømhastighet på 10 ml/minutt i løpet av 50 minutter ved 40 ºC. De peptidholdige fraksjonene blir oppsamlet og fortynnet med 3 volumer vann og ført gjennom en Sep-Pak<®>C18-patron (Waters delenr. 51910) som er blitt ekvilibrert med 0,1% TFA. Peptidet blir så eluert med 70% CH3CN-holdig 0,1% TFA, hvoretter det rensede peptidet blir isolert ved frysetørking etter fortynning v eluatet med vann.
FTA: Etter tørking ble det urene peptidet løst i 5 ml 50% eddiksyre H2O og fortynnet til 20 ml med vann og injisert i kolonnen som så ble eluert med en gradient på 40-60% CH3CN i 0,1% TFA med en strømhastighet på 10 ml/minutt i løpet av 50 minutter ved 40 ºC. De peptidholdige fraksjonene ble oppsamlet.
Det rensede peptidet ble frysetørket etter fortynning av eluatet med vann. Det fremstilte sluttproduktet kan karakteriseres ved analytisk RP-HPLC (retensjonstid) og ved hjelp av LCMS.
De RP-HPLC-analyser som ble utført som beskrevet i eksperimentavsnittet, ble utført ved å bruke UV-påvisning ved 214 nm og en Vydac 218TP54 4,6 mm x 250 mm 5 μ C-18 silikakolonne (The Separations Group, Hesperia, USA) som ble eluert med en strømhastighet på 1 ml/minutt ved 42 ºC. De forskjellige elueringsbetingelsene var som følger:
A1: Ekvilibrering av kolonnen med en buffer bestående av 0,1 M (NH4)2SO4som var justert til pH 2,5 med konsentrert svovelsyre og eluering med en gradient fra 0% til 60% CH3CN i den samme bufferen i løpet av 50 minutter.
B1: Ekvilibrering av kolonnen med 0,1% TFA/H2O og eluering med en gradient fra 0% CH3CN/0,1% TFA/H2O til 60% CH3CN/0,1% TFA/H2O i løpet av 50 minutter.
B6: Ekvilibrering av kolonnen med 0,1% TFA/H2O og eluering med en gradient fra 0% CH3CN/0,1% TFA/H2O til 90% CH3CN/0,1% TFA/H2O i løpet av 50 minutter.
Et alternativt system er som følger:
B4: RP-analysen ble utført ved å bruke et Alliance Waters 2695-system utstyrt med en Waters 2487 dobbeltbåndsdetektor. De fraksjonene som ble UV-påvist ved 214 nm og 254 nm ble oppsamlet ved å bruke en Symmetry300 C18, 5 μm, 3,9 mm x 150 mm kolonne, 42 ºC. Eluert med en lineær gradient fra 5-95% acetonitril, 90-0% vann og 5% trifluoreddiksyre (1,0%) i vann i løpet av 15 minutter med en strømhastighet på 1,0 ml/minutt.
LCMS ble utført med et oppsett som besto av Hewlett Packard-serien 1100 G1312A Bin-pumpe, Hewlett Packard-serien 1100 kolonneavdeling, Hewlett Packard-serie 1100 G1315A DAD diodematrisedetektor, Hewlett Packard-serien 1100 MSD og Sedere 75 fordampende lysspredning som var detektorkontrollert ved hjelp av HP Chemstation-programvaren. HPLC-pumpen var forbundet med to elueringsmiddelholdige reservoarer:
A: 0,05% TFA/vann
B: 0,05% TFA/acetonitril
Eller alternativt kan de to systemene være:
A: 10 mM NH4OH i vann
B: 10 mM NH4OH i 90% acetonitril
Analysen ble utført ved 23 ºC ved å injisere et passende volum av prøvene (fortrinnsvis 20 μl) inn i kolonnen som ble eluert med en gradient av A og B.
HPLC-betingelsene, detektorinnstillingene og massespektrometerinnstillingene som ble brukt er gitt i den følgende tabellen.
Kolonne Waters Xterra MS C-18 (50 x 3 mm id 5 μm)
Gradient 5%-100% acetonitril lineær i løpet av 6,5 minutter ved en strømhastighet på 1,5 ml/minutt
Påvisning 210 nm (analogt uttak fra DAD)
ELS (analogt uttak fra ELS)
MS-ioniseringsmetode API-ES, skann 550-1500 amu trinn 0,1 amu.
Alternativt kan LC-MS-analysen utføres i et PE-Sciex API 100 massespektrometer utstyrt med to Perkin Elmer serie 200 mikropumper, en Perkin Elmer serie 200 automatisk prøveoppsamler, en Applied Biosystems 785A UV-detektor og en Sedex 75 fordampende lysspredningsdetektor. En Waters Xterra 3,0 mm x 50 mm 5 μ C-18 silikakolonne ble eluert med 1,5 ml/minutt ved romtemperatur. Den ble ekvilibrert med 5% CH3CN/0,05% TFA/H2O og eluert i 1,0 minutt med 5% CH3CN/0,05% TFA/H2O og så med en lineær gradient til 90% CH3CN/0,05% TFA/H2i løpet av 7 minutter. Påvisning ble utført ved hjelp av UV-påvisning ved 214 nm og fordampende lysspredning. En fraksjon av kolonneeluatet ble ført inn på ioneforstøvningsinterfasen i et PE-Sciex API 100 massespektrometer.
Masseområdet fra 300 til 2000 amu ble skannet hvert 2. sekund under analysen.
MALDI-TOF MS-analyse ble utført ved å bruke et Voyager RP-instrument (PerSeptive Biosystems Inc., Framingham, MA) utstyrt med forsinket ekstraksjon og operert på en lineær måte. Alfa-cyano-4-hydroksykanelsyre ble brukt som matrise og masseangivelsene var basert på ekstern kalibrering.
Eksempel 1
N<ε37>-(2(2(2(-dodekylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid
En harpiks (Rink-amid, 0,68 mmol/g Novabiochem 0,25 mmol) ble brukt for å fremstille den primære sekvensen i en ABI433A-maskin ved å følge fabrikantens retningslinjer. Alle beskyttende grupper var syrelabile, unntatt den resten som ble brukt i posisjon 37 (FmocLys(ivDde)-OH, Novabiochem), noe som muliggjorde spesifikk avbeskyttelse av dette lysinet snarere enn ethvert annet lysin.
Fremgangsmåte
Den ovenfor fremstilte harpiksen (0,25 mmol) som inneholdt den GLP-1-analoge aminosyresekvensen ble plassert i et manuelt riste/filtreringsapparat og behandlet med 2% hydrazin i N-metylpyrrolidon i (2 x 12 minutter, 2 x 20 ml) for å fjerne Dde-gruppen. Harpiksen ble så vasket med 4 x 20 ml N-metylpyrrolidon. Fmoc-8-amino-3,6-dioksaoktansyre (Neosystem FA03202) (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble løst i N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1, 20 ml).
Hydroksybenzotriazol (HOBt) (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og diisopropylkarbodiimid (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble tilsatt og løsningen ble rørt i 15 minutter. Løsningen ble tilsatt harpiksen, hvoretter diisopropyletylamin (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble tilsatt.
Harpiksen ble så ristet i 24 timer ved romtemperatur. Den ble deretter vasket med 4 x 20 ml N-metylpyrrolidon. En løsning av 20% piperidin i N-metylpyrrolidon (3 x 20 ml, 10 minutter hver gang) ble tilsatt harpiksen under risting. Harpiksen ble så vasket med 4 x 20 ml N-metylpyrrolidon.
Dodekansyre (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble løst i N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1, 20 ml). Hydroksybenzotriazolhydrat (HOBt; H2O) (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og diisopropylkarbodiimid (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble tilsatt og løsningen ble rørt i 15 minutter. Den ble tilsatt harpiksen og så tilsatt diisopropyletylamin (4 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen). Harpiksen ble ristet i 24 timer ved romtemperatur. Den ble så vasket med N-metylpyrrolidon (2 x 20 ml), N-metylpyrrolidon/metylenklorid (1:1) (2 x 20 ml) og metylenklorid (2 x 20 ml). Peptidet ble avspaltet fra harpiksen med risting i 180 minutter ved romtemperatur med en blanding av trifluoreddiksyre, vann og triisopropylsilan (95:2,5:2,5, 15 ml). Spaltingsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert til en olje i vakuum. Det urene peptidet ble utfelt fra denne oljen med 45 ml dietyleter og vasket 3 ganger med 45 ml dietyleter. Det urene peptidet ble renset ved preparativ HPLC på en 20 mm x 250 mm kolonne pakket med 7 μ C-18-silika. Det urene peptidet ble løst i 5 ml 50% eddiksyre i vann og fortynnet til 20 ml med vann og så injisert i kolonnen som så ble eluert med en gradient fra 40-60% (CH3CN i vann med 0,1% TFA) ved 10 ml/minutt i løpet av 50 minutter ved 40 ºC. De peptidholdige fraksjonene ble så oppsamlet. Det rensede peptidet ble frysetørket etter fortynning av eluatet med vann.
HPLC: (Metode B6): RT = 32,8 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 43,6 minutter.
LCMS: m/z = 765,0 (M05H)<5+>, 957,0 (M+4H)<4+>, 1275,0 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3825,0.
Eksempel 2
N<ε37>-(2-(2-(2-(17-sulfoheksadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>] GLP-1 (7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 45,5 minutter.
LCMS: m/z = 792,9 (M05H)<5+>, 990,9 (M+4H)<4+>, 1320,9 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3959,9.
Eksempel 3
N<ε37>-{2-[2-(2-(15-karboksypentadekanoylamino)etoksy)etoksy]acetyl}-[Aib<8,22,35>,Lys<37>] GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B1): RT = 43,8 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 42,0 minutter.
LCMS: m/z = 978,3 (M+4H)<4+>, 1303,8 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3909,6.
Eksempel 4
N<ε37>-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B1): RT = 46,4 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 44,4 minutter.
LCMS: m/z = 985,5 (M+4H)<4+>, 1313,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3937,6.
Eksempel 5
N<ε37>-(2-(2-(2-(19-karboksynonadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B1): RT = 49,5 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 47,1 minutter.
LCMS: m/z = 992,5 (M+4H)<4+>, 1322,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3965,7.
Eksempel 6
[Aib<8,22,35>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyryl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 36,28 minutter.
LCMS: m/z = 995 (M+4H)<4+>, 1326 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3977,6.
Eksempel 7
[Aib<8,22,35>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 37,1 minutter.
LCMS: m/z = 999 (M+4H)<4+>, 1332 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3993,7.
Eksempel 8
N<ε37>-(2-[2-(2,6-(S)-bis-{2-[2-(2-(dodekanoylamino)etoksy)etoksy]-heksanoylamino)etoksy]etoksy})acetyl-[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,2 minutter.
LCMS: m/z = 1106,7 (M+4H)<4+>, 1475,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4433,0.
Eksempel 9
N<ε37>-(2-[2-(2,6-(S)-bis-{2-[2-(2-(tetradekanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino}-etoksy]etoksy})-[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 42,9 minutter.
LCMS: m/z = 1120,9 (M+4H)<4+>, 1494,2 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4480,4.
Eksempel 10
[Aib<8,22,35>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 36,0 minutter.
LCMS: m/z = 1032,0 (M+4H)<4+>, 1374,0 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4122,8.
Eksempel 11
[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys((2-{2-[4-[4-(4-amino-9,10-diokso-3-sulfo-9,10-dihydroantracen-1-ylamino)-2-sulfofenylamino]-6-(2-sulfofenylamino)-[1,3,5]triazin-2-ylamino]etoksy}etoksy)acetyl)amid
Fremstilt ved å feste DdeLys(Fmoc)-OH på Rink-harpiks. Harpiksen ble så behandlet med piperidin som beskrevet i "syntetiske metoder" for å selektivt fjerne Fmoc. 2-(2-(2-(Fmoc-amino)etoksy)etoksy)eddiksyre ble koblet på epsilonaminogruppen i lysin og Fmoc ble fjernet. DMSO og Cibacronblått 3GA (17 ekvivalenter) (Sigma C-9534) ble tilsatt og blandingen ble holdt på 60 ºC i 15 minutter, vasket 3 ganger med vann og 2 ganger med metanol, 2 ganger med THF og 2 ganger med dietyleter. Den Dde-beskyttende gruppen ble fjernet og de gjenværende aminosyrene ble tilført som beskrevet i "syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 38,1 minutter.
LCMS: m/z = 1110,4 (M+4H)<4+>, 1436,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4435,9.
Eksempel 12
[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys(({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-karboksypentadekanoylamino)etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}-acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl))amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 41,2 minutter.
HPLC: (Metode B6): RT = 30,7 minutter.
LCMS: m/z = 1069,1 (M+4H)<4+>, 1424,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4271.
Eksempel 13
N<ε37>-([2-(2-{3-[2,5-diokso-3-(15-karboksypentadecylsulfanyl)pyrrolidin-1-yl]-propionylamino}etoksy)etoksy)acetyl]-[D-Ala<8>,Lys<37>]-GLP-1-[7-37]amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 45,2 minutter.
LCMS: m/z = 1004,0 (M+4H)<4+>, 1338,2 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4010,7.
Eksempel 14
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(2-(11-(oksalylamino)undekanoylamino)-etoksy)etoksy)acetyl)))amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 37,9 minutter.
HPLC: (Metode B6): RT = 39,5 minutter.
LCMS: m/z = 993,3 (M+4H)<4+>, 1323,9 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3967,6.
Eksempel 15
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-karboksypentadekanoylamino)etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 31,1 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 41,9 minutter.
LCMS: m/z = 1376,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4125,8.
Eksempel 16
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys((2-{2-[11-(5-dimetylaminonaftalen-1-sulfonylamino)undekanoylamino]etoksy}etoksy)acetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 42,6 minutter.
HPLC: (Metode B6): RT = 30,4 minutter.
LCMS: m/z = 1377,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4128,8.
Eksempel 17
[Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys(([2-(2-{2-[1-(4-klorbenzyl)-5-metoksy-2-metyl-1H-indol-3-yl]acetylamino}etoksy)etoksy]acetyl))amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 41,1 minutter.
HPLC: (Metode B6): RT = 31,1 minutter.
LCMS: m/z = 1351,8 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4052,0.
Eksempel 18
[Aib<8>,Arg<26,34>,Glu<22,23,30>]GLP-1 H(7-37)Lys(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 39,3 minutter.
LCMS: m/z = 1366,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4095,6.
Eksempel 19
[Aib<8>,Arg<26,34>,Glu<22,23,30>]GLP-1 H(7-37)Lys(2-(2-(2-(eikosanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 42,6 minutter.
LCMS: m/z = 1375,7 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4123,7.
Eksempel 20
[Gly<8>,Arg<26,34>] GLP-1 H-(7-37)Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,0 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 49,0 minutter.
LCMS: m/z = 1054,6 (M+4H)<4+>, 1405,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4211,8.
Eksempel 21
[Aib<8>,Arg<26,34>]GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy]-acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,7 minutter.
LCMS: m/z = 1029,2 (M+4H)<4+>, 1371,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4110,8.
Eksempel 22
[Aib<8>]-GLP-1-(7-37)Lys (2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 34,7 minutter.
LCMS: m/z = 1000,3 (M+4H)<4+>, 1337,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4110,8.
Eksempel 23
[Aib<8>,Arg<26 34>] GLP-1-(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 37,5 minutter.
LCMS: m/z = 1414,9 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4239,8.
Eksempel 24
[Aib<8>,Arg<26,34>] GLP-1-(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)-etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,4 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 43,8 minutter.
LCMS: m/z = 1381,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4140,0.
Eksempel 25
[Gly<8>,Arg<26,34>] GLP-1-(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode A1): RT = 42,3 minutter.
LCMS: m/z = 1372,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4112,7.
Eksempel 26
[Aib<8>]GLP-1-(7-37)Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 33,5 minutter.
LCMS: m/z = 1040,3 (M+4H)<4+>, 1386,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4155,8.
Eksempel 27
N<ε37>-(2-(2-(2-(dodekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 H(7-37)-amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,8 minutter.
LC-MS: m/z = 756,7 (M+H)<5+>, 957,0 (M+H)<4+>, 1275,7 (M+H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3822,9.
Eksempel 28
N<ε37>-(2-(2-(2-(tetradekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 H(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 34,6 minutter.
LC-MS: m/z = 771,4 (M+5H)<5+>, 964,1 (M+4H)<4+>, 1284,9 (M+H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3851,5.
Eksempel 29
N<ε37>-(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 (7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 36,8 minutter.
LC-MS: m/z = 970,7 (M+4H)<4+>, 1294,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3879,6.
Eksempel 30
N<ε37>-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1 (7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 39,4 minutter.
LC-MS: m/z = 977,9 (M+4H)<4+>, 1303,7 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3907,6.
Eksempel 31
N<ε37>-(2-(2-(2-(eikosanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>Lys<37>] GLP-1(7-37)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 42,7 minutter.
LC-MS: m/z = 984,8 (M+4H)<4+>, 1312,8 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3935,7.
Eksempel 32
N<ε37>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))[Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 40,7 minutter.
LC-MS: m/z = 792,3 (M+5H)<5+>, 989,8 (M+4H)<4+>, 1319,2 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3955,5.
Eksempel 33
N<ε37>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))[Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 40,5 minutter.
LC-MS: m/z = 789,5 (M+5H)<5+>, 986,3 (M+4H)<4+>, 1314,8 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3941,5.
Eksempel 34
N<ε37>-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)}-[Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,3 minutter.
LC-MS: m/z = 786,8 (M+5H)<5+>, 982,8 (M+4H)<4+>, 1310,1 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3927,5.
Eksempel 35
N<ε37>-(2-(2-(2-(4-4(4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,9-tridekafluornonanoylsulfamoylbutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl))[Aib<8,22,35>,Lys<37>] GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,4 minutter.
LC-MS: m/z = 1042,7 (M+4H)<4+>, 1389,9 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4166,4.
Eksempel 36
N<ε37>-(2-(2-(2-(3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,12,12,12-heneikosafluordodecyloksyacetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 36,7 minutter.
LC-MS: m/z = 1062,8 (M+4H)<4+>, 1416,9 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4247,3.
Eksempel 37
N<ε37>-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylsulfamoyl)butyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 37,4 minutter.
LC-MS: m/z = 1008,8 (M+4H)<4+>, 1344,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4030,7.
Eksempel 38
[Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys({2-(2-(2-(2-[2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy]-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)})-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,5 minutter.
LCMS: m/z = (M+4H)<4+>, 1025,1 (M+3H)<3+>, 1366,7. Beregnet (M+H)<+>= 4096,0.
Eksempel 39
[Arg<26,34>] GLP-1(7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 37,7 minutter.
LCMS: m/z = (M+4H)<4+>, 1057,8 (M+3H)<3+>, 1410,2. Beregnet (M+H)<+>= 4235,9.
Eksempel 40
N<ε20>-{2-(2-(2-(2-[2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy]-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-eksendin(1-39)
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 33,6 minutter.
LCMS: m/z = (M+4H)<4+>, 1205,3 (M+3H)<3+>, 1606,9. Beregnet (M+H)<+>= 4816,5.
Eksempel 41
[Ala<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys((2-[2-((2-oksalylamino-3-karboksy-2-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]tiofen-6-ylacetylamino))etoksy]etoksyacetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,1 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 42,2 minutter.
LCMS: m/z = 1033,3 (M+4H)<4+>, 1376,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4126,7.
Eksempel 42
[Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys((2-[2-((2-oksalylamino-3-karboksy-2-4,5,6,7-tetrahydrobenzo[b]tiofen-6-ylacetylamino))etoksy]etoksyacetyl)amid
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B1): RT = 37,4 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 35,5 minutter.
LCMS: m/z = 1002,5 (M+4H)<4+>, 1336,7 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4007,5.
Eksempel 43
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 39,0 minutter.
LC-MS: m/z = 1022,3 (M+4H)<4+>, 1362,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4084,6.
Eksempel 44
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 38,6 minutter.
LC-MS: m/z = 1015,2 (M+4H)<4+>, 1353,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4056,6.
Eksempel 45
N<ε36>-2-(2-(2-(4-(4-(heptadekanoylamino)-4-(S)-karboksybutyrylamino)-4-(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-NH2
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 10,72 minutter.
LCMS: m/z = 1039,0 (M+4H)<4+>, 1385,0 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4152,0.
Eksempel 46
N<ε37>-2-(2-[2-(2-[2-(4-[4-(heptadekanoylamino)-4-(S)-karboksybutyrylamino]-4-(S)-karboksybutyrylamino)etoksy]etoksy)acetylamino)etoksy]etoksy)acetyl-[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1-(7-37)-NH2
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 10,74 minutter.
LCMS: m/z = 1074 (M+4H)<4+>, 1433 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4297.
Eksempel 47
N<ε26>-(2-(2-(2-(4-(heksadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)-acetyl)-[Aib<8>,Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 10,71 minutter.
LCMS: m/z = 979,0 (M+4H)<4+>, 1304,0 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3910,0.
Eksempel 48
N<ε26>-2-(2-2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl-[Aib<8>,Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
Forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåtene i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 11,32 minutter.
LCMS: m/z = 1021 (M+4H)<4+>, 1362 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4084.
Peptidet ble syntetisert på en klortritylharpiks (Novabiochem) ved å bruke Fmocstrategien i et Advanced Chemtech 348 peptidsynteseapparat (det ble brukt 0,5 mmol/g, 100 mg harpiks/hull og 10 hull). Koblingene ble kontrollert i diisopropylkarbodiimid (DIC) (Fluka) og 1-hydroksybenzotriazol (HOBt)/1-hydroksy-7-azabenzotriazol (HOAt) (2:1) (Senn Chemicals) i 1-metylpyrrolidin-2-on (NMP) og det ble anvendt 10 molare ekvivalenter av aminosyrene og koblingsreagensene. De brukte beskyttede aminosyrederivatene var standard Fmocaminosyrer (Advanced Chemtech) med unntak av aminosyrene Fmoc-Lys(ivDde) (Novabiochem) og Fmoc-Glu-OtBu (Bachem). Harpiksen ble deretter oppdelt i 5 porsjoner (0,1 mmol) og N-terminalen ble så behandlet med (Boc)2O og DIEA (5 molare ekvivalenter) i NMP.
Tilknytning av sidekjeder og linkere til spesifikke lysinrester på det urene harpiksbundne beskyttede peptidet ble utført i en spesifikk posisjon ved inkorporering av Fmoc-Lys(ivDde)-OH under en automatisert syntese fulgt av selektiv avbeskyttelse med hydrazin.
Fremgangsmåte for fjerning av Dde-beskyttelse. Harpiksen (0,1 mmol) ble plassert i en sprøyte og behandlet med 3% hydrazin og 3% piperidin i NMP (50 minutter ved r.t.) for å fjerne Dde-gruppen og vasking med NMP (4 x 5 ml).
Fremgangsmåte for tilknytning av sidekjeder til lysinrester.
OEG eller aminosyren (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble løst i NMP. HOAt (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og diisopropylkarbodiimid (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble tilsatt og løsningen ble rørt i 15 minutter. Den ble så tilsatt harpiksen. Harpiksen ble ristet over natten ved romtemperatur og så vasket med 3 x 5 ml NMP.
Fremgangsmåte for fjerning av Fmoc-beskyttelse: Harpiksen (0,1 mmol) ble plassert i en sprøyte og behandlet med en løsning av 30% piperidin i NMP (5 ml i løpet av 20 minutter). Harpiksen ble så vasket med 2 x 5 ml NMP og 2 x 5 ml metylenklorid.
Fremgangsmåte for avspalting av peptidet fra harpiksen:
Peptidet ble avspaltet fra harpiksen ved røring i 120 minutter ved romtemperatur med en blanding av trifluoreddiksyre, vann og triisopropylsilan (94:3:3).
Spaltingsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert til en olje i en strøm av nitrogen. Det urene peptidet ble utfelt fra denne oljen med 10 ml dietyleter og så vasket 2 ganger med 10 ml dietyleter.
Eksempel 49
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(19-(karboksy)nonadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl)-OH
En klortritylharpiks (0,5 mmol/g, Novabiochem, 0,1 mmol) ble brukt for å fremstille den primære sekvensen i en Advanced Chemtech 348-maskin. Alle beskyttende grupper var syrelabile med unntak av resten som ble brukt i posisjon 37 (FmocLys(ivDde)-OH, Novabiochem), noe som muliggjorde spesifikk avbeskyttelse av dette lysinet snarere enn et ethvert annet lysin.
Fremgangsmåte
Den ovenfor fremstilte harpiksen (0,1 mmol) som inneholdt GLP-1-analogaminosyresekvensen ble plassert i en sprøyte og behandlet med 3% hydrazin og 3% piperidin i N-metylpyrrolidon (50 minutter) for å fjerne Dde-gruppen.
Harpiksen ble vasket med 4 x 5 ml NMP. Fmoc-8-amino-3,6-doksaoktansyre (Neosystem FA03202) (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble løst i NMP. HOAt (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og diisopropylkarbodiimid (7 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble tilsatt og løsningen ble rørt i 15 minutter. Den ble så til satt harpiksen som ble ristet over natten ved romtemperatur. Den ble så vasket med 4 x 5 ml NMP. En løsning av 30% piperidin i NMP (5 ml, 20 minutter) ble så tilsatt harpiksen som så igjen ble vasket med 4 x 5 ml NMP. N-hydroksysuccinimidesteren av C20 (6 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen, KJ. Ross-Petersen A/S) og DIEA løst i NMP ble tilsatt harpiksen. Denne ble så ristet over natten ved romtemperatur og så vasket med 3 x 5 ml NMP og 2 x 5 ml metylenklorid. Peptidet ble avspaltet fra harpiksen ved røring i 120 minutter ved romtemperatur med en blanding av trifluoreddiksyre, vann og triisopropylsilan (94:3:3, 3 ml). Avspaltingsblandingen ble filtrert og filtratet ble konsentrert til en olje i vakuum. Det urene peptidet ble utfelt fra denne oljen med 10 ml dietyleter og så vasket 2 ganger med 10 ml dietyleter.
Rensing
Det urene peptidet ble løst i DMSO i en konsentrasjon på 5-10 mg/200 μl og påsatt en 7,8 x 300 mm X-Terra Prep MS C18 10 μm kolonne som ble kjørt ved 40 ºC. Etter 5 minutter ved 30% CH3CN, 0,08% TFA, 4 ml/minutt, ble kolonnen eluert med en lineær gradient fra 30 til 65% CH3CN i løpet av 35 minutter. Hoved UV-toppfraksjonene ble oppsamlet manuelt og den forønskede toppen ble identifisert ved MALDI-MS.
Konsentrasjonen av peptidet i eluatet ble bestemt ved å måle UV-absorpsjonen ved 280 nm, idet man antok at de molare ekstinksjonskoeffisientene var 1280 og 3690 for henholdsvis tyrosin og tryptofan.
Etter konsentrasjonsbestemmelsen ble eluatet oppdelt og plassert i ampuller som inneholdt den forønskede mengden også tørket ved vakuumsentrifugering.
HPLC: Eluerer ved 27,9 minutter = 52,9% CH3CN.
MALDI-MS: 3996 (MH<+>).
Eksempel 50
[Gly<8>,Arg<26 34>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(17-(karboksy)heptadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl))-OH
Forbindelsen ble fremstilt som beskrevet i de tidligere eksemplene og ifølge "syntetiske metoder", bortsett fra at oktadekandionsyre C18 ble tilknyttet som en monobeskyttet tert-butylester (3 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) og koblingen ble utført ved hjelp av HOAt og DIC (også 3 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) i NMP. Det urene peptidet ble løst i 22,5% CH3CN, 0,1 N NaOH for rensing.
HPLC: Eluerer ved 25,4 minutter = 50,4% CH3CN.
MALDI-MS: 3969 (MH<+>).
Eksempel 51
[Gly<8>,Arg<26 34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(19-(karboksy)nonadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Forbindelsen ble fremstilt som beskrevet i de to tidligere eksemplene og ifølge "syntesemetoder". Aminosyren Fmoc-Glu(OtBu) (6 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) ble koblet til harpiksen med HOAt og DIC (6 molare ekvivalenter i forhold til harpiksen) i NMP. Det urene peptidet ble løst i 22,5% CH3CN, 0,1 N NaOH for rensing.
HPLC: Eluerer ved 27,2 minutter = 52,2% CH3CN.
MALDI-MS: 4124 (MH<+>).
Eksempel 52
[Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(heksadekanoylamino)-etoksy)acetyl)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH
Denne forbindelsen ble fremstilt som beskrevet i de tre foregående eksemplene og ifølge "syntesemetoder", bortsett fra at ytterligere to OEG ble koblet til sidekjeden i Lys.
HPLC: Eluerer ved 25,0 minutter = 50,0% CH3CN.
MALDI-MS: 4259 (MH<+>).
Eksempel 53
[Gly<8>,Arg<26 34>]GLP-1 (7-37)Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)NH2
Denne forbindelsen ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1 og ifølge "syntesemetoder".
HPLC (metode B6): RT = 38,8 minutter.
LCMS: m/z = 1022,3 (M+4H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4081,7.
Eksempel 54
N<ε20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(karboksy)heptadekanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)-etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl [Lys<20>]eksendin-4 (1-39)-NH2
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntesemetoder".
HPLC (metode A1): RT = 41,9 minutter.
HPLC (metode B6): RT = 31,3 minutter.
LCMS: m/z = 1722,7 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 5164,9.
Eksempel 55
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Aib<8>,Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37)
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 34,2 minutter.
LC-MS: m/z = 997,2 (M+4H)<4+>, 1329,4 (M+3H)<3+>, 1993,2 (M+2H)<2+>. Beregnet (M+H)<+>= 3985,5.
Eksempel 56
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37)
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (metode B6): RT = 34,2 minutter.
LC-MS: m/z = 993,8 (M+4H)<4+>, 1324,6 (M+3H)<3+>, 1987,2 (M+2H)<2+>. Beregnet (M+H)<+>= 3971,5.
Eksempel 57
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37)
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 34,2 minutter.
LC-MS: m/z = 990,3 (M+4H)<4+>, 1320,3 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3957,4.
Eksempel 58
N<ε20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(oktadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)-etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Lys<20>] eksendin-4 (1-39)amid
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 37,7 minutter.
LC-MS: m/z = 1216,6 (M+4H)<4+>, 1621,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4861,5.
Eksempel 59
N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(oktadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino)etoksy)-etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-[Arg<26,34>,Lys<36>]GLP-1-(7-37)
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 39,1 minutter.
LC-MS: m/z = 1018,8 (M+4H)<4+>, 1357,6 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4070,6.
Eksempel 60
N<ε26>-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy]etoksy)-acetylamino]etoksy)etoksy]acetyl)[Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 12,1 minutter.
LC-MS: m/z = 993,0 (M+4H)<4+>, 1325,0 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 3970,0.
Eksempel 61
N<ε26>-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino]etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy]etoksy)acetyl][Arg<34>]GLP -1-(7-37)-OH
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B4): RT = 11,8 minutter.
LC-MS: m/z = 1026 (M+4H)<4+>, 1368 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4100.
Eksempel 62
N<ε20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)-acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Lys<20>] eksendin-4 (1-39)amid
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,3 minutter.
LC-MS: m/z = 1223,9 (M+4H)<4+>, 1630,8 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4891,5.
Eksempel 63
[Gly<8>,Glu<22,23,30>,Arg<18,26,34>]GLP1 (7-37) Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadekanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy))etoksy)acetyl)-NH2
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 32,0 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 43,4 minutter.
LCMS: m/z = 1438,7 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4311,8.
Eksempel 64
[Imidazolylpropionsyre<7>,Asp<16>,Aib<22,35>]GLP1(7-37)Lys NH((2-{[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy))
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B1): RT = 32,5 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 43,5 minutter.
LCMS: m/z = 1028,8 (M+4H)<4+>. Beregnet (M+H)<+>= 4108,7.
Eksempel 65
[Imidazolylpropionsyre<7>,Aib<22,35>]GLP1(7-37)Lys NH((2-{[4-(17-karboksyheptadekanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy))
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
HPLC: (Metode B6): RT = 33,7 minutter.
HPLC: (Metode A1): RT = 44,8 minutter.
LCMS: m/z = 1024,8 (M+4H)<4+>, 1365,4 (M+3H)<3+>. Beregnet (M+H)<+>= 4092,8.
Eksempel 66
[3-(5-imidazoyl)propionyl<7>,Aib<8>,Arg<26,34>]GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH
Denne forbindelsen ble fremstilt ifølge fremgangsmåten i eksempel 1 og i "generelle syntetiske metoder".
MALDI-MS: 4217 (MH+).
HPLC: Eluerer: 25,5 minutter = 50,6% CH3CN.
BIOLOGISKE OBSERVASJONER
Forlenget virkning av GLP-1-derivater etter i.v. eller s.c. administrering
Den forlengede virningen av en rekke GLP-1-derivater ble bestemt ved å undersøke konsentrasjonen av disse i plasma etter sc-administrering i friske griser ved å bruke de fremgangsmåter som er beskrevet i det etterfølgende. For sammenligning undersøkte man også konsentrasjonen i plasma av GLP-1(7-37) etter scadministrering. Den forlengede virkningen av andre GLP-1-derivater kan bestemmes på samme måte.
Farmakokinetisk testing av GLP-1-analoger i minigriser
Prøvestoffene ble løst i en bærervæske som er egnet for subkutan eller intravenøs administrering. Konsentrasjonen ble justert slik at doseringsvolumet var tilnærmet 1 ml.
Undersøkelsen ble utført i 12 Göttingen hannminigriser fra Ellegaard Göttingen Minipigs ApS. Dyrene fikk en akklimatiseringsperiode på tilnærmet 10 dager før undersøkelsen startet. Ved begynnelsen av akklimatiseringsperioden var minigrisene omtrent 5 måneder gamle og hadde en vekt på 8-10 kg.
Undersøkelsen ble utført i et egnet dyrerom med en temperatur på 21-23 ºC og en relativ fuktighet som var ≥ 50%. Rommet var belyst slik at det var en syklus med 12 timers lys og 12 timers mørke. Lyset var på fra kl 06:00 til kl 18:00.
Dyrene ble holdt i åpne båser med halm på gulvet og det var seks dyr i hver åpne bås. Dyrene hadde fri adgang til vanlig drikkevann under undersøkelsen, men ble fastet fra omtrent kl 16:00 dagen før doseringen til omtrent 12 timer etter doseringen.
Dyrene ble veid ved ankomst og på doseringsdagen.
Dyrene fikk en enkelt intravenøs eller subkutan injeksjon. Den subkutane injeksjonen ble gitt på høyre side av nakken, omtrent 5-7 cm fra høyre øre og 7-9 cm fra midten av nakken. Injeksjonene ble gitt med en stoppeanordning på nålen, noe som gjorde at bare 0,5 cm av nålen kunne innføres i dyret.
Hvert teststoff ble gitt tre dyr. Hvert dyr mottok en dose på 2 nmol/kg kroppsvekt.
Seks dyr ble dosert hver uke, mens de gjenværende seks dyrene hvilte.
Det ble oppnådd en full plasmakonsentrasjons-tidsprofil fra hvert dyr. Det ble tatt blodprøver ved å anvende det følgende tidsskjema:
Etter intravenøs administrering:
Predose (0), 0,17 (10 minutter), 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 og 120 timer etter injeksjon.
Etter subkutan administrering:
Predose (0), 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 og 120 timer etter injeksjon.
På hvert prøvetidspunkt ble det tatt 2 ml blod fra hvert dyr. Blodprøvene ble tatt fra lårvenen.
Blodprøvene ble oppsamlet i testrør som inneholdt en buffer for stabilisering for å hindre enzymatisk nedbrytning av GLP-1-analogene.
Plasma ble umiddelbart overført til Micronic-rør. Tilnærmet 200 μl plasma ble overført til hvert Micronic-rør. Plasma ble lagret ved -20 ºC inntil det ble analysert. Plasmaprøvene ble analysert for innholdet av GLP-1-analoger ved å bruke en immunoprøve. Plasmakonsentrasjons-tidsprofilene ble analysert ved hjelp av en ikke-kompartemental farmakokinetisk analyse. De følgende farmakokinetiske parametere ble beregnet i hvert enkelt tilfelle: AUC, AUC/dose, AUC%Extrap, Cmax, tmax, λz, t1/2, CL, CL/f, Vz, Vz/f og MRT.
Utvalgte forbindelser ble testet i danske landrasegriser.
Farmakokinetisk testing av GLP-1-analoger i griser
Griser (50% Duroc, 25% Yorkshire og 25% dansk landrase, omtrent 40 kg) ble fastet fra begynnelsen av eksperimentet. Hver enkelt gris ble administrert 0,5 nmol av testforbindelsen pr kg kroppsvekt i en 50 μM isoton løsing (5 mM fosfat, pH 7,4, 0,02% Tween<®>-20 (Merck), 45 mg/ml mannitol (pyrogenfritt, Novo Nordisk)). Blodprøvene ble tatt fra et kateter i vena jugularis. 5 ml av blodprøvene ble helt over i avkjølte glass som inneholdt 175 μl av den følgende løsningen: 0,18 M EDTA, 15000 KIE/ml aprotinin (Novo Nordisk) og 0,30 mM valin-pyrrolidid (Novo Nordisk), pH 7,4. I løpet av 30 minutter ble prøvene sentrifugert i 10 minutter ved 5-6000<*>g. Temperaturen ble holdt på 4 ºC. Supernatanten ble pipettert over i forskjellige glass og holdt på minus 20 ºC inntil de skulle brukes.
Plasmakonsentrasjonene av peptidene ble bestemt i en sandwich ELISA eller ved hjelp av RIA ved å bruke forskjellige mono- eller polyklonale antistoffer. Valg av antistoffer var avhengig av GLP-1-derivatene. Tidspunktet hved hvilket toppkonsentrasjonen i plasma ble oppnådd varierer innenfor vide grenser, avhengig av det valgte spesielle GLP-1-derivatet.
Generell prøveprotokoll for sandwich ELISA i 96 brønners mikrotiterplate
Beleggende buffer (PBS) : Fosfatbufret saltløsning, pH 7,2
Vaskebuffer (PBS-vask) : Fosfatbufret saltløsning, 0,05% volum/volum Tween 20, pH 7,2
Prøvebuffer (BSA-buffer) : Fosfatbufret saltløsning, 10 g/l storfeserumalbumin (Fluka 05477), 0,05% volum/volum Tween 20, pH 7,2
Streptavidinbuffer : Fosfatbufret saltløsning, 0,5 M NaCl, 0,05%
volum/volum Tween 20, pH 7,2
Standard : Individuelle forbindelser i en plasmamatrise A-TNP : Nonsens antistoff
AMDEX : Streptavidin-pepperrotperoksidase (Amersham
RPN4401V)
TMB-substrat : 3,3',5,5'tetrametylbenzidin (<0,02%),
hydrogenperoksid
Prøven ble utført som følger (volum/brønn):
1.) Belegging med 100 μl innfangende antistoff 5 μg/ml i PBS-buffer
→ innkuber o/n, 4 ºC
→ 5x PBS-vasking → blokkert med siste vasking i minimum 30 minutter → tøm platen
2.) 20 μl prøve 100 μl biotinylert påvisende antistoff 1 μg/ml i BSA-buffer med 10 μg/ml A-TNP
→ innkubering i 2 timer, ved romtemperatur, i risteapparat → 5x PBS-vasking, platen tømmes
3.) 100 μl AMDEX 1:8000 i streptavidinbuffer
→ innkubering i 45-60 minutter ved romtemperatur i et risteapparat
→ 5x PBS-vasking, tøm platen
4.) 100 μl TMB-substrat
→ innkuber x minutter ved romtemperatur i et risteapparat
→ stopp reaksjonen med 100 μl 4 M H3PO4
Avles absorpsjonen ved 450 nm med 620 nm som referanse.
Konsentrasjonen i prøvene ble beregnet ut fra standardkurver.
Generell prøveprotokoll for RIA
DB-buffer : 80 mM fosfatbuffer, 0,1% humant serumalbumin, 10 mM EDTA,
0,6 mM tiomersal, pH 7,5
FAM-buffer : 40 mM fosfatbuffer, 0,1% humant serumalbumin, 0,6 mM tiomersal, pH 7,5
Trekull : 40 mM fosfatbuffer, 0,6 mM tiomersal, 16,7% storfeplasma, 15 g/l aktivert karbon, pH 7,5 (bland suspensjonen i minimum 1 time før bruk ved 4 ºC)
Standard : Individuelle forbindelser i en plasmamatrise
Prøven ble utført i minisorprør 12 x 75 ml (volum/rør) som følger:
Bland - innkubert 30 minutter ved 4 ºC - sentrifuger ved 3000 rpm, 30 minutter -overfør supernatanten umiddelbart til nye rør, lukk disse med en kork og utfør tellingen på en gammateller i 1 minutt. Konsentrasjonen i prøvene blir beregnet ut fra individuelle standardkurver.
GLP-1 radioreseptorprøve (RRA):
Denne metoden er en radiometrisk ligandbindingsprøve som bruker LEADseeker billeddannende partikler. Prøven er sammensatt av membranfragmenter som inneholder GLP-1-reseptoren, umerkede GLP-1-analoger, humant GLP-1 merket med<125>I og PS LEADseeker-partikler belagt med hvetekimagglutinin (WGA). Kald og<125>I-merket GLP-1 vil konkurrere om binding til reseptoren. Når LEADseekerpartiklene blir tilsatt, vil de binde seg til karbohydratrester på membranfragmentene via WGA-restene. Nærkontakt mellom<125>I-molekylene og LEADseeker-partiklene vil gi en lysemisjon fra partiklene. LEADseekeren vil gi et bilde av det emitterte lyset og vil være revers korrelert til mengden av GLP-1-analogen som er tilstede i prøven.
Reagenser & materialer:
Forbehandling av dyreplasma: Dyreplasma ble holdt på 50 ºC i 4 timer og så sentrifugert ved 10000 rpm i 10 minutter. Deretter ble Val-Pyr (10 μM) og aprotenin (500 KIE/ml) tilsatt og blandingen ble lagret ved < -18 ºC inntil den skulle brukes.
GLP-1-analogkalibratorer: GLP-1-analogene ble overført til varmebehandlet plasma for å fremstille fortynningsløsninger som varierte fra tilnærmet 1 μM til 1 pM.
GLP-1 RRA-prøvebuffer: 25 mM Na-HEPES (pH = 7,5), 2,5 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 50 mM NaCl, 0,1% ovalbumin, 0,003% tween 20, 0,005% bacitracin, 0,05% NaN3.
GLP-1-reseptorsuspensjon: GLP-1-reseptormembranfragmentene ble renset fra nyfødt hamsternyre (BHK) -celler som uttrykte den humane pankreatiske GLP-1-reseptoren. Lagret ved < -80 ºC inntil bruk.
WGA-koblet polystyren LEADseeker billeddannende perler (RPNQ0260, Amersham): Perlene ble rekonstituert med GLP-1 RRA-prøvebuffer til en konsentrasjon på 13,3 mg/ml. GLP-1-reseptormembransuspensjonen ble så tilsatt og blandingen ble innkubert kaldt (2-8 ºC) ved end-over-end i minst 1 time før bruk.
[<125>I]-GLP-1(736)amid (Novo Nordisk A/S): Lagret ved < -18 ºC inntil bruk.
Etanol 99,9 volum% (De Danske Spritfabrikker A/S): Lagret ved < -18 ºC inntil bruk.
MultiScreen ® Solvinert 0,45 μm hydrofobe PTFE-plater (MSRPN0450, Millipore Corp)
Polypropylenplater (katalog nr. 650201, Greiner Bio-One)
Hvite polystyren 384-brønners plater (katalog nr. 781075, Greiner Bio-One)
Apparater:
Horisontal plateblander
Sentrifuge med standard svingbøtte mikrotitreringsplaterotorsammensetning UltraVap - nedtørkings prøvekonsentrator (Porvair)
LEADseeker<TM>multimodalitets billedsystem (Amersham)
Prøveprosedyre:
Prøvefremstilling:
Plasser MultiScreen ® Solvinert filterplaten på en kjemisk sammenlignbar mottakerplate (det vil si polypropylenplater for oppsamling av filtratet.
Tilsett 150 μl iskald etanol 99,9% i de tomme brønnene på MultiScreen ® Solvinert filterplaten fulgt av 50 μl kalibrator eller plasmaprøve. Plasser lagringslokket på filterplaten. Innkuber platene i 15 minutter ved 18-22 ºC på en horisontal plateblander.
Plasser den sammensatte filter- og mottakerplaten med lokket i en standard svingbøtte mikrotitreringsplaterotorsammensetning. Filtratet blir så oppsamlet i de tomme brønnene på mottakerplaten ved 1500 rpm i 2 minutter.
Tørk filtratet ved å bruke nevnte UltraVap-apparat ved oppvarming (40 ºC) i nitrogen i 15 minutter. Rekonstituert det tørre materialet ved å tilsette 100 μl GLP-1 RRA-prøvebuffer i hver brønn. Innkubert platen i 5 minutter på en horisontalblander.
GLP-1 radioreseptorprøve:
Bruk det følgende pipetteringsskjema og hvite polystyren 384 brønners plater:
• 35 μl GLP-1 RRA-prøvebuffer.
• 5 μl rekonstituert filtrat.
• 10 μl [<125>I]-GLP-1(7-36)amid. Lagerløsningen ble fortynnet i GLP-1 RRA-prøvebuffer til 20000 cpm/brønn før bruk.
• 15 μl GLP-1 reseptormembranfragmenter ( ≈ 0,5 μg/brønn) på forhånd belagt på WGA-polystyren LEADseeker billedperler (0,2 mg/brønn).
Forsegl platene og innkubert over natten ved 18-22 ºC.
Lysemisjonen fra hver brønn ble påvist ved å bruke LEADseeker<TM>multimodalitetsbilledsystemet i 10 minutter.
Stimulering av cAMP-dannelse i en cellelinje som uttrykker den klonede humane GLP-1-reseptoren
Rensede plasmamembraner fra en stabil transfektert cellelinje, BHK467-12A (tkts13) som uttrykker den humane GLP-1-reseptoren, ble stimulert med GLP-1 og peptidanaloger og størrelsen på cAMP-produksjonen ble målt ved å bruke AlphaScreen<TM>cAMP-prøvesettet fra Perkin Elmer Life Sciences.
En stabil transfektert cellelinje ble fremstilt ved NN og en klon med høyt ekspresjonsnivå ble valgt for screening. Cellene ble dyrket ved 5% CO2i DMEM, 5% FCS, 1% Pen/Strep og 0,5 mg/ml G418.
Celler ved tilnærmet 80% sammenflytning ble vasket 2 ganger med PBS og høstet med Versene, sentrifugert i 5 minutter ved 1000 rpm hvoretter supernatanten ble fjernet. Alle de ytterligere trinnene ble utført på is. Cellepelleten ble homogenisert ved hjelp av Ultrathurax i 20-30 sekunder i 10 ml buffer 1 (20 mM Na-HEPES, 10 mM EDTA, pH = 7,4), sentrifugert i 15 minutter ved 20000 rpm, hvoretter pelleten på nytt ble suspendert i buffer 2 (20 mM Na-HEPES, 0,1 mM EDTA, pH = 7,4).
Suspensjonen ble homogenisert i 20-30 sekunder og sentrifugert i 15 minutter ved 20000 rpm. Suspendering i buffer 2, homogenisering og sentrifugering ble gjentatt en gang og membranene ble på nytt suspendert i buffer 2 og var da ferdig for analyse eller ble lagret ved -80 ºC. Den funksjonelle reseptorprøven ble utført ved å måle den peptidinduserte cAMP-produksjonen ved hjelp av AlphaScreen-teknologi. Det grunnleggende prinsippet ved AlphaScreen-teknologien er en konkurranse mellom endogent cAMP og eksogent tilsatt biotin-cAMP. Innfangingen av cAMP ble oppnådd ved å bruke et spesifikt antistoff som var konjugert til akseptorperler. Dannet cAMP ble telt og målt i en AlphaFusion mikroplateanalysator. EC50-verdiene ble beregnet ved å bruke Graph-Pad Prisme-programvaren.

Claims (15)

  1. PATENTKRAV 1. Forbindelse, k a r a k t e r i s e r t v e d formelen (I): A - W - B - Y - terapeutisk polypeptid (I) hvori nevnte polypeptid er et GLP-1-peptid omfattende aminosyresekvensen med formel (V): Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 Formel (V) (SEQ ID No: 3) hvori Xaa7er L-histidin, D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, β-hydroksyhistidin, homohistidin, N<α>-acetylhistidin, α-fluormetylhistidin, α-metylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin eller 4-pyridylalanin; Xaa8er Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-aminocyclopropyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclobutyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclopentyl)-karboksylsyre, (1-aminocyclohexyl)-karboksylsyre, (1-aminocycloheptyl)-karboksylsyre, eller (1-aminocyclooctyl)-karboksylsyre; Xaa18er Ser, Lys eller Arg; Xaa22er Gly, Glu eller Aib; Xaa23er Gln, Glu, Lys eller Arg; Xaa26er Lys, Glu eller Arg; Xaa30er Ala, Glu eller Arg; Xaa34er Lys, Glu eller Arg; Xaa35er Gly eller Aib; Xaa36er Arg eller Lys; Xaa37er Gly, Ala, Glu eller Lys; Xaa38er Lys, amid eller er fraværende hvori A er en albumbindende rest valg fra gruppen bestående av
    hvor det kirale karbonatomet enten er R eller S,
    hvor det kirale karbonatomet enten er R eller S,
    hvor de to kirale karbonatomene enten er R eller S,
    hvor de to kirale karbonatomene enten er R eller S,
    B er -(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-, hvor l, m, n, og p uavhengig er 1-5, og q er 0-5; Y er en kjemisk gruppe som binder B og det terapeutiske middelet, valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH -, -NHC(O)O-, -C(O)NHCH2-, CH2NHC(O)-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- and –C(O)NH-, hvori s is 0 eller 1; og W er en kjemisk gruppe som binder A og B, valgt fra gruppen bestående av -C(O)NH-, -NHC(O)-, -C(O)NHCH2-, -CH2NHC(O)-, -OC(O)NH -, -NHC(O)O-, -C(O)CH2-, -CH2C(O)-, -C(O)CH=CH-, -CH=CHC(O)-, -(CH2)s-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -NHC(O)- og –C(O)NH-, hvori s er 0 eller 1; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller forløpermedikament derav.
  2. 2. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at i) q er 0 eller 1; ii) q er 1; eller iii) q er 0. .
  3. 3. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 2-13, k a r a k t e r i s e r t v e d at l er 2; og/eller hvori n er 2.
  4. 4. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at -W-B-Y- er valgt fra gruppen bestående av
  5. 5. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at den albuminbindende resten i) via avstandsgruppe og linkere er knyttet til nevnte terapeutiske polypeptid via ε-aminogruppen på en lysinrest; og/eller ii) via en linker til en aminosyrerest valgt fra cystein, glutamat og aspartat.
  6. 6. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, hvori nevnte GLP-1-peptid omfatter i) ikke mer enn 10 aminosyrerester som har blitt erstattet, tilført eller fjernet sammenliknet med GLP-1 (7-37) (SEQ ID Nr.1); ii) fortrinnsvis ikke mer enn 6 aminosyrerester som har blitt erstattet, tilført eller fjernet sammenliknet med GLP-1 (7-37) (SEQ ID Nr.1); og/eller iii) ikke mer enn 4 aminosyrerester som ikke er kodet av den genetiske kode.
  7. 7. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, hvori i) nevnte GLP-1-peptid omfatter en Aib-rest i posisjon 8; og/eller ii) hvori aminosyreresten i posisjon 7 i nevnte GLP-1-peptid er valgt fra gruppen bestående av D-histidin, desaminohistidin, 2-aminohistidin, β-hydroksyhistidin, homohistidin, N<α>-acetylhistidin,<α>-fluormetylhistidin,<α>-metylhistidin, 3-pyridylalanin, 2-pyridylalanin og 4-pyridylalanin.
  8. 8. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at nevnte GLP-1-peptid er valgt fra gruppen bestående av Arg<34>GLP-1(7-37), Lys<38>Arg<26,34>GLP-1(7-38), Lys<38>Arg<26,34>GLP-1(7-38)-OH, Lys<36>Arg<26,34>GLP-1(7-36), Aib<8,22,35>GLP-1(7-37), Aib<8,35>GLP-1(7-37), Aib<8,22>GLP-1(7-37), Aib<8,22,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26,34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<26>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Arg<34>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,35>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22>Ala<37>Lys<38>GLP-1(7-38), Aib<8,22,35>Lys<37>GLP-1(7-37), Aib<8,35>Lys<37>GLP-1(7-37) and Aib<8,22>Lys<37>GLP-1(7-38).
  9. 9. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at nevnte GLP-1-peptid er knyttet til nevnte hydrofile avstandsgruppe via aminosyreresten i posisjon 23, 26, 34, 36 eller 38 i forhold til aminosyresekvensen SEKV.ID. NR. 1.
  10. 10. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at en albuminbindende rest via nevnte hydrofile avstandsgruppe er knyttet til den C-terminale aminosyreresten i nevnte GLP-1-peptid.
  11. 11. Forbindelse ifølge krav 10, k a r a k t e r i s e r t v e d at en annen albuminbindende rest er knyttet til en aminosyrerest som ikke er den C-terminale aminosyreresten.
  12. 12. Forbindelse ifølge ethvert av de foregående krav, k a r a k t e r i s e r t v e d at nevnte forbindelse er valgt fra gruppen bestående av N<ε 37>-{2-[2-(2-(15-karboksypentadecanoylamino)etoksy)etoksy]acetyl}-[Aib<8,22,35>,Lys<37>] GLP-1(7-37)amid,
    N<ε 37>-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid,
    N<ε 37>-(2-(2-(2-(19-karboksynonadecanoylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Aib<8,22,35>,Lys<37>]GLP-1(7-37)amid,
    [Aib<8,22,35>]GLP-1(7-37)Lys(({2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(15-karboksypentadecanoylamino)-etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl amino)etoksy]etoksy}acetyl))amid,
    N<ε 37>-([2-(2-{3-[2,5-dioxo-3-(15-karboksypentadecylsulfanyl)-pyrrolidin-1-yl]-propionylamino}etoksy)etoksy)acetyl]-[D-Ala<8>,Lys<37>]-GLP-1-[7-37]amid,
    [Aib<8,22,35>Ala<37>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(2-(11-(oxalylamino)undecanoylamino)etoksy)-etoksy)acetyl-)))amid,
    [Aib<8,22,35>,Ala<37>]-GLP-1(7-37)Lys({2-[2-(2-{2-[2-(2-(15-karboksy-pentadecanoylamino)-etoksy]etoksy}acetylamino)etoksy]etoksy}acetyl)amid,
    [Aib<8>,Arg<26,34>] GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH,
    [Gly<8>, Arg<26,34>] GLP1-(7-37) Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy]acetyl)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH,
    , [Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(19-(karboksy)nonadecanoylamino)etoksy)-
    [Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys((2-(2-(17-(karboksy)heptadecanoylamino)etoksy)etoksy)-acetyl))-OH,
    [Gly<8>,Arg<26,34>]GLP-1(7-37)Lys(2-(2-(2-(4-(19-(karboksy)nonadecanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetyl)-OH,
    N<ε20>(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(4-(17-(karboksy)heptadecanoylamino)-4-karboksybutyrylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetylamino) etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Lys<20>]exendin-4 (1-39)-NH2,
    N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-carboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy) acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Aib<8>,Arg<26,34>, Lys<36>] GLP-1 (7-37),
    N-<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-carboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy) acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Arg<26,34>, Lys<36>] GLP-1 (7-37), , N<ε36>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy) acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl) [Gly<8>,Arg<26,34>,Lys<36>] GLP-1 (7-37),
    N<ε 26>-(2-[2-(2-[2-(2-[2-(17-karboksyheptadecanoylamino)etoksy] etoksy)acetylamino]etoksy)etoksy]acetyl)[Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH,
    N<ε 26>-[2-(2-[2-(2-[2-(2-[4-(17-karboksyheptadecanoylamino)-4(S)-karboksybutyrylamino]etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy]etoksy)acetyl][Arg<34>]GLP-1-(7-37)-OH,
    , N<ε 20>-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-Karboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)[Lys<20>] Exendin-4 (1-39) amid,
    , [Gly<8>, Glu<22,23,30>, Arg<18,26,34>]GLP1 (7-37) Lys(2-(2-(2-(2-(2-(2-(17-karboksyheptadecanoylamino)etoksy)etoksy)acetylamino)etoksy))etoksy)acetyl)-NH2,
    [Imidazolylpropionic acid<7>, Asp<16>, Aib<22,35>]GLP1(7-37)Lys NH((2-{[4-(17-karboksyheptadecanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy)),
    [Imidazolylpropionic acid<7>, Aib<22,35>]GLP1(7-37)Lys NH( (2-{[4-(17-karboksyheptadecanoylamino)butylkarbamoyl]metoksy}etoksy)etoksy)),
    and [3-(5-Imidazoyl)propionyl<7>, Aib<8>, Arg<26,34>] GLP-1 (7-37)Lys{2-(2-(2-(2-[2-(2-(17-karboksyheptanoylamino)etoksy)etoksy]acetylamino)etoksy)etoksy)acetyl)}-OH,
  13. 13. Farmasøytisk sammensetning, k a r a k t e r i s e r t v e d å omfatte en forbindelse ifølge ethvert av kravene 1-12 og en farmasøytisk akseptabel eksipient.
  14. 14. Forbindelse ifølge ethvert av kravene 1-12 for anvendelse som et medikament.
  15. 15. Anvendelse av en forbindelse ifølge ethvert av kravene 1-12 for fremstilling av et medikament; fortrinnsvis for behandling eller for å forebygge hyperglykemi, type 2 diabetes, svekket glukosetoleranse, type 1 diabetes, overvekt, hypertensjon, syndrom X, dyslipidemi, kognitive lidelser, aterosklerose, myokardialt infarkt, koronar hjertesykdom og andre kardiovaskulære lidelser, slag, inflammatorisk tarmsyndrom, dyspepsi og magesår; ii) for fremstilling av et medikament for å forsinke eller å forebygge sykdomsutvikling i type 2 diabetes; og/eller iii) for fremstilling av et medikament for å redusere matinntak, senke β -celle-apoptose, øke β-cellefunksjon og β-cellemasse, og/eller for å gjenopprette glukosesensitiviteten til β -celler.
NO20061722A 2003-09-19 2006-04-19 GLP-1-derivater og farmasøytisk sammensetninger og medisinske anvendelser derav. NO343825B1 (no)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200301367 2003-09-19
US50573903P 2003-09-25 2003-09-25
US52684703P 2003-12-04 2003-12-04
DKPA200301789 2003-12-04
PCT/DK2004/000624 WO2005027978A2 (en) 2003-09-19 2004-09-17 Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20061722L NO20061722L (no) 2006-06-12
NO343825B1 true NO343825B1 (no) 2019-06-17

Family

ID=46045404

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20061722A NO343825B1 (no) 2003-09-19 2006-04-19 GLP-1-derivater og farmasøytisk sammensetninger og medisinske anvendelser derav.

Country Status (13)

Country Link
US (6) US20070203058A1 (no)
EP (2) EP1670515A2 (no)
JP (1) JP4949838B2 (no)
KR (1) KR101241862B1 (no)
AU (2) AU2004273573B2 (no)
BR (2) BR122019021416A2 (no)
CA (1) CA2539253A1 (no)
IL (1) IL174154A (no)
MX (1) MXPA06002941A (no)
NO (1) NO343825B1 (no)
SI (1) SI2932981T1 (no)
TW (1) TW200526254A (no)
WO (1) WO2005027978A2 (no)

Families Citing this family (236)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200522976A (en) * 2003-09-19 2005-07-16 Novo Nordisk As Novel plasma protein affinity tags
PL1740154T3 (pl) * 2004-03-12 2009-11-30 Biodel Inc Kompozycje insuliny o ulepszonym wchłanianiu
US7878978B2 (en) * 2004-03-18 2011-02-01 University Of Pittsburgh- Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of relaxin to increase arterial compliance
AU2005247369A1 (en) 2004-05-10 2005-12-08 Mdrna, Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of parathyroid hormone
KR20120133403A (ko) 2004-06-01 2012-12-10 도만티스 리미티드 증강된 혈청 반감기를 가지는 이특이성 융합 항체
US20090111730A1 (en) 2004-07-08 2009-04-30 Novo Nordisk A/S Polypeptide protracting tags
JP5107713B2 (ja) 2004-10-07 2012-12-26 ノヴォ ノルディスク アー／エス 遅延性のエキセンディン−４化合物
JP2008515856A (ja) 2004-10-07 2008-05-15 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 遅延性ｇｌｐ−１化合物
US8394765B2 (en) 2004-11-01 2013-03-12 Amylin Pharmaceuticals Llc Methods of treating obesity with two different anti-obesity agents
JP5185624B2 (ja) 2004-12-02 2013-04-17 ドマンティス リミテッド 血清アルブミンおよびｇｌｐ−１またはｐｙｙを標的とする二重特異性抗体
TWI372629B (en) * 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
WO2006097538A1 (en) * 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Extended glp-1 compounds
KR101242795B1 (ko) * 2005-05-04 2013-03-12 질랜드 파마 에이/에스 글루카곤 유사 펩티드-2(ｇｌｐ-2) 유사체
CN101217940B (zh) * 2005-06-06 2013-03-27 卡穆鲁斯公司 Glp-1类似物制剂
CN100429227C (zh) * 2005-06-29 2008-10-29 常州制药厂有限公司 Exendin4多肽片段
US7846445B2 (en) * 2005-09-27 2010-12-07 Amunix Operating, Inc. Methods for production of unstructured recombinant polymers and uses thereof
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
AU2006312307A1 (en) * 2005-11-01 2007-05-18 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and related disorders
ES2507098T3 (es) 2005-11-07 2014-10-14 Indiana University Research And Technology Corporation Análogos de glucagón que muestran solubilidad y estabilidad fisiológicas
JP2009519296A (ja) 2005-12-14 2009-05-14 ノボ・ノルデイスク・エー／エス ポリペプチド延長タグ
JP5096363B2 (ja) 2005-12-16 2012-12-12 ネクター セラピューティックス Ｇｌｐ−１のポリマ複合体
ES2364982T3 (es) * 2006-02-08 2011-09-20 Lonza Ag Síntesis de péptidos similares a glucagón.
JP5252435B2 (ja) * 2006-03-15 2013-07-31 ノボ・ノルデイスク・エー／エス アミリン誘導体
EP2574624A1 (en) * 2006-04-20 2013-04-03 Amgen Inc. GLP-1 compounds
AU2007283113A1 (en) 2006-08-08 2008-02-14 Sanofi-Aventis Arylaminoaryl-alkyl-substituted imidazolidine-2,4-diones, processes for preparing them, medicaments comprising these compounds, and their use
US20090318353A1 (en) * 2006-08-25 2009-12-24 Novo Nordisk A/S Acylated Exendin-4 Compounds
EP2051995B1 (en) 2006-11-08 2017-02-08 Zealand Pharma A/S Selective glucagon-like-peptide-2 (glp-2) analogues
JP2010043001A (ja) * 2006-11-09 2010-02-25 Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd Ｇｌｐ−１誘導体とその用途
EP2124974B1 (en) * 2007-01-05 2017-03-15 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting enhanced solubility in physiological ph buffers
DE102007005045B4 (de) 2007-01-26 2008-12-18 Sanofi-Aventis Phenothiazin Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US8454971B2 (en) 2007-02-15 2013-06-04 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
US20100268055A1 (en) * 2007-07-19 2010-10-21 Arizona Board of Regents, a body corporate acting for and on behalf of Arizona State University Self-Anchoring MEMS Intrafascicular Neural Electrode
EP2025674A1 (de) 2007-08-15 2009-02-18 sanofi-aventis Substituierte Tetrahydronaphthaline, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
CA2695374A1 (en) * 2007-08-15 2009-02-19 Amunix, Inc. Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides
CN101842386A (zh) * 2007-09-05 2010-09-22 诺沃-诺迪斯克有限公司 截短的glp-1衍生物和它们的治疗用途
EP2190460B1 (en) 2007-09-05 2014-12-17 Novo Nordisk A/S Peptides derivatized with a-b-c-d- and their therapeutical use
EP2679597A1 (en) 2007-09-05 2014-01-01 Novo Nordisk A/S Glucagon-like peptide-1 derivatives and their pharmaceutical use
EP2036923A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-18 Novo Nordisk A/S Improved derivates of amylin
WO2009058662A2 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonists
JP5771005B2 (ja) * 2007-10-30 2015-08-26 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ グルカゴンアンタゴニスト及びｇｌｐ−１アゴニスト活性を示す化合物
DE102007054497B3 (de) 2007-11-13 2009-07-23 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Neue kristalline Diphenylazetidinonhydrate und Verfahren zu deren Herstellung
WO2009072802A2 (en) * 2007-12-03 2009-06-11 Amorepacific Corporation Composition for slimming
US20100317057A1 (en) 2007-12-28 2010-12-16 Novo Nordisk A/S Semi-recombinant preparation of glp-1 analogues
AU2009204309B2 (en) * 2008-01-04 2012-11-22 Biodel, Inc. Insulin formulations for insulin release as a function of tissue glucose levels
CN101983066B (zh) * 2008-01-30 2016-06-29 印第安那大学科技研究公司 基于酯的胰岛素前药
WO2009115469A1 (en) 2008-03-18 2009-09-24 Novo Nordisk A/S Protease stabilized, acylated insulin analogues
WO2009115525A2 (en) * 2008-03-20 2009-09-24 N.V. Organon Preparation of a pharmaceutical composition for increasing bone mineral density
US20110020345A1 (en) 2008-03-31 2011-01-27 Christopher Herring Drug fusions and conjugates
AU2009248041B2 (en) * 2008-05-16 2013-10-03 Novo Nordisk A/S Long-acting Y2 and/or Y4 receptor agonists
PL2300035T3 (pl) * 2008-06-17 2016-04-29 Univ Indiana Res & Tech Corp Mieszani agoniści na bazie GIP do leczenia zaburzeń metabolicznych i otyłości
JP5753779B2 (ja) * 2008-06-17 2015-07-22 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生理学的ｐＨの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体
US8546327B2 (en) 2008-06-17 2013-10-01 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
UY31968A (es) 2008-07-09 2010-01-29 Sanofi Aventis Nuevos derivados heterocíclicos, sus procesos para su preparación, y sus usos terapéuticos
CA2733200A1 (en) * 2008-08-06 2010-02-11 Novo Nordisk Health Care Ag Conjugated proteins with prolonged in vivo efficacy
JP5703226B2 (ja) 2008-10-21 2015-04-15 ノヴォ ノルディスク アー／エス アミリン誘導体
MX2011005874A (es) 2008-12-05 2011-06-27 Glaxo Group Ltd Metodos para seleccionar polipeptidos resistentes a proteasa.
WO2010068601A1 (en) 2008-12-08 2010-06-17 Sanofi-Aventis A crystalline heteroaromatic fluoroglycoside hydrate, processes for making, methods of use and pharmaceutical compositions thereof
CA2747195A1 (en) * 2008-12-19 2010-07-15 Indiana University Research And Technology Corporation Dipeptide linked medicinal agents
US8697632B2 (en) 2008-12-19 2014-04-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based insulin prodrugs
KR20110110174A (ko) 2008-12-19 2011-10-06 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 아미드 기반 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 프로드럭
CN102292349B (zh) 2009-01-22 2016-04-13 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 稳定的生长激素化合物
US9480753B2 (en) * 2009-01-23 2016-11-01 Novo Nordisk A/S FGF21 derivatives with albumin binder A-B-C-D-E- and their use
US8716448B2 (en) 2009-02-03 2014-05-06 Amunix Operating Inc. Coagulation factor VII compositions and methods of making and using same
US8703717B2 (en) * 2009-02-03 2014-04-22 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
US8680050B2 (en) * 2009-02-03 2014-03-25 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides fused to extended recombinant polypeptides and methods of making and using same
CN102348715B (zh) 2009-02-03 2017-12-08 阿穆尼克斯运营公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
US9060927B2 (en) * 2009-03-03 2015-06-23 Biodel Inc. Insulin formulations for rapid uptake
CN104127880A (zh) 2009-03-27 2014-11-05 葛兰素集团有限公司 药用融合体和缀合物
PT2440228T (pt) 2009-06-08 2018-12-24 Amunix Operating Inc Polipéptidos de regulação da glicose e métodos de preparação e utilização dos mesmos
US9849188B2 (en) 2009-06-08 2017-12-26 Amunix Operating Inc. Growth hormone polypeptides and methods of making and using same
MX2011013625A (es) 2009-06-16 2012-01-20 Univ Indiana Res & Tech Corp Compuestos glucagon activo de receptor de gip.
CN102612376A (zh) 2009-08-06 2012-07-25 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 具有延长的体内功效的生长激素
CA2771278A1 (en) 2009-08-26 2011-03-03 Sanofi Novel crystalline heteroaromatic fluoroglycoside hydrates, pharmaceuticals comprising these compounds and their use
US20130040877A1 (en) * 2009-09-18 2013-02-14 Novo Nordisk A/S Long-acting y2 receptor agonists
MX2012003939A (es) 2009-09-30 2012-07-30 Glaxo Group Ltd Fusiones y conjugados de farmaco.
EP2493919A1 (en) 2009-10-30 2012-09-05 Novo Nordisk A/S Derivatives of cgrp
CN102905722A (zh) * 2009-11-13 2013-01-30 诺沃—诺迪斯克有限公司 长效y2受体激动剂
WO2011080102A2 (en) 2009-12-16 2011-07-07 Novo Nordisk A/S Glp-1 analogues and derivatives
WO2011075393A2 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
CN106139158A (zh) 2010-01-22 2016-11-23 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 体内功效延长的生长激素
EP2525833A2 (en) 2010-01-22 2012-11-28 Novo Nordisk Health Care AG Stable growth hormone compounds
RU2012136450A (ru) 2010-01-27 2014-03-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Конъюгаты антагонист глюкагона - агонист gip и композиции для лечения метаболических расстройств и ожирения
EP2536434B1 (en) * 2010-02-16 2016-04-20 Novo Nordisk A/S Purification method
WO2011107494A1 (de) 2010-03-03 2011-09-09 Sanofi Neue aromatische glykosidderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
WO2011109787A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 Conjuchem, Llc Methods of administering insulinotropic peptides
RU2559320C2 (ru) * 2010-03-26 2015-08-10 Ново Нордиск А/С Новые аналоги глюкагона
WO2011123830A2 (en) 2010-04-02 2011-10-06 Amunix Operating Inc. Alpha 1-antitrypsin compositions and methods of making and using same
DE102010015123A1 (de) 2010-04-16 2011-10-20 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Benzylamidische Diphenylazetidinone, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
EP2560675A1 (en) 2010-04-20 2013-02-27 Novo Nordisk A/S Long-acting gastrin derivatives
EP2565205B1 (en) * 2010-04-27 2015-07-01 Betta Pharmaceuticals Co., Ltd. Glucagon-like peptide-1 analogue and use thereof
KR20130093470A (ko) 2010-04-30 2013-08-22 가부시키가이샤산와카가쿠켄큐쇼 생리활성 물질 등의 생체 내 안정성 향상을 위한 펩티드 및 생체 내 안정성이 향상된 생리활성 물질
KR20130111923A (ko) 2010-05-13 2013-10-11 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 G-단백결합 수용체 활성을 나타내는 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드
CA2797095A1 (en) 2010-05-13 2011-11-17 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity
EP2582719B1 (en) 2010-06-16 2016-08-10 Indiana University Research and Technology Corporation Single chain insulin agonists exhibiting high activity at the insulin receptor
EP2582709B1 (de) 2010-06-18 2018-01-24 Sanofi Azolopyridin-3-on-derivate als inhibitoren von lipasen und phospholipasen
US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
CA2803164C (en) 2010-06-24 2018-08-21 Indiana University Research And Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
CA2796894A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
TW201215387A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Aventis Spirocyclically substituted 1,3-propane dioxide derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201215388A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Sa (2-aryloxyacetylamino)phenylpropionic acid derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TW201221505A (en) 2010-07-05 2012-06-01 Sanofi Sa Aryloxyalkylene-substituted hydroxyphenylhexynoic acids, process for preparation thereof and use thereof as a medicament
WO2012010553A1 (en) 2010-07-20 2012-01-26 Novo Nordisk A/S N-terminal modified fgf21 compounds
WO2012050925A2 (en) 2010-09-28 2012-04-19 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Highly soluble leptins
JP6039569B2 (ja) 2010-11-09 2016-12-07 ノヴォ ノルディスク アー／エス 二重アシル化されたｇｌｐ−１誘導体
RU2600440C3 (ru) 2010-12-16 2021-12-10 Ново Нордиск А/С Твердые композиции, содержащие агонист glp-1 и соль n-(8-(2-гидроксибензоил)амино)каприловой кислоты
MA34885B1 (fr) 2010-12-22 2014-02-01 Indiana Unversity Res And Technology Corp Analogues du glucagon presentant una ctivite de recepteur de gip
KR20130141648A (ko) * 2011-01-26 2013-12-26 노보 노르디스크 에이/에스 렙틴 유도체
WO2012120052A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Mit carbozyklen oder heterozyklen substituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
WO2012120058A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Mit benzyl- oder heteromethylengruppen substituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
US8871758B2 (en) 2011-03-08 2014-10-28 Sanofi Tetrasubstituted oxathiazine derivatives, method for producing them, their use as medicine and drug containing said derivatives and the use thereof
US8809324B2 (en) 2011-03-08 2014-08-19 Sanofi Substituted phenyl-oxathiazine derivatives, method for producing them, drugs containing said compounds and the use thereof
US8828994B2 (en) 2011-03-08 2014-09-09 Sanofi Di- and tri-substituted oxathiazine derivatives, method for the production thereof, use thereof as medicine and drug containing said derivatives and use thereof
WO2012120057A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Neue substituierte phenyl-oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
US8809325B2 (en) 2011-03-08 2014-08-19 Sanofi Benzyl-oxathiazine derivatives substituted with adamantane and noradamantane, medicaments containing said compounds and use thereof
WO2012120053A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Verzweigte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
EP2683699B1 (de) 2011-03-08 2015-06-24 Sanofi Di- und trisubstituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
KR101496136B1 (ko) 2011-03-30 2015-02-26 베타 파머수티컬 컴퍼니 리미티드 글루카곤 유사 펩타이드-1 유사체 및 이의 용도
WO2012136790A1 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Glaxo Group Limited Compositions comprising fusion proteins or conjugates with an improved half -life
WO2012136792A2 (en) 2011-04-07 2012-10-11 Glaxo Group Limited Cck compositions
WO2012140647A2 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Yeda Research And Development Co. Ltd Albumin binding probes and drug conjugates thereof
CN106117344B (zh) 2011-04-12 2020-11-03 诺沃—诺迪斯克有限公司 双酰化glp-1衍生物
US9320777B2 (en) 2011-05-13 2016-04-26 Bolder Biotechnology, Inc. Methods and use of growth hormone supergene family protein analogs for treatment of radiation exposure
LT2723367T (lt) 2011-06-22 2017-08-25 Indiana University Research And Technology Corporation Bendri gliukagono/glp-1 receptoriaus agonistai
CN103748109A (zh) 2011-06-22 2014-04-23 印第安纳大学研究及科技有限公司 胰高血糖素/glp-1受体共同激动剂
WO2013009539A1 (en) 2011-07-08 2013-01-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Engineered polypeptides having enhanced duration of action and reduced immunogenicity
WO2013009545A1 (en) * 2011-07-08 2013-01-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Engineered polypeptides having enhanced duration of action with reduced immunogenicity
EP2567959B1 (en) 2011-09-12 2014-04-16 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
WO2013037390A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
TWI596110B (zh) 2011-09-23 2017-08-21 諾佛 儂迪克股份有限公司 新穎升糖素類似物
EP2760862B1 (en) 2011-09-27 2015-10-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-alkyl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
WO2013074910A1 (en) 2011-11-17 2013-05-23 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting glucocorticoid receptor activity
WO2013083826A2 (en) 2011-12-09 2013-06-13 Novo Nordisk A/S Glp-1 agonists
CN104114183A (zh) 2011-12-20 2014-10-22 印第安纳大学研究及科技有限公司 用于治疗糖尿病的基于ctp的胰岛素类似物
US9273092B2 (en) 2011-12-23 2016-03-01 RioGin LLC Selective binding compounds
ES2682253T3 (es) 2011-12-29 2018-09-19 Novo Nordisk A/S Dipéptido que comprende un aminoácido no proteogénico
KR20190094480A (ko) 2012-02-15 2019-08-13 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 재조합 인자 viii 단백질
CN111548418A (zh) 2012-02-15 2020-08-18 比奥贝拉蒂治疗公司 因子viii组合物及其制备和使用方法
CN117462693A (zh) 2012-02-27 2024-01-30 阿穆尼克斯运营公司 Xten缀合组合物和制造其的方法
US10933120B2 (en) 2012-03-22 2021-03-02 Novo Nordisk A/S Compositions of GLP-1 peptides and preparation thereof
HRP20231613T1 (hr) 2012-03-22 2024-03-15 Novo Nordisk A/S Pripravci koji sadrže sredstvo za unošenje i njihova priprava
ES2715308T3 (es) 2012-03-22 2019-06-03 Novo Nordisk As Composiciones que comprenden un agente de suministro y su preparación
EP2844670B1 (en) 2012-05-03 2017-12-06 Zealand Pharma A/S Glucagon-like-peptide-2 (glp-2) analogues
JP6250034B2 (ja) * 2012-05-08 2017-12-20 ノヴォ ノルディスク アー／エス 二重アシル化されたｇｌｐ−１誘導体
US11274135B2 (en) 2012-05-08 2022-03-15 Novo Nordisk A/S Double-acylated GLP-1 derivatives
RU2014150850A (ru) 2012-05-16 2016-07-10 Глэксо Груп Лимитед Нагруженные полипептидом роса-наночастицы для перорального введения
EP2863895B1 (en) 2012-06-20 2021-04-14 Novo Nordisk A/S Tablet formulation comprising a peptide and a delivery agent
RU2015101697A (ru) 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Аналоги глюкагона, обладающие активностью рецептора gip
MX366405B (es) 2012-07-01 2019-07-08 Novo Nordisk As Uso de peptidos glp-1 de accion prolongada.
AU2013323669B2 (en) 2012-09-26 2018-03-01 Indiana University Research And Technology Corporation Insulin analog dimers
EP2908844A1 (en) 2012-10-17 2015-08-26 Novo Nordisk A/S Fatty acid acylated amino acids for oral peptide delivery
IN2015DN03795A (no) 2012-10-24 2015-10-02 Inserm Inst Nat De La Santé Et De La Rech Médicale
RU2678134C2 (ru) 2013-03-14 2019-01-23 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Конъюгаты инсулин-инкретин
CN103217522A (zh) * 2013-03-18 2013-07-24 中国人民解放军第四军医大学 一种采用消化法消化提取细胞流式检测组织内细胞凋亡率的方法
US11045523B2 (en) 2013-04-05 2021-06-29 Novo Nordisk Healthcare Ag Formulation of growth hormone albumin-binder conjugate
WO2014170496A1 (en) 2013-04-18 2014-10-23 Novo Nordisk A/S Stable, protracted glp-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
BR112015030948A2 (pt) * 2013-06-20 2017-09-19 Novo Nordisk As Derivados de glp-1 e usos dos mesmos
WO2014210029A1 (en) * 2013-06-24 2014-12-31 Riogin Corporation Double binding constructs
TW202003554A (zh) 2013-08-14 2020-01-16 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
US10266577B2 (en) 2013-08-15 2019-04-23 Novo Nordisk A/S GLP-1 derivatives, and uses thereof
KR102302634B1 (ko) 2013-09-13 2021-09-14 더 스크립스 리서치 인스티튜트 변형된 치료제 및 이의 조성물
AU2014333979B2 (en) * 2013-10-07 2018-02-15 Novo Nordisk A/S Novel derivative of an insulin analogue
WO2015067791A1 (en) * 2013-11-11 2015-05-14 Ascendis Pharma Relaxin Division A/S Relaxin prodrugs
JP6629198B2 (ja) 2013-11-15 2020-01-15 ノヴォ ノルディスク アー／エス ３５位にβ−ホモアルギニン置換を有するＨＰＹＹ（１−３６）
TWI661835B (zh) 2013-11-15 2019-06-11 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 選擇性ｐｙｙ化合物及其用途
CA2933701C (en) 2013-12-18 2022-05-31 The California Institute For Biomedical Research Modified therapeutic agents, stapled peptide lipid conjugates, and compositions thereof
CN103985909B (zh) * 2014-05-14 2016-08-24 山东爱通工业机器人科技有限公司 一种锂电池电池片组左右两侧面贴胶装置
CN106536547A (zh) 2014-06-04 2017-03-22 诺和诺德股份有限公司 用于医疗用途的glp‑1/胰高血糖素受体共激动剂
US10588980B2 (en) 2014-06-23 2020-03-17 Novartis Ag Fatty acids and their use in conjugation to biomolecules
US10232020B2 (en) 2014-09-24 2019-03-19 Indiana University Research And Technology Corporation Incretin-insulin conjugates
EP3197912B1 (en) 2014-09-24 2023-01-04 Indiana University Research & Technology Corporation Lipidated amide-based insulin prodrugs
EP3006045B3 (en) 2014-10-07 2021-03-17 Cyprumed GmbH Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide or protein drugs
US9585934B2 (en) 2014-10-22 2017-03-07 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin D conjugates
ES2896971T3 (es) 2014-11-21 2022-02-28 Ascendis Pharma Endocrinology Div A/S Formas de administración de hormona del crecimiento de acción prolongada
ES2739289T3 (es) * 2014-11-27 2020-01-30 Novo Nordisk As Derivados de GLP-1 y sus usos
US10392428B2 (en) 2014-12-17 2019-08-27 Novo Nordisk A/S GLP-1 derivatives and uses thereof
RU2729011C2 (ru) 2014-12-23 2020-08-03 Ново Нордиск А/С Производные fgf21 и их применения
US9744209B2 (en) 2015-01-30 2017-08-29 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9687526B2 (en) 2015-01-30 2017-06-27 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9925233B2 (en) 2015-01-30 2018-03-27 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9744239B2 (en) 2015-01-30 2017-08-29 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9750785B2 (en) 2015-01-30 2017-09-05 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US9937223B2 (en) 2015-01-30 2018-04-10 Par Pharmaceutical, Inc. Vasopressin formulations for use in treatment of hypotension
US10426818B2 (en) 2015-03-24 2019-10-01 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Method and pharmaceutical composition for use in the treatment of diabetes
RU2726777C2 (ru) 2015-06-12 2020-07-15 Ново Нордиск А/С Селективные соединения пептида yy и их применения
JP6909203B2 (ja) 2015-08-03 2021-07-28 バイオベラティブ セラピューティクス インコーポレイテッド 第ｉｘ因子融合タンパク質及びそれらの製造方法及び使用方法
WO2017040344A2 (en) 2015-08-28 2017-03-09 Amunix Operating Inc. Chimeric polypeptide assembly and methods of making and using the same
US11229683B2 (en) 2015-09-18 2022-01-25 Bolder Biotechnology, Inc. Hematopoietic growth factor proteins and analogs thereof and angiotensin converting enzyme inhibitors for treatment of radiation exposure
MX2018002514A (es) 2015-09-22 2018-08-15 Univ California Citotoxinas modificadas y su uso terapeutico.
US10286079B2 (en) 2015-09-22 2019-05-14 The Regents Of The University Of California Modified cytotoxins and their therapeutic use
CA2997343A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide drugs
WO2017083604A1 (en) * 2015-11-12 2017-05-18 Amgen Inc. Triazine mediated pharmacokinetic enhancement of therapeutics
WO2017109706A1 (en) 2015-12-22 2017-06-29 Novartis Ag Methods of treating or ameliorating metabolic disorders using growth differentiation factor 15 (gdf-15)
EP3423103A1 (en) * 2016-03-01 2019-01-09 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Pth prodrugs
WO2018011266A1 (en) 2016-07-13 2018-01-18 Ascendis Pharma A/S Conjugation method for carrier-linked prodrugs
JP7039574B2 (ja) 2016-09-29 2022-03-22 アセンディス ファーマ ボーン ディジージズ エー／エス 放出制御ｐｔｈ化合物の漸増用量設定
CN109789189B (zh) 2016-09-29 2024-01-23 阿森迪斯药物骨疾病股份有限公司 控释pth化合物的剂量方案
CN117257922A (zh) 2016-09-29 2023-12-22 阿森迪斯药物骨疾病股份有限公司 具有低峰-谷比的pth化合物
CN109843295B (zh) 2016-09-29 2022-04-05 阿森迪斯药物生长障碍股份有限公司 控释cnp激动剂的组合疗法
WO2018065634A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of peptide or protein drugs
US10913952B2 (en) * 2016-10-26 2021-02-09 Salk Institute For Biological Studies Environmental stress response transcriptional regulatory network
CN117384274A (zh) 2016-12-09 2024-01-12 西兰制药公司 酰化的glp-1/glp-2双重激动剂
HUE055231T2 (hu) 2016-12-16 2021-11-29 Novo Nordisk As Inzulint tartalmazó gyógyászati készítmények
TWI762706B (zh) 2017-08-24 2022-05-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Glp-1組成物及其用途
EP3746111B1 (en) 2018-02-02 2023-07-19 Novo Nordisk A/S Solid compositions comprising a glp-1 agonist, a salt of n-(8-(2-hydroxybenzoyl)amino)caprylic acid and a lubricant
JP2021516222A (ja) * 2018-03-16 2021-07-01 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション 副甲状腺ホルモンポリペプチドコンジュゲートおよびその使用方法
IL277495B1 (en) * 2018-03-23 2024-04-01 Carmot Therapeutics Inc Modulators of protein-coupled receptors - G
WO2019185706A1 (en) 2018-03-28 2019-10-03 Ascendis Pharma A/S Conjugates
AU2019246389A1 (en) 2018-03-28 2020-08-27 Ascendis Pharma Oncology Division A/S IL-2 conjugates
SG11202009467YA (en) 2018-04-05 2020-10-29 Sun Pharmaceutical Ind Ltd Novel glp-1 analogues
US20210087250A1 (en) 2018-04-06 2021-03-25 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical compositions for the transmucosal delivery of therapeutic peptides and proteins
TWI829687B (zh) 2018-05-07 2024-01-21 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 包含glp-1促效劑與n-(8-(2-羥基苯甲醯基)胺基)辛酸之鹽的固體組成物
KR20210013584A (ko) 2018-05-18 2021-02-04 아센디스 파마 본 디지즈 에이/에스 Pth 접합체의 개시 용량
US20200181597A1 (en) * 2018-05-31 2020-06-11 The Hong Kong Polytechnic University Composition and Application of Arginine-depleting Agents for Cancer, Obesity, Metabolic Disorders, and Related Complications and Comorbidities
CA3098420A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Novartis Ag Binding molecules against bcma and uses thereof
WO2020109978A1 (en) 2018-11-26 2020-06-04 Novartis Ag Lpl-gpihbp1 fusion polypeptides
EP3914282A1 (en) 2019-01-25 2021-12-01 Ospedale San Raffaele S.r.l. Inhibitor of dux4 and uses thereof
US20220088149A1 (en) 2019-02-11 2022-03-24 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Liquid Pharmaceutical Formulations of PTH Conjugates
US20220088147A1 (en) 2019-03-04 2022-03-24 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Long-acting growth hormone dosage forms with superior efficacy to daily somatropin
EP3972993A1 (en) 2019-05-21 2022-03-30 Novartis AG Variant cd58 domains and uses thereof
UY38701A (es) 2019-05-21 2020-12-31 Novartis Ag Moléculas de unión a cd19, conjugados, composiciones que las comprenden y usos de las mismas
CN110845601B (zh) * 2019-10-12 2021-01-19 广东药科大学 不同构型的glp-1类似肽修饰二聚体及其制备方法在治疗ii型糖尿病中的应用
CN116925237A (zh) 2019-12-31 2023-10-24 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和gdf15的融合蛋白以及其缀合物
WO2021144249A1 (en) 2020-01-13 2021-07-22 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Hypoparathyroidism treatment
WO2021144476A1 (en) 2020-02-18 2021-07-22 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulations
CN115461044A (zh) 2020-04-29 2022-12-09 诺和诺德股份有限公司 包含glp-1激动剂和组氨酸的固体组合物
EP4161956A1 (en) 2020-06-03 2023-04-12 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Il-2 sequences and uses thereof
JP2023540701A (ja) 2020-08-28 2023-09-26 アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー／エス グリコシル化ｉｌ－２タンパク質及びその使用
WO2022049310A1 (en) 2020-09-07 2022-03-10 Cyprumed Gmbh Improved pharmaceutical formulations of glp-1 receptor agonists
IL301411A (en) 2020-09-28 2023-05-01 Ascendis Pharma Bone Diseases As Improving the physical and mental condition of patients with hypoparathyroidism
EP4222176A4 (en) * 2020-09-30 2024-02-28 Beijing Ql Biopharmaceutical Co Ltd POLYPEPTIDE CONJUGATES AND METHODS OF USE
KR20230104651A (ko) 2020-11-06 2023-07-10 노파르티스 아게 Cd19 결합 분자 및 이의 용도
WO2022159395A1 (en) 2021-01-20 2022-07-28 Viking Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of metabolic and liver disorders
KR20230164709A (ko) 2021-04-01 2023-12-04 아센디스 파마 에이에스 염증 유발 질환을 치료하기 위한 지속형 성장 호르몬의 용도
EP4360645A1 (en) * 2021-06-25 2024-05-01 Gan & Lee Pharmaceuticals Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing glp-1 compound
WO2023012263A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 Novo Nordisk A/S Solid oral peptide formulations
AU2022350937A1 (en) 2021-09-22 2024-03-21 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Long-acting pth compound treatments

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999043707A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S N-terminally modified glp-1 derivatives
WO2001004156A1 (en) * 1999-07-12 2001-01-18 Zealand Pharmaceuticals A/S Peptides that lower blood glucose levels

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
CA1341320C (en) 1986-05-05 2001-11-20 Joel Habener Insulinotropic hormone
NZ222907A (en) 1986-12-16 1990-08-28 Novo Industri As Preparation for intranasal administration containing a phospholipid absorption enhancing system
EP0464022B1 (en) 1989-03-20 2000-05-31 The General Hospital Corporation Insulinotropic hormone
US5545618A (en) * 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
DE69129226T2 (de) 1990-01-24 1998-07-30 Douglas I Buckley Glp-1-analoga verwendbar in der diabetesbehandlung
DK36492D0 (da) 1992-03-19 1992-03-19 Novo Nordisk As Praeparat
WO1998008872A1 (en) * 1996-08-30 1998-03-05 Novo Nordisk A/S Glp-2 derivatives
US6268343B1 (en) * 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
JP2002504527A (ja) * 1998-02-27 2002-02-12 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 部分的に組織化したミセル様凝集物を形成する２５％を越えるヘリックス成分を有するｇｌｐ−２誘導体
JP2002508162A (ja) * 1998-02-27 2002-03-19 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ Ｎ末端を短縮したｇｌｐ−１誘導体
JP2002504518A (ja) * 1998-02-27 2002-02-12 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 部分的に構造化されたミセルー様凝集体を形成する、２５％を超えるヘリックス−含有率を有するｇｌｐ−１誘導体
US6528486B1 (en) * 1999-07-12 2003-03-04 Zealand Pharma A/S Peptide agonists of GLP-1 activity
US20040001827A1 (en) * 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
AU2353701A (en) * 2000-01-11 2001-07-24 Novo Nordisk A/S Transepithelial delivery of glp-1 derivatives
WO2002046227A2 (en) * 2000-12-07 2002-06-13 Eli Lilly And Company Glp-1 fusion proteins
FR2819810B1 (fr) * 2001-01-23 2004-05-28 Pf Medicament Peptides non glycosyles derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
DE60224284T2 (de) * 2001-06-28 2008-12-18 Novo Nordisk A/S Stabile formulierung von modifiziertem glp-1
JP2004537580A (ja) * 2001-08-10 2004-12-16 エピックス メディカル， インコーポレイテッド 延長された循環半減期を有するポリペプチド結合体
BR0308904A (pt) * 2002-04-10 2005-05-03 Lilly Co Eli Método de tratamento de gastroparesia, e, uso de um composto de glp-1
TW200522976A (en) * 2003-09-19 2005-07-16 Novo Nordisk As Novel plasma protein affinity tags
TWI372629B (en) * 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
WO2008019147A2 (en) * 2006-08-04 2008-02-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of exendins, exendin agonists and glp-1 receptor agonists for altering the concentration of fibrinogen
CN102149411A (zh) * 2008-09-12 2011-08-10 诺沃—诺迪斯克有限公司 酰化肽或蛋白的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999043707A1 (en) * 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S N-terminally modified glp-1 derivatives
WO2001004156A1 (en) * 1999-07-12 2001-01-18 Zealand Pharmaceuticals A/S Peptides that lower blood glucose levels

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
OSTROVSKII YU M.,"Comparative characteristics of the hydrophobic nature of certain proteins by their interaction with 2-p toluidino naphthalene-6-sulfonate", Ukrayins`Kyi Biokhimichnyi Zhurnal, vol. 47, nr. 6, 1975, side 701-707, Dated: 01.01.0001 *
SHEFFIELD W.P., "Modification of clearance of therapeutic and potentially therapeutic proteins", Current Drug Targets-Cardiovascular and Haematological Disorders, vol. 1, nr. 1, 2001, side 1-22, Dated: 01.01.0001 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2932981B1 (en) 2021-06-16
TW200526254A (en) 2005-08-16
US20130244931A1 (en) 2013-09-19
SI2932981T1 (sl) 2021-11-30
AU2004273573B2 (en) 2010-04-22
WO2005027978A3 (en) 2005-05-19
EP2932981A2 (en) 2015-10-21
WO2005027978A2 (en) 2005-03-31
US20160108102A1 (en) 2016-04-21
BRPI0414539B8 (pt) 2021-05-25
BRPI0414539A (pt) 2006-11-07
JP4949838B2 (ja) 2012-06-13
EP1670515A2 (en) 2006-06-21
US20130040884A1 (en) 2013-02-14
IL174154A0 (en) 2006-08-01
EP2932981A3 (en) 2016-02-24
KR20060096997A (ko) 2006-09-13
AU2010203063A1 (en) 2010-08-12
US20070203058A1 (en) 2007-08-30
KR101241862B9 (ko) 2022-12-09
US20130053315A1 (en) 2013-02-28
AU2010203063B2 (en) 2012-10-25
MXPA06002941A (es) 2006-05-31
US20100305032A1 (en) 2010-12-02
NO20061722L (no) 2006-06-12
AU2004273573A1 (en) 2005-03-31
KR101241862B1 (ko) 2013-03-13
JP2007505840A (ja) 2007-03-15
BR122019021416A2 (no) 2019-12-21
CA2539253A1 (en) 2005-03-31
BRPI0414539B1 (pt) 2020-12-29
IL174154A (en) 2013-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO343825B1 (no) GLP-1-derivater og farmasøytisk sammensetninger og medisinske anvendelser derav.
JP5476304B2 (ja) グルカゴン様ペプチド−１誘導体及びそれらの医薬用途
US9657079B2 (en) Truncated GLP-1 derivatives and their therapeutical use
ES2532116T3 (es) Péptidos derivados con A-B-C-D y sus usos terapéuticos
JP5755398B2 (ja) 伸長されたｇｌｐ−１化合物
US7893017B2 (en) Protracted GLP-1 compounds
CN108026153B (zh) 作为选择性肽双重glp-1/胰高血糖素受体激动剂的新毒蜥外泌肽-4衍生物
JP4585037B2 (ja) アシル化ｇｌｐ−１化合物
US20090062192A1 (en) Dimeric Peptide Agonists of the Glp-1 Receptor
US20070042956A1 (en) Novel GLP-1 compounds
ZA200602000B (en) Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides
ES2528496T3 (es) Nuevos análogos de péptido similar a glucagón, composición, y métodos de uso