ES2532116T3 - Péptidos derivados con A-B-C-D y sus usos terapéuticos - Google Patents

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Lauge SCHÄFFER
Jesper Lau
Thomas Kruse
Patrick William Garibay
Søren Østergaard
Steffen Runge
Henning THØGERSEN
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Abstract

Un derivado del péptido GLP-1, donde el derivado es: N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2 5 -[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); o**Fórmula**

Description

Péptidos derivados con A-B-C-D y sus usos terapéuticos
5 Campo de la invención
[0001] Esta invención da a conocer el campo de los péptidos terapéuticos, es decir, nuevos péptidos de acción prolongada derivados con A-B-C-D y su uso terapéutico. Los ejemplos de péptidos terapéuticos de particular importancia para la presente invención son el péptido-1 similar al glucagón (GLP-1) y la exendina-4, así como sus
10 análogos.
[0002] La invención da a conocer un derivado del péptido GLP-1 tal que el derivado es N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][desamino
15 His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37). La invención también da a conocer composiciones farmacéuticas y sus usos.
Antecedentes de la invención
20 [0003] Se ha empleado una serie de métodos diferentes para modificar la estructura de los péptidos terapéuticos como GLP-1 y exendina-4 a efectos de proporcionar una mayor duración de la acción in vivo. Por ejemplo, WO 2006/097538, WO 2006/097536, WO 2006/037810, WO2006005667, WO 2005/027978. WO 98/08871 y US 2001/0011071 describe varios análogos de GLP-1 y sus derivados.
25 [0004] Muchos pacientes diabéticos, particularmente en el segmento de la diabetes tipo 2 están sujetos a la llamada "fobia a la aguja", es decir un temor muy fuerte a inyectarse a sí mismos. En el segmento de la diabetes tipo 2 la mayoría de los pacientes es tratada con hipoglucemiantes orales, y puesto que se espera que los compuestos de GLP-1 serán un producto farmacéutico inyectable que se administrará a estos pacientes, el temor a las inyecciones puede convertirse en un serio obstáculo para el uso generalizado de compuestos clínicamente muy prometedores.
30 Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar nuevos compuestos que se puedan administrar menos de una vez al día, por ejemplo una vez cada dos o tres días preferentemente una vez por semana, manteniendo simultáneamente un perfil clínico aceptable, u opcionalmente una vía administración no invasiva como la vía pulmonar, nasal, sublingual, bucal u oral.
35 [0005] Uno de los objetivos de la invención es proporcionar derivados peptídicos de acción prolongada, es decir, que tengan un régimen de administración como el descrito antes, por ejemplo derivados de GLP-1, exendina-4 o análogos de éstos.
[0006] Otro objetivo de esta invención es proporcionar derivados peptídicos, por ejemplo derivados de GLP-1,
40 exendina-4, o sus análogos de elevada potencia (afinidad por el receptor), para reducir la dosis terapéutica empleada por ejemplo a una administración s.c. una vez a la semana o alternativamente una administración no invasiva.
[0007] Otro objetivo es proporcionar derivados de GLP-1 o análogos de éstos para los cuales la afinidad por el
45 receptor de GLP-1 sólo esté parcialmente disminuida cuando se compara la afinidad en presencia de muy baja concentración de albúmina humana a la afinidad en presencia de una mayor concentración de albúmina humana. El cambio en la afinidad de unión es preferentemente bajo.
[0008] Otro objetivo de esta invención es proporcionar derivados peptídicos como los derivados de GLP-1 o sus
50 análogos con elevada afinidad de unión a la albúmina que proteja al péptido de la degradación proteolítica y reduzca la depuración renal del péptido.
[0009] La potencia, en particular la relación entre la afinidad de unión al receptor de GLP-1 en presencia de altas y bajas concentraciones de albúmina, la semivida y la afinidad de unión a la albúmina son propiedades de posible
55 importancia para el objetivo general de lograr derivados peptídicos de acción prolongada, estables y por supuesto terapéuticamente activos como los derivados de GLP-1, con una posible administración de una vez por semana.
[0010] Los derivados peptídicos de la invención son preferentemente química, física y enzimáticamente estables.
60 Resumen de la invención
[0011] La presente invención da a conocer un derivado peptídico que consiste en un péptido en el que al menos un residuo de aminoácido es derivado con A-B-C-D-, en el que A-es
donde R es un alquilo inferior lineal o ramificado como isobutilo, p se elige del grupo constituido por 10, 11, 12, 13 y 14, y d se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4 y 5, y -B-se elige del grupo constituido por
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, e y se elige del grupo constituido por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12,
o A es
donde n se elige del grupo constituido por 14, 15, 16 17, 18 y 19 y B se elige del grupo constituido por
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y -C-se elige del grupo constituido por
donde b y e se eligen cada uno independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2, y c y f se eligen cada uno 30 independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2 con la condición de que b sea 1 o 2 cuando c es 0, o que b sea 0 cuando c es 1 o 2, y que e sea 1 o 2 cuando f es 0, o e sea 0 cuando f es 1 o 2 y -D-está unido al residuo de
dicho aminoácido y es un conector, representa un enlace o está ausente.
[0012] La invención también da a conocer composiciones y usos de dichos derivados peptídicos.
[0013] La invención da a conocer un derivado del péptido GLP-1 tal que el derivado es N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi) acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37). La invención también da a conocer composiciones farmacéuticas y sus usos.
Descripción de la invención
Definiciones y realizaciones particulares
[0014] En la presente memoria, los términos siguientes tienen el significado indicado: los términos "polipéptido" y "péptido" como se utilizan en este documento significan un compuesto formado por al menos cinco aminoácidos constituyentes conectados por enlaces peptídicos. Los aminoácidos constituyentes pueden ser del grupo de los aminoácidos codificados por el código genético y pueden ser aminoácidos naturales que no son codificados por el código genético, así como aminoácidos sintéticos. Los aminoácidos naturales que no son codificados por el código genético son por ejemplo, γ-carboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, D-alanina y D-glutamina. Los aminoácidos sintéticos comprenden los aminoácidos fabricados por síntesis química, es decir, los D-isómeros de los aminoácidos codificados por el código genético como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido α-aminoisobutírico), Abu (α-aminobutírico), Tie (tert-butilglicina), β-alanina, ácido 3-aminometil benzoico y ácido antranílico.
[0015] Los 22 aminoácidos proteinogénicos son: alanina, arginina, asparragina, ácido aspártico, cisteína, cistina, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, hidroxiprolina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina.
[0016] Por lo tanto un aminoácido no proteinogénico (que también puede ser denominado un aminoácido no natural) es una porción que se puede incorporar en un péptido mediante enlaces peptídicos, pero no es un aminoácido proteinogénico. Los ejemplos son γ-carboxiglutamato, ornitina, fosfoserina, los D-aminoácidos como D-alanina y Dglutamina. Los aminoácidos sintéticos no proteinogénicos comprenden los aminoácidos fabricados por síntesis química, es decir, D-isómeros de los aminoácidos codificados por el código genético como D-alanina y D-leucina, Aib (ácido α-aminoisobutírico), Abu (ácido α-aminobutírico), Tle (tert-butilglicina), ácido 3-aminometil benzoico, ácido antranílico, des-amino-histidina (abreviada DesaminoHis, nombre alternativo ácido imidazopropiónico abreviado Impr) "los análogos beta de los aminoácidos como β-alanina etc., D-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, ácido α,α-dimetil-glutámico, m-CF3fenilalanina (abreviada m-CF3-Phe), ácido alfa,alpha-diaminopropiónico (abreviado Dap), 2-naftil-treonina (abreviada 2-naftil-Thr o -T), 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina, ácido (1-aminociclopropil) , ácido (1aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico.
[0017] El término épsilon-amino-Lys (o épsilon-Lys) pretende indicar que un residuo de lisina está unido a un péptido como el péptido GLP-1(7-37) o un análogo de éste, a través de su grupo épsilon amino, no (como suele ser el caso) a través de su grupo alfa amino (véase por ejemplo el compuesto del ejemplo 53).
[0018] El término "análogo" según se usa en este documento con referencia a un polipéptido significa un péptido modificado en el que se sustituyeron uno o más residuos de aminoácidos del péptido con otros residuos de aminoácidos y/o en el que se eliminaron uno o más residuos de aminoácidos del péptido y/o en el que se añadieron uno o más residuos de aminoácidos. Dicha adición o eliminación de residuos de aminoácidos puede tener lugar en el extremo N-terminal del péptido y/o en el extremo C-terminal.
[0019] A menudo se utiliza un sistema simple para describir análogos: por ejemplo [Arg34] GLP-1(7-37)Lys designa un análogo de GLP-1(7-37) en el que la lisina natural en la posición 34 ha sido sustituida con arginina y en el que se ha añadido una lisina al residuo de aminoácido terminal, es decir, a Gly37.
[0020] Se debe entender que todos los aminoácidos para los cuales no se menciona el isómero óptico son el isómero L.
[0021] En una realización particular del derivado peptídico de la invención, el conector D está ausente, lo que significa que el péptido es derivado sólo con A-B-C.
[0022] En otra realización particular, el conector D está incluido y contiene al menos 5, 8, 10, 19, 20, 29, 41 o al menos 60 átomos que no son de hidrógeno.
[0023] En otra realización aún más particular, 30-50% (por ejemplo, 34, 38, 40, 41 o 42%) de los átomos que no son de hidrógeno del conector consisten en átomos de N u O. Propiedades funcionales
[0024] Varios derivados peptídicos de la invención han sido sintetizados y ensayados como se describe en la parte experimental.
[0025] Los derivados peptídicos de la invención tienen varias propiedades ventajosas y beneficiosas como se explica más adelante, haciendo referencia a los ejemplos.
[0026] En un primer aspecto, el derivado peptídico de la invención tiene un perfil de acción prolongada que lo hace potencialmente adecuado para la administración con menor frecuencia que una vez al día, preferentemente con un potencial de administración de una vez por semana, o incluso menos frecuente. El perfil de acción se puede evaluar en experimentos farmacocinéticos con animales de laboratorio como ratones o cerdos. Se encuentran experimentos adecuados en el ejemplo 73 (minicerdos) y en el ejemplo 77 (ratones) de la presente solicitud.
[0027] Como se describe en el ejemplo 73 de minicerdos, (i) el derivado peptídico se puede administrar por vía s.c. o i.v., preferentemente s.c.; (ii) los cerdos son preferentemente minicerdos Göttingen, preferentemente de 5 meses y que pesen de 8 a 10 kg; (iii) los animales se mantienen preferentemente en ayunas antes de la administración, convenientemente como se describe; (iv) la inyección se administra preferentemente como se indica; (v) el número de animales evaluados es preferentemente el indicado; (vi) la dosis es preferentemente según se indica; y/o (vii) también preferentemente las muestras de sangre se extraen, se recogen y se analizan como se indica en este ejemplo.
[0028] Los experimentos farmacocinéticos como el del ejemplo 73 resultan en un perfil de concentración plasmática del compuesto en cuestión versus el tiempo, basándose en el cual se puede determinar la semivida, T½.
[0029] En una primera realización particular, la semivida de un péptido, como un derivado de GLP-1 de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos es superior a 18 horas, preferentemente superior a 24 horas, más preferentemente superior a 28 horas, e incluso más preferentemente superior a 30 horas, y muy preferentemente superior a 32 horas.
[0030] En una segunda realización particular, la semivida del derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos, es superior a 32 horas, preferentemente superior a 34 horas, más preferentemente superior a 36 horas, e incluso más preferentemente superior a 38 horas, y muy preferentemente superior a 40 horas.
[0031] En una tercera realización particular, la semivida del derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos, es superior a 45 horas, preferentemente superior a 50 horas, más preferentemente superior a 55 horas, e incluso más preferentemente superior a 60 horas, y muy preferentemente superior a 65 horas.
[0032] En una cuarta realización particular, la semivida del derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos, es superior a 45 horas, preferentemente superior a 50 horas, más preferentemente superior a 55 horas, e incluso más preferentemente superior a 60 horas, y muy preferentemente superior a 65 horas.
[0033] En una quinta realización particular, la semivida del derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos, es superior a 70 horas, preferentemente superior a 75 horas, más preferentemente superior a 80 horas, e incluso más preferentemente superior a 85 horas, y muy preferentemente superior a 90 horas.
[0034] En una sexta realización particular, la semivida del derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a minicerdos, es superior a 92 horas, preferentemente superior a 94 horas, más preferentemente superior a 96 horas, e incluso más preferentemente superior a 98 horas, y muy preferentemente superior a 100 horas.
[0035] En consecuencia, los ejemplos de intervalos de semivida (tiempo indicado en horas, h) del derivado peptídico de la invención, determinada en minicerdos por administración s.c., son: 20-100, 30-100, 40-100, 50-100, 60-100, 70-100, 80-100 o 90-100 (horas).
[0036] La semivida de un derivado peptídico como un derivado de GLP-1 de la invención también se puede determinar en un estudio de respuesta a la dosis en ratones db/db, por ejemplo como se describe en el ejemplo 77. Como se describe en este ejemplo, (i) los ratones son preferentemente de Taconic; (ii) de 10 a 12 semanas de vida;
(iii) tienen libre acceso a ración estándar como Altromin 1324 y agua del grifo; (iv) se mantienen en 24 °C; (v) son aclimatados durante 1 semana; (vi) se distribuyen en 7 grupos (preferentemente n = 6) basándose en las coincidencias en los valores medios de glucemia; (vii) reciben tratamiento según se describe en el ejemplo; (viii)
reciben las dosis que se describe; (ix) la glucemia se evalúa según un esquema como el descrito, preferentemente se analiza como se describe; y/o (x) la semivida se determina basándose en determinaciones de glucemia en función del tiempo, preferentemente según se describe en el ejemplo.
[0037] En una primera realización particular, la semivida de un derivado peptídico como un derivado de GLP-1 de la invención, después de la administración s.c. a ratones db/db, es superior a 10 horas, preferentemente superior a 11 horas, más preferentemente superior a 12 horas, incluso más preferentemente superior a 13 horas, muy preferentemente superior a 14 horas.
[0038] En una segunda realización particular, la semivida de un derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a ratones db/db, es superior a 15 horas, preferentemente superior a 16 horas, más preferentemente superior a 17 horas, incluso más preferentemente superior a las horas, muy preferentemente superior a 19 horas.
[0039] En una tercera realización particular, la semivida de un derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a ratones db/db, es superior a 20 horas, preferentemente superior a 21 horas, más preferentemente superior a 22 horas, incluso más preferentemente superior a 23 horas, muy preferentemente superior a 24 horas.
[0040] En una cuarta realización, la semivida de un derivado peptídico de la invención, después de la administración
s.c. a ratones db/db, es superior a 25 horas, preferentemente superior a 26 horas, más preferentemente superior a 27 horas, incluso más preferentemente superior a 28 horas, muy preferentemente superior a 29 horas.
[0041] En una quinta realización particular, la semivida de un derivado peptídico de la invención, después de la administración s.c. a ratones db/db, es superior a 30 horas, preferentemente superior a 31 horas, más preferentemente superior a 32 horas, incluso más preferentemente superior a 33 horas, muy preferentemente superior a 34 horas.
[0042] En consecuencia, los ejemplos de intervalos de semivida (tiempo indicado en horas, h) del derivado peptídico de la invención, evaluados en ratones db/db por administración s.c., son: 5-35, 10-35, 15-35, 20-35 o 25-35 (horas).
[0043] En un segundo aspecto, el derivado peptídico de la invención tiene una potencia aceptable preferentemente alta (en su receptor). La potencia de un agente insulinotrópico como el derivado de GLP-1 de la invención se puede determinar calculando el valor de CE50 de la curva dosis-respuesta como se describe en el ejemplo 74.
[0044] La expresión "agente insulinotrópico" según se usa en este documento significa un derivado que es un agonista del receptor de GLP-1 humano, es decir, un derivado que estimula la formación de cAMP en un medio adecuado que contiene el receptor del GLP-1 humano (un medio como el dado conocer más adelante).
[0045] En realizaciones particulares, (i) se utilizan células de riñón de hámster recién nacido (BHK) que expresan el receptor de GLP-1 humano clonado, preferentemente BHK-467-12A, más preferentemente BHK-467-12A (tk-ts13);
(ii) las células se cultivan en medio DMEM con la adición de 100 UI/mL de penicilina, 100 µg/mL de estreptomicina (1% de Pen/Strep), 5% de suero fetal de ternero (FCS) y 0.5 mg/mL de Geneticin G-418 (Life Technologies), preferentemente a 5% de CO2; (iii) las células, preferentemente con aproximadamente 80% de confluencia, se lavan dos veces en solución salina tamponada con fosfato (PBS); (iv) las células se recogen con una solución acuosa de la sal tetrasódica del ácido etilendiaminotetraacético, como Versene; (v) se preparan las membranas plasmáticas de las células por homogeneización, preferentemente en tampón 1; (vi) el homogeneizado se centrifuga, por ejemplo a 48 000 x g durante 15 min a 4 °C; y/o (vii) el sedimento se suspende por homogeneización en tampón 2; preferentemente se repiten los pasos (vi) y (viii), por ejemplo una o dos veces más.
[0046] El ensayo funcional del receptor se puede llevar a cabo como se describe en el ejemplo 74 midiendo el AMP cíclico (cAMP) como una respuesta a la estimulación por el agente insulinotrópico. El cAMP formado se cuantifica preferentemente mediante el kit de cAMP AlphaScreen™ (Perkin Elmer Life Sciences). Se pueden llevar a cabo incubaciones en placas de microtitulación de 96 pocillos de media área en un volumen total de 50 µL de tampón 3 (Tris-HCl 50 mM, HEPES 5 mM, MgCl2 10 mM, pH 7.4) y con las adiciones siguientes: ATP 1 mM, GTP 1 µM, 3isobutil-1-metilxantina (IBMX) 0.5 mM, 0.01% de Tween-20, 0.1% de BSA, 6 µg de preparación de membrana, 15 µg/mL de perlas aceptoras, 20 µg/mL de perlas dadoras preincubadas con cAMP biotiniliado 6 nM. Los derivados cuya actividad agonista se va a determinar se disuelven y diluyen preferentemente en tampón 3. GTP se prepara en el momento para cada experimento. La placa se incuba en la oscuridad con agitación lenta durante tres horas a temperatura ambiente seguido de recuento en el instrumento Fusion™ (Perkin Elmer Life Sciences). Se grafican las curvas de concentración-respuesta para cada derivado y se calculan los valores de CE50 utilizando un modelo logístico de cuatro parámetros con Prism, preferentemente en la versión 4.0 o 5.0, (GraphPad, Carlsbad, CA).
[0047] En una primera realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una potencia (CE50 en nM),
determinada mediante el ensayo de cAMP, inferior a 4.00, preferentemente inferior a 3.50, más preferentemente inferior a 3.00, incluso más preferentemente inferior a 2.50 y muy preferentemente inferior a 2.00 (nM).
[0048] En una segunda realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una potencia (CE50 en nM), determinada mediante el ensayo de cAMP, inferior a 1.80, preferentemente inferior a 1.60, más preferentemente inferior a 1.40, incluso más preferentemente inferior a 1.20 y muy preferentemente inferior a 1.00 (nM).
[0049] En una tercera realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una potencia (CE50 en nM), determinada mediante el ensayo de cAMP, inferior a 0.80, preferentemente inferior a 0.60, más preferentemente inferior a 0.40, incluso más preferentemente inferior a 0.20 y muy preferentemente inferior a 0.10 (nM).
[0050] En una cuarta realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una potencia (CE50 en nM), determinada mediante el ensayo de cAMP, inferior a 0.090, preferentemente inferior a 0.080, más preferentemente inferior a 0.070, incluso más preferentemente inferior a 0.060 y muy preferentemente inferior a 0.050 (nM).
[0051] En una quinta realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una potencia (CE50 en nM), determinada mediante el ensayo de cAMP, inferior a 0.040, preferentemente inferior a 0.030, más preferentemente inferior a 0.020, y muy preferentemente inferior a 0.010 (nM).
[0052] En consecuencia, los ejemplos de rangos de potencia (CE50 en nM, determinada mediante el ensayo de cAMP) de los derivados de GLP-1 de la invención son 0.010-2.00, 0.010-1.80, 0.010-1.60, 0.010-1.40, 0.010-1.20, 0.010-1.00, 0.010-0.80, 0.010-0.60, 0.010-0.40, 0.010-0.30, 0.010-0.20, 0.010-0.10, 0.010 y 0.90 (nM), preferentemente 0.010-0.40, 0.010-0.30, 0.010-0.20, 0.010-0.10 y 0.010-0.90 (nM).
[0053] En una sexta realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención se puede unir a la albúmina y al receptor de GLP-1 simultáneamente. Por ejemplo, el derivado de GLP-1 de la invención se puede unir al receptor de GLP-1 con una afinidad inferior a 100 nM, preferentemente inferior a 30 nM en presencia de albúmina al 2%.
[0054] En un tercer aspecto, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una afinidad por el receptor de GLP-1 que sólo disminuye parcialmente al comparar la afinidad en presencia de muy baja concentración (por ej. 0.005% a 0.2%) de albúmina humana con la afinidad en presencia de 2% de albúmina humana (alta/baja). El cambio en la afinidad de unión en estas condiciones es preferentemente menor de 100 veces, más preferentemente menor de 50 veces, incluso más preferentemente menor de 30 veces y muy preferentemente menor de 10 veces. La afinidad de unión al receptor a una concentración alta y baja de albúmina humana se puede determinar como se describe en el ejemplo 75.
[0055] En una primera realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una relación entre [(CI50/nM) HSA alta/(CI50/nM) HSA ultra baja] inferior a 500, preferentemente inferior a 400, más preferentemente inferior a 300, incluso más preferentemente inferior a 200 y muy preferentemente inferior a 100.
[0056] En una segunda realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una relación entre [(CI50/nM) HSA alta/(CI50/nM) HSA ultra baja] inferior a 90, preferentemente inferior a 80, más preferentemente inferior a 70, incluso más preferentemente inferior a 69 y muy preferentemente inferior a 50.
[0057] En una tercera realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una relación entre [(CI50/nM) HSA alta/(CI50/nM) HSA ultra baja] inferior a 40, preferentemente inferior a 35, más preferentemente inferior a 30, incluso más preferentemente inferior a 25 y muy preferentemente inferior a 20.
[0058] En una primera realización particular, el derivado de GLP-1 de la invención tiene una relación entre [(CI50/nM) HSA alta/(CI50/nM) HSA ultra baja] inferior a 15, preferentemente inferior a 10, más preferentemente inferior a 8, incluso más preferentemente inferior a 5 y muy preferentemente inferior a 4.
[0059] En consecuencia, los ejemplos de rangos para la relación entre [(CI50/nM) HSA alta]/[(CI50/nM) HSA ultrabaja] son 2-500, 2-300, 2-100, 2-50, 2-30, 2-20 y 2-10.
[0060] En un cuarto aspecto, el derivado peptídico de la invención tiene una alta afinidad de unión a la albúmina. La albúmina se refiere a la seroalbúmina humana (HSA) y la afinidad se puede determinar según se describe en el ejemplo 76.
[0061] Las afinidades de los derivados de GLP-1 por la seroalbúmina humana (HSA) se pueden medir mediante un ensayo de competición de centelleo por proximidad (SPA), preferentemente (i) incubando perlas de SPAestreptavidina (como GE Healthcare RPNQ0009) con HSA biotinilada, por ej. durante 5 horas; (ii) lavando las perlas con tampón; (iii) mezclando las perlas con un análogo acilado de GLP-1 marcado con 125I, como N-épsilon26-[2-(2{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-(17-carboxi
heptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxy)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,125I-Tyr19,Arg34]GLP-1(7-37) o Népsilon37-[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino)-4carboxibutirilamino)-4-carboxibutirilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8125I-Tyr19,Glu22, Arg26,34,Lys37] GLP-1(7-37)-NH2, preferentemente en un tampón que contenga Hepes 100 mM, NaCl 100 mM, MgSO4 10 mM, 0.025% de Tween-20, pH 7,4; (iv) transfiriendo la mezcla a los pocillos de un contador de centelleo como un Perkin Elmer Optiplate-96 6005290 (100 µl por pocillo), utilizando volúmenes adecuados como 100 µl de una serie de diluciones adecuadas del derivado de GLP-1 a ser medido, preferentemente en el mismo tampón; (v) centrifugando las placas después de un tiempo de incubación adecuado como 20 horas, preferentemente con balanceo suave, más preferentemente a temperatura ambiente; (vi) contando las placas, por ejemplo, en un TopCounter; y/o (vii) graficando las cpm unidas en función de la concentración del derivado de GLP-1. El valor CE50 de la curva de competición se usa preferentemente como una medida de la afinidad del derivado por HSA. La afinidad de unión a HSA también se puede expresar como Kd aparente (Kd para la constante de equilibrio de disociación).
[0062] En una primera realización particular, la afinidad de unión a la albúmina (es decir, el valor de CE50 (en nM) de la curva de la competición, medida usando el ensayo del ejemplo 76), es inferior a 3000, preferentemente inferior a 2500, más preferentemente inferior a 2000, incluso más preferentemente inferior a 800 y muy preferentemente inferior a 600 (nM).
[0063] En una segunda realización particular, la afinidad de unión a la albúmina (es decir, el valor de CE50 (en nM) en la curva de la competición, medida usando el ensayo del ejemplo 76), es inferior a 500, preferentemente inferior a 400, más preferentemente inferior a 300, incluso más preferentemente inferior a 200, y muy preferentemente inferior a 100 (nM).
[0064] En consecuencia, los ejemplos de rangos de afinidad de unión a la albúmina (CE50 en nM) del derivado de GLP-1 de la invención son: 1-3000, 1-2500, 1-2000, 100-2000, 200-2000, 400-1500, 600-1500 y 800-1500 (nM). Definiciones adiconales y realizaciones particulares
[0065] Un ejemplo de otros péptidos que se pueden derivar según la invención es un péptido terapéutico con un peso molar menor de 100 kDa, menor de 50 kDa o menor de 10 kDa.
[0066] Los ejemplos de otros péptidos que se pueden derivar según la invención son exendina 4, hormona del crecimiento humana, insulina humana, factores de coagulación como el factor VII, factor VIII, factor IX, factor X, factor XIII, hormona paratiroidea, hormona estimulante del folículo humana, factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), factor de crecimiento transformante α (TGF-α), factor de crecimiento transformante β (TGF-β), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una somatomedina como el factor de crecimiento insulínico I (IGF-I), factor de crecimiento insulínico II (IFG-II), eritropoyetina (EPO), trombopoyetina (TPO) o angiopoyetina, interferón, prourocinasa, urocinasa, activador tisular del plasminógeno (T-PA), inhibidor del activador del plasminógeno 1, inhibidor del activador del plasminógeno 2, factor de von Willebrandt, una citocina, por ej. una interleucina como la interleucina (IL) 1, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, 16-IL, IL-17, IL-18, IL-20 o IL-21, un factor estimulante de las colonias (CFS) como GM-CSF, el factor de células madre, un factor de necrosis tumoral como TNF-α, linfotoxina-α, linfotoxina-β, CD40L o CD30L, un inhibidor de proteasas por ej. aprotinina, una enzima como superóxido dismutasa, asparraginasa, arginasa, arginina desaminasa, adenosina desaminasa, ribonucleasa, catalasa, uricasa, bilirrubina-oxidasa, tripsina, papaína, fosfatasa alcalina, β-glucoronidasa, purina nucleósido fosforilasa o batroxobina, un opiáceo, por ej. endorfinas, encefalinas u opiáceos no naturales, una hormona o un neuropéptido, por ej. calcitonina, glucagón, gastrinas, hormona adrenocorticotrópica (ACTH), colecistoquininas, hormona luteinizante, hormona liberadora de gonadotropinas, gonadotropina coriónica, factor liberador de corticotrofina, vasopresina, oxitocina, hormonas antidiuréticas, hormona estimulante de la tiroides, hormona liberadora de tirotropina, relaxina, prolactina, péptido YY, agonistas del receptor de Y2, agonistas del receptor de Y4, agonistas mixtos del receptor de Y2/Y4, neuropéptido Y, polipéptido pancreático, leptina, CART (transcrito regulado por cocaína y anfetamina), un péptido relacionado con CART, perilipina, péptidos natriuréticos, adrenomedulina, endotelina, secretina, amilina, péptido intestinal vasoactivo (VIP), polipéptido activador de la adenilato-ciclasa hipofisaria (PACAP), bombesina, péptidos similares a la bombesina, timosina, proteína de unión a la heparina, CD4 soluble, factor de liberación hipotalámico, melanotoninas y análogos de éstas, hematida y sus análogos.
[0067] La expresión "cada residuo de aminoácido en dirección 3'" según se usa en este documento se refiere a cada aminoácido ubicado hacia el extremo C-terminal en relación con un aminoácido específico. Por ejemplo Lys34, Gly35 y Arg36 y Gly37 son cada uno residuos de aminoácidos en dirección 3’ de Val33 en GLP-1 (7-37).
[0068] En un aspecto de la invención, el extremo C-terminal del derivado según la invención se puede terminar como un ácido o una amida. En un aspecto preferido el extremo C-terminal del derivado de la invención es una amida. En otro aspecto preferido, el extremo C-terminal del derivado de la invención es un ácido.
[0069] En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 17 aminoácidos. En realizaciones de la
invención se modificaron un máximo de 15 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 10 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 8 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 7 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 6 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 5 aminoácidos. En
5 realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 4 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 3 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificaron un máximo de 2 aminoácidos. En realizaciones de la invención se modificó 1 aminoácido.
[0070] El término "derivado" según se usa en este documento en relación con un péptido, significa un péptido o un
10 análogo de éste modificado químicamente, en el que al menos un sustituyente no está presente en el péptido o un análogo de éste sin modificar, es decir, un péptido que ha sido modificado covalentemente. Las modificaciones típicas son amidas, carbohidratos, grupos alquilo, grupos acilo, ésteres y similares. Un ejemplo de un derivado de un análogo de GLP-1(7-37) según la invención es N-épsilon37{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil
15 [desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1(7-37)amida en la que la Gly que ocupa naturalmente la posición 37 fue sustituida con lisina que se derivó en N-épsilon37 con {2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil (estructura 1)
y en el que la histidina que ocupa naturalmente la posición 7 fue sustituida con desaminoHis y la glicina que ocupa naturalmente la posición 22 fue sustituida con glutamato y la lisina en la posición 26 y 34 fue sustituida con arginina.
[0071] La expresión "péptido GLP-1" según se usa en este documento significa GLP-1(7-37) (SEQ ID No 1) o un 25 análogo de la GLP-1(7-37).
[0072] En un aspecto de la invención, el péptido GLP-1 se elige del grupo constituido por
[desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1(7-37)amida,
30 [desaminoHis7,Arg34]GLP-1-(7-37), [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida, [DesaminoHis7, Glu22,Arg26,Arg 34,Phe(m-CF3)28]GLP-1-(7-37)amida, [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys, [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys, [desaminoHis7,Arg26,Arg34,]GLP-1-(7-37)-Lys,
35 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida, [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida, [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37), [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37), [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Glu30,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37),
40 [Aib8,Lys20,Arg26,Glu30,Thr(O-bencil)33,]GLP-1-(7-37)amida, [Aib8,Glu22,Arg26,Lys30]GLP-1-(7-37), [Aib8,Glu22,Arg26,Lys31]GLP-1-(7-37), [Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina28, Glu30,]GLP-1 (7-37)amida, [Aib8, Glu22, Arg26, Arg34,]GLP-1-(7-37)-Lys, [Aib8,Lys20,Arg 26, 2-Naftilalanina12, Glu30,]GLP-1-(7-37)amida,
45 [Aib8,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]GLP-1-(7-37), [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37), [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)-amida, [Aib8,Lys18,Arg26,Arg34]GLP-1(7-37), [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida,
50 [Aib8,Lys26] GLP-1 (7-37)amida, [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34), [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35), [Aib8,Lys33,Arg34]GLP-1-(7-34), [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida,
55 [Aib8,Lys26,Arg34]GLP-1-(7-36)amida, [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys, [Aib8,Lys20,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(7-37)amida,
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida,
[DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida,
[DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida,
Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(7-37)Lys,
[Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-((7-37)Lys y
[Aib8,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37).
[0073] En un aspecto de la invención, el péptido GLP-1 es Arg18,Leu20,Gln34, Lys33(Nε-(γ-aminobutiroil(Nαhexadecanoil)))exendina-4-(7-45)-amida o Arg33, Leu20,Gln34,Lys18(Nε-(γ-aminobutiroil(Nαhexadecanoil)))exendina-4-(7-45)-amida.
[0074] El término "derivado" según se usa en este documento en relación con un péptido significa un péptido modificado químicamente o un análogo de éste, en el que al menos un sustituyente no está presente en el péptido sin modificar o un análogo de éste, es decir, un péptido que ha sido modificado covalentemente. Las modificaciones típicas son amidas, carbohidratos, grupos alquilo, grupos acilo, ésteres y similares.
[0075] Cualquier posición del aminoácido en el péptido, por ejemplo el péptido GLP-1, se puede derivar. En un aspecto de la invención, el residuo de aminoácido que se deriva contiene un grupo amino. En un aspecto el residuo de aminoácido derivado contiene un grupo amino. En otro aspecto, el residuo de aminoácido derivado contiene un grupo amino primario en una cadena lateral. En otro aspecto, el residuo de aminoácido derivado es lisina. En un aspecto de la invención, el residuo de aminoácido derivado es cisteína. En un aspecto de la invención, un residuo de aminoácido se deriva. En otro aspecto de la invención, el derivado según la invención sólo se deriva en una posición, por ejemplo, sólo se deriva un residuo de aminoácido.
[0076] Los ejemplos de residuos de aminoácidos que contienen un grupo amino son lisina, ornitina, lisina épsilon-Nalquilada como épsilon-N metillisina, O-aminoetilserina, O-aminopropilserina o serinas O alquiladas más largas que contienen un grupo amino primario o secundario en la cadena lateral. En otro aspecto de la invención, el residuo de aminoácido derivado contiene un grupo amino primario en una cadena lateral. Los ejemplos de residuos de aminoácidos que contienen un grupo amino primario son lisina, ornitina, O-aminoetilserina, O-aminopropilserina o serinas O alquiladas más largas que contienen un grupo amino primario en la cadena lateral.
[0077] En una realización el derivado del péptido GLP-1 según la invención es un agente insulinotrópico.
[0078] La expresión "agente insulinotrópico" según se usa en este documento significa un derivado que es un agonista del receptor de GLP-1 humano, es decir, un derivado que estimula la formación de cAMP en un medio adecuado que contiene el receptor del GLP-1 humano (un medio como el dado a conocer más adelante). La potencia de un agente insulinotrópico se determina calculando el valor de CE50 de la curva dosis-respuesta como se describe a continuación. Se cultivan células de riñón de hámster recién nacido (BHK) que expresan el receptor GLP-1 humano clonado (BHK467-12A) en medio DMEM con el agregado de 100 IU/mL penicilina, 100 µg/mL de estreptomicina, 5% de suero fetal de ternero y 0.5 mg/mL de Geneticina G-418 (Life Technologies). Las células se lavan dos veces en solución salina tamponada con fosfato y se recogen con Versene. Se preparan membranas plasmáticas a partir de las células por homogeneización con un Ultraturrax en tampón 1 (HEPES-Na 20 mM, EDTA 10 mM, pH 7.4). El homogeneizado se centrifuga a 48 000 x g durante 15 min a 4 °C. El sedimento se suspende por homogeneización en tampón 2 (HEPES-Na 20 mM, EDTA 0.1 mM, pH 7.4), después se centrifuga a 48 000 x g durante 15 min a 4 °C. El procedimiento de lavado se repite una vez más. El sedimento final se suspende en tampón 2 y se usa inmediatamente para los ensayos o se almacena a -80 °C.
[0079] El análisis funcional del receptor se realiza mediante la medición de AMP cíclico (cAMP) como una respuesta a la estimulación por el agente insulinotrópico. El cAMP formado se cuantifica mediante el kit de cAMP AlphaScreen™ (Perkin Elmer Life Sciences). Se llevan a cabo incubaciones en placas de microtitulación de 96 pocillos de media área en un volumen total de 50 µL de tampón 3 (Tris-HCl 50 mM, HEPES 5 mM, MgCl2 10 mM, pH 7.4) y con las adiciones siguientes: ATP 1 mM, GTP 1 µM, 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) 0.5 mM, 0.01% de Tween-20, 0.1% de BSA, 6 µg de preparación de membranas, 15 µg/mL de perlas aceptoras, 20 µg/mL de perlas dadoras preincubadas con cAMP biotiniliado 6 nM. Los derivados cuya actividad agonista se va a determinar se disuelven y diluyen preferentemente en tampón 3. GTP se prepara en el momento para cada experimento. La placa se incuba en la oscuridad con agitación lenta durante tres horas a temperatura ambiente seguido de recuento en el instrumento Fusion™ (Perkin Elmer Life Sciences). Se grafican las curvas de concentración-respuesta para cada derivado y se calculan los valores de CE50 utilizando un modelo logístico de 4 parámetros con Prism v. 4.0 (GraphPad, Carlsbad, CA).
[0080] La expresión "protegido contra DPP-IV" según se usa en este documento por referencia a un polipéptido, significa un polipéptido que ha sido modificado químicamente con el fin de tornar dicho derivado resistente a la peptidasa plasmática dipeptidil aminopeptidasa-4 (DPP-IV). La enzima DPP-IV en el plasma es conocida por estar
implicada en la degradación de varias hormonas peptídicas, por ej. GLP-1, GLP-2, exendina-4, etc. Por lo tanto, se está realizando un esfuerzo considerable para desarrollar análogos y derivados de los polipéptidos sensibles a la hidrólisis mediada por DPP-IV a fin de reducir la tasa de degradación por DPP-IV.
5 [0081] En un aspecto de la invención, el péptido GLP-1 es un péptido GLP-1 protegido contra DPPIV.
[0082] En un aspecto de la invención, dicho péptido GLP-1 es estabilizado contra la degradación por DPP-IV comparativamente con la estabilidad de la liraglutida.
10 [0083] En una realización un derivado según la invención es un derivado protegido contra DPP-IV que es más resistente al DPP-IV que la liraglutida.
[0084] La resistencia de un péptido a la degradación por la dipeptidil amino peptidasa IV se determina mediante el ensayo de degradación siguiente:
15 Se incuban alícuotas del péptido (5 nmol) a 37 °C con 1 µL de dipeptidil amino peptidasa IV purificada correspondiente a una actividad enzimática de 5 mU durante 10-180 minutos en 100 µL de tampón de trietilamina-HCl 0.1 M, pH 7.4. Las reacciones enzimáticas se terminan por adición de 5 µL de ácido trifluoroacético al 10%, y los productos de degradación del péptido se separan y se cuantifican usando análisis
20 de HPLC. Un método para realizar este análisis es: las mezclas se aplican sobre una columna de poro ancho Vydac C18 (poros de 30 nm, partículas de 5 µm) de 250 x 4.6 mm y se eluyen a una velocidad de flujo de 1 mL/min con gradientes lineales graduales de acetonitrilo en 0.1% de ácido trifluoroacético (0% de acetonitrilo durante 3 min, 0-24% de acetonitrilo durante 17 min, 24-48% de acetonitrilo durante 1 min) según Siegel et al., Regul. Pept. 1999; 79:93-102 y Mentlein et al. Eur. J. Biochem. 1993; 214:829-35. Los péptidos y sus productos
25 de degradación se pueden monitorear por su absorbancia a 220 nm (enlaces peptídicos) o 280 nm (aminoácidos aromáticos) y se cuantifican por integración de las áreas de sus picos con relación a la de los estándares. La velocidad de hidrólisis de un péptido por la dipeptidil aminopeptidasa IV se calcula a tiempos de incubación que resulten en menos de 10% de hidrólisis del péptido.
30 [0085] Alternativamente, la resistencia de un péptido a la degradación por la dipeptidil aminopeptidasa IV se determina mediante el ensayo de degradación siguiente:
Se incuban alícuotas del péptido (4 nmol) a 37 °C con 10.9 mU de dipeptidil aminopeptidasa IV purificada durante 22 horas, en 40 µL de tampón Tris-HCl 0.085 M, pH 8.0, en presencia o ausencia de 1.6% de 35 seroalbúmina humana. Luego de 0, 4 y 22 horas se toman muestras de 10 µl y se terminan las reacciones enzimáticas por mezcla con 100 µl de ácido trifluoroacético al 1%. Los productos de degradación del péptido se separan y se cuantifican mediante análisis de HPLC. Un método para realizar este análisis es: la mezcla se aplica en una columna Agilent Zorbax 300SB-C18 (partículas de 5 µm) de 150 x 2.1 mm y se eluyen a una velocidad de flujo de 0.5 mL/min con un gradiente lineal de ácido trifluoroacético al 0.1% a acetonitrilo 100%
40 con 0.07% de TFA en 30 minutos. Los péptidos y sus productos de degradación se monitorean por su absorbancia a 214 nm, y se cuantifican por integración de las áreas de sus picos. La estabilidad de un péptido frente a la dipeptidil aminopeptidasa IV se determina como el área del pico del péptido intacto con relación a la suma de las áreas de los picos del péptido intacto y el producto de degradación que carece de los dos aminoácidos amino terminales después de la escisión.
45 [0086] La expresión "farmacéuticamente aceptable" según se usa en este documento significa adecuado para aplicaciones farmacéuticas normales, es decir, que no produce eventos adversos graves en los pacientes, etc.
[0087] El término "excipiente" según se usa en este documento significa los compuestos químicos que normalmente 50 se agregan a las composiciones farmacéuticas, por ej. tampones, agentes de tonicidad, conservantes y similares.
[0088] La expresión "cantidad eficaz" según se usa en este documento significa una dosis suficiente para ser eficaz para tratar a un paciente en comparación con no tratarlo.
55 [0089] La expresión "composición farmacéutica" según se usa en este documento significa un producto que contiene un derivado activo según la invención junto con excipientes farmacéuticos como tampón, conservante y opcionalmente un modificador de la tonicidad y/o un estabilizante. Por lo tanto una composición farmacéutica también se conoce como una formulación farmacéutica.
60 [0090] La expresión "tratamiento de una enfermedad" según se usa en este documento significa el manejo y la atención de un paciente que presenta una enfermedad, una afección o un trastorno. El propósito del tratamiento es combatir la enfermedad, la afección o el trastorno. El tratamiento incluye la administración del derivado activo según la invención para eliminar o controlar la enfermedad, la afección o el trastorno, así como para aliviar los síntomas o las complicaciones asociados a la enfermedad, la afección o el trastorno.
[0091] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que se puede unir a la albúmina y al receptor de GLP-1 simultáneamente.
[0092] En otro aspecto la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que se une al receptor de GLP-1 con una afinidad inferior a 100 nM, preferentemente inferior a 30 nM en presencia de 2% de albúmina. En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 cuya afinidad por el receptor de GLP-1 sólo disminuye parcialmente cuando se compara la afinidad en presencia de una concentración muy baja (por ej. 0.005% a 0.2%) de albúmina humana con la afinidad en presencia de 2% de albúmina humana. El cambio en la afinidad de unión en estas condiciones es de menos de 50 veces, preferentemente de menos de 30 veces y más preferentemente de menos de 10 veces.
[0093] En otro aspecto la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que es estable frente a la degradación química que normalmente se observa con exendina-4 especialmente la oxidación y la desamidación.
[0094] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene una alta potencia en el receptor. Para análogos con unión a la albúmina muy fuerte, con afinidad de unión a la albúmina menor de 100 nM, la potencia de GLP-1 es mejor que 3 micromolar y preferentemente la potencia es mejor que 1 micromolar en el ensayo de cAMP.
[0095] Para derivados con unión a la albúmina fuerte, con afinidad de unión a la albúmina menor de 500 nM, la potencia de GLP-1 es mejor que 1 micromolar y preferentemente la potencia es mejor que 0.2 micromolar en el ensayo de cAMP.
[0096] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene una alta afinidad de unión a la albúmina. Los derivados de esta invención tienen una afinidad de unión a la albúmina que es menor de 1 micromolar. Más preferentemente los derivados de esta invención tienen una afinidad de unión a la albúmina que es menor de 500 nM y aún más preferentemente menor de 200 nM o incluso menor de 100 nM.
[0097] La afinidad de unión a la albúmina se puede medir usando el análisis siguiente:
Ensayo de unión a la albúmina:
La afinidad de los derivados de GLP-1 por la seroalbúmina humana (HSA) se mide mediante un ensayo de competición de centelleo por proximidad (SPA).Se incuban perlas de SPA-estreptavidina (GE Healthcare RPNQ0009) con HSA biotinilada durante 5 horas. Las perlas se lavan con tampón para eliminar la HSA sin unirLas perlas se mezclan con un análogo acilado de GLP-1 marcado con 125I como N-épsilon26-[2-(2-{2-[2(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-(17-carboxi-heptadecanoilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil] [Aib8,125I-Tyr19,Arg34]GLP-1(7-37) o N-épsilon37-[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-(1H-tetrazol-5il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino)-4carboxibutirilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,125I-Tyr19,Glu22,Arg26,34,Lys37] GLP-1(7-37)-NH2 en un tampón que contiene Hepes 100 mM, NaCl 100 mM, MgSO4 10 mM, 0.025% de Tween-20, pH 7.4. La mezcla se transfiere con pipeta a los pocillos de una placa Perkin Elmer Optiplate-96 6005290 (100 µl por pocillo) y se agregan 100 µl de una serie de diluciones del derivado de GLP-1 que se va a medir en el mismo tampón. Después de 20 horas de balanceo suave a temperatura ambiente las placas se centrifugan y se cuentan en un TopCounter. Se grafican las cpm unidas como una función de la concentración del derivado de GLP-1 y se usa el valor de CE50 de la curva de competición como una medida de la afinidad del derivado por HSA
[0098] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado del péptido GLP-1 con alta afinidad de unión al dominio N-terminal extracelular aislado del receptor GLP-1R (nGLP-1R). La afinidad se mide por la habilidad para desplazar a 125I-Exendina-4(9-39) de la unión a nGLP-1R. En este ensayo la exendina-4 se une a nGLP-1R con un valor de CI50 de 5 nM, GLP-1(7-37) se une a nGLP-1R con un valor de CI50 de 1120 nM y la liraglutida se une a nGLP-1R con un valor de CI50 de 1000 nM. En un aspecto, los derivados de esta invención se unen a nGLP-1R con un valor de CI50 inferior al de la liraglutida. Más preferentemente los derivados de esta invención se unen a nGLP-1R con un valor de CI50 inferior a 100 nM y aún más preferentemente inferior a 10 nM o incluso inferior a 5 nM.
[0099] La unión a nGLP-1R se mide en el ensayo siguiente: la proteína nGLP-1R se prepara como se describió previamente (Runge et al 2007), se biotinila y se inmoviliza en perlas de SPA-estreptavidina. nGLP1R en NaHCO3 0.1M se biotinila usando 75 µg de BNHS (Sigma H1759) para 1 mg de proteína. A continuación nGLP1R biotinilada se dializa contra PBS. Todo los reactivos y derivados se diluyen en PBS con 0.05% v/v de Tween 20. El ensayo de unión se lleva a cabo en placas de 96 pocillos OptiPlates (PerkinElmer 6005290) en un volumen final de 200 µl. Cada pocillo contiene 2 mg de perlas de SPA recubiertas con estreptavidina (PerkinElmer RPNQ007), 0.1 pmol de nGLP1R biotinilada, 50 pCi de 125I-Exendina (9-39) y el péptido de prueba en concentraciones finales que varían de 1000 nM a 0.064 nM. Las placas se incuban en un agitador a temperatura ambiente durante 3 horas. Las partículas
de SPA sedimentan por centrifugación durante 10 min a 1500 rpm y las placas se cuentan en un TopCount-NXT (PerkinElmer).
[0100] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene una semivida 5 terminal sustancialmente mayor en un modelo de roedor y de no roedor con relación a la liraglutida.
[0101] En un aspecto de esta invención, la semivida terminal en un modelo de roedor y de no roedor se mejora por lo menos 3 veces en relación con la liraglutida.
10 [0102] En otro aspecto de esta invención, la semivida terminal en un modelo no roedor se mejora por lo menos 6 veces en relación con la liraglutida.
[0103] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene una semivida in vivo de al menos 10 horas luego de la administración i.v. a ratas.
15 [0104] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene una semivida in vivo de al menos 50 h luego de la administración s.c. a minicerdos y preferentemente una semivida in vivo de al menos 80 h luego de la administración s.c. a minicerdos.
20 [0105] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que se puede formular en partículas adecuadas para la administración pulmonar.
[0106] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que es física y químicamente estable a pH neutro, más preferentemente en el rango 6-8.
25 [0107] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que tiene poca o ninguna tendencia a agregarse. En un aspecto la tendencia a la agregación mejora significativamente en relación con la tendencia a la agregación de la liraglutida cuando fue analizada en un ensayo de tioflavina.
30 [0108] En otro aspecto, la presente invención da a conocer un derivado de un péptido GLP-1 que es adecuado para la administración pulmonar. Esto puede ser en relación con los aspectos físicos o químicos que son útiles para una formulación pulmonar. Alternativamente, los derivados son estables frente a la degradación por enzimas en las vías respiratorias y los pulmones.
35 [0109] En realizaciones de la invención se logra una combinación de las características anteriores.
[0110] La expresión "porción de unión a la albúmina" según se usa en este documento significa un residuo que se une no covalentemente a la seroalbúmina humana. El residuo de unión a la albúmina unido al polipéptido terapéutico tiene habitualmente una afinidad de unión a la albúmina que es inferior a 1 micromolar, preferentemente inferior a
40 500 nM y aún más preferentemente inferior a 200 nM o incluso inferior a 100 nM.
[0111] Se conoce una gama de residuos de unión a la albúmina entre las porciones lipófilas lineales y ramificadas que contienen 4-40 átomos de carbono que tienen un grupo ácido distal.
45 [0112] La expresión "conector hidrófilo" según se usa en este documento significa un espaciador que separa un péptido y un residuo de unión a la albúmina con una porcióno químico que contiene al menos 5 átomos que no son de hidrógeno de los cuáles 30-50% de éstos son N u O.
[0113] En las fórmulas siguientes los enlaces terminales de los grupos unidos se deben considerar como enlaces de 50 unión y no que finalizan en grupos metileno, a menos que se indique lo contrario.
Composiciones y usos farmacéuticos
[0114] Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica que contenga un
55 derivado según la presente invención que esté presente en una concentración de 0.1 mg/mL a 25 mg/mL, y donde dicha formulación tenga un pH de 3.0 a 9.0. La formulación también puede contener un sistema de tampón, conservante(s), agente(s) de tonicidad, quelante(s), estabilizantes y surfactantes.
[0115] En una realización de la invención, la formulación farmacéutica es una formulación acuosa, es decir una 60 formulación que contiene agua. Dicha formulación es habitualmente una solución o una suspensión.
[0116] En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica es una solución acuosa.
[0117] La expresión "formulación acuosa" se define como una formulación que contiene al menos 50% p/p de agua.
Asimismo, la expresión "solución acuosa" se define como una solución que contiene al menos 50% p/p de agua, y la expresión "suspensión acuosa" se define como una suspensión que contiene al menos 50% p/p de agua.
[0118] En otra realización, la formulación farmacéutica es una formulación liofilizada, en la que el médico o el paciente añade solventes o diluyentes antes de usarla.
[0119] En otra realización, la formulación farmacéutica es una formulación seca (por ej. liofilizada o secada por aspersión) pronta para usar sin ninguna disolución previa.[0120]
[0120] En otro aspecto, la invención da a conocer una formulación farmacéutica que consiste en una solución acuosa de un derivado según la invención y un tampón, donde dicho derivado está presente en una concentración de 0.1 mg/mL o mayor y donde dicha formulación tiene un pH entre aproximadamente 3.0 y aproximadamente 9.0.
[0121] En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 7.0 y aproximadamente 9.5. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 3.0 y aproximadamente 7.0. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 5.0 y aproximadamente 7.5. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 7.5 y aproximadamente 9.0. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 7.5 y aproximadamente 8.5. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 6,0 y aproximadamente 7.5. En otra realización de la invención, el pH de la formulación es entre aproximadamente 6.0 y aproximadamente 7.0. En otra realización, el pH de la formulación farmacéutica es entre 8.0 y 8.5.
[0122] En una realización de la invención, cada dosis administrada contiene de 0.01 mg -10 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene más de 0.05 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene más de 0.1 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 10 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 9 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 8 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 7 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 6 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene hasta 5 mg de derivado activo. En una realización, la dosis administrada contiene de 0.2 mg a 5 mg de derivado activo.
[0123] En otra realización de esta invención el tampón se elige del grupo que consiste en acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, fosfato ácido de sodio, fosfato ácido disódico, fosfato de sodio, y tris(hidroximetil)-aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico o sus mezclas. Cada uno de estos tampones específicos constituye una realización alternativa de esta invención.
[0124] En otra realización de la invención, la formulación contiene además un conservante farmacéuticamente aceptable. En otra realización de la invención el conservante se elige del grupo constituido por fenol, o-cresol, mcresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol y tiomersal, bronopol, ácido benzoico, imidurea, clorhexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3pclorfenoxipropano-1,2-diol) o sus mezclas. En una realización, el conservante es fenol o m-cresol. En otra realización de la invención el conservante está presente en una concentración entre 0.1 mg/mL y 20 mg/mL. En otra realización de la invención el conservante está presente en una concentración entre 0.1 mg/mL y 5 mg/mL. En otra realización de la invención el conservante está presente en una concentración entre 5 mg/mL y 10 mg/mL. En otra realización de la invención el conservante está presente en una concentración entre 10 mg/mL y 20 mg/mL. Cada uno de estos conservantes específicos constituye una realización alternativa de esta invención. El uso de un conservante en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, 1995.
[0125] En otra realización de la invención, la formulación contiene además un agente isotónico. En otra realización de la invención, el agente isotónico se elige del grupo constituido por una sal (por ej. cloruro de sodio), un azúcar o alcohol de azúcar, un aminoácido (por ej. L-glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina), un alditol (por ej. glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol) polietilenglicol (por ej. PEG400), o sus mezclas. En una realización, el agente de isotonicidad es propilenglicol. Se puede emplear cualquier azúcar como mono, di, o polisacáridos, o glucanos solubles en agua, incluidas por ejemplo fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, alfa y beta HPCD, almidón soluble, hidroxietil almidón y carboximetilcelulosa de sodio. En una realización, el aditivo azúcar es sacarosa. El alcohol de azúcar se define como un hidrocarburo C4-C8 que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol. En una realización, el aditivo alcohol de azúcar es manitol. Los azúcares o alcoholes de azúcares mencionados antes se pueden utilizar individualmente o en combinación. No existen límites fijos para la cantidad empleada, en tanto el azúcar o el alcohol de azúcar sean solubles en la preparación líquida y no afecten adversamente a los efectos
estabilizantes logrados utilizando los métodos de esta invención. En una realización, la concentración del azúcar o del alcohol de azúcar es entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 150 mg/mL. En otra realización de la invención el agente isotónico está presente en una concentración entre 1 mg/mL y 50 mg/mL. En otra realización de la invención el agente isotónico está presente en una concentración entre 1 mg/mL y 7 mg/mL. En una realización de la invención el agente isotónico está presente en una concentración entre 5 mg/mL y 7 mg/mL. En otra realización de la invención el agente isotónico está presente en una concentración entre 8 mg/mL y 24 mg/mL. En otra realización de la invención el agente isotónico está presente en una concentración entre 25 mg/mL y 50 mg/mL. Cada uno de estos agentes isotónicos específicos constituye una realización alternativa de la invención. El uso de un agente isotónico en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, 1995.
[0126] En otra realización de la invención, la formulación contiene además un quelante. En otra realización de la invención el quelante se elige entre sales del ácido etilendiaminotetracético (EDTA), ácido cítrico, ácido aspártico y sus mezclas. En otra realización de la invención el quelante está presente en una concentración entre 0.1 mg/mL y 5 mg/mL. En otra realización de la invención el quelante está presente en una concentración entre 0.1 mg/mL y 2 mg/mL. En otra realización de la invención el quelante está presente en una concentración entre 2 mg/mL y 5 mg/mL. Cada uno de estos quelantes específicos constituye una realización alternativa de la invención. El uso de un quelante en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, 1995. En otra realización de la invención, la formulación contiene además un estabilizante. El uso de un estabilizante en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, 1995.
[0127] Más particularmente, las composiciones de la invención son composiciones farmacéuticas líquidas estabilizadas, cuyos componentes terapéuticamente activos incluyen un polipéptido que presenta posiblemente formación de agregados durante el almacenamiento en formulaciones farmacéuticas líquidas.
[0128] Por "formación de agregados" se entiende una interacción física entre las moléculas del polipéptido que resulta en la formación de oligómeros, que pueden permanecer solubles, o grandes agregados visibles que precipitan de la solución. Por "durante el almacenamiento" se entiende una composición o formulación farmacéutica líquida que una vez preparada, no es administrada inmediatamente a un sujeto. Por el contrario, luego de la preparación, se acondiciona para el almacenamiento, ya sea en forma líquida, congelada o en forma seca para su posterior reconstitución en forma líquida o en otra forma adecuada para la administración a un sujeto. Por "forma seca" se entiende que la composición o formulación farmacéutica líquida se seca ya sea mediante secado por congelación (por ej. liofilización; véase, por ejemplo, Williams y Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol. 38:48-59), secado por aspersión (véase Masters (1991) en Spray-Drying Handbook (5ª ed; Longman Scientific and Technical, Essez, Reino Unido), pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel. Ind. Pharm. 18:1169-1206; y Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11:12-20), o secado al aire (Carpenter y Crowe (1988) Cryobiology 25:459-470; y Roser (1991) Biopharm. 4:47-53). La formación de agregados por un polipéptido durante el almacenamiento de una composición farmacéutica líquida puede afectar adversamente la actividad biológica de dicho polipéptido, produciendo una pérdida de la eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la formación de agregados puede causar otros problemas como bloqueo de tubos, membranas, o bombas cuando la composición farmacéutica que contiene el polipéptido se administra usando un sistema de infusión.
[0129] Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden contener una cantidad de una base de aminoácido suficiente para disminuir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de la composición. Por "base de aminoácido" se entiende un aminoácido o una combinación de aminoácidos, en la que está presente cualquier aminoácido en su forma de base libre o su forma de sal. Cuando se usa una combinación de aminoácidos, todos los aminoácidos pueden estar presentes en sus formas de base libre, todos pueden estar presentes en sus formas de sal, o algunos pueden estar presentes en sus formas de base libre en tanto otros están presentes en sus formas de sal. En una realización, los aminoácidos para usar en la preparación de las composiciones de la invención son los que tienen una cadena lateral cargada, como arginina, lisina, ácido aspártico y ácido glutámico. Cualquier estereoisómero (es decir, L, D, o una mezcla de ambos) de un aminoácido particular (por ej. metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptófano, treonina y sus mezclas) o combinaciones de estereoisómeros, pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas de la invención siempre que el aminoácido particular esté presente en su forma de base libre o en su forma de sal. En una realización se usa el estereoisómero L. Las composiciones de la invención también se pueden formular con análogos de estos aminoácidos. Por “análogo de aminoácido” se entiende un derivado del aminoácido natural que produce el efecto deseado de disminuir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención. Los análogos adecuados de la arginina incluyen, por ejemplo, aminoguanidina, ornitina y N-monoetil L-arginina, los análogos adecuados de la metionina incluyen etionina y butionina y los análogos adecuados de la cisteína incluyen S-metil-L-cisteína. Al igual que con los otros aminoácidos, los análogos de aminoácidos se incorporan en las composiciones ya sea en su forma de base libre como de sal. En otra realización de la invención los aminoácidos o análogos de aminoácidos se usan en una
concentración suficiente para evitar o retrasar la agregación de la proteína.
[0130] En otra realización de la invención, se puede agregar metionina (u otros aminoácidos o análogos de aminoácidos sulfúricos) para inhibir la oxidación de los residuos de metionina a sulfóxido de metionina cuando el polipéptido que actúa como el agente terapéutico es un polipéptido que contiene al menos un residuo de metionina propenso a dicha oxidación. Por “inhibir” se entiende la acumulación mínima en el tiempo de especies de metionina oxidada. Inhibir la oxidación de metionina resulta en una mayor retención del polipéptido en su forma molecular apropiada. Se puede usar cualquier estereoisómero de la metionina (L o D) o sus combinaciones. La cantidad a agregar debe ser una cantidad suficiente para inhibir la oxidación de los residuos de metionina de modo que la cantidad de sulfóxido de metionina sea aceptable para los organismos reguladores. Esto significa que la composición no contenga más de aproximadamente 10% a aproximadamente 30% de sulfóxido de metionina. Generalmente, esto se puede lograr agregando metionina de modo que la relación entre la metionina agregada y los residuos de metionina varíe entre aproximadamente 1:1 y aproximadamente 1000:1, por ejemplo entre 10:1 y aproximadamente 100:1.
[0131] En otra realización de la invención, la formulación contiene además un estabilizante elegido del grupo de los polímeros de alto peso molecular o compuestos de bajo peso molecular.
[0132] En otra realización de la invención, el estabilizante se elige entre polietilenglicol (por ej. PEG 3350), alcohol polivinílico (PVA), polivinilpirrolidona, carboxi-/hidroxicelulosa o sus derivados (por ej. H PC, HPC-SL, HPC-L y HPMC), ciclodextrinas, sustancias que contienen azufre como monotioglicerol, ácido tioglicólico y 2-metiltioetanol, y diferentes sales (por ej. cloruro de sodio). Cada uno de estos estabilizantes específicos constituye una realización alternativa de esta invención.
[0133]Las composiciones farmacéuticas también pueden contener estabilizantes adicionales, que mejoren aún más la estabilidad de un polipéptido terapéuticamente activo.
[0134] Los estabilizantes de particular interés para la presente invención incluyen, pero no exclusivamente, metionina y EDTA, que protegen al polipéptido contra la oxidación de la metionina, y un surfactante no iónico, que protege al polipéptido contra la agregación asociada a la congelación-descongelación o al cizallamiento mecánico.
[0135] En otra realización de la invención, la formulación contiene además un surfactante. En otra realización de la invención, la composición farmacéutica contiene dos surfactantes diferentes. El término “surfactante” según se usa en este documento se refiere a cualquier molécula o ión que esté constituido por una parte soluble en agua (hidrófila), la cabeza y un segmento soluble en grasa (lipófilo). Los surfactantes se acumulan preferentemente en las interfases, en las que la parte hidrófila se orienta hacia el agua (fase hidrófila) y la parte lipófila hacia la fase oleosa o hidrófoba (es decir, vidrio, aire, aceite, etc.). La concentración a la cual los surfactantes comienzan a formar micelas se conoce como la concentración micelar crítica o CMC. Además los surfactantes reducen la tensión superficial de un líquido. Los surfactantes se conocen también como compuestos anfipáticos. El término “detergente” es un sinónimo utilizado para los surfactantes en general. Los surfactantes aniónicos se pueden elegir del grupo de: ácido quenodesoxicólico, sal de sodio del ácido quenodesoxicólico, ácido cólico, ácido deshidrocólico, ácido desoxicólico, éster metílico del ácido desoxicólico, digitonina, digitoxigenina, N,N-dimetildodecilamina N-óxido, docusato sódico, sal de sodio del ácido glicoquenodesoxicólico, ácido glicocólico hidratado, ácido glicodesoxicólico monohidratado, sal de sodio del ácido glicodesoxicólico, sal de sodio del ácido glicodesoxicólico, sal disódica de 3-sulfato del ácido glicolitocólico, éster etílico del ácido glicolitocólico, sal de sodio de N-lauroilsarcosina, sal de sodio de N-lauroilsarcosina, Nlauroilsarcosina, N-lauroilsarcosina, dodecil sulfato de litio, Lugol, sal de sodio del ácido 1-octanosulfónico, sal de sodio del ácido 1-octanosulfónico, 1-butanosulfonato de sodio, 1-decanosulfonato de sodio, 1-dodecanosulfonato de sodio, 1-heptanosulfonato de sodio, 1-heptanosulfonato de sodio, 1-nonanosulfonato de sodio, 1-propanosulfonato de sodio monohidratado, 2-bromoetansulfonato de sodio, colato de sodio hidratado, bilis de buey o de oveja, colato de sodio hidratado, colato de sodio, desoxicolato de sodio, dodecil sulfato de sodio, dodecil sulfato de sodio, hexanosulfonato de sodio, octil sulfato de sodio, pentanosulfonato de sodio, taurocolato de sodio, sal de sodio del ácido tauroquenodesoxicólico, sal de sodio del ácido taurodesoxicólico monohidratada, sal disódica de 3-sulfato del ácido taurolitocólico, sal de sodio del ácido tauroursodesoxicólico, dodecil sulfato de Trizma® , DSS (docusato de sodio, Nº de reg. CAS [577-11-7]), docusato de calcio, Nº de reg. CAS [128-49-4]), docusato de potasio, Nº de reg. CAS [7491-09-0]), SDS (dodecil sulfato de sodio o lauril sulfato de sodio), dodecilfosfocolina (FOS-Colina-12), decilfosfocolina (FOS-Colina-10), nonilfosfocolina (FOS-Colina-9), ácido dipalmitoil fosfatídico, caprilato de sodio y/o ácido ursodesoxicólico. Los surfactantes catiónicos se pueden elegir del grupo de: bromuro de alquiltrimetilamonio
[0136] cloruro de benzalconio, cloruro de benzalconio, cloruro de bencildimetilhexadecilamonio, cloruro de bencildimetiltetradecilamonio, tetracloroyodato de benciltrimetilamonio, bromuro de dimetildioctadecilamonio, bromuro de dodeciletildimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de dodeciltrimetilamonio, bromuro de etilhexadecidimetilamonio, bromuro de hexadeciltrimetilamonio, bromuro de hexadeciltrimetilamonio,
polioxietileno 10-N-sebo-1,3-diaminopropano, bromuro de tonzonio y/o bromuro de trimetil(tetradecil)amonio. Los surfactantes no iónicos se pueden elegir del grupo de: BigCHAP, Bis(polietilenglicol bis[imidazoil carbonil), copolímeros en bloque como óxido de polietileno/óxido de polipropileno, copolímeros en bloque como poloxámeros, poloxámero 188 y poloxámero 407, Brij® 35, Brij® 56, Brij® 72, Brij® 76, Brij® 92V, Brij® 97, Brij® 58P, Cremophor® EL, decaetilenglicol monododecil éter, N-decanoil-N-metilglucamina, n-dodecanoil-N-metilglucamida, alquilpoliglucósidos, aceite de ricino etoxilado, heptaetilenglicol monodecil éter, heptaetilenglicol monododecil éter, heptaetilenglicol monotetradecil éter, hexaetilenglicol monododecil éter, hexaetilenglicol monohexadecil éter, hexaetilenglicol monooctadecil éter, hexaetilenglicol monotetradecil éter, Igepal CA-630, Igepal CA-630, metil-6-O(N-heptilcarbamoil)-beta-D-glucopiranósido, nonaetilenglicol monododecil éter, N-Nonanoil-N-metilglucamina, NNonanoil-N-metilglucamina, octaetilenglicol monodecil éter, octaetilenglicol monododecil éter, octaetilenglicol monohexadecil éter, octaetilenglicol monooctadecil éter, octaetilenglicol monotetradecil éter, octil-β-Dglucopiranósido, pentaetilenglicol monodecil éter, pentaetilenglicol monododecil éter, pentaetilenglicol monohexadecil éter, pentaetilenglicol monohexil éter, pentaetilenglicol monooctadecil éter, pentaetilenglicol monooctil éter, polietilenglicol diglicidil éter, polietilenglicol éter W-1, polioxietileno 10 tridecil éter, estearato de polioxietileno 100, polioxietileno 20 isohexadecil éter, polioxietileno 20 oleil éter, estearato de polioxietileno 40, estearato de polioxietileno 50, estearato de polioxietileno 8, polioxietileno bis(imidazolil carbonil), estearato de polioxietileno 25 propilenglicol, saponina de corteza de Quillay, Span® 20, Span® 40, Span® 60, Span® 65, Span® 80, Span® 85, Tergitol, tipo 15-S-12, Tergitol, tipo 15-S-30, Tergitol, tipo 15-S-5, Tergitol, tipo 15-S-7, Tergitol, tipo 15-S9, Tergitol, tipo NP-10, Tergitol, tipo NP-4, Tergitol, tipo NP-40, Tergitol, tipo NP-7, Tergitol, tipo NP-9, tetradecil-β-Dmaltósido, tetraetilenglicol monodecil éter, tetraetilenglicol monododecil éter, tetraetilenglicol monotetradecil éter, trietilenglicol monodecil éter, trietilenglicol monododecil éter, trietilenglicol monohexadecil éter, trietilenglicol monooctil éter, trietilenglicol monotetradecil éter, Triton CF-21, Triton CF-32, Triton DF-12, Triton DF-16, Triton GR5M, Triton QS-15, Triton QS-44, Triton X-100, Triton X-102, Triton X-15, Triton X-151, Triton X-200, Triton X-207, Triton® X-100, Triton® X-114, solución de Triton® X-165, solución de Triton® X-305, Triton® X-405, Triton® X-45, Triton® X-705-70, TWEEN® 20, TWEEN® 40, TWEEN® 60, TWEEN® 6, TWEEN® 65, TWEEN® 80, TWEEN® 81, TWEEN® 85, Tiloxapol, esfingofosfolípidos (esfingomielina), y esfingoglucolípidos (ceramidas, gangliósidos), fosfolípidos y/o n-undecil β-D-glucopiranósido. Los surfactantes zwitteriónicos se pueden elegir del grupo de: CHAPS, CHAPSO, sal interna de 3(decildimetilamonio)propanosulfonato, sal interna de 3-(dodecildimetilamonio)-propanosulfonato, sal interna de 3(dodecildimetilamonio)propanosulfonato, 3-(N,N-dimetilmiristilamonio)propanosulfonato, 3-(N,N-dimetiloctadecilamonio)propanosulfonato, sal interna de 3-(N,N-dimetiloctilamonio)propanosulfonato, 3-(N,Ndimetilpalmitilamonio)propanosulfonato, N-alquil-N,N-dimetilamonio-1-propanosulfonato, 3-colamido-1propildimetilamonio-1-propanosulfonato, dodecilfosfocolina, miristoil lisofosfatidilcolina, Zwittergent 3-12 (N-dodecilN,N-dimetil-3-amonio-1-propanosulfonato), Zwittergent 3-10 (sal interna de 3-(decildimetil-amonio)propanosulfonato), Zwittergent 3-08 (3-(octildimetil-amonio)propanosulfonato), glicerofosfolípidos (lecitina, cefalinas, fosfatidilserina), gliceroglucolípidos (galactopiranósido), derivados alquil, alcoxil (alquil éster), alcoxi (alquil éter) de lisofosfatidil y fosfatidilcolina, por ej. lauroil y miristoil derivados de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina, y modificaciones del grupo de cabeza polar, es decir colinas, etanolaminas, ácido fosfatídico, serinas, treoninas, glicerol, inositol, lisofosfatidilserina y lisofosfatidiltreonina, acilcarnitinas y derivados, derivados Nbeta-acilados de lisina, arginina o histidina, o derivados de cadena lateral acilada de lisina o arginina, derivados Nbeta-acilados de dipéptidos que contengan cualquier combinación de lisina, arginina o histidina y un aminoácido neutro o ácido, derivados Nbetaacilados de un tripéptido que contengan cualquier combinación de un aminoácido neutro y dos aminoácidos cargados, o el surfactante se puede elegir del grupo de derivados de imidazolina, ácidos grasos de cadena larga y sus sales C6-C12 (por ej. ácido oleico y ácido caprílico), N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amonio-1-propanosulfonato, surfactantes aniónicos monovalentes (alquil-aril-sulfonatos), palmitoil lisofosfatidil-L-serina, lisofosfolípidos (por ej. ésteres 1-acil-sn-glicero-3-fosfato de etanolamina, colina, serina o treonina), o sus mezclas.
[0137] El término "alquil-poliglucósidos" según se usa en este documento se refiere a una cadena C5-20-alquilo, alquenilo o -alquinilo lineal o ramificada que está sustituida con una o más porciones glucósido como maltósido, sacárido, etc. Las realizaciones de estos alquil-poliglucósidos incluyen C6-18-alquil-poliglucósidos. Las realizaciones específicas de estos alquil-poliglucósidos incluyen las cadenas de número par de carbonos como las cadenas alquilo C6, C8, C10, C12, C14, C16, C18 y C20. Realizaciones específicas de las porciones glucósido incluyen piranósido, glucopiranósido, maltósido, maltotriósido y sacarosa. En realizaciones de la invención, menos de 6 porciones glucósido están unidas al grupo alquilo. En realizaciones de la invención, menos de 5 porciones glucósido están unidas al grupo alquilo. En realizaciones de la invención, menos de 4 porciones glucósido están unidas al grupo alquilo. En realizaciones de la invención, menos de 3 porciones glucósido están unidas al grupo alquilo. En realizaciones de la invención, menos de 2 porciones glucósido están unidas al grupo alquilo. Realizaciones específicas de alquil-poliglucósidos son alquil-glucósidos como n-decil β-D-glucopiranósido, decil β-Dmaltopiranósido, dodecil β-D-glucopiranósido, n-dodecil β-D-maltósido, n-dodecil β-D-maltósido, n-dodecil β-Dmaltósido, tetradecil β-D-glucopiranósido, decil β-D-maltósido, hexadecil β-D-maltósido, decil β-D-maltotriósido, dodecil β-D-maltotriósido, tetradecil β-D-maltotriósido, hexadecil β-D-maltotriósido, n-dodecil-sacarosa, n-decilsacarosa, monocaprato de sacarosa, monolaurato de sacarosa, monomiristato de sacarosa y monopalmitato de sacarosa.
[0138] El uso de un surfactante en composiciones farmacéuticas es bien conocido por los expertos. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19ª Edición, 1995.
[0139] En otra realización de la invención, la formulación contiene además inhibidores de proteasas como EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) y benzamidina HCl, pero también se pueden utilizar otros inhibidores de proteasas disponibles en el comercio. El uso de un inhibidor de proteasas es particularmente útil en composiciones farmacéuticas que contienen zimógenos de proteasas para inhibir la autocatálisis.
[0140] Es posible que estén presentes otros ingredientes en la formulación farmacéutica del péptido de la presente invención. Dichos ingredientes adicionales pueden incluir humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes de masa, modificadores de la tonicidad, quelantes, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ej. seroalbúmina humana, gelatina o proteínas) y un zwitterión (por ej. un aminoácido como betaína, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina). Dichos ingredientes adicionales, por supuesto, no deben afectar adversamente la estabilidad general de la formulación farmacéutica de la presente invención.
[0141] Las composiciones farmacéuticas que contienen un derivado según la presente invención se pueden administrar a un paciente que necesita dicho tratamiento en varios sitios, por ejemplo, tópicamente, por ejemplo, en sitios de la piel y la mucosa, en sitios que eluden la absorción, por ejemplo, la administración en una arteria, en una vena, en el corazón y en sitios que implican absorción, por ejemplo, la administración en la piel, debajo de la piel en un músculo o en el abdomen.
[0142] La administración de composiciones farmacéuticas según la invención puede realizarse a través de varias vías de administración, por ejemplo, lingual, sublingual, bucal, en la boca, oral, en el estómago y los intestinos, nasal, pulmonar, por ejemplo, a través de los bronquiolos y alveolos o una combinación de éstos, epidérmica, dérmica, transdérmica, vaginal, rectal, ocular, por ejemplo a través de la conjuntiva, ureteral y parenteral a pacientes que necesitan dicho tratamiento.
[0143] Las composiciones de la presente invención se pueden administrar en varias formas farmacéuticas, por ejemplo como soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, emulsión múltiple, espumas, pomadas, pastas, yesos, ungüentos, comprimidos, comprimidos recubiertos, goma de mascar, enjuagues, cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina blanda y cápsulas de gelatina dura, supositorios, cápsulas rectales, gotas, geles, atomizaciones, polvos, aerosoles, inhalantes, gotas oculares, ungüentos oftálmicos, enjuagues oftálmicos, pesarios vaginales, anillo vaginales, ungüentos vaginales, solución de inyección, soluciones que se transforman in situ, por ejemplo gelificación in situ, solidificación in situ, precipitación in situ, cristalización in situ, solución de infusión e implantes. Las composiciones de la invención también se pueden combinar con, o unir a, por ejemplo a través de interacciones covalentes, hidrófobas y electrostáticas, un portador farmacéutico, un sistema de administración del fármaco y un sistema de administración del fármaco avanzado para mejorar aún más la estabilidad del derivado de la presente invención, aumentar la biodisponibilidad, aumentar la solubilidad, disminuir los efectos adversos, lograr la cronoterapia bien conocida por los expertos y aumentar la obediencia del paciente, o cualquier combinación de éstos. Los ejemplos de portadores, sistemas de administración del fármaco y sistemas de administración del fármaco avanzados incluyen, pero no exclusivamente, polímeros, por ejemplo celulosa y derivados, polisacáridos, por ejemplo dextrano y derivados, almidón y derivados, poli (vinil alcohol), polímeros de acrilato y metacrilato, ácido poliláctico y poliglicólico y copolímeros en bloque de ellos, polietilenglicoles, proteínas portadoras, por ejemplo albúmina, geles, por ejemplo, sistemas de termogelificación, por ejemplo sistemas de copolímeros en bloque bien conocidos por los expertos, micelas, liposomas, microesferas, nanopartículas, cristales líquidos y sus dispersiones, fase L2 y sus dispersiones, bien conocidas por los expertos en el comportamiento de fases en sistemas lípido-agua, micelas poliméricas, emulsiones múltiples, autoemulsión, automicroemulsión, ciclodextrinas y sus derivados, y dendrímeros.
[0144] Las composiciones de la presente invención son útiles en la formulación de sólidos, semisólidos, polvos y soluciones para la administración pulmonar de derivados de la presente invención, empleando, por ejemplo un inhalador de dosis fija, un inhalador de polvo seco y un nebulizador, todos dispositivos bien conocidos en el área.
[0145] Las composiciones de la invención actual son específicamente útiles en la formulación de sistemas de administración de fármacos de liberación controlada, sostenida, prolongada, retardada y lenta. Más específicamente, pero no exclusivamente, las composiciones son útiles en la formulación de sistemas de liberación parenteral controlada y sistemas de liberación sostenida (ambos sistemas conducen a una reducción en muchas veces de la cantidad de administraciones), bien conocidos por los expertos en el área. Aún más preferentemente, son sistemas de liberación controlada y de liberación sostenida administrados por vía subcutánea. Sin limitar el alcance de la invención, los ejemplos de sistemas de liberación controlada y composiciones útiles son los hidrogeles, los geles oleaginosos, los cristales líquidos, las micelas poliméricas, las microesferas y las nanopartículas.
[0146] Los métodos para producir sistemas de liberación controlada útiles para las composiciones de la invención actual incluyen, pero no exclusivamente, cristalización, condensación, co-cristalización, precipitación, co
precipitación, emulsión, dispersión, homogeneización a alta presión, encapsulación, secado por aspersión, microencapsulación, coacervación, separación de fases, evaporación del solvente para producir microesferas, extrusión y procesos de fluidos supercríticos. Se hace referencia general a Handbook of Pharmaceutical Controlled Release (Wise, D.L., ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000) y Drug and the Pharmaceutical Sciences vol. 99: Protein
5 Formulation and Delivery (MacNally, E.J., ed. Marcel Dekker, Nueva York, 2000).
[0147] La administración parenteral se puede realizar por inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa en forma de lapicera. Alternativamente, la administración parenteral se puede realizar por medio de una bomba de infusión. Otra opción es una composición que puede ser una solución
10 o una suspensión o un polvo para la administración del derivado de la presente invención en formar de un aerosol líquido o de polvo nasal o pulmonar. Como otra opción más, las composiciones farmacéuticas que contienen el derivado de la invención también se pueden adaptar a la administración transdérmica, por ej. mediante inyección sin aguja o desde un parche, opcionalmente un parche iontoforético, o administración transmucosa, por ej. bucal.
15 [0148] Los derivados de la presente invención se pueden administrar por vía pulmonar en un vehículo, como una solución, suspensión o polvo seco empleando cualquiera de los tipos conocidos de dispositivos adecuado para la administración pulmonar de un fármaco. Los ejemplos de estos comprenden, pero no exclusivamente, los tres tipos generales de generadores de aerosol para la administración pulmonar de un fármaco, y pueden incluir nebulizadores de chorro o ultrasónicos, inhaladores de dosis fija, o inhaladores de polvo seco (Cf. Yu J, Chien YW. Pulmonary drug
20 delivery: Physiologic and mechanistic aspects. Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4) (1997) 395-453).
[0149] Basándose en la metodología de análisis estandarizada, el diámetro aerodinámico (da) de una partícula se define como el diámetro geométrico equivalente de una partícula esférica estándar de referencia que tiene la densidad de una unidad (1 g/cm3). En el caso más simple, para las partículas esféricas, da está relacionado con un
25 diámetro de referencia (d) como una función de la raíz cuadrada de la relación de densidad según lo descrito por:
Ocurren modificaciones a esta relación para partículas no esféricas (cf. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). Los términos "MMAD" y "MMEAD" están bien descritos y son conocidos en el área (cf. Edwards DA, 30 Ben-Jebria A, Langer R y representan una medida del valor medio de la distribución de tamaño de partículas aerodinámicas. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). El diámetro aerodinámico de masa media (MMAD) y el diámetro aerodinámico de masa media eficaz (MMEAD) se usan indistintamente, son parámetros estadísticos, y describen empíricamente el tamaño de las partículas de aerosol en relación con su potencial para depositarse en los 35 pulmones, independientemente de su forma, tamaño o densidad reales (cf. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer
R. Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385). El MMAD se calcula normalmente a partir de las mediciones hechas con impactadores, un instrumento que mide el comportamiento inercial de la partícula en el aire. En otra realización, la formulación pudo ser aerosolizada por cualquier tecnología de aerosolización conocida, como la nebulización, para lograr
40 un MMAD de las partículas del aerosol menor de 10 µm, más preferentemente entre 1-5 µm, y muy preferentemente entre 1-3 µm. El tamaño de partícula preferido se basa en el tamaño más eficaz para la administración del fármaco a la parte profunda del pulmón, donde la proteína es absorbida óptimamente (cf. Edwards DA, Ben-Jebria A, Langer A, Recent advances in pulmonary drug delivery using large, porous inhaled particles. J Appl Physiol 84(2) (1998) 379-385).
45 [0150] El depósito de las formulaciones pulmonares que contienen el derivado de la presente invención en la zona profunda del pulmón puede ser optimizada aún más, opcionalmente, empleando modificaciones de las técnicas de inhalación, por ejemplo, pero no exclusivamente: flujo de inhalación lento (por ej. 30 L/min), retención de la respiración y tiempo de actuación.
50 [0151] El término "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con mayor estabilidad física, mayor estabilidad química o mayor estabilidad física y química.
[0152] El término "estabilidad física" de la formulación de proteína según se usa en este documento se refiere a la
55 tendencia de la proteína a formar agregados biológicamente inactivos y/o insolubles de la proteína, como resultado de la exposición de la proteína a tensiones termomecánicas y/o interacción con las interfases y las superficies que son desestabilizantes, como las superficies e interfases hidrofóbas. La estabilidad física de las formulaciones acuosas de proteína se evalúa mediante inspección visual y/o las mediciones de turbidez, después de exponer la formulación acondicionada en recipientes adecuados (por ej. cartuchos o viales) a estrés mecánico o físico (por ej.
60 agitación) a diferentes temperaturas durante diversos períodos de tiempo. La inspección visual de las formulaciones se realiza en una luz fuerte enfocada, con un fondo oscuro. La turbidez de la formulación se caracteriza por una puntuación visual que clasifica el grado de turbidez por ejemplo en una escala de 0 a 3 (una formulación que no presenta turbidez corresponde a una puntuación visual de 0 y una formulación que presenta turbidez visual a la luz del día corresponde a una puntuación visual de 3). Una formulación se clasifica como físicamente inestable con
respecto a la agregación de proteína, cuando presenta turbidez visual a la luz del día. Alternativamente, la turbidez de la formulación se puede evaluar mediante mediciones simples de turbidez conocidas por los expertos. La estabilidad física de las formulaciones acuosas de proteínas también se puede evaluar mediante el uso de un agente espectroscópico o sonda del estado conformacional de la proteína. La sonda es preferentemente una molécula pequeña que preferentemente se une a un confórmero no natural de la proteína. Un ejemplo de una sonda molecular espectroscópica pequeña de la estructura de la proteína es tioflavina T. La tioflavina T es una tintura fluorescente que ha sido utilizada ampliamente para la detección de fibrillas amiloides. En presencia de fibrillas y tal vez de otras configuraciones de proteínas, la tioflavina T da lugar a un nuevo máximo de excitación aproximadamente a 450 nm y una emisión potenciada aproximadamente a 482 nm cuando se une a una forma de proteína fibrilar. La tioflavina T sin unir es esencialmente no fluorescente a esas longitudes de onda.
[0153] Otras moléculas pequeñas se pueden utilizar como sondas de los cambios en la estructura de la proteína de estados naturales a no naturales. Por ejemplo las sondas "parche hidrófobo" que se unen preferentemente a parches hidrófobos expuestos de una proteína. Los parches hidrófobos generalmente están enterrados dentro de la estructura terciaria de una proteína en su estado natural, pero quedan expuestos cuando una proteína comienza a desplegarse o desnaturalizarse. Los ejemplos de estas sondas moleculares espectroscópicas pequeñas, son tinturas aromáticas, hidrófobas, como antraceno, acridina, fenantrolina o similares. Otras sondas espectroscópicas son complejos metal-aminoácido, como complejos metálicos de cobalto de aminoácidos hidrófobos, como fenilalanina, leucina, isoleucina, metionina y valina, o similares.
[0154] La expresión "estabilidad química" de la formulación de proteína según se usa en este documento se refiere a cambios químicos covalentes en la estructura de la proteína que conducen a la formación de productos de degradación química con posible menor potencia biológica y/o posibles mayores propiedades inmunógenas en comparación con la estructura de la proteína natural. Dependiendo del tipo y la naturaleza de la proteína natural y del medio ambiente al que está expuesta la proteína, se pueden formar diversos productos de degradación química. La eliminación de la degradación química puede probablemente no ser evitada completamente y a menudo se observan cantidades crecientes de productos de degradación química durante el almacenamiento y uso de la formulación de la proteína como bien saben los expertos. La mayoría de las proteínas es propensa a la desamidación, un proceso en el cual se hidroliza el grupo amida de la cadena lateral en residuos de glutaminilo o asparraginilo para formar un ácido carboxílico libre. Otras vías de degradación implican la formación de productos de transformación de alto peso molecular donde dos o más moléculas de la proteína se unen covalentemente entre sí a través de transamidación y/o interacciones disulfuro que dan lugar a la formación de productos de degradación diméricos, oligoméricos y poliméricos unidos covalentemente (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, Nueva York 1992). La oxidación (por ejemplo de los residuos de metionina) se puede mencionar como otra variante de degradación química. La estabilidad química de la formulación de proteína se puede evaluar midiendo la cantidad de productos de degradación química en diversos momentos después de la exposición a diferentes condiciones ambientales (a menudo la formación de productos de degradación puede ser acelerada por ejemplo aumentando la temperatura). La cantidad de cada producto de degradación se determina a menudo por separación de los productos de degradación dependiendo del tamaño y/o la carga de la molécula, empleando diversas técnicas cromatográficas (por ej. SEC-HPLC y/o RP-HPLC).
[0155] Por consiguiente, como se señaló antes, una "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con mayor estabilidad física, mayor estabilidad química o mayor estabilidad física y química. En general, una formulación debe ser estable durante el uso y el almacenamiento (de conformidad con las condiciones de uso y almacenamiento recomendadas) hasta la fecha de vencimiento.
[0156] En una realización de la invención, la formulación farmacéutica que contiene el derivado de la presente invención es estable durante más de 6 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.
[0157] En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica que contiene el derivado de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de 3 años de almacenamiento.
[0158] En otra realización de la invención, la formulación farmacéutica que contiene el derivado de la presente invención es estable durante más de 4 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento.
[0159] En otra realización más de la invención, la formulación farmacéutica que contiene el derivado de la presente invención es estable durante más de 2 semanas de uso y durante más de dos años de almacenamiento
[0160] En otro aspecto, la presente invención da a conocer el uso de un derivado según la invención para la preparación de un medicamento.
[0161] En una realización, un derivado según la invención se utiliza para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o la prevención de: hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio,
accidente cerebrovascular, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
[0162] En otra realización, un derivado según la invención se utiliza para la preparación de un medicamento destinado a retrasar o prevenir el avance de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
[0163] En otra realización, un derivado según la invención se utiliza para la preparación de un medicamento destinado a disminuir el consumo de alimentos, disminuir la apoptosis de las células β, aumentar la función de las células β y la masa de las células β, y/o para restaurar a las células β la sensibilidad a la glucosa.
[0164] En un aspecto de la invención, se proporciona un método para aumentar el tiempo de acción de un péptido en un paciente, como un péptido GLP-1, caracterizado porque dicho péptido, como un péptido GLP-1(7-37), es derivado con A-B-C-D -según lo estipulado en este documento.
[0165] En un aspecto de la invención, se proporciona un método para aumentar el tiempo de acción de un péptido en un paciente, como un péptido GLP-1, a más de alrededor de 40 horas, caracterizado porque dicho péptido, como un péptido GLP-1(7-37), es derivado con A-B-C-D-según lo estipulado en este documento.
[0166] En un aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que contiene un derivado según la invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
[0167] En un aspecto de la invención, la composición farmacéutica según la invención es adecuada para la administración parenteral.
[0168] En otro aspecto de la invención, se proporciona el uso de un derivado según la invención para la preparación de un medicamento.
[0169] En otro aspecto más de la invención, se proporciona el uso de un derivado según la invención para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o la prevención de: hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
[0170] En otro aspecto más de la invención, se proporciona el uso de un derivado según la invención para la preparación de un medicamento destinado a retrasar o prevenir el avance de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
[0171] El tratamiento con un derivado según la presente invención también se puede combinar con un segundo o más principios farmacológicamente activos, por ej. elegidos entre antidiabéticos, agentes antiobesidad, reguladores del apetito, antihipertensivos, agentes para el tratamiento o la prevención de las complicaciones resultantes de, o asociadas a, la diabetes y agentes para el tratamiento y/o la prevención de complicaciones y trastornos resultantes de, o asociados a, la obesidad. Los ejemplos de estos principios farmacológicamente activos son: insulina, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, inhibidores de la glucosidasa, antagonistas de glucagón, inhibidores de la DPP-IV (dipeptidil peptidasa-IV), inhibidores de las enzimas hepáticas involucradas en la estimulación de la gluconeogénesis y/o la glucogenólisis, moduladores de la absorción de glucosa, compuestos que modifican el metabolismo lipídico, como compuestos antihiperlipidémicos por ejemplo inhibidores de la HMG CoA (estatinas), polipéptidos inhibidores gástricos (análogos de GIP), compuestos que disminuyen el consumo de alimentos, agonistas de RXR y agentes que actúan sobre el canal de potasio dependiente de ATP de las células β; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; β-bloqueantes como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, inhibidores de ACE (enzima convertidora de angiotensina) como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueadores del canal del calcio como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem y verapamilo y α-bloqueantes como doxazosina, urapidilo, prazosina y terazosina; agonistas de CART (transcrito regulado por la cocaína y la anfetamina), antagonistas de NPY (neuropéptido Y), agonistas de PYY, agonistas del receptor de Y2, agonistas del receptor de Y4, agonistas mixtos del receptor de Y2/Y4, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de orexina, agonistas de TNF (factor de necrosis tumoral), agonistas de CRF (factor de liberación de corticotropina), antagonistas de CRF BP (proteína de unión al factor de liberación de corticotropina), agonistas de la urocortina, agonistas β3, oxintomodulina y análogos, agonistas de MSH (hormona estimulante de los melanocitos), antagonistas de MCH (hormona concentradora de melanocitos), agonistas de CCK (colecistoquinina), inhibidores de la recaptación de serotonina, inhibidores de la recaptación de serotonina y noradrenalina, compuestos mixtos serotoninérgicos y noradrenérgicos, agonistas de 5HT (serotonina), agonistas de la bombesina, antagonistas de la galanina, hormona de crecimiento, compuestos liberadores de la hormona del crecimiento, agonistas de TRH (hormona liberadora de tirotropina), moduladores de UCP 2 o 3 (proteína desacopladora 2 o 3), agonistas de la leptina, agonistas de DA (bromocriptina, doprexina), inhibidores de la lipasa/amilasa, moduladores RXR (receptor retinoide X), agonistas TR β; antagonistas de la histamina H3, agonistas
o antagonistas del polipéptido inhibidor gástrico (análogos de GIP), gastrina y análogos de la gastrina.
[0172] El tratamiento con un derivado según esta invención también se puede combinar con cirugía, una cirugía que influya en los niveles de glucosa y/o la homeostasis lipídica como la banda gástrica o la derivación gástrica (bypass).
[0173] Se debe entender que cualquier combinación adecuada de los derivados según la invención con uno o más de los compuestos mencionados antes y opcionalmente uno o más de otros principios farmacológicamente activos se considera comprendida por el alcance de la presente invención.
Método de fabricación de péptidos y sus análogos
[0174] Dependiendo de la secuencia, los análogos de esta invención se pueden producir mediante un método que consiste en cultivar una célula huésped que contenga una secuencia de ADN que codifique el polipéptido, y capaz de expresar el polipéptido en un medio nutritivo adecuado en las condiciones que permiten la expresión del péptido, tras lo cual se recupera el péptido resultante del cultivo.
[0175] El medio utilizado para el cultivo de las células puede ser cualquier medio convencional adecuado para multiplicar las células huésped, como medios mínimos o complejos que contengan los complementos adecuados. Los medios adecuados se pueden adquirir a proveedores comerciales o se pueden preparar según fórmulas publicadas (por ejemplo, en catálogos de la American Type Culture Collection). El péptido producido por las células se puede recuperar después del medio de cultivo mediante procedimientos convencionales que incluyen la separación de las células huésped del medio por centrifugación o filtración, la precipitación de los componentes proteicos del sobrenadante o del filtrado por medio de una sal, por ejemplo, sulfato de amonio, la purificación por diversos procedimientos cromatográficos, por ej., cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de filtración en gel, cromatografía de afinidad, o similares, dependiendo del tipo de péptido en cuestión.
[0176] La secuencia de ADN que codifica el polipéptido terapéutico puede ser adecuadamente de ADN genómico o ADNc, obtenido por ejemplo preparando una genoteca de ADN genómico o ADNc y detectando las secuencias de ADN que codifican todo o parte del polipéptido mediante hibridación con sondas de oligonucleótidos sintéticos de conformidad con las técnicas estándar (véase, por ejemplo, Sambrook, J, Fritsch, EF y Maniatis, T, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York, 1989). La secuencia de ADN que codifica el polipéptido también se puede preparar sintéticamente por métodos estándar establecidos, por ejemplo, el método de la fosfoamidita descrito por Beaucage y Caruthers, Tetrahedron Letters 22 (1981), 1859 -1869, o el método descrito por Matthes et al., EMBO Journal 3 (1984), 801-805. La secuencia de ADN también se puede preparar mediante reacción en cadena de la polimerasa empleando cebadores específicos, por ejemplo como los descritos en US 4,683,202 o por Saiki et al., Science 239 (1988), 487 -491.
[0177] La secuencia de ADN se puede insertar en cualquier vector que pueda ser sometido convenientemente a procedimientos de recombinación del ADN, y la elección del vector dependerá a menudo de la célula huésped en la cual se va a introducir. Por lo tanto, el vector puede ser un vector que se replica autónomamente, es decir, un vector, que existe como una entidad extracromosómica, cuya replicación es independiente de la replicación cromosómica, por ejemplo, un plásmido. Alternativamente, el vector puede ser uno que, cuando se introduce en una célula huésped, se integra en el genoma de la célula huésped y se replica junto con el cromosoma o los cromosomas en los que se ha integrado.
[0178] El vector es preferentemente un vector de expresión en el que la secuencia de ADN que codifica el péptido está unida operablemente a segmentos adicionales necesarios para la transcripción del ADN, como un promotor. El promotor puede ser cualquier secuencia de ácido nucleico que tenga actividad transcripcional en la célula huésped de elección y se pueda derivar de genes que codifican proteínas homólogas o heterólogas a la célula huésped. Los ejemplos de promotores adecuados para dirigir la transcripción del ADN que codifica el péptido de la invención en diversas células huésped son muy conocidos en el área, cf. por ejemplo Sambrook et al., supra.
[0179] La secuencia de ADN que codifica el péptido también puede, si es necesario, ser conectada operablemente a un terminador adecuado, señales de poliadenilación, secuencias potenciadoras de la transcripción y secuencias potenciadoras de la traducción adecuados. El vector recombinante de la invención puede además contener una secuencia de ADN que permita al vector replicarse en la célula huésped en cuestión.
[0180] El vector también puede contener un marcador seleccionable, por ejemplo un gen cuyo producto complemente un defecto en la célula huésped o uno que le confiera resistencia a un fármaco, por ej. ampicilina, kanamicina, tetraciclina, cloranfenicol, neomicina, higromicina o metotrexato.
[0181] Para dirigir un péptido original de la presente invención a la vía secretora de las células huésped, se debe proporcionar una secuencia señal secretora (también conocida como una secuencia líder, prepro secuencia o pre
secuencia) en el vector recombinante. La secuencia señal secretora se une a la secuencia de ADN que codifica el péptido en el marco de lectura correcto. Las secuencias señal secretoras comúnmente se ubican 5' respecto a la secuencia de ADN que codifica el péptido. La secuencia señal secretora puede ser la que normalmente se asocia al péptido o puede ser de un gen que codifica otra proteína segregada. Los procedimientos usados para ligar las
5 secuencias de ADN que codifican el péptido de la presente, el promotor y opcionalmente el terminador y/o la secuencia de señal secretora, respectivamente, y para insertarlos en vectores adecuados que contienen la información necesaria para la replicación, son conocidos por los expertos en el área (cf., por ejemplo, Sambrook et al., supra).
10 [0182] La célula huésped en la cual se introduce la secuencia de ADN o el vector recombinante puede ser cualquier célula que sea capaz de producir el péptido de la presente e incluye bacterias, levaduras, hongos y células eucariotas superiores. Los ejemplos de células huésped adecuadas conocidas y usadas en el área son, sin limitación, E. coli, Saccharomyces cerevisiae o líneas celulares BHK o CHO de mamíferos.
15 Realizaciones
[0183]
1. Un derivado peptídico que consiste en un péptido en el que al menos un residuo de aminoácido es derivado
con A-B-C-D 20 donde A –es
donde p se elige del grupo constituido por 10, 11, 12, 13 y 14, y d se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4 25 y 5, y
-B-se elige del grupo constituido por
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, e y se elige del grupo constituido por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12,
o A es 35
donde n se elige del grupo constituido por 14, 15, 16 17, 18 y 19 y B se elige del grupo constituido por
y
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y -C-se elige del grupo constituido por
10 donde b y e se eligen cada uno independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2, y c y f se eligen cada uno independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2 con la condición de que b sea 1 o 2 cuando c es 0, o que b sea 0 cuando c es 1 o 2, y e sea 1 o 2 cuando f es 0, o e sea 0 cuando f es 1 o 2, y -D-está unido al residuo de dicho aminoácido y es un conector.
15 2. El derivado de acuerdo con la realización 1, donde dicho péptido es un péptido GLP-1 elegido entre GLP1(7-37) y un análogo de GLP-1(7-37), donde, en dicho péptido, al menos un residuo de aminoácido es derivado con A-B-C-D-.
3. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-2, donde el residuo de aminoácido derivado 20 contiene un grupo amino.
4. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-4, donde el residuo de aminoácido derivado es lisina.
25 5. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-4, donde D se elige del grupo constituido por
(preferentemente Nº 1, 3, 4, 5 y 6 de estas estructuras, es decir excluida la Nº 2), donde k se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4, 5, 11 y 27, y m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4, 5 y 6, y D está unido al residuo de aminoácido del final representado con un *.
6. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-5, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (I):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-
Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-
Xaa45-Xaa46 fórmula (I) (SEQ ID No: 2)
en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu, Met o Lys, preferentemente Leu o Met; Xaa22 es Gly, Glu o Aib; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Lys, Glu o Arg; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg, preferentemente Ala, Glu o Arg; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Asn o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg, Gly o Lys; Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, amida o está ausente; Xaa38 es Lys, Ser, amida o está ausente. Xaa39 es Ser, Lys, amida o está ausente; Xaa40 es Gly, amida o está ausente; Xaa41 es Ala, amida o está ausente; Xaa42 es Pro, amida o está ausente; Xaa43 es Pro, amida o está ausente; Xaa44 es Pro, amida o está ausente; Xaa45 es Ser, amida o está ausente; Xaa46 es amida o está ausente; siempre que si Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 o Xaa46 está ausente, entonces cada residuo de aminoácido en dirección 3' también está ausente.
7. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-5, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (II):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-Phe
Ile-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 fórmula (II) (SEQ ID No: 3)
en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, 25
Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa22 es Gly, Glu o Aib; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa26 es Lys, Glu o Arg; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg, preferentemente Ala, Glu o Arg; Xaa34 es Lys, Glu o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Ala, Glu o Lys; Xaa38 es Lys, amida o está ausente.
8. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-5, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (III) que está derivada en la posición 18, 23, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (III) (SEQ ID No: 6) en la que
Xaa7 -Xaa8 es L-histidina-Aib , desamino-histidina-alanina o desamino-histidina-Aib Xaa9 es Glu o un derivado de Glu como alfa,alfa-dimetil-Glu Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Arg o está ausente; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Asn o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Aib o está ausente Xaa38 es Lys, Glu o está ausente Xaa39 es amida o está ausente; siempre que si Xaa37 está ausente, entonces Xaa38 también está ausente.
9. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-5, donde el péptido GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (IV) que es derivada con un residuo de unión a la albúmina en la posición 18, 23, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (IV) (SEQ ID No: 7) en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa30 es Ala, Glu, Lys, Arg o está ausente, preferentemente Ala, Glu o Arg; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Aib o está ausente, Xaa38 es Lys o está ausente, y Xaa39 es amida o está ausente;
10.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-9, en el que Xaa38 está ausente.
11.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-10, en el que Xaa37 y Xaa38 están ambos ausentes.
12.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-11, en el que Xaa7 es desamino-histidina.
13.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que Xaa8 es Aib.
14.
Una composición farmacéutica que contiene un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 113 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
15.
Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-13 para utilizar en el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
[0184] La secuencia de aminoácidos de GLP-1(7-37) humano está incluida en el listado de secuencias como SEQ ID No 1, y SEQ ID No 2-3 y 6-7 son ejemplos de análogos de GLP-1(7-37) para utilizar en los derivados según la invención. En el listado de secuencias la numeración de GLP-1(7-37) y de sus análogos comienza con el residuo de aminoácido Nº 1. Concordantemente, por ej., la posición 1 de SEQ ID No 1 es equivalente a la posición 7 de GLP1(7-37) (His), la posición 16 de SEQ ID No 1 es equivalente a la posición 22 de GLP-1(7-37) (Gly) y la posición 20 de SEQ ID No 1 es equivalente a la posición 26 de GLP-1(7-37) (Lys) -y vice versa para las otras posiciones y las otras secuencias.
[0185] Concordantemente, la invención también proporciona, por ejemplo en la realización 6 anterior, un derivado peptídico en el que el análogo de GLP-1(7-37) contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (I) (SEQ ID NO: 2) en la que:
Xaa7 (posición Nº 1 en SEQ ID NO: 2) es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, βhidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 (posición Nº 2 en SEQ ID NO: 2) es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1-aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa16 (posición Nº 10 en SEQ ID NO: 2) es Val o Leu; Xaa18 (posición Nº 12 en SEQ ID NO: 2) es Ser, Lys o Arg; Xaa19 (posición Nº 13 en SEQ ID NO: 2) es Tyr o Gln; Xaa20 (posición Nº 14 en SEQ ID NO: 2) es Leu, Met o Lys; Xaa22 (posición Nº 16 en SEQ ID NO: 2) es Gly, Glu o Aib; Xaa23 (posición Nº 17 en SEQ ID NO: 2) es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 (posición Nº 19 en SEQ ID NO: 2) es Ala o Val; Xaa26 (posición Nº 20 en SEQ ID NO: 2) es Lys, Glu o Arg; Xaa27 (posición Nº 21 en SEQ ID NO: 2) es Glu o Leu; Xaa30 (posición Nº 24 en SEQ ID NO: 2) es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa33 (posición Nº 27 en SEQ ID NO: 2) es Val o Lys; Xaa34 (posición Nº 28 en SEQ ID NO: 2) es Lys, Glu, Asn o Arg; Xaa35 (posición Nº 29 en SEQ ID NO: 2) es Gly o Aib; Xaa36 (posición Nº 30 en SEQ ID NO: 2) es Arg, Gly o Lys; Xaa37 (posición Nº 31 en SEQ ID NO: 2) es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, amida o está ausente; Xaa38 (posición Nº 32 en SEQ ID NO: 2) es Lys, Ser, amida o está ausente; Xaa39 (posición Nº 33 en SEQ ID NO: 2) es Ser, Lys, amida o está ausente; Xaa40 (posición Nº 34 en SEQ ID NO: 2) es Gly, amida o está ausente; Xaa41 (posición Nº 35 en SEQ ID NO: 2) es Ala, amida o está ausente; Xaa42 (posición Nº 36 en SEQ ID NO: 2) es Pro, amida o está ausente; Xaa43 (posición Nº 37 en SEQ ID NO: 2) es Pro, amida o está ausente; Xaa44 (posición Nº 38 en SEQ ID NO: 2) es Pro, amida o está ausente; Xaa45 (posición Nº 39 en SEQ ID NO: 2) es Ser, amida o está ausente; Xaa46 (posición Nº 40 en SEQ ID NO: 2) es amida o está ausente; siempre que si Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 o Xaa46 (posición Nº 32 a 40 en SEQ ID NO: 2, respectivamente) está ausente, entonces cada residuo de aminoácido en dirección 3' también está ausente.
[0186] La invención proporciona además derivados, métodos y usos de éstos adicionales, y composiciones farmacéuticas con un contenido de éstos correspondiente a cualquiera de las reivindicaciones y realizaciones particulares de acuerdo con la invención, en las cuales las enmiendas de la numeración de la posición correspondiente se hicieron como se explicó antes, y se muestran antes para el derivado de la realización 6. Por ejemplo, en las reivindicaciones 7-13 de la solicitud de prioridad (realizaciones anteriores 7-13) con relación a derivados particulares de la invención en los cuales el análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de las fórmulas (II, III y IV) (SEQ ID NO 3, 6 y 7, respectivamente), la numeración de la posición puede ser enmendada como se explica antes para referirse a las SEQ ID NO respectivas en vez de a las fórmulas.
[0187] Son realizaciones adicionales de la invención:
8a. Un derivado de GLP-1 que contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (I):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26-
Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-
Xaa45-Xaa46 fórmula (I) (SEQ ID No: 2)
en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 2(3H-imidazol-4-il)acetil, 3-piridilalanina, 2piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu, Met o Lys; Xaa22 es Gly, Glu o Aib; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Lys, Glu o Arg; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa33 es Val, Thr(O-bencil) o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Gln, Asn o Arg; Xaa35 es Gly, Aib o está ausente; Xaa36 es Arg, Gly, Lys o está ausente; Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, épsilon-amino-Lys, amida o está ausente; Xaa38 es Lys, Ser, amida o está ausente; Xaa39 es Ser, Lys, amida o está ausente; Xaa40 es Gly, amida o está ausente; Xaa41 es Ala, amida o está ausente; Xaa42 es Pro, amida o está ausente; Xaa43 es Pro, amida o está ausente; Xaa44 es Pro, amida o está ausente; Xaa45 es Ser, amida o está ausente; Xaa46 es amida o está ausente; siempre que si Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 o Xaa46 está ausente, entonces cada residuo de aminoácido en dirección 3' también está ausente.
9a. Un derivado de GLP-1 que contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (II):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-PheIle-Xaa30-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 fórmula (II) (SEQ ID No: 3) en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 2(3H-imidazol-4-il)acetil, 3-piridilalanina, 2piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg;
Xaa22 es Gly, Glu o Aib;
Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg;
Xaa26 es Lys, Glu o Arg;
Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg;
Xaa34 es Lys, Glu, Gln o Arg;
Xaa35 es Gly, Aib o está ausente;
Xaa36 es Arg, Lys o está ausente;
Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys o épsilon-amino-Lys;
Xaa38 es Lys, amida o está ausente.
10a. El derivado de GLP-1, preferentemente de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 8a-9a, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (III) que está derivada en la posición 18, 23, 26, 30, 31, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27
Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (III) (SEQ ID No: 6)
en la que
Xaa7 -Xaa8 es 2(3H-imidazol-4-il)acetil-alanina, L-histidina-Aib, desamino-histidina-alanina o desaminohistidina-Aib; Xaa9 es Glu o un derivado de Glu como alfa,alfa-dimetil-Glu; Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Lys, Arg o está ausente; Xaa33 es Val, Thr(O-bencil) o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Gln, Asn o Arg; Xaa35 es Gly, Aib o está ausente; Xaa36 es Arg, Lys o está ausente; Xaa37 es Gly, Aib, Pro, épsilon-amino-Lys o está ausente Xaa38 es Lys, Glu o está ausente Xaa39 es amida o está ausente; siempre que si Xaa37 está ausente, entonces Xaa38 también está ausente.
11a. Un derivado de GLP-1 que contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (IV) que es derivada con un residuo de unión a la albúmina en la posición 18, 23, 26, 30, 31, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-
Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (IV) (SEQ ID No: 7)
en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 2(3H-imidazol-4-il)acetil, 3-piridilalanina, 2piridilalanina o 4-piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Gln o Arg; Xaa35 es Gly, Aib o está ausente; Xaa36 es Arg, Lys o está ausente; Xaa37 es Gly, Aib, Pro, épsilon-amino-Lys o está ausente; Xaa38 es Lys o está ausente; y Xaa39 es amida o está ausente;
12a. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 8a-11a, en el que Xaa38 está ausente.
13a. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 8a-12a, en el que Xaa37 y Xaa38 están ambos ausentes.
14a. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 8a-13a, en el que Xaa7 es desamino-histidina.
15a. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 8a-14a, en el que Xaa38 es Aib.
16a. Un derivado de GLP-1 que se elige entre los siguientes:
N-ε37{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1(737)amida; N-ε20-{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib2,Leu14,Lys20,Gln28,Ser(O-bencill)39]exendina-4 (1-39)amida; N-ε26{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[desaminoHis7,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon37{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoilamino)piperidin-4-ilcarbonilamino]-3(carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Arg26, Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidin-4-ilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Phe(mCF3)28]GLP-1-(7-37)amida; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil); N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,Glu30,Thr(O-bencil)33]GLP-1-(737)amida; N-épsilon30{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil) piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi} acetil [Aib8,Glu22,Arg26,Lys30]GLP-1-(7-37); N-épsilon31{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib8, Glu22,Arg26,Lys 31]GLP-1-(7-37); N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)[Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina28,Glu30]GLP-1-(737)amida; [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil]piperidina-4carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina12,Glu30,]GLP-1-(737)amida; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil] piperidina-4-carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida N-épsilon31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)[Aib 8,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butiril][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-{4-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]butiril}[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon18-{2-(2-(2-(2-[2-(2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butanoilamino]etoxi)etoxi]acetil)etoxi)etoxi)acetil}[Aib8,Lys18,Arg26,Arg34]GLP-1(7-37) N-ε20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[trans-4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil] [desaminoHis1,Lys20,Ser(O-bencil)33,Ser(Obencil)39]exendina (1-39); [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil) ciclohexilcarbonilamino]-3-carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,
Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(trans-19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]amida; [DesaminoHis7,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino] metil)ciclohexilcarbonilamino]3-carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon26[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil[Aib8,Lys 26] GLP-1 (7-37)amida; N-épsilon26[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-2-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Lys26] GLP-1 (7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Glu30,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)-hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]-butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]-dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys33,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino] etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)aceti lamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys26,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}-butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]amida; N-épsilon20-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys20,Glu22,Arg26,Glu30,Pro 37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP -1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37] GLP-1-(7-37)amida;
[Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[4-carboxi-4-(4-carboxi-4-{4-[4-(16-1H-tetrazol-5-ilhexadecanoilsulfamoil)butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]; [Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-((7-37)Lys(2-(2-(3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-[4-(S)-carboxi-4(4-(S)-carboxi-4-(4-{4-[16-(Tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil]butanoilamino}butanoilamino)butirilamino) butirilamino];etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)propionilamino)etoxi)etoxi) péptido; N-alpha37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Arg34,épsilon-Lys37]GLP-1-(7-37); N-alfa8-[2-(4-imidazolil)acetil] N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)a cetil][Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(8-37); [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil) piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetil)péptido; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-carboxi-4-({4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi) acetil]péptido; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys((S)-4-carboxi-4-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)butiril)péptido; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-(2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)butirilamino]etoxi} etoxi)acetil)péptido; [DesaminoHis7,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil) piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) péptido; N-épsilon37-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxi-nonadecanoil)-piperidina-4-carbonil]-amino}-butiril) [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxi-nonadecanoil)piperidina-4-carbonil]-amino}-butiril)péptido; N-épsilon26-[2-(2-{2-[(R)-4-carboxi-4-((R)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-1H-tetrazol-5-il-hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-{2-[2-(2-{(S)-4-[(S)-4-(12-{4-[16-(2-tert-butil-2H-tetrazol-5-il)-hexadecanoilsulfamoil] butirilamino}dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino]-4-carboxibutirilamino}etoxi)etoxi]acetil} [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37] GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37); [ImPr7,Arg26,34,Glu22]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-1H-tetrazol-5-ilhexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino)-4-carboxibutirilamino)etoxi]etoxi)acetil]-amida; N-épsilon36-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Gln34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Glu22, Gln34]GLP-1-(7-37); N-épsilon18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,22,35,Lys18,Arg26,34]GLP-1-(7-37); y N-épsilon18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Lys18,Glu22,Gln34]GLP-1-(7-37).
Realizaciones adicionales
[0188]
1. Un derivado peptídico que contiene un péptido en el que al menos un residuo de aminoácido es derivado con A-B-C-D donde A -es
donde p se elige del grupo constituido por 10, 11, 12, 13 y 14, y d se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4 y 5, y -B-se elige del grupo constituido por
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, e y se elige del grupo constituido por 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12,
o A es
donde n se elige del grupo constituido por 14, 15, 16 17, 18 y 19, y B se elige del grupo constituido por
donde x se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y -C-se elige del grupo constituido por
y
donde b y e se eligen cada uno independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2, y c y f se eligen cada uno independientemente del grupo constituido por 0, 1 y 2 con la condición de que b sea 1 o 2 cuando c es 0, o 5 que b sea 0 cuando c es 1 o 2, y e sea 1 o 2 cuando f es 0, o e sea 0 cuando f es 1 o 2, y -D-está unido al residuo de dicho aminoácido y es un conector.
2. El derivado de acuerdo con la realización 1, donde dicho péptido es un péptido GLP-1 elegido entre GLP
1(7-37) y un análogo de GLP-1(7-37), donde, en dicho péptido, al menos un residuo de aminoácido es derivado 10 con A-B-C-D-.
3. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-2, donde el residuo de aminoácido derivado contiene un grupo amino.
15 4. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-3, donde el residuo de aminoácido derivado contiene un grupo amino primario en una cadena lateral.
5. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-4, donde el residuo de aminoácido derivado es
lisina. 20
6. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-5, donde sólo un residuo de aminoácido es derivado.
7. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que A-es 25
8.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-7, en el que n se elige del grupo constituido por 15 y 17, y preferentemente es 17.
9.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6, en el que A-es
35 10. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6 y 9, en el que p se elige del grupo constituido por 12, 13 y 14, y preferentemente es 13.
11. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6 y 9-10, en el que d se elige del grupo
constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, preferentemente 0, 1 y 2, y muy preferentemente 1. 40
12. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6 y 9-11, en el que d se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2, y p se elige del grupo constituido por 12, 13 o 14, preferentemente d se elige del grupo constituido por 1 y 2, y p se elige del grupo constituido por 13 y 14, y muy preferentemente d es 1 y p es 13.
45 13. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que -B-es
14.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que -B-es
15.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que -B-es
16.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12, en el que -B-es
15 17. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-12 y 16, en el que x se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2, más preferentemente x se elige del grupo constituido por 0 y 1, y muy preferentemente x es 1.
18. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6 y 9-12, en el que -B-es 20
19. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-6 y 9-13, en el que y se elige del grupo constituido por 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10, y preferentemente y se elige del grupo constituido por 2, 3, 4, 5, 6, 7 y
25 8.
20. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-19, en el que -C-es
30
21. El derivado de acuerdo con la realización 20, en el que c se elige del grupo constituido por 0 y 1, y b se elige del grupo constituido por 1 y 2, preferentemente b es 1 y c es 0.
35
22. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-19, en el que -C-es
23.
El derivado de acuerdo con la realización 22, en el que f se elige del grupo constituido por 0 y 1 y e se elige del grupo constituido por 1 y 2, preferentemente e es 1 y f es 0.
24.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-19, en el que -C-es
25. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-24, en el que D se elige del grupo constituido 10 por
y
donde k se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4, 5, 11 y 27 y m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3, 4, 5 y 6, y D está unido al residuo de aminoácido del final representado con un *.
26. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que -D-es
27. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 25-26, en el que k se elige del grupo constituido 30 por 1, 2, 3, 11 y 27, y preferentemente k es 1.
28. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 25-27, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
35 29. El derivado de acuerdo con la realización 29, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
30. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que -D-es
31.
El derivado de acuerdo con la realización 31, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
32.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que -D-es
33.
El derivado de acuerdo con la realización 33, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
34.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que -D-es
35.
El derivado de acuerdo con la realización 35, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
36.
Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-25, en el que -D-es
37.
El derivado de acuerdo con la realización 37, en el que m se elige del grupo constituido por 0, 1, 2, 3 y 4, y preferentemente m se elige del grupo constituido por 0, 1 y 2.
38.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-38, en el que A-B-C-D-se elige y se combina entre
39. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-38, en el que A-B-C-D-se elige y se combina entre
40. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-40, en el que A-B-C-D-se elige del grupo constituido por
41. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (I):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Xaa26
Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38-Xaa39-Xaa40-Xaa41-Xaa42-Xaa43-Xaa44-Xaa45-Xaa46 fórmula (I) (SEQ ID No: 2) en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa20 es Leu, Met o Lys; Xaa22 es Gly, Glu o Aib; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa26 es Lys, Glu o Arg; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Asn o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg, Gly o Lys; Xaa37 es Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, amida o está ausente; Xaa38 es Lys, Ser, amida o está ausente. Xaa39 es Ser, Lys, amida o está ausente; Xaa40 es Gly, amida o está ausente; Xaa41 es Ala, amida o está ausente; Xaa42 es Pro, amida o está ausente; Xaa43 es Pro, amida o está ausente; Xaa44 es Pro, amida o está ausente; Xaa45 es Ser, amida o está ausente; Xaa46 es amida o está ausente ; siempre que si Xaa38, Xaa39, Xaa40, Xaa41, Xaa42, Xaa43, Xaa44, Xaa45 o Xaa46 está ausente, entonces cada residuo de aminoácido en dirección 3' también está ausente.
42. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (II):
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Ala-Xaa26-Glu-PheIle-Xaa3o-Trp-Leu-Val-Xaa34-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38 fórmula (II) (SEQ ID No: 3) en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa22 es Gly, Glu o Aib; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa26 es Lys, Glu o Arg; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa34 es Lys, Glu o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Ala, Glu o Lys; Xaa38 es Lys, amida o está ausente.
43. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, donde dicho péptido GLP-1 es GLP-1(A-B) en el que A es un número entero entre 1 y 7 y B es un número entero entre 38 y 45, y opcionalmente tiene una o más sustituciones, donde el péptido GLP-1 es derivado a través de un espaciador hidrófilo en el
residuo de aminoácido C-terminal y, opcionalmente, también es derivado en uno de los otros residuos de aminoácidos.
44. El derivado de cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 se elige entre
5 GLP-1(7-35), GLP-1(7-36), GLP-1(7-36)-amida, GLP-1(7-37), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP-1(7-40) y GLP1(7-41), y opcionalmente tiene una o más sustituciones.
45. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-45, que es un derivado de GLP-1(7-37) (SEQ
ID No 1). 10
46.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-45, que es un derivado de un análogo de GLP-1(7-37) (SEQ ID No 1).
47.
El derivado de acuerdo con la realización 47, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de quince
15 residuos de aminoácidos que han sido sustituidos, añadidos o eliminados en comparación con GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1).
48. El derivado de acuerdo con la realización 47, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de diez
residuos de aminoácidos que han sido sustituidos, añadidos o eliminados en comparación con GLP-1(7-37) 20 (SEQ ID No. 1).
49. El derivado de acuerdo con la realización 47, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de seis residuos de aminoácidos que han sido sustituidos, añadidos o eliminados en comparación con GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1).
25 50.El derivado de acuerdo con la realización 47, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de cuatro residuos de aminoácidos que han sido sustituidos, añadidos o eliminados en comparación con GLP-1(7-37) (SEQ ID No. 1).
30 51. El derivado de acuerdo con la realización 51, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de 4 residuos de aminoácidos que no son codificados por el código genético.
52. El derivado de acuerdo con la realización 47, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de 3
residuos de aminoácidos que han sido sustituidos, añadidos o eliminados en comparación con GLP-1(7-37) 35 (SEQ ID No. 1).
53. El derivado de acuerdo con la realización 53, en el que dicho análogo de GLP-1 contiene no más de 3 residuos de aminoácidos que no son codificados por el código genético.
40 54. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 contiene sólo un residuo de lisina que ha sido derivado.
55. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es un
péptido GLP-1 protegido contra DPPIV. 45
56. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es estable frente a DPPIV.
57. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 50 contiene un residuo Aib en posición 8.
58. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que el residuo de aminoácido en la posición 7 de dicho péptido GLP-1 se elige del grupo constituido por D-histidina, desamino-histidina, 2amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3
55 piridilalanina, 2-piridilalanina y 4-piridilalanina.
59. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 se elige del grupo constituido por
60 Arg34GLP-1(7-37), Lys38Arg26,34GLP-1(7-38), Lys38Arg26,34GLP-1(7-38)-OH, Lys36Arg26,34GLP-1(7-36),
Aib8,35 Aib8,22 Aib8,22,35
Aib8,22,35GLP-1(7-37), GLP-1(7-37), GLP-1(7-37), Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22 Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,3-5 Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35
Aib8,22,35 Aib8,35 Aib8,22
Arg26,34Lys38GLP-1(7-38), Arg26Lys38GLP-1(7-38), Arg26Lys38GLP-1(7-38),
Aib8,22,35
Arg26Lys38GLP-1(7-38), Arg3aLys38GLP-1(7-38), Aib8,35Arg34Lys38GLP-1(7-38),
Aib8,22Arg34Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8,35Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22Ala37Lys38GLP-1(7-38), Aib8,22,35 Lys37GLP-1(7-37), Aib8,35Lys37GLP-1(7-37) y Aib8,22Lys37GLP-1(738).
60.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es exendina-4 (SEQ ID NO 4).
61.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es ZP-10, es decir, HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-amida (SEQ ID NO 5).
62.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGX, donde X = P o Y, o un fragmento o un análogo de éstos.
63.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, en el que dicho péptido GLP-1 es Arg18, Leu20, Gln34, Lys33 (Nε-(γ-aminobutiroil(Nα-hexadecanoil)))exendina-4-(7-45)-amida o Arg33, Leu20, Gln34, Lys18 (Nε-(γ-aminobutiroil(Nα-hexadecanoil)))exendina-4-(7-45)-amida.
64.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, donde dicho análogo de GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (III) que está derivado en la posición 18, 23, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Xaa9-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Xaa23-Ala-Xaa25-Arg-Xaa27Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (III) (SEQ ID No: 6) en la que
Xaa7 -Xaa8 es L-histidina-Aib , desamino-histidina-alanina o desamino-histidina-Aib Xaa9 es Glu o un derivado de Glu como alfa, alfa dimetil-Glu Xaa16 es Val o Leu; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa19 es Tyr o Gln; Xaa23 es Gln, Glu, Lys o Arg; Xaa25 es Ala o Val; Xaa27 es Glu o Leu; Xaa30 es Ala, Glu, Lys, Arg o está ausente; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu, Asn o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Aib o está ausente Xaa38 es Lys, Glu o está ausente Xaa39 es amida o está ausente; siempre que si Xaa37 está ausente, entonces Xaa38 también está ausente.
65. El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, donde el péptido GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de fórmula (IV) que es derivada con un residuo de unión a la albúmina en la posición 18, 23, 34, 36, 37 o 38:
Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Xaa18-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Arg-Glu-Phe-Ile-Xaa30-Trp-Leu-Xaa33-Xaa34-Xaa35-Xaa36 -Xaa37-Xaa38-Xaa39 fórmula (IV) (SEQ ID No: 7) en la que
Xaa7 es L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β-hidroxi-histidina, homohistidina, Nα-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4piridilalanina; Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, ácido (1-aminociclopropil) carboxílico, ácido (1-aminociclobutil) carboxílico, ácido (1-aminociclopentil) carboxílico, ácido (1-aminociclohexil) carboxílico, ácido (1aminocicloheptil) carboxílico o ácido (1-aminociclooctil) carboxílico; Xaa18 es Ser, Lys o Arg; Xaa30 es Ala, Glu, Lys o Arg; Xaa33 es Val o Lys; Xaa34 es Lys, Glu o Arg; Xaa35 es Gly o Aib; Xaa36 es Arg o Lys; Xaa37 es Gly, Aib o está ausente, Xaa38 es Lys o está ausente, y
Xaa39 es amida o está ausente;
66.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 65-66 anteriores, en el que Xaa38 está ausente.
67.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-67 anteriores, en el que Xaa37 y Xaa38 están ambos ausentes.
68.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-68 anteriores, en el que 2 aminoácidos están sustituidos en comparación con GLP-1 (7-37).
69.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-68 anteriores, en el que 3 aminoácidos están sustituidos en comparación con GLP-1 (7-37).
70.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-68 anteriores, en el que 4 aminoácidos están sustituidos en comparación con GLP-1 (7-37).
71.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-68 anteriores, en el que 5 aminoácidos están sustituidos en comparación con GLP-1 (7-37).
72.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-68 anteriores, en el que 6 aminoácidos están sustituidos en comparación con GLP-1 (7-37).
73.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-73 anteriores, en el que Xaa7 es desaminohistidina.
74.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 65-74 anteriores, en el que Xaa38 es Aib.
75.
El derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones anteriores, que se elige del grupo constituido por
N-ε37{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1(737)amida; N-ε20-{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[Aib2,Leu14,Lys20,Gln28,Ser(O-bencil)39]exendina-4 (139)amida: N-ε26{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}propionilamino) etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[desaminoHis7,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon37{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil] amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(737)amida; N-épsilon23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoilamino)piperidin-4-ilcarbonilamino]-3(carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidin-4-ilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Phe(mCF3)28]GLP-1-(7-37)amida; [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxilacetilamino)etoxi]etoxilacetil); N-épsilon20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,Glu30,Thr(O-bencil)33]GLP-1-(737)amida N-épsilon30{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[Aib8,Glu22,Arg26,Lys30]GLP-1-(7-37); N-épsilon31{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[Aib8,Glu22,Arg26,Lys31]GLP-1-(7-37); N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)[Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina28,Glu30]GLP-1-(737)amida; [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil]piperidina-4carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)[Aib8,Lys20,Arg 26,2-Naftilalanina12,Glu30]GLP-1(7-37)amida;
[DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil] piperidina-4-carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} propionilamino)etoxi]etoxilacetilamino)etoxi]etoxilacetil)[Aib8,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butiril][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-{4-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]butiril}[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(737)amida; N-épsilon18-{2-(2-(2-(2-[2-(2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butanoilamino]etoxi)etoxi]acetil)etoxi)etoxi)acetil}[Aib8,Lys18,Arg26,Arg34]GLP-1(7-37); N-épsilon20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[trans-4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil] [desaminoHis1,Lys20,Ser(O-bencil)33,Ser(O-bencil)33]exendina (1-39 ); [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(trans-19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]amida; [desaminoHis7,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino] metil)ciclohexilcarbonilamino]3-carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida; N-épsilon26[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil[Aib8,Lys26] GLP-1 (7-37)amida; N-épsilon26[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-2-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Lys26] GLP-1 (7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37); N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22, Arg26,Glu30,Arg34,Lys37 ]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)-hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]-butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]-dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)
butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys33,Arg34]GLP-1-(7-34); N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino] etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi) acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys26,Arg34]GLP-1-(7-36)amida; [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}-butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]amida; N-épsilon20-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys20,Glu22,Arg26,Glu30,Pro 37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22 ,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34, Lys37]GLP-1-(7-37)amida; N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37] GLP-1-(7-37)amida; [Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[4-carboxi-4-(4-carboxi-4-{4-[4-(16-1H-tetrazol-5-ilhexadecanoilsulfamoil)butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]; y [Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-((7-37)Lys(2-(2-(3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-[4-(S)-carboxi-4(4-(S)-carboxi-4-(4-{4-[16-(Tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil]butanoilamino}butanoilamino)butirilamino) butirilamino]etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)propionilamino)etoxi)etoxi) péptido.
76.
Un método para aumentar el tiempo de acción de un péptido GLP-1 en un paciente, caracterizado porque un péptido GLP-1(7-37) o un análogo de éste es derivado con A-B-C-D-según se da a conocer en cualquiera de las realizaciones precedentes.
77.
Un método para aumentar el tiempo de acción de un péptido GLP-1 en un paciente a más de alrededor de 40 horas, caracterizado porque un péptido GLP-1-(7-37) o un análogo de éste es derivado con A-B-C-D-según se da a conocer en cualquiera de las realizaciones precedentes.
78.
Una composición farmacéutica que contiene un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 176 y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
79.
La composición farmacéutica de acuerdo con la realización 1-76, que es adecuada para la administración parenteral.
80.
El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-76 para la preparación de un medicamento.
81.
El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-76 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
82.
El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-76 para la preparación de un medicamento para retrasar o prevenir el avance de la enfermedad en la diabetes tipo 2.
83.
El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-76 para la preparación de un medicamento para disminuir el consumo de alimentos, disminuir la apoptosis de las células β, aumentar la función de las células β y la masa de las células β, y/o restaurar a las células β la sensibilidad a la glucosa.
84.
Un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-76 para utilizar en el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión,
síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
[0189] Todos los títulos y subtítulos se usan en este documento sólo a efectos de conveniencia y no deben ser tomados como limitantes de la invención en modo alguno.
[0190] Cualquier combinación de los elementos descritos antes en todas sus variaciones posibles está comprendida por la invención, a menos que se indique lo contrario en este documento o el contexto lo contradiga claramente.
[0191] Los términos "un" y "una" y "el" y "la" y referentes similares utilizados en el contexto de describir la invención se deben considerar que cubren tanto el singular como el plural, a menos que se indique lo contrario en este documento o el contexto lo contradiga claramente.
[0192] La relación de rangos de valores en este documento pretende simplemente servir como un método de escritura rápido para referirse individualmente a cada valor diferente comprendido en un rango, a menos que se indique lo contrario en este documento, y cada valor diferente es incorporado en la memoria como si se hubiera indicado individualmente en el documento. A menos que se indique lo contrario, todos los valores exactos provistos son representativos de los valores aproximados correspondientes (por ej., todo los ejemplos de valores exactos provistos con respecto a un factor o una medida particular se puede considerar que también proporcionan una medida aproximada correspondiente, modificada por “aproximadamente”, cuando corresponda).
[0193] Todos los métodos descritos en este documento se pueden realizar en cualquier orden adecuado a menos que se indique lo contrario o el contexto lo contradiga claramente.
[0194] El uso de cualquiera y todos los ejemplos, o el lenguaje ejemplificante (por ej., “como”) provistos aquí, pretende únicamente iluminar mejor la invención y no plantea ninguna limitación al alcance de la misma a menos que se indique lo contrario. Ningún lenguaje de esta memoria se debe interpretar que indica que algún elemento es esencial para la práctica de la invención a menos que se establezca explícitamente.
[0195] El hecho de citar documentos de patente en esta memoria se hace sólo por conveniencia y no refleja ninguna visión de la validez, patentabilidad y/o aplicabilidad de dichos documentos de patente.
[0196] La descripción de cualquier aspecto o realización de la invención empleando términos como "comprende/que comprende,", "tiene/que tiene", "que incluye/incluido(a)(s)" o "contiene/que contiene" con referencia a un elemento o elementos pretende proporcionar respaldo para un aspecto o realización similar de la invención que "esté constituido(a) por", "esté constituido(a) esencialmente por", o "consista sustancialmente en" ese elemento o elementos particulares, a menos que se indique lo contrario o el contexto lo contradiga claramente (por ej., una formulación que se describa aquí que contiene un elemento particular se debe entender que también describe una formulación que está constituida por ese elemento, a menos que se indique lo contrario o el contexto lo contradiga claramente).
[0197] La presente invención se ilustra aún más en los métodos y ejemplos representativos siguientes que, no obstante, no pretenden limitar el alcance de la invención en modo alguno.
[0198] Las características dadas a conocer en la descripción precedente y en los ejemplos siguientes pueden, tanto separadamente como en cualquier combinación de ellas, ser material para realizar la invención en sus diversas formas.
Ejemplos
[0199] Abreviaturas utilizadas:
t.a.:
temperatura ambiente
DIPEA:
diisopropiletilamina
H2O:
agua
CH3CN:
acetonitrilo
DMF:
N,N-dimetilformamida
HBTU:
hexafluorofosfato de de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio
Fmoc:
9 H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilo
Boc:
tert-butiloxicarbonilo
OtBu:
éster tert-butílico
tBu:
tert-butilo
Trt:
trifenilmetilo
Pmc:
2,2,5,7,8-pentametil-croman-6-sulfonilo
Dde:
1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo
ivDde:
1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metilbutilo
Mtt:
4-metiltritilo
Mmt:
4-metoxitritilo
DCM:
diclorometano
TIS:
triisopropilsilano
TFA:
ácido trifluoroacético
Et2O:
éter dietílico
NMP:
1-metil-pirrolidin-2-ona
DIPEA:
diisopropiletilamina
HOAt:
1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HOBt:
1-hidroxibenzotriazol
DIC:
diisopropilcarbodiimida
DBU:
1,8-diazabiciclo-[5,4,0]undeceno-7
PM:
peso molecular
A: Síntesis de péptidos unidos a resinas
SPPS Método A.
5 [0200] La peptidil-resina protegida se sintetizó según la estrategia de Fmoc en un sintetizador de péptidos Applied Biosystems 433 en una escala de 0.25 mmol o 1.0 mmol utilizando los protocolos FastMoc UV provistos por el fabricante que emplean acoplamientos mediados por HBTU (hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3tetrametiluronio) o HATU (hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) en NMP (N
10 metilpirrolidona) y monitoreo UV de la eliminación del grupo protector Fmoc. La resina de partida utilizada para la síntesis de péptido amidas fue la resina Rink-Amida, y la resina Wang o clorotritilo se usó para los péptidos con un carboxi C-terminal. Los derivados de aminoácidos protegidos utilizados fueron aminoácidos-Fmoc estándar (suministrados por ejemplo por Anaspec o Novabiochem) provistos en cartuchos pesados previamente adecuados para el sintetizador ABI433A con excepción de los aminoácidos no naturales como Fmoc-Aib-OH (Fmoc-ácido
15 aminoisobutírico). El aminoácido N-terminal se protegió con Boc en el grupo alfa amino (por ej. se usó BocHis(Boc)OH para los péptidos con His en el extremo N-terminal). El grupo épsilon amino de la lisina en posición 26 se protegió con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta para la unión de la porción de unión a la albúmina y el espaciador. La síntesis de los péptidos puede en algunos casos ser mejorada por el uso de dipéptidos protegidos en el enlace amida del dipéptido con un grupo que puede ser escindido en condiciones ácidas por
20 ejemplo, pero no exclusivamente, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en que está presente una serina o una treonina en el péptido, se pueden usar dipéptidos de pseudoprolina (véase, por ej. el catálogo de Novobiochem 2002/2003 o una versión más nueva, o W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403.
SPPS Método B:
25 [0201] Un método alternativo (método B) de síntesis de péptidos fue la química de Fmoc en un sintetizador de péptidos Liberty a base de microondas (CEM Corp., Carolina del norte). La resina fue Tentagel S RAM con una carga de 0.24 mmol/g. La química de acoplamiento fue DIC/HOAt en NMP utilizando soluciones de aminoácido 0.3 M en NMP y un exceso molar de 8-10 veces. Las condiciones de acoplamiento fueron 5 minutos hasta 70 °C. La
30 desprotección se hizo con 5% de piperidina en NMP hasta 70 °C. Cuando se deseaba una modificación química de una cadena lateral de la lisina, la lisina se incorporaba como Lys(Mtt). El grupo Mtt se eliminó suspendiendo la resina en hexafluoroisopropanol puro durante 20 minutos seguido de lavado con DCM y NMP. La modificación química de
la lisina se realizó por síntesis manual o mediante uno o más pasos automatizados en el sintetizador Liberty seguido de acoplamiento manual. Otro método de síntesis de péptidos fue mediante química de Fmoc en un ABI 433 con acoplamiento por HBTU. Luego de la síntesis la resina se lavó con DCM y se secó, y el péptido se escindió de la resina mediante un tratamiento de 2 horas con TFA/TIS/agua (92.5/5/2.5) seguido de precipitación con éter dietílico. El péptido se redisolvió en ácido acético al 30% o un solvente similar y se purificó por RP-HPLC estándar en una columna C18 utilizando acetonitrilo/TFA. La identidad del péptido se confirmó por MALDI-MS.
SPPS Método C
[0202] La peptidil-resina protegida se sintetizó según la estrategia de Fmoc en un sintetizador Advanced ChemTech (APEX 348) en una escala de 0.25 mmol empleando los protocolos provistos por el fabricante que emplean acoplamientos mediados por DIC (diciclohexilcarbodiimida) y HOBt (1-hidroxibenzotriazol) en NMP (Nmetilpirrolidona). La resina de partida utilizada para la síntesis de las péptido amidas fue la resina Rink-Amida, y la resina Wang o clorotritilo se usó para los péptidos con un carboxi C-terminal. Los derivados de aminoácidos protegidos fueron aminoácidos-Fmoc estándar (provistos por ejemplo por Anaspec o Novabiochem. El aminoácido N-terminal fue protegido con Boc en el grupo alfa amino (por ej. se usó Boc-His(Boc)OH para los péptidos con His en el extremo N-terminal). El grupo épsilon amino de la lisina en posición 26 se protegió con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta para la unión de la porción de unión a la albúmina y el espaciador. La síntesis de los péptidos puede en algunos casos ser mejorada por el uso de dipéptidos por ej. pseudoprolinas de Novabiochem, Fmoc-Ser(tbu)-ΨSer(Me,Me)-OH, véase por ej., el catálogo de Novobiochem 2002/2003 o una versión más nueva o
W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403
Procedimiento para la eliminación de la protección con ivDde o Dde
[0203] Se colocó la resina (0.25 mmol) en un aparato de agitación/filtración manual y se trató con hidrazina al 2% en N-metilpirrolidona (20 mL, 2 x 12 min) para eliminar el grupo Dde o ivDde y se lavó con N-metilpirrolidona (4 x 20 mL). Procedimiento para la eliminación de la protección con Mtt o Mmt
[0204] Se colocó la resina (0.25 mmol) en un aparato de agitación/filtración manual y se trató con TFA al 2% y TIS 23% en DCM (20 mL, 5-10 min se repitió 6-12 veces) para eliminar el grupo Mtt o Mmt y se lavó con DCM (2 x 20 mL), MeOH al 10% y DIPEA al 5% en DCM (2 x 20ml) y N-metilpirrolidona (4 x 20 mL).
Procedimiento alternativo para la eliminación de la protección con Mtt:
[0205] Se colocó la resina en una jeringa y se trató con hexafluroisopropanol durante 2 X 10 min para eliminar el grupo Mtt. Después la resina se lavó con DCM y NMP como se describió antes.
Procedimiento para la unión de cadenas laterales al residuo de lisina.
[0206] El residuo de unión a la albúmina (B-U-cadena lateral de fórmula I) se puede unir al péptido mediante acilación al péptido unido a la resina o acilación en solución al péptido sin proteger usando reactivos de acilación estándar como, pero no exclusivamente, DIC, HOBt/DIC, HOAt/DIC o HBTU.
Unión al péptido unido la resina:
Ruta I
[0207] El residuo de unión a la albúmina (A-B)-cadena lateral de fórmula I) activado (éster activo o anhídrido simétrico) como el éster mono-(2,5-pirrolidinio-1-il) del ácido octadecadienoico (Ebashi et al. EP511600, 4 equivalentes molares con relación al péptido unido a la resina) se disolvió en NMP (25 mL), se agregó a la resina y se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se filtró y la resina se lavó exhaustivamente con NMP, diclorometano, 2-propanol, metanol y éter dietílico.
Ruta II
[0208] El residuo de unión a la albúmina (A-(B)-cadena lateral de fórmula I) se disolvió en N-metilpirrolidona/cloruro de metileno (1:1, 10 mL). Se agregaron el reactivo de activación como hidroxibenzotriazol (HOBt) (4 equivalentes molares en relación con la resina) y diisopropilcarbodiimida (4 equivalentes molares en relación con la resina) y la solución se agitó durante 15 min. La solución se agregó a la resina y se agregó diisopropiletilamina (4 equivalentes molares en relación con la resina). La resina se agitó 2 a 24 horas a temperatura ambiente. La resina se lavó con Nmetilpirrolidona (2 x 20 mL), N-metilpirrolidona/cloruro de metileno (1:1) (2 x 20 mL) y cloruro de metileno (2 x 20 mL).
Ruta III
[0209] El residuo de unión a la albúmina (A-B-cadena lateral de fórmula I) activado (éster activo o anhídrido simétrico) como el éster mono-(2,5-pirrolidinio-1-il) del ácido octadecadienoico (Ebashi et al. EP511600, 1-1.5 equivalentes molares con relación al péptido) se disolvió en un solvente orgánico como acetonitrilo, THF, DMF, DMSO o en una mezcla de agua/solvente orgánico (1-2 mL) y se agregó a una solución del péptido en agua (10-20 mL) junto con 10 equivalentes molares de DIPEA. En el caso de grupos protectores en el residuo de unión a la albúmina como tert-butilo, la mezcla de reacción se liofilizó toda la noche y después se desprotegió el péptido crudo aislado -en el caso de un grupo tert-butilo el péptido se disolvió en una mezcla de ácido trifluoroacético, agua y triisopropilsilano (90:5:5). Después de 30 minutos la mezcla se evaporó al vacío y el péptido final se purificó por HPLC preparativa.
[0210] Procedimiento para la eliminación de la protección con Fmoc: Se colocó la resina (0.25 mmol) en un matraz de vidrio en un aparato de agitación manual y se trató con N-metilpirrolidona/cloruro de metileno (1:1) (2 x 20 mL) y con N-metilpirrolidona (1 x 20 mL), una solución de piperidina al 20% en N-metilpirrolidona (3 x 20 mL, 10 min cada uno). La resina se lavó con N-metilpirrolidona (2 x 20 mL), N-metilpirrolidona/cloruro de metileno (1:1) (2 x 20 mL) y cloruro de metileno (2 x 20 mL).
Procedimiento para escindir el péptido de la resina:
[0211] El péptido se escindió de la resina agitando durante 180 min a temperatura ambiente con una mezcla de ácido trifluoroacético, agua y triisopropilsilano (95:2.5:2.5 a 92:4:4). La mezcla de escisión se filtró y el filtrado se concentró hasta obtener un aceite mediante una corriente de nitrógeno. El péptido crudo se precipitó de este aceite con 45 mL de éter dietílico y se lavó 1 a 3 veces con 45 mL de éter dietílico.
[0212] Purificación: El péptido crudo se purificó por HPLC semipreparativa en una columna de 20 mm x 250 mm empacada con sílice C-18 de 5 µ o 7 µ. Dependiendo del péptido se usaron uno o dos sistemas de purificación. TFA: Después de secarlo, el péptido crudo se disolvió en 5 mL de ácido acético al 50% en H2O, se diluyó a 20 mL con H2O y se inyectó en una columna que después se eluyó con un gradiente de 40-60% de CH3CN en 0.1% de TFA, 10 mL/min durante 50 min a 40 °C. Se recogieron las fracciones que contenían el péptido. El péptido purificado se liofilizó después de la dilución del eluato con agua. Sulfato de amonio: La columna se equilibró con 40% de CH3CN en (NH4)2SO4 0.05 M, que se ajustó a pH 2.5 con H2SO4 concentrado. Después de secarlo el péptido crudo se disolvió en 5 mL de ácido acético al 50% en H2O, se diluyó a 20 mL con H2O y se inyectó en la columna que después se eluyó con un gradiente de 40% -60% de CH3CN en (NH4)2SO4 0.05 M, pH 2.5 a 10 mL/min durante 50 min a 40 °C. Se recogieron las fracciones que contenían el péptido, se diluyeron con 3 volúmenes de H2O y se pasaron a través de un cartucho Sep-Pak® C18 (Waters Nº de pieza 51910) que se equilibró con 0.1% de TFA. Después se eluyó con 70% de CH3CN que contenía 0.1% de TFA y el péptido purificado se aisló por liofilización después de la dilución del eluato con agua. El producto final obtenido se caracterizó por RP-HPLC analítica (tiempo de retención) y por LCMS. El análisis de RP-HPLC se realizó utilizando detección UV a 214 nm y por ejemplo una columna Vydac 218TP54 de
4.6 mm x 250 mm de sílice C-18 de 5 µ (The Separations Group, Hesperia, EE.UU.) y se eluyó por ejemplo a 1 mL/min a 42 °C. La mayoría de las veces se usaron las condiciones específicas siguientes:
Método 03_A1_1
[0213] HPLC (Método 03_A1_1): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Waters 2690 equipado con un detector de arreglo de diodos Waters 996. Se obtuvieron detecciones UV a 214, 254, 276 y 301 nm en una columna 218TP54 de 4.6 mm x 250 mm de sílice C-18 de 5 µ (The Seperations Group, Hesperia), que se eluyó a 1 mL/min a 42 °C. La columna se equilibró con 10% de sulfato amonio 0.5 M, que se ajustó a pH 2.5 con ácido sulfúrico 4 M. Después de la inyección, la muestra se eluyó con un gradiente de 0% a 60% de acetonitrilo en el mismo tampón acuoso durante 50 min.
Método 03_B1_2
[0214] HPLC (Método 03_B1_2): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Waters 2690 equipado con un detector de arreglo de diodos Waters 996. Se obtuvieron detecciones UV a 214, 254, 276 y 301 nm en una columna Zorbax 300SB C-18 (4.5 x 150 mm, 5 µ), que se eluyó a 0.5 mL/min a 42 °C. La columna se equilibró con una solución acuosa de TFA en agua (0.1%). Después de la inyección, la muestra se eluyó con un gradiente de 0% a 60% de acetonitrilo (+ 0.1% de TFA) en una solución acuosa de TFA en agua (0.1%), durante 50 min.
Método 02_B1_1
[0215] HPLC (Método 02_B1_1): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Alliance Waters 2695 equipado con un detector de banda dual Waters 2487. Se obtuvieron detecciones UV a 214 nm y 254 nm empleando una
columna Vydac 218TP53, C18 , 300Å, 5 µm, 3.2 mm x 250 mm, 42 °C. Se eluyó con un gradiente lineal de 0-60% de acetonitrilo, 95-35% de agua y 5% de ácido trifluoroacético (1.0%) en agua, en 50 minutos, a una velocidad de flujo de 0.50 mL/min.
5 Método 01_B4_2
[0216] HPLC (Método 01_B4_2): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Waters 600S equipado con un detector de arreglo de diodos Waters 996. Se obtuvieron detecciones UV a 214 nm y 254 nm empleando una columna Symmetry300 C18, 5 µm, 3.9 mm x 150 mm, 42 °C. Se eluyó con un gradiente lineal de 5-95% de 10 acetonitrilo, 90-0% de agua y 5% de ácido trifluoroacético (1.0%) en agua, en 15 minutos, a una velocidad de flujo de
1.0 mL/min.
Método 02_B4 4
15 [0217] HPLC (Método 02_B4_4): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Alliance Waters 2695 equipado con un detector de banda dual Waters 2487. Se obtuvieron detecciones UV a 214 nm y 254 nm empleando una columna Symmetry300 C18, 5 µm, 3.9 mm x 150 mm, 42 °C. Se eluyó con un gradiente lineal de 5-95% de acetonitrilo, 90-0% de agua y 5% de ácido trifluoroacético (1.0%) en agua, en 15 minutos, a una velocidad de flujo de
1.0 mL/min.
20 Método 02_B6_1
[0218] HPLC (Método 02_B6_1): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Alliance Waters 2695 equipado con un detector de banda dual Waters 2487. Se obtuvieron detecciones UV a 214 nm y 254 nm empleando una 25 columna Vydac 218TP53, C18, 300Å, 5 µm, 3.2 mm x 250 mm, 42 °C. Se eluyó con un gradiente lineal de 0-90% de acetonitrilo, 95-5% de agua y 5% de ácido trifluoroacético (1.0%) en agua, en 50 minutos, a una velocidad de flujo de
0.50 mL/min.
Método 03_B6_1
30 [0219] HPLC (Método 03_B1_1): El análisis de RP se realizó empleando un sistema Waters 2690 equipado con un detector de arreglo de diodos Waters 996. Se obtuvieron detecciones UV a 214, 254, 276 y 301 nm en una columna 218TP54 de 4.6 mm x 250 mm de sílice C-18 de 5 µ (The Seperations Group, Hesperia), que se eluyó a 1 mL/min a 42 °C. La columna se equilibró con 5% de acetonitrilo (+ 0.1% de TFA) en una solución acuosa de TFA en agua
35 (0.1%). Después de la inyección, la muestra se eluyó con un gradiente de 0% a 90% de acetonitrilo (+ 0.1% de TFA) en una solución acuosa de TFA en agua (0.1%), durante 50 min.
[0220] Alternativamente se puede realizar una elución por gradiente preparativa como se indica antes y el porcentaje de acetonitrilo al cual eluye el compuesto está indicado. La identidad se confirma por MALDI. 40 [0221] Se usó el equipamiento siguiente::
LCMS se realizó en un sistema que constaba de un espectrómetro de masas Sciex API 100 Single tipo cuadripolo, bomba Perkin Elmer Serie 200 Quard, muestrador automático Perkin Elmer Serie 200, detector UV 45 Applied Biosystems 785A, detector evaporativo de dispersión de la luz Sedex 75.
[0222] El control del instrumento y la adquisición de datos se hicieron mediante el software de control Sciex Sample corriendo en una computadora con Windows 2000.
50 [0223] La bomba de HPLC se conectó a dos recipientes de eluyente que contenían:
A: Ácido trifluoroacético al 0.05% en agua
B: Ácido trifluoroacético al 0.05% en acetonitrilo
55 [0224] El análisis se realizó a temperatura ambiente inyectando un volumen adecuado de la muestra (preferentemente 20 µl) en la columna, que se eluyó con un gradiente de acetonitrilo.
[0225] Las condiciones de HPLC, parámetros del detector y parámetros del espectrómetro de masas utilizados se indican en la tabla siguiente. 60
Columna:
: Waters Xterra MS C-18 X 3 mm di 5 µm
Gradiente:
: 5% -90% de acetonitrilo lineal durante 7.5 min a 1.5 mL/min
Detección:
: 210 nm (salida análoga del DAD)
[0226] ELS (salida análoga del ELS), 40 °C
MS modo de ionización API-ES
5 [0227] La LCMS alternativa se realizó en un sistema que constaba de bomba binaria Hewlett Packard serie 1100 G1312A, compartimiento de columna Hewlett Packard series 1100, detector de arreglo de diodos Hewlett Packard serie 1100 G1315A DAD, Hewlett Packard serie 1100 MSD y detector evaporativo de dispersión de la luz Sedere 75 controlado por el software HP Chemstation. La bomba de HPLC se conectó a dos recipientes de eluyente que contenían:
A: NH4OH 10 mM en agua
B: NH4OH 10 mM en 90% de acetonitrilo
El análisis se realizó a 23 °C inyectando un volumen adecuado de la muestra (preferentemente 20 µl) en la columna
15 que se eluyó con un gradiente de A y B. [0379] Las condiciones de HPLC, parámetros del detector y parámetros del espectrómetro de masas utilizados se indican en la tabla siguiente. Columna Waters Xterra MS C-18 X 3 mm di 5 µm Gradiente 5% -100% de acetonitrilo lineal durante 6.5 min a 1.5 mL/min
20 Detección a 210 nm (salida análoga del DAD) ELS (salida análoga del ELS) MS modo de ionización API-ES, Rango de escaneo 100-1000 amu paso 0.1 amu
MALDI-MS:
25 [0228] Los pesos moleculares de los péptidos se determinaron usando espectroscopía de masas de tiempo de vuelo desorción láser asistida por matriz (MALDI-MS), y se registraron en un Microflex (Bruker). Se utilizó una matriz de ácido α-ciano-4-hidroxicinámico.
30 Condiciones de HPLC analítica (método I):
[0229] Equilibrado de la columna (Xterra TM MS C18, 5 µm, 4.6 x 150 mm, P7N 186 000490) con 0.1% de TFA/H2O y elución con gradiente de 0% de CH3CN/0.1% de TFA/H2O hasta 60% de CH3CN/0.1% de TFA/H2O durante 25 min seguido de un gradiente de 60% a 100% en 5 min.
35 [0230] En los ejemplos de esta invención la nomenclatura y las gráficas estructurales significan:
Se usan símbolos de una letra para los aminoácidos naturales, por ej. H es L-histidina, A es L-alanina, etc. También se pueden usar abreviaturas de tres letras para los aminoácidos, por ej. His es L-histidina, Ala es L
40 alanina, etc. Para los aminoácidos no naturales se usan abreviaturas de tres letras, como Aib para ácido aminoisobutírico. La posición de los aminoácidos puede ser indicada con un número en supraíndice después del símbolo del aminoácido como Lys37 o como Lys37. El grupo amino N-terminal se puede simbolizar como NH2 o como H. El grupo carboxílico C-terminal se puede simbolizar como -OH o como -COOH. El grupo amida C-terminal se simboliza como -NH2
45 Las subestructuras
ambas significan His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe.
50 [0231] El grupo épsilon amino de la Lisina se puede describir también como el símbolo griego que se deletrea "épsilon".
[0232] Las estructuras de los ejemplos siguientes son en varios casos una combinación de símbolos de una letra
55 para los aminoácidos naturales, combinados con las abreviaturas de tres letras Aib para el ácido aminoisobutírico. En varios casos algunos de los aminoácidos se muestran en la estructura completa expandida. La lisina que ha sido derivada se puede mostrar como las estructuras completas expandidas del ejemplo 1 en las que la lisina en la
posición 38 está expandida. El nitrógeno (con H indicado) entre la arginina en posición 37 y la lisina expandida en posición 38 es por lo tanto el nitrógeno del enlace peptídico que conecta los dos aminoácidos en el ejemplo 1. Según el procedimiento anterior, los derivados siguientes se prepararon como ejemplos no limitantes de la invención:
5 Ejemplo 1
N-ε37{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [desaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP1(7-37)amida
Método de preparación: A 15
[0234] HPLC método B6
RT= 35.49 min
LCMS: m/z = 1096.2 (M+3H)3+ 20 PM calculado = 4380.0
Ejemplo 2
N-ε20-{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-425 carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil
bencil)39]exendina-4 (1-39)amida
[Aib2,Leu14,Lys20,Gln28,Ser(O
30 Método de preparación: A
[0236] HPLC método B6:
35 RT= 37.63 min LCMS: m/z = 1705.9 (M+3H)3+ PM calculado = 5113.9
Ejemplo 3
40 N-ε26{2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [desaminoHis7,Arg34]GLP-1-(7-37)
[0237]
Método de preparación: A
5 [0238] HPLC método B6:
RT= 36.45 min LCMS: m/z = 1404.3 (M+3H)3+ PM calculado = 4209.8
10 Ejemplo 4
N-épsilon37{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(715 37)amida
[0239]
20 Método de preparación: B
[0240] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4409.1
25 Ejemplo 5
N-épsilon23-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoilamino)piperidin-4-ilcarbonilamino]-3(carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Arg26, Arg34]GLP-1-(7-37) 30 [0241]
Método de preparación: A 35
[0242] HPLC método 02_B6_4:
RT= 9.32 min
LCMS: m/z = (M+3H)3+ 1413.8 40 PM calculado = 4238.8
Ejemplo 6
N-épsilon37-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidin-4-ilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Phe(mCF3)28]GLP-1-(7-37)amida
[0243]
Método de preparación: A
10 [0244] HPLC método 01_B6_2:
RT= 11.92 min LCMS: m/z = 1474.8 (M+3H)3+ PM calculado = 4420.0
15 Ejemplo 7
[DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) 20 [0245]
Método de preparación: B
25 [0246] El péptido se preparó de manera similar al método A, aunque usando un sintetizador de péptidos Liberty CEM, y partiendo de resina Fmoc-Lys(mtt)-wang. La amina N-terminal se protegió con un grupo Boc. Mtt se eliminó de la lisina utilizando hexafluoro-2-propanol, y la cadena lateral se preparó usando química de fmoc en un sintetizador de péptidos Liberty CEM.
30 HPLC método 03_B6_1:
RT= 35.50 min LCMS: m/z = 1114.0 (M+4H)4+
(M) calculada = 4452.1
35 Ejemplo 8
N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,Glu30,Thr(O-bencil)33]GLP-140 (7-37)amida;
[0247]
Método de preparación: A
5 [0248] HPLC método B6:
RT= 32.49 min LCMS: m/z = 1459.0 (M+3H)3+ PM calculado = 4375.0
10 Ejemplo 9
N-épsilon30 {2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil) piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil [Aib8,Glu22,Arg26,Lys30]GLP-1-(7-37) 15 [0249]
[0250] Método de preparación: El péptido se preparó en un equipo Apex396 D Advanced Chemtech y el producto
20 final se caracterizó mediante HPLC analítica y MALDI-MS. HPLC (método I): véase la descripción anterior RT= 27.6 min MALDI-MS: 4367.9
25 Ejemplo 10
N-épsilon31{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxy-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil[Aib8, Glu22, Arg26,Lys 31]GLP-1-(7-37)
[0252] Método de preparación: El péptido se preparó en un equipo Apex396 D Advanced Chemtech y el producto final se caracterizó mediante HPLC analítica y MALDI-MS.
35 HPLC (método A): véase la descripción anterior RT= 28.4 min MALDI-MS: 4252.5
Ejemplo 11
40 N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina28,Glu30,]GLP1-(7-37)amida
45 [0253]
Método de preparación: A
5 [0254] HPLC método B6:
RT= 32.31 min LCMS: m/z = 1445.0 (M+3H)3+ PM calculado = 4332.9
10 Ejemplo 12
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil]piperidina-4carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida 15 [0255]
Método de preparación: A 20 [0256] HPLC método 02_B4_4:
RT= 9.73 min LCMS: m/z = (M/3)+1 = 1494.9 y (M/4)+1 = 1120.9 ; (Sciex100 API) 25 PM calculado = 4480.1
Ejemplo 13
N-ε20({2-[2-(2-{2-[2-((R)-3-carboxi-3-{[1-(17-carboxiheptadecanoil)piperidina-430 carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [Aib8,Lys20,Arg26,2-Naftilalanina12,Glu30]GLP1-(7-37)amida
35 Método de preparación: A
[0258] HPLC método B6:
40 RT= 30.70 min LCMS: m/z = 1084.0 (M+4H)4+ PM calculado = 4332.9
Ejemplo 14 45 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil]piperidina-459
carbonilamino]-4-carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida [0259]
5 Método de preparación: A, y ejemplo 72
[0260] HPLC método 02_B6_4:
10 RT= 9.95 min LCMS: m/z = 1484. (M+3H)3+ PM calculado = 4451.1
Ejemplo 15
15 N-épsilon31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxi-nonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)[Aib 8,Glu22,Arg26,Lys31,Arg34]GLP-1-(7-37)
[0261]
Método de preparación: B, y ejemplo 72
[0262] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. 25 La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4280.9
Ejemplo 16
30 N-épsilon26-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butiril] [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
35 Método de preparación: B, y ejemplo 72
[0264] El péptido se eluyó a 69% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS
40 PM calculado = 3990.6
Ejemplo 17
N-épsilon26-{4-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]butiril}[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37) [0265]
Método de preparación: B
10 [0266] El péptido se eluyó a 70% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4075.7
15 Ejemplo 18
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil] [Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: B, y ejemplo 72
25 [0268] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4135.8
Ejemplo 19
30 N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34 ]GLP-1-(7-37)-amida
Método de preparación: B, y ejemplo 72
40 [0270] El péptido se eluyó a 70% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4279.9
Ejemplo 20
45 N-épsilon18-{2-(2-(2-(2-[2-(2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butanoilamino]etoxi)etoxi]acetil)etoxi)etoxi)acetil}[Aib8,L ys18,Arg26,Arg34]GLP-1(7-37) [0271]
5 [0272] Método de preparación: El péptido se preparó en un equipo Apex396 D Advanced Chemtech y el producto final se caracterizó por HPLC analítica y MALDI-MS. HPLC (método B6):
RT= 34.1 min
10 LCMS: m/z = XX (M+4H)4+: 1088 PM calculado = 4350.0
Ejemplo 21
15 N-ε20-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[trans-4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][desaminoHis1,Lys20,Ser(O-bencil)33,Ser(Obencil)39]exendina (1-39)
[0274] HPLC método B6:
25 RT= 39.22 min LCMS: m/z = 1736.9 (M+3H)3+ PM calculado = 5207.0
30 Ejemplo 22
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-3-[4-([19-carboxinonadecanoilamino]metil) ciclohexilcarbonilamino]-3-carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida
Método de preparación: B
40 [0276] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4494.2
Ejemplo 23
N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxy-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida
10 Método de preparación: B
[0278] El péptido se eluyó a 67% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4451.1
15 Ejemplo 24
N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(720 37)amida
25 Método de preparación: B
[0280] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4422.1
30 Ejemplo 25
N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(trans-19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida 35 [0281]
Método de preparación: B [0282] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo.
La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4350.0
Ejemplo 26
5 N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Carboxy-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
[0283]
Método de preparación: B
[0284] El péptido se eluyó a 69% de acetonitrilo. 15 La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4423.1
Ejemplo 27
20 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]-amida
25 Método de preparación: B
[0286] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS
30 PM calculado = 4479.1
Ejemplo 28
[DesaminoHis7,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil) 35 ciclohexilcarbonilamino]3-carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil]amida
40 Método de preparación: A [0288] HPLC método B6:
Ejemplo 29
10 N-épsilon26[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil[Aib8,Lys26]GLP-1-(7-37)amida
15 Método de preparación: Método C
[0290] HPLC método 01_B4_2:
20 RT= 11.26 min LCMS: m/z = XX (M+4H)4+ 1071 PM calculado = 4279.9
Ejemplo 30
25 N-épsilon26[2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-2-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]-4carboxibutanoilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Lys26] GLP-1-(7-37)amida
[0291]
Método de preparación: Método C
[0292] HPLC método 01_B4_2:
35 RT= 11.11 min LCMS: m/z = XX (M+4H)4+ 1103 PM calculado = 4409.1
40 Ejemplo 31
N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37) [0293]
5 Método de preparación: B
[0294] El péptido se eluyó a 71% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4351.0
10 Ejemplo 32
N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Glu30,Arg34,Lys37]GLP-115 (7-37)
20 Método de preparación: B
[0296] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4481.1
25 Ejemplo 33
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)-hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37) 30 [0297]
Método de preparación: B
[0298] El péptido se eluyó a 62% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4341.9
Ejemplo 34
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: B
10 [0300] El péptido se eluyó a 65% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4454.1
15 Ejemplo 35
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: B
25 [0302] El péptido se eluyó a 62% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4370.0
Ejemplo 36
30 N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{4-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34)
[0304] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4071.6
Ejemplo 37
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34)
Método de preparación: B
15 [0306] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4183.8
Ejemplo 38
20 N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-34)
[0307]
Método de preparación: B [0308] El péptido se eluyó a 67% de acetonitrilo.
30 La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4099.7 Ejemplo 39
35 N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35) [0309]
Método de preparación: B
5 [0310] El péptido se eluyó a 70% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4240.9
Ejemplo 40
10 N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35)
[0312] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. 20 La estructura se confirmó por MALDI-MS
PM calculado = 4156.7
Ejemplo 41
25 N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida
30 Método de preparación: B
[0314] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS
35 PM calculado = 4311.9
Ejemplo 42
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{6-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]
hexanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-35)
5 Método de preparación: B
[0316] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS
10 PM calculado = 4128.7
Ejemplo 43
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] 15 dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys33,Arg34]GLP-1-(7-34)
20 Método de preparación: B
[0318] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4113.7
25 Ejemplo 44
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-36)amida 30 [0319]
Método de preparación: B
35 [0320] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4396.1
40 Ejemplo 45 N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1Htetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino] etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8, Lys26,Arg34]GLP-1-(7-36)amida
Método de preparación: B
10 [0322] El péptido se eluyó a 65% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 5121.9
15 Ejemplo 46
[Aib8,Glu22,Arg26,Arg34]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino]dodecanoilamino}-butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]amida
Método de preparación: B
25 [0324] El péptido se eluyó a 65% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4681.4
Ejemplo 47
30 N-épsilon20-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Lys20,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(737)amida
35 [0325]
Método de preparación: B
5 [0326] El péptido se eluyó a 62% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4638.3
Ejemplo 48
10 N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida
[0328] El péptido se eluyó a 69% de acetonitrilo. 20 La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4624.3
Ejemplo 49
25 N-épsilon37-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(737)amida
[0330] El péptido se eluyó a 65% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4595.3
5 Ejemplo 50
N-épsilon37-[[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)amida 10 [0331]
Método de preparación: B
15 [0332] El péptido se eluyó a 66% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4523.2
20 Ejemplo 51
[Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-{2-[4-carboxi-4-(4-carboxi-4-{4-[4-(16-1H-tetrazol-5-ilhexadecanoilsulfamoil)butirilamino]butirilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]
[0334] Método de preparación: Método A excepto que el péptido se preparó en un equipo Apex396 de Advanced Chemtech usando un exceso molar de 8-10 veces de aminoácido, DIC y HOAt/HOBt (1:1) y el grupo protector Mtt se
30 eliminó con hexaflouroisopropanol. La unión del conector tioamida se llevó a cabo en dos pasos; primero se acopló el ácido 4-sulfamoilbutírico (exceso de 3 veces) con la resina usando DIC y HOAt/HOBt (1:1). Después, se agregó a la resina ácido 16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoico (exceso de 3 veces) mezclado con carbonildiimidazol en NMP, seguido de la adición de DBU. HPLC método B6:
35 RT= 29.8 min LCMS: m/z = 1161.2 (M+4H)4+ PM calculado = 4640.2
40 Ejemplo 52 [Aib8,Glu22,Arg26,Glu30,Pro37]GLP-1-((7-37)Lys (2-(2-(3-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-(2-[4-(S)-carboxi-4-(4-(S)carboxi-4-(4-{4-[16-(Tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil]butanoilamino}butanoilamino)butirilamino)butirilamino]etoxi) etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)etoxi)propionilamino)etoxi)etoxi)péptido
[0336] Método de preparación: El péptido se preparó en un equipo Apex396 de Advanced Chemtech y la unión al conector tioamida se llevó a cabo en dos pasos. Primero se acopló ácido 4-sulfamoilbutírico a la resina usando DIC
10 y HOAt/HOBt (1:1). Después, se agregó a la resina ácido 16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoico mezclado con carbonildiimidazol en NMP, seguido de la adición de DBU. De lo contrario es el mismo protocolo descrito en el comienzo de la sección de ejemplos. HPLC (método B6):
15 RT= 30 min LCMS: m/z = XX (M+4H)4+: 1274 Calculado (M+H)+ = 5096
Ejemplo 53
20 N-alpha37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,épsilon-Lys37]GLP-1(7-37)
[0338] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7. 30 [0339] HPLC método 02_B6_1: RT= 37.05 min LCMS: m/z = 1106.3 (M+4H)4+
(M) calculada = 4423.1
35 Ejemplo 54
N-alfa8-[2-(4-imidazolil)acetil] N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino) metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP 40 -1-(8-37)
[0340]
Método de preparación: B
5 [0341] El péptido se eluyó a 68% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4409.1
Ejemplo 55
10 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetil)péptido
[0344] HPLC método 03_B6_1:
20 RT= 35.58 min LCMS: m/z = 1077.8 (M+4H)4+
(M) calculada = 4306.9
25 Ejemplo 56
[DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-carboxi-4-({4-[(19-carboxinonadecanoilamino) metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil]péptido
[0346] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7. 35 [0347] HPLC método 02_B6_1: RT= 34.40 min LCMS: m/z = 1120.8 (M+4H)4+
(M) calculada = 4480.1
Ejemplo 57
[DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys((S)-4-carboxi-4-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)butiril)péptido
10 [0349] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7. [0350] HPLC método 03_B6_1: RT= 35.14 min 15 LCMS: m/z = (M+4H)4+
(M) calculada = 4436.0
Ejemplo 58
20 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1-(7-37)-Lys-(2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)butirilamino]etoxi}etoxi) acetil)péptido
[0353] HPLC método 03_B6_1: 30
RT= 34.92 min
LCMS: m/z = 1146.3 (M+4H)4+
(M) calculada = 4581.2 35 Ejemplo 59 [DesaminoHis7,Arg26,34]-GLP-1 (7-37)-Lys(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina
4-carbonil]amino}butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil)péptido 40 [0354]
[0355] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7. 5 [0356] HPLC método 03_B6_1: RT= 35.39 min LCMS: m/z = 1095.8 (M+4H)4+
(M) calculada = 4380.0
10 Ejemplo 60
N-épsilon37-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4-carbonil]amino} butirilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37) 15
[0358] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7. 20
[0359] HPLC (Método 03_A1_1):
RT= 35.73 min
LCMS: m/z = 1081.3 (M+4H)4+ 25 (M) calculada = 4323.0
Ejemplo 61
N-épsilon37-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxi-nonadecanoil)-piperidina-4-carbonil]-amino}-butiril) 30 [DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
[0361] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7.
[0362] HPLC método 03_B6_1:
(M) calculada = 4032.6
Ejemplo 62
10 [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,34]-GLP-1 carbonil]-amino}-butiril)péptido
(7-37)-Lys-((S)-4-carboxi-4-{[1-(19-carboxinonadecanoil)-piperidina-4
[0364] Método de preparación: B, de manera similar a la descrita para el ejemplo 7.
[0365] HPLC método 03_B6_1: 20
RT= 36.06 min
LCMS: m/z = 1041.0 (M+4H)4+
(M) calculada = 4161.8 25 Ejemplo 63
N-épsilon26-[2-(2-{2-[(R)-4-carboxi-4-((R)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-1H-tetrazol-5-il-hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil]-[Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación B
35 [0367] El péptido se eluyó a 70% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4454.1
Ejemplo 64
40 N-épsilon37-{2-[2-(2-{(S)-4-[(S)-4-(12-{4-[16-(2-tert-butil-2H-tetrazol-5-il)-hexadecanoilsulfamoil]butirilamino} dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino]-4-carboxibutirilamino}etoxi)etoxi]acetil}[DesaminoHis7,Glu22,Arg26, Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
45 [0368]
Método de preparación B
5 [0369] El péptido se eluyó a 74% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por MALDI-MS PM calculado = 4652.4
Ejemplo 65
10 N-épsilon37-[[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-((S)-4-carboxi-4-{12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil)butirilamino] dodecanoilamino}butirilamino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
Método de preparación B
[0371] El péptido se eluyó a 65% de acetonitrilo. 20 La estructura se confirmó por MALDI-MS
PM calculado = 4524.2
Ejemplo 66
25 N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil} amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
30 [0373] Preparación análoga al método B de SPPS.
[0374] HPLC método 02_B6_1: RT= 33.58 min 35 LCMS: m/z = 1114 (M+4H)4+
(M) calculada = 4451.1 Ejemplo 67
40 [ImPr7,Arg26,34,Glu22]GLP-1-(7-37)Lys[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-1H-tetrazol-5-ilhexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino)-4-carboxibutirilamino)etoxi]etoxi)acetil]-amida [0375]
Método de preparación A
5 [0376] El péptido se eluyó a 61% de acetonitrilo. La estructura se confirmó por LC-MS PM calculado: (M/3)+1 = 1550.8 y (M/4)+1 =1163.1; (Sciex100 API) PM encontrado. (M/3)+1 = 1551.9 y (M/4)+1 =1164.3; (Sciex100 API)
10 Ejemplo 68
N-épsilon36-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Glu22, Gln34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: A
20 [0378] HPLC (método B6):
RT= 36.8 min MS-TOF: m/z = 4468 Calculado (M+H)+ = 4469
25 Ejemplo 69
N-épsilon26-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Glu22,Gln34]GLP-1-(7-37)
35
Método de preparación: A [0380] HPLC (método B4):
40
RT= 11.4 min LCMS: m/z = 1433 (M+3H)3+ Calculado (M+H)+ = 4296.9
Ejemplo 70
80
N-épsilon18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,22,35, Lys18,Arg26,34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: A [0382] HPLC (método B4): RT= 11.0 min LCMS: m/z = 1459 (M+3H)3+
Calculado (M+H)+ = 4378.1 Ejemplo 71 N-épsilon18-[2-(2-[2-(2-[2-(2-((R)-3-[trans-4-((9-carboxinonadecanoilamino]metil)ciclohexilcarbonilamino]3
carboxipropionilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,Lys18, Glu22,Gln34]GLP-1-(7-37)
Método de preparación: A 25 [0384] HPLC (método B4):
RT= 11.4 min MS-TOF: m/z = 4338 Calculado (M+H)+ = 4338
[0385] Sintetizador de péptidos Liberty a base de microondas (CEM Corp., Carolina del norte 0.125 mMol síntesis de análogos de Lys GLP-1 derivados con A-B-C-D
35 Ejemplo 72: Síntesis de péptido amidas
[0386] Noticia general. La resina de partida utilizada para la síntesis de péptido amidas fue la resina Rink-Amida y, la resina Wang o clorotritilo se usó para los péptidos con un carboxi C-terminal.
[0387] Síntesis de la derivación de N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil] en el ejemplo 19
Paso 1
45 [0388] Una vez que se completó la secuencia peptídica, y se eliminó el grupo protector mtt del grupo épsilon amino de la Lys, se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó hasta 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7ml).
Paso 2
[0389] La resina obtenida en el paso 1 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL) se
calentó durante 30 s, se escurrió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml). Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanico/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 3
[0390] La resina obtenida en el paso 2 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL) se calentó durante 30 s, se escurrió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml). Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC-Glu-OTBU/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 4
[0391] La resina obtenida en el paso 3 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL) se calentó durante 30 s, se escurió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml).
[0392] Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC-ácido tranexámico/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 5
[0393] La resina obtenida en el paso 4 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL), se calentó durante 30 s, se escurrió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml).
[0394] Se agregó a la resina una solución 0.3 M de éster mono tert-butílico del ácido eicosanodioico y HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 6
Eliminación de la protección del éster tert-butílico y escisión de la resina
[0395] La resina obtenida en el paso 5 se lavó con DCM (4 x 7ml) y se secó. Se retiró la resina seca del sintetizador Liberty y se trató durante 2 h con TFA/TIS/agua (92.5/5/2.5) escindiendo el péptido de la resina y eliminando los grupos protectores éster tert-butílico. La resina se separó por filtración y el péptido se precipitó con éter dietílico y se aisló por centrifugación. El péptido se redisolvió en ácido acético al 30% o en una mezcla solvente alternativa, y se purificó utilizando uno de los métodos descritos. Síntesis de la derivación de [2-(2-[2-(2-[2-(2-((S)-4-[1-[19-carboxinonadecanoil]piperidina-4-carbonilamino]-4carboxibutirilamino)etoxi)etoxi]acetilamino)etoxi]etoxi)acetil] del ejemplo 14
Paso 7
[0396] Una vez completada la secuencia peptídica, y eliminado el grupo protector mtt del grupo épsilon amino de la Lys, la resina se modificó como se describe en los pasos 1-3. Se eliminó la protección de FMOC usando piperidina al 5% en NMP (7 mL), se calentó durante 30 s, se escurrió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml).
[0397] Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC-ácido isonipecótico/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 8
[0398] La resina obtenida en el paso 7 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL), se calentó durante 30 s, se escurrió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml). Se agregó a la resina una solución 0.3 M de éster mono tert-butílico del ácido eicosanodioico/HOAT en NMP (2.5
mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL) y luego el procedimiento de escisión descrito en el paso 6. Síntesis de la derivación de N-épsilon31-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-3-carboxi-3-{[1-(19-carboxinonadecanoil)piperidina-4carbonil]amino}propionilamino)etoxi]etoxi}acetilamino)etoxi]etoxi}acetil) del ejemplo 15
Paso 9
[0399] La resina obtenida en el paso 2 se desprotegió de FMOC utilizando 5% de piperidina en NMP (7 mL), se calentó durante 30 s, se escurió y se lavó con NMP (7 mL) seguido de piperidina al 5% en NMP (7 mL) adicional, se calentó durante 3 min a 70-75 grados seguido de lavado con NMP (4 x 7ml).
[0400] Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC-Asp-OTBU/HOAT en NMP (2.5 mL), seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7 mL).
Paso 10
[0401] La resina obtenida en el paso 9 es seguida del paso 7 uniendo el FMOC ácido isonipecótico seguido del paso 8 uniendo el éster mono tert-butílico del ácido eicosanodioico finalizando la síntesis por la desprotección descrita en el paso 6 Síntesis de la derivación de N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil] del ejemplo 18
Paso 11
[0402] La derivación de N-épsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil] se obtiene siguiendo los pasos 1-3-4-5 y 6 de la síntesis de la derivación de N-épsilon26-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19carboxinonadecanoilamino)metil]ciclohexanocarbonil}amino)butiril] del ejemplo 16
Paso 12
[0403] Se agregó a la resina una solución 0.3 M de FMOC-Glu-OTBU/HOAT en NMP (2.5ml), después de la desprotección de Mtt, seguido de adición de una solución 0.75 M de DIC en NMP (1 mL). La reacción se calentó a 70-75 grados durante 5 min seguido de lavado con NMP (4 x 7ml), seguido de los pasos 4-5 y 6
Paso 13
[0404] Para la unión de la parte A descrita del enlazador de la albúmina se puede usar el paso 8 del procedimiento reemplazando el éster tert-butílico del ácido eicosanodioico con el A adecuado como un ácido.
Paso 14
[0405] Para la unión de la parte B descrita del enlazador de la albúmina se puede usar el paso 7 del procedimiento reemplazando FMOC-ácido isonipecótico con el B adecuado como un ácido.
Paso 15
[0406] Para la unión de la parte C descrita del enlazador de la albúmina se puede usar el paso 9 del procedimiento reemplazando FMOC-Asp-ácido OTBU con el C adecuado como un ácido.
Paso 16
[0407] Para la unión de la parte D descrita del enlazador de la albúmina se puede usar el paso 1 del procedimiento reemplazando FMOC-ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico con el D adecuado como un ácido.
Hallazgos biológicos
Prolongación de la acción de los derivados de GLP-1 después de la administración i.v. o s.c.
[0408] La prolongación de la acción de una serie de derivados de GLP-1 de la invención se puede determinar monitoreando la concentración plasmática de éstos luego de la administración sc a cerdos sanos, usando los métodos descritos a continuación. A efectos de comparar también se puede seguir la concentración plasmática de
GLP-1(7-37) luego de la administración sc. La prolongación de la acción de otros derivados de GLP-1 de la invención se puede determinar de la misma manera.
Ejemplo 73: Análisis farmacocinético en minicerdos
[0409] Se sometieron varios derivados de GLP-1 de la invención (los compuestos de los ejemplos 1, 2, 5, 7, 9, 10, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 35, 49, 50, 52, 59 y 63) a análisis farmacocinético en minicerdos. Se incluyó la liraglutida en el análisis para comparar.
[0410] Generalmente, las sustancias de prueba se deben disolver en un vehículo adecuado para la administración subcutánea o intravenosa. En el estudio de la presente las sustancias de prueba se administraron por vía subcutánea. Cada animal recibió una dosis de 2 nmol/kg de peso corporal y la concentración se ajustó de modo que el volumen de la dosis fuera de aproximadamente 1 mL, utilizando el vehículo siguiente: tampón de fosfato 50 mM con 0.05% p/v de Tween 80 (pH aproximadamente 8).
[0411] El estudio se llevó a cabo en minicerdos Göttingen machos de Ellegaard Göttingen Minipigs ApS. Se permitió un período de aclimatación de aproximadamente 6-10 días antes de que los animales ingresaran en el estudio. Al comienzo del período de aclimatación los minicerdos tenían alrededor de 5 meses de edad y un rango de peso de 710 kg.
[0412] El estudio se condujo en una habitación para animales adecuada con una temperatura ambiente fijada a 2123 °C y una humedad relativa a ≥ 50%. La habitación se iluminó de modo de proporcionar un ciclo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. La iluminación fue de 06.00 a 18.00 h. Los animales se alojaron en corrales con paja como lecho, seis en cada corral. Los animales tuvieron acceso libre a agua para beber de calidad doméstica durante el estudio, pero se mantuvieron en ayunas desde aproximadamente las 4 p.m. del día anterior a la administración hasta aproximadamente 12 horas después de la administración. Los animales se pesaron al llegar y los días de administración de la dosis.
[0413] Los animales recibieron una única inyección subcutánea. La inyección subcutánea se administró en el lado derecho del cuello, aproximadamente a 5-7 cm de la oreja y a 7-9 cm del centro del cuello. Las inyecciones se administraron con un tapón de goma en la aguja, permitiendo introducir 0.5 centímetros de la misma Cada sustancia de prueba se administró en general a tres animales pero en algunos casos a dos o más animales. Para cada animal se obtuvo un perfil completo de concentración plasmática-tiempo, empleando 12-16 puntos de toma de muestras. Las muestras de sangre se extrajeron según el cronograma siguiente:
Luego de la administración intravenosa (no aplicable en el estudio actual):
[0414] Predosis (0), 0.17 (10 minutos), 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 y 120 horas después de la inyección. En algunos casos también 168 horas y 240 horas post inyección.
Después de la administración subcutánea:
[0415] Predosis (0), 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96 y 120 horas después de la inyección.
[0416] En cada tiempo de toma de muestra, se extrajeron 1-2 mL de sangre de cada animal. Las muestras de sangre se extrajeron de la vena yugular. En algunos casos también 168 horas y 240 horas post inyección.
[0417] Las muestras de sangre se recogieron en tubos de prueba que contenían un tampón para la estabilización a fin de evitar la degradación enzimática de los derivados de GLP-1. Un ejemplo de tampón adecuado es: EDTA (disódico) 0.18 M; Aprotinina 15000 KIE/mL, Val-Pyr 0.30 mM (y con el pH ajustado a 7.4), o directamente en tubos de prueba de EDTA (es decir microtubo Sarstedt de 1.3 mL K3E). Las muestras de sangre se mantuvieron preferentemente en hielo durante un máximo de 20 minutos antes de la centrifugación.
[0418] El plasma se separó usando centrifugación (por ej. a 4 °C, 10 min, 1500G) y se transfirió inmediatamente a tubos Micronic. Se transfirieron aproximadamente 200 µl de plasma a cada tubo Micronic. El plasma se almacenó a 20 °C hasta que se analizó. Las muestras de plasma se analizaron para determinar el contenido de derivados de GLP-1 utilizando un ensayo adecuado, por ej. un inmunoensayo como ELISA, RIA, RRA, o un ensayo de LCMS, según se describe a continuación.
[0419] Para el ensayo de LCMS se analizaron muestras de plasma por LC-MS en un espectrómetro de masas LTQ- Orbitrap (ThermoFisher Scientific, Bremen) al cual se conectaron bombas de HPLC Accela y un automuestreador (ambos de ThermoFisher). El espectrómetro de masas se equipó con una interfase de electronebulización, que se operó en modo de ionización positiva. El análisis se condujo en modo de monitoreo de ión seleccionado con una
ventana de 5 Da y a una resolución de 30 000. Para la cuantificación, se extrajeron los cinco picos de isótopos más intensos con una exactitud de 5 ppm. Se realizó una elución por gradiente en una columna Jupiter Proteo (4 µ) 90A (50 x 2.0 mm de DI). Las fases móviles consistieron en A. 0.1% de ácido fórmico y B. 0.1% de ácido fórmico en acetonitrilo y la velocidad de flujo fue de 0.3 mL/min. Las muestras de plasma se precipitaron con solvente orgánico.
5 Para la elaboración de estándares plasmáticos, se agregó el compuesto en cantidades conocidas al plasma y los estándares de plasma se trataron como las muestras. Se prepararon controles de calidad como los estándares, con un criterio de aceptación en 20%.
[0420] Se analizaron los perfiles de concentración plasmática-tiempo, por ej. por análisis farmacocinético. Un
10 ejemplo de una herramienta de análisis adecuada es (NCA) que usa WinNonlin Professional 5.0 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, EE.UU.). Se realizó la NCA utilizando los perfiles individuales de concentración plasmáticatiempo de cada animal y se calculó la semivida terminal (T½).
[0421] Excepto para dos compuestos, todos los derivados de GLP-1 de la invención analizados tuvieron una
15 semivida luego de la administración subcutánea a minicerdos en el rango de 19-101 horas. Y excepto para tres compuestos, todos los derivados de GLP-1 de la invención analizados tuvieron una semivida luego de la administración subcutánea a minicerdos en un rango de 29-101 horas. La semivida del compuesto comparativo liraglutida fue de 18 horas.
20 [0422] Los derivados seleccionados de la invención se pueden probar en cerdos Danish Landrace:
Análisis farmacocinético de los derivados de GLP-1 en cerdos
[0423] Se dejaron en ayunas cerdos (50% Duroc, 25% Yorkshire, 25% Danish Landrace, de aproximadamente 40
25 kg) desde el comienzo del experimento. A cada cerdo se le administró 0.5 nmol del derivado de prueba por kg de peso corporal en una solución isotónica 50 µM (fosfato 5 mM, pH 7.4, 0.02% de Tween®-20 (Merck), 45 mg/mL de manitol (A piógeno, Novo Nordisk). Las muestras de sangre se extrajeron con un catéter en la vena yugular. Se vertieron 5 mL de las muestras de sangre en recipientes de vidrio refrigerados que contenían 175 µl de la solución siguiente: EDTA 0.18 M, 15000 KIE/mL aprotinina (Novo Nordisk) y Valina-Pirrolidida 0.30 mM (Novo Nordisk), pH
30 7.4. En el correr de 30 min, las muestras se centrifugaron durante 10 min a 5-6000*g. La temperatura se mantuvo a 4 °C. El sobrenadante se transfirió con pipeta a diferentes recipientes de vidrio y se mantuvo a -20 °C hasta que se usó.
[0424] Las concentraciones plasmáticas de los péptidos se determinaron en un ELISA sándwich o por RIA usando
35 anticuerpos mono o policlonales diferentes. La elección de los anticuerpos depende de los derivados de GLP-1. El tiempo al cual se logra la concentración plasmática máxima varía dentro de amplios límites, dependiendo del derivado de GLP-1 particular elegido.
Protocolo del ensayo general para ELISA sándwich en microplacas de 96 pocillos
40 [0425]
Tampón de recubrimiento, PBS
: Solución salina amortiguada con fosfato, pH 7.2
Tampón de lavado (PBS-lavado)
: Solución salina amortiguada con fosfato, 0.05% v/v de Tween 20, pH 7.2
Tampón del ensayo (BSA-tampón)
: Solución salina amortiguada con fosfato, 10 g/l de seroalbúmina bovina
(Fluka 05477), 0.05% v/v de Tween 20, pH 7.2
Estreptavidina-tampón
Solución salina amortiguada con fosfato, NaCl 0.5 M, 0.05% v/v de Tween 20, pH 7.2
Estándar
: Derivados individuales en matriz de plasma
A-TNP
: Anticuerpos sin sentido
AMDEX
: Estreptavidina-peroxidasa de rábano (Amersham RPN4401V)
TMB-sustrato
: 3,3',5,5'-tetrametilbenzidina (<0.02%), peróxido de hidrógeno
[0426] El ensayo se llevó a cabo de la manera siguiente (volumen/pocillo): 1.) Se recubrió con 100 µl de anticuerpo de captura 5 µg/mL en PBS-tampón  Se incubó toda la noche, 4 °C  5 x PBS-lavado 85
 Se bloqueó, el último lavado en 30 minutos mínimo  Después se vació la placa
2.) 20 µl de muestra + 100 µl de anticuerpo de detección biotinilado 1 µg/mL en BSA-tampón con 10 µg/mL A5 TNP
 Se incubó 2 h, a temperatura ambiente, en un agitador □ 5 x PBS-lavado, después se vació la placa
3.) 100 µl de AMDEX 1:8000 en estreptavidina-tampón
10  Se incubó 45-60 minutos, a temperatura ambiente, en un agitador  5 x PBS-lavado, después se vació la placa
4.) 100 µl de TMB-sustrato
15  Se incubó x minutos a temperatura ambiente en un agitador  Se detuvo la reacción con 100 µl de H3PO4 4 M
[0427] Se leyó la absorbancia a 450 nm con 620 nm como referencia 20 La concentración en las muestras se calculó a partir de las curvas estándar.
Protocolo para el ensayo general de RIA
[0428]
DB-tampón FAM-tampón
: tampón de fosfato 80 mM, 0.1% de seroalbúmina humana, EDTA 10 mM, tiomersal 0.6 mM, pH 7.5 : tampón de fosfato 40 mM, 0.1% de seroalbúmina humana, tiomersal 0.6 mM, pH 7.5
Carbón
: tampón de fosfato 40 mM, tiomersal 0.6 mM, 16.7% de plasma bovino, 15 g/l de carbón activado, pH 7.5 (mezclar la suspensión mínimo 1 h antes de usar a 4 °C)
Estándar
: Derivados individuales en matriz de plasma
[0429] El ensayo se llevó a cabo en tubos minisorp de 12 x 75 mm (volumen/tubo) de la manera siguiente:
DB-tampón MUESTRA Anticuerpo: FAM-tampón Trazador¶ Carbón H2O
Día 1
TOTAL
100 µL
NSB
330 µL 100 µL
Muestra
300 µL 30 µL 100 µL 100 µL
Se mezcló, se incubó toda la noche a 4 °C Día 2
TOTAL
1,5 mL.
NSB
1,5 mL.
Muestra
1,5 mL.
[0430] Se mezcló, se incubó 30 min a 4 °C, se centrifugó a 3000 rpm, 30 min -inmediatamente después se
30 transfirieron los sobrenadantes a los tubos nuevos, se cerraron con tapón de goma y se contaron en un contador gamma durante 1 minuto. La concentración en las muestras se calculó a partir de las curvas estándar individuales.
Ensayo de radio GLP-1 -receptor (RRA):
35 [0431] El método es un ensayo radiométrico de unión ligando-receptor utilizando partículas para imagenología LEADseeker. El ensayo se compone de fragmentos de membranas que contienen el receptor de GLP-1, análogos de GLP-1 sin marcar, GLP-1 humano marcado con 125I y partículas PS LEADseeker recubiertas con aglutinina de germen de trigo (WGA). El GLP-1 frío y marcado con 125I competirán por la unión al receptor. Las partículas
40 LEADseeker una vez agregadas se unirán a los residuos de carbohidratos de los fragmentos de membranas a través de los residuos de WGA. La proximidad entre las moléculas marcadas con 125I y las partículas LEADseeker causa la emisión de luz desde las partículas. El LEADseeker tomará imágenes de la luz emitida y se correlacionará reversiblemente con la cantidad de análogo de GLP-1 presente en la muestra.
Materiales y reactivos:
[0432] Pretratamiento de plasma animal: el plasma animal se trató con calor durante 4 h a 56 °C y se centrifugó a 10 000 rpm durante 10 minutos. A continuación, se agregaron Val-Pyr (10 µM) y aprotenina (500 KIE/mL) y se almacenó a <-18°C hasta que se utilizó. Calibradores de análogos de GLP-1: se agregaron cantidades conocidas de análogos de GLP-1 al plasma tratado con calor para producir líneas de dilución que variaran desde aproximadamente 1 µM hasta 1 pM. Tampón del ensayo de RRA para GLP-1: Na-HEPES 25 mM (pH=7.5), CaCl2 2.5 mM, MgCl2 1 mM, NaCl 50 mM, 0.1% de ovoalbúmina, 0.003% de Tween 20, 0.005% de bacitracina, 0.05% de NaN3. Suspensión del receptor de GLP-1: se purificaron fragmentos de membranas con receptor de GLP-1 de células de riñón de hámster recién nacido (BHK) que expresaban establemente el receptor de GLP-1 pancreático humano. Se almacenaron a <-80 °C hasta que se usaron. Perlas de imagenología LEADseeker de poliestireno acopladas a WGA (RPNQ0260, Amersham): las perlas se reconstituyeron con tampón de ensayo de RRA para GLP-1 hasta una concentración de 13.3 mg/mL. Después se agregó la suspensión de membranas con receptor de GLP-1 y se incubó en frío (2-8 °C) invirtiendo durante al menos 1 h antes de usar. [125I]-GLP-1(7-36)amida (Novo Nordisk A/S): se almacenó a <-18 °C hasta que se usó. Etanol 99.9% vol (De Dansk Spritfabrikker A/S): se almacenó a <-18 °C hasta que se usó. Placas de PTFE hidrófobas de 0.45 µm MultiScreen®Solvinert (MSRPN0450, Millipore Corp.) placas de polipropileno (cat. no. 650201, Greiner Bio-One) Placas de poliestireno blancas de 384 pocillos (cat. no. 781075, Greiner Bio-One)
Aparato:
[0433] Mezclador de placas horizontal Centrifugar con un conjunto de rotor para placas de microtitulación con cuba de agitación Concentrador de muestras por secado UltraVap (Porvair) Sistema de imagenología multimodalidad LEADseeker™ (Amersham)
Procedimiento de análisis:
Preparación de la muestra:
[0434] Monte la placa de filtro MultiScreen® Solvinert en una placa receptora químicamente compatible (es decir placas de polipropileno) para recoger el filtrado. Agregue 150 µL de etanol helado al 99.9% en los pocillos vacíos de la placa de filtro MultiScreen® Solvinert seguido de 50 µL de calibrador o de muestra de plasma. Coloque la tapa de almacenamiento sobre la placa de filtro. Incube 15 minutos a 18-22 °C en un mezclador de placas horizontal. Coloque el conjunto de filtro y placa receptora, con la tapa, en un rotor de placas de microtitulación con cuba de agitación. Después recoja el filtrado en los pocillos vacíos de la placa receptora a 1500 rpm durante 2 minutos. Seque el filtrado utilizando el UltraVap con N2 calentado (40°C) durante 15 minutos. Reconstituya el material seco agregando 100 µL del tampón del ensayo de RRA para GLP-1 en cada pocillo. Incube durante 5 minutos en un mezclador horizontal.
Ensayo de radio GLP-1 -receptor:
[0435] Use el esquema de transferencia con pipeta siguiente y placas de poliestireno blancas de 384 pocillos:
 35 µl de tampón del ensayo de RRA para GLP-1:  5 µl de filtrado reconstituido.  10 µL de [125I]-GLP-1(7-36)amida. La solución madre se diluye en tampón del ensayo de RRA para GLP-1
hasta 20 000 cpm/pocillo antes de usar.  15 µL de fragmentos de membranas con receptor de GLP-1 (≈0.5 µg/pocillo) depositados previamente sobre perlas de imagenología LEADseeker de poliestireno-WGA (0.2 mg/pocillo)
[0436] Selle las placas e incúbelas toda la noche a 18-22 °C
[0437] La emisión de luz de cada pocillo es detectada utilizando el sistema de imagenología multimodalidad LEADseeker™ durante 10 minutos.
Ejemplo 74: Estimulación de la formación de cAMP en una línea celular que expresa el receptor de GLP-1 humano clonado
[0438] Se determinaron las potencias de varios derivados de GLP-1 de la invención (los compuestos de los ejemplos 1-28, 31-37 y 39-71) como se describe más adelante, es decir, como la estimulación de la formación de AMP cíclico (cAMP) en un medio que contiene el receptor de GLP-1 humano. A efectos de comparar, también se determinó la potencia de la liraglutida.
[0439] Se estimularon membranas plasmáticas purificadas de una línea celular transinfectada estable, BHK467-12A (tk-ts13), que expresaba el receptor de GLP-1 humano, con el derivado de GLP-1 en cuestión, y la potencia de la producción de cAMP se midió usando el kit del ensayo de cAMP AlphaScreen™ de Perkin Elmer Life Sciences.
[0440] Se preparó una línea celular transinfectada estable en NN A/S, Dinamarca, y para el cribado se eligió un clon con alta expresión. Las células se cultivaron en 5% de CO2 en DMEM, 5% de FCS, 1% de Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 0.5 mg/mL del marcador de selección G418.
[0441] Se lavaron células con aproximadamente 80% de confluencia 2 X con PBS (solución salina tamponada con fosfato) y se recogieron con Versene (solución acuosa de la sal tetrasódica del ácido etilendiaminotetraacético), se centrifugaron 5 min a 1000 rpm y se eliminó el sobrenadante. Los pasos adicionales se hicieron todos en hielo. El sedimento celular se homogeneizó mediante el Ultrathurax durante 20-30 s en 10 mL de tampón 1 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 10 mM, pH = 7.4), se centrifugó 15 min a 20 000 rpm y el sedimento se resuspendió en 10 mL de tampón 2 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 0.1 mM, pH = 7.4). La suspensión se homogeneizó durante 20-30 s y se centrifugó 15 minutos a 20 000 rpm. La suspensión en tampón 2, la homogeneización y la centrifugación se repitieron una vez y las membranas se resuspendieron en tampón 2 y estuvieron prontas para el análisis posterior o se almacenaron a 80 °C.
[0442] El ensayo funcional del receptor se llevó a cabo midiendo la producción de cAMP inducida por el péptido mediante The AlphaScreen Technology. El principio básico de The AlphaScreen Technology es una competencia entre el cAMP endógeno y cAMP-biotina agregado exógenamente. La captura de cAMP se logra empleando un anticuerpo específico conjugado a perlas aceptoras. El cAMP formado se contó y se midió en un analizador de microplacas AlphaFusion. Los valores de CE50 se calcularon usando el software Graph-Pad Prisme software (versión 5).
[0443] Excepto por seis compuestos, se encontró que todos los derivados de GLP-1 de la invención analizados tenían potencias (CE50) inferiores a 4.00.
Ejemplo 75: Afinidad por el receptor de GLP-1 a una concentración de albúmina alta versus baja
[0444] La afinidad de unión de los péptidos GLP-1 al receptor de GLP-1 humano se midió por medio de su desplazamiento de 125I-GLP-1 del receptor.
[0445] Para determinar la unión de los péptidos a la albúmina, el ensayo se llevó a cabo con una concentración baja de albúmina (0.005% -correspondiente a la cantidad residual de éstos en el trazador), así como con una alta concentración de albúmina (2.0% añadida).
[0446] Un cambio en la afinidad de unión, CI50, es una indicación de que el péptido en cuestión se une a la albúmina, y por lo tanto una predicción de un potencial perfil farmacocinético prolongado del péptido en cuestión, en modelos animales.
Condiciones
[0447] Especie (in vitro): hámster Criterio de evaluación biológico: unión al receptor Método de ensayo: SPA Receptor: receptor de GLP-1 Línea celular: BHK tk-tsl3
Purificación de la membrana:
[0448] Se lavaron las células (aprox. 80% de confluencia) dos veces en PBS y se recogieron (PBS + EDTA o Versene), luego de lo cual se separaron por centrifugación a 1000 rpm durante 5 min. Las células/el sedimento de células se mantuvieron en hielo en la medida de lo posible en los pasos siguientes. El sedimento de células se homogeneizó con Ultrathurrax durante 20-30 segundos en una cantidad adecuada de tampón 1 (dependiendo de la cantidad de células, pero por ej. 10 mL). El homogeneizado se centrifugó a 20 000 rpm durante 15 minutos. El sedimento se resuspendió (homogeneizó) en 10 mL de tampón 2 y se volvió a centrifugar. Este paso se repitió una vez más. El sedimento resultante se resuspendió en tampón 2 y se determinó la concentración de proteína. Las
5 membranas se almacenaron a -80 °C
[0449] Tampón 1: Na-HEPES 20 mM + EDTA 10mM, pH 7.4
Tampón 2: Na-HEPES 20 mM + EDTA 0.1 mM, pH 7.4
10 Ensayo de unión:
SPA:
[0450] Los compuestos de prueba/péptidos, las membranas, las partículas de SPA y [125I] se diluyeron en tampón de
15 ensayo. Se agregaron 25 µl de los compuestos de prueba/péptidos al Optiplate. Se agregó HSA (experimento "albúmina alta") o tampón (experimento" albúmina baja") (50 µl). Se agregaron 5-10 µg de proteína/muestra (50 µl) correspondientes a 0.1-0.2 mg de proteína/mL (a ser optimizado preferentemente para cada preparación de membrana). Se agregaron partículas de SPA (perlas de SPA aglutinina de germen de trigo) RPNQ 0001) 0.5 mg/pocillo (50 µl). Se inició la incubación con [125]-GLP-1 (concentración final 0.05 nM correspondiente a 49.880
20 DPM, 25 µl). Las placas se sellaron con PlateSealer. Se incubó durante 120 minutos a 30 °C agitando. Las placas se centrifugaron (1500 rpm, 10 min) y se contaron en Topcounter. Tampón de ensayo: HEPES 50 mM EGTA 5 mM MgCl2 5 mM
25 0.005% de Tween 20 pH 7.4 El HSA fue SIGMA A1653.
[0451] El valor de CI50 se leyó de la curva como la concentración que desplazó 50% de 125I-GLP-1 del receptor, y se
30 determinó la relación entre [(CI50/nM) HSA alta]/[(CI50/nM) HSA ultra baja]. Veintiuno de los derivados de GLP-1 ensayados tuvieron una relación menor de 10, doce en el rango de 10-30, doce en el rango de 30-50, y catorce en el rango de 50-100.
Ejemplo 76: Afinidad de unión a la albúmina
35 [0452] Se midió la afinidad de una serie de derivados de GLP-1 de la invención (los compuestos de los ejemplos 1-2, 4-16, 22-28, 31 y 33-71) por la seroalbúmina humana (HSA) mediante un ensayo de competición de centelleo por proximidad (SPA) como se describe a continuación.
40 [0453] Se incubaron perlas de SPA-estreptavidina (GE Healthcare RPNQ0009) con HSA biotinilada durante 5 horas. Las perlas se lavaron con tampón para eliminar la HSA sin unir. Las perlas se mezclaron con un análogo de GLP-1
125I
acilado marcado con (N-épsilon37-[2-(2-[2-((S)-4-((S)-4-(12-[4-(16-(1H-tetrazol-5-il)hexadecanoilsulfamoil) butirilamino]dodecanoilamino)-4-carboxibutirilamino)-4-carboxibutirilamino)etoxi]etoxi)acetil][Aib8,125I-Tyr19,Glu22, Arg26,Arg34,Lys37] GLP-1(7-37)-NH2) en un tampón que contenía Hepes 100 mM, NaCl 100 mM, MgSO4 10 mM,
45 0.025% de Tween-20, pH 7.4. La mezcla se transfirió con pipeta a los pocillos de una placa Perkin Elmer Optiplate96 6005290 (100 µl por pocillo) y se agregaron 100 µl de una serie de diluciones del derivado de GLP-1 que se iba a medir en el mismo tampón. Después de 20 horas de balanceo suave a temperatura ambiente las placas se centrifugaron y se contaron en un TopCounter. Se graficaron las cpm unidas como una función de la concentración del derivado de GLP-1 y se usó el valor de CE50 de la curva de competición como una medida de la afinidad del
50 derivado por HSA.
[0454] La afinidad de unión a la albúmina (CE50, en nM) de diversos derivados de GLP-1 de la invención se muestra en la tabla 1 a continuación.
55 Tabla 1: Afinidad de unión a la albúmina [0455] Como resulta evidente de la tabla 1, varios de los derivados de GLP-1 de la invención tiene una afinidad de unión a la albúmina correspondiente a una CE50 inferior a 2000 nM (cuanto menor la CE50, mayor la afinidad de unión a la albúmina).
Compuesto del ejemplo Nº
Afinidad de unión a la albúmina (CE50/nM)
63, 44, 50, 47, 53, 67, 37,46, 43, 42, 65, 68, 64, 34, 66, 38, 39
1-100
33, 49, 69, 57, 35, 45, 36, 10, 58
100-150
51, 55, 41, 40, 56, 15, 22, 54, 9, 13
150-300
62, 12, 7, 60, 4, 52, 2, 5, 8, 31, 16, 14, 1
300-800
Compuesto del ejemplo Nº
Afinidad de unión a la albúmina (CE50/nM)
70, 26, 71, 48, 61, 11, 23, 24, 27, 6
800-2000
59, 28, 25
superior a 2000
Ejemplo 77: Estudio de dosis-respuesta en ratones db/db
[0456] Varios derivados de GLP-1 de la invención (los compuestos de los ejemplos 1, 7, 14, 16, 22, 23, 24, 26, 27,
28. 31, 33, 46, 47, 48, 49, 50, 53 y 59) se analizaron en un estudio de dosis-respuesta en un modelo de ratón obeso y diabético (ratón db/db) como se describe a continuación.
[0457] Se alojaron cincuenta ratones db/db (Taconic, Dinamarca), de 10-12 semanas de vida, según las pautas estándar de bienestar animal de Novo Nordisk y se les permitió el acceso libre a ración estándar (por ej. Altromin 1324, Brogaarden, Gentofte, Dinamarca) y al agua del grifo y se mantuvieron a 24 °C. Luego de 1 semana de aclimatación, se evaluó dos veces la glucemia basal. Basándose en la media de los valores de glucemia, se eligieron 42 ratones para experimentación posterior y se distribuyeron en 7 grupos (n = 6) con niveles de glucemia concordantes. Los ratones se utilizaron en experimentos de 3-6 días de duración hasta 4 veces, luego de lo cual fueron sacrificados.
[0458] Los siete grupos recibieron tratamiento de la manera siguiente:
1: Vehículo, s.c.
2: Derivado de GLP-1, 0.3 nmol/kg, s.c.
3: Derivado de GLP-1, 1 nmol/kg, s.c.
4: Derivado de GLP-1, 3 nmol/kg, s.c.
5: Derivado de GLP-1, 10 nmol/kg, s.c.
6: Derivado de GLP-1, 30 nmol/kg, s.c.
7: Derivado de GLP-1, 100 nmol/kg, s.c.
[0459] Vehículo: fosfato 50 mM, 0.05% de tween 80, pH 8. El derivado de GLP-1 se disolvió en el vehículo, por ej. a concentraciones de 0.05, 0.17, 0.5, 1.7, 5 y 17 nmol/mL y se administraron 300 microlitros s.c. por ratón de 50 g de peso (6 mL/kg).
[0460] El día de la administración de la dosis, el compuesto en cuestión se administró aproximadamente a las 9 am (tiempo 0). En el tiempo -½h (8.30 am) se evaluó la glucemia, luego de lo cual se pesaron los ratones. La glucemia se evaluó varias veces el día de administración de la dosis, habitualmente 1, 3 y 6 h después (10 a.m., 12 a.m. y 3 p.m.).
[0461] En los días siguientes, la glucemia se evaluó 24, 48, 72 y 96 h después de la administración (es decir a las 9
a.m. el día 2, 3, 4, 5), seguido de pesaje. En algunos estudios la glucemia y el peso corporal fueron evaluados adicionalmente 120 h (día 6) después de la administración.
[0462] Los ratones se pesaron individualmente en una balanza digital.
[0463] Las muestras para la medición de la glucemia se obtuvieron de los capilares de la punta de la cola de los ratones conscientes. La sangre, 10 µl, se recogió en capilares heparinizados y se transfirió a 500 µl de tampón de glucosa (solución de tampón EBIO, Eppendorf, Alemania). La concentración de glucosa se midió empleando el método de la glucosa oxidasa (analizador de glucosa Biosen 5040, EKF Diagnostic, GmbH, Barleben, Alemania). Las muestras se mantuvieron a temperatura ambiente durante no más de 1 h hasta el análisis. Si era necesario posponer el análisis, las muestras se mantenían a 4 °C durante un máximo de 24 h.
[0464] Se calcularon las semividas (T½) según el modelo matemático siguiente: Suponiendo que
(1)
la desaparición de los compuestos del plasma es monoexponencial;
(2)
el efecto sobre la glucemia (deltaBG) se puede describir mediante una curva dosis-respuesta sigmoidal estándar;
(3)
las primeras 6 horas de absorción y distribución se ignoran y sólo se ajusta el retorno de la glucosa desde el punto inferior hasta la línea de base (mínimo hasta 0); después la respuesta de la glucosa (Y) (por ejemplo deltaBG) se puede describir mediante la ecuación
siguiente:
5 en la que las variables DE50 y T½ se definen como sigue: DE50 es la dosis que da lugar a la mitad del efecto máximo sobre la glucemia (en inglés BG) (en nmol/kg) T½ es la semivida (en horas); y las siguientes son constantes globales: Punto superior (la respuesta luego del retorno de la glucosa a la línea de base), punto inferior (la respuesta a la máxima caída de la glucosa); y la siguiente es una constante para cada conjunto de datos (cada dosis): Dosis (la dosis administrada (en nmol/kg)). Todos los conjuntos de datos se ajustan simultáneamente.
15 [0465] Todos los compuestos analizados tuvieron una semivida (T½) en el rango de 12-35 horas.
LISTADO DE SECUENCIAS
[0466]
<110> Novo Nordisk A/S
<120> Peptides derivatized with A-B-C-D-and their therapeutic use
<130> 7694.204-WO
<160> 7
<170> PatentIn version 3.5 25 <210> 1
<
211> 31
<
212> PRT
<
213> Homo sapiens
<220>
<
221> PEPTIDE
<
222> (1)..(31)
<400> 1
<210> 2 35 < 211> 40
<
212> PRT
<
213> Artificial Sequence
<220>
< 223> Formula I (GLP-1 analogues)
<220>
<
221> PEPTIDE
<
222> (1)..(40)
<220>
<
221> MISC_FEATURE 45 < 222> (1)..(1)
< 223> Xaa7 is L-his, D-his, desamino-his, 2-amino-his, beta-hydroxy-his, homo-his, Nalpha-acetyl-his, alpha-fluoroethyl-his, alhpa-methyl-his, 2(3H-imidazol-4-yl)acetyl, 3-pyridyl-ala, 2-pyridyl-ala, or
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (2)..(2)
<
223> Xaa8 is Ala,Gly,Val,Leu,Ile,Lys,Aib, (1-aminocyclopropyl-, -butyl-, -pentyl-, -hexyl-, -heptyl-, or octyl)carboxylic acid,
<220>
<
221> MISC_FEATURE 55 < 222> (10)..(10)
< 223> Xaa16 is Val, or Leu
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (12)..(12)
<
223> Xaa18 is Ser, Lys, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (13)..(13)
<
223> Xaa19 is Tyr, or Gln
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (14)..(14)
<
223> Xaa20 is Leu, Met, or Lys
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (16)..(16)
<
223> Xaa22 is Gly, Glu, or Aib
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (17)..(17)
<
223> Xaa23 is Gln, Glu, Lys, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (19)..(19)
<
223> Xaa25 is Ala, or Val
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (20)..(20)
<
223> Xaa26 is Lys, Glu, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (21)..(21)
<
223> Xaa27 is Glu, or Leu
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (24)..(24)
<
223> Xaa30 is Ala, Glu, Lys, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (27)..(27)
<
223> Xaa33 is Val, Thr(O-benzyl), or Lys
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (28)..(28)
<
223> Xaa34 is Lys, Glu, Gln, Asn, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (29)..(29)
<
223> Xaa35 is Gly, Aib, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (30)..(30)
<
223> Xaa36 is Arg, Gly, Lys, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (31)..(31)
<
223> Xaa37 is Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, epsilon-amino-Lys, amide, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (32)..(32)
<
223> Xaa38 is Lys, Ser, amide, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (33)..(33)
<
223> Xaa39 is Lys, Ser, amide, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (34)..(34)
<
223> Xaa40 is Gly, amide, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE 5 < 222> (35)..(35)
< 223> Xaa41 is Ala, amide, or absent
<220>
< 221> MISC_FEATURE
<
222> (36)..(36) 10 < 223> Xaa42 is Pro, amide, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (37)..(37)
<
223> Xaa43 is Pro, amide, or absent 15 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (38)..(38)
<
223> Xaa44 is Pro, amide, or absent
<220> 20 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (39)..(39)
<
223> Xaa45 is Ser, amide, or absent
<220>
< 221> MISC_FEATURE 25 < 222> (40)..(40)
< 223> Xaa46 is amide, or absent
<400> 2
<210> 3 30 < 211> 32
<
212> PRT
<
213> Artificial Sequence
<220>
<
223> Formula II (GLP-1 analogues) 35 <220>
<
221> PEPTIDE
<
222> (1)..(32)
<220>
<
221> MISC_FEATURE 40 < 222> (1)..(1)
< 223> Xaa7 is L-his, D-hist, desamino-his, 2-amino-his, beta-hydroxy-his, homohis, Nalpha-acetyl-histidine, alphafluoromethyl-histidine, alpha-methyl-histidine, 2(3H-imidazol-4-yl)acetyl, 3-pyridylalanine, 2pyridylalanine or
<220>
45 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (2).. (2)
<
223> Xaa8 is Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-aminocyclopropyl-, -butyl-, -pentyl-, -hexyl-, -heptyl-, or octyl)carboxylic acid,
<220>
50 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (12)..(12)
<
223> Xaa18 is Ser, Lys, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE 55 < 222> (16)..(16)
< 223> Xaa22 is Gly, Glu, or Aib 93
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (17)..(17)
<
223> Xaa23 is Gln, Glu, Lys, or Arg 5 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (20)..(20)
<
223> Xaa26 is Lys, Glu, or Arg
<220> 10 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (24)..(24)
<
223> Xaa30 is Ala, Glu, Lys, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE 15 < 222> (28)..(28)
< 223> Xaa34 is Lys, Glu, Gln, or Arg
<220>
< 221> MISC_FEATURE
<
222> (29)..(29) 20 < 223> Xaa35 is Gly, Aib, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (30)..(30)
<
223> Xaa36 is Arg, Lys, or absent 25 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (31)..(31)
<
223> Xaa37 is Gly, Ala, Glu, Pro, Lys, or epsilon-amino-Lys
<220> 30 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (32)..(32)
<
223> Xaa38 is Lys, amide, or is absent
<400> 3
35 <210> 4
<
211> 40
<
212> PRT
<
213> Heloderma suspectum
<220> 40 < 221> PEPTIDE
< 222> (1)..(40)
<220>
< 221> MISC_FEATURE
<
222> (40)..(40) 45 < 223> Xaa is NH2
<400> 4
<210> 5
<
211> 45
<
212> PRT
<
213> Artificial Sequence
<220> 94
< 223> Variant of Heloderma suspectum protein of SEQ ID NO: 4
<220>
<
221> PEPTIDE
<
222> (1)..(45)
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (45)..(45)
<
223> Xaa is amide
<400> 5
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (24)..(24)
<
223> Xaa30 is Ala, Glu, Lys, Arg, or absent 5 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (27)..(27)
<
223> Xaa33 is Val, Thr(O-benzyl), or Lys
<210> 6
< 211> 33
< 212> PRT
< 213> Artificial Sequence
15
<220>
< 223> Formula III (GLP-1 analogues)
<220>
< 221> PEPTIDE
< 222> (1)..(33)
20
<220>
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (1)..(33)
< 223> Xaa39 is amide, or is absent
<220>
25
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (1)..(2)
< 223> Xaa7-Xaa8 is 2(3H-imidazol-4-yl)acetyl-alanine, L-histidine-Aib, desamino-histidine-alanine,
or
desamino-histidine-Aib
<220>
30
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (3)..(3)
< 223> Xaa9 is Glu or a Glu derivative such as alpha, alpha dimethyl-Glu
<220>
< 221> MISC_FEATURE
35
< 222> (10)..(10)
< 223> Xaa16 is Val, or Leu
<220>
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (12)..(12)
40
< 223> Xaa18 is Ser, Lys, or Arg
<220>
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (13)..(13)
< 223> Xaa19 is Tyr, or Gln
45
<220>
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (17)..(17)
< 223> Xaa23 is Gln, Glu, Lys, or Arg
<220>
50
< 221> MISC_FEATURE
< 222> (19)..(19)
< 223> Xaa25 is Ala, or Val
<220>
< 221> MISC_FEATURE
55
< 222> (21)..(21)
< 223> Xaa30 is Ala, Glu, Lys, Arg, or absent
95
<220> 10 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (28)..(28)
<
223> Xaa34 is Lys, Glu, Gln, Asn, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE 15 < 222> (29)..(29)
< 223> Xaa35 is Gly, Aib, or absent
<220>
< 221> MISC_FEATURE
<
222> (30)..(30) 20 < 223> Xaa36 is Arg, Lys, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (31)..(31)
<
223> Xaa37 is Gly, Aib, Pro, epsilon-amino-Lys, or absent 25 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (32)..(32)
<
223> Xaa38 is Lys, Glu, or absent
<400> 6
<210> 7
<
211> 33
<
212> PRT
<
213> Artificial Sequence 35 <220>
< 223> Formula IV (GLP-1 analogues)
<220>
< 221> PEPTIDE
<
222> (1)..(33) 40 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (1)..(1)
<
223> Xaa7 is L-his, D-hist, desamino-his, 2-amino-his, beta-hydroxy-his, homohis, Nalpha-acetyl-his,
alpha-fluoromethyl-his, alpha-methyl-his, 2(3H-imidazol-4-yl)acetyl, 3-pyridylalanine, 2-pyridylalanine or 45 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (2).. (2)
<
223> Xaa8 is Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Lys, Aib, (1-aminocyclopropyl-, -butyl-, -pentyl-, -hexyl-, -heptyl-, or
octyl)carboxylic acid 50 <220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (12)..(12)
<
223> Xaa18 is Ser, Lys or Arg
<220> 55 < 221> MISC_FEATURE
<
222> (24)..(24)
<
223> Xaa30 is Ala, Glu, Lys or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (27)..(27)
<
223> Xaa33 is Val or Lys
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (28)..(28)
<
223> Xaa34 is Lys, Glu, Gln, or Arg
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (29)..(29)
<
223> Xaa35 is Gly, Aib, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (30)..(30)
<
223> Xaa37 is Gly, Aib, Pro, epsilon-amino-Lys, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (31)..(31)
<
223> Xaa38 is Lys, or absent
<220>
<
221> MISC_FEATURE
<
222> (32)..(32)
<
223> Xaa39 is amide or is absent
<400> 7

Claims (4)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un derivado del péptido GLP-1, donde el derivado es:
    N-épsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-carboxi-4-({trans-4-[(19-carboxi-nonadecanoilamino)metil] ciclohexanocarbonil}amino)butirilamino]etoxi}etoxi)acetilamino]etoxi}etoxi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,
    10 2. Una composición farmacéutica que contiene un derivado de acuerdo con la reivindicación 1 o una sal, amida, alquilo o éster farmacéuticamente aceptable de éste, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.
  2. 3. Un derivado de acuerdo con la reivindicación 1, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación
    2, para ser utilizado como un medicamento. 15
  3. 4. Un derivado de acuerdo con la reivindicación 1, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, para emplear en el tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino
    20 irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
  4. 5. Un derivado de acuerdo con la reivindicación 1, o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 2, para emplear en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento o la prevención de hiperglucemia, diabetes tipo 2, intolerancia a la glucosa, diabetes tipo 1, obesidad, hipertensión, síndrome X, dislipidemia, trastornos
    25 cognitivos, aterosclerosis, infarto de miocardio, coronariopatía y otros trastornos cardiovasculares, accidente cerebrovascular, síndrome de intestino irritable, dispepsia y úlceras gástricas.
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Families Citing this family (101)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8981061B2 (en) 2001-03-20 2015-03-17 Novo Nordisk A/S Receptor TREM (triggering receptor expressed on myeloid cells) and uses thereof
GB0426146D0 (en) 2004-11-29 2004-12-29 Bioxell Spa Therapeutic peptides and method
CN102112157B (zh) 2008-08-06 2013-05-29 诺沃-诺迪斯克保健股份有限公司 具有延长的体内效能的缀合蛋白
MX2011007736A (es) 2009-01-22 2011-09-06 Novo Nordisk Healthcare Ag Compuestos de hormona del crecimiento estables.
CA2748593A1 (en) 2009-01-23 2010-07-29 Novo Nordisk A/S Fgf21 derivatives with albumin binder a-b-c-d-e- and their use
CN102802657A (zh) * 2009-06-11 2012-11-28 诺沃-诺迪斯克有限公司 用于治疗2型糖尿病的glp-1和fgf21组合
CN105963710A (zh) * 2009-08-06 2016-09-28 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 具有延长的体内功效的生长激素
US20120148586A1 (en) * 2009-08-27 2012-06-14 Joyce Ching Tsu Chou Glucagon-like protein-1 receptor (glp-1r) agonists for treating autoimmune disorders
CN102573888A (zh) * 2009-09-18 2012-07-11 诺和诺德公司 长效y2 受体激动剂
WO2011058165A1 (en) * 2009-11-13 2011-05-19 Novo Nordisk A/S Long-acting y2 receptor agonists
HUE027229T2 (en) * 2009-12-16 2016-08-29 Novo Nordisk As Double acylated glp-1 derivatives
JO2976B1 (en) 2009-12-22 2016-03-15 ايلي ليلي اند كومباني Axentomodulin polypeptide
AR079344A1 (es) * 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
CN118767116A (zh) 2010-01-22 2024-10-15 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 体内功效延长的生长激素
JP5980689B2 (ja) 2010-01-22 2016-08-31 ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー 安定な成長ホルモン化合物
EP2539364A1 (en) 2010-02-26 2013-01-02 Novo Nordisk A/S Peptides for treatment of obesity
WO2011107494A1 (de) 2010-03-03 2011-09-09 Sanofi Neue aromatische glykosidderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
JP6054861B2 (ja) 2010-03-26 2016-12-27 ノヴォ ノルディスク アー／エス 新規のグルカゴン類似体
DE102010015123A1 (de) 2010-04-16 2011-10-20 Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh Benzylamidische Diphenylazetidinone, diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel und deren Verwendung
US9040660B2 (en) 2010-04-20 2015-05-26 Novo Nordisk A/S Long-acting gastrin derivatives
JP2013533227A (ja) * 2010-06-08 2013-08-22 ノヴォ ノルディスク アー／エス Ｆｇｆ２１類似体および誘導体
CN103124562A (zh) * 2010-06-08 2013-05-29 诺沃—诺迪斯克有限公司 Fgf21的类似物和衍生物
US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TW201215387A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Aventis Spirocyclically substituted 1,3-propane dioxide derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201221505A (en) 2010-07-05 2012-06-01 Sanofi Sa Aryloxyalkylene-substituted hydroxyphenylhexynoic acids, process for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201215388A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Sa (2-aryloxyacetylamino)phenylpropionic acid derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
CN103209711B (zh) * 2010-11-09 2016-04-13 诺沃—诺迪斯克有限公司 双-酰化的glp-1衍生物
PL2651398T3 (pl) 2010-12-16 2018-05-30 Novo Nordisk A/S Stałe kompozycje zawierające agonistę GLP-1 i sól kwasu N-(8-(2-hydroksybenzoilo)amino)kaprylowego
KR20130141648A (ko) * 2011-01-26 2013-12-26 노보 노르디스크 에이/에스 렙틴 유도체
RU2013145013A (ru) * 2011-03-28 2015-05-10 Ново Нордиск А/С Новые аналоги глюкагона
ES2612278T3 (es) 2011-04-12 2017-05-16 Novo Nordisk A/S Derivados de GLP-1 doble-acilados
EP2567959B1 (en) 2011-09-12 2014-04-16 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
WO2013037390A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
KR20140070612A (ko) 2011-09-23 2014-06-10 노보 노르디스크 에이/에스 신규 글루카곤 유사체
WO2013045413A1 (en) 2011-09-27 2013-04-04 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-alkyl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
US9550830B2 (en) 2012-02-15 2017-01-24 Novo Nordisk A/S Antibodies that bind and block triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1)
PT2814844T (pt) 2012-02-15 2017-09-18 Novo Nordisk As Anticorpos que se ligam e bloqueiam recetor de acionamento expresso em células mieloides-1 (trem-1)
US9663568B2 (en) 2012-02-15 2017-05-30 Novo Nordisk A/S Antibodies that bind peptidoglycan recognition protein 1
LT2827885T (lt) 2012-03-22 2018-10-10 Novo Nordisk A/S Glp-1 peptidų kompozicijos ir jų gavimas
DK2827845T3 (en) 2012-03-22 2019-04-01 Novo Nordisk As COMPOSITIONS INCLUDING A PROCEDURE AND PREPARING THEREOF
EP4331667A3 (en) 2012-03-22 2024-05-08 Novo Nordisk A/S Compositions comprising a delivery agent and preparation thereof
EP2846823B1 (en) 2012-05-08 2019-12-04 Novo Nordisk A/S Double-acylated glp-1 derivatives
US9993430B2 (en) 2012-06-20 2018-06-12 Novo Nordisk A/S Tablet formulation comprising semaglutide and a delivery agent
UA116217C2 (uk) 2012-10-09 2018-02-26 Санофі Пептидна сполука як подвійний агоніст рецепторів glp1-1 та глюкагону
US20150273069A1 (en) 2012-10-17 2015-10-01 Novo Nordisk A/S Fatty acid acylated amino acids for oral peptide delivery
US20150297573A1 (en) 2012-10-24 2015-10-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) TPL2 KINASE INHIBITORS FOR PREVENTING OR TREATING DIABETES AND FOR PROMOTING Beta-CELL SURVIVAL
LT2934568T (lt) 2012-12-21 2018-02-12 Sanofi Dvigubi glp1/gip arba trigubi glp/gip/gliukagono agonistai
CN105120887A (zh) 2013-04-05 2015-12-02 诺和诺德保健股份有限公司 生长激素化合物制剂
JP6594856B2 (ja) 2013-04-18 2019-10-23 ノヴォ ノルディスク アー／エス 医療用の安定な遷延性ｇｌｐ−１／グルカゴン受容体コアゴニスト
KR20180115814A (ko) 2013-05-02 2018-10-23 노보 노르디스크 에이/에스 Glp-1 화합물의 경구 투여
JP6475233B2 (ja) * 2013-06-20 2019-02-27 ノヴォ ノルディスク アー／エス Ｇｌｐ−１誘導体及びその使用
MX2015016875A (es) 2013-07-04 2016-04-07 Novo Nordisk As Derivados de peptidos similares a peptido similar a glucagon 1 (glp-1) y sus usos.
KR20160075819A (ko) 2013-11-15 2016-06-29 노보 노르디스크 에이/에스 선택적 pyy 화합물 및 그것의 사용
WO2015071356A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Novo Nordisk A/S Hpyy(1 -36) having a beta-homoarginine substitution at position 35
TW201609799A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 雙重ｇｌｐ－１／ｇｉｐ受體促效劑
TW201609796A (zh) 2013-12-13 2016-03-16 賽諾菲公司 非醯化之艾塞那肽－４（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）胜肽類似物
WO2015086728A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Exendin-4 peptide analogues as dual glp-1/gip receptor agonists
WO2015086733A1 (en) 2013-12-13 2015-06-18 Sanofi Dual glp-1/glucagon receptor agonists
AR100306A1 (es) 2014-02-18 2016-09-28 Novo Nordisk As Análogos de glucagón estables y uso para el tratamiento de la hipoglucemia
TW201625668A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物
TW201625669A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自艾塞那肽－４（Ｅｘｅｎｄｉｎ－４）之肽類雙重ＧＬＰ－１／升糖素受體促效劑
TW201625670A (zh) 2014-04-07 2016-07-16 賽諾菲公司 衍生自ｅｘｅｎｄｉｎ－４之雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑
US10689429B2 (en) 2014-04-07 2020-06-23 Novo Nordisk A/S Double-acylated GLP-1 compounds
US10570184B2 (en) 2014-06-04 2020-02-25 Novo Nordisk A/S GLP-1/glucagon receptor co-agonists for medical use
US9932381B2 (en) 2014-06-18 2018-04-03 Sanofi Exendin-4 derivatives as selective glucagon receptor agonists
KR102641268B1 (ko) 2014-07-17 2024-02-27 노보 노르디스크 에이/에스 점도를 감소시키기 위한 trem-1 항체의 부위 지정 돌연변이유발
ES2630106T3 (es) 2014-10-07 2017-08-18 Cyprumed Gmbh Formulaciones farmacéuticas para la administración oral de fármacos peptídicos o proteicos
EP3204408B1 (en) * 2014-10-10 2020-05-06 Novo Nordisk A/S Stable glp-1 based glp-1/glucagon receptor co-agonists
US11572398B2 (en) 2014-11-27 2023-02-07 Novo Nordisk A/S GLP-1 derivatives and uses thereof
WO2016097108A1 (en) 2014-12-17 2016-06-23 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives and uses thereof
EP3236991B1 (en) 2014-12-23 2019-06-19 Novo Nordisk A/S Fgf21 derivatives and uses thereof
EP3273981B1 (en) 2015-03-24 2020-04-29 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Method and pharmaceutical composition for use in the treatment of diabetes
AR105319A1 (es) 2015-06-05 2017-09-27 Sanofi Sa Profármacos que comprenden un conjugado agonista dual de glp-1 / glucagón conector ácido hialurónico
AU2016270373A1 (en) 2015-06-05 2018-01-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Triazoles for the treatment of demyelinating diseases
ES3019234T3 (en) 2015-06-12 2025-05-20 Novo Nordisk As Selective pyy compounds and uses thereof
TW201706291A (zh) 2015-07-10 2017-02-16 賽諾菲公司 作為選擇性肽雙重ｇｌｐ－１／升糖素受體促效劑之新毒蜥外泌肽（ｅｘｅｎｄｉｎ－４）衍生物
CA2997343A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical formulations for the oral delivery of peptide drugs
WO2018065634A1 (en) 2016-10-07 2018-04-12 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical compositions for the nasal delivery of peptide or protein drugs
WO2018106646A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Aminotriazoles for the treatment of demyelinating diseases
WO2018106641A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazoles for the treatment of demyelinating diseases
WO2018106643A1 (en) 2016-12-06 2018-06-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Heterocyclic azoles for the treatment of demyelinating diseases
TW201918494A (zh) * 2017-07-19 2019-05-16 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 雙功能性化合物
MX2020001525A (es) 2017-08-24 2020-03-20 Novo Nordisk As Composiciones de peptido similar al glucagon tipo 1 (glp-1) y sus usos.
MA53076B1 (fr) 2018-02-02 2023-11-30 Novo Nordisk As Compositions solides comportant un agoniste glp-1, du sel d'acide n-(8-(2-hydroxybenzoyl)amino)caprylate et un lubrifiant
CN111936520A (zh) 2018-04-02 2020-11-13 百时美施贵宝公司 抗trem-1抗体及其用途
KR102801994B1 (ko) 2018-04-05 2025-04-30 썬 파마슈티칼 인더스트리스 리미티드 신규한 glp-1 유사체
WO2019193204A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Cyprumed Gmbh Pharmaceutical compositions for the transmucosal delivery of therapeutic peptides and proteins
WO2019200594A1 (zh) 2018-04-19 2019-10-24 杭州先为达生物科技有限公司 酰化的glp-1衍生物
TWI829687B (zh) 2018-05-07 2024-01-21 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 包含glp-1促效劑與n-(8-(2-羥基苯甲醯基)胺基)辛酸之鹽的固體組成物
CN119060163A (zh) * 2019-12-30 2024-12-03 甘李药业股份有限公司 长效glp-1化合物
CN115260313B (zh) 2019-12-31 2023-07-18 北京质肽生物医药科技有限公司 Glp-1和gdf15的融合蛋白以及其缀合物
MX2022009844A (es) 2020-02-18 2022-09-05 Novo Nordisk As Composiciones y usos del peptido similar al glucagon-1 (glp-1).
US20230165939A1 (en) 2020-04-29 2023-06-01 Novo Nordisk A/S Solid compositions comprising a glp-1 agonist and histidine
WO2022049310A1 (en) 2020-09-07 2022-03-10 Cyprumed Gmbh Improved pharmaceutical formulations of glp-1 receptor agonists
JP2023545684A (ja) 2020-09-30 2023-10-31 ベイジン キューエル バイオファーマシューティカル カンパニー，リミテッド ポリペプチドコンジュゲートおよび使用の方法
TW202440619A (zh) 2020-12-18 2024-10-16 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 Glp-1及澱粉素受體之共促效劑
WO2023012263A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 Novo Nordisk A/S Solid oral peptide formulations
WO2024141760A1 (en) 2022-12-30 2024-07-04 Algipharma As Compositions and methods to increase the systemic bioavailability of a polypeptide therapeutic agent undergoing oral administration
WO2024165571A2 (en) 2023-02-06 2024-08-15 E-Therapeutics Plc Inhibitors of expression and/or function
WO2025125576A2 (en) 2023-12-15 2025-06-19 E-Therapeutics Plc Inhibitors of expression and/or function
WO2025133348A1 (en) 2023-12-22 2025-06-26 E-Therapeutics Plc Inhibitors of expression and/or function

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995033474A1 (fr) * 1994-06-03 1995-12-14 Tsumura & Co. Composition medicinale
US5869602A (en) 1995-03-17 1999-02-09 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
US7235627B2 (en) 1996-08-30 2007-06-26 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
US6458924B2 (en) * 1996-08-30 2002-10-01 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
WO1998008871A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives
US6268343B1 (en) 1996-08-30 2001-07-31 Novo Nordisk A/S Derivatives of GLP-1 analogs
WO1999043708A1 (en) 1998-02-27 1999-09-02 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives of glp-1 and exendin with protracted profile of action
RU2288232C9 (ru) 1998-12-07 2007-04-20 Сосьете Де Консей Де Решерш Э Д`Аппликасьон Сьентифик Сас Аналоги glp-1
AU754770B2 (en) 1999-05-17 2002-11-21 Conjuchem Biotechnologies Inc. Long lasting insulinotropic peptides
SK288342B6 (en) 2000-12-07 2016-03-01 Lilly Co Eli GLP-1 fusion proteins
EP2275117B1 (en) * 2001-07-31 2016-10-26 The Government of the United States of America, as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services GLP-1, exendin-4, peptide analogs and uses thereof
US7557183B2 (en) 2003-03-19 2009-07-07 Eli Lilly And Company Polyethylene glycol linked GLP-1 compounds
WO2005027978A2 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Novo Nordisk A/S Albumin-binding derivatives of therapeutic peptides
EP1704165B1 (en) 2003-12-18 2010-03-17 Novo Nordisk A/S Glp-1 compounds
EP2292272A3 (en) * 2004-07-08 2011-10-26 Novo Nordisk A/S Polypeptide protracting tags comprising a tetrazole moiety
JP2008515856A (ja) 2004-10-07 2008-05-15 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 遅延性ｇｌｐ−１化合物
WO2006097535A2 (en) * 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Peptide agonists of the glucagon family with secretin like activity
WO2006097536A2 (en) 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Dimeric peptide agonists of the glp-1 receptor
AU2006224537A1 (en) 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Extended GLP-1 compounds
TWI372629B (en) * 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds

Also Published As

Publication number Publication date
EP2190460B1 (en) 2014-12-17
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US20140011732A1 (en) 2014-01-09
JP2010538048A (ja) 2010-12-09
US9067977B2 (en) 2015-06-30

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