KR20160075819A

KR20160075819A - 선택적 pyy 화합물 및 그것의 사용

Info

Publication number: KR20160075819A
Application number: KR1020167015805A
Authority: KR
Inventors: 쇠렌 외스터가르드; 킬리안 발더마르 콘데 프리뵈스; 비르기트 비초렉; 옌스 카알비 톰센; 비르기테 쉬엘레루프 불프; 카르스텐 옌센
Original assignee: 노보 노르디스크 에이/에스
Priority date: 2013-11-15
Filing date: 2014-11-13
Publication date: 2016-06-29
Also published as: CN105722526A; MX2016006053A; RS59026B1; EP3068421A1; TWI661835B; BR112016010383A2; JP2017505284A; TW201605467A; CN105722526B; EP3068421B1; AU2014350197A1; IL245045B; PL3068421T3; CA2929672A1; MX369818B; SI3068421T1; US9085637B2; WO2015071355A1; US20160289283A1; JP6602760B2

Abstract

본 발명은 hPYY(1-36)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판으로 치환된 아미노산을 가진 PYY 화합물 및 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 부착된 변형기를 가진 이것의 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 선택적 Y2 수용체 작용제이다. 본 발명은 또한 이러한 PYY 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물, 뿐만 아니라 PYY 화합물의 의학적 사용에 관한 것이다.

Description

선택적 PYY 화합물 및 그것의 사용{SELECTIVE PYY COMPOUNDS AND USES THEREOF}

기술 분야

본 발명은 펩타이드 YY (Peptide YY; PYY)의 유사체 및/또는 유도체, 및 그것들의 약학적 사용에 관한 것이다.

서열 목록의 원용

"SEQUENCE LISTING"이라는 제목의 서열 목록은 35329 바이트이고, 2014년 10월 22일에 생성되었으며 본원에 참고로 포함된다.

PYY는 식사 중에 원위부 소장 및 결장에서 L-세포로부터 방출된다. PYY는 위장 (GI) 관에서 주변적 효과를 가지며 포만 신호로서 중심적으로 작용하는 것으로 알려져 있다. PYY는 C-말단 아미드를 가진 36개 아미노산 펩타이드 (PYY(1-36))로서 저절로 분비되지만 순환성 PYY의 대략 50%를 구성하는 PYY(3-36)으로 분할된다. 분해의 원인이 되는 효소는 디펩티딜 펩티다제 IV (DPPIV)이다. PYY(3-36)은 프로테아제 및 다른 클리어런스(clearance) 메커니즘에 의해 신속하게 제거되었다. PYY(3-36)의 반감기는 돼지에서 <30분인 것으로 보고되었다. 따라서, PYY는 차선의 약물동역학적 특성을 나타내며, 펩타이드가 하루에 적어도 두 번 투여되어야 한다는 것을 의미한다.

PYY(1-36)은 매우 적은 선택성을 가진 Y1, Y2 및 Y5 수용체를 활성화하고 Y4 수용체를 약간 덜 활성화하는 반면에, 일부 Y1 및 Y5 친화도가 유지되기는 하지만, DPP IV 가공된 PYY(3-36)은 Y1, Y4 및 Y5 수용체보다 Y2 수용체에 대하여 증가된 선택성을 나타낸다. Y2 수용체 활성화는 식욕 및 음식물 섭취를 감소시키는 것으로 알려져 있는 반면에 Y1 및 Y5 수용체 활성화는 식욕 및 음식물 섭취의 증가로 이어진다. 뿐만 아니라, Y1 및 Y5 수용체 활성화는 혈압의 증가로 이어질 수도 있다.

PYY(3-36)은 동물 모델 및 사람에서 이러한 펩타이드들 중 일부의 입증된 효과, 및 비만인 사람의 PYY의 바닥 수준이 낮을 뿐만 아니라 이 펩티드의 식사 반응이 더 낮다는 사실에 근거하여 비만 및 관련 질환의 치료에 사용에 대하여 제안되었다. 뿐만 아니라, Y2 작용제는 위장 (GI) 관에서 항-분비 및 친흡수성 효과를 갖는 것으로 입증되었다. 많은 위장 장애의 치료에 있어서 Y2 작용제의 잠재적 사용이 제안되었다.

예를 들어, 주커 래트(Zucker rat) 및 식이 유도성 비만 (Diet-Induced obese; DIO) 마우스에서 입증된 효과에 기초하여, Y2 선택적 PYY(3-36) 유사체는 글루코스 대사에 대하여 긍정적인 효과를 갖고 따라서 당뇨병(diabetes)의 치료에 사용되도록 제안되었다.

WO 2009/138511 A1은 지속성 Y2 및/또는 Y4 수용체 작용제에 관한 것이다. WO 2011/033068 A1은 C-말단 단백질 가수 분해의 고장에 대하여 안정화된 PYY 유사체에 관한 것이다. WO 2011/058165 A1은 지연성 약물동역학적 특성을 가진 Y2 수용체 작용제에 관한 것이다.

Y 수용체 조절에 반응성인 질병, 예를 들어, 비만 및 당뇨병의 치료를 위해서, Y 수용체 서브타입 Y2에 특이적이고 또한 중요하게는 지연성 약물동역학적 특성을 나타내며 이와 같이 PYY 또는 PYY(3-36)보다 더 낮은 투여 빈도의 용법으로 사용될 수 있는 PYY 유사체를 사용하는 것이 흥미로울 것이다.

본 발명은 PYY 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 PYY 화합물은 인간 PYY(3-36) (hPYY(3-36), SEQ ID NO:2)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 포함하고, 인간 PYY(1-36) (hPYY(1-36), SEQ ID NO:1)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판으로 치환된 아미노산을 가질 수도 있다.

한 양태에서, PYY 화합물은 hPYY(1-36)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸아르기닌을 더 포함한다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, PYY 화합물은 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신, 및 이 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기를 더 포함한다.

한 양태에서, 본 발명은 또한 이러한 PYY 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물, 뿐만 아니라 PYY 화합물의 의학적 사용에 관한 것이다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 본 발명은 Y2 수용체 작용제인 PYY 화합물에 관한 것이다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 본 발명은 Y 수용체 서브타입 Y1, Y4 및 Y5와 비교하여 Y 수용체 서브타입 Y2에 대한 선택성을 나타내는 PYY 화합물에 관한 것이다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 본 발명은 hPYY(3-36)의 반감기보다 더 긴 반감기를 가진 PYY 화합물에 관한 것이다. 또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 본 발명은 hPYY(1-36)의 반감기보다 더 긴 반감기를 가진 PYY 화합물에 관한 것이다.

본 발명은 PYY 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 포함하고, hPYY(1-36)의 위치 30에 해당하는 위치에서 아미노산이 트립토판으로 치환될 수도 있다.

또한, 한 양태에서, 아르기닌 잔기는 hPYY(1-36)의 위치 35에 해당하는 위치에서 α-아미노 기에 첨가된 메틸 기를 가지며, 잔기는 따라서 hPYY(1-36)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸아르기닌이라는 것을 의미한다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 본 발명은 Y 수용체 서브타입 Y2 작용제인 PYY 화합물에 관한 것이다.

한 양태에서, 다른 수용체보다 특이적 수용체에 대하여 "선택적"인 펩타이드는 시험관 내에서 수용체 기능에 대한 검정, 예를 들어, EC50 값으로 비교되는 액톤 기능적 효능 검정(Actone functional potency assay), 또는 수용체 결합 친화도를 측정하여, Ki 값으로 비교되는 섬광 근접 검정 (Scintillation Proximity Assay; SPA)으로 측정된 바와 같이 다른 Y 수용체보다 하나의 Y 수용체에 대하여 적어도 10배, 예를 들어, 적어도 20배, 적어도 50배, 또는 적어도 100배 더 높은 효능을 나타내는 펩타이드를 말한다.

다음에서, 그리스 문자는 그것들의 부호 또는 해당 표기명으로 표현될 수도 있으며, 예를 들어, α = 알파; β = 베타; ε = 엡실론; γ = 감마; ω = 오메가; 등이 있다.

PYY 화합물

용어 "hPYY(1-36)"는 본원에서 사용된 바와 같이 인간 펩타이드 YY, SEQ ID NO:1로서 서열 목록에 포함된 서열을 말한다. SEQ ID NO:1의 서열을 가진 펩타이드는 또한 고유한 hPYY로 지정될 수도 있다.

용어 "PYY 화합물"은 본원에서 사용된 바와 같이 hPYY(1-36)의 변종인 펩타이드, 또는 화합물을 말한다. 용어 "PYY 화합물"은 또한 본원에서 사용된 바와 같이 hPYY(3-36) (SEQ ID NO:2)의 변종인 펩타이드, 또는 화합물을 말할 수도 있다.

용어 "PYY 화합물"은 또한 본원에서 사용된 바와 같이 hPYY(4-36)의 변종인 펩타이드, 또는 화합물을 말할 수도 있다.

고유한 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1) 및 hPYY(3-36) (SEQ ID NO:2) 각각의 C-말단에서와 같이, 본 발명의 PYY 화합물의 C-말단은 아미드이다.

본 발명의 PYY 화합물은 이것들의 PYY 유사체 및/또는 유도체일 수 있다.

용어 "PYY 유사체"는 백본에서 적어도 하나의 아미노산 변형이 존재하는 경우 PYY 화합물로 사용된다.

용어 "PYY 유도체"는 공유 결합으로 부착된 적어도 하나의 비-아미노산 치환기를 포함하는 PYY 화합물로 사용된다.

따라서 PYY 유사체의 유도체는 적어도 하나의 아미노산 변형 및 공유 결합으로 부착된 적어도 하나의 비-아미노산 치환기를 포함하는 PYY 화합물이다.

본 발명의 PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 포함할 수도 있다.

본 출원 전체에 걸쳐 사용된 용어 "아미노산 변형"은 hPYY(3-36)과 비교하여 아미노산에 대한 변형의 의미로 사용된다. 이 변형은 아미노산의 결실, 아미노산의 첨가, 한 아미노산의 또 다른 것으로의 치환 또는 펩타이드의 아미노산에 공유 결합으로 부착된 치환기의 결과일 수 있다.

본 발명의 PYY 화합물은 hPYY(1-36)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판을 포함하며, 본 발명의 PYY 화합물이 hPYY(1-36)의 위치 30에 해당하는 위치에서 이러한 변형 이외에 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 9개의 아미노산 변형을 포함할 수도 있다는 것을 의미한다.

예로서, [Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)는 hPYY(3-36)과 비교하여 4개의 아미노산 치환을 포함한다.

또 다른 예로서, [Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)은 hPYY(3-36)과 비교하여 5개의 아미노산 치환과 1개의 결실을 포함하며, 이 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 6개의 아미노산 변형을 갖는다는 것을 의미한다.

또 다른 양태에서, 본 발명의 PYY 펩타이드는 hPYY(3-36)에 대하여 적어도 70%, 75% 또는 80% 서열 동일성을 나타낼 수도 있다. 두 개의 유사체 간의 서열 동일성 결정 방법의 예로서, 두 개의 펩타이드 [NMeArg35]hPYY(3-36) 및 hPYY(3-36)이 정렬된다. hPYY(3-36)에 관하여 [NMeArg35]hPYY(3-36) 유사체의 서열 동일성은 정렬된 잔기의 총 수 빼기 다른 잔기의 수 (즉, 정렬된 동일한 잔기의 수) 나누기 hPYY(3-36)의 잔기의 총 수로 제공된다. 따라서, 상기 예에서 서열 동일성은 (34-1)/34이다.

본 발명의 PYY 화합물 또는 PYY 유사체는 i) hPYY(1-36)에서 변화되는 아미노산 잔기에 해당하는 아미노산 잔기의 수 (즉, hPYY(1-36)에서 해당하는 위치), 및 ii) 실제 변화를 참조하여 기술될 수도 있다.

다음은 적합한 유사체 명명법의 비-제한적 예이다. [NMeArg35]hPYY(3-36)은 인간 PYY(1-36)의 유사체를 지정하는데, 위치 35에서 자연 발생한 아르기닌은 N(알파)-메틸아르기닌으로 치환되었고 (hPYY(1-36)의 위치 35에 해당하는 위치에서 아르기닌 잔기는 알파-아미노 기에 첨가된 메틸 기를 가지고) 위치 1 및 2에서 자연 발생한 티로신 및 프롤린은 각각 결실되었다.

유사하게, [Trp30]hPYY(3-36)은 인간 PYY(3-36)의 유사체를 지정하는데, 인간 PYY(1-36)의 위치 30에서 자연 발생한 류신은 트립토판으로 치환되었다.

다음은 PYY 유사체의 유도체에 적합한 명명법의 비-제한적 예이다. 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)은 hPYY(3-36) (SEQ ID NO:2)의 유사체의 유도체를 지정하는데, [Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]는 인간 PYY(3-36)과 비교하여 PYY(1-36)의 해당하는 위치를 말하는 숫자로 아미노산 변화를 지정하고, 치환기 [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-은 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된다.

표현 "~와 동등한 위치" 또는 "해당하는 위치"는 hPYY(1-36)을 참조하여 변종 PYY 서열에서 변화의 부위를 특성화하는데 사용된다.

본 출원 전체에 걸쳐 일반적으로, PYY 유사체의 특정 위치를 말할 때, 언급된 위치는 hPYY(1-36)의 상기 특정 위치에 해당하는 PYY 유사체의 위치이다.

본 출원 전체에 걸쳐 사용된, PYY 화합물이 hPYY(1-36)의 특정 위치에 해당하는 위치에서 특정 아미노산을 포함한다는 표현은 상기 위치에서 고유한 아미노산이 상기 특정 아미노산으로 대체되었다는 것을 의미한다.

아미노산 잔기는 그것들의 전체 이름, 그것들의 한 글자 암호, 및/또는 그것들의 세 글자 암호로 확인될 수도 있다. 이 세 가지 방법은 완전히 동등하다.

특정 명시된 변화를 "포함하는" 유사체는 hPYY(1-36)와 비교할 때, 추가의 변화를 포함할 수도 있다. 한 양태에서, 유사체는 명시된 변화를 "갖는다".

PYY 유사체

PYY 유사체는 hPYY(1-36)과 비교할 때 많은 아미노산 잔기가 변형된 PYY 펩타이드이다. 이 변형들은 치환, 삽입, 및/또는 결실을, 단독으로 또는 조합하여, 포함한다.

특정 양태에서, 본 발명의 PYY 유사체는 "비-필수" 아미노산 잔기의 하나 이상의 변형을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, "비-필수" 아미노산 잔기는 인간 PYY 아미노산 서열에서 Y2 수용체에 대한 PYY 유사체의 활성을 없애거나 실질적으로 감소시키지 않으면서 변할 수 있는, 즉, 결실되거나 치환될 수 있는 잔기이다.

치환. 한 양태에서, 아미노산은 보존적 치환으로 치환될 수도 있다. 용어 "보존적 치환"은 본원에서 사용된 바와 같이 하나 이상의 아미노산이 생물학적으로 유사한 또 다른 잔기로 대체된다는 것을 나타낸다. 예는 유사한 특징을 가진 아미노산 잔기, 예를 들어, 작은 아미노산, 산성 아미노산, 극성 아미노산, 염기성 아미노산, 소수성 아미노산 및 방향족 아미노산의 치환을 포함한다.

한 양태에서, 본 발명의 PYY 유사체는 PYY의 서열로 하나 이상의 비천연 및/또는 비-아미노산, 예를 들어, 아미노산 모방체의 치환을 포함할 수도 있다.

결실 및 절단. 한 양태에서, 본 발명의 PYY 유사체는 인간 PYY의 아미노산 서열로부터 결실된 하나 이상의 아미노산 잔기를, 단독으로, 또는 하나 이상의 삽입 또는 치환과 조합하여, 가질 수도 있다.

삽입. 한 양태에서, 본 발명의 PYY 유사체는, 단독으로 또는 하나 이상의 결실 및/또는 치환과 조합하여, 인간 PYY의 아미노산 서열로 삽입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수도 있다.

한 양태에서, 본 발명의 PYY 유사체는 PYY의 서열로 하나 이상의 비천연 아미노산 및/또는 비-아미노산의 삽입을 포함할 수도 있다.

PYY 펩타이드는 척추동물, 예를 들어, 인간, 마우스, 양, 염소, 소, 또는 말로부터 유래될 수도 있다. 용어 "척추동물"은 어류, 양서류, 파충류, 조류, 및 포유류를 포함하는 척색동물문(phylum Chordata)의 주요 부문인 척추동물아문(subphylum Vertebrata)의 일원을 의미하며, 이것들 모두는 분절된 척추 및 뚜렷한 고분화된 머리를 특징으로 한다. 용어, "포유동물"는 인간, 뿐만 아니라 포유강(class Mammalia)에서 항상성 메커니즘을 갖고 있는 동물계(animal kingdom)의 다른 모든 온혈 구성원, 예를 들어, 반려 포유동물, 동물원 포유동물, 및 식용 포유동물을 의미한다. 반려 포유동물의 일부 예는 개과 (예를 들어, 개), 고양이과 (예를 들어, 고양이) 및 말류이고; 식용 포유동물의 일부 예는 돼지, 소, 양, 등이다. 한 양태에서 포유동물은 인간 또는 반려 포유동물이다. 한 양태에서 포유동물은 인간, 남성 또는 여성이다.

예를 들어, 본 발명의 PYY 화합물의 맥락에서 사용된 용어 "펩타이드"는 아미드 (또는 펩타이드) 결합에 의해 서로 연결된 일련의 아미노산을 포함하는 화합물을 말한다.

본 발명의 PYY 펩타이드는 펩타이드 결합에 의해 연결된 적어도 24개의 구성 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, PYY 펩타이드는 적어도 33개의 아미노산을 포함한다. 특정 구체예에서, PYY 펩타이드는 적어도 34개의 아미노산을 포함한다.

아미노산은 아민 기 및 카르복시산 기, 및, 선택적으로, 종종 측쇄로도 불리는 하나 이상의 추가적인 기를 함유하는 분자이다.

용어 "아미노산"은 단백질 형성성 (또는 암호화된 또는 천연) 아미노산 (20개의 표준 아미노산 중에서), 뿐만 아니라 비-단백질, 뿐만 아니라 비-단백질 형성성 (또는 비-암호화된 또는 비-천연) 아미노산을 포함한다. 단백질 형성성 아미노산은 자연스럽게 단백질에 통합되는 것들이다. 표준 아미노산은 유전 암호에 의해 암호화된 것들이다. 비-단백질 형성성 아미노산은 단백질에서 발견되지 않거나, 또는 표준 세포 장치에 의해 생성되지 않는다 (예를 들어, 그것들은 번역 후 변형의 대상일 수도 있다). 비-단백질 형성성 아미노산의 비-제한적 예는 Aib (α-아미노아이소부티르산), N(알파)-메틸아르기닌, 뿐만 아니라 단백질 형성성 아미노산의 D-이성질체이다. 단백질 형성성 아미노산의 D-이성질체의 한 예는 아스파르트산의 D-이성질체이며, 이것은 D-Asp로도 쓰여질 수 있다.

다음에서, 광학 이성질체가 진술되지 않은 PYY 화합물의 모든 아미노산은 L-이성질체를 의미하는 것으로 생각되어야 한다 (달리 명시되지 않으면).

PYY 유도체

용어 "유도체"는 본원에서 사용된 바와 같이 PYY 펩타이드 또는 유사체의 맥락에서 화학적으로 변형된 PYY 펩타이드를 의미하며, 이것에서 하나 이상의 치환기가 펩타이드에 공유 결합으로 부착되었다.

본 발명의 한 양태에서, 치환기는 N-말단 치환기일 수도 있다.

또한 또는 대안으로, 한 양태에서, 치환기는 변형 기일 수도 있거나 또는 대안으로, 연장 모이어티로 불릴 수도 있다.

N-말단 치환기

본 발명의 한 양태에서, PYY 화합물은 PYY 화합물의 N-말단의 아미노산에서 알파-아미노 기에 공유 결합으로 부착된 치환기를 포함한다. 한 양태에서, hPYY(1-36)의 위치 1-3에 해당하는 위치에서 아미노산 잔기가 없고, N-말단 치환기는 hPYY(1-36)의 위치 4에 해당하는 위치에서 아미노산 잔기에 공유 결합으로 부착된다.

한 양태에서, N-말단 치환기는 알콕시 기이다. 한 양태에서, N-말단 치환기는 최대 12개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기이다. 또 다른 양태에서, N-말단 치환기는 최대 6개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기이다.

변형 기 / 연장 모이어티

한 양태에서, PYY 화합물은 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 아미노산 잔기에 공유 결합으로 부착된 치환기 또는 변형 기를 포함한다. 추가의 한 구체예에서, 치환기 또는 변형 기는 단백질과 비-공유 컨쥬게이트를 형성할 수 있으며, 이로 인해 혈류와 함께 유도체의 순환을 촉진하고, PYY 유도체 및 알부민의 컨쥬게이트가 단지 신장 클리어런스에 의해서는 느리게 제거된다는 사실로 인해, 또한 유도체의 작용 시간을 연장하는 효과를 갖는다. 따라서, 치환기, 또는 변형 기는 전체로서 연장 모이어티로도 불릴 수도 있다.

변형 기는 아실화에 의해, 즉, 변형 기의 카르복시산 기 및 리신 잔기의 엡실론 아미노 기 사이에서 형성된 아미드 결합을 통해 PYY 펩타이드의 리신 잔기에 공유 결합으로 부착될 수도 있다. 리신의 아미노 기는 또한 환원성 아미노화에 의해 변형 기의 알데하이드에 커플링될 수 있다. 또 다른 양태에서, 시스테인의 티올 기는 마이클 첨가(Michael addition)에 의해 변형 기의 말레이미도 기에 커플링되거나 또는 친핵성 치환에 의해 변형 기의 클로로- 또는 아이오도아세틸 기에 커플링될 수 있다.

한 양태에서, 변형 기는 아실화에 의해, 즉, 변형 기의 카르복시산 기 및 리신 잔기의 엡실론 아미노 기 사이에서 형성된 아미드 결합을 통해 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기에 공유 결합으로 부착될 수도 있다.

본 발명의 유도체는 결합된 원자의 같은 분자식 및 서열을 갖지만, 공간에서 단지 그 원자들의 3차원 배향이 다른, 상이한 입체이성질체 형태로 존재할 수도 있다. 본 발명의 예시된 유도체의 입체 이성(stereoisomerism)은 실험 섹션에서, 표준 명명법을 사용하여, 이름, 뿐만 아니라 구조로도 나타난다. 달리 진술되지 않으면, 본 발명은 청구된 유도체의 모든 입체이성질체 형태에 관한 것이다.

본원에서, 광학 이성질체가 진술되지 않은 PYY 화합물의 모든 아미노산은 L-이성질체를 의미하는 것으로 생각되어야 한다 (달리 명시되지 않으면).

약학적으로 허용 가능한 염

본 발명의 PYY 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 되어 있을 수도 있다.

염은, 예를 들어, 염기 및 산 사이의 화학 반응에 의해 형성되며, 예를 들어, 2NH₃ + H₂SO₄ → (NH₄)₂SO₄가 있다.

염은 염기성 염, 산성 염일 수도 있거나, 그것은 둘 다 아닐 수도 있다 (즉, 중성 염). 염기성 염은 물에서 수산화 이온을 생성하고 산성 염은 하이드로늄 이온을 생성한다.

본 발명의 유도체의 염은 각각 음이온성 또는 양이온성 기들 사이에서 첨가된 양이온 또는 음이온으로 형성될 수도 있다. 이 기들은 펩타이드 모이어티에, 및/또는 본 발명의 유도체의 측쇄에 위치할 수도 있다.

본 발명의 유도체의 음이온성 기의 비-제한적 예는, 존재하면, 측쇄에서, 뿐만 아니라 펩타이드 모이어티에서 유리 카르복시 기를 포함한다. 펩타이드 모이어티는 종종 내부의 산 아미노산 잔기, 예를 들어, Asp 및 Glu에서 유리 카르복시 기를 포함한다.

펩타이드 모이어티에서 양이온성 기의 비-제한적 예는, 존재하면, N-말단에서 유리 아미노 기, 뿐만 아니라 내부 염기성 아미노산 잔기, 예를 들어, His, Arg, 및 Lys의 어떠한 유리 아미노 기를 포함한다.

기능적 특성

첫 번째 기능적 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물은 양호한 Y2 수용체 효능을 갖는다. 또한, 또는 대안으로, 두 번째 양태에서, 그것들은 Y2 수용체에 매우 잘 결합한다. 바람직하게는 그것들은 hPYY(1-36) 및 hPYY(3-36)과 비교하여 수용체를 완전히 활성화하는 능력과 결합된, Y2 수용체에 강하게 결합하는 능력에 의해 반영된 바와 같이 완전한 Y2 수용체 작용제이다.

또한 또는 대안으로, 두 번째 기능적 양태에서, 본 발명은 Y 수용체 서브타입 Y1, Y4 및 Y5와 비교하여 Y 수용체 서브타입 Y2에 대한 선택성을 나타내는 PYY 화합물에 관한 것이다.

또한, 또는 대안으로, 세 번째 기능적 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물은 개선된 약물동역학적 특성을 갖는다. 또한, 또는 대안으로, 네 번째 기능적 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물은 증가된 반감기 및/또는 감소된 클리어런스를 갖는다. 또한, 또는 대안으로, 다섯 번째 기능적 양태에서, 그것들은 생체 내에서 혈당을 감소시키는 효과를 갖는다. 또한, 또는 대안으로, 여섯 번째 기능적 양태에서, 그것들은 생체 내에서 음식물 섭취를 감소시키는 효과를 갖는다. 또한, 또는 대안으로, 일곱 번째 기능적 양태에서, 그것들은 생체 내에서 체중을 감소시키는 효과를 갖는다.

생물학적 활성 - 시험관 내 효능

첫 번째 기능적 양태에 따르면, 본 발명의 PYY 화합물은 생물학적으로 활성이거나, 강력하다.

특정 구체예에서, 효능 및/또는 활성은 시험관 내 효능, 즉, 기능적 Y2 수용체 검정에서의 성능, 더 자세하게는 인간 Y2 수용체를 활성화하는 능력을 말한다.

용어 반 최대 유효 농도 (EC₅₀)는 일반적으로, 용량 반응 곡선을 참조하여, 기저선 및 최대 사이에서 절반의 반응을 유발하는 농도를 말한다. EC₅₀은 화합물의 효능의 측정값으로 사용되고 최대 효과의 50%가 관찰되는 경우의 농도를 나타낸다.

본 발명의 유도체의 시험관 내 효능은 실시예 39에서 기술된 바와 같이 결정될 수도 있으며, 문제의 유도체의 EC₅₀이 결정된다. EC₅₀ 값이 낮을수록, 효능은 더 양호하다.

본 발명의 한 양태에서, 본 발명의 유도체는 실시예 39의 방법을 사용하여 결정된, 100 nM 이하의 EC₅₀에 해당하는 시험관 내 효능을 갖는다. 한 양태에서, 본 발명의 유도체는 실시예 39의 방법을 사용하여 결정된, 50 nM 이하의 EC₅₀에 해당하는 시험관 내 효능을 갖는다. 한 양태에서, 본 발명의 유도체는 실시예 39의 방법을 사용하여 결정된, 25 nM 이하의 EC₅₀에 해당하는 시험관 내 효능을 갖는다.

생물학적 활성 - 시험관 내 수용체 결합

두 번째 기능적 양태에 따르면, 본 발명의 PYY 화합물은 Y2 수용체에 매우 잘 결합한다. 이것은 실시예 40에서 기술된 바와 같이 결정될 수도 있다.

일반적으로, Y2 수용체로의 결합은 가능한 양호해야 하며, 낮은 Ki 값에 해당한다. Ki 값은 쳉-프루소프 방정식 (Cheng-Prusoff equation) Ki=IC50/(1+[L]/Kd)에 의해 결정되는데, IC50은 작용제의 반 최대 억제 농도이며, [L]은 방사성 리간드의 농도이고 Kd는 결합에 대한 해리 상수이다.

예로서, 특정 양태에서, Y2 수용체 결합 친화도 (Ki)는 100 nM 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, Y2 수용체 결합 친화도 (Ki)는 50 nM 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, Y2 수용체 결합 친화도 (Ki)는 10 nM 이하이다.

생물학적 활성 - 생체 내 약리학

또 다른 특정 구체예에서, 본 발명의 PYY 화합물은 생체 내에서 강력하며, 이것은 업계에 공지된 바와 같이 어떠한 적합한 동물 모델, 뿐만 아니라 임상 시험에서도 결정될 수 있다.

당뇨병 db/db 마우스는 적합한 동물 모델의 한 예이고, 혈당 저하 효과는, 예를 들어, 실시예 42에서 기술된 바와 같이, 이러한 마우스의 생체 내에서 결정될 수도 있다.

이에 더하여, db/db 마우스에서 음식물 섭취의 억제는 실시예 42에서 또한 기술된 바와 같이 음식물 섭취 및 체중에 대한 효과의 결정에 적합한 모델이다.

일반적으로, 1 μmol/kg 용량의 글루코스 저하 효과는 가능한 양호해야 하며 낮은 상대 % 글루코스 수준에 해당한다.

예로서, 본 발명의 특정 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 상대적 % 글루코스 수준은 80% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 상대적 % 글루코스 수준은 70% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 상대적 % 글루코스 수준은 60% 이하이다.

예로서, 본 발명의 특정 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 % 상대적 음식물 섭취는 40% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 % 상대적 음식물 섭취는 30% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 16시간에 % 상대적 음식물 섭취 는 20% 이하이다.

예로서, 본 발명의 특정 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 상대적 % 글루코스 수준은 80% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 상대적 % 글루코스 수준은 70% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 상대적 % 글루코스 수준은 60% 이하이다.

예로서, 본 발명의 특정 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 % 상대적 음식물 섭취는 40% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 % 상대적 음식물 섭취는 30% 이하이다. 본 발명의 한 양태에서, 투여 (1 μmol/kg) 후 4시간에 % 상대적 음식물 섭취는 20% 이하이다.

약물동역학적 프로파일

세 번째 기능적 양태에 따르면, 본 발명의 PYY 화합물은 개선된 약물동역학적 특성, 예를 들어, 증가된 말단 반감기 및/또는 감소된 클리어런스를 갖는다.

말단 반감기의 증가 및/또는 클리어런스의 감소는 문제의 화합물이 신체로부터 더 느리게 제거된다는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물에 대하여, 이것은 약학적 효과의 연장된 기간을 수반한다.

본 발명의 유도체의 약물동역학적 특성은 생체 내 약물동역학적 (PK) 연구에서 적합하게 결정될 수도 있다. 이러한 연구는, 시간이 흐름에 따라, 약학적 화합물이 신체에서 어떻게 흡수되고, 분포되고, 제거되는지, 및 이러한 공정들이 신체에서 화합물의 농도에 어떻게 영향을 미치는지를 평가하기 위해 실행된다.

의약품 개발의 발견 및 전임상 단계에서, 마우스, 래트, 원숭이, 개, 또는 돼지와 같은 동물 모델은 이러한 특성화를 수행하는데 사용될 수도 있다. 이 모델들 중 어느 것도 본 발명의 유도체의 약물동역학적 특성을 테스트하는데 사용될 수 있다.

말단 반감기 및/또는 클리어런스의 추정은 용법의 평가와 관련이 있고, 신약 화합물의 평가시 약물 개발의 중요한 파라미터이다.

약물동역학적 프로파일 - 미니피그에서 생체 내 반감기

세 번째 기능적 양태에 따르면, 본 발명의 유도체는 개선된 약물동역학적 특성을 갖는다.

특정 구체예에서, 약물동역학적 특성은, 예를 들어, 본원에서 실시예 41에서 기술된 바와 같이 i.v. 투여 후 미니피그에서 생체 내 말단 반감기 (T_½)로서 결정될 수도 있다.

본 발명의 한 양태에서, 미니피그에서 말단 반감기는 적어도 10시간이다. 본 발명의 한 양태에서, 미니피그에서 말단 반감기는 적어도 20시간이다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 미니피그에서 말단 반감기는 적어도 40시간이다.

PYY 화합물의 생산

본 발명의 PYY 화합물과 유사한 펩타이드의 생산은 업계에 잘 공지되어 있다.

본 발명의 유도체의 PYY 모이어티는, 예를 들어, t-Boc 또는 Fmoc 화학법 또는 다른 잘 확립된 기술을 사용하는 고전적인 펩타이드 합성, 예를 들어, 고체상 펩타이드 합성에 의해 생산될 수도 있으며, 예를 들어, Greene and Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dorwald, "Organic Synthesis on solid phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, 및 "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", Edited by W.C. Chan and P.D. White, Oxford University Press, 2000을 참고하면 된다.

또한, 또는 대안으로, 그것들은 재조합 방법에 의해, 즉, 펩타이드의 발현을 허용하는 조건 하에 적합한 영양 배지에서 유사체를 암호화하고 펩타이드를 발현할 수 있는 DNA 서열을 함유하는 숙주 세포를 배양함으로써 생성될 수도 있다. 이 펩타이드의 발현에 적합한 숙주 세포의 비-제한적 예는 다음과 같다: 대장균(Escherichia coli), 사카로미세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae), 뿐만 아니라 포유류 BHK 또는 CHO 세포주.

비-천연 아미노산 및/또는 공유 결합으로 부착된 치환기를 포함하는 본 발명의 PYY 화합물은, 예를 들어, 실험 부분에서 기술된 바와 같이 생성될 수도 있다.

본 발명의 많은 PYY 화합물의 제조 방법의 특정 예는 실험 부분에 포함되어 있다.

단백질 정제

본 발명의 PYY 화합물은 업계에 공지된 다양한 과정에 의해 정제될 수도 있으며, 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화도, 소수성, 및 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC)), 전기영동 과정, 또는 추출을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다 (예를 들어, Protein Purification, J.-C. Janson and Lars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989 참조).

투여 방식

용어 "치료"는 맥락에 의해 달리 지시되지 않거나 분명하게 부인하지 않으면 참조되는 질환, 장애, 또는 질병의 예방 및 최소화 둘 다를 포함하는 것을 의미한다 (즉, "치료"는 본 발명의 PYY 화합물 또는 본 발명의 PYY 화합물을 포함하는 조성물의 예방적 및 치료적 투여 둘 다를 말한다).

투여의 경로는 본 발명의 화합물을 신체에서 원하는 또는 적절한 장소로, 예를 들어, 비경구적으로, 예를 들어, 피하로, 근육 내로 또는 정맥 내로 효과적으로 운송하는 어떠한 경로도 될 수 있다. 대안으로, 본 발명의 화합물은 경구로, 폐로, 직장으로, 경피로, 구강으로, 혀 밑으로, 또는 비강으로 투여될 수 있다.

약학적 조성물

본 발명의 PYY 화합물을 포함하는 주사 가능 조성물은 원하는 최종 산물을 제공하기에 적절한 성분들을 용해시키고 혼합하는 단계를 수반하는 제약업의 통상적인 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 따라서, 한 과정에 따르면, 본 발명의 PYY 화합물은 적합한 pH에서 적합한 버퍼에 용해되어 침전이 최소화되거나 방지된다. 주사 가능 조성물은, 예를 들어, 멸균 여과에 의해, 멸균 상태로 만들어진다.

조성물은 안정화된 제형일 수도 있다. 용어 "안정화된 제형"은 증가된 물리적 및/또는 화학적 안정성, 바람직하게는 둘 다를 가진 제형을 말한다. 일반적으로, 제형은 유효 기간이 도달할 때까지 사용 및 저장 중에 (추천된 사용 및 저장 조건에 따라) 안정해야 한다.

용어 "물리적 안정성"은 열-기계적 응력에 노출, 및/또는 불안정화 계면 및 표면 (예를 들어, 소수성 표면)과의 상호작용의 결과로서 생물학적으로 비활성 및/또는 불용성 응집체를 형성하려는 폴리펩타이드의 성향을 말한다. 수성 폴리펩타이드 제형의 물리적 안정성은 다른 온도에서 다른 기간 동안 기계적/물리적 응력 (예를 들어, 교반)에 노출 후 시각적 검사, 및/또는 탁도 측정에 의해 평가될 수도 있다. 대안으로, 물리적 안정성은 폴리펩타이드의 구조적 상태의 분광 시약 또는 프로브, 예를 들어, 티오플라빈 T 또는 "소수성 패치" 프로브를 사용하여 평가될 수도 있다.

용어 "화학적 안정성"은 온전한 폴리펩타이드와 비교하여 감소된 생물학적 효능, 및/또는 증가된 면역원성 효과를 잠재적으로 가지고 있는 화학적 분해 생성물의 형성으로 이어지는, 폴리펩타이드 구조의 화학적 변화 (특히 공유 결합의 변화)를 말한다. 화학적 안정성은 다른 환경 조건에 노출 후 다양한 시점에서 화학적 분해 생성물의 양을, 예를 들어, SEC-HPLC, 및/또는 RP-HPLC로 측정함으로써 평가될 수 있다.

한 양태에서, 본 발명은 개선된 물리적 안정성을 가진 PYY 화합물을 제공한다. 한 양태에서, 본 발명은 개선된 화학적 안정성을 가진 PYY 화합물을 제공한다.

조합 치료

본 발명의 PYY 화합물로의 치료는 또한, 예를 들어, 당뇨병 약, 항비만제, 식욕 조절제, 혈압강하제, 당뇨병으로부터 발생하거나 이와 관련된 합병증의 치료 및/또는 방지를 위한 약제 및 비만으로부터 발생하거나 이와 관련된 합병증 및 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 약학적 활성 물질과 결합될 수도 있다.

이 약학적 활성 물질의 예는 다음과 같다: GLP-1 수용체 작용제, 인슐린, DPP-IV (디펩티딜 펩티다제-IV) 억제제, 아밀린 작용제 및 렙틴 수용체 작용제.

본 발명의 한 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물은 GLP-1 작용제와 결합된다. 화합물은 두 화합물 모두를 함유하는 단일 투약 형태, 또는 제1 단위 투약 형태로서 PYY 화합물의 조제물 및 제2 단위 투약 형태로서 GLP-1 작용제의 조제물을 포함하는 부품들의 키트의 형태로 공급될 수도 있다.

본 발명의 PYY 화합물과 결합되는 GLP-1 작용제의 비-제한적 예는 리라글루티드, 세마글루티드, 엑세나티드, 둘라글루티드, 릭시세나티드, 타스포글루티드, 및 알비글루티드이다.

리라글루티드, Novo Nordisk A/S에 의해 2009년에 판매된, 하루에 한 번 투여를 위한, 모노아실화된 GLP-1 유도체가 WO 98/08871, 실시예 37에서 개시된다.

WO 2006/097537은 세마글루티드를 포함하는 추가적인 GLP-1 유도체 (실시예 4), Novo Nordisk A/S에 의해 개발 중인, 일주일에 한 번 투여를 위한, 모노아실화된 GLP-1 유도체를 개시한다.

엑세나티드는 엑센딘-4, 미국 독도마뱀(Gila monster)의 침에서 발견된 호르몬의 합성 버젼이다. 그것은 GLP-1과 유사한 생물학적 특성을 나타낸다.

둘라글루티드는 GLP-1-Fc 구조 (GLP-1 - 링커 - IgG4의 Fc)이다.

릭시세나티드는 여섯 개의 Lys 잔기로 C-말단에서 변형된 엑센딘-4(1-39)를 기반으로 한다.

타스포글루티드는 인간 GLP-1의 아미노산 서열 7-36의 8-(2-메틸알라닌)-35-(2-메틸알라닌)-36-L-아르기닌아미드 유도체이다.

알비글루티드는 재조합 인간 혈청 알부민 (HSA)-GLP-1 하이브리드(hybrid) 단백질, 아마도 HSA에 융합된 GLP-1 다이머이다. 구성적 GLP-1 펩타이드는 위치 8에서 Ala가 Gly로 치환된 유사체이다.

약학적 징후

본 발명은 또한 의약으로 사용되는 본 발명의 PYY 화합물에 관한 것이다.

본 발명의 특정 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물은 하기 의학적 처치에 사용될 수도 있다:

(i) 모든 형태의 당뇨병, 예를 들어, 과혈당증(hyperglycemia), 2형 당뇨병, 손상된 글루코스 내성, 1형 당뇨병, 비-인슐린 의존적 당뇨병, MODY (소아 성인형 당뇨병), 임신성 당뇨병의 예방 및/또는 치료, 및/또는 HbA1C의 감소;

(ii) 당뇨성 질환 진행, 예를 들어, 2형 당뇨병에서의 진행의 지연 또는 예방, 손상된 글루코스 내성 (IGT)의, 인슐린 요구형 2형 당뇨병으로의 진행의 지연, 인슐린 저항성의 지연 또는 예방, 및/또는 비-인슐린 요구형 2형 당뇨병의, 인슐린 요구형 2형 당뇨병으로의 진행의 지연;

(iii) β-세포 기능의 개선, 예를 들어, β-세포 아폽토시스(apoptosis) 감소, β-세포 기능 및/또는 β-세포 질량의 증가, 및/또는 β-세포에 대한 글루코스 민감도 회복;

(iv) 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키고, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 예방 및/또는 치료; 폭식 장애(binge eating disorder), 폭식증(bulimia nervosa), 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환(comorbidity), 예를 들어, 퇴행성 관절염(osteoarthritis) 및/또는 요실금(urine incontinence)의 예방 및/또는 치료;

(v) 당뇨 합병증, 예를 들어, 혈관병증(angiopathy); 말초 신경병증(peripheral neuropathy)을 포함하는 신경병증(neuropathy); 신증(nephropathy); 및/또는 망막증(retinopathy)의 예방 및/또는 치료;

(vi) 지질 파라미터의 개선, 예를 들어, 이상지질혈증(dyslipidemia)의 예방 및/또는 치료, 총 혈청 지질 저하; HDL 증가; 작고, 밀집된 LDL의 저하; VLDL 저하; 트리글리세리드 저하; 콜레스테롤 저하; 인간에서 지질단백질 a (Lp(a))의 혈장 수준 저하; 시험관 내 및/또는 생체 내 아포지질단백질 a (apo(a)) 생성 억제;

(vii) 심혈관 질환의 예방 및/또는 치료; 및/또는

(viii) 수면 무호흡증(sleep apnoea)의 예방 및/또는 치료.

다음 징후가 특히 바람직하다: 2형 당뇨병, 및/또는 비만.

한 양태에서, 대상체에서 에너지 대사를 변화시키는 방법이 본원에서 개시된다. 방법은 본 발명의 PYY 화합물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하고, 이로 인해 에너지 소비량을 변화시키는 단계를 포함한다. 에너지는 모든 생리학적 공정에서 연소된다. 신체는 상기 공정의 효율을 조절하거나, 일어나고 있는 공정의 수 및 성질을 변화시킴으로써, 에너지 소비율을 직접적으로 변화시킬 수 있다. 예를 들어, 소화 중에 신체는 창자를 통해 음식을 이동시키고, 음식을 소화시키는 에너지를 소진하고, 세포 내에서는, 세포 대사의 효율이 더 많거나 더 적은 열을 생성하도록 바뀔 수 있다.

한 양태에서, 본 출원에서 기술된 정확한 회로의 모든 조작을 위한 방법이 본원에서 기술되며, 대등하게 음식물 섭취를 변화시키고 상호간에 에너지 소비를 변화시킨다. 에너지 소비는 세포 대사, 단백질 합성, 대사율, 및 칼로리 활용의 결과이다. 따라서, 이 구체예에서, 말초 투여는 증가된 에너지 소비, 및 감소된 효율의 칼로리 활용을 초래한다. 한 양태에서, 본 발명의 PYY 화합물의 치료적 유효량이 대상체에게 투여되며, 이로 인해 에너지 소비를 증가시킨다.

"비만"은 일반적으로 30 이상의 체질량 지수로서 한정되는 한편, 본원의 목적을 위해서는, 30 미만의 체질량 지수를 가진 사람들을 포함하여, 체중을 감소시킬 필요가 있거나 감소시키길 바라는 어떠한 대상체도 "비만"의 범위에 포함된다. 어떠한 이론에 의해서도 제한하려는 의도 없이, 음식물 섭취에 있어서, 위 배출의 지연에 있어서, 영양분 이용성의 감소에 있어서, 및 체중 손실의 원인에 있어서 말초 투여된 본 발명의 PYY 화합물의 효과는 PP 과의 것들에서, 또는 이것들과 유사한 하나 이상의 독특한 수용체 클래스와의 상호작용에 의해 결정된다고 생각된다. 더 자세하게는, PYY-선호 (또는 Y2) 수용체와 유사한 수용체 또는 수용체들이 수반되는 것으로 나타난다.

특정 구체예

본 발명은 본 발명의 다음 비-제한적 구체예에 의해 더 기술된다:

1. hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판, 및 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형, 및 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 PYY 화합물.

2. hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판, 및 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형, 또는 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 PYY 화합물.

3. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸-L-아르기닌을 더 포함하는 PYY 화합물.

4. 구체예 1 내지 구체예 3 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸-L-아르기닌을 포함하는 PYY 화합물.

5. 구체예 1 내지 구체예 4 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 18에 해당하는 위치에서 글루타민을 더 포함하는 PYY 화합물.

6. 구체예 1 내지 구체예 5 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 18에 해당하는 위치에서 글루타민을 포함하는 PYY 화합물.

7. 구체예 1 내지 구체예 6 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 4에 해당하는 위치에서 아르기닌을 더 포함하는 PYY 화합물.

8. 구체예 1 내지 구체예 7 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 4에 해당하는 위치에서 아르기닌을 포함하는 PYY 화합물.

9. 구체예 1 내지 구체예 8 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 28에 해당하는 위치에서 Aib를 더 포함하는 PYY 화합물.

10. 구체예 1 내지 구체예 9 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 28에 해당하는 위치에서 Aib를 포함하는 PYY 화합물.

11. 구체예 1 내지 구체예 10 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1 및 2에 해당하는 위치가 없는 PYY 화합물.

12. 구체예 1 내지 구체예 11 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1-3에 해당하는 위치가 없는 PYY 화합물.

13. 구체예 1 내지 구체예 12 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1-3에 해당하는 위치가 없고, PYY 화합물은 N-말단 치환기를 더 포함하며, N-말단 치환기는 최대 12개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 PYY 화합물.

14. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 최대 10개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 PYY 화합물.

15. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 최대 8개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 PYY 화합물.

16. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 최대 6개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 PYY 화합물.

17. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 6개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 PYY 화합물.

18. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 3-메틸부타노일, 3-메틸펜타노일 또는 헥사노일로부터 선택되는 PYY 화합물.

19. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 3-메틸부타노일인 PYY 화합물.

20. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 3-메틸펜타노일인 PYY 화합물.

21. 구체예 13에 있어서, N-말단 치환기는 헥사노일인 PYY 화합물.

22. 구체예 1 내지 구체예 21 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 8개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

23. 구체예 1 내지 구체예 22 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 6개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

24. 구체예 1 내지 구체예 23 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최소 4개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

25. 구체예 1 내지 구체예 24 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최소 6개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

26. 구체예 1 내지 구체예 25 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최소 8개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

27. 구체예 1 내지 구체예 26 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 4 내지 10개의 범위의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

28. 구체예 1 내지 구체예 27 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 6 내지 8개의 범위의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

29. 구체예 1 내지 구체예 28 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 4 내지 6개의 범위의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

30. 구체예 1 내지 구체예 29 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 4개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

31. 구체예 1 내지 구체예 30 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 6개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

32. 구체예 1 내지 구체예 31 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 8개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

33. 구체예 1 내지 구체예 32 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)에 대하여 적어도 70% 서열 동일성을 나타내는 PYY 화합물.

34. 구체예 1 내지 구체예 33 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)에 대하여 적어도 75% 서열 동일성을 나타내는 PYY 화합물.

35. 구체예 1 내지 구체예 34 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)에 대하여 적어도 80% 서열 동일성을 나타내는 PYY 화합물.

36. 구체예 1 내지 구체예 35 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 및 위치 7에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기를 더 포함하며, 상기 변형 기는 A-B-C-로 한정되고, A-는 카르복시산, 테트라졸 또는 설폰산을 포함하는 PYY 화합물.

37. 구체예 1 내지 구체예 36 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 및 상기 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기를 포함하며, 상기 변형 기는 A-B-C-로 한정된 PYY 화합물.

38. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, A-는 다음으로부터 선택되는 PYY 화합물:

,

,또는

상기 식에서 a는 12 내지 19의 정수이고, b는 10 내지 16의 정수이며, c는 10 내지 16의 정수이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.

39. 구체예 38에 있어서, a는 15이거나, b는 13이거나, 또는 c는 13인 PYY 화합물.

40. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, A-는 다음으로부터 선택되는 PYY 화합물:

또는

상기 식에서 a는 12 내지 19의 정수이고, c는 10 내지 16의 정수이며, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.

41. 구체예 40에 있어서, a는 15이거나, 또는 c는 13인 PYY 화합물.

42. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, A-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 a는 12 내지 19의 정수이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.

43. 구체예 42에 있어서, a는 15인 PYY 화합물.

44. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, A-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 b는 10 내지 16의 정수이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.

45. 구체예 44에 있어서, b는 13인 PYY 화합물.

46. 구체예 36 또는 구체예 37에 있어서, A-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 c는 10 내지 16의 정수이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.

47. 구체예 46에 있어서, c는 13인 PYY 화합물.

48. 구체예 36 또는 구체예 47 중 어느 하나에 있어서, B-는 다음으로부터 선택되는 PYY 화합물:

,

,또는

상기 식에서 d는 1 또는 2이고; e는 1 또는 2이며; f는 2, 3 또는 4이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시한다.

49. 구체예 48에 있어서, B-는 다음으로부터 선택되는 PYY 화합물:

,또는

상기 식에서 d는 1 또는 2이고; f는 2, 3 또는 4이며; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시한다.

50. 구체예 49에 있어서, d는 1 또는 2이고; f는 3인 PYY 화합물.

51. 구체예 48에 있어서, B-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 d는 1 또는 2이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시한다.

52. 구체예 48에 있어서, B-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 f는 2, 3 또는 4이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시한다.

53. 구체예 53에 있어서, f는 3인 PYY 화합물.

54. 구체예 36 내지 구체예 53 중 어느 하나에 있어서, -C-는

또는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 g는 1-5의 범위의 정수이고, h는 1-5의 범위의 정수이며, i는 2 내지 6의 범위의 정수이고, j는 2 내지 6의 범위의 정수이며, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하고, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시한다.

55. 구체예 36 내지 구체예 53 중 어느 하나에 있어서, -C-는

또는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 g는 1-5의 범위의 정수이고, h는 1-5의 범위의 정수이며, i는 2 내지 6의 범위의 정수이고, j는 1 내지 6의 범위의 정수이며, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하고, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시한다.

56. 구체예 54 또는 구체예 55에 있어서, g 및 h는 각각 1인 PYY 화합물.

57. 구체예 54 내지 구체예 56 중 어느 하나에 있어서, i는 2, 3, 4 또는 5로부터 선택되고, j는 1, 2 또는 3으로부터 선택되는 PYY 화합물.

58. 구체예 36 내지 구체예 53 중 어느 하나에 있어서, -C-는

인 PYY 화합물:

상기 식에서 g는 1-5의 범위의 정수이고, h는 1-5의 범위의 정수이며, i는 2 내지 6의 범위의 정수이고, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하며, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시한다.

59. 구체예 58에 있어서, g 및 h는 각각 1인 PYY 화합물.

60. 구체예 58 또는 구체예 59에 있어서, i는 2, 4 또는 6으로부터 선택되는 PYY 화합물.

61. 구체예 60에 있어서, i는 2인 PYY 화합물.

62. 구체예 60에 있어서, i는 4인 PYY 화합물.

63. 구체예 60에 있어서, i는 6인 PYY 화합물.

64. 구체예 58에 있어서, g 및 h는 각각 1이고, i는 2인 PYY 화합물.

65. PYY 화합물로서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 갖고, PYY 화합물은

(i) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판;

(ii) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸-L-아르기닌;

(iii) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 18에 해당하는 위치에서 글루타민;

(iv) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신; 및

(v) 상기 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기로서, 상기 변형 기는 A-B-C-로 한정되며,

A-는

또는

으로부터 선택되고

상기 식에서 a는 15이고, c는 13이며, *는 -B-에 대한 부착점을 표시하며;

B-는

이고

상기 식에서 d는 1 또는 2이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하며, **는 -C-에 대한 부착점을 표시하고;

-C-는

이고

상기 식에서 g 및 h는 각각 1이고, i는 2 또는 4로부터 선택되며, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하고, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시하는, 변형 기

또는 이것들의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 PYY 화합물.

66. 구체예 65에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 4에 해당하는 위치에서 아르기닌을 포함하는 PYY 화합물.

67. 구체예 65 또는 구체예 66에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1 및 2에 해당하는 위치가 없는 PYY 화합물.

68. 구체예 65 내지 구체예 67 중 어느 하나에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1-3에 해당하는 위치가 없고, PYY 화합물은 N-말단 치환기를 더 포함하며, N-말단 치환기는 3-메틸부타노일, 3-메틸펜타노일 또는 헥사노일로부터 선택되는 PYY 화합물.

69. 구체예 65 내지 구체예 68 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 8개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

70. PYY 화합물로서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 가지며, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1-3에 해당하는 위치가 없고, PYY 화합물은

(iv) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신;

(v) 상기 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기로서, 상기 변형기는 A-B-C-로 한정되며,

A-는

이고

상기 식에서 c는 13이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시하며;

B-는

이고

상기 식에서 d는 1이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시하며;

-C-는

이고

상기 식에서 g 및 h는 각각 1이고, i는 2이며, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하고, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시하는, 변형 기;

(vi) hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 4에 해당하는 위치에서 아르기닌; 및

(vii) 3-메틸부타노일, 3-메틸펜타노일 또는 헥사노일로부터 선택되는 N-말단 치환기;

71. 구체예 70에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 8개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

71a. 구체예 70에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(3-36)과 비교하여 6개의 아미노산 변형을 갖는 PYY 화합물.

72. 구체예 1 내지 구체예 71 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 염이 아닌 PYY 화합물.

73. 다음으로부터 선택된 구체예 1 내지 구체예 72 중 어느 하나의 PYY 화합물:

[Trp30]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:3)

; [Trp30,NMeArg35]hPYY3-36 (SEQ ID NO:4)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18, Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:5)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:6)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:7)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:8)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-테트라졸-5-일)-헥사데카노일설파모일]부타노일아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:9)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]-아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Aib28,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:10)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:11)

; 4-N{알파}-(헥사노일)-7-N{엡실론}-2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:12)

; 4-N{알파}-(3-메틸-펜타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:13)

; 4-N{알파}-(3-메틸-펜타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:14)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:15)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:16)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:17)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:18)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:19)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(14-설포테트라데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:20)

.

74. 다음으로부터 선택된 구체예 1 내지 구체예 73 중 어느 하나의 PYY 화합물:

[Trp30]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:3)

; [Trp30,NMeArg35]hPYY3-36 (SEQ ID NO:4)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-테트라졸-5-일)-헥사데카노일설파모일]부타노일아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18, Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:9)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-카르복시-헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:21)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(14-카르복시-테트라카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:22)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Ile28,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:23)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:24)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:25)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:26)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:27)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]-에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:28)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]-에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]-에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:29)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[(2S)-2-아미노-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]헥사노일]]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:30)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(15-카르복시펜타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:31)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Val3,Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:32)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,D-Asp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:33)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:34)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,D-isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:35)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:36)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:37)

.

75. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:3인 PYY 화합물.

76. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:4인 PYY 화합물.

77. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:5인 PYY 화합물.

78. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:6인 PYY 화합물.

79. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:7인 PYY 화합물.

80. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:8인 PYY 화합물.

81. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:9인 PYY 화합물.

82. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:10인 PYY 화합물.

83. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:11인 PYY 화합물.

84. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:12인 PYY 화합물.

85. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:13인 PYY 화합물.

86. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:14인 PYY 화합물.

87. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:15인 PYY 화합물.

88. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:16인 PYY 화합물.

89. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:17인 PYY 화합물.

90. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:18인 PYY 화합물.

91. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:19인 PYY 화합물.

92. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:20인 PYY 화합물.

93. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:21인 PYY 화합물.

94. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:22인 PYY 화합물.

95. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:23인 PYY 화합물.

96. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:24인 PYY 화합물.

97. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:25인 PYY 화합물.

98. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:26인 PYY 화합물.

99. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:27인 PYY 화합물.

100. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:28인 PYY 화합물.

101. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:29인 PYY 화합물.

102. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:30인 PYY 화합물.

103. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:31인 PYY 화합물.

104. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:32인 PYY 화합물.

105. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:33인 PYY 화합물.

106. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:34인 PYY 화합물.

107. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:35인 PYY 화합물.

108. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:36인 PYY 화합물.

109. 구체예 1 또는 구체예 2에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:37인 PYY 화합물.

110. 구체예 1 내지 구체예 109 중 어느 하나에 있어서, 인간 Y2 수용체 작용제인 PYY 화합물.

111. 구체예 1 내지 구체예 110 중 어느 하나에 있어서, 완전한 인간 Y2 수용체 작용제인 PYY 화합물.

112. 구체예 1 내지 구체예 111 중 어느 하나에 있어서, 선택적 인간 Y2 수용체 작용제인 PYY 화합물.

113. 구체예 1 내지 구체예 112 중 어느 하나에 있어서, 선택적 완전한 인간 Y2 수용체 작용제인 PYY 화합물.

114. 구체예 1 내지 구체예 113 중 어느 하나에 있어서, 인간 Y2 수용체를 활성화할 수 있는 PYY 화합물.

115. 구체예 1 내지 구체예 114 중 어느 하나에 있어서, 인간 Y2 수용체를 발현하는 전체 세포를 이용한 검정에서 인간 Y2 수용체를 활성화할 수 있는 PYY 화합물.

116. 구체예 1 내지 구체예 115 중 어느 하나에 있어서, 실시예 39의 액톤 기능적 효능 검정에서 인간 Y2 수용체를 활성화할 수 있는 PYY 화합물.

117. 구체예 1 내지 구체예 116 중 어느 하나에 있어서, 인간 Y2 수용체에 결합할 수 있는 PYY 화합물.

118. 구체예 1 내지 구체예 117 중 어느 하나에 있어서, 인간 Y2 수용체에 결합할 수 있고, 인간 Y2 수용체로의 결합은 경쟁적 결합 검정, 예를 들어, 실시예 40의 검정에서 측정되는 PYY 화합물.

119. 구체예 1 내지 구체예 118 중 어느 하나에 있어서, 개선된 약물동역학적 특성을 가진 PYY 화합물.

120. 구체예 1 내지 구체예 119 중 어느 하나에 있어서, 증가된 반감기 및/또는 감소된 클리어런스를 가진 PYY 화합물.

121. 구체예 1 내지 구체예 120 중 어느 하나에 있어서, db/db 마우스 모델에서 단일-용량 연구에서 결정된, 생체 내에서 혈당을 감소시키는 효과를 가진 PYY 화합물.

122. 구체예 1 내지 구체예 121 중 어느 하나에 있어서, db/db 마우스 모델에서 단일-용량 연구에서 결정된, 생체 내에서 음식물 섭취를 감소시키는 효과를 가진 PYY 화합물.

123. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.

124. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 의약으로 사용되는 PYY 화합물.

125. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행의 지연 또는 예방에 사용되는 PPY 화합물.

126. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 당뇨병의 치료 및/또는 예방에 사용되는 PPY 화합물.

127. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 2형 당뇨병의 치료 및/또는 예방에 사용되는 PPY 화합물.

128. 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행의 예방 또는 지연용 의약의 제조를 위한 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 사용.

129. 당뇨병의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 사용.

130. 2형 당뇨병의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 사용.

131. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써, 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증을 치료 및/또는 예방하고; 및/또는 지질 파라미터를 개선하고, β-세포 기능을 개선하며, 및/또는 당뇨성 질환 진행을 지연 또는 예방하는 방법.

132. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써, 당뇨병을 치료 및/또는 예방하는 방법.

133. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써, 2형 당뇨병을 치료 및/또는 예방하는 방법.

134. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키고, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 치료 및/또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료에 사용되는 PYY 화합물.

135. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나에 있어서, 비만의 치료 및/또는 예방에 사용되는 PPY 화합물.

136. 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 치료 및/또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료용 의약의 제조를 위한 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 사용.

137. 비만의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위한 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 사용.

138. 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 치료 및/또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료 방법.

139. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써, 비만을 치료 및/또는 예방하는 방법.

140. 구체예 1 내지 구체예 122 중 어느 하나의 PYY 화합물, GLP-1 작용제, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.

141. 구체예 140에 있어서, GLP-1 작용제는 리라글루티드인 약학적 조성물.

142. 구체예 140에 있어서, GLP-1 작용제는 세마글루티드인 약학적 조성물.

143. 구체예 140 내지 구체예 142 중 어느 하나에 있어서, PYY 화합물은 SEQ ID NO:18인 약학적 조성물.

144. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나에 있어서, 의약으로 사용되는 약학적 조성물.

145. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나에 있어서, 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행 및/또는, 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 지연 또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료에 사용되는 약학적 조성물.

146. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나에 있어서, 당뇨병의 치료 및/또는 예방에 사용되는 약학적 조성물.

147. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나에 있어서, 2형 당뇨병의 치료 및/또는 예방에 사용되는 약학적 조성물.

148. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나에 있어서, 비만의 치료 및/또는 예방에 사용되는 약학적 조성물.

149. 당뇨병 및/또는 비만의 치료 및/또는 예방용 의약의 제조를 위해, 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나의 약학적 조성물의 사용.

150. 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나의 약학적 조성물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행의 지연 또는 예방 방법.

151. 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 치료 및/또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 구체예 140 내지 구체예 143 중 어느 하나의 약학적 조성물의 약학적으로 활성인 양을 투여함으로써, 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료 방법.

실시예

이 실험 부분은 약어의 목록으로 시작하고, 본 발명의 화합물을 합성하고 특성화하는 일반적인 방법을 포함하는 섹션으로 이어진다. 이어서 특정 PYY 화합물의 제조에 관한 많은 실시예, 및 끝에는 이 화합물들의 활성 및 특성에 관하여 포함된 많은 실시예 (약학적 방법이라는 표제가 붙은 섹션)로 이어진다.

실시예는 본 발명을 예시하는 역할을 한다.

약어의 목록

ACN: 아세토니트릴

Aib: α-아미노아이소부탄산

Boc: 삼차 부틸옥시카르보닐

CH₃CN: 아세토니트릴

cpm: 분 당 계수

DCM: 디클로로메탄

DIC: 디아이소프로필카르보디이미드

DIPEA: 디아이소프로필에틸아민

DMF: N,N-디메틸포름아미드

Et2O: 디에틸 에테르

Fmoc: 9 H-플루오렌-9-일메톡시카르보닐

HFIP: 헥사플루오로아이소프로판올

HMWP: 고분자량 단백질

h: 시간

H₂O: 물

HOAc: 아세트산

HOAt: 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸

HOBt: 1-하이드록시벤조트리아졸

Min: 분

Mtt: 4-메틸트리틸

MW: 분자량

NMeArg: N(알파)-메틸-L-아르기닌

NMF: 1-메틸-포름아미드

NMP: 1-메틸-피롤리돈-2-오네

OtBu: 삼차 부틸 에스터

Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디하이드로벤조푸란-5-설포닐

PyBOP: 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리돈오포스포늄 헥사플루오로포스페이트

rpm: 분 당 라운드

r.t: 실온

tBu: 삼차 부틸

TFA: 트리플루오로아세트산

TIPS: 트리아이소프로필실란

Trt: 트리페닐메틸

재료 및 방법

일반적인 제조 방법

이 섹션은 펩타이드 백본의 고체상 합성 및 백본에 부착된 측쇄의 합성 방법에 관한 것이다 (아미노산의 커플링 방법, Fmoc-아미노산의 탈보호, 레진으로부터 펩타이드를 분할하는 방법, 및 그것의 정제 방법을 포함하는, SPPS 방법),

1. 레진 결합된 보호된 펩타이드 백본의 합성

펩타이드 백본의 자동적 단계적 조립 과정. 보호된 펩티딜 레진을 Fmoc 계획에 따라 제조사로부터 공급된 기계 프로토콜을 사용하여 고체상 펩타이드 합성기 Prelude (Protein Technologies, Tucson, USA) 상에서 0.25 mmol 스케일 또는 0.4 mmol 스케일로 합성하였다. 사용된 Fmoc-보호된 아미노산 유도체는 권장된 표준이었다: 예를 들어, Bachem, Iris Biotech, Protein Technologies 또는 Novabiochem으로부터 공급된 Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Mtt)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, 또는, Fmoc-Val-OH 등. 아무것도 명시되지 않으면, 천연 L-형의 아미노산을 사용한다. 커플링을 NMP (N-메틸 피롤리돈)에서 DIC (디사이클로헥실카르보디이미드) 및 Ozyma Pure (에틸 2-시아노-2-(하이드록시이미노)-아세테이트, Merck, Novabiochem, Switzerland) 매개된 커플링을 사용하여 실행하였다. Fmoc-아미노산의 커플링을 레진 치환에 비해 아미노산의 4-8배 초과량 (4-8 eq)을 사용하여 상기 기술된 바와 같이 실행하였다. 커플링 시간은 1시간에서 최대 4시간의 범위였다. Fmoc-Arg(pbf)-OH를 이중 커플링 과정 (1시간 + 1시간)을 사용하여 커플링하였다. 펩타이드 아미드의 합성에 사용된 레진은 Tentagel RAM (Rapp Polymere, Germany), Rink amid ChemMatrix resin (Matrix Innovation, Canada) Rink-Amide resin (Merck/Novabiochem)일 수 있다. 사용된 보호된 아미노산 유도체는 표준 Fmoc-아미노산이었다 (예를 들어, Protein Technologies, 또는 Novabiochem으로부터 공급됨). 유도체화되는 리신의 엡실론 아미노 기를 Mtt로 보호하였다. N-말단 아미노산 또는 빌딩을 Boc-보호된 아미노산, 예를 들어, Boc-Ile로서 커플링하였다. 대안으로 아이소발레르산을 Fmoc-아미노산에 대하여 상기 기술된 커플링 과정에 따라 커플링하였다. Prelude 상에서 단계적 고체상 조립을 다음 단계를 사용하여 실행하였다: 1) 2x4분 동안 NMP 중 25% 피페리딘의 사용에 의한 탈보호 (Fmoc의 제거), 단계 2) NMP 및 DCM로 세척 (피페리딘의 제거), 단계 3) NMP 중 1/10 부피의 3M DIC 및 NMP 중 1/10 부피 콜리딘을 첨가함으로써 시작된 1-4시간 커플링을 위해 4-8 eq 초과량으로 Fmoc-아미노산 (NMP 중 0.3M Oxyma Pure 중 0.3M Fmoc-아미노산)의 커플링. 가끔 질소로의 기포 발생으로 혼합을 실행하였고, 단계 4) 세척 (NMP 및 DCM의 사용에 의해 초과량의 아미노산 및 시약의 제거). 마지막 단계는 리신 측쇄 상의 알부민 결합 모이어티의 부착이 준비된 레진을 만드는 DCM으로의 세척을 포함하였다.

2. 레진 결합된 보호된 펩타이드 백본에 변형 기의 부착

Mtt -보호의 수동적 제거 과정 (리신( Mtt )): 변형 기의 합성 전에, 부착 부위 상의 Mtt 기 (리신)을 제거해야 한다. 레진을 주사기 또는 반응 플라스크에 두고 Mtt 기를 제거하기 위해 2 X 30분 동안 75% 헥사플루로아이소프로판올 (HFIP) + 25% DCM을 처리하였다. 이어서 레진을 상기 기술된 바와 같이 DCM 및 NMP로 세척하였고 NMP 중 5% DIPEA (중화 단계) 또는 NMP 중 25% 피페리딘으로 중화한 후 이어서 알부민 모이어티를 커플링하기 전에 NMP로 세척하였다. 대안으로, 중화 단계를 제외하였다.

Mtt -보호의 Prelude 제거 과정 (리신( Mtt )): Prelude 상에서 레진에 2 x 2분에 이어서 2 X 30분 동안 75% 헥사플루오로아이소프로판올 (HFIP) + 25% DCM을 처리하여 리신 상의 Mtt 기를 제거하였다. 이어서 레진을 DCM 및 NMP로 세척한 후 NMP 중 25% 피페리딘을 사용하는 4분 만큼의 중화 단계로 이어졌고, 변형 기의 합성이 준비되었다.

리신 잔기 상으로 변형 기의 수동적 합성 과정:

빌딩 블록 Fmoc-8-아미노-3,6-디옥사옥탄산 (제품 번호 166108-71-0), Fmoc-TTDS-OH (제품 번호 172089-14-4, IRIS Biotech GmbH), Fmoc-L-Glu-OtBu (84793-07-7), 및 에이코산디오산 모노-삼차-부틸 에스터 (제품 번호 843666-40-0)를 레진 치환에 비해 4-8 eq의 DIC 및 Oxyma Pure를 사용하여 커플링하였다. 커플링 시간은 보통 2-16시간이었으며 15-60분 동안 1 M 무수 아세트산을 사용하는 캡핑(cappinig) 단계로 이어졌다. Fmoc-기를 10-30분 동안 NMP 중 25% 피페리딘으로 제거한 후 이어서 세척하였다.

16-설포닉 헥사데카노산을 섭씨 60도 이상에서 NMP 또는 N-메틸포름아미드 (NMF)에 용해시켰고 설포닉 헥사데카노산에 비해 PyBOP 1 eq로 활성화하였으며 설포닉 헥사데카노산에 비해 2eq의 디아이소프로필에틸아민 (DIPEA)을 또한 첨가하였다. 펩티딜 레진을 활성화된 설포닉 헥사데카노산의 첨가 직전에 뜨거운 NMP 또는 NMF로 세척하였다. 3-4 초과량의 설포닉 빌딩 블록을 사용하여 커플링이 > 16시간 진행되게 하였다.

리신 잔기 상으로 변형 기의 자동적 합성 과정:

변형 기의 합성을 위해서, 다음 빌딩 블록을 사용하였다: Fmoc-8-아미노-3,6-디옥사옥탄산, Fmoc-TTDS-OH, Fmoc-Glu-OtBu, 및 에이코산디오산 모노-삼차-부틸 에스터 (제품 번호 843666-40-0). 변형 기를 레진 치환에 비해 4-8 eq의 DIC 및 Oxyma Pure를 사용하여 커플링하였다. 커플링 시간은 보통 2-16시간이었으며 20분 동안 1 M 무수 아세트산을 사용하는 캡핑 단계로 이어졌다. Fmoc-기를 2x4분 동안 NMP 중 25% 피페리딘으로 제거한 후 펩타이드 백본의 SPPS에서 기술된 바와 같이 세척하였다. 다른 모든 합성 단계는 또한 백본 합성으로 상기 기술된 바와 같다. 16-설포닉 헥사데카노산의 커플링을 커플링 시약으로서 pyBOP를 사용하여 상기 기술된 수동적 과정으로 실행하였다.

3. 부착된 변형 기가 있거나 없는 레진 결합된 펩타이드의 분할 및 정제

TFA 탈보호 전에 펩티딜 레진을 DCM 또는 디에틸 에테르로 세척하고 건조하였다. 펩타이드 및 측쇄 보호 기를 2-4시간 동안 20-40 ml (0.25 mmol 스케일) 30-60 (0.4 mmol 스케일) ml 92% TFA, 5% TIPS 및 3% H₂O의 추가에 의해 제거하였다. 이어서 TFA를 여과하였고 일부 경우에서는 아르곤의 흐름에 의해 농축하였으며 디에틸에테르를 첨가하여 펩타이드를 침천시켰다. 펩타이드를 디에틸 에테르로 3-5번 세척하였고 건조하였다.

일반적인 검출 및 특성화 방법

이 섹션은 결과로 얻은 펩타이드의 검출 및 특성화 방법에 관한 것이며, LCMS, MALDI 및 UPLC 방법을 포함한다.

1. LC-MS 방법 ( LCMS1 )

Agilent 1200 시리즈 HPLC 시스템으로부터 용출 후 Agilent Technologies LC/MSD TOF (G1969A) 질량 분석계를 사용하여 펩타이드의 분자량을 확인하였다. 질량 데이터의 디콘볼루션(de-convolution)을 Agilent 소프트웨어를 사용하여 계산하였다.

용출액:

버퍼 A: 수중 0.1% TFA

버퍼 B: CH₃CN 중 0.1% TFA

LC-MS Waters Acquity (LCMS2)

LC-시스템: Waters Acquity UPLC

컬럼: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1.7μm, 2.1mm x 50mm

검출기: Waters (Micromass) LCT Premier XE

선형 구배: 5 % 내지 95 % B

구배 실행 시간: 4.0분

총 실행 시간: 7.0분

유속: 0.4 ml/분

컬럼 온도: 40℃

용제 A: 99.90 % MQ-물, 0.1% 포름산

용제 B: 99.90 % 아세토니트릴, 0.1 % 포름산

2. UPLC 방법

방법 UPLC2

버퍼 A: 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.4ml/분

구배: 5-95% B, (16분),

컬럼: Acquity UPLC BEH C18, 1.7μm, 2.1 x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC26v01

버퍼 A: 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.45 ml/분

구배: 5-60% 버퍼 B (0.5 - 4분)

컬럼: Acquity UPLC BEH C18 1.7μm, 2.1 x 50 mm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC29v01

버퍼 A: 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.45 ml/분

구배: 15-35% 버퍼 B (0.5 - 4분)

컬럼: Acquity UPLC BEH C18 1.7μm, 2.1 x 50 mm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC30v01

버퍼 A: 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.45 ml/분

구배: 20-40% 버퍼 B (0.5 - 4분)

컬럼: Acquity UPLC BEH C18 1.7μm, 2.1 x 50 mm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC31v01

버퍼 A: 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.45 ml/분

구배: 25-45% 버퍼 B (0.5 - 4분)

컬럼: Acquity UPLC BEH C18 1.7μm, 2.1 x 50 mm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC02v01

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 A: H₂O 중 0.05% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0.05% TFA

유속: 0.40 ml/분

구배: 5-95 % 버퍼 B (16분)

컬럼: Acquity UPLC BEH C18 1.7μm, 2.1 x 150 mm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC07v01

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 A: 0.09 M 인산 수소 이암모늄 (aq) 및 10% 아세토니트릴, pH 3.6

버퍼 B: 20% 아이소프로판올, 20% 물 및 60% 아세토니트릴

유속: 0.50 ml/분

구배: 35-65 % 버퍼 B (2-17분)

컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 1.7μm, 2.1 mm x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 60℃

방법 UPLC16v01

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 A: 0.2 M 황산 나트륨, 0.02 M 인산 수소 이나트륨, 0.02 M 인산 이수소 나트륨, 90% 물 및 10% 아세토니트릴, pH 7.2

버퍼 B: 70% 아세토니트릴, 30% 물

유속: 0.40 ml/분

구배: 20-50% 버퍼 B (3-20분)

컬럼: ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7μm, 2.1 mm x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 60℃

방법 UPLC60

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 A: 0.02 M 황산 나트륨, 0.02 M 인산 수소 이나트륨, 0.02 M 인산 이수소 나트륨, 90% 물 및 10% 아세토니트릴, pH 7.2

버퍼 B: 70% 아세토니트릴, 30% 물

유속: 0.40 ml/분

구배: 20-50 % 버퍼 B (3-20분)

컬럼: ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7μm, 2.1 mm x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 60℃

방법 UPLC17

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 B: 70% 아세토니트릴, 30% 물

유속: 0.40 ml/분

단계 구배: 3분 동안 10-20% B, 이어서 17분 동안 20-80% B, 이어서 1분 동안 80-90% B

컬럼: ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7μm, 2.1 mm x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 60℃

방법 UPLC61

시스템: Waters Acquity UPLC 시스템

버퍼 B: 70% 아세토니트릴, 30% 물

유속: 0.40 ml/분

구배: 10-20% 버퍼 B (0-3분) 20-80 % 버퍼 B (3-20분)

컬럼: ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 1.7μm, 2.1 mm x 150 mm 컬럼

컬럼 온도: 60℃

방법 UPLC - AP-01

버퍼 A: H₂O 중 0.1% TFA

버퍼 B: CH3CN + 0,1% TFA

유속: 0,40 ml/분

구배: 5-95 % 버퍼 B (16분)

컬럼: Acquity UPLC BEH130; 150x 2.1; 1.7μm

컬럼 온도: 40℃

방법 UPLC - AP-02

버퍼 A: 90% 물 / 10% 아세토니트릴 중 20mM Na2HPO4, 20mM NaH2PO4, 200mM Na2SO4, pH 7.20

버퍼 B: 70% 아세토니트릴/ 30% 물

유속: 0,40 ml/분

구배: 10-20 % 버퍼 B (0-3분); 20-50% 버퍼 B (3-20분); 50-80% (20-21분)

컬럼: Acquity UPLC BEH Shield, RP18 1.7 μm, 2.1 x 150 mm

컬럼 온도: 40℃

3. MALDI -MS 방법

펩타이드의 분자량을 비행 질량 분석법 (MALDI-MS)의 매트릭스-보조 레이져 탈착 시간(matrix-assisted laser desorption time)을 사용하여 결정하였고, Microflex (Bruker) 상에 기록하였다. 알파-시아노-4-하이드록시 신남산의 매트릭스를 사용하였다. 생성물의 분자량을 제조사로부터 공급된 소프트웨어를 사용하여 MALDI-MS 분석 결과에 기초하여 계산하였다.

중간 생성물의 합성

16- 설포 - 헥사데카노산의 합성

16-헥사데카놀라이드 (997 g, 3.92 mol)를 메탄올 (15.1 L)에 용해시켰고 톨루엔-4-설폰산 일수화물 (90.0 g, 0.473 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50 L 반응기에서 55℃에서 16시간 동안 가열하였다. 냉각 후 탄산 수소 나트륨 (56.0 g, 0.67 mol)을 첨가하였고 반응 혼합물을 15분 동안 휘저었다. 용제를 Heidolph 20 L 회전 증발기 상에서 증발시켰다. 에틸 아세테이트 (12 L)를 첨가하였고 혼합물을 탄산 수소 나트륨 (10 L)의 5% 용액으로 추출하였다. 유기 층을 분리하였고; 에멀젼 층을 에틸 아세테이트 (3 x 3 L)로 추출하였으며, 흰색 불용성 탁한 재료를 분리하였고 에틸 아세테이트 층을 다시 탄산 수소 나트륨 (5 L)의 5% 용액으로 세척하였다. 유기 층을 결합시켜 탄산 수소 나트륨 (5 L) 및 염수 (10 L)의 포화 용액으로 세척하였다. 용제를 Heidolph 20 L 회전 증발기 상에서 증발시켰다. 조생성물을 헥산 (8 L)으로부터 결정화하였다. 헥산의 뜨거운 용액을 옮겨 부었고 이어서 얼음 수조에서 결정화되도록 두었다. 재료를 큰 프릿(frit) 상에서 여과하였고 차가운 헥산 (2 L)으로 세척하였다. 순수한 재료를 진공에서 건조하였다.

수율: 1062.2 g (95%). R_F (SiO₂, 디클로로메탄/메탄올 95:5): 0.65.

¹H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl₃, δ_H): 3.67 (s, 3 H); 3.67-3.60 (m, 2 H); 2.30 (t, J=7.5 Hz, 2 H); 1.67-1.53 (m, 4 H); 1.25 (s, 22 H).

상기 에스터 (957 g, 3.34 mol)를 Heidolph 20 L 회전 증발기 상에서 디클로로메탄 (7 L)에 용해시켰다. 트리에틸아민 (695 mL, 4.98 mol)을 첨가하였고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였으며 (증발기 수조에 얼음을 넣음으로써) 디클로로메탄 (200 mL) 중 메탄설포닐 클로라이드 (325 mL, 4.19 mol)를 작은 진공을 사용하여 외부 튜브에 의해 10분 동안 천천히 첨가하였다. 이어서 반응 혼합물을 1시간 동안 35℃로 가열하였다. NMR 분석은 완벽한 전환을 나타냈다. 물을 첨가하였고 (690 mL) 용제를 증발시켰다. 에틸 아세테이트 (8 L)를 첨가하였고 혼합물을 1 M 염산 (4 L) 및 탄산 나트륨 (4 L)의 5% 용액으로 세척하였다. 탄산 나트륨 추출이 에멀젼을 형성하였기 때문에 이 층을 에틸 아세테이트 (4 L)로 추출하였고 주요부에 첨가하였다. 결합된 에틸 아세테이트 층을 염수 (4 L)로 세척하였고, 무수 황산 나트륨 위에서 건조하였고 여과하였다. 용제를 증발시켜서 흰색 고체로서 16-메탄설포닐옥시-헥사데카노산 메틸 에스터를 제공하였다.

수율: 1225.4 g (100%).

¹H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl₃, δ_H): 4.22 (t, J=6.6 Hz, 2 H); 3.66 (s, 3 H); 3.00 (s, 3 H); 2.30 (t, J=7.5 Hz, 2 H) 1.82-1.67 (m, 2 H); 1.68-1.54 (m, 2 H); 1.36-1.17 (m, 22 H).

상기 메실레이트 (1.23 kg, 3.34 mol)를 아세톤 (8 L)에 용해시켰고 브롬화 리튬 (585 g, 6.73 mol)을 첨가하였으며 반응 혼합물을 Heidolph 20 L 회전 증발기상에서 50℃에서 12시간 동안 가열하였다. 냉각 후 용제를 증발시켰고, 에틸 아세테이트 (10 L)를 첨가하였으며 혼합물을 탄산 수소 나트륨의 5% 용액 (3 x 15 L) 및 염수 (8 L)로 세척하였다. 용제를 건조 증발시켜서 결정화하기 시작하는 연노란색 오일로서 16-브로모-헥사데카노산 메틸 에스터를 수득하였다.

수율: 1219 g (105%); 아세톤 및 아세톤 알돌화(aldolization) 생성물을 함유함.

R_F (SiO₂, 헥산/에틸 아세테이트 9:1): 0.90.

¹H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl₃, δ_H): 3.65 (s, 3 H); 3.42 (t, J=6.9 Hz, 2 H); 2.32 (t, J=7.5 Hz, 2 H); 1.92-1.77 (m, 2 H) 1.69-1.53 (m, 2 H); 1.50-1.35 (m, 2 H); 1.25 (bs, 10 H).

수중 (1.26 L) 아황산 나트륨 (327 g, 2.60 mol) 및 1-프로판올 (945 mL) 및 메탄올 (420 mL) 중 16-브로모-헥사데카노산 메틸 에스터 (728 g, 2.00 mol, 96% 순도)의 용액을 가열하여 기계적 스터러(stirrer)가 장착된 6 L 반응기에서 48시간 동안 환류시켰다. 반응 혼합물을 27℃로 냉각하였고 테트라하이드로푸란 (2 L)으로 희석하였다. 반응 혼합물을 여과하였고 고체 재료를 테트라하이드로푸란 (3 x 700 mL)으로 세척하였다. 여과액을 0℃로 냉각하였고 재료의 또 다른 부분을 침전시켰다. 이 침전물을 여과하였고 테트라하이드로푸란 (2 x 200 mL)으로 세척하였다. 고체를 결합시켜 20 L 포트에서 물 (8.4 L)과 혼합하였다. 수산화 나트륨 (120 g, 3.00 mol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 약 5시간 동안 끓였다. 수중 (500 mL) 황산 (430 mL, 8.00 mol)의 용액을 반응 혼합물에 천천히 첨가하였다 (이산화 황이 형성됨). 반응 혼합물을 가열하여 10분 동안 끓였고 이어서 15℃로 냉각되도록 두었다 (얼음 수조). 혼합물을 진공을 적용하여 Buchner 깔때기 상에서 여과지 Seitz (여러 층의 여과지)를 통해 여과하였다. 이 과정은 매우 느려서 2일이 걸렸다. 고체 재료를 여과액의 pH가 2 내지 3일 때까지 증류수로 여러 번 세척하였다. 이 과정은 약 3일이 걸렸다. 흰색 탁한 재료를 오븐에서 80℃로 건조하여 원하는 생성물을 제공하였다.

수율: 510 g (76%).

¹H NMR 스펙트럼 (300 MHz, DMSO-d₆, δ_H): 2.45-2.33 (m, 2 H); 2.18 (t, J=7.3 Hz, 2 H); 1.60-1.40 (m, 4 H); 1.24 (s, 22 H).

MS-ESI (neg, H₂O/MeCN + NaHCO₃ 중 샘플; m/z): 335.5 (M-H)^-, 357.5 (M-2H+Na)^-, 167.3 (M-2H)^2-

14- 설포 - 헥사데카노산의 합성

테트라하이드로푸란 (52 mL, 52,0 mmol) 중 보란-테트라하이드로푸란 복합체의 1M 용액을 아르곤 하에 0℃에서 건식 테트라하이드로푸란 (75 mL) 중 테트라데칸디오산 모노-삼차-부틸 에스터 (10.0 g, 31.9 mmol)의 용액에 한 방울씩 첨가하였다. 결과로 얻은 용액을 0℃에서 2시간 동안 휘저었고, 이어서 냉각 수조를 제거하고 혼합물을 실온에서 밤새도록 휘저었다. 탄산 수소 나트륨의 포화 수용액 (150 mL)을 첨가하였고 결과로 얻은 혼합물을 디클로로메탄 (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 결합된 유기 추출물을 탄산 나트륨 (1 x 150 mL)의 5% 수용액 및 10% 수용액 시트르산 (1 x 100 mL)으로 추출하였다. 결합된 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘 위에서 건조하여 건조 증발시켰다. 잔류물은 컬럼 크로마토그래피 (Silicagel 60A, 0.060-0.200 mm; 용출액: 디클로로메탄/메탄올 100:0-99:1)를 받아서 황갈색 오일로서 14-하이드록시-테트라데칸산 삼차-부틸 에스터를 제공한다.

수율: 9.19 g (96%).

RF (SiO2, 클로로포름/메탄올 9:1): 0.60.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl3, dH): 3.60 (t, J=6.4 Hz, 2 H); 2.18 (t, J=7.2 Hz, 2 H); 1.61-1.48 (m, 4 H); 1.42 (s, 9 H); 1.24 (bs, 18 H).

수중 (100 mL) 수산화 칼륨 (8.60 g, 153 mmol)의 용액을 메탄올 (100 mL) 중 상기 에스터 (9.20 g, 30.6 mmol)의 용액에 첨가하였고 결과로 얻은 혼합물을 60℃에서 2일 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각한 다음; 그것을 헥산 (2 x 70 mL)으로 세척하였고 진공에서 농축하였다. 농축된 염산 (32%, 20 mL, 0.65 mol)을 한 방울씩 첨가하였고 혼합물을 에틸 아세테이트 (2 x 150 mL)로 추출하였다. 결합된 유기 층을 무수 황산 마그네슘 위에서 건조하였고 건조 증발시켜서 흰색 고체로 14-하이드록시-테트라데칸산을 수득하였다.

수율: 7.10 g (95%).

RF (SiO2, 클로로포름/메탄올 85:15): 0.50.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl3, dH): 3.66 (t, J=6.6 Hz, 2 H); 2.36 (t, J=7.4 Hz, 2 H); 1.72-1.52 (m, 4 H); 1.29 (bs, 18 H).

p-톨루엔설폰산 일수화물 (0.28 g, 1.45 mmol)을 메탄올 (150 mL) 중 상기 14-하이드록시-테트라데칸산 (7.10 g, 29.1 mmol)의 용액에 첨가하였고 결과로 얻은 용액을 실온에서 3일 동안 휘저었다. 메탄올을 감소된 압력 하에 제거하였고; 잔류물을 에틸 아세테이트 (170 mL)에 용해시켰으며; 탄산 나트륨 (3 x 50 mL)의 5% 수용액 및 염수 (25 mL)로 세척하였고; 무수 황산 마그네슘 위에서 건조하였으며 진공에서 증발시켜 흰색 고체로서 메틸 14-하이드록시-테트라데카노에이트를 제공한다.

수율: 7.28 g (97%).

RF (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 95:5): 0.45.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl3, dH): 3.61-3.71 (m, 5 H); 2.32 (t, J=7.5 Hz, 2 H); 1.70-1.52 (m, 4 H); 1.44 (s, 1 H); 1.28 (bs, 18 H).

상기 제조된 에스터 (7.28 g, 28.2 mmol)를 DCM (60 mL)에 용해시켰다. 트리에틸아민을 첨가하였고 (5.30 mL, 52.3 mmol), 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였으며 메실 클로라이드 (2.45 mL, 31.7 mmol)를 10분 동안 천천히 첨가하였다. 한 시간 후 반응 혼합물을 실온으로 가온시켰고 밤새도록 휘저었다. 16시간 후 물을 첨가하였고 (1 mL) 혼합물을 30분 동안 휘저었다. 용제를 증발시켰고, 에틸 아세테이트를 첨가하였으며 (80 mL) 혼합물을 1M 염산 (2 x 30 mL), 탄산 나트륨의 5% 용액 (2 x 20 mL) 및 물 (20 mL)로 추출하였다. 용제의 무수 황산 마그네슘으로의 건조, 여과 및 증발 이후, 흰색 고체로서 16-메실헥사데카노산 메틸 에스터를 얻었다.

수율: 9.15 g (92%).

RF (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 95:5): 0.70.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl3, dH): 4.24 (t, J=6.6 Hz, 2 H); 3.68 (s, 3 H); 3.01 (s, 3 H); 2.32 (t, J=7.5 Hz, 2 H) 1.83-1.70 (m, 2 H); 1.70-1.56 (m, 2 H); 1.47-1.20 (m, 22 H).

상기 제조된 메실레이트 (9.15 g, 26.0 mmol)를 아세톤 (230 mL)에 용해시켰고 브롬화 리튬 (4.50 g, 51.8 mmol)을 첨가하였으며 반응 혼합물을 밤새도록 환류시켰다. 냉각 후 용제를 증발시켰고, 에틸 아세테이트 (530 mL)를 첨가하였으며 혼합물을 탄산 수소 나트륨의 5% 용액 (3 x 230 mL)으로 추출하였다. 결합된 유기 추출물을 무수 황산 마그네슘 위에서 건조하였고 건조 증발시켜서 주황색 오일로서 14-브로모-테트라데칸산 메틸 에스터를 수득하였다.

수율: 8.34 g (100%).

RF (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 95:5): 0.90.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, CDCl3, dH): 3.66 (s, 3 H); 3.42 (t, J=6.9 Hz, 2 H); 2.32 (t, J=7.5 Hz, 2 H); 1.93-1.80 (m, 2 H) 1.69-1.56 (m, 2 H); 1.50-1.38 (m, 2 H); 1.28 (bs, 16 H).

상기 제조된 14-브로모-테트라데칸산 (8.34 g, 26.0 mmol)을 n-프로판올 (10 mL), 물 (25 mL) 및 수산화 나트륨의 1M 수용액 (32 mL)에 용해시켰고 아황산 나트륨 (5.00 g, 39.7 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 가열하여 22시간 동안 환류시켰다. 냉각 후 흰색 침전물을 여과하였다. 농축된 염산을 첨가하여 산성 pH를 제공하였고 침전물을 원심분리하여 물 (2 x 50 ml)과 함께 두 번 옮겨 부었다. 동결건조 후 흰색 고체로서 14-설포-테트라데칸산 나트륨 염을 얻었다.

수율: 7.3 g (85%).

RF (SiO2, 디클로로메탄/메탄올 95:5): 0.60.

1H NMR 스펙트럼 (300 MHz, DMSO-d6, dH): 2.40 (m, 2 H); 2.18 (t, J=7.2 Hz, 2 H); 1.61-1.40 (m, 4 H); 1.23 (bs, 18 H).

본 발명의 화합물의 합성

실시예 1:

SEQ ID NO:1

hPYY(1-36)

YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH₂

실시예 2:

SEQ ID NO:2

hPYY(3-36)

IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH₂

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 3.37분 (91.4%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC29v01: 10.07분 (85.6%)

계산된 MW: 4049.6 g/mol

MALDI MS: 4048.2 g/mol

실시예 3:

SEQ ID NO:3

[Trp30]hPYY(3-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC - AP-01: (96.6%)

계산된 MW: 4123.6 g/mol

LCMS1: ((M/3)+3) 1374,8; ((M/4)+4) 1031,3

실시예 4:

SEQ ID NO:4

[Trp30,NMeArg35]hPYY3-36

체류 시간 UPLC29v01: 3.43분 (100%)

체류 시간 UPLC16v01: 10.93 (90.9%)

계산된 MW: 4136,6 g/mol

LCMS2: ((M/1)+1) 4136.03; ((M/2)+2) 2069,02 ((M/3)+3) 1379,68; ((M/4)+4) 1035,02

실시예 5:

SEQ ID NO:5

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC- AP-01: 7.44분 (95.7%)

계산된 MW: 4923.6 g/mol

LCMS: ((M/3)+3) 1641.9; ((M/4)+4) 1231.5; ((M/5)+5) 985.6

실시예 6:

SEQ ID NO:6

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC-AP-01: 7.46분 (93%)

계산된 MW: 5343.1 g/mol

LCMS2: ((M/3+3) 1782.6; ((M/4)+4) 1336.6; ((M/5+5) 1069.6

실시예 7:

SEQ ID NO:7

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01: 3.11분 (91.6%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 13.89분 (89.7%)

계산된 MW: 5213.97 g/mol

MALDI MS: 5215.8 g/mol

실시예 8:

SEQ ID NO:8

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC02v02: 6.63 분 (97%)

체류 시간 UPLC16v01: 11.94분 (93.2%)

계산된 MW: 4945.67 g/mol

LCMS2: ((M/4)+4) 1237.47; ((M/3)+3) 1649.61; ((M/2)+2) 2473.87

실시예 9:

SEQ ID NO:9

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-테트라졸-5-일)-헥사데카노일설파모일]부타노일아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01: 3.78분 (100%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 12.41분 (96.4%)

계산된 MW: 5244.0 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z 1748.9 ((M/3)+3); 1311.9 ((M/4)+4); 875 ((M/6)+6)

실시예 10:

SEQ ID NO:10

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-

4-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]-아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Aib28,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC- AP-01: 7.26 (91.5%)

계산된 MW: 5315.0 g/mol

LCMS: ((M/3)+3) 1772.6; ((M/4)+4) 1329.6; ((M/5)+5) 1063.5

실시예 11:

SEQ ID NO:11

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC02v02: 6.64분 (94.7%)

체류 시간 UPLC16v01: 12.05분 (92%)

계산된 MW: 4973.69 g/mol

질량 (발견됨): 4973.35 g/mol

LCMS2: ((M/4)+4) 1244.22; ((M/3)+3) 1658.94

실시예 12:

SEQ ID NO:12

4-N{알파}-(헥사노일)-7-N{엡실론}-2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC16v01: 12.72분 (95.1%)

계산된 MW: 4958.67 g/mol

발견된 질량: 4959.22

LCMS2: ((M/4)+4) 1240.64

실시예 13:

SEQ ID NO:13

4-N{알파}-(3-메틸-펜타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC02v01: 7.76분 (98%)

체류 시간 UPLC16v01: 9.2분 (93.2%)

계산된 MW: 4908.63 g/mol

LCMS: 미결정

실시예 14:

SEQ ID NO:14

4-N{알파}-(3-메틸-펜타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC02v01: 6.96분 (99%)

체류 시간 UPLC07v01: 5.04분 (89%)

체류 시간 UPLC16v01: 13.01분 (89.6%)

계산된 MW: 4930.65 g/mol

LCMS2: ((M/1)+1) 4931.6; ((M/3)+3) 1644.5; ((M/4)+4) 1233.4

실시예 15:

SEQ ID NO:15

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35] hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC30v01: 3.37분 (91.7%)

체류 시간 UPLC16v01: 12.18분 (91.35%)

계산된 MW: 5045.7 g/mol

MALDI (발견됨): 5045 g/mol

실시예 16:

SEQ ID NO:16

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC30v01: 3.43분 (94.5%)

체류 시간 UPLC16v01: 12.39분 (90.24%)

계산된 MW: 4916.6 g/mol

MALDI (발견됨): 4915 g/mol

실시예 17:

SEQ ID NO:17

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시] 에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC30v01: 3.50분 (94%)

체류 시간 UPLC17v01: 8.56 (86.3%)

계산된 MW: 4930.62 g/mol

MALDI-MS (발견됨): 4929.8 g/mol

실시예 18:

SEQ ID NO:18

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC16v01: 12.23분 (95.2%)

계산된 MW: 4944.6 g/mol

발견된 질량: 4945.34

LCMS2: M((/4)+4) 1237.20

실시예 19:

SEQ ID NO:19

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC02v01: 7.69분 (96.7%)

체류 시간 UPLC17v01: 9.50분 (92.5%)

계산된 MW: 4922.62 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1231.7.0 ((M/4)+4); 985.3 ((M/5+5); 821.3 ((M/6+6)

실시예 20:

SEQ ID NO:20

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(14-설포테트라데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.32분 (90.4%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC60: 17.1분 (85.2%)

계산된 MW: 4916,48g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1229.9 ((M/4)+4); 984.33 ((M/5+5)

실시예 21:

SEQ ID NO:21

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-카르복시-헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC31v01: 13.0분 (97.4%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 3.3분 (95.8%)

계산된 MW: 4908.6 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1637.20 ((M/3)+3); 1227.91 ((M/4)+4); 982.52 ((M/5+5)

실시예 22:

SEQ ID NO:22:

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(14-카르복시-테트라카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01 : 3.8분 (97%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 10.7분 (100%)

계산된 MW: 4880.43 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1627.64 ((M/3)+3); 1220.98 ((M/4)+4); 977.19 ((M/5+5)

실시예 23:

SEQ ID NO:23:

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Ile28,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC2 : 6.8분 (100%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC17: 8.4분 (91.8%)

계산된 MW: 4944.53 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1648.2 ((M/3)+3); 1236.2 ((M/4)+4); 988.7 ((M/5+5)

실시예 24:

SEQ ID NO:24

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC2 6.76분 (100%):

체류 시간 HPLC 방법 UPLC17 8.4분 (91.7%)

계산된 MW: 5089.69 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1696.8 ((M/3)+3); 1272.5 ((M/4)+4); 1017.7 ((M/5+5)

실시예 25:

SEQ ID NO:25

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01 :

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01:

계산된 MW: 5234.84 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1745 ((M/3)+3); 1308.7 ((M/4)+4); 1046.7 ((M/5+5)

실시예 26:

SEQ ID NO:26

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC2:6.7분 (100%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 8.5분 (88.9%)

계산된 MW: 5380.00g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1793 ((M/3)+3); 1344.9 ((M/4)+4); 1075.8 ((M/5+5)

실시예 27:

SEQ ID NO:27

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.69분 (93.2%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 12.21분 (84.6%)

계산된 MW: 4956.59 g/mol

MW(발견됨): 4957.4 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1653.23 ((M/3)+3); 1240.19 ((M/4)+4); 992.36 ((M/5+5)

실시예 28:

SEQ ID NO:28

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]-에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.66분 (92.4%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 12.36분 (65.6%)

계산된 MW: 5258.96 g/mol

MW(발견됨): 5258.96 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1753.96 ((M/3)+3); 1315.80 ((M/4)+4); 1052.80 ((M/5+5)

실시예 29:

SEQ ID NO:29

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]-에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]-에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.68분 (94.5%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 11.89분 (85.8%)

계산된 MW: 5561.32 g/mol

MW(발견됨): 5562.1 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1391.31 ((M/4)+4); 1113.26 ((M/5+5)

실시예 30:

SEQ ID NO:30

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[(2S)-2-아미노-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]헥사노일]]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 11.8분 (93.29%)

계산된 MW: 4927.55 g/mol

MW(발견됨): 4928.36 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1232.92 ((M/4)+4); 986.54 ((M/5+5)

실시예 31:

SEQ ID NO:31

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(15-카르복시펜타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC31v01:3.21분 (95.8%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC61v01: 12.36분 (85.9%)

계산된 MW: 4894.46 g/mol

MW(발견됨): 4894.56 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1632.52 ((M/3)+3); 1224.64 ((M/4+4)

실시예 32:

SEQ ID NO:32

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Val3,Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC16v01: 12.83분 (88.6%)

계산된 MW: 4859.55 g/mol

MW(발견됨): 4960.21 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1240-64 ((M/4)+4); 992.91 ((M/5+5)

실시예 33:

SEQ ID NO:33

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,D-Asp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.82분 (95.3%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC17v01: 9.07분 (90.5%)

계산된 MW: 4944.53 g/mol

MW(발견됨): 4944.60 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1237.15 ((M/4)+4); 989.68 ((M/5+5)

실시예 34:

SEQ ID NO:34

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:1.87분 (89.0%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC17v01: 8.65분 (74.3%)

계산된 MW: 4944.53 g/mol

MW(발견됨): 4943.36 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1236.84 ((M/4)+4); 989.68 ((M/5+5)

실시예 35:

SEQ ID NO:35

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,D-isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC30v01:3.72분 (98.1%)

체류 시간 HPLC 방법 UPLC61: 12.78분 (96.2%)

계산된 MW: 4944.53 g/mol

실시예 36:

SEQ ID NO:36

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC- AP-01: 7.78분 (96%)

계산된 MW: 4909.48 g/mol

MW(발견됨): 4909.8 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1637.6 ((M/3)+3); 1228.2 ((M/4)+4); 982.9 ((M/5+5)

실시예 37:

SEQ ID NO:37

7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(3-36)

체류 시간 UPLC- AP-01: 6.51 분 (95.3%)

계산된 MW: 4960.7 g/mol

MW(발견됨): 4960.2 g/mol

LCMS (LCMS1): m/z: 1654.46 ((M/3)+3); 1241.1 ((M/4)+4); 992.7 ((M/5+5)

실시예 38:

SEQ ID NO:38

4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-[Arg4,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

체류 시간 UPLC16: 13.18 분 (62.5%)

체류 시간 UPLC29: 3.80 분 (92.3%)

계산된 MW: 4149.6 g/mol

MW(발견됨): 4149.9.2 g/mol

LCMS (LCMSv27): m/z: 1384.04 ((M/3)+3); 1038.28 ((M/4)+4); 830.83 ((M/5+5)

약학적 방법

포유동물 (예를 들어, 인간)에서 체중 증가의 감소 및 비만의 치료에 있어서, 및 당뇨병의 치료를 위해, 약학적 활성제로서 본 발명의 PYY 펩타이드 유도체 또는 이것의 유사체의 유용성은 통상적인 검정 및 하기 기술된 시험관 내 및 생체 내 검정에서 작용제의 활성에 의해 입증될 수도 있다.

이러한 검정은 또한 본 발명의 PYY 화합물의 활성이 공지된 화합물의 활성과 비교될 수 있다는 의미를 제공한다.

실시예 39: PYY 화합물의 수용체 효능

본 실시예의 목적은 시험관 내에서 PYY 화합물의 활성, 또는 효능을 테스트하는 것이다. 시험관 내 효능은 전체 세포 검정에서 인간 Y1, Y2, Y4 및 Y5 수용체 서브타입 각각의 활성화의 측정값이다.

실시예 3-38의 PYY 화합물의 효능을 하기 기술된 액톤 기능적 효능 검정을 사용하여 결정하였다. hPYY(3-36) (실시예 2, SEQ ID NO:2)을 참고로 포함시켰다.

액톤 기능적 효능 검정

뉴로펩타이드 Y (NPY) 수용체는 ATP로부터의 cAMP 생산의 감소를 초래하는 아데닐레이트 사이클라제 활성을 억제함으로써 주로 cAMP 의존적 경로를 통해 신호를 전달하는 G_i-커플링된 일곱 개의 막관통 수용체이다. 액톤 검정은 cAMP에 대한 선택적 결합을 가지며, 세포의 칼슘 유입을 초래하고, 칼슘 반응성 염료에 의해 검출되는 변형된 칼슘 채널을 기반으로 한다. 감소된 수준의 cAMP를 측정하기 위해서, NPY 수용체 활성화의 결과로서, β1/β2-아드레노수용체 작용제, 아이소프로테레놀을 첨가하여 세포에서 아데닐레이트 사이클라제를 활성화시키고 cAMP 수준을 증가시킨다. 감소된 세포의 칼슘 농도는 NPY 수용체 활성화로 인한 cAMP 수준의 감소를 반영하며, 칼슘 민감성 염료로부터의 형광 발광의 감소로서 검출된다.

인간 NPY 수용체 Y1, Y2, Y4 또는 Y5 중 하나 및 cAMP 민감성 칼슘 채널을 발현하는 HEK-293 세포 (CodexBiosolution, Gaithersburg, MD, USA)를 10% 소 태아 혈청 (FCS), 1% 페니실린-스트렙토마이신, 250 μg/ml 아미노글리코시드 항생제 G418 및 1 μg/ml 아미노뉴클레오시드 항생제 퓨로마이신을 함유하는 DMEM 배지의 25 μl의 부피에서 14,000개 세포/웰의 밀도로 폴리리신 코팅된 384웰 플레이트로 분주하였다. 세포를 +37℃에서 습한 환경에서 5% CO₂에서 밤새도록 배양한 후 이어서 20 mM Hepes, 0.1% 오발부민, 0.005% Tween 20, 1.5 mM 프로베네시드, 250 μM PDE-억제제 4-(3-부톡시-4-메톡시벤질)이미다졸리딘-2-오네 및 8 mM CaCl₂를 함유하는 100 ml 버퍼에 용해된 1 바이알의 Calcium 5 염료 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)을 함유하는 25 μl 칼슘 염료 버퍼를 첨가하였고 pH를 7.40로 조정하였다. 세포를 칼슘 염료 버퍼와 함께 1시간 동안 배양하였고 이어서 액체 핸들링 시스템이 PYY 화합물 (1000-1 nM 최종 농도) 및 아이소프로테레놀 (0.05 μM 최종 농도)을 동시에 직접 첨가하는 FLIPR Tetra System (Molecular Devices)에 둔 후 이어서 30초 간격으로 360초 동안 형광 발광 신호를 측정하였다 (Ex540/Em590). 모든 측정을 2배수로 수행하였고 EC₅₀ 값을 GraphPad Prism v 5.02 (Graph Pad software, La Jolla, CA, USA)를 사용하여 에스자형(sigmoidal) 용량 반응 곡선의 비선형 회귀 분석으로 계산하였다. EC50 값은 표 1에서 나타난다.

시험관 내 효능

실시예	화합물	Y2 EC50 (nM)	Y1 EC50 (nM)	Y4 EC50(nM)	Y5 EC50 (nM)
2	hPYY(3-36) SEQ ID NO:2	0.80	6.6	651	8.4
3	SEQ ID NO:3	0.57	335	403	16
4	SEQ ID NO:4	0.64	>1000	>1000	201
5	SEQ ID NO:5	2.2	>1000	>1000	260
6	SEQ ID NO:6	8.5	628	>1000	280
7	SEQ ID NO:7	3.2	977	>1000	540
8	SEQ ID NO:8	1.1	>1000	>1000	345
9	SEQ ID NO:9	2.9	>1000	>1000	219
10	SEQ ID NO:10	21	>1000	>1000	>1000
11	SEQ ID NO:11	1.9	>1000	>1000	189
12	SEQ ID NO:12	3.1	>1000	999	188
13	SEQ ID NO:13	3.6	>1000	>1000	235
14	SEQ ID NO:14	1.6	>1000	>1000	246
15	SEQ ID NO:15	4.2	599	>1000	860
16	SEQ ID NO:16	1.9	>1000	>1000	389
17	SEQ ID NO:17	1.7	>1000	>1000	81
18	SEQ ID NO:18	1.9	>1000	971	311
19	SEQ ID NO:19	4.5	>1000	>1000	>1000
20	SEQ ID NO:20	7.8	>1000	>1000	>1000
21	SEQ ID NO:21	5.6	>1000	>1000	876
22	SEQ ID NO:22	5.7	>1000	>1000	>1000
23	SEQ ID NO:23	2.8	>1000	>1000	526
24	SEQ ID NO:24	5.0	>1000	>1000	803
25	SEQ ID NO:25	6.8	>1000	>1000	>1000
26	SEQ ID NO:26	9.3	>1000	>1000	>1000
27	SEQ ID NO:27	2.9	>1000	>1000	>1000
28	SEQ ID NO:28	6.5	>1000	>1000	>1000
29	SEQ ID NO:29	19	>1000	>1000	>1000
30	SEQ ID NO:30	1.7	>1000	>1000	292
31	SEQ ID NO:31	3.5	>1000	>1000	976
32	SEQ ID NO:32	1.4	>1000	>1000	167
33	SEQ ID NO:33	3.2	>1000	>1000	923
34	SEQ ID NO:34	3.2	>1000	>1000	420
35	SEQ ID NO:35	12	>1000	>1000	626
36	SEQ ID NO:36	1.5	>1000	>1000	61
37	SEQ ID NO:37	1.0	>1000	>1000	27
38	SEQ ID NO:38	1.0	>1000	>1000	>1000

본 발명의 PYY 화합물 모두는 양호한 Y2 효능을 나타내는 반면, 수용체 Y1, Y4 및 Y5에 대한 효능은 강력하게 감소된다.

실시예 40: Y1, Y2, Y4 및 Y5 수용체 서브타입 결합

이 실시예의 목적은 Y1, Y2, Y4 및 Y5 수용체 서브타입 각각에 PYY 화합물의 시험관 내 결합을 테스트하는 것이다. 수용체 결합 친화도는 인간 Y1, Y2, Y4 및 Y5 수용체 서브타입 각각에 대한 화합물의 친화도의 측정값이다.

실시예 3-38의 PYY 화합물의 시험관 내 결합을 하기 기술된 섬광 근접 검정 (SPA)에서 결정하였다. hPYY(3-36) (실시예 2, SEQ ID NO:2)을 참고로 포함시켰다.

섬광 근접 검정 (SPA)

NPY -수용체 발현 세포주. 모든 세포를 +37℃에서 5% CO₂를 가진 습한 대기에서 배양하였다. 인간 Y1 수용체 (P25929, NPY1R_HUMAN, Uniprot)의 유도성 발현을 가진 BHK-482-8 세포를 10% 소 태아 혈청 (FBS), 1% 페니실린-스트렙토마이신 (P/S), 1 mg/ml G418 항생제, 1mg/ml 하이그로마이신 B 항생제 및 1% 비-필수 아미노산이 들어있는 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)에서 배양하였다. 1 mM 아이소프로필 β-D-1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)를 NPY-Y1 수용체 발현의 유도를 위해 세포의 수확 전 24시간에 첨가하였다. 인간 Y2 수용체 (P49146, NPY2R_HUMAN, Uniprot)를 안정하게 발현하는 CHO-K1 세포를 10% FBS, 1% P/S, 150 μg/ml 하이그로마이신 B 및 10 μg/ml 퓨로마이신 항생제가 들어있는 DMEM F-12에서 배양하였다. 인간 Y4 수용체 (P50391, NPY4R_HUMAN, Uniprot)를 안정하게 발현하는 CHO-K1 세포를 10% FBS, 1% P/S, 10 μg/ml 퓨로마이신이 들어있는 DMEM F-12에서 배양하였다. 인간 Y5 수용체 (Q15761, NPY5R_HUMAN, Uniprot)를 안정하게 발현하는 HEK-293 세포를 10% FBS, 1% 페니실린-스트렙토마이신, 250 μg/ml G418 및 1 μg/ml 퓨로마이신을 함유하는 DMEM F-12 배지에서 배양하였다.

막 제조. 배양된 세포를 긁어냄으로써 기계적으로 떼어냈고 매우 차가운 PBS (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 4.3 mM Na₂HPO₄, 1.47 mM KH₂PO₄ pH는 7.4로 조정됨)로 세척하였으며 튜브로 옮겼고 +4℃에서 1000 g로 5분 동안 원심분리하였다. 펠렛을 매우 차가운 균질화 버퍼 (Y1: 20 mM Hepes, 10 mM EDTA, 2개의 완전히 EDTA가 없는 프로테아제 억제제 칵테일 타블렛/50 ml (Roche, Mannheim, Germany)이 들어있음 pH 7.4; Y2, Y4: 20 mM Hepes, 5 mM MgCl₂, 1 mg/ml 바시트라신, pH 7.1; Y5: 10 mM NaCl, 20 mM Hepes, 0.22 mM KH₂PO₄, 1.26 mM CaCl₂, 0.81 mM MgSO₄, pH 7.4)에 재현탁한 다음 중간 속도에서 조직 균질기를 사용하여 30초 동안 균질화하였다. 균질액을 초원심분리기를 사용하여 +4℃에서 10분 동안 35000g로 원심분리하였고 상층액을 제거하고 신선한 균질화 버퍼를 첨가하였다. 펠렛의 균질화를 총 세 번 반복하였다. 최종 펠렛을 몇 밀리리터의 균질화 버퍼에 재현탁하였고 단백질 농도를 Bradford 방법을 사용하여 결정하였으며 마이크로플레이트 판독기에서 595 nm에서 측정하였다. 단백질 농도를 1mg/ml로 조정하였으며 동결 튜브로 옮겼고 -80℃에서 저장하였다. 250 mM 수크로스를 얼리기 전에 Y5 막에 첨가하였다.

검정. 인간 Y 수용체 SPA 결합 검정을 흰색 96-웰 플레이트에서 웰 당 200 μl의 총 부피로 수행하였다. 맥아 아글루티닌 코팅된 비드 함유 신틸레이션 액체 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)를 결합 버퍼 (Y1, Y2: 50 mM Hepes, 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂, 0.02% tween 20, 0.25% 오발부민 pH 7.4; Y4, Y5: 20 mM Hepes, 10 mM NaCl, 0.22 mM KH₂PO₄, 1.26 mM CaCl₂, 0.81 mM MgSO₄, 0.1% 바시트라신 및 0.25% 오발부민 pH 7.4)에서 복원하였고 1 mg 비드 및 3 μg의 Y1 막/웰, 3 μg의 Y2 막/웰, 1 μg의 Y4 막/웰 또는 20 μg의 Y5 막/웰의 최종 농도를 제공하기 위해 막 조제물과 혼합하였다. 웰 당 50000 cpm의 방사성 리간드 인간 [¹²⁵I]-PYY를 첨가하였으며 Y1, Y2 및 Y5 결합 검정에서 100 pM의 농도에 해당한다. 100 pM의 농도에 해당하는 웰 당 50000 cpm의 방사성 리간드 인간 [¹²⁵I]-췌장 폴리펩타이드 (PP)를 Y4 결합 검정 사용하였다.

동결 건조된 유사체를 2000 μM (Y1,Y4 및 Y5) 및 200 μM (Y2)의 스톡 용액에 대하여 80% 디메틸 설폭사이드 (DMSO), 19% H₂O 및 1% 아세트산 (CH₃COOH)에 용해시켰고 Y1, Y4 및 Y5 검정에서 10000 nM 내지 1 pM 및 Y2 검정에서 1000 nM 내지 0.1 pM의 범위의 최종 농도로 단계별 희석 (1:10)을 결합 버퍼에서 수행하였다. 플레이트를 밀봉하였고 400 rpm으로 설정된 플레이트 셰이커에서 +25℃에서 2시간 동안 배양하였고 그 후 마이크로플레이트 신틸레이션 및 발광 계수기에서 발광의 판독 전에 10분 동안 1500 rpm으로 원심분리하였다. Y1 SPA 플레이트를 판독 전에 16시간 동안 실온에 두었다. 방사성 리간드의 이동을 발광의 감소로 측정하였고 IC₅₀ 값을 에스자형 용량-반응 곡선의 비선형 회귀 분석으로 계산하였다. 결합 친화도에 대한 Ki 값을 수용체 특이적 Kd 값 (Y1=0.556 nM; Y2=0.275 nM; Y4=0.111 nM; Y5=0.345 nM), 방사성 리간드 농도 및 IC50 값을 포함하는 쳉-프루소프 방정식 (Ki=IC50/(1+[L]/Kd)으로 얻었다.

Y 수용체 결합 친화도

실시예	화합물	Y2 Ki (nM)	Y1 Ki (nM)	Y4 Ki (nM)	Y5 Ki (nM)
2	hPYY(3-36) SEQ ID NO:2	0.25	45.5	83	4.5
3	SEQ ID NO:3	0.21	443	51	15
4	SEQ ID NO:4	0.7	5089	788	379
5	SEQ ID NO:5	1.3	8021	9866	252
6	SEQ ID NO:6	5.7	6388	>10000	894
7	SEQ ID NO:7	1.5	6370	7337	713
8	SEQ ID NO:8	0.87	>10000	8881	427
9	SEQ ID NO:9	3.2	>10000	9068	495
10	SEQ ID NO:10	48	>10000	>10000	5534
11	SEQ ID NO:11	1.1	>10000	6077	246
12	SEQ ID NO:12	3.3	>10000	9807	665
13	SEQ ID NO:13	1.4	1666	7984	275
14	SEQ ID NO:14	4.8	>10000	9968	803
15	SEQ ID NO:15	6.1	>10000	>10000	2027
16	SEQ ID NO:16	3.0	>10000	>10000	1152
17	SEQ ID NO:17	0.93	8853	371	166
18	SEQ ID NO:18	4.0	>10000	9584	621
19	SEQ ID NO:19	2.1	>10000	6188	760
20	SEQ ID NO:20	7.0	>10000	6730	2540
21	SEQ ID NO:21	3.3	>10000	6587	1584
22	SEQ ID NO:22	5.0	>10000	8601	2274
23	SEQ ID NO:23	3.7	>10000	3115	1224
24	SEQ ID NO:24	4.8	>10000	6276	1848
25	SEQ ID NO:25	5.6	9200	7196	1947
26	SEQ ID NO:26	6.1	>10000	8852	3052
27	SEQ ID NO:27	2.7	>10000	5411	1437
28	SEQ ID NO:28	6.5	>10000	4912	2623
29	SEQ ID NO:29	8.3	>10000	6427	2326
30	SEQ ID NO:30	1.2	>10000	6826	690
31	SEQ ID NO:31	4.0	>10000	3040	2000
32	SEQ ID NO:32	0.84	>10000	4138	305
33	SEQ ID NO:33	2.6	>10000	5182	1622
34	SEQ ID NO:34	4.3	>10000	7692	1436
35	SEQ ID NO:35	7.5	>10000	>10000	1573
36	SEQ ID NO:36	1.5	6972	321	75
37	SEQ ID NO:37	0.37	2591	177	17
38	SEQ ID NO:38	0.87	3767	403	935

본 발명의 PYY 화합물 모두는 양호한 Y2 결합을 나타내는 한편 수용체 Y1, Y4 및 Y5에 대한 결합 친화도는 강력하게 감소된다.

실시예 41: 미니피그에서 약물동역학적 연구

이 연구의 목적은 미니피그에 i.v. 투여 후 PYY 화합물의 생체 내 반감기를 결정하는 것, 즉, 체 내에 있는 시간 및 이로 인한 작용 시간의 연장이다. 이것은 약물동역학적 (PK) 연구에서 실행되는데, 문제의 유도체의 말단 반감기가 결정된다. 말단 반감기는 일반적으로 특정 혈장 농도를 반으로 줄이는데 든 시간을 의미하며, 초기 분포 단계 이후 측정된다.

Gottingen 미니피그에서 정맥 내 투여 후 약물동역학적 평가에 대한 생체 내 연구

동물. 15-25 kg의 Gottingen 미니피그 암컷을 Ellegaard Minipigs, Denmark로부터 구입하였다. 동물을 Animal Unit, Novo Nordisk A/S에서 사육하였고 Animal Unit의 정상적인 과정에 따라 유지하고 핸들링하였다. 최소 2주의 순응 후 두 개의 영구적인 중심 정맥 카테터(catheter)를 각 동물의 꼬리 대정맥(vena cava caudalis)에서 실행하였다. 수술 후 동물들은 약물동역학적 실험 중에 정상적인 개개의 우리 안에 있었다.

체중. 동물들의 체중을 매주 측정하였다. 동물들은 투여 전 아침에 금식하였지만 물에는 임의로(ad libitum) 접근하였다; 투여 중에는 음식을 공급하였다.

펩타이드 및 투여 용액의 투여. 짧은 중심 카테터를 통해 정맥 내 주사를 제공하였으며, 투여 후 최소 10 ml의 멸균 식염수로 플러싱된다(flushed). 테스트 물질을 0.05 ml/kg의 부피로 15 nmol/kg, n = 3으로 투여하였다. 버퍼: 50 mM 인산 나트륨, 70 mM 염화 나트륨, 0.05% tween 80, pH 7.4 또는 20 mM HEPES, 2.2% 글리세롤, 0.05% 폴리소르베이트 80, pH 6.5.

혈액 샘플 및 분석. 혈액 샘플을 다음 일정에 따라 중심 카테터를 통해 채취하였다: 예비 투여, 5, 15, 30, 45분, 1 h, 1.5 h, 2 h, 3 h, 4 h, 6 h, 8 h, 10 h, 24 h, 48 h, 72 h, 96 h, 120 h, 168 h, 192 h, 216 h, 240 h, 264 h 및 288 h. 제1 일에, 카테터를 확장 튜브에 연결하였으며, 이것을 제1 일의 끝에 제거할 것이다. 샘플 (0.8 ml)을 카테터를 통해 채취하였다. 혈액을 EDTA 버퍼 (8 mM) 및 50 μl Val-Pyr 버퍼 (50 ml 트라실롤에 용해된 3.097g K3EDTA를 함유하고 0.5 ml 20 mM Val-Pyr이 첨가된 안정화 버퍼. pH은 7.4로 조정하였다)를 함유하는 테스트 튜브에 수거하였다. 각 혈액 샘플 이후 카테터를 최소 5 ml의 멸균 0.9 % NaCl 및 10 IE/ml 헤파린으로 플러싱하였다. 무균성 기술은 카테터에서 응혈 형성의 위험을 증가시키는 카테터 내 박테리아 성장을 방지하는 것이 요구되었다. 샘플을 원심분리할 때까지 (10분, 4℃, 1942 g) 젖은 얼음 위에 두었다. 그 후에, 혈장 (최소 200 μl)을 즉시 Micronic 튜브로 옮겼고 분석할 때까지 -20℃를 유지하였다. 혈장 샘플을 하기 기술된 바와 같이 LC/MS로 분석하였다.

데이터 및 결과. 혈장 농도-시간 프로파일을 Phoenix (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)를 사용하는 비-구획화 약물동역학적 분석법으로 분석하였다. 계산을 각각의 동물에서 개개의 농도-시간 값을 사용하여 수행하였다.

샘플 분석

혈장 샘플에 대한 정량적 검정. 테스트 물질을 액체 크로마토그래피와 결합된 난류 흐름 크로마토그래피(Turbulent Flow Chromatography)에 의해 혈장에서 검정하였고 그 이후에 질량 분석법으로 검출하였다 (TFC/LC/MS). 방법의 선택성은 다양한 화합물이 하나의 샘플에서 정량화되게 하였으며, 예를 들어, 카세트는 동물 당 네 개의 화합물을 투여한다. 미공개 샘플에서 테스트 물질의 농도를 양의 함수로서 피크 면적을 사용하여 계산하였다. 분석제(analyte)가 첨가된 혈장 샘플 기반의 보정 그래프를 회귀 분석으로 구성하였다. 검정에 대한 전형적인 동적 범위는 1 - 2,000 nmol/l였다. 방법 성능을 세 개의 농도 수준에서 2배수의 품질 관리 (QC) 샘플을 동시-검정함으로써 보장하였다. 분석제의 스톡 및 작용 용액을 혈장에서 제조하였고 37℃에서 1시간 동안 배양하였다.

샘플 제조. 40.0 μl EDTA-혈장을 160 μl 50% 메탄올, 1% 포름산에 첨가한 다음, 보텍스(vortex)하고 4℃에서 20분 동안 14300 rpm (16457 g)로 원심분리하였다. 상층액을 96 웰 플레이트로 옮겼다 (플레이트를 0.4% BSA와 함께 37℃에서 ½시간 동안 사전 배양하였다). 주입 부피는 25 μl였다.

샘플 정화를 위해 Thermo Scientific, Franklin, MA, USA의 TurboFlow Cyclone 컬럼 (0.5 x 50 mm)을 사용하여 LC 분리를 Phenomenex, Torrance, CA, USA의 Onyx C18 컬럼 (2.0 x 50 mm) 상에서 실행하였다. 용출액은 등용매성이었고 메탄올, 아세토니트릴, Milli-Q 물 및 포름산의 구배 조합이었다. 선택적 검출을 양성 방식 이온화에서 작동된 질량 분석법에 의해 실행하였다.

데이터 핸들링. 혈장 농도-시간 프로파일을 Phoenix (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA)를 사용하는 비-구획적 약물동역학적 분석으로 분석하였다. 계산을 각 동물에서 개개의 농도-시간 값을 사용하여 수행하였다.

반감기 (t½)

실시예	화합물	t½ (시간)
2	hPYY(3-36) SEQ ID NO:2	0.33
7	SEQ ID NO:7	63
9	SEQ ID NO:9	72
11	SEQ ID NO:11	28
12	SEQ ID NO:12	65
13	SEQ ID NO:13	55
14	SEQ ID NO:14	52
15	SEQ ID NO:15	29
16	SEQ ID NO:16	50
17	SEQ ID NO:17	58
18	SEQ ID NO:18	66
19	SEQ ID NO:19	89
20	SEQ ID NO:20	14
21	SEQ ID NO:21	52
22	SEQ ID NO:22	11
25	SEQ ID NO:25	53
26	SEQ ID NO:26	52
27	SEQ ID NO:27	59
28	SEQ ID NO:28	50
30	SEQ ID NO:30	73
31	SEQ ID NO:31	30
33	SEQ ID NO:33	58
34	SEQ ID NO:34	62
35	SEQ ID NO:35	61
36	SEQ ID NO:36	83

테스트된 본 발명의 PYY 화합물은 hPYY(3-36)의 반감기와 비교하여 매우 긴 반감기를 갖는다.

실시예 42: db/db 마우스에서 약역학적 연구

당뇨병 설정에서 혈당 및 음식물 섭취에 대한 PYY 화합물의 생체 내 효과를 결정하기 위해서, 화합물을 하기 기술된 바와 같이 비만, 당뇨성 마우스 모델 (db/db 마우스)에서 테스트하였다.

수컷 db/db 마우스를 정상적인 일일 리듬 (6 pm 내지 6 am 암주기)에서 사육하였고 알트로민 식단(Altromin diet)으로의 임의의 접근을 제공하였다. 11-13주령에서 마우스를 혈당, 뿐만 아니라 체중에 대하여 매치시켜서 9마리의 마우스의 매칭 군으로 나누었고 케이지 당 3마리씩 사육하였다. 마우스에 표시된 화합물 또는 비히클(vehicle) (50 mM Na2HPO4, pH 7,4, 70 mM NaCl, 0.05% Tween 80)을 4 pm (시간=0)에 2.5 ml/kg의 부피에서 표시된 용량으로 피하로 투여하였고 일부 실험에서는 제2 주사를 시간=23시간에 제공하였다. 혈당 및 음식물 섭취를 주사 후 표시된 시점, 예를 들어, 주사 후 4시간 (4 h), 16시간 (16 h), 23시간 (23 h) 및 40시간 (40 h)에 측정한다. 혈당에 대한 혈액 샘플을 꼬리 정맥으로부터 Biosen^® 시스템 용액 (250 μl)이 들어있는 에펜도르프 튜브에 배치된 5 μl 헤파린 코팅된 모세관 튜브로 채취한다. 샘플을 Biosen^® 기구 상에서 즉시 분석한다.

혈당 (BG) 측정값을 전처리에 비해 비히클 조정된 % BG의 평균 ± SEM으로 보고하고 다음과 같이 계산한다:

100-[%BG(비히클,평균)-%BG] 여기에서,

%BG=100*[BG(시간=t)/BG(전처리)]

및 %BG(비히클,평균)=비히클 전처리에 비해 시간=t에서 비히클 구넹 대한 %BG 값의 평균.

음식물 섭취를 표시된 간격에 대한 비히클 군의 평균 음식물 섭취의 퍼센트로서 케이지 당 평균 ± SEM 음식물 섭취로 보고한다.

db/db 마우스에서 혈당에 대한 효과. 혈당 (BG) 측정값을 전처리에 비해 비히클 조정된 %BG의 평균 ± SEM으로 보고한다.

실시예	화합물	용량	혈당의 % 상대적 변화
		( μmol /kg)	4 h	16 h	23 h	40 h
7	SEQ ID NO:7	0.3	77	88	83	86
8	SEQ ID NO:8	1	nd	68	55	nd
9	SEQ ID NO:9	1	73	70	66	66
11	SEQ ID NO:11	1	nd	62	48	nd
12	SEQ ID NO:12	1	70	68	73	67
14	SEQ ID NO:14	1	47	47	35	37
15	SEQ ID NO:15	1	nd	78	68	nd
16	SEQ ID NO:16	0.3	67	59	70	68
16	SEQ ID NO:16	1	64	47	44	40
17	SEQ ID NO:17	1	nd	58	42	nd
18	SEQ ID NO:18	0.3	66	53	56	64
18	SEQ ID NO:18	1	67	56	49	62
19	SEQ ID NO:19	1	nd	47	30	nd
20	SEQ ID NO:20	1	58	86	83	nd

db/db 마우스에서 음식물 섭취에 대한 효과. 음식물 섭취를 표시된 간격에 대하여 비히클 군의 평균 음식물 섭취의 퍼센트로서 케이지 당 평균 ± SEM 음식물 섭취로 보고한다.

실시예	화합물	용량	% 상대적 음식물 섭취
		( μmol /kg)	4 h	16 h	23 h	40 h
7	SEQ ID NO:7	0.3	27	34	45	54
8	SEQ ID NO:8	1	nd	33	24	nd
9	SEQ ID NO:9	1	16	14	16	16
11	SEQ ID NO:11	1	nd	24	20	nd
12	SEQ ID NO:12	1	20	23	22	22
14	SEQ ID NO:14	1	11	14	13	15
15	SEQ ID NO:15	1	nd	13	26	nd
16	SEQ ID NO:16	0.3	6.5	12	19	27
16	SEQ ID NO:16	1	6.5	8.0	7.1	12
17	SEQ ID NO:17	1	nd	18	23	nd
18	SEQ ID NO:18	0.3	10	17	24	32
18	SEQ ID NO:18	1	12	12	20	21
19	SEQ ID NO:19	1	nd	7.6	6.7	nd
20	SEQ ID NO:20	1	0	56	61	nd

이 데이터들은 본 발명의 PYY 화합물의 혈당 저하 효과 및 음식물 섭취의 억제를 강력하게 지지한다.

실시예 43: 물리적 안정성

이 연구의 목적은 페놀의 존재 및 부재 하에 펩타이드 제형의 안정성을 결정하는 것이다. 펩타이드 제형의 안정성의 측정값으로서, 시간의 함수로서 고분자량 펩타이드 형성의 형성 (%HMWP)을 크기-배제 HPLC (SE-HPLC)로 분석하였다.

제형: 유사체를 30 mM Na-인산염 버퍼, 10 mM NaCl pH 8.2에서 1 mM로 용해시켰다. 필요한 경우 스톡 용액의 pH를 NaOH로 조정하였다. 이 스톡 용액을 상기 언급된 버퍼 또는 페놀을 함유하는 해당 버퍼에서 더 희석하였으며, 표 6에서 나타난 조성을 가진 최종 제형을 제공한다.

배양: 샘플을 단단한 스크루 캡(screw cap)을 가진 UPLC 바이알로 나누어서 37℃ 및 5℃에서 배양하였고, 37℃의 샘플을 1, 2 및 4주 후 5℃로 이동시키거나 분석하였다. 5℃ 샘플을 시작 값으로 사용하였다.

분석 방법: HMWP 함량을 Waters Insulin HMWP SEC 컬럼 (7.8x300 mm)으로 해리성 SE-HPLC 방법을 사용하여 분석하였으며 컬럼 온도는 50℃였다. 샘플을 0.5 ml/분의 유속으로 500 mM NaCl, 10 mM NaH2PO4, 5 mM H3PO4, 50 부피% 2-프로판올의 용출액으로 등용매 용출에 의해 용출하였다. 검출을 215 nm에서 수행하였다.

표 6에서 보이는 바와 같이, N-말단 치환기, 예를 들어, 3-메틸-부타노일의 첨가는 응집체의 형성을 감소시킨다 (고분자량 단백질 - HMWP). 위치 4의 리신을 아르기니으로 변화시키는 것이 또한 응집체의 형성을 감소시킨다. N-말단 치환기의 첨가 및 위치 4에서 리신의 변화의 결합은 응집체의 형성을 현저하게 감소시킨다.

HMWP 형성

제형 번호	실시예의 화합물 (0.2 mM )	인산염 ( mM )	NaCl ( mM )	페놀 ( mM )	pH	HMWP 형성 ( % /월)
1A	18	30	10	-	8.2	0.5
1B	18	27	9	58	8.2	1.6
2A	16	30	10	-	8.2	1.0
2B	16	27	9	58	8.2	13.0
3A	8	29	10	-	8.2	1.9
3B	8	26	8	55	8.2	19.1
4A	11	29	10	-	8.2	0.7
4B	11	26	8	55	8.2	7.5

실시예 44: 암컷 Landrace Yorkshire Duroc ( LYD ) 돼지에서 PYY 화합물 및 GLP-1 작용제의 조합 처리의 약역학적 효과

돼지에서 음식물 섭취에 대한 PYY 화합물 및 GLP-1 작용제의 조합 처리의 생체 내 효과를 결정하기 위해서, GLP-1 작용제 리라글루티드 단독 또는 리라글루티드 및 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18)의 조합의 효과를 하기 기술된 바와 같이 측정하였다.

재료 및 방법.

WO 98/08871은 리라글루티드의 제조 방법을 포함하여, 리라글루티드를 개시한다 (실시예 37).

음식물 섭취에 대한 효과를 체중이 30-43 kg이고, 대략 3개월령의 암컷 Landrace Yorkshire Duroc (LYD) 돼지 (Askelygaard, Roskilde, Denmark) (n=4)에서 연구하였다. 동물들을 연구 전에 1-2주 동안 순응시켰고 순응 및 실험 기간 동안 항상 임의로 돼지 사료 (Svine 5, Brogaarden, Denmark)를 급식하였다. 실험 기간 동안 시스템 Mpigwin (Ellegaard Systems, Faaborg, Denmark)을 사용하여 개개의 음식물 섭취의 측정을 위해 동물들을 개개의 우리에 배치하였다. 어떠한 엎질러진 음식 (음식물 쓰레기)도 수거하여 중량을 측정하였고, 측정된 음식물 섭취를 이 값에 대하여 수동으로 교정하였다 (교정된 음식물 섭취).

실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18)을 3 nmol/kg 리라글루티드와 조합하여, 2가지 다른 용량, 25 및 50 nmol/kg의 단일 s.c. 투여로서 테스트하였다. 리라글루티드를 제-4 일에서 제3 일까지 하루에 한 번 s.c. 투여하였다 (처음 2일에 2 nmol/kg에 해당하는 0.017 mL/kg, 및 이어서 나머지 6일에 3 nmol/kg에 해당하는 0.025 mL/kg). PYY 유사체를 제0 일 아침에 한 번 투여하였다 (투여 용량은 0.025 mL/kg이었다). PYY 유사체를 PYY 주입용 비히클의 역할을 하는 다음 버퍼에서 제형화하였다: 50 mM 인산 나트륨, 70 mM 염화 나트륨, 0.05% tween 80, pH 7.4. 리라글루티드를 매일 리라글루티드 주입용 비히클의 역할을 하는 다음 버퍼에서 제형화하였다: 8 mM 인산염, 184 mM 프로필렌글리콜, 58 mM 페놀, pH 8.15.

평균 비히클 음식물 섭취의 퍼센트로 개개의 음식물 섭취를 제0-4 일에 대하여 계산하였고 이원 ANOVA에 이은 본페로니 사후 테스트(Bonferroni's post test)로 통계적으로 평가하였다. 제0 일 내지 제4 일에 체중 변화를 계산하였고 일원 ANOVA에 이은 본페로니 사후 테스트로 통계적으로 평가하였다.

어린, 성장하는 LYD 돼지에서 비히클, 리라글루티드 3 nmol/kg, 리라글루티드 3 nmol/kg과 조합된 PYY 유사체 25 nmol/kg 및 리라글루티드 3 nmol/kg과 조합된 PYY 유사체 50 nmol/kg의 투여 후 제0-1 일 내지 제3-4 일에 비히클의 퍼센트 음식물 섭취. 리라글루티드의 투여를 제-4 일 내지 제3 일의 아침에 하루에 한 번 실행하는 반면, 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18)을 제0 일의 아침에 단일 s.c. 투여로서 제공하였다. N=4. 데이터는 평균으로 표시된다. 이원 ANOVA에 이어서 본페로니 사후 테스트.

일	비히클	리라글루티드 3 nmol /kg	리라글루티드 3 nmol /kg + SEQ ID NO:18 25 nmol /kg	리라글루티드 3 nmol /kg + SEQ ID NO:18 50 nmol /kg
0-1	100.0	39.3	4.5	1.2
1-2	100.0	57.7	7.1	1.8
2-3	100.0	54.8	22.0	7.4
3-4	100.0	53.0	28.9	21.5

어린, 성장하는 LYD 돼지에서 비히클, 리라글루티드 3 nmol/kg, 리라글루티드 3 nmol/kg과 조합된 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 25 nmol/kg 및 리라글루티드 3 nmol/kg과 조합된 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 50 nmol/kg의 투여 후 제0 일에서 제4 일까지의 체중 변화. 리라글루티드의 투여를 제-4 일 내지 제3 일의 아침에 하루에 한 번 실행하는 반면에, 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18)을 제0 일의 아침에 단일 s.c. 투여로서 제공하였다. N=4, 데이터는 평균으로 표시된다. 일원 ANOVA에 이어서 본페로니 사후 테스트.

	비히클	리라글루티드 3 nmol /kg	리라글루티드 3 nmol /kg + SEQ ID NO:18 25 nmol /kg	리라글루티드 3 nmol /kg + SEQ ID NO:18 50 nmol /kg
델타 BW 제0-4 일 (kg)	4.5	3.1	0.4	-2.3

결론적으로, 이 데이터들은 GLP-1 유사체와 PYY 유사체의 조합의 음식물 섭취 억제 및 체중 저하 효과에 대하여 추가된 이점을 강력하게 지지한다.

실시예 45. db/db 마우스에서 PYY 유사체 및 GLP-1 유사체의 조합 처리의 약역학적 효과

혈당 및 체중에 대한 PYY 화합물 및 GLP-1 작용제의 조합 처리의 생체 내 효과를 결정하기 위해서, PYY 화합물, 리라글루티드 단독 또는 조합의 효과를 하기 기술된 바와 같이, 비만, 당뇨성 마우스 모델 (db/db 마우스)에서 측정하였다.

수컷 db/db 마우스 (9-10주령)을 사용하여 다양한 용량의 PYY-유래 유사체, 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18), 리라글루티드 (Lira), 또는 둘 다 (조합)의 처리 후 혈당 및 체중에 대한 효과를 측정하였다. 연구 전에 마우스를 체중, 비-공복 혈당 및 HbA1c에 대하여 매치된 군으로 무작위로 할당하였다. 군에서 혈당의 차이를 표 9에서 요약된 투여-일정에 따라 연구하였다. SEQ ID NO:18 및 리라글루티드의 상향 적정을 사용하여 제1 투여 전 제-9 일 내지 제0 일에 갑작스러운 식욕 상실을 방지하였다 (데이터 미도시).

투여-일정 개요

2 x 일일 투여	샘플, n=	주입 제1- 8 일 당 주어진 용량 1-8 ( nmol /kg)	주입 제9- 16 일 당 주어진 용량	주입 제17- 24 일 당 주어진 용량
비히클 + 비히클	9	-	-	-
SEQ ID NO:18	9	30	100	1000
리라글루티드	8	10	10	10
SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	9	15 + 5	50 + 5	1000 + 5
SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	8	30 + 10	100 + 10	1000 + 10

간략히 말하면, 화합물을 날마다 11:00 및 17:00시간에 피하로 투여하였다 (2.5 ml/kg). 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18)을 50 mM 인산염; 70 mM 염화 나트륨; 0.05 % 폴리소르베이트 80 버퍼 (pH=8.0)에서 제공하였다. 리라글루티드를 50 mM 인산염; 70 mM 염화 나트륨; 0.05 % 폴리소르베이트 80 버퍼 (pH=7.4)에서 제공하였다. 혈당을 글루코스 분석기 (Biosen 5040)를 사용하여 글루코스 옥시다제 방법에 기초한 각각의 용량의 처리 3-5일 후 단일 시점 (9 am)에 측정하였다. 체중을 같은 날 측정하였다. 결과는 하기 표 10에서 나타난다.

혈당 및 체중에 대한 다양한 용량의 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 또는 리라글루티드 단독, 또는 조합의 효과. 데이터는 평균으로 표시된다. 차이를 일원 ANOVA 및 터키 다중 비교 테스트(Tukey's multiple comparisons test)를 통해 분석하였다. 샘플, n=9.

	2 x 일일 처리	주입 당 제공되는 용량	혈당 (mmol/L)	체중 (g)
주입 제1-8 일	비히클 + 비히클	비히클	23.1	47.6
	SEQ ID NO:18	30 nmol/kg	20.5	48.6
	리라글루티드	10 nmol/kg	15.4	47.6
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	15+5 nmol/kg	9.9	46.4
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	30+10 nmol/kg	6.6	44.0
주입 제9-16 일	비히클 + 비히클	비히클	25.3	46.8
	SEQ ID NO:18	100 nmol/kg	20.2	47.7
	리라글루티드	10 nmol/kg	17.4	47.7
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	50+5 nmol/kg	10.3	45.5
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	100+10 nmol/kg	7.6	42.8
주입 제17-24 일	비히클 + 비히클	비히클	23.4	45.8
	SEQ ID NO:18	1000 nmol/kg	13.7	45.3
	리라글루티드	10 nmol/kg	19.8	48.1
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	1000+5 nmol/kg	6.2	41.9
	SEQ ID NO:18 + 리라글루티드	1000+10 nmol/kg	5.8	38.8

실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 및 리라글루티드의 조합의 글루코스-저하 효과는 별개로 화합물에 의해 생성된 이점보다 훨씬 더 컸다. 혈당 수준을 테스트된 대부분의 용량의 조합으로 처리된 마우스에서 표준화하였다. 중요하게는, 저혈당(hypoglycemia)의 경우는 관찰되지 않았다.

실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 및 리라글루티드의 조합의 시너지 효과는 또한 체중의 감소에 대하여 명백하였다. 결론적으로, 실시예 18의 PYY 화합물 (SEQ ID NO:18) 및 리라글루티드의 조합은 시너지 효과에 의해 정지 혈당 및 체중을 낮추며, 단일 요법에 의해 생성된 같거나, 또는 유사한 이점을 달성하는데 필요한 약물의 양을 크게 감소시킨다.

본 발명의 특정한 특징이 본원에서 예시되고 기술되는 한편, 많은 변형, 치환, 변화, 및 동등물이 이제 당업자에게 발생할 것이다. 그러므로, 첨부된 청구범위는 본 발명의 진정한 사상의 범위에 있는 이러한 모든 변형 및 변화를 커버할 의도가 있는 것으로 생각되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> Novo Nordisk A/S <120> Selective PYY compounds and uses thereof <130> 130009WO01 <160> 38 <170> Novo Nordisk A/S PatSeq 1.0.2.2 <210> 1 <211> 36 <212> PRT <213> HOMO SAPIENS <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 1 Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 2 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 2 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 3 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 3 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 4 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 4 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 5 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 5 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 6 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]butanoyl]aminoethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 6 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 7 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 7 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 8 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 8 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 9 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-tetrazol-5-yl)hexadecanoylsulfamoyl]butanoylamino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 9 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 10 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (28)..(28) <223> The amino acid in this position is Aib (2-Aminoisobutyric acid) <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 10 Xaa Xaa Ile Lys Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Xaa Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 11 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 11 Xaa Xaa Ile Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 12 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: hexanoyl <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: 2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 12 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 13 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These 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<211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 18 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 19 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent:[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 19 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 20 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(14-sulfotetradecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 20 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 21 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-carboxy-hexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 21 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 22 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(14-carboxytetracanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 22 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 23 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 23 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Ile Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 24 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES 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Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 25 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 26 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 26 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 27 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 27 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 28 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 28 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 29 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-4-oxobutanoyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 29 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 30 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]hexanoyl]]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 30 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 31 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(15-carboxypentadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 31 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 32 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 32 Xaa Xaa Val Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 33 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Asp <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 33 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Xaa Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 34 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> Mod_Res <222> (11)..(11) <223> IsoAsp <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 34 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Xaa Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 35 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> Mod_Res <222> (11)..(11) <223> D-IsoAsp <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 35 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Xaa Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 36 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(17-carboxyheptadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 36 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 37 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> These positions are deleted <220> <221> Mod_Res <222> (7)..(7) <223> The epsilon amino group of Lys has the following substituent: [2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxy-4-(16-sulfohexadecanoylamino)butanoyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]amino]ethoxy]ethoxy]acetyl]- <220> <221> Mod_Res <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 37 Xaa Xaa Ile Arg Pro Glu Lys Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 38 <211> 36 <212> PRT <213> ARTIFICIAL <220> <223> Artificial protein based on human PYY <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(3) <223> These positions are deleted <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> The alpha amino group of Arg has the following substituent: 3-Methylbutanoyl <220> <221> MOD_RES <222> (35)..(35) <223> METHYLATION <220> <221> MOD_RES <222> (36)..(36) <223> AMIDATION <400> 18 Xaa Xaa Xaa Arg Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Gln Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35

Claims

hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 30에 해당하는 위치에서 트립토판, 및 hPYY(3-36)과 비교하여 최대 10개의 아미노산 변형을 포함하는 PYY 화합물, 또는 이것의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1 항에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 35에 해당하는 위치에서 N(알파)-메틸-L-아르기닌을 포함하는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제1 항 또는 제2 항에 있어서, hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 1-3에 해당하는 위치가 없고, PYY 화합물은 N-말단 치환기를 더 포함하며, N-말단 치환기는 최대 12개의 탄소 원자를 포함하는 알콕시 기인 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제1 항 내지 제3 항 중 어느 한 항에 있어서, PYY 화합물은 hPYY(1-36) (SEQ ID NO:1)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 및 상기 리신의 엡실론 아미노 기에 부착된 변형 기를 포함하며, 상기 변형 기는 A-B-C-로 한정되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제4 항에 있어서, A-는 다음으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물:

,
,또는

상기 식에서 a는 12 내지 19의 정수이고, b는 10 내지 16의 정수이며, c는 10 내지 16의 정수이고, *는 -B-에 대한 부착점을 표시한다.
제4 항 또는 제5 항에 있어서, B-는 다음으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물:

,
,또는

상기 식에서 d는 1 또는 2이고; e는 1 또는 2이며; f는 2, 3 또는 4이고; ***는 A-에 대한 부착점을 표시하고, **는 -C-에 대한 부착점을 표시한다.
제4 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서, -C-는

또는

인 것을 특징으로 하는 PYY 화합물:
상기 식에서 g는 1-5의 범위의 정수이고, h는 1-5의 범위의 정수이며, i는 2 내지 6의 범위의 정수이고, j는 1 내지 6의 범위의 정수이며, ****는 -B-에 대한 부착점을 표시하고, *****는 hPYY(1-36)의 위치 7에 해당하는 위치에서 리신 잔기의 엡실론 아미노 기에 대한 부착점을 표시한다.
제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서,
[Trp30]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:3)

; [Trp30,NMeArg35]hPYY3-36 (SEQ ID NO:4)

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; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:27)

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; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]프로폭시]-에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]-에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]아미노]프로폭시]에톡시]에톡시]프로필아미노]-4-옥소부타노일]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:29)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[(2S)-2-아미노-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]-아미노]헥사노일]]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:30)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(15-카르복시펜타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]-에톡시]에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:31)

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; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:34)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,D-isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:35)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(17-카르복시헵타데카노일아미노)부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:36)

; 7-N{엡실론}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-카르복시-4-(16-설포헥사데카노일아미노)-부타노일]아미노]에톡시]에톡시]아세틸]아미노]에톡시]-에톡시]아세틸]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(3-36) (SEQ ID NO:37)

; 4-N{알파}-(3-메틸부타노일)-[Arg4,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36) (SEQ ID NO:38)

로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항의 PYY 화합물, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로 사용되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행 및/또는 비만의 지연 또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료에 사용되는 것을 특징으로 하는 PYY 화합물.
제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항의 PYY 화합물, GLP-1 작용제, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
제12 항에 있어서, GLP-1 작용제는 리라글루티드 또는 세마글루티드이며, PYY 화합물은 SEQ ID NO:18인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제12 항 또는 제13 항에 있어서, 의약으로 사용되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제12 항 또는 제13 항에 있어서, 모든 형태의 당뇨병 및 관련된 질환, 예를 들어, 섭식 장애, 당뇨 합병증, 심혈관 질환 및/또는 수면 무호흡증의 치료 및/또는 예방; 및/또는 예를 들어, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중을 감소시키며, 식욕을 억제하고, 포만감을 유도함으로써 지질 파라미터의 개선, β-세포 기능의 개선, 및/또는 당뇨성 질환 진행 및/또는 섭식 장애, 예를 들어, 비만의 지연 또는 예방; 폭식 장애, 폭식증, 및/또는 항정신병제 또는 스테로이드의 투여에 의해 유발된 비만의 치료 또는 예방; 위 운동의 감소; 위 배출 지연; 신체적 운동성 증가; 및/또는 비만에 대한 동반질환, 예를 들어, 퇴행성 관절염 및/또는 요실금의 예방 및/또는 치료에 사용되는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.