TW201629095A - 穩定的基於ｇｌｐ－１之ｇｌｐ－１／升糖素受體共促效劑 - Google Patents

穩定的基於ｇｌｐ－１之ｇｌｐ－１／升糖素受體共促效劑 Download PDF

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Abstract

本發明係關於新GLP-1衍生物、其組成物及其在醫學中之用途。

Description

穩定的基於GLP-1之GLP-1/升糖素受體共促效劑
本發明係關於新穎GLP-1衍生物GLP-1/升糖素受體共促效劑、其組成物及其在醫學中之用途。
許多胃腸肽激素參與調節食物攝入及能量恆定(例如CCK、GLP-1、PYY、胃內激素)。最近，來自腸L-細胞中升糖素原基因之產物調酸素(Oxm)亦展示在嚙齒動物及人類中具有食慾減退特性。肥胖人類之四周長期臨床研究展現重複皮下投予Oxm減少食物攝入且造成顯著體重減輕。由於特異性Oxm受體仍有待發現，已表明許多生理作用係經由GLP-1及升糖素受體活化介導。實際上，Oxm結合且活化GLP-1及升糖素受體，即使親和力及效力比同源配位體更低。近期幾篇論文已藉由構建雙重促效劑及比較DIO小鼠與基因剔除小鼠模型中之重量下降效果來展現同時GLP-1/升糖素受體靶向之能力。用平衡之GLP-1/升糖素受體共促效劑治療導致體重及脂肪量穩固減少，超出純GLP-1受體促效劑，且葡萄糖控制與GLP-1受體促效劑之葡萄糖控制相當。在用GLP-1/升糖素受體共促效劑治療後，包括胰島素、瘦素及脂聯素之血漿代謝參數的改進比純GLP-1受體促效劑更明顯。另外，GLP-1/升糖素受體共促效劑治療在DIO小鼠中增加脂肪酸氧化且降低肝脂肪變性。在GLP-1或升糖素受體基因剔除小鼠中， GLP-1/升糖素受體共促效劑展現相比於野生型動物對體重減輕之降低但仍顯著的影響，因此支持GLP-1及升糖素受體之同時活化導致優異重量減輕之假定。
升糖素受體活化之一個生理作用為藉由刺激肝糖分解及葡糖新生來增加血糖水準。升糖素受體活化另外已展示在嚙齒動物及人類中增加能量消耗及減少食物攝入。
在近期研究中，16名人類志願者被輸注升糖素、GLP-1、升糖素與GLP-1之組合或鹽水。在組合組中用餐期間之能量攝入顯著減少(13%)，但在單獨給予任一激素時無法實現。
在另一研究中，在將GLP-1、升糖素或其組合輸注至健康人類志願者中之後量測能量消耗(EE)。研究展示升糖素及升糖素與GLP-1之組合在類似程度上增加EE，而GLP-1無效果。升糖素輸注伴隨有血漿葡萄糖水準上升，但除升糖素之外還共輸注GLP-1會快速減少此偏移。使用鼠受體效力對於兩個受體不同之GLP-1/升糖素受體共促效劑肽家族進一步展現GLP-1受體活性在肥胖小鼠中預防升糖素受體介導之高血糖症的重要性。研究指示平衡之GLP-1/升糖素受體共促效劑肽展現重量減輕之最佳治療特徵，同時減低與升糖素受體活化相關之高血糖風險。
總之，此等研究支持雙重GLP-1及升糖素促效作用的概念作為治療肥胖症之潛在目標。
絕大部分GLP-1/升糖素受體共促效劑已使用升糖素或調酸素作為起點來獲得，且GLP-1活性已藉由各種胺基酸突變改進。升糖素具有不佳物理及化學穩定性，且許多基於升糖素之共促效劑亦觀測到此。
因此，仍需要具有改進之穩定性，包括改進之化學及物理穩定性的GLP-1/升糖素受體共促效劑。
本發明係關於新穎穩定及拖延性GLP-1衍生物GLP-1/升糖素受體共促效劑；其組成物；GLP-1衍生物在醫學中之用途；及治療方法，其包含向患者投予GLP-1衍生物，包括治療糖尿病、肥胖症及相關疾病及病狀。
在一些具體實例中，本發明係關於GLP-1衍生物，其包含由式I胺基酸序列組成的多肽：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、Ile或Tyr；X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib；X23為Gln、Arg或Lys；X26為Lys或Arg；X27為Glu或Lys；X33為Val、Leu或Ile；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在； X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在；X37為Gly或不存在；其中該GLP-1衍生物進一步包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端；其中該多肽視情況包含C端醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽及/或酯。
在一些具體實例中，本發明係關於一種醫藥組成物，其包含如前述主張中任一者所定義之GLP-1衍生物及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
在一些具體實例中，本發明係關於一種如前述主張中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於醫學，諸如用於治療或預防肥胖症、高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常及/或第1型糖尿病。
在一些具體實例中，本發明係關於呈如本文所定義之GLP-1類似物形式之中間產物，或其醫藥學上可接受之鹽、醯胺或酯。
本發明提供包含胺基酸取代及具有帶負電部分的取代基之新穎GLP-1衍生物，該等GLP-1衍生物為GLP-1/升糖素受體共促效劑。如本文所用之術語「GLP-1/升糖素受體共促效劑(GLP-1/glucagon receptor co-agonist)」係指使GLP-1受體及升糖素受體活化之促效劑。特定言之，本發明之GLP-1衍生物包含在胺基酸序列之位置7處脫胺基組胺酸及位置9 處組胺酸之胺基酸取代，GLP-1衍生物進一步包含具有至少兩個負電荷之取代基。在一些具體實例中，提及如本文所用之GLP-1衍生物中之胺基酸位置係相對於N端組胺酸定義為位置7之人類GLP-1(7-37)。
在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物使GLP-1受體比升糖素受體更佳活化，亦即，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率為大於1。在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物與GLP-1受體之結合比升糖素受體更佳，亦即，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率為大於1。本文所揭示之受體分析可用於評估該等比率。
本發明人已發現本發明之GLP-1衍生物可具有改進之物理穩定性及改進之化學穩定性，同時保持適當水溶解性、受體效力及受體結合。在一些具體實例中，GLP-1衍生物具有改進之物理穩定性(例如，GLP-1衍生物在用於評估物理穩定性之分析中展示無或延遲之原纖維化-該等分析之實例揭示於本文中)。此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物在醫藥組成物可接受之pH範圍，諸如中性pH或稍微鹼性pH內具有適當水溶解性。此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物具有改進之化學穩定性，例如GLP-1衍生物在例如液體組成物(諸如醫藥組成物)中之化學降解減少。此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物具有改進之藥物動力學特性，亦即，例如與人類升糖素及/或人類GLP-1相比，其具有延長之活體內半衰期。此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物在皮下投予之後誘使體重顯著減少。如本文所述之分析(I)及(II)可用於分別量測本發明之GLP-1衍生物對升糖素及GLP-1受體之活性及親和力。本發明 之GLP-1衍生物在不同pH值下之溶解性可如本文所述量測，參見例如功能特性部分。本發明之GLP-1衍生物之物理穩定性可藉由如本文分析(III)中所述之方法量測。本發明之GLP-1衍生物之化學穩定性可如本文分析(V)中所述量測。可在諸如小鼠(例如，使用本文分析(IV)中所述之方法)、大鼠或小型豬之物種的藥物動力學研究中測定GLP-1衍生物之半衰期。可藉由向DIO小鼠投予本發明之GLP-1衍生物且與投予單獨媒劑比較其對體重之影響來量測由本發明之GLP-1衍生物造成的體重減少。
在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物包含由式I胺基酸序列組成的多肽：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、Ile或Tyr；X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib；X23為Gln、Arg或Lys；X26為Lys或Arg；X27為Glu或Lys；X33為Val、Leu或Ile；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在； X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在；X37為Gly或不存在；其中該多肽包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端；或其醫藥學上可接受之鹽、醯胺及/或酯。
在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物包含由式I胺基酸序列組成的多肽：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、Ile或Tyr；X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib；X23為Gln、Arg或Lys；X26為Lys或Arg；X27為Glu或Lys；X33為Val、Leu或Ile；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在；X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在；X37為Gly或不存在； 其中該胺基酸序列在選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的一或多個位置包含離胺酸殘基；且其中該多肽包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端，且其中該取代基在選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處連接於離胺酸殘基之ε位置；或其醫藥學上可接受之鹽、醯胺及/或酯。
GLP-1肽及類似物
如本文所用之術語「GLP-1肽(GLP-1 peptide)」係指人類GLP-1，其序列包括於以SEQ ID NO：1所列之序列中；或其類似物。由序列SEQ ID NO：1組成之肽在本文中亦可簡稱為「GLP-1」。在一些具體實例中，如本文所用，術語「人類GLP-1(human GLP-1)」及「GLP-1」係指HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG(SEQ ID NO：1)。在序列表中，SEQ ID NO：1(組胺酸)之第一胺基酸殘基指定為1號。然而，在下文中，根據此項技術中之慣例，此組胺酸殘基稱為7號，且相應地編號後續胺基酸殘基，以甘胺酸37號結束。因此，本文中對GLP-1(7-37)序列之胺基酸殘基編號或位置數目的任何提及一般為對以位置7處的His開始且以位置37處的Gly結束之序列的提及。
可參考i)天然GLP-1(7-37)中對應於改變之胺基酸殘基(亦即，天然GLP-1中之相應位置)之胺基酸殘基的數目及ii)實際改變來描述本發明衍生物之GLP-1類似物。
換言之，GLP-1類似物為GLP-1(7-37)肽，其中在與天然 GLP-1(7-37)(SEQ ID NO：1)相比時多個胺基酸殘基已改變。此等改變可獨立地表示一或多個胺基酸取代、添加及/或缺失。
如本文所用之術語「GLP-1類似物(GLP-1 analogue)」係指一種肽或化合物，其為GLP-1(SEQ ID NO：1)之變體。本文中式I胺基酸序列為GLP-1類似物之一實例。術語「GLP-1類似物」與「類似物」可在本文中互換使用。如本文例如關於GLP-1衍生物所用之術語「多肽(polypeptide)」，諸如「GLP-1衍生物之多肽(polypeptide of the GLP-1 derivative)」可指由如本文所定義之式I胺基酸序列組成的肽。
可參考i)人類GLP-1(SEQ ID NO：1)中對應於修飾之胺基酸殘基(亦即，GLP-1(SEQ ID NO：1)中之相應位置)之胺基酸殘基的數目及ii)實際修飾來描述本發明衍生物之GLP-1類似物。以下為適合之GLP-1類似物命名法之非限制性實例。
GLP-1類似物為在與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比時具有多個胺基酸殘基修飾之GLP-1肽。此等修飾可為一或多個胺基酸取代、添加及/或缺失。舉例而言，「[Imp7,His9]-GLP-1」或「[Imp7,His9]-GLP-1(7-37)肽」表示GLP-1(SEQ ID NO：1)，其中位置7之胺基酸已經Imp取代且位置9之胺基酸已經His取代。類似地，「[Imp7,His9,des36-37]-GLP-1(7-35)肽」或「[Imp7,His9,des36-37]-GLP-1」表示GLP-1(SEQ ID NO：1)，其中位置7之胺基酸已經Imp取代，且位置9之胺基酸已經His取代，且位置36及37之胺基酸已缺失。
在與SEQ ID NO：1比較時，「包含」某些指定改變之類似物可包含其他改變。在一特定具體實例中，類似物「由」指定改變「組成」 或「具有」指定改變。
如自以上實例顯而易知，胺基酸殘基可藉由其全稱、其單字碼及/或其三字碼鑑別。此等三種方式完全等效。在一些具體實例中，根據IUPAC-IUB命名法使用標準單字碼或三字碼來繪製GLP-1類似物及GLP-1衍生物。
表述「位置」或「相應位置」可用於參考人類GLP-1(SEQ ID NO：1)使GLP-1胺基酸序列之變化位點特性化。位置以及變化數可易於例如藉由簡單手寫及目視檢查來推論。
如例如在本發明衍生物之GLP-1類似物的情形下使用之術語「肽(peptide)」係指包含由醯胺(或肽)鍵互連之一系列胺基酸的化合物。本發明之GLP-1衍生物包含至少五個由肽鍵連接之構成胺基酸。在特定具體實例中，肽a)包含或b)由以下組成：i)28個、ii)29個、iii)30個或iv)31個胺基酸。在又一特定具體實例中，肽由藉由肽鍵互連之胺基酸組成。
胺基酸為包含胺基及羧酸基之分子。如本文所用之術語「胺基酸(amino acid)」包括編碼胺基酸(尤其20個標準胺基酸)以及非編碼胺基酸。編碼胺基酸為由遺傳密碼編碼之胺基酸(IUPAC表1之3AA-1部分，http：//www.chem.qmul.ac.uk/iupac/AminoAcid/AA1n2.html#AA1)。非編碼胺基酸為未在天然(例如人類)肽及/或蛋白質中發現或不由標準細胞機制產生之胺基酸(例如，其可能已經受轉譯後修飾)。非編碼胺基酸之非限制性實例為α-胺基異丁酸(alpha-aminoisobutyric acid；Aib)、脫胺基-組胺酸(3-(咪唑-4-基)丙酸，替代名稱為咪唑并丙酸，簡稱為Imp)以及編碼胺基 酸之D-異構體。在本文中，Imp定義為胺基酸，儘管其不包含胺基。
在本文中，未陳述光學異構體之肽(例如，GLP-1類似物或GLP-1衍生物)之所有胺基酸理解為意謂L-異構體(除非另外規定)。
與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物可在多肽中包含總計高達15個胺基酸修飾(例如，一或多個添加、一或多個缺失及/或一或多個取代)。在一些具體實例中，與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物包含有包含3-15個胺基酸殘基修飾(諸如取代、添加或缺失)之多肽。在一些具體實例中，與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物包含有包含至多14個(諸如至多13個或至多12個)胺基酸殘基修飾(諸如取代、添加或缺失)之多肽。在一些具體實例中，與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物包含有包含至多11個(諸如至多10個或至多9個)胺基酸殘基修飾(諸如取代、添加或缺失)之多肽。在一些具體實例中，與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物包含有包含至多8個(諸如至多7個或至多6個)胺基酸殘基修飾(諸如取代、添加或缺失)之多肽。在一些具體實例中，與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比，GLP-1衍生物包含有包含至多5個(諸如至多4個或至多3個)胺基酸殘基修飾(諸如取代、添加或缺失)之多肽。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物之多肽由式I胺基酸序列組成：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]，其中 X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、Ile或Tyr；X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib；X23為Gln、Arg或Lys；X26為Lys或Arg；X27為Glu或Lys；X33為Val、Leu或Ile；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在；X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在-X36或者可為天然Arg殘基；X37為Gly或不存在。
在一些具體實例中，多肽包含C端酸基，諸如羧酸基。在一些具體實例中，多肽包含C端醯胺。
在一些具體實例中，X8為Ala、Aib、Acb；X22為Ala或Glu；X35為Gly或Thr；及/或X36為Gly或不存在。
在一些具體實例中，X8為Ala、Aib、Acb或Gly。在一些具體實例中，X8為Ala、Aib或Acb。
在一些具體實例中，X16為Val、Leu、Ile或Tyr。
在一些具體實例中，X18為Lys或Arg。
在一些具體實例中，X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib。在一些具體實例中，X22為Gly、Ala或Glu。在一些具體實例中， X22為Lys、Arg、Ser或Aib。在一些具體實例中，X22為Ala或Glu。
在一些具體實例中，X23為Gln、Arg或Lys。
在一些具體實例中，X26為Lys或Arg。
在一些具體實例中，X27為Glu或Lys。
在一些具體實例中，X33為Val、Leu或Ile。
在一些具體實例中，X34為Lys或Arg。
在一些具體實例中，X35為Gly、Thr、Lys或不存在。在一些具體實例中，X35為Gly或Thr。
在一些具體實例中，X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在。在一些具體實例中，X36為Ala、Gly或Lys。在一些具體實例中，X36為Gly或不存在。
在一些具體實例中，若X35不存在，則X36及X37亦不存在。在一些具體實例中，若X35不存在，則X36及X37亦不存在，且該GLP-1衍生物包含C端羧酸基。
在一些具體實例中，若X36不存在，則X37亦不存在。在一些具體實例中，若X36不存在，則X37亦不存在，且該GLP-1衍生物包含C端羧酸醯胺。
本發明上下文中所用之縮寫具有以下含義：
以D-開始後接三字碼之胺基酸縮寫，諸如D-Ser、D-His等係指相應胺基酸(例如D-絲胺酸、D-組胺酸等)之D-對映異構體。
GLP-1衍生物
本發明係關於GLP-1衍生物，其為GLP-1類似物之衍生物。如本文在GLP-1類似物之情形下所用之術語「衍生物(derivative)」意謂經化學修飾之GLP-1類似物，其中一或多個取代基已共價連接至GLP-1類似物。如本文所用之術語「取代基(substituent)」意謂置換氫原子之化學部分或基團。衍生物可包含選自醯胺、碳水化合物、烷基、醯基、酯及其類似物之一或多個修飾。
在一些具體實例中，取代基在該多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處經由胺基酸殘基共價連接。在一些具體實例中，取代基在該多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處連接於離胺酸殘基之ε位置。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端，且其中該取代基在由式I胺基酸序列組成之多肽中選自由22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者中連接於離胺酸殘基之ε位置。
如本文所用之術語「親脂性部分(lipophilic moiety)」意謂具有大於6個且小於30個碳原子之脂族或環狀烴部分，其中該烴部分可包含 額外取代基。
如本文所用之術語「帶負電部分(negatively charged moiety)」意謂可帶負電之化學部分，諸如(但不限於)胺基酸部分(例如，Glu、γ Glu、Asp或β-Asp、羧酸、磺酸或四唑部分)。帶負電部分之數目可在生理pH(pH 7.4)下測定。帶負電部分可為羧酸基。
在一些具體實例中，取代基在由式I胺基酸序列組成之多肽之選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的位置連接至胺基酸殘基。在一些具體實例中，取代基在由式I胺基酸序列組成之多肽中之位置34或位置35連接至胺基酸殘基。
在一些具體實例中，取代基在由式I胺基酸序列組成之多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的位置連接於離胺酸殘基之ε氮。在一些具體實例中，取代基在由式I胺基酸序列組成之多肽中之位置34及位置35的位置連接於離胺酸殘基之ε氮。
在一些具體實例中，取代基包含至少兩個帶負電部分。在一些具體實例中，取代基包含三個、四個或五個帶負電部分。在一些具體實例中，取代基包含三個或四個帶負電部分。在一些具體實例中，取代基包含兩個至十個帶負電部分。
在一些具體實例中，取代基非共價結合至白蛋白。
在一些具體實例中，取代基在生理pH，諸如pH 7.0-8.2、pH 7.0-7.7或pH 7.2-7.5或諸如pH 7.4下帶負電。
在一些具體實例中，取代基包含式II：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]， 其中Z1包含式IIa： 其中在式IIa中n為6-20，且符號*表示相鄰基團與氮之連接點；其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地不存在或為選自由Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr、Ado組成之群的胺基酸；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10一起包含至少兩個帶負電部分。
在一些具體實例中，取代基連接於胺基酸殘基之側鏈，諸如GLP-1衍生物之多肽中離胺酸殘基之ε位置。
在一些具體實例中，Z1由式IIa組成：
其中n為12至18範圍內之整數。在一些具體實例中，n在式IIa中為12、14、16或18。在一些具體實例中，n在式IIa中為16(亦即，Z1為17-羧基十七醯基)。
在一些具體實例中，在式II中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為連接子，其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之每一者獨立地為以下胺基酸殘基中任一者：Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr及/或Ado；或殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少兩者存在；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-一起包含至少兩個帶負電部分。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地由以下胺基酸殘基中任一者表示：Glu、γ Glu、Gly、Ser及/或Ado；或Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、 Z8、Z9及Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少兩者存在。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地由以下胺基酸殘基中任一者表示：γ Glu及/或Ado；或Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少兩者存在。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少三者存在。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少四者存在。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少五者存在。在一些具體實例中，Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10中之至少六者存在。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-選自由以下組成之群：γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-、γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-、γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-γ Glu-、γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-、γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-、γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-、γ Glu-γ Glu-γ Glu--Ado-Ado-、γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ Glu-、γ Glu-Ado-Ado-、γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-γ Glu-及Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γ Glu-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-。在一些具體實例中， Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-Ado-Ado-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-γ Glu-。在一些具體實例中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γ Glu-γ Glu-。
在一些具體實例中，親脂性部分(例如Z1)包含具有至少12個碳原子，諸如12-20個碳原子或14-18個碳原子或諸如16個碳原子之烷基。
在一些具體實例中，取代基共價連接至胺基酸側鏈，諸如離胺酸側鏈之氮原子。
在一些具體實例中，取代基選自由以下組成之群：
取代基可經由在該取代基之結構式中用波浪線標記之羰基共價連接至GLP-1衍生物之多肽，亦即由式I組成之胺基酸序列。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基 -4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18, Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-((17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17- 羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-羧基-2-[[(2S)-2-[[2-(17-羧基十七醯基胺基)乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基] 胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基] 胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
製備GLP-1類似物之衍生物
本發明衍生物可藉由下述方法製備。
SPPS通用方法
待使用之Fmoc保護之胺基酸衍生物可為如下建議之標準：由例如Anaspec、Bachem、Iris Biotech或NovabioChem供應之Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(BOC)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及Fmoc-Lys(Mtt)-OH或Fmoc-Lys(Alloc)-OH。3-(N-1-三苯甲基-咪唑-4-基)-丙酸用於併入Imp。可使用基於Fmoc之化學方法在來自Protein Technologies(Tucson,AZ 85714 U.S.A.)之Prelude固相肽合成器上進行SPPS。製備C端羧酸之適合樹脂為預負載有胺基酸之Wang樹脂，諸如Fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(低負載，0.35mmol/g)。在取代基連接至C端離胺酸之情況下，適合樹脂為預負載之Fmoc-Lys(Mtt)-Wang。製備C端肽醯胺之適合樹脂為H-Rink Amide-ChemMatrix樹脂(負載為例如0.52nmol/g)或Rink Amide AM聚苯乙烯樹脂(Novabiochem，負載為例如0.62mmol/g)或其類似物。用20%哌啶/NMP達成去除Fmoc保護基。藉由使用DIC/HOAt/三甲基吡啶或有或無三甲基吡啶之DIC/Oxyma Pure在有或無預活化之情況下進行肽偶合，或使用3-(二乙氧基磷醯氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBt)/DIPEA在偶合期間抑制例如His之差向異構。向樹脂中添加胺基酸/HOAt或胺基酸/Oxyma Pure溶液(0.3M/0.3M NMP，3-10倍莫耳過量)，隨後相同莫耳當量DIC(3M NMP)，隨後三甲基吡啶(3M NMP)。舉例而言，對於以下規模之反應，每次偶合可使用以下量之0.3M胺基酸/HOAt溶液：規模/mL，0.05mmol/1.5mL、0.10mmol/3.0mL、0.25mmol/7.5mL。
若使用Fmoc-Lys(Mtt)-OH，則可藉由以下來移除Mtt基團：用HFIP/DCM(75：25)洗滌樹脂(2×2min)，用DCM洗滌且將樹脂懸浮於HFIP/DCM(75：25)中(2×20min)，且隨後在可在離胺酸部分之ε位置引入取代基之前洗滌。
若使用Fmoc-Lys(Alloc)-OH，則可藉由在一或多種清除劑之組合，例如嗎啉(6.0當量)及/或二甲基硼烷複合物(18.0當量)存在下用Pd(PPh3)4(0.02當量)處理樹脂(30min)來移除Alloc基團。隨後在可在離胺酸部分之ε位置引入取代基之前分別用MeOH、NMP或DMF及異丙醇(isopropyl alcohol；IPA)洗滌樹脂。
合成Imp(脫胺基His(Trt)-OH)
可以三步驟程序由尿刊酸合成Imp(脫胺基His)，得到具有三苯甲基保護之Imp自由酸(脫胺基His(Trt)-OH)(參見以下方案)。
將鈀/碳(10%,150g,1.41mol)添加至尿刊酸(1，1.01kg，7.33mol)於MeOH(5.50L)、水(5.50L)及35%HCl(752mL，8.59mol)中之溶液中，且所得混合物在常壓下氫化4天。藉由1H NMR監測反應轉化率。在完成後過濾出催化劑，且將濾液蒸發至乾。將殘餘物再溶解於MeOH(7.00L)中，且添加HCl於MeOH(500mL)中之2.2M溶液，且在45℃下攪拌16小時。藉由蒸發至乾來移除溶劑。添加MeOH(10.0L)及HCl(47.0g)/MeOH(1.00L)，且在45℃下攪拌隔夜。將混合物蒸發至乾，得到呈灰白色固體狀之純3-(1H-咪唑-4-基)-丙酸甲酯鹽酸鹽(2)。產量：1.37kg(98%)。1H NMR(300MHz,MeOD-d 4)δ 7.40-7.28(m,10 H)；7.19-7.07(m,6 H)；6.55(s,1 H)；3.63(s,3 H)；2.94-2.83(m,2 H)；2.71-2.62(m,2 H)。
將三苯甲基氯(Trt-OH)(2.04Kg，7.33mol)添加至上述產物(2，1.37kg，7.20mol)於無水DCM(25.2L)中之溶液中，且添加Et3N(2.62L，18.7mol)。在23℃下攪拌混合物隔夜。用水(15.0L)洗滌所得溶液，再次用DCM(2.50L)萃取水相。合併之有機相用10%檸檬酸水溶液(10.0L)洗滌，且水相再次用DCM(2.50L)萃取。合併之有機相用水(10.0L)洗滌，且水相再次用DCM(2.50L)萃取。合併之有機相經無水硫酸鎂脫水且蒸發至乾，得到呈白色固體狀之3-(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)-丙酸甲酯(3)。
將NaOH(570g，14.3mol)於水(5.00L)中之溶液添加至上述酯(3)於THF(20.0L)中之溶液中；在23℃下攪拌所得混合物隔夜。 將檸檬酸水溶液(10%，15.0L)添加至殘餘物中，且混合物用DCM(3×5.00L)萃取。合併之有機萃取物用水(2×5.00L)洗滌，經無水硫酸鎂脫水且蒸發，獲得結晶物質。將殘餘物懸浮於DCM(2.50L)中，且添加環己烷(10.0L)。過濾固體，用環己烷(7.00L)洗滌。產物含有0.34%副產物，因此將固體懸浮於MeOH(20.0L)中且過濾。將固體空氣乾燥且再溶解於回流DCM(10.0L)中，且藉由蒸發移除溶劑。使固體均質化，得到呈白色粉末狀之標題產物(4)。產量：2679.2g(97%)。1H NMR光譜(300MHz,CDCl3)δ 10.49(bs,1 H)；7.48(s,1 H)；7.41-7.28(m,9 H)；7.18-7.05(m,6 H)；6.60(s,1 H)；2.93-2.81(m,2 H)；2.77-2.65(m,2 H)。LC-MS純度：100%(ELSD)。LC-MS Rt(Kinetex C18,4.6mm×50mm,MeCN/水20：80至100：0+0.1% FA)：2.82min。LC-MS m/z：383.2(M+H)+。熔點：190-191℃。UPLC純度：99.74%(214nm)。UPLC Rt(Acquity UPLC BEHC18,1.7um,2.1×150mm,40℃,MeCN/水05：95至100：0+0.05% TFA,6min.)：2.512min。內毒素水準：<0.06EU/mL(藉由鱟變形細胞溶菌液(Limulus Amebocyte Lysate)PYROGENT Plus測試使用1mg化合物於10% DMSO水溶液中之溶液估計)。
取代基之連接
可藉由如上文所述之Prelude肽合成器使用適當保護之構建塊，諸如上文所述之標準胺基酸、Fmoc-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸及Fmoc-Glu-OtBu以逐步程序引入取代基。可使用構建塊達成引入脂肪酸部分，諸如(但不限於)十八烷二酸單-第三丁基-酯。各偶合步驟後，可使用過量乙酸酐及三甲基吡啶(>10當量)將未反應之肽中間物封端。
各偶合步驟後，可使用過量乙酸酐及三甲基吡啶(>10當量) 將未反應之肽中間物封端。
在離胺酸之ε-氮上引入取代基係使用用Mtt(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)、Alloc(Fmoc-Lys(Alloc)-OH)或ivDde基團(Fmoc-Lys(ivDde)-OH)保護之離胺酸達成。在取代基中併入γ Glu部分可藉由與胺基酸Fmoc-Glu-OtBu偶合達成。
在取代基中引入各部分可使用延長之偶合時間(1×6小時)隨後用乙酸酐或者乙酸/DIC/HOAt/三甲基吡啶封端來達成。
自樹脂裂解
在合成後，用DCM洗滌樹脂，且藉由用TFA/TIPS/水(95/2.5/2.5)或TFA/1,2-乙二硫醇(1,2-ethanedithiol；EDT)/水(90/5/5)處理2-3小時隨後用二乙醚(diethyl ether；Et2O)或二異丙醚(diisopropyl ether；IPE)沈澱以自樹脂裂解肽。用所用溶劑洗滌沈澱物。
純化及定量
在60℃下將粗肽溶解於水與MeCN(諸如水/MeCN(4：1))或水/AcOH(1：1)之適合混合物中持續1小時，且藉由逆相製備型HPLC(Waters Deltaprep 4000或Gilson)在包含C8-矽膠或C18-矽膠之管柱上純化。用梯度增加之包含0.1% TFA之MeCN水溶液進行洗提。藉由分析型HPLC或UPLC檢查相關洗提份。將包含純靶肽之洗提份混合且在減壓下濃縮。可使用另一梯度(例如含有0.05M NH4HCO3)引入額外純化步驟。分析(HPLC、LCMS)所得溶液，且使用化學發光氮特異性HPLC偵測器(Antek 8060 HPLC-CLND)或藉由量測280nm下之UV吸收來定量產物(亦即衍生物)。將產物分配至玻璃小瓶中。用Millipore玻璃纖維預濾器為小瓶加蓋。 冷凍乾燥得到呈白色固體狀之肽三氟乙酸鹽。
肽三氟乙酸鹽可藉由例如用NaOAc/MeCN進行管柱離子交換而變為鈉鹽。或者，肽三氟乙酸鹽可藉由例如以含有0.05M NH4HCO3之梯度管柱層析，隨後冷凍乾燥且懸浮於水中而變為銨鹽。藉由添加1M NaOH(根據鹼性/酸性殘基之當量)將肽變為鈉鹽，使懸浮液變澄清。最後，肽鈉鹽可藉由冷凍乾燥分離。
中間產物
在一些具體實例中，本發明係關於一種中間產物，其呈選自由以下組成之群的GLP-1類似物形式：[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯 胺；[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺； [Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；及[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些具體實例中，本發明係關於一種中間產物，其呈選自由以下組成之群的GLP-1類似物形式：[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽； [Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽； [Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；及[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之GLP-1衍生物可藉由以下逐步合成方法製備，其包含(i)製備中間物GLP-1類似物，隨後(ii)連接取代基。此方法之步驟(i)可使用如實驗部分中所述之標準固相合成使用受保護胺基酸達成；自樹脂裂解後，GLP-1類似物可如本文實驗部分中所述使用製備型HPLC進行純化，得到中間產物。或者，此方法之步驟(i)，即製備中間產物，可使用如WO2009/083549中所述之半重組合成進行。此方法之步驟(ii)，亦即使取代基連接於中間產物，得到最終產物，以及製備取代基自身，可使用WO2009/083549中所述之方法達成。
醫藥學上可接受之鹽、醯胺或酯
本發明之衍生物或中間產物可呈醫藥學上可接受之鹽、醯胺或酯形式。鹽例如藉由鹼與酸之間的化學反應形成，例如：2NH3+H2SO4→ (NH4)2SO4。鹽可為鹼性鹽、酸性鹽，或其可既不為鹼性鹽亦不為酸性鹽(亦即，中性鹽)。在水中，鹼性鹽產生氫氧離子且酸性鹽產生水合氫離子。
本發明之衍生物或中間產物之鹽可藉由在陰離子基團或陽離子基團之間分別添加之陽離子或陰離子來形成。此等基團可位於肽部分及/或本發明之衍生物或中間產物之取代基。
本發明之衍生物或中間產物之陰離子基團之非限制性實例包括取代基(若存在)以及肽部分中的自由羧酸基。肽部分通常包括內部酸性胺基酸殘基(諸如Asp及Glu)處之自由羧酸基。
肽部分中之陽離子基團之非限制性實例包括N-端(若存在)處之自由胺基以及內部鹼性胺基酸殘基(諸如His、Arg及Lys)之任何自由胺基。
本發明之衍生物或中間產物之酯可例如藉由自由羧酸基與醇或酚反應形成，導致至少一個羥基經烷氧基或芳氧基置換。酯形成可涉及在肽之C端處的自由羧基，及/或取代基中之任何自由羧基。
本發明之類似物或衍生物之醯胺可例如藉由自由羧酸基與胺或經取代之胺反應或藉由自由或經取代之胺基與羧酸反應來形成。
醯胺形成可涉及肽之C端處的自由羧基、取代基中之任何自由羧基、肽之N端處的自由胺基及/或肽及/或取代基中之肽的任何自由或經取代之胺基。
在本發明上下文中，術語「醫藥學上可接受之鹽」意欲指示對患者無害之鹽。此類鹽包括醫藥學上可接受之酸加成鹽、醫藥學上可接受之金屬鹽、銨及烷基化銨鹽。酸加成鹽包括無機酸以及有機酸之鹽。
在一些具體實例中，肽呈醫藥學上可接受之鹽形式。在一些具體實例中，肽呈醫藥學上可接受之醯胺形式，較佳在肽之C端具有醯胺基。在一些具體實例中，肽呈醫藥學上可接受之酯形式。
功能特性
本發明之GLP-1衍生物能夠結合及活化GLP-1受體及升糖素受體。換言之，本發明之GLP-1衍生物為升糖素受體促效劑及GLP-1受體促效劑，在本文中亦稱為「GLP-1/升糖素受體共促效劑」。在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物為GLP-1及升糖素受體促效劑，如由其對兩個受體之效力所反映。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50值比對升糖素受體之EC50值更低。
此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物化學穩定、物理穩定及可溶的，例如GLP-1衍生物之化學穩定性、物理穩定性及溶解性使得GLP-1衍生物在液體醫藥組成物中能夠有足夠儲存穩定性。
此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物例如與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)或人類升糖素相比對升糖素受體具有良好受體結合及效力。
此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物例如與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)或人類升糖素相比對GLP-1受體具有良好受體結合及效力。
此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物具有改進之藥物動力學特性。
此外，或者，在一些具體實例中，GLP-1衍生物例如與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)或人類升糖素相比為拖延性衍生物。
受體結合及效力
本發明衍生物為GLP-1/升糖素受體共促效劑，亦即GLP-1受體促效劑及升糖素受體促效劑。
受體促效劑可定義為與受體結合且引發天然配位體之典型反應的肽(例如，GLP-1衍生物)。因此，「GLP-1受體促效劑」例如可定義為能夠與人類GLP-1受體結合且能夠使其完全或部分活化之化合物。類似地，如本文所用之術語「升糖素受體促效劑」可定義為能夠與升糖素受體結合且能夠使其完全或部分活化之化合物。天然配位體之典型反應可為胞內信號轉導路徑之完全或部分活化，諸如腺苷酸環化酶活化及胞內cAMP水準提高，如此項技術中已知介導生理作用。舉例而言，術語「GLP-1受體活性(GLP-1 receptor activity)」係指與GLP-1受體結合且起始信號轉導路徑之能力，如此項技術中已知導致促胰島素作用或其他生理作用。
可使用本文所述之分析(I)(a)或分析(II)(a)測試本發明之衍生物或類似物之GLP-1受體活性，或使用本文所述之分析(I)(b)或分析(II)(b)測試其升糖素受體活性。在一些具體實例中，如本文所用之術語「受體活性(receptor activity)」係指受體促效劑之效果。
在一些具體實例中，如本文所用之術語「升糖素受體(glucagon receptor)」意謂人類升糖素受體。在一些具體實例中，如本文所用之術語「GLP-1受體(GLP-1 receptor)」意謂人類GLP-1受體。
生物活性-試管內親和力及效力
在一些具體實例中，如本文所用之術語「親和力(affinity)」或「受體結合(receptor binding)」係指試管內受體結合親和力，亦即GLP-1受體結合親和力分析及升糖素受體結合親和力分析中之效能，更特定言之，結合人類GLP-1受體及人類升糖素受體之能力。人類GLP-1受體之結合親和力可在結合分析中例如在來自穩定表現人類GLP-1受體之BHK細胞系的膜上量測。放射性標記之GLP-1與受體結合且可由化合物(例如，GLP-1衍生物)競爭性地移置。可藉由添加與細胞膜結合之閃爍近接分析(SPA)珠粒來測定其餘結合放射性配位體，且當放射性接近珠粒時，其產生光，量測光且其為化合物之試管內結合親和力的量測。測定結合親和力之分析之一個非限制性實例描述於本文分析(II)中。人類升糖素受體之結合親和力可在結合分析中例如在來自穩定表現人類升糖素受體之BHK細胞系的膜上量測。放射性標記之升糖素與受體結合且可由化合物(例如，GLP-1衍生物)競爭性地移置。可藉由添加與細胞膜結合之閃爍近接分析(SPA)珠粒來測定其餘結合放射性配位體，且當放射性接近珠粒時，其產生光，量測光且其為化合物之試管內結合親和力的量測。
術語半最大抑制濃度(IC50)一般係指參考劑量反應曲線，移置放射性配位體結合之特異性結合的50%之競爭化合物對應於基線與最大值之間的一半之濃度。IC50用作化合物之結合親和力的量測且為觀測到其最大結合之50%時的濃度。
可如上文所述測定本發明之GLP-1衍生物之試管內結合，且測定所述肽之IC50。IC50值愈低，結合親和力愈佳。
在一些具體實例中，對應於100nM或低於100nM、更佳低 於10nM、甚至更佳低於5nM或最佳低於1nM之IC50，GLP-1衍生物具有使用本文分析(II)(a)中所述之方法測定的對GLP-1受體之試管內結合親和力。
對應於100nM或低於100nM或低於50nM或低於10nM之IC50，GLP-1衍生物可具有使用本文分析(II)(b)中所述之方法測定的對升糖素受體之試管內結合親和力。
在一些具體實例中，效力及/或活性係指試管內效力，亦即功能性GLP-1受體分析及升糖素受體分析中之效能，更特定言之使人類GLP-1受體及人類升糖素受體活化之能力。人類GLP-1受體之反應可在報導基因分析中，例如在穩定表現人類GLP-1受體且包含與啟動子偶合之cAMP反應元素(CRE)之DNA及螢火蟲螢光素酶(CRE螢光素酶)之基因的BHK細胞系中量測。當由於GLP-1受體之活化產生cAMP時，此轉而導致螢光素酶被表現。螢光素酶表現可藉由添加螢光素測定，其藉由酶轉化為氧化螢光素且產生生物發光，量測生物發光且其為試管內受體效力之量測。測定受體效力之分析之一個非限制性實例描述於本文分析(I)中。人類升糖素受體之反應可在報導基因分析中，例如在穩定表現人類升糖素受體且包含與啟動子偶合之cAMP反應元素(CRE)之DNA及螢火蟲螢光素酶(CRE螢光素酶)之基因的BHK細胞系中量測。當由於升糖素受體之活化產生cAMP時，此轉而導致螢光素酶被表現。螢光素酶表現可藉由添加螢光素測定，其藉由酶轉化為氧化螢光素且產生生物發光，量測生物發光且其為試管內受體效力之量測。
術語半最大有效濃度(EC50)一般係指參考劑量反應曲線在 基線與最大值之間的一半誘發反應之濃度。EC50用作化合物(例如，GLP-1衍生物)之效力的量測且為觀測到其最大效果之50%時的濃度。
可如上文所述測定本發明之GLP-1衍生物之試管內受體效力，且測定所述肽之EC50。EC50值愈低，效力愈佳。
GLP-1/升糖素受體共促效劑
GLP-1/升糖素受體共促效劑可定義為能夠使GLP-1受體及升糖素受體活化之肽。本發明衍生物對GLP-1受體之EC50低於1nM，且對升糖素受體之EC50低於10nM。在一些具體實例中，本發明衍生物對GLP-1受體之EC50低於100pM且對升糖素受體之EC50低於100pM；或對GLP-1受體之EC50低於50pM且對升糖素受體之EC50低於100pM；或對GLP-1受體之EC50低於10pM且對升糖素受體之EC50低於50pM。EC50可如本文分析(I)中所述測定。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50值比對升糖素受體之EC50值更低。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在100至250範圍內，諸如在50至100範圍內，在20至50範圍內，在10至20範圍內，或在1至10範圍內。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在50至100範圍內。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在20至50範圍內。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在10至20範圍內。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體 之EC50之間的比率在1至10範圍內。在一些具體實例中，對GLP-1受體之EC50係根據本文所述之分析(I)(a)測定。在一些具體實例中，對升糖素受體之EC50係根據本文所述之分析(I)(b)測定。
GLP-1衍生物對升糖素受體之效力(EC50)可低於10nM或低於1nM或100pM或低於10pM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<10nM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<1nM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<100pM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<10pM。
本發明之GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50可低於1nM或低於100pM或低於50pM或低於10pM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50低於100pM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50低於50pM。在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50低於10pM。
本發明之GLP-1衍生物對GLP-1受體之效力(亦即EC50)可根據本文所述之分析(I)(a)測定。本發明之GLP-1衍生物對升糖素受體之效力(亦即EC50)可根據本文所述之分析(I)(b)測定。
本發明衍生物對GLP-1受體之IC50低於35nM且對升糖素受體之IC50低於150nM。IC50可如本文分析(II)中所述測定。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物對GLP-1受體之IC50值比對升糖素受體之IC50值更低。在一些具體實例中，GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在1至5範圍內，諸如在5至10範圍內，在10至15範圍內，在15至25範圍內；或諸如在25至100 範圍內，或高於100。
生物活性-活體內藥理學
在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物在活體內有效，其可如此項技術中已知在任何適合動物模型中以及在臨床試驗中確定。
飲食誘導之肥胖(DIO)小鼠為適合動物模型之一個實例，且可在此模型中之亞慢性給藥期間評估對體重、食物攝入及葡萄糖耐受性之影響。可在此類小鼠中活體內測定對體重及血糖之影響。可藉由單一殼體動物及每日消耗之稱重食物評估食物攝入。此模型亦可用於藉由進行口服或腹膜內葡萄糖耐受性測試(OGTT或IPGTT)評估對葡萄糖耐受性之影響。此等測試藉由向半空腹動物經口或經腹膜內投予葡萄糖負荷及隨後高達三小時血糖量測來進行。
藥物動力學特徵
本發明之GLP-1衍生物例如與人類GLP-1或人類升糖素相比可具有改進之藥物動力學特性，諸如終半衰期增加。較佳地，本發明之GLP-1衍生物具有適用於每日投予一次或少於一次之藥物動力學特性。
可在藥物動力學(PK)研究中適當地活體內測定本發明之GLP-1衍生物之藥物動力學特性。進行此類研究以評估如何在體內吸收、分佈及消除醫藥化合物，及此等過程如何隨時間推移影響化合物於體內之濃度。
在藥物研發之發現及臨床前期中，諸如小鼠、大鼠、猴、狗或豬之動物模型可用於進行此特性化。此等模型中之任一者可用於測試本發明之GLP-1衍生物之藥物動力學特性。
在此類研究中，動物典型地經靜脈內(i.v.)、經皮下(s.c.)或經口(p.o.)投予相關醫藥組成物形式之單劑藥物。在給藥後預定義時間點抽取血液樣品，且藉由相關定量分析來分析樣品之藥物濃度。基於此等量測，標繪研究之化合物的時間-血漿濃度特徵且進行資料之所謂的非室藥物動力學分析。
對於大部分化合物，當以半對數曲線繪製時，血漿-濃度特徵之末端部分將為線性的，反映在初始吸收及分佈之後以恆定分率自身體移除藥物。速率(λ Z或λz)等於減去曲線之末端部分的斜率。亦可根據此速率將終半衰期計算為t½=ln(2)/λz(參見例如Johan Gabrielsson及Daniel Weiner：Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis.Concepts & Applications，第3版，Swedish Pharmaceutical Press,Stockholm(2000))。
可在經靜脈內投予之後測定清除率且定義為劑量(D)除以血漿濃度相對於時間特徵之曲線下面積(AUC)(Rowland,M及Tozer TN：Clinical Pharmacokinetics：Concepts and Applications，第3版，1995 Williams Wilkins)。
終半衰期及/或清除率之估計與給藥方案之評估相關且為藥物研發、新藥物化合物評估中的重要參數。
藥物動力學特徵-大鼠中之活體內半衰期
GLP-1衍生物之藥物動力學特性可確定為經靜脈內及經皮下投予後大鼠中之活體內終半衰期(T½)。在一些具體實例中，GLP-1衍生物之終半衰期為至少1小時，較佳至少3小時，較佳至少4小時，甚至更佳至少5小時或最佳至少6小時。
藥物動力學特徵-小鼠中之活體內半衰期
本發明之GLP-1衍生物與人類GLP-1或人類升糖素相比可具有改進之藥物動力學特性。較佳地，本發明之GLP-1衍生物具有適用於每日投予一次或少於一次之藥物動力學特性。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物之藥物動力學特性可確定為經靜脈內及經皮下投予後小鼠中之活體內終半衰期(T½)。在一些具體實例中，GLP-1衍生物之終半衰期為至少1小時，較佳至少3小時，較佳至少4小時，甚至更佳至少5小時或最佳至少6小時。測定小鼠經皮下投予GLP-1衍生物後之終半衰期之適合分析描述於本文分析(IV)中。
藥物動力學特徵-小型豬中之活體內半衰期
本發明之GLP-1衍生物可具有改進(相比於hGLP-1)且較佳適用於每日一次或每週一次投予之藥物動力學特性。在一些具體實例中，GLP-1衍生物之藥物動力學特性可確定為在經靜脈內投予之後小型豬中之活體內終半衰期(T½)，例如如下文所述。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物在小型豬中之終半衰期為至少5小時，較佳至少10小時，甚至更佳至少15小時或最佳至少20小時。
此研究之目的為確定GLP-1衍生物在經靜脈內投予至小型豬之後之活體內藥物動力學特性。此在藥物動力學(PK)研究中進行，其中除了其他參數外，確定所述衍生物之終半衰期及消除率。終半衰期增加及消除率降低意謂研究之化合物自身體較慢消除。對於GLP-1衍生物，此需要藥理作用之持續時間延長。
將大約7-14月齡且稱重為大約16-35kg之獲自Ellegaard Göttingen小型豬(Dalmose,Denmark)之雄性Göttingen小型豬用於研究。將小型豬單獨(具有永久導管之豬)或以小組圈養，且每日限制性地餵食SDS小型豬飲食(Special Diets Services,Essex,UK)一次或兩次。
在一些研究中，在適應至少2週後之各動物中尾側腔靜脈或顱側腔靜脈植入兩個永久中心靜脈導管。使動物在手術之後恢復1週，且隨後用於藉由連續GLP-1衍生物給藥之間的適合洗脫期進行重複藥物動力學研究。在其他研究中，使動物適應1週，之後其用於藉由連續GLP-1衍生物給藥之間的適合洗脫期進行重複藥物動力學研究。在各給藥時刻，此等豬在一個耳靜脈配備有維氟隆(venflon)，經由其給予衍生物。在頸靜脈或顱側腔靜脈中藉由靜脈穿刺進行血液取樣。
動物在給藥前大約18h及給藥後0至4h未空腹或空腹，但在整個時段期間隨意進食水。
GLP-1衍生物通常溶解於50mM磷酸鈉、145mM氯化鈉、0.05%吐溫(tween)80(pH 7.4)中以達到通常20-60nmol/ml之濃度。經由一個導管或經由維氟隆給予化合物之靜脈內注射液(體積對應於通常2-3nmol/kg，例如0.1ml/kg)，且在預定義時間點取樣血液直至給藥後13天(較佳經由另一導管或藉由靜脈穿刺)。將血液樣品(例如0.8ml)收集於含EDTA緩衝劑(8mM)之管(有時添加抑肽酶500KIU/ml血液)中，且隨後在4℃及1942G下離心10分鐘。在乾冰上用移液管將血漿移至細管，且保持在-20℃下直至使用如ELISA或LC-MS之適當定量分析來分析各別GLP-1衍生物之血漿濃度。
基於此等量測，標繪研究之化合物的時間-血漿濃度特徵， 且在WinNonlin 5.0版或Phoenix 6.2版(Pharsight Inc.,Mountain View,CA,USA)或其他相關之PK分析軟體中進行資料之所謂的非室藥物動力學分析。對於大部分化合物，當以半對數曲線繪製時，血漿-濃度特徵的末端部分將為線性的，反映在初始分佈之後以恆定分率自身體移除藥物。速率(λ Z或λ z)等於減去曲線之末端部分的斜率。亦可根據此速率將終半衰期計算為t½=ln(2)/λ z(參見例如Johan Gabrielsson及Daniel Weiner：Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis.Concepts & Applications,第3版，Swedish Pharmaceutical Press,Stockholm(2000))。清除率定義為劑量(D)除以血漿濃度相對於時間特徵之曲線下面積(AUC)(Rowland,M及Tozer TN：Clinical Pharmacokinetics：Concepts and Applications，第3版，1995Williams Wilkins)。
當在如上文所述之微型豬中測試根據本發明之化合物時，觀測到顯著延長之活體內半衰期-正如此類型之衍生GLP-1化合物所預期一樣。
物理穩定性
肽可經歷各種物理狀態變化。肽可由於在某組條件下缺乏溶解性，例如由於pH變化所致的中和胺基酸側鏈上之相斥電荷而沈澱。另一物理變化為形成澱粉樣原纖維，其包括構形變化為富含β片之大分子纖維結構。其他大分子結構可藉由由於聚集產生之較小系統結構重複序列形成。在後兩種情況下，可最終觀測到呈沈澱物狀之肽物質。實際上，此等物理變化可在一定程度上相關，例如溶解性與pH值及原纖維形成相關[Schmittschmitt及Scholtz,Protein Science,12,10,2374-2378,2003]。此外，極難 僅藉由目視檢查區分此等現象，因此此等變化之結果通常藉由通用術語「沈澱物」描述。
物理狀態之其他變化包括吸附於表面，從而觀測到溶液之肽含量損失；及液體溶液變為凝膠的變化。儘管如此，觀測到沈澱物(不考慮其性質)或形成凝膠在藥物可注射劑時在其儲存及使用時間期間為一個問題。
衍生物或組成物之如本文所用之術語「物理穩定性(physical stability)」係指肽及/或蛋白質(亦即，本文中為GLP-1衍生物)由於使肽及/或蛋白質暴露於熱機械應力及/或與去穩定化之界面及表面(諸如疏水性表面及界面)相互作用而形成肽及/或蛋白質之生物不活化及/或不溶性聚集體的傾向。水性肽及/或蛋白質組成物之物理穩定性藉助於在使適合容器(例如筒或小瓶)中所填充之組成物在不同溫度下暴露於機械/物理應力(例如攪拌)各個時間段後目視檢查及/或濁度量測來評估。組成物之目視檢查在強聚焦光中在深色背景下進行。組成物之濁度藉由目測評分特性化，其將濁度分為0至3之等級(展示無濁度之組成物對應於目測評分0，且白天展示目測濁度之組成物對應於目測評分3)。組成物在其在白天展示目測濁度時可關於蛋白質聚集歸類為物理不穩定。或者，可藉由熟習此項技術者熟知之簡單濁度量測來評估組成物之濁度。水性肽及/或蛋白質組成物之物理穩定性亦可藉由使用肽及/或蛋白質之構形狀態之光譜試劑或探針評估。探針較佳為優先結合於肽及/或蛋白質之非天然構像的小分子。肽及/或蛋白質結構之小分子光譜探針的一個實例為硫代黃素T。硫代黃素T為一種廣泛用於偵測澱粉樣原纖維之螢光染料。在原纖維存在下，且可能亦存在其他 肽及/或蛋白質組態，硫代黃素T在結合於原纖維肽及/或蛋白質形式時在約450nm下產生新激發最大值，且在約482nm下之發射增強。未結合硫代黃素T在此等波長下基本上為非螢光的。
其他小分子可用作肽及/或蛋白質結構自天然狀態向非天然狀態之變化的探針。舉例而言，優先結合於肽及/或蛋白質之暴露之疏水片的「疏水片」探針。疏水片一般埋入天然狀態肽及/或蛋白質之三級結構內，但隨著肽及/或蛋白質開始展開或變性而變得暴露。此等小分子光譜探針之實例為芳族疏水染料，諸如蒽、吖啶、啡啉或其類似物。
衍生物之物理穩定性可藉由本文所述之分析(III)(亦即ThT原纖維化分析)中之回收率及/或滯後時間來測定。在一些具體實例中，在本文所述之分析(III)中，物理穩定衍生物具有超過70%回收率及/或超過7小時滯後時間。
在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析(諸如本文所述之分析(III))中，衍生物具有超過70%回收率。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析(諸如本文所述之分析(III))中，衍生物具有超過90%(諸如超過95%或超過98%)回收率。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析(諸如本文所述之分析(III))中，衍生物具有約100%回收率。
在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析(諸如本文所述之分析(III))中，衍生物具有超過7小時(諸如超過20小時或超過45小時)滯後時間。
在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1衍生物具有超過70%回收率。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1 衍生物具有超過90%回收率。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1衍生物具有約100%回收率。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1衍生物具有超過7小時滯後時間。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1衍生物具有超過20小時滯後時間。在一些具體實例中，在ThT原纖維化分析中，GLP-1衍生物具有45小時滯後時間或更長。在一些具體實例中，ThT原纖維化分析為本文所述之分析(III)。
化學穩定性
術語「化學穩定性(chemical stability)」及「化學穩定(chemically stable)」在本文中關於衍生物或組成物使用時係指肽結構中導致形成具有潛在較小生物效力及/或潛在增加免疫原性特性之化學降解產物之化學共價變化。視天然肽之類型及性質及肽所暴露之環境而定，可形成各種化學降解產物。化學降解之消除很可能不能完全避免，且通常在長期儲存期間可見增加量之化學降解產物。大多數肽易於脫醯胺，脫醯胺為如下過程，其中麩醯胺醯基或天冬醯胺醯基殘基中之側鏈醯胺基團水解形成自由羧酸。其他降解路徑包括形成高分子量轉型產物，其中兩個或大於兩個肽分子經由轉醯胺及/或二硫鍵相互作用彼此共價結合，導致共價結合二聚物、寡聚物及聚合物降解產物形成(Stability of Protein Pharmaceuticals,Ahern.T.J.及Manning M.C.,Plenum Press,New York 1992)。氧化(例如甲硫胺酸殘基之氧化)可作為化學降解之另一變化形式提及。包含天冬醯胺或天冬胺酸之肽可易於經由形成中間物天冬醯亞胺異構化，產生相應異天冬胺酸異構體，其中可形成D-異構體及L-異構體。天冬醯亞胺中間物亦可導致D-天冬胺酸異構體形成。(Formulation Consideration for Proteins Susceptible to Asparagine Deamidation and Aspartate Isomerization,Wakankar及Borchardt,Journal of Pharmaceutical Sciences,2006，第95卷，第11期，第2321頁)。最後，肽亦可經歷水解裂解，其中肽片段或單一胺基酸藉由肽鍵水解而裂解。
可藉由在暴露於不同環境條件後的多個時間點量測化學降解產物之量(通常可藉由例如提高溫度加速降解產物形成)來評估組成物之化學穩定性。各個別降解產物之量通常藉由視分子大小及/或電荷而定使用各種層析技術(例如，SE-HPLC及/或RP-UPLC)分離降解產物來測定。
因此，如上文所概述，「穩定組成物(stabilized composition)」係指具有增加之物理穩定性、增加之化學穩定性或增加之物理及化學穩定性的組成物。一般而言，組成物必須在使用及儲存(按照建議之使用及儲存條件)期間穩定直至達到過期日期。
衍生物之化學穩定性可藉由測定本文所述之分析(V)中的化學降解來量測。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，衍生物具有小於14%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於13%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於12%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於10%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於9%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於7%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於5%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於3%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1衍生物具有小於2%降解。在一些具體實例中，在化學穩定性分析中，GLP-1 衍生物具有小於1%降解。在一些具體實例中，化學穩定衍生物之化學降解小於5%，諸如小於4%、小於3%或小於2%，其中該化學降解可藉由本文所述之分析(V)測定。
溶解性
本發明之GLP-1衍生物可為可溶的，且例如其溶解性為至少0.1mmol/l，諸如至少0.2mmol/l、至少0.5mmol/l或至少2mmol/l。本發明之GLP-1衍生物可為可溶的，且例如其例如在10mM磷酸鹽水溶液中之溶解性為至少4mmol/l，諸如至少8mmol/l、至少10mmol/l或至少15mmol/l。
本發明之GLP-1衍生物可在pH 7.0-8.2(諸如pH 7.0-7.7或pH 7.2-7.5)之pH範圍內可溶或在pH 7.4下可溶，例如可溶於10mM磷酸鹽水溶液。特定言之，本發明之GLP-1衍生物可在pH 7.0-8.2之pH範圍內可溶，且例如在10mM磷酸鹽水溶液中之溶解性為至少0.1mmol/l溶解性。
在一些具體實例中，GLP-1衍生物之溶解性為在室溫下，例如20-25℃。在一些具體實例中，GLP-1衍生物之溶解性為在低溫下，例如4-10℃、4-8℃或4-5℃。
在本發明上下文中，若不另外陳述，則術語「可溶(soluble)」、「溶解性(solubility)」、「可溶於水溶液(soluble in aqueous solution)」、「水溶解性(aqueous solubility)」、「水可溶(water soluble/water-soluble)」、「水溶性(water solubility/water-solubility)」係指化合物於水或鹽水溶液或水性緩衝劑溶液(例如，10mM磷酸鹽溶液)中或包含其他化合物之水溶液中且例如在室溫下的溶解性。可使用以下分析評估溶解性：
pH依賴性溶解性分析
肽及蛋白質之溶解性視溶液pH而定。蛋白質或肽通常在或接近其等電點(pI)下沈澱，其淨電荷在等電點下為零。蛋白質及肽在低pH(亦即低於pI)下典型地帶正電，其在高於pI之pH下帶負電。
若治療性肽在既定pH下可溶於足夠濃度，則其宜適用於調配穩定藥品及例如藉由皮下注射向患者投予藥品。
如所述量測溶解性相對於pH曲線：製備調配物或肽水溶液，且藉由添加HCl及NaOH將等分試樣調節至所要範圍內之pH值。此等樣品在室溫下保持平衡2-4天。隨後使樣品離心。取出各樣品之小等分試樣用於逆向HPLC分析來測定溶液中蛋白質之濃度。在離心之後量測各樣品之pH，且相對於所量測之pH描繪各蛋白質之濃度。
DPP-IV穩定性
在一些具體實例中，GLP-1衍生物為DPPIV保護之化合物。在一些具體實例中，GLP-1衍生物為DPPIV穩定化合物。
可使用以下分析確定DPP-IV穩定性：在添加0.005%吐溫(Tween)20之HEPES緩衝劑中在37℃下一式兩份地將10μM肽與DPP-IV(2μg/ml)一起培育。在實驗中，人類GLP-1用作陽性對照組。在3min、15min、30min、60min、120min及240min採集樣品之等分試樣，且添加三體積乙醇來停止反應。藉由LC-MS分析母肽之樣品。根據第一級動力學標繪資料，且穩定性報導為半衰期。
組合
在一些具體實例中，本發明係關於本發明之GLP-1衍生物 與一或多種額外治療活性化合物(諸如GLP-1化合物)或胰島素化合物之組合。在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物與GLP-1化合物組合。在一些具體實例中，本發明之GLP-1衍生物與胰島素化合物組合。
如本文所用，「GLP-1化合物」為能夠使GLP-1受體而非例如升糖素受體具有活性之化合物。
如本文所用，「胰島素化合物」為能夠使胰島素受體具有活性之化合物。
在一些具體實例中，該組合之GLP-1化合物選自由以下組成之群：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][脫胺基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)： N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺 基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)： 及其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、烷基或酯。
在一些具體實例中，該組合之胰島素化合物為：N-ε-B29-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]desB30人類胰島素：
醫藥組成物
在一些具體實例中，本發明係關於一種醫藥組成物，其包含本發明衍生物及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。在一些具體實例中，組成物適合於非經腸投予，諸如皮下(SC)、肌肉內(IM)或靜脈內(IV)投予。如本文所用之術語「醫藥組成物(pharmaceutical composition)」意謂包含活性化合物或其鹽連同醫藥賦形劑，諸如緩衝劑、防腐劑及視情況張力改質劑及/或穩定劑之產物。因此，醫藥組成物亦此項技術中已知為醫藥調配物。術語「醫藥組成物」、「組成物」及「調配物」在本文中可互換使用。
包含本發明衍生物之醫藥組成物可藉由習知技術製備，例如如Remington's Pharmaceutical Sciences,1985或Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995中所述。
在一些具體實例中，本發明係關於一種包含本發明衍生物之醫藥組成物，其中該GLP-1衍生物以約0.01mg/mL至約25mg/mL，諸如約0.05mg/mL至約5mg/mL及約0.1mg/mL至約2mg/mL之濃度存在，且其中該組成物之pH為2.0至10.0。醫藥組成物可包含本發明衍生物，其中該GLP-1衍生物以約0.01mg/mL至約50mg/mL之濃度存在，且其中該組成物之pH為2.0至10.0。
在一些具體實例中，醫藥組成物包含本發明衍生物之水溶液及緩衝劑，其中該GLP-1衍生物以0.01mg/mL或高於0.01mg/mL之濃度存在，且其中該組成物之pH為約2.0至約10.0。在一些具體實例中，醫藥組成物包含本發明衍生物之水溶液及緩衝劑，其中該GLP-1衍生物以0.01mg/mL或高於0.01mg/mL之濃度存在，且其中該組成物之pH為約6.5至約 8.5。
在一些具體實例中，本發明組成物之pH為約2.0至約10.0。在一些具體實例中，該組成物之pH為約6.5至約8.5。在一些具體實例中，該組成物之pH為約7.0至約8.5，諸如約7.2至約8.2。
組成物可進一步包含緩衝劑系統、防腐劑、等張劑、螯合劑、穩定劑及界面活性劑。在一些具體實例中，醫藥組成物為水性組成物，亦即包含水之組成物。此類組成物典型地為溶液或懸浮液。在本發明之一些具體實例中，醫藥組成物為水溶液。術語「水性組成物(aqueous composition)」定義為包含至少50% w/w水之組成物。同樣，術語「水溶液(aqueous solution)」定義為包含至少50% w/w水之溶液。在一些具體實例中，組成物包含非水性有機溶劑。
在一些具體實例中，醫藥組成物為冷凍乾燥組成物，在使用前例如由醫師或患者向其中添加溶劑及/或稀釋劑。
在一些具體實例中，醫藥組成物為一種無需任何預先溶解之即用型乾燥組成物(例如冷凍乾燥或噴霧乾燥)。
在一些具體實例中，本發明係關於一種組成物，其包含本發明衍生物及一或多種其他活性成分，諸如GLP-1、胰島素或其類似物及/或衍生物。在一些具體實例中，本發明係關於一種組成物，其包含本發明衍生物及GLP-1或其類似物及/或衍生物。在一些具體實例中，本發明係關於一種組成物，其包含本發明衍生物及胰島素或其類似物及/或衍生物。包含本發明衍生物與一或多種其他活性成分之組合的組成物可稱為「共調配物」。在一些具體實例中，此類共調配物為物理穩定及/或化學穩定組成物。
本發明衍生物可在中性pH下可溶之事實可允許與胰島素共調配，且使血糖水準更穩定且使低血糖發作次數減少，以及糖尿病相關併發症之風險降低。
如本文所用之術語「賦形劑(excipient)」意謂通常添加至醫藥組成物中之化合物，例如緩衝劑、張力劑、防腐劑及其類似物。
在一些具體實例中，醫藥組成物進一步包含一或多種額外治療活性化合物或物質。在一些具體實例中，額外治療活性化合物為GLP-1化合物或胰島素化合物。在一些具體實例中，額外治療活性化合物為GLP-1化合物。在一些具體實例中，額外治療活性化合物為胰島素化合物。在一些具體實例中，GLP-1化合物選自由以下組成之群：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37) N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][脫胺基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37) N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37) N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37) 及其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、烷基或酯。
在一些具體實例中，胰島素化合物為N-ε-B29-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]desB30人類胰島素
在一些具體實例中，醫藥組成物在單位劑型中包含約0.01mg至約1000mg，諸如約0.1mg至約500mg，約0.5mg至約5mg，例如約0.5mg至約200mg之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物。
在一些具體實例中，醫藥組成物適合於非經腸投予。
藥物投予
本發明衍生物可非經腸投予患者。衍生物之投予途徑可為肌肉內(IM)、皮下(SC)或靜脈內(IV)。建議投予患者之包含本發明衍生物之組成物之劑量由醫師選擇。
非經腸投予可藉助於注射器(視情況筆樣注射器)藉由皮下、肌肉內、腹膜內或靜脈內注射進行。在一些具體實例中，包含本發明衍生物之組成物可用於供投予升糖素用之即用型筆裝置。或者，非經腸投予可藉助於輸注泵進行。在一些具體實例中，包含本發明衍生物之組成物可用於供投予升糖素用之泵。非經腸投予可為經鼻投予。作為另一選擇，包含本發明衍生物之升糖素製劑亦可適合於經皮投予，例如藉由無針注射或自貼片(視情況離子導入貼片)或經黏膜(例如經頰)投予。
本發明之衍生物或組成物在用於根據本發明之方法中時之 典型劑量在每天約0.0001至約1mg/kg體重、較佳約0.001至約1mg/kg體重、更佳約0.005至約0.02mg/kg體重之範圍內。如上文所述，本發明衍生物可與一或多種額外治療活性化合物或物質組合投予或施用，且適合之額外化合物或物質可例如選自抗糖尿病劑、抗高血脂劑、抗肥胖症劑、抗高血壓劑及用於治療由糖尿病引起或與糖尿病相關之併發症的試劑。
適合抗糖尿病劑包括胰島素、胰島素衍生物或類似物；升糖素樣肽-1(glucagon like peptide-1；GLP-1)、衍生物或類似物[諸如WO 98/08871(Novo Nordisk A/S)中所揭示之彼等類似物；或其他GLP-1類似物，諸如艾塞那肽(exenatide)(Byetta,Eli Lilly/Amylin；AVE0010,Sanofi-Aventis)、他司魯肽(taspoglutide)(Roche)、阿必魯肽(albiglutide)(Syncria,GlaxoSmithKline)、度拉糖肽(dulaglutide)(Trulicity,Eli Lilly)]；澱粉素、澱粉素類似物(例如，辛姆林(Symlin)/普蘭林肽(Pramlintide))；以及口服活性低血糖劑。
在投予本發明之GLP-1衍生物視情況與如上文所揭示之一或多種額外治療活性化合物或物質之組合的情況下，出於與治療或預防肥胖症或超重相關，亦即與減少或預防過度肥胖相關之目的，相關的可為採用此類投予結合手術干預，例如結合肥胖症治療手術干預用於達成重量減輕或預防重量增加之目的。經常使用之肥胖症治療手術技術之實例包括(但不限於)以下：垂直捆綁胃成形術(亦稱為「縮胃手術」)，其中將一部分胃切掉以產生更小前胃袋，其用作新胃；胃束帶術，例如使用可調節胃束帶系統(諸如瑞典可調節胃束帶(SAGB)、LAP-BANDä或MIDbandä)，其中充當新胃之小前胃袋係使用可由患者調節大小之彈性(例如聚矽氧)束 帶產生；及胃旁路術，例如「Roux-en-Y」旁路術，其中小胃袋係使用吻合器(stapler device)產生且連接至遠端小腸，小腸上部再連接於Y形組態。
本發明之GLP-1衍生物(視情況與如上文所揭示之一或多種額外治療活性化合物組合)之投予可在進行所述肥胖症治療手術干預之前進行一定時段，及/或在其後進行一定時間段。在許多情況下，較佳可為在已進行肥胖症治療手術干預之後開始投予本發明化合物。
本發明之GLP-1衍生物及如本文所定義之抗肥胖症劑或抗糖尿病劑可同時或依次投予。該等因子可以單一劑型供應，其中單一劑型包含兩種化合物，或呈分裝部分之套組形式，其包含本發明之GLP-1衍生物之製劑作為第一單位劑型及抗肥胖症劑或抗糖尿病劑之製劑作為第二單位劑型。每當在本說明書通篇中提及第一或第二或第三等單位劑量時，此不指示較佳投予順序，但僅為方便目的進行。
「同時」給藥本發明之GLP-1衍生物之製劑及抗肥胖症劑或抗糖尿病劑之製劑意謂化合物以單一劑型投予或投予第一劑之後以不超過15分鐘、較佳10分鐘、更佳5分鐘、更佳2分鐘之時間間隔投予第二劑。可首先投予任一因子。
「依次」給藥意謂投予第一劑之後以超過15分鐘之時間間隔投予第二劑。可首先投予兩個單位劑型中之任一者。較佳地，兩種產物經由同一靜脈內入口注射。
如已指示，在上文所揭示之所有治療方法或指示中，本發明之GLP-1衍生物可單獨投予。然而，其亦可與一或多種額外治療活性化合物組合投予，依次或同時。
本發明化合物(例如，GLP-1衍生物)在用於根據本發明之方法中時之典型劑量在以一或多劑(諸如1至3劑)投予之每天約0.0001至約100mg/kg體重、較佳約0.001至約10mg/kg體重、更佳每天約0.001至約5mg/kg體重，例如每天約0.001至約10mg/kg體重或每天約0.001至約5mg/kg體重之範圍內。確切劑量將視以下而定：投予頻率及模式；經治療個體之性別、年齡、重量及一般條件；經治療病狀之性質及嚴重程度；待治療之任何伴隨疾病；及熟習此項技術者顯而易知之其他因素。
本發明化合物包含咸信非常適合於以比例如每日一次更長的時間間隔投予之化合物，因此，適當調配之本發明化合物可適用於例如藉由適合投予途徑(諸如本文所揭示之途徑中之一者)每週投予兩次或每週投予一次。
如上文所述，本發明化合物可與一或多種額外治療活性化合物或物質組合投予或施用，且適合之額外化合物或物質可例如選自抗糖尿病劑、抗高血脂劑、抗肥胖症劑、抗高血壓劑及用於治療由糖尿病引起或與糖尿病相關之併發症的試劑。
藥物適應症
在一些具體實例中，本發明係關於如本文所定義之GLP-1衍生物視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於醫學。
如本文所用，術語「治療有效量(therapeutically effective amount)」之化合物(例如，GLP-1衍生物)係指足以治癒、減輕或部分遏止既定疾病及/或其併發症之臨床表現的量。足以實現此之量定義為「治療有效量」。用於各目的之有效量將視疾病或損傷之嚴重程度以及個體之體重 及一般狀態而定。應理解，適當劑量之確定可使用常規實驗藉由構建值之矩陣且測試矩陣中之不同點來達成，其均在經培訓醫師或獸醫之一般技能水準內。
如本文所用之術語「治療(treatment/treating)」及其其他變化形式係指出於對抗病狀(諸如疾病或病症)之目的管理及護理患者。該等術語意欲包括對患者罹患之既定病狀的所有治療系列，諸如投予所述活性化合物來減輕症狀或其併發症，延遲疾病、病症或病狀之進展，治癒或消除疾病、病症或病狀及/或預防病狀，其中預防應理解為出於對抗疾病、病狀或病症之目的管理及護理患者，且包括投予所述活性化合物來預防症狀或併發症之發作。待治療患者較佳為哺乳動物，尤其人類，但治療其他動物(諸如，狗、貓、牛、馬、羊、山羊或豬)亦在本發明之範疇內。
術語「糖尿病(diabetes/diabetes mellitus)」包括第1型糖尿病、第2型糖尿病、妊娠期糖尿病(在妊娠期間)及引起高血糖症之其他病況。該術語用於代謝失調，其中胰腺產生不足量之胰島素或其中身體之細胞不能對胰島素作出適當反應而因此阻止細胞吸收葡萄糖。因此，葡萄糖積聚在血液中。
第1型糖尿病亦稱為胰島素依賴型糖尿病(IDDM)及青少年發病型糖尿病，其由β-細胞破壞引起，通常導致絕對胰島素缺乏。
第2型糖尿病亦稱為非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)及成人發病型糖尿病，其與主要胰島素抗性且因此相對胰島素缺乏及/或含胰島素抗性之主要胰島素分泌缺陷相關。
如本文所用之術語「血糖正常(euglycaemia)」意謂血液中 葡萄糖之濃度正常。亦稱為血糖濃度正常。
術語「肥胖症(obesity)」意味著脂肪組織過量。當能量攝入超出能量消耗時，過量卡路里存儲在脂肪組織中，且若此淨正平衡延長，則導致肥胖症，亦即有兩個分量進行重量平衡，且任一方(攝入或消耗)之反常可導致肥胖症。在此情形下，肥胖症最佳視為任何程度之賦予健康風險之過量脂肪組織。正常個體與肥胖個體之間的區別可僅為近似的，但肥胖症賦予之健康風險可能連續增加脂肪組織。然而，在本發明之上下文中，身體質量指數(BMI=以公斤計之體重除以以公尺計之身高的平方)高於25之個體將被視為肥胖。
在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療肥胖症或預防超重。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於減少食物攝入。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於增加能量消耗。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於減輕體重。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於調節食慾。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於誘導飽腹感。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於防止在成功重量減輕之後重量恢復。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療與超重或肥胖症相關之疾病或病況。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療貪食症。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之 GLP-1衍生物，其用於治療暴食症。
在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療動脈粥樣硬化。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療高血壓。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療血脂異常。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療冠心病。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療肝脂肪變性。
在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療第2型糖尿病。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於治療葡萄糖耐受性異常。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於延遲或防止第2型糖尿病之疾病進展。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於延遲葡萄糖耐受性異常(IGT)進展為第2型糖尿病。在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物，其用於延遲第2型糖尿病進展為胰島素需要型糖尿病。
在一些具體實例中，本發明係關於一種治療肥胖症、預防超重、減少食物攝入、增加能量消耗、減輕體重、調節食慾、誘導飽腹感、防止在成功重量減輕之後重量恢復、治療與超重或肥胖症相關之疾病或病況、治療貪食症或治療暴食症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如本文所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
在一些具體實例中，本發明係關於一種治療動脈粥樣硬化、高血壓、血脂異常、冠心病或肝脂肪變性之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如本文所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
在一些具體實例中，本發明係關於一種治療第2型糖尿病、治療葡萄糖耐受性異常、延遲葡萄糖耐受性異常(IGT)進展為第2型糖尿病、延遲第2型糖尿病進展為胰島素需要型糖尿病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如本文所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
在一些具體實例中，本發明係關於一種如本文所定義之GLP-1衍生物用於製備藥物之用途。在一些具體實例中，本發明係關於一種如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物之用途，其用於製備治療或預防肥胖症、高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常及第1型糖尿病之藥物。
本發明之具體實例
可藉由以下非限制性具體實例進一步描述本發明：
1.一種GLP-1衍生物，其包含由式I胺基酸序列組成之多肽：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、Ile或Tyr(或者，X16為Val、Leu或Tyr)； X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib(或者，X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg或Ser)；X23為Gln、Arg或Lys；X26為Lys或Arg(或者，X26為Arg)；X27為Glu或Lys；X33為Val、Leu或Ile(或者，X33為Leu或Ile)；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在；X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在(或者，X36為Arg)；X37為Gly或不存在；其中該GLP-1衍生物進一步包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端；其中該多肽視情況包含C端醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽及/或酯。
2.如具體實例1之GLP-1衍生物，其中該取代基在該多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處經由胺基酸殘基共價連接。
3.如具體實例1之GLP-1衍生物，其中該取代基在該多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處連接於離胺酸殘基之ε位置。
4.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽包含C端酸 基，諸如羧酸基。
5.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽包含C端醯胺。
6.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比具有3-15個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
7.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比具有至多14個，諸如至多13個或至多12個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
8.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比具有至多11個，諸如至多10個或至多9個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
9.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比具有至多8個，諸如至多7個或至多6個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
10.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽中該GLP-1衍生物與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比包含至多5個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
11.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X8為Ala、Aib、Acb；X22為Ala或Glu；X35為Gly或Thr；及/或 X36為Gly或不存在。
12.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly。
13.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X8為Ala、Aib或Acb。
14.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X16為Val、Leu、Ile或Tyr。
15.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X18為Lys或Arg。
16.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib。
17.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X22為Gly、Ala或Glu。
18.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X22為Lys、Arg、Ser或Aib。
19.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X22為Ala或Glu。
20.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X23為Gln、Arg或Lys。
21.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X26為Lys或Arg。
22.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X27為Glu或Lys。
23.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X33為Val、Leu、或Ile。
24.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X34為Lys或Arg。
25.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X35為Gly、Thr、Lys或不存在。
26.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X35為Gly或Thr。
27.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在。
28.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X36為Ala、Gly或Lys。
29.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中X36為Gly或不存在。
30.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中若X35不存在，則X36及X37亦不存在。
31.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中若X36不存在，則X37亦不存在。
32.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中若X35不存在，則X36及X37亦不存在，且該GLP-1衍生物包含C端羧酸基。
33.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中若X36不存在，則X37亦不存在。
34.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中若X36不存在，則X37亦不存在，且該GLP-1衍生物包含C端羧酸醯胺。
35.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含至少三個帶負電部分。
36.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該親脂性部分包含 具有至少12個碳原子，諸如12-20個碳原子或14-18個碳原子或諸如16個碳原子之烷基。
37.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基共價連接至胺基酸側鏈，諸如離胺酸側鏈之氮原子。
38.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基在該多肽中選自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的位置連接至胺基酸殘基。
39.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基在該多肽中選自由位置34及35組成之群的胺基酸位置連接於離胺酸殘基之ε位置。
40.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含式II：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]，其中Z1包含式IIa： 其中在式IIa中n為6-20，且符號*表示相鄰基團與氮之連接點；其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地不存在或為選自由Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr、Ado組成之群的胺基酸；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10一起包含至少兩個帶負電部分。
41.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含式II：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]，其中Z1包含式IIa： 其中在式IIa中n為6-20，且符號*表示相鄰基團與氮之連接點； 其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地不存在或為選自由Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr、Ado組成之群的胺基酸；且其中該取代基連接於該多肽之離胺酸殘基之ε位置；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10一起包含至少兩個帶負電部分。
42.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含三個、四個或五個帶負電部分。
43.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含三個或四個帶負電部分。
44.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基包含三個帶負電部分。
45.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基非共價結合至白蛋白。
46.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基在生理pH下帶負電。
47.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中Z1由式IIa組成；
其中n為12至18範圍內之整數。
48.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中n在式IIa中為12、14、16或18。
49.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中n在式IIa中為16(亦即，Z1為17-羧基十七醯基)。
50.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在式II中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為連接子，其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之每一者獨立地為以下胺基酸殘基中任一者：Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr及/或Ado；或殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少兩者存在；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-一起包含至少三個帶負電部分。
51.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地為以下胺基酸殘基中任一者：Glu、γ Glu、Gly、Ser及/或Ado；或殘基Z2至Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為殘基Z2至Z10中之至少兩者存在。
52.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地為以下胺基酸殘基中任一者：γ Glu及/或Ado；或殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之一或多者不存在；然而，其限制條件為Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少兩者存在。
53.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少三者存在。
54.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少四者存在。
55.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中殘基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少五者存在。
56.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中殘基Z2、Z3、Z4、 Z5、Z6、Z7、Z8、Z9或Z10中之至少六者存在。
57.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在式II中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為連接子，其包含選自由以下組成之群的結構：γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-；γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-；γ Glu-γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ Glu-；γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-γ Glu-；Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γ Glu-γ Glu-。
58.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該取代基選自由以下組成之群： 且其中該取代基在該取代基之結構式中可經由用波浪線標記之羰基共價連接至該多肽。
59.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物選自由以下組成之群：Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺 基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯 基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯 基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-羧基-2-[[(2S)-2-[[2-(17-羧基十七醯基胺基)乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33，Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
60.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物呈該GLP-1衍生物之醫藥學上可接受之鹽、醯胺及/或酯形式。
61.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該多肽包含C端醯胺。
62.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物呈該GLP-1衍生物之醫藥學上可接受之鹽形式。
63.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物呈該GLP-1衍生物之酯形式。
64.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物為升糖素受體促效劑及GLP-1受體促效劑。
65.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在100至250範圍內，諸如在50至100範圍內，在20至50範圍內，在10至20範圍內，或在1至10範圍內。
66.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在50至100範 圍內。
67.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在20至50範圍內。
68.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在10至20範圍內。
69.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在1至10範圍內。
70.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之EC50值與對GLP-1受體之EC50之間的比率在1至10範圍內。
71.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<10nM。
72.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<1nM。
73.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<100pM。
74.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對升糖素受體之EC50<10pM。
75.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對 GLP-1受體之EC50<100pM。
76.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50<50pM。
77.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50<10pM。
78.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物對GLP-1受體之EC50值比對升糖素受體之EC50值更低。
79.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中對GLP-1受體之該EC50係根據本文所述之分析(I)(a)測定。
80.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中對升糖素受體之該EC50係根據本文所述之分析(I)(b)測定。
81.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在1至5範圍內，諸如在5至10範圍內，在10至15範圍內，在15至25範圍內，或在25至100範圍內，或諸如高於100。
82.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在5至10範圍內。
83.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在10至15範圍內。
84.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在 其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在15至25範圍內。
85.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率在25至100範圍內。
86.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物在其對升糖素受體之IC50值與對GLP-1受體之IC50之間的比率高於100。
87.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中對GLP-1受體之該IC50係根據本文所述之分析(II)(a)測定。
88.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中對升糖素受體之該IC50係根據本文所述之分析(II)(b)測定。
89.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分析中該GLP-1衍生物具有超過70%回收率。
90.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分析中該GLP-1衍生物具有超過90%回收率。
91.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分析中該GLP-1衍生物具有約100%回收率。
92.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分析中該GLP-1衍生物具有超過7小時滯後時間。
93.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分析中該GLP-1衍生物具有超過20小時滯後時間。
94.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在ThT原纖維化分 析中該GLP-1衍生物具有45小時滯後時間或更長。
95.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該ThT原纖維化分析為本文所述之分析(III)。
96.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於14%降解。
97.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於13%降解。
98.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於12%降解。
99.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於10%降解。
100.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於9%降解。
101.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於7%降解。
102.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於5%降解。
103.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於3%降解。
104.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性分析中該GLP-1衍生物具有小於2%降解。
105.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中在化學穩定性 分析中該GLP-1衍生物具有小於1%降解。
106.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該化學穩定性分析為本文所述之分析(V)。
107.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物為DPPIV保護之化合物。
108.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物為DPPIV穩定化合物。
109.如前述具體實例中任一者之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物呈該GLP-1衍生物之醫藥學上可接受之鹽及/或酯形式。
110.一種醫藥組成物，其包含如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑。
111.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其進一步包含一或多種額外治療活性化合物或物質。
112.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其中該額外治療活性化合物為GLP-1化合物或胰島素化合物。
113.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其中該額外治療活性化合物為GLP-1化合物。
114.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其中該額外治療活性化合物為胰島素化合物。
115.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其中GLP-1化合物選自由以下組成之群：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37) N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][脫胺基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37) N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37) N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37) 及其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、烷基或酯。
116.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其中胰島素化合物為N-ε-B29-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]desB30人類胰島素
117.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其在單位劑型中包含約0.01mg至約1000mg，諸如約0.1mg至約500mg，約0.5mg至約5mg，例如約0.5mg至約200mg之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物。
118.如前述具體實例中任一者所定義之醫藥組成物，其適合於非經腸投予。
119.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於醫學。
120.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於預防及/或治療第2型糖尿病及/或肥胖症。
121.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防肥胖症、高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常及/或第1型糖尿病。
122.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防肥胖症。
123.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常及/或第1型糖尿病。
124.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防肥胖症或預防超重、減少食物攝入、增加能量消耗、調節食慾、誘導飽腹感、防止在成功重量減輕之後重量恢復、治療與超重或肥胖症相關之疾病或病況、治療貪食症及/或治療暴食症。
125.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防第2型糖尿病、治療葡萄糖耐受性異常、延遲或防止第2型糖尿病之疾病進展、延遲葡萄糖耐受性異常(IGT)進展為第2型糖尿病及/或延遲第2型糖尿病進展為胰島素需要型糖尿病。
126.如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，其用於治療或預防動脈粥樣硬化、高血壓、血脂異常、冠心病及/或肝脂肪變性。
127.如前述具體實例中任一者使用之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物與一或多種額外治療活性化合物組合投予。
128.一種預防及/或治療第2型糖尿病及/或肥胖症之方法，其包含向 有需要之患者投予治療有效量之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物。
129.一種治療肥胖症或預防超重之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
130.一種治療肥胖症或預防超重、減少食物攝入、增加能量消耗、減輕體重、調節食慾、誘導飽腹感、防止在成功重量減輕之後重量恢復、治療與超重或肥胖症相關之疾病或病況、治療貪食症及/或治療暴食症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
131.一種治療或預防第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、延遲或預防第2型糖尿病之疾病進展、延遲葡萄糖耐受性異常(IGT)進展為第2型糖尿病及/或延遲第2型糖尿病進展為胰島素需要型糖尿病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
132.一種治療或預防動脈粥樣硬化、治療高血壓、治療血脂異常、治療冠心病及/或治療肝脂肪變性之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物，視情況與一或多種額外治療活性化合物組合。
133.如前述具體實例中任一者之治療方法，其中該GLP-1衍生物與一或多種額外治療活性化合物組合投予。
134.一種如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物之用途， 其用於製備藥物。
135.一種如前述具體實例中任一者所定義之GLP-1衍生物之用途，其用於製備治療或預防肥胖症、高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常及第1型糖尿病之藥物。
136.一種GLP-1類似物，其選自由以下組成之群：[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽； [Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽；[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽； [Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；及[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例
參考以下實施例進一步說明本發明，該等實施例不意欲以任何方式限於如所主張之本發明之範疇。
縮寫清單
BOC：第三丁基氧基羰基
DCM：二氯甲烷
DIC：二異丙基碳化二亞胺
Fmoc：9-茀基甲氧羰基
HFIP：1,1,1,3,3,3-六氟-2-異丙醇
HOAt：1-羥基-7-氮雜苯并三唑
HPLC：高效液相層析
LCMS：液相層析質譜分析
MeCN：乙腈
Mtt：4-甲基三苯甲基
NMP：N-甲基吡咯啶酮
Oxyma Pure：氰基-羥亞胺基-乙酸乙酯
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺醯基
RP：逆相
RP-HPLC：逆相高效液相層析
RT：室溫
Rt：滯留時間
SPPS：固相肽合成
TFA：三氟乙酸
TIPS：三異丙基矽烷
Trt：三苯甲基
UPLC：超高效液相層析
10EE：10的冪次(例如，「10EE(X)」係指數值10之(X)次冪，或簡單為數值10(X)，亦即5×10EE3為5×103)
通用方法
此部分係關於用於合成樹脂結合肽之方法(SPPS法，包括用於胺基酸之脫保護的方法，用於自樹脂裂解肽及其純化之方法)以及用於偵測及特性化所得肽之方法(LCMS法及UPLC法)。
本文實施例1-42中之化合物基本上根據下述通用程序製備、純化及分析。
SPPS通用方法
所用之Fmoc保護之胺基酸衍生物為如下建議之標準：由例如Anaspec、Bachem、Iris Biotech或NovabioChem供應之Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及Fmoc-Lys(Mtt)-OH或Fmoc-Lys(Alloc)-OH。使用3-(N-1-三苯甲基-咪唑-4-基)-丙酸併入N端Imp。
在離胺酸之ε-氮上使用用Mtt(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)或Alloc(Fmoc-Lys(Alloc)-OH)保護之離胺酸達成取代基之引入。適當保護之構建塊，諸如Fmoc-8-胺基-3,6-二氧雜辛酸、Fmoc-Glu-OtBu以及上文所述之受保護之標準胺基酸用於引入取代基。使用單第三丁基化二酸(諸如18-第三丁氧基-18-側氧基-十八酸)達成脂肪酸部分之引入。
在100μmol或250μmol規模下在來自Protein Technologies(Tucson,AZ 85714 U.S.A.)之Prelude固相肽合成器上進行SPPS。Rink Amide AM聚苯乙烯樹脂(Novabiochem，負載為例如0.62mmol/g)或預負載Wang樹脂(例如Novabiochem)用作固體支撐物。在NMP中使用20%哌啶進行Fmoc脫保護。相比於胺基酸/Oxyma Pure®)/DIC/三甲基吡啶(100μmol規模：10：9：9：9；250μmol規模：7：6：6：6)之混合物之樹脂，在NMP中使用過量進行偶合。或者，3-(二乙氧基磷醯氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3H)-酮(DEPBt)/DIPEA可用於在偶合期間抑制例如His之差向異構。在脫保護與偶合步驟之間進行NMP及DCM頂洗(各為5-7ml，0.5min，2×2)。偶合時間典型地為60分鐘。一些胺基酸包括(但不限於)Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Aib-OH或Boc-His(Trt)-OH，以及包含取代基之構建塊為「雙偶合」，意謂在第一偶合(例如60min)之後，瀝乾樹脂且添加更多試劑(胺基酸、(HOAt或Oxyma Pure®)、DIC及三甲基吡啶)，且使混合物再次反應(例如60min)。
若使用Fmoc-Lys(Mtt)-OH，則藉由用HFIP/DCM(75：25)洗滌樹脂(2×2min)，用DCM洗滌且將樹脂懸浮於HFIP/DCM(75：25)中(2×20min)，且隨後用哌啶/NMP(20：80)、DCM(1×)、NMP(1×)、DCM(1×)、NMP(1×)依次洗滌來移除Mtt基團。
若使用Fmoc-Lys(Alloc)-OH，則可藉由在一或多種清除劑之組合，例如嗎啉(6.0當量)及/或二甲基硼烷複合物(18.0當量)存在下用Pd(PPh3)4(0.02當量)處理樹脂(30min)來移除Alloc基團。隨後在可在離胺酸部分之ε位置引入取代基之前分別用MeOH、NMP或DMF及異丙醇(isopropyl alcohol；IPA)洗滌樹脂。
自樹脂裂解
在合成後，用DCM洗滌樹脂，且藉由用TFA/TIPS/水(95/2.5/2.5)或TFA/1,2-乙二硫醇(1,2-ethanedithiol；EDT)/水(90/5/5)處理2-3小時隨後用二乙醚(diethyl ether；Et2O)或二異丙醚(diisopropyl ether；IPE)沈澱以自樹脂裂解肽。用所用溶劑洗滌沈澱物。
純化及定量
在60℃下將粗肽溶解於水與MeCN(諸如水/MeCN(4：1))或水/AcOH(1：1)之適合混合物中持續1小時，且藉由逆相製備型HPLC(Waters Deltaprep 4000或Gilson)在包含C8-矽膠或C18-矽膠之管柱上純化。用梯度增加之包含0.1% TFA之MeCN水溶液進行洗提。藉由分析型HPLC或UPLC檢查相關洗提份。將包含純靶肽之洗提份合併且在減壓下濃縮。可使用另一梯度(例如含有0.05M NH4HCO3)引入額外純化步驟。分析 (HPLC、LCMS)所得溶液，且使用化學發光氮特異性HPLC偵測器(Antek 8060 HPLC-CLND)或藉由量測280nm下之UV吸收來定量產物。將產物分配至玻璃小瓶中。用Millipore玻璃纖維預濾器為小瓶加蓋。冷凍乾燥得到呈白色固體狀之肽三氟乙酸鹽。
肽三氟乙酸鹽可藉由例如用NaOAc/MeCN進行管柱離子交換而變為鈉鹽。或者，肽三氟乙酸鹽可藉由例如以含有0.05M NH4HCO3之梯度管柱層析，隨後冷凍乾燥且懸浮於水中而變為銨鹽。藉由添加1M NaOH(根據鹼性/酸性殘基之當量)將肽變為鈉鹽，使懸浮液變澄清。最後，肽鈉鹽可藉由冷凍乾燥分離。
偵測及特性化之方法
LCMS法
方法：LCMS01
方法：LCMS13
UPLC法
方法：UPLC02
實施例1
Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙 醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.7min
LCMS01：計算值m/1=4423；實驗值m/3=1475；實驗值m/4=1107；實驗值m/5=886
實施例2
Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.3
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4359；實驗值m/1=4359；實驗值m/3=1453；實驗值m/4=1091；實驗值m/5=873
實施例3
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.8min
LCMS01：Rt=2.3分鐘；計算值m/1=4320；實驗值m/1=4320；實驗值m/3=1441；實驗值m/4=1081；實驗值m/5=865
實施例4
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.1min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4046；實驗值m/3=1350；實驗值m/4=1012；實驗值m/5=810；實驗值m/z=4047；
實施例5
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：RT=2.3min；計算值m/1=4193；實驗值m/3=1398；實驗值m/4=1049；實驗值m/5=839；實驗值m/z=4193；
實施例6
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧 基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：RT=2.3min；計算值m/1=4161；實驗值m/3=1388；實驗值m/4=1041；實驗值m/5=833；實驗值m/z=4162
實施例7
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.9min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4348；實驗值m/1=4348；實驗值m/3=1449；實驗值m/4=1087；實驗值m/5=870
實施例8
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4276；實驗值m/1=4276；實驗值m/3=1426；實驗值m/4=1070；實驗值m/5=856
實施例9
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.9min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4332；實驗值m/1=4332；實驗值m/3=1445；實驗值m/4=1084；實驗值m/5=867
實施例10
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.6min
LCMS13：Rt=2.3min；計算值m/1=4264；實驗值m/3=1422；實驗值m/4=1067
實施例11
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=8.7min
LCMS13：Rt=2.3min；計算值m/1=4335；實驗值m/3=1445；實驗值m/4=1084
實施例12
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.3min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4064；實驗值m/1=4064；實驗值m/3=1356；實驗值m/4=1017
實施例13
Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17- 羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=8.4min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4392；實驗值m/1=4392；實驗值m/3=1465；實驗值m/4=1099
實施例14
Nε 36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=8.2min
LCMS01：Rt=2.1min；計算值m/1=4526；實驗值m/1=4526；實驗值m/3=1510；實驗值m/4=1133
實施例15
Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.8min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=3992；實驗值m/1=3992；實驗值m/3=1332；實驗值m/4=999
實施例16
Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.6min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4056；實驗值m/1=4055；實驗值m/3=1353；實驗值m/4=1015
實施例17
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽
UPLC02：Rt=9.5min
LCMS01：Rt=2.9min；計算值m/1=4192；實驗值m/1=4192；實驗值m/3=1398；實驗值m/4=1049
實施例18
Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽
UPLC02：Rt=8.7min
LCMS01：Rt=2.1min；計算值m/1=4263；實驗值m/3=1422；實驗值m/4=1067；實驗值m/5=853
實施例19
Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽
UPLC02：Rt=8.7min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4277；實驗值m/3=1426；實驗值m/4=1070；實驗值m/5=856
實施例20
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.6min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4287.88；實驗值m/1=4290；實驗值m/3=1430；實驗值m/4=1073；實驗值m/5=858
實施例21
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.5min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4829；實驗值m/3=1610；實驗值m/4=1208；實驗值m/5=966
實施例22
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基] 乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.5min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4884；實驗值m/4=1222；實驗值m/5=978；實驗值m/z=4885
實施例23
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
LCMS01：Rt=2.1min；計算值m/1=4855；實驗值m/4=1215；實驗值m/5=972；實驗值m/z=4856
實施例24
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.0min
LCMS01：Rt=2.1min；計算值m/1=4884；實驗值m/3=1629；實驗值m/4=1222；實驗值m/5=978
實施例25
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4321；實驗值m/3=1441；實驗值m/4=1081；實驗值m/5=865
實施例26
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.1min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4784；實驗值m/3=1596；實驗值m/4=1197；實驗值m/5=958；實驗值m/z=4785
實施例27
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-羧基-2-[[(2S)-2-[[2-(17-羧基十七醯基胺基)乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
UPLC02：Rt=9.06min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4321；實驗值m/3=1441；實驗值m/4=1081，實驗值m/5=865
實施例28
Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.3min
LCMS01：Rt=2.3min；計算值m/1=4840；實驗值m/4=1211；實驗值m/5=969
實施例29
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽
UPLC02：Rt=9.05min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4323；實驗值m/3=1442；實驗值m/4=1082；實驗值m/5=866
實施例30
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.3min
LCMS01：Rt=3.0min；計算值m/1=4348；實驗值m/1=4348；實驗值m/3=1450；實驗值m/4=1088
實施例31
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=8.4min
LCMS13：Rt=2.3min；計算值m/1=4363；實驗值m/3=1455；實驗值m/4=1091
實施例32
Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.6min
LCMS13：Rt=2.1min；計算值m/1=4361；實驗值m/4=1091；實驗值m/5=873
實施例33
Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.3min
LCMS13：Rt=2.2min；計算值m/1=4333；實驗值m/3=1445；實驗值m/4=1084；實驗值m/5=867
實施例34
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.9min
LCMS13：Rt：=2.4min；計算值m/1=4248；實驗值m/3=1417
實施例35
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=9.8min
LCMS13：Rt=2.3min；計算值m/1=4375；實驗值m/3=1459；實驗值m/4=1095
實施例36
Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-肽
UPLC02：Rt=9.7min
LCMS13：Rt=2.3min；計算值m/1=4391；實驗值m/3=1465；實驗值 m/4=1099
實施例37
Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4320；實驗值m/3=1441；實驗值m/4=1081；實驗值m/5=865
實施例38
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=8.7min
LCMS01：Rt=2.1min；計算值m/1=4137；實驗值m/3=1380；實驗值m/4=1035；實驗值m/5=828
實施例39
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.8min
LCMS01：Rt=2.2min；計算值m/1=4165；實驗值m/3=1389；實驗值m/4=1042；實驗值m/5 834
實施例40
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.0min
LCMS01：Rt=2.4min；計算值m/1=4221；實驗值m/3=1408；實驗值m/4=1056；實驗值m/5=845
實施例41
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=10.1min
LCMS01：Rt=2.5min；計算值m/1=4207；實驗值m/3=1403；實驗值m/4=1053；實驗值m/5=842
實施例42
Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
UPLC02：Rt=9.9min
LCMS01：Rt=2.5min；計算值m/1=4193；實驗值m/3=1398；實驗值m/4=1049；實驗值m/5=839
分析(I)：GLP-1及升糖素受體效力
此實施例之目的為測試本發明之GLP-1衍生物之試管內活性或效力。試管內效力為在全細胞分析中分別量測之人類GLP-1受體(GLP-1R)或升糖素受體(glucagonR)活化。
原理
試管內效力藉由在報導基因分析中分別量測人類GLP-1或 升糖素受體活化之細胞反應來測定。該分析在BHK細胞系中進行，該細胞系表現人類GLP-1受體或人類升糖素受體且包含與啟動子偶合之cAMP反應元素(CRE)之DNA及螢火蟲螢光素酶(CRE螢光素酶)之基因。當人類GLP-1或升糖素受體分別活化時，其導致cAMP產生，繼而導致螢光素酶蛋白質表現。當完成分析培育時，添加螢光素酶基質(螢光素)，且酶將螢光素轉化為氧化螢光素且產生生物發光。量測發光作為分析之讀數。
(a)GLP-1受體活化
細胞培養及製備
用於此分析之細胞(純系FCW467-12A/KZ10-1)為以BHKTS13作為母細胞系之BHK細胞。該等細胞衍生自表現人類GLP-1受體之純系(FCW467-12A)且藉由經CRE螢光素酶進一步轉染來獲得當前純系而建立。
將細胞在5% CO2下在具有10% FBS、1×GlutaMAX、1mg/ml G418、240nM甲胺喋呤(methotrexate；MTX)及1%青黴素/鏈黴素(penicillin/streptomycin；pen/strep)之DMEM培養基中培養。將其等分且儲存於液氮中。各分析之前，將等分試樣溶解且在PBS中洗滌三次，隨後以所要濃度懸浮於分析培養基中。對於96孔盤，使懸浮液給出5×10EE3個細胞/孔之最終濃度。
物質
將以下化學品用於分析中：普洛尼克(Pluronic)F-68(10%)(Gibco 2404)、卵白蛋白(Sigma A5503)、無酚紅之DMEM(Gibco 11880-028)、1M Hepes(Gibco 15630)、格魯塔瑪(Glutamax)100×(Gibco 35050) 及史狄普斯(steadylite plus)(PerkinElmer 6016757)。分析培養基由無酚紅之DMEM、10mM Hepes、1×格魯塔瑪、2%卵白蛋白及0.2%普洛尼克F-68組成。
程序
將細胞儲備液在37℃水浴中解凍。將細胞在PBS中洗滌三次。將細胞計數且調節為5×10EE3個細胞/50微升(1×10EE5個細胞/毫升)分析培養基。將細胞之50μl等分試樣轉移至分析盤中之各孔中。
將測試化合物及參考化合物之儲備液稀釋至0.2μM濃度之分析培養基。將化合物稀釋10倍，得到以下濃度：2×10EE-6M、2×10EE-7M、2×10EE-8M、2×10EE-9M、2×10EE-10M、2×10EE-11M、2×10EE-12M及2×10EE-13M。對於各化合物，亦包括空白分析培養基對照組。
將化合物或空白之50μl等分試樣自稀釋盤轉移至分析盤。在以下最終濃度下測試化合物：1×10EE-6M、1×10EE-7M、1×10EE-8M、1×10EE-9M、1×10EE-10M、1×10EE-11M及1×10EE-12M及1×10EE-13M。
將分析盤在5% CO2培育箱中在37℃下培育3h。自培育箱移除分析盤且使其在室溫下靜置15min。將史狄普斯試劑之100μl等分試樣添加至分析盤之各孔中(試劑為光敏感的)。用鋁箔覆蓋各分析盤以保護其免受光照且在室溫下震盪30min。在Perkin Elmer TopCount NXT儀器中讀取各分析盤。
計算
將來自TopCount儀器之資料轉移至GraphPad Prism軟體。軟體進行非線性回歸(log(促效劑)相對於反應可變之斜率(四參數))。藉由軟 體計算EC50值且以pM報導。
(b)升糖素受體活化
細胞培養及製備
用於此分析之細胞(純系pLJ6'-4-25)為以BHK570作為母細胞系之表現CRE螢光素酶基因(純系BHK/KZ10-20-48)之BHK細胞，且藉由經人類升糖素受體(pHZ-1載體中之純系pLJ6')進一步轉染而建立。
將細胞在5% CO2下在具有10% FBS、1×GlutaMAX、1mg/ml G418、240nM甲胺喋呤(methotrexate；MTX)及1%青黴素/鏈黴素(penicillin/streptomycin；pen/strep)之DMEM培養基中培養。將其等分且儲存於液氮中。各分析之前，將等分試樣溶解且在PBS中洗滌三次，隨後以所要濃度懸浮於分析培養基中。對於96孔盤，使懸浮液給出5×10EE3個細胞/孔之最終濃度。
物質
將以下化學品用於分析中：普洛尼克F-68(10%)(Gibco 2404)、卵白蛋白(Sigma A5503)、無酚紅之DMEM(Gibco 11880-028)、1M Hepes(Gibco 15630)、格魯塔瑪100×(Gibco 35050)及史狄普斯(PerkinElmer 6016757)。分析培養基由無酚紅之DMEM、10mM Hepes、1×格魯塔瑪、2%卵白蛋白及0.2%普洛尼克F-68組成。
程序
將細胞儲備液在37℃水浴中解凍。將細胞在PBS中洗滌三次。將細胞計數且調節為5×10EE3個細胞/50微升(1×10EE5個細胞/毫升)分析培養基。將細胞之50μl等分試樣轉移至分析盤中之各孔中。
將測試化合物及參考化合物之儲備液稀釋至0.2μM濃度之分析培養基。將化合物稀釋10倍，得到以下濃度：2×10EE-6M、2×10EE-7M、2×10EE-8M、2×10EE-9M、2×10EE-10M、2×10EE-11M、2×10EE-12M及2×10EE-13M。對於各化合物，亦包括空白分析培養基對照組。
將化合物或空白之50μl等分試樣自稀釋盤轉移至分析盤。在以下最終濃度下測試化合物：1×10EE-6M、1×10EE-7M、1×10EE-8M、1×10EE-9M、1×10EE-10M、1×10EE-11M及1×10EE-12M及1×10EE-13M。
將分析盤在5% CO2培育箱中在37℃下培育3h。自培育箱移除分析盤且使其在室溫下靜置15min。將史狄普斯試劑之100μl等分試樣添加至分析盤之各孔中(試劑為光敏感的)。用鋁箔覆蓋各分析盤以保護其免受光照且在室溫下震盪30min。在Perkin Elmer TopCount NXT儀器中讀取各分析盤。
計算
將來自TopCount儀器之資料轉移至GraphPad Prism軟體。軟體進行非線性回歸(log(促效劑)相對於反應可變之斜率(四參數))。藉由軟體計算EC50值且以pM報導。
分析(II)：GLP-1及升糖素受體結合
此分析之目的為測試本發明之GLP-1衍生物之試管內受體結合活性。
(a)GLP-1受體結合
GLP-1受體(GLP-1R)結合為人類GLP-1受體衍生物之親和力的量測。
原理
藉由競爭性結合測定各衍生物之GLP-1受體結合，移置之[125I]-GLP-1與在與麥胚凝集素(WGA)閃爍近接分析(SPA)珠粒相關聯之細胞膜中表現之GLP-1受體結合。將一系列濃度之各衍生物添加至包含人類GLP-1受體之分離膜，且監測標記放射性配位體之位移。將受體結合報導為自受體移置一半標記配位體之濃度，IC50值。
物質
以下化學品用於分析中：無酚紅之DMEM(Gibco 11880-028)、Pen/strep(Invitrogen 15140-122)、G418(Invitrogen 10131-027)、1M Hepes(Gibco 15630)、EDTA(Invitrogen 15575-038)、PBS(Invitrogen 14190-094)、胎牛血清(Invitrogen 16140-071)、EGTA、MgCl2(Merck 1.05832.1000)、吐溫20(Amresco 0850C335)、SPA粒子(麥胚凝集素(WGA)SPA珠粒，Perkin Elmer RPNQ0001)、[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2(自製)、OptiPlateTM-96(Perkin Elmer)。
緩衝劑1由20mM Na-HEPES加10mM EDTA組成，且將pH調節為7.4。緩衝劑2由20mM Na-HEPES加0.1mM EDTA組成，且將pH調節為7.4。分析緩衝劑由補充有5mM EGTA、5mM MgCl2、0.005%吐溫20之50mM HEPES組成，且將pH調節為7.4。0.02%白蛋白儲備液由以0.02%(w/v)溶解於分析緩衝劑中之HSA組成。
細胞培養及膜製備
用於此分析之細胞(純系FCW467-12A)為以BHKTS13作為母細胞系之BHK細胞。該等細胞表現人類GLP-1受體。
細胞在5% CO2下在DMEM、10%胎牛血清、1%青黴素/鏈黴素(Penicillin/Streptomycin；Pen/Strep)及1.0mg/ml之選擇標記物G418中生長。為製造膜製劑，使細胞生長至大約80%匯合。在磷酸鹽緩衝鹽水中洗滌細胞兩次且收集。使用短暫離心使細胞粒化且將細胞集結粒保持於冰上。將細胞集結粒在適合量之緩衝劑1(例如，10ml)中用ULTRA-THURRAX分散儀器均質化20-30秒。將均質物離心15分鐘。將集結粒再懸浮(均質化)於10ml緩衝劑2中且離心。再重複此步驟一次。將所得集結粒再懸浮於緩衝劑2中且測定蛋白質濃度。將膜等分且儲存於零下80℃下。
程序
1.為進行受體結合分析，將50μl分析緩衝劑添加至分析盤之各孔中。
2.連續稀釋測試化合物，得到以下濃度：8×10EE-7M、8×10EE-8M、8×10EE-9M、8×10EE-10M、8×10EE-11M、8×10EE-12M及8×10EE-13M。將25μl添加至分析盤中之適當孔中。
3.將細胞膜等分試樣解凍且稀釋至其工作濃度。將50μl添加至分析盤中之各孔中。
4.將WGA SPA珠粒以20mg/ml懸浮於分析緩衝劑中。將懸浮液稀釋至10mg/ml分析緩衝劑，隨後立即添加至分析盤。將50μl添加至分析盤中之各孔中。
5.藉由將25μl之480pM[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2溶液添加至分析盤之各孔開始培育。保留25μl等分試樣用於量測總計數/孔。
6.在30℃下培育分析盤2h。
7.將分析盤離心10min。
8.在Perkin Elmer TopCount NXT儀器中讀取分析盤。
計算
將來自TopCount儀器之資料轉移至GraphPad Prism軟體。軟體將複本之值平均化且進行非線性回歸。藉由軟體計算IC50值且以nM報導。
(b)升糖素受體結合
升糖素受體(glucagonR)結合活性為人類升糖素受體衍生物之親和力的量測。
原理
藉由競爭性結合測定各衍生物之升糖素受體結合，移置之[125I]-升糖素與在與麥胚凝集素(WGA)閃爍近接分析(SPA)珠粒相關聯之細胞膜中表現之升糖素受體結合。將一系列濃度之各衍生物添加至包含人類升糖素受體之分離膜，且監測標記配位體之位移。將受體結合報導為自受體移置一半標記配位體之濃度，IC50值。
物質
以下化學品用於分析中：含格魯塔瑪之DMEM(Gibco 61965-026)、Pen/strep(Invitrogen 15140-122)、G418(Invitrogen 10131-027)、維爾烯(Versene)(Gibco 15040)、1M Hepes(Gibco 15630)、PBS(Invitrogen 14190-094)、胎牛血清(Invitrogen 16140-071)、MgCl2(Merck 1.05832.1000)、EDTA(Invitrogen 15575-038)、CaCl2(Sigma、C5080)、吐溫20(Amresco 0850C335)、卵白蛋白(Sigma A5503)、SPA粒子(麥胚凝集素(WGA)SPA 珠粒，Perkin Elmer RPNQ0001)、[125I]-升糖素(自製)、OptiPlateTM-96(Packard 6005290)。
HME緩衝劑由25mM HEPES、2mM MgCl2及1mM EDTA組成，且將pH調節為7.4。分析緩衝劑由補充有5mM MgCl2、1mM CaCl2、0.02%吐溫20及0.1%卵白蛋白之50mM HEPES組成，且將pH調節為7.4。
細胞培養及膜製備
用於此分析之細胞(純系BHK hGCGR A3*25)為經包含編碼人類升糖素受體之cDNA之表現質體穩定轉染的BHK細胞。
細胞在5% CO2下在DMEM、10%胎牛血清、1%青黴素/鏈黴素(Penicillin/Streptomycin；Pen/Strep)及1.0mg/ml之選擇標記物G418中生長。為製造膜製劑，使細胞生長至大約80%匯合。在磷酸鹽緩衝鹽水中洗滌細胞兩次且收集。使用短暫離心使細胞粒化且將細胞集結粒保持於冰上。藉由添加大約5ml HME緩衝劑溶解細胞，藉由移液混合且快速冷凍於液氮中。快速解凍且添加10ml HME緩衝劑。將細胞集結粒用ULTRA-THURRAX分散儀器均質化20-30秒。在4℃下以20.000×G離心均質物10分鐘。將集結粒再懸浮(均質化)於1-2ml HME緩衝劑中。測定蛋白質濃度。將膜等分且速凍於液氮中且儲存於零下80℃下。
程序
1.為進行受體結合分析，將50μl分析緩衝劑添加至分析盤之各孔中。
2.連續稀釋測試化合物，得到以下濃度：8×10EE-7M、8×10EE-8M、8×10EE-9M、8×10EE-10M、8×10EE-11M、8×10EE-12M及8×10EE-13M。將25μl添加至分析盤中之適當孔中。
3.將細胞膜等分試樣解凍且稀釋至其工作濃度。將50μl添加至分析盤中之各孔中。
4.將WGA SPA珠粒以20mg/ml懸浮於分析緩衝劑中。將懸浮液稀釋至10mg/ml分析緩衝劑，隨後立即添加至分析盤。將50μl添加至分析盤中之各孔中。
5.藉由將25μl之480pM[125I]-升糖素溶液添加至分析盤之各孔開始培育。保留25μl等分試樣用於量測總計數/孔。
6.在25℃下培育分析盤2h。
7.在1500rpm下離心分析盤10min。
8.在Perkin Elmer TopCount NXT儀器中讀取分析盤。
計算
將來自TopCount儀器之資料轉移至GraphPad Prism軟體。軟體將複本之值平均化且進行非線性回歸。藉由軟體計算IC50值且以nM報導。
分析(III)：評估肽組成物之物理穩定性的ThT原纖維化分析
此分析之目的為評估本發明之GLP-1衍生物在水溶液中之物理穩定性。
肽之低物理穩定性可導致澱粉樣原纖維形成，在樣品中亦觀測到有序之絲樣大分子結構，最終可導致凝膠形成。在傳統上，此已藉由目視檢查樣品來量測。然而，該種量測極為主觀且視觀測者而定。因此，應用小分子指示探針更加有利。硫代黃素T(ThT)為此類探針且在結合於原纖維時具有不同螢光簽名[Naiki等人(1989)Anal.Biochem.177,244-249；LeVine(1999)Methods.Enzymol.309,274-284]。
原纖維形成之時程可藉由S形曲線用以下陳述式描述[Nielsen等人(2001)Biochemistry 40,6036-6046]：
此處，F為在時間t之ThT螢光。常數t0為達到最大螢光之50%所需的時間。描述原纖維形成之兩個重要參數為藉由t0-2 τ計算之滯後時間及表觀速率常數κ 1/τ。
提出肽之部分摺疊中間物之形成為原纖維化之一般起始機制。極少彼等中間物成核以形成上面可組合有其他中間物且進行原纖維化之模板。滯後時間對應於時間間隔，其中細胞核之臨界質量增加且表觀速率常數為形成原纖維自身之速率。
在各分析之前新鮮製備樣品。各樣品組成描述於圖例中。使用適當量之濃NaOH及HCl將樣品之pH調節至所要值。將硫代黃素T添加至來自儲備H2O溶液之樣品以達到1μM之最終濃度。
將200μl樣品等分試樣(250μM GLP-1衍生物/10mM HEPES緩衝劑，pH 7.5)置於96孔微量滴定盤(Packard OptiPlateTM-96，白 色聚苯乙烯)中。通常，將各樣品之四或八個複本(對應於一種測試條件)置於一行孔中。用Scotch墊(Qiagen)密封該盤。
在既定溫度下培育，在Fluoroskan Ascent FL螢光讀盤儀(Thermo Labsystems)中進行震盪及ThT螢光發射量測。將溫度調節至37℃。在調節至960rpm且幅度為1mm之迴旋震盪下培育該盤。使用經由444nm濾光器之激發及經由485nm濾光器之發射量測來進行螢光量測。
各運作藉由在分析溫度下培育盤10min起始。每20分鐘量測盤，持續所要時間段。在各量測之間，如所述震盪且加熱該盤。
完成ThT分析後，彙集各樣品之四或八個複本且在18℃下在20000rpm下離心30分鐘。經由0.22μm過濾器過濾上清液，且將等分試樣轉移至HPLC小瓶中。
藉由逆相HPLC使用適當標準物作為參考測定初始樣品及經過濾上清液中肽之濃度。將經過濾樣品之濃度占初始樣品濃度之百分率報導為回收率。
量測點以Microsoft Excel格式保存以便進一步處理及曲線繪製，且使用GraphPad Prism進行擬合。在原纖維不存在下來自ThT之背景發射可忽略。資料點典型地為四或八個樣品之平均值且以標準差誤差棒展示。僅同一實驗中獲得之資料(亦即同一盤上之樣品)呈現於同一曲線中，確保實驗之間原纖維化之相對量度。
資料集可擬合為方程式(1)。然而，可藉由目視檢查曲線以鑑別ThT螢光增加顯著高於背景值之時間點來評估原纖維化之前的滯後時間。
分析(IV)：小鼠中之藥物動力學特徵
此分析之目的為評估本發明之GLP-1衍生物在小鼠中之藥物動力學特徵。
GLP-1衍生物之藥物動力學特徵可在正常雄性c57/BL6小鼠(大致體重：30公克，n=12)中測試，其中例如在各時間點(例如：t=0.25、0.5、1、3、6、10、24、30及48小時)呈現3隻小鼠。測試化合物可以10nmol/kg單劑皮下給予。
GLP-1衍生物之血漿水準可使用ELISA/LOCI分析或LCMS測定。化合物之藥物動力學計算，諸如半衰期(T½)最大濃度(Cmax)及最大濃度之時間(Tmax)可使用基於PC之軟體Phoenix(來自Pharsight,Certara之WinNonLin 6.3版)測定。
分析(V)：化學穩定性評估
此分析之目的為評估本發明之GLP-1衍生物在水溶液中之化學穩定性。
GLP-1衍生物之化學穩定性可藉由RP-UPLC分離及UV偵測來研究。將凍乾樣品溶解於8mM磷酸鹽緩衝劑(pH 8.6)中，隨後使用HCl調節至pH 7.3，最終濃度為333μM。在5℃及37℃下培育樣品14天，隨後進行RP-UPLC分析。純度定義為主峰相對於各層析圖中所有整合峰之總面積的面積百分比。在37℃下14天後之純度損失(在本文中亦稱為化學降解)被確定為在5℃及37℃下培育之樣品之間的純度差除以在5℃下培育14天後之樣品純度。
使用在50℃及0.4mL/min流動速率下操作之Waters BEH130 2.1mm×150mm、1.7μm管柱使用由A：0.05% TFA/MQ-水及B：0.05% TFA/乙腈組成之移動相系統進行RP-UPLC分析。在215nm處進行UV偵測。下文展示用於大多數樣品之典型梯度特徵。
對於相較於大多數衍生物在實質上不同滯留時間下洗提之一些個別衍生物，對梯度特徵進行一些調節以能夠更好地進行樣品之間的純度評估比較。
實施例43：GLP-1衍生物之受體效力、受體結合及物理穩定性
根據本文分析(I)、(II)及(III)中所述之方法測定所選本發明GLP-1衍生物之GLP-1及升糖素受體效力(EC50)及親和力(IC50)以及物理穩定性。在pH 7.5下進行分析(III)。結果展示於表1中。
表1中之結果展示GLP-1衍生物為GLP-1/升糖素受體共促效劑。另外，結果展示在ThT原纖維化分析中大多數GLP-1衍生物展現藉由滯後時間及/或回收率評估之出人意料的高物理穩定性。
實施例44：GLP-1衍生物之化學穩定性
根據本文分析(V)中所述之方法測定所選本發明GLP-1衍生物之化學穩定性。在pH 7.3下進行分析(V)。結果展示於表2中。
表2中之結果展示GLP-1/升糖素受體共促效劑出乎意料地具有優異化學穩定性。
儘管已在本文中說明及描述本發明之某些特徵，但一般技術者現將想到多種修改、取代、變化及等效物。因此，應理解，所附申請專利範圍意欲涵蓋如屬於本發明之真實精神內的所有此類修改及變化。
<110> 諾佛儂迪克股份有限公司
<120> 穩定的基於GLP-1之GLP-1/升糖素受體共促效劑
<130> 140051EP01
<160> 44
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
<210> 2
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵(MISC FEATURE)
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Ala、Aib、Acb或Gly
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (10)..(10)
<223> Val、Leu、Ile或Tyr
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (12)..(12)
<223> Lys或Arg
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (16)..(16)
<223> Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser或Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (17)..(17)
<223> Gln、Arg或Lys
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (20)..(20)
<223> Lys或Arg
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (21)..(21)
<223> Glu或Lys
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (24)..(24)
<223> 共價連接之取代基
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (27)..(27)
<223> Val、Leu或Ile
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> Lys或Arg
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> Gly、Thr、Lys或不存在
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (30)..(30)
<223> Ala、Gly、Lys、Ser或不存在
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (31)..(31)
<223> Gly或不存在
<400> 2
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 3
<210> 4
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 4
<210> 5
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 5
<210> 6
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 6
<210> 7
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> misc
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> misc
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> misc
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 7
<210> 8
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 8
<210> 9
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 9
<210> 10
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 10
<210> 11
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 11
<210> 12
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 12
<210> 13
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 13
<210> 14
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 14
<210> 15
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (16)..(16)
<223> 共價連接之取代基
<400> 15
<210> 16
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 16
<210> 17
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (17)..(17)
<223> 共價連接之取代基
<400> 17
<210> 18
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (17)..(17)
<223> 共價連接之取代基
<400> 18
<210> 19
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 19
<210> 20
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (21)..(21)
<223> 共價連接之取代基
<400> 20
<210> 21
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (21)..(21)
<223> 共價連接之取代基
<400> 21
<210> 22
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 22
<210> 23
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 23
<210> 24
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 24
<210> 25
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 25
<210> 26
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 26
<210> 27
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 27
<210> 28
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 28
<210> 29
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 29
<210> 30
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (29)..(29)
<223> 共價連接之取代基
<400> 30
<210> 31
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 31
<210> 32
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 32
<210> 33
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 33
<210> 34
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (16)..(16)
<223> 共價連接之取代基
<400> 34
<210> 35
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Acb
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (16)..(16)
<223> 共價連接之取代基
<400> 35
<210> 36
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 36
<210> 37
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 37
<210> 38
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 38
<210> 39
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 39
<210> 40
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 40
<210> 41
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 41
<210> 42
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 42
<210> 43
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 43
<210> 44
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工
<220>
<223> 基於人類GLP-1之人工序列
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (1)..(1)
<223> 此胺基酸殘基為Imp(亦即，脫胺基組胺酸)
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (2)..(2)
<223> Aib
<220>
<221> 雜項特徵
<222> (28)..(28)
<223> 共價連接之取代基
<400> 44

Claims (12)

  1. 一種GLP-1衍生物，其包含由式I胺基酸序列組成之多肽：Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37[I]，其中X8為Ala、Aib、Acb或Gly；X16為Val、Leu、(Ile)或Tyr；X18為Lys或Arg；X22為Gly、Ala、Glu、Lys、Arg、(Ser)或(Aib)；X23為Gln、Arg或Lys；X26為(Lys)或Arg；X27為Glu或Lys；X33為(Val)、Leu或Ile；X34為Lys或Arg；X35為Gly、Thr、Lys或不存在；X36為Ala、Gly、Lys、Ser或不存在；X37為Gly或不存在；其中該GLP-1衍生物進一步包含有包含親脂性部分及至少兩個帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分中之一者在親脂性部分遠端；其中該多肽視情況包含C端醯胺；或其醫藥學上可接受之鹽及/或酯。
  2. 如申請專利範圍第1項之GLP-1衍生物，其中該取代基在該多肽中選 自由位置22、23、27、34、35及36組成之群的胺基酸位置中之一者處經由胺基酸殘基共價連接。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該多肽與人類GLP-1(SEQ ID NO：1)相比具有3-15個胺基酸殘基修飾，諸如取代、添加或缺失。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中X8為Ala、Aib、Acb；X22為Ala或Glu；X35為Gly或Thr；及/或X36為Gly或不存在。
  5. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中若X35不存在，則X36及X37亦不存在。
  6. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中若X36不存在，則X37亦不存在。
  7. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該取代基包含至少三個帶負電部分。
  8. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該親脂性部分包含具有至少12個碳原子，諸如12-20個碳原子或14-18個碳原子或諸如16個碳原子之烷基。
  9. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該取代基共價連接至胺基酸側鏈，諸如離胺酸側鏈之氮原子。
  10. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該取代基包含 式II：Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]，其中Z1包含式IIa： 其中在式IIa中n為6-20，且符號*表示相鄰基團與氮之連接點；其中Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及Z10獨立地不存在或為選自由Glu、γ Glu、Gly、Ser、Ala、Thr、Ado組成之群的胺基酸；且其中Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10一起包含至少兩個帶負電部分。
  11. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中在式II中，Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-為連接子，其包含選自由以下組成之群的結構：γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-Ado-γ Glu-；γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-；γ Glu-γ Glu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-；γ Glu-γ Glu-γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ Glu-；γ Glu-Ado-Ado-；γ Glu-Ado-Ado-γ Glu-γ Glu-；Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γ Glu-γ Glu-。
  12. 如申請專利範圍第1項或第2項之GLP-1衍生物，其中該GLP-1衍生物選自由以下組成之群：Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基 -4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 22-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-肽 Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-肽 Nε 34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-羧基-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基] 乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]-3-羥基丙醯基]胺基]乙醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙 氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺 Nε 35-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-肽醯胺
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