KR101059602B1 - 신경펩타이드 2 수용체 작용물질 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질뿐만 아니라 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 유도체 및 단편을 제공한다:
화학식 I
Figure 112008048311818-pct00055
상기 식에서,
치환체들은 명세서에 정의된 바와 같다.
상기 화합물 및 이를 함유하는 약학 조성물은 질병, 예를 들어 비만증 및 당뇨병의 치료에 유용하다.

Description

신경펩타이드 2 수용체 작용물질{NEUROPEPTIDE-2 RECEPTOR-AGONISTS}
본 발명은 PYY3 -36의 말단 절단된 동족체에 관한 것이다. 상기 동족체는 신경펩타이드-2 수용체의 작용물질이며 대사 질환 및 장애, 예를 들어 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성 및 이상지질혈증의 치료에 유용하다. 본 발명의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염이다:
Figure 112008048311818-pct00001
상기 식에서,
X는 4-옥소-6-(1-피페라지닐)-3(4H)-퀴나졸린-아세트산(Pqa)이고,
Y는 H, 아실 잔기, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 저급 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 치환되거나 비 치환된 헤테로아릴, 치환되거나 비 치환된 알콕시, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
Y'는 H, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
R1은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고,
R2는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고,
R3은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸 Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R4는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고,
R5는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R6은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고,
R7은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고,
R8은 Leu 또는 Trp이고,
R9는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고,
R10은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고,
R11은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R12는 Gln 또는 Ala이고,
R13은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R14는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr, 변형된-Tyr, Phe, 변형된-Phe, Cha, (1)Nal, (2)Nal, C-알파-메틸 Tyr 또는 Trp이고,
PEGm은 1 내지 60 KDa이다.
본 발명에 인용된 모든 문헌들은 본 발명에 참고로 인용된다.
대사 질환 및 장애는 선진국에서 심각한 건강 문제로 널리 인식되고 있으며 미국에서는 유행병 수준에까지 이르렀다. 비만에 대한 최근의 연구에 따르면, 예를 들어 미국 인구의 50%를 초과하는 사람들이 과체중으로 간주되며, 25%를 초과하는 사람들이 임상적으로 비만하고 심장병, 2형 당뇨병 및 특정 암의 위험이 상당한 것으로 진단되었다. 이러한 유행병은 미국에서만 연간 700억 달러를 넘는 비만 치료 프로젝트 비용이 예상되므로 보건 의료 시스템에 중대한 부담을 일으킨다. 비만 치료 전략으로는 음식물 섭취의 감소 및 에너지 소비의 증대가 있다.
36 아미노산 펩타이드 신경전달물질인 신경펩타이드 Y(NPY)는 말초 및 중추 신경계 모두에 존재하는 것으로 나타난 신경전달물질/신경호르몬의 췌장 폴리펩타이드 부류의 일원이다. NPY는 공지된 가장 효능 있는 식욕유발제 중 하나로, 인간을 포함한 동물에서 음식물 섭취의 조절에 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다.
6 개의 신경펩타이드 Y 수용체(NPY), Y1-, Y2-, Y3-, Y4 및 Y5- 및 Y6-서브유형이 클로닝되었으며, 이들은 로돕신-형 G-단백질-커플링된 7-막 통과 수용 체(GPCR)에 속한다. 상기 NPY Y2 수용체(Y2R)는 381 아미노산 수용체로, 다른 공지된 NPY 수용체들과는 낮은 상동성을 나타내면서 Gi를 통해 아데닐 사이클라제의 활성화를 억제한다. 래트와 인간 Y2 수용체 사이에는 98% 아미노산 일치율의 고도의 보존이 존재한다.
상기 Y2R 수용체는 설치류와 인간 모두에서 중추 신경계 내에 광범위하게 분포한다. 시상하부에서, Y2 mRNA는 활꼴핵, 시각로앞핵, 및 등쪽내측시상하부핵에 위치한다. 인간 뇌에서, Y2R은 우세한 Y 수용체 서브유형이다. 상기 활꼴핵에서, 상기 NPY 뉴런의 80% 이상이 Y2R mRNA를 함께 발현한다. Y2-선택성 작용물질의 적용은 시험관 내에서 시상하부 절편으로부터 NPY의 방출을 감소시키는 반면 상기 Y2 비 펩타이드 길항물질 BIIE0246은 NPY 방출을 증가시키는 것으로 나타났다. 이러한 발견은 상기 NPY 방출을 조절하고 따라서 섭식 조절에 연루될 수 있는 시냅스전 자가수용체로서 Y2R의 역할을 지지한다(Kaga T et al., Peptides 22:501-506(2001) 및 King PJ et al., Eur J Pharmacol 396:R1-3(2000)).
펩타이드 YY3 -36(PYY3 -36)은 신경펩타이드 Y2(NPY2R) 작용물질 활성을 갖는 34 아미노산 선형 펩타이드이다. PYY3 -36의 활꼴 내(IC) 또는 복강 내(IP) 주사는 래트에서 급식을 감소시키며 만성 치료로서 체중 증가를 감소시킨 것으로 나타났다. 90 분 동안 PYY3 -36의 정맥 내(IV) 주입(0.8 pmol/㎏/분)은 24 시간에 걸쳐 비만 및 정상 인간 실험대상자에서 음식물 섭취를 감소시켰다. 이러한 발견은 상기 PYY 시스템이 비만증의 치료를 위한 치료 표적일 수 있음을 암시한다(Batterham RL et al., Nature 418:650-654(2002); Batterham RL et al., New Engl J Med 349:941-948(2003)). 더욱이, PYY의 Cys2-(D)Cys27-환화된 버전(여기에서 잔기 5-24는 탄소 수 5 내지 8의 메틸렌-쇄에 의해 치환되었다)은 래트 회장의 전압-클램핑된 점막 표본 조직을 통해 감소된 전류에 의해 입증된 바와 같이, 장 PYY 수용체의 활성화를 나타내었다(Krstenansky, et al. Peptides, Proceedings of the Twelfth American Peptide Symposium. J. Smith and J. Rivier Editors, ESCOM.Leiden Page 136-137).
더욱이, 폴리(에틸렌 글리콜) 또는 폴리(에틸렌 옥사이드)(둘 다 PEG라 칭한다)에 의한 단백질의 공유 개질은 수퍼옥사이드 디스뮤타제에 의해 입증되었고(Somack, R, et al., (1991) Free Rad Res Commun 12-13:553-562; 미국 특허 제 5,283,317 호 및 5,468,478 호), 다른 유형의 단백질의 경우 사이토킨에 의해 입증되었다(Saifer, M G P, et al., (1997) Polym Preprints 38:576-577; Sherman, M R, et al., (1997) in J M Harris, et al.(Eds.), Poly(ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications. ACS Symposium Series 680(pp. 155-169) Washington, D.C.: American Chemistry Society).
또한 최근의 데이터는 위장 바이오패스 환자가 조기 혈당 조절 및 장기 체중 유지에 부분적으로 기여할 수 있는 PYY 수준의 이른, 과도한 증가를 가짐을 입증하였으며, 이는 대사 질환의 병인에서 상기 펩타이드의 중요성을 설명한다. PYY의 다른 공지된 작용으로는 감소된 위 배출, 및 개선된 식후 혈당 조절에 기여하는 지 연된 위장관 통과가 있다. 고혈당 지수, 예를 들어 HbA1c 및 프럭토스아민은 2형 당뇨병의 동물 모델에서 PYY3 -36의 말초 투여 후 용량 의존적인 감소를 보인다. 따라서, 이러한 결과는 PYY3 -36 또는 약학적으로 관련된 작용물질이 혈당 및 체중 조절에 대한 장기적인 치료학적 접근법을 제공할 수 있음을 가리킨다(Korner et al., J Clin Endocrinol Metabol 90:359-365(2005); Chan JL et al., Obesity 14: 194-198(2006); Stratis C et al., Obes Surg 16:752-758(2006); Borg CM et al., Br J Surg 93:210-215(2006); 및 Pittner RA et al., Int J Obes 28:963-971(2004)).
그러나, 같거나 보다 양호한 효능 및 Y1, Y4 및 Y5 수용체에 대한 선택성, 약동학적 성질 및 약물학적 성질을 가지면서, 보다 작은 분자량을 갖는 PYY의 신규의 가공된 동족체의 필요성이 존재한다. 바람직하게는 앞서 입수할 수 있는 것들보다 더 오래 활성을 지속하는 화합물에 대한 필요성이 존재한다. 또한 예를 들어 PYY의 peg화된 동족체가 필요한 환자에서 단백질 반감기를 증가시키고 면역원성을 감소시키기 위해 상기와 같은 작용물질의 필요성이 존재한다.
도 1은 본 발명의 화합물(실시예 34)을 함유하는 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 정제된 화합물(실시예 34)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 화합물(실시예 34)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 4는 본 발명의 또 다른 화합물(실시예 35)의 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 5는 본 발명의 정제된 화합물(실시예 35)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 6은 본 발명의 화합물(실시예 35)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 7은 본 발명의 화합물(실시예 36)의 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 8은 본 발명의 정제된 화합물(실시예 36)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 9는 본 발명의 더욱 또 다른 화합물(실시예 36)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 10은 본 발명의 화합물(실시예 37)의 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 11은 본 발명의 정제된 화합물(실시예 37)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 12는 본 발명의 화합물(실시예 37)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 13은 본 발명의 또 다른 화합물(실시예 38)의 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 14는 본 발명의 정제된 화합물(실시예 38)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 15는 본 발명의 화합물(실시예 38)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 16은 본 발명의 화합물(실시예 39)의 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 17은 본 발명의 정제된 화합물(실시예 39)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 18은 본 발명의 더욱 또 다른 화합물(실시예 39)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 19는 탈보호 전의 본 발명의 화합물(실시예 41)을 함유하는 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 20은 본 발명의 화합물(실시예 41)을 함유하는 탈보호된 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 21은 본 발명의 정제된 화합물(실시예 41)의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 22는 본 발명의 화합물(실시예 41)의 MALDI-TOF 스펙트럼을 나타낸다.
도 23은 수컷 음식물 유도된 비만(DIO) 래트에서 체중에 대한 화합물(실시예 41)의 아 만성 투여 효과를 나타낸다.
도 24는 암컷 db/db 마우스에서 경구 글루코스 허용성 시험(OGTT)에 대한 화합물(실시예 41)의 급성 효과를 나타낸다.
도 25는 암컷 db/db 마우스에서 기초 혈당(A) 및 경구 글루코스 허용성 시험(B)에 대한 화합물(실시예 41)의 아 만성 투여 효과를 나타낸다.
본 발명에 개시된 바와 유사하거나 동등한 임의의 방법, 장치 및 물질들을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있지만, 이제 바람직한 방법, 장치 및 물질을 개시한다.
본 발명에서 언급한 모든 펩타이드 서열들은 통상적인 규약에 따라 작성되며, 이에 의해 달리 나타내지 않는 한 N-말단 아미노산은 좌측에, C-말단 아미노산은 우측에 있다. 두 아미노산 잔기 사이의 짧은 선은 펩타이드 결합을 가리킨다. 상기 아미노산이 이성체 형태를 갖는 경우, 달리 나타내지 않는 한 상기 아미노산의 L 형을 나타낸다. 편의상 본 발명을 개시함에 있어서 다양한 아미노산들에 대한 통상적 및 비 통상적 약어들을 사용한다. 이들 약어는 당해 분야의 숙련가들에게 친숙하나, 명확성을 위해 하기에 나타낸다:
Asp=D=아스파트산; Ala=A=알라닌; Arg=R=아르기닌; Asn=N=아스파라진; Gly=G=글리신; Glu=E=글루탐산; Gln=Q=글루타민; His=H=히스티딘; Ile=I=아이소류신; Leu=L=류신; Lys=K=리신; Met=M=메티오닌; Phe=F=페닐알라닌; Pro=P=프롤린; Ser=S=세린; Thr=T=쓰레오닌; Trp=W=트립토판; Tyr=Y=타이로신; Cys=C=시스테인; 및 Val=V=발린; Nle=노르-류신.
또한 편의상, 하기의 약어 또는 기호들을 사용하여 본 발명에 사용된 잔기, 시약 등을 나타낸다:
Ac 아세틸;
Aib 알파-아미노아이소부티르산;
1-1-Aic 1-아미노인단-1-카복실산;
2-2-Aic 2-아미노인단-2-카복실산;
Ach 알파-아미노사이클로헥산-카복실산;
Acp 알파-아미노사이클로펜탄-카복실산;
Tic 알파-아미노-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린-3-카복실산;
3-Pal 알파-아미노-3-피리딜알라닌-카복실산;
4-pal 알파-아미노-4-피리딜알라닌-카복실산;
4-MeO-Apc 1-아미노-4-(4-메톡시페닐)-사이클로헥산-1-카복실산;
Bip 4-페닐-페닐알라닌-카복실산;
Dip 3,3-다이페닐알라닌-카복실산;
Pqa 4-옥소-6-(1-피페라지닐)-3(4H)-퀴나졸린-아세트산(CAS 889958- 08-1)
3,4,5,F3-Phe
3,4,5-트라이플루오로 페닐알라닌;
2,3,4,5,6,F5-Phe
2,3,4,5,6-펜타플루오로 페닐알라닌;
Cha 사이클로헥실 알라닌;
(1)Nal 1-나프틸 알라닌;
(2)Nal 2-나프틸 알라닌;
Fmoc 9-플루오레닐메틸옥시카보닐;
Mtt 4-메틸트리틸;
2Pip 2-페닐아이소프로필 에스터;
Pmc 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐;
CH2Cl2 염화 메틸렌;
A2O 아세트산 무수물;
CH3CN 아세토나이트릴;
DMAc 다이메틸아세트아미드;
DMF 다이메틸폼아미드;
DIPEA N,N-다이아이소프로필에틸아민;
TFA 트라이플루오로아세트산;
HOBT N-하이드록시벤조트라이아졸;
DIC N,N'-다이아이소프로필카보다이이미드;
BOP 벤조트라이아졸-1-일옥시-트리스-(다이메틸아미노)포스포늄-헥 사플루오로포스페이트
HBTU 2-(1H-벤조트라이아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄-헥사플 루오로포스페이트
NMP 1-메틸-2-피롤리데논;
SSA 숙신이미딜 숙신아미드;
β-SBA 숙신이미딜 베타-부탄산;
SPA 숙신이미딜 프로피온산;
BTC 벤조트라이아졸 카보네이트;
MALDI-TOF 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화-타임 오브 플라이트;
FAB-MS 고속 원자 충격 질량 분광측정법;
ES-MS 전기 분무 질량 분광측정법;
PEGm-SSA PEGm-CH2CH2NHCOCH2CH2CO-;
PEGm-β-SBA
PEGm-CH(CH3)CH2CO-;
PEGm-SPA PEGm-CH2CH2CO-;
PEGm-BTC PEGm-CO-; 및
PEGm 약 1 KDa 초과의 폴리(에틸렌)글리콜 잔기.
본 발명에 사용된 바와 같이, "알킬"이란 용어는 치환되거나 비 치환될 수 있는 분지되거나 비 분지된, 환상 또는 비 환상의, 포화되거나 불포화된 하이드로카빌 라디칼을 의미한다. 환상인 경우, 상기 알킬 그룹은 바람직하게는 C3 내지 C12, 보다 바람직하게는 C5 내지 C10, 보다 바람직하게는 C5 내지 C7이다. 비 환상인 경우, 상기 알킬 그룹은 바람직하게는 C1 내지 C10, 보다 바람직하게는 C1 내지 C6, 보다 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필(n-프로필 또는 아이소프로필), 부틸(n-부틸, 아이소부틸 또는 3급-부틸) 또는 펜틸(n-펜틸 및 아이소펜틸 포함), 보다 바람직하게는 메틸이다. 따라서 본 발명에 사용된 바와 같은 "알킬"이란 용어는 알킬(분지되거나 비 분지된), 치환된 알킬(분지되거나 비 분지된), 치환된 알키닐(분지되거나 비 분지된), 사이클로알킬, 치환된 사이클로알킬, 사이클로알케닐, 치환된 사이클로알케닐, 사이클로알키닐 및 치환된 사이클로알키닐을 포함함을 알 것이다. 바람직한 알킬 그룹은 비 환상이고 포화된 것이다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "저급 알킬"이란 용어는 상기 환상 저급 알킬 그룹이 C5, C6 또는 C7이고, 상기 비 환상 저급 알킬 그룹이 C1, C2, C3 또는 C4이고 바람직하게는 메틸, 에틸, 프로필(n-프로필 또는 아이소프로필) 및 부틸(n-부틸, 아이소부틸 또는 3급-부틸) 중에서 선택되는 분지되거나 비 분지된, 환상 또는 비 환상의, 포화되거나 불포화된 하이드로카빌 라디칼을 의미한다. 따라서 본 발명에 사용된 바와 같은 "저급 알킬"이란 용어는 저급 알킬(분지되거나 비 분지된), 저급 알케닐(분지되거나 비 분지된), 저급 알키닐(분지되거나 비 분지된), 사이클로저급알킬, 및 사이클로저급알케닐을 포함함을 알 것이다. 바람직한 저급 알킬 그룹은 비 환상이고 포화된 것이다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "아실"이란 용어는 카보닐 그룹을 통해 결합된 임의로 치환된 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 아릴 또는 헤테로아릴 그룹을 의미하며, 아세틸, 프로피오닐, 벤조일, 3-피리디닐카보닐, 2-모폴리노카보닐, 4-하이드록시부타노일, 4-플루오로벤조일, 2-나프토일, 2-페닐아세틸, 2-메톡시아세틸 등과 같은 그룹을 포함한다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "아릴"이란 용어는 치환되거나 비 치환된 카보사이클릭 방향족 그룹, 예를 들어 페닐 또는 나프틸을 의미한다.
"헤테로아릴"이란 용어는 단독으로 또는 다른 그룹과 함께 N, O 및 S 중에서 선택된 1, 2 또는 3 개의 고리 헤테로원자를 함유하고 나머지 고리 원자는 C인, 하나 이상의 방향족 고리를 갖는 5 내지 12 개 고리 원자의 모노사이클릭 또는 바이사이클릭 라디칼을 의미하며, 상기 헤테로아릴 라디칼의 결합 점은 방향족 고리 상에 있을 것으로 이해된다. 상기 헤테로아릴 그룹의 하나 또는 2 개의 고리 탄소 원자가 카보닐 그룹으로 치환될 수도 있다.
상기 알킬, 아릴 및 헤테로아릴 그룹은 치환되거나 비 치환될 수 있다. 치환되는 경우, 일반적으로는 1 내지 3 개, 바람직하게는 1 개의 치환체가 존재할 것이다. 치환체로는 탄소 함유 그룹, 예를 들어 알킬, 아릴, 아릴알킬(예를 들어 치환 및 비 치환된 페닐, 치환 및 비 치환된 벤질); 할로겐 원자 및 할로겐 함유 그룹, 예를 들어 할로알킬(예를 들어 트라이플루오로메틸); 산소 함유 그룹, 예를 들어 알콜(예를 들어 하이드록실, 하이드록시알킬, 아릴(하이드록실)알킬), 알콕시, 아릴옥시, 알콕시알킬, 아릴옥시알킬, 아실, 산(예를 들어 카복시, 카복시알킬), 산 유도체, 예를 들어 에스터(예를 들어 알콕시카보닐, 알콕시카보닐알킬, 알킬카보닐옥시, 알킬카보닐옥시알킬), 아미드(예를 들어 아미노카보닐, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐, 아미노카보닐알킬, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐알킬, 아릴아미노카보닐), 카바메이트(예를 들어 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐옥시, 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐옥시, 아릴아미노카보닐옥시) 및 유레아(예를 들어 모노- 또는 다이-알킬아미노카보닐아미노 또는 아릴아미노카보닐아미노); 질소 함유 그룹, 예를 들어 아민(예를 들어 아미노, 모노- 또는 다이-알킬아미노, 아미노알킬, 모노- 또는 다이-알킬아미노알킬), 아지드, 나이트릴(예를 들어 시아노, 시아노알킬), 나이트로; 황 함유 그룹, 예를 들어 티올, 티오에테르, 설폭사이드 및 설폰(예를 들어 알킬티오, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 알킬티오알킬, 알킬설피닐알킬, 알킬설포닐알킬, 아릴티오, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아릴티오알킬, 아릴설피닐알킬, 아릴설포닐알킬); 및 하나 이상, 바람직하게는 하나의 헤테로원자를 함유하는 헤테로사이클릭 그룹(예를 들어 티에닐, 퓨라닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 아이소티아졸릴, 옥사졸릴, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 아지리디닐, 아제티디닐, 피롤리디닐, 피롤리닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 테트라하이드로퓨라닐, 피라닐, 피로닐, 피리딜, 피라지닐, 피리다지닐, 피페리디닐, 헥사하이드로아제피닐, 페페라지닐, 모폴리닐, 티아나프틸, 벤조퓨라닐, 아이소벤조퓨라닐, 인돌릴, 옥시인돌릴, 아이소인돌릴, 인다졸릴, 인돌리닐, 7-아자인돌릴, 벤조피라닐, 쿠마리닐, 아이소쿠마리닐, 퀴놀리닐, 아이소퀴놀리닐, 나프트리디닐, 신놀리닐, 퀴나졸리닐, 피리도피리딜, 벤즈옥사지닐, 퀴녹살리닐, 크로메닐, 크로마닐, 아이소크로마닐, 프탈라지닐 및 카볼리닐)이 있을 수 있다.
상기 저급 알킬 그룹은 치환되거나 비 치환될 수 있고, 바람직하게는 비치환된다. 치환되는 경우, 일반적으로는 1 내지 3 개, 바람직하게는 1 개의 치환체가 존재할 것이다. 치환체로는 알킬, 아릴 및 아릴알킬 이외에 상기 나타낸 치환체 그룹들이 있다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "알콕시"란 용어는 알킬-O-를 의미하며, "알카노일"은 알킬-CO-를 의미한다. 알콕시 치환체 그룹 또는 알콕시-함유 치환체 그룹은 하나 이상의 알킬 그룹에 의해 치환될 수도 있다.
본 발명에 사용된 바와 같이, "할로겐"이란 용어는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 라디칼, 바람직하게는 불소, 염소 또는 브롬 라디칼, 보다 바람직하게는 불소 또는 염소 라디칼을 의미한다.
"약학적으로 허용 가능한 염"은 화학식 I 화합물의 생물학적 유효성 및 성질을 유지하고 적합한 무독성 유기 또는 무기산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성되는 통상적인 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭한다. 샘플 산 부가염에는 무기산, 예를 들어 염산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 황산, 설팜산, 인산 및 질산으로부터 유도되는 염, 및 유기산, 예를 들어 아세트산, p-톨루엔설폰산, 살리실산, 메탄설폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 퓨마르산 등으로부터 유도되는 염이 있다. 샘플 염기 부가염으로는 암모늄, 칼륨, 나트륨 및 4급 암모늄 하이드록사이드로부터 유도되는 염, 예를 들어 테트라메틸암모늄 하이드록사이드가 있다. 약제 화합물(즉 약물)을 염으로 화학적으로 변형시키는 것은 화합물의 물리 또는 화학 안정성을 수반하는 성질들, 예를 들어 흡습성, 유동성 또는 용해성을 개선시키고자 하는 시도에 사용되는 널리 공지된 기법이다. 예를 들어 문헌[H. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(6th Ed. 1995), p. 196 및 1456-1457]을 참조하시오.
"약학적으로 허용 가능한 에스터"는 카복실 그룹을 갖는 화학식 I의 통상적으로 에스터화된 화합물을 지칭하며, 상기 에스터는 화학식 I 화합물의 생물학적 유효성 및 성질을 유지할 수 있고 생체 내(유기체 내)에서 상응하는 활성 카복실산으로 절단된다. 생체 내에서 상응하는 카복실산으로 절단되는(이 경우 가수분해되는) 에스터 그룹의 예는 상기 절단된 수소가 예를 들어 헤테로사이클, 사이클로알킬 등에 의해 임의로 치환되는 -저급 알킬로 치환되는 것들이다. 치환된 저급 알킬 에스터의 예는 저급 알킬이 피롤리딘, 피페리딘, 모폴린, N-메틸피페라진 등으로 치환된 것들이다. 생체 내에서 절단되는 그룹은 예를 들어 에틸, 모폴리노 에틸 및 다이에틸아미노 에틸일 수 있다. 본 발명과 관련하여, -CONH2는 또한, 상기 -NH2가 생체 내에서 절단되고 하이드록시 그룹으로 치환되어 상응하는 카복실산을 형성하므로 에스터로 간주된다.
"변형된-Tyr"이란 용어는 바람직하게는 저급 알킬 및 할로겐으로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 3 개, 바람직하게는 1 내지 2 개의 치환체에 의한 치환에 의해 임의의 방식으로 변형되는 타이로신을 지칭한다. 바람직한 변형된-Tyr은 메틸-타이로신, 바람직하게는 C-알파-메틸-타이로신(C-알파-Me-Tyr), 3-요오도-타이로신((3-I)Y), 3,5-다이플루오로-타이로신((3,5 다이 F)Y), 2,6-다이플루오로-타이로신((2,6 다이 F)Y), 및 2,6-다이메틸-타이로신((2,6 다이 Me)Y)이다. 또 다른 바람직한 변형된-Tyr은 메타-타이로신((m-)Y)이다. 특히 바람직한 변형된-Tyr은 하기 구체적인 예에서 존재하는 것들이다.
"변형된-Phe"란 용어는 바람직하게는 저급-알킬, 하이드록시-저급-알킬, 플루오로-저급-알킬, 저급-알콕시, 아미노 및 할로겐으로 이루어진 그룹 중에서 독립적으로 선택된 1 내지 4 개의 치환체에 의한 치환에 의해 임의의 방식으로 변형된 페닐알라닌을 지칭한다. 바람직한 변형된-Phe는 4-메톡시-페닐알라닌(F(4-O-CH3)), 4-아미노-페닐알라닌((4-NH2)Phe), 4-플루오로-페닐알라닌((4-F)Phe), 4-하이드록시메틸-페닐알라닌((4-CH2OH)Phe), 4-트라이플루오로메틸-페닐알라닌((4-CF3)Phe), 3-플루오로-페닐알라닌((3-F)Phe), 2,3,4,5,6-펜타플루오로-페닐알라닌((2,3,4,5,6-펜타-F)Phe) 및 3,4-다이클로로 페닐알라닌((3,4-다이-Cl)Phe)이다. 특히 바람직한 변형된-Tyr은 하기 구체적인 예에서 존재하는 것들이다.
"하이드록시-저급-알킬"이란 용어는 하이드록시 그룹, 바람직하게는 하이드록시메틸로 치환된, 상기 정의한 바와 같은 저급-알킬 그룹을 지칭한다.
"플루오로-저급-알킬"이란 용어는 불소로 일- 또는 다중 치환된, 상기 정의한 바와 같은 저급-알킬 그룹을 지칭한다. 플루오로-저급-알킬 그룹은 예를 들어 CFH2, CF2H, CF3, CF3CH2, CF3(CH2)2, (CF3)2CH 및 CF2H-CF2, 바람직하게는 CF3이다.
상세히, 본 발명은 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I
Figure 112008048311818-pct00002
상기 식에서,
X는 4-옥소-6-(1-피페라지닐)-3(4H)-퀴나졸린-아세트산(Pqa)이고,
Y는 H, 아실 잔기, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 저급 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 치환되거나 비 치환된 헤테로아릴, 치환되거나 비 치환된 알콕시, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
Y'는 H, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
R1은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고,
R2는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고,
R3은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸 Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R4는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고,
R5는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R6은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고,
R7은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고,
R8은 Leu 또는 Trp이고,
R9는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고,
R10은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고,
R11은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R12는 Gln 또는 Ala이고,
R13은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R14는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr, 변형된-Tyr, Phe, 변형된-Phe, Cha, (1)Nal, (2)Nal, C-알파-메틸 Tyr 또는 Trp이고,
PEGm은 1 내지 60 KDa이다.
화학식 I의 화합물은 개별적으로 바람직하고 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 개별적으로 바람직하며, 이때 화학식 I의 화합물이 특히 바람직하다.
상술한 바와 같은 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 하기 화학식 Ia를 특징으로 하는 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염이다:
Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2
상기 식에서,
X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴나졸리논-3-아세트산(Pqa)이고,
Y는 H, 아실 잔기, 치환되거나 비 치환된 알킬, 치환되거나 비 치환된 저급 알킬, 치환되거나 비 치환된 아릴, 치환되거나 비 치환된 알콕시, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEG-SSA, PEG-β-SBA, PEG-SPA 또는 PEG-BTC이고,
R1은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고,
R2는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고,
R3은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸 Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R4는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고,
R5는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
R6은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고,
R7은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고,
R8은 Leu 또는 Trp이고,
R9는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고,
R10은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고,
R11은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R12는 Gln 또는 Ala이고,
R13은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
R14는 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr, 변형된-Tyr, Phe, 변형된-Phe 또는 Trp이다.
본 발명의 바람직한 실시태양은 R2가 Y'로 치환되고 Y'가 H, 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 관한 것이다. 보다 바람직하게는 Y'는 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양은
Y가 H 또는 아실 잔기이고,
Y'가 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 관한 것이다. 보다 바람직하게는 Y'는 PEGm-SSA 또는 PEGm-SPA이다.
바람직하게는, Y는 아실 잔기이다. 또 다른 바람직한 실시태양에서, Y는 H일 수 있다. 더욱 또한, Y'가 H일 수 있는 것이 바람직하다.
상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에서, PEGm이 20 내지 40 KDa인 것이 바람직하다. 바람직하게는 PEGm는 30 KDa이다. 바람직하게는, 폴리(에틸렌)글리콜 잔기는 1 내지 60 KDa, 보다 바람직하게는 20 내지 40 KDa, 보다 바람직하게는 30 KDa의 중량을 갖는다.
상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에서, R1이 Ile인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R2가 Lys 또는 Nle인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R3이 Arg인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R4가 His인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R5가 Tyr인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R6이 Leu인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R7이 Asn인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R8이 Leu 또는 Trp인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R9가 Val인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R10이 Thr인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R11이 Arg인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R12가 Gln인 것이 바람직하다. 더욱 또한, R13이 Arg 또는 (N-메틸)Arg인 것이 바람직하다.
더욱 또한, R14가 Tyr, (D)Tyr 또는 N-메틸 Tyr, 변형된-Tyr, Phe, 변형된-Phe 또는 Trp인 것이 바람직하다. 바람직하게는 R14는 Y, (m-)Y, (3-I)Y, (3,5 다이 F)Y, (2,6 다이 F)Y, (2,6 다이 Me)Y, F(4-O-CH3), F, (4-NH2)Phe, (4-F)Phe, (4-CH2OH)Phe, (4-CF3)Phe, (3-F)Phe, (2,3,4,5,6-펜타-F)Phe, (3,4-다이-Cl)Phe, Cha, W, (1)Nal, (2)Nal 또는 C-알파-Me-Tyr이다. 보다 바람직하게는 R14는 Tyr 또 는 (2,6 다이 F)Tyr이다.
상술한 바와 같은 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것들이다:
IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RY,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(m-)Y,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3-I)Y,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3,5 다이 F)Y,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 Me)Y,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RF(4-O-CH3),
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RF,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-NH2)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-F)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-CH2OH)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-CF3)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3-F)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,3,4,5,6 펜타 F)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3,4 다이 Cl)Phe,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RCha,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RW,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(1)Nal,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2)Nal,
IK-Pqa-RHYLNLVTRQR-C-알파-Me-Tyr,
IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y,
Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
펜틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
트라이메틸아세틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
사이클로헥실-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
벤조일-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
아담틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
(PEG 30,000 SPA)IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
(PEG 40,000 BTC)-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
(PEG 30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
(PEG 30,000)-베타-SBA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY, 및
IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염.
상술한 바와 같은 다른 바람직한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것들이다:
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY, 및
IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
또는 이들의 약학적으로 허용 가능한 염.
약학적으로 허용 가능한 염이 아닌 상술한 바와 같은 화합물이 바람직하다. 상기 언급한 개별적인 화합물들은 각각 별도로 바람직한 실시태양을 구성한다.
상기 정의한 바와 같은 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y인 것이다.
상기 정의한 바와 같은 또 다른 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 것이다.
상기 정의한 바와 같은 또 다른 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 (PEG30,000)-SPA-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 것이다.
상기 정의한 바와 같은 또 다른 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 (PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 것이다.
상기 정의한 바와 같은 또 다른 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 것이다.
상기 정의한 바와 같은 또 다른 특히 바람직한 신경펩타이드-2 수용체는 상기 작용물질이 H-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 것이다.
peg화되지 않은, 즉 Y 및 Y'가 모두 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC가 아닌, 상술한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 또한 Y 및 Y' 중 하나 또는 이들 모두가 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 화합물의 제조를 위한 중간체로서 사용할 수 있다. 상기와 같은 그룹 Y 및 Y'를 당해 분야의 숙련가에게 널리 공지된 표준 방법에 의해 도입할 수 있다.
바람직하게는, 상술한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질은 하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되지 않는다:
Figure 112008048311818-pct00003
Figure 112008048311818-pct00004
Figure 112008048311818-pct00005
본 발명의 화합물은 예를 들어 상기 PYY3 -36의 말단 절단된 버전이므로 유리하다. 보다 짧은 펩타이드는 예를 들어 상기 화합물의 보다 용이한 합성 및 정제를 촉진할 뿐만 아니라 제조 과정 및 비용을 개선 및 감소시킨다. 더욱이, 본 발명의 화합물은 바람직하게는 Y2-수용체와 반응하고 동족 수용체, 예를 들어 NPY Y1, Y4 및 Y5와는 반응하지 않을 것이다. 불필요한 작용물질 또는 길항물질 부 반응들이 이에 의해 최소화된다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 대사 질환 및 장애의 치료에 유용하다. 상기와 같은 대사 질환 및 장애는 예를 들어 비만증, 당뇨병, 바람직하게는 2형 당뇨병, 대사 증후군(또한 증후군 X로서 공지됨), 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애를 포함한다.
따라서 본 발명은 또한 상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 및 약학적으로 허용 가능한 담체 및/또는 보조제를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 마찬가지로 치료학적으로 활성인 물질로서, 특히 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 치료학적으로 활성인 물질로서, 특히 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료학적으로 활성인 물질로서 사용하기 위한 상술한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 포함한다.
또 다른 바람직한 실시태양에서, 본 발명은 상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 인간 또는 동물에게 투여함을 포함하는, 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질병의 치료 및/또는 예방학적 치료, 특히 대사질환 또는 장애, 특히 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애의 치료 및/또는 예방학적 치료를 위한 방법에 관한 것이다. 상술한 바와 같은 바람직한 방법에서, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 하루에 1 회 투여한다. 바람직하게는, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 매 3일마다 1 회 투여한다. 보다 바람직하게는, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 1 주일에 1 회 투여한다. 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 상기 환자에게 경구, 비 내, 정맥 내, 피하, 비 경구, 경피, 복강 내, 직장 또는 흡입에 의해 투여하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 비 내 투여한다. 또한 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 피하 투여하는 것이 바람직하다. 상 술한 방법에서, 상기 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 바람직하게는 약 0.001 내지 약 100 ㎎의 투여량으로 투여한다.
본 발명은 또한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질병의 치료 및/또는 예방학적 치료, 특히 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애의 치료 및/또는 예방학적 치료를 위한 상기 정의한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질의 용도를 포함한다.
본 발명은 또한 신경펩타이드-2 수용체 작용물질에 의해 조절되는 질병의 치료 및/또는 예방학적 치료, 특히 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애의 치료 및/또는 예방학적 치료를 위한 약제의 제조를 위한 상술한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질의 용도에 관한 것이다. 상기와 같은 약제는 상술한 바와 같은 신경펩타이드-2 수용체 작용물질을 포함한다.
본 발명의 특정 실시태양의 변화를 수행할 수 있고 이는 여전히 첨부된 청구의 범위의 범위 내에 있으므로, 본 발명이 본 발명에 개시된 상기 특정 실시태양들로 제한되지 않음은 물론이다. 또한 상기 사용된 용어가 특정 실시태양들을 개시하기 위한 것이지, 제한하고자 하는 것은 아님은 물론이다. 대신에, 본 발명의 범위는 첨부된 청구의 범위에 의해 확립될 것이다.
약학 화합물의 예 및 그의 전달을 위한 에스터의 용도에 관한 추가적인 정보를 문헌[Design of Prodrugs. Bundgaard H. ed. Elsevier 1985]에서 얻을 수 있다. 또한 문헌[H. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems(6th Ed. 1995) p. 108-109], [Krogsgaard-Larsen, et al., Textbook of Drug Design and Development(2d Ed. 1996) p. 152-191]을 참조하시오.
본 발명의 전형적인 화합물들을 아미노산 사이에 펩타이드 결합을 형성하는 것에 대한 임의의 공지된 통상적인 과정에 의해 쉽게 합성할 수 있다. 상기와 같은 통상적인 과정은 예를 들어 카복실 그룹 및 보호된 다른 반응성 그룹을 갖는 아미노산 또는 그의 잔기의 유리 알파 아미노 그룹과, 아미노 그룹 또는 보호된 다른 반응성 그룹을 갖는 또 다른 아미노산 또는 그의 잔기의 유리 1급 카복실 그룹간의 축합을 허용하는 임의의 액상 과정을 포함한다.
본 발명의 신규 화합물의 합성을 위한 상기와 같은 통상적인 과정은 예를 들어 임의의 고상 펩타이드 합성 방법을 포함한다. 상기와 같은 방법에서 상기 신규 화합물의 합성은, 목적하는 아미노산 잔기들을 고상 방법의 일반적인 원리에 따라 성장하는 펩타이드 쇄에 한번에 하나씩 연속적으로 통합시킴으로써 수행할 수 있다. 상기와 같은 방법은 예를 들어 문헌[Merrifield, R.B., J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154(1963)], [Barany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284(1980)](본 발명에 참고로 인용된다)에 개시되어 있다.
펩타이드의 화학 합성에 통상적인 것은 다양한 아미노산 잔기의 반응성 측쇄 그룹들을 적합한 보호 그룹으로 보호하는 것으로, 이는 상기 보호 그룹이 최종적으로 제거될 때까지 상기 부위에서 발생하는 화학 반응을 방지할 것이다. 대개는 또한 아미노산 또는 단편 상의 알파 아미노 그룹을 상기 존재가 카복실 그룹에서 반 응하는 동안 보호한 다음 상기 알파 아미노 보호 그룹을 선택적으로 제거하여 상기 부위에서 후속 반응이 일어나게 하는 것도 통상적이다. 특정한 보호 그룹들을 상기 고상 합성 방법에 관하여 개시하였지만, 각각의 아미노산이 액상 합성에서 각각의 아미노산에 통상적으로 사용되는 보호 그룹에 의해 보호될 수 있음은 물론이다.
알파 아미노 그룹을 방향족 유레탄-유형 보호 그룹, 예를 들어 알릴옥시카보닐, 벤질옥시카보닐(Z) 및 치환된 벤질옥시카보닐, 예를 들어 p-클로로벤질옥시카보닐, p-나이트로벤질옥시카보닐, p-브로모벤질옥시카보닐, p-바이페닐-아이소프로필옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐(Fmoc), 및 p-메톡시벤질옥시카보닐(Moz); 지방족 유레탄-유형 보호 그룹, 예를 들어 t-부틸옥시카보닐(Boc), 다이아이소프로필메틸옥시카보닐, 아이소프로필옥시카보닐 및 알릴옥시카보닐 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. 본 발명에서, Fmoc가 알파 아미노 보호에 가장 바람직하다.
구아니디노 그룹을 나이트로, p-톨루엔설포닐(Tos), (Z), 펜타메틸크로만설포닐(Pmc), 4-메톡시-2,3,6-트라이메틸벤젠설포닐(Mtr) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있으며, (Pmc) 및 (Mtr)이 아르기닌(Arg)에 대해 가장 바람직하다.
상기 ε-아미노 그룹을 2-클로로 벤질옥시카보닐(2-Cl-Z), 2-브로모 벤질옥시카보닐(2-Br-Z) 및 t-부틸옥시카보닐(Boc) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. Boc가 (Lys)에 대해 가장 바람직하다.
하이드록실 그룹(OH)을 벤질(Bzl), 2,6 다이클로로벤질(2,6 다이Cl-Bzl), 및 3급 부틸(t-Bu) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. (tBu)가 (Tyr), (Ser) 및 (Thr)에 대해 가장 바람직하다.
상기 β- 및 γ-아미드 그룹을 4-메틸트리틸(Mtt), 2,4,6-트라이메톡시벤질(Tmob), 4,4-다이메톡시다이틸Bis-(4-메톡시페닐)-메틸(Dod) 및 트리틸(Trt) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. Trt가 (Asn) 및 (Gln)에 대해 가장 바람직하다.
상기 인돌 그룹을 폼일(For), 메시틸-2-설포닐(Mts) 및 t-부틸옥시카보닐(Boc) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. Boc가 (Trp)에 대해 가장 바람직하다.
상기 이미다졸 그룹을 벤질(Bzl), t-부틸옥시카보닐(Boc) 및 트리틸(Trt) 중에서 선택된 적합한 보호 그룹에 의해 보호할 수 있다. Trt가 (His)에 대해 가장 바람직하다.
상기 아미노산 Pqa의 합성은 문헌[J. Hutchinson et al., J. Med. Chem. 1996, 39, 4583-4591]에 개시되어 있다. 상기 Fmoc-Pqa 유도체를 NeoMPS 인코포레이티드(San Diego CA)로부터 구입하였다.
모든 용매, 아이소프로판올(iPrOH), 염화 메틸렌(CH2Cl2), 다이메틸폼아미드(DMF) 및 N-메틸피롤리논(NMP)을 피셔(Fisher) 또는 버딕 앤드 잭슨(Burdick & Jackson)으로부터 구입하였으며 추가의 증류 없이 사용하였다. 트라이플루오로아세트산을 할로카본(Halocarbon) 또는 플루카(Fluka)로부터 구입하였으며 추가의 정 제 없이 사용하였다.
다이아이소프로필카보다이이미드(DIC) 및 다이아이소프로필에틸아민(DIPEA)을 플루카 또는 알드리치로부터 구입하였으며 추가의 정제 없이 사용하였다. 하이드록시벤조트라이아졸(HOBT) 다이메틸설파이드(DMS) 및 1,2-에탄다이티올(EDT)을 시그마 케미칼 캄파니(Sigma Chemical Co.)로부터 구입하였으며 추가의 정제 없이 사용하였다. 보호된 아미노산은 일반적으로 L-형태를 가졌으며 바켐(Bachem) 또는 네오시스템(Neosystem)으로부터 상업적으로 수득하였다. 상기 시약들의 순도를 사용 전에 박층 크로마토그래피, NMR 및 융점에 의해 확인하였다. 벤즈하이드릴아민 수지(BHA)는 바켐 또는 어드밴스드 켐테크(Advanced Chemtech)로부터 수득한 스타이렌-1% 다이비닐벤젠(100-200 또는 200-400 메쉬)의 공중합체였다. 상기 수지의 전체 질소 함량은 일반적으로 0.3 내지 1.2 meq/g이었다.
바람직한 실시태양에서, 펩타이드를 문헌[Merrifield, J. Amer. Chem. Soc., 85, 2149(1963)]에 일반적으로 개시된 방법에 의해 고상 합성을 사용하여 제조하였지만, 당해 분야에 공지된 다른 등가의 화학 합성을 앞서 언급한 바와 같이 사용할 수 있었다. 고상 합성은 보호된 알파-아미노산을 적합한 수지에 커플링시킴으로써 상기 펩타이드의 C-말단 단부로부터 개시된다. 상기와 같은 출발 물질은 알파-아미노-보호된 아미노산을 에스터 결합에 의해 p-벤질옥시벤질 알콜(Wang) 수지에, 또는 Fmoc-링커, 예를 들어 p-((R,S)-α-(1-(9H-플루오렌-9-일)-메톡시폼아미도)-2,4-다이메틸옥시벤질)-페녹시아세트산(Rink 링커) 간의 아미드 결합에 의해 벤즈하이드릴아민(BHA) 수지에 결합시킴으로써 제조될 수 있다. 상기 하이드록시메틸 수지의 제조는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. Fmoc-링커-BHA 수지 지지체는 상업적으로 입수할 수 있으며 일반적으로는 합성하려는 목적하는 펩타이드가 C-말단에서 비 치환된 아미드를 가질 때 사용된다.
전형적으로, 상기 아미노산 또는 유사물질을, 아미노산 또는 유사물질의 Fmoc 보호된 형태를 2 내지 5 당량의 아미노산 및 적합한 커플링제와 함께 사용하여 상기 Fmoc-링커-BHA 수지상에 커플링시킨다. 커플링 후에, 상기 수지를 세척하고 진공 하에서 건조시킬 수 있다. 상기 아미노산의 상기 수지에의 부하는 Fmoc-아미노산 수지 분액의 아미노산 분석 또는 UV 분석에 의한 Fmoc 그룹의 측정에 의해 측정될 수 있다. 상기 수지를 염화 메틸렌 중의 아세트산 무수물 및 다이아이소프로필에틸아민과 반응시킴으로써 캡핑할 수 있다.
상기 수지를 여러 번의 반복 주기를 통해 운반하여 아미노산을 연속적으로 가한다. 상기 알파 아미노 Fmoc 보호 그룹을 염기성 조건 하에서 제거한다. DMF 중의 피페리딘, 피페라진 또는 모폴린(20 내지 40% v/v)을 상기 목적에 사용할 수 있다. 바람직하게는 DMF 중의 40% 피페리딘을 사용한다.
알파 아미노 보호 그룹의 제거에 이어서, 후속의 보호된 아미노산을 목적하는 순서로 단계적으로 커플링하여 중간체인 보호된 펩타이드-수지를 수득한다. 상기 펩타이드의 고상 합성에서 아미노산의 커플링에 사용된 활성화제는 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 상기와 같은 합성에 적합한 시약은 벤조트라이아졸-1-일옥시-트라이-(다이메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP), 브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(PyBroP)2-(1H-벤조트라이 아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU), 및 다이아이소프로필카보다이이미드(DIC)이다. 여기에서는 HBTU 및 DIC가 바람직하다. 다른 활성화제들이 문헌[Barany and Merrifield, The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, ed., Academic Press, 1979, pp 1-284]에 개시되어 있으며 이들을 사용할 수 있다. 다양한 시약들, 예를 들어 1 하이드록시벤조트라이아졸(HOBT), N-하이드록시숙신이미드(HOSu) 및 3,4-다이하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트라이아진(HOOBT)을 상기 합성 주기의 최적화를 위해 상기 커플링 혼합물에 가할 수 있다. 여기에서 HOBT가 바람직하다.
N-말단 아세틸 유도체의 제조를 위해서, 상기 수지 결합된 펩타이드를 5% DIEA와 함께 DMF 중의 20% 아세트산 무수물로 처리하여 아세틸화를 수행하였다. 다른 N-말단 아실화의 경우, 아실화를 30 분간 DIC/HOBT로 동일 반응계에서 활성화시킨 상응하는 카복실산을 사용하여 수행하였다.
전형적인 합성 주기에 대한 프로토콜은 하기와 같다:
프로토콜 1
단계 시약 시간
1 DMF 2 x 30 초
2 20% 피페리딘/DMF 1 분
3 20% 피페리딘/DMF 15 분
4 DMF 2 x 30 초
5 iPrOH 2 x 30 초
6 DMF 3 x 30 초
7 커플링 60 분 내지 18 시간
8 DMF 2 x 30 초
9 iPrOH 1 x 30 초
10 DMF 1 x 30 초
11 CH2Cl2 2 x 30 초
모든 세척 및 커플링을 위한 용매를 10 내지 20 ㎖/g 수지의 부피로 측정하 였다. 상기 합성 전체를 통한 커플링 반응을 카이저 닌하이드린(Kaiser Ninhydrin) 시험에 의해 모니터하여 완료 정도를 측정하였다(Kaiser et al. Anal. Biochem. 34, 595-598(1970)). 느린 반응 동역학이 Fmoc-Arg(Pmc) 및 입체 장애 산에 의한 2 차 아민에의 커플링에 대해 관찰되었다. 임의의 불완전 커플링 반응을 새로 제조한 활성화된 아미노산과 다시커플링시키거나 또는 상기 펩타이드 수지를 상술한 바와 같이 아세트산 무수물로 처리하여 캡핑하였다. 상기 완전히 조립된 펩타이드-수지를 진공 하에서 수 시간 동안 건조시켰다.
대부분의 화합물의 경우, 차단 그룹들을 제거하고 펩타이드를 상기 수지로부터 절단하였다. 예를 들어, 상기 펩타이드-수지를 실온에서 180 분 동안 수지 그램 당 100 ㎕ 에탄다이티올, 100 ㎕ 다이메틸설파이드, 300 ㎕ 아니솔, 및 9.5 ㎖ 트라이플루오로아세트산으로 처리하였다. 또는 한편으로, 상기 펩타이드-수지를 실온에서 180 분 동안 수지 그램 당 1.0 ㎖ 트라이아이소프로필 실란 및 9.5 ㎖ 트라이플루오로아세트산으로 처리하였다. 상기 수지를 여과하고 여액을 냉각된 에틸 에테르에 침전시켰다. 상기 침전물을 원심분리하고 에테르 층을 경사분리하였다. 상기 잔사를 2 또는 3 부피의 Et2O로 세척하고 원심분리하였다. 상기 조 생성물을 진공 하에서 건조시켰다.
상기 조 펩타이드의 정제를 바람직하게는 역상 C-18 컬럼(50 x 250 ㎜. 300A, 10 내지 15 ㎛) 상에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 시마츠(Shimadzu) LC-8A 시스템상에서 수행하였다. 상기 펩타이드를 최소 부피의 0.1 AcOH/H2O 또는 CH3CH/H2O 중에서 컬럼에 주입하였다. 구배 용출은 일반적으로 50 ㎖/분의 유속에서 70 분에 걸쳐 2% B 완충액, 2% 내지 70% B(완충액 A: 0.1% TFA/H2O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH3CN)에서 출발하였다. UV 검출을 220/280 ㎚에서 수행하였다. 상기 생성물들을 함유하는 분획들을 분리시키고 그들의 순도를 2 ㎖/분의 유속에서 10 분에 걸쳐 구배(2 내지 70%)(완충액 A: 0.1% TFA/H2O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH3CN)로 역상 Ace C18 컬럼(4.6 x 50 ㎜)을 사용하여 시마츠 LC-10AT 분석 시스템상에서 판단하였다. 고 순도인 것으로 판단된 분획들을 모으고 동결건조시켰다.
최종 생성물의 순도를 상기 나타낸 바와 같이 역상 컬럼 상에서 분석 HPLC에 의해 조사하였다. 모든 생성물의 순도는 대략 95 내지 99%인 것으로 판단되었다. 모든 최종 생성물에 대해서 또한 고속 원자 충격 질량 분광측정(FAB-MS) 또는 전기분무 질량 분광측정(ES-MS)을 수행하였다. 모든 생성물들은 허용 가능한 한계 내에서 예상된 모 M+H 이온을 제공하였다.
본 발명의 화합물들을 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제공할 수 있다. 바람직한 염의 예는 약학적으로 허용 가능한 유기산, 예를 들어 아세트산, 락트산, 말레산, 시트르산, 말산, 아스코브산, 숙신산, 벤조산, 살리실산, 메탄설폰산, 톨루엔설폰산, 트라이플루오로아세트산 또는 파모산뿐만 아니라 중합체산, 예를 들어 탄닌산 또는 카복시메틸 셀룰로스와 형성된 염, 및 무기산, 예를 들어 할로겐화수소산(예를 들어 염산), 황산 또는 인산 등과의 염이다. 숙련가에게 공지된 약학적 으로 허용 가능한 염을 수득하기 위한 임의의 과정을 사용할 수 있다.
본 발명의 방법의 실시에서, 유효량의 본 발명의 펩타이드 중 어느 하나 또는 본 발명의 펩타이드 중 어느 하나 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 조합을 당해 분야에 공지된 통상적이고 허용 가능한 방법 중 어느 하나를 통해 단독으로 또는 함께 투여한다. 투여는 예를 들어 하루에 한 번, 매 3일마다 한 번, 또는 1 주일에 한 번일 수 있다. 따라서 상기 화합물 또는 조성물을 경구(예를 들어 구강), 설하, 비 경구(예를 들어 근육 내, 정맥 내 또는 피하), 직장(예를 들어 좌약 또는 세척액에 의해), 경피(예를 들어 피부 일렉트로포레이션), 또는 흡입(예를 들어 에어로졸)에 의해, 및 정제 및 현탁액을 포함하여 고체, 액체 또는 기상 투여의 형태로 투여할 수 있다. 상기 투여를 단일 단위 투여형으로 연속적인 요법과 함께 또는 단일 투여 요법으로 임의로 수행할 수 있다. 상기 치료 조성물은 또한 친지성 염, 예를 들어 파모산과 함께 오일 현탁액 또는 분산액의 형태, 또는 피하 또는 근육 내 투여를 위한 생분해성 서방성 조성물의 형태일 수 있다.
따라서, 본 발명의 방법을 증상의 경감이 특별히 요구되거나 추정 상 긴급한 경우 수행한다. 한편으로, 본 발명의 방법을 연속적인 치료 또는 예방학적 치료로서 유효하게 실시한다.
본 발명 조성물의 제조에 유용한 약학 담체는 고체, 액체 또는 기체일 수 있으며; 따라서 상기 조성물은 정제, 환제, 캡슐, 좌약, 분말, 장 코팅 또는 다른 보호된 제형(예를 들어 이온 교환 수지 상에의 결합 또는 지질-단백질 소낭 중의 패키징), 서방성 제형, 용액, 현탁액, 엘릭서, 에어로졸 등의 형태를 취할 수 있다. 상기 담체를 다양한 오일, 예를 들어 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일, 예를 들어 땅콩 오일, 대두 오일, 미네랄 오일, 참기름 등으로부터 선택할 수 있다. 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 글리콜이 특히(혈액과 등장성인 경우) 주사용액의 경우에 바람직한 액체 담체이다. 예를 들어, 정맥 내 투여용 제형은 고체 활성 성분(들)을 물에 용해시켜 수성 용액을 제조하고, 상기 용액을 멸균성으로 만들어 제조한 활성 성분(들)의 멸균 수용액을 포함한다. 적합한 약학 부형제로는 전분, 셀룰로스, 활석, 글루코스, 락토오스, 활석, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카, 마그네슘 스테아레이트, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 염화 나트륨, 건조된 탈지유, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 물, 에탄올 등이 있다. 상기 조성물에 통상적인 약학 첨가제, 예를 들어 보존제, 안정제, 습윤 또는 유화제, 삼투압 조절용 염, 완충제 등을 가할 수 있다. 적합한 약학 담체 및 그의 제형은 문헌[E.W. Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences]에 개시되어 있다. 상기와 같은 조성물은 어쨌든 수용자에게 적합한 투여를 위해 적합한 투여형을 제조하기 위해서 적합한 담체와 함께 유효량의 상기 활성 화합물을 함유할 것이다.
본 발명 화합물의 용량은 다수의 인자, 예를 들어 투여 방식, 환자의 연령 및 체중, 및 치료하려는 환자의 조건에 따라 변하며, 최종적으로는 주치의 또는 수의사에 의해 결정될 것이다. 주치의 또는 수의사에 의해 결정되는 상기와 같은 활성 화합물의 양을 본 발명 및 청구의 범위에서 "유효량"이라 칭한다. 예를 들어 비 내 투여를 위한 용량은 전형적으로는 약 0.001 내지 약 0.1 ㎎/㎏ 체중의 범위이다. 인간에서, 펩타이드 함량을 기준으로 한 바람직한 피하 용량은 약 0.001 내 지 약 100 ㎎; 바람직하게는 약 0.1 내지 약 15 ㎎이다. API의 경우, 상기 용량은 약 0.015 내지 약 100 ㎎; 바람직하게는 약 1 내지 약 100 ㎎의 범위일 것이다.
이제 본 발명을 하기 실시예에서 추가로 개시할 것이며, 이들 실시예는 단지 예시적인 것으로서 해석되며 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
시약의 제조
mPEG 30k - 메실레이트
Figure 112008048311818-pct00006
자기 교반기, 딘-스타크 트랩, 환류 냉각기 및 아르곤(또는 질소) 유입구 버블러가 장착된 1 L 환저 플라스크를 mPEG 30 kDa(Nippon Oil and Fat으로부터 수득함) 100 g(3.34 밀리몰) 및 톨루엔 500 ㎖로 충전하였다. 톨루엔 중의 PEG 용액을 톨루엔 250 ㎖을 증류시킴으로써 공비증류에 의해 건조시키고 이어서 상기 용액을 실온으로 냉각시켰다. 상기 용액에 무수 다이클로로메탄 200 ㎖을 가하고, 상기 용액을 0 내지 5 ℃로 냉각시키고 트라이에틸아민 0.67 ㎖(4.84 밀리몰) 및 메탄설포닐 클로라이드 0.33 ㎖(4.34 밀리몰)을 고무 격벽을 통해 주사기를 사용하여 적가하였다. 상기 혼합물을 약 4 ℃에서 2 시간 동안 건조시키고 이어서 실온에서 밤새 아르곤 기체 하에서 교반하였다.
상기 혼합물을 회전 증발기 상에서 농축시키고 거친 유리 프릿을 통해 여과 하여 염을 제거하였다(주의: 상기 여과 동안 상기 유리 프릿을 가온하여 상기 용액이 고화되는 것을 방지한다). 상기 생성물을 약 1800 ㎖의 저온 아이소프로필 알콜 및 다이에틸 에테르(30:70, v/v)를 첨가하여 침전시켰다. 상기 생성물을 수거하고 실온에서 밤새 진공 하에 건조시켜 백색 고체 90 g(90%)을 제공하였다.
단계 2. mPEG 30k -아민
Figure 112008048311818-pct00007
자기 교반기 및 아르곤 유입구 버블러가 장착된 2L 환저 플라스크를 상기 제조된 mPEG 30 kDa 메실레이트 2 90 g(3 밀리몰) 및 수산화 암모늄 수용액(30%, v/v) 1600 ㎖로 충전하였다. 상기 용액에 염화 암모늄 160 g을 가하였다. 상기 용액을 조심스럽게 가온하여 상기 PEG 메실레이트를 전부 용해시켰다. 생성 용액을, 버블러를 통해 과잉의 기체를 실온에서 배출시켜 상기 반응 플라스크 중의 압력 형성을 방지하면서 실온에서 48 시간 동안 교반하였다.
상기 반응이 완료된 후에, 염화 나트륨 160 g(10 중량%)을 가하고 상기 혼합물을 3 x 200 ㎖ = 1200 ㎖의 다이클로로메탄으로 추출하였다. 상기 합한 유기 추출물을 무수 황산 나트륨 상에서 약 1 시간 동안 건조시키고, 여과하고 회전 증발기 상에서 농축시켰다. 상기 생성물을 저온 다이에틸 에테르 1800 ㎖의 첨가에 의해 침전시키고 실온에서 밤새 진공 하에 건조시켜 백색 고체로서 3 85 g(94%)을 제공하였다.
단계 3. mPEG 30k - 숙신아미드 산
Figure 112008048311818-pct00008
자기 교반기 및 아르곤 유입구 버블러가 장착된 1L 환저 플라스크를 mPEG 30 kDa 아민 3 60 g(2.00 밀리몰) 및 무수 아세토나이트릴 500 ㎖로 충전하였다. 상기 용액을 약 4 ℃로 냉각시키고, 이어서 무수 아세토나이트릴 50 ㎖ 중의 숙신산 무수물 2 g(20.00 밀리몰)을 적가 깔때기를 사용하여 서서히 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 아르곤 기류 하에 교반하였다.
상기 반응이 완료된 후에, 용매를 회전 증발기에 의해 증발 건조시켰다. 이어서, 상기 생성물을 물 400 ㎖에 용해시켰다. 상기 용액의 pH를 1M NaOH 용액으로 7.0으로 조절하고 pH를 7.0에서 유지시키면서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 용액에 염화 나트륨 40 g(10 중량%)을 가하고 pH를 6N HCl 용액으로 ∼4.2로 조절하였다. 생성된 수성 혼합물을 200, 100, 50 ㎖ = 350 ㎖의 다이클로로메탄으로 추출하였다. 상기 합한 유기 추출물을 무수 황산 나트륨 상에서 약 1 시간 동안 건조시켰다. 상기 황산 나트륨을 여과하고 여액을 회전 증발기 상에서 농축시켰다. 상기 생성물을 저온 다이에틸 에테르 1L에서 침전시켰다. 상기 생성물을 수거하고 실온에서 진공 하에 밤새 건조시켜 백색 고체로서 4 56 g(93%)을 제공하였다.
단계 4. mPEG 30k - 숙신이미딜 숙신아미드
Figure 112008048311818-pct00009
자기 교반기 및 아르곤 유입구 버블러가 장착된 500 ㎖ 환저 플라스크를 mPEG 30 kDa 숙신아미드 산 4 56 g(1.87 밀리몰) 및 무수 다이클로로메탄 500 ㎖로 충전하였다. 상기 용액에 N-하이드록시숙신이미드 0.24 g(2.05 밀리몰) 및 1,3-다이사이클로헥실카보다이이미드 0.46 g(2.24 밀리몰)을 서서히 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 아르곤 기류 하에 교반하였다.
상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 회전 증발기 상에서 증발 건조시켰다. 이어서, 상기 생성물을 무수 톨루엔 200 ㎖에 용해시키고 상기 용액을 셀라이트 패드가 놓인 예열된 거친 유리 프릿을 통해 여과하였다. 상기 생성물을 저온 무수 아이소프로필 알콜 및 다이에틸 에테르(30:70, v/v) 1200 ㎖의 첨가에 의해 침전시켰다. 상기 생성물을 수거하고 실온에서 진공 하에 밤새 건조시켜 백색 고체로서 5 20 g(80%)을 제공하였다.
바람직한 화합물의 제조
실시예 1
Fmoc -링커- BHA 수지의 제조
벤즈하이드릴아민 코폴리스타이렌-1% 다이비닐벤젠 가교결합된 수지(10.0 g, 9.3 mequiv, 100 내지 200 ASTM 메쉬, Advanced ChemTech)를 CH2Cl2 100 ㎖ 중에 팽윤시키고, 여과하고, CH2Cl2, 6% DIPEA/CH2Cl2(2 회), CH2Cl2(2 회) 각각 100 ㎖로 연속적으로 세척하였다. 상기 수지를 실온에서 24 시간 동안 25% DMF/CH2Cl2 100 ㎖ 중의 p-((R,S)-α-(1-(9H-플루오렌-9-일)-메톡시폼아미도)-2,4-다이메톡시벤질)-페녹시아세트산(Fmoc-링커)(7.01 g, 13.0 밀리몰), N-하이드록시벤조트라이아졸(2.16 g, 16.0 밀리몰) 및 다이아이소프로필-카보다이이미드(2.04 ㎖, 13.0 밀리몰)로 처리하였다. 상기 수지를 여과하고 CH2Cl2(2 회), 아이소프로판올(2 회), DMF 및 CH2Cl2(3 회) 각각 100 ㎖로 연속적으로 세척하였다. 카이저 닌하이드린 분석은 음성이었다. 상기 수지를 진공 하에서 건조시켜 Fmoc-링커-BHA 수지 16.12 g을 제공하였다. 상기 수지의 일부(3.5 ㎎)에 Fmoc 탈보호 및 정량적인 UV 분석을 수행하였으며, 이는 0.56 밀리몰/g의 부하를 가리켰다.
실시예 2
플루오레닐메틸옥시카보닐 ( Fmoc ) 화학을 사용하는 어플라이드 바이오시스템 433A 합성기에 의한 펩타이드의 합성을 위한 프로토콜
어플라이드 바이오시스템 433A 합성기(Foster City, CA)에 의한 0.25 밀리몰 규모 펩타이드 합성을 위해서, FastMoc 0.25 밀리몰 주기를 수지 샘플링과 함께 또는 상기 샘플링 없이 41 ㎖ 반응 용기에서 사용하였다. 상기 Fmoc-아미노산 수지를 NMP 2.1 g, DMF 중의 0.45M HOBT/HBTU 2 g 및 2M DIEA로 용해시키고, 이어서 반응 용기로 옮겼다. 상기 기본적인 FastMoc 커플링 주기를 "BADEIFD"로 나타내며, 여기에서 각각의 문자는 모듈(어플라이드 바이오시스템스에 의해 정의된 바와 같다)을 나타낸다. 예를 들어:
B는 20% 피페리딘/NMP를 사용한 Fmoc 탈보호 및 관련된 세척 및 30 분간의 판독(UV 모니터링 또는 전도도)에 관한 모듈을 나타내고; A는 0.45M HBTU/HOBt 및 2.0M DIEA에 의한 카트리지 중의 아미노산 활성화 및 N2 발포와 혼합에 관한 모듈을 나타내고; D는 반응 용기에서 수지의 NMP 세척에 관한 모듈을 나타내고; E는 커플링을 위한 반응 용기에의 상기 활성화된 아미노산의 전달에 관한 모듈을 나타내고; I는 반응 용기의 와동 온 오프에 따른 10 분 기다림 주기에 관한 모듈을 나타내고; F는 카트리지 세척, 대략 10 분간의 커플링 및 반응 용기의 배수에 관한 모듈을 나타낸다. 커플링을 전형적으로는 1 회 또는 수 회 모듈 "I"의 부가에 의해 연장시켰다. 예를 들어 이중 커플링을 상기 과정 "BADEIIADEIFD"를 수행함으로써 실행하였다. 다른 모듈, 예를 들어 염화 메틸렌 세척의 경우 c 및 아세트산 무수물에 의한 캡핑의 경우 "C"를 이용할 수 있다. 개별적인 모듈을 또한 예를 들어 전달되는 용매 또는 시약의 양을 변경시키기 위해서 다양한 작용 타이밍, 예를 들어 전달 시간의 변화에 의해 변형시킬 수 있었다. 상기 주기를 전형적으로는 하나의 아미노 산 커플링에 사용하였다. 그러나 4 펩타이드의 합성을 위해서 상기 주기를 반복하고 연결시켰다. 예를 들어 BADEIIADEIFD를 사용하여 첫 번째 아미노산을 커플링한 다음 BADEIIADEIFD를 사용하여 두 번째 아미노산을 커플링하고, 이어서 BADEIIADEIFD를 사용하여 세 번째 아미노산을 커플링한 다음, BADEIIADEIFD를 사용하여 네 번째 아미노산을 커플링하고, 이어서 최종 탈보호 및 세척을 위해 BIDDcc를 사용하였다.
실시예 3
H- Ile - Lys - Pro - Glu - Ala - Pro - Gly - Glu - Asp - Ala - Ser - Pro - Glu - Glu - Leu - Asn - Arg - Tyr -Tyr-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-The-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH 2 (PYY 3-36 )의 제조
Figure 112008048311818-pct00010
상기 펩타이드를 어플라이드 바이오시스템 433A 합성기 상에서 Fmoc 화학을 사용하여 합성하였다. 상기 합성기는 실시예 2에 개시된 모듈을 사용하여 이중 커플링에 대해 프로그램되어 있다. 상기 합성을 실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)를 사용하여 0.25 밀리몰 규모로 수행하였다. 상기 합성의 끝에서, 상기 수지를 절단용 진탕기 상의 반응 용기로 옮겼다. 상기 펩타이드 를 97% TFA/3% H2O 13.5 ㎖ 및 트라이아이소프로필실란 1.5 ㎖을 사용하여 실온에서 180 분간 상기 수지로부터 절단하였다. 탈보호 용액을 저온 ET2O 100 ㎖에 가하고, TFA 1 ㎖ 및 저온 ET2O 30 ㎖로 세척하여 상기 펩타이드를 침전시켰다. 상기 펩타이드를 2 x 50 ㎖ 폴리프로필렌 튜브에서 원심분리시켰다. 상기 개별적인 튜브로부터의 침전물을 단일 튜브에 합하고 저온 ET2O로 3 회 세척하고 하우스 진공 하에 건조기에서 건조시켰다.
상기 조 물질을 퍼수트(Pursuit) C18-컬럼(250 x 50 ㎜, 10 ㎛ 입자 크기) 상에서 예비 HPLC에 의해 정제하고 90 분간, 60 ㎖/분의 유속 및 220/280 ㎚에서의 검출로, 2 내지 70% B의 선형 구배(완충액 A: 0.1% TFA/H2O; 완충액 B: 0.1% TFA/CH3CN)로 용출시켰다. 상기 분획들을 모으고 분석 HPLC에 의해 검사하였다. 순수한 생성물을 함유하는 분획들을 합하고 동결건조시켜 백색 비결정성 분말 151 ㎎(15%)을 수득하였다. C180H279N53O54에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 4049.55, 실측치 4050.40.
실시예 4
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln - Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00011
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 48 ㎎(9%)을 수득하였다. C98H155N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2131.53, 실측치 2130.56.
실시예 5
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00012
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성(N-메틸 Arg를 상기 서열의 35 번 위치에 삽입하였다) 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 32 ㎎(6%)을 수득하였다. C99H155N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2143.56, 실측치 2143.50.
실시예 6
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -m- Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00013
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 38.5 ㎎(7%)을 수 득하였다. C99H155N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2143.5477, 실측치 2143.50.
실시예 7
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -3- 요오도 - Tyr -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00014
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 41 ㎎(7%)을 수득하였다. C99H154N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2269.44, 실측치 2269.20.
실시예 8
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -3,5 다이 F-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00015
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 28 ㎎(5%)을 수득하였다. C99H153F2N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2179.52, 실측치 2179.46.
실시예 9
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -2,6 다이 F-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00016
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 49.3 ㎎(9%)을 수득하였다. C99H153F2N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2179.53, 실측치 2179.50.
실시예 10
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -2,6 다이 Me -Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00017
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 13.5 ㎎(3%)을 수득하였다. C101H159N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2171.60, 실측치 2171.40.
실시예 11
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -4 메톡시 - Phe -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00018
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 72 ㎎(13%)을 수득하였다. C100H157N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2157.57, 실측치 2157.58.
실시예 12
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Phe - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00019
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 85.3 ㎎(16%)을 수득하였다. C99H155N33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2127.55, 실측치 2127.53.
실시예 13
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -4 아미노- Phe -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00020
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 51.4 ㎎(10%)을 수득하였다. C99H156N34O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2142.56, 실측치 2142.55.
실시예 14
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -4F- Phe - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00021
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 35 ㎎(7%)을 수득하였다. C99H154FN33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2145.54, 실측치 2145.51.
실시예 15
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -4-( CH2OH )- Phe -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00022
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 24 ㎎(4%)을 수득하였다. C100H157N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2157.57, 실측치 2157.56.
실시예 16
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -4- 트라이플루오로메틸 - Phe - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00023
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 81 ㎎(15%)을 수득하였다. C100H154F3N33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2195.54, 실측치 2195.51.
실시예 17
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - 3플루오로 - Phe -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00024
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 84 ㎎(16%)을 수득하였다. C99H154FN33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2145.54, 실측치 2145.53.
실시예 18
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -2,3,4,5,6 펜타플루오로 - Phe - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00025
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 89 ㎎(16%)을 수득하였다. C99H150FN33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2217.50, 실측치 2217.48.
실시예 19
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -3,4- 다이클로로 -Phe-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00026
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 46 ㎎(8%)을 수득하였다. C99H153Cl2N33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2196.44, 실측치 2196.41.
실시예 20
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Cha - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00027
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 49 ㎎(9%)을 수득하였다. C106H162N34O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2248.69, 실측치 2248.71.
실시예 21
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Trp - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00028
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 57 ㎎(10%)을 수득하였다. C108H157N35O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2281.68, 실측치 2281.67.
실시예 22
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -1- Nal - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00029
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 45 ㎎(8%)을 수득하였다. C103H157N33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2177.61, 실측치 2177.59.
실시예 23
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -2- Nal - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00030
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 43 ㎎(8%)을 수득하였다. C103H157N33O20에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2177.60, 실측치 2177.58.
실시예 24
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Leu - Val - Thr - Arg - Gln - Arg -C-α- 메틸Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00031
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 35.1 ㎎(7%)을 수득하였다. C99H155N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2143.55, 실측치 2143.56.
실시예 25
H- Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00032
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 130 ㎎(23%)을 수득하였다. C104H154N34O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2216.60, 실측치 2216.62.
실시예 26
H-Ile-Nle-Pqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2의 제조
Figure 112008048311818-pct00033
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 84 ㎎(15%)을 수득하였다. C104H153N33O21에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2201.59, 실측치 2201.56.
실시예 27
Ac - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -2,6-F2- Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00034
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 24 ㎎(4%)을 수득하였다. C106H154F2N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2099.49, 실측치 2100.3.
실시예 28
Ac - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00035
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 68 ㎎(12%)을 수득하였다. C106H156N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2258.64, 실측치 2258.61.
실시예 29
펜토일 - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00036
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 67 ㎎(12%)을 수득하였다. C109H162N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2300.72, 실측치 2300.69.
실시예 30
트라이메틸아세틸 - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00037
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 6 ㎎(1%)을 수득하였다. C109H162F2N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2300.72, 실측치 2300.68.
실시예 31
사이클로헥실아세틸 - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00038
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 15 ㎎(3%)을 수득하였다. C112H166N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2340.79, 실측치 2340.81.
실시예 32
벤조일 - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00039
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 23 ㎎(4%)을 수득하였다. C111H158N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2320.71, 실측치 2320.68.
실시예 33
아다만토일 - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr -NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00040
실시예 1로부터의 Fmoc-링커-BHA 수지(450 ㎎, 0.25 밀리몰)에 실시예 3의 과정에 따라 고상 합성 및 정제를 수행하여 백색 비결정성 분말 29 ㎎(5%)을 수득하였다. C116H170N34O22에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2392.86, 실측치 2392.89.
실시예 34 내지 39 및 41에 대한 분석 방법
시험 및 대조용 제품들을 하기 역상 HPLC/UV 과정을 사용하여 분석하였다:
자동샘플러 알리안스 워터스(Alliance Waters) 2690 분리 모듈
주입 부피 10 ㎕
주입기 온도 주변
검출기 워터스 996 포토다이오드 어레이(Photodiode Array) 검출기
검출기 파장 280 ㎚
컬럼 에이질런드 이클립스(Agilent Eclipse) XDB-C8, 5 마이크론, 150 ㎜ x 4.6 ㎜ 내경. PN: 99367-906
컬럼 온도 25 ℃
유속 1.0 ㎖/분(∼1000 psi)
이동상 A 0.05% TFA 함유 수
이동상 B 0.05% TFA 함유 아세토나이트릴
실행시간 대략 30 분
샘플 제제 대략 0.2 내지 0.5 ㎎/㎖
희석제 탈이온수
이동상 구배 조건 1(RP-HPLC1):
시간, 분 이동상 A% 이동상 B% 조건
0 95 5 선형 경사
20 5 95
26 95 5 평형
이동상 구배 조건 2(RP-HPLC2):
시간, 분 이동상 A% 이동상 B% 조건
0 85 15 선형 경사
20 25 75
26 85 15 평형
실시예 34
(( PEG -30,000) CH 2 CH 2 CO ) Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -(NMe)Arg-Tyr-NH 2 및 Ile (( PEG -30,000) CH 2 CH 2 CO )(ε)Lys- Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00041
(상기에서, n = ∼675)
Figure 112008048311818-pct00042
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 69.8% 전환율
RP-HPLC1-정제된 10.1 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 33.9 kDa
실시예 25로부터의 펩타이드 25 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 7.5 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 프로피온산(Nektar로부터 구입함) 500 ㎎을 칭량하여 2:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 1은 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 69.8%의 30 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘(Amicon) 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다.
실시예 34의 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 2는 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(RT = 10.1 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >97%인 것으로 측정되었다. 도 3은 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
방법들의 조합을 사용하여 PEG 변형 부위를 측정하였다. 여기에는 MALDI TOF MS, 역상 HPLC, 단백질 분해 절단 및 N-말단 서열화(Edman)가 포함된다. 상기 분석으로부터의 결과는 상기 PEG의 대부분이 상기 펩타이드의 위치(R2)에서 상기 리신의 ε 아미노 그룹을 통해 결합됨을 보였다.
실시예 35
(( PEG -40,000) CO ) Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg -Tyr-NH 2 및 Ile (( PEG -40,000) CO )(ε)Lys- Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg -Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00043
(상기에서, n = ∼900)
Figure 112008048311818-pct00044
(상기에서, n = ∼900)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 60.4% 전환율
RP-HPLC1-정제된 10.1 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 41.9 kDa
실시예 25로부터의 펩타이드 25 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 8.0 완충액에 용해시켰다. 40 kDa PEG-벤조트라이아졸 카보네이트 319 ㎎을 칭량하여 0.8:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 4는 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 60.4%의 40 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다.
실시예 35의 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 5는 정제된 40 kDa PEG-PYY 펩타이드(RT = 10.1 분)의 HPLC 크로 마토그램이다. 40 kDa 펩타이드의 순도는 >90%인 것으로 측정되었다. 도 6은 40 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
실시예 36
(( PEG -30,000) CH 2 CH 2 NHCOCH 2 CH 2 CO ) Ile - Nle - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr -Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00045
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 94.1% 전환율
RP-HPLC1-정제된 10.4 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 34.2 kDa
실시예 26으로부터의 펩타이드 13 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 8.0 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 숙신아미드 624 ㎎을 칭량하여 4:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF(Amersham)상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 7은 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 94.1%의 30 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다. 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 8은 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(10.4 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >90%인 것으로 측정되었다. 도 9는 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타낸다.
실시예 37
(( PEG -30,000) CH ( CH 3 ) CH 2 CO ) Ile - Nle - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00046
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 93.4% 전환율
RP-HPLC1-정제된 10.5 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 34.6 kDa
실시예 26으로부터의 펩타이드 1.25 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 8.0 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 베타-SBA 62 ㎎을 칭량하여 4:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희 석하고 SP-세파로스 FF(Amersham)상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 10은 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 93.4%의 30 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 PYY 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다. 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 11은 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(10.5 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >90%인 것으로 측정되었다. 도 12는 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
실시예 38
Ac - Ile ( PEG -30,000) CH 2 CH 2 CO (ε) Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00047
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 83.3% 전환율
RP-HPLC1-정제된 9.5 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 34.6 kDa
실시예 28로부터의 펩타이드 100 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 8.0 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 프로피온산(Nektar로부터 구입) 1.8 g을 칭량하여 1.5:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 13은 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 83.3%의 30 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다.
실시예 38의 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 14는 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(RT = 9.5 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >95%인 것으로 측정되었다. 도 15는 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
실시예 39
Ac - Ile (( PEG -30,000) CH 2 CH 2 NHCOCH 2 CH 2 CO )(ε)Lys- Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val -Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00048
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC1-반응 혼합물 81.4% 전환율
RP-HPLC1-정제된 9.5 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 33.6 kDa
실시예 28로부터의 펩타이드 100 ㎎을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 8.0 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 숙신아미드 3.6 g을 칭량하여 3:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 후에 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 16은 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 81.4%의 30 kDa 펩타이드를 제공하였다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 250 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다.
실시예 39의 농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 17은 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(RT = 9.5 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >97%인 것으로 측정되었다. 도 18은 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
실시예 40
Fmoc - Ile - Lys - Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr - Arg - Gln -( NMe ) Arg - Tyr - NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00049
Fmoc-링커-BHA 수지 @0.45 ㎜/g(AnaSpec Inc. 카탈로그 #408/452-5055로부터 구입) 55.0 g을 하기 과정에 의해 고상 펩타이드 합성 및 정제하였다: Fmoc 보호된 아미노산을 DIC/HOBt를 통해 25% 과잉으로 커플링하였다(55.0 g x 0.45 ㎜/g x 1.25 당량 = 31.0 ㎜). 모든 탈보호는 대략 10 ㎖/g에서 DMF 중의 20% 피페리딘으로 2 x 10 분이었다(펩타이드-수지의 부피가 증가함에 따라 조절됨). 탈보호 후 상기 펩타이드 수지를 4 x DMF(20 부피)로 세척하였다.
모든 커플링을 ∼40 ㎖ DIC(∼6 당량) 및 4.5 g HOBt(1.25 당량)로 수행하였다. 커플링 후에 상기 수지 용액을 ∼.25㎖로 샘플링하고 CH2Cl2로 세척하고, 닌하이드린을 통해 완료에 대해 검사하였다. NMe-Arg 및 Pqa에의 커플링 후에, 상기 수지를 CH2Cl2로 세척하고 3 방울의 DMAc 중의 2% 클로리날 및 3 방울의 DMAc 중의 2% 아세트알데하이드로 검사하였다(황색 용액의 변화가 없음은 2 차 아민이 없음을 가리키고 청색 내지 흑색 비드는 불완전한 커플링을 가리킨다). 커플링이 불완전한 것으로 판단되면, DIEA를 상기 커플링 용액에 가하고 1 시간 동안 추가로 속행시켰다. 완료되었으면, 상기 수지를 4 x DMF(20 부피)로 세척하였다.
Fmoc-Tyr(But)-OH: 14.0 g. Fmoc-NMeArg(Mtr)-OH: 20.0 g. Fmoc-Gln(Trt)-OH: 18.5 g. Fmoc-Arg(Pbf)-OH: 20.0 g. Fmoc-Thr(But)-OH: 18.0 g. Fmoc-Val-OH: 10.5 g. Fmoc-Trp-OH: 13.0 g. Fmoc-Asn(Trt)-OH: 18.0 g. Fmoc-Leu-OH: 11.0 g. Fmoc-Tyr(But)-OH: 14.0 g. Fmoc-His(Trt)-OH: 20.0 g. Fmoc-Arg(Pbf)-OH: 20.0 g. Fmoc-Pqa-OH: 15.4 g. Fmoc-Lys(Boc)-OH: 14.1 g. Fmoc-Ile-OH: 11.0 g.
상기 펩타이드 수지를 3 x DMF, 3 x CH2Cl2 및 3 x MeOH로 세척하고 흡입 하에 건조시켜 펩타이드 수지 115.38 g을 수득하였다. 상기 수지를 TFA 절단을 위해 6 x 19.25 g으로 분할하였다.
펩타이드 수지 19.25 g을 1:1:1 DTE;아니솔;티오아니솔 8.0 ㎖, iPr3SiH 8.0 ㎖, H2O 8.0 ㎖ 및 TFA/200 ㎖로 6 시간(6:30 AM에서 13:30 PM) 동안 절단한 다음 2.0 L 저온(-20 ℃) Et2O에서 침전시켰다. 상기 침전물을 8 x 50 ㎖ 폴리프로필렌 원심분리 튜브에서 원심분리에 의해 수거하고 3 x 저온 Et2O로 세척하였다. 이어서 상기 침전물을 하우스 진공 하에 밤새 건조시켜 조 펩타이드 6.5 g을 수득하였다. 6 탈보호 후 조 펩타이드의 총량은 38.71 g이었다.
조 펩타이드의 정제를 역상 퍼수트 C-18 컬럼(50 x 250 ㎜. 300Å, 10 ㎛) 상에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 시마츠 LC-8A 시스템상에서 수행하였다. 조 물질 38.71 g을 36 프렙으로 정제하였다. 매번 대략 1.1 g의 조 펩타이드를 최소량의 물 및 아세토나이트릴에 용해시키고 컬럼에 주입하였다. 구배 용출은 일반적으로 50 ㎖/분의 유속에서 70 분에 걸쳐 20% B 완충액, 20% 내지 70% B(완충액 A: 0.1% TFA/H2O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH3CN)에서 출발하였다. UV 검출을 220/280 ㎚에서 수행하였다. 상기 생성물들을 함유하는 분획들을 분리시키고 순도를 2.5 ㎖/분의 유속에서 10 분에 걸쳐 구배(20 내지 70%)(완충액 A: 0.1% TFA/H2O, 완충액 B: 0.1% TFA/CH3CN)로 역상 퍼수트 C18 컬럼(4.6 x 50 ㎜)을 사용하여 시마츠 LC-10AT 분석 시스템상에서 판단하였다. 고 순도인 것으로 판단된 분획들을 모으고 동결건조시켜 백색 비결정성 분말을 수득하였다. 36 프렙으로부터 동결건조된 생성물을 합하고 다시 동결건조시켜 순수한 펩타이드 8.233 g(12.6%)을 제공하였다. 최종 생성물의 순도를 상기 나타낸 바와 같이 역상 컬럼 상에서 분석 HPLC에 의해 다시 조사하였으며 대략 95 내지 99%였다. C119H164N34O23에 대한 (ES)+-LCMS m/e 계산치 2438.85, 실측치 2438.84.
실시예 41
Ile (( PEG -30,000) CH 2 CH 2 NHCOCH 2 CH 2 CO )(ε)Lys- Pqa - Arg - His - Tyr - Leu - Asn - Trp - Val - Thr -Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH 2 의 제조
Figure 112008048311818-pct00050
(상기에서, n = ∼675)
분석 방법 결과
RP-HPLC2 93.8% 전환율 - 보호된 PEG-펩타이드
89.5% 수율 전체 - 탈보호된 PEG-펩타이드
RP-HPLC2-정제된 10.1 분 체류 시간
MALDI-TOF MS 평균 질량 = 35 kDa
실시예 40으로부터의 펩타이드 1.8 g을 칭량하여 50 mM 보레이트, pH 7.5 완충액에 용해시켰다. 30 kDa PEG-숙신이미딜 숙신아미드 37.5 g을 칭량하여 대략 2:1 PEG:펩타이드 몰 비를 성취하였으며 이를 용해된 펩타이드에 가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 2 시간 교반하였다. 상기 peg화된 펩타이드를, 피페리딘(20%)을 상기 반응 혼합물에 실온에서 1 시간 동안 가하여 탈보호하였다. 상기 반응 혼합물을 얼음 상에 놓고 빙초산(20%)을 서서히 가하여 산성화시켰다. 이어서 상기 반응 혼합물을 20 mM NaOAc, pH 4.5 완충액에서 10 배 희석하고 SP-세파로스 FF상에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 도 19는 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이다. 상기 반응은 93.8%의 보호된 peg화된 펩타이드를 제공하였다. 도 20은 상기 탈보호된 반응 혼합물의 HPLC 크로마토그램이며, 이때 peg화된 탈보호된 펩타이드의 전체 수율은 89.5%이었다.
모노-peg화된 PYY 펩타이드를 계단식 NaCl 구배를 사용하여 용출시켰다. 전형적으로는, 목적하는 모노-peg화된 펩타이드를 175 mM NaCl로 용출시켰다. 상기 용출된 PEG-PYY와 같은 펩타이드를 10 kDa MW 컷오프 멤브레인을 사용하여 아미콘 한외여과 셀에서 농축시켰다. 이어서 상기를 PBS로 1회 10 배 초여과시켰다.
농축된 펩타이드를 분석을 위해 제공하고, 분석하고 -20 ℃에서 보관하였다. 도 21은 정제된 30 kDa PEG-PYY 펩타이드(RT = 10.1 분)의 HPLC 크로마토그램이다. 30 kDa 펩타이드의 순도는 >95%인 것으로 측정되었다. 도 22는 30 kDa PEG-PYY 펩타이드의 MALDI-TOF(분자량 확인을 위해 수행되었다)를 나타내는 그래프이다.
실시예 42
칼슘 유출 분석
G 단백질 키메라 Gαqi9 및 하이그로마이신-B 내성 유전자로 안정하게 형질감염시킨 HEK-293 세포를 인간 NPY2 수용체로 추가로 형질감염시키고 G418 항생제 선별을 수행하였다. 하이그로마이신-B 및 G418 모두에서 선별에 이어서, 개별적인 클론들을 PYY에 대한 그의 반응에 대해 분석하였다. 상기 형질감염된 세포(HEK293/hNPY2R)를 10% 송아지 태아 혈청, 하이그로마이신-B 50 ㎍/㎖, 2mM 글루타민, 100U/㎖ 페니실린, 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신 및 250 ㎍/㎖ G418을 보충한 DMEM 배지에서 배양하였다. 세포를 트립신-EDTA에 의해 수확하고 ViaCount 시약을 사용하여 카운트하였다. 상기 세포 현탁액 부피를 완전 생육 배지로 4.8 x 105 세포/㎖로 조절하였다. 25 ㎕의 분액을 384-웰 폴리-D 리신 코팅된 흑색/투명 미세플레이트(Falcon)에 분배하고 상기 미세플레이트를 37 ℃ CO2 배양기에 밤새 두었다.
부하 완충액(칼슘-3 분석 키트, Molecular Devices)을, 하나의 바이 알(Express Kit)의 내용물을 20 mM HEPES 및 5 mM 프로베네시드를 함유하는 1000 ㎖ 행크 균형염 용액(HBSS)에 용해시켜 제조하였다. 희석된 염료의 분액(25 ㎕)을 세포 플레이트에 분배하고 이어서 상기 플레이트를 37 ℃에서 1 시간 동안 배양하였다.
상기 배양 중에, 시험 화합물을 HBSS(20 mM HEPES)/0.05% BSA/1% DMSO 중의 3.5 x 목적하는 농도로 제조하고 FLIPR(등록상표)(FLIPR, 형광 상 플레이트 판독기, Molecular Devices Corp.의 등록 상표)상에서 사용하기 위해 384-웰 플레이트로 옮겼다.
배양 후에, 상기 세포 및 화합물 플레이트를 모두 상기 FLIPR(등록상표)로 가져오고 상기 희석된 화합물 20 ㎕를 상기 FLIPR(등록상표)에 의해 상기 세포 플레이트로 옮겼다. 상기 분석 중에, 형광 판독을 매 1.5 초마다 상기 세포 플레이트의 모든 384 웰로부터 동시에 취하였다. 5 회의 판독을 취하여 안정한 기준선을 설정하고, 이어서 샘플 20 ㎕를 신속히(30 ㎕/초) 동시에 상기 세포 플레이트의 각 웰에 가하였다. 상기 형광을 총 100 초의 시간이 경과하는 동안 샘플 첨가 전, 첨가 도중 및 첨가 후에 연속적으로 모니터하였다. 첨가에 이은 각 웰 중의 반응(피크 형광의 증가)을 측정하였다. 리간드 자극 전, 각 웰로부터의 초기 형광 판독을 상기 웰로부터의 데이터에 대한 제로 기준선 값으로서 사용하였다. 상기 반응들을 양성 대조군의 최대 반응 퍼센트로서 나타내었다.
실시예 43
환상 AMP 분석
본 실시예에서, 하기의 물질들을 사용하였다: 384-웰 플레이트; 트로픽스(Tropix) cAMP-스크린 키트:(Applied Biosystems, cat. #T1504); 포스콜린(Calbiochem Cat. #344270); 세포: HEK293/hNPY2R 세포; 도말 배지: DMEM/F12 w/o 페놀 레드(Gibco Cat #1133032); 10% 열 불활성화된 FBS(Gibco Cat.#10082-147); 1% 페니실린/스트렙토마이신(Gibco Cat.#15140-122); 500 ㎎/㎖ G418(Geneticin, Gibco Cat. #11811-031).
HEK293/hNPY2R 세포를 다중-점적 분배기를 사용하여 384-웰 플레이트에 104 세포/웰의 밀도로 도말하고 상기 플레이트를 37 ℃에서 밤새 배양하였다. 다음 날, 75 내지 85% 합류점에 도달한 세포를 실험에 사용하였다. 상기 배지 및 시약들을 실온으로 가온하였다. 상기 희석액을 제조하기 전에, 다이메틸 설폭사이드(DMSO, Sigma Cat#D2650) 중의 Y2-수용체 리간드의 모액 및 대조용을 32 ℃까지 5 내지 10 분간 가온하였다. 상기 희석을 배양 배지[0.5 mM 3-아이소부틸-1-메틸잔틴(IBMS, Calbiochem Cat # 410957) 및 0.5 ㎎/㎖ BSA(Sigma Cat # A8806)를 함유하는 DMEM/F12 배지]를 사용하여 수행하였다. 상기 배양 배지 중의 DMSO 및 포스콜린의 최종 농도는 각각 1.1% 및 5 μM이었다.
상기 도말 배지를, 종이 타월 상에서 상기 384-웰 플레이트를 서서히 뒤집어 제거하고 다양한 농도의 Y2-수용체 리간드(4 회 복제물/농도)를 함유하는 배양 배지(50 ㎕/웰)로 대체하였다. 상기 플레이트를 실온에서 30 분간 배양하였다. 30 분 처리 기간에 이어서, 상기 배양 배지를 버리고 50 ㎕/웰의 분석 용해 완충액(트 로픽스 키트에서 제공됨)으로 대체하였다. 상기 세포를 37 ℃에서 플레이트를 45 분간 배양하여 용해시켰다. 상기 용해물(20 ㎕)을 트로픽스 키트에서 공급된 예비 코팅된 항체 플레이트(384-웰)로 옮겼다. AP 접합물(10 ㎕) 및 항-cAMP 항체(20 ㎕)를 각 웰에 가하고 상기 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 진탕기 상에서 배양하였다. 상기 플레이트를 세척 완충액(70 ㎕/웰/세척)으로 5 회 세척하고 상기 플레이트를 가볍게 두드려 건조시켰다. CSPD/사파이어-II RTU 기질/보강제 용액(30 ㎕/웰)을 가하고 실온에서 45 분간 배양하였다. 각 웰 중의 신호를 조도계(VICTOR-V)를 사용하여 측정하였다(1 초/웰).
본 발명의 화합물들은 상기 칼슘 유출 분석(FLIPR(등록상표); 실시예 42) 및 환상 AMP 분석(실시예 43)에서 입증된 바와 같이, 시험관 내에서 선택적인 신경펩타이드-2 수용체 활성을 나타내었다. 상기 시험관 내 결과, 실시예 3 내지 39 및 41에 대한 EC50의 요약을 하기 표 1에 예시한다:
Figure 112008048311818-pct00051
Figure 112008048311818-pct00052
Figure 112008048311818-pct00053
실시예 44
만성 DIO 래트 연구
수컷 스프래그 다우리 래트(7 주된 것)를 찰스 리버 레보라토리즈(USA)로부터 수득하고 12 시간 명:12 시간 암 주기로 온도 및 습도 조절된 환경에 수용하였다. 상기 래트를 상기 연구 전체를 통해 고 지방 사료 식이(HFD; 식이성 kcal의 60%가 지방, Research Diets D12492) 및 물에 자유롭게 접근시켰다. 상기 HFD에서 7 주 후에, 래트를 체중에 의해 분류하고 따로따로 가두었다. 상기 래트에게 암 주기의 개시 전에 비히클(피하) 또는 실시예 41의 화합물(1, 5 및 10 ㎎/㎏, 피하)을 3 주간 2일마다 1 회 투여하였다(N = 6 내지 8 래트/그룹). 체중을 일수로 기록하고 도 23에 나타내었다.
데이터 분석:
나타낸 모든 데이터는 평균±표준 오차(s.e.m.)이다. 상기 데이터의 통계학적 평가를 일방 ANOVA에 이어서 듄네트의 시험을 사용하여 수행하여 비히클과 약물 처리된 그룹 사이에 통계학적 유의수준의 차이가 존재하는 지를 측정하였다. 차이는 P<0.05에서 통계학적으로 유의수준인 것으로 간주되었다. 데이터 분석을 그래프패드 소프트웨어(GraphPad Prism)로 수행하였다.
결과:
수컷 DIO 래트에서 실시예 41 화합물(5 및 10 ㎎/㎏, q48시간, 피하)의 만성적인 투여는 3 주 처리 기간 후에 비히클 처리된 동물에 대해 체중 증가의 현저한 감소를 유도하였다(도 23).
급성 db / db 마우스 연구
암컷 db/db 마우스(C57BL/KsJ-Lepdb/db, Jackson Laboratories, USA)는 받았을 때 6주령이었다. 상기 마우스를 12 시간 명:12 시간 암 주기로 온도 및 습도 조절된 환경에 수용하고, 사료(Purina 설치류 사료 5008) 및 물에 자유롭게 접근시켰다. 상기 마우스(12 주된 것)를 연구 4일 전 미리 채혈하고, 비히클 대조군과 약물 처리된 그룹 간의 변화를 최소화하기 위해 좁은 범위 내의 공복 혈당 수준의 것들을 상기 연구에 선택하였다. 상기 마우스에게, 경구 글루코스 허용성 시험(N = 10 마우스/그룹) 28 시간 전에 비히클(피하) 또는 실시예 41의 화합물(0.3, 1 및 10 ㎎/㎏, 피하)을 투여하였다. 기준선 값(t = 0 분)의 측정을 위해, 혈액 샘플을 6 시간 금식 후 꼬리 클립으로부터 수거하였다. 이어서 상기 마우스에게 경구 글루코스 환괴(bolus)(1 g/㎏)를 위관영양 공급하고, 글루코스 측정을 위해 규칙적인 간격(t = 30, 60 및 120 분)으로 추가의 혈액 샘플을 수거하였다. 경구 글루코스 허용성에 대한 실시예 41 화합물의 효과를 분석하기 위해서 기준선으로부터의 혈당(공복 혈당)의 절대적인 차이를 각 시점에 대해 계산하였다. 상기 곡선 아래 면적(AUC0-120분)을 사다리꼴 법을 사용하여 측정하였다.
데이터 분석:
나타낸 모든 데이터는 평균±표준 오차(s.d.)이다. 상기 데이터의 통계학적 평가를 일방 ANOVA에 이어서 듄네트의 시험을 사용하여 수행하여 비히클과 약물 처리된 그룹 사이에 통계학적 유의수준의 차이가 존재하는 지를 측정하였다. 차이는 P<0.05에서 통계학적으로 유의수준인 것으로 간주되었다. 데이터 분석을 그래프패드 소프트웨어(GraphPad Prism)로 수행하였다.
결과:
암컷 db/db 마우스에서 실시예 41 화합물(1 및 10 ㎎/㎏, 피하)의 급성 투여는 경구 글루코스 시험투여에 반응한 글루코스 이탈을 현저하게 감소시켰다(도 24).
만성 db / db 마우스 연구
암컷 db/db 마우스(C57BL/KsJ-Lepdb/db, Jackson Laboratories, USA)는 받았을 때 6주령이었다. 상기 마우스를 12 시간 명:12 시간 암 주기로 온도 및 습도 조절된 환경에 수용하고, 먹이(Purina 설치류 사료 5008) 및 물에 자유롭게 접근시켰다. 상기 마우스(9 주된 것)를 약물 처리 4일 전에 미리 채혈하고, 비히클 대조군과 약물 처리된 그룹 간의 변화를 최소화하기 위해 좁은 범위 내의 공복 혈당 수준의 것들을 상기 연구에 선택하였다. 상기 마우스에게 3 주 간 2일마다 1 회 비히클(피하) 또는 실시예 41의 화합물(1, 3 및 10 ㎎/㎏, 피하)을 투여하였다(N = 10 마우스/그룹). 기준선 공복(2 내지 6 시간) 혈당 측정을 매주 수행하였다. 연구 20일째에, 경구 글루코스 허용성 시험을 6 시간 금식 후 수행하였다. 기준선 값(t = 0 분)의 측정을 위해 혈액 샘플을 꼬리 클립으로부터 수거하였다. 이어서 상기 마우스에게 경구 글루코스 환괴(1 g/㎏)를 위관영양공급하고, 글루코스 측정을 위해 규칙적인 간격(t = 30, 60 및 120 분)으로 추가의 혈액 샘플을 수거하였다. 경구 글루코스 허용성에 대한 실시예 41 화합물의 효과를 분석하기 위해서 기준선으로부터의 혈당(공복 혈당)의 절대적인 차이를 각 시점에 대해 계산하였다. 상기 곡선 아래 면적(AUC0-120분)을 사다리꼴 법을 사용하여 측정하였다.
데이터 분석:
나타낸 모든 데이터는 평균±표준 오차(s.d.)이다. 상기 데이터의 통계학적 평가를 일방 ANOVA에 이어서 듄네트의 시험을 사용하여 수행하여 비히클과 약물 처리된 그룹 사이에 통계학적 유의수준의 차이가 존재하는 지를 측정하였다. 차이는 P<0.05에서 통계학적으로 유의수준인 것으로 간주되었다. 데이터 분석을 그래프패드 소프트웨어(GraphPad Prism)로 수행하였다.
결과:
암컷 db/db 마우스에서 실시예 41 화합물(1, 3 및 10 ㎎/㎏, q48 시간, 피하)의 만성적인 투여는 상기 3 주 처리 기간 동안 비히클 처리된 동물에 대해 기초 혈당 수준(8, 15 및 21 일)을 감소시켰다(도 25A). 도 25B에 나타낸 바와 같이, 20일째에 실시예 41의 화합물(3 및 10 ㎎/㎏ 모두에서, q48시간, 피하)은 경구 글루코스 시험투여에 반응한 글루코스 이탈을 현저하게 감소시켰다.
본 발명의 특정 실시태양을 변화시킬 수 있고 이는 여전히 첨부된 청구의 범위의 범위 내에 있으므로, 본 발명이 본 발명에 개시된 상기 특정 실시태양들로 제한되지 않는 것으로 이해되어야만 한다.
실시예 A
하기의 성분들을 함유하는 필름 코팅된 정제를 통상적인 방식으로 제조할 수 있다:
성분 정제 당(㎎)
속:
화학식 I의 화합물 10.0 200.0
미정질 셀룰로스 23.5 43.5
수화 락토오스 60.0 70.0
포비돈 K30 12.5 15.0
나트륨 전분 글리콜레이트 12.5 17.0
마그네슘 스테아레이트 1.5 4.5
(속 중량) 120.0 350.0
필름 피막:
하이드록시프로필 메틸 셀룰로스 3.5 7.0
폴리에틸렌 글리콜 6000 0.8 1.6
활석 1.3 2.6
산화 철(황색) 0.8 1.6
이산화 티탄 0.8 1.6
상기 활성 성분을 체질하고 미정질 셀룰로스와 혼합하고 상기 혼합물을 수 중 폴리비닐피롤리돈 용액과 함께 과립화한다. 상기 과립을 나트륨 전분 글리콜레이트 및 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 압착시켜 각각 120 또는 350 ㎎의 속을 제공한다. 상기 속을 상기 언급한 필름 피막의 수용액/현탁액으로 칠한다.
실시예 B
하기의 성분들을 함유하는 캡슐을 통상적인 방식으로 제조할 수 있다:
성분 캡슐 당(㎎)
화학식 I의 화합물 25.0
락토오스 150.0
옥수수 전분 20.0
활석 5.0
상기 성분들을 체질하고 혼합하고 크기 2의 캡슐에 충전한다.
실시예 C
주사 용액은 하기의 조성을 가질 수 있다:
화학식 I의 화합물 3.0 ㎎
폴리에틸렌 글리콜 400 150.0 ㎎
아세트산 pH 5.0 까지 충분량
주사용액용 수 1.0 ㎖까지
상기 활성 성분을 폴리에틸렌 글리콜 400 및 주사용수(일부)의 혼합물에 용해한다. pH를 아세트산으로 5.0으로 조절한다. 부피를 나머지 량의 물을 가하여 1.0 ㎖로 조절한다. 상기 용액을 여과하고, 적절한 과잉을 사용하여 바이알에 충전하고 살균한다.
실시예 D
하기의 성분들을 함유하는 연질 캡슐을 통상적인 방식으로 제조할 수 있다:
캡슐 함량 캡슐 당(㎎)
화학식 I의 화합물 5.0
옐로우 왁스 8.0
수소화된 대두 오일 8.0
부분 수소화된 식물성 오일 34.0
대두 오일 110.0
캡슐 내용물의 중량 165.0
젤라틴 캡슐
젤라틴 75.0
글리세롤 85% 32.0
카리온 83 8.0(건조 물질)
이산화 티탄 0.4
산화 철 옐로우 1.1
상기 활성 성분을 다른 성분들의 가온 용융물에 용해시키고 상기 혼합물을 적합한 크기의 연질 젤라틴 캡슐에 충전한다. 상기 충전된 연질 젤라틴 캡슐을 통상적인 과정에 따라 처리한다.
실시예 E
하기의 성분들을 함유하는 향낭을 통상적인 방식으로 제조할 수 있다:
화학식 I의 화합물 50.0 ㎎
락토오스, 미세 분말 1015.0 ㎎
미정질 셀룰로스(AVICEL PH 102) 1400.0 ㎎
나트륨 카복시메틸 셀룰로스 14.0 ㎎
폴리비닐피롤리돈 K 30 10.0 ㎎
마그네슘 스테아레이트 10.0 ㎎
풍미 첨가제 1.0 ㎎
상기 활성 성분을 락토오스, 미정질 셀룰로스 및 나트륨 카복시메틸 셀룰로스와 혼합하고 수 중 폴리비닐피롤리돈의 혼합물로 과립화한다. 상기 과립을 마그네슘 스테아레이트 및 풍미 첨가제와 혼합하고 향낭에 충전한다.
SEQUENCE LISTING <110> F. HOFFMANN-LA ROCHE AG <120> NEUROPEPTIDE-2 RECEPTOR-AGONISTS <130> 23353 <140> <141> <150> 60/748,071 <151> 2005-12-07 <160> 41 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <400> 2 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 3 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> m-Tyr <400> 4 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 3-iodo-Tyr <400> 5 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 3,5 di F-Tyr <400> 6 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 2,6 di F-Tyr <400> 7 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 2,6 di Me-Tyr <400> 8 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 9 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 4-methoxy-Phe <400> 9 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 10 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 11 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 4-amino-Phe <400> 11 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 4 F-Phe <400> 12 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 13 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 4(CH2OH)-Phe <400> 13 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 4-trifluoro methyl-Phe <400> 14 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 15 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 3 F-Phe <400> 15 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 16 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 2,3,4,5,6 Penta F-Phe <400> 16 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 17 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 3,4 dichloro-Phe <400> 17 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Phe 1 5 10 15 <210> 18 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> Cha <400> 18 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 19 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 19 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Trp 1 5 10 15 <210> 20 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 1-Nal <400> 20 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 2-Nal <400> 21 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Xaa 1 5 10 15 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> 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MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <220> <221> MOD_RES <222> (15) <223> 2,6 difluoro-Tyr <400> 25 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 26 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Ac-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 26 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Pentoyl-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 27 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Trimethylacetyl-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 28 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 29 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Cyclohexylacetyl-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 29 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 30 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Benzoyl-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 30 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Adamantoyl-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 31 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 32 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 32 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 33 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Lys(PEG-30,000 SPA) <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 33 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 34 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 34 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 35 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Lys(PEG-40,000 BTC) <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 35 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 36 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 36 Ile Xaa Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 37 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Nle <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES 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<221> MOD_RES <222> (1) <223> Fmoc-Ile <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 40 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Lys(PEG-30,000 SSA) <220> <221> MOD_RES <222> (3) <223> Pqa <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> (NMe)Arg <400> 41 Ile Lys Xaa Arg His Tyr Leu Asn Trp Val Thr Arg Gln Arg Tyr 1 5 10 15

Claims (29)

  1. 하기 화학식 I의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    화학식 I
    Figure 712011001198179-pct00054
    상기 식에서,
    X는 4-옥소-6-(1-피페라지닐)-3(4H)-퀴나졸린-아세트산(Pqa)이고,
    Y는 H, 아실 잔기, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
    Y'는 H, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC이고,
    R1은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고,
    R2는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고,
    R3은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸 Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
    R4는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고,
    R5는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
    R6은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고,
    R7은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고,
    R8은 Leu 또는 Trp이고,
    R9는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고,
    R10은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고,
    R11은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
    R12는 Gln 또는 Ala이고,
    R13은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
    R14는 Tyr; (D)Tyr; N-메틸 Tyr; (3-I)Tyr, (3,5 다이 F)Tyr, (2,6 다이 F)Tyr, (2,6 다이 Me)Tyr; Phe; (4-O-CH3)Phe, (4-NH2)Phe, (4-F)Phe, (4-CH2OH)Phe, (4-CF3)Phe, (3-F)Phe, (2,3,4,5,6-펜타-F)Phe, (3,4-다이-Cl)Phe; Cha; (1)Nal; (2)Nal; C-알파-Me-Tyr; 또는 Trp이고,
    PEGm은 1 내지 60 KDa이다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    하기 화학식 Ia의 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    화학식 Ia
    Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2
    상기 식에서,
    X는 N-피페라진-1-일-4(3H)-퀴나졸리논-3-아세트산(Pqa)이고,
    Y는 H, 아실 잔기, 폴리(에틸렌) 글리콜 잔기, PEG-SSA, PEG-β-SBA, PEG-SPA 또는 PEG-BTC이고,
    R1은 Ile, Ala, (D)Ile, N-메틸 Ile, Aib, 1-1Aic, 2-2Aic, Ach 또는 Acp이고,
    R2는 Lys, Ala, (D)Lys, NMelys, Nle 또는 (Lys-Gly)이고,
    R3은 Arg, Ala, (D)Arg, N-메틸 Arg, Phe, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
    R4는 His, Ala, (D)His, N-메틸 His, 4-MeOApc, 3-Pal 또는 4-Pal이고,
    R5는 Tyr, Ala, (D)Tyr, N-메틸 Tyr, Trp, Tic, Bip, Dip, (1)Nal, (2)Nal, 3,4,5-트라이플루오로 Phe 또는 2,3,4,5,6-펜타플루오로 Phe이고,
    R6은 Leu, Ala, (D)Leu 또는 N-메틸 Leu이고,
    R7은 Asn, Ala 또는 (D)Asn이고,
    R8은 Leu 또는 Trp이고,
    R9는 Val, Ala, (D)Val 또는 N-메틸 Val이고,
    R10은 Thr, Ala 또는 N-메틸 Thr이고,
    R11은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
    R12는 Gln 또는 Ala이고,
    R13은 Arg, (D)Arg 또는 N-메틸 Arg이고,
    R14는 Tyr; (D)Tyr; N-메틸 Tyr; (3-I)Tyr, (3,5 다이 F)Tyr, (2,6 다이 F)Tyr, (2,6 다이 Me)Tyr, C-알파-Me-Tyr; Phe; (4-O-CH3)Phe, (4-NH2)Phe, (4-F)Phe, (4-CH2OH)Phe, (4-CF3)Phe, (3-F)Phe, (2,3,4,5,6-펜타-F)Phe, (3,4-다이-Cl)Phe; 또는 Trp이다.
  3. 제 2 항에 있어서,
    R2가 Y'로 치환되고 Y'가 H, 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  4. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    Y'가 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  5. 제 1 항에 있어서,
    Y가 H 또는 아실 잔기이고,
    Y'가 폴리(에틸렌)글리콜 잔기, PEGm-SSA, PEGm-β-SBA, PEGm-SPA 또는 PEGm-BTC인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  6. 제 1 항에 있어서,
    Y가 아실 잔기인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  7. 제 1 항에 있어서,
    Y가 H인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  8. 제 1 항에 있어서,
    Y'가 H인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  9. 제 1 항에 있어서,
    R1이 Ile이고, R2가 Lys 또는 Nle이고, R3이 Arg이고, R4가 His이고, R5가 Tyr이고, R6이 Leu이고, R7이 Asn이고, R8이 Leu 또는 Trp이고, R9가 Val이고, R10이 Thr이고, R11이 Arg이고, R12가 Gln이고, R13이 Arg 또는 (N-메틸)Arg이고, R14가 Tyr, (m-)Tyr, (3-I)Tyr, (3,5 다이 F)Tyr, (2,6 다이 F)Tyr, (2,6 다이 Me)Tyr, (4-O-CH3)Phe, Phe, (4-NH2)Phe, (4-F)Phe, (4-CH2OH)Phe, (4-CF3)Phe, (3-F)Phe, (2,3,4,5,6-펜타-F)Phe, (3,4-다이-Cl)Phe, Cha, Trp, (1)Nal, (2)Nal 또는 C-알파-Me-Tyr인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  10. 제 1 항에 있어서,
    R14가 Tyr 또는 (2,6 다이 F)Tyr인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  11. 제 1 항에 있어서,
    PEGm이 20 내지 40 KDa인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  12. 제 1 항에 있어서,
    PEGm이 30 KDa인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  13. 제 1 항에 있어서,
    하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQRY,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RY,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(m-)Y,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3-I)Y,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3,5 다이 F)Y,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 Me)Y,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RF(4-O-CH3),
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RF,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-NH2)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-F)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-CH2OH)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(4-CF3)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3-F)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2,3,4,5,6 펜타 F)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(3,4 다이 Cl)Phe,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RCha,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)RW,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(1)Nal,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQ(N-메틸)R(2)Nal,
    IK-Pqa-RHYLNLVTRQR-C-알파-Me-Tyr,
    IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y,
    Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    펜틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    트라이메틸아세틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    사이클로헥실-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    벤조일-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    아담틸-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    (PEG 30,000 SPA)IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    (PEG 40,000 BTC)-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    (PEG 30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    (PEG 30,000)-베타-SBA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY, 및
    IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY.
  14. 제 1 항에 있어서,
    하기로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 신경펩타이드-2 수용체 작용물질 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SPA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY,
    Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY, 및
    IK(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY.
  15. 제 1 항에 있어서,
    Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)R(2,6 다이 F)Y인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  16. 제 1 항에 있어서,
    Ac-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  17. 제 1 항에 있어서,
    (PEG30,000)-SPA-IK-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  18. 제 1 항에 있어서,
    (PEG30,000)-SSA-INle-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  19. 제 1 항에 있어서,
    Ac-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  20. 제 1 항에 있어서,
    H-Ile-Lys(PEG30,000 SSA)-Pqa-RHYLNWVTRQ(N-메틸)RY인 신경펩타이드-2 수용체 작용물질.
  21. 제 1 항에 따른 신경펩타이드-2 수용체 작용물질, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 약학적으로 허용 가능한 보조제 또는 이의 혼합물을 포함하는, 비만증, 2형 당뇨병, 대사 증후군, 인슐린 내성, 이상지질혈증, 공복혈당장애 및 내당능장애에서 선택되는 질환을 치료 또는 예방적 치료하기 위한 약학 조성물.
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