JP5000663B2 - 神経ペプチド２受容体アゴニスト - Google Patents

Description

本発明は、ＰＹＹ_３−３６の切断型アナログに関する。該アナログは神経ペプチド２受容体のアゴニストであり、例えば肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性および脂質代謝異常などの代謝性疾患および障害の処置に有用である。本発明の神経ペプチド２受容体アゴニストは、式（Ｉ）：

［式中：
Ｘは、４−オキソ−６−（１−ピペラジニル）−３（４Ｈ）−キナゾリン−酢酸（Ｐｑａ）であり、
Ｙは、Ｈ、アシル部分、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アルコキシ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
Ｙ′は、Ｈ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｉｌｅ、Ｎ−メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１−１Ａｉｃ、２−２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ）Ａｒｇ、Ｎ−メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｈｉｓ、Ｎ−メチルＨｉｓ、４−ＭｅＯＡｐｃ、３−Ｐａｌまたは４−Ｐａｌであり、
Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｔｙｒ、Ｎ−メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ）ＬｅｕまたはＮ−メチルＬｅｕであり、
Ｒ_７は、Ａｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ）Ａｓｎであり、
Ｒ_８は、ＬｅｕまたはＴｒｐであり、
Ｒ_９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、（Ｄ）ＶａｌまたはＮ−メチルＶａｌであり、
Ｒ_１０は、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＮ−メチルＴｈｒであり、
ＣＳ／２６．１０．０６
Ｒ_１１は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
Ｒ_１２は、ＧｌｎまたはＡｌａであり、
Ｒ_１３は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
Ｒ_１４は、Ｔｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾Ｐｈｅ、Ｃｈａ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、Ｃ−α−メチルＴｙｒまたはＴｒｐであり、そして
ＰＥＧ_ｍは、１〜６０KDaである、
またはその医薬的に許容される塩］、
で表されるものである。

本明細書において引用する全ての文献は、本明細書に参照により明確に組み入れる。

代謝性疾患および障害は、先進国にとって深刻な健康問題として広く認識されており、米国では蔓延レベルに達している。肥満に関する近年の研究によれば、例えば、米国人口の５０％超が過体重であると考えられており、２５％超が臨床的に肥満で、心臓疾患、２型糖尿病および特定の癌の危険性がかなりあると診断されている。米国単独において年間７百億ドルを超える突出した肥満処置費用が予測されており、この蔓延は保険医療システムの重大な負担となっている。肥満処置のストラテジーには、食物摂取の低下およびエネルギー消費の増強が含まれる。

３６アミノ酸のペプヂド神経伝達物質である神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）は、神経伝達物質／神経ホルモンの膵臓ポリペプチドクラスのメンバーであり、末梢および中枢神経系の両方に存在することが示されている。ＮＰＹは公知の最も強力な食欲促進物質の１つであり、ヒトを含む動物の食物摂取の調節において主要な役割を担っていることが示されている。

６つの神経ペプチドＹ受容体（ＮＰＹ）、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ５およびＹ６サブタイプがクローン化されており、これらはロドプシン様Ｇタンパク質共役型７回膜貫通型受容体（ＧＰＣＲ）に属している。ＮＰＹ Ｙ２受容体（Ｙ２Ｒ）は、Ｇ_ｉを介してアデニルシクラーゼの活性化を阻害し、他の公知のＮＰＹ受容体と低い相同性を示す、３８１アミノ酸の受容体である。ラットおよびヒトＹ２受容体の間に９８％のアミノ酸同一性という高度な保存が存在する。

Ｙ２Ｒ受容体はげっ歯類およびヒトの両方において中枢神経系内に広く分布している。視床下部では、Ｙ２ ｍＲＮＡは弓状核、視束前核、および背内側核に局在している。ヒト脳では、Ｙ２Ｒは優勢なＹ受容体サブタイプである。弓状核内では、８０％を超えるＮＰＹニューロンがＹ２Ｒ ｍＲＮＡを同時発現している。Ｙ２選択性アゴニストの適用はインビトロで視床下部切片からのＮＰＹの放出を低下させることが示されており、一方、Ｙ２非ペプチドアンタゴニストＢＩＩＥ０２４６はＮＰＹの放出を増加させる。これらの知見は、ＮＰＹ放出を調節し、よって摂食の調節に関与している可能性があるシナプス前自己受容体としてのＹ２Ｒの役割を支持している（Kaga T et al., Peptides 22: 501-506 (2001)およびKing PJ et al., Eur J Pharmacol 396: R1-3 (2000)）。

ペプチドＹＹ_３−３６（ＰＹＹ_３−３６）は、神経ペプチドＹ２（ＮＰＹ２Ｒ）アゴニスト活性を有する３４アミノ酸の直鎖状ペプチドである。ＰＹＹ_３−３６の弓状内（ＩＣ）または腹腔内（ＩＰ）注射はラットの摂食を低下させ、慢性処置として、体重増加を低下させることが実証されている。ＰＹＹ_３−３６の９０分間の静脈内（ＩＶ）注入（０．８pmol／kg／分）は、肥満および正常ヒト被検体の摂食を２４時間にわたって低下させた。これらの知見はＰＹＹ系が肥満の処置に関する治療標的になり得ることを示唆する。（Batterham RL et al., Nature 418: 650-654 (2002); Batterham RL et al., New Engl J Med 349: 941-948 (2003)）。さらに、残基５〜２４が５〜８炭素長のメチレン鎖によって置換された、ＰＹＹのＣｙｓ^２−（Ｄ）Ｃｙｓ^２７環化型は腸ＰＹＹ受容体の活性化を示し、これはラット空腸の電圧固定された粘膜標本を通過する電流の低下によって証明された。（Krstenansky et al., in Peptides, Proceedings of the Twelfth American Peptide Symposium. J. Smith and J. Rivier Editors, ESCOM. Leiden Page 136-137）。

さらに、ポリ（エチレングリコール）またはポリ（エチレンオキシド）（両方をＰＥＧという）でのタンパク質の共有結合的修飾は、スーパーオキシドジスムターゼを用いて（Somack, R, et al., (1991) Free Rad Res Commun 12-13: 553-562; U.S. Pat. Nos. 5,283,317および5,468,478）、そして他の型のタンパク質、例えばサイトカイン（Saifer, MGP, et al., (1997) Polym Preprints 38: 576-577; Sherman, M R, et al., (1997) in J M Harris, et al., (Eds.), Poly (ethylene glycol) Chemistry and Biological Applications. ACS Symposium Series 680 (pp. 155-169) Washington, D.C.: American Chemical Society）について実証されている。

さらに、近年のデータは、胃バイパス患者が、初期血糖コントロールおよび長期体重維持を部分的に担い得るＰＹＹレベルの初期の誇張された増加を有することを示しており、このことは代謝性疾患の病因における本ペプチドの重要性を実証する。ＰＹＹの他の公知の作用としては、食後血糖コントロールの改善を担う胃排出の減少および胃腸管通過の遅延が挙げられる。２型糖尿病の動物モデルにおいて、ＰＹＹ_３−３６の末梢投与の後に、ＨｂＡ_１Ｃおよびフルクトサミンなどの高血糖の指標は用量依存的な減少を示す。したがってこれらの結果は、ＰＹＹ_３−３６または医薬的に関連したアゴニストが血糖コントロールおよび体重コントロールに対する長期の治療アプローチをもたらし得ることを示す。（Korner et al., J Clin Endocrinol Metabol 90: 359-365 (2005); Chan JL et al., Obesity 14: 194-198 (2006); Stratis C et al., Obes Surg 16: 752-758 (2006); Borg CM et al., Br J Surg 93: 210-215 (2006); およびPittner RA et al., Int J Obes 28: 963-971 (2004)）。

しかし、同等またはより良好なＹ１、Ｙ４およびＹ５受容体に対する効力および選択性、薬物動態特性ならびに薬理学的特性を有しながら、より低い分子量を有するＰＹＹの新規な加工されたアナログが必要とされている。好ましくは、以前に入手可能なものより長い活性持続時間を有する化合物が必要とされている。例えば、タンパク質の半減期を増加させ、このようなアゴニストを必要としている被検体における免疫原性を減少させるために、ＰＹＹのＰＥＧ化アナログも必要とされている。

本明細書に記載するものと類似または同等の任意の方法、装置および材料を本発明の実施または試験の際に使用することができるが、好ましい方法、装置および材料をここに記載する。

本明細書で言及する全てのペプチド配列は、別段の記載が無い限り、Ｎ末端アミノ酸が左に、そしてＣ末端アミノ酸が右にある通常の慣習にしたがって記載されている。２つのアミノ酸残基の間の短い線はペプチド結合を示す。アミノ酸が異性体形態を有する場合、別段明確に示さない限り、表されるのはＬ体のアミノ酸である。本発明の記載において便宜上、種々のアミノ酸のための慣習的および非慣習的な略語を使用する。当業者はこれらの略語に精通しているが、明確性を期すため以下に列挙する：

Ａｓｐ＝Ｄ＝アスパラギン酸；Ａｌａ＝Ａ＝アラニン；Ａｒｇ＝Ｒ＝アルギニン；Ａｓｎ＝Ｎ＝アスパラギン；Ｇｌｙ＝Ｇ＝グリシン；Ｇｌｕ＝Ｅ＝グルタミン酸；Ｇｌｎ＝Ｑ＝グルタミン；Ｈｉｓ＝Ｈ＝ヒスチジン；Ｉｌｅ＝Ｉ＝イソロイシン；Ｌｅｕ＝Ｌ＝ロイシン；Ｌｙｓ＝Ｋ＝リジン；Ｍｅｔ＝Ｍ＝メチオニン；Ｐｈｅ＝Ｆ＝フェニルアラニン；Ｐｒｏ＝Ｐ＝プロリン；Ｓｅｒ＝Ｓ＝セリン；Ｔｈｒ＝Ｔ＝トレオニン；Ｔｒｐ＝Ｗ＝トリプトファン；Ｔｙｒ＝Ｙ＝チロシン；Ｃｙｓ＝Ｃ＝システイン；およびＶａｌ＝Ｖ＝バリン；Ｎｌｅ＝ノルロイシン。

また、便宜上、本発明で使用する部分、試薬等を表すために、以下の略語または記号を使用する：
Ac アセチル；
Aib α−アミノイソ酪酸；
1-1-Aic １−アミノインダン−１−カルボン酸；
2-2-Aic ２−アミノインダン−２−カルボン酸；
Ach α−アミノシクロヘキサン−カルボン酸；
Acp α−アミノシクロペンタン−カルボン酸；
Tic α−アミノ−１，２，３，４，テトラヒドロイソキノリン
−３−カルボン酸；
3-Pal α−アミノ−３−ピリジルアラニン−カルボン酸；
4-Pal α−アミノ−４−ピリジルアラニン−カルボン酸；
4-MeO-Apc １−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）−シクロヘキサン−
１−カルボン酸；
Bip ４−フェニル−フェニルアラニン−カルボン酸；
Dip ３，３−ジフェニルアラニン−カルボン酸；
Pqa ４−オキソ−６−（１−ピペラジニル）−３（４Ｈ）−
キナゾリン−酢酸（ＣＡＳ ８８９９５８−０８−１）；
3,4,5, F3-Phe ３，４，５−トリフルオロフェニルアラニン；
2,3,4,5,6, F5-Phe ２，３，４，５，６−ペンタフルオロフェニルアラニン；
Cha シクロヘキシルアラニン；
(1) Nal １−ナフチルアラニン；
(2) Nal ２−ナフチルアラニン；
Fmoc ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル；
Mtt ４−メチルトリチル；
2Pip ２−フェニルイソプロピルエステル；
Pmc ２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル；
CH₂Cl₂ 塩化メチレン；
A2O 無水酢酸；
CH₃CN アセトニトリル；
DMAc ジメチルアセトアミド；
DMF ジメチルホルムアミド；
DIPEA Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；
TFA トリフルオロ酢酸；
HOBT Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール；
DIC Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミド；
BOP ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−（ジメチル
アミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスファート；
HBTU ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３
−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロホスファート；
NMP １−メチル ２−ピロリデノン；
SSA スクシンイミジルスクシンアミド；
β-SBA スクシンイミジルβ−ブタン酸；
SPA スクシンイミジルプロピオン酸；
BTC ベンゾトリアゾールカルボナート；
MALDI-TOF マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間；
FAB-MS 高速原子衝撃質量分析；
ES-MS エレクトロスプレー質量分析；
PEG_m-SSA ＰＥＧ_ｍ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−；
PEG_m-β-SBA ＰＥＧ_ｍ−ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＯ−；
PEG_m-SPA ＰＥＧ_ｍ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−；
PEG_m-BTC ＰＥＧ_ｍ−ＣＯ−；及び
PEG_m 約１ＫＤａより大きなポリ（エチレン）グリコール部分である。

本明細書で使用する用語「アルキル」は、置換されてもよくまたは置換されなくてもよい、分枝または非分枝、環式または非環式、飽和または不飽和のヒドロカルビル基を意味する。環式である場合、アルキル基は好ましくはＣ_３〜Ｃ_１２、より好ましくはＣ_５〜Ｃ_１０、より好ましくはＣ_５〜Ｃ_７である。非環式である場合、アルキル基は好ましくはＣ_１〜Ｃ_１０、より好ましくはＣ_１〜Ｃ_６、より好ましくはメチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピルまたはイソプロピル）、ブチル（ｎ−ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル）またはペンチル（ｎ−ペンチルおよびイソペンチルを含む）、より好ましくはメチルである。したがって、本明細書で使用する用語「アルキル」は、アルキル（分枝または非分枝）、置換アルキル（分枝または非分枝）、置換アルキニル（分枝または非分枝）、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、シクロアルキニルおよび置換シクロアルキニルを含むことが理解される。好ましいアルキル基は非環式で飽和している。

本明細書で使用する用語「低級アルキル」は、分枝または非分枝、環式または非環式、飽和または不飽和のヒドロカルビル基を意味し、ここで環式低級アルキル基はＣ_５、Ｃ_６またはＣ_７であり、そして非環式低級アルキル基はＣ_１、Ｃ_２、Ｃ_３またはＣ_４であり、好ましくはメチル、エチル、プロピル（ｎ−プロピルまたはイソプロピル）またはブチル（ｎ−ブチル、イソブチルまたはｔｅｒｔ−ブチル）から選択される。したがって、本明細書で使用する用語「低級アルキル」は、低級アルキル（分枝または非分枝）、低級アルケニル（分枝または非分枝）、低級アルキニル（分枝または非分枝）、シクロ低級アルキルおよびシクロ低級アルケニルを含むことが理解される。好ましい低級アルキル基は非環式で飽和している。

本明細書で使用する用語「アシル」は、カルボニル基を介して結合している任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、複素環、アリールまたはヘテロアリール基を意味し、そしてアセチル、プロピオニル、ベンゾイル、３−ピリジニルカルボニル、２−モルホリノカルボニル、４−ヒドロキシブタノイル、４−フルオロベンゾイル、２−ナフトイル、２−フェニルアセチル、２−メトキシアセチル等の基を含む。

本明細書で使用する用語「アリール」は、フェニルまたはナフチルなどの飽和または不飽和の炭素環式芳香族基を意味する。

用語「ヘテロアリール」は、単独でまたは他の基との組み合わせで、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個、２個または３個の環ヘテロ原子を含有し、残りの環原子はＣである、少なくとも１つの芳香環を有する５〜１２個の環原子の単環式または二環式基を意味し、ヘテロアリール基の付着点は芳香環上にあることが理解される。ヘテロアリール基の１または２つの環炭素原子はカルボニル基で置換されてもよい。

アルキル、アリールおよびヘテロアリール基は置換されてもよくまたは置換されなくてもよい。置換される場合、一般に１〜３個の置換基、好ましくは１個の置換基が存在する。置換基は以下を含み得る：アルキル、アリール、アリールアルキル（例えば置換および非置換フェニル、置換および非置換ベンジル）などの炭素含有基；ハロゲン原子およびハロゲン含有基、例えばハロアルキル（例えばトリフルオロメチル）；酸素含有基、例えばアルコール（例えばヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アリール（ヒドロキシル）アルキル）、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシアルキル、アリールオキシアルキル、アシル、酸（例えばカルボキシ、カルボキシアルキル）、酸誘導体、例えばエステル（例えばアルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアルキル、アルキルカルボニルオキシ、アルキルカルボニルオキシアルキル）、アミド（例えばアミノカルボニル、モノまたはジアルキルアミノカルボニル、アミノカルボニルアルキル、モノまたはジアルキルアミノカルボニルアルキル、アリールアミノカルボニル）、カルバメート（例えばアルコキシカルボニルアミノ、アリールオキシカルボニルアミノ（arloxycarbonylamino)、アミノカルボニルオキシ、モノまたはジアルキルアミノカルボニルオキシ、アリールアミノカルボニルオキシ（arylminocarbonloxy））および尿素（例えばモノまたはジアルキルアミノカルボニルアミノまたはアリールアミノカルボニルアミノ）；窒素含有基、例えばアミン（例えばアミノ、モノまたはジアルキルアミノ、アミノアルキル、モノまたはジアルキルアミノアルキル）、アジド、ニトリル（例えばシアノ、シアノアルキル）、ニトロ；硫黄含有基、例えばチオール、チオエーテル、スルホキシドおよびスルホン（例えばアルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキルチオアルキル、アルキルスルフィニルアルキル、アルキルスルホニルアルキル、アリールチオ、アリールスルフィニル（arysulfinyl）、アリールスルホニル（arysulfonyl）、アリールチオアルキル（arythioalkyl）、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアルキル）；および１つ以上の、好ましくは１つのヘテロ原子を含有する複素環基（例えばチエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、アジリジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピラニル、ピロニル、ピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピペリジル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル（peperazinyl）、モルホリニル、チアナフチル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、インドリル、オキシインドリル、イソインドリル、インダゾリル、インドリニル、７−アザインドリル、ベンゾピラニル、クマリニル、イソクマリニル、キノリニル、イソキノリニル、ナフトリジニル（naphthridinyl）、シンノリニル、キナゾリニル、ピリドピリジル、ベンゾキサジニル、キノキサリニル、クロメニル、クロマニル、イソクロマニル、フタラジニルおよびカルボニリル）。

低級アルキル基は置換されてもよくまたは置換されなくてもよく、好ましくは置換されない。置換される場合、一般に１〜３個の置換基、好ましくは１個の置換基が存在する。置換基は、アルキル、アリールおよびアリールアルキル以外の上記に列挙する置換基を含む。

本明細書で使用する用語「アルコキシ」はアルキル−Ｏ−を意味し、「アルカノイル」はアルキル−ＣＯ−を意味する。アルコキシ置換基またはアルコキシ含有置換基は１つ以上のアルキル基で置換されてもよい。

本明細書で使用する用語「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素基、好ましくはフッ素、塩素または臭素基、より好ましくはフッ素または塩素基を意味する。

「医薬的に許容される塩」は、式Ｉで表される化合物の生物学的有効性および特性を保持し、そして適切な非毒性の有機もしくは無機酸または有機もしくは無機塩基から形成される従来の酸付加塩または塩基付加塩を指す。酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸などの無機酸由来のもの、ならびに酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸等の有機酸由来のものを含む。塩基付加塩の例は、アンモニウム、カリウム、ナトリウムおよび、例えばテトラメチルアンモニウムヒドロキシドなどの四級水酸化アンモニウム由来のものを含む。医薬化合物（すなわち薬物）の塩への化学修飾は、化合物の物理的または化学的安定性、例えば吸湿性、流動性または溶解性を含む特性を改善する試みに使用されている周知の技術である。例えばH. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995) pp. 196および1456-1457を参照されたい。

「医薬的に許容されるエステル」は、従来法でエステル化されたカルボキシル基を有する式Ｉで表される化合物であって、該エステルが式Ｉで表される化合物の生物学的有効性および特性を保持し得、インビボで（生体内で）対応する活性カルボン酸へ開裂される化合物を指す。対応するカルボン酸へインビボで開裂される（この場合加水分解される）エステル基の例は、開裂した水素が、任意に置換された（例えば複素環、シクロアルキル等で）低級アルキルで置換されたものである。置換された低級アルキルエステルの例は、低級アルキルがピロリジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−メチルピペラジン等で置換されたものである。インビボで開裂される基は、例えばエチル、モルホリノエチルおよびジエチルアミノエチルであってよい。本発明に関して、−ＮＨ_２はインビボで開裂され、そしてヒドロキシ基で置換されて、対応するカルボン酸を形成するので、−ＣＯＮＨ_２もエステルと考えられる。

用語「修飾Ｔｙｒ」は、任意の方法で、好ましくは低級アルキルおよびハロゲンから成る群より独立して選択される１〜３個の、好ましくは１〜２個の置換基での置換によって修飾されたチロシンを指す。好ましい修飾Ｔｙｒは、メチル−チロシン、好ましくはＣ−α−メチル−チロシン（Ｃ−α−Ｍｅ−Ｔｙｒ）、３−ヨード−チロシン（（３−Ｉ）Ｙ）、３，５−ジフルオロ−チロシン（（３，５ジＦ）Ｙ）、２，６−ジフルオロ−チロシン（（２，６ジＦ）Ｙ）および２，６−ジメチル−チロシン（（２，６ジＭｅ）Ｙ）である。別の好ましい修飾Ｔｙｒはメタ−チロシン（（ｍ−）Ｙ）である。特に好ましい修飾Ｔｙｒは以下の具体例において生じるものである。

用語「修飾Ｐｈｅ」は、任意の方法、好ましくは、低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキル、フルオロ−低級アルキル、低級アルコキシ、アミノおよびハロゲンから成る群より独立して選択される１〜４個の置換基での置換によって修飾されたフェニルアラニンを指す。好ましい修飾Ｐｈｅは、４−メトキシ−フェニルアラニン（Ｆ（４−Ｏ−ＣＨ_３））、４−アミノ−フェニルアラニン（（４−ＮＨ_２）Ｐｈｅ）、４−フルオロ−フェニルアラニン（（４−Ｆ）Ｐｈｅ）、４−ヒドロキシメチル−フェニルアラニン（（４−ＣＨ_２ＯＨ）Ｐｈｅ）、４−トリフルオロメチル−フェニルアラニン（（４−ＣＦ_３）Ｐｈｅ）、３−フルオロ−フェニルアラニン（（３−Ｆ）Ｐｈｅ）、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−フェニルアラニン（（２，３，４，５，６−ペンタ−Ｆ）Ｐｈｅ）および３，４−ジクロロフェニルアラニン（（３，４ジＣｌ）Ｐｈｅ）である。特に好ましい修飾Ｔｙｒは以下の具体例において生じるものである。

用語「ヒドロキシ−低級アルキル」は、ヒドロキシ基、好ましくはヒドロキシメチルで置換された、上記で定義する低級アルキル基を指す。

用語「フルオロ−低級アルキル」は、フッ素で単置換または多置換された、上記で定義する低級アルキル基を指す。フルオロ−低級アルキル基の例は、例えばＣＦＨ_２、ＣＦ_２Ｈ、ＣＦ_３、ＣＦ_３ＣＨ_２、ＣＦ_３（ＣＨ_２）_２、（ＣＦ_３）_２ＣＨおよびＣＦ_２Ｈ−ＣＦ_２、好ましくはＣＦ_３である。

詳細には、本発明は式（Ｉ）：

［式中：
Ｘは、４−オキソ−６−（１−ピペラジニル）−３（４Ｈ）−キナゾリン−酢酸（Ｐｑａ）であり、
Ｙは、Ｈ、アシル部分、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アルコキシ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
Ｙ′は、Ｈ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｉｌｅ、Ｎ−メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１−１Ａｉｃ、２−２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ）Ａｒｇ、Ｎ−メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｈｉｓ、Ｎ−メチルＨｉｓ、４−ＭｅＯＡｐｃ、３−Ｐａｌまたは４−Ｐａｌであり、
Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｔｙｒ、Ｎ−メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ）ＬｅｕまたはＮ−メチルＬｅｕであり、
Ｒ_７は、Ａｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ）Ａｓｎであり、
Ｒ_８は、ＬｅｕまたはＴｒｐであり、
Ｒ_９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、（Ｄ）ＶａｌまたはＮ−メチルＶａｌであり、
Ｒ_１０は、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＮ−メチルＴｈｒであり、
Ｒ_１１は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
Ｒ_１２は、ＧｌｎまたはＡｌａであり、
Ｒ_１３は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
Ｒ_１４は、Ｔｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾Ｐｈｅ、Ｃｈａ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、Ｃ−α−メチルＴｙｒまたはＴｒｐであり、そして
ＰＥＧ_ｍは、１〜６０KDaである、
またはその医薬的に許容される塩］、
で表される神経ペプチド２受容体アゴニストに関する。

式（Ｉ）で表される化合物は個々に好ましく、そしてその医薬的に許容される塩は個々に好ましく、式（Ｉ）で表される化合物が特に好ましい。

好ましい上記の神経ペプチド２受容体アゴニストは式（Ｉａ）：

［式中：
Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４（３Ｈ）−キナゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）であり、
Ｙは、Ｈ、アシル部分、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ−ＳＳＡ、ＰＥＧ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ−ＳＰＡまたはＰＥＧ−ＢＴＣであり、
Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｉｌｅ、Ｎ−メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１−１Ａｉｃ、２−２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ）Ａｒｇ、Ｎ−メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｈｉｓ、Ｎ−メチルＨｉｓ、４−ＭｅＯＡｐｃ、３−Ｐａｌまたは４−Ｐａｌであり、
Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｔｙｒ、Ｎ−メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ）ＬｅｕまたはＮ−メチルＬｅｕであり、
Ｒ_７は、Ａｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ）Ａｓｎであり、
Ｒ_８は、ＬｅｕまたはＴｒｐであり、
Ｒ_９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、（Ｄ）ＶａｌまたはＮ−メチルＶａｌであり、
Ｒ_１０は、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＮ−メチルＴｈｒであり、
Ｒ_１１は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
Ｒ_１２は、ＧｌｎまたはＡｌａであり、
Ｒ_１３は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、そして
Ｒ_１４は、Ｔｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾ＰｈｅまたはＴｒｐである、
またはその医薬的に許容される塩］、
によって特徴付けられるものである。

本発明の好ましい実施態様は上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストに関しており、ここでＲ_２はＹ′で置換され、Ｙ′はＨ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである。より好ましくは、Ｙ′はポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである。

本発明の別の好ましい実施態様は上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストに関しており、ここで：
Ｙは、Ｈまたはアシル部分であり、そして
Ｙ′は、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである。より好ましくは、Ｙ′はＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡである。

好ましくは、Ｙはアシル部分である。別の好ましい実施態様では、ＹはＨであり得る。さらにＹ′がＨであり得ることが好ましい。

上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストにおいて、ＰＥＧ_ｍが２０〜４０KDaであることが好ましい。好ましくは、ＰＥＧ_ｍは３０KDaである。好ましくは、ポリ（エチレン）グリコール部分は、１〜６０KDa、より好ましくは２０〜４０KDa、より好ましくは３０KDaの重量を有する。

上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストにおいて、Ｒ_１はＩｌｅであることが好ましい。さらに、Ｒ_２はＬｙｓまたはＮｌｅであることが好ましい。さらに、Ｒ_３はＡｒｇであることが好ましい。さらに、Ｒ_４はＨｉｓであることが好ましい。さらに、Ｒ_５はＴｙｒであることが好ましい。さらに、Ｒ_６はＬｅｕであることが好ましい。さらに、Ｒ_７はＡｓｎであることが好ましい。さらに、Ｒ_８はＬｅｕまたはＴｒｐであることが好ましい。さらに、Ｒ_９はＶａｌであることが好ましい。さらに、Ｒ_１０はＴｈｒであることが好ましい。さらに、Ｒ_１１はＡｒｇであることが好ましい。さらに、Ｒ_１２はＧｌｎであることが好ましい。さらに、Ｒ_１３はＡｒｇまたは（Ｎ−メチル）Ａｒｇであることが好ましい。

さらに、Ｒ_１４はＴｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾ＰｈｅまたはＴｒｐであることが好ましい。好ましくは、Ｒ_１４はＹ、（ｍ−）Ｙ、（３−Ｉ）Ｙ、（３，５ジＦ）Ｙ、（２，６ジＦ）Ｙ、（２，６ジＭｅ）Ｙ、Ｆ（４−Ｏ−ＣＨ_３）、Ｆ、（４−ＮＨ_２）Ｐｈｅ、（４−Ｆ）Ｐｈｅ、（４−ＣＨ_２ＯＨ）Ｐｈｅ、（４−ＣＦ_３）Ｐｈｅ、（３−Ｆ）Ｐｈｅ、（２，３，４，５，６ペンタＦ）Ｐｈｅ、（３，４ジＣｌ）Ｐｈｅ、Ｃｈａ、Ｗ、（１）Ｎａｌ、（２）ＮａｌまたはＣ−α−Ｍｅ−Ｔｙｒである。より好ましくは、Ｒ_１４はＴｙｒまたは（２，６ジＦ）Ｔｙｒである。

好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、

またはその医薬的に許容される塩
から成る群より選択されるものである。

他の好ましい上記の神経ペプチド２受容体アゴニストは、

またはその医薬的に許容される塩
から成る群より選択されるものである。

医薬的に許容される塩ではない上記の化合物が好ましい。上記の個々の化合物の各々は好ましい実施態様を別々に構成する。

特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストがＡｃ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）Ｒ（２−６ジＦ）Ｙであるものである。

別の特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストがＡｃ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹであるものである。

別の特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストが（ＰＥＧ３０，０００）−ＳＰＡ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹであるものである。

別の特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストが（ＰＥＧ３０，０００）−ＳＳＡ−ＩＮｌｅ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹであるものである。

別の特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストがＡｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ３０，０００ＳＳＡ）−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹであるものである。

別の特に好ましい上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストは、前記アゴニストがＨ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ３０，０００ＳＳＡ）−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹであるものである。

ＰＥＧ化されていない、すなわちＹおよびＹ′の両方がポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣではない上記の神経ペプチド２受容体アゴニストは、ＹおよびＹ′の一方または両方がポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである化合物の調製のための中間体としても使用可能である。このような基ＹおよびＹ′は当業者に周知の標準的な方法によって導入することが可能である。

好ましくは、上記の神経ペプチド２受容体アゴニストは：

から成る群より選択されない。

本発明の化合物は、例えばそれがＰＹＹ_３−３６の切断型であるので有利である。例えば、より短いペプチドは、化合物のより容易な合成および精製を促進するだけでなく、製造の手順および費用の改善および軽減もする。さらに、本発明の化合物は好適にＹ２受容体と相互作用し、そしてＮＰＹ Ｙ１、Ｙ４およびＹ５などの相同受容体とは相互作用しない。それによって、所望されないアゴニストまたはアンタゴニストの副反応が最小化される。

本発明の化合物は、好ましくは、代謝性疾患および障害の処置に有用である。このような代謝性疾患および障害としては、例えば肥満、糖尿病、好ましくは２型糖尿病、メタボリックシンドローム（シンドロームＸとしても知られる）、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害が挙げられる。

したがって本発明はまた、上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストおよび医薬的に許容される担体および／またはアジュバントを含む医薬組成物に関する。

同様に本発明は、治療活性物質としての、特に神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の処置および／または予防のための治療活性物質としての、特に肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の処置および／または予防のための治療活性物質としての使用のための上記の神経ペプチド２受容体アゴニストを包含する。

別の好ましい実施態様では、本発明は神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の治療的および／または予防的処置のための、特に代謝性疾患または障害、特に肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の治療的および／または予防的処置のための方法に関しており、該方法は上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストを人間または動物に投与することを含む。好ましい上記の方法では、前記神経ペプチド２受容体アゴニストは１日１回前記患者に投与される。好ましくは、前記神経ペプチド２受容体アゴニストは３日毎に１回前記患者に投与される。より好ましくは、前記神経ペプチド２受容体アゴニストは１週間に１回前記患者に投与される。前記神経ペプチド２受容体アゴニストは、経口的に、鼻腔内に、静脈内に、皮下に、非経口的に、経皮的に、腹腔内に、経直腸的に、または吸引によって前記患者に投与されることが好ましい。好ましくは、前記神経ペプチド２受容体アゴニストは鼻腔内に投与される。前記神経ペプチド２受容体アゴニストが皮下に投与されることも好ましい。上記の方法では、前記神経ペプチド２受容体アゴニストは好ましくは約０．００１〜約１００mgの用量で投与される。

本発明はまた、神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の治療的および／または予防的処置のための、特に肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の治療的および／または予防的処置のための上記で定義する神経ペプチド２受容体アゴニストの使用を包含する。

本発明はまた、神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の治療的および／または予防的処置のための、特に肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の治療的および／または予防的処置のための医薬の調製のための上記の神経ペプチド２受容体アゴニストの使用に関する。このような医薬は上記の神経ペプチド２受容体アゴニストを含む。

本発明が本明細書に記載される本発明の特定の実施態様に限定されないことを理解すべきである。なぜなら、特定の実施態様の変形が添付の請求の範囲内でなされ得そしてなおその範囲内にあり得るからである。用いる用語は特定の実施態様を記載する目的のためのものであり、限定する意図はないことも理解すべきである。むしろ、本発明の範囲は添付の請求の範囲によって確立される。

医薬化合物の送達のためのエステルの使用およびその例に関するさらなる情報はDesign of Prodrugs. Bundgaard H. ed. (Elsevier, 1985)中に入手可能である。H. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995）pp. 108-109; Krogsgaard-Larsen et al., Textbook of Drug Design and Development (2d Ed. 1996）pp. 152-191も参照されたい。

本発明の代表的な化合物は、アミノ酸間のペプチド結合の形成のための任意の公知の従来の手順によって容易に合成され得る。このような従来の手順は、例えば、そのカルボキシル基および他の反応性基が保護されたアミノ酸またはその残基の遊離αアミノ基と、そのアミノ基または他の反応性基が保護された別のアミノ酸またはその残基の遊離第一級カルボキシル基との間の縮合を可能にする任意の液相手順を含む。

本発明の新規の化合物を合成するためのこのような従来の手順は、例えば、任意の固相ペプチド合成法を含む。このような方法において、新規の化合物の合成は、固相法の一般的な原理にしたがって、所望のアミノ酸残基を、伸長しているペプチド鎖に１つずつ逐次的に組み込むことにより実施することができる。このような方法は、例えば、Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963); Barany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980)（本明細書に参照により組み入れる）に開示されている。

ペプチドの化学合成に共通していることは、適切な保護基での種々のアミノ酸部分の反応性側鎖基の保護であり、これは保護基が最終的に除去されるまで化学反応がその部位で生じることを防止する。通常これもまた共通していることは、その物質がカルボキシル基で反応している間のアミノ酸またはフラグメント上のαアミノ基の保護、それに続く、その後の反応をその部位で生じさせるαアミノ保護基の選択的除去である。固相合成法に関して特定の保護基が開示されているが、液相合成においてそれぞれのアミノ酸のために従来使用されている保護基によって各アミノ酸を保護できることに留意すべきである。

αアミノ基は、アリルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などの芳香族ウレタン型保護基およびｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロピルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）などの置換ベンジルオキシカルボニル；ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメチルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニルなどの脂肪族ウレタン型保護基から選択される適切な保護基によって保護してもよい。本明細書において、αアミノ保護にはＦｍｏｃが最も好ましい。

グアニジノ基は、ニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、（Ｚ，）ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、４−メトキシ−２，３，６，−トリメチルベンゼンスルホニル（4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzzenesulfonyl）（Ｍｔｒ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよく、アルギニン（Ａｒｇ）のためには（Ｐｍｃ）および（Ｍｔｒ）が最も好ましい。

ε−アミノ基は、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（2-bromo benztloxycarbonyl）（２−Ｂｒ−Ｚ）−およびｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよい。（Ｌｙｓ）のためにはＢｏｃが最も好ましい。

ヒドロキシル基（ＯＨ）は、ベンジル（Ｂｚｌ）、２，６ジクロロベンジル（2,6 dichlorobenztl）（２，６ジＣｌ−Ｂｚｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル（ｔ−Ｂｕ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよく、（Ｔｙｒ）、（Ｓｅｒ）および（Ｔｈｒ）のためには（ｔＢｕ）が最も好ましい。

β−およびγ−アミド基は、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、２，４，６−トリメトキシベンジル（Ｔｍｏｂ）、４，４−ジメトキシジチルビス−（４−メトキシフェニル）−メチル（Ｄｏｄ）およびトリチル（Ｔｒｔ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよい。（Ａｓｎ）および（Ｇｌｎ）のためにはＴｒｔが最も好ましい。

インドール基はホルミル（Ｆｏｒ）、メシチル−２−スルホニル（Ｍｔｓ）およびｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよい。（Ｔｒｐ）のためにはＢｏｃが最も好ましい。

イミダゾール基は、ベンジル（Ｂｚｌ）、−ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）およびトリチル（Ｔｒｔ）から選択される適切な保護基によって保護されてもよい。（Ｈｉｓ）のためにはＴｒｔが最も好ましい。

アミノ酸Ｐｑａの合成はJ. Hutchinson et al.（J.Med. Chem. 1996, 39, 4583-4591）によって記載されている。Ｆｍｏｃ−Ｐｑａ誘導体はNeoMPS, Inc. (San Diego CA)から購入した。

全ての溶媒、イソプロパノール（ｉＰｒＯＨ）、塩化メチレン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびＮ−メチルピロリノン（ＮＭＰ）はFisherまたはBurdick & Jacksonから購入し、さらなる蒸留なしに使用した。トリフルオロ酢酸はHalocarbonまたはFlukaから購入し、さらなる精製なしに使用した。

ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）はFlukaまたはAldrichから購入し、さらなる精製なしに使用した。ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、ジメチルスルフィド（ＤＭＳ）および１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）はSigma Chemical Co.から購入し、さらなる精製なしに使用した。保護アミノ酸は一般にＬ立体配置のものであり、BachemまたはNeosystemから商業的に入手した。使用に先だって、これらの試薬の純度を薄層クロマトグラフィー、ＮＭＲおよび融点によって確認した。ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）は、BachemまたはAdvanced Chemtechから入手したスチレン−１％ジビニルベンゼンの共重合体（１００〜２００または２００〜４００メッシュ）であった。これらの樹脂の総窒素含有量は一般に０．３〜１．２meq／gの間であった。

上記のように当該分野で公知の他の同等の化学合成が使用可能であったが、好ましい実施態様では、ペプチドは、Merrifield（J. Amer. Chem. Soc., 85, 2149 (1963)）に一般に記載される方法による固相合成を使用して調製した。固相合成は、保護αアミノ酸を適切な樹脂にカップリングさせることによってペプチドのＣ末端から開始される。このような出発物質は、ｐ−ベンジルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂へのエステル結合によって、またはｐ−（（Ｒ，Ｓ）−α−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド）−２，４−ジメチルオキシベンジル）−フェノキシ酢酸（Rinkリンカー）などのＦｍｏｃリンカーとベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂との間のアミド結合によって、αアミノ保護アミノ酸を付着させることによって調製可能である。ヒドロキシメチル樹脂の調製は当該分野で周知である。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持体は市販されており、合成される所望のペプチドがＣ末端に非置換アミドを有する場合に一般に使用される。

典型的には、アミノ酸または模倣物のＦｍｏｃ保護形態を使用して、２〜５当量のアミノ酸および適切なカップリング試薬を用いて、アミノ酸または模倣物をＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂にカップリングする。カップリング後、樹脂を洗浄し、真空乾燥してもよい。樹脂へのアミノ酸の負荷はＦｍｏｃ−アミノ酸樹脂のアリコートのアミノ酸分析によって、またはＵＶ分析によるＦｍｏｃ基の決定によって決定してもよい。塩化メチレン中で樹脂を無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンと反応させることによって任意の未反応アミノ基をキャッピングしてもよい。

樹脂を数回の反復サイクルに通して、アミノ酸を逐次的に付加する。αアミノＦｍｏｃ保護基を塩基性条件下で除去する。この目的のために、ＤＭＦ中のピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン（２０〜４０％v／v）を使用してもよい。好ましくは、ＤＭＦ中の４０％ピペリジンを利用する。

αアミノ保護基の除去後に、続く保護アミノ酸を所望の順序で段階的にカップリングして、中間体である保護ペプチド−樹脂を得る。ペプチドの固相合成におけるアミノ酸のカップリングに使用される活性化試薬は当該分野で周知である。例えば、このような合成のための適当な試薬は、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリ−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｒｏＰ）２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）、およびジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）である。ここではＨＢＴＵおよびＤＩＣが好ましい。他の活性化剤はBarany and Merrifield（The Peptides, Vol. 2, J. Meienhofer, ed., Academic Press, 1979, pp 1-284）によって記載されており、これを利用してもよい。合成サイクルを最適化するために、１ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）および３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢＴ）などの種々の試薬をカップリング混合物に添加してもよい。ここではＨＯＢＴが好ましい。

Ｎ末端アセチル誘導体の調製のためには、５％ＤＩＥＡを含むＤＭＦ中の２０％無水酢酸で樹脂結合ペプチドを処理することによってアセチル化を実施した。他のＮ末端アシル化のためには、インサチュでＤＩＣ／ＨＯＢＴで３０分間活性化させた対応するカルボン酸を使用してアシル化を行った。

典型的な合成サイクルのためのプロトコールは以下のとおりである：

全ての洗浄およびカップリングのための溶媒を、１０〜２０ml／g樹脂の体積に計量した。合成の間じゅうのカップリング反応をKaiserニンヒドリン試験によってモニターして、完了の程度を決定した（Kaiser et al. Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970)）。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）、および立体障害された酸による二級アミンへのカップリングに関して、遅い反応速度が観察された。不完全なカップリング反応物はいずれも、新たに調製した活性化アミノ酸を用いて再カップリングするか、または上記の無水酢酸でのペプチド樹脂の処理によってキャッピングした。完全にアセンブルしたペプチド−樹脂を数時間真空乾燥した。

大部分の化合物について、ブロッキング基を除去し、そしてペプチドを樹脂から切断した。例えば、ペプチド−樹脂を、樹脂１グラム当たり１００μLのエタンジチオール、１００μlのジメチルスルフィド、３００μLのアニソールおよび９．５mLのトリフルオロ酢酸で、室温で１８０分間処理した。あるいは、ペプチド−樹脂を、樹脂１グラム当たり１．０mLのトリイソプロピルシランおよび９．５mLのトリフルオロ酢酸で、室温で１８０分間処理した。樹脂をろ過し、そしてろ液を冷エチルエーテル中で沈殿させた。沈殿を遠心分離し、そしてエーテル層をデカントした。残渣を２または３容のＥｔ_２Ｏで洗浄し、そして再遠心分離した。粗生成物を真空乾燥した。

粗ペプチドの精製は、逆相Ｃ−１８カラム（５０×２５０mm、３００Ａ、１０〜１５μm）での高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってShimadzu LC-8Aシステムで好適に行った。ペプチドを最小体積の０．１ ＡｃＯＨ／Ｈ_２ＯまたはＣＨ３ＣＨ／Ｈ_２Ｏのいずれかの中でカラムに注入した。勾配溶離は一般に２％のＢバッファーで開始した；７０分間にわたる２％〜７０％のＢ（バッファーＡ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、バッファーＢ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）、流速５０ml／分。ＵＶ検出は２２０／２８０nmで行った。生成物を含有する画分を分離し、そしてその純度をShimadzu LC-10AT分析システムで逆相Ace C18カラム（４．６×５０mm）を使用して、流速２ml／分、１０分にわたる勾配（２〜７０％）（バッファーＡ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、バッファーＢ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ））で判定した。高純度であると判定された画分をプールし、そして凍結乾燥した。

最終生成物の純度を、上記のように逆相カラムでの分析用ＨＰＬＣによってチェックした。全ての生成物の純度は約９５〜９９％であると判定された。また全ての最終生成物を高速原子衝撃質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）またはエレクトロスプレー質量分析（ＥＳ−ＭＳ）に供した。全ての生成物が予想した親Ｍ＋Ｈイオンを許容限度内で生じた。

本発明の化合物は医薬的に許容される塩の形態で提供可能である。好ましい塩の例は、医薬的に許容される有機酸、例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸またはパモ酸、ならびにタンニン酸またはカルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸と形成された塩、およびハロゲン化水素酸（hydrohalic acid）（例えば塩酸）、硫酸またはリン酸等の無機酸との塩である。当業者に公知の医薬的に許容される塩を得るための任意の手順が使用可能である。

本発明の方法の実施において、有効量の、本発明のペプチドのいずれかまたは本発明のペプチドのいずれかの組み合わせまたはその医薬的に許容される塩を、当該分野で公知の通常の許容される方法のいずれかを介して、単独または組み合わせのいずれかで投与する。投与は、例えば、１日１回、３日毎に１回、または１週間に１回であり得る。したがって化合物または組成物は経口的に（例えば頬側口腔）、舌下に、非経口的に（例えば筋肉内、静脈内または皮下）、経直腸的に（例えば坐薬または洗浄液により）、経皮的に（例えば皮膚電気穿孔）または吸入によって（例えばエアロゾルによって）、および固体、液体または気体製剤の形態（錠剤および懸濁液を含む）で投与可能である。投与は、連続治療での単一単位剤形で、または適宜単一用量治療で行うことができる。治療組成物はまた、パモ酸などの親油性塩と共同した油乳濁剤または分散剤の形態、あるいは皮下または筋肉内投与用の生分解性徐放組成物の形態でもあり得る。

したがって、本発明の方法は、症状の軽減が特に必要であるか、または切迫しているかもしれない場合に実施される。あるいは、本発明の方法は、連続的または予防的処置として効果的に実施される。

本明細書の組成物の調製に有用な医薬担体は固体、液体または気体であり得る；したがって、組成物は錠剤、丸剤、カプセル、坐薬、散剤、腸溶性またはその他の保護された製剤（例えばイオン交換樹脂上の結合または脂質−タンパク質小胞中の封入）、徐放製剤、溶液、懸濁液、エリキシル剤、エアロゾル等の形態をとることが可能である。担体は、石油、動物、植物または合成起源のものを含む種々の油、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等から選択可能である。水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液およびグリコールは、特に（血液と等張である場合）注射溶液に、好ましい液体担体である。例えば、静脈内投与用の製剤は、固体有効成分（単数または複数）を水中に溶解して水溶液を作製しそして溶液を無菌にすることによって調製される、有効成分（単数または複数）の無菌水溶液を含む。適切な医薬賦形剤としては、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、タルク、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカ、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセリンモノステアラート、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール等が挙げられる。組成物は、保存料、安定化剤、湿潤または乳化剤、浸透圧調整用の塩、バッファー等の従来の医薬添加剤に供してもよい。適切な医薬担体およびそれらの処方はE. W. MartinによるRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。レシピエントへ適正な投与のために適正な剤形を調製するために、このような組成物は、いずれにしても、適切な担体と共に有効量の活性化合物を含有する。

本発明の化合物の用量は、例えば投与方法、被検体の年齢および体重、ならびに処置すべき被検体の状態などいくつかの因子に依存し、そして最終的には主治医または獣医によって決定される。主治医または獣医により決定される活性化合物のこのような量を本明細書および請求の範囲において「有効量」という。例えば、経鼻投与用の用量は典型的には約０．００１〜約０．１mg／ kg体重の範囲である。ヒトでは、好ましいペプチド含量に基づく皮下用量は約０．００１mg〜約１００mg；好ましくは約０．１mg〜約１５mgである。ＡＰＩのためには、約０．０１５mg〜約１００mg；好ましくは約１mg〜約１００mgの範囲である。

ここで本発明を以下の実施例においてさらに説明する。これは例示としてのみ意図されており、本発明の範囲を限定するものではない。

試薬の調製
ｍＰＥＧ_３０ｋ−メシラート

マグネティックスターラー、ディーンスタークトラップ、還流冷却器およびアルゴン（または窒素）インレットバブラーを備えた１Ｌ丸底フラスコに、ｍＰＥＧ ３０ｋＤａ（Nippon Oil and Fatから入手した）１００g（３．３４mmol）およびトルエン５００mLを入れた。トルエン中のＰＥＧ溶液を２５０mLのトルエンを留去することによって共沸的に乾燥させ、その後溶液を室温まで冷却した。該溶液に２００mLの無水ジクロロメタンを添加し、溶液を０〜５℃まで冷却し、そして０．６７mL（４．８４mmol）のトリエチルアミンおよび０．３３mL（４．３４mmol）のメタンスルホニルクロリドを、ゴム隔膜を通してシリンジを使用して滴下した。混合液を約４℃で２時間攪拌し、その後、アルゴンガス下、室温で一晩攪拌した。

混合液をロータリーエバポレーターで濃縮し、粗ガラスフリットを通してろ過して、塩を除去した。（注意：ろ過の間にガラスフリットを加温して、溶液が固化することを防止する）。約１８００mlの冷イソプロピルアルコールおよびジエチルエーテル（３０：７０、v／v）の添加によって生成物を沈殿させた。生成物を回収し、そして室温で一晩真空乾燥させて、９０g（９０％）の白色固体を得た。

工程２．ｍＰＥＧ_３０ｋ−アミン

マグネティックスターラーおよびアルゴンインレットバブラーを備えた２Ｌ丸底フラスコに、上記で調製したｍＰＥＧ ３０ｋＤａメシラート２ ９０g（３mmol）および水酸化アンモニウム水溶液（３０％、v／v）１６００mLを入れた。この溶液に、１６０gの塩化アンモニウムを添加した。溶液を注意深く加温して、全てのＰＥＧメシラートを溶解した。反応フラスコ中での圧力増大を防止するためにバブラーを通して過剰の気体を放出しながら、得られた溶液を室温で４８時間攪拌した。

反応完了後、１６０g（１０重量％）の塩化ナトリウムを添加し、そして３×２００mL＝１２００mLのジクロロメタンで混合液を抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで約１時間乾燥し、ろ過し、そしてロータリーエバポレーターで濃縮した。１８００mLの冷ジエチルエーテルの添加によって生成物を沈殿させ、ろ過し、そして室温で一晩真空乾燥して、８５g（９４％）の３を白色固体として得た。

工程３．ｍＰＥＧ_３０ｋ−スクシンアミド酸

マグネティックスターラーおよびアルゴンインレットバブラーを備えた１Ｌ丸底フラスコに、ｍＰＥＧ ３０ｋＤａアミン３ ６０g（２．００mmol）および無水アセトニトリル５００mLを入れた。溶液を約４℃まで冷却し、その後５０mLの無水アセトニトリル中の２g（２０．００mmol）の無水コハク酸を添加漏斗を用いてゆっくりと添加した。反応混合液をアルゴンガス流下、室温で一晩攪拌した。

反応終了後、ロータリーエバポレーターで溶媒を蒸発乾固させた。その後、生成物を４００mLの水に溶解した。溶液のｐＨを、１Ｍ ＮａＯＨ溶液で７．０に調整し、ｐＨを７．０に維持しながら１時間攪拌した。この溶液に４０g（１０重量％）の塩化ナトリウムを添加し、そして６Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨを約４．２に調整した。得られた水性混合液を、２００、１００、５０mL＝３５０mLのジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出物を無水硫酸ナトリウムで約１時間乾燥させた。硫酸ナトリウムをろ過し、そしてろ液をロータリーエバポレーターで濃縮する。１Lの冷ジエチルエーテル中で生成物を沈殿させる。生成物を回収し、そして室温で一晩真空乾燥して、５６g（９３％）の４を白色固体として得る。

工程４．ｍＰＥＧ_３０ｋ−スクシンイミジルスクシンアミド

マグネティックスターラーおよびアルゴンインレットバブラーを備えた５００mＬ丸底フラスコに、ｍＰＥＧ ３０ｋＤａスクシンアミド酸４ ５６g（１．８７mmol）および無水ジクロロメタン５００mLを入れた。この溶液に、０．２４g（２．０５mmol）のＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび０．４６g（２．２４mmol）の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドをゆっくりと添加した。反応混合液をアルゴンガス流下、室温で一晩攪拌した。

反応完了後、ロータリーエバポレーターで混合液を蒸発乾固させた。その後、生成物を２００mLの無水トルエンに溶解し、そしてセライトのパッドを置いた事前に加温した粗ガラスフリットを通して溶液をろ過した。１２００mLの冷無水イソプロピルアルコールおよびジエチルエーテル（３０：７０、v／v）を添加することによって生成物を沈殿させた。生成物を回収し、そして室温で一晩真空乾燥して、２０g（８０％）の５を白色固体として得た。

好ましい化合物の調製
実施例１
Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂の調製
ベンズヒドリルアミンコポリスチレン−１％ジビニルベンゼン架橋樹脂（１０．０g、９．３mequiv、１００〜２００ＡＳＴＭメッシュ、Advanced ChemTech）を１００mLのＣＨ_２Ｃｌ_２中で膨張させ、ろ過し、そして各１００mlのＣＨ_２Ｃｌ_２、６％ＤＩＰＥＡ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）で連続的に洗浄した。樹脂を、１００mLの２５％ＤＭＦ／ＣＨ_２Ｃｌ_２中のｐ−（（Ｒ，Ｓ）−α−（１−（９Ｈ−フルオレン−９−イル）−メトキシホルムアミド）−２，４−ジメトキシベンジル）−フェノキシ酢酸（Ｆｍｏｃ−リンカー）（７．０１g、１３．０mmol）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．１６g、１６．０mmol）およびジイソプロピル−カルボジイミド（２．０４ml、１３．０mmol）で２４時間室温で処理した。樹脂をろ過し、そして各１００mlのＣＨ_２Ｃｌ_２（２回）、イソプロパノール（２回）、ＤＭＦ、およびＣＨ_２Ｃｌ_２（３回）で連続的に洗浄した。Kaiserニンヒドリン分析は陰性であった。樹脂を真空乾燥して、１６．１２gのＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂を得た。この樹脂の一部（３．５mg）をＦｍｏｃ脱保護および定量的ＵＶ分析に供し、これは０．５６mmol／gの負荷を示した。

実施例２
フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）化学を使用したApplied Biosystem 433A合成装置によるペプチドの合成のためのプロトコール。
Applied Biosystem 433A合成装置（Foster City, CA）による０．２５mmolスケールのペプチド合成のために、樹脂サンプリングまたは非樹脂サンプリングのいずれかで４１mL反応容器で、FastMoc０．２５mmolサイクルを使用した。Ｆｍｏｃ−アミノ酸樹脂を、２．１gのＮＭＰ、２gの０．４５Ｍ ＨＯＢＴ／ＨＢＴＵと共にＤＭＦおよび２Ｍ ＤＩＥＡに溶解し、その後反応容器に移した。基本的なＦａｓｔＭｏｃカップリングサイクルは「ＢＡＤＥＩＦＤ」で表され、ここで各文字がモジュールを表している（Applied Biosystemsによって定義される）。例えば：

Ｂは、２０％ピペリジン／ＮＭＰを使用したＦｍｏｃ脱保護および関連した洗浄および３０分間の読み取り（ＵＶモニタリングまたは伝導率のいずれか）のモジュールを表し；Ａは、０．４５M ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔおよび２．０M ＤＩＥＡでのカートリッジ中でのアミノ酸の活性化ならびにＮ_２バブリングでの混合のモジュールを表し；Ｄは反応容器内の樹脂のＮＭＰ洗浄のモジュールを表し；Ｅは、カップリングのための反応容器への活性化アミノ酸の移送のモジュールを表し；Ｉは、反応容器のボルテックスのオンおよびオフをともなう１０分間の待機期間のモジュールを表し；そしてＦはカートリッジの洗浄、約１０分間のカップリングおよび反応容器の排液のモジュールを表す。カップリングは典型的にはモジュール「Ｉ」を１回または複数回追加することによって延長した。例えば、手順「ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤ」を行うことによって二重カップリングを行った。塩化メチレン洗浄のｃおよび無水酢酸でのキャッピングの「Ｃ」などの他のモジュールが利用可能であった。移送される溶媒または試薬の量を変更するために、個々のモジュールはまた、例えば移送時間などの種々の機能のタイミングを変えることによって改変可能であった。上記のサイクルは典型的には１つのアミノ酸をカップリングするために使用した。しかし、テトラペプチドを合成するために、サイクルを反復し、そして一連のものとした。例えば、ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを使用して最初のアミノ酸をカップリングし、ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを続けて第２のアミノ酸をカップリングし、ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを続けて第３のアミノ酸をカップリングし、ＢＡＤＥＩＩＡＤＥＩＦＤを続けて第４のアミノ酸をカップリングし、最終脱保護および洗浄のためにＢＩＤＤｃｃを続けた。

実施例３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（ＰＹＹ_３−３６）の調製

上記のペプチドは、Applied Biosystem 433A合成装置でＦｍｏｃ化学を使用して合成した。合成装置は実施例２に記載のモジュールを使用して二重カップリング用にプログラミングした。実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を使用して０．２５mmolスケールで合成を行った。合成の最後に、切断のために樹脂を振盪機上の反応容器へ移した。ペプチドを、１３．５mLの９７％ＴＦＡ／３％Ｈ_２Ｏおよび１．５mLのトリイソプロピルシランを使用して、室温で１８０分間、樹脂から切断した。脱保護溶液を１００mLの冷ＥＴ_２Ｏに添加し、そして１mLのＴＦＡおよび３０mLの冷ＥＴ_２Ｏで洗浄して、ペプチドを沈殿させた。ペプチドを２×５０mLポリプロピレンチューブで遠心分離した。個々のチューブからの沈殿を単一のチューブ中に合わせ、そして冷ＥＴ_２Ｏで３回洗浄し、そしてハウスバキューム下でデシケーター中で乾燥させた。

粗物質をPursuit C18カラム（２５０×５０mm、１０μm粒径）での調製用ＨＰＬＣによって精製し、そして２〜７０％のＢ（バッファーＡ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、バッファーＢ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）の直線勾配で９０分、流速６０mL／分、および検出２２０／２８０nmで溶出した。画分を回収し、そして分析用ＨＰＬＣによってチェックした。純粋生成物を含有する画分を合わせ、そして凍結乾燥して、１５１mg（１５％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ_１８０Ｈ_２７９Ｎ_５３Ｏ_５４についての計算値４０４９．５５、実測値４０５０．４０。

実施例４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４８mg（９％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ_９８Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１についての計算値２１３１．５３、実測値２１３０．５６。

実施例５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成（Ｎ−メチルＡｒｇを配列の３５位に挿入した）および精製に供して、３２mg（６％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ_９９Ｈ_１５５Ｎ_３３Ｏ_２１についての計算値２１４３．５６、実測値２１４３．５０

実施例６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−ｍ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、３８．５mg（７％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５５Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１４３．５４７７、実測値２１４３．５０。

実施例７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−３−ヨード−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４１mg（７％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５４ＩＮ３３Ｏ２１についての計算値２２６９．４４、実測値２２６９．２０。

実施例８
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−３，５ジＦ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、２８mg（５％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５３Ｆ２Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１７９．５２、実測値２１７９．４６。

実施例９
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−２，６ジＦ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４９．３mg（９％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５３Ｆ２Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１７９．５３、実測値２１７９．５０。

実施例１０
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−２，６ジＭｅ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、１３．５mg（３％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０１Ｈ１５９Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１７１．６０、実測値２１７１．４０。

実施例１１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−４メトキシ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、７２mg（１３％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１００Ｈ１５７Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１５７．５７、実測値２１５７．５８。

実施例１２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、８５．３mg（１６％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５５Ｎ３３Ｏ２０についての計算値２１２７．５５、実測値２１２７．５３。

実施例１３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−４アミノ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、５１．４mg（１０％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５６Ｎ３４Ｏ２０についての計算値２１４２．５６、実測値２１４２．５５。

実施例１４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−４Ｆ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、３５mg（７％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５４ＦＮ３３Ｏ２０についての計算値２１４５．５４、実測値２１４５．５１。

実施例１５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−４−（ＣＨ２ＯＨ）−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、２４mg（４％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１００Ｈ１５７１Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１５７．５７、実測値２１５７．５６。

実施例１６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−４−トリフルオロメチル−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、８１mg（１５％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１００Ｈ１５４Ｆ３Ｎ３３Ｏ２０についての計算値２１９５．５４、実測値２１９５．５１。

実施例１７
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−３フルオロ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、８４mg（１６％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５４ＦＮ３３Ｏ２０についての計算値２１４５．５４、実測値２１４５．５３。

実施例１８
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−２，３，４，５，６ペンタフルオロ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、８９mg（１６％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５０ＦＮ３３Ｏ２０についての計算値２２１７．５０、実測値２２１７．４８。

実施例１９
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−３，４−ジクロロ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４６mg（８％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５３Ｃ１２Ｎ３３Ｏ２０についての計算値２１９６．４４、実測値２１９６．４１。

実施例２０
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｃｈａ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４９mg（９％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０６Ｈ１６２Ｎ３４Ｏ２１についての計算値２２４８．６９、実測値２２４８．７１。

実施例２１
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、５７mg（１０％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０８Ｈ１５７Ｎ３５Ｏ２１についての計算値２２８１．６８、実測値２２８１．６７。

実施例２２
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−１−Ｎａｌ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４５mg（８％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０３Ｈ１５７Ｎ３３Ｏ２０についての計算値２１７７．６１、実測値２１７７．５９。

実施例２３
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−２−Ｎａｌ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、４３mg（８％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０３Ｈ１５７Ｎ３３Ｏ２０についての計算値２１７７．６０、実測値２１７７．５８。

実施例２４
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｃ−α−メチルＴｙｒ−−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、３５．１mg（７％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ９９Ｈ１５５Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２１４３．５５、実測値２１４３．５６。

実施例２５
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、１３０mg（２３％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０４Ｈ１５４Ｎ３４Ｏ２１についての計算値２２１６．６０、実測値２２１６．６２。

実施例２６
Ｈ−Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、８４mg（１５％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０４Ｈ１５３Ｎ３３Ｏ２１についての計算値２２０１．５９、実測値２２０１．５６。

実施例２７
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−２，６−Ｆ２−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、２４mg（４％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０６Ｈ１５４Ｆ２Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２０９９．４９、実測値２１００．３。

実施例２８
Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、６８mg（１２％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０６Ｈ１５６Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２２５８．６４、実測値２２５８．６１。

実施例２９
Ｐｅｎｔｏｙｌ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、６７mg（１２％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０９Ｈ１６２Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２３００．７２、実測値２３００．６９。

実施例３０
トリメチルアセチル−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、６mg（１％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１０９Ｈ１６２Ｆ２Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２３００．７２、実測値２３００．６８。

実施例３１
シクロヘキシルアセチル−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、１５mg（３％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１１２Ｈ１６６Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２３４０．７９、実測値２３４０．８１。

実施例３２
ベンゾイル−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、２３mg（４％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１１１Ｈ１５８Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２３２０．７１、実測値２３２０．６８。

実施例３３
アダマントイル−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

実施例１のＦｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂（４５０mg、０．２５mmol）を実施例３の手順にしたがって固相合成および精製に供して、２９mg（５％）の白色非晶質粉末を得た。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１１６Ｈ１７０Ｎ３４Ｏ２２についての計算値２３９２．８６、実測値２３９２．８９。

実施例３４〜３９および４１のための分析法
以下の逆相ＨＰＬＣ／ＵＶ手順を使用して試験品および対照品を分析した：
オートサンプラー Alliance Waters 2690 Separation Module
注入量 １０μL
注入器温度 外気温
検出器 Waters 996 Photodiode Array Detector
検出器波長 ２８０nm
カラム Agilent Eclipse XDB-C8、５μm、１５０mm×４．６mm ｉ．ｄ．ＰＮ：９９３６７−９０６
カラム温度 ２５℃
流速 １．０mL／分（約１０００psi）
移動相Ａ ０．０５％ＴＦＡ含有水
移動相Ｂ ０．０５％ＴＦＡ含有アセトニトリル
流動時間 約３０分
試料調製 約０．２〜０．５mg／ml
希釈剤 脱イオン水

移動相勾配条件１（ＲＰ−ＨＰＬＣ１）：

移動相勾配条件２（ＲＰ−ＨＰＬＣ２）：

実施例３４
（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ）Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２およびＩｌｅ（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ）（ε）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の混合物の調製

［式中、ｎ＝約６７５である］
および、

［式中、ｎ＝約６７５である］

実施例２５のペプチド２５mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ７．５バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオン酸（Nektarから購入）５００mgを秤量して、２：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌し、その後２０mMのＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FFでの陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図１は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により６９．８％の３０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。

濃縮した実施例３４のペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図２は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（ＲＴ＝１０．１分）。３０kDaペプチドの純度は＞９７％と測定された。また図３は、分子量を確認するために行った３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表すグラフである。

ＰＥＧ修飾部位を決定するために方法の組み合わせを使用した。これらには、ＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳ、逆相ＨＰＬＣ、タンパク質消化およびＮ末端配列決定（Edman）が含まれた。これらの分析の結果は、ＰＥＧの大部分がペプチドの（Ｒ２）位におけるリジンのε−アミノ基を介して付加されていることを示した。

実施例３５
（（ＰＥＧ−４０，０００）ＣＯ）Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２およびＩｌｅ（（ＰＥＧ−４０，０００）ＣＯ）（ε）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の混合物の調製

［式中、ｎ＝約９００である］
および、

［式中、ｎ＝約９００である］

実施例２５のペプチド２５mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ８．０バッファー中に溶解した。４０kDa ＰＥＧ−ベンゾトリアゾールカルボナート３１９mgを秤量して、０．８：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で１時間攪拌し、その後２０mMのＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FFでの陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図４は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により６０．４％の４０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。

濃縮した実施例３５のペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図５は精製した４０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（ＲＴ＝１０．１分）。４０kDaペプチドの純度は＞９０％と測定された。また図６は、分子量を確認するために行った４０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表すグラフである。

実施例３６
（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ）Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

［式中、ｎ＝約６７５である］

実施例２６のペプチド１３mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ８．０バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルスクシンアミド６２４mgを秤量して、４：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、その後２０mM ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FF（Amersham）での陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図７は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により９４．１％の３０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。濃縮したペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図８は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（１０．４分）。３０kDaペプチドの純度は＞９０％と測定された。また図９は、分子量を確認するために行った３０kDaＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表す。

実施例３７
（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ（ＣＨ_３）ＣＨ_２ＣＯ）Ｉｌｅ−Ｎｌｅ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

［式中、ｎ＝約６７５である］

実施例２６のペプチド１．２５mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ８．０バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルβ−ＳＢＡ ６２mgを秤量して、４：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌し、その後２０mM ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FF（Amersham）での陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図１０は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により９３．４％の３０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。濃縮したペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図１１は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（１０．５分）。３０kDaペプチドの純度は＞９０％と測定された。また図１２は、分子量を確認するために行った３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表す。

実施例３８
Ａｃ−Ｉｌｅ（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ（ε）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

［式中、ｎ＝約６７５である］

実施例２８のペプチド１００mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ８．０バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルプロピオン酸（Nektarから購入）１．８gを秤量して、１．５：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌し、その後２０mM ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FFでの陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図１３は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により８３．３％の３０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。

濃縮した実施例３８のペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図１４は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（ＲＴ＝９．５分）。３０kDaペプチドの純度は＞９５％と測定された。また図１５は、分子量を確認するために行った３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表すグラフである。

実施例３９
Ａｃ−Ｉｌｅ（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ）（ε）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

［式中、ｎ＝約６７５である］

実施例２８のペプチド１００mgを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ８．０バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルスクシンアミド３．６gを秤量して、３：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌し、その後２０mM ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FFでの陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図１６は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により８１．４％の３０kDaペプチドを得た。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ペプチドは２５０mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。

濃縮した実施例３９のペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図１７は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（ＲＴ＝９．５分）。３０kDaペプチドの純度は＞９７％と測定された。また図１８は、分子量を確認するために行った３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表すグラフである。

実施例４０
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

０．４５mm／gのＦｍｏｃ−リンカーＢＨＡ（AnaSpec Inc. から購入、cat# 408/452-5055）５５．０gを以下の手順による固相ペプチド合成および精製に供した：Ｆｍｏｃ保護アミノ酸は２５％過剰のＤＩＣ／ＨＯＢｔを介してカップリングした。（５５．０g×０．４５mm／g×１．２５eqv＝３１．０mm）。全ての脱保護は、約１０ml／g（ペプチド−樹脂量の増加にしたがって調整）でＤＭＦ中の２０％ピペリジン(piperdine)を用いて２×１０分であった。脱保護後、ペプチド樹脂を４×ＤＭＦ（２０容）で洗浄した。

全てのカップリングに約４０mLのＤＩＣ（約６eqv）および４．５gのＨＯＢｔ（１．２５eqv）を用いた。カップリング後、樹脂溶液を約．２５mlサンプリングし、ＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、そしてニンヒドリンにより完了についてチェックした。ＮＭｅ−ＡｒｇおよびＰｑａへのカップリング後、樹脂をＣＨ_２Ｃｌ_２で洗浄し、そしてＤＭＡｃ中２％Chlorinal ３滴およびＤＭＡｃ中２％アセトアルデヒド３滴を用いてチェックした（黄色溶液中で変化のないことは二次アミンがないことの指標となり、そして青色から黒色のビーズは不完全なカップリングの指標となる）。カップリングが不完全であると判断された場合、ＤＩＥＡをカップリング溶液に添加し、そしてさらに１時間継続した。完了すると、樹脂を４×ＤＭＦ（２０容）で洗浄した。

Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ：１４．０g。Ｆｍｏｃ−ＮＭｅＡｒｇ（Ｍｔｒ）−ＯＨ：２０．０g。Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ：１８．５g。Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ：２０．０g。Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ：１８．０g。Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ：１０．５g。Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ：１３．０。Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ：１８．０g。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ １１．０g、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｕｔ）−ＯＨ １４．０g、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ ２０．０g、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ ２０．０g、Ｆｍｏｃ−Ｐｑａ−ＯＨ １５．４g、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ １４．１g、Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ １１．０g。

ペプチド樹脂を３×ＤＭＦ、３×ＣＨ_２Ｃｌ_２および３×ＭｅＯＨで洗浄し、そして吸引下で乾燥して、１１５．３８gのペプチド樹脂を得た。ＴＦＡ切断のために樹脂を６×１９．２５gのバッチに分割した。

１９．２５gのペプチド樹脂を８．０mLの１：１：１ ＤＴＥ；アニソール；チオアニソール（Thioanisloe）、８．０mLのｉＰｒ_３ＳｉＨ、８．０mLのＨ_２Ｏおよび２００mLのＴＦＡで６時間（ＡＭ６：３０〜ＰＭ１３：３０）切断し、その後２．０Lの冷（−２０℃）Ｅｔ_２Ｏ中で沈殿させた。沈殿を８×５０mLポリプロピレン遠心管中で遠心分離することによって回収し、そして３×冷Ｅｔ_２Ｏで洗浄した。その後沈殿をハウスバキューム下で一晩乾燥させて、６．５gの粗ペプチドを得た。６回の脱保護後の粗ペプチドの総量は３８．７１gであった。

粗ペプチドの精製を、Shimadzu LC-8Aシステムで、逆相Pursuit C-18カラム（５０×２５０mm、３００Å、１０μm）での高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって行った。３８．７１gの粗物質を３６のプレップで精製した。毎回、約１．１gの粗ペプチドを最小量の水およびアセトニトリルに溶解し、そしてカラムに注入した。勾配溶離は一般に２０％のＢバッファーで開始した；７０分間にわたる２０％〜７０％のＢ（バッファーＡ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、バッファーＢ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）、流速５０ml／分。ＵＶ検出は２２０／２８０nmで行った。生成物を含有する画分を分離し、そして純度をShimadzu LC-10AT分析システムで逆相Pursuit C18カラム（４．６×５０mm）を使用して、流速２．５ml／分で、１０分にわたる勾配（２０〜７０％）［バッファーＡ：０．１％ＴＦＡ／Ｈ_２Ｏ、バッファーＢ：０．１％ＴＦＡ／ＣＨ_３ＣＮ）］で判定した。高純度であると判定された画分をプールし、そして凍結乾燥して、白色非晶質粉末を得た。３６のプレップからの凍結乾燥生成物を合わせ、そして再度凍結乾燥して、８．２３３gの純粋なペプチドを得た（１２．６％）。最終生成物の純度を上記のように逆相カラムでの分析用ＨＰＬＣによって再度チェックし、そしてそれは約９５〜９９％であった。（ＥＳ）＋−ＬＣＭＳ ｍ／ｅ：Ｃ１１９Ｈ１６４Ｎ３４Ｏ２３についての計算値２４３８．８５、実測値２４３８．８４。

実施例４１
Ｉｌｅ（（ＰＥＧ−３０，０００）ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ）（ε）Ｌｙｓ−Ｐｑａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−（ＮＭｅ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２の調製

［ｎ＝約６７５］

実施例４０のペプチド１．８gを秤量し、そして５０mMホウ酸、ｐＨ７．５バッファー中に溶解した。３０kDa ＰＥＧ−スクシンイミジルスクシンアミド３７．５gを秤量して、約２：１のＰＥＧ：ペプチドモル比を達成し、そして溶解したペプチドに添加した。反応混合物を室温で２時間攪拌した。１時間室温でピペリジン（２０％）を反応混合物へ添加することによってＰＥＧ化ペプチドを脱保護した。反応混合物を氷上に置き、そして氷酢酸（２０％）をゆっくりと添加することによって酸性化した。その後反応混合物を２０mM ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．５バッファー中で１０倍希釈し、そしてSP-Sepharose FFでの陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。図１９は反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムである。反応により９３．８％の保護ＰＥＧ化ペプチドを得た。図２０は脱保護反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムであり、これにより、ＰＥＧ化脱保護ペプチドの全収率は８９．５％であった。

モノＰＥＧ化ＰＹＹペプチドをステップＮａＣｌ勾配を使用して溶出した。典型的には、所望のモノＰＥＧ化ペプチドは１７５mM ＮａＣｌで溶出された。溶出したＰＥＧ−ＰＹＹ様ペプチドを１０kDa ＭＷカットオフ膜を使用してAmicon限外ろ過セル中で濃縮した。その後それを１回ＰＢＳで１０倍ダイアフィルトレーションした。

濃縮したペプチドを分析に付し、アッセイし、そして−２０Ｃで貯蔵した。図２１は精製した３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＨＰＬＣクロマトグラムである（ＲＴ＝１０．１分）。３０kDaペプチドの純度は＞９５％と測定された。また図２２は、分子量を確認するために行った３０kDa ＰＥＧ−ＰＹＹペプチドのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦを表すグラフである。

実施例４２
カルシウム流アッセイ
Ｇタンパク質キメラＧαｑｉ９およびハイグロマイシンＢ耐性遺伝子で安定にトランスフェクションされたＨＥＫ−２９３細胞を、ヒトＮＰＹ２受容体およびＧ４１８抗生物質選択でさらにトランスフェクションした。ハイグロマイシンＢおよびＧ４１８の両方での選択の後、ＰＹＹに対するその応答性について個々のクローンをアッセイした。トランスフェクションされた細胞（ＨＥＫ２９３／ｈＮＰＹ２Ｒ）を１０％ウシ胎仔血清、５０μg／mlハイグロマイシンＢ、２mMグルタミン、１００U／mlペニシリン、１００μg／mlストレプトマイシンおよび２５０μg／ml Ｇ４１８を補充したＤＭＥＭ培地中で培養した。細胞をトリプシン−ＥＤＴＡを用いて回収し、そしてViaCount試薬を使用して計数した。細胞懸濁液の量を完全増殖培地で４．８×１０^５細胞／mlに調整した。２５μlのアリコートを３８４ウェルポリＤリジンコート黒色／透明マイクロプレート（Falcon）に分注し、そしてマイクロプレートを３７℃のＣＯ_２インキュベーター中に一晩入れた。

１つのバイアル(Express Kit)の内容物を２０mMのＨＥＰＥＳおよび５mMのプロベネシドを含有する１０００mlのハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に溶解することによって、ローディングバッファー（Calcium-3 Assay Kit, Molecular Devices）を調製した。希釈した色素のアリコート（２５μl）を細胞プレートへ分注し、その後プレートを３７℃で１時間インキュベートした。

インキュベーション中、試験化合物を、ＨＢＳＳ（２０mM ＨＥＰＥＳ）／０．０５％ＢＳＡ／１％ＤＭＳＯ中３．５×所望の濃度に調製し、そしてFLIPR（登録商標）（FLIPR、Fluorescent Imaging Plate Reader、はMolecular Devices Corp.の登録商標である）での使用のために３８４ウェルプレートに移した。

インキュベーション後、細胞および化合物両方のプレートをFLIPR（登録商標）に運び、そして２０μLの希釈した化合物をFLIPR（登録商標）によって細胞プレートに移した。アッセイ中、１．５秒毎に細胞プレートの３８４個のウェルの全てから同時に蛍光示度を取った。５つの示度を取って、安定なベースラインを確立し、その後２０μlの試料を細胞プレートの各ウェルに迅速に（３０μl／秒）そして同時に添加した。１００秒の総経過時間の間、試料添加の前、間および後に蛍光を連続的にモニターした。添加後の各ウェルにおける応答（ピーク蛍光の増加）を測定した。リガンド刺激の前の、各ウェルからの初期蛍光示度を、そのウェルからのデータについてのゼロベースライン値として使用した。応答を陽性対照の最大応答の百分率として表した。

実施例４３
サイクリックＡＭＰアッセイ
本実施例では、以下の材料を使用した：３８４ウェルプレート；Tropix cAMP-Screen Kit：（Applied Biosystems, Cat. #T1504）；フォルスコリン（Calbiochem Cat. #344270）；細胞：ＨＥＫ２９３／ｈＮＰＹ２Ｒ細胞；プレーティング培地：ＤＭＥＭ／Ｆ１２ ｗ／ｏフェノールレッド（Gibco Cat #1133032）；１０％熱不活性化ＦＢＳ（Gibco Cat. #10082-147）；１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco Cat. #15140-122）；５００mg／ml Ｇ４１８（Geneticin, Gibco Cat. #11811-031）。

ＨＥＫ２９３／ｈＮＰＹ２Ｒ細胞を、Multi-dropディスペンサーを使用して３８４ウェルプレート中１０^４細胞／ウェルの密度でプレーティングし、そしてプレートを３７℃で一晩インキュベートした。翌日、７５〜８５％コンフルエンスに達した細胞を実験に使用した。培地および試薬を室温まで加温した。希釈液を調製する前に、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Sigma Cat# D2650）中のＹ２受容体リガンドおよび対照のストック溶液を５〜１０分間、３２℃まで温めた。インキュベーション培地［０．５mMの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ、Calbiochem Cat # 410957）および０．５mg／mlのＢＳＡ（Sigma Cat # A8806）を含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２培地］を使用して希釈を行った。インキュベーション培地中のＤＭＳＯおよびフォルスコリンの最終濃度はそれぞれ、１．１％および５μMであった。

ペーパータオル上に３８４ウェルプレートを穏やかに反転させることによってプレーティング培地を除去し、そして種々の濃度のＹ２受容体リガンド（４複製物／濃度）を含むインキュベーション培地（５０μl／ウェル）と交換した。プレートを室温で３０分間インキュベートした。３０分の処理期間の後、インキュベーション培地を廃棄し、そして５０μl／ウェルのAssay Lysis Buffer（Tropixキット中に提供される）と交換した。プレートを３７℃で４５分間インキュベートすることによって細胞を溶解させた。溶解物（２０μl）を、Tropixキット中に供給されるプレコートされた抗体プレート（３８４ウェル）へ移した。ＡＰコンジュゲート（１０μl）および抗ｃＡＭＰ抗体（２０μl）を各ウェルに添加し、そしてプレートを振盪機上で室温で１時間インキュベートした。プレートをWash Bufferで５回洗浄し（７０μl／ウェル／洗浄）、そしてプレートをたたいて乾燥させた。CSPD/Saphire-II RTU基質／エンハンサー溶液（３０μl／ウェル）を添加し、そして室温で４５分間インキュベートした。各ウェルのシグナルをLuminometer（VICTOR-V）を使用して測定した（１秒／ウェル）。

カルシウム流アッセイ（FLIPR（登録商標）；実施例４２）およびサイクリックＡＭＰアッセイ（実施例４３）において実証されるように、本発明の化合物はインビトロで選択的神経ペプチド２受容体活性を示した。インビトロでの結果の要約（実施例３〜３９および４１についてのＥＣ_５０）を以下の表１に示す：

実施例４４
慢性ＤＩＯラット研究
雄性Sprague Dawleyラット（７週齢）をCharles River Laboratories（USA）から得、そして温度および湿度制御環境下で、１２時間明：１２時間暗サイクルで飼育した。研究を通して、ラットを高脂肪固形飼料（ＨＦＤ；食餌kcalの６０％が脂肪、Research Diets D12492）および水へ自由に接近させた。ＨＦＤでの７週間の後に、ラットを体重によって分類し、そして１匹ずつケージに入れた。暗サイクルの開始に先だってラットにビヒクル（皮下）または実施例４１の化合物（１、５および１０mg／kg、皮下）を２日毎に１回、３週間投与した（Ｎ＝６〜８匹／群）。体重を、図２３に示す日に記録した。

データ分析：
示したデータはすべて平均±標準誤差（ｓ．ｅ．ｍ）である。一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてダネット検定を使用してデータの統計的評価を行って、ビヒクル処置群と薬物処置群との間に統計的有意差が存在する場合を決定した。差異はＰ＜０．０５で統計的に有意であるとみなした。データ分析をGraphPadソフトウェア（GraphPad Prism）を用いて行った。

結果：
雄性ＤＩＯラットにおける実施例４１の化合物の慢性投与（５および１０mg／kg、４８時間毎、皮下）は、３週間の処置期間の後、ビヒクル処置動物に対して、体重増加の有意な低下を誘導した（図２３）。

急性ｄｂ／ｄｂマウス研究
雌性ｄｂ／ｄｂマウス（Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ−Ｌｅｐ^{ｄｂ／ｄｂ}、Jackson Laboratories, USA）は投与時に６週齢であった。マウスを温度および湿度制御環境下で、１２時間明：１２時間暗サイクルで飼育し、そして食物（Purina rodent chow 5008）および水に自由に接近させた。ビヒクル対照処置群と薬物処置群との間の変動を最小限にするために、マウス（１２週齢）を研究の４日前に事前採血し、そして絶食血糖レベルの狭い範囲内のものを研究用に選択した。経口グルコース負荷試験の２８時間前に、ビヒクル（皮下）または実施例４１の化合物（０．３、１および１０mg／kg、皮下）をマウスに投与した（Ｎ＝１０匹／群）。ベースライン値（ｔ＝０分）を決定するために、６時間の絶食の後に、血液試料を尾部クリップから採取した。その後、マウスにグルコースの経口ボーラスを強制飼養し（１g／kg）、そしてグルコースを測定するために、規則的な間隔で（ｔ＝３０、６０および１２０分）さらに血液試料を採取した。経口耐糖能に対する実施例４１の化合物の効果を分析するために、ベースライン（空腹時血糖）との血糖の絶対差を各時点について算出した。台形法を使用して曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜１２０分}）を測定した。

データ分析：
示したデータはすべて平均±標準偏差（ｓ．ｄ．）である。一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてダネット検定を使用してデータの統計的評価を行って、ビヒクル処置群と薬物処置群との間に統計的有意差が存在する場合を決定した。差異はＰ＜０．０５で統計的に有意であるとみなした。データ分析をGraphPadソフトウェア（GraphPad Prism）を用いて行った。

結果：
雌性ｄｂ／ｄｂマウスへの実施例４１の化合物の急性投与（１および１０mg／kg、皮下）は、経口グルコースチャレンジに応答してのグルコース可動域を有意に低下させた（図２４）。

慢性ｄｂ／ｄｂマウス研究
雌性ｄｂ／ｄｂマウス（Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ−Ｌｅｐ^{ｄｂ／ｄｂ}、Jackson Laboratories, USA）は投与時に６週齢であった。マウスを温度および湿度制御環境下で、１２時間明：１２時間暗サイクルで飼育し、そして食物（Purina rodent chow 5008）および水に自由に接近させた。ビヒクル対照処置群と薬物処置群との間の変動を最小限にするために、マウス（９週齢）を薬物処置の４日前に事前採血し、そして絶食血糖レベルの狭い範囲内のものを研究用に選択した。ビヒクル（皮下）または実施例４１の化合物（１、３および１０mg／kg、皮下）を、２日毎に１回、３週間マウスに投与した（Ｎ＝１０匹／群）。基礎絶食（２〜６時間）血糖測定を毎週行った。研究の２０日目に、経口グルコース負荷試験を６時間の絶食の後に行った。ベースライン値（ｔ＝０分）を決定するために、血液試料を尾部クリップから採取した。その後、マウスにグルコースの経口ボーラスを強制飼養し（１g／kg）、そしてグルコースを測定するために、規則的な間隔で（ｔ＝３０、６０および１２０分）さらに血液試料を採取した。経口耐糖能に対する実施例４１の化合物の効果を分析するために、ベースライン（空腹時血糖、ｔ＝０分）との血糖の絶対差を各時点について算出した。台形法を使用して曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜１２０分}）を測定した。

データ分析：
示したデータはすべて平均±標準偏差（ｓ．ｄ．）である。一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてダネット検定を使用してデータの統計的評価を行い、ビヒクル処置群と薬物処置群との間に統計的有意差が存在する場合を決定した。差異はＰ＜０．０５で統計的に有意であるとみなした。データ分析をGraphPadソフトウェア（GraphPad Prism）を用いて行った。

結果：
雌性ｄｂ／ｄｂマウスへの実施例４１の化合物の慢性投与（１、３および１０mg／kg、４８時間毎、皮下）は、３週間の処置期間の間、ビヒクル処置動物に対して、基礎血糖レベル（８、１５および２１日目）を低下させた（図２５Ａ）。図２５Ｂに示すとおり、２０日目に実施例４１の化合物（３および１０mg／kgの両方、４８時間毎、皮下）は経口グルコースチャレンジに応答してのグルコース可動域を有意に低下させた。

本発明が上記の本発明の特定の実施態様に限定されないことを理解すべきである。なぜなら、特定の実施態様の変形が添付の請求の範囲内でなされ得そしてなおその範囲内に入り得るからである。

実施例Ａ
以下の成分を含有するフィルムコート錠剤を従来の方法で製造可能である：
成分 １錠当たり
カーネル：
式（Ｉ）の化合物 １０．０mg ２００．０mg
微結晶セルロース ２３．５mg ４３．５mg
含水ラクトース ６０．０mg ７０．０mg
ポビドンＫ３０ １２．５mg １５．０mg
デンプングリコール酸ナトリウム １２．５mg １７．０mg
ステアリン酸マグネシウム １．５mg ４．５mg
（カーネル重量） １２０．０mg ３５０．０mg
フィルムコート：
ヒドロキシプロピルメチルセルロース ３．５mg ７．０mg
ポリエチレングリコール６０００ ０．８mg １．６mg
タルク １．３mg ２．６mg
酸化鉄（黄色） ０．８mg １．６mg
二酸化チタン ０．８mg １．６mg

有効成分を篩にかけ、微結晶セルロースと混合し、そして混合物をポリビニルピロリドン水溶液を用いて顆粒化する。粒状物をデンプングリコール酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムと混合しそして圧縮して、それぞれ１２０または３５０mgのカーネルを得る。カーネルに上記のフィルムコートの水溶液／懸濁液を塗る。

実施例Ｂ
以下の成分を含有するカプセルを従来の方法で製造可能である：
成分 １カプセル当たり
式（Ｉ）の化合物 ２５．０mg
ラクトース １５０．０mg
トウモロコシデンプン ２０．０mg
タルク ５．０mg

成分を篩にかけ、混合し、そしてサイズ２のカプセルに充填する。

実施例Ｃ
注射溶液は以下の組成を有し得る：
式（Ｉ）の化合物 ３．０mg
ポリエチレングリコール４００ １５０．０mg
酢酸 適量、ｐＨ５．０まで
注射溶液用水 １．０mlまで

有効成分をポリエチレングリコール４００および注射用水（一部）の混合液に溶解する。ｐＨを酢酸によって５．０に調整する。体積を、水の残量を添加することによって１．０mlに調整する。溶液をろ過し、適切な被覆を使用してバイアルに充填し、そして滅菌する。

実施例Ｄ
以下の成分を含有する軟ゼラチンカプセルを従来の方法で製造可能である：
カプセル内容物
式（Ｉ）の化合物 ５．０mg
黄ろう ８．０mg
硬化大豆油 ８．０mg
部分硬化植物油 ３４．０mg
大豆油 １１０．０mg
カプセル内容物の重量 １６５．０mg
ゼラチンカプセル
ゼラチン ７５．０mg
グリセロール８５％ ３２．０mg
カリオン８３ ８．０mg（乾物）
二酸化チタン ０．４mg
酸化鉄黄色 １．１mg

有効成分を他の成分の加温融解物に溶解し、そして混合物を適当なサイズの軟ゼラチンカプセルに充填する。充填した軟ゼラチンカプセルを通常の手順にしたがって処理する。

実施例Ｅ
以下の成分を含有するサシェを従来の方法で製造可能である：
式（Ｉ）の化合物 ５０．０mg
ラクトース、微粉末 １０１５．０mg
微結晶セルロース（AVICEL PH 102） １４００．０mg
カルボキシメチルセルロースナトリウム １４．０mg
ポリビニルピロリドンＫ３０ １０．０mg
ステアリン酸マグネシウム １０．０mg
香味添加剤 １．０mg

有効成分をラクトース、微結晶セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムと混合し、そして水中のポリビニルピロリドンの混合物を用いて顆粒化する。粒状物をステアリン酸マグネシウムおよび香味添加剤と混合し、そしてサシェに充填する。

本発明の化合物（実施例３４）を含有する反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３４）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例３４）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 本発明の別の化合物（実施例３５）の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３５）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例３５）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 本発明の化合物（実施例３６）の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３６）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明のまた別の化合物（実施例３６）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 本発明の化合物（実施例３７）の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３７）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例３７）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 本発明の別の化合物（実施例３８）の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３８）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例３８）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 本発明の化合物（実施例３９）の反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例３９）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明のまた別の化合物（実施例３９）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 脱保護前の本発明の化合物（実施例４１）を含有する反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例４１）を含有する脱保護した反応混合物のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の精製した化合物（実施例４１）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。 本発明の化合物（実施例４１）のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。 雄性食事性肥満（ＤＩＯ）ラットにおける体重に対する化合物（実施例４１）の亜慢性投与の効果を示す。 雌性ｄｂ／ｄｂマウスにおける経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）に対する化合物（実施例４１）の急性効果を示す。 雌性ｄｂ／ｄｂマウスにおける基礎血糖（Ａ）および経口グルコース負荷試験（Ｂ）に対する化合物（実施例４１）の亜慢性投与の効果を示す。

Claims (27)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   ［式中：
   Ｘは、４−オキソ−６−（１−ピペラジニル）−３（４Ｈ）−キナゾリン−酢酸（Ｐｑａ）であり、
   Ｙは、Ｈ、アシル部分、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アルコキシ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
   Ｙ′は、Ｈ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣであり、
   Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｉｌｅ、Ｎ−メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１−１Ａｉｃ、２−２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
   Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
   Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ）Ａｒｇ、Ｎ−メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｈｉｓ、Ｎ−メチルＨｉｓ、４−ＭｅＯＡｐｃ、３−Ｐａｌまたは４−Ｐａｌであり、
   Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｔｙｒ、Ｎ−メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ）ＬｅｕまたはＮ−メチルＬｅｕであり、
   Ｒ_７は、Ａｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ）Ａｓｎであり、
   Ｒ_８は、ＬｅｕまたはＴｒｐであり、
   Ｒ_９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、（Ｄ）ＶａｌまたはＮ−メチルＶａｌであり、
   Ｒ_１０は、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＮ−メチルＴｈｒであり、
   Ｒ_１１は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
   Ｒ_１２は、ＧｌｎまたはＡｌａであり、
   Ｒ_１３は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
   Ｒ_１４は、Ｔｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾Ｐｈｅ、Ｃｈａ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、Ｃ−α−メチルＴｙｒまたはＴｒｐであり、そして
   ＰＥＧ_ｍは、１〜６０KDaである、
   またはその医薬的に許容される塩］、
   で表される神経ペプチド２受容体アゴニスト、
   ただし、
   式（Ｉ’）：
   

   

   （式中：
   Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、
   Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、
   Ｒ₁は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
   Ｒ₂は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
   Ｒ₃は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ)Ａｒｇ、Ｎ-メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ₄は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｈｉｓ、Ｎ-メチルＨｉｓ、４-ＭｅＯＡｐｃ、３-Ｐａｌまたは４-Ｐａｌであり、
   Ｒ₅は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｔｙｒ、Ｎ-メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１)Ｎａｌ、（２)Ｎａｌ、３,４,５-トリフルオロＰｈｅまたは２,３,４,５,６-ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ₆は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、
   Ｒ₇はＡｓｎ、Ａｌａ、または（Ｄ)Ａｓｎであり、
   Ｒ₈はＬｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ)ＬｅｕまたはＮ-メチルＬｅｕであり、
   Ｒ₉はＶａｌ、Ａｌａ、（Ｄ)ＶａｌまたはＮ-メチルＶａｌであり、
   Ｒ₁₀はＴｈｒ、ＡｌａまたはＮ-メチルＴｈｒであり、
   Ｒ₁₁はＡｒｇ、（Ｄ)ＡｒｇまたはＮ-メチルＡｒｇであり、
   Ｒ₁₂はＧｌｎまたはＡｌａであり、
   Ｒ₁₃はＡｒｇ、(Ｄ)Ａｒｇ、またはＮ-メチルＡｒｇであり、および
   Ｒ₁₄は、Ｔｙｒ、(Ｄ)Ｔｙｒ、またはＮ-メチルＴｙｒである）
   の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいは薬学的に許容されるそれらの塩であって、神経ペプチド−２レセプターアゴニストが以下の（Ａ）〜（Ｃ）からなる群より選択される、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト、あるいは薬学的に許容されるそれらの塩：
   （Ａ）式（II）：
   

   

   （式中、
   Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれる部分であり、
   Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分であり、
   Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｉｌｅ、Ｎ-メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１-１Ａｉｃ、２-２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、および
   Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ)Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）である）
   の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト；
   （Ｂ）式（III）：
   Ｙ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｘ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２ （III）
   （式中、
   Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４(３Ｈ)−キノゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）、Ｎ−(５−Ｏ−カルボキシメチル)−セロトニン（Ｃｍｓ）、４−(２−アミノメチル)−６−ジベンゾフランプロパン酸、４−(１−ピペリジン−４−イル)−ブタン酸および４−(２−アミノエチル)−１−カルボキシメチルピペラジンから成る群より選ばれ、
   Ｙは、Ｈ、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシまたはポリ（エチレン）グリコール部分である）
   の、神経ペプチド−２レセプターアゴニスト；
   （Ｃ）
   

   

   

   

   を除く。
2. 式（Ｉａ）：
   Ｙ−Ｒ_１−Ｒ_２−Ｘ−Ｒ_３−Ｒ_４−Ｒ_５−Ｒ_６−Ｒ_７−Ｒ_８−Ｒ_９−Ｒ_１０−Ｒ_１１−Ｒ_１２−Ｒ_１３−Ｒ_１４−ＮＨ_２（Ｉａ）
   ［式中：
   Ｘは、Ｎ−ピペラジン−１−イル−４（３Ｈ）−キナゾリノン−３−酢酸（Ｐｑａ）であり、
   Ｙは、Ｈ、アシル部分、置換または非置換アルキル、置換または非置換低級アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換アルコキシ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ−ＳＳＡ、ＰＥＧ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ−ＳＰＡまたはＰＥＧ−ＢＴＣであり、
   Ｒ_１は、Ｉｌｅ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｉｌｅ、Ｎ−メチルＩｌｅ、Ａｉｂ、１−１Ａｉｃ、２−２Ａｉｃ、ＡｃｈまたはＡｃｐであり、
   Ｒ_２は、Ｌｙｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｌｙｓ、ＮＭｅｌｙｓ、Ｎｌｅまたは（Ｌｙｓ−Ｇｌｙ）であり、
   Ｒ_３は、Ａｒｇ、Ａｌａ、（Ｄ）Ａｒｇ、Ｎ−メチルＡｒｇ、Ｐｈｅ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ_４は、Ｈｉｓ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｈｉｓ、Ｎ−メチルＨｉｓ、４−ＭｅＯＡｐｃ、３−Ｐａｌまたは４−Ｐａｌであり、
   Ｒ_５は、Ｔｙｒ、Ａｌａ、（Ｄ）Ｔｙｒ、Ｎ−メチルＴｙｒ、Ｔｒｐ、Ｔｉｃ、Ｂｉｐ、Ｄｉｐ、（１）Ｎａｌ、（２）Ｎａｌ、３，４，５−トリフルオロＰｈｅまたは２，３，４，５，６−ペンタフルオロＰｈｅであり、
   Ｒ_６は、Ｌｅｕ、Ａｌａ、（Ｄ）ＬｅｕまたはＮ−メチルＬｅｕであり、
   Ｒ_７は、Ａｓｎ、Ａｌａまたは（Ｄ）Ａｓｎであり、
   Ｒ_８は、ＬｅｕまたはＴｒｐであり、
   Ｒ_９は、Ｖａｌ、Ａｌａ、（Ｄ）ＶａｌまたはＮ−メチルＶａｌであり、
   Ｒ_１０は、Ｔｈｒ、ＡｌａまたはＮ−メチルＴｈｒであり、
   Ｒ_１１は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、
   Ｒ_１２は、ＧｌｎまたはＡｌａであり、
   Ｒ_１３は、Ａｒｇ、（Ｄ）ＡｒｇまたはＮ−メチルＡｒｇであり、そして
   Ｒ_１４は、Ｔｙｒ、（Ｄ）ＴｙｒまたはＮ−メチルＴｙｒ、修飾Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、修飾ＰｈｅまたはＴｒｐである、
   またはその医薬的に許容される塩］、
   によって特徴付けられる、請求項１記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
3. Ｒ_２がＹ′で置換され、Ｙ′がＨ、ポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである、請求項２記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
4. Ｙ′がポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである、請求項１または３のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
5. ＹがＨまたはアシル部分であり、そして
   Ｙ′がポリ（エチレン）グリコール部分、ＰＥＧ_ｍ−ＳＳＡ、ＰＥＧ_ｍ−β−ＳＢＡ、ＰＥＧ_ｍ−ＳＰＡまたはＰＥＧ_ｍ−ＢＴＣである、請求項１〜４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
6. Ｙがアシル部分である、請求項１〜５のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
7. ＹがＨである、請求項１〜６のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
8. Ｙ′がＨである、請求項１または３〜７のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
9. Ｒ_１がＩｌｅであり、Ｒ_２がＬｙｓまたはＮｌｅであり、Ｒ_３がＡｒｇであり、Ｒ_４がＨｉｓであり、Ｒ_５がＴｙｒであり、Ｒ_６がＬｅｕであり、Ｒ_７がＡｓｎであり、Ｒ_８がＬｅｕまたはＴｒｐであり、Ｒ_９がＶａｌであり、Ｒ_１０がＴｈｒであり、Ｒ_１１がＡｒｇであり、Ｒ_１２がＧｌｎであり、Ｒ_１３がＡｒｇまたは（Ｎ−メチル）Ａｒｇであり、Ｒ_１４がＹ、（ｍ−）Ｙ、（３−Ｉ）Ｙ、（３，５ジＦ）Ｙ、（２，６ジＦ）Ｙ、（２，６ジＭｅ）Ｙ、Ｆ（４−Ｏ−ＣＨ_３）、Ｆ、（４−ＮＨ_２）Ｐｈｅ、（４−Ｆ）Ｐｈｅ、（４−ＣＨ_２ＯＨ）Ｐｈｅ、（４−ＣＦ_３）Ｐｈｅ、（３−Ｆ）Ｐｈｅ、（２，３，４，５，６ペンタＦ）Ｐｈｅ、（３，４ジＣｌ）Ｐｈｅ、Ｃｈａ、Ｗ、（１）Ｎａｌ、（２）ＮａｌまたはＣ−α−Ｍｅ−Ｔｙｒである、請求項１〜８のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
10. Ｒ_１４がＴｙｒまたは（２，６ジＦ）Ｔｙｒである、請求項１〜９のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
11. ＰＥＧ_ｍが２０〜４０KDaである、請求項１〜１０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
12. ＰＥＧ_ｍが３０KDaである、請求項１〜１１のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
13. 

    

    またはその医薬的に許容される塩
    から成る群より選択される請求項１〜１２のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
14. 

    またはその医薬的に許容される塩
    から成る群より選択される請求項１〜１３のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
15. 前記アゴニストがＡｃ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）Ｒ（２−６ジＦ）Ｙである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
16. 前記アゴニストがＡｃ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
17. 前記アゴニストが（ＰＥＧ３０，０００）−ＳＰＡ−ＩＫ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
18. 前記アゴニストが（ＰＥＧ３０，０００）−ＳＳＡ−ＩＮｌｅ−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
19. 前記アゴニストがＡｃ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ３０，０００ＳＳＡ）−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
20. 前記アゴニストがＨ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ（ＰＥＧ３０，０００ＳＳＡ）−Ｐｑａ−ＲＨＹＬＮＷＶＴＲＱ（Ｎ−メチル）ＲＹである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
21. 請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニストおよび医薬的に許容される担体および／またはアジュバントを含む医薬組成物。
22. 治療活性物質として使用するための請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
23. 神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の処置および／または予防のための治療活性物質として使用するための請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
24. 疾患が、代謝性疾患または障害である、請求項２３記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
25. 肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の治療的および／または予防的処置のための請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニスト。
26. 神経ペプチド２受容体アゴニストによって調節される疾患の治療的および／または予防的処置のための医薬を調製するための請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニストの使用。
27. 肥満、２型糖尿病、メタボリックシンドローム、インスリン抵抗性、脂質代謝異常、空腹時血糖異常および耐糖能障害の治療的および／または予防的処置のための医薬を調製するための請求項１〜２０のいずれか１項記載の神経ペプチド２受容体アゴニストの使用。

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