CN105722526A

CN105722526A - 选择性pyy化合物及其用途

Info

Publication number: CN105722526A
Application number: CN201480062213.5A
Authority: CN
Inventors: S.奧斯特加亚尔德; K.W.C.弗里伊博伊斯; B.维伊茨奧雷克; J.K.托姆森; B.S.伍弗; C.杰斯森
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2013-11-15
Filing date: 2014-11-13
Publication date: 2016-06-29
Anticipated expiration: 2034-11-13
Also published as: US10246497B2; US20160289283A1; TWI661835B; SI3068421T1; EP3068421B1; IL245045B; JP6602760B2; RS59026B1; EP3068421A1; US9085637B2; AU2014350197A1; US20150152150A1; KR20160075819A; MX2016006053A; JP2017505284A; CN105722526B; AU2014350197B2; PL3068421T3; CA2929672A1; BR112016010383A2

Abstract

本发明涉及在与hPYY(1-36)的位置30相对应的位置处的氨基酸被色氨酸置换的PYY化合物及其衍生物，其具有连接至与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置的修饰基团。本发明的化合物是选择性Y2受体激动剂。本发明还涉及包含这样的PYY化合物和药学上可接受的辅料的药物组合物，以及该PYY化合物的医疗用途。

Description

选择性PYY化合物及其用途

技术领域

本发明涉及肽YY(PYY)的类似物和/或衍生物及其制药用途。

序列表的援引并入

标题为“序列表”的序列表为35329个字节，于2014年10月22日创建并通过引用并入本文。

背景技术

PYY在进餐过程中从在远端小肠和结肠中的L-细胞中释放。已知PYY在胃肠(GI)道中具有外周作用，并且还在中枢起到饱腹感信号的作用。PYY作为具有C-末端酰胺的36氨基酸肽(PYY(1-36))被天然地分泌，但被切割成PYY(3-36)，其构成约50％的循环PYY。负责该降解的酶是二肽基肽酶IV(DPPIV)。PYY(3-36)快速地被蛋白酶及其他清除机制消除。已经报道，PYY(3-36)在猪中的半衰期<30分钟。因此，PYY显示出次优的药代动力学性质，这意味着该肽必须每天施用至少两次。

PYY(1-36)以非常小的选择性激活Y1、Y2和Y5受体而以略微更小的选择性激活Y4受体，但DPPIV处理过的PYY(3-36)显示出对Y2受体的选择性比对Y1、Y4和Y5受体的选择性增加，尽管保留了一定的Y1和Y5亲和性。已知Y2受体活化降低食欲和食物摄取，而Y1和Y5受体活化导致食欲和食物摄取增加。此外，Y1和Y5受体活化可导致血压升高。

根据这些肽中的某些肽在动物模型和人中所显示出的效果，以及根据肥胖者具有低基础水平的PYY以及该肽较低的进餐响应这一事实，PYY(3-36)已被建议在肥胖症以及相关疾病的治疗中使用。此外，已经证明Y2激动剂在胃肠(GI)道中具有抗分泌和促吸收作用。已经提示了Y2激动剂在一些胃肠病症的治疗中的潜在应用。

根据在例如Zucker大鼠和饮食诱发的肥胖(DIO)小鼠中所显示出的效果，Y2选择性PYY(3-36)类似物对葡萄糖代谢具有积极影响，并因此被建议用于糖尿病的治疗。

WO2009/138511A1涉及长效Y2和/或Y4受体激动剂。WO2011/033068A1涉及针对C-末端蛋白水解分解而稳定化的PYY类似物。WO2011/058165A1涉及具有延长的药代动力学性质的Y2受体激动剂。

对于对Y受体调节具有响应的病况如肥胖症和糖尿病的治疗，使用对Y受体亚型Y2具有特异性且重要的是也显示出延长的药代动力学性质的PYY类似物将是有吸引力的，由此该PYY类似物可在具有比PYY或PYY(3-36)更低的施用频率的给药方案中使用。

发明概述

本发明涉及PYY化合物。本发明的PYY化合物可包含与人PYY(3-36)(hPYY(3-36)，SEQIDNO:2)相比至多10个氨基酸修饰，并且在与人PYY(1-36)(hPYY(1-36)，SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的氨基酸被色氨酸置换。

在一个方面，所述PYY化合物进一步在与hPYY(1-36)的位置35相对应的位置处包含N(α)-甲基精氨酸。

另外或可替代地，在一个方面，所述PYY化合物还包含在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸，以及连接至该赖氨酸的ε氨基基团的修饰基团。

在一个方面，本发明还涉及包含这样的PYY化合物和药学上可接受的辅料的药物组合物，以及该PYY化合物的医疗用途。

另外或可替代地，在一个方面，本发明涉及为Y2受体激动剂的PYY化合物。

另外或可替代地，在一个方面，本发明涉及相比于对Y受体亚型Y1、Y4和Y5，显示出对Y受体亚型Y2的选择性的PYY化合物。

另外或可替代地，在一个方面，本发明涉及具有比hPYY(3-36)的半衰期更长的半衰期的PYY化合物。另外或可替代地，在一个方面，本发明涉及具有比hPYY(1-36)的半衰期更长的半衰期的PYY化合物。

发明详述

本发明涉及PYY化合物。本发明的PYY化合物可包含与hPYY(3-36)相比至多10个氨基酸修饰，并且在与hPYY(1-36)的位置30相对应的位置处的氨基酸被色氨酸置换。

而且，在一个方面，在与hPYY(1-36)的位置35相对应的位置处的精氨酸残基具有添加至α氨基基团的甲基基团，这意味着在与hPYY(1-36)的位置35相对应的位置处的残基因此为N(α)-甲基精氨酸。

另外或可替代地，在一个方面，本发明涉及为Y受体亚型Y2激动剂的PYY化合物。

在一个方面，对特定受体相比于对其他受体具有“选择性”的肽是指这样的肽：如在受体功能试验如Actone功能效力试验中体外测量并按照EC50值进行比较，或者在测量受体结合亲和力的闪烁迫近分析(ScintillationProximityAssay,SPA)中体外测量并按照Ki值进行比较，其显示出对一种Y受体相比于对其他Y受体为至少10倍，如至少20倍、至少50倍或至少100倍的效力。

在下文中，希腊字母可由其符号或相应的书面名称来表示，例如：α＝alpha；β＝beta；ε＝epsilon；γ＝gamma；ω＝omega；等等。

PYY化合物

如本文所用的术语“hPYY(1-36)”是指人肽YY，其序列作为SEQIDNO:1包括在序列表中。具有SEQIDNO:1的序列的肽也可称为天然hPYY。

如本文所用的术语“PYY化合物”是指为hPYY(1-36)的变体的肽或化合物。如本文所用的术语“PYY化合物”还可指为hPYY(3-36)(SEQIDNO:2)的变体的肽或化合物。

如本文所用的术语“PYY化合物”还可指为hPYY(4-36)的变体的肽或化合物。

本发明的PYY化合物的C-末端是酰胺，正如天然hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)和hPYY(3-36)(SEQIDNO:2)各自的C-末端一样。

本发明的PYY化合物可以是PYY类似物和/或其衍生物。

术语“PYY类似物”用于其中存在至少一个在骨架中的氨基酸修饰的PYY化合物。

术语“PYY衍生物”用于包含至少一个共价连接的非氨基酸取代基的PYY化合物。

因此，PYY类似物的衍生物是包含至少一个氨基酸修饰和至少一个共价连接的非氨基酸取代基的PYY化合物。

相比于hPYY(3-36)，本发明的PYY化合物可包含至多10个氨基酸修饰。

在整个申请中使用的术语“氨基酸修饰”以相比于hPYY(3-36)的氨基酸修饰的含义使用。该修饰可以是氨基酸缺失、氨基酸添加、一种氨基酸被另一种氨基酸置换、或共价连接至该肽的氨基酸的取代基的结果。

本发明的PYY化合物在与hPYY(1-36)的位置30相对应的位置处包含色氨酸，这意味着除了在与hPYY(1-36)的位置30相对应的位置处的该修饰之外，本发明的PYY化合物还可包含与hPYY(3-36)相比至多9个氨基酸修饰。

作为一个示例，与hPYY(3-36)相比，[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)包含4个氨基酸置换。

作为另一个示例，与hPYY(3-36)相比，[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)包含5个氨基酸置换和1个缺失，这意味着与hPYY(3-36)相比，该化合物具有6个氨基酸修饰。

在又一个方面，本发明的PYY肽可呈现出与hPYY(3-36)至少70％、75％或80％的序列同一性。作为用于确定两种类似物之间的序列同一性的方法的实例，将两种肽[NMeArg35]hPYY(3-36)和hPYY(3-36)进行比对。类似物[NMeArg35]hPYY(3-36)相对于hPYY(3-36)的序列同一性通过用比对的残基的总数减去不同残基的数目(即，比对的相同残基的数目)除以hPYY(3-36)中残基的总数而得出。相应地，在所述实例中，序列同一性为(34-1)/34。

本发明的PYY化合物或PYY类似物可参照以下方面进行描述：i)hPYY(1-36)中与被改变的氨基酸残基相对应的氨基酸残基(即，hPYY(1-36)中的相应位置)的编号，和ii)实际的变化。

以下是合适的类似物命名的非限制性实例。[NMeArg35]hPYY(3-36)用来命名人PYY(1-36)的一种类似物，其中在位置35处的天然存在的精氨酸已被N(α)-甲基精氨酸置换(在与hPYY(1-36)的位置35相对应的位置处的精氨酸残基具有添加至α氨基基团的甲基基团)，并且分别在位置1和2处的天然存在的酪氨酸和脯氨酸已缺失。

同样地，[Trp30]hPYY(3-36)用来命名人PYY(3-36)的一种类似物，其中在人PYY(1-36)的位置30处的天然存在的亮氨酸已被色氨酸置换。

以下是PYY类似物的衍生物的合适命名的非限制性实例。7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)用来命名hPYY(3-36)(SEQIDNO:2)的类似物的一种衍生物，其中[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]指与人PYY(3-36)相比的氨基酸变化——编号参照PYY(1-36)的相应位置，并且其中取代基[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-连接至在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸的ε氨基基团。

表述“与…等同的位置”或“对应的位置”用于表征变体PYY序列中相对于hPYY(1-36)发生变化的位点。

通常在整个申请中，当提及PYY类似物的特定位置时，所提及的位置是与hPYY(1-36)的该特定位置相对应的PYY类似物的位置。

在整个申请中所用的表述，PYY化合物在与hPYY(1-36)的某位置相对应的位置处包含特定氨基酸，意指在该位置处的天然氨基酸已被该特定氨基酸替换。

氨基酸残基可用其全名、其单字母密码和/或其三字母密码来表示。这三种方式是完全等同的。

“包含”某些特定变化的类似物可包含与hPYY(1-36)相比进一步的变化。在一个方面，该类似物“具有”该指定的变化。

PYY类似物

PYY类似物是与hPYY(1-36)相比其中一些氨基酸残基已经被修饰的PYY肽。这些修饰包括单独或组合形式的置换、插入和/或缺失。

在特定的方面，本发明的PYY类似物包含一个或多个“非必需”氨基酸残基修饰。在本发明的上下文中，“非必需”氨基酸残基是在人PYY氨基酸序列中可被改变，即删除或置换，而不消除或不显著降低PYY类似物对Y2受体的活性的残基。

置换。在一个方面，氨基酸可通过保守置换进行置换。如本文所用的术语“保守置换”表示一个或多个氨基酸被另外的生物学相似的残基替换。实例包括具有相似特征的氨基酸残基如小氨基酸、酸性氨基酸、极性氨基酸、碱性氨基酸、疏水性氨基酸以及芳香族氨基酸的置换。

在一个方面，本发明的PYY类似物可包含一个或多个非天然氨基酸和/或非氨基酸例如氨基酸模拟物在PYY序列中的置换。

缺失和截短。在一个方面，本发明的PYY类似物可相对于人PYY的氨基酸序列缺失一个或多个氨基酸残基，其单独发生或与一个或多个插入或置换组合。

插入。在一个方面，本发明的PYY类似物可具有一个或多个插入到人PYY的氨基酸序列中的氨基酸残基，其单独发生或与一个或多个缺失和/或置换组合。

在一个方面，本发明的PYY类似物可包含一个或多个非天然氨基酸和/或非氨基酸在PYY序列中的插入。

PYY肽可来源于脊椎动物，如人、小鼠、绵羊、山羊、牛或马。术语“脊椎动物”意指脊索动物门的主要分支—脊椎动物亚门的成员，其包括鱼、两栖动物、爬行动物、禽类和哺乳动物，所有这些动物的特征都在于分节的脊柱和明显的分化良好的头部。术语“哺乳动物”指人类以及哺乳纲中具有内环境稳定机制的动物界中的其他温血成员，例如，陪伴哺乳动物、动物园哺乳动物以及食物来源哺乳动物。陪伴哺乳动物的一些实例是犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)和马；食物来源哺乳动物的一些实例是猪、牛、羊等。在一个方面，哺乳动物是人或陪伴哺乳动物。在一个方面，哺乳动物是人(男性或女性)。

例如在本发明的PYY化合物的上下文中使用的术语“肽”是指包含一系列由酰胺(或肽)键相互连接的氨基酸的化合物。

本发明的PYY肽包含至少24个通过肽键连接的组成性氨基酸。在特定的实施方案中，该PYY肽包含至少33个氨基酸。在特定的实施方案中，该PYY肽包含至少34个氨基酸。

氨基酸是含有胺基团和羧酸基团并任选地包含一个或多个常被称为侧链的其他基团的分子。

术语“氨基酸”包括蛋白原(proteinogenic)(或编码的或天然的)氨基酸(20种标准氨基酸中的)，以及非蛋白原(或非编码的或非天然的)氨基酸。蛋白原氨基酸是天然地并入蛋白质中的那些氨基酸。标准氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸。非蛋白原氨基酸或者未见于蛋白质中，或者不通过标准细胞机器产生(例如，它们可能已经经历翻译后修饰)。非蛋白原氨基酸的非限制性实例是Aib(α-氨基异丁酸)、N(α)-甲基精氨酸)以及蛋白原氨基酸的D-异构体。蛋白原氨基酸的D-异构体的一个实例是天冬氨酸的D-异构体，其还可书写为D-Asp。

在下文中，对其旋光异构体没有说明的PYY化合物的所有氨基酸应理解为指L-异构体(除非另有说明)。

PYY衍生物

如本文在PYY肽或类似物的上下文中所用的术语“衍生物”是指其中一个或多个取代基已共价连接至该肽的化学修饰的PYY肽。

在本发明的一个方面，所述取代基可以是N-末端取代基。

另外或可替代地，在一个方面，所述取代基可以是修饰基团或可替代地指延长部分。

N-末端取代基

在本发明的一个方面，PYY化合物包含共价连接至在PYY化合物的N-末端的氨基酸残基中的α-氨基基团的取代基。在一个方面，在与hPYY(1-36)的位置1-3相对应的位置处的氨基酸残基缺失，并且N-末端取代基共价连接至与hPYY(1-36)的位置4相对应的位置处的氨基酸残基。

在一个方面，所述N-末端取代基是烷氧基基团。在一个方面，所述N-末端取代基是包含至多12个碳原子的烷氧基基团。在另一个方面，所述N-末端取代基是包含至多6个碳原子的烷氧基基团。

修饰基团/延长部分

在一个方面，PYY化合物包含共价连接至与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的氨基酸残基的取代基或修饰基团。在一个进一步的方面，该取代基或修饰基团能够与蛋白质形成非共价缀合物，由此促进该衍生物随血流的循环，并且由于PYY衍生物与白蛋白的缀合物仅通过肾脏清除缓慢地除去，该取代基或修饰基团还具有延长该衍生物的作用时间的效果。因此，该取代基或修饰基团作为整体也可被称为延长部分。

所述修饰基团可通过酰化，即经由在修饰基团的羧酸基团与赖氨酸残基的ε氨基基团之间形成的酰胺键而共价连接至PYY肽的赖氨酸残基。赖氨酸的氨基基团还可通过还原氨化与修饰基团的醛偶联。在另一个方面，半胱氨酸的巯基基团可通过迈克尔加成偶联至修饰基团的马来酰亚胺基基团，或通过亲核取代偶联至修饰基团的氯乙酰基或碘乙酰基基团。

在一个方面，所述修饰基团可通过酰化，即经由在修饰基团的羧酸基团与赖氨酸残基的ε氨基基团之间形成的酰胺键而共价连接至在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基。

本发明的衍生物可以以不同的立体异构形式存在，该立体异构形式具有相同的分子式和键合原子的序列，仅在其原子在空间中的三维取向上不同。本发明的示例性衍生物的立体异构性在实验部分中使用标准命名法以名称及结构的形式说明。除非另外说明，本发明涉及所请求保护的衍生物的所有立体异构形式。

在本文中，对其旋光异构体没有说明的PYY化合物的所有氨基酸应理解为指L-异构体(除非另有说明)。

药学上可接受的盐

本发明的PYY化合物可以是药学上可接受的盐的形式。

例如，盐通过碱与酸之间的化学反应形成，例如：2NH₃+H₂SO₄→(NH₄)₂SO₄。

所述盐可以是碱性盐、酸性盐，或者其可以两者都不是(即中性盐)。在水中碱性盐产生氢氧根离子，而酸性盐产生水合氢离子。

本发明的衍生物的盐可通过分别在阴离子或阳离子基团间添加阳离子或阴离子来形成。这些基团可位于本发明的衍生物的肽部分，和/或位于侧链中。

本发明的衍生物的阴离子基团的非限制性实例包括在侧链(如果存在)以及肽部分中的游离羧基基团。肽部分通常包括在内部酸性氨基酸残基如Asp和Glu处的游离羧基基团。

在肽部分中的阳离子基团的非限制性实例包括在N-末端(如果存在)的游离氨基基团，以及内部碱性氨基酸残基如His、Arg和Lys的任何游离氨基基团。

功能性质

在第一个功能方面，本发明的PYY化合物具有优良的Y2受体效力。另外或可替代地，在第二个方面，这些PYY化合物与Y2受体非常好地结合。如通过这些PYY化合物与Y2受体强烈结合的能力所反映的，结合其相比于hPYY(1-36)和hPYY(3-36)使受体完全活化的能力，优选这些PYY化合物是完全Y2受体激动剂。

另外或可替代地，在第二个功能方面，本发明涉及相比于对Y受体亚型Y1、Y4和Y5，显示出对Y受体亚型Y2的选择性的PYY化合物。

另外或可替代地，在第三个功能方面，本发明的PYY化合物具有改善的药代动力学性质。另外或可替代地，在第四个功能方面，本发明的PYY化合物具有延长的半衰期和/或降低的清除率。另外或可替代地，在第五个功能方面，其具有降低血糖的体内效果。另外或可替代地，在第六个功能方面，其具有降低食物摄取的体内效果。另外或可替代地，在第七个功能方面，其具有减轻体重的体内效果。

生物活性—体外效力

根据第一功能方面，本发明的PYY化合物是有生物活性的或有生物效力的。

在特定的实施方案中，效力和/或活性是指体外效力，即在功能性Y2受体试验中的表现，更具体地指激活人Y2受体的能力。

术语半数最大有效浓度(EC₅₀)通常是指参考剂量响应曲线，诱发响应达到基线与最大值之间的一半时的浓度。EC₅₀用作化合物效力的量度，并代表观察到其最大效果的50％时的浓度。

本发明的衍生物的体外效力可如实施例39中所述进行确定，并确定所讨论的衍生物的EC₅₀。EC₅₀值越低，效力越高。

在本发明的一个方面，本发明的衍生物具有对应于100nM或以下的EC₅₀的体外效力，该体外效力采用实施例39的方法确定。在一个方面，本发明的衍生物具有对应于50nM或以下的EC₅₀的体外效力，该体外效力采用实施例39的方法确定。在一个方面，本发明的衍生物具有对应于25nM或以下的EC₅₀的体外效力，该体外效力采用实施例39的方法确定。

生物活性—体外受体结合

根据第二个功能方面，本发明的PYY化合物与Y2受体非常好地结合。这可以如实施例40中所述进行确定。

通常，与Y2受体的结合应尽可能的好，这对应于低Ki值。Ki值通过Cheng-Prusoff等式Ki＝IC50/(1+[L]/Kd)确定，其中IC50是激动剂的半数最大抑制浓度，[L]是放射配体的浓度，且Kd是结合的解离常数。

作为示例，在特定的方面，Y2受体结合亲和力(Ki)低于100nM。在本发明的一个方面，Y2受体结合亲和力(Ki)低于50nM。在本发明的一个方面，Y2受体结合亲和力(Ki)低于10nM。

生物活性—体内药理学

在另一个特定的实施方案中，本发明的PYY化合物在体内有效力，这可以如本领域已知的在任何合适的动物模型以及临床试验中确定。

糖尿病db/db小鼠是合适的动物模型的一个实例，并且例如如实施例42中所述，可以在这样的小鼠中体内确定血糖降低效果。

此外，如同样在实施例42中描述的，对db/db小鼠的食物摄取的抑制是用于确定对食物摄取和体重的影响的合适的模型。

通常，1μmol/kg剂量的葡萄糖降低效果应尽可能的好，其对应于较低的相对％葡萄糖水平。

作为示例，在本发明的特定方面，给药(1μmol/kg)后16小时，相对％葡萄糖水平低于80％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后16小时，相对％葡萄糖水平低于70％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后16小时，相对％葡萄糖水平低于60％。

作为示例，在本发明的特定方面，给药(1μmol/kg)后16小时，％相对食物摄取低于40％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后16小时，％相对食物摄取低于30％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后16小时，％相对食物摄取低于20％。

作为示例，在本发明的特定方面，给药(1μmol/kg)后4小时，相对％葡萄糖水平低于80％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后4小时，相对％葡萄糖水平低于70％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后4小时，相对％葡萄糖水平低于60％。

作为示例，在本发明的特定方面，给药(1μmol/kg)后4小时，％相对食物摄取低于40％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后4小时，％相对食物摄取低于30％。在本发明的一个方面，给药(1μmol/kg)后4小时，％相对食物摄取低于20％。

药代动力学概况

根据第三个功能方面，本发明的PYY化合物具有改善的药代动力学性质，如延长的终末半衰期(terminalhalf-life)和/或降低的清除率。

延长终末半衰期和/或降低清除率意味着所讨论的化合物从体内排除变慢。对于本发明的化合物，这导致持续时间延长的药理学作用。

本发明的衍生物的药代动力学性质可适当地在药代动力学(PK)研究中体内确定。进行这样的研究以评价药物化合物如何在体内吸收、分布和排除，以及这些过程如何随时间进程影响化合物在体内的浓度。

在制药药物开发的发现和临床前阶段，可使用动物模型如小鼠、大鼠、猴、狗或猪来进行该表征。这些模型中的任意模型均可用于测试本发明的衍生物的药代动力学性质。

在新药化合物的评价中，终末半衰期和/或清除率的估计与对给药方案的评价相关，是药物开发中的重要参数。

药代动力学概况—在小型猪中的体内半衰期

根据第三个功能方面，本发明的衍生物具有改善的药代动力学性质。

在特定的实施方案中，药代动力学性质可确定为在小型猪中静脉内施用后的体内终末半衰期(T_1/2)，例如，如本文实施例41中所述。

在本发明的一个方面，在小型猪中的终末半衰期为至少10小时。在本发明的一个方面，在小型猪中的终末半衰期为至少20小时。在本发明的又一个方面，在小型猪中的终末半衰期为至少40小时。

PYY化合物的生产

肽如本发明的PYY化合物的生产是本领域公知的。

例如，本发明的衍生物的PYY部分可通过经典的肽合成，例如，采用t-Boc或Fmoc化学法的固相肽合成或其他公认的技术来生产，参见，例如，Greene和Wuts,“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis”,JohnWiley&Sons,1999；FlorencioZaragoza“OrganicSynthesisonsolidPhase”,Wiley-VCHVerlagGmbH,2000；以及“FmocSolidPhasePeptideSynthesis”,W.C.Chan和P.D.White编著,OxfordUniversityPress,2000。

另外或可替代地，它们可以通过重组方法来生产，也就是通过将含有编码该类似物的DNA序列并能够表达该肽的宿主细胞在合适的营养培养基中在允许该肽表达的条件下培养而进行生产。适合于这些肽的表达的宿主细胞的非限制性实例是：大肠杆菌、酿酒酵母以及哺乳动物BHK或CHO细胞系。

例如，包含非天然氨基酸和/或共价连接的取代基的本发明的PYY化合物可以如实验部分所述进行生产。

制备若干本发明的PYY化合物的方法的具体实例包括在实验部分中。

蛋白质纯化

本发明的PYY化合物可通过本领域已知的多种程序进行纯化，该程序包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水色谱法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC))、电泳法或萃取(参见，例如，ProteinPurification,J.-C.Janson和LarsRyden编著,VCHPublishers,NewYork,1989)。

给药方式

除非另外指出或明显与上下文矛盾，否则术语“治疗”意在包括所提及的疾病、病症或病况的预防和最小化两者(即，“治疗”指本发明的PYY化合物或包含本发明PYY化合物的组合物的预防性和治疗性给药两者)。

给药途径可以是将本发明的化合物有效运输到身体中期望的或适当的位置的任何途径，如肠胃外，例如，皮下、肌内或静脉内。或者，本发明的化合物可以口服、经肺、经直肠、经皮、经颊、舌下或经鼻给药。

药物组合物

包含本发明的PYY化合物的可注射组合物可采用制药工业的常规技术来制备，该常规技术包括将成分适当地溶解并混合以得到期望的终产物。因此，根据一种程序，将本发明的PYY化合物溶解于在适当pH下的合适的缓冲液中，以便最小化或避免沉淀。该可注射组合物制成无菌的，例如通过无菌过滤。

组合物可以是稳定化的制剂。术语“稳定化的制剂”是指具有提高的物理和/或化学稳定性(优选两者兼具)的制剂。通常，制剂在使用和储存(按照推荐的使用和储存条件)期间必须是稳定的，直到达到有效期。

术语“物理稳定性”是指由于暴露于热-机械应力和/或与去稳定化界面和表面(如疏水表面)相互作用而导致多肽形成无生物活性和/或不溶性聚集体的倾向。水性多肽制剂的物理稳定性可通过目测的方法，和/或通过在不同温度下暴露于机械/物理应力(例如，搅拌)不同时间段后的浊度测量来评价。或者，可使用多肽构象状态的光谱试剂或探针，例如，硫黄素T(ThioflavinT)或“疏水补片(hydrophobicpatch)”探针来评价物理稳定性。

术语“化学稳定性”是指导致化学降解产物形成的多肽结构的化学(特别是共价的)变化，该化学降解产物可能具有相比于完整多肽降低的生物学效力和/或增加的免疫原性效应。可通过例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC测量在暴露于不同环境条件后的不同时间点化学降解产物的量来评价化学稳定性。

在一个方面，本发明提供了具有改善的物理稳定性的PYY化合物。在一个方面，本发明提供了具有改善的化学稳定性的PYY化合物。

联合治疗

采用根据本发明的PYY化合物的治疗还可与一种或多种其他药理学活性物质相组合，该药理学活性物质例如选自抗糖尿病剂、抗肥胖剂、食欲调节剂、抗高血压剂、用于治疗和/或预防由糖尿病引起或与糖尿病相关的并发症的药剂、以及用于治疗和/或预防由肥胖症引起或与肥胖症相关的并发症和病症的药剂。

这些药理学活性物质的实例是：GLP-1受体激动剂、胰岛素、DPP-IV(二肽基肽酶-IV)抑制剂、胰淀素(amylin)激动剂和瘦素受体激动剂。

在本发明的一个方面，根据本发明的PYY化合物与GLP-1激动剂组合。所述化合物可以以单一剂型提供(其中该单一剂型包含这两种化合物)，或者以多部分药剂盒(kit-of-parts)的形式提供，该药剂盒包含作为第一单位剂型的PYY化合物的制剂和作为第二单位剂型的GLP-1激动剂的制剂。

与本发明的PYY化合物组合的GLP-1激动剂的非限制性实例为利拉鲁肽、索马鲁肽(semaglutide)、艾塞那肽(exenatide)、度拉糖肽(ulaglutide)、利司那肽(lixisenatide)、他泊鲁肽(taspoglutide)和阿必鲁肽(albiglutide)。

在WO98/08871的实施例37中公开了利拉鲁肽——由NovoNordiskA/S自2009年销售的用于每日一次施用的单酰化GLP-1衍生物。

WO2006/097537公开了另外的GLP-1衍生物，包括索马鲁肽(实施例4)——正在由NovoNordiskA/S开发的用于每周一次施用的单酰化GLP-1衍生物。

艾塞那肽是毒蜥外泌肽-4(exendin-4)的合成形式，毒蜥外泌肽-4是一种发现于钝尾毒蜥(GilaMonster)的唾液中的激素。它显示出类似于GLP-1的生物学性质。

度拉糖肽是GLP-1-Fc构建体(GLP-1-接头-来自IgG4的Fc)。

利司那肽基于在C端用六个Lys残基修饰的毒蜥外泌肽-4(1-39)。

他泊鲁肽是人GLP-1的氨基酸序列7–36的8-(2-甲基丙氨酸)-35-(2-甲基丙氨酸)-36-L-精氨酰胺衍生物。

阿必鲁肽是重组人血清白蛋白(HSA)-GLP-1杂合蛋白，很可能是与HSA融合的GLP-1二聚体。组分GLP-1肽是一种类似物，其中在位置8处的Ala已被Gly置换。

药物适应症

本发明还涉及用作药物的本发明的PYY化合物。

在本发明的特定方面，本发明的PYY化合物可用于以下的医学治疗：

(i)预防和/或治疗所有形式的糖尿病，如高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、1型糖尿病、非胰岛素依赖型糖尿病、MODY(青少年成人型糖尿病(maturityonsetdiabetesoftheyoung))、妊娠期糖尿病和/或HbA1C的减少；

(ii)延缓或阻止糖尿病进展，如2型糖尿病的进展，延缓葡萄糖耐量降低(IGT)向需要胰岛素的2型糖尿病的进展，延缓或阻止胰岛素抗性，和/或延缓不需要胰岛素的2型糖尿病向需要胰岛素的2型糖尿病的进展；

(ⅲ)改善β-细胞功能，如降低β-细胞凋亡、增加β-细胞功能和/或β-细胞量，和/或用于恢复β-细胞的葡萄糖敏感性；

(iv)通过例如减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感预防和/或治疗进食障碍(eatingdisorders)，诸如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病(comorbidities)，例如骨关节炎和/或尿失禁；

(v)预防和/或治疗糖尿病并发症，如血管病；神经病，包括周围神经病变；肾病；和/或视网膜病变；

(vi)改善脂质参数，如预防和/或治疗血脂异常、降低总血清脂质；增加HDL；降低小而密的LDL；降低VLDL；降低甘油三酯；降低胆固醇；降低人体内脂蛋白a(Lp(a))的血浆水平；抑制载脂蛋白a(apo(a))的体外和/或体内产生；

(vii)预防和/或治疗心血管疾病；和/或

(viii)预防和/或治疗睡眠呼吸暂停。

下列适应症是特别优选的：2型糖尿病和/或肥胖症。

在一个方面，本文中公开了用于改变受试者的能量代谢的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的PYY化合物，由此改变能量消耗。能量在所有的生理过程中燃烧。身体可通过调节这些过程的效率，或改变正在发生的过程的数目和性质，来直接改变能量消耗的速率。例如，在消化过程中，身体耗费能量使食物移动通过肠并消化食物，并且在细胞内，细胞代谢的效率可被改变，以产生更多或更少的热量。

在一个方面，本文公开了用于在本申请中描述的精确循环(circuitry)中的任意和全部操作的方法，这些操作协调地(co-ordinately)改变食物摄取并相互地(reciprocally)改变能量消耗。能量消耗是细胞代谢、蛋白质合成、代谢速率和卡路里使用的结果。因此，在该实施方案中，外周给药导致能量消耗增加，以及卡路里利用效率降低。在一个方面，向受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY化合物，由此增加能量消耗。

尽管“肥胖”通常被定义为身体质量指数超过30，但对于本公开内容而言，“肥胖”的范围内包括需要或希望减轻体重的任何受试者，包括那些身体质量指数小于30的受试者。不希望受到理论的限制，认为外周施用本发明的PYY化合物在减少食物摄取、延迟胃排空、降低营养物可利用性以及引起体重减轻方面的效果取决于其与一种或多种在PP家族中的受体中的或与之相似的独特受体类别的相互作用。更具体地，似乎涉及到与PYY-优选(或Y2)受体相似的一种或多种受体。

具体实施方案

通过以下本发明的非限制性实施方案对本发明进行进一步描述：

1.PYY化合物及其药学上可接受的盐，该PYY化合物包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的色氨酸以及相比于hPYY(3-36)的最多10个氨基酸修饰。

2.PYY化合物或其药学上可接受的盐，该PYY化合物包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的色氨酸以及相比于hPYY(3-36)的最多10个氨基酸修饰。

3.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其进一步在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置35相对应的位置处包含N(α)-甲基-L-精氨酸。

4.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置35相对应的位置处包含N(α)-甲基-L-精氨酸。

5.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其进一步在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置18相对应的位置处包含谷氨酰胺。

6.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置18相对应的位置处包含谷氨酰胺。

7.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其进一步在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置4相对应的位置处包含精氨酸。

8.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置4相对应的位置处包含精氨酸。

9.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其进一步在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置28相对应的位置处包含Aib。

10.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置28相对应的位置处包含Aib。

11.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1和2相对应的位置缺失。

12.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1-3相对应的位置缺失。

13.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1-3相对应的位置缺失，并且其中该PYY化合物进一步包含N末端取代基，其中该N末端取代基是包含至多12个碳原子的烷氧基基团。

14.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是包含至多10个碳原子的烷氧基基团。

15.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是包含至多8个碳原子的烷氧基基团。

16.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是包含至多6个碳原子的烷氧基基团。

17.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是包含6个碳原子的烷氧基基团。

18.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基选自3-甲基丁酰基、3-甲基戊酰基或己酰基。

19.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是3-甲基丁酰基。

20.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是3-甲基戊酰基。

21.根据实施方案13的PYY化合物，其中所述N末端取代基是己酰基。

22.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多8个氨基酸修饰。

23.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多6个氨基酸修饰。

24.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最少4个氨基酸修饰。

25.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最少6个氨基酸修饰。

26.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最少8个氨基酸修饰。

27.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有4到10个氨基酸修饰。

28.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有6到8个氨基酸修饰。

29.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有4到6个氨基酸修饰。

30.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有4个氨基酸修饰。

31.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有6个氨基酸修饰。

32.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有8个氨基酸修饰。

33.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物表现出与hPYY(3-36)至少70％的序列同一性。

34.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物呈现出与hPYY(3-36)至少75％的序列同一性。

35.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物呈现出与hPYY(3-36)至少80％的序列同一性。

36.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其进一步包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置7相对应的位置处的赖氨酸，以及连接至在位置7处的赖氨酸残基的ε氨基基团的修饰基团，其中所述修饰基团被定义为A-B-C-，其中A-包含羧酸、四唑或磺酸。

37.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置7相对应的位置处的赖氨酸和连接至所述赖氨酸的ε氨基基团的修饰基团，其中所述修饰基团被定义为A-B-C-。

38.根据实施方案36-37中任一个的PYY化合物，其中A-选自

其中a为12至19的整数，b为10至16的整数，且c为10至16的整数，并且其中*表示与–B-的连接点。

39.根据实施方案38的PYY化合物，其中a为15，b为13，或c为13。

40.根据实施方案36-37中任一个的PYY化合物，其中A-选自

其中a为12至19的整数，c为10至16的整数，并且其中*表示与–B-的连接点。

41.根据实施方案40的PYY化合物，其中a为15，或c为13。

42.根据实施方案36-37中任一个的PYY化合物，其中A-为

其中a为12至19的整数，并且其中*表示与–B-的连接点。

43.根据实施方案42的PYY化合物，其中a为15。

44.根据实施方案36-37中任一个的PYY化合物，其中A-为

其中b为10至16的整数，并且其中*表示与–B-的连接点。

45.根据实施方案44的PYY化合物，其中b为13。

46.根据实施方案36-37中任一个的PYY化合物，其中A-为

其中c为10至16的整数，并且其中*表示与–B-的连接点。

47.根据实施方案46的PYY化合物，其中c为13。

48.根据实施方案36-47中任一个的PYY化合物，其中B-选自

其中d为1或2；e为1或2；且f为2、3或4；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点。

49.根据实施方案48的PYY化合物，其中B-选自

其中d为1或2；且f为2、3或4；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点。

50.根据实施方案49的PYY化合物，其中d为1或2；并且f为3。

51.根据实施方案48的PYY化合物，其中B-为

其中d为1或2；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点。

52.根据实施方案48的PYY化合物，其中B-为

其中f为2、3或4；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点。

53.根据实施方案52的PYY化合物，其中f为3。

54.根据实施方案36-53中任一个的PYY化合物，其中-C-为

其中g为在1-5范围内的整数，h为在1-5范围内的整数，i为在2至6范围内的整数，j为在2至6范围内的整数，并且其中****表示与-B-的连接点，且*****表示与在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基的ε氨基基团的连接点。

55.根据实施方案36-53中任一个的PYY化合物，其中-C-为

其中g为在1-5范围内的整数，h为在1-5范围内的整数，i为在2至6范围内的整数，j为在1至6范围内的整数，并且其中****表示与-B-的连接点，且*****表示与在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基的ε氨基基团的连接点。

56.根据实施方案54-55中任一个的PYY化合物，其中g和h分别为1。

57.根据实施方案54-56中任一个的PYY化合物，其中i选自2、3、4或5，并且j选自1、2或3。

58.根据实施方案36-53中任一个的PYY化合物，其中-C-为

其中g为在1-5范围内的整数，h为在1-5范围内的整数，i为在2至6范围内的整数，并且其中****表示与-B-的连接点，且*****表示与在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基的ε氨基基团的连接点。

59.根据实施方案58的PYY化合物，其中g和h分别为1。

60.根据实施方案58-59中任一个的PYY化合物，其中i选自2、4或6。

61.根据实施方案60的PYY化合物，其中i为2。

62.根据实施方案60的PYY化合物，其中i为4。

63.根据实施方案60的PYY化合物，其中i为6。

64.根据实施方案58的PYY化合物，其中g和h分别为1，并且i为2。

65.PYY化合物或其药学上可接受的盐，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多10个氨基酸修饰，并且其中该PYY化合物包含

(i)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的色氨酸；

(ii)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置35相对应的位置处的N(α)-甲基-L-精氨酸；

(iii)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置18相对应的位置处的谷氨酰胺；

(iv)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置7相对应的位置处的赖氨酸；和

(v)连接至所述赖氨酸的ε氨基基团的修饰基团，其中所述修饰基团被定义为A-B-C-，其中

A-选自

其中a为15，c为13，并且其中*表示与–B-的连接点；

B-为

其中d为1或2；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点；并且

-C-为

其中g和h分别为1，i选自2或4，并且其中****表示与-B-的连接点，且*****表示与在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基的ε氨基基团的连接点。

66.根据实施方案65的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置4相对应的位置处包含精氨酸。

67.根据实施方案65-66中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1和2相对应的位置缺失。

68.根据实施方案65-67中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1-3相对应的位置缺失，并且其中该PYY化合物进一步包含N末端取代基，其中该N末端取代基选自3-甲基丁酰基、3-甲基戊酰基或己酰基。

69.根据实施方案65-68中任一个的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多8个氨基酸修饰。

70.一种PYY化合物或其药学上可接受的盐，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多10个氨基酸修饰，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1-3相对应的位置缺失，并且其中该PYY化合物包含

(i)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的色氨酸；

(iv)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置7相对应的位置处的赖氨酸；

A-为

其中c为13，并且其中*表示与–B-的连接点；

B-为

其中d为1；并且其中***表示与A-的连接点，且**表示与-C-的连接点；并且

-C-为

其中g和h分别为1，i为2，并且其中****表示与-B-的连接点，且*****表示与在与hPYY(1-36)的位置7相对应的位置处的赖氨酸残基的ε氨基基团的连接点；

(vi)在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置4相对应的位置处的精氨酸；和

(vii)N末端取代基，其中该N末端取代基选自3-甲基丁酰基、3-甲基戊酰基或己酰基。

71.根据实施方案70的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有最多8个氨基酸修饰。

71a.根据实施方案70的PYY化合物，其中与hPYY(3-36)相比，该PYY化合物具有6个氨基酸修饰。

72.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物不是盐。

73.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其选自以下化合物：

[Trp30]hPYY(3-36)(SEQIDNO:3)

[Trp30,NMeArg35]hPYY3-36(SEQIDNO:4)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:5)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:6)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:7)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:8)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)-十六碳酰基氨基磺酰基]丁酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:9)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Aib28,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:10)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:11)

4-N{α}-(己酰基)-7-N{ε}-2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:12)

4-N{α}-(3-甲基-戊酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:13)

4-N{α}-(3-甲基-戊酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:14)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:15)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:16)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)(SEQIDNO:17)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:18)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:19)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(14-磺基十四碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:20)

74.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其选自以下化合物：[Trp30]hPYY(3-36)(SEQIDNO:3)

[Trp30,NMeArg35]hPYY3-36(SEQIDNO:4)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-羧基-十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:21)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(14-羧基-十四碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:22)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Ile28,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:23)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:24)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:25)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:26)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:27)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]-乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:28)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]-乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]-乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:29)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[(2S)-2-氨基-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-氨基]己酰基]]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:30)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:31)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Val3,Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)(SEQIDNO:32)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,D-Asp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:33)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:34)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,D-isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:35)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)(SEQIDNO:36)

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(3-36)(SEQIDNO:37)

75.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:3。

76.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:4。

77.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:5。

78.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:6。

79.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:7。

80.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:8。

81.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:9。

82.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:10。

83.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:11。

84.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:12。

85.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:13。

86.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:14。

87.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:15。

88.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:16。

89.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:17。

90.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:18。

91.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:19。

92.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:20。

93.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:21。

94.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:22。

95.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:23。

96.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:24。

97.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:25。

98.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:26。

99.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:27。

100.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:28。

101.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:29。

102.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:30。

103.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:31。

104.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:32。

105.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:33。

106.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:34。

107.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:35。

108.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:36。

109.根据实施方案1-2中任一个的PYY化合物，其中该PYY化合物为SEQIDNO:37。

110.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其为人Y2受体激动剂。

111.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其为完全人Y2受体激动剂。

112.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其为选择性人Y2受体激动剂。

113.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其为选择性完全人Y2受体激动剂。

114.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其能够激活人Y2受体。

115.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其能够在使用表达人Y2受体的全细胞的试验中激活人Y2受体。

116.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其能够在实施例39的Actone功能效力试验中激活人Y2受体。

117.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其能够与人Y2受体结合。

118.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其能够与人Y2受体结合，其中所述与人Y2受体的结合在竞争性结合试验如实施例40的试验中进行测量。

119.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其具有改善的药代动力学性质。

120.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其具有延长的半衰期和/或降低的清除率。

121.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其具有降低血糖的体内效果，所述效果在db/db小鼠模型中的单剂量研究中确定。

122.根据前述实施方案中任一个的PYY化合物，其具有降低食物摄取的体内效果，所述效果在db/db小鼠模型中的单剂量研究中确定。

123.药物组合物，其包含根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物和至少一种药学上可接受的辅料。

124.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用作药物。

125.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展。

126.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用于治疗和/或预防糖尿病。

127.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用于治疗和/或预防2型糖尿病。

128.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展。

129.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物在制备用于治疗和/或预防糖尿病的药物中的用途。

130.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物在制备用于治疗和/或预防2型糖尿病的药物中的用途。

131.一种通过施用药学活性量的根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展的方法。

132.一种通过施用药学活性量的根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物治疗和/或预防糖尿病的方法。

133.一种通过施用药学活性量的根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物治疗和/或预防2型糖尿病的方法。

134.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用于治疗和/或预防进食障碍如肥胖症，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，例如骨关节炎和/或尿失禁。

135.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，其用于治疗和/或预防肥胖症。

136.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗和/或预防进食障碍如肥胖症，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，例如骨关节炎和/或尿失禁。

137.根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物在制备用于治疗和/或预防肥胖症的药物中的用途。

138.一种通过施用药学活性量的根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感而治疗和/或预防进食障碍如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病如骨关节炎和/或尿失禁的方法。

139.一种通过施用药学活性量的根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物治疗和/或预防肥胖症的方法。

140.一种药物组合物，其包含根据实施方案1-122中任一个的PYY化合物、GLP-1激动剂和至少一种药学上可接受的辅料。

141.根据实施方案140的药物组合物，其中所述GLP-1激动剂为利拉鲁肽。

142.根据实施方案140的药物组合物，其中所述GLP-1激动剂为索马鲁肽。

143.根据实施方案140-142中任一个的药物组合物，其中所述PYY化合物为SEQIDNO:18。

144.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，其用作药物。

145.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展和/或进食障碍如肥胖症，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，例如骨关节炎和/或尿失禁。

146.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，其用于治疗和/或预防糖尿病。

147.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，其用于治疗和/或预防2型糖尿病。

148.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，其用于治疗和/或预防肥胖症。

149.根据实施方案140-143中任一个的药物组合物在制备用于治疗和/或预防糖尿病和/或肥胖症的药物中的用途。

150.一种通过施用药学活性量的根据实施方案140-143中任一个的药物组合物治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展的方法。

151.一种通过施用药学活性量的根据实施方案140-143中任一个的药物组合物，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感而治疗和/或预防进食障碍如肥胖症；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病如骨关节炎和/或尿失禁的方法。

实施例

该实验部分从缩写列表开始，随后为包括用于合成和表征本发明化合物的通用方法的部分。然后为若干个涉及具体PYY化合物的制备的实施例，在最后，也包括若干个涉及这些化合物的活性和性质的实施例(标题为药理学方法的部分)。

这些实施例用于说明本发明。

缩写列表

ACN：乙腈

Aib：α-氨基异丁酸

Boc：叔丁氧羰基

CH₃CN：乙腈

cpm：每分钟计数

DCM：二氯甲烷

DIC：二异丙基碳二亚胺

DIPEA：二异丙基乙胺

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

Et2O：乙醚

Fmoc：9H-芴-9-基甲氧基羰基

HFIP：六氟异丙醇

HMWP：高分子量蛋白质

h：小时

H₂O：水

HOAc：乙酸

HOAt：1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HOBt：1-羟基苯并三唑

Min：分钟

Mtt：4-甲基三苯甲基

MW：分子量

NMeArg：N(α)-甲基-L-精氨酸

NMF：1-甲基-甲酰胺

NMP：1-甲基-吡咯烷-2-酮

OtBu：叔丁酯

Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基

PyBOP：苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐

rpm：每分钟转数

r.t：室温

tBu：叔丁基

TFA：三氟乙酸

TIPS：三异丙基硅烷

Trt：三苯甲基

材料与方法

通用制备方法

该部分涉及用于肽骨架的固相合成和连接至骨架的侧链的合成的方法(SPPS法，包括氨基酸偶联、Fmoc-氨基酸去保护的方法，用于从树脂上切割肽以及用于其纯化的方法)。

1.与树脂结合的受保护的肽骨架的合成

用于肽骨架的自动化逐步组装的程序。根据在固相肽合成仪Prelude(ProteinTechnologies,Tucson,USA)上0.25mmol规模或0.4mmol规模的Fmoc策略，采用制造商提供的机器加工方案合成了受保护的肽基树脂。所使用的Fmoc-保护的氨基酸衍生物是以下推荐的标准品：由例如Bachem、IrisBiotech、ProteinTechnologies或Novabiochem提供的Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH或Fmoc-Val-OH等。如果没有另外指定，则使用氨基酸的天然L-形式。通过使用在NMP(N-甲基吡咯烷酮)中DIC(二环己基碳二亚胺)和OzymaPure(2-氰基-2-(羟基亚氨基)-乙酸乙酯,Merck,Novabiochem,Switzerland)介导的偶联来实现偶联。采用相对于树脂替代物过量4-8倍(4-8当量)的氨基酸，如上所述完成Fmoc-氨基酸的偶联。偶联时间在1小时直到4小时的范围内。采用双偶联程序(1小时+1小时)使Fmoc-Arg(pbf)-OH偶联。用于合成肽酰胺的树脂可以是TentagelRAM(RappPolymere,Germany)、RinkamidChemMatrix树脂(MatrixInnovation,Canada)、Rink-Amide树脂(Merck/Novabiochem)。所使用的受保护的氨基酸衍生物是标准的Fmoc-氨基酸(由例如ProteinTechnologies或Novabiochem提供)。用Mtt保护待衍生的赖氨酸的ε氨基基团。N-末端氨基酸或构件作为Boc-保护的氨基酸，例如，Boc-Ile进行偶联。或者，根据以上针对Fmoc-氨基酸所述的偶联程序将异戊酸偶联。采用以下步骤完成在Prelude上的逐步固相组装：1)通过使用在NMP中的25％哌啶去保护(去除Fmoc)，持续2x4min，步骤2)用NMP和DCM洗涤(去除哌啶)，步骤3)通过添加1/10体积的在NMP中的3MDIC和1/10体积的在NMP中的可力丁引发过量4-8当量的Fmoc-氨基酸(在NMP中的0.3MOxymaPure中的0.3MFmoc-氨基酸)的偶联，持续1-4小时。通过不时用氮气鼓泡完成混合，步骤4)洗涤(通过使用NMP和DCM去除过量的氨基酸和试剂)。最后一步包括用DCM洗涤，这使得该树脂备用于白蛋白结合部分在赖氨酸侧链上的连接。

2.修饰基团与树脂结合的受保护的肽骨架的连接

手工去除Mtt-保护(赖氨酸(Mtt))的程序：在修饰基团合成之前，必须去除在连接位点上的Mtt基团(赖氨酸)。将该树脂置于注射器或反应烧瓶中并用75％六氟异丙醇(HFIP)+25％DCM处理2X30分钟以去除Mtt基团。然后如上所述用DCM和NMP洗涤该树脂，并用在NMP中的5％DIPEA或在NMP中的25％哌啶进行中和(中和步骤)，随后在偶联白蛋白部分之前进行NMP洗涤。或者省略中和步骤。

Prelude去除Mtt-保护(赖氨酸(Mtt))的程序：在Prelude上，将树脂用75％六氟异丙醇(HFIP)+25％DCM处理2x2分钟，随后处理2X30分钟，以去除在赖氨酸上的Mtt基团。然后将该树脂用DCM和NMP洗涤，之后为使用在NMP中的25％哌啶持续4分钟的中和步骤，随后将该树脂备用于修饰基团的合成。

将修饰基团手工合成至赖氨酸残基上的程序：

采用DIC和OxymaPure，以相对于树脂替代物的4-8当量将构件Fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(CASNo.166108-71-0)、Fmoc-TTDS-OH(CASNo.172089-14-4,IRISBiotechGmbH)、Fmoc-L-Glu-OtBu(84793-07-7)和二十烷二酸单叔丁酯(CASNo.843666-40-0)偶联。偶联时间为2-16小时，通常随后为采用1M乙酸酐持续15-60min的加帽步骤。通过采用在NMP中的25％哌啶处理10-30分钟，随后洗涤来去除Fmoc-基团。将16-磺基十六烷酸溶解于在60摄氏度或以上的NMP或N-甲基甲酰胺(NMF)中，并用相对于该磺基十六烷酸为1当量的PyBOP进行活化，并且还添加相对于该磺基十六烷酸为2当量的二异丙基乙胺(DIPEA)。在临添加活化的磺基十六烷酸之前，将肽基树脂用热的NMP或NMF洗涤。采用3-4倍过量的磺酸构件并使偶联进行>16小时。

将修饰基团自动化合成至赖氨酸残基上的程序：

为了合成修饰基团，使用了以下的构件：Fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸、Fmoc-TTDS-OH、Fmoc-Glu-OtBu和二十烷二酸单叔丁酯(CASNo.843666-40-0)。采用DIC和OxymaPure，以相对于树脂替代物物的4-8当量将修饰基团偶联。偶联时间为2-16小时，通常随后为采用1M乙酸酐持续20min的加帽步骤。如在肽骨架的SPPS中描述的，通过采用在NMP中的25％哌啶处理2x4分钟，随后洗涤来去除Fmoc-基团。所有其他合成步骤也都与以上针对骨架合成所述的相同。通过如上所述的手工程序，采用pyBOP作为偶联剂实现16-磺基十六烷酸的偶联。

3.连接有或没有修饰基团的与树脂结合的肽的切割以及纯化

在TFA去保护之前，将肽基树脂用DCM或乙醚洗涤并干燥。通过添加20-40ml(0.25mmol规模)或30-60(0.4mmol规模)ml92％TFA、5％TIPS和3％H₂O持续2-4小时来去除肽和侧链保护基团。然后将TFA过滤，并在一些情况下用氩气流进行浓缩，并且添加乙醚以使肽沉淀。将肽用乙醚洗涤3-5次并干燥。

检测和表征的通用方法

该部分涉及用于检测和表征所得肽的方法，包括LCMS、MALDI和UPLC方法。

1.LC-MS方法(LCMS1)

使用AgilentTechnologiesLC/MSDTOF(G1969A)质谱仪来确定从Agilent1200系列HPLC系统洗脱后的肽的分子量。使用Agilents软件计算质量数据的去卷积。

洗脱液：

缓冲液A：在水中的0.1％TFA

缓冲液B：在CH₃CN中的0.1％TFA

LC-MSWatersAcquity(LCMS2)

LC-系统：WatersAcquityUPLC

柱子：WatersAcquityUPLCBEH,C-18,1.7μm,2.1mmx50mm

检测器：Waters(Micromass)LCTPremierXE

线性梯度：5％到95％B

梯度运行时间：4.0分钟

总运行时间：7.0分钟

流速：0.4ml/分钟

柱温：40℃

溶剂A：99.90％MQ-水，0.1％甲酸

溶剂B：99.90％乙腈，0.1％甲酸

2.UPLC方法

UPLC2法

缓冲液A：0.05％TFA

缓冲液B：CH3CN+0.05％TFA

流速：0.4ml/min

梯度：5-95％B,(16min),

柱子：AcquityUPLCBEHC18,1.7um,2.1x150mm柱

柱温：40℃

UPLC26v01法

缓冲液A：0.05％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.05％TFA

流速：0.45ml/min

梯度：5-60％缓冲液B(0.5–4min.)

柱子：AcquityUPLCBEHC181.7um,2.1x50mm

柱温：40℃

UPLC29v01法

缓冲液A：0.05％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.05％TFA

流速：0.45ml/min

梯度：15-35％缓冲液B(0.5–4min.)

柱子：AcquityUPLCBEHC181.7um,2.1x50mm

柱温：40℃

UPLC30v01法

缓冲液A：0.05％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.05％TFA

流速：0.45ml/min

梯度：20-40％缓冲液B(0.5–4min.)

柱子：AcquityUPLCBEHC181.7um,2.1x50mm

柱温：40℃

UPLC31v01法

缓冲液A：0.05％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.05％TFA

流速：0.45ml/min

梯度：25-45％缓冲液B(0.5–4min.)

柱子：AcquityUPLCBEHC181.7um,2.1x50mm

柱温：40℃

UPLC02v01法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液A：在H₂O中的0.05％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.05％TFA

流速：0.40ml/min

梯度：5-95％缓冲液B(16min.)

柱子：AcquityUPLCBEHC181.7um,2.1x150mm

柱温：40℃

UPLC07v01法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液A：0.09M磷酸氢二铵(水溶液)和10％乙腈，pH3.6

缓冲液B：20％异丙醇、20％水和60％乙腈

流速：0.50ml/min

梯度：35-65％缓冲液B(2-17min.)

柱子：PhenomenexKinetexC18,1.7um,2.1mmx150mm柱

柱温：60℃

UPLC16v01法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液A：0.2M硫酸钠、0.02M磷酸氢二钠、0.02M磷酸二氢钠、90％水和10％乙腈，pH7.2

缓冲液B：70％乙腈，30％水

流速：0.40ml/min

梯度：20-50％缓冲液B(3-20min.)

柱子：ACQUITYUPLCBEHShieldRP18,1.7um,2.1mmx150mm柱

柱温：60℃

UPLC60法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液A：0.02M硫酸钠、0.02M磷酸氢二钠、0.02M磷酸二氢钠、90％水和10％乙腈，pH7.2

缓冲液B：70％乙腈，30％水

流速：0.40ml/min

梯度：20-50％缓冲液B(3-20min.)

柱子：ACQUITYUPLCBEHShieldRP18,1.7um,2.1mmx150mm柱

柱温：60℃

UPLC17法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液B：70％乙腈，30％水

流速：0.40ml/min

阶梯梯度：10-20％B历时3分钟，然后20-80％B历时17分钟，然后80-90％B历时1分钟

柱子：ACQUITYUPLCBEHShieldRP18,1.7um,2.1mmx150mm柱

柱温：60℃

UPLC61法

系统：WatersAcquityUPLC系统

缓冲液B：70％乙腈，30％水

流速：0.40ml/min

梯度：10-20％缓冲液B(0-3min)20-80％缓冲液B(3-20min.)

柱子：ACQUITYUPLCBEHShieldRP18,1.7um,2.1mmx150mm柱

柱温：60℃

UPLC-AP-01法

缓冲液A：在H₂O中的0.1％TFA

缓冲液B：CH₃CN+0.1％TFA

流速：0.40ml/min

梯度：5-95％缓冲液B(16min.)

柱子：AcquityUPLCBEH130；150x2.1；1.7um

柱温：40℃

UPLC-AP-02法

缓冲液A：在90％水/10％乙腈中的20mMNa₂HPO₄、20mMNaH₂PO₄、200mMNa₂SO₄，pH7.20

缓冲液B：70％乙腈/30％水

流速：0.40ml/min

梯度：10-20％缓冲液B(0-3min.)；20-50％缓冲液B(3-20min)；50-80％(20-21min)

柱子：AcquityUPLCBEHShield,RP181.7um,2.1x150mm

柱温：40℃

3.MALDI-MS方法

使用记录在Microflex(Bruker)上的基质辅助激光解吸飞行时间质谱法(MALDI-MS)来确定肽的分子量。采用α-氰基-4-羟基肉桂酸基质。采用由制造商提供的软件，基于MALDI-MS分析的结果计算产物的分子量。

中间体的合成

16-磺基-十六烷酸的合成

将16-十六内酯(997g，3.92mol)溶解于甲醇(15.1L)中，并添加甲苯-4-磺酸一水合物(90.0g，0.473mol)。将反应混合物在55℃下在50L反应器中加热16小时。冷却后，添加碳酸氢钠(56.0g，0.67mol)，并将反应混合物搅拌15min。在Heidolph20L旋转蒸发仪上蒸发溶剂。添加乙酸乙酯(12L)，并将混合物用5％的碳酸氢钠溶液(10L)萃取。将有机层分离；将乳液层用乙酸乙酯(3x3L)萃取，分离白色不溶性泥状物质，并将乙酸乙酯层用5％的碳酸氢钠溶液(5L)再次洗涤。将有机层合并，并用饱和的碳酸氢钠溶液(5L)和盐水(10L)洗涤。在Heidolph20L旋转蒸发仪上蒸发溶剂。使粗产物从己烷(8L)中结晶。倒出在己烷中的热溶液，随后使其在冰浴中结晶。将该物质在大烧结滤器(frit)上过滤并用冷己烷(2L)洗涤。将纯物质真空干燥。

产量：1062.2g(95％)。R_F(SiO₂，二氯甲烷/甲醇95:5)：0.65。

¹HNMR谱(300MHz,CDCl₃,δ_H)：3.67(s,3H)；3.67-3.60(m,2H)；2.30(t,J＝7.5Hz,2H)；1.67-1.53(m,4H)；1.25(s,22H)。

将上述酯(957g，3.34mol)在Heidolph20L旋转蒸发仪上溶解于二氯甲烷(7L)中。添加三乙胺(695mL，4.98mol)，将反应混合物冷却至0℃(通过将冰放入蒸发仪浴中)，并采用微小真空通过外部管线在10分钟内缓慢添加在二氯甲烷(200mL)中的甲磺酰氯(325mL，4.19mol)。然后将反应混合物加热至35℃持续1小时。NMR分析显示完全转化。添加水(690mL)并蒸发溶剂。添加乙酸乙酯(8L)，并将混合物用1M盐酸(4L)和5％的碳酸钠溶液(4L)洗涤。由于碳酸钠萃取物形成乳液，因此将该层用乙酸乙酯(4L)萃取并添加至主要部分。将合并的乙酸乙酯层用盐水(4L)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。蒸发溶剂，得到呈白色固体的16-甲磺酰基氧基-十六烷酸甲酯。

产量：1225.4g(100％)。

¹HNMR谱(300MHz,CDCl₃,δ_H)：4.22(t,J＝6.6Hz,2H)；3.66(s,3H)；3.00(s,3H)；2.30(t,J＝7.5Hz,2H)1.82-1.67(m,2H)；1.68-1.54(m,2H)；1.36-1.17(m,22H)。

将上述甲磺酸酯(1.23kg，3.34mol)溶解于丙酮(8L)中，并添加溴化锂(585g，6.73mol)，并将反应混合物在50℃下在Heidolph20L旋转蒸发仪上加热12小时。冷却后，蒸发溶剂，添加乙酸乙酯(10L)，并将混合物用5％的碳酸氢钠溶液(3x15L)和盐水(8L)洗涤。将溶剂蒸发至干，以产生呈浅黄色油的开始结晶的16-溴-十六烷酸甲酯。

产量：1219g(105％)；含有丙酮和丙酮缩醛反应的产物。

R_F(SiO₂，己烷/乙酸乙酯9:1)：0.90。

¹HNMR谱(300MHz,CDCl₃,δ_H)：3.65(s,3H)；3.42(t,J＝6.9Hz,2H)；2.32(t,J＝7.5Hz,2H)；1.92-1.77(m,2H)1.69-1.53(m,2H)；1.50-1.35(m,2H)；1.25(bs,10H)。

将亚硫酸钠(327g，2.60mol)的水(1.26L)溶液和16-溴-十六烷酸甲酯(728g，2.00mol，96％纯度)在1-丙醇(945mL)和甲醇(420mL)中的溶液在装备有机械搅拌器的6L反应器中加热至回流48小时。将反应混合物冷却至27℃并用四氢呋喃(2L)稀释。将反应混合物过滤并将固体物质用四氢呋喃(3x700mL)洗涤。将滤液冷却至0℃并使物质的另一部分沉淀。将该沉淀物过滤并用四氢呋喃(2x200mL)洗涤。将固体合并，并与水(8.4L)在20L的锅中混合。添加氢氧化钠(120g，3.00mol)的溶液。将混合物加热至沸腾，持续约5小时。将硫酸(430mL，8.00mol)的水(500mL)溶液缓慢添加至反应混合物中(形成二氧化硫)。将反应混合物加热至沸腾，持续10min，随后使其冷却至15℃(冰浴)。将混合物在施加真空的布氏漏斗上通过滤纸Seitz(若干层滤纸)过滤。该程序非常缓慢，花费了两天。将固体物质用蒸馏水洗涤若干次，直到滤液的pH在2到3之间。该程序花费了约三天。将泥状白色物质在80℃烘箱中干燥，得到期望的产物。

产量：510g(76％)。

¹HNMR谱(300MHz,DMSO-d₆,δ_H)：2.45-2.33(m,2H)；2.18(t,J＝7.3Hz,2H)；1.60-1.40(m,4H)；1.24(s,22H)。

MS-ESI(负，在H₂O/MeCN+NaHCO₃中的样品；m/z)：335.5(M-H)^-,357.5(M-2H+Na)^-,167.3(M-2H)^2-

14-磺基-十六烷酸的合成

在氩气下，在0℃下，将硼烷-四氢呋喃复合物在四氢呋喃(52mL，52.0mmol)中的1M溶液逐滴添加至十四烷二酸单叔丁酯(10.0g，31.9mmol)在无水四氢呋喃(75mL)中的溶液中。将所得溶液在0℃下搅拌2hr，随后移除冷却浴，并将混合物在室温下搅拌过夜。添加碳酸氢钠的饱和水溶液(150mL)，并将所得混合物用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机萃取物用5％的碳酸钠水溶液(1x150mL)和10％的柠檬酸水溶液(1x100mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸镁干燥，并蒸发至干。对残余物进行柱色谱分析(Silicagel60A，0.060-0.200mm；洗脱液：二氯甲烷/甲醇100:0-99:1)，以得到呈微黄色油的14-羟基-十四烷酸叔丁酯。

产量：9.19g(96％)。

RF(SiO₂，氯仿/甲醇9:1)：0.60。

1HNMR谱(300MHz,CDCl3,dH)：3.60(t,J＝6.4Hz,2H)；2.18(t,J＝7.2Hz,2H)；1.61-1.48(m,4H)；1.42(s,9H)；1.24(bs,18H)。

将氢氧化钾(8.60g，153mmol)的水(100mL)溶液添加至上述酯(9.20g，30.6mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中，并将所得混合物在60℃下加热2天。将混合物冷却至室温；随后用己烷(2x70mL)洗涤，并真空浓缩。逐滴添加浓盐酸(32％，20mL，0.65mol)，并将混合物用乙酸乙酯(2x150mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥并蒸发至干，以得到呈白色固体的14-羟基-十四烷酸。

产量：7.10g(95％)。

RF(SiO₂，氯仿/甲醇85:15)：0.50。

1HNMR谱(300MHz,CDCl3,dH)：3.66(t,J＝6.6Hz,2H)；2.36(t,J＝7.4Hz,2H)；1.72-1.52(m,4H)；1.29(bs,18H)。

将对甲苯磺酸一水合物(0.28g，1.45mmol)添加至上述14-羟基-十四烷酸(7.10g，29.1mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中，并将所得溶液在室温下搅拌3天。在减压下去除甲醇；将残余物溶解于乙酸乙酯(170mL)中；用5％的碳酸钠水溶液(3x50mL)和盐水(25mL)洗涤；经无水硫酸镁干燥并真空蒸发，以得到呈白色固体的14-羟基-十四烷酸甲酯。

产量：7.28g(97％)。

RF(SiO₂，二氯甲烷/甲醇95:5)：0.45。

1HNMR谱(300MHz,CDCl3,dH)：3.61-3.71(m,5H)；2.32(t,J＝7.5Hz,2H)；1.70-1.52(m,4H)；1.44(s,1H)；1.28(bs,18H)。

将上述制备的酯(7.28g，28.2mmol)溶解于DCM(60mL)中。添加三乙胺(5.30mL，52.3mmol)，将反应混合物冷却至0℃，并在10分钟内缓慢添加甲磺酰氯(2.45mL，31.7mmol)。一小时后，使反应混合物升温至室温并搅拌过夜。16hr后，添加水(1mL)，并将混合物搅拌30分钟。蒸发溶剂，添加乙酸乙酯(80mL)，并将混合物用1M盐酸(2x30mL)、5％的碳酸钠溶液(2x20mL)和水(20mL)萃取。用无水硫酸镁干燥后，过滤并蒸发溶剂，得到呈白色固体的16-甲磺酰基十六烷酸甲酯。

产量：9.15g(92％)。

RF(SiO₂，二氯甲烷/甲醇95:5)：0.70。

1HNMR谱(300MHz,CDCl3,dH)：4.24(t,J＝6.6Hz,2H)；3.68(s,3H)；3.01(s,3H)；2.32(t,J＝7.5Hz,2H)1.83-1.70(m,2H)；1.70-1.56(m,2H)；1.47-1.20(m,22H)。

将上述制备的甲磺酸酯(9.15g，26.0mmol)溶解于丙酮(230mL)中，并添加溴化锂(4.50g，51.8mmol)，并将反应混合物回流过夜。冷却后蒸发溶剂，添加乙酸乙酯(530mL)，并将混合物用5％的碳酸氢钠溶液(3x230mL)萃取。将合并的有机萃取物经无水硫酸镁干燥并蒸发至干，以得到呈橙色油的14-溴-十四烷酸甲酯。

产量：8.34g(100％)。

RF(SiO₂，二氯甲烷/甲醇95:5)：0.90。

1HNMR谱(300MHz,CDCl3,dH)：3.66(s,3H)；3.42(t,J＝6.9Hz,2H)；2.32(t,J＝7.5Hz,2H)；1.93-1.80(m,2H)1.69-1.56(m,2H)；1.50-1.38(m,2H)；1.28(bs,16H)。

将上述制备的14-溴-十四烷酸(8.34g，26.0mmol)溶解于正丙醇(10mL)、水(25mL)和1M的氢氧化钠水溶液(32mL)中，并添加亚硫酸钠(5.00g，39.7mmol)。将反应混合物加热至回流22hr。冷却后过滤出白色沉淀物。添加浓盐酸以得到酸性pH，并将沉淀物离心并用水(2x50ml)倾析两次。冻干后，获得呈白色固体的14-磺基-十四烷酸钠盐。

产量：7.3g(85％)。

RF(SiO₂，二氯甲烷/甲醇95:5)：0.60。

1HNMR谱(300MHz,DMSO-d6,dH)：2.40(m,2H)；2.18(t,J＝7.2Hz,2H)；1.61–1.40(m,4H)；1.23(bs,18H)。

本发明化合物的合成

实施例1：

SEQIDNO:1

hPYY(1-36)

YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH₂

实施例2：

SEQIDNO:2

hPYY(3-36)

IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH₂

保留时间HPLC方法UPLC16v01：3.37min(91.4％)

保留时间HPLC方法UPLC29v01：10.07min(85.6％)

MW计算值：4049.6g/mol

MALDIMS：4048.2g/mol

实施例3：

SEQIDNO:3

[Trp30]hPYY(3-36)

保留时间HPLC方法UPLC-AP-01：(96.6％)

MW计算值：4123.6g/mol

LCMS1：((M/3)+3)1374,8；((M/4)+4)1031,3

实施例4：

SEQIDNO:4

[Trp30,NMeArg35]hPYY3-36

保留时间UPLC29v01：3.43分钟(100％)

保留时间UPLC16v01：10.93(90.9％)

MW计算值：4136.6g/mol

LCMS2：((M/1)+1)4136.03；((M/2)+2)2069,02((M/3)+3)1379,68；((M/4)+4)1035,02

实施例5：

SEQIDNO:5

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间UPLC-AP-01：7.44分钟(95.7％)

MW计算值：4923.6g/mol

LCMS：((M/3)+3)1641.9；((M/4)+4)1231.5；((M/5)+5)985.6

实施例6：

SEQIDNO:6

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间UPLC-AP-01：7.46分钟(93％)

MW计算值：5343.1g/mol

LCMS2：((M/3+3)1782.6；((M/4)+4)1336.6；((M/5+5)1069.6

实施例7：

SEQIDNO:7

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.11分钟(91.6％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：13.89分钟(89.7％)

MW计算值：5213.97g/mol

MALDIMS：5215.8g/mol

实施例8：

SEQIDNO:8

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间UPLC02v02：6.63分钟(97％)

保留时间UPLC16v01：11.94分钟(93.2％)

MW计算值：4945.67g/mol

LCMS2：((M/4)+4)1237.47；((M/3)+3)1649.61；((M/2)+2)2473.87

实施例9：

SEQIDNO:9

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)-十六碳酰基氨基磺酰基]丁酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.78分钟(100％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：12.41分钟(96.4％)

MW计算值：5244.0g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z1748.9((M/3)+3)；1311.9((M/4)+4)；875((M/6)+6)

实施例10：

SEQIDNO:10

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Aib28,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间UPLC-AP-01：7.26(91.5％)

MW计算值：5315.0g/mol

LCMS：((M/3)+3)1772.6；((M/4)+4)1329.6；((M/5)+5)1063.5

实施例11：

SEQIDNO:11

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间UPLC02v02：6.64分钟(94.7％)

保留时间UPLC16v01：12.05分钟(92％)

MW计算值：4973.69g/mol

分子量(实测值)：4973.35g/mol

LCMS2：((M/4)+4)1244.22；((M/3)+3)1658.94

实施例12：

SEQIDNO:12

4-N{α}-(己酰基)-7-N{ε}-2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC16v01：12.72分钟(95.1％)

MW计算值：4958.67g/mol

分子量实测值：4959.22

LCMS2：((M/4)+4)1240.64

实施例13：

SEQIDNO:13

4-N{α}-(3-甲基-戊酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC02v01：7.76分钟(98％)

保留时间UPLC16v01：9.2分钟(93.2％)

MW计算值：4908.63g/mol

LCMS：未测定

实施例14：

SEQIDNO:14

4-N{α}-(3-甲基-戊酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC02v01：6.96分钟(99％)

保留时间UPLC07v01：5.04分钟(89％)

保留时间UPLC16v01：13.01分钟(89.6％)

MW计算值：4930.65g/mol

LCMS2：((M/1)+1)4931.6；((M/3)+3)1644.5；((M/4)+4)1233.4

实施例15：

SEQIDNO:15

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC30v01：3.37分钟(91.7％)

保留时间UPLC16v01：12.18分钟(91.35％)

MW计算值：5045.7g/mol

MALDI(实测值)：5045g/mol

实施例16：

SEQIDNO:16

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC30v01：3.43分钟(94.5％)

保留时间UPLC16v01：12.39分钟(90.24％)

MW计算值：4916.6g/mol

MALDI(实测值)：4915g/mol

实施例17：

SEQIDNO:17

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)

保留时间UPLC30v01：3.50分钟(94％)

保留时间UPLC17v01：8.56(86.3％)

MW计算值：4930.62g/mol

MALDI-MS(实测值)：4929.8g/mol

实施例18：

SEQIDNO:18

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC16v01：12.23分钟(95.2％)

MW计算值：4944.6g/mol

分子量实测值4945.34

LCMS2：M((/4)+4)1237.20

实施例19：

SEQIDNO:19

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC02v01：7.69分钟(96.7％)

保留时间UPLC17v01：9.50分钟(92.5％)

MW计算值：4922.62g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1231.7.0((M/4)+4)；985.3((M/5+5)；821.3((M/6+6)

实施例20：

SEQIDNO:20

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(14-磺基十四碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01:3.32分钟(90.4％)

保留时间HPLC方法UPLC60：17.1分钟(85.2％)

MW计算值：4916.48g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1229.9((M/4)+4)；984.33((M/5+5)

实施例21：

SEQIDNO:21

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-羧基-十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC31v01：13.0分钟(97.4％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：3.3分钟(95.8％)

MW计算值：4908.6g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1637.20((M/3)+3)；1227.91((M/4)+4)；982.52((M/5+5)

实施例22：

SEQIDNO:22:

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(14-羧基-四碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01:3.8分钟(97％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：10.7分钟(100％)

MW计算值：4880.43g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1627.64((M/3)+3)；1220.98((M/4)+4)；977.19((M/5+5)

实施例23：

SEQIDNO:23:

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Ile28,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC2：6.8分钟(100％)

保留时间HPLC方法UPLC17：8.4分钟(91.8％)

MW计算值：4944.53g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1648.2((M/3)+3)；1236.2((M/4)+4)；988.7((M/5+5)

实施例24：

SEQIDNO:24

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC26.76分钟(100％):

保留时间HPLC方法UPLC178.4分钟(91.7％)

MW计算值：5089.69g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1696.8((M/3)+3)；1272.5((M/4)+4)；1017.7((M/5+5)

实施例25：

SEQIDNO:25

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：

保留时间HPLC方法UPLC16v01：

MW计算值：5234.84g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1745((M/3)+3)；1308.7((M/4)+4)；1046.7((M/5+5)

实施例26：

SEQIDNO:26

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC2：6.7分钟(100％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：8.5分钟(88.9％)

MW计算值：5380.00g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1793((M/3)+3)；1344.9((M/4)+4)；1075.8((M/5+5)

实施例27：

SEQIDNO:27

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.69分钟(93.2％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：12.21分钟(84.6％)

MW计算值：4956.59.g/mol

MW(实测值)：4957.4g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1653.23((M/3)+3)；1240.19((M/4)+4)；992.36((M/5+5)

实施例28：

SEQIDNO:28

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]-乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.66分钟(92.4％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：12.36分钟(65.6％)

MW计算值：5258.96g/mol

MW(实测值)：5258.96g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1753.96((M/3)+3)；1315.80((M/4)+4)；1052.80((M/5+5)

实施例29：

SEQIDNO:29

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[4-[3-[2-[2-[3-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]丙氧基]-乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]-乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]氨基]丙氧基]乙氧基]乙氧基]丙基氨基]-4-氧代丁酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.68分钟(94.5％)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：11.89分钟(85.8％)

MW计算值：5561.32g/mol

MW(实测值)：5562.1g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1391.31((M/4)+4)；1113.26((M/5+5)

实施例30：

SEQIDNO:30

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[(2S)-2-氨基-6-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-氨基]己酰基]]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：11.8分钟(93.29％)

MW计算值：4927.55g/mol

MW(实测值)：4928.36g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1232.92((M/4)+4)；986.54((M/5+5)

实施例31：

SEQIDNO:31

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]-乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC31v01：3.21分钟(95.8％)

保留时间HPLC方法UPLC61v01：12.36分钟(85.9％)

MW计算值：4894.46g/mol

MW(实测值)：4894.56g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1632.52((M/3)+3)；1224.64((M/4+4)

实施例32：

SEQIDNO:32

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Val3,Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(3-36)

保留时间HPLC方法UPLC16v01：12.83分钟(88.6％)

MW计算值：4859.55g/mol

MW(实测值)：4960.21g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1240-64((M/4)+4)；992.91((M/5+5)

实施例33：

SEQIDNO:33

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,D-Asp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.82分钟(95.3％)

保留时间HPLC方法UPLC17v01：9.07分钟(90.5％)

MW计算值：4944.53g/mol

MW(实测值)：4944.60g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1237.15((M/4)+4)；989.68((M/5+5)

实施例34：

SEQIDNO:34

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：1.87分钟(89.0％)

保留时间HPLC方法UPLC17v01：8.65分钟(74.3％)

MW计算值：4944.53g/mol

MW(实测值)：4943.36g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1236.84((M/4)+4)；989.68((M/5+5)

实施例35：

SEQIDNO:35

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,D-isoAsp11,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间HPLC方法UPLC30v01：3.72分钟(98.1％)

保留时间HPLC方法UPLC61：12.78分钟(96.2％)

MW计算值：4944.53g/mol

实施例36：

SEQIDNO:36

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(4-36)

保留时间UPLC-AP-01：7.78分钟(96％)

MW计算值：4909.48g/mol

MW(实测值)：4909.8g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1637.6((M/3)+3)；1228.2((M/4)+4)；982.9((M/5+5)

实施例37：

SEQIDNO:37

7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(16-磺基十六碳酰基氨基)-丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30]hPYY(3-36)

保留时间UPLC-AP-01：6.51分钟(95.3％)

MW计算值：4960.7g/mol

MW(实测值)：4960.2g/mol

LCMS(LCMS1)：m/z：1654.46((M/3)+3)；1241.1((M/4)+4)；992.7((M/5+5)

实施例38：

SEQIDNO:38

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-[Arg4,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)

保留时间UPLC16：13.18分钟(62.5％)

保留时间UPLC29：3.80分钟(92.3％)

MW计算值：4149.6g/mol

MW(实测值)：4149.9.2g/mol

LCMS(LCMSv27)：m/z：1384.04((M/3)+3)；1038.28((M/4)+4)；830.83((M/5+5)

药理学方法

本发明的PYY肽衍生物或其类似物作为药物活性剂在减少增重和治疗哺乳动物(如人类)的肥胖症方面以及在治疗糖尿病方面的效用可通过在常规试验和在下文描述的体外及体内试验中的激动剂的活性来证明。

这样的试验还提供了可将本发明的PYY化合物的活性与已知化合物的活性相比较的方法。

实施例39：PYY化合物的受体效力

本实施例的目的在于体外测试PYY化合物的活性或效力。在全细胞试验中，体外效力分别是人Y1、Y2、Y4和Y5受体亚型的活化的量度。

采用如下描述的Actone功能效力试验来确定实施例3-38的PYY化合物的效力。hPYY(3-36)(实施例2，SEQIDNO:2)作为参考包括在内。

Actone功能效力试验

神经肽Y(NPY)受体是G_i-偶联的七跨膜受体，其主要通过抑制腺苷酸环化酶活性(导致由ATP产生的cAMP减少)经由cAMP依赖性途径发信号。Actone试验基于改进的钙通道，该通道具有对cAMP的选择性结合，从而导致细胞钙流入，该细胞钙流入通过钙反应性染料来检测。为了测量由NPY受体活化导致的降低的cAMP水平，添加β1/β2-肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素来激活腺苷酸环化酶并提高细胞中的cAMP水平。反映由NPY受体活化导致的cAMP水平降低的细胞钙浓度降低通过来自该钙敏感性染料的荧光的减少进行检测。

将表达cAMP敏感性钙通道，以及人NPY受体Y1、Y2、Y4或Y5中的一种的HEK-293细胞(CodexBiosolution,Gaithersburg,MD,USA)以14,000个细胞/孔的密度接种到用聚赖氨酸包被的384孔板中体积为25μl的DMEM培养基中，该DMEM培养基含有10％胎牛血清(FCS)、1％青霉素-链霉素、250μg/ml氨基糖苷抗生素G418和1μg/ml氨基核苷抗生素嘌呤霉素。将细胞在+37℃下在5％CO₂、加湿环境中温育过夜，随后添加25μl钙染料缓冲液，该钙染料缓冲液含有：溶解于100ml缓冲液中的1小瓶Calcium5染料(MolecularDevices,Sunnyvale,CA,USA)，该缓冲液含有20mMHepes、0.1％卵白蛋白、0.005％吐温20、1.5mM丙磺舒、250μMPDE-抑制剂4-(3-丁氧基-4-甲氧基苄基)咪唑烷-2-酮和8mMCaCl₂，并将pH调节至7.40。将细胞与钙染料缓冲液一起温育1小时，随后放置在其中液体处理系统同时添加了PYY化合物(1000-1nM最终浓度)和异丙肾上腺素(0.05μM最终浓度)的FLIPRTetra系统(MolecularDevices)中，随后紧接着以30秒间隔持续360秒的荧光信号测量(Ex540/Em590)。所有测量均一式两份进行，并且通过采用GraphPadPrismv5.02(GraphPad软件,LaJolla,CA,USA)对S形剂量响应曲线的非线性回归分析来计算EC₅₀值。EC₅₀值在表1中示出。

表1.体外效力

本发明的PYY化合物均显示出优良的Y2效力，而对受体Y1、Y4和Y5的效力大大降低。

实施例40：Y1、Y2、Y4和Y5受体亚型结合

本实施例的目的在于测试PYY化合物分别与Y1、Y2、Y4和Y5受体亚型的体外结合。受体结合亲和力是化合物分别对人Y1、Y2、Y4和Y5受体亚型的亲和力的量度。

实施例3-38的PYY化合物的体外结合在如下所述的闪烁迫近分析(SPA)中确定。hPYY(3-36)(实施例2，SEQIDNO:2)作为参考包括在内。

闪烁迫近分析(SPA)

表达NPY受体的细胞系。所有细胞在+37℃下在具有5％CO₂的加湿气氛下培养。可诱导表达人Y1受体的BHK-482-8细胞(P25929,NPY1R_HUMAN,Uniprot)在含10％胎牛血清(FBS)、1％青霉素-链霉素(P/S)、1mg/mlG418抗生素、1mg/ml潮霉素B抗生素和1％非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)中培养。在收获细胞之前24小时添加1mM异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)以诱导NPY-Y1受体表达。稳定表达人Y2受体的CHO-K1细胞(P49146,NPY2R_HUMAN,Uniprot)在含10％FBS、1％P/S、150μg/ml潮霉素B和10μg/ml嘌呤霉素抗生素的DMEMF-12中培养。稳定表达人Y4受体的CHO-K1细胞(P50391,NPY4R_HUMAN,Uniprot)在含10％FBS、1％P/S、10μg/ml嘌呤霉素的DMEMF-12中培养。稳定表达人Y5受体的HEK-293细胞(Q15761,NPY5R_HUMAN,Uniprot)在含10％FBS、1％青霉素-链霉素、250μg/mlG418和1μg/ml嘌呤霉素的DMEMF-12培养基中培养。

膜制备。将培养的细胞通过刮擦机械地分离，并在冰冷的PBS(137mMNaCl、2.7mMKCl、4.3mMNa₂HPO₄、1.47mMKH₂PO₄，pH调节至7.4)中洗涤并转移至管中，并在+4℃下以1000g离心5分钟。将沉淀物重悬于冰冷的匀浆化缓冲液中；Y1：20mMHepes、10mMEDTA，具有2片完全无EDTA的蛋白酶抑制剂混合物片/50ml(Roche,Mannheim,Germany)，pH7.4；Y2、Y4：20mMHepes、5mMMgCl₂、1mg/mlBacitracin，pH7.1；Y5：10mMNaCl、20mMHepes、0.22mMKH₂PO₄、1.26mMCaCl₂、0.81mMMgSO₄，pH7.4，随后采用组织匀浆器在中速下匀浆化30秒。采用超速离心机将匀浆在+4℃下以35000g离心10分钟，弃去上清液，并添加新鲜的匀浆化缓冲液。沉淀物的匀浆化总共重复三次。将最终的沉淀物重悬于数毫升的匀浆化缓冲液中，并采用Bradford法确定蛋白质浓度，并在酶标仪中在595nm处进行测量。将蛋白质浓度调节至1mg/ml并转移至冻存管(cryotube)中，并在-80℃下储存。在冷冻前向Y5膜中添加250mM蔗糖。

分析。在白色96孔板中以每孔200μl的总体积进行人Y受体SPA结合分析。将含有闪烁液(PerkinElmer,Waltham,MA,USA)的涂覆有麦胚凝集素的珠子在结合缓冲液——Y1、Y2：50mMHepes、1mMCaCl₂、5mMMgCl₂、0.02％吐温20、0.25％卵白蛋白，pH7.4；Y4、Y5：20mMHepes、10mMNaCl、0.22mMKH₂PO₄、1.26mMCaCl₂、0.81mMMgSO₄、0.1％杆菌肽和0.25％卵白蛋白，pH7.4——中重建，并与膜制剂混合，以得到1mg珠子和3μgY1膜/孔、3μgY2膜/孔、1μgY4膜/孔或20μgY5膜/孔的最终浓度。添加每孔50000cpm的放射性配体人[¹²⁵I]-PYY，这对应于在Y1、Y2和Y5结合分析中的100pM的浓度。在Y4结合分析中使用对应于100pM浓度的每孔50000cpm的放射性配体人[¹²⁵I]-胰多肽(PP)。

将冷冻干燥的类似物溶于80％二甲基亚砜(DMSO)、19％H₂O和1％乙酸(CH₃COOH)中，以产生2000μM(Y1、Y4和Y5)和200μM(Y2)的储备溶液，并在结合缓冲液中进行系列稀释(1:10)，直到最终浓度在Y1、Y4和Y5分析中为10000nM到1pM而在Y2分析中为1000nM到0.1pM。将板密封并在设置为400rpm的平板摇床上在+25℃下温育2小时，之后在微板闪烁发光计数器上读取发光之前将板在1500rpm下离心10分钟。在读取前，将Y1SPA板在室温下静置16小时。放射性配体的置换通过发光的减少来测量，并且通过对S形剂量-响应曲线的非线性回归分析来计算IC₅₀值。通过Cheng-Prusoff等式(Ki＝IC50/(1+[L]/Kd)获得结合亲和力的Ki值，该等式包括受体特异性Kd值(Y1＝0.556nM；Y2＝0.275nM；Y4＝0.111nM；Y5＝0.345nM)、放射性配体浓度和IC₅₀值。

表2：Y受体结合亲和力

本发明的PYY化合物均显示出优良的Y2结合，但对受体Y1、Y4和Y5的结合亲和力大大降低。

实施例41：在小型猪中的药代动力学研究

本研究的目的在于确定PYY化合物在向小型猪静脉内施用后的体内半衰期，即，其在体内的时间的延长，由此其作用时间的延长。这在药代动力学(PK)研究中完成，在该研究中确定所讨论的衍生物的终末半衰期。所谓终末半衰期通常指在初始分布期之后测量的，使某个血浆浓度减半所需要的时间。

关于在静脉内施用后在小型猪中的药代动力学评价的体内研究。

动物。购自EllegaardMinipigs,Denmark的15-25kg的雌性小型猪。将动物安置在AnimalUnit,NovoNordiskA/S中，并根据正常程序在AnimalUnit中进行饲养和处理。

在最少2周的适应后，将两个永久的中心静脉导管植入每只动物的尾腔静脉。手术后，在药代动力学实验期间动物均在其正常的单独栏圈中。

体重。每周对动物称重。在给药前使动物在早上禁食，但可自由饮水；在给药期间供应食物。

肽的施用和给药方案。通过中心短导管给予静脉内注射液，在施用后用最少10ml的无菌生理盐水冲洗该导管。测试物质在0.05ml/kg体积中以15nmol/kg给药，n＝3。缓冲液：50mM磷酸钠、70mM氯化钠、0.05％吐温80，pH7.4，或20mMHEPES、2.2％甘油、0.05％聚山梨酯80，pH6.5。

血液样品和分析。根据以下时间表通过中心导管取得血液样品：给药前，5、15、30、45min，1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h、24h、48h、72h、96h、120h、168h、192h、216h、240h、264h和288h。在第1天，将导管联接至延伸管，该延伸管将在第1天结束时除去。通过该导管取得样品(0.8ml)。将血液收集在含有EDTA缓冲液(8mM)和50μlVal-Pyr缓冲液(添加含有溶解于50ml抑肽酶(Trasylol)中的3.097gK3EDTA和0.5ml20mMVal-Pyr的稳定化缓冲液。将pH调节至7.4)的试管中。在取得每个血液样品后，用最少5ml的无菌0.9％NaCl和10IE/ml肝素冲洗导管。要求使用无菌技术以避免导管中细菌生长，细菌生长会增加在导管中形成凝块的风险。将样品保持在湿冰上直到离心(10min，4℃，1942g)。之后，将血浆(最少200μl)立即转移到Micronic管中并保持在-20℃下直到分析。通过如下所述的LC/MS对血浆样品进行分析。

数据和结果。使用Phoenix(PharsightInc.,MountainView,CA,USA)，通过非房室药代动力学分析对血浆浓度-时间曲线进行分析。采用来自每只动物的单独的浓度-时间值进行计算。

样品分析

血浆样品的定量测定。通过与带有后续质谱检测的液相色谱法耦合的湍流色谱法(TFC/LC/MS)对血浆中的测试物质进行测定。该方法的选择性使得不同化合物能在一个样品中定量，例如，每只动物四种化合物的盒式给药(cassettedosing)。采用作为量的函数的峰面积计算测试物质在未知样品中的浓度。通过回归分析构建基于掺有分析物的血浆样品的校准图。该测定的典型动态范围为1-2,000nmol/l。通过在三个浓度水平下一式两份共同测定质量控制(QC)样品来确保该方法的性能。分析物的储备溶液和工作溶液在血浆中制备并在37℃温育1小时。

样品制备。向40.0μlEDTA-血浆中添加160μl50％甲醇、1％甲酸，然后涡旋并在4℃下以14300rpm(16457g)离心20分钟。将上清液转移至96孔板(该板已经在37℃下与0.4％BSA预温育了半小时)。注射体积为25μl。

为净化样品，使用来自ThermoScientific,Franklin,MA,USA的TurboFlowCyclone柱(0.5x50mm)，并在来自Phenomenex,Torrance,CA,USA的OnyxC18柱(2.0x50mm)上进行LC分离。洗脱液为甲醇、乙腈、Milli-Q水和甲酸的等度和梯度组合。通过以正模式电离运行的质谱法进行选择性检测。

数据处理。使用Phoenix(PharsightInc.,MountainView,CA,USA)，通过非房室药代动力学分析对血浆浓度-时间曲线进行分析。采用来自每只动物的单独的浓度-时间值进行计算。

表3：半衰期(t¹/₂)

相比于hPYY(3-36)的半衰期，测试的本发明PYY化合物具有非常长的半衰期。

实施例42：在db/db小鼠中的药效学研究

为了确定在糖尿病情况下PYY化合物对血糖和食物摄取的体内影响，如下所述在肥胖的糖尿病小鼠模型(db/db小鼠)中测试该化合物。

将雄性db/db小鼠安置在正常的昼夜节律下(下午6点到上午6点的暗周期)，并提供自由获取的Altromin饮食。在11-13周龄时，针对血糖以及体重对小鼠进行匹配，并将小鼠分成各9只小鼠的匹配组，且每个笼子容纳3只。在下午4点(时间＝0)对小鼠皮下给予指定剂量、体积为2.5ml/kg的指定化合物或载体(50mMNa₂HPO₄，pH7.4，70mMNaCl，0.05％吐温80)，并且在一些实验中，在时间＝23小时时给予第二次注射。在注射后指定的时间点，例如，在注射后4小时(4h)、16小时(16h)、23小时(23h)和40小时(40h)测量血糖和食物摄取。从尾静脉取得用于血糖测量的血液样品，将样品放入5μl肝素涂覆的毛细管中，将该毛细管放置在具有体系溶液(250μl)的eppendorf管中。立即在仪器上分析样品。

血糖(BG)测量值报告为相对于治疗前载体校正的％BG的平均值±SEM，并如下计算：

100-[％BG(载体，平均值)-％BG]，其中，

％BG＝100*[BG(时间＝t)/BG(治疗前)]

且％BG(载体，平均值)＝相对于处理前的载体，在时间＝t时载体组的％BG值的平均值。

食物摄取报告为对于指定的时间间隔，每个笼子的食物摄取与载体组的平均食物摄取的百分比的平均值±SEM。

表4：在db/db小鼠中对血糖的影响。血糖(BG)测量值报告为相对于治疗前，载体校正的％BG的平均值±SEM。

表5：在db/db小鼠中对食物摄取的影响。食物摄取报告为对于指定的时间间隔，每个笼子的食物摄取与载体组的平均食物摄取的百分比的平均值±SEM。

这些数据强有力地支持了本发明的PYY化合物的血糖降低效果和对食物摄取的抑制。

实施例43：物理稳定性

本研究的目的在于测定存在和不存在苯酚时肽制剂的稳定性。作为肽制剂的稳定性的量度，通过体积排阻HPLC(SE-HPLC)对作为时间的函数的高分子量肽的形成(％HMWP)进行分析。

制剂：使类似物在pH8.2的30mM磷酸钠缓冲液、10mMNaCl中溶解至1mM。如果必要的话，用NaOH调节储备溶液的pH。将这些储备溶液在以上提到的缓冲液中或在相应的含苯酚的缓冲液中进一步稀释，得到具有如表6中所示的组成的最终制剂。

温育：将样品分至具有紧螺帽的UPLC小瓶中，并在37℃和5℃下储存温育，将37℃下的样品移至5℃下，或在1、2和4周后进行分析。5℃样品用作起始值。

分析方法：使用50℃柱温的WatersInsulinHMWPSEC柱(7.8x300mm)，通过分离SE-HPLC方法分析HMWP含量。采用500mMNaCl、10mMNaH₂PO₄、5mMH₃PO₄、50％(v/v)2-丙醇的洗脱液，通过等度洗脱以0.5ml/min的流速对样品进行洗脱。在215nm处进行检测。

从表6中可见，添加N末端取代基如3-甲基-丁酰基减少了聚集体(高分子量蛋白质-HMWP)的形成。将在位置4的赖氨酸改变为精氨酸也减少了聚集体的形成。将N末端取代基的添加和位置4的赖氨酸改变为精氨酸相组合显著减少了聚集体的形成。

表6.HMWP形成

实施例44：在雌性LandraceYorkshireDuroc(LYD)猪中，PYY化合物和GLP-1激动剂联合治疗的药效作用

为了在猪中确定PYY化合物和GLP-1激动剂联合治疗对食物摄取的体内作用，如下所述测量单独的GLP-1激动剂利拉鲁肽或利拉鲁肽与实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)的组合的作用。

材料与方法

WO98/08871公开了利拉鲁肽(实施例37)，包括利拉鲁肽的制备方法。

在约3个月龄、重30-43kg的雌性LandraceYorkshireDuroc(LYD)猪(Askelygaard,Roskilde,Denmark)(n＝4)中研究对食物摄取的影响。在研究前使动物适应1-2周，并在适应过程中和实验期间均始终用猪食(Svine5,Brogaarden,Denmark)自由采食喂养。在实验期间，将动物安置在单独的栏圈中，以使用系统Mpigwin(EllegaardSystems,Faaborg,Denmark)测量单独的食物摄取。收集食物的任何溢出(食物废弃物)并称重，并将测得的食物摄取用该量进行手动校正(校正的食物摄取)。

对实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)进行测试，其以2种不同的剂量(25和50nmol/kg)与3nmol/kg利拉鲁肽组合单次皮下施用。利拉鲁肽从第-4天至第3天每日一次皮下给药(前2天为对应于2nmol/kg的0.017mL/kg，随后剩余6天为对应于3nmol/kg的0.025mL/kg)。PYY类似物在第0天早上给药一次(剂量体积为0.025mL/kg)。PYY类似物在以下缓冲液(还充当PYY注射液的载体)中配制：50mM磷酸钠，70mM氯化钠，0.05％吐温80，pH7.4。利拉鲁肽在以下缓冲液(还充当每日利拉鲁肽注射液的载体)中配制：8mM磷酸盐，184mM丙二醇，58mM苯酚，pH8.15。

计算第0-4天单独食物摄取相对于平均载体食物摄取的百分比，并用双因素ANOVA、随后用Bonferroni事后检验进行统计学评价。计算从第0天至第4天的体重变化，并用单因素ANOVA、随后用Bonferroni事后检验进行统计学评价。

表7.在成长中的幼年LYD猪中，载体、利拉鲁肽3nmol/kg、PYY类似物25nmol/kg与利拉鲁肽3nmol/kg组合以及PYY类似物50nmol/kg与利拉鲁肽3nmol/kg组合给药后第0-1天至第3-4天对载体的食物摄取百分比。在第-4天至第3天的早上每日一次进行利拉鲁肽的给药，而在第0天的早上以单次皮下给药给予实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)。N＝4。数据以平均值表示。双因素ANOVA之后进行Bonferroni事后检验。

表8.在成长中的幼年LYD猪中，载体、利拉鲁肽3nmol/kg、实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)25nmol/kg与利拉鲁肽3nmol/kg组合以及实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)50nmol/kg与利拉鲁肽3nmol/kg组合给药后第0天至第4天的体重变化。在第-4天至第3天的早上每日一次进行利拉鲁肽的给药，而在第0天的早上以单次皮下给药给予实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)。N＝4。数据以平均值表示。单因素ANOVA之后进行Bonferroni事后检验。

总之，这些数据有力地支持了PYY类似物与GLP-1类似物组合的抑制食物摄取和体重减轻作用的附加益处。

实施例45.在db/db小鼠中PYY类似物和GLP-1类似物联合治疗的药效作用

为了测定PYY化合物和GLP-1激动剂联合治疗对血糖和体重的体内作用，如下所述在肥胖的糖尿病小鼠模型(db/db小鼠)中测量单独或组合的PYY化合物、利拉鲁肽的作用。

使用雄性db/db小鼠(9-10周龄)来测量用不同剂量的PYY衍生的类似物——实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)、利拉鲁肽(Lira)或两者(组合)治疗后对血糖和体重的影响。研究前，将小鼠随机分组，各组针对体重、非空腹血糖和HbA1c进行匹配。根据表9中概述的给药时间表研究各组之间血糖的差异。在首次给药前第-9至0天(数据未示出)，使用SEQIDNO:18和利拉鲁肽的增量(Up-titration)来预防突发性食欲丧失。

表9.给药时间表概述

简而言之，在每天11:00和17:00点皮下施用(2.5ml/kg)化合物。在50mM磷酸盐、70mM氯化钠、0.05％聚山梨酯80缓冲液(pH＝8.0)中给予实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)。在50mM磷酸盐、70mM氯化钠、0.05％聚山梨酯80缓冲液(pH＝7.4)中给予利拉鲁肽。以每一剂量治疗3-5天后，基于葡萄糖氧化酶法，使用葡萄糖分析仪(Biosen5040)在单一时间点(上午9点)测量血糖。在同一天测量体重。结果示于以下表10中。

表10.单独或组合的不同剂量的实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)或利拉鲁肽对血糖和体重的影响。数据以平均值表示。通过单因素ANOVA和Tukey多重比较检验分析差异。样品，n＝9。

实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)和利拉鲁肽的组合的血糖降低作用显著大于单独的任一化合物所产生的益处。对于所测试的大多数剂量，在用该组合治疗的小鼠中对血糖水平进行归一化。重要的是，没有观察到低血糖的情况。实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)和利拉鲁肽的组合的协同效应对于体重的减轻也是明显的。总之，实施例18的PYY化合物(SEQIDNO:18)和利拉鲁肽的组合协同降低了静息血糖(restingbloodglucose)和体重，从而极大地降低了达到与单一治疗所产生的益处相同或类似的益处所必需的药物量。

虽然本文中已阐明并描述了本发明的某些特征，但本领域普通技术人员现在将会想到许多修改、替换、变化和等同变换。因此，应理解，所附权利要求书旨在涵盖所有这些落入本发明的真实范围内的修改和变化。

Claims

1.PYY化合物或其药学上可接受的盐，该PYY化合物包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置30相对应的位置处的色氨酸以及相比于hPYY(3-36)的最多10个氨基酸修饰。

2.根据权利要求1所述的PYY化合物，其中该PYY化合物在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置35相对应的位置处包含N(α)-甲基-L-精氨酸。

3.根据前述权利要求中任一项所述的PYY化合物，其中与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置1-3相对应的位置缺失，并且其中该PYY化合物进一步包含N末端取代基，其中该N末端取代基是包含至多12个碳原子的烷氧基基团。

4.根据前述权利要求中任一项所述的PYY化合物，其中该PYY化合物包含在与hPYY(1-36)(SEQIDNO:1)的位置7相对应的位置处的赖氨酸，以及连接至所述赖氨酸的ε氨基基团的修饰基团，其中所述修饰基团被定义为A-B-C-。

5.根据权利要求4所述的PYY化合物，其中A-选自

6.根据权利要求4-5中任一项所述的PYY化合物，其中B-选自

7.根据权利要求4-6中任一项所述的PYY化合物，其中-C-为

8.根据前述权利要求中任一项所述的PYY化合物，其选自以下化合物：

[Trp30]hPYY(3-36)(SEQIDNO:3)

[Trp30,NMeArg35]hPYY3-36(SEQIDNO:4)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-7-N{ε}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(14-羧基-四碳酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]]氨基]乙氧基]-乙氧基]乙酰基]-[Arg4,Lys7,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:22)

4-N{α}-(3-甲基丁酰基)-[Arg4,Gln18,Trp30,NMeArg35]hPYY(4-36)(SEQIDNO:38)

9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的PYY化合物和至少一种药学上可接受的辅料。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的PYY化合物，其用作药物。

11.根据权利要求1-8中任一项所述的PYY化合物，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展和/或肥胖症，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，例如骨关节炎和/或尿失禁。

12.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的PYY化合物、GLP-1激动剂和至少一种药学上可接受的辅料。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其中所述GLP-1激动剂为利拉鲁肽或索马鲁肽，并且其中所述PYY化合物为SEQIDNO:18。

14.根据权利要求12-13中任一项所述的药物组合物，其用作药物。

15.根据权利要求12-13中任一项所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防所有形式的糖尿病及相关疾病，如进食障碍、糖尿病并发症、心血管疾病和/或睡眠呼吸暂停；和/或用于改善脂质参数、改善β-细胞功能，和/或用于延缓或阻止糖尿病进展和/或进食障碍如肥胖症，例如通过减少食物摄取、减轻体重、抑制食欲、诱发饱腹感；治疗或预防暴食症、神经性贪食症和/或由抗精神病药物或类固醇给药而引起的肥胖症；减少胃运动；延缓胃排空；增加身体活动；和/或预防和/或治疗肥胖症的共病，例如骨关节炎和/或尿失禁。