TWI596110B

TWI596110B - 新穎升糖素類似物

Info

Publication number: TWI596110B
Application number: TW101134663A
Authority: TW
Inventors: 賈斯佩Ｆ勞; 湯瑪斯克魯斯; 漢寧托傑森; 烏瑞奇森司法斯; 彼得克瑞斯頓尼爾森
Original assignee: 諾佛儂迪克股份有限公司
Priority date: 2011-09-23
Filing date: 2012-09-21
Publication date: 2017-08-21
Also published as: MY167234A; KR20140070612A; JP6352806B2; JP2018021081A; US20160347812A1; US20130079278A1; MX2014003312A; US9486506B2; AU2012311484B2; AU2012311484A1; ZA201401603B; CA2849673A1; IL231199A0; CN104093735B; RU2014114434A; WO2013041678A1; RU2610175C2; RU2017101333A; AR088161A1; US20150182594A1

Description

新穎升糖素類似物

本發明係關於新穎升糖素肽類似物、該等肽在治療中之用途、包含向患者投予該等肽之治療方法及該等肽在製造醫藥品中之用途。

精確控制血糖含量對於人類以及其他哺乳動物而言極為重要。亦充分確定兩種激素胰島素與升糖素對於維持正確血糖含量係重要的。胰島素在肝臟及周圍組織中藉由經周圍吸收之葡萄糖增加且自肝臟輸出之葡萄糖減少降低血糖含量來起作用，而升糖素藉由經葡萄糖新生及肝糖病之上調作用增加血糖含量而主要作用於胰腺及肝臟。亦已報導升糖素增加脂肪溶解、誘發酮尿症且減少血漿中之血漿三酸甘油酯含量[Schade及Eaton,Acta Diabetologica,1977,14,62]。

升糖素係針對低血糖症之防禦機制的重要部分且投予低劑量之升糖素可預防胰島素誘發性低血糖症或改良自低血糖症恢復之能力。升糖素激動作用亦已展示對於脂質代謝、能量消耗及食物攝入發揮作用[Habegger等人，Nature Reviews Endocrinology 2010,6,689-697]。

大量罹患糖尿病(詳言之為2型糖尿病)之人超重或肥胖。肥胖在嚴重且甚至致命之常見疾病中表示高風險因素，且對於大多數糖尿病患者而言，高度需要其治療不引起重量增加。

此項技術中已知若干揭示不同升糖素基類似物及GLP-1/升糖素受體協同激動劑的專利申請案，諸如專利WO2008/086086、WO2008/101017、WO2007/056362、WO2008/152403及WO96/29342。所揭示之其他升糖素類似物在天然人類升糖素(例如WO96/29342)之特定位置經聚乙二醇化(例如WO2007/056362)或醯化。例如在專利申請案US7314859中已揭示用於預防低血糖症之升糖素肽。

升糖素由於具有約5 min之半衰期而自循環快速清除，因此在醫藥學中之有效用途有限。治療劑之高度清除率在需要長時間維持其高血糖含量之情況下係不方便的，因為隨後將有必要進行重複投藥。在某些情況下，可能藉由施用適合之醫藥組合物來影響肽之釋放概況，但此方法具有各種不足且通常不適用。

升糖素通常以凍乾配方形式可用，具有短的作用持續時間，即使升糖素含量為遠高於內源性升糖素含量之峰值含量，仍侷限於一小時以內。因此需要經化學改質之升糖素化合物從而以連續含量傳遞，使得可達成較長之生物半衰期，亦即具有延長作用概況之改質升糖素肽。

升糖素在溶解於水溶液中時之物理以及化學穩定性較差。視肽之純度、鹽濃度、pH及溫度而定，升糖素溶液在數小時或數天內形成凝膠及原纖維(Beaven等人，European J.Biochem.1969,11,37-42)。升糖素含有可導致脫醯胺作用、裂解、天冬醯亞胺形成及異構化作用之若干不穩定胺基酸或胺基酸序列。另外，人類升糖素之溶解性在3.5-9.5 之pH範圍內極差。

本發明係關於該等肽在治療中之用途、包含向患者投予該等肽之治療方法及該等肽在製造用以治療糖尿病、肥胖及相關疾病與病況之醫藥品中的用途。

本發明者已令人驚訝地發現，升糖素肽之胺基酸位置3、15及/或16之一或多個取代及該升糖素肽之位置24連接包含三個或三個以上帶負電部分之取代基(其中該等帶負電部分之一位於親脂性部分遠端)導致升糖素激動劑穩定性得以改良。

本發明提供具有改良之藥物動力學性質且在中性pH下具有改良之物理及化學穩定性的新穎改質升糖素肽。

在第一個具體實例(具體實例1)中，本發明係關於一種升糖素肽，其包含：SEQ ID 1，其中X₂₄表示Lys，其中存在至少一種以下取代：X₃為His、X₁₅為Glu或X₁₆為Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr，且該升糖素肽中存在至多六個額外胺基酸取代，及包含一個親脂性部分及三個或三個以上帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分之一位於該親脂性部分遠端且其中該取代基於位置24連接於Lys之側鏈氮，或其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、酸或前藥。

在另一個具體實例中，本發明亦提供升糖素肽之酯形式。

本發明此外係關於本發明之化合物在治療中之用途、包含本發明化合物之醫藥組合物及本發明化合物在製造醫藥品中之用途。

本發明之肽除在生理學pH下之穩定醫藥組合物中提供該等改質升糖素肽以外，亦提供具有延長作用概況之新穎改質升糖素肽。本發明係關於具有改良之溶解性、針對凝膠及原纖維形成具有改良之物理穩定性、具有改良之化學穩定性及具有增加之半衰期的新穎升糖素類似物。

本發明者令人驚訝地發現，本發明之化合物展示針對凝膠及原纖維形成而言改良之物理穩定性、改良之化學穩定性及增加之半衰期，同時亦展示在中性pH或弱鹼性pH下改良之水溶解性。

在一個具體實例中，本發明係關於一種升糖素肽，其中X₁₆為Ile、Phe、Arg、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr。

本發明之其他具體實例為以下：

2.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含零個、一個、兩個、三個、四個、五個或六個額外胺基酸殘基取代。

3.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含零個額外胺基酸殘基取代。

4.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含一個額外胺基酸殘基取代。

5.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含兩個額外胺基酸殘基取代。

6.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含三個額外胺基酸殘基取代。

7.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含四個額外胺基酸殘基取代。

8.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含五個額外胺基酸殘基取代。

9.根據具體實例1之升糖素肽，其中該升糖素肽在該升糖素肽中包含六個額外胺基酸殘基取代。

10.根據具體實例1-2及4-9中任一項之升糖素肽，其中該等額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之以下胺基酸位置：X₉、X₁₀、X₁₂、X₁₇、X₂₀、X₂₁、X₂₇、X₂₈、X₂₉及/或X₃₀。

11.根據具體實例10之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之以下胺基酸位置：X₁₀、X₁₂、X₁₇、X₂₀、X₂₁、X₂₇、X₂₈及/或X₂₉。

12.根據具體實例11之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之以下胺基酸位置：X₁₂、X₁₇、X₂₀、X₂₁、X₂₇及/或X₂₈。

13.根據具體實例12之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之位置X₁₀、X₁₂、X₂₇及/或X₂₈。

14.根據具體實例13之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之位置X₁₂、X₂₇及/或X₂₈。

15.根據具體實例11之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之位置X₁₀、X₁₂、X₂₇及/或X₂₉。

16.根據具體實例15之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可位於該升糖素肽之位置X₁₂、X₂₇及/或X₂₉。

17.根據具體實例10-16中任一項之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可選自該升糖素肽之以下位置：X₉表示Glu；X₁₀表示Val；X₁₂表示Arg；X₁₇表示Lys；X₂₀表示Lys；X₂₁表示Glu；X₂₇表示Met(O)、Val、Leu、Ile、Ala或Glu；X₂₈表示Ser、Thr、Ala、Gln、Val、Leu、Ile、Arg、Lys、His、Asp、Gly或Glu；X₂₉表示Ser、Gln、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Arg、Lys、His、Asp或Glu，且X₃₀不存在或表示Pro。

18.根據具體實例17之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可選自該升糖素肽之以下位置：X₁₂為Arg，X₁₇為Lys，X₂₀為Lys，X₂₁為Glu，X₂₇為Leu，X₂₈為Ser、Ile或Thr。

19.根據具體實例17之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可選自該升糖素肽之以下位置：X₁₀為Val，X₂₁為Glu，X₂₇為Leu，X₂₈為Ser。

20.根據具體實例17之升糖素肽，其中X₉表示Glu。

21.根據具體實例19之升糖素肽，其中X₁₀表示Val。

22.根據具體實例18之升糖素肽，其中X₁₂表示Arg。

23.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Ala。

24.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Ile。

25.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Phe。

26.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Arg。

27.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Thr。

28.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Val。

29.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Leu。

30.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Glu。

31.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Trp。

32.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中X₁₆表示Tyr。

33.根據具體實例23-32中任一項之升糖素肽，其中X₁₇表示Lys。

34.根據具體實例33之升糖素肽，其中X₂₀表示Lys。

35.根據具體實例34之升糖素肽，其中X₂₁表示Glu。

36.根據具體實例35之升糖素肽，其中X₂₇表示Met(O)、Met(O2)、Val、Leu、Ile、Ala或Glu。

37.根據具體實例36之升糖素肽，其中X₂₇表示Leu或Glu。

38.根據具體實例36之升糖素肽，其中X₂₇表示Leu。

39.根據具體實例36之升糖素肽，其中X₂₇表示Glu。

40.根據具體實例33-39中任一項之升糖素肽，其中X₂₈表示Ser、Thr、Ala、Gln、Val、Leu、Ile、Arg、Lys、His、Asp、Gly或Glu。

41.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Ser、Thr、Gly或Ile。

42.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Ser、Thr或Ile。

43.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Ser。

44.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Thr。

45.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Gly。

46.根據具體實例40之升糖素肽，其中X₂₈表示Ile。

47.根據具體實例40-46中任一項之升糖素肽，其中X₂₉表示Ser、Gln、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Arg、Lys、His、Asp或Glu。

48.根據具體實例47之升糖素肽，其中X₂₉表示Val、Leu或Ile。

49.根據具體實例47-48中任一項之升糖素肽，其中X₂₉表示Val。

50.根據具體實例47-48中任一項之升糖素肽，其中X₂₉表示Leu。

51.根據具體實例47-48中任一項之升糖素肽，其中X₂₉表示Ile。

52.根據具體實例47-51中任一項之升糖素肽，其中X₃₀不存在或表示Pro。

53.根據具體實例52之升糖素肽，其中X₃₀不存在。

54.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基具有式II：Z₁-Z₂-Z₃-Z₄ [II]其中，Z₁表示根據式IIa或Iib之一的結構；其中式IIa中之n為6-20，式IIa與IIb中之符號^＊表示與Z₂中之氮的連接點；若Z₂不存在，則Z₁在符號^＊處連接至Z₃上之氮，且若Z₂及Z₃不存在，則Z₁在符號^＊處連接至Z₄上之氮；Z₂不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地具有立體化學L或D；其中Z₂經由^＊表示之碳原子連接至^＊表示之Z₃之氮；若Z₃不存在，則Z₂經由^＊表示之碳原子連接至^＊表示之Z₄之氮；且若Z₃及Z₄不存在，則Z₂經由^＊表示之碳連接至升糖素肽之位置24之Lys的ε氮；Z₃不存在或表示根據式IIm、IIn、IIo或IIp之一的結構； Z₃經由具有符號^＊之Z₃之碳連接至具有符號^＊之Z₄之氮，若Z₄不存在，則Z₃經由具有符號^＊之碳連接至升糖素肽之位置24之Lys的ε氮；Z₄不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地為L或D，其中Z₄經由具有符號^＊之碳連接至升糖素肽之位置24之Lys的ε氮，其限制條件為該取代基中存在Z₂或Z₄或Z₂與Z₄兩者。

55.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基具有式II：Z₁-Z₂-Z₃-Z₄- [II]其中Z₁表示根據式IIa或IIb之一的結構；其中式IIa中之n為6-20，Z₂不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地具有立體化學L或D；Z₃不存在或表示根據式IIm、IIn、IIo或IIp之一的結構； Z₄不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地具有立體化學L或D。

56.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中式IId-IIk之結構具有立體化學L。

57.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中式IId-IIk之結構具有立體化學D。

58.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中當Z₄存在時，該式II取代基之Z₂不存在。

59.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中當Z₂存在時，該式II取代基之Z₄不存在。

60.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIi、IIIj、IIIk、IIIl、IIIm、IIIn、IIIo、IIIp、IIIq、IIIr、IIIs、IIIt、IIIu、IIIv、IIIw、IIIx或IIIy之一的結構：

61.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIb、IIIi、IIIn、IIIp、IIIr、IIIs、IIIt、IIIu、IIIv、IIIw、IIIx或IIIy之一的結構：

62.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIp或IIIt之一的結構：

63.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₄不存在。

64.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₃及Z₄不存在。

65.根據具體實例1-62中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由帶負電部分來表示，諸如γ Glu、Glu及/或Asp。

66.根據具體實例65之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由至多十個該等帶負電部分來表示。

67.根據具體實例66之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由三個該等帶負電部分來表示。

68.根據具體實例66之升糖素肽，其中該取代基之Z₂ 及Z₄獨立地表由四個該等帶負電部分來表示。

69.根據具體實例66之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由五個該等帶負電部分來表示。

70.根據具體實例1-62及65-69中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Glu及/或γ Glu部分來表示。

71.根據具體實例70之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由γ Glu、γ Glu-Glu、γ Glu-Glu-Glu、γ Glu-Glu-Glu-Glu、γ Glu-Glu-Glu-Glu-Glu來表示。

72.根據具體實例1-62及65-69中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Glu及/或Asp部分來表示。

73.根據具體實例72之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由γ Glu及/或Asp部分來表示。

74.根據具體實例72-73中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Asp部分來表示。

75.根據具體實例74之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Asp、Asp-Asp、Asp-Asp-Asp或Asp-Asp-Asp-Asp來表示。

76.根據具體實例70或72中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Glu部分來表示。

77.根據具體實例76之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由Glu、Glu-Glu、Glu-Glu-Glu、Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Glu-Glu-Glu-Glu來表示。

78.根據具體實例70或73中任一項之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由γ Glu部分來表示。

79.根據具體實例78之升糖素肽，其中該取代基之Z₂及Z₄獨立地由γ Glu、γ Glu-γ Glu、γ Glu-γ Glu-γ Glu、γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ Glu、γ Glu-γ Glu-γ Glu-γ GIu-γ Glu來表示。

80.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基包含直鏈烷基或支鏈烷基。

81.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示根據式IIa之結構且式IIa中之n為12至18。

82.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示19-羧基十九醯基、17-羧基十七醯基、15-羧基十五醯基、13-羧基十三醯基或4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基。

83.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示19-羧基十九醯基、17-羧基十七醯基、15-羧基十五醯基或13-羧基十三醯基。

84.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基。

85.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示19-羧基十九醯基。

86.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示17-羧基十七醯基。

87.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁ 表示15-羧基十五醯基。

88.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中Z₁表示13-羧基十三醯基。

89.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基非共價結合至白蛋白。

90.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該取代基在生理學pH下帶負電荷。

本發明係關於具有改良之溶解性、針對凝膠與原纖維形成而改良之物理穩定性、改良之化學穩定性及增加之半衰期的新穎升糖素類似物。

本發明者令人驚訝地發現，本發明之化合物在中性pH或弱鹼性pH下顯示改良之水溶解性。可如檢定IX中所述量測不同pH值之溶解性。此外，本發明者亦已令人驚訝地發現，本發明之升糖素類似物針對在水溶液中形成凝膠及原纖維而言具有改良之穩定性。本發明化合物之所謂物理穩定性可藉由如檢定II中所述之方法來量測。本發明之升糖素類似物具有改良之化學穩定性，亦即類似物之化學降解減少。類似物之化學穩定性可如檢定X中所述來量測。

本發明者已發現，本發明之化合物展示改良之藥物動力學性質，亦即其具有延長之活體內半衰期。半衰期可在諸如大鼠(檢定VIII)或豬(檢定XI)之物種之藥物動力學研究中來測定。此外，本發明之化合物在皮下投藥時展示體重顯著減少。體重減輕可如檢定XII中所述在DIO小鼠體內來量測。

本發明化合物之延長作用意謂其發揮生物活性之時間段延長。

可藉由共同投予升糖素與已知抗糖尿病劑(諸如胰島素、GLP-1激動劑及GIP激動劑)來達成對1型及2型糖尿病之血糖含量的更佳控制。

在一個具體實例中，本發明之升糖素類似物可與GLP-1類似物或胰島素類似物共同調配，形成穩定醫藥組合物。

胰島素與升糖素組合療法與單獨之胰島素療法相比可為有利的。通常在血糖含量變低之餐後情形中，第一激素反應為胰島素產量降低。當血糖進一步下降時，第二線反應為產生升糖素-導致自肝臟輸出之葡萄糖增加。當糖尿病患者接受過高外源性劑量之胰島素時，增加升糖素之天然反應因存在外源性胰島素而受阻，這是因為胰島素對升糖素產生具有抑制作用。因此，輕度用藥過量之胰島素可導致低血糖症。目前，許多糖尿病患者因懼怕可能威脅生命之低血糖事件而傾向於寧願使用比最佳劑量略少量之胰島素。

本發明化合物在中性pH下可溶之事實使得可與胰島素共同調配，且產生更穩定之血糖含量且低血糖事件數量減少、以及與糖尿病相關之併發症風險降低。

本發明之其他具體實例為以下：

91.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽包含一個胺基酸殘基之C-末端延伸。

92.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為C-末端醯胺或C-末端羧酸。

93.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為C-末端醯胺。

94.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為C-末端羧酸。

95.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽係選自升糖素(1-29)、升糖素(1-29)-醯胺或其類似物。

96.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係選自以下組成之群：化學物1、化學物2、化學物3、化學物4、化學物5、化學物6、化學物7、化學物8、化學物9、化學物10、化學物11、化學物12、化學物13、化學物14、化學物15、化學物16、化學物17、化學物18、化學物19、化學物20、化學物21、化學物22、化學物23、化學物24、化學物25、化學物26、化學物27、化學物28、化學物29、化學物30、化學物31、化學物32、化學物33、化學物34、化學物35、化學物36、化學物37、化學物38、化學物39、化學物40、化學物41、化學物42、化學物43、化學物44、化學物45、化學物46、化學物47、化學物48、化學物49、化學物50、化學物51、化學物52、化學物53、化學物54、化學物55、化學物56、化學物57、化學物58、化學物59、化學物60、化學物61、化學物62、化學物63、化學物64、化學物65、化學物66、化學物67、化學物68、化學物69、化學物70、化學物71、化學物72、化學物73、化學物74、化學物75、化學物76、化學物77、化學物78、化學物79、化學物80、化學物81、化學物82、化學物83、化學物84、化學物85、化學物86、化學物87、化學物88、化學物89、化學物90、化學物91、化學物92、化學物93、化學物94、化學物95、化學物96及化學物97。

本發明之其他具體實例係關於與抗糖尿病劑或抗肥胖劑一起投予本發明之化合物。

97.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與升糖素樣肽1(GLP-1)化合物組合。

98.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與胰島素化合物組合。

99.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與腸促胰島素類似物(exendin)-4組合。

100.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其為雙腔、儲藏及/或微膠囊化配方。

101.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與升糖素樣肽1(GLP-1)化合物組合，用於製備用以治療糖尿病及/或肥胖之醫藥品。

102.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與胰島素化合物組合，用於製備用以治療糖尿病及/或肥胖之醫藥品。

103.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其係與腸促胰島素類似物-4組合，用於製備用以治療糖尿病及/或肥胖之醫藥品。

104.根據具體實例97-103中任一項之升糖素肽，其中該GLP-1化合物及該胰島素化合物分別由式G1-G4及G5來表示：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G1)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][去胺基His7、Glu22、Arg26、Arg34、Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G2)；N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G3)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G4)及N ε B29-十六烷二醯基-γ-Glu-(desB30)人類胰島素 (化合物G5)。

105.根據具體實例104之升糖素肽，其中該GLP-1化合物由式G1表示：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G1)。

106.根據具體實例104之升糖素肽，其中該GLP-1化合物由式G2表示：N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][去胺基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G2)。

107.根據具體實例104之升糖素肽，其中該GLP-1化合物由式G3表示： N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G3)。

108.根據具體實例104之升糖素肽，其中該GLP-1化合物由式G4表示：N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G4)。

109.根據具體實例104之升糖素肽，其中該胰島素化合物由式G5表示：N ε B29-十六烷二醯基-γ-Glu-(desB30)人類胰島素 (化合物G5)。

110.根據具體實例97-104中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽係選自化學物1-化學物97組成之群且與選自G1-G4之群之GLP-1化合物組合。

111.根據具體實例97-104中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽係選自化學物1-化學物97組成之群且與胰島素化合物(諸如G5)組合。

112.根據具體實例97-104中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽係選自化學物1-化學物97組成之群且與腸促胰島素類似物-4組合。

GLP-1係在攝取食物後由小腸之內分泌細胞產生之腸促胰島素激素。GLP-1係葡萄糖代謝之調節劑，且自胰腺之蘭氏小島(islets of Langerhans)之β細胞分泌胰島素。GLP-1亦導致糖尿病狀態下之胰島素分泌。然而，GLP-1本身之活體內半衰期極短，因此延長GLP-1活體內半衰期之方式受到諸多關注。

WO 98/08871揭示基於人類GLP-1(7-37)之延長GLP-1類似物及衍生物，其具有延長之半衰期，包括利拉魯肽 (liraglutide)，其係一種由Novo Nordisk A/S研發銷售用以治療2型糖尿病之每日一次投藥之GLP-1衍生物。

艾塞那肽(Exenatide)係一種用於治療2型糖尿病之由Amylin Pharmaceuticals及Eli Lilly & Co.製造且銷售之市售腸促胰島素模擬物。艾塞那肽係基於腸促胰島素類似物-4，一種在希拉毒蜥(Gila monster)唾液中發現之激素。其展示與人類GLP-1類似之生物性質。US 5424286尤其係關於一種藉由投予腸促胰島素類似物-4(SEQ ID NO 3)刺激哺乳動物體內之胰島素釋放的方法。

如本文所用之術語「GLP-1化合物」係指人類GLP-1(7-37)、腸促胰島素類似物-4以及其類似物、融合肽及衍生物，其維持GLP-1活性。

關於GLP-1化合物中之位置編號：為本發明之目的，任何胺基酸取代、缺失及/或添加均相對於GLP-1(7-37)(SEQ ID 2)及/或腸促胰島素類似物-4之序列來表示。然而，序列表中之胺基酸殘基編號總是自1號開始，而對於本發明之目的，吾人欲根據此項技術中之確定實際情況自7號胺基酸開始，且在GLP-1(7-37)之情況下將其指定為7號。因此，本文中任何提及GLP-1(7-37)序列之位置編號均為以位置7之His開始且以位置37之Gly結束之序列。

GLP-1化合物可如此項技術中已知來製備。

GLP-1活性可使用此項技術中已知之任何方法來測定，例如本文之檢定(II)(模擬表現人類GLP-1受體之細胞系中的cAMP形成)。

此外，GLP-1化合物為可具備以下性質之化合物：i)包含以下中至少一者：去胺基His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35及/或Lys37；ii)為包含至少一個、較佳至少兩個、更佳兩個自由羧酸基團的含有白蛋白結合部分之GLP-1衍生物；或其醫藥學上可接受之鹽；iii)包含二羧酸之醯基的含有白蛋白結合部分之GLP-1衍生物，較佳包含總計12至24個碳原子，諸如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最佳C16、C18或C20；其中較佳地，a)醯基經由連接子連接至GLP-1肽之離胺酸殘基之ε胺基；b)連接子包含至少一個OEG基團及/或至少一個4-胺基甲基-環己烷羧酸基團，且視情況另外包含至少一個Glu；及/或iv)選自以下化合物組成之群：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G1)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][去胺基 His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G2)；N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G3)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G4)；及其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、烷基或酯。

本發明之「胰島素」本文中應理解為人類胰島素、胰島素類似物或胰島素衍生物。

胰島素化合物為例如可由以下表示之化合物：N ε B29-十六烷二醯基-γ-Glu-(desB30)人類胰島素 (化合物G5)。

如本說明書中定義之本發明化合物及抗肥胖劑或抗糖尿病劑可同時或相繼投藥。該等因子可以單一劑型供應，其中單一劑型含有兩種化合物，或以分裝部分之套組形式供應，其包含本發明化合物之製劑作為第一單位劑型及抗肥胖劑或抗糖尿病劑之製劑作為第二單位劑型。無論何時，當本說明書中提及第一或第二或第三等等單位劑量時，此並非表示較佳投藥次序，而僅為便利之目的。

「同時」給予本發明化合物製劑及抗肥胖劑或抗糖尿病劑製劑意謂以單一劑型投予該等化合物，或以不大於15分鐘、較佳10分鐘、更佳5分鐘、更佳2分鐘之時間間隔投予第一藥劑、繼而投予第二藥劑。任一因子均可先投予。

「相繼」給藥意謂以大於15分鐘之時間間隔投予第一藥劑、繼而投予第二藥劑。兩種單位劑型之任一者均可先投予。較佳地，兩種產品經相同靜脈內通道注射。

如已指示，在上文揭示之所有治療方法或適應症中，本發明之化合物均可單獨投予。然而，其亦可與一或多種其他治療活性劑、物質或化合物組合相繼或同時投予。

在用於根據本發明之方法時，本發明化合物之典型劑量在每天每公斤體重約0.0001至約100 mg之範圍內、較佳在每天每公斤體重約0.001至約10mg之範圍內、更佳在每天每公斤體重約0.001至約5 mg之範圍內，例如每天每公斤體重約0.001至約10 mg或每天每公斤體重約0.001至約5 mg，分一或多次劑量投予，諸如1至3次劑量。精確劑量將視投藥頻率及模式、所治療個體之性別、年齡、體重及一般病況、所治療病況之性質及嚴重度、任何待治療之併發性疾病及熟習此項技術者顯而易知之其他因素而定。

本發明之化合物包含咸信充分適於以例如大於每天一次之較長間隔投予之化合物，因此本發明之適當調配化合物可適合藉由適合投藥路徑(諸如本文揭示路徑之一)例如每週兩次或每週一次投藥。

如上文所述，本發明之化合物可與一或多種額外治療活性化合物或物質組合投予或應用，且適合之其他化合物或物質例如可選自抗糖尿病劑、抗高血脂劑、抗肥胖劑、抗高血壓劑及用於治療糖尿病所導致或與其相關之併發症之藥劑。

適合之抗糖尿病劑包括胰島素、胰島素衍生物或類似物、GLP-1(升糖素樣肽-1)衍生物或類似物或其他GLP-1類似物，諸如利拉魯肽(Victoza,Novo Nordisk A/S)、艾塞那肽(Byetta,Eli Lilly/Amylin)、他司魯肽(taspoglutide)(Roche)、阿必魯肽(albiglutide)(Syncria,GlaxoSmithKline)、澱粉素、澱粉素類似物(例如Symlin^TM/Pramlintide)以及口服活性降血糖劑。

本發明之化合物相對於此項技術中先前揭示之肽具有較高之升糖素受體選擇性。本發明之肽亦具有延長之活體內半衰期。本發明之化合物可為可溶性升糖素受體激動劑，例如溶解度為至少0.1 mmol/l、0.2 mmol/l、至少0.5 mmol/l、至少2 mmol/l、至少4 mmol/l、至少8 mmol/l、至少10 mmol/l或至少15 mmol/l。

在本文中，若未另外說明，否則術語「可溶(soluble)」、「溶解度(solubility)」、「可溶於水溶液中(soluble in aquous solution)」、「水性溶解度(aqueous solubility)」、「水可溶(water soluble)」、「水可溶(water-soluble)」、「水溶解度(water solubility)」及「水溶解度(water-solubility)」係指化合物在水中或在鹽水溶液或緩衝劑水溶液(例如10 mM磷酸鹽溶液)中之溶解度，或化合物在含有其他化合物但無有機溶劑之水溶液中之溶解度。

如本文所用之術語「多肽」及「肽」意謂由至少五個由肽鍵連接之組分胺基酸構成的化合物。組分胺基酸可來自由遺傳密碼編碼之胺基酸之群且其可為未經遺傳密碼編碼之天然胺基酸以及合成胺基酸。未經遺傳密碼編碼之天然胺基酸例如為羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸酯、鳥胺酸、磷絲胺酸、D-丙胺酸及D-麩醯胺酸。合成胺基酸包含由化學合成製造之胺基酸，亦即由遺傳密碼編碼之胺基酸之D-異構體，諸如D-丙胺酸及D-白胺酸、Aib(α-胺基異丁酸)、Abu(α-胺基丁酸)、Tle(第三丁基甘胺酸)、β-丙胺酸、3-胺基甲基苯甲酸、鄰胺苯甲酸。

如本文所用之關於多肽之術語「類似物」意謂其中肽之一或多個胺基酸殘基經其他胺基酸殘基取代及/或其中一或多個胺基酸殘基自肽缺失及/或其中一或多個胺基酸殘基自肽缺失及/或其中一或多個胺基酸殘基添加至肽的經修飾之肽。胺基酸殘基之該添加或缺失可發生於肽之N-末端及/或肽之C-末端。使用簡單系統來描述類似物。使用根據IUPAC-IUB命名法使用之關於胺基酸之標準單字母或三字母縮寫來描繪肽類似物及其衍生物之式。

如本文所用之關於肽之術語「衍生物」意謂經化學修飾之肽或其類似物，其中未經修飾之肽或其類似物中不存在至少一個取代基，亦即經共價修飾之肽。典型修飾為醯胺、碳水化合物、烷基、醯基、酯及其類似物。

未說明光學異構體之所有胺基酸應理解為意謂L-異構體。

如本文所用之術語「升糖素肽」意謂升糖素肽、升糖素化合物、根據本發明之化合物、本發明之化合物、式I化合物、升糖素類似物、升糖素衍生物或升糖素類似物人類升糖素之衍生物、人類升糖素(1-29)、升糖素(1-30)、升糖素(1-31)、升糖素(1-32)以及其類似物、融合肽及衍生物，其仍保持升糖素活性。

關於升糖素化合物中之位置編號：為本發明之目的，任何胺基酸取代、缺失及/或添加均相對於天然人類升糖素(1-29)之序列(SEQ ID 1)來表示。人類升糖素胺基酸位置1-29在本文中與胺基酸位置X₁至X₂₉相同。人類升糖素(1-29)序列為His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr(SEQ ID 1)。

升糖素(1-30)意謂在C-末端延伸一個胺基酸之人類升糖素，升糖素(1-31)意謂在C-末端延伸兩個胺基酸之人類升糖素且升糖素(1-32)意謂在C-末端延伸三個胺基酸之人類升糖素。

如本文所用之術語「遠端」意謂距連接點最遠(末端)。

如本文所用之術語「帶負電部分」意謂可帶負電之化學部分，諸如(但不限於)羧酸、磺酸或四唑部分。

如本文所用之術語「親脂性部分」意謂具有6個以上且30個以下碳原子之脂族烴或環烴部分，其中該烴部分可含有其他取代基。

如本文所用之術語「取代基」意謂置換氫之化學部分或基團。

如本文所用之作為化學名稱一部分之術語「1H-四唑-5-基」欲表示1H-四唑-5-基與2H-四唑-5-基兩者。

本發明之其他具體實例係關於：

113.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為受DPPIV保護之化合物。

114.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽經DPPIV穩定。

115.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為升糖素受體之激動劑。

116.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽為升糖素受體之激動劑，其EC₅₀<1 nM。

如本文所用之關於多肽之術語「經DPP-IV保護」意謂經化學修飾以使得該化合物可抵抗血漿肽酶二肽基胺基肽酶-4(DPP-IV)之多肽。已知在若干種肽激素(例如升糖素、GLP-1、GLP-2、調酸素等)之降解中涉及血漿中之DPP-IV酶。因此，正進行相當大之努力來研發易受DPP-IV介導之水解影響以減小DPP-IV之降解速率的多肽之類似物及衍生物。

此外，本發明之化合物可在如檢定VII中所述之無白蛋白檢定中經穩定化而免於DPP-IV裂解。

在本文中，術語「激動劑」欲表示使所論述受體類型活化之物質(配體)。

在本文中，術語「拮抗劑」欲表示使激動劑之作用阻斷、中和或抵消之物質(配體)。

如本文所用之術語「升糖素激動劑」係指使人類升糖素受體完全或部分活化之任何升糖素肽。在一較佳具體實例中，「升糖素激動劑」為使升糖素受體活化之任何升糖素肽，如由檢定I所量測較佳具有低於1 μM(例如低於100 nM或低於1 nM)之親和力效能(EC₅₀)。

在本文中，術語「醫藥學上可接受之鹽」欲表示對患者無害之鹽。該等鹽包括醫藥學上可接受之酸加成鹽、醫藥學上可接受之金屬鹽、銨鹽及烷基化銨鹽。酸加成鹽包括無機酸以及有機酸之鹽。適合無機酸之代表性實例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硫酸及硝酸及其類似物。適合有機酸之代表性實例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、反丁烯二酸、乙醇酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、苦杏仁酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水楊酸、丁二酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、酒石酸、抗壞血酸、帕莫酸(pamoic)、雙亞甲基-水楊酸、乙烷二磺酸、葡萄糖酸、焦檸檬酸、天冬胺酸、硬脂酸、棕櫚酸、EDTA、乙醇酸、對胺基苯甲酸、麩胺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸及其類似物。醫藥學上可接受之無機或有機酸加成鹽之其他實例包括J.Pharm.Sci.(1977)66,2中列舉之醫藥學上可接受之鹽，其以引用的方式併入本文中。相關金屬鹽之實例包括鋰、鈉、鉀及鎂鹽及其類似物。烷基化銨鹽之實例包括甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、乙基銨、羥乙基銨、二乙基銨、丁基銨及四甲基銨鹽及其類似物。

如本文所用之術語化合物之「治療有效量」係指足以治癒、緩解或部分阻止指定疾病及/或其併發症之臨床表現的量。足以達成此目標之量定義為「治療有效量」。用於每一目的之有效量將取決於疾病或損傷之嚴重度以及個體之體重及一般狀態。應瞭解，可使用常規實驗，藉由構建值之矩陣且測試矩陣中之不同點來測定適當劑量，所有該等均在經訓練醫師或獸醫之一般技術水準內。

如本文所用之術語「治療(treatment)」、「治療(treating)」及其其他變化形式係指為對抗病況(諸如疾病或病症)之目的對患者之管理及照護。該等術語欲包括對患者所患指定病況之整個範圍之治療，諸如投予所論述活性化合物以緩解症狀或其併發症，延緩疾病、病症或病況之發展，治癒或消除疾病、病症或病況及/或預防病況，其中預防應理解為為對抗疾病、病況或病症之目的對患者之管理及照護，且包括投予所論述之活性化合物以預防症狀或併發症發作。待治療之患者較佳為哺乳動物，詳言之為人類，但對於其他動物(諸如狗、貓、奶牛、馬、綿羊、山羊或豬)之治療亦在本發明之範疇內。

如本文所用之術語「白蛋白結合殘基」意謂與人類血清白蛋白非共價結合之殘基。連接至治療性多肽之白蛋白結合殘基典型地與人類血清白蛋白具有低於10 μM且較佳低於1 μM之親和力。在含有4-40個碳原子之直鏈及支鏈親脂性部分中已知多種白蛋白結合殘基。本發明之其他具體實例係關於醫藥組合物：

117.一種包含根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的醫藥組合物。

118.根據具體實例117之醫藥組合物，其另外包含一或多種額外治療活性化合物或物質。

119.根據具體實例117-118中任一項之醫藥組合物，其另外包含GLP-1化合物。

120.根據具體實例119之醫藥組合物，其中GLP-1化合物係選自以下組成之群：N-ε 26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G1)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反-4-[(19-羧基十九醯基胺基)甲基]環己烷羰基}胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][去胺基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys373GLP-1-(7-37)： (化合物G2)；N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G3)；N-ε 37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五醯基胺基)-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)： (化合物G4)；及其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、烷基或酯。

121.根據具體實例117-118中任一項之醫藥組合物，其另外包含胰島素化合物。

122.根據具體實例121之醫藥組合物，其中胰島素化合物為：N ε B29-十六烷二醯基-γ-Glu-(desB30)人類胰島素 (化合物G5)。

123.根據具體實例105-110中任一項之醫藥組合物，其為包含約0.01 mg至約1000 mg，諸如約0.1 mg至約500 mg、約0.5 mg至約5 mg、例如約0.5 mg至約200 mg根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的單位劑型。

124.根據具體實例117-123中任一項之醫藥組合物，其適於腸胃外投藥。

125.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其用於治療中。

本發明之其他具體實例係關於以下：

126.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、1型糖尿病及肥胖。

127.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於延緩或預防2型糖尿病之疾病發展。

128.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療肥胖或預防超重。

129.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於減少食物攝入。

130.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於增加能量消耗。

131.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於減輕體重。

132.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於延緩葡萄糖耐受性異常(IGT)發展為2型糖尿病。

133.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於延緩2型糖尿病發展為需要胰島素之糖尿病。

134.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於調節食慾。

135.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於引發飽食。

136.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於預防成功體重減輕後之體重反彈。

137.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療與超重或肥胖相關之疾病或病態。

138.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療貪食症。

139.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療暴食。

140.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療動脈粥樣硬化。

141.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療高血壓。

142.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療2型糖尿病。

143.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療葡萄糖耐受性異常。

144.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療異常血脂症。

145.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療冠心病。

146.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療肝脂肪變性。

147.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療肝脂肪變性。

148.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療β-阻斷劑中毒。

149.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合，結合使用諸如x-射線、CT-及NMR-掃描之技術研究胃腸道可用的用於抑制胃腸道之運動性。

150.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防低血糖症。

151.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防胰島素誘發性低血糖症。

152.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防反應性低血糖症。

153.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防糖尿病性低血糖症。

154.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防非糖尿病性低血糖症。

155.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防空腹低血糖症。

156.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防藥物誘發性低血糖症。

157.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防胃繞道術誘發性低血糖症。

158.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防妊娠低血糖症。

159.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防酒精誘發性低血糖症。

160.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防胰島瘤。

161.根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽，其視情況與一或多種額外治療活性化合物組合用於治療或預防Von Girkes病。

本發明之其他具體實例係關於以下方法：

162.一種治療或預防低血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、1型糖尿病及肥胖之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

163.一種延緩或預防2型糖尿病之疾病發展的方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

164.一種治療肥胖或預防超重之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

165.一種減少食物攝入之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

166.一種用於增加能量消耗之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

167.一種用於減輕體重之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

168.一種用於延緩葡萄糖耐受性異常(IGT)發展為2型糖尿病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

169.一種用於延緩2型糖尿病發展為需要胰島素之糖尿病的方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

170.一種用於調節食慾之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

171.一種用於誘發飽食之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

172.一種用於預防成功體重減輕後體重反彈之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

173.一種用於治療與超重或肥胖相關之疾病或病態之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

174.一種用於治療貪食症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

175.一種用於治療暴食之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

176.一種用於治療動脈粥樣硬化之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

177.一種用於治療高血壓之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

178.一種用於治療2型糖尿病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

179.一種用於治療葡萄糖耐受性異常之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

180.一種用於治療異常血脂症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

181.一種用於治療冠心病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

182.一種用於治療肝脂肪變性之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

183.一種用於治療β-阻斷劑中毒之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

184.一種結合使用諸如x-射線、CT-及NMR-掃描之技術研究胃腸道可用的用於抑制胃腸道之運動性的方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

185.一種用於治療或預防低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

186.一種用於治療或預防胰島素誘發性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

187.一種用於治療或預防反應性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

188.一種用於治療或預防糖尿病性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

189.一種用於治療或預防非糖尿病性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

190.一種用於治療或預防空腹低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

191.一種用於治療或預防藥物誘發性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

192.一種用於治療或預防胃繞道術誘發性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

193.一種用於治療或預防妊娠低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

194.一種用於治療或預防酒精誘發性低血糖症之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

195.一種用於治療或預防胰島瘤之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

196.一種用於治療或預防Von Girkes病之方法，其包含向有需要之患者投予有效量之視情況與一或多種額外治療活性化合物組合的根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽。

本發明之其他具體實例係關於以下用途：

197.一種根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的用途，其用於製備醫藥品。

198.一種根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的用途，其用於製備用以治療或預防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、1型糖尿病及肥胖之醫藥品。

199.一種根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備用以延緩或預防2型糖尿病之疾病發展、治療肥胖或預防超重、用於減少食物攝入、增加能量消耗、減輕體重、延緩葡萄糖耐受性異常(IGT)發展為2型糖尿病；延緩2型糖尿病發展為需要胰島素之糖尿病；調節食慾；誘發飽食；預防成功體重減輕後體重反彈；治療與超重或肥胖相關之疾病或病態；治療貪食症；治療暴食；治療動脈粥樣硬化、高血壓、2型糖尿病、IGT、異常血脂症、冠心病、肝脂肪變性、治療β-阻斷劑中毒、結合使用諸如x-射線、CT-及NMR-掃描之技術研究胃腸道可用的用於抑制胃腸道之運動性的醫藥品。

200.一種根據具體實例1-116中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備用以治療或預防低血糖症、胰島素誘發性低血糖症、反應性低血糖症、糖尿病性低血糖症、非糖尿病性低血糖症、空腹低血糖症、藥物誘發性低血糖症、胃繞道術誘發性低血糖症、妊娠低血糖症、酒精誘發性低血糖症、胰島瘤及Von Girkes病之醫藥品。

本發明之其他具體實例係關於以下：

201.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有大於70%之回收率。

202.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有大於90%之回收率。

203.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有約100%之回收率。

204.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有超過7小時之延遲時間。

205.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有超過20小時之延遲時間。

206.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在ThT原纖維形成檢定中具有45小時或超過45小時之延遲時間。

207.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於14%之降解。

208.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於13%之降解。

209.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於12%之降解。

210.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於10%之降解。

211.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於9%之降解。

212.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於7%之降解。

213.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於5%之降解。

214.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽在化學穩定性檢定中具有小於3%之降解。

215.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的30倍。

216.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的50倍。

217.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的100倍。

218.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的250倍。

219.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的500倍。

220.根據前述具體實例中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽對升糖素受體之選擇性為對GLP-1受體之選擇性的1000倍。

GLP-1與升糖素受體之間之選擇性可經量測為兩種受體上之EC₅₀值或IC₅₀值之間之比值。可使用檢定(I)及檢定(III)分別來量測升糖素及GLP-1受體上之活性。

在投予視情況與如上文揭示之一或多種額外治療活性化合物或物質組合的本發明之升糖素肽的情況下，為與治療或預防肥胖或超重相關(亦即，與減輕或預防過度肥胖相關)之目的，可相關地採用與手術介入組合的該投藥以達成體重減輕或預防體重增加之目的，例如與減肥手術介入組合。常用減肥手術技術之實例包括(但不限於)以下：垂直束帶胃成形手術(亦稱作「胃分隔術(stomach stapling)」)，其中分隔一部分胃以產生充當新胃之較小胃前囊；胃束帶，例如使用可調節束胃帶系統(諸如Swedish Adjustable Gastric Band(SAGB)、LAP-BAND ^TM或MIDband ^TM)，其中使用可由患者調節尺寸之彈性(例如聚矽氧)帶產生將充當新胃之小胃前囊；及胃繞道手術，例如「Roux-en-Y」繞道術，其中使用分隔裝置產生小胃囊且連接至遠端小腸，小腸上部再以Y形組態連接。

可在投予本發明升糖素肽(視情況與如上文揭示之一或多種額外治療活性化合物或物質組合)發生一段時間後進行所論述之減肥手術介入及/或在其後歷時一段時間。在許多情形下，可較佳在發生減肥手術介入之後開始投予本發明之化合物。

術語「肥胖」表示脂肪組織過量。當能量攝入超過能量消耗時，多餘熱量儲存在脂肪組織中，且若此淨正平衡延長，則產生肥胖，亦即存在兩種組分來衡量平衡，且任一側(攝入或消耗)異常均可導致肥胖。在此情形下，肥胖最佳視為產生健康風險之任何程度的過量脂肪組織。正常個體與肥胖個體之間之區別僅可為大致的，但肥胖所產生之健康風險可能與脂肪組織增加具有連續性。然而，在本發明之情形下，具有25以上之身體質量指數(BMI=以公斤計之體重除以以公尺計之高度的平方)的個體視為肥胖。

本文中所用之胺基酸縮寫具有以下含義：

以D-開始後接三個字母碼之胺基酸縮寫(諸如D-Ser、D-His等等)係指相應胺基酸之D-鏡像異構體，例如D-絲胺酸、D-組胺酸等等。

醫藥組合物

根據本發明之醫藥組成物可經由若干投藥途徑投予需要該治療之患者，該等投藥途徑例如為經舌、舌下、經頰、口腔內、經口、胃部及腸道內、經鼻、肺部(例如經由細支氣管及肺泡或其組合)、表皮、真皮、經皮、陰道、直腸、眼部(例如經由結膜)、尿道以及腸胃外投藥。

醫藥組合物可於若干部位投予需要該治療之患者，該等部位例如局部部位(例如皮膚及黏膜部位)、繞道吸附部位(例如在動脈內、靜脈內、心臟內投藥)及包涵吸附部位(例如在皮膚內、皮膚下、肌肉內或腹部內投藥)。

醫藥配方可包含濃度為[0.01]mg/mL至[50]mg/mL之升糖素肽。該配方可另外包含緩衝劑系統、防腐劑、張力劑、螯合劑、穩定劑及界面活性劑。在本發明之一個具體實例中，醫藥配方為含水配方，亦即包含水之配方。該配方典型地為溶液或懸浮液。在本發明之另一具體實例中，醫藥配方為水溶液。術語「含水配方」定義為包含至少50%w/w水之配方。同樣，術語「水溶液」定義為包含至少50%w/w水之溶液，且術語「含水懸浮液」定義為包含至少50%w/w水之懸浮液。

在另一具體實例中，醫藥配方為無需任何先前溶解即可使用之乾燥配方(例如凍乾或噴乾)。

緩衝劑可選自乙酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽、甘胺醯甘胺酸、組胺酸、甘胺酸、磷酸鹽、磷酸氫鹽及參(羥甲基)-胺基甲烷(TRIS)、二羥乙甘胺酸、三(羥甲基)甲基甘胺酸(tricine)、丁二酸鹽、天冬胺酸、天冬醯胺酸或其混合物組成之群。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含醫藥學上可接受之防腐劑。在本發明之另一具體實例中，防腐劑係選自苯酚、間甲酚、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、2-苯氧基乙醇、苄基醇、氯丁醇、氯甲酚、苄索氯銨(benzethonium chloride)或其混合物組成之群。熟習此項技術者熟知防腐劑在醫藥組合物中之使用。為便利起見，參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含等滲劑。等滲劑可選自以下組成之群：鹽(例如氯化鈉)、糖(諸如單醣、二醣或多醣)或水溶性葡聚糖(例如包括果糖、葡萄糖、甘露糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、聚葡糖或糖醇，諸如胺基酸(例如L-甘胺酸、L-組胺酸、精胺酸、離胺酸、異白胺酸、天冬胺酸、色胺酸、蘇胺酸)、醛醣醇(例如甘油(glycerol)(丙三醇(glycerine))、1,2-丙二醇(propanediol)(丙二醇(propyleneglycol))、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)或其混合物。糖醇例如包括甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、半乳糖醇、甜醇、木糖醇及阿拉伯糖醇。

熟習此項技術者熟知等滲劑在醫藥組合物中之使用。為便利起見，參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含螯合劑。在本發明之另一具體實例中，螯合劑係選自乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸及天冬胺酸、EGTA及其混合物之鹽。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含穩定劑。熟習此項技術者熟知穩定劑在醫藥組合物中之使用。為便利起見，參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

本發明之醫藥組合物可另外包含量足以在組合物儲存期間減少多肽或蛋白質之聚集體形成之胺基酸鹼。「胺基酸鹼」欲為胺基酸或胺基酸組合，其中任何給定之胺基酸均以其自由鹼形式或其鹽形式存在。胺基酸可為精胺酸、離胺酸、天冬胺酸及麩胺酸、胺基胍、鳥胺酸及N-單乙基 L-精胺酸、乙硫胺酸及丁硫胺酸及S-甲基-L半胱胺酸。

在本發明之另一具體實例中，當充當治療劑之多肽為包含至少一個易受氧化作用影響之甲硫胺酸殘基的多肽時，可添加甲硫胺酸(或其他硫酸胺基酸或胺基酸類似物)來抑制甲硫胺酸殘基氧化為甲硫胺酸亞碸。「抑制」欲為甲硫胺酸氧化物質隨時間最小程度聚集。抑制甲硫胺酸氧化作用導致多肽更大程度上以其適當分子形式滯留。可使用甲硫胺酸之任何立體異構體(L或D)其組合。添加量應為足以抑制甲硫胺酸殘基氧化作用之量以使得甲硫胺酸亞碸之量為管理機構可接受。典型地，此意謂組合物含有不大於約10%至約30%之甲硫胺酸亞碸。此通常可藉由添加甲硫胺酸以使得所添加甲硫胺酸與甲硫胺酸殘基之比率在約1：1至約1000：1、諸如10：1至約100：1之範圍內來達成。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含選自高分子量聚合物或低分子量化合物組成之群之穩定劑。在本發明之另一具體實例中，穩定劑係選自聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯基吡咯啶酮、羧基-/羥基纖維素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L及HPMC)、環糊精、含硫物質(諸如單硫甘油、硫乙醇酸及2-甲基硫乙醇)及不同鹽(例如氯化鈉).

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含界面活性劑。典型界面活性劑(實例商標名稱在括號[ ]中提供)為聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯(諸如聚氧乙烯(20)去水山梨醇單月桂酸酯[吐溫20(Tween 20)]、聚氧乙烯(20) 去水山梨醇單棕櫚酸酯[吐溫40]或聚氧乙烯(20)去水山梨醇單油酸酯[吐溫80])，泊洛沙姆(poloxamer)(諸如聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物[普洛尼克(Pluronic)F68/泊洛沙姆188]、聚乙二醇辛基苯基醚[Triton X-100]或聚氧乙二醇十二烷基醚[Brij 35])。熟習此項技術者熟知界面活性劑在醫藥組合物中之使用。為便利起見，參考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。

在本發明之另一具體實例中，該配方另外包含蛋白酶抑制劑，諸如EDTA(乙二胺四乙酸)及苄脒HCl，但亦可使用其他市售蛋白酶抑制劑。使用蛋白酶抑制劑尤其適用於包含蛋白酶酶原或活化酶(諸如FVIIa)之醫藥組合物中以抑制自催化作用。

本發明之肽醫藥配方中可能存在其他成分。該等額外成分可包括濕潤劑、乳化劑、抗氧化劑、增積劑、張力改質劑、螯合劑、金屬離子、油質媒劑、蛋白質(例如人類血清白蛋白、明膠或蛋白質)及兩性離子(例如，胺基酸，諸如甜菜鹼、牛磺酸、精胺酸、甘胺酸、離胺酸及組胺酸)。

本發明之組合物可另外與藥物載劑、藥物傳遞系統及高級藥物傳遞系統混配或例如經由共價、疏水性及靜電相互作用與藥物載劑、藥物傳遞系統及高級藥物傳遞系統連接以進一步增強化合物之穩定性、增加生物可用性、增加溶解度、減少不利影響、達成熟習此項技術者熟知之生物時鐘治療且增加患者順應性或其任何組合。載劑、藥物傳遞系統及高級藥物傳遞系統之實例包括(但不限於)聚合物(例如纖維素及衍生物)、多醣(例如聚葡糖及衍生物)、澱粉及衍生物、聚(乙烯基醇)、丙烯酸酯及甲基丙烯酸酯聚合物、聚乳酸及聚乙醇酸及其嵌段共聚物、聚乙二醇、載體蛋白(例如白蛋白)、凝膠(例如熱膠凝系統、例如熟習此項技術者熟知之嵌段共聚系統)、微胞、脂質體、微粒、奈米粒子、液晶及其分散液、L2相及其分散液(熟習此項技術者熟知其在脂質-水系統中之相行為)、聚合微胞、多重乳液、自乳化、自微乳化環糊精及其衍生物及樹枝狀聚合物。

腸胃外投藥可藉由藉助於注射器(視情況為筆樣注射器)皮下、肌肉內、腹膜內或靜脈內注射來進行。或者，腸胃外投藥可藉助於輸液泵來進行。另一選擇為組合物可為溶液或懸浮液以供以鼻或肺噴霧之形式投予升糖素肽。作為又一選擇，含有本發明之升糖素肽之醫藥組合物亦可適用於經皮投藥，例如經無針注射或由貼片(視情況為離子電滲貼片)投藥，或適用於經黏膜投藥，例如經頰投藥。

用於經口施用治療性蛋白及多肽之醫藥配方可包括將活性化合物囊封於奈米粒子、微粒或其他種類之多粒子劑型中。另一選擇為使用滲透增強劑，諸如表面活性化合物、細胞穿透肽、黏膜黏附性藥物傳遞系統、螯合劑及其他。又一選擇可為添加蛋白酶抑制劑。另一選擇為使用基於脂質之藥物傳遞系統，諸如SEDDS、SMEDDS SNEDDS(自乳化、自微乳化或自奈米乳化藥物傳遞系統)。上述藥物傳遞系統可經調配成錠劑或填充至可經塗佈以控制方式或以較佳腸段釋放活性化合物之適合硬質或軟質膠囊中。

本發明亦涵蓋以下具體實例：

221.一種升糖素肽，其包含：SEQ ID 1，其中X₂₄表示Lys且其中存在至少一個以下取代：X₃為His、X₁₅為Glu及/或X₁₆為Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr且在該升糖素肽中存在至多六個額外胺基酸取代，及包含三個或三個以上帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分之一位於親脂性部分遠端且其中該取代基連接於位置24之Lys的側鏈氮處。

或其醫藥學上可接受之鹽、醯胺、酸或前藥。

222.根據具體實例221之升糖素肽，其中該胺基酸取代可選自該升糖素肽之以下位置：X₁₂為Arg X₁₇為Lys X₂₀為Lys X₂₁為Glu X₂₇為Leu X₂₈為Ser、Ile或Thr。

223.根據具體實例221-222中任一項之升糖素肽，其中該取代基具有式II：Z₁-Z₂-Z₃-Z₄ [II]其中，Z₁表示根據式IIa、IIb或IIc之一的結構；其中式IIa中之n為6-20，式IIc中之m為5-11，式IIc中之COOH基團可連接至苯環上之位置2、3或4，式IIa、IIb及IIc中之符號^＊表示與Z₂中之氮的連接點；若Z₂不存在，則Z₁在符號^＊處連接至Z₃上之氮，且若Z₂及Z₃不存在，則Z₁在符號^＊處連接至Z₄上之氮；Z₂不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地具有立體化學L或D；其中Z₂經由^＊表示之碳原子連接至^＊表示之Z₃之氮；若Z₃不存在，則Z₂經由^＊表示之碳原子連接至^＊表示之Z₄之氮，且若Z₃及Z₄不存在，則Z₂經由^＊表示之碳連接至升糖素肽的離胺酸之ε氮或鳥胺酸之δ氮，Z₃不存在或表示根據式IIm、IIn、IIo或IIp之一的結構； Z₃經由具有符號^＊之Z₃之碳連接至具有符號^＊之Z₄之氮，若Z₄不存在，則Z₃經由具有符號^＊之碳連接至升糖素肽的離胺酸之ε氮或鳥胺酸之δ氮，Z₄不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地為L或D，其中Z₄經由具有符號^＊之碳連接至升糖素肽的離胺酸之ε氮或鳥胺酸之δ氮。

224.根據具體實例221-223中任一項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIi、IIIj、IIIk、IIIl、IIIm、IIIn、IIIo、IIIp、IIIq或IIIr之一的結構：

225.根據具體實例221-224中任一項之升糖素肽，其係選自以下組成之群：化學物1、化學物2、化學物3、化學物4、化學物5、化學物6、化學物7、化學物8、化學物9、化學物10、化學物11、化學物12、化學物13、化學物14、化學物15、化學物16、化學物17、化學物18、化學物19、化學物20、化學物21、化學物22、化學物23、化學物24、化學物25、化學物26、化學物27、化學物28及化學物29。

226.一種包含根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽的醫藥組合物。

227.根據具體實例226之醫藥組合物，其另外包含一或多種額外治療活性化合物或物質。

228.根據具體實例226-227中任一項之醫藥組合物，其另外包含GLP-1化合物。

229.根據具體實例226-228中任一項之醫藥組合物，其另外包含胰島素化合物。

230.根據具體實例226-229中任一項之醫藥組合物，其適於腸胃外投藥。

231.根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽，其用於治療中。

232.一種根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備醫藥品。

233.一種根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備用以治療或預防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐受性異常、1型糖尿病及肥胖的醫藥品。

234.一種根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備用以延緩或預防2型糖尿病之疾病發展、治療肥胖或預防超重、用於減少食物攝入、增加能量消耗、減輕體重、延緩葡萄糖耐受性異常(IGT)發展為2型糖尿病；延緩2型糖尿病發展為需要胰島素之糖尿病；調節食慾；誘發飽食；預防成功體重減輕後體重反彈；治療與超重或肥胖相關之疾病或病態；治療貪食症；治療暴食；治療動脈粥樣硬化、高血壓、2型糖尿病、IGT、異常血脂症、冠心病、肝脂肪變性、治療β-阻斷劑中毒、結合使用諸如x-射線、CT-及NMR-掃描之技術研究胃腸道可用的用於抑制胃腸道之運動性之醫藥品。

235.一種根據具體實例221-225中任一項之升糖素肽的用途，其係用於製備用以治療或預防低血糖症、胰島素誘發性低血糖症、反應性低血糖症、糖尿病性低血糖症、非糖尿病性低血糖症、空腹低血糖症、藥物誘發性低血糖症、胃繞道術誘發性低血糖症、妊娠低血糖症、酒精誘發性低血糖症、胰島瘤及Von Girkes病的醫藥品。

實施例

縮寫清單

BOC：第三丁氧羧基

DCM：二氯甲烷

DIC：二異丙基碳二醯亞胺

Fmoc：9-茀基甲氧羰基

HOAt：1-羥基-7-氮雜苯并三唑

HPLC：高效液相層析法

LCMS：液相層析質譜法

MeCN：乙腈

Mtt：4-甲基三苯甲基

NMP：N-甲基吡咯啶酮

Oxyma Pure：氰基-羥基亞胺基-乙酸乙酯

RP：逆相

RP-HPLC：逆相高效液相層析法

RT：室溫

Rt：滯留時間

SPPS：固相肽合成

TFA：三氟乙酸

TIPS：三異丙基矽烷

UPLC：極致效能液相層析法

通用方法

此部分係關於合成樹脂結合肽之方法(SPPS法，包括使胺基酸去除保護之方法、自樹脂裂解肽之方法及其純化方法)以及偵測及特性化所得肽之方法(LCMS及UPLC法)。

SPPS通用方法

所用之Fmoc-保護胺基酸衍生物為推薦之標準物：例如由Anaspec、Bachem、Iris Biotech或NovabioChem供應之Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(BOC)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及Fmoc-Lys(Mtt)-OH。

使用基於Fmoc之化學物在來自Protein Technologies (Tucson,AZ 85714 U.S.A.)之Prelude固相肽合成器上進行SPPS。適用於製備C-末端羧酸之樹脂為可購自NovabioChem之預負載、低負載Wang樹脂(例如低負載fmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂，LL，0.27 mmol/g)。N-末端α胺基由Boc保護。

Fmoc去除保護係以NMP中20%之哌啶歷時2×3 min來達成。偶合化學物為DIC/HOAt/柯林鹼(collidine)或DIC/Oxyma Pure/柯林鹼。向樹脂中添加胺基酸/HOAt或胺基酸/Oxyma Pure溶液(0.3 M/0.3 M於NMP中，莫耳過量3-10倍)，繼而添加相同莫耳當量之DIC(3 M於NMP中)，繼而添加柯林鹼(3 M於NMP中)。舉例而言，對於以下規模反應之每次偶合，使用以下量之0.3 M胺基酸/HOAt溶液：規模/ml，0.05 mmol/1.5 mL、0.10 mmol/3.0 mL、0.25 mmol/7.5 mL。偶合時間為2×30 min或1×240 min。

藉由以HFIP/DCM(75：25)(2×2 min)洗滌樹脂、以DCM洗滌且將樹脂懸浮於HFIP/DCM(75：25)(2×20min)中且隨後依次以哌啶/NMP(20：80)、DCM(1×)、NMP(1×)、DCM(1×)、NMP(1×)洗滌來移除Mtt基團。

在離胺酸之ε氮上引入取代基係使用經Mtt保護之離胺酸(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)來達成。同樣，當鳥胺酸側鏈上存在側鏈時，以Mtt保護欲經醯化之鳥胺酸之δ胺基(例如Fmoc-Orn(Mtt)-OH)。或者，離胺酸之ε氮可經ivDde基團保護(Fmoc-Lys(ivDde)-OH)。鳥胺酸之δ胺基同樣可由ivDde基團保護(Fmoc-Orn(ivDde)-OH)。在側鏈中併入γ-Glu部分可藉由與胺基酸Fmoc-Glu-OtBu偶合來達成。在側鏈中引入每一部分均可使用延長的偶合時間(1×6小時)，繼而以乙酸酐或者乙酸/DIC/HOAt/柯林鹼封端來達成。取代基上末端氮之乙醯化作用係使用乙酸酐(10當量)及柯林鹼(20當量)於NMP中來達成。

連接取代基

白蛋白結合部分可經逐步程序、藉由如上所述之Prelude肽合成器、使用經適合保護之建構塊來引入，修改之處在於在每一步驟中使胺基酸及脂肪酸衍生物(包括Fmoc-Ado-OH、Fmoc-Glu-OtBu及十八烷二酸單第三丁酯(或類似物C8、C10、C12-、C14-、C16-、C20-二酸單第三丁酯))偶合6 hr。在每一偶合步驟之後，使用過量乙酸酐及柯林鹼(>10當量)將未反應之肽中間物封端。以類似方式，藉由使用建構塊4-(N-(16-(四唑-5-基)十六醯基)胺磺醯基)丁酸(由WO 2007/009894中所述之合成程序可得)製備含有4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基部分之化合物。

自樹脂裂解

合成之後，以DCM洗滌樹脂，且藉由以TFA/TIS/水(95/2.5/2.5)處理2-3小時、繼而以乙醚沈澱使肽自樹脂裂解。以乙醚洗滌沈澱物。

純化及定量

將粗肽溶解於水與MeCN之適合混合物(諸如水/MeCN(4：1))中，且在含有C18-矽膠之管柱上藉由逆相製備性

HPLC(Waters Deltaprep 4000或Gilson)純化。以在含有0.1% TFA之水中增加梯度之MeCN進行洗提。藉由分析性HPLC或UPLC檢查相關部分。將含有純目標肽之部分混合且在減壓下濃縮。分析所得溶液(HPLC，LCMS)且使用化學螢光氮特異性HPLC偵測器(Antek 8060 HPLC-CLND)或藉由在280 nm下量測UV吸收來定量產物。將產物分配於玻璃小瓶中。以Millipore玻璃纖維預濾器對小瓶加蓋。冷凍乾燥產生呈白色固體狀之肽三氟乙酸鹽。

偵測及特性化方法

LCMS方法

方法：LCMS_2

使用Perkin Elmer Sciex API 3000質譜儀來識別自Perkin Elmer Series 200 HPLC系統洗提後之樣品的質量。洗提液：A：水中之0.05%三氟乙酸；B：乙腈中之0.05%三氟乙酸。管柱：Waters Xterra MS C-18×3 mm id 5 μm。梯度：5%-90% B以1.5 ml/min歷經7.5 min。

方法：LCMS_4

在由來自Waters Acquity UPLC系統及Micromass之LCT Premier XE質譜儀組成之配置上進行LCMS_4。洗提液：A：水中之0.1%甲酸；B：乙腈中之0.1%甲酸。在室溫下藉由向經一定梯度之A與B洗提之管柱上注射適當體積之樣品(較佳2-10 μl)進行分析。UPLC條件、偵測器設定及質譜儀設定為：管柱：Waters Acquity UPLC BEH、C-18、1.7 μm、2.1 mm×50 mm。梯度：線性5%-95%乙腈，在4.0 min(或者8.0 min)期間，0.4 ml/min。偵測：214 nm(自TUV(可調節UV偵測器)輸出類似物)MS電離模式：API-ES，掃描：100-2000 amu(或者500-2000 amu)，步長0.1 amu。

方法：LCMS_13

在由具有PDA UV偵測器之UPLC系統及具有電噴霧電離之單一四極質量偵測器組成之Waters Acquity UPLC SQD 2000系統上進行方法LCMS_13。洗提液：A：水中之0.1%三氟乙酸；B：乙腈中之0.1%三氟乙酸。管柱：Waters Acquity UPLC BEH C18、100 Å、1.7 μm、2.1 mm×100 mm。梯度：線性10%-90% B歷經3 min、流速0.3 ml/min、總運行時間4 min。MS掃描範圍：500-2000 amu。

方法：LCMS_AP

使用Micromass Quatro micro API質譜儀來識別自HPLC系統洗提後之樣品質量，該HPLC系統由Waters 2525雙梯度模組、Waters 2767樣品管理器、Waters 2996光二極體陣列偵測器及Waters 2420 ELS偵測器構成。洗提液：A：水中之0.1%三氟乙酸；B：乙腈中之0.1%三氟乙酸。管柱：Phenomenex Synergi MAXRP、4 μm、75×4,6 mm。梯度：5%-95% B，以1.0 ml/min歷經7 min。

UPLC方法

方法04_A3_1

UPLC(方法04_A3_1)：使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：90% H₂O、10% CH₃CN、0.25 M碳酸氫銨

B：70%CH₃CN、30% H₂O

使用以下線性梯度：75% A、25% B至45% A、55% B，以0.35 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法04_A4_1

UPLC(方法04_A4_1)：使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：90% H₂O、10% CH₃CN、0.25 M碳酸氫銨

B：70%CH₃CN、30% H₂O

使用以下線性梯度：65% A、35% B至25% A、65% B，以0.35 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：04_A2_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：90% H₂O、10% CH₃CN、0.25 M碳酸氫銨；B：70%CH₃CN、30% H₂O。使用以下線性梯度：90% A、10% B 至60% A、40% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：04_A6_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：10 mM TRIS、15 mM硫酸銨、80% H₂O、20%、pH 7.3；B：80% CH₃CN、20% H₂O。使用以下線性梯度：95% A、5% B至10% A、90% B，以0.35 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：04_A7_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：10 mM TRIS、15 mM硫酸銨、80% H₂O、20%、pH 7.3；B：80% CH₃CN、20% H₂O。使用以下線性梯度：95% A、5% B至40% A、60% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：04_A9_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18、C18、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在60℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：200 mM Na₂SO₄+20 mM Na₂HPO₄+20 mM a₂HPO₄於90% H₂O/10% CH₃CN中、pH 7.2；B：70% CH₃CN、30% H₂O。使用以下階段梯度：90% A、10% B至80% A、20% B歷經3分鐘，80% A、20% B至50% A、50% B歷經17分鐘，流動速率為0.40 ml/min。

方法05_B5_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：0.2 M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% CH₃CN(pH 3.5)

B：70% CH₃CN、30% H₂O

使用以下線性梯度：60% A、40% B至30% A、70% B，以0.35 ml/min之流動速率歷經8分鐘。

方法：05_B7_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：0.2 M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% CH₃CN(pH 3.5)；B：70% CH₃CN、30% H₂O。使用以下線性梯度：80% A、20% B至40% A、60% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經8分鐘。

方法：05_B8_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：0.2 M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% CH₃CN(pH 3.5)；B：70% CH₃CN、30% H₂O。使用以下線性梯度：50% A、50% B至20% A、80% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經8分鐘。

方法：05_B9_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：0.2 M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% CH₃CN(pH 3.5)；B：70% CH₃CN、30% H₂O。使用以下線性梯度：70% A、30% B至20% A、80% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經8分鐘。

方法：05_B10_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：0.2 M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% CH3CN(pH 3.5)；B：70% CH₃CN、30% H₂O。使用以下線性梯度：40% A、60% B至20% A、80% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經8分鐘。

方法：07_B4_1

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：99.95% H₂O、0.05% TFA；B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA。使用以下線性梯度：95% A、5% B至5% A、95% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：09_B2_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：99.95% H₂O、0.05% TFA；B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA。使用以下線性梯度：95% A、5% B至40% A、60% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法：09_B4_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在40℃下收集214 nm及254 nm 下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：99.95% H₂O、0.05% TFA；B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA。使用以下線性梯度：95% A、5% B至5% A、95% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法08_B2_1

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：99.95%H₂O、0.05% TFA

B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA

使用以下線性梯度：95% A、5% B至40% A、60% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法08_B4_1

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：99.95%H₂O，0.05% TFA

B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA

使用以下線性梯度：95% A、5% B至5% A、95% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

方法10_B4_2

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在50℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：99.95%H₂O、0.05% TFA

B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA

使用以下線性梯度：95% A、5% B至5% A、95% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經12分鐘。

方法10_B5_2

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：

A：70% MeCN、30%水

B：0.2M Na₂SO₄、0.04 M H₃PO₄、10% MeCN、pH 2.25

使用以下線性梯度：40% A在1 min內、40→70% A在7 min內，流動速率為0.40 ml/min。

方法：10_B14_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC ShieldRP18、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在50℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：99.95%H₂O、0.05% TFA；B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA。使用以下線性梯度：70% A、30% B至40% A、60% B，以0.40 ml/min之流動速率歷經12分鐘。

方法：AP_B4_1

使用裝配有雙頻帶偵測器之Waters UPLC系統進行RP分析。使用ACQUITY UPLC BEH130、C18、130 Å、1.7 μm、2.1 mm×150 mm管柱在30℃下收集214 nm及254 nm下之UV偵測值。

UPLC系統連接至含有以下之兩個洗提液貯器：A：99.95% H₂O、0.05% TFA；B：99.95% CH₃CN、0.05% TFA。使用以下線性梯度：95% A、5% B至5% A、95% B，以0.30 ml/min之流動速率歷經16分鐘。

實施例1

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu¹⁵,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物1：

UPLC方法：04_A9_1：Rt=12.84 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.61 min

LCMS方法：LCMS,,4：Rt=3.7 min，m/3=1427；m/4=1071；m/5=857

實施例2

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物2：

UPLC方法：05_B9_1：Rt=8.4

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.8 min，m/4=1106

實施例3

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Lys²⁰,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物3：

UPLC方法：04_A9_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.0 min

LCMS方法：LCMS_4：RT=2.8 min，m/3=1474；m/4=1106；m/5=885

實施例4

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Glu¹⁶,Lys²⁰,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物4：

UPLC方法：04_A9_1：Rt=12.0 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.0 min

LCMS方法：LSMS_4：RT=2.8 min，m/3=1488；m/4=1117；m/5=893

實施例5

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Lys²⁴,Leu²⁷]-升糖素

化學物5：

UPLC方法：09_B4 Rt=8.29 min

UPLC方法：Rt=7.66 min

LCMS：方法：LCMS_4 Rt=2.85；m/Z=4452；M/3：1483，M/4：1113

實施例6

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Lys¹⁷,Glu²¹,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物6：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=12.2 min

UPLC方法：09_B4_1；Rt=8.2 min

LCMS方法：LCMS_4；RT=2.1 min；m/3=1421；m/4=1066；m/5=853

實施例7

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷]-升糖素

化學物7：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=12.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1485；m/4=1114；m/5=891

實施例8

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ile¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷]-升糖素

化學物8：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.2 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.7 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt 13.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1489；m/4=1117；m/5=894

實施例9

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[His³,Glu¹⁵,Thr¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷]-升糖素

化學物9：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=12.4 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.2 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=12.7 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1493；m/4=1120；m/5=896

實施例10

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Thr¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷]-升糖素

化學物10：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.3 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=13.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1495，m/4=1121；m/5=897

實施例11

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ile¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物11：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1480；m/4=1110；m/5=889

實施例12

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Thr¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物12：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=12.7 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.4 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=12.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1476；m/4=1107；m/5=886

實施例13

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物13：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1480；m/4=1110；m/5=889

實施例14

N ^{ε 24}-[(4SH-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Glu¹⁵,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物14：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.4 min

UPLC方法：04_A6_1：Rt=5.9 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=13.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1486；m/4=1115；m/5=892

實施例15

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物15：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.7 min

UPLC方法：04_A6_1：Rt=7.2 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=16.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1490；m/4=1117；m/5=894

實施例16

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Ala¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物16：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=12.7 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.4 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=14.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1476；m/4=1107；m/5=886

實施例17

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Phe¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物17：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1501；m/4=1126；m/5=901

實施例18

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ile²⁸]-升糖素

化學物18：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1499；m/4=1124；m/5=899

實施例19

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Thr²⁸]-升糖素

化學物19：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1494；m/4=1121；m/5=897

實施例20

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Arg¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物20：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=10.6 min；

UPLC方法：04_A6_1：Rt=5.9 min；

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min；m/3=1504；m/4=1128；m/5=903

實施例21

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Val¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物21：

UPLC方法：10_B4_1：Rt=8.5 min；

UPLC方法：04_A9_1：Rt=14.5 min；

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min；m/3=1485；m/4=1114；m/5=891

實施例22

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Thr¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物22：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=13.1 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.4 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2；m/3=1485；m/4=1114；m/5=892

實施例23

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-E[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Ile¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物23：

UPLC方法：10_B4_1：Rt=8.6 min；

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.2 min；

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min；m/3=1490；m/4=1118；m/5=894

實施例24

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物24：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=11.7 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=7.7 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=13.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1471；m/4=1103；m/5=883

實施例25

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物25：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=12.4 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.2 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=14.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1481；m/4 =1110；m/5=889

實施例26

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物26：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=14.0 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=9.2 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=16.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1499；m/4=1124；m/5=900

實施例27

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物27：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=14.7 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1489；m/4=1117；m/5=894

實施例28

N ^{ε 24}-[2-[2-[2-[E2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物28：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.5 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=14.7 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1489；m/4=1117；m/5=894

實施例29

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素

化學物29：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=13.2 min

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.7 min

UPLC方法：04_A9_1：Rt=15.2

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1392；m/4=1045；m/5=836

實施例30

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物30：

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A6_1；Rt=7.3 min

LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.3，m/3=1475；m/4=1107；m/5=886

實施例31

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物31：

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.4 min

UPLC方法：04_A9_1；Rt=13.3 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3=1481；m/4=1111；m/5=889

實施例32

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ile29]-升糖素

化學物32：

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.8 min

UPLC方法：04_A9_1；Rt=13.5 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.4，m/3=1446；m/4=1085；m/5=868

實施例33

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Val29]-升糖素

化學物33：

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A9_1；Rt=12.9 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.4，m/3=1442；m/4=1081；m/5=865

實施例34

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Leu29]-升糖素

化學物34：

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.9 min

UPLC方法：04_A9_1；Rt=13.8 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5，m/3=1446；m/4=1085；m/5=868

實施例35

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ile29]-升糖素

化學物35：

UPLC方法：09_B4_1；Rt=8.8 min

LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.4 min，m/3=1446；m/4=1085；m/5=868

實施例36

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基3-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Val29]-升糖素

化學物36：

UPLC方法：09_B4_1；Rt=8.6 min

LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.3 min；m/4=1085；m/5=868

實施例37

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Leu29]-升糖素

化學物37：

UPLC方法：09_B4_1；Rt=8.9 min

LC-MS方法：LCMS_2：Rt=6.2 min；m/3=1451，m/4=1088

實施例38

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物38：

UPLC方法：06_B4_1：Rt=8.4 min

LC-MS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1494.1；m/4=1120.5；m/5=896.8

實施例39

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物39：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.3 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.3 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1476；m/4=1107；m/5=886

實施例40

N ^{ε 24}-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物40：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.3 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1476；m/4=1107；m/5=886

實施例41

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物41：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.3 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min，m/3=1485；m/4=1114；m/5=892

實施例42

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物42：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.3 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1495；m/4=1121；m/5=897

實施例43

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物43：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.4 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=13.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1466；m/4=1100；m/5=880

實施例44

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-t2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物44：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=11.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=7.9 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=9.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.0 min，m/3=1491；m/4=1118；m/5=895

實施例45

N ^{ε 24}4(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物45：

UPLC方法：09_B2_1：Rt=14.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1532；m/4=1149；m/5=920

實施例46

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物46：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.4 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1494；m/4=1121；m/5=897

實施例47

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基 -4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物47：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.8 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=10.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min，m/3=1495；m/4=1121；m/5=897

實施例48

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-E2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gln28]-升糖素

化學物48：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.6 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.2 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=14.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1503；m/4=1127；m/5=902

實施例49

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物49：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.9 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.5 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min，m/3=1427；m/4=1070；m/5=857

實施例50

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物50：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.2 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.0 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1406；m/4=1054；m/5=844

實施例51

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物51：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.2 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.0 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1436；m/4=1077；m/5=862

實施例52

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物52：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=12.2 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.3 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3=1490；m/4=1118；m/5=894

實施例53

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ile16,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物53：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=11.0 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.0 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3=1499，m/4=1125，m/5=900

實施例54

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物54：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=9.0 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.1 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3=1474；m/4=1106；m/5=885

實施例55

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物55：

UPLC方法：04_A9_1 Rt=8.8 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=8.1 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2；m/3=1495；m/4=1121；m/5=898

實施例56

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Gln28]-升糖素

化學物56：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.3 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.0 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=13.5 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1480；m/4=1110；m/5=888

實施例57

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ala16,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物57：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.5 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=9.5 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1471；m/4=1104；m/5=883

實施例58

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物58：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.2 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=9.0 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=14.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1476；m/4=1107；m/5=886

實施例59

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Glu27,Ser28]-升糖素

化學物59：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.5 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.5 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=8.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.1 min，m/3=1481；m/4=1111；m/5=889

實施例60

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Gln28]-升糖素

化學物60：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.9 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1489；m/4=1117；m/5=894

實施例61

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物61：

UPLC方法：04_A9_1；Rt=16.1 min

UPLC方法：10_B4_1；Rt=9.6 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5；m/3=1459；m/4=1094；m/5=875

實施例62

N ^{ε 24}-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物62：

UPLC方法：05_B4_1：Rt=9.6 min

LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.5 min；m/3=1459；m/4= 1095；m/5=876

實施例63

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Leu16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物63：

UPLC方法：05_B4_1：Rt=8.6 min

LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.6，m/3=1463；m/4=1098；m/5=878

實施例64

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Val10,Arg12,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物64：

UPLC方法：05_B4_1：Rt=9.7 min

LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5 min；m/3=1468；m/4=1101；m/5=881

實施例65

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-E4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物65：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.1 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1481；m/4=1111

實施例66

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物66：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1437

實施例67

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物67：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.5 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1542；m/4=1157

實施例68

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六醯基胺磺醯基]丁醯基胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物68：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1499；m/4=1124

實施例69

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物69：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1467；m/4=1100

實施例70

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物70：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1476；m/4=1107

實施例71

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物71：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.7 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.2 min，m/3=1481

實施例72

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物72：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=7.9 min

LCMS方法：LCMS_13：Rt=2.2 min，m/3=1369；m/4=1027

實施例73

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[E(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物73：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=7.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1412；m/4 =1060；m/5=848

實施例74

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物74：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.1 min

LCMS方法：LCMS_3：Rt=2.2 min，m/3=1426；m/4=1070

實施例75

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-E[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物75：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1426；m/4=1070；m/5=856

實施例76

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物76：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.5 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=14.6 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1421；m/4=1066；m/5=853

實施例77

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素醯胺

化學物77：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1426；m/4=1070；m/5=856

實施例78

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物78：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.5 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1422；m/4=1066；m/5=853

實施例79

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物79：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=13.1 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1426；m/4=1070；m/5=856

實施例80

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[E(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物80：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.1 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=13.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.3 min，m/3=1426；m/4=1070；m/5=856

實施例81

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物81：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1466

實施例82

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基 -4-[t2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物82：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1476

實施例83

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物83：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1457；m/4=1093

實施例84

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物84：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=11.8 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1466；m/4=1100

實施例85

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物85：

UPLC方法：04_A3_1：Rt=12.2 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.4 min，m/3=1471；m/4=1103

實施例86

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物86：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.6 min，m/3=1436；m/4=1077；m/5=862

實施例87

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ala28]-升糖素

化學物87：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.9 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.5 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=15.5 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.6 min，m/3=1484；m/4=1113；m/5=891

實施例88

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gly28]-升糖素

化學物88：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=13.0 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.6 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=16.0 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.6 min，m/3=1479；m/4=1110；m/5=888

實施例89

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-t[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ala28]-升糖素

化學物89：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.2 min.

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.0 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=14.4 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1475；m/4=1106；m/5=885

實施例90

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gly28]-升糖素

化學物90：

UPLC方法：08_B2_1：Rt=12.3 min

UPLC方法：08_B4_1：Rt=8.1 min

UPLC方法：04_A3_1：Rt=14.9 min

LCMS方法：LCMS_4：Rt=2.5 min，m/3=1470；m/4=1103；m/5=882

實施例91

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物91：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.2 min

LCMS方法：LCMS_13：Rt=2.2 min，m/3=1383；m/4=1038

實施例92

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物92：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.5 min

LCMS方法：LCMS_13：Rt=2.3 min，m/3=1379；m/4 =1034

實施例93

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物93：

UPLC方法：AP_B4_1：Rt=7.8 min

LCMS方法：LCMS_AP：Rt=5.1 min，m/3=1476；m/4=1107

實施例94

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4'[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物94：

UPLC方法：AP_B4_1：Rt=7.8 min

LCMS方法：LCMS_AP：Rt=5.3 min，m/3=1485；m/4=1116

實施例95

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物95：

UPLC方法：AP_B4_1：Rt=8.0 min

LCMS方法：LCMS_AP：Rt=5.2 min，m/3=1466；m/4=1100

實施例96

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物96：

UPLC方法：09_B4_1：Rt=8.4 min

LCMS方法：LCMS_13：Rt=2.3 min，m/3=1422；m/4=1067

實施例97

N ^{ε 24}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg12,Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-升糖素

化學物97：

UPLC方法：AP_B4_1：Rt=8.2 min

LCMS方法：LCMS_AP：Rt=5.2 min，m/3=1475； m/4=1106

方法

檢定(I)

升糖素活性

將升糖素受體選殖至具有膜結合cAMP生物感測器(ACTOne^TM)之HEK-293細胞中。將細胞(每孔14000個)在384孔培養盤中培育(37℃、5% CO₂)隔夜。次日，以僅分佈至細胞質中之鈣反應性染料負載細胞。添加丙磺舒(Probenecid，一種有機陰離子輸送體抑制劑)以防止染料離開細胞。添加PDE抑制劑以防止格式化cAMP降解。將培養盤置於FLIPRTETRA中且添加升糖素類似物。6分鐘後收集終點資料。細胞內cAMP之增加與細胞質中鈣濃度之增加成比例。當鈣乾燥結合時，產生螢光信號。以Prism5計算EC50值。

檢定(II)

用於評估肽配方物理穩定性之ThT原纖維形成檢定。

肽之物理穩定性低可導致澱粉樣原纖維形成(在樣品中觀測到良序纖絲樣巨分子結構)，最終導致形成凝膠。此傳統上由目測檢查樣品來量測。然而，彼種量測極具主觀性且取決於觀測者。因此，應用小分子指示探針有利得多。硫代黃素(Thioflavin T，ThT)係此種探針且在與原纖維結合時具有獨特螢光特徵[Naiki等人(1989)Anal.BioChem.177,244-249；LeVine(1999)Methods.Enzymol.309,274-284]。

原纖維形成之時程可由具有以下表達式之S形曲線來描述[Nielsen等人，(2001)Biochemistry 40,6036-6046]：

此處，F為時間t時之ThT螢光。常數t0為達成50%最大螢光所需之時間。描述原纖維形成之兩個重要參數為由t0-2 τ計算之延遲時間及表觀速率常數k_app 1/τ。

形成肽之部分摺疊中間物建議作為原纖維形成之通用起始機制。彼等中間物中極少成核而形成其他中間物可於其上組裝且繼續進行原纖維形成之模板。延遲時間對應於建構核之臨界質量的間隔且表觀速率常數為原纖維自身形成之速率。

在每次檢定前新鮮製備樣品。以圖例描述每一樣品組成。使用適當量之濃NaOH及HCl將樣品之pH調整至所需值。自H₂O中之儲備溶液向樣品中添加硫代黃素T，最終濃度為1 μM。

在96孔微量滴定板(Packard OptiPlate^TM-96，白色聚苯乙烯)中置放200 μl樣品等分試樣。通常，一行孔中置放各樣品之四或八個複本(對應於一種測試條件)。將培養盤以Scotch Pad(Qiagen)密封。

在Fluoroskan Ascent FL螢光盤讀取器(Thermo Labsystems)中進行指定溫度下之培育、震盪及ThT螢光發射之量測。將溫度調整至所需值，典型地為30℃或37℃。在無震盪下(無外部物理應力)或在振幅為1 mm之調整至960 rpm之迴轉式震盪下培育培養盤。使用經444 nm過濾器激發且經485 nm過濾器量測發射來進行螢光量測。

藉由將培養盤在檢定溫度下培育10 min來起始每次運行。每隔20分鐘量測培養盤歷時所需時間段。每次量測之間，如所述震盪且加熱培養盤。

完成ThT檢定之後，彙集每一樣品之四個或八個複本且在18℃下以20000 rpm離心30分鐘。經0.22 μm過濾器過濾上清液且將等分試樣轉移至HPLC小瓶。

使用適當標準物作為參考，藉由逆相HPLC測定初始樣品及濾過上清液中之肽濃度。濾過樣品濃度佔初始樣品濃度之百分比報導為回收率。

量測點以Microsoft Excel格式保存以供進一步處理，且使用GraphPad Prism繪示與擬合曲線。在不存在原纖維下，來自ThT之背景發射可忽略。資料點典型地為四個或八個樣品之平均值且由標準偏差誤差條形柱顯示。僅同一實驗(亦即同一培養盤上之樣品)中獲得之資料呈現於同一圖中，從而確保對於各實驗間之原纖維形成的相對量度。資料集可與方程式(1)擬合。然而，可藉由視覺檢查曲線來評估原纖維形成前之延遲時間，以識別ThT螢光顯著高於背景水準之時間點。

檢定(III)

GLP-1活性

將GLP-1受體選殖至具有膜結合cAMP生物感測器(ACTOne^TM)之HEK-293細胞中。將細胞(每孔14000個)在384孔培養盤中培育(37℃、5% CO₂)隔夜。次日，以僅分佈至細胞質中之鈣反應性染料負載細胞。添加丙磺舒(一種有機陰離子輸送體抑制劑)以防止染料離開細胞。添加PDE抑制劑以防止格式化cAMP降解。將培養盤置於FLIPRTETRA中且添加升糖素類似物。6分鐘後收集終點資料。細胞內cAMP之增加與細胞質中鈣濃度之增加成比例。當鈣乾燥結合時，產生螢光信號。以Prism5計算EC50值。

檢定(IV)

LOCI檢定

使用螢光氧通道免疫檢定(Luminescence Oxygen Channeling Immunoassay，LOCI)分析樣品之肽。以抗生蛋白鏈菌素塗佈供者珠粒，而使受者珠粒與對升糖素具特異性之單株抗體(1F120)結合。以生物素標記其他升糖素結合單株抗體(2F7)。使三種反應物與分析物合併且形成雙位點免疫複合物。照射複合物可自供者珠粒釋放單態氧原子。其開道進入受者珠粒中且觸發可在EnVision盤讀取器中進行量測之化學發光。發射光之量與肽濃度成比例。

將1 μL樣品/校準物/對照物施加至384孔LOCI培養盤之孔中，繼而施加經抗體塗佈之受者珠粒(0.5 μg/孔)與生物素標記抗體之15 μL混合物。將培養盤在21-22℃下培育1 h。隨後向每一孔中添加30 μL經抗生蛋白鏈菌素塗佈之供者珠粒(2 μg/孔)且在21-22℃下培育30分鐘。在由680 nm雷射激發後，以具有520-645 nm帶寬之過濾器在21-22℃下於Envision盤讀取器中讀取盤數據。每孔之總量測時間為210 ms，包括70 ms激發時間。

檢定(V)

飲食誘發性肥胖大鼠之體重減輕

將64隻高脂肪(Research Diet D12492)餵養及八隻低脂肪(Research Diet D12450B)餵養之來自Taconic Europe之史泊格多利(Sprague Dawley)大鼠用於此研究。此等大鼠在給藥前之重量應分別約為970 g及730 g。大鼠應可隨意獲取水且個別圈養以使得可每日監控食物攝入。在10AM至10PM之間關閉燈光。

將大鼠分為八組且每日一次以兩種測試物質經皮下給藥歷時15天，給藥量為0.5 ml/kg。開始給藥之前，每日處置大鼠且訓練皮下給藥歷時5天。

在第5個給藥日，由於大鼠經歷之劇烈體重減輕曲線，因此將升糖素類似物之劑量由30 nmol/kg調整為3 nmol/kg且由300 nmol/kg調整為30 nmol/kg。

在第11天，描繪大鼠之血糖概況。在第15天或第16天終止大鼠，且收集血液樣品以供量測胰島素及膽固醇。

檢定(VI)

使用隨意餵食大鼠模型，測試升糖素衍生物對於食慾之功效之實驗方案

使用來自Taconic Europe,Denmark之史泊格多利(SD)大鼠進行實驗。此等大鼠在實驗開始時體重為200-250 g。大鼠在實驗開始前14天到達以適應實驗設備。在此期間，將動物處置兩次。到達之後，使大鼠在歷時兩週之逆相亮/暗相(意謂在白天關閉燈光且在夜晚開啟燈光)中個別圈養一週。由於大鼠在黑暗階段期間通常活躍且食入其每日食物攝入之大部分，因此在關閉燈光前之清晨對大鼠給藥。

此設置導致最低資料變化及最高測試敏感性。在圈養大鼠之籠內進行實驗且大鼠在整個適應期及實驗期可自由獲取食物及水。在5隻大鼠之組中測試每一劑量之衍生物。每一組測試中包括6-7隻大鼠之媒劑組。根據體重以皮下(sc.)投予之0.01-3 mg/kg溶液對大鼠給藥一次。給藥之後，大鼠再回到其圈養籠，此處其可獲取食物及水。個別地由線上登記連續記錄食物消耗或每小時手動記錄歷時7小時，且隨後在24 h之後且在48小時之後再次記錄。實驗階段結束時，使動物安樂死。

以Microsoft excel表格記錄個體資料。在對異常值應用Grubbs統計學評估試驗之後，排除異常值。使用學生t試驗(Student's t-test)或單向ANOVA在媒劑組與測試組之間進行比較。

檢定(VII)

DPP-IV穩定性檢定

在37℃下，在添加有0.005%吐溫20之HEPES緩衝液中以DPP-IV(2 μg/ml)一式兩份培育10 μM肽。在此實驗中，使用人類GLP-1作為陽性對照。在3、15、30、60、120及240 min時獲得等分試樣之樣品且添加三體積乙醇以停止反應。藉由LC-MS分析樣品之母肽。根據第一動力學對資料作圖且將穩定性報導為半衰期。

檢定(VIII)

PK概況

將15隻雄性大鼠(史泊格多利，400 g，Taconic Europe)分為三組，每組五隻大鼠。在t=0時分別對大鼠給藥15 nmol/kg(靜脈內，IV)、30 nmol/kg(皮下，SC)或100 nmol/kg。在使大鼠很快地處於異氟醚麻醉下的同時，經由尾部靜脈進行靜脈內給藥。在時間t=-15 min、5 min(僅靜脈內給藥大鼠)、15 min、30 min、1 h、1½ h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h時經由舌下靜脈獲得血液樣品。將血漿樣品冷凍儲存直至藉由檢定IV進行分析。

檢定(IX)

pH依賴性溶解度

肽及蛋白質之溶解度取決於溶液之pH。蛋白質或肽常在其等電點(pI)時或接近其等電點時沈澱，此時其淨電荷為零。在低pH(亦即，低於pI)下，蛋白質及肽典型地帶正電，在高於pI之pH下，其帶負電。

若治療性肽在指定pH下以足夠濃度可溶則為有利的，其適合於調配穩定藥物產品及例如藉由皮下注射向患者投予該藥物產品。

如下所述量測溶解度相對於pH之曲線：製備配方或肽於水中之溶液且藉由添加HCl及NaOH將等分試樣調整至所需範圍內之pH值。使此等樣品在室溫下保持平衡歷時2-4天。隨後將樣品離心。提取小的等分試樣之每一樣品進行逆相HPLC分析以測定溶液中之蛋白質濃度。在離心之後量測每一樣品之pH，且相對於所量測之pH描繪每一蛋白質之濃度。

檢定(X)

化學穩定性評估

藉由RP-UPLC分離及UV偵測研究升糖素類似物之化學穩定性。將冷凍樣品溶解於緩衝液(參見下文詳細組成)中，最終濃度為333 μM及pH為8.15，且在5℃及37℃下培育14天，繼而進行RP-UPLC分析。將純度定義為在每一層析圖中主峰相對於所有積分峰總面積之面積百分比。在37℃下14天後之純度損失確定為在5℃及37℃下培育之樣品之間的純度差異除以在5℃下培育14天後之樣品純度。

使用典型地由A：50 mM磷酸鹽、10 w/w%乙腈pH 3及B：80 v/v%乙腈組成之流動相系統，使用在50℃下以0.4 mL/min之流動速率操作之Waters BEH130 2.1 mm×150 mm、1.7 μm管柱進行RP-UPLC分析。在215 nm下進行UV-偵測。用於大多數樣品之典型梯度概況如下所示。

對於與大部分類似物相比以實質上不同之滯留時間洗提之某些個別類似物而言，對梯度概況進行某些調整以使得可在樣品之間更佳地進行純度評估比較。通道B流動相組分之組成在某些分析中亦交換為90 v/v%乙腈溶劑溶液以試圖更佳地處置序列中一次注射至下次注射之物質遺留。然而，此代價在於適當時需重新計算梯度概況。

緩衝液：50 mM磷酸二鈉二水合物(Dinatriumphosphatdihydrat)

184 mM丙二醇

58 mM苯酚

pH經H₃PO₄調整至8.15。在類似物再懸浮後pH調整至8.15的情況下，使用0.2 M NaOH。

檢定(XI)

小種豬之藥物動力學研究

此研究目的在於確定升糖素衍生物在靜脈內投予小種豬後之活體內藥物動力學性質。此在藥物動力學(PK)研究中進行，其中尤其測定所論述衍生物之末端半衰期及清除率參數。增加末端半衰期及減少清除率意謂自主體更緩慢消除所研究之化合物。對於升糖素類似物而言，此使得藥理學作用之持續時間延長。

自Ellegaard Gottingen Minipigs(Dalmose，Denmark)獲得約7-14個月大且體重約16-35 kg之雄性或雌性Göttingen小種豬用於研究。小種豬個別圈養(豬具有永久性導管)或分組圈養且每天一次或兩次限制性喂飼SDS小種豬飲食(Special Diets Services，Essex，UK)。在某些研究中，在適應至少2週後，在每一動物之尾側腔靜脈或顱側腔靜脈中植入兩個永久性中樞靜脈導管。使動物在手術後恢復1週，且隨後用於重複藥物動力學研究，在連續升糖素衍生物給藥之間具有適合洗淨期。在其他研究中，使動物適應1週，之後用於重複藥物動力學研究，在連續升糖素衍生物給藥之間具有適合洗淨期。在每次給藥情況下，使此等豬之一個耳靜脈中裝配一個衍生物經其給藥之靜脈留置針導管(venflon)。藉由靜脈穿刺在頸靜脈或顱側腔靜脈進行血液採樣。

使動物在給藥前不禁食或禁食約18 h，且在給藥後禁食0至4 h，但在整個期間可隨意獲取水。

通常將升糖素衍生物溶解於50 mM磷酸鈉、145 mM氯化鈉、0.05%吐溫80(pH 7.4)中，濃度通常為20-60 nmol/ml。經由一個導管或經由靜脈留置針導管給予化合物之靜脈內注射液(量通常對應於2-3 nmol/kg，例如0.1 ml/kg)，且在預定時間點對血液採樣(較佳經由另一導管或藉由靜脈穿刺)直至給藥後13天。將血液樣品(例如0.8 ml)收集在具有EDTA緩衝液(8 mM)之小管中(有時添加抑酶肽500 KIU/ml血液)且隨後在4℃及1942 G下離心10分鐘。將血漿以吸液管吸至乾冰上之微管中且保持在-20℃下直至使用如ELISA或LC-MS之適當定量檢定分析各別升糖素衍生物之血漿濃度。基於此等量測值，對所研究化合物之時間-血漿濃度概況作圖且以WinNonlin 5.0版或Phoenix 6.2版(Pharsight Inc.,Mountain View,CA,USA)或其他PK分析相關軟體對資料進行所謂非室體模型藥物動力學分析。對於大多數化合物而言，當以半對數曲線繪製時，血漿-濃度概況之末端部分將為線性的，反映在初始分佈之後，藥物以恆定分數速率自體內移除。速率(λZ或λ_Z)等於曲線末端部分之斜率的負值。由此速率，亦可計算末端半衰期為t½=ln(2)/λ_z(例如參見Johan Gabrielsson及Daniel Weiner：Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis.Concepts & Applications，第3版，Swedish Pharmaceutical Press,Stockholm(2000))。

清除率定義為劑量(D)除以血漿濃度相對於時間概況上之曲線下面積(AUC)(Rowland,M及Tozer TN：Clinical Pharmacokinetics：Concepts and Applications，第3版，1995 Williams Wilkins)。

檢定(XII)

升糖素類似物對飲食誘發性肥胖(DIO)大鼠體重的影響

此檢定之目的在於評估升糖素類似物對飲食誘發性肥胖(DIO)大鼠體重的影響。

簡言之，對大鼠喂飼高脂肪飲食歷時10週且獲得約600 g之體重。隨後對DIO大鼠每日投予皮下劑量之升糖素類似物歷時三週。與給藥相關每天量測體重。

每籠圈養三隻到達時重量約325 g之雄性史泊格多利大鼠(Taconic，Denmark)且可隨意獲取高脂肪飲食(Research Diets，R12492，60%熱量來自脂肪)及水。在高脂肪飲食下4週後，將動物隨機分為每籠圈養兩隻，且再一週後，以每日皮下給藥升糖素類似物起始一週研究。此後，動物接受4週洗淨，之後起始目前研究。洗淨期之後，將動物隨機分為16組，每組6隻大鼠，及一組10隻大鼠構成媒劑組。在整個期間使動物保持12小時亮-暗循環。

將升糖素類似物溶解於50 mM Na₂HPO₄、145 mM NaCl及0.05%吐溫中且對DIO大鼠每日投予皮下劑量為0.5 ml/kg之升糖素類似物歷時三週(下午4點)。與給藥相關每日量測體重。

儘管本文已說明且描述本發明之某些特徵，但多種改變、取代、變化及等效物現將為一般熟習此項技術者所瞭解。因此應瞭解，隨附申請專利範圍欲涵蓋在本發明真實精神內之所有該等改變及變化。

圖1展示升糖素類似物對DIO大鼠體重之影響。每日投予DIO大鼠皮下劑量(4 nmol/kg)之升糖素類似物歷時三週且每日量測體重。所有四種升糖素類似物均隨時間推移使體重減輕。

<110> 諾佛．儂迪克股份有限公司(Novo Nordisk A/S)

<120> 新穎升糖素類似物

<130> 8417.204-WO

<160> 5

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 29

<212> PRT

<213> 智慧人

<400> 1

<210> 2

<211> 31

<212> PRT

<213> 智慧人

<400> 2

<210> 3

<211> 39

<212> PRT

<213> 吉拉毒蜥

<400> 3

<210> 4

<211> 29

<212> PRT

<213> 智慧人

<220>

<221> X3

<222> (3)..(3)

<223> His

<220>

<221> X10

<222> (10)..(10)

<223> Val

<220>

<221> X12

<222> (12)..(12)

<223> Arg

<220>

<221> X15

<222> (15)..(15)

<223> Glu

<220>

<221> X16

<222> (16)..(16)

<223> Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr

<220>

<221> X17

<222> (17)..(17)

<223> Lys

<220>

<221> X20

<222> (20)..(20)

<223> Lys

<220>

<221> X21

<222> (21)..(21)

<223> Glu

<220>

<221> X24

<222> (24)..(24)

<223> Lys

<220>

<221> X27

<222> (27)..(27)

<223> Leu

<220>

<221> X28

<222> (28)..(28)

<223> Ser、Ile、Gly或Thr

<220>

<221> X29

<222> (29)..(29)

<223> Val、Leu或Ile

<400> 4

<210> 5

<211> 30

<212> PRT

<213> 智慧人

<220>

<221> X3

<222> (3)..(3)

<223> His

<220>

<221> X10

<222> (10)..(10)

<223> Val

<220>

<221> X12

<222> (12)..(12)

<223> Arg

<220>

<221> X15

<222> (15)..(15)

<223> Glu

<220>

<221> X16

<222> (16)..(16)

<223> Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr

<220>

<221> X17

<222> (17)..(17)

<223> Lys

<220>

<221> X20

<222> (20)..(20)

<223> Lys

<220>

<221> X21

<222> (21)..(21)

<223> Glu

<220>

<221> X24

<222> (24)..(24)

<223> Lys

<220>

<221> X27

<222> (27)..(27)

<223> Leu

<220>

<221> X28

<222> (28)..(28)

<223> Ser、Ile、Gly或Thr

<220>

<221> X29

<222> (29)..(29)

<223> Val、Leu或Ile

<220>

<221> X30

<222> (30)..(30)

<223> 此位置之Pro可存在或不存在。此肽在1至6個胺基酸延伸上可具有附加殘基。

<400> 5

Claims

一種升糖素肽，其包含：SEQ ID 1，其中X₂₄為Lys且其中存在至少一個以下取代：X₁₅為Glu或X₁₆為Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr，且該升糖素肽中存在至多六個額外胺基酸取代，及包含三個或三個以上帶負電部分之取代基，其中該等帶負電部分之一位於親脂性部分遠端，且其中該取代基於位置24連接於Lys之側鏈氮，或其醫藥學上可接受之鹽、酯、醯胺或酸。
如申請專利範圍第1項之升糖素肽，其中X₁₆為Ile、Phe、Arg、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr。
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中X₁₆為Ile、Val、Leu或Phe。
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中該額外胺基酸取代可選自該升糖素肽之以下位置：X₁₀為Val、X₁₂為Arg、X₁₇為Lys、X₂₀為Lys、X₂₁為Glu、X₂₇為Leu、X₂₈為Ser、Ile、Gly或Thr，且X₂₉為Val、Leu或Ile。
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中該X₂₈為Ser。
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中該取代基具有式II：Z₁-Z₂-Z₃-Z₄[II]其中，Z₁表示根據式IIa或IIb之一的結構；其中式IIa中之n為6-20，式IIa及IIb中之符號*表示與Z₂中之氮的連接點；若Z₂不存在，則Z₁在符號*處連接至Z₃上之氮，且若Z₂及Z₃不存在，則Z₁在符號*處連接至Z₄上之氮；Z₂不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地具有立體化學L或D；其中Z₂經由*表示之碳原子連接至*表示之Z₃之氮；若Z₃不存在，則Z₂經由*表示之碳原子連接至*表示之Z₄之氮；且若Z₃及Z₄不存在，則Z₂經由*表示之碳連接至該升糖素肽之位置24之Lys的ε氮；Z₃不存在或表示根據式IIm、IIn、IIo或IIp之一的結構； Z₃經由具有符號*之Z₃之碳連接至具有符號*之Z₄之氮，若Z₄不存在，則Z₃經由具有符號*之碳連接至該升糖素肽之位置24之Lys的ε氮；Z₄不存在或表示根據式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的結構；其中每一胺基酸部分獨立地為L或D，其中Z₄經由具有符號*之碳連接至該升糖素肽之位置24之Lys的ε氮，其限制條件為該取代基中存在Z₂或Z₄或Z₂與Z₄兩者。
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIi、IIIj、IIIk、IIIl、IIIm、IIIn、IIIo、IIIp、IIIq、IIIr、IIIs、IIIt、IIIu、IIIv、IIIw、IIIx或IIIy之一的結構：或
如申請專利範圍第7項之升糖素肽，其中該取代基表示根據式IIIa、IIIp或IIIt之一的結構：
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其係選自以下組成之群：化學物8：化學物13：化學物15：化學物17：化學物19：化學物24 化學物26：化學物28：化學物34：化學物37：化學物40：化學物42：化學物44：化學物46：化學物48：化學物50：化學物56：化學物58：化學物60：化學物68：化學物70：化學物72：化學物74：化學物76：化學物78：化學物80：化學物82：化學物84：化學物86：化學物88：化學物90：化學物92：化學物94：化學物96：
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其具有以下結構：N^ε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]-[Val¹⁰,Leu¹⁶,Glu²¹,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其具有以下結構：N^ε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其具有以下結構：N^ε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2- [2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]乙氧基]乙氧基]乙醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Arg¹²,Ala¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其具有以下結構：N^ε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]胺基]丁醯基]-[Leu¹⁶,Lys²⁴,Leu²⁷,Ser²⁸]-升糖素
如申請專利範圍第1-2項中任一項之升糖素肽，其中該升糖素肽係與GLP-1化合物、胰島素化合物或腸促胰島素類似物(exendin)-4組合。
如申請專利範圍第14項之升糖素肽，其中該GLP-1 化合物係選自化合物G1和G3組成之群：N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)[Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G1)；和N-ε 26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七醯基胺基)丁醯基胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯胺基]乙氧基}乙氧基)乙醯基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)： (化合物G3)。
如申請專利範圍第14項之升糖素肽，其中該胰島素化合物為化合物G5：N ε B29-十六烷二醯基-γ-Glu-(desB30)人類胰島素 (化合物G5)。
一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第1-16項中任一項之升糖素肽。
如申請專利範圍第17項之醫藥組合物，其另外包含一或多種額外治療活性化合物或物質。
如申請專利範圍第17-18項中任一項之醫藥組合物，其適於腸胃外投藥。
一種用於療法中使用之如申請專利範圍第1-16項中任一項的升糖素肽。