CN104093735B - 新的胰高血糖素类似物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的胰高血糖素、所述胰高血糖素肽在疗法中的用途、包括将所述胰高血糖素肽给予有需要的患者的治疗方法和所述胰高血糖素肽在制备药物中的用途。本发明的胰高血糖素肽在有关高血糖症、糖尿病和肥胖症以及与高血糖症、糖尿病和肥胖症有关的各种疾病或病况的治疗中具有特殊价值。

Description

新的胰高血糖素类似物
发明领域
本发明涉及新的胰高血糖素肽类似物、所述肽在疗法中的用途、包括将所述肽给予患者的治疗方法和所述肽在制备药物中的用途。
发明背景
对血糖水平的精确控制对人以及其它哺乳动物都极其重要。十分确定的是胰岛素和胰高血糖素两种激素对于维持适当的血糖水平很重要。胰岛素通过葡萄糖的外周摄取增加和自肝脏的葡萄糖输出减少来降低血糖水平而作用于肝脏和外周组织，而胰高血糖素通过糖异生和糖原分解上调来提高血糖水平而主要作用于胰腺和肝脏。另据报告，胰高血糖素增加脂解作用，诱导酮症并降低血浆中的血浆甘油三酯水平[Schade和Eaton，Acta Diabetologica，1977，14，62]。
胰高血糖素是抵抗低血糖的防御机制的重要部分，给予低剂量的胰高血糖素可防止胰岛素诱导性低血糖或改善从低血糖恢复的能力。还表明胰高血糖素激动作用对脂质代谢、能量消耗和食物摄取发挥作用[Habegger等, Nature Reviews Endocrinology 2010，6，689-697]。
许多患有糖尿病、特别是患有2型糖尿病的人体重超重或肥胖。肥胖症表示严重的并且甚至是致命的常见病的高风险因素，并且对于大多数糖尿病患者，非常需要的是对他们的治疗不引起体重增加。
公开了不同的基于胰高血糖素的类似物和GLP-1/胰高血糖素受体协同激动剂的若干专利申请是本领域已知的，例如专利WO2008/086086、WO2008/101017、WO2007/056362、WO2008/152403和WO96/29342。所公开的其它胰高血糖素类似物在天然人胰高血糖素的特定位置上是聚乙二醇化的(例如WO2007/056362)或者是酰化的(例如WO96/29342)。用于防止低血糖的胰高血糖素肽公开于例如专利申请US7314859中。
胰高血糖素由于具有约5分钟的半寿期而在循环中快速清除，因此在药物中具有有限的潜在应用。在需要在延长的时间内保持治疗剂的高血液水平的情况下，其高清除率是不方便的，因为重复给药将会是必需的。在一些情况下，通过应用合适的药物组合物来影响肽的释放特征是可能的，但这种方法有各种缺点，一般不适用。
目前可获得作为冻干制剂的胰高血糖素，其作用持续时间短，限于少于1小时，尽管胰高血糖素水平达到的峰值水平远高于内源性胰高血糖素的水平。因此需要化学修饰的胰高血糖素化合物以便以连续水平递送，使得达到较长的生物半寿期，即作用特征延长的修饰胰高血糖素肽。
当溶于水溶液中时，胰高血糖素的物理和化学稳定性差。胰高血糖素的溶液在数小时或数天内形成凝胶和原纤维，这取决于肽的纯度、盐浓度、pH和温度(Beaven等，European J. Biochem. 1969, 11, 37-42)。胰高血糖素含有可产生脱酰氨基化、切割、天冬酰亚胺形成和异构化的若干不稳定的氨基酸或氨基酸序列。另外，人胰高血糖素的溶解度在3.5-9.5的pH范围内极差。
发明概述
本发明涉及所述肽在疗法中的用途、包括将所述肽给予患者的治疗方法和所述肽在制备用于治疗糖尿病、肥胖症和相关疾病和病况的药物中的用途。
本发明人出乎意料地发现胰高血糖素肽的氨基酸3、15和/或16位中的一个或多个取代和所述胰高血糖素肽的24位与包含3个或更多个带负电荷的部分的取代基连接导致稳定性改进的胰高血糖素激动剂，其中所述带负电荷的部分之一是亲脂部分的远端。
本发明提供新的修饰胰高血糖素肽，其在中性pH下溶解度改进，针对凝胶和原纤维形成的物理稳定性改进，化学稳定性改进且半寿期延长，同时药代动力学性质也得到改进。
在第一个实施方案(实施方案1)中，本发明涉及胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、酸或前药，其包含：
● SEQ ID 1，其中X24表示Lys，其中存在至少一个下列取代：X3为His，X15为Glu或X16为Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr且在所述胰高血糖素肽中多达6个另外的氨基酸取代和
● 包含亲脂部分和3个或更多个带负电荷的部分的取代基，其中所述带负电荷的部分之一为所述亲脂部分的远端，且其中取代基在24位的Lys的侧链氮上连接。
在另一个实施方案中，本发明还提供胰高血糖素肽的酯形式。
本发明还涉及本发明的化合物在疗法中的用途、包含本发明的化合物的药物组合物和本发明的化合物在制备药物中的用途。
附图简述
图1显示胰高血糖素类似物对DIO大鼠的体重的作用。给予DIO大鼠每日皮下剂量(4 nmol/kg)的胰高血糖素类似物达3周，并每天测量体重。所有4种胰高血糖素类似物随时间推移减轻体重。
发明描述
除了提供在生理pH下在稳定的药物组合物中的这类修饰胰高血糖素肽以外，本发明的肽还提供具有延长的作用特征的新的修饰胰高血糖素肽。本发明涉及新的胰高血糖素类似物，其溶解度改进、针对凝胶和原纤维形成的物理稳定性改进、化学稳定性改进并且半寿期延长。
本发明人出乎意料地发现，本发明的化合物针对凝胶和原纤维形成的物理稳定性得到改进、化学稳定性改进且半寿期延长，同时在中性pH或略碱性pH下的水溶性也得到改进。
在一个实施方案中，本发明涉及胰高血糖素肽，其中X16为Ile、Phe、Arg、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr。
本发明的其它实施方案包括以下：
2. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含0、1、2、3、4、5或6个另外的氨基酸残基取代。
3. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含0个另外的氨基酸残基取代。
4. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含1个另外的氨基酸残基取代。
5. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含2个另外的氨基酸残基取代。
6. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含3个另外的氨基酸残基取代。
7. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含4个另外的氨基酸残基取代。
8. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含5个另外的氨基酸残基取代。
9. 实施方案1的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽在所述胰高血糖素肽中包含6个另外的氨基酸残基取代。
10. 实施方案1-2和4-9中任一个的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的下列氨基酸位置：X9、X10、X12、X17、X20、X21、X27、X28、X29和/或X30。
11. 实施方案10的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的下列氨基酸位置：X10、X12、X17、X20、X21、X27、X28和/或X29。
12. 实施方案11的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的下列氨基酸位置：X12、X17、X20、X21、X27和/或X28。
13. 实施方案12的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的X10、X12、X27和/或X28位。
14. 实施方案13的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的X12、X27和/或X28位。
15. 实施方案11的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的X10、X12、X27和/或X29位。
16. 实施方案15的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可位于所述胰高血糖素肽的X12、X27和/或X29位。
17. 实施方案10-16中任一个的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可选自所述胰高血糖素肽的下列位置：
X9表示Glu；
X10表示Val；
X12表示Arg；
X17表示Lys；
X20表示Lys；
X21表示Glu；
X27表示Met(O)、Val、Leu、Ile、Ala或Glu；
X28表示Ser、Thr、Ala、Gln、Val、Leu、Ile、Arg、Lys、His、Asp、Gly或Glu；
X29表示Ser、Gln、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Arg、Lys、His、Asp或Glu和
X30不存在或表示Pro。
18. 实施方案17的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可选自所述胰高血糖素肽的下列位置：X12为Arg，X17为Lys，X20为Lys，X21为Glu，X27为Leu，X28为Ser、Ile或Thr。
19. 实施方案17的胰高血糖素肽，其中所述另外的氨基酸取代可选自所述胰高血糖素肽的下列位置：X10为Val，X21为Glu，X27为Leu，X28为Ser。
20. 实施方案17的胰高血糖素肽，其中X9表示Glu。
21. 实施方案19的胰高血糖素肽，其中X10表示Val。
22. 实施方案18的胰高血糖素肽，其中X12表示Arg。
23. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Ala。
24. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Ile。
25. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Phe。
26 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Arg。
27. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Thr。
28. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Val。
29. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Leu。
30. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Glu。
31. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Trp。
32. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中X16表示Tyr。
33. 实施方案23-32中任一个的胰高血糖素肽，其中X17表示Lys。
34. 实施方案33的胰高血糖素肽，其中X20表示Lys。
35. 实施方案34的胰高血糖素肽，其中X21表示Glu。
36. 实施方案35的胰高血糖素肽，其中X27表示Met(O)、Met(O2)、Val、Leu、Ile、Ala或Glu。
37. 实施方案36的胰高血糖素肽，其中X27表示Leu或Glu。
38. 实施方案36的胰高血糖素肽，其中X27表示Leu。
39. 实施方案36的胰高血糖素肽，其中X27表示Glu。
40 实施方案33-39中任一个的胰高血糖素肽，其中X28表示Ser、Thr、Ala、Gln、Val、Leu、Ile、Arg、Lys、His、Asp、Gly或Glu。
41. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Ser、Thr、Gly或Ile。
42. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Ser、Thr或Ile。
43. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Ser。
44. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Thr。
45. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Gly。
46. 实施方案40的胰高血糖素肽，其中X28表示Ile。
47. 实施方案40-46中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Ser、Gln、Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Arg、Lys、His、Asp或Glu。
48. 实施方案47的胰高血糖素肽，其中X29表示Val、Leu或Ile。
49. 实施方案47-48中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Val。
50. 实施方案47-48中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Leu。
51. 实施方案47-48中任一个的胰高血糖素肽，其中X29表示Ile。
52. 实施方案47-51中任一个的胰高血糖素肽，其中X30不存在或表示Pro。
53. 实施方案52的胰高血糖素肽，其中X30不存在。
54. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基具有下式II：
Z1-Z2-Z3-Z4 [II]
其中，
Z1表示式IIa或IIb之一的结构；
其中n在式IIa中为6-20，
式IIa和IIb中的符号*表示与Z2中的氮的连接点；
如果Z2不存在，则Z1在符号*处与Z3的氮连接，并且如果Z2和Z3不存在，则Z1在符号*处与Z4的氮连接；
Z2不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；
其中各个氨基酸部分独立地具有立体化学结构L或D；
其中Z2通过标为*的碳原子与标为*的Z3的氮连接；
如果Z3不存在，则Z2通过标为*的碳原子与标为*的Z4的氮连接，并且如果Z3和Z4不存在，则Z2通过标为*的碳与胰高血糖素肽24位处的Lys的ε氮连接；
Z3不存在或表示式IIm、IIn、IIo或IIp之一的结构；
Z3通过具有符号*的Z3的碳与具有符号*的Z4的氮连接，如果Z4不存在，则Z3通过具有符号*的碳与胰高血糖素肽24位处Lys的ε氮连接；
Z4不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；其中各个氨基酸部分独立地为L或D，其中Z4通过具有符号*的碳与胰高血糖素肽24位处Lys的ε氮连接，
条件是Z2或Z4的任一个或Z2和Z4两个存在于所述取代基中。
55. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基具有下式II：
Z1-Z2-Z3-Z4- [II]
其中，
Z1表示式IIa或IIb之一的结构；
其中n在式IIa中为6-20，
Z2不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；
其中各个氨基酸部分独立地具有立体化学结构L或D。
Z3不存在或表示式IIm、IIn、IIo或IIp之一的结构；
Z4不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；
其中各个氨基酸部分独立地具有立体化学结构L或D。
56. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中式IId-IIk的结构具有立体化学结构L。
57. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中式IId-IIk的结构具有立体化学结构D。
58. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中当Z4存在时，式II的所述取代基的Z2不存在。
59. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中当Z2存在时，式II的所述取代基的Z4不存在。
60. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基表示式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIi、IIIj、IIIk、IIIl、IIIm、IIIn、IIIo、IIIp、IIIq、IIIr、IIIs、IIIt、IIIu、IIIv、IIIw、IIIx或IIIy之一的结构：
。
61. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基表示式IIIa、IIIb、IIIi、IIIn、IIIp、IIIr、IIIs、IIIt、IIIu、IIIv、IIIw、IIIx或IIIy之一的结构：
。
62. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基表示式IIIa、IIIp或IIIt之一的结构：
。
63. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z4不存在。
64. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z3和Z4不存在。
65. 实施方案1-62中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由带负电荷的部分(例如γGlu、Glu和/或Asp)表示。
66. 实施方案65的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由多达10个所述带负电荷的部分表示。
67. 实施方案66的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由3个所述带负电荷的部分表示。
68. 实施方案66的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由4个所述带负电荷的部分表示。
69. 实施方案66的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由5个所述带负电荷的部分表示。
70. 实施方案1-62和65-69中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Glu和/或γGlu部分表示。
71. 实施方案70的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由γGlu、γGlu-Glu、γGlu-Glu-Glu、γGlu-Glu-Glu-Glu、γGlu-Glu-Glu-Glu-Glu表示。
72. 实施方案1-62和65-69中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Glu和/或Asp部分表示。
73. 实施方案72的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由γGlu和/或Asp部分表示。
74. 实施方案72-73中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Asp部分表示。
75. 实施方案74的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Asp、Asp-Asp、Asp-Asp-Asp或Asp-Asp-Asp-Asp部分表示。
76. 实施方案70或72中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Glu部分表示。
77. 实施方案76的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由Glu、Glu-Glu、Glu-Glu-Glu、Glu-Glu-Glu-Glu、Glu-Glu-Glu-Glu-Glu表示。
78. 实施方案70或73中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由γGlu部分表示。
79. 实施方案78的胰高血糖素肽，其中所述取代基的Z2和Z4独立地由γGlu、γGlu-γGlu、γGlu-γGlu-γGlu、γGlu-γGlu-γGlu-γGlu、γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-γGlu表示。
80. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基包含直链烷基或支链烷基。
81. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示式IIa的结构，且n在式IIa中为12-18的数。
82. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示19-羧基十九烷酰基、17-羧基十七烷酰基、15-羧基十五烷酰基、13-羧基十三烷酰基或4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基。
83. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示19-羧基十九烷酰基、17-羧基十七烷酰基、15-羧基十五烷酰基或13-羧基十三烷酰基。
84. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基。
85. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示19-羧基十九烷酰基。
86. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示17-羧基十七烷酰基。
87. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示15-羧基十五烷酰基。
88. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中Z1表示13-羧基十三烷酰基。
89. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基与白蛋白非共价地结合。
90. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基在生理pH下带负电荷。
本发明人出乎意料地发现，本发明的化合物在中性pH或略碱性pH下水溶性得到改进。此外，本发明人还出乎意料地发现，本发明的胰高血糖素类似物针对在水溶液中凝胶和原纤维的形成具有改进的稳定性。本发明的胰高血糖素类似物的化学稳定性也出人意料地得到改进，即类似物的化学降解降低。本发明人发现，本发明的化合物的药代动力学性质得到改进，即它们的体内半寿期延长。此外，本发明的化合物以s.c.给予时显著降低体重。
不同pH值的溶解度可按测定法IX中所述测量。
本发明化合物的物理稳定性可按测定法II中描述的方法测量。
类似物的化学稳定性可按测定法X中所述测定。
半寿期可在物种例如大鼠(测定法VIII)或猪(测定法XI)中的药代动力学研究中测定。体重减轻可按测定法XII中所述在DIO小鼠中测量。
本发明化合物的长期作用意味着它们发挥生物学活性的时间延长。
可通过共同给予胰高血糖素与已知的抗糖尿病药(例如胰岛素、GLP-1激动剂和GIP激动剂)，实现对1型和2型糖尿病的血糖水平的更好控制。
在一个实施方案中，本发明的胰高血糖素类似物可与GLP-1类似物或胰岛素类似物共同配制，形成稳定的药物组合物。
与仅胰岛素的疗法相比，胰岛素和胰高血糖素疗法的组合可为有利的。通常，在餐后情况下，当血糖水平变低，第一激素反应是胰岛素产生降低。当血糖进一步下降时，二线反应是产生胰高血糖素—导致葡萄糖从肝脏的输出增加。当糖尿病患者接受太高的外源剂量的胰岛素时，胰高血糖素升高的天然反应被外源胰岛素的存在阻止，因为胰岛素对胰高血糖素产生具有抑制作用。因此，略微过量给予胰岛素可引起低血糖。目前，许多糖尿病患者因担心可能是危及生命的低血糖事件而往往较喜欢使用稍低于最适的胰岛素。
本发明的化合物在中性pH下可溶解，因此可允许与胰岛素共同配制，且允许更稳定的血糖水平，使低血糖事件次数减少，以及使糖尿病相关并发症的风险降低。
本发明的其它实施方案如下：
91. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽包含一个氨基酸残基的C端延伸。
92. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽为C端酰胺或C端羧酸。
93. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽为C端酰胺。
94. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽为C端羧酸。
95. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽选自胰高血糖素(1-29)、胰高血糖素(1-29)-酰胺或其类似物。
96. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其选自：Chem.1、Chem.2、Chem.3、Chem.4、Chem.5、Chem.6、Chem.7、Chem.8、Chem.9、Chem.10、Chem.11、Chem.12、Chem.13、Chem.14、Chem.15、Chem.16、Chem.17、Chem.18、Chem.19、Chem.20、Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、Chem.25、Chem.26、Chem.27、Chem.28、Chem.29、Chem.30、Chem.31、Chem.32、Chem.33、Chem.34、Chem.35、Chem.36、Chem.37、Chem.38、Chem.39、Chem.40、Chem.41、Chem.42、Chem.43、Chem.44、Chem.45、Chem.46、Chem.47、Chem.48、Chem.49、Chem.50、Chem.51、Chem.52、Chem.53、Chem.54、Chem.55、Chem.56、Chem.57、Chem.58、Chem.59、Chem.60、Chem.61、Chem.62、Chem.63、Chem.64、Chem.65、Chem.66、Chem.67、Chem.68、Chem.69、Chem.70、Chem.71、Chem.72、Chem.73、Chem.74、Chem.75、Chem.76、Chem.77、Chem.78、Chem.79、Chem.80、Chem.81、Chem.82、Chem.83、Chem.84、Chem.85、Chem.86、Chem.87、Chem.88、Chem.89、Chem.90、Chem.91、Chem.92、Chem.93、Chem.94、Chem.95、Chem.96和Chem.97。
本发明的其它实施方案涉及本发明的化合物与抗糖尿病药或抗肥胖症药一起给予：
97. 与胰高血糖素样肽1 (GLP-1)化合物组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽。
98. 与胰岛素化合物组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽。
99. 与毒蜥外泌肽-4 (exendin-4)组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽。
100. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其为双室制剂、贮库制剂(depository formulation)和/或微囊化制剂。
101. 与胰高血糖素样肽1 (GLP-1)化合物组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其用于制备治疗糖尿病和/或肥胖症的药物。
102. 与胰岛素化合物组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其用于制备治疗糖尿病和/或肥胖症的药物。
103. 与毒蜥外泌肽-4组合的前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其用于制备治疗糖尿病和/或肥胖症的药物。
104. 实施方案97-103中任一个的胰高血糖素肽，其中GLP-1化合物和胰岛素化合物分别用式G1-G4和G5表示：
N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六烷酰基氨基-丁酰基)[Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G1)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反式4-[(19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]环己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][脱氨基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G2)；
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G3)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五烷酰基氨基)-丁酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G4)和
NεB29-十六烷二酰基-γ-Glu-(desB30)人胰岛素
(化合物G5)。
105. 实施方案104的胰高血糖素肽，其中GLP-1化合物用式G1表示：
N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六烷酰基氨基-丁酰基)[Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G1)；
106. 实施方案104的胰高血糖素肽，其中GLP-1化合物用式G2表示：
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反式4-[(19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]环己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][脱氨基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G2)；
107. 实施方案104的胰高血糖素肽，其中GLP-1化合物用式G3表示：
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G3)；
108. 实施方案104的胰高血糖素肽，其中GLP-1化合物用式G4表示：
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五烷酰基氨基)-丁酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G4)
109. 实施方案104的胰高血糖素肽，其中胰岛素化合物用式G5表示：
NεB29-十六烷二酰基-γ-Glu-(desB30)人胰岛素
(化合物G5)。
110. 实施方案97-104中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽选自Chem.1-Chem.97，并与选自G1-G4的GLP-1化合物组合。
111. 实施方案97-104中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽选自Chem.1-Chem.97，并与胰岛素化合物例如G5组合。
112. 实施方案97-104中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽选自Chem.1-Chem.97，并与毒蜥外泌肽-4组合。
GLP-1是在食物摄取后由肠内分泌细胞产生的肠降血糖素激素。GLP-1是葡萄糖代谢和胰岛素从胰腺胰岛β细胞分泌的调节因子。GLP-1在糖尿病状态下还引起胰岛素分泌。然而GLP-1本身的体内半寿期非常短，因此，延长GLP-1的体内半寿期的方法引起了极大关注。
WO 98/08871公开了半寿期延长的基于人GLP-1(7-37)的长效GLP-1类似物和衍生物，包括利拉糖肽，一种每日一次给药的GLP-1衍生物，由Novo Nordisk A/S开发，市售用于治疗2型糖尿病。
艾塞那肽是用于治疗2型糖尿病的市售肠降血糖素模拟物，由AmylinPharmaceuticals和Eli Lilly & Co制造并销售。艾塞那肽以存在于吉拉毒蜥(Gilamonster)唾液中的激素毒蜥外泌肽-4为基础。它显示类似于人GLP-1的生物学性质。US5424286尤其涉及通过给予毒蜥外泌肽-4 (SEQ ID NO 3)而在哺乳动物中刺激胰岛素释放的方法。
本文所用术语“GLP-1化合物”是指人GLP-1(7-37)、毒蜥外泌肽-4及其保持GLP-1活性的类似物、融合肽和衍生物。
至于GLP-1化合物中的位置编号：对于本发明的目的，任何氨基酸取代、缺失和/或添加相对于GLP-1(7-37) (SEQ ID 2)和/或毒蜥外泌肽-4的序列而指明。然而，序列表中氨基酸残基的编号总是始于编号1，而对于本发明的目的，按照本领域已确立的作法，我们需要始于氨基酸残基编号7，并在GLP-1(7-37)的情况下将其指定为编号7。因此，本文中任何提及GLP-1(7-37)序列的位置编号通常是指始于第7位的His并且终于37位的Gly的序列。
GLP-1化合物可按照本领域已知制备。
GLP-1活性可用本领域已知的任何方法测定，例如本文的测定法(II) (在表达人GLP-1受体的细胞系中刺激cAMP形成)。
此外，GLP-1化合物是以下这样的化合物，其可：
i) 包含下列的至少一个：脱氨基His7、Aib8、Aib22、Arg26、Aib35和/或Lys37；
ii) 为包含白蛋白结合部分的GLP-1衍生物或其药学上可接受的盐，所述白蛋白结合部分包含至少一个、优选至少两个、更优选两个游离羧酸基团；
iii) 为包含白蛋白结合部分的GLP-1衍生物，所述白蛋白结合部分包含二羧酸的酰基，其优选包含共12-24个碳原子，例如C12、C14、C16、C18、C20、C22或C24，最优选C16、C18或C20；其中优选a)酰基通过接头与GLP-1肽的赖氨酸残基的ε氨基连接；b)接头包含至少一个OEG基团和/或至少一个4-氨基甲基-环己烷羧酸基团，任选另外至少一个Glu；和/或
iv) 选自化合物N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六烷酰基氨基-丁酰基)[Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G1)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反式4-[(19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]环己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][脱氨基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
(化合物G2)；
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G3)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五烷酰基氨基)-丁酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G4)；及其药学上可接受的盐、酰胺、烷基或酯。
本发明的“胰岛素”在本文要理解为人胰岛素、胰岛素类似物或胰岛素衍生物。
胰岛素化合物是可用例如以下表示的化合物：
NεB29-十六烷二酰基-γ-Glu-(desB30)人胰岛素
(化合物G5)；
可同时或序贯给予本说明书中定义的本发明的化合物和抗肥胖症药或抗糖尿病药。各要素可以单一剂型提供，其中所述单一剂型含有两种化合物，或者以套装药盒(kit-of-parts)的形式提供，所述套装药盒装有本发明化合物的制剂作为第一单位剂型和抗肥胖症药或抗糖尿病药的制剂作为第二单位剂型。每当本说明书全文中提及第一或第二或第三等单位剂量时，均不表示给药的优选顺序，而只是出于方便的目的。
所谓“同时”给予本发明化合物的制剂和抗肥胖症药或抗糖尿病药的制剂意指给予呈单一剂型的化合物，或给予第一药剂，之后给予第二药剂，其时间间隔不超过15分钟、优选10分钟、更优选5分钟、更优选2分钟。可先给予任一要素。
所谓“序贯”给药意指给予第一药剂，之后给予第二药剂，其时间间隔超过15分钟。可先给予两种单位剂型的任一种。优选通过同一静脉口(intravenous access)注射两种产品。
正如已说明的一样，在所有上述公开的治疗方法或适应症中，都可单独给予本发明的化合物。然而，还可与一种或多种其它的治疗活性剂、物质或化合物序贯地或同时地组合给予。
当用于本发明的方法时，本发明化合物的典型剂量的范围为约0.0001-约100 mg/kg体重/天，优选约0.001-约10 mg/kg体重，更优选约0.001-约5 mg/kg体重/天，例如约0.001-约10 mg/kg体重/天或约0.001-约5mg/kg体重/天，其以一个剂量或多个剂量给予，例如1-3个剂量。确切的剂量将取决于给药的频率和方式、所治疗受试者的性别、年龄、体重和一般状况、所治疗病况的性质和严重程度、待治疗的任何伴发疾病和对本领域技术人员而言是显然的其它因素。
本发明的化合物包含被认为是极适于以长于例如一日一次的间隔给予的化合物，因此，适当配制的本发明化合物可适于例如通过合适的给药途径(例如本文公开的途径之一)一周两次或一周一次给予。
如上所述，本发明的化合物可与一种或多种其它的治疗活性化合物或物质组合给予或组合施用，并且合适的其它化合物或物质可选自例如抗糖尿病药、抗高血脂药、抗肥胖症药、抗高血压药和用于治疗由糖尿病产生的并发症或与糖尿病有关的并发症的药物。
合适的抗糖尿病药包括胰岛素、胰岛素衍生物或类似物、GLP-1 (胰高血糖素样肽-1)衍生物或类似物或其它GLP-1类似物，例如利拉糖肽(Victoza，Novo Nordisk A/S)、艾塞那肽(Byetta，Eli Lilly/Amylin)、taspoglutide (Roche)、albiglutide (Syncria，GlaxoSmithKline)、胰岛淀粉样多肽、胰岛淀粉样多肽类似物(例如SymlinTM/Pramlintide)以及口服活性降血糖药。
本发明的化合物相对于本领域之前公开的肽具有较高的胰高血糖素受体选择性。本发明的肽还有延长的体内半寿期。本发明的化合物可以是可溶解的胰高血糖素受体激动剂，例如其溶解度为至少0.1 mmol/l、0.2 mmol/l、至少0.5 mmol/l、至少2 mmol/l、至少4mmol/l、至少8 mmol/l、至少10 mmol/l或至少15 mmol/l。
在本文中，如不另外说明，则术语“可溶解的”、“溶解度”、“可溶于水溶液”、“水溶性”、“水溶性的”、“可溶于水的”、“水溶解度”和“水溶性”是指化合物在水中或在含水盐溶液或水性缓冲溶液(例如10 mM磷酸盐溶液)中或在含有其它化合物但无有机溶剂的水溶液中的溶解度。
本文所用术语“多肽”和“肽”意指由通过肽键连接的至少5个组分氨基酸(constituent amino acid)组成的化合物。组分氨基酸可来自由遗传密码编码的氨基酸的组别，且它们可以是非由遗传密码编码的天然氨基酸，以及合成氨基酸。非由遗传密码编码的天然氨基酸为例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、鸟氨酸、磷酸丝氨酸、D-丙氨酸和D-谷氨酰胺。合成氨基酸包括通过化学合成制备的氨基酸，即由遗传密码编码的氨基酸的D-异构体，例如D-丙氨酸和D-亮氨酸、Aib (α-氨基异丁酸)、Abu (α-氨基丁酸)、Tle (叔丁基甘氨酸)、β-丙氨酸、3-氨甲基苯甲酸、邻氨基苯甲酸。
本文提及多肽使用的术语“类似物”意指修饰肽，其中肽的一个或多个氨基酸残基被其它氨基酸残基取代和/或其中一个或多个氨基酸残基从肽中缺失和/或其中一个或多个氨基酸残基从肽中缺失和或其中一个或多个氨基酸残基添加至肽中。氨基酸残基的这类添加或缺失可发生在肽的N端和/或肽的C端。利用一个简单系统来描述类似物。使用按照IUPAC-IUB命名法所用的氨基酸的标准单字母或三字母缩写绘制肽类似物及其衍生物的化学式。
本文所用的与肽有关的术语“衍生物”意指化学修饰的肽或其类似物，其中至少一个取代基不存在于未修饰肽或其类似物中，即已经共价修饰的肽。典型的修饰为酰胺、糖类、烷基、酰基、酯等。
未规定旋光异构体的所有氨基酸要理解为意指L-异构体。
本文所用术语“胰高血糖素肽”意指胰高血糖素肽、胰高血糖素化合物、按照本发明的化合物、本发明的化合物、式I的化合物、胰高血糖素类似物、胰高血糖素衍生物或胰高血糖素类似物的衍生物、人胰高血糖素、人胰高血糖素(1-29)、胰高血糖素(1-30)、胰高血糖素(1-31)、胰高血糖素(1-32)及其保持胰高血糖素活性的类似物、融合肽和衍生物。
至于胰高血糖素化合物的位置编号：对于本发明的目的，相对于天然人胰高血糖素(1-29)的序列(SEQ ID 1)而言指出任何氨基酸取代、缺失和/或添加。人胰高血糖素氨基酸第1-29位在本文与与氨基酸位置X1-X29相同。人胰高血糖素(1-29)序列为His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (SEQ ID 1)。
胰高血糖素(1-30)意指在C端具有一个氨基酸延伸的人胰高血糖素，胰高血糖素(1-31)意指在C端具有2个氨基酸延伸的人胰高血糖素，胰高血糖素(1-32)意指在C端具有3个氨基酸延伸的人胰高血糖素。
本文所用术语“远端”意指距连接点的最远处(末端)。
本文所用术语“带负电荷的部分”意指可带有负电荷的化学部分，例如但不限于羧酸、磺酸或四唑部分。
本文所用术语“亲脂部分”意指具有大于6个和小于30个碳原子的脂族或环烃部分，其中所述烃部分可含有其它的取代基。
本文所用术语“取代基”意指置换氢的化学部分或基团。
本文用作化学名称的部分的术语“1H-四唑-5-基”欲表示1H-四唑-5-基和2H-四唑-5-基两者。
本发明的其它实施方案涉及：
113. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽是DPPIV保护的化合物。
114. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽是DPPIV稳定的。
115. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽是胰高血糖素受体的激动剂。
116. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽是其EC50 <1 nM的胰高血糖素受体的激动剂。
本文提及多肽使用的术语“DPP-IV保护的”意指这样的多肽，其经化学修饰从而使所述化合物对血浆肽酶二肽基氨基肽酶-4 (DPP-IV)具有抗性。已知血浆中的DPP-IV酶参与若干肽激素例如胰高血糖素、GLP-1、GLP-2、泌酸调节肽等的降解。因此，进行了相当多的努力以开发经得住DPP-IV介导的水解的多肽的类似物和衍生物以降低通过DPP-IV的降解速率。
此外，在按测定法VII中所述的无白蛋白测定法中，本发明的化合物对DPP-IV切割是稳定的。
在本文中，术语“激动剂”欲表示激活所讨论受体类型的物质(配体)。
在本文中，术语“拮抗剂”欲表示阻断、中和或抵消激动剂作用的物质(配体)。
本文所用术语“胰高血糖素激动剂”是指完全或部分激活人胰高血糖素受体的任何胰高血糖素肽。在一个优选的实施方案中，“胰高血糖素激动剂”是按测定法I测量，优选以低于1μM、例如低于100nM或低于1nM的亲和力或效能(EC50)激活胰高血糖素受体的任何胰高血糖素肽。
在本文中，术语“药学上可接受的盐”欲表示对患者无害的盐。这类盐包括药学上可接受的酸加成盐、药学上可接受的金属盐、铵盐和烷基化铵盐。酸加成盐包括无机酸以及有机酸的盐。合适无机酸的代表性实例包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸、硫酸和硝酸等。合适有机酸的代表性实例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、富马酸、乙醇酸、乳酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、草酸、苦味酸、丙酮酸、水杨酸、琥珀酸、甲磺酸、乙磺酸、酒石酸、抗坏血酸、双羟萘酸、双亚甲基-水杨酸、乙二磺酸、葡萄糖酸、柠康酸、天冬氨酸、硬脂酸、棕榈酸、EDTA、乙醇酸、对氨基苯甲酸、谷氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。药学上可接受的无机酸或有机酸加成盐的其它实例包括J. Pharm. Sci.(1977) 66，2 (其通过引用结合到本文中)中列出的药学上可接受的盐。相关金属盐的实例包括锂盐、钠盐、钾盐和镁盐等。烷基化铵盐的实例包括甲基铵、二甲基铵、三甲基铵、乙基铵、羟基乙基铵、二乙基铵、丁基铵和四甲基铵盐等。
本文所用术语化合物的“治疗有效量”是指足以治愈、减轻或部分抑制指定疾病和/或其并发症的临床表现的量。将适于实现这一目的的量定义为“治疗有效量”。对于每个目的而言，有效量将取决于疾病或损伤的严重程度以及受试者的体重和一般状况。应理解的是，可采用常规实验，通过构建值的矩阵并测定矩阵中的不同点来实现合适剂量的确定，所有这些都属于受过训练的医师或兽医的普通技能水平。
本文所用术语“治疗”、“医疗”及其其它的变化形式是指为了对抗病况(例如疾病或病症)而对患者进行管理和护理。该术语欲包括对患者所患的指定病况的全面治疗，例如给予所讨论活性化合物以减轻其症状或并发症，延迟疾病、病症或病况的进展，治愈或消除疾病、病症或病况和/或预防病况，其中预防要理解为为了对抗疾病、病况或病症而对患者进行管理和护理，并包括给予所讨论活性化合物以预防症状或并发症的发作。待治疗的患者优选为哺乳动物，特别是人类，但狗、猫、牛、马、绵羊、山羊或猪等其它动物的治疗也落入本发明的范围。
本文所用术语“白蛋白结合残基”意指与人血清白蛋白非共价结合的残基。与治疗性多肽连接的白蛋白结合残基对人血清白蛋白的亲和力通常低于10 µM、优选低于1 µM。已知含有4-40个碳原子的直链和支链亲脂部分的各种白蛋白结合残基。
本发明的其它实施方案涉及药物组合物：
117. 一种药物组合物，其包含实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽。
118. 实施方案117的药物组合物，其还包含一种或多种其它的治疗活性化合物或物质。
119. 实施方案117-118中任一个的药物组合物，其还包含GLP-1化合物。
120. 实施方案119的药物组合物，其中GLP-1化合物选自：
N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六烷酰基氨基-丁酰基)[Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G1)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-({反式4-[(19-羧基十九烷酰基氨基)甲基]环己烷羰基}氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][脱氨基His7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G2)；
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G3)；
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(15-羧基-十五烷酰基氨基)-丁酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酰基][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)：
(化合物G4)；
及其药学上可接受的盐、酰胺、烷基或酯。
121. 实施方案117-118中任一个的药物组合物，其还包含胰岛素化合物。
122. 实施方案121的药物组合物，其中胰岛素化合物是：
NεB29-十六烷二酰基-γ-Glu-(desB30)人胰岛素
(化合物G5)；
123. 实施方案105-110中任一个的药物组合物，其呈包含约0.01mg-约1000mg、例如约0.1mg-约500mg、约0.5 mg-约5mg、例如约0.5mg-约200 mg的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽的单位剂型。
124. 实施方案117-123中任一个的药物组合物，其适于胃肠外给予。
125. 用于疗法的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽。
本发明的其它实施方案涉及：
126. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病和肥胖症。
127. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于延迟或防止2型糖尿病的疾病进展。
128. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗肥胖症或预防体重超重。
129. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于减少食物摄取。
130. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于增加能量消耗。
131. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于减轻体重。
132. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展。
133. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展。
134. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于调节食欲。
135. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于引起饱满感。
136. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于防止成功减轻体重后体重反弹。
137. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态。
138. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗贪食症。
139. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗暴食症。
140. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗动脉粥样硬化。
141. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗高血压。
142. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗2型糖尿病。
143. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗葡萄糖耐量减低。
144. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗血脂异常(dyslipidemia)。
145. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗冠心病 。
146. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗肝脂肪变性。
147. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗肝脂肪变性。
148. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗β-阻断剂中毒。
149. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于抑制胃肠道蠕动，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描等技术进行的胃肠道检查结合。
150. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防低血糖。
151. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防胰岛素诱导性低血糖。
152. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防反应性低血糖。
153. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防糖尿病性低血糖。
154. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防非糖尿病性低血糖。
155. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防空腹低血糖。
156. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防药物诱发性低血糖。
157. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防胃旁路术诱发性低血糖。
158. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防妊娠期低血糖。
159. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防酒精诱发性低血糖。
160. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防胰岛素瘤。
161. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽，其任选与一种或多种其它的治疗活性化合物组合，用于治疗或预防Von Girkes病。
本发明的其它实施方案涉及下列方法：
162. 一种用于治疗或预防低血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病和肥胖症的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
163. 一种用于延迟或防止2型糖尿病的疾病进展的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
164. 一种用于治疗肥胖症或预防体重超重的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
165. 一种用于减少食物摄取的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
166. 一种用于增加能量消耗的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
167. 一种用于减轻体重的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
168. 一种用于延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
169. 一种用于延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
170. 一种用于调节食欲的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
171. 一种用于引起饱满感的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
172. 一种用于防止成功减轻体重后体重反弹的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
173. 一种用于治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
174. 一种用于治疗贪食症的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
175. 一种用于治疗暴食症的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
176. 一种用于治疗动脉粥样硬化的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
177. 一种用于治疗高血压的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
178. 一种用于治疗2型糖尿病的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
179. 一种用于治疗葡萄糖耐量减低的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
180. 一种用于治疗血脂异常的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
181. 一种用于治疗冠心病的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
182. 一种用于治疗肝脂肪变性的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
183. 一种用于治疗β-阻断剂中毒的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
184. 一种用于抑制胃肠道蠕动的方法，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描等技术进行的胃肠道检查结合，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
185. 一种用于治疗或预防低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
186. 一种用于治疗或预防胰岛素诱导性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
187. 一种用于治疗或预防反应性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
188. 一种用于治疗或预防糖尿病性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
189. 一种用于治疗或预防非糖尿病性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
190. 一种用于治疗或预防空腹低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
191. 一种用于治疗或预防药物诱发性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
192. 一种用于治疗或预防胃旁路术诱发性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
193. 一种用于治疗或预防妊娠期低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
194. 一种用于治疗或预防酒精诱发性低血糖的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
195. 一种用于治疗或预防胰岛素瘤的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
196. 一种用于治疗或预防Von Girkes病的方法，所述方法包括将任选与一种或多种其它治疗活性化合物组合的有效量的实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽给予有需要的患者。
本发明的其它实施方案涉及下列用途：
197. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽用于制备药物的用途。
198. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽用于制备治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病和肥胖症的药物的用途。
199. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽用于制备用于以下方面的药物的用途：延迟或防止2型糖尿病的疾病进展、治疗肥胖症或预防体重超重、减少食物摄取、增加能量消耗、减轻体重、延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展；延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展；调节食欲；引起饱满感；防止成功减轻体重后体重反弹；治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态；治疗贪食症；治疗暴食症；治疗动脉粥样硬化、高血压、2型糖尿病、IGT、血脂异常、冠心病、肝脂肪变性、治疗β-阻断剂中毒、用于抑制胃肠道蠕动，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描等技术进行的胃肠道检查结合。
200. 实施方案1-116中任一个的胰高血糖素肽用于制备治疗或预防以下疾病的药物的用途：低血糖、胰岛素诱导性低血糖、反应性低血糖、糖尿病性低血糖、非糖尿病性低血糖、空腹低血糖、药物诱发性低血糖、胃旁路术诱发性低血糖、妊娠期低血糖、酒精诱发性低血糖、胰岛素瘤和Von Girkes病。
本发明的其它实施方案涉及以下：
201. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有超过70%的回收率。
202. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有超过90%的回收率。
203. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有约100%的回收率。
204. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有超过7小时的延迟时间。
205. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有超过20小时的延迟时间。
206. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在ThT原纤维形成测定法中所述胰高血糖素肽具有45小时或更长的延迟时间。
207. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于14%的降解。
208. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于13%的降解。
209. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于12%的降解。
210. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于10%的降解。
211. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于9%的降解。
212. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于7%的降解。
213. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于5%的降解。
214. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中在化学稳定性测定法中所述胰高血糖素肽具有小于3%的降解。
215. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的30倍。
216. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的50倍。
217. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的100倍。
218. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的250倍。
219. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的500倍。
220. 前述实施方案中任一个的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽对胰高血糖素受体的选择性是对GLP-1受体的选择性的1000倍。
GLP-1和胰高血糖素受体之间的选择性可测量为对两种受体的EC50值或IC50值之间的比率。测定法(I)和(III)可分别用来测量对胰高血糖素受体和GLP-1受体的活性。
为了与治疗或预防肥胖症或体重超重有关(即与减轻或防止过度肥胖有关)的目的而任选与一种或多种上文公开的其它治疗活性化合物或物质组合给予本发明胰高血糖素肽的情况下，采用这类给药与手术介入的组合(例如与肥胖手术介入组合)可能是适当的，以实现减轻体重或防止体重增加的目的。常用的肥胖病手术的实例包括但不限于下列手术：垂直遮断胃成形术(vertical banded gastroplasty) (亦称“胃分隔”)，其中将一部分胃缝合以形成较小的用作新胃的前胃囊；胃束带手术(gastric banding)，例如使用可调节的胃束带系统(例如Swedish Adjustable Gastric Band (SAGB)、LAP-BAND TM 或MIDband TM )，其中使用弹性体(例如硅酮)带产生小的用作新胃的前胃囊，患者可调节弹性体(例如硅酮)带的大小；以及胃旁路手术，例如“Roux-en-Y”旁路术，其中用缝合装置(stapler device)产生小的胃囊并将其与小肠远端连接，小肠上部以Y型结构再附着。
本发明的胰高血糖素肽(任选与一种或多种上文公开的其它治疗活性化合物或物质组合)的给予可发生在进行所述肥胖病手术介入前的一段时间和/或其之后的一段时间。在许多情况下，在进行肥胖病手术介入后开始给予本发明的化合物可能是优选的。
术语“肥胖症”意指脂肪组织过量。当能量摄取超过能量消耗时，过量的卡路里便保存在脂肪组织中，如果这种净的正平衡持续，便导致肥胖症，即体重平衡有两个组分，任一方面(摄取或消耗)异常都可导致肥胖症。在这种情况下，最好把肥胖症视为引起健康风险的任何程度的过量脂肪组织。正常和肥胖个体之间的区别可能仅仅是近似的，但肥胖症引起的健康风险或许随脂肪组织增加而持续。然而，在本发明的情况下，体重指数(BMI =体重(千克)除以身高(米)的平方)超过25的个体被视为肥胖。
用于本文的氨基酸缩写词具有下列含义：
以D-开始、接着三字母代码的氨基酸缩写词，例如D-Ser、D-His等，是指相应氨基酸的D-对映异构体，例如D-丝氨酸、D-组氨酸等。
药物组合物
可以通过若干给药途径给予需要这类治疗的患者本发明的药物组合物，例如舌、舌下、口腔、口内、口服、胃肠内、经鼻、经肺(例如通过细支气管和肺泡或其组合)、表皮、真皮、透皮、阴道、直肠、眼(例如通过结膜)、输尿管和胃肠外。
可将药物组合物在若干部位给予需要这类治疗的患者，所述部位例如在局部部位例如皮肤和粘膜部位，在旁路吸收的部位例如在动脉中、静脉中、心脏中给予，以及在涉及吸收的部位，例如在皮肤中、在皮肤下、在肌肉中或在腹部给予。
药物制剂可包含浓度为[0.01] mg/mL至[50] mg/mL的胰高血糖素肽。制剂还可包含缓冲系统、防腐剂、张度剂、螯合剂、稳定剂和表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，药物制剂是含水制剂，即包含水的制剂。这类制剂通常是溶液剂或混悬剂。在本发明的其它实施方案中，药物制剂是水溶液剂。术语“含水制剂”定义为制剂包含至少50% (重量/重量)水。同样，术语“水溶液剂”定义为包含至少50% (重量/重量)水的溶液剂，术语“含水混悬剂”定义为包含至少50% (重量/重量)水的混悬剂。
在又一个实施方案中，药物制剂是无需任何提前的溶解即可使用的干燥制剂(例如冷冻干燥或喷雾干燥)。
缓冲剂可选自乙酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、磷酸盐、磷酸氢盐、和三(羟甲基)-氨基甲烷(TRIS)、N-二(羟乙基)甘氨酸、N-三(羟甲基)甲基甘氨酸、琥珀酸盐、天冬氨酸、天冬酰胺或其混合物。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含药学上可接受的防腐剂。在本发明的又一个实施方案中，防腐剂选自苯酚、邻甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、2-苯氧乙醇、苯甲醇、三氯叔丁醇、氯甲酚、苄索氯铵或其混合物。防腐剂在药物组合物中的用途为本领域技术人员所熟知。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含等渗剂。等渗剂可选自盐(例如氯化钠)、糖(例如单糖、二糖或多糖)或水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖，或糖醇例如氨基酸(例如L-甘氨酸、L-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、糖醇(例如甘油(丙三醇)、1,2-丙二醇(丙二醇)、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)或其混合物。糖醇包括例如甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、半乳糖醇、卫矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。
等渗剂在药物组合物中的用途为本领域技术人员所熟知。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含螯合剂。在本发明的又一个实施方案中，螯合剂选自乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和天冬氨酸的盐、EGTA及其混合物。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含稳定剂。稳定剂在药物组合物中的用途为本领域技术人员所熟知。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。
本发明药物组合物还可包含足以减少组合物保存期间多肽或蛋白质形成聚集体的量的氨基酸碱(amino acid base)。所谓“氨基酸碱”意指氨基酸或氨基酸的组合，其中任何给定的氨基酸以其游离碱的形式或以其盐的形式存在。氨基酸可以是精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、和谷氨酸、氨基胍、鸟氨酸和N-单乙基L-精氨酸、乙硫氨酸和丁硫氨酸(buthionine)和S-甲基-L半胱氨酸。
在本发明的又一个实施方案中，当作为治疗剂起作用的多肽是包含至少一个易受氧化的甲硫氨酸残基时，可加入甲硫氨酸(或其它含硫氨基酸或氨基酸类似物)以抑制甲硫氨酸残基氧化成甲硫氨酸亚砜。所谓“抑制”意指甲硫氨酸氧化物质随时间推移发生的最小蓄积。抑制甲硫氨酸氧化导致多肽以其适合的分子形式得到更大的保留。可以使用甲硫氨酸的任何立体异构体(L或D)或其组合。要加入的量应是足以抑制甲硫氨酸残基氧化的量，使得甲硫氨酸亚砜的量可被监管机构接受。这通常意味着组合物含有不超过约10%-约30%的甲硫氨酸亚砜。这一般可通过加入甲硫氨酸，使得所加入的甲硫氨酸与甲硫氨酸残基之比的范围为约1:1-约1000:1、例如10:1-约100:1来实现。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含选自高分子量聚合物或低分子量化合物的稳定剂。在本发明的又一个实施方案中，稳定剂选自聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基/羟基纤维素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精、含硫物质如单硫代甘油、巯基乙酸和2-甲基硫代乙醇和不同的盐(例如氯化钠)。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含表面活性剂。典型的表面活性剂(商品名实例以括号[ ]给出)为聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯例如聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯[Tween 20]、聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯[Tween 40]或聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯[Tween 80]、泊洛沙姆例如聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物[PluronicF68/poloxamer 188]、聚乙二醇辛基苯基醚[Triton X-100]或聚氧乙二醇十二烷基醚[Brij 35]。表面活性剂在药物组合物中的用途为技术人员所熟知。为方便起见，可参照Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1995。
在本发明的又一个实施方案中，制剂还包含蛋白酶抑制剂例如EDTA (乙二胺四乙酸)和苯甲脒HCl，但是也可使用其它市售可获得的蛋白酶抑制剂。蛋白酶抑制剂特别可用于包含蛋白酶的酶原或活化酶(例如FVIIa)的药物组合物以抑制自身催化。
其它成分也可存在于本发明的肽药物制剂中。这类其它成分可包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张度改性剂(tonicity modifier)、螯合剂、金属离子、油性溶媒、蛋白质(例如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)和两性离子(例如氨基酸，例如甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。
本发明的药物组合物还可(例如通过共价、疏水和静电相互作用)与药物载体、药物递送系统或先进药物递送系统配混(compound)或连接，以进一步提高化合物的稳定性、提高生物利用度、提高溶解度、降低不良反应、实现本领域技术人员熟知的时间治疗及提高患者依从性或其任何组合。载体、药物递送系统和先进药物递送系统的实例包括但不限于聚合物，例如纤维素和衍生物、多糖(例如葡聚糖和衍生物、淀粉和衍生物)、聚乙烯醇、丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯聚合物、聚乳酸和聚乙醇酸及其嵌段共聚物、聚乙二醇、载体蛋白(例如白蛋白)、凝胶(例如热胶凝系统，例如本领域技术人员熟知的嵌段共聚物系统)、微团、脂质体、微粒、纳米颗粒、液晶及其分散体、脂质-水系统的相特性领域技术人员熟知的L2相及其分散体、聚合物微团、复合型乳剂、自乳化剂、自微乳化剂、环糊精及其衍生物和树枝状高分子(dendrimer)。
胃肠外给药可以用注射器(任选笔型注射器)，通过皮下、肌内、腹膜内或静脉内注射进行。或者，胃肠外给药可以用输注泵进行。另外的选择是组合物，其可以是以经鼻或经肺喷雾剂的形式给予胰高血糖素肽的溶液剂或混悬剂。作为又一个选择，含有本发明胰高血糖素肽的药物组合物还可适于透皮给药例如通过无针注射或由贴剂、任选离子导入贴剂，或经粘膜(例如口腔)给药。
治疗性蛋白质和多肽口服应用的药物制剂可包括将活性化合物包封在纳米粒、微粒或其它类型的多粒子剂型中。又一个选择是利用渗透促进剂例如表面活性化合物、细胞穿透性肽、粘膜粘着药物递送系统、螯合剂等。再一个选择可加入蛋白酶抑制剂。另一个选择是利用基于脂质的药物递送系统例如SEDDS、SMEDDS、SNEDDS (自乳化、自微乳化或自纳米乳化药物递送系统)。可将上述药物递送系统制成片剂或装入合适的硬胶囊或软胶囊，其可经包衣以控释方式或在优选的肠段中释放活性化合物。
本发明还考虑下列实施方案：
221. 一种胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酰胺、酸或前药，其包含：
● SEQ ID 1，其中X24表示Lys，且其中存在下列取代的至少一个：X3为His，X15为Glu和/或X16为Ala、Ile、Phe、Arg、Thr、Val、Leu、Glu、Trp或Tyr，和在所述胰高血糖素肽中多达6个另外的氨基酸取代，和
● 包含3个或更多个带负电荷的部分的取代基，其中所述带负电荷的部分之一为亲脂部分的远端，且其中取代基在24位的Lys的侧链氮上连接。
222. 实施方案221的胰高血糖素肽，其中所述氨基酸取代可选自所述胰高血糖素肽的下列位置：
X12为Arg
X17为Lys
X20为Lys
X21为Glu
X27为Leu
X28为Ser、Ile或Thr
223. 实施方案221-222中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基具有下式II：
Z1-Z2-Z3-Z4 [II]
其中，
Z1表示式IIa、IIb或IIc之一的结构；
其中n在式IIa中为6-20，
m在式IIc中为5-11
式IIc中的COOH基团可与苯环上的2、3或4位连接，
式IIa、IIb和IIc中的符号*表示与Z2中的氮的连接点；
如果Z2不存在，则Z1在符号*处与Z3上的氮连接，并且如果Z2和Z3不存在，则Z1在符号*处与Z上的氮连接；
Z2不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；
其中各个氨基酸部分独立地具有立体化学结构L或D；
其中Z2通过标为*的碳原子与标为*的Z3的氮连接；
如果Z3不存在，则Z2通过标为*的碳原子与标为*的Z4的氮连接，并且如果Z3和Z4不存在，则Z2通过标为*的碳与胰高血糖素肽的赖氨酸的ε氮或鸟氨酸的δ氮连接。
Z3不存在或表示式IIm、IIn、IIo或IIp之一的结构；
Z3通过具有符号*的Z3的碳与具有符号*的Z4的氮连接，如果Z4不存在，则Z3通过具有符号*的碳与胰高血糖素肽的赖氨酸的ε氮或鸟氨酸的δ氮连接。
Z4不存在或表示式IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj或IIk之一的结构；其中各个氨基酸部分独立地为L或D，其中Z4通过具有符号*的碳与胰高血糖素肽的赖氨酸的ε氮或鸟氨酸的δ氮连接。
224. 实施方案221-223中任一个的胰高血糖素肽，其中所述取代基表示式IIIa、IIIb、IIIc、IIId、IIIe、IIIf、IIIg、IIIh、IIIi、IIIj、IIIk、IIIl、IIIm、IIIn,IIIo、IIIp、IIIq或IIIr之一的结构：
。
225. 实施方案221-224中任一个的胰高血糖素肽，其选自：Chem.1、Chem.2、Chem.3、Chem.4、Chem.5、Chem.6、Chem.7、Chem.8、Chem.9、Chem.10、Chem.11、Chem.12、Chem.13、Chem.14、Chem.15、Chem.16、Chem.17、Chem.18、Chem.19、Chem.20、Chem.21、Chem.22、Chem.23、Chem.24、Chem.25、Chem.26、Chem.27、Chem.28和Chem.29。
226. 一种药物组合物，其包含实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽。
227. 实施方案226的药物组合物，其还包含一种或多种其它的治疗活性化合物或物质。
228. 实施方案226-227中任一个的药物组合物，其还包含GLP-1化合物。
229. 实施方案226-228中任一个的药物组合物，其还包含胰岛素化合物。
230. 实施方案226-229中任一个的药物组合物，其适于胃肠外给予。
231. 用于疗法的实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽。
232. 实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽用于制备药物的用途。
233. 实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽用于制备治疗或预防以下疾病的药物的用途：高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病和肥胖症。
234. 实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽用于制备用于以下方面的药物的用途：延迟或防止2型糖尿病的疾病进展、治疗肥胖症或预防体重超重、减少食物摄取、增加能量消耗、减轻体重、延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展；延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展；调节食欲；引起饱满感；防止成功减轻体重后体重反弹；治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态；治疗贪食症；治疗暴食症；治疗动脉粥样硬化、高血压、2型糖尿病、IGT、血脂异常、冠心病、肝脂肪变性、治疗β-阻断剂中毒、用于抑制胃肠道蠕动，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描等技术进行的胃肠道检查结合。
235. 实施方案221-225中任一个的胰高血糖素肽用于制备治疗或预防以下疾病的药物的用途：低血糖、胰岛素诱导性低血糖、反应性低血糖、糖尿病性低血糖、非糖尿病性低血糖、空腹低血糖、药物诱发性低血糖、胃旁路术诱发性低血糖、妊娠期低血糖、酒精诱发性低血糖、胰岛素瘤和Von Girkes病。
实施例
缩略词表
BOC：叔丁基氧基羰基
DCM：二氯甲烷
DIC：二异丙基碳二亚胺
Fmoc：9-芴基甲基氧基羰基
HOAt：1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HPLC：高效液相色谱法
LCMS：液相色谱质谱联用法
MeCN：乙腈
Mtt：4-甲基三苯甲基
NMP：N-甲基吡咯烷酮
Oxyma Pure：氰基-羟基亚氨基-乙酸乙酯
RP：反相
RP-HPLC：反相高效液相色谱法
RT：室温
Rt：保留时间
SPPS：固相肽合成
TFA：三氟乙酸
TIPS：三异丙基甲硅烷
UPLC：超效液相色谱法
通用方法
该部分涉及用于合成树脂结合的肽的方法(SPPS方法，包括氨基酸脱保护的方法、从树脂上切割肽的方法及其纯化的方法)以及用于检测和表征所得肽的方法(LCMS和UPLC方法)。
SPPS通用方法
所用的Fmoc保护的氨基酸衍生物是推荐的标准物：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(BOC)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH和Fmoc-Lys(Mtt)-OH，由例如Anaspec、Bachem、Iris Biotech或NovabioChem供应。
SPPS采用基于Fmoc的化学法在得自Protein Technologies (Tucson，AZ 85714U.S.A.)的Prelude固相肽合成仪(Prelude Solid Phase Peptide Synthesizer)上进行。用于制备C端羧酸的合适树脂是可获自NovabioChem的预装柱的低负载Wang树脂(例如低负载fmoc-Thr(tBu)-Wang树脂，LL，0.27 mmol/g)。N端α氨基用Boc保护。
Fmoc脱保护用含20%哌啶的NMP进行2 x 3分钟实现。偶联化学法为DIC/HOAt/三甲基吡啶或DIC/Oxyma Pure/三甲基吡啶。将氨基酸/HOAt或氨基酸/Oxyma Pure溶液(0.3 M/0.3 M于NMP中，以3-10倍的摩尔浓度过量)加入树脂中，接着依次加入相同摩尔当量的DIC(3 M，于NMP中)和三甲基吡啶(3 M，于NMP中)。例如，对于以下规模的反应，每次偶联使用以下量的0.3 M氨基酸/HOAt溶液：规模/ml，0.05 mmol/1.5 mL，0.10 mmol/3.0 mL，0.25mmol/7.5 mL。偶联时间为2 x 30分钟或1 x 240分钟。
如下除去Mtt基团：将树脂用HFIP/DCM (75:25)洗涤(2 x 2分钟)，用DCM洗涤，并将树脂悬浮于HFIP/DCM (75:25) (2 x 20分钟)中，随后依次用哌啶/NMP (20:80)、DCM(1x)、NMP(1x)、DCM(1x)、NMP(1x)洗涤。
使用被Mtt保护的赖氨酸(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)来实现赖氨酸ε氮上取代基的引入。同样当侧链存在于鸟氨酸侧链上时，待酰化的鸟氨酸的δ氨基用Mtt保护(例如Fmoc-Orn(Mtt)-OH)。或者赖氨酸的ε氮可用ivDde基团保护(Fmoc-Lys(ivDde)-OH)。鸟氨酸的δ氨基同样也可用ivDde基团保护(Fmoc-Orn(ivDde)-OH)。侧链中γ-Glu部分的掺入通过与氨基酸Fmoc-Glu-OtBu偶联来实现。
使用延长的偶联时间(1 x 6小时)接着用乙酸酐或备选乙酸/DIC/HOAt/三甲基吡啶帽化来实现侧链中各个部分的引入。使用含乙酸酐(10 eq.)和三甲基吡啶(20 eq.)的NMP来实现取代基上末端氮的乙酰化。
取代基的连接
如上所述，可用Prelude肽合成仪，使用适当保护的结构单元在逐步法中将白蛋白结合部分引入，其中的改动在于使包括Fmoc-Ado-OH、Fmoc-Glu-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯(或类似物C8、C10、C12-、C14-、C16-、C20-二酸单叔丁酯)的氨基酸和脂肪酸衍生物在各步骤中偶联6小时。在各偶联步骤后，未反应的肽中间体使用过量的乙酸酐和三甲基吡啶(>10 eq.)帽化。通过使用结构单元4-(N-(16-(四唑-5-基)十六烷酰基)氨磺酰基)丁酸(可通过WO 2007/009894中描述的合成程序获得)，以类似方式制备含有4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基部分的化合物。
从树脂上切割
在合成后，将树脂用DCM洗涤，通过用TFA/TIS/水(95/2.5/2.5)处理2-3小时，接着用乙醚沉淀，将肽从树脂上切割下来。沉淀物用乙醚洗涤。
纯化和定量测定
将粗制肽溶于水和MeCN的合适混合物(例如水/MeCN (4:1))中，在含有C18-硅胶的柱上，通过反相制备型HPLC (Waters Deltaprep 4000或Gilson)纯化。用递增梯度的含有0.1% TFA的MeCN/水进行洗脱。相关流分用分析型HPLC或UPLC检查。将含有纯的靶肽的流分混合，减压浓缩。分析所得溶液(HPLC、LCMS)，使用化学发光氮特异性HPLC检测器(Antek8060 HPLC-CLND)或者通过测量280 nm下的UV吸收，定量测定产物。将产物分装入玻璃小瓶中。将小瓶用Millipore玻璃纤维预滤器盖住。冻干得到肽三氟乙酸盐，为白色固体。
检测和表征的方法
LCMS方法
方法：LCMS_2
在从Perkin Elmer Series 200 HPLC系统中洗脱后，利用Perkin Elmer SciexAPI 3000质谱仪鉴定样品质量。洗脱液：A：含0.05%三氟乙酸的水；B：含0.05%三氟乙酸的乙腈。柱：Waters Xterra MS C-18 X 3 mm内径5 µm。梯度：5%-90% B，以1.5ml/分钟7.5分钟内。
方法：LCMS_4
在由Waters Acquity UPLC系统和得自Micromass的LCT Premier XE质谱仪组成的装置上进行LCMS_4。洗脱液：A：含0.1%甲酸的水；B：含0.1%甲酸的乙腈。在室温下，通过将适当体积的样品(优选2-10µl)注入柱上来进行分析，所述柱用A和B的梯度洗脱。UPLC条件、检测器设置和质谱仪设置为：柱：Waters Acquity UPLC BEH，C-18，1.7µm，2.1mm x 50mm。梯度：线性5%-95%乙腈，以0.4ml/分钟在4.0分钟(或8.0分钟)内。检测：214 nm (TUV (可调UV检测器)的模拟输出)。MS电离方式：API-ES
扫描：100-2000 amu (或500-2000 amu)，步进0.1 amu。
方法：LCMS_13
方法LCMS_13在由带有PDA UV检测器的UPLC系统和带有电喷雾电离的单四级杆质量检测器组成的Waters Acquity UPLC SQD 2000系统中进行。洗脱液：A：含0.1%三氟乙酸的水；B：含0.1%三氟乙酸的乙腈。柱：Waters Acquity UPLC BEH C18，100Å，1.7µm，2.1mm x100mm。梯度：线性10%-90% B在3分钟内，流速0.3 ml/分钟，总运行时间4分钟。MS扫描范围：500-2000 amu。
方法：LCMS_AP
在从由Waters2525二元梯度模块、Waters2767样品管理器、Waters 2996光电二极管阵列检测器和Waters 2420 ELS检测器组成的HPLC系统洗脱后，利用Micromass Quatromicro API质谱仪确定样品质量。洗脱液：A：含0.1%三氟乙酸的水；B：含0.1%三氟乙酸的乙腈。柱：Phenomenex Synergi MAXRP，4um，75x4.6mm。梯度：5%-95% B，以1.0 ml/分钟在7分钟内。
UPLC方法
方法04_A3_1
UPLC (方法04_A3_1)：利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLC BEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：90% H2O、10% CH3CN、0.25 M碳酸氢铵
B：70% CH3CN、30% H2O
使用下列线性梯度：75% A，25% B至45% A，55% B，在16分钟内，流速为0.35 ml/分钟。
方法04_A4_1
UPLC (方法04_A4_1)：利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLC BEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：90% H2O、10% CH3CN、0.25 M碳酸氢铵
B：70% CH3CN、30% H2O
使用下列线性梯度：65% A、35% B至25% A、65% B，16分钟内，流速为0.35 ml/分钟。
方法：04_A2_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：90% H2O，10% CH3CN，0.25 M碳酸氢铵；B：70% CH3CN，30% H2O。使用下列线性梯度：90% A，10% B至60% A，40% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：04_A6_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：10 mM TRIS，15 mM硫酸铵，80%H2O，20%，pH 7.3；B：80% CH3CN，20% H2O。使用下列线性梯度：95% A，5% B至10% A，90% B，16分钟内，流速为0.35 ml/分钟。
方法：04_A7_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：10 mM TRIS，15 mM硫酸铵，80%H2O，20%，pH 7.3；B：80% CH3CN，20% H2O。使用下列线性梯度：95% A，5% B至40% A，60% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：04_A9_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLC BEHShield RP18，C18，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，60℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：200 mM Na2SO4 + 20 mMNa2HPO4 +含20mM NaH2PO4的90% H2O/10% CH3CN，pH 7.2；B：70% CH3CN，30% H2O。采用以下阶梯梯度：90% A，10% B至80% A，20% B，3分钟内；80% A，20% B至50% A，50% B，17分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法05_B5_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：0.2 M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% CH3CN (pH 3.5)
B：70% CH3CN、30% H2O
使用下列线性梯度：60% A，40% B至30% A，70% B，8分钟内，流速为0.35 ml/分钟。
方法：05_B7_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：0.2 M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% CH3CN (pH 3.5)；B：70% CH3CN、30% H2O。使用下列线性梯度：80% A，20% B至40% A，60%B，8分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：05_B8_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：0.2 M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% CH3CN (pH 3.5)；B：70% CH3CN、30% H2O。使用下列线性梯度：50% A，50% B至20% A，80%B，8分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：05_B9_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：0.2 M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% CH3CN (pH 3.5)；B：70% CH3CN、30% H2O。使用下列线性梯度：70% A，30% B至20% A，80%B，8分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：05_B10_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：0.2 M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% CH3CN (pH 3.5)；B：70% CH3CN、30% H2O。使用下列线性梯度：40% A，60% B至20% A，80%B，8分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：07_B4_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：99.95% H2O、0.05%TFA；B：99.95% CH3CN、0.05% TFA。使用下列线性梯度：95% A，5% B至5% A，95% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：09_B2_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：99.95% H2O、0.05% TFA；B：99.95% CH3CN、0.05% TFA。使用下列线性梯度：95% A，5% B至40% A，60% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：09_B4_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：99.95% H2O、0.05% TFA；B：99.95% CH3CN、0.05% TFA。使用下列线性梯度：95% A，5% B至5% A，95% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法08_B2_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：99.95%H2O、0.05% TFA
B：99.95% CH3CN、0.05% TFA
使用下列线性梯度：95% A，5% B至40% A，60% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法08_B4_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，40℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：99.95%H2O、0.05% TFA
B：99.95% CH3CN、0.05% TFA
使用下列线性梯度：95% A，5% B至5% A，95% B，16分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法10_B4_2
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，50℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：99.95%H2O、0.05% TFA
B：99.95% CH3CN、0.05% TFA
使用下列线性梯度：95% A，5% B至5% A，95% B，12分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法10_B5_2
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，50℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：
A：70% MeCN、30%水
B：0.2M Na2SO4、0.04 M H3PO4、10% MeCN，pH 2.25
使用下列线性梯度：40% A，1分钟内，40--> 70% A，7分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：10_B14_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLC BEHShieldRP18，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，50℃，收集214nm和254nm下的UV检测。将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：99.95% H2O、0.05% TFA；B：99.95% CH3CN、0.05% TFA。使用下列线性梯度：70% A，30% B至40% A，60% B，12分钟内，流速为0.40 ml/分钟。
方法：AP_B4_1
利用配备双频段检测器的Waters UPLC系统进行RP-分析。利用ACQUITY UPLCBEH130，C18，130Å，1.7um，2.1 mm x 150 mm柱，30℃，收集214nm和254nm下的UV检测。
将UPLC系统与两个洗脱液贮器连接，所述洗脱液贮器装有：A：99.95% H2O、0.05%TFA；B：99.95% CH3CN、0.05% TFA。使用下列线性梯度：95% A，5% B至5% A，95% B，16分钟内，流速为0.30 ml/分钟。
实施例1
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
化合物1：
UPLC方法：04_A9_1：Rt =12.84分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.61分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 3.7分钟，m/3 = 1427；m/4 = 1071；m/5 = 857
实施例2
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.2：
UPLC方法：05_B9_1：Rt = 8.4
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.8分钟，m/4 = 1106
实施例3
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Lys20,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.3：
UPLC方法：04_A9_1：Rt =13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：RT = 2.8分钟，m/3 = 1474；m/4 = 1106；m/5 = 885
实施例4
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Glu16,Lys20,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.4：
UPLC方法：04_A9_1：Rt =12.0分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.0分钟
LCMS方法：LSMS_4：RT = 2.8分钟，m/3 = 1488；m/4 = 1117；m/5 = 893
实施例5
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Lys24,Leu27]-胰高血糖素
Chem.5：
UPLC方法：09_B4 Rt=8.29分钟
UPLC方法：Rt= 7.66分钟
LCMS：方法：LCMS_4 Rt= 2.85；m/Z=4452；M/3：1483，M/4：1113
实施例6
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Lys17,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.6:
UPLC方法：04_A9_1；Rt = 12.2分钟
UPLC方法：09_B4_1；Rt = 8.2分钟
LCMS方法：LCMS_4；RT=2.1分钟；m/3 = 1421；m/4 = 1066；m/5 = 853
实施例7
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val16,Lys24,Leu27]-胰高血糖素
Chem.7：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 12.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1485；m/4 = 1114；m/5 = 891
实施例8
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ile16,Lys24,Leu27]-胰高血糖素
Chem.8：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.2分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.7分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt 13.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1489；m/4 = 1117；m/5 = 894
实施例9
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[His3,Glu15,Thr16,Lys24,Leu27]-胰高血糖素
Chem.9：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 12.4分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.2分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 12.7分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1493；m/4 = 1120；m/5 = 896
实施例10
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Leu27]-胰高血糖素
Chem.10：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.3分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 13.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1495，m/4 = 1121；m/5 = 897
实施例11
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.11：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1480；m/4 = 1110；m/5 = 889
实施例12
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.12：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 12.7分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.4分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 12.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例13
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.13：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1480；m/4 = 1110；m/5 = 889
实施例14
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.14：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.4分钟
UPLC方法：04_A6_1：Rt = 5.9分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 13.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1486；m/4 = 1115；m/5 = 892
实施例15
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.15：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.7分钟
UPLC方法：04_A6_1：Rt = 7.2分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 16.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1490；m/4 = 1117；m/5 = 894
实施例16
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.16：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 12.7分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.4分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 14.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例17
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Phe16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.17：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1501；m/4 = 1126；m/5 = 901
实施例18
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ile28]-胰高血糖素
Chem.18：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1499；m/4 = 1124；m/5 = 899
实施例19
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Thr28]-胰高血糖素
Chem.19：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1494；m/4 = 1121；m/5 = 897
实施例20
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Arg16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.20：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 10.6分钟；
UPLC方法：04_A6_1：Rt = 5.9分钟；
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟；m/3 = 1504；m/4 = 1128；m/5 = 903
实施例21
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.21：
UPLC方法：10_B4_1：Rt = 8.5分钟；
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 14.5分钟；
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟；m/3 = 1485；m/4 = 1114；m/5 = 891
实施例22
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.22：
UPLC方法：04_A9_1；Rt = 13.1分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.4分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2；m/3 =1485；m/4 = 1114；m/5 = 892
实施例23
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.23：
UPLC方法：10_B4_1：Rt = 8.6分钟；
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.2分钟；
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟；m/3 = 1490；m/4 = 1118；m/5 = 894
实施例24
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(13-羧基十三烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.24：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 11.7分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 7.7分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 13.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1471；m/4 = 1103；m/5 = 883
实施例25
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.25：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 12.4分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.2分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 14.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1481；m/4 = 1110；m/5 = 889
实施例26
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(19-羧基十九烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.26：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 14.0分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 9.2分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 16.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1499；m/4 = 1124；m/5 = 900
实施例27
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.27：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 14.7分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1489；m/4 = 1117；m/5 = 894
实施例28
Nε24-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.28：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.5分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 14.7分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1489；m/4 = 1117；m/5 = 894
实施例29
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.29：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 13.2分钟
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.7分钟
UPLC方法：04_A9_1：Rt = 15.2
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1392；m/4 = 1045；m/5 = 836
实施例30
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.30：
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.6分钟
UPLC方法：04_A6_1；Rt= 7.3分钟
LC-MS方法：LCMS_4；Rt = 2.3，m/3 = 1475；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例31
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.31：
UPLC方法：10_B4_1；Rt = 8.4分钟
UPLC方法：04_A9_1；Rt = 13.3分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT = 2.2，m/3 = 1481；m/4 = 1111；m/5 = 889
实施例32
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ile29]-胰高血糖素
Chem.32：
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.8分钟
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 13.5分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.4，m/3 =1446；m/4 = 1085；m/5= 868
实施例33
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Val29]-胰高血糖素
Chem.33：
UPLC方法：10_B4_1；Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 12.9分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.4，m/3 = 1442；m/4 = 1081；m/5 = 865
实施例34
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Leu29]-胰高血糖素
Chem.34：
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.9分钟
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 13.8分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5，m/3 = 1446；m/4 = 1085；m/5 = 868
实施例35
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ile29]-胰高血糖素
Chem.35：
UPLC方法：09_B4_1；Rt= 8.8分钟
LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.4分钟，m/3 = 1446；m/4 = 1085；m/5 = 868
实施例36
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Val29]-胰高血糖素
Chem.36：
UPLC方法：09_B4_1；Rt= 8.6分钟
LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.3分钟；m/4 = 1085；m/5 = 868
实施例37
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Leu29]-胰高血糖素
Chem.37：
UPLC方法：09_B4_1；Rt= 8.9分钟
LC-MS方法:LCMS_2：Rt=6.2分钟；m/3 = 1451，m/4 =1088
实施例38
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.38：
UPLC方法：06_B4_1：Rt= 8.4分钟
LC-MS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3=1494.1；m/4= 1120.5；m/5=896.8
实施例39
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.39：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.3分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.3分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例40
Nε24-[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.40：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.3分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例41
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.41：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.3分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟，m/3 = 1485；m/4 = 1114；m/5 = 892
实施例42
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.42：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.3分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1495；m/4 = 1121；m/5 = 897
实施例43
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.43：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.4分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 13.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1466；m/4 = 1100；m/5 = 880
实施例44
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.44：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 11.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 7.9分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 9.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.0分钟，m/3 = 1491；m/4 = 1118；m/5 = 895
实施例45
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.45：
UPLC方法：09_B2_1：Rt = 14.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1532；m/4 = 1149；m/5 = 920
实施例46
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.46：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.4分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1494；m/4 = 1121；m/5 = 897
实施例47
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.47：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.8分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 10.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟，m/3 = 1495；m/4 = 1121；m/5 = 897
实施例48
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gln28]-胰高血糖素
Chem.48：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.6分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.2分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 14.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1503；m/4 = 1127；m/5 = 902
实施例49
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.49：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.9分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.5分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟，m/3 = 1427；m/4 = 1070；m/5 = 857
实施例50
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.50：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.2分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.0分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1406；m/4 = 1054；m/5 = 844
实施例51
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.51：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.2分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.0分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1436；m/4 = 1077；m/5 = 862
实施例52
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.52：
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 12.2分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.3分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3 = 1490；m/4 = 1118；m/5 = 894
实施例53
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ile16,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.53：
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 11.0分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.0分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3 = 1499，m/4 = 1125，m/5 = 900
实施例54
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.54：
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 9.0分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.1分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2，m/3 = 1474；m/4 = 1106；m/5 = 885
实施例55
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.55：
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 8.8分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 8.1分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.2；m/3 =1495；m/4 = 1121；m/5 = 898
实施例56
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Gln28]-胰高血糖素
Chem.56：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.3分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.0分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 13.5分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1480；m/4 = 1110；m/5 = 888
实施例57
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ala16,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.57：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.5分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 9.5分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1471；m/4 = 1104；m/5 = 883
实施例58
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.58：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.2分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 9.0分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 14.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107；m/5 = 886
实施例59
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Glu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.59：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.5分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.5分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 8.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.1分钟，m/3 = 1481；m/4 = 1111；m/5 = 889
实施例60
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Gln28]-胰高血糖素
Chem.60：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.9分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1489；m/4 = 1117；m/5 = 894
实施例61
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.61：
UPLC方法：04_A9_1；Rt= 16.1分钟
UPLC方法：10_B4_1；Rt= 9.6分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5；m/3 =1459；m/4 = 1094；m/5 = 875
实施例62
Nε24-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]-[Val10,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.62：
UPLC方法：05_B4_1：Rt=9.6分钟
LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.5分钟；m/3= 1459；m/4= 1095；m/5= 876
实施例63
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Leu16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.63：
UPLC方法：05_B4_1：Rt=8.6分钟
LC-MS方法：LCMS_4；Rt=2.6 m/3=1463；m/4= 1098；m/5= 878
实施例64
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Arg12,Thr16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.64：
UPLC方法：05_B4_1：Rt=9.7分钟
LC-MS方法：LCMS_4；RT=2.5分钟；m/3= 1468；m/4= 1101；m/5= 881
实施例65
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.65：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.1分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1481；m/4 = 1111
实施例66
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.66：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1437
实施例67
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.67：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.5分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1542；m/4 = 1157
实施例68
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[4-[16-(1H-四唑-5-基)十六烷酰基氨磺酰基]丁酰基氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.68：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1499；m/4 = 1124
实施例69
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.69：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1467；m/4 = 1100
实施例70
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.70：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107
实施例71
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu15,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.71：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.7分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1481
实施例72
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.72：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 7.9分钟
LCMS方法：LCMS_13：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1369；m/4 = 1027
实施例73
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.73：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 7.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1412；m/4 = 1060；m/5 = 848
实施例74
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.74：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.1分钟
LCMS方法：LCMS_13：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1426；m/4 = 1070
实施例75
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.75：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1426；m/4 = 1070；m/5 = 856
实施例76
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.76：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.5分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 14.6分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1421；m/4 = 1066；m/5 = 853
实施例77
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素酰胺
Chem.77：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1426；m/4 = 1070；m/5 = 856
实施例78
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.78：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.5分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1422；m/4 = 1066；m/5 = 853
实施例79
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ile16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.79：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 13.1分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1426；m/4 = 1070；m/5 = 856
实施例80
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.80：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.1分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 13.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1426；m/4 = 1070；m/5 = 856
实施例81
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.81：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1466
实施例82
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Thr16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.82：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1476
实施例83
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.83：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1457；m/4 = 1093
实施例84
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.84：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 11.8分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1466；m/4 = 1100
实施例85
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.85：
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 12.2分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.4分钟，m/3 = 1471；m/4 = 1103
实施例86
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.86：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.6分钟，m/3 = 1436；m/4 = 1077；m/5 = 862
实施例87
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ala28]-胰高血糖素
Chem.87：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.9分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.5分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 15.5分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.6分钟，m/3 = 1484；m/4= 1113；m/5 = 891
实施例88
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gly28]-胰高血糖素
Chem.88：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 13.0分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.6分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 16.0分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.6分钟，m/3 = 1479；m/4 = 1110；m/5 = 888
实施例89
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ala28]-胰高血糖素
Chem.89：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.2分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.0分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 14.4分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1475；m/4 = 1106；m/5 = 885
实施例90
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Gly28]-胰高血糖素
Chem.90：
UPLC方法：08_B2_1：Rt = 12.3分钟
UPLC方法：08_B4_1：Rt = 8.1分钟
UPLC方法：04_A3_1：Rt = 14.9分钟
LCMS方法：LCMS_4：Rt = 2.5分钟，m/3 = 1470；m/4 = 1103；m/5 = 882
实施例91
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.91：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.2分钟
LCMS方法：LCMS_13：Rt = 2.2分钟，m/3 = 1383；m/4 = 1038
实施例92
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.92：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.5分钟
LCMS方法：LCMS_13：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1379；m/4 = 1034
实施例93
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.93：
UPLC方法：AP_B4_1：Rt = 7.8分钟
LCMS方法：LCMS_AP：Rt = 5.1分钟，m/3 = 1476；m/4 = 1107
实施例94
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Glu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.94：
UPLC方法：AP_B4_1：Rt = 7.8分钟
LCMS方法：LCMS_AP：Rt = 5.3分钟，m/3 = 1485；m/4 = 1116
实施例95
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.95：
UPLC方法：AP_B4_1：Rt = 8.0分钟
LCMS方法：LCMS_AP：Rt = 5.2分钟，m/3 = 1466；m/4 = 1100
实施例96
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.96：
UPLC方法：09_B4_1：Rt = 8.4分钟
LCMS方法：LCMS_13：Rt = 2.3分钟，m/3 = 1422；m/4 = 1067
实施例97
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(15-羧基十五烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Val16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
Chem.97：
UPLC方法：AP_B4_1：Rt = 8.2分钟
LCMS方法：LCMS_AP：Rt = 5.2分钟，m/3 = 1475；m/4 = 1106
方法
测定法(I)
胰高血糖素活性
将胰高血糖素受体克隆至具有膜结合的cAMP生物传感器(ACTOne™)的HEK-293细胞中。将细胞(14000个/孔)在384孔板中孵育(37℃，5% CO2)过夜。次日，使细胞负载只分布于胞质中的钙反应性染料。加入有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒以防止染料离开细胞。加入PDE抑制剂以防止形成的(formatted) cAMP降解。将板置于FLIPRTETRA中，加入胰高血糖素类似物。6分钟后收集终点数据。胞内cAMP的增加与胞质中钙浓度的增加成比例。当钙结合染料时，产生荧光信号。用Prism5计算EC50值。
测定法(II)
用于评价肽制剂的物理稳定性的ThT原纤维形成测定法
肽的低物理稳定性可导致淀粉状原纤维形成，观察到其是样品中井然有序的线状大分子结构，最终导致凝胶形成。传统上这通过目视检查样品来测量。然而，这种测量是非常主观的，取决于观测者。因此，应用小分子指示探测物要有利得多。硫磺素T (ThT)便是这类探测物，当与原纤维结合时，具有截然不同的荧光特性[Naiki等(1989) Anal. Biochem.177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 274-284]。
可用下列表达式，通过S形曲线描述原纤维形成的时程[Nielsen等(2001)BioChemistry 40，6036-6046]：
方程式(1)
式中，F是时间t时的ThT荧光。常数t0是达到最大荧光50%所需要的时间。描述原纤维形成的两个重要参数是通过t0 - 2τ计算的延迟时间和表观速率常数kapp 1/τ。
肽的部分折叠的中间体的形成被视作原纤维形成的一般引发机制。很少量的这些中间体成核形成模板，更多的中间体可在其上装配，并继续进行原纤维形成。延迟时间相当于其中建立核的临界质量的间隔，而表观速率常数是原纤维本身形成的速率。
在每次测定前新鲜制备样品。图例中描述了各样品的组成。用适当量的浓NaOH和HCl调节样品的pH至所需值。将硫磺素T自H2O中的储液加入样品中至终浓度1 μM。
将200 μl等分量的样品置于96孔微量滴定板(Packard OptiPlateTM-96，白色聚苯乙烯)中。通常，将各样品一式4份或8份(相当于一种试验条件)置于一列孔中。将板用Scotch Pad (Qiagen)密封。
在规定温度下孵育，振荡，在Fluoroskan Ascent FL荧光读板仪(ThermoLabsystems)中进行ThT荧光发射的测量。调节温度至所需值，通常为30℃或37℃。在无振荡(无外部物理应力)或用调节至960 rpm、幅度为1 mm的定轨振荡将板孵育。采用通过444 nm滤光片的激发和通过485 nm滤光片发射的测量，进行荧光测量。
每轮一开始都是将板在测定温度下孵育10分钟。在所需时间内每20分钟对板进行测量。在每次测量之间，按照所述将板振荡和加热。
在ThT测定法完成后，合并各样品的一式4份或8份，在18℃下以20000 rpm离心30分钟。上清液通过0.22 µm过滤器过滤，将等分样品转移至HPLC小瓶中。
使用合适的标准品作为参比，通过反相HPLC测定初始样品中和经过滤的上清液中的肽浓度。过滤样品的浓度占初始样品浓度的百分比报告为回收率。
将测量点存于Microsoft Excel格式用于进一步处理，利用GraphPad Prism绘制曲线并拟合。在缺乏原纤维时得自ThT的背景发射可忽略。数据点通常为4或8个样品的平均值，用标准差误差棒表示。在同一曲线中仅提供同一实验(即同一板中的样品)中得到的数据以确保实验之间原纤维形成的相对测量。
可将数据集拟合至方程式(1)。然而，可通过目视检查曲线，识别ThT荧光显著高于背景水平的时间点，来评价原纤维形成前的延迟时间。
表1. 对受体结合的体外数据、在pH 7.5下的ThT测定法的延迟时间和回收率及在pH 8.15下的化学稳定性
n. d.：未测定
表2. 小种猪(minipig)中胰高血糖素类似物的半寿期
测定法(III)
GLP-1活性
将GLP-1受体克隆至具有膜结合的cAMP生物传感器(ACTOne™)的HEK-293细胞中。将细胞(14000个/孔)在384孔板中孵育(37℃，5% CO2)过夜。次日，使细胞负载只分布于胞质中的钙反应性染料。加入有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒以防止染料离开细胞。加入PDE抑制剂以防止已形成的cAMP降解。将板置于FLIPRTETRA中，加入胰高血糖素类似物。6分钟后收集终点数据。胞内cAMP的增加与胞质中钙浓度的增加成比例。当钙结合染料时，便产生了荧光信号。用Prism5计算EC50值。
测定法(IV)
LOCI测定法
采用冷光氧通道形成免疫测定法(Luminescence Oxygen ChannelingImmunoassay，LOCI)，对样品中的肽进行了分析。供体珠用链霉抗生物素包被，同时，使受体珠与对胰高血糖素有特异性的单克隆抗体(1F120)缀合。使其它结合胰高血糖素的单克隆抗体(2F7)生物素化。将3种反应物与分析物混合，形成二部位(two-sited)免疫复合物。照射复合物从供体珠中释放出单线态氧原子。它们在受体珠中开出通道，并激发化学发光，其在EnVision读板仪中进行测量。所发出光的量与肽浓度成比例。
将1 μL样品/校准物/对照应用于384孔LOCI板的各孔中，接着加入15 μL抗体包被的受体珠(0.5 µg/孔)和生物素化抗体的混合物。将板在21-22℃下孵育1小时。然后，将30μL链霉抗生物素包被的供体珠(2 µg/孔)加入各孔中，在21-22℃下孵育30分钟。在用680nm激光激发后，在21-22℃下在具有520-645 nm带宽的滤光片的Envision读板仪中读板。每孔的总测量时间为210 ms，包括70 ms激发时间。
测定法(V)
饮食诱导性肥胖大鼠的体重减轻
该研究使用了得自Taconic Europe的六十四只高脂肪(Research Diet D12492)饲喂的和八只低脂肪(Research Diet D12450B)饲喂的Sprague Dawley大鼠。给药前，给大鼠称重，分别为约970g和730g。大鼠任意饮水，单独关养以供每日监测食物摄取。从10AM到10PM关灯。
将大鼠分成8组，一日一次皮下(sc)给予两种试验物质15天，剂量体积为0.5 ml/kg。在开始给药前，每日对大鼠进行处理和训练以皮下给药5天。
在第5个给药日，由于大鼠经历的急剧体重减轻曲线所致，自30 nmol/kg到3nmol/kg和自300 nmol/kg到30 nmol/kg调整胰高血糖素类似物(实施例3)的剂量。
在第11天，对大鼠进行血糖特征分析。在第15天或第16天处死大鼠，采集血液用于测量胰岛素和胆固醇。
测定法(VI)
使用任意喂食的大鼠模型用胰高血糖素衍生物对食欲的功效测试的实验方案。
本实验使用得自Taconic Europe，Denmark的Sprague Dawley (SD)大鼠。大鼠在开始实验时体重为200-250 g。大鼠在实验开始前14天到达以使之适应实验环境。在该时间内，处理动物两次。在到达后，将大鼠单独关养一周，在逆转的光/暗期(意味着在日间关灯，在夜间开灯)中两周。因为大鼠通常在暗期活动，并进食其大部分的每日食物摄取，因此正好在关灯前的早晨对大鼠给药。这种安排产生最小的数据变化和最高的试验灵敏度。实验在大鼠关养笼中进行，大鼠在整个适应期和实验期内自由进食和饮水。在5只大鼠的组中测定衍生物的各种剂量。在每套测试中包括6-7只大鼠的溶媒组。根据体重，用皮下(sc.)给予的0.01-3 mg/kg溶液给予大鼠一次。给药后，把大鼠送回其关养笼，在其中它们取得食物和水。通过联机连续地分别记录食物消耗或每小时手工分别记录食物消耗，持续7小时，然后在24小时后和48小时后再次记录。在实验期结束时，使动物安乐死。
在Microsoft excel表格中记录各个数据。在应用用于异常值的Grubbs统计评价检验后，排除异常值。将数据报告为作为时间的函数的累积食物摄取。应用斯氏t检验或单因素ANOVA对溶媒组和试验组进行了比较。
测定法(VII)
DPP-IV稳定性测定法
将10 µM肽一式两份与DPP-IV (2µg/ml)一起在37℃下在向其中加入0.005%Tween20的HEPES缓冲液中孵育。在该实验中，人GLP-1用作阳性对照。在3、15、30、60、120和240分钟时取出等分量的样品，加入3体积的乙醇终止反应。通过LC-MS针对母体肽对样品进行分析。根据第一动力学对数据绘图，并将稳定性报告为半寿期。
测定法(VIII)
PK概况
将15只雄性大鼠(Sprague Dawley，400g，Taconic Europe)分为3组，每组5只大鼠。在t=0时，分别以15 nmol/kg IV、30 nmol/kg SC或100 nmol/kg给予大鼠。在使大鼠短暂处于异氟烷麻醉的同时，通过尾静脉进行IV给药。在t=-15分钟、5分钟(仅IV给药的大鼠)、15分钟、30分钟、1小时、1½小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时和72小时的时间，通过舌下静脉获得血样。将血浆样品冷冻保存直到通过测定法IV分析。
测定法(IX)
pH依赖性溶解度
肽和蛋白质的溶解度取决于溶液的pH。蛋白质或肽通常在其等电点(pI)或接近等电点时沉淀，等电点时其净电荷为零。在低pH (即低于pI)下，蛋白质和肽通常带正电荷，在高于pI的pH下，它们带负电荷。
如果治疗性肽在给定pH下在足够的浓度下是溶解的，则对治疗性肽是有利的，这既适于配制稳定的药物产品，又适于将药物产品例如通过皮下注射给予患者。
如下所述测量溶解度相对于pH的曲线：在水中制备制剂或肽溶液，通过加入HCl和NaOH调节等分试样至所需范围的pH值。使这些样品在室温下平衡2-4天。然后将样品离心。取出小等分量的各样品用于反相HPLC分析以测定溶液中蛋白质的浓度。离心后，测量各样品的pH，对各蛋白质的浓度相对于所测量的pH绘图。
测定法(X)
化学稳定性评价
通过RP-UPLC分离和UV检测，对胰高血糖素类似物的化学稳定性进行了研究。将冻干样品溶于缓冲液(有关详细组成参见下文)至终浓度为333 µM和pH为8.15，在5℃和37℃下孵育14天，接着RP-UPLC分析。纯度定义为各色谱图中主峰相对于所有整合峰的总面积的面积百分比。在37℃下14天后的纯度损失计算为在5℃和37℃下孵育的样品间纯度的差异，除以在5℃下孵育14天后样品的纯度。
使用在50℃下和以0.4 mL/分钟的流速运行的Waters BEH130 2.1 mm x 150 mm，1.7 µm柱，使用通常由A：50mM磷酸盐、10 w/w%乙腈pH 3和B：80 v/v%乙腈组成的流动相系统，进行RP-UPLC分析。在125 nm下进行UV-检测。用于大多数样品的典型梯度特征如下。
时间/分钟 B
注射 20
30 50
31 99
32 99
34 20
35 20
40 20
对于与大多数类似物相比在明显不同的保留时间洗脱的某些各别类似物，对梯度特征进行某些调整以便更好地能够进行样品间的纯度评价比较。此外在一些分析中，使通道B流动相组分的组成交换成为90 v/v%乙腈溶剂溶液，以试图更好地处理依次从一次注射到下一注射的材料遗留物(carry-over)。然而，这通过适当地重新计算梯度特征予以补偿。
缓冲液:
50 mM Dinatriumphosphatdihydrat
184 mM丙二醇(Propylenglycol)
58 mM苯酚
用H3PO4调节至pH 8.15。在重新悬浮类似物后调节pH至8.15的情况下，则使用0.2M NaOH。
测定法(XI)
小种猪中的药代动力学研究
该研究的目的是测定在i.v.给予小种猪后胰高血糖素衍生物的体内药代动力学性质。这在药代动力学(PK)研究中进行，其中除其它参数外，还测定了所述衍生物的终末半寿期和清除率。延长终末半寿期和降低清除率意味着研究中的化合物较慢从机体中清除。对于胰高血糖素类似物，这需要延长的药理学作用持续时间。
在研究中使用获自Ellegaard Göttingen Minipigs (Dalmose，Denmark)，约7-14周龄，重约16-35 kg的雄性或雌性Göttingen小种猪。将小种猪单独(带有永久导管的猪)或按组关养，用SDS小种猪日粮(Special Diets Services，Essex，UK)限制性饲喂一次或两次。在一些研究中，在至少2周适应后，将2个永久中心静脉导管植入每只动物的尾腔静脉或颅腔静脉。使动物在手术后恢复1周，然后在连续胰高血糖素衍生物给予之间以适当的清洗期用于重复的药代动力学研究。在其它研究中，动物适应1周，此后在连续胰高血糖素衍生给予之间以适当的清洗期将其用于重复的药代动力学研究。在每次给予时，给这些猪在一个耳静脉中装入venflon，通过venflon给予所述衍生物。采血通过颈静脉或颅腔静脉静脉穿刺术进行。
在给药前约18小时和给药后自0到4小时使动物不禁食或禁食，但在整个期间任意饮水。
通常将胰高血糖素衍生物溶于50 mM磷酸钠、145 mM氯化钠、0.05% tween 80，pH7.4中至通常20-60 nmol/ml的浓度。化合物的静脉内注射(通常相当于2-3 nmol/kg，例如0.1 ml/kg的体积)通过一根导管或通过venflon给予，在预先确定的时间点采血直到给药后13天(优选通过另一根导管或通过静脉穿刺)。将血液样品(例如0.8 ml)收集在具有EDTA缓冲液(8 mM) (有时加入抑酶肽500 KIU/ml血液)的管中，然后在4℃和1942 G下离心10分钟。将血浆吸取到干冰上的Micronic管中，并保持在-20℃下直到采用合适的定量测定法(像ELISA或LC-MS)分析各个胰高血糖素衍生物的血浆浓度。根据这些测量，对研究的化合物绘制时间-血浆浓度分布图，在WinNonlin 5.0或Phoenix 6.2 (Pharsight Inc.，Mountain View，CA，USA)或用于PK分析的其它相关软件中，对数据进行所谓的非室药代动力学分析。对于大多数化合物，当以半对数曲线绘制时，血浆-浓度分布图的末端部将是线性的，反映出在初始分布后，药物以恒定的极小速率从机体排除。速率(λZ或λz)等于负的曲线末端部斜率。根据该速率，还可计算终末半寿期为t½= ln(2) /λz (参见例如JohanGabrielsson和Daniel Weiner：Pharmacokinetics and Pharmacodynamic DataAnalysis. Concepts & Applications (药代动力学和药效动力学数据分析：概念与运用)，第3版，Swedish Pharmaceutical Press，Stockholm (2000))。
清除率定义为剂量(D)除以血浆浓度相对于时间分布曲线的曲线下面积(AUC)(Rowland，M和Tozer TN：Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications (临床药代动力学：概念与应用)，第3版，1995 Williams Wilkins)。
测定法(XII)
饮食诱导性肥胖症(DIO)大鼠中胰高血糖素类似物对体重的作用
该测定法的目的是评价在饮食诱导性肥胖症(DIO)大鼠中胰高血糖素类似物对体重的作用。
简单地说，给大鼠饲喂高脂肪饮食10周，并达到约600 g的体重。然后给予DIO大鼠每日皮下剂量的胰高血糖素类似物达3周。每天连同给药测量体重。
每笼关养在到达时体重约325 g的雄性Sprague Dawley大鼠，Taconic(Denmark)，并提供任意获得的高脂肪饮食(Research Diets，R12492，60%卡路里来自脂肪)和水。在高脂肪饮食4周后，每笼随机关养2只动物，再过一周后，开始每日皮下给予胰高血糖素类似物的一周研究。之后，动物在开始当前研究之前接受4周清洗。在清洗期后，将动物随机分成16组(每组6只大鼠)和构成溶媒组的10只大鼠1组。在整个期间使动物保持在12小时的光暗周期。
将胰高血糖素类似物溶于50 mM Na2HPO4、145 mM NaCl、0.05% Tween中，按0.5ml/kg给予DIO大鼠每日皮下剂量的胰高血糖素类似物达3周(下午4点)。每日连同给药测量体重。
虽然本文说明和描述了本发明的某些特征，但是本领域普通技术人员可发现许多修改、取代、变化和等同内容。因此，要了解随附权利要求书欲涵盖落入本发明真实精神内的所有的这类修改和变化。

Claims (13)

1.一种胰高血糖素肽或其药学上可接受的盐、酯、酰胺、酸或前药，其基于SEQ ID 1进行取代，其中X24为Lys且其中存在下列取代的至少一个：X15为Glu或X16为Ile、Phe、Val或Leu，和在所述胰高血糖素肽中存在多达6个另外的氨基酸取代，和所述胰高血糖素肽包含含有3个或更多个带负电荷的部分的取代基，其中所述带负电荷的部分之一为亲脂部分的远端，且其中取代基在24位的Lys的侧链氮上连接；
其中所述另外的氨基酸取代选自所述胰高血糖素肽的下列位置：
X10为Val，
X12为Arg，
X17为Lys，
X20为Lys，
X21为Glu，
X27为Leu，
X28为Ser，和
X29为Val、Leu或Ile；
其中所述取代基表示式IIIa、IIIp或IIIt之一的结构：
IIIa；
IIIp或
IIIt。
2.选自以下的胰高血糖素肽，：
Chem.1：
；
Chem.2：
；
Chem.3：
；
Chem.4：
；
Chem.5：
；
Chem.6:
；
Chem.7：
；
Chem.8：
；
Chem.9：
；
Chem.10：
；
Chem.11：
；
Chem.12：
；
Chem.13：
；
Chem.14：
；
Chem.15：
；
Chem.16：
；
Chem.17：
；
Chem.18：
；
Chem.19：
；
Chem.20：
；
Chem.21：
；
Chem.22：
；
Chem.23：
；
Chem.24：
；
Chem.25：
；
Chem.26：
；
Chem.27：
；
Chem.28：
；
Chem.29：
；
Chem.30：
；
Chem.31：
；
Chem.32：
；
Chem.33：
；
Chem.34：
；
Chem.35：
；
Chem.36：
；
Chem.37：
；
Chem.38：
；
Chem.39：
；
Chem.40：
；
Chem.41：
；
Chem.42：
；
Chem.43：
；
Chem.44：
；
Chem.45：
；
Chem.46：
；
Chem.47：
；
Chem.48：
；
Chem.49：
；
Chem.50：
；
Chem.51：
；
Chem.52：
；
Chem.53：
；
Chem.54：
；
Chem.55：
；
Chem.56：
；
Chem.57：
；
Chem.58：
；
Chem.59：
；
Chem.60：
；
Chem.61：
；
Chem.62：
；
Chem.63：
；
Chem.64：
；
Chem.65：
；
Chem.66：
；
Chem.67：
；
Chem.68：
；
Chem.69：
；
Chem.70：
；
Chem.71：
；
Chem.72：
；
Chem.73：
；
Chem.74：
；
Chem.75：
；
Chem.76：
；
Chem.77：
；
Chem.78：
；
Chem.79：
；
Chem.80：
；
Chem.81：
；
Chem.82：
；
Chem.83：
；
Chem.84：
；
Chem.85：
；
Chem.86：
；
Chem.87：
；
Chem.88：
；
Chem.89：
；
Chem.90：
；
Chem.91：
；
Chem.92：
；
Chem.93：
；
Chem.94：
；
Chem.95：
；
Chem.96：
；或
Chem.97：
。
3.权利要求1或2的胰高血糖素肽，其结构为：
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]-[Val10,Leu16,Glu21,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
。
4.权利要求1或2的胰高血糖素肽，其结构为：
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
。
5.权利要求1或2的胰高血糖素肽，其结构为：
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]乙氧基]乙氧基]乙酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Arg12,Ala16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
。
6.权利要求1或2的胰高血糖素肽，其结构为：
Nε24-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]氨基]丁酰基]-[Leu16,Lys24,Leu27,Ser28]-胰高血糖素
。
7.权利要求1或2的胰高血糖素肽，其中所述胰高血糖素肽与GLP-1化合物、胰岛素化合物或毒蜥外泌肽-4组合。
8.权利要求7的胰高血糖素肽，其中所述GLP-1化合物选自化合物G1和G3：
N-ε26-((S)-4-羧基-4-十六烷酰基氨基-丁酰基)[Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G1)；和
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰基氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)：
(化合物G3)。
9.权利要求7的胰高血糖素肽，其中所述胰岛素化合物是化合物G5：
NεB29-十六烷二酰基-γ-Glu-(desB30)人胰岛素
(化合物G5)。
10.一种药物组合物，其包含权利要求1-9中任一项的胰高血糖素肽。
11.权利要求10的药物组合物，还包含一种或多种其它的治疗活性化合物或物质。
12.权利要求10-11中任一项的药物组合物，其适于胃肠外给予。
13.权利要求1-9中任一项的胰高血糖素肽用于制备用于以下方面的药物的用途：
a. 治疗或预防高血糖症、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病和肥胖症；
b. 延迟或防止2型糖尿病的疾病进展、预防体重超重、减少食物摄取、增加能量消耗、减轻体重、延迟从葡萄糖耐量减低(IGT)到2型糖尿病的进展；延迟从2型糖尿病到需要胰岛素的糖尿病的进展；调节食欲；引起饱满感；防止成功减轻体重后体重反弹；治疗与体重超重或肥胖症有关的疾病或状态；治疗贪食症；治疗暴食症；治疗动脉粥样硬化、高血压、IGT、血脂异常、冠心病、肝脂肪变性、治疗β-阻断剂中毒、用于抑制胃肠道蠕动，所述抑制可用于与采用X射线、CT扫描和NMR扫描进行的胃肠道检查结合；或
c. 治疗或预防低血糖、胰岛素诱导性低血糖、反应性低血糖、糖尿病性低血糖、非糖尿病性低血糖、空腹低血糖、药物诱发性低血糖、胃旁路术诱发性低血糖、妊娠期低血糖、酒精诱发性低血糖、胰岛素瘤和Von Girkes病。
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