JPS5890514A - ヒト免疫インターフエロンをコートするｄｎａ配列 - Google Patents

ヒト免疫インターフエロンをコートするｄｎａ配列

Info

Publication number
JPS5890514A
JPS5890514A JP57182681A JP18268182A JPS5890514A JP S5890514 A JPS5890514 A JP S5890514A JP 57182681 A JP57182681 A JP 57182681A JP 18268182 A JP18268182 A JP 18268182A JP S5890514 A JPS5890514 A JP S5890514A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polypeptide
lys
sequence
amino acid
interferon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP57182681A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH0135639B2 (ja
Inventor
デイヴイツド・ヴイ・ゴ−デル
パトリク・ダブリユ・グレイ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genentech Inc
Original Assignee
Genentech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=23211703&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JPS5890514(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genentech Inc filed Critical Genentech Inc
Publication of JPS5890514A publication Critical patent/JPS5890514A/ja
Publication of JPH0135639B2 publication Critical patent/JPH0135639B2/ja
Granted legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • C07K14/57—IFN-gamma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C12N15/71—Expression systems using regulatory sequences derived from the trp-operon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/811—Interferon
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
    • Y10S930/142—Interferon
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/30—Signal or leader sequence

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は組換ＤＮＡ技術の領゛域に係る・本発明は、前
記の如き技術を利用するヒト免疫インターフェロンのＤ
ＮＡ配列及びそれから慎重推定されるアミノ酸の解析手
段及び方法に係り、更に前記インターフェロンの製法及
びこの製法により産生される種々の産生物及びそれらの
用途に係る。
より詳細には本発明は、ヒト免疫インターフェロンをコ
ードするＤＮＡ配列の単−及び同定、前記の如きＤＮＡ
配列を発現プロモーター配列に有効に発現し得るように
（正しく読みとられるようｅζ）結合させて得られる組
換ＤＮム発机ベヒクルの構成並びに前記の如く構成され
る発現ベヒクルに係る。本発明は更に、前記の如き発現
ベヒクルで形質転換され従って前記ＤＮＡ配列を発現し
得る培養系、例えば檀々の微生物及びを椎動物＃ｌ胞培
１１（セルカルチャー）に係る。更に一本発明は、前記
の如く発現した目的産生物をヒトの予防処置又は治療処
置に有用な新規な完全体例えば薬剤に転換する手段及び
方法に係る１、好ましい具体例によれば本発明は、ヒト
免疫インターフェロンが成熟し友形態で宿主細胞から分
泌されるように正当に結合された特定の発現ベヒクルを
提供する。史に本発明は、前記ＤＮＡ配列、発現ベヒク
ル、宿主培養系、目的産生物及び該麓生物ｉ含む完全体
の製造に有用な種々の方法並びに対応するそれらの特定
具体例に係る。
本発明は、部分的には、ヒト免疫インターフェロンをコ
ードするＤＮＡ配列及びそれから推定される構成アミノ
酸配列を知見し良ことｆ：；ｔ／Ａｇとする。更に本発
明は、ヒト免疫インターフェロン遺伝子の３′−及び５
′−フランキング（ｆｌａｎｋｊ曜）配列に関する配列
情報を提供し、その結果、該配列をインビトロ（ｉｎ　
ｖｌｔｒｏ　）で＠現ベヒクルへ結合することが容易に
なる。本発明は、特に、所−成熟ヒト免疫インターフェ
ロンのアミノ酸配列の、１繭に位置する所謂内因性（＊
ｎｔｌｏｇ＊ｎｏｕｍ　）シグナルポリベグテドをコー
ドする５’−ＤＮＡセグメントを提供する。これらの知
見に基いて、組換ＤＮム技暫を用いるととにより十分な
量のヒト免疫インターフェロンの産生手段及び方法の開
発が次第に可能となり、従′つてこの物質の生化学的特
性及び生物活性の測定も可能になった。
本発明のバックグラウンドを明らかにし且つ特定の場合
には本発明の実施に関する詳細を補なう目的で、本文中
に多くの刊行物及び学術論文を参考として引用した。便
宜上１．これらの参考文献に参照番号を付し、目録とし
て本明Ｍ４Ｆ末尾に添付した。本文中では参考文献を参
照番号で示す。
抗原性、生物学的％性、生化学的特性の違いに基いてヒ
トインターフェロンを３グループに分類し得る。
第１グループは白血球インターフェロン（α−インター
フェロン、ムＩＦ又はＩＦＮ−α）＠である。このグル
ープのインターフェロンは、通常、ヒト血液の成分細胞
のウィルス誘発によって主として産生ずる。α−インタ
ーフェロンは、既ニ、微生物で産生され、生物学的に活
性であることが知見され（＆に記参考鳥献１．２及び３
参煕、以）同じ）、ウィルス感染往及び悪性朧命状態の
治療薬としての臨床使用が促進されている（４゜第２グ
ループはヒト騨維芽細胞インターフェロン（Ｉ−インタ
ーフェロン、　Ｆ’ＩｉＦ又ｔｉＩＦＮ−１）である。
このグループのインターフェロン＃マ、通常、繊維芽細
胞のウィルス誘発によって産生ずる。
！−イン！−フエ四ンも同じく値生物で産生され、広い
範囲の生物学的活性を示すことが知見された（５）。臨
床試験もβ−インターフェロンの潜在的治療価値を示唆
している。
白血球インターフェロンと線維芽細胞インターフェロン
は、アミノ酸レベルでの相同（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）の程
度が比較的低いにもかかわらず、生物学的特性が極めて
類似している　更に、これらのインターフェロンはいず
れも、１６５乃至１６６イ朧のアミノ酸を含み且つ酸に
対して安定なタンパクである。
本発明の目的たるヒト免役インターフェロン（ＩＦＮ−
ｒ、ヒト　ガンマ　インターフェロンともいつ）ハ、α
−インターフェロン及ヒ！−インターフェロンと対照的
に、ｐＨ２で不安定であり、主としてリンパ球のマイト
ゲン誘発によって産生し７・　しかも明らかに異なった
抗原性を示す。最近まで、ヒト免疫インターフェロンは
極めて低いレベルでしか検出されなかつ之ため、特性決
定が固液でめった。最近になって、ヒト免疫インターフ
ェロンのかなり進んだＩ製が報告されｆｉｃ（ａが、こ
の精製もまだ部分的なものであるっこの報告によれば、
フイトヘムアグルチ二ン（ｐｈｙｔｏｈａｅｍａｇｇｌ
ｕｔｌｎ）とホルボールエステル（ｐｈｏｒｂｏｌ　ｅ
ｓｔ＠ｒ）との組合せを用いてリンパ球培地（カルチャ
ー）を刺＃し、て化合物ｔ−産生し、一連のクロｉトゲ
ラフ分陰によって化合物を精製した。この方法で分子値
５８，０００の産生物が得られた。
ｍＲＮＡを卵母細胞中で翻訳するとヒト免疫インターフ
ェロンに特有のインターフェロン活性を示す極めて少量
のヒト免疫インターフェロンが互生じた。これにより、
免疫インターフェロンｅＤＮＡの合成及びクローニング
が可能であると予想された（７）。
これまでは、十分な量の免疫インターフェロンが得られ
ないため、精製した成分の特性決定及び生物学的特性を
明らかにするための実Ｍｔ”行なうことができなかった
。しかし乍ら、粗Ｉｇ！剤を用い゛たｉｔｈ　ｖｉｔｒ
ｏテスト及びネズミｒ−インターフェロン製剤を用いた
インビボ（１ｍ−マＯ）テストＩＩＣより、免疫インタ
ーフェロンの主たる作用は免役−節剤たる作用であろう
と推定されていた（８．９）。
免疫インターフェロンは、全てのヒトインターフ二一ン
に共通の抗ウイルス的性及び抗細胞活性を有しており、
加えて、α−インターフェロン及び！−インターフェロ
ンの活性に相乗効果を与えるα−０更に、腫瘍細胞に対
するｒ−インターフェロンのＬｌ四υ抗増殖効果は、他
グループのインターフェロンの約１０乃至１００倍であ
ると報告され７’ｈ（８，１１，１２）。この結果と顕
著な免役調節作用（８，ｉｌ）とを合せて考慮すると、
ＩＦＮ−ｒはＩＦＮ−α及びＩＦＮ−／よシも癌かに顕
著な抗腫瘍作用を有すると推定される。事爽、マウス及
びネズ＜ＩＦＮ−ｒＨ剤を用いたｉｎ−テストでは、骨
肉腫に対する抗腫瘍作用が、抗ウイルス的に誘発された
インターフェロンよりも明らかにすぐれていることが証
明されｆｔ　ｕ＠　。
ＩＦＮ−ｒが極めて入手し難いため本発明以前の前記の
如きテストではいずれも、かな９粗な製剤を使用せざる
を得なかった。にもかかわらず、これらのテストから免
疫インターフェロンの極めて重要な生物学的作用を確信
することができた。免疫インターフエーンは、抗ウィル
ス活性を保有するのみでなく、多分強力な免疫調節及び
抗腫瘍活性を有しており、極めて有望な治療薬にな９得
る筈である。
組換ＤＮＡ技術を応用した方法によって必要な多量のヒ
ト免疫インメーフエ四ンを極めて有効に産生じ得ること
が判明した。産生される物質は、天然のヒト由来物質の
特徴であると思われるグリコシレージ目ン（ｇｌｙｅｗ
ｙｌａｔｌｏｎ）を含むか否かく関わり無く、ウィルス
、新生（腫瘍）及び免疫抑制の見られる種々の症状又は
病気の治療の丸めに臨床使用することが可能な生物活性
を示すであろう。
組換ＤＮＡ技術は、かな夛複雑な応用の段階に到達しえ
１分子生物学者は、種々のＤＮＡ配列をかなり容ＪＩＫ
組換えて、形質転換微生物中で大量の外因性（・ｘｏｇ
＠ｎｏｍｓ　）メン／＜り産物を産生じ得る新しいＤＮ
Ａ完全体を作成し得る。種々の平滑末端又は１付着”末
端を有するＤＮム断片ｋｌｎｘｌｌｘｓ。
結合し特定微生物の形質転換に使用１得る有効な発現ベ
ヒクルを製造しこれらのベヒクルに所望の外因性−物を
有効に合成させるための一般的な手段及び方法はすでに
開発されている。しかし乍ら、個々の産物に関しては、
技術がまだ開発途上であり、常に成功を予調し得る１１
どには技゛術は進歩していない。実際、実験による裏付
けをもえずに結果の成功を予言した学者もｈるが、彼等
の方法は、実行不能である危険を含む。
プラスミド、すなわちしばしば細胞１個当や！ルチコビ
ーとして細菌又は他の微生物中に見出される二重鎖ＤＮ
Ａの非染色体ループは依然として組換ＤＮＡ技術の基本
的９！索である。プツスゼドＤＮムがコードする情報に
は、娘細胞内にグラスイドを再生するのに必要な情報（
すなわち、複製の開始点（オリジン））が含まれ、さら
に通常は、−所望のグラスイドを含有する宿主細胞のク
ローンｔ″識別し且つ選択培地で優先的に増殖させうる
ような１つもしくはそれ以上の選択特性、たとえば抗生
物質に対する耐性が含まれる。グラスイドの有用性は、
それヤれプラス電ドＤＮム上の異なる部位を識別する成
る種の制限エンドヌクレアーゼすなわち「制限酵素」に
より特異的に開裂させうる点にある。その後、開裂部位
またはこの開裂部位に＠接して再構成した末端における
末端−末端結合によｐ１異種遺伝子もしくは遺伝子断片
をプラス々ド中に挿入することができる。仁のようにし
て、いわゆゐ複製可能な発現ベヒクルが形成される。Ｄ
ＮＡ０組換えは細胞の外部で行なわれ、得られ九「組換
体」複製可能発現ベヒクル、すなわちグラスイドを形質
転換上して知られる過程によｐ細施中に導入し、この形
質転換体を増殖させることによシ組換ベヒクルを多量に
得ることができる。さらに、コードされているＤＮＡメ
ツセージの転写及び翻訳を支配するプラスきドの部分に
対して遺伝子が適正に挿入、されれば、得られる発現ベ
ヒクルを使用して挿入遺伝子がコードするポリベグテド
配列を実際に産生させることができ、この遇輻を発現と
名付ける。
発現は、グロモーメーとして知られる領域で開始される
。ＲＮムポリメラーゼがこのブロモ−ターを識別し結合
する。発現の転写期において、ＤＮＡははどけて（ｕｍ
ｉｍｌｍｇ　）　、メッセンジャーＲＮＡをＤＮＡ配列
から合成する鋳型としてｍ出させる０次いで、メッセン
ジャーＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡがコードしてい
たアンノ酸配列を有するポリペプチドに翻訳される。各
アミノ酸は翼クレオチドトリプレットすなわち「コドン
」によりコードされ、このコドンが集合して「構造遺伝
子」すなわち発現されるポリペプチド産生物のアミノ酸
配列をコードする部分を構成する。翻訳は「開始」信号
（通常人ＴＧであって、これは得られるメッセンジャー
ＲＮＡにおいてはＡＵＧになる）において開始する。い
わゆる停止コドンは翻訳の終了を規定し、従ってそれ以
後アンノ酸ユニットは産生されない。産生じた産生物は
、重賛に応じ微生物系で宿主細胞を溶菌しかつ他の細曹
偏白質を適尚に精製除去して産生物を回収することによ
〕得られる〇 実際、組換ＤＮム技術の使用によシ、いわゆる直鎖的発
現法によ）全く異種のポリペプチドの発現が可能になシ
、或いは同種ポリペプチドの７ξミノ配列の一部と融合
し九異種ポリペプチドを発現させることもできる。後者
の場合、目的とする生物活性産物は、時に、融合した同
ａｌ／異種ポリヘクチド中で、細胞外環境において開裂
されるまで、生物的に不活性の形で存在する。英国特許
出願公開ｇ意・６７１８７６ム号及び％ＶＭｓ＠Ｌ　Ａ
ｍｒｌｅａｗ＋８ｅｉ＊ｍ＠１ｓｔ、　ｓｓ、　＠＠４
（ｉ＠８０）参照。
遺伝学及び細胞生理学を研究するための細胞培養又は組
織培養技術は十分に確立している。単一した正常細胞か
ら連続トランスファ処理にょｐ永久細胞系（％ｒ−賛ｎ
ｔ　ｃ＠ｌｌ　ｌｌｎ・）ｔ−得てこれを一部する手段
及び方法もすでに知られている。研究に使用する゛ため
には、これらの細胞系を液体培地中の固体担体上に維持
するか、又は栄養支持体を含む懸濁液中で増殖させる。
機械的な問題さえ解決できれば量産は容易である。技術
の現状を更に十分に理解するために、Ｍｉｅｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙｅ　ｌｉ　２版、　＆ｒｐ＠ｒａｍ　Ｒｏｖｅ
　Ｐｄ１ｉａｈ＠ｒｓ＊　Ｉｎａ＊　Ｈａｇ＊ｒｓ＊ｏ
ｖｎｅ　Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９７３）、特に１１２２
頁以障、及び、８ｃ１＊ｎｔｌｆｉａｊｋａ＊ｒｉｅａ
ｎ、　ｊＬｉＪ＊　ａｌ１頁以障（１９８１）を参考文
献として引用する。
本発＃４蝶、組換ＤＮム技術を用いて、ヒト免疫インタ
ーフェロンを、好ましくは直接的な形態で、且つ市場で
認可されるための動物実験及び臨床試験を開始し且つ実
施するに充分な量で、上手く産生じ得るという知見に基
いている。産生物は、その金てＯ形態において、人間の
ウィルス感染、騰性膣瘍及び免疫抑制又は免疫欠如状朧
に対する予防又は治療装置での使用に適している。その
形態は、様々な可能性のあるオリゴマーの形ｌ１ｔ−含
んでおり、又、グリコシレージ曹ン（ａｓｓｏｃｌａｔ
＠ｄｇｌｙａｏｓｙｌａｔｉｏｍ）を含むこともある。
産生物は遺伝学的に操作された微生物又は細胞培養系（
セルカルチャー’／Ｊ？ム）Ｋよシ産生される◎従って
、従来よりもより有効にヒト免疫インターフェロンを産
生し、単離し得る可能性がある。その最適具体例におい
て、本発明の一つの重畳なファクターは、単離し得る量
且り成熟形１１　（ｍｔｍｒ＠ｆｏｒｍ　）でヒト免疫
インターフェロンが産生されて宿主ｉ＆！から分ｉｐｓ
れるように微生物又はセルカルチャーを遺伝学的に製造
することにある。
本発明は、このように産生されるヒト免疫インターフェ
ロン並びにその産生手段及び方法を含り本発明は更に、
発現可能な形態でヒト免疫イン！−フエ冑ンをコードす
る遺伝子配列を含む複製可能なりＮム発現ベヒクルに係
る。更に本発明は、前記発現ベヒクルで形質転換した微
生物菌株又はセルカルチャーに係）、又、ヒト免疫イン
ターフェロンを童生じ得る前記の如く形質転換された菌
株又はカルチャーの微生物カルチャー又はセルカルチャ
ーに係る。更に本発明は、前記免疫インタ−７ｚロン遺
伝子配列、ＤＮム発現ベヒクル、微生物菌株及びセルカ
ルチャーｔ−＊製するのに有用な種々の方法並びに特定
の具体例に係る。更に本発明は、前記微生物及びセルカ
ルチャーの発酵カルチャー（培地）のｍＨに係る。更に
本発明は、。
直接発現産物として成熟形で宿主細胞から分泌されるヒ
ト免疫インターフェロンの製造に係る。この方法は、成
熟ヒト免疫インターフェロンの配列をコードする遺伝子
に加えて、シグナルポリペプチドをコードする５′−フ
ランキングＤＮＡ配列を使用する。シグナルポリペプチ
ドは、宿主生物の細胞壁へ分子を運搬する際に補助的役
割を果し、この細胞壁において成熟ヒトインターフエラ
ン産生物の分泌遥１中に開裂されると信じられている。
この具体例によル、細胞内宿主ｌンパク質又は細胞砕片
の汚染物を除去するように設計された関連方法を用いな
くても、意図する成熟免疫インターフェロンを単離且つ
精製し得るようになる。
本明細書中、「成熟ヒト免役インターフェロン」とは、
シグナルペプチド又はプレシーケンスペプチドを伴わな
いヒト免疫インターフェロンのｌｌ生物又はセルカルチ
ャー産生物を示し、このシグナルペプチド又はプレシー
ケンスペプチドはヒト免疫インターフェロンｍＲＮムの
翻訳の際に常に存在するものである。従って本発明は、
第一アミノ酸゛としてのメチオニンを有している（構造
遺伝子の前にムＴＧ開始シグナルコドンを挿入すること
により存在する）か、或いはメチオニンが細胞内で又は
細龜外で開裂されている場合は第一アミノ酸として正常
なシスナインを有する成熟ヒト免疫インターフェロンを
提供する。成熟ヒト免疫インターフェロンは通常のシグ
ナルポリペプチド以外のものとの複合タンパク質として
産生され得、この複合体は細胸外壌境で特定的に！＄１
１１！され得る（英国特許出願公開第２００７６７６ム
号参照）。最後に、成熟ヒト免疫インターフェロンは外
因性の余分のポリペプチドを開裂除去する必要もなく直
接発現によシ産生され得る。発現ベヒクルがシグナルペ
プチドと成熟ヒトインターフェロンとを一緒に発現し且
つ所与の宿主がシグナルペプチドを除去できない或いは
有効的に除去できない場合にはこのことは特に重要であ
−る。このように産生された成熟ヒト免疫インターフェ
ロンは、ウィルス病、悪性腫瘍及び免疫抑制又は免疫欠
如状態の治療に使用し得る適合レベルにまで回収、精製
される。
ヒト免疫インターフェロンは次のようにして得られ喪。
１、ｋ）組織、例えばヒト騨組織又は末梢皇箪リンパ球
を免疫インターフェロンの産生を刺激すＪｌｌえめマイ
トゲンと共に培養しえ。
ｉ　前記セルカルチャーからのセルペレツ）にりいて、
全細胞質ＢＮムを単離するためリポヌタレアーゼ阻害剤
の存在下で抽出し九〇 龜　オリゴ４Ｔ−カラムによ）ポリアゾ翼ル駿膠態Ｏ全
メツセンジャーＲＮム（ｍＲＮム）を単一し九〇こｔ）
ｗａ翼ＮムをＶ曹糖ｌ！Ｆ度勾配と酸−尿素ゲル電気泳
動法とを用いてナイメ分画し九〇 也　適轟１に諷１１Ｎム（１８乃至１８ｇ）を対応する
一重鎖相補ＤＮム（・ＤＮム）Ｋ転換し、これから二本
鎖０＠ＤＮムを産生し九〇ポリーーＣテーリング（ｐ＠
１ｙ（Ｃｔａｌｌ魚萼）の後、前記ＤＮムを−り又は１
数０１１１１１？−カーを有するプツス々ドのようなベ
タターＯ中に挿入し九〇 ４　このように調製されたベクターを使用してｓ　ａ　
ｘ−ライプツリを提供すみ細菌細胞を形質転換しえ。前
記のように誘導された誘発及び非諦発ｍＲＮムから調製
され九岡位体標識・ＤＮムを複数に移された：Ｉ−二−
ツィプラリＱｍｐｌｉ軸ｔ・・・ｌ・ｑｌｌｂｒａｒｉ
・−）を個別に試験するために用いえ。次に余分Ｏ・Ｄ
Ｎムを除去し、誘発＠ＤＮムり冒−ンを同定する丸め：
！ロニーをＸ＠フィルムに露出させ九〇ｔ　ｌ１発＠Ｄ
Ｎムり一一ンから対応するプラス建ドＤＮムを単離し、
配列しえ。
ｉ　次に配列され−ｋＤＮムを適嶋な発現ベヒクルの中
に挿入する九めＫ　ｉｎ　ｖｌｔｒｅ麩１し、この発現
ベヒクルを適轟な宿主細胞を形質転換する大めに用い、
この宿主細胞を今ｊＩ社培地の中で増殖させ、所曹のヒ
ト免疫インター７エーン童生物を発現させえ。
龜　このようＫして産生し九ヒト免疫イｙター７エｐン
は確かにシスティンで始まるその成熟形態で１４ｇ個の
ア擢ノ酸を有してお〕、その特性は非常に塩基性である
。その単量体分子量はｉｆｆ、１４・と計算され丸。恐
らく多くの塩基性残基、疎水性、塩ブリッジ形成等が存
在するため、分子はオリゴマーの形で例えば二量体、二
量体又は四量体の形でそれ自身会合すゐ・自然物質で以
前ＫＩ［Ｉ［された高分子量（６）は、ア々ノ歇配列の
みに基いて計算され得なかつえものであ〕、翻訳後０／
リコＶレージ冒ンによる炭水化物の寄与と同様そのよう
なオリゴ！−の存在に基づ（ものかもしれない。
９、幾つかの宿主細胞システムでは、籍に！Ｏ値のアミ
）酸のシグナルペプチドと共に発現されるようＫ１１ｌ
ｌべ把タルに結合し九とき、ヒト免疫インター７エーシ
０１１Ｅ勤彫態は竜ルカルチャー培地０”ｌ”Ｋ這ばれ
、間取及び精製方法において＠）知れないほど助けとな
る〇 ζζに記載する本発明Ｏ好適具体例は、とシわ杜、英１
１４Ｉ許出願公開第ｆＯ暴！１３１１！Ａ号に記載の微
生物Ｅ、−・１１に一１２株２９４　（＠ｍｄＡ、　ｔ
ｈｉ″″。
ｋ＊ｒ−＊　ｋｈ１ｍ＋）　　を用いて実施した。この
菌株はアメリカン　タイプ　カルチャー　コレクシ冒ン
に、ムＴＣＣ寄託番号＠３１４４６号で寄託されている
◎しかし、他の種々の微生物菌株、例えば、１ｓｅｌｌ
　ｌ、１．　！１ｕＸ１７７１１（ＡＴＣＣ第３１５３
７号×１、ｇｌｌＷ３１１Ｇ（Ｐ″″、λ−、＊ｍ栄養
株ｐｒ＊ｔｒ＊ｐｋｉ＊　）（ムＴＣＣ第２７３１２１
号）Ｏような公知のＬセ旦菌株或いは他の微生物菌株も
有用であ夛、これらの微生物菌株の多く紘寄託されてお
ル、アメリカンタイプカルチャー；レクシ曹ン（ムＴＣ
Ｃ）（Ｄようｔｉｉ可された微生物寄託施設から入手し
うる（可能性がある）０ムＴＣＣカタ謬グリスト参照。
又、ドイツ公開公報第２１１４４４ｍ２号参照◇これら
の他の微生物には、例えばＢａｓｔｌｌｗｓ　５ｍＭ１
１１ｓのようｌｋ　１１ａ＠１ｌｌｌ　並びに８ｍ１ｍ
ｍ１ｌａ　旋岐加シル＝及び８・社ａｔｔａ　ａｖａｒ
・・赫ａｓ　のような他の腸内菌等があｐ％これら紘異
種遺伝子配列を複製し、発現し得るプラスミドを用いて
使用される。
例えば、ベーメツクタ！−ゼ及びツクトースプ鑓篭−タ
ーシステムが、＾穏ポリペプチドの微生物的産生を開始
させ旦り維持する丸めに有利に用いられえ。これらＯプ
ロモーターシステムの構成と構造に関する詳細はＣ−■
ｄ　ａｌ　、　、　Ｎａｔｕｒ＠’！１　’Ｉ　Ｂ　。
藝１！（１０８）及びＩｔａｋｗａ　ｄ　ａｌ、　、　
８＠１＠ｍｅ＊　ｕＪｅｉｏｉ・（１１１７？）を参照
されたい０最近、トリプトファンに基くシステム、いわ
ゆる轡プｇ毫−ターシステムが一発されえ〇このシステ
ムの構成と構造Ｅｌｌする詳細はＧｏ＠ｄ４ｓｌ　ａｔ
　ａｌ、　、　Ｎｌｌ＠１＠量・材用Ｒｅ５ｅａｒ＠ｈ
、　Ｉ、　４Ｇ！！７（１９８０）及び１９１０都３月
！４日付で出願されたＫｌ＠１４畦１．、米ｉｓ＊許出
願υ、Ｉ１．ｇ、Ｎ、１１１１Ｌｊｔ−６号を参照され
たいＯ弛の多くの微生物プロ毫−ターが発見され利用さ
れておル、轟業者がプラスミドベクター中に機能的にそ
れらを結合し得るようにそのヌクレオチド配列に関する
詳細が発表された。例えば８ｔ＠ｂｍＩｌｓｔａｔ　ｍ
ｌ、、Ｃａ１ｌ、　２Ｇ、　２＠１１（１８８０）参照
〇　　−１酵母菌株／酵母曹グロモーター とこぞ用いる発現システム拡Ｎ：ｃｏ…と酵母菌、シ憇
匝ツ史山ｅａｒ・マ１ｓｉａ・との両方において選択と
複製が可能なプラスミドＹＲｐ７（１４，１５，１６）
でもよい＠酵母菌での選択の九め、プラスミドはυ炭１
遺伝子（１４，１Ｂ、　１＠）を含有し、この遺伝子は
酵母菌の染色体■に見い出される仁の遺伝子上の突然変
異（財）を含む酵母菌を補足する（す表わちトリプトフ
ァンの不在下での増殖を許容する）。
ここで社アメリカンタイプカルチャーコレクシ冒ンに制
限なしに寄託されていゐ菌株ＲＨ！　１１１（Ａ’ＦＣ
Ｃ寄託番号第４４０７６号）（至）を用い九。
しかし、菌体を■１にする突然変異を含むどの勤二匝μ
史’ａｓ　ｅ＠ｒ・マ１ｍ１ａ・菌株も発現システムを
含むプラスミドの発現のための有効な環境となシ得ると
いうことが理解されよう。他の菌株Ｐ＠１１４−１（至
）も用い得る。このトリプトファン栄養要求菌株も又Ｔ
ＲＰ　１遺伝子上に点突然変異を有している０（アルコ
ール脱水素酵素ｌ用の）酵母菌遺伝子由来６′−７ツｙ
キングＤＮム配列（プロモーター）を非酵母菌遺伝子０
６’−側に配置し、外来遺伝子をプラスさド中に配置し
、ヒれを用いて酵母菌を形質転換すると、酵母菌中で異
種遺伝子の発現を促進（プロ毫−ト）シ得るＯプロモー
ターの他に更に、酵母菌でＯ非酵母菌遺伝子の適正な発
現には、第二の酵母菌配列を必要とし、この第二の配列
は酵母菌での適正な転写終了とポリアデニル化とを許容
する丸めプラスよド上に非酵母菌遺伝子ｏ　ｓｌ−末＃
に配置される０このプロモーターも他のものと同様に本
発明で好適に用いられ得る（以下参照）０好★しい具体
例では、酵母菌３−ホスホダシセリン酸キナーゼ遺伝子
（２）の８’−７９ンキンダ配列を構造遺伝子の上流に
配置し、この構造遺伝子に続いて更に終了−ポリアブ二
ル化シグナル含有ＤＮＡ、例えばＴＲＰ１遺伝子（１４
゜１５．１６）又はＰＧＫ遺伝子−を配置して使用する
。
酵母−６′−フランキング配列は（３′−酵母菌終了Ｄ
ＮＡと共に使用すると、後述）酵母菌での外来遺伝子の
発現を促進し得るため、高度に発現されたいかなる酵母
菌遺伝子の５′−７ランキング配列も重要な遺伝子産物
の発現に用い得る。成る環境の下で酵母菌は糖分解酵素
としての可溶性蛋白質を６５％まで発現しく自）、旦つ
この高レベルは個個のｍＲＮＡの高レベル産生の結果と
思われる（２）から、いかなる他の糖分解遺伝子の５′
−７ランキング配列もそのような発現目的に使用し得る
筈である。例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−
３−燐酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナ−ゼ、ピルビン
酸脱炭酸酵累、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−
６−燐酸インメラーセ、３−ホスホグリセリン酸ムター
ゼ、ピルビン酸キナーゼ、三員糖燐酸イソメツーゼ、ホ
スホグルコースイソメ２−ゼ及びグルコキナーゼ等。こ
れらの遺伝子の３′−７ランキング配列のいずれも上述
のような発現システムで適正な終了及びｍＲＮムボリ７
デニル化に用いられ得る。他の幾つかの高度に発現され
た遺伝子は酸性ホスファター”ＩＩ’に）遺伝子であり
、１’−７ランキング領域での突然変異（発現を高める
突然変異体）、通常ＴＹ１転移可能畏素（ｔｒａ＊＋ｎ
−ｐｏｓａｂｌ＊　ｓｌ＠ａｎｍｔ　）　＠の存在によ
ｐ高レベルの産生を発現する遺伝子である０ 前記遺伝子は全て酵母菌ＲＮＡポリメラーゼｌ−によ〕
転写されると考えられる。リボゾームＲＮ１．８８　Ｒ
ＮＡ及びｌＲＮＡ０４．２ｓ）Ｋ対する遺伝子を転写す
るＲＮＡボリメ２−ゼ！及び鳳に対するプロモーターも
又そのような発現構成で有用であ）得る。
最後に、多くの酵母菌プロモーターは又転写制御作用を
有しておｐ１従って増殖条件の変化によ如オフにしたｐ
オンにしたりし得る。そのような酵母菌プロモーター唸
例えｄ次の蛋白質を産生ずる遺伝子である。即ち、アル
コールデヒドロゲナーゼ厘、イソチトクロム−電、酸性
ホスファターゼ、窺素代−と関連した分解ｌｌ素、グリ
セルアルデヒド−３−燐酸デヒドロゲナーゼ、麦芽糖と
ガラクトース利用に関係する酵素−勢である。そのよう
な制御領域はタンパク童生物の発現を制御するのに、特
にそれらの産生が酵母菌に対し有毒であるとき、非常に
有用であろう０又高度に発現され九遺伝子由来のプレモ
ーター含有５’−７−）ンキング配列を一つの５′−７
ランキング配列の制御領域と組み合わせることも可能で
あろう。この結果ハイブリッドプロモーターが生じ、制
御領域とプロモーター紘物理的に別個のＤＮム配列であ
ると思われるためこの組み合わせは可能であろう。
龜　セルカルチャーシステム　セルカルチヤニさＵ二 培養（組織培養）でのを椎動物細胞の増殖は最近では通
常の方法となつ九（Ｔ１ｓｓｕ＠Ｃｕ１ｔｕｒｅ　。
ムｍａｄａｍｓ　Ｐｒ＠ｍｓ、　Ｋｒｕｓ＠ｉｍｄ　Ｐ
ａｔｒｙｒｓｏｎ　＠ｄｓ、　、　１９７３参照）０こ
こでは免疫インターフェロン産生用宿主としてｃｏｉｉ
−ｙ系すル腎線維芽細胞を用いた（２Ｓｍ）。しかし、
ここに詳細に説明する実験は、適合性のベクターを複製
及び発現し得るいか表る細胞系でも遂行され得る。例え
ば、ＷＩ３８゜１１ＨＫ、　８Ｔ３．　ＣＩＯ，ＶＩＲ
Ｏ，及びＨ＊Ｌａ細胞系勢。
更に発現ベクターに必要とされるものは、複製のオリゴ
４始（転）並びに発現されるべき遺伝子の前に配置され
九プロモーターであシ、これらは必ｌ！なすｌシーム結
合部位、ＲＮムスプライス部位、ポリアデニル化部位、
及び転写終了配列と共に配置される０本発明ではｇＶ４
　Ｇのこれらの本質的な要素を使用し、好ましい具体例
として本発明を説明するが、本発明はこれらの配列に限
定されるべきでないことが理解されよう。例えば、宿主
ＤＮＡに組み込まれていない状態で機能し得るＤＮＡ複
製の細胞性オリジンと同様、他のウィルス（例えば、Ｐ
ｏｌｙｍｉ、　Ａｄ＠ｎ＊、　ＶｌｌＶ、　ＢＰＶ　勢
）性ベクターの複製オリジンも用い得る。
直接発現 成熟インターフエｐンポリベプチド（マイナスシグナル
配列）としてＥ、　５ｅｌｌでＩＦＮ−ｒ　を直接発現
させるために用い九方法紘、それが合成Ｎ−末端と・Ｄ
ＮＡの結合を含んでい、るので、ヒト成長ホルモン（２
）とヒト白血球インターフェロン（１）に対し以前用い
た方法の変形である。
後述される１６１１のヌクレオチド配列から、並びに幾
つかのＩＦＮ−α（２）のシグナルペプチドと成熟ポリ
ペプチドとの間の公知の開表部位との比較により推論さ
れるように、ＩＦＮ−ｒは、１０個のアミノ酸から成る
疎水性シグナルペプチド及びそれに続く成熟ＩＦＮ−ｒ
　（０１４６個のアミノ酸を有していゐ（第５図）。第
７１１１に示されているように、１１１ＮＩ　　制限エ
ンドヌクレアーゼ部位は、好都合なことに、成熟ＩＦＮ
−ｒの第四アミノ酸に位置している。ＡＴＧ翻訳開始コ
ドン、第一、二、三ア電ノ酸（システィン−チロシン−
システィン）の；トンを導入し且つ旦蚊ＲＩ付着末端を
創出する丸めに、２つの合成デオキシオリゴヌクレオチ
ドが設計された０これらのデオキシオリゴヌクレオチド
をν・Ｉ　Ｏ１１０（）塩基対旦ａｔ　ＮＩ−ヱｄＩ　
　断片に結合し、ＩＦＮ−ｒをコードし旦り互叩Ｒ１及
びＰｓｉ　ｘ　ｌｌｌｉｌＳ位を末ｔｌＡＩｆｃ有ｆｂ
　１１１　Ｓ　ｍｊ１対０対酸合成然ハイブリッド遺伝
子を構成したＯこの遺伝子をＩＩＩ　ＲＩ　　とＰｓｔ
　１部位間でプラスミドｙＬ＠ＩＦ　Ａ☆１０３に挿入
し、発現プラスミドｐｘＦＮ−ｒ　ｔｒｙ　４　ｍ　を
構成し九〇このプラスミドではＩＦＮゴ遺伝子はＥ、　
憇１１　ｔｒｐグーモーターの制御下で発ｌｌＬされる
ｏ　（ｐＬ＠ＩＦ　Ａ　カ１０　ＢはｐＬ・ＩＦムＸＳ
Ｏ誘導体であＪ）、Ｌ＠！Ｆム遺伝子から遠位の１ｕＲ
Ｉ　部位が除去されている。こ０４　ＲＩ部位を除去す
るために用いられた方法については既に分表′されてい
る嬶。） ｔｍ工皇二！ 免疫インター７エ四ンを；−ドするａＤＮムのような異
種遺伝子を酵母菌で発現するため、４つの成分を含むプ
ラスミドベクターを構成すゐことが必要であった。最初
の成分はに、　ｃｅｌｌと酵母菌の両方の形質転換を可
能にする部分であ夛、従って各画の選択し得る遺伝子を
含んでいなければなら危い。（ここでは、これはＥ４Ｑ
…のアンピシリン耐性遺伝子及び酵母菌のＴＲＰ　１　
　遺伝子である・）この成分は又両方の生体中でグラス
々ドＤＮムとして維持されゐ丸めに両方の生体０１１製
オリジンを必要とする・（ここでは、これはｐＢＲ８＄
１２゜Ｅ−５ｅｌｌ　　オリジン及び酵母菌の染色体層
のａｒｍ　１オリジンである。） プ２スンドＯ第二の成分は、下流に位置する構造遺伝子
の転写をプロモートするための、高度に発現された酵母
菌遺伝子の５′−フランキング配列である。ヒヒで用い
た５′−７ランキング配列は酵母菌３−ホスホグリセリ
ン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子の配列である。断片はＰ
ＧＫ　構造遺伝子配列のＡＴＧからこのＡＴＧから上流
の５ｂｐｔでを切り出すようにして構成されたｏ５’７
？ンキング配列に構造遺伝子がうまく結合するように、
この５′−７ランキング配列はＸｂａ　Ｉ及び旦ｓｏ　
Ｒ１制限部位の両方を含む配列で置換されている。
システムの第三の成分は、ムＴＧｓ訳開始シグナルと翻
訳停止シグナルの両方を含むように構成された構造遺伝
子である０そのような遺伝子の単離と構成については以
下で説明するＯ 第四〇成分は酵母菌遺伝子の３′−７ランキング配列を
會む１１母曹ＤＮ臘列であ襲、これ社転写終了とポリア
デニル化の適正なシグナルを含んでいる。
これらＯ成分が全て存在した場合に、免疫インターフェ
ロンが酵母菌でＩＩＩｊ：、された。　　　−３、哺乳
動物セルカルチャーでの発現 哺乳動１ｌａｌｌ！培養（セルカルチャー）での免疫イ
ンターフェロンの合成方法は、異種転写ヱニットの制御
下で外来遺伝子の自律的複製と発現の両方が可能なベク
ターの開発に依存していた。紡織培養でのこのベクター
の複製は、ベクターに（８Ｖ４０ウイルス由来の）ＤＮ
Ａ複製オリジンを提供する仁とと、ヘルパー機能として
Ｔ抗原を内因的に発現する細胞系（ｓｔｓ、、２ｏ）へ
ベクターを導入することで達成され九〇ＳＶ４０ウィル
スの後期プロモーターはインターフェロンの構造遺伝子
の上流に存在し、遺伝子の転写を確保していた０ＩＦＮ
−ｒを発現させるために用いたベクターは、ＤＮＡ複製
の＆１旦オリジンとともにＬ！！ｔＬＬでの選択のため
に選択し得るマーカー（アンピシリン耐性）を提供する
ｐＢＲ３２２配列で構成されていた。
これらの配列線、プラスミドｐｕｔ、−ｔ＠からＩＩ導
され、ＪＬＪＢＩ　及び−、ＩＬＨＩ制限部位に及ぶ領
域を含んでいた・８Ｖ４０オリジンはこの領域（８Ｇ、
ａｌ）を含む３４２塩基対Ｐｖｕｌ　−ｊｏｉｎ１厘断
片から鋳導される（両方の末端紘４児８Ｉ末端に転換さ
れる）。これらの配列は、ＤＮムＩＩｌ！製のウィルス
性オリジンを含むのに加えて、初期及び後期転写ユニッ
トの両方に対するプロモーターをコードしている・ＳＶ
４０オリジン領域の方向性紘、後期転写ユニットに対す
るプロモーターがイン／−７エロンをコードする遺伝子
の近くに配置されるようにし九〇 第１図れ、誘発末梢血リンパ球（ＰＩＩＬ）ポリ（２）
十ＢＮＡ０３１１１１１！Ｉｌ勾Ｅｌｉ心分１１１１０
結Ｊｐｔ示している・インターフェロン活性を有する２
つＯビークが１２ｇと１６Ｓのナイスで観察された（斜
線を付し−にヒストグラムによｐ示されている）Ｏリポ
ソー五ＲＮムマーカー（別個に遠心分離した）Ｏ位置社
吸収プロフィールの上方に示した。
第２図は、誘発ＰＢＬポリ（４）＋ＲＮＡの酸−尿素−
アガ四−ス電気泳動の結果を示している。
ｒｓｓｎｍＡと共に移動するたり九−っの活性ピークが
観察された。隣接するレーンで電気泳動にがけ旦つ臭化
エチジウム染色によｐ可視化したリボソームＲＮＡｆｆ
−カーの位置は活性プロフィールの上方に示した。
第６図は、誘発及び非誘発のＩｆｉｐ−標識ｃＤＮＡプ
ローブと９６個のコロニーとのハイプリダイゼーシ目ン
パターンを示す。９６個の個々の形質転換体をマイク四
タイタープレートで成育させ、レプリカ（ｒ＠ｐＨｇｍ
）を２秋のニド冒セルロース膜上ＫＩＩＬ、次にフィル
ターを誘発ｍＲＮＡ　（第３図ム）か或いは非誘発ＰＩ
Ｌカルチャーから単離した一ＲＮム＜開発されていない
、第３図Ｂ）からａｌ製し九”Ｐ−ｅＤＮムプ田−プと
ハイブリダイズしえ。
フィルターをハイブリダイズしていないＲＮムを除去す
ゐ九め洗浄し、次ＫＸＩＩＩフィルムに露出さぜえ０む
のフィルターのセットはそのような８６備のセット（＄
ｓＯＯ個の独立したブー＝−＞０典型例を表わしている
。「誘発」りＲ−７の例はＨｌｌとして示されている。
第４閣は、クーーン＠　９　ｅＤＮム挿入物の１！１ｌ
ｌｔｉｌエンドヌタレア−（マツプである。・ＤＮム挿
入物はＬ１１部位（両端に点で示す）とオリゴａｃ−４
Ｇテール（１本曽で示す）を末端に有している。制限ヌ
クレアーイー表によル生成する断片Ｏ数と大１１さ紘・
−アクリルア建トグル電気泳動によシ評価し九〇部位の
位置は核酸配列（第５図に表示）によ）確ｉＩされ九〇
最大のオープン解読７゛レームＯ：１−ド領域はａｍに
囲われてお）、斜線領域は推定し九３０残基シグナルペ
プチド配列を表わし、他方点Ｏ領域は成熟ＩＦＮ配列（
１４６ア書）酸）を表わしている・ｍＲＮＡの墨′末端
は左側にあ〉、３′末端は右側にある・ 第６図は、プラスイドｐ　６９　＠ＤＮＤＮＡ物のヌク
レオチド配列を示している。しかしながら、この配列ｄ
ＩＦＮ−γ中の最も普遍的な相同形（ａｌｌ＠ｌｌ・ｆ
＠ｎｓ　）　を示している。最大のオープン解読７レー
ムの推定アオノ酸配列も示されている０推定シグナル配
列は８１から８２０で示す残基によ９表わされている。
第６ＷＡは、ＩＦＮ−ｒｍｍＮム構造と白血球インター
７エｐン（ＩＦＮ−α）及び＊維芽細胞インターフエ■
ン（ＩＦＮ−β）の構造との比較図でるゐ０クロー　７
６９　ｍＲＮＡ（Ｉ　ＦＮ−ｒ　）　拡かなシ多量の翻
訳されない配列を含んでいる〇 第７図は、ＩＦＮ−ｒ発現プツスｉドｐＩＦＮ−ｒｔ！
１１４１の構成を示す模式図であゐ０出発物質はプラス
イドｔ・９から０１２１ｓＯ塩基対Ｐｓｉ　１−ＤＮム
挿入物である。
第８Ｅは、サル細胞でのＩＦＮ−ｒの発ＩＡＫ用いられ
るプラスイドの構造を示す図である０第９図は、ｓ穏Ｏ
星ｃｏ　ＲＩ　　消化ヒトゲノムＤＮＡをｐ６９の＠Ｄ
ＮＤＮＡ物からの″ｆｆ１Ｐ−榔識６００塩基対１２ｄ
ｎｌ断片とハイブリダイズする５ｏｕｔｈ・ｒｍハイプ
リダイゼーシ曹ンの結果を示す０８つのＩ！ｊＪＲＩ　
断片は明らかに各々のＤＮＡサンプル中でプローブとハ
イブリダイズする。
第１０図は、６種０１１１Ｊ　＠エンドヌクレアーゼで
消化し九ヒトゲノムＤＮムをＰ６９由来Ｉｍｐ−標識プ
ー−プとハイブリダイズする８ｏｗｔｋ＠ｒｍノ為イブ
リダイゼーシ■ンの結果を示すＯ 第１１図は、ＰＧＫプロ彎−ターが単離されたベクター
ｐ　ｌ　１　（Ｄ　１．１　ｋｂｐ　１１１雇冨挿入物
の制限マツプを示す。ＰＧＫ遺伝子の５′−７ランキン
グＤＮムへの１ＪＲＩ　部位及びｍ１部位の挿入が示さ
れている。
第１！図は、ｘｋ！１１部位及びシＬＩＲＩ　　部位の
挿入前のＰＧＫ遺伝子に対する初期コード配列を加＃１
１３図は、ＰＧＫプロモーター上の位置−８にｘ−１部
位を挿入するために、及びこのＸｍｌ末端及び鋤３ム末
端を會むＬ旦Ｉの５′−７ランキング配列の３９ｂｙ断
片を単離するために用いられた接衝を図式的に示す。
第１４図は、上記ｓ＊ｂｐ断片、Ｐ！！Ｉから勤１３ム
までの付加ＬＬＫ！！’−フランキング配列（ｚｓｓｂ
ｐ）　（第１１図参照）とｘ−Ｉに隣接すゐＩＪ３３　
ＲＩ　　部位とを含む３００ｂｐ断片の構成を図式第１
ｉｔ図は、第１４図で構成された断片に加えて、ＬＬＫ
　Ｓ’−７９ンキング配列の坦■麗からＰｖｗ　Ｉまで
のｌ５ＯＯｂν断片（第１１図参照）を含む１ｉｏｏｂ
シＰＧＫブ一モーター断片（」雇璽／　Ｉｈｓ　ＲＩ　
）の構成を図式的に示す〇第１６図は、改良ＰＧＫプ騨
毫−ター、Ｉｆｆ−ｒ＊ＤＮム及び酵母菌ＰＧＫ遺伝子
の終了領域とを為発現ペタターの組成を示す。これにつ
いては以下に詳細に説明する・ Ａ、　　ＩＦＮ−ｒ　ｍＲＮムの起 末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を白血球泳動法によ）人間の
提供者から採堆し九。ＰＩＩＬを更にフィコルーハイパ
ツク（Ｆｉ＊ｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕ・）勾配遠心法によ
〉精製し、次ＫＩＰＭ１１６４０，１ＳＬ−グルタミン
、露１　ｗＭ　ＩｉｌＰｍＢ及び１チベエシリンースト
レプトｉイシ／ＩＩＩ液（Ｇｌｂ＠ａ、　Ｇｒａｎｄ　
ｌ５ｌａｎｄ、　　ＮＹ　）中！１Ｘ１０・細胞／−の
濃度で培養した。これらの細胞を！イトダンぶどう球菌
エンテートキシン１（ｌｓ／ｓｇ）Ｋよ）誘発してＩＦ
Ｎ−ｒを産生させ、１−ｃｏ、中３７′ｃ″ｅ１４時間
から４１時間培養した。ＩＦＮ−１活性の相対収率な増
加させるためデスア竜チルチ罎シン−α−１（０，１μ
ぎ／−）をＰＡＩＬ培養物に加え＊０ 農、メツ４／ジ　−ＲＮムの ＰＩＩＬｔＩ１１養吻からの全ＫＮムを本質的にｌｉｌ
＠ｒｇ＠Ｌ８ａ　Ｌ−ｓｔ　ａｌ、ｇによシ報告されて
いるようにして抽出した０細胞を遠心によってベレット
にし、次に１０　ｍＭ　Ｎａ０４１０　ｍＭ　　）リス
−ＭＣＩ（ｐＨ７，５）、１、５　ｍＭ　ＭｇＣＬ＊及
び１０ｍＭ　リボヌクレオシドバナジル複合体中に再懸
濁した。細胞をＮＰ−４０（最終濃度１チ）の添加によ
シ溶解し、核を遠心によシペレ゛ットにした。上Ｕみは
全ＲＮＡを含んでおシ、これを多数回のフェノール及び
クロロホルム抽出によシ更に和製した。水相をＮａＣ１
Ｏ，２Ｍにし、次に全ＲＮＡを２倍量のエタノールの添
加によシ沈殿させた０非霞発（ｊｌｔｌＪ激しない）培
養峻からＲＮＡを同じ方法により単離した。オリゴ−Ｉ
Ｔセルロースクロマトグラフイーヲ全ＲＮ人標本軸から
ｒａＲＮ　Ａを精製するために用いた０培養したＰＢＬ
Ｉ−ｆｉｔからの典型的な収量は、全ＲＮＡは５乃至１
０１９であｐ１ポリ（４）＋ＲＮＡは５０乃至２０．０
μｇであった。− Ｃ，ｍＲ）ｉＡＯナイズ分画 ｍ１ＬＮム標本を分画するため２つの方法を用いえ〇こ
れらＯ方法は（−緒によシもむしろ）別々に用いられ、
その結果各々でかなル０１４ＤＩＦＮ−ｒ飄ＢＮムが得
られた。
魔性剤７オ羨ムア建ドの存在下でのシ冒糖勾配達心法を
ｍＲＮムを分画するために用いた。１０％の７オルムア
ミド中のＳ−乃至２５−のショ糖勾配−をｇｏ℃で１９
時間１５４．０００Ｘｇで遠心し九・次に連続７ラクシ
薗ン（０，８ｍ）を勾配の頂部から除去し、エタノール
沈殿し、その一定量をｍＲＮムの■訳の丸めＸ＠ｎｏｐ
ｗｓ　ｌａ・１１ｇ卵母細胞の中に注入した■ｏｉｍｌ
Ｌに２４時時間−え後、Ｊｉｔ＊ｖａｒｔ　＃によ〕説
明されたＷＩＩＨ（ヒト羊ＩＩＩ）細胞上でＶ＠５ｌｓ
ｕｌａｒ　ｇｔｅｍｔｌｔ１ｍクイルス（インディアナ
株）又はＩｍ軸ｐｈａ１ｗｙｅ＊ａｒｄｉｔｌａ　？イ
ルＡを用いるｌＩｓ的細胞変性効果抑制試験でインキエ
ペーシｍｙ培地の抗ウィルス活性を分析し九〇九だし、
ζこで妹、ウィルス感染に先立ち（４時間のかわシに）
２４時間サンプルを細胞とインキュベートし九０２つの
活性ピークが常にシヨ糖密度勾配分画ＲＮＡで観察され
た（第１図）０片方のピークは１２Ｓ゛の計算値（サイ
ズ）で沈降し、注入ＲＮＡ１μｇにつき（ＩＦＮ−α基
準で）Ｚｏｏ−４００ユニット／−の抗ウィルス活性を
有していた。活性の他方のビーク祉サイズ１６ｇで沈降
し、遅い沈殿ピークの、活性の約半分を有していた。ヒ
トＩＦＮ−γが効果を有しないウシ細胞系（ＭＤＢＫ）
で同じ７？クシ曹ンを分析しても活性が観察されなかつ
九ことから、これらの各々の活性ピークはＩＦＮ−ｒに
よるものと思われるｏＩＦ）Ｊ−α活性とＩＦＮ−／活
性の両方ともＭＩ　Ｂ　Ｋ分析で容＋ｌに検出される筈
である（５）。
論翼Ｎム（２００μｇ）の分画な、酸−尿素−アガｐ−
スゲル電気泳動法でもおこなった０スラプアガーースゲ
ル（１７，８１）を、１．７Ｓ−アガｐ−ヌ、０．０１
！ｉＭりｚｙ酸ナテトウＡ（ｐｔ１３８）及び６Ｍ尿素
で構成し九〇電気泳動を１１９アンペア、４℃で１時間
おこなった０次にゲルをかみそ〉Ｏ刃で細分し九。個々
の薄片を７０℃で嬢解し、フェノールで二度、りａａ７
オルムで一度抽出した壷状に７ツクシ目ンをエタノール
沈殿させ、その後シシ！→卵母細胞に注入し抗ウイルス
分析によ）ＩＦＮ−ｒｍＲＮムを分析した。九つ九一つ
Ｏ活性ビータがゲル分画サンプルでＩ！察されたく第１
Ｏ０こＯビークは１８１１　　ＲＮＡと共に移動し、注
入ＲＮＡ　ｌμｇにつき６０Ｇ二ニツ）／ｓｇＯ活性を
有してい九０この活性は、又ＭＤＩＫｆｉ胞を保護せず
、ＩＦＮ−ｒＫ４ＩｌＩｋ的と思われる・ シ璽糖密度勾配（１！ＩＩ及び五・８）と酸−尿素ゲル
（ＩＩＩ）で観察され九活性ピーク間のナイス０１異は
これらの別々Ｏ分画方法が全く同一〇変性条件下では遂
行されないことによシ説明され得る。
Ｄ、　　ＩＦＮ−γ配列を含む；口二一ライブラリのｌ
ｌｌ１１ ゲル分画した３μｇのｍＲＮＡを使用し、標準操作法（
２６，３９）で二重鎖＠ＤＮＡを調製した。６−ポリア
クリルア建ドゲルでｅ　Ｄ　Ｎ　Ａをサイズ分画した０
２種のサイズ画分（７ラクシヨン）＄００−１５００　
ｋ＋ｐ（１Ｂ１＋ａｇ）と）１１００ｂｐ（１０４ｍｇ
）とを電気泳動溶出した。各サイズのｌＤＮＡのサンプ
ル８５ｍｇにターにナルデオキシヌクレオチジルトツｙ
スフエツーゼーを用いてデオキシ−Ｃ残基をつなぎ、同
様にＰ３１部位−にデオキシ−Ｃ残基をテーリングした
８００ｎｇのプラス建ｒｐＢＫ３２　ｇ−とア；−ル（
ａｎｎｅａｌ　）　　シた０アニール後の各混合物を用
いてＥ、　ｃｏ旦に一１２株３９４を形質転換した。８
００−１５００ｂν・ＤＮＡから約５ｏｏｏ株、　）　
１５００ｂｐＯｏＤＮムから約４００株のトランスホー
マント（形質転換体）が得られ九〇 ｇ、　　ｗ発＠ＤＮム０ニア０ニーライブラリのスクリ
ーニング 各＝ｙａ＝−を、ＬＢ←）＋５声ｇ／ｓＣ）テトラサイ
クリνを入れたマイクロタイタープレートのウェル（ｗ
ｌｌ）　　Ｋ別々に１１種し、ＤＭＳＯをｙｓｔで加え
九後−ＳＯ℃で貯蔵した。コミニーりイプラリの２種の
コピーをニトロセルｐ−スフイルター上で誘発及び非誘
発ＰＢＬ培地からゲル分画したｍＲＮＡのサイズ１８８
画分を用いて”ｐ−＊識・ＤＮムプ四−プを調製した。
プライマーとしてオリゴ（ＩＴＩ！−１１を使用し既報
（１）の反応条件を用いた。
６００−１５００ｂｐサイズＣ１ｌＤＮＡ　ｉｉ分から
得喪ｓｏｏ。
株のトランスホーマントと）１５００に＋ｐサイズのｌ
ＤＮＡ　ｉ１分から得九４００株のトランスホーマント
とを含む１組のフィルターを、２０Ｘ１０＠＠ｐｎａの
誘発”Ｐ−ｖＤＮムとハイブリダイズさせたＯも５１組
０フイルターを２０　Ｘ　１０’＊ｙｍの非篩発Ｓ″Ｐ
−＠ＤＮＡとハイブリダイズさせた。Ｆｒ１ｆｓ＊に勢
輔が示した条件でハイブリダイゼーションを１６時間継
続した。フィルターをよく洗浄しＩｎ、ＤｕＰｏｎｔ　
Ｌｉｇｋｔｎｌｎｇ−Ｐｌｕｓ増感板を密着させたＫｏ
ｄａｋＸＲ−５Ｘｌｄフィルムに１６〜４８時間露出し
た０２種のプローブに関して各コロニーのノーイブリダ
イゼーションノ（ターンを比較した０約４（ｌのコロニ
ーは明らかに双方のプローブと〕為イプリダイズし、約
５０９６のコロニーはいずれのプローブともノーイブリ
ダイズしなかった（第３図）。１２４個のコロニーは誘
発プローブとかなジノ・イブリダイズしたが、非誘発プ
ローブについては検出不能な程弱いものであった。これ
らの各コロニーをマイクロタイタープレートのウェルに
個別に接種し、増殖させてニトロセルロースフィルター
に移し、前記と同様に２柚のプローブとハイブリダイズ
させ九〇同様に各コロニーから急速法（ｒ桑ｐｉｄ　ｍ
・ｔｈｏｄ）−によって単離しえプラス虐ドＤＮムをニ
トロセルレースフィルターに付着さぜ、誘発及び非−発
プ四−プとハイブリダイズさせ良＠０意！個のブー品−
から得たＤＮムは誘発プー−プＯみとハイブリダイズし
た・これらな”ｓｔ発−１ｕ＆−と名付は九・７９発：
１ｗｘ−Ｏ４Ｉ性決定 膠り０１８１１１冨ｇｍニーーからプラスζドＤＮムを
調製し、これを用いて挿入＠ＤＮＡ０ｑ性決定を行なつ
え０暴りＯＩＩ１１発プラス（Ｐ・Ｌｐ＠Ｉ。
１６ｍ、１７１及び？７り０制隈エンドヌクレアーゼ！
ツビンダによれに４つのプラス建ドが同様の開隔ヌクレ
アーゼマッグを有すると推定された・これｂ０４種のプ
ラス建ド（ｔ・’Ｉ、　ｐ＠ｅ、　ｐｌｌ、　１１雪）
は夫々、挿入・ＤＮＮ空中４個のジ組１部位と８個Ｏ］
！１ｌｆ１部位と１個の、Ｒａ１１部位とを有していえ
。
第暴Ｏグツス電ド（ｐｉｌｌ）は共通の！！！！Ｉ断片
を有してお〉、他０４１１に比較して短い・ＤＮムクー
−ｙであると思われ九〇制限ヌタレアーゼマツビンダに
よって推定された相同性（ｈｏｍ＠ｌ・Ｕ）はハイブリ
ダイゼーシ冒ンによって確認された０プラスｉ　Ｖｐ６
’１０６００ｂｐ　ＯＤｄ＊　Ｉ　ＩＦｉ片からＩｍｐ
−標識ＤＮムプｐ−プを調製し−１これを使用して他Ｏ
誘発コ關ニーとのハイプリダイゼーシ目ン−を実施し九
〇制限ヌクレアーイでラッピングされた移りのコロニー
全部がこＯブー−プとクロスハイブリダイズし九〇誘発
／非誘発スタリーエｙグに選択した１２４個のうちの他
０１７個のコロニーも同様であった・クロスハイブリダ
イズするこれらのプラスミドの各個に於ける挿入＠ＤＮ
ムの長さを、加Ｉ消化及びゲル電気泳動法によって測定
し九〇、シ 最長の挿入ｅＤＮム含有するりは一ン紘挿入長１２００
−１４００ｂｙの夕筒−ン＠−と考えられる・以後の実
験全部にこのＤＮムを使用し九。
この制限エンドヌクレアーゼマップを第４図に示すＯ １目の挿入＠ＤＮムは、３つの独立発現系で産生された
発ｉ１！産物によって抗ウィルス活性を生ずるＩＦＮ　
ｒ　＠ＤＮムであることがＩｉＥ明された〇これに関し
て以下に詳述する。
０、　６９０挿入ＩＤＮ人の配列解析 グラス建ドｐ６＠０挿入・ＤＮムの完全ヌクレオチド配
列を決定するために、断片をＭＩＳベクター鵬Ｐ１＠で
サブクルー二ング後にジデオキシヌクレオチドチェーン
メー々ネーシロンメソッドーで処理しＭ＆ｘＭｍ−０１
１ｍｒｔ　法−で処理した〇最長Ｏオープン解読７レー
ムは、第５図に示す１６６個のアミノ酸から成るタンパ
クをコードしている〇；−ドされた第一残基は、・ＤＮ
ムの５′−末端の第−ｍＩｔ署トンである０ア電ノ末端
の最初＋０２６個の残基ｄｌｌｌｊｌ１２）１４６個の
アミノ酸の分泌のためＯＶシグナル配列して機能すると
推定される０この推定シグナル配列は、別の特性付けさ
れたシグナル配列と共通の４Ｉ黴、例えＦｉナイズ及び
疎水性を有する。頁に、推定され九−表記列に見られる
４個Ｏア電ノ１１（ｓｅｒ−１ｅｕ−ｇｌｙ　ｅＦｍ　
）は、数種の白血球インク−７二−ン（ＬｅＩＦ　Ｂ、
Ｃ，Ｄ、Ｆ及びＨ，（２））の開裂点で見られる４個の
残基に等しい・１４ｍ個のア電−ノ駿から成る；−ドさ
れ九成熟ア建ノ酸配列は分子量１７．１４０である。
コードされたタンパク配列中のアミノ酸２ｓ−Ｎ　Ｏ（
ａｓｎ−ｇｌｙ−ｔｈｒ）及びアミノ酸１０Ｇ−１０２
（ａｓｎ”ｔｙｒ−ｓ＠ｒ　）にグリ−シレージョンが
可能な２個の位置−が存在する。このような位置の存在
は、ヒトＩＦＮ−ｒ（ｓ、ｓｔ）の周知のグリコシレー
ジ目ンに一致する◇更に、２個しか々いシスティン残基
（位置！及び３）社立体配置から見て余夛にも近接して
いるためジスにフィトブリッジを彫成し得ない０このこ
とは、β−メルカプトエタノール−）の如き還元剤の存
在中でのＩＦＮ−１の周知の安定性に一致する◇推定さ
れた成熟アミノ酸配列はほは完全に塩基性であシ、全部
で３０個のリジン。
アルギニン、ヒスチジン残基を有しておシ、アスパラギ
ン酸及びグルタミン酸残蓬は全部で１９しかない。
プラス建ドｐ６９のＤＮＡ配列から推定されたＩＦＮ−
ｒのｍＲＮＡ構造は、ＩＦＮ−α（１，２）又は夏ＦＮ
−β（５）のｍＲＮ人とは明らかに異なる。＃ｇ６図に
示す如（、ＩＦＮ−α又はＩＦＮ−βに比較してＩＦＮ
−ｒｏコブー領域はよシ短かく、５′及び３′の未翻訳
領域はよシ長い。
Ｈ，１１匹」欠ぢυＩす■ロ２１ニヱ王旦乙の直接発現 第７図に示す如く、５０μｇのプラスミドｐ６９を組！
で消化し、６−ポリアクリルアミドゲル上の電気泳動で
１２１ＳＯｂｐの挿入物を単離した０約１０μｇの挿入
物がゲルから電気泳動溶出した。
こＯＰｎＩ断片Ｓμｇを３　”　＝　ツ）　Ｏ！Ｌａｊ
　ＮＩ（Ｂ＠ｔｈ＠ｓｄａ　Ｒ＊ｓｗｒ＊ｈ　Ｌａｂｓ
　）で３１℃で１５分間部分消化し、＋８１ボリアクリ
ルア々トグルを用いて反応拠金物を精製したＯ所望の１
１００塩基対Ｂｓｔ翼！−ヱｓｔ　Ｉ断片約ＯｕｊＫｇ
　を回収した０ホスホトリエステル法−によって図示の
２個のデオキシオリゴヌクレオチド即ちｓ　’−ｄＡＡ
ＴＴｃＡＴＧＴＧＴｒＡＴｒＧＴｃと５’−ｄＴＧＡＣ
ＡＡＴＡＡＣＡＣＡＴＧ（第７図）とを合成し、下記の
如くリン酸化した０３０　ｓＬの６ＯｍＭ）リス−ＨＣ
１（ｐ　８　）　　と１０　ｖｄｌｉ　ＭｇＣ４と１１
ｗ＋Ｍβ−メルカプトエタノールと２４０　ｆｉｃｉｃ
ｒ−”Ｐ）Ａ’ｌ’Ｐ　（Ａｍ＠ｒｓｈａｍ　、　５０
００　ＣＬ　／８ｏ１ｍ　）中で各デオキシオリゴヌク
レオチド１００　ｐｍ・ｌ・を脅せた０１２具ニツトの
Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを添加し、３１℃で３０
分間反応させた０１μｔの１０ｍＭＡＬＰを添加し更に
２０分間反応させた・φ−ＯＨ／ＣＭ（ツ３抽出後、オ
リゴマーを０．２６μぎの担ＮＩ−Ｌ１１１１００塩基
対断片と合せてエタノール沈殿した。３０μｔのＳＩＯ
ｍＭ）リス−ＨｃｔｃｔＭ７．５）と１０　ｍＭ　Ｍｇ
Ｃ４と１０ｍＭジチオスレイトールと０．５ｍＭＡＴＰ
と１０ユニツト０Ｔ４ＤＮムリガーゼ中で前記の断片を
２０℃で２時間給合し九〇（付着末端の結合による重合
を阻止すぺ＜−）混合物を３０エニツトＣ）Ｐａｉｌと
３０エエツトのＥｃｏ　ＲＩ　　とＫよって１時間消化
し、６Ｌｊ！ボリアクリルアイドゲルを用いて電気泳動
にかけたＯ電気泳動溶出によ、９１１１Ｂ塩基対の産生
物（１１０，０００ｃｙｍ　）を回収した。
プツスミドＰＬ＠ＩＦＡ抛　１０３（第７図）はＬ＠Ｉ
Ｆム遺伝子から離れた―ＲＩ部位が除去されたープラス
ミ・ドｐＬ・ＩＦ　Ａ　２５（１）の誘尋体である０３
ＨのｐＬ＠ＩＦ　Ａ曹１０Ｂを２０エニツトのｌ・・■
と２０エニツトのＰｓｔ　夏とを用いて８７℃で９０分
間消化し、６チポリアクリルアきドゲルを用いて電気泳
動にかけたＯ（〜３９００塩基対の）大音いベタター断
片を電気泳動溶出によシ回収したＱこのように調製した
０、１Ｂ４ｇのベクターＪｌ　１１　Ｂ塩基対の１ｌｕ
ＲＩ−Ｅａｉｌ　　ＩＦＮ−ｒＤＮム断片を結合した。
＆Ｕ…　Ｋ−１２株鵞９４（ムチＣＣＡＢ１４４１１）
を形質転換して１２０＠のテトラサイクリｙ耐性コａ＝
−を得た。これらのトランスホーフッ１６０個力、らプ
ラス々ドＤにムをａ製し、石ＲＩ及びＰｎｌで消化しえ
。これらのプラスミドのうちの３Ｉｌｌｉが所望の１１
１暴塩基対Ｎ３１　ＲＩ−ＰＪ　１断片を含んでい九ｏ
ＤＮム配列の解析によ〕、これらのプラスきドが、ｓｒ
ジブロモ−ター、合成りＮム及び＠ＤＮム間の結合部に
所望のヌクレオチド配列を有する仁とが確認され九〇こ
れらのプラスイドの１つｐＩＦＮ−ｒ　捲４　ＩＩを選
択して更に研究を続は九・咳プツスミドを用いてＥ、蝕
…ｒ［−１２株ｗａ１１ｏ（ムＴＣＣＡ２７３２５）を
形質転換した◎ １、ＩＦＮ−ｒｔＪ−ド　る　　の遺　　　造ＩＰＮ−
ｒをコードする遺伝子の構造をＳ・ｍｔｋ＠ｒ墓ハイプ
リダイゼーシ曹ンによって解析し九Ｑこの方法−では、
５鰭の高分子量ヒトリンパ球ＤＮＡ（５Ｊ＄の如＜ｐｌ
ｍ＞を種々の制限エンドヌクレアーゼで完全消化し、１
．０パーセントのアガロースゲルを用いて電気泳動にか
け−、ニトロセルａ　−メフイルターＨＫｍｋ抹した・
１ｌｐ−標識ＤＮムプブープをＰ６−の挿入・ＤＮムの
６００　ｂｐ論Ｉ　断片から調製し−、エト買セルｐ−
スに移し九ＤＮムとハイブリダイズした輔。１分関轟ｆ
ｉ　１０”カラン）０７’ｌｌ−プを１６時間ハイブリ
ダイズし、前記＠Ｏ如く洗浄し九〇別々の提供者から得
た８個ＯゲノムＤＮＡナングルを制限エンドヌクレアー
ゼｌａｍｌｌｌ　で消化し、ｐ　ｓ　ｅ　　”Ｐ−ａｌ
織７’＊−フトハイプリダイズした・第−ｍｌｌに示す
如く、２個の明白なハイツシメイゼー１７Ｎ／Ｖグナル
が見られたＱ凪−厘　消化λＤＮムとの移動度比較によ
れば、これらは夫々、＆暮キー塩基対０６シ）及・びＬ
ＯＷｈｙを有すると推定されたＯこれ紘、３個のＩＦＮ
−ｒ遺伝子があるか、又は１備Ｏ遺伝子が３ｉＢＲＩ郁
位によって切断（ａｐｌｉｔ　）され九結果であろうＯ
ν＠Ｉ＊Ｄ）ｉＡが１蝕Ｒ１部位な會壕ないので、１個
の遺伝子を発蝙させるに線内部Ｊｊ！凰１部位を有する
介在配列（イントロン）が必要であつ九〇これらの可能
性を見分けるために、具なる他の５積のエンドヌクレア
ーゼで消化し九１側のヒトＤＮム（−第１０図）Ｋ対し
て同じプローブを用いてＳ・ｗｔｋ＠ｒｍハイプリダイ
ゼ−１／Ｗンを奥施し九〇３１１０他のエンドヌクレア
ー−Ｖ辷咀１．患」■で−は夫々２個のハイブリダイズ
ＤＮム断片（ｈ厘ではｔ　７　ｋｈｐと４．０ｋｂｐ、
Ｈ１ｍ＊Ｉ　で紘＆　Ｓ　ｋｂｐとＬ　Ｑ　１ｄｓ）　
）が見られ九〇しかし乍らＳ＠Ｏエンドヌクレアーゼ−
組シη１．ＪＬａｍＨＩによる消化パターンでは夫々１
個のハイブリダイズＤＮム断片（担躬厘では９．０ｋｋ
ν、−４厘　で社１１．各ｉｐ。
１１ａｍＨＩでａｅ、ｓｍｐ）Ｌか得られなかった。
同−ｌ−厘ハイプリダイズ断片に會すれるためには２個
０ＩＦＮ−ｒ遺伝子が異常に接近して（ｉｌ、０１６シ
未満）結合していなければならない。
この結果よシ、ヒトゲノムＤＮムには（多数存在したＩ
ＦＮ−α遺伝子と違って）ひとつの同質Ｏ（ｈｏｍｏｌ
ｏｇｏｕａ　）　Ｉ　ＦＮ−ｒ遺伝子が存在しておシこ
の遺伝子がＮｅｏ　ＲＩ　＊　Ｅ！１１　Ｌ　馳１　　
部位を含む１個以上のイントロンによって切断されると
推定される・この推定を確認するために、Ｐ６９から得
た＠ＤＮＡ０３’−未翻訳領域のみから調整し九１ｌｐ
Ｓ＊断片（第６図の８６０番目から９９０番目箇での１
８０塩基対の身性Ｉ断片）を１ｇＲＩ　消化し九ヒトゲ
ノムＤＮ五にハイブリダイズし九＠。
１０ｋｂｐｌｓｓＲＩ　　断片のみがこのグローブにハ
イブリダイズし九〇このことは、この断片が３′−未翻
訳配列を含んでおＪ）　８．　ＩＩ　１ｄ＋ｐ　１１ｇ
３　ＲＩ断片がｓ／−配列を含む仁とを示す。ＩＦＮ−
ｒｃ）遺伝子構造（少くとも１個のイン）ｍｓ７を有す
る１個の遺伝子）は、ＩＦＮ−α（イントロン−）を有
さない多数遺伝子（ｍｕｌｔ１ｐｌ＠ｇ＠ｎｇｓ　）　
（２）　）又はＩＦＮ−β（インドシン−を有さない１
個の遺伝子）と明らかに興なっているＯ Ｊ、岨亀隻巨艷（罠艶 寥ｓ９／−のテトラサイクリンを加え九Ｌｓ＋ｒｉｉプ
ロスで１晩培養したｊｉ、　恕ｉｌ　Ｗ３１１０／ｐＩ
ＦＮ　ｒ１ａＬ４　ｇを、Ｏ，！　Ｘのグルコースと０
５Ｘのカザき）酸とｓｓ９／−のテトラサイクリンとを
含むＭｌｌ＠培地に希釈度１：１００で接種した＠ムｌ
−０が０．１乃至０．２のときにｊｌｌｌｍｌ［２Ｇμ
ｇ／−になるまでインドールアクリル＠を添加した。ム
−１・＝１．０で遠心して１０−のサンプルを採取し、
１１ｖ／−のクシ崩清アルプンンを含む１１１ＩＩの燐
酸塩緩衝食塩水（ＰＨ１−１８ム）に直ちに再懸濁させ
た。
超音波で細胞を破砕し残渣を遠心で除去した＠アッセイ
（分析）を行なうまで上清を４℃で保存し九〇ｍｙｉｉ
ｉ変性効果（ＣＰり阻止アッセイで標準ＩＦＮ−αと比
職すると、上清中のインターフエ四ン活性は意５０ユニ
ット／−と測定され九。
Ｋ、酵母の形質転換／　株及び培地 酵母菌を既１１１ｆ４に準じて形質転換した０！・刺」
株Ｊム３００　（ｔｈｒ　１ｓｍ　Ｂａ　ｔｈｉ　ｗム
☆０１１１７　ｈｍｋｒ−艶！　ｌｉ”−ｓｉｒ”　）
　＠を用いて発現能のあるＴＲＰＩ遺伝子を含むグラス
ミドを選択した。遺伝子型（ａ虫１　耐重８ＵＣｍ　ｍ
ａＩ　ＣＵＰ　１．）　ｕｔ有すル１１ｆｉ曹ＲＨ１１
８を酵母形質転換宿主として使用した。１１１２１ｍは
、アメリカン・メイズ・カルチャー・コレタション（ム
ＴＣ０４４４０７ｇ　）にを託されている。０１８％の
カザミノ酸（Ｃムム）を含むＭ−（最小栄養検電）及び
ＬＢ（！ｊラッチ地）は、Ｍｉｌｌ・ｒ＠によって記載
されているように、培地をオートタレープで処理し冷却
してからｇ　ｏ　ｓ９／−のアンピシリン（８１ｖＩｍ
）を添加して得られた。
下記の培地によって酵母を増殖させた◎ＩＸＯ＄母抽出
物と２％のベグトンと！にのグルコース、これに所望に
よりｓ％Ｄｌｆｅｏ　＠天とを含むＹＥＰＤＩＬ中Ｋｔ
１ｇの酵母窒素塩基（アミノ酸非含有）（ＹＮＢ　）　
（Ｄｉｔｅａ　）と１０Ｍｇのアゾ＝ンとｌ０ＩＩＦの
ウラシルと易ｆｏＣムムと２０ｇのグルコース１これに
所望によりｓｏｙの寒天とを含むＹＮｌ＋Ｃムム。
Ｌ、　　母　　ベクターの １．１０４９のＹＲ，７（１４、１５、ｊ６　）をｌｃ
ｏ　３１１で消化した。得られ７ｔＤＮムの付着末端を
ＤＮＡポリメラーゼ１　（Ｋｌ＠ｎｏｖ断片）で平滑末
端化した。ベクターと挿入物とをＩＮの７ガロース（８
・１−ｍ）グルに−流し、グルから切り敗や、電気泳動
溶出して等容量のクロロホルムとフェノールとで２回抽
出し、エタノール沈殿した。得られた平滑末端ＤＮＡ分
子をｉＩｋ終容量５０声ｔで１２℃で１２時間結合させ
た。この結合混合物（１１１ｓｔｌｏｎ　ｍｉｘ　）で
Ｊ、　ａｏｌｉ　　株ＪＡ３００をアンピシリン耐性及
びトリプトファン原栄養性に形質転換し九。夫々反対の
方向を向いた［「夏遺伝子を含むグラスミドを単離した
。ｐ　ＦＲＷ　１はＹＲ，７と同方向のＴＭＩ遺伝子を
有してお’）　、Ｐ　ＦＲＳ％’　２はＹＲ，７と反対
方向を向いたＴＲＰ　Ｉ遺伝子を有していた。
ｇｕｓｔの、　ｒａｗ　ｘをＨｌｍ　ｌで直線化し、Ｉ
Ｘの７ガロースゲルを用いて電気泳動にかけた。直線状
分子をゲルから溶出し、次に２００ｎ９を、＃母３−ホ
スホーグリセリン酸キナーゼ遺伝子を含む制限断片であ
るグラスミドｐＢ１　（ｌ場の３．！ｂ！！ｊｍｌ挿入
暢５ＧＯｎ９と結合させた。結合混合物を用いて旦４担
株２９４ｔ−アンピシリン耐性及びテドラナイクリン感
受性に形質転換した。このような組換体の１つからｌｌ
ｌ製したグラスミドは、テトＩ）サイクリン耐性遺伝子
のＨａｎｄ　１部位に、Ｂ１挿入ＤＮＡのＬ　１　ｋｂ
ｐ　Ｈｌｎｄ　ｌ断片を有する完全なｙ１遺伝子を有し
ていた。このグラスｉＦ′は、ＰＲＭ　Ｓ　１　テある
。５膚すの、ＩＰＲＭ　Ｎ　ｌをｌｃｏ、ｉＬ菫で完全
に消化し、フェノール及びクロロホルムで３回抽出しエ
タノール沈殿した。夫々２５０μＭのチオ中ジヌクレオ
シドトリホスフェートを用いた反応でＤＮＡポリメラー
ゼＩ　（Ｋｌ＠ｎｏｖ断片）を田【△イＡ工め針善会−
を兜増り走。反応１１４℃で２０分間継続後、フェノー
ル−クロロホルムで８同抽出し、ＤＮＡをエタノールで
沈殿させた。
次ＫＤＮムを含む再懸濁液をＣ１ｍ　ｌで完全に消化し
、６Ｘアクリルアミドグルを用いて電気泳動にかけ九。
ベクター断片をゲルから溶出し、フェノ−ルーフ冒ロホ
ル”ム抽出し、エタノール沈殿した。
ヒトから精製し友３−ホスホグリセリン酸キナーゼ酵素
の６個ＯＮ−末端アミノ酸は下記の配列を有していた。
１−２−１−４−！１−８ ＳＩＲ−ＬＥＵ　−Ｊ３１Ｒ−ＳＩＲ−ＬＹＥ　−Ｉ、
ＮＵ　−１４１塩基対の旦具８Ａ−ｇａｕＪＩＡ制限断
片のＤＮＡ配列から生成した翻訳解読フレームの１個は
、（内部用胚一部位を含む。第１１図のとｉ制＠マツプ
参照）下記のアミノ酸配列を生成する。
１−２−３−４−５−６ ＭＥＴ−８ＥＲ−１，ＮＵ−ＢＫＢ−８ＩＲ−ＬＹ８−
ＬＩＵ−イニシエーメー念るメチオニンヲ論〈トＰＧＫ
Ｎ−末端アオノ酸配列は、ヒトＰＣ！ＫＣ）Ｎ−末端ア
ンノ酸配列と５乃至６個のア建ノ酸と相同（ｈｏｍｅｌ
ｏｇ）を示した。
この配列決定によシ酵母ＰＧＭ構造遺伝子の起点が、ｐ
Ｈ４Ｄ１４１塩基対ｊｌＬＬ３　Ａ制限断片中のＤＮＡ
によシブードされると推定できる・従来の研究（至）で
は、ＰＧＫ　ｎｄｔＮＡ　　ｔ−特定化するＤＮＡ配列
がＨ１ｄ厘断片のとの領櫨に存在するであろうと推定さ
れていえ。更に１４１塩基対Ｓａｗ　８　Ａ断片の配列
にはよ〕多くのＰＧＫプロモーターのＤＮＡ配列が含ま
れている（第１雪図）。
配列蕃′−ムＴＴＴＧＴＴＧＴＡムム−３′を有する合
成オリゴ買クレオチドを標準法によシ合成した（Ｃｒ＠
ａ他、Ｎｗｓｌｅｉ−ム＠１ｄｓＢ＠ｓ、、８．　２３
３１（１８８０）　　）＊　　１　０　０ｎｇＯプライ
！−の５′−末端をｇｏａｔの反応液中で雪＠　＠　Ｊ
ＩＣｌのＣｒ−５ａｐ”Ｊｈｒｐ及び１Ｑｘ＝ツトの！
４ポリ翼クレオチドキナーゼでＩＩＩＩＩした０この機
織プライマー溶液を用いてプライマー修復反応（ｐｒｌ
ｍｒ　−ｒ＠％ｌｒ　ｒ＠ａｅｔ１ｏｎ　）を１１施し
た。この反応は、ＰＧＫ構造遺伝子配列の直前に位置す
るム痣Ｓ′−フランキンクＤＮムに胞−■制限部位を入
れ墨多段階プロセスの第１！ＩＩである。
１１００ＪＩノｐＨ１ｒ１ｉＪを一厘で完全消化し６％
のボリアクリルアオドグルで電気振動する。エチジウム
染色ゲル上の最上部のバンド（ＰＧＫ７’ロモーター領
域を含む）を前記の如き電気泳動溶出によプ単離した。
このＤＮＡの１２０Ｇ塩基対旦吐璽断片をＨｌｎｔ　Ｉ
で消化し、次に６Ｘアクリルアにドゲルで電気泳動した
。電気泳動溶出によシＳＳＯ塩基対のバンドを単一し丸
。５μすのＤＮＡを単離した。ＤＮＡの６ｓｏ塩基対ｋ
ｈ＊　Ｉ　−ＩＵｎ。
量断片を１１０　Ａｌ−０ＨｓＯに再度輔濁させ、次に
ｍｏｓｔｏＨ記の燐酸化プライマー溶液と混合した＠こ
の混合物をフェノール−クロロホルムで１回抽出し次に
エタノール沈殿させ友。乾燥したＤＮＡをＳＯμｔの山
０に再度Ｓ浦さぞ、次に沸騰水浴て７分間加熱し友、こ
０１液をドライアイス−エタノール浴で（１０乃至２０
秒間）急冷し、氷水浴に移しえ。次に、この溶液に、１
０μＬのＤＮムポリメツーゼ■の１０倍緩衝液（ｉｌｏ
＊ｈｒｉ−ψｒ　Ｍａｎａｈ＠ｉｍ　）とデオキシヌク
レオシドトリホスフェート（４ムＴＰ　、　ｄＴＴＰ　
、　ｄＧＴＰ及びｄＣ’ｒＰ）’＆：夫夫λ５ｍＭにし
ｐｌｏｓｔｔＤｆｌｔ液と２５ｓＬの山０とｌｉ！Ｌニ
ットのＤＮＡポリメラーゼＩ　Ｋｌｅｎｏｗ断片とを含
む溶液５０μＬを添加した０このＺｏ。
μＬの反応滴液を３７℃で４時間インキュベートしえ。
次Ｋ１１１ｍ１をフェノール−クロロホルム抽出し、エ
タノール沈殿し、凍結乾燥して１０ユニツ）（Ｄ８ａｗ
３ムで完全に消化した。溶液を６％アクリルア建トグル
で電気泳動した。３９塩基対のナイスに相当するバンド
をゲルから切取シ前記の電気泳動溶出で単一した。この
３９塩基対のバンドは１個の平滑末端と１個の旦５３ム
付着末端とを有する。この断片を改造し＊　、ＰＩＦ■
　６９ベクター（１１にクローニングした。１０μσの
、？！？強＠　９　ヲＸｂ＆　Ｉで直線化し、フェノー
ル−クロＨホにムで１回抽出し、エタノール沈ｊｌした
。ヌクレオシドトリホスフェートを夫々２５０μＭ含む
５Ｏａｌの反応溶液中でＤＮＡポリメラーゼＩＫ１＠ｎ
ｏｖ断片を使用してＸｍｌ付着末端を充填した。
このＤ　Ｎ　Ａ　ｆ　ｊ！ＭＬＨＩで切取ｐ６Ｘアクリ
ルアミドゲルで電気泳動した。ベクター断片を電気泳動
溶出によってゲルから単離し次に２０ｓＬの迅０に再ｔ
Ｓ濁させた。２０ｍｇのこのべりｌ−と前記で調製した
２０ｎ９のｓ９塩基対断片とを室温で４時間結合させた
。結合混合物の号量を使用してＬ　（１０１１株２９４
　ｔ（Ｌｌ＋２０　、ａ１ｇ／ｄａｍｐプレート上で）
アンピシリン耐性に形質転換した。トランスホーマント
から得たプラス々ドをクイックスクリーンブーセス（ｑ
ｕｉｃｋ　ｓｅｒｍ＠ｎ　ｐｒｏｏ＠ｄｗｒ＊　）−で
テストした・配列解析の九めにプラスミドｐＰＱＫ−３
９を選択した。２０μすのプラスミドｔ−Ｊｂａｌで消
化し、エタノール沈殿ｉｌｌ　ＯＯＧユニットの細■由
来アルカリ性ホスファ！−ゼと共に６８℃で４ｓ分間処
理し良。ＤＮムを３回フェノールーク四ロホルム抽出し
、エタノール沈殿させた。！００ｓＣｉのＣｒ−！寺Ｐ
ｌムＴＰと１１ＳＬ＝ツトの一ポリ翼タレオチド中ナー
ゼさを含むＨｏ５ｔの反応潜液中で脱リン酸末端ｔ−標
識した・プラスミドを１ｅＪＩで切断し＠Ｌ！Ｘのアク
リルアミドゲルで電気泳動し九〇 標識し九挿入バンドをゲルから単離し、Ｍａｘａｍ−Ｇ
Ｈ１ｎｒｔ法１ｉ１によって配列を決定した。このプ冒
モーター断片Ｏｓ′−末端のＤＮム配列は予想通シであ
った。
２５ｓｆｉのｐｐｏｉｃ　−３９（第１３図）を（夫々
５エニツトの）　ＪＬＬＬ　Ｉとｘ−！とで同時に消化
し６％ゲルを用いて電気泳動にかけた０３９塩基対のプ
ロモーメー断片を含むｓ９ｏ塩基対のバンドを電気泳動
溶出により単離し友。再懸濁ＤＮムをＢａ！１３ムで消
化し、８Ｘアクリルアイトグルを用いて電気泳動にかけ
た。３９塩基対ＰＧＫプロモーメーバンドを電気泳動溶
出によ）単一し友。こ０ＤＮＡは、ｌツ８　Ａ　−：４
ＪＨＩ断片ｆｃＰＧＫグロモーメ−の５′−末端のＳ−
塩基対を含んでいた０２８４ｇ（ＤｐＢｌをｂｌと＆！
１１とで消化し、６Ｘアクリルアミドゲルを用いて電気
泳動にかけた。ＤＮムの０．８　ｋｂｙバンドを電気泳
動溶出によシ単離し、ｈ！３ムで消化して、６Ｘアクリ
ルアイトグルを用いて電気泳動にかけ虎。ＰＧＫ、；’
Ｅｌモーターから得ｆｔ２ａｈｂｐバンド（第１１図）
を電気泳動溶出によシ単離し友。
次に、このＤＮムと前記のＢ９ｂｐプ關モーター断片と
を室温で２時間給合し友。結合混合物を１−１と上四璽
とで消化し、ｓＸアクリルアミドゲルを用いて電気泳動
にかけた。８１２ｂｐＸ■１−ｂ１断片を電気泳動溶出
により単離し、これをｇ００ｖｓ９の（先に単離し喪Ｐ
ｖｕ　Ｉ　−Ｐａｔ　１１６２塩基対断片の欠如した）
　ｐｌＲ３２２１４ｊと、２００　＊ｆｉＯ’ｊＱ３１
−Ｐａｔ　Ｉ　Ｌ＠ＩＦＡ　ａＤＮＡ遺伝子とを含む結
合混合物に添加した。このＬ−ＩＦムｏＤＮム遺伝子は
先にｇｕｓｔのＰＬ＠ＩＦ　＊ｒｐＡｇ５から単一され
ている。この３因子結合混合物を用いて＆　（１０１１
株２９４をテトラナイフリン耐性に形質＆換り九。トラ
ンスホーｉントコロニーｔＺニスクリーニングし−、コ
ロニーの１つ、即ちＰＢＲ３２２をベースとするベクタ
ー中でＩａ　Ｉ　Ｆム遺伝子に融合した３０４塩基対の
ｐ　Ｑ　Ｋ　５’−フランキングＤＮムを有するｐＰＧ
Ｋ３００を単層した。Ｌ・！Ｆム遺伝子のＳ′−末端は
、配列５’−ＣＴムＧＡＡＴ’ｒＣ−３′を有する。従
ってこの配列にＰＧＫプロモーメー断片からｘｈ菖部位
が融合すると、Ｘ艶１部位にＥｇｏ　Ｂ　１部位が付加
することが可能になるＯ従ってｐＰＧＫ　−８００はＰ
ｖｕ　ｌ　−［６６Ｒ１断片中に単一され九ＰＧＫ７’
ロモータ一部分を含む。
１０ｓ９のｐＢｌをＰｖｗｌ及びＥｇｏ　ＲＩで消化し
６％アクリルアミドグルで電気泳動しな。１？ｌｋｂの
！！！ｌ　Ｉ　　ＩｊＪＩ　ＲＩ　ＤＮムバンドをＰ　
Ｇ　Ｋ　５’−フランキングＤＮＡから電気泳動溶出に
よｐ単一した。
１０　ｊｇｏｐＰＧＫ−８００を’１ｍ　Ｂ　Ｉ及び−
Ｉで消化し、ｓＸアクリルアイドゲルを用いて消化混合
物（社−５ｔ１ｏｎ　ｍ１ｘ）を電気泳動Ｋかけ、次に
電気泳動溶出して３１２ｂｐのプルモーター断片’に単
離した。　Ｂ　ｓ　９　ＯｐＰＲＬ　４　ｔ−１１ＬＩ
ＲＩ　テ切断し、エタノール沈殿させ、６８℃で細菌由
来アルカリ性ホスファターゼで４８分間処理Ｌ＆。フェ
ノール／クーロホルムで３回抽出し、ＤＮＡｔ−エタノ
ール沈殿させ、２Ｇ−の１１０に再懸濁させ友。
１００ｍｇのベクターを、ｐＰＧＫ−３００から単離し
た１００ｍｇの３１２ｂｐのＥｇｏ　ＲＩ　−Ｒｘｘ　
ＩＤＮＡ−Ｐｉｌｌから単離しｆｔ　ｌ　００　ｎ　９
のＥ（１０嵐１−Ｐｖｕｌ　ＤＮＡと結合させた・結合
混合物を用いて！−！株２９４をアンピシリン耐性に形
質転換した＠得られたトランスホーマントの１つがｐｐ
ａｉｃ−１８００であった。この７＃ラスミドは、ＤＮ
Ａの鋤ＲＩ−ｌ遠Ｒｆ又は」−厘一旦υＲ１断片として
１１ｉＯＧｋｐ　　０ＰＧＫプロモ一ター断片を含ん、
でいた。
１ｏｓｙのｐＰＧＫ−１５００をシＩ及び′ＦｔＢＲ■
で完全消化し、消化混合物を６％アクリルアミドグル電
気振動にかけた。電気泳動溶出によシＰＧＫ２ａモーｌ
−を含む９００　ｈｐの断片を単離したｅ　　１０　Ａ
９（ＤｐＩＦＮ−ｒ　ｔｒｙ　　４８ｔＭ！ｊＲＩ及び
−厘で完全消化し、６Ｘアクリルアミドゲル電気泳動Ｋ
かけ良。電気泳動滓出によル直接発現できるＩＦＮ−ｒ
　＠ＤＮＡを含む９８１１１＋ｐ　ＯＡン）”がゲルか
ら単離された。
（聾１　１ｃａｅｉｌ鳳断片上・の）ＰＧＫグロモーメ
ー断片と欠失ｐ？ＲＭ−ａｌと前記の単＠１ＦＮ−ｒａ
ＤＮムとを８断片結合反応によって酵母発現ベクターを
構成した。結合反応は１４℃にて１２時間行なわれた。
次にこの結合混合物を用いてｊＬｏｏ且株２，９４をア
ンピシリン耐性に形質転換し友。トランスホーマントを
分析し、適正な構成の発現グラス建ドｐＰＧＫ−ＩＦＮ
−ｒ　の存在を確認した（第１６図）。発現系を含むグ
ラス建ドを用い、トリブトファン欠失寒天中で酵母菌Ｂ
Ｈ２１１１（Ｄスフェロプラストをトリプトファン原栄
養性に形質転換した。これらの組換酵母に対し、免疫イ
ンメーフ工冒ンの存在を勇べるアッセイを夾麹したつ酵
母抽出物を下記の如く調製した。１０−の培養液ｔ’Ｙ
ＮＢ＋ｃＡム中でム・・・さｌ−２まで増殖させ、遠心
によｐ集め、ＳＯＯμｔのＰＢ８１１衝液（ｇｏｍＭ　
　ＮａＨ電ＰＯ番ｅｐＨ＝７．４　　、　１５０ｍＭ　
　　ＮａＣｔ）　　に再懸濁させた。等容量のガラスピ
ーズ（０，４５−０、ｍ　ｗ　）を添加し、混合物を２
分間攪拌した。抽出物を１４００　Ｏｒｐｍで３０秒間
遠心し、上清を堆出し友。ＣＰｌ阻止アッセイを用いて
標準ＩＦＮ−αと比做すると、上滑中のインメーフエロ
ン活性の一定値ｄｉ＠、０００エニット／−であった。
ｋ　セルカルチャーベクＪ　−ｐ８Ｖｒ　６９の構成り
Ｖ４０ｙｔＱｔ）ンｆ含ｔｒ８４２ｂｐ　０Ｈ１ｎｄｌ
　−ｈ厘断片をｌｅｅ　ＲＩ制限部位末端を有する断片
に変えたｅ四曵璽部位に合成オリゴｖ−（５’−−ムＧ
Ｃ’ｆ’ＧムムＴＴＣ）を添加して、ポリメラーゼ１（
Ｅｌ・ｍｏｗ　＠片）を作用させて充填し、ヱジ厘部位
は平滑末端結合によって呈Ｌ）　Ｒ１部位に変えた。
得られた１ＪＲ１断片をｐＭＬ−１＠ＯＩｃｅ　Ｒ１部
位に挿入しえ。、工、Ｒｆｆｉ伝子に逆向きとなる５ｖ
４０９１期グロモー！−を有するグラス建ドに於いて、
シＭＥ、−１ｍのａｍｐｉ遺伝子に最も近い鋤８１部位
を除去してこのａ、−遺伝子を更に改造した。
りａ−ンＨＢＶ　ＤＮＡ−０１０１ＳｂｐＯＨｐａ　Ｉ
　−−３３断片を単離し、ｍｌ！Ｊｆ炎つ（ルス（ＨＢ
Ｖ）Ｏ！！１＝Ｉｉ１位を合成オリゴ−ｒ　−（轟’−
ｄＧｃＧＡＡＴＴｃＧｃ　）で！恕ｇｉｇ位に転換した
。このＢｏｏ　Ｒ１−シビ厘の付いた断片を８Ｖ４０の
オリジンをもつ前記プラスミドのｇｃｏ　ＲＩ　−Ｂａ
ｍＨ１部位に直接クロー二ンクした。
ｐａｌｌの１２５０ｂｐＰｓｔｌ断片に於いて加１末端
を１１０　ＲＩ末端に転換し、残りのＮｅｏ　Ｒ１部位
にＩＦＮ−ｒ遺伝子を挿入した。ＩＮ’Ｎ−１の構造遺
伝子の前にＢＹ４０後期グロモーＩを有するクローンを
単離した。ＤＩＣムＥ−テキストランの存在中でトラン
スフェクションを８時間行なうように改変し喪ＤＩムＥ
−デキスト２ン法−を用いて、前記で得られたグラス建
ドを組織培養細＆Ｉ＠に導入し友。細胞培地を２〜３日
毎に交換した。毎日２００ｓＡｆつ取申してインメーフ
エｐンのバイオアラ＊４を行ｔｘつ九。トランスフェク
ションの８〜４日後に検定したサンプルでの典型的な収
率は５０乃至１００ユニット／−であつ友。
Ｎ、　　ｔル細龜由来免疫インターフェ費ンの部分精製 ナル細胞がりくるヒ）ＩＦＮ−ｒをよシ多量に製造する
ために、１０個の１０ｃｓ＋プレート内の新しい単層Ｃ
ｏ５−７に％　　１１０ｄｏＤＩＡＩ−Ｔ’Ｆ　ストラ
ン（２００ｓｆｌ／−のＤＩＡＩＣデキストツ＞　５０
０，０００ＭＹ、＆ＯＩＭＯ）すｘ、ｐ？、！ｉ、ＤＭ
ＩＭ中）中の総量８０４９のｐＤＬＩＦｌをトランスフ
ェクトし虎。３７℃で１６時間維持し、プレートをＤＭ
ＩＭで８回洗浄し７ｔ、１０Ｘのｆ４ｓ＊と１ｍＭのグ
ル／電ンとｍｏｓ９／−のペニシリンＱを加えた１１ｓ
ｔＱ新しいＤＭｌｉｊＭを補充し、次に５０ｗｖ／ｄの
ストレプトｉイシンを各プレートに添加した。
翌日、培地を血清を含まないＤＭＩＭに代え良。以後、
この血清を會ｔない培地を毎日新しく添加した。収集し
た培地をアッセイを行なう迄又はＣＰＧに結合する迄４
℃に維持した。トランスフェクションの３〜４日後のサ
ンプルからプールした一分は活性をほぼ全部含むことが
判明した。
αｉｇのＣＰＧ（コンドロールド−ポアガラス、１１＊
＊ｔｒｅｍｕｌ＠ｏｎｂ＋ｓ、ＣＰＧ８５Ｇ、メツシエ
ナイズ１２０／ｇｏｏ）Ｙｔｔｏｏ−の細胞上清に添加
し、混合物を４℃で３時間攪拌した。ベンチトップ遠心
機で短時間遠心し、沈降ビーズをカラムに詰め、２０ｍ
Ｍリン酸ナトリウム（Ｎａ１ＰＯ４ｅ　Ｎａ愈ＨＰＯ４
＠ＮａＨ１ＰＯ４又はＰＩ３）　、　ＩＭ　　ＮａＣｔ
　、　　０．１　％　／　−メびＳＯＮのエチレングリ
コールを含む前、記緩衝液（ を順次用いて活性を溶出させ良。ｆｌは全部の活性がＣ
ＰＧに付着していた。７ｓ％の溶出活性は、３０％エチ
レングリコールで溶出した両分中に存在した。これらの
画分をプールし２０ｍＭリン酸ナトリウム、ＩＭ　Ｎａ
Ｃ１，、ｐ！（７，１１で希釈し最終濃度をエチレング
リコール１０％にして、１０−のＣｏｔムセファ四−ス
（Ｐｈａｒｍａｃｌｍ　）カラムに直接かけ７ｊ、２０
ｍＭリン酸ナトリウム、Ｉ　Ｍ　ＮａＣＡ　。
ｐＨＶ、２で完全洗浄後、２０ｍＭリン酸ナトリウム、
ＩＭ）ＪａＣｊ　、　　Ｏ，ｊｉＭα−メチル−３）−
ｖンノサイドで活性を溶出し喪。かなりの量の活性（５
５％）がこのレクチンに付着しなかった。α−メチル−
ｐ−−ｖンノナイドによって４５％の活性７１出し友。
薬剤組成物 薬剤として有用な組成物を製造する丸めの公知の方法に
準じて本発明物質を製剤化し得る。即ち１本発明によｐ
得られたヒト免疫インターフェロン産生−を、薬剤上許
容し得る賦形剤と混合組合せる。適尚な賦形剤及びその
製剤イヒはＩＡａ　Ｗ、　Ｍａｒｔｌｍ。
ＩｋｎｉｌＨｔｏｎのＰｈａｒｍｃ＊ｔｓｔｌｏａｌ　
８ａｉ嗜ｎｃ＊−に１載されている。この書物を参考文
献としてここに引用する。このような組成物は、宿主に
有効投与するのに適した薬剤上許容し得る組成物をｌ１
ｌｉｌＩｌするために有効量の本発明のインターフェロ
ンタンパク質を適正量の賦形剤と組合せて得られる。
ム・　庄鮭旦翌１ 本発−のヒト免疫インターフェロンを、抗腫瘍治療又は
抗ウイルス治療を畳する患者、又は、免疫抑制状線を示
す患者に非経口投与し得る。用法及び用量は、他のヒト
インターフェロンの臨床研究で常用の用法及び用量に準
じる。例えば日用量約１乃至１０ＸＩＯ一単位で使用さ
れ、純度１％より下と考えられる物質は従来と同様に例
えばｌ５ＯＸＩＯ＠単位／日で使用される。ＩＦＮ−ｒ
以外のヒトタンパク質即ちヒト由来物質中に存在すると
成る種の好ましくない作用を生じる恐れのあるタンパク
質が＃１！ホ全く混在しないので、効能を良くする九め
にＩＦＮ−ｒの用量をかなり増すことができる。
はぼ同型のＩＦＮ−ｒの非経口投与に適し友剤形の一例
としては、特異的比活性例えば２　Ｘ　１０’Ｕ／）の
ＩＦＮ−ｒ　８　ＷＩＩｉを２５−０５Ｎ血清アルプ建
ン（ヒト）−Ｕ８ＰＫｍ解し、溶液を滅菌フイルメーに
通し、Ｐ遇し九溶液を無菌的に１００本のバイアスに分
注する。各バイアルは、非経口投与に適し丸軸インター
フェロン４ｉ　Ｘ　１　Ｇ＠単位を収移している。使用
するまでバイアルを低温（−ｇ。
Ｃ）保存するのが好ましい。
抗体中和のために、必要ならば、テンプルをｐＢｓ−ｉ
ｓムでＩ！００〜１０００単位／ｄ（Ｄｌｌｌｆｌ”？
”希釈する・希釈度を順次増加したラビットの抗とト白
皇球、ｌｌｌ１ｍ芽細胞又は免疫インターフェロン抗血
清を夫々用い、等容量ずつのサンプルを４Ｃにて８〜１
１時間インキュベートし友。ＮａｔｉｏｍｌＩｍｔｌｔ
ｍｔ＠ｄ　Ａｌｌ＠ｒｇｙ　ａＩｕＩＩｍ＊ｅｔｉｏｍ
　Ｄ釉＠＆＠＠＠　　から抗−ＩＦＮ−αと−Ｉとを入
手し虎。胸激末檜皇リンパ球から精製し九（純Ｉｓ〜２
０〜）の標準ＩＦＮ−ｒを用いて抗−ｒｒｗ−ｒｔ−調
製した。アッセイを行なう前にサンプルを１２，０００
）ｌで３分間遠心した。…２の安定度をテストするため
にアツ＊イＭｍＦｃＩＮｋｌＣ１を添加してテンプルを
ｐ！１２に調整し、４℃にて２〜１２時間インキュベー
トし、Ｉ　ＮＮａＯＨ’ｆｔ添加して一中和した。ドデ
シル硫ｆｌｔｔト９クム（８Ｄ８）感受性をテストする
ためにアッセイ以前にサンプルを等容量の０．２％ＢＯ
Ｂと共に４℃で２〜１２時間インキュベートした。
フィルス活　　ユニット／−） この表は、種々の熟珊後の標準ＩＦＮ−α、！、ｒｏ作
用特性を示す。ｇ、　ｅｏｌｉ　ＷＴｌ　１０　／ｐ　
Ｉ　ＦＮ−ｒ”３４ｍ及びＣｏｇ−１７ｐＢＶｒ６１に
よシ産生じたインターフェロン活性は、酸感受性、ｓｎ
ｇｇ受性であ）免疫インターフェロン抗血清により中和
されるが、ＩＰ！ｆ−（１又はｌに対する抗体によって
中和されない。これらのデー　タより、前記の系に於い
て産生し友イン！−フエｑンがＩＦＮ−ｒであシブラス
ミドｐｓｉの挿入ａＤＮムがＩＦＮ−１−をロードして
いることが確紹される＠ 精製 たとえば細菌等からＩＦＮ−ｒｔ−精製する一力法を以
下に述べる一般的な大ｌ！に従って記載する。
１、高電導性の溶菌バッファー（約−８，０）中で細胞
を高圧力でホモグナイザー中を通過させ、次いで水浴中
で流出物を冷却することによる、細胞からの抽出、 １　攪拌下例えば約４℃でのポリエチレンーイオン添加
によるＤＮムの沈殿、 Ｌ　ｆａ液液中ＩＦＮ−ｒを再び残しつり細菌！ンバク
質の−による沈殿除去翫 ４、４℃での遠心分離による固相分層、Ｌ　（−の再調
整後）限外濾過等による上澄の湊縮、 亀　低伝導性バッファによる＃細物の透析、Ｌ　遠心分
離による同相除去によって、溶液中ＫＩＦＮ−ｒを残す
こと、 龜　イオン強度を順次増加する溶出法による＼カルボ中
ジメチルセルロース上でのイオン交換クロマトグラフィ
ー、 ９、イオン強ｆを順次増加する溶出法による、燐酸カル
シウムグル上でのクロマトグラフィー、１０、イオン強
１ｆｔ−順次増加する溶出法による、弱い変性条件下で
のカルボキシメチルセルロース上イオン交換クロマトグ
ラフィー、 １１、　　ゲル濾過クロマトグラフィーによる分離。
この方法によれば、９０Ｘ以上更に９５％以上Ｏ＃１［
を有する物質の精製が可能である。
本発明の免疫インターフェロンメンノくり質の構造は、
ＤＮム遺伝子を決定し、それに基いてアミノ酸配列を決
定することによって解明されたー第ｓ図参照。本・文に
記載したこの特定インターフエ四ンについて自然に起こ
った相同変異（ａｌｌ・ｌｌａマａｒ１ａｔｉｏｎ　）
存在しこの変Ｊ！が個々人の間で起こることが理解され
るであろう。これらの相同変異は、ある場合には全体配
列中の１個（又ｉｔｓ数）のアミノ酸の違いにより示さ
れ、又める場合には該配列中の１個（又は複数）のアミ
ノ酸の欠失、ｔｉｉ換、挿入、転位又は付加によｐ示さ
れる。このような相同変異の全部が本発明の範囲内に包
含される。
実際、種々のヒ）ＩＦＮ−ｒ９導体の製造に組換えＤＮ
Ａ技術を使用することに大きな可能性が存在する。この
誘導体は単一の又は多数のアミノ酸の置換、欠失、付加
又は順序の置き換えによって穐櫨修飾され次ものである
。これらヒトＩＦＮ−ｒ’ｌｌｌ導体を生成する前記の
ごとき修飾は全て、基本的な特性であるヒ）ｒＦＮ−ｒ
活性が不変のｔま残っている限り、本発明の範囲に含ま
れる。
上記ＩＦＮ−ｒ　ｆ７）　Ｄ　ＮＡ及びアばノ酸配列（
第５図参照）を用いて、本発明を疑いを残さずに追試す
るのに最適な方法は、（例えば２６に示すごとき）合成
手段による完全な遺伝子の製造であシ、又は合成デオキ
シオリゴヌクレオチドを製造し、この合成デオキシオリ
ゴヌクレオチドをグローブに使って、ヒトゲノムライブ
ラリ又は他のｃＤＮ五ソースから、標準的なハイブリダ
イゼーション技術によって目的遺伝子を単離する方法で
ある。必要とするＩＦＮ−ｒメンバク質をコードしてい
るヌクレオチド配列が一旦既知となれば発現をさせ、単
一し、高置の純化したＩＦＮ−Ｔｏ製剤を製造する方法
は上記記載の方法株従って実施し得る。
好ましい特定具体例に基いて本発明を説明してき九が、
本発明はこれらの特定具体例に限定されること無く、む
しろ特許請求の範囲の適法範囲に限定されると解釈すべ
きであることも理解されよう。
Ｌ　　Ｇｏ＠シｄ＠１＠ｔす０．幾り社、シ四、　２Ｇ
（１９８１）。
ＩＬ　　ＢｌｏｏｍＩ紅■、　１ｊＬ９．５９３（１９
８０ハ１４、　８ｔｔｎｅｈｃｏｍｂ　ｄ　１１５．　
烏−り、　ｍ、　３９（１９７９）。
１５、　　Ｋｉｎｇ＊ｍａｎ　ａｊ　ｔｌ−、ｍｅ　７
．１４１（１９７９）−１１　　Ｔｓｃｈｕｍｐ＠ｒＬ
ｔａ１．、Ｇｓｍ、１０，１５７（１９８Ｇ）。
１９．　　Ｊｏｎ＠ｓ、　Ｇ＠ｎｅｔｉｃｍ、　８Ｌ　
２３（Ｂ１７７）。
Ｓｐｒｉｎｇムｒｂｏｒ、　Ｎ＠Ｗ　Ｙｏｒｋ。
２５ａ、　Ｇｌｍｓｍａｍ、　Ｑｇｊｊ、　２３．１７
５（１９８１）。
２嶋、　　Ｇｏ＠ｄ＋ｉＩｌ　ａｔ社・ｅ当独た。シｌ
ｌ、　５４４（１Ｇ７１）。
２７、　　　　Ｉ龜ａｋａａｒａ　　ａｔ　　ａｌ・、
　　５ａｌａｎｅａ、　　１９８．　１０５６（１９７
７ン。
２Ｂ、　　Ｌｕ５ｋｙ　Ｑ　Ｌ！、Ｉ　Ｎａｔｕｒｅ、
　２９３．７９（１９８１）。
３０、　　Ｆｊｅｒｓ　ａｔ　ａｌ、、　当■Ｄ、　２
７３．１１３（１９７Ｍ）。
３１・　Ｒ＠ｄｄｙ　＠ｊａｌ・、紅…ジ、　２００．
４９４（１９７！ｌ）。
３８、　　Ｌｙｎｃｈ　ａｔ　ａｌ、、　■組紐紅、　
９８．２５１（１９７Ｇ）。
４０、　’　Ｃｍｎｇ　ａｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ
、　２７５．６１７（１９７８）、　　’４１、　　Ｂ
ｏ１１ｖａｒ躬ａ１．＋Ｇｅｎ５．２．９５（１９７７
）。
４３、　　Ｆｒ１ｔｓｃｈＬｔ＠−１，、Ｃｅ１１，１
９，９５９（１９８０）。
４１１、　　　８ｍ１ｔｈ、Ｍｏｔｈｏｄｓ　　年すリ
リ２！ρ１．．６５．５６０（１９８Ｇ）。
暴１．　　　Ｎａｔｈａｎ　ａｔ　　ａｌ−＊　　Ｎａ
ｔｕｒｅ、２２２゜８４ｇ（１９８１）。
５４．８ｏｕｔｈ＠ｒｍ、　＝、　Ｍｏ１ｅｓ、　Ｂｌ
ｏｌ、＊　ａｓ、　５０３（１９７５）。
５５−　　Ｂ１１ｎ　ＪＬｌｌｌ、、上−ｂ釦ムｃＪＪ
　勘［、３，２３０３（１９７８）。
５６、　　Ｌａｗｎ　ｄ　ｄ、、　紅菌」、　２１２　
１１５９（１９８１）。
５７、　　　Ｌａｗｎ　＠ｔｍ１．．　Ｎｕｃｌ＊ｉｏ
　Ａｃ１ｄｓ　ｆｋｍ、、　９．１０４５（１９１１１
）： ５９−　　’Ｂ＠ＫＫ”ｍ　Ｎ１五μ、居ｅ　１０４（
１９７８）−
【図面の簡単な説明】
第１図は、誘発末梢血リンパ球ポリ囚十ＲＮＡの７０％
ホルムアミド中５−２５％ショｗｓ密度勾配遠心分−の
結果を示す図、第２図は、篩発未檜血リンパ球ポリＦＡ
）＋ＲＮＡの６Ｍ尿素中１．７Ｂ％アガロースゲル電気
振動の結果を示す図、ｆｊｇ３図ムは、誘発　Ｐ−標１
ｌＩｃＤＮＡとコロニーとのノ・イブリダイゼーション
パメーンを示す図、ｊＩ３図Ｂは非鱒発３２Ｐ−標繊ａ
ＤＮムとコロニーとのハイプリダイゼーシ曹ンパターン
を示す図、第４図は、クローン６９の挿入ａ　ＤＮＡの
制限エンドヌクレアーゼマツプ、第５図は、プラスミド
９６９挿入（ＩＤＮムのヌクレオチド配列図、第６図は
、３８Ｉのインターフェロン、ＩＦＮ−α、ｘ　ｙＮ−
１１及びＩＮ’Ｎ−ｒの構造の比較図、第７図は、ＩＦ
Ｎ−ｒ％現プ２スミド　ｐＩＦＮ−ｒ　　ｍ４ｇの構成
を示す説明図、１ｉｔｓ図は、ナル細胞でのＩｉｉ’Ｎ
−ｒ発現に用いられるプラスイドの構成を示す図、第９
図は、８種のＷｏｏ　ＲＩ消化ヒトゲノムＤＮＡとｐｉ
ｅの挿入ａＤＮＡ　”Ｐ−標識クローンとの８ｏｕｔｈ
＠ｒｎ　／Ｎイブリメイゼーシ目ンの結果を示す図、１
９１１０図は、６種の制限工ンドタクレアーゼで消化し
たヒトゲノムＤＮＡと１１由来ＩＩｐ−標識プロープと
の５ｏｕｔｈ＠ｒｎハイプリダイゼーシ習ンの結果を示
す図、第１１図は、ベクターｐｉｌｌのＬＩＫｈｐｊｉ
ＩＪＭ１厘挿入物の制限マツプ、第１２囚は、酵母３−
ホスホグリセリン酸キナーゼ構造遺伝子の５′−末端部
及び５′−フランキングＤＮＡｌ２）ＤＮＡ配列を示す
図、第１３−は、ＰＧＫプロモーターにＸ肪１部位を挿
入し且つＰ　Ｇ　Ｋ　５’−フランキング配列の３９ｂ
ｐ断片を単離する工程図、第１４図は、プラスイドｐＰ
ＧＫ−３９から得た３９ｂｐ断片とｐＢｌから得之２６
５ｂｐ　Ｐｖｕ　Ｉ−加３Ａ付加Ｐ　Ｇ　Ｋ　５’−フ
ランキング配列とｐＬ＠ＩＦｔｒｐ　Ａから得たＸｂａ
　Ｉ　ＫＩＮ接する身性Ｒ１部位とを有する３００ｂｐ
断片の構成を示す図、＃！１５図は、第１４図ノ３００
１ｅｐ断片に加えてＰ　Ｇ　Ｋ　５’−フランキング配
列から得た１　３００ｂｐ　Ｈｌｎｄ　Ｉ　−Ｐｖｕ　
１断片を有する１　５００　ｈｐＰＧＫ７０モーター断
片の構成を示す図、第１６図は、酵母菌中でヒト免疫イ
ンターフェロンを発現するベクターｐＰＧＫ　−ＩＦＮ
−ｒの構成を示す図である。 メニンθ５３゜ 一如Ｔ−−ｔｃｗ絵口は〒ｒ＋ｍｉ鵡頽〔１α１１］−
−モ田思唐胴Ｉｉ８幣曳謙唱Ｖ１四沿出摩引ｌ翼長ｍｍ
ｍＷＷｇ獄災（ｎ　＃１＋　ＩＴＩＡ　ＴＡＴ　ｍ　Ｍ
Ｔ　ＫＡ　［（ｉＴ　（ＡＴ　ＴＣＡ　ＧＡＴ　ｉＡ　
ＯＧＡＴ、曽Ｔ　ＧＧＡ　ＩＤ　ＣＩＴ　ＹｉＣＴ’ｌ
＾（転）＾ＴＴ　Ｔｉ１ｌ　Ｇ６　ＭＴ　ｍ博Ｇ１１ｉ
　Ｇ１１＋　ＩＧＩ％崩廊＾得７Ｇ（Ｍ□ＣＭＡＴｒ□
ｔｃｃｍχ■繊Ｃ市常に■繰りＴ眞駕虹＾【隔隔原価％
　ＡＣＣＡＴＣＡ＃ｉ、ｆＰＫＡｍ　ＭＴ　１ｉｌｃ眉
ｍ　ｎＣＭＴ　ｇ　ＭＣＭ　顧ＡＭ　ｆｆＡ　１ｉｌＴ
　％、Ｔｍ　ＱＩＡ　ＭＧ　ＣＴＧ　ＪＵＴ　ＭＴ　Ｗ
　Ｂ　ｌｉＴＡＧＭ９Ｔ＃ＫＡＴＣＴＣＡｆｆ＋ｌＩＡ
ｍＣＡＷＩｉＣＣＡＭＴＡ７ＴＧＴＡＣｆｆＪＡＡＴＩ
ｉ＃ＡＧＴＡＩＣＴＣＡＴＩＴＧＩＴＭＴＰ、ＴＣＭＴ
ＡＴＣＴＭｎＴＡＴｈｍＭＴＭｍｉＴＡ１１ｉｎｔＡＣ
ＭＣ９メツλ９，５ 一一 メツ八λ９ メツｈλＩ メ；ンｙ、　ｉ！ 第１頁の続き ２１１０４　　　　　　　　７２５２−４ＣＣ１２Ｎ　
１５１００　　　　　　　　７２３５−４Ｂ＠発　明　
者　パトリク・ダブリュ・プレイアメリカ合衆国カリフ
ォルニア ９４１２７サン・フランシスコ・サ ン・フエランド・ウェイ２１９ １５０−

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 （１）　　成熟ヒト免疫インターフェロンのアイノ酸配
    列を含む、微生物の又はセルカルチャーのポリペプチド
    産生物。 （２）次のア建ノ酸配列； ＣＴ４　ＴＹＲＣＴ４　ＧＬＮ　ＡＢＰ　ＰＲＯＴＹＲ
    ＶＡＬ　ＬＹＳ　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　Ｌ
    ＥＵＬＹＳ　ＬＹＳ　ＴＹＲＰＲＥ　ＡＳＮ　ＡＬＡ　
    ＧＬＹＨＩＳ　８ＥＲＡＬＰ　ＶＡＬ　ＡＬＡ　ＡＳＰ
    　ＡＳＮＧＬＹ　ＴＨＲＬＭｉＵ　ＰＲＥ　ＩＪＵ　Ｇ
    ＬＹ　ＩＬＥＬＥＵ　ＬＹＳ　ＡＳＮ　ＴＲＰ　ＬＹＳ
    　ＧＬＵ　ＧＬＵｓｇｇ　ＡＬＰ　ＡＲＧ　ＬＹＳ　　
    ＩＬＥ　ＭＥＴ　ＧＬＮＳｍｉ２ＲＧＬＮ　ＩＬＥ　Ｖ
    ＡＬ　ＳＥＲＰＨＥ　ＴＹＲＰＩＥ　ＬＹＥ　ＬＥＵ　
    ＰＩＥ　ＬＹＳ　ＡＳＮ　ＰＨＥＬＹ８　ＡＬＰ　ＡＳ
    Ｐ　ＧＬＮ　ＳＥＲＩＬＥ　ＧＬＮＬＹ８　　ＳＥＲＶ
    ＡＬ　ＧＬＵ　Ｔｌ１ＲＩＩＪ　ＬＹＳＧＬＵ　ＡＬＰ
    　ＭＥＴ　ＡＳＮ　ＶＡＬ　ＬＹＳ　ＰＨＥＰＨＩＣＡ
    ＳＮ　ＳＩＲＡＳＮ　ＬＹＳ　ＬＹＳ　ＬＹＳＡＲＧ　
    　ＡＬＰ　　ＡＬＰ　　ＰＨＩ　　ＧＬＵ　　ＬＹＳ　
    　ＬＥＵＴＨＲＡＳＮ　　ＴＹＲ８ＥＲＶＡＬ　ＴＨＲ
    ＡＳＰＬＥＵ　　ＡＳＮ　ＶＡＬ　　ＧＬＮ　ＡＲＧ　
    　ＬＹＳ　　ＡＬＡＩＬＥ　　ＨＩＳ　　ＧＬＵ　　Ｌ
    ＥＵ　　ＩＬＢ　ＧＬＮ　　ＶＡＬ￥ＥＴ　　ＡＬＡ　
    ＧＬＵ　ＬＥＵ　　ＳＥＲＰＲＯＡＬＡＡＬＡ　　ＬＹ
    Ｓ　　ＴＨＲＧＬＹ　　ＬＹＳ　　ＡＲＧ　　ＬＹＳＡ
    ＲＧ　　ＳＩＲＧＬＮ　ＭＥＴ　　ＬＥＵ　　ＰＨＥ　
    　ＡＲＧＧＬＹ　　ＡＲＧ　　ＡＲＧ　　ＡＬＡ　　Ｓ
    ＥＲＧＬＮを有することを特徴とする特許請求の範囲第
    １項に記載のポリペプチド産生物。 （３）天然のグリコシレージョンを伴っていないことを
    特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項に記載のポ
    リペプチド産生物。 （４）　　前記インターフェロンの正常な第一アミノ酸
    ＯＮ−末端にメチオニンが結合していることを特徴とす
    る特許請求の範囲第１項乃至第３項のいずれかに記載の
    ポリペプチド産生物。 （５）前記インターフェロンの正常な第一アミノ酸ＯＮ
    −末端に開裂可能な共役タン、ｅり又はシグナルタンパ
    クが結合していることを特徴とする特許請求の範囲第１
    項乃至第３項のいずれかに記載のポリペプチド産生物。 （６）次のア建ノ酸配列； ＭＩＣＴ　ＬＹＳ　ＴＹＲＴＨＲＳＥＲＴＹＲＩＬＥＩ
    ＪＵ　ＡＬＡ　ＰＨＩ　ＧＬＮ　ＬＥＵ　ＣＴ４　　Ｉ
    ＬＥＶＡＬ　ＬＥＵ　ＧＬＹ　ＳＩＲＬＥＵ　ＧＬＹ　
    ＣＹＳＴＹＲＣＴ４　ＧＬＮ　Ａ８Ｐ　ＰＲＯＴＹＲＶ
    ＡＬＬＹ８　ＧＬＵ　ＡＬＡ　ＧＬＵ　ＡＳＮ　ＬＥＵ
    　ＬＹＳＬＹ８　　ＴＹＲＰＩ（Ｅ　　ＡＳＮ　　ＡＬ
    Ａ　ＧＬＹ　　）ＩＩｓＳＩＲＡＳＰ　ＶＡＬ　ＡＬＡ
    　ＡＳＰ　ＡＳＮ　ＧＬＹＴＨＲＬＦＵ　ＰＨＩ　ＬＥ
    Ｕ　ＧＬＹ　ＩＬＥ　ＬＥＵＬＹＳＡＳＮ　ＴＲＰ　Ｌ
    ＹＳ　ＧＬＵ　ＧＬＵ　ＳＥＲム８Ｐ　ＡＲＧ　ＬＹＳ
    　　ＩＬＥ　ＭＥＴ　ＧＬＮ　８ＥＲＧＬＮ　ＩＬＥ　
    ＶＡＬ　Ｓ′ＥＲＰＨＥ　ＴＹＲＰＨＥＬＹＳ　　Ｌｇ
    ｔｒ　ＰＨＥ　ＬＹＳ　ＡＳＮ　ＰＨＥ　ＬＹＳＡ８Ｐ
    　ＡＳＰ　ＧＬＮ　８ＥＲＩＬＥ　ＧＬＮ　ＬＹＳＳＩ
    ＲＶＡＬ　ＧＬＵ　ＴＨＲＩＬＥ　ＬＹＳ　ＧＬＵＡ８
    Ｐ　ＭＥＴ　ＡＳＮ　ＶＡＬ　ＬＹＳ　ＰＨＥ　ＰＩＥ
    人ＳＮ　８ＥＲＡＳＮ　ＬＹＳ　ＬＹＳ　ＬＹＥ　ＡＲ
    ＧムｆｉＰ　Ａ８Ｐ　ＰＨＥ　ＧＬＵ　ＬＹＳ　ＬＥＵ
    　Ｔｆ（ＲＡ８Ｎ　ＴＹＲＳＥＲＶＡＬ　ＴＨＲＡＳＰ
    　Ｌ）ｉＵＡ８Ｎ　ＶＡＬ　ＧＬＮ　ＡＲＧ　ＬＹＳ　
    ＡＬＡ　ＩＬＥＨＩＳ　　ＧＬＵ　　ＬＥＵ　　ＩＬＥ
    　　ＧＬＮ　　ＶＡＬ　　ＭＥＴＡＬＡ　　ＧＬＵ　　
    ＬＥＵ　　ＳＥＲＰＲＯＡＬＡ　　ＡＬＡＬＹＳ　　Ｔ
    ＨＲＧＬＹ　ＬＹＳ　　ＡＲＧ　ＬＹＳ　　ＡＲＧＳＩ
    ＲＧＬＮ　ＭＥＴ　ＬＥＵ　ＰＨＥ　ＡＲＧ　ＧＬＹＡ
    ＲＧ　　ＡＲＧ　　ＡＬＡ　　ＳＥＲＧＬＮを有するこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第５項に記載のポリペプ
    チド産生物。 （７）　　前記ポリペプチドの相同変異に相当する部分
    構造を有することを特徴とする特許請求の範囲第１項乃
    至第６項のいずれかに記載のポリペプチド産生物。 （８）　　成熟ヒト免疫インターフェロンのアばノ酸配
    列を含むポリペプチドをコードする配列を有するＤＮＡ
    配列。 （９）前記ポリペプチドをコードする配列が、次のＤＮ
    Ａ配列； ＴＧＴ　ＴＡＣＴＧＣＣＡＧ　ＧＡＣＣＣＡ　ＴＡＴＧ
    ＴＡ　ＡＡＡ　ＧＡＡ　ＧＣＡ　ＧＡＡ　ＡＡＣＣＴＴ
    ＡＡＧ　ＡＡＡ　ＴＡＴ　ＴＴＴ　ＡＡＴ　ＧＣＡ　Ｇ
    ＧＴＣＡＴ　ＴＣＡ　ＧＡＴ　ＧＴＡ　ＧＣＧ　ＧＡＴ
    　ＡＡＴＧＧＡ　ＡＣＴ　ＣＴＴ　ＴＴＣＴＴＡ　ＧＧ
    ＣＡＴＴ　　　＝ＴＴＧ　ＡＡＧ　ＡＡＴ　ＴＧＧ　Ａ
    ＡＡ　ＧＡＧ　ＧＡＧＡＧＴ　　ＧＡＣＡＧＡ　　ＡＡ
    Ａ　　ＡＴＡ　　ＡＴＧ　　ＣＡＧＡＧＣＣＡＡ　　Ａ
    ＴＴ　　ＧＴＣＴＣＣＴＴＴ　　ＴＡＣＴＴＣＡＡＡ　
    　ＣＴＴ　　ＴＴＴ　　ＡＡＡ　　ＡＡＣＴＴＴＡＡＡ
    　　ＧＡＴ　　ＧＡＣＣＡＧ　　ＡＧＣＡＴＣＣＡＡＡ
    ＡＧ　　ＡＣＴ　　ＧＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＣＣＡＴＣ
    ＡＡＧＧＡＡ　ＧＡＣＡＴＧ　ＡＡＴ　Ｇ、ＴＯＡＡＧ
    　ＴＴＴＴＴＣＡＡＴ　　ＡＧＯＡＡＣＡＡＡ　　ＡＡ
    Ｇ　　ＡＡＡＣＧＡ　　ＧＡＴ　　ＧＡＣＴＴＣＧＡＡ
    　　ＡＡＧ　　ＣＴＧＡＣＴ　　ＡＡＴ　　ＴＡＴ　　
    ＴＣＧ　　ＧＴＡ　、ＡＣＴ　　ＧＡＣＴＴＧ　　ＡＡ
    Ｔ　　ＧＴＣＣＡＡ　　ＣＧＣＡＡＡ　　ＧＣＡＡＡＡ
    　　ＣＡＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＣＡＴＣＣＡＡ　　ｕ’
    ｒＧムＴＧ　　ＧＣＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＧ　　ＴＣＧ
    　　ＣＣＡ　　ＧＣＡＧＣＴ　　ＡＡＡ　　ＡＣＡ　　
    ＧＧＧ　　ＡＡＧ　　ＣＧＡ　　ＡＡＡＡＧＧ　　ＡＧ
    Ｔ　　ＣＡＧ　　ＡＴＧ　　ＣＴＧ　　ＴＴＴ　　ＣＧ
    ＡＧＧＴ　　ＣＧＡ　　ＡＧＡ　　ＧＣＡ　　ＴＣＣＣ
    ＡＧを有することを特徴とする特許請求の範囲第８、項
    に記載のＤＮＡ配列。 韓　前記ポリペプチドをコードする配列が、次のＤＮＡ
    配列； ＡＴＧムムムＴＡＴ　ＡＣＡ　ＡＧＴ　ＴＡＴ　ＡＴＣ
    ＴＴＧ　ＧＣＴ　ＴＴＴ　ＣＡＧ　ＣＴＣＴＧＣＡＴＣ
    ＧＴＴ　ＴＴＧ　ＧＧＴ　ＴＣＴ　ＣＴＴ　ＧＧＣＴＧ
    ＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧ　ＧＡＣＣＣＡ　ＴＡＴ　ＧＴＡ
    ＡＡＡ　　ＧＡＡ　　ＧＣＡ　　ＧＡＡ　　ＡＡＣＣＴ
    Ｔ　　ＡＡＧＡＡＡ　　ＴＡＴ　　ＴＴＴ　　ＡＡＴ　
    　ＧＣＡ　　ＧＧＴ　　ＣＡＴＴＣＡ　　ＧＡＴ　　Ｇ
    ＴＡ　　ＧＣＧ　　ＧＡＴ　　ＡＡＴ　　ＧＧＡＡＣＴ
    　　ＣＴＴ　　ＴＴＣＴＴＡ　　ＧＧＣＡＴＴ　　ＴＴ
    ＧＡＡＧ　　ＡＡＴ　　ＴＧＧ　　ＡＡＡ　　ＧＡＧ　
    ＧＡＧ　　ＡＧＴＧＡＣＡＧＡ　　ＡＡＡ　　ＡＴＡ　
    　ＡＴＧ　　ＣＡＧ　　ＡＧＣＣＡＡ　　ＡＴＴ　　Ｇ
    ＴＣＴＣＣＴＴＴ　　ＴＡＣＴＴＣＡＡＡ　　ＣＴＴ　
    　ＴＴＴ　　ＡＡＡ　　ＡＡＣＴＴＴ　　ＡＡＡＧＡＴ
    　　ＧＡＣＣＡＧ　　ＡＧＣＡＴＣＣＡＡ　　ＡＡＧＡ
    ＧＴ　　ＧＴＧ　　ＧＡＧ　　ＡＣＣＡＴＣＡＡＧ　　
    ＧＡＡＧＡＣＡＴＧ　　ＡＡＴ　　ＧＴＣＡＡＧ　　Ｔ
    ＴＴ　　ＴＴＣＡＡＴ　　ＡＧＣＡＡＣＡＡＡ　　ＡＡ
    Ｇ　　ＡＡＡ　　ＣＧＡＧＡＴ　　ＧＡＣＴＴＣＧＡＡ
    　　ＡＡＧ　　ＣＴＧ　　ＡＣＴＡＡＴ　　ＴＡＴ　　
    ＴＣＧ　　ＧＴＡ　　ＡＣＴ　　ＧＡＣＴＴＧＡＡＴ　
    　ＧＴＣＣＡＡ　　ＣＧＣＡＡＡ　　ＧＣＡ　　ＡＴＡ
    ＣＡＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＣＡＴＣＣＡＡ　　ＧＴＧ　
    　ＡＴＧＧＣＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＧ　　ＴＣＧ　　Ｃ
    ＣＡ　　ＧＣＡ　　ＧＣＴＡＡＡ　　ＡＣＡ　　ＧＧＧ
    　　ＡＡＧ　　ＣＧＡ　　ＡＡＡ　　ＡＧＧＡＧＴ　　
    ＣＡＧ　　ＡＴＧ　　ＣＴＧ　　ＴＴＴ　　ＣＧＡ　　
    ＧＧＴＣＧＡ　　ＡＧＡ　　ＧＣＡ　　ＴＣＣＣＡＧを
    有することを特徴とする特許請求の範囲第８項に記載の
    ＤＮＡ配列。 （１１）　　前記ポリペプチドの相同変異をコードする
    配列を有すゐことを特徴とする特許請求の範囲第８項に
    記載のＤＮＡ配列。 （１１遺伝子コードの縮重を包含することを特徴とする
    特許請求の範囲第８項乃至第１１項のいずれかに記載の
    ＤＮＡ配列。 （至）前記ポリペプチドをコードする配列が前記ポリペ
    プチドを発現させうるＤＮＡ配列に有効に結合している
    ことを特徴とする特許請求の範囲第８項乃至第１２項の
    いずれかに記載のＤＮＡ配列。 Ｑ４　　成熟ヒト免疫インターフェロンのアミノ酸配列
    を含むポリペプチドから主として構成される組成物。 ａ！９　　インターフェロン活性を有することを特徴と
    する特許請求の範囲第１４項に記載の組成物。 （１＠　　ヒト由来の他のタン、ｅりを実質的に含まな
    いことを特徴とする特許請求の範囲第１４項又は第１５
    項に記載の組成物。 顛　主として成熟ヒト免疫インターフェロ／のアミノ酸
    配列からなる約９０９６より高い純度のポリペプチドを
    含むセルカルチャー抽出物であることｉ４Ｉ黴とする特
    許請求の範囲第１４項乃至第１６項のいずれかに記載の
    組成物。 ａυ　成熟ヒト免疫インターフェロンのアミノ酸配列を
    含むポリペプチドを治療上有効な量で含む抗腫瘍組成物
    。 （１１非経口投与に適することを特徴とする特許請求の
    範囲第１８項に記載の組成物。 ■　成熟ヒト免疫インターフェロンのアミノ酸配列を含
    むポリペプチドを治療上有効な量で含む抗９イルス性組
    成物。 Ｑｌ）非経口投与に適することを特徴とする請求求の範
    囲第２０項に記載の組成物。 （財）成熟ヒト免疫インター７エロンのアミノ酸配列を
    含むポリペプチドを治療上有効な量で含む免疫調節治療
    用組成物。 （自）非経口投与に適することを特徴とする特許請求の
    範囲第２２項に記載の組成物。 （財）形質転換された微生物又はセルカルチャー中で、
    成熟ヒト免疫インターフェロンのアミノ酸配列を含むポ
    リペプチドを発現し得る複製可能な発現ベヒクル。 （ホ）プラスイドが、、ｌＩｐＩＦＮ−ｒ−ｔｒｐ　４
    ８。 ＰＳＶ−１７−６９及びｐＰＧＫ−ＩＦＮ−ｒかうなる
    グループから選択されることを特徴とする特許請求の範
    囲第２４項に記載のベヒクル。 （４）成熟ヒト免疫インターフェロンの゛ｆアミノ酸配
    列含むポリペプチドを発現し得る複Ｍ町能な発現ベヒク
    ルで形質転換された微生物又はセルカルチャー。 （財）プラスミドが、ｐ　ＩＦＮ−ｒ−ｔｒＰ　４８．
    ＰＳＶ−ｒ−６９及びｐＰＧＫ−ＩＦＮ−ｒからなるグ
    ループから選択されることを特徴とする特許請求の範囲
    第２６項に記載の微生物又はセルカルチャー。 （ホ）ＣＯＳ　−　７系サル腎線維芽細紀を形質転換す
    ることにより得られることを特徴とする特許請求の範囲
    第２６項又は第２７項に記載のセルカルチャー。 （イ）大腸菌株（Ｅ．ｃｏｉｌ）を形質転換するζとに
    よシ得られることを特徴とする特許請求の範囲第　−２
    ６項又は第２７項に記載の微生物。 （至）酵母菌株を形質転換することによ）得られること
    を特徴とする特許請求の範囲第２６項又は第２７項に記
    載の微生物。 ０１）ヒト免疫インターフェロンを成熟した形態で産生
    じ得る形質転換細患のカルチャー。 （自）成熟形態のヒト免疫インターフェロンをコードす
    る遺伝子を微生物又はセルカルチャー中で発現させるこ
    とからなる方法。 （ロ）成熟ヒト免疫インターフェロンのアミノ酸配列を
    含むポリペプチドを微生物又はセルカルチャー中で産生
    ずる方法。 ｃ３４）複製可能な発現ベヒクルで形質転換された微生
    物又はセルカルチャーを増殖させ、成熟ヒト免疫インタ
    ーフェロンのアミノ酸配列を含むポリペプチドを産生さ
    せ、前記ポリペプチドを回収することがら々る前記ポリ
    ペプチドの製造方法。 （ト）成熟ヒト免疫インターフェロンの゛アミノ酸配列
    を含むポリペプチドをコードする第−ＤＮＡ配列を構成
    し、第−ＤＮＡ配列を発現させ得る第二ＤＮＡ配列と有
    効に結合させることからなる。形質転換された微生物又
    はセルカルチャー中で前記ポリペプチドを発現し得る発
    現ベヒクルの製造方法。 （以１・余白）
JP57182681A 1981-10-19 1982-10-18 ヒト免疫インターフエロンをコートするｄｎａ配列 Granted JPS5890514A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31248981A 1981-10-19 1981-10-19
US312489 1981-10-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS5890514A true JPS5890514A (ja) 1983-05-30
JPH0135639B2 JPH0135639B2 (ja) 1989-07-26

Family

ID=23211703

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP57182681A Granted JPS5890514A (ja) 1981-10-19 1982-10-18 ヒト免疫インターフエロンをコートするｄｎａ配列
JP61268482A Expired - Lifetime JP2515308B2 (ja) 1981-10-19 1986-11-11 ヒト免疫インタ−フエロン
JP2278835A Expired - Lifetime JPH07106144B2 (ja) 1981-10-19 1990-10-17 ヒト免疫インターフェロン

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP61268482A Expired - Lifetime JP2515308B2 (ja) 1981-10-19 1986-11-11 ヒト免疫インタ−フエロン
JP2278835A Expired - Lifetime JPH07106144B2 (ja) 1981-10-19 1990-10-17 ヒト免疫インターフェロン

Country Status (43)

Country Link
US (4) US4762791A (ja)
EP (1) EP0077670B1 (ja)
JP (3) JPS5890514A (ja)
KR (1) KR840001837A (ja)
AT (1) ATE44289T1 (ja)
AU (1) AU561343B2 (ja)
BG (2) BG44877A3 (ja)
BR (1) BR8206068A (ja)
CA (1) CA1341590C (ja)
CH (1) CH663619A5 (ja)
CZ (1) CZ282154B6 (ja)
DD (1) DD208822A5 (ja)
DE (4) DE77670T1 (ja)
DK (1) DK163187C (ja)
DZ (1) DZ467A1 (ja)
ES (1) ES516620A0 (ja)
FI (1) FI86559C (ja)
FR (1) FR2514783B1 (ja)
GB (1) GB2107718B (ja)
GR (1) GR78391B (ja)
GT (1) GT198277746A (ja)
HK (1) HK66289A (ja)
HU (1) HU202287B (ja)
IE (1) IE54371B1 (ja)
IL (1) IL66992A (ja)
IT (1) IT1153265B (ja)
LU (1) LU88327I2 (ja)
MX (2) MX166499B (ja)
MY (1) MY102546A (ja)
NL (1) NL930040I2 (ja)
NO (2) NO164177C (ja)
NZ (1) NZ202190A (ja)
OA (1) OA07233A (ja)
PH (1) PH26963A (ja)
PL (1) PL153202B1 (ja)
PT (1) PT75696B (ja)
RO (1) RO89534A (ja)
RU (3) RU2056460C1 (ja)
SG (1) SG76988G (ja)
SK (1) SK738982A3 (ja)
YU (1) YU45871B (ja)
ZA (1) ZA827569B (ja)
ZW (1) ZW22282A1 (ja)

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58110548A (ja) * 1981-12-24 1983-07-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規な生理活性ペプチド
JPS58201995A (ja) * 1982-05-20 1983-11-25 Suntory Ltd ヒト・ガンマ・インタ−フエロン様ポリペプチドの製造法
JPS5951792A (ja) * 1982-02-22 1984-03-26 バイオジェン　インコーポレイテッド Ｄｎａ配列、組換ｄｎａ分子およびヒト免疫インタフエロン様ポリペプチドの製造方法
JPS6034919A (ja) * 1983-08-04 1985-02-22 Green Cross Corp:The ガンマ・インタ−フェロン組成物
WO1985004420A1 (en) * 1984-03-29 1985-10-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel dna and its use
JPS60202899A (ja) * 1983-12-16 1985-10-14 ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド 安定性の高い組換えガンマインタ−フエロン
JPS60233100A (ja) * 1984-04-19 1985-11-19 ヘキスト・アクチエンゲゼルシヤフト ヒトγ―インターフェロン活性を有するポリペプチドおよびその製造法
WO1985005618A1 (en) * 1984-06-06 1985-12-19 Takeda Chemical Industries, Ltd. Process for preparing interferon derivative
JPS60262594A (ja) * 1984-06-11 1985-12-25 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd ヒトインタ−フエロン−γ
JPS611395A (ja) * 1984-06-12 1986-01-07 ジ−・デイ・サ−ル　アンド　コンパニ− ヒトｒ−インタ−フエロン
JPS6156195A (ja) * 1985-03-01 1986-03-20 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規生理活性ペプチド
JPS6169800A (ja) * 1983-09-20 1986-04-10 エフ・ホフマン−ラ　ロシユ　ウント　コンパニ−　アクチエンゲゼルシヤフト 免疫インタフエロンおよびその精製方法
JPS6188875A (ja) * 1984-10-05 1986-05-07 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd ヒトインタ−フエロン−γ
JPS6193130A (ja) * 1984-10-05 1986-05-12 ビオフエロン　ビオヒエミシエ　サブスタンツエン　ゲゼルシヤフト　ミツト　ベシユレンクテル　ハフツング　ウント　コムパニー 低投与量にてヒトの各種病気を系統的に処置するためのγ‐インタフエロン含有剤
JPS61108397A (ja) * 1984-10-31 1986-05-27 Green Cross Corp:The インタ−フエロン−γ蛋白質の製造法
JPS61501430A (ja) * 1984-03-16 1986-07-17 バイオジェン インコーポレイテッド 修飾ガンマ・インタ−フェロン、そのｉｆｎをコ−ドするｄｎａ配列およびそのｉｆｎの生産方法
JPS62223191A (ja) * 1981-12-24 1987-10-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規な生理活性ペプチドの製法
JPS62265986A (ja) * 1981-10-19 1987-11-18 ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド ヒト免疫インタ−フエロン
JPS63211240A (ja) * 1982-11-22 1988-09-02 Takeda Chem Ind Ltd ヒト免疫インターフェロン蛋白質含有薬剤

Families Citing this family (169)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ199722A (en) 1981-02-25 1985-12-13 Genentech Inc Dna transfer vector for expression of exogenous polypeptide in yeast;transformed yeast strain
ZW18282A1 (en) * 1981-08-31 1983-03-23 Genentech Inc Preparation of polypeptides in vertebrate cell culture
JPS58146281A (ja) * 1981-10-19 1983-08-31 Suntory Ltd 酵母細胞の形質転換法
US5004689A (en) * 1982-02-22 1991-04-02 Biogen, Massachusetts DNA sequences, recombinant DNA molecules and processes for producing human gamma interferon-like polypeptides in high yields
US6432677B1 (en) 1982-03-08 2002-08-13 Genentech, Inc. Non-human animal interferons
IE54592B1 (en) * 1982-03-08 1989-12-06 Genentech Inc Anumal interferons, processes involved in their production, compositions containing them, dna sequences coding therefor and espression vehicles containing such sequences and cells transformed thereby
US5827694A (en) * 1982-03-08 1998-10-27 Genentech, Inc. DNA encoding non-human animal interferons, vectors and hosts therefor, and recombinant production of IFN polypeptides
IL68100A0 (en) * 1982-03-24 1983-06-15 Takeda Chemical Industries Ltd Novel dna and use thereof
US6936694B1 (en) * 1982-05-06 2005-08-30 Intermune, Inc. Manufacture and expression of large structural genes
AU577259B2 (en) * 1982-08-13 1988-09-22 Zymogenetics Inc. Glycolytic promters for regulated protein expression protease inhibitor
AU571460B2 (en) * 1982-09-27 1988-04-21 Cancer Institute Of Japanese Foundation For Cancer Research Alpha interferon dna, recombinant plasmid, engineered organism and alpha interferon polypeptide
EP0121569B1 (en) * 1982-10-08 1990-08-22 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Novel vector
US5831023A (en) * 1982-11-01 1998-11-03 Genentech, Inc. Recombinant animal interferon polypeptides
US4966843A (en) * 1982-11-01 1990-10-30 Cetus Corporation Expression of interferon genes in Chinese hamster ovary cells
GR79124B (ja) * 1982-12-22 1984-10-02 Genentech Inc
US4518526A (en) * 1982-12-22 1985-05-21 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4512922A (en) * 1982-12-22 1985-04-23 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4511502A (en) * 1982-12-22 1985-04-16 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4620948A (en) * 1982-12-22 1986-11-04 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4599197A (en) * 1982-12-22 1986-07-08 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
US4511503A (en) * 1982-12-22 1985-04-16 Genentech, Inc. Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins
JPH0740925B2 (ja) * 1983-03-14 1995-05-10 協和醗酵工業株式会社 新規ヒトインタ−フエロン−γポリペプチド
US7198919B1 (en) * 1983-04-25 2007-04-03 Genentech, Inc. Use of alpha factor sequences in yeast expression systems
ZA843275B (en) * 1983-05-05 1984-12-24 Hoffmann La Roche Novel vectors for interferon expression
IL71951A0 (en) * 1983-06-01 1984-09-30 Hoffmann La Roche Polypeptides having interferon activity,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
JP2551746B2 (ja) * 1983-07-19 1996-11-06 サントリー株式会社 改良プラスミドベクタ−およびその利用
EP0133767B1 (en) * 1983-08-04 1991-04-03 The Green Cross Corporation Gamma interferon composition
IL72773A0 (en) * 1983-08-29 1984-11-30 Meloy Lab Production of immune interferon and its mrna
US4604284A (en) * 1983-09-20 1986-08-05 Hoffmann-La Roche Inc. Homogeneous immune interferon fragment
US4476049A (en) * 1983-09-20 1984-10-09 Hoffmann-La Roche Inc. Method for the extraction of immune interferon
US4681930A (en) * 1983-09-20 1987-07-21 Hoffmann-La Roche Inc. Immune interferon and a method for its extraction and purification
JPS6079000A (ja) * 1983-10-04 1985-05-04 Takeda Chem Ind Ltd ヒトγ型インタ−フエロン単量体の製造法
JPH0788398B2 (ja) * 1983-10-17 1995-09-27 サントリー株式会社 新規生理活性ポリペプチドおよびその製造法
GB8328820D0 (en) * 1983-10-28 1983-11-30 Searle & Co Synthetic human gamma interferon gene
FR2556365B1 (fr) * 1983-12-09 1987-07-31 Transgene Sa Vecteurs de clonage et d'expression de l'interferon-g, bacteries transformees et procede de preparation de l'interferon-g
US4703008A (en) * 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
KR850004274A (ko) * 1983-12-13 1985-07-11 원본미기재 에리트로포이에틴의 제조방법
NZ210501A (en) * 1983-12-13 1991-08-27 Kirin Amgen Inc Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence
MX9203641A (es) * 1983-12-16 1992-07-01 Genentech Inc Interferones gamma recombinantes que poseen estabilidad mejorada y metodos biotecnologicos para su obtencion.
JPS60145098A (ja) * 1984-01-09 1985-07-31 Suntory Ltd 糖付加ポリペプチドの製造法
GB8414354D0 (en) * 1984-06-05 1984-07-11 Biogen Nv Purifying protein
IL75302A0 (en) * 1984-06-06 1985-09-29 Takeda Chemical Industries Ltd Novel polypeptide and production thereof
CA1302320C (en) * 1984-06-11 1992-06-02 Hideo Niwa Expression of human cromosomal interferon-_ in animal cells
JPS6124599A (ja) * 1984-07-11 1986-02-03 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規ヒトインタ−フエロン−ｒポリペプチド誘導体
GB2164650A (en) * 1984-09-25 1986-03-26 Fujisawa Pharmaceutical Co Process for production of y-interferon
US4946674A (en) * 1984-10-05 1990-08-07 Bioferon Biochemische Substanzen Gmbh & Co. Process for treatment of rheumatic diseases
DE3436638C2 (de) * 1984-10-05 1992-10-08 Bioferon biochemische Substanzen GmbH & Co, 7958 Laupheim Verwendung von Interferon-gamma (IFN-gamma) enthaltenden Präparationen zur Behandlung rheumatischer Erkrankungen
IL76591A0 (en) * 1984-10-05 1986-02-28 Bioferon Biochem Substanz Pharmaceutical compositions containing ifn-ypsilon and processes for the preparation thereof
KR930007429B1 (ko) * 1984-12-27 1993-08-10 산도리 가부시기가이샤 인터페론의 정제방법
GB8508340D0 (en) * 1985-03-29 1985-05-09 Creighton T E Production of protein
EP0225887B1 (en) * 1985-04-08 1994-06-08 Amgen Inc. A method and a hybrid promoter for controlling exogenous gene transcription
US4873312A (en) * 1985-04-25 1989-10-10 Amgen Method for purifying interferon and composition of matter produced thereby
FR2583429B1 (fr) * 1985-06-18 1989-11-03 Transgene Sa Vecteur d'expression de l'interferon u dans les cellules de mammifere, procede pour sa mise en oeuvre et produit obtenu et composition pharmaceutique contenant l'interferon u
US4845196A (en) * 1985-06-24 1989-07-04 G. D. Searle & Co. Modified interferon gammas
US5104795A (en) * 1985-11-13 1992-04-14 Zoma Corporation Shortened phosphoglycerate kinase promoter
JPS63501767A (ja) * 1985-11-13 1988-07-21 ゾマ、コーポレーション 短縮化されたホスホグリセリン酸キナ−ゼプロモ−タ−
EP0237019A3 (en) * 1986-03-14 1988-03-09 Toray Industries, Inc. Interferon conjugate and production thereof using recombinant gene
US5198343A (en) * 1986-08-05 1993-03-30 Transgene, S.A. Method for expressing a heterologous protein in a dapD- mutant of E. coli and the strain obtained
US6238889B1 (en) * 1986-12-16 2001-05-29 Dsm N.V. Molecular cloning and expression of the Pro8 isoform of human IL-3
US4939088A (en) * 1987-02-18 1990-07-03 Meloy Laboratories Inc. Sustained production of recombinant gamma interferon using an Epstein-Barr virus replicon
US4944941A (en) * 1987-08-07 1990-07-31 Genentech, Inc. Methods and compositions for the treatment of lung conditions
US6384194B1 (en) * 1987-12-16 2002-05-07 Dsm N.V. Expression and purification of human interleukin-3 and muteins thereof
US5258287A (en) * 1988-03-22 1993-11-02 Genentech, Inc. DNA encoding and methods of production of insulin-like growth factor binding protein BP53
IL90021A0 (en) * 1988-04-25 1989-12-15 Phillips Petroleum Co Process for the production of interferon
US5198212A (en) * 1988-10-31 1993-03-30 University Of Lousville Research Foundation Incorporated Method and compositions for treatment of trauma-associated sepsis with gamma interferon
US6451600B1 (en) * 1989-12-22 2002-09-17 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
US20020168750A1 (en) * 1988-12-23 2002-11-14 James Rasmussen Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
US5236838A (en) * 1988-12-23 1993-08-17 Genzyme Corporation Enzymatically active recombinant glucocerebrosidase
US5196191A (en) * 1989-03-17 1993-03-23 Genentech, Inc. Temporal gamma-interferon administration for allergies
US5112605A (en) * 1989-03-17 1992-05-12 Genentech, Inc. Temporal gamma-interferon administration for allergies
WO1990012877A1 (en) * 1989-04-19 1990-11-01 Cetus Corporation Multifunctional m-csf proteins and genes encoding therefor
DE4009268A1 (de) * 1990-03-22 1991-09-26 Consortium Elektrochem Ind Sekretion von hirudinderivaten
US5281520A (en) * 1990-09-12 1994-01-25 Zymogenetics, Inc. Method for producing acyloxyacyl hydrolase
WO1992006115A1 (en) * 1990-09-27 1992-04-16 Schering Corporation Antagonists of human gamma interferon
EP0487298A3 (en) * 1990-11-21 1992-12-16 Schering Corporation Human gamma interferon antagonist/agonist screen
AU1268192A (en) * 1991-01-04 1992-08-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Cloning and expression of tissue transglutaminases
AU1337092A (en) * 1991-01-29 1992-08-27 Brigham And Women's Hospital A cdna encoding the type i iodothyronine 5' deiodinase
US5272078A (en) * 1991-01-29 1993-12-21 Brigham And Women's Hospital CDNA encoding the type I iodothyronine 5'deiodinase
US6180602B1 (en) 1992-08-04 2001-01-30 Sagami Chemical Research Center Human novel cDNA, TGF-beta superfamily protein encoded thereby and the use of immunosuppressive agent
WO1994003599A1 (en) * 1992-08-04 1994-02-17 Sagami Chemical Research Center HUMAN cDNA AND PROTEIN WHICH SAID cDNA CODES FOR
WO1994010296A1 (en) * 1992-11-03 1994-05-11 Oklahoma Medical Research Foundation Transglutaminase gene
JP3887011B2 (ja) * 1992-12-29 2007-02-28 ジェネンテク，インコーポレイテッド ＩＦＮ−γインヒビターによる炎症性腸疾患の処置
ATE437942T1 (de) 1993-09-15 2009-08-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Rekombinante alphavirus-vektoren
EP1997900A3 (en) 1996-04-05 2010-10-06 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis
WO1998012332A1 (en) 1996-09-17 1998-03-26 Chiron Corporation Compositions and methods for treating intracellular diseases
US20020168634A1 (en) * 1999-05-05 2002-11-14 Christine Marie Debouck Methods for identifiying genes essential to the growth of an organism
US20080076706A1 (en) 1997-07-14 2008-03-27 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of Growth Hormone and Related Proteins, and Methods of Use Thereof
US6753165B1 (en) * 1999-01-14 2004-06-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
US7153943B2 (en) * 1997-07-14 2006-12-26 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of growth hormone and related proteins, and methods of use thereof
WO2001087925A2 (en) * 2000-05-16 2001-11-22 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for refolding proteins containing free cysteine residues
IL133974A0 (en) * 1997-07-14 2001-04-30 Bolder Biotechnology Inc Derivatives of growth hormone and related proteins
CN1201814C (zh) 1998-04-02 2005-05-18 基因技术股份有限公司 心脏肥大的治疗方法
EP1141313A2 (en) 1998-12-31 2001-10-10 Chiron Corporation Improved expression of hiv polypeptides and production of virus-like particles
US7935805B1 (en) 1998-12-31 2011-05-03 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc Polynucleotides encoding antigenic HIV Type C polypeptides, polypeptides and uses thereof
US8288126B2 (en) 1999-01-14 2012-10-16 Bolder Biotechnology, Inc. Methods for making proteins containing free cysteine residues
JP2003513681A (ja) 1999-11-12 2003-04-15 マキシゲン・ホールディングス・リミテッド インターフェロンガンマ・コンジュゲート
YU32402A (sh) 1999-11-12 2005-03-15 Maxygen Holdings Ltd. Konjugati gama interferona
JP2003530838A (ja) 2000-04-12 2003-10-21 ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド アルブミン融合タンパク質
US20020197235A1 (en) * 2000-11-03 2002-12-26 Moran Stanford Mark Method for short-term and long-term drug dosimetry
EP2236156A3 (en) * 2001-01-09 2011-01-05 Baylor Research Institute Methods for treating and diagnosing Psoriasis
US6958388B2 (en) 2001-04-06 2005-10-25 Maxygen, Aps Interferon gamma polypeptide variants
US7038015B2 (en) 2001-04-06 2006-05-02 Maxygen Holdings, Ltd. Interferon gamma polypeptide variants
CA2452015C (en) 2001-07-05 2012-07-03 Chiron Corporation Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof
US20030198621A1 (en) 2001-07-05 2003-10-23 Megede Jan Zur Polynucleotides encoding antigenic HIV type B and/or type C polypeptides, polypeptides and uses thereof
IL160157A0 (en) * 2001-08-17 2004-07-25 Coley Pharm Group Inc Combination motif immune stimulation oligonucleotides with improved activity
JP2005511580A (ja) * 2001-11-06 2005-04-28 アプライド・リサーチ・システムズ・エーアールエス・ホールディング・エヌ・ヴィ 子宮内膜症の処置法
JP2005509647A (ja) * 2001-11-06 2005-04-14 アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ エストロゲン応答性乳癌の治療方法
DE60237721D1 (de) * 2001-11-09 2010-10-28 Intarcia Therapeutics Inc Kombinationstherapie mit omega-interferon zur behandlung von hepatitis c virus oder gelbfieber virus infektionen
AU2002346686A1 (en) * 2001-12-07 2003-06-23 Intermune, Inc. Compositions and method for treating hepatitis virus infection
CA2471363C (en) 2001-12-21 2014-02-11 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
EP1497437A4 (en) 2002-05-01 2005-11-16 Cell Genesys Inc LENTIVIRAL VECTOR PARTICLES RESISTANT TO THE INACTIVATION OF A COMPLEMENT
AU2003239774A1 (en) 2002-07-03 2004-01-23 Maxygen Holdings Ltd. Full-length interferon gamma polypeptide variants
WO2004004643A2 (en) * 2002-07-03 2004-01-15 The Brighamn And Women's Hospital, Inc. Interferon gamma in the detection and treatment of angiomyolipomas
AU2003285874A1 (en) 2002-10-16 2004-05-04 Amgen Inc. HUMAN ANTI-IFN-Gamma NEUTRALIZING ANTIBODIES AS SELECTIVE IFN-Gamma PATHWAY INHIBITORS
US7731947B2 (en) 2003-11-17 2010-06-08 Intarcia Therapeutics, Inc. Composition and dosage form comprising an interferon particle formulation and suspending vehicle
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
AU2004290070A1 (en) 2003-11-12 2005-05-26 Biogen Idec Ma Inc. Neonatal Fc receptor (FcRn)-binding polypeptide variants, dimeric Fc binding proteins and methods related thereto
JP4889505B2 (ja) 2004-02-02 2012-03-07 アンブレツクス・インコーポレイテツド 被修飾されたヒト成長ホルモンポリペプチドおよびこれらの使用
WO2009100255A2 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Ambrx, Inc. Modified leptin polypeptides and their uses
CN101072585A (zh) 2004-11-01 2007-11-14 诺华疫苗和诊断公司 产生免疫应答的组合方法
KR20070102684A (ko) 2004-12-23 2007-10-19 몰메드 에스피에이 접합 생성물
EP1838736B1 (en) 2005-01-05 2013-03-06 Biogen Idec MA Inc. Cripto binding molecules
EP1848744B1 (en) 2005-01-27 2012-01-18 Novimmune SA Human anti-interferon gamma antibodies and methods of use thereof
US11246913B2 (en) 2005-02-03 2022-02-15 Intarcia Therapeutics, Inc. Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide
WO2006083761A2 (en) 2005-02-03 2006-08-10 Alza Corporation Solvent/polymer solutions as suspension vehicles
US20100196336A1 (en) 2006-05-23 2010-08-05 Dongsu Park Modified dendritic cells having enhanced survival and immunogenicity and related compositions and methods
ES2351527T3 (es) 2006-05-30 2011-02-07 Intarcia Therapeutics, Inc Modulador de flujo en dos piezas con conducto interno para un sistema osmótico de administración.
EP2359808B1 (en) 2006-08-09 2013-05-22 Intarcia Therapeutics, Inc Osmotic delivery systems and piston assemblies
US8617531B2 (en) * 2006-12-14 2013-12-31 Bolder Biotechnology, Inc. Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine
EP2157967B1 (en) 2007-04-23 2013-01-16 Intarcia Therapeutics, Inc Suspension formulations of insulinotropic peptides and uses thereof
EP2076533B1 (en) * 2007-05-02 2014-10-08 Ambrx, Inc. Modified interferon beta polypeptides and their uses
EP2214824A4 (en) * 2007-11-28 2015-08-19 Smart Tube Inc DEVICES, SYSTEMS AND METHODS FOR DETECTING, STIMULATING, STABILIZING AND ANALYZING A BIOLOGICAL SAMPLE
CA2726861C (en) 2008-02-13 2014-05-27 Intarcia Therapeutics, Inc. Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents
EP2248903A1 (en) 2009-04-29 2010-11-10 Universitat Autònoma De Barcelona Methods and reagents for efficient and targeted gene transfer to monocytes and macrophages
EP3323423B1 (en) 2009-09-28 2020-06-17 Intarcia Therapeutics, Inc Rapid establishment and/or termination of substantial steady-state drug delivery
EA201291482A1 (ru) 2010-07-09 2013-10-30 Байоджен Айдек Хемофилия Инк. Химерные факторы коагуляции
US20120208755A1 (en) 2011-02-16 2012-08-16 Intarcia Therapeutics, Inc. Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers
RU2446172C1 (ru) * 2011-03-24 2012-03-27 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фармапарк" Способ получения зрелого интерферона альфа-2 человека с использованием дрожжей saccharomyces cerevisiae и штамм-продуцент интерферона альфа-2 человека (варианты)
EA023379B1 (ru) * 2011-06-21 2016-05-31 Общество С Ограниченной Ответственностью "Фарма Ген" ШТАММ ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)-pIE-GAMMA И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НАТИВНОГО РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА ГАММА ЧЕЛОВЕКА
WO2013012733A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Biogen Idec Ma Inc. Heterodimeric fc regions, binding molecules comprising same, and methods relating thereto
WO2013024158A1 (en) 2011-08-17 2013-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combinations of protein kinase inhibitors and interferons or of protein kinase inhibitors and direct acting antivirals for the treatment and the prevention of hcv infection
WO2013024156A2 (en) 2011-08-17 2013-02-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combinations of anti-hcv-entry factor antibodies and interferons for the treatment and the prevention of hcv infection
WO2013106577A2 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Biogen Idec Ma Inc. Enhancement of transport of therapeutic molecules across the blood brain barrier
US20140350087A9 (en) 2012-03-22 2014-11-27 Halozyme, Inc. Oncovector Nucleic Acid Molecules and Methods of Use
EP2870238A4 (en) 2012-07-05 2016-03-09 Ohio State Innovation Foundation COMPOSITIONS AND METHODS ASSOCIATED WITH VIRAL VACCINES
WO2014033266A1 (en) 2012-08-31 2014-03-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Anti-sr-bi antibodies for the inhibition of hepatitis c virus infection
TWI788044B (zh) 2013-03-15 2022-12-21 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｉｘ多肽調配物
EP2940128A1 (en) 2014-04-30 2015-11-04 Institut d'Investigació Biomèdica de Bellvitge (IDIBELL) Adenovirus comprising an albumin-binding moiety
US9889085B1 (en) 2014-09-30 2018-02-13 Intarcia Therapeutics, Inc. Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c
AU2016215155A1 (en) 2015-02-04 2017-08-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Tau antisense oligomers and uses thereof
EP3254104B1 (en) 2015-02-04 2021-08-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of selecting therapeutic molecules
SG10202108996PA (en) 2015-05-07 2021-09-29 Swedish Orphan Biovitrum Ag Methods and compositions for diagnosis and treatment of disorders in patients with elevated levels of cxcl9 and other biomarkers
US11091543B2 (en) 2015-05-07 2021-08-17 Swedish Orphan Biovitrum Ag Methods, compositions and dosing regimens for treating or preventing interferon-gamma related indications
MA44390A (fr) 2015-06-03 2019-01-23 Intarcia Therapeutics Inc Systèmes de mise en place et de retrait d'implant
US11324816B2 (en) 2015-08-31 2022-05-10 Technovax, Inc. Human respiratory syncytial virus (HRSV) virus-like particles (VLPS) based vaccine
JP7250520B2 (ja) 2016-04-13 2023-04-03 ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 組換えアルテリウイルスレプリコン系およびその使用
SG11201810102SA (en) 2016-05-16 2018-12-28 Intarcia Therapeutics Inc Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof
USD860451S1 (en) 2016-06-02 2019-09-17 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant removal tool
USD840030S1 (en) 2016-06-02 2019-02-05 Intarcia Therapeutics, Inc. Implant placement guide
JP7382230B2 (ja) 2016-10-17 2023-11-16 ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 組み換えウイルスレプリコン系及びその使用
KR102655641B1 (ko) 2016-12-05 2024-04-05 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 유전자 발현을 향상시키기 위한 조성물 및 방법
CN110225762A (zh) 2017-01-03 2019-09-10 因塔西亚制药公司 包括glp-1受体激动剂的连续施用和药物的共同施用的方法
EP3672488A4 (en) 2017-08-23 2021-07-14 Wayne State University IN VIVO IMMUNOIMAGING OF INTERFERON GAMMA
EA202091513A1 (ru) 2017-12-19 2020-09-09 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани Вакцины против вируса гепатита b (hbv) и их применение
EA202091517A1 (ru) 2017-12-19 2020-11-03 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани Способы и устройство для доставки вакцин против вируса гепатита b (hbv)
EA202091516A1 (ru) 2017-12-19 2020-11-03 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Анлимитед Компани Способы и композиции для индукции иммунного ответа против вируса гепатита b (hbv)
BR112020014525A2 (pt) 2018-01-19 2020-12-08 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Induzir e intensificar respostas imunes utilizando sistemas de replicon recombinantes
EP4121115A1 (en) 2020-03-19 2023-01-25 Trizell Ltd. Temperature-responsive virus storage system
JP2023519709A (ja) 2020-03-30 2023-05-12 トライゼル リミテッド がんを治療するための組成物及び方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5598118A (en) * 1979-01-18 1980-07-25 Hayashibara Takeshi Preparation of type-2 interferon and drug containing the same
JPS5813397A (ja) * 1981-04-17 1983-01-25 メロイ・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレイテイド 免疫インタ−フエロン及びそのｍＲＮＡの製造方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4332892A (en) * 1979-01-15 1982-06-01 President And Fellows Of Harvard College Protein synthesis
AU538665B2 (en) * 1979-10-30 1984-08-23 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research Human interferon dna
IL58765A (en) * 1979-11-21 1986-09-30 Yeda Res & Dev Process for the production of essentially pure messenger rna of human fibroblast interferon and process for the production of interferon beta
GB2068970B (en) * 1980-02-06 1983-06-22 Searle & Co Recombinant dna technique for the preparation of a protein resembling human interferon
DE3005897A1 (de) * 1980-02-16 1981-09-03 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enhtaltenden mikroorganismus
US4338397A (en) * 1980-04-11 1982-07-06 President And Fellows Of Harvard College Mature protein synthesis
US4460685A (en) * 1980-05-29 1984-07-17 New York University Method of enhancing the production of human γ Interferon
FI64813C (fi) * 1980-12-31 1984-01-10 Ilkka Antero Palva Foerfarande foer producering av ett utvalt aeggviteaemne och vid foerfarandet anvaenda rekombinantplasmidvektorer
IL65475A0 (en) * 1981-04-17 1982-07-30 Meloy Lab Production of immune interferon and its mrna
AU561343B2 (en) * 1981-10-19 1987-05-07 Genentech Inc. Human immune interferon by recombinant dna

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5598118A (en) * 1979-01-18 1980-07-25 Hayashibara Takeshi Preparation of type-2 interferon and drug containing the same
JPS5813397A (ja) * 1981-04-17 1983-01-25 メロイ・ラボラトリ−ズ・インコ−ポレイテイド 免疫インタ−フエロン及びそのｍＲＮＡの製造方法

Cited By (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH03246232A (ja) * 1981-10-19 1991-11-01 Genentech Inc ヒト免疫インターフェロン
JPS62265986A (ja) * 1981-10-19 1987-11-18 ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド ヒト免疫インタ−フエロン
JPS58110548A (ja) * 1981-12-24 1983-07-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規な生理活性ペプチド
JPS62223191A (ja) * 1981-12-24 1987-10-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規な生理活性ペプチドの製法
JPS5951792A (ja) * 1982-02-22 1984-03-26 バイオジェン　インコーポレイテッド Ｄｎａ配列、組換ｄｎａ分子およびヒト免疫インタフエロン様ポリペプチドの製造方法
JPS58201995A (ja) * 1982-05-20 1983-11-25 Suntory Ltd ヒト・ガンマ・インタ−フエロン様ポリペプチドの製造法
JPH0536414B2 (ja) * 1982-11-22 1993-05-31 Takeda Chemical Industries Ltd
JPS63211240A (ja) * 1982-11-22 1988-09-02 Takeda Chem Ind Ltd ヒト免疫インターフェロン蛋白質含有薬剤
JPS6034919A (ja) * 1983-08-04 1985-02-22 Green Cross Corp:The ガンマ・インタ−フェロン組成物
JPS6169800A (ja) * 1983-09-20 1986-04-10 エフ・ホフマン−ラ　ロシユ　ウント　コンパニ−　アクチエンゲゼルシヤフト 免疫インタフエロンおよびその精製方法
JPS60202899A (ja) * 1983-12-16 1985-10-14 ジエネンテツク・インコ−ポレイテツド 安定性の高い組換えガンマインタ−フエロン
JPH0919295A (ja) * 1983-12-16 1997-01-21 Genentech Inc 組換えガンマインターフェロン組成物
JPH03201979A (ja) * 1983-12-16 1991-09-03 Genentech Inc 安定性の高い組換えガンマインターフエロン
JPS61501430A (ja) * 1984-03-16 1986-07-17 バイオジェン インコーポレイテッド 修飾ガンマ・インタ−フェロン、そのｉｆｎをコ−ドするｄｎａ配列およびそのｉｆｎの生産方法
WO1985004420A1 (en) * 1984-03-29 1985-10-10 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel dna and its use
JPS60233100A (ja) * 1984-04-19 1985-11-19 ヘキスト・アクチエンゲゼルシヤフト ヒトγ―インターフェロン活性を有するポリペプチドおよびその製造法
JPH06153957A (ja) * 1984-04-19 1994-06-03 Hoechst Ag ヒトγ−インターフェロンの部分アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列
WO1985005618A1 (en) * 1984-06-06 1985-12-19 Takeda Chemical Industries, Ltd. Process for preparing interferon derivative
JPS60262594A (ja) * 1984-06-11 1985-12-25 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd ヒトインタ−フエロン−γ
JPS611395A (ja) * 1984-06-12 1986-01-07 ジ−・デイ・サ−ル　アンド　コンパニ− ヒトｒ−インタ−フエロン
JPS6193130A (ja) * 1984-10-05 1986-05-12 ビオフエロン　ビオヒエミシエ　サブスタンツエン　ゲゼルシヤフト　ミツト　ベシユレンクテル　ハフツング　ウント　コムパニー 低投与量にてヒトの各種病気を系統的に処置するためのγ‐インタフエロン含有剤
JPS6188875A (ja) * 1984-10-05 1986-05-07 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd ヒトインタ−フエロン−γ
JPS61108397A (ja) * 1984-10-31 1986-05-27 Green Cross Corp:The インタ−フエロン−γ蛋白質の製造法
JPS6156195A (ja) * 1985-03-01 1986-03-20 Asahi Chem Ind Co Ltd 新規生理活性ペプチド

Also Published As

Publication number Publication date
DE3238554C2 (ja) 1989-11-23
FR2514783B1 (fr) 1985-11-29
MX9206041A (es) 1994-04-29
CA1341590C (en) 2009-02-03
IE54371B1 (en) 1989-09-13
JPH07106144B2 (ja) 1995-11-15
HK66289A (en) 1989-08-25
US4929554A (en) 1990-05-29
YU45871B (sh) 1992-09-07
PL153202B1 (en) 1991-03-29
ES8402351A1 (es) 1984-02-01
ZA827569B (en) 1983-11-30
DK163187B (da) 1992-02-03
JPS62265986A (ja) 1987-11-18
DK460882A (da) 1983-05-27
BR8206068A (pt) 1983-09-13
US4925793A (en) 1990-05-15
JPH0135639B2 (ja) 1989-07-26
ES516620A0 (es) 1984-02-01
NO1994025I1 (no) 1994-12-20
JP2515308B2 (ja) 1996-07-10
NO164177B (no) 1990-05-28
EP0077670A2 (en) 1983-04-27
FI823528L (fi) 1983-04-20
EP0077670A3 (en) 1984-07-04
PL238671A1 (en) 1983-07-18
FI86559C (fi) 1992-09-10
NO164177C (no) 1990-09-12
AU8935282A (en) 1983-04-28
SG76988G (en) 1989-03-23
PT75696B (en) 1987-03-24
CH663619A5 (de) 1987-12-31
DE19375065I2 (de) 2004-07-01
FI823528A0 (fi) 1982-10-15
EP0077670B1 (en) 1989-06-28
GT198277746A (es) 1984-04-11
IT8223795A0 (it) 1982-10-18
PT75696A (en) 1982-11-01
IE822517L (en) 1983-04-19
SK279535B6 (sk) 1998-12-02
RO89534A (ro) 1986-07-30
US4727138A (en) 1988-02-23
DE77670T1 (de) 1987-09-03
ATE44289T1 (de) 1989-07-15
MY102546A (en) 1992-07-31
DK163187C (da) 1992-06-22
CZ738982A3 (en) 1997-03-12
LU88327I2 (fr) 1994-05-04
NL930040I1 (nl) 1993-08-02
IT1153265B (it) 1987-01-14
DZ467A1 (fr) 2004-09-13
IL66992A0 (en) 1983-02-23
RU2092561C1 (ru) 1997-10-10
CZ282154B6 (cs) 1997-05-14
MX166499B (es) 1993-01-12
YU233582A (en) 1985-03-20
OA07233A (fr) 1984-04-30
FI86559B (fi) 1992-05-29
DE3279788D1 (en) 1989-08-03
KR840001837A (ko) 1984-06-07
NZ202190A (en) 1987-06-30
NL930040I2 (nl) 1993-09-16
HU202287B (en) 1991-02-28
RU2107728C1 (ru) 1998-03-27
ZW22282A1 (en) 1983-05-11
RU2056460C1 (ru) 1996-03-20
PH26963A (en) 1992-12-28
DD208822A5 (de) 1984-04-11
GB2107718B (en) 1985-11-20
FR2514783A1 (fr) 1983-04-22
AU561343B2 (en) 1987-05-07
DE3238554A1 (de) 1983-05-05
BG42527A3 (en) 1987-12-15
GB2107718A (en) 1983-05-05
JPH03246232A (ja) 1991-11-01
IL66992A (en) 1991-07-18
US4762791A (en) 1988-08-09
BG44877A3 (ja) 1989-02-15
GR78391B (ja) 1984-09-27
NO823467L (no) 1983-04-20
SK738982A3 (en) 1998-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPS5890514A (ja) ヒト免疫インターフエロンをコートするｄｎａ配列
EP0043980B1 (en) Mature human leukocyte interferon a, process for its microbial preparation, intermediates therefor and compositions containing it.
JP2548526B2 (ja) 腫瘍壊死因子の増加した収量を生産し得る組換ｄｎａ分子
US5096705A (en) Human immune interferon
JPH0321151B2 (ja)
JPH04502628A (ja) 幹細胞因子
JPS60115528A (ja) ヒトインタ―ロイキン―２蛋白質を含有する抗腫瘍用または免疫機能低下疾患治療用組成物
US5582824A (en) Recombinant DES-CYS-TYR-CYS human immune interferon
US10875903B2 (en) Bifunctional fusion proteins to inhibit angiogenesis in tumor microenvironment and to activate adaptive immune responses and the genes and uses thereof
WO1984002129A1 (en) Human immune interferon protein and process for its preparation
US20240052007A1 (en) Fusion protein containing human interleukin-10 and Fc fragment and medical use thereof
JP2006136341A (ja) 可溶性ｌｄｌリセプター
JPH0550273B2 (ja)
EP0446931A1 (en) Human ciliary neuronotrophic factor, DNA sequence encoding the factor, and production of the factor by recombinant technology
JPH03505039A (ja) 可溶性ｃｄ４を発現するレトロウイルスベクター、エイズの遺伝子治療法
JPS6361960B2 (ja)
CN107353348A (zh) 一种重组羊长效干扰素τ及制备此长效干扰素的融合蛋白及其制备方法
JPS60126088A (ja) 新規ｄνａおよびその用途
CN117659158A (zh) 一种il-2衍生物及其制备方法
KR0141315B1 (ko) 인간 싸이모신 알파 1의 새로운 제조방법
JP2832358B2 (ja) モノクローナル抗体の増収法
WO1995023861A1 (fr) MEGACARYOPOIETINE HUMAINE ET ISOLEMENT DE CELLE-CI, CLONAGE D'ADNc, ET PREPARATION DE LA PROTEINE RECOMBINEE
WO9008828 Pharmaceutical applications
BG61060B2 (bg) човешки имунен интерферон
JPS61501430A (ja) 修飾ガンマ・インタ−フェロン、そのｉｆｎをコ−ドするｄｎａ配列およびそのｉｆｎの生産方法