JPS6156195A - 新規生理活性ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、抗ウィルス作用、ＮＪｉＩ胞Ｎ殖抑制作用お
よびＮＫ細胞活性増強作用などの生理活性能に優れた新
規な生理活性ペゾチド、その製法及びその用途に関する
。 従来、抗ウィルス削又は細胞増消仰制剤としては、代謝
拮抗剤、アルキル化剤、抗生物質等が使用されてきたが
、これらは毒性が篩〈好ましくない。従って、毒性の低
い覆ウィルス剤又は細胞増殖抑制ハリの開発が独く望ま
れている。 最近、インターフェロン−α（以下「■ＦＮ−α」と称
する）及びインターフェロン−β（以下ｒＩＦＮ−β」
と称する）が低毒性の抗ウイルスハリとして効果的であ
ることから、これらの研究が進んできた。しかし、ＩＦ
Ｎ−α及びＩＦＮ−βの細胞増殖抑制作用は満足できる
ものではない。一方、インターフェロン−γ（以下ｒＩ
ＦＮ−γ」　と称する）の研究は、ＩＦＮ−αおよびＩ
Ｆ’Ｎ−βの研究に比較して、あまり進んでいない。 しかしながら、１９８１年１０月アメリカ合衆国サンフ
ランジスコア１ｊで開かれたインターフェロン研究国際
会議第二回年金（Ｔｈｅ　５ｅｃｏｎｄ　Ａｎｎｕａｌ
Ｉｎｔａｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　ｆｏ
ｒ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ）におい
て、ＩＦＮ−γが単離されたという報告はなかったが、
デビットやブイ・ゲーデル（Ｄａｖｉｄ　Ｖ。 Ｇｏｏｄｄｅｌ）　（ジエネンテツク社（Ｇｅｎｅｎｔ
ｅｃｈ、　Ｉｎｃ、）、アメリカ合衆国カリフォルニア
用〕によって、ＩＦＮ−７のメツセンジャーＲＮＡ（以
下「ｍＲＮＡＪと略称する）の相捕的ＤＮＡ（以下ｒｃ
ＤＮＡＪと称する）のデオキシヌクレオチドの配列から
推定したプロＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−γ及びＩＦＮ−γ様
ペゾチ′　　　ドのアミノ酸配列が発表された。そのア
ミノ酸配列１１次式（＋）で表される。 式（夏）： Ｊ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ
　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｉ、ｅｕＬｙｅ　
Ｌｙａ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈ
ｉａ　Ｓｅｒ　Ａａｐ　Ｖａｔ　ＡｌａＡｓｐ　　Ａｓ
ｎ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｌｅｕ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅ
ｕ　　Ｇｌｙ　　Ｉｌｅ　　Ｌｅｕ　　Ｌｙ８　Ａｓｎ
Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａａｐ　Ａ
ｒｇ　Ｌｙｅ　Ｉｌｅ　Ｍａｔ　Ｇｉｎ　５ｅｒＧｉｎ
　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　
Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　ＡｓｎＰｈａ　Ｌｙ
ｓ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ
　Ｌｙｅ　Ｓａｒ　Ｖａｌ　ＧｌｕＴｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌ
ｙａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　Ａａｎ　Ｖａｌ　Ｌｙ
ｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　ＡａｎＳｅｒ　　Ａａｎ　　Ｌｙ
ｓ　　Ｌｙａ　　Ｌｙｓ　　Ａｒｇ　　Ａｓｐ　　Ａｓ
ｐ　　Ｐｈｅ　　Ｇｌｕ　　Ｌｙｓ　　ＩＪｅｕＴｈｒ
　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　
Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｇｌｎ　ＡｒｇＬｙｅ　Ａｌ
ａ　ＩＩｓ　Ｈｉｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　ＩＩｓ　Ｇｌｎ
　Ｖａｌ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　ＧｌｕＬｅｕ　Ｓｅｒ　Ｐ
ｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙ
ＩＩＡｒｇ　Ｔ、ｙａ　ＡｒｇＳｅｒ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ
　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　
Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ（但し、Ｊはシステニルチロシ
ルシステニル基を表わす）。 さらに前述の会議において、ＩＦＮ−γ様ペプチドの情
報を有する遺伝子含有細胞の培養液は抗ウィルス活性を
有するが、プロＩＦＮ−γの情報を有する遺伝子含有細
胞の培養液は抗ウィルス活性を有していないことも発表
された。一方、ＩＦＮ−γはＩＦＮ−γ様ペプチドと異
なり、そのＮ−末端に人工的メチオニルシステニルチロ
シルシステニル基がイ・［加されていないので、より望
ましいがＩＦＮ−γの↑ｌｖ報を有する遺伝子含有細胞
の培養液の製造を」いまだに成功

【２ていない。 上述の如き現在の状況を鑑み、本発明者らは、抗ウィル
ス活性が高いだけでなく、細胞増殖抑制作用およびＮ　
Ｋ　４１１１胞増強作用にも優れた生理活性剤を開発す
べく鋭意研究を行なった。 従って、本発明の目的は抗ウィルス活性に優れているだ
けでなく、細胞増殖抑制作用及びＮＫａ胞増強作用にも
優れている生理活性ペプチドを提供することＫある。 本発明の他の諸口的及び諸利益は、特許請求の範囲と共
に以下に記載する詳細な説明から明らかとなろう。 本発明によれば、式０）で表される新規な生理活性ペプ
チド（但し、第（り式中、Ｊは水素原子を表す）が提供
される。 本発明の新規な生理活性被ゾチｒけ、従来から公知の方
法、即ち、泉屋信夫等著［合成化学シリ−ズー被ブチｒ
合成Ｊ１９７５年丸善株式会社発行；日本生化学金輪［
生化学実験ｇＨ座／タンパク質の化学！−ＩＶＪ１９７
７年東京化学同人発行に記載の方法を利用することによ
！ｌｌ！Ｉ！！！造することができる。 その実施態様の１つとして、同相法について以下囲体的
に説明する。α−アミノ保護基をイ号するアミノ酸のカ
ルは？ン酸基をジビニルベンゼンで架橋したボリスチレ
／樹脂などの支持体に結合させた後、α−アミノ保護基
を選択的に除去する。遊離したアミン基に、α−アミノ
保護基を有する２番目のアミノ酸と反応させる。とのα
−アミノ保護基の除去とα−アミノ保護基を有するアε
）酸の導入をくり返して目的のペゾヂド鎖を得る。次に
ペプチドのＣ−末端アミノ酸のカルｌ？ン酸基と樹脂と
の間の共有結合を切断する。この際、共有結合を切断す
るのに用いる試薬によっては、α−アミノ保護基や側鎖
保護基の除去を共有結合の切断と同時に行なうことがで
きる。 上述の固相法は、すべての反応が１つの容器で行なえる
のでベゾチｒの製造が操作の上で簡単であり、また得ら
れた生成物は反応に用いた溶媒に可溶であるので、反応
に用いた適量の試薬および副産物を濾過により除去でき
るために、目的のペプチドが短時間でしかも高い収率で
製造できることから、いわゆるΔり相法より有利な方法
である。 第】の方法で用いられる支持体としては、一般にジビニ
ルベンゼンで架秘した架橋度２係のスチレンポリマーで
、２００〜４００　メツシュのサイズのものが望ましい
。償１脂をアミノ酸と反応させて結合する前に、樹脂に
官能基を導入し反応性を付与する。一般に、樹脂に官能
基を導入するためにｔ）、５ｎＣＡ’２を触媒とし−ご
用いるフリーデル・クラフッ反応によりスチレンの芳香
環とクロロメチルメチルエーテルとを反応させ、静スチ
レンの芳香環をクロロメチル化する方法がとられる。 第１の方法で用いられるα−アミノ保護基とし、　　　
てけ、支持体とα−アミノ保護基を有するアミノ酸との
カンプリングに際して安定であり、側鎖保護基やペプチ
ド鎖に悪影譬を与えずに容易に除去できるものが好まし
い。上述のような好ましいα−アミン保護基としては、
第三ブトキシカル）ｉ？ニル（以下ｒＢｏｃＪと略称す
る）基が挙げられる。 このＢｏｃ基は、Ｉ　Ｎ　ＨＣｌ／酢酸混合液、４Ｎ１
１Ｃ１／ジオキサン混合液あるいは５０％（Ｗ／ｖ）Ｔ
ｒｏ＋＋（テトラフルオロ酢酸）　／　ｃ　ｕ、ｃ　ｌ
、混合液を用いて容易にペプチド鎖から除去することが
できる。 側鎖保護基としては、カップリング及びα−アミノ保護
基の除去の時に安定であり、且つペプチド合成の段階で
容易に除去できる基が好ましい。 このような好ましい側鎖保護基としては、アルギニンの
側鎖保護用にはＮＯ２又はトシル基が、アス・ぞラギン
酸の側鎖保護用にはベンジル基（以下［ＢｚｌＪと略称
する）基が、システィン及びグルタミン酸の側鎖保護用
にけＢｚｌ基又はＯ−メチルベンジル（以下ｆ”０Ｂｚ
Ｊと略称する）−ｊ１５が、ヒスチジンの側鎖保Ｉｆ！
車用ＫをまＴ３ｚｌ基、ベンジルオキシカルｓｆ　竺ル
（以下ｒＺＪと略称する）基又はＢｏｃ　基が、リジン
の側鎖保護用にはＺ基、トシル基又はジイソゾロビルメ
チルオキシカルボニル（以下ｒＤｉｐｍｏｃＪと略称す
る）基が、メチオニンの側鎖保護用に打１．スルホキシ
Ｐ基が、そしてセリン、スレオニン及びチロシンの側鎖
保護用にはＢｚｌ　　基が挙げられる。 本発明の新規な生理活性ペプチドのアミノ酸配列を決定
する方法は以下の通りである。まず、最初に本発明の新
規な生理活性ペプチドのメチオニル結合ヲプロモシアン
で切断する。切断して得たペプチド断片をセファデック
スＧ−１００（ファーマシア・ファイン−ケミカル社製
、スウェーデン）を用いて分離して、各断片のアミノ酸
配列を公知の高精度アミノ酸配列分析で、各断片のＮ−
末端から順に決定していく。一方、本発明の新規な生理
活性ペプチドをトリプシンで部分分解し、得られたペプ
チド断片をセファデックスＧ−１００カラムを用いて分
離する。分離した各断片を上述と同様の方法で、各断片
のアミノ配列を各断片のＮ−末端から順に決定していく
。ブロモシアンで切断して得られたペプチドの各断片の
アミノ酸配列とトリプシンで切断して得られたペプチド
の各断片のアミノ酸配列を比較することによって、眩り
ゾチドの各断片の配列を決定する。このようにして、本
発明の新規な生（ｇｌｊ活性ベゾヂｒのアミノ酸配列を
決定する。 細胞増殖の抑制、例えば悪性腫瘍細胞の増殖抑制を目的
とする場合、本発明のペプチドは一般には静脈内、筋肉
内又は皮下に注射投与することができる。本発明のペプ
チドの１日投与１ｔＶｉ、、もちろん患者の年令、病状
及び体重により異なるが、通常、成人１人当りｌＸｌ０
’〜ｌＸｌ０”単位７日の量で注射投与される。 ウィルス性の疾病を治療するために、軟膏剤１０ｇ当シ
本発明のペプチドｌＸ１０４〜ｌＸｌ０’単 る。従来公知の医薬上許容しうる軟膏基剤を用いて、本
発明のペプチドを含有する軟膏剤を；１１！ｌ製するこ
とができる。本発明のペプチドを含有する軟膏剤の１日
投与量は、もちろん患者の年令及び病状により異なるが
、通常本発明のペプチド基準でｌＸｌ０’〜ｌＸｌ０’
単位となる量を分割して塗布す−　１０　−・ ることかできる。 Ｊソ下、実施例に上り本発明をより詳細に説明するが、
本発明１１口′、１）の実施例に限定されるもので−１
１ない。 Ｑ　　Ｎ　Ｏｚ　−７ルギニン：ｒルギニンのグアニジ
ノ基（Ｇ−）にニド１１基（ＮＯ２）が結合したもの １ｍ１３ｚｌ−ヒスチジン：ヒスチジンのイミダゾリル
基（ｉｍ）にベンジル基（ＢＺＩ−）が結合したもの ０−Ｂｚｌ−セリン：セリンの水酸基（０−）にベンジ
ル基（Ｂｚｌ−）が結合したもの Ｂｏａ−／々リン：ノ々リンのα−アミノ基に第三ブト
キシカルゼニル基（Ｂｏｃ−）が結合したもの ０Ｂｚｌ：側鎖保護基の１つであるオルト−メチルベン
ジル基ＶＳＶ　：水痘性口内炎ウィルス（Ｖｅａｉｃｕ
ｌａｒ　Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　Ｖｉｒｕａ）ＡＭＶ　
：鳥類骨髄芽球症ウィルス（Ａｖｉａｎ　Ｍｙａｌｏｂ
ｌａｓｔｏｓｉｓ　Ｖｉｒｕｓ）ＢＳＡ　：牛血清アル
ブミン ＳＥＡ　：マイトジエンの１４であるスタフイロコツカ
ル・エンテロトギシンＡ 実施例１ 工程１（樹脂の洗浄） 樹脂［：　Ｂｉｏ−Ｂｅａｄ　Ｓ　−Ｘ２．２００〜４
００メツシユ（２１ジビニルベンゼン架橋スチレンポリ
マーの曲品名、パイオーラッド社製、アメリカ合衆国）
１１５０ｇを１ｇの蒸留ベンゼンに攪１’ｌ’　Ｌなが
ら１１１１ぐる。３０分佼、樹脂をガラスフィルターで
一促取１゜乾燥する。 次に乾燥した樹脂をｌｌのメタノール中に情１′１しな
がら加え、３０分後にガラスフィルターで１１１取して
乾燥する。乾燥してイυられる樹脂をメタノール、メタ
ノール／水及び水で順次洗浄する。洗浄した樹脂を１１
のｌＮＮａ０Ｉ（水溶液中に加える。 得られる混合物を沸騰水浴中で１時間攪拌した後、樹脂
を濾取し、水洗する。次に、得られる樹脂を１１のＩＮ
塩酸水溶液中に加え、沸騰水浴中で１時間攪拌する。次
いで樹脂を濾取し、水洗する。 水洗して得られる樹脂を４１の蒸留水に懸濁した後、静
置する。静置３０分後、浮遊する微細な樹脂をデカンテ
ーションにより除去する。このようにして、樹脂を沈殿
物として得る。沈殿した樹脂はガラスフィルター上に濾
取し、メタノールで洗浄する３、洗浄した樹脂を少址の
ジメチルホルムアミｌ’　（ＪＬｌ、　’Ｆ　ｒ　Ｉ）
　Ｍ　ｌｉ”　、Ｊと略称する）に加え、３０分間８０
℃で攪拌Ｌ　ｆｃ　汝、攪拌を濾取してＤＭＦおよびメ
タノールで洗浄する。史に１樹脂を２６のメタノール中
で１時間攪拌した後濾取する。得られろ樹脂を風乾した
後、さらに１００℃で２時間真空乾祿する。 工程２（クロＩ」メチル樹脂の製造） 工程１で得らｊｌ、た（ＩｌＩ　Ｊｌｔｌｉ　２５　ｇ
と蒸留したクロロメチルメチルニーデルｌｏｏｍｅを１
１の丸底二頭フラスコに人）１て、２５℃で静かに１時
間攪拌して樹脂を膨潤させた後、０℃に冷却する。この
膨潤した樹脂に１．８８−のＳ　ｎ　Ｃ１４を含有する
５０−のクロロメチルメチルエーテルを０℃に保ったま
ま攪拌しながら３０分間かけて加えた後、さらに３０分
間攪拌して反応生成物を得る。このようにしてイυられ
る生成物をガラスフィルターで濾取し、５ＯＯ−のジオ
キザンー水（１：１）、次いで５０〇一のジオキサン−
３Ｎ塩酸（３：１）で静かに洗浄する。史に１生成物を
水、ジオキサン−水及びメタノールで順次洗浄した後、
減圧下１００℃で乾燥する。 工程３ Ａ、（ａ−Ｚ−リジン） １１ｇのし一すジン銅」ムに、】ＯｇのＮ　ａ　ＩＴＣ
０３と１２−のＺ−Ｃ１を４分の１ずつ１０分おきに水
冷上攪拌しながら加え、さらに３５時間攪拌する。 このようにして得られる沈殿物を濾取１〜、水、エタノ
ールおよびアセトン／ニーデルで順次洗浄する。洗浄し
た沈殿物を２５０−の水圧懸濁し、次にこの懸濁液に４
１２−の６Ｎ塩酸水溶液を加えることにより上記沈殿物
を溶解させる。次いで、得られる溶液にＨ２Ｓガスを１
〜２時間通気する。 その結果生成するＣｕＳをハイフロス−・ぞ−士ル和光
純薬製、日本）を用いて濾去し、このＣｕ　ＳをＩＮ塩
酸水溶液で洗浄する。上述の操作で得られる濾液及び洗
液を集めて、空気を通しＨ２Ｓを除去する。その後、こ
の溶液を水冷上製アンモニア＝　１４− 水を加えてｐＨ６，５にし、冷蔵庫で２時間放置する。 その結果得られる沈殿物を濾取し、水、エタノール及び
エーテルで順次洗浄する。このようにして、融点２５４
℃のａ−Ｚ−リジン１０ｇが得られる。 生成するａ　−７，−リジンの収率は６５％である。 得られる＄７−ＩＪジンの再結晶は、希塩酸に溶解した
後、アンモニア水で中和して行う。 ＩＩ、　　（Ｇ−Ｎｏ！−アルギニン）発煙硝酸１２０
−と発煙硫酸７５−の混合液を氷冷し、この混合液に１
１０ｇのＬ−アルギλン塩ｒｌＲ塩を攪拌しながら徐々
に加える。更に、濃硫酸４５−を上記の混合液に加える
。得られる混合液を１時間攪拌した後、氷片中に注ぎ、
濃アンモニア水でｐ　１１８　Ｋ調節する。次に該混合
液を酢酸でｐＨ６に調節した後、冷蔵庫内で約４時間放
置する。 その結果生じる沈殿を濾取し、熱水より再結晶する。得
らｆＬる結晶をエタノール及びジエチルニー−チルで順
次洗浄し乾燥する。 このようにして融点２５１℃のＧ−ＮＯ２フルギニン６
０ｇが得られる。Ｇ−Ｎｏ２−アルギニンの収率は５０
係である。 Ｃ，（ｉｍＢｚｌ−ヒスチジン） ２０ｇのＬ−ヒスチジン塩酸塩Ｈ２０を、ドライアイス
−アセトンの浴中で一３０℃に冷却した２００−の液体
アンモニアに溶かし、この溶液に金属ナトリウムの小片
を、溶液の青色が消えずに残るように々るまで攪拌しな
がら加える。次に少量のヒスチジンを、該溶液の青色が
消えるまで加えた後、塩化ベンジルを該溶液に滴下する
。この混合溶液を３０分間攪拌した後、この混合溶液中
のＮ１」３を室温で大気圧下蒸発させ、次いで水流ポン
プを用いて減圧下ＮＨｚを除去する。ＮＨ３除去後の残
渣を１００艷の氷水に注ぎ入れる。ｍられる混合液をジ
エチルエーテルで抽出した後、不溶分は濾去する。 得られる溶液に希硫酸を加えてｐＨ８に調節し、冷蔵庫
内で３時間放置する。その結果生じる沈殿物を濾取し、
７０重量係エタノールから再結晶する。 融点２４８℃１ｍＢｚｌ−ヒスチジン１３ｇが得られる
。ｉｍＢｚｌ−ヒスチジンの収率Ｖ！、５０’ｌである
。 Ｄ、（０−Ｂｚｌ−セリン） ２３７ｇのアセチル−Ｌ−セリンを２３５ｍ６の５ＮＮ
ａＯＨ水溶液罠溶かし、ｐＩＩを７．３に調節する。こ
の溶液に４ｇのタカジャスターゼ（三共株式会社製）を
２５〃１００．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ６，７、Ｃａ
Ｃ１ｚ　　０．０２５Ｍ合有）合有解して得られる溶液
を加え、更にトルエン数滴を滴下後、得られる混合液を
３６℃で１０日間放置する。生じる沈殿を濾去し、濾液
を濃縮した後、この濃縮濾液にアセトンを加えて結晶を
得る。このよう圧して１００ｇの０−Ｂｚｌ−セリンが
得られる。同様の７１１Ｃ［って２４０ｇのアセチル−
し−スレオニ／から１００ｇの０−Ｂｚｌ−スレオニン
が得られる。 Ｂ、（０−Ｂｚレチロシン） １．８ｇのＬ−チロシンと１．２ｇのＣｕＳＯ４ｌｌ５
Ｈ２０を５　ｍｅの２ＮＮａＯＨ水溶液と１０−の水と
の溶液に懸濁して２時間攪拌する。この懸濁液に６０−
のメタノールを加え、次いで１．２−の臭化ベンジル及
び０．７−の２ＮＮｎＯＨ水浴液を徐々に加える。 １５分Ｂ　Ｏ，３ｔｒｔの臭化ベンジル及び０．８−の
２ＮＮａＯＨ水溶液を唄に加える。得られる混合液を１
時間攪拌した優、牛しる沈殿を緒惚Ｌ、この沈殿をメタ
ノール−水（１：３）で洗浄ｒる。このようＶこ）７て
、２ｇの０−ＢＺｌ−チロシンの鋼重をイ：する。 この０−Ｂｚｌ−チロシンの網場と２１１　ｍｇのＩＩ
Ｊ　）ｌ）ｉ’Ａ水溶液とを乳鉢内でこねて得られる混
合物から固形分を濾取し、この固形分を水洗する。洗浄
し／こ生成物を少量のＢＤＴＡを官有する熱水から再結
晶することにより、融点２２３℃を有する０−Ｂｚｌ−
チロシン１ｇが得られる。０−Ｂｚｌチロシンの収率は
３０係である。 Ｆ、（Ｓ−Ｂｚ、１−システィン） １５７ｇのし一システィン塩酸塩を２１の２Ｎ　ＮａＯ
Ｈ水酎液水溶液し、この溶液に２５６ｇの臭化ベンジル
を水冷下激しく攪拌しながら添加後、冷室で５時間攪拌
する。その後、該溶液を酢酸でｐ　Ｈ５に調節してｔＪ
：、散物を生成させる。生成した沈殿物を濾取し水洗す
る。このようにして、融点２１２℃の５−Ｂｚｌ−シス
ティン１６０ｇが得られる。Ｓ−Ｂｚｌ−システィンの
収率は７０憾である。 上述と同様の方法で１６０ｇのアスパラギン酸から１５
０ｇの０−１１ｚｌ−アスパラギン酸が、１６０ｇのグ
ルタミン酸から１５０ｇの０−Ｂｚｌ−グルタミン酸が
得られる。 Ｇ。（Ｄｅｃ−アミノ酸） ２９ｇのＬ−バリンを２５０−〇用ＮａＯＨ水浴液に溶
かして得られる溶液に水を加えて４０〇−の溶液とする
。この溶液に１５０−のテトラヒドロフランを添加後、
１０℃で激しく攪拌しながら、該溶液に１００−〇Ｂｏ
ａ−Ｃ１を５分の１ずつ１０分毎ＩＣ７１＋１える。一
方、２ＪＪ　ＮａＯＨを前記のＢｏｃ−ＣＩを加えるた
びに該溶液に加えて、溶液のｐＨを８〜９に保°つよう
にする。２時間後、この混合液をジエチルエーテルで抽
出し、得られる水層を０．５Ｍクエン酸水溶液で酸性に
し、析出する油状物質を酢酸エチルで抽出する。得られ
る抽出！　　　物を少量の水で洗浄しＮａ２ＳＯ４で乾
燥後、減圧下で濃縮する。濃縮抽出物九石油エーテルを
加えて、冷蔵庫内に放置し結晶を生成させる。生成結晶
を濾取して乾燥する。 このようにして融点７８℃のＢｏａ−ノ々リン３０ｇを
得る。Ｂｏｃ−ノセリンの収率は５５係である。 Ｈ，（その他のＢｏｃ−アミノ酸） 上述と同様の方法を行うことにより、ＢｏＣ−グリシン
１５ｇ、ＢｏＣ−アラニン１６ｇ５　Ｂｏａ−ロイシン
１５ｇＸ　Ｂｏｃ−イソロイシン１５ｇ５　Ｂｏａ−セ
リン（Ｂｚｌ）１４　ｇ、　　Ｂｏｃ−スレオニン（Ｂ
ｚｌ）１４ｇ、Ｂｏｃ−システィン（Ｂｚｌ）１５　ｇ
、　　Ｂｏａ　−メチオニン１５ｇ、Ｂｏｃ−ゾロリン
１２ｇ、Ｂｏｃ−アスパラギン酸（ＯＢｚｌ）１５　ｇ
、　Ｂｏａ−グルタミンｉｌｌ　（ＯＢｚｌ）１５　ｇ
、　　Ｂｏａ−グルタミン１５ｇ１Ｂｏａ−ヒスチジン
（Ｂｚｌ）１２　ｇ、　　Ｂｏｃ−ｏイシン（Ｚ）１３
　ｇ、　Ｂｏｃ−アルギニン（ＮＯ２）１５　ｇ、　Ｂ
ｏａ−フェニルアラニン１５ｇ、Ｂｏａ−チロシン（Ｂ
ＺＩ）１５ｇ及びＢｏａ−トリプトファン１０ｇがそれ
ぞし、クリシン３０ｇ１アラニン３０ｇ１０イシン３０
ｇ１イソロイシン３０ｇ１セリン（Ｂｚｌ）３０ｇ１ス
レオニン（ｎｚｌ）３０　ｇ、システィン（Ｂｚ　１　
）３０ｇ１　メチオニン３０ｇ１　ゾロリン３０ｇ１ア
スノぐラギン酸（ＯＢｚｌ）３０　ｇ、グルタミン酸（
ＯＢｚｘ）ａｏｇ、グルタミン３０ｇ、ヒスチジン（Ｂ
ＺＩ）３　ｏ　ｇ、　　リジン（Ｚ）３０ｇｓアルギニ
ン（Ｎｏ２）３０ｇ１フ工ニルアラニン３０ｇ１チロシ
ン（Ｂｚｌ）３０ｇ及びトリシトファン３０ｇから得ら
れる。 工程４　（Ｂｏｃ−グルタミンと樹脂との結合）２ｇの
クロロメチル樹脂（ＣＩ総含量４ミリモル）、２ミリモ
ルのＢｏｃ−Ｌ−グルタミン、１．８ミリモルのトリエ
チルアミン及び１２−のジメチルホルムアミドの混合物
を室温で２４時間振とりする。 次にガラスフィルターを用いて上記混合物から固形分を
濾取し、得られる固形生成物をそれぞれ７００ゴのジメ
チルホルムアミド、エタノール、酢酸／エタノール及び
塩化メチレンで順次洗浄する。その後生成物を室温で減
圧下乾燥する。生成物のアミノ酸含量を測定するために
、該生成物５０■を秤量し、１２Ｎ塩酸水溶液とジオキ
サンの１：１谷址比の混合物中に入れて２４時間加水分
解した後、アミノ酸分析計で測定する。生成物のアミノ
酸含量は０．２ミリモル／ｇである。 　２１一 工程５　（Ｂｏｃ−８ｅｒ−Ｇｌｎ−側１ｊ［）工程４
で侍られた２ｇのＨｏｅ−グルタミン（以下ｒＢｏｃ−
ＧｌｎＪと略称する）樹脂を１６０　ｍｌの酢酸中に入
れて室温で６時間放置する。次にこの混合物をガラスフ
ィルターで濾過する。得られる固形物を１６０ゴの酢酸
中に入れて振とうし、濾取する。この操作を３回くりか
えず。次に上記の固形物を１６０−のＩＮ塩酸水浴液／
酢酸中に入れて室温で３０分間做とうし、樹脂からＢｏ
Ｃ羞を除去する。このようにして得られた生成ｖＤを濾
取し、酢酸、エタノール及びジメチルホルムアミドで、
それぞれ３圓ずつ順次洗浄する。洗浄生成物を１６０ｄ
（Ｄｉ　ｏｍｉｔ％トリエチルアミン／ジメチルホルム
アミド中に入れて１０分間振とうして中和反応を行なう
。その結果、得られる生成ｖｌＪを濾取してジメチルホ
ルムアミドで洗浄し、次いで塩化メチレンに２ミリモル
のＢｏａ−セリン（Ｂｚｌ）ｅ溶かした浴数中に入几、
嶽とうする。ｌＯ分恢、この混合物に６０ｗｔの塩化メ
チレンに２０ミリモルのジシクロへギシル力ルＩジイミ
ドを浴かした溶液中に加え、室温で２時間振とうしてカ
ッシリングを行なう。その結果前られる生成物を濾取し
、塩化メチレン及びエタノールで順次洗浄する。 ■４！Ｉ！６（Ｉｌｏｃ−ベゾチジル樹脂）工程５と同
様の操作を繰り返してアミノ酸を伸長させて１３ｏｃ−
ペゾチジル樹脂を得る。 工程７（樹脂からのペプチドの切断） 工程６で得られた１、４ｇのＢｏａ−ペプチジル−樹脂
と１−のアニソールを　Ｈ５リテトラフルオロエチレン
で力・々−した攪拌子の入った反応容器に入れて、ドラ
イアイス−アセトンで冷却し寿から７ツ化水素２０ｔｎ
ｔを該反応容器に導入し、０℃で１時間攪拌後、０℃の
減圧上反応容器中のフッ化水素を除去する。得られる残
渣に１重量係酢酸水溶液を加えて撹拌後ペプチドを抽出
し、抽出物を分液ロートに入れてエーテルで洗浄して凍
結乾燥する。このようにして保獲基を持たないペプチド
１　　を分離する。 工程８（合成ペプチドの物性） 工程７で得られる各ペプチドの分子量、アミノ酸組成及
びアミノ酸配列を測定する。 各ペプチドの分子量けＳＤＳゲル電気泳動測定での移動
度から求める。 アミノ酸組成（モルチ）は、一定量の各ベゾＬドを６Ｎ
塩酸水ｍ液中で２４時間１１０℃で加水分解し、得られ
る混合物を二次元ペー）ｅ−クロマトグラフィーに供し
て決定する。この方法では、トリシトファン、シスチン
及びシスティンは検出されない。従って、別の一定量の
各ペゾチｒを蛋白分解酵素で分解することにより、トリ
シトファン及びシスチン又はシスティンの組成を求める
。 なお、グルタミン酸とグルタミン、及びアスパラギン酸
とアスノぐラギンの区別はつかない。 各ペプチドのアミノ酸配列は、日立製作所製の自動アミ
ノ酸分析機によって分析する。 工程９（抗ウィルス活性の測定） 工程７で得られる各ペプチドの抗ウィルス活性の測定は
、ビー・シー・メリガン著−ヒト新生児皮膚繊維芽細胞
の単層とウシ水痘性口内炎ウィルスを用いるヒトインタ
ーフェロンのプラーク形成阻害の評価−「細胞媒介免疫
におけるイン・ビトロ法」イー・ディー・ビー・アール
・ブルーム及びビー・アール・グレード編アカデミツク
・プレス社刊、：：：３−　ｂ−ヨーク１９７１年、４
８９頁〔Ｐ、ｃ。 Ｍａｒｉｇａｎ　、　Ｐｌａｑｕｏ　Ｉｎｈｉｂｌ　ｔ
ｏｎ　Ａｓ５ａｙ　ｆｏｒ　ＨｕｍａｎＴｎｔｅｒｆａ
ｒｏｎＥｍｐｌｏｙｌｎｇ　　Ｉｌｕｍａｎ　　Ｎｅｏ
ｎａｔｅ　　５ｋｉｎ　　ＦｉｂｒｏｂｌａｓｔＭｏｎ
ｏｌａｙａｒａ　　＆　　１ｌｏｖｉｎｅ　　Ｖｏｓｔ
ｉｃｕｌａｒ　　Ｓｔｏｍａｔｌｔｉｓ　　Ｖｉｒｕｓ
。 ”Ｉｎ−ｖｌｔｒｏ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｃｅｌｌ−
Ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ″。 ｅｄｊＬａｄ　ｂｙ　Ｅ、　Ｉ）、Ｂ、Ｒ，Ｉｌｌｏｏ
ｍ　＆　Ｐ　、Ｒ，Ｇｒａｄｅ　、ＡｃａｄｅｍｉｃＰ
ｒｅｓｓ、Ｎ、Ｙ、１９７１　＋　ｐｐ４８９　　）に
記載の方法と同様の方法で山１１定−ノーる。 拝しくけ、工程７で得られる各ペプチドを種々に希釈し
て、１０容量係の胎児性小生血清を含有する増殖培地に
入れる。この培地にはＦＳ−４細胞（ヒトｇｒ生児皮膚
繊維芽細胞）が単層に培養されている。１８時間後、細
胞当り２０個のプラーク形成能を有する水痘性口内炎ウ
ィルス（ＶＳＶ）を該細胞に感染させ、さらに１時間３
７℃で培養する。 次に該細胞を上記の増殖培地で２回洗浄した後、再び該
増殖培地中３７℃で２４時間培養する。ウイルスが発生
したかどうかは、培養後の該細胞を顕微鏡観察すること
により検査する。その結果認められる細胞の損傷はウィ
ルスによるものである。 ペプチドが１ｇｇ／−の濃度で抗ウィルス活性を示す。 工程１０（細胞増殖抑制作用の測定） ２Ｘ１０ＳＦＢ−４細胞をＩＨ径６０龍のシャー１／　
Ｊ／（入れた工程９で記述した増殖培地に移植する。５
時間後に増殖培地を除去し、代わりに０．１７７　ｇ　
／　ｍｅの濃度の工程７で得られるペプチドを含むυ［
餠な培地を上記のシャーレに注ぎ入れて、３７℃で１８
時間培養を続ける。培養後、培地を除去Ｉ７．５μＣｉ
　／ｍｌの濃度の３Ｈ−チミジンを含む培地を加え、さ
らに３７℃で２時間培養する。培養後、細胞、をリン酸
緩衝食塩水で洗浄した後、洗浄した細胞に５重量係のト
リクロロ酢酸を加える。その結果イυられる沈殿の一定
量を乾燥し、液体シンチｌ）−ジョンカウンター（パラ
カード社製、アメリカ合衆国）を用いて乾燥した沈殿物
の３Ｈの放射能を測定する。比較のためにデビット・ブ
イ・ゲーデル（Ｄａｖｉｄ　Ｖ、　Ｇｏｅｄｄａ］）よ
り解明されたプロＩＦＮ−ｒｚＩＦＮ−γ及びＩＦＮ−
ｒ一様ペゾチドさそれぞれ同じアミノ酸配列を有するペ
ゾチドを前記の同相合成法により調製し、上記の方法で
細胞増殖抑制作用をｉｌｌり定する。 結果を以下に示す。 」工程９で得ら７ＬるゾＯＩＦＮ−７，ＩＦＮ−７とＩ
ＦＮ−ｒ株ベゾチドの抗ウィルス活性の結果全以下に示
す。 抗ウィルス活性が希釈無しで認められ、倍希釈ｔ　　　
で認められない場合を１単位とし、ｎ倍希釈で認められ
、２ｎ陪希釈で認められない場合をｎ単位とする。 以上より、プロＩＦＮ−γは細胞増殖抑制能がなく、Ｉ
ＦＮ−γ及びＩＦＮ−γ様ペゾチドの細胞増殖抑制能は
２０チあるということがわかる。 工程６で得られるＢｏｃ−ペゾチジル樹脂：１、　Ｈｏ
ｅ　Ｇｉｎ　Ａａｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　
（Ｂｚｌ）　Ｖａｌ　Ｌｙｍ（Ｚ）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚ
ｌ）　Ａｌａ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　Ａｉｎ　Ｌｅｕ
　Ｌｙｓ（Ｚ）　Ｌｙ＠（Ｚ）　Ｔｙｒ　（Ｂｚｌ）　
Ｐｈｅ　Ａｍｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｌａ（Ｂｚｌ）　
Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｖａｌ　
Ａｌａ　Ａａｐ（ＯＢｚｌ）　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ
　（Ｂｚｌ）　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　ＧｌｙＴｉｅ
　Ｌｅｕ　Ｌｙａ　（Ｚ）　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　
（Ｚ）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　
Ｓｅｒ　（Ｈｚｌｌ　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ａｒｇ　
（ＮＯ２）Ｌｙｓ　（Ｚ）　ＩＩｓ　Ｍｅｔ　Ｇ】ｎ　
Ｓａｒ　（Ｂｚｌ）　Ｇｌｎ　ＩＩｓ　ＶａｌＳｅｒ　
（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　（ｒ３ｚｌ）　Ｐｈａ　
Ｌｙｅ　（Ｚ）　ＬｅｕＰｈｅ　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　
　Ａｓｎ　　Ｐｂｅ　　Ｌｙｅ　　（Ｚ）　　Ａｓｐ　
　（ＯＢｚｌ）　　Ａ８ｐ（ＯＢｚｌ）Ｇｉｎ　Ｓｅｒ
　　（Ｂｚｌ）ＩＩ＠Ｇｌｎ　Ｌｙｅ　　（Ｚ）Ｓｅｔ
（Ｂｚｌ）　　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｔ
ｈｒ　　（Ｂｚｌ）　　ＩＩｓ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）Ｇｌ
ｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ａｓｐ　　ｆＯＢｚｌ）　　Ｍ
ａｔ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）Ｐｈｅ　Ｐｈ
ｅ　Ａｓｎ　　Ｓ＠ｒ　　（Ｂｚｌ）Ａａｎ　Ｌｙｇ　
（Ｚ）Ｌｙｓ　　（Ｚ）ＬｙＪＩ（Ｚ）　　Ａｒｇ　　
（Ｎｏｔ）　　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　　Ａｓｐ　　
（ＯＢｚｌ）　　ＰｈｅＧｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｌ
ｙｅ　　（Ｚ）　　Ｌｓｕ　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　　
Ａｇｎ　Ｔｙｒ（Ｂｙ、ｌ）　　Ｓ＠ｒ　　（Ｂｚｌ）
　　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ　　（ＯＢ
ｚｌ）Ｌｅｕ　Ａｉｎ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　　（
ＮＯ２）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ａｌａ　　ｌｌ５Ｈ
１ａ　　（Ｂｚｌ）Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）Ｌｅｕ　　
Ｉｌｅ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　　ＭａｔＡｌａ　Ｇｌｕ　　
（ＯＢｚｌ）Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　　（Ｒｚｌ）Ｐｒｏ　Ａ
ｌａ　ＡｌａＬｙｓ　　（Ｚ）　　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ
）　Ｇｌｙ　Ｌｙａ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ　　（ＮＯｘ
　）Ｌｙｅ　　（Ｚ）Ａｒｇ　　（ＮＯ２）Ｓｅｒ　　
（Ｒｚｌ）Ｇｉｎ　Ｍａｔ　ＬｅｕＰｂｅ　Ａｒｇ　　
（ＮＯ２）Ｇｌｙ　Ａｒｇ　　（ＮＯ２）Ａｒｇ　　（
ＮＯＩ）ＡｌａＳｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｇｉｎ　−樹脂、
２、　Ｂｏｃ　Ｍｅｔ　Ｃｙｓ　　（Ｂｚｌ）　　Ｔｙ
ｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｃｙａ　　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｎ
Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　　（Ｈｚ
ｌ）　　Ｖａｌ　　Ｌｙ８（Ｚ）　Ｇｌｕ（ＯＲｚｌ）
Ａｌａ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）Ａ＋＋ｎ　Ｌａｕ　Ｌ
ｙｓ　　（Ｚ）Ｌｙａ（Ｚ）　　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）
　　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　　（Ｂ
ｚｌ）Ｓａｒ　　（Ｂｚｌ）Ａｓｐ　　ｆＯＲｚｌ）Ｖ
ａｌ　Ａｉｍ　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）Ａｓｎ　Ｇｌｙ
　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｇ
ｌｙ　ｌｉｅ　ＬｅｕＬｙｓ　（Ｚ）　Ａｓ＋ｎ　Ｔｒ
ｐ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　Ｇｌｕ　　（（−）Ｂｚｌ）　
Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ａａｐ　（
ｏＢｚｌ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ｌｙｅ（Ｚ）　　Ｉ
Ｉｓ　Ｍｅｔ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｇｉｎ　
ＩＩｓ　Ｖａｔ　５ｅｒ（Ｂｚｌ）　Ｐｈａ　Ｔｙｒ　
（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｌａｕ　Ｐｌｅ
ａＬｙｓ　（Ｚ）　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｅ　（Ｚ）　
Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　Ｇｉｎ　
Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ｌｙａ　（Ｚ）
　Ｂａｒ（Ｂｚｌ）　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　
Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　Ｉｌｅ　Ｌｙａ　（Ｚ）Ｇｌｕ　
（ＯＢｚｌ）　Ａａｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｍｅｔ　Ａｓｎ
　Ｖａｔ　Ｌｙ８（Ｚ）Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓｅ
ｒ　（Ｂｚｌ）　Ａａｎ　Ｌｙｅ　　（Ｚ）　Ｌｙａ　
　（Ｚ）Ｌｙｍ　（Ｚ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ａｍｐ
　（ＯＢｚｌｌ　Ａａｐ　（ＯＢｚｌ）Ｐｂｅ　Ｇｌｕ
　（ＯＢｚｌ）　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　
（Ｂｚｌ）　ＡａｎＴｙｒ　（Ｂｚｌ）　Ｓｅｒ　（Ｂ
ｚｌ）　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）　Ｌｅｕ　Ａａｎ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　（Ｎ
Ｏ２）　Ｌｙｓ　（Ｚ）Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｈｉｍ　　（
Ｂｚｌ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｌｅｕ　ＩＩ
ｓ　ＧｉｎＶａｌ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　　（ＯＢ
ｚｌ）　Ｌ＠ｕ　Ｓａｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｐｒ。 Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙａ　（Ｚ）　Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）
　Ｇｌｙ　Ｌｙａ　（Ｚ）　Ａｒｇ（ＮＯ２）　Ｌｙｓ
　（Ｚ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　
Ｇｌｎ　ＭａｔＬｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　
Ｇｌｙ　Ａｒｇ　（Ｎｏｗ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）Ａｌ
ａ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｎ−樹脂、３、　ｆｌ
ｏｅ　Ｍｅｔ　　Ｌｙａ　　（Ｚ）　　Ｔｙｒ　　（Ｂ
ｚｌ）　　Ｔｈｒ　　（ＢＺＩ）　　５ｅｒｆＢｚｌ）
　　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ
　Ｐｈｅ　Ｇｌｎ　ＬｅｕＣｙａ　　（ｌｌｚｌ）　　
Ｉｌｅ　Ｖａｌ　　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　　（Ｂｚ
ｌ）　　ＬｅｕＧｌｙ　Ｃｙｓ　　（Ｉｌｚｉ）　Ｔｙ
ｒ　（Ｂｚｌ）　Ｃｙｓ　　（Ｂｚｌ）　Ｇｌｎ　Ａｓ
ｐ（（翔ｚｌ）　　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）　　
Ｖａｌ　Ｌｙａ　　（Ｚ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）
Ａｌａ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｎ　Ｔ、ａｅｕ　
Ｌｙｅ　　（Ｚ）　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　Ｔｙｒ（Ｂｚｌ
）　Ｐｈｓ　Ａｓｎ　、Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　　（
Ｂｚｌ）　Ｓｅｔ　　（Ｂｚｌ）Ａｓｐ　（ＯＲｚｌ）
　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａ＋＋ｐ　　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｎ
　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ（ｎｚｌ）　　ＩＪ６ＬＩ　　Ｐｂｅ
　　Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ　　ＩＩｓ　　Ｌｅｕ　　Ｌｙｓ
　　（Ｚ）　　ＡｓｎＴｒｐ　ＬｙＢ（Ｚ）　Ｇｌｕ　
　（（’）Ｂｚｌ）　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｓｅ
ｒ　　（Ｂｚｌ）Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）Ａｒｇ　　（
ＮＯ２）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　ＩＩｓ　Ｍｅｔ　Ｇ
１ｎ５ｅｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｎ　　ｒｌｅ　Ｖａ
ｔ　Ｓｅｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ（Ｂｚｌ
）　　Ｐｈｅ　Ｌｙａ　　（Ｚ）　　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　
Ｌｙｓ　　（Ｚ）　Ａｇｎ　ＰｈｅＬｙｓ　　（Ｚ）　
　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｇ
ｌｎ　Ｓｅｒ！（Ｂｚｌ）１１ｅ　Ｇｉｎ　Ｌｙａ　　
（Ｚ）　　Ｓｅｒ　　（Ｂｚｌ）　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　　
（ＯＢｚｌ）Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｉｌｅ　Ｌ）Ｉ
ｌ（Ｚ）　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｐ　　（ＯＢ
ｚｌ）Ｍａｔ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　
Ｐｈａ　Ｐｈｅ　Ａａｎ　Ｓａｒ　　（Ｂｚｌ）、　　
　　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｌｙｓ　（Ｚ）　ＬｙＢ
（Ｚ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　　
Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　　（ＯＢ
ｚｌ）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）Ｌａｕ　Ｔｈｒ　　（Ｂｚ
ｌ）　　Ａａｎ　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｓｅｒ　　
（Ｂｚｌ）　ＶａｌＴｈｒ　　（Ｂｚｌ）　Ａａｐ　　
（ＯＢｚｌ）　　Ｌｅｕ　Ａａｎ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａ
ｒｇ（ＮＯ２）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ａｌａ　　Ｉ
Ｉｓ　ｌ１ｉａ　　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚ
ｌ）Ｌｅｕ　　ＩＩｓ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　　Ｍｅｔ　Ａ
ｌａ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）Ｌｅｕｓｅｒ　　（Ｂｚ
ｌ）ＰｒｏＡｌａＡｌａＬｙａ　　（Ｚ）　　Ｔｈｒ　
　（Ｂｚｌ）　　ＧｌｙＬｙａ　　（Ｚ　）　　Ａｒｇ
　　（ＮＯ２）　　Ｌｙａ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ　　（
ＮＯ２）　　５ａｒ（Ｂｚｌ）Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　　Ｌｅ
ｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　　（ＮＯ２）ＧｌｙＡｒｇ（ＮＯ
２）　Ａｒｇ　（Ｎｏ２）　Ａｌａ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ
）　Ｇｌｎ−樹脂、（但し、記号ンま前記において電極
したものと同じである）。 工程８で得られる物性： １、　　ＩＦＮ−γのベゾチド 分子蓋：約２０，０００ｇ１モル アミノ酸組成（モル％）： ヒスチジン（１，４）　　　トリシトファン（０３）リ
ンｙ（１３，６）　　アルギニン（ｓ、ｓ）７スノぐラ
キン酸／アス・ξラギン（１３，６）　　セリン（７，
６）グルタミン［Ｗ／グルタミン（１１，３）　　スレ
メニン（３４）　グリシン（３４）　ゾロリン（１４）
アラニン（５，５）　　ノセリン（ｓ、　ｓ　）　１／
２／スヂン（００）　メチオニン（２７）　イソＬＪ１
″シン（４，ｓ　）　　ロイシン（６，８）　　フェニ
ルアラニン（６，８）　　チロシン（２，７）アミノ酸
配列： Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇ
ｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ＡｓｎＬａｕ　ＬｙＩＩＬｙｅ
　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　
ＳｅｒＡｍｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌ
ｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｉｌａ　
Ｌｅｕ　Ｌｙａ　Ａａｎ　Ｔｒｐ　ＬｙＢＧＬｕ　Ｇｌ
ｕ　５ｅｒＡｓｐ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｉｌａ　Ｍｅｔ　
Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　ＩＩｓ　ＶａｌＳ＠ｒ　Ｐｈ
ａ　Ｔｙｒ　Ｐｈａ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙｅ
　Ａｇｎ　ＰｈｅＬｙｅ　Ａｓｐ　Ａａｐ　Ｇｌｎ　Ｓ
ｅｒ　ＩＩｓ　Ｇｌｎ　Ｌｙｍ　Ｓａｒ　ＶａｌＧｌｕ
　Ｔｈｒ　ＩＩｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｍｅｔ　
Ａｓｎ　Ｖａｌ　ＬｙｓＰｈｉ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓａ
ｒ　Ａｓｎ　Ｌｙａ　Ｌｙｍ　Ｌｙｅ　Ａｒｇ　Ａｓｐ
Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａ
ｓｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　ＶａｌＴｈｒ　Ａａｐ　Ｌｅｕ
　Ａａｎ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｙ８Ａｌａ　ｌ
１ｅＨ１ｓ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　ＩＩｓ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ
　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ＬｅｕＳｅｒ　Ｐｒｏ　Ａ
ｌａ　Ａｌａ　ＬｙＩＩＴｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ａｒ
ｇ　ＬｙｓＡｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　
Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　ＡｒｇＡｉｍ　Ｓａ
ｒ　Ｇｉｎ 等電点　ＰＨ８，６ 紫外吸収スペクトル ２７８ｍμに極大のピークを示す（第１図）。 ＳＤＳ電気泳動 ５ＤＳ−ＰＡＧＥをＬａｅｒｎｍｌｉ、Ｕ、に、（１９
７０）Ｎａｔｕｒｅ　（Ｌｏｎｄｏｎ）　２−２η、６
８０〜６８５の方法で実施した後、クマシーブリリアン
トゾルー〇）で染色する。 マーカーはＰｏ５ｐｈｏｒｙｌａｓｅ　ｂ　（９４１ｃ
）　、　ＢＳＡ（６７ｋ）　＋Ｏｖａｌｂｕｍｉｎ（４
３ｋ）　、　Ｃａｒｂｏｎｉｃ　ａｎｈｙｄｒａｓｅ（
３０ｋ）　。 ５ｏｙｂｅａｎ　Ｔｒｉｐｓｉｎ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ
　（２０，１１０１ａ−Ｌａｃｔａｌｂｕｍｉｎ（１４
，４ｋ）である（第２図）。 ２、ＩＦＮ−７様ペゾチド 分子量：約２０，０００　ｇ１モル アミノ酸組成（モル％）： ヒスチジン（１，４）　　）リプトファン（０，３）リ
ジン（１３，６）　　アルギニン（５，４）　　アス・
（ラギン酸／アスノξラギン（１３，６）　　セリン（
７５）グルタミン酸／グルタミン（１２，２）　　スレ
オニン（３，４）　　グリシン（３，４）　　ゾロリン
（１４）アラニン（５，４）　　　ノ々リン（５，４）
１／２シスチン（１，４）　　メチオニン（３，４）　
　インロイシン（４，ｓ　）　　ロイシン（６，８）　
　フェニルアラニン（６８）　チロシン（３，４） アミノ酸配列： Ｍｅｔ　ｅｙ８Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｐｒ
ｏ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙ８Ｇｌｕ　　Ａｌａ　　Ｇｌ
ｕ　　Ａ＋＋ｎ　　Ｌｅｕ　　Ｌｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ｔ
ｙｒ　　Ｐｈｅ　　ＡｓｎＡｌａ　Ｇｌｙ　ｌｌｌ５　
Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｍｎ　Ｇ
ｌｙＴｌｌｒ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　ＩＩ
ｓ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　ＴｒｐＬｙｓ　　にｌｕ
　　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　Ａｍｐ　　Ａｒｇ　　Ｌｙｓ
　　Ｉｌｅ　　Ｍｅｔ　　Ｇ１ｎ５ｅｒ　Ｇｌｎ　Ｔｌ
ｅ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ
　Ｌｅｕ円１ｅ　　Ｌｙｓ　　Ａａｎ　　Ｐｂｅ　　Ｌ
ｙ＋＋　　Ａｓｐ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ　　
ｌ１ｅＧｉｎ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈ
ｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　ＡａｐＭｅｔ　　Ａａｎ
　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　ｐＨｅ　　Ａｓｎ　Ｓｅ
ｒ　　Ａａｎ　ＬｙｓＬｙｌｌＩｉｙａ　Ａｒｇ　Ａｓ
ｐ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｌｙ８Ｌｅｕ　ＴｈｒＡ
ｓｎ　’ｒｙｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　’Ｉ”ｈｒ　Ａｓｐ
　Ｌｏｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　ＧｉｎＡｒｇ　Ｉｒｙｓ　
Ａｌａ　ｌｉｅ　Ｉｒ１ｓ　Ｇｌｕ　Ｌｏｕ　Ｉｌｅ　
Ｇｉｎ　Ｖａｌｌｖｂｔ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｉｕｅｌｌ
　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　ＴｈｒＧ
ｌｙ　Ｌｙａ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌ
ｎ　Ｍａｔ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ’　　　　　Ａｒｇ　Ｇｌ
ｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｇ１ｎ３　プロ
ＩＦＮ−γのペゾチド 分子葉：約２０．ｏｏｏｇ１モル アミノ酸組成（モル係）： ヒスチジン（１，２）　　　）リプトファン（Ｏ，ａ　
）リジン（１２，７）　　アルギニン（４，８）　　ア
ス・にラキン酸／アスノぞラギン（１２，０１セリン（
７，８）グルタミン酸／グルタミン（９，４）　　スレ
オニン（３６）　グリシン（４，２）　　ゾロリン（１
２）アラニン（ｓ、　４　）　　ノ々リン（５，４）　
１／２シスチン（１，ｓ）　　メチオニン（３，０）　
　イソロイシン（５，４）　　ロイシン（８，４）　　
フェニルアラニン（６６）　チロシン（４２） アミノ濱配列： Ｍｅｔ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｉ
Ｉｓ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　ＰｈｅＧｉｎ　Ｌｅｕ　Ｃｙｓ
　Ｉｌｅ　Ｖａｔ　Ｌｅｕ　Ｇａｙ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　
ＧｌｙＣｙｓ　　Ｔｙｒ　　Ｃｙｓ　　Ｇｉｎ　　Ａｓ
ｐ　　Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　Ｖａｔ　　Ｌｙｅ　　Ｇ　
ＩＩＩＡｌａ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙ
ｓ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａａｎ　ＡｌａＧｌｙ　Ｈｉｓ　
Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　ＡＲｐＡａｎ　Ｇｌ
ｙ　ＴｈｒＬｅｕＰｈｅＬｅｕＧｌｙＩｌｅＬｅｕＬｙ
ｓ八３ｎＴｒｐｌｙｓＧｌｕ　Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　Ａへ
ｐ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　　Ｉｌｅ　Ｍｅｔ　（月ｎ５ｅｒ
Ｇｌｎ　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｐ
ｈｅ　Ｌｙａ　Ｌｏｕ　ｒ’ｈｅＬｙａ　Ａｓｎ　Ｐｈ
ｅ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ａ、ｓｐ　Ｇｉｎ　５Ｌ１ｒ　Ｔ
ｌｅ　ＧｌｎＬｙａ　　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈ
ｒ　　Ｉｌａ　　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　ＭｅｔＡｓ
ｎ　Ｖａｔ　　Ｌｙｅ　　Ｐｂｅ　Ｐｈｅ　　Ａｓｎ　
Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｙａ　ＬｙｓＬｙｅ　Ａｒｇ　Ａｓ
ｐ　Ａｓｐ　Ｐｈａ　Ｇｌｕ　Ｌｙａ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ
　ＡｓｎＴｙｒ　　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　Ａｓｐ
　　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　ＡｒｇＬｙｅ
　　Ａｉｍ　　ＩＩｓ　　ｌ１ｉａ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅ
ｕ　　ＩＩｓ　　Ｇｉｎ　　Ｖａｌ　　ＭｅｔＡｌａ　
　Ｇｌｕ　　Ｌａｕ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　
Ａｌａ　Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ　ＧｌｙＬｙｓ　　Ａｒｇ　
Ｌｙｓ　　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　Ｇｌｎ　Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ
　Ｐｈｅ　　ＡｒｇＧｌｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　
　Ｓｅｒ　Ｇ１ｎ

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得たＩＦＮ−γのベゾチドの紫外部
吸収スペクトル、第２図はそのＳＤＳゲル電気泳動を示
す。マーカーとしてはオ・９ルブミン（分子＃１４３ｋ
）、カルゼニツクアンヒトラーゼ（３０ｋ）、大豆トリ
ジシンインヒビター（２０，１ｋ　）とα−ラクトアル
ブミン（１４４ｋ　）を用いた。 特ｄ「出願人　旭化成工業株式会社 第１図 人ｍａｘ ２７８ｍア 吸 光 度 ０．０６２ 第２図 オハ゛ルフパミソ　　−４３に・ カルホ゛′ニックアンヒト゛ラーセーー→−３０に・大
豆トワ７′ノノイノヒこ゛ター　−一→−２０１に・業
に装置ＦＮ−ａ”ペプチド ｄ．−ラクトアルフ”ミソ　ｍ−→−　１４．４に・ｊ
皮灸（ｍ月）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）式（Ｉ）：【アミノ酸配列があります】（但し、
   Ｇｌｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ、Ｌｙｓ、Ｇ
   ｌｕ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉ
   ｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ、ＡｒｇおよびＭ
   ｅｔは、グルタミン、アスパラギン酸、プロリン、チロ
   シン、バリン、リジン、グルタミン酸、アラニン、アス
   パラギン酸、ロイシン、フェニルアラニン、グリシン、
   ヒスチジン、セリン、スレオニン、イソロイシン、トリ
   プトファン、アルギニンおよびメチオニンの残基を；ま
   たＪは水素原子を表す）で表わされるペプチド